WO2009050365A2 - Nouveau procede de preparation de derives (poly)aminoalkylaminoacetamide d'epipodophyllotoxine, utiles pour leurs applications en therapeutique comme agent anticancereux. - Google Patents

Nouveau procede de preparation de derives (poly)aminoalkylaminoacetamide d'epipodophyllotoxine, utiles pour leurs applications en therapeutique comme agent anticancereux. Download PDF

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butyloxycarbonyl
butyl
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Martial Grousseaud
Thierry Imbert
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Pierre Fabre Medicament
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Definitions

  • the present invention relates to a new process for the preparation of the (poly) aminoalkylaminoacetamide derivatives of epipodophyllotoxin of formula 1 and their pharmaceutically acceptable salts.
  • R represents a hydrogen atom or a - (CH 2 ) C - NH 2 group with 2 ⁇ a, b, c ⁇ 5.
  • These compounds are constituted by an epipodophyllotoxin type lignane part and a polyamine part grafted on the 4 position of the epipodophyllotoxin with an acetamide unit.
  • the presence of the polyamine chain confers on the molecule its water solubility properties, particularly for its hydrochlorides, as well as its pharmacological properties which are particularly advantageous in the treatment of cancers.
  • anticancer compounds are therefore anticancer compounds, particularly useful in the treatment of solid or non-solid tumors such as melanomas, colorectal cancers, lung cancers, prostate, bladder, breast, uterus, stomach, pancreas, liver, ovaries as well as in the treatment of leukemias, lymphomas and myelomas, cancers of the ENT sphere and brain tumors.
  • R ' represents a hydrogen or a - (CH 2 ) C - NHP chain, where a, b, c have the same meanings as above and where P represents a group protecting the amine functions.
  • Suitable protecting groups may be a benzyl, benzyloxycarbonyl or tert-butyloxycarbonyl radical.
  • the method described above also provides bis-alkylation by-products, by reaction of another molecule of 4-chloroacetamido-4'-demethylepipodophyllo toxin on the secondary amine formed of the product of formula 1 in protected form.
  • the use of an excess of primary amine reagent of formula 5 is then necessary for the most complete possible transformation of the raw materials while minimizing the production of by-products, which requires a difficult step of recovery of the amine. excess, making this process uneconomical.
  • the present invention therefore relates to a new process for synthesizing the compounds of formula 1 and their pharmaceutically acceptable salts from 4-amino-4'-demethylepipodophyllotoxin of formula 4a comprising a step of peptide coupling of the latter with a substituted acetic acid of formula 6.
  • the process is applicable to the preparation of compounds of formula 1 in hydrochloride form.
  • the protective groups used in the compound of formula 6 are benzyloxycarbonyl or t-butyloxycarbonyl groups.
  • 4-Amino-4'-demethylepipodophyllotoxin of formula 4a is a known intermediate (J Med Chem 2004, 47, 2365-237 '4, and J Med Chem 1991, 34, 3346-3350) which can be prepared by the synthesis method described in patent application WO 2007/010007.
  • the introduction of the acetic unit on the polyamine part of compound 5 to obtain compound 6 which will then be condensed on 4-amino-4'-demethylepipodophyllotoxin, of formula 4bis, represents a particularly interesting strategy.
  • the acetic unit is provided by reacting the primary amine moiety of (poly) aminoalkylamino derivatives of formula 5 with an alkyl haloacetate.
  • use will be bromo-, chloro- or iodoacetate ethyl.
  • Other methods of installing the acetic unit can also be used, such as, for example, reductive amination using a glyoxylic acid derivative.
  • the hydrolysis of the ester function to acid can be carried out in a basic medium such as dilute sodium hydroxide.
  • the compounds of formula 5 are obtained as described in the publication Tet. Lett. 1998, 39,439. A particular example of the use of this synthesis is given in Example 27 of the patent application WO 2005/100363.
  • Another aspect of the invention relates to a new process for synthesizing compounds of general formula 1 characterized in that it comprises the following steps: a) Grafting an acetic unit on primary amino reactants of formula 5
  • the protective groups used in the compounds of formula 5 and in step b) are benzyloxycarbonyl or t-butyloxycarbonyl groups.
  • an alkyl haloacetate selected from bromo, chloro or ethyl iodoacetate will be used.
  • the basic media are not compatible, since they generate, as mentioned above, an epimerization of the carbon atom in the 2-position, on the other hand the acidic media giving by-products that are volatile, or easily separable or eliminables can be used.
  • the alkylation of the primary amine of compound 5 is carried out with an alkyl haloacetate: bromo, chloro or ethyl iodoacetate, for example, the two reagents being in stoichiometric quantities.
  • 2nd step the alkyl haloacetate: bromo, chloro or ethyl iodoacetate, for example, the two reagents being in stoichiometric quantities.
  • the secondary amine obtained in the preceding step is protected by the same protective group P as that initially used during the synthesis of the compounds of formula 5, using conventional techniques used for the protection of this type of amine function.
  • the benzyloxycarbonyl or t-butyloxycarbonyl groups will be used as protecting groups. In this way all the identical protective groups will cleave in the same step.
  • the ester obtained in the preceding step is saponified in basic medium, for example with ethanolic sodium hydroxide, to obtain the compound of formula 6.
  • the 4-amino-4'-demethylepipodophyllotoxin of formula 4a is a known compound and the method of synthesis of which is described (J Med Chem 2004, 47, 2365-2374, and J Med.
  • Step 4 During this step, the peptide coupling of the polyaminoacetic acid of formula 6, as previously synthesized, is carried out with 4-amino-4'-demethylepipodophyllotoxin of formula 4a. This coupling is done in a neutral medium and at room temperature.
  • Step 5 The protective groups P of the compound obtained in the preceding step are removed, according to standard deprotection techniques, to give the compound of formula 1.
  • the invention also relates to a process for the preparation of intermediates of general formula 6
  • Formula 6 characterized in that it comprises the following steps: a) grafting of an acetic unit on the primary amines of formula 5
  • the alkyl haloacetate used in step b) is chosen from bromo, chloro or ethyl iodoacetate.
  • the protective groups of the compounds of formula 5 and those used in step b) are benzyloxycarbonyl or t-butyloxy carbony groups.
  • the invention also relates to the use of the compounds of general formula 6 in the preparation of the compounds of general formula 1.
  • the invention also relates, as new products, to the following compounds:
  • Step 1 Preparation of ⁇ 3- [benzyloxycarbonyl- (4-benzyloxycarbonylaminobutyl) -amino] -propylamino ⁇ -acetic acid ethyl ester.
  • Step 2 Preparation of (benzyloxycarbonyl- ⁇ 3- [benzyloxycarbonyl- (4-benzyloxycarbonylaminobutyl) -amino] -propyl ⁇ -amino) -acetic acid ethyl ester.
  • Step 3 Preparation of (benzyloxycarbonyl- ⁇ 3- [benzyloxycarbonyl- (4-benzyloxycarbonylaminobutyl) -amino] -propyl ⁇ -amino) acetic acid.
  • Step 4 Preparation of (4-benzyloxycarbonylaminobutyl) - [3- (benzyloxycarbonyl - ⁇ [(5S, 5aS, 8aR, 9R) -9- (4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl) benzyl ester 8-oxo-5,5a, 6,8,8a, 9-hexahydrofuro [3 ', 4': 6,7] naphtho [2,3-di] -l-3-dioxol-5-ylcarbamoyl] - methyl-amino) propyl-carbamic acid.
  • reaction medium is stirred for 1 h at room temperature. After addition of water, the medium is extracted with ethyl acetate, the organic phases are separated and washed with a solution of NaHCO 3 , then NaCl. The organic phases are again separated and dried over anhydrous sodium sulphate, filtered and evaporated to obtain 5 g of a white foam.
  • a rapid flash chromatography on silica eluted with a gradient going from pure heptane to heptane / AcOEt (40/60) makes it possible to obtain 4.6 g of product having a purity of 97% and then another fraction of 0.41 g of purity. at 73%. These fractions are pooled and purified by reverse phase preparative HPLC.
  • Step 5 Preparation of 2- [3- (4-aminobutylamino) propylamino] -N- [9- (4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl) -8-oxo-5,5a, 6,8,8a, 9-hexahydrofuro [3 f, 4 ': 6,7] naphtho [2,3-d] [l, 3] dioxol-5-yl] -acetamide, hydrochloride.
  • Step 1 Preparation of ⁇ benzyloxycarbonyl- [3- (benzyloxycarbonyl- ⁇ 4- [benzyloxycarbonyl- (3-benzyloxycarbonylaminopropyl) amino] -butyl ⁇ -amino) -propyl] -amino ⁇ -acetic acid ethyl ester .
  • Step 3 Preparation of ⁇ benzyloxycarbonyl- [3- (benzyloxycarbonyl- ⁇ 4- [benzyloxycarbonyl- (3-benzyloxycarbonylaminopropyl) -amino] -butyl ⁇ -amino) -propyl] -amino ⁇ -acetic acid
  • This intermediate is debenzylated according to the procedure of step 5 of Example 1.
  • Step 1 and 2 Preparation of ⁇ benzyloxycarbonyl- [4- (benzyloxycarbonyl- ⁇ 4- [benzyloxycarbonyl- (4-benzyloxycarbonylaminobutyl) amino] -butyl ⁇ -amino) -butyl] -amino ⁇ ethyl ester -acetic.
  • Step 3 Preparation of ⁇ benzyloxycarbonyl- [4- (benzyloxycarbonyl- ⁇ 4- [benzyloxycarbonyl- (4-benzyloxycarbonylaminobutyl) -amino] -butyl ⁇ -amino) -butyl] -amino ⁇ -acetic acid
  • Step 4 and 5 Preparation of 2- ⁇ 4- [4- (4-aminobutylamino) butylamino] butylamino ⁇ -N- [9- (4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl) -8-oxo-5,5a , 6,8,8a, 9- hexahydrofuro [3 f, 4 f: 6,7] naphtho [2,3-d] [1,3] dioxol-5-yl] -acetamide as hydrochloride.
  • This intermediate is debenzylated according to the procedure of step 5 of Example 1.
  • Step 3 Preparation of (benzyloxycarbonyl- ⁇ 4- [benzyloxycarbonyl- (3-benzyloxycarbonylaminopropyl) -amino] -butyl ⁇ -amino) -acetic acid.
  • Step 4 and 5 Preparation of 2- [4- (3-aminopropylamino) butylamino] -N- [9- (4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl) -8-oxo-5,5a, 6,8, 8a, 9- hexahydrofuro [3 f, 4 f: 6,7] naphtho [2,3-d] [l, 3] dioxol-5-yl] -acetamide as hydrochloride.
  • Step 2 Preparation of ⁇ t-butyloxycarbonyl- [3- (t-butyloxycarbonyl- ⁇ 4 - [* - butyloxycarbonyl- (3 - * - butyloxycarbonylaminopropyl) amino] butyl ⁇ -amino) ethyl ester propylaminoacetic acid.
  • Step 3 Preparation of ⁇ t-Butyloxycarbonyl- [3 - (* - butyloxycarbonyl- ⁇ 4- [f-butyloxycarbonyl- (3 - * - butyloxycarbonylaminopropyl) -amino] -butyl ⁇ -amino) -propyl] -amino acid ⁇ -acetic
  • Step 4 and 5 Preparation of 2- ⁇ 3- [4- (3-aminopropylamino) -butylamino] -propylamino ⁇ -N- [9- (4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl) -8-oxo-5, 5a, 6,8,8a, 9- hexahydrofuro [3 f, 4 f: 6,7] naphtho [2,3-d] [1,3] dioxol-5-yl] -acetamide as hydrochloride.

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Abstract

La présente invention a pour objet un nouveau procédé de préparation des dérivés (poly)aminoalkylaminoacétamide d'épipodophyllotoxine et de leurs sels caractérisé en ce qu'il comprend une étape de couplage peptidique de la 4 amino 4' déméthylépipodophyllotoxine avec un réactif aminé comportant des groupements protecteurs.

Description

NOUVEAU PROCEDE DE PREPARATION DE DERIVES
(POLY)AMINOALKYLAMINOACETAMIDE DΕPIPODOPHYLLOTOXINE, UTILES POUR LEURS APPLICATIONS EN THERAPEUTIQUE COMME
AGENT ANTICANCEREUX
La présente invention a pour objet un nouveau procédé de préparation des dérivés (poly)aminoalkylaminoacétamide d'épipodophyllotoxine de formule 1 et de leurs sels pharmaceutiquement acceptables.
Figure imgf000002_0001
Formule 1 dans laquelle R représente un atome d'hydrogène ou un groupe — (CH2)C — NH2 avec 2 < a,b,c < 5.
Ces composés sont constitués par une partie lignane de type épipodophyllotoxine et d'une partie polyamine greffée sur la position 4 de l' épipodophyllotoxine avec un motif acétamide. La présence de la chaîne polyamine confère à la molécule ses propriétés d'hydrosolubilité particulièrement pour ses chlorhydrates, ainsi que ses propriétés pharmacologiques particulièrement intéressantes dans le traitement des cancers. Ces composés, décrits dans la demande WO 2005/100363, sont donc des composés anticancéreux, particulièrement utiles dans le traitement des tumeurs solides ou non solides tels les mélanomes, les cancers colorectaux , les cancers du poumon, prostate, vessie, sein, utérus, estomac, pancréas, foie, ovaires ainsi que dans le traitement des leucémies, lymphomes et myélomes, les cancers de la sphère ORL et les tumeurs du cerveau. Le procédé de synthèse décrit dans WO 2005/100363, pour préparer les composés de formule 1 utilise comme produit de départ la podophyllotoxine de formule 2 OH
Figure imgf000003_0001
Formule 2 puis la 4'- déméthylépipodophyllotoxine de formule 3
Figure imgf000003_0002
Formule 3 sur laquelle on fait réagir le chloroacétonitrile en milieu acide pour obtenir l'intermédiaire de synthèse 4-chloroacétamido-4'-déméthylépipodophyllotoxine de formule 4
Figure imgf000003_0003
Formule 4 Ce composé est ensuite condensé avec un réactif aminé primaire de formule 5 :
H P P
I I I
H Vf8 VTb ^R'
Formule 5 dans laquelle R' représente un hydrogène ou une chaîne — (CH2)C — NHP, où a, b, c ont les mêmes significations que précédemment et où P représente un groupement protégeant les fonctions aminé. Les groupements protecteurs appropriés peuvent être un radical benzyl, benzyloxycarbonyl ou tert-butyloxycarbonyl. Cette condensation se fait dans un mélange de solvants comprenant un solvant polaire aprotique (acétonitrile, DMF) en présence d'une base de Lewis (triéthy lamine). Cependant ce procédé, outre le fait qu'il comporte un nombre d'étapes élevé et donc un rendement global assez faible, présente deux inconvénients :
D'une part, les conditions utilisées dans le brevet WO 2005/100363 sont propices à l'épimérisation du carbone en position 2 du dérivé de l'épipodophyllotoxine de formule
1, conduisant à une forme cis-lactone, nommée « picro » de formule 7
Figure imgf000004_0001
Formule 7 la purification du produit trans lactone recherché est donc difficile et nécessite des opérations de chromatographies laborieuses et coûteuses.
D'autre part, la méthode décrite ci-dessus fournit également des sous-produits de type bis alkylation, par réaction d'une autre molécule de 4-chloroacétamido-4'- déméthylépipodophyllo toxine sur l'aminé secondaire formée du produit de formule 1 sous forme protégé. L'utilisation d'un excès de réactif aminé primaire de formule 5 est alors nécessaire pour une transformation la plus complète possible des matières premières tout en minimisant l'obtention de produits secondaires, ce qui nécessite une étape difficile de récupération de l'aminé en excès, rendant ce procédé peu économique .
De manière inattendue, la demanderesse a constaté qu'en condensant par couplage peptidique sur la 4-amino-4'-déméthylépipodophyllotoxine de formule 4bis, l' acide polyaminoacétique de formule 6 , dans laquelle R' représente un hydrogène ou une chaîne — (CH2)C — NHP, a, b et c ayant les mêmes valeurs que précédemment et où P représente le groupement protégeant les fonctions aminé, on obtenait un composé de couplage dans un très bon état de pureté en n'utilisant aucun excès de réactif. La réaction se produit avec un bon rendement pour conduire, après déprotection des groupes protecteurs portés par les atomes d'azote, aux composés (poly)aminoalkylaminoacétamide d'épipodophyllotoxine de formule 1, dont les chlorhydrates solubles dans l'eau sont utiles pour leur application comme agents anticancéreux. O P P P
I I I .X^N N Nk
Formule 6
Figure imgf000005_0001
Formule 4bis
La présente invention concerne donc un nouveau procédé de synthèse des composés de formule 1 et de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, à partir de 4-amino-4'- déméthylépipodophyllotoxine de formule 4bis comprenant une étape de couplage peptidique de cette dernière avec un acide acétique substitué de formule 6. De manière préférentielle le procédé s'applique à la préparation de composés de formule 1 sous forme de chlorhydrate.
De manière préférentielle encore, les groupements protecteurs utilisés dans le composé de formule 6 sont les groupements benzyloxycarbonyl ou t-butyloxycarbonyl.
La 4-amino-4'-déméthylépipodophyllotoxine de formule 4 bis est un intermédiaire connu (J Med Chem. 2004, 47, 2365-237 '4, et J Med Chem. 1991, 34, 3346-3350) qui peut être préparé par le procédé de synthèse décrit dans la demande de brevet WO 2007/010007. L'introduction du motif acétique sur la partie polyamine du composé 5 pour obtenir le composé 6 qui sera ensuite condensé sur la 4-amino-4'-déméthylépipodophyllotoxine, de formule 4bis, représente donc une stratégie particulièrement intéressante. Dans les composés de formule 6, le motif acétique est apporté par réaction de la partie aminé primaire de dérivés (poly)aminoalkylamino de formule 5 avec un haloacétate d'alkyle. Préférentiellement, on utilisera le bromo-, chloro- ou iodoacétate d'éthyle. D'autres méthodes d'installation du motif acétique peuvent être utilisées également, comme par exemple une amination réductrice à l'aide d'un dérivé d'acide glyoxylique. L'hydrolyse de la fonction ester en acide peut se faire en milieu basique comme la soude diluée. Les composés de formule 5 sont obtenus de la manière décrite dans la publication : Tet. Lett. 1998, 39,439. Un exemple particulier de l'utilisation de cette synthèse est donné à l'exemple 27 de la demande de brevet WO 2005/100363.
Le couplage peptidique de cet intermédiaire acétique 6 avec la 4-amino-4'- déméthylépipodophyllotoxine de formule 4bis, permet à la fois d'opérer en milieu neutre, donc non épimérisant, et de fournir un produit plus pur ne nécessitant pas le travail chromatographique indispensable à la stratégie telle que décrite dans WO 2005/100363.
La grande diversité des méthodes de couplage peptidique décrites dans la littérature, comme par exemple dans la revue : Tet. 2005, 61, 10827 laisse le choix à l'homme de l'art d'appliquer la plus efficace et celle fournissant le composé le plus pur (telles les méthodes utilisant : DCC, anhydrides mixtes, CDI, BOP et ses dérivés, TBTU ). A titre d'exemple le procédé utilisant l'activation par le TBTU (O-Benzotriazol-l-yl-N,N,N',N'- tetraméthyluronium tétrafluoroborate) (J.O.C. 1996, 61, 2322) présente l'avantage de se conduire à température ordinaire en milieu neutre, d'être rapide, tout en fournissant un composé propre et dont les produits secondaires issus des réactifs sont solubles dans l'eau au cours de l'extraction. Une simple chromatographie classique fournit un composé au stade préfinal de qualité parfaite (pureté > 99%).
Nous décrivons ci-après quelques exemples montrant l'avantage de ce procédé en terme de facilité de mise en œuvre, de pureté d'obtention par traitement extractif et chromatographique.
L'invention concerne plus particulièrement un procédé pour la préparation du composé de formule 1 dans lequel a = 3, b = 4, R = - (CH2)3 - NH2 soit le 2-{3-[4-(3- aminopropylamino)-butylamino] -propylamino } -N- [9-(4-hydroxy-3 ,5 -diméthoxyphényl)- 8-oxo-5, 5a,6, 8, 8a,9-hexahydrofuro[3',4':6,7]naphto[2,3-d][l,3]dioxol-5-yl]-acétamide, chlorhydrate, caractérisé en ce qu'il comprend une étape de couplage peptidique entre la 4-amino-4'-déméthylépipodophyllotoxine et le composé de formule 6 : l'acide {benzyloxycarbonyl-[3-(benzyloxycarbonyl-{4-[benzyloxycarbonyl-(3- benzyloxycarbonylaminopropyl)-amino]-butyl} -amino)-propyl]-amino} -acétique ou l'acide {t-butyloxycarbonyl-[3-(t-butyloxycarbonyl- {4-[t-butyloxycarbonyl-(3-£- butyloxycarbonylaminopropyl)-amino]-butyl} -amino)-propyl]-amino} -acétique, ce qui correspond aux composés de formule 6 dans lequel a = 3, b = 4 et R' = - (CH2)3 - NHP avec P qui est soit le groupement benzyloxycarbonyl soit le groupement t - buty Io xy carb ony 1.
L'invention concerne également un procédé de préparation du composé de formule 1 dans lequel a = 3, b = 4, R = H soit le 2-[3-(4-aminobutylamino)-propylamino]-N-[9-(4- hydroxy-3,5-diméthoxyphényl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro[3',4':6,7]naphto[2,3- d][l,3]dioxol-5-yl]-acétamide, sous forme de chlorhydrate caractérisé en ce qu'il comprend une étape de couplage peptidique entre la 4-amino-4'- déméthylépipodophyllotoxine et le composé de formule 6 : l'acide (benzyloxycarbonyl- {3-[benzyloxycarbonyl-(4-benzyloxycarbonylaminobutyl)-amino]-propyl}- amino)acétique ou l'acide t-butyloxycarbonyl-{3-[t-butyloxycarbonyl-(4-t- butyloxycarbonylaminobutyl)-amino]-propyl}-amino)acétique ce qui correspond aux composés de formule 6 dans lequel a = 3, b = 4, R' = H avec P qui est soit le groupement benzyloxycarbonyl, soit le groupement t-butyloxycarbonyl.
L'invention concerne également un procédé de préparation du composé de formule 1 dans lequel a = 4, b = 4, c = 4 soit le 2-{4-[4-(4-aminobutylamino)-butylamino]- butylamino}-N-[9-(4-hydroxy-3,5-diméthoxyphényl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9- hexahydrofuro[3',4':6,7]naphto[2,3-d][l,3]dioxol-5-yl]-acétamide, chlorhydrate caractérisé en ce qu'il comprend une étape de couplage peptidique entre la 4-amino-4'- déméthylépipodophyllotoxine et le composé de formule 6 : l'acide {benzyloxycarbonyl- [4-(benzyloxycarbonyl-{4-[benzyloxycarbonyl-(4-benzyloxycarbonylaminobutyl)- amino]-butyl}-amino)-butyl]-amino} -acétique ou l'acide {t-butyloxycarbonyl-[4-(t- butyloxycarbonyl-{4-[t-butyloxycarbonyl-(4-t-butyloxycarbonylaminobutyl)-amino]- butyl}-amino)-butyl]-amino} -acétique, ce qui correspond aux composés de formule 6 dans lesquels a = 4, b = 4, c = 4 avec P qui est soit le groupement benzyloxycarbonyl, soit le groupement t-butyloxycarbonyl.
L'invention concerne également un procédé de préparation du composé de formule 1 dans lequel a = 4, b = 3, R = H soit le 2-[4-(3-aminopropylamino)-butylamino]-N-[9-(4- hydroxy-3,5-diméthoxyphényl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro[3',4':6,7]naphto[2,3- d][l,3]dioxol-5-yl]-acétamide, chlorhydrate caractérisé en ce qu'il comprend une étape de couplage peptidique entre la 4-amino-4'-déméthylépipodophyllotoxine et le composé de formule 6 : l'acide (benzyloxycarbonyl-{4-[benzyloxycarbonyl-(3- benzyloxycarbonylaminopropyl)-amino]-butyl}-amino)-acétique ou l'acide (t- butyloxycarbonyl-{4-[t-butyloxycarbonyl-(3-t-butyloxycarbonylaminopropyl)-amino]- butyl}-amino)-acétique, ce qui correspond aux composés de formule 6 dans lesquels a = 4, b = 3, R' = H avec P qui est soit le groupement benzyloxycarbonyl, soit le groupement t-butyloxycarbonyl.
Un autre aspect de l'invention concerne un nouveau procédé de synthèse des composés de formule générale 1 caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) Greffage d'un motif acétique sur les réactifs aminés primaires de formule 5
H P P
I I I
Formule 5 à l'aide d'un haloacétate d'alkyle b) Protection de l'aminé secondaire du composé obtenu à l'étape précédente a) par un groupement protecteur P c) Saponification du composé obtenu à l'étape b) en milieu basique pour obtenir l'acide polyamino acétique de formule 6 d) Couplage peptidique de l'acide polyaminoacétique obtenu à l'étape c) avec la 4-amino-4'-déméthylépipodophyllotoxine de formule 4bis e) Elimination des groupements protecteurs P des composés obtenus à l'étape précédente pour arriver aux composés de formule générale 1.
De manière préférentielle les groupements protecteurs utilisés dans les composés de formule 5 et à l'étape b) sont les groupements benzyloxycarbonyl ou t-butyloxycarbonyl. De manière préférentielle également on utilisera à l'étape a) un haloacétate d'alkyle choisi parmi le bromo, chloro ou iodoacétate d'éthyle.
Le nouveau procédé de synthèse est illustré par le schéma réactionnel suivant : H P P monoalkylation J JJ J J Protection N ,J1 ,J1 ^
Figure imgf000009_0001
dont les différentes étapes sont décrites de façon générale ci-après.
Méthode de préparation des aminés primaires 5
La synthèse des aminés primaires de formules 5 protégées par des groupements protecteurs P (benzyloxycarbonyl (Z) par exemple) sur les atomes d'azote ne devant pas réagir, est décrite dans la demande de brevet WO 2005/100363 . Le groupement benzyloxycarbonyl représente un choix particulier qui n'est pas limitatif. D'autres groupements protecteurs peuvent être utilisés dans le cadre de l'invention. En dehors des groupes benzyloxycarbonyl substitués, de clivage plus facile, il est aussi possible d'utiliser des groupes butyloxycarbonyl dont le clivage en milieu acide est compatible avec la stabilité du composé final de formule 1. En effet, le clivage en fin de synthèse doit être compatible avec les différentes fonctions en place sur la molécule finale. En particulier, les milieux basiques ne sont pas compatibles, puisqu'ils génèrent, comme mentionné plus haut, une épimérisation de l'atome de carbone en position 2, par contre les milieux acides donnant des sous-produits soit volatils, soit facilement séparables ou éliminables peuvent être utilisés. Etape 1 :
Au cours de cette étape, on réalise l'alkylation de l'aminé primaire du composé 5 avec un haloacétate d'alkyle : bromo, chloro ou iodoacétate d'éthyle par exemple , les 2 réactifs étant en quantités stoechiométriques. Etape 2 :
L'aminé secondaire obtenue à l'étape précédente est protégée par le même groupement protecteur P que celui initialement utilisé lors de la synthèse des composés de formule 5, en mettant en jeu les techniques classiques utilisées pour la protection de ce type de fonction aminé. De manière préférentielle on utilisera comme groupement protecteur les groupements benzyloxycarbonyl ou t-butyloxycarbonyl. De cette façon tous les groupements protecteurs identiques se cliveront dans la même étape. Etape 3 :
L'ester obtenu à l'étape précédente est saponifié en milieu basique, par exemple avec de la soude éthanolique, pour obtenir le composé de formule 6.
Synthèse de la 4-amino-4'-déméthylépipodophyllotoxine de formule 4 bis
La 4-amino-4'-déméthylépipodophyllotoxine de formule 4bis est un composé connu et dont le procédé de synthèse est décrit (J Med. Chem. 2004, 47, 2365-2374, et J Med.
Chem. 1991, 34, 3346-3350). Un nouveau procédé de synthèse de ce dérivé, moins dangereux, plus économique et fournissant un dérivé plus pur fait l'objet de la demande de brevet WO 2007/010007.
Etape 4 : Au cours de cette étape, on réalise le couplage peptidique de l'acide polyamino acétique de formule 6, tel que synthétisé précédemment, avec la 4-amino-4'- déméthylépipodophyllotoxine de formule 4bis. Ce couplage se fait en milieu neutre et à température ambiante.
Etape 5 : On élimine les groupements protecteurs P du composé obtenu à l'étape précédente, selon les techniques classiques de déprotection pour aboutir au composé de formule 1.
L'invention concerne plus particulièrement le procédé de préparation d'un composé de formule 1 dans lequel a = 3, b = 4, R= - (CH2)3 - NH2 soit le 2-{3-[4-(3- aminopropylamino)-butylamino] -propylamino } -N- [9-(4-hydroxy-3 ,5 -diméthoxyphenyl)- 8-oxo-5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro[3',4':6,7]naphto[2,3-d][l,3]dioxol-5-yl]-acétamide, sous forme de chlorhydrate, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) Greffage d'un motif acétique sur l'ester benzylique de l'acide {4-[(3- aminopropyl)-benzyloxycarbonylamino]butyl}-(3- benzyloxycarbonylaminopropyl)-carbamique ou la triBOC spermine à l'aide du bromoacétate d'éthyle pour obtenir l'ester éthylique de l'acide[3- (benzyloxycarbonyl-{4-[benzyloxycarbonyl-(3-benzyloxycarbonylaminopropyl)- amino]-butyl}-amino)-propyl]-amino} -acétique ou l'ester éthylique de l'acide 3- (t-butyloxycarbonyl-{4-[t-butyloxycarbonyl-(3-t-butyloxycarbonylaminopropyl)- amino] -butyl} -amino)-propylamino] -acétique b) Protection de l'aminé secondaire du composé obtenu à l'étape précédente a) par un groupement protecteur qui est soit le groupement benzyloxycarbonyl soit le groupement t-butyloxycarbonyl c) Saponification du composé obtenu à l'étape b) en milieu basique pour obtenir soit l'acide {benzyloxycarbonyl-[3-(benzyloxycarbonyl- {4-[benzyloxycarbonyl- (3-benzyloxycarbonylaminopropyl)-amino]-butyl} -amino)-propyl]-amino} - acétique soit l'acide {t-butyloxycarbonyl-[3-(t-butyloxycarbonyl-{4-[t- butyloxycarbonyl-(3-t-butyloxycarbonylaminopropyl)-amino]-butyl}-amino)- propyl] -amino } -acétique d) Couplage peptidique des composés obtenus à l'étape c) avec la 4-amino-4'- déméthylépipodophyllotoxine e) Elimination des groupements protecteurs benzyloxycarbonyl ou t- butyloxycarbonyl des composés obtenus à l'étape d)
L'invention concerne plus particulièrement également le procédé de préparation d'un composé de formule 1 dans lequel a = 3, b = 4, R= H soit le 2-[3-(4-aminobutylamino)- propylamino]-N-[9-(4-hydroxy-3,5-diméthoxyphényl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9 hexahydrofuro [3',4':6,7] naphto [2,3d][l,3]dioxol-5-yl]-acétamide, chlorhydrate caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) Greffage d'un motif acétique sur le composé de formule 5 dans lequel a =3 , b = 4 et R' = H avec P qui est soit le groupement benzyloxycarbonyl, soit le groupement t-butyloxycarbonyl à l'aide du bromoacétate d'éthyle. b) Protection de l'aminé secondaire du composé obtenu à l'étape précédente a) à l'aide du même groupement protecteur que celui utilisé à l'étape a) c) Saponification du composé obtenu à l'étape b) en milieu basique pour obtenir le composé de formule 6 dans lequel a = 3, b = 4 et R' = H, P ayant la même signification qu'aux étapes a) et b) d) Couplage peptidique du composé obtenu à l'étape c) avec la 4-amino-4'- déméthylépipodophyllotoxine e) Elimination des groupements protecteurs benzyloxycarbonyl ou t- butyloxycarbonyl des composés obtenus à l'étape précédente. L'invention concerne plus particulièrement le procédé de préparation d'un composé de formule 1 dans lequel a = 4, b = 4, c = 4 soit le : 2-{4-[4-(4-aminobutylamino)- butylamino]-butylamino}-N-[9-(4-hydroxy-3,5-diméthoxyphényl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9- hexahydrofuro [3',4':6,7] naphto [2,3-d] [l,3]dioxol-5-yl]-acétamide, sous forme de chlorhydrate caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) Greffage d'un motif acétique sur le composé de formule 5 dans lequel a = 4 , b = 4 et c = 4 avec P qui est soit le groupement benzyloxycarbonyl, soit le groupement t-butyloxycarbonyl à l'aide du bromoacétate d'éthyle b) Protection de l'aminé secondaire du composé obtenu à l'étape précédente a) par un groupement protecteur qui est identique à celui utilisé à l'étape a) c) Saponification du composé obtenu à l'étape b) en milieu basique pour obtenir le composé de formule 6 dans lequel a = 4, b = 4 et c = 4, P ayant la même signification qu'aux étapes a) et b) d) Couplage peptidique du composé obtenu à l'étape c) avec la 4-amino-4'- déméthylépipodophyllotoxine e) Elimination des groupements protecteurs benzyloxycarbonyl ou t- butyloxycarbonyl du composé obtenu à l'étape précédente.
L'invention concerne plus particulièrement le procédé de préparation d'un composé de formule 1 dans lequel a = 4, b = 3, R= H soit le 2-[4-(3-aminopropylamino)- butylamino]-N-[9-(4-hydroxy-3,5-diméthoxyphényl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro [3',4':6,7] naphto [2,3-d] [1,3] dioxol-5-yl]-acétamide, chlorhydrate , caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) Greffage d'un motif acétique sur le composé de formule 5 dans lequel a = 4 , b = 3 et R' = H avec P qui est soit le groupement benzyloxycarbonyl, soit le groupement t-butyloxycarbonyl à l'aide du bromoacétate d'éthyle b) Protection de l'aminé secondaire du composé obtenu à l'étape précédente a) par un groupement protecteur qui est identique à celui utilisé à l'étape a) c) Saponification du composé obtenu à l'étape b) en milieu basique pour obtenir le composé de formule 6 dans lequel a = 4, b = 3 et R' = H, P ayant la même signification qu'aux étapes a) et b) d) Couplage peptidique du composé obtenu à l'étape c) avec la 4-amino-4'- déméthylépipodophyllotoxine e) Elimination des groupements protecteurs benzyloxycarbonyl ou t- butyloxycarbonyl du composé obtenu à l'étape précédente
L'invention concerne également un procédé de préparation des intermédiaires de formule générale 6
O P P P
I I I H0 ^ H, R'
Formule 6 caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) Greffage d'un motif acétique sur les aminés primaires de formule 5
Figure imgf000013_0001
Formule 5 à l'aide d'un haloacétate d'alkyle b) Protection de l'aminé secondaire du composé obtenu à l'étape précédente a) par un groupement protecteur P c) Saponification du composé obtenu à l'étape b) en milieu basique pour obtenir l'acide polyamino acétique de formule 6
De manière préférentielle l'haloacétate d'alkyle utilisé à l'étape b) est choisi parmi le bromo, chloro ou iodoacétate d'éthyle.
De manière préférentielle également les groupements protecteurs des composés de formule 5 et ceux utilisés à l'étape b) sont les groupements benzyloxycarbonyl ou t- buty Io xy carb ony 1.
L'invention concerne également plus particulièrement un procédé de préparation de l'intermédiaire de formule 6 dans lequel a = 3, b = 4 et R' = -(CH2)S-NHP avec P qui est un groupement benzyloxycarbonyl ou t-butyloxycarbonyl soit l'acide {benzyloxycarbonyl-[3-(benzyloxycarbonyl-{4-[benzyloxycarbonyl-(3- benzyloxycarbonylaminopropyl)-amino]-butyl} -amino)-propyl]-amino} -acétique soit l'acide {t-butyloxycarbonyl-[3-(t-butyloxycarbonyl-{4-[t-butyloxycarbonyl-(3-t- butyloxycarbonylaminopropyl)-amino] -butyl} -amino)-propyl] -amino } -acétique caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) Greffage d'un motif acétique sur le réactif aminé primaire de formule 5 : l'ester benzylique de l'acide (4-[(3-aminopropyl)- benzyloxycarbonylamino]butyl}-(3-benzyloxycarbonylaminopropyl)-carbamique ou la triBOC spermine, (ce qui correspond aux composés 5 dans lesquels a = 3, b = 4, R' = - (CH2)3 - NHP avec P qui est soit un groupement benzyloxycarbonyl soit un groupement t-butyloxycarbonyl) à l'aide du bromoacétate d'éthyle. b) Protection de l'aminé secondaire du composé obtenu à l'étape précédente a) par un groupement protecteur identique à celui choisi à l'étape précédente. c) Saponification du composé obtenu à l'étape b) en milieu basique
L'invention concerne également plus particulièrement un procédé de préparation de l'intermédiaire de formule 6 dans lequel a = 3, b = 4 et R' = H avec P qui est un groupement benzyloxycarbonyl ou t-butyloxycarbonyl caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) Greffage d'un motif acétique sur le réactif aminé primaire de formule 5 dans lequel a = 3, b = 4, R' = H avec P qui est soit un groupement benzyloxycarbonyl soit un groupement t-butyloxycarbonyl, à l'aide du bromoacétate d'éthyle. b) Protection de l'aminé secondaire du composé obtenu à l'étape précédente a) par un groupement protecteur identique à celui choisi à l'étape précédente. c) Saponification du composé obtenu à l'étape b) en milieu basique
L'invention concerne également un procédé de préparation de l'intermédiaire de formule 6 dans lequel a = 4, b = 4 et c = 4 avec P qui est un groupement benzyloxycarbonyl ou t- butyloxycarbonyl caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) Greffage d'un motif acétique sur le réactifs aminé primaire de formule 5 dans lequel a = 4, b = 4, c = 4 avec P qui est soit un groupement benzyloxycarbonyl soit un groupement t-butyloxycarbonyl, à l'aide du bromoacétate d'éthyle. b) Protection de l'aminé secondaire du composé obtenu à l'étape précédente a) par un groupement protecteur identique à celui choisi à l'étape précédente. c) Saponification du composé obtenu à l'étape b) en milieu basique
L'invention concerne également plus particulièrement un procédé de préparation de l'intermédiaire de formule 6 dans lequel a = 4, b = 3 et R' = H avec P qui est un groupement benzyloxycarbonyl ou t-butyloxycarbonyl caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) Greffage d'un motif acétique sur le réactif aminé primaire de formule 5 dans lequel a = 4, b = 3, R' = H avec P qui est soit un groupement benzyloxycarbonyl soit un groupement t-butyloxycarbonyl, à l'aide du bromoacétate d'éthyle. b) Protection de l'aminé secondaire du composé obtenu à l'étape précédente a) par un groupement protecteur identique à celui choisi à l'étape précédente, c) Saponification du composé obtenu à l'étape b) en milieu basique
L'invention concerne également l'utilisation des composés de formule générale 6 à la préparation des composés de formule générale 1 .
L'invention concerne encore, en tant que produits nouveaux les composés suivants :
• L'acide (benzyloxycarbonyl- {3-[ benzyloxycarbonyl-(4- benzyloxycarbonyl amino-butyl)-amino]-propyl}-amino)-acétique de formule suivante :
Figure imgf000015_0001
• L'acide (benzyloxycarbonyl- {4-[ benzyloxycarbonyl-(3- benzyloxycarbonyl amino-propyl)-amino]-butyl}-amino)-acétique de formule suivante :
Figure imgf000015_0002
• L'acide (tert-butoxycarbonyl-{3-[ tert-butoxycarbonyl-(4- tert-butoxycarbonyl amino-butyl)-amino]-propyl}-amino) acétique de formule suivante :
Figure imgf000016_0001
• L'acide (tert-butoxycarbonyl-{4-[ tert-butoxycarbonyl-(3- tert-butoxycarbonyl amino-propyl)-amino]-butyl}-amino)-acétique de formule suivante :
Figure imgf000016_0002
Les exemples mentionnés ci-dessous servent à illustrer le procédé de l'invention sans toutefois en limiter la portée.
A) Méthode utilisant les groupements benzyloxycarbonyl.
Exemple 1 : Préparation du 2-[3-(4-aminobutylamino)-propylamino]-N-[9-(4- hydroxy-3,5-diméthoxyphényl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9- hexahydrofuro[3f,4f:6,7]naphto[2,3-d][l,3]dioxol-5-yl]-acétamide, sous forme de chlorhydrate, (a = 3, b = 4, R = H)
Figure imgf000016_0003
Etape 1. Préparation de l'ester éthylique de l'acide {3-[benzyloxycarbonyl-(4- benzyloxycarbonylaminobutyl)-amino]-propylamino}-acétique.
Figure imgf000017_0001
A une solution de 6.35 g (15.4 mmol) de l'ester benzylique de l'acide (3-aminopropyl)- (4-benzyloxycarbonylaminobutyl)-carbamique ( Synth. Commun. 2005, 35, 1085) dans 200 mL d'acétonitrile, et de 2.6 mL (1.86 g, 15.4 mmol) de triéthylamine, on introduit sous agitation 1.70 mL (2.56 g, 15.4 mmol) de bromacétate d'éthyle à température ambiante. L'agitation est maintenue 4h. Le milieu réactionnel est versé sur de l'eau et extrait par de l'acétate d'éthyle. Les phases organiques sont décantées, puis séchées sur sulfate de sodium, filtrées et évaporées. On obtient 7.7g d'une huile utilisée directement dans l'étape suivante. Etape 2. Préparation de l'ester éthylique de l'acide (benzyloxycarbonyl-{3- [benzyloxycarbonyl-(4-benzyloxycarbonylaminobutyl)-amino]-propyl}-amino)- acétique.
Figure imgf000017_0002
A une solution de 7.7 g (15.4 mmol) d'ester éthylique de l'acide {3-[benzyloxycarbonyl- (4-benzyloxycarbonylaminobutyl)-amino]-propylamino} -acétique, tel qu'obtenu précédemment, dans 200 mL d'un mélange eau/acétone (1/1) et 1.68 g (20 mmol) de NaHCO3, on introduit sous agitation et goutte à goutte 2.42 mL (17 mmol) de chloroformiate de benzyle. L'agitation est maintenue pendant 2 h. L'acétone est évaporée sous pression réduite puis le milieu est acidifié par HCl IN. Le milieu est ensuite extrait par de l'acétate d'éthyle, les phases organiques séparées et séchées sur sulfate de sodium anhydre, filtrées et évaporées. Le résidu est flash-chromatographié sur colonne de silice, à l'aide d'un gradient d'éluant de l'heptane pur au mélange heptane/AcOEt (60/40). L'évaporation des fractions d'intérêt représente 6 g d'une huile incolore. Rdt = 61%. CCM SiO2, CH2Cl2/MeOH/NH4OH (90/10/1) Rf= 0.9 . Etape 3 : Préparation de l'acide (benzyloxycarbonyl-{3-[benzyloxycarbonyl-(4- benzyloxycarbonylaminobutyl)-amino]-propyl}-amino)acétique.
Figure imgf000018_0001
Une solution de 5.8 g (9.2 mmol) d'ester éthylique de l'acide (benzyloxycarbonyl-{3- [benzyloxycarbonyl-(4-benzyloxycarbonylaminobutyl)-amino]-propyl}-amino)-acétique, tel qu'obtenu à l'étape précédente, dans 100 mL d'éthanol et 13.8 mL (13.7 mmol) d'une solution de soude IN est portée au reflux pendant Ih. Après refroidissement, on ajoute 20 mL d'une solution d'acide chlorhydrique IN et on extrait cette solution acide par du chlorure de méthylène. Les phases organiques sont séparées, séchées sur sulfate de sodium anhydre, filtrées et évaporées. Le résidu est flash-chromatographié sur silice avec un gradient d'éluant de l'heptane pur au chlorure de methylène/MeOH (95/5). On isole alors après évaporation 4.7 g d'une huile claire Rdt = 85%. CCM ; SiO2 ; CH2Cl2/Me0H (90/10) ; Rf= 0.35.
Etape 4 : Préparation de l'ester benzylique de l'acide (4- benzyloxycarbonylaminobutyl)-[3-(benzyloxycarbonyl-{[(5S,5aS,8aR,9R)-9-(4- hydroxy-3,5-diméthoxyphényl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9- hexahydrofuro [3 ' ,4 ' : 6,7] naphto [2,3-</] - 1 ,3-dioxol-5-ylcarbamoyl] -méthyl}-amino)- propyl]-carbamique.
Figure imgf000018_0002
A une suspension de 3.34 g (5.5 mmol) d'acide (benzyloxycarbonyl-{3- [benzyloxycarbonyl-(4-benzyloxycarbonylaminobutyl)-amino]-propyl}-amino)acétique, tel qu'obtenu à l'étape précédente, et 2.4 g (5.5 mmol) du chlorhydrate de la 4-amino-4'- déméthylépipodophyllotoxine dans 100 mL d'acétonitrile, sont ajoutés 1.63 mL (11.6 mmol) de triéthylamine, le milieu se solubilise sous agitation. On ajoute à ce stade 1.77 g (5.5 mmol) de TBTU. Le milieu réactionnel est agité pendant 1 h à température ambiante. Après addition d'eau, le milieu est extrait par de l'acétate d'éthyle, les phases organiques sont séparées et lavées avec une solution de NaHCO3, puis de NaCl. Les phases organiques sont à nouveau séparées et séchées sur sulfate de sodium anhydre, filtrées et évaporées, pour obtenir 5 g d'une mousse blanche. Une flash chromatographie rapide sur silice éluée avec un gradient allant de l'heptane pur à heptane/ AcOEt (40/60) permet d'obtenir 4.6 g de produit ayant une pureté de 97% puis une autre fraction de 0,41 g de pureté à 73%. Ces fractions sont rassemblées et purifiées par HPLC préparative sur phase inverse. Colonne C 18, élution H2O/CH3CN (60/40), puis H2O/CH3CN (40/60). On obtient à ce stade 4.6 g de composé (Rdt = 84.6 %) de pureté 99.8%. CCM : SiO2 CH2Cl2/Me0H (90/10) ; Rf= 0.75.
Etape 5 : Préparation du 2-[3-(4-aminobutylamino)-propylamino]-N-[9-(4-hydroxy- 3,5-diméthoxyphényl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro [3f ,4' : 6,7] naphto [2,3- d][l,3]dioxol-5-yl]-acétamide, chlorhydrate.
L'intermédiaire ester benzylique de l'acide (4-benzyloxycarbonylaminobutyl)-[3- (benzyloxycarbonyl-{[(5S,5aS,8aR,9R)-9-(4-hydroxy-3,5-diméhoxyphenyl)-8-oxo- 5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro[3',4' :6,7]naphto[2,3-J]-l,3-dioxol-5-ylcarbamoyl]- méthyl}-amino)-propyl]-carbamique (4.6 g, 4.7 mmol) tel qu'obtenu à l'étape précédente, est placé sous agitation et atmosphère d'hydrogène dans 200 mL de méthanol, avec 460 mg de charbon palladié à 10% pendant 3 h . On ajoute à ce stade 3 équivalents d'HCl / isopropanol. Après filtration et évaporation du solvant, le résidu est repris dans de l'éthanol absolu puis filtré et rincé avec de l'éther éthylique. 3.1 g de chlorhydrate sont isolés (Rdt = 60%) . MS-ESI m/z 585.2 (MH+). Exemple 2 : Préparation du 2-{3-[4-(3-aminopropylamino)-butylamino]- propylamino}-N-[9-(4-hydroxy-3,5-diméthoxyphenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9- hexahydrofuro [3f,4f:6,7] naphto [2,3-d] [l,3]dioxol-5-yl]-acétamide, sous forme de chlorhydrate . (a = 3, b = 4, c = 3 )
Figure imgf000020_0001
Etape 1. Préparation de l'ester éthylique de l'acide {benzyloxycarbonyl-[3- (benzyloxycarbonyl-{4-[benzyloxycarbonyl-(3-benzyloxycarbonylaminopropyl)- amino] -butyl}-amino)-propyl] -amino}-acétique.
Figure imgf000020_0002
En reprenant le mode opératoire indiqué à l'étape 1 de l'exemple 1, mais en utilisant cette fois l'ester benzylique de l'acide {4-[(3-aminopropyl)-benzyloxycarbonylamino]- butyl}-(3-benzyloxycarbonylaminopropyl)-carbamique, on obtient l' ester éthylique de l'acide [3-(benzyloxycarbonyl- {4-[benzyloxycarbonyl-(3- benzyloxycarbonylaminopropyl)-amino]-butyl}-amino)-propylamino]-acétique sous forme d'huile
(CCM SiO2 CH2Cl2/MeOH/NH4OH (90/9/1) Rf= 0.45.
Etape 2.
Cet intermédiaire est engagé directement dans la transformation suivante. Cette transformation est en tous points analogue à celle décrite dans l'étape 2 de l'exemple 1, mais en utilisant les réactifs correspondants. On obtient ainsi 7 g (Rdt = 96.8 %) d'une huile incolore .
CCM SiO2 Heptane/AcOEt (50/50) Rf = 0.3. Etape 3. Préparation de l'acide {benzyloxycarbonyl-[3-(benzyloxycarbonyl-{4- [benzyloxycarbonyl-(3-benzyloxycarbonylaminopropyl)-amino]-butyl}-amino)- propyl]-amino}-acétique
Figure imgf000021_0001
Selon le même mode opératoire que celui décrit dans l'étape 3 de l'exemple 1, mais en utilisant le composé obtenu à l'étape précédente, on obtient 3.6 g de l'acide correspondant (Rdt = 53%) après flash-chromatographie avec un gradient d'élution de CH2Cl2 pur à CH2Cl2/Me0H (95/5). CCM SiO2, CH2Cl2/Me0H (95/5) Rf = 0.24.
Etape 4 et 5. Préparation du 2-{3-[4-(3-aminopropylamino)-butylamino]- propylamino}-N-[9-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9- hexahydrofuro [3f,4f:6,7] naphto [2,3-d] [l,3]dioxol-5-yl]-acétamide, sous forme de chlorhydrate.
Figure imgf000021_0002
Etape 4 :
De manière identique à l'exemple 1, mais en utilisant l'intermédiaire préparé à l'étape 3 précédente, le couplage avec la 4-amino-4'-déméthylépipodophyllotoxine fournit le composé amide avec un rendement de 53% sous forme d'une mousse blanche. On réalise ensuite une flash-chromatographie rapide sur silice à l'aide d'un gradient d'élution d'heptane à un mélange CH2Cl2/MeOH/NH4OH (90/9/1) puis une HPLC préparative sur phase inverse C 18, élution H2O/CH3CN (60/40), puis H2O/CH3CN (35/65), et finalement une évaporation de l'acétonitrile et une extraction par de l'acétate d'éthyle. CCM : SiO2 CH2Cl2/Me0H (95/05) ; Rf= 0.35. Etape 5 :
Cet intermédiaire est mis à débenzyler selon le mode opératoire de l'étape 5 de l'exemple 1. On obtient alors le chlorhydrate du 2-{3-[4-(3-aminopropylamino)- butylamino]-propylamino}-N-[9-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9- hexahydrofuro[3',4':6,7]naphto[2,3-d][l,3]dioxol-5-yl]-acetamide avec un rendement de 92%.
F = 267°C ; CCM SiO2 CH2Cl2/MeOH/NH4OH (72/25/3) Rf = 0.31 ; SM-ESI m/z = 642.2 (MH+).
Exemple 3 : Préparation du 2-{4-[4-(4-aminobutylamino)-butylamino]- butylamino}-N-[9-(4-hydroxy-3,5-diméthoxyphenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9- hexahydrofuro [3f,4f:6,7] naphto [2,3-d] [l,3]dioxol-5-yl]-acétamide, sous forme de chlorhydrate, (a = 4, b = 4, c = 4 )
Figure imgf000022_0001
Etape 1 et 2. Préparation de l'éthyl ester de l'acide {benzyloxycarbonyl-[4- (benzyloxycarbonyl-{4-[benzyloxycarbonyl-(4-benzyloxycarbonylaminobutyl)- amino]-butyl}-amino)-butyl]-amino}-acétique.
Etape 1:
En utilisant le mode opératoire décrit à l'étape 1 de l'exemple 1, mais en utilisant l'ester benzylique de l'acide (4-aminobutyl)-{4-[benzyloxycarbonyl-(4- benzyloxycarbonylaminobutyl)-amino]-butyl}-carbamique, on obtient l'ester éthylique de l'acide [4-(benzyloxycarbonyl-{4-[benzyloxycarbonyl-(4- benzyloxycarbonylaminobutyl)-amino]-butyl} -amino)-butylamino] -acétique sous forme d'huile CCM SiO2 CH2Cl2/MeOH/NH4OH (90/9/1) Rf = 0.48. Etape 2 :
Cet intermédiaire est engagé directement dans l'étape suivante où l'on procède de manière en tous points analogues à ce qui est décrit dans l'étape 2 de l'exemple 1. On obtient ainsi en utilisant les réactifs correspondants l'ester éthylique de l'acide {benzyloxycarbonyl-[4-(benzyloxycarbonyl-{4-[benzyloxycarbonyl-(4- benzyloxycarbonylaminobutyl)-amino]-butyl} -amino)-butyl]-amino} -acétique avec un rendement de 75% d'une huile incolore . CCM SiO2 CH2Cl2/MeOH/NH4OH (95/4.5/0.5) Rf = 0.35.
Etape 3. Préparation de l'acide {benzyloxycarbonyl-[4-(benzyloxycarbonyl-{4- [benzyloxycarbonyl-(4-benzyloxycarbonylaminobutyl)-amino]-butyl}-amino)- butyl] -amino}-acétique
Figure imgf000023_0001
Selon le mode opératoire tel que décrit dans l'étape 3 de l'exemple 1, mais en utilisant le composé obtenu précédemment, on obtient l'acide correspondant avec un rendement de 88% après flash-chromatographie avec un gradient d'élution de CH2Cl2 pur à CH2Cl2/Me0H (90/10).
CCM SiO2, CH2Cl2/Me0H (90/0) Rf = 0.53.
Etape 4 et 5 Préparation du 2-{4-[4-(4-aminobutylamino)-butylamino]- butylamino}-N-[9-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9- hexahydrofuro [3f,4f:6,7] naphto [2,3-d] [1,3] dioxol-5-yl]-acétamide, sous forme de chlorhydrate.
Etape 4 :
De façon identique à l'étape 4 de l'exemple 1, mais en utilisant l'intermédiaire préparé à l'étape précédente, son couplage avec la 4-amino-4'-déméthylépipodophyllotoxine fournit le composé amide avec un rendement de 62% sous forme d'une mousse blanche. Après flash-chromatographie rapide sur silice à l'aide d'un gradient de CH2Cl2 à un mélange CH2Cl2ZMeOH (95/5) puis HPLC préparative sur phase inverse C 18, élution H2O/CH3CN (60/40), puis H2O/CH3CN (30/70), suivies d'une évaporation de l'acétonitrile et d'une extraction par de l'acétate d'éthyle. CCM : SiO2 CH2Cl2/MeOH/NH4OH (95/4.5/0.5) ; Rf = 0.24, pour obtenir l'intermédiaire utilisé directement dans l'étape suivante. Etape 5 :
Cet intermédiaire est mis à débenzyler selon le mode opératoire de l'étape 5 de l'exemple 1. On obtient alors le chlorhydrate du 2-{4-[4-(4-aminobutylamino)- butylamino]-butylamino}-N-[9-(4-hydroxy-3,5-diméthoxyphényl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9- hexahydrofuro [3',4':6,7] naphto [2,3-d] [l,3]dioxol-5-yl]-acétamide avec un rendement de 78%. F = 263°C ; SM-DCI/CH4 m/z = 670.5 (MH+).
Exemple 4 : Préparation du 2-[4-(3-aminopropylamino)-butylamino]-N-[9-(4- hydroxy-3,5-diméthoxyphényl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9- hexahydrofuro[3f,4f:6,7]naphto[2,3-d][l,3]dioxol-5-yl]-acétamide, sous forme de chlorhydrate. ( a = 4, b = 3, R = H )
Figure imgf000024_0001
Etape 1 et 2. Préparation de l'ester éthylique de l'acide benzyloxycarbonyl-{4-
[benzyloxycarbonyl-(3-benzyloxycarbonylaminopropyl)-amino]-butyl}-amino)- acétique.
Figure imgf000024_0002
Etape 1:
En utilisant le mode opératoire indiqué à l'étape 1 de l'exemple 1, mais en utilisant l'ester benzylique de l'acide {3-[(4-aminobutyl)-benzyloxycarbonylamino]-propyl}- carbamique, on obtient l'ester éthylique de l'acide {4-[benzyloxycarbonyl-(3- benzyloxycarbonylaminopropyl)-amino]-butylamino} -acétique sous forme d'huile.
CCM SiO2 CH2Cl2/MeOH/NH4OH (95/4.5/0.5) Rf= 0.28, SM-ESI m/z = 500.3 (MH+).
Etape 2 :
L' intermédiaire précédemment obtenu est engagé directement dans la transformation suivante en tous points analogue à celle décrite dans l'étape 2 de l'exemple 1. On obtient ainsi l'ester éthylique de l'acide benzyloxycarbonyl-{4-[benzyloxycarbonyl-(3- benzyloxycarbonylaminopropyl)-amino]-butyl}-amino)-acétique sous forme d'une huile incolore.
(CCM SiO2 CH2Cl2/MeOH/NH4OH (95/4.5/0.5) Rf = 0.39. SM-APCI m/z = 634.3 (MH+)
Etape 3. Préparation de l'acide (benzyloxycarbonyl-{4-[benzyloxycarbonyl-(3- benzyloxycarbonylaminopropyl)-amino] -butyl}-amino)-acétique .
Figure imgf000025_0001
Selon le même mode opératoire que celui décrit dans l'étape 3 de l'exemple 1, mais en utilisant le composé obtenu à l'étape précédente, on obtient par extraction acide, l'acide correspondant avec un rendement de 86% CCM SiO2, CH2Cl2/Me0H (90/10) Rf= 0.48.
Etape 4 et 5 : Préparation du 2-[4-(3-aminopropylamino)-butylamino]-N-[9-(4- hydroxy-3,5-diméthoxyphényl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9- hexahydrofuro[3f,4f:6,7]naphto[2,3-d][l,3]dioxol-5-yl]-acétamide, sous forme de chlorhydrate.
Figure imgf000025_0002
Etape 4 :
De façon identique à l'étape 4 de l'exemple 1, mais en utilisant l'intermédiaire préparé à l'étape précédente, son couplage avec la 4-amino-4'-déméthylépipodophyllotoxine fournit le composé amide avec un rendement de 48% sous forme d'une mousse blanche. Après flash-chromatographie rapide sur silice à l'aide d'un gradient allant de l'heptane à 1' AcOEt. puis HPLC préparative sur phase inverse C 18, élution H2CVCH3CN (60/40), puis H2O/CH3CN (35/65), et finalement évaporation de l'acétonitrile et extraction par de l'acétate d'éthyle. CCM : SiO2 CH2Cl2/MeOH/NH4OH (95/4.5/0.5) ; Rf= 0.30 Etape 5 : L'intermédiaire obtenu est mis à débenzyler selon le mode opératoire de l'étape 5 de l'exemple 1. On obtient alors le 2-[4-(3-aminopropylamino)-butylamino]-N-[9-(4- hydroxy-3,5-diméthoxyphényl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro[3',4':6,7]naphto[2,3- d][l,3]dioxol-5-yl]-acétamide,chlorhydrate avec un rendement de 79%. F = 197°C ; SM-ESI m/z = 585.3 (MH+).
B) Méthode utilisant les groupements ^-butyloxycarbonyl.
Exemple 5 : Préparation du 2-{3-[4-(3-aminopropylamino)-butylamino]- propylamino}-N-[9-(4-hydroxy-3,5-diméthoxyphenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9- hexahydrofuro [3f,4f:6,7 ]naphto [2,3-d] [1,3] dioxol-5-yl]-acétamide, sous forme de chlorhydrate . (a = 3, b = 4, c = 3) Etape 1. Préparation de l'ester éthylique de l'acide 3-(*-butyloxycarbonyl-{4-[f- butyloxycarbonyl-(3-*-butyloxycarbonylaminopropyl)-amino]-butyl}-amino)- propylamino] -acétique.
Figure imgf000026_0001
A une solution de 5.11 g triBOC spermine {Jet. Let. 1998, 39, 439) (10 mmol, 1 eq) dans 120 mL d'acétonitrile, sont ajoutés 1.7 mL de triéthylamine (12 mmol, 1.2 eq). On introduit alors, rapidement sous agitation 1.13 mL de bromoacétate d'éthyle (10 mmol, 1 eq) à cette solution. Après 1 h d'agitation à température ordinaire, on jette le milieu réactionnel dans l'eau saturée de NaCl (300 mL) et on extrait par de l'acétate d'éthyle (2x200mL). Après séchage des phases organiques, filtration et évaporation, on purifie le résidu obtenu par flash chromatographie sur SiO2 (élution avec gradient à partir de l'heptane pur au CH2Cl2 pur, puis avec CH2Cl2/ MeOH - 90/10) . On obtient 3.35 g d'une huile incolore (Rdt = 56%) CCM Rf= 0.57 (CH2Cl2/Me0H - 90/10) .
Etape 2. Préparation de l'éthyl ester de l'acide {*-butyloxycarbonyl-[3-(f- butyloxycarbonyl-{4-[*-butyloxycarbonyl-(3-*-butyloxycarbonylaminopropyl)- amino] -butyl}-amino)-propyl] -amino}-acétique.
Figure imgf000027_0001
A une solution à température ambiante de 3.35 g de l'intermédiaire obtenu à l'étape 1 précédente (5.7 mmol, 1 eq) dans 60 mL de THF, on ajoute 1 mL de triéthylamine (6.8 mmol, 1.2 eq), puis sous agitation, une solution de 1.36 g de BOC2O (6.2 mmol, 1.1 eq), et on laisse agiter pendant 2h. Le milieu réactionnel est alors jeté dans l'eau (300 mL), et extrait par l'acétate d'éthyle (3x200mL). Les phases organiques une fois séchées sur sulfate de sodium, et filtrées, sont évaporées puis flash chromatographiées sur SiO2 (élution par gradient de l'heptane pur à l'acétate d'éthyle pur), pour fournir 2.52 g d'une huile incolore. Rdt = 64% CCM Rf= 0.43 (SiO2 Heptane/AcOEt - 50/50) .
Etape 3. Préparation de l'acide {*-butyloxycarbonyl-[3-(*-butyloxycarbonyl-{4-[f- butyloxycarbonyl-(3-*-butyloxycarbonylaminopropyl)-amino]-butyl}-amino)- propyl]-amino}-acétique
Figure imgf000027_0002
L'ester intermédiaire obtenu à l'étape 2 (2.52 g, 3.6 mmol, 1 eq) est chauffé à reflux sous agitation dans 50 mL d'un mélange EtOH/H2O et 5.5 mL d'une solution de soude IN, pendant 3h. On jette dans l'eau glacée (30OmL) et on acidifie avec HCl IN (5.6 mL). Après extraction par du CH2Cl2, séchage sur Na2SO4 , filtration et évaporation, on purifie sur flash chromatographie de SiO2 (élution gradient d'heptane pur à CH2Cl2 pur puis à CH2Cl2/Me0H - 90/10). On obtient alors 2.27 g de l'acide tetraBOC spermine acétique sous forme d'une huile incolore. Rdt = 94%. CCM Rf 0.4 (SiO2 CH2Cl2/Me0H - 90/10). (lit. Tet.Let. 1997, 35, 3219).
Etape 4 et 5 : Préparation du 2-{3-[4-(3-aminopropylamino)-butylamino]- propylamino}-N-[9-(4-hydroxy-3,5-diméthoxyphényl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9- hexahydrofuro [3f,4f:6,7] naphto [2,3-d] [1,3] dioxol-5-yl]-acétamide, sous forme de chlorhydrate.
Etape 4:
A une solution sous agitation de 670 mg de 4-amino-4'-déméthylépipodophyllotoxine (1.54 mmol, 1 eq) et de 1.02 g de l'intermédiaire obtenu à l'étape 3 (1.54 mmol, 1 eq) dans 100 mL d'acétonitrile, à température ambiante, on ajoute 0.45 mL de triéthylamine (3.28 mmol, 2 eq). On observe un dissolution totale. On ajoute alors 0.5 g de TBTU (1.54 mmol, 1 eq) et on laisse l'agitation pendant 2h. Le milieu réactionnel est alors jeté dans 300 mL d'eau et extrait par l'acétate d'éthyle (3x100 mL) . Après séchage des phases organiques sur Na2SO4, filtration et évaporation, le résidu est flash chromatographie sur SiO2 (élution par gradient de l'heptane pur à 1 'AcOEt). Le composé obtenu avec une pureté de 92% est à nouveau chromatographie par HPLC préparative (C 18, Sunfire OBD, lOμ) et élue par CH3CN/H2O - 50/50 à CH3CN/H2O - 65/35. La phase aqueuse obtenue est réextraite par l'acétate d'éthyle, séchée, évaporée pour fournir 800 mg d'une huile incolore, engagée directement au stade suivant. Rdt = 50% . CCM SiO2 Rf 0.4 (CH2Cl2/MeOH/NH4OH - 90/9/1).
Etape 5 :
A une solution de 800 mg du composé obtenu précédemment (0.77 mmol, leq) dans 20 mL d'EtOH, on ajoute sous agitation 20 mL d'une solution d'isopropanol saturé de HCl. L'agitation est maintenue pendant 5 h. Le milieu est évaporé sous vide et repris sous agitation par 10 mL d'EtOH absolu. On obtient un précipité qui est filtré et séché sous vide. (500 mg). Une purification par HPLC préparative (C 18, Sunfire, OBD, lOμ) éluée par CH3CN/H2O/ AcONH4 1.54 g/L, AcOH 2 mL/L, permet d'obtenir un composé pur, dont la solution est lyophilisée. Le lyophilisât est repris par 10 mL de MeOH, puis acidifié jusqu'à pH 3 par une solution d'isopropanol HCl. La solution du chlorhydrate obtenue est évaporée puis reprise par EtOH absolu. On obtient 190 mg (Rdt = 32 %) de 2-{3-[4-(3-aminopropylamino)-butylamino]-propylamino}-N-[9-(4-hydroxy-3,5- diméthoxyphényl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro[3',4':6,7]naphto[2,3-d][l,3]dioxol- 5-yl]-acétamide, sous forme de chlorhydrate.

Claims

REVENDICATIONS
1. Procédé de préparation des dérivés (poly)aminoalkylaminoacétamide d'épipodophyllotoxine de formule générale 1, et de leurs sels pharmaceutiquement acceptables
Figure imgf000030_0001
Formule 1 dans laquelle R représente un atome d'hydrogène ou un groupe -(CH2)C-NH2 avec 2 < a,b,c < 5, caractérisé en ce qu'il comprend une étape de couplage peptidique de la 4-amino-4'-déméthylepipodophyllotoxine de formule 4bis
Figure imgf000030_0002
Formule 4bis avec des composés de formule 6,
O P P P
JL /N^, ^NN, ^N^ HO ^ VT3 Mb R' Formule 6 dans lesquels P représente un groupement protecteur de la fonction aminé, R' représente H ou une chaîne -(CH2)C-NHP avec 2 ^c < 5.
2. Procédé selon la revendication 1 caractérisé en ce que les groupements protecteurs de la fonction aminé sont les groupements benzyloxycarbonyl ou t- buty Io xy carb ony 1.
3. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que le composé de formule 1 est sous forme de chlorhydrate.
4. Procédé de préparation du 2-{3-[4-(3-aminopropylamino)-butylamino]- propylamino}-N-[9-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9- hexahydrofuro [3',4':6,7] naphto [2,3-d] [1,3] dioxol-5-yl]-acétamide, sous forme de chlorhydrate, selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 caractérisé en ce qu'il comprend une étape de couplage peptidique entre la 4-amino-4'- déméthylépipodophyllotoxine et l'acide {benzyloxycarbonyl-[3-
(benzyloxycarbonyl-{4-[benzyloxycarbonyl-(3-benzyloxycarbonylaminopropyl)- amino]-butyl}-amino)-propyl]-amino} -acétique ou l'acide 3-(t-butyloxycarbonyl-
{4-[t-butyloxycarbonyl-(3-t-butyloxycarbonylaminopropyl)-amino]-butyl}-amino)- propylamino]-acétique.
5. Procédé de préparation du 2-[3-(4-aminobutylamino)-propylamino]-N-[9-(4- hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9- hexahydrofuro[3',4':6,7]naphto[2,3-d][l,3]dioxol-5-yl]-acetamide, chlorhydrate selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 caractérisé en ce qu'il comprend une étape de couplage peptidique entre la 4-amino-4'-déméthylépipodophyllotoxine et l'acide (benzyloxycarbonyl-{3-[benzyloxycarbonyl-(4- benzyloxycarbonylaminobutyl)-amino]-propyl}-amino)acétique ou l'acide (t- butyloxycarbonyl-{3-[t-butyloxycarbonyl-(4-t-butyloxycarbonylaminobutyl)- amino]-propyl}-amino) acétique.
6. Procédé de préparation du 2-{4-[4-(4-aminobutylamino)-butylamino]-butylamino}- N-[9-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro
[3',4':6,7] naphto [2,3-d] [1,3] dioxol-5-yl]-acétamide, tétrachlorhydrate selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 caractérisé en ce qu'il comprend une étape de couplage peptidique entre la 4-amino-4'-déméthylépipodophyllotoxine et l'acide {benzyloxycarbonyl-[4-(benzyloxycarbonyl-{4-[benzyloxycarbonyl-(4- benzyloxycarbonylaminobutyl)-amino]-butyl} -amino)-butyl]-amino} -acétique ou l'acide {t-butyloxycarbonyl-[4-(t-butyloxycarbonyl-{4-[t-butyloxycarbonyl-(4-t- butyloxycarbonylaminobutyl)-amino]-butyl}-amino)-butyl]-amino} -acétique.
7. Procédé de préparation du 2-[4-(3-aminopropylammo)-butylammo]-N-[9-(4- hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9- hexahydrofuro[3',4':6,7]naphto[2,3-d][l,3]dioxol-5-yl]-acétamide, chlorhydrate selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 caractérisé en ce qu'il comprend une étape de couplage peptidique entre la 4-amino-4'-déméthylépipodophyllotoxine et l'acide (benzyloxycarbonyl-{4-[benzyloxycarbonyl-(3- benzyloxycarbonylaminopropyl)-amino]-butyl}-amino)-acétique ou l'acide (t- butyloxycarbonyl-{4-[t-butyloxycarbonyl-(3-t-butyloxycarbonylaminopropyl)- amino]-butyl} -amino)-acétique.
8. Procédé de préparation des dérivés de formule générale 1 selon les revendications 1 à 3 caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) Greffage d'un motif acétique sur les réactifs aminés primaires de formule 5
H P P
I I I
Formule 5 à l'aide d'un haloacétate d'alkyle b) Protection de l'aminé secondaire du composé obtenu à l'étape précédente a) par un groupement protecteur P c) Saponification du composé obtenu à l'étape b) en milieu basique pour obtenir l'acide polyamino acétique de formule 6 d) Couplage peptidique de l'acide polyaminoacétique de formule 6 obtenu à l'étape c) avec la 4-amino-4'-déméthylépipodophyllotoxine e) Elimination des groupements protecteurs P des composés obtenus à l'étape précédente pour arriver aux composés de formule générale 1.
9. Procédé selon la revendication 8 caractérisé en ce que les groupements protecteurs P utilisés sont les groupements benzyloxycarbonyl ou t-butyloxycarbonyl.
10. Procédé selon l'une quelconque des revendications 8 ou 9 caractérisé en ce que l'haloacétate d'alkyle utilisé à l'étape a) est un bromo, chloro ou iodoacétate d'éthyle.
11. Procédé de préparation du 2-{3-[4-(3-aminopropylamino)-butylamino]- propylamino}-N-[9-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9- hexahydrofuro [3',4':6,7] naphto [2,3-d] [1,3] dioxol-5-yl]-acétamide, sous forme de chlorhydrate selon les revendications 8 à 10 caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) Greffage d'un motif acétique sur l' ester benzylique de l'acide {4-[(3- aminopropyl)-benzyloxycarbonylamino]butyl} -(3- benzyloxycarbonylaminopropyl)-carbamique ou la triBOC spermine à l'aide du bromoacétate d'éthyle pour obtenir l'ester éthylique de l'acide [3-(benzyloxycarbonyl-{4-[benzyloxycarbonyl-(3- benzyloxycarbonylaminopropyl)-amino] -butyl} -amino)-propyl] -amino } - acétique ou l' ester éthylique de l'acide 3-(t-butyloxycarbonyl-{4-[t- butyloxycarbonyl-(3-t-butyloxycarbonylaminopropyl)-amino]-butyl}- amino)-propylamino] -acétique b) Protection de l'aminé secondaire du composé obtenu à l'étape précédente a) par un groupement protecteur qui est soit le groupement benzyloxycarbonyl soit le groupement t-butyloxycarbonyl c) Saponification du composé obtenu à l'étape b) en milieu basique pour obtenir soit l'acide {benzyloxycarbonyl-[3-(benzyloxycarbonyl-{4- [benzyloxycarbonyl-(3-benzyloxycarbonylaminopropyl)-amino]-butyl}- amino)-propyl] -amino} -acétique soit l'acide {t-butyloxycarbonyl-[3-(t- butyloxycarbonyl- {4-[t-butyloxycarbonyl-(3-t- butyloxycarbonylaminopropyl)-amino] -butyl} -amino)-propyl] -amino } - acétique d) Couplage peptidique des composés obtenus à l'étape c) avec la A- amino-4'-déméthylépipodophyllotoxine e) Elimination des groupements protecteurs benzyloxycarbonyl ou t- butyloxycarbonyl des composés obtenus à l'étape précédente .
12. Procédé de préparation du le 2-[3-(4-aminobutylamino)-propylamino]-N-[9-(4- hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9 hexahydrofuro [3',4':6,7] naphto [2,3d] [1,3] dioxol-5-yl]-acétamide, sous forme de chlorhydrate selon l'une quelconque des revendications 8 à 10 caractérisé en ce que les composés de formule 5 et 6 utilisés aux étapes a) et c) sont ceux pour lesquels a = 3, b = 4 et R' = H.
13. Procédé de préparation du 2-{4-[4-(4-aminobutylamino)-butylamino]-butylamino}- N-[9-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro [3',4':6,7] naphto [2,3-d] [1,3] dioxol-5-yl]-acétamide, sous forme de chlorhydrate selon l'une quelconque des revendications 8 à 10 caractérisé en ce que les composés de formule 5 et 6 utilisés aux étapes a) et c) sont ceux pour lesquels a = 4, b = 4 et c = 4.
14. Procédé de préparation du 2-[4-(3-aminopropylamino)-butylamino]-N-[9-(4- hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9- hexahydrofuro[3',4':6,7]naphto[2,3-d][l,3]dioxol-5-yl]-acétamide, sous forme de chlorhydrate selon l'une quelconque des revendications 8 à 10 caractérisé en ce que les composés de formule 5 et 6 utilisés aux étapes a) et c) sont ceux pour lesquels a = 4, b = 3 et R' = H.
15. Procédé de préparation des composés de formule 6 caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes :
Figure imgf000034_0001
Formule 6 a) Greffage d'un motif acétique sur les réactifs aminés primaires de formule 5
H P P
I I I
Formule 5 à l'aide d'un haloacétate d'alkyle b) Protection de l'aminé secondaire du composé obtenu à l'étape précédente a) par un groupement protecteur P c) Saponification du composé obtenu à l'étape b) en milieu basique pour obtenir l'acide polyamino acétique de formule 6.
16. Procédé de préparation des composés de formule 6 selon la revendication 15 caractérisé en ce que les groupements protecteurs P sont les groupements benzyloxycarbonyl ou t-butyloxycarbonyl.
17. Procédé de préparation des composés de formule générale 6 selon l'une quelconque des revendications 15 ou 16 caractérisé en ce que l' haloacétate d'alkyl utilisé à l'étape a) est un bromo, chloro ou iodoacétate d'éthyl.
18. Procédé de préparation des composés de formule générale 6 : l'acide {benzyloxycarbonyl-[3-(benzyloxycarbonyl-{4-[benzyloxycarbonyl-(3- benzyloxycarbonylaminopropyl)-amino]-butyl} -amino)-propyl]-amino} -acétique ou l'acide {t-butyloxycarbonyl-[3-(t-butyloxycarbonyl- {4-[t-butyloxycarbonyl-(3-t- butyloxycarbonylaminopropyl)-amino]-butyl} -amino)-propyl]-amino} -acétique selon les revendications 15 à 17 caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) Greffage d'un motif acétique sur le réactifs aminé primaire de formule 5 dans lequel a = 3, b = 4, R' = - (CH2^ - NHP avec P qui est soit un groupement benzyloxycarbonyl soit un groupement t-butyloxycarbonyl à l'aide du bromoacétate d'éthyle. b) Protection de l'aminé secondaire du composé obtenu à l'étape précédente a) par un groupement protecteur analogue à celui choisi à l'étape a) c) Saponification du composé obtenu à l'étape b).
19. Procédé de préparation du composé de formule 6 dans laquelle a = 3, b = 4 et
R' = H selon l'une quelconque des revendication 15 à 17, caractérisé en ce que le composé de formule 5 utilisé à l'étape a) est celui pour lequel a = 3, b = 4 et R' = H.
20. Procédé de préparation du composé de formule 6 dans laquelle a = 4, b = 4 et c = 4 selon l'une quelconque des revendication 15 à 17, caractérisé en ce que le composé de formule 5 utilisé à l'étape a) est celui pour lequel a = 4, b = 4 et c = 4.
21. Procédé de préparation du composé de formule 6 dans laquelle a = 4, b = 3 et
R' = H selon l'une quelconque des revendication 15 à 17, caractérisé en ce que le composé de formule 5 utilisé à l'étape a) est celui pour lequel a = 4, b = 3 et R' = H.
22. Utilisation des composés de formule générale 6, tels que préparés selon les revendications 15 à 21 pour la préparation des composés de formule générale 1 selon la revendication 1.
23. L'acide (benzyloxycarbonyl-{3-[ benzyloxycarbonyl-(4- benzyloxycarbonyl amino- butyl)-amino]-propyl}-amino)-acétique de formule suivante :
Figure imgf000036_0001
24. L'acide (benzyloxycarbonyl- {4-[ benzyloxycarbonyl-(3- benzyloxycarbonyl amino- propyl)-amino]-butyl}-amino)-acétique de formule suivante :
Figure imgf000036_0002
Figure imgf000036_0003
25. L'acide (tert-butoxycarbonyl-{3-[ tert-butoxycarbonyl-(4- tert-butoxycarbonyl amino-butyl)-amino]-propyl}-amino) acétique de formule suivante :
Figure imgf000036_0004
26. L'acide (tert-butoxycarbonyl-{4-[ tert-butoxycarbonyl-(3- tert-butoxycarbonyl amino-propyl)-amino]-butyl}-amino)-acétique de formule suivante :
Figure imgf000037_0001
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