WO2010123179A1 - 유럽종 포도의 씨 추출물을 함유하는 골관절염 예방 또는 치료용 약학 조성물 - Google Patents

유럽종 포도의 씨 추출물을 함유하는 골관절염 예방 또는 치료용 약학 조성물 Download PDF

Info

Publication number
WO2010123179A1
WO2010123179A1 PCT/KR2009/005752 KR2009005752W WO2010123179A1 WO 2010123179 A1 WO2010123179 A1 WO 2010123179A1 KR 2009005752 W KR2009005752 W KR 2009005752W WO 2010123179 A1 WO2010123179 A1 WO 2010123179A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
extract
vitis vinifera
acetone
osteoarthritis
water
Prior art date
Application number
PCT/KR2009/005752
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
민준기
조미라
박미경
허유정
박진실
김호연
오혜좌
우윤주
류종현
김현규
이근혁
박진하
곽은영
전주연
Original Assignee
가톨릭대학교 산학협력단
에이치 엘 지노믹스(주)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 가톨릭대학교 산학협력단, 에이치 엘 지노믹스(주) filed Critical 가톨릭대학교 산학협력단
Publication of WO2010123179A1 publication Critical patent/WO2010123179A1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/87—Vitaceae or Ampelidaceae (Vine or Grape family), e.g. wine grapes, muscadine or peppervine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis

Definitions

  • the present invention relates to a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of osteoarthritis containing the seed extract of the European species grape ( Vitis vinifera ) as an active ingredient.
  • Osteoarthritis is a type of arthritis, also called degenerative arthritis, and refers to arthritis caused by degenerative changes in cartilage and surrounding bone in lubricated joints.
  • osteoarthritis is a disease characterized by gradual loss of articular cartilage, hypertrophy of bone located below the cartilage, bone formation at the joint edge, and nonspecific synovial inflammation.
  • Osteoarthritis is a disease caused by cartilage damage caused by aging or excessive physical pressure (eg, obesity, trauma, etc.). Therefore, osteoarthritis represents severe pain and movement disorders such as knee joints, knee joints, hip joints, etc., which are heavily weighted, resulting in deformation of joints when left for a long time.
  • Osteoarthritis is the cartilage change stage (step 1), which leads to swelling due to increased water content in the cartilage, and the fibrillation step (step 2), in which the cartilage surface is cracked and torn as the cartilage is broken and torn, resulting in bones and narrowing of the joint cavity.
  • the fibrillation step step 2
  • the overall decrease is (step 3), and bone change stages where bones are deformed, resulting in joint malformations and dysfunction (Ste 4), and joint soft tissue change step (step 5), where the soft tissue becomes thick.
  • Rheumatoid arthritis which belongs to osteoarthritis and other classifications, is a chronic autoimmune disease characterized by inflammation and proliferation of synovial cells. Unlike osteoarthritis, osteoporosis and osteoporosis of bones around joints occur. In rheumatoid arthritis, the gap between the synovial membrane spreads into the joint capsule, ligaments and tendons (stage 1) and the gradual destruction of the joint cartilage leads to narrowing of the joint gap. The tension of the joint membrane and the ligaments is lost (step 2), the inflammation invades the bones and causes partial erosion of the bones (step 3), and the joint function is lost (step 4). Therefore, osteoarthritis and rheumatoid arthritis have completely different causes and stages of the invention, and treatment methods thereof are also different.
  • Vitis is a vine plant belonging to Rhamnales and Vitaceae, and is grown or grown all over the earth except near the equator and latitudes above 50 °.
  • extracts obtained from seeds of the European species Vitis vinifera include (-) epicatechin, proanthocyanidins B1 and B2, (+) catechins, and mixtures of polymerized derivatives thereof, which are procyano Known as stone or flavonol oligomers (GB-A-1541469 and FR-A-2092743).
  • the extract mainly acts on glycosaminoglycans such as connective tissue, blood vessels, lymph and joints selectively to promote synthesis and inhibit degradation of fibers related to the binding ability of collagen, elastin, fibronectin, etc. It has been reported to inhibit the capillary permeability and quickly restore the elasticity of veins. [Arteres et veines Vol. 5 (5), 397-401 (1986); Sem-dex Hopitaux 48/47, 2009-2013 (1981)] In addition, grape seed extract has been reported to have therapeutic effects on capillary vulnerability, hypertension-related retinopathy, and residual retinal edema after retinal detachment in diabetic patients. [Gazette Mde France Vol. 88, No.
  • the present inventors have discovered that while trying to retrieve a variety of pharmacological activity against seed extract of the common grape vine (Vitis vinifera), surprisingly the seed extract of the common grape vine (Vitis vinifera) has an excellent therapeutic and palliative effect on osteoarthritis . This is surprising given that there are no reports of extracts from Vitis vinifera related to osteoarthritis.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of osteoarthritis, containing the seed extract of the European species grape ( Vitis vinifera ) as an active ingredient.
  • a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of osteoarthritis comprising a seed extract of the European species Vitis vinifera and a pharmaceutically acceptable carrier.
  • the osteoarthritis may be osteoarthritis caused by aging, obesity, or trauma.
  • the seed extract of the grape varieties is a procyanidolic value (PCV) of 80 to 130; Content of (+) catechin and ( ⁇ ) epicatechin of up to 30%; And a proanthocididine content of 95 to 105%.
  • PCV procyanidolic value
  • the seed extract of the European grape is (a) the seeds of the ground European grape ( Vitis vinifera ) is extracted at room temperature with a mixed solvent of acetone and water having a volume ratio of acetone and water of 1: 1 to 2, Filtration; (b) distilling the filtrate obtained in step (a) to remove acetone, then saturating sodium chloride and filtering; (c) extracting the filtrate obtained in step (b) with ethyl acetate and concentrating; And (d) adding chloroform to the concentrate obtained in step (c) and filtering to obtain a precipitate.
  • the seed extract of the grape varieties Vitis vinifera may be (A) (i) a mixed solvent of acetone and water having a volume ratio of acetone and water of 3 to 5: 1 in the seed of the ground grape varieties Vitis vinifera .
  • Extracting with filtration and filtering comprising the step of mixing the first extract and the second extract.
  • the seed extract of the grape varieties Vitis vinifera has excellent prophylactic and therapeutic activity of osteoarthritis.
  • the seed extracts of Vitis vinifera which have a specific procyanidolic value, (+) catechin and (-) epicatechin content, and a proanthocyanidin content of 95-105%, are excellent for preventing and treating osteoarthritis. It has been found by the present invention to have activity.
  • the extract can be preferably obtained by the manufacturing method developed by the present inventors.
  • FIG. 1 and 2 are the results of evaluating the effect of the seed extract of the grape varieties ( Vitis vinifera ) on the behavioral power of osteoarthritis-induced animals using the Dynamic Planear Aesthesiometer, Figure 1 and 2 are paw withdrawal latency (PWL), respectively ) And paw withdrawal threshold (PWT) are measured.
  • PWL paw withdrawal latency
  • PWT paw withdrawal threshold
  • Figure 3 shows the results measured by comparing the weight on both feet when the seed extract of the European grape ( Vitis vinifera ) using an Incapacitance tester or not.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of osteoarthritis comprising a seed extract of the European species grape ( Vitis vinifera ) and a pharmaceutically acceptable carrier.
  • the osteoarthritis may be osteoarthritis caused by aging, obesity, or trauma.
  • Seed extracts of the European varieties Vitis vinifera have been shown to effectively inhibit the destruction of cartilage and thus exhibit excellent prevention and treatment of osteoarthritis.
  • MIA Monosodium Iodoacetate
  • the stimulus was long lasted (see Figs. 1 and 2), the weight bearing was maintained at a level similar to that of the control group (see Fig. 3), and the destruction of cartilage was hardly observed as well as no bone hyperplasia was observed (see Fig. 3). 4 to 6).
  • Seed extracts of the European grape varieties include a procyanidolic value (PCV) of 80-130; Content of (+) catechin and ( ⁇ ) epicatechin of up to 30%; And a proanthocididine content of 95 to 105%.
  • PCV procyanidolic value
  • PCV procyanidolic value
  • 100 mg of the sample is precisely weighed and operated in the same manner as the standard solution to prepare a sample solution.
  • test tubes 10 mlTlr of sample solution and standard solution are placed in 5 test tubes, respectively, and plugged, and then heated for 45 minutes in a 100 ° C water bath. After heating, the test tubes were cooled in cold water, 2 ml of each test tube was taken, and 20 ml of isopropanol was added thereto. Take the reacted test solution and the standard solution, and measure the absorbance at 550 nm using isopropanol as a reference solution.
  • the content of the (+) catechin and (-) epicatechin means a value quantified as follows.
  • sample solution 50 mg of the sample is precisely weighed, dissolved in an acetonitrile and dilute phosphoric acid mixed solution (5:95), and 10 ml is used as the sample solution.
  • -Standard solution 2 Accurately weigh 10 mg of proanthocyanidin standard into a 10 ml volumetric flask and dissolve in 5 ml of internal standard solution.
  • Detector ultraviolet absorbance photometer (wavelength: 280 nm)
  • Lithium bromide aqueous solution 1.04 g of lithium bromide is precisely taken and placed in a 1000 ml volumetric flask.
  • Standard solutions 1, 2, 3 and sample solutions 1, 2 are analyzed twice with the following liquid chromatography method.
  • the calibration curve of the standard solution is prepared using the concentration of the standard solution and the corresponding main peak to IS peak area ratio (A proanthocyanidin / A BHT ) and calculated according to the following formula.
  • Ti% ⁇ [(A proanthocyanidin / A BHT ) test -a] / b ⁇ x (1 / C test ) x 100
  • a proanthocyanidin peak area of proanthocyanidins in the sample solution
  • a BHT peak area of BHT in the sample solution
  • Proanthocyanidin content Ti% x [(100-KF std ) / (100-KF test )]
  • the seed extract of the European species grape may be preferably used by the improved manufacturing method as follows (ie, WO2009 / 031826).
  • the seed extract of the grape varieties ( Vitis vinifera ) is (a) the seeds of the pulverized grape varieties ( Vitis vinifera ) are extracted at room temperature with a mixed solvent of acetone and water having a volume ratio of acetone and water of 1: 1 to 2, Filtration; (b) distilling the filtrate obtained in step (a) to remove acetone, then saturating sodium chloride and filtering; (c) extracting the filtrate obtained in step (b) with ethyl acetate and concentrating; And (d) adding chloroform to the concentrate obtained in step (c) and filtering to obtain a precipitate.
  • Seeds of crushed European grapes are washed with skin, seeds and branches obtained by pressing European grapes ( Vitis vinifera ) in water, dried using an oven, etc., and then the seeds are separated, and the conventional method is used. It can be obtained by grinding.
  • the manufacturing method is compared to the conventional extraction method (for example, GB-A-1541469)
  • a water-acetone mixed solvent having a low acetone content is used as the primary extraction solvent, and the primary extraction process is performed at room temperature (about 25 ° C.) without additional heating.
  • a water-acetone mixed solvent used in the preparation method a mixed solvent having a volume ratio of acetone and water of 1: 1 to 2, preferably about 1: 1.5 may be used.
  • the first extraction may be performed once or repeatedly, more preferably 2 to 3 times.
  • the filtration of step (a) may be carried out in a conventional manner, and the filtrate is recovered for carrying out the next step.
  • step (b) In the step of distilling the filtrate obtained in step (a) to remove acetone, and then saturating sodium chloride and filtering [step (b)], the acetone having a relatively low boiling point is removed by the distillation and is dissolved in acetone.
  • the impurities are precipitated.
  • the distillation may be performed according to a conventional distillation method, for example, may be carried out by distillation under reduced pressure. Preferably it is carried out under reduced pressure conditions of about 50 °C or less.
  • the extract obtained through the distillation process is subjected to saturation of sodium chloride and filtration immediately, without a separate organic solvent extraction process.
  • the extract that is, the extract obtained by distilling acetone
  • impurities such as a tannin component are precipitated, which is removed through a filtration process.
  • the impurity precipitation by saturation of sodium chloride and filtration is preferably filtered after saturating sodium chloride and then leaving it for 2 to 3 hours.
  • the filtration can be carried out in a conventional manner, and the filtrate is recovered for carrying out the next step.
  • step (c) the extraction with ethyl acetate (secondary extraction) may be performed once or repeatedly, preferably Preference is given to repeating 2-3 times.
  • concentration is preferably carried out to be concentrated to 0.4 to 0.7 times the total volume of the extract (ie filtrate) obtained in step (b).
  • step [c] of adding the chloroform to the concentrate obtained in step (c), and filtering to obtain a precipitate when the chloroform is added, active ingredients including oligomers which are not dissolved in chloroform are precipitated and formed.
  • the precipitates can be isolated by simply filtering the seed extract of Vitis vinifera .
  • the precipitate obtained by filtration can be obtained in the form of a dry powder by drying according to a conventional method, and the drying can be carried out by drying under reduced pressure, for example, a reduced pressure of 50 °C or less.
  • the seed extract of the European grape varieties ( Vitis vinifera ) contained as an active ingredient in the pharmaceutical composition of the present invention (A) (i) the seeds of pulverized European grapes ( Vitis vinifera ) are 3 to 3 by volume ratio of acetone and water.
  • the preparation method is performed by separately preparing the first extract and the second extract, and mixing them to obtain an extract. Therefore, the manufacturing method not only reduces the amount of acetone used as a whole, but also lacks a sodium chloride saturation process and a chloroform extraction process, thereby simplifying extraction and minimizing the problem of environmental pollution due to the use of an organic solvent. In addition, the yield of the resulting extract can be greatly increased by about 10 times.
  • step (i) extracts the seeds of pulverized European grapes ( Vitis vinifera ) with a mixed solvent of acetone and water having a volume ratio of acetone and water of 3-5 to 1, more preferably 4: 1, , By filtration.
  • the first extraction may be performed once or repeatedly, more preferably 2 to 3 times.
  • the filtration of step (i) can be carried out in a conventional manner, and the filtrate is recovered for the performance of the next step.
  • step (ii) is carried out by concentrating the filtrate obtained in step (i) to remove acetone and filtering.
  • the acetone having a relatively low boiling point is removed by the concentration, and impurities dissolved in acetone are precipitated.
  • the concentration may be carried out by conventional vacuum concentration (or distillation under reduced pressure), for example, may be carried out by distillation under reduced pressure conditions. After concentration, the precipitate is removed by filtration and the filtrate is recovered.
  • step (iii) is carried out by extracting the filtrate obtained in step (ii) with ethyl acetate. Extraction using the ethyl acetate (secondary extraction) may be performed once or repeatedly, preferably 2 to 3 times.
  • step (iii) may further include a dehydration process using anhydrous sodium sulfate after performing the extraction process using the ethyl acetate.
  • step (p) can be carried out by extracting the seeds of pulverized European grape ( Vitis vinifera ) with water and filtering;
  • step (q) can be carried out by extracting the filtrate obtained in step (p) with ethanol and filtering.
  • the extraction of step (q) may be performed once or repeatedly, preferably two to three times.
  • Mixing of the first extract and the second extract obtained as described above may be carried out by simply mixing the extract, the mixing ratio of the first extract and the second extract may be a weight ratio of 1: 0.5 to 1.5.
  • the pharmaceutical composition of the present invention comprises a pharmaceutically acceptable carrier, and oral formulations, external preparations, suppositories, and sterile injections of powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols, etc., respectively, according to conventional methods. It may be formulated in the form of a solution, preferably in the form of a tablet.
  • the pharmaceutically acceptable carrier is lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methyl cellulose, microcrystalline Cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate, mineral oil and the like. Also included are diluents or excipients such as fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrants, surfactants, and the like.
  • Oral solid preparations include tablets, pills, powders, granules, capsules and the like, and such solid preparations include at least one excipient such as starch, calcium carbonate, sucrose or lactose. ), Gelatin, and the like, and may include a lubricant such as magnesium stearate, talc, and the like.
  • Oral liquid preparations include suspensions, solvents, emulsions, syrups, and the like, and may include water, diluents such as liquid paraffin, wetting agents, sweeteners, fragrances, preservatives, and the like.
  • Parenteral preparations include sterile aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, lyophilized preparations, suppositories, and non-aqueous solvents and suspensions include propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oils such as olive oil, ethyl Injectable esters such as oleate and the like.
  • aqueous solvents and suspensions include propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oils such as olive oil, ethyl Injectable esters such as oleate and the like.
  • witepsol macrogol, tween 61, cacao butter, laurin butter, glycerogelatin and the like can be used.
  • the dosage of the seed extract of the grape varieties Vitis vinifera contained in the pharmaceutical composition of the present invention varies depending on the condition and weight of the patient, the extent of the disease, the form of the drug, the route of administration, and the duration, and is appropriately selected by those skilled in the art.
  • the seed extract of Vitis vinifera is 1 to 100 mg / kg per day, preferably a dose of 5 to 50 mg / kg, more preferably about 5 to 10 mg / kg It may be administered in a dose, and the administration may be administered once or several times a day.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may be administered alone or in combination with other osteoarthritis prophylactic or therapeutic agents, and when administered in combination, may be administered sequentially or simultaneously with other therapeutic agents.
  • the dosage of the pharmaceutical composition of the present invention is preferably administered in an amount that can achieve the maximum effect in a minimum amount without side effects, which can be easily determined by those skilled in the art.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be administered to mammals such as rats, mice, livestock, humans, etc. by various routes, for example, by oral, rectal or intravenous, intramuscular, subcutaneous injection, preferably orally. Can be.
  • the filtrate obtained was extracted three times with 250 ml of ethyl acetate and then dehydrated with anhydrous sodium sulfate.
  • the resulting extract was concentrated under reduced pressure until the volume was reduced to about 125 ml.
  • About 600 ml of chloroform was added to the obtained concentrate, and a precipitate was produced and filtered.
  • the precipitate obtained by filtration was dried in a vacuum oven at 50 ° C. or lower to obtain about 3.5 g of the seed extract of Vitis vinifera as a brown powder.
  • the first extract and the second extract were mixed to obtain about 35 g of the seed extract of the grape varieties Vitis vinifera .
  • the obtained extract was hydrolyzed by heating in a dilute acid solution, and then the procyanidolic value (PCV) was measured by quantifying the content of procyanidolic oligomer, showing a high value of about 98.
  • the proanthocyanidin content was measured as described above and found to be 98.5%. Therefore, the extract contains a large amount of oligomers in which two or more monomers of (+) catechin and (-) epicatechin are polymerized.
  • MIA Monosodium Iodoacetate
  • Osteoarthritis-induced rats were divided into 2 groups of 6 rats each, the first group was treated with no treatment (MIA group), and the second group (MIA-GSPE group) was 300 mg of the grape seed extract prepared in Example 2. It was dissolved in physiological saline at the dose of / kg and administered orally for 4 weeks once daily. The group without any treatment, that is, the group without MIA and grape seed extract, was used as a normal control.
  • Behavioral measures were measured using the Dynamic Plantar Aesthesiometer to stimulate the rat's hind paws and observe their responses.
  • a 0.5mm diameter needle (filament) mounted on the Dynamic Plantar Aesthesiometer is stimulated at a right angle to the rat's foot with a force of 50g for 20 seconds, and the rat feels the force of the corresponding weight and removes the foot.
  • the paw withdrawal latency and threshold were measured by obtaining seconds and weights.
  • the Incapacitance tester was used to compare and measure the force on the left and right feet of rats.
  • the rats were placed in a plastic chamber and the left and right feet of the rats were placed on each plate on separate plates of the Incapacitance tester to obtain the average value of the force on each foot for 3 seconds.
  • the weight bearing (%) thus obtained was obtained by substituting the equation for the right foot (foot with MIA) / left foot (foot without MIA) X 100%.
  • the rat joints were collected and separated, and stained with india ink and observed under an anatomical microscope. H & E staining was performed to observe the detailed morphology of the joints. The saponin O and toluidine blue staining methods to determine the degree of cartilage destruction caused the degradation of proteoglycans according to degradation. The morphology of cartilage was observed.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

본 발명은 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 골관절염(osteoarthritis)의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.

Description

유럽종 포도의 씨 추출물을 함유하는 골관절염 예방 또는 치료용 약학 조성물
본 발명은 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물을 유효성분으로 함유하는 골관절염(osteoarthritis)의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
골관절염(osteoarthritis)은 퇴행성 관절염으로 칭해지기도 하는 관절염의 일종으로서, 윤활 관절에서 연골과 주위골에 퇴행성 변화가 나타나서 생기는 관절 염을 말한다. 즉, 골관절염은 관절 연골의 점차적인 소실과 더불어 연골 하방에 위치한 뼈의 비대, 관절 가장자리 부위의 골 생성, 및 비특이적인 활막 염증을 특징으로 하는 질환이다. 골관절염은 노화나 과도한 물리적 압박(예를 들어, 비만, 외상 등)에 의해서 연골이 손상되어 발생하는 질환이다. 따라서, 골관절염은 체중을 많이 받는 관절, 즉, 무릎(슬)관절, 엉덩이 (고)관절 등에 심한 통증과 운동 장애를 나타내며, 장기간 방치할 경우에는 관절의 변형까지 초래하게 된다.
골관절염은 연골내 수분 함량이 증가되어 부종을 일으키는 연골 변화 단계(1 단계), 연골이 파괴되면서 연골 표면이 갈라지고 찢어지면서 손상되어 뼈가 드러나고 관절강이 좁아지는 원섬유화(fibrillation) 단계(2 단계), 연골세포가 연골을 회복하기 위해 연골 생성을 시작하지만 연골 생성보다 연골 파괴가 더 빠르게 일어나기 때문에 전반적으로이 줄어들게 되는 단계(3 단계), 뼈가 변형되어 관절 기형 및 기능장애를 초래하는 뼈 변화 단계(4 단계), 및 연조직(soft tissue)이 두꺼워지는 관절 연조직 변화 단계(5 단계)로 진행되게 된다.
골관절염과 다른 분류에 속하는 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis)은 활막 세포의 염증과 증식을 특징으로 하는, 만성 자가면역 질환(autoimmune diseases)으로서, 골관절염과 달리 관절 주위 뼈의 골다공증 및 골미란 등이 발생한다. 류마티스 관절염은 활막(synovial membrane)의 염증이 관절막(joint capsule)과 인대(ligament), 건(tendon)으로 퍼지는 단계(1 단계), 관절연골(joint cartilage)의 점차적인 파괴로 관절 간격이 좁아지고 관절막과 인대의 장력이 소실되는 단계(2 단계), 염증이 뼈로 침범하여 뼈의 부분적 침식이 발생하는 단계(3 단계), 및 관절기능이 소실되는 단계(4 단계)로 진행되게 된다. 따라서, 골관절염과 류미티스 관절염은 그 발명 원인 및 진행단계가 전혀 상이하며, 이에 대한 치료 방법도 상이하다.
한편, 포도속(Vitis) 식물은 갈매나무목(Rhamnales), 포도과(Vitaceae)에 속하는 덩굴성 식물로 적도부근 및 위도 50°이상 지역을 제외한 지구상 전역에서 자생 혹은 재배되고 있다. 포도과에는 11속 700 여종이 알려져 있으며, 유럽종 포도(Vitis vinifera), 미국종 포도(Vitis labrusca), 강변 포도(Vitis riparia), 사막 포도(Vitis rupestris), 겨울 포도(Vitis berladieri), 머루(Vitis coignetiae), 왕머루(Vitis amurensis) 등이 주로 과실을 이용하기 위하여 재배되고 있다. 이 중, 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨로부터 얻어지는 추출물은 (-)에피카테킨, 프로안토시아니딘 B1 및 B2, (+)카테킨, 및 이들의 중합 유도체들의 혼합물들을 포함하며, 이들은 프로시아니돌 또는 플라보놀 올리고머로서 알려져 있다 (GB-A-1541469 및 FR-A-2092743).
상기 추출물은 주로 결합조직, 혈관, 림프, 관절 등의 글리코스아미노글리칸(glycosaminoglycan)에 선택적으로 작용하여 콜라겐, 엘라스틴, 피브로넥틴 등의 결합능에 관련하는 섬유들의 합성을 촉진하고 분해를 억제하여, 증가된 모세혈관 투과성을 억제하고 정맥의 신축성을 빠르게 회복시켜 주는 것으로 보고되고 있다.[Arteres et veines Vol.5(5), 397∼401(1986); Sem-dex Hopitaux 48/47, 2009∼2013(1981)] 또한, 포도씨 추출물은 당뇨병 환자의 모세혈관 취약증, 고혈압에 관련된 망막증, 망막분리후의 잔여 망막부종에 대한 치료효과를 갖는 것이 보고된 바 있으며[Gazette Mde France Vol.88, No.14, 2035∼2038(1981)], 망막의 여러 구조를 보호함으로써 시각색소의 재생속도를 빠르게 하며, 임상시험에서 섬광에 노출된 후에 망막을 회복시키는데도 효과가 있는 것으로 보고된 바 있다[Bull. Soc. Opth. France Vol 88(2), 173-4, 177-9(1988)].
본 발명자들은 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 추출물의 개선된 제조방법을 개발한 바 있으며, 또한, 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물이 우수한 류마티스 관절염에 대한 우수한 예방 및 치료효과를 갖는다는 것을 보고한 바 있다(국제특허공개 제WO2009/031826호).
본 발명자들은 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물에 대하여 다양한 약리활성을 검색하던 중, 놀랍게도 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물이 골관절염에 대한 우수한 치료 및 증상완화 효과를 갖는다는 것을 발견하였다. 이는 유럽종 포도(Vitis vinifera)로부터 얻어진 추출물이 골관절염에 관련된다는 보고가 없다는 것을 감안할 때, 매우 놀라운 것이다.
따라서, 본 발명은 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물을 유효성분으로 함유하는 골관절염의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 태양에 따라, 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 골관절염(osteoarthritis)의 예방 또는 치료용 약학 조성물이 제공된다. 특히, 상기 골관절염은 노화, 비만, 또는 외상에 의하여 발생한 골관절염일 수 있다.
본 발명의 약학 조성물에 있어서, 상기 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물은 80 ∼ 130 의 프로시아니돌릭 값(Procyanidolic value, PCV); 30 % 이하의 (+)카테킨 및 (-)에피카테킨의 함량; 및 95 ∼ 105 %의 프로안토시아디딘 함량을 갖는 것이 바람직하다.
또한, 상기 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물은 (a) 분쇄된 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨를 아세톤 및 물의 부피비가 1 : 1 내지 2인 아세톤과 물의 혼합용매로 실온에서 추출하고, 여과하는 단계; (b) 단계(a)에서 얻어진 여액을 증류하여 아세톤을 제거한 다음, 염화나트륨을 포화시키고, 여과하는 단계; (c) 단계(b)에서 얻어진 여액을 에틸 아세테이트로 추출하고, 농축시키는 단계; 및 (d) 단계(c)에서 얻어진 농축물에 클로로포름을 가하고, 여과하여 침전물을 얻는 단계를 포함하는 제조방법으로 얻어질 수 있다.
또한, 선택적으로, 상기 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물은 (A) (i) 분쇄된 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨를 아세톤 및 물의 부피비가 3 ∼ 5 : 1인 아세톤과 물의 혼합용매로 추출하고, 여과하는 단계; (ii) 단계(i)에서 얻어진 여액을 농축하여 아세톤을 제거하고, 여과하는 단계; (iii) 단계(ii)에서 얻어진 여액을 에틸 아세테이트로 추출하는 단계; (iv) 단계(iii)에서 얻어진 추출물을 건조하여 제1 추출물을 얻는 단계; (B) (p) 분쇄된 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨를 물로 추출하고, 여과하는 단계; (q) 단계(p)에서 얻어진 여액을 에탄올로 추출하고, 여과하는 단계; (r) 단계(q)에서 얻어진 여액을 건조하여 제2 추출물을 얻는 단계; 및 (C) 상기 제1 추출물 및 제2 추출물을 혼합하는 단계를 포함하는 제조방법으로 얻어질 수 있다.
본 발명에 의해 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물이 우수한 골관절염(osteoarthritis)의 예방 및 치료활성을 갖는다는 것이 밝혀졌다. 특히, 특정한 프로시아니돌릭 값, (+)카테킨 및 (-)에피카테킨의 함량, 및 95 ∼ 105 %의 프로안토시아디딘 함량을 갖는 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물이 우수한 골관절염 예방 및 치료활성을 갖는다는 것이 본 발명에 의해 밝혀졌다. 상기 추출물은 본 발명자들이 개발한 제조방법에 의해 바람직하게 얻을 수 있다.
도 1 및 도 2는 Dynamic Planear Aesthesiometer를 이용하여, 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물이 골관절염 유발 동물의 행동력에 미치는 영향을 평가한 결과로서, 도 1 및 도 2는 각각 paw withdrawal latency (PWL) 및 paw withdrawal threshold (PWT)를 측정한 결과를 나타낸다.
도 3은 Incapacitance tester를 이용하여 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물을 투여 또는 비투여하였을 때, 양쪽 발에 실리는 무게를 비교하여 측정한 결과를 나타낸다.
도 4는 india ink 염색법으로 연골의 파괴정도를 측정한 결과이다.
도 5는 톨루이딘 블루(toluidine blue), 사프라닌 O(safranin O), H&E 염색법을 이용하여 조직학적으로 연골 및 뼈의 파괴정도를 분석한 결과이다.
도 6은 조직학적 분석 결과로부터 Histology grade 를 계산하여 나타낸 결과이다.
본 발명은 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 골관절염(osteoarthritis)의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다. 특히, 상기 골관절염은 노화, 비만, 또는 외상에 의하여 발생한 골관절염일 수 있다.
유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물이 연골의 파괴를 효과적으로 억제함으로써 우수한 골관절염의 예방 및 치료효과를 나타내는 것으로 밝혀졌다. 골관절염 유도물질로 알려져 있는 모노소듐 요오드아세테이트(Monosodium Iodoacetate, MIA)를 랫트에 투여하여 골관절염을 유발시킨 동물모델에서, 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물을 경구투여하였을 때, 비투여군에 비하여 강한 자극에 대해서는 오랫동안 견디었으며(도 1 및 도 2 참조), weight bearing 도 콘트롤군과 비슷한 수준을 유지하였고(도 3 참조), 연골의 파괴도 거의 관찰되지 않았을 뿐만 아니라 뼈의 과형성도 관찰되지 않았다(도 4 내지 도 6 참조). 이러한 시험결과는 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물이 연골의 파괴를 억제함으로써 골관절염에 대한 우수한 예방 및 치료 활성을 가지는 것을 시사한다.
상기 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물은 80 ∼ 130의 프로시아니돌릭 값(Procyanidolic value, PCV); 30 % 이하의 (+)카테킨 및 (-)에피카테킨의 함량; 및 95 ∼ 105 %의 프로안토시아디딘 함량을 갖는 것이 특히 바람직하다.
본 명세서에서 상기 "프로시아니돌릭 값(Procyanidolic value, 이하 'PCV'라 칭함)"은 다음 방법 및 식에 의해서 계산된 값을 의미한다.
① 표준액의 조제
유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물 표준품 100 mg을 정밀히 달아 이소프로판올을 가해 50 ml로 한다. 이 액 10 ml를 취하여 3M 염산 10 ml를 가하고 이소프로판올을 가해 50 ml로 한 액을 표준액으로 한다.
② 검액 조제
샘플 100mg을 정밀히 달아, 표준액과 동일하게 조작하여 검액으로 한다.
③ 조작
검액 및 표준액 10 mlTlr각각 5개의 시험관에 넣고 마개를 한 다음, 100℃ 수욕중에서 45분간 가열한다. 가열 후 시험관을 냉수에 넣어 냉각시키고, 각 시험관의 액 2 ml를 취한 후 이소프로판올 20 ml를 가한다. 반응시킨 검액, 표준액을 가지고 이소프로판올을 대조액으로 하여 550 nm에서 흡광도를 측정하고 각 5개의 평균 흡광도를 구한다.
④ 계산식
PCV = 105 X [A(t) X Mt X (100-Et)] / [A(s) X M X (100-E)]
A(t): 반응시킨 검액의 평균 흡광도
A(s): 반응시킨 표준액의 평균 흡광동
Mt: 표준품 취한 량(mg)
M: 검체 취한 량(mg)
Et: 표준품의 수분 함량(%)
E: 검체의 수분함량(%)
상기 (+)카테킨 및 (-)에피카테킨의 함량은 다음과 같이 정량된 값을 의미한다.
① 표준액의 조제
(+)카테킨 표준품, (-)에피카테킨 표준품 각각 50 mg을 정밀하게 달아 아세토니트릴·묽은 인산 혼합액(5:95)에 녹여 100ml로 한 액을 표준액으로 한다.
② 검액 조제
샘플 50mg을 정밀하게 달아, 아세토니트릴·묽은 인산 혼합액(5:95)에 녹여 10ml로 한 액을 검액으로 한다.
③ 분석조건
- 컬럼: 옥타데실실릴화한 실리카겔을 충진한 컬럼 (0.46 X 25 cm, 5 um)
- 이동상 (표 1)
표 1
시간(분) 이동상A 이동상 B
0 95 5
50 85 15
60 20 80
70 95 5
이동상 A: 묽은 인산 (묽은 인산: 0.3%, V/V 수용액)
이동상 B: 아세토니트릴
- 유속: 0.7 ml/분
- 검출기: 자외부흡광도측정 (측정파장: 278 nm)
- 주입량: 10 ul
④ 계산식
에피카테킨으로서 카테킨의 함량(%)
= [A1 X Me X 100 X 100] / [Ae X M1 X (100-E) X 10]
에피카테킨의 함량(%)
= [A2 X Me X 100 X 100] / [Ae X M1 X (100-E) X 10]
A1: 검액 중 카테킨의 피크면적
A2: 검액 중 에피카테킨의 피크면적
Ae: 표준액 중 에피카테킨의 피크면적
Me: 표준액 중 에피카테킨의 양(mg)
M1: 검액 중 추출물의 양(mg)
E: 추출물중 수분(%)
또한, 상기 "프로안토시아디딘 함량"이라 함은 다음 방법 및 식에 의해서 계산된 값을 의미한다.
① 내부표준액의 조제
2,6-디-tert-부틸-4-메틸페놀(2,6-di-tert-butyl-4-methylphenol, BHT) 30.0 mg을 정밀하게 달아 100 ml 용량플라스크에 넣고 이동상으로 표선을 맞추어 내부표준액으로 한다.
② 검액 1의 조제
샘플 10 mg을 정밀하게 달아 10 ml 용량플라스크에 넣고 5 ml 내부표준액 용액에 녹인 후, 내부표준액으로 표선을 맞추어 검액으로 한다.
③ 검액 2의 조제
샘플 10 mg을 정밀하게 달아 10 ml 용량플라스크에 넣고 5 ml 내부표준액 용액에 녹인 후, 내부표준액으로 표선을 맞추어 검액으로 한다.
④ 표준액의 검량선 조제
- 표준액 1: 프로안토시아니딘 표준품 8 mg을 정밀하게 달아 10 ml 용량플라스크에 넣고 5 ml 내부표준액에 녹인 후, 내부표준액으로 표선을 맞추어 표준액 1로 한다.
- 표준액 2: 프로안토시니딘 표준품 10 mg을 정밀하게 달아 10 ml 용량플라스크에 넣고 5 ml 내부표준액에 녹인 후, 내부표준액으로 표선을 맞추어 표준액 2로 한다.
- 표준액 3: 프로안토시아니딘 표준품 12 mg을 정밀하게 달아 10 ml 용량플라스크에 넣고 5 ml 내부표준액에 녹인 후, 내부표준액으로 표선을 맞추어 표준액 3으로 한다.
⑤ 조작조건
- 컬럼: PL Gel Column (7.6 X 300 mm, 5 um) 또는 그와 유사한 컬럼
- 검출기: 자외부흡광광도계 (측정파장: 280 nm)
- 이동상: 테트라히드로퓨란과 리튬 브로마이드 수용액의 혼합용매(95:5)
* 리튬 브로마이드 수용액: 리튬 브로마이드 1.04g을 정밀하게 취하여 1000 ml 용량플라스크에 넣고 물로 표선을 맞춘다.
- 유속: 1.0 ml/min
- 주입량: 10 uL
- 측정시간: 15분
⑥ 조작방법
표준액 1, 2, 3 및 검액 1, 2를 아래의 액체크로마토그래피법으로 각각 2회씩 분석한다. 단 표준액의 농도와 그에 상응하는 주피크 대 IS피크 면적비(Aproanthocyanidin/ABHT)로 표준액의 검량선을 작성하고 아래의 식에 따라 계산한다.
⑦ 계산식
- Ti% = {[(Aproanthocyanidin/ABHT)test - a] / b} x (1 / Ctest) x 100
Aproanthocyanidin = 검액에서 프로안토시아니딘의 피크면적
ABHT = 검액에서 BHT의 피크면적
a = 표준액 검량선의 Y 절편값
b = 표준액 검량선의 기울기값
Ctest = 검액의 농도(mg/ml)
- 프로안토시아니딘 함량(%) = Ti% x [(100-KFstd)/(100-KFtest)]
KFstd = 표준품 수분보정
KFtest = 검체 수분보정
또한, 상기 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물은 다음과 같이 개선된 제조방법(즉, 국제특허공개 제WO2009/031826호)에 의해 제조된 것을 바람직하게 사용할 수 있다.
즉, 상기 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물은 (a) 분쇄된 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨를 아세톤 및 물의 부피비가 1 : 1 내지 2인 아세톤과 물의 혼합용매로 실온에서 추출하고, 여과하는 단계; (b) 단계(a)에서 얻어진 여액을 증류하여 아세톤을 제거한 다음, 염화나트륨을 포화시키고, 여과하는 단계; (c) 단계(b)에서 얻어진 여액을 에틸 아세테이트로 추출하고, 농축시키는 단계; 및 (d) 단계(c)에서 얻어진 농축물에 클로로포름을 가하고, 여과하여 침전물을 얻는 단계를 포함하는 제조방법에 의해 얻어질 수 있다.
분쇄된 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨는 유럽종 포도(Vitis vinifera)를 압착하여 얻어진 껍질, 씨, 가지를 물에 세척하고 오븐 등을 사용하여 건조시킨 후, 씨를 분리하고, 이를 통상의 방법으로 분쇄함으로써 얻을 수 있다.
상기 제조방법은 종래의 추출방법(예를 들어, GB-A-1541469)에 비하여 아세톤 함량이 낮은 물-아세톤 혼합용매를 1차 추출용매로 사용하고, 별도의 가온 없이 실온(약 25 ℃)에서 1차 추출공정을 수행한다. 상기 제조방법에서 사용하는 물-아세톤 혼합용매로는 아세톤 및 물의 부피비가 1 : 1 내지 2, 바람직하게는 약 1 : 1.5인 혼합용매를 사용할 수 있다. 상기 1차 추출은 단회 또는 반복적으로 수행할 수 있으며, 2 내지 3 회 반복 수행하는 것이 더욱 바람직하다. 단계(a)의 상기 여과는 통상의 방법으로 수행할 수 있으며, 다음 단계의 수행을 위하여 여액을 회수한다.
단계(a)에서 얻어진 여액을 증류하여 아세톤을 제거한 다음, 염화나트륨을 포화시키고, 여과하는 단계[단계(b)]에 있어서, 상기 증류에 의하여 상대적으로 비등점이 낮은 아세톤이 제거되게 되며, 아세톤에 용해되어 있는 불순물들이 침전되게 된다. 상기 증류는 통상의 증류 방법에 따라 수행될 수 있으며, 예를 들어 감압 조건에서 증류하여 수행될 수 있다. 바람직하게는 약 50 ℃ 이하의 감압 조건에서 수행되는 것이 바람직하다. 증류 과정을 거쳐 얻어진 추출액은 별도의 유기용매 추출과정 없이, 곧바로 염화나트륨 포화 및 여과 과정이 수행된다. 상기 추출액(즉, 아세톤이 증류된 추출액)을 염화나트륨으로 포화시키면, 탄닌 성분 등의 불순물이 침전되게 되며, 이는 여과 과정을 통하여 제거되게 된다. 상기 염화나트륨 포화 및 여과에 의한 불순물 침전은 염화나트륨을 포화시킨 다음, 2 내지 3 시간 동안 방치한 후, 여과하는 것이 바람직하다. 상기 여과는 통상의 방법으로 수행할 수 있으며, 다음 단계의 수행을 위하여 여액을 회수한다.
단계(b)에서 얻어진 여액을 에틸 아세테이트로 추출하고, 농축시키는 단계[단계(c)]에 있어서, 상기 에틸 아세테이트를 이용한 추출(2차 추출)은 단회 또는 반복적으로 수행할 수 있으며, 바람직하게는 2 내지 3 회 반복 수행하는 것이 바람직하다. 또한, 상기 농축은 단계(b)에서 얻어진 추출액(즉, 여액) 총 부피에 대하여 0.4 내지 0.7 배로 농축되도록 수행되는 것이 바람직하다.
단계(c)에서 얻어진 농축물에 클로로포름을 가하고, 여과하여 침전물을 얻는 단계[단계(d)]에 있어서, 상기 클로로포름을 가할 경우, 클로로포름에 용해되지 않는 올리고머를 포함한 유효성분들이 침전되게 되며, 생성된 침전물은 간단히 여과함으로써 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물을 간단히 분리해낼 수 있다. 여과하여 얻어진 침전물은 통상의 방법에 따라 건조함으로써, 건조 분말 형태로 얻을 수 있으며, 상기 건조는 감압 조건, 예를 들어 50 ℃ 이하의 감압 조건에서 건조함으로써 수행될 수 있다.
선택적으로, 본 발명의 약학 조성물에 유효성분으로 함유되는 상기 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물은 (A) (i) 분쇄된 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨를 아세톤 및 물의 부피비가 3 ∼ 5 : 1인 아세톤과 물의 혼합용매로 추출하고, 여과하는 단계; (ii) 단계(i)에서 얻어진 여액을 농축하여 아세톤을 제거하고, 여과하는 단계; (iii) 단계(ii)에서 얻어진 여액을 에틸 아세테이트로 추출하는 단계; (iv) 단계(iii)에서 얻어진 추출물을 건조하여 제1 추출물을 얻는 단계; (B) (p) 분쇄된 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨를 물로 추출하고, 여과하는 단계; (q) 단계(p)에서 얻어진 여액을 에탄올로 추출하고, 여과하는 단계; (r) 단계(q)에서 얻어진 여액을 건조하여 제2 추출물을 얻는 단계; 및 (C) 상기 제1 추출물 및 제2 추출물을 혼합하는 단계를 포함하는 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물의 제조방법에 의해 얻어질 수 있다.
상기 제조방법은 제1 추출물 및 제2 추출물을 별도로 제조하고, 이들을 혼합하여 추출물을 얻음으로써 수행된다. 따라서, 상기 제조방법은 전체적으로 아세톤의 사용량을 줄일 수 있을 뿐만 아니라, 염화나트륨 포화공정 및 클로로포름 추출공정을 결여하므로, 추출이 간단하고 유기용매 사용으로 인한 환경오염의 문제도 최소화할 수 있다. 또한, 얻어지는 추출물의 수율을 약 10배 정도로 크게 높일 수 있다.
제1 추출물 제조에 있어서, 단계(i)는 분쇄된 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨를 아세톤 및 물의 부피비가 3 ∼ 5 : 1, 더욱 바람직하게는 4 : 1인 아세톤과 물의 혼합용매로 추출하고, 여과함으로써 수행된다. 상기 1차 추출은 단회 또는 반복적으로 수행할 수 있으며, 2 내지 3 회 반복 수행하는 것이 더욱 바람직하다. 단계(i)의 상기 여과는 통상의 방법으로 수행할 수 있으며, 다음 단계의 수행을 위하여 여액을 회수한다.
제1 추출물 제조에 있어서, 단계(ii)는 단계(i)에서 얻어진 여액을 농축하여 아세톤을 제거하고, 여과함으로써 수행된다. 상기 농축에 의하여 상대적으로 비등점이 낮은 아세톤이 제거되게 되며, 아세톤에 용해되어 있는 불순물들이 침전되게 된다. 상기 농축은 통상의 감압 농축(또는 감압 증류)에 의해 수행될 수 있으며, 예를 들어 감압 조건에서 증류하여 수행될 수 있다. 농축 과정을 거친 후 여과에 의해 침전물을 제거하고 여액을 회수한다.
제1 추출물 제조에 있어서, 단계(iii)은 단계(ii)에서 얻어진 여액을 에틸 아세테이트로 추출함으로써 수행된다. 상기 에틸 아세테이트를 이용한 추출(2차 추출)은 단회 또는 반복적으로 수행할 수 있으며, 바람직하게는 2 내지 3 회 반복 수행하는 것이 바람직하다. 또한, 단계(iii)은 상기 에틸 아세테이트를 이용한 추출공정 수행 후, 무수 황산나트륨 등을 이용한 탈수 공정을 추가로 포함할 수 있다.
제1 추출물 제조에 있어서, 단계(iv)는 단계(iii)에서 얻어진 추출물을 건조함으로써 수행된다. 상기 건조는 통상의 방법, 예를 들어 50 ℃ 이하의 감압 조건에서의 건조에 의해 수행될 수 있다. 더욱 바람직하게는 단계(iii)에서 얻어진 추출물을 농축하여 에틸 아세테이트를 제거하고, 얻어진 농축물을 물에 용해시킨 후, 분무건조함으로써 수행될 수 있다.
제2 추출물 제조에 있어서, 단계(p)는 분쇄된 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨를 물로 추출하고, 여과함으로써 수행할 수 있고; 단계(q)는 단계(p)에서 얻어진 여액을 에탄올로 추출하고, 여과함으로써 수행할 수 있다. 단계(q)의 상기 추출은 단회 또는 반복적으로 수행할 수 있으며, 바람직하게는 2 내지 3 회 반복 수행하는 것이 바람직하다.
또한, 제2 추출물 제조에 있어서, 단계(r)은 단계(q)에서 얻어진 여액을 건조함으로써 수행할 수 있다. 단계(r)의 상기 건조는 단계(q)에서 얻어진 여액을 분무건조함으로써 수행되거나; 단계(q)에서 얻어진 여액을 농축한 후, 얻어진 농축액을 분무건조함으로써 수행되는 것이 바람직하다. 상기 농축은 단계(q)에서 얻어진 여액 총 부피에 대하여 0.4 내지 0.7 배로 농축될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기와 같이 얻어진 제1 추출물 및 제2 추출물의 혼합은 단순히 추출물들을 혼합함으로써 수행될 수 있으며, 상기 제1 추출물 및 상기 제2 추출물의 혼합비는 1 : 0.5∼1.5 의 중량비일 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하며, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제제화될 수 있으며, 바람직하게는 정제 형태로 제제화될 수 있다. 상기 약학적으로 허용가능한 담체는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등을 포함한다. 또한, 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 포함한다. 경구용 고형 제제는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등을 포함하며, 이러한 고형제제는 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트 (calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 포함할 수 있으며, 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제 등을 포함할 수 있다. 경구용 액상 제제는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등을 포함하며, 물, 리퀴드 파라핀 등의 희석제, 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등을 포함할 수 있다. 비경구용 제제는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제를 포함하며, 비수성 용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르류 등을 포함한다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 약학조성물에 함유되는 상기 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물의 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 예를 들면, 상기 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물은 1일 1 내지 100 mg/kg으로, 바람직하게는 5 내지 50 mg/kg의 용량, 더욱 바람직하게는 약 5 내지 10 mg/kg의 용량으로 투여할 수 있으며, 상기 투여는 하루에 한번 또는 수회 나누어 투여할 수도 있다. 본 발명의 약학 조성물은 단독으로 투여되거나 다른 골관절염 예방 또는 치료제와 병용하여 투여될 수 있고, 병용하여 투여할 경우 다른 치료제와 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 상기 단독 투여 또는 병용 투여 시 본 발명의 약학 조성물의 투여량은 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 바람직하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본 발명의 약학조성물은 랫트, 마우스, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하 주사에 의해 투여될 수 있으며, 바람직하게는 경구로 투여될 수 있다.
이하, 본 발명을 실시예 및 시험예를 통하여 더욱 상세히 설명한다. 그러나 이들 실시예 및 시험예는 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예 및 시험예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물의 제조
유럽종 포도(Vitis vinifera)를 압착하여 껍질, 씨, 가지를 모아 물에 세척하고 회전 오븐에서 건조시킨 후, 씨를 분리하였다. 얻어진 씨 1 kg을 분쇄한 다음, 정제수 300 ml 및 아세톤 200 ml로 이루어진 아세톤 수용액 500 ml를 가하여, 실온에서 추출하였다. 상기 추출 과정을 3회 반복하고, 얻어진 추출액을 모두 합하여 여과하였다. 얻어진 여액을 50 ℃ 이하의 감압하에서 증류하여 아세톤을 제거한 다음, 염화나트륨을 포화시킨 후, 약 3 시간 동안 실온에서 방치한 다음 여과하였다. 얻어진 여액을 에틸 아세테이트 250 ml을 사용하여 3회 추출한 다음, 무수 황산나트륨으로 탈수하였다. 얻어진 추출액을 부피가 약 125 ml로 줄어들 때까지 감압 농축시켰다. 얻어진 농축액에 클로로포름 약 600 ml를 가하여 침전물을 생성시킨 후, 여과하였다. 여과하여 얻어진 침전물을 50 ℃ 이하의 진공 오븐에서 건조하여 약 3.5 g의 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물을 갈색 분말 상으로 얻었다. 얻어진 추출물을 희산성 용액에서 가열하여 가수분해한 다음, 프로시아니돌릭 올리고머의 함량을 정량하여 PCV (Procyanidolic value)를 측정한 결과, 약 105의 높은 값을 나타내었다. 또한, 상기한 바와 같이 프로안토시아디딘 함량을 측정한 결과 103 % 이었다. 따라서 상기 추출물은 (+)카테킨 및 (-)에피카테킨의 모노머가 2개 이상 중합된 올리고머류를 다량으로 함유한다.
실시예 2. 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물의 제조
유럽종 포도(Vitis vinifera)를 압착하여 껍질, 씨, 가지를 모아 물에 세척하고 회전 오븐에서 건조시킨 후, 씨를 분리하였다. 얻어진 씨 1 kg을 분쇄한 다음, 아세톤 수용액 (아세톤/물 = 8/2, v/v) 500 ml를 가하여 추출하였다. 상기 추출 과정을 3회 반복하고, 얻어진 추출액을 모두 합하여 여과하였다. 얻어진 여액을 감압농축하여 아세톤을 제거한 후, 여과하였다. 얻어진 여액을 에틸 아세테이트 250 ml을 사용하여 3회 추출한 다음, 무수 황산나트륨으로 탈수하였다. 얻어진 추출액을 감압농축하여 에틸 아세테이트를 제거하고, 얻어진 농축물을 물 500 ml에 용해시킨 후, 분무건조하여 분말상의 추출물(제1 추출물) 약 20 g을 얻었다.
유럽종 포도(Vitis vinifera)를 압착하여 껍질, 씨, 가지를 모아 물에 세척하고 회전 오븐에서 건조시킨 후, 씨를 분리하였다. 얻어진 씨 1 kg을 분쇄한 다음, 정제수 500 ml를 가하여 추출하였다. 상기 추출 과정을 3회 반복하고, 얻어진 추출액을 모두 합하여 여과하였다. 얻어진 여액을 에탄올 250 ml을 사용하여 3회 추출한 다음, 여과하였다. 얻어진 여액을 감압농축한 후, 얻어진 농축액을 분무건조하여 분말상의 추출물(제2 추출물) 약 15 g을 얻었다.
상기 제1 추출물 및 제2 추출물을 혼합하여 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물 약 35 g을 얻었다. 얻어진 추출물을 희산성 용액에서 가열하여 가수분해한 다음, 프로시아니돌릭 올리고머의 함량을 정량하여 PCV (Procyanidolic value)를 측정한 결과, 약 98 의 높은 값을 나타내었다. 또한, 상기한 바와 같이 프로안토시아디딘 함량을 측정한 결과 98.5 % 이었다. 따라서 상기 추출물은 (+)카테킨 및 (-)에피카테킨의 모노머가 2개 이상 중합된 올리고머류를 다량으로 함유한다.
시험예.
1. 시험방법
(1) 골관절염 유도 및 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물 투여
5주령의 웅성 위스터(Wistar)계 랫트의 오른쪽 무릎에 4mg/75ul의 용량으로 모노소듐 요오드아세테이트(Monosodium Iodoacetate, MIA)를 투여하여 골관절염을 유도하였다. MIA는 생리식염수에 용해시켜 투여하였다.
골관절염이 유도된 랫트를 각각 6마리씩 2군으로 나누고, 첫번째 군은 아무런 처리를 하지 않은 군(MIA군)으로 하고, 두번째 군(MIA-GSPE군)은 실시예 2에서 제조한 포도씨 추출물을 300 mg/kg의 용량으로 생리식염수에 용해시켜 하루에 한번 매일 4 주 동안 경구투여하였다. 아무런 처리를 하지 않은 군 즉, MIA 및 포도씨 추출물이 투여되지 않은 군을 정상 대조군(normal control)으로 하였다.
(2) 행동력 측정 및 조직학적 분석
행동력 측정은 Dynamic Plantar Aesthesiometer를 이용하여 랫트의 뒷발에 자극을 주고 그에 대한 반응을 관찰하였다. 즉, Dynamic Plantar Aesthesiometer 에 장착되어 있는 0.5mm의 직경의 침(필라멘트)을 20초 동안 50g의 힘으로 랫트의 발바닥에 직각방향으로 자극을 주어 랫트가 해당되는 무게의 힘을 느끼고 발을 치울때의 초와 무게값을 얻어 paw withdrawal latency 와 threshold를 측정하였다. 또한, 랫트의 왼발과 오른발에 실리는 힘을 비교, 측정하기 위하여 Incapacitance tester를 이용하였다. 랫트를 플라스틱 챔버에 넣고 Incapacitance tester의 분리된 판 위에 랫트의 왼발과 오른발을 각 판위에 올려 놓고 3초 동안 각 발에 실리는 힘의 평균값을 얻었다. 이렇게 얻은 Weight bearing (%)은 오른발 (MIA를 주입한 발) / 왼발 (MIA를 주입하지 않은발) X 100%의 식에 대입하여 결과를 얻었다.
MIA 유도 후 13일째 랫트의 관절을 채취하여 분리한 뒤, india ink로 염색하여 해부현미경으로 관찰하였다. 관절의 세부적인 형태를 관찰하기 위해 H&E 염색을 하였고, 연골의 파괴정도를 알 수 있는 염색법인 사프라닌 O (Safranin O) 와 톨루이딘 블루(Toluidine blue) 통해 프로테오글리칸(proteoglycan)의 함량을 degradation 에 따라 연골의 형태를 관찰하였다.
2. 시험결과
(1) 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물이 골관절염 유발 동물의 행동력에 미치는 영향 평가
MIA를 주입한 뒤 4일 정도가 지났을 때 골관절염이 유도되었으며, Dynamic Planear Aesthesiometer를 이용하여 랫의 뒷발에 자극을 주고 그에 대한 반응을 살펴본 결과, 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물을 경구투여한 군은 투여하지 않은 군에 비하여 paw withdrawal latency 및 threshold가 유의성 있게 높았다 (도 1 및 도 2). 이러한 결과는 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물을 경구투여 한 군은 투여하지 않은 군에 비하여 강한 자극에 대해서도 오래 견디는 것을 나타낸다. 또한 각 군의 랫의 weight bearing을 측정한 결과, 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물을 경구투여한 군에서의 weight bearing이 비투여 군에 비해 유의성 있게 높았다. 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물을 투여하지 않은 군에서는 왼쪽발에 무게를 많이 두고 있었다 (도 3).
(2) 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물이 골관절염 유발 동물의 연골에 미치는 영향 평가
골관절염이 유도된지 13일째에 랫트의 관절을 채취하여 분리한 뒤, india ink로 염색하여 해부현미경으로 관찰한 결과, 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물을 경구투여하지 않은 군에서는 연골부분에 파괴가 일어났다 (도 4의 가운데 사진의 화살표). 그러나 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물을 경구투여한 군에서는 연골의 파괴가 거의 일어나지 않았다 (도 4). 이러한 결과는 MIA 투여에 의해 골관절염을 유도하고 30일이 지나서도 계속 유지되었다.
또한, 톨루이딘 블루(toluidine blue), 사프라닌 O (safranin O), H&E 염색을 통한 조직학적 분석 결과, 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물을 경구투여 하지 않은 군에서는 연골의 파괴가 더 심하게 일어나 그 부위가 확인되지 않을 뿐 아니라 뼈가 과형성되어 기형적인 모습을 띠고 있음에 반해, 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물을 경구투여 한 군에서는 여전히 연골이 분해되지 않고 유지 되어 있었다 (도 5). 또한, Histology grade를 하기 표 2에 따라 점수화하여 측정한 결과는 도 6과 같으며, 도 6의 결과로부터 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물 투여군에서는 연골의 파괴가 거의 없음을 알 수 있다.
표 2
증상 Histology grade
정상(Normal) 1
사프라닌 O 염색의 약간의 표면적 수축(Slight superficial reduction of safranin O staining) 2
사프라닌 O 염색의 수축 및 약간의 표면 불규칙성(Reduction of safranin O staining and slight surface irregularity) 3
심각한 표면 불규칙성 및/또는 틈(Severe surface irregularity and/or clefts) 4
완전환 비-경화된 연골 두께 감소(Full non-calcified cartilage thickness loss) 5
경화된 연골 감소(calcified cartilage loss) 6
따라서, 상기한 시험결과는 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물이 연골의 파괴를 억제함으로써 골관절염에 대한 우수한 예방 및 치료 활성을 가지는 것을 시사한다.

Claims (5)

  1. 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 골관절염(osteoarthritis)의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 골관절염이 노화, 비만, 또는 외상에 의하여 발생한 골관절염인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물이 80 ∼ 130의 프로시아니돌릭 값(Procyanidolic value, PCV); 30 % 이하의 (+)카테킨 및 (-)에피카테킨의 함량; 및 95 ∼ 105 %의 프로안토시아디딘 함량을 갖는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물이 (a) 분쇄된 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨를 아세톤 및 물의 부피비가 1 : 1 내지 2인 아세톤과 물의 혼합용매로 실온에서 추출하고, 여과하는 단계; (b) 단계(a)에서 얻어진 여액을 증류하여 아세톤을 제거한 다음, 염화나트륨을 포화시키고, 여과하는 단계; (c) 단계(b)에서 얻어진 여액을 에틸 아세테이트로 추출하고, 농축시키는 단계; 및 (d) 단계(c)에서 얻어진 농축물에 클로로포름을 가하고, 여과하여 침전물을 얻는 단계를 포함하는 제조방법으로 얻어진 추출물임을 특징으로 하는 약학 조성물.
  5. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨 추출물이 (A) (i) 분쇄된 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨를 아세톤 및 물의 부피비가 3 ∼ 5 : 1인 아세톤과 물의 혼합용매로 추출하고, 여과하는 단계; (ii) 단계(i)에서 얻어진 여액을 농축하여 아세톤을 제거하고, 여과하는 단계; (iii) 단계(ii)에서 얻어진 여액을 에틸 아세테이트로 추출하는 단계; (iv) 단계(iii)에서 얻어진 추출물을 건조하여 제1 추출물을 얻는 단계; (B) (p) 분쇄된 유럽종 포도(Vitis vinifera)의 씨를 물로 추출하고, 여과하는 단계; (q) 단계(p)에서 얻어진 여액을 에탄올로 추출하고, 여과하는 단계; (r) 단계(q)에서 얻어진 여액을 건조하여 제2 추출물을 얻는 단계; 및 (C) 상기 제1 추출물 및 제2 추출물을 혼합하는 단계를 포함하는 제조방법으로 얻어진 추출물임을 특징으로 하는 약학 조성물.
PCT/KR2009/005752 2009-04-24 2009-10-08 유럽종 포도의 씨 추출물을 함유하는 골관절염 예방 또는 치료용 약학 조성물 WO2010123179A1 (ko)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020090035796A KR101099021B1 (ko) 2009-04-24 2009-04-24 유럽종 포도의 씨 추출물을 함유하는 골관절염 예방 또는 치료용 약학 조성물
KR10-2009-0035796 2009-04-24

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2010123179A1 true WO2010123179A1 (ko) 2010-10-28

Family

ID=43011274

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/KR2009/005752 WO2010123179A1 (ko) 2009-04-24 2009-10-08 유럽종 포도의 씨 추출물을 함유하는 골관절염 예방 또는 치료용 약학 조성물

Country Status (2)

Country Link
KR (1) KR101099021B1 (ko)
WO (1) WO2010123179A1 (ko)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ITUA20164757A1 (it) * 2016-06-29 2017-12-29 Indena Spa Composizioni utili nella prevenzione e/o nel trattamento dell’infiammazione e del dolore osteoarticolare e del danno cartilagineo

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101877780B1 (ko) * 2011-09-08 2018-07-13 (주)바이오메디앙 유럽종 포도 추출물의 분석방법
KR101454336B1 (ko) * 2013-03-14 2014-10-27 케일럽 멀티랩 (주) 관절염 예방 및 치료를 위한 조성물

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003053167A1 (en) * 2001-12-11 2003-07-03 Societe Des Produits Nestle S.A. Composition for promotion of bone growth and maintenance of bone health
KR20060032147A (ko) * 2003-06-27 2006-04-14 인데나 에스피아 관절염 질환의 치료를 위한 제형
KR20060110018A (ko) * 2005-04-04 2006-10-24 중모포도영농조합법인 고품질의 포도씨유 및 포도씨 추출물의 제조방법
KR20090024647A (ko) * 2007-09-04 2009-03-09 가톨릭대학교 산학협력단 유럽종 포도의 씨 추출물의 제조방법 및 이를 함유하는 류마티스 관절염 예방 또는 치료용 약학 조성물

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003053167A1 (en) * 2001-12-11 2003-07-03 Societe Des Produits Nestle S.A. Composition for promotion of bone growth and maintenance of bone health
KR20060032147A (ko) * 2003-06-27 2006-04-14 인데나 에스피아 관절염 질환의 치료를 위한 제형
KR20060110018A (ko) * 2005-04-04 2006-10-24 중모포도영농조합법인 고품질의 포도씨유 및 포도씨 추출물의 제조방법
KR20090024647A (ko) * 2007-09-04 2009-03-09 가톨릭대학교 산학협력단 유럽종 포도의 씨 추출물의 제조방법 및 이를 함유하는 류마티스 관절염 예방 또는 치료용 약학 조성물

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ITUA20164757A1 (it) * 2016-06-29 2017-12-29 Indena Spa Composizioni utili nella prevenzione e/o nel trattamento dell’infiammazione e del dolore osteoarticolare e del danno cartilagineo
WO2018002144A1 (en) * 2016-06-29 2018-01-04 Indena S.P.A. Compositions useful in the prevention and/or treatment of osteoarticular inflammation and pain and cartilage damage
CN109475591A (zh) * 2016-06-29 2019-03-15 因德纳有限公司 用于预防和/或治疗骨关节炎症和疼痛以及软骨损伤的组合物
US10583162B2 (en) 2016-06-29 2020-03-10 Indena S.P.A. Compositions useful in the prevention and/or treatment of osteoarticular inflammation and pain and cartilage damage
RU2750993C2 (ru) * 2016-06-29 2021-07-07 Индена С.П.А. Композиции, полезные для предупреждения и/или лечения костно-суставного воспаления и боли и повреждения хряща

Also Published As

Publication number Publication date
KR101099021B1 (ko) 2011-12-28
KR20100117184A (ko) 2010-11-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2010058926A2 (ko) 생강 추출물 또는 쇼가올을 포함하는 약학 조성물
WO2018194309A1 (ko) 인디루빈 유도체를 유효성분으로 포함하는 약학 조성물
WO2016080691A1 (ko) 노린재나무 및 황기의 추출물을 포함하는 관절염의 예방 또는 치료용 약학 조성물 및 그 제조방법
WO2010123179A1 (ko) 유럽종 포도의 씨 추출물을 함유하는 골관절염 예방 또는 치료용 약학 조성물
WO2010036052A2 (ko) 4-ｏ-메틸호노키올을 함유하는 아밀로이드 관련 질환의 치료 또는 예방용 조성물
WO2012121560A2 (ko) 난청의 예방 또는 치료용 조성물
WO2010067953A2 (ko) 유럽종 포도의 씨 추출물을 함유하는 골다공증 예방 또는 치료용 약학 조성물
WO2020116996A1 (ko) 식나무 추출물을 포함하는 황반변성의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
WO2013122344A1 (ko) 백합나무 수피 추출물을 유효 성분으로 함유하는 약학적 조성물
WO2019125058A1 (en) Composition comprising a horse chestnut extract
WO2010147309A2 (ko) 광곽향 추출물을 포함하는 염증성 위장관 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물
KR101044433B1 (ko) 유럽종 포도의 씨 추출물의 제조방법 및 이를 함유하는 류마티스 관절염 예방 또는 치료용 약학 조성물
WO2018230942A1 (ko) 호장근 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 안구건조증 예방 및 치료용 조성물
KR20110137588A (ko) 유럽종 포도의 씨 추출물을 함유하는 비만의 예방 또는 치료용 약학 조성물
WO2014157811A1 (ko) 류마티스 관절염 및 골관절염의 개선 또는 치료를 위한 조성물
WO2011019153A2 (ko) 오미자, 황금 및 해동피의 혼합 생약재 추출물을 유효성분으로 포함하는 관절염 예방 또는 치료용 조성물
WO2016114621A9 (ko) 오미자, 두충 및 구기자의 복합 추출물을 유효성분으로 함유하는 골 대사질환의 예방 또는 치료용 조성물
KR101187195B1 (ko) 유럽종 포도의 씨 추출물을 함유하는 위장관 궤양의 예방 또는 치료용 약학 조성물
WO2019098568A2 (ko) 동백나무 추출물을 포함하는 통증의 완화, 예방 또는 치료용 조성물
WO2023224158A1 (ko) 실리마린 생체이용률이 증대된 밀크씨슬 추출물 제조방법
WO2017171404A1 (ko) 펜타사이클릭 트리터펜 카페익 액씨드 에스터를 포함하는 피부 보습 또는 피부 미백용 조성물
WO2022114784A1 (ko) 선인장오일 발효물을 포함하는 조성물 및 그의 피부 상태 개선 용도
WO2023033535A1 (en) Composition comprising horse chestnut extract
WO2022211396A1 (ko) 배암차즈기 추출물 또는 이의 유래 화합물을 유효성분으로 포함하는 근위축 예방 또는 치료용 약학적 조성물
WO2022215827A1 (ko) Sars-cov-2 3cl 프로테아제와 rdrp활성을 억제하는 지유 추출 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 09843707

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 09843707

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1