WO2002011718A1

WO2002011718A1 - Inhibiteurs de production d'ige

Info

Publication number: WO2002011718A1
Application number: PCT/JP2001/006704
Authority: WO
Inventors: Toshiaki Nakajima; Tomoya Aoyama; Osamu Suzuki; Kazuhisa Ono; Seiji Kawamoto
Original assignee: Idemitsu Technofine Co., Ltd.
Priority date: 2000-08-04
Filing date: 2001-08-03
Publication date: 2002-02-14
Also published as: EP1319402A4; JP2002047176A; US20030166723A1; EP1319402A1

Description

明細 ^:

I gE産生抑制剤技術分野本発明は、 I gE産生抑制剤に関し、好適には I gE産生に起因する疾患の治療、特には皮膚症状の治療に用いることができる薬剤に関する。背景技術アーリノレン酸は、代表的な不飽和脂肪酸の一つであり、 6、 9、 12位にシス二重結合を持つ炭素数 18の直鎖トリエン脂肪酸である。アーリノレン酸は、月見草の種子油に 8〜10%含まれ、健康食品などに利用されている。

また、アーリノレン酸は、種々の医薬成分として用いられている。例えば、ァ —リノレン酸を有効成分として含むアレルギー性鼻炎又はアレルギー性喘息の治療薬（特開昭 61— 8762 1号）、 γ—、 Jノレン酸又はジホモーア一リノレン酸等を含む人工透析患者の皮膚そう痒症治療組成物及び副甲状腺機能亢進症治療組成物（特開平 7— 233062号）、ァ—リノレン酸又はジホモ—ァ一リノレン酸を含み、アトピー性湿疹、リウマチ様関節炎、冠状動脈疾患、喘息、糖尿病、前立腺疾患等の治療や予防に有効な強化果物ジュース（特開平 8 _ 205832 号）、アーリノレン酸又はジホモーア—リノレン酸を含む、脱毛処理後の皮膚トリートメント外用剤（特開平 10— 218731号）等が知られている。

しかし、上記のようなァ一リノレン酸を含む薬剤は、抗炎症作用に基づくと説明されており、アーリノレン酸の I gE (ィムノグロブリン E) 産生を抑制する作用については知られていない。発明の開示本発明は、 I gE産生に起因する疾患の治療、特には皮膚症状等の治療に用いることができる新規な I gE産生抑制剤を提供することを課題とする。

本発明者は、上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、ァ—リノレン酸が I g E産生抑制作用を有することを見い出し、本発明を完成した。

すなわち本発明は、アーリノレン酸、ジホモーア一リノレン酸及びこれらの誘導体から選ばれる一種または二種以上を有効成分として含有する I g E産生抑制剤である。

また本発明は、前記の有効成分の量として 0 . 3 m g / k g /日以上で投与されることを特徴とするェ g E産生抑制剤である。以下、本発明を詳細に説明する。

本発明の I g E産生抑制剤は、アーリノレン酸、ジホモ—ァ一リノレン酸及びこれらの誘導体から選ばれる一種または二種以上（以下、「アーリノレン酸等」ともいう）.を有効成分として含有する。

ァ一リノレン酸等は、天然の供給源が限られており、通常、モルティエレラ ( M o r t i Θ r e 1 1 a ) 属、ムコール（M u c o r ) 属、リゾプス（R h i z o p u s ) 属等の糸状菌類、あるいは月見草、ボレージ等の植物、さらにはスピルリナ等の藻類等に含まれる油脂から得られるが、これらからの抽出物をそのまま用いてもよく、精製したものを用いてもよい。また、抽出することなく、糸状菌、スピルリナ等をそのまま用いてもよい。また、アーリノ'レン酸は、化学合成によって得ることもでき、市販されているものを使用してもよい。さらに、ァ一リノレン酸又はその誘導体を含有する微生物又は植物等の抽出物、粗精製物も、薬学的に許容できる限り、使用することができる。

また、アーリノレン酸等の誘導体としては、これらと各種アルコール類との反応により得られるエステル、例えばェチルエステル、グリセロールエステル、リン脂質等、あるいは無機、有機の塩基とを等モル比で作用して得られる塩、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等が挙げられる。

尚、アーリノレン酸等は必須脂肪酸であり、食用に用いられており、安全性には特に問題はないと考えられる。

本発明の I g E産生抑制剤は、有効成分であるアーリノレン酸等以外に、通常の医薬又は健康食品等に用いられる成分を配合することができる。

本発明の I g E産生抑制剤の剤型は特に限定されないが、アーリノレン酸、ジホモ— ₇—リノレン酸およびそれらの誘導体から選ばれる 1種又は 2種以上の混合物、あるいは上記糸状菌類や植物等の油脂から得られる抽出物、あるいはそのままの菌体等を、一般に製剤上許容される無害の 1種、或は数種のべヒクル、坦体、賦形剤、統合剤、防腐剤、安定剤、香味剤等と共に混和して、錠剤、顆粒剤、カプセル剤、水剤等の内服剤；坐剤；膣剤；軟膏剤、クリーム、ローション等の外用剤；無菌溶液剤、懸濁液剤等の注射剤とすることができる。これらは、従来公知の技術を用いて製造することができる。

例えば、上記ァ一リノレン酸等と、コーンスターチ、ゼラチン等の結合剤、微晶性セルロース等の賦形剤、馬鈴薯デンプン、アルギン酸ナトリウム等の膨化剤、乳糖、ショ糖等の甘味剤等を配剤して散剤、錠剤、丸剤、顆粒剤とすることができる。また、カプセル剤は常法に従い、アーリノレン酸等と他の油脂類との混合物を軟質ゼラチンカプセル、硬質ゼラチンカプセル等に充填して調製される。さらに、常法によりシクロデキストリンとァ一リノレン酸等とのシクロデキストリン包接物とすることもできる。外用剤とする場合には、基剤としてワセリン、パラフィン、油脂類、ラノリン等が使用される。

また、上記アーリノレン酸等には、ひ一リノレン酸、エイコサペンタエン酸ゃドコサへキサェ,ン酸などの ω 3系の不飽和脂肪酸、ミリストォレイン酸などの ω 5系の不飽和脂肪酸、パルミトォレイン酸などの ω 7系の不飽和脂肪酸、ォレイン酸、エルシン酸などの ω 9系の不飽和脂肪酸、ラウリン酸、ミリスチン酸などの飽和脂肪酸を任意の割合で添加してもよい。また、ァ—リノレン酸等又はその他の脂肪酸の酸化を防止するために、ビタミン Ε、ァスコルビルパルミテート、ァスコルビルステアレート等の抗酸化剤を添加してもよい。

また、アーリノレン酸等に加えて、他の I g E抑制作用を有する薬効成分を併用してもよい。

さらに、アーリノレン酸等の配合量は、 I g E産生抑制剤全量の 0 . 0 0 0 0 ◦ 1〜 1 0 0重量％であることが好ましく、 0 . 0 0 0 0 1 8〜 1 0 0重量％であることがさらに好ましい。

アーリノレン酸等を、 I g E産生誘導前、または誘導初期から投与することにより高い I g E産生抑制効果が得られることが明かとなった。したがって本発明の I gE産生抑制剤は、即時型アレルギーの原因となる I gEの産生を効果的に抑制することができるので、 I gE産生に起因する疾患のいずれに対しても、症状の予防、即ち、いわゆる予防的治療に用いることができる。

ここで、 I gE産生に起因する疾患としては、 I gE産生が原因となる皮膚疾患、アトピー性皮膚炎、喘息、アレルギー性鼻炎、アレルギー性腸炎、花粉症、アレルギー性結膜炎等が挙げられる。

以上のことから、本発明の I gE産生抑制剤は、健常者や上記疾患に罹りやすい体質を有する者に投与し、上記疾患を予防することもできるが、特に、発症が予想される患者に対して発症の予防に用いることが効果的である。また、 I gE 産生が上昇していない場合には、上記疾患の発症初期患者に投与し、症状を軽減することも期待される。

投与量に関しては、ァ一リノレン酸等の量として I gE産生抑制効果を有する限り特に制限はないが、投与量が多くなりすぎると軟便になりやすい傾向がある。患者の年齢、体重、病歴、疾患の種類、症状等により投与量を適宜設定すればよい。 I gE産生に起因する疾患の予防的治療においては、一日のアーリノレン酸等の投与量として、好ましくは 0. 3〜 1 000mg/k g (被投与者の体重）、より好ましくは l〜50 0 mg/kg、投与することにより、所期の効果が期待できる。図面の簡単な説明

図 1は、 NC/N g aマウスの病体スコアの経時変化を示す図である。

図 2は、 NC/N g aマウスの血漿中総 I gE量の経時変化を示す図である。図 3は、 NC/N g aマウスの病体スコアの経時変化を示す図である。

図 4は、 NC/N g aマウスの血漿中総 I gE量の経時変化を示す図である。図 5は、各 GL A添加濃度における培養上清中 I gE量を示す図である。

図 6は、各 GL A添加濃度における細胞増殖能（405nm吸光度）を示す図である。発明を実施するための最良の形熊まず、実施例において使用したモデル動物を説明する。

〔モデル動物〕 '

モデル動物として、 N C / N g aマウスを使用した。 N C / N g aマウスは、玩具用マウスである錦ネズミを起源とし、 1957年に樹立された近交系マウスである。以前から X線感受性や卵白アルブミンに対するアナフィラキシーショヅク感受性であることが知られていたが、 1997年に Matsudaらにより、同マウスがヒトにおけるアトピー性皮膚炎（以下、「AD」と称する）に酷似した表現型を示すことを明かにされている（Int. I匪 unol .， 9， 461-466 , 1997) 。

すなわち、同マウスに激しい接痒、皮膚の炎症 · 出血 ·浮腫 ·乾燥をともなう AD様の臨床所見と高 I g E血症が起こることが明らかとなり、皮膚の組織病理学的所見からも ADに類似した肥満細胞 ·好酸球等、炎症性細胞の浸潤と皮膚組織の過形成が見られることが示されている。また、これらの AD様表現型は、通常環境下で引き起こされる一方で、微生物や寄生虫のいない SPF ( specific pathogen - f ree) 環境下では起こらないという特徴もあるため発症をコントロールできることから、アトピー性皮膚炎の病体モデルとして本実施例で用いることにした。尚、高 I g E産生が N C /N g aマウスの AD様の病態形成に必要であるか否かを検討した実験結果はこれまでに報告されていないが、本発明者らは N C / N g aマウスの個体差に着目して病態が著しく悪化している集団と、それ程悪化していない集団の I g E量を比較したところ、著しく悪化している集団の I g Eレぺルが有為に高値であったことを認めており、病態の悪化と I g E産生の上昇はこれまでの報告を見る限りでは相関していると考えられる。

〔実施例 1〕

臨床にて GLAに富む月見草油の経口投与が ADの治療に有効であるとの結果が長年示唆されているが、逆に効果がないという臨床結果もある。それそれの臨床試験条件の相違や月見草油の純度の問題も含め、現状ではアーリノレン酸（以下、「GLA」と称する）の真の効果を正当に評価できる状況にはないものと考えられる。そこで本実施例では ADモデルである N C / N g aマウスにおける精製 GLAの経口投与による効果について検討した。モデル動物として、皮膚炎様の所見や高 I gE血症を呈していない、 SPF環境下で飼育した 5週齢のォス N C/N g aマウスを用いた。これらマウスに GLAェチルエステル（精製度 95.98% ：出光マテリアル（株）製）を 50mg/個体で、 5週齢から 2日に 1回、胃ゾンデ法で投与し、一群 6匹からなる GLA投与群とした。また、コントロールとして、 GLAェチルエステルの代りに PBS (リン酸緩衝生理食塩水）を 5 0〃1/個体で同様に投与し、一群 6匹からなるコントロール群とした。投与開示時（ 5週齢）から 1 9週齢の間の各週において、上記マウスの病態スコアを Matsudaらの方法（Int. Immunol., 9， 461-466, 1997) に従って点数化した。具体的方法を以下に示す。

下記の A- Eの 5項目について 0 (無し）， 1 (軽度に悪化）， 2 (中程度に悪化）， 3 (著しく悪化）の 3点満点によりスコアリングした。合計で 15点満点となる。

A (かゆみ）： 3分間マウスを見て、搔く頻度に点を付ける。

B (紅斑、出血）：耳ゃ顏からの出血、耳の裏の紅斑に点を付ける。

C (浮腫）：主に耳の腫れ具合に点を付ける。

D (擦過傷、糜爛）：顏の周りや耳の後ろ、腕の付け根辺りの擦過傷に点を付ける。

E (乾燥）：背中、顔にかけての皮膚の乾燥具合に点を付ける。また、投与開始時（ 5週齢）、 7、 9、 1 1週齢時に、上記のマウスから血液を採取し、 1 5 0 0 r pmで 1 0分遠心分離し、血漿を得た。そして血漿中の総 I gE量を、サンドウイツチ ELISA法により測定した。具体的方法を以下に示す。コーティングノソファー（0.1M NaHCOs, 0.5M NaCl, pH8.5) で 2〃g/mlに希釈したラット抗マウス I gEモノクローナル抗体（PharMingen社製）を、プレ一ト（NUNC- IMMUNOPLATE, NUNC社製）の各ゥエルに 5 0〃1づっ加え、 4°Cでー晚または 3 7 °Cで 3時間置き、 PBS/Tween (PBS, 0.05%T een-20, pH7.5) で 3回洗浄した。

各ゥエルにブロッキングバッファ一（PBS， 2 %スキムミルク）を 200〃ずつ加え、 37°Cで 3時間インキュベートし、 PBS/Tweenで 3回洗浄した。

また、上述したマウスの血漿をダイリューシヨンバッファー（PBS， 2 %スキムミルク， 0.25 % SDS) で 1 0 0倍希釈し、測定用サンプルを作成した。さらに、マウス I g E標準（PharMingen社製）をダイリューシヨンバッファ一で希釈し、測定用スタンダードを作成した。

これら測定用サンプルおよびス夕ンダードを、それそれのゥヱルに 50 lずつ加えて、 37°Cで 3時間インキュベートし、 PBS/Tweenで 3回洗浄した。

ダイリユーシヨンバヅファーで 2 g/mlに希釈したビォチニルラヅト抗マウス I g E抗体（PharMingen社製）を、それそれのゥエルに 50〃1ずつ加え、 37°C で約 3時間ィンキュベートして、 PBS/Tweenで 6回洗浄した。

さらに、アルカリフォスファターゼ標識したストレプトアビジン（BioSource 社製）をダイリューシヨンバヅファーで 1000倍希釈したものをゥヱルに 50〃1ずつ加え、 37°Cで 1時間インキュベートして、 PBS/Tweenで 6回洗浄した。

そして、 AttoPhos™ (B0EHRINGER MANNHEIM社製) を各ゥエルに 50 / 1ずつ加え、遮光の状態で発色するまで放置し（約 6時間）、蛍光強度を CytoFluo ^MI I (PE Biosystems社製）で測定し、そこから総 I g E量を測定した。

マウスの病態スコァの結果を図 1に示す。

コントロール群（PBS投与群）では、経時的に病態スコアが著しく増加したのに対し、 GLA投与群では 11週以降は、有意な増加はみられなかった。また、 '対象群と比較すると、 GLA投与群においては、 11週齢および 13- 19週齢において有為な病態スコアの抑制があることが明かとなった。

また、マウスの血漿中の総 I g E量の結果を図 2に示す。

対照群及び GLA投与群の両方において、経時的に総 I g E量が増加する傾向が見られたが、 GLA投与群は対象群と比較して各測定時における総 I g E量が低く、特に 11週齢において総 I g E量が有為に低値であることが明かとなった。

以上のことから、 GLAは I g E産生を抑制する作用を有することが明らかである。

以上の結果から、 GLAの経口投与により、 N C / N g aマウスの AD様病態ならびに高 I g E産生が抑制されることが示された。本結果は GLAの抗アトピー効果ならびに I g E産生抑制効果を動物病態モデルにて示した最初の例であり、 AD予防効果を有する次世代機能性食品を設計する上での GLAの有用性を強く示唆するものである。〔実施例 2〕

50 mgの GLA経口投与試験によって、 GLAが N C / N g aマウスの病態進行と高 I g E産生を抑制する効果があることが判明した。そこで異なる用量および投与形態による、同マウスの GLA経口投与による効果について検討を行った。

モデル動物として、皮膚炎様の所見や高 I g E血症を呈していない、 SPF環境下で飼育した 5週齢のォス N C / N g aマウスを用いた。一群 10匹とし、これらマウスに、 GLAェチルエステル（精製度 95. 98% ：出光マテリアル（株）製）を、 GLA投与群には 0. 1 mg/個体で胃ゾンデ法により、 2日に 1回投与した。ここで GL Aの投与は、必須脂肪酸を殆ど含まないオリ一ブオイルを 0. Imgの GLAェチルエステルに加えて 50〃1にして投与を行った。またコントロール群には、ォリーブォィルのみのを同様に投与した。

これらの群のマウスについて、実施例 1と同様に、病態スコアの計測を 1週間毎に、また、血漿中の総 I g E量の測定を 2週間に 1回行った。

マウスの病態スコアの結果を図 3に示す。

マウスの個体差による点数のばらつきが見られるが、全体的に 6週齢からスコァの上昇が見られている。コントロール群では、 8週齢から皮膚の乾燥が起こり搔きむしる回数が増えて、目の回り '耳 ·顔に出血、また、胴体部分に紅斑が見られはじめた。そのため急激なスコアの上昇が見られて、少しの波はあるものの常に症状は悪く、改善することはなかった。これに対し GLA投与群に関しては、コントロール群と比較して、 9週年齢以降は低い平均値を示し、特に 15-17週齢までに有意に低値を示した。

また、マウスの血漿中の総 I g E量の結果を図 4に示す。

7週齢から 9週齢にかけて総 I g E量の値が上昇し始め、コントロール群では 17 週齢で上昇のピークを迎えている（図 4の♦で示されるグラフ参照）。これに対し GLA投与群に関しては 9週齢から上昇しているが、 13週以降では有意な増加傾向は見られず、 13〜19週齢までコントロール群に比べて有意に低値を示した（図 4 の Xで示されるグラフ参照）。本実施例の 0. lmgGLAェチルエステルを含むオリーブオイルの経口による効果の検討では、 I gE量、病態とも有意に低値であることが見受けられた。

〔実施例 3〕

上記実施例 1 , 2により、 GLAを経口投与することで N C/N g aマウスの A D様病態の進行および高 I gE産生を抑制する効果があることが判明した。本実施例では、同マウス脾細胞を用いた in vitroクラススイッチ誘導系により、 in V itroにおける GLAの I gE産生抑制効果を検討した。

まず、 N C/N g aマウスからの脾細胞の採取を以下の方法により行った。皮膚炎様の所見や高 I gE血症などを呈していない、 SPF環境下で飼育した 8週齢の NC/Ngaマウスを、頸椎脱曰で屠殺して無菌状態で脾臓を摘出した。摘出した脾臓を、シャーレ中の RPMI-1640培地（約 3 ml) に入れ、滅菌したピンセヅトで細胞をバラバラにほぐした。ほく、した細胞を 15 mlの Falconチューブに入れて、脾臓の膜を取り除いた。そして培地に懸濁された細胞を 1500rpm, 5 分間遠心し、細胞のみを回収した。次に、赤血球を取り除くため、回収した細胞を 4 °Cの滅菌済みリシスバッファー 10 mlに懸濁して溶血させ、その後 4 °Cの滅菌済み Milli Q製 PBSで 2回洗浄して脾細胞を採取した。得られた脾細胞は一部をトリパンブルー（Trypan Blue Stain 0.4%:LIFE TECHNOLOGIES社製）で染色して、血球計算盤によってカウントした。

そして、クラススイッチ誘導系での培養上清の I g E量の測定を以下の方法で行った。

上述した方法でカウントした細胞数をもとに、プレート（96ゥヱル細胞培養用マイクロテストプレート平底低蒸発タイプ ·蓋付きポリスチレン： FALCON 社製）中の 1ゥヱル当たり 2xl0⁵cells/mlの濃度になるように細胞を撒いた。この時の培地には、 I gEクラススィヅチ誘導の刺激剤としてサイトカインの IL-4 (100 U/ml) と LPS (10 us D を添加した。

また、クラススイッチへの刺激が入る前と入っている最中、入ったあとでの GL Aの影響を観測するため、培養 0時間後（培養開始時）、 48時間後、 72時間後に、 GLAを各濃度 (0,10, 20, 40, 60,80, 120, 160 g/ml) となるように培地に添加した。ここで GLAの添加は、エタノールでそれそれ適量に希釈し、エタノールの最終濃度が 0.1%になるようにして行われた。

培養はすべて 37°Cで 5 % CO²インキュぺ一夕一で、これらの培養上清を 7日後 (168時間後）に回収し、サンドウイヅチ ELISA法により I gE量を測定した。さらに、 GLAの添加による細胞の増殖に与える影響を検討するため、以下の方法で細胞増殖能の測定を行った。上述した方法でカウントした細胞数をもとに、 RPMI- 1640培地を用いて 2X 10⁵ cell/mlでゥエルに撒いて、 IL-4 (100 U/ml) とレ PS (10 g/ml) の刺激剤を入れた。

また、培養 0時間後（培養開始時）に、 GLAを各濃度（0,10,20，40，60,80,120, 160^g/ml) となるように培地に添加した。ここで GLAの添加は、エタノールでそれそれ適量に希釈し、ェタノールの最終濃度が 0.1%になるようにして行われた。さらに、コントロールとして、クラススイッチの刺激剤の、 IL- 4のみを添加したもの、 LPSのみを添加したもの、刺激剤を全く入れないものを設定した。

上記培地中の細胞の細胞増殖能について、培養開始から 60時間〜 72時間の間の増殖活性を測定した。培養開始から 60時間目に BrdUラベリング&ディテクシヨンキヅト（BOEHRINGER MA丽 HEIM社製）の中にある BrdUラベリング溶液を最終濃度 1 10 Mになるように、培地 200〃1に対して 20〃1の割合で添加して、通常通り 37°C, 5 % CO²インキュベーターで 72時間まで培養した。

培養 72時間後の細胞を 300 rpm,10 分間の遠心し、そのまま培養プレートの蓋を開けて 60°Cのオーブンで培地を乾燥させた。約 6時間の乾燥後、 - 20°Cに冷やして置いた固定液（70 %エタノール， 0.5 M塩酸）を 1 ゥエル当たり 200 /1加えて、 - 20°C、 30分間により、細胞を固定させた。余剰の BrdUと固定液を PBSで 3回洗浄することで完全に除き、ヌクレア一ゼ溶液を 100〃1を加え、 37°Cで 30分間反応を仃つた。

再び PBSで 3回洗浄し、 10 mg/ml BSAの入った anti- BrdU-POD抗体の溶液を 100〃 1加え 37°Cで 30 分間静置した。次に、キットについているゥォッシングバヅファ一で 3回洗浄後、ペルォキシダーゼ基質溶液によって発色させた。測定は、基質を加えてから 10分、 405 nmでの吸光度についてプレートリーダーを用いて行つた。ツチ誘導系での GLA添加における培養上清中の I g E量測定結果を図 5に示す。

培養 0時間後に添加した場合では、ほぼ GLA添加濃度の上昇に伴って総 I g E 産生量が減少しており、 GLAは用量依存的に I g E産生を抑制し、添加濃度 120〃 g/mlで I g E産生を完全に抑制していることが明かとなった（図 5の園で示されるグラフ参照）。

培養 48時間後に添加した場合では、添加濃度が 80〃g/mlまでは I g E抑制が見られなかったが、添加濃度が 120 z g/mlを越えると、完全にでは無いが有意に抑制していた（図 5の△で示されるグラフを参照）。

培養 72時間後に添加した場合では、測定した添加濃度においては、 I g E産生の有意な抑制が認められなかった（図 5の口で示されるグラフを参照）。

以上の結果から、 GLAは in vitroにおいても I g E産生を抑制する能力を有しており、しかもクラススィヅチを含む I g E産生初期の段階に作用させると用量依存的に I g E産生を抑制するという結果が得られた。

しかしながら上述した結果のみでは、該 I g E産生量の低下は、 GLAがクラススィツチそのものを何らかの形で制御することにより引き起こされたものとも、 GLAが細胞の増殖を制御し、全体として I g E産生細胞が少なくなることにより引き起こされたとも考えられたため、 GLAを添加したときの細胞の増殖能を測定した。結果を図 6に示す。

その結果、 GLA添加濃度の増大に伴い、細胞増殖の低下が観察されたが、各 GLA 添加濃度において、 I g E生産量の低下と同じ比率で細胞増殖は低下しておらず、特に GLA添加濃度 20〜60/^/πι1の範囲においては、総 I g E生産量の低下は、細胞増殖の低下よりも著しく大きいことが判明した（図 6および図 5の園で示されるグラフを参照）。具体的には、 GLA40〃g/ml添加区を GLA無添加（0〃g/ml ) 区とを比較すると、総 I g E産生量は約 1割程に低下しているのに対し、細胞増殖は殆ど低下していないことが明かとなった。

以上のことから、 GLAは細胞増殖を抑制することによって I g E産生を抑制するのではなく、別の経路によって I g E産生を抑制している可能性が示唆された。本実験により、 GLAが in vitroにおいても Γ g E産生抑制効果を示すことが明白となった。本実験系では、 I gE生産を誘導するサイトカイン刺激開始 72時間後に GLAを添加しても抑制効果が認められなかったことから、 GLAは抗体遺伝子のクラススィッチ組換えを含めた I g E産生初期の段階を阻害していることが推察される。また、この結果は、高 I gE血症を呈した AD発症 NC/Ng aマウスに、 GLAを 2力月間経口投与しても I gE産生の抑制が認められなかったという in viv oでの結果とも一致しているようにも思われる。 GLAの I g E抑制効果は、細胞毒性や増殖抑制によるものではないことから、 I gE産生機構のいずれかの段階 (例えば、 I gE定常領域における胚型転写、クラススィッチ組換えにおける 2 重鎖 DNA切断と修復反応、 I gE陽性 B細胞の抗体産生細胞への分化など）を阻害した結果、引き起こされたものと考えられる。産業上の利用可能件. 本発明の I g E産生抑制剤は、 I g E産生抑制に優れているので、 I gE産生に起因する疾患に対して有効である。

Claims

求の範囲

1. ァ一リノレン酸、ジホモ一ァ一リノレン酸及びこれらの誘導体から選ばれる一種または二種以上を有効成分として含有する I gE産生抑制剤。

2. 前記有効成分の量として 0. 3mg/kg/日以上で投与されることを特徴とする請求項 1記載の I gE産生抑制剤。