Verwendung von Triazolverbindungen zur Prophylaxe und Therapie neurodegenerativer Erkrankungen, Hirntrauma und zerebraler Ischämie
Beschreibung
Die Erfindung betrifft die Verwendung von Triazolverbindungen zur Prophylaxe und Therapie neurodegenerativer Erkrankungen, Hirn- trauma und zerebraler Ischämie, insbesondere Schlaganf ll, und den durch diese Erkrankungen hervorgerufenen Folgeerkrankungen.
Neurodegenerative Erkrankungen wie Multiple Sklerose und Alzheimer, Hirntrauma und zerebrale ischämische Ereignisse, vor allem Gehirnschlag, sowie deren Folgeerkrankungen sind ernste und zur Zeit nur schwer durch Medikamente zu therapierende Erkrankungen.
Verschiedentlich wurde darüber berichtet, dass Verbindungen, die eine Affinität zu 5-HTιA-Rezeptoren aufweisen und die insbesondere als 5-HTiA-Agonisten wirken, zur Behandlung von neurodegenerativen Störungen, zur Therapie von Hirntrauma sowie zur Therapie und Prophylaxe zerebraler, ischämischer Ereignisse, insbesondere Schlaganfall (Hirninfarkt, Hirnschlag), sowie deren Folgeerkrankungen geeignet sind: Siehe die Arbeiten von SMITHKLINE BEECHAM (EP-A 345 948), BAYER/TROPON (EP-A 749 970; De Vry et al . , Drugs of the Future 1997, 22(4), S. 341-349) und SUNTORY (WO 96/24594, WO 99/03847) .
Die DE-A 19900545 und die DE 10031390.6 beschreiben 3-substi- tuierte Thieno[2,3-b]pyrimidin-4-one und deren Derivate, die zur Behandlung und Prophylaxe von Neurodegeneration, Hirntrauma und zerebraler Ischämie, insbesondere Schlaganfall, bzw. den durch diese Krankheiten hervorgerufenen Folgeerkrankungen geeignet sind.
Die WO 99/02503 beschreibt Triazolverbindungen und deren Verwendung zur Behandlung von Erkrankungen des zentralen Nervensystems , Die dort beschriebenen Verbindungen sind selektive Dopamin-D3-Re- zeptorliganden .
Es wurde überraschenderweise gefunden, dass Triazolverbindungen der allgemeinen Formel I
worin
Ar1 für Phenyl, Naphthyl, einen 5- oder 6-gliedrigen heteroaroma- tischen Ring mit 1, 2, 3 oder 4 Heteroatomen, die unabhängig voneinander ausgewählt sind unter 0, S und N, Indolyl, Benzo- furanyl oder Benzothienyl steht, wobei Ar1 gegebenenfalls 1 oder 2 Substituenten aufweist, die unabhängig voneinander ausgewählt sind unter Ci-Cβ-Alkyl, das gegebenenfalls durch Fluor oder Phenyl substituiert ist, Hydroxy, Cι-C6-Alkoxy, C -C6-Alkenyl, C3-C6-Cycloalkyl, Halogen, CN, COOR2, NR3R4, N02, S02R5, S02NR3R4 und Phenyl, das gegebenenfalls durch Cι-C6-Alkyl, Ci-Cδ-Alkoxy, Cι-C6-Alkoxy-Cι~C6-alkyl, CN, CF3, CHF2, oder Halogen substituiert ist;
A für geradkettiges oder verzweigtes Alkylen mit 3 bis 10 C- Atomen oder für Alkylen mit 2 bis 10 C-Atomen und wenigstens einem weiteren Kettenglied Z steht, das ausgewählt ist unter O, S, S(0), S(0)2 und CO, wobei Alkylen gesättigt oder eine Doppelbindung aufweisen kann;
J_=_!_ eine Einfachbindung oder eine Doppelbindung bedeutet,
R1 für H, C3-C6-Cycloalkyl oder Cι-C6-Alkyl, das gegebenenfalls durch OH, Cι-C6-Alkoxy, Fluor oder Phenyl substituiert ist, steht;
die Reste R2, R3, R4 und R5, die gleich oder verschieden sein können, für H oder Cι-C6-Alkyl, das gegebenenfalls durch OH, OCi-Cg-Alkyl oder Phenyl substituiert ist, stehen, oder zwei Reste R3, R4 gemeinsam mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, einen gesättigten 5- oder 6-gliedrigen Stickstoffheterocyclus bilden, der gegebenenfalls eine NH-, N- Cι-C4-Alkylgruppe oder ein Sauerstoffatom als Ringglied auf- weisen kann, wobei R5 auch Phenyl oder Tolyl bedeuten kann;
R6 CHF2, CF3, CF2C1, Cl oder Cι-C6-Alkyl bedeutet und
R7 für Wasserstoff, CHF2, CF3, CF2Cl, Cl oder Cι-C6-Alkyl steht;
sowie deren Salze mit physiologisch verträglichen Säuren eine hohe Affinität zu 5-HTiA-Rezeptoren aufweisen und daher zur Prophylaxe und Therapie der eingangs erwähnten Erkrankungen geeignet sind.
Die Erfindung betrifft somit die Verwendung von Triazolverbindungen der oben definierten Formel I sowie von deren Salzen mit physiologisch verträglichen Säuren zur Prophylaxe und Therapie von Neurodegeneration, insbesondere von Hirntrauma, zerebraler Ischä- mie und Schlaganfall sowie den durch diese Krankheiten hervorgerufenen Folgeerkrankungen und zur Herstellung eines Medikaments für die Therapie und Prophylaxe dieser Erkrankungen.
Erfindungsgemäß verwendet man zur Behandlung der vorstehend ge- nannten Indikationen wenigstens eine Verbindung der allgemeinen Formel I mit den eingangs genannten Bedeutungen. Sofern die Verbindungen der Formel I ein oder mehrere Asymmetriezentren aufweisen, können auch Enantiomerengemische, insbesondere Racemate, Diastereomerengemische, Tautomerengemische, vorzugsweise jedoch die jeweiligen im Wesentlichen reinen Enantiomere, Diastereomere und Tautomere eingesetzt werden.
Ebenfalls brauchbar sind physiologisch verträgliche Salze der Verbindungen der Formel I, vor allem Säureadditionssalze mit phy- siologisch verträglichen Säuren. Als physiologisch verträgliche organische und anorganische Säuren kommen beispielsweise Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Phosphorsäure, Schwefelsäure, Oxalsäure, Maleinsäure, Fumarsäure, Milchsäure, Weinsäure, Adipin- säure oder Benzoesäure in Betracht. Weitere brauchbare Säuren sind in Fortschritte der Arzneimittelforschung, Band 10, Seiten 224 ff., Birkhäuser Verlag, Basel und Stuttgart, 1966, beschrieben.
Der Begriff "Halogen" umfasst ein Fluor-, Chlor-, Brom- oder Iod- ato und insbesondere ein Fluor- oder Chloratom.
Begriffe wie Cn-Cm-Alkyl, Cn-Cm-Alkoxy, etc. umfassen geradkettige oder verzweigte Kohlenwasserstoffgruppen, wobei das Präfix Cn~Cm jeweils die mögliche Anzahl von Kohlenstoffatomen in der Gruppe angibt. So stehen beispielsweise:
Cι-C4-Alkyl für: Methyl, Ethyl, n-Propyl, Isopropyl, n-Butyl, 2-Butyl, Isobutyl und tert.-Butyl;
- Cx-Cδ-Alkyl z.B. für: Cι-C4-Alkyl wie vorstehend genannt, sowie z.B. n-Pentyl, 2-Pentyl, 2-Methylbutyl, 3-Methylbutyl, 2,2-Dimethylpropyl, 1-Ethylpropyl, n-Hexyl, 1, 1-Dimethylpro-
pyl, 1,2-Dimethylpropyl, 1-Methylpentyl, 2-Methylpentyl, 3-Methylpentyl, 4-Methylpentyl, 1, 1-Dimethylbutyl, 1,2-Dime- thylbutyl, 1,3-Dimeth lbutyl, 2 ,2-Dimethylbutyl, 2, 3-Dimethylbutyl, 3 ,3-Dimeth lbutyl, 1-Ethylbutyl, 2-Ethylbutyl, 1,1,2-Trimethylpropyl, 1, 2,2-Trimethylpropyl, 1-Ethyl-l-me- thylpropyl oder l-Ethyl-2-methylpropyl, vorzugsweise Methyl, Ethyl, n-Propyl, Isopropyl, n-Butyl, 2-Butyl, Isobutyl, tert.-Butyl, n-Pentyl oder n-Hexyl;
- Cι-C4-Alkoxy für: Methoxy, Ethoxy, n-Propoxy, Isopropoxy, n- Butoxy, 2-Butoxy, iso-Butoxy oder tert.-Butoxy, vorzugsweise für Methoxy, Ethoxy oder Isopropoxy;
Ci-Cδ-Alkoxy z.B. für: Cι-C4-Alkoxy wie vorstehend genannt, sowie z.B. n-Pentyloxy, 2-Pentyloxy, 2-MethyIbutoxy, 3-Me- thylbutoxy, 2,2-Dimethylpropoxy, 1-Ethylpropoxy, n-Hexoxy, 1, 1-DimethyIpropoxy, 1,2-Dimethylpropoxy, 1-Methylpentoxy, 2-Methylpentoxy, 3-Methylpentoxy, 4-Methylpentoxy, 1,1-Dime- thylbutoxy, 1,2-Dimethylbutoxy, 1, 3-DimethyIbutoxy, 2,2-Dime- thylbutoxy, 2, 3-Dimeth Ibutoxy, 3 , 3-Dimethylbutoxy, 1-Ethyl- butoxy, 2-EthyIbutoxy, 1, 1,2-TrimethyIpropoxy, 1,2,2-Trime- thylpropoxy, 1-Ethyl-1-methyl ropoxy oder l-Ethyl-2-methyl- propoxy, vorzugsweise Methoxy, Ethoxy, n-Propoxy, Isopropoxy, n-Butoxy, tert.-Butoxy, n-Pentyloxy oder n-Hexyloxy.
Zu substituierten "Alkyl, Alkoxy, etc." gehören insbesondere:
partiell oder vollständig durch Halogen wie Fluor, Chlor, Brom und/oder lod substituiertes C1-C4-Alkyl (= Cι-C4-Haloge- nalkyl), also z.B. CH2F, CHF2, CF3, CH2C1, Dichlormethyl,
Trichlormethyl, Chlorfluormethyl, Dichlorfluormethyl, Chlor- difluormethyl, 2-Fluorethyl, 2-Chlorethyl, 2-Bromethyl, 2-Io- dethyl, 2,2-Difluorethyl, 2,2,2-Trifluorethyl, 2-Chlor-2-fluorethyl, 2-Chlor-2 ,2-difluorethyl, 2,2-Dich- lor-2-fluorethyl, 2, 2 ,2-Trichlorethyl, C2Fs, 2-Fluorpropyl,
3-Fluorpropyl, 2, 2~Difluorpropyl, 2,3-Difluorpropyl, 2-Chlor- propyl, 3-Chlorpropyl, 2 , 3-Dichlorpropyl, 2-Brompropyl, 3-Brompropyl, 3, 3 ,3-Trifluorpropyl, 3,3,3-Trichlσrpropyl, 2,2,3,3,3-Pentafluorpropyl, Heptafluorpropyl, l-(Fluorme- thyl)-2-fluorethyl, 1-(Chlormethyl )-2-chlorethyl, l-(Bromme- thyl)-2-bromethyl, 4-Fluorbutyl, 4-Chlorbutyl, 4-Brombutyl oder Nonafluorbutyl, wobei durch Fluor substituiertes Alkyl und insbesondere CF3, CHF2, CF2C1 und CH2F besonders bevorzugt sind;
partiell oder vollständig durch Fluor, Chlor, Brom und/oder lod substituiertes Cι-C6-Alkyl (Ci-Cδ-Halogenalkyl) , also z.B. einen der unter C!-C4-Halogenalkyl genannten Reste sowie für 5-Fluor-l-pentyl, 5-Chlor-l-pentyl, 5-Brom-l-pentyl, 5-Iod-l-pentyl, 5,5, 5-Trichlor-l-pentyl, Undecafluorpentyl,
6-Fluor-l-hexyl, 6-Chlor-l-hexyl, 6-Brom-l-hexyl, 6-Iod-l-he- xyl, 6, 6 ,6-Trichlor-l-hexyl oder Tridecafluorhexyl;
durch Hydroxy substituiertes Cx-Cö- lkyl, insbesondere C1-C4- Alkyl (Hydroxy-Ci-Cß-alkyl) also z.B. Hydroxymethyl,
2-Hydroxyeth-l-yl, 2-Hydroxy-prop-l-yl, 3-Hydroxy-prop-l-yl, l-Hydroxy-prop-2-yl, 2-Hydroxy-but-l-yl, 3-Hydroxy-but-l-yl, 4-Hydroxy-but-l-yl, l-Hydroxy-but-2-yl, l-Hydroxy-but-3-yl, 2-Hydroxy-but-3-yl, l-Hydroxy-2-methyl-prop-3-yl, 2-Hydroxy-2-methyl-prop-3-yl oder 2-Hydroxymethyl-prop-2-yl, insbesondere für 2-Hydroxyethyl;
durch Alkoxy - wie vorstehend genannt - insbesondere durch Methoxy oder Ethoxy substituiertes Ci-Cö-Alkyl, insbesondere Cι-C4-Alkyl (Alkoxy-Cι-C6-alkyl) , also z.B. CH2-OCH3,
CH2-OC2H5, n-Propoxymethyl , CH2-OCH(CH3)2, n-Butoxymethyl, ( 1-MethyIpropox )meth 1, (2-Methylpropox )methy1, CH2-OC(CH3)3, 2- (Methoxy) ethyl, 2- (Ethoxy)ethyl, 2-(n-Propoxy)ethyl, 2-( 1-Methylethoxy) ethyl, 2-(n-Butoxy)ethyl, 2- ( 1-MethyIpropoxy) ethyl, 2-(2-Methylpropoxy)ethyl, 2-( 1, 1-Dimethylethoxy)ethyl, 2-(Methoxy)propyl, 2- (Ethoxy)propyl, 2- (n-Propoxy)propyl, 2-(l-Methylethoxy)pro- pyl, 2-(n-Butoxy)propyl, 2-( l-Methylpropoxy)propyl, 2-(2-Me- thylpropoxy) ropyl, 2-( 1, l-Dimethylethoxy)propyl, 3-(Me- thoxy)propyl, 3-(Ethoxy) ropyl, 3-(n-Propoxy)propyl, 3-(l-Me- thylethoxy)propyl, 3- (n-Butoxy)propyl, 3-( 1-Methylpro- poxy)propyl, 3- (2-MethyIpropoxy)propyl, 3-( 1, 1-Dimethyle- thoxy)propyl, 2- (Methoxy)butyl, 2- (Ethoxy)butyl, 2- (n-Propoxy)butyl, 2-( l-Methylethoxy)butyl, 2-(n-Butoxy)butyl, 2-(l-Methylpropoxy)butyl, 2-(2-Methylpropoxy)butyl,
2-(l,l-Dimethylethoxy)butyl, 3- (Methoxy)butyl, 3- (Ethox )bu- tyl, 3- (n-Propoxy)butyl, 3-( l-Methylethoxy)butyl, 3-(n-Bu- tox )b ty1, 3-( 1-Methylpropoxy)bu y1, 3-( 2-Methylpropox )bu- tyl, 3-(l,l-Dimethylethoxy)butyl, 4- ( ethox )butyl, 4- (Ethoxy)butyl, 4-(n-Propox )butyl, 4-( l-Methylethoxy)butyl, 4-(n-Butoxy)butyl, 4- ( 1-Methylpropoxy)butyl, 4-(2-Methylpro- poxy)butyl oder 4-( 1, l-Dimethylethoxy)butyl, vorzugsweise für CH
2-OCH
3, CH
2-OC
2H
5, 2-Methoxyethyl, 2-Ethoxyethyl, 2- (Methoxy) ropyl, 2- (Ethoxy) ropyl oder 3- (Methoxy) ropyl, 3- (Ethoxy)propyl;
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sind dabei vorzugsweise so angeordnet, dass jeweils die Carbonyl- gruppe an den Triazolring gebunden ist.
Beispiele für "5- oder 6-gliedrige aromatische heterocyclische Reste, die 1, 2, 3 oder 4 Heteroatome aufweisen, die ausgewählt sind unter O, S und N", sind vor allem Pyridinyl, Pyrimidinyl, Pyrazinyl, Triazinyl, I idazolyl, Pyrrolyl, Pyrazolyl, Thienyl, Furanyl, Oxazolyl, Thiazolyl, Isoxazolyl, Tetrazolyl, Thiadiazo- lyl und Triazolyl. Diese können an den Stickstoffato en sowie an den Kohlensto fatomen 1 oder 2 der vorgenannten Substituenten aufweisen. Sofern einer der Substituenten Hydroxy ist, können die Reste auch in einer tautomeren Form mit Carbonylgruppe vorliegen.
Im Hinblick auf die Verwendung der Verbindungen I zur Prophylaxe und Therapie der obengenannten Erkrankungen haben die Variablen Ar1, A, R1, R2 bis R5, R6 und R7 für sich alleine oder vorzugsweise in Kombination die folgenden Bedeutungen:
Ar1 Phenyl oder 5- oder 6-gliedriges Hetaryl, das 1, 2 oder 3 He- teroatome, ausgewählt unter N, 0 und S aufweisen kann, insbesondere Pyrrolyl, Thienyl, Furanyl, Thiazolyl, Imidazolyl, Oxazolyl, Tetrazolyl, Pyridinyl, Pyrazinyl, Pyrimidinyl, besonders bevorzugt für Hetaryl, das wenigstens ein Stickstoffatom und gegebenenfalls ein weiteres Heteroatom, ausgewählt unter N, O und S, aufweist, wobei Hetaryl in der vorstehend beschriebenen Weise substituiert sein kann. Insbesondere steht Ar1 für unsubstituiertes oder substituiertes Phenyl, Pyrrolyl, Thienyl, Thiazolyl, Pyridinyl, Pyrazinyl oder Pyrimidinyl und speziell für unsubstituiertes Phenyl, 2-Pyrrolyl, l-Methylpyrrol-2-yl, Pyridinyl, Thienyl oder Pyridazinyl. Bevorzugte Substituenten an Ar1 sind CN, CH3, OH, 0CH3, Halogen, Phenyl und tert.-Butyl. Insbesondere ist Ar1 unsubsti- tuiert oder weist einen oder zwei Substituenten auf, z.B. eine Methylgruppe, eine oder zwei Methoxygruppen;
A Z-C3-C6-Alkylen, das eine Doppelbindung aufweisen kann, insbesondere Z-CH2CH2-, Z-CH2CH2CH2-, -Z-CH2CH2CH2CH2- , -Z-CH2CH=CHCH2-, -Z-CH2C(CH3)=CHCH2-, -Z-CH2C(=CH2 )CH2-, -Z-CH2CH(CH3)CH-, wobei Z an den Triazolring gebunden ist. Z steht vorzugsweise für 0, SO oder S02 und insbesondere für S. Ganz besonders bevorzugt steht A für für S-(CH2)k steht mit k = 2, 3, 4 oder 5 und worin S an den Triazolrest gebunden ist. Weiterhin bevorzugt steht A für -(CH2)4-, -(CH2)s-, -CH2CH2CH=CHCH2-, -CH2CH2C (CH3 )=CHCH2- , -CHC (=CH2 )CH2- oder -CH2CH2CH(CH3)CH2-;
R1 Wasserstoff, Cι-C6-Alkyl, C3-C6-Cycloalkyl, insbesondere Ci-Cδ-Alkyl und speziell Methyl;
R2 Wasserstoff, Cι-C4-Alkyl, Hydroxy-Cι-C4-alkyl, Methoxy- Cι-C4-alkyl, Phenyl-C1-C4-alkyl;
R3 Wasserstoff, Cι-C4-Alkyl;
R4 Wasserstoff, Cι-C4-Alkyl, oder R3 und R4 bilden gemeinsam mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, einen Pyrroli- dinyl-, Morpholinyl- , Piperidinyl- oder Piperazinyl-Rest;
R5 Cι-C4-Alkyl, Phenyl oder Tolyl;
R6 in der meta-Position des Phenylrings gebundenes CHF2, CF3, Cl oder Cι-C4-Alkyl, insbesondere Trifluormethyl , speziell in meta-Position gebundenes Trifluormethyl;
R7 Wasserstoff oder Methyl.
.Ϊ..^. steht besonders bevorzugt für eine Doppelbindung. Besonders bevorzugt sind die Verbindungen der allgemeinen Formeln I-A.l, I-A.2, I-B.l und I-B.2, worin Ar1, R1, R6 und Z die zuvor genannten, insbesondere die als bevorzugt genannten Bedeutungen auf ei- sen, R7 für Wasserstoff steht, A' für C2-Cιo- und insbesondere für C3-Cg-Alkylen steht und A" für C3-Cιo- und insbesondere für C -Cξ- Alkylen steht, wobei Alkylen eine Doppelbindung aufweisen kann und insbesondere gesättigt ist.
In den Verbindungen der Formeln I-A.l und I-A.2 steht Z insbesondere für Schwefel. -A'- steht insbesondere für -CH2CH2-, -CH2CH2CH2-, -CH2CH2CH2CH2-, -Z-CH2CH=CHCH2-, -Z~CH2C (CH3)=CHCH2-, -Z-CH2C(=CH2)CH2- oder -Z-CH2CH(CH3)CH2-. In den Verbindungen der Formeln I-B.l und I-B.2 steht -A"- insbesondere für -(CH2)3-, -(CH2)4-, -(CH2)5-, -CH2CH2CH=CHCH2-, -CH2CH2C(CH3) =C.HCH2-, -CH2C(=CH2)CH2- oder -CH2CH2CH(CH3)CH2-.
Die Verbindungen der allgemeinen Formel I sind grundsätzlich aus der WO 99/02503 bereits bekannt. Solche Verbindungen, die dort nicht beschrieben sind, können grundsätzlich gemäß den in der WO 99/02503 beschriebenen Methoden hergestellt werden. Zur Herstellung der Verbindungen (I) bieten sich ausserdem insbesondere die nachstehend beschriebenen Verfahrenswege i) bis iv) an.
i) Umsetzung einer Verbindung der allgemeinen Formel (II)
worin Y1 für eine übliche Abgangsgruppe wie Halogen, z.B. Brom oder lod, Alkansulfonyloxy, Arylsulfonyloxy oder der- gleichen steht, mit einer Verbindung der allgemeinen Formel (III)
ii) Umsetzung einer Verbindung der allgemeinen Formel (IV)
10 worin Zl für O oder S und A1 für Cx-Cs-Alk len oder eine Bindung steht, mit einer Verbindung der allgemeinen Formel (V)
wobei Y1 die oben angegebene Bedeutung besitzt und A2 für 20 C2-C10-Alkylen steht, wobei A1 und A2 zusammen 3 bis 10 C-
Ato e aufweisen und A1 und/oder A2 gegebenenfalls wenigstens eine Gruppe Z umfassen; oder
iii) eine Verbindung der allgemeinen Formel (VI)
30 nach literaturbekannten Methoden umgepolt wird (Verfahren zur Umpolung von Aldehydgruppen siehe z.B. Albright Tetrahedron , 1983, 3_9_, 3207, D. Seebach Synthesis 1969, 17 und 1979, 19, H. Stetter Angew. Chem. Int . Ed. 1976, 15, 639, van Niel et ,5 al. Tetrahedron 1989, 45, 7643, Martin et al. Synthesis 1979, 633) und anschließend mit Verbindungen der allgemeinen Formel (VII)
45
wobei Y1 die oben angegebene Bedeutung besitzt und A3 für C3-C7-Alkylen steht, das eine Gruppe Z enthalten kann, kettenverlängert wird, wobei man nach Entschützen oder Reduktion Verbindungen der Formel ( I ' ) erhält
worin Z2 für CO oder eine Methylengruppe steht und Z2 und A2 zusammen 4 bis 8 C-Atome aufweisen, oder
iv) eine Verbindung der allgemeinen Formel (VI) mit einer Verbindung der allgemeinen Formel (VIII)
worin Y2 für ein Phosphoran oder einen Phosphonsäureester steht, nach üblichen Methoden, wie zum Beispiel beschrieben in Houben Weyl "Handbuch der Organischen Chemie" 4. Auflage, Thie e Verlag Stuttgart, Band V/lb S.383 ff oder Bd V/lc S.575 ff umgesetzt wird.
Die Verbindungen der Formeln II, IV und VI sowie Verbindungen vom Typ Ar1 und Ar2 sind aus dem Stand der Technik, z.B. aus der WO 99/02503, bekannt oder können nach bekannten Verfahren hergestellt werden wie beispielsweise beschrieben in s. Kubota et al. Chem . Pharm . Bull 1975,23, 955 oder A.R. Katritzky, C.W. Rees(ed-) "Comprehensive Heterocyclic Chemistry", Pergamon Press, oder "The Chemistry of Heterocyclic Compounds"' J. Wiley & Sons Inc. NY und der dort zitierten Literatur. Die Verbindungen der Formel III sind Ausgangsverbindungen zur Herstellung von Verbindungen der Formeln V und VII und VIII und werden durch Standard- methoden, wie z. B. beschrieben in J.A. Kiristy et al., J. Med. Chem . 1978, 21 , 1303 oder C.B. Pollard, J. Am. Chem. Soσ.1934, 56, 2199 hergestellt, oder indem man
a) eine Verbindung der allgemeinen Formel (IX)
Q-N γ3 < IX)
worin Q für H oder eine übliche Aminoschutzgruppe, z. B. Bu- tyloxycarbonyl, Benzyl oder Methyl, steht und Y3 für eine Abgangsgruppe, z. B. Triflat, Sn(Butyl) 3, B(0H)2, B(OR')2 oder Halogen, steht, mit einer Verbindung der allgemeinen Formel (X)
ϊ4^3R7 worin Y4 für einen Boronsaure- oder Boronester-Rest, z.B. für B(OH)2, B(OR')2 oder eine metallhaltige Abgangsgruppe, z. B. SnR3 (R = Butyl oder Phenyl) oder Zinkhalogenid steht, wenn Y3 für Halogen oder Trifluormethylsulfonyloxy steht oder Y4 für Halogen oder Trifluormethylsulfonyloxy steht, wenn Y3 für ei- nen Boronsaure- oder Boronester-Rest wie B(OH)2, B(OR') oder für eine metallhaltige Abgangsgruppe, z. B. für SnR oder Zinkhalogenid, steht, nach bekannten Verfahren umsetzt, wie beschrieben in: J.K. Stille, Angew. Chem. 1986, 98, 504; J.K. Stille et al., J. Org. Chem. 1990, 55 , 3014; M. Pereyre et aι. "Tin in Organic Synthesis", Butterworth 1987; oder
eine Verbindung der allgemeinen Formel (XI)
worin Q die oben angegebene Bedeutung besitzt, mit einer Verbindung
umsetzt, wobei M für ein Metall wie Li oder MgY5 mit Y5 = Br, Cl, I steht.
Eine gegebenenfalls nachfolgende Eliminierung kann unter Einsatz starker Säuren vorzugsweise Thionylchlorid oder Poly- phosphorsäure vorgenommen werden. Die nachfolgende Eliminierung erfolgt in der Regel bei Temperaturen im Bereich von 0
bis 80°C und zweckmäßig in einem inerten organischen Lösungsmittel, insbesondere einem Halogenkohlenwasserstoff, oder ohne Lösungsmittel.
5 c) eine Verbindung der allgemeinen Formel (XII)
10 worin Q die oben angegebene Bedeutung besitzt, durch Reduktion, z. B. Hydrierung, von Verbindungen der allgemeinen Formel XIII, in literaturbekannter Weise herstellt.
2υ Verbindungen der Formeln IX, X, XI und XIII sind entweder bekannt oder sie können analog zu bekannten Verfahren hergestellt werden (WO 99/02503 und WO 97/25324).
Einige spezielle Verbindungen der Formel I, die bei A eine Sulfi- " nyl oder Sulfonyl-Gruppierung tragen, werden durch spezifische Oxidationsmethoden geeigneter Vorstufen aus den zugrundeliegenden Endstufen der Formel I hergestellt, z.B. durch Oxidation mit Me- tachlorperbenzoesäure oder mit Chlorwasser.
3^ Die Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen und der Ausgangsmaterialien und der Zwischenprodukte kann auch analog zu den in den eingangs genannten Patentpublikationen beschriebenen Methoden erfolgen.
3 Die oben beschriebenen Umsetzungen erfolgen im allgemeinen in einem Lösungsmittel bei Temperaturen zwischen Raumtemperatur und der Siedetemperatur des verwendeten Lösungsmittels. Brauchbare Lösungsmittel sind beispielsweise Ester, wie Ethylacetat, Ether, wie Diethylether oder Tetrahydrofuran, Dimethylformamid,
40 Dimethylsulfoxid, Dimethoxyethan, Toluol, Xylol, Ketone, wieAce- ton oder Methylethylketon, oder Alkohole, wie Ethanol oder Buta- nol.
Gewünschtenfalls arbeitet man in Gegenwart eines säurebindenden ^ Mittels. Geeignete säurebindende Mittel sind anorganische Basen, wie Natrium- oder Kaliumcarbona^, Natrium- oder Kaliumhydrogen- carbonat, Natriumethylat, Natriumhydrid oder metallorganische
Verbindungen, wie Butyllithium- oder Alkylmagnesium-Verbindungen, oder organische Basen, wie Triethylamin oder Pyridin. Letztere können gleichzeitig als Lösungsmittel dienen.
Die Umsetzungen erfolgen gegebenenfalls unter Verwendung eines Katalysators, wie z.B. Übergangsmetalle und deren Salze oder Komplexe, z.B. Tetrakis[triphenylphosphin]palladium, Bis[triphenyl- phosρhin]palladium(II)chlorid, Palladiumacetat oder Tetrakisftri- o-tolylphosphin]palladium, und/oder eines Phasen-Transfer-Kataly- sators, z.B. Tetrabutylammoniumchlorid oder Tetrapropylammoniu - bromid.
Die Isolierung des Rohprodukts erfolgt in üblicher Weise, beispielsweise durch Filtration, Abdestillieren des Lösungsmittels oder Extraktion aus dem Reaktionsgemisch etc. Die Reinigung der erhaltenen Verbindungen kann in üblicher Weise erfolgen, beispielsweise durch Umkristallisieren aus einem Lösungsmittel, Chromatographie oder Überführen in eine Säureadditionsverbindung.
Die Säureadditionssalze werden in üblicher Weise durch Mischen der freien Base mit der entsprechenden Säure, gegebenenfalls in Lösung in einem organischen Lösungsmittel, beispielsweise einem niedrigen Alkohol, wie Methanol, Ethanol oder Propanol, einem Ether, wie Methy1-t-butylether, einem Keton, wie Aceton oder Me- thylethylketon oder einem Ester, wie Essigsaureethylester, hergestellt.
Von den vorstehend genannten Verbindungen sind erfindungsgemäß insbesondere diejenigen von Vorteil, die eine hohe Affinität zu 5-HTA-Rezeptoren besitzen. In diesem Sinne besonders bevorzugt sind Verbindungen, die in vitro Kj_-Werte von weniger als 100 nM vor allem von weniger als 10 nM besitzen und insbesondere von weniger als 5 nM. Geeignete Testverfahren zur Auswahl dieser Verbindungen sind dem Fachmann bekannt. Beispielsweise können Bin- dungsaffinitäten zu 5-HTiA-Rezeptoren in Rezeptorbindungsstudien über die Verdrängung von 3H-8-OH-DPAT bestimmt werden.
Die vorstehend beschriebenen und weitere in ähnlicher Weise geeignete Testsysteme können die Grundlage bilden für in vitro-Scree- ning-Verfahren, vorzugsweise zum primären Screening, mit denen man aus den beschriebenen Verbindungen diejenigen auslesen kann, die im Hinblick auf die erfindungsgemäße Anwendung besondere Vorteile bieten. Dies ist automatisierbar. Screening-Roboter dienen der effizienten Auswertung der vorzugsweise auf Mikrotiterplatten angeordneten Einzelassays.
Eine besonders effektive Technologie zur Durchführung derartiger Verfahren ist der im Bereich des Wirkstoffscreenings bekannte Scintillation Proximity Assay, kurz SPA genannt. Kits und Komponenten zur Durchführung dieses Assays können kommerziell bezogen werden, beispielweise bei Amershairt Pharmacia Biotech.
Eine weitere besonders effektive Technologie zur Durchführung derartiger Verfahren ist die im Bereich des Wirkstoffscreenings bekannte FlashPlate-Technologie. Kits und Komponenten zur Durch- führung dieses Assays können kommerziell bezogen werden, beispielweise bei NEN Life Science Products. Dieses Prinzip basiert ebenfalls auf Mikrotiterplatten (96er oder 384er), die mit Scin- tillationssubstanz beschichtet sind.
Weitere, vor allem zum sekundären Screening geeignete Testverfahren beruhen auf in-vitro und in-vivo Modellen für erfindungsgemäß zu behandelnde Indikationen. Geeignete in-vivo-Modelle im Bereich der obengenannten Indikationen sind bekannt, z.B. die induzierte zerebrale Ischämien bei Säugern wie Ratten und Bestimmung des Ausmaß an betroffenem Gewebe wie nachstehend beschrieben.
Die erfindungsgemäße Verwendung der beschriebenen Verbindungen beinhaltet im Rahmen der Behandlung ein Verfahren. Dabei wird dem zu behandelnden Individuum, vorzugsweise einem Säuger, insbeson- dere einem Menschen, Nutz- oder Haustier, eine wirksame Menge eines oder mehrerer Verbindungen, in der Regel der pharmazeutischen und tierarzneilichen Praxis entsprechend formuliert, verabreicht. Ob eine solche Behandlung angezeigt ist und in welcher Form sie zu erfolgen hat, hängt vom Einzelfall ab und unterliegt einer me- dizinischen Beurteilung (Diagnose), die vorhandene Anzeichen, Symptome und/oder Fehlfunktionen, Risiken, bestimmte Anzeichen, Symptome und/oder Fehlfunktionen zu entwickeln, und weitere Faktoren miteinbezieht.
Die Behandlung erfolgt in der Regel durch einmalige oder mehrmalige tägliche Verabfolgung gegebenenfalls zusammen oder im Wechsel mit anderen Wirkstoffen oder wirkstoffhaltigen Präparaten, wobei die Dosierung vom Alter, Zustand und Gewicht des Patienten sowie von der Applikationsart abhängt. In der Regel erfolgt die Verabreichung in einer Menge, dass bei einem zu behandelnden Individuum eine Tagesdosis von etwa 10 bis 1000 mg/kg Körpergewicht bei oraler Gabe, vorzugsweise von etwa 1 bis 500 mg/kg Körpergewicht bei parenteraler Gabe zugeführt wird.
Die Erfindung betrifft auch pharmazeutische Mittel zur Behandlung eines Individuums, vorzugsweise eines Säugers, insbesondere eines Menschen, Nutz- oder Haustieres und ihre Herstellung. So werden
die erfindungsgemäßen Wirkstoffe gewöhnlich in Form von pharmazeutischen Zusammensetzungen verabreicht, die einen pharmazeutisch verträglichen Exzipienten mit wenigstens einem erfindungsgemäßen Liganden und gegebenenfalls weiteren Wirkstoffen umfas- sen. Diese Zusammensetzungen können beispielsweise auf oralem, rektalem, transdermalem, subkutanem, intravenösem, intramuskulärem oder intranasalem Weg verabreicht werden.
Beispiele geeigneter pharmazeutischer Formulierungen sind feste Arzneiformen, wie Pulver, Puder, Granulate, Tabletten, insbesondere Filmtabletten, Pastillen, Sachets, Cachets, Dragees, Kapseln wie Hart- und Weichgelatinekapseln, Suppositorien oder vaginale Arzneiformen, halbfeste Arzneiformen, wie Salben, Cremes, Hydro- gele, Pasten oder Pflaster, sowie flüssige Arzneiformen, wie Lö- sungen, Emulsionen, insbesondere Öl-in-Wasser-Emulsionen, Suspensionen, beispielsweise Lotionen, Injektions- und Infusionszubereitungen, Augen- und Ohrentropfen. Auch implantierte Abgabevorrichtungen können zur Verabreichung erfindungsgemäßer Wirkstoffe verwendet werden. Ferner können auch Liposomen oder Mikrosphären zur Anwendung kommen.
Bei der Herstellung der Zusammensetzungen werden erfindungsgemäße Wirkstoffe gewöhnlich mit einem Exzipienten vermischt oder verdünnt. Exzipienten können feste, halbfeste oder flüssige Materia- lien sein, die als Vehikel, Träger oder Medium für den Wirkstoff dienen.
Geeignete Exzipienten sind den einschlägigen Arzneimonographien gelistet. Ferner können die Formulierungen pharmazeutisch akzep- table Träger oder übliche Hilfsstoffe, wie Gleitmittel; Netzmittel; emulgierende und suspendierende Mittel; konservierende Mittel; Antioxidantien; Antireizstoffe; Chelatbildner; Dragierhilfsmittel; Emulsionsstabilisatoren; Filmbildner; Gelbildner; Geruchsmaskierungsmittel; Geschmackskorrigentien; Harze; Hydrokol- loide; Lösemittel; Lösungsvermittler; Neutralisierungsmittel;
Permeationsbeschleuniger; Pigmente; quaternäre Ammoniumverbindungen; Rückfettungs- und Überfettungsmittel; Salben-, Creme- oder Öl-Grundstoffe; Silikon-Derivate; Spreithilfsmittel; Stabilisatoren; Sterilanzien; Suppositoriengrundlagen; Tabletten-Hilfs- Stoffe, wie Bindemittel, Füllstoffe, Gleitmittel, Sprengmittel oder Überzüge; Treibmittel; Trocknungsmittel; Trübungsmittel; Verdickungsmittel; Wachse; Weichmacher; Weißöle umfassen. Eine diesbezügliche Ausgestaltung beruht auf fachmännischem Wissen, wie beispielsweise in Fiedler, H.P., Lexikon der Hilfsstoffe für Pharmazie, Kosmetik und angrenzende Gebiete, 4. Auflage, Aulendorf: ECV-Editio-Cantor-Verlag, 1996, dargestellt ist. (vgl. H. Sucker et al., Pharmazeutische Technologie, Thie e-Verlag, Stutt-
gart, 1978). Die so erhaltenen Applikationsformen enthalten den Wirkstoff normalerweise in einer Menge von 1 bis 99 Gew.-%.
Die nachfolgenden Beispiele dienen zur Erläuterung der Erfindung ohne sie zu begrenzen.
I. Herstellung der Wirkstoffe:
Wirkstoff 1: l-{3-[ ( 4-Methyl-5-phenyl-4iϊ-l,2 ,4-tria- zol-3-yl)sulfanyl]propyl}-4-[3-(trifluoromethyl)phe- ny1]-1 , 2 , 3 , 6-tetrahydropyridin
1A Herstellung der Ausgangsverbindungen:
1A1 tert-Butyl-4-{ [ (trifluoromethyl) sulfonylloxyJ.-S^-dihy- dro-l ( 2H) -pyridin-carboxylat
Eine Lösung von 1,3 eq. LDA in 180 ml THF wurde bei —78°C mit einer Lösung von 12.7 g (64 mmol) N-Boc-Piperidon-4 in 80ml THF versetzt. Nach 2 h bei dieser Temperatur wurden 25 g (70 mmol) Bis (trifluormethylsulfonyl)anilid — gelöst in 60ml THF - zugetropft. Man ließ auf Raumtemperatur erwärmen und beendete nach einer Stunde und vollständigem Umsatz die Reaktion durch Eingießen in 1,8 1 gesättigte NaHC03-Lösung. Nach Extraktion mit Methyl- tert .-butylether, Trocknen der vereinigten organischen Phasen über Natriumsulfat wurde filtriert, die Lösung im Vakuum eingedampft und der Rückstand chromatographisch (Si02, Dichlormethan) gereinigt.
Ausbeute: 18.8g (57mmol) 89%d.Th. iH-NMR (CDC13): δ=l,4 (s, 9H); 2,5 (m, 2H) ; 3,6 (t, 2H);
4,1 ( , 2H); 5,8 (m, 1H) .
1A2 tert-Butyl 4- [ 3-(trifluoromethyl)phenyl] -3 , 6-dihy- dro-1 ( 2H) -pyridincarboxylat
Eine zweimolare wäßrige Natriumcarbonatlösung (4θml) in 120 ml Dimethoxyethan wurde nacheinander mit 8.7g (46 mmol) 3-Trifluormethylphenylboronsäure, 15,2g (46 mmol) der vorstehend beschriebenen Verbindung 1A1, 4,3g (92 mmol) Lithiumchlorid, 0,86g (4,6 mmol) Kupfer(I) iodid und 2,1 g (1,8 mmol) Tetrakis(triphenylphosphin)-palladium (0) versetzt und vier Stunden bei Rückfluß gerührt. Zur Aufarbeitung versetzte man mit NaHC03-Lösung, extrahierte mit Dichloromethan, trocknete die organische Phase und
erhielt nach Einengen und chromatographischer Aufreinigung 5 , 8 g ( 17 , 6 mmol , 38% ) Produkt .
iH-NMR (CDC13 ) : δ=1 . 5 ( s , 9H ) ; 2 . 5 (m, 2H ) ; 3. 6 ( t, 2H) ; 4 . 1 (m, 2H ) ; 6 . 1 ( m, 1H ) .
1A3 4-[3-(Trifluoromethyl)phenyl]-1, 2 , 3 , 6-tetrahydropyridi- nium chlorid
10.5g (32.3mmol) der vorstehend beschriebenen Verbindung
1A2 wurden in wenig Diethylether gelöst und mit 62ml etherischer Salzsäure versetzt. Nach 20h bei Raumtemperatur wurde das Präzipitat isoliert, mit Ether nachgewaschen und getrocknet.
Ausbeute: 6.6g (25mmol) 78%d.Th. Smp.: 199-201°C
1A4 1- ( 3-Chloropropyl ) -4- [ 3-(trifluoromethyl )phe- nyl]-1,2 , 3 , 6-tetrahydropyridin
3,5 g (14 mmol) 1A3 wurde zusammen mit 5 ml Triethylamin und 3,2g (20 mmol) l-Brom-3-chlorpropan in 40 ml DMF bei 50°C bis zum vollständigen Umsatz erwärmt. Zur Aufarbei- tung wurde mit Natronlauge auf pH=9 eingestellt, mit Me- thyl-tert .-butylether extrahiert, die organische Phase getrocknet, filtriert und nach Evaporation chromatographisch gereingt.
Ausbeute: 2,4g (8mmol) 58% d.Th.
Cι5H17ClF3N (303.8) MS (m/z): 304/306 [M+H]+
Die eingesetzten Triazole sind bekannt oder wurden nach der Methode von S. Kubota et al., Chem Pharm.Bull. 1975,23,955 hergestellt.
1B Herstellung des Endproduktes
0,45g (2 mmol) 1A4 wurden mit 0,6g (2 mmol) 3-Mer- capto-4-methyl-5-phenyl-4H-l,2,4-triazol - Kaliumsalz in 10 ml DMF in Gegenwart von 50 mg Lithiumhydroxid 4 h auf 100°C erhitzt. Zur Aufarbeitung wurde in 50 ml Wasser aufgenommen, mit Meth 1-tert .butylether extrahiert und die vereinigten organischen Phasen nach Trocknen über Na- triumsulfat filtriert und evaporiert. Nach chromatogra-
phischer Aufarbeitung erhielt man 0,5g (l,lmmol, 55% d.Th.) Produkt.
iH-NMR (CDC13): δ= 2,0 (q, 2H) ; 2,5-2,7 (m, 6H) ; 3,2 (m, 2H); 3,5 (t, 2H); 3,7 (s, 3H) ; 6,1 (m, 1H); 7,3 (m, 3H);
7,4-7,7 (m, 6H).
Es wurden 0,51 g der Titelverbindung als Hydrochlorid nach Fällung mit etherischer Salzäure isoliert. Smp.: 195-197°C.
Wirkstoff 2: l-(3-{ [4-Methyl-5-( 3-pyridinyl) -4H-1,2 , 4-tria- zol-3-yl ] sulfanyl}propyl ) -4- [ 3- ( trifluoromethyl )phenyl ] -1 , 2 , 3 , 6-tetrahydropyridin
Durch Umsetzung von 9,6g (50 mmol) 3-Mercapto-4-me- thyl-5-(3-pyridyl)-4H-l,2,4-triazol mit 15,3g (50 mmol) der unter 1A4 beschriebenen Chlorpropyl-Verbindung in Gegenwart von 3 g (125 mmol) Lithiumhydroxid in 400 ml DMF bei 100°C erhielt man nach Aufarbeitung ein Rohprodukt, das chromatographischer gereinigt wurde (Kieselgel, Methylenchlorid /Methanol =95/5) .
Ausbeute: 8,9g (19 mmol) 39% d.Th. Es wurden 9,2 g der Titelverbindung als Fumarat nach Umsetzung mit Fumarsäure in Essigester isoliert. Smp.: 131-133°C.
In analoger Weise wurden die folgenden Wirkstoffe der allgemeinen Formel (I) hergestellt:
Wirkstoff 3: 1- (3-{ [ 4-Methyl-5-( lfl-pyrrol-2-yl) -4H- 1,2, 4-triazol-3-yl ] sulfanyl}propyl ) -4- [ 3- (trifluoromethyl )phenyl] -1,2 ,3,6-tetrahydropyridin; Smp.: 146.5-148.5°C (Fumarat) .
Wirkstoff 4: l-(2-{ [4-Methyl-5-( ltf-pyr- rol-2-yl) -4H-1 , 2 , 4-triazol-3-yl ] sulfanyl}ethyl ) -4- [ 3- (tri- fluoromethyl)phenyl] -1,2, 3 ,6-tetrahydropyridin;
Smp.: 138-141°C.
Wirkstoff 5: l-(3-{ [4-Methyl-5-(4-pyridinyl)-4tf-l,2 , 4-tria- zol-3-yl] sulfanyl}propyl) -4-[ 3- (trifluoromethyl )phenyl ] -1 , 2 , 3 , 6-tetrahydropyridin; Smp.: ab 96°C Zersetzung (Hydrochlorid).
Wirkstoff 6: l-{3-[ ( 4-Methyl-5-phenyl-4iϊ-l,2, 4-tria- zol-3-yl) sulfanyl ]propyl}-4-[ 3- (trifluoromethyl )phenyl ]pipe- ridin;
Herstellung der Ausgangsverbindung:
6A1 4- [ 3- (Trifluoromethyl )phenyl]-piperidin
26,0 g (115 mmol) 4- [3- (Trifluoromethyl)phenyl] -1,2, 3, 6-tetrahydropyridin in 200 ml Ethanol und 80 ml 10-proz. Salzsäure wurden mit 4,2 g Palladium auf
Kohle (10 %) versetzt und über Nacht bei Raumtemperatur hydriert. Nach Absaugen des Katalysators und Nachwaschen mit Ethanol engte man die organische Phase ein. Der Rückstand wurde zwischen Wasser und Methylenchlorid verteilt, mit Ammoniaklösung alkalisch gestellt und die wäßrige
Phase mit Methylenchlorid extrahiert. Nach Trocknen und Einengen der organischen Phase isolierte man 21,5 g (82%d.Th.) Produkt als Öl.
6A2 l-( 3-chloropropyl)-4-[3-(trifluoromethyl)phenyl] iperidin
7,1 g (28 mmol) 6A1 wurde zusammen mit 10 ml Triethylamin und 6,42g (40 mmol) l-Brom-3-chlorpropan in 60 ml DMF bei 50°C bis zum vollständigen Umsatz erwärmt. Zur Aufarbei- tung wurde mit Natronlauge auf pH=9 eingestellt, mit Me- thyl-tert.butylether extrahiert, die organische Phase getrocknet, filtriert und nach Evaporation chromatographisch gereingt.
Ausbeute: 4.5 g (15mmol) 52%d.Th.
Cι5Hι9ClF3N (305.8) MS (m/z): 305/307 [M+H]+
6B Herstellung der Endverbindung
Durch Umsetzung von 4,5g (20mmol) 3-Mercapto-4-me- thyl-5-phenyl)-4H-l,2,4-triazol-Kaliumsalz mit 6,1g (20 mmol) der unter 6A2 beschriebenen Chlorpropyl-Verbindung in Gegenwart von 1,23g (50mmol) Lithiumhydroxid in 180ml DMF bei 80°C erhielt man nach Aufarbeitung ein Rohprodukt, das chromatographisch gereinigt wurde (Kieselgel, Methylenchlorid /Methanol =95/5).
Ausbeute: 3,76g, 40% d.Th. C24H25F3N4S (458.5) MS (m/z): 459 [M]+
Analog wurden die folgenden Wirkstoffe hergestellt:
Wirkstoff 7: l-(3-{ [4-Methyl-5-(2-methyl-l,3-oxa- zol-4-yl ) -4fT-l , 2 , 4-triazol-3-yl] sulfanyl}propyl ) -4- [ 3- (tri- fluoromethyl)phenyl] -1 , 2 , 3 , 6-tetrahydropyridin.
Wirkstoff 8: l-(3-{ [4-Methyl-5-( 1-methyl-lH-pyr- rol-2-yl ) -4H-1 , 2 , 4-triazol-3-yl ] sulfanyl}propyl ) -4- [ 3- (tri- fluoromethyl) henyl] -1,2 ,3, 6-tetrahydropyridin.
Wirkstoff 9: l-(3-{ [4-Methyl-5-(3-thienyl)-4.ff-l,2,4-tria- zol-3-yl] sulfanyl}propyl) -4-[ 3- (trifluoromethyl)phenyl]-1,2 ,3 , 6-tetrahydropyridin
Wirkstoff 10: l-( 3-{ [5-( 2-Furyl)-4-methyl-4iϊ-l, 2 , 4-tria- zol-3-yl] sulf nyl}propyl) -4- [ 3- (trifluoromethyl )phe- nyl]-l,2,3,6-tetrahydropyridin
Wirkstoff 11: l-{2-[ ( 4-Methyl-5-phenyl-4ff-1,2, 4-tria- zol-3-yl) sulf nyl]ethyl}-4-[ 3-(trifluoromethyl)phenyl ] -1 , 2 , 3 , 6-tetrahydropyridin
Wirkstoff 12: l-(2-{ [4-Methyl-5-(3-pyridinyl)-4#-l,2 , 4-tria- zol-3-yl] sulfanyl}ethyl) -4- [ 3- (trifluoromethyl)phenyl ] -1 , 2 , 3 , 6-tetrahydropyridin
Wirkstoff 13: 2-( 4-Methyl-5-{ [ 3-(4-[ 3- (trifluoromethyl)phenyl ] -3 , 6-dihydro-l ( 2H) -pyridinyl)propyl ] sulfa- nyl}-4iJ-l, 2 , 4-triazol-3-yl)pyrazin
Wirkstoff 14: l-{4-(4-Methyl-5-phenyl-4tf-l,2, 4-tria- zol-3-yl)butyl}-4-[3- (trifluoromethyl)phenyl] -1,2,3, 6-tetra- hydropyridin (Smp.230-233°C; Hydrochlorid)
Wirkstoff 15: l-(3-{ [ 4-Methyl-5-( 3-pyridyl)-4if-l, 2, 4-tria- zol-3-yl] sul anyl}propyl) -4-[ 3-(trifluoromethyl )phenyl] -pipe- ridin; Smp.: 174-176°C (Hydrochlorid).
Wirkstoff 16: l-(2-{ [ 4-Methyl-5-phenyl-4iϊ-l, 2 , 4-tria- zol-3-yl] sul anyl}ethyl) -4- [ 3- (trifluoromethyl) henyl ]-pipe- ridin; Smp.: 202-204°C (Hydrochlorid).
Wirkstoff 17 : l-(3-{ [ 4-Methyl-5- ( liϊ-pyr- rol-2-yl ) -4H-1 , 2 , ~triazol-3-yl] sulf anyl}propyl ) -4- [ 3- ( tri- f luoromethyl ) phenyl ] -piperidin; Smp. : 98-100°C ( Hydrochlo- rid ) •
Wirkstoff 18: l-(2-{[4-Methyl-5-( lH-p r- rol-2-yl) -4H-1, 2, 4-triazol-3-yl] sulfanyl}ethyl ) -4-[ 3-(tri- fluoromethyl )phenyl ]-piperidin; Smp.: 149-151°C.
Wirkstoff 19: l-(3-{ [4-Methyl-5-(2-thiophenyl)-4.ff-l,2,4-tria- zol-3-yl] sulfanyl}propyl ) -4- [ 3- (trifluoromethyl ) henyl ] -pipe- ridin; Smp.: 155-157°C.
Wirkstoff 20: l-(3-{ [4-Methyl-5- ( 3-thiophenyl) -4H-1, 2, 4-tria- zol-3-yl ] sulfanyl}propyl) -4- [ 3- (trifluoromethyl)phenyl] -pipe- ridin; Smp.: 128-130°C.
Wirkstoff 21: l-(3-{ [4-Methyl-5- (2-pyridinyl )-4iϊ-l, 2 , 4-tria- zol-3-yl ] sulfanyl}propyl ) -4- [ 3- ( rifluoromethyl )phenyl ]-l, 2, 3 , 6-tetrahydropyridin; Smp.: 122-123°C (Hydrochlorid) .
Wirkstoff 22: l-(3-{ [ 4-Methyl-5-( 3-pyrazinyl)-4i3-l, 2 , 4-tria- zol-3-yl ] sulfanyl}propyl ) -4- [ 3- (trifluoromethyl)phenyl] -pipe- ridin; Smp.: 192-194°C (Hydrochlorid).
Wirkstoff 23: l-(2-{ [4-Methyl-5-( 3-thiophenyl) -4H-1, 2 , 4-tria- zol-3-yl] sulfanyl}ethyl ) —4—[ 3— ( trifluoromethyl)phe- nyl]-1,2 ,3, 6-tetrahydropyridin; Smp.: 170-172°C (Hydrochlorid) .
Wirkstoff 24: l-(2-{ [ 4-Methyl-5- (2-thiophenyl)-4H-l,2 , 4-tria- zol-3-yl ] sulfanyl}ethyl ) —4—[ 3— (trifluoromethyl )phenyl] -1,2,3, 6-tetrahydropyridin; Smp.: 171-173°C (Hydrochlorid) .
Wirkstoff 25: l-(2-{ [ 4-Methyl-5-( 3-pyrazinyl)-4iϊ-l, 2 , 4-tria- zol-3-yl]sulfanyl}ethyl)-4-[ 3- (trifluoromethyl)phenyl] -1,2, 3, 6-tetrahydropyridin; Smp.: 162-164°C (Hydrochlorid) .
Wirkstoff 26: l-(3-{ [ 4-Methyl-5- ( 2-thiophenyl)-4tf-l, 2 , 4-tria- zol-3-yl]sulfanyl}propyl) -4- [ 3- (trifluoromethyl)phenyl] -1,2,3 ,6-tetrahydropyridin; Smp.: 182-184°C (Hydrochlorid) .
Wirkstoff 27: l-(2-{ [4-Methyl-5- ( 2-thiophenyl)-4H-l, 2 , 4-tria- zol-3-yl]sulfanyl}ethyl ) -4-[3-(trifluoromethyl) henyl] -pipe- ridin; Smp.: 191-193°C (Hydrochlorid).
Wirkstoff 28: l-(2-{ [4-Methyl-5-( 3-pyridinyl)-4iϊ-l,2, 4-tria- zol-3-yl] sulfanyl}ethyl) -4- [ 3- (trifluoromethyl )phenyl] -pipe- ridin; Smp.: 168-170°C (Hydrochlorid).
Wirkstoff 29: l-(2-{ [4-Methyl-5- ( 3-thiophenyl)-4tf-l, 2 , 4-tria- zol-3-yl ] sulfanyl}ethyl ) -4-[ 3- ( trifluoromethyl )phenyl ] -pipe- ridin; Smp.: 202-204°C (Hydrochlorid).
Wirkstoff 30: l-(2-{ [4-Methyl-5- ( 4-pyridinyl) -4H-1, 2, 4-tria- zol-3-yl ] sulfanyl}ethyl ) -4-[ 3- (trifluoromethyl )phenyl] -pipe- ridin; Smp.: 192-194°C (Hydrochlorid).
Wirkstoff 31: l-(3-{ [4-Methyl-5-(2-indolyl)-4H-l, 2, 4-tria- zol-3-yl] sulfanyl}propyl) -4- [3- (trifluoromethyl) henyl] -1,2, 3, 6-tetrahydropyridin; Smp.: 172-175°C.
Wirkstoff 32: l-(2-{ [4-Methyl-5- ( 3-pyrazinyl)-4iϊ-l, 2 , 4-tria- zol-3-yl ] sulfanyl}ethyl ) -4- [ 3- (trifluoromethyl)phenyl ] -pipe- ridin; Smp.: 166-168°C (Hydrochlorid).
Wirkstoff 33: l-(2-{[4-Methyl-5-(4-pyridinyl)-4iϊ-l,2,4-tria- zol-3-yl] sulfanyl}ethyl)-4-[ 3- (trifluoromethyl)phenyl ]-1,2, 3,6-tetrahydropyridin; Smp.: 199-201°C (Hydrochlorid) .
Wirkstoff 34: l-(3-{[4-Methyl-5-(4-pyridinyl)-4tf-l,2,4-tria- zol-3-yl] sulfanyl}propyl) —4—[ 3— ( rifluoromethyl )phenyl]-pipe- ridin; Smp.: 192-194°C (Hydrochlorid).
Wirkstoff 35: l-(4-{[4-Methyl-5-phenyl-4iϊ-l,2,4-tria- zol-3-yl] sulfanyl}butyl) -4-[ 3-(trifluoromethyl)phenyl] -1,2 ,3, 6-tetrahydropyridin; MS (m/z): 474 [M+H]+.
Wirkstoff 36: l-( 4-{ [ 4-Methyl-5- ( 2-thiophenyl)-4tf-l, 2 , 4-tria- zol-3-yl] sulfanyl}butyl)-4- [ 3-(trifluoromethyl)phe- nyl]-l, 2,3, 6-tetrahydropyridin; MS (m/z): 480 [M+H]+.
Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung besitzen eine überraschend hohe Affinität zum 5-HTιA-Rezeptor, wie BindungsStudien mit klonierten humanen 5-HTiA-Rezeptoren zeigen.
Die folgende Testanordnung wurde zur Bestimmung der 5-HTιA-Rezep- torbindungs-Affinität eingesetzt:
II 5-HTlA-Bindungsassay mit Membranen von 5-HTιA-Rezeptor exprimierenden HEK293-Zellen:
II.1 Kultur von 5-HTιA-Rezeptor exprimierenden HEK293-Zellen:
5-HTχA Rezeptor-exprimierende HEK293-Zellen werden in RPMI/ Glutamax-Medium (RPMI 1640, 25 mM Hepes, 2 mM Glutamax, 10 % FCS, 2 mM Glutamin, Penicillin/Streptomycin (100 IU/ l each) , Geneticin (G-418 ) -Sulfate 400 mg/1, NaHC03 1,2 g/1) in Kul- turflaschen (TripleFlasks T — 175) in einer 5 % C02 Atmosphäre bei 37°C kultiviert. Nach Erreichen der Konfluenz wird das Medium entnommen und die Flaschen mit 15 ml sterilen PBS (phosphate buffered saline) gefüllt. Die Zellen werden durch 10-minütige Inkubation (Brutschrank, 37°C) mit einer Trypsin- Lösung (0,05 % Trypsin, 0,0004 % EDTA, 0,02 % EGTA, 2,682 M KC1, 1,47 mM KH2P04, 6,46 mM Na2HP04, 136,89 mM NaCl) gelöst. Das Ablösen der Zellen wird durch Klopfen auf den Flaschenboden gefördert. Nach Überführen in 50-ml-Röhrchen (Greiner) werden die Zellen bei 250 x g bei Raumtemperatur zentrifu- giert. Der Überstand wird verworfen und die Zellen in 10 ml
Medium resuspendiert. Die Zellen werden erneut auf Kulturflaschen verteilt und weitere 5 bis 6 Tage bis zur Präparation der Membranen kultiviert.
II.2 Präparation der Membranen von 5-HTιA-Rezeptor-exprimie- renden HEK293-Zellen
Die Überstände der Zellen werden abgenommen und die Kulturflaschen mit PBS gefüllt. Die Zellen werden daraufhin 10 Mi- nuten mit einer Trypsin-Lösung (zur Zusammensetzung siehe oben) inkubiert. Das Ablösen der Zellen wird durch Klopfen auf den Flaschenboden gefördert. Die Zellsuspension wird entnommen und die verbleibenden Zellen durch 2-maliges Waschen der Kulturflaschen mit PBS ebenfalls in PBS aufgenommen. Die gesammelte Zellsuspension wird auf 150-ml-Falcon-Röhrchen verteilt und 10 Minuten bei 250 x g bei 4°C zentrifugiert. Die Überstände werden verworfen und die Zellen im Pellet in PBS resuspendiert. 20 μl der Zeil-Suspension werden entnommen und die Zelldichte bestimmt. Die Zellen werden erneut 10 Mi- nuten bei 250 x g (4°C) zentrifugiert, der Überstand verworfen und die Zellen im Pellet in 50 mM Tris-HCl pH 7,4 ( 1 ml / 108 Zellen) mit Hilfe eines Ultra-Turrax (30 sec) homogenisiert. Das Homogenat wird auf Kryo-Röhrchen verteilt ( 1 ml / Kryo-Röhrchen) und bis zur Verwendung im Bindungsassay in flüssigen Stickstoff gelagert.
II.3 5-HTιA-Bindungsassay
Die eingefrorenen Membranen werden bei 37°C aufgetaut, bei 48000 * g (20 Minuten) zentrifugiert, und in Bindungspuffer (50 mM Tris-HCl pH 7,4, 5 mM CaCl2) resuspendiert. Ein Inkubationsansatz enthält Membranmaterial von 50 mg/Probe, 0,15 pmol (= 0,15 nM) 3H-8-0H-DPAT sowie die zu testenden Substanzen in insgesamt 1 ml Bindungspuffer. Die unspezifische Bindung wird in Gegenwart von 10~5 M 5-Carboxamidotryptamin be- stimmt. Nach erfolgter 90-minütiger Inkubation bei 22°C wird gebundener und freier Ligand durch Filtration über GF/B-Fil- ter und anschließendem Waschen mit 5 bis 9 ml eiskaltem Bindungspuffer voneinander getrennt. Die GF/B-Filter werden vor Verwendung mindestens 2 Stunden mit 0,3 % Polyethylenimin be- handelt. Nach erfolgter Filtration werden die Filter mit 3 bis 4 ml Packard Ultima Gold XR versetzt und die Radioaktivität durch Flüssigkeits-Scintillationszählung im Packard Tri- carb bestimmt.
II.4 Auswertung der Daten des 5-HTιA-Bindungsassays
Die Verdrängungs-Kurven werden durch nichtlineare Regression mit Hilfe einer modifizierten Version des "Ligand"-Programmes von Munson & Rodbard (Anal. Biochem. , 107, 220 (1980)) analysiert. Der Wert für die theoretische unspezifische Bindung wird als theoretische Radioligand-Bindung bei unendlich hohen Ligandenkonzentration geschätzt. Dabei werden die gemessenen Werte für die unspezifische Bindung als Datenpunkte der Verdrängungskurve behandelt, die Meßpunkte bei einer unendlich hohen Liganden-Konzentration entsprechen.
Bei Testung von weniger als 4 Konzentrationen einer Substanz oder bei spezifischer Verdrängung des Radioliganden < 25 % (bei allen getesteten Konzentrationen) wird ein ICso-Wert unter Verwendung der Hill-Gleichung geschätzt und der Ki-Wert nach der Gleichung von Cheng und Prusoff (Biochem. Pharmacol. 22, 3099 (1973)) berechnet.
Die folgenden Resultate (Ki— erte) wurden erhalten:
In-vivo-Studie: Experimenteller Schlaganfall an der Ratte - Standardversuch -
Als Versuchstiere werden am Vortag entfütterte männliche Long-Evans-Ratten verwendet. Das Gewicht der Tiere soll am Tag des Nüchternsetzens zwischen 280 und 320 g liegen. Sie werden mit 4% Halothan in 30% Sauerstoff und 70% N20 im Ex- sikkator vornarkotisiert und mit 0.1 mg/kg Atropin i.p. behandelt. Für die Operation wird die Halothankonzentration auf 1.5% reduziert und das Versuchstier an den Temperaturregler (37 °C) angeschlossen.
Für den Venenkatheter wird die Jugularvene freipräpariert. Zur Präparation der A. cerebri media (MCA) wird die Ratte auf die linke Seite gelegt und fixiert. Mit einem Skalpell wird ein senkrechter Schnitt auf der Höhe zwischen Auge und Ohr gemacht und die OP-Stelle wird mit einem Wundspreizer offen gehalten. Der Schädelknochen wird freigelegt und anschließend mit einem Handbohrer soweit angefräst, daß man diesen mit einer Pinzette abheben kann und die darunterliegende MCA sichtbar wird.
Nach Öffnen der Dura mit einer hierfür zurechtgebogenen Kanüle wird die freipräparierte MCA mit einem Faden unterhalb der untersten sichtbaren nach rechts abgehenden Abzweigung dauerhaft abgebunden. Anschließend wird die Ratte an die Infusion angeschlossen.
22 Stunden nach MCA-Okklusion erhält die Ratte 0.1 ml Heparin i. . Unter Halothan-Nakose wird eine Femoralarterie für die Blutabnahme freipräpariert und die Rektaltemperatur wird gemessen. Die erste Blutprobe dient zur Bestimmung der Blutgase, die zweite wird zentrifugiert und zur Glucosebestimmung herangezogen.
Nach Entnahme wird das Gehirn in 2 mm dicke Scheiben geschnitten, die anschließend in einer 2%igen TTC-Lösung bei 37°C für 30 min inkubiert werden. Die behandelten Schnitte werden in 3.8% Formalin gelagert. Die Bestimmung des Infarkt- Volumens erfolgt mit einer computerisierten Bildverarbeitungsanlage. Die Wirkung der Testsubstanz wird anhand entsprechender statistischer Verfahren ermittelt.
Die Behandlung der Versuchstiere mit der Testsubstanz begann 90 Minuten nach der MCA-Okklusion mit einer Bolusinjektion von 2 mg/kg i.v. Die anschließende Dauerinfusion von 1 mg/ kg/h i.v. wurde bis Ende des Versuches, das heißt, über 20,5 Stunden aufrechterhalten (Dosierungsschema "2 + 1"). Es wurden folgende prozentuale Infarktreduktionen (bezogen auf die mit Leerlösung behandelten Kontrolltiere) erzielt: