WO2006064807A1 - 検体前処理方法およびそれを用いた免疫測定方法 - Google Patents

検体前処理方法およびそれを用いた免疫測定方法 Download PDF

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Kazuhiro Ohmiya
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Definitions

  • an object of the present invention is to provide a sample pretreatment method capable of measuring a nasal discharge-derived sample while preventing a nonspecific reaction in the immunoassay method, and an immunoassay method using the same. is there.
  • nucleoprotein Since the nucleoprotein is localized inside the envelope composed of the lipid bilayer membrane of the virus particle and does not exist on the surface of the window, it is necessary to extract the nucleoprotein by some method. Examples of such methods include destruction of physical virus particles by repeated ultrasonic treatment and freeze-thawing, and chemical treatment methods using a surfactant or the like.
  • chemical treatment method there is generally a method of extraction with an extractant such as a nonionic surfactant such as Tween 20 (trade name, general name: Polyoxyethylene Sorbitan Monolaurate).
  • latex dispersion buffer 50 mM Tris — HC1 buffer pH 8.4 is adjusted to 0.1% (w / v). 0.1 wt% 83 8, 0.1 l wt% NaN)
  • Semi-alkaline protease (derived from Aspergillus melleus, Amano Enzyme's semi-alkali proteinase) 0.4 mg, 1 weight 0 / on-Octanoy- N-methylglucamide (trade name ME GA-8, the same applies below), 0.1% by weight EDTA 2Na, 0.9 wt ° ⁇ & ⁇ 1, 0.09 wt% sodium azide-containing 50 mM CHES (N-Cyclohexy ⁇ 2-aminoethanesulfonic acid) buffer solution (pH 9.8) Sample extract A was used.
  • Purified influenza A virus AZKievZ30l / 94 (H3N2) is used as an antigen, and this is diluted with the sample diluent (0.1% by weight with i% BSA) to the prescribed virus concentration (4 ⁇ gZmL and 20 ⁇ g / mL). Dilute with PBS pH 7.4) containing 2% sodium azide A virus solution was prepared. Furthermore, just before the measurement, the virus solutions of each concentration, the sample extract ⁇ (0 ⁇ 4mgZmL Semi alkaline protease, 1 wt 0/0 n-Octanoy Bok N-methylgluca mide, 0. 5 weight 0/0 BSA, 0 . 9 wt 0/0 NaCl, 0.
  • the sample was diluted 10-fold with 50 mM Tris — HC1 buffer pH 8.4) containing 0.1% by weight NaCl, 0.1 weight 0 / oEDTA ′ 2Na, and this was used as a sample for measurement of latex immunoturbidimetry.
  • a sample with a virus concentration of zero a sample diluted 10-fold with the sample extract B was used.
  • the reaction buffer includes 1.95 wt% polyethylene glycol 20000 (Nacalaine soil), 1 wt% 83, 0.9 wt% NaCl, 0.1% EDTA '2Na, and 0.1 wt% azide.
  • Absorbance is measured using an immunoreaction measuring device Spotchem-IM (Arkray). Each reagent and sample are mixed in a cuvette at the following ratio and treated at 37 ° C for 5 minutes. The change in absorbance (measurement wavelength: 730 nm) in minutes was measured. The results obtained are shown in Table 2 below.

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Abstract

　免疫測定方法において、非特異的な反応を防止しつつ、鼻汁由来検体を測定可能にする検体前処理方法を提供する。予め、前記鼻汁由来検体をプロテアーゼで処理し、その後、免疫測定方法を実施する。前記プロテアーゼとしてセミアルカリプロテアーゼ（EC 3.4.21.63）を用いることが好ましい。また、本発明の前処理方法は、前記鼻汁由来検体中のインフルエンザウイルスを対象にすることが好ましい。前記免疫測定方法としては、免疫凝集法が好ましく、例えば、免疫比濁法、ラテックス免疫比濁法、スライドガラス上でのラテックス凝集法などがある。                                                                             

Description

明 細 書
検体前処理方法およびそれを用いた免疫測定方法
技術分野
[0001] 本発明は、検体前処理方法およびそれを用いた免疫測定方法に関する。
背景技術
[0002] 抗原抗体反応を利用した免疫測定方法は、検体若しくは試料中の成分若しくは物 質を高感度に検出できるため、臨床検査の分野において、血液 (血漿 '血清'全血）、 尿、髄液、便などの様々な検体等を対象に利用されている。抗原抗体反応を利用し た免疫測定方法としては、例えば、酵素免疫測定法 (EIA法）、蛍光免疫測定法 (FI A)、化学発光免疫測定法（CLIA)、ィムノクロマト法、免疫比濁法 (TIA法）、ラテツ タス免疫比濁法 (LTIA)等の様々な方法がある。
[0003] その中でも、免疫比濁法、ラテックス免疫比濁法、スライドガラス上でのラテックス凝 集法 (以下、これら 3つの方法をまとめて「免疫凝集法」と呼ぶことがある）は、抗原と 未反応の抗体とを分離する B/F (Bound/Free)分離の操作が不要な原理であるこ とから、ホモジニァスィムノアッセィと呼ばれている。そして、簡便性と迅速性に優れた 方法として、例えば、 CRP (C反応性蛋白）、 AS〇（抗ストレプトリジン〇）、 RF (リウマ チ因子）、尿中マイクロアルブミン、エラスターゼ等、多くの項目の臨床検査に適用さ れている。
[0004] これら免疫凝集法の測定対象検体は、血液 (血清、血漿、全血)、尿、子宮類管粘 液等が一般的である。一方、鼻腔ぬぐい液、鼻腔吸引液、鼻腔洗浄液等として採取 される鼻汁由来検体について測定される項目としては、インフルエンザウイルスや RS ウィルス等、呼吸器系感染症の判定に利用されるものがある。しかし、これらの項目 の測定方法は、いずれもその原理力 Wムノクロマト法や膜フィルターを利用した EIA 法であり、鼻汁由来検体について、免疫凝集法を利用する測定方法は、未だに実用 化されていない（例えば、非特許文献 1〜4参照）。
[0005] さて、鼻汁由来検体は、個別の検体によって程度は違うが、ある程度の粘性を持つ ているものが多ぐこのことからもわかるように、 目的とする測定対象物質の他に、糖タ ンパク等の高分子物質が非常に多く含まれている。ィムノクロマト法や膜フィルターを 利用した EIA法では、原因物質は特定されていないものの、検体中の共存物質が非 特異的反応を引き起こし、間違った検査結果をもたらす場合があることが知られてい る。間違った検査結果により偽陽性となる場合、真の病因特定を遅らせることになり、 さらには、不適切な措置によって症状をかえって悪化させる場合もある。そのため、 鼻汁由来検体は、例えば、界面活性剤を添加して粘性を低下させたり、予め、濾紙 やフィルタ一等で鼻汁由来検体中の固形物（共存物質)を除去してから測定されて いる。し力、しながら、それでもなお非特異的反応により多くの偽陽性が生じている。
[0006] 本発明者らは、簡易なィムノクロマト法や膜フィルターを利用した EIA法と同様に、 簡易な免疫凝集法でも鼻汁由来検体を測定しようと研究した。しかしながら、やはり、 界面活性剤を添加したり、予め固形成分の除去処理を施すだけの検体前処理では 、多くの非特異的な反応が生じてしまい、本来陰性となるべき検体が陽性、つまり偽 陽性となってしまっていた。
非特許文献 1 :日本小児科学会雑誌 108卷 3号 406— 411 (2004)
非特許文献 2 :感染症学雑誌 第 78卷 9号 865— 871 (2004)
非特許文献 2 :感染症学雑誌 第 77卷 12号 1007— 1014 (2003)
非特許文献 4 :医学検査 VOL. 52 NO. 2 141 144 (2003)
発明の開示
発明が解決しょうとする課題
[0007] そこで、本発明の目的は、免疫測定方法において、非特異的な反応を防止しつつ 、鼻汁由来検体を測定可能にする検体前処理方法およびそれを用いた免疫測定方 法の提供である。
課題を解決するための手段
[0008] 前記目的を達成するために、本発明の検体前処理方法は、免疫測定方法におけ る検体前処理方法であって、前記検体は、鼻汁由来検体であり、前記免疫測定方法 の実施に先立ち、前記検体をプロテアーゼで処理する検体前処理方法である。
[0009] また、本発明の免疫測定方法は、免疫反応を利用した免疫測定方法であって、検 体が鼻汁由来検体であり、この検体に対し、前記本発明の検体前処理方法により前 処理を行い、その後、前記免疫反応を実施する免疫測定方法である。 発明の効果
[0010] このように、鼻汁由来検体を予めプロテアーゼで処理すれば、免疫測定方法であつ ても、非特異的な反応を防止した測定が可能となる。この結果、本発明により、簡便 性と迅速性に優れた鼻汁由来検体の測定が実現できる。
発明を実施するための最良の形態
[0011] つぎに、本発明について、詳しく説明する。
[0012] 本発明において、前記免疫測定方法は、特に制限されないが、例えば、前記検体 中の測定対象物質と、不溶性担体に担持され且つ前記測定対象物質と免疫反応す る免疫学的物質とを免疫反応させ、その際に生じる前記不溶性担体の凝集度合いを 測定することにより、前記測定対象物質の濃度を測定する方法 (いわゆる「免疫凝集 法」）がある。本発明の検体前処理方法は、前記免疫凝集法において、適用すること が好ましい。
[0013] 本発明に用いるプロテアーゼは、特に限定されるものではなぐ例えば動物由来、 植物由来の他、ァスペルギルス属、バチルス属、ストレプトミセス属、リゾパス属、ぺニ シリウム属等の微生物由来プロテアーゼが挙げられる。具体的な酵素名としては、例 えば、セミアルカリプロテアーゼ、トリプシン、キモトリブシン、エラスターゼ、ズブチリシ ン、プロテナーゼ 、プロナーゼ、パパイン、ブロメラインなどが挙げられる。またプロ テアーゼは、 1種類だけでなぐ 2種類以上を併用しても良い。
[0014] 鼻汁由来検体は、例えば、鼻腔ぬぐい液、鼻腔吸引液、鼻腔洗浄液として得られる ものを使用することができる。
[0015] また、本発明では、測定対象物質力 Sインフルエンザウイルスであるときに、好適に使 用できる。この場合、本発明を用いると、前記不溶性担体の凝集度合いを定量するこ とで、ウィルス量を定量的に測定することが可能である。これは、臨床症状と合わせて 判断することによって、検体中のウィルス量が多い場合には、その患者での重篤度が ある程度予想されるし、また、その患者から周囲の人への感染力が強いことが予想さ れる。発症からの時間経過とともにウィルス量が減少した場合には、感染の末期であ ることも予想され易くなり、治療方針や患者への説明に役立てることができる。 [0016] プロテアーゼによる鼻汁由来検体の処理は、プロテアーゼを用いる以外は、特に制 限されないが、例えば、プロテアーゼの酵素活性を測定する場合と同様に、酵素活 性が有効な pH範囲内で、一般的な条件により行うことができる。プロテアーゼがセミ アルカリプロテアーゼの場合、例えば、酵素を 50mMの CHES (N_Cyclohexy卜 2_am moethanesulfonic acid)緩衡液、pH9. 8、 1直 % n_Octanoy卜 N_methylglucamide、 0. l重量％EDTA· 2Na、 0. 9重量％NaCl、 0. 09重量％アジ化ナトリウムを含む） に溶解したものを検体抽出液とし、鼻汁由来検体と反応させる。また、前記検体抽出 液の緩衝液は、前述の CHES緩衝液に限らず、例えば、リン酸緩衝液、トリス塩酸緩 衝液、 CAPS (N-Cyclohexyl-3-aminopropanesulfonic acid)緩衝液等も好ましく使用 できる。また、緩衝液の pHは、例えば、 pH5〜： 11が好ましぐこの pH範囲の場合、 例えば、緩衝剤の種類も特に限定されるものではなレ、。プロテアーゼがトリプシン、キ モトリプシン、エラスターゼ、ズブチリシンの場合では、例えば、 50mMトリス塩酸緩衝 液（ρΗ8· 4、 1重量0 /0 n-Octanoyl-N-methylglucamide, 0. 03重量0 /oCaCl、 0. 9
2 重量％NaCl、 0. 09重量％アジ化ナトリウムを含む）に溶解して鼻汁由来検体と反応 させること力 Sできる。
[0017] これらの好ましいプロテアーゼの中でも、例えば、検体の影響を最も受け難ぐさら に、前記不溶性担体との相性が特に良いことから、本発明におけるプロテアーゼとし ては、セミアルカリプロテアーゼ（EC 3.4.21.63)を特に好ましく用いることができる。
[0018] 本発明において、前記免疫測定方法は、前述のように、不溶性担体を用いた免疫 凝集法を利用した方法であることが好ましい。前記不溶性担体としては、特に制限さ れないが、不溶性担体粒子があげられる。前記不溶性担体粒子としては、例えば、 ポリスチレン製のラテックス粒子が一般的である力 ポリスチレンに限らず、ポリプロピ レン製粒子、ポリエチレン製粒子、ゼラチン粒子、金属コロイド等、抗体または抗原を 感作できる粒子が使用できる。粒子と抗原又は抗体との結合は、例えば、物理的な 吸着力を利用した物理吸着法を適用できるが、その他に、例えば、前記粒子上の力 ルポキシル基と抗原又は抗体のアミノ基を共有結合させる等、化学結合法でもよレ、。 凝集度合いの検出方法は、例えば、濁度を測定するための分光光度計等、 自動的 に制御された光学測定装置を用いても良いし、凝集の有無をスライドガラス上などで 目視確認する方法でも良レヽ。
[0019] 本発明において、測定対象物質がインフルエンザウイルスである場合、インフルェ ンザウィルスの A型と B型の鑑別を行うことが好ましい。その場合、例えば、インフルェ ンザウィルスの核蛋白に対して特異的な抗体を使用することが好ましレ、。インフルェ ンザウィルスの表面蛋白であるへマグルチニン等は、抗原性が次々と変異するため、 一定の抗へマグノレチニン抗体を用いた場合、流行したウィルスの亜型によって反応 性が異なってしまい、場合によっては反応しなくなる可能性がある。しかし、核蛋白に 対する抗体を用いれば、核蛋白は A型や B型を分類する際の基本となる抗原性を維 持しており、亜型の種類に関わらず一定の反応性を示すため、 A型と B型の鑑別に 適している。
[0020] 核蛋白は、ウィルス粒子の脂質二層膜からなるエンベロープの内部に局在し、ウイ ノレス表面には存在しないため、何らかの方法で核蛋白を抽出する必要がある。その 方法としては、例えば、超音波処理や凍結融解の繰り返しによる物理的なウィルス粒 子の破壊や、界面活性剤等による化学的な処理方法がある。化学的な処理方法で は、一般的に、 Tween20 (商品名、一般名称： Polyoxyethylene Sorbitan Monolaurat e)のような非イオン性界面活性剤等の抽出剤で抽出する方法がある。 EIA法ゃィム ノクロマト法等の従来法では、抗原の抽出に界面活性剤である Tween20を用いてい る力 Tween20をそのままラテックス免疫比濁法に適用すると、抗原に対する反応 性が著しく低下してしまう。このような場合、界面活性剤として、 n-Octanoy卜 N-methyl glucamide (商品名： MEGA— 8)を使用すれば、ラテックス免疫比濁反応の反応性に 及ぼす影響が少なぐかつ、抽出効果もあるため、好ましい。
[0021] つぎに、本発明の実施例について説明する。ただし、本発明は、下記の実施例に 限定されない。
実施例 1
[0022] (実験 1 )抗インフルエンザ A型抗体感作ラテックスの調製
抗インフルエンザ A型マウスモノクローナル抗体を 0. 8mg/mLになるように調製し た抗体液（50mMリン酸緩衝液 ρΗ7 · 4) 0. 5mLと、 1 % (w/v)ポリスチレンラテツ タス粒子 (積水化学社製、平均粒子径 0. 5 μ ΐη) 0. 5mLとを混合し、 37°Cで 1時間 インキュベートして抗体をラテックスに感作した。そこに、 BSA (Sigma社製、ゥシ血 清アルブミン）を 1重量％となるように添加し、 37°Cで 1時間インキュベートしてブロッ キングを行った。ブロッキングされた抗体感作ラテックスを 50mMリン酸緩衝液（pH7 . 4)で洗浄した後、 0. l % (w/v)になるようにラテックス分散緩衝液（50mM Tris — HC1緩衝液 pH8. 4、 0. 1重量％83八， 0. l重量％NaN )に分散させて、抗イン
3
フルェンザ A型抗体感作ラテックス試液とした。
[0023] (実験 2)抗インフルエンザ B型抗体感作ラテックスの調製
抗インフルエンザ B型マウスモノクローナル抗体を 0. 6mgZmLになるように調製し た抗体液（50mMリン酸緩衝液 pH7. 4) 0. 5mLと、 1 % (w/v)ポリスチレンラテツ タス粒子 (積水化学社製、平均粒子径 0. 6 M m) 0. 5mLとを混合し、 37°Cで 1時間 インキュベートして抗体をラテックスに感作した。ブロッキング以降の操作は（実験 1) と同様に行レ、、抗インフルエンザ B型抗体感作ラテックス試液とした。
[0024] 以下の一連の実験は、プロテアーゼとして、セミアルカリプロテアーゼを使用して実 験を行ったものである。
[0025] (実験 3)検体抽出液の調製
セミアルカリプロテアーゼ（Aspergillus melleus由来、天野ェンザィム社製セミアルカ リプロティナーゼ） 0· 4mgを、 1重量0 /o n-Octanoy卜 N-methylglucamide (商品名 ME GA— 8、以下同様）、 0. l重量％EDTA· 2Na、 0. 9重量° ^&〇1、 0. 09重量％ァ ジ化ナトリウムを含む 50mM CHES (N-Cyclohexy卜 2- aminoethanesulfonic acid)緩 衝液（pH9. 8) lmLに溶解して、検体抽出液 Aとした。
[0026] また、セミアルカリプロテアーゼ（Aspergillus melleus由来、天野ェンザィム社製セミ ァノレカリプロティナーゼ) 0. 4mgを、 1重量0 /o n-Octanoyl-N-methylglucamide, 0. 5 重量％BSA、 0. 9重量％NaCl、 0. 1重量％EDTA' 2Naを含む 50mM Tris _H Q緩衝液（ ρΗ8. 4) lmLに溶解して、検体抽出液 Bとした。
[0027] (実験 4)ラテックス免疫比濁法によるインフルエンザ A型抗原標準液の測定
抗原として精製インフルエンザ A型ウィルス AZKievZ30l/94 (H3N2)を使用 し、これを所定のウィルス濃度（4 μ gZmLと 20 μ g/mL)となるように検体希釈液（ i %BSAと 0. 1重量％アジ化ナトリウムを含む PBS pH7. 4)で希釈し、二種類 のウィルス液を調製した。さらに、測定の直前に、各濃度のウィルス液を、検体抽出 液 Β (0· 4mgZmLセミアルカリプロテアーゼ、 1重量0 /0 n-Octanoy卜 N-methylgluca mide、 0. 5重量0 /0BSA、 0. 9重量0 /0NaCl、 0. 1重量％EDTA' 2Naを含む 50mM Tris— HCl緩衝液 pH8. 4)で 10倍希釈し、これを検体としてラテックス免疫比濁法 の測定に用いた。ウィルス濃度ゼロの検体としては、前記検体希釈液を前記検体抽 出液 Bで 10倍希釈したものを用レ、た。
[0028] 反応用緩衝液としては、 2. 1重量％ポリエチレングリコール 20000 (ナカライネ土製） 、 1重量％BSA、 0. 9重量。/^&じ1、 0. l重量％EDTA· 2Naぉょび0. 1重量％ァ ジ化ナトリウムを含む 200mM Tris- HCl (pH8. 4)緩衝液を用いた。吸光度の測 定には、免疫反応測定装置スポットケムー IM (アークレイ社製）を使用し、以下の割 合で各試薬と検体とをキュベット内で混合し、 37°Cで 5分間処理した際の、 5分間に おける吸光度（測定波長 660nm)変化量を測定した。得られた結果を、下記表 1に 示す。
S (検体） ： 28 / L
R1 (反応用緩衝液） ： 56 L
R2 (抗体感作ラテックス試液）： 56 /i L
[0029] [表 1]
Figure imgf000008_0001
[0030] 前記表 1から判断できるように、 A型インフルエンザウイルス濃度に比例して吸光度 差が増加してレ、る（反応してレ、る）ことから、検体をセミアルカリプロテアーゼを含む検 体抽出液で処理することによって、ラテックス免疫比濁法で定量的に A型インフルェ ンザウィルス量を測定できることが確認できた。
[0031] (実験 5)ラテックス免疫比濁法によるインフルエンザ B型抗原標準液の測定
抗原として精製インフルエンザ B型ウィルス B/Victoria/504/OOを使用し、こ れを所定のウィルス濃度（1 μ g/mLと 5 g/mL)となるように検体希釈液（1重量 %BSAと 0. 1重量％アジ化ナトリウムを含む PBS pH7. 4)で希釈し、二種類のウイ ノレス溶液を調製した。さらに、測定の直前に、各濃度のウィルス液を、検体抽出液 B ( 0. 4mg/mLセミアルカリプロテアーゼ、 1重量0/ on - Octanoy卜 N_methylglucamide、 0. 5重量0 /oBSA、 0. 9重量％NaCl、 0. 1重量0 /oEDTA' 2Naを含む 50mM Tris — HC1緩衝液 pH8. 4)で 10倍希釈し、これを検体としてラテックス免疫比濁法の測 定に用いた。ウィルス濃度ゼロの検体としては、前記検体希釈液を前記検体抽出液 Bで 10倍希釈したものを用いた。
[0032] 反応用緩衝液としては、 1. 95重量％ポリエチレングリコール 20000 (ナカライネ土製 )、 1重量％83八、 0. 9重量％NaCl、 0. 1 %EDTA' 2Naおよび 0. 1重量％アジ化 ナトリウムを含む 200mM Tris-HCl (pH8. 4)緩衝液を用いた。吸光度の測定に は、免疫反応測定装置スポットケム -IM (アークレイ製）を使用し、以下の割合で各 試薬と検体とをキュベット内で混合し、 37°Cで 5分間処理した際の、 5分間における 吸光度（測定波長 730nm)変化量を測定した。得られた結果を、下記表 2に示す。
S (検体） ： 28
R1 (反応用緩衝液） ： 56
R2 (抗体感作ラテックス試液）： 56 /i L
[0033] [表 2]
Figure imgf000009_0001
[0034] 前記表 2から判断できるように、 B型インフルエンザウイルス濃度に比例して吸光度 差が増加してレ、る（反応してレ、る）ことから、検体をセミアルカリプロテアーゼを含む検 体抽出液で処理することによって、ラテックス免疫比濁法で定量的に B型インフルェ ンザゥイノレス量を測定できることが確認できた。
[0035] (実験 6)インフルエンザ A型陰性検体の測定
症状から明らかにインフルエンザではない人より鼻腔吸引液を採取し、そのうちィム ノクロマト法を原理とする市販のインフルエンザウイルス検出キット (日本べタトン 'ディ ッキンソン社商品名キヤピリア FluA/B)で A型陰性であることが確認できた鼻腔吸 引液を検体として使用し（14検体）、インフルエンザ A型ウィルスを測定した。綿棒に 力 ませた鼻腔吸引液を検体抽出液 lmLに懸濁する点以外は、基本的に実験 4と 同じ方法で行った。検体抽出液としては、プロテアーゼに関する以外は、前記実験 4 で使用した検体抽出液 Bと同様の組成であり、セミアルカリプロテアーゼを含まない 抽出液 B— 1と、セミアルカリプロテアーゼを 0. 4mg/mL含む抽出液 B- 2とを使用 した。そして、これらの抽出液 B—1および B_ 2を用いて、それぞれの結果を比較し 、セミアルカリプロテアーゼによる非特異的反応の抑制効果を調べた。定性判定結果 は、吸光度差が 0. 0050以上を陽性（ + )、 0. 0050未満を陰性（-)とした。これら の結果を下記表 3に示す。なお、抽出液 B- 1を用いた例は比較例となり、抽出液 B- 2 を用いた例が実施例となる。
[表 3]
Figure imgf000010_0001
前記表 3から判断されるように、ラテックス免疫比濁法によるインフルエンザ A型ウイ ルスの測定において、セミアルカリプロテアーゼを含まない抽出液 B- 1で処理した場 合は、 14検体中 12検体で非特異的に凝集反応を生じ、偽陽性を示したが、セミアル カリプロテアーゼを含む抽出液 B- 2で処理した場合、 14検体すべてが本来の陰性 結果となった。
[0038] (実験 7)インフルエンザ B型陰性検体の測定
症状から明らかにインフルエンザではない人より鼻腔吸引液を採取し、そのうちィム ノクロマト法を原理とする市販のインフルエンザウイルス検出キット（日本べタトン.ディ ッキンソン社商品名キヤピリア FluAZB)で B型陰性であることを確認した鼻腔吸引 液を検体として使用し（8検体）、インフルエンザ B型ウィルスを測定した。綿棒にから ませた鼻腔吸弓 |液を検体抽出液 lmLに懸濁する点以外は、基本的に実験 5と同じ 方法で行った。検体抽出液としては、プロテアーゼに関する以外は、前記実験 5で使 用した検体抽出液 Bと同様の組成であり、セミアルカリプロテアーゼを含まない抽出 液 B—1と、セミアルカリプロテアーゼを 0. 4mg/mL含む抽出液 B- 2とを使用した。 そして、これらの抽出液 B—1および B— 2を用いて、それぞれの結果を比較し、セミ アルカリプロテアーゼによる非特異的反応の抑制効果を調べた。定性判定結果は、 吸光度差が 0. 0050以上を陽性（ + )、 0· 0050未満を陰性（-)とした。これらの結 果を表 4に示す。検体 # 15〜# 19は A型 B型とも陰性であった力 # 20〜# 22の 3 検体は A型陽性 B型陰性であった。なお、抽出液 B- 1を用いた例は比較例であり、抽 出液 B- 2を用いた例が実施例となる。
[0039] [表 4]
Figure imgf000011_0001
[0040] 前記表 4から判断されるように、ラテックス免疫比濁法によるインフルエンザ B型ウイ ノレスの測定において、セミアルカリプロテアーゼを含まない抽出液 B- 1で処理した場 合は、 8検体中 7検体で非特異的に凝集反応を生じ、偽陽性を示したが、セミアルカ リプロテアーゼを含む抽出液 B- 2で処理した場合、 8検体すべてが本来の陰性結果 となった。
[0041] (実験 8)インフルエンザ A型ウィルスの相関性試験
臨床的にインフルエンザ感染が疑われる患者 61名の鼻腔吸引液を採取し、これを 検体とした。そして、これらの検体を、本発明に従ってセミアルカリプロテア一ゼを含 む検体抽出液 A (実験 3で調製したもの）で処理し、ラテックス免疫比濁法で測定した 。測定方法は、前記実験 6と同じ方法で行った。得られた吸光度差のデータについて 、前述の基準に基づき、定性的に陽性（+ )、陰性（―）の判定を行い、この結果を対 象法の結果と比較した。対照法として、 MDCK (Madin-Darby canine kidney)細胞を 用いたウィルス分離培養法を実施した。両方法による一致結果を下記表 5に示す。
[0042] [表 5]
Figure imgf000012_0001
[0043] 前記表 5から判断されるように、セミアルカリプロテアーゼを含む検体抽出液 Aで鼻 腔吸引液検体を前処理し、ラテックス免疫比濁法によりインフルエンザ A型ウィルス の測定を行った場合、対照法のウィルス分離培養法による結果と、良好な相関性が 確認された。この結果から、本発明の免疫測定方法は、従来のウィルス分離培養法 の代替法として、十分に利用可能であるといえる。
[0044] (実験 9)インフルエンザ B型ウィルスの相関性試験
臨床的にインフルエンザ感染が疑われる患者 35名の鼻腔吸引液を採取し、これを 検体とした。そして、これらの検体を、本発明に従ってセミアルカリプロテア一ゼを含 む検体抽出液 A (実験 3で調製したもの）で処理し、ラテックス免疫比濁法で測定した 。測定方法は、前記実験 7と同じ方法で行った。得られた吸光度差のデータについて 、前述の基準に基づき、定性的に陽性（+ )、陰性（-)の判定を行い、この結果を対 照法の結果と比較した。対照法として、ィムノクロマト法を原理とする市販の B型インフ ルェンザウィルス検出キット（日本べタトン.ディッキンソン社、商品名キヤピリア FluB) を実施した。両方法による一致結果を下記表 6に示す。
[0045] [表 6]
Figure imgf000013_0001
[0046] 前記表 6から判断されるように、セミアルカリプロテアーゼを含む検体抽出液 Aで鼻 腔吸引液検体を前処理し、ラテックス免疫比濁法によりインフルエンザ B型ウィルスの 測定を行った場合、対照法のィムノクロマト法による結果と、良好な相関性が確認さ れた。この結果から、本発明の免疫測定方法は、従来のィムノクロマト法の代替法と して、十分に利用可能であるといえる。
産業上の利用可能性
[0047] 以上のように、本発明の前処理方法を適用すれば、非特異的な反応を防止した鼻 汁由来検体の免疫測定方法が実施可能となる。したがって、本発明の前処理方法は 、医学や生物学等の広い分野に適用でき、特に、臨床検査の分野に有用である。

Claims

請求の範囲
[1] 免疫測定方法における検体前処理方法であって、
前記検体が、鼻汁由来検体であり、
前記免疫測定方法の実施に先立ち、前記検体をプロテアーゼで処理することを特 徴とする検体前処理方法。
[2] 前記免疫測定方法が、前記検体中の測定対象物質と、不溶性担体に担持され且 つ前記測定対象物質と免疫反応する免疫学的物質とを免疫反応させ、その際に生 じる前記不溶性担体の凝集度合いを測定することにより、前記測定対象物質の濃度 を測定する方法である、請求の範囲 1記載の検体前処理方法。
[3] 前記プロテアーゼが、セミアルカリプロテアーゼ（EC 3.4.21.63)である、請求の範囲 1記載の検体前処理方法。
[4] 前記検体中の測定対象物質が、インフルエンザウイルスである、請求の範囲 1記載 の検体前処理方法。
[5] 前記不溶性担体に担持された免疫学的物質が、前記インフルエンザウイルスに対 する抗体である、請求の範囲 4記載の検体前処理方法。
[6] プロテアーゼ処理の pH条件力 S、 5〜： 11の範囲である、請求の範囲 1記載の検体前 処理方法。
[7] 免疫反応を利用した免疫測定方法であって、
検体が鼻汁由来検体であり、この検体に対し、請求の範囲 1記載の検体前処理方 法により前処理を行い、その後、前記免疫反応を実施することを特徴とする免疫測定 方法。
[8] 前記免疫測定方法が、前記検体中の測定対象物質と、不溶性担体に担持され且 つ前記測定対象物質と免疫反応する免疫学的物質とを免疫反応させ、その際に生 じる前記不溶性担体の凝集度合いを測定することにより、前記測定対象物質の濃度 を測定する方法である、請求の範囲 7記載の免疫測定方法。
[9] 前記検体中の測定対象物質が、インフルエンザウイルスである、請求の範囲 7記載 の免疫測定方法。
[10] 前記不溶性担体に担持された免疫学的物質が、前記インフルエンザウイルスに対 する抗体である、請求の範囲 8記載の免疫測定方法。
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Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102628868A (zh) * 2011-12-30 2012-08-08 北京九强生物技术股份有限公司 检测非对称二甲基精氨酸含量的胶乳增强免疫比浊法试剂盒
CN106290822A (zh) * 2016-07-28 2017-01-04 武汉景川诊断技术股份有限公司 D‑二聚体免疫胶乳微球制备方法及应用
CN106324239A (zh) * 2016-07-28 2017-01-11 武汉景川诊断技术股份有限公司 C‑反应蛋白免疫胶乳微球制备方法及应用
CN112858698A (zh) * 2021-04-25 2021-05-28 北京沃森赛瑟生物技术有限公司 一种d-二聚体胶乳增强免疫比浊试剂盒及其制备方法
JP7105970B1 (ja) 2021-06-16 2022-07-25 積水メディカル株式会社 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の免疫測定方法及び免疫測定キット
JP2023026761A (ja) * 2021-06-16 2023-03-01 積水メディカル株式会社 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の免疫測定方法及び免疫測定キット、並びにモノクローナル抗体又はその抗体断片

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101894106B1 (ko) * 2010-03-31 2018-08-31 세키스이 메디칼 가부시키가이샤 측정계외 성분에 의한 간섭을 감소시키는 방법
CN101819202B (zh) * 2010-05-06 2012-12-26 上海太阳生物技术有限公司 D-二聚体(D-Dimer)测定试剂盒(胶乳免疫比浊法)
WO2013040346A1 (en) * 2011-09-14 2013-03-21 The Ohio State University Devices and methods for the rapid and accurate diagnosis and treatment of sinusitis
US11085931B2 (en) * 2015-01-09 2021-08-10 W. Health L.P. Universal assay for determining the quantity of TNFα inhibitory drugs and their corresponding anti-drug-antibodies
SI3075862T1 (en) 2015-03-30 2018-02-28 Entvantage Diagnostics, Inc. Aids and tests for the diagnosis of sinusitis
US10921320B2 (en) 2015-03-30 2021-02-16 Entvantage Diagnostics, Inc. Devices and methods for diagnosis of sinusitis
US11650213B2 (en) 2015-03-30 2023-05-16 Entvantage Diagnostics, Inc. Devices and assays for diagnosis of viral and bacterial infections
EP3482199A1 (en) * 2016-07-08 2019-05-15 Atonomics A/S A universal assay for determining the quantity of therapeutic monoclonal antibodies and their corresponding anti-drug-antibodies in samples
JP6853504B2 (ja) 2017-03-01 2021-03-31 スズキ株式会社 リチウム空気電池の負極複合体構造

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5530656A (en) * 1978-08-28 1980-03-04 Fujirebio Inc Sensitized latex for inspecting influenza and production thereof
JPS55141198A (en) * 1979-03-06 1980-11-04 Inst Nat Sante Rech Med Method and reagent of coagulation reaction test for detecting influenza virus
JP2002062299A (ja) * 2000-08-24 2002-02-28 Kyowa Medex Co Ltd 結核菌の検出方法及び試薬
JP2004069341A (ja) * 2002-08-02 2004-03-04 Kyokuto Seiyaku Kogyo Kk 抗酸菌アクリジンオレンジ蛍光染色法
JP2004245831A (ja) * 2003-01-21 2004-09-02 Denka Seiken Co Ltd メンブレンアッセイ法
JP2005164496A (ja) * 2003-12-04 2005-06-23 Arkray Inc インフルエンザウイルスの免疫学的測定方法

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4663277A (en) * 1983-05-20 1987-05-05 Profile Diagnostic Sciences Inc. Virus detection method and materials
US5122449A (en) * 1988-10-07 1992-06-16 Eastman Kodak Company Use of a protease in the extraction of chlamydial, gonococcal and herpes antigens
WO1991006559A1 (en) * 1989-10-24 1991-05-16 E.I. Du Pont De Nemours And Company Use of polymerized immunoglobulin to reduce the incidence of false-positive responses in immunoassays
JPH10267929A (ja) * 1997-03-25 1998-10-09 Shima Kenkyusho:Kk 簡易測定方法及びそれに使用する反応板並びに試薬キ ット
AU1927899A (en) * 1997-12-18 1999-07-05 Sepracor, Inc. Screening assays for the detection and diagnosis of influenza virus
WO1999031267A1 (en) * 1997-12-18 1999-06-24 Sepracor Inc. Methods for the simultaneous identification of novel biological targets and lead structures for drug development
US20030186285A1 (en) * 2000-08-01 2003-10-02 Noriyuki Saito Method of pretreating sample
CA2511372C (en) * 2002-12-26 2014-07-08 Jeff D. Debad Methods, compositions and kits for biomarker extraction
JP2004245813A (ja) * 2003-02-14 2004-09-02 Bee Brand Medico Dental Co Ltd 唾液のりん酸カルシウム沈澱物形成能の検査法
JP2004309477A (ja) * 2003-03-26 2004-11-04 Sysmex Corp 抗体測定方法
EP1494030B1 (en) * 2003-06-30 2013-11-27 Sysmex Corporation Sample pretreatment solution for influenza virus test by immunochromatography

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5530656A (en) * 1978-08-28 1980-03-04 Fujirebio Inc Sensitized latex for inspecting influenza and production thereof
JPS55141198A (en) * 1979-03-06 1980-11-04 Inst Nat Sante Rech Med Method and reagent of coagulation reaction test for detecting influenza virus
JP2002062299A (ja) * 2000-08-24 2002-02-28 Kyowa Medex Co Ltd 結核菌の検出方法及び試薬
JP2004069341A (ja) * 2002-08-02 2004-03-04 Kyokuto Seiyaku Kogyo Kk 抗酸菌アクリジンオレンジ蛍光染色法
JP2004245831A (ja) * 2003-01-21 2004-09-02 Denka Seiken Co Ltd メンブレンアッセイ法
JP2005164496A (ja) * 2003-12-04 2005-06-23 Arkray Inc インフルエンザウイルスの免疫学的測定方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
THE JAPANESE JOURNAL OF MEDICAL TECHNOLOGY, vol. 52, no. 2, 2003, pages 141 - 144
THE JOURNAL OF THE JAPAN PEDIATRIC SOCIETY, vol. 108, no. 3, 2004, pages 406 - 411
THE JOURNAL OF THE JAPANESE ASSOCIATION FOR INFECTIOUS DISEASES, vol. 77, no. 12, 2003, pages 1007 - 1014
THE JOURNAL OF THE JAPANESE ASSOCIATION FOR INFECTIOUS DISEASES, vol. 78, no. 9, 2004, pages 865 - 871

Cited By (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102628868A (zh) * 2011-12-30 2012-08-08 北京九强生物技术股份有限公司 检测非对称二甲基精氨酸含量的胶乳增强免疫比浊法试剂盒
CN102628868B (zh) * 2011-12-30 2014-09-17 北京九强生物技术股份有限公司 检测非对称二甲基精氨酸含量的胶乳增强免疫比浊法试剂盒
CN106290822A (zh) * 2016-07-28 2017-01-04 武汉景川诊断技术股份有限公司 D‑二聚体免疫胶乳微球制备方法及应用
CN106324239A (zh) * 2016-07-28 2017-01-11 武汉景川诊断技术股份有限公司 C‑反应蛋白免疫胶乳微球制备方法及应用
CN106290822B (zh) * 2016-07-28 2018-06-19 武汉景川诊断技术股份有限公司 D-二聚体免疫胶乳微球制备方法及应用
CN106324239B (zh) * 2016-07-28 2018-06-19 武汉景川诊断技术股份有限公司 C-反应蛋白免疫胶乳微球制备方法及应用
CN112858698A (zh) * 2021-04-25 2021-05-28 北京沃森赛瑟生物技术有限公司 一种d-二聚体胶乳增强免疫比浊试剂盒及其制备方法
CN112858698B (zh) * 2021-04-25 2021-11-09 北京沃森赛瑟生物技术有限公司 一种d-二聚体胶乳增强免疫比浊试剂盒及其制备方法
JP7105970B1 (ja) 2021-06-16 2022-07-25 積水メディカル株式会社 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の免疫測定方法及び免疫測定キット
JP2022191725A (ja) * 2021-06-16 2022-12-28 積水メディカル株式会社 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の免疫測定方法及び免疫測定キット
JP2023026761A (ja) * 2021-06-16 2023-03-01 積水メディカル株式会社 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の免疫測定方法及び免疫測定キット、並びにモノクローナル抗体又はその抗体断片

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