WO2001087291A1

WO2001087291A1 - Compositions permettant de regulariser le rythme circadien

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Publication number: WO2001087291A1
Application number: PCT/JP2001/004027
Authority: WO
Inventors: Yoshinobu Kiso; Yoshiko Ono; Katsuya Nagai
Original assignee: Suntory Limited
Priority date: 2000-05-16
Filing date: 2001-05-15
Publication date: 2001-11-22
Also published as: PT1283038E; DK1283038T3; DE60135647D1; ES2312430T3; US20030091614A1; AU780120B2; EP1283038B1; EP1283038A4; HK1053269A1; US7001611B2; ATE406882T1; CA2374958C; AU5674001A; CA2374958A1; EP1283038A1

Description

明細署

日内リズム正常化組成物

[技術分野]

本発明はァスタキサンチンおよび/又はそのエステルを有効成分とする日内リズム正常化組成物、ならびにメラトニンの睡眠作用を増強する合あるいは併用させる組成物に関する。また、すでに生体内にあるメラトニンの睡眠作用を増強するために、ァスタザキンチンおよび/又はそのエステルを添加してなる組成物に関する。

[背景技術]

地球上の生物は体内時計と呼ばれる、地球の自転に伴って起こる昼夜、つまり明暗周期などの 24時間の環境周期に同調する日内リズムを持ち、脳の視床下部視交又上核によって制御されている。そして、我々はこの体内時計に由来した睡眠一覚醒や節食行動の日内リズムを持つ。

日内リズムは睡眠や食事のみならず、体温、血圧、心拍、内分泌の多くに見られ、心 · 血管系の病気の治療 ·予防において自律神経系、内分泌系、血行動態等の日内リズムを理解し正常に保つことが重要であるとされている。交代勤務、長距離のジェット飛行、高齢化社会、生活様式の多様化などによる人為的で不規則な生活が恒常化しつつある現代社会にあって、日内リズム睡眠障害をはじめとする生体リズム障害に起因した種々の疾患が急速に増加しており、その有効な治療対策が急がれている。日内リズムの乱れによる非同期症候群（時差ぼけ）では、夜に不眠に陥り、昼に睡魔に襲われるばかりでなく、頭痛、耳鳴り、心悸亢進、悪心、腹痛、下痢に悩まされ、判断力 ·集中力低下の症状が現れる。また睡眠相後退症候群（DSPS) は思春期での発病率が最も高く（Diagnostic Classification Steering Committee, Thorpy M. J.： International Classification of Sleep Disorders： Diagnostic and Coding Manual. American Sleep Disorders Association, Rochester, 1990)、こうした若年者での日内リズム睡眠障害は社会適応を困難にし、患者の有する能力の発揮を阻害する（Kaj i mur a e t . a l.：日本臨床， Vo l . 56, No. 2, p. 404, 1 998)。

このような症状をもたらす日内リズムの乱れを調節する方法として、精神療法的アプローチ、非薬物療法、薬物療法がある。非薬物療法には高照度光照射があり、現在では、季節性感情障害や日内リズム睡眠障害の治療に積極的に用いられている。また、薬物療法には、ビタミン B _{1 2}、ベンゾジァゼピン系睡眠薬などが利用されているが、いずれも確実に効果をもたらすとは言い難く、薬物療法の確立が待たれている。ベンゾジァゼピン系睡眠薬はこれまで主流であったパルビツール系あるいは非パルビツール系睡眠薬と比較して、耐性 ·依存性が生じにくく比較的安全性が高いものの、筋弛緩作用 ·持ち越し効果 · 健忘作用などの副作用が発現することが知られており、その使用には十分な注意が必要である。つまり、全で有効な日内リズム正常化作用を持つ優れた化合物がないのが現状である。

日内リズム調節を行う際の新たな化合物としてメラトニンが期待されている。メラトニンは主に松果体で産生されるホルモンで、その産生は著明な日内変動を示す。夜間の産生量は日中の 5 0 — 1 0 0倍にも達する。

夜間のメラトニン分泌を 3—ブロッカー投与により抑制すると、夜間の中途覚醒の増加などの睡眠の低質化（Brismar et. al. : Acta. Med. Scand. , 223, p .525, 1988)および日中の覚醒水準の低下（Dimenas et. al. : J. Clin. Pharmacol., 30, s l03, 1990) など睡眠 ·覚醒リズム障害が生じる。老年者の睡眠障害の背景にはメラトニン分泌の減少があり、メラトニン補充療法が有効（Garfinkel et. al. : Lancet, 346, p .541, 1995) とされている _t また、メラトニンの生理的分泌が低下する高齢者でも、良眠できる高齢者にはメラトニンの分泌量が多い（Haimov et. al. : Sleep . 18， p .598,

1995)。このような事実から内因性メラトニンは睡眠 '覚醒リズムの調節に関与する生理的な催眠物質であるとされている。

これに対し、外因性メラトニンの催眠作用については、多様な結果が報告されている。メラトニンの投与により入眠潜時の短縮、中途覚醒の減少、不眠の改善等の睡眠良質化がみとめられたとする報告（Zhdanova et. al.: Clin. Pharmacol. Ther., 57, p.552, 1995) がある一方で、睡眠調節効果、睡眠障害改善効果を否定する報告（James et. al. Neuropsycho- pharmacology, 3, p.19, 1990) もあ。

これら相対する結果が得られた理由の一つに、投与時刻依存性が指摘されている（Mishima: 日本臨床， Vol.56， Νο·2， ρ·302, 1998〉。この他、メラトニンが酸化され易いことも理由として考えられる。生体内メラトニンは、スーパーォキシドア二オンの存在下で、インドールァミン 2， 3 —ジォキシゲナーゼによるィンドール環の酸化的環開裂反応により代謝され失活する（Hayaishi: J. Biochem., 79, p.13, 1976) ことが知られている。従って、ス一パーォキシドア二オンの発生要因となる活性酸素やラジカル濃度が高いとされる高齢者あるいはストレス負荷時には、この反応が進行しやすく、結果的にメラトニンの濃度が下がり、睡眠調節が困難になると考えられる。

このようにメラトニンは日内リズム調節に関る因子であることは明らかであるが、その治療効果を十分に発揮させるには解決すべき点が多い。よって、別の天然物化合物に日内リズム正常化作用を見出すことができれば、睡眠障害やこれに起因する種々の疾患の予防的にその利用価値はきわめて高い。また、生体内メラトニンおよび外因性メラトニンの生体内利用効率を安全かつ有効に引き上げることのできる化合物が天然物から得られれば、その利用価値もきわめて高い。

ァスタキサンチンは甲殻類や魚類など水棲動物や微生物などにみられる赤色のカロテノィド色素である。ァスタキサンチンは魚類の体色改善剤や家畜の色調改善添加剤として（特開昭 57-206342、特開昭 60-54647, 特開平 4-63552) 利用されてきた。また、ァスタキサンチンの抗酸化作用はひ一トコフェロール以上に強力であることが明らかとなり、天然着色料としての用途に加え、酸化防止剤、健康食品、化粧品、医薬品への利用が期待されている（山下栄治：食品と開発， vol.27, No.3, p.38, 1992) < 最近では、ァスタキサンチンが ^6DCoの照射による脳内での過酸化脂質の上昇を《-トコフエロールの 1/100 の用量で抑制できる（NishigaM et. al.: J. Clin. Biochem. Nutr" 16, p.161, 1994) ことが報告されている。しかしながら、ァスタキサンチンが日内リズムの正常化作用、および日内リズムの乱れにより生じる睡眠障害やそれに起因する種々の疾患の予防又は改善に有効である事は知られてない。また、ァスタキサンチンがメラトニンの日内リズム調節作用を増強させることも知られていない。さらに、ァスタキサンチンを日内リズムの正常化および睡眠作用を目的として飲食品および食品添加物、あるいは医薬品の有用成分として用いることは従来知られていない。

[発明の開示〗

本発明が解決しょうとする課題は、安全性が高く、かつ日内リズムを効果的に調節し、睡眠障害や日内リズムの乱れによる種々の疾患などの医学的症状等を予防または改善することを目的とする組成物およびこれを添加してなる飲食物 · 医薬品を提供することである。

また、メラトニンの生体内での利用率を高め日内リズムを効果的に調節する作用を有する組成物、およびこれを添加してなる飲食物 · 医薬品を提供することにある。

本発明者らは、日内リズムの正常化作用を有する物質を探索する目的で， 1 2時間明期一 1 2時間暗期に制御された環境下でラットの自発運動量を指標とした日内リズム計測法を用い、様々な物質に関し研究行った。その結果、カロテノィドの一種であるァスタキサンチンおよび Z又はそのエステルが、日内リズム正常化作用を有することを明らかにした。さ用して摂取することにより、メラトニンの日内リズム正常化作用を増強できることを見出し、本発明を完成した。

本発明は、ァスタキサンチンおよび/又はそのエステルを有効成分として含有するか、またはメラトニンとァスタキサンチンおよび/又はそのを併用摂取できるように含有する医薬品又は食品等の組成物を提供する。これら組成物は、安全性が高く、かつ日内リズム正常化作用を示すものである。

[図面の簡単な説明]

図 1はァスタキサンチンの総運動量（経日変化）に及ぼす影響を示す図である。

図 2はァスタキサンチンの総運動量に対する明期の運動比率（経日変化）に及ぼす影響を示す図である。

図 3はァスタキサンチンの総運動量に対する明期の運動比率（平均）に及ぼす影響を示す図である。

図 4はァスタキサンチンとメラトニンの総運動量（平均）に及ぼす影響を示す図である。

図 5はァスタキサンチンとメラトニンの明期の運動比率（平均値）に及ぼす影響を示す図である。

図 6はメラトニンの日内リズム正常化作用に対する低用量 0；—トコフエロールの効果を示す図である。

図 7はメラトニンの日内リズム正常化作用に対する高用量一トコフエロールの効果を示す図である。

図 8はメラトニンの日内リズム正常化作用に対するァスタキサンチンの効果を示す図である。

図 9は明期の運動比率（平均値）に及ぼすァスタキサンチンの効果（用量依存性）を示す図である。

図 1 0は総運動量（平均値）に及ぼすァスタキサンチンの効果（用量依存性）を示す図である。

[発明の実施の形態]

本発明は制御された環境下で飼育したラットの自発運動量を指標とした日内リズム計測法を用い、日内リズム正常化作用を有する物質を探索し得たものである。その結果、カロテノイドの一種であるァスタキサンチンおよび/又はそのエステルが、日内リズム正常化作用を有することを見出した。つまり、日内リズムが乱されたラットにァスタキサンチンを摂取させることでラットの日内リズムを正常値に近づけることができた。

さらに、ァスタキサンチンおよび Z又はそのエステルとメラトニンとを同時に摂取させることにより、メラトニンの日内リズム正常化作用を増強できることを見出した。そして、この増強作用はァスタキサンチンと同じ抗酸化剤である ―トコフエロールでは見られなかった。ァス夕キサンチンのこの作用は、メラトニンが酸化分解を受けやすい化合物であることから、ァスタキサンチンの抗酸化作用に由来するものと考えられた。つまり、メラトニンの日内リズム正常化作用を増強する効果は抗酸化物質に共通の作用であることが推察された。そこでァスタキサンチンの替わりに、ァスタキサンチンと同様の抗酸化剤である Q!—トコフエロールを用いてその効果を比較した（実施例 3 )。その結果、 0.001%および 0.005%の一トコフエロールではメラトニンの日内リズム正常化作用を増強する効果を示さなかった。これに対して、 0.0045%のァス夕キサンチンはメラトニンの日内リズム正常化作用を有意に増強することを見出した。このことはァスタキサンチンの作用として従来知られていなかったことである。とることができ、一般食品、健康食品、機能性食品、栄養補助食品などの食品または医薬品として提供できる。また、メラトニンと併用する場 • 合のメラトニンの使用量は、そのメラトニンの有する機能を発現するために必要な量に応じて適宜増減すれば良いが、本発明の組成物ではその生体内でのメラ卜ニンの利用率が改善されているために、これまで必要とされてきた投与量の 5 0— 8 0 %程度の投与量で良い。

本発明の有効成分であるァスタキサンチン及び Z又はそのエステルは、甲殻類の甲殻及び卵（Kuhn et. al. ： Angew. C em. , 51, p.465, 1938 又は Ber. , 71, p.1879, 1938)、臓器（Kuhn et. al. : Ber. 72, p.1879, 1939)、植物（Tischer et. al.： Z. Physiol. Chem. , 267, p.281, 1941). 福寿草や金鳳花の花弁（Seybold et. al.： Nature, 184, p.1714, 1959). 種々の魚介類の皮 (Matsuno et. al. ： Carotenoids Chemistry and Biology, Plenum Press, p.59, 1989)、卵 (Miki et. al. ： Comp. Biochem. Physiol. , 71B, p.7, 1982)、ナンキヨクオキアミ（Yamaguchi et. al. ： Bull. Japan. Soc. Sci. Fish, , p.1411, 1983)、緑藻へマトコッカス（Rens troem et. al. ： Phytochem. 20, p.2561, 1981), 赤色酵母ファフィァ（Andrewes et. al. : Phytochem. , 15, p.1003, 1976 )、海洋性細菌 Agrobacter ium aurant i acum(Yokoyama et. al. ： Biosc i, Biotech. Biochem. , 58, p. 1842, 1994) などより発見されている。また、ァスタキサンチンの化学構造は決定され (Andrewes et. al.： Acta Chem. Scand. , B28, p.730, 1974)、また有機合成法も確立している（Widmer et. al. ： Helv. Chem. Acta. , 64, p.2405, 1981、 Mayer et. al. ： Helv. Chem. Acta. , 64, p.2419, 1981) ところから、化学合成品としても入手は容易である。

本発明における有効成分は、化学的に合成されたァスタキサンチンでも、またァスタキサンチン及び Z又はそのエステルを含有する赤色酵母、テイグリオパス（赤ミジンコ）、ォキアミ等の甲殻類の殻、緑藻類、微細藻類よりの抽出物（溶媒抽出エキスの状態であっても、また必要により適宜精製したものであってもよい）であってもよい。またァスタキサンチン及びノ又はそのエステルを含有する甲殻類やへマトコッカス属の緑藻類を粉砕処理した粉体であっても使用することができる。

例えば、ァスタキサンチンおよび Z又はそのエステルの製法は、甲殻類を利用した製法（特開昭 5 8— 8 8 3 5 3、特開平 1 — 1 8 6 8 6 0 )、藻類を利用した製法（特開平 1 一 1 8 7 0 8 2号、特表平 2 - 5 0 1 1 · 8 9、特開平 5— 6 8 5 8 5、特開平 3— 8 3 5 7 7)、ァスタキサンチン生産性酵母を利用した製法（特表平 2— 5 0 4 1 0 1、特開平 3 — 2 0 6 8 8 0、特開平 4 _ 2 2 8 0 6 4)、ォキアミを利用した製法（特開昭 6 0— 4 5 5 8、特開昭 6 1 — 2 8 1 1 5 9、山下栄次：食品と開発， vol.27, p38 ( 1992)) などが挙げられる。また、ァスタキサンチンの新規な合成（特開平 4一 2 2 5 9 3 3 ) も開示されている。これら以外の方法であっても本発明の有効成分の特性を有効に利用できるものであれ 4027 ば単独又は組み合わせて適宜使用することができる。

本発明で用いるァスタキサンチンのエステルは、食用あるいは医薬用として許容される任意の脂肪酸とァスタキサンチンのエステルである。脂肪酸としてはパルミチン酸、ステアリン酸等の飽和脂肪酸.、あるいはォレイン酸、リノール酸、 α—リノレン酸、アーリノレン酸、ビスホモ一ァ一リノレン酸、ァラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサへキサェン酸等の不飽和脂肪酸が挙げられ、これらがァスタキサンチンに 1 つ結合したモノエステル及び 2つ結合したジエステルのいずれも本発明に使用できる。

本発明の有効成分を食品又は医薬品として利用する場合、上記の粗抽出エキスあるいは精製品のいずれを使用することもできる。これらを使ところから、常法にしたがって有効成分を浮剤化あるいはシナジストとなるような化合物を加えて浮剤化することができる。

本発明の飲食物および医薬品の有効成分であるァスタキサンチンおよび Ζ又はそのエステルは、飲食物又は医薬品が体内に取り込まれたときァスタキサンチンおよび/又はそのエステルが曰内リズム正常化作用を有するための有効量、例えば、一日あたり 0 . 5 — 5 0 0 mg、好ましくは 5 — 5 O mg含まれているが、その上限には特別な制限は存在しない。 —方、本発明におけるメラトニンは、合成品でも、メラトニンを含有する動物あるいは植物から抽出されたものでも良く、また精製品でも粗抽出物であっても良い。いずれも何ら限定されることなく使用することができる。ンに添加あるいは併用して摂取することができるが、本発明の効果を発揮するためには、メラトニンに対してそれぞれ 3倍、 6倍（重量比）以上であることが望ましい。

本発明の飲食物及び医薬品の組成及び製剤には、本発明における有効成分であるァスタキサンチン及び Z又はそのエステルは化学的に合成されたものでも天然物由来のものでもよく、これらを単独であるいは適宜組み合わせて使用可能である。ァスタキサンチンあるいは粗抽出エキスはエタノールに溶解し、そのまま水で希釈して使用することも可能である。また、必要に応じて乳液状製剤を調製することができる。乳液状製剤の調製にあたっては、水相部に没食子酸、 L -ァスコルビン酸（あるいはそのエステルまたは塩）、ガム質（例えばローカストビーンガム、アラビアガムまたはゼラチン等）、さらに'ビタミン P (例えばヘスペリジン、ルチン、ケルセチン、カテキン、チア二ジン等のフラボノイド類またはポリフエノール類あるいはその混合物）等を添加することが出来る。また油相部にはァスタキサンチンあるいはそのエステル、粗抽出エキス、またはその混合物を添加し、さらにグリセロール、グリセリン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、デキストリンまたは油脂、例えばナタネ油、大豆油、コーン油等通常の液状油を加えて乳化することによって容易に調製できる。乳化に際しては、拘束撹袢機、ホモジナイザー等を用いて混合乳化が可能である。

また、本発明の医薬として、錠剤及び粉末のような固形投薬形態、あるいはェリキシロール、シロップ及び懸濁液のような液体投薬形態で経口投与される。また非経口投与的に、例えば注射剤、座薬としても使用可能である。経口投与薬として使用する楊合の補助剤としては、例えば固形粉末上の担体、ラクトース、サッカロースなどの糖、グリシンなどのアミノ酸、セルロース等が挙げられる。また潤滑剤として二酸化珪素、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレンダリコール等、結合剤としてデンプン、ゼラチン、メチルセルロース、ポリピニルピロリドン等が例示できる。崩壊剤としてはデンプン、寒天等がある。

本発明の組成物は、日内リズムを正常化する作用を有する。したがつて、日内リズム睡眠障害の予防又は改善の目的で利用できる。また、睡眠だけでなく、日内リズムをもつホルモン分泌、神経活動、酵素活性や代謝、体温、腎機能などのリズムの正常化を目的としてし、利用することができ、これに起因する種々の疾患などの医学的症状等を予防または改善することができる。なお本発明における症状の改善とは疾患の治療をも含む。

また本発明のァスタキサンチンは、メラトニンの日内リズム正常化作用を増強する効果を有する。驚くべきこと（ここの作用は同用量の抗酸化剤である一トコフエロールでは認められなかった。よって、メラトニンの日内リズム正常化作用を増強するこのようなァスタキサンチンの作用効果はァスタキサンチンが抗酸化剤であるというだけでは説明ができない。

本発明の医薬中に含まれるァスタキサンチンまたはそのエステル（有効成分）の量は、成人に対して 1 日あたり、普通 0 . 5— 5 0 0 mg、好ましくは 5— 5 0 m_gの服用量で経口投与を行うか、あるいは非経口投与を行うことができる量である。投与量は、投与される疾患の種類、患者の年齢、体重、症状の程度、投与形態によって異なることは明らかである。本発明の有効成分は日内リズム正常化作用を有するため、日内リズムの乱れによって生じる睡眠障害および心 ·血管系障害等種々の疾患を予防または改善し得る。

また本発明の飲食物の形態としては、マ一ガリン、パター、バターソース、チーズ（ナチュラル、プロセス）、生クリーム、ショートニング、ラード、アイスクリーム、ヨーグルト、コーヒー用ミルク、乳製品、ソ一ス、スープ、肉製品、魚製品、ポップコーン、フライドポテト、ポテトチップ、ふりかけ、だて巻き、和菓子類（せいべい等）、洋菓子類（プリン、ゼリー、グミキャンディ一、キャンディー、ドロップ、キャラメル、チョコレート、チューインガム、ペストリ一等）、焼き菓子類（カステラケーキ、ドーナッツ、ビスケット、クッキー、クラッカー等）、マカロニパスタ、サラダ油、インスタントスープ、ドレッシング、卵、マヨネ一ズ、みそ、炭酸系飲料、非炭酸系飲料（果汁飲料、ネクター飲料等）、清涼飲料、スポーツ飲料、茶、コーヒー、ココアなどの非アルコール飲料、リキュール、薬用酒等のアルコール飲料等の一般食品の形態を拳げることができる。本発明の飲食物は、ァスタキサンチン及び Z又はそのエステル、もしくはこれらを含有する天然物から得られたものを、一般食品の原料ととも配合し、通常の方法により加工製造することができる。その配合濃度は剤形、食品の形態性状により異なるが、一般には 0 . 0 0 1— 1 0 %が好ましいが特に限定されるものではない。ただし最終製品の 1 日摂取量あたり、本発明の有効成分が、ァスタキサンチンとして日内リズム正常化作用を発揮するのに必要な量だけ含まれるように調製する。現在知られている限り成人 1 日摂取量あたり 0 . 5 _ 5 0 O mg、好ましくは 5— 5 0 mgが好ましいが、そのような量は、当業者が適宜選択できる。

本発明の飲食物を栄養補助食品あるいは機能性食品として用いる場合、その形態は、上記医薬製剤と同様の形態でもよいが、例えば蛋白質（蛋白質源としてはアミノ酸バランスのとれた栄養価の高い乳蛋白質、大豆蛋白質、卵アルブミン等の蛋白質が最も広く使用されるが、これらの分解物、卵白のオリゴペプチド、大豆加水分解物等の他、アミノ酸単体の混合物も使用される）、糖類、脂肪、微量元素、ビタミン類、乳化剤、香料等が配合された自然流動食、半消化態栄養食および成分栄養食や、ドリンク剤、カプセル剤、経腸栄養剤等の加工形態であってもよい。スポーッドリンクあるいは栄養ドリンクとして提供する場合は、栄養パランスを整え、かつ摂取時の風味を一層よくするため、易消化性の含水炭素、アミノ酸、ビタミン類、ミネラル類等の栄養的添加物や甘味料、香辛料、香料、色素等を配合することもできる。

本発明の栄養補助食品あるいは機能性食品の形態は、これらに限定されるものではなく、上記の一般食品の形態であってもよいが、できれば単位服用形態にあることが望ましい。

以下、実施例及び参考例を詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。

実施例 1 . ァスタキサンチンの日内リズム正常化作用

ァスタキサンチンが日内運動に及ぼす影響をラットを用いて調べた。ラットは明期に主に休息（睡眠）し、暗期に活動する習性を持つ。ラットの日内リズムは 1 日の運動量を連続的に測定し、明期と喑期の運動量の経時変化測定することで調べた。

4週齢の Wistar 系雄性ラット（日本チヤ一ルスリバ一社より購入）を一週間予備飼育後、 5週齢で実験に供した。ラットを無作為に 2群（5— 6 匹 Z群）に分け、一方をコントロール食群（低トコフエロール食）、もう一方をァスタキサンチン食群とし 4週間摂取させた。動物は室温 23.5土 1°C、湿度 55±5%に保った動物舎内で飼育し、飼料および水は自由摂取とした。

ラット日内運動量の計測方法

飼料組成

飼料組成については表 1のように調製した。ァスタキサンチンはォキアミから抽出精製されたァスタキサンチン（ァスタキサンチンをフリー体換算で 1 5 %含有するオイル、イタノ冷凍（株）製造）を用いた。

ラット日内運動量の計測

ラットを赤外線センサーを設置したボックス内で個別に飼育し、その運動量を赤外線センサーによりカウントした。つまり、動物がその赤外線センサーを一回越える毎に 1 カウントとして数え、その数を積算して運動量 (カウント）として表わした。統計処理は、 AN0VA および student t - test を用いて行った。

実験食で飼育開始後 1週間は 12時間暗期一 12時間明期の同調期間とし，その後 2 週目から 3 週間にわたり、日内運動量を連続的に計測した。 1 日毎に総運動量ならびに総運動量に対する明期の運動比率（明期運動量 /総運動量 X 100 ( )) を算出した。ァスタキサンチンはコントロールと比べて総運動量に影響を及ぼさなかった（図 1 ) が、明期の運動比率を低下させた（図 2)。このことから、ァスタキサンチンの摂取により明期のラットの活動が低下し、ァスタキサンチンに日内リズムを安定化させる作用があることが確認できた。明期の運動比率 (%) の平均値を比べると（図 3)、ァスタキサンチン食群には明期の運動比率の有意な低下が見られ、ァスタキサンチンが日内リズムの正常化作用を有することが明 W らかである。実施例 2. ァスタキサンチンによるメラトニンの日内リズム正常化増強効果

4週齢の Wistar系雄性ラット（日本チヤ一ルスリバ一社より購入）を —週間間予備飼育後、 5週齢で実験に供した。ラットを無作為に 2群（10 -11匹 Z群）にわけ、それぞれコントロール食（低トコフエロール食）とァスタキサンチン食（表 1)を与えた。各群は更にそれぞれ 2群（5— 6 匹ノ群）に分け、それぞれ蒸留水およびメラトニン水を 4週間摂取させた。動物は室温 23.5±1°C、湿度 55±5%に保たれた動物舎内で飼育し、飼料および水は自由摂取とした。メラトニンは 0.5mg/100ml の濃度で水に溶解して飲料水として自由に摂取させた。ラットの飲水量から換算されるメラトニンの摂取量は約 lmg/日となる。

実験食による飼育開始後、 1週間の同調期間ののち 3週間にわたりラットの運動量を実施例 1のように計測し、日内リズムの変化を調べた。各群の総運動量の平均値に差は見られなかった（図 4)。総運動量に対する明期の活動比率（明期運動量ノ総運動量 X100 (%)) を比べると、コントロール群に比ベアス夕キサンチン群およびメラトニン群はそれぞれ単独でも明期の活動率を低下させる傾向がみられた。ァスタキサンチンとメラトニンとを同時に与えると日内リズム正常化作用がさらに増強された (図 5)。

実施例 3. α—トコフエロールのメラトニンの日内リズム正常化増強効果との比較'

ァスタキサンチンと同じ脂溶性の抗酸化剤である α—トコフヱロールがメラトニンの日内リズム正常化作用に及ぼす影響をァスタキサンチンのそれと比較した。

4週齢の Wistar系雄性ラット（日本チヤ一ルスリバ一社より購入）を一週間間予備飼育後、 5週齢で実験に供した。ラットを無作為に 2群（10 一 11匹群）にわけ、各群に 0.001%および 0.005%トコフエロール食を摂取させた。おのおのをさらに 2群（5— 6 匹/群) にわけ、 1 群は蒸留水を、もう 1群にはメラトニン水を 4週間与えた。動物は室温 23.5土 1°C、湿度 55±5%に保つた動物舎内で飼育し、飼料および水は自由摂取とした。実験食で飼育を開始後、 1週間の同調期間ののち 3週間にわたりラットの運動量を実施例 1のように計測し、日内リズムの変化を調べた。総運動量に対する明期の運動比率（明期運動量 Z総運動量 X100 ( )) の経日変化を図 6、 7および図 8に示す。 0.001%トコフエロール食群にはメラトニンの日内リズム正常化作用の増強効果はみられなかった（図 6)。 0.005%トコフエロール食摂取群でわずかなメラトニンの日内リズム正常化作用の増強効果が認められた（図 7)。しかし、 0.005%トコフエロール食群にみられるメラトニンの日内リズム正常化作用の増強効果は 0.0045%ァスタキサンチン食群に見られるメラトニンの日内リズム正常化作用の増強効果（図 8 ) と比較して弱いものであった。この結果から、ァスタキサンチンが一トコフエロールより効果的なメラトニンの日内リズム正常化作用の増強効果を持つことが明らかとなった。

実施例 4. ァスタキサンチンの日内リズム正常化作用における用量

依存性

4週齢の Wistar系雄性ラット（日本チヤ一ルスリバ一社より購入）を一週間予備飼育後、 5週齢で実験に供した。ラットを無作為に 5群にわけ. それぞれコントロール食（トコフエロール欠乏食）とァスタキサンチン食（表 2)を与えた。飼料および水は自由摂取とした。ラットの摂餌量から換算されるァスタキサンチンの摂取量は約 2— 20mg/日となる。

1 週間の同調期間ののち 3週間にわたりラッ卜の運動量を実施例 1のように計測し、日内リズムの変化を調べた。総運動量に対する明期の活動比率（明期運動量 Z総運動量 X100 (%)) は最少用量の 0.15g/kg diei よりァスタキサンチンの濃度に依存して低下し、 0. 3g/kg diet以上で有意であった（図 9 )。一方、総運動量は最高用量の 1· 5g/kg dietで上昇する傾向が認められた（図 1 0)。

本実施例では、基本となる飼料にトコフエロール欠乏食を用いている。実施例 1の低トコフエロール食を基本飼料として用いた場合と同様に、ァスタキサンチンによる日内リズム正常化作用が確認されたことより、ァスタキサンチンはトコフエロールが欠乏して日内リズムに変調を来たした場合にも、有効に作用することが確認できた。

[製剤例 1 ] 乳化状製剤

油相部 1%)

0. 1

ナタネ油 3 9. 9

コハク酸グリセリド 2. 0

水相部 (重量％)

L-ァスコルビン酸 2. 0

没食子酸 1. 0

ケルセチン 1. 0

口一カストビーンガム 0

水 5 3 9

口一カストビーンガムを溶解させた水を 65°Cに加熱してから没食子酸と L—ァスコルビン酸とケルセチンを混合し、予め 65°Cで合、溶解しておいた油相部を混合、撹袢後ホモジナイザーを通し、均質化し 10°Cまで冷却して上記配合の乳化状製剤を得た。この乳化状製剤は、 1回あたり約 1— 2 0 ml飲用する。

[製剤例 2] 乳化状製剤

油相部（重量％)

ァスタキサンチン 0. 1

ナタネ油 3 8. 9

クェン酸モノグリセリド 2. 0

水相部（童量％)

L-ァスコルビン酸 2. 0

没食子酸 1. 0

ヘスペリジン 1. 0 ローカス卜ビーンガム 0. 0 5

水 5 4. 9 5

ローカストビーンガムを溶解させた水を 65°Cに加熱してから没食子酸と Lーァスコルビン酸とヘスペリジンを混合し、予め 65°Cで混合、溶解しておいた油相部を混合、撹袢後ホモジナイザーを通し、均質化し 10°C まで冷却して上記配合の乳化状製剤を得た。この乳化状製剤は、 1回あたり約 1一 2 0 ml飲用する。

[製剤例 3 ] 錠剤

(重量％)

5

乳糖 8 0

重質酸化マグネシウム 1 5

を均一に混合し、粒 1 8 Omgの錠剤とした。

[製剤例 4] 散剤及び顆粒剤

, (重量％)

ァスタキサンチン 45

乳糖 40

デンプン 1 5

を均一に混合し、散剤又は顆粒剤とした

[製剤例 5 ] カプセル剤

1%)

ゼラチン 7 0. 0

グリセリン 2 2. 9

パラォキシ安息香酸メチル 0. 1 5

パラォキシ安息香酸プロピル 0. 5 1

水

計 1 0 0 %

.上記成分からなるソフトカプセル剤皮の中に、ォキアミ抽出油脂（ァスタキサンチンジエステル 1. 7 %含有）を常法により充填し、 1粒 1 8 0 mgのソフトカプセルを得た

[製剤例 6 ] ドリンク剤 '

呈味： D L—酒石酸ナトリウム 1 g

コハク酸 0. 0 9 g

甘味：液糖 8 Kg

酸味：クェン酸 1 2 0 g

ビタミン：ビタミン C 1 0 0 g

ビタミン E 3 0 0 g

ンチ 1 0 g

シクロデキストリン 5 0 g

香料 1 5 0ml

塩化力リゥム 1 0 g

硫酸マグネシウム 5 g

上記の成分を配合し、水を加えて 1 0 0 リットルとした。このドリンク剤は、 1回あたり約 1 0 0 mlを飲用する。

[製剤例 7 ] メラトニン配合錠剤 '

(重量％)

6

メラトニン 2

ビタミン B6 1 0

3 0

重質酸化マグネシウム 5 1

上記を均一に混合し、 1粒 1 0 Omgの錠剤とした。

[製剤例 8 ] メラトニン配合カプセル剤

(重量％)

ゼラチン 7 0. 0

グリセリン 2 2. 9

パラォキシ安息香酸メチル 0. 1 5

パラォキシ安息香酸プロピル 0. 5 1 水適量

計 1 0 0 %

上記成分からなるソフトカプセル剤皮の中に、ォキアミ抽出油脂（ァスタキサンチン、フリー体換算で 5 % ) とメラトニンを常法により充填し、 1粒 1 8 0 mgのソフトカプセルを得た。

[産業上の利用分野]

本発明の飲食物および医薬品に含まれるァスタキサンチンおよび Z又はそのエステルは、実施例で述べたように日内リズム正常化作用を有する。また、内因性メラトニンあるいはァスタキサンチンと同時に摂取した外因性メラトニンの保護作用により、メラトニンの効果を増強させ、日内リズムを正常化する作用を持つ。従来の技術では、このような作用を持つ物質は知られていない。

表 1 実験飼料の組成成分： (g/kg)

コント口一ノレ食

カセイン（α -トコフェローノレフリー） 200 200

DL -メチォニン 3 3 コーンスターチ 150 150 シユークロース 500 500 セノレ口一スノウダ一 50 50 ラード α—トコフエ口ーノレフリ一) 50 50 ミネラル類 (ΑΙΝ - 76) 35 35 ビタミン類（ΑΙΝ-76, α -トコフエ口ールフリ一) 10 10 リン 2 2 -トコフエ口一ノレ 0. 01 0. 01 ァスタキサンチン 0. 3

-体換算で 15%含むオイル

表 2 実験飼料の組成成分量 (g/kg)

コント口一ノレァスタキサンチン食

0. 15 0. 3 0. 6 1. 5 カゼイン（α—トコフェローノレフリ一） 200 200 200 200 200

DL-メチォニン 3 3 3 3 3

3—ンスターチ 150 150 150 150 150 シユークロース 500 500 500 500 500 セノレロースノウタ、'— 50 50 50 50 50 o ラード（α—トコフェローノレフリー） 50 50 50 50 50 ミネラル類 (ΑΙΝ-76) 35 35 35 35 35 ビタミン類 (ΑΙΝ- 76， α -トコフエ口ールフリ一） 10 10 10 10 10 重酒石酸コリン 2 2 2 2 2 ァスタキサンチン' 0. 15 0. 3 0. 6 1. 5

^:ァスタキサンチンをフリ一体換算で 15%含むオイル

Claims

求の範囲

1 . ァスタキサンチンおよび/又はそのエステルを有効成分として含有する日内リズム正常化作用を有する飲食物および医薬品組成物。

2 . ァス夕キサンチンおよび/又はそのエステルを有効成分として含有する日内リズムの乱れに起因する睡眠障害および種々の疾患の予防および改善のための飲食物および医薬品組成物。の保護によるメラトニンの睡眠作用および/又は日内リズム正常化作用と、日内リズムの乱れに起因する睡眠障害および種々の疾患の予防および改善作用をもたらすァスタキサンチンおよび/又はそのエステルを含有する飲食物および医薬品組成物。

4 . ァスタキサンチンおよび Z又はそのエステルとメラトニンとを併用して摂取することによるメラトニンの睡眠作用およびノ又は日内リズム正常化作用と、日内リズムの乱れに起因する睡眠障害および種々の疾患の予防および改善を目的とするァスタキサンチンおよび/又はそのェステルとメラトニンとの組成物。

5 . ァスタキサンチンおよび/又はそのエステルによる生体内メラトニンの分解を抑制するためのァスタキサンチンおよびノ又はそのエステルを含有する組成物。