WO2005007846A1 - 腫瘍細胞の抗癌剤に対する感受性を判定する方法 - Google Patents

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sensitivity
genes
expression
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Takao Yamori
Yoko Yoshida
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Japanese Foundation For Cancer Research
Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd.
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    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5011—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing antineoplastic activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2503/00—Use of cells in diagnostics
    • C12N2503/02—Drug screening

Definitions

  • the present invention relates to a method for identifying a group of genes involved in sensitivity of a tumor cell to an anticancer drug, a method for determining the sensitivity of a cancer patient to an anticancer drug, and a method for screening a substance that enhances the sensitivity of a tumor cell to an anticancer drug.
  • Cancer chemotherapy with various anticancer drugs is one of the most important methods in treating cancer.
  • it is important to predict the sensitivity of patients to anticancer drugs and to select appropriate drugs.
  • Finding genes that determine susceptibility to anticancer drugs is one method for predicting susceptibility.
  • many genes have been reported as determinants of sensitivity to multiple anticancer drugs.
  • the drug transporters MDR1 Choen, CJ, et. Al., J. Biol. Chem., 265, 506-514, 1990
  • MRP2 Kool, M, et.
  • DT-diaphorase activity enhancement is a susceptibility factor to mitomycin C (hereinafter abbreviated as MMC) (Gustafson, DL and Pritsos, CA, Cancer Res., 52, 6936-6939, 1992).
  • MMC mitomycin C
  • an object of the present invention is to provide a set of cell strains suitable for selection of a gene defining a sensitivity to an anticancer drug, and to analyze a specific organ to select a gene correlated with the sensitivity to the anticancer drug with higher accuracy.
  • the purpose is to select genes that are actually involved in determining sensitivity to anticancer drugs.
  • An object of the present invention is to provide a method for determining the susceptibility of a cancer patient to an anticancer drug by using a gene involved in determining the susceptibility to the anticancer drug selected by the above method.
  • Yet another object of the present invention is to provide an anticancer drug sensitization enhancer utilizing a gene exhibiting an activity of enhancing sensitivity to an anticancer drug by forcibly expressing or suppressing expression in cancer cells from the genes selected by the above method.
  • Still another object of the present invention is to provide a method for screening a substance that enhances the sensitivity of a tumor cell to an anticancer agent using the gene selected by the above method.
  • the present inventors diligently studied to solve the above-mentioned problems, and firstly developed a new human cancer cell panel consisting of 45 cell lines derived from three types of tissues (ie, breast, liver and stomach). It was constructed (Tables 1-5). Furthermore, in a cancer cell panel composed of these 45 cells, the sensitivity to the anticancer drug and the expression profile of the gene were obtained and evaluated, and genes whose expression correlated with the sensitivity to the anticancer drug were selected (Tables 6 to 11). In addition, among these genes, genes that change the sensitivity to anticancer drugs at the cell level were screened. As a result, the present inventors have succeeded in identifying a gene that can be a marker for predicting susceptibility to an anticancer agent.
  • the present invention relates to the following (1) to (64).
  • One or more genes are selected from the group of genes identified by the method according to any of (1) to (4) above, and a score corresponding to the expression level of each of the selected genes is selected. The process of determining the-
  • a method for determining the sensitivity of a cancer patient to mitomycin C comprising the steps of: SF1 (D26121), CBR3 (AB004854), EMS1 in a tumor cell extracted from the cancer patient.
  • V00595 V00595
  • RARA X06614
  • ITGB4 X53587
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  • PACE X17094
  • AGA M64073
  • MVD U49260
  • EHHADH L07077)
  • TFPI2 D29992
  • MARCKS MARCKS
  • a method for determining the sensitivity of a cancer patient to paclitaxel comprising the steps of detecting ADH6 (M68895), RAB28 (X94703), and U2AF1 in a tumor cell extracted from the cancer patient.
  • a method for determining the sensitivity of a cancer patient to doxorubicin comprising the steps of: RPS7 (M77233), RPL23 (X52839), and CALT in a tumor cell extracted from the cancer patient. (X72946), EEF1D (Z21507), RPS15A (X84407), ADCY1 (L05500), HNRPU (X65488), C0X5A (M22760), U2AF1 (M96982) and RPYR1 (U35232)
  • RPS7 M77233
  • RPL23 X52839)
  • CALT in a tumor cell extracted from the cancer patient.
  • EEF1D Z21507
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  • ADCY1 L05500
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  • C0X5A M22760
  • U2AF1 M96982
  • RPYR1 U35232
  • EB1 U24166
  • JUN J04111
  • EIF3S8 U46025
  • CCL5 M21121
  • PHB S85655
  • HSPAIA M11717
  • SPPl SPPl
  • RAB7 X93499
  • CTSD Ml 1233
  • ACTN1 X15804
  • RXRB RXRB
  • PSME2 D45248
  • HLA-C RPL19
  • MAPK6 X80692
  • GCSH GCSH
  • the method comprises the steps of: (1) TEAD4 (U63824), NR2C2 (U10990), CSFl (M37435), RAB28 (X94703), CBR3 (AB004854) ), NFYC (Z74792), PGF (X54936), ERG (M21535), MLLTl (L04285), FOS (K00650), TNFAIP3 (M59465), CNR2 (X74328), DRPLA (D31840), PSMB5 (D29011), SLC6A8 (L31409) ), SERPINBIO (U35459), VATl (U18009), TJPl (L14837), PELPl (U88153), CIQBP (L04636), CDK10
  • X65488 one or more genes selected from the group consisting of C0X5A (M22760), U2AF1 (M96982) and RPYR1 (U35232) (the numbers in parentheses indicate the GenBank accession number), A method for determining sensitivity to doxorubicin using the method described in 5).
  • a reagent for quantifying RNA comprising an oligonucleotide complementary to the RNA, for use in the method according to (23).
  • a mitomycin comprising a gene or a plurality of genes (the numbers in parentheses indicate GenBank accession numbers), which are genes that exhibit an activity of enhancing sensitivity to mitomycin C by forcibly expressing them in cancer cells, or a protein encoded by the genes; C sensitizer.
  • a drug for enhancing sensitivity to vinorelbine comprising a gene exhibiting an activity of enhancing susceptibility to vinorelbine by forcibly expressing it in cancer cells or a protein encoded by the gene.
  • ADH6 (M68895), Bandit 28 (X94703), U2AF1 (M96982), GPC1 (X54232), HKl (M75126), CARS (L06845), TNFAIP3 (M59465), K-ALPHA-1 (K00558), PFKP
  • An agent for enhancing sensitivity to paclitaxel comprising a gene exhibiting an activity of enhancing sensitivity to paclitaxel by forcibly expressing it in cells or a protein encoded by the gene.
  • SRPK1 U09564
  • 0AZ1 D78361
  • RPL34 L38941
  • ARHB X06820
  • RPS17 M13932
  • RPL28 U14969
  • TRIP11 L40380
  • ZNF75 S67970
  • a drug for enhancing sensitivity to 5-fluorouracil comprising a gene having an activity of enhancing sensitivity to 5-fluorouracil or a protein encoded by the gene.
  • doxorubicin sensitivity enhancer comprising a gene exhibiting an activity of enhancing doxorubicin sensitivity by forcibly expressing it in cancer cells or a protein encoded by the gene.
  • An agent for enhancing sensitivity to cisplatin comprising a gene exhibiting an activity of enhancing sensitivity to cisplatin when expressed or a protein encoded by the gene.
  • a drug for enhancing susceptibility to mitomycin C in cancer which comprises a gene having an activity of enhancing sensitivity to mitomycin C by forcibly expressing it in cancer cells or a protein encoded by the gene.
  • TEAD4 (U63824), NR2C2 (U10990), CSF1 (M37435), RAB28 (X94703), CBR3 (AB004854), FYC (Z74792), PGF (X54936), ERG (M21535), MLLT1 (L04285), FOS (K00650), TNFAIP3 (M59465), CNR2 (X74328), DRPLA (D31840), PSMB5 (D29011), SLC6A8 (L31409), SERPINB10 (U35459), VAT1 (U18009), TJP1 (L14837), PELP C1QBP (L04636), CDK10 (L33264), SERPINA6 (J02943), ACTB (X00351), SFRP4 (AF026692), EMX1 (X68879), RPS9 (U14971), AMDl (M21154), RPL26 (X69392), HNRPF (L28010), One or
  • ALDH3B1 (U10868), SRPK1 (U09564), ALPP (M13077), EB1 (U24166), MAPKAPK (U12779), GPI (K03515), CTBPl (U37408), HMGCL (L07033), CAPZ (U03271)
  • An agent for enhancing sensitivity to paclitaxel of liver cancer comprising the gene shown or the protein encoded by the gene.
  • SRPK1 U09564
  • 0AZ1 D78361
  • RPL34 L38941
  • ARHB X06820
  • RPS17 M13932
  • RPL28 U14969
  • TRIP 11 L40380
  • ZNF75 S67970
  • An agent for enhancing susceptibility to 5-fluorouracil of liver cancer comprising a gene exhibiting an activity for causing the disease or a protein encoded by the gene.
  • a drug for enhancing susceptibility to doxorubicin of liver cancer comprising a gene having an activity of enhancing sensitivity to doxorubicin or a protein encoded by the gene.
  • a drug for enhancing susceptibility to cisplatin of liver cancer comprising a gene exhibiting an activity of enhancing susceptibility to cisplatin by causing the same or a protein encoded by the gene.
  • An agent for enhancing sensitivity to mitomycin C comprising the gene HSPA1A (GenBank accession number: M11717) or a protein encoded by the gene.
  • An agent for enhancing sensitivity to mitomycin C comprising the gene JUN (GenBank accession number: J04111) or the protein encoded by the gene.
  • SF1 (D26121), CBR3 (AB004854), EMS1 (M98343), JUN (J04111), SFRS9 (U30825), listen R (M73482), RBMX (Z23064), S0D1 (M13267), NOLI (X55504), PELPl (U88153) , A Fuji (L25080), RS (D32050), NMEl (X17620), HNRPA2B1 (M29065), NME2 (L16785), VAT1 (U18009), SERPINB10 (U35459), KIAA0436 (AB007896), DRPLA (D31840) and MC L06155);
  • ARHA L25080
  • ME2 L16785
  • VIL2 X51521)
  • YWHAQ X564608
  • HK1 M75126
  • SATB1 M97287
  • CAMLG U18242
  • CARS L06845
  • CCNB1 M25753
  • EB1 (U24166), JUN (J04111), EIF3S8 (U46025), CCL5 (M21121), PHB (S85655), HSPA1A (M11717), SPP1 (X13694), RAB7 (X93499), CTSD (M11233), ACTN1
  • SRPK1 U09564
  • 0AZ1 D78361
  • RPL34 L38941
  • ARHB X06820
  • RPS17 M13932
  • RPL28 U14969
  • TRIP11 L40380
  • ZNF75 S67970
  • RPL37 D23661
  • PLOD M98252
  • RPS7 M77233
  • RPL23 X52839
  • CALT X72946
  • EEF1D Z21507
  • RPS15A X84407
  • the expression level of at least one or more genes selected from the group consisting of was measured, and the expression level of the gene when no test substance was added was measured.
  • SPTBN1 (M96803), PET112L (AF026851), CAPN1 (X04366), MEL (X56741), PACE (X17094), DVL2 (AF006012), L0C54543 (AJ011007), PAPOLA (X76770), RPLP2 (M17887) ⁇ ⁇
  • SiRNAs or antisense polynucleotides that suppress the expression of genes that exhibit enhanced activity.
  • H0XB1 (X16666), F10 (K03194), GPX2 (X53463), NR1I2 (AF061056), A XA4 (M19383), PDLIMl (U90878), LIPC (X07228), SERPINF2 (D00174), HSD17B1
  • V00595 RAM
  • X06614 ITGB4
  • IMPA1 X66922
  • PACE PACE
  • AGA M64073
  • MVD U49260
  • EHHADH L07077)
  • TFPI2 D29992
  • MARCKS MARCKS
  • NAP1L1 (M86667), H0XB1 (X16666), PACE (XI 7094), MAN2B1 (U60266), GPX2 (X53463), DBN1 (Intestinal 802), A XA4 (M19383), SERPINF2 (D00174), AGA
  • siRNA or antisense polynucleotide suppresses the expression of a gene having an activity of enhancing sensitivity to paclitaxel by suppressing the expression of the gene in cancer cells.
  • RPN2 selected from the group consisting of RPN2 (Y00282), ATP50 (X83218), CAST (D50827), HPCA (D16593), ZNF9 (M28372), A2LP (U70671), IL18 (D49950) and NRGN (Y09689)
  • RPN2 Y00282
  • ATP50 X832128
  • CAST CAST
  • HPCA D16593
  • ZNF9 M28372
  • A2LP U70671
  • IL18 D49950
  • NRGN NRGN
  • MAPK6 (X80692), GCSH (M69175), G22P1 (M32865), USP11 (U44839), ACTB (X00351), YWHAZ (M86400), IL10 (M57627), RFC4 (M87339), CRLF1 (AF059293), RPS6 (M20020), a single or a plurality of genes selected from the group consisting of EMX1 (X68879) and TK2 (U77088) (the numbers in parentheses indicate GenBank accession numbers), which suppress the expression of the genes in cancer cells An siRNA or antisense polynucleotide that suppresses the expression of a gene exhibiting activity to enhance susceptibility to mitomycin C.
  • PSMD8 (D38047), LAMP2 (J04183), CTSD (M11233), AD0RA2B (M97759), ANXA4 (M19383), PTPRK (Z70660), RAD23A (D21235), SDHA (D30648), PET112L
  • CD81 (M33680), HNRPC (M16342), AP2S1 (M97074), GAPD (X01677), PAFAH1B3 (D63391), GBE1 (L07956), DEK (X64229), PEA15 (X86809) PSMD7
  • RAB1 M28209
  • UBE2L6 AF031141
  • PSMB7 D38048
  • C0X4AL (AF005888), RPS27A (X63237), F2 (V00595), GFAP (J04569), SCD (Y13647), YWHAZ (M86400), GCSH (M69175), SQLE (D78130), BCL2L1 (Z23115) and RFC40; M87338
  • CD81 (M33680), HNRPC (M16342), AP2S1 (M97074), GAPD (X01677), PAFAH1B3 (D63391), GBEl (L07956), DEK (X64229), PEA15 (X86809) PSMD7 (D50063) and UBE2E1X 929
  • a sensitivity enhancer for an anticancer drug comprising an antibody against a protein encoded by a gene selected from the group consisting of (the numbers in parentheses indicate GenBank registration numbers).
  • PACE (X17094), DVL2 (AF006012), L0C54543 (AJ011007), PAPOLA (X76770),
  • HOXBl (X16666), FIO (K03194), GPX2 (X53463), NR1I2 (AF061056), A XA4 (M19383), PDLIMl (U90878), LIPC (X07228), SERPINF2 (D00174), HSD17B1 (M36263), M36263 , LSS (D63807), PIK3CG (X83368), DBNl (U00802),
  • NDUFA4 (U94586), BDH (M93107), BCL2L1 (Z23115), EEF1B2 (X60656), F2 (V00595), RAM (X06614), ITGB4 (X53587), IMPAl (X66922), PACE (X17094),
  • AGA M64073
  • MVD U49260
  • EHHADH L07077
  • TFPI2 D29992
  • MARCKS M68956
  • FGB J00129
  • GPD1 L34041
  • NAPILI M86667
  • HOXBl X16666
  • PACE X17094
  • MAN2B1 U60266
  • GPX2 X53463
  • DBNl U00802
  • ANXA4 M19383
  • SERPINF2 D00174
  • AGA M64073
  • BCL2L1 Z23115
  • LIPC BDH
  • LSS LSS
  • PDLIMl U90878)
  • ZNF161 D28118
  • UBE2E1 X92963
  • TLEl M99435)
  • RARA X06614
  • PTPRN PTPRN
  • RPN2 (Y00282), ATP50 (X83218), CAST (D50827), HPCA (D16593), ZNF9
  • MAPK6 (X80692), GCSH (M69175), G22P1 (M32865), USPll (U44839), ACTB
  • X00351 YWHAZ (M86400), ILIO (M57627), RFC4 (M87339), CRLFl (AF059293), RPS6 (M20020), EMXl (X68879) and TK2 (U77088);
  • PSMD8 (D38047), LAMP2 (J04183), CTSD (Ml 1233), AD0RA2B (M97759), A XA4
  • CD81 (M33680), HNRPC (M16342), AP2S1 (M97074), GAPD (X01677), PAFAH1B3
  • ADCYl (L05500), HNRPU (X65488), C0X5A (M22760), U2AF1 (M96982) and RPYRl (U35232);
  • the expression level of at least one or more genes selected from the group consisting of are measured, and compared with the expression level of the gene when no test substance is added.
  • FIG. 1 shows the results of hierarchical clustering of 51 anticancer drugs based on the sensitivity of 45 human cancer cell lines.
  • FIG. 2 shows the results of hierarchical clustering of 42 human cancer cells based on the results of gene expression.
  • FIG. 3 shows the correlation between MMC sensitivity and CSPD protein expression in hepatocyte cell lines.
  • a in FIG. 4 shows the correlation between sensitivity to MMC and HSPA1A gene expression in breast cancer cell lines.
  • Panel B of FIG. 4 shows the correlation between sensitivity to MMC and JUN gene expression in all 42 cell lines. One dot indicates one cell line.
  • the X-axis shows sensitivity to MMC, and the Y-axis shows HSPA1A or JUN gene expression.
  • C and D in FIG. 4 show growth inhibition curves when HT1080 cells transfected with each gene were treated with MMC.
  • Each curve shows vector only (black square: garden), LacZ (black diamond: decree), NQ01 (X), HSPA1A (black triangle: ⁇ ), and JUN (white triangle: ⁇ ).
  • Transfection of HT1080 cells with NQ01, HSPAIA, or JUN enhances the inhibitory activity of MMC on growth.
  • the asterisk is The t-test shows a significant difference between p and 0.01.
  • FIG. 5 shows CTSD expression suppression by CTSD-specific siRNA.
  • Lane 1 is cells without transfection treatment
  • 2 is cells transfected with ribophenatamine 2000 only
  • 3 is CTSD # 271
  • 4 is CTSD # 387
  • 5 is CTSD # 400.
  • 4 shows a Western blot of cells. The arrow on the left indicates the position and molecular weight of the detected CTSD band.
  • FIG. 6 shows the proliferation of SSP-25 cells transfected with CTSD # 400 treated with mitomycin C (Fig. 6A), paclitaxel (Fig. 6B left) or doxorubicin (Fig. 6B right).
  • 4 shows an inhibition curve.
  • the X axis represents the concentration (mol / L) of each anticancer drug, and the Y axis represents the ratio of cell proliferation (%) to the case where no anticancer drug was added.
  • Each curve represents a cell transfected with CTSD # 400 siRNA (solid circle: see) and a control not transfected with siRNA (open square: mouth), respectively.
  • FIG. 7 shows the correlation between CTSD gene expression and susceptibility to secreted C, paclitaxel, and doxorubicin, respectively, in 12 liver cancer cell lines.
  • One dot indicates one cell line.
  • the X axis indicates the sensitivity to each anticancer drug, and the Y axis indicates the expression of the CTSD gene.
  • a method for identifying a group of genes involved in sensitivity of a tumor cell to an anticancer agent As a method for identifying a gene involved in sensitivity to an anticancer agent according to the present invention,
  • an anticellular activity measurement As a method for measuring sensitivity to an anticancer agent in the present invention, an anticellular activity measurement, a DNA synthesis rate measurement, a total protein mass measurement, and the like can be used.
  • a method for measuring the anticellular activity a method such as the MTT method or the XTT method, in which cells are contacted with an anticancer agent for a certain period of time and the proliferation of the cells is observed by a color reaction, is used.
  • the measurement of DNA synthesis rate the measurement can be performed by measuring the incorporation of thymidine labeled with 3 ⁇ 4 into cells.
  • a sulforhodamine B atsey method or the like can be used.
  • the expression level of a gene can be measured by quantifying RNA which is a transcription product of the gene or protein which is a gene product.
  • RNA or protein can be extracted from cancer cell lines or cancer cells derived from cancer patients by the following general method.
  • RNA for example, when TRIZ0L reagent (Invitrogen) is used, it may be performed according to the attached operation method.
  • a protein it may be performed according to a book such as, for example, The Protein Handbook, 1996, Humana Press, New Jersey, USA.
  • RNA quantification can be performed by techniques such as DNA microarray, Northern blot analysis, and RT-PCR. Further, a reagent for quantifying RNA, including a polynucleotide complementary to the RNA, to be used in RT-PCR is also included in the scope of the present invention.
  • the protein can be quantified by an immunochemical quantification method using a specific antibody.
  • Antibodies to proteins can be found, for example, in the book Antibodies: A Laboratory Manual, 1988, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York). Clonal or polyclonal antibodies can be prepared. If commercially available antibodies are available, they can be used after confirming their specificity. Using the obtained antibody, protein can be quantified by performing ELISA or RIA according to the method described in a compendium (eg, enzyme immunoassay (Eiji Ishikawa et al., Medical Shoin, 1982)). Further, an immunoassay reagent containing an antibody against the protein for use in the above method is also included in the scope of the present invention.
  • a correlation coefficient between the sensitivity to an anticancer drug and the result of gene expression is calculated, and a gene having a high correlation with the sensitivity to the anticancer drug is statistically selected.
  • the correlation analysis performed here can be performed by calculating, for example, Pearson correlation coefficients.
  • anticancer agent used in the present invention is not particularly limited, and any anticancer agent can be used, and candidate anticancer agents can also be used.
  • Specific examples of the anticancer agent include those described in Table 1, and more specifically, mitomycin C, vinorelbine, paclitaxel 5-pacenotaxel.
  • genes that are correlated with the sensitivity to various anticancer agents identified by the above method include the genes described in Tables 6, 7 and 12 to 14.
  • Genes that correlate with susceptibility to vinorelbine include those listed in Tables 8 and 9.
  • Genes associated with paclitaxel susceptibility include those listed in Table 10, Table 11, and Table 15. I can make it.
  • Genes that correlate with sensitivity to 5-fluorouracil include those listed in Table 16.
  • Genes that correlate with doxorubicin sensitivity include those listed in Table 17.
  • Genes that correlate with sensitivity to cisplatin include the genes listed in Table 18.
  • the genes listed in Table 12 were correlated with the susceptibility of breast cancer to mitomycin C.
  • the genes listed in Table 13 were correlated with the susceptibility of liver cancer to mitomycin C.
  • Genes that are correlated with the sensitivity of cancer to mitomycin C include the genes listed in Table 14 respectively.
  • the genes listed in Table 15 are correlated with the susceptibility of liver cancer to paclitaxel, and the genes listed in Table 16 are correlated with the susceptibility of liver cancer to 5-fluorouracil.
  • the genes listed in Table 17 correlate with the susceptibility of liver cancer to doxorubicin, and the genes listed in Table 18 can be listed as the genes correlated with the susceptibility of liver cancer to sizuvlatin. it can.
  • the present invention further provides a method for determining the susceptibility of a cancer patient to an anticancer drug.
  • the expression of a gene in a tumor cell taken out from a cancer patient can be quantified by the method described in the above (A).
  • A As a determination method, one or more genes are selected from the gene group identified for each drug by the method (A) above, and for each of the selected genes, (1) a score corresponding to the expression level is determined.
  • Susceptibility to the anticancer agent that has been used The above points are determined, the total value is calculated, and the threshold is compared with multiple regression analysis, discriminant analysis, SVM (support vector)
  • the method can be performed using multivariate analysis methods such as the terminator method, principal component analysis, and self-organizing map method (described in SAS, etc., analysis of experimental data, supervised by Kei Takeuchi, University of Tokyo Press, 1990, etc.). it can.
  • the following method can be used to examine whether a change in the expression of a gene determined to be correlated with the sensitivity to an anticancer agent by the above method actually changes the sensitivity to the anticancer agent.
  • the expression level of the gene can be increased.
  • an anticancer drug that has a correlation therewith, it can be determined whether or not the sensitivity to the anticancer drug changes as compared to the case where the gene is not expressed.
  • pEGFP-C2 As expression vectors, for example, pEGFP-C2 '(Clontech), pAGE107 [JP-A-3-22979; Cytotechnol., 3, 133, (1990)], pAS3-3 (JP-A-2-227075), pCDM8
  • Any method for introducing a recombinant vector can be used as long as it is a method for introducing DNA into animal cells.
  • the electoral port method [Miyaji H. et al., Cytotechnol., 3, 133 (1990)]
  • the calcium phosphate method Japanese Patent Application Laid-Open No. 2-227075
  • the lipofection method [Feigner PL et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 84, 7413 (1987)]
  • the expression level of the gene can be reduced.
  • introducing an antisense polynucleotide or siRNA expression vector into cancer cells thus, the expression level of the gene can be similarly reduced.
  • the gene therapy drug containing the gene is susceptible to the anticancer drug. It can be used as an enhancer.
  • a protein preparation containing a protein encoded by the gene can be used as a sensitivity enhancer for the anticancer drug.
  • one or more genes selected from the genes listed in “Sensitivity” in Table 6 and Tables 12 to 14 are forcibly expressed in cancer cells by forcibly expressing them in cancer cells.
  • a gene exhibiting an activity of enhancing sensitivity or a protein encoded by the gene can be used as a sensitivity enhancer for mitomycin C.
  • a gene or a plurality of genes selected from the genes listed in Table 8 and exhibiting an activity of enhancing sensitivity to vinorelbine by forcibly expressing them in cancer cells or a protein encoded by the gene is vinorelbine It can be used as a sensitizer for steroids.
  • the indicated gene or the protein encoded by the gene can be used as a sensitivity enhancer for paclitaxel.
  • the protein encoded by the gene can be used as a sensitizer to 5-fluorouracil.
  • These proteins can be used as sensitizers for doxorubicin.
  • a gene or a plurality of genes selected from the genes listed in “Sensitivity” in Table 18 and exhibiting an activity of enhancing cisplatin susceptibility by forcibly expressing it in cancer cells, or the gene. Can be used as a sensitizer to cisplatin.
  • the above-mentioned gene exhibiting the activity of enhancing sensitivity to various anticancer drugs or the protein encoded by the gene can be used alone as a sensitivity enhancer for anticancer drugs, but is usually one of pharmacologically acceptable Alternatively, it is desirable to mix it with a further carrier and use it as a pharmaceutical preparation produced by any method well known in the technical field of pharmaceutics. Details of such a pharmaceutical preparation will be described later in (F) in the present specification.
  • siRNA or antisense polynucleotide suppressing the expression of the gene Alternatively, a vector expressing the siRNA or the antisense polynucleotide can be used as a sensitivity enhancer for the anticancer agent. Further, a drug containing a neutralizing antibody or the like that suppresses the function of the protein encoded by the gene can be used as a sensitivity enhancer for the anticancer agent. ⁇
  • a single or a plurality of genes selected from the genes listed in Table 7 and ⁇ resistance '' in Tables 12 to 14 by suppressing the expression of the genes in cancer cells A siRNA or antisense polynucleotide that suppresses the expression of a gene exhibiting an activity of enhancing sensitivity to mitomycin C, or the siRNA or Vectors expressing antisense polynucleotides can be used as sensitizers to mitomycin C.
  • siRNA or antisense polynucleotide that suppresses the expression or a vector that expresses the siRNA or antisense polynucleotide can be used as a sensitizer for vinorelbine.
  • An siRNA or antisense polynucleotide that suppresses the expression of a gene exhibiting an enhancing activity, or a vector that expresses the siRNA or antisense polynucleotide, can be used as a paclitaxel sensitivity enhancer.
  • An siRNA or antisense polynucleotide that suppresses the expression of a gene exhibiting an activity or a vector that expresses the siRNA or antisense polynucleotide can be used as an agent for enhancing sensitivity to 5-fluorouracil.
  • the siRNA or antisense polynucleotide that suppresses the expression of the indicated gene or a vector that expresses the siRNA or antisense polynucleotide can be used as a doxorubicin sensitivity enhancer.
  • Vectors that express nucleotides can be used as sensitizers to cisplatin.
  • the siRNA is a short double-stranded RA containing a partial sequence of the mRNA of a certain target gene, and can be used to suppress the expression of the gene by RNAi (RNA interference).
  • the sequence of the siRNA can be appropriately designed based on the conditions of the literature [Genes Dev., 13, 3191, (1999)] from the base sequence of the mRNA.
  • a sequence having 19 bases following AA and a GC content of 30 to 70%, more preferably around 50% is selected.
  • RNAs each having a sequence with TT added to the 3 ′ end of each of the selected 19-base sequence and the complementary sequence are synthesized by a DNA synthesizer and annealed to produce an siRNA.
  • the expression of the gene can be controlled by introducing a DNA corresponding to the selected 19-base sequence into an siRNA expression vector such as pSilencer 1.0-U6 (Ambion) or pSUPER (OligoEngine). Vectors expressing siRNA that can be suppressed can be produced.
  • the antisense polynucleotide used in the present invention is a polynucleotide having a nucleotide sequence complementary to a continuous sequence of 15 or more nucleotides in the nucleotide sequence of the target gene.
  • Polynucleotides include DNA, thighs, and derivatives of polynucleotides.
  • polynucleotide derivative a polynucleotide derivative in which a phosphodiester bond in a polynucleotide is converted into a phosphorothioate bond, and a phosphodiester bond in a polynucleotide is converted into a ⁇ 3'-P5 'phosphoramidate bond
  • Examples thereof include a polynucleotide derivative substituted with 2, -0-propylribose, and a polynucleotide derivative substituted with 2'-methoxyethoxy ribose in a polynucleotide.
  • RNA / DNA technology [Bioscience and Industry, 50, 322 (1992), Gidani, 681 (1991), Biotechnology, 9, 358 (1992), Trends Biotechnol., 10, 87 (1992), Trends Biotechnol., 10, 152 (1992), Cell engineering, 16, 1463 (1997)], Triple 'helix technology [Trends Biotechnol., 10, 132 (1992) 3,
  • a base sequence complementary to 100 to 100 bases, including the start codon of the region encoding the polypeptide of the target gene is preferred.
  • deoxyribonucleases and polynucleotide derivatives that are not subject to degradation by ribonucleases.
  • Antisense polynucleotides can be produced using a commercially available DNA synthesizer, the method described in W093 / 20095, W002 / 10185, and the like.
  • a recombinant vector is prepared in which the target gene is reversely connected downstream of the promoter of the expression vector used for forced expression of the gene (1) in (B), and this recombinant vector is introduced into cancer cells. By doing so, the antisense RNA can be expressed in the cell.
  • an antibody against a protein encoded by any of the genes described in “resistance” in Tables 7, 9, 11 and 12 to 18 can also be used as a sensitivity enhancer for an anticancer agent.
  • the antibody is a neutralizing antibody that suppresses the function of the protein.
  • An antibody against such a target protein can be obtained by a method known to those skilled in the art.
  • the expressed vector and antibody can be used alone as a sensitizer to an anticancer drug, but usually they are mixed with one or more pharmacologically acceptable carriers to obtain a pharmaceutical technology. It is desirable to use as a pharmaceutical preparation produced by any method well known in the art. Details of such a pharmaceutical preparation will be described later in (F) of the present specification.
  • a substance having an activity of enhancing or suppressing the expression of the gene can also be used as a sensitivity enhancer for the anticancer agent.
  • the target substance can be obtained by binding the expression control region of the gene to an appropriate reporter gene, introducing the cell into a cell, and selecting a substance that increases or decreases the expression of the reporter gene by adding a test sample.
  • the reporter gene firefly luciferase gene, green fluorescent protein (GFP) gene, ⁇ -galactosidase gene and the like can be used.
  • the mRNA of the gene may be directly quantified by RT-PCR, Northern plotting, quantitative PCR, or the like, or the protein encoded by the gene may be determined by immunological methods such as ELISA or EIA. It is possible to screen the target substance by quantification.
  • Test samples include synthetic compounds, naturally occurring proteins, artificially synthesized proteins, peptides, carbohydrates, lipids, their modifications and derivatives, and mammals (for example, mice, rats, mo / remotes).
  • the substance obtained by the above-described screening method of the present invention is useful as a sensitivity enhancer for an anticancer agent, and the substance, and a sensitivity enhancer for an anticancer agent containing the same are also included in the scope of the present invention.
  • genes, proteins, antibodies and substances as described in (C), (D) and (E) above in the present specification can be used alone as a sensitivity enhancer for anticancer drugs, Usually, it is desirable to mix it with one or more pharmacologically acceptable carriers and use it as a pharmaceutical preparation produced by any method well known in the technical field of pharmaceutics.
  • Dosage forms include sprays, capsules, tablets, granules, syrups, emulsions, suppositories, injections, ointments, tapes and the like.
  • Formulations suitable for oral administration include emulsions, syrups, capsules, tablets, powders, granules and the like.
  • liquid preparations such as emulsions and syrups include water, sugars such as sucrose, sorbitol, and fructose; dalicols such as polyethylene glycol and propylene glycol; oils such as sesame oil, olive oil, and soybean oil; It can be manufactured using preservatives such as p-hydroxybenzoic acid esters, and flappers such as stove belly flapper and peppermint as additives.
  • sugars such as sucrose, sorbitol, and fructose
  • dalicols such as polyethylene glycol and propylene glycol
  • oils such as sesame oil, olive oil, and soybean oil
  • flappers such as stove belly flapper and peppermint as additives.
  • excipients such as lactose, pudose, sucrose, mannitol, disintegrants such as starch, sodium alginate, lubricants such as magnesium stearate, talc, It can be produced using a binder such as polybutyl alcohol, hydroxypropylcellulose, or gelatin, a surfactant such as a fatty acid ester, or a plasticizer such as glycerin as an additive.
  • Formulations suitable for parenteral administration include injections, suppositories, sprays and the like.
  • a carrier comprising a salt solution, a glucose solution, or a mixture of both.
  • Suppositories are prepared using carriers such as cocoa butter, hydrogenated fats or carboxylic acids.
  • Sprays are prepared using the active ingredient itself or a carrier which does not irritate the oral and respiratory mucosa of the recipient and which disperses the active ingredient as fine particles to facilitate absorption.
  • Specific examples of the carrier include lactose and glycerin.
  • Formulations such as aerosols and dry powders are possible depending on the properties of the carrier used for the protein.
  • the components exemplified as additives for oral preparations can also be added.
  • the dosage or frequency of administration varies depending on the type of active ingredient used, the intended therapeutic effect, administration method, duration of treatment, age, body weight, etc., but is usually 0.01 ⁇ g per day per adult per day. Fill with 0 mgkg. ⁇
  • the DNA or RNA may be used alone or in a retrovirus vector, an adenovirus vector, or an adeno-associated virus vector.
  • an appropriate vector such as, for example, the method of formulation, treatment and administration according to the above-described conventional methods, or the method of administration by non-viral gene transfer method can be used.
  • the recombinant virus vector can be prepared according to the method described below. Prepare a fragment of DNA (hereinafter also referred to as target DNA) to be used as an active ingredient. A recombinant virus vector is constructed by inserting the DNA fragment downstream of the promoter in the virus vector.
  • RNA virus vector a recombinant virus is constructed by preparing RNA fragments homologous to the target DNA and inserting them downstream of a promoter in the virus vector.
  • RNA fragment in addition to the double strand, either the sense strand or the antisense strand is selected depending on the type of the viral vector.
  • a retrovirus vector an RNA homologous to the sense strand is selected, and in the case of a sense virus vector, an RNA homologous to the antisense strand is selected.
  • the recombinant viral vector is introduced into a packaging cell adapted to the vector.
  • the packaging cell may be any cell capable of supplying the protein deficient in a recombinant virus vector deficient in at least one gene encoding a protein required for virus packaging.
  • human kidney-derived HEK293 cells, mouse fibroblasts NI H3T3, and the like can be used.
  • Proteins supplied by the packaging cells include gag, pol, and env derived from mouse retroviruses for retrovirus vectors, and gag, pol, env, vpr, vpu, and vif derived from HIV viruses for lentivirus vectors. , Tat, rev, nef, etc.
  • E1A and E1B derived from adenovirus, for adeno-associated virus Rep (p5, 19, p40), Vp And proteins such as (C a).
  • virus vector those containing a promoter at a position where a recombinant virus can be produced in the above-mentioned packaging cell and the target DNA can be transcribed in the target cell are used.
  • MFG Proc. Natl. Acad.
  • Any promoter can be used as long as it functions in human tissues.
  • the promoter of the IE (immediate early) gene of cytomegalovirus (human CMV) the early promoter of SV40
  • examples of such promoters include retroviral promoters, metamouth thionine promoters, heat shock protein promoters, and SRa promoters.
  • the enhancer of the IE gene of human CMV may be used together with the promoter.
  • Examples of a method for introducing a recombinant virus vector into packaging cells include the calcium phosphate method (Japanese Patent Laid-Open No. 2-227075) and the ribofection method (Proc. Natl.
  • the above-mentioned fibrous recombinant virus vector may be administered in combination with direct in vivo gene transfer using liposome delivery to direct the viral vector to a knee lesion. You can also do so. That is, a target DNA of an appropriate size is combined with a polylysine-conjugate antibody specific for adenovirus / hexon protein to form a complex, and the obtained complex is ligated to an adenovirus vector, whereby a virus vector is obtained. Can be prepared. The virus vector reaches the target cell stably, is taken up by the endosome into the cell, is degraded in the cell, and can efficiently express the gene.
  • a vector expressing a target DNA or siRNA or an antisense polynucleotide can be delivered to a lesion also by a non-viral gene transfer method.
  • Non-viral gene transfer methods known in the art include calcium phosphate co-precipitation [Virology, 52, 456-467 (1973); Science, 209, 1414-1422 (1980)], microinjection [Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77, 5399-5403 (1980); Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77, 7380-7384 (1980); Cell, 27, 223-231 (1981); Nature, 294, 92-. 94 (1981)], ribosome-mediated membrane fusion-mediated transfer method [Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 84, 7413-7417 (1987); Biochemistry, 28, 9508-9514 (1989); J. Biol.
  • ribosome-mediated membrane fusion-mediated transfer allows for local uptake and expression of genes in the target tissue by direct administration of the ribosome preparation to the targeted tissue. [Hum. Gene Ther. 3, 399-410 (1992)]. Therefore, a similar effect can be expected in the spleen lesion.
  • the direct DNA uptake technique is preferred.
  • Receptor-mediated DNA transfer is accomplished, for example, by conjugating the DNA ligand (usually in the form of a covalently closed supercoiled brassmid) to the protein ligand via polylysine. Ligands are selected based on the presence of the corresponding ligand receptor on the cell surface of the target cell or tissue.
  • the ligand-DNA conjugate can, if desired, be injected directly into a blood vessel and directed to a target tissue where receptor binding and internalization of the DNA-protein complex occur.
  • Adenovirus can be co-infected to disrupt endosomal function to prevent intracellular destruction of DNA.
  • Example 1 Sensitivity test for anticancer drug consisting of a panel of 45 human cancer cell lines The following 45 cell lines were used. Those without individual citations are described below (Yamori, T., et. Al., Cancer Res, 59: 4042-4049, 1999.).
  • Hepatoma 12 cell line HepG2 (Schwartz, AL, et. Al., J Biol Chem, 256: 8878-8881, 1981 .; ATCC No. HB-8065), Hep3B (Liu, P., et. Al., Int J Oncol, 16: 599-610, 2000 .; Medical Cell Resource Center, Tohoku University Institute for Aging Medicine TKG 0291), Li-7 (Tohoku University Institute for Aging Medicine, Medical Cell Resource Center TKG 0368), PLC / PRF / 5 (MacNab, GM, et.
  • RIKEN BioResource Center RC B1367 RBE (Fukutomi, M., et. Al., Cell Biochem Funct, 19: 65-68, 2001 .; RIKEN Paioli Source Center RCB1292), SSP-25 (Fukutomi, M., et. Al. , Cell Biochem Funct, 19: 65-68, 2001 .; RIKEN BioResource Center RCB1293), HuL-1 (Sorimachi, K., et. Al., Cell Struct Funct, 13: 11, 1988.) , JHH-1 (Fujise, K., et. Al., Hepatogastroenterology, 37: 457-460, 1990.);
  • Gastric cancer 21 cell line St-4, MKN1, MKN7, picture 28, picture 45, MKN74, GCIY (Nozue, M., et. Al., Hum Cell, 71-75, 1991), GT3TKB (Taraura, G. , Et. Al., Jpn J Cancer Res, 87: 1153-1159, 1996), HGC27 (Hassan, S., et. Al., Dig Dis Sci, 43: 8-14, 1998), AZ521 (Imanishi, K) , Et. Al., Br J Cancer, 59: 761-765, 1989.), 4-1st (Morisada, S., et.
  • the evaluation of the sensitivity to the anticancer drug was performed by inhibiting growth.
  • the growth inhibition was measured by measuring the change in the total amount of intracellular protein after drug contact for 48 hours by the sulforhodamine B assay method.
  • GI 5 The calculation of the value (concentration of anticancer drug showing 50% growth inhibition, unit mol / L) was performed according to the following literature (Yamori, T., et. Al., Cancer Res, 59: 4042-4049, 1999. Monks, A., et. Al., J Natl Cancer Inst, 83: 757-766, 1991.).
  • the median value of triplicate experiments was defined as the GI 50 value.
  • NK109 5.49 6.31 5.56 6.30 5.57 Mitomycin C DNA alkylator-5.46 6.40 5.50 5.42 5.49 Methotrexate DHFR 4.00 7.53 5.25 4.00 4.00 Laissir rales HSP90 / Tyr quinase '5.19 6.13 5.28 7.43 5.39 Vinplastin 9.17 9.77 9.13 9.15 6.00 Vincristine 9.12 9.57 9.31 9.22 6.00 Vinolenolevin 8.33 9.35 8.93 8.41 6.00 Paclitaxel 7.38 8.20 7.53 7.90 6.00 Docetaxenolen 8.18 8.82 8.19 8.56 6.00 Dolastatin 10 10.02 10.74 9.44 9.95 8.00 Konorechtin Tuublin 7.58 8.48 7.89 6.64 5.00
  • FIG. 1 shows the results of hierarchical clustering of 51 anticancer drugs based on the sensitivity of 45 human cancer cell lines. Hierarchical clustering was performed by Gene Spring software (Silicon Genetics) using the average linkage method. As the distance between the data, lo gl of each cell between the two anticancer drugs. GI 5 . We used Pearson's correlation coefficient obtained from the distribution of the absolute values of.
  • Two anticancer agents lo gl . GI 5 Two anticancer agents lo gl . GI 5 .
  • 51 drugs there was possible to divide 51 drugs into several clusters, each of which contained multiple drugs with similar mechanisms of action.
  • one cluster contains inhibitors of topoisomerase I, such as camptothecin and topotecan
  • the second cluster contains microtubules such as taxane-based anticancer drugs (paclitaxel and docetaxel) and bincer alkaloid-based anticancer drugs (vinblastine, vincristine, vinorelbine)
  • the drug (tubulin binder) gathered, and 5-fluorouracil and its derivatives also gathered in one cluster.
  • Example 2 Clustering of 42 human cancer cells by gene expression profile Of the human cancer cell panel composed of 45 cells, 42 cell lines excluding 3 cells of HBC-9, HBC-8 and GMK-3 were used. Expression of 3537 genes was measured by cDM array. Measuring gene expression using cDNA arrays>
  • the cDNA array was repeated twice using an Atlas TM human 3.6 array (BD Biosciences Clontech). The experiments were performed according to the Clontech product description, which is briefly described below.
  • the cell lines were treated during the logarithmic growth phase, and total RA (Total RA) was extracted using Trizol reagent (Invitrogen) and purified using the RNeasy Kit (Qiagen). It was converted Purified Total RNA Atlas TM Pure Total RNA Labeling System (BD Biosciences Clontech Co.) labeled cDNA probe by reverse transcription by 32 P using. This cDNA probe is hybridized to the Atlas Array at 68 ° C, and then washed. did.
  • the hybridized array was scanned by Phosphorlmager (Molecular Dynamics) to detect the signal.
  • Detected data was quantified by Atlas TM Image 2.0 software (BD Biosciences Clontech) and normalized by dividing by the 90th percentile of all genes. Genes that showed more than 2-fold different values in two replicate experiments were excluded from the analysis.
  • the threshold value was set at 30% of the 90th percentile value, and the threshold value was given for values lower than the threshold value. After processing this data, it was converted to a logarithmic value with 2 as the base.
  • Hierarchical clustering was performed using the group average method with Gene Spring software (Silicon Genetics). The distance between data is lo gl of each anticancer drug between two cells. GI 5 . The Pearson's correlation coefficient obtained from the distribution of the absolute value of was used.
  • Figure 2 shows the results of clustering.
  • Cell lines derived from the same tissue tended to form clusters. That is, breast cancer cell lines except for KPL-4 were grouped into one cluster.
  • Hepatic cancer cell lines were united except for HLE, although several gastric cancer cell lines were inserted between them. For gastric cancer cell lines, they were roughly grouped into two groups. The above results show that the established cell lines maintain the properties of the tissue from which they were derived, as seen from the results of the gene expression profiles.
  • Example 3 Correlation analysis between gene expression profile and sensitivity to anticancer drugs
  • da is the absolute value of the logarithm of the sensitivity to anticancer drugs da cell I.. Shows the (
  • x m represents the mean of the expression of the gene; r, the mean of the logarithmic expression (mean), and y represents the mean of the absolute value of the sensitivity to the anticancer agent da, expressed in logarithm (
  • Tables 6 to 11 show a set of genes related to susceptibility to MMC, vinorelbine, and paclitaxel when a total of 42 cells were used. That is, Tables 6 to 11 show a list of genes significantly correlated with the susceptibility to the anticancer agent.
  • the results of correlation analysis of MMC (Tables 6 and 7), vinorelbine (Tables 8 and 9) and paclitaxel (Tables 10 and 11) in 42 cell lines are shown.
  • the “gene” column shows the gene name in the HUGO database. "Correlation coefficient” indicates the value of Pearson's correlation coefficient between sensitivity to an anticancer drug and expression of the gene.
  • Tables 6, 8, and 10 (marked as “sensitive") indicate genes that are sensitive to high expression, and Tables 7, 9, and 11 (marked as “resistant”) indicate genes that are resistant to strong expression. Indicates a gene.
  • genes were selected as susceptible genes (highly expressed in susceptible strains) and 10 genes were selected as resistant genes (highly expressed in resistant strains).
  • JUN, EMS1, and NMBR are genes related to cell proliferation.
  • Other genes included S0D1, PELP1, and SFRS9.
  • VIL2 for paclitaxel, which is a microtubule acting drug, the VIL2 gene encoding ezrin associated with the cytoskeletal system was selected.
  • many genes were selected as susceptibility or resistance genes for each anticancer drug.
  • genes selected as genes correlated with sensitivity to anticancer drugs in 10 types of breast cancer cell lines, 12 types of liver cancer cell lines, and 20 types of gastric cancer cell lines are shown in Tables 12 to 12. See 14 That is, Table 12 shows a list of genes associated with sensitivity and expression to mitomycin C in breast cancer, Table 13 shows liver cancer, Tables 14-11 and 2 show gastric cancer, respectively. Column descriptions are the same as in Tables 6 to 11. These genes include those that can be used as markers for predicting susceptibility to anticancer drugs, and that some actually define susceptibility to anticancer drugs.
  • Tables 15 to 18 show a group of genes selected as genes having a correlation with susceptibility to various anticancer agents other than mitomycin C in 12 types of liver cancer cell lines. That is, in liver cancer, Table 15 shows a list of paclitaxel, Table 16 shows 5-fluorouracil, Table 17 shows doxorubicin, and Table 18 shows a list of genes whose sensitivity and expression are correlated with each other. Column descriptions are the same as Tables 6-11. These genes include those that can be used as markers for predicting susceptibility to anticancer drugs, and some are considered to actually define susceptibility to anticancer drugs.
  • PCR primers were prepared for 6 types of susceptibility genes and 7 types of resistance genes shown in Table 19, and the expression levels of each gene in each gastric cancer cell line were measured by RT-PCR. The correlation with the sensitivity to MMC obtained in 1 was examined.
  • RT-PCR the reaction mixture containing 2 g of total RNA prepared in Example 2, RNase inhibitor, oligo d (T) 16, and MuLV reverse transcriptase was incubated at 42 ° C for 60 minutes to synthesize cDNA. PCR was performed using each gene-specific PCR primer with 1/10 amount of this reaction solution as type III.
  • PCR is performed by heating at 95 ° C for 5 minutes, followed by a reaction cycle of 95 ° C for 1 minute (denaturation), 55-60 ° C for 1 minute (annealing), and 72 ° C for 1-2 minutes (extension). was repeated for 25 to 30 cycles, and heating was performed at 72 ° C for 5 minutes (annealing temperature, elongation time, and the number of cycles / number depended on the gene).
  • paclitaxel susceptibility gene candidates were also verified by RT-PCR in liver cancer, and acetylCoA-acetyltransf erase (ACATl, GenBank registered as a susceptibility gene) No .: D90228, rank 10 in Table 15), expression level and paclitaxel measured by RT-PCR for bcl-XL (BCL2L1, GenBank accession number: Z23115, rank 9 in Table 15) as a resistance gene Correlation with the sensitivity to DNA was confirmed, confirming the correlation found by the cDNA array.
  • Example 5 Verification of selected gene expression by Western blot
  • the membrane to which the protein was transferred was reacted with a CTSD-specific mouse monoclonal antibody Ab-1 (Oncogene Research Products) diluted 1: 250.
  • the membrane was washed and reacted with a horseradish-conjugated anti-mouse IgG antibody (Amersham Bioscience) diluted 1: 1000.
  • CTSD protein was detected using an ECL (Enhanced Chemiluminescence) detection system (Amersham Biosciences), and the signal intensity was measured.
  • Example 6 Identification of a gene that alters the sensitivity of an anticancer drug to an anticancer drug (1)
  • a gene screening system that can detect a change in sensitivity to an anticancer drug due to inhibition of cell growth is established. did. This system detects changes in sensitivity to anticancer drugs by introducing genes into cells. [3 ⁇ 4] -thymidine incorporation was used as an indicator of cell proliferation. High transfection efficiency is required to detect small changes in sensitivity. Therefore, we used HT1080, a human fibroblast sarcoma cell line that can transfer genes with an efficiency of 90% or more.
  • This system is used to screen for genes that determine the sensitivity of MMC to anticancer drugs.
  • the entire translation region of the cDNA of the candidate gene was cloned and cloned into pcDNA3.1 / myc-HisA (Invitrogen), an animal cell expression vector.
  • These expression plasmids were introduced into HT1080 cells using Lipofectamine Plus reagent (Invitrogen). Twenty-four hours after transfection, an appropriate concentration of C was added, and the cells were cultured for another 24 hours.
  • DT-diaphorase (Gustafson, DL, & Pritsos, CA, Cancer Res., 52, 6936-6939, 1992.), which is known to define susceptibility to MMC.
  • the coding gene NQ01 was examined.
  • HT1080 cells transfected with NQ01 had increased sensitivity to MMC (Fig. 4C). That is, this system is considered to be an effective system for detecting changes in sensitivity to anticancer drugs.
  • HSPA1A gene (GenBank accession number: M11717) encoding the HSP70-1 protein significantly increased susceptibility to marauding C (FIG. 4C). HSPA1A expression is significantly correlated with sensitivity to hiring C in breast cancer ( Figure 4A, Table 12) and liver cancer (Table 13), but not significantly in gastric cancer (Table 14). ).
  • JUN gene (GenBank accession number: J04111), which showed a correlation between expression and susceptibility to MMC in analysis of all cell lines (Fig. 4 Rose ( Figure 4D).
  • Example 7 Identification of a gene that alters the sensitivity of an anticancer drug to an anticancer drug (2) To search for a gene that determines sensitivity to an anticancer drug, establish a screening system to detect changes in sensitivity to an anticancer drug when gene expression is suppressed did. The following is an example of confirming that the CTSD gene, which showed a correlation between gene expression and MMC susceptibility in liver cancer, is a susceptibility determining gene.
  • CTSD-specific siRs (CTSD # 271, CTSD # 387 and CTSD # 400) for suppressing the expression of the CTSD gene were prepared as follows. Oligonucleotides consisting of each of the sequences of SEQ ID NOs: 1 to 6 (composite products of Dharmacon Research Inc.) were dissolved in buffers supplied by Dharmacon Research, respectively. And 2, 3 and 4, 5 and 6 were mixed. After incubating at 60 ° C.
  • CTSD # 271 sense strand ′: SEQ ID NO: 1, antisense strand: SEQ ID NO: 2)
  • CTSD # 387 Sense strand: SEQ ID NO: 3, antisense strand: SEQ ID NO: 4
  • CTSD # 400 sense strand: SEQ ID NO: 5, antisense strand: SEQ ID NO: 6) was generated.
  • IX annealing buffer (30 mmol / L HEPES-KOH (pH 7.9), 100 mmol / L potassium acetate, 2 t / L magnesium acetate].
  • the liver cancer cell line SSP-25 is suspended in Dulbecco's modified single-grain medium (DMEM) containing 5% serum and 2.5 x 10 5 cells are dispensed on a 6-well plate. did. Sixteen hours later, the above siRNAs (CTSD # 271, CTSD # 387 and CTSD # 400) were finally transfected into cells at a concentration of 100 nmol / L per well using Rifofetathamine 2000 (Invitrogen). did.
  • DMEM Dulbecco's modified single-grain medium
  • CTSD # 271, CTSD # 387, and CTSD # 400 were hardly detected in the cells transfected with each, and the expression of CTSD gene was detected by siRNA. It was confirmed that the situation was suppressed.
  • CTSD-specific siRACTSD # 400 was transfected into the liver cancer cell line SSP-25.
  • Cells were harvested from the transflector Ekushi Yon after 48 hours, 96 ⁇ El plate 1 X 10 dispensed by four Z Weru minute, RPMI containing 5% FBS, 100 units / mL penicillin and 100 mg / mL streptomycin The cells were cultured in 1640 medium (100; zL).
  • the inhibition of cell proliferation was measured by the sulforhodamine B assay method, and the sensitivity to the anticancer drug was evaluated.
  • the present invention it is possible to select genes that predict the susceptibility to anticancer agents in tumor cells and cancer cell lines extracted from cancer patients, and use those genes. This makes it possible to determine the sensitivity of the cancer patient to the anticancer drug. In addition, it is possible to enhance the sensitivity to anticancer drugs by using those genes or by controlling the expression of those genes.

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Abstract

　本発明によれば、乳癌細胞株、肝癌細胞株、及び胃癌細胞株から選択される癌細胞株の全てあるいは一部を利用し、該細胞株における少なくとも１以上の遺伝子の発現レベルと抗癌剤に対する感受性の強さとを測定し、それらの相関の有無を統計的に検定することによって、腫瘍細胞の用いた抗癌剤に対する感受性に関わる遺伝子群を同定する方法が提供される。　本発明により、癌患者より取り出された腫瘍細胞及び癌細胞株における、抗癌剤に対する感受性を予測する遺伝子を選抜することができ、それらの遺伝子を用いた癌患者の抗癌剤に対する感受性の判定が可能となる。

Description

明細書
腫瘍細胞の抗癌剤に対する感受性を判定する方法 技術分野
本発明は、腫瘍細胞の抗癌剤に対する感受性に関わる遺伝子群を同定する方法、 癌患者の抗癌剤に対する感受性を判定する方法、 及ぴ腫瘍細胞の抗癌剤に対する 感受性を増強させる物質をスクリーニングする方法などに関する。 背景技術
種々の抗癌剤による癌化学療法は、 癌の治療において最も重要な方法の一つで ある。 抗癌剤によって有効な治療を行うためには、 患者における抗癌剤に対する 感受性を予測し、 適切な薬剤を選抜することが重要である。 抗癌剤に対する感受 性を決定している遺伝子を見出すことは、感受性予測のための一つの方法である。 今までに多くの遺伝子が複数の抗癌剤に対する感受性の決定因子として報告され てきた。 例えば、 薬剤トランスポーターである MDR1 (Chen, C. J.， et. al. , J. Biol. Chem. , 265, 506—514, 1990)、 MRP2 (Kool, M， et. al. , Cancer Res. , 57, 3537-3547, 1997；及ぴ Taniguchi, K.， Cancer Res.， 56, 4124-4129, 1996)、 薬物代謝酵素であるチトクローム（cytochrome) P450 (CYP)フアミリー（Patterson: L. H. and Murray, G. I.， Curr. Pharm. Des. , 8, 1335 - 1347， 2002)、 glutathione- S - transferase (GST) (Batist, G. , et. al. , J. Biol. Chem. , 2bl, 15544 - 15549， 1986) , N-acetyltransf erase (Meisel, P.， Pharmacogenomics, 3, 349-366, 2002)などである。 さらに、 各々の抗癌剤に対する感受性を規定してい る遺伝子として例えば以下のものが報告されている。 γ - glutamyl
hydrolase (Nair, M, G. , et. al. , Biochemistry, 12, 3923—3927， 1973)及ぴ dihydrofolate ruductase (Schimke, R. Τ·， Cancer, 57, 1912 - 1917， 1986)は methotrexate (MTX)に対する耐性因子である。 また、 thymidylate synthase ( Pinedo, H. M. and Peters, G. F. , J. Clin. Oncol., 6, 1653-1664, 1988) 、 metallothionein (Eastman, A. , Cancer, Treat Res.， 57， 233-249, 1991)、 cytidine deaminase (Cohen, S. S.， Cancer, 40, 509 - 518, 1977) の活性増強は、 それぞれ 5- fuluorouracile (5-FU)、 cisplatin (CDDP)、 ara-Cに対する抵抗性因子 である。 DT- diaphoraseの活性増強は、 マイトマイシン C (Mitomycin C 、 以下、 MMCとも略す）に対する感受性因子である（Gustafson, D. L. and Pritsos, C. A. , Cancer Res. , 52, 6936 - 6939, 1992)。 このように、 多くの遺伝子が抗癌剤に対す る感受性を決定する遺伝子として知られている。 しかし、 これらの既知の遺伝子 だけでは抗癌剤に対する感受性を説明するには不十分であり、 さらなる研究が求 められている。
一方で、 抗癌剤に対する感受性の予測あるいは抗癌剤に対する感受性に関与す る遺伝子の予測を、 cDNAマイクロアレイや SNPsなどのゲノムワイドな解析を用 いて行う試みも進んでいる。 ヒト癌細胞株パネルゃヒト癌のゼノグラフトでの遺 伝子発現と抗癌剤に対する感受性との相関の解析も発明者らの報告も含め、 報告 されてレヽる（Scherf, U. , et. al. , Nat. Genet, 24, 236-244, 2000； Zembutsu, H. , et. al. , Cancer Res. , 62, 518-527, 2002； Dan, S. , et. al. , Cancer Res. , 62, 1139-1147, 2002； Stauton, J. E. et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 98, 10787 - 10792, 2001；及ぴ特開 2003 - 61678号公報） 。 これらの研究で見出され た遺伝子は、抗癌剤に対する感受性予測のマーカーとして使用することができる。 さらに、 これらの遺伝子のうちの一部は、 実際に抗癌剤に対する感受性を決定し ている可能性がある。 発明の開示
本発明は上記した従来技^ fの問題点を解消することを解決すべき課題とした。 すなわち、 本発明の課題は、 抗癌剤に対する感受性規定遺伝子の選抜に適切な細 胞株のセットを与え、 臓器別の解析を行うことで、 より精度高く抗癌剤に対する 感受性に相関する遺伝子を選抜すること、 及ぴその中から実際に抗癌剤に対する 感受性の決定に関与している遺伝子を選抜することである。 本発明のさらに別の 課題は、 上記方法で選抜された抗癌剤に対する感受性の決定に関与している遺伝 子を利用して、 癌患者の抗癌剤に対する感受性を判定する方法を提供することで ある。 本発明のさらに別の課題は、 上記方法で選抜された遺伝子の中から癌細胞 に強制発現又は発現抑制することによって抗癌剤に対する感受性を増強させる活 性を示す遺伝子を利用した抗癌剤に対する感受性増強薬を提供することである。 本発明のさらに別の課題は、 上記方法で選抜された遺伝子を利用して腫瘍細胞の 抗癌剤に対する感受性を増強させる物質をスクリーニングする方法を提供するこ とである。
本発明者らは、 上記課題を解決するために鋭意検討し、 先ず、 3種の組織 （す なわち乳房、肝臓及び胃） に由来する 45細胞株よりなる、新たなヒト癌細胞パネ ルを構築した （表 1〜5 )。 さらに、 これら 45細胞からなる癌細胞パネルにおい て、 抗癌剤に対する感受性と遺伝子の発現プロファイルを取得して評価し、 発現 が抗癌剤に対する感受性と相関のある遺伝子を選抜した（表 6〜表 1 1 )。また、 これらの遺伝子の中から、 細胞レベルにおいて抗癌剤に対する感受性を変化させ る遺伝子をスクリーニングした。 その結果、 本発明者らは、 抗癌剤に対する感受 性を予測するマーカーとなりうる遺伝子を同定することに成功した。 また、 それ ら遺伝子の発現を調べることで、 癌患者の抗癌剤に対する感受性を判定する方法 を提供することが可能になった。 さらに、 それらの遺伝子の発現を増加あるいは 減少させることで、 抗癌剤に対する感受性を増強させる方法、 並びにそれらの抗 癌剤に対する感受性を増強させる物質をスクリ一ユングする方法を提供すること が可能になつた。 本発明はこれらの知見に基づいて完成したものである。
即ち、 本発明は、 以下の （1 ) から （6 4 ) に関する。
( 1 ) 乳癌 12細胞株 (HBC - 4， BSY-1, HBC - 5, MCF - 7, MM- MB - 231, KPL-3C, KPL-4, KPL-1, T-47D, HBC-9, ZR - 75- 1, HBC - 8) 、 肝癌 12細胞株 （HepG2, Hep3B, Li - 7， PLC/PRF/5, HuH7, HLE, HLF, HuH6, RBE, SSP- 25， HuL-l， JHH-1) 、 及び胃癌 21 細胞株 （St-4, 画 1, MKN7, 画 28, 画 45， MKN74, GCIY, GT3TKB, HGC27, AZ521, 4 - 1st, NUGC-3, NUGC-3/5FU, HSC-42, AGS, KWS-l, TGS-11, GMK-2 (別名 0KIBA)， 1st - 1, GMK-3, GMK- 5(別名 A0T0)) から選択される癌細胞株の全てあるいは一部 を利用し、 該細胞株における少なくとも 1以上の遺伝子の発現レベルと抗癌剤に 対する感受性の強さとを測定し、 それらの相関の有無を統計的に検定することに よって、 腫瘍細胞の用いた抗癌剤に対する感受性に関わる遺伝子群を同定する方 法。
(2) 胃癌 21細胞株 （St- 4,画 1， MKN7, MKN28, MKN45, MKN74, GCIY, GT3TKB, HGC27, AZ521, 4 - 1st, NUGC-3, NUGC-3/5FU, HSC-42, AGS, KWS - 1, TGS-ll, GMK - 2( 別名 0KIBA), 1st - 1, GMK-3, GMK-5 (別名 A0T0) ) から選択される癌細胞株の全て あるいは一部を利用して、 胃癌細胞の用いた抗癌剤に対する感受性に関わる遺伝 子群を同定する、 （1) 記載の方法。
(3) 乳癌 12細胞株（HBC- 4, BSY-1, HBC- 5, MCF-7, MDA-MB- 231， KPL-3C, KPL-4, KPL-1, T-47D, HBC-9, ZR - 75-1, HBC - 8) から選択される癌細胞株の全てあるいは 一部を利用して、 乳癌細胞の用いた抗癌剤に対する感受性に関わる遺伝子群を同 定する、 （1) 記載の方法。
( 4 ) 肝癌 12細胞株 （HepG2， Hep3B, Li - 7, PLC/PRF/5, HuH7, HLE, HLF, HuH6, RBE, SSP-25, HuL-1, JHH-1) から選択される癌細胞株の全てあるいは一部を利用 して、 肝癌細胞の用いた抗癌剤に対する感受性に関わる遺伝子群を同定する、 （ 1) 記載の方法。
(5) 癌患者の抗癌剤に対する感受性を判定する方法において、
(1) 上記 （1) から （4) の何れかに記載の方法により同定された遺伝子群か ら、 1以上の遺伝子を選択し、 選択された遺伝子の各々について、 その発現量に 対応した点数を決定する工程、 -
( 2 ) 被験患者について該遺伝子の発現量を測定する工程、
(3) (2) で測定した発現量に基づき （1) で得た点数を割り当てる工程、
(4) 選択された全遺伝子について割り当てられた点数を合計して合計値を求め る工程、 及ぴ
(5) 予め決定した閾値と該合計値を比較する工程、 を含む上記方法。
( 6 ) 癌患者のマイトマイシン Cに対する感受性を判定する方法において、 癌 患者より取り出された腫瘍細胞における、 SF1 (D26121) 、 CBR3 (AB004854) 、 EMS1
(M98343) 、 JUN (J04111) 、 SFRS9 (U30825) 、 NMBR (M73482) 、 RBMX (Z23064) 、 SODl (M13267)、 NOLI (X55504)、 PELPl (U88153)、 ARHA (L25080)、 RS (D32050)、 NMEl (X17620) 、 HNRPA2B1 (M29065)、 ME2 (L16785)、 VATl (U18009) 、 SERPINBIO (U35459) 、 KIAA0436 (AB007896) 、 DRPLA (D31840) 、 MC3R (L06155) 、 SPTBN1 (M96803)、 PET112L (AF026851)、 CAPN1 (X04366)、 MEL (X56741)、 PACE (XI 7094)、 DVL2 (AF006012) 、 L0C54543 (AJ011007) 、 PAPOLA (X76770) 、 RPLP2 (M17887) 、 及ぴ ARF4L (L38490) からなる群から選択される 1個または複数の遺伝子 （括弧 内は GenBank登録番号を示す） の発現量を測定し、 （5 ) に記載の方法を用いて マイトマイシン Cに対する感受性を判定する方法。
( 7 ) 癌患者のビノレルビンに対する感受性を判定する方法において、 癌患者 より取り出された腫瘍細胞における、 ARHA(L25080)、NME2 (L16785)、VIL2 (X51521)、 YWHAQ (X56468)、 HK1 (M75126)、 SATB1 (M97287)、 CAMLG (U18242)、 CARS (L06845)、 CCNBl (M25753) 、 U2AF1 (M96982) 、 PTMA (M26708) 、 MLCISA (M31211) 、 NMEl
(X17620)、 SARS (X91257)、 CDC20 (U05340)、 PPP4C (X70218)、 TNFAIP3 (M59465)、 EEFID (Z21507) 、 PFKP (D25328) 、 ENTPD2 (U91510) 、 CCL5 (M21121) 、 ACATl
(D90228)、 IQGAP1 (L33075)、 PAX5 (M96944)、 NRGN (Y09689)、 K— ALPHA-1 (K00558)、 NDUFB7 (M33374)、H0XB1 (X16666)、F10 (K03194)、GPX2 (X53463) .NR1I2 (AF061056)、 A XA4 (M19383)、 PDLIMl (U90878)、 LIPC (X07228)、 SERPINF2 (D00174)、 HSD17B1
(M36263)、 MAN2B1 (U60266)、 LSS (D63807)、 PIK3CG (X83368)、 DBN1 (U00802)、 NDUFA4 (U94586) 、 BDH (M93107) 、 BCL2L1 (Z23115) 、 EEF1B2 (X60656) 、 F2
(V00595)、 RARA (X06614)、 ITGB4 (X53587)、 IMPA1 (X66922)、 PACE (X17094)、 AGA (M64073) 、 MVD (U49260) 、 EHHADH (L07077) 、 TFPI2 (D29992) 、 MARCKS
(M68956) 、 FGB (J00129) 、 及ぴ GPD1 (L34041) からなる群から選択される 1 個または複数の遺伝子 （括弧内は GenBank登録番号を示す） の発現量を測定し、 ( 5 ) に記載の方法を用いてピノレルビンに対する感受性を判定する方法。
( 8 ) 癌患者のパクリタキセルに対する感受性を判定する方法において、 癌患 者より取り出された腫瘍細胞における、 ADH6 (M68895) 、 RAB28 (X94703) 、 U2AF1
(M96982)、 GPC1 (X54232)、 HK1 (M75126)、 CARS (L06845)、 TNFAIP3 (M59465)、 K-ALPHA-1 (K00558) 、 PFKP (D25328) 、 GDI2 (D13988) 、 VIL2 (X51521) 、 RUNX2
(AF001450)、 NME2 (L16785)、 CDC20 (U05340)、 GNAI2 (X04828)、 ARHA (L25080)、 CNR2 (X74328) 、 PPP2R2B (M64930) 、 SLC6A8 (L31409) 、 DDX9 (L13848) 、 ACATl
(D90228)、 PI3 (Z18538)、 NAP1L1 (M86667)、 H0XB1 (X16666) 、 PACE (X17094)、 MAN2B1 (U60266) 、 GPX2 (X53463) 、 DBNl (U00802) 、 ANXA4 (M19383) 、 SERPINF2
(D00174) 、 AGA (M64073) 、 BCL2L1 (Z23115) 、 LIPC (X07228) 、 BDH (M93107) 、 LSS (D63807) 、 PDLIM1 (U90878) 、 ZNF161 (D28118) 、 UBE2E1 (X92963) 、 TLE1
(M99435) 、 RA (X06614) 、 PTPR (L18983) 、 APOE (M12529) 、 F10 (K03194) 、 NR1I2 (AF061056) 、 UBE2L3 (X92962) 、 及び FGB (J00129) からなる群から選択 される 1個または複数の遺伝子 （括弧内は GenBank登録番号を示す） の発現量を 測定し、 （5 ) に記載の方法を用いてパクリタキセルに対する感受性を判定する 方法。
( 9 ) 癌患者の 5 -フルォロゥラシルに対する感受性を判定する方法において、 癌患者より取り出された腫瘍細胞における、 SRPK1 (U09564) 、 0AZ1 (D78361) 、 RPL34 (L38941) 、 A腿 (X06820) 、 RPS17 (M13932) 、 RPL28 (U14969) 、 TRIPll
(L40380)、 ZNF75 (S67970)、 RPL37 (D23661)、 PLOD (M98252)、 CD81 (M33680)、 HNRPC (M16342) 、 AP2S1 (M97074) 、 GAPD (X01677) 、 PAFAH1B3 (D63391) 、 GBEl
(L07956)、 DEK (X64229)、 PEA15 (X86809) PSMD7 (D50063)及ぴ UBE2E1 (X92963) からなる群から選択される 1個または複数の遺伝子 （括弧内は GenBank登録番号 を示す） の発現量を測定し、 （5 ) に記載の方法を用いて 5-フルォロウラシルに 対する感受性を判定する方法。
( 1 0 ) 癌患者のドキソルビシンに対する感受性を判定する方法において、 癌 患者より取り出された腫瘍細胞における、 RPS7 (M77233)、 RPL23 (X52839)、 CALT (X72946)、 EEF1D (Z21507)、 RPS15A (X84407)、 ADCY1 (L05500)、 HNRPU (X65488)、 C0X5A (M22760) 、 U2AF1 (M96982) 及ぴ RPYR1 (U35232) からなる群から選択さ れる 1個または複数の遺伝子 （括弧内は GenBank登録番号を示す） の発現量を測 定し、 （5) に記載の方法を用いてドキソルビシンに対する感受性を判定する方 法。
(1 1) 癌患者のシスブラチンに対する感受性を判定する方法において、 癌患 者より取り出された腫瘍細胞における、 CALT (X72946) 、 Z F165 (X84801) 、 GPC1
(X54232) 、 TUBA1 (K00558) 、 GCP2 (X78686) 、 C0X5A (M22760) 、 GLA (X00351) 及ぴ GNS (X06956) からなる群から選択される 1個または複数の遺伝子 （括弧内 は GenBank登録番号を示す） の発現量を測定し、 （5) に記載の方法を用いてシ スプラチンに対する感受性を判定する方法。
(12) 患者が乳癌患者である （5) から （1 1) の何れかに記載の感受性を 判定する方法。
(13) 患者が胃癌患者である （5) 力 ら （1 1) の何れかに記載の感受性を 判定する方法。
(14) 患者が肝臓癌患者である （5) から （1 1) の何れかに記載の感受性 を判定する方法。
(15) 乳癌患者のマイトマイシン Cに対する感受性を判定する方法において、 乳癌患者より取り出された腫瘍細胞における、 INHBB (M31682) 、 NK4 (M59807) 、 HSPAIA (M11717) 、 L0C54557 (AF075050) 、 CD47 (Y00815) 、 RPN2 (Y00282) 、 ATP50 (X83218)、 CAST (D50827)、 HPCA (D16593)、 ZNF9 (M28372)、 A2LP (U70671)、 IL18 (D49950) 及び NRGN (Y09689) からなる群から選択される 1個または複数の 遺伝子 （括弧内は GenBank登録番号を示す） の発現量を測定し、 （5) に記載の 方法を用いてマイトマイシン Cに対する感受性を判定する方法。
(16) 肝癌患者のマイトマイシン Cに対する感受性を判定する方法において、 肝癌患者より取り出された腫瘍細胞における、 EB1 (U24166) 、 JUN (J04111) 、 EIF3S8 (U46025) 、 CCL5 (M21121) 、 PHB (S85655) 、 HSPAIA (M11717) 、 SPPl (X13694) 、 RAB7 (X93499) 、 CTSD (Ml 1233) 、 ACTN1 (X15804) 、 RXRB (M84820) 、 PSME2 (D45248) 、 HLA-C (Ml 1886) 、 RPL19 (X63527) 、 MAPK6 (X80692) 、 GCSH
(M69175)、 G22P1 (M32865)、 USP11 (U44839)、 ACTB (X00351)、 YWHAZ (M86400)、 ILIO (M57627) 、 RFC4 (M87339) 、 CRLFl (AF059293) 、 RPS6 (M20020) 、 EMXl
(X68879) 及び TK2 (U77088) からなる群から選択される 1個または複数の遺伝 子 （括弧内は GenBank登録番号を示す） の発現量を測定し、 （5 ) に記載の方法 を用いてマイトマイシン Cに対する感受性を判定する方法。
( 1 7 ) 胃癌患者のマイトマイシン Cに対する感受性を判定する方法において、 胃癌患者より取り出された腫瘍細胞における、 TEAD4 (U63824)、 NR2C2 (U10990)、 CSFl (M37435)、 RAB28 (X94703)、 CBR3 (AB004854)、 NFYC (Z74792)、 PGF (X54936)、 ERG (M21535)、 MLLTl (L04285)、 FOS (K00650)、 TNFAIP3 (M59465)、 CNR2 (X74328)、 DRPLA (D31840) 、 PSMB5 (D29011) 、 SLC6A8 (L31409) 、 SERPINBIO (U35459) 、 VATl (U18009) 、 TJPl (L14837) 、 PELPl (U88153) 、 CIQBP (L04636) 、 CDK10
(L33264) 、 SERPINA6 (J02943) 、 ACTB (X00351) 、 SFRP4 (AF026692) 、 EMXl
(X68879)、 RPS9 (U14971)、 AMD1 (M21154)、 RPL26 (X69392)、 HNRPF (L28010)、 PTMS (M24398) 、 STK12 (AF008552) 、 NR2F6 (X12794) 、 GBEl (L07956) 、 PSMD8
(D38047)、 LAMP2 (J04183)、 CTSD (Ml 1233)、 AD0RA2B (M97759)、 ANXA4 (M19383)、 PTPRK (Z70660) 、 RAD23A (D21235) 、 SDHA (D30648) 、 PET112L (AF026851) 、 DADl (D15057) 、 HSPBl (X54079) 、 PSMA6 (X61972) 、 KDELRl (X55885) 、 B2M
(AB021288)、 M6PR (M16985)、 GCLC (M90656)、 SPTBN1 (M96803)、 PACE (XI 7094)、 RPL24 (M94314) 、 SPINT2 (U78095) 、 STX4A (U07158) 、 SIAT8B (U33551) 、 CTSK
(U13665) 、 DCI (U24774) 、 MEL (X56741) 、 PITPNB (D30037) 、 YY1 (M76541) 、 RABl (M28209) 、 UBE2L6 (AF031141) 及ぴ PSMB7 (D38048) からなる群から選択 される 1個または複数の遺伝子 （括弧内は GenBank登録番号を示す） の発現量を 測定し、 （5 ) に記載の方法を用いてマイトマイシン Cに対する感受性を判定す る方法。
( 1 8 ) 肝癌患者のパクリタキセルに対する感受性を判定する方法において、 肝癌患者より取り出された腫瘍細胞における、 ALDH3B1 (U10868)、 SRPK1 (U09564)、 ALPP (M13077)、 EBl (U24166)、 MAPKAPK (U12779)、 GPI (K03515)、 CTBPl (U37408)、 HMGCL (L07033) 、 CAPZ (U03271) 、 ACATl (D90228) 、 COMAL (AF005888) 、 RPS27A
(X63237) 、 F2 (V00595) 、 GFAP (J04569) 、 SCD (Y13647) 、 YWHAZ (M86400) 、 GCSH (M69175) 、 SQLE (D78130) 、 BCL2L1 (Z23115) 及ぴ RFC40 (M87338) から なる群から選択される 1個または複数の遺伝子 （括弧内は GenBank登録番号を示 す） の発現量を測定し、 （5 ) に記載の方法を用いてパクリタキセルに対する感 受性を判定する方法。
( 1 9 ) 肝癌患者の 5-フルォロゥラシルに対する感受性を判定する方法におい て、肝癌患者より取り出された腫瘍細胞における、 SRPK1 (U09564)、 0AZ1 (D78361)、 RPL34 (L38941) 、 ARHB (X06820) 、 RPS17 (M13932) 、 RPL28 (U14969) 、 TRIPll
(L40380)、 ZNF75 (S67970)、 RPL37 (D23661)、 PLOD (M98252)、 CD81 (M33680)、 HNRPC (M16342) 、 AP2S1 (M97074) 、 GAPD' (X01677) 、 PAFAH1B3 (D63391) 、 GBEl
(L07956)、 DEK (X64229)、 PEA15 (X86809) PSMD7 (D50063)及ぴ UBE2E1 (X92963) からなる群から選択される 1個または複数の遺伝子 （括弧内は GenBank登録番号 を示す） の発現量を測定し、 （5 ) に記載の方法を用いて 5-フルォロウラシルに 対する感受性を判定する方法。
( 2 0 ) 肝癌患者のドキソルビシンに対する感受性を判定する方法において、 肝癌患者より取り出された腫瘍細胞における、 RPS7 (M77233) 、 RPL23 (X52839) 、 CALT (X72946) 、 EEFID (Z21507) 、 RPS15A (X84407) 、 ADCYl (L05500) 、 HNRPU
(X65488) 、 C0X5A (M22760) 、 U2AF1 (M96982) 及ぴ RPYR1 (U35232) からなる 群から選択される 1個または複数の遺伝子 （括弧内は GenBank登録番号を示す） の発現量を測定し、 （5 ) に記載の方法を用いてドキソルビシンに対する感受性 を判定する方法。
( 2 1 ) 肝癌患者のシスブラチンに対する感受性を判定する方法において、 肝 癌患者より取り出された腫瘍細胞における、 CALT (X72946) 、 ZNF165 (X84801) 、 GPC1 (X54232)、 TUBA1 (K00558)、 GCP2 (X78686)、 C0X5A (M22760)、 GLA (X00351) 及び GNS (X06956) からなる群から選択される 1個または複数の遺伝子 （括弧内 は GenBank登録番号を示す） の発現量を測定し、 （5) に記載の方法を用いてシ スプラチンに対する感受性を判定する方法。
( 22 ) 遺伝子の発現量の測定を、 該遺伝子の転写産物である R Aを DNAマイ クロアレイにより定量することにより行う、 （1) から （21) の何れかに記載 の方法。
(23) 遺伝子の発現量の測定を、該遺伝子の転写産物である RNAを定量的 PCR により定量することにより行う、 （1) から （21) の何れかに記載の方法。
(24) 遺伝子の発現量の測定を、 該遺伝子の転写産物である R Aをノーザン ブロットにより定量することにより行う、 （1) から （21) の何れかに記載の 方法。
(25) (23) に記載の方法において使用するための、 該 RNAに相補的なォ リゴヌクレオチドを含む、 RNAの定量試薬。
(26) 遺伝子の発現量の測定を、 該遺伝子の遺伝子産物である蛋白質を免疫 化学的方法により定量することにより行う、 （1) から （21) の何れかに記載 の方法。
(27) 遺伝子の発現量の測定を、該遺伝子の遺伝子産物である蛋白質を ELISA により定量することにより行う、 （26) に記載の方法。
(28) 遺伝子の発現量の測定を、 該遺伝子の遺伝子産物である蛋白質をゥェ スタンプロットにより定量することにより行う、 （26) に記載の方法。
(29) (26) に記載の方法において使用するための、 該蛋白質に対する抗 体を含む免疫測定試薬。
(30) SFKD26121) 、 CBR3 (AB004854) 、 EMS1 (M98343) 、 JUN (J04111) 、 SFRS9 (U30825)、 NMBR (M73482)、 RBMX (Z23064)、 SODl (M13267)、 NOLI (X55504 ) 、 PELPl (U88153)、 A腿 (L25080)、 RS (D32050) 、 NMEl (X17620)、 HNRPA2B1
(M29065) 、 NME2 (L16785) 、 VATl (U18009) 、 SERPINBIO (U35459) 、 KIAA0436
(AB007896) 、 DRPLA (D31840) 及ぴ MC3R (L06155) からなる群から選択される 単独又は複数の遺伝子 （括弧内は GenBank登録番号を示す） であって癌細胞に強 制発現させることによってマイトマイシン Cに対する感受性を増強させる活性を 示す遺伝子又は該遺伝子がコードするタンパク質を含有する、 マイトマイシン C に対する感受性増強薬。
( 3 1 ) A腿 (L25080) 、 NME2 (L16785) 、 VIL2 (X51521) 、 YWHAQ (X56468) 、 HKl (M75126)、 SATB1 (M97287)、 CAMLG (U18242)、 CARS (L06845)、 CCNB1 (M25753)、 U2AF1 (M96982) 、 PTMA (M26708) 、 MLCISA (M31211) 、 NMEl (X17620) 、 SARS
(X91257)、 CDC20 (U05340)、 PPP4C (X70218)、 TNFAIP3 (M59465)、 EEF1D (Z21507)、 PFKP (D25328) 、 ENTPD2 (U91510) 、 CCL5 (M21121) 、 ACAT1 (D90228) 、 IQGAP1
(L33075)、 PAX5 (M96944)、 NRGN (Y09689)、 K- ALPHA- 1 (K00558)、 NDUFB7 (M33374) からなる群から選択される単独又は複数の遺伝子 （括弧内は GenBank登録番号を 示す） であつて癌細胞に強制発現させることによってビノレルビンに対する感受 性を増強させる活性を示す遺伝子又は該遺伝子がコードするタンパク質を含有す る、 ビノレルビンに対する感受性増強薬。
( 3 2 ) ADH6 (M68895) 、 匪 28 (X94703) 、 U2AF1 (M96982) 、 GPC1 (X54232) 、 HKl (M75126) 、 CARS (L06845) 、 TNFAIP3 (M59465) 、 K- ALPHA- 1 (K00558) 、 PFKP
(D25328) 、 GDI2 (D13988) 、 VIL2 (X51521) 、 RUNX2 (AF001450) 、 NME2 (L16785) 、 CDC20 (U05340) 、 GNAI2 (X04828) 、 ARHA (L25080) 、 CNR2 (X74328) 、 PPP2R2B
(M64930) 、 SLC6A8 (L31409) 、 DDX9 (L13848) 、 ACAT1 (D90228)及ぴ PI3 (Z18538) からなる群から選択される単独又は複数の遺伝子 （括弧内は GenBank登録番号を 示す） であって癌細胞に強制発現させることによってパクリタキセルに対する感 受性を増強させる活性を示す遺伝子又は該遺伝子がコードするタンパク質を含有 する、 パクリタキセルに対する感受性増強薬。
( 3 3 ) SRPK1 (U09564) 、 0AZ1 (D78361) 、 RPL34 (L38941) 、 ARHB (X06820) 、 RPS17 (M13932) 、 RPL28 (U14969) 、 TRIP11 (L40380) 、 ZNF75 (S67970) 、 RPL37
(D23661) 及ぴ PLOD (M98252) からなる群から選択される単独または複数の遣伝 子 （括弧内は GenBank登録番号を示す） であって、 癌細胞に強制発現させること によって 5-フルォロウラシルに対する感受性を増強させる活性を示す遺伝子又 は該遺伝子がコードするタンパク質を含有する、 5-フルォロウラシルに対する感 受性増強薬。
( 3 4 ) RPS7 (M77233) 、 RPL23 (X52839) 、 CALT (X72946) 、 EEF1D (Z21507) 及ぴ RPS15A (X84407) からなる群から選択される単独または複数の遺伝子 （括弧 内は GenBank登録番号を示す） であって、 癌細胞に強制発現させることによって ドキソルビシンに対する感受性を増強させる活性を示す遺伝子又は該遺伝子がコ 一ドするタンパク質を含有する、 ドキソルビシンに対する感受性増強薬。
( 3 5 ) CALT (X72946) 、 ZNF165 (X84801) 及び GPC1 (X54232) からなる群か ら選択される単独または複数の遺伝子 （括弧内は GenBank登録番号を示す） であ づて、 癌細胞に強制発現させることによってシスプラチンに対する感受性を増強 させる活性を示す遺伝子又は該遺伝子がコードするタンパク質を含有する、 シス ブラチンに対する感受性増強薬。
( 3 6 ) INHBB (M31682)、 NK4 (M59807)、 HSPA1A (M11717)、 L0C54557 (AF075050) 及ぴ CD47 (Y00815) からなる群から選択される単独または複数の遺伝子 （括弧内 は GenBank登録番号を示す） であって、 癌細胞に強制発現させることによってマ ィトマイシン Cに対する感受性を増強させる活性を示す遺伝子又は該遺伝子がコ 一ドするタンパク質を含有する、轧癌のマイトマイシン Cに対する感受性増強薬。
( 3 7 ) EB1 (U24166) 、 JUN (J04111) 、 EIF3S8 (U46025) 、 CCL5 (M21121) 、 PHB (S85655)、 HSPA1A (Ml 1717)、 SPP1 (X13694)、 RAB7 (X93499)、 CTSD (Ml 1233)、 ACTNl (X15804) 、 RXRB (M84820) 、 PSME2 (D45248) 、 HLA-C (Ml 1886)及ぴ RPL19
(X63527)からなる群から選択される単独または複数の遺伝子（括弧内は GenBank 登録番号を示す） であって、 癌細胞に強制発現させることによってマイトマイシ ン Cに対する感受性を増強させる活性を示す遺伝子又は該遺伝子がコードするタ ンパク質を含有する、 肝癌のマイトマイシン Cに対する感受性増強薬。
( 3 8 ) TEAD4 (U63824) 、 NR2C2 (U10990) 、 CSF1 (M37435) 、 RAB28 (X94703) 、 CBR3 (AB004854)、 FYC (Z74792)、 PGF (X54936)、 ERG (M21535)、 MLLT1 (L04285)、 FOS (K00650) 、 TNFAIP3 (M59465) 、 CNR2 (X74328) 、 DRPLA (D31840) 、 PSMB5 (D29011) 、 SLC6A8 (L31409) 、 SERPINB10 (U35459) 、 VAT1 (U18009) 、 TJP1 (L14837) 、 PELP1 (U88153) 、 C1QBP (L04636) 、 CDK10 (L33264) 、 SERPINA6 (J02943)、 ACTB (X00351)、 SFRP4 (AF026692)、 EMX1 (X68879)、 RPS9 (U14971)、 AMDl (M21154) 、 RPL26 (X69392) 、 HNRPF (L28010) 、 PTMS (M24398) 、 STK12 (AF008552) 、 NR2F6 (X12794) 及び GBE1 (L07956) からなる群から選択される 単独または複数の遺伝子 （括弧内は GenBank登録番号を示す） であって、 癌細胞 に強制発現させることによってマイトマイシン Cに対する感受性を増強させる活 性を示す遺伝子又は該遺伝子がコードするタンパク質を含有する、 胃癌のマイト マイシン Cに対する感受性増強薬。
( 3 9 ) ALDH3B1 (U10868) 、 SRPK1 (U09564) 、 ALPP (M13077) 、 EB1 (U24166) 、 MAPKAPK (U12779) 、 GPI (K03515) 、 CTBPl (U37408) 、 HMGCL (L07033) 、 CAPZ (U03271) 及ぴ ACAT1 (D90228) からなる'群から選択される単独または複数の遺 伝子 （括弧内は GenBank登録番号を示す） であって、 癌細胞に強制発現させるこ とによってパクリタキセルに対する感受性を増強させる活性を示す遺伝子又は該 遺伝子がコードするタンパク質を含有する、 肝癌のパクリタキセルに対する感受 性増強薬。
( 4 0 ) SRPK1 (U09564) 、 0AZ1 (D78361) 、 RPL34 (L38941) 、 ARHB (X06820) 、 RPS17 (M13932) 、 RPL28 (U14969) 、 TRIP 11 (L40380) 、 ZNF75 (S67970) 、 RPL37
(D23661) 及び PLOD (M98252) からなる群から選択される単独または複数の遺伝 子 （括弧内は GenBank登録番号を示す） であって、 癌細胞に強制発現させること によって 5 -フルォロウラシルに対する感受性を増強させる活性を示す遺伝子又 は該遺伝子がコードするタンパク質を含有する、肝癌の 5-フルォロウラシルに対 する感受性増強薬。
( 4 1 ) RPS7 (M77233) 、 RPL23 (X52839) 、 CALT (X72946) 、 EEF1D (Z21507) 及ぴ RPS15A (X84407) からなる群から選択される単独または複数の遺伝子 （括弧 内は GenBank登録番号を示す） であって、 癌細胞に強制発現させることによって ドキソルビシンに対する感受性を増強させる活性を示す遺伝子又は該遺伝子がコ 一ドするタンパク質を含有する、 肝癌のドキソルビシンに対する感受性増強薬。
( 4 2 ) CALT (X72946) 、 ZNF165 (X84801) 及び GPC1 (X54232) からなる群か ら選択される単独または複数の遺伝子 （括弧内は GenBank登録番号を示す） であ つて、 癌細胞に強制発現させることによってシスブラチンに対する感受性を増強 させる活性を示す遺伝子又は該遺伝子がコードするタンパク質を含有する、 肝癌 のシスブラチンに対する感受性増強薬。
( 4 3 ) 遺伝子 HSPA1A (GenBank登録番号： M11717) または該遺伝子がコード するタンパク質を含有する、 マイ トマイシン Cに対する感受性増強薬。
( 4 4 ) 遺伝子 JUN (GenBank登録番号： J04111)または該遺伝子がコードするタ ンパク質を含有する、 マイ トマイシン Cに対する感受性増強薬。
( 4 5 ) 遺伝子 CTSD (GenBank登録番号： Ml 1233)または該遺伝子がコードする タンパク質を含有する、 マイ トマイシン Cに対する感受性増強薬。
( 4 6 ) 細胞に試験物質を添加し、 該細胞における
SF1 (D26121) 、 CBR3 (AB004854) 、 EMS1 (M98343) 、 JUN (J04111) 、 SFRS9 (U30825) 、聽 R (M73482) 、 RBMX (Z23064) 、 S0D1 (M13267) 、 NOLI (X55504) 、 PELPl (U88153) 、 A藤 (L25080) 、 RS (D32050) 、 NMEl (X17620) 、 HNRPA2B1 (M29065) 、 NME2 (L16785) 、 VAT1 (U18009) 、 SERPINB10 (U35459) 、 KIAA0436 (AB007896) 、 DRPLA (D31840) 及ぴ MC3R (L06155) ；
ARHA (L25080)、 ME2 (L16785)、 VIL2 (X51521)、 YWHAQ (X56468)、 HK1 (M75126)、 SATB1 (M97287) 、 CAMLG (U18242) 、 CARS (L06845) 、 CCNB1 (M25753) 、 U2AF1
(M96982)、 PTMA (M26708)、 MLC1SA (M31211) 、 NMEl (X17620)、 SARS (X91257) 、 CDC20 (U05340) 、 PPP4C (X70218) 、 TNFAIP3 (M59465) 、 EEFID (Z21507) 、 PFKP
(D25328)、 ENTPD2 (U91510)、 CCL5 (M21121)、 ACAT1 (D90228)、 IQGAP1 (L33075)、 PAX5 (M96944) 、 NRGN (Y09689) 、 K- ALPHA- 1 (K00558) 及ぴ NDUFB7 (M33374) ； ADH6 (M68895) 、 RAB28 (X94703) 、 U2AF1 (M96982) 、 GPC1 (X54232) 、 HK1
(M75126) 、 CARS (L06845) 、 TNFAIP3 (M59465) 、 K- ALPHA- 1 (K00558) 、 PFKP (D25328)、 GDI2 (D13988)、 VIL2 (X51521)、 RUNX2 (AF001450)、 ME2 (L16785)、 CDC20 (U05340) 、 GNI2 (X04828) 、 ARHA (L25080) 、 CNR2 (X74328) 、 PPP2R2B
(M64930)、 SLC6A8 (L31409)、 DDX9 (L13848)、 ACAT1 (D90228)及ぴ PI3 (Z18538) ； INHBB (M31682) 、 NK4 (M59807) 、 HSPA1A (M11717) 、 L0C54557 (AF075050) 及び CD47 (Y00815) ；
EB1 (U24166)、 JUN (J04111)、 EIF3S8 (U46025)、 CCL5 (M21121)、 PHB (S85655)、 HSPA1A (M11717) 、 SPP1 (X13694) 、 RAB7 (X93499) 、 CTSD (M11233) 、 ACTN1
(X15804)、 RXRB (M84820)、 PSME2 (D45248)、 HLA- C (Ml 1886)及び RPL19 (X63527) ； TEAD4 (U63824) 、 NR2C2 (U10990) 、 CSF1 (M37435) 、 RAB28 (X94703) 、 CBR3
(AB004854) 、 NFYC (Z74792) 、 PGF (X54936) 、 ERG (M21535) 、 MLLT1 (L04285) 、 FOS (K00650) 、 T FAIP3 (M59465) 、 CNR2 (X74328) 、 DRPLA (D31840) 、，PSMB5 ゆ 29011) 、 SLC6A8 (L31409) 、 SERPINB10 (U35459) 、 VAT1 (U18009) 、 TJP1
(L14837) 、 PELP1 (U88153) 、 C1QBP (LI34636) 、 CDK10 (L33264) 、 SERPINA6
(J02943)、 ACTB (X00351)、 SFRP4 (AF026692)、 EMX1 (X68879)、 RPS9 (U14971)、 AMDl (M21154) 、 RPL26 (X69392) 、 HNRPF (L28010) 、 PTMS (M24398) 、 STK12
(AF008552) 、 NR2F6 (X12794) 及ぴ GBE1 (L07956) ；
ALDH3B1 (U10868) 、 SRPK1 (U09564) 、 ALPP (M13077) 、 EB1 (U24166) 、 MAPKAPK (U12779) 、 GPI (K03515) 、 CTBP1 (U37408) 、 HMGCL (L07033) 、 CAPZ (U03271) 及ぴ ACAT1 (D90228) ；
SRPK1 (U09564) 、 0AZ1 (D78361) 、 RPL34 (L38941) 、 ARHB (X06820) 、 RPS17 (M13932)、 RPL28 (U14969)、 TRIP11 (L40380)、 ZNF75 (S67970)、 RPL37 (D23661) 及ぴ PLOD (M98252) ；
RPS7 (M77233) 、 RPL23 (X52839) 、 CALT (X72946) 、 EEF1D (Z21507)及び RPS15A (X84407) ；及び
CALT (X72946) 、 ZNF165 (X84801) 及ぴ GPC1 (X54232)
からなる群から選択される少なくとも 1以上の遺伝子 （括弧内は GenBank登録番 号を示す） の発現量を測定し、 試験物質を添加しない場合の該遺伝子の発現量と' 比較して該遺伝子の発現を増加させる物質を、 抗癌剤に対する感受性を増強させ る候補物質として選択する、 抗癌剤に対する感受性を増強させる物質のスクリー ニング方法。
( 4 7 ) ( 4 6 ) に記載の方法によって取得された抗癌剤に対する感受性を増 強させる物質。
( 4 8 ) ( 4 7 ) に記載の物質を含む、 抗癌剤に対する感受性増強薬。
( 4 9 ) SPTBN1 (M96803)、 PET112L (AF026851)、 CAPN1 (X04366)、 MEL (X56741)、 PACE (X17094) 、 DVL2 (AF006012) 、 L0C54543 (AJ011007) 、 PAPOLA (X76770) 、 RPLP2 (M17887) 、 及ぴ ARF4L (L38490) からなる群から選択される単独又は複数 の遺伝子 （括弧内は GenBank登録番号を示す） であって、 癌細胞において該遺伝 子の発現を抑制することで、 マイトマイシン Cに対する感受性を増強させる活性 を示す遺伝子の発現を抑制する siRNAもしくはアンチセンスポリヌクレオチド。
( 5 0 ) H0XB1 (X16666) 、 F10 (K03194) 、 GPX2 (X53463) 、 NR1I2 (AF061056) 、 A XA4 (M19383)、 PDLIMl (U90878)、 LIPC (X07228)、 SERPINF2 (D00174)、 HSD17B1
(M36263) 、 MA 2B1 (U60266)、 LSS (D63807)、 PIK3CG (X83368)、 DBN1 (U00802)、 NDUFA4 (U94586) 、 BDH (M93107) 、 BCL2L1 (Z23115) 、 EEF1B2 (X60656) 、 F2
(V00595) 、 RAM (X06614) 、 ITGB4 (X53587) 、 IMPA1 (X66922) 、 PACE (X17094) 、 AGA (M64073) 、 MVD (U49260) 、 EHHADH (L07077) 、 TFPI2 (D29992) 、 MARCKS
(M68956) 、 FGB (J00129) 、 及ぴ GPD1 (L34041) からなる群から選択される単 独又は複数の遺伝子 （括弧内は GenBank登録番号を示す） であって、 癌細胞にお いて該遺伝子の発現を抑制することで、 ビノレルビンに対する感受性を増強させ る活性を示す遺伝子の発現を抑制する siRNAもしくはアンチセンスポリヌクレオ チド。
( 5 1 ) NAP1L1 (M86667)、 H0XB1 (X16666)、 PACE (XI 7094)、 MAN2B1 (U60266)、 GPX2 (X53463) 、 DBN1 (腸 802) 、 A XA4 (M19383) 、 SERPINF2 (D00174) 、 AGA
(M64073) 、 BCL2L1 (Z23115) 、 LIPC (X07228) 、 BDH (M93107) 、 LSS (D63807) 、 PDLIMl (U90878) ZNF161 (D28118) 、 UBE2E1 (X92963) 、 TLEl (M99435) 、 RA (X06614)、 PTPRN (L18983)、 APOE (M12529)、 F10 (K03194)、 R1I2 (AF061056)、 UBE2L3 (X92962) 、 及び FGB (J00129) からなる群から選択される単独又は複数 の遺伝子 （括弧内は GenBank登録番号を示す） であって、 癌細胞において該遺伝 子の発現を抑制することで、 パクリタキセルに対する感受性を増強させる活性を 示す遺伝子の発現を抑制する siRNAもしくはァンチセンスポリヌクレオチド。
( 5 2 ) RPN2 (Y00282) 、 ATP50 (X83218) 、 CAST (D50827) 、 HPCA (D16593) 、 ZNF9 (M28372) 、 A2LP (U70671) 、 IL18 (D49950) 及び NRGN (Y09689) からなる 群から選択される単独または複数の遺伝子 （括弧内は GenBank登録番号を示す） であって、 癌細胞において該遺伝子の発現を抑制することで、 マイトマイシン C に対する感受性を増強させる活性を示す遺伝子の発現を抑制する siRNAもしくは ァンチセンスポリヌクレオチド。
( 5 3 ) MAPK6 (X80692) 、 GCSH (M69175) 、 G22P1 (M32865) 、 USP11 (U44839) 、 ACTB (X00351)、 YWHAZ (M86400)、 IL10 (M57627)、 RFC4 (M87339)、 CRLF1 (AF059293)、 RPS6 (M20020) 、 EMX1 (X68879) 及ぴ TK2 (U77088) からなる群から選択される 単独または複数の遺伝子 （括弧内は GenBank登録番号を示す） であって、 癌細胞 において該遺伝子の発現を抑制することで、 マイトマイシン Cに対する感受性を 増強させる活性を示す遺伝子の発現を抑制する siRNAもしくはアンチセンスポリ ヌクレ才チド。
( 5 4 ) PSMD8 (D38047)、 LAMP2 (J04183)、 CTSD (M11233)、 AD0RA2B (M97759)、 ANXA4 (M19383) 、 PTPRK (Z70660) 、 RAD23A (D21235) 、 SDHA (D30648) 、 PET112L
(AF026851)、 DAD1 (D15057)、 HSPB1 (X54079)、 PSMA6 (X61972)、 KDELR1 (X55885)、 B2M (AB021288) 、 M6PR (M16985) 、 GCLC (M90656) 、 SPTBNl (M96803) 、 PACE
(X17094)、 RPL24 (M94314)、 SPINT2 (U78095)、 STX4A (U07158)、 SIAT8B (U33551)、 CTSK (U13665) 、 DCI (U24774) 、 MEL (X56741) 、 PITPNB (D30037) 、 YY1 (M76541)、 RABl (M28209) 、 UBE2L6 (AF031141) 及び PSMB7 (D38048) からなる群から選択 される単独または複数の遺伝子 （括弧内は GenBank登録番号を示す） であって、 癌細胞において該遺伝子の発現を抑制することで、 マイトマイシン Cに対する感 受性を増強させる活性を示す遺伝子の発現を抑制する siRNAもしくはアンチセン スポリヌクレオチド。
( 5 5 ) C0X4AL (AF005888)、 RPS27A (X63237)、 F2 (V00595)、 GFAP (J04569) 、 SCD (Y13647)、 YWHAZ (M86400)、 GCSH (M69175)、 SQLE (D78130)、 BCL2L1 (Z23115) 及ぴ RFC40 (M87338) からなる群から選択される単独または複数の遺伝子 （括弧 内は GenBank登録番号を示す） であって、 癌細胞において該遺伝子の発現を抑制 することで、 パクリタキセルに対する感受性を増強させる活性を示す遺伝子の発 現を抑制する siRNAもしくはアンチセンスポリヌクレオチド。
( 5 6 ) CD81 (M33680) 、 HNRPC (M16342) 、 AP2S1 (M97074) 、 GAPD (X01677) 、 PAFAH1B3 (D63391) 、 GBE1 (L07956) 、 DEK (X64229) 、 PEA15 (X86809) PSMD7
(D50063) 及び UBE2E1 (X92963) からなる群から選択される 1個または複数の遺 伝子 （括弧内は GenBank登録番号を示す） であって、 癌細胞において該遺伝子の 発現を抑制することで、 5 -フルォロウラシ に対する感受性を増強させる活性を 示す遺伝子の発現を抑制する siRNAもしくはアンチセンスポリヌクレオチド。
( 5 7 ) ADCY1 (L05500) 、 HNRPU (X65488) 、 C0X5A (M22760) 、 U2AF1 (M96982) 及び RPYR1 (U35232) からなる群から選択される 1個または複数の遺伝子 （括弧 内は GenBank登録番号を示す） であって、 癌細胞において該遺伝子の発現を抑制 することで、 ドキソルビシンに対する感受性を増強させる活性を示す遺伝子の発 現を抑制する siRNAもしくはアンチセンスポリヌクレオチド。
( 5 8 ) TUBA1 (K00558) 、 GCP2 (X78686) 、 C0X5A (M22760) 、 GLA (X00351) 及ぴ GNS (X06956) からなる群から選択される 1個または複数の遺伝子 （括弧内 は GenBank登録番号を示す） であって、 癌細胞において該遺伝子の発現を抑制す ることで、 シスブラチンに対する感受性を増強させる活性を示す遺伝子の発現を 抑制する siRNAもしくはァンチセンスポリヌクレオチド。
. ( 5 9 ) ( 4 9 ) から （5 8 ) の何れかに記載の siRNAもしくはアンチセンス ポリヌクレオチドを発現するベクター。
( 6 0 ) ( 4 9 ) から （5 8 ) の何れかに記載の siRNAもしくはアンチセンス ' )) () ( ( ))tsx IχlA99εκ> INvood Έωί9989svπι89MLd ΐ 96 INes , , , , ) ( ()) ()XMV99S9SV Vε9 ε9χ 6ΐε03 Old99Π SXH99O , , , ( ()) () () (δ§〇80 ία89ε8χ3SId08ε 3Ζε9α ssi99209α 1画ε929ε , , , ,，
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RAB1 (M28209) 、 UBE2L6 (AF031141) 及び PSMB7 (D38048) ；
C0X4AL (AF005888) 、 RPS27A (X63237) 、 F2 (V00595) 、 GFAP (J04569) 、 SCD (Y13647)、 YWHAZ (M86400) 、 GCSH (M69175) 、 SQLE (D78130) 、 BCL2L1 (Z23115) 及び RFC40 (M87338) ；
CD81 (M33680) 、 HNRPC (M16342) 、 AP2S1 (M97074) 、 GAPD (X01677) 、 PAFAH1B3 (D63391) 、 GBEl (L07956) 、 DEK (X64229) 、 PEA15 (X86809) PSMD7 (D50063) 及ぴ UBE2E1 (X92963) ；
ADCYl (L05500) 、 HNRPU (X65488) 、 C0X5A (M22760) 、 U2AF1 (M96982) 及ぴ
RPYR1 (U35232) ；及び
CALT (X72946) 、 ZNF165 (X84801) 、 GPCl (X54232) 、 TUBAl (K00558) 、 GCP2 (X78686) 、 C0X5A (M22760) 、 GLA (XOO'351) 及び GNS (X06956)
からなる群から選択される遺伝子 （括弧内は GenBank登録番号を示す） にコード される蛋白質に対する抗体を含有する、 抗癌剤に対する感受性増強薬。
( .6 2 ) 細胞に試験物質を添加し、 該細胞における
SPTBNl (M96803) 、 PET112L (AF026851) 、 CAPNl (X04366) 、 MEL (X56741) 、
PACE (X17094) 、 DVL2 (AF006012) 、 L0C54543 (AJ011007) 、 PAPOLA (X76770) 、
RPLP2 (M17887) 、 及び ARF4L (L38490) ；
HOXBl (X16666) 、 FIO (K03194) 、 GPX2 (X53463) 、 NR1I2 (AF061056) 、 A XA4 (M19383) 、 PDLIMl (U90878) 、 LIPC (X07228) 、 SERPINF2 (D00174) 、 HSD17B1 (M36263)、 MAN2B1 (U60266)、 LSS (D63807)、 PIK3CG (X83368)、 DBNl (U00802)、
NDUFA4 (U94586) 、 BDH (M93107) 、 BCL2L1 (Z23115) 、 EEF1B2 (X60656) 、 F2 (V00595)、 RAM (X06614)、 ITGB4 (X53587)、 IMPAl (X66922)、 PACE (X17094)、
AGA (M64073) 、 MVD (U49260) 、 EHHADH (L07077) 、 TFPI2 (D29992) 、 MARCKS (M68956) 、 FGB (J00129) 、 及ぴ GPD1 (L34041) ；
NAPILI (M86667) 、 HOXBl (X16666) 、 PACE (X17094) 、 MAN2B1 (U60266) 、 GPX2 (X53463)、 DBNl (U00802)、 ANXA4 (M19383)、 SERPINF2 (D00174)、 AGA (M64073)、 BCL2L1 (Z23115)、 LIPC (X07228)、 BDH (M93107)、 LSS (D63807)、 PDLIMl (U90878)、 ZNF161 (D28118) 、 UBE2E1 (X92963) 、 TLEl (M99435) 、 RARA (X06614) 、 PTPRN
(L18983)、 APOE (M12529)、 FIO (K03194)、 NR1I2 (AF061056)、 UBE2L3 (X92962)、 及ぴ FGB (J00129) ；
RPN2 (Y00282) 、 ATP50 (X83218) 、 CAST (D50827) 、 HPCA (D16593) 、 ZNF9
(M28372) 、 A2LP (U70671) 、 IL18 (D49950) 及ぴ NRGN (Y09689) ；
MAPK6 (X80692) 、 GCSH (M69175) 、 G22P1 (M32865) 、 USPll (U44839) 、 ACTB
(X00351)、 YWHAZ (M86400)、 ILIO (M57627)、 RFC4 (M87339)、 CRLFl (AF059293)、 RPS6 (M20020) 、 EMXl (X68879) 及び TK2 (U77088) ；
PSMD8 (D38047)、 LAMP2 (J04183) 、 CTSD (Ml 1233)、 AD0RA2B (M97759) 、 A XA4
(M19383)、 PTPRK (Z70660)、 RAD23A (D21235)、 SDHA (D30648)、 PET112L (AF026851)、 DADl (D15057) 、 HSPBl (X54079) 、 PSMA'6 (X61972) 、 KDELRl (X55885) 、 B2M
(AB021288)、 M6PR (M16985)、 GCLC (M90656)、 SPTBNl (M96803)、 PACE (X17094)、 RPL24 (M94314) 、 SPINT2 (U78095) 、 STX4A (U07158) 、 SIAT8B (U33551) 、 CTSK
(U13665) 、 DCI (U24774) 、 MEL (X56741) 、 PITPNB (D30037) 、 YYl (M76541) 、 RABl (M28209) 、 UBE2L6 (AF031141) 及ぴ PSMB7 (D38048) ；
C0X4AL (AF005888) 、 RPS27A (X63237) 、 F2 (V00595) 、 GFAP (J04569) 、 SCD
(Y13647) 、 YWHAZ (M86400) 、 GCSH (M69175) 、 SQLE (D78130) 、 BCL2L1 (Z23115) 及ぴ RFC40 (M87338) ；
CD81 (M33680) 、 HNRPC (M16342)、 AP2S1 (M97074) 、 GAPD (X01677) 、 PAFAH1B3
(D63391) 、 GBEl (L07956) 、 DEK (X64229) 、 PEA15 (X86809) PSMD7 (D50063) 及び UBE2E1 (X92963) ;
ADCYl (L05500) 、 HNRPU (X65488) 、 C0X5A (M22760) 、 U2AF1 (M96982) 及び RPYRl (U35232) ；及び
CALT (X72946) 、 ZNF165 (X84801) 、 GPCl (X54232) 、 TUBAl (K00558) 、 GCP2
(X78686) 、 C0X5A (M22760) 、 GLA (X00351) 及び GNS (X06956) からなる群から選択される少なくとも 1以上の遺伝子 （括弧内は GenBank登録番 号を示す） の発現量を測定し、 試験物質を添加しない場合の該遺伝子の発現量と 比較して該遺伝子の発現を減少させる物質を、 抗癌剤に対する感受性を増強させ る候補物質として選択する、 抗癌剤に対する感受性を増強させる物質のスクリー ユング方法。
( 6 3 ) ( 6 2 ) の方法によって取得された抗癌剤に対する感受性を増強させ る物質。
( 6 4 ) ( 6 3 ) に記載の物質を含む、 抗癌剤に対する感受性増強薬。 図面の簡単な説明
図 1は、 45種のヒト癌細胞株の感受性を元に 51種の抗癌剤の階層的クラスタ リングを行った結果を示す。
図 2は、 42のヒト癌細胞を遺伝子発現の'結果により階層的クラスタリングを行 つた結果を示す。
図 3は、 MMCに対する感受性と CSPD蛋白質発現の肝細胞株における相関を示す。 図 4の Aは、 MMCに対する感受性と HSPA1A遺伝子発現の乳癌細胞株における相 関を示す。
図 4の Bは、 MMC に対する感受性と JUN遺伝子発現の全 42細胞株における相 関を示す。一つの点が一つの細胞株を示す。 X軸は MMCに対する感受性を、 Y軸は HSPA1Aあるいは JUNの遺伝子発現を示す。 MMCに対する感受性と HSPA1A及ぴ JUN の発現の間のピアソンの相関係数の値は、それぞれ 0. 75 (p= 0. 05)及ぴ 0. 473 (p= 0. 015)である。
図 4の C及び Dは各遺伝子をトランスフエクシヨンした HT1080細胞を MMCで処 理した際の増殖阻害曲線を示す。各曲線はそれぞれ、ベクターのみ（黒四角：園）、 LacZ (黒菱形：令）， NQ01 ( X ) , HSPA1A (黒三角：▲)， JUN (白三角：△)を示 す。 HT1080細胞に NQ01， HSPAIA, JUNのいずれかをトランスフエクションする と MMC の増殖抑制活性が増強される。 アスタリスクは、 コントロールに対する t-testで、 pく 0. 01で有意差が見られたものを示す。
図 5は、 CTSD特異的な siRNAによる CTSDの発現抑制を示す。 レーン 1はトラ ンスフエクション処理をしない細胞、 2はリボフエタトァミン 2000のみでトラン スフヱクション処理した細胞、 3は CTSD #271、 4は CTSD #387、 5は CTSD #400 をそれぞれトランスフエクションした細胞のウェスタンブロットを示す。 左の矢 印は検出される CTSDのバンドの位置と分子量を示す。
図 6の A及び Bは CTSD #400をトランスフエクションした SSP- 25細胞をマイト マイシン C (図 6 A) 、 パクリタキセル (図 6 B左) またはドキソルビシン (図 6 B右） で処理した際の増殖阻害曲線を示す。 X軸は各抗癌剤の濃度 （mol/L) 、 Y軸は抗癌剤を添加しない場合に対する細胞増殖の割合 （％) を表す。 各曲線は それぞれ、 CTSD #400siRNAをトランスフエクシヨンした細胞 （黒丸：參） 、 siRNA をトランスフエクシヨンしなかったコントロール （白四角：口） を示す。
図 7は、 肝癌細胞株 12株における、 匿 C、 パクリタキセルおよぴドキソルビシ ンそれぞれに対する感受性と CTSD遺伝子発現の相関を示す。一つの点が一つの細 胞株を示す。 X軸は各抗癌剤に対する感受性を、 Y軸は CTSD遺伝子の発現を示す。 発明を実施するための最良の形態
以下に本発明の実施の形態について、 詳細に説明する。
(A) 腫瘍細胞の抗癌剤に対する感受性に関わる遺伝子群を同定する方法 本発明による抗癌剤に対する感受性に関与する遺伝子の同定方法としては、
( 1 ) 癌細胞株パネルにおける各種抗癌剤に対する感受性を測定する工程；
( 2 ) 上記 （1 ) と同じ癌細胞株パネルにおいて、 複数の遺伝子の発現を測定す る工程；
( 3 ) 上記 （1 ) の抗癌剤に対する感受性と上記 （2 ) の遺伝子発現の結果の相 関係数を計算して、 抗癌剤に対する感受性との相関の高い遺伝子を統計的に選抜 する工程；
から構成することができる。 ここで用いるヒト癌細胞株パネルとしては、 本明細書の表 1〜 5に記載の 45 細胞株からなるパネルの全部あるいは一部を用いることができる。 また、 胃癌、 乳癌、 肝臓癌に属する細胞株を表 1〜 5に記載のパネルから選抜して用いること で、 胃癌、 乳癌、 肝臓癌に特化した抗癌剤に対する感受性に関与する遺伝子群を 選抜することができる。
本発明における抗癌剤に対する感受性の測定法としては、抗細胞活性測定、 DNA 合成速度測定、 総蛋白質量測定などを用いることができる。 抗細胞活性の測定法 としては、 MTT法、 XTT法など、抗癌剤と細胞を一定期間接触させた後の発色反応 で細胞の増殖を見る方法が用いられる。 また、 DNA合成速度測定においては、 ¾ で標識したチミジンの細胞への取り込みを測定することなどにより、 測定するこ とができる。 総蛋白質量測定においては、 sulf orhodamine B アツセィ法などを用 いることができる。
本発明における遺伝子の発現量の測定は、 遺伝子の転写産物である RNAまたは 遺伝子産物である蛋白質を定量することにより行うことができる。
( 1 ) RNAまたは蛋白質の抽出
癌細胞株あるいは癌患者由来の癌細胞から以下の一般的な方法で RNAまたは蛋 白質を抽出できる。 RNAの場合、例えば TRIZ0L試薬 （Invitrogen社） を用いた場 合、 添付の操作法に従って行えばよい。 蛋白質の場合、 例えば The Protein Handbook, 1996, Humana Press, New Jersey, USA等の成書に従って行えばよレヽ。
( 2 ) R Aの定量
RNAの定量は DNAマイクロアレイ、 ノーザンプロット解析、 RT- PCR等の技術に より行うことができる。 また、 RT- PCRにおいて使用するための、 該 RNAに相補的 なポリヌクレオチドを含む、 RNAの定量試薬も本発明の範囲に含まれる。
( 3 ) 蛋白質の定量
蛋白質の定量は特異的抗体を用いた免疫化学的定量法によって行うことができ る。蛋白質に対する抗体は、例えば成書 Antibodies : A Laboratory Manual, 1988, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York)【こ言己載の方法【こ従って、 モノ クローナル抗体あるいはポリクローナル抗体を作製することができる。 また、 巿 販の抗体が利用可能な場合は、 特異性を確認の上、 使用することもできる。 得ら れた抗体を用いて、成書（例えば酵素免疫測定法（石川栄治他、医学書院、 1982) ) に記載の方法に従って、 ELISAあるいは RIAを行い、 蛋白質を定量することがで きる。 また、 上記の方法において使用するための、 該蛋白質に対する抗体を含む 免疫測定試薬も本発明の範囲に含まれる。
本発明では、抗癌剤に対する感受性と遺伝子発現の結果の相関係数を計算して、 抗癌剤に対する感受性との相関の高い遺伝子を統計的に選抜する。 ここで行なう 相関解析は、 例えばピアソンの相関係数（Peason correlation coefficients)など を計算することによって行うことができる。 抗癌剤に.対する感受性と遺伝子発現 が相関するかどうかの統計学的検定は、 例えば両者を対数表示した際に正規分布 であるという仮定をおくことによって、 ピアソンの相関係数 r力 S r=0であるかを 検定することで行う。 例えば、 相関の有意性の検定において、 P値が Pく 0. 05を満 たす遺伝子を選抜し、 「抗癌剤に対する感受性と相関のある遺伝子」 として同定 することができる。
本発明で用いる抗癌剤の種類は、 特に限定されず任意の抗癌剤を使用すること ができ、また抗癌剤の候補物質を用いることもできる。抗癌剤の具体例としては、 表 1に記載のものが挙げられ、 さらに具体的には、 マイトマイシン C、 ビノレル ビン (vinorelbine) 、 パクリタキセル (paclitaxel) 5—フノレオ口ゥラシノレ
(5-fluorouracil) ドキソルビシン (doxorubicin) 、 シスプラチン (cisplatin) などを挙げることができる。
上記の方法で同定された各種抗癌剤に対する感受性と相関する遺伝子として、 以下のものが挙げられる。 マイトマイシン Cに対する感受性と相関する遺伝子と しては、 表 6、 表 7、 およぴ表 1 2〜1 4に記載された遺伝子を挙げることがで きる。 ビノレルビンに対する感受性と相関する遺伝子としては、 表 8およぴ表 9 に記載された遺伝子を挙げることができる。 パクリタキセルに対する感受性と相 関する遺伝子としては、 表 1 0、 表 1 1、 および表 1 5に記載された遺伝子を挙 げることができる。 5 -フルォロウラシルに対する感受性と相関する遺伝子として は、 表 1 6に記載された遺伝子を挙げることができる。 ドキソルビシンに対する 感受性と相関する遺伝子としては、 表 1 7に記載された遺伝子を挙げることがで きる。 シスプラチンに対する感受性と相関する遺伝子としては、 表 1 8に記載さ れた遗伝子を挙げることができる。 また、 乳癌のマイ トマイシン Cに対する感受 性と相関する遺伝子としては表 1 2に記載された遺伝子を、 肝癌のマイトマイシ ン Cに対する感受性と相関する遺伝子としては表 1 3に記載された遺伝子を、 胃 癌のマイトマイシン Cに対する感受性と相関する遺伝子としては表 1 4に記載さ れた遗伝子を、 それぞれ挙げることができる。 さらに、 肝癌のパクリタキセルに 対する感受性と相関する遺伝子としては、 表 1 5に記載された遺伝子を、 肝癌の 5二フルォロウラシルに対する感受性と相関する遺伝子としては、 表 1 6に記載さ れた遺伝子を、肝癌のドキソルビシンに対する感受性と相関する遺伝子としては、 表 1 7に記載された遺伝子を、 肝癌のシズブラチンに対する感受性と相関する遺 伝子としては、 表 1 8に記載された遺伝子を、 それぞれ挙げることができる。
( B ) 癌患者の抗癌剤に対する感受性を判定する方法
本発明はさらに、 癌患者の抗癌剤に対する感受性を判定する方法を提供する。 癌患者から取り出した腫瘍細胞における遺伝子の発現については、 上記 （A) に 記載の方法により定量することができる。 判定の方法としては、 上記 （A) の方 法により薬剤ごとに同定した遺伝子群から 1以上の遺伝子を選択し、 選択された 遺伝子の各々について、 （1 ) その発現量に対応した点数を決定し、 （2 ) 被験 患者由来の腫瘍細胞における該遺伝子の発現量を測定し、 （3 ) ( 2 ) で測定し た発現量に基づき （1 ) で得た点数を割り当て、 （4 ) 選択された全遺伝子につ いて割り当てられた点数を合計して合計値を求め、 （5 ) 予め決定した閾値と該 合計値を比較することにより、 抗癌剤に対する感受性を判定するという工程によ つて、 与えられた抗癌剤に対する感受性を判定することができる。 上記点数の決 定、 合計値の計算、 閾値との比較は、 重回帰分析、 判別分析、 SVM (サポートべク ターマシン） 法、 主成分分析、 自己組織化マップ法などの多変量解析の手法（SAS による実験データの解析、 竹内啓監修、 東京大学出版会、 1990などに記載） を用 いることで行うことができる。
上記の方法により抗癌剤に対する感受性と相関があると判断された遺伝子の発 現変化が、 実際に抗癌剤に対する感受性を変化させるかを調べるには、 以下の方 法を用いることができる。
( 1 ) 遺伝子の強制発現
選抜された遺伝子の全長または部分長の cDNAを適当な動物細胞の発現べクタ 一に挿入し、 癌細胞にトランスフエクシヨンにより導入することで、 該遺伝子の 発現量を上げることができる。 そこに相関があるとされた抗癌剤を添加すること で、 該遺伝子を発現しない場合と比較して抗癌剤に対する感受性が変化するかど うかを判定することができる。
発現ベクターとして、 例えば、 pEGFP - C2' (クロンテック社） 、 pAGE107 〔特開平 3-22979； Cytotechnol. , 3, 133, (1990) ] 、 pAS3- 3 (特開平 2 - 227075) 、 pCDM8
[Nature, 329, 840, (1987)〕 、 pCMV-Tagl (ストラタジーン社製） pcDNA3. 1 (+)
(インビトロジェン社） 、 pREP4 (ィンビトロジェン社製） 、 pMSG (アマシャム · バイオサイエンス社製） 、 pAMo [J. Biol. Chem. , 268, 22782 (1993)〕 等を例示 することができる。
組換えベクターの導入方法としては、 動物細胞に D NAを導入する方法であれ ばいずれも用いることができ、 例えば、 エレクト口ポレーシヨン法 [Miyaji H. ら， Cytotechnol. , 3, 133 (1990) ] 、 リン酸カルシウム法 （特開平 2-227075) 、 リポフエクシヨン法 [Feigner P. L.ら， Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 84, 7413 (1987) ] 等をあげることができる。
( 2 ) 遺伝子の発現抑制
選抜された遺伝子に対応するアンチセンスポリヌクレオチドまたは siRNAを癌 細胞に導入することで、 該遺伝子の発現量を下げることができる。 また、 アンチ センスポリヌクレオチドまたは siRNAの発現べクターを癌細胞に導入すること で、 同様に該遺伝子の発現量を下げることができる。
そこに相関があるとされた抗癌剤を添加することで、 遺伝子発現を抑制しない 場合と抗癌剤に対する感受性が変化するかどうかを判定することができる。
(C) 抗癌剤に対する感受性増強薬 （i )
上記 （B ) の （1 ) 遺伝子の強制発現に記載した方法により、 ある遺伝子の強 制発現により抗癌剤に対する感受性が増強された場合には、 該遺伝子を含有する 遺伝子治療薬は、 該抗癌剤に対する感受性増強薬として用いることができる。 ま た、 該遺伝子がコードする蛋白質を含有する蛋白製剤は、 該抗癌剤に対する感受 性増強薬として用いることができる。
具体的には、 表 6およぴ表 1 2〜 1 4の 「感受性」 に記載された遺伝子から選 択される単独又は複数の遺伝子であつて癌細胞に強制発現させることによってマ イトマイシン Cに対する感受性を増強させる活性を示す遺伝子又は該遺伝子がコ 一ドするタンパク質はマイトマイシン Cに対する感受性増強薬として使用するこ とができる。
同様に、 表 8に記載された遺伝子から選択される単独又は複数の遺伝子であつ て癌細胞に強制発現させることによってビノレルビンに対する感受性を増強させ る活性を示す遺伝子又は該遺伝子がコードするタンパク質はビノレルビンに対す る感受性増強薬として使用することができる。
同様に、 表 1 0およぴ表 1 5の 「感受性」 に記載された遺伝子から選択される 単独又は複数の遺伝子であって癌細胞に強制発現させることによってパクリタキ セルに対する感受性を増強させる活性を示す遺伝子又は該遺伝子がコードするタ ンパク質はパクリタキセルに対する感受性増強薬として使用することができる。 同様に、 表 1 6の 「感受性」 に記載された遺伝子から選択される単独又は複数 の遺伝子であって癌細胞に強制発現させることによって 5-フルォロウラシルに 対する感受性を増強させる活性を示す遺伝子又は該遺伝子がコードするタンパク 質は 5 -フルォロウラシルに対する感受性増強薬として使用することができる。
、 同様に、 表 1 7の 「感受性」 に記載された遺伝子から選択される単独又は複数 の遺伝子であつて癌細胞に強制発現させることによってドキソルビシンに対する 感受性を増強させる活性を示す遺伝子又は該遺伝子がコードするタンパク質はド キソルビシンに対する感受性増強薬として使用することができる。
同様に； 表 1 8の 「感受性」 に記載された遺伝子から選択される単独又は複数 の遺伝子であって癌細胞に強制発現させることによってシスプラチンに対する感 受性を増強させる活性を示す遺伝子又は該遺伝子がコードするタンパク質はシス ブラチンに対する感受性増強薬として使用することができる。
上記した各種抗癌剤に対する感受性を増強させる活性を示す遺伝子又は該遺伝 子がコードするタンパク質は、 抗癌剤に対する感受性増強薬として単独で用いる ことが可能ではあるが、 通常は薬理学的に許容される一つあるいはそれ以上の担 体と一緒に混合し、 製剤学の技術分野においてよく知られる任意の方法により製 造した医薬製剤として用いることが望まじい。 このような医薬製剤の詳細につい ては、 本明細書中の （F ) に後記する。
(D) 抗癌剤に対する感受性増強薬 （ i i )
上記 （B ) の （2 ) 遺伝子の発現抑制に記載した方法により、 ある遺伝子の発 現抑制によりある抗癌剤に対する感受性が増強された場合には、 該遺伝子の発現 を抑制する siRNAもしくはァンチセンスポリヌクレオチドまたは該 siRNAもしくは アンチセンスポリヌクレオチドを発現するベクターは該抗癌剤に対する感受性増 強薬として用いることができる。 また、 該遺伝子がコードする蛋タンパク質の機 能を抑制する中和抗体などを含有する薬剤は、 該抗癌剤に対する感受性増強薬と して用いることができる。 ·
具体的には、 表 7および表 1 2〜 1 4の 「耐性」 に記載された遺伝子から選択 される単独又は複数の遺伝子であって、 癌細胞において該遺伝子の発現を抑制す ることで、マイトマイシン Cに対する感受性を増強させる活性を示す遺伝子の発現 を抑制する siRNAもしくはアンチセンスポリヌクレオチドまたは該 siRNAもしくは 、 アンチセンスポリヌクレオチドを発現するベクターは、マイトマイシン Cに対する 感受性増強薬として使用することができる。
同様に、 表 9に記載された遺伝子から選択される単独又は複数の遺伝子であつ て、 癌細胞において該遺伝子の発現を抑制することで、 ビノレルビンに対する感 受性を増強させる活性を示す遺伝子の発現を抑制する siRNAもしくはアンチセン スポリヌクレオチドまたは該 siRNAもしくはアンチセンスポリヌクレオチドを発 現するベクターは、 ビノレルビンに対する感受性増強薬として使用することがで きる。
同様に、 表 1 1および表 1 5の 「耐性」 に記載された遺伝子から選択される単 独又は複数の遺伝子であって、癌細胞において該遺伝子の発現を抑制することで、 パクリタキセルに対する感受性を増強させる活性を示す遺伝子の発現を抑制する siRNAもしくはアンチセンスポリヌクレオチドまたは該 siRNAもしくはアンチセン スポリヌクレオチドを発現するベクターは、 パクリタキセルに対する感受性増強 薬として使用することができる。
同様に、 表 1 6の 「耐性」 に記載された遺伝子から選択される単独又は複数の 遺伝子であって、 癌細胞において該遺伝子の発現を抑制することで、 5-フルォロ ゥラシルに対する感受性を増強させる活性を示す遺伝子の発現を抑制する siRNA もしくはアンチセンスポリヌクレオチドまたは該 siRNAもしくはアンチセンスポ リヌクレオチドを発現するベクターは、 5 -フルォロウラシルに対する感受性増強 薬として使用することができる。
同様に、 表 1 7の 「耐性」 に記載された遺伝子から選択される単独又は複数の 遺伝子であって、 癌細胞において該遺伝子の発現を抑制することで、 ドキソルビ シンに対する感受性を増強させる活性を示す遺伝子の発現を抑制する siRNAもし くはアンチセンスポリヌクレオチドまたは該 siRNAもしくはアンチセンスポリヌ クレオチドを発現するベクターは、 ドキソルビシンに対する感受性増強薬として 使用することができる。
同様に、 表 1 8の 「耐性」 に記載された遺伝子から選択される単独又は複数の 遺伝子であって、 癌細胞において該遺伝子の発現を抑制することで、 シスプラチ ンに対する感受性を増強させる活性を示す遺伝子の発現を抑制する siR Aもしく はァンチセンスポリヌクレオチドまたは該 siRNAもしくはアンチセンスポリヌク レオチドを発現するベクターは、 シスブラチンに対する感受性増強薬として使用 することができる。
次に本発明で用いる siRNAについて説明する。 siRNAとは、 ある標的遺伝子の mRNAの一部の配列を含む短い二本鎖 R Aであり、 RNAi (RNA interference) によ り、 該遺伝子の発現を抑制できるものをいう。 siRNAの配列は、 mRNAの塩基配列 から文献 [Genes Dev. , 13, 3191, (1999) ] の条件に基づいて適宜設計すること ができる。好ましくは、 mRNAの翻訳領域中の開始コドンより 50〜100塩基下流の 領域中で、 AAに続く 19塩基、 GC含量が 30〜70%、 より好ましくは 50%前後の配 列を選択する。 選択した 19塩基の配列および相補的な配列それぞれの 3'端に TT を付加した配列を有する 2本の RNAを DNA合成機により合成し、 ァニーリングす ることにより siRNAを作製できる。 また、 pSilencer 1. 0 - U6 (Ambion社製） 、 pSUPER (OligoEngine社）等の siRNA発現用ベクターに上記の選択した 19塩基の 配列に相当する DNAを揷入することにより、 該遺伝子の発現を抑制できる siRNA を発現するベクターを作製することができる。
また、 本発明で用いるアンチセンスポリヌクレオチドとは、 標的遺伝子の塩基 配列中の連続した 15塩基以上の配列と相補的な塩基配列を有するポリヌクレオ チドである。 ポリヌクレオチドとしては、 DNA、 腿、 ポリヌクレオチドの誘導体 が含まれる。 ポリヌクレオチド誘導体としては、 ポリヌクレオチド中のリン酸ジ エステル結合がホスフォロチォエート結合に変換されたポリヌクレオチド誘導 体、 ポリヌクレオチド中のリン酸ジエステル結合が Ν3' - P5'ホスフォアミデート 結合に変換されたポリヌクレオチド誘導体、 ポリヌクレオチド中のリポースとリ ン酸ジエステル結合がぺプチド核酸結合に変換されたポリヌクレオチド誘導体、 ポリヌクレオチド中のゥラシルが C - 5プロビュルゥラシルで置換されたポリヌク レオチド誘導体、 ポリヌクレオチド中のゥラシルが C-5チアゾールゥラシルで置 換されたポリヌクレオチド誘導体、 ポリヌクレオチド中のシトシンが C- 5プロピ ニルシトシンで置換されたポリヌクレオチド誘導体、 ポリヌクレオチド中のシト シンがフエノキサジン修飾シトシンで置換されたポリヌクレオチド誘導体、 ポリ ヌクレオチド中のリボースが 2，- 0-プロピルリボースで置換されたポリヌクレオ チド誘導体、あるいはポリヌクレオチド中のリボースが 2'—メトキシエトキシリ ボースで置換されたポリヌクレオチド誘導体等をあげることができる。
アンチセンス RNA/DNA技術 〔バイオサイエンスとィンダストリー, 50, 322 (1992)、 ィ匕学， ， 681 (1991) 、 Biotechnology, 9, 358 (1992) 、 Trends Biotechnol. , 10, 87 (1992) 、 Trends Biotechnol.， 10, 152 (1992)、 細胞工学， 16, 1463 (1997)〕 、 トリプル 'ヘリックス技術 [Trends Biotechnol.， 10, 132 (1992)3 、 に基づき、 上記のアンチセンスポリヌクレオチドを癌細胞に投与する ことにより、 癌細胞での標的遺伝子の転写または翻訳を抑制し、 その結果、 標的 遺伝子の発現を抑制することができる。 特に標的遺伝子のポリべプチドをコ一ド する領域の開始コドンを含む 15〜； 100塩基と相補的な塩基配列が好ましレ、。また、 デォキシリボヌクレアーゼ、 リボヌクレアーゼによる分解を受けないポリヌクレ ォチド誘導体が好ましい。
ァンチセンスポリヌクレオチドは、市販の DNA合成機、 W093/20095, W002/10185 に記載の方法などを用いて製造することができる。 また、 （B ) の （1 ) の遺伝 子の強制発現に用いる発現ベクターのプロモーターの下流に標的遺伝子を逆向き につなげた組換え体ベクターを作製し、 この組換え体ベクターを癌細胞に導入す ることにより、 細胞内でアンチセンス RNAを発現することができる。
さらに本発明では、 表 7、 9、 1 1及ぴ 1 2〜 1 8の 「耐性」 に記載の何れか の遺伝子がコードする蛋白質に対する抗体を抗癌剤に対する感受性増強薬として 使用することもできる。 好ましくは、 上記抗体は、 上記タンパク質の機能を抑制 する中和抗体である。 このような目的蛋白質に対する抗体は当業者に公知の方法 により取得することができる。
上記した各種抗癌剤に対する感受性を増強させる活性を示す siRNAもしくはァ 発現するベクター並びに抗体は、 抗癌剤に対する感受性増強薬として単独で用い ることが可能ではあるが、 通常は薬理学的に許容される一つあるいはそれ以上の 担体と一緒に混合し、 製剤学の技術分野においてよく知られる任意の方法により 製造した医薬製剤として用いることが望ましい。 このような医薬製剤の詳細につ いては、 本明細書中の （F ) に後記する。
(E) スクリーニングおよぴ該スクリーニングにより得られる抗癌剤に対する感 受性増強薬
ある物質を投与することにより本明細書の表 6から 1 8に記載した何れかの遺 伝子の発現増強あるいは発現抑制を達成し、 それによりある抗癌剤に対する感受 性が増強される場合には、 該遺伝子の発現を増強あるいは抑制する活性を有する 物質も、 該抗癌剤に対する感受性増強薬と—して用いることができる。
そうした活性を有する物質は以下の方法によりスクリーニングすることができ る。 例えば、 該遺伝子の発現制御領域を適当なレポーター遺伝子に結合して細胞 に導入し、 被験試料の添加によりレポーター遺伝子の発現を増加あるいは減少さ せる物質を選択することで目的の物質を得ることができる。 レポーター遺伝子と してはホタルルシフェラーゼ遺伝子、 緑色蛍光蛋白質 （GFP) 遺伝子、 β -ガラク トシダーゼ遺伝子などを用いることができる。また、該愈伝子の mRNAを RT - PCR法、 ノーザンプロッティング法、定量 PCR法などによって直接定量することや、該遺伝 子のコードする蛋白質を ELISA法や EIA法などの免疫学的方法で定量することで も、 目的とする物質をスクリーニングすることが可能である。
被験試料としては、 合成化合物、 天然に存在する蛋白質、 人工的に合成された 蛋白質、 ペプチド、 糖質、 脂質、 これらの修飾体、誘導体を、 また哺乳動物 (例え ばマウス、 ラット、 モ /レモット、 ハムスタ^"、 ブタ、 ヒッジ、 ゥシ、 ゥマ、 ィヌ、 ネコ、 サル、 ヒト等）の尿、 体液、 組織抽出物、 細胞培養上清、 細胞抽出物を、 更 に、；非ペプチド性化合物、 発酵生産物、 植物その他の生物の抽出物等をあげるこ とができる。
上記した本発明のスクリーニング方法により取得される物質は、 抗癌剤に対す る感受性増強薬として有用であり、 当該物質、 並びにそれを含む抗癌剤に対する 感受性増強薬も本発明の範囲内に属する。
(F ) 本発明の抗癌剤に対する感受性増強薬の医薬製剤
本明細書中の上記 （C ) 、 (D) 及ぴ （E ) に記載した通りの各種の遺伝子、 蛋白質、 抗体及び物質などは抗癌剤に対する感受性増強薬として単独で用いるこ とも可能ではあるが、 通常は薬理学的に許容される一つあるいはそれ以上の担体 と一緒に混合し、 製剤学の技術分野においてよく知られる任意の方法により製造 した医薬製剤として用いることが望ましい。
投与経路は、予防または治療に際し最も効果的なものを使用するのが望ましく、 経口投与または、 口腔内、 気道内、 直腸内、 皮下、 筋肉内おょぴ静脈内等の非経 口投与をあげることができる。 投与形態としては、 噴霧剤、 カプセル剤、 錠剤、 顆粒剤、 シロップ剤、 乳剤、 座剤、 注射剤、 軟膏、 テープ剤等があげられる。 経口投与に適当な製剤としては、 乳剤、 シロップ剤、 カプセル剤、錠剤、散剤、 顆粒剤等があげられる。例えば乳剤およぴシロップ剤のような液体調製物は、水、 ショ糖、 ソルビトール、 果糖等の糖類、 ポリエチレングリコール、 プロピレング リコール等のダリコール類、 ごま油、 ォリーブ油、 大豆油などの油類、 p—ヒド ロキシ安息香酸エステル類等の防腐剤、 スト口べリーフレ一パー、 ペパーミント 等のフレーパー類等を添加剤として用いて製造できる。 カプセル剤、錠剤、散剤、 顆粒剤等は、 乳糖、 プドウ糖、 ショ糖、 マンニトール等の賦形剤、 デンプン、 ァ ルギン酸ナトリゥム等の崩壌剤、ステアリン酸マグネシウム、 タルク等の滑沢剤、 ポリビュルアルコール、 ヒ ドロキシプロピルセルロース、 ゼラチン等の結合剤、 脂肪酸エステル等の界面活性剤、 グリセリン等の可塑剤等を添加剤として用いて 製造できる。
非経口投与に適当な製剤としては、 注射剤、 座剤、 噴霧剤等があげられる。 例 えば、 注射剤は、 塩溶液、 ブドウ糖溶液、 あるいは両者の混合物からなる担体等 を用いて調製する。 座剤はカカオ脂、 水素化脂肪またはカルボン酸等の担体を用 いて調製する。 また、 噴霧剤は有効成分そのもの、 ないしは受容者の口腔および 気道粘膜を刺激せず、 かつ該有効成分を微細な粒子として分散させ吸収を容易に させる担体等を用いて調製する。 担体として具体的には乳糖、 グリセリン等が例 示される。 該蛋白質おょぴ用いる担体の性質により、 エアロゾル、 ドライパウダ 一等の製剤が可能である。 また、 これらの非経口剤においても経口剤で添加剤と して例示した成分を添加することもできる。
投与量または投与回数は、 使用する有効成分の種類、 目的とする治療効果、 投 与方法、 治療期間、 年齢、 体重等により異なるが、 通常成人 1日当たり 0 . 0 1 μ g / : g〜 1 0 m g k gでめる。 ■
また、 抗癌剤に対する感受性増強のための有効成分として D N Aや R N Aなど の核酸を利用する遺伝子治療剤の場合にほ、 該 D N A又は R N Aを単独あるいは レトロウイルスベクター、 アデノウイルスベクター、 アデノ随伴ウィルスべクタ 一などの適当なベクターに挿入した後、 上記に記載した常法に従って製剤化、 処 方および投与する方法、 あるいは非ウィルス遗伝子移入法により投与する方法を 使用することができる。
組換えウィルスベクターは、 以下に記載の方法に従い作製することができる。 有効成分として使用する D N A (以下、 対象 D N Aとも称する） の断片を調製 する。 該 D NA断片をウィルスベクター内のプロモーターの下流に挿入すること により、 組換えウィルスベクターを造成する。
R NAウィルスベクターの場合には、対象 D N Aに相同な R NA断片を調製し、 それらをウィルスベクター内のプロモーターの下流に挿入することにより、 組換 えウィルスを造成する。 R N A断片は、 2本鎖のほか、 ウィルスベクターの種類 に応じて、 センス鎖もしくはアンチセンス鎖のどちらか一方の鎖を選択する。 例 えば、 レトロウイルスベクターの場合は、 センス鎖に相同な R NAを、 センスゥ ィルスべクタ一の場合には、 アンチセンス鎖に相同な R NAを選択する。 該組換えウィルスベクターを、 該べクタ一に適合したパッケージング細胞に導 入する。 パッケージング細胞としては、 ウィルスのパッケージングに必要な蛋白 質をコードする遺伝子の少なくとも 1つを欠損している組換えウィルスベクター の該欠損する蛋白質を補給できる細胞であればいかなるものでもよレ、。 例えば、 ヒト腎臓由来の HEK293細胞、 マウス繊維芽細胞 N I H3T 3などを用いる ことができる。 パッケージング細胞で補給する蛋白質としては、 レトロウイルス ベクターの場合はマウスレトロウイノレス由来の g a g、 p o l、 e n vなど、 レ ンチウィルスベクターの場合は H I Vウィルス由来の g a g、 p o l、 e n v、 v p r、 v p u、 v i f、 t a t, r e v、 n e f など、 アデノウイ/レスべクタ 一の場合はアデノウイルス由来の E 1 A、 E 1 Bなど、 アデノ随伴ウィルスの場 合は Re p (p 5, 19, p 40) 、 Vp (C a ) などの蛋白質があげられ る。
ウィルスベクターとしては、 上記パッケージング細胞において組換えウィルス が生産でき、 標的細胞で対象 DNAを転写できる位置にプロモーターを含有して いるものが用いられる。 プラスミ ドベクターとしては MFG[Proc. Natl. Acad.
Sci. USA, 92, 6733-6737 (1995)]、 pB a b e Pu r o [Nucleic Acids Res. , 18,
3587 - 3596 (1990)]、 LL— CG、 CL_CG、 CS— CG、 C L G [Journal of
Virology, 72, 8150-8157(1998)]、 p A d e x 1 [Nucleic Acids Res., 23,
3816 - 3821 (1995)]等が用いられる。 プロモーターとしては、 ヒ ト組織中で機能す るものであればいずれも用いることができ、 例えば、 サイトメガロウィルス （ヒ ト CMV) の I E (immediate early) 遺伝子のプロモーター、 SV40の初期プ 口モーター、 レトロウイノレスのプロモーター、 メタ口チォネインプロモーター、 ヒートショック蛋白質プロモーター、 SRaプロモーター等をあげることができ る。 また、 ヒト CMVの I E遺伝子のェンハンサーをプロモーターと共に用いて もよい。
パッケージング細胞への糸且換えウィルスベクターの導入法としては、 例えば、 リン酸カルシウム法〔特開平 2-227075号公報〕、リボフ クション法〔Proc. Natl.
、、 . Acad. Sci. USA, 84, 7413 (1987)〕 等をあげることができる。
また、 上記糸且換えウィルスベクターの投与方法としては、 上記の方法に加え、 リポソームデリバリーを用いる直接的イン ·ビボ（in vivo)遺伝子移入と組み合わ せることにより、 膝臓病巣にウィルスベクターを指向させるようにすることもで きる。 すなわち、 適当なサイズの対象 D N Aを、 アデノウイルス ·へキソン蛋白 質に特異的なポリリジン -コンジユゲート抗体と組み合わせてコンプレックスを 作製し、 得られたコンプレックスをアデノウィルスベクターに結合させることに より、 ウィルスベクターを調製することができる。 該ウィルスベクターは安定に 標的細胞に到達し、 エンドソームにより細胞内に取り込まれ、 細胞内で分解され 効率的に遺伝子を発現させることができる。
本発明においては、 対象 D NAあるいは siRNAもしくはアンチセンスポリヌク レオチドを発現するべクタ一は非ウイルス遺伝子移入法によっても病巣に輸送す ることができる。 "
当該分野で公知の非ウィルス遺伝子移入法には、 リン酸カルシウム共沈法 [Virology, 52, 456-467 (1973) ； Science, 209, 1414-1422 (1980) ]、 マイクロ インジェクション法 [Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77, 5399-5403 (1980) ； Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77, 7380-7384 (1980) ； Cell, 27, 223-231 (1981) ； Nature, 294, 92-94 (1981) ]、 リボソームを介した膜融合 -介在移入法 [Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 84, 7413-7417 (1987) ； Biochemistry, 28, 9508-9514 (1989) ； J. Biol. Chem. , 264, 12126—12129 (1989) ； Hum. Gene Ther. , 3, 267-275, (1992) ； Science, 249, 1285-1288 (1990) ； Circulation, 83, 2007-2011 (1992) ]あるいは直接 D N A取り込みおよび受容体-媒介 D NA移入法 [Science, 247, 1465-1468 (1990) ； J. Biol. Chem. , 266, 14338 - 14342 (1991) ； Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87, 3655-3659 (1991) ； J. Biol. Chem. , 264, 16985-16987 (1989) ； BioTechniques, U, 474-485 (1991) ； Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87, 3410 - 3414 (1990) ； Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88, 4255-4259 (1991) ； Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87, 4033-4037 (1990) ； Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88， 8850-8854 (1991) ； Hum. Gene Ther. , 3, 147-154 (1991)]等をあげることができる。
リボソームを介した膜融合一介在移入法ではリボソーム調製物を標的とする組 織に直接投与することにより、 当該組織の局所的な遺伝子の取り込みおよび発現 が可能であることが腫瘍に関する研究において報告されている [Hum. Gene Ther. 3, 399-410 (1992)]。 したがって同様の効果が瞎臓病巣でも期待される。 DNA を瞎臓病巣に直接標的化するには、直接 DN A取り込み技術が好ましい。受容体 - 媒介 DN A移入は、例えば、ポリリジンを介して、蛋白質リガンドに DN A (通常、 共有的に閉環したスーパーコィル化ブラスミドの形態をとる）をコンジユゲート することによって行う。 リガンドは、 標的細胞または組織の細胞表面上の対応す るリガンド受容体の存在に基づいて選択する。当該リガンド -DNAコンジユゲー トは、 所望により、 血管に直接注射することができ、 受容体結合おょぴ DNA - 蛋白質コンプレツタスの内在化が起こる標的組織に指向し得る。 DNAの細胞内 破壊を防止するために、 アデノウイルスを同時感染させて、 エンドソーム機能を 崩壌させることもできる。
以下の実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、 本発明は実施例によ つて限定されるものではない。 実施例
実施例 1 : 45株のヒ ト癌細胞株パネルからなる抗癌剤に対する感受性試験 細胞株としては、以下の 45種類を用いた。個々の引用のないものは以下に記述 がある （Yamori, T.， et. al. , Cancer Res, 59： 4042-4049, 1999. ) 。
乳癌 12 細胞株： HBC - 4， BSY-1, HBC- 5， MCF-7, MDA- MB- 231， KPL-3C (Kurebayashi, J. , et. al. , Br J Cancer, 74： 200-207, 1996. ) KPL- 4 ( Kurebayashi, J. , et. al. , Br J Cancer, 79： 707—717, 1999·), KPL—l ( Kurebayashi, J., et. al. , Br J Cancer, 71: 845—853， 1995·), T-47D ( Shiu, R. P., J Biol Chem, 255： 4278-4281, 1980.), HBC- 9, ZR - 75- 1 ( Engel, L. W. , et. al. , Cancer Res, 38: 3352—3364， 1978.), HBC - 8; 肝癌 12 細胞株： HepG2 ( Schwartz, A. L.， et. al. , J Biol Chem, 256： 8878-8881, 1981. ； ATCC番号 HB-8065) , Hep3B ( Liu, P.， et. al. , Int J Oncol, 16： 599-610, 2000. ；東北大学加齢医学研究所医用細胞資源センター TKG 0291) , Li-7 (東北大学加齢医学研究所医用細胞資源センター TKG 0368) , PLC/PRF/5 ( MacNab, G. M. , et. al. , Br J Cancer, 34： 509 - 515, 1976. ；ヒューマンサイエ ンス研究資源バンク JCRB0406) , HuH7 (Kaneko, S.， et. al. , Cancer Res, 55： 5283-5287, 1995. ；ヒューマンサイエンス研究資源バンク JCRB0403) , HLE ( Dor, I. , et. al. , Gann, 66： 385-392, 1975. ；ヒューマンサイエンス研究資源バンク JCRB0404) , HLF ( Dor, I.， et. al. , Gann, 66： 385 - 392， 1975. ；ヒューマンサ ィエンス研究資源バンク JCRB0405) , HuH6 ( Tanaka, M. , et. al. , Biochem Biophys Res Commun, 110： 837-841, 1983. ； 理化学研究所パイオリソースセン ター RCB1367) , RBE ( Fukutomi, M. , et. al. , Cell Biochem Funct, 19： 65—68, 2001. ； 理化学研究所パイオリ ソースセンター RCB1292) , SSP- 25 ( Fukutomi, M.， et. al. , Cell Biochem Funct, 19： 65 - 68, 2001. ；理化学研究所バイオリ ソ ースセンター RCB1293) , HuL-1 (Sorimachi, K. , et. al.， Cell Struct Funct, 13： 1 11, 1988. ； ) , JHH-1 (Fujise, K. , et. al. , Hepatogastroenterology, 37 : 457-460, 1990. ) ;
胃癌 21細胞株： St - 4， MKN1, MKN7, 画 28, 画 45, MKN74, GCIY (Nozue, M.， et. al. , Hum Cell, ： 71-75, 1991) , GT3TKB (Taraura, G.， et. al. , Jpn J Cancer Res, 87： 1153-1159, 1996) , HGC27 (Hassan, S. , et. al. , Dig Dis Sci, 43： 8-14, 1998) , AZ521 (Imanishi, K.， et. al. , Br J Cancer, 59： 761-765, 1989· )， 4 - 1st (Morisada, S. , et. al. , Jpn J Cancer Res, 80： 69 - 76， 1989. ) , NUGC—3, UGC-3/5FU (Inaba, M.， et. al.， Jpn J Cancer Res, 87： 212-220, 1996) , HSC— 42 (Nishiyama, M.， et. al. , Int J Cancer, 72： 649-656, 1997) , AGS (Barranco, S. C.， et. al. , Cancer Res, 43： 1703 - 1709, 1983) , KWS— 1, TGS— 11, GMK - 2 ( 別名 0KIBA) , 1st- 1 (Terashima, M. , et. al. , Jpn J Cancer Res, 82 : 883—885， 1991) , GMK - 3, GMK - 5 (別名 A0T0) . 全ての細胞株は RPMI1640 (Nissui Pharmaceutical) 培地 （5% 仔牛血清， penicillin (100 units/ ml) , streptomycin (100 /z g/ ml) を含む） 中で、 37。C、 5% C02存在下で培養した。
抗癌剤に対する感受性の評価は増殖抑制により行なった。 増殖抑制の測定は、 48時間薬剤接触を行った後の細胞内総蛋白質量の変化を sulforhodamine B アツ セィ法により測定した。 GI5。値 （50%の増殖抑制を示す抗癌剤濃度、 単位 mol/L) の計算は以下の文献に従った (Yamori, T. , et. al. , Cancer Res, 59： 4042-4049, 1999. Monks, A. , et. al. , J Natl Cancer Inst, 83： 757—766， 1991. ) 。 3連 の実験のメジアン値を GI50値とした。
用いた 51種の抗癌剤の推定作用機構と、 45細胞株のそれぞれに対する logl。GI50 の絶対値を表 1〜 5に示す。
表 1 乳癌細胞株の各種抗癌剤に対する感受性 （1
抗¾¾ 標的/作用機構 KPL- 3C KPL-4 KPL^ T-47D HBC-9 アクラ/レビシン DNA/RNA合成 7.11 7.63 7.95 7.39 7.08 ォキサリブラチン DMAクロスリンカ一 5.04 5.20 4.78 5.17 4.10 ァクチノマイシン - D RNA合成 8.90 9.05 9.04 8.89 8.24 HCFU ピリミジン 4.65 5.55 4.41 4.97 4.22
5 -フルォロウラシル ピリミジン 4.00 5.23 4.00 4.13 4.00 ドキシフルリジン ピリミジン 4.00 4.09 4.00 4.00 4.00 E7070 4.94 5.01 4.74 4.69 4.00 タモキシフェン πチチラヱプフ生nτチ ¾ i 'スト Pゲン受容体 5.14 5.49 4.93 5.31 4.90 トレミフェン エス^ュ体体体白トロケ'ン受容体 4.93 5.13 4.88 5.17 4.89
/ /反質反反
MS - 247 6.09 6.16 5.86 6.63 6.42 合 ^山ジ芯心
ダウノルビシン DNA合成ォ成/ Topo I 6.77 7.25 6.84 7.41 6.92 ドキソレビシン DNA合成/ Topo I 6.74 7.38 6.76 7.36 6.94 ェピルビシン DNA合成/ Topルo I 6.50 7.03 6.83 7.26 6.73 ミトキサントロン DNA合成 6.40 6.83 6.83 7.11 6.96 ピラルビシン DNA合成/ Topo I 8.62 9.00 8.39 9.00 8.22 トポテカン Topo I 6.37 6.71 5.90 7.51 6.18 カンプトテシン Topo I 6.67 6.60 6.70 7.12 5.80 ブレオマイシン DNA合成 4.00 5.59 4.00 5.46 4.46 ぺプロマイシン DNA合成 4.61 6.29 4.08 5.37 4.52 ネオカルチノスタチン DNA合成 6.42 7.61 6.18 7.26 7.06
TAS-103 6.45 7.20 6.17 7.25 6.16 ゲムシタビン ピリミジン 4.00 7.25 4.00 7.18 5.15 クラドリビン ピリミジン 4:60 4.73 4.00 4.83 4.23 シタラビン ピリミジン 4.00 5.02 4.00 4.00 4.00 エトポシド Topo II 4.00 5.42 4.68 5.93 4.48 アムサクリン Topo II 4.89 5.69 4.93 5.97 5.14
NK611 4.00 5.03 4.00 5.05 4.89
NK109 5.49 6.31 5.56 6.30 5.57 マイトマイシン C DNAアルキレータ— 5.46 6.40 5.50 5.42 5.49 メトトレキサ一ト DHFR 4.00 7.53 5.25 4.00 4.00 ラァイシ ra—ル HSP90/Tyrキナーセ' 5.19 6.13 5.28 7.43 5.39 ビンプラスチン ン 9.17 9.77 9.13 9.15 6.00 ビンクリスチン ン 9.12 9.57 9.31 9.22 6.00 ビノレノレビン ン 8.33 9.35 8.93 8.41 6.00 パクリタキセル ン 7.38 8.20 7.53 7.90 6.00 ドセタキセノレ ン 8.18 8.82 8.19 8.56 6.00 ドラスタチン 10 10.02 10.74 9.44 9.95 8.00 コノレヒチン チュ一ブリン 7.58 8.48 7.89 6.64 5.00
E7010 5.38 6.69 5.71 6.29 5.50 メノレファラン DNAクロスリンカ一 4.67 4.04 4.66 4.38 4.08 レプトマイシン B 9.59 9.47 9.63 9.26 8.96 力ノレポプラチン DNAクロスリンカ一 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 シスプラチン DNAクロスリンカ一 4.72 5.52 4.63 4.56 5.35 4 - HPO - CPA 4.78 4.54 4.74 4.86 5.18
6 -メルカプトプリン 5.11 4.50 5.02 6.00 4.27 6 -チォグァニン 5.92 5.55 5.91 5.81 4.53
L-ァスパラギナ一ゼ 6.03 7.20 6.18 6.10 5.49 エストラムスチン 4.85 4.56 4.31 4.17 4.74 インターフェロン - α 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 インタ一フエロン- β 4.23 7.08 4.00 4.00 4.00 インタ一フエロン- 7一 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 乳癌細胞株の各種抗癌剤に対する感受性 （ 2 )
MDA- B 抗癌剤 ZR-75-1 HBC-8 HBC-4 BSY-1 HBC-5 MCF-7
-231 アクラルビシン 8.03 7.93 7.04 8.69 7.92 7.86 7.83 ォキサリブラチン 5.08 6.17 5.79 5.75 5.40 5.69 4.75 ァクチノマイシン - D 8.98 9.60 9.20 9.10 8.85 9.45 8.71
HCFU 4.68 4.84 4.36 5.17 4.44 5.13 4.57
5 -フル才ロウラシノレ 4.70 5.11 4.43 4.87 4.40 5.12 4.18 ドキシフルリジン 4.14 4.19 4.00 4.42 4.00 4.00 4.00
E7070 4.38 4.98 4.50 6.20 4.22 4.50 4.35 タモキシフェン 4.95 5.53 4.95 5.42 5.01 5.04 4.90 トレミフェン 4.88 4.86 4.81 5.12 4.87 4.96 4.85
MS - 247 6.88 6.71 . 6.08 6.79 5.32 6.78 5.98 ダウノルビシン 7.39 7.97 6.96 7.34 6.82 7.68 6.83 ドキソノレビシン 7.12 7.85 7.13 7.26 6.85 7.58 6.66 ェピノレビシン 7.90 7.19 6.08 6.90 6.59 7.08 6.42 ミトキサントロン 8.02 7.44 6.28 7.12 6.00 8.06 6.50 ピラルビシン 9.00 9.00 8.97 9.00 8.34 9.00 8.47 トポテカン 7.20 7.61 5.84 6.57 5.10 8.00 5.55 カンプトテシン 7.21 6.92 5.92 6.57 6.04 7.63 5.86 ブレオマイシン 4.22 4.37 4.81 4.89 4.00 4.48 4.00 ぺプロマイシン 4.72 5.25 4.90 5.84 4.00 5.22 4.27 ネオカルチノスタチン 7.26 8.10 7.35 8.00 6.03 8.17 6.55
TAS-103 7.13 7.60 6.81 7.22 6.37 7.66 6.57 ゲムシタビン 4.71 5.75 6.74 5.62 4.00 8.00 5.20 クラドリビン 4.00 4.68 4.00 4.00 4.00 4.00 5.41 シタラビン 4.00 4.54 4.00 4.00 4.00 6.40 4.00 エトポシド 5.11 4.72 4.88 5.48 4.39 6.15 4.66 アムサクリン 6.56 5.70 5.20 5.78 5.29 6.56 5.25
NK611 5.74 4.71 4.67 4.82 4.02 6.02 4.48
NK109 6.08 5.81 5.69 5.88 5.27 6.37 6.04 マイトマイシン C 5.74 6.69 5.90 6.68 5.68 6.99 5.14 メトトレキサ一ト 4.00 4.00 7.11 5.19 4.00 7.53 4.00 ラデイシコーノレ 6.18 6.62 5.55 5.80 5.17 7.28 6.55 ビンブラスチン 7.58 7.99 9.22 9.76 9.22 9.68 8.67 ビンクリスチン 8.41 6.20 8.77 9.72 9.29 9.42 8.67 ビノレノレビン 8.16 6.00 8.45 9.23 8.51 8.85 8.23 パクリタキセル 7.05 6.59 7.30 8.43 7.94 7.72 7.37 ドセタキセノレ 7.15 8.28 8.41 8.98 8.23 8.52 7.88 ドラスタチン 10 9.46 8.67 9.15 10.83 11.19 10.26 9.07 コノレヒチン ■ 7.84 6.59 6.06 8.68 6.33 6.48 7.24
E7010 6.04 4.72 4.37 6.56 4.00 6.14 5.07 メノレファラン 4.45 4.57 4.20 4.92 4.42 5.09 4.33 レプトマイシン B 9.78 9.74 9.35 9.64 9.33 9.44 8.91 カルポプラチン 4.00 4.00 4.00 4.34 4.12 4.00 4.00 シスプラチン 4.71 · 5.39 4.90 5.69 5.65 5.09 4.56
4-HPO-CPA 4.76 4.78 4.78 4.85 5.41 5.58 4.68
6 -メルカプトプリン 4.05 4.50 5.41 4.73 4.15 5.88 5.17
6 -チォグァニン 5.21 5.66 4.59 5.85 5.40 5.86 5.80
L -ァスパラギナーゼ 6.07 6.36 6.55 6.63 4.00 6.43 6.01 エストラムスチン 4.00 4.73 4.09 4.51 4.00 4.00 4.66 インタ一フエロン一 QJ 4.00 5.02 4.00 7.71 4.00 4.00 4.23 インターフェロン- β 4.00 4.56 4.00 8.00 4.00 4.00 6.40 インタ一フエロン- γ 4.00 4.00 7.69 7.93 4.00 4.00 4.00 表 3 肝癌細胞株の各種抗癌剤に対する感受性
"Θ 2 Ρ Li- 7 p^p ' HLE HLF HuH6 RBE SSP- 25 HuL- 1 JHH アクラルビシン .13 7.77 7.39 7.68 8.29 7.49 7.86 7.70 7.87 7.39 —•23 ォキサリブラチン .07 5.39 5.78 5.61 6.44 4.90 4.75 5.60 5.19 4.58 6.01 ァクチノマイシン- D .03 8.61 8.24 8.04 8.99 8.13 8.45 8.75 8.25 8.47 9.00 HCFU .28 4.80 4.79 4.56 4.99 4.67 4.70 4.50 4.92 4.69 4.63
5-フルォロウラシノレ .27 4.20 4.26, 4.21 08 4.00 4.19 4.00 4.60 4.00 4.72 ドキシフルリジン .49 4.00 4.00 4.00 00 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 E7070 .47 4.99 4.77 4.44 36 4.61 4.43 4.74 .09 4.29 4.87 タモキシフェン ,45 5.30 5.23 4.79 09 5.02 4.97 5.38 .90 5.11 4.97 トレミフェン .06 4.97 4.92 4..8； 2 99 5..09 4.91 4.95 .92 5..00 5.10 MS - 247 .33 5.84 6.35 5..23 02 6..58 6.42 5.82 .66 6..37 6.82 ダウノルビシン 7.48 10 6.83 6..39 29 7..55 .49 6.98 .18 6..73 7.51 ドキソノレビシン .29 77 6.88 5..83 04 7..39 .25 6.87 .89 6..68 7.31 ェピノレビシン .33 86 6.87 6..29 31 7..21 .25 6.91 .84 6..73 7.03 ミトキサントロン .95 51 7.88 6..51 76 1.：60 .67 6.71 .37 7..59 7.15 ビラ/レビシン ,00 58 9.00 8..26 00 9•.00 .00 8.59 .98 9..00 9.00 トポテカン .93 81 7.70 5.·6' 4 07 7..73 .73 5.72 .83 6..74 6.99 カンプトテシン .44 19 7.48 5..86 35 7..42 .53 6.10 .69 6..79 6.92 ブレオマイシン ,02 38 5.66 4..0' 0 4.85 6..04 .59 4.15 .73 4..97 4.94 ぺプロマイシン 73 72 6.40 4.45 5.46 5..86 .56 4.01 .12 5..83 5.34 ネオカルチノスタチン ,22 72 7.81 6.34 6.92 7..60 .80 6.57 .27 7..53 7.09 TAS-103 .56 57 7.68 6.64 6.95 7..81 .87 6.55 .32 6..89 6.94 ゲムシタビン .00 63 8.00 4.00 6.16 7..83 .00 4.19 .56 7..24 5.85 クラドリビン ,05 30 4.00 4.86 4.00 4..00 .85 5.45 4.00 4.86 4.00 シタラビン .22 00 4.00 4..00 4.00 5..22 .41 4.00 4.00 4.00 4.00 エトポシド ,62 4.86 5.56 4..60 4..92 5..80 .70 5.05 4.85 5.35 5.09 アムサクリン 6.41 .56 6.66 5..47 5..77 6..58 .61 5.43 5..90 5.98 5.46 腿 11 5.56 .66 5.70 4..54 4..73 5..75 .84 4.57 5..20 5.54 4.66 NK109 6.56 .96 6.72 5..85 6..05 6..83 .77 5..84 6..24 6.39 6.09 マイトマイシン C 6.56 .04 7.09 5..63 5..73 6..15 .31 5.•38 5..32 6.20 5.99 メトトレキサート 7.47 .00 6.11 4..00 6..12 6..64 .83 4.00 6..71 4.06 5.13 ラデイシコーノレ 7.87 .08 6.43 6..16 6..46 6..63 .83 6..03 5..52 5.61 5.68 ビンブラスチン 8.18 .50 9.30 7..73 9..35 9..73 .20 7..22 6..00 9.51 9.66
4448600006626850790880896963037795950820633 97271111 ビンクリスチン 7.93 .00 7.70 6..00 8..43 8..75 .28 7..05 6..00 8.51 448544629000600004520244894 ο 0575055251899705111771 7· 9.21 ビノレノレビン 7.98 .00 8.15 6..00 8..43 8..75 .28 7..05 6..00 8.51 9.21 パクリタキセノレ 7.35 .84 7.41 6.48 7..44 7..50 .27 6..00 6..73 7.80 7.94 ドセタキセノレ 8.08 .11 7.83 6.80 8..23 8..09 .08 6..00 6..14 8.50 8.50 ドラスタチン 10 10.42 .94 10.71 9.50 10.12 10.19 .94 8..60 8..00 10.30 10.6： コルヒチン 7.16 .40 7.25 6.43 7.62 7.77 .39 5..54 5..00 7.50 8.17
E7010 6.28 .62 6.38 6.23 6.35 6.47 .35 4..79 4.00 6.50 6.50 メノレファラン 4.76 4.47 4.62 4.00 4.44 4.59 4.81 4.03 4.39 4.40 4.86 レプトマイシン B 9.67 9.32 9.44 9.19 9.10 9.31 9.37 9.00 9.29 9.51 9.66 カルポプラチン 4.18 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 4.53 シスプラチン 5.53 5.32 5.51 4.75 5.63 5.36 5.45 5.26 4.73 4.94 5.86
4-HPO-CPA 4.92 4.74 4.88 4.65 4.84 4.87 5.04 4.82 4.69 4.90 5.30
6-メルカプトプリン 5.01 4.10 5.12 4.42 4.00 4.17 4.49 4.90 5.29 4.58 5.1C 6-チォグァニン 5.08 4.57 5.23 5.37 4.70 4.22 5.14 6.04 5.76 5.18 6.14
L -ァスパラギナーゼ 6.40 4.78 8.00 6.49 4.00 6.91 6.63 4.00 6.35 8.00 4.42 エス卜ラムスチン 4.00 4.00 4.27 4.24 4.05 4.37 4.03 4.10 4.14 4.18 14 インタ—フエロン一 α 4.00 4.00 4.20 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 4.0C インタ一フエロン一 β 4.00 4.00 7.15 6.17 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 4.0C インターフェロン一 γ 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 .92 表 4 胃癌細胞株の各種抗癌剤に対する感受性 （1 )
抗癌剤 GCIY ^ H„G 7 C AZ521 4- 1st N^C ^^^― HSC- 42 AGS KWS-1 アクラノレビシン 8.00 7.86 7.13 8.49 7.96 04 7.51 27 7.96 8.31 ォキサリブラチン 5.71 5.31 5.10 6.16 5.17 18 5.23 58 6.26 7.02 ァクチノマイシン - D 8.24 9.12 8.76 9.55 8.80 85 8.56 99 9.22 9.55 HCFU 4.77 5.09 4.74 5.21 4.84 74 4.36 00 4.71 4.27
5 -フルォロウラシル 4.60 5.09 4.34 5.12 4.04 67 4.00 02 4.50 4.06 ドキシフノレリジン 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 02 4.00 4 26 4.00 4.00 E7070 5.04 4.82 5.69 6.02 4.88 75 4.39 4 46 5.25 4.96 タモキシフェン 4.92 5 ..19 5..25 5•.11 4.87 06 4.86 59 4.93 5.20 トレミフェン 4.85 4..92 5..07 5..09 4.87 96 4.85 4.93 5.07 MS- 247 5.71 6..88 6..76 7..58 7..09 62 5.64 6.74 6.67 ダウノルビシン 6.79 7..55 7..17 7..98 7..18 74 6.85 6.99 6.93 ドキソノレビシン 6.39 7..14 6..86 7..87 6..'68 66 6.47 53 6.91 6.90 ェピノレビシン 6.53 7..10 6..71 8..00 7..02 68 6.13 02 7.12 6.91 ミトキサントロン 6.87 7..82 6..83 8..79 7..38 59 6.18 75 7.21 6.74 ピラルビシン 8.81 9..00 8..56 9..00 8..86 00 8.65 00 8.99 8.58 トポテカン 6.61 7..83 5..64 7..74 8.•00 68 5.82 54 6.07 6.39 カンプトテシン 6.81 ■7..53 5..49 7..6' 1 7..75 73 6.00 23 6.36 6.64 ブレオマイシン 4.00 6..21 4..22 7..18 6..03 75 4.00 19 4.00 4.00 ぺプロマイシン 4.39 5..96 4.68 7..32 6..16 4.92 4.05 82 4.65 4.08 ネオ力ノレチノスタチン 6.95 7..74 6.92 8..58 7..59 .00 6.54 .78 6.84 6.60 TAS-103 6.96 7..97 6.81 8..51 7.40 .76 6.45 .98 6.94 6.45 ゲムシタビン 6.18 7..57 4.00 8..00 6.68 .70 4.00 65 4.00 4.06 クラドリビン 4.00 5..56 4.00 6..52 4.43 .42 4.00 4 56 4.00 4.00 シタラビン 4.00 6..38 00 6..56 5.68 .76 4.00 5 60 4.00 4.00 エトポシド 4.96 5..55 22 6..23 5.80 .90 4.72 6 .13 5.13 4.41 アムサクリン 5.75 6..55 50 6..98 6.44 .68 4.91 6 30 5.71 4.99 N 611 .97 5..75 05 5..99 5.72 .14 4.12 17 4.78 4.36 NK109 .58 6..92 29 6..90 6.66 .78 5.95 47 6.63 5.68 マイトマイシン C .75 6..17 74 6..45 5.99 .28 5.58 .23 5.86 5.75 メトトレキサ一ト .06 7..04 49 7..37 7.33 .32 4.00 53 7.81 4.00 ラデイシ： ル .40 6.89 00 6..6' 3 7.42 .08 5.71 07 6.78 6.80 ビンブラスチン .58 9.88 37 9..76 9.85 •53 8.20 69 9.80 9.28 ビンクリスチン 12 9.30 91 9..36 9.61 .94 7.12 24 9.35 9.41 ビノレノレビン .96 9.22 37 8..89 8.83 .87 7.13 86 8.87 8.58 パクリタキセル .77 8.15 70 8..09 7.86 .15 6.49 ,74 7.96 8.03 ドセタキセノレ .93 8.85 19 9..0' 8 8.50 .51 7.21 63 8.47 8.49 ドラスタチン 10 10.51 10.60 23 10.42 10.53 10.35 8.89 .50 10.44 10.13 コルヒチン 7.34 7.78 65 70 8.69 7.53 5.98 19 8.34 7.45
E7010 6.39 6.69 6.08 69 6.67 6.40 4.37 47 6.64 6.27 メ 7レファラン 4.55 4.59 4.72 18 5.26 5.32 4.56 27 4.00 5.00 レプトマイシン B 9.15 9.48 9.57 81 9.69 9.54 9.12 53 8.66 9.16 カルボプラチン 4.00 4.14 4.00 00 4.24 4.97 4.00 16 4.00 4.00 シスプラチン 5.35 5.46 4.75 12 5.60 6.52 4.80 55 4.74 5.71
4-HPO-CPA 4.85 4.81 4.80 30 5.25 5.33 4.78 44 4.70 4.68
6 -メルカプトプリン 4.45 5.21 5.47 54 5.97 5.03 5.19 86 4.95 4.55 6 -チォグァニン 5.83 5.57 5.83 21 6.53 5.36 5.50 61 5.79 5.92
L -ァスパラギナーゼ 5.30 6.70 5.78 72 6.34 6.51 6.63 93 6.51 4.94 エス卜ラムスチン 4.29 4.45 4.34 20 5.11 4.48 4.08 4 74 4.42 4.02 インターフェロン一 4.00 4.00 4.00 00 4.00 4.00 4.00 4 00 4.00 4.51 インターフェロン一 β 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 4 00 4.00 6.02 インターフェロン一 y 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 4 00 4.00 4.00 表 5 胃癌細胞株の各種抗癌剤に対する感受性 （2 )
^ンン
タタ GM GMK GM KN KN KN MKN
-2 1 1 一 3 -5 一4 1 7 28 45 アクラ/レビシン 7.20 7.19 8.54 7.57 7.88 8.09 7.73 7.25 8.59 7.43 ォキサリブラチン 5.85 5.14 5.46 4.78 4.75 5.04 4.42 4.58 6.84 4.93 ァクチノマイシン - D 9.35 8.77 9.39 8.88 7.99 8.74 8.77 9.02 9.39 9.20 HCFU 5.10 4.15 4.23 4.44 4.17 4.70 4.82 4.77 5.56 4.86
5 -フルォロウラシル 6.38 4.00 4.42 4.09 4.35 4.40 4.26 4.27 5.46 4.22 ドキシフルリジン 4.18 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 4.01 4.00 4.20 4.00 E7070 6.05 4.83 6.69 4.97 4.43 6.03 4.90 5.48 4.55 5.20 タモキシフェン 5.58 4.93 5.43 5.13 4.95 4.89 5.44 5.23 5.13 5.67 トレミフェン 5.58 4.88 5.50 5.24 4.81 4.92 4.90 4.82' 4.93 5.23 MS - 247 6.20 5.70 5.70 5.63 5.66 5.72 6.27 5.59 7.32 6.62 ダウノルビシン 7.59 6.37 6.94 6.80 6.60 7.30 6.98 7.03 7.66 6.88 ドキソ /レビシン 8.00 6.01 6.34 6.54 6.39 7.45 6.79 6.71 7.32 6.70 ェピノレビシン 7.12 5.99 7.00 6.51 7.21 7.53 6.85 6.60 7.35 6.60 ミトキサントロン 8.56 5.76 6.14 6.37 6.82 7.52 6.57 6.52 7.79 6.68 ピラルビシン 8.81 8.16 8.68 8.57 8.31 8.97 8.55 8.57 9.00 8.53 トポテカン 6.10 6.70 6.90 6.85 7.21 6.27 5.54 5.81 8.00 5.62 カンプトテシン 6.81 6.43 6.72 6.96 7.13 6.39 5.82 5.50 7.99 5.62 ブレオマイシン 5.55 4.00 4.81 4.58 4.00 4.61 4.03 4.00 4.54 4.22 ぺプロマイシン 5.92 4.23 5.04 4.78 4.00 4.80 4.56 4.09 5.18 4.82 ネオカルチノスタチン 7.05 6.54 6.74 7.24 6.17 6.92 6.58 6.47 8.38 7.19 TAS-103 6.89 6.24 6.45 7.74 5.75 7.54 6.50 6.56 7.50 6.43 ゲムシタビン 6.76 4.86 5.82 7.27" 4.09 6.17 4.45 4.00 8.00 5.38 クラドリビン 6.41 4.00 4.00 4.24 4.11 4.51 4.00 4.00 6.88 4.00 シタラビン 7.32 4.00 5.58 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 6.41 4.00 エトポシド 8.00 4.73 5.10 5.79 4.67 5.79 4.59 4.51 5.43 4.22 アムサクリン 6.60 5.06 5.57 6.29 5.30 6.24 5.01 4.96 6.43 5.34 NK611 6.25 4.57 4.80 5.75 4.70 5.63 4.57 4.37 5.67 4.29 NK109 7.27 5.79 5.91 6.86 6.02 6.66 5.88 5.76 6.51 5.62 マイトマイシン C 5.56 5.32 6.03 5.86 4.93 5.00 5.33 5.10 7.09 5.56 メトトレキサート 6.66 4.00 4.00 4.00 7.27 7.04 4.00 4.00 7.15 4.00 ラテイシコール 6.80 5.76 6.38 6.74 6.96 6.59 5.88 5.66 6.44 6.15 ビンブラスチン 9.71 7.04 8.12 8.33 6.17 9.62 7.60 9.64 9.04 9.25 ビンクリスチン 10.00 6.00 7.46 8.20 6.37 9.36 8.60 8.58 8.42 9.13 ビノレノレビン 9.79 6.00 8.25 8.64 6.00 8.60 8.51 8.59 8.42 8.53 パクリタキセル 8.29 6.52 7.79 7.52 6.87 7.68 7.50 7.48 7.89 7.16 ドセタキセノレ 8.46 7.33 8.68 8.27 7.05 8.06 8.10 8.32 8.47 7.71 ドラスタチン 10 11.86 8.69 10.09 10.26 9.41 9.56 10.27 10.18 9.75 10.29 コノレヒチン 8.74 6.05 7.56 7.84 7.76 7.99 7.28 7.90 7.75 7.51 E7010 6.88 4.51 5.50 5.36 6.06 6.21 6.26 6.35 6.02 6.15 メルファラン 4.62 4.15 4.73 4.67 4.47 4.70 4.19 4.00 4.79 4.36 レプトマイシン B 9.71 8.82 9.76 9.49 9.45 9.44 9.36 9.25 9.45 9.50 力ノレポプラチン 4.62 4.00 4.00 4.26 4.00 4.25 4.00 4.00 4.00 4.00 シスプラチン 5.79 5.43 5.57 5.51 4.78 5.61 5.07 4.66 5.47 4.48 4-HPO-CPA 5.17 4.61 4.66 4.78 4.37 4.77 4.81 4.92 5.13 4.76
6 -メルカプトプリン 4.85 4.00 4.00 4.00 4.21 5.58 4.67 5.21 5.39 5.86 6 -チォグァニン 6.10 4.00 4.46 4.36 6.18 6.13 5.49 5.46 5.66 5.74
L-ァスパラギナーゼ 6.52 4.00 5.56 4.00 6.32 6.32 6.64 6.54 6.65 6.91 エストラムスチン 4.79 4.59 4.95 4.76 4.21 4.21 4.00 4.00 4.20 4.72
~フエ Dンー a 4.20 4.62 4.62 4.16 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 4.51 —フエロン一 β 4.93 4.77 6.28 6.54 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 —フエロン一 y 4.00 4.00 5.06 4.00 4.00 4.07 4.00 4.00 4.00 4.00 45種のヒト癌細胞株の感受性を元に 51種の抗癌剤の階層的クラスタリングを 行った結果を図 1に示す。 階層的クラスタリングは Gene Springソフトウエア （ Silicon Genetics社） により、 群平均法（average linkage method)を用いて行つ た。 データ間の距離としては、 2抗癌剤間の各細胞の logl。GI5。の絶対値の分布か ら求めたピアソンの相関係数を用いた。
2つの抗癌剤 logl。GI5。の絶対値の分布から求められるその結果、 51の薬剤を数 個のクラスターに分けることが可能であつたが、 それぞれのクラスターは類似の 作用機構を有する複数の薬剤を含んでいた。 例えば、 あるクラスターにはカンプ トテシン、 トポテカンなどのトポイソメラーゼ Iの阻害剤が、 第二のクラスター にはタキサン系抗癌剤 （パクリタキセル、 ドセタキセル） とビン力アルカロイド 系抗癌剤 (ビンブラスチン、 ビンクリスチン、 ビノレルビン） などの微小管作用 薬 （tubulin binder) が集まり、 5 -フルォロウラシルとその誘導体も一つのクラ スターに集まった。この結果は、発明者らのこの 45細胞を用いるシステムにより、 多数の薬剤を作用機構に基づいて分類分けすることが可能であることを示してい る。 実施例 2 ：遺伝子発現プロフアイルによる 42ヒト癌細胞のクラスタリング 上記 45細胞からなるヒト癌細胞パネルのうち、 HBC- 9、 HBC - 8、 GMK- 3の 3細胞 を除く 42細胞株を用いて、 3537の遺伝子の発現を cDMアレイにより測定した。 く cDNAァレイによる遺伝子発現の測定 >
cDNAアレイとしては、 Atlas™ human3. 6 array (BD Biosciences Clontech社） を用い、 2度繰り返した。実験は Clontech社の製品説明書に従って行ったが、以 下に簡単に述べる。 細胞株は対数増殖期に処理し、 全 R A (Total R A)を Trizol 試薬（Invi rogen社）を用いて抽出し、 RNeasy Kit (Qiagen社）を用いて精製した。 精製した Total RNAを Atlas™ Pure Total RNA Labeling System (BD Biosciences Clontech社）を用いた逆転写により 32Pで標識した cDNAプローブに変換した。 こ の cDNAプローブは、 Atlas Arrayに 68°C、 ー晚、 ハイブリダイズし、 その後洗浄 した。 ハイブリダィズ済みのアレイは、 Phosphorlmager (Molecular Dynamics社） によってスキャンしシグナルを検出した。 検出したデータは Atlas™ Image 2. 0 software (BD Biosciences Clontech社）によって数値化され、 全ての遺伝子の 90 パーセンタイルの値で割算することにより、 標準化された。 2回の繰り返し実験 で 2倍以上の異なる値を示した遺伝子は解析から除いた。 90パーセンタイルの値 の 30%の値を閾値と設定し、 閾値より低い値に対しては、 閾値の値を与えた。 こ のデータ処理を行った後で、 2を底として対数値に変換した。
この発現プロファイルの結果を元に、 細胞を階層的クラスタリングにより分類 した。 階層的クラスタリングは Gene Springソフトウェア （Silicon Genetics社 ) により、 群平均法を用いて行っ 。 データ間の距離としては、 2細胞間の各抗 癌剤の logl。GI5。の絶対値の分布から求めたピアソンの相関係数を用いた。
クラスタリングの結果を図 2に示す。 同じ組織由来の細胞株がクラスターを形 成する傾向が見られた。 即ち、 KPL- 4 を除く乳癌細胞株が一つのクラスターにま とまった。 また、 肝癌細胞株についても、 数個の胃癌細胞株が間に挿入されたも のの、 HLE を除いて一つにまとまった。 胃癌細胞株については、 大枠で 2つのグ ループにまとまった。 以上の結果は、 遺伝子発現プロファイルの結果から見る限 り、 樹立された細胞株も由来した組織の性質を維持していることを示すものであ る。 実施例 3 ：遺伝子発現プロファイルと抗癌剤に対する感受性の相関解析
抗癌剤に対する感受性に関係する遺伝子群を探索するため、 実施例 1と実施例 2でそれぞれ得られた遺伝子発現と抗癌剤に対する感受性の 2つのデータベース を統合し、 その相関解析を行った。 42 の細胞株について、 3537遺伝子の発現と 51の抗癌剤に対する感受性を用いて、 ピアソンの相関係数の包括的な計算を行つ た。 用いた計算式は以下の通りである。
Figure imgf000049_0001
ここで、 . は細胞 iにおける遺伝子 X の発現量対数表示を示し、 ダ. は細胞 I の抗癌剤ダに対する感受性の対数表示の絶対値（| logl。GI5。| ) を示す。 xm は遺伝 子； rの発現量の対数表示の平均値 (mean)を示し、 y は抗癌剤ダ に対する感受性 の対数表示の絶対値（| log1QGI5。| )の平均値を示す。 P値が 0. 05未満 （p < 0. 05) のものを有意な相関と見なした。
「Pく 0. 05かつ全細胞の 50%以上で発現が見られる」 という制限で、 「抗癌剤に 対する感受性と有意に相関のある発現を示す遺伝子」 を選抜した。 51の抗癌剤の それぞれに対して異なる遺伝子のセットが抽出された。 表 6から表 1 1には、 全 42 細胞を用いた際の、 MMC、 ビノレルビン、 パクリタキセルに対する感受性と相 関する遺伝子のセットを示す。 即ち、 表 6から表 1 1は、 抗癌剤に対する感受性 と有意に相関する遺伝子のリストを示す。 MMC (表 6及び表 7 )、 ビノレルビン（ 表 8及び表 9 )並びにパクリタキセル (表 1 0及ぴ表 1 1 ) について、 42細胞株で の相関解析結果を示す。 "遺伝子" の欄は HUGO databaseでの遺伝子名を示す。 "相関係数" は抗癌剤に対する感受性とその遺伝子の発現の間のピアソンの相関 係数の値を示す。 表 6 、 8及び 1 0 ( "感受性" と付記） は、発現が強いと感受 性である遺伝子を示し、 表 7 、 9及び 1 1 ( "耐性" と付記） は、 発現が強いと 耐性である遺伝子を示す。
マイトマイシン C感受性と相関する遺伝子 （感受性） 順位 遺伝子 ^enBank P値 'レ、 ¾1¾丁 登録番吾
1 SF1 D26121 0.566 0.001
2 CBR3 AB004854 0.486 0.006
3 EMS1 M98343 0.480 0.010
4 JUN J04111 0.473 0.015
5 SFRS9 U30825 0.448 0.010
6 固 BR M73482 0.428 0.012
7 RBMX Z23064 0.419 0.012
8 SOD1 M13267 0.418 0.024
9 NOLI X55504 0.415 0.025
10 PEし PI U88153 0.405 0.019
11 ARHA L25080 0.404 0.030
12 AARS D32050 0.398 0.018
13 NME1 X17620 0.398 0.032 係相
14 HNRPA2B1 M29065. 0数関.390 0.044
15 NME2 L16785 0.378 0.025
16 VAT1 U18009 0.376 0.031
17 SERPINBIO U35459 0.372 0.028
18 KIAA0436 AB007896 0.353 0.041
19 DRPLA D31840 0.350 0.049
20 MC3R L06155 0.346 0.049
マイトマイシン C感受性と相関する遺伝子 （耐性)
GenBank 相関
順位 遺伝子 P値
"^ 係数
Figure imgf000051_0001
5 PACE X17094 0,035
6 DVL2 AF006012 -0.370 0.034
7 LOC54543 AJ011007
Figure imgf000051_0002
0.022
8 PAPOLA X76770 -0.351 0.033
9 RPし P2 M17887 -0.345 0.049
10 ARF4し L38490 0.042
o o
寸 oo
o o
ビノレルビン感受性と相関する遺伝子 （感受性)
GenBank 相関
順位 遺伝子 P値
Figure imgf000052_0001
2 NME2 L16785 0.521 0.001
3 VIL2 X51521 0.463 0.015
4 YWHAQ X56468 0.450 0.011
5 HK1 M75126 0.449
6 SATB1 M97287 0.439 0.006
7 CAMLG U18242 0.439 0.007
8 CARS L06845 0.433 0.007
Figure imgf000052_0002
10 U2AF1 M96982 0.424 0.022
11 PTMA M26708 0.423 0.018
12 MLCISA 31211 0.397 0.022
o o
Figure imgf000052_0003
25 NRGN Y09689 0.336 0.042
26 K - ALPHA - 1 K00558 0.328 0.048
27 NDUFB7 M33374 ' 0.321 0.049 ビノレルビン感受性と相関する遺伝子 （耐性)
GenBank 相関
順位 遺伝子 P値 登録番号 係数
1 HOXB1 X16666 - 0.600 0.000
2 F10 謹 194 -0.514 0.002
3 GPX2 X53463 - 0.509 0.002
o
J -
Figure imgf000053_0001
19 RARA X06614 -0.369 0.029
20 ITGB4 X53587 0.042
21 IMPA1 X66922 -0.367 0.042
22 PACE X17094 -0.367 0.042
23 AGA M64073 -0.361 0.042
24 MVD ■260 -0.353 0.038
25 EHHADH L07077 -0.346 0.039
26 TFPI2 D29992 -0.343 0.035
27 MARCKS M68956 -0.342 0.045
28 FGB 扉 29 -0.334 0.035
29 GPD1 L34041 -0.322 0.049 パクリタキセル感受性と相関する遺伝子 （感受性) u-enBank 相関
順位 遺伝子 P値 係数
1 ADH6 68895 0.513 0.002
2 RAB28 X94703 0.480 0.007
3 U2AF1 M96982 0.441 0.017
4 GPC1 X54232 0.440 0.013
5 HK1 M75126 0.439 0.020
6 CARS L06845 0.436
7 TNFAIP3 59465 0.433
8 K- ALPHA - 1 議 558 0.418
9 PFKP D25328 0.416 0.012
10 GDI2 D13988 0.411
11 VIL2 X51521 0.410 0.034
12 RUNX2 AF001450 0.409 0.038
13 NME2 L16785 0.407 0.015
14 CDC20 U05340 0.395 0.025
15 GNAI2 Χ04828 0.391 0.033
Figure imgf000054_0001
o ο ο ο
PPP2R2B 64930 0.376 0. ο ο02 o6
C
19 SLC6A8 L31409 0.374 0.04 οO
6
20 DDX9 LI 3848 0.374 0.042
21 ACATl D90228 0.369 0.038
22 PI3 Z18538 0.328 0.047
パクリタキセル感受性と相関する遺伝子 （耐性) -, GenBank
意 fe子 P
1 NAP1L1 M86667 -0.530 0.004
2 HOXB1 X16666 -0.516 0.004
3 PACE X17094 -0.507 0.004
4 MAN2B1 U60266 -0.486 0.003
5 GPX2 X53463 -0.480 0.004
6 DBN1 ■802 -0.469 0.006
7 ANXA4 M19383 -0.468 0.007
8 SERPINF2 D00174 0.003
9 AGA 64073 -0.444 0.011
10 BCL2L1 Z23115 -0.428 0.021
11 LIPC X07228 0.015
12 BDH 93107 -0.393 0.026
13 LSS D63807 -0.384 0.030 係相
14 PDLIMl U90878 . - d o 0数関..寸372 0.033
15 ZNF161 D28118 -0.3D o6 C8 0.038
16 UBE2E1 X92963 -0.363 0.032
17 TLE1 M99435 -0.360 0.039
18 RARA X06614 -0.359 0.034
19 PTPRN L18983 -0.357 0.035
20 APOE M12529 -0.353 0.048
21 F10 K03194 -0.348 0.040
22 NR1I2 AF061056 -0.342 0.041
23 UBE2L3 X92962 -0.332 0.045
24 FGB J00129 一 0.313 0.049
表 6及び表 7に示す通り、 MMCの場合、 20個の遺伝子が感受性遺伝子 （感受性 株で高発現） 、 10個の遺伝子が耐性遺伝子 （耐性株で高発現） 、 として選抜され た。 これらの遺伝子のうち、 JUN, EMS1, NMBR は細胞増殖に関係する遺伝子であ る。他には S0D1，PELP1, SFRS9など様々な遺伝子が含まれていた。 また、表 1 0に 示す通り、 微小管作用薬であるパクリタキセルにおいては、 細胞骨格系に関連す る ezrinをコードする VIL2遺伝子が選抜された。同様にして、多くの遺伝子がそ れぞれの抗癌剤について、 感受性あるいは耐性遺伝子として選抜された。
さらに、 ピアソンの相関係数による解析を、 同じ組織由来の細胞株毎にも行つ た。 MMCに関して、 10種の乳癌細胞株、 12種の肝癌細胞株、 20種の胃癌細胞株に おいて、 それぞれ抗癌剤に対する感受性と相関のある遺伝子として選抜された遺 伝子群を表 1 2から表 1 4に示す。 即ち、 表 1 2は乳癌、 表 1 3は肝癌、 表 1 4 一 1、 2は胃癌において、 それぞれマイトマイシン Cに対する感受性と発現が相 関する遺伝子のリストを示す。 カラムの説明は表 6から 1 1と同一である。 これ らの遺伝子群は抗癌剤に対する感受性予測のマーカーとして利用できるものを含 む他、 あるものは実際に抗癌剤に対する感受性を規定していると考えられる。
乳癌においてマイトマイシン C感受性と相関する遺伝子 (感受性） 順 i^一 enBank
登録番吾 P
1 INHBB M31682 0.972 0.000
2 NK4 M59807 0.838 0.018
3 HSPA1A 11717 0.751 0.050
4 LOC54557 AF075050 0.735 0.024
5 CD47 Y00815 0.717 0.045
(耐性）
m 一 (jenBank
P
順 遺伝子 登録番号
1 RPN2 Y00282 -0.882
2 ATP50 X83218 0.017 係係相相
3 CAST D50827 . -0 o数数関 HE.815 0.025
4 HPCA D16593 -0. 00776 0.024
5 ZNF9 M28372 - 0.774
6 A2LP U70671 -0.772 0.042 o o
7 IL18 D49950 -0.747 0. o o
033 寸
8 NRGN Y09689 -0.727 0.041
肝癌においてマイトマイシン C感受性と相関する遺伝子
(感受性）
GenBank 相関
順位 遺伝子 P値
登録番号 係数
1 EB1 U24166 0.872 0.002
2 JUN J04111 0.008
3 EIF3S8 U46025 0.772 0.015
4 CCL5 M21121 0.741 0.022
Figure imgf000058_0001
6 HSPA1A M11717 0.729 0.026
7 SPP1 X13694
8 RAB7 X93499 0.712 0.021
9 CTSD M11233 0.692 0.018
10 ACTN1 . X15804 0.692
11 RXRB 84820 0.678 0.045
12 PSME2 D45248 0.673 0.047 o O
13 HLA-C M11886 - 0.0 0647 0.043
o c
14 RPL19 X63527 0.643 o o o O
(耐性) o
O C
GenBank 相関
順位 退125子 P値
係数
1 MAPK6 X80692 -0.862 0.003
2 GCSH 69175 -0.793 0.006
3 G22P1 M32865 -0.727 0.017
4 USP11 U44839 -0.725 0.027
5 ACTB X00351 -0.715 0.020
6 YWHAZ M86400 -0.706 0.022
7 IL10 M57627 -0.694 0.018
8 RFC4 M87339 -0.677 0.016
9 CRLF1 AF059293 -0.644 0.033
10 RPS6 M20020 -0.619 0.042
11 EMX1 X68879 -0.618 0.043
12 TK2 U77088 -0.607 0.047 胃癌においてマイ トマイシン C感受性と相関する遺伝子 （感受性) 相関
順位 遺伝子 GenBank
登驟杳^" 係数 P値
1 TEAD4 U63824 0.803 0.001
2 NR2C2 U10990 0.713 0.001
3 CSF1 M37435 0.711 0.004
4 RAB28 X94703 0.695 0.008
5 CBR3 AB004854 0.683 0.007
6 NFYC Z74792 0.639 0.019
7 PGF X54936 0.627 0.022
8 ERG M21535 0.620 0.005
9 Mしし T1 L04285 0.613 0.015
10 FOS K00650 0.599 0.014
11 TNFAIP3 M59465 0.584 0.011
12 CNR2 X74328 0.581 0.009
13 DRPLA D31840 0.577 0.024
14 PSMB5 D29011 0.572 0.026
15 SLC6A8 L31409 0.570 0.017
16 SERPINBIO U35459 0.570 0.013
17 VAT1 U18009 0.570 0.009
18 TJP1 L14837 0.562 0.029
19 PELP1 ■153 0.545 0.035
20 C1QBP L04636 0.545 0.024
21 CDK10 L33264 0.543 0.045
22 SERPINA6 J02943 0.542 0.025
23 ACTB X00351 0.538 0.021
24 SFRP4 AF026692 0.538 0.018
25 EMX1 X68879 0.535 0.018
26 ACTB X00351 0.529 0.024
27 RPS9 U14971 0.528 0.043
28 AMD1 M21154 0.522 0.038
29 RPし 26 X69392 0.522 0.038
30 HNRPF L28010 - 0.520 0.047
31 PTMS M24398 0.502 0.040
32 STK12 AF008552 0.498 0.050
33 NR2F6 X12794 0.491 0.046
34 GBE1 L07956 0.470 0.049 胃癌においてマイ トマイシン C感受性と相関する遺伝子 （耐性) enBank 相関
順位 P値
係数
1 PSMD8 D38047 -0.747 0.002
2 LAMP2 J04183 - 0.677 0.002
3 CTSD M11233 -0.651 0.006
4 ADORA2B M97759 -0.645 0.005
5 ANXA4 薦 383 -0.639 0.008
6 PTPRK Z70660 -0.638 0.003
7 RAD23A D21235 -0.622
8 SDHA D30648 -0.613 0.015
9 PET112L AF026851 -0.598 0.024
10 DAD1 D15057 - 0.593 0.025
11 HSPB1 X54079 -0.588 0.013
12 PSMA6 X61972 -0.586 0.036
13 KDELR1 X55885 -0.584 0.028
14 B2M AB021288 - 0.581 0.023
15 M6PR M16985 - 0.579 0.038
16 GCし C M90656 -0.576 0.015
17 SPTBN1 M96803 -0.557 0.038
o
18 PACE X17094 -0.547 0. o019
o
19 RPし 24 M94314 -0.539 0.017
20 SPINT2 U78095 -0.538 0.039
21 STX4A U07158 -0.534 0.027
22 SIAT8B U33551 -0.532 0.028
23 CTSK U13665 -0.529 0.029
24 DCI L24774 - 0.525 0.044
25 MEL X56741 - 0.525 0.045
26 PITPNB D30037 - 0.523 0.038
27 YY1 M76541 -0.512 0.043
28 RAB1 . M28209 -0.495 0.037
29 UBE2し 6 AF031141 -0.492 0.045
30 PSMB7 D38048 -0.484 0.049 また、 12種の肝癌細胞株において、 マイトマイシン C以外の各種抗癌剤に対す る感受性と相関のある遺伝子として選抜された遺伝子群を表 1 5から表 1 8に示 す。 即ち、 肝癌において、 表 1 5はパクリタキセル、 表 1 6は 5-フルォロウラシ ル、 表 1 7はドキソルビシン、 表 1 8はシスプラチンそれぞれに対する感受性と 発現が相関する遺伝子のリストを示す。 カラムの説明は表 6から 1 1と同一であ る。 これらの遺伝子群は抗癌剤に対する感受性予測のマーカーとして利用できる ものを含む他、 あるものは実際に抗癌剤に対する感受性を規定していると考えら れる。
肝癌においてパクリタキセル感受性と相関する遺伝子 (感受性） 順位 遺伝子 登録番 P
1 ALDH3B1 U10868 0.772 0.005
2 SRPK1 U09564 0.760 0.018
3 ALPP M13077 0.703
4 EB1 U24166 0.699 0.036
5 MAPKAPK U12779 0.681 0.043
6 GPI K03515 0.666 0.025
7 CTBP1 U37408 0.619 0.042
8 HMGCL L07033 0.609 0.036
9 CAPZ U03271 0.608
10 ACAT1 D90228 0.597 係係相相
(耐性） 数数関関 雌 遺伝子 Si 4 P
1 C0X4AL AF005888 -0.913 ο 0.001
2 RPS27A X63237 - 0.803 0. ο o ο005
3 F2 V00595 -0.774 0.015
4 GFAP J04569 -0.757 0.011
5 SCD Y13647 -0.722 0.018
6 YWHAZ M86400 - 0.676 0.032
7 GCSH M69175 -0.673 0.033
8 SQLE D78130 -0.665 0.018
9 BCL2L1 Z23115 -0.648 0.043
10 RFC40 M87338 -0.645 0.032
肝癌において 5-フルォロウラシル感受性と相関する遺伝子
(感受性）
順位 遺伝子 SS P
1 SRPK1 U09564 0.771 0.015
2 OAZ1 D78361 0.763 0.017
3 RPL34 L38941 0.757 0.007
4 ARHB X06820 0.672 0.033
5 RPS17 M13932 0.667 0.035
6 RPL28 U14969 0.659 0.028
Figure imgf000063_0001
8 ZNF75 S67970 0.639 0.034
9 RPL37 D23661 0.044
係相
O数関
Figure imgf000063_0002
8 PEA15 X86809 -0.651 0.030
9 PSMD7 D50063 -0.641 0.034
10 UBE2E1 X92963 -0.637 0.035
7 肝癌においてドキソルビシン感受性と相関する遺伝子
(感受性）
GenBank 相関
順位 遺伝子 P値
係数
1 RPS7 M77233 0.684 0.020 2 RPし 23 X52839 0.649 0.042 3 CALT X72946 0.648 0.043 4 EEF1D Z21507 0.640 0.025 . 5 RPS15A X84407 0.628 0.039
■生）
GenBank 相関
順位 P値
登録番号 係数
Figure imgf000064_0001
8 肝癌においてシスブラチン感受性と相関する遺伝子
(感受性）
一 GenBank 相 ι ,^. 順 退伝子 登録番号 係数 ρ
1 CALT Χ72946 0.701 0.024
2 ZNF165 X84801 0.691 0.027
3 GPC1 Χ54232 0.674 0.047
(耐性)
GenBank 相関
順位 遺伝子 P値
登録番号 係数
1 TUBA1 謹 558 -0.736 0.010
2 GCP2 X78686 -0.724 0.018
3 COX5A M22760 - 0.712 0.021
4 GLA X05790 -0.663 0.026
5 GNS X06956 . -0.653 0.041
実施例 4 ：選抜された遺伝子発現の RT- PCR法による検証
実験例 3で示した DNAァレイの実験結果から肝癌および胃癌において MMCに対す る感受性と相関があるとして選抜された遺伝子について、 RT - PCR法によって検証 を行った。
胃癌については表 1 9に示す感受性遺伝子 6種、 耐性遺伝子 7種について特異的 PCRプライマーを作製し、 RT- PCRにより、それぞれの遺伝子の各胃癌細胞株におけ る発現量を測定し、 実施例 1で得られた MMCに対する感受性との相関を調べた。 RT - PCRは、実施例 2で調製した total RNA 2 g、RNaseインヒビター、オリゴ d (T) 16、 MuLVリバーストランスクリプターゼを含む反応液を 42°Cで 60分間ィンキュベート して、 cDNAの合成を行い、 この反応液の 1/10量を铸型として、各遺伝子特異的 PCR プライマーを用いた PCRを行った。 PCRは、 95°Cで 5分間加熱後、 95°Cで 1分間 （変 性） 、 55〜60°Cで 1分間 （アニーリング） 、 72°Cで 1〜2分間 （伸長） の反応サイク ルを 25〜30サイクル繰り返し、 72°Cで 5分間加熱する条件（アニーリング温度、伸 長時間、 サイク/レ数は遺伝子により異なる） で行った。
その結果、 感受性遺伝子として TEA domain family member 4 (TEAM, GenBank 登録番号: U63824)、 Solute Carrier Family 6 (SLC6A8, GenBank登録番号： L31409) の 2遺伝子が、 而す性遺伝子として Proteasome 26S subunit, non- ATPase 8 (PSMD8, GenBank登録番号： D38047) , cathepsin D (CTSD, GenBank登録番号： Ml 1233)， annexin A4 (ANXA4, GenBank登録番号： M19383) , KDEL endoplasmic reticulum protein retention receptor 1 (KDELRl, GenBank登録番号： X55885)の 4遺伝子に、 RT - PCRによつて測定された発現量と匪 Cに対する感受性との相関が認められ、確か に発現と感受性に相関がある遺伝子として確認された （表 1 9 ) 。 9 胃癌においてマイトマイシン C感受性と相関する遺伝子 （RT-PCR)
(感受性)
第 13表の順 遺伝子発現の 遺伝子 相関 N positive
位 タイナミックレンジ
1 TEAD4 あり 14 11 1.450
3 CSF1 ― 14 11 1.984
4 RAB28 ― 13 13 1.615
9 MLLT1 一 15 14 1.576
11 TNFAIP3 ― 18 15 1.263
15 SLC6A8 -あり 17 17 1.739
(耐性)
第 13表の順 遺伝子発現の 遺伝子 相関 N positive
位 ダイナミックレンジ
1 PS D8 あり 14 14 2.544
2 LAMP2 ― . 18 16 1.295
3 CTSD あり 16 14 3.8 3
5 ANXA4 あり 16 15 2.571
8 SDHA ― 15 14 1.318
11 HSPB1 ― 17 15 5.354
13 KDELR1 あり 14 14 1.683
また、肝癌については、感受性遺伝子として表 2 0に示す 3種について同様に検 証したところ、 C- jun QUN, GenBank登録番号： J04111)、 cathepsin D (CTSD, GenBank登録番号: Ml 1233)の遺伝子に、 RT-PCRによって測定された発現量と匿 Cに 対する感受性との相関が認められ、 発現量と感受性との相関が確認された （表 2 0 ) 。
肝癌においてマイトマイシン C感受性と相関する遺伝子 （RT- PCR)
(感受性)
第 13表の順 遺伝子発現の 退1云子 相関 N positive
位 ダイナミックレンジ
1 2 JUN あり 9 7 3.040
2 8 RAB7 ― 10 10 2.953
3 9 CTSD あり 11 11 2.249 さらに、 同じく肝癌においてパクリタキセルの感受性遺伝子候補についても同 様に RT - PCRに よ る検証を行っ た と こ ろ、 感受性遺伝子 と して acetylCoA-acetyltransf erase (ACATl, GenBank登録番号： D90228、 表 1 5中の順 位 10) 、 耐性遺伝子として bcl - XL (BCL2L1, GenBank登録番号： Z23115、 表 1 5 中のランク 9)について、 RT - PCRによって測定された発現量とパクリタキセルに対 する感受性との相関が認められ、 cDNAァレイによって見出された相関が確認され た。 実施例 5 ：選抜された遺伝子発現のウェスタンブロットによる検証
実験例 3および 4で、肝癌において、 DNAァレイまたは RT- PCRにより測定した遺 伝子の発現量が MMCに対する感受性と相関があることが確認されたカテブシン D ( CTSD) について、 遺伝子の発現量を、 遺伝子産物である蛋白質量をウェスタンブ 口ットにより測定した場合に、遺伝子の発現量と MMCに対する感受性とに相関があ るかどうかについて、 検証を行った。 細胞をプレートに培養後、 PBS (-)で 2回洗浄した。プレートから細胞をはがし、 溶解バッファー 〔62. 5讓 ol/L Tris- HC1 pH6. 8、 2% (W/V) ドデシル硫酸ナトリ ゥム (SDS) 、 5% (v/v) 2-メルカプトエタノール、 10% (v/v) グリセロール、 1 mmol/Lフエ二ルメチルスルフォニルフルオライド〕 中で溶解させた。 細胞溶解液 の蛋白質濃度を DCプロテインアツセィキット (バイオラッド社) により定量し、 10 μ gの蛋白質を含む細胞溶解液を、 10%ポリアクリルアミドー SDSゲル上で電気 泳動により分離した。 ゲルから蛋白質を膜に移し、 以下のようにウェスタンプロ ットによる解析を行った。蛋白質を移した膜を、 1 : 250に希釈した CTSD特異的マウ スモノクローナル抗体 Ab-1 (オンコジーン · リサーチ ·プロダクツ社) と反応さ せた。膜を洗浄し、 さらに 1 : 1000に希釈したホースラディッシュ結合抗マウス IgG 抗体 （アマシャム ·バイオサイエンス社） を反応させた。 ECL (ェンハンスト ·ケ ミルミネッセンス)検出システム （アマシャム .バイオサイエンス社） を用いて、 CTSD蛋白質を検出し、 そのシグナル強度を測定した。
CTSD蛋白質のシグナル強度と実施例 1で得られた顧 Cに対する感受性との相関 を調べたところ、 ピアソンの相関係数は 0. 862となった。 したがって、 ウェスタン プロットによって測定された CTSD遺伝子の発現量と MMCに対する感受性との相関 が認められた (図 3 ) 。 実施例 6 ：抗癌剤の抗癌剤に対する感受性を変化させる遺伝子の同定 （1 ) 抗癌剤に対する感受性を決定する遺伝子を探索するため、 細胞増殖の阻害によ つて抗癌剤に対する感受性の変化を検出できる遺伝子スクリーニングシステムを 確立した。 遺伝子を細胞に導入することによる抗癌剤に対する感受性の変化を検 出するシステムである。 細胞増殖の指標としては、 [¾] -チミジン （thymidine) のとりこみを用いた。 わずかな感受性の変化を検出するために、 高いトランスフ ェクシヨン効率が要求される。そこで、 90%以上の効率で遺伝子導入が可能なヒト 線維芽肉腫細胞株である HT1080を用いた。
この系を用いて、 MMC の抗癌剤に対する感受性を決定する遺伝子のスクリー二 ングを行った。候補となる遺伝子の cDNAの翻訳領域全長をクローユングし、動物 細胞発現べクタ一である pcDNA3. 1/myc-HisA (Invitrogen社）にクローユングし た。 これら発現プラスミドを Lipofectamine Plus試薬（Invitrogen社）を用いて、 HT1080細胞に導入した。 トランスフエクシヨン後 24時間後に、適切な濃度の匿 C を添加し、 さらに 24時間培養した。 0. 067MBqの [¾]-チミジンを添カ卩し、 37°Cで 45分間保温した後、 予め暖めておいた PBS (-)で洗い、 10% TCAで氷上に 2時間処 理し、 細胞を固定した。 固定後、 細胞を 10% TCAで洗い、 0. 1% SDS/0. 2% NaOHで 溶解させた。 溶解した細胞を 37°Cで保温した後、 0. 25M酢酸溶液を加えて中和し た。 [¾]-チミジンの取り込みは、 シンチレーシヨンカウンターで測定した。 このシステムの有効性を確認するため、 MMC に対する感受性を規定することが 知られてレヽる DT - diaphorase (Gustafson, D. L. , & Pritsos, C. A.， Cancer Res. , 52， 6936- 6939， 1992. )をコードする遺伝子 NQ01について調べた。 NQ01を導入し た HT1080細胞は MMCに対する感受性が上昇した （図 4 C )。すなわち、 このシス テムは抗癌剤に対する感受性の変化を検出するのに有効なシステムであると考え られる。
このシステムを用いて、 表 6及ぴ表 1 2から 1 4に選抜された遺伝子のいずれ 力 実際に抗癌剤に対する感受性を変化させるかを検討した。その結果、 HSP70- 1 蛋白質をコードしている HSPA1A遺伝子 （GenBank登録番号: M11717) の導入が、 匪 Cに対する感受性を有意に上昇させることが示された （図 4 C ) 。 HSPA1Aの発 現は乳癌 （図 4 A、 表 1 2 ) 、 肝癌 （表 1 3 ) では有意に雇 Cに対する感受性と 相関しているが、 胃癌では有意な相関は見られていない （表 1 4 ) 。 また、 全細 胞株の解析で発現と MMCに対する感受性との相関が見られた JUN遺伝子 (GenBank 登録番号： J04111) (図 4 ·Β、 表 6 ) の導入でも、 同じく MMCに対する感受性が 有意に上昇した （図 4 D) 。 以上の結果はバイオインフォマティクス的ァプロ一 チを用いて DNAァレイの実験結果から抽出した結果が、 抗癌剤に対する感受性を 決定する遺伝子の予測に有効であることを示している。 実施例 7 ：抗癌剤の抗癌剤に対する感受性を変化させる遺伝子の同定 （2 ) 抗癌剤に対する感受性を決定する遺伝子を探索するため、 遺伝子発現を抑制し た場合の抗癌剤に対する感受性の変化を検出するスクリーニングシステムを確立 した。 以下に、 肝癌において、 遺伝子発現と MMCに対する感受性の相関が見られ た CTSD遺伝子が、 感受性決定遺伝子であることを確認した例をあげる。
( 1 ) siRNAによる CTSD発現の抑制の確認
CTSD遺伝子の発現を抑制するための、 CTSD特異的な siR (CTSD #271, CTSD #387 および CTSD #400) を以下のようにして調製した。 配列番号 1〜 6の配列それぞ れからなるオリゴヌクレオチド 〔ダーマコン · リサーチ社 （Dharmacon Research Inc. ) の委託合成品〕 を、 それぞれダーマコン · リサーチ社から供給されたバッ ファーに溶解させ、 配列番号 1と 2、 3と 4、 5と 6の組み合わせで混合した。 それぞれ、 60°Cで 45分間保温した後、 室温に 30分置いてァニールさせ、 2本鎖 オリゴヌクレオチド CTSD #271 (センス鎖'：配列番号 1、 了ンチセンス鎖：配列 番号 2 ) 、 CTSD #387 (センス鎖：配列番号 3、 アンチセンス鎖：配列番号 4 ) お ょぴ CTSD #400 (センス鎖：配列番号 5、 アンチセンス鎖：配列番号 6 ) を生成 した。 それぞれを沈殿させた後、 最終的に 20 mol/Lの濃度になるように、 I X ァニーリング 'バッファー 〔30 mmol/L HEPES-KOH (pH7. 9)、 100 mmol/L酢酸力 リウム、 2 腿 ol/L酢酸マグネシウム〕 に溶解させた。
肝癌細胞株 SSP-25を、 5%ゥシ血清を含むダルべッコ改変ィ一グル培地 （DMEM ) に懸濁させ、 6ゥエルプレート上に 2. 5 X 105個 Zゥェルずつ分注した。 16時間 後、 上記の siRNA (CTSD #271、 CTSD #387および CTSD #400) をそれぞれリボフ エタトァミン 2000 (インビトロジェン社） を用いて、 最終的にゥエルあたり 100 nmol/Lの濃度で細胞にトランスフエクシヨンした。
siRNAをトランスフエクシヨンしてから 48時間後に細胞を回収し、実施例 5と 同様にして、 ウェスタン ·プロットにより細胞の CTSD蛋白質を検出した。その結 果、 図 5に示すように、 CTSD #271、 CTSD #387および CTSD #400それぞれを導入 した細胞では、 CTSD蛋白質がほとんど検出されず、 siRNAにより CTSD遺伝子の発 現が抑制されていることが確認された。
( 2 ) CTSD発現の抑制による匿 C感受性の変化
( 1 ) と同様にして CTSD特異的な siR A CTSD #400を肝癌細胞株 SSP-25にト ランスフエクシヨンした。トランスフエクシヨンしてから 48時間後に細胞を回収 し、 96 ゥエルプレートに 1 X 104個 Zゥェルずつ分注し、 5% FBS、 100単位/ mL ぺニシリンおよび 100 mg/mLストレプトマイシンを含む RPMI 1640培地 100 ;z L でー晚培養した。 MMC、 パクリタキセル、 ドキソルビシンを、 MMCおよびドキソル ビシンは 10— 5〜10— 9 mol/Lの濃度、 パクリタキセルは 10— 6〜： !O—10 mol/Lの濃度に なるようにそれぞれ添加して培養した。 薬剤を添加してから 48 時間後に、 sulforhodamine B ァッセィ法により細胞の増殖抑制を測定し、抗癌剤に対する感 受性を評価した。
その結果、 図 6 Aに示すように、 CTSD #400 をトランスフエタトしなかったコ ントロールの細胞と比べ、 CTSD #400をトランスフエタトし、 CTSD遺伝子の発現 を抑制した細胞では、 MMC に対する感受性が低下することが確認された。 このこ と力 ら、 CTSD遺伝子は、 肝癌において、 発現を抑制することにより MMCに対する 感受性が低下するような感受性決定遺伝子であることが確認された。 肝癌におい ては、 CTSD遺伝子の発現は有意に MMCに対する感受性と相関しているが、パクリ タキセルおよぴドキソルビシンに対する感受性とは有意な相関は見られていない (図 7、 表 1 3 ) 。 CTSD遺伝子の発現を抑制した細胞において、 パクリタキセル およぴドキソルビシンに対する感受性には変化はみられなかった （図 6 B ) 。 以上の結果はパイオインフォマテイクス的アプローチを用いて DNAァレイの実 験結果から抽出した結果が、 抗癌剤に対する感受性を決定する遺伝子の予測に有 効であることを示している。 産業上の利用可能性
本発明により、 癌患者より取り出された腫瘍細胞及び癌細胞株における、 抗癌 剤に対する感受性を予測する遺伝子を選抜することができ、 それらの遺伝子を用 いた癌患者の抗癌剤に対する感受性の判定が可能となる。 また、 それらの遺伝子 を用いて、 あるいはそれら遺伝子の発現を制御することにより、 抗癌剤に対する 感受性を増強することが可能となる。

Claims

請求の範囲
1 . 乳癌 12細胞株（HBC- 4， BSY-1, HBC - 5, MCF_7， MDA - MB - 231, KPL - 3C, KPL- 4, KPL-1, T-47D, HBC-9, ZR- 75 - 1, HBC - 8) 、 肝癌 12細胞株 (HepG2, Hep3B, Li- 7， PLC/PRF/5, HuH7, HLE, HLF, HuH6, RBE, SSP- 25, HuL - 1， JHH-l) 、 及ぴ胃癌 21 細胞株 （St - 4， MKN1, MKN7, MKN28, MKN45, 画 74， GCIY, GT3TKB, HGC27, AZ521, 4 - 1st, NUGC-3, NUGC-3/5FU, HSC- 42, AGS, KWS- 1, TGS- 11， GMK- 2 (別名 OKIBA) , 1st- 1， GMK - 3， GMK - 5 (別名 AOTO) ) から選択される癌細胞株の全てあるいは一部 を利用し、 該細胞株における少なくとも 1以上の遺伝子の発現レベルと抗癌剤に 対する感受性の強さとを測定し、 それらの相関の有無を統計的に検定することに よって、 腫瘍細胞の用いた抗癌剤に対する感受性に関わる遺伝子群を同定する方 法。
2 . 胃癌 21細胞株 （St- 4, MKN1, MKN7, MKN28, MKN45, MK 74, GCIY, GT3TKB, HGC27, AZ521, 4— 1st, NUGC-3, NUGC- 3/5FU, HSC - 42, AGS, KWS— 1, TGS- 11, GMK_2 ( 別名 OKIBA) , 1st- 1, GMK- 3, GMK- 5 (別名 A0T0) ) から選択される癌細胞株の全て あるいは一部を利用して、 胃癌細胞の用いた抗癌剤に対する感受性に関わる遺伝 子群を同定する、 請求項 1記載の方法。
3 . 乳癌 12細胞株（HBC - 4， BSY-1, HBC - 5, MCF- 7, MDA - MB - 231, KPL-3C, KPL- 4, KPL-1, T-47D, HBC-9, ZR-75- 1, HBC- 8) から選択される癌細胞株の全てあるいは 一部を利用して、 乳癌細胞の用いた抗癌剤に対する感受性に関わる遺伝子群を同 定する、 請求項 1記載の方法。
4 . 肝癌 12細胞株 （HepG2, Hep3B, Li- 7, PLC/PRF/5, HuH7, HLE, HLF, HuH6, RBE, SSP - 25， HuL- 1, JHH-l) から選択される癌細胞株の全てあるいは一部を利用 して、 肝癌細胞の用いた抗癌剤に対する感受性に関わる遺伝子群を同定する、 請 求項 1記載の方法。
5 . 癌患者の抗癌剤に対する感受性を判定する方法において、
( 1 ) 請求項 1から 4の何れかに記載の方法により同定された遺伝子群から、 1 以上の遺伝子を選択し、 選択された遺伝子の各々について、 その発現量に対応し た点数を決定する工程、
( 2 ) 被験患者について該遺伝子の発現量を測定する工程、
( 3 ) ( 2 ) で測定した発現量に基づき （1 ) で得た点数を割り当てる工程、
( 4 ) 選択された全遺伝子について割り当てられた点数を合計して合計値を求め る工程、 及ぴ
( 5 ) 予め決定した閾値と該合計値を比較する工程、
を含む上記方法。
6 . 癌患者のマイトマイシン Cに対する感受性を判定する方法において、 癌 患者より取り出された腫瘍細胞における、 SFKD26121) 、 CBR3 (AB004854) 、 EMS1
(M98343) 、 JUN (J04111) 、 SFRS9 (U30825) 、 MBR (M73482) 、 RBMX (Z23064) 、 S0D1 (M13267)、 NOLI (X55504)、 PELP1 (U88153)、 ARHA (L25080)、 MRS (D32050)、 NMEl (X17620) 、 HNRPA2B1 (M29065)、 NME2 (L16785) 、 VATl (U18009)、 SERPINBIO (U35459) 、 KIAA0436 (AB007896) 、 DRPLA (D31840) 、 MC3R (L06155) 、 SPTBN1 (M96803)、 PET112L (AF026851)、 CAPN1 (X04366)、 MEL (X56741)、 PACE (X17094)、 DVL2 (AF006012) 、 L0C54543 (AJ011007) 、 PAPOLA (X76770) 、 RPLP2 (M17887) 、 及ぴ ARF4L (L38490) からなる群から選択される 1個または複数の遺伝子 （括弧 内は GenBank登録番号を示す） の発現量を測定し、請求項 5に記載の方法を用い てマイトマイシン Cに対する感受性を判定する方法。
7 . 癌患者のビノレルビンに対する感受性を判定する方法において、 癌患者 より取り出された腫瘍細胞における、 ARHA(L25080)、NME2 (L16785)、VIL2 (X51521)、 YWHAQ (X56468)、 HK1 (M75126)、 SATB1 (M97287)、 CAMLG (U18242)、 CARS (L06845)、 CC B1 (M25753) 、 U2AF1 (M96982) 、 PTMA (M26708) 、 MLC1SA (M31211) 、 MEl
(X17620)、 SARS (X91257)、 CDC20 (U05340)、 PPP4C (X70218)、 TNFAIP3 (M59465)、 EEFID (Z21507) 、 PFKP (D25328) 、 ENTPD2 (U91510) 、 CCL5 (M21121) 、 ACATl
(D90228)、 IQGAP1 (L33075)、 PAX5 (M96944)、 NRGN (Y09689)、 K- ALPHA- 1 (K00558)、 NDUFB7 (M33374)、 H0XB1 (X16666)、 F10 (K03194)、 GPX2 (X53463)、 NR1I2 (AF061056)、 ANXA4 (M19383)、 PDLIMl (U90878)、 LIPC (X07228)、 SERPINF2 (D00174)、 HSD17B1 (M36263)、 MAN2B1 (U60266)、 LSS (D63807)、 PIK3CG (X83368)、 DBNl (U00802)、
NDUFA4 (U94586) 、 BDH (M93107) 、 BCL2L1 (Z23115) 、 EEF1B2 (X60656) 、 F2 (V00595)、 RARA (X06614)、 ITGB4 (X53587)、 IMPA1 (X66922)、 PACE (X17094)、
AGA (M64073) 、 MVD (U49260) 、 EHHADH (L07077) 、 TFPI2 (D29992) 、 MARCKS (M68956) 、 FGB (J00129) 、 及び GPD1 (L34041) からなる群から選択される 1 個または複数の遺伝子 （括弧内は GenBank登録番号を示す） の発現量を測定し、 請求項 5に記載の方法を用いてビノレルビンに対する感受性を判定する方法。
8 . 癌患者のパクリタキセルに対する感受性を判定する方法において、 癌患 者より取り出された腫瘍細胞における、 ADH6 (M68S95) 、 RAB28 (X94703) 、 U2AF1
(M96982)、 GPC1 (X54232)、 HK1 (M75126)、 CARS (L06845)、 TNFAIP3 (M59465)、 K-ALPHA-1 (K00558) 、 PFKP (D25328) 、 GDI2 (D13988) 、 VIL2 (X51521) 、 RUNX2
(AF001450)、 NME2 (L16785)、 CDC20 (U05340)、 GNAI2 (X04828)、 ARHA (L25080)、 CNR2 (X74328) 、 PPP2R2B (M64930) 、 SLC6A8 (L31409) 、 DM9 (L13848) 、 ACATl
(D90228)、 PI3 (Z18538)、 NAP1L1 (M86667)、 H0XB1 (X16666)、 PACE (X17094)、 MA 2B1 (U60266) 、 GPX2 (X53463) 、 DBNl (U00802) 、 ANXA4 (M19383) 、 SERPINF2
(D00174) 、 AGA (M64073) 、 BCL2L1 (Z23115) 、 LIPC (X07228) 、 BDH (M93107) 、 LSS (D63807) 、 PDLIMl (U90878) 、 ZNF161 (D28118) 、 UBE2E1 (X92963) 、 TLEl
(M99435) 、 RARA (X06614) 、 PTPR (L18983) 、 APOE (M12529) 、 F10 (K03194) 、 NR1I2 (AF061056) 、 UBE2L3 (X92962) 、 及び FGB (J00129) からなる群から選択 される 1個または複数の遺伝子 （括弧内は GenBank登録番号を示す） の発現量を 測定し、 請求項 5に記載の方法を用いてパクリタキセルに対する感受性を判定す る方法。
9 . 癌患者の 5-フルォロウラシルに対する感受性を判定する方法において、 癌患者より取り出された腫瘍細胞における、 SRPK1 (U09564) 、 0AZ1 (D78361) 、 RPL34 (L38941) 、 ARHB (X06820) 、 RPS17 (M13932) 、 RPL28 (U14969) 、 TRIPll
(L40380)、 ZNF75 (S67970) 、 RPL37 (D23661)、 PLOD (M98252)、 CD81 (M33680)、 HNRPC (M16342) 、 AP2S1 (M97074) 、 GAPD (X01677) 、 PAFAH1B3 (D63391) 、 GBEl (L07956)、 DEK (X64229)、 PEA15 (X86809) PSMD7 (D50063)及び UBE2E1 (X92963) からなる群から選択される 1個または複数の遺伝子 （括弧内は GenBank登録番号 を示す） の発現量を測定し、請求項 5に記載の方法を用いて 5-フルォロウラシル に対する感受性を判定する方法。
1 0 . 癌患者のドキソルビシンに対する感受性を判定する方法において、 癌 患者より取り出された腫瘍細胞における、 RPS7 (M77233)、 RPL23 (X52839)、 CALT
(X72946)、 EEF1D (Z21507)、 RPS15A (X84407)、 ADCY1 (L05500)、 HNRPU (X65488)、 C0X5A (M22760) 、 U2AF1 (M96982) 及び RPYR1 (U35232) からなる群から選択さ れる 1個または複数の遺伝子 （括弧内は GenBank登録番号を示す） の発現量を測 定し、 請求項 5に記載の方法を用いてドキソルビシンに対する感受性を判定する 方法。
1 1 . 癌患者のシスブラチンに対する感受性を判定する方法において、 癌患 者より取り出された腫瘍細胞における、 CALT (X72946) 、 ZNF165 (X84801) 、 GPC1
(X54232) 、 TUBA1 (腸 558) 、 GCP2 (X78686) 、 C0X5A (M22760) 、 Gし A (X00351) 及ぴ GNS (X06956) からなる群から選択される 1個または複数の遺伝子 （括弧内 は GenBank登録番号を示す） の発現量を測定し、 請求項 5に記載の方法を用いて シスブラチンに対する感受性を判定する方法。
1 2 . 患者が乳癌患者である請求項 5から 1 1の何れかに記載の感受性を判 定する方法。
1 3 . 患者が胃癌患者である請求項 5カゝら 1 1の何れかに記載の感受性を判 定する方法。
1 4 . 患者が肝臓癌患者である請求項 5から 1 1の何れかに記載の感受性を 判定する方法。
1 5 . 乳癌患者のマイトマイシン Cに対する感受性を判定する方法において、 乳癌患者より取り出された腫瘍細胞における、 INHBB (M31682) 、 NK4 (M59807) 、 HSPA1A (M11717) 、 L0C54557 (AF075050) 、 CD47 (Y00815) 、 RPN2 (Y00282) 、 ATP50 (X83218)、 CAST (D50827)、 HPCA (D16593)、 Z F9 (M28372)、 A2LP (U70671)、 IL18 (D49950) 及ぴ NRGN (Y09689) からなる群から選択される 1個または複数の 遺伝子 （括弧内は GenBank登録番号を示す） の発現量を測定し、 請求項 5に記載 の方法を用いてマイトマイシン Cに対する感受性を判定する方法。
1 6 . 肝癌患者のマイトマイシン Cに対する感受性を判定する方法において、 肝癌患者より取り出された腫瘍細胞における、 EB1 (U24166) 、 JUN (J04111) 、 EIF3S8 (U46025) 、 CCL5 (M21121) 、 PHB (S85655) 、 HSPAIA (M11717) 、 SPP1
(X13694) 、 RAB7 (X93499) 、 CTSD (Ml 1233) 、 ACTN1 (X15804) 、 RXRB (M84820) 、 PSME2 (D45248) 、 HLA- C (Ml 1886) 、 RPL19 (X63527) 、 MAPK6 (X80692) 、 GCSH
(M69175)、 G22P1 (M32865)、 USP11 (U44839)、 ACTB (X00351)、 YWHAZ (M86400)、 IL10 (M57627) 、 RFC4 (M87339) 、 CRLFl (AF059293) 、 RPS6 (M20020) 、 EMXl
(X68879) 及ぴ TK2 (U77088) からなる群から選択される 1個または複数の遺伝 子 （括弧内は GenBank登録番号を示す） の発現量を測定し、 請求項 5に記載の方 法を用いてマイトマイシン Cに対する感受性を判定する方法。
1 7 . 胃癌患者のマイトマイシン Cに対する感受性を判定する方法において、 胃癌患者より取り出された腫瘍細胞における、 TEAD4 (U63824)、 NR2C2 (U10990)、 CSFl (M37435)、 RAB28 (X94703)、 CBR3 (AB004854)、 NFYC (Z74792)、 PGF (X54936)、 ERG (M21535)、 MLLTl (L04285)、 FOS (K00650)、 TNFAIP3 (M59465)、 CNR2 (X74328)、 DRPLA (D31840) 、 PSMB5 (D29011) 、 SLC6A8 (L31409) 、 SERPINBIO (U35459) 、 VATl (U18009) 、 TJPl (L14837) 、 PELPl (U88153) 、 CIQBP (L04636) 、 CDK10
(L33264) 、 SERPINA6 (J02943) 、 ACTB (X00351) 、 SFRP4 (AF026692) 、 EMXl
(X68879)、 RPS9 (U14971)、 AMD1 (M21154)、 RPL26 (X69392)、 HNRPF (L28010)、 PTMS (M24398) 、 STK12 (AF008552) 、 NR2F6 (X12794) 、 GBEl (L07956) 、 PSMD8
(D38047)、 LAMP2 (J04183)、 CTSD (Ml 1233)、 AD0RA2B (M97759)、 ANXA4 (M19383)、 PTPRK (Z70660) 、 RAD23A (D21235) 、 SDHA (D30648) 、 PET112L (AF026851) 、 DADl (D15057) 、 HSPBl (X54079) 、 PSMA6 (X61972) 、 KDELRl (X55885) 、 B2M
( :1288)、 M6PR (M16985)、 GCLC (M90656)、 SPTBN1 (M96803)、 PACE (X17094)、 RPL24 (M94314) 、 SPINT2 (U78095) 、 STX4A (U07158) 、 SIAT8B (U33551) 、 CTSK (U13665) 、 DCI (U24774) 、 MEL (X56741) 、 PITPNB (D30037) 、 YY1 (M76541) 、 RABl (M28209) 、 UBE2L6 (AF031141) 及び PSMB7 (D38048) からなる群から選択 される 1個または複数の遺伝子 （括弧内は GenBank登録番号を示す） の発現量を 測定し、 請求項 5に記載の方法を用いてマイトマイシン Cに対する感受性を判定 する方法。
1 8 . 肝癌患者のパクリタキセルに対する感受性を判定する方法において、 肝癌患者より取り出された腫瘍細胞における、 ALDH3B1 (U10868)、 SRPK1 (U09564)、 ALPP (M13077)、 EB1 (U24166)、 MAPKAPK (U12779)、 GPI (K03515)、 CTBP1 (U37408)、 HMGCL (L07033) 、 CAPZ (U03271) 、 ACATl (D90228) 、 C0X4AL (AF005888) 、 RPS27A
(X63237) 、 F2 (V00595) 、 GFAP (J04569) 、 SCD (Y13647) 、 YWHAZ (M86400) 、 GCSH (M69175) 、 SQLE (D78130) 、 BCL2L1 (Z23115) 及び RFC40 (M87338) から なる群から選択される 1個または複数の遺伝子 （括弧内は GenBank登録番号を示 す） の発現量を測定し、 請求項 5に記載の方法を用いてパクリタキセルに対する 感受性を判定する方法。
1 9 . 肝癌患者の 5-フルォロゥラシルに対する感受性を判定する方法にぉレ、 て、肝癌患者より取り出された腫瘍細胞における、 SRPK1 (U09564)、 0AZ1 (D78361)、 RPL34 (L38941) 、 A腿 (X06820) 、 RPS17 (M13932) 、 RPL28 (U14969) 、 TRIPll
(L40380) 、 ZNF75 (S67970) 、 RPL37 (D23661) 、 PLOD (M98252) 、 CD81 (M33680) 、 HNRPC (M16342) 、 AP2S1 (M97074) 、 GAPD (X01677) 、 PAFAH1B3 (D63391) 、 GBEl
(L07956)、 DEK (X64229)、 PEA15 (X86809) PSMD7 (D50063)及ぴ UBE2E1 (X92963) からなる群から選択される 1個または複数の遺伝子 （括弧内は GenBank登録番号 を示す） の発現量を測定し、'請求項 5に記載の方法を用いて 5-フルォロウラシル に対する感受性を判定する方法。
2 0 . 肝癌患者のドキソルビシンに対する感受性を判定する方法において、 肝癌患者より取り出された腫瘍細胞における、 RPS7 (M77233) 、 RPL23 (X52839 ) 、 CALT (X72946) 、 EEF1D (Z21507) 、 RPS15A (X84407) 、 ADCY1 (L05500) 、 HNRPU (X65488) 、 C0X5A (M22760) 、 U2AF1 (M96982) 及ぴ RPYRl (U35232) から なる群から選択される 1個または複数の遺伝子 （括弧内は GenBank登録番号を示 す） の発現量を測定し、 請求項 5に記載の方法を用いてドキソルビシンに対する 感受性を判定する方法。
2 1 . 肝癌患者のシスブラチンに対する感受性を判定する方法において、 肝 癌患者より取り出された腫瘍細胞における、 CALT (X72946) 、 Z F165 (X84801) 、 GPC1 (X54232)、 TUBA1 (K00558)、 GCP2 (X78686)、 C0X5A (M22760)、 GLA (X00351) 及ぴ GNS (X06956) からなる群から選択される 1個または複数の遺伝子 （括弧内 は GenBank登録番号を示す） の発現量を測定し、 請求項 5に記載の方法を用いて シスブラチンに対する感受性を判定する方法。
2 2 . 遺伝子の発現量の測定を、 該遺伝子の転写産物である RNAを DNAマイ クロアレイにより定量することにより行う、 請求項 1から 2 1の何れかに記載の 方法。 '
2 3 . 遺伝子の発現量の測定を、該遺伝子の転写産物である RNAを定量的 PCR により定量することにより行う、 請求項 1カゝら 2 1の何れかに記載の方法。
2 4 . 遺伝子の発現量の測定を、 該遺伝子の転写産物である RNAをノーザン ブロットにより定量することにより行う、 請求項 1カゝら 2 1の何れかに記載の方 法。
2 5 . 請求項 2 3に記載の方法において使用するための、 該 RNAに相補的な 才リゴヌクレオチドを含む、 RNAの定量試薬。
2 6 . 遺伝子の発現量の測定を、 該遺伝子の遺伝子産物である蛋白質を免疫 化学的方法により定量することにより行う、 請求項 1カゝら 2 1の何れかに記載の 方法。
2 7 . 遺伝子の発現量の測定を、該遺伝子の遺伝子産物である蛋白質を ELISA により定量することにより行う、 請求項 2 6に記載の方法。
2 8 . 遺伝子の発現量の測定を、 該遺伝子の遺伝子産物である蛋白質をゥェ スタンプロットにより定量することにより行う、 請求項 2 6に記載の方法。
2 9 . 請求項 2 6に記載の方法において使用するための、 該蛋白質に対する 抗体を含む免疫測定試薬。
3 0 . SF1 (D26121) 、 CBR3 (AB004854) 、 EMS1 (M98343) 、 JUN (J04111) 、 SFRS9 (U30825) 、 MBR (M73482) 、 RBMX (Z23064) 、 S0D1 (M13267) 、 NOLI (X55504) 、 PELPl (U88153) 、 ARHA (L25080) 、 MRS (D32050) 、 NMEl (X17620) 、 HNRPA2B1
(M29065) 、 NME2 (L16785) 、 VAT1 (U18009) 、 SERPINB10 (U35459) 、 KIAA0436
(AB007896) 、 DRPLA (D31840) 及び MC3R (L06155) からなる群から選択される 単独又は複数の遺伝子 （括弧内は GenBank登録番号を示す） であつて癌細胞に強 制発現させることによってマイトマイシン Cに対する感受性を増強させる活性を 示す遺伝子又は該遺伝子がコードするタンパク質を含有する、 マイトマイシン C に対する感受性増強薬。
3 1 . ARHA (L25080) 、 NME2 (L16785) 、 VIL2 (X51521) 、 YWHAQ (X56468) 、 HKl (M75126) 、 SATB1 (M97287) 、 CAMLG (U18242) 、 CARS (L06845) 、 CCNB1 (M25753) 、 U2AF1 (M96982) 、 PTMA (M26708) 、 MLC1SA (M31211) 、 MEl (X17620) 、 SARS
(X91257) 、 CDC20 (U05340) 、 PPP4C (X70218) 、 TNFAIP3 (M59465) 、 EEF1D (Z21507) 、 PFKP (D25328) 、 ENTPD2 (U91510) 、 CCL5 (M21121) 、 ACATl (D90228) 、 IQGAPl
(L33075) 、 PAX5 (M96944) 、 NRGN (Y09689) 、 K- ALPHA- 1 (K00558) 、 NDUFB7 (M33374) からなる群から選択される単独又は複数の遺伝子 （括弧内は GenBank登録番号を 示す） であって癌細胞に強制発現させることによってピノレルビンに対する感受 性を増強させる活性を示す遺伝子又は該遺伝子がコードするタンパク質を含有す る、 ビノレルビンに対する感受性増強薬。
3 2 . ADH6 (M68895) 、 RAB28 (X94703) 、 U2AF1 (M96982) 、 GPC1 (X54232) 、 HKl (M75126) 、 CARS (L06845) 、 TNFAIP3 (M59465) 、 K- ALPHA- 1 (K00558) 、 PFKP
(D25328) 、 GDI2 (D13988)、 VIL2 (X51521) 、 RUNX2 (AF001450) 、 NME2 (L16785) 、 CDC20 (U05340) 、 GNAI2 (X04828) 、 ARHA (L25080) 、 CNR2 (X74328) 、 PPP2R2B
(M64930) 、 SLC6A8 (L31409) 、 DDX9 (L13848) 、 ACATl (D90228)及ぴ PI3 (Z18538) か なる群から選択される単独又は複数の遺伝子 （括弧内は GenBank登録番号を 示す） であって癌細胞に強制発現させることによってパクリタキセルに対する感 受性を増強させる活性を示す遺伝子又は該遺伝子がコードするタンパク質を含有 する、 パクリタキセルに対する感受性増強薬。
3 3 . SRPK1 (U09564) 、 0AZ1 (D78361) 、 RPL34 (L38941) 、 ARHB (X06820) 、 RPS17 (M13932) 、 RPL28 (U14969) 、 TRIPll (L40380) 、 ZNF75 (S67970) 、 RPL 37 (D23661) 及ぴ PLOD (M98252) からなる群から選択される単独または複数の遺 伝子 （括弧内は GenBank登録番号を示す） であって、 癌細胞に強制発現させるこ とによって 5 -フルォロウラシルに対する感受性を增強させる活性を示す遺伝子 又は該遺伝子がコードするタンパク質を含有する、 5-フルォロウラシルに対する 感受性増強薬。
3 4 . RPS7 (M77233) 、 RPL23 (X52839) 、 CALT (X72946) 、 EEF1D (Z21507) 及び RPS15A (X84407) からなる群から選択される単独または複数の遺伝子 （括弧 内は GenBank登録番号を示す） であって、—癌細胞に強制発現させることによって ドキソルビシンに対する感受性を増強させる活性を示す遗伝子又は該遗伝子がコ 一ドするタンパク質を含有する、 ドキソルビシンに対する感受性増強薬。
3 5 . CALT (X72946) 、 ZNF165 (X84801) 及ぴ GPC1 (X54232) からなる群か ら選択される単独または複数の遺伝子 （括弧内は GenBank登録番号を示す） であ つて、 癌細胞に強制発現させることによってシスブラチンに対する感受性を増強 させる活性を示す遺伝子又は該遺伝子がコードするタンパク質を含有する、 シス ブラチンに対する感受性増強薬。
3 6 . INHBB (M31682)、 N 4 (M59807)、 HSPA1A (Ml 1717)、 L0C54557 (AF075050 ) 及び CD47 (Y00815) からなる群から選択される単独または複数の遺伝子 （括弧 内は GenBank登録番号を示す） であって、 癌細胞に強制発現させることによって マイトマイシン Cに対する感受性を増強させる活性を示す遺伝子又は該遺伝子が コードするタンパク質を含有する、 乳癌のマイ トマイシン Cに対する感受性増強 薬。
3 7 . EB1 (U24166) 、 JUN (J04111) 、 EIF3S8 (U46025) 、 CCL5 (M21121) 、 PHB (S85655) 、 HSPA1A (M11717) 、 SPP1 (X13694) 、 RAB7 (X93499) 、 CTSD (M11233) 、 ACTNl (X15804) 、 RXRB (M84820) 、 PSME2 (D45248) 、 HLA-C (Ml 1886)及ぴ RPL19 (X63527)からなる群から選択される単独または複数の遺伝子（括弧内は GenBank 登録番号を示す） であって、 癌細胞に強制発現させることによってマイトマイシ ン Cに対する感受性を増強させる活性を示す遺伝子又は該遺伝子がコードするタ ンパク質を含有する、 肝癌のマイトマイシン Cに対する感受性増強薬。
3 8 . TEAD4 (U63824) 、 R2C2 (U10990) 、 CSF1 (M37435) 、 RAB28 (X94703) 、 CBR3 (AB004854)、 NFYC (Z74792)、 PGF (X54936)、 ERG (M21535) 、 MLLT1 (L04285)、 FOS (K00650) 、 TNFAIP3 (M59465) 、 CNR2 (X74328) 、 DRPLA (D31840) 、 PSMB5 (D29011) 、 SLC6A8 (L31409) 、 SERPINB10 (U35459) 、 VAT1 (U18009) 、 TJP1 (L14837) 、 PELP1 (U88153) 、 C1QBP (L04636) 、 CDK10 (L33264) 、 SERPINA6 (J02943)、 ACTB (X00351) 、 SFRP4 (AF026692)、 EMX1 (X68879)、 RPS9 (U14971)、 AMDl (M21154) 、 RPL26 (X69392) 、 HNRPF (L28010) 、 PTMS (M24398) 、 STK12 (AF008552) 、 NR2F6 (X12794) 及ぴ GBE1 (L07956) からなる群から選択される 単独または複数の遺伝子 （括弧内は GenBank登録番号を示す） であって、 癌細胞 に強制発現させることによってマイトマイシン Cに対する感受性を増強させる活 性を示す遺伝子又は該遺伝子がコードするタンパク質を含有する、 胃癌のマイト マイシン Cに対する感受性増強薬。
3 9 . ALDH3B1 (U10868) 、 SRPK1 (U09564) 、 ALPP (M13077) 、 EB1 (U24166) 、 MAPKAPK (U12779) 、 GPI (K03515) 、 CTBPl (U37408) 、 HMGCL (L07033) 、 CAPZ
(U03271) 及ぴ ACAT1 (D90228) からなる群から選択される単独または複数の遺 伝子 （括弧内は GenBank登録番号を示す） であって、 癌細胞に強制発現させるこ とによってパクリタキセルに対する感受性を増強させる活性を示す遺伝子又は該 遺伝子がコードするタンパク質を含有する、 肝癌のパクリタキセルに対する感受 性増強薬。
4 0 . SRPK1 (画 564) 、 0AZ1 (D78361) 、 RPL34 (L38941) 、 ARHB (X06820) 、 RPS17 (M13932) 、 RPL28 (U14969) 、 TRIP 11 (L40380) 、 ZNF75 (S67970) 、 RPL37 (D23661) 及び PLOD (M98252) からなる群から選択される単独または複数の遺伝 子 （括弧内は GenBank登録番号を示す） であって、 癌細胞に強制発現させること によって 5-フルォロウラシルに対する感受性を増強させる活性を示す遺伝子又 は該遺伝子がコードするタンパク質を含有する、肝癌の 5 -フルォロウラシルに対 する感受性増強薬。
4 1 . RPS7 (M77233) 、 RPL23 (X52839) 、 CALT (X72946) 、 EEF1D (Z21507) 及ぴ RPS15A (X84407) からなる群から選択される単独または複数の遺伝子 （括弧 内は GenBank登録番号を示す） であって、 癌細胞に強制発現させることによって ドキソルビシンに対する感受性を増強させる活性を示す遺伝子又は該遺伝子がコ 一ドするタンパク質を含有する、 肝癌のドキソルビシンに対する感受性増強薬。
4 2 . CALT (X72946) 、 ZNF165 (X84801) 及び GPC1 (X54232) からなる群か ら選択される単独または複数の遺伝子 （括弧内は GenBank登録番号を示す） であ つて、 癌細胞に強制発現させることによってシスプラチンに対する感受性を増強 させる活性を示す遺伝子又は該遺伝子がコードするタンパク質を含有する、 肝癌 のシスブラチンに対する感受性増強薬。
4 3 . 遺伝子 HSPA1A (GenBank登録番号： M11717) または該遺伝子がコード するタンパク質を含有する、 マイトマイシン Cに対する感受性増強薬。
4 4 . 遺伝子 JUN (GenBank登録番号： J04111)または該遺伝子がコードするタ ンパク質を含有する、 マイトマイシン Cに対する感受性増強薬。
4 5 . 遺伝子 CTSD (GenBank登録番号： M11233)または該遺伝子がコードする タンパク質を含有する、 マイ トマイシン Cに対する感受性増強薬。
4 6 . 細胞に試験物質を添加し、 該細胞における
SF1 (D26121) 、 CBR3 (AB004854) 、 EMS1 (M98343) 、 JUN (J04111) 、 SFRS9 (U30825) 、 NMBR (M73482) 、 RBMX (Z23064) 、 S0D1 (M13267) 、 NOLI (X55504) 、 PELPl (U88153) 、 ARHA (L25080) 、 MRS (D32050) 、 匿 1 (X17620) 、 HNRPA2B1 (M29065) 、 NME2 (L16785) 、 VAT1 (U18009) 、 SERPINB10 (U35459) 、 KIAA0436 (AB007896) 、 DRPLA (D31840) 及ぴ MC3R (L06155) ； A腿（L25080)、 NME2 (L16785)、 VIL2 (X51521)、 YWHAQ (X56468)、 HKl (M75126)、 SATBl (M97287) 、 CAMLG (U18242) 、 CARS (L06845) 、 CCNBl (M25753) 、 U2AF1 (M96982) 、 PTMA (M26708) 、 MLCISA (M31211) 、 NMEl (X17620) 、 SARS (X91257) 、 CDC20 (U05340) 、 PPP4C (X70218) 、 TNFAIP3 (M59465) 、 EEFID (Z21507) 、 PFKP (D25328)、 ENTPD2 (U91510)、 CCL5 (M21121)、 ACATl (D90228)、 IQGAPl (L33075)、 PAX5 (M96944) 、 NRGN (Y09689) 、 K- ALPHA- 1 (K00558) 及ぴ NDUFB7 (M33374) ； ADH6 (M68895) 、 RAB28 (X94703) 、 U2AF1 (M96982) 、 GPCl (X54232) 、 HKl (M75126) 、 CARS (L06845) 、 TNFAIP3 (M59465) 、 K-ALPHA- 1 (K00558) 、 PFKP (D25328)、 GDI2 (D13988)、 VIL2 (X51521)、 RUNX2 (AF001450) 、應 2 (L16785)、 CDC20 (U05340). 、 GNI2 (X04828) 、 ARHA (L25080) 、 CNR2 (X74328) 、 PPP2R2B (M64930)、 SLC6A8 (L31409)、 DDX9 (L13848)、 ACATl (D90228)及ぴ PI3 (Z18538) ； INHBB (M31682) 、 NK4 (M59807) 、 HSPAIA (M11717) 、 L0C54557 (AF075050) 及び CD47 (Y00815) ；
EBl (U24166)、 JUN (J04111)、 EIF3S8 (U46025)、 CCL5 (M21121)、 PHB (S85655)、 HSPAIA (M11717) 、 SPPl (X13694) 、 RAB7 (X93499) 、 CTSD (M11233) 、 ACTNl (X15804)、 RXRB (M84820)、 PSME2 (D45248)、 HLA- C (Ml 1886)及び RPL19 (X63527) ； TEAM (U63824) 、 NR2C2 (U10990) 、 CSFl (M37435) 、 RAB28 (X94703) 、 CBR3 (AB004854) 、 NFYC (Z74792) 、 PGF (X54936) 、 ERG (M21535) 、 MLLTl (L04285) 、 FOS (K00650) 、 TNFAIP3 (M59465) 、 CNR2 (X74328) 、 DRPLA (D31840) 、 PSMB5 (D29011) 、 SLC6A8 (L31409) 、 SERPINBIO (U35459) 、 VATl (U18009) 、 TJPl (L14837) 、 PELPl (U88153) 、 CIQBP (L04636) 、 CDKIO (L33264) 、 SERPINA6 (J02943)、 ACTB (X00351) 、 SFRP4 (AF026692)、 EMXl (X68879)、 RPS9 (U14971)、 AMDl (M21154) 、 RPL26 (X69392) 、 HNRPF (L28010) 、 PTMS (M24398) 、 STK12 (AF008552) 、 R2F6 (X12794) 及ぴ GBEl (L07956) ；
ALDH3B1 (U10868) 、 SRPKl (U09564) 、 ALPP (M13077) 、 EBl (U24166) 、 MAPKAPK (U12779) 、 GPI (K03515) 、 CTBPl (U37408) 、 HMGCL (L07033) 、 CAPZ (U03271) 及 ACATl (D90228) ； SRPK1 (U09564) 、 0AZ1 (D78361) 、 RPL34 (L38941) 、 A腿 (X06820) 、 RPS17 (M13932)、 RPL28 (U14969)、 TRIP11 (L40380)、 ZNF75 (S67970)、 RPL37 (D23661) 及び PLOD (M98252) ；
RPS7 (M77233)、 RPL23 (X52839)、 CALT (X72946)、 EEF1D (Z21507)及ぴ RPS15A (X84407) ；及び
CALT (X72946) 、 ZNF165 (X84801) 及び GPC1 (X54232)
からなる群から選択される少なくとも 1以上の遺伝子 （括弧内は GenBank登録番 号を示す） の発現量を測定し、 試験物質を添加しない場合の該遺伝子の発現量と 比較して該遺伝子の発現を増加させる物質を、 抗癌剤に対する感受性を増強させ る候補物質として選択する、 抗癌剤に対する感受性を増強させる物質のスクリー ユング方法。
4 7 . 請求項 4 6に記載の方法によって取得された抗癌剤に対する感受性を 増強させる物質。
4 8 . 請求項 4 7に記載の物質を含む、 抗癌剤に対する感受性増強薬。
4 9 . SPTBN1 (M96803)、 PET112L (AF026851)、 CAPN1 (X04366)、 MEL (X56741)、 PACE (X17094) 、 DVL2 (AF006012) 、 L0C54543 (AJ011007) 、 PAPOLA (X76770) 、 RPLP2 (M17887) 、 及ぴ ARF4L (L38490) からなる群から選択される単独又は複数 の遺伝子 （括弧内は GenBank登録番号を示す） であって、 癌細胞において該遺伝 子の発現を抑制することで、 マイトマイシン Cに対する感受性を増強させる活性 を示す遺伝子の発現を抑制する siR Aもしくはァンチセンスポリヌクレオチド。
5 0 . H0XB1 (X16666) 、 F10 (K03194) 、 GPX2 (X53463) 、 NR1I2 (AF061056) 、 ANXA4 (M19383)、 PDLIM1 (U90878)、 LIPC (X07228)、 SERPINF2 (D00174)、 HSD17B1
(M36263)、 MAN2B1 (U60266)、 LSS (D63807)、 PIK3CG (X83368)、 DBN1 (U00802)、 NDUFA4 (U94586) 、 BDH (M93107) 、 BCL2L1 (Z23115) 、 EEF1B2 (X60656) 、 F2
(V00595)、 RARA (X06614) 、 ITGB4 (X53587)、 IMPA1 (X66922)、 PACE (X17094)、 AGA (M64073) 、 MVD (U49260) 、 EHHADH (L07077) 、 TFPI2 (D29992) 、 MARCKS
(M68956) 、 FGB (J00129) 、 及び GPD1 (L34041) からなる群から選択される単 独又は複数の遺伝子 （括弧内は GenBank登録番号を示す） であって、 癌細胞にお いて該遺伝子の発現を抑制することで、 ピノレルビンに対する感受性を増強させ る活性を示す遺伝子の発現を抑制する siRNAもしくはアンチセンスポリヌクレオ チド。
5 1 . NAP1L1 (M86667)、 H0XB1 (X16666)、 PACE (X17094)、 MA 2B1 (U60266)、 GPX2 (X53463) 、 DBNl (U00802) 、 ANXA4 (M19383) 、 SERPINF2 (D00174) 、 AGA
(M64073) 、 BCL2L1 (Z23115) 、 LIPC (X07228) 、 BDH (M93107) 、 LSS (D63807) 、 PDLIMl (U90878) 、 ZNF161 (D28118) 、 UBE2E1 (X92963) 、 TLEl (M99435) 、 RARA
(X06614)、 PTPR (L18983)、 APOE (M12529)、 F10 (K03194)、 NR1I2 (AF061056)、 UBE2L3 (X92962) 、 及ぴ FGB (J00129) から/よる群から選択される単独又は複数 の遺伝子 （括弧内は GenBank登録番号を示す） であって、 癌細胞において該遺伝 子の発現を抑制することで、 パクリタキセルに対する感受性を増強させる活性を 示す遗伝子の発現を抑制する siRNAもしぐはアンチセンスポリヌクレオチド。
5 2 · RPN2 (Y00282) 、 ATP50 (X83218) 、 CAST (D50827) 、 HPCA (D16593) 、 ZNF9 (M28372) 、 A2LP (U70671) 、 IL18 (D49950) 及び NRGN (Y09689) からなる 群から選択される単独または複数の遺伝子 （括弧内は GenBank登録番号を示す） であって、 癌細胞において該遺伝子の発現を抑制することで、 マイトマイシン C に対する感受性を増強させる活性を示す遺伝子の発現を抑制する siRNAもしくは ァンチセンスポリヌクレオチド。
5 3 . MAPK6 (X80692) 、 GCSH (M69175) 、 G22P1 (M32865)、 USP11 (U44839) 、 ACTB (X00351)、 YWHAZ (M86400)、 IL10 (M57627)、 RFC4 (M87339)、 CRLF1 (AF059293)、 RPS6 (M20020) 、 EMX1 (X68879) 及ぴ TK2 (U77088) からなる群から選択される 単独または複数の遺伝子 （括弧内は GenBank登録番号を示す） であって、 癌細胞 において該遺伝子の発現を抑制することで、 マイトマイシン Cに対する感受性を 増強させる活性を示す遺伝子の発現を抑制する siRNAもしくはァンチセンスポリ ヌクレオチド。
5 4 . PSMD8 (D38047)、 LAMP2 (J04183)、 CTSD (Ml 1233)、 AD0RA2B (M97759)、 ANXA4 (M19383) 、 PTPRK (Z70660) 、 RAD23A (D21235) 、 SDHA (D30648) 、 PET112L (AF026851)、 DAD1 (D15057)、 HSPB1 (X54079)、 PSMA6 (X61972)、 KDELR1 (X55885)、 B2M (AB021288) 、 M6PR (M16985) 、 GCLC (M90656) 、 SPTBNl (M96803) 、 PACE (X17094)、 RPL24 (M94314)、 SPINT2 (U78095)、 STX4A (U07158)、 SIAT8B (U33551)、 CTSK (U13665) 、 DCI (U24774) 、 MEL (X56741)、 PITPNB (D30037)、 YY1 (M76541) 、 RABl (M28209) 、 UBE2L6 (AF031141) 及ぴ PSMB7 (D38048) からなる群から選択 される単独または複数の遺伝子 （括弧内は GenBank登録番号を示す） であって、 癌細胞において該遗伝子の発現を抑制することで、 マイトマイシン Cに対する感 受性を増強させる活性を示す遺伝子の発現を抑制する siR Aもしくはアンチセン スポリヌクレオチド。
5 5 . C0X4AL (AF005888)、 RPS27A (X63237)、 F2 (V00595) 、 GFAP (J04569) 、 SCD (Y13647)、 YWHAZ (M86400)、 GCSH (M69175)、 SQLE (D78130)、 BCL2L1 (Z23115) 及ぴ RFC40 (M87338) からなる群から選択される単独または複数の遺伝子 （括弧 内は GenBank登録番号を示す） であって、 癌細胞において該遺伝子の発現を抑制 することで、 パクリタキセルに対する感受性を増強させる活性を示す遗伝子の発 現を抑制する siRNAもしくはアンチセンスポリヌクレオチド。
5 6 . CD81 (M33680) 、 H RPC (M16342) 、 AP2S1 (M97074) 、 GAPD (X01677) 、 PAFAH1B3 (D63391) 、 GBEl (L07956) 、 DEK (X64229) 、 PEA15 (X86809) PSMD7 (D50063) 及び UBE2E1 (X92963) からなる群から選択される 1個または複数の遺 伝子 （括弧内は GenBank登録番号を示す） であって、 癌細胞において該遺伝子の 発現を抑制することで、 5 -フルォロウラシルに対する感受性を増強させる活性を 示す遺伝子の発現を抑制する siRNAもしくはアンチセンスポリヌクレオチド。
5 7 . ADCY1 (L05500) 、 HNRPU (X65488) 、 C0X5A (M22760) 、 U2AF1 (M96982) 及び RPYR1 (U35232) からなる群から選択される 1個または複数の遺伝子 （括弧 内は GenBank登録番号を示す） であって、 癌細胞において該遺伝子の発現を抑制 することで、 ドキソルビシンに対する感受性を増強させる活性を示す遺伝子の発 現を抑制する siRNAもしくはアンチセンスポリヌクレオチド。
5 8 . TUBA1 (K00558) 、 GCP2 (X78686) 、 C0X5A (M22760) 、 GLA (X00351) 及び GNS (X06956) からなる群から選択される 1個または複数の遺伝子 （括弧内 は GenBank登録番号を示す） であって、 癌細胞において該遺伝子の発現を抑制す ることで、 シスブラチンに対する感受性を増強させる活性を示す遺伝子の発現を 抑制する siRNAもしくはァンチセンスポリヌクレオチド。
5 9 . 請求項 4 9力 ら 5 8の何れかに記載の siRNAもしくはアンチセンスポ リヌクレオチドを発現するベクター。
6 0 . 請求項 4 9から 5 8の何れかに記載の siRNAもしくはアンチセンスポ リヌクレオチド又は請求項 5 9に記載のベクターを含有する、 抗癌剤に対する感 受性増強薬。
6 1 . SPTBN1 (M968Q3)、 PET112L (AF026851)、 CAPN1 (X04366)、 MEL (X56741)、
PACE (X17094) 、 DVL2 (AF006012) 、 L0C54543 (AJ011007) 、 PAPOLA (X76770) 、
RPLP2 (M17887) 、 及ぴ ARF4L (L38490) ；'
H0XB1 (X16666) 、 F10 (K03194). 、 GPX2 (X53463) 、 NR1I2 (AF061056) 、 A XA4 (M19383) 、 PDLIM1 (U90878) 、 LIPC (X07228) 、 SERPI F2 (D00174) 、 HSD17B1 (M36263)、 MAN2B1 (U60266)、 LSS (D63807)、 PIK3CG (X83368)、 DBN1 (U00802)、
NDUFA4 (U94586) 、 BDH (M93107) 、 BCL2L1 (Z23115) 、 EEF1B2 (X60656) 、 F2 (V00595)、 RARA (X06614)、 ITGB4 (X53587)、 IMPA1 (X66922)、 PACE (X17094)、
AGA (M64073) 、 MVD (U49260) 、 EHHADH (L07077) 、 TFPI2 (D29992) 、 MARCKS (M68956) 、 FGB (J00129) 、 及ぴ GPD1 (L34041) ；
NAP1L1 (M86667) 、 H0XB1 (X16666) 、 PACE (X17094) 、 MA 2B1 (U60266) 、 GPX2 (X53463)、 DBN1 (U00802)、 ANXA4 (M19383)、 SERPINF2 (D00174)、 AGA (M64073)、 BCL2L1 (Z23115)、 LIPC (X07228)、 BDH (M93107)、 LSS (D63807)、 PDLIM1 (U90878)、 ZNF161 (D28118) 、 UBE2E1 (X92963) 、 TLEl (M99435) 、 RARA (X06614) 、 PTPRN (L18983)、 APOE (M12529)、 F10 (K03194)、 NR1I2 (AF061056)、 UBE2L3 (X92962)、 及ぴ FGB (J00129) ；
RPN2 (Y00282) 、 ATP50 (X83218) 、 CAST (D50827) 、 HPCA (D16593) 、 ZNF9 (M28372) 、 A2LP (U70671) 、 IL18 (D49950) 及ぴ NRGN (Y09689) ；
MAPK6 (X80692) 、 GCSH (M69175) 、 G22P1 (M32865) 、 USPll (U44839) 、 ACTB (X00351)、 YWHAZ (M86400)、 ILIO (M57627)、 RFC4 (M87339)、 CRLFl (AF059293)、
RPS6 (M20020) 、 EMX1 (X68879) 及ぴ TK2 (U77088) ；
PSMD8 (D38047) 、 LAMP2 (J04183) 、 CTSD (M11233) 、 AD0RA2B (M97759) 、 ANXA4 (M19383)、 PTPRK (Z70660)、 RAD23A (D21235)、 SDHA (D30648)、 PET112L (AF026851)、
DADl (D15057) 、 HSPBl (X54079) 、 PSMA6 (X61972) 、 KDELRl (X55885) 、 B2M (AB021288)、 M6PR (M16985)、 GCLC (M90656)、 SPTBNl (M96803)、 PACE (X17094)、
RPL24 (M94314) 、 SPINT2 (U78095) 、 STX4A (U07158) 、 SIAT8B (U33551) 、 CTSK (U13665) 、 DCI (U24774) 、 MEL (X56741) 、 PITPNB (D30037) 、 YYl (M76541) 、
RAB1 (M28209) 、 UBE2L6 (AF031141) 及ぴ PSMB7 (D38048) ；
C0X4AL (AF005888) 、 RPS27A (X63237) 、 F2 (V00595) 、 GFAP (J04569) 、 SCD (Y13647)、 YWHAZ (M86400) 、 GCSH (M69175) 、 SQLE (D78130)、 BCL2L1 (Z23115) 及ぴ RFC40 (M87338) ；
CD81 (M33680) 、 HNRPC (M16342)、 AP2S1 (M97074) 、 GAPD (X01677) 、 PAFAH1B3 (D63391) 、 GBEl (L07956) 、 DEK (X64229) 、 PEA15 (X86809) PSMD7 (D50063) 及び UBE2E1 (X92963) ；
ADCYl (L05500) 、 HNRPU (X65488) 、 C0X5A (M22760) 、 U2AF1 (M96982) 及ぴ
RPYR1 (U35232) ；及び
CALT (X72946) 、 ZNF165 (X84801) 、 GPCl (X54232) 、 TUBAl (K00558) 、 GCP2 (X78686) 、 C0X5A (M22760) 、 GLA (X00351) 及ぴ GNS (X06956)
からなる群から選択される遺伝子 （括弧内は GenBank登録番号を示す） にコード される蛋白質に対する抗体を含有する、 抗癌剤に対する感受性増強薬。
6 2 . 細胞に試験物質を添加し、 該細胞における
SPTBNl (M96803) 、 PET112L (AF026851) 、 CAPNl (X04366) 、 MEL (X56741) 、 PACE (XI 7094) 、 DVL2 (AF006012) 、 L0C54543 (AJ011007) 、 PAPOLA (X76770) 、 RPLP2 (M17887) 、 及ぴ ARF4L (L38490) ； HOXBl (X16666) 、 FIO (K03194) 、 GPX2 (X53463) 、 NR1I2 (AF061056) 、 A XA4 (M19383) 、 PDLIMl (U90878) 、 LIPC (X07228) 、 SERPI F2 (D00174) 、 HSD17B1 (M36263) 、 MAN2B1 (U60266)、 LSS (D63807)、 PIK3CG (X83368)、 DBNl (画 802)、
NDUFA4 (U94586) 、 BDH (M93107) 、 BCL2L1 (Z23115) 、 EEF1B2 (X60656) 、 F2 (V00595) 、 RARA (X06614) 、 ITGB4 (X53587) 、 IMPAl (X66922) 、 PACE (X17094) 、
AGA (M64073) 、 MVD (U49260) 、 EHHADH (L07077) 、 TFPI2 (D29992) 、 MARCKS (M68956) 、 FGB (J00129) 、 及ぴ GPDl (L34041) ；
NAPILI (M86667) 、 HOXBl (X16666) 、 PACE (X17094) 、 MAN2B1 (U60266) 、 GPX2 (X53463)、 DBNl (U00802)、 A XA4 (M19383)、 SERPINF2 (D00174)、 AGA (M64073)、
BCL2L1 (Z23115)、 LIPC. (X07228)、 BDH (M93107)、 LSS (D63807)、 PDLIMl (U90878)、
ZNF161 (D28118) 、 UBE2E1 (X92963) 、 TLEl (M99435) 、 RARA (X06614) 、 PTPRN (L18983)、 APOE (M12529)、 FIO (K03194)、 NR1I2 (AF061056)、 UBE2L3 (X92962)、 及ぴ FGB (J00129) ；
RPN2 (Y00282) 、 ATP50 (X83218) 、 CAST (D50827) 、 HPCA (D16593) 、 ZNF9 (M28372) 、 A2LP (U70671) 、 IL18 (D49950) 及び NRGN (Y09689) ；
MAPK6 (X80692) 、 GCSH (M69175) 、 G22P1 (M32865) 、 USPll (U44839) 、 ACTB (X00351)、 YWHAZ (M86400)、 ILIO (M57627)、 RFC4 (M87339)、 CRLFl (AF059293)、
RPS6 (M20020) 、 EMXl (X68879) 及ぴ TK2 (U77088) ；
PSMD8 (D38047) 、 LAMP2 (J04183) 、 CTSD (Ml 1233) 、 AD0RA2B ( 97759) 、 ANXA4 (M19383)、 PTPRK (Z70660)、 RAD23A (D21235)、 SDHA (D30648)、 PET112L (AF026851)ゝ
DADl (D15057) 、 HSPBl (X54079) 、 PSMA6 (X61972) 、 KDELRl (X55885) 、 B2M (AB021288)、 M6PR (M16985)、 GCLC (M90656)、 SPTBNl (M96803)、 PACE (X17094)、
RPL24 (M94314) 、 SPINT2 (U78095) 、 STX4A (U07158) 、 SIAT8B (U33551) 、 CTSK (U13665) 、 DCI (U24774) 、 MEL (X56741) 、 PITPNB (謂 037) 、 YYl (M76541) 、
RABl (M28209) 、 UBE2L6 (AF031141) 及ぴ PSMB7 (D38048) ；
C0X4AL (AF005888) 、 RPS27A (X63237) 、 F2 (V00595) 、 GFAP (J04569) 、 SCD (Y13647) 、 YWHAZ (M86400) 、 GCSH (M69175) 、 SQLE (D78130) 、 BCL2L1 (Z23115) 及ぴ RFC40 (M87338) ；
CD81 (M33680) 、 H RPC (M16342) 、 AP2S1 (M97074) 、 GAPD (X01677)、 PAFAH1B3 (D63391) 、 GBE1 (L07956) 、 DEK (X64229) 、 PEA15 (X86809) PSMD7 (D50063) 及ぴ UBE2E1 (X92963) ；
ADCY1 (L05500) 、 HNRPU (X65488) 、 C0X5A (M22760) 、 U2AF1 (M96982) 及ぴ RPYR1 (U35232) ；及ぴ
CALT (X72946) 、 Z F165 (X84801) 、 GPC1 (X54232) 、 TUBA1 (K00558) 、 GCP2 (X78686) 、 C0X5A (M22760) 、 GLA (X00351) 及ぴ GNS (X06956)
からなる群から選択される少なくとも 1以上の遺伝子 （括弧内は GenBank登録番 号を示す） の発現量を測定し、 試験物質を添カ卩しない場合の該遺伝子の発現量と ' 比較して該遺伝子の発現を減少させる物質を、 抗癌剤に対する感受性を増強させ る候補物質として選択する、 抗癌剤に対する感受性を増強させる物質のスクリー ユング方法。 ·
6 3 . 請求項 6 2の方法によって取得された抗癌剤に対する感受性を増強さ せる物質。
6 4 . 請求項 6 3に記載の物質を含む、 抗癌剤に対する感受性増強薬。
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