JPH0195A - α−グリコシルセラミド誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 【産業上の利用分野］ 本発明はα−グリコシルセラミド誘導体及びその製造方
法に関するものであり、更に詳しくはスフィンゴ糖脂質
に類似したα−グリコシルセラミド誘導体及びその製造
方法に関するものである。

［従来の技術］ スフィンゴ糖脂質は一般にセラミド（Ｎ−アシルスフィ
ンゴシン）の第１級水酸基が単糖またはオリゴ糖にβ−
結合でグリコシド結合している”ものである。これらは
主に動物界に存在し、細胞膜の構成成分として知られて
いるが、細胞増殖や運動制御における情報媒介分子、細
胞の種類や分化過程に関連した細胞膜抗原分子、酵素や
蛋白質抗原などの生理活性分子の活性調節作用など、さ
まざまな機能が明らかにされてきている。しかし、この
様な脂質セラミドの第１級水酸基が単糖またはオリゴ糖
にα−結合したものは知られていなかった。

［発明が解決すべき問題点］ 糖脂質の糖鎖は、蛋白質のそれと同様、癌に関連した抗
原決定部位として、またヒトの代表的アロ抗原であるＡ
ＢＯ血液型物質の抗原決定部位として重要である。特に
α（１−３）結合の２−アセトアミド−２−デオキシヘ
キソピラノシル基、例えば２−アセトアミド−２−デオ
キシガラクトピラノシル基を持つ化合物はＡ型の抗原関
連物質として知られている。従って、これらの抗原に対
する抗体を産生させることのできる感作用抗原として働
く化合物を開発することは重要な技術的課題である。

［問題点を解決するための手段］ 本発明は一般式（１） ％式％ （式中Ｒ及びＲ２はいずれか一方が水素で他方■ は水酸基であり、Ｒ及びＲ４はいずれか一方が水素で他
方は水酸基又は（１→４）結合のへキサピラノシル基で
あり、Ｒ５は炭素数１０ないし２５のアルキル基であり
、Ｘ　及びＸ２はそれぞれ水素又は両者合体して形成さ
れる二重結合を表わし、ｎは１０ないし２５の正の整数
を表わす）で表わされるα−グリコシルセラミド誘導体
を提供するものである。

本発明のα−グリコシルセラミド誘導体の糖脂質部分は
Ｒが水酸基、Ｒが水素、Ｒ３が水素で、Ｒ４がヘキサピ
ラノシル置換された又は無置換の水酸基のときＮ−アセ
チル−α−Ｄ−グルコサミン又はその誘導体の骨格を有
する。

またＲ　が水酸基、Ｒが水素、Ｒ３がヘキサピラノシル
基で置換された又は無置換の水酸基で、Ｒ４が水素のと
きＮ−アセチル−α−Ｄ−ガラクトサミン又はその誘導
体の骨格を有する。

Ｒ又はＲ４の置換基としてのヘキサピラノシル越として
はＤ−グルコピラノシル基及びＤ−ガラクトピラノシル
基を代表例として例示することができる。

セラミド部分のＲ５として代表的な基はへブタ′デシル
基であり、このときＲ５は隣接するアミドカルボニル基
とともにステアロイルアミド基を構成する。またｎの代
表例は、セラミドがスフィンゴシンなどの天然物由来の
原料から調製されるとき１２である。

ＸｌとＸ２が両者合体して二重結合を形成するときは、
セラミド部分は通常の型となり、Ｘｌ及びＸ２が水素の
場合はその水素添加体の型となる。

本発明のα−グリコシルセラミド誘導体は一般式（１１
）、即ち は低級アシルオキシ基であり、Ｒ及びＲ１４はいずれか
一方が水素で他方は低級アシルオキシ基又はその水酸基
が低級アシル基でペルアシル化された（１−４）結合の
ヘキソピラノシル基であり、Ｒは低級アシル基でありＲ
５は炭素数１０ないし２５の低級アルキル基でありＲ７
は第２級水酸基の保護基であり、ｎは１０ないし２５の
正の整数を表わす）で表わされるα−（２−アジド−２
−デオキシピラノシル）セラミド誘導体を■）そのアジ
ド部分にトリフェニルホスフィンを付加させたのち加水
分解してアジド基をアミノ基に変換し、又は ２）水素添加によってセラミド部分の二重結合を飽和結
合とし、かつアジド基をアミノ基に転換し、 形成されたアミノ基をアセチル化し、保護基Ｒ７を離脱
させ、かつ低級アシルオキシ基を水酸基に変換して前記
一般式（１）のα−グリコシルセラミド誘導体とするこ
とによって製造することかできる。

保護基Ｒ７としてはベンジル基、アセチル基、ベンゾイ
ル基、ベンジルオキシカルボニル基などを例示すること
ができる。

一般式（１１）で表されるα−（２−アジド−２−デオ
キシヘキソピラノシル）セラミド誘導体（以下一般式（
！Ｉ）のセラミド誘導体という）は一般式（ＩＩ＋）、
即ち （式中Ｒ、Ｒ、Ｒ、ＲＲは前記同様 ８　　１１　　１２　　１３ゝ　１４ の意味を表し、Ｘはハロゲン原子を表す）で表されるペ
ルアシル−２−アジド−２−デオキシ糖ハロゲン化物を
分子篩及び銀塩触媒の存在下に、−般式（！Ｖ）、即ち Ｈ （式中Ｒ及びＲ７は前記同様の意味を表す）で表される
セラミド類とを反応させることによって調製することが
できる。

本発明の方法で一般式（Ｉ＋）で表されるセラミ、ド誘
導体にトリフェニルホスフィンを付加させるためには、
このセラミド誘導体の有機溶媒溶液中にトリフェニルフ
ォスフインを加え、必要に応じて撹拌を行って保持する
ことによって行うことができる。用いる有機溶媒として
はテトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、ジオキサン
などを例示することができる。その使用量は限定的でな
く出発物質を溶解することができる量以上あればよいが
、通常一般式（１１）のセラミド誘導体１垂量部に対し
て３ないし３０重量部程度を用いる。

トリフェニルフォスフインの量は当量以上、好ましくは
一般式（Ｉ＋）のセラミド誘導体１モルに対して５モル
程度以下用いる。

反応温度は限定的でなく、室温程度の温度で行なってよ
いが−２０ないし５０”Ｃ程度の温度を用いることがで
きる。

反応時間は反応条件によって変り得るが室温程度の温度
での反応では一２０時間程度で充分である。

トリフェニルフォスフイン付加体の加水分解は反応系に
水を加えることによって容易に達成できる。

加える水の量は当量以上であることが必要であるがその
上限は全く限定的でない。通常付加体１モルに対して水
２モルないし１００モル程度用いる。

反応温度は限定的でなく、溶媒系が凍結しない程度の温
度から溶媒系の沸点までの温度で行なうことができるが
、室温付近で行なってよい。

反応時間は反応温度により変り得るが、通常数時間ない
し１日程度である。

生成物は溶媒抽出、液体クロマトグラフィなどによる分
離等の慣用の手段で精製回収できる。

本発明の方法で一般式（Ｉりのセラミド誘導体を水素添
加によってそのセラミド部分の二重結合を飽和結合とし
、かつアジド基をアミノ基に転換することは、このセラ
ミド誘導体を慣用の方法、例えばメタノール、エタノー
ル、酢酸等の溶媒中、酸化白金、ラネーニッケル、パラ
ジウム−硫酸バリウム、パラジウム−炭素などを触媒と
して接触還元することによって容易に達成することがで
きる。この接触還元は常圧で行なうことができる。

また溶媒や触媒の量、反応温度その他の反応条件はすべ
て慣用の条件でよい。生成物は溶媒抽出、液体クロマト
グラフィなどによる分離等の慣用の手段で精製回収でき
る。　アセチル化はピリジン等の溶媒中無水酢酸等のア
セチル化剤により慣用の方法で行なうことがことができ
る。その使用量も慣用量でよく、例えばアミノ基に対し
て工ないし１０倍量程度のアセチル化剤と重量比で１０
ないし１００倍量程度の溶媒を使用できる。

生成物は通常の方法で精製分離できる。

次の工程の脱アシル化は無水メタノール、無水エタノー
ル等の溶媒中触媒量の金属ナトリウム（ナトリウムアル
コラード）により容易に行うことができる。この反応は
通常のアシルオキシ基の脱アシル化と全く同様に行なう
ことができる。

この工程でセラミド部分の第二級水酸基も脱保護される
。

［作用］ 本発明のα−グリコシルセラミド誘導体はこれで哺乳動
物を感作することによってその糖鎖部分に対する抗体を
産生させることができる。

以下本発明を実施例で更に詳しく説明する。

なお実施例中で用いたセラミドは下記の構造を有する天
然物由来のものである。

Ｈ 実施例１ ２−アジド−２−デオキシ−３，４，６−トリー〇−ア
セチルーα−Ｄ−ガラクトピラノシル１−１　（３−０
−ベンゾイル）セラミド３位水酸基をベンゾイル化した
セラミド４０ｍｇ。

モレキュラーシーブ４人１００ｍｇ、炭酸銀１１００Ｉ
Ｉ１．過塩素酸銀５０ｍｇを塩化メチレン５　ｍｌに加
えて、アルゴン気流下に室温でよく攪はんした。これに
、２−アジド−２−デオキシ−３，４，６一トリー〇−
アセチルーα−Ｄ−ガラクトピラノシルクロライド４０
ｍｇを塩化メチレンに溶かした溶液を滴下した。室温で
４０時間攪はんを続け、反応終了後、反応液を口過し、
塩化メチレンでよく洗浄して溶液を減圧濃縮した。残さ
を酢酸エチル：ｎ−ヘキサン−１：３の混合溶媒を使用
してシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した。

精製画分を集めて蒸発乾固し、３２．４ａ＋ｇの固体を
得た。

’Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｊ２３）の測定結果より、δ−４
，９０ｐｐｍ（Ｊ　　−３，６６Ｈｚ）に■−２ α結合した時のアノマー位プロトンが見られ、６．６１
ｐｐｍに−ＮＨＣＯ−１５．５７ｐｐｍと５．９４ｐｐ
ｍに二重結合プロトンが、そして、赤外吸収スペクトル
において、２１２０ｃｍ−’にアジドの吸収が見られる
ことから、このものは２−アジド−２−デオキシ−３，
４，６−トリー〇−アセチルーα−Ｄ−ガラクトピラノ
シル１−１（３−０−ベンゾイル）セラミドであると確
認された。

実施例２ ２−アジド−２−デオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノシ
ル１−１　（３−０−ベンゾイル）セラミド３２．Ｏａ
＋ｇを乾燥したテトラヒドロフラン６　ｍｌに溶解し、
トリフェニルフォスフイン５．５ａ＋ｇを加えて、室温
で攪はん、した。反応が終了した時点で水を加えた。酢
酸エチルで抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥後、溶液を
減圧濃縮した。残さを酢酸エチル：ｎ−ヘキサン−１＝
１、続いて、クロロホルム：メタノール−９：１の混合
溶媒を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーに
かけて分離精製した。精製画分を直ちに、無水酢酸を用
いてアセチル化した。反応液を常法により処理して、残
さを酢酸エチル：ｎ−ヘキサン−１＝１の混合溶媒を用
いて、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけて分
離精製した。精製画分から２０．６ｓｇのシロップを得
た。

’Ｈ−ＮＭＲＣＣＤＣ１３）の測定結果より、０．９ｐ
ｐｍにメチル基、１．２ｐｐｍ付近に−ＣＨ２−，２，
０５ｐＩ）ｍｌニーＮＨＣＯＣＨ３゜５．５ｐｐｍ付近
に二重結合のプロトン、７．２−８．２ｐｐｍに芳香族
プロトンが確認された。

従って、このものは、２−アセタミド−２−デオキシ−
３，４，６−）ジ−０−アセチル−α−り一ガラクトピ
ラノシル１−１　　（３−０−ベンゾイル）セラミドで
あると確認された。

実施例３ ２−アセタミド−２−デオキシ−３，４，６−トリー〇
−アセチルーα−Ｄ−ガラクトピラノシルー−１（３−
０−ベンゾイル）ジヒドロセラミド ２−アセタミド−２−デオキシ−３，４，６−トリー〇
−アセチルーα−Ｄ−ガラクトピラノシルー−１（３−
０−ベンゾイル）セラミド２８．５ｍｇをメタノール２
０ｍ１にとかし、酸化白金１．４ｍｇを加えて、反応器
を水素で置換して激しく攪はんした。４８時間後、反応
液を口過してメタノールでよく洗浄し、口演を約半分に
減圧濃縮し、無水酢酸を加えて、室温で一夜攪はんした
。

反応液を減圧濃縮した。残さをクロロホルム：メタノー
ル−９８：２の混合溶媒を使用して、シリカゲルカラム
クロマトグラフィーで精製した。精製画分を集めて減圧
濃縮し、２０．９＋ａｇのシロップを得た。

’Ｈ−ＮＭＲＣＣＤＣ１３）の測定結果より、δ−６．
５６ｐｐｍ　（Ｊ−９，４５Ｈｚ）にセラミド部分の−
ＮＨＣＯ−１６．０７ｐｐｍ（Ｊ−９，４５Ｈｚ）に−
ＮＨＣＯＣＨ３が見られたが、５．５ｐｐｍ付近に二重
結合プロトンが見られなかった。従って、このものはセ
ラミド部分の二重結合が飽和した２−アセタミド−２−
デオキシ−３，４，６−）リーＯ−アセチルーα−Ｄ−
ガラクトピラノシル１−１　　（３−０−ベンゾイル）
ジヒドロセラミドであると確認した。

実施例４ ２−アセタミド−２−デオキシ−３，４，６−トリー〇
−アセチルーα−Ｄ−ガラクトピラノシル１−１　（３
−０−ベンゾイル）セラミド２０．６ｎｇを乾燥したメ
タノールに溶解し、これに無水メタノールに溶解したナ
トリウムメチラートを少量加えて室温で攪はんした。反
応終了後、イオン交換樹脂（ＩＲ−１２０Ｂ）を使用し
て中和した。樹脂を口過してメタノールで洗浄し、口演
を減圧濃縮した。残さをシリカゲルカラムクロマトグラ
フィーにかけて分離精製した。まず、酢酸エチル：ｎ−
ヘキサン調１：３の混合溶媒を使用して不純物を除き、
次に、クロロホルム：メタノール−９；２の混合溶媒を
使用して精製し、精製画分から白色固体１０．５ｍｇ得
た。

１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣ１３）の測定結果より、０．８９
ｐｐｍに一〇Ｈ、１，１−１，４ｐｐｍ付近に−ＣＭ２
−、２．Ｏ４ｐｐｍに−ＮＨＣＯＣＨ，４，８１ｐｐｍ
　（Ｊ−３，７５Ｈｚ）にアノマー位のプロトン、５．
２−６．０ｐｐｍに二重結合プロトンが見られた。

従って、このものは、２−アセタミド−２−デオキシ−
α−Ｄ−ガラクトピラノシル１−１セラミドであると確
認された。

実施例５ ２−アセタミド−２−デオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラ
ノシル１−１ジヒドロセラミドセラミド部分が飽和した
２−アセタミド−２−デオキシ−３，４，６−１リー０
−アセチル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル１−１　　（
３−０−ベンゾイル）ジヒドロセラミド２０．９ｍｇを
メタノール１０ｍ１に溶解し、これにナトリウムメチラ
ートのメタノール溶液を少し加えて室温で一夜攪はんし
た。イオン交換樹脂（ＩＲ−１２０Ｂ）で中和して口過
した。樹脂をメタノールでよく洗浄して、口演を減圧濃
縮して、残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィーで
精製した。まず、クロロホルム：メタノール−９５：５
の混合溶媒を使用して不純物を分離し、引き続いて、ク
ロロホルム：メタノール纏９：１の混合溶媒を使用して
目的物を精製した。精製画分を集めて蒸発乾固し、１０
．６＋＋＋ｇの白色固体を得た。

’Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣＪ　３）の測定結果より、δ−４
，８０（Ｊ−３，８４Ｈｚ）にα体のアノマー位のプロ
トンが見られ、２．Ｏ５ｐｐｍにＮ−アセチル基のメチ
ルプロトンが見られたが、二重結合プロトンが見られな
かったので、このものは、２−アセトアミド−２−デオ
キシ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル１−１ジヒドロセラ
ミドであると確認された。

実施例６ ベンゾイル化したセラミド４０鳳ｇ、モレキュラーシー
ブ４人を１００ｍｇ、炭酸銀１００ｍｇ、過塩素酸銀５
　ｍｇを塩化メチレン５　ｍｌに加えて、アルゴン気流
下に室温でよく攪はんした。これに、２−アジド−２−
デオキシ−３，４，６−トリー〇−アセチルーα−Ｄ−
グルコピラノシルクロライド４０ｍｇを塩化メチレン２
ｍｌに溶かした溶液を滴下した。室温で攪はんを続け、
反応終了後、反応液を口過し、塩化メチレンでよく洗浄
して溶液を減圧濃縮した。残さを酢酸エチル：ｎ−ヘキ
サン−１：３の混合溶媒を使用してシリカゲルカラムク
ロマトグラフィーで精製した。精製画分を集めて蒸発乾
固し＞３９．２ｍｇの固体を得た。

’Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣ第３）の測定結果より、δ−４，
９１ｐｐｍ（Ｊ＝３．６５Ｈｚ）にα体のアノマー位プ
ロトンが見られ、６．６１ｐｐｍに−ＮＨＣＯ−１５．
５７ｐｐｍと５８９２ｐｐｍに二重結合のプロトンが見
られ、赤外吸収スペクトルにおいて、２１２００１１−
’にアジドの吸収が見られることから、このものは２−
アジド−２−デオキシ−３，４，６−トリー〇−アセチ
ルーα−Ｄ−グルコピラノシル！−１（３−０−ベンゾ
イル）セラミドであると確認された。

実施例７ ２−アセタミド−２−デオキシ−３，４，６−トリーＯ
−アセチルーα−ｐ−グルコピラノシル１−１　（３−
０−ベンゾイル）セラミド２−アジド−２−デオキシ−
３，４，６−トリー〇−アセチルーα−Ｄ−グルコピラ
ノシル１−１　　（３−０−ベンゾイル）セラミド３１
．５ｎｇを乾燥したテトラヒドロフラン６　ｍｌに溶解
し、トリフェニルフォスフイン５．５ｍｇを加えて、室
温で攪はんした。反応が終了した時点で水を加えた。

加水分解終了後、反応液を酢酸エチルで抽出し、硫酸マ
グネシウムで乾燥後、溶液を減圧濃縮した。

残さを酢酸エチル：ｎ−ヘキサン−１：１、続いて、ク
ロロホルム：メタノール−９；１の混合溶媒を使用して
シリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけて分離精製
した。このものを直ちに、無水酢酸を用いてアセチル化
した。反応液を常法により処理して、残さを酢酸エチル
：ｎ−ヘキサン−１：１の混合溶媒を用いて、シリカゲ
ルカラムクロマトグラフィーにかけて分離精製した。精
製画分から２５．４ｍｇのシロップを得た。

’Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ（１３）の測定結果より、０．９ｐ
ｐｍにメチル基、１．２ｐｐｍ付近にメチレン基、２．
Ｏ５ｐｐｍに−ＮＨＣＯＣＨ３のメチル基、５．５ｐｐ
ｍ付近に二重プロトン、７．２−８．２ｐｐｍに芳香族
プロトンが見られ、このものは、２−アセタミド−２−
デオキシ−３゜４．６−）ジ−０−アセチルーα−Ｄ−
グルコピラノシル１−１　（３−０−ベンゾイル）セラ
ミドであると確認された。

実施例８ ２−アセタミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノ
シル１−１セラミド ２−アセタミド−２−デオキシ−３，４，６−トリー〇
−アセチルーα−Ｄ−グルコピラノシル１−１　（３−
０−ベンゾイル）セラミド２２，６ｍｇを乾燥したメタ
ノールに溶解し、これに無水メタノールに溶解したナト
リウムメチラートを少量加えて室温で攪はんした。イオ
ン交換樹脂（ＩＲ−１２０Ｂ）を使用して中和した後、
樹脂を口過してメタノールで洗浄し、口演を減圧濃縮し
た。

残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけて分
離精製した。まず、酢酸エチル：ｎ−ヘキサン−１＝３
の混合溶媒を使用して不純物を除き、次に、クロロホル
ム：メタノール−９＝２の混合溶媒を使用して精製し、
精製画分から白色固体１４．３ｍｇ得た。

’Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｊｌ　３）の測定結果より、δ−
０，９１ｐｐｍにメチル基、１．２ｐｐｍ付近にメチレ
ン、２．４０ｐｐｍにアセタミド基のメチル基、４．７
８ｐｐｍ　（Ｊ−３，７６Ｈｚ）にアノマー位のプロト
ン、５．２−６．０ｐｐｍに二重結合プロトンが見られ
、このものは、２−アセタミド−２−デオキシ−α−Ｄ
−グルコピラノシル１−１セラミドであると確認された
。

実施例９ ２−アジド−２−デオキシ−３，４，６−トリー〇−ア
セチルーα−Ｄ−グルコピラノシル１−１　（３−０−
ベンゾイル）セラミド３３．５−ｇをメタノール２５ｍ
１に溶かし、酸化白金１．５−ｇを加えて、反応器内を
水素で置換して激しく攪はんした。４８時間後、反応液
を口過してメタノールで洗浄し、口液を約半分に濃縮し
、無水酢酸を加えて、室温で一夜攪はんして、反応液を
減圧濃縮した。残さをクロロホルム；メタノール−９８
：２の混合溶媒を使用して、シリカゲルカラムクロマト
グラフィーで精製した。精製画分を集めて減圧濃縮し、
２６．２ｇのシロップを得た。

’Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｊｌ　３）の測定結果より、δ−
６．５７ｐｐｍ　（Ｊ−９，４４Ｈｚ）にセラミド部分
の−ＮＨＣＯ−が、δ−６．０５ｐｐｍ（Ｊ＝９．４３
Ｈｚ）に−ＮＨＣＯＣＨ３が見られたが、δ−５，５ｐ
ｐｍ付近に二重結合プロトンが見られなかった。従って
、このものは、セラミド部分の二重結合が飽和した２−
アセタミド−２−デオキシ−３，４，６−）ジ−０−ア
セチルーα−Ｄ−グルコピラノシル１−１　（３−０−
ベンゾイル）ジヒドロセラミドであると確認した。

実施例１０ セラミド部分が飽和した２−アセタミド−２−デオキシ
−３，４，δ−トリー〇−アセチルーα−Ｄ−グルコピ
ラノシル１−１　　（３−０−ベンゾイル）ジヒドロセ
ラミド２６．２ａ＋ｇメタノール２０ｍ１に溶かし、こ
れに、ナトリウムメチラートのメタノール溶液を少し加
えて、室温で一夜攪はんした。

イオン交換樹脂（ＩＲ−１２０Ｂ）で中和して口過した
。樹脂をメタノールでよく洗浄して、口演を減圧濃縮し
て、残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製
した。まず、クロロホルム；メタノール−９５＝５の混
合溶媒を使用して不純物ヲ除去し、引き続いて、クロロ
ホルム：メタノール−９：１の混合溶媒を使用して目的
物を精製した。精製画分を集めて蒸発乾固し、１２．５
ｍｇの白色固体を得た。

’Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣＡ　３）の測定結果より、δ−４
，７５（Ｊ−３，８５Ｈｚ）にα体のアノマー位のプロ
トンが確認され、２．Ｏ５ｐｐｍにＮ−アセチル基のメ
チルプロトンが見られたが、二重結合のプロトンが見ら
れなかった。このものは、２−アセタミド−２−デオキ
シ−α−Ｄ−グルコピラノシル１−１ジヒドロセラミド
であると確認された。

実施例１１ ベンゾイル化したセラミド４０ｍｇ、モレキュラーシー
ブ４Ａ　　１００ａ＋ｇ、炭酸銀１００ｍｇ、過塩素酸
銀５　ａ＋ｇを塩化メチレン５　ｍｌに加えて、アルゴ
ン気流下に室温でよく攪はんした。これに、２−アジド
−２−デオキシ−３，６−ジー０−アセチル−４−０−
（２，３，４，６−テトラ−０−アセチルーβ−Ｄ−ガ
ラクトピラノシル）−α−Ｄ−グルコビラノシルクロラ
イド８（ｌｏｇを塩化メチレン２　ｍｌに溶かした溶液
を滴下した。室温で攪はんを続け、反応終了後、反応液
を口過し、塩化メチレンで洗浄して溶液を減圧濃縮した
。残さを酢酸エチル：ｎ−ヘキサン−１；３の混合溶媒
を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製
した。精製画分を集めて蒸発乾固し、５２．８ｍｇの固
体を得た。

’Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｊｌ　３）の測定結果より、δ−
４，９０ｐｐｍ　（Ｊ−３，６６Ｈｚ）にα結合した時
のアノマー位プロトンが見られた。

２、ｌｐｐｍ付近に一〇〇ＯＣＲ，６，５９・３ ｐｐｍにセラミド部分の−ＮＨＣＯ−が確認された。赤
外吸収スペクトルで２１２０ｃｍ−１にアジドの吸収が
見られた。従って、このものは２−アジド−２−デオキ
シ−３，６−ジー０−アセチル−４−０−（２，３，４
，６−テトラ−０−アセチルーβ−Ｄ−ガラクトピラノ
シル）−α−Ｄ−グルコピラノシル１−１　　（３−０
−ベンゾイル）セラミドであることが確認された。

実施例１２ ベンゾイル化したセラミド４０＋ａｇ、モレキュラーシ
ーブ４人　１θＯ”ｇ＋炭酸銀１００ｍｇ、過塩素酸銀
５　ｍｇを塩化メチレン５　ｍｌに加えて、アルゴン気
流下に室温でよく攪はんする。これに、２−アジトー２
−デオキシ−３，６−ジー０−アセチル−４−０−（２
，３，４，６−チトラーＯ−アセチルーβ−Ｄ−グルコ
ピラノシル）−α−り一グルコピラノシルクロライド８
０ａｇを塩化メチレン２　ｍｌに溶かした溶液を滴下し
た。室温で攪はんを続け、反応終了後、反応液を口過し
、塩化メチレンで洗浄して溶液を減圧濃縮した。　残さ
を酢酸エチル：ｎ−ヘキサン−１：３の混合溶媒を使用
してシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した。

精製画分を集めて蒸発乾固し、６０．９ｍｇの固体を得
た。

’Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｊｌ　３）の測定結果より、δ−
４，８８ｐｐｍ　（Ｊ＝３．６６Ｈｚ）にα結合した時
のアノマー位プロトンが確認された。

２、ｌｐｐｍ付近に一〇〇〇〇Ｈ，６，６２ｐｐｍにセ
ラミド部分の−ＮＨＣＯ−が確認された。従って、この
ものは２−アジド−２−デオキシ−３，６−ジー０−７
−ｔ？チ／！、−４−０−（２゜３．４．６−テトラ−
０−アセチルーβ−Ｄ−グルコピラノシル）−α−Ｄ−
グルコピラノシル１−１　（３−０−ベンゾイル）セラ
ミドであることが確認された。

実施例１３ ２−アジド−２−デオキシ−３，６−ジー〇−アセチル
−４−０−（２，３，４，６−テトラ−０−アセチルー
β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−α−Ｄ−グルコピラノ
シル１−１　　（３−０−ベンゾイル）セラミド５２．
８ａ＋ｇをメタノール４０ｍ１に溶解し、酸化白金１．
５ａ＋ｇを加えて、反応器を水素で置換して激しく攪は
んした。４８時間後、反応液を口過してメタノールで洗
浄し、口演を約半分に減圧濃縮した。残さをクロロホル
ム：メタノール−９８８２の混合溶媒を使用して、シリ
カゲルカラムクロマトグラフィーで精製した。精製画分
を集めて減圧濃縮し、３８．６ｍ５ｒのシロップを得た
。

’Ｈ−ＮＭＲＣＣＤＣ１３）の測定結果より、δ−６，
５６ｐｌ）ｍ　（Ｊ−９，４４Ｈｚ）にセラミド部分の
−ＮＨＣＯ−が、δ−６．０６ｐｐｍ（Ｊ＝９．４４Ｈ
ｚ）に−ＮＨＣＯＣＨ３が見られたが、δ−５，５ｐｐ
ｍ付近に二重結合のプロトンが見られなかった。従って
、このものは、２−アセタミド−２−デオキシ−３，６
−ジーＯ−アセチル−４−０−（２，３，４，６−テト
ラ−０−アセチルーβ−Ｄ−ガラクトピラノシル）−α
−Ｄ−グルコピラノシル１−１　　（３−０−ベンゾイ
ル）ジヒドロセラミドであると確認された。

実施例１４ ２−アジド−２−デオキシ−３，６−ジー〇−アセチル
−４−０−（２，３，４，６−テトラ−０−アセチルー
β−Ｄ−グルコピラノシル）−α−Ｄ−グルコピラノシ
ル１−１　（３−０−ベンゾイル）セ→ミド６０．９ｍ
ｇをメタノール４０ｍ１に溶かし、酸化白金１．７ｍｇ
を加えて、反応器を水素で置換して、激しく攪はんした
。４８時間後、反応液を口過してメタノールで洗浄し、
口演を約半分に減圧濃縮し、無水酢酸を加えて、−夜攪
はんした。反応液を減圧濃縮し、残さをクロロホルム：
メタノール−９８：２の混合溶媒を使用して、シリカゲ
ルカラムクロマトグラフィーで精製した。

精製画分を集めて減圧濃縮し、４１．３ａｇのシロップ
を得た。

’Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣ１３）の測定結果より、δ−６．
ｓｇｐｐｍ　（Ｊ−９，４４Ｈｚ）にセラミド部分の−
ＮＨＣＯ−が、δ−６．０６ｐｐｍ。

（Ｊ＝９．４４Ｈｚ）に−ＮＨＣＯＣＨ３が見られたが
、δ−５，５ｐｐｍ付近に二重結合のプロトンが見られ
なかった。従って、このものは、２−アセタミド−２−
デオキシ−３，６−ジー〇−アセチル−４−０−（２，
３，４，６−テトラ−０−アセチルーβ−Ｄ−グルコピ
ラノシル）−α−Ｄ−グルコピラノシル１−１　（３−
０−ベンゾイル）ジヒドロセラミドであると確認された
。

実施例１５ ２−アセタミド−２−デオキシ−３，６−ジー０−アセ
チル−４−０−（２，３，４，６−テトラ−０−アセチ
ルーβ−Ｄ−ガラクトピラノシル）−α−Ｄ−グルコピ
ラノシル１−１　　（３−０−ベンゾイル）ジヒドロセ
ラミド３８．６ｍｇをメタノール３０ｍ１に溶かし、こ
れに、ナトリウムメチラートのメタノール溶液を少し加
えて、室温で一夜攪はんした。イオン交換樹脂（ＩＲ−
１２０Ｂ）で中和して口過した。メタノールでよく洗浄
して、口演を減圧濃縮して、残さをシリカゲルカラムク
ロマトグラフィーで精製した。まず、クロロホルム：メ
タノール−９５：５の混合溶媒を使用して不純物を分離
し、引き続いて、クロロホルム：メタノール−９：１の
混合溶媒を使用して目的物を精製した。精製画分を集め
て蒸発乾固し、２８．２ｍｇの白色固体を得た。

’Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｊｉ　３）の測定結果より、δ−
６，５６ｐｌｍ　（Ｊ−３，８４Ｈｚ）にα体のアノマ
ー位のプロトンが確認され、２．Ｏ５ｐｐｍにＮ−ＮＨ
ＣＯＣＨ３のメチルプロトンが見られたが、二重結合の
プロトンが見られなかった。従って、このものは、２−
アセタミド−２−デオキシ−４−０−（β−Ｄ−ガラク
トピラノシル）−α−Ｄ−グルコピラノシル１−１ジヒ
ドロセラミドであると確認された。

実施例１６ ２−アセタミド−２−デオキシ−３，６−ジー０−アセ
チル−４−０−（２，３，４，６−テトラ−０−アセチ
ルーβ−Ｄ−グルコピラノシル）−α−Ｄ−グルコピラ
ノシル１−１　（３−０−ベンゾイル）ジヒドロセラミ
ド４１．３ｍｇをメタノール３０ｍ１に溶かし、これに
ナトリウムメチラートのメタノール溶液を少し加えて、
室温で一夜攪はんした。イオン交換樹脂（ＩＲ−１２０
Ｂ）で中和して口過した。メタノールで樹脂をよく洗浄
して、口演を減圧濃縮して、残さをシリカゲルカラムク
ロマトグラフィーで精製した。まず、クロロホルム：メ
タノール−９５＝５の混合溶媒を使用して不純物を分離
し、引き続いて、クロロホルム：メタノール−９：１の
混合溶媒を使用して目的物を精製した。精製画分を集め
て蒸発乾固し、３０．５ａ＋ｇの白色固体を得た。

’Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣＪ　３）の測定結果より、δ−４
，８０ｐｐｍ　（Ｊ−３，８４Ｈｚ）にα体のアノマー
位のプロトンが確認され、２．Ｏ７ｐｐｍに−ＮＨＣＯ
ＣＨ３のメチルプロトンが見られたが、二重結合のプロ
トンが見られなかった。

従って、このものは、２−アセタミド−２−デオキシ−
４−０−（β−Ｄ−グルコピラノシル）−α−Ｄ−グル
コピラノシル１−１ジヒドロセラミドであると確認され
た。

実施例１７ ２−アジド−２−デオキシ−３，６−ジーＯ−アセチル
−４−０−（２，３，４，６−テトラ−０−アセチルー
β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−α−Ｄ−グルコピラノ
シル１−１　（３−０−ベンゾイル）セラミド３１．３
＋ａｇを乾燥したテトラヒドロフラン６　ｍｌに溶解し
、トリフェニルフォスフイン７．３ｍｇを加えて、室温
で攪はんした。反応が終了した時点で水を加えた。加水
分解終了後、反応液を酢酸エチルで抽出し、硫酸マグネ
シウムで乾燥後、溶液を減圧濃縮した。残さをまず、酢
酸エチル：ｎ−ヘキサン−１：１、続いて、クロロホル
ム：メタノール−９：１の混合溶媒を使用してシリカゲ
ルカラムクロマトグラフィーにがけて分離精製した。精
製画分は、ニンヒドリン反応が陽性であったので直ちに
、無水酢酸を用いてアセチル化した。反応数を常法によ
り処理して、残さを酢酸エチル：ｎ−ヘキサン−１：１
の混合溶媒を使用して、シリカゲルカラムクロマトグラ
フィーにかけて分離精製した。精製画分から２５．８Ｉ
１ｇのシロップを得た。

１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｊｌ　３）の測定結果より、０．
９ｐｐｍにメチル基、１．２ｐｐｍ付近にメチレン、２
．Ｏ５ｐｐｍにアセタミド基のメチル基、５．５ｐｐｍ
付近に二重のプロトン、７．２−８．２ｐｐｍに芳香族
プロトンが確認された。

従って、このものは、２−アセタミド−２−デオキシ−
３，６−ジー０−アセチル−４−０−（２゜３．４．６
−チトラーＯ−アセチルーβ−Ｄ−ガラクトピラノシル
）−α−Ｄ−グルコピラノシル１−１　（３−０−ベン
ゾイル）セラミドであると確認された。

実施例１８ ２−アセタミド−２−デオキシ−３，６−ジー０−アセ
チル−４−０−（２，３，４，６−チトラーＯ−アセチ
ルーβ−Ｄ−ガラクトピラノシル）−α−Ｄ−グルコピ
ラノシル１−１　（３−０−ベンゾイル）セラミド２５
．８ｍｇを乾燥したメタノールに溶解し、これに無水メ
タノールに溶解したナトリウムメチラートを少量加えて
室温で攪はんした。イオン交換樹脂（ＩＲ−１２０Ｂ）
を使用して中和した。樹脂を口過してメタノールで洗浄
し、口演を減圧濃縮した。残さをシリカゲルカラムクロ
マトグラフィーにかけて分離精製した。

まず、酢酸エチル：ｎ−ヘキサン−１＝３の混合溶媒を
使用して不純物を除き、次に、クロロホルム：メタノー
ル−９：２の混合溶媒を使用して精製し、精製画分から
白色固体１０．９ｍｇ得た。

’Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣＪ　３）の測定結果より、０．９
０ｐｐｍにメチル基、１．２ｐｐｍ付近にメチレン、２
．Ｏ４ｐｐｍにアセタミド基のメチル基、４．７５ｐｐ
ｍ　（Ｊ−３，７７Ｈｚ）にアノマー位のプロトン、５
．３２と５．６４ｐｐｍに二重結合プロトンが見られた
。従って、このものは、２−アセタミド−２−デオキシ
−４−〇−（β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−α−Ｄ−
グルコピラフシル１−１セラミドであると確認された。

実施例１９ ２−アジド−２−デオキシ−３，６−ジー〇−アセチル
−４−０−（２，３，４，６−チトラーＯ−アセチルー
β−Ｄ−グルコピラノシル）−α−Ｄ−グルコピラノシ
ル１−１　（３−０−ベンゾイル）セラミド４０．６ｍ
ｇを乾燥したテトラヒドロフラン１０ｍ１に溶解し、ト
リフェニルフォスフイン９．６ｍｇを加えて、室温で攪
はんした。反応が終了した時点で水を加えた。加水分解
終了後、反応液を酢酸エチルで抽出し、硫酸マグネシウ
ムで乾燥後、溶液を減圧濃縮した。残さを、まず、酢酸
エチル：ｎ−ヘキサン−１：１、続いて、クロロホルム
：メタノール−９：１の混合溶媒を使用して、シリカゲ
ルカラムクロマトグラフィーにかけて分離精製した。精
製画分を、直ちに無水酢酸を用いてアセチル化した。反
応液を常法により処理して、残さを酢酸エチル：ｎ−ヘ
キサン−１＝１の混合溶媒−を使用して、シリカゲルカ
ラムクロマトグラフィーにかけて分離精製した。精製画
分から３１．２ｍｇのシロップを得た。

１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣＪ　３）の測定結果より、０．９
２ｐｐｍにメチル基、１．２ｐｐｍ付近にメチレン、２
．Ｏ７ｐｐｍにアセタミド基のメチル基、５．５ｐｐｍ
付近に二重結合のプロトン、７．２−８．２ｐｐｍに芳
香族プロトンが確認された。従って、このものは、２−
アセタミド−２−デオキシ−３，６−ジー０−アセチル
−４−０−（２，３，４，６−テトラ−０−ナセチルー
β−Ｄ−グルコピラノシル）−α−Ｄ−グルコピラノシ
ル１−１　（３−０−ベンゾイル）セラミドであると確
認された。

実施例２０ ２−アセタミド−２−デオキシ−３，６−ジー０−アセ
チル−４−０−（２，３，４，６−チトラーＯ−アセチ
ルーβ−Ｄ−グルコピラノシル）−α−Ｄ−グルコピラ
ノシル１−１　（３−０−ベンゾイル）セラミド３１．
２■ｇを乾燥したメタノールに溶解し、これに無水メタ
ノールに溶解したナトリウムメチラートを少量加えて室
温で攪はんした。反応終了後、イオン交換樹脂（ＩＲ−
１２０Ｂ）を使用して中和した。樹脂を口過してメタノ
ールで洗浄し、口演を減圧濃縮した。残さをシリカゲル
カラムクロマトグラフィーにかけて分離精製した。まず
、酢酸エチル二〇−ヘキサン−１＝３の混合溶媒を使用
して不純物を除き、次に、り゛ロウホルム：メタノール
−９＝２の混合溶媒を使用して精製し、精製画分から白
色固体１７．２ｍｇ得た。

’Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣＪ　３）の測定結果より、０．８
９ｐｐｍにメチル基、１．２ｐｐｍ付近にメチレン、２
．Ｏ５ｐｐｍにアセタミド基のメチル基、４．７８ｐｐ
ｍ（Ｊ−３，７７Ｈｚ）にアノマー位のプロトン、５．
２−６．０ｐｐｍに二重結合プロトンが見られた。従っ
て、このものは、２−アセタミド−２−デオキシ−４−
０−（β−Ｄ−グルコピラノシル）−α−Ｄ−グルコピ
ラノシル１−１セラミドであることが確認された。

実施例２１ 実施例４で得た２−アセタミド−２−デオキシ−α−Ｄ
−ガラクトピラノシル１−１セラミドを慣用の方法でサ
ルモネラ　ミネソタ菌体に吸着させ、バルブ／Ｃ（Ｂａ
　１　ｂ／Ｃ）系マウスの腹腔内に当初５ｍｇ、４日日
１０ｍｇ、７日目１５ｍｇ。

１２日０エ０ｍｇ及び２６日日目０ｍｇの量で投与した
。免疫開始後３０日日目採血を行ない、抗血清を得た。

　この抗血清の抗体力価を以下の様にしてＥＬ　Ｉ　Ｓ
Ａ法で測定した。

実施例４で得た２−アセタミド−２−デオキシ−α−Ｄ
−ガラクトピラノシル１−１セラミド１０ｎｇ、ホスフ
ァチジルコリン１１００ｎ及びコレステロール５０ｎｇ
を含む抗原溶液並びにホスファチジルコリン１ｏｏｎｇ
及びコレステロール５０ｎｓｒのみを含む対照溶液を用
いて９６ウエル　プレートのコーテングを行ない、各、
ウェルを水洗した。

一方得られたマウ°ス抗血清を５６℃で３０分間加熱処
理したのち倍数希釈を行なって、それぞれを検体及び対
照の各ウェルに添加した。そのまま室温で１時間反応さ
せたのち、反応液を除去し、ウェルを水洗した。

ペルオキシダーゼで標識したヤギ抗マウスＩｇＧ血清（
対Ｈ鎖及び対し鎖、５００倍希釈）及び同ヤギ抗マウス
ＩｇＭ血清（対μ鎖、５００倍希釈）の混合液を各ウェ
ルに加えて室温で１時間反応させた。反応液を水洗し、
基質０−フェニレンジアミンを含む水溶液を添加して室
温で１０分間反応させ、５００ｎｍでの吸光度をｎ１定
した。結果を第１表に示す。実施例４で得た糖鎖抗原に
対する抗体が産生されていたことが明かである。

第　　１　　表 ［発明の効果］ 本発明のα−グリコシルセラミド誘導体は糖鎖抗原とし
て有用である。また本発明の方法によれば、この誘導体
を容易かつ効率よく製造することができる。

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. （１）一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中Ｒ＿１及びＲ＿２はいずれか一方が水素で他方は
   水酸基であり、Ｒ＿３及びＲ＿４はいずれか一方が水素
   で他方は水酸基又は（１→４）結合のヘキサピラノシル
   基であり、Ｒ＿５は炭素数１０ないし２５のアルキル基
   であり、 Ｘ＿１及びＸ＿２はそれぞれ水素又は両者合体して形成
   される二重結合を表わし、ｎは１０ないし２５の正の整
   数を表わす）で表わされるα−グリコシルセラミド誘導
   体。
2. （２）（１→４）結合のヘキソピラノシル基がグルコピ
   ラノシル基又はガラクトピラノシル基である特許請求の
   範囲第１項記載のα−グリコシルセラミド誘導体。
3. （３）Ｒ＿５がヘプタデシル基であり、ｎが１２である
   特許請求の範囲第１項又は第２項記載のα−グリコシル
   セラミド誘導体。
4. （４）一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中Ｒ＿１＿１及びＲ＿１＿２はいずれか一方が水素で
   他方は低級アシルオキシ基であり、Ｒ＿１＿３及びＲ＿
   １＿４はいずれか一方が水素で他方は低級アシルオキシ
   基又はその水酸基が低級アシル基でペルアシル化された
   （１→４）結合のヘキソピラノシル基であり、Ｒ＿６は
   低級アシル基であり、Ｒ＿５は炭素数１０ないし２５の
   アルキル基であり、Ｒ＿７は水酸基の保護基であり、ｎ
   は１０ないし２５の正の整数を表わす）で表わされるα
   −（２−アジド−２−デオキシヘキソピラノシル）セラ
   ミド誘導体を、 １）そのアジド部分にトリフェニルホスフィンを付加さ
   せたのち加水分解してアジド基 をアミノ基に転換し、又は ２）水素添加によってそのセラミド部分の二重結合を飽
   和結合とし、かつアジド基をア ミノ基に転換し、 形成されたアミノ基をアセチル化し、保護基Ｒ＿７を離
   脱させ、かつ低級アシルオキシ基を水酸基に変換するこ
   とを特徴とする、一般式▲数式、化学式、表等がありま
   す▼ （式中Ｒ＿１及びＲ＿２はいずれか一方が水素で他方は
   水酸基であり、Ｒ＿３及びＲ＿４はいずれか一方が水素
   で他方は水酸基又は（１→４）結合のヘキソピラノシル
   基であり、Ｘ＿１及びＸ＿２はそれぞれ水素又は両者合
   体して形成される二重結合を表わし、Ｒ＿５及びｎは前
   記同様の意味を表わす）で表わされるα−グリコシルセ
   ラミド誘導体の製造方法。
5. （５）低級アシルオキシ基がアセチルオキシ基で、低級
   アシル基がアセチル基である特許請求の範囲第４項記載
   の製造方法。
6. （６）低級アシル基でペルアシル化された（１→４）結
   合のヘキソピラノシル基が２，３，４，６−テトラ−Ｏ
   −アセチルグルコピラノシル基又は２，３，４，６−テ
   トラ−Ｏ−アセチルガラクトピラノシル基である特許請
   求の範囲第４項又は第５項記載の製造方法。
7. （７）Ｒ＿５がヘプタデシル基であり、Ｒ＿７がベンゾ
   イル基であり、ｎが１２である特許請求の範囲第４項な
   いし第６項のいずれかの項記載の製造方法。