WO2004069243A1 - 乳癌耐性蛋白（ｂｃｒｐ）阻害剤 - Google Patents

乳癌耐性蛋白（ｂｃｒｐ）阻害剤 Download PDF

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WO2004069243A1
WO2004069243A1 PCT/JP2004/001067 JP2004001067W WO2004069243A1 WO 2004069243 A1 WO2004069243 A1 WO 2004069243A1 JP 2004001067 W JP2004001067 W JP 2004001067W WO 2004069243 A1 WO2004069243 A1 WO 2004069243A1
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ester
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Ryuta Yamazaki
Yukiko Nishiyama
Tomio Furuta
Takeshi Matsuzaki
Hiroshi Hatano
Oh Yoshida
Masato Nagaoka
Ritsuo Aiyama
Shusuke Hashimoto
Yoshikazu Sugimoto
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Kabushiki Kaisha Yakult Honsha
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    • C07D317/46—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3 ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems condensed with one six-membered ring
    • C07D317/48—Methylenedioxybenzenes or hydrogenated methylenedioxybenzenes, unsubstituted on the hetero ring
    • C07D317/50—Methylenedioxybenzenes or hydrogenated methylenedioxybenzenes, unsubstituted on the hetero ring with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to atoms of the carbocyclic ring
    • C07D317/60—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals

Definitions

  • BCRP Breast cancer I-protein
  • the present invention relates to a breast cancer resistance protein (BCRP) inhibitor.
  • BCRP breast cancer resistance protein
  • the drug-transporting protein P-glycoprotein encoded by the MDR1 gene discovered in the 1970s is highly susceptible to cross-resistance to multiple anticancer drugs with different chemical structures and mechanisms of action. It has been a potential target molecule for drug resistance overcoming agents.
  • P-glycoprotein alone cannot explain the mechanism of resistance to anticancer drugs, and there is a need for the development of new drug-overcoming agents that target new drug transport proteins.
  • BCRP breast cancer resistance protein
  • ABS ATP-binding cassette
  • BCRP is a resistant mechanism against topoisomerase I inhibitors such as irinotecan hydrochloride (CPT-11) and topotecan, and topoisomerase ⁇ inhibitors such as mitoxantrone Deeply involved in
  • BCRP does not act on paclitaxel or vincristine, etc., which are excreted by P-glycoprotein, and CPT-11 and 7-ethyl-10-hydroxycamptothecin, which are hardly excreted by P-glycoprotein. It has a different substrate specificity from P-glycoprotein because it is involved in the secretion of camptothecin derivatives such as SN-38 (an active form of CPT-11) (see Cancer Res.
  • camptothecin derivatives such as SN-38 (an active form of CPT-11)
  • BCRP is involved in the limitation of the bioavailability of orally administered anticancer drugs (see J. Clin. Oncol. 20, 2944-2950 (2002)). Based on these facts, drugs that inhibit BCRP can exert an effect of overcoming the resistance of anticancer drugs that could not be overcome by conventional resistance overcoming drugs, and also improve the bioavailability of anticancer drugs. It is expected and its development is desired.
  • An object of the present invention is to provide a drug that inhibits BCRP. Disclosure of the invention
  • the present inventor screened various compounds using anticancer drug-resistant cancer cells that have acquired resistance by BCRP to solve the above-mentioned problems. As a result, a diphenylacrylonitrile derivative represented by the following formula (1) was obtained. Have a potent BCRP inhibitory action, and have completed the present invention. That is, the present invention provides the following formula (1)
  • FIG. 1 is a graph showing the degree of A549 / SN-38-4 cell acquisition of resistance to SN-38 (A) and mitoxantrone (B).
  • FIG. 2 is a diagram showing the results of analyzing the expression of mRNA of various drug transport proteins in A549 cells and A549 / SN-38 cells by RT-PCR.
  • FIG. 3 shows the results of quantitative analysis of BCRP (A) and MRP2 (B) mRNA expression in A549 cells and A549 / SN-38 cells by real-time RT-PCR.
  • FIG. 4 is a graph showing the accumulated amounts of SN-38 (A) and SN-38 darc oxalate conjugate (B) in A549 cells and A549 / SN-38-4 cells.
  • FIG. 5 is a graph showing the effect of a diphenylacrylonitrile derivative (Compound 1) on the resistance of A549 / SN-38-4 cells to SN 38 (A) and mitoxantrone (B).
  • Compound 1 a diphenylacrylonitrile derivative
  • Figure 6 shows various diphenylacrylonitrile derivatives against SN-38 resistance of P388 / BCRP cells (Compound 1 (A), Compound 3 (B), Compound 4 (C), Compound 5 (D), Compound 7 (E ), And the effect of compound 13 (F)].
  • FIG. 7 is a graph showing the effect of a diphenylacrylonitrile derivative (Compound 1) on increasing SN-38 accumulation in P388 / BCRP cells.
  • FIG. 8 is a graph showing the effect of various diphenylacrylonitrile derivatives to increase SN-38 accumulation in MCF-7 cells.
  • the diphenylacrylacrylonitrile derivative represented by formula (1) has a strong BCRP inhibitory effect. I found something.
  • examples of the C1-C4 alkyl group represented by R include a methyl group, an ethyl group, an n-propyl group, an isopropyl group, and an n-butyl group. Particularly preferred are tyl and ethyl groups.
  • examples of the C1-C8 alkoxy group include a methoxy group, an ethoxy group, an n-propoxy group, an isopropoxy group, an n-butoxy group and the like. Among them, a methoxy group, an ethoxy group and an n-butoxy group are particularly preferable.
  • halogen atom examples include a fluorine atom, a chlorine atom, a bromine atom and an iodine atom, and among them, a fluorine atom, a chlorine atom and a bromine atom are particularly preferred.
  • C1-C4 alkoxy C1-C4 alkoxy As the C1-C4 alkoxy group, a C1-C2 alkoxy C1-(: 2 alkoxy C1-C2 alkoxy group is preferable, and a methoxyethoxymethoxy group is particularly preferable.
  • a C2-C8 alkoxy group examples include acetooxy group, propionyloxy group, butyryloxy group, etc.-C00R, groups include carboxy group, methoxycarbonyl group, ethoxycarbonyl group, etc., among which methoxycarbonyl group is particularly preferable.
  • Br (CH 2 ) 7 C00-group Glycoviranosyl groups include a / 3-D-darcopyranosyl group, ⁇ -maltosyl group,] 3-maltotriosyl group,] 3-D-2-Doxy-2-aminoaminocolpyranosyl group, and the like.
  • i3-D-darcopyranosyl, ⁇ -maltosyl and / 3-maltotriosyl are particularly preferred.
  • the above diphenylacrylonitrile derivative can form a pharmaceutically acceptable salt by addition of, for example, sodium, potassium, hydrochloride and the like, and such a salt is also included in the present invention.
  • the diphenylacrylonitrile derivative may exist in the form of a solvate such as a hydrate, and such a solvate is also included in the present invention.
  • the diphenylacrylonitrile derivative may have isomers, and these isomers and a mixture thereof are also included in the present invention.
  • the diphenyl acrylonitrile derivative is represented by the following formula (1a):
  • the A ring X is a hydrogen atom, a hydroxyl group, a halogen atom, a nitro group, an amino group, Asechi Ruamino group (_NHC0CH 3 group), C2-C8 Ashiruokishi group, a methoxy ethoxymethoxy group, or a C1 ⁇ C8 alkoxy group;
  • X 2 is a hydrogen atom, a hydroxyl group, C1 to C8 alkoxy group, a halogen atom, a nitro group, an amino group, Asechiruamino group (NHC0C3 ⁇ 4 group), C2-C8 Ashiruokishi group, Metokishetoki Shimetokishi group, Mechirenjiokishi group, or C1 ⁇ C4 alkyl Group;
  • X in A ring! Is a hydrogen atom, a hydroxyl group, an acetyl group, a halogen atom, a nitro group, an amino group, an acetylamino group (-C0C3 ⁇ 4 group), or a methoxy group;
  • X 3 is a hydrogen atom, a hydroxyl group, Asetokishi group, a methoxy group, a halogen atom, a nitro group, an amino group, Asechiruamino group (- NHC0CH 3 group), Mechirenjiokishi group, Gurikopi Ranoshiru groups and salts thereof, phosphoric acid esters of Gurikobiranoshiru groups and Salts thereof, sulfates of glycopyranosyl groups and salts thereof, phosphate groups (-0P (0) (0H) 2 ) and salts thereof, sulfate groups (-0S0 3 H) and salts thereof, and piperidinopyridinocarboxy A methoxy group or a methoxyethoxymethoxy group;
  • Ring A is desirably mono- to tri-substituted, mono-substituted, 2-, 3- or 4-position, di-substituted, 2, 3-, 3, 4- or 3, 5-position, And in the case of trisubstitution, it is desirable that the 3, 4, and 5 positions are substituted.
  • Ring B is preferably mono- to tri-substituted, mono-substituted, 4-position, di-substituted, 3, 4-position, tri-substituted, 3, 4, 5-position Is desirable.
  • Preferred compounds from another viewpoint of the present invention are those wherein, in the above formula (la), the A ring is 4-hydroxyphenyl, 2-hydroxyphenyl, 4-piperidinopiperidinocarboxy oxyphenyl, 4-acetoxyphenyl , 4-Methoxymethoxymethoxyphenyl, 4-hydroxy-3-methoxyphenyl, 3,4-dihydroxyphenyl, 3-hydroxy-2-methoxyphenyl, 3,5-dimethyl-4-hydroxy Phenyl, 4-hydroxy-3-ethoxyphenyl, 4-bromophenyl, 2-fluorophenyl, 3-fluorophenyl, 4-fluorophenyl, 2,3-difluorophenyl, 2,4-difluorophenyl, 2, 5-difluor
  • Acetic acid 4 [(Z) — 2—Cyanol 2- (3,4-dimethoxy-phenyl) -vinyl] —phenyl ester;
  • Acetic Acid 4_ [(Z) — 1-Cyanaw 2— (3, 4-dimethoxy
  • Acetic acid 4-[(Z) -1-1-cyano 2- (3,4-dimethoxy-phenyl) -vinyl] -12-fluoro-phenyl ester;
  • the diphenylacrylonitrile derivative (1) of the present invention or a salt thereof can be produced, for example, according to the following reaction formula.
  • a diphenylacrylonitrile derivative (1) is produced by condensing a benzaldehyde (2) and a benzyl cyanide (3).
  • R is a hydroxyl group
  • It is produced by condensing a benzaldehyde (2) protected with a protecting group with benzyl cyanide and then removing these protecting groups.
  • the condensation reaction is preferably performed in the presence of a base such as sodium alkoxide, sodium hydroxide, potassium hydroxide and the like.
  • a base such as sodium alkoxide, sodium hydroxide, potassium hydroxide and the like.
  • the condensation reaction in the presence of sodium alkoxide is performed, for example, in an alcoholic solvent such as methanol or ethanol at room temperature to reflux temperature.
  • the condensation reaction in the presence of sodium hydroxide is carried out by adding a quaternary ammonium salt or the like in a mixed solvent of water and an inert solvent such as methylene chloride or chloroform.
  • the elimination reaction of the hydroxyl protecting group after the completion of the condensation reaction is preferably carried out by hydrolysis in the presence of, for example, hydrochloric acid, sulfuric acid, acetic acid, paratoluenesulfonic acid, trifluoroacetic acid and the like.
  • the benzyloxy group is preferably deprotected by catalytic hydrogenation in the presence of a catalyst such as palladium carbon or platinum oxide.
  • the diphenylacrylonitrile compound of the present invention can be administered as it is, but within a range that does not reduce the effect, it is mixed with a carrier such as a dispersing aid, an excipient, and the like, which is used for normal formulation.
  • a carrier such as a dispersing aid, an excipient, and the like, which is used for normal formulation.
  • Used in oral dosage forms such as powders, liquids, capsules, suspensions, emulsions, syrups, elixirs, granules, pills, tablets, troches, limonide and in dosage forms such as injections can do.
  • Such carriers include water-soluble monosaccharides, oligosaccharides and polysaccharides such as mannitol, lactose and dextran; gel-forming substances such as hydroxypropylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose and methylcellulose.
  • water-soluble celluloses for example, water-absorbable and poorly water-soluble celluloses such as crystalline cellulose, hy-cellulose, cross-linking lipoxymethylcellulose sodium, and derivatives thereof; for example, hydroxypropyl starch and carboxymethyl starch.
  • Water-absorbable and poorly water-soluble polysaccharides such as powder, cross-linked starch, amylose, mycobacterial pectin, pectin and derivatives thereof; Poorly water-soluble gums; for example, polyvinylpyrrolidone, crosslinked polyacrylic acid and its salts, crosslinked polyvinyl alcohol, crosslinked vinyl polymers such as polyhydroxyethyl methacrylate and derivatives thereof; phospholipids, cholesterol, etc. And lipids forming a molecular assembly such as liposomes.
  • a solubilization treatment can be performed.
  • a solubilization treatment a method which can be generally applied to pharmaceuticals, for example, polyoxyethylene alcohol ethers, polyoxetylene acetyl esters, sorbynacinyl esters, poloxyxenylene sorbinacinsters And a method using a water-soluble polymer such as polyethylene dalicol. If necessary, a method of forming a soluble salt, a method of forming an inclusion compound using cyclodextrin, or the like can also be used. The method of solubilization treatment can be appropriately changed depending on the desired diphenylacrylonitrile conjugate.
  • BCRP inhibitors can be used as anticancer drug resistance overcoming agents for cancers that have acquired BCRP-related resistance by administration of anticancer drugs.
  • BCRP naturally expresses BCRP and can be used as an anticancer drug effect enhancer for cancers with low sensitivity to anticancer drugs.
  • the anticancer drug which is a target of the anticancer drug resistance overcoming agent and the anticancer drug effect enhancer containing a BCRP inhibitor as an active ingredient as long as it is an anticancer drug which can be a substrate of BCRP.
  • topoisomerase I inhibitors such as topotecan
  • topoisomerase II inhibitors such as mitoxantrone, doxorubicin, daunorubicin, bisantrene and etoposide
  • antifolates such as methotrexate.
  • the dose of the BCRP inhibitor of the present invention is appropriately adjusted according to the administration method, the patient's symptoms, and the like. It is advisable to administer 1 mg to 10 g, more preferably 100 nig to 10 g, especially 500 mg to 10 g per day for an adult.
  • the ratio of the anticancer agent to the BCRP inhibitor is not particularly limited, and the preferred range varies depending on the type of the anticancer agent and the inhibitor to be used.For example, when irinotecan hydrochloride is used as the anticancer agent, the weight of the anticancer agent: It is preferred that the BCRP inhibitor be in a ratio of 1: 1 to 1: 500, particularly 1: 1 to 1: 100, and more preferably 1: 1 to 1:10.
  • Table 1 shows specific examples of the diphenylacrylonitrile derivative used in the present invention.
  • Succi quasid 4-[( ⁇ ) -2-cyano-2- (3,4-si "methoxy-fu :: le) -vinyltofe :: luster methyl ester succinic acid 4-[( ⁇ ) -2 -Cyano-2- (3,4-dimethyloxy-phenyl) -vinyltofe;: ester Succi ;; quasidbis- (4-[(Z) -2-cyano-2- (3,4-si "methoxy-phen;: l) -vinyl] -hue;: l) ester
  • Example 1 Preparation of diphenylacrylonitrile derivative, raw material having hydroxyl group (derived from benzaldehyde derivative or benzyl cyanide) The compound synthesized from isomer) was subjected to the condensation step after protecting the hydroxyl group in the first protection step as described below, and finally the protecting group was eliminated in the deprotection step. In the case of a raw material having no hydroxyl group, it was directly subjected to the condensation step.
  • a benzaldehyde derivative or benzyl cyanide derivative having a hydroxyl group was dissolved in tetrahydrofuran. Cool the reaction vessel with ice, and add 1.2 equivalents for one hydroxyl group and 2.4 equivalents for two hydroxyl groups, in an amount corresponding to the number of hydroxyl groups (content 60%: oil suspension ) Was added little by little, and the tube was covered with a calcium chloride tube. Wait for the generation of hydrogen to end, then add 2-methoxyethoxymethyl chloride in an amount equivalent to the number of hydroxyl groups, such as 1 equivalent for one hydroxyl group and 2 equivalents for two 7_ ⁇ hydroxy groups. Was.
  • Method A Equivalent amounts of a benzaldehyde derivative and a benzyl cyanide derivative were placed in a reaction vessel, and ethanol was added. Separately, sodium metal was weighed in a vessel containing n-hexane, sodium was added little by little to a vessel containing ethanol, and the vessel was capped with a calcium chloride tube. When the sodium was completely dissolved, the sodium ethoxide solution was added to the reaction vessel. The reaction was refluxed for about 1 hour. One hour after the reaction, the temperature was returned to room temperature, water was added, and ethanol was distilled off under reduced pressure. Black-mouthed form and saline were added, liquids were separated, and the black-mouthed form layer was separated.
  • a saline solution was added thereto, and the mixture was separated into layers.
  • the port-form layer was dried over anhydrous sodium sulfate and filtered.
  • a small amount of silica gel for column chromatography was added, shaken, and filtered.
  • the solvent was distilled off under reduced pressure.
  • Ethanol was added to dissolve, and an appropriate amount of activated carbon was added. Filtration with a celite pad and concentration resulted in precipitation of diphenylacrylonitrile derivative crystals, which was filtered under reduced pressure. This operation was performed three times to separate crystals.
  • the precipitated crystals were recrystallized from isopropanol (twice). The crystals were washed with hexane and dried.
  • Method B Equivalent amounts of benzaldehyde derivative and benzyl cyanide derivative were placed in a reaction vessel and dissolved in methylene chloride. 1.2 equivalents of a 10-20 ml aqueous solution of sodium hydroxide and 1/5 equivalents of sodium chloride trioctylammonium were added, and the mixture was stirred at room temperature for 4 hours. After the reaction, the reaction solution was dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, and concentrated. The residue was recrystallized from isopropanol.
  • the organic layer was concentrated to dryness under reduced pressure, and purified by silica gel chromatography using a porcine form / medium system. This was dissolved in dichloromethane, bromotrimethylsilane was added, and the mixture was stirred at 0 ° C for 2 hours. After completion of the reaction, water was added to the reaction solution, and the mixture was stirred for 1 hour. After washing with ethyl acetate, the aqueous layer was freeze-dried to obtain the desired product (yield 119 mg: 85%).
  • Human non-small cell lung cancer A549 cells were prepared using Ham's F-12 medium (10% FBS / Ham's F-12) containing 10% FBS, 100 U / ml penicillin and 100 g / nil streptomycin. They were subcultured in 5% C0 2, 37 ° C conditions. SN-38 resistant A549 cells were selected by subculturing A549 cells for 2 months by gradually increasing the SN-38 concentration in the medium (4-10 ng / ml). I chose. Furthermore, cloning was performed by limiting dilution from the SN-38 resistant A549 cells, and six cloned SN-38 resistant A549 cells (A549 / SN-38-1 to 6) were established.
  • Example 3 A549 / SN-38 cell anticancer drug sensitivity test
  • Each cell of the A549 or A549 / SN- 38- 1 to 6 was suspended in 10% FBS / Hara 's F- 12, were cultured in 5% C0 2, 37 conditions were plated in 96 ⁇ E Le microplate (2 X 10 3 cel ls / 50 l / wel l). After chromatography ⁇ culture, e 10% FBS / Ham 's F- 12 50 1 pressurized dissolving the anticancer drug and cultured for 48 hours in 5% C0 2, 37 ° C conditions. After the culture, the number of viable cells was measured using a reagent for measuring live cells [TetraColor ONE (trade name), manufactured by Seikagaku Corporation] according to the attached operation procedure. Table 2 and FIG.
  • IC 5 value is the concentration of inhibiting 50% anticancer cell growth.
  • relative resistance is divided by the IC 5. Values that put the IC 5.
  • Value A549 cells in A549 / SN- 38 cells A549 / SN-38 cells showed particularly strong resistance to BCRP substrates SN-38 and mitoxantrone. .
  • RNA extraction reagent US0GEN trade name, manufactured by Futatsu Gene
  • RT-PCR reagents Ready To Go RT-PCR Beads (trade name), Amersham Pharmacia Biotech (Amersham) Pharmacia biotech
  • CiCycler TM trade name, manufactured by BIO-RAD
  • the PCR product was electrophoresed on a 2% agarose gel, stained with ethidium bromide, and detected with a transilluminator.
  • Real-time RT-PCR reagents SYBR Green RT-PCR Reagents (trade name), manufactured by Applied Biosystems) and PCR product automatic detection Z quantification system (ABI PRISM 7000 (trade name)
  • Applied Real-time RT-PCR was performed using Biosystems] according to the attached operation procedure, and quantitative analysis was performed (all RM O. lg).
  • PCR primers for BCRP, MDRK MRPK MRP2, MRP3, and G3PDH of the endogenous control gene are known mRM nucleotide sequences (accession numbers AF09 8951, AF016535, L05628, U63970, ⁇ 9670). , M33197).
  • Figure 2 shows the results of RT-PCR and
  • Figure 3 shows the results of real-time RT-PCR. BCRP expression was significantly increased in all six A549 / SN-38 cells compared to A549 cells. On the other hand, there was no significant difference in the expression level of MRP2 using SN-38 as a substrate as in BCRP.
  • Example 5 A549 / SN-38 cell accumulation of anticancer drug
  • A549 / SN-38-4 cells (4 x 10 6 cel ls / ml) suspended in 1 ml of 10% FBS / R bandage 640 in 1 ml of SN-38 DMS0 solution 1 (final concentration: 300 ng / ml) was added and incubated at 37 ° C for 60 minutes, followed by centrifugation (2 ° (:, 1,400 g, 1 min)) to remove the supernatant.
  • the precipitated cells were resuspended by adding ice-cold PBS, and centrifuged (2 ° C, 1,400 Xg, 1 min) to wash the cells. After performing this washing operation one more time, PBS was added and the cells were broken by ultrasonic treatment.
  • the amount of SN-38 accumulated in A549 / SN-38-4 cells was reduced to about 1/5 compared to the amount accumulated in A549 cells.
  • This result supports the involvement of BCRP in the anticancer drug resistance mechanism of A549 / SN38 cells.
  • the SN-38 glucuronide was hardly detected in both cells, indicating that the glucosinate activity was not involved in the resistance mechanism.
  • Example 6 Effect of a diphenylacrylonitrile derivative on the resistance of A549 / SN-38-4 cells to anticancer drugs
  • Human lung cancer A549 / SN-38-4 cells that had acquired anticancer drug resistance by BCRP, the effect of diphenylacrylonitrile derivative on BCRP-related anticancer drug resistance was examined.
  • Human lung cancer A549 cells or A549 / SN- 38- 4 cells were suspended in 10% FBS / Ham 's F -12, were cultured in 5% C0 2, 37 ° C conditions were seeded in 96-well microphone port plate (2 X 10 3 c el ls / 50 xl / el l).
  • diphenyl acrylonitrile derivative and SN - 38 or Mitokisan Bok Ron were 25 I pressurizing example 10% FBS / Ham 's F- 12 a obtained by dissolving, in 5% C0 2, 37 ° C conditions, 48 Cultured for hours. After the culture, the number of viable cells was measured using TetraColor or ONE according to the attached operation procedure.
  • EC 5 5 overcome effects on SN- 38 or mitoxantrone resistance diphenyl acrylonitrile derivative (Compound 1), also overcoming effects on SN- 38 resistance of each derivative in Table 3. Indicated by value.
  • the EC5fi value is the concentration of the diphenylacrylonitrile derivative at which the relative resistance is reduced by 50%. Relative resistance was IC 5 in A549 / SN-38-4 cells.
  • the value (the concentration of the anticancer drug that inhibits cell growth by 50%) is the value obtained by dividing the IC5D value in A549 cells. The larger the value, the greater the resistance acquisition. As a result, the diphenylacrylonitrile derivative showed a strong overcoming effect on the resistance of A549 / SN-38-4 cells to SN-38 and mitoxantone.
  • the diphenylacrylonitrile derivative itself did not affect the growth of A549 cells and A549 / SN-38-4 cells. This result suggests that the diphenylacrylonitrile derivative of the present invention inhibits BCRP and overcomes anticancer drug resistance of cancer cells.
  • Example 7 Anti-cancer drug of MCF-7 cells by diphenylacrylonitrile derivative Sensitivity enhancing action
  • MCF-7 cells known to express BCRP (Blood 99, 3763-3770 (2002))
  • the effect of a diphenylacrylonitrile derivative on the sensitivity of cancer cells to anticancer drugs was examined.
  • MCF-7 cells were suspended in 10% FBS / RPMI 1640, 9 6 were seeded into the wells microphone port plate 5% C0 2, 37T: were cultured under conditions (3 X 10 3 cel ls / 50 l / wel l ). After overnight culture, 251 each of 10% FBS / RPMI 1640 in which a diphenylacrylonitrile derivative and SN-38 were dissolved were added, and the cells were cultured for 48 hours under conditions of 5% CO 2 and 37 ° C.
  • Example 8 Effect of overcoming anti-cancer drug resistance of human BCRP transgenic mouse leukemia P388 cells by diphenylacrylonitrile derivative
  • Mouse leukemia ⁇ 88 cells or human BCRP gene transfected P388 cells (P388 / BCRP cells, obtained from Yoshikazu Sugimoto, Cancer Chemotherapy Center, Cancer Society of Japan) suspended in 10% FBS / RPMI1640 in a 96-well microphone plate after seeding (1 X 10 4 cells / 50 l / wel 1), Jifue two Ruakurironi Bok Lil derivative and SN-38 to 103 ⁇ 4 FBS / RPNI16 40 were each dissolved 25 1 was added, 48 in 5% C0 2, 37 under Cultured for hours. After the culture, the number of viable cells was measured using Tetra Color ONE according to the attached operation procedure. Figure 6 shows the results.
  • Human uterine cancer MES-SA cells or MES-SA / Dx5 cells with high expression of P-glycoprotein and acquired multidrug resistance [Cancer Res. 45, 4091-4096 (1985)] are suspended in 10% FBS / DMEM. Nigoshi, were cultured in 5% C0 2, 37 ° C conditions, it was seeded in 9 6-well microphone opening plate (3 X 10 3 cel ls / 50 xl / wel l). After overnight incubation, the 10% FBS / DMEM was dissolved diphenyl acrylonitrile derivatives and Pas Kuritakiseru added each 25 1, and cultured for 48 hours under 5% C0 2, 37 condition.
  • EC 5 The ⁇ boss acting in Table 5 in multidrug resistance of each diphenyl ⁇ methacrylonitrile nitrile derivatives. Indicated by value. In addition, EC 5. The value is the concentration of the diphenylacrylonitrile derivative at which the relative resistance is reduced by 50%. As a result, the diphenylacrylonitrile derivative did not affect the paclitaxel resistance of MES-SA / DX5 cells in the concentration range studied. In addition, the diphenylacrylonitrile derivative itself did not affect the growth of MES-SA cells and 3 ⁇ 4ES-SA / Dx5 cells. The results indicated that the diphenylacrylonitrile derivative of the present invention did not act on P-glycoprotein and had specificity for BCRP.
  • the cells were disrupted by adding 375 / l of PBS and sonication. To this cell lysate was added 375 of methanol and 15 xl of a 10% zinc sulfate solution, and the mixture was stirred and centrifuged (2 ° C, 12,500 xg, 5 min) to recover the supernatant. After dispensing the supernatant collected in a white 96-well microphone plate for fluorescence intensity measurement (200 ⁇ / well), the amount of SN-38 in the supernatant was measured using a microplate fluorometer (SN-38). : Excitation wavelength 380 nm, measurement wavelength 560 nm), and the amount of accumulation in cells was calculated.
  • the diphenyl acrylonitrile derivative of the present invention increased the amount of P388 / BCRP cells accumulated in SN-38 cells.
  • the diphenylacrylonitrile derivative of the present invention increased the amount of SN-38 accumulated in MCF-7 cells. This result suggests that the diphenylacrylonitrile derivative of the present invention inhibits BCRP and increases the amount of an anticancer agent taken into cells.
  • Example 11 Effect of diphenylacrylonitrile derivative on in vivo resistance to anticancer drugs
  • mice Six-week-old CDF, strain, female mice (5 / group) were inoculated with ⁇ 88 cells or P388 / BCRP (1 ⁇ 10 6 cel ls / mouse) intraperitoneally, and diphenylacrylonitrile derivative and irinotecan hydrochloride ( CPT-11) was intraperitoneally administered once a day for a total of 10 times from 1 day to 10 days after tumor implantation.
  • the diphenyl acrylonitrile derivative is a physiological saline solution or ethanol, polyoxyethylene (20) sorbitan monooleate CTween 80 (trade name, manufactured by Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) and a 5% glucose mixture (ethanol I Tween).
  • the BCRP inhibitory action of the diphenylacrylonitrile derivative of the present invention makes it possible to overcome BCRP-related resistance to anticancer drugs. It is also possible to enhance the effects of anticancer drugs against BCRP-expressing cancers. Furthermore, it is expected to improve the bioavailability of anti-acne drugs, which is expected to lead to improved treatment results in cancer chemotherapy.

Description

明 細 書
乳癌 I 性蛋白 （BCRP) 阻害剤
技術分野
本発明は乳癌耐性蛋白 （BCRP) 阻害剤に関する。
背景技術
癌化学療法において、 治療開始時から抗癌剤に無効である自然耐性や抗癌剤を 長期に連用するとその効果が低下する獲得耐性の出現は大きな問題となってい る。 この抗癌剤に対する耐性の克服は、 癌化学療法の治療成績向上につながるこ とが期待され、 これまでに様々な耐性機構の存在が明らかにされてきた。 その中 でも抗癌剤を細胞外へ能動輸送し、 その細胞内蓄積量を減少させる薬剤輸送蛋白 質の発現は、 耐性機構の中心的な役割を果たしていると考えられている。
特に、 1970年代に発見された MDR1遺伝子にコ一ドされる薬剤輸送蛋白質 P -糖蛋 白質は、 化学構造や作用機序が異なる複数の抗癌剤に対して交叉耐性を じるこ とから、 多剤耐性克服剤の有力な標的分子とされてきた。 しかし、 P-糖蛋白質だ けでは抗癌剤耐性機構を説明しきれないことも次第に明らかとなり、 さらに新し い薬剤輸送蛋白質を標的分子とした耐性克服剤の開発が望まれている。
その様な中、 1998年に、 P-糖蛋白質と同じく ATP結合カセット (ABC) トランス ポータースーパ—ファミリーと呼ばれる一群に属する薬剤輸送蛋白質として、 乳 癌耐性蛋白 (BCRP) が発見された (Proc. Nat l . Acad. Sci . USA 95, 15665-156 70 (1998) 参照） 。 BCRPの構造には ATP結合カセットがーつしか存在せず、 二つ の ATP結合カセットを有する P-糖蛋白質や他の薬剤輸送蛋白質とは構造的に異な つている。 BCRPは塩酸イリノテカン （CPT- 11) やトポテカン等のトポイソメラ一 ゼ I阻害剤、 ミトキサントロン等のトポイソメラ一ゼ Π阻害剤に対する耐性機構 に深く関与する。 一方、 BCRPは P-糖蛋白質により排出されるパクリタキセルやビ ンクリスチン等に対しては作用しないこと、 また P-糖蛋白質ではほとんど細胞外 へ排出されない CPT-11や 7-ェチル - 10-ヒドロキシカンプトテシン （SN- 38： CPT-1 1の活性体） 等のカンプトテシン誘導体の排出に関わることから （Cancer Res. 5 9, 5938-5946 (1999) 参照） 、 P-糖蛋白質とは異なる基質特異性を有することが 明らかにされている。 さらに、 BCRPは経口投与された抗癌剤のバイオアベイラビ リティの限界にも関与していることが示唆されている （J. Cl in. Oncol . 20, 29 43-2950 (2002) 参照） 。 これらの事実から、 BCRPを阻害する薬剤は、 従来の耐 性克服剤では克服され得なかった抗癌剤の耐性に対して克服効果を発揮し、 さら には抗癌剤のバイオアべィラビリティをも向上させることが期待され、 その開発 が望まれる。
これまでに、 抗癌剤に対する耐性克服を目的として数多くの P-糖蛋白質阻害剤 が開発されている。 一方、 BCRPに対する特異的な阻害剤に関する報告は少なく、 またその阻害作用も十分とはいえないことから、 より強力な BCRP阻害作用を有す る薬剤が要望されていた (Mol . Cancer. Ther. 1, 27-434 (2002) 参照） 。 な お、 ジフエ二ルァクリロニトリル誘導体の中には抗癌作用を示すものが報告され ている (J. Med. Chem. 41, 3022-3032 (1998) 参照） が、 抗癌剤耐性克服作用 や BCRP阻害作用を有するジフエ二ルァクリロニトリル誘導体については知られて いない。
本発明は、 BCRPを阻害する薬剤を提供することを目的とする。 発明の開示
本発明者は、 上記課題を解決すべく、 BCRPにより耐性を獲得した抗癌剤耐性癌 細胞を用いて様々な化合物についてスクリーニングを行った結果、 下記式 （1) で表されるジフエニルァクリロニトリル誘導体に強力な BCRP阻害作用があること を見出し、 本発明を完成するに至った。 すなわち本発明は、 下記式 （1)
Figure imgf000006_0001
( 1 )
〔式中、 8個の Rは同一又は異なり、 それぞれ独立して水素原子、 水酸基、 ニトロ 基、 アミノ基、 ァセチルァミノ基 (- NHC0C 基）、 シァノ基 (-CN基）、 ホルミル基 (- CH0基)、 - COORi基 0 ^水素原子、 C1〜C4アルキル基〉、 -0 (CH2)nCOOR^ (ii=l〜7: R2=水素原子、 C1〜C4アルキル基）、 - OOCCH2CH2COOR3基 (R3=水素原子、 C1〜C4アル キル基、 グリコビラノシル基）、 C1〜C8アルコキシ基、 C1〜C4アルキル基、 ハロ ゲン原子、 C 1〜 C4.アルコキシ C 1〜 C4アルコキシ C 1〜C4アルコキシ基、 C2〜C8ァシ ルォキシ基、 C2〜C8ハロゲノアシルォキシ基、 メチレンジォキシ基、 トリフルォ ロメチル基、 リン酸基 (- 0P (0) (0H) 2)およびその塩、 硫酸基 (- 0S03H)およびその 塩、 グリコピラノシル基およびその塩、 グリコビラノシル基のリン酸エステルお よびその塩、 ダリコビラノシル基の硫酸エステルおよびその塩又はピペリジノピ ペリジノカルボ二ルォキシ基を示す。 〕 で表されるジフエ二ルァクリロニトリル 誘導体又はその塩を有効成分とする BCRP阻害剤、 抗癌剤耐性克服剤および抗癌剤 効果増強剤を提供するものである。
また本発明は、 上記の BCRP阻害剤および BCRPの基質となり得る抗癌剤を含有す る抗癌剤を提供するものである。 図面の簡単な説明 図 1は、 A549/SN- 38- 4細胞の SN- 38 (A) およびミトキサントロン （B ) に対 する耐性獲得の程度を示す図である。
図 2は、 A549細胞および A549/SN-38細胞における各種薬剤輸送蛋白質の mRNAの 発現を RT-PCR法により解析した結果を示す図である。
図 3は、 A549細胞および A549/SN-38細胞における BCRP (A) および MRP2 (B) mRNAの発現をリアルタイム RT-PCR法により定量的に解析した結果を示す図 である。
図 4は、 A549細胞および A549/SN-38-4細胞の SN- 38 (A) および SN- 38ダルク口 ン酸抱合体 (B ) の蓄積量を示す図である。
図 5は、 A549/SN- 38- 4細胞の SN 38 (A) およびミトキサントロン （B ) 耐性 に対するジフエニルアクリロニトリル誘導体 (化合物 1 ) の克服作用を示す図で ある。
図 6は、 P388/BCRP細胞の SN-38耐性に対する各種ジフエ二ルァクリロニトリル 誘導体 〔化合物 1 (A) 、 化合物 3 (B) 、 化合物 4 (C) 、 化合物 5 (D) 、 化合物 7 (E) 、 及び化合物 1 3 ( F) 〕 の作用を示す図である。
図 7は、 ジフエニルアクリロニトリル誘導体 （化合物 1 ) による P388/BCRP細 胞の SN- 38蓄積増大作用を示す図である。
図 8は、 各種ジフエ二ルァクリロニトリル誘導体による MCF-7細胞の SN- 38蓄積 増大作用を示す図である。 発明を実施するための最良の形態
BCRPにより抗癌剤耐性を獲得した癌細胞を用いて、 耐性克服作用を指標に様々 な化合物についてスクリーニングを行った結果、 式 (1) で示されるジフエ二ル ァクリロ二トリル誘導体に強力な BCRP阻害作用があることを見出した。
一般式 （1 ) 中、 Rで示される C1—C4アルキル基としてはメチル基、 ェチル 基、 n—プロピル基、 イソプロピル基、 n—ブチル基等が挙げられ、 このうちメ チル基及びェチル基が特に好ましい。 C1一 C8アルコキシ基としてはメトキシ基、 エトキシ基、 n—プロポキシ基、 イソプロポキシ基、 n—ブトキシ基等が挙げら れ、 このうちメトキシ基、 エトキシ基及び n—ブトキシ基が特に好ましい。 ハロ ゲン原子としてはフッ素原子、 塩素原子、 臭素原子及びヨウ素原子が挙げられ、 このうちフッ素原子、 塩素原子及び臭素原子が特に好ましい。 C1〜C4アルコキシ C1〜C4アルコキシ C1〜C4アルコキシ基としては C1〜C2アルコキシ C1〜(： 2アルコキ シ C1〜C2アルコキシ基が好ましく、 メトキシェトキシメトキシ基が特に好まし い。 C2— C8ァシルォキシ基としては、 ァセトキシ基、 プロピオニルォキシ基、 ブ チリルォキシ基等が挙げられる。 - C00R,基としてはカルボキシ基、 メ卜キシカル ポニル基、 ェトキシカルボニル基等が挙げられ、 このうちメトキシカルポニル基 が特に好ましい。 - 0 (C¾) nC00R2基 (n=l〜7)としては、 -OCH2COOC2H5基、 _0 (C¾) 2C0 0C2¾基、 -0 (CH2) 6COOC2H5基等が挙げられる。 - OOCC CH2COOR3基としては - 00CCH2CH 2C00C¾基、 - 00CC¾C¾C00C2¾基、 - oocc¾c¾coo-テトラァセチルダルコピラノシ ル基等が挙げられる。 C2〜C8ハロゲノアシルォキシ基としては、 Br (CH2) 7C00 -基 等が挙げられる。 グリコビラノシル基としては /3-D -ダルコピラノシル基、 β -マ ルトシル基、 ]3 -マルトトリオシル基、 ]3 -D - 2 -デォキシ -2 -ァミノダルコピラノ シル基などが挙げられ、 このうち i3 -D -ダルコピラノシル基、 β -マル卜シル基、 /3 -マルトトリオシル基が特に好ましい。
上記のジフエ二ルアクリロニトリル誘導体は、 例えばナトリウム、 カリウム、 塩酸塩等が付加して薬学的に許容される塩を形成することができ、 斯かる塩もま た本発明に含まれる。 また、 上記ジフエニルアクリロニトリル誘導体は、 水和物 等の溶媒和物の形態で存在することもあり、 かかる溶媒和物も本発明に含まれ る。 更に、 このジフエ二ルアクリロニトリル誘導体には、 異性体が存在し得る が、 これらの異性体及びその混合物もまた、 本発明に含まれる。
本発明の好ましい態様においては、 ジフエニルァクリロニトリル誘導体は下記 式 ( 1 a ) で表される
Figure imgf000009_0001
( 1 a )
[式 （l a ) 中、
A環の X,は、 水素原子、 水酸基、 ハロゲン原子、 ニトロ基、 アミノ基、 ァセチ ルァミノ基（_NHC0CH3基）、 C2〜C8ァシルォキシ基、 メトキシエトキシメトキシ 基、 又は C1〜C8アルコキシ基；
X2は、 水素原子、 水酸基、 C1〜C8アルコキシ基、 ハロゲン原子、 ニトロ基、 アミ ノ基、 ァセチルァミノ基 ( NHC0C¾基)、 C2〜C8ァシルォキシ基、 メトキシェトキ シメトキシ基、 メチレンジォキシ基、 又は C1〜C4アルキル基；
は水素原子、 水酸基、 C2〜(： 8ァシルォキシ基、 C1〜C8アルコキシ基、 ハロゲン 原子、 ニトロ基、 アミノ基、 ァセチルァミノ基 (-NHC0C¾基)、 シァノ基、 ホルミ ル基 (-CH0基）、 -C00R,基 (R,=水素原子、 C1〜C4アルキル基）、 - 0 (CH2) nC00R2基 (n= 1〜7 :R2=水素原子、 C1〜C4アルキル基)、 -00CCH2CH2C00R3基 (R3=水素原子、 C1〜C4 アルキル基、 ( Z ) - 2 - ( 3， 4ージメトキシ—フエニル） - 3 - ( 4ーヒドロ キシーフエニル) 一アクリロニトリル、 グリコビラノシル基）、 C2〜C8ハロゲノ ァシルォキシ基、 メチレンジォキシ基、 リン酸基（- 0P (0) (OH) 2)およびその塩、 硫酸基 (- 0S03H)およびその塩、 グリコピラノシル基およびその塩、 グリコピラノ シル基のリン酸エステルおよびその塩、 ダリコピラノシル基の硫酸エステルおよ びその塩、 ピペリジノピペリジノカルボニルォキシ基、 又はメトキシェトキシメ チル基を示し、 B環の Y,は、 水素原子、 C2〜C8ァシルォキシ基、 トリフルォロメチル基、 又は C1〜C8アルコキシ基； Y2は、 水素原子、 水酸基、 C2〜C8ァシルォキシ基、 メトキ シエトキシメトキシ基、 - COORi基 (R 水素原子、 C1〜C4アルキル基）、 -0 (CH2) nC0 0R2基（n=l〜7 :R2=水素原子、 C1〜C4アルキル基）、 _OOCCH2CH2COOR3基 (R3=水素原 子、 C1〜C4アルキル基、 （Z )— 2 _ ( 3 , . 4—ジメトキシ—フエニル） 一 3 _ ( 4—ヒドロキシ一フエニル） 一アクリロニトリル、 グリコピラノシル基）、 C2 〜C8ハロゲノアシルォキシ基、 メチレンジォキシ基、 リン酸基 (- 0P (0) (0H) 2)お よびその塩、 硫酸基 (- 0S03H)およびその塩、 グリコピラノシル基およびその塩、 ダリコビラノシル基のリン酸エステルおよびその塩、 ダリコピラノシル基の硫酸 エステルおよびその塩、 ピペリジノピペリジノカルポニルォキシ基、 又は C1〜C8 アルコキシ基を示す。 ]
特に好ましい式 （l a ) の化合物は、
A環の X！が、 水素原子、 水酸基、 ァセトキシ基、 ハロゲン原子、 ニトロ基、 ァ ミノ基、 ァセチルァミノ基 (-腿 C0C¾基）、 又はメトキシ基；
が、 水素原子、 水酸基、 メトキシ基、 エトキシ基、 ァセトキシ基、 ハロゲン 原子、 ニトロ基、 アミノ基、 ァセチルァミノ基 (- NHC0C¾基）、 メチレンジォキシ 基、 又はメチル基；
X3が、 水素原子、 水酸基、 ァセトキシ基、 メトキシ基、 ハロゲン原子、 ニトロ 基、 アミノ基、 ァセチルァミノ基 (- NHC0CH3基）、 メチレンジォキシ基、 グリコピ ラノシル基およびその塩、 グリコビラノシル基のリン酸エステルおよびその塩、 グリコピラノシル基の硫酸エステルおよびその塩、 リン酸基（- 0P (0) (0H) 2)ぉよ びその塩、 硫酸基 (- 0S03H)およびその塩、 ピぺリジノピぺリジノカルボ二ルォキ シ基、 又はメトキシエトキシメトキシ基を示し、
B環の が水素原子、 卜リフルォロメチル基、 又はメトキシ基；
Y2が水素原子、 水酸基、 メトキシェトキシメトキシ基、 ァセトキシ基、 又はメ トキシ基を示す化合物である。 A環は一〜三置換体であるのが望ましく、 一置換体の場合、 2位、 3位又は 4 位、 二置換体の場合、 2， 3位、 3 , 4位又は 3, 5位、 そして三置換の場合、 3， 4， 5位が置換されているのが望ましい。
B環は一〜三置換体であるのが望ましく、 一置換体の場合、 4位、 二置換体の 場合、 3 , 4位、 三置換の場合、 3 , 4， 5位が置換されているのが望ましい。 本発明の別の観点から好ましい化合物は、 上記式 （l a ) において、 A環が 4 - ヒドロキシフエニル、 2 -ヒドロキシフエニル、 4-ピペリジノピペリジノカルボ二 ルォキシフエニル、 4-ァセトキシフエ二ル、 4 -メ卜キシェ卜キシメトキシフエ二 ル、 4ーヒドロキシ -3-メトキシフエニル、 3, 4-ジヒドロキシフエニル、 3-ヒドロ キシ -2-メトキシフエニル、 3, 5 -ジメチル- 4-ヒドロキシフエニル、 4-ヒドロキ シ- 3-エトキシフエニル、 4-ブロモフエニル、 2-フルオロフェニル、 3-フルォロ フエニル、 4-フルオロフェニル、 2， 3-ジフルオロフェニル、 2, 4-ジフルオロフェ ニル、 2， 5-ジフルオロフェニル、 2, 6-ジフルオロフェニル、 3， 4-ジフルオロフェ ニル、 3, 5-ジフルオロフェニル、 2， 3， 4-トリフルオロフェニル、 2， 3， 5-トリフル オロフェニル、 2, 3， 6-トリフルオロフェニル、 2, 4, 5-トリフルオロフェニル、 3, 4, 5-トリフルオロフェニル、 4-ニトロフエニル、 3-ニトロフエニル、 2_ニトロフ ェニル、 4 -シァノフエニル、 4-ァミノフエ二ル、 3-ァミノフエ二ル、 4-メ卜キシ カルポニルフエニル、 4-クロ口- 3-ニトロフエニル、 2-フルォロ -5-ニトロフエ二 ル、 3 -ェトキシ -4-二トロフエニル、 4-00CC¾CH2C00CH3-フエニル、 4- 00CC¾CH2C0 OC2H5 -フエニル、 4 - β -D-グルコピラノシル-フエニル、 4-ヒドロキシ -3-ニトロ フエニル、 3, 4-メチレンジォキシ -6-ニトロフエニル、 3，4-ジメトキシフエ二 ル、 4- 3 -マルトシル-フエニル、 4- ,3 -マルト卜リオシル-フエニル、 2 -ェトキ シ- 5-ニトロフエニル、 3-ヒドロキシ- 4-ニトロフエニル、 3-フルォロ- 2-ヒドロ キシフエニル、 3 -フルォロ- 4-メトキシェトキシメトキシ、 3 --フルォ口- 4-ヒドロ ，キシフエニル、 4-0P (0) (0Na) 2 -フエニル、 4_ホルミルフエニル、 4-ァセトキシ- 3-エトキシフエニル、 4-ァセトキシ- 3-フルオロフェニル、 4- 00C (CH2) 7Br-フエ ニル、 3-メトキシ- 4- OP (0) ((Ma) 2-フエエル、 4-0P (0) (OH) 2_フエニル、 3-メトキ シ- 4- 0P(0) (0H)2-フエニル、 4-ァセチルァミノフエニル、 4- ( j3-D -グルコース- 6' _0P(0) (0Na)2)-フエニル、 4-0S03H- N(C2H5)3_フエニル、 4- (j3- D-グルコース- 6， - 0P(0) (0H)2) -フエニル、 2-ヒドロキシ -5-ニトロフエニル又は 4-フルォロ- 3- ニトロフエニルのいずれかであり、 B環が 4_n-ブトキシフエニル、 3， 4-ジメト キシフエニル、 3,4,5-トリメトキシフエ二ル、 4-ヒドロキシフエニル、 4 -メトキ シエトキシメトキシフエニル、 4-ァセトキシフエ二ル又は 3, 5-ビストリフルォロ メチルフエニルのいずれかである化合物である。 但し、 A環及び B環ともに 4一 ヒドロキシフエニルである化合物を除く。 これらの中で特に好ましい化合物は、 下記の化合物である。
(Z)- 2- (3, 4ージメトキシーフエニル) —3— (4—ヒドロキシーフエ二 ル） —アクリロニトリル；
[1, 4，] ビピベリジ二ルー 1，—カルポキシリックアシッド 4- [ (Z) 一 2 —シァノ _ 2— (3, 4ージメトキシ—フエニル) 一ビエル] —フエニルエステ ル；
ァセティックアシッド 4— [ (Z) _ 2—シァノー 2— (3, 4—ジメトキシー フエニル） ービニル] —フエニルエステル；
(Z) —2— (3， 4ージメトキシ—フエニル) - 3 - [4— (2—メトキシー エトキシメトキシ） 一フエニル] 一アクリロニトリル；
(Z) —2— (3， 4—ジメトキシーフエニル) - 3 - (3—ヒドロキシ一フエ ニル） 一ァクリロニ卜リル；
(Z) - 2 - (3, 4—ジメ卜キシ一フエニル) - 3 - (2—ヒドロキシ一フエ ニル） 一アクリロニトリル；
(Z) —2— （3, 4—ジメトキシ一フエニル） 一 3— （4ーヒドロキシー 3— メトキシ一フエニル） 一アクリロニトリル；
(Z) —3— (3, 4—ジヒドロキシ一フエニル） 一 2— （3, 4—ジメトキシー フエニル） —アクリロニトリル；
(Z) - 2 - (3， 4—ジメトキシ—フエニル） — 3— (3—ヒドロキシ— 2— メトキシ一フエニル） 一アクリロニトリル；
(Z) 一 2— （3, 4—ジメトキシ一フエニル） 一3— （4—ヒドロキシ一 3, 5 一ジメチルーフエニル) 一アクリロニトリル；
(Z) 一 2— (3， 4ージメトキシ一フエニル) — 3— （3—エトキシ一 4ーヒ ドロキシーフエニル） —アクリロニトリル；
(Z) - 3 - (4—ブロモーフエニル） 一 2— (3， 4—ジメトキシーフエ二 ル） 一アクリロニトリル；
(Z) 一 2— (3， 4ージメトキシ一フエニル) - 3 - (3—フルオローフエ二 ル） —アクリロニトリル ;
(Z)_ 2一 (4一ブトキシ—フエニル) - 3 - (4—ヒドロキシーフエニル) —アクリロニトリル；
(Z) —3— (4—ヒドロキシ一フエニル） 一2— (3， 4， 5—卜リメトキシー フエニル) 一アクリロニトリル；
(Z) 一 2， 3—ビス一 (4—ヒドロキシーフエニル) —アクリロニトリル；
(Z) 一 2— （3， 4ージメトキシ—フエニル） 一3— (4—ヒドロキシ一フエ ニル） 一アクリロニトリル，ナトリウム塩；
(Z) -2- (3, 4ージメトキシーフエニル) 一 3— (4一フルオローフエ二 ル） —ァクリロニトリル；
(Z) 一 2— （3, 4—ジメトキシーフエニル） 一 3— （4一二トロ一フエ二 ル） —アクリロニトリル；
(Z)— 2— (3, 4—ジメトキシーフエニル) 一 3— （2—フルオローフエ二 ル） 一アクリロニトリル；
4一 [ (Z) —2—シァノ一2— （3， 4ージメトキシーフエニル) 一ビニル] - ベンゾニトリル； (Z) - 3 - (2, 3—ジフルオローフエニル） 一 2— (3， 4—ジメトキシ— フエニル） —アクリロニトリル；
(Z) _ 3— (2, 4ージフルオローフエニル） — 2— (3, 4—ジメトキシ一 フエニル） —アクリロニトリル；
(Z) — 3— (2, 5—ジフルオローフエニル） — 2— (3, 4ージメトキシー フエニル) —アクリロニトリル；
(Z) 一 3— （3， 4—ジフルオローフエニル） - 2 - (3, 4ージメトキシー フエニル） 一アクリロニトリル；
(Z) 一 3— (3， 5—ジフルオローフエニル） — 2— (3， 4ージメトキシー フエニル） 一アクリロニトリル；
(Z) 一 2— （3, 4—ジメトキシーフエニル） 一 3 _ (2, 3， 4一トリフル オローフエニル） 一アクリロニトリル；
(Z) — 2— （3， 4ージメトキシ一フエニル） 一 3— (2, 3， 5—トリフル オローフエニル） —アクリロニトリル；
(Z) - 2- (3, 4—ジメトキシ一フエニル） 一 3— (2, 3, 6—トリフル オローフエニル） 一アクリロニトリル；
(Z) 一 2— （3， 4—ジメトキシ—フエニル） — 3— (2, 4, 5—
オローフエニル） 一アクリロニトリル；
(Z) —2— （3， 4ージメトキシーフエニル） 一 3— (3, 4, 5—
オローフエニル） 一アクリロニトリル；
(Z) - 3 - (2, 6—ジフルオローフエニル） — 2— (3， 4—ジメトキシー フエニル） —アクリロニトリル；
(Z) - 2 - (3, 4—ジメトキシーフエニル） 一 3— （3—二トローフエ二 ル） 一アクリロニトリル；
(Z) 一 3— （4—ァミノ一フエニル） 一 2— （3, 4—ジメトキシーフエ二 一アクリロニトリル； [4一 [ (Z) 一 2—シァノー 2— (3， 4ージメトキシーフエニル） ービニ ル] ーフエノキシ] —ァセティックアシッド ェチルエステル；
4— [ (Z) — 2—シァノ _2— （3, 4—ジメトキシ—フエニル） 一ビニル] 一ベンゾィックァシッド メチルエステル；
(Z) 一 2— （3, 4—ジメトキシーフエニル） 一 3— （2—ニトロ一フエ二 ル） 一アクリロニトリル；
(Z) - 3 - (4—クロロー 3—ニトロ一フエニル） 一 2— (3， 4—ジメトキ シ一フエニル） 一アクリロニトリル；
(Z) - 2 - (3, 4—ジメトキシ一フエニル） 一3— (2—フルオロー 5—二 トロ—フエニル） —アクリロニトリル；
(Z) 一 2— (3, 4—ジメトキシーフエニル） 一 3_ (4—エトキシ一 3—二 トロ—フエニル） —アクリロニトリル；
スクシニックアシッド 4一 [ (Z) 一 2—シァノー 2— (3, 4—ジメトキシ一 フエニル） ービニル] —フエニルエステルメチルエステル；
スクシニックアシッド 4— [ (Z) —2—シァノ一2— (3, 4—ジメトキシ一 フエニル） —ビニル] —フエニルエステルェチルエステル；
スクシニックアシッド ビス一 {4一 [ (Z) —2—シァノ一2— (3, 4—ジメ トキシーフエニル） —ビニル] —フエ二ル}エステル；
(Z) - 2 - (3, 4ージメトキシフエ二ル） 一 3— （4一 /3— D—ダルコピラ ノシルーフエニル） 一アクリロニトリル；
(Z) —2— （3， 4—ジメトキシ一フエニル） 一 3— (4—ヒドロキシ一 3— ニトロ一フエニル） 一アクリロニトリル；
(Z) — 2— （3， 4ージメトキシーフエニル） 一 3— (6-ニトロ一ベンゾ
[1, 3] ジォキソ一ル— 5—ィル） —アクリロニトリル；
(Z) -3- (3, 4—ジメトキシ一フエニル） — 2— [4— (2—メトキシーェ トキシメトキシ）一フエニル]一アクリロニトリル； (Z) ー 3— (3, 4ージメトキシーフエニル） 一 2— (4ーヒドロキシ—フエ ニル） —アクリロニトリル；
(Z) 一 2— (3, 5—ビス一トリフルォロメチル—フエニル） 一 3— （4ーヒ ドロキシーフエニル） 一アクリロニトリル；
(E)— 2_ (3， 4—ジメトキシーフエニル） 一 3— (4—ヒドロキシ一フエ二 ル） 一アクリロニトリル；
(Z) -2 - (3， 4—ジメトキシフエ二ル) 一 3— （4一 i3—マルトシル―フ ェニル) —ァクリロニトリル；
(Z) —2— (3, 4ージメトキシ一フエニル） 一 3— (2—エトキシ一 5—二 トロ一フエニル） 一アクリロニトリル；
(Z) -2 - (3, 4—ジメトキシーフエニル） 一 3— (3—ヒドロキシ一 4一 ニトロ一フエニル) —アクリロニトリル；
(Z) -2 - (3, 4—ジメトキシフエ二ル) — 3— （4一 /3 _マルトトリオシ ルーフエニル） 一アクリロニトリル；
(Z) -2 - (3， 4—ジメトキシ一フエニル） 一 3— (3—フルォロ一 2—ヒ ドロキシ一フエニル） 一アクリロニトリル；
(Z) — 2, 3—ビス一 （3， 4ージメトキシ—フエニル) ーァクリロ二トリ ル
(Ζ) - 3 - (3—ァミノ一フエニル) — 2— (3, 4ージメトキシ一フエ二 ル） 一アクリロニトリル；
(Ζ) 一 2— (3， 4ージメトキシ一フエニル） ― 3一 [3—フルオロー 4一 (2—メトキシーエトキシメトキシ） —フエニル]一アクリロニトリル；
(Ζ) — 2— （3, 4—ジメトキシ一フエニル) — 3— (3—フルオロー 4ーヒ ドロキシーフエニル） —アクリロニトリル；
ホスホリックアシッドモノ一 {4- [ (Ζ) — 2—シァノー 2— （3, 4—ジメ トキシーフエニル） ービニル] 一フエ二ル} エステル，ナトリウム塩； ァセティックアシッド 4一 [ (Z) 一 1—シァノー 2— (3, 4ージメトキシ —フエニル） ービニル] フエニルエステル；
(Z) -2- (3， 4—ジメトキシ—フエニル） 一 3— （4一ホルミル—フエ二 ル） 一アクリロニトリル；
ァセティックアシッド 4_ [ (Z) — 1ーシァノー 2— (3, 4—ジメトキシ
—フエニル） ービニル] 一 2 _エトキシ—フエニルエステル；
ァセティックアシッド 4— [ (Z) 一 1ーシァノー 2— (3， 4—ジメトキシ 一フエニル） —ビニル] 一 2—フルオローフエニルエステル；
ァセティックアシッド 4- [ (Z) 一 2—シァノー 2— （3， 4, 5—トリメ トキシーフエニル) ービニル] —フエニルエステル；
7- [4— [ (Z) _2—シァノ一2— (3, 4—ジメトキシ—フエニル) —ビ ニル] ーフエノキシ] 一ヘプタノイツクアシッド ェチルエステル；
8—ブロモ一ォクタノイツクァシッド 4- [ (Z) 一 1—シァノ一2— (3, 4—ジメトキシーフエニル) -ビニル] 一フエニルエステル；
(Z) 一 3— (3—ァミノ一フエニル） 一 2— (3, 4—ジメトキシ一フエ二 ル） 一アクリロニトリル,塩酸塩；
ホスホリックアシッド モノ— {4- [ (Z) _ 2—シァノー 2— (3, 4ージ メトキシ—フエニル） 一ビエル] 一 2—メトキシ—フエ二ル} エステル，ナトリ ゥム塩；
ホスホリックアシッド モノ— {4_ [ (Z) —2—シァノー 2— （3, 4—ジ メトキシーフエ二ル） 一ビニル] 一フエ二ル} エステル；
ホスホリックアシッド モノ— {4— [ (Z) 一 2—シァノー 2— (3, 4—ジ メトキシーフエニル） ービニル] 一 2—メトキシ—フエ二ル} エステル； N— [3— [2—シァノー 2— (3， 4—ジメトキシーフエニル) 一ビニル] 一 フエ二ル—] 一ァセトアミド；
(Z) -2- (3， 4—ジメトキシフエ二ル） _3— 「4一 （6—ホスホー iS— D—ダルコピラノシル） 一フエニル」 一アクリロニトリル； スルホリックアシッド モノ一 {4一 [ (Z) 一 2—シァノー 2— （3， 4—ジ メトキシーフエニル） ービニル] 一フエ二ル} エステル，トリェチルアンモニゥ ム塩；
(Z) - 2- (3， 4—ジメトキシフエニル) - 3 - Γ4- (6—ホスホー 一 D—ダルコピラノシル) 一フエニル」 —アクリロニトリル，ナトリウム塩；
(Z) -2- (3， 4—ジメトキシ一フエニル） _3— （2—ヒドロキシ一 5— ニトロ—フエニル) 一アクリロニトリル；及び
(Z) -2- (3, 4—ジメトキシ—フエニル） 一3— (4一フルオロー 3—二 トローフエニル） —アクリロニトリル。
(Z) 一 2— (3, 4—ジメ卜キシーフエニル) 一 3— (3—ヒドロキシ _ 4， 5—ジメトキシーフエニル） 一アクリロニトリル
(Z) -2- (3, 4ージメトキシーフエニル) 一 3— (4ーヒドロキシ _ 3， 5—ジメトキシ—フエニル） —アクリロニトリル
本発明のジフエ二ルアクリロニトリル誘導体 (1) 又はその塩は、 例えば次の 反応式に従つて製造することができる。
Figure imgf000018_0001
(式中、 Rは前記と同じ意味を示す。 ）
すなわち、 ベンズアルデヒド類 (2) とベンジルシアニド類 (3) を縮合させ ることにより、 ジフエニルアクリロニトリル誘導体 （1) が製造される。 ただ し、 Rが水酸基であるジフエニルアクリロニトリル誘導体 （1) を得る場合に は、 Rがメトキシメトキシ基、 メトキシェトキシメトキシ基、. メチルチオメトキ シ基、 テトラヒドロピラニルォキシ基、 シクロプロピルメトキシ基、 ベンジルォ キシ基、 トリメチルシリルォキシ基、 ter t -プチルジメチルシリルォキシ基等の 保護基で保護したベンズアルデヒド類 （2 ) とベンジルシアニド類とを縮合さ せ、 次いでこれらの保護基を脱離させることにより製造される。
縮合反応は、 ナトリウムアルコキシド、 水酸化ナトリウム、 水酸化カリウム等 の塩基の存在下にて行うのが好ましい。 ナトリゥムアルコキシドの存在下での縮 合反応は、 例えばメタノール、 エタノール等のアルコール溶媒中、 室温から還流 温度で行われる。 また、 水酸化ナトリウムの存在下での縮合反応は、 塩化メチレ ン、 クロ口ホルム等の不活性溶媒と水との混合溶媒中、 第四級アンモニゥム塩等 を添加して行われる。
縮合反応終了後の水酸基保護基の脱離反応は、 例えば塩酸、 硫酸、 酢酸、 パラ トルエンスルホン酸、 トリフルォロ酢酸等の存在下に加水分解するのが好まし い。 また、 ベンジルォキシ基は、 パラジウム炭素、 酸化白金等の触媒の存在下、 接触水素添加により脱保護するのが望ましい。
本発明のジフエ二ルアクリロニトリル化合物は、 そのままでも投与することが できるが、 効果を低減させない範囲内で、 分散補助剤、 賦形剤等の通常製剤化に 使用されるような担体と混合し、 粉剤、 液剤、 カプセル剤、 懸濁剤、 乳剤、 シロ ップ剤、 エリキシル剤、 顆粒剤、 丸剤、 錠剤、 トローチ剤、 リモネ一デ剤等の経 口剤又は注射剤等の剤形で使用することができる。
この様な担体としては、 例えば、 マンニ! ^一ル、 乳糖、 デキストラン等の水溶 性の単糖類ないしオリゴ糖類もしくは多糖類；例えばヒドロキシプロピルセル口 ース、 ヒドロキシプロピルメチルセルロース、 メチルセルロース等のゲル形成性 又は水溶性のセルロース類；例えば結晶性セルロース、 ひ-セルロース、 架橋力 ルポキシメチルセルロースナトリゥム、 及びそれらの誘導体等の水吸収性でかつ 水難溶性のセルロース類；例えばヒドロキシプロピル澱粉、 カルボキシメチル澱 粉、 架橋澱粉、 アミロース、 アミ口べクチン、 ぺクチン及びそれらの誘導体等の 水吸収性でかつ水難溶性の多糖類；例えばアラビアガム、 トラガントガム、 ダリ コマンナン及びそれらの誘導体等の水吸収性でかつ水難溶性のガム類；例えばポ リビニルピロリドン、 架橋ポリアクリル酸及びその塩、 架橋ポリビニルアルコー ル、 ポリヒドロキシェチルメタクリレ一ト及びそれらの誘導体等の架橋ビニル重 合体類； リン脂質、 コレステロール等のリポソ一ム等分子集合体を形成する脂質 類等を挙げることができる。
本発明のジフエ二ルァクリロニトリル化合物の溶解性が低い場合には、 可溶化 処理を施すことができる。 可溶化処理としては通常医薬に適用できる方法、 例え ば、 ポリオキシエチレンアルコールエーテル類、 ポリォキシェチレンァシルエス テル類、 ソルビ夕ンァシルエステル類、 ポリォキシェチレンソルピ夕ンァシル工 ステル類等の界面活性剤を添加する方法、 ポリエチレンダリコール等の水溶性高 分子を使用する方法等が挙げられる。 また、 必要により、 可溶性の塩にする方 法、 シクロデキストリン等を用いて包接化合物を形成させる方法等も使用でき る。 可溶化処理の方法は、 目的とするジフエニルアクリロニトリルィ匕合物に応じ て適宜変更できる。
BCRP阻害剤は、 抗癌剤の投与によって BCRP関与の耐性を獲得した癌に対しては 抗癌剤耐性克服剤として使用することが出来る。 また、 もとから BCRPを発現し、 抗癌剤に対して低感受性の癌に対しては抗癌剤効果増強剤として使用することが 出来る。 BCRP阻害剤を有効成分とする抗癌剤耐性克服剤および抗癌剤効果増強剤 の対象となる抗癌剤としては、 BCRPの基質となり得る抗癌剤であれば特に制限は ないが、 .例えば塩酸-ィリノテカン /CPT- 1 1 (活性本体： SN-38) やトポテカン等の トポイソメラーゼ I阻害剤や、 ミトキサントロン、 ドキソルビシン、 ダウノルビ シン、 ビスアントレン、 エトポシド等のトポイソメラーゼ I I阻害剤や、 メトトレ キサート等の葉酸代謝拮抗薬等が挙げられる。
本発明の BCRP阻害剤の投与量は、 投与法や患者の症状等に合わせて適宜調整す ればよいが、 成人 1日あたり 1 mg〜10 g、 更に 100 nig〜10 g、 特に 500mg〜10 g投 与するのが好ましい。 また、 抗癌剤と BCRP阻害剤との比率は、 特に限定されず、 その好適な範囲は用いる抗癌剤、 阻害剤の種類等により異なるが、 例えば抗癌剤 として塩酸ィリノテカンを用いる場合には、 重量換算で抗癌剤: BCRP阻害剤が 1： 1 -1:500, 特に 1 : 1〜1:100、 更に 1:1〜1:10の比率とすることが好ましい。
本発明に用いられるジフエ二ルァクリロ二トリル誘導体の具体例を表 1に示 す。
表 1 化合物 化学名
1 (z)-2-(3, 4-y メトキシ-フ 1ニル)- 3- (4-ヒド口キシ-フ 1こル)-ァクリにトリル
2 [1， 4，]ヒ"ピへ。リシ'、ニル- 1，-カルホ"キシリックアシッド 4- [(Z) -2-シァノ -2- (3， 4-y メトキシ-フ ェニル) -ビニル] -フエニルエステル
3 ァセティツクァシッド 4 - [ (Z) -2-/77-2- (3， 4-y メトキシ-フエニル) -ビニル] -フエニルエステル
4 (Z) - 2 -（3， 4 -シ"メトキシ-フエニル) -3- [4- (2-メトキシ-エトキシメトキシ) -フエニル] -アクリロニトリル
5 (z)-2-(3, 4-y メトキシ-フ I二ル)- 3- (3 -ヒド口キシ-フ 1ニル) -ァク 二トリル
6 (z)-2-(3, 4-y メトキシ-フ 1ニル)- 3- (2-ヒト"口キシ-フ 1こル)-ァクリ0二トリル
7 (Z) - 2 -（3, 4-y メトキシ-フエ::ル)- 3 -（4-ヒド口キシ- 3-メトキシ-フ 1ニル)-ァクリ D::卜リル
8 (z)-3-(3, 4- ヒドロキシ-フ Iニル) -2 -（3, 4-y メトキシ-フエニル) -ァクリ D二トリル
9 (Z)- 2- (3, 4一シ'メトキシーフエニル) -3 -（3—ヒト"ロキシ -2-メトキシ -フエ；:ル) -アクリロ：:卜リル
10 (z)-2-(3, 4-y メトキシ-フエ二ル)- 3- (4-ヒト"口キシ- 3, 5 -シ'メチル -フエ二ル)-アタリ D二トリル
11 (z)-2-(3, 4-シ'メトキシ-フ I二ル)- 3- (3-1トキシ -4-ヒ卜"ロキシ -フエニル) -アクリロニトリル
12 (Z) -3- (4-7'ロモ-フエ：:ル) - 2 - (3, 4->" )、トキシ-フエ；:ル) -ァクリロ：:トリル
13 (Z)- 2 -（3， 4 -シ" トキシ-フエ；:ル) - 3 -（3-フルォロ -フエ::ル) -ァクリロ；:トリル
14 (Z)- 2 - (4 -フ'、トキシ-フ 1ニル)- 3- (4 -ヒドロキシ -フエ；:ル)-ァクリにトリル
15 (Z)- 3 -（4 -ヒド口キシ-フエニル) - 2 -（3, 4, 5 -トリメトキシ-フエ二ル)-アクリロニトリル
16 (z)-2, 3-ビス- (4-ヒドロキシ-フ 1ニル)-ァクリ Di:トリル (Z)-2-(3, 4- メトキシ-フエ；:ル )-3- (4 -ヒド口キシ-フ. ι二ル)-ァクリ Π二トリル ナトリウム塩
(Z)-2-(3, 4-y メトキシ-フ 1ニル)- 3- (4-フルォ H -フエ；:ル)-ァクリにトリル
(Z)-2-(3, 4-y メトキシ-フエニル) -3_ (4 -二トロ-フエニル)一アクリロニトリル
(Z) - 2 -（3, 4 -シ"メトキシ -フエ::ル) -3- (2-フルォロ-フ 1ニル)-ァクリロ：:トリル
4- [ (Z) - 2-シァノ- 2- (3， 4-y メトキシ-フエ；:ル) -ビニル]—へ"ン、 /：:トリル
(z)-3-(2, 3 -シ"フル才口-フ I二ル)- 2_ (3, 4 -シ"メトキシ-フ 1ニル)-ァクリにトリル
(z)-3-(2, 4-y フル才 Π-フ 1ニル)- 2- (3, 4 -シ メトキシ -フエ::ル) -ァクリロ;:トリル
(Ζ) - 3 -（2, 5 -シ'、フルォ口-フエ;:ル) -2 -（3， 4-y メトキシ -フエ;:ル) -ァクリロ;:トリル
(Z) -3- (3, 4- フルォ口-フエ::ル) -2- (3, 4 -シ"メトキシ-フエ;:ル) -ァクリロ：:トリル
(Z) -3- (3, 5 -シ"フル才ロ -フエ：:ル) -2- (3, 4 -シ"メトキシ-フエ::ル) -ァクリロ：:トリル
(z)-2-(3, 4-y メトキシ-フエニル) -3- (2, 3, 4-トリフルォ Πΐ-フ inル)-ァクリにトリル
(Z)-2-(3, 4 -シ"メトキシ-フヱニル) -3- (2， 3, 5 -トリフルォ D-フ 1ニル) -ァクリ 0ニトリル
(z)-2-(3, 4-シ'、メトキシ-フ I二ル)- 3- (2, 3, 6-トリフルォ D-フ 1こル)-ァクリ D二トリル
(z)-2-(3, 4-y メトキシ-フ Iニル) -3- (2， 4, 5 -トリフルォ D -フエ;:ル)-ァクリにトリル
(z)-2-(3, 4-y メトキシ-フエ二ル)- 3- (3, 4, 5—トリフルォ口-フエ；:ル)ーァクリロ；:トリル
(Z)- 3 -（2, 6-シ'、フルォ Π-フ 1ニル)- 2- (3， 4-y メトキシ -フエ；:ル) -ァクリロ；:トリル
(z)-2-(3, 4-y メトキシ-フエ二ル)- 3- (3 -二トローフエニル)—アクリロニトリル
(Z)- 3- (4-ァミノ-フエ::ル) - 2 -（3， 4-シ'、メトキシ -フエ;:ル) -ァクリロ；:トリル
[4- [ (Z) - 2-シァノ- 2 -（3， 4-y トキシ-フエ：:ル) -ビ：:ル] -フエノキシ] -ァセティックァシッド ェチルェ ステル
4- [ (Z) - 2—シァノ -2 - (3, 4-y"メトキシ-フエ：:ル)—ビ：:ル] -へ'ン、 /イツクァシッド メチルエステル
(Z)-2- (3， 4-y メトキシ-フ 1ニル)- 3- (2-ニト Π-フ 1ニル) -ァクリにトリル
(Ζ) -3- (4 -ク DD- 3-ニト D-フエニル) -2- (3, 4-シ"メトキシ-フヱニル) -アタリにトリル
(Ζ) -2- (3, 4-シ"メトキシ -フエ::ル) - 3- (2-フル才ロ -5-ニトロ-フエ::ル) -ァクリロ；:トリル
(Ζ)-2(3，4_シ'、メ卜キシ-フエ：:ル) -3-(4-エトキシ -3 トロ-フエ::ル) -ァクリロ：:トリル
スクシ::ックアシッド 4-[(Ζ)-2-シァノ -2-(3，4-シ"メトキシ-フエ：:ル) -ビニルトフエ：:ルエステル メチルエステル スクシニックァシッド 4-[(Ζ)-2-シァノ -2-(3,4-シ"メ卜キシ -フエニル) -ビニルトフエ;:ルエステル ェチルエステル スクシ;:ックアシッドビス -(4-[(Z)-2-シァノ -2-(3,4-シ"メトキシ-フエ；:ル) -ビニル] -フエ；:ル)エステル
(Z)-2-(3,4-シ"メトキシ-フエ;:ル) -3-(4- iS -D-ゲルコピラノ'ンル-フエ；:ル) -ァクリロ::トリル
(Z)-2-(3,4- メトキシ-フエ::ル) _3_(4-ヒドロキシ -3-ニトロ-フエ：:ル) -ァクリロ；:トリル
(Z)-2-(354- メトキシ-フエ：:ル )_3-(6-ニトロ-へ'、ンソ" [l,3]y ォキリ-ル- 5-ィル) -ァクリロ::トリル
(Z)-3-(3,4-シ'、メトキシ-フエニル) -2-[4-(2-メトキシ-エトキシメトキシ) -フエニル] -アクリロニトリル
(Z)-3-(3,4-シ"メトキシ-フエ;:ル) -2-(4-ヒド口キシ-フエニル) -ァクリロ；:トリル
(Z)-2-(3，5-ビス-トリフルォロ州 1 -フ 1ニル) -3-(4-ヒト"ロキシ-フエニル)-ァクリロ；:トリル
(E)-2_(3,4-シ"メトキシ-フエニル)_3-(4_ヒド Dキシ-フエ::ル)—アクリロニトリル
(Z)-2-(3,4-y メトキシフエ二ル) -3-(4- β -マルトシル-フエニル) -アクリロニトリル
(Ζ) -2- (3, 4 -シ'メトキシ-フエニル) -3- (2 -エトキシ -5-ニトロ -フエニル) -アクリロニトリル
(Ζ) -2- (3, 4-シ'、メトキシ-フ Iニル) -3- (3 -ヒドロキシ -4-二ト D-フエ二ル) -ァクリにトリル
(Ζ)-2-(3,4-シ"メトキシフエ;:ル) -3-(4- β -マルトトリオシル-フエ：:ル) -ァクリロ：:トリル
(Ζ) -2- (3, 4- メトキシ-フエニル) -3- (3-フルれ - 2-ヒド口キシ-フエ；:ル) -ァクリロ：:トリル
(Z) -2, 3—ビスー (3, 4-y メトキシ-フエニル) -ァクリ Π二トリル
(Z) - 3- (3-ァミノ-フエ二ル) - 2 -（3, 4-y メトキシ-フ 1ニル) -ァクリ E トリル
(Z) -2- (3, 4-y メトキシ-フエ二.ル) -3- [3-フルオロ- 4 - (2 -メトキシ-エトキシメトキシ) -フエニル] -ァクリ ロニトリル
(z) -2- (3, 4-y メトキシ-フ I二ル) - 3- (3-フルォ α- 4-ヒド口キシ-フ 1こル) -ァク 'jD二トリル ホスホリックアシッドモノ- (4 - [ (Z) - 2-シァノ -2 -（3， 4-シ'、メトキシ-フ inル) -ビニル] -フ ιϋル)エステ ル,ナトリウム塩
ァセティツクアシッド 4- [ (Ζ) -トシァノ- 2 -（3， 4-y メトキシ-フエニル) -ビニル] -フエニルエステル
(Z) - 2 - (3, 4-y iトキシ-フヱニル) -3- (4-ホルミル -フエニル) -アタリ D二トリル
ァセティックアシッド 4- [ (Z) -卜シァノ -2 -（3， 4-y メトキシ-フエニル) -ビ二ル] - 2-1卜キシ-フエニルェ ステル
ァセティックアシッド 4- [ (Z) -卜シァノ -2- (3， 4-y メ卜キシ-フエニル) -ビニル] -2 -フル才口-フエニルェ ステル
ァセティックアシッド 4- [ (Z) - 2-シァノ -2- (3， 4, 5 -トリメトキシ-フエニル) -ビ:：ル] -フエ：:ルエステル 66 7- [4- [ (Z) - 2—シァノ- 2— (3, 4 -シ'、メトキシーフエニル)—ビニル] -フエノキシ]—へフ。タノイツクアシッド ェチルエステル
67 8-フ'、口モ-ォクタノイツクアシッド 4- [ (z) -l- T;-2- (3, 4—シ'、メトキシ-フエニル) -ビニル]一フエニル エステル
68 (Z) - 3- (3-アミノ-フ ル) - 2 -（3, 4-シ"メトキシ-フ 1ニル) -ァクリにトリル，塩酸塩
69 ホスホリックアシッドモノ- (4一 [ (Z) - 2-シァノ- 2 -（3, 4-シ、、メトキシ-フエニル)ービニル] -2 -メトキシ-フエ ニル)エステル，ナトリウム塩
70 ホスホリックアシッドモノ- (4一 [ (Z)—2-シァノー 2 -（3, 4-シ'、メトキシ-フエニル)ービニル]一フエニル)エステル
71 ホスホリックアシッドモノ- (4_ [ (Z) - 2-シァノ - 2: (3, 4 -シ" トキシ-フ 1こル) -ビ二ル] - 2-メトキシ-フエ ニル)エステル
72 N- [3_ [ (Z) -2-シァノ -2- (3， 4 - メトキシ-フエ：:ル) -ビニル] -フエ;:ル] -ァセトアミド
73 (Z) -2- (3, 4 -シ'、メトキシ-フエ；:ル) -3- [4- (6-ホスホ- β - D -ゲルコピラノシル) -フエ::ル] -ァクリロ 二トリル
74 スルホリックァシット"モノ- (4- [ (Ζ) - 2-シァノ -2- (3, 4-シ"メトキシ-フエニル) -ビニル] -フエニル)エステ ル，トリェチルアンモニゥム塩
75 (Ζ) -2- (3, 4 -シ、、メトキシ -フエニル) -3 - [4- (6 -ホスホ- β -D -ク'、ルコピラノシル) -フエニル] -ァクリロ 二トリル，ナトリウム塩
76 (ζ) -2- (3, 4-シ'、メ.トキシ -フエ;:ル) - 3_ (2 -ヒド口キシ- 5-こト D-フエ;:ル) -ァクリ D二トリル
77 (Ζ) -2- (3, 4 - メトキシ-フエニル) -3- (4 -フルォ D-3-ニト Π-フエニル) -ァクリ D二トリル
78 (Z)-2-(3，4-シ'メトキシ-フエ：:ル) -3-(3_ヒト'ロキシ -4,5-シ'メトキシ-フ Iニル) -アクリロニトリル
79 r.ZV2-(3,4-y' トキシ-フ 1ニル) _3ィ 4-ヒト'ロキシ -3,5-シ'メトキシ-フエ：:ル) -ァクリロ：:トリル 実施例
次に本発明を実施例を挙げて更に詳細に説明するが、 これは単に例示であって 本発明を限定するものではない。
実施例 1 ：ジフエニルアクリロニトリル誘導体の製造 、 水酸基を有する原料 （ベンズアルデヒド誘導体またはベンジルシアニド誘導 体） から合成される化合物は、 以下に記すように最初の保護工程で水酸基を保護 した後、 縮合工程に供し、 最後に脱保護工程によって保護基を脱離した。 水酸基 を有しない原料の場合は、 そのまま縮合工程に供した。
(製造工程 1 ) 水酸基を有するベンズアルデヒド誘導体またはべンジルシア二ド 導体の水酸基保護工程
Figure imgf000025_0001
X=-CH0, - C¾CN ΜΕΜ-メ
反応容器に攪拌下、 水酸基を有するベンズアルデヒド誘導体又はべンジルシア ニド誘導体をテトラヒドロフランに溶解した。 反応容器を氷冷し、 水酸基 1個の 場合は 1. 2当量、 水酸基 2個の場合は 2. 4当量という具合に水酸基の数に応じた量 の水素化ナトリウム （含量 60% :油懸濁） を少量ずつ加え、 塩化カルシウム管で 蓋をした。 水素の発生が終わるのを待つて、 2-メトキシエトキシメチルクロライ ドを水酸基 1個の場合は 1当量、 7_Κ酸基 2個の場合は 2当量という具合に水酸基の数 に応じた量を加えた。 同様に、 2-メトキシェトキシメチルクロライドと当量のジ イソプロピルアミンを加えた。 塩化カルシウム管をつけ、 2時間加熱還流した。 冷却後、 ろ過により不要物を除去した。 テトラヒドロフラン溶液を減圧下濃縮乾 固した。 クロ口ホルムと食塩水を加え、 クロ口ホルム層を分液した。 クロ口ホル ム層をとり、 水酸化ナ卜リゥム水溶液を加えて分液した。 クロ口ホルム層をとり 2度水洗した。 クロ口ホルム層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、 減圧で濃縮乾固 した。 シリカゲルカラムクロマトでへキサン/クロ口ホルム〜クロ口ホルムで溶 出した。 得られた画分を、 濃縮し、 油状物質を得た。
(製造工程 2) ベンズアルデヒド誘導体とベンジルシアニド誘導体の縮合工程
Figure imgf000026_0001
A法：反応容器に当量のベンズアルデヒド誘導体及びベンジルシアニド誘導体を 入れ、 エタノールを加え、 塩ィ匕カルシウム管を付け攪拌し溶解した。 別に、 n -へ キサンの入つた容器中で金属ナトリゥムを抨量し、 エタノールの入つた容器にナ トリウムを少量ずつ加え、 塩化カルシウム管で蓋をした。 ナトリウムが完全に溶 けたら、 このナトリウムエトキシド溶液を反応容器に加えた。 反応液を約 1時間 還流した。 反応 1時間後、 室温に戻し、 水を加え、 減圧でェタノ一ルを留去し た。 クロ口ホルムと食塩水を加え、 分液し、 クロ口ホルム層を分離した。 食塩水 を加え、 分液し、 クロ口ホルム層を分離した。 クロ口ホルム層を無水硫酸ナトリ ゥムで乾燥し、 ろ過した。 少量のカラムクロマト用シリカゲルを加え、 振り混 ぜ、 ろ過した。 減圧で溶媒留去した。 エタノールを加えて溶かし、 活性炭を適量 加えた。 セライトパッドでろ過し、 濃縮すると、 ジフエニルアクリロニトリル誘 導体の結晶が析出するので、 減圧濾過した。 この操作を 3回行い、 結晶を分離し た。 析出した結晶をイソプロパノールで再結晶した （2回） 。 結晶はへキサンで 洗浄し、 乾燥した。
B法：反応容器に当量のベンズアルデヒド誘導体及びべンジルシア二ド誘導体を 入れ、 塩化メチレンに溶かした。 1. 2当量の水酸化ナトリウムの 10- 20 ml水溶 液、 1/5当量の塩ィ匕メチルトリオクチルアンモニゥムを加え、 室温で 4時間攪拌し た。 反応後、 無水硫酸ナトリウムで反応液を乾燥し、 濾過した後、.濃縮した。 残 渣をイソプロパノ一ルで再結晶した。
(製造工程 3) ジフエ二ルァクリロニトリル誘導体の水酸基の脱保護工程
Figure imgf000027_0001
水酸基の保護されたジフエ二ルァクリロニトリル誘導体をエタノールに溶か レ、 少量の濃塩酸を加え、 一昼夜攪拌した。 析出した結晶を減圧で結晶分離し た。 結晶をイソプロパノールで再結晶した。
以下にジフエニルァクリロニトリル誘導体の製造と分析結果の具体例を示す。
(Z) —2— (3， 4ージメトキシフエ二ル) - 3 - (4ーヒドロキシフエ二 ル） アクリロニトリル （化合物 1) の製造
4-ヒドロキシベンズアルデヒド （24.9 g) 及び 2-メトキシェトキシメチルクロ ライド （24.4 g) を用いて、 （製造工程 1) に従って水酸基を保護し （収量 33. 5 g:収率 80%) 、 得られた 4-メトキシェトキシメトキシベンズアルデヒド （21.0 g) 及び 3， 4-ジメトキシベンジルシアニド （17.7 g) を用いて、 （製造工程 2) A法に従って縮合し、 （Z)_2- (3，4-ジメトキシフエ二ル) - 3_ [4- (2-メトキシ- エトキシメトキシ）-フエニル] アクリロニトリル （収量 29.1 g:収率 86%) を得 た。 また、 別のルートとして同様に製造した 2-メトキシェトキシメチルクロライ ド (4.1 g) 及び 3， 4-ジメトキシベンジルシア二ド (3.4 g) を用いて、 (製造ェ 程 2) B法に従って縮合し、 （Z)- 2- (3, 4 -ジメトキシ-フエ二ル)- 3- [4- (2-メトキ シ-エトキシメトキシ)-フエニル]アクリロニトリル （収量 5.2 g：収率 73%) を得 ることもできた。 この（Z)- 2- (3， 4 ジメトキシ-フエ二ル）- 3- [4- (2-メトキシ-ェ トキシメトキシ) -フエ二ル]-ァクリロニトリル (10.2 g) を （製造工程 3) に従 つて脱保護し、 目的物を得た （収量 6.22 g:収率 74%) 。
淡黄色結晶性粉末、 MS (APCI, m/z )： 282 (MH+), Ή-画 R (DMS0-d6) δ 3.80
(3H， s)， 3.85 (3H, s), 6.89(2H, d, J=9Hz), 7.05 (1H, d, J=9Hz)， 7.20(1 H, dd, J=2Hz, 9Hz), 7.27(1H, d, J=2Hz), 7.80(1H, s), 7.82C2H, d, J=9Hz) [1, 4，] ビピペリジニル—1'一力ルポキシリックアシッド 4— [ (Z) -2 ーシァノー 2— (3, 4—ジメトキシーフエニル） —ビエル] —フエニルエステ ル （化合物 2) の製造
(Z) -2- (3, 4—ジメトキシフエ二ル） _3— （4ーヒドロキシフエ二 ル） アクリロニトリル （化合物 1) (0.28 g) と 4 -ピペリジノピペリジノカルポ ニルクロライド （0.23 g) をピリジン （5 ml) に溶かし、 一昼夜攪拌した。 反 応後、 反応液を 200 mlの水にあけ、 析出した沈殿物をとり、 クロ口ホルム/メタ ノール系でシリカゲルクロマトにて精製して、 目的物を得た （収量 0.38 g:収率 79%) 。
淡黄色結晶、 MS (APCI, m/z )： 476 (腿 +), 'Η-醒 R (DMS0-d6) δ1.47(3Η, in), 1.75(2H, m), 2.49(5H, m), 2.85(1H, br.t)， 3.0K1H, br. t), 3.71 (1H, m), 3.79 (3H, s)， 3.84 (3H， s), 4.03(1H, br.d)， 4.17(1H, br.d), 6.89(2H, d, J=9Hz), 7.07 (1H, d, J=8Hz)， 7.26(1H, dd, J=2Hz, 8Hz) , 7.27(2H, d, J =8Hz) , 7.33(1H, d, J=2Hz), 7.91 (2H, d， J=8Hz), 7.95(1H, s)
ァセティックアシッド 4一 [ (Z) —2—シァノー 2— (3， 4—ジメトキシー フエニル） ービニル] 一フエニルエステル （化合物 3) の製造
化合物 1 (0.28 g) を無水酢酸及びピリジンで定法に従いァセチル化して、 目 的物を得た （収量 0.30 g:収率 95%) 。
白色結晶、 MS (APCI, m/z )： 324 (MH+), Ή-NMR (CDC ) δ2.33(3Η, s), 3.9 3 (3Η, s), 3.96 (3H, s), 6.92(2H, d， J=9Hz), 7.14 (1H, d, J=9Hz), 7.20(1 H， d， J=2Hz), 7.25(1H, dd, J=2Hz, 9Hz), 7.40(1H, s), 7.89(2H, d， J=9Hz)
(Z) -2 - (3， 4ージメトキシ—フエニル) - 3 - [4- (2—メトキシー エトキシメトキシ） 一フエニル] 一アクリロニトリル (化合物 4) の製造 上記の化合物 1の製造において、 縮合工程で標題の化合物が得られた。
淡黄色結晶、 MS (APCI, m/z )： 370 (匪 +)， -丽 R (DMSO- d6) δ3.40(3Η, s), 3.56 (2H, t， J=8Hz) , 3.84 (2H, t， J=8Hz), 3.88 (3H, s), 3.92 (3H, s), 5.35(2H, s), 6.87(2H, d,. J=9Hz), 7.14 (1H, d, J=8Hz), 7.28(1H, dd, J =2Hz, 8Hz), 7.29(2H, d, J=8Hz)， 7.40(1H, d, J=2Hz), 7.92(2H, d， J=8Hz) , 7.99(1H, s)
(Z) —2— （3, 4—ジメトキシ一フエニル） ー3— （3—ヒドロキシ一フエ ニル） 一アクリロニトリル （化合物 5) の製造
3 -ヒドロキシベンズアルデヒド （1.5 g) 及び 2-メトキシェトキシメチルクロ ライド （1.4 ml) を用いて、 （製造工程 1) に従って水酸基を保護し （収量 2.0 g:収率 76%) 、 得られた 3-メトキシェトキシメトキシベンズアルデヒド （1.9 g) 及び 3， 4-ジメトキシベンジルシア二ド (1.6 g) を用いて、 (製造工程 2) A 法に従って縮合し、 目的物のメトキシェトキシメトキシ体 （以下 MEM体） を得、 引き続いて （製造工程 3) に従って保護基を脱離して、 目的物を得た （収量 1.2 g：収率 48%) 。
淡黄色結晶性粉末、 MS (APCI, m/z )： 282 (MH+), Ή-NMR (DMSO- d6) (53.82 (3H, s), 3.87 (3H, s), 5.35 (2H, s), 6.89 (1H, dd, J=8Hz, 3Hz), 7.07 (1 H, d, J=8Hz), 7.25-7.37 (5H, 重複 m), 7.87(1H, s)
(Z) - 2 - (3, 4—ジメトキシ—フエニル） - 3 - (2—ヒドロキシ一フエ ニル) 一アクリロニトリル (化合物 6) の製造
2 -ヒドロキシベンズアルデヒド (3.0 g) 及び 2-メトキシェトキシメチルクロ ライド （3.1 ml) を用いて、 （製造工程 1) に従って水酸基を保護し （収量 3.7 g :収率 70 ) 、 得られた 2-メトキシェトキシメトキシベンズアルデヒド （2.0 g) 及び 3， 4-ジメトキシベンジルシア二ド (1.7 g) を用いて、 （製造工程 2) A法 に従って縮合し、 目的物の MEM体を得、 引き続いて （製造工程 3) に従って保護基 を脱離して、 目的物を得た （収量 1.4 g :収率 52%) 。
淡黄色結晶性粉末、 MS (APCI, m/z ): 282 (MH+), 'H-NMR (DMSO- d6) δ 3.81 (3H, s), 3.85(3H, s), 7.87(1H, dd, J=8Hz,lHz), 7.92(1H, Br.s), 6.93(1H, dt, J=7Hz, 1Hz), 6.97(1H, dd, J=7Hz, 1Hz), 7.07(lH,d, J=8Hz), 7.22(1H, d, J=2Hz), 7.3K1H, dt, J=7Hz, 1Hz), 7.87(1H, dd, J=8Hz,2Hz), 7.93(1H, s)
(Z) - 2 - (3， 4—ジメトキシ一フエニル） 一 3— （4—ヒドロキシ一 3— メトキシーフエニル) 一アクリロニトリル (化合物 7) の製造
4-ヒドロキシ- 3-メトキシべンズアルデヒド （1.4 g) 及び 2-メトキシェトキ シメチルクロライド （1.7 g) を用いて、 （製造工程 1) に従って水酸基を保護し
(収量 0.8 g：収率 31%) 、 得られた 3-メトキシ -4-メトキシェトキシメトキシべ ンズアルデヒド (0.8 g) 及び 3， 4 -ジメトキシベンジルシア二ド (0.6 g) を用い て、 （製造工程 2) A法に従って縮合し、 目的物の MEM体を得、 引き続いて （製造 工程 3) に従って保護基を脱離して、 目的物を得た （収量 0.5 g:収率 51%) 。 淡黄色結晶、 MS (APCI, m/z )： 312 (ΜΗ+) , Ή- NMR (CDC13) δ 3.92(3H, s), 3.96 (3H, s), 3.99 (3H, s), 5.94(1H, s), 6.90(1H, d, J=8Hz) , 6.96(2H, d,
J=8Hz), 7.12 (1H, s)， 7.22(2H, 重複 m), 7.33(1H, s), 7.73(1H, s)
(Z) - 3 - (3， 4—ジヒドロキシ一フエニル） -2- (3, 4—ジメトキシー フエニル） —アクリロニトリル （化合物 8) の製造
3, 4-ジヒドロキシベンズアルデヒド (2.0 g) 及び 2-メトキシェトキシメチル クロライド （3.6 g) を用いて、 （製造工程 1) に従って水酸基を保護し （収量 3. 6 g：収率 89%) 、 得られた 3, 4 -ジ（メトキシエトキシメトキシ）ベンズアルデヒド
(3.5 g) 及び 3， 4-ジメトキシベンジルシアニド (2.0 g) を用いて、 (製造工程 2) A法に従って縮合し、 目的物の MEM体を得、 引き続いて (製造工程 3) に従って 保護基を脱離して、 目的物を得た （収量 1.6 g:収率 50%) 。
黄色結晶、 MS (APCI, m/z )： 298 (MH+)， Ή-NMR (DMS0 - d6) δ 3.85 (3H, s), 3.92 (3H, s), 6.85(1H, d, J=8Hz), 6.94(2H, d, J=8Hz)， 7.22 (3H, m), 7.48(1H, d, J=2Hz), 7.49(1H, s)， 7.70(1H, s), 9.33(1H， s)， 7.69(1H, s)
(Z) —2— （3， 4—ジメトキシ一フエニル） - 3 - (3—ヒドロキシー 2— メトキシーフエ二ル） 一アクリロニトリル (化合物 9) の製造 2 -メトキシ -3-ヒドロキシベンズアルデヒド （2.0 g) 及び 2-メトキシェトキシ メチルクロライド （3.6 g) を用いて、 （製造工程 1) に従って水酸基を保護し
(収量 4.5 g:定量的収率） 、 得られた 2, 4-ジ（メトキシェトキシメトキシ）ベン ズアルデヒド （4.0 g) 及び 3, 4 -ジメトキシベンジルシアニド （2.2 g) を用い て、 （製造工程 2) A法に従って縮合し、 目的物の MEM体を得、 引き続いて （製造 工程 3) に従って保護基を脱離して、 目的物を得た （収量 2.5 g:収率 67%) 。 黄色結晶、 MS (APCI, m/z )： 312 (ΜΗ+) , Ή-NMR (DMS0-d6) δ 3.32(3H, s),
3.80 (3H, s)， 3.84 (3H, s), 7.05 (2H, m), 7.24 (1H, dd, J=2Hz, 8Hz), 7.2 8 (1H, d, J=2Hz), 7.38(1H, dd, J=2Hz, 8Hz), 7.49(1H, s), 7.76(1H, s), 9. 36 (2H, br.s)
(Z) —2— (3, 4—ジメトキシーフエニル） 一 3— (4—ヒドロキシ一 3, 5 ージメチル—フエニル） 一アクリロニトリル (化合物 10) の製造
3， 5-ジメチル -4 -ヒドロキシベンズアルデヒド (2.3 g) 及び 2-メトキシエト キシメチルクロライド （3.4 g) を用いて、 （製造工程 1) に従って水酸基を保護 し （収量 2.7 g：収率 62%) 、 得られた 3, 5 -ジメチル -4-メトキシェトキシメトキ シベンズアルデヒド （2.0 g) 及び 3， 4-ジメトキシベンジルシアニド （1.5 g) を 用いて、 （製造工程 2) A法に従って縮合し、 目的物の MEM体を得、 引き続いて
(製造工程 3) に従って保護基を脱離して、 目的物を得た （収量 1.5 g :収率 5 7%) 。
淡黄色結晶、 MS (APCI, m/z )： 310 (MH+)， 'H-NMR (CDC13) 6 2.30 (6H, s), 3.92 (3H， s)， 3.95 (3H， s)， 6.89(2H, d， J=8Hz), 7.12 (1H, s)， 7. 0(1H, d d, J=2Hz, 8Hz), 7.27(1H, d， J=8Hz), 7.56 (2H, s)
(Z) —2— （3, 4—ジメトキシ一フエニル） 一 3— (3—エトキシー 4—ヒ ドロキシーフエニル） 一アクリロニトリル （化合物 11) の製造
3-ェ卜キシ -4 -ヒドロキシベンズアルデヒド (2.0 g) 及び 2-メトキシェトキシ メチルクロライド （1.5 g) を用いて、 （製造工程 1) に従って水酸基を保護し (収量 2.8 g：収率 91%) 、 得られた 3-エトキシ- 4 -ジ（メトキシエトキシメトキ シ）ベンズアルデヒド （2.8 g) 及び 3， 4-ジメ卜キシベンジルシアニド （2.0 g) を用いて、 （製造工程 2) A法に従って縮合し、 目的物の MEM体を得、 引き続いて
(製造工程 3) に従って保護基を脱離して、 目的物を得た （収量 1.35 g:収率 3 7%) 。
淡黄色結晶、 MS (APCI, m/z ): 326 (MH+)， -NMR (CDC13) δ 1.49(3H, t， J -8Hz) , 3.92 (3H, s), 3.95 (3H, s)， 4.22(2H, d， J=8Hz), 6.90(2H, dd, J=2H z, 8Hz), 6.96(2H, d, J=8Hz), 7.11 (1H, d, J=2Hz) , 7.22(1H, dd, J=2Hz, 8H z), 7.32(1H, s)， 7.72(2H, d, J=2Hz)
(Z) - 3 - (4 _ブロモ—フエニル) —2— (3， 4—ジメトキシ一フエ二 ル） 一アクリロニトリル （化合物 12) の製造
4-プロモベンズアルデヒド （2.0 g) 及び 3, 4-ジメトキシベンジルシアニド (1.9 g) を用いて、 （製造工程 2) A法に従って縮合し、 目的物を得た （収量 2.9 g：収率 78%) 。
黄色結晶、 MS (APCI, m/z )： 346 (MH 2), 344 (MR') Ή-NMR (CDC13) δ 3.9 3 (3H, s), 3.96 (3H， s), 6.92(2H, d, J=9Hz), 7.26 (2H, 重複 m)， 7.35(1H, s), 7.59(2H, d, J=9Hz), 7.73(2H, d, J=9Hz)
(Z) —2— （3， 4ージメトキシ一フエニル） 一 3— （3—フルオローフエ二 ル） 一アクリロニトリル （化合物 13) の製造
3 -フルォロベンズアルデヒド (2.0 g) 及び 3， 4-ジメトキシベンジルシアニド (2.9 g) を用いて、 （製造工程 2) A法に従って縮合し、 目的物を得た （収量 0.7 g：収率 15%) 。
淡黄色結晶、 MS (APCI, m/z )： 284 (MH+) , 'Η -匪 R (CDC13) δ 3.93 (3H, s), 3.96 (3H， s)， 6.92(1H, d, J=10Hz), 7.11 (1H, dd, J=2Hz, 14Hz), 7.24(1H, d, J=2Hz), 7.27(1H, dd, J-2Hz, lOHz), 7.38(1H, s), 7.42(1H, dd, J=8Hz, 14Hz), 7.60(1H, dd, J=8Hz, 14Hz) (Z)— 2— (4—ブトキシーフエニル） —3— (4—ヒドロキシーフエニル） 一 アクリロニトリル （化合物 14) の製造
4-ヒドロキシベンジルシアニド （5.0 g) 、 卜ブロモブタン （5.7 g) をジメチ ルホルムアミド （100 ml) に溶角早し、 炭酸カリウム （6.2 g) を加え、 80°Cで 1 時間加熱した。 反応後冷却し、 食塩水と酢酸ェチルで分配した。 酢酸ェチル層を 硫酸ナトリウムで乾燥し、 濃縮した。 へキサン Z酢酸ェチル （4:1) を用いたシ リカゲルカラムで精製し、 4 -ブトキシベンジルシアニド (収量 5.1 g:収率 70%) を得た。 この 4-ブトキシベンジルシアニド (2.0 g) と化合物 1で製造した 4-メ トキシエトキシメトキシベンズアルデヒド (2.2 g) を用いて、 (製造工程 2) A 法に従って縮合し、 目的物の MEM体を得、 引き続いて （製造工程 3) に従って保護 基を脱離して、 目的物を得た （収量 0.7 g：収率 23%) 。
淡黄色結晶性粉末、 MS (APCI, m/z )： 294 (MH+) , 'H-NMR (DMS0-d6) δ 0.94 (3H, t, J=10Hz), 1.44(2H, sextet, J=10Hz), 1.71(2H, quintet, J=10Hz)， 4. 00 (2H, t, J=10Hz), 6.88(2H, d， J-9Hz), 7.03 (2H, d, J=9Hz), 7.62 (2H, d, J=2Hz), 7.73(1H, s), 7.82(2H, d， J=9Hz)
(Z) - 3 - (4—ヒドロキシ一フエニル) 一 2— (3, 4, 5—卜リメトキシ一 フエニル） 一アクリロニトリル （化合物 15) の製造
3, 4， 5 - 4-トリメトキシベンジルシアニド （1.9 g) と化合物 1の製造過程で得ら れた 4-メトキシェトキシメトキシベンズアルデヒド (2.0 g) を用いて、 （製造 工程 2) A法に従って縮合し、 目的物の MEM体を得、 引き続いて （製造工程 3) に従 つて保護基を脱離して、 目的物を得た （収量 1.2 g:収率 41 ) 。
黄色結晶、 MS (APCI, m/z )： 312 (MH+) , Ή -匪 R (CDC") δ 3.89 (3H, s), 3.93 (6H, s), 6.06(1H, br.s), 6.84(2H, s)， 6.94 (2H, d, J=12Hz), 7.39(1 H, s), 7.82(2H, d, J=12Hz)
(Z) — 2， 3—ビス一 (4—ヒドロキシ一フエニル） 一アクリロニトリル （化 合物 16) の製造 4-ヒドロキシベンジルシアニド （4.3 g) 、 及び 2-メトキシエトキシメチルク 口ライド （4.1 g) を用いて （製造工程 1) に従って 4-メトキシェトキシメトキシ ベンジルシアニド （収量 5.4 g：収率 75%) を得た。 この 4-メトキシェトキシメト キシベンジルシアニド （2.1 g) と化合物 1の製造過程で得られた 4-メ卜キシェ トキシメトキシベンズアルデヒド （2.0 g) を用いて、 （製造工程 2) A法に従つ て縮合し、 目的物の MEM体を得、 引き続いて （製造工程 3) に従って保護基を脱離 して、 目的物を得た （収量 1.1 g:収率 49%) 。
淡黄緑色結晶、 MS (APCI, m/z )： 238 (ΜΗ+) , Ή-NMR (DMS0-d6) (56.87 (1Η, d， J=9Hz), 6.89(1H, d， J=2Hz, 9Hz)， 7.53 (1H, d, J=9Hz), 7.67(1H, s)， 7. 79 (2H, d, J=9Hz)
(Z) — 2— （3， 4—ジメトキシーフエニル） ー3— （4ーヒドロキシ—フエ エル) —アクリロニトリル，ナトリウム塩 （化合物 17) の製造
化合物 1(281 mg)をエタノールに溶解した。 等量の水酸化ナトリウム水溶液を 加え、 室温にて攪拌した。 減圧下で濃縮し、 析出した結晶を濾取、 再結晶するこ とにより目的物を得た （収量 270 mg：収率 90%) 。
淡黄色結晶、 MS (APCI, m/z )： 280 (M_Na+)， Ή -顧 R (DMS0-d6) δ 3.76(3H, s)， 3.82(3H, s), 6.19 (1H, d， J=9Hz)， 6.96(1H, d, J=9Hz), 7.05(1H, dd, J =2Hz, 9Hz), 7.11 (1H, d， J=2Hz), 7.41 (1H， s)， 7.58(1H, d, J=9Hz)
(Z) - 2 - (3, 4ージメトキシ一フエニル） 一 3— (4一フルオローフエ二 ル） —アクリロニトリル （化合物 18) の製造
4-フルォロベンズアルデヒド （620 mg) 及び 3, 4-ジメトキシベンジルシアニド (880 rag) を用いて、 （製造工程 2) A法に従って縮合し、 目的物を得た （収量 1.02 g：収率 72%) 。
微黄色結晶、 MS (APCI, m/z )： 283 (Mつ， 'Η-腿 R (CDC13) 6 3.93 (3H, s), 3.96(3H, s)， 6.9 QH, d, J=9Hz) , 7.11〜7.18(2H, m), 7.13(1H, d, J=2Hz), 7.25(1H, dd, J=2Hz, 9Hz), 7.39(1H, s)， 7· 84〜7.90 (2H, m) (Z) - 2 - (3， 4—ジメトキシ一フエニル） 一3— （4—ニトロ一フエ二 ル） 一アクリロニトリル （化合物 19) の製造
4 -二トロべンズアルデヒド （760 mg) 及び 3， 4-ジメトキシベンジルシアニド
(890 mg) を用いて、 （製造工程 2) B法に従って縮合し、 目的物を得た （収量 1. 31 g：収率 85%) 。
微黄色結晶、 MS (APCI, m/z )： 310 (M -)， Ή-NMR (CDC13) δ 3.95(3H, s), 3.98(3H, s)， 6.95(1H, d， J=9Hz), 7.17(1H, d, J=2Hz), 7.32(1H, dd, J=2Hz, 9Hz), 7.47(1H, s)， 8.0K2H, d, J=9Hz), 8.32(2H, d, J=9Hz)
(Z) - 2 - (3, 4—ジメトキシ—フエニル) - 3 - (2—フルオローフエ二 ル） —アクリロニトリル （化合物 20) の製造
2-フルォロベンズアルデヒド (620 mg) 及び 3， 4-ジメトキシベンジルシア二ド
(880 mg) を用いて、 （製造工程 2) A法に従って縮合し、 目的物を得た （収量 562 mg：収率 40 ) 。
微黄色結晶、 MS (APCI, m/z )： 283 (M— ), 'H-NMR (CDC13) δ 3.94(3H, s)， 3.97(3H, s), 6.93(1H, d， J=8Hz) , 7. U〜7.18(1H， m) ， 7.17(1H, d， J=2Hz), 7.23〜7.29(1H, m), 7.29(1H, dd, J=2Hz, 8Hz), 7.37〜7.45 (1H, m), 7.66(1 H, s)， 8.20〜8.25(1H， m)
4一 [ (Z) —2—シァノ一2— (3, 4—ジメトキシーフエニル） 一ビニル]一 ベンゾニトリル （化合物 21) の製造
4 -シァノベンズアルデヒド (1.97 g) 及び 3, 4-ジメトキシベンジルシアニド (1.80 g) を用いて、 （製造工程 2) A法に従って縮合し、 目的物を得た （収量 3. 33 g：収率 77 ) 。
微黄色結晶、 MS (APCI, m/z )： 290 (M— ), 'Η -匪 R (CDC13) δ 3.95(3H, s), 3.97(3H, s), 6.94(1H, d, J-8Hz), 7.16(1H, d, J=2Hz), 7.30(1H, dd, J=2Hz, 9Hz), 7.43(1H, s)， 7.75(2H, d， J=9Hz), 7.95(2H, d, J=9Hz)
(Z) — 3— (2, 3ージフルオローフエニル) -2- (3， 4—ジメトキシー フエニル） 一アクリロニトリル （化合物 22) の製造
2,3-フルォロベンズアルデヒド （426 mg) 及び 3， 4 -ジメトキシベンジルシア二 ド （532 mg) を用いて、 （製造工程 2) A法に従って縮合し、 目的物を得た （収量 813 mg：収率 90%)
微黄色結晶、 MS (APCI, m/z )： 301 (M -)， Ή-NMR (CDC13) δ 3.94(3H, s)， 3.97(3H, s)， 6.94(1H, d， J=9Hz), 7.17(1H, d， J=2Hz), 7.17〜7.28(2H， m), 7.3K1H, dd, J=2Hz, 9Hz), 7.62(1H, s), 7.95〜8.01(1H， m)
(Z) —3— (2, 4—ジフルオローフエニル) -2- (3, 4ージメトキシー フエニル） 一アクリロニトリル （化合物 23) の製造
2, 4-ジフルォ口べンズアルデヒド (142 mg) 及び 3， 4-ジメトキシベンジルシア ニド （177 mg) を用いて、 （製造工程 2) B法に従って縮合し、 目的物を得た （収 量 94 mg：収率 31%)
微黄色結晶、 MS (APCI, m/z )： 301 (M―)， 'Η -匪 R (CDC13) δ 3.94(3Η, s), 3.97(3Η, s), 6·88〜6.94(1Η, m), 6.93(1Η, d, J=8Hz), 6.98〜7.04(1Η， m), 7.15 (1Η, d， J=2Hz), 7.28(1Η, dd, J=2Hz, 8Hz)， 7.57(1H, s), 8.21〜8.28(1 H, m)
(Z) 一 3— (2, 5—ジフルォロ—フエニル） 一 2— (3, 4—ジメトキシ一 フエニル） 一アクリロニトリル （化合物 24) の製造
2,5-ジフルォ口べンズアルデヒド (1.42 g) 及び 3， 4-ジメトキシベンジルシア ニド （1.77 g) を用いて、 （製造工程 2) A法に従って縮合し、 目的物を得た （収 量 2· 20 g：収率 73%)
微黄色結晶、 MS (APCI, m/z ): 301 (M- ), Ή-醒 R (CDC ) δ 3.94(3H, s), 3.97(3H, s)， 6.93(1H, d, J=9Hz), 7.07〜7.14(2H， m), 7.16(1H, d， J=2Hz), 7.30(1H, d, J=2Hz, 9Hz), 7.58(1H, s), 7.92〜7· 98 (1H, m)
(Z) —3— （3, 4—ジフルオローフエニル） 一2— （3, 4—ジメトキシ一 フエニル） 一アクリロニトリル （化合物 25) の製造 3, 4-ジフルォ口べンズアルデヒド（426 mg)及び 3， 4-ジメトキシベンジルシア二 ド（532 mg)を用いて、 （製造工程 2) A法に従って縮合し、 目的物を得た (収量 780 mg:収率 86%)。
微黄色結晶、 MS (APCI, m/z )： 301 (M -)， 'H-NMR (CDC13) δ 3.94(3H, s)， 3.96(3H, s), 6.93(1H, d, J=8Hz), 7.13(1H, d, J=2Hz), 7.25(1H, dd, J=2Hz, 8Hz), 7.21〜7.29(1H， m), 7.32(1H, s), 7.57〜7.62(1H， m), 7.71-7.78 (1H, m)
(Z) - 3 - (3, 5—ジフルオローフエニル） 一 2— (3, 4ージメ卜キシー フエニル) 一アクリロニトリル （化合物 26) の製造
3， 5 -ジフルォロベンズアルデヒド（1.42 g)及び 3， 4-ジメトキシベンジルシア二 ド （1.77 g) を用いて、 （製造工程 2) A法に従って縮合し、 目的物を得た （収量 2.10 g：収率 69%) 。
微黄色結晶、 MS (APCI, m/z )： 301 (M -)， Ή-丽 R (CDC13) 6 3.94 (3H, s), 3.97(3H, s), 6.84〜6.91(1H, in), 6.93(1H, d, J=9Hz), 7.13 (1H, d, J=2Hz), 7.27(1H, dd, J=2Hz, 8Hz), 7.32(1H, s), 7.36〜7.43(1H, m)
(Z) 一 2— (3, 4ージメトキシ一フエニル） 一3— (2， 3, 4—トリフル オローフエニル) 一アクリロニトリル （化合物 27) の製造
2, 3, 4 -トリフルォ口べンズアルデヒド （160 mg) 及び 3, 4-ジメトキシベンジル シアニド （177 mg) を用いて、 （製造工程 2) B法に従って縮合し、 目的物を得た (収量 90 mg：収率 30%) 。
微黄色結晶、 MS (APCI, m/z )： 319 (It), Ή -醒 R (CDC13) δ 3.94(3H, s) , 3.97 (3H, s), 6.94 (1H, d, J=9Hz)， 7.05〜7.14 (1H, m), 7.15(1H, d, J=2Hz) , 7.29 (1H, dd, J=2Hz, 8Hz), 7.52(1H, s), 7.93〜8.02(1H， m)
(Z) 一 2— (3, 4—ジメトキシーフエニル） 一3— (2, 3, 5—トリフル オローフエニル） —アクリロニトリル （化合物 28) の製造
2,3, 5-トリフルォロベンズアルデヒド (320 mg) 及び 3, 4 -ジメトキシベンジル シアニド （354 mg) を用いて、 （製造工程 2) A法に従って縮合し、 目的物を得た (収量 536 mg：収率 84%) 。
微黄色結晶、 MS (APCI, m/z )： 319 (M— ), 'Η-匪 R (CDC13) δ 3.95(3H, s), 3.97(3Η, s), 6.94(1Η, d, J=8Hz)， 6.95〜7.05 (1H, m), 7.16(1H, d， J=2Hz), 7.3K1H, dd, J=2Hz, 8Hz), 7.56(1H, s), 7.71〜7.77 (1H, m)
(Z) 一 2— (3, 4—ジメトキシーフエニル） 一3— (2， 3, 6—トリフル オローフエニル） —アクリロニトリル （化合物 29) の製造
2, 3, 6-トリフルォロベンズアルデヒド（320 nig)及び 3, 4-ジメトキシベンジルシ アニド（354 mg)を用いて、 （製造工程 2) A法に従って縮合し、 目的物を得た （収 量 549 mg：収率 86%) 。
微黄色結晶、 MS (APCI, m/z )： 319 (M―)， 'Η-丽 R (CDC13) δ 3.94(3H, s), 3.96(3H, s)， 6.94(1H, d, J=9Hz), 6.93〜6.99 (1H， m), 7.17(1H, d, J=2Hz), 7.17(1H, d， J=2Hz), 7.18〜7.26 (1H, m), 7.27(1H, s), 7.32(1H, dd, J=2Hz, 8Hz)
(Z) -2 - (3, 4—ジメトキシ一フエニル） 一 3— (2, 4, 5—トリフル オローフエニル） —アクリロニトリル （化合物 30) の製造
2, 4, 5-トリフルォロベンズアルデヒド （160 mg) 及び 3， 4-ジメトキシベンジル シアニド （177 nig) を用いて、 （製造工程 2) B法に従って縮合し、 目的物を得た
(収量 80 mg：収率 26%) 。
微黄色結晶、 MS (APCI, m/z )： 319 (M -)， 'Η -丽 R (CDC13) δ 3.94(3H, s), 3.97(3H, s)， 6.93(1H, d, J=9Hz), 6.99〜7· 06 (1H, m), 7.14 (1H, d, J=2Hz), 7.28(1H, dd, J=2Hz, 9Hz), 7.51 (1H， s), 8· 07〜8.16(1H, m)
(Z) —2— (3, 4—ジメトキシーフエニル） 一 3— （3， 4, 5—トリフリレ オローフエニル） 一アクリロニトリル （化合物 31) の製造
3,4, 5-トリフルォロベンズアルデヒド （160 mg) 及び 3， 4 -ジメトキシベンジル シアニド （177 mg) を用いて、 （製造工程 2) B法に従って縮合し、 目的物を得た (収量 60 mg：収率 19%) 。
微黄色結晶、 MS (APCI, m/z )： 319 (M— ), ¾-匪 R (CDC13) δ 3.94(3H, s), 3.96(3H, s), 6.93(1H, d, J=9Hz), 7.1K1H, d， J=2Hz), 7.25(1H, s)， 7.26(1 H, dd, J=2Hz, 9Hz)， 7.48〜7.56 (1H， m)
(Z) —3— (2, 6—ジフルオローフエニル） 一 2— (3, 4—ジメトキシ一 フエニル） 一アクリロニトリル （化合物 32) の製造
2， 6-ジフルォ口べンズアルデヒド (284 mg) 及び 3, 4 -ジメトキシベンジルシア ニド （354 nig) を用いて、 （製造工程 2) A法に従って縮合し、 目的物を得た （収 量 358 mg：収率 40%) 。
微黄色結晶、 MS (APCI, m/z )： 301 (M—)， ¾-NMR (CDC13) δ 3.94(3H, s) , 3.96(3H, s), 6.93(1H, d, J=9Hz)， 6.98〜7.05 (2H, dd, m), 7.17(1H, d， J=2 Hz), 7.3K1H, dd, J=2Hz, 9Hz), 7.32(1H, s), 7.33〜7.42 (1H， m)
(Z) - 2 - (3， 4—ジメトキシ—フエニル) — 3— (3—ニトロ一フエ二 ル） 一アクリロニトリル (化合物 33) の製造
3 -二トロべンズアルデヒド （3.02 g) 及び 3， 4-ジメトキシベンジルシアニド (3.54 g) を用いて、 （製造工程 2) A法に従って縮合し、 目的物を得た （収量 6. 01 g：収率 97%) 。
黄色結晶、 MS (APCI, m/z )： 310 (IT), ¾ -腿 R (CDC13) 6 3.95 (3H, s), 3.9 8(3H, s)， 6.95(1H, d, J=9Hz), 7.17(1H, d, J=2Hz), 7.3K1H, dd, J=2Hz, 9H z), 7.49(1H, s), 7.68(1H, t， J=8Hz), 8.27(1H, ddd, J=lHz, 2Hz, 8Hz)， 8.3 3(1H, ddd, J=lHz, 2Hz， 8Hz), 8.56 (1H, t， J=2Hz)
(Z) - 3 - (4ーァミノ一フエニル) -2 - (3， 4ージメ卜キシ一フエ二 ル） 一アクリロニトリル (化合物 34) の製造
化合物 19 (880 rag) を酢酸に溶解した。 亜鉛末を添加し、 4時間攪拌した。 減 圧下濃縮乾固後、 シリカゲルカラムを用いて精製を行うことにより目的物を得た (収量 760 mg：収率 95%) 。 微黄色結晶、 MS (APCI, m/z )： 281 (MH+) , Ή-NMR (CDC13) δ 3.91(3H, s), 3.95(3H, s), 6.71 (2H, d, J=9Hz) , 6.90(1H, d, J=9Hz), 7.11(1H, d, J=2Hz) , 7.20(1H, dd, J=2Hz, 8Hz), 7.29(1H, s), 7.75(2H, d, J=9Hz)
[4- [ (Z) —2—シァノー 2— (3, 4ージメトキシーフエニル） 一ビニ ル] ーフエノキシ] —ァセティックアシッド ェチルエステル （化合物 35) の製 造
化合物 1 (281 mg) 及びクロ口酢酸ェチル （245 mg) をアセトンに溶解し、 炭 酸カリウムを加え 3時間還流した。 ろ過により不溶物を除き、 濾液を減圧下濃縮 乾固した。 再結晶により目的物を得た （収量 124 mg:収率 3«) 。
白色結晶、 MS (APCI, m/z )： 368 (MH+) , Ή-應 R (CDC13) δ 1.32(3H, t, J=7 Hz), 3.93(3H, s)， 3.96(3H, s), 4.30(2H, q, J=7Hz), 4.68(2H, s), 6.92(1 H, d， J=9Hz), 6.98(2H, d, J=9Hz), 7.13 (1H, d, J=2Hz), 7.24(1H, dd, J=2H z, 9Hz), 7.36(1H, s)， 7.86(2H, d, J=9Hz)
4一 [ (Z) _ 2—シァノー 2— (3, 4ージメトキシ一フエニル） 一ビエル] 一べンゾイツクァシッド メチルエステル (化合物 36) の製造
4-ホルミル安息香酸メチル （1.64 g) 及び 3， 4 -ジメトキシベンジルシアニド (1.77 g) を用いて、 （製造工程 2) B法に従って縮合し、 目的物を得た （収量 0. 97 g：収率 30%) 。
淡黄色結晶、 MS (APCI, m/z )： 323 (Μ"), 'Η -麵 R (CDC13) δ 3.94(3H, s), 3.95(3H, s), 3.97(3H, s), 6.94(1H, d, J=9Hz), 7.16(1H, d, J=2Hz), 7.30(1 H, dd, J=2Hz, 9Hz), 7.46(1H, s)， 7.92(2H, d， J=9Hz) , 8.12(2H, d, J=9Hz) (Z) -2 - (3， 4ージメ卜キシーフエニル) —3— （2—二トローフエ二 ル） 一アクリロニトリル (化合物 37) の製造
2 -二トロべンズアルデヒド (1.51 g) 及び 3, 4-ジメトキシベンジルシアニド (1.77 g) を用いて、 '（製造工程 2) A法に従って縮合し、 目的物を得た （収量 2. 59 g：収率 84 ) 。 黄橙色結晶、 MS (APCI, m/z )： 310 (M—)， 'Η-丽 R (CDC13) δ 3.95(3H, s), 3.97(3H, s), 6.95(1H, d, J=9Hz), 7.19 (1H, d， J-2Hz), 7.33(1H, dd， J-2Hz, 9Hz), 7.62(1H, br t), 7.78(1H, br t), 7.93(1H, s), 7.94(1H, d， J=8Hz,), 8.24C1H, d, J=8Hz)
(Z) - 3 - (4—クロロー 3—ニトロ一フエニル） 一 2— (3, 4ージメトキ シーフエニル） 一アクリロニトリル （化合物 38) の製造
4 -クロ口- 3-ニトロべンズアルデヒド (557 mg) 及び 3， 4-ジメトキシベンジル シアニド （532 mg) を用いて、 （製造工程 2) B法に従って縮合し、 目的物を得た
(収量 372 rag：収率 36%) 。
淡黄色結晶、 MS (ESI, m/z )： 343 (M-H") , Ή-NMR (CDC13) δ 3.95(3Η, s), 3.97(3Η, s), 6.95(1Η, d, J=9Hz), 7.14(1Η, d， J=2Hz) , 7.29(1Η, dd, J=2Hz, 9Hz), 7.38(1Η, s), 7.66(1Η, d, J=9Hz), 8.15(1Η, dd, J=2Hz, 9Hz)， 8.23(1 H, d, J=2Hz)
(Z) 一 2— (3， 4—ジメトキシ—フエニル） —3— (2—フルオロー 5—二 トローフエニル） 一アクリロニトリル （化合物 39) の製造
2 -フルォロ- 5-ニトロべンズアルデヒド (85 mg) 及び 3， 4-ジメトキシベンジル シアニド （89 mg) を用いて、 （製造工程 2) B法に従って縮合し、 目的物を得た
(収量 24 mg：収率 15%) 。
淡黄色結晶、 MS (APCI, m/z )： 328 (M"), 'H-NMR (CDC13) <5 3.95 (3H, s), 3.98(3H, s)， 6.95(1H, d， J=9Hz), 7.18(1H, dd, J=2Hz), 7.31(111, d, J=9H z), 7.34(1H, d， J=2Hz, 9Hz)， 7.57 (1H, s)， 8.32(1H, ddd, J=3Hz, 4Hz， 9H z), 9.08(1H, dd, J=3Hz, 6Hz)
(Z) 一 2— (3, 4ージメトキシーフエニル) 一 3— （4一エトキシ一 3—二 トロ一フエニル） 一アクリロニトリル （化合物 40) の製造
4-エトキシ- 3-ニトロべンズアルデヒド （586 mg) 及び 3, 4-ジメトキシベンジ ルシアニド （532 mg) を用いて、 （製造工程 2) B法に従って縮合し、 目的物を得 た （収量 425 rag：収率 40%) 。
黄橙色結晶、 MS (ESI, m/z )： 354 (M— )， ΐ-NMR (CDC13) 6 1.52(3H, t, J=7 Hz), 3.95(3H, s), 3.97(3H, s)， 4.27(2H, q, J=7Hz), 6.94(1H, d， J=9Hz)， 7.1 (1H, d, J=2Hz), 7.16 (1H, d, J=9Hz), 7.25(1H, dd, J=2Hz, 9Hz), 7.34(1 H, s)， 8.16 (1H, d, J=2Hz), 8.26(1H, dd, J=2Hz, 9Hz),
スクシニックアシッド 4一 [ (Z) 一 2 _シァノ _ 2— (3, 4ージメトキシー フエニル） —ビニル] —フエニルエステルメチルエステル （化合物 41) の製造 化合物 1 (50 mg) とこはく酸モノメチルクロリド （44 \) をピリジン （1 m 1) に溶解し、 一昼夜攪拌した。 反応終了後、 反応液を減圧下濃縮乾固し、 クロ 口ホルム/メタノール系でシリカゲルクロマトグラフィーにて精製して、 目的物 を得た （収量 63 mg：収率 90%) 。
淡黄色結晶、 MS (APCI, m/z) ： 396 (MH+) ， Ή-NMR (CDC 13) 52.77(2H, dd, J=6 Hz, 7Hz), 2.92(2H, dd, J=6Hz, 7Hz), 3.74(3H, s), 3.93(3H, s)， 3.96(3H， s), 6.92(1H, d, J=8Hz) , 7.14(1H, d, J=2Hz), 7.21 (2H, d, J=9Hz), 7.26(1H, dd, J=2Hz, 8Hz), 7.40(1H, s), 7, 89 (2H, d， J=9Hz)
スクシニックアシッド 4一 [ (Z) — 2—シァノ一 2_ (3, 4ージメトキシー フエニル） —ビニル] —フエニルエステルェチルエステル （化合物 42) の製造 化合物 1 (50 mg) とこはく酸モノェチルクロリド （51 \) をピリジン （1 m 1) に溶解し、 一昼夜攪拌した。 反応終了後、 反応液を減圧下濃縮乾固し、 クロ 口ホルム, /メタノ一ル系でシリカゲルクロマ卜グラフィ一にて精製して、 目的物 を得た (収量 73 mg：収率 90%) 。
淡黄色結晶、 MS (APCI, m/z) ： 410 (丽 +) , 'Η-腿 R(CDCi3) <51.29(3H, t, J=7H z), 2.75(2H, dd, J=6Hz, 8Hz)， 2.9K2H, dd, J=6Hz, 8Hz), 3.93(3H, s), 3.9 7(3H, s)， 4.20(2H, dd, J=7Hz, 14Hz), 6.92(1H, d, J=9Hz), 7.14(1H, d, J=2 Hz), 7.2K2H, d， J=9Hz), 7.26(1H, dd, J=2Hz， 9Hz), 7.40(1H, s)， 7, 90(2H， d, J=9Hz) スクシニックアシッドビス _{4一 [ (Z) —2—シァノ一2— （3， 4ージメ トキシーフエニル） 一ビニル] 一フエ二ル}エステル （化合物 43) の製造 化合物 1 (50 mg) と二塩化スクシ二ル （20 n\) をピリジン （1 ml) に溶解 し、 一昼夜攪拌した。 反応終了後、 反応液を減圧下濃縮乾固し、 クロ口ホルム Z メタノ一ル系でシリカゲルクロマトグラフィーにて精製して、 目的物を得た （収 量 56 mg：収率 98%) 。
淡黄色結晶、 MS (EI, m/z) ： 644 (M+) , Ή-NMR (GDC 13) δ 3.05 (4Η, s), 3.9 3(6Η, s)， 3.96(6Η, s), 6.92(2Η, d, J=9Hz), 7·14(2Η, d, J=2Hz), 7.23(4H, d, J-9Hz), 7.26(2H, dd, J=2Hz, 9Hz), 7.4K2H, s)， 7,91(4H, d, J=9Hz)
(Z) -2- (3, 4ージメトキシフエ二ル） 一3— (4— 3— D—ダルコピラノ シル—フエニル) —アクリロニトリル （化合物 44) の製造
化合物 1 (1.71g) をアセトンに溶解し、 これに α-D-ァセトブロモグルコース
(10.0 g) と炭酸カリウム （3.57 g) を加え、 激しく攪拌しながら一昼夜煮沸還 流した。 濾過により不溶物を除き、 濾取物をクロ口ホルムで洗浄し、 濾洗液を合 し、 これを減圧下濃縮乾固した。 残留物をクロ口ホルム/メタノール系でシリカ ゲルクロマトグラフィーにて精製した。 これを無水メタノールに懸濁し、 28%Na OMeを滴下し、 室温で 0.5時間攪拌した。 反応混合物に水を加え、 イオン交換樹脂
(スルホン酸- +H型） で中和した。 樹脂を濾過により除き、 溶媒を減圧下濃縮乾 固し、 クロ口ホルム メタノール系でシリカゲルクロマトグラフィーにて精製し て、 目的物を得た （収量 696 mg：収率 26%) 。
淡黄色結晶、 MS (EI, m/z) ： 443 (M+) ， 'H-NMR(DMS0-d6) 53.2K1H, t, J= 9Hz), 3.31 (1H, t, J:9Hz), 3.35(1H, t, J=9Hz), 3.44(1H, m), 3.50(1H, dd, J=6Hz, 12Hz), 3.74(1H, dd, J=lHz, 1 Hz), 3.8K3H, s)， 3.86(3H, s), 5.00 (1H, d, J=7Hz), 7.09(1H, d， J二 9Hz), 7.18(2H, d, J=9Hz), 7.25(1H, dd, 1=2 Hz,9Hz), 7.29(1H, d， J=2Hz), 7.86(1H, s), 7.90(2H, d, J=9Hz)
(Z) 一 2— (3, 4ージメトキシ一フエニル） 一 3— （4ーヒドロキシー3— ニトロ一フエニル） —アクリロニトリル （化合物 45) の製造
4-ヒドロキシ- 3-ニトロべンズアルデヒド （500 mg) 及び 2-メトキシェトキシ メチルクロライド（374 mg)を用いて、 （製造工程 1)に従って水酸基を保護し (収量 605 mg:収率 70%)、 得られた MEM体（255 mg)及び 3， 4-ジメトキシベンジルシア二 ド （177 mg) を用いて、 （製造工程 2) B法に従って縮合し、 （Z)- 2- (3， 4 -ジメト キシ-フエ二ル)- 3 [4- (2-メトキシ-ェトキシメトキシ）- 3-二ト口-フエ二リレ] -ァ クリロニトリル (収量 153 mg：収率 40%)を得た。 (Z) - 2- (3, 4-ジメトキシ-フエ二 ル) -3- [4- (2-メトキシ-ェトキシメトキシ) - 3-二ト口-フエ二ル]-ァクリロ二トリ ル (140 mg)を (製造工程 3)に従って脱保護し、 目的物を得た （収量 72 mg：収率 6 0%) 。
黄橙色結晶、 MS (APCI, m/z )： 327 (MH+), -薩 R (CDC13) δ 3.94(3H, s), 3.97(3H, s)， 6.94(1H, d， J=9Hz), 7.13(1H, d， J-2Hz), 7.27(1H, dd， J=2Hz,
9Hz), 7.28(1H, d, J=9Hz), 7.36(1H, s), 8.29(1H, dd, J=2Hz, 9Hz)， 8.51(1 H, d， J=2Hz), 10.77(1H, s)
(Z) 一 2— (3, 4—ジメトキシ一フエニル） 一 3— (6-ニトロ一べンゾ
[1, 3] ジォキソ一ルー 5—ィル） 一アクリロニトリル (化合物 46) の製造 6 -二トロピぺラナ一ル （195 mg) 及び 3， 4-ジメトキシベンジルシアニド （177 mg) を用いて、 （製造工程 2) B法に従って縮合し、 目的物を得た （収量 124 mg: 収率 35%) 。
淡黄色結晶、 MS (ESI, m/z )： 354 (Μ—)， Ή -画 R (CDC 6 3.94(3H, s), 3. 96 (3H, s)， 6.2K2H, s), 6.94(1H, d， J=9Hz) , 7.17(1H, d, J=2Hz)， 7.28(1H, s)， 7.30(1H, dd, J=2Hz, 9Hz), 7.72(1H, s), 7.88(1H, s)
(Z) —3— （3， 4—ジメトキシーフエニル） 一 2— [4—（2—メトキシ一ェ トキシメトキシ）一フエニル]一アクリロニトリル （化合物 47) の製造
4 -ヒドロキシベンジルシアニド （26.63 g) 及び 2-メトキシェトキシメチルク 口ライド（24.42 g)を用いて、 （製造工程 1)に従って水酸基を保護し（収量 24.39 g：収率 55%)、 得られた MEM体（22.13 g)及び 3, 4-ジメトキシベンズアルデヒド
(16.62 g) を用いて、 （製造工程 2) A法に従って縮合し、 目的物を得た （収量 2 9.79 g：収率 81%) 。
淡黄色結晶、 MS (APCI, m/z )： 370 (MH+), Ή-NMR (CDC13) δ 3.39(3H, s)， 3.55〜3.59(2Η， m), 3.82〜3.86 (2Η， m), 3.95(3Η, s)， 3.97 (3Η, s)， 5.31(2 Η, s)， 6.92(1Η, d, J=8Hz), 7.11 (1H, d， J=9Hz)， 7.34(1H, dd， J=2Hz, 8H z)， 7.38(1H, s), 7.58(1H, d, J=9Hz), 7.69(1H, d， J=2Hz)
(Z) —3— (3, 4—ジメトキシ—フエニル） 一 2— (4—ヒドロキシ一フエ ニル） 一アクリロニトリル （化合物 48) の製造
化合物 47 (18.45 g) を (製造工程 3)に従って保護基を脱離して、 目的物を得た
(収量 8.38 g：収率 60%) 。
淡黄色結晶、 MS (APCI, m/z )： 282 (MH†) , -NMR (CDC13) δ 3.94(3Η, s), 3.97(3Η, s)， 6.90(1Η, d， J=9Hz), 6.92(1Η, d, J=8Hz) , 7.33(1H, dd, J=2Hz, 8Hz), 7.34(1H, s), 7.54(1H, d, J=9Hz), 7.67(1H, d, J=2Hz)
(Z) -2- (3, 5_ビス一トリフルォロメチルーフエニル) - 3 - (4—ヒ ドロキシ—フエニル） —アクリロニトリル （化合物 49) の製造
4 -メトキシェトキシメトキシベンズアルデヒド （420 mg) 及び 3, 5-ビス（トリ フルォロメチル）フエ二ルァセトニトリル （506 mg) を用いて、 （製造工程 2) A 法に従って縮合し、 得られた生成物を（製造工程 3)に従って脱保護し、 目的物を 得た （収量 122 mg：収率 17%) 。
淡黄色結晶、 MS (ESI, m/z )： 356 (M-『)， 'Η-函 R (CDC13) δ6.96(2Η, br.d ), 7.57(1H, s), 7.87(1H, s)， 7.9K2H, br.d), 8.06(2H, s)
(E)— 2— (3, 4ージメトキシーフエニル） 一3— （4ーヒドロキシ一フエ二 ル） 一アクリロニトリル （化合物 50) の製造
化合物 1 (100 mg) をァセトニトリルに溶解し、 高圧水銀ランプを用いて光反 応を行った。 反応液を減圧下濃縮乾固後、 シリカゲルカラムを用いて精製するこ とにより目的物を得た （収量 41 mg:収率 41 ) 。
淡黄色結晶、 MS (APCI, m/z )： 282 (ΜΗ+) , Ή- NMR (CDC13) δ 3.73(3H, s), 3.90(3H, s), 6.7K2H, d, J=9Hz), 6.86(1H, d, J=8Hz), 6.87(1H, d, J=2Hz),
7.00(1H, dd, J=2Hz, 8Hz), 7.10(2H, d， J=9Hz), 7.20(1H, s)
(Z) —2— (3, 4—ジメトキシフエ二ル） 一 3— （4一 i3—マルトシルーフ ェニル） 一アクリロニトリル （化合物 51) の製造
化合物 1 (224 nig) をアセトンに溶解し、 これに CK-D-ァセトブロモマル! ^一ス
(2.23 g) と炭酸カリウム （468 mg) を加え、 激しく攪拌しながら一昼夜煮沸還 流した。 濾過により不溶物を除き、 濾取物をクロ口ホルムで洗浄し、 濾洗液を合 し、 これを減圧下濃縮乾固した。 残留物をクロ口ホルム/メタノール系でシリカ ゲルクロマトグラフィ一にて精製した。 これを無水メタノールに懸濁し、 28%Na OMeを滴下し、 室温で 0.5時間攪拌した。 反応混合物に水を加え、 イオン交換樹脂 - (スルホン酸- ¾型） で中和した。 樹脂を濾過により除き、 溶媒を減圧下濃縮乾 固し、 クロ口ホルム Zメ夕ノール系でシリ力ゲルク口マトグラフィ一にて精製し て、 目的物を得た （収量 195 mg:収率 27%) 。
淡黄色結晶、 MS (ESI, m/z) ： 604 (M - IT) ， Ή-丽 R(DMS0- d6) δ 3.11 (1H, t,
J=9Hz), 3.28(1H, dd, J=4Hz, lOHz), 3.8K3H, s), 3.86(3H, s), 5.05(1H, d, J=8Hz), 5.09(1H, d, J=3Hz), 7.07(1H, d， J=9Hz)， 7.18(2H, d, J=9Hz), 7.25(1H, dd, J=2Hz, 9Hz), 7.29(1H, d, J=2Hz)， 7.84(1H, s)， 7.89(2H, d, J =9Hz)
(Z) 一 2— (3, 4ージメトキシ一フエニル） 一3— (2—エトキシー 5—二 トロ—フエニル） —アクリロニトリル （化合物 52) の製造
2 -エトキシ- 5-ニトロべンズアルデヒド （390 mg) 及び 3, 4-ジメトキシベンジ ルシアニド （354 mg) を用いて、 （製造工程 2) B法に従って縮合し、 目的物を得 た （収量 319 mg：収率 45%) 。
黄橙色結晶、 MS (ESI, m/z )： 354 (M -)， Ή -腿 R (CDC13) <5 1.52(3H, i, J-7 Hz), 3.95(3H, s), 3.97(3H, s), 4. 4(2H, q, J=7Hz) , 6.95(1H, d, J=9Hz), 7.00(1H, d, J=9Hz), 7.17(1H, d, J=2Hz), 7.30(1H, dd， J=2Hz, 9Hz), 7.70(1 H, s), 8.29(1H, dd, J=3Hz, 9Hz), 8.92(1H, dd, J=3Hz)
(Z) —2— （3, 4—ジメトキシ一フエニル） 一 3— (3—ヒドロキシー 4一 ニトロ一フエニル） 一アクリロニトリル （化合物 53) の製造
3 -ヒドロキシ- 4-ニトロべンズアルデヒド （0.67 g) 及び 2-メトキシェトキシ メチルクロライド（0.50 g)を用いて、 （製造工程 1)に従って水酸基を保護し (収量 0.97 g：収率 95 )、 得られた MEM体（944 mg)及び 3, 4-ジメトキシベンジルシア二 ド （673 mg) を用いて、 （製造工程 2) B法に従って縮合し、 （Z) -2- (3, 4-ジメト キシ-フエニル) -3- [3- (2-メトキシ-ェトキシメトキシ)- 4-ニトロ-フエニル] -ァ クリロニトリル (収量 515 mg：収率 34%)を得た。 (Z)-2-(3, 4-ジメトキシ-フエ二 ル) -3- [3- (2 メトキシ-ェトキシメトキシ) -- 4-二 1、口-フエニル] -ァクリロ二トリ ル (350 nig)を (製造工程 3)に従って脱保護し、 目的物を得た （収量 267 mg:収率 9 7%) 。
黄橙色結晶、 MS (ESI, m/z )： 325 ( -H") , Ή-醒 R (CDC13) δ 3.95(3H, s)， 3.97(3H, s), 6.95(1H, d, J=9Hz), 7.16 (1H, d, J=2Hz), 7.32K1H, dd, J=2H z， 9Hz), 7.37(1H, s), 7.52(1H, dd, J=2Hz, 9Hz), 7.56(1H, d, J=2Hz) ， 8.1 2(1H, d, J=9Hz)
(Z) -2- (3, 4ージメトキシフエ二ル） - 3 - (4— —マルトトリオシ ルーフエニル) 一アクリロニトリル （化合物 54) の製造
化合物 1 (791 mg) をアセトンに溶解し、 これに α-D-ァセトブロモマルトトリ オース (11.1 g) と炭酸カリウム (1.11 g) を加え、 激しく攪拌しながら一昼夜 煮沸還流した。 濾過により不溶物を除き、 濾取物をクロ口ホルムで洗浄し、 濾洗 液を合し、 これを減圧下濃縮乾固した。 残留物をクロ口ホルム/メタノール系で シリカゲルク口マトグラフィ一にて精製した。 これを無水メ夕ノ一ルに懸濁し、 28%Na0Meを滴下し、 室温で 0.5時間攪拌した。 反応混合物に水を加え、 換樹脂 （スルホン酸- 型） で中和した。 樹脂を濾過により除き、 溶媒を減圧下 濃縮乾固し、 クロ口ホルム/メタノ一ル系でシリカゲルクロマトグラフィーにて 精製して、 目的物を得た （収量 368 mg：収率 17%) 。
淡黄色結晶、 MS (ESI, m/z) ： 766 (M -『) , 匪 R(DMS0 - d6) (53.07(1H, t， J=9Hz), 3.25(1H, dd， J=4Hz， 9Hz), 3.8K1H, s)， 3.86(1H, s)， 5.02(1H, d， J-4Hz), 5.06(1H, d, J=8Hz), 5.09(1H, d， J=4Hz), 7.08(1H， d， J=9Hz), 7.1 8(2H, d, J=9Hz), 7.24(1H, dd， J=2Hz, 9Hz), 7.3K1H, d, J=2Hz), 7.89(1H, s), 7.91 (2H, d, J=9Hz)
(Z) 一 2— (3, 4—ジメトキシーフエニル) 一 3— （3—フルオロー 2—ヒ ドロキシーフエニル） —アクリロニトリル （化合物 55) の製造
3 -フルォロ- 2 -ヒドロキシベンズアルデヒド （560 mg) 及び 2-メトキシェトキ シメチルクロライド（500 mg)を用いて、 （製造工程 1)に従って水酸基を保護し（収 量 660 mg：収率 72%)、 得られた MEM体（650 mg)及び 3， 4-ジメトキシベンジルシア ニド （500 mg) を用いて、 （製造工程 2) A法に従って縮合し、 （Z)- 2-(3，4-ジメ トキシ-フエ二ル)- 3- (3-フルォロ- 2-メトキシェトキシメトキシ-フエ二ル)-ァク リロ二トリル （収量 680 mg：収率 58%) を得た。 （Z)- 2 -（3， 4-ジメトキシ-フエ二 ル) -3-(3-フルォ口- 2-メトキシェトキシメトキシ-フエ二ル)-ァクリロニ 1、リル (670 mg)を（製造工程 3)に従って脱保護し、 目的物を得た （収量 140 mg：収率 2 9%) 。
淡黄色結晶、 MS (APCI, m/z )： 300 (匪 +)， 'H-NMR (CDC13) δ 3.93(3H, s), 3.96(3H, s), 6.92(1H, d, J=9Hz)， 6.93〜6.99 (1H， m), 7·12〜7.17(1H, m),7. 18 (1H， d, J=2Hz), 7.30(1H, dd, J=2Hz, 9Hz), 7.80 (1H, s)， 7.93(1H, d， J=8 Hz)
(Z) —2, 3—ビス一 （3, 4—ジメトキシ一フエニル） 一アクリロニトリル (化合物 56) の製造
3, 4-ジメトキシベンズアルデヒド (1.00 g) 及び 3， 4-ジメトキシベンジルシア ニド （ί.07 g) を用いて、 （製造工程 2) A法に従って縮合し、 目的物を得た （収 量 i.75 g：収率 89%)
淡黄色結晶、 MS (APCI, m/z )： 326 (MH+), Ή-醒 R (CDC13) δ 3.93(3H, s), 3.95(3H, s), 3.97(3H, s)， 3.98(3H, s), 6.9K1H, d， J=9Hz), 6.93(1H, d, J =9Hz) , 7.13(1H, d, J=2Hz), 7.24(1H, dd, J=2Hz, 9Hz), 7.35(1H, s), 7.36(1 H, dd, J=2Hz, 9Hz)， 7.67(1H, d， J=2Hz)
(Z) 一 3— (3—ァミノ一フエニル) —2— (3, 4—ジメトキシ一フエ二 ル） 一アクリロニトリル （化合物 57) の製造
化合物 33 (1.80 g) を酢酸に溶解した。 亜鉛末を添加し、 4時間攪拌した。 減 圧下濃縮乾固後、 シリカゲルカラムを用いて精製を行うことにより目的物を得た
(収量 1.30 g：収率 80%) 。
淡黄色結晶、 MS (APCI, m/z )： 281 (MH+) , Ή -醒 R (CDC13) δ 3.81 (2H, br s)， 3.93(3H, s)， 3.96(3H, s)， 6.75(1H, ddd, J=lHz, 2Hz, 9Hz), 6.92(1H, d, J=9Hz), 7.13(1H, d, J=2Hz), 7.15〜7.19 (1H， m), 7.23(1H, d, J=9Hz), 7. 25 (1H, dd, J=2Hz, 9Hz), 7.26〜7.28(1H, m), 7.34(1H, s)
(Z) — 2— (3, 4—ジメトキシーフエニル） 一 3— [3—フルオロー 4— (2—メトキシーエトキシメトキシ) —フエニル]一アクリロニトリル （化合物 5 8) の製造
3 -フルオロー 4ーヒドロキシベンズアルデヒド (3.92 g) 及び 2—メトキシエト キシメチルクロライド（3.49 g)を用いて、 （製造工程 1)に従って水酸基を保護し (収量 .98 g：収率 78%)、 得られた MEM体（4.98 g)及び 3, 4-ジメトキシベンジル シアニド （3.87 g) を用いて、 （製造工程 2) A法に従って縮合し、 目的物を得た (収量 6.55 g：収率 78%) 。
淡黄色結晶、 MS (APCI, m/z )： 284 (M - C¾0CH2CH20C — )， Ή-NMR (CDC13) δ 3.38(3Η, s), 3.56〜3·60(2Η， m), 3.87〜3.91 (2Η, m), 3.93(3Η, s), 3.96 (3Η, s)， 6.92(1Η, d, J=8Hz), 7.12(1Η, d, J=2Hz), 7.24 (1H, dd, J=2Hz, 8Hz), 7.30(1H, t, J=9Hz)， 7.3K1H, s)， 7.56(1H, dd, J=2Hz, 9Hz), 7.60(1H, dd, J=2Hz, 12Hz)
(Z) 一 2— (3, 4—ジメトキシ一フエニル） 一3— (3—フルオロー 4ーヒ ドロキシーフエニル） —アクリロニトリル （化合物 59) の製造
化合物 58 (6.00 g)を用いて、 （製造工程 3)に従って保護基を脱離して、 目的物 を得た（収量 4.44 g：収率 96%)。
淡黄色結晶、 MS (APCI, m/z )： 298 (M - H -)， - NMR (CDC13+CD30D) δ 3.93(3 H, s)， 3.96(3H, s), 6.93(1H, d， J=8Hz)， 7.01 (1H, t, J=9Hz), 7.12(1H, d, J=2Hz), 7.22(1H, dd, J=2Hz, 8Hz), 7.32(1H, s), 7.5K1H, dd, J=2Hz, 9Hz), 7.69(1H, dd, J=2Hz, 12Hz)
ホスホリックアシッドモノー {4一 [ (Z) —2—シァノ一2— (3, 4—ジメ トキシーフエニル） 一ビニル] 一フエ二ル} エステル，ナトリウム塩 (化合物 6 0) の製造
化合物 1 (103 mg)をエタノールに溶解し、 ナトリウムメトキシドを加え 12時間 攪拌した。 これを減圧下濃縮乾固した後、 水に溶解して酢酸ェチルで洗浄し、 水 層を凍結乾燥して目的物を得た （収量 112 mg :収率 97%) 。
淡黄色結晶、 MS (ESI, m/z) ： 360 (M-2Na+H") , ιΗ-匪 R(D20) (53.7Κ3Η, s)， 3.75(3H, s)， 6.88 1H, d， J=8Hz)， 6.99(1H, d, J=2Hz), 7.07(1H, dd, J-2, 8Hz), 7.22(2H, d， J=8Hz), 7.43(1H, s)， 7.70(2H, d, ' J=8Hz)
ァセティックアシッド 4- [ (Z) 一 1ーシァノー 2— （3， 4ージメ卜キシ 一フエニル) 一ビエル] フエニルエステル (化合物 61) の製造
化合物 48 (1.41g)を無水酢酸及びピリジンで定法に従いァセチル化して、 目的 物を得た （収量 1.52 g:収率 94%) 。
白色結晶、 MS (APCI, m/z ): 324 (MH+) , Ή-NMR (CDC13) δ 2.33(3H, s)， 3. 95 (3H, s), 3.98(3H, s), 6.93(1H, d, J=8Hz), 7.18 (2H, d, J=9Hz), 7.35(1H, dd, J=2Hz, 8Hz), 7.42(1H, s), 7.67(2H, d, J=9Hz), 7.71 (1H, d, J=2Hz) (Z) 一 2— （3， 4—ジメトキシーフエニル） —3— （4—ホルミル一フエ二 ル） 一アクリロニトリル （化合物 62) の製造
4 -ジエトキシメチル-ベンズアルデヒド （4.16 g) 及び 3, 4-ジメトキシベンジ ルシアニド （3.54 g) を用いて、 （製造工程 2) A法に従って縮合し、 （Z)- 3 - (4 - ジェトキシメチル-フエ二ル）- 2-(3， 4-ジメトキシ-フエ二ル)-ァクリロニトリル (収量 6.54 g :収率 89%)を得た。 （Z)-3- (4-ジエトキシメチル-フエ二ル)- 2-(3，4_ ジメトキシ -フエニル) -アクリロニトリル（1.84 g)をメタノールに溶解し、 水、 2 規定硫酸を加え、 攪拌することにより目的物を得た （収量 1.20 g:収率 82 ) 。 淡黄色結晶、 MS (APCI, m/z )： 294 (ΜΗ+) , -丽 R (CDC13) δ 3.95(3H, s)， 3.98(3H, s), 6.95(1H, d, J=9Hz), 7.17(1H, d, J=2Hz), 7.32(1H, dd, J=2Hz, 9Hz), 7.48(1H, s), 7.97(2H, d, J=9Hz), 8.02(2H, d， J=9Hz), 10.06(1H, s) ァセティックアシッド 4- [ (Z) 一 1ーシァノー 2— (3, 4—ジメトキシ —フエニル） 一ビニル] 一 2—エトキシ—フエニルエステル （化合物 63) の製造 化合物 11 (1.30 g)を無水酢酸及びピリジンで定法に従いァセチル化して、 目 的物を得た （収量 1.19 g:収率 81%) 。
白色結晶、 MS (APCI, m/z )： 368 (MH+), Ή-匪 R (CDC13) δ 1.44(3H, t, J=7 Hz), 2.34(3H, s), 3.94(3H, s)， 3.97(3H, s)， 4.16(2H, q, J=7Hz) , 6.93(1H, d, J=9Hz), 7.1K1H, d, J=8Hz), 7.13 (1H, d, J=2Hz), 7.26(1H, dd, J=2Hz, 8Hz), 7.3K1H, d， J=2Hz, 8Hz), 7.37(1H, s)， 7.69(1H, d, J=2Hz) ァセティックアシッド 4_ [ (Z) 一 1ーシァノー 2 _ (3, 4ージメ卜キシ 一フエニル） —ビエル] 一 2—フルオローフエニルエステル （化合物 64) の製造 化合物 59 (1.20 g)を無水酢酸及びピリジンで定法に従いァセチル化して、 目 的物を得た （収量 1.26 g:収率 92%) 。
微黄色結晶、 MS (APCI, m/z )： 298 (M- C0C¾—)， -匪 R (CDC13) <5 2.37 (3H, s)， 3.94(3H, s), 3.97(3H, s), 6.93(1H, d, J=9Hz), 7.13(1H, d-, J=2Hz), 7. 22 (1H, d， J=8Hz), 7.27(1H, d， J=2Hz, 9Hz), 7.35(1H, s), 7.62〜7.67 (1H, m), 7.72(1H, dd, J=2Hz, 11Hz)
ァセティックアシッド 4— [ (Z) —2—シァノー 2— （3， 4, 5—トリメ トキシーフエニル） ービニル] 一フエニルエステル （化合物 65) の製造
化合物 15 (1.20 g)を無水酢酸及びピリジンで定法に従いァセチル化して、 目 的物を得た （収量 1.27 g:収率 93%) 。
白色結晶、 MS (APCI, m/z )： 352 (M-H") , Ή-NMR (CDC13) δ 2.34(3H, s), 3.89(3Η, s), 3.94(6Η, s), 6.87(2Η, s)， 7.22(2Η, d, J=9Hz) , 7.43(1H, s), 7.91(2H, d, J=9Hz)
7- [4一 [ (Z) 一 2—シァノー 2— (3, 4—ジメトキシ一フエニル） ービ ニル] ーフエノキシ] —ヘプタノイツクアシッド ェチルエステル （化合物 66) の製造
化合物 1 (200 mg)をジメチルスルホキシドに溶解し、 無水炭酸カリウムを添加 し室温で攪拌した。 1時間後、 7-ブロモヘプタン酸ェチル (169mg)を添加し攪拌し た。 炭酸カリウムを濾別し、 濾液を氷水中に注いだ。 塩酸を加え、 pH3に調整し た後、 クロ口ホルムにて 2度抽出した。 クロ口ホルム層を塩水で洗浄した後、 無 水硫酸ナトリウムにて乾燥した。 硫酸ナトリウムを濾別し、 濾液を減圧下濃縮乾 固した。 再結晶により目的物を得た （収量 223 mg:収率 72%) 。
微黄色結晶、 MS (ESI, m/z )： 437 (M— ), 'H-NMR (CDC13) δ 1.26(3H, t, J=7 Hz), 1.37〜1.45(2H， m), 1.46〜1.55 (2H， m), 1· 63〜1.71 (2H, in), 1.78〜1.8 6(2H, m)， 2.32(2H, t, J=7Hz), 3.93(3H, s), 3.96(3H, s), 4.02(2H, t， J=7H z), 4.13(2H, q， J=7Hz), 6.9K1H, d， J=9Hz), 6.95(2H, d， J=9Hz), 7.13(1H, d, J-2Hz), 7.23 (1H, dd, J=2Hz, 9Hz), 7.36 (1H, s)， 7.85(2H, d， J=9Hz) 8—ブロモ一ォクタノイツクアシッド 4一 [ (Z) — 1—シァノー 2_ (3, 4—ジメトキシーフエニル） —ビニル] —フエニルエステル （化合物 67) の製造 化合物 1 (1.41 g) 、 8-ブロモオクタン酸（1.78 g) 及びパラトルエンスルホン 酸（1.90 g)をトルエンに溶解し、 10時間還流した。 濃縮後、 シリカゲルカラムク 口マトグラフィ一により精製し、 目的物を得た （収量 0.72 g：収率 34%) 。
淡黄色結晶、 MS (APCI, m/z )： 486 (MH+), ¾-NMR (CDC13) δ 1.35〜1·55(6 Η, m), 1.74〜1.82(2Η， m), 1.84〜1.92 (2Η， ra), 2.59(2Η, t), 3.42(2Η, t)， 3.93(3Η, s), 3.96 (3Η, s)， 6.93(1Η, d, J=9Hz), 7.14(1Η, d, J=2Hz), 7.19 (2Η, d, J=9Hz), 7.26(1H, dd, J=2Hz, 9Hz), 7.4K1H, s), 7.90(2H, d, J=9H z)
(Z) — 3— （3—アミノーフエニル） - 2 - (3, 4—ジメトキシーフエ二 ル） —アクリロニトリル，塩酸塩 （化合物 68) の製造
化合物 57 (500 mg)を 1.1等量の塩酸に懸濁し、 1，4-ジォキサン、 ァセトニト リルを加えて溶解した。 反応液を減圧下濃縮乾固後、 再結晶により目的物を得た
(収量 550 mg：収率 97%) 。
淡黄色結晶、 MS (APCI, m/z )： 486 (MH+), -醒 R (DMS0-d6) δ 3.82(3H, s), 3.86(3H, s)， 7.09(1H, d， J=9Hz), 7.21 (1H, brd), 7.28(1H, dd, J=2Hz, 9Hz), 7.36(1H, d, J=2Hz), 7.49(1H, brt), 7.60(1H, brd), 7.64(1H, brd), 7.96(1H, s)
ホスホリックアシッドモノ一 {4一 [ (Z) —2—シァノー 2— （3, 4—ジメ トキシーフエニル） ービニル] 一 2—メトキシ一フエ二ル} エステル，ナトリウ ム塩 （化合物 69) の製造
化合物 7 (119 mg)をエタノールに溶解し、 ナトリゥムメトキシドを加え 12時間攪 拌した。 これを減圧下濃縮乾固した後、 水に溶解して酢酸ェチルで洗浄し、 水層 を凍結乾燥して目的物を得た （収量 130 mg:収率 98%) 。
淡黄色結晶、 MS (ESI, m/z) ： 390 (M-2Na+H") ， ¾-NMR(D20) 53.64(3H, s)，
3.67(3H, s)， 3.69 (3H, s)， 6.83 (1H, d， J=9Hz), 6.97(1H, d, J=2Hz), 7.02 (1H, dd, J=2， 9Hz)， 7.14(1H, dd, J=2, 9Hz)， 7.36(1H, d, J=9Hz), 7.39(1H, s), 7.43(1H, d, J=2Hz)
ホスホリックァシッドモノー {4一 [ (Z) 一 2—シァノー 2— (3, 4—ジメ トキシーフエニル） ービニル] 一フエ二ル} エステル （化合物 70) の製造 化合物 1 (100 mg) と 4— (ジメチルァミノ） ピリジン （5 mg) をァセトニト リル （700 l) に溶解して- 10°Cに冷却し、 四塩化炭素 （171 l) とジイソプロ ピルェチルァミン （129 UL \) を加え、 0.5時間攪拌した。 その後、 亜リン酸ジべ ンジル （117 l) を加え 12時間攪拌した。 反応終了後、 反応液に 0.5Mリン酸二 水素カリウムを加え、 酢酸ェチルで洗浄した。 有機層を減圧下濃縮乾固し、 クロ 口ホルム/メタノール系でシリカゲルクロマトグラフィーにて精製した。 これを ジクロロメタンに溶解し、 プロモトリメチルシランを加え 0°Cにて 2時間攪拌し た。 反応終了後、 反応液に水を加え、 1時間攪拌した。 酢酸ェチルで洗浄し、 水 層を凍結乾燥して目的物を得た （収量 103mg：収率 80%) 。
淡黄色結晶、 MS (ESI, m/z) ： 360 (M-H") , 'H-NMR(DMS0-d6) 53.8Κ3Η, s)， 3.86(3H, s), 7.06(1H, d, J=9Hz), 7.25(1H, dd, J=2Hz, 9Hz), 7.30(2H, d, J=8Hz), 7.3K1H, d， J=2Hz), 7.88(1H, s)， 7.89(2H, d, J=8Hz) ホスホリックァシッドモノー {4- [ (Z) 一 2—シァノ _ 2 - (3, 4ージメ トキシーフエニル） ービニル] —2—メトキシーフエ二ル} エステル （化合物 7 1) の製造
化合物 7 (111 mg) と 4一 （ジメチルァミノ） ピリジン （5mg) をァセトニト リル （700 H i) に溶解して- 10°Cに冷却し、 四塩化炭素 （171 1) とジイソプ 口ピルェチルァミン （129 m l) を加え、 0.5時間攪拌した。 その後、 亜リン酸ジ ベンジル （117 il l) を加え 12時間攪拌した。 反応終了後、 反応液に 0.5Mリン酸 二水素カリウムを加え、 酢酸ェチルで洗浄した。 有機層を減圧下濃縮乾固し、 ク 口口ホルム/メ夕ノ一ル系でシリ力ゲルクロマ卜グラフィ一にて精製した。 これ をジクロロメタンに溶解し、 プロモトリメチルシランを加え 0°Cにて 2時間攪拌し た。 反応終了後、 反応液に水を加え、 1時間攪拌した。 酢酸ェチルで洗浄し、 水 層を凍結乾燥して目的物を得た （収量 119 mg:収率 85%) 。
淡黄色結晶、 MS (ESI, m/z) ： 390 (M - H_) ， lH-NMR(DMS0-d6) (53.8K3H, s)， 3.85(3H, s)， 3.86(3H, s), 7.08(1H, d, J=9Hz) , 7.26(1H, dd, J=2Hz, 9Hz) , 7.33(1H, d, J=2Hz), 7.42(1H, d, J=9Hz)， 7.48(1H, dd, J=2, 9Hz)，， 7.66(1 H, d, J=2Hz), 7.93(1H, s)
N- [3- [2—シァノー 2 _ (3, 4—ジメトキシ一フエニル） ービニル] 一 フエ二ルー] 一ァセトアミド （化合物 72) の製造
化合物 57 (50 mg)を無水酢酸及びピリジンで定法に従いァセチル化して、 目的 物を得た （収量 48 mg：収率 84%) 。
微黄色結晶、 MS (ESI, m/z )： 323 (MH+) , 'Η -顧 R (CDC13) δ 2.21(3H, s),3. 93 (3H, s), 3.96(3H, s), 6.92(1H, d, J-9Hz), 7.14(1H, d, J=2Hz), 7.25(1H, dd, J=2Hz, 9Hz), 7.40(1H, t, J=8Hz)， 7.4K1H, s)， 7.52(1H, brd), 7.61(2 H, brd), 8.0K1H, brs)
(Z) - 2- (3, 4ージメトキシフエ二ル) _3— [4一 (6—ホスホー /3— D —ダルコピラノシル） 一フエニル]一アクリロニトリル （化合物 73) の製造 化合物 44 (100 mg) と（2,2,2-トリクロロェチル) =ホスホロクロリデート （256 mg) をピリジン （2 ml) に溶解し、 2時間攪拌した。 反応終了後、 反応液を減圧 下濃縮乾固し、 クロ口ホルム/メ夕ノール系でシリカゲルク口マトグラフィ一に て精製した。 これをピリジン：酢酸 =4 ： 1混合溶媒に溶かし、 亜鉛末（140 mg) を加えて 2時間攪拌した。 反応終了後、 反応液を減圧下濃縮乾固し、 クロ口ホル ム Zメタノール系でシリカゲルクロマトグラフィーにて精製して、 目的物を得た
(収量 83 mg：収率 70%) 。
淡黄色結晶、 MS (ESI, m/z) ： 522 (ΜΗ÷), 'Η - NMR(DMS0-(16) o3.80(3H, s), 3. 83 (3H, s)， 4.98 (1H, d， J=7Hz), 7.05(1H, d， J=9Hz), 7.1 (2H, d, J=9Hz), 7.22(1H, dd, J=2Hz， 9Hz), 7.29(1H, d, J=2Hz), 7.85(1H, s)， 7.88(2H, d， J =9Hz)
スルホリックアシッドモノー {4一 [ (Z) —2—シァノー 2— （3, 4—ジメ トキシーフエニル） ービニル] —フエ二ル} エステル， トリェチルアンモニゥム 塩 （化合物 74) の製造
化合物 1 (100 mg) をクロ口ホルム （10 ml) に懸濁し、 トリェチルァミン （51 6^1) とスルファートリオキシドピリジン錯体 (588 rag) を加え、 2時間攪拌し た。 反応終了後反応液を減圧下濃縮乾固し、 クロ口ホルム Zメタノール系の溶媒 を用いてシリカゲルクロマトグラフィーにて精製し、 目的物を得た （収量 160 m g：収率 97%) 。
淡黄色結晶、 MS (ESI, m/z) ： 360 (M-(C2H5)3NH-), -匪 R(CDC13) (51.29(9H, t， J=7Hz), 3.18(6H, dd, J=7, 15Hz), 3.86(3H, s), 3.90(3H, s), 7.01(1H, d， J=9Hz), 7.27(2H, m), 7.39(2H, d, J=9Hz), 7.69(1H, s), 7.90(2¾ d, J=9 Hz)
(Z) -2- (3, 4—ジメトキシフエニル) 一 3— [4— (6—ホスホ _/3— D 一ダルコピラノシル） —フエニル]—アクリロニトリル，ナトリウム塩 (化合物 7 5) の製造
化合物 73 (83 mg)をエタノールに溶解し、 ナトリウムメトキシドを加え 12時間 攪拌した。 これを減圧下濃縮乾固した後、 水に溶解して酢酸ェチルで洗浄し、 水 層を凍結乾燥して目的物を得た （収量 81 mg:収率 90%) 。
淡黄色結晶、 MS (ESI, m/z) ： 522 (M-2Na+H") , 'Η-丽 R(D20) (53.53 (3Η, s), 3.58(3Η, s), 3.86(1Η, dd, J=6Hz, 12Hz), 4.01 (1H, m), 4.97(1H, d， J=7Hz) , 6.60(1H, d， J=9Hz), 6.70(1H, d， J=2Hz), 6.81 (1H, dd, J=2Hz, 9Hz), 6.94 (2H, d, J=9Hz), 7.06(1H, s), 7,43(2H, d， J=9Hz)
(Z) - 2 - (3, 4—ジメトキシ一フエニル) 一 3— （2—ヒドロキシー 5— ニトロ—フエニル) 一アクリロニトリル （化合物 76) の製造
2-ヒドロキシ -5-ニトロべンズアルデヒド (1.00 g) 及び 2-メトキシェトキシ メトキシルク口ライド（0.75 g)を用いて、 （製造工程 1)に従って水酸基を保護し (収量 1.10 g:収率 65%)、 得られた MEM体（510 mg)及び 3， 4 -ジメトキシベンジルシ アニド （354 mg) を用いて、 （製造工程 2) B法に従って縮合し、 （Z)- 2- (3， 4 -ジ メトキシ -フエ二ル）- 3-[2- (2-メトキシ-ェトキシメトキシ） -5-ニトロ-フエ二 ル] -ァクリロニトリル（収量 330 rag：収率 40%)を得た。 (Z)-2-(3, 4-ジメトキシ- フエニル) -3- [2- (2-メトキシ-ェトキシメトキシ）- 5-二ト口-フエ二ル]-ァクリ口 二トリル (200 mg)を (製造工程 3)に従って脱保護し、 目的物を得た （収量 87 mg: 収率 55%) 。
黄橙色結晶、 MS (ESI, m/z )： 327 (M- H—)， 'H-NMR (CDC13) δ 3.95(3H, s), 3.96(3H, s)， 6.97(1H, d, J-9Hz), 7.3K1H, d, J=2Hz), 7.32(1H, dd, J=2Hz, 9Hz), 7.49(1H, d, J=9Hz), 7.85(1H, s), 8.38(1H, dd, J=2Hz, 9Hz), 8.49(1 H, d, J=2Hz)
(Z) - 2 - (3， 4—ジメトキシ—フエニル) - 3 - (4一フルオロー 3—二 トローフエニル） 一アクリロニトリル （化合物 77) の製造
4_フルォロ- 3-ニトロべンズアルデヒド (507 nig) 及び 3， 4-ジメトキシベンジ ルシアニド （532 mg) を用いて、 （製造工程 2) B法に従って縮合し、 目的物を得 た （収量 485 mg：収率 30%) 。
黄橙色結晶、 MS (ESI, m/z ): 325 (M- H— )， ¾ -丽 R (CDC13) δ 3.95(3H, s), 3.97 (3H, s), 6.95(1H, d, J=9Hz), 7.14(1H, d, J=2Hz), 7.29(1H, dd, J=2Hz,
9Hz), 7.40(1H, s)， 7.41 (1H, dd, J=9Hz, lOHz), 8.25〜8.32(1H， m), 8.42(1 H, dd, J=2Hz, 7Hz)
(Z) 一 2— (3, 4—ジメトキシーフエニル） 一 3— （3—ヒドロキシ一 4, 5—ジメトキシーフエニル) —アクリロニトリル (化合物 78) の製造
3-ヒドロキシ- 4， 5 -ジメトキシベンズアルデヒド (l.OOg)及び 2-メトキシェトキ シメチルクロライド（0.70g)を用いて、 （製造工程 1)に従って水酸基を保護し（収 量 1.40g：収率 95%)、 得られた1^¾1体（1.458)及び3,4-ジメトキシベンジルシア二 ド（l.OOg)を用いて（製造工程 2) A法に従って縮合し、 （Z)- 3- [3, 4-ジメトキシ- 5- (2 -メトキシエトキシメトキシ)-フエ二ル]- 2- (3, 4-ジメトキシ-フエニル) -ァク リロニトリル（収量 1.60g：収率 71%)を得た。 (Z) - 3 - [3, 4-ジメ卜キシ- 5- (2 -メト キシエトキシメトキシ)-フエニル] -2- (3, 4-ジメトキシ-フエニル) -ァクリロニト リル（l'.60g)を（製造工程 3)に従って脱保護し、 目的物を得た（収量 0.74g：収率 5 6%)。
微黄色結晶、 MS (APCI, m/z) :342 (MH+), Ή-NMR (CDC 13) (53.93 (3H, s)， 3.95 (3H, s), 3.96(3H, s)， 3.98(3H, s), 6.92(1H, d, J=9Hz), 6.97(1H, d, J=2H z)， 7.13(1H， d， J=2Hz), 7.24(1H, dd， J=2Hz, 9Hz)， 7.27(1H, d， J=2Hz), 7. 29 (1H, s)
(Z) 一 2— (3, 4ージメトキシーフエニル） 一3— (4—ヒドロキシ一 3, 5—ジメトキシーフエニル） —アクリロニトリル (化合物 79) の製造
4-ヒドロキシ- 3, 5-ジメトキシベンズアルデヒド（2.44g)及び 2-メトキシェトキ シメチルクロライド（1.67g)を用いて、 （製造工程 1)に従って水酸基を保護し（収 量 3· 40g：収率 94%)、 得られた MEM体（3.40g)及び 3, 4 -ジメ卜キシベンジルシア二 ド（2.23g)を用いて (製造工程 2) A法に従って縮合し、 （Z)-3_[3， 5 -ジメトキシ -4- (2-メトキシェトキシメトキシ)-フエ二ル]- 2- (3,4-ジメトキシ -フエ二ル)-ァク リロニトリル (収量 3.53g：収率 65%)を得た。 (Z)-3-[3, 5 -ジメトキシ -4-(2-メト キシエトキシメトキシ)-フエニル] -2- (3， 4-ジメトキシ -フエ二ル)-ァクリロニト リル (0.35g)を (製造工程 3)に従って脱保護し、 目的物を得た (収量 0.25g:収率 9 0%)。
微黄色結晶、 MS (APCI, m/z) :342 (ΜΗ+), Ή-匪 R(CDC13) <53.93 (3H, s), 3.97 (3H， s), 3.97(6H, s), 6.92(1H, d, J=9Hz), 7.13(1H, d, J=2Hz), 7.22(2H, s), 7.24C1H, dd， J-2Hz, 9Hz), 7.32(1H, s)
実施例 2： SN-38耐性 A549細胞の樹立
ヒト非小細胞肺癌 A549細胞は、 10% FBS、 100 U/mlペニシリンおよび 100 g/nil ストレプトマイシンを含有した Ham' s F- 12培地 （10% FBS/Ham' s F-12) を使用 して 5% C02, 37°C 条件下で継代培養した。 SN- 38耐性 A549細胞は、 A549細胞を培 地中の SN- 38濃度を段階的 （4〜10 ng/ml) に増加させて 2ヶ月間継代培養して選 択した。 さらに、 この SN- 38耐性 A549細胞から限界希釈法によるクローン化を行 い、 6株のクローン化 SN- 38耐性 A549細胞 (A549/SN- 38- 1〜6) を樹立した。
実施例 3： A549/SN-38細胞の抗癌剤感受性試験
A549または A549/SN- 38- 1〜6の各細胞を 10% FBS/Hara' s F- 12に懸濁し、 96ゥェ ルマイクロプレートに播種して 5% C02、 37 条件下で培養した （2 X 103 cel l s /50 l/wel l) 。 ー晚培養後、 抗癌剤を溶解した 10% FBS/Ham' s F- 12を 50 1加 え、 5% C02、 37°C条件下で 48時間培養した。 培養後、 生細胞測定用試薬 〔TetraC olor ONE (商標名） 、 生化学工業製〕 を使用して、 添付の操作手順に従って生細 胞数を測定した。 各種抗癌剤に対する A549細胞および A549/SN- 38細胞 6株の感受 性を表 2および図 1に示す。 なお、 IC5„値は細胞増殖を 50%抑制する抗癌剤の濃度 である。 また、 相対耐性度は、 A549/SN- 38細胞における IC5。値を A549細胞におけ る I C5。値で除した値であり、 この値が大きいほど耐性獲得が大きいことを意味す ' る。 A549/SN- 38細胞は、 BCRPの基質である SN- 38およびミトキサントロンに対し て特に強い耐性を示した。
表 2 抗癌剤 A549 A549/SN-38
1 2 3 4 5 6
IC50 /ig/ml (相対耐性度）
SN-38 0.013 0.12 0.10 0.13 0.10 0.10 0.10
(9.2) (7.5) (9.7) (7.7) (7.7) (7.4) クリタキセル 0.0049 0.0098 0.012 0.013 0.014 0.0061 0.0071
(2.0) (2.4) (2.7) (2.8) (1.2) (1.4) エトホ。シド 0.90 0.27 0.80 1.6 3.5 2.3 1.0
(0.3) (1.0) (1.9) (4.0) (2.7) (1.1) シスフ。ラチン 18.6 15.1 16.5 15.1 17.0 15.9 16.8
(0.8) (0.9) (0.8) (0.9) (0.9) (0.9)
5-フル才ロウラシル 2.1 4.3 1.3 0.69 0.91 1.7 1.0
(2.0) (0.6) (0.3) (0.4) (0.8) (0.5) ケ"ムシタビン 0.0090 0.0039 0.0053 0.0032 0.0040 0.0040
(0.4) (0.6) (0.4) (0.4) (0.4) (0.4) ドキリルビシン 0.10 0.19 0.14 0.12 0.22 0.057 0.049
(1.9) (1.4) (1.3) (2.3) (0.6) (0.5) マ仆マイシン C 0.11 0.13 0.11 0.0029 0.15 0.11 0.047
(1.2) (1.1) (0.3) (1.4) (1.0) (0.4) 実施例 4： A549/SN- 38細胞の RT-PCR解析
A549細胞、 A54.9/SN- 38細胞 6株および BCRPを発現していることが知られるヒ卜 乳癌 MCF- 7細胞における各種薬剤輸送蛋白質の mRNAの発現を RT-P CR法により解析 した。 細胞より RNA抽出用試薬 US0GEN (商標名） 、 二ツボンジーン製〕 を用い て全 RNAを抽出し、 RT-PCR用試薬 [Ready To Go RT-PCR Beads (商標名）、 アマシ ャム フアルマシア バイオテク （Amersham Pharmacia biotech) 製〕 およびサ 一マルサイクラ一 CiCyc ler (商標名） 、 バイオ 'ラッド （BIO- RAD) 製〕 を使用 して添付の操作手順に従って RT-PCRを行った （全 RNA: O. g) 。 PCR産物は、 2% ァガロースゲルを用いて電気泳動後、 ェチジゥムブ口マイド染色を施してトラン スイルミネーターにて検出した。 また、 リアルタイム RT-PCR用試薬 〔SYBR Green RT-PCR Reagents (商標名） 、 アプライド バイオシステムズ （Appl ied Biosys tems) 製〕 および PCRプロダクト自動検出 Z定量システム 〔ABI PRISM 7000 (商 標名） 、 アプライド バイオシステムズ製〕 を使用して添付の操作手順に従って リアルタイム RT- PCR法を行い、 定量的な解析を行った （全 RM O. l g) 。 なお、 BCRP、 MDRK MRPK MRP 2, MRP3および内在性コント口一ル遺伝子の G3PDHに対す る各 PCRプライマーは、 それぞれ公知の mRM塩基配列 （ァクセッション番号 AF09 8951、 AF016535, L05628, U63970, 删9670、 M33197) よりデザインした。 RT-P CRの結果を図 2に、 リアルタイム RT- PCRの結果を図 3に示す。 A549細胞に比較して A549/SN- 38細胞 6株では全てにおいて BCRPの発現が顕著に増加していた。 一方、 B CRPと同じく SN- 38を基質とする MRP2の発現量に大きな違いは認められなかった。 また、 その他の薬剤輸送蛋白質についても A549細胞および A549/SN- 38細胞間で発 現量に違いは認められなかった。 これらの結果から、 BCRPが A549/SN-38細胞の抗 癌剤耐性機構に関与することが示唆された。 なお、 本 RT- PCR解析で、 ヒト乳癌 MC F-7細胞における BCRP発現も確認された。 一方、 薬剤輸送蛋白質の発現の他に も、 トポイソメラ一ゼ- 1、 トポイソメラ一ゼ- I I、 Bd- 2、 Baxおよび I κ Β αの発 現をウェスタンブロット法により、 トボイソメラーゼ- 1活性について DNA弛緩反 応を指標に検討したが、 これら力 ¾ 549/SN-38細胞の抗癌剤耐性機構に関与するこ とを示唆するデータは得られなかつた。
実施例 5： A549/SN-38細胞の抗癌剤蓄積量
Α549細胞または A549/SN-38- 4細胞 (4 X 106 cel l s/ml) を懸濁した 10% FBS/R 匪 640 1mlに SN- 38 DMS0溶液 1 1 (最終濃度: 300 ng/ml) を加えて 37°Cにて 60 分間インキュベート後、 遠心 （2° (：、 1, 400 g、 1 min) して上清を除去した。 沈殿した細胞に氷冷 PBSを加えて再懸濁後、 遠心 （2°C、 1, 400 X g、 1 min) して 細胞を洗浄した。 この洗浄操作をさらに 1回行った後、 PBS を加えて超音 波処理により細胞を破壌した。 この細胞破壊液にメ夕ノール 375 /i 1および 10%硫 酸亜鉛溶液 15 lを加えて攪拌後、 遠心 （2°C、 12, 500 x g、 5 min) して上清を 回収した。 蛍光強度測定用の白色 96ウェルマイク口プレートに回収した上清を分 注後 （200 x/wel l) 、 マイクロプレート蛍光光度計 〔SPECTRA max GEMINI XS (商標名） 、 モレキュラー デバイス（Molecular Devices)製〕 により上清中の S N - 38および SN-38グルクロン酸抱合体量を測定し （SN-38：励起波長 38G 腹、 測定 波長 560 nm ； SN- 38グルクロン酸抱合体：励起波長 370 nm、 測定波長 430 nm) 、 細胞内の蓄積量を算出した。 その結果、 図 4に示すように、 A549/SN- 38-4細胞の S N- 38蓄積量は A549細胞における蓄積量に比較して約 1/5に減少していた。 この結 果は A549/SN 38細胞の抗癌剤耐性機構に BCRPが関与することを支持するものであ る。 一方、 SN- 38グルクロン酸抱合体は両細胞においてほとんど検出されず、 グ ルク口ン酸抱合活性の耐性機構への関与はないことが示された。
実施例 6：ジフエ二ルァクリロニトリル誘導体による A549/SN- 38- 4細胞の抗癌剤 耐性に対する克服作用
BCRPにより抗癌剤耐性を獲得したヒト肺癌 A549/SN- 38-4細胞を用いて、 BCRP関 与の抗癌剤耐性に及ぼすジフエ二ルァクリロニトリル誘導体の作用を検討した。 ヒト肺癌 A549細胞または A549/SN- 38- 4細胞を 10% FBS/Ham' s F-12に懸濁し、 96 ウェルマイク口プレートに播種して 5% C02、 37°C条件下で培養した （2 X 103 c el l s/50 x l/ el l) 。 ー晚培養後、 ジフエニルアクリロニトリル誘導体および SN - 38、 またはミトキサン卜ロンを溶解した 10% FBS/Ham' s F- 12をそれぞれ 25 I加 え、 5% C02、 37°C条件下で 48時間培養した。 培養後、 Tet raCo l or ONEを使用し て、 添付の操作手順に従って生細胞数を測定した。 ジフエニルアクリロニトリル 誘導体 （化合物 1) の SN- 38またはミトキサントロン耐性に対する克服作用を図 5 に、 また各誘導体の SN- 38耐性に対する克服作用を表 3に EC5。値で示した。 なお、 EC5fi値は、 相対耐性度を 50%低下させる時のジフエ二ルァクリロニトリル誘導体 の濃度である。 相対耐性度は、 A549/SN-38- 4細胞における IC5。値 （細胞増殖を 5 0%抑制する抗癌剤の濃度） を A549細胞における IC5D値で除した値であり、 この値 が大きいほど耐性獲得が大きいことを意味する。 その結果、 ジフエ二ルァクリロ 二トリル誘導体は A549/SN-38- 4細胞の SN- 38およびミトキサント口ン耐性に対し て強力な克服作用を示した。 一方、 濃度依存的に耐性を克服する濃度範囲におい て、 ジフエ二ルァクリロニトリル誘導体自体は A549細胞および A549/SN-38- 4細胞 の増殖に影響を及ぼさなかった。 この結果は、 本発明のジフエ二ルァクリロニト リル誘導体が BCRPを阻害し、 癌細胞の抗癌剤耐性を克服することを示唆するもの である。
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55 0.015
56 0.016
57 0.037
58 0.033
59 0.043
60 0.064
61 0.024
62 0.11
63 0.024
64 0.010
65 0.20
66 0.71
67 0.065
68 0.048
69 0.13
70 0.24
71 0.29
72 0.028
73 1.0
74 〉1.0
75 〉1.0
76 0.82
77 0.30
78 0.053
79 0.017
実施例 7：ジフエ二ルァクリロニトリル誘導体による MCF- 7細胞の抗癌剤に対する 感受性増強作用
BCRPを発現していることが知られるヒト乳癌 MCF-7細胞 (Blood 99, 3763-3770 (2002) ) を用いて、 癌細胞の抗癌剤に対する感受性に及ぼすジフエニルァクリ ロニトリル誘導体の作用を検討した。 MCF-7細胞を 10% FBS/RPMI 1640に懸濁し、 9 6ウェルマイク口プレートに播種して 5% C02、 37T:条件下で培養した （3 X 103 cel l s/50 l/wel l) 。 一晩培養後、 ジフエニルアクリロニトリル誘導体および S N - 38を溶解した 10% FBS/RPMI 1640をそれぞれ 25 1加え、 5% C02、 37°C条件下で 4 8時間培養した。 培養後、 TetraCoI or (MEを使用して、 添付の操作手順に従って 生細胞数を測定した。 表 4にジフエ二ルァクリロニトリル誘導体による MCF-7細胞 の SN-38に対する感受性の変化を、 I C5Q値 （細胞増殖を 50%抑制する SN- 38の濃 度） で表した。 その結果、 ジフエニルアクリロニトリル誘導体は MCF- 7細胞の SN- 38に対する感受性を増強した。 一方、 濃度依存的に感受性を増強する濃度範囲に おいて、 ジフエ二ルァクリロニトリル誘導体自体は MCF- 7細胞の増殖に影響を及 ぼさなかった。 この結果は、 本発明のジフエ二ルァクリロニトリル誘導体が BCRP を阻害し、 抗癌剤に対する癌細胞の感受性を増強することを示唆するものであ る。
表 4 化合物 化合物濃度 g/ml)
0 0.1 1.0
SN - 38:IC5。 g/ml)
1 0.021 0.010 0.0048
3 0.012 0.011 0.0026
4 0.011 0.0083 0.0023
5 0.014 0.015 0.0042
6 0.020 0.015 0.010
7 0.017 0.013 0.0041
8 0.022 0.026 0.010
9 0.027 0.012 0.0060
11 0.012 0.0032 0.0032
13 0.016 0.0066 0.0058 実施例 8：ジフエ二ルァクリロニトリル誘導体によるヒト BCRP遺伝子導入マウス 白血病 P388細胞の抗癌剤耐性に対する克服作用
マウス白血病 Π88細胞またはヒト BCRP遺伝子導入 P388細胞 （P388/BCRP細胞、 財団法人癌研究会癌化学療法センター 杉本芳一氏より入手） を 10% FBS/RPMI16 40に懸濁して 96ウェルマイク口プレートに播種後 (1 X 104 cells/50 l/wel 1) 、 ジフエ二ルァクリロニ卜リル誘導体および SN-38を溶解した 10¾ FBS/RPNI16 40をそれぞれ 25 1加え、 5% C02、 37 条件下で 48時間培養した。 培養後、 Tetra Color ONEを使用して、 添付の操作手順に従って生細胞数を測定した。 その結果 を図 6に示す。 ジフエ二ルァクリロニトリル誘導体は P388/BCRP細胞の SN-38耐性 に対して強力な克服作用を示した。 一方、 P388細胞の SN-38に対する感受性に対 しては影響を及ぼさなかった。 この結果は、 本発明のジフエ二ルァクリロ二トリ ル誘導体に BCRP阻害作用があることを確証づけるものである。 実施例 9：ジフエ二ルァクリロニトリル誘導体による MES- SA/Dx5細胞の多剤耐性 に及ぼす作用
ヒト子宮癌 MES-SA細胞または P-糖蛋白質を高発現して多剤耐性を獲得した MES - SA/Dx5細胞 [Cancer Res. 45, 4091-4096 (1985) 〕 を 10% FBS/DMEMに懸濁し、 9 6ウェルマイク口プレートに播種して 5% C02、 37°C条件下で培養した （3 X 103 cel ls/50 x l/wel l) 。 一晩培養後、 ジフエニルアクリロニトリル誘導体およびパ クリタキセルを溶解した 10% FBS/DMEMをそれぞれ 25 1加え、 5% C02、 37 条件 下で 48時間培養した。 培養後、 TetraCoIor ONEを使用して、 添付の操作手順に従 つて生細胞数を測定した。 各ジフェニルァクリロ二トリル誘導体の多剤耐性に及 ぼす作用を表 5に EC5。値で示す。 なお、 EC5。値は、 相対耐性度を 50%低下させる時 のジフエニルアクリロニトリル誘導体の濃度である。 その結果、 検討した濃度範 囲において、 ジフエ二ルァクリロニトリル誘導体は MES-SA/DX5細胞のパクリタキ セル耐性に影響を及ぼさなかった。 また、 ジフエ二ルアクリロニトリル誘導体自 体は MES-SA細胞および ¾ES-SA/Dx5細胞の増殖に影響を及ぼさなかった。 この結果 から、 本発明のジフエ二ルァクリロニトリル誘導体は P-糖蛋白質には作用せず、 BCRPに対して特異性を有することが示された。
表 5 化合物 耐性克服作用
EC50 (^g/ml)
1 〉1.0
2 >1.0
3 〉1.0
4 >1.0
5 〉1.0
6 >1.0
7 >1.0
8 >1.0
9 >1.0
10 〉1.0
11 〉1.0
12 >1.0
13 >1.0
14 〉1.0
15 >1.0
16 >1.0 実施例 10：ジフエニルァクリロニトリル誘導体による BCRP発現細胞の抗癌剤蓄積 量に及ぼす作用
P388細胞および P388/BCRP細胞 (1 X 107 cells/ml) 、 または MCF- 7細胞 (3 X 106 cells/ml) を懸濁した 10% FBS/RPMI1640 1mlにジフエ二ルァクリロニト リル誘導体および SN- 38 (最終濃度： 500 ng/ml) を加えて 37°Cにて 60分間インキ ュべ一ト後、 遠心 （2° (、 1,400 X g、 1 min) して上清を除去した。 沈殿した細 胞に氷冷 10% FBS/RPMI1640を加えて再懸濁後、 遠心 (2。 (：、 1,400 x g、 1 min) して細胞を洗浄した。 この洗浄操作をさらに 1回行った後、 PBS 375 / lを加えて 超音波処理により細胞を破壊した。 この細胞破壌液にメタノール 375 および 1 0%硫酸亜鉛溶液 15 x lを加えて攪拌後、 遠心 （2°C：、 12, 500 x g、 5 min) して上 清を回収した。 蛍光強度測定用の白色 96ウェルマイク口プレートに回収した上清 を分注後 （200 ^/wel l) 、 マイクロプレー卜蛍光光度計により上清中の SN- 38量 を測定し （SN- 38：励起波長 380 nm、 測定波長 560 nm) 、 細胞内の蓄積量を算出 した。.その結果、 図 7に示すように、 本発明のジフエ二ルアクリロニトリル誘導 体は P388/BCRP細胞の SN- 38細胞内蓄積量を増加させた。 また、 図 8に示すよう に、 本発明のジフエ二ルァクリロニトリル誘導体は MCF- 7細胞の SN- 38蓄積量を増 加させた。 この結果は、 本発明のジフエ二ルアクリロニトリル誘導体が BCRPを阻 害し、 抗癌剤の細胞内取り込み量を増加させることを示唆するものである。 実施例 11：ジフエニルアクリロニトリル誘導体の in vivoにおける抗癌剤耐性克 服効果
6週齢の CDF,系、 雌マウス (5匹/群) の腹腔内に、 Π88細胞または P388/BCRP (1 X 106 cel ls/mouse) を移植し、 ジフエ二ルアクリロニトリル誘導体および 塩酸イリノテカン （CPT- 11) を腫瘍移植 1日後より 10日後まで 1日 1回、 計 10回腹 腔内に投与した。 なお、 ジフエ二ルアクリロニトリル誘導体は生理食塩水、 また はエタノール、 ポリオキシエチレン（20)ソルビタンモノォレエート CTween 80 (商標名） 、 東京化成工業製〕 および 5% グルコース混合液 （エタノール I Twee n 80 / 5% ダルコ一ス = 5 : 5 : 90または 5 ： 7. 5 ： 87. 5) に溶解または懸濁 し、 CFT-11は生理食塩水に溶解して投与し、 対照群には溶媒のみを投与した。 腫 瘍移植後のマウスの生存日数を調べ、 次式より延命率 T/C (¾) を求め、 抗腫瘍効 果を判定した。
延命率 T/C (%) =
(投与群マウスの平均生存日数） ÷ (対照群マウスの平均生存日数） X 100 結果を表 6、 7および 8に示す。 本発明のジフエ二ルアクリロニトリル誘導体は in vivoにおいても BCRPを阻害し、 抗癌剤耐性克服効果を発揮することが示され た。
表 6 化合物 投与量 （mg/kg/day) 生存日数 T/C
化合物 CPT-11 平均 土 (%)
ι¾、 'iiH
1 100 20 19.4 土 1.1 162
3 , 100 20 19.8 土 0.8 165
5 100 20 19.2 + 1.1 160
7 100 20 20.0 土 0.7 167
8 100 20 19.2 土 0.8 160
11 100 20 19.4 土 0.5 162
13 100 20 20.6 + 0.9 172
16 100 20 19.2 土 0.4 160 溶媒 0 20 14.6 土 0.5 122 溶媒 0 0 12.0 ± 0.7 100
化合物 投与量 (mg/kg/day; 生存日数 T/C 化合物 CPT-11 平均土 (%) 標準偏差
57 100 20 18.8 + 0.8 145
68 100 20 18.8 土 2.9 145 溶媒 0 20 12.8 土 0.4 98 溶媒 0 0 13.0 土 1.2 100 表 8
化合物 投与量 （mg/kg/day) 生存日数 T/C 化合物 CPT-11 干 土 V)
60 100 20 20.2 土 0.8 151
69 100 20 19.0 + 2.3 142 溶媒 0 20 12.8 土 0.4 96 溶媒 0 0 13.4 + 0.5 100
実施例 12
以下に示す成分を混和して、 その混和物を打錠した
表 9 化合物 1 100 mg
乳糖 100 mg
バレイショデンプン 39 rag
微結晶セルロース 30 mg
合成ケィ酸アルミニウム 30 mg
ステアリン酸カルシウム 1 mg
(1錠分） 300 mg 本発明のジフエ二ルァクリロニトリル誘導体の BCRP阻害作用によって、 BCRPが 関与する抗癌剤耐性を克服することが可能となる。 また、 もとから BCRPを発現す る癌に対して抗癌剤の効果を増強することが可能である。 さらには抗瘡剤のバイ オアべィラピリティを向上させることも期待され、 癌化学療法における治療成績 の向上につながることが期待される。

Claims

請求の範囲
1 . 下記式 （1)
7 2
Figure imgf000075_0001
(1)
式中、 8個の Rは同一又は異なり、 それぞれ独立して水素原子、 水酸基、 ニトロ 基、 アミノ基、 ァセチルァミノ基 (- NHC0CH3基）、 シァノ基 (-CN基）、 ホルミル基 (- CH0基）、 - COORt基 ( =水素原子、 C1〜C4アルキル基)、 -0 (CH2) nCOOR2基 (n=l〜7 : R2=水素原子、 C1〜C4アルキル基）、 - OOCH2CH2COOR3基 (R3=水素原子、 C1〜C4アル キル基、 （Z)— 2— （3， 4—ジメトキシーフエニル） 一 3— （4—ヒドロキシ 一フエニル） —アクリロニトリル、 グリコビラノシル基）、 C1〜C8アルコキシ 基、 C1〜C4アルキル基、 ハロゲン原子、 C1〜C4アルコキシ C1〜C4アルコキシ Cl〜 C4アルコキシ基、 C2〜C8ァシルォキシ基、 C2〜C8ハロゲノアシルォキシ基、 メチ レンジォキシ基、 トリフルォロメチル基、 リン酸基（- 0P (0) (OH) 2)およびその 塩、 硫酸基 (- 0S03H)およびその塩、 グリコピラノシル基およびその塩、 グリコピ ラノシル基のリン酸エステルおよびその塩、 グリコビラノシル基の硫酸エステル およびその塩又はピペリジノピペリジノカルポ二ルォキシ基を示す。 ]で表され るジフエ二ルァクリロニトリル誘導体又はその塩を有効成分とする乳癌耐性蛋白 阻害剤。
2. 請求項 1記載のジフエ二ルァクリロニトリル誘導体又はその塩を有効成分 とする抗癌剤耐性克服剤又は抗癌剤効果増強剤。
3. 請求項 1記載のジフエ二ルアクリロニトリル誘導体又はその塩、 および乳 癌耐性蛋白の基質となり得る抗癌剤を含有する抗癌剤。
4. 下記から選ばれたジフエ二ルァクリロ二トリル誘導体：
(Z)— 2— (3， 4ージメトキシーフエニル） 一 3— （4ーヒドロキシ一フエ二 ル） 一アクリロニトリル ;
[1, 4，] ビピぺリジニル— 1 '一力ルポキシリックァシッド - [ (Z) ― 2 ーシァノー 2— （3， 4—ジメトキシーフエニル） ービニル] 一フエニルエステ ル；
ァセティックアシッド 4一 [ (Z) —2—シァノー 2— (3， 4—ジメトキシー フエニル） ービニル] —フエニルエステル；
(Z) — 2— （3, 4—ジメトキシーフエニル） 一3— [4— (2—メトキシー エトキシメトキシ） 一フエニル] 一アクリロニトリル；
(Z) -2- (3, 4—ジメトキシ一フエニル） 一 3— （2—ヒドロキシ一フエ ニル） 一アクリロニトリル；
(Z) —2— (3, 4—ジメトキシ一フエニル） — 3— (4—ヒドロキシ _ 3— メトキシーフエニル） 一アクリロニトリル；
(Z) 一 3— (3， 4ージヒドロキシ一フエニル) 一 2— （3, 4—ジメトキシー フエニル） 一ァクリロニトリル；
(Z) 一 2— （3， 4—ジメトキシ一フエニル） 一 3— (3—ヒドロキシー 2一 メ卜キシーフエニル) 一アクリロニトリル；
(Z) 一 2— (3, 4—ジメトキシ一フエニル) - 3 - (4—ヒドロキシー 3, 5 一ジメチルーフエニル) 一アクリロニトリル；
(Z) ー2— （3， 4—ジメトキシ一フエニル） 一 3— （3—エトキシ一 4—ヒ ドロキシーフエニル） 一アクリロニトリル； (Z)- 2- (4一ブトキシ—フエニル） 一 3— （4—ヒドロキシ—フエニル） 一 ァクリロニ卜リリレ；
(Z) 一 3— （4—ヒドロキシ一フエニル） 一 2_ (3, 4， 5—トリメトキシー フエニル） 一アクリロニトリル；
(Z) —2— (3, 4ージメトキシ一フエニル） 一3— (4—ヒドロキシ一フエ ニル） 一アクリロニトリル,ナトリウム塩；
4-[ (Z) —2—シァノ一2— （3， 4—ジメトキシ一フエニル） ービニル]一 ベンゾニトリル；
(Z) 一 3— (2, 3—ジフルオローフエニル） —2— (3， 4—ジメトキシ— フエニル） 一アクリロニトリル；
(Z) 一 3— (2, 4ージフルオローフエニル） -2- (3, 4_ジメトキシ一 フエニル） 一アクリロニトリル；
(Z) —3— （2， 5—ジフルオローフエニル） —2— (3, 4—ジメトキシ一 フエニル） 一アクリロニトリル；
(Z) 一 3— （3， 4—ジフルオローフエニル） 一 2— （3, 4—ジメトキシ— フエニル） 一アクリロニトリル；
(Z) 一 3— (3, 5—ジフルオローフエニル） —2— (3, 4ージメトキシ— フエニル） 一アクリロニトリル；
(Z) 一 2— (3, 4ージメトキシ一フエニル） 一3— (2, 3， 4一トリフル オローフエニル） 一アクリロニトリル；
(Z) —2— (3, 4—ジメトキシーフエニル） 一3— (2, 3， 5—トリフル オローフエニル） —アクリロニトリル；
(Z) 一 2— (3, 4—ジメトキシ一フエニル） 一3— (2, 3， 6 - オローフエニル） —アクリロニトリル；
(Z) —2— （3， 4ージメトキシーフエニル） 一 3— (2, 4， 5- オローフエニル） —アクリロニトリル； (Z) -2- (3, 4ージメトキシ一フエニル） 一3— (3, 4， 5—トリフル オローフエニル） 一アクリロニトリル；
(Z) 一 3— (2, 6—ジフルオローフエニル） 一 2— (3, 4—ジメトキシ一 フエニル) —アクリロニトリル；
(Z) 一 2— （3， 4ージメトキシ一フエニル） 一 3— （3—二トロ—フエ二 ル） —アクリロニトリル；
(Z) - 3 - (4—ァミノ一フエニル) _2— (3, 4ージメトキシーフエ二 ル） 一アクリロニトリル；
[4- [ (Z) 一 2—シァノー 2— (3, 4ージメトキシーフエニル) —ビニ ル] ーフエノキシ] —ァセティックアシッド ェチルエステル；
4- [ (Z) _ 2—シァノ _ 2— (3, 4—ジメトキシ—フエニル) -ビエル] 一ベンゾィックァシッド メチルエステル；
(Z) 一 2— (3， 4—ジメトキシ一フエニル) — 3— (2—ニトロ—フエ二 ル） 一アクリロニトリル；
(Z) —3— (4—クロ口一 3—ニトロ一フエニル) -2- (3, 4—ジメトキ シーフエニル） 一アクリロニトリル；
(Z) 一 2— (3, 4—ジメトキシーフエニル） —3— （2—フルオロー 5_二 トロ一フエニル） 一アクリロニトリル；
(Z) 一 2— (3, 4ージメトキシーフエニル) - 3 - (4一エトキシー 3—二 トロ—フエニル) 一アクリロニトリル；
スクシニックアシッド 4 - [ (Z) 一 2—シァノ一 2— (3, 4ージメトキシ 一フエニル) 一ビエル] —フエニルエステル メチルエステル；
スクシニックアシッド 4- [ (Z) 一 2—シァノー 2— (3, 4—ジメトキシ 一フエニル) 一ビニル] 一フエニルエステル ェチルエステル；
スクシニックアシッド ビス— { 4 - - [ (Z) —2—シァノー 2 _ (3, 4—ジメ トキシーフエニル） 一ピニル] —フェニン (Z) - 2 - (3, 4ージメトキシフエ二ル） 一3— （4一 /3— D—ダルコビラ ノシル一フエニル） 一アクリロニトリル；
(Z) 一 2— (3, 4ージメトキシ一フエニル） 一 3— (4—ヒドロキシー 3— ニトロ—フエニル） 一アクリロニトリル；
(Z) —2— (3， 4ージメトキシーフエニル） 一 3— (6-ニトロ一べンゾ
[1, 3] ジォキソールー 5—ィル） 一アクリロニトリル；
(Z) -3- (3， 4—ジメトキシ一フエニル） 一2— [4一（2—メトキシーェ トキシメトキシ）一フエ二ル]—ァクリロニトリル；
(Z) - 2 - (3, 5—ビス一トリフルォロメチルーフエニル) 一 3— （4ーヒ ドロキシーフエニル） 一アクリロニトリル；
(E) - 2 - (3, 4—ジメトキシ—フエニル) - 3 - (4—ヒドロキシーフエ二 ル） 一アクリロニトリル；
(Z) 一 2— （3， 4ージメトキシフエニル） —3— (4一 β—マルトシルーフ ェニル） 一アクリロニトリル；
(Ζ) -2- (3, 4—ジメトキシ—フエニル) 一 3— (2—エトキシ一5—二 トロ一フエニル） 一アクリロニトリル；
(Ζ) -2- (3， 4—ジメトキシ一フエニル） 一3— （3—ヒドロキシー 4一 ニトロ一フエニル） 一アクリロニトリル；
(Ζ) 一 2— (3， 4—ジメトキシフエ二ル) 一 3— (4— ) 3—マルトトリオシ ルーフエニル） 一アクリロニトリル；
(Ζ) —2— (3， 4—ジメトキシ—フエニル) - 3 - (3—フルオロー 2—ヒ ドロキシーフエニル） —アクリロニトリル；
(Ζ) - 2 - (3, 4ージメトキシーフエニル) 一 3— [3—フルオロー 4— (2—メトキシーエトキシメトキシ） 一フエニル]一アクリロニトリル； (Ζ) 一 2— (3， 4—ジメトキシーフエニル） 一3— （3—フルォロ一4—ヒ ドロキシーフエニル） —アクリロニトリル； ホスホリックアシッド モノー {4— [ (Z) 一 2—シァノー 2— （3, 4—ジ メトキシーフエ二ル） ービニル] 一フエ二ル} エステル，ナトリウム塩； ァセティックアシッド 4— [ (Z) 一 1ーシァノー 2— (3, 4—ジメトキシ —フエニル） ービニル] フエニルエステル；
(Z) —2— （3, 4—ジメトキシ—フエニル） —3— （4—ホルミル一フエ二 ル） 一アクリロニトリル；
ァセティックァシッド 4一 [ (Z) 一 1—シァノー 2— (3, 4—ジメトキシ
—フエニル） ービニル] 一 2—エトキシーフエニルエステル；
ァセティックアシッド 4- [ (Z) 一 1ーシァノー 2— (3, 4ージメトキシ 一フエニル) —ビエル] 一 2—フルオローフエニルエステル；
ァセティックアシッド 4- [ (Z) 一 2—シァノー 2— (3， 4， 5—卜リメ トキシーフエニル） ービニル] —フエニルエステル；
7 - [4一 [ (Z) 一 2—シァノー 2— (3, 4ージメトキシ—フエニル) —ビ ニル] ーフエノキシ] 一ヘプタノイツクァシッド ェチルエステル；
8—ブロモ一ォクタノイツクアシッド 4一 [ (Z) 一 1ーシァノー 2— (3, 4—ジメトキシーフエニル） —ビニル] 一フエニルエステル；
(Z) 一 3— (3—アミノーフエニル） 一2— (3, 4ージメトキシ一フエ二 ル） ーァクリロ二トリリレ,塩酸塩；
ホスホリックァシッド モノ— {4_ [ (Z) —2—シァノー 2— （3, 4—ジ メトキシーフエニル) 一ピニル] 一 2—メトキシ—フエ二ル} エステル，ナトリ ゥム塩；
ホスホリックアシッド モノー {4_ [ (Z) —2—シァノー 2— (3, 4—ジ メトキシ—フエニル) ーピニル] 一フエ二ル} エステル；
ホスホリックアシッド モノー {4一 [ (Z) 一 2—シァノー 2_ (3, 4—ジ メトキシ一フエニル） ービニル] 一 2—メトキシーフエ二ル} エステル；
N— [3- [ (Z) 一 2—シァノー 2— （3， 4ージメトキシーフエニル） ービ ニル] 一フエニル] —ァセトアミド；
(Z) 一 2— (3， 4ージメトキシフエ二ル） 一 3— 「4— (6—ホスホ一 ]3— D—ダルコピラノシル） 一フエニル」 —アクリロニトリル；
スルホリックアシッド モノ一 {4一 [ (Z) 一 2—シァノー 2— (3, 4—ジ メトキシーフエニル） 一ビエル] 一フエ二ル} エステル， トリェチルアンモニゥ ム: ；
(Z) -2 - (3， 4—ジメトキシフエ二ル) 一 3— 「4— (6—ホスホ一 ;3— D_ダルコピラノシル） 一フエニル」 —アクリロニトリル，ナトリウム塩；
(Z) — 2— (3, 4—ジメトキシ—フエニル） 一3— （2—ヒドロキシ一 5— ニトロ一フエニル） 一アクリロニトリル；
(Z) -2- (3, 4ージメトキシーフエニル） _3— （4一フルオロー 3—二 トロ—フエニル） 一アクリロニトリル；
(Z) 一 2— （3, 4—ジメトキシ一フエニル） _3— （3—ヒドロキシー 4， 5—ジメトキシーフエニル） 一アクリロニトリル;及び
(Z) 一 2— (3， 4—ジメトキシ一フエニル） 一 3— （4ーヒドロキシ一 3, 5—ジメトキシーフエニル） —アクリロニトリル。
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