WO2002032847A1 - Procede de purification de la pravastatine ou de son sel pharmacologiquement acceptable - Google Patents

Procede de purification de la pravastatine ou de son sel pharmacologiquement acceptable Download PDF

Info

Publication number
WO2002032847A1
WO2002032847A1 PCT/JP2001/009044 JP0109044W WO0232847A1 WO 2002032847 A1 WO2002032847 A1 WO 2002032847A1 JP 0109044 W JP0109044 W JP 0109044W WO 0232847 A1 WO0232847 A1 WO 0232847A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
salt
pravastatin
sodium
pharmacologically acceptable
acceptable salt
Prior art date
Application number
PCT/JP2001/009044
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Nobunari Sugio
Shunshi Kojima
Mutsuo Suzuki
Kiyoshi Hamano
Yasuyuki Takamatsu
Minoru Hagisawa
Original Assignee
Sankyo Company, Limited
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority to BR0114680-7A priority Critical patent/BR0114680A/pt
Application filed by Sankyo Company, Limited filed Critical Sankyo Company, Limited
Priority to PL01360920A priority patent/PL360920A1/xx
Priority to IL15515801A priority patent/IL155158A0/xx
Priority to SK452-2003A priority patent/SK4522003A3/sk
Priority to KR10-2003-7004751A priority patent/KR20030043984A/ko
Priority to EP01974857A priority patent/EP1327624A4/en
Priority to AU2001294257A priority patent/AU2001294257A1/en
Priority to HU0303123A priority patent/HUP0303123A3/hu
Priority to MXPA03003346A priority patent/MXPA03003346A/es
Priority to CA002425882A priority patent/CA2425882A1/en
Publication of WO2002032847A1 publication Critical patent/WO2002032847A1/ja
Priority to NO20031738A priority patent/NO20031738L/no
Priority to US10/414,691 priority patent/US20030204105A1/en

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/62—Carboxylic acid esters
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C67/00—Preparation of carboxylic acid esters
    • C07C67/48—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
    • C07C67/52—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives by change in the physical state, e.g. crystallisation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C67/00—Preparation of carboxylic acid esters
    • C07C67/48—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
    • C07C67/60—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives by treatment giving rise to chemical modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C2602/00—Systems containing two condensed rings
    • C07C2602/02—Systems containing two condensed rings the rings having only two atoms in common
    • C07C2602/14—All rings being cycloaliphatic
    • C07C2602/26—All rings being cycloaliphatic the ring system containing ten carbon atoms
    • C07C2602/28—Hydrogenated naphthalenes

Definitions

  • the present invention relates to a method for purifying pravastatin or a pharmacologically acceptable salt thereof by salting out.
  • Pravastatin is a compound disclosed as a ⁇ MG-Go ⁇ reductase inhibitor in JP-A-57-2240 (US Pat. No. 4,346,227), and has the following formula (I)
  • Pravastatin sodium is currently being marketed as a therapeutic agent for hypolipidemia (
  • WO 92/1 6276 (Tokuhyo Hei 6-506 210) discloses: "An HMG-CoA reductase inhibitor characterized by using high performance liquid chromatography.
  • the HMG-CoA reductase inhibitor specifically described with respect to the ⁇ Purification method '' is a fat-soluble oral pastatin and simpastatin in order to obtain a ratatotone body as a final product. This is different from pravastatin, which uses salt as the final product.
  • WO 00/17182 discloses “displacement chromatography And a method of purifying an HMGG-CoA reductase inhibitor. However, after all, considering industrial production, purification using chromatography such as high performance liquid chromatography or displacement chromatography is cumbersome and impractical.
  • This gazette discloses that after adjusting a culture concentrate of an HMG-CoA reductase inhibitor to pH 4.5 to 7.5 with an acid, the HMG-CoA reductase inhibitor was extracted with ethyl acetate. And then, if desired, lactonizing and crystallizing to obtain an HMG-CoA reductase inhibitor having a purity of 99.6 / o or more.
  • Example 3 of this publication describes a method for isolating or purifying pravastatin, in this example, the purity of pravastatin extracted with ethyl acetate was less than 70.3%. However, after all, there is a description of purification using chromatography, and further, the purity of the finally obtained pravastatin is not described at all, and high-purity pravastatin is finally obtained. It is unknown at first whether or not.
  • lovastatin which is said to be obtained with a purity of 99.6% or more, has a purity of 99.9%, as shown in the HPLC chart of the final product (Fig. 4). It is unlikely that more than 6% of the oral pastatin is obtained and is not credible.
  • the purification method of the present invention is characterized by using salting-out, and is a method of adding an inorganic salt or the like to an aqueous solution to precipitate a previously dissolved substance.
  • salting out purifies high molecular compounds such as protein amino acids from impurities.
  • high molecular compounds such as protein amino acids
  • salting out purifies high molecular compounds such as protein amino acids from impurities.
  • high molecular compounds such as protein amino acids from impurities.
  • salt ions used to For example, when a large amount of salt is added to an aqueous solution of a protein, the interaction between the protein molecule and the water molecule is hindered by salt ions, so that the protein is precipitated.
  • HMG-CoA reductase inhibitors Many compounds other than pravastatin are known as HMG-CoA reductase inhibitors.
  • atorvastatin, flupastatin, itavastatin and the like are all compounds produced by synthesis.
  • lovastatin and simpastatin are produced by fermentation in the same way as pravastatin, but are produced by one-stage fermentation, but pravastatin is produced by two-stage fermentation. That is, as shown in the following formula, pravastatin sodium is produced by subjecting the precursor produced in the first stage fermentation to microbial conversion culture in the second stage.
  • fermenting a bacterium produces many unpredictable impurities rather than performing a chemical reaction. Even if purification is performed in each step, it is not possible to remove all the impurities, and it is even more difficult to remove the impurities, especially in a large-scale culture for industrial production.
  • "One of the key factors in producing safe and effective medicines is obtaining high-purity products. Chemical substances are synthesized from raw materials, and are produced by living organisms. Obtained by a manufacturing method such as isolating or purifying the substance, or isolating or purifying the substance produced by production using genetically modified cells, etc.
  • HMG-CoA reductase inhibitors are drugs that are administered over a long period of time to effectively lower blood cholesterol, and must be particularly high-purity to minimize side effects. It is said that.
  • pravastatins produced by two-step fermentation produce more impurities than simvastatin and oral pastatin produced by one-step fermentation, and thus the purification step is particularly important.
  • pravastatin or a pharmacologically acceptable salt thereof is not so complicated and industrially disadvantageous as chromatography, does not impair productivity, and has high purity enough to be purified by chromatography.
  • Disclosure of the invention is not so complicated and industrially disadvantageous as chromatography, does not impair productivity, and has high purity enough to be purified by chromatography.
  • the present inventors have studied a method for isolating or purifying pravastatin or a pharmacologically acceptable salt thereof having a purity as high as that which can be purified by chromatography, without impairing process productivity, for many years. As a result, they have found that high purity pravastatin can be selectively precipitated by using salting out for pravastatin, which is a low molecular compound, and completed the present invention.
  • Alkali metal salt refers to, for example, alkali metal halides such as lithium chloride, potassium chloride, and sodium chloride, lithium acetate, potassium acetate, sodium acetate, lithium formate, potassium formate, and sodium formate.
  • Alkali metal organic oxides, salts containing alkali metals such as alkali metal inorganic oxides such as lithium nitrate, potassium nitrate, sodium nitrate, lithium sulfate, lithium sulfate, sodium sulfate, etc.
  • alkaline earth metal salt means, for example, an alkaline earth metal halide such as magnesium chloride, an alkaline earth metal organic oxide such as magnesium acetate or magnesium formate, magnesium nitrate, magnesium sulfate, or the like.
  • a salt containing an alkaline earth metal such as an anorekari earth metal inorganic oxide such as
  • ammonium salt is, for example, an ammonium salt such as ammonium chloride, ammonium acetate, ammonium formate, ammonium nitrate, or ammonium sulfate.
  • the salt used in the salting-out of the present invention is not particularly limited as long as it is generally used as a salt, but is preferably an alkali metal salt, an alkaline earth metal salt or an ammonium salt. More preferably, it is an alkali metal salt or an ammonium salt, more preferably, sodium chloride, ammonium sulfate, ammonium acetate or ammonium nitrate, and most preferably, sodium chloride.
  • Pharmacologically acceptable salt '' in ⁇ Pharmacologically acceptable salt '' There is no particular limitation as long as it does not cause pharmacological side effects and is usually used as a salt, but examples thereof include alkali metal salts such as sodium salt, potassium salt, and lithium salt, calcium salts, and magnesium salts.
  • Metal salts such as alkaline earth metal salts, aluminum salts, and iron salts; inorganic salts such as ammonium salts; metal salts such as aluminum salts, iron salts, zinc salts, copper salts, Eckerl salts, and cobalt salts; t-octylamine Salt, dibenzylamine salt, morpholine salt, darcosamine salt, phenylglycine alkyl ester salt, ethylenediamine salt, N-methyldalcamine salt, guanidine salt, getylamine salt, triethylamine salt, dicyclohexylamine salt, N, N'-dibenzyl Ethylene diamine salt, black mouth, procaine salt, procaine, dietano Amine salts such as organic amines such as ruamine salts, N-benzylphenethylamine salts, piperazine salts, tetramethylammonium salts, tris (hydroxymethyl) aminoamino salts
  • the salting-out method of the present invention comprises adding an inorganic salt to an aqueous solution in which pravastatin or a pharmacologically acceptable salt is dissolved or suspended, cooling the mixture, then adding pravastatin seed crystals, and re-adding.
  • the cooling is carried out by precipitating the salt of pravastatin.
  • the salt used for salting out may or may not have the same cation as the pharmacologically acceptable salt of pravastatin.
  • the amount of the inorganic salt to be added to the aqueous solution in which the pharmacologically acceptable salt of prapastatin is dissolved or suspended is preferably 5% to 40% with respect to the amount of the above aqueous solution, most preferably. Is between 15% and 35%.
  • the temperature at which an inorganic salt is added to an aqueous solution in which a pharmacologically acceptable salt of pravastatin is dissolved or suspended and heated varies depending on the type of the inorganic salt used, but is usually from 20 ° C to 60 ° C. C, and preferably 30 ° C. to 45 ° C.
  • the method for purifying pravastatin or a pharmacologically acceptable salt thereof according to the present invention is characterized in that, in addition to salting-out, the power of performing a step of decomposing impurities with an inorganic base is combined, and / or The force performed by combining the steps of decomposition in each step is performed by the following method.
  • the “inorganic base” used in the inorganic base decomposition of impurities is not particularly limited as long as it is used as an inorganic base in a usual reaction, and examples thereof include lithium carbonate, sodium carbonate, and potassium carbonate.
  • Alkali metal carbonates Alkali metal bicarbonates such as lithium bicarbonate, sodium bicarbonate, hydrogen bicarbonate
  • Alkali metal hydrides such as lithium hydride, sodium hydride, hydrogen hydride
  • water Alkali metal hydroxides such as lithium oxide, sodium hydroxide and potassium hydroxide
  • alkaline metal alkoxides such as lithium methoxide, sodium methoxide, sodium methoxide and potassium t-butoxide
  • alkali metal hydroxides and most preferred are hydroxides Sodium.
  • the step of decomposing the impurities of pravastatin or a pharmaceutically acceptable salt thereof with an inorganic base is carried out in the presence or absence (preferably, in the presence) of an inert solvent, of pravastatin or a pharmaceutically acceptable salt thereof. Is performed under the condition of giving pH10 to pH14.
  • the reaction temperature and reaction time for decomposing pravastatin or its pharmacologically acceptable salt impurities with an inorganic base also depend on the pH value, but basically, the lower the reaction temperature, the longer the reaction time If the reaction temperature is high, the reaction time must be shortened.For example, the reaction temperature is -10 ° C to 110 ° C, and the reaction time is 15 minutes to 200 hours. is there.
  • the preferred reaction conditions for decomposing impurities contained in the culture concentrate containing pravastatins produced by the bacteria with an inorganic base are as follows: pH is 11 to 14 (more preferably, 11 to 12). ), The reaction temperature is 40 ° C to 110 ° C (more preferably, 95 ° C to 105 ° C), and the reaction time is 2 hours to 24 hours (more preferably, 2 hours to 5 hours). Time).
  • the inert solvent used to decompose pravastatin or its pharmacologically acceptable salt impurities with an inorganic base is an inert solvent that is inert to this reaction, and is usually used conveniently as a solvent.
  • an aqueous acid solution such as an aqueous sulfuric acid solution is added, an organic solvent immiscible with water such as ethyl acetate is added, an organic layer containing a target compound is separated, washed with water or the like, and the solvent is distilled off.
  • an aqueous acid solution such as an aqueous sulfuric acid solution is added, an organic solvent immiscible with water such as ethyl acetate is added, an organic layer containing a target compound is separated, washed with water or the like, and the solvent is distilled off.
  • activated carbon to remove color
  • remove activated carbon by filtration add a salt-forming reagent such as sodium methoxide, sodium ethoxide, and sodium hydroxide, and concentrate under reduced pressure using a rotary evaporator.
  • pravastatin salt can be obtained.
  • the “inorganic acid” commonly used in the inorganic acid decomposition of impurities is not particularly limited as long as it is usually used as an inorganic acid. Examples thereof include hydrobromic acid, hydrochloric acid, sulfuric acid, perchloric acid, Inorganic acids such as phosphoric acid and nitric acid can be mentioned, preferably phosphoric acid or sulfuric acid, and most preferably phosphoric acid.
  • the step of decomposing pravastatin or a pharmaceutically acceptable salt thereof with an inorganic acid the step of decomposing pravastatin or a pharmaceutically acceptable salt thereof in the presence or absence (preferably, in the presence) of an inert solvent is performed. The reaction is performed under the condition of giving pH 2 to 5 (preferably pH 3 to 4).
  • the reaction temperature and reaction time for decomposing pravastatin or its pharmacologically acceptable salt impurities with an inorganic acid also depend on the pH value, but basically, the lower the reaction temperature, the longer the reaction time If the reaction temperature is high, the reaction time must be shortened.
  • the reaction temperature is 20 ° C. to 80 ° C. (preferably 40 ° C. to 60 ° C.). ), And the reaction time is 1 minute to 6 hours (preferably 5 minutes to 20 minutes).
  • the inert solvent used when decomposing the impurities of pravastatin or a pharmacologically acceptable salt thereof with an inorganic acid is not particularly limited as long as it is inert to the reaction. And the same inert solvent as those used in the step of decomposing impurities.
  • the target compound, pravastatin is collected from the above reaction solution according to a conventional method.
  • it can be obtained by adding an organic solvent immiscible with water such as ethyl acetate, separating an organic layer containing the target compound, purifying the organic layer with water or the like, and distilling off the solvent.
  • an organic solvent immiscible with water such as ethyl acetate
  • separating an organic layer containing the target compound purifying the organic layer with water or the like, and distilling off the solvent.
  • activated carbon to decolorize remove the activated carbon by filtration
  • add a salt-forming reagent such as sodium hydroxide, sodium methoxide, sodium methoxide, and reduce the pressure with a mouth evaporator.
  • the pravastatin salt can be obtained by concentration under the following conditions.
  • pravastatin or a pharmacologically acceptable salt thereof may be purified as described above and then crystallized.
  • a method L1 well known in the art of organic synthetic chemistry is described in Ulmann's, Encyclopedia. of Industrial Chemistry, Vol. A24, 5th edition (1993), pp. 437-505].
  • pravastatin or a pharmacologically acceptable salt thereof is obtained by adding an organic solvent and water to purified pravastatin or a pharmacologically acceptable salt thereof, heating and dissolving, and inoculating the solution. Can be obtained.
  • organic solvent used for crystallization examples include aliphatic hydrocarbons such as hexane and heptane; aromatic hydrocarbons such as toluene and xylene: methyl acetate, ethyl acetate, propyl acetate, and acetic acid.
  • Esters such as butyl and getyl carbonate; organic acids such as acetic acid; methanol, ethanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol, isobutanol, t-butanol, isoamyl alcohol, Alcohols such as tylene glycol, glycerin, and otanol; ketones such as acetone and methylethyl ketone; ethers such as getyl ether, diisopropyl ether, tetrahydrofuran, dioxane, dimethoxetane, diethylene glycol dimethinole ether Amides such as formamide, dimethylformamide, dimethylacetamide, and hexamethylphosphoric triamide; sulfoxides such as dimethinole sulfoxide; or a mixed solvent of water and one or more of the above solvents. More preferably, it is a mixed solvent of water and one or more
  • low-purity brapastatin or a pharmacologically acceptable salt thereof can be obtained without using a complicated and low-productivity method such as column chromatography, which is not suitable for industrial production. Salt can be obtained.
  • the pravastatin of the present invention or a pharmacologically acceptable salt thereof is used as a medicament, it is mixed with a pharmacologically acceptable diluent or the like itself or an appropriate pharmacologically acceptable agent. It can be administered orally by a lock, capsule, granule, powder, syrup or the like, or parenterally by injection or suppository.
  • HPLC high performance liquid chromatography
  • the aqueous layer (3) was charged into an eggplant flask (50 O ml), and concentrated under reduced pressure to about 2Z5 with an evaporator to obtain a back-extracted aqueous layer concentrate (88 ml) (content of pravastatin sodium: 19.3 g). .
  • Example 1 The aqueous layer (3) was charged into an eggplant flask (50 O ml), and concentrated under reduced pressure to about 2Z5 with an evaporator to obtain a back-extracted aqueous layer concentrate (88 ml) (content of pravastatin sodium: 19.3 g).
  • bravastatin sodium 78.69% according to 3 ml tH PLC (Condition A) of the back-extracted aqueous layer concentrate obtained in Reference Example 1 was subdivided into test tubes and approximately 50. Add up to C After the temperature, 0.83 g of ammonium nitrate was added, and the mixture was cooled to 38 ° C to precipitate crystals. The mixture was heated to 53 ° C, but the crystals did not dissolve. The mixture was cooled to 0 ° C and filtered. The crystals were washed with cold water to obtain pravastatin sodium salted out crystals. Purity of pravastatin sodium by HPLC (Condition A) was 93.37%. Example 7.
  • 132 ml of ethyl acetate was added to 7 Om 1 of the alkali-treated solution (content of pravastatin sodium: 5.3 g), and the pH was adjusted to 5.4 with a 20% aqueous sulfuric acid solution while stirring at room temperature. After stirring and extracting at room temperature, the mixture was separated into an ethyl acetate layer 1 and an aqueous layer 1. 132 ml of ethyl acetate was added to the aqueous layer, and the mixture was extracted and separated to obtain an ethyl acetate layer.
  • pravastatin sodium content 4.4 g
  • Purity of pravastatin sodium by HPLC is 84.88. /. Met.
  • This back-extracted aqueous layer is concentrated under reduced pressure to about 1/2 volume with an evaporator, and After adjusting the pH to 12 with a sodium aqueous solution, salting out was performed in the same manner as in Example 1 using sodium chloride to obtain a pravastatin sodium precipitated crystal.
  • the purity of pravastatin sodium according to HP LC (condition A) is 99.54. /. Met.
  • pravastatin sodium crystals Purity of pravastatin sodium by HPLC (Condition B) is 99.85 ° /. Met.
  • 60 ml of the back-extracted aqueous layer was concentrated to about 20%, cooled to 0 ° C, and then 4 equivalents of sodium hydroxide.

Description

明細 ΐ プラバスタチン又はその薬理上許容される塩の精製方法 技術分野
本発明は、塩析により、 プラバスタチン又はその薬理上許容される塩を精製する 方法に関する。 技術背景
プラバスタチンは、 特開昭 57- 2240号公報 （US P 4346227) に Η MG- Go Αリダクタ一ゼ阻害剤として開示されている化合物であり、下記式（I)
Figure imgf000002_0001
を有し、現在、 プラバスタチンナトリゥムが髙脂血症治療剤として発売されている (
—方、 プラバスタチンも含まれる HMG- C o Aリダクターゼ阻害剤の精製方法 としては、 以下のものが知られている。
(1) WO 92/1 6276号公報 （特表平 6— 506 210号公報） は、 ·「高性 能液体クロマトグラフィーを使用することを特徴とする HMG-C o Aリダクタ一 ゼ阻害剤の精製方法」 に関し、 具体的に記載されている HMG- C o Aリダクタ一 ゼ阻害剤は、 ラタ トン体を最終生成物とするために、脂溶性の口パスタチン及びシ ンパスタチンであり、 そもそも、ナトリゥム塩を最終生成物とするプラバスタチン とは相違する。 一方、 WO00/17182号公報は、 「置換クロマトグラフィ一 を使用することを特徴とする HM G- C o Aリダクターゼ阻害剤の精製方法」 に関 する。 しかしながら、 所詮、 工業的生産を考盧すれば、 高性能液体クロマトグラフ ィ一や置換クロマトグラフィ一のようなクロマトグラフィーを使用して精製する ことは、 煩雑で、 実用的ではない。 ( 2 ) WO 9 9 / 4 2 6 0 1号公報
本公報は、 「HMG-C o Aリダクターゼ阻害剤の培養濃縮液を、酸で p H 4 . 5 乃至 7 . 5に調節した後、 酢酸ェチルで HMG - C o Aリダクタ一ゼ阻害剤を抽出 し、 所望によりラク トン化させた後結晶化することにより、 9 9 . 6。/o以上の純度 を有する HMG- C o Aリダクターゼ阻害剤を得る単離又は精製方法」 に関する。 本公報の実施例 3には、プラバスタチンの単離又は精製方法が記載されているも のの、 本実施例では、 酢酸ェチルで抽出されたプラバスタチンの純度が 7 0 . 3 % 足らずに留まっており、 結局のところ、 その後、 クロマトグラフィーを用いて精製 する記載があり、 しかも、最終的に得られたプラバスタチンの純度については全く 記載されておらず、最終的に高純度のプラバスタチンが得られているのか否かはそ もそも不明である。
また、 本公報の実施例において、 9 9 . 6 %以上の髙純度で得られるとされてい るロバスタチンでさえ、 最終生成物の H P L Cのチャート （Fig. 4) を見る限り、 純度が 9 9 . 6 %以上の口パスタチンが得られているとは考えにくく、信憑性がな い。
いずれにせよ、 プラバスタチンの精製のためには、煩雑なクロマトグラフィーを 使用せねばならないことは変わりがなレ、。 ところで、 本発明の精製方法は、 塩析を用いることを特徴とする力 塩折は、 水 溶液に無機塩類等を加え、 先に溶解している物質を析出させる方法をいう。
通常、塩析は、 タンパク質ゃァミノ酸のような高分子化合物を不純物から精製す るために用いられる。 例えば、 タンパク質の水溶液に多量の塩を加えることにより 、 タンパク質分子と水分子相互作用が塩類イオンにより妨げられるため、 タンパク 質が析出してくるのである。
一方、 低分子化合物の水溶液に無機塩類等を加えた場合も、塩結晶が析出する場 合がある。 これは、 上記高分子化合物に塩析を用いる場合とは異なる。塩類を水に 加えることによって、塩類の水和力によりまわりの水分子が水和水として固定され るので、溶質の溶解を可能にする水分子の量が減少し、溶質が析出してくるのであ る。 しカゝしながら、 低分子化合物であって、 しカゝも、 極めて化学構造の近似した類 縁物質が、 溶質として、 多数、 水溶液に解けている場合、 選択的にある特定の化合 物のみを高純度で析出させることは困難であると考えられていた。 このため、 プラ パスタチンのみならず、 いかなる HMG- C ο Aリダクターゼ阻害剤についても、 塩析により精製することは、 記載も示唆もなかった。
HMG-C o Aリダクタ一ゼ阻害剤として、 プラバスタチンの他に多くの化合物 が知られているが、 例えば、 アトロバスタチン、 フルパスタチン、 イタバスタチン 等は、 全て合成により製造される化合物である。
—方、 ロバスタチン及びシンパスタチンは、 プラバスタチンと同様に発酵により 製造されるものの、 一段階の発酵により生成されるが、 プラバスタチンは、 二段階 発酵により生成される点で相違する。 すなわち、 プラバスタチンナトリウムは、 下 記式に示すとおり、一段階目の発酵で生成された前駆体を二段階目で微生物変換培 養を行うことにより、 生成されるものである。
ぺニシリゥム
シトリナム
Figure imgf000004_0001
そもそも、 菌を発酵させた場合、 化学反応で合成を行うよりも、 予想し得ない多 くの不純物が生成してしまうものである。各工程毎に精製を行ったとしても、全て の不純物を除去しきれるものではなく、 特に、 工業的生産を目的とした大量培養に おいては、 不純物を除去することはなおさら困難である。 そして、 一方では、 「安全で有効な医薬を製造するための重要な因子の一つが、 高純度の生成物を得ることである。 化学物質は、 原料物質から化学合成、 生物によ り生產された当該物質を単離若しくは精製する又は遺伝子組換え細胞等を利用し た生産で生成された当該物質を単離若しくは精製する等の製法により取得される。 一般的に、 遺伝子組換法を含めいかなる製法を採用しようが、 原料の純度、 反応の 不完全性、 単離又は精製過程での分解等により、製造される化学物質は 1 0 0 %の 純度のものを得ることは困難なことが多い。 また、 医薬の分野において、 診断薬、 治療薬は、不純物を含むと診断や治療に好ましくない影響を及ぼす可能性を否定す ることができないのは、本願発明の属する技術分野における技術常識に属すること は明らかであり、できる限り髙純度の生成物を得る事が重要とされている。」 （東京 高裁平成 9年 （行ケ） 第 3 0 2号事件 （1 2年 2月 1 7日判決）） のである。
特に、 HMG- C o Aリダクターゼ阻害剤は、 血中コレステロールを有効に低下 させるために、 投与期間が長期にわたるような薬剤であり、副作用を極力低減させ るため、 特に高純度であることが必要とされるのである。
上記のとおり、二段階発酵により生成されるプラバスタチン類は、一段階発酵に より生成されるシンパスタチン及び口パスタチンに比べて、不純物もより多く生成 されるため、 精製工程が特に重要である。
従って、 クロマトグラフィーのような煩雑で、 工業的に不利なものではなく、 ェ 程生産性を損なわず、 しかもクロマトグラフィーで精製される程度の高純度で、 プ ラバスタチン又はその薬理上許容される塩を単離又は精製する方法が望まれてい た。 発明の開示
本発明者らは、 永年に 1り、 工程生産性を損なわず、 クロマトグラフィーで精製 される程度の高純度で、プラバスタチン又はその薬理上許容される塩を単離又は精 製する方法を検討した結果、低分子化合物であるプラバスタチンに対して塩析を用 いることにより、選択的に髙純度のプラバスタチンが析出することを見出し、本発 明を完成した。 本発明は、
(1) 塩析により、 プラバスタチン又はその薬理上許容される塩を精製する方法 に関し、 好適には、
(2) 塩析に用いられる塩が、 アルカリ金属塩、 アルカリ土類金属塩又はアンモニ ゥム塩である （1) に記載の方法、
(3) 塩析に用いられる塩が、 アルカリ金属塩又はアンモニゥム塩である （1) に 記載の方法、
(4) 塩析に用いられる塩が、 塩化ナトリウム、 硫酸アンモニゥム、 酢酸アンモニ ゥム又は硝酸アンモ-ゥムである （1) に記載の方法、
(5) 塩祈に用いられる塩が、 塩化ナトリウムである （1) に記載の方法、
(6)更に、不純物を無機塩基で分解する工程を組み合わせて行う、 （1)乃至（5) より選択されるいずれか一項に記載の方法、
(7) 更に、 不純物を無機酸で分解する工程を組み合わせて行う、 （1) 乃至 （6) より選択されるいずれか一項に記載の方法、
(8) 無機酸が、 リン酸又は硫酸である、 （7) に記載の方法、
(9) 無機酸が、 リン酸である、 （7) に記載の方法、
(10) 無機酸を用いて分解する工程の p Hが、 2乃至 5である、 （7) 乃至 （9) より選択される！、ずれか一項に記載の方法及び
( 1 1 ) プラバスタチンナトリウムを精製する、 （1 ) 乃至 （1 0 ) より選択さ れるいずれか一項に記載の方法
である。 本発明の塩析に用いられる塩において、
「アルカリ金属塩」 とは、 例えば、 塩化リチウム、 塩化カリウム、 塩化ナトリウ ムのようなアルカリ金属ハロゲン化物、 酢酸リチウム、 酢酸力リウム、酢酸ナトリ ゥム、 ギ酸リチウム、 ギ酸カリウム、 ギ酸ナトリウムのようなアルカリ金属有機酸 化物、 硝酸リチウム、 硝酸カリウム、 硝酸ナトリウム、 硫酸リチウム、 硫酸力リウ ム、硫酸ナトリウムのようなアルカリ金属無機酸化物等のようなアルカリ金属を含 有する塩であり、
「アル力リ土類金属塩」 とは、 例えば、塩化マグネシウムのようなアル力リ土類金 属ハロゲン化物、酢酸マグネシウム、 ギ酸マグネシウムのようなアルカリ土類金属 有機酸化物、硝酸マグネシゥム、硫酸マグネシゥムのようなァノレカリ土類金属無機 酸化物等のアル力リ土類金属を含有する塩であり、
「アンモニゥム塩」 とは、 例えば、 塩化アンモニゥム、 酢酸アンモニゥム、 ギ酸ァ ンモユウム、硝酸アンモニゥム、硫酸アンモニゥムのようなアンモニゥム塩である。 なお、 本発明の塩析に用いられる塩としては、 通常、塩として使用されるもので あれば特に限定はないが、 好適には、 アルカリ金属塩、 アルカリ土類金属塩又はァ ンモニゥム塩であり、 更に好適には、 アルカリ金属塩又はアンモ-ゥム塩であり、 より好適には、塩化ナトリゥム、 硫酸アンモニゥム、 酢酸アンモユウム又は硝酸ァ ンモユウムであり、 最も好適には、 塩化ナトリウムである。
)薬1 理上許容される塩」 の 「薬理上許容される塩」 とは, 薬理学的に副作用を起こさず、通常、塩として使用されるものであれば特に限定は ないが、 例えば、 ナトリウム塩、 カリウム塩、 リチウム塩のようなアルカリ金属塩、 カルシウム塩、 マグネシウム塩のようなアルカリ土類金属塩、 アルミニウム塩、 鉄 塩等の金属塩；アンモニゥム塩のような無機塩、 アルミニウム塩、 鉄塩、 亜鉛塩、 銅塩、 エッケル塩、 コバルト塩等の金属塩、 t—ォクチルァミン塩、 ジベンジルァ ミン塩、 モルホリン塩、 ダルコサミン塩、 フエニルグリシンアルキルエステル塩、 エチレンジァミン塩、 N—メチルダルカミン塩、 グァニジン塩、 ジェチルァミン塩、 トリェチルァミン塩、 ジシクロへキシルァミン塩、 N， N ' —ジベンジルエチレン ジァミン塩、 クロ口プロ力イン塩、 プロカイン 、 ジエタノールアミン塩、 N—べ ンジルフエネチルァミン塩、 ピぺラジン塩、 テトラメチルアンモニゥム塩、 トリス (ヒ ドロキシメチル） ァミノメタン塩のような有機塩等のァミン塩；及び、 グリシ ,ン塩、 リジン塩、 アルギニン塩、 オル二チン塩、 グルタミン酸塩、 ァスパラギン酸 塩のようなアミノ酸塩であり、 好適には、 アルカリ金属塩、 アルカリ土類金属塩、 無機塩又は金属塩であり、 更に好適には、 アルカリ金属塩であり、 最も好適には、 ナトリゥム塩である。 本発明の精製方法は、 以下に記載する方法によって達成される。
即ち、本発明の塩析方法は、 プラバスタチン若しくはその薬理上許容される塩が、 溶解又は懸濁している水溶液に無機塩を加えた後、 冷却し、 次いで、 プラバスタチ ン種結晶を添加し、再度冷却することにより、 プラバスタチンの塩を析出させるこ とにより行なわれる。
塩析に用いられる塩は、プラバスタチンの薬理上許容される塩と同じカチオンを 有していてもいなくてもよい。 プラパスタチンの薬理上許容される塩が溶解又は懸濁した水溶液に加える無機 塩の量は、 好適には、 上記水溶液の量に対して、 5 %乃至 4 0 %であり、 最も好適 には、 1 5 %乃至 3 5 %である。 プラバスタチンの薬理上許容される塩が溶解又は懸濁した水溶液に無機塩を加 え、 加熱する際の温度は、 使用される無機塩の種類により異なるが、 通常、 2 0 °C 乃至 6 0 °Cであり、 好適には、 3 0 °C乃至 4 5 °Cである。 本発明の、 プラバスタチン又はその薬理上許容される塩の精製方法は、塩析に加 えて、 更に、 不純物を無機塩基で分解する工程を組み合わせて行う力、 又は/及び、 更に、 不純物を無機酸で分解する工程を組み合わせて行う力 各工程については、 以下の方法により行なわれる。 不純物の無機塩基分解で使用される 「無機塩基」 とは、 通常の反応において無機 塩基として使用されるものであれば特に限定はないが、 例えば、 炭酸リチウム、 炭 酸ナトリウム、 炭酸カリゥムのようなアルカリ金属炭酸塩類；炭酸水素リチウム、 炭酸水素ナトリウム、炭酸水素力リウムのようなアル力リ金属重炭酸塩類；水素化 リチウム、水素化ナトリウム、水素化力リゥムのようなアルカリ金属水素化物類； 水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化力リウムのようなアル力リ金属水酸化 物類；又はリチウムメ トキシド、 ナトリウムメ トキシド、 ナトリゥムェトキシド、 カリウム t一ブトキシドのようなアル力リ金属アルコキシド類を挙げることがで き、 好適には、 アルカリ金属水酸化物類であり、 最も好適には、 水酸化ナトリウム である。 プラバスタチン又はその薬理上許容される塩の不純物を無機塩基で分解するェ 程は、 不活性溶媒の存在下又は非存在下 （好適には、 存在下） に、 プラバスタチン 又はその薬理上許容される塩を、 p H l 0〜p H l 4を付与する条件で行われる。 プラバスタチン又はその薬理上許容される塩の不純物を無機塩基で分解する際 の反応温度及び反応時間は、 pH値にも依存するが、 基本的には、 反応温度が低け れば反応時間は長くする必要があり、反応温度が高ければ反応時間は短くする必要 があるが、 例えば、 反応温度は、 ー 10°C〜1 10°Cであり、 反応時間は、 1 5分 間乃至 200時間である。 また、菌により生成されたプラバスタチン類を含む培養濃縮液に含まれる不純物 を無機塩基で分解する場合の好適な反応条件は、 pHは、 1 1乃至 14 (より好適 には、 1 1乃至 1 2) であり、 反応温度は、 40¾乃至1 10°C (より好適には、 95°C乃至 105°C) であり、 反応時間は、 2時間乃至 24時間 （より好適には、 2時間乃至 5時間） である。
一方、菌により生成されたプラバスタチン類を含む培養濃縮液から有機溶媒を用 いて酸性 （好適には、 pH4乃至 6) で一旦抽出分液した後、 アルカリ性 （好適に は、 p H 8乃至 9 ) として逆抽出した水溶液に含まれる不純物を無機塩基で分解す る場合の好適な反応条件は、 pHは、 1 3乃至 14 (より好適には、 1 3. 5乃至 14) であり、反応温度は、 一 10°C乃至 50。C (より好適には、 ー5¾乃至5°0 であり、 反応時間は、 2時間乃至 1 80時間 （より好適には、 20時間乃至 50日き 間であり、 最も好適には、 25時間乃至 3 5時間） である。 プラバスタチン又はその薬理上許容される塩の不純物を無機塩基で分解する際 に使用される不活性溶媒としては、 本反応に不活性なもので、 通常、溶媒として便 用されるものであれば特に限定はないが、 例えば、 メタノール、 エタノール、 n— プロパノール、 イソプロパノール、 n—ブタノ一ル、 イソブタノ一ル、 tーブタノ 一ノレ、 イソアミノレァノレコール、 ジエチレングリコール、 グリセリン、 ォクタノール、 シク口へキサノール、 メチルセ口ソルブのようなアルコ一ル類；水：又は水と上記 アルコール類との混合溶媒であり、好適には、水又は水と上記ァノレコール類との混 合溶媒であり、 最も好適には、 水又は水とエタノールとの混合溶媒である。 反応終了後、 目的化合物であるプラバスタチンは常法に従って、上記反応液から 採取される。 例えば、 硫酸水溶液のような酸水溶液を加え、 酢酸ェチルのような水 と混和しない有機溶媒を加え、 目的化合物を含む有機層を分離し、水等で洗浄して、 溶剤を留去することによって得られる。 更に必要ならば、活性炭を加えて脱色し、 ろ過により活性炭を除去した後、 ナトリゥムメ トキシド、ナトリウムエトキシド、 水酸化ナトリウムのような塩を形成する試薬を加え、ロータリエバポレーター等に より減圧下濃縮して、 プラバスタチンの塩を得ることができる。 不純物の無機酸分解で便用される 「無機酸」 とは、 通常、 無機酸として用いられ るものであれば特に限定はないが、 例えば、 臭化水素酸、 塩酸、 硫酸、 過塩素酸、 リン酸、 硝酸のような無機酸を挙げることができ、 好適には、 リン酸又は硫酸であ り、 最も好適には、 リン酸である。 プラバスタチン又はその藥理上許容される塩の不純物を無機酸により分解する 工程は、 不活性溶媒の存在下又は非存在下 （好適には、 存在下）、 プラバスタチン 又はその薬理上許容される塩を、 p H 2乃至 5を付与する条件 （好適には、 p H 3 乃至 4 ) で行われる。 プラバスタチン又はその薬理上許容される塩の不純物を無機酸により分解する 際の反応温度及び反応時間は、 p H値にも依存するが、 基本的には、 反 温度が低 ければ反応時間は長くする必要があり、反応温度が高ければ反応時間は短くする必 要があるが、 例えば、 反応温度は、 2 0 °C〜8 0 °C (好適には、 4 0 °C〜6 0。C) であり、 反応時間は、 1分間乃至 6時間 （好適には、 5分間乃至 2 0分間） である。 プラバスタチン又はその薬理上許容される塩の不純物を無機酸により分解する 際に使用される不活性溶媒としては、本反応に不活性なものであれば特に限定はな いが、上記無機塩基を用いて不純物を分解する工程において使用される不活性溶媒 と同様のものを挙げることができる。 反応終了後、 目的化合物であるプラバスタチンは常法に従って、 上記反応液から 採取される。 例えば、 酢酸ェチルのような水と混和しない有機溶媒を加え、 目的化 合物を含む有機層を分離し、水等で冼浄して、溶剤を留去することによって得られ る。 更に必要ならば、 活性炭を加えて脱色し、 ろ過により活性炭を除去した後、 水 酸化ナトリゥム、 ナトリゥムメ トキシド、ナトリゥムェトキシドのような塩を形成 する試薬を加え、 口一タリエバポレーター等により減圧下濃縮して、プラバスタチ ンの塩を得ることができる。 なお、 所望により、 プラバスタチン又はその薬理上許容される塩を、 上記により 精製した後、結晶化することもでき、一般に有機合成化学の技術において周知の方 法 L1列 は、 Ul lmann' s, Encyclopedia of Industrial Chemistry, Vol. A24, 5th edition (1993) , pp. 437-505に記載の方法] により以下のように行うことができ る。
結晶化の方法としては、例えば、精製されたプラバスタチン又はその薬理上許容 される塩に、 有機溶媒及び水を加え、 加温溶解し、 接種することにより、 プラバス タチン又はその薬理上許容される塩の結晶を得ることができる。
結晶化に使用される有機溶媒としては、 例えば、 へキサン、 ヘプタンのような脂 肪族炭化水素類； トルエン、 キシレンのような芳香族炭化水素類：酢酸メチル、 酢 酸ェチル、 酢酸プロピル、 酢酸プチル、 炭酸ジェチルのようなエステル類；酢酸の ような有機酸類； メタノール、 エタノール、 n—プロパノール、 イソプロパノール、 n—ブタノ一ル、 イソブタノ一ル、 tーブタノール、 イソアミルアルコール、 ジェ チレングリコール、 グリセリン、 オタタノ一ノレのようなアルコール類；ァセトン、 メチルェチルケトンのようなケトン類；ジェチルエーテル、 ジイソプロピルエーテ ル、 テトラヒ ドロフラン、 ジォキサン、 ジメ トキシェタン、 ジエチレングリコール ジメチノレエーテルのようなエーテル類；ホルムアミ ド、 ジメチルホルムアミ ド、 ジ メチルァセトアミ ド、へキサメチルリン酸トリアミ ドのようなアミ ド類；ジメチノレ スルホキシドのようなスルホキシド類；又は水と 1種類以上の上記溶媒との混合溶 媒であり、 更に好適には、 水と、 アルコール類、 エステル類及びケトン類から選択 される 1種類以上の有機溶媒との混合溶媒であり、 最も好適には、 水、 アルコール 類及びェステル類の混合溶媒である。 発明の効果
本発明の精製方法を使用することにより、カラムクロマトグラフィーのような煩 雑で生産性が低く、 工業的生産に向かない方法を使用することなく、髙純度のブラ パスタチン又はその薬理上許容される塩を得ることができる。 産業上の利用可能性
本発明のプラバスタチン又はその薬理上許容される塩を、医薬として使用する場 合には、 それ自体或は適宜の薬理学的に許容される、 陚形剤、 希釈剤等と混合し、 例えば、 鍵剤、 カプセル剤、 顆粒剤、 散剤若しくはシロップ剤等による経口的又は 注射剤若しくは坐剤等による非経口的に投与することができる。 なお、 本発明の精製度の分析は、 高性能液体ク口マトグラフィー （H P L C ) を 使用して行うことができる。 H P L Cの測定条件は、
A：移動相： メタノール：水：酢酸（100) ： トリェチルアミン混液（600 : 400 : 1 : 1)； 検出波長： UV 2 3 8 nm；
カラム ：エルマ光学製力ラム ERC - 0DS - 1262 ^ 6讓 X 10cm； カラム温度： 30°C；
流量： lml/min,
B ：移動相：メタノール：水：酢酸（100) ： トリエチルァミン混液（450:δ50:1:υ ； 検出波長： UV238nm；
カラム ： BECKMAN社製カラム ULTRAS PHERE 0DS φ i.6mm X 15cm 5 μ m ;
カラム温度： 25。C；
流量： 1.3ml/min、 又は
C ：移動相： 20%ァセ トニトリル、 30%メタノール、 50%TEAP緩衝液
(0.3%Triethylaraine-H3P04 (pH3.2)) ；
検出波長： UV238nm；
カラム： Waters社製逆相カラム Sy讓 etry C18 3.5 μ m, 4.6匪 X 15cm； 流量： lml/min
である。 以下に、 参考例及び実施例を示し、 本発明を更に詳細に説明するが、本発明の範 囲はこ;^らに限定されるものではない。 参考例 1. .
プラバスタチンの培養濃縮液 200m l (プラバスタチンナトリゥムの含有量： 21 g) に酢酸ェチル 264 m 1を加え、室温で攪拌しながら 20。ノ。硫酸水溶液を 加えて pH5. 4に調整した。 室温にて抽出後、 酢酸ェチル層①と水層①に分離し た。
水層①に酢酸ェチル 264m 1を加え、 抽出分液し、 酢酸ェチル層②を得た。 酢 酸ェチル層①と酢酸ェチル層②を合わせて、水 1 0 Om 1 を加え、室温で攪拌しな がら、 4 8 %水酸化ナトリゥム水溶液を加えて p H 8. 7に調整した。 室温にて抽 出分液した後、 酢酸ヱチル層③と水層③に分離した。 水層③をナスフラスコ (5 0 O m l ) に仕込み、 エバポレータ で約 2Z5量まで減圧濃縮し、 逆抽出水層濃縮 液 8 8m l (プラバスタチンナトリウムの含有量： 1 9. 3 g) を得た。 実施例 1.
参考例 1で得られた逆抽出水層濃縮液 3 m 1 [HP LC (条件 A) によるブラバ スタチンナトリゥムの純度： 7 8. 6 9 %] を試験管に小分けし、 約 5 0。Cまで加 温後、 塩ィヒナトリウムを 0. 9 0 g添加し、 3 3°Cでプラバスタチンナトリウムを 接種し、 0°Cまで冷却後、 ろ過した。 結晶を冷水で洗浄し、 プラバスタチンナトリ ゥムの塩析結晶を得た。 HP LC (条件 A) によるプラバスタチンナトリウムの純 度は、 9 1. 3 6。/。であった。 実施例 2.
参考例 1で得られた逆抽出水層濃縮液 3 m l [HP LC (条件 A) によるプラバ スタチンナトリゥムの純度： 7 8. 6 9 %] を試験管に小分けし、 約 50°Cまで加 温後、 硫酸ァンモニゥムを 0. 8 3 g添加し （オイル状物分液は、 上層及び下層に 分かれた。）、 3 3°Cでプラバスタチンナトリウムを接種し、 0°Cまで冷却し、 ろ過 した。 結晶を冷水で洗浄し、 プラバスタチンナトリウムの塩析結晶 （結晶上層は褐 色固体、 結晶下層は白色スラリ状であった。） を得た。 HP LC (条件 A) による プラバスタチンナトリゥムの純度は、結晶上層 8 3. 8 2%、結晶下層 9 1. 74% であった。 実施例 3.
参考例 1で得られた逆抽出水層濃縮液 3 m l [HP LC (条件 A) スタチンナトリゥムの純度： 78. 69°/。] を試験管に小分けし、 約 50°Cまで加 温した。 酢酸ァンモユウムを 0. 83 g添加すると、 数分で結晶が析出した。 0 °C まで冷却し、 冷水 2 m 1 を加えてスラリ化した後、 ろ過した。 結晶を冷水で洗浄し、 プラバスタチンナトリウムの塩析結晶を得た。 HP LC (条件 A) によるプラバス タチンナトリウムの純度は、 90. 10%であった。 実施例 4.
参考例 iで得られた逆抽出水層濃縮液 3 m 1 [HP LC (条件 A) によるブラバ スタチンナトリウムの純度： 78. 69%] を試験管に小分けし、 約 50。Cまで加 温した。 酢酸ァンモニゥムを 0. 83 g添加すると、 数分で結晶が析出した。 水 3 m 1を添加後、 約 50°Cまで加温し、 結晶を溶解した後、 33°Cでプラバスタチン ナトリウムを接種し、 0°Cまで冷却し、 ろ過した。 結晶を冷水で洗浄し、 プラバス タチンナトリウムの塩析結晶を得た。 HPLC (条件 A) によるプラバスタチンナ トリゥムの純度は、 93. 22。/。であった。 実施例 5.
参考例 1で得られた逆抽出水層濃縮液 3m l [HPLC (条件 A) によるブラバ スタチンナトリゥムの純度： 78. 69 %] を試験管に小分けし、 約 50。Gまで加 温後、 硝酸アンモニゥムを 0. 83 g添加し、 33。Cでプラバスタチンナトリウム を接種し、 0°Cまで冷却し、 ろ過した。 結晶を冷水で洗浄し、 プラバスタチンナト リウムの塩析結晶を得た。 HP LG (条件 A) によるプラバスタチンナトリウムの 純度は、 93. 1 8。ノ。であった。 実施例 6.
参考例 1で得られた逆抽出水層濃縮液 3m l tH P L C (条件 A) によるブラバ スタチンナトリゥムの純度： 78. 69%] を試験管に小分けし、 約 50。Cまで加 温後、 硝酸アンモニゥムを 0. 83 g添加し、 38 °Cまで冷却すると結晶が析出し た。 53 °Cまで加温したが結晶は溶解せず、 0°Cまで冷却し、 ろ過した。 結晶を冷 水で洗浄し、 プラバスタチンナトリウムの塩析結晶を得た。 HPLC (条件 A) に よるプラバスタチンナトリウムの純度は、 93. 37%であった。 実施例 7.
(1) 無機塩基分解による精製
プラバスタチンの培養濃縮液 300m l (プラバスタチンナトリゥムの含有量： 3 7 g) を 4つ口フラスコ （50 Om 1 ) に仕込み、 100 °Cまで加熱した後、 2 当量分の水酸化ナトリウムを水溶液として添加した （ p H 1 1 · 5 )。 1 00 で 3時間攪拌後冷却し、 室温にて 20。/。硫酸水溶液で p H 9. 0に調整し、 アル力リ 処理液を得た （プラバスタチンナトリウムの含有量： 33 g)0
このアルカリ処理液 7 Om 1 (プラバスタチンナトリウムの含有量： 5. 3 g) に酢酸ェチル 13 2 m 1 を加え、室温で攪拌しながら 20 %硫酸水溶液で、 p H 5. 4に調整した。 室温にて攪拌抽出後、 酢酸ェチル層①と水層①に分離した。 水層① に酢酸ヱチル 132m lを加え、 抽出分液し、 酢酸ェチル層②を得た。 一方、 酢酸 ェチル層①に水 25 m 1 を加え、抽出分液し、酢酸ェチル層③及び水層③を得た。 また、 酢酸ェチル層②と水層③を合わせて抽出分液し、 酢酸ェチル層④を得た。 酢 酸ェチル層③に水 60m lを加え、室温で攪拌しながら、 48 %水酸化ナトリウム 水溶液で PH8. 7に調整後、 抽出分液し水層⑤を得た。 酢酸ェチル層④と水層⑤ を合致し、室温で攪拌しながら 48 %水酸化ナトリウム水溶液で p H 8. 7に調整 後、 抽出分液し逆抽出水層 50 m 1 (プラバスタチンナトリウムの含有量： 4. 4 g) を得た。 HPLC (条件 A) によるプラバスタチンナトリウムの純度は、 84. 88。/。であった。
(2) 塩析による精製
この逆抽出水層を、 エバポレータ一で約 1/2量まで減圧濃縮し、 48%水酸化 ナトリウム水溶液で P H 1 2に調整後、塩化ナトリゥムを用いて実施例 1と同様に 塩析を行い、 プラバスタチンナトリウムの埴析結晶を得た。 HP LC (条件 A) に よるプラバスタチンナトリウムの純度は、 99. 54。/。であった。
この後、 参考のために、 常法に従って再結晶し、 洗浄した後、 40°Cで真空乾燥 したところ、 プラバスタチンナトリウムの結晶が、 2. 14 g得られた。 HPLC (条件 B) によるプラバスタチンナトリウムの純度は、 99. 85 °/。であった。 なお、培養濃縮液を上記条件で無機塩基分解する代わりに、上記逆抽出水層を、 約 20 %濃縮した液 60 m 1を、 0°Cまで冷却した後、 4当量分の水酸化ナトリウ ムを水溶液として添加し （p HI 4付近）、 0°Cで 30時間攪拌 （無機塩基分解） したところ、 上記よりも更に良好な純度のプラバスタチンナトリゥムが得られた。 実施例 8.
変換培養を終えたプラバスタチンの培養液 10 Lをカセィソーダで p HI 2と した後、 50°Cに加温し、 30分間撹拌した。 培養液を窒温に冷却後、 ろ過助剤と して 500 gのセライ ト 545 (商標） （セライ ト コ一ポレーシヨン社製） を加 えてろ過した。 分離した菌体に、 水を 3 L加え、 再度懸濁させた後、 ろ過した。 得 られた 2つのろ液を合わせて、 10 Lの培養ろ液を得た。 このろ液を、 25%硫酸 で、 pH5. 7とした後、 5 Lの酢酸プロピルを加えて撹拌し、 プラバスタチンを 抽出した。
分離した水層を 75。/。硫酸で p H 5. 7とした後、 5 Lの酢酸プロピルを加えて 撹拌し抽出した。得られた 2つの酢酸プロピル層を合わせて、 これに 2 Lの飽和食 塩水を加えて、 撹拌して洗浄した。 上層を分離して得た 8 Lの抽出液に、 1 Lの水 を加え、 撹拌しながら 25 %水酸化ナトリゥム水溶液を加えて、 p H 9. 5とした 後、 水層を分離してプラバスタチンナトリゥム水溶液 1 Lを得た。
得られた水溶液に、 3 50 m lのエタノ一ルを加え、 リン酸で p H 3. 0に調整 した後、 50°Cで 10分間撹拌した。 その後、 25%水酸化ナトリゥム水溶液を加 えて p H 1 2とし、 更に、 5 0。Cで 3 0分撹拌を続けた。溶液を減圧下ロータリ一 エバポレータ一で 80 0 m lまで濃縮し、 4 8。/。水酸化ナトリゥム水溶液で p H 1 2に調整した後、塩化ナトリゥムを用いて実施例 1と同様に塩析を行い、 プラバス タチンナトリゥムの塩析結晶を得た（プラバスタチンナトリゥムの含有量： 60 g)。
HP LC (条件 G) によるプラバスタチンナトリウムの純度は、 9 9. 7。/0であつ た。
この後、 参考のために、 常法に従って再結晶し、 洗浄した後、 40DCで真空乾燥 したところ、 プラバスタチンナトリウムの結晶が、 5 5 g得られた。 HP LC (条 件 C) よるプラバスタチンナトリウムの純度は、 9 9. 8 5 %であった。

Claims

請求の範囲
1 . 塩析により、 プラバスタチン又はその薬理上許容される塩を精製する方法。
2 . 塩析に用いられる塩が、 アルカリ金属塩、 アルカリ土類金属塩又はアンモニ ゥム塩である、 請求項 1に記載の方法。
3 . 塩析に用いられる塩が、 アルカリ金属塩又はアンモニゥム塩である、 請求項 1に記載の方法。
4 . 塩祈に用いられる塩が、 塩化ナトリウム、 硫酸アンモユウム、 酢酸アンモニ ゥム又は硝酸アンモニゥムである、 請求項 1に記載の方法。
5 . 塩祈に用いられる塩が、 塩化ナトリウムである、 請求項 1に記載の方法。
6 . 更に、 不純物を無機塩基で分解する工程を組み合わせて行う、 請求項 1乃至 請求項 5より選択されるいずれか一項に記載の方法。
7 . 更に、 不純物を無機酸で分解する工程を組み合わせて行う、 請求項 1乃至請 求項 6より選択されるいずれか一項に記,載の方法。
8 . 無機酸が、 リン酸又は硫酸である、 請求項 7に記載の方法。
9 . 無機酸が、 リン酸である、 請求項 7に記,載の方法。
1 0 . 無機酸を用いて分解する工程の p Hが、 2乃至 5である、 請求項 7乃至請 求項 9より選択されるいずれか一項に記載の方法。
1 1 . プラバスタチンナトリゥムを精製する、請求項 1乃至請求項 1 0より選択 されるいずれか一項に記載の方法。
PCT/JP2001/009044 2000-10-16 2001-10-15 Procede de purification de la pravastatine ou de son sel pharmacologiquement acceptable WO2002032847A1 (fr)

Priority Applications (12)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP01974857A EP1327624A4 (en) 2000-10-16 2001-10-15 PROCESS FOR THE PURIFICATION OF PRAVASTATIN OR ITS PHARMACOLOGICALLY ACCEPTABLE SALT
PL01360920A PL360920A1 (en) 2000-10-16 2001-10-15 Method of purifying pravastatin or its pharmacologically acceptable salt
IL15515801A IL155158A0 (en) 2000-10-16 2001-10-15 A method for purification of pravastatin
SK452-2003A SK4522003A3 (en) 2000-10-16 2001-10-15 Method of purifying pravastatin or its pharmacologically acceptable salt
KR10-2003-7004751A KR20030043984A (ko) 2000-10-16 2001-10-15 프라바스타틴 또는 이의 약리학적으로 허용가능한 염의정제 방법
BR0114680-7A BR0114680A (pt) 2000-10-16 2001-10-15 Método para a purificação de pravastatina ou de um sal farmacologicamente aceitável da mesma
AU2001294257A AU2001294257A1 (en) 2000-10-16 2001-10-15 Method of purifying pravastatin or its pharmacologically acceptable salt
CA002425882A CA2425882A1 (en) 2000-10-16 2001-10-15 Method of purifying pravastatin or its pharmacologically acceptable salt
MXPA03003346A MXPA03003346A (es) 2000-10-16 2001-10-15 Metodo para la purificacion de pravastatina o una sal farmacologicamente aceptable de la misma.
HU0303123A HUP0303123A3 (en) 2000-10-16 2001-10-15 Method of purifying pravastatin or its pharmacologically acceptable salt
NO20031738A NO20031738L (no) 2000-10-16 2003-04-15 Fremgangsmåte for rensing av pravastatin eller dets farmakologisk akseptable salt
US10/414,691 US20030204105A1 (en) 2000-10-16 2003-04-16 Method for purification of pravastatin or a pharmacologically acceptable salt thereof

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2000315255A JP2002121172A (ja) 2000-10-16 2000-10-16 プラバスタチン又はその薬理上許容される塩の精製方法
JP2000-315255 2000-10-16

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
US10/414,691 Continuation-In-Part US20030204105A1 (en) 2000-10-16 2003-04-16 Method for purification of pravastatin or a pharmacologically acceptable salt thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2002032847A1 true WO2002032847A1 (fr) 2002-04-25

Family

ID=18794391

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2001/009044 WO2002032847A1 (fr) 2000-10-16 2001-10-15 Procede de purification de la pravastatine ou de son sel pharmacologiquement acceptable

Country Status (17)

Country Link
US (1) US20030204105A1 (ja)
EP (1) EP1327624A4 (ja)
JP (1) JP2002121172A (ja)
KR (1) KR20030043984A (ja)
CN (1) CN1481352A (ja)
AU (1) AU2001294257A1 (ja)
BR (1) BR0114680A (ja)
CA (1) CA2425882A1 (ja)
CZ (1) CZ2003956A3 (ja)
HU (1) HUP0303123A3 (ja)
IL (1) IL155158A0 (ja)
MX (1) MXPA03003346A (ja)
NO (1) NO20031738L (ja)
PL (1) PL360920A1 (ja)
SK (1) SK4522003A3 (ja)
WO (1) WO2002032847A1 (ja)
ZA (1) ZA200302968B (ja)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2005500307A (ja) * 2001-06-21 2005-01-06 アンドルックス ファーマスーティカルズ インコーポレーテッド プラバスタチンを含む安定な徐放性薬剤組成物
US6716615B2 (en) * 2002-02-27 2004-04-06 Yung Shin Pharmaceutical Ind. Co., Ltd. Strains of saccharaothrix, process for producing pravastatin using the strains and isolation process of (HMG)-CoA reductase
JP4813841B2 (ja) * 2005-07-25 2011-11-09 キユーピー株式会社 プラバスタチンナトリウムの製造方法
WO2009068556A1 (en) * 2007-11-29 2009-06-04 Dsm Ip Assets B.V. Purification of pravastatin
CN111393432A (zh) * 2020-04-09 2020-07-10 北京世纪迈劲生物科技有限公司 去甲托品醇盐析制备方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5058284A (ja) * 1973-09-29 1975-05-21
GB1543563A (en) * 1975-02-07 1979-04-04 Glaxo Lab Ltd Beta-lactam antibiotic in purified form
GB2077264A (en) * 1980-06-06 1981-12-16 Sankyo Co Ml-236b derivatives and their preparation
EP0605230A1 (en) * 1992-12-28 1994-07-06 Sankyo Company Limited Hexanhydronaphthalene ester derivatives, their preparation and their therapeutic uses
JPH06256278A (ja) * 1993-03-03 1994-09-13 Nissan Chem Ind Ltd 光学活性α−カルバモイルアルカン酸誘導体およびその製法
JPH0767671A (ja) * 1993-07-06 1995-03-14 Haarmann & Reimer Corp 強酸及びその塩を添加することによる純度の低い粗生成混合物からのクエン酸の回収法

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SI20305A (sl) * 1999-08-06 2001-02-28 LEK, tovarna farmacevtskih in kemi�nih izdelkov, d.d. Kristali natrijeve soli pravastatina
SI20070A (sl) * 1998-09-18 2000-04-30 LEK, tovarna farmacevtskih in kemi�nih izdelkov, d.d. Nove soli inhibitorjev HMG-CoA reduktaze
US6444452B1 (en) * 1999-11-30 2002-09-03 Biogal Gyogyszergyar Rt. Process for recovering statin compounds from a fermentation broth

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5058284A (ja) * 1973-09-29 1975-05-21
GB1543563A (en) * 1975-02-07 1979-04-04 Glaxo Lab Ltd Beta-lactam antibiotic in purified form
GB2077264A (en) * 1980-06-06 1981-12-16 Sankyo Co Ml-236b derivatives and their preparation
EP0605230A1 (en) * 1992-12-28 1994-07-06 Sankyo Company Limited Hexanhydronaphthalene ester derivatives, their preparation and their therapeutic uses
JPH06256278A (ja) * 1993-03-03 1994-09-13 Nissan Chem Ind Ltd 光学活性α−カルバモイルアルカン酸誘導体およびその製法
JPH0767671A (ja) * 1993-07-06 1995-03-14 Haarmann & Reimer Corp 強酸及びその塩を添加することによる純度の低い粗生成混合物からのクエン酸の回収法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KAGAKU DAIJITEN HENSHUU IIN-KAI ED.: "Kagaku dai-jiten 1", KYORITSU SHUPPAN, 1 July 1963 (1963-07-01), pages 1108, XP002949756 *
NIPPON KAGAKU-KAI ED.: "Jikken kagaku kouza, kihon sousa I", MARUZEN, 5 November 1990 (1990-11-05), pages 188, XP002949757 *

Also Published As

Publication number Publication date
CZ2003956A3 (cs) 2003-09-17
MXPA03003346A (es) 2003-06-19
ZA200302968B (en) 2004-07-15
NO20031738D0 (no) 2003-04-15
PL360920A1 (en) 2004-09-20
EP1327624A1 (en) 2003-07-16
AU2001294257A1 (en) 2002-04-29
KR20030043984A (ko) 2003-06-02
US20030204105A1 (en) 2003-10-30
EP1327624A4 (en) 2004-07-14
IL155158A0 (en) 2003-10-31
CN1481352A (zh) 2004-03-10
SK4522003A3 (en) 2003-11-04
HUP0303123A3 (en) 2004-10-28
HUP0303123A2 (hu) 2004-01-28
CA2425882A1 (en) 2003-04-15
NO20031738L (no) 2003-06-11
JP2002121172A (ja) 2002-04-23
BR0114680A (pt) 2003-10-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2003523751A (ja) 培養液の精製方法
JP3236282B1 (ja) プラバスタチンを精製する方法
WO2002032847A1 (fr) Procede de purification de la pravastatine ou de son sel pharmacologiquement acceptable
WO1996033197A1 (en) Preparation of clavulanate salts
JP4954421B2 (ja) クラブラン酸塩の精製方法
JP3463881B2 (ja) プラバスタチン又はその薬理上許容される塩の単離・精製方法
JP5065569B2 (ja) 工業的に生産されたプラバスタチンナトリウム含有組成物
JP3422791B2 (ja) プラバスタチンの単離・精製方法
JP3463875B2 (ja) プラバスタチンを精製する方法
US9802934B2 (en) Process for the synthesis of (R)-praziquantel
CN1312814A (zh) 制备棒酸盐类及其酯类的改进方法
JP3883525B2 (ja) プラバスタチンナトリウムの精製方法
EP1673361B1 (en) A method for the manufacture of lovastatin
JP5419570B2 (ja) ２−アセチルアミノメチル−４−（４−フルオロベンジル）モルホリンの精製方法
JP5397706B2 (ja) 高純度１−ベンジル−３−アミノピロリジンの製造方法
EP1452519A1 (en) Method for the isolation and purification of pravastatin sodium
AU692091C (en) Preparation of clavulanate salts

Legal Events

Date Code Title Description
AK Designated states

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AU BR CA CN CO CZ HU ID IL IN KR MX NO NZ PL RU SG SK US VN ZA

AL Designated countries for regional patents

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AT BE CH CY DE DK ES FI FR GB GR IE IT LU MC NL PT SE TR

DFPE Request for preliminary examination filed prior to expiration of 19th month from priority date (pct application filed before 20040101)
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2001974857

Country of ref document: EP

Ref document number: 155158

Country of ref document: IL

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 1020037004751

Country of ref document: KR

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: PV2003-956

Country of ref document: CZ

Ref document number: 407/KOLNP/2003

Country of ref document: IN

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 525255

Country of ref document: NZ

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 4522003

Country of ref document: SK

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2003/02968

Country of ref document: ZA

Ref document number: PA/a/2003/003346

Country of ref document: MX

Ref document number: 2425882

Country of ref document: CA

Ref document number: 200302968

Country of ref document: ZA

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 10414691

Country of ref document: US

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2001294257

Country of ref document: AU

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 1200300383

Country of ref document: VN

WWP Wipo information: published in national office

Ref document number: 1020037004751

Country of ref document: KR

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 018206344

Country of ref document: CN

WWP Wipo information: published in national office

Ref document number: 2001974857

Country of ref document: EP

WWP Wipo information: published in national office

Ref document number: PV2003-956

Country of ref document: CZ

WWW Wipo information: withdrawn in national office

Ref document number: 2001974857

Country of ref document: EP