JP2001318098A - アルカリ処理したウシ血清アルブミンを用いた免疫測定方法 - Google Patents
アルカリ処理したウシ血清アルブミンを用いた免疫測定方法Info
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- JP2001318098A JP2001318098A JP2000135400A JP2000135400A JP2001318098A JP 2001318098 A JP2001318098 A JP 2001318098A JP 2000135400 A JP2000135400 A JP 2000135400A JP 2000135400 A JP2000135400 A JP 2000135400A JP 2001318098 A JP2001318098 A JP 2001318098A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 従来、十分抑制することができなかった非特
異反応を抑制することができる免疫測定方法の提供。 【解決手段】 検体中に存在する抗体の有無を検出する
ために標識した抗イムノグロブリン抗体を用いる測定系
において、検体中の抗体と測定試薬との反応をアルカリ
処理したウシ血清アルブミンの存在下行わせることによ
り、ウシ血清アルブミンで被覆された抗原結合固相を用
いても十分抑制できなかった非特異反応を抑制すること
ができる、改善された免疫測定方法。
異反応を抑制することができる免疫測定方法の提供。 【解決手段】 検体中に存在する抗体の有無を検出する
ために標識した抗イムノグロブリン抗体を用いる測定系
において、検体中の抗体と測定試薬との反応をアルカリ
処理したウシ血清アルブミンの存在下行わせることによ
り、ウシ血清アルブミンで被覆された抗原結合固相を用
いても十分抑制できなかった非特異反応を抑制すること
ができる、改善された免疫測定方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、検体中に存在する
抗体の有無を検出するために標識した抗イムノグロブリ
ン抗体を用いる測定系において、検体中の抗体と測定試
薬とをアルカリ処理したウシ血清アルブミンの存在下、
反応させることを特徴とする免疫測定方法に関する。
抗体の有無を検出するために標識した抗イムノグロブリ
ン抗体を用いる測定系において、検体中の抗体と測定試
薬とをアルカリ処理したウシ血清アルブミンの存在下、
反応させることを特徴とする免疫測定方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】検体中の抗体又は抗原の有無を測定する
免疫測定方法は、疾患に感染したか否かを迅速に高感度
に測定することができるため、疾患感染の診断において
広く用いられている手法である。この分野においては、
微量の検体から測定対象物質である抗体又は抗原を検出
するためにさらに高感度な測定を行うことができるよう
に現在でも種々の研究がなされている。その中でも、検
体中に非特異反応を生じさせる物質が多種多様に存在す
ることによる非特異反応を抑制するために、固相を用い
る免疫測定においては、固相にウシ血清アルブミン（以
下、ＢＳＡと称する。）を被覆させ、非特異反応の原因
となる非特異物質が固相へ吸着することを阻害する技術
は、効率のよい測定を行う上で極めて効果が高く、現在
では、通常に用いられている。また、固相をＢＳＡで被
覆しても非特異反応が十分抑制できない場合もあり、非
特異物質の影響をさらに少なくするため、反応溶液中に
もＢＳＡ等の蛋白質を熱処理後アシル化した物質（特表
平８−５０６９０７号公報参照）等の吸収剤を添加する
等、様々な改良が行われている。
免疫測定方法は、疾患に感染したか否かを迅速に高感度
に測定することができるため、疾患感染の診断において
広く用いられている手法である。この分野においては、
微量の検体から測定対象物質である抗体又は抗原を検出
するためにさらに高感度な測定を行うことができるよう
に現在でも種々の研究がなされている。その中でも、検
体中に非特異反応を生じさせる物質が多種多様に存在す
ることによる非特異反応を抑制するために、固相を用い
る免疫測定においては、固相にウシ血清アルブミン（以
下、ＢＳＡと称する。）を被覆させ、非特異反応の原因
となる非特異物質が固相へ吸着することを阻害する技術
は、効率のよい測定を行う上で極めて効果が高く、現在
では、通常に用いられている。また、固相をＢＳＡで被
覆しても非特異反応が十分抑制できない場合もあり、非
特異物質の影響をさらに少なくするため、反応溶液中に
もＢＳＡ等の蛋白質を熱処理後アシル化した物質（特表
平８−５０６９０７号公報参照）等の吸収剤を添加する
等、様々な改良が行われている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、上記の
ような非特異反応を抑制した系であっても全ての非特異
物質を吸収できるわけではなく、未だ非特異反応が生
じ、測定結果を誤らせる原因となっている。特に、従来
技術で記載したように固相を用いる測定系において、非
特異反応を抑制するために固相をＢＳＡで被覆する技術
は、現在市販されている製品においても通常に用いられ
ているものである。しかしながら、このような固相をＢ
ＳＡで被覆することに起因する非特異反応も存在するた
め、これを原因として測定結果を誤らせてしまう場合が
ある。本発明は、このような原因に基づく非特異反応を
効率よく抑制することにより、さらなる高感度な免疫測
定方法を見いだすことを課題とした。
ような非特異反応を抑制した系であっても全ての非特異
物質を吸収できるわけではなく、未だ非特異反応が生
じ、測定結果を誤らせる原因となっている。特に、従来
技術で記載したように固相を用いる測定系において、非
特異反応を抑制するために固相をＢＳＡで被覆する技術
は、現在市販されている製品においても通常に用いられ
ているものである。しかしながら、このような固相をＢ
ＳＡで被覆することに起因する非特異反応も存在するた
め、これを原因として測定結果を誤らせてしまう場合が
ある。本発明は、このような原因に基づく非特異反応を
効率よく抑制することにより、さらなる高感度な免疫測
定方法を見いだすことを課題とした。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、前記課題
を解決するために鋭意検討した結果、検体中に存在する
抗体の有無を検出するために標識した抗イムノグロブリ
ン抗体を用いる測定系において、検体中の抗体と測定試
薬とをアルカリ処理したウシ血清アルブミン（以下、ア
ルカリ処理ＢＳＡと称する。）の存在下、反応させるこ
とによって、従来十分抑制できなかった非特異反応を、
効率よく抑制することができることを見出し本発明を完
成した。
を解決するために鋭意検討した結果、検体中に存在する
抗体の有無を検出するために標識した抗イムノグロブリ
ン抗体を用いる測定系において、検体中の抗体と測定試
薬とをアルカリ処理したウシ血清アルブミン（以下、ア
ルカリ処理ＢＳＡと称する。）の存在下、反応させるこ
とによって、従来十分抑制できなかった非特異反応を、
効率よく抑制することができることを見出し本発明を完
成した。
【０００５】前記した課題は、ＢＳＡで固相を被覆する
ことによって生じるものであるが、これは検体中にＢＳ
Ａに対する抗体が存在する場合があるため生じるもので
ある。ＢＳＡで固相を被覆することによって、様々な蛋
白質等の非特異物質が固相へ吸着することは抑制するこ
とができるが、ＢＳＡに対する抗体が存在する場合に
は、この抗体が固相へ結合してしまうのである。
ことによって生じるものであるが、これは検体中にＢＳ
Ａに対する抗体が存在する場合があるため生じるもので
ある。ＢＳＡで固相を被覆することによって、様々な蛋
白質等の非特異物質が固相へ吸着することは抑制するこ
とができるが、ＢＳＡに対する抗体が存在する場合に
は、この抗体が固相へ結合してしまうのである。
【０００６】これに起因し、標識した抗イムノグロブロ
リン抗体を用いる測定において、該抗イムノグロブロリ
ン抗体は、固相に複合体を形成して結合している測定対
象の抗体と固相を被覆したＢＳＡに結合した非特異の原
因となる抗体との両者と結合してしまうため、標識物の
存在により測定結果を算出してもその中には測定対象以
外の抗体に結合している標識物も含まれることとなり測
定結果を誤ったものとしてしまうのである。
リン抗体を用いる測定において、該抗イムノグロブロリ
ン抗体は、固相に複合体を形成して結合している測定対
象の抗体と固相を被覆したＢＳＡに結合した非特異の原
因となる抗体との両者と結合してしまうため、標識物の
存在により測定結果を算出してもその中には測定対象以
外の抗体に結合している標識物も含まれることとなり測
定結果を誤ったものとしてしまうのである。
【０００７】本発明は、このような欠点を改善した新た
な免疫測定方法であり、前述した通り、検体中に存在す
る抗体の有無を検出するために標識した抗イムノグロブ
リン抗体を用いる測定系において、検体中の抗体と測定
試薬とをアルカリ処理したウシ血清アルブミンの存在
下、反応させることを特徴とする免疫測定方法である。
な免疫測定方法であり、前述した通り、検体中に存在す
る抗体の有無を検出するために標識した抗イムノグロブ
リン抗体を用いる測定系において、検体中の抗体と測定
試薬とをアルカリ処理したウシ血清アルブミンの存在
下、反応させることを特徴とする免疫測定方法である。
【０００８】以下、本発明を詳細に説明する。本発明
は、前記のように固相をＢＳＡで被覆する場合であっ
て、さらに標識抗体として抗イムノグロブリン抗体を用
いる測定系で生じる問題を解決するものであるため該測
定系に特に有用であるが、これに限定されるものではな
く、その他の測定においても同様の問題が生じるのであ
れば用いることができる測定方法である。
は、前記のように固相をＢＳＡで被覆する場合であっ
て、さらに標識抗体として抗イムノグロブリン抗体を用
いる測定系で生じる問題を解決するものであるため該測
定系に特に有用であるが、これに限定されるものではな
く、その他の測定においても同様の問題が生じるのであ
れば用いることができる測定方法である。
【０００９】本発明の免疫測定方法としては、サンドイ
ッチ測定法、競争法等の公知の測定方法を用いることが
できる。また、固相としては、通常、この分野において
用いられているもの、例えば、ポリスチレンビーズ、ラ
テックス粒子、磁性粒子等の微粒子であれば特に限定さ
れずに用いることができ、この固相は非特異反応を抑制
するためＢＳＡで被覆処理されたものである。
ッチ測定法、競争法等の公知の測定方法を用いることが
できる。また、固相としては、通常、この分野において
用いられているもの、例えば、ポリスチレンビーズ、ラ
テックス粒子、磁性粒子等の微粒子であれば特に限定さ
れずに用いることができ、この固相は非特異反応を抑制
するためＢＳＡで被覆処理されたものである。
【００１０】抗イムノグロブリン抗体としては、例え
ば、抗ヒトＩｇＧ抗体、抗ヒトＩｇＧ（Ｆａｂ’）抗
体、抗ヒトＩｇＧ（Ｆａｂ’）2抗体等を用いることが
でき、その標識物としては、酵素、発光物質、蛍光物
質、放射性物質等の公知の標識物を用いることができ
る。
ば、抗ヒトＩｇＧ抗体、抗ヒトＩｇＧ（Ｆａｂ’）抗
体、抗ヒトＩｇＧ（Ｆａｂ’）2抗体等を用いることが
でき、その標識物としては、酵素、発光物質、蛍光物
質、放射性物質等の公知の標識物を用いることができ
る。
【００１１】本発明の免疫測定においては、アルカリ処
理ＢＳＡを存在させることを特徴とするが、アルカリ処
理ＢＳＡはＢＳＡにアルカリ性溶液を添加するか又はＢ
ＳＡを含有する溶液に塩基を添加することによるアルカ
リ性条件で処理することで得ることができる。原料とな
るＢＳＡは、市販されている各種ＢＳＡを用いることが
でき、ＢＳＡは容易に入手可能なものである。
理ＢＳＡを存在させることを特徴とするが、アルカリ処
理ＢＳＡはＢＳＡにアルカリ性溶液を添加するか又はＢ
ＳＡを含有する溶液に塩基を添加することによるアルカ
リ性条件で処理することで得ることができる。原料とな
るＢＳＡは、市販されている各種ＢＳＡを用いることが
でき、ＢＳＡは容易に入手可能なものである。
【００１２】ＢＳＡのアルカリ処理に用いることができ
る塩基としては、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カ
リウム、水酸化カルシウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素
ナトリウム等の無機塩基を挙げることができる。
る塩基としては、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カ
リウム、水酸化カルシウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素
ナトリウム等の無機塩基を挙げることができる。
【００１３】アルカリ処理は、溶液をアルカリ条件にす
ることによって行われるが、特にｐＨ７．５〜９．５の
範囲で行うことが好ましい。また、処理温度としては、
４０〜７５℃の範囲で行うことができるが、５０〜６５
℃であることが特に好ましい。さらに、塩基による処理
時間は、３０分間〜６時間反応させることにより達成で
きる。
ることによって行われるが、特にｐＨ７．５〜９．５の
範囲で行うことが好ましい。また、処理温度としては、
４０〜７５℃の範囲で行うことができるが、５０〜６５
℃であることが特に好ましい。さらに、塩基による処理
時間は、３０分間〜６時間反応させることにより達成で
きる。
【００１４】アルカリ処理後、不溶物を生じる場合に
は、ろ紙、グラスフィルター等を用いてろ過し、不溶物
を除去することが望ましい。また、アルカリ処理ＢＳＡ
はさらに、ゲルろ過法、透析法等を用いることによって
精製することによって純度の高いものとすることができ
る。
は、ろ紙、グラスフィルター等を用いてろ過し、不溶物
を除去することが望ましい。また、アルカリ処理ＢＳＡ
はさらに、ゲルろ過法、透析法等を用いることによって
精製することによって純度の高いものとすることができ
る。
【００１５】このように製造されたアルカリ処理ＢＳＡ
は、免疫測定を行う反応溶液中に存在させるものであ
り、この時、反応溶液中のアルカリ処理ＢＳＡ濃度が
０．００１〜２％（Ｗ／Ｖ）の範囲となるように調製さ
れ、特に、非特異反応抑制効果の効率の観点から、０．
０２〜０．２％（Ｗ／Ｖ）に調製されることが好まし
い。アルカリ処理ＢＳＡは、反応溶液中に添加すること
により存在させることもでき、また、抗原結合固相溶
液、検体希釈液、添加剤溶液等の少なくとも一つに加え
ておき、反応の際に上記濃度となるように予め調製して
おいてもよい。
は、免疫測定を行う反応溶液中に存在させるものであ
り、この時、反応溶液中のアルカリ処理ＢＳＡ濃度が
０．００１〜２％（Ｗ／Ｖ）の範囲となるように調製さ
れ、特に、非特異反応抑制効果の効率の観点から、０．
０２〜０．２％（Ｗ／Ｖ）に調製されることが好まし
い。アルカリ処理ＢＳＡは、反応溶液中に添加すること
により存在させることもでき、また、抗原結合固相溶
液、検体希釈液、添加剤溶液等の少なくとも一つに加え
ておき、反応の際に上記濃度となるように予め調製して
おいてもよい。
【００１６】本発明の測定検体としては、抗ＢＳＡ抗体
が存在する血液、血清、血漿等の目的物質を含有してい
ると疑われるものを用いることができる。
が存在する血液、血清、血漿等の目的物質を含有してい
ると疑われるものを用いることができる。
【００１７】測定操作の概要を、２ステップサンドイッ
チ法を例として下記に示す。本発明の測定方法は、ま
ず、測定対象物質の抗体を含有すると思われる検体とＢ
ＳＡで被覆した抗原結合固相とをアルカリ処理ＢＳＡの
存在下反応させ、固相を洗浄して未反応物質を除去し、
固相に結合した抗体と標識抗イムノグロブリン抗体とを
反応させ、さらに固相を洗浄して未反応の標識抗イムノ
グロブリン抗体を除去した後、固相に結合した標識物質
を測定することによって測定対象物質である抗体の存在
を検出することができる測定方法である。
チ法を例として下記に示す。本発明の測定方法は、ま
ず、測定対象物質の抗体を含有すると思われる検体とＢ
ＳＡで被覆した抗原結合固相とをアルカリ処理ＢＳＡの
存在下反応させ、固相を洗浄して未反応物質を除去し、
固相に結合した抗体と標識抗イムノグロブリン抗体とを
反応させ、さらに固相を洗浄して未反応の標識抗イムノ
グロブリン抗体を除去した後、固相に結合した標識物質
を測定することによって測定対象物質である抗体の存在
を検出することができる測定方法である。
【００１８】
【発明の実施の形態】以下、参考例及び実施例により本
発明をさらに詳細に説明する。
発明をさらに詳細に説明する。
【００１９】参考例１： アルカリ処理ＢＳＡの作製 ５０ｍＭトリス緩衝液（ｐＨ７．２）にＢＳＡを１００
ｍｇ／ｍｌとなるように溶解した。この溶液９容量に
０．２５Ｍ水酸化ナトリウム溶液１容量を加え、ｐＨ
８．３に調整し６５℃で３０分間加熱した。この溶液を
冷却後、０．４５μｍメンブレンフィルター（ミリポア
社製）を用いてろ過した。得られたアルカリ処理ＢＳＡ
は分子量１００Ｋｄ以上に分布していた。
ｍｇ／ｍｌとなるように溶解した。この溶液９容量に
０．２５Ｍ水酸化ナトリウム溶液１容量を加え、ｐＨ
８．３に調整し６５℃で３０分間加熱した。この溶液を
冷却後、０．４５μｍメンブレンフィルター（ミリポア
社製）を用いてろ過した。得られたアルカリ処理ＢＳＡ
は分子量１００Ｋｄ以上に分布していた。
【００２０】参考例２： ＨＩＶ抗原結合フェライト粒
子の作製 特開平３−１１５７６２号に記載されたフェライト粒子
を２％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ、４％（ｖ／ｖ）ＮＲＳ、０．
１ＭＮａＣｌ、０．１％アジ化ナトリウムを含む５０ｍ
Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．２）に分散し、更にＨ
ＩＶ−１ｇｐ４１抗原、ＨＩＶ−２ｇｐ３６抗原及びＨ
ＩＶ−１ｐ２４抗原を添加して、３７℃で一晩攪拌し
た。反応後、フェライト粒子を磁力で集め、粒子を洗浄
液で洗浄してＨＩＶ抗原結合フェライト粒子を得た。
子の作製 特開平３−１１５７６２号に記載されたフェライト粒子
を２％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ、４％（ｖ／ｖ）ＮＲＳ、０．
１ＭＮａＣｌ、０．１％アジ化ナトリウムを含む５０ｍ
Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．２）に分散し、更にＨ
ＩＶ−１ｇｐ４１抗原、ＨＩＶ−２ｇｐ３６抗原及びＨ
ＩＶ−１ｐ２４抗原を添加して、３７℃で一晩攪拌し
た。反応後、フェライト粒子を磁力で集め、粒子を洗浄
液で洗浄してＨＩＶ抗原結合フェライト粒子を得た。
【００２１】実施例１： 非特異検体の測定 参考例２で作製したＨＩＶ抗原結合フェライト粒子と検
体の血清とを反応させ、洗浄後にアルカリホスファター
ゼ標識抗ヒトＩｇＧ抗体で検出するルミパルスＨＩＶ−
１／２抗体測定試薬（富士レビオ社製）を用いて測定し
たところ、カットオフインデックス（Ｃ．Ｏ．Ｉ．）が
３．０となる非特異反応検体が存在した。尚、Ｃ．Ｏ．
Ｉ．はある検体の測定値をカットオフ値で割った値であ
り、１．０以上を陽性、１．０未満を陰性と判断する抗
体測定における指標である。
体の血清とを反応させ、洗浄後にアルカリホスファター
ゼ標識抗ヒトＩｇＧ抗体で検出するルミパルスＨＩＶ−
１／２抗体測定試薬（富士レビオ社製）を用いて測定し
たところ、カットオフインデックス（Ｃ．Ｏ．Ｉ．）が
３．０となる非特異反応検体が存在した。尚、Ｃ．Ｏ．
Ｉ．はある検体の測定値をカットオフ値で割った値であ
り、１．０以上を陽性、１．０未満を陰性と判断する抗
体測定における指標である。
【００２２】更に、参考例２で作製したＨＩＶ抗原結合
フェライト粒子懸濁液（トリス−塩酸緩衝液，ｐＨ７．
２）２５０μｌに５０μｌの０％、０．０６４％、０．
１２８％、１．２２％、３．５８％、１０．７％（Ｗ／
Ｖ）のＢＳＡ溶液又はアルカリ処理ＢＳＡ溶液を添加
し、上記非特異反応検体を以下のように測定した。調製
した粒子懸濁液に検体希釈液（トリス−塩酸緩衝液，ｐ
Ｈ７．２）で１：１０に希釈した検体２０μｌを加えて
反応溶液のＢＳＡ又はアルカリ処理ＢＳＡの最終濃度
が、０％、０．０１％、０．０２％、０．１９％、０．
５６％、１．６７％となるよう混合し、撹拌後３７℃で
１０分間反応させた。粒子懸濁液から粒子を磁石により
集磁し上清を除去した後、粒子を洗浄液（トリス−塩酸
緩衝液）にて３回洗浄した。洗浄後の粒子に０．２μｇ
／ｍｌのアルカリホスファターゼ標識抗ヒトＩｇＧ抗体
溶液を２５０μｌ混合し、撹拌後３７℃で１０分間反応
させた。再び粒子懸濁液から粒子を磁石により集磁し上
清を除去した後、粒子を洗浄液にて３回洗浄した。この
粒子にアルカリホスファターゼの化学発光基質である３
−（２’−スピロアダマンタン）−４−メトキシ−４−
（３’’−ホスホリルオキシ）フェニル−１，２−ジオ
キセタン・２ナトリウム塩（ＡＭＰＰＤ）溶液を２００
μｌ混合し、撹拌後３７℃で５分間反応させた。反応後
の化学発光量をルミノメーターで測定した。なお、これ
ら一連の免疫反応、酵素反応、化学発光量測定は全自動
化学発光酵素免疫測定装置ルミパルス1200（富士レビオ
社製）にて行った。その結果を図１に示す。
フェライト粒子懸濁液（トリス−塩酸緩衝液，ｐＨ７．
２）２５０μｌに５０μｌの０％、０．０６４％、０．
１２８％、１．２２％、３．５８％、１０．７％（Ｗ／
Ｖ）のＢＳＡ溶液又はアルカリ処理ＢＳＡ溶液を添加
し、上記非特異反応検体を以下のように測定した。調製
した粒子懸濁液に検体希釈液（トリス−塩酸緩衝液，ｐ
Ｈ７．２）で１：１０に希釈した検体２０μｌを加えて
反応溶液のＢＳＡ又はアルカリ処理ＢＳＡの最終濃度
が、０％、０．０１％、０．０２％、０．１９％、０．
５６％、１．６７％となるよう混合し、撹拌後３７℃で
１０分間反応させた。粒子懸濁液から粒子を磁石により
集磁し上清を除去した後、粒子を洗浄液（トリス−塩酸
緩衝液）にて３回洗浄した。洗浄後の粒子に０．２μｇ
／ｍｌのアルカリホスファターゼ標識抗ヒトＩｇＧ抗体
溶液を２５０μｌ混合し、撹拌後３７℃で１０分間反応
させた。再び粒子懸濁液から粒子を磁石により集磁し上
清を除去した後、粒子を洗浄液にて３回洗浄した。この
粒子にアルカリホスファターゼの化学発光基質である３
−（２’−スピロアダマンタン）−４−メトキシ−４−
（３’’−ホスホリルオキシ）フェニル−１，２−ジオ
キセタン・２ナトリウム塩（ＡＭＰＰＤ）溶液を２００
μｌ混合し、撹拌後３７℃で５分間反応させた。反応後
の化学発光量をルミノメーターで測定した。なお、これ
ら一連の免疫反応、酵素反応、化学発光量測定は全自動
化学発光酵素免疫測定装置ルミパルス1200（富士レビオ
社製）にて行った。その結果を図１に示す。
【００２３】図１の結果から非特異反応検体の測定シグ
ナルはＢＳＡの添加により容量依存的に減少した。１．
６７％ＢＳＡにおいて０％濃度に比べて約１／３まで低
下が見られている。一方、アルカリ処理ＢＳＡにおいて
は０．０２％アルカリ処理ＢＳＡですでに０％濃度の約
５％まで低下しており、それ以上の濃度でもさらに低下
が見られ、１．６７％では０濃度の３．７％まで低下し
ていた。すなわち、アルカリ処理ＢＳＡではＢＳＡの最
低でも１／１６以下の濃度で同等以上の効果を示してい
ることとなる。
ナルはＢＳＡの添加により容量依存的に減少した。１．
６７％ＢＳＡにおいて０％濃度に比べて約１／３まで低
下が見られている。一方、アルカリ処理ＢＳＡにおいて
は０．０２％アルカリ処理ＢＳＡですでに０％濃度の約
５％まで低下しており、それ以上の濃度でもさらに低下
が見られ、１．６７％では０濃度の３．７％まで低下し
ていた。すなわち、アルカリ処理ＢＳＡではＢＳＡの最
低でも１／１６以下の濃度で同等以上の効果を示してい
ることとなる。
【００２４】参考例３： ＴＰ、ＨＩＶ−１／２、ＨＣ
Ｖ抗原結合粒子の調製 ＴＰ抗原結合粒子についてはウサギ睾丸にて培養された
菌体抽出成分抗原を、ＨＩＶ−１／２抗原結合粒子につ
いてはリコンビナント抗原であるＨＩＶ−１ｇｐ４１、
ＨＩＶ−２ｇｐ３６、ＨＩＶ−１ｐ２４抗原を、ＨＣＶ
についてはリコンビナント抗原であるｃ２５、ｃ３３
ｃ、ＮＳ５抗原をそれぞれフェライト粒子に結合し、ポ
ストコート後、０．０１〜０．０１５％濃度になるよう
に懸濁液を加えて粒子を調製した。この懸濁液中に０．
２％ＢＳＡを添加したものと、同様に０．２％アルカリ
処理ＢＳＡを添加したものとを調製した。
Ｖ抗原結合粒子の調製 ＴＰ抗原結合粒子についてはウサギ睾丸にて培養された
菌体抽出成分抗原を、ＨＩＶ−１／２抗原結合粒子につ
いてはリコンビナント抗原であるＨＩＶ−１ｇｐ４１、
ＨＩＶ−２ｇｐ３６、ＨＩＶ−１ｐ２４抗原を、ＨＣＶ
についてはリコンビナント抗原であるｃ２５、ｃ３３
ｃ、ＮＳ５抗原をそれぞれフェライト粒子に結合し、ポ
ストコート後、０．０１〜０．０１５％濃度になるよう
に懸濁液を加えて粒子を調製した。この懸濁液中に０．
２％ＢＳＡを添加したものと、同様に０．２％アルカリ
処理ＢＳＡを添加したものとを調製した。
【００２５】実施例２： 非特異反応検体の測定 実施例１の非特異反応検体を同じく実施例１に示した方
法で、参考例３の粒子を用いて測定した。その結果を表
１に示す。
法で、参考例３の粒子を用いて測定した。その結果を表
１に示す。
【００２６】
【表１】
【００２７】表１に示すようにＴＰ、ＨＩＶ−１／２、
ＨＣＶ抗体測定系においてＢＳＡの代わりにアルカリ処
理ＢＳＡを使用することで測定シグナル、ならびにＣ．
Ｏ．Ｉ．が低下して、その結果陽性判定であった非特異
反応検体（偽陽性検体）が陰性判定となった。また、こ
のとき同時に測定した陽性標準検体の測定シグナルに二
者間の差は見られなく、陽性検体には影響を与えず、非
特異反応を起こす偽陽性検体のシグナルのみを低下させ
ることがわかった。
ＨＣＶ抗体測定系においてＢＳＡの代わりにアルカリ処
理ＢＳＡを使用することで測定シグナル、ならびにＣ．
Ｏ．Ｉ．が低下して、その結果陽性判定であった非特異
反応検体（偽陽性検体）が陰性判定となった。また、こ
のとき同時に測定した陽性標準検体の測定シグナルに二
者間の差は見られなく、陽性検体には影響を与えず、非
特異反応を起こす偽陽性検体のシグナルのみを低下させ
ることがわかった。
【００２８】
【発明の効果】本発明は、反応の溶液中に添加されるア
ルカリ処理ＢＳＡによって、固相への非特異反応による
抗体結合を低減することができるため、検体に含まれる
測定対象物質の抗体だけを正確に測定することができ
る。殊に、測定対象物質が低濃度の検体にあってはその
効果が大きい。
ルカリ処理ＢＳＡによって、固相への非特異反応による
抗体結合を低減することができるため、検体に含まれる
測定対象物質の抗体だけを正確に測定することができ
る。殊に、測定対象物質が低濃度の検体にあってはその
効果が大きい。
【図１】 濃度を変えてアルカリ処理ＢＳＡ又はＢＳＡ
を添加し、ＨＩＶ−１／２抗体測定の発光量のシグナル
を測定した結果を比較した図である。
を添加し、ＨＩＶ−１／２抗体測定の発光量のシグナル
を測定した結果を比較した図である。
Claims (4)
- 【請求項１】 検体中に存在する抗体の有無を検出する
ために標識した抗イムノグロブリン抗体を用いる測定系
において、検体中の抗体と測定試薬とをアルカリ処理し
たウシ血清アルブミンの存在下、反応させることを特徴
とする免疫測定方法。 - 【請求項２】 測定試薬が抗原を固定化した固相である
請求項１に記載の免疫測定方法。 - 【請求項３】 検体中の抗体と測定試薬とを反応させた
後、標識物質の検出を行うことを特徴とする請求項１乃
至２に記載の免疫測定方法。 - 【請求項４】 アルカリ処理がｐＨ７．５〜９．５の範
囲で行われたものであることを特徴とする請求項１乃至
３に記載の免疫測定方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000135400A JP2001318098A (ja) | 2000-05-09 | 2000-05-09 | アルカリ処理したウシ血清アルブミンを用いた免疫測定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000135400A JP2001318098A (ja) | 2000-05-09 | 2000-05-09 | アルカリ処理したウシ血清アルブミンを用いた免疫測定方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2001318098A true JP2001318098A (ja) | 2001-11-16 |
Family
ID=18643484
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000135400A Pending JP2001318098A (ja) | 2000-05-09 | 2000-05-09 | アルカリ処理したウシ血清アルブミンを用いた免疫測定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2001318098A (ja) |
-
2000
- 2000-05-09 JP JP2000135400A patent/JP2001318098A/ja active Pending
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Legal Events
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|---|---|---|---|
| A977 | Report on retrieval |
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| A131 | Notification of reasons for refusal |
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| A02 | Decision of refusal |
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