WO2002034786A1 - Procede d"elimination de polymeres d"albumine serique humaine - Google Patents

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WO2002034786A1
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human serum
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buffer
anion exchanger
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Satoshi Adachi
Hiroshi Mizokami
Yoshitaka Tajima
Yoshinobu Miyatsu
Toshinobu Nouchi
Yoshitaka Ushio
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    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
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    • C07K14/765—Serum albumin, e.g. HSA
    • A—HUMAN NECESSITIES
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    • A61P7/08—Plasma substitutes; Perfusion solutions; Dialytics or haemodialytics; Drugs for electrolytic or acid-base disorders, e.g. hypovolemic shock
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    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
    • C07K1/18—Ion-exchange chromatography

Definitions

  • the present invention relates to a method for removing multimers of human serum albumin. More specifically, the present invention relates to a method for removing a multimer of human serum albumin by contacting a human serum albumin solution containing the multimer with an anion exchanger under specific conditions.
  • HSA Human serum albumin
  • HSA Human serum albumin
  • the purified HSA is used, for example, in the treatment of hypoalbuminemia due to albumin loss such as surgery, hemorrhagic shock or burns or nephrotic syndrome.
  • purification methods usually used in protein diagnosing such as salting out method, ultrafiltration method, isoelectric point precipitation method, electrophoresis method, ion exchange chromatography, and the like.
  • One method, gel filtration method, affinity chromatography, and the like can be used.
  • an object of the present invention is to provide a method for efficiently removing a multimer of human serum albumin produced in a process for producing human serum albumin by performing only one step.
  • Another object of the present invention is to provide human serum albumin which is highly safe as a pharmaceutical.
  • the present invention is characterized in that a human serum albumin solution containing a multimer of human serum albumin is brought into contact with an anion exchanger equilibrated with a buffer having a salt concentration of 10 to 150 mM and a pH of 5 to 9.5. And a method for removing a human serum albumin multimer.
  • the present invention also provides a human serum albumin produced by a production process including the method. Includes high purity human serum albumin with reduced multimer content.
  • FIG. 1 shows that the sample after dialyzing against 50 mM phosphate buffer (pH 6.5) containing 75 mM NaCl (before treatment) and the sample after dialyzing were subjected to strong anion exchange chromatography equilibrated with the same buffer and passed through.
  • FIG. 4 is a drawing showing the results when the fraction (after treatment) was analyzed by gel filtration HPLC.
  • the method of the present invention comprises the steps of: preparing a human serum albumin solution containing a human serum albumin multimer to a buffer composition having an appropriate salt concentration, and then equilibrating the human serum albumin solution with the same buffer solution for anion exchange. It is characterized by contacting the body with a human body, removing the multimer by adsorbing it to an anion exchanger, and recovering high-purity human serum albumin. By performing this method, high-purity human serum albumin substantially free of human serum albumin multimers can be efficiently obtained.
  • multimers are expected to be produced at each production step, but multimer-containing aqueous solutions produced at any step can be used.
  • examples thereof include an aqueous solution of Fraction V of the low-temperature alcohol fractionation, and an aqueous solution containing the multimer in each purification step generated when Fraction V is subjected to further purification steps (chromatography, heat treatment, etc.).
  • the multimer-containing aqueous solution of each production step generated in the production of HSA can also be used.
  • a culture of an rHSA-producing host an aqueous solution containing a multimer in each purification step generated when the culture is subjected to a further production step (chromatography, heat treatment, etc.) and the like can be mentioned.
  • the culture includes a culture solution in which the host is cultured and a host crushed liquid obtained by crushing the host by a commonly used method.
  • the host producing rHSA is not particularly limited, and includes yeast, Escherichia coli, Bacillus subtilis, and animal cells.
  • yeast for example, Saccharomyces or Pichia
  • Saccharomyces cerevisiae AH22 or a mutant thereof is used.
  • the method of the present invention comprises a human serum albumin solution containing contaminants derived from plasma or a recombinant host, which is subjected to treatment steps such as ultrafiltration, heat treatment, ion exchange chromatography, B and B chromatographies, gel filtration and salting out. It is desirable to use it at a stage where purification has progressed to some extent (purity of HSA or rHSA is about 85% or more).
  • the type of the buffer used for preparing the albumin solution is not particularly limited, but a phosphate buffer, a tris-monohydrochloride buffer, and the like used for ordinary anion exchange chromatography are preferable.
  • the concentration of the buffer component in the buffer is generally set to the conditions under which anion exchange chromatography is performed. That is, preferably 5 to 200 mM, more preferably 10 to 100 mM is used.
  • the pH of the buffer may be set within a range in which a multimer of human serum albumin is adsorbed to the anion exchanger under the condition that the buffer does not contain a salt. That is, it is used in the range of pH 5 to 9.5, preferably in the range of pH 5.5 to 7.5, and more preferably in the range of pH 6 to 7.
  • sodium chloride, alkaline chloride metal chloride such as chloride chloride, etc. can be used, but preferably sodium chloride is preferably used.
  • the concentration of the salt is preferably in a concentration range in which a polymer is adsorbed but a monomer is not adsorbed, and is appropriately adjusted depending on a combination of a type, a concentration, and a pH of a buffer solution to be used. And preferably ranges from 25 to 100 mM, more preferably from 50 to 75 m.
  • a method of replacing by dialyzing against a buffer solution of mM, pH 5 to 9.5, a gel filtration method, a method of once concentrating a human serum albumin solution, and then diluting with a buffer solution repeatedly are used. Can be used.
  • the concentration of human serum albumin in the human serum albumin solution is not particularly limited as long as it is within the range where the albumin can be dissolved, but is preferably 1 to 30%, and more preferably 5 to 25%.
  • the base carrier for the anion exchanger is not particularly limited, but it is preferable to select a carrier that does not nonspecifically adsorb human serum albumin.
  • a strong anion exchange group any of a strong anion exchange group and a weak anion exchange group can be used, but a strong anion exchange group is preferably used.
  • the strong anion exchanger having such a strong anion exchange group include Q-Sepharose FF (manufactured by Amersham-Pharmacia Biotech) and Cellfine Q (manufactured by Millipore). There is no particular limitation.
  • an albumin solution containing the albumin multimer is subjected to column chromatography, and the albumin multimer is selectively adsorbed to the anion exchanger.
  • the albumin solution is brought into contact with an anion exchanger according to the Ricki method to selectively adsorb the multimer to the anion exchanger, and then the solution is allowed to stand or centrifuged. To separate the anion exchanger and collect the resulting supernatant.
  • either method may be used.
  • chromatography conditions such as column size and flow rate are appropriately adjusted depending on the concentration and volume of the sample. For example, for 10 L of 10% human serum albumin, an anion exchanger volume of 25 L, a column size (700 cm 2 x 35 cm), and a flow rate of 1200 ml / min are set.
  • the extent to which the multimers of human serum albumin have been removed can be determined by analyzing a part of the recovered solution by gel filtration high performance liquid chromatography (HPLC). For example, using a column of TSKgel G300SW (Tosoh Ltd. one company), eluting with 0.1MKH 2 P0 4 / 0.3M aCl buffer, it is carried out by measuring the absorbance of the 2 8 0 nm.
  • HPLC gel filtration high performance liquid chromatography
  • yeast According to the method described in Tokuhei 1 1—5 0 9 5 25, yeast (
  • Saccharomyces cerevisiae produced rHSA.
  • the culture solution containing rHSA was diluted with purified water to about twice the volume, and then adjusted to pH 4.5 with an acetic acid aqueous solution.
  • the solution was applied to a streamline SP column (manufactured by Amersham Pharmacia Biotech) (diameter: 60 cm ⁇ 16 cm), which was equilibrated with a 50 mM sodium acetate buffer (pH 4.5) containing 50 mM sodium chloride.
  • a human serum albumin solution containing 6.1% of human serum albumin multimer prepared by the method of Preparation Example (quantified by gel filtration HPLC analysis) was added to 50 mM, 75 mM, or Q-cephalo was dialyzed at room temperature for 8 hours in 50m sodium phosphate buffer (pH 6.5) containing lOOmM sodium chloride, and the human serum albumin solution was previously balanced with the same buffer.
  • the mixture was applied to a single FF column (2.5 cm x 10 cm in diameter), the same buffer (500 ml, elution rate 12 ml / min) was fed, and all the passed-through fractions were collected.
  • Experimental example 1 Gel filtration HPLC analysis
  • Example 1 The flow-through fraction 0.02ml of Example 1, gel filtration 0.1MK3 ⁇ 4P0 4 subjected to buffer equilibrated with TSKgel G300SW (Tosoh Ltd. one company) column (diameter 0.75Cmx30cm), detection wavelength 2 8 0 nm containing 0.3MNaCl HPLC analysis was performed.
  • FIG. 1 and Table 1 show the analysis results of Example 1.
  • Table 1 shows that a human serum albumin solution is dialyzed against a phosphate buffer containing sodium chloride at a concentration of 50 to 75 mM, and then the solution is passed through a strong anion exchange force column equilibrated with the same buffer. Shows that the multimers are selectively adsorbed on the strong anion exchanger, and that human serum albumin with reduced multimer concentration can be obtained with high recovery.
  • a human serum albumin-containing solution containing a multiplicity of human serum albumin is prepared into a predetermined buffer composition, and this is brought into contact with an anion exchanger equilibrated with the same buffer, The multimer can be effectively removed, and the monomer can be recovered in high yield.
  • the method of the present invention provides high-purity human serum albumin substantially free of human serum albumin multimers that may cause side effects such as shock and allergy when administered to humans.

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Description

明細 ΐ ヒト血清アルブミン多量体の除去方法
技術分野
本発明は、 ヒト血清アルブミンの多量体を除去する方法に関する。 より詳細に は、 ヒト血清アルブミンの多量体を含有するヒト血清アルブミン溶液を、 特定条 件下で陰イオン交換体と接触させることによって、 該多量体を除去する方法に関 する。 背景技術
ヒト血清アルブミン （以下、 H S Aと称することもある） は、 血漿中の主要な 蛋白成分で、 585個のアミノ酸の単鎖ポリペプチドからなり、 約 66, 000ダルトン の分子量を有する（Minghetti, P. P . et al . ( 1986 ) Molecular structure of the human albumin gene is revealed by nucleotide sequence within 11-22 of chromosome 4. J.Biol. Chem. 261, 6747-6757)。 H S Aは、 主に血液の正常 な浸透圧の維持や血中に現れるカルシウムイオン、 脂肪酸、 ビリルビン、 トリプ トフアン、 薬物など様々なものと結合し、 これらを運搬するキャリア一としての 役割を果たすことが知られている。 純ィ匕した H S Aは、 例えば、 外科手術、 出血 性ショックあるいは熱傷やネフローゼ症候群などアルブミンの喪失による低アル プミン血症の治療に使用される。
従来、 H S Aは、 ヒト血漿からコーンの低温エタノール分画法あるいは該方法 に準じた方法により、 H S A画分 （H S Aは画分 Vに分画される） を得た後、 更 に、 種々の精製方法を駆使して製造されている。 また近年、 原料をヒト血漿に依 存しない方法として、 遺伝子組換え技術を応用して酵母や大腸菌、 枯草菌にヒト 血清アルブミンを生産させる技術が開発されている。
酵母については、 ( 1 ) Production of Recombinant Human Serum Albumin from Saccharomyces cerevisiae; Quirk, R. et. al, Biotechnology and Applied Biochemistry 11, 273-287( 1989)、 (2) Secretory Expression of the Human Serum Albumin Gene in the Yeast, Saccharomyces cerevisiae; Ken.
Okabayashi et. al, J. Biochemistry, 110, 103-110(1991 )s (3) Yeast Systems for the Commercial Production of Heterologous Proteins; Richard G.
Buckholz and Martin A. G. Gleeson, Bio/Technology 9， 1067-1072( 1991)、 大 腸菌については (4) Construction of DNA sequences and their use for microbial production of proteins, in particular human serum albumin; Lawn, R. M. 3 European Patent Appl. 73,646 ( 1983)、 (5) Synthesis and Purification of mature human serum albumin from E. coli; Latta, L. et. al . Biotechnique 5, 1309-1314 (1897)、 枯草菌については（6) Secretion of human serum albumin from Bacillus subtil is; Saunders, C. . et. al, J. Bacteriol . 169, 2917-2925 ( 1987)参照。 ヒト血清アルブミンの精製方法としては、 一般に、 蛋白質ィ匕学において通常使 用される精製方法、 例えば、 塩析法、 限外濾過法、 等電点沈殿法、 電気泳動法、 ィオン交換ク口マトグラフィ一法、 ゲル濾過ク口マトグラフィ一法、 ァフィニテ ィークロマトグラフィー法等を用いることができる。 実際には、 生体組織、 細胞
、 血液などに由来する多種類の夾雑物が混在するため、 ヒト血清アルブミンの精 製は、 上記方法の複雑な組み合わせにより行われている。
ヒト血清アルブミンの工業的生産においては、 ヒ卜の体内環境と異なる諸条件 で処理する必要があり、 そのためにヒト血清アルブミンの多量体が生成する。 ヒ ト血清アルブミンの臨床応用でこれらの多量体が人体に悪影響を及ぼすという報 告はまだされていないが、 これらの多量体による新たな抗原性の発現等の懸念が ある。 このような医薬品としての安全性の観点より、 「ヒト血清アルブミン」 の 医薬品としての規格試験において多量体の混入限度が規定されており、 製剤中の 多量体の含量を充分低下させることは製造上の非常に重要な課題となっている。 このヒト血清アルブミンの多量体は、 単量体が 2分子或いはそれ以上結合して 形成されるものであり、 等電点ゃ化学的性状が単量体と非常に似通っており、 通 常生産で行われる精製方法では分離が困難である。 そのため、 従来技術ではゲル 濾過クロマトグラフィー、 イオン交換クロマトグラフィー、 ァフィ二ティ一クロ マトグラフィ一、 等電点分画処理、 硫安分画処理、 エタノール分画処理など数種 類の精製方法を組み合わせて除去されてきた （特表平 11- 509525(国際公開 W096/3 7515 特許第 2926722号 (平成 11年 5月 14日登録)。
精製方法を複数組み合わせると、 回収率は各工程の乗算となり、 生産性の低下 を招く場合が多い。 工業的観点から、 なるべく精製工程を少なくして多量体を効 率的に除去し、 かつ、 単量体は高収率で回収できる方法の開発が望まれている。 発明の開示 .
したがって、 本発明の目的は、 ヒト血清アルブミンの製造工程において生成 するヒト血清アルプミンの多量体を一段の工程のみを施すことにより効率的に除 去する方法を提供することにある。
また、 本発明の他の目的は、 医薬品として安全性の高いヒト血清アルブミンを 提供することにある。
本発明は、 ヒト血清アルブミンの多量体を含有するヒト血清アルブミン溶液を 、 塩濃度 10〜： 150 mM、 pH 5〜9.5の緩衝液で平衡ィ匕した陰イオン交換体と接触さ せることを特徴とするヒト血清アルプミン多量体の除去方法を提供するものであ る。 本発明はまた、 該方法を含む製造工程により製造されたヒト血清アルブミン 多量体の含有量が低減された高純度のヒト血清アルブミンを包含する。 以下、 本 発明について詳述する。 図面の簡単な説明
図 1は、 75mMNaClを含む 50mMリン酸緩衝液 (pH6.5)で透析した後の試料 （処理 前） 及び透析後の試料を同緩衝液で平衡化した強陰イオン交換クロマトグラフィ —にかけ、 素通りした画分 （処理後） を、 ゲル濾過 H P L Cで分析した時の結果 を示す図面である。 発明を実施するための最良の形態
本発明の方法は、 ヒト血清アルプミン多量体を含有するヒト血清アルブミン溶 液を適当な塩濃度の緩衝液組成に調製した後、 該ヒト血清アルブミン溶液を、 同 緩衝液で平衡化した陰イオン交換体と接触させ、 前記多量体を陰イオン交換体に 吸着させることにより除去し、 高純度のヒト血清アルプミンを回収することを特 徴とするものである。 この方法を実施することによって、 ヒト血清アルブミン多 量体を実質的に含有しない高純度のヒト血清アルブミンを効率的に得ることがで きる。
前記の陰イオン交換体に供されるヒト血清アルブミンとしては、 遺伝子組換え 技術によって得られた組換え型ヒト血清アルブミン （以下、 r H S Aと称するこ ともある） 又は H S Aが使用される。
血漿から H S Aを製造する際、 各製造工程で多量体を生じることが予測される が、 いずれの工程で生じた多量体含有水溶液も使用可能である。例えば、 低温ァ ルコール分画の画分 Vの水溶液、 画分 Vを更なる精製工程 （クロマトグラフィー 、 熱処理など） に供した際に生じた各精製段階の多量体含有水溶液などが挙げら れる。 r H S A製造の際に生じた各製造工程の多量体含有水溶液も同様に使用するこ とができる。 例えば r H S A産生宿主の培養物、 該培養物を更なる製造工程 ( クロマトグラフィー、 熱処理など） に供した際に生じた各精製段階の多量体含有 水溶液などが挙げられる。 ここで、 培養物とは、 上記宿主を培養した培養液及び 宿主を通常使用される方法で破砕した宿主破砕液を含むものとする。
r H S Aを生産する宿主には特に制限はなく、 酵母、 大腸菌、 枯草菌及び動物 細胞などが挙げられる。 好ましくは、 酵母、 例えば、 サヅカロミセス属、 ピキア 属が使用されるが、 更に好ましくは、 サヅカロミセスセレピシェ A H22株又はそ の変異株が用いられる。 本発明の方法は、 血漿又は組換え宿主由来の夾雑物を含むヒト血清アルブミン 溶液を、 限外濾過、 加熱処理、 イオン交換クロマト、 B及着クロマト、 ゲル濾過及 び塩析などの処理工程を経てある程度精製が進んだ段階 （ H S A又は r H S Aの 純度約 85%以上） で使用することが望ましい。
前記のアルブミン溶液を調製するために用いる緩衝液の種類は、 特に限定され ないが、 通常の陰イオン交換クロマトグラフィーに使用されるリン酸緩衝液、 ト リス一塩酸緩衝液などが好ましい。 緩衝液中の緩衝成分の濃度は、 一般に、 陰ィ オン交換クロマトグラフィ一が行われる条件に設定される。 すなわち、 好ましく は 5〜200mM、さらに好ましくは 10〜100mMが使用される。
緩衝液の pHは、 該緩衝液中に塩を含まない条件下において、 ヒト血清アルブミ ンの多量体が陰イオン交換体に吸着する範囲に設定すれば良い。 すなわち、 pH5 〜9.5の範囲、好ましくは、 pH5.5〜7, 5の範囲、更に好ましくは、 pH6〜7の範囲で使 用される。
緩衝液に添加される塩としては、 塩化ナトリゥム、 塩化力リゥム等のアル力リ 金属塩化物等が使用可能であるが、 好ましくは、 塩ィ匕ナトリウムが用いられる。 該塩の濃度は、 多量体は吸着するが単量体は吸着しない濃度範囲が好ましく、 使 用される緩衝液の種類、 濃度及び pHの組み合わせによって、適宜に調整され、 10〜 150 mMの範囲で使用することができ、好ましくは、 25〜； 100 mM、更に好ましくは、 50 〜75 mの範囲である。
塩濃度 10〜： 150 mM、 pH5〜9.5の緩衝液に溶解したヒト血清アルブミンの多量体 を含有するヒト血清アルプミン溶液は、 任意の溶液に溶解したヒト血清アルプミ ン溶液を、 塩濃度 10〜150 mM、 pH5〜9. 5の緩衝液に対して透析して置換する方法 、 ゲル濾過法、 一旦ヒト血清アルブミン溶液を濃縮した後に前記緩衝液で希釈す ることを繰り返すことにより置換する方法等を用いることができる。
ヒト血清アルブミン溶液中のヒト血清アルブミン濃度は、 該アルブミンが溶解 する濃度の範囲であれば特に限定されないが、 好ましくは 1〜30%、さらに好まし くは 5〜25%である。
陰イオン交換体のベース担体は特に限定されないが、 ヒト血清アルブミンを非 特異的に吸着しない担体を選択することが好ましい。 また、 陰イオン交換基は、 強陰イオン交換基及び弱陰イオン交換基のいずれも使用可能であるが、 好ましく は、 強陰イオン交換基が使用される。 斯かる強陰イオン交換基を有する強陰ィォ ン交換体としては、 Q—セファロ一ス F F (アマシャム ·フアルマシア ·バイオ テク社製)、 セルファイン Q (ミリポア社製)などが挙げられるが、 特に限定され ない。
陰イオン交換体を用いてアルブミン多量体を除去する方法としては、 アルブミ ン多量体を含有するアルプミン溶液をカラムクロマトグラフィ一にかけ、 アルブ ミン多量体を選択的に陰イオン交換体に吸着させ、 多量体を含まない素通り画分 を回収する方法、 ノ チ式により該アルブミン溶液を陰イオン交換体と接触させ 、 多量体を選択的に陰イオン交換体に吸着させた後、 該溶液の自然放置若しくは 遠心により陰イオン交換体を分離し、 得られる上清を回収する方法が挙げられる が、 いずれの方法でも良い。 例えば、 カラムクロマトグラフィーを行う場合、 力 ラムサイズ、 流速などのクロマトグラフィーの条件は、 試料の濃度、 容量によつ て適宜調整される。 例えば、 10%ヒト血清アルブミン 10Lに対し、 陰イオン交換体 容積 25L、カラムサイズ (700cm2 x 35cm)、流速 1200ml/分が設定される。
ヒト血清アルブミンの多量体が除去された程度については、 回収液の一部をゲ ル濾過高速液体クロマトグラフィー（H P L C )分析することによって調べること ができる。 例えば、 TSKgel G300SW (東ソ一社製） のカラムを用い、 0.1MKH2P04/ 0.3M aCl緩衝液で溶離し、 2 8 0 nmの吸光度を測定することにより行われる。 実施例
調製例：多量体を含有するヒト血清アルブミン溶液の調製
特表平 1 1— 5 0 9 5 2 5に述べられている方法に従って、 酵母 （
Saccharomyces cerevisiae) により r H S Aを生産させた。 この r H S Aを含む 培養液を精製水で約 2倍容量になるように希釈後、 酢酸水溶液を用いて pH4.5に 調整した。 50 mM塩ィ匕ナトリゥムを含む 50 mM酢酸ナトリゥム緩衝液 (pH4.5)で平 衡ィ匕したストリ一ムライン S Pカラム （アマシャム ·フアルマシア ·バイオテク 社製） （径 60cmx l6cm)に適用した。 次に、 カラムの平衡ィ匕に用いた緩衝液と同 じ緩衝液で洗浄し、 次に、 300 mM塩化ナトリゥムを含む 50 m リン酸緩衝液 (PH9.0)を送液して r H S A含有画分を得た。 当該ストリ一ムライン S Pカラム 溶出 H S A画分をホウ酸塩にて pH9.0に調整し、 5時間放置してヒト血清アルプミ ン多量体の一部を単量体化した。 実施例 1 ：透析に続く強陰イオン交換クロマトグラフィー
調製例の方法によって調製したヒト血清アルブミン多量体を 6.1% (ゲル濾過 H P L C分析での定量値） 含むヒト血清アルブミン溶液を、 50mM、 75mM、又は lOOmMの塩ィ匕ナトリウムをそれぞれ含む 50m リン酸ナトリウム緩衝液 （pH6.5) 中 で、 室温で 8時間透析した後、 該ヒト血清アルブミン溶液を予め同じ緩衝液で平 衡ィ匕した Q—セファロ一ス F Fカラム （径 2.5cmx l0cm)にかけ、 同緩衝液 （ 500ml、 溶出速度 12ml/分） を送液し、 素通りした画分をすベて回収した。 実験例 1 ：ゲル濾過 H P L C分析
実施例 1の素通り画分 0.02mlを、 0.3MNaClを含む 0.1MK¾P04緩衝液で平衡化し た TSKgel G300SW (東ソ一社製） カラム（径 0.75cmx30cm)にかけ、 検出波長 2 8 0 nmでゲル濾過 H P L C分析を実施した。 図 1及び表 1は実施例 1の分析結果を示 す。
Figure imgf000010_0001
表 1は、 ヒト血清アルブミン溶液を塩化ナトリゥムの濃度 50〜75 mMを含むリ ン酸緩衝液で透析した後、 該溶液を同緩衝液で平衡化した強陰ィオン交換体力ラ ムを通過させることにより、 強陰イオン交換体に多量体を選択的に吸着させ、 多 量体濃度が低減したヒト血清アルプミンが、 高い回収率で得られることを示す。 産業上の利用可能性
本発明によれば、 ヒト血清アルブミンの多量体が混在するヒト血清アルブミン 含有溶液を、 所定の緩衝液組成に調製し、 これを同緩衝液で平衡化した陰イオン 交換体と接触させることによって、 該多量体を効果的に除去し、 かつ単量体を高 収率で回収することができる。
また、 本発明の方法により、 ヒトに投与された場合ショックやアレルギーなど の副作用の原因となるかもしれないヒト血清アルブミンの多量体を実質的に含ま ない高純度のヒト血清アルブミンが提供される。

Claims

m求の範囲
1 . ヒト血清アルプミンの多量体を含有するヒト血清アルブミン溶液を、 塩濃度 10〜； 150 mM pH 5 9.5の緩衝液で平衡ィ匕した陰イオン交換体と接触させること を特徴とするヒト血清アルブミン多量体の除去方法。
2 . 前記緩衝液が、 塩濃度 25〜： 100 m、 .5 7.5でぁる請求項1記載の方法。
3 . 前記緩衝液が、 塩濃度 50 75 mM pH6 7である請求項 2記載の方法。
4 . 陰ィオン交換体が強陰イオン交換体である請求項 1ないし 3のいずれか 1項 記載の方、法。
5 . ヒト血清アルブミンの多量体を含有するヒト血清アルプミン溶液を、 塩ィ匕ナ トリゥム 50 75 m を含む pH 6 7のリン酸ナトリゥム緩衝液で溶媒置換した後
、 同緩衝液で平衡化した強陰イオン交換体と接触させ、 多量体を吸着、 除去する ことを特徴とする請求項 1記載の方法。
6 . ヒト血清アルプミンの多量体を含有するヒト血清アルプミン溶液を、 塩ィ匕ナ トリゥム 50 75 mMを含む pH 6 7のリン酸ナトリゥム緩衝液で溶媒置換した後
、 同緩衝液で平衡化した強陰イオン交換クロマトグラフィーにかけて多量体を強 陰イオン交換体に吸着させ、 多量体を実質的に含有しない素通り画分を回収する ことを特徴とする請求項 1記載の方法。
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