WO2004104163A2

WO2004104163A2 - α−選択的グリコシル化反応方法

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Publication number: WO2004104163A2
Application number: PCT/JP2004/007155
Authority: WO
Inventors: Hiromune Ando; Akihiro Imamura; Makoto Kiso; Hideharu Ishida
Original assignee: Japan Science & Tech Agency; Hiromune Ando; Akihiro Imamura; Makoto Kiso; Hideharu Ishida
Priority date: 2003-05-22
Filing date: 2004-05-19
Publication date: 2004-12-02
Also published as: CN100384862C; JP4599295B2; JPWO2004104163A1; EP1626053A2; CN1795199A; EP1626053A4; WO2004104163A3; US20060122379A1; EP1626053B1; US8148505B2

Description

明細書発明の名称 α—選択的グリコシル化反応方法技術分野

本発明は α—選択的グリコシル化反応方法に関し、更に詳しくは、ガラタトースその他の一定の基本構造を持つ糖構造体やその誘導体化合物、あるいはこれらの糠構造体や誘導体化合物を還元末端に持つ二糖以上のォリゴ糖な！/ヽし糖鎖における選択的なひーグリコシル化反応方法に関する。背景技術

近年、特にポストゲノム時代を迎えて、多細胞生物、特に高等生物の細胞内外の膜成分及び細胞外分子として存在する含糖鎖高分子が、その生体内での機能との関係で注目されている。含糖鎖高分子の代表的な一例として、糖タンパク質を挙げることができる。

一定の例外はあるが、ヒトをはじめとする多くの動物の細胞表面莫ゃ血清タンパク質のほとんどは糖タンパク質である。抗体、レセプター、ホルモン、酵素等も、単純タンパク質ではなく糖タンパク質であることが多い。そして旧来、これらの糖タンパク質の生体内での機能については、専らタンパク質構造だけで説明される例が多かった。しかしながら A B O (Η) 式血液型抗原の特異性が糖鎮部分の微妙な構造の違レ、によつて決定されていると言う事実が発見されて以来、多細胞生物の成立と維持に必要な様々な識別現象において、糖タンパク質における糖鎖のシグナルとしての役割が次第に大きくクローズアップされてきた。

即ち、動植物の組織、器管に広く分布する糖タンパク質において、遺伝情報によりタンパク質が発現された後に、グリコシルイ匕（糖鎖の付加）によって、タンパク質自身の機能に極めて特異的な生物学的選択性が与えられる。糖タンパク質における糖鎖のこのような重要性に鑑み、例えば糖鎖に由来するガン特異的抗原の研究等に例示されるような広範囲力膨大な研究が蓄積されてきており、同時に糖鎖構造（その配列や立体構造）の解析も飛躍的に進展している。

糖タンパク質糖鎖は、ポリぺプチドを構成するアミノ酸残基の Lーァスパラギンと結合した N _グリコシド結合型（ Asn結合型）と、 Lーセリン又は Lースレオニンと結合した O—グリコシド結合型（〇結合型）とに大別される。この内、 O結合型の糖鎖は各種の粘液タンパク質、血清タンパク質、膜タンパク質等に広範囲に見出される。このような O結合型の糖鎖としては、 N—ァセチルー D—ガラタトサミンをドナーとし Lーセリン又は L—スレオニンのアルコール性水酸基をァクセプターとした求核反応により、ひ一 O—グリコシド結合を形成するものが代表的である。

ところで、糖タンパク質糖鎖、あるいは糖タンパク質糖鎖を特異的に認識する機能性タンパク質として注目されているレクチン等を研究 ·解析する場合、試料としての糠タンパク質を、例えばマイクログラム程度以上の量に準備する必要がある。しかし通常、動植物の組織や細胞等において、目的とする糖タンパク質はナノグラム/ミリリツトルオーダーと言う極めて微量にしか存在しないため、必要な量の糖タンパク質試料を準備することは容易ではない。

そこで、 Asn結合型や O結合型の糖タンパク質の化学合成の研究が世界各国において精力的に行われてきた。 Asn結合型の糖タンパク質の化学合成研究はさておき、〇結合型の糖タンパク質の化学合成においては、糖ィヒ学に馴染み易い O ーグリコシド結合を扱うと言う点から、糖残基同士のグリコシノレ化反応方法の技術開発に準じて、今までに種々な手法が提案されている。

し力し、 O結合型の糖タンパク質の化学合成では、還元末端のガラクトサミンとアミノ酸のアルコール性水酸基との間のグリコシル化反応を如何に α—選択的に行わせるかと言う難関があった。即ち、 Ν—ァセチルー D—ガラクトサミンのグリコシル化反応では、 2位の Ν—ァセチルァミノ基が隣接基関与によってグリコシル化反応に干渉するため、かなりの比率で —グリコシル化反応が起こつてしまうと言う問題である。

この問題に対して、 Paulsen らは 2—アジド誘導体を利用した方法を提案している。その方法は、第 1図に示すように、 1 , 6 ; 2， 3—ジアンヒドロ糖（i ) を立体特異的にアジドア二オンで開裂して 2—アジド体（i i ) を得た後、これを変換して α—ブロミド（i V ) を合成し、次いでこれをテトラェチルアンモニゥムクロリドで処理することにより ]3—クロリド（V ) を得る。それによつて、 Koenigs-Knorr反応条件下で α—グリコシドを生成させる方法である。

その後、 Lemieuxと Ratcliffeにより簡便な 2一アジド糖の合成法が開発され、第 2図に示すように、 Ferrariと Paviaはこの合成法で得られた（x ) の化合物を変換して jS—クロリド（x i ) とし、次いで水銀塩をプロモーターとして L—セリン誘導体との縮合を試みて、 6 6 %の収率で α—グリコシド（X i i ) を得ている。

前記の Paulsenらは更に、第 2図の化合物（x i ) の不要なァノメリゼーションを抑えるために非極性の塩化メチレン Zトルエン混合溶媒中、過塩素酸銀一炭酸銀 ( 1 : 1 0 ) をプロモーターに用いた。そしてこの方法により、収率 8 5 %、 a ]3選択性が 1 9 ： 1と言う結果を得ている。

以上の各種の合成法、特に Paulsenらの過塩素酸銀一炭酸銀をプロモーターに用いる方法は、グリコシル化反応を α—選択的に行わせると言う前記の問題自体については優れた結果をもたらすが、ドナーの調製段階や、反応制御の困難さ等の点にぉレ、て現実的な汎用性に乏しいと言う共通の欠点があった。

本発明の目的は、 Ο結合型の糖タンパク質の化学合成も含め、一定の糖構造体における高度に選択的な α—グリコシル化反応を、簡易かつ便宜な手段によって可能とすることである。発明の開示

本願発明者は、ガラクトース等の糖構造体における一定の水酸基にシリルァセタール構造の保護基を形成するだけで、糖鎖ァクセプターに対して高度に選択的な α—グリコシル化反応を起こさせ得ることを見出した。

本願の第 1発明は、ドナーとしての糖構造体とァクセプター化合物のアルール性水酸基又はチオール基との間でグリコシル化反応を行わせる方法であり、 ( 1 ) 前記糖構造体として、単糖体であり又は二糖体以上のオリゴ糖ないし糖鎖の還元末端である 6炭糖以上の糖構造体であって、少なくとも 4位と 6位に水酸基を持ち、かつ 4位の水酸基がアキシャノレ配向で 5位の基がェカトリアル配向であると言う構造的条件を満たすものを用い、

( 2 ) この糖構造体の 4位と 6位の水酸基にわたつてシリルァセタール構造の保護基を環状に形成したもとで、

( 3 ) この糖構造体と前記アルコール性水酸基又はチオール基との間でグリコシル化反応を行わせることにより、

( 4 ) α / β比にぉレ、て _α—グリコシドを 8 0 %以上の比率で含む糖構造体グリコシドを得る、 α—選択的グリコシル化反応方法である。

第 1発明の α—選択的グリコシル化反応方法によれば、所定の糖構造体の 4 位と 6位の水酸基にわたつてシリルァセタール構造の保護基を環状に形成したもとで、ァクセプター化合物のアルコール性水酸基又はチオール基との間でダリコシルイ匕反応を行わせると言う極めて簡単な手段により、高度に選択的な α—ダリコシルイヒ反応を起こすことができる。得られるダリコシド中の α—ァノマーの比率は、一般的に 8 0 %以上である。

本願発明者がこの効果を見出した合成実験においては、ドナーたる Ν—ァセチルガラクトサミンには上記シリルァセタール構造の保護基の他に 2 , 2 , 2— トリクロ口エトキシカルボニル基（Troc基）等も存在し、ァクセプター化合物はジシァリルガラクトースであった。しかし、実施例において後述するように、これらの各要素について検証実験を順次行うことにより、高度な _α—選択的ダリコシルイヒ反応を可能にしたものが、上記シリルァセタール構造の保護基の形成であることを、確認している。

この α—選択的グリコシル化反応方法は、後述のように、 Ο結合型の糖タンパク質の化学合成に関して問題となってきた Ν—ァセチルァミノ基のグリコシル化反応への干渉を受けない。更に、同じ観点から提案されてきた従来技術、例えば前記した Paulsenらの 2—アジド誘導体を利用する方法、 Ferrariと Paviaによるその改良法等に比較して、極めて簡便な操作であり、現実的な汎用性を備える化学合成法である。従って、糖タンパク質糖鎖ゃレクチン等を研究 '解析する場合における研究試料としての糖タンパク質を、簡単な化学合成によって調製することが可能となった。

又、第 1発明の一選択的グリコシル化反応方法は、所定の条件を備える糖構造体（ドナー）と、少なくともアルコール性水酸基又はチオール基を備えるァクセプター化合物との間で一般的に成立し、上記のような o結合型の糖タンパク質の合成に限定されない。即ち、ドナーが単糖やオリゴ糖であっても良いし、了クセプター化合物としては、アルコール性水酸基又はチオール基を備える限りにおいて、アミノ酸、ペプチド鎖、単糖、糖鎖、及びその他の種類の任意の有機化合物を使用することが可能である。

本願の第 2発明においては、前記第 1発明に係る糖構造体が、以下（a) 〜 (d) のいずれかである。

(a) D—ガラクトース又は L一ガラクトース

(b) D—グロース又は L一グロース

(c) 2—デォキシ一D—ガラクトース又は 2—デォキシ一 L一ガラクトース

(d) 上記（a) 〜（c) のいずれかを基本構造とする 7炭糖

α—選択的グリコシル化反応方法において、ドナーたる糖構造体は第 1発明で述べた一定の構造的条件を満たすことが必要であるが、その構造的条件を満たす代表的なものとして、第 2発明の（a) 〜（d) に列挙するいずれかの糖構造体を例示することができる。

本願の第 3発明においては、前記第 1発明又は第 2発明に係る糖構造体が、 D体においては C 1立体配座（即ち、「 ⁴CL 」ビラノシド構造）であり、 L体においては 1 C立体配座（即ち、「 'C₄ 」ビラノシド構造）である。

ドナーたる糖構造体としては、 D体である糖構造体においては C 1立体配座 1S L体である糖構造体においては 1 C立体配座が、それぞれ優先配座となるため、特に好ましレ、。但し、 D体である糖構造体における 1 C立体配座のもの、 L 体である糖構造体における C 1立体配座のものについても、第 1発明の作用 ·効果を発現できる可能性を否定しない。本願の第 4発明においては、前記第 1発明〜第 3発明のいずれかに係るシリルァセタール構造の保護基がジアルキルシリレン基である。

前記糖構造体の 4位と 6位の水酸基にわたって形成する環状の保護基は、シリルァセタール構造である限りにおいて限定されないが、より好ましくは、ジァルキルシリレン基を形成することができる。

本願の第 5発明においては、前記第 4発明に係るジアルキルシリレン基が、ジー —ブチル）一シリレン基（D T B S基）である。

ジアルキルシリレン基としては、とりわけ、ジ一（tーブチル）ーシリレン基（D T B S基）が好ましい。

本願の第 6発明においては、前記第 1発明〜第 5発明のいずれかに係るシリルァセタール構造の保護基形成に当たり、予め、糖構造体における所定の反応性官能基に対して保護基修飾を行う。

第 6発明のような一定の保護基修飾を行うことは、糖構造体における前記シリルァセタール構造の保護基形成に当たり、あるいはその後の一選択的グリコシル化反応に当たり、不要な副反応の抑制に有効である。更に、ドナー又はァクセプターの構成部分である糖やアミノ酸等における特定の官能基に対して更に他の糖等を付加したい場合に備え、他の保護基に影響なく脱保護が可能な保護基によってその官能基を修飾しておくことも有効である。

本願の第 7発明においては、前記第 6発明に係る保護基修飾において、アミノ基に対する保護基が 2， 2， 2—トリクロロェトキシカルボニル基（Troc基）である。

糖構造体が（特に 2位に）アミノ基を備える場合、例えばガラクトサミンやダルコサミン等のァミノ糖におけるアミノ基を保護する場合には、従来はフタ口ィル基（Phth基）が汎用されてきた。し力しながら、 Phth基は導入効率が悪く大量合成に不向きである。又、例えば反応系にシアル酸等が共存している場合には、 Phth基の脱保護の際に一般的にヒドラジンを用いるため、そのメチルエステルへの攻撃によるアミド類の生成を回避するために、ー且メチルエステルを除去しておき、後に遊離のカルボン酸を再度メチルエステルイ匕する、と言う脱保護の際

― g― の面倒を伴う。これらの点に関し本願発明者は、ひーグリコシドの効率的合成の見地から、ァミノ基を Troc基で保護することが適切であることを見出した。

本願の第 8発明においては、前記第 1発明〜第 7発明のいずれかに係る糖構造体が、隣接基関与によってひ一選択的グリコシルイ匕反応に干渉する置換基を 2 位に有するものである。

前記第 1発明の作用 .効果の内、特に有利な点の一つが、通常のグリコシルィ匕反応においては隣接基関与によって一選択的グリコシル化反応に強く干渉する置換基を 2位に有する糖構造体においても、高度に選択的な α—グリコシルイ匕反応を確保できる点である。

本願の第 9発明においては、前記第 8発明に係る 2位の置換基が Troc基ゃァセチル基と結合したアミノ基である。

糖構造体の 2位の置換基が、 Troc基ゃァセチル基と結合したァミノ基である場合（第 6発明や第 7発明によつて Troc基ゃァセチル基で修飾された場合を含む）に、一般的には強い隣接基関与を示すことが知られている。又、前記のように、そのことが O結合型の糖タンパク質の化学合成における大きな障害になっていた。従って、このような場合には第 1発明の α—選択的ダリコシル化反応方法を行うメリツトが、とりわけ大きレヽ。

本願の第 1 0発明においては、前記第 1発明〜第 9発明のいずれかに係るァクセプター化合物として、アルコール性水酸基又はチオール基を有するアミノ酸、これらのいずれかのアミノ酸を構成残基として含有するペプチド鎖、単糖、あるいは二糖以上のオリゴ糖ないし糖鎖を用いる。

a一選択的グリコシル化反応方法で用いるァクセプター化合物としては、ァルコール性水酸基又はチオール基を持つ限りにおいて限定されないが、第 1 0発明に規定する化合物のいずれかを好ましく例示することができる。図面の簡単な説明

第 1図は、従来技術に係るひ一選択的グリコシル化反応方法のフローを示す図である。第 2図は、従来技術に係る選択的グリコシル化反応方法のフローを示す図である。第 3図は、本発明の実施例に係る α—選択的グリコシル化反応を示す図である。発明を実施するための最良の形態

次に、本願の各発明を実施するための形態を、その最良の形態を含めて説明する。以下において単に「本発明」と言うときは本願の各発明を指している。

〔 a一選択的グリコシル化反応方法〕

本発明の α—選択的グリコシルイヒ反応方法は、糖構造体（糖ドナー）と、ァルコール性水酸基又はチオール基を有する化合物（糖ァクセプター）との間でグリコシル化反応を行わせる方法である。その特徴は、糖構造体の 4位と 6位の水酸基にわたってシリルァセタール構造の保護基を環状に形成したもとで、ァクセプター化合物との間でグリコシル化反応を行わせる点にある。その結果、得られる糖構造体ダリコシドの内、 a / jS比において a—ダリコシドを 8 0 %以上の比率で含むと言う高度に α—選択的なグリコシル化反応方法が可能となる。

シリルァセタール構造の保護基を形成するに当たり、糖構造体における 4位と 6位の水酸基以外の一定の反応性官能基を予め保護基修飾することが、「第 8 発明の作用 ·効果」欄で前記した各種の理由から、好ましい。予め保護基修飾すべき反応性官能基の種類及び糖構造体における位置は限定されず、必要に応じて適宜に保護基修飾を行えば良いが、糖構造体の 2位のアミノ基又は水酸基、 3位の水酸基に対する保護基修飾を代表的に例示することができる。

2位のアミノ基に対する保護基としては、例えばァセチル基、トリハロアセチル基、レブリノィル基、フタロイル基、 Troc基等のァシル系保護基全般を挙げることができる。 2位の水酸基に対する保護基としては、ァセチル基、モノハロァセチル基、ジハロアセチル基、レブリノィル基、ベンゾィル基、ビバロイル基等のァシル系保護基全般を挙げることができる。 3位の水酸基に対する保護基としては、ァセチル基、ベンゾィル基、ビバロイル基等のァシル系保護基の他、ベンジル基、 p—メトキシベンジル基、ァリル基等のエーテル系保護基を挙げることができる。上記の各種保護基の内、 2位のァミノ基又は水酸基に対する保護基の多くは、通常のグリコシル化反応においては強い隣接基関与を示し、 _α—選択的なダリコシル化反応に対しては重大な障害になるものであるが、前記のように本発明に係る a一選択的グリコシルイ匕反応方法においては、そのような懸念がない。

〔 a一選択的グリコシル化反応方法の反応条件等〕

本発明の α—選択的グリコシル化反応方法を行うに当たり、反応条件、反応系におけるドナーとァクセプターの濃度、反応触媒の利用等については別段の限定がなく、必要に応じて適宜に設計することができる。

但し、反応条件について、好ましくは、塩ィ匕メチレン等の非極性溶媒を用レ、、反応温度は一 3 0 ° C〜0 ° Cの範囲で行うことができる。又、反応系におけるドナーとァクセプターの濃度は、好ましくは、 0 . 1 M程度とすることが望ましレ、。反応系におけるドナーとァクセプターの濃度比については、基本的には化学量論的に決定すれば良いが、より好ましくは、ァクセプターに対して 1 . 5等量モノレ程度のドナーを用いることができる。

〔糖構造体〕

本発明で用いる糖構造体は、少なくとも 4位と 6位に水酸基を持ち、かつ 4 位の水酸基がアキシャル配向で 5位の基がェカトリアル配向であると言う構造的条件を満たす 6炭糖以上の糖構造体である。糖構造体は、単糖体としても、二糖体以上のオリゴ糖ないし糖鎖の還元末端としても、用いることができる。

糠構造体の種類は上記に該当する限りにおいて限定されなレ、が、以下の（a ) 〜（d ) のいずれかを代表的に例示することができる。これらはいずれも、任意の置換基が任意の位置に導入された誘導体、例えば D/ L—ガラクトースにおける N—ァセチルガラクトサミン等の置換基誘導体を包含する概念である。

( a ) D—ガラクトース又は L—ガラクトース

( b ) D—グロース又は Lーグロース

( c ) 2—デォキシ一D—ガラクトース又は 2—デォキシ一L一ガラクトース

( d ) 上記（1 ) 〜（3 ) のいずれかを基本構造とする 7炭糖

又、「第 3発明の作用 '効果」の欄で前記した理由から、これらの糖構造体は、 D体においては六員環の C 1立体配座 ( ⁴ C , ビラノシド構造）であることが好ましく、 L体においては六員環の 1 C立体配座 ( ^X C ₄ ビラノシド構造）であることが好ましいが、力かる条件に該当しない糖構造体も使用できる可能性を否定しない。

〔シリルァセタール構造の保護基形成〕

糖構造体の 4位と 6位の水酸基にわたって形成する環状の保護基は、シリルァセタール構造のものである限りにおいて限定されないが、特にジアルキルシリレン基を、とりわけジ一（t—プチル）一シリレン基（D T B S基）を、好ましく例示することができる。その他にも、ジ一イソプロピル一シリレン基、ジ一ィソブチルーシリレン基、ジー n—プチルーシリレン基、ジー n—プロピルーシリレン基等も、好ましく例示することができる。

〔ァクセプタ一化合物〕

本発明で用いるァクセプタ一化合物は、基本的にアルコール性水酸基又はチオール基を有する有機化合物であれば良い。ァクセプター化合物の好ましい例示として、アルコール性水酸基又はチオール基を有するァミノ酸、例えばセリン、スレオニン、システィン等を挙げることができる。本発明は有機合成法の一種であるから、 L—アミノ酸、 D—アミノ酸ともに利用できることは勿論である。

又、上記のいずれかのアミノ酸を構成残基として含有するペプチド鎖（オリゴペプチド又はポリペプチド）も、ァクセプター化合物として好ましく例示することができる。単糖、あるいはニ耱以上のォリゴ糖なレ、し糖鎖も好ましく例示することができる。

更に、上記以外の一般的な有機のアルコール化合物又はチオール化合物、例えばメチルアルコール、エチルアルコール、ェチルメルカプタン等も、ァクセプター化合物として利用可能である。実施例

次に本発明の実施例を説明する。本発明の技術的寧囲は、これらの実施例によって限定されるものではない。〔実施例 1 ：ァクセプター化合物の合成〕

まず、コロミン酸から得られた下記ィ匕学式 1のシアル酸ダイマーにつき、そのカルボキシル基をメチルエステルイ匕して下記ィヒ学式 2に示すシアル酸ダイマーを得た。その際、非還元末端側のカルボキシル基は還元末端側の 8位の水酸基とラクトンを形成させた。更に、この化学式 2に示すシアル酸ダイマーにおけるァノメリック位のァセチル基をフエ二ルチオ基（ SPh基）に変換することにより、下記化学式 3に示すジシァリルガラクトースを得た。なお、化学式 1〜化学式 3 において、「Ac」はァセチル基を、「 SPh」はフエ二ルチオ基を意味する。

【化学式 1】

【化学式 2】

1 - 【化学式 3】

次に、下記化学式 4に示すように保護基で修飾されたガラクトースを別途準備した。化学式 4において、「BnJ はベンジル基を、「SE」は 2— (トリメチノレシリル）ェチル基を意味する。

【化学式 4】

そして、化学式 3に示すジシァリルガラクトースと化学式 4に示すガラクトースとを、反応条件の検討から好適と思われた所定の反応条件下で縮合させた。こうして生成した α , ]3の立体異性体混合物から、一定の組成の溶離液を用いるシリカゲルク口マトグラフィ一により、下記化学式 5に示すひ異性体を分離した。この化学式 5に示すィヒ合物を、本発明に係る α—選択的ダリコシル化反応方法に用いるァクセプター化合物とした。化学式 5に示す a異性体は 2— (トリメチルシリル）ェチル〔メチル 5— ァセトアミドー 8— O— (5—ァセトアミドー 4， 7 , 8, 9—テトラー O—ァセチル一3, 5—ジデォキシ一 D—グリセロー oj—D—ガラクトー 2—ノヌロピラノシロノ一 1' , 9—ラクトン）一4, 7—ジ一0—ァセチル一 3, 5—ジデォキシ一D—グリセ口一α— D—ガラクトー 2—ノヌロビラノシロネート〕一（2 →3) 一 2, 6—ジ一 Ο—ベンジルーガラクトピラノシドである。

【化学式 5】

〔実施例 2 ：糖構造体の合成〕

まず、 1位の水酸基を Sph基で、 2位のアミノ基を Troc基でそれぞれ保護した、下記化学式 6に示すガラクトサミントリオール誘導体を所定の合成プロセスによって調製した。このガラクトサミントリオール誘導体は「 ⁴d 」ビラノシド構造を持つ。 - 次に、ジ一 t—プチルシランに脱離基としてトリフルォロメタンスルホン酸が付いた DTBS (OT f ) ₂ を用いて、所定の反応条件下、化学式 6に示すィ匕合物の 4, 6位に DTB Sを導入し、 4， 6位にシリルァセタール構造の保護基を有する下記ィヒ学式 7に示す化合物を得た。

更に、化学式 7に示す化合物に対してピリジン溶媒中で TrocC 1を作用させ、 3位に Troc 基が導入された下記化学式 8に示す化合物を得た。この化学式 8 の化合物を、本発明に係る 0；—選択的グリコシル化反応方法に用レヽる糖構造体（ガラタトサミンドナー）とじた。

化学式 8に示す化合物は、フエニル 2—デォキシー 4， 6— O—ジー tert 一プチルシリレン一 1—チォ一 3— O— （2， 2 , 2—トリクロ口エトキシカノレボニル）ー2— （2 , 2 , 2—トリクロ口エトキシカルボニルァミノ）一 ]3— D 一ガラクトピラノシドである。

【化学式 6】

【化学式 7】

4 - 【化学式 8】

〔実施例 3 ：グリコシル化反応〕

第 3図に示すように、化学式 8に示す糖構造体と、化学式 5に示すァクセプター化合物とから、以下に述べるプロセスによって、下記ィ匕学式 9に示すグリコシドを得た。

化学式 9に示すグリコシドは、 2— （トリメチルシリル）ェチル〔メチル 5—ァセトアミドー 8 _〇_ (5—ァセトアミドー 4, 7, 8， 9ーテトラ一0 —ァセチル一3, 5_ジデォキシ一 D—グリセ口一 a— D—ガラクトー 2—ノヌロビラノシロノ一 1， , 9一ラタトン）一4, 7—ジ一0—ァセチルー 3， 5- ジデォキシ _D—グリセ口一 α—D—ガラクト一2—ノヌロビラノシロネート一 (2→3) 〕一〔2—デォキシー 4， 6— O—ジー tert—ブチルシリレン一 3— 0- (2, 2, 2—トリクロ口エトキシカルボニル）一 2 (2, 2, 2—トリクロ口エトキシカルボニルァミノ）一 α— D—ガラタトピラノシル〕一 2, 6— ジ一 Ο—べンジ Λ^— β— D—ガラクトビラノシドである。【化学式 9】

即ち、まず、化学式 8に示す糖構造体（1 1 8mg, 0. 1 5 5mmo 1 ) と、化学式 5に示すァクセプター化合物（1 0 Omg, 7 7. 4 m o 1 ) とを、 5. 0m 1のジクロロメタンに溶解し、 MS 4A (20 Omg) を加え、室温にて 1時間攪拌した。その後、 0。 Cに冷却し、 70mg即ち 0. 3 1 0mmo l の N—ヨウ化コハク酸イミド（N I S) と 2. 1即ち 3 1. Ο μπιο 1のトリフルォロメタンスルホン酸（T f OH) を加えて、攪拌した。

そして薄層クロマトグラフィー（TLC) で反応の進行を確認しながら、途中、化学式 8に示す糖構造体 (1 1 8mg) 、 N I S (7 Omg) 、 T f OH (2. 7 μ l ) をそれぞれもう一回ずつ加えた。結局、攪拌は 3 2時間行った。

反応の終了を TLC (A c OE t/Me OH= 1 5/1) によって確認した後、生成した固形物をセライトにて濾別し、クロ口ホルムで洗浄した。次に、濾液と洗浄液とを合わせてクロ口ホルムで希釈し、有機層を s a t . Na ₂ C0₃ 、 s a t . N a ₂ S₂ 0₃ 、 B r i n eの順で洗浄し、 N a ₂ SO₄ で乾燥 ·濃縮した後、得られたシラップをカラムクロマトグラフィーに供して、その溶出溶媒中から、化学式 9に示すグリコシド（1 1 3 m g， 7 5 %) を得た。

〔実施例 1〜実施例 3の考察〕

ところで上記実施例 1〜実施例 3は、当初の目的としては、ジシァリルガラクトースュニットの合成を目的として行った実験の一部であった。そして本願発明者の予測としても、化学式 8の糖構造体の 2位のァミノ基を隣接基関与が予想される Troc基としていること等から、化学式 8の糖構造体と化学式 5のァクセプタ一化合物との j3—グリコシドが得られるであろう、と予想していた。

し力しながら、得られた化学式 9のグリコシドは、 ¹ H _ NMRで解析したところ、意外にも α—ダリコシドであり、 ]3—グリコシドと思われる生成物を確認できなかつた。この他にも、下記表 1のように、上記の実施例 3と同様の内容であるが、反応温度、ドナー、ァクセプターの使用濃度及び反応時間のみを少し変更した合成実験（上記の実施例 3は表 1の Entry No. 1に相当する）を行った力いずれの合成実験例（ Entry No. ) においても、 ct—グリコシドのみが表 1 の収率で得られ、 —ダリコシドと思われる生成物を確認できなかった。

【表 1】

Entry Temp. Cone. Time Yield

0°C 4bmM 32h (75%)

2 0°C 300mM 32h (68%)

3 -30°C→0°C 300mM U7h (70%)

なお、表 1の収率の欄（「Y i e 1 d」）の百分比数値をカツコ付きで表記した理由は、 ¹ H— NMRにおいて r 0 t a m e rと思われる不純シグナルが混在していたためである。この現象の原因を詳述することは控えるが、 D T B S基の影響によるものであることが分かった。

実施例 1〜実施例 3のような合成反応系において高度に選択的な _α—グリコシル化反応を達成できるとなると、従来から有力な改良合成法の開発が求められている、例えば Ο結合型糖鎖の化学合成等についての極めて簡単で有利な新規合成手段を提供できることになる。そこで、実施例 1〜実施例 3において α—選択的ダリコシルイ匕反応を可能にした要素がどの点に存するのかを確認するため、引き続き、次の実施例 4〜実施例 6及び比較例 1を行つた。

〔実施例 4 ：ァクセプター化合物の変更（1) 〕

グリコシル化反応に対する立体障害の少ない 2—ァダマンタノール（下記化学式 1 0に示す）をァクセプター化合物に用い、以下のようにして、その水酸基への糖構造体ドナーの導入を試みた。

【化学式 1 0】

即ち、前記した化学式 8の糖構造体（5 0mg, 6 5. 6 /zmo l ) と、ァクセプター化合物たる化学式 1 0の 2—ァダマンタノール（30mg， 0. 1 9 7mmo 1 ) とを 2. 6 m 1のジクロロメタンに溶解し、 MS 4 A ( 8 0 m g ) を加え、室温にて 1時間攪拌した。その後、 0° Cに冷却して、 N I S (3 0m g, 0. 1 3 l mmo 1 ) , Τ f OH (1. 2 μ I , 1 3. 1 ^mo 1 ) を加えて、 1時間攪拌した。

反応の終了を TLC (A c OE t/H e x a n e = l/3) により確認した後、生成した固形物をセライトにて濾別し、クロ口ホルムで洗浄した。次に、濾液と洗浄液とを合わせてクロ口ホルムで希釈し、有機層を s a t . N a ₂ C0₃ 、 s a t . Na ₂ S₂ 〇₃ 、 B r i n eの順で洗浄し、 N a ₂ S0₄ で乾燥 ·減圧濃縮した後、得られたシラップをカラムクロマトグラフィーに供した。

そして、カラムクロマトグラフィーの溶出溶媒（Ac OE t/He X a n e = 1/20) 中から縮合反応に係るグリコシドを得た。このグリコシドを構造解析（ — NMRによる。以下同様。）したところ、 i3—グリコシドも 8%程度見られたが、 8 5 %の収率で α—グリコシドが得られていた。

〔実施例 5 ：ァクセプター化合物の変更（2) 〕

本発明の糖での応用を視野に入れ、 1級アルコールであるグルコース（下記化学式 1 1に示す）をァクセプター化合物に用い、以下のようにして、その 6位水酸基への糖構造体ドナーの導入を試みた。

【化学式 1 1】

即ち、前記した化学式 8の糖構造体（50mg， 6 5. 6 m o 1 ) と、ァクセプター化合物たる化学式 1 1の化合物（n—へキシルー 2， 3， 4一トリー O—ァセチル一 ]3— D—ダルコビラノシド； 38mg， 98. 4 μιαο 1 ) とを、 2m ίのジクロロメタンに溶解し、 MS 4 A (1 0 Omg).を加えた後、室温にて 1時間攪拌した。その後、 0° Cに冷却し、 N I S (3 Omg, 0. 1 3 1m mo l) 、 T f OH (l. 2 μ 1 , 1 3. l /^mo l ) を加えて、 5時間攪拌した。

反応の終了を TLC (Ac OE t/He x a n e = l/ 2 ) により確認した後、生成した固形物をセライトにて濾別し、クロ口ホルムで洗浄した。次に、濾液と洗浄液とを合わせてクロ口ホルムで希釈し、有機層を s a t. Na ₂ C0₃ 、 s a t. Na ₂ S₂ O₃、 B r i n eの順で洗浄し、 N a ₂ SO₄ で乾燥 ·減圧濃縮した後、得られたシラップをカラムクロマトグラフィ一に供した。

そして、カラムクロマトグラフィーの溶出溶媒 (Ac OE t/He x a n e = 1/4) 中から、縮合反応に係るグリコシドを得た。このグリコシドを構造解析したところ、驚くべきことに 90%の高収率でひ一ダリコシドが得られていた。 TLC上で —グリコシドの可能性のあるスポットも見られたが、単離'同定には至っていない。

〔実施例 6 ：糖構造体の 3位保護基の変更〕

次に、糖構造体における 3位の保護基の影響を検証するため、前記化学式 8 の糖構造体における 3位の保護基であった Troc基を同じァシル系のァセチル基に変更した下記化学式 1 2に示すィヒ合物を糖構造体ドナーとして用レ、、以下のようにして、実施例 5と同じ化学式 1 1のグルコースァクセプターの 6位水酸基への糖構造体ドナーの導入を試みた。

【化学式 1 2】 '

即ち、化学式 1 2の糖構造体（5 Omg, 79. 5 ^ m o 1) とァクセプタ一化合物たる化学式 1 1の化合物（47m g, 0. 1 1 9mmo 1 ) とを 2m l のジクロロメタンに溶解し、 MS 4A (1 0 Omg) を加えた後、室温にて 1時間攪拌した。その後、 0° Cに冷却し、 N I S (36mg， 0. 1 59 mm o 1 ) , Τ f OH (1. 4 μ 1 , 1 5. 9 //mo 1 ) を加えて 30分間攪拌した。

反応の終了を TLC ( A c O E t /H e x a n e = l/ 2) により確認した後、生成した固形物をセライトにて濾別し、クロ口ホルムで洗浄した。次に、濾液と洗浄液とを合わせてクロ口ホルムで希釈し、有機層を s a t. Na ₂ CO₃ 、 s a t. Na₂ S₂ O₃ 、 B r i n eの順で洗浄し、 N a ₂ S0₄ で乾燥 ·減圧濃縮した後、得られたシラップをカラムクロマトグラフィ一に供した。

そして、カラムクロマトグラフィーの溶出溶媒（A c〇E tZH e X a n e = 1/4) 中から、化学式 1 3に示すィヒ合物を得た。その収量は 6 9mgであり、、収率にして実に 96%と言うほぼ定量的なものであった。この結果は驚くべきものであると考える。

【化学式 1 3】

〔比較例 1 ： D T B S基で保護しなレ、糖構造体の使用〕

ここで、糖構造体の 4位と 6位の水酸基にわたってシリルァセタール構造の保護基を有しない糖構造体ドナーとして、下記化学式 1 4に示す化合物〔3， 4， 6 _トリー O—ァセチル一 2—デォキシ— 1ーチォ一 2— (2, 2, 2—トリクロロエトキシカルボニルァミノ） — —D—ガラクトビラノシド〕を用い、以下のようにして、前記化学式 5に示すァクセプター化合物とのグリコシル化反応を

^み 7こ。

【化学式 1 4】

即ち、化学式 1 4の糖構造体（1. 1 0 g, 1. 9 3mmo 1 ) とァクセプター化合物たる化学式 5の化合物（1. 0 0 g, 0. 7 74mm o 1 ) とを、 7 7m 1のジクロロメタンに溶解し、 MS 4 A (2 g) を加えた後、室温にて 1時間攪拌した。その後、 0 ° Cに冷却し、 N I S (8 6 8mg, 3. 8 6mmo l) 、 T f OH (34 μ I , 0. 3 8 6 mm o 1 ) を加えて 1時間攪拌した。

反応の終了を TLC (A c〇E t/Me OH= 1 5/1) により確認した後、生成した固形物をセライトにて濾別し、クロ口ホルムで洗浄した。次にこの濾液と洗浄液とを合わせてクロ口ホルムで希釈し、有機層を s a t . N a ₂ CO₃ 、 s a t . N a ₂ S₂ 0₃ , B r i n eの順で洗浄し、 N a ₂ SO₄ で乾燥 '濃縮した後、得られたシラップをカラムクロマトグラフィーに供した。

そして、カラムクロマトグラフィーの溶出溶媒（A c OE t) 中から、下記の化学式 1 5に示すグリコシドを収量 9 94mg、収率 7 3 %で得た。このダリコシドを構造解析した結果、 β—グリコシドであることが分かつた。【化学式 1 5】

〔実施例 4〜実施例 6及び比較例 1の考察〕

実施例 4及び実施例 5の結果を実施例 3の結果と併せて考えると、ァクセプター化合物の種類又は化学構造は α—選択的ダリコシル化反応の可否を規定する要素ではないと考えられる。従って、本発明に係る α—選択的グリコシルイ匕反応に用い得るァクセプター化合物としては、通常のダリコシル化反応におけるァクセプタ一化合物の条件たるアルコール性水酸基又はチオール基を備えてレ、れば足りる、と考えられる。

次に、実施例 6の結果から、糖構造体における 3位の保護基の種類も _α—選択的グリコシルイ匕反応の可否を規定する要素ではないと考えられる。

—方、上記の各実施例において生成したダリコシドの全量あるいはほぼ全量が _α—グリコシドであったのに対して、比較例 1のように、. 4位と 6位の水酸基にわたつてシリルァセタール構造の保護基を有しない糖構造体ドナーを用いた場合にのみ、生成したグリコシドの全量が ]3—グリコシドであった。従って、本発明に係る一選択的グリコシル化反応の可否を規定する要素は、「糖構造体ドナ一の 4位と 6位の水酸基にわたって、シリルァセタール構造の保護基が環状に形成されていること」である。

〔実施例 7 ：ァミノ糠ドナーにおける 2位保護基の隣接基関与（1 ) 〕次に、 2位にアミノ基を有するガラクトサミンやダルコサミンをァクセプタ一化合物に α—選択的に導入したい場合、 2位ァミノ基の保讀基による隣接基関与が大きな障害になってきたことは、従来技術に関して前記した通りである。そこで、化学式 8に示す糖構造体における 2位のアミノ基の保護基であった Troc 基を、それよりも明らかに隣接基関与が強いと認知されている保護基に変更しても a—選択的ダリコシル化反応を確保できるか否かを検証するため、以下の実施例 7を行った。

即ち、化学式 8の化合物における 2位の Troc基を Bz基に変更（なお、実際には 3位の Troc基も同様に変更）した下記化学式 1 6の化合物を糖構造体ドナ一として用い、以下のようにして、実施例 5と同じ化学式 1 1のグルコースァクセプターの 6位水酸基への糖構造体ドナーの導入を試みた。

【化学式 1 6】

まず、化学式 1 6の糖構造体（50mg， 80. 5 πιο 1 ) とァクセプタ一化合物たる化学式 1 1の化合物（4 7m g， 0. 1 2 lmmo 1 ) とを 2m l のジクロロメタンに溶解し、 MS 4A (1 0 Omg) を加えた後、室温にて 1時間攪拌した。その後、 0° Cに冷却し、 N I S (36mg, 0. 1 6 1mmo l) 、 T f OH (1. μ I , 1 6. 1 m o 1 ) を加えて 20時間攪拌した。

反応の終了を TLC (Ac OE t/He x a n e = l/2) により確認した後、生成した固形物をセライトにて濾別し、クロ口ホルムで洗浄した。次に、濾液と洗浄液とを合わせてクロ口ホルムで希釈し、有機層を s a t. Na₂ C0₃ 、 s a t. Na₂ S₂ 〇₃ 、 B r i n eの順で洗浄し、 N a ₂ S O₄ で乾燥 ·減圧濃縮した後、得られたシラップをカラムクロマトグラフィーに供した。

そして、カラムクロマトグラフィーの溶出溶媒（Ac OE t He X a n e = 1/5) 中から、下記化学式 17に示すひーグリコシド化合物（構造解析にて確認、）を得た。その収量は 51 m gであり、収率は 71 %であった。 β—グリコシドは単離されず、他の若干の副産物を生成した。

【化学式 17】

〔実施例 8 ：ァミノ糖ドナーにおける 2位保護基の隣接基関与（2) 〕実施例 7の場合と同様の理由から、化学式 8に示す糖構造体における 2位のァミノ基の保護基であった Troc基を、それよりも明らかに隣接基関与が強いと認知されている Phth基に変更（なお、実際には 3位の Troc基もァセチル基に変更）した下記化学式 18の化合物を糖構造体ドナーとして用い、以下のようにして、実施例 5と同じ化学式 1 1のグルコースァクセプターの 6位水酸基への糖構造体ドナーの導入を試みた。

【化学式 18】

化学式 18の糖構造体（100mg， 0. 17 Immo 1 ) と、ァクセプタ一化合物たる化学式 11の化合物（10 Omg, 0. 256mmo 1 ) とを 4. 3mlのジクロロメタンに溶解し、 MS4A (20 Omg) を加えた後、室温にて 1時間攪拌した。その後 0° Cに冷却し、 NI S (77mg, 0. 342mm o 1 ) , Τ f OH (3 μ 1 , 34. 2 m ο 1 ) を加えて 30分間攪拌した。

反応の終了を TLC (AcOE t/He x a n e = l/ 2) により確認した後、生成した固形物をセライトにて濾別し、クロ口ホルムで洗浄した。次に、濾液と洗浄液とを合わせてクロ口ホルムで希釈し、有機層を s a t. Na₂ C0₃ 、 s a t. Na₂ S₂ O₃ 、 B r i n eの順で洗浄し、 N a ₂ S0₄ で乾燥 ·減圧濃縮した後、得られたシラップをカラムクロマトグラフィーに供した。

そして、カラムクロマトグラフィーの溶出溶媒（Ac OE t/He X a n e = 2/5) 中から、下記化学式 19に示すひーグリコシド化合物（構造解析にて確認）を得た。その収量は 14 lmgであり、収率は 95。/。であった。【化学式 1 9】

〔実施例 7及び実施例 8の考察〕

実施例 7及び実施例 8の結果から、本発明に係るひ一選択的ダリコシル化反応方法は、従来より問題となっていた隣接基関与の強弱に影響されることなく達成され、従つて汎用性の高！/、方法であることが確認された。 - 〔実施例 9 ：ひ一ガラクトサミンーセリンの合成〕

前記したように、ガラクトースタイプの糖構造体ドナーにおけるひ一選択的グリコシルイ匕反応の最も利用価値の高いケースは、 O結合型糖鎖の化学合成であると考えられる。そこで、 O結合型糖鎖における糖鎖とペプチドの結合部位を構成する a—ガラクトサミン一 Lーセリン又はひ一ガラクトサミン一 L—スレオニンの内、後者のケースを選択して、以下のようにひ一選択的グリコシル化反応方法を試みた。

まず、ガラクトサミンドナーには、後の糖鎖延長を考慮して、 3位に Troc 基を導入した化学式 8の糖構造体を用いた。セリンの側も、後のペプチド鎖延長を考慮して、化学式 20及び化学式 21のように保護基を導入した 2種類のものを準備した。下記実施例 9—1及び実施例 9一 2に述べるように、ァミノ酸の保護基の違いにより幾分かの収率の差異は見られたが、いずれの場合にも予想通りの高いひ一選択性を示した。

【化学式 20】

【化学式 21】

(実施例 9一 1)

化学式 8の糖構造体（122mg, 0. 16 Ommo 1 ) と、ァクセプター化合物たる化学式 20の化合物（N—べンジルォキシカルボ二ルー Lーセリン.一ペンタフルオロフェニノレエステル； 50mg， 0. 123mmo 1 ) とを、 2. 8mlのジクロロメタンに溶解し、 MS4A (17 Omg) を加えた後、室温にて 1時間攪拌した。その後、 0° Cに冷却して、 N I S (72mg, 0. 320 mmo l) 、 T f 〇H (2. 8 μ 1 , 32. 0 μπιο 1 ) を加えた後、 30分間攪拌した。

反応の終了を TLC (AcOE t/He x a n e = l/2) により確認した後、生成した固形物をセライトにて濾別し、クロ口ホルムで洗浄した。次に、濾液と洗浄液とを合わせてクロ口ホルムで希釈し、有機層を s a t. Na₂ C0₃ 、 s a t. Na ₂ S₂ 0₃ B r i n eの順で洗浄し、 N a ₂ S0₄ で乾燥 ·減圧濃縮した後、得られたシラップをカラムクロマトグラフィ一に供した。

そして、カラムクロマトグラフィーの溶出溶媒（Ac OE tZHe X a n e = 1/3) 中から、期待した通りの α—ダリコシドである a—ガラクトサミン一セリン（構造解析にて確認）を得た。その収量は 1 1 7 m gであり、収率は 90% であった。

(実施例 9— 2)

化学式 8の糖構造体（1 00mg， 0. 1 3 lmmo 1 ) と、ァクセプターィ匕合物たる化学式 2 1の化合物（N— 9一フルォレニルメトキシカルボ-ルー L ーセリン一ペンタフノレオロフェニルエステノレ； 5 Omg, 0. 1 0 1 mm o 1 ) とを、 2. 3m 1のジクロロメタンに溶角旱し、 MS 4 A (1 5 Omg) を加えた後、室温にて 1時間攪拌した。その後、 0° Cに冷却し、 N I S (59mg, 0. 262mmo l ) 、 T f OH (2. 3 μ 1 , 26. 2 umo 1 ) を加え、 30分間攪拌した。

反応の終了を TLC (AcOE t/He x a n e = l/2) により確認した後、生成した固形物をセライトにて濾別し、クロ口ホルムで洗浄した。次に、濾液と洗浄液とを合わせてクロ口ホルムで希釈し、有機層を s a t. Na ₂ CO₃ 、 s a t. Na ₂ S₂ 〇₃ 、 B r i n eの順で洗浄し、 N a ₂ S0₄ で乾燥 ·減圧濃縮した後、得られたシラップをカラムクロマトグラフィーに供した。

そして、カラムクロマトグラフィーの溶出溶媒（Ac OE tZHe X a n e = 1/3) 中から、期待した通りの α—グリコシドである α—ガラクトサミン一セリン（構造解析にて確認、）を得た。その収量は 9 lmgであり、収率は 78% でめった。

〔実施例 10 ：糖構造体の 1位保護基の変更〕

次に、前記化学式 8の糖構造体における 1位水酸基の保護基（ Sph基）を、ィ： SCH₃ 基、口： F基、ハ： OC (NH) CC 1₃ 基にそれぞれ変更した糖構造体を用い、これらと 2—ァダマンタノールとの間で α—選択的グリコシル化反応方法を行った。

(実施例 10-1)

アルゴン気流下、糖構造体ィ（150mg， 0. 214mmo 1 ) と 2—ァダマンタノール（21. 7mg, 0. 143mmo l) を 3. 5mlのジクロ口メタンに溶解し、 MS4A (17 Omg) を加えて室温で 1時間攪拌した後に、 0° Cに冷却して、 NI S (96. 4mg, 0. 428mmo 1 ) 、 T f OH (3. 8 μ 1 , 42. 8 Atmo 1 ) を加えて、 30分間攪拌した。

反応の終了を TLC (AcOE t/He x a n e = l/3) で確認した後、生成した固形物をセライトにて濾別しクロ口ホルムで洗浄した。次に濾液と洗浄液とを合わせてクロ口ホルムで希釈し、有機層を s a t . Na₂ C0₃ 、 s a t. Na₂ S₂ 〇₃ 、 B r i n eの順で洗浄し、 N a ₂ SO₄ で乾燥 ·減圧濃縮した後、得られたシラップをシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供した。溶出溶媒（AcOE t/He x a n e^lZS O) 中から得たグリコシドを構造解析したところ、 0—グリコシドも 1 1%程度 (13mg) 見られたが、 85% (10 6mg) の収率で α—グリコシドが得られた。

(実施例 10— 2)

アルゴン気流下、糖構造体口（150mg, 0. 223mm o 1) と 2—ァダマンタノール（22. 6mg, 0. 148mmo l) を 3. 7mlのジクロ口メタンに溶解し、 MS4A (17 Omg) を加え室温で 1時間攪拌した後 0 ° C に冷却し、遮光下にて S nC 1₂ (42· 3mg, 0. 223 mm o 1 ) 、 A g C 10₄ (55. 5mg, 0. 267mm o 1 ) を加え 16時間攪拌した。

反応の終了を TLC ( A c O E t /H e x a n e = l/ 4) で確認した後、生成した固形物をセライトにて濾別しクロ口ホルムで洗浄した。次に濾液と洗浄液とを合わせてクロ口ホルムで希釈し、有機層を s a t. N a HCO₃ 、 B r i neの順で洗浄し、 Na₂ S0₄ で乾燥'減圧濃縮した後、得られたシラップをシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供した。溶出溶媒（AcOE t/He x a n e = 1/30) 中から得たグリコシドを構造解析したところ、 β—グリコシドも 10%程度 (12mg) 見られたが、 78% (93mg) の収率で α—ダリコシドが得られた。

(実施例 10— 3)

アルゴン気流下、糖構造体ノヽ（150mg， 0. 184mmo 1) と 2—ァダマンタノール（18. 7mg, 0. 123mmo l) を 3. 1mlのジクロ口メタンに溶角牟し、 AW— 300 (17 Omg) を加え室温で 1時間攪拌した後、 0° Cに冷却し、 TMSO f (0. 670 μ 1 , 3. 68 ^ m ο 1 ) を加え、 3 ◦分間攪拌した。

反応の終了を TLC (AcOE t/He x a n e = l/ 3) で確認した後、生成した固形物をセライトにて濾別しクロ口ホルムで洗浄した。次に濾液と洗浄液とを合わせてクロ口ホルムで希釈し、有機層を s a t. NaHC〇₃ 、 B r i n eの順で洗浄し、 N a 2 S0₄ で乾燥 ·減圧濃縮した後、得られたシラップをシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供した。溶出溶媒（AcOE t/He x a n e = l/30) 中から得たグリコシドを構造解析したところ、 β—グ])コシドも 9%程度（9mg) 見られたが、 87% (86mg) の収率で _α—グリコシドが得られた。産業上の利用分野

以上のように、本発明によれば、糖構造体における高度に選択的な α—ダリコシル化反応が、簡易かつ便宜な方法によつて可能となる。

一 3

Claims

請求の範囲

1. ドナーとしての糖構造体とァクセプター化合物のアルコール性水酸基又はチオール基との間でグリコシル化反応を行わせる方法であって、

( 1 ) 前記糖構造体として、単糖体であり又は二糖体以上のオリゴ糖ないし糖鎖の還元末端である 6炭糖以上の糖構造体であって、少なくとも 4位と 6位に水酸基を持ち、かつ 4位の水酸基がアキシャル配向で 5位の基がェカトリアル配向であると言う構造的条件を満たすものを用い、

(2) この糖構造体の 4位と 6位の水酸基にわたってシリルァセタール構造の保護基を環状に形成したもとで、

(3) この糖構造体と前記アルコール性水酸基又はチオール基との間でグリコシル化反応を行わせることにより、

(4) α/β比にぉレ、て α—グリコシドを 8 0 %以上の比率で含む糖構造体グリコシドを得るひ一選択的グリコシル化反応方法。

2. 前記糖構造体が、以下（a) 〜（d) のいずれかである請求の範囲 1項に記載のひ一選択的グリコシル化反応方法。

(a) D—ガラクトース又は L—ガラクトース

(b) D—グロース又は L一グロース

(d) 上記（a) 〜（c) のいずれかを基本構造とする 7炭糖

3. 前記糖構造体が、 D体においては C 1立体配座 ( ⁴C_t ビラノシド構造）であり、 L体においては 1 C立体配座（ ¹C₄ ビラノシド構造）である請求の範囲 1項又は 2項に記載のひ一選択的グリコシル化反応方法。

4. 前記シリルァセタール構造の保護基がジアルキルシリレン基である請求の範囲 1項〜 3項のいずれかに記載の α—選択的グリコシル化反応方法。

5. 前記ジアルキルシリレン基が、ジー（t—プチル）シリレン基（DT B S基）である請求の範囲 4項に記載の一選択的グリコシル化反応方法。

6. 前記シリルァセタール構造の保護基形成に当たり、予め、糖構造体における所定の反応性官能基に対して保護基修飾を行う請求の範囲 1項〜 5項のいずれかに記載の α—選択的グリコシル化反応方法。

7 . 前記保護基修飾において、アミノ基に対する保護基が 2 , 2 , 2—トリクロロェトキシカルボニル基（Troc基）である請求の範囲 6項に記載の α—選択的ダリコシル化反応方法。

8 . 前記糖構造体が、隣接基関与によってひ一選択的グリコシルイヒ反応に干渉する置換基を 2位に有するものである請求の範囲 1項〜 7項のいずれかに記載の a一選択的グリコシル化反応方法。

9 . 前記 2位の置換基が Troc基ゃァセチル基と結合したアミノ基である請求の範囲 8項に記載の a一選択的グリコシル化反応方法。

1 0 . 前記ァクセプター化合物として、アルコール性水酸基又はチオール基を有するアミノ酸、これらのいずれかのアミノ酸を構成残基として含有するぺプチド鎖、単糖、あるいは二糖以上のオリゴ糖ないし糖鎖を用いる請求の範囲 1項〜 9項のいずれかに記載のひ一選択的グリコシル化反応方法。