WO2006016561A1

WO2006016561A1 - 表面修飾血清アルブミン－金属ポルフィリン複合体、およびそれを含有する酸素輸液

Info

Publication number: WO2006016561A1
Application number: PCT/JP2005/014533
Authority: WO
Inventors: Eishun Tsuchida; Teruyuki Komatsu; Yubin Huang
Original assignee: Eishun Tsuchida; Teruyuki Komatsu; Yubin Huang
Priority date: 2004-08-09
Filing date: 2005-08-08
Publication date: 2006-02-16
Also published as: JP2006045173A; EP1792917A1; US20070142290A1; EP1792917A4

Abstract

　金属ポルフィリンを包接した血清アルブミンを含み、血清アルブミンの分子表面にポリオキシエチレン基が共有結合されている表面修飾血清アルブミン－金属ポルフィリン複合体。

Description

明細書

表面修飾血清アルブミン—金属ポルフィリン複合体、およびそれを含有する酸素輸液

技術分野

[0001] 本発明は、金属ポルフィリンを包接した血清アルブミンの分子表面にポリオキシェチレン基を共有結合して得た表面修飾血清アルブミン金属ポルフィリン複合体と、それを含有する酸素輸液 (人工酸素運搬体）に関する。

背景技術

[0002] 生体内で酸素運搬'貯蔵の役割を担うヘモグロビンやミオグロビンの補欠分子族であるヘム、すなわち鉄 (Π)ポルフィリンは、酸素分圧に応答して分子状酸素を可逆的に結合解離する。このような天然のヘムと同じ酸素吸脱着能を合成の鉄 (II)ポルフィリンで再現しょうとする研究は 1970年代力も報告されている力初期の研究例としては、 J. P. Collman, Acc. Chem. Res., 10, 265 (1977)、 F. Basolo, B. M. Hoffinan, J. A. Ibers, Acc. Chem. Res., 8, 384 (1975)等が代表的であり、また、最近の開発動向は Momentau et al., Chem. Rev., 110, 7690 (1994)、 J. P. Collman, Chem. Rev., 104, 561 (2004)等に記載されている。

[0003] 室温条件下で安定な酸素錯体を形成できる鉄 (II)ポルフィリンとしては、 5, 10, 15 、 20—テトラキス（ α , a , a , a—o ピバルロイルァミノフエ-ル）ポルフィリン鉄（Π )錯体（以下、 FeTpivPP錯体と呼ぶ）（J. P. Collman, et al" J. Am. Chem. Soc, 97, 1 427 (1975))が知られている。 FeTpivPP錯体は軸塩基、例えば、 1—アルキルイミダゾール、 1 アルキル 2—メチルイミダゾール等を共存させると、ベンゼン、トルエン、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、 N, N ジメチルホルムアミド等の有機溶媒中、室温で分子状酸素を可逆的に結合解離できる。

[0004] 可逆的な酸素配位活性を発現できるのは、鉄ポルフィリンの中心鉄が 2価の状態にある時のみで、中心鉄が酸ィ匕し、鉄 (III)錯体になると、その酸素配位活性は完全に失われる。一般的に水溶液中では中心鉄 (II)の酸ィ匕反応が加速されるため、得られる酸素錯体の安定度は著しく低い。本発明者らの研究グループは、 FeTpivPP錯体をリン脂質力成る二分子膜小胞体に包埋させることにより、この問題を克服し、生理条件下 (水相系、 PH7. 4、 37°C)でも同様の酸素吸脱着機能を発揮させることに成功した（例えば、 E. Tsuchida et al, J. Chem. Soc, Dalton Trans., 1984, 1147 (1984)、 E. Tsuchida et al" J. Chem. Soc, Perkin Trans. 2, 1995, 747 (1995)等）。鉄（Π)ポルフィリンをリン脂質小胞体中に包接させるこの技術は、均一に水中へ溶解させるだけでなぐ酸素配位座近傍に微小な疎水空間を提供することにより、酸素錯体の安定度を延長させる効果がある。しかし、 FeTpivPP錯体が酸素を可逆的に結合解離するためには、有機溶媒中と同様に過剰モル数の軸塩基分子を外部力添加することが不可欠であった。よく知られているように、軸塩基として広く用いられているイミダゾール誘導体には薬理作用を持つものがあり、体内毒性の高い場合が多い。また、リン脂質小胞体を利用する場合、過剰に共存させたイミダゾール誘導体がその形態を不安定化させる要因とも成り得る。この軸塩基の添加量を極限的に少なくする方法は、分子内に共有結合でイミダゾール誘導体を導入することに他ならな、。

[0005] 本発明者らの研究グループは、鉄 (II)ポルフィリンの分子内へ置換基として、例えばアルキルイミダゾール誘導体を共有結合すれば、軸塩基を外部添加することなく安定な酸素運搬体を供給できるものと考え、既にポルフィリン環の 2位に置換基を有する FeTpivPP類縁体を合成し、これをリン脂質小胞体中ゃヒト血清アルブミンに包接させた系につ、て、可逆的な酸素の吸脱着反応を明らかにして、る（特開平 06 - 27 1577号公報、特開平 08— 301873号公報、特開 2003— 040893号公報)。特に、ヒト血清アルブミンに、この分子内塩基結合型の FepivPPを包接させて得たアルブミン —鉄 (II)ポルフィリン複合体は、安全性高く生体内で酸素輸送のできる赤血球代替物として作用することが実証されている（E. Tsuchida et al., Bioconjugate Chem. 11, 46 (2000)) oまた、分子状ヘモグロビン製剤に見られる血圧亢進等の副作用も全く認められない（E. Tsuchida et al" J. Biomed. Mater. Res. 64A, 257 (2003))。

[0006] 他方、このアルブミン一鉄（II)ポルフィリン複合体系では鉄（II)ポルフィリンの包接駆動力は、疎水性相互作用、すなわち非共有結合であるため、酸素結合サイトとして機能する金属ポルフィリンカ、疎水場力解離してしまう可能性もある。上記アルブミン金属ボルフイリン複合体水溶液を人工酸素運搬体として、例えば赤血球代替物として体内へ投与した場合、ある程度の期間、血流中に留まり、酸素輸送体の役割を担ってくれることが望ましい。実際、アルブミン金属ポルフィリン複合体を血中に投与すると、金属ポルフィリンはアルブミン力も解離する。つまり、より長い血中半減期を実現するため、アルブミン力も金属ポルフィリンが解離しにくい分子設計と合成が待たれて!/ヽたのが現状であった。

発明の開示

[0007] 従って、本発明は、上記従来技術の問題点を解消し、より長期にわたって安定な酸素錯体を形成し、生体内で酸素輸液として有効に作用し得るアルブミン金属ポルフィリン複合体を提供することを目的とする。

[0008] 本発明者らは、アルブミン力も金属ボルフイリン錯体が解離しにくい構造体の分子設計と機能発現に鋭意研究を重ねた結果、金属ポルフィリンを包接した血清アルブミンの分子表面にポリオキシエチレン基を共有結合することにより、表面修飾血清アルブミン—金属ポルフィリン複合体を調製すると、従来、金属ポルフィリンをアルブミンの疎水領域へただ包接させていただけの血清アルブミン金属ポルフィリン複合体に比べ、金属ボルフイリン錯体がアルブミン内部に留まる率が高ぐ結果として血中半減期が延長する新し、酸素輸液が提供できることを見ヽだし、本発明を完成するに至った。

[0009] すなわち、本発明の第 1の側面によれば、金属ポルフィリンを包接した血清アルブミンを含み、前記血清アルブミンの分子表面にポリオキシエチレン基が共有結合されている表面修飾血清アルブミン—金属ポルフィリン複合体が提供される。

[0010] また、第 2の側面によれば、表面修飾血清アルブミン—金属ポルフィリン複合体を含む酸素輸液 (人工酸素運搬体)が提供される。

発明を実施するための最良の形態

[0011] 本発明の表面修飾血清アルブミン金属ポルフィリン複合体は、金属ポルフィリンを包接した血清アルブミンを含み、血清アルブミンの分子表面にポリオキシエチレン基が共有結合されている。好ましくは、ポリオキシエチレン基は、チォエーテル結合で導入されており、特に、血清アルブミンの分子表面に存在するリジン残基のァミノ基をイミノチオランでチォレート基に変換し、それに末端マレイミド基を有するポリオキシエチレンを反応させることによりチォエーテル結合で導入される。

包接される金属ポルフィリンは、上記式 [I]、 [II]、 [III]、 [IV]、または [V]で示されるものがよい。

[化 1]

[化 3]

CCSM0/S00Zdf/X3d 9 T9S910/900Z OAV

アルブミン

[0013] 式 [I]で示される金属ポルフィリンは、特開平 6— 271577号公報および特開 2003 —40893号公報に記載されている。式 [I]において、 Rは置換基を有してもよい直鎖

1

または脂環式炭化水素基である。 Rは 1位に置換基を有する直鎖または脂環式炭化

1

水素基が好ましい。そのような直鎖または脂環式炭化水素基の例を挙げると、 1, 1 二置換 c〜C アルカン基、 1 置換シクロプロピル基、 1 置換シクロペンチル基、

1 10

1—置換シクロへキシル基、 2—置換ノルボル-ル基 (これら基における置換基は、メチル基、アルキルアミド基 (R' CONH ）、アルキルエステル基 (R' OOC ）またはアルキルエーテル基 (R '〇—））、 1—メチル—2—シクロへキセ-ル基、または 1—ァダマンチル基等である。ここで R'で表されるアルキル基としては C〜Cアルキル基が

1 6

好ましい。

[0014] 式 [I]において、 Rはアルキレン基であり、好ましくは C〜C アルキレン基である。

2 1 10

[0015] 式 [I]において、 Rはイミダゾリル基の中心遷移金属イオン M (周期律表第 4〜5周

3

期の遷移金属イオン)への配位を許容する基である。かかる Rの例を挙げると、水素

3

原子またはメチル基、ェチル基もしくはプロピル基である。 X—は塩ィ匕物イオン、臭化物イオン等のハロゲンィ匕物イオンを示し、 X—の個数 _nは前記遷移金属イオン Mの価数から 2を差し引いた数である。 [0016] 式 [II]で示される金属ポルフィリンは、特開 2002— 128781号公報に記載されている。式 [II]において、 Rは置換基を有してもよい直鎖または脂環式炭化水素基で

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ある。 Rは 1位に置換基を有する直鎖または脂環式炭化水素基が好ましい。そのよう

4

な直鎖または脂環式炭化水素基の例を挙げると、 1, 1一二置換 c〜c アルカン基

1 10

、 1 置換シクロプロピル基、 1 置換シクロペンチル基、 1 置換シクロへキシル基、 2—置換ノルボルニル基 (これら基における置換基は、メチル基、アルキルアミド基 (R ， CONH - )、アルキルエステル基 (R， OOC - )またはアルキルエーテル基 (R， O— ) )、 1—メチル—2—シクロへキセ-ル基、または 1—ァダマンチル基等である。ここで、 R'で表されるアルキル基としては C〜Cアルキル基が好ましい。

1 6

[0017] 式 [II]において、 Rはアルキレン基、好ましくは C〜Cアルキレン基である。

5 1 6

[0018] 式 [II]にお!/、て、 Rはアルキル基、好ましくはじ〜Cアルキル基である。

6 1 6

[0019] 式 [II]において、 Mは中心遷移金属イオン (周期律表第 4〜5周期の遷移金属ィォン）である。 X—は塩ィ匕物イオン、臭化物イオン等のハロゲンィ匕物イオンを示し、 X—の個数 nは前記遷移金属イオン Mの価数から 2を差し引、た数である。

[0020] 式 [III]で示される金属ポルフィリンは、特願 2004— 190189号明細書に開示されている。式 [III]において、 Rは置換基を有してもよい直鎖または脂環式炭化水素基

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である。 Rは 1位に置換基を有する直鎖または脂環式炭化水素基が好ましい。その

7

ような直鎖または脂環式炭化水素基の例を挙げると、 1, 1一二置換 C

1〜C アルカン 10 基、 1 置換シクロプロピル基、 1 置換シクロペンチル基、 1 置換シクロへキシル基、 2—置換ノルボルニル基 (これら基における置換基は、メチル基、アルキルアミド基 (R， CONH ）、アルキルエステル基 (R， OOC ）またはアルキルエーテル基 (R ，0— ) )、 1—メチル—2—シクロへキセ-ル基、または 1—ァダマンチル基等である。ここで、 R'で表されるアルキル基としては C〜Cアルキル基が好ましい。

1 6

[0021] 式 [III]において、 Rはアルキレン基、好ましくは C〜C アルキレン基である。

8 1 10

[0022] 式 [III]において、 Rはイミダゾリル基の中心遷移金属イオン M (周期律表第 4〜5

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周期の遷移金属イオン)への配位を許容する基、好ましくは水素原子またはメチル基

、ェチル基もしくはプロピル基であり、 Rはメチレン基またはエチレン基である。 X—は塩ィ匕物イオン、臭化物イオン等のハロゲンィ匕物イオンを示し、 X—の個数 nは前記遷移金属イオン Mの価数から 2を差し引、た数である。

式 [III]で示される金属ポルフィリンは、例えば、次のようにして合成することができる。メソ一テトラキス (o—ァミノフエ-ル)ポルフィリンを適当な有機溶媒 (例えば、クロ口ホルム、テトラヒドロフランなど）に溶解し、そこにトリチルブロマイドおよびトリェチルァミンを加え、さらに 10分〜 1時間撹拌後、溶媒を減圧除去する。得られたポルフィリンのトルエン溶液を活性アルミナおよびヘプタンの入った容器にカ卩え、 90°C、遮光下にて 12〜24時間撹拌する。ガラスフィルターでアルミナを濾別し、シリカゲルカラムによりメソ一トリ , a , α— o—ァミノフエ-ル）一（j8— o— (N—トリフエ-ルメチル）ァミノフエニル)ポルフィリンを分画精製する。得られたポルフィリンと適当な塩基 (ピリジン、 4—ジメチルァミノピリジン、トリェチルァミン等）を適当な有機溶媒 (例えば、クロロホノレム、テトラヒドロフラン等）に溶解した溶液を式 R COC1 (ここで、 Rは、上記定義

7 7

の通り）で示される酸クロライドに滴下し、窒素雰囲気下、室温で 2〜15時間撹拌する。溶媒を減圧除去後、クロ口ホルム、水を添加、水層をクロ口ホルムで洗浄後、有機層を回収し、溶媒を減圧除去する。得られた残渣をシリカゲルカラムで分画精製し、真空乾燥することで、メソートリ（a , a , a - o - (置換アミド)フエ-ル） - ( β - ο ~ ( Ν—トリフエ-ルメチル）アミノフヱ-ル）ポルフィリンを固体として得る。得られたボルフィリンと適当な塩基 (ピリジン、 4—ジメチルァミノピリジン、トリェチルァミン等）を適当な有機溶媒 (例えば、クロ口ホルム、テトラヒドロフラン等）に溶解した溶液を下記式 [V I]で示される ω—イミダゾリルカルボン酸（式 [VI]において、 R〜Rは、上記定義の

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通り）の酸クロライドに滴下し、窒素雰囲気下、室温で 2〜15時間撹拌する。

[化 6]

ついで、溶媒を減圧除去後、クロ口ホルム層を水洗し、溶媒を減圧除去する。得られた残渣をシリカゲルカラムで分画精製し、真空乾燥することで、式 [III]で示されるボルフイリンィ匕合物を得ることができる。

[0025] こうして得られたボルフイリンィ匕合物への中心金属導入は、例えば D. Dolphin編、 The Porphyrin, 1978年、アカデミック 'プレス社などに記載の一般法により達成され、相当のポルフィリン金属錯体として得られる。

[0026] 式 [IV]で示される金属ポルフィリンは、上記特許文献 2 (特開平 08— 301873号公報）に記載されている。式 [IV]において、 R は炭化水素基である。 R は水素原子、

10 10

ビュル基、ェチル基、ホルミル基、ァセチル基が好ましい。

[0027] 式 [IV]において、 R はアルキル基であり、好ましくは C〜C アルキル基である。

11 1 10

[0028] 式 [IV]において、 R はアルキレン基であり、好ましくは C〜C アルキレン基である

12 1 10

[0029] 式 [IV]において、 R はイミダゾリル基の中心遷移金属イオン M (周期律表第 4〜5

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周期の遷移金属イオン)への配位を許容する基である。かかる R の例を挙げると、水

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素原子またはメチル基、ェチル基もしくはプロピル基である。 X—は塩ィ匕物イオン、臭化物イオン等のハロゲンィ匕物イオンを示し、 X—の個数 nは前記遷移金属イオン Mの価数から 2を差し引、た数である。

[0030] 式 [V]で示される金属ポルフィリンは、特願 2004— 190190号明細書に開示されている。式 [V]において、 Rは、メチレン基またはエチレン基である。 R は置換基を有

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してもよい直鎖または脂環式炭化水素基である。 R は 1位に置換基を有する直鎖ま

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たは脂環式炭化水素基が好ま、。そのような直鎖または脂環式炭化水素基の例を挙げると、 1, 1—二置換 C〜C アルカン基、 1—置換シクロプロピル基、 1—置換シ

1 10

クロペンチル基、 1 置換シクロへキシル基、 2—置換ノルボル-ル基（これら基における置換基は、メチル基、アルキルアミド基 (R' CONH )、アルキルエステル基 (R' OOC - )またはアルキルエーテル基 (R， O— ) )、 1 メチル - 2-シクロへキセ-ル基、または 1—ァダマンチル基等である。ここで、 R'で表されるアルキル基としては C

1

〜Cアルキル基が好ましい。

6

[0031] 式 [V]において、 R はアルキレン基、好ましくは、 C〜C アルキレン基である。

15 1 10

[0032] 式 [V]において、 R はイミダゾリル基の中心遷移金属イオン M (周期律表第 4〜5

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周期の遷移金属イオン)への配位を許容する基で、好ましくは水素原子またはメチル基、ェチル基もしくはプロピル基である。 X—は塩ィ匕物イオン、臭化物イオン等のハロゲンィ匕物イオンを示し、 X—の個数 nは前記遷移金属イオン Mの価数から 2を差し引ヽた数である。

式 [V]で示される金属ポルフィリンは、例えば、 Tsuchida et al.， J. Chem. Soc. Perki n Trans 2, 1995, 747 (1995)に記載の方法を用いて合成した 2 ヒドロキシメチルー 5 , 10, 15, 20 テトラキス（a , a , a , α—o 置換アミドフエ二ノレ）ポノレフイリンを出発物質として合成することができる。具体的には、式 [A]： R'OOCRC (NH - Fmoc ) COOH (ここで、 Rは、上に定義した通り、 Fmocは、 9—フルォレニルメチルォキシカルボ-ル、 R"は、例えば、 tーブチル）で示されるァスパラギン酸もしくはグルタミン酸誘導体を適当な乾燥溶媒 (例えば、ジクロロメタン、ベンゼン、ジメチルホルムアミド等）に溶解し、縮合剤としてジシクロへキシルカルポジイミド (DCC)をカ卩え、室温で 1 〜12時間撹拌する。反応の進行に伴い白色の沈殿が生成するので、反応溶液を 2 〜30分間氷浴中で冷却した後、析出した N, N'—ジシクロへキシル尿素（DCU)を濾過により除去する。濾液に、 2 ヒドロキシメチルー 5, 10, 15, 20—テトラキス , a , α , α—ο 置換アミドフエ-ル）ポルフィリンをカ卩え、遮光下で 1〜12時間攪拌する。薄層クロマトグラフィー (TLC)で反応の進行を追跡し、必要であれば適当な塩基 (ピリジン、ジメチルァミノピリジン、トリェチルァミン等）をカ卩える。溶媒を減圧除去し、残渣をベンゼンに溶解し、析出した DCUを再び濾過により除去する。溶媒を減圧除去後、冷へキサンを加え、ポルフィリンを析出させる。得られた混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製すると、 2 - (N— Fmoc— t ブトキシカルボ-ル一ァミノアシノレ)メチノレ一 5, 10, 15, 20 テトラキス（a , a , a , α—o 置換アミドフエ -ル）ポルフィリンが得られる。ここで、アミノアシルは、いうまでもなぐァスパラギルまたはダルタミルである（以下、同じ)。得られたボルフイリンをジメチルホルムアミドに溶解し、ピぺリジンを加え、遮光下、室温で 6〜24時間撹拌する。ジメチルホルムアミドとピペリジンを減圧除去した後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製すると、 2— (t—ブトキシカルボ-ルーアミノアシル)メチル 5, 10, 15, 20—テトラキス（ a , a , a , α—o 置換アミドフエ-ル）ポルフィリンが得られる。次に、下記式 [VII] で示される ω—イミダゾリルアルカン酸（式 [VII]において、 R および R は、上に定義した通り）の塩酸塩を蒸留ジメチルホルムアミドに溶解し、 DCCと適当な塩基 (例えばピリジン、ジメチルァミノピリジン、トリェチルァミン等）をカ卩え、室温で 30分〜 4時間撹拌する。

[化 7]

式 [VII]

[0034] 反応の進行に伴い生成した DCUを濾過により除去し、濾液に 2—（t ブトキシカノレボ-ノレ一アミノアシノレ)メチノレ一 5, 10, 15, 20 テトラキス（a , a , a , a ~o~ 置換アミドフエ-ル)ポルフィリンを加え、遮光下で 15分〜 2時間攪拌する。溶媒を減圧除去し、残渣をジクロロメタンとトリェチルァミンの混合溶媒に再溶解し、 6〜24時間、室温、遮光下にて攪拌する。 DCUを濾過により除去した後、残渣をベンゼンに溶解し、析出物を濾別して、溶媒を減圧除去する。残渣をクロ口ホルムに溶解し、純水と炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、脱水後、クロ口ホルムを除去して、 2— (N— ( ω—イミダゾリルアルカノィル）—t—ブトキシカルボ-ルーアミノアシル)メチルー 5, 10, 15, 20 テトラキス（a , a , a , α—o 置換アミドフエ二ノレ）ポノレフイリンを得る。本化合物は、光、シリカゲルカラムによる分離操作で分解してしまうので、そのまま次の反応に用いる。

[0035] こうして得られたポルフィリンを適当な乾燥溶媒（ジクロロメタン、クロ口ホルム、ベンゼン等）に溶解し、トリフルォロ酢酸を加え、室温、遮光下で 1〜6時間撹拌する。 TL Cで反応の進行を追跡、溶媒を減圧除去し、残渣にベンゼンを加え、 2- (N—（ω —イミダゾリルアルカノィル）一アミノアシル)メチル 5, 10, 15, 20—テトラキス（α , a , a , α—ο 置換アミドフエ-ル）ポルフィリンを得る。本化合物は、光、シリカゲルカラムによる分離操作で分解してしまうので、そのまま次の反応に用いる。

[0036] 得られたポルフィリンへ中心金属 Μを導入する。この中心金属 Μの導入は、例えば D. Dolphin編、 The Porphyrin, 1978年、アカデミック 'プレス社等に記載の一般法により達成され、相当のポルフィリン金属錯体として得られる。一般に、鉄錯体の場合にはポルフィリン鉄 (III)錯体が、コバルト錯体の場合にはボルフイリンコノレト（Π)錯体が得られる。具体的には、 2— (N— ( ω イミダゾリルアルカノィル）—アミノアシル)メチル— 5, 10, 15, 20 テ卜ラキス , a , a , α—o 置換アミド、フエ-ル）ポルフィリンの蒸留 THF溶液を電解鉄と臭化水素酸により調製した臭化鉄 (Π)へ、乾燥ァルゴン雰囲気下ですばやく加え、 60〜80°Cで 2〜24時間反応させる。溶媒を減圧除去後、残渣をクロ口ホルムに溶解させ、純水で十分に洗浄する。脱水、溶媒除去後、得られた混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで分画精製すると、茶色固体の 2— (Ν—( ω—イミダゾリルアルカノィル）一アミノアシル)メチル 5, 10, 15, 20 ーテトラキス（a , a , a , α—o 置換アミドフヱ-ル）ボルフイナト鉄（III)が得られる

[0037] このポルフィリンを適当な乾燥溶媒（ジクロロメタン、クロ口ホルム、ベンゼン、ジェチルエーテル等）に溶解し、 DCCをカ卩え、室温で 10分〜 2時間撹拌する。そこへ N ヒドロキシスクシンイミドのジクロロメタン溶液を添カロし、室温、遮光下にて 2〜24時間反応させる。 TLCで反応の進行を追跡し、析出物を 0°Cで濾別し、溶媒を減圧除去する。残渣をベンゼンに溶解し、 DCUを再び濾過により除去した後、溶媒を減圧除去すると、目的化合物 2—（N— ( ω イミダゾリルアルカノィル）ースクシンィミジルーァミノ酸エステノレ)メチノレ一 5, 10, 15, 20 テトラキス（a , a , a , α— o 置換アミドフエニル)ボルフイナト鉄（III)が得られる。ここで、アミノ酸エステルは、いうまでもなぐアルギネートまたはグルタメートである。

[0038] なお、上記ポルフィリン金属錯体のうち、鉄 (III)錯体の形を有する場合は、適当な還元剤（亜ニチオン酸ナトリウム、ァスコルビン酸等）を用い、常法により中心金属を 3 価から 2価へ還元すれば、酸素結合活性が付与できる。

[0039] これらのポルフィリン鉄 (II)錯体をアルブミンと結合させるには、まずポルフィリン鉄 ( II)錯体のカルボ二ル錯体エタノール溶液を調製し、それを例えばヒト血清アルブミンのリン酸緩衝水溶液と混合し、ゆっくりと室温で 30分〜 3時間攪拌する。得られた溶液をリン酸緩衝水溶液に対して、 10〜24時間透析し、エタノールを除去する。こうして得られた式 [V]で示される金属ポルフィリンが得られる。ここで、ポルフィリンのスクシンィミジルォキシ基が離脱したァシル基がアルブミンのリジンァミノ基とアミド結合を形成している。

[0040] 本発明の金属ポルフィリンを包接した血清アルブミンは、金属ポルフィリンの結合をもたらすアミノ酸を遺伝子組み換え技術により少なくとも一つ導入した組換えヒト血清アルブミンに、金属ポルフィリンを軸配位結合させて得た組換えヒト血清アルブミン金属ポルフィリン錯体であってもよ、。このような組換えヒト血清アルブミン金属ポルフイリン錯体は、特表 2002— 500862号公報に記載されている。導入されるアミノ酸はヒスチジンが好ましぐ導入位置はサブドメイン IBが好ましい。この場合の金属ポルフィリンは、軸塩基配位子を分子内に持っていない金属プロトポルフィリン、金属デュ一テロポルフィリン、金属ジァセチルデューテロポルフィリン、金属メソポルフィリン、金属ジホルミルポルフィリン、金属テトラフヱ-ルポルフィリン、金属オタタエチルポルフィリンが好ましい。

[0041] 本発明の表面修飾血清アルブミン金属ポルフィリン複合体において、中心遷移金属イオン Mは好ましくは Feまたは Coである。 Feの原子価は + 2価または + 3価であり得、 Coの原子価は + 2価であり得る。

[0042] また、本発明の表面修飾血清アルブミン金属ポルフィリン複合体にぉ、て、血清アルブミンはヒト血清アルブミン、ゥシ血清アルブミン、組換えヒト血清アルブミン、ァルブミン多量体が好まし!/、。

[0043] アルブミン 1分子当りのポリオキシエチレンの平均結合分子数は、 1〜15が好ましく、ポリオキシエチレンの平均分子量は 1, 000〜20, 000力 S好ましい。

[0044] このような表面修飾血清アルブミン金属ポルフィリン複合体は、酸素を可逆的に結合解離できるので、酸素輸液としての機能を発現することはもちろん、アルブミンの分子表面がポリオキシエチレン鎖で被覆されているので、アルブミン内部に包接されている金属ポルフィリンが解離しにくい特徴を持つ。つまり、体内へ投与した場合でも、血液循環系で金属ポルフィリンがアルブミンカゝら離脱することなぐより長い血中滞留時間が期待される。

[0045] 酸素輸液の適応は、出血ショックの蘇生液（輸血用血液の血液代替物）のほか、術前血液希釈液、人工心肺等体外循環回路の補填液、移植臓器の灌流液、虚血部位への酸素供給液 (心筋梗塞、脳梗塞、呼吸不全等)、慢性貧血治療剤、液体換気の環流液、癌治療用増感剤、再生組織細胞の培養液、さらに、稀少血液型患者への利用、宗教上の理由による輸血拒否患者への対応、動物医療への応用、が期待されている。

[0046] 力！]えて、ポルフィリンが例えば第 4〜5周期に属する金属イオンの錯体である場合、酸化還元反応、酸素酸化反応または酸素添加反応の触媒としての付加価値も高、。従って、本発明のポルフィリン金属錯体は、酸素輸液のほか、ガス吸着剤、酸ィ匕還元触媒、酸素酸化反応触媒、酸素添加反応触媒としての特徴を持つ。

[0047] 本発明の表面修飾血清アルブミン金属ポルフィリン複合体の製造方法に制限はないが、例えば次の方法により合成される。

[0048] 特開 2003— 040893号公報に記載の方法により合成された、例えば 2— (N— (8 一（2—メチルイミダゾリル）オタタノィルォキシ））メチルー 5, 10, 15, 20—テトラキス ( a , a , a , α—o—（1ーメチルシクロへキサンアミド）フエ-ル）ボルフイナト鉄（Π) ( 一酸化炭素)錯体を包接したヒト血清アルブミン複合体 (アルブミン濃度： 0. l〜10w t%、好ましくは 0. 5〜5. Owt%、鉄（II)ポルフィリン Zアルブミン： 1〜8 (モル Zモル；) )のリン酸緩衝生理塩水溶液 (PBS、 pH7. 4)に、例えばイミノチオラン (ピアス ·ケミカル製、イミノチオラン Zアルブミン： 3〜40 (モル Zモル）、好ましくは 10〜30)を加え、室温で 1〜12時間、好ましくは 2〜6時間攪拌した。続いて片末端マレイミド片末端メチルポリオキシエチレン、例えば、サンブライトメマール 50—H (Mw: 5, 000、日本油脂製、ポリオキシエチレン Zアルブミン： 3〜40 (モル Zモル）、好ましくは 10 〜30)を添加し、同条件で 0. 5〜6時間、好ましくは 1〜3時間反応させた。得られた混合物を限外濾過装置 (アドバンテック製、 UHP— 76K、限外分子量膜 : 5kDa)を用い、数 Lの PBS溶液で濃縮'洗浄を繰り返す。得られた赤色の表面修飾血清アルブミン一鉄（II)ポルフィリン複合体水溶液を 0. 45 μ mの除菌フィルター（アドバンテツク社製、 DISMIC 25CS045AS)を通過させて最終調整する。

[0049] 表面修飾血清アルブミン—鉄 (Π)ポルフィリン複合体の鉄イオン濃度は、誘導ブラズマ発光分析（ICP、セイコーインスツルメンッ製 SPS 7000A)を用いて測定し、へム濃度の指標とできる。また、プロモクレゾールグリーン法 (和光純薬社製、アルブミンテストヮコ一）により、アルブミン濃度を測定できる。さらに、表面修飾血清アルブミン一鉄 (Π)ポルフィリン複合体のマトリックス支援レーザー脱離イオン化法質量分析（MALDI- T0FMS) (島津製作所、 KRATOS AXIMA- CFR)〖こより、分子量を測定できる。以上の分析結果から、アルブミン表面に結合したポリオキシエチレン鎖の本数がわカゝる。

[0050] 表面修飾血清アルブミン一鉄 (Π)ポルフィリン複合体は、ヽずれの場合も酸素と接触すると速やかに安定な酸素錯体を生成する。また、これらの錯体は酸素分圧に応じて酸素を吸脱着できる。この酸素結合解離は可逆的に繰り返し行うことができ、酸素吸脱着剤、酸素運搬体として作用する。

[0051] 酸素以外にも金属に配位性である気体の場合、相当する配位錯体を形成できる（例えば、一酸化炭素、一酸化窒素、二酸化窒素等)。これらの理由から、本発明のポルフィリン金属錯体は、特に鉄 (Π)またはコバルト (Π)錯体の場合、有効な酸素輸液として機能することはもちろん、均一系、不均一系での酸化還元反応触媒、およびガス吸着剤としての応用が可能となる。

[0052] 表面修飾血清アルブミン一鉄 (Π)ポルフィリン複合体 (酸素錯体)水溶液を麻酔下のウィスターラットの尾静脈力投与し、その後の経時的採血から血漿中に含まれる鉄 (II)ポルフィリン濃度を定量、その血中滞留時間を測定できる。鉄 (II)ポルフィリンの血中半減期は 12〜24時間であり、これはポリオキシエチレンで修飾して!/、な!/、血清アルブミン一鉄 (II)ポルフィリン複合体に比べ約 7〜34倍に延長していることになる。

[0053] 以下、この発明を実施例により詳細に説明する。なお、本発明が実施例のものに限定されないことは、言うまでもないことである。

[0054] 例 1

特開 2003— 040893号公報に記載の方法により合成された 2— (Ν— (8— (2—メチルイミダゾリル）オタタノィルォキシ））メチルー 5, 10, 15, 20—テトラキス（a , a , a , a -o- (1ーメチルシクロへキサンアミド）フエ-ル）ボルフイナト鉄（II) (一酸化炭素)錯体を包接したヒト血清アルブミン複合体 (アルブミン濃度： lwt%、鉄 (II)ボルフィリン Zアルブミン： 4 (モル Zモル））のリン酸緩衝生理塩水溶液（PBS、 pH7. 4、 50 mL)に 20mgのイミノチオラン（ピアスケミカル製、イミノチオラン/アルブミン： 20 (モル Zモル)）を加え、室温でゆっくりと 4時間攪拌した。続いて片末端マレイミド片末端メチルーポリオキシエチレン（サンブライトメマール 50— H、 Mw: 5, 000、日本油脂製、 0. 6g)を添加し、同条件で 2時間反応させた。得られた混合物を限外濾過装置（アドバンテック製、 UHP— 76K、限外分子量膜： 5kDa)を用い、 1Lの PBS溶液で濃縮'洗浄を繰り返し、最終的には 10mLに濃縮した。得られた赤色の表面修飾血清ァルブミン一鉄（II)ポルフィリン複合体水溶液を 0. 45 μ mの除菌フィルター（アドバンテック製、 DISMIC 25CS045AS)を通過して最終調整した。

[0055] 得られた表面修飾血清アルブミン一鉄 (Π)ポルフィリン複合体の鉄イオン濃度を誘導プラズマ発光分析 (ICP、セイコーインスツルメンッ製 SPS 7000A)を用いて測定し、ヘム濃度の指標とした。また、プロモクレゾールグリーン法 (和光純薬社製、アルブミンテストヮコ一）により、アルブミン濃度を測定。さら〖こ、表面修飾血清アルブミン一鉄 (Π)ポルフィリン複合体のマトリックス支援レーザー脱離イオン化法質量分析 ( MALDI-TOFMS) (島津製作所製、 KRATOS AXIMA- CFR)〖こより、分子量を測定した。以上の実験結果から、鉄 (II)ポルフィリン濃度は 3. 0mM、アルブミン濃度は 4. 9 mM、分子量は 101, 516、アルブミン表面に結合したポリオキシエチレン鎖の本数は平均 6本であることがわかった。

[0056] 例 2

例 1で使用した 2— (N— (8— (2—メチルイミダゾリル)オタタノィルォキシ)）メチル - 5, 10, 15, 20 テトラキス（a , a , a , α—o— (1 メチルシクロへキサンアミド）フエニル)ボルフイナト鉄 (Π) (—酸化炭素)錯体を包接したヒト血清アルブミン複合体の代わりに、特開 2002— 128781号公報に記載の方法により合成された 2— (4— ( o—メチルー L—ヒスチジルカルボニル）ブタノィルォキシ）メチルー 5, 10, 15, 20- テトラキス（a , a , a , α—o ピバルアミドフエ-ル）ボルフイナト鉄（II) (一酸化炭素)錯体を包接したヒト血清アルブミン複合体 (アルブミン濃度： lwt%、鉄 (II)ボルフィリン Zアルブミン： 8 (モル Zモル））のリン酸緩衝生理塩水溶液（PBS、 pH7. 4、 50 mL)を用いた以外は全く同様な方法に従って、表面修飾血清アルブミン一鉄 (II)ポルフィリン複合体水溶液を得た。アルブミン表面に結合したポリオキシエチレン鎖の本数は平均 6本であった。 [0057] 例 3

例 1で使用した 2— (N— (8— (2—メチルイミダゾリル)オタタノィルォキシ)）メチル - 5, 10, 15, 20 テトラキス（a , a , a , α—o— (1 メチノレシクロへキサンアミド）フエニル)ボルフイナト鉄 (Π) (—酸化炭素)錯体を包接したヒト血清アルブミン複合体の代わりに、特許文献 2 (特開平 08— 301873号公報）に記載の方法により合成された 3, 18 ジビ-ルー 8—（3 エトキシカルボ-ル）ェチルー 12—（N—イミダゾリルプロピルアミド） 9ーォキシメチル）カルボ-ル）ェチルー 2, 7, 13, 17—テトラメチルポルフイナト鉄 (Π) (—酸化炭素)錯体を包接したヒト血清アルブミン複合体 (アルブミン濃度： lwt%、鉄 (Π)ポルフィリン Zアルブミン： 1 (モル Zモル) )のリン酸緩衝生理塩水溶液（PBS、 pH7. 4、 50mL)を用い、イミノチオラン Zアルブミン： 15 (モル Zモル)）にした以外は全く同様な方法に従って、表面修飾血清アルブミン一鉄 (II) ポルフィリン複合体水溶液を得た。アルブミン表面に結合したポリオキシエチレン鎖の本数は平均 5本であった。

[0058] 例 4

例 1で調製した表面修飾血清アルブミン一鉄 (Π)ポルフィリン複合体 (一酸化炭素錯体)水溶液 (4mL)を lcm石英製分光用セルに入れ、氷水浴で冷やしながら、酸素を通気（フロー）しながら、ハロゲンランプ（500W)を用いてポルフィリン鉄 (II)錯体結合アルブミン水溶液に光照射した（10分間）。その後、得られた水溶液の紫外可視吸収スペクトル測定を行った。酸素錯体の形成を確認後、窒素を通気して、脱酸素を行、デォキシ体を調製した。ポルフィリン鉄 (II)錯体結合アルブミンの窒素雰囲気下における吸収スペクトルは、 max力 44、 540、 566nmであり、包接されている鉄 (Π)ポルフィリン鉄は分子内軸塩基が 1つ配位した Fe (II)高スピン 5配位錯体を形成していることがわ力つた。この分散液に酸素を通気すると、その可視吸収スペクトルのえ maxは 428、 551nmへ移行し、これは明らかに酸素化錯体になっていることを示す。この酸素化錯体溶液に窒素ガスを 1分間吹き込むことにより、可視吸収スペクトルは酸素化型スペクトル力デォキシ型スペクトルへ可逆的に変化し、酸素の吸脱着が可逆的に生起することを確認した。なお、酸素を吹き込み、次に窒素を吹き込む操作を繰り返し、酸素吸脱着を連続して行うことができた。 [0059] 例 5

例 4で調製した表面修飾血清アルブミン一鉄 (Π)ポルフィリン複合体 (酸素錯体)水溶液（3. 8mL)をセボフルランで麻酔したウィスターラット（体重:約 300g、雄）の尾静脈から lmLZ分の速度で投与した (この時、投与量はラット全血量の約 20%に相当）。投与後、経時的に大腿動脈力採血を行い、得られた血液を遠心分離 (3000r pm、 10分、 4°C)して、血漿中に含まれる鉄 (II)ポルフィリン濃度を ICP測定により定量し、血中滞留時間を測定した (使用したラットの数 (n) = 5)。鉄 (II)ポルフィリンの血中半減期は約 15時間であり、これはポリオキシエチレンで修飾してヽな、血清ァルブミン—鉄 (II)ポルフィリン複合体に比べ約 20倍に延長したことになる。

[0060] 以上述べたように、本発明の表面修飾血清アルブミン金属ポルフィリン複合体は、アルブミン分子の表面がポリオキシエチレン基で被覆されているため、その内部に包接されている金属ポルフィリンが解離しにくい特徴を持つ。つまり、本発明の表面修飾血清アルブミン金属ポルフィリン複合体を含有する酸素輸液は、酸素結合能を保持したまま、金属ポルフィリンを解離しにくい、実用に耐える、血中滞留時間の長い製剤として提供できる。また、本発明の表面修飾血清アルブミン—金属ボルフイリン複合体は前記した酸素輸液のほかにも、ガス吸着剤、酸素吸着剤、酸化還元触媒、酸素酸化反応触媒等としても有用なものである。

Claims

請求の範囲

[1] 金属ポルフィリンを包接した血清アルブミンを含み、前記血清アルブミンの分子表面にポリオキシエチレン基が共有結合されて、る表面修飾血清アルブミン金属ポルフィリン複合体。

[2] 前記ポリオキシエチレン基力チォエーテル結合により前記血清アルブミンの分子表面に導入されて！ヽる請求項 1に記載の表面修飾血清アルブミン金属ボルフイリン複合体。

[3] 前記ポリオキシエチレン基が、前記血清アルブミンの分子表面に存在するリジン残基のアミノ基をイミノチオランでチォレート基に変換し、それに末端マレイミド基を有するポリオキシエチレンを反応させることにより導入されている請求項 2に記載の表面修飾血清アルブミン金属ポルフィリン複合体。

[4] 前記金属ポルフィリンが、一般式 [I]：

[化 8]

(ここで、 Rは置換基を有してもよい直鎖または脂環式炭化水素基、 Rはアルキレン

1 2

基、 Rはイミダゾリル基の中心遷移金属イオン M (周期律表第 4〜5周期の遷移金属

3

イオン)への配位を許容する基)で示される請求項 1に記載の表面修飾血清アルブミン金属ボルフイリン複合体。

Rが 1位に置換基を有する直鎖または脂環式炭化水素基であり、 Rが C〜C アルキレン基であり、 Rが水素原子またはメチル基、ェチル基もしくはプロピル基である請

3

求項 4に記載の表面修飾血清アルブミン金属ポルフィリン複合体。

[6] Rが 1 , 1 二置換 C〜C アルカン基、 1―置換シクロプロピル基、 1―置換シクロ

1 1 10

ペンチル基、 1 置換シクロへキシル基、 2—置換ノルボル-ル基（これら基における置換基は、メチル基、アルキルアミド基、アルキルエステル基またはアルキルエーテル基）、 1ーメチルー 2—シクロへキセ-ル基、または 1ーァダマンチル基である請求項 5に記載の表面修飾血清アルブミン金属ポルフィリン複合体。

[7] 前記金属ポルフィリンが、一般式 [II]：

[化 9]

4 5

基、 Rはアルキル基、 Mは中心遷移金属イオン (周期律表第 4〜5周期の遷移金属

6

イオン) )で示される請求項 1に記載の表面修飾血清アルブミン金属ボルフイリン複合体。

[8] Rが 1位に置換基を有する直鎖または脂環式炭化水素基であり、 Rが C〜Cアル

4 5 1 6 キレン基であり、 Rが C〜Cアルキル基である請求項 7に記載の表面修飾血清アル

6 1 6

ブミン―金属ボルフイリン複合体。

[9] Rが 1 , 1 二置換 C〜C アルカン基、 1―置換シクロプロピル基、 1―置換シクロ

4 1 10

ペンチル基、 1 置換シクロへキシル基、 2—置換ノルボル-ル基（これら基における置換基は、メチル基、アルキルアミド基、アルキルエステル基またはアルキルエーテル基）、 1ーメチルー 2—シクロへキセ-ル基、または 1ーァダマンチル基である請求項 8に記載の表面修飾血清アルブミン金属ポルフィリン複合体。

[10] 前記金属ポルフィリンカ、一般式 [III]：

[化 10]

7 8

9

[11] Rが 1位に置換基を有する直鎖または脂環式炭化水素基であり、 Rが C〜C アル

7 8 1 10 キレン基であり、 Rが水素原子またはメチル基、ェチル基もしくはプロピル基で示され

9

る請求項 10に記載の表面修飾血清アルブミン金属ボルフイリン複合体。

[12] Rが 1, 1一二置換 C〜C アルカン基、 1 置換シクロプロピル基、 1 置換シクロ

7 1 10

ペンチル基、 1 置換シクロへキシル基、 2—置換ノルボル-ル基（これら基における置換基は、メチル基、アルキルアミド基、アルキルエステル基またはアルキルエーテル基）、 1ーメチルー 2—シクロへキセ-ル基、または 1ーァダマンチル基である請求項 11に記載の表面修飾血清アルブミン金属ポルフィリン複合体。

[13] 前記金属ポルフィリンカ、一般式 [IV]： [化 11]

(ここで、 R は炭化水素基、 R はアルキル基、 R はアルキレン基、 R はイミダゾリル

10 11 12 13

基の中心遷移金属イオン M (周期律表第 4〜5周期の遷移金属イオン)への配位を許容する基)で示される請求項 1に記載の表面修飾血清アルブミン金属ボルフイリン複合体。

[14] R が水素原子、ビュル基、ェチル基、ホルミル基、もしくはァセチル基であり、 R が

10 11

C〜C ァノレキレン基であり、 R が C〜C ァノレキレン基であり R が水素原子または

1 10 12 1 10 13

メチル基、ェチル基もしくはプロピル基である請求項 13に記載の表面修飾血清アルブミン―金属ボルフイリン複合体。

[15] 前記金属ポルフィリンカ、一般式 [V]：

[化 12]

ァルブミン

(ここで、 R は置換基を有してもよい直鎖または脂環式炭化水素基、 R はアルキレ

14 15

ン基、 R はイミダゾリル基の中心遷移金属イオン M (周期律表第 4〜5周期の遷移金

16

属イオン)への配位を許容する基、 Rはメチレン基またはエチレン基)で示され、血清アルブミンのリジン残基であるアミノ基と結合して、る請求項 1に記載の表面修飾血清アルブミン金属ポルフィリン複合体。

[16] R 力 ^位に置換基を有する直鎖または脂環式炭化水素基であり、 R が C〜C ァ

14 15 1 10 ルキレン基であり、 R が水素原子またはメチル基、ェチル基もしくはプロピル基で示

16

される請求項 15に記載の表面修飾血清アルブミン金属ボルフイリン複合体。

[17] R が 1, 1一二置換 C〜C アルカン基、 1 置換シクロプロピル基、 1 置換シクロ

14 1 10

ペンチル基、 1 置換シクロへキシル基、 2—置換ノルボル-ル基（これら基における置換基は、メチル基、アルキルアミド基、アルキルエステル基またはアルキルエーテル基）、 1ーメチルー 2—シクロへキセ-ル基、または 1ーァダマンチル基である請求項 16に記載の表面修飾血清アルブミン金属ポルフィリン複合体。

[18] 金属ポルフィリンを包接した血清アルブミン力金属ポルフィリンの結合をもたらすアミノ酸を遺伝子組み換え技術により少なくとも一つ導入された組換えヒト血清アルブミンに、金属ポルフィリンを軸配位結合させて得た組換えヒト血清アルブミン—金属ポルフイリン錯体で示される請求項 1に記載の表面修飾血清アルブミン金属ポルフィリン複合体。

[19] 金属ポルフィリンの Mが Feまたは Coである請求項 6に記載の表面修飾血清アルブミン金属ポルフィリン複合体。

[20] 金属ポルフィリンの Mが Feまたは Coである請求項 9に記載の表面修飾血清アルブミン金属ポルフィリン複合体。

[21] 金属ポルフィリンの Mが Feまたは Coである請求項 12に記載の表面修飾血清アルブミン―金属ボルフイリン複合体。

[22] 金属ポルフィリンの Mが Feまたは Coである請求項 14に記載の表面修飾血清アルブミン―金属ボルフイリン複合体。

[23] 金属ポルフィリンの Mが Feまたは Coである請求項 17に記載の表面修飾血清アルブミン―金属ボルフイリン複合体。

[24] 金属ポルフィリンの金属が Feまたは Coである請求項 18に記載の表面修飾血清ァルブミン金属ボルフイリン複合体。

[25] Feの価数が + 2価または + 3価である請求項 19記載の表面修飾血清アルブミン金属ポルフィリン複合体。

[26] Feの価数が + 2価または + 3価である請求項 20記載の表面修飾血清アルブミン金属ポルフィリン複合体。

[27] Feの価数が + 2価または + 3価である請求項 21記載の表面修飾血清アルブミン金属ポルフィリン複合体。

[28] Feの価数が + 2価または + 3価である請求項 22記載の表面修飾血清アルブミン金属ポルフィリン複合体。

[29] Feの価数が + 2価または + 3価である請求項 23記載の表面修飾血清アルブミン金属ポルフィリン複合体。

[30] Feの価数が + 2価または + 3価である請求項 24記載の表面修飾血清アルブミン金属ポルフィリン複合体。

[31] Coの価数が + 2価である請求項 19記載の表面修飾血清アルブミン金属ボルフイリン複合体。

[32] Coの価数が + 2価である請求項 20記載の表面修飾血清アルブミン金属ボルフイリン複合体。

[33] Coの価数が + 2価である請求項 21記載の表面修飾血清アルブミン金属ボルフイリン複合体。

[34] Coの価数が + 2価である請求項 22記載の表面修飾血清アルブミン金属ボルフイリン複合体。

[35] Coの価数が + 2価である請求項 23記載の表面修飾血清アルブミン金属ボルフイリン複合体。

[36] Coの価数が + 2価である請求項 24記載の表面修飾血清アルブミン金属ボルフイリン複合体。

[37] アルブミンがヒト血清アルブミン、ゥシ血清アルブミン、組換えヒト血清アルブミン、ァルブミン多量体である請求項 1に記載の表面修飾血清アルブミン金属ポルフィリン複合体。

[38] アルブミン 1分子当りのポリオキシエチレンの平均結合分子数が 1〜15である請求項 1に記載の表面修飾血清アルブミン金属ポルフィリン複合体。

[39] ポリオキシエチレンの平均分子量が 1, 000-20, 000である請求項 1に記載の表面修飾血清アルブミン金属ポルフィリン複合体。

[40] 請求項 37に記載の表面修飾血清アルブミン金属ポルフィリン複合体を含有する酸素輸液。

[41] 請求項 38に記載の表面修飾血清アルブミン金属ポルフィリン複合体を含有する酸素輸液。

[42] 請求項 39に記載の表面修飾血清アルブミン金属ポルフィリン複合体を含有する酸素輸液。