FR2921369A1 - Nouveau procede de preparation de derives (poly) aminoalkylaminoacetamide d'epipodophyllotoxine,utiles pour leurs applications en therapeutique comme agent anticancereux. - Google Patents

Nouveau procede de preparation de derives (poly) aminoalkylaminoacetamide d'epipodophyllotoxine,utiles pour leurs applications en therapeutique comme agent anticancereux. Download PDF

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Abstract

La présente invention a pour objet un nouveau procédé de préparation des dérivés (poly)aminoalkylaminoacétamide d'épipodophyllotoxine de formule 1 et de leurs sels. dans laquelle R représente un atome d'hydrogène ou un groupe -(CH2)c-NH2avec 2 <= a,b,c <= 5 caractérisé en ce qu'il comprend une étape de couplage peptidique de la 4-amino-4'-déméthylepipodophyllotoxine de formule 4bis avec des composés de formule 6, dans lesquels P représente un groupement protecteur de la fonction amine, R' représente H ou une chaîne -(CH2)c-NHP avec 2 < C < 5.

Description

-1- La présente invention a pour objet un nouveau procédé de préparation des dérivés (poly)aminoalkylaminoacétamide d'épipodophyllotoxine de formule 1 et de leurs sels pharmaceutiquement acceptables. OH Formule 1 dans laquelle R représente un atome d'hydrogène ou un groupe ù(CH2)c NH2 avec 2 < a,b,c < 5. Ces composés sont constitués par une partie lignane de type épipodophyllotoxine et d'une partie polyamine greffée sur la position 4 de l'épipodophyllotoxine avec un motif acétamide. La présence de la chaîne polyamine confère à la molécule ses propriétés d'hydrosolubilité particulièrement pour ses chlorhydrates, ainsi que ses propriétés pharmacologiques particulièrement intéressantes dans le traitement des cancers. Ces composés, décrits dans la demande WO 2005/100363, sont donc des composés anticancéreux, particulièrement utiles dans le traitement des tumeurs solides ou non solides tels les mélanomes, les cancers colorectaux , les cancers du poumon, prostate, vessie, sein, utérus, estomac, pancréas, foie, ovaires ainsi que dans le traitement des leucémies, lymphomes et myélomes, les cancers de la sphère ORL et les tumeurs du cerveau. Le procédé de synthèse décrit dans WO 2005/100363, pour préparer les composés de 25 formule 1 utilise comme produit de départ la podophyllotoxine de formule 2 OH OMe Formule 2
-2- puis la 4'- déméthylépipodophyllotoxine de formule 3 OH OH
Formule 3 sur laquelle on fait réagir le chloroacétonitrile en milieu acide pour obtenir 10 l'intermédiaire de synthèse 4-chloroacétamido-4'-déméthylépipodophyllotoxine de formule 4 ci N OH Formule 4 Ce composé est ensuite condensé avec un réactif aminé primaire de formule 5 : H P P I I I ,NNN, H R' Formule 5 dans laquelle R' représente un hydrogène ou une chaîne -(CH2), NHP, où a, b, c ont les mêmes significations que précédemment et où P représente un groupement protégeant les fonctions amine. Les groupements protecteurs appropriés peuvent être un 20 radical benzyl, benzyloxycarbonyl ou tert-butyloxycarbonyl. Cette condensation se fait dans un mélange de solvants comprenant un solvant polaire aprotique (acétonitrile, DMF) en présence d'une base de Lewis (triéthylamine). Cependant ce procédé, outre le fait qu'il comporte un nombre d'étapes élevé et donc un rendement global assez faible, présente deux inconvénients : 25 D'une part, les conditions utilisées dans le brevet WO 2005/100363 sont propices à l'épimérisation du carbone en position 2 du dérivé de l'épipodophyllotoxine de formule 1, conduisant à une forme cis-lactone, nommée picro de formule 7 15 -3 OH Formule 7 la purification du produit trans lactone recherché est donc difficile et nécessite des opérations de chromatographies laborieuses et coûteuses. D'autre part, la méthode décrite ci-dessus fournit également des sous-produits de type bis alkylation, par réaction d'une autre molécule de 4-chloroacétamido-4'-déméthylépipodophyllotoxine sur l'amine secondaire formée du produit de formule 1 sous forme protégé. L'utilisation d'un excès de réactif aminé primaire de formule 5 est alors nécessaire pour une transformation la plus complète possible des matières premières tout en minimisant l'obtention de produits secondaires, ce qui nécessite une étape difficile de récupération de l'amine en excès, rendant ce procédé peu économique . De manière inattendue, la demanderesse a constaté qu'en condensant par couplage peptidique sur la 4-amino-4'-déméthylépipodophyllotoxine de formule 4bis, 1' acide polyaminoacétique de formule 6 , dans laquelle R' représente un hydrogène ou une chaîne ù(CH2)ù NHP, a, b et c ayant les mêmes valeurs que précédemment et où P représente le groupement protégeant les fonctions amine, on obtenait un composé de couplage dans un très bon état de pureté en n'utilisant aucun excès de réactif. La réaction se produit avec un bon rendement pour conduire, après déprotection des groupes protecteurs portés par les atomes d'azote, aux composés (poly)aminoalkylaminoacétamide d'épipodophyllotoxine de formule 1, dont les chlorhydrates solubles dans l'eau sont utiles pour leur application comme agents anticancéreux. P P P I I I N'M'a N N HO 'R' Formule 630 -4- OH Formule 4bis
La présente invention concerne donc un nouveau procédé de synthèse des composés de formule 1 et de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, à partir de 4-amino-4'-déméthylépipodophyllotoxine de formule 4bis comprenant une étape de couplage peptidique de cette dernière avec un acide acétique substitué de formule 6. De manière préférentielle le procédé s'applique à la préparation de composés de formule 1 sous forme de chlorhydrate.
De manière préférentielle encore, les groupements protecteurs utilisés dans le composé de formule 6 sont les groupements benzyloxycarbonyl ou t-butyloxycarbonyl.
La 4-amino-4'-déméthylépipodophyllotoxine de formule 4 bis est un intermédiaire connu (J. Med. Chem. 2004, 47, 2365-2374, et J. Med. Chem. 1991, 34, 3346-3350) qui peut être préparé par le procédé de synthèse décrit dans la demande de brevet WO 2007/010007. L'introduction du motif acétique sur la partie polyamine du composé 5 pour obtenir le composé 6 qui sera ensuite condensé sur la 4-amino-4'-déméthylépipodophyllotoxine, de formule 4bis, représente donc une stratégie particulièrement intéressante.
Dans les composés de formule 6, le motif acétique est apporté par réaction de la partie amine primaire de dérivés (poly)aminoalkylamino de formule 5 avec un haloacétate d'alkyle. Préférentiellement, on utilisera le bromo-, chloro- ou iodoacétate d'éthyle. D'autres méthodes d'installation du motif acétique peuvent être utilisées également, comme par exemple une amination réductrice à l'aide d'un dérivé d'acide glyoxylique.
L'hydrolyse de la fonction ester en acide peut se faire en milieu basique comme la soude diluée. Les composés de formule 5 sont obtenus de la manière décrite dans la publication : Tet. Lett. 1998, 39,439. Un exemple particulier de l'utilisation de cette synthèse est donné à l'exemple 27 de la demande de brevet WO 2005/100363. -5- Le couplage peptidique de cet intermédiaire acétique 6 avec la 4-amino-4'-déméthylépipodophyllotoxine de formule 4bis, permet à la fois d'opérer en milieu neutre, donc non épimérisant, et de fournir un produit plus pur ne nécessitant pas le travail chromatographique indispensable à la stratégie telle que décrite dans WO 2005/100363.
La grande diversité des méthodes de couplage peptidique décrites dans la littérature, comme par exemple dans la revue : Tet. 2005, 61, 10827 laisse le choix à l'homme de l'art d'appliquer la plus efficace et celle fournissant le composé le plus pur (telles les méthodes utilisant : DCC, anhydrides mixtes, CDI, BOP et ses dérivés, TBTU ). A titre d'exemple le procédé utilisant l'activation par le TBTU (O-Benzotriazol-l-yl-N,N,N',N'-tetraméthyluronium tétrafluoroborate) (J.O.C. 1996, 61, 2322) présente l'avantage de se conduire à température ordinaire en milieu neutre, d'être rapide, tout en fournissant un composé propre et dont les produits secondaires issus des réactifs sont solubles dans l'eau au cours de l'extraction. Une simple chromatographie classique fournit un composé au stade préfinal de qualité parfaite (pureté > 99%).
Nous décrivons ci-après quelques exemples montrant l'avantage de ce procédé en terme de facilité de mise en œuvre, de pureté d'obtention par traitement extractif et chromatographique.
L'invention concerne plus particulièrement un procédé pour la préparation du composé de formule 1 dans lequel a = 3, b = 4, R = - (CH2) 3 - NH2 soit le 2-{3-[4-(3-aminopropylamino)-•butylamino]-propylamino } -N-[9-(4-hydroxy-3,5-diméthoxyphényl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro [3',4':6,7]naphto[2,3-d][ 1,3]dioxol-5-yl]-acétamide, chlorhydrate, caractérisé en ce qu'il comprend une étape de couplage peptidique entre la 4-amino-4'-déméthylépipodophyllotoxine et le composé de formule 6: l'acide {benzyloxycarbonyl-[3-(benzyloxycarbonyl- {4-[benzyloxycarbonyl-(3-benzyloxycarbonyl arninopropyl)-amino]-butyl}-amino)-propyl]-amino}-acétique ou l'acide {t-butyloxycarbonyl-[3-(t-butyloxycarbonyl-{4-[t-butyloxycarbonyl- (3-tbutyloxycarbonylaminopropyl)-amino]-butyl} -amino)-propyl]-amino}-acétique, ce qui correspond aux composés de formule 6 dans lequel a = 3, b = 4 et R' = - (CH2)3 - NHP avec P qui est soit le groupement benzyloxycarbonyl soit le groupement t û butyloxycarbonyl. -6-L'invention concerne également un procédé de préparation du composé de formule 1 dans lequel a = 3, b = 4, R = H soit le 2-[3-(4-aminobutylamino)-propylamino]-N-[9-(4-hydroxy-3,5-diméthoxyphényl) -8-oxo-5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro[3',4':6,7]naphto[2,3-d][1,3] dioxol-5-yl]-acétamide, sous forme de chlorhydrate caractérisé en ce qu'il comprend une étape de couplage peptidique entre la 4-amino-4'-déméthylépipodophyllotoxine et le composé de formule 6 : l'acide (benzyloxycarbonyl-{ 3-[benzyloxycarbonyl-(4-benzyloxycarbonylaminobutyl)-amino]-propyl } -amino)acétique ou l'acide t-butyloxycarbonyl-{3-[t-butyloxycarbonyl-(4-tbutyloxycarbonylaminobutyl) -amino]-propyl}-amino)acétique ce qui correspond aux composés de formule 6 dans lequel a = 3, b = 4, R' = H avec P qui est soit le groupement benzyloxycarbonyl, soit le groupement t-butyloxycarbonyl.
L'invention concerne également un procédé de préparation du composé de formule 1 dans lequel a = 4, b = 4, c = 4 soit le 2-{4-[4-(4-aminobutylamino)-butylamino]-butylamino } -N-[9-(4-hydroxy-3, 5 -diméthoxyphényl)-8-oxo-5 ,5 a,6, 8,8a,9-hexahydrofuro[3',4':6,7]naphto[2,3-d][1,3]dioxol-5-yl]-acétamide, chlorhydrate caractérisé en ce qu'il comprend une étape de couplage peptidique entre la 4-amino-4'-déméthylépipodophyllotoxine et le composé de formule 6 : l'acide {benzyloxycarbonyl-[4-(benzyloxycarbonyl-{4-[benzyloxycarbonyl- (4-benzyloxycarbonylaminobutyl)-amino]-butyl}-amino)-butyl]-amino} -acétique ou l'acide {t-butyloxycarbonyl-[4-(t- butyloxycarbonyl-{4-[t-butyloxycarbonyl-(4-t-butyloxycarbonylaminobutyl) -amino]-butyl} -amino)-butyl]-amino}-acétique, ce qui correspond aux composés de formule 6 dans lesquels a = 4, b = 4, c = 4 avec P qui est soit le groupement benzyloxycarbonyl, soit le groupement t-butyloxycarbonyl.
L'invention concerne également un procédé de préparation du composé de formule 1 dans lequel a = 4, b = 3, R = H soit le 2-[4-(3-aminopropylamino)-butylamino]-N-[9-(4-hydroxy-3,5-diméthoxyphényl) -8-oxo-5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro[31,4':6,7]naphto[2,3-d][1,3] dioxol-5-yl]-acétamide, chlorhydrate caractérisé en ce qu'il comprend une étape de couplage peptidique entre la 4-amino-4'-déméthylépipodophyllotoxine et le composé de formule 6: l'acide (benzyloxycarbonyl-{4-[benzyloxycarbonyl-(3-benzyloxycarbonylaminopropyl) -amino]-butyl}-amino)-acétique ou l'acide (t-butyloxycarbonyl-{4-[t-butyloxycarbonyl- (3-t-butyloxycarbonylaminopropyl)-amino]- 5 butyl}-amino)-acétique, ce qui correspond aux composés de formule 6 dans lesquels a = 4, b = 3, R' = H avec P qui est soit le groupement benzyloxycarbonyl, soit le groupement t-butyloxycarbonyl. Un autre aspect de l'invention concerne un nouveau procédé de synthèse des composés 10 de formule générale 1 caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes :
a) Greffage d'un motif acétique sur les réactifs aminés primaires de formule 5 HAN% a ()b -7- H P P 1 1 1 Formule 5
15 à l'aide d'un haloacétate d'alkyle
b) Protection de l'amine secondaire du composé obtenu à l'étape précédente a) par un groupement protecteur P c) Saponification du composé obtenu à l'étape b) en milieu basique pour obtenir l'acide polyaminoacétique de formule 6 20 d) Couplage peptidique de l'acide polyaminoacétique obtenu à l'étape c) avec la 4-amino-4'-déméthylépipodophyllotoxine de formule 4bis e) Elimination des groupements protecteurs P des composés obtenus à l'étape précédente pour arriver aux composés de formule générale 1. 25 De manière préférentielle les groupements protecteurs utilisés dans les composés de formule 5 et à l'étape b) sont les groupements benzyloxycarbonyl ou t-butyloxycarbonyl. De manière préférentielle également on utilisera à l'étape a) un haloacétate d'alkyle choisi parmi le bromo, chloro ou iodoacétate d'éthyle. 30 Le nouveau procédé de synthèse est illustré par le schéma réactionnel suivant : 1 1 I monoalkylation HAN M N~Înrt R' EtO H P P 1 I I Protection Ny~ XNX/ N \' /a 1" Îb R' P P P 1 1 1 N.M'aNN'R l'Yb OH EtO couplage P P P peptidique HOC NNN 6 P P P N.M N ~N. R.
Déprotection o OH saponification -8- dont les différentes étapes sont décrites de façon générale ci-après. Méthode de préparation des amines primaires 5 La synthèse des amines primaires de formules 5 protégées par des groupements protecteurs P (benzyloxycarbonyl (Z) par exemple) sur les atomes d'azote ne devant pas réagir, est décrite dans la demande de brevet WO 2005/100363 . Le groupement benzyloxycarbonyl représente un choix particulier qui n'est pas limitatif. D'autres groupements protecteurs peuvent être utilisés dans le cadre de l'invention. En dehors des groupes benzyloxycarbonyl substitués, de clivage plus facile, il est aussi possible d'utiliser des groupes butyloxycarbonyl dont le clivage en milieu acide est compatible avec la stabilité du composé final de formule 1. En effet, le clivage en fin de synthèse doit être compatible avec les différentes fonctions en place sur la molécule finale. En particulier, les milieux basiques ne sont pas compatibles, puisqu'ils génèrent, comme mentionné plus haut, une épimérisation de l'atome de carbone en position 2, par contre les milieux acides donnant des sous-produits soit volatils, soit facilement séparables ou éliminables peuvent être utilisés.
Etape 1 : Au cours de cette étape, on réalise l'alkylation de l'amine primaire du composé 5 avec un haloacétate d'alkyle : bromo, chloro ou iodoacétate d'éthyle par exemple , les 2 réactifs étant en quantités stoechiométriques. Etape 2 : L'amine secondaire obtenue à l'étape précédente est protégée par le même groupement protecteur P que celui initialement utilisé lors de la synthèse des composés de formule 5, en mettant en jeu les techniques classiques utilisées pour la protection de ce type de fonction amine. De manière préférentielle on utilisera comme groupement protecteur les groupements benzyloxycarbonyl ou t-butyloxycarbonyl. De cette façon tous les groupements protecteurs identiques se cliveront dans la même étape. Etape 3 : L'ester obtenu à l'étape précédente est saponifié en milieu basique, par exemple avec de la soude éthanolique, pour obtenir le composé de formule 6. Synthèse de la 4-amino-4'-déméthylépipodophyllotoxine de formule 4 bis La 4-amino-4'-déméthylépipodophyllotoxine de formule 4bis est un composé connu et dont le procédé de synthèse est décrit (J. Med. Chem. 2004, 47, 2365-2374, et J. Med. Chem. 1991, 34, 3346-3350). Un nouveau procédé de synthèse de ce dérivé, moins -9- dangereux, plus économique et fournissant un dérivé plus pur fait l'objet de la demande de brevet WO 2007/010007. Etape 4 : Au cours de cette étape, on réalise le couplage peptidique de l'acide polyamino acétique de formule 6, tel que synthétisé précédemment, avec la 4-amino-4'- déméthylépipodophyllotoxine de formule 4bis. Ce couplage se fait en milieu neutre et à température ambiante. Etape 5 : On élimine les groupements protecteurs P du composé obtenu à l'étape précédente, selon les techniques classiques de déprotection pour aboutir au composé de formule 1. 15 L'invention concerne plus particulièrement le procédé de préparation d'un composé de formule 1 dans lequel a = 3, b = 4, R= - (CH2)3 û NH2 soit le 2-{3-[4-(3-aminopropylamino)-butylamino]-propylamino } -N-[9-(4-hydroxy-3,5-diméthoxyphenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro [3',4':6,7]naphto[2,3-d] [ 1,3]dioxol-5-yl]-acétamide, 20 sous forme de chlorhydrate, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) Greffage d'un motif acétique sur l'ester benzylique de l'acide {4-[(3-aminopropyl)-benzyloxycarbonylamino]butyl } -(3-benzyloxycarbonylaminopropyl)-carbamique ou la triBOC spermine à l'aide du bromoacétate d'éthyle pour obtenir l'ester éthylique de l'acide[3- 25 (benzyloxycarbonyl- {4-[benzyloxycarbonyl-(3-benzyloxycarbonylaminopropyl)-amino] -butylit-amino)-propyl]-aminol-acétique ou l'ester éthylique de l'acide 3- (t-butyloxycarbonyl-{4-[t-butyloxycarbonyl- (3-t-butyloxycarbonylaminopropyl)- amino]-butyl} -amino)-propylamino]-acétique b) Protection de l'amine secondaire du composé obtenu à l'étape précédente a) 30 par un groupement protecteur qui est soit le groupement benzyloxycarbonyl soit le groupement t-butyloxycarbonyl c) Saponification du composé obtenu à l'étape b) en milieu basique pour obtenir soit l'acide {benzyloxycarbonyl-[3-(benzyloxycarbonyl- {4-[benzyloxycarbonyl-(3-benzyloxyc arbonylaminopropyl)-amino]-butyl } -amino)-propyl]-amino } -35 acétique soit l'acide {t-butyloxycarbonyl-[3-(t-butyloxycarbonyl-{4-[t-butyloxycarbonyl- (3-t-butyloxycarbonylaminopropyl)-amino]-butyl } -amino)-propyl]-amino } -acétique - 10 - d) Couplage peptidique des composés obtenus à l'étape c) avec la 4-amino-4'-déméthylépipodophyllotoxine e) Elimination des groupements protecteurs benzyloxycarbonyl ou tbutyloxycarbonyl des composés obtenus à l'étape d) L'invention concerne plus particulièrement également le procédé de préparation d'un composé de formule 1 dans lequel a = 3, b = 4, R= H soit le 2-[3-(4-aminobutylamino)-propylamino]-N-[9-(4-hydroxy-3,5-diméthoxyphényl) -8-oxo-5,5a,6,8,8a,9 hexahydrofuro [3',4':6,7] naphto [2,3d][1,3]dioxol-5-yl]-acétamide, chlorhydrate caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) Greffage d'un motif acétique sur le composé de formule 5 dans lequel a =3 , b = 4 et R' = H avec P qui est soit le groupement benzyloxycarbonyl, soit le groupement t-butyloxycarbonyl à l'aide du bromoacétate d'éthyle. b) Protection de l'amine secondaire du composé obtenu à l'étape précédente a) à l'aide du même groupement protecteur que celui utilisé à l'étape a) c) Saponification du composé obtenu à l'étape b) en milieu basique pour obtenir le composé de formule 6 dans lequel a = 3, b = 4 et R' = H, P ayant la même signification qu'aux étapes a) et b) d) Couplage peptidique du composé obtenu à l'étape c) avec la 4-amino-4'-25 déméthylépipodophyllotoxine e) Elimination des groupements protecteurs benzyloxycarbonyl ou tbutyloxycarbonyl des composés obtenus à l'étape précédente.
30 L'invention concerne plus particulièrement le procédé de préparation d'un composé de formule 1 dans lequel a = 4, b = 4, c = 4 soit le : 2-{4-[4-(4-aminobutylamino)-butylamino]-butylamino } -N-[9-(4-hydroxy-3, 5-diméthoxyphényl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro [3',4":6,7] naphto [2,3-d] [1,3]dioxol-5-yl]-acétamide, sous forme de chlorhydrate caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : 35 a) Greffage d'un motif acétique sur le composé de formule 5 dans lequel a = 4 , b = 4 et c = 4 avec P qui est soit le groupement benzyloxycarbonyl, soit le groupement t-butyloxycarbonyl à l'aide du bromoacétate d'éthyle - 11 - b) Protection de l'amine secondaire du composé obtenu à l'étape précédente a) par un groupement protecteur qui est identique à celui utilisé à l'étape a) c) Saponification du composé obtenu à l'étape b) en milieu basique pour obtenir le composé de formule 6 dans lequel a = 4, b = 4 et c = 4, P ayant la même signification qu'aux étapes a) et b) d) Couplage peptidique du composé obtenu à l'étape c) avec la 4-amino-4'-déméthylépipodophyllotoxine e) Elimination des groupements protecteurs benzyloxycarbonyl ou tbutyloxycarbonyl du composé obtenu à l'étape précédente.
L'invention concerne plus particulièrement le procédé de préparation d'un composé de formule 1 dans lequel a = 4, b = 3, R= H soit le 2-[4-(3-aminopropylamino)-butylamino]-N-[9-(4-hydroxy-3,5-diméthoxyphényl) -8-oxo-5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro [3',4':6,7] naphto [2,3-d] [1,3] dioxol-5-yl]-acétamide, chlorhydrate , caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) Greffage d'un motif acétique sur le composé de formule 5 dans lequel a = 4 , b = 3 et R' = H avec P qui est soit le groupement benzyloxycarbonyl, soit le groupement t-butyloxycarbonyl à l'aide du bromoacétate d'éthyle b) Protection de l'amine secondaire du composé obtenu à l'étape précédente a) par un groupement protecteur qui est identique à celui utilisé à l'étape a) c) Saponification du composé obtenu à l'étape b) en milieu basique pour obtenir le composé de formule 6 dans lequel a = 4, b = 3 et R' = H, P ayant la même signification qu'aux étapes a) et b) d) Couplage peptidique du composé obtenu à l'étape c) avec la 4-amino-4'- déméthylépipodophyllotoxine e) Elimination des groupements protecteurs benzyloxycarbonyl ou tbutyloxycarbonyl du composé obtenu à l'étape précédente L'invention concerne également un procédé de préparation des intermédiaires de formule générale 6 - 12 - P P P 1 1 1 N ,NN,R HO Formule 6 caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) Greffage d'un motif acétique sur les amines primaires de formule 5
H P P 1 1 1 NNNR' Formule 5 à l'aide d'un haloacétate d'alkyle b) Protection de l'amine secondaire du composé obtenu à l'étape précédente a) par un groupement protecteur P c) Saponification du composé obtenu à l'étape b) en milieu basique pour obtenir l'acide polyaminoacétique de formule 6 De manière préférentielle l'haloacétate d'alkyle utilisé à l'étape b) est choisi parmi le bromo, chloro ou iodoacétate d'éthyle. De manière préférentielle également les groupements protecteurs des composés de 20 formule 5 et ceux utilisés à l'étape b) sont les groupements benzyloxycarbonyl ou t- butyloxycarbonyl.
L'invention concerne également plus particulièrement un procédé de préparation de l'intermédiaire de formule 6 dans lequel a = 3, b = 4 et R' = ù(CH2)3-NHP avec P qui est 25 un groupement benzyloxycarbonyl ou t-butyloxycarbonyl soit l'acide {benzyloxycarbonyl -[3-(benzyloxycarbonyl-{4-[benzyloxycarbonyl-(3- benzyloxycarbonylaminopropyl)-amino]-butyl } -amino)-propyl]-amino } -acétique soit l'acide {t-butyloxycarbonyl-[3-(t-butyloxycarbonyl- {4-[t-butyloxycarbonyl-(3-t-butyloxycarbonylaminopropyl)-amino]-butyl } -amino)-propyl]-amino } -acétique 30 caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) Greffage d'un motif acétique sur le réactif aminé primaire de formule 5 : l'ester benzylique de l'acide {4-[(3-aminopropyl)-benzyloxycarbonylamino]butyl } -(3-benzyloxycarbonylaminopropyl)-carbamique ou la triBOC spermine, (ce qui correspond aux composés 5 dans lesquels a = 3, b - 13 - = 4, R' = -(CH2)3 û NHP avec P qui est soit un groupement benzyloxycarbonyl soit un groupement t-butyloxycarbonyl) à l'aide du bromoacétate d'éthyle. b) Protection de l'amine secondaire du composé obtenu à l'étape précédente a) par un groupement protecteur identique à celui choisi à l'étape précédente. c) Saponification du composé obtenu à l'étape b) en milieu basique L'invention concerne également plus particulièrement un procédé de préparation de l'intermédiaire de formule 6 dans lequel a = 3, b = 4 et R' = H avec P qui est un groupement benzyloxycarbonyl ou t-butyloxycarbonyl caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) Greffage d'un motif acétique sur le réactif aminé primaire de formule 5 dans lequel a = 3, b = 4, R' = H avec P qui est soit un groupement benzyloxycarbonyl soit un groupement t-butyloxycarbonyl, à l'aide du bromoacétate d'éthyle. b) Protection de l'amine secondaire du composé obtenu à l'étape précédente a) par un groupement protecteur identique à celui choisi à l'étape précédente. c) Saponification du composé obtenu à l'étape b) en milieu basique
L'invention concerne également un procédé de préparation de l'intermédiaire de formule 6 dans lequel a = 4, b = 4 et c = 4 avec P qui est un groupement benzyloxycarbonyl ou tbutyloxycarbonyl caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) Greffage d'un motif acétique sur le réactifs aminé primaire de formule 5 dans lequel a = 4, b = 4, c = 4 avec P qui est soit un groupement benzyloxycarbonyl soit un groupement t-butyloxycarbonyl, à l'aide du bromoacétate d'éthyle. b) Protection de l'amine secondaire du composé obtenu à l'étape précédente a) par un groupement protecteur identique à celui choisi à l'étape précédente. c) Saponification du composé obtenu à l'étape b) en milieu basique
L'invention concerne également plus particulièrement un procédé de préparation de l'intermédiaire de formule 6 dans lequel a = 4, b = 3 et R' = H avec P qui est un groupement benzyloxycarbonyl ou t-butyloxycarbonyl caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : - 14 - a) Greffage d'un motif acétique sur le réactif aminé primaire de formule 5 dans lequel a = 4, b = 3, R' = H avec P qui est soit un groupement benzyloxycarbonyl soit un groupement t-butyloxycarbonyl, à l'aide du bromoacétate d'éthyle. b) Protection de l'amine secondaire du composé obtenu à l'étape précédente a) par un groupement protecteur identique à celui choisi à l'étape précédente. c) Saponification du composé obtenu à l'étape b) en milieu basique
L'invention concerne également l'utilisation des composés de formule générale 6 à la préparation des composés de formule générale 1 .
L'invention concerne encore, en tant que produits nouveaux les composés suivants : • L'acide (benzyloxycarbonyl-{3-[ benzyloxycarbonyl-(4-benzyloxycarbonyl amino-butyl).-amino]-propyl}-amino)-acétique de formule suivante : HO O'L O • L'acide (benzyloxycarbonyl- {44 benzyloxycarbonyl-(3- benzyloxycarbonyl 20 amino-propyl)-amino]-butyl}-amino)-acétique de formule suivante : O HOOC H O O O • L'acide (tert-butoxycarbonyl-{3-[ tert-butoxycarbonyl-(4-tert-butoxycarbonyl amino-butyl)-amino]-propyl}-amino) acétique de formule suivante : - 15 - HO v NN.r/NNH • L'acide (tert-butoxycarbonyl-{4-[ tert-butoxycarbonyl-(3- tert-butoxycarbonyl amino-propyl)-amino]-butyl}-amino)-acétique de formule suivante : o o ~ 0 HOOC,,,. NNNÂ0 H O O 10 Les exemples mentionnés ci-dessous servent à illustrer le procédé de l'invention sans toutefois en limiter la portée. A) Méthode utilisant les groupements benzyloxycarbonyl. 15 Exemple 1: Préparation du 2-[3-(4-aminobutylamino)-propylamino]-N-[9-(4-hydroxy-3,5-diméthoxyphényl) -8-oxo-5,5a,6,8,8a,9- hexahydrofuro[3',4':6,7] naphto[2,3-d][1,3]dioxol-5-yl]-acétamide, sous forme de chlorhydrate. (a = 3, b = 4, R = H) Ioo HN" NH2 20 OH
Etape 1. Préparation de l'ester éthylique de l'acide {3-[benzyloxycarbonyl-(4-benzyloxycarbonylaminobutyl)-amino]-propylamino} -acétique. o o o O o5 - 16 - H EtO A une solution de 6.35 g (15.4 mmol) de l'ester benzylique de l'acide (3-aminopropyl)-(4-benzyloxycarbony laminobutyl)-carbamique ( Synth. Commun. 2005, 35, 1085) dans 200 mL d'acétonitrile, et de 2.6 mL (1.86 g, 15.4 mmol) de triéthylamine, on introduit sous agitation 1.70 mL (2.56 g, 15.4 mmol) de bromacétate d'éthyle à température ambiante. L'agitation est maintenue 4h. Le milieu réactionnel est versé sur de l'eau et extrait par de l'acétate d'éthyle. Les phases organiques sont décantées, puis séchées sur sulfate de sodium, filtrées et évaporées. On obtient 7.7g d'une huile utilisée directement dans l'étape suivante.
Etape 2. Préparation de l'ester éthylique de l'acide (benzyloxycarbonyl-{3-[benzyloxycarbonyl-(4-benzyloxycarbonylaminobutyl) -amino]-propyl}-amino)-acétique.
9P o o Oo ~O o= o A une solution de 7.7 g (15.4 mmol) d'ester éthylique de l'acide {3-[benzyloxycarbonyl-(4-benzyloxycarbonylaminobutyl)-amino]-propylamino} -acétique, tel qu'obtenu précédemment, dans 200 mL d'un mélange eau/acétone (1/1) et 1.68 g (20 mmol) de NaHCO3, on introduit sous agitation et goutte à goutte 2.42 mL (17 mmol) de chloroformiate de benzyle. L'agitation est maintenue pendant 2 h. L'acétone est évaporée sous pression réduite puis le milieu est acidifié par HC1 1N. Le milieu est ensuite extrait par de l'acétate d'éthyle, les phases organiques séparées et séchées sur sulfate de sodium anhydre, filtrées et évaporées. Le résidu est flash-chromatographié sur colonne de silice, à l'aide d'un gradient d'éluant de l'heptane pur au mélange heptane/AcOEt (60/40).
L'évaporation des fractions d'intérêt représente 6 g d'une huile incolore. Rdt = 61%. CCM SiO2, CH2C12/1vleOH/NH4OH (90/10/1) Rf= 0.9 . - 17 - Etape 3: Préparation de l'acide (benzyloxycarbonyl-{3-[benzyloxycarbonyl-(4-benzyloxycarbonylaminobutyl) -amino] -propyl}-amino)acétique. 9P
o 'oo o
HO~N~~N~U~N" O H 10 Une solution de 5.8 g (9.2 mmol) d'ester éthylique de l'acide (benzyloxycarbonyl-{3-[benzyloxycarbonyl-(4-benzyloxycarbonylaminobutyl) -amino]-propyl } -amino)-acétique, tel qu'obtenu à l'étape précédente, dans 100 mL d'éthanol et 13.8 mL (13.7 mmol) d'une solution de soude 1N est portée au reflux pendant 1h. Après refroidissement, on ajoute 20 15 mL d'une solution d'acide chlorhydrique 1N et on extrait cette solution acide par du chlorure de méthylène. Les phases organiques sont séparées, séchées sur sulfate de sodium anhydre, filtrées et évaporées. Le résidu est flash-chromatographié sur silice avec un gradient d'éluant de l'heptane pur au chlorure de methylène/MeOH (95/5). On isole alors après évaporation 4.7 g d'une huile claire Rdt = 85%. 20 CCM ; SiO2 ; CH2Cl2/MeOH (90/10) ; Rf = 0.35. Etape 4: Préparation de l'ester benzylique de l'acide (4-benzyloxycarbonylaminobutyl)-[3-(benzyloxycarbonyl-{ [(5S,5aS,8aR,9R)-9-(4-hydroxy-3,5-diméthoxyphényl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9-
25 hexahydrofuro[3',4' :6,7]naphto[2,3-d]-1,3-dioxol-5-ylcarbamoyl]-méthyl}-amino)-propyl] -carbamique. 9P o o o ~O 0~ o HN v N~~N~\N" 0 H 0 OH - 18 - A une suspension de 3.34 g (5.5 mmol) d'acide (benzyloxycarbonyl-{3-[benzyloxycarbonyl-(4-benzyloxycarbonylaminobutyl) -amino]-propyl } -amino)acétique, tel qu'obtenu à l'étape précédente, et 2.4 g (5.5 mmol) du chlorhydrate de la 4-amino-4'-déméthylépipodophyllotoxine dans 100 mL d'acétonitrile, sont ajoutés 1.63 mL (11.6 mmol) de triéthylamine, le milieu se solubilise sous agitation. On ajoute à ce stade 1.77 g (5.5 mmol) de TBTU. Le milieu réactionnel est agité pendant 1 h à température ambiante. Après addition d'eau, le milieu est extrait par de l'acétate d'éthyle, les phases organiques sont séparées et lavées avec une solution de NaHCO3, puis de NaCl. Les phases organiques sont à nouveau séparées et séchées sur sulfate de sodium anhydre, filtrées et évaporées, pour obtenir 5 g d'une mousse blanche. Une flash chromatographie rapide sur silice éluée avec un gradient allant de l'heptane pur à heptane/AcOEt (40/60) permet d'obtenir 4.6 g de produit ayant une pureté de 97% puis une autre fraction de 0,41 g de pureté à 73%. Ces fractions sont rassemblées et purifiées par HPLC préparative sur phase inverse. Colonne C 18, élution H2O/CH3CN (60/40), puis H2O/CH3CN (40/60). On obtient à ce stade 4.6 g de composé (Rdt = 84. 6 %) de pureté 99.8%. CCM : SiO2 CH2C12/MeOH (90/10) ; Rf = 0.75.
Etape 5 : Préparation du 2-[3-(4-aminobutylamino)-propylamino]-N-[9-(4-hydroxy-3,5-diméthoxyphényl) -8-oxo-5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro [3',4':6,7] naphto [2,3-25 d] [1,3] dioxol-5-yl]-a cétamide, chlorhydrate.
L'intermédiaire ester benzylique de l'acide (4-benzyloxycarbonylaminobutyl)-[3-(benzyloxycarbonyl- { [(5 S,5 aS,8aR,9R)-9-(4-hydroxy-3,5-diméhoxyphenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a, 9-hexahydrofuro[3',4' :6,7]naphto[2,3-d]-1,3-dioxol-5-ylcarbamoyl]- 30 méthyl}-amino)-propyl]-carbamique (4.6 g, 4.7 mmol) tel qu'obtenu à l'étape précédente, est placé sous agitation et atmosphère d'hydrogène dans 200 mL de méthanol, avec 460 mg de charbon palladié à 10% pendant 3 h . On ajoute à ce stade 3 équivalents d'HCl / isopropanol. Après filtration et évaporation du solvant, le résidu est repris dans de l'étha.nol absolu puis filtré et rincé avec de l'éther éthylique. 3.1 g de 35 chlorhydrate sont isolés (Rdt = 60%) . MS-ESI m/z 585.2 (MH+). - 19 - Exemple 2: Préparation du 2-{3-[4-(3-aminopropylamino)-butylamino]-propylamino}-N-[9-(4-hydroxy-3, 5-diméthoxyphenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro [3',4':6,7] naphto [2,3-d] [1,3]dioxol-5-yl]-acétamide, sous forme de chlorhydrate . (a = 3, b = 4, c=3) OH
Etape 1. Préparation de l'ester éthylique de l'acide {benzyloxycarbonyl-[3-(benzyloxycarbonyl-{4-[benzyloxycarbonyl- (3-benzyloxycarbonylaminopropyl)-15 amino]-butyl}-amino)-propyl]-amino}-acétique. EtO En reprenant le mode opératoire indiqué à l'étape 1 de l'exemple 1, mais en utilisant 20 cette fois l'ester benzylique de l'acide {4-[(3-aminopropyl)-benzyloxycarbonylamino]-butyl}- (3-benzyloxycarbonylaminopropyl)-carbamique, on obtient 1' ester éthylique de l'acide [3-(benzyloxycarbonyl- {4-[benzyloxycarbonyl-(3-benzyloxycarbonylaminopropyl)-amino]-butyl} -amino)-propylamino]-acétique sous forme d'huile 25 (CCM SiO2 CH2C12/MeOH/NH4OH (90/9/1) Rf = 0.45. -20-Etape 2. Cet intermédiaire est engagé directement dans la transformation suivante. Cette transformation est en tous points analogue à celle décrite dans l'étape 2 de l'exemple 1, mais en utilisant les réactifs correspondants. On obtient ainsi 7 g (Rdt = 96.8 %) d'une huile incolore .
CCM SiO2 Heptane/AcOEt (50/50) Rf = 0.3.
Etape 3. Préparation de l'acide {benzyloxycarbonyl-[3-(benzyloxycarbonyl-{4-[benzyloxycarbonyl- (3-benzyloxycarbonylaminopropyl)-amino]-butyl}-amino)-propyl]-amino} -acétique 0 0 0 }I I~ o H Selon le même mode opératoire que celui décrit dans l'étape 3 de l'exemple 1, mais en utilisant le composé obtenu à l'étape précédente, on obtient 3.6 g de l'acide
20 correspondant (Rdt = 53%) après flash-chromatographie avec un gradient d'élution de CH2C12 pur à CH2C12/MeOH (95/5). CCM SiO2, CH2C12/MeOH (95/5) Rf = 0.24. Etape 4 et 5. Préparation du 2-{3-[4-(3-aminopropylamino)-butylamino]-
25 propylamino}-N-[9-•(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl)-8-oxo-5,5a,6,8, 8a,9-hexahydrofuro [3',4':6,7] naphto [2,3-d] [1,3]dioxol-5-yl]-acétamide, sous forme de chlorhydrate. o
HN" v N~~N~~~N~~\NHZ H OH 30 - 21 - Etape 4 : De manière identique à l'exemple 1, mais en utilisant l'intermédiaire préparé à l'étape 3 précédente, le couplage avec la 4-amino-4'-déméthylépipodophyllotoxine fournit le composé amide avec un rendement de 53% sous forme d'une mousse blanche. On réalise ensuite une flash-chromatographie rapide sur silice à l'aide d'un gradient d'élution d'heptane à un mélange CH2C12/MeOH/NH4OH (90/9/1) puis une HPLC préparative sur phase inverse C18, élution H2O/CH3CN (60/40), puis H2O/CH3CN (35/65), et finalement une évaporation de l'acétonitrile et une extraction par de l'acétate d'éthyle. CCM : SiO2 CH2C12/MeOH (95/05) ; Rf = 0.35. Etape 5 : Cet intermédiaire est mis à débenzyler selon le mode opératoire de l'étape 5 de l'exemple 1. On obtient alors le chlorhydrate du 2-{3-[4-(3-aminopropylamino)-butylamino]-propylamino} -N-[9-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl)-8-oxo-5,5a,6, 8,8a,9-hexahydrofuro[3',4':6,7]naphto[2,3-d][1,3]dioxol-5-yl]-acetamide avec un rendement de 92%.
F = 267°C ; CCM SiO2 CH2C12/MeOH/NH4OH (72/25/3) Rf = 0.31 ; SM-ESI m/z = 642.2 (MH+). Exemple 3 : Préparation du 2-{4-[4-(4-aminobutylamino)-butylamino]-butylamino}-N-[9-(4-hydroxy-3, 5-diméthoxyphenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9- hexahydrofuro [3',4':6,7] naphto [2,3-d] [1,3]dioxol-5-yl]-acétamide, sous forme de chlorhydrate. (a = 4., b = 4, c=4) " vo N HN ,--NH, H OH Etape 1 et 2. Préparation de l'éthyl ester de l'acide {benzyloxycarbonyl-[4-(benzyloxycarbonyl-{4-[benzyloxycarbonyl- (4-benzyloxycarbonylaminobutyl)-amino]-butyl}-amino) -butyl]-amino}-acétique. Etape 1: - 22 - En utilisant le mode opératoire décrit à l'étape 1 de l'exemple 1, mais en utilisant l'ester benzylique de l'acide (4-aminobutyl)-{4-[benzyloxycarbonyl-(4-benzyloxycarbonylariiinobutyl) -amino]-butyl}-carbamique, on obtient l'ester éthylique de l'acide [4-(benzyloxycarbonyl-{4-[benzyloxycarbonyl-(4- benzyloxycarbonylaminobutyl)-amino]-butyl } -amino)-butylamino]-acétique sous forme d'huile CCM SiO2 CH2C12/1\4eOH/NH4OH (90/9/1) Rf = 0.48. Etape 2 : Cet intermédiaire est engagé directement dans l'étape suivante où l'on procède de manière en tous points analogues à ce qui est décrit dans l'étape 2 de l'exemple 1. On obtient ainsi en utilisant les réactifs correspondants l'ester éthylique de l'acide {benzyloxycarbonyl-[4-(benzyloxycarbonyl- {4-[benzyloxycarbonyl-(4-benzyloxycarbonylaminobutyl)-amino]-butyl}-amino) -butyl]-amino}-acétique avec un rendement de 75% d'une huile incolore . CCM SiO2 CH2C12/MeOH/NH4OH (95/4.5/0.5) Rf = 0.35.
Etape 3. Préparation de l'acide {benzyloxycarbonyl-[4-(benzyloxycarbonyl-{4-[benzyloxycarbonyl-• (4-benzyloxycarbonylaminobutyl)-amino]-butyl}-amino)-butyl]-amino} -acétique Selon le mode opératoire tel que décrit dans l'étape 3 de l'exemple 1, mais en utilisant le composé obtenu précédemment, on obtient l'acide correspondant avec un rendement de 88% après flash- chromatographie avec un gradient d'élution de CH2C12 pur à CH2C12/MeOH (90/10). CCM SiO2, CH2C12/MeOH (90/0) Rf = 0.53.
Etape 4 et 5 Préparation du 2-{4-[4-(4-aminobutylamino)-butylamino]-butylamino}-N-[9-(4--hydroxy-3, 5-dimethoxyphenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9- -23- hexahydrofuro [3',4':6,7] naphto [2,3-d] [1,3] dioxol-5-yl]-acétamide, sous forme de chlorhydrate. Etape 4 : De façon identique à l'étape 4 de l'exemple 1, mais en utilisant l'intermédiaire préparé à l'étape précédente, son couplage avec la 4-amino-4'-déméthylépipodophyllotoxine fournit le composé amide avec un rendement de 62% sous forme d'une mousse blanche. Après flash-chromatographie rapide sur silice à l'aide d'un gradient de CH2C12 à un mélange CH2C12/MeOH (95/5) puis HPLC préparative sur phase inverse C18, élution H2O/CH3CN (60/40), puis H2O/CH3CN (30/70), suivies d'une évaporation de l'acétonitrile et d'une extraction par de l'acétate d'éthyle.
CCM : SiO2 CH2C12/MeOH/NH4OH (95/4.5/0.5) ; Rf = 0.24, pour obtenir l'intermédiaire utilisé directement dans l'étape suivante. Etape 5 : Cet intermédiaire est mis à débenzyler selon le mode opératoire de l'étape 5 de l'exemple 1. On obtient alors le chlorhydrate du 2-{4-[4-(4-aminobutylamino)- butylamino]-butylam no} -N-[9-(4-hydroxy-3,5-diméthoxyphényl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro [3',4':6,7] naphto [2,3-d] [1,3]dioxol-5-yl]-acétamide avec un rendement de 78%. F = 263°C ; SM-DCl/CH4 m/z = 670.5 (MH+).
Exemple 4 :Préparation du 2-[4-(3-aminopropylamino)-butylamino]-N-[9-(4-hydroxy-3,5-diméthoxyphényl) -8-oxo-5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro[3',4':6,7]naphto[2,3-d][1,3] dioxol-5-yl]-acétamide, sous forme de chlorhydrate. (a = 4, b = 3, R = H ) OH - 24 - Etape 1 et 2. Préparation de l'ester éthylique de l'acide benzyloxycarbonyl-{4-[benzyloxycarbonyl-(3-benzyloxycarbonylaminopropyl) -amino]-butyl}-amino)-acétique. o 0 N~N^/-- H Etape 1: En utilisant le mode opératoire indiqué à l'étape 1 de l'exemple 1, mais en utilisant l'ester benzylique de l'acide {3-[(4-aminobutyl)-benzyloxycarbonylamino]-propyl}-carbamique, on obtient l'ester éthylique de l'acide {4-[benzyloxycarbonyl-(3-benzyloxycarbonylaminopropyl)-amino]-butylamino} -acétique sous forme d'huile. CCM SiO2 CH2C12/MeOH/NH4OH (95/4.5/0.5) Rf = 0.28, SM-ESI m/z = 500.3 (MH+). Etape 2 : L' intermédiaire précédemment obtenu est engagé directement dans la transformation suivante en tous points analogue à celle décrite dans l'étape 2 de l'exemple 1. On obtient ainsi l'ester éthylique de l'acide benzyloxycarbonyl-{4-[benzyloxycarbonyl-(3-benzyloxycarbonylaminopropyl) -amino]-butyl}-amino)-acétique sous forme d'une huile incolore. (CCM SiO2 CH2C12/MeOH/NH4OH (95/4.5/0.5) Rf = 0.39. SM-APCI m/z = 634.3 (MH+) Etape 3. Préparation de l'acide (benzyloxycarbonyl-{4-[benzyloxycarbonyl-(3-benzyloxycarbonylaminopropyl) -amino]-butyl}-amino)-acétique . P 0 o }IOI~ ' ~o o~ 0 HO H EtO30 - 25 -Selon le même mode opératoire que celui décrit dans l'étape 3 de l'exemple 1, mais en utilisant le composé obtenu à l'étape précédente, on obtient par extraction acide, l'acide correspondant avec un rendement de 86%
CCM SiO2, CH2C12/MeOH (90/10) Rf = 0.48.
Etape 4 et 5: Préparation du 2-[4-(3-aminopropylamino)-butylamino]-N-[9-(4-hydroxy-3,5-diméth oxyphényl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro[3',4":6,7]naphto12,3-d][1,3] dioxol-5-yl]-acétamide, sous forme de chlorhydrate. o H HN N~~NHZ H OH
Etape 4 : De façon identique à l'étape 4 de l'exemple 1, mais en utilisant l'intermédiaire préparé à l'étape précédente, son couplage avec la 4-amino-4'-déméthylépipodophyllotoxine 20 fournit le composé amide avec un rendement de 48% sous forme d'une mousse blanche. Après flash-chromatographie rapide sur silice à l'aide d'un gradient allant de l'heptane à l'AcOEt. puis HPLC préparative sur phase inverse C18, élution H2O/CH3CN (60/40), puis H2O/CH3CN (3.5/65), et finalement évaporation de l'acétonitrile et extraction par de l'acétate d'éthyle. CCM : SiO2 CH2C12/MeOH/NH4OH (95/4.5/0.5) ; Rf = 0.30 25 Etape 5 : L'intermédiaire obtenu est mis à débenzyler selon le mode opératoire de l'étape 5 de l'exemple 1. On obtient alors le 2-[4-(3-aminopropylamino)-butylamino]-N-[9-(4-hydroxy-3,5-diméthoxyphényl) -8-oxo-5,5a,6, 8, 8a,9-hexahydrofuro[3',4':6,7]naphto[2,3-d][1,3]dioxol-5-yl]-acétamide, chlorhydrate avec un rendement de 79%. 30 F = 197°C ; SM-ESI m/z = 585.3 (MH+).15 -26- B) Méthode utilisant les groupements t-butyloxycarbonyl. Exemple 5 : Préparation du 2-{3-[4-(3-aminopropylamino)-butylamino]-propylamino}-N-[9-• (4-hydroxy-3,5-diméthoxyphenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro [3',4':6,7 ]naphto [2,3-d] [1,3] dioxol-5-yl]-acétamide, sous forme de chlorhydrate . (a = 3, b = 4,
c = 3)
Etape 1. Préparation de l'ester éthylique de l'acide 3-(t-butyloxycarbonyl-{4-[tbutyloxycarbonyl- (3-t-butyloxycarbonylaminopropyl)-amino]-butyl}-amino)propylamino] -acétique. uOu \~7I EtO H O Q A une solution de 5.11 g triBOC spermine (Tet. Let. 1998, 39, 439) (10 mmol, 1 eq) dans 120 mL d'acétonitrile, sont ajoutés 1.7 mL de triéthylamine (12 mmol, 1.2 eq). On introduit alors, rapidement sous agitation 1.13 mL de bromoacétate d'éthyle (10 mmol, 1 eq) à cette solution. Après 1 h d'agitation à température ordinaire, on jette le milieu réactionnel dans l'eau saturée de NaCl (300 mL) et on extrait par de l'acétate d'éthyle (2x200mL). Après séchage des phases organiques, filtration et évaporation, on purifie le résidu obtenu par flash chromatographie sur SiO2 (élution avec gradient à partir de l'heptane pur au CH2C12 pur, puis avec CH2C12/ MeOH - 90/10) . On obtient 3.35 g d'une huile incolore (Rdt = 56%) CCM Rf = 0.57 (CH2C12/MeOH - 90/10) . Etape 2. Préparation de l'éthyl ester de l'acide {t-butyloxycarbonyl-[3-(tbutyloxycarbonyl-{4-[t-butyloxycarbonyl- (3-t-butyloxycarbonylaminopropyl)-amino]-butyl}-amino)-propyl]-amino} -acétique. E yO OyO M) 0 ). - 27 - A une solution à température ambiante de 3.35 g de l'intermédiaire obtenu à l'étape 1 précédente (5.7 mmol, 1 eq) dans 60 mL de THF, on ajoute 1 mL de triéthylamine (6.8 mmol, 1.2 eq), puis sous agitation, une solution de 1.36 g de BOC2O (6.2 mmol, 1.1 eq), et on laisse agiter pendant 2h. Le milieu réactionnel est alors jeté dans l'eau (300 mL), et extrait par l'acétate d'éthyle (3x200mL). Les phases organiques une fois séchées sur sulfate de sodium, et filtrées, sont évaporées puis flash chromatographiées sur SiO2 (élution par gradient de l'heptane pur à l'acétate d'éthyle pur), pour fournir 2.52 g d'une huile incolore. Rdt = 64% CCM Rf = 0.43 (SiO2 Heptane/AcOEt û 50/50) . Etape 3. Préparation de l'acide {t-butyloxycarbonyl-[3-(t-butyloxycarbonyl-{4-[tbutyloxycarbonyl- (3-t-butyloxycarbonylaminopropyl)-amino]-butyl}-amino)-propyl]-amino} -acétique O O O O uI N O t ~~N~ ~ /°< N 20 L'ester intermédiaire obtenu à l'étape 2 (2.52 g, 3.6 mmol, 1 eq) est chauffé à reflux sous agitation dans 50 mL d'un mélange EtOH/H20 et 5.5 mL d'une solution de soude 1N, pendant 3h. On jette dans l'eau glacée (300mL) et on acidifie avec HC1 1N (5.6 mL). Après extraction par du CH2C12, séchage sur Na2SO4 , filtration et évaporation, on purifie sur flash chromatographie de SiO2 (élution gradient d'heptane pur à CH2C12 25 pur puis à CH2C12/MeOH û 90/10). On obtient alors 2.27 g de l'acide tetraBOC spermine acétique sous forme d'une huile incolore. Rdt = 94%. CCM Rf 0.4 (SiO2 CH2C12/MeOH û 90/10). (lit. Tet.Let. 1997, 38, 3219). Etape 4 et 5: Préparation du 2-{3-[4-(3-aminopropylamino)-butylamino]- 30 propylamino}-N-[9-(4-hydroxy-3,5-diméthoxyphényl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a, 9-hexahydrofuro [3',4':6,7] naphto [2,3-d] [1,3] dioxol-5-yl]-acétamide, sous forme de chlorhydrate. Etape 4: A une solution sous agitation de 670 mg de 4-amino-4'-déméthylépipodophyllotoxine 35 (1.54 mmol, 1 eq) et de 1.02 g de l'intermédiaire obtenu à l'étape 3 (1.54 mmol, 1 eq) dans 100 mL d'acétonitrile, à température ambiante, on ajoute 0.45 mL de triéthylamine - 28 - (3.28 mmol, 2 eq). On observe un dissolution totale. On ajoute alors 0.5 g de TBTU (1.54 mmol, 1 eq) et on laisse l'agitation pendant 2h. Le milieu réactionnel est alors jeté dans 300 mL d'eau et extrait par l'acétate d'éthyle (3x100 mL) . Après séchage des phases organiques sur Na2SO4, filtration et évaporation, le résidu est flash chromatographié sur SiO2 (élution par gradient de l'heptane pur à l'AcOEt). Le composé obtenu avec une pureté de 92% est à nouveau chromatographié par HPLC préparative (C18, Sunfire OBD, l01.1) et élué par CH3CN/H2O û 50/50 à CH3CN/H2O û 65/35. La phase aqueuse obtenue est réextraite par l'acétate d'éthyle, séchée, évaporée pour fournir 800 mg d'une huile incolore, engagée directement au stade suivant. Rdt = 50% . CCM SiO2 Rf 0.4 (CH2C12/MeOH/NH4OH û 90/9/1).
Etape 5 : A une solution de 800 mg du composé obtenu précédemment (0.77 mmol, 1 eq) dans 20 mL d'EtOH, on ajoute sous agitation 20 mL d'une solution d'isopropanol saturé de HC1.
L'agitation est maintenue pendant 5 h. Le milieu est évaporé sous vide et repris sous agitation par 10 mL d'EtOH absolu. On obtient un précipité qui est filtré et séché sous vide. (500 mg). Une purification par HPLC préparative (C 18, Sunfire, OBD, 10 ) éluée par CH3CN/H2O/AcONH4 1.54 g/L, AcOH 2 mL/L, permet d'obtenir un composé pur, dont la solution est lyophilisée. Le lyophilisat est repris par 10 mL de MeOH, puis acidifié jusqu'à pH 3 par une solution d'isopropanol HC1. La solution du chlorhydrate obtenue est évaporée puis reprise par EtOH absolu. On obtient 190 mg (Rdt = 32 %) de 2- { 3-[4-(3-aminopropylamino)-butylamino]-propylamino } -N-[9-(4-hydroxy-3,5-diméthoxyphényl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro [3',4': 6,7]naphto[2,3-d] [ 1,3]dioxol-5-yl]-acétamide, sous forme de chlorhydrate.30

Claims (26)

REVENDICATIONS
1. Procédé de préparation des dérivés (poly)aminoalkylaminoacétamide d'épipodophyllotoxine de formule générale 1, et de leurs sels pharmaceutiquement acceptables OH Formule 1 dans laquelle R représente un atome d'hydrogène ou un groupe ù(CH2),-NH2 avec 15 2 < a,b,c < 5, caractérisé en ce qu'il comprend une étape de couplage peptidique de la 4-amino-4'-déméthylepipodophyllotoxine de formule 4bis OH Formule 4bis avec des composés de formule 6, o P P P I I I 20 HO,-\N.("raN N,R. Formule 6 dans lesquels P représente un groupement protecteur de la fonction amine, R' représente H ou une chaîne ù(CH2)c- NHP avec 2 < c < 5. 25
2. Procédé selon la revendication 1 caractérisé en ce que les groupements protecteurs de la fonction amine sont les groupements benzyloxycarbonyl ou tbutyloxycarbonyl. 10- 30 -
3. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que le composé de folnnule 1 est sous forme de chlorhydrate.
4. Procédé de préparation du 2-{3-[4-(3-aminopropylamino)-butylamino]-propylamino}-N-[9-(4-hydroxy-3, 5-dimethoxyphenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9- hexahydrofuro [3',4':6,7] naphto [2,3-d] [1,3] dioxol-5-yl]-acétamide, sous forme de chlorhydrate, selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 caractérisé en ce qu'il comprend une étape de couplage peptidique entre la 4-amino-4'-déméthylépipodophyllotoxine et l'acide {benzyloxycarbonyl-[3-(benzyloxycarbonyl-{4-[benzyloxycarbonyl- (3-benzyloxycarbonylaminopropyl)-amino]-butyl}-a.mino)-propyl]-amino} -acétique ou l'acide 3-(t-butyloxycarbonyl-{4-[t-butyloxycarbonyl- (3-t-butyloxycarbonylaminopropyl)-amino]-butyl } -amino)-propylamino] -acétique.
5. Procédé de préparation du 2-[3-(4-aminobutylamino)-propylamino]-N-[9-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl) -8-oxo-5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro[3',4':6,7]naphto[2,3-d][1,3] dioxol-5-yl]-acetamide, chlorhydrate selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 caractérisé en ce qu'il comprend une étape de couplage peptidique entre la 4-amino-4'-déméthylépipodophyllotoxine et l'acide (benzyloxycarbonyl- {3 -[benzyloxycarbonyl-(4-benzyloxycarbonylaminobutyl)-amino]-propyl}-amino) acétique ou l'acide (t-butyloxycarbonyl- { 3 -[t-butyloxycarbonyl-(4-t-butyloxycarbonylaminobutyl)-amino]-propyl} -amino) acétique.
6. Procédé de préparation du 2-{4-[4-(4-aminobutylamino)-butylamino]-butylamino}-N-[9-(4-hydroxy-3, 5-dimethoxyphenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro [3',4':6,7] naphto [2,3-d] [1,3] dioxol-5-yl]-acétamide, tétrachlorhydrate selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 caractérisé en ce qu'il comprend une étape de couplage peptidique entre la 4-amino-4'-déméthylépipodophyllotoxine et l'acide {benzyloxycarbonyl-[4-(benzyloxycarbonyl- {4-[benzyloxycarbonyl-(4-benzyloxycarbonylaminobutyl)-amino]-butyl}-amino) -butyl]-amino}-acétique ou l'acide {t-butyloxycarbonyl-[4-(t-butyloxycarbonyl-{4-[t-butyloxycarbonyl- (4-tbutyloxycarbonylaminobutyl)-amino]-butyl } -amino)-butyl]-amino } -acétique.- 31 -
7. Procédé de préparation du 2-[4-(3-aminopropylamino)-butylamino]-N-[9-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl) -8-oxo-5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro[3',4':6,7]naphto[2,3-d][1,3] dioxol-5-yl]-acétamide, chlorhydrate selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 caractérisé en ce qu'il comprend une étape de couplage peptidique entre la 4-amino-4'-déméthylépipodophyllotoxine et l'acide (benzyloxycarbonyl-{4-[benzyloxycarbonyl-(3-benzyloxycarbonylaminopropyl) -amino]-butyl} -amino)-acétique ou l'acide (tbutyloxycarbonyl-{4-[t-butyloxycarbonyl- (3-t-butyloxycarbonylaminopropyl)-amino]-butyl } -amino)-acétique.
8. Procédé de préparation des dérivés de formule générale 1 selon les revendications 1 à 3 caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) Greffage d'un motif acétique sur les réactifs aminés primaires de formule 5 H P P 1 1 1 AN 'N, H Ma R' Formule 5 à l'aide d'un haloacétate d'alkyle b) Protection de l'amine secondaire du composé obtenu à l'étape précédente a) par un groupement protecteur P 25 c) Saponification du composé obtenu à l'étape b) en milieu basique pour obtenir l'acide polyaminoacétique de formule 6 d) Couplage peptidique de l'acide polyaminoacétique de formule 6 obtenu à l'étape c) avec la 4-amino-4'-déméthylépipodophyllotoxine e) Elimination des groupements protecteurs P des composés obtenus à l'étape 30 précédente pour arriver aux composés de formule générale 1.
9. Procédé selon la revendication 8 caractérisé en ce que les groupements protecteurs P utilisés sont les groupements benzyloxycarbonyl ou t-butyloxycarbonyl.20- 32 -
10. Procédé selon l'une quelconque des revendications 8 ou 9 caractérisé en ce que l'haloacétate d'alkyle utilisé à l'étape a) est un bromo, chloro ou iodoacétate d'éthyle.
11. Procédé de préparation du 2-{3-[4-(3-aminopropylamino)-butylamino]-propylamino}-N-[9-(4-hydroxy-3, 5-dimethoxyphenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a, 9-hexahydrofuro [3',4':6,7] naphto [2,3-d] [1,3] dioxol-5-yl]-acétamide, sous forme de chlorhydrate selon les revendications 8 à 10 caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) Greffage d'un motif acétique sur 1' ester benzylique de l'acide {4-[(3-aminopropyl)-benzyloxycarbonylamino]butyl } -(3-benzyloxycarbonylaminopropyl)-carbamique ou la triBOC spermine à l'aide du bromoacétate d'éthyle pour obtenir l'ester éthylique de l'acide [3-(benzyloxycarbonyl-{4-[benzyloxycarbonyl- (3-benzyloxycarbonylaminopropyl)-amino]-butyl } -amino)-propyl]-amino } - acétique ou 1' ester éthylique de l'acide 3-(t-butyloxycarbonyl-{4-[tbutylox.ycarbonyl- (3-t-butyloxycarbonylaminopropyl)-amino]-butyl } - amino )-propylamino]-acétique b) Protection de l'amine secondaire du composé obtenu à l'étape précédente a) par un groupement protecteur qui est soit le groupement benzyloxycarbonyl soit le groupement t-butyloxycarbonyl c) Saponification du composé obtenu à l'étape b) en milieu basique pour obtenir soit l'acide {benzyloxycarbonyl-[3-(benzyloxycarbonyl-{4-[benzyloxycarbonyl- (3-benzyloxycarbonylaminopropyl)-amino]-butyl } -amino)-propyl]-amino}-acétique soit l'acide {t-butyloxycarbonyl-[3-(tbutyloxycarbonyl-{4-[t-butyloxycarbonyl- (3-tbutyloxycarbonylaminopropyl)-amino]-butyl } -amino)-propyl]-amino 1-acétique d) Couplage peptidique des composés obtenus à l'étape c) avec la 4-amino-4' -déméthylépipodophyl lotoxine e) Elimination des groupements protecteurs benzyloxycarbonyl ou tbutyloxycarbonyl des composés obtenus à l'étape précédente . 20 25 30 35-3 3 -
12. Procédé de préparation du le 2-[3-(4-aminobutylamino)-propylamino]-N-[9-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl) -8-oxo-5,5a,6,8,8a,9 hexahydrofuro [3',4':6,7] naphto [2,3d] [1,3] dioxol-5-yl]-acétamide, sous forme de chlorhydrate selon l'une quelconque des revendications 8 à 10 caractérisé en ce que les composés de formule 5 et 6 utilisés aux étapes a) et c) sont ceux pour lesquels a = 3, b = 4 et R' = H.
13. Procédé de préparation du 2-{4-[4-(4-aminobutylamino)-butylamino]-butylamino}-N-[9-(4-hydroxy-3, 5-dimethoxyphenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro [3',4':6,7] naphto [2,3-d] [1,3] dioxol-5-yl]-acétamide, sous forme de chlorhydrate selon l'une quelconque des revendications 8 à 10 caractérisé en ce que les composés de formule 5 et 6 utilisés aux étapes a) et c) sont ceux pour lesquels a = 4, b = 4 et c = 4.
14. Procédé de préparation du 2-[4-(3-aminopropylamino)-butylamino]-N-[9-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl) -8-oxo-5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro[3',4':6,7]naphto[2,3-d][1,3] dioxol-5-yl]-acétamide, sous forme de chlorhydrate selon l'une quelconque des revendications 8 à 10 caractérisé en ce que les composés de formule 5 et 6 utilisés aux étapes a) et c) sont ceux pour lesquels a = 4, b = 3 et R'==H.
15. Procédé de préparation des composés de formule 6 caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : P P P 1 1 1 NaNN~R HO Formule 6 a) Greffage d'un motif acétique sur les réactifs aminés primaires de formule 5 H P P I I I Nx'1- XN H xX N~ a R' Formule 5 à l'aide d'un haloacétate d'alkyle b) Protection de l'amine secondaire du composé obtenu à l'étape précédente a) 35 par un groupement protecteur P30- 34 - c) Saponification du composé obtenu à l'étape b) en milieu basique pour obtenir l'acide polyaminoacétique de formule 6.
16. Procédé de préparation des composés de formule 6 selon la revendication 15 caractérisé en ce que les groupements protecteurs P sont les groupements 10 benzyloxycarbonyl ou t-butyloxycarbonyl.
17. Procédé de préparation des composés de formule générale 6 selon l'une quelconque des revendications 15 ou 16 caractérisé en ce que 1' haloacétate d'alkyl utilisé à l'étape a) est un bromo, chloro ou iodoacétate d'éthyl. 15
18. Procédé de préparation des composés de formule générale 6 : l'acide {benzyloxycarbonyl- [3 -(benzyloxycarbonyl-{4-[benzyloxycarbonyl-(3-benzyloxycarbonylaminopropyl) -amino]-butyl } -amino)-propyl]-amino } -acétique ou l'acide {t-butyloxycarbonyl-[3-(t-butyloxycarbonyl- {4-[t-butyloxycarbonyl-(3-t- 20 butyloxycarbonylaminopropyl)-amino]-butyl}-amino)-propyl]-amino}-acétique selon les revendications 15 à 17 caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes: a) Greffage d'un motif acétique sur le réactifs aminé primaire de formule 5 dans lequel a = 3, b = 4, R' = - (CH2)3 û NHP avec P qui est soit un groupement 25 benzyloxycarbonyl soit un groupement t-butyloxycarbonyl à l'aide du bromoacétate d'éthyle. b) Protection de l'amine secondaire du composé obtenu à l'étape précédente a) par un groupement protecteur analogue à celui choisi à l'étape a) c) Saponification du composé obtenu à l'étape b). 30
19. Procédé de préparation du composé de formule 6 dans laquelle a = 3, b = 4 et R' = H selon l'une quelconque des revendication 15 à 17, caractérisé en ce que le composé de formule 5 utilisé à l'étape a) est celui pour lequel a = 3, b = 4 et R' = H. 35
20. Procédé de préparation du composé de formule 6 dans laquelle a = 4, b = 4 et c = 4 selon l'une quelconque des revendication 15 à 17, caractérisé en ce que le composé de formule 5 utilisé à l'étape a) est celui pour lequel a = 4, b = 4 et c = 4.- 35 -
21. Procédé de préparation du composé de formule 6 dans laquelle a = 4, b = 3 et R' _ H selon l'une quelconque des revendication 15 à 17, caractérisé en ce que le composé de formule 5 utilisé à l'étape a) est celui pour lequel a = 4, b = 3 et R' = H. 10
22. Utilisation des composés de formule générale 6, tels que préparés selon les revendications 15 à 21 pour la préparation des composés de formule générale 1 selon la revendication 1.
23. L'acide (benzyloxycarbonyl-{3-[ benzyloxycarbonyl-(4-benzyloxycarbonyl amino-15 butyl)-amino]-propyl}-amino)-acétique de formule suivante : HO OO
24. : L'acide (benzyloxycarbonyl-{4-[ benzyloxycarbonyl-(3-benzyloxycarbonyl amino-propyl)-amino]-butyl}-amino)-acétique de formule suivante : Yv O HOOCN~~ N N CO H O O O 20
25. L'acide (tert-butoxycarbonyl-{3-[ tert-butoxycarbonyl-(4-tert-butoxycarbonyl amino-butyl)-amino]-propyl}-amino) acétique de formule suivante : oy o oy O o HO N~~/N~/U~NH-36-
26. L'acide (tert-butoxycarbonyl-{4-[ tert-butoxycarbonyl-(3-tert-butoxycarbonyl amino-propyl)-amino]-butyl}-amino)-acétique de formule suivante : O o Y 0 HOOCNNNO H O O fi
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