WO2000012555A1

WO2000012555A1 - Proteine de liaison de l'interleukine 18

Info

Publication number: WO2000012555A1
Application number: PCT/JP1998/005186
Authority: WO
Inventors: Kakuji Torigoe; Madoka Taniai; Masashi Kurimoto
Original assignee: Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo
Priority date: 1998-09-01
Filing date: 1998-11-18
Publication date: 2000-03-09
Also published as: EP1110969A1; EP1110969A4; KR100537558B1; BR9816013A; CA2340579A1; KR20010074925A; US20050191303A1

Description

明細書インターロイキン一 1 8結合蛋白質技術分野

この発明は新規なサイトカン結合蛋白質、とりわけ、インターロイキンー 1 8結合蛋白質に関する。背景技術

インターロイキン一 1 8 (以下、「 I L— 1 8」と略記する。）は、免疫系における情報伝達物質であるサイトカインの 1種である。特開平 8- 27 1 89号公報、特開平 8— 1 93098号公報及びハルキ · ォ力ムラら『ネイチヤー』、第 378卷、第 6， 552号、 88乃至 91 頁 U 995年）に見られるように、 I L— 1 8は、発見当初、「インターフェロン一 r誘導因子（ I G 1 F ) 」と呼称されていたが、その後, シンペイ · ゥシォら『ザ · ジャーナル · ォブ ' ィ厶ノロジー』、第 1 5 6卷、 4, 274乃至 4, 279頁（ 1 996年）における提案にしたがって、「 I L— 1 8 (インターロイキン一 1 8) 」と呼称されるようになった。アンガス ' ダブリュ，トムソン編『ザ ' サイト力イン · ハンドブック』、第 3版、アカデミック ' プレス ' リミテツド発行、 465 乃至 489頁に記載されているように、成熟型の I L— 1 8は 1 57個のアミノ酸からなり、免疫担当細胞において生理活性物質として有用なインターフヱロン一 r (以下、「 I F N— r」と略記する。）の産生を誘導する性 ¾と、キラー細胞の細胞障害性を増強したり、キラー細胞そのものの生成を誘導する性質を兼備している。これらの性 ¾ゆえに、 I L一 1 8は抗ウィルス剤、抗菌剤、抗腫瘍剤、抗免疫疾患剤などの医薬品として広範な用途が期待され、現在、その実用化を目指して鋭意研究が進められている。

前述のとおり、 I し一〗 8にかぎらず、サイトカインは、本来、免疫系における情報伝達を担う物質として産生され、分泌される。したがつて、 I L一 1 8が哺乳類の体内で過剰に産生されたり、外部から過剰に投与されたりすると、免疫系のバランスに偏りを生じ、生体にとって有害な免疫反応を惹起する可能性がある。例えば、特開平 1 0— 9 6 7 3 0号公報などにみられるように、最近の知見は、慢性関節リウマチを含む自己免疫疾患の患者が、 I L一〗 8の体液レベルにおいて、健常者よリ有意に高いことを示している。このことは、 I L一 1 8がある種の疾患の発症に直接又は間接に関与していることを物語っている。したがつて、斯界においては、 I L一 1 8そのものの生理作用の解明や実用化に加えて、 I L一 1 8の生理作用を抑制する物質が一刻も早く解明され、実用化されることが期待されている。

斯かる状 ί兄に鑑み、この発明の第一の課題は、 I L一 1 8の生理作用を抑制する性質を有し、医薬品としてヒ卜を含む哺乳類に適用可能な物質を提供することにある。

さらに、この発明の第二の課題は、斯かる物質をコードする D Ν Αを提供することにある。

加えて、この発明の第三の課題は、斯かる物質の I L一〗 8抑制剤としての用途を提供することにある。

さらに加えて、この発明の第四の課理は、斯かる物 Kの医蕖品としての用途を提供することにある。発明の開示

本発明者がこれらの課題を解決すべく鋭意研究したところ、 I L— 1 8に結合することによってその生理作用を抑制する物質が哺乳類の体液中に存在することを突き止めた。本発明者がこの物質を分離し、性 « · 性状を調べたところ、その本質は蛋白質であり、単離された状態でも I L一 1 8に結合し、その生理作用を顕著に抑制することを見出した。さらに、斯くして存在が確認された I L— 1 8結合蛋白質は、ヒトを含む喃乳類に投与すると、自己免疫疾患、炎症性疾患及びアレルギー疾患を含む、過剰な免疫反応に起因する諸種の疾患の治療 · 予防に効果を発揮することも見出した。

すなわち、この発明は、前記第一の課題を、 S列表における配列番号 1 及び 2に示すいずれかのアミノ酸配列の全部又は一部を含有する I L - 1 8結合蛋白質を提供することによリ解決するものである。

さらに、この発明は、前記第二の課題を、斯かる I L一 1 8結合蛋白質をコードする D N Aを提供することによリ解決するものである。

加えて、この発明は、前記第三の課題を、有効成分として、斯かる I L - 1 8結合蛋白を含有する I L一 1 8抑制剤を提供することにより解決するものである。

さらに加えて、この発明は、前記第四の課題を、有効成分として、斯かる I L一 1 8結合蛋白を含有する抗感受性疾患剤を提供することによリ解決するものである。図面の簡単な説明

第 1 図は、ヒ卜由来の I L一〗 8結合蛋白質のぺプチドマップである, 図において、クロマトグラム A及びクロマ卜グラム Bは、それぞれ、卜リブシン消化後及び卜リプシン/ペプシン消化後に得られたぺプチドマップである。図中、 1 乃至 2 0は、それぞれ、アミノ酸配列を解析したペプチド断片 1 乃至 2 0の溶出位置を示している。

差替え用紙（規則 26) 3/1

第 2図は、マウス由来の I L— 1 8結合蛋白質のペプチドマップである。図において、クロマトグラム A及びクロマトグラム Bは、それぞれ卜リプシン消化後及び卜リプシンペプシン消化後に得られたぺプチドマップである。図中、〗乃至 8は、それぞれ、アミノ酸配列を解祈したぺプチド断片 1 乃至 8の溶出位 Sを示している。

第 3図は、ヒ卜由来の I L一 1 8結合蛋白 Sをコードする塩基配列を含む組換え D N Aの構造を示す制限酵素地図である。

差替え用紙（規則 26) 第 4図は、マウス由来の I L一 1 8結合蛋白をコードする塩基配列を含む組換え D N Aの構造を示す制限酵素地図である。

なお、図において、以下の符号は、それぞれ以下のものを表す。

H 1 8 B P H 6 c D N A ヒ卜由来の I L一 1 8結合蛋白質をコードする塩基 S列を含む c D N A

M 1 8 B P H— M K 2 c D N A マウス由来の I L一 1 8結合蛋白質をコードする塩基配列を含む c D N A

a P 延長因子 1 プロモーター

A m p ァンピシリン耐性遺伝子

複製起点発明を実施する最良の形態

以下、この発明の実施の形態について説明すると、この発明の蛋白 S は、 I L— 〗 8に結合することによってその生理作用を抑制する性と, 独特のアミノ酸配列により特徴付けられる。すなわち、この発明の I L 一 1 8結合蛋白質は、 I L— 1 8に作用させると、 I L— 1 8の代表的な生理作用である、免疫担当細胞において I F N— rの産生を誘導する作用を抑制する。また、当該 I L— 1 8結合蛋白質は、 I L一〗 8に結合させると、 I L一 1 8の生理作用によるキラ一細胞の細胞障害性の増強や、キラー細胞の生成の誘導を抑制する場合がある。この発明の I L 一 1 8結合蛋白質は配列表における配列番号 1 及び 2に示すいずれかのァミノ酸配列の全部又は一部を含んでなリ、例えば、ヒト由来の I し - 1 8結合蛋白 Sは、部分アミノ酸 K列として、配列表における配列番号 3乃至 23に示すアミノ酸 5B列の全部又は一部を、また、マウス由来の I L一〗 8結合蛋白質は配列表における配列番号 24乃至 3 〗に示すァミノ酸配列の全部又は一部をそれぞれ含有する。この発明の I し一 1 8 結合蛋白質は、尿や血液などの体液においては、通常、可溶性糖蛋白質として存在し、還元剤存在下の S D S—ポリアクリルアミドゲル電気泳動（以下、「 S D S— P A G E」と略記する。）を適用すると、分子量約 40， 000乃至 60, 000ダルトンに I し一 1 8結合能を伴う蛋白 Kのバンドを示す。

この発明の I L— 1 8結合蛋白質は、斯かる特徴を指標にして、哺乳類の体液や細胞から得ることができる。個々の体液としては、血液、リンパ液、腹腔内液、尿などが挙げられ、また、細胞としては、上皮細胞、内皮細胞、間質細胞、軟骨細胞、単球、顆粒球、リンパ球、神経細胞及びそれらを培養株化して得られる細胞株が挙げられる。経済性を問題にするのであれば、この発明の I L一〗 8結合蛋白質をコードする D N A に組換え D N A技術を適用するのが有利である。この発明の I L— 1 8 結合蛋白質をコ一ドする D N Aは、配列番号 1 乃至 3 1 に示すアミノ酸配列に基づき哺乳類の遺伝子を検索することによリ得ることができる。例えば、この発明の I L一 1 8結合蛋白質をコードするヒト由来の D N Aは、通常、配列表における配列番号 32に示す塩基配列の全部又は一部を、また、マウス由来の D N Aは、通常、配列表における配列番号 3 3に示す塩基配列の全部又は一部をそれぞれ含有する。斯かる D N Aによリ形 «転換した動物及び微生物由来の宿主は、常法にしたがって培養することにより、この発明の I L一 1 8結合蛋白質を高収量で産生する, 動物由来の宿主の具体例としては、例えば、 3 T 3細胞（AT C C C C L - 92 ) 、 C 1 27 I 細胞（A T C C C R L— 1 6 1 6) 、 C H 0— 細胞（AT C C C C L— 6 1 ) 、 C V— 1 細胞（AT C C C C L一 70) 、 C O S— 1 細胞（AT C C C R L - 1 650) 、 H e L a細胞（A T C C C C L - 2 ) , M O P 8細胞（A T C C C R L— 1 7 0 9 ) 及びそれらの変異株を始めとする、ヒト、サル、マウス及びハムスター由来の上皮系細胞、間質系細胞及び造血系細胞が挙げられる。微生物由来の宿主の具体例としては、例えば、細菌、真菌及び酵母が挙げられる。これらの宿主のうち、動物由来の宿主や酵母は、糖蛋白質としての形態の当該 I L一 1 8結合蛋白 Sの産生にとりわけ有用である。

上記のごとき給源を用いてこの発明の I L 一 1 8結合蛋白質を調製するには、体液又は細胞若しくは微生物の培養物を、必要に応じて、超音波などにより破砕した後、生理活性蛋白質を精製するための憤用の方法, 例えば、塩祈、透析、濂過、濃縮、分別沈激、イオン交換クロマ卜グラフィ一、ゲル濂過クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー、等電点クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、逆相クロマ卜グラフィ一、ァフィ二ティ一クロマトグラフィー、ゲル電気泳動、等電点電気泳動などを単独又は組合せて適用すればよい。

ところで、免疫系は、本来、有害な異物から生体を防御するためのものであるが、ときとして、その働きゆえに、却って、生体に有害な結果をもたらすことがある。哺乳類に、例えば、皮膚、臓、肝臟、心臃、骨髄などの臓器を移植すると、同種異系抗原に対する拒絶反応によリ、 T細胞が活性化され、リンパ球が増殖したり、炎症が生じることがある, 症状の程度こそ違え、同様の現象は、例えば、アレルゲンのように、宿主が固有のものと見做さない異種異系抗原が侵入した場合にも観察される。また、自己免疫疾患においては、本来、固有のものと見做されるべき成分がアレルギー反応を惹起する。

この発明の I L 一 1 8結合蛋白 ¾は、免疫系を活性化する I L一 1 8 に結合することによつてその生理作用を抑制する I L 一 1 8抑制剤として機能するので、ヒ卜を含む哺乳類に投与すると、上記のごとき免疫反応を抑制することが期待される。したがって、この発明でいう感受性疾患とは、拒絶反応及びアレルギー反応を含む免疫反応一般の亢進に起因する免疫疾患を含み、この発明の I L一 1 8結合蛋白質が直接又は間接に作用して治療及び又は予防し得るすべての疾患ということになる。個々の感受性疾患としては、例えば、上記のごとき臃器移植に伴う拒絶反応に加えて、活動性慢性肝炎、萎縮性胃炎、自己免疫性溶血性貧血、バセドウ病、ベ一チエツト症候群、 C R S T症候群、寒冷凝集素性溶血性贫血、澴瘍性大腸炎、グッドバスチヤ一症候群、甲状腺機能亢進症、慢性甲状腺炎、特発性血小板減少性紫斑病、若年性糖尿病、白血球滅少症、多発性硬化症、重症筋無力症、発作性寒冷血色素尿症、悪性貧血、多発性結節性動脈炎、多発性筋炎、原発性胆汁性肝硬変、リウマチ熱、慢性関節リウマチ、桷本病、シエーグレン症候群、クローン病、交換性眼炎、進行性全身性硬化症、ウェジナ一肉芽腫症、 H I V感染症、喘息、アトピー性皮膚炎、アレルギー性 A炎、花粉症及びハチ毒アレルギーを含む自己免疫疾患、炎症性疾患及びアレルギー性疾患一般が挙げられる。なお、この発明の I L一 1 8結合蛋白質は、 I F N— rの過剰産生や過剰投与などに起因する敗血症ショックの治療 · 予防にも有効である。また、生体内において、 I L一 1 8が F a s リガンドの産生を増強したり、逆に、 F a s リガンドが I L 一 1 8の細胞からの分泌を誘導する場合があるので、この発明の I L— 1 8結合蛋白質は、 F a s及び F a s リガンドが関与する免疫疾患一般の治療 · 予防にも有効である。さらに、この発明の I L— 1 8結合蛋白質は、例えば、ウイルス性肝炎、アルコ一ル性肝炎、中毒性肝炎、劇症肝炎、ウィルス性肝硬変、アルコール性肝硬変、中毒性肝硬変、胆汁性肝硬変、脂肪肝、肝臓腫瘍及び肝血管障害などの肝疾患、胆管炎、胆炎、原発性硬化性胆管炎、胆 ¾腫瘍及び胆管腫瘍などの胆 s · 胆道疾患、急性薛炎、慢性驊炎、辉機能不全、薛臓腫瘍及び薛橐胞などの薛疾患の治療 · 予防、さらには、それらの疾患に伴う、例えば、食欲不振、倦怠感、疲労感、腹痛、背痛、黄疽、発熱、肝性脳症、腹水、出血傾向などの肝機能障害及び肝機能不全を緩和又は解消する効果もある。その際、例えば、プロトポルフィリン、チ才プリン、マロチラ一卜、肝臓加水分解物、グリチルリチン、ジクロロ酢酸ジイソプロピルアミン、メチルメチ才ニンスルホニゥ厶クロリド、グルタチ才ン、タウリン、シァニダノール、インターフェロン、ビタミン B ,、ビタミン B ₂、ビタミン B ₆、ビタミン B , ₂、チォク卜酸、小紫胡湯、大紫胡湯、紫胡桂枝湯、ァスパラギン酸、甘草、メチォニン、チ才プリン、グリチルリチンなどの肝細胞の機能を促進する薬剤を併用してもよい。加えて、この発明の I L— 1 8結合蛋白質は、虚血、虚血性心筋症、脳虚血、脳底動脈片頭痛、脳底部異常血管網症、脳卒中、脳底部動脈癯、動脈硬、血管内皮障害、糖尿病、腸管膜血管閉塞症及び上脹管膜動脈症候群を含む循環器系疾患、パーキンソン病、脊髄筋肉萎縮症、筋萎縮性側策硬化症、アルツハイマー病、痴呆症、脳血管性痴呆症、エイズ痴呆症及び脳脊髄炎を含む神経系疾患の症状を緩和したリ、予防する効果もある。斯くして、有効成分として I L— 1 8結合蛋白質を含有するこの発明の抗感受性疾患剤は、ヒ卜をはじめとする哺乳動物における上記のごとき感受性疾患を治療 · 予防するための抗自己免疫疾患剤、抗炎症剤，抗アレルギー剤、抗腫瘍剤、免疫抑制剤、増血剤、白血球増多剤、血小板増多剤、錤痛剤、解熱剤、肝機能改善剤などとして多種多様な用途を有することとなる。剤型並びに感受性疾患の種類及び症状にもよるが、この発明の感受性疾患剤は、通常、液状、懸濁状、ペースト状又は固状に調製され、この発明の I L— 1 8結合蛋白質を 0 . 0 0 0 0 1 乃至 1 0 0 % ( w / w ) 、望ましくは、 0 . 0 0 0 1 乃至 2 0 % ( w / w ) 含んでなる。

この発明の抗感受性疾患剤は、 I L一 1 8結合蛋白質単独の形態はもとより、 I L一 1 8結合蛋白質とそれ以外の生理的に許容される、例えば、補助剤、増量剤、希釈剤、賦形剤、安定剤、防腐剤、免疫助成剤、着色剤、着香剤、さらには、必要に応じて、他の生理活性物質の 1 又は複数との組成物としての形態をも包含する。安定剤としては、例えば、血清アルブミンやゼラチンなどの蛋白質、グルコース、シュクロース、ラクト一ス、マルトース、トレハロース、ソルビトール、マルチトール、マンニトール、ラクチトールなどの糖及びクェン酸塩、燐酸塩若しくは炭酸塩を主体とする緩衝剤が、また、併用し得る他の生理活性物質としては、例えば、アスピリン、フルフエナム酸、メフエナム酸、ジクロフエナック、インドメタシン、卜ルメチン、イブプロフェン、ケトプロフェン、フエ二ルブタゾン、ォキシフヱンブタゾン、消炎酵素剤、金製剤、クロ口キン製剤などの抗炎症剤、 F K 5 0 6、シクロフォスフアミド、ァザチォプリン、メ卜トレキセ一卜、サイクロスポリン A、副皮質ホルモンなどの免疫抑制剤、さらには、 I L― 〗 8及び I L一 1 8以外のサイトカインの受容体アンタゴニスト、例えば、インターロイキン一 1 受容体蛋白質、インタ一ロイキン一 2受容体蛋白質、インターロイキン一 5受容体蛋白質、インターロイキン一 6受容体蛋白質、インターロイキン一 8受容体蛋白質、インターロイキン一 1 2受容体蛋白 ¾及び I L - 1 8受容体蛋白質に対する、ヒ卜化抗体を含むそれぞれの抗体や T N F— α受容体、 T N F— 3受容体、インターロイキン一 1 受容体、インターロイキン一 5受容体、インターロイキン一 8受容体及び I L一 1 8受容体に対するそれぞれのアンタゴニスト、さらには、インター口ィキン一 1 、インターロイキン一 2、インタ一ロイキン一 5、インタ一ロイキン一 8、インターロイキン一 6、インターロイキン一 8、インタ 10 一ロイキン一 1 2及びインタ一ロイキン一 1 8に対する、ヒト化抗体を含むそれぞれの抗体が挙げられる。

さらに、この発明の抗感受性疾患剤は、投薬単位形態の薬剤をも包含し、その投薬単位形態の薬剤とは、 I L― 〗 8結合蛋白質を、例えば、 1 回当りの用量又はその整数倍（4倍まで）若しくはその約数（ 1 / 4 0まで）に相当する量を含んでなり、投薬に適する物理的に一体の剤型にある薬剤を意味する。このような投薬単位形態の薬剤としては、ェキス剤、エリキシル剤、カプセル剤、顆粒剤、丸剤、眼軟膏剤、懸¾剤、乳剤、硬膏剤、坐剤、散剤、酒精剤、錠剤、シロップ剤、浸剤、煎剤、注射剤、補輸液、チンキ剤、点眼剤、トローチ剤、軟膏剤、パップ剤、芳香水剤、リニメント剤、リモナ一デ剤、流エキス剤及びローション剤が挙げられ、必要に応じて、点廉剤、 A噴霧剤、下気道吸入剤、眼科用除法剤、口腔粘膜貼付剤及び浣腸剤としてもよい。この発明の抗感受性疾患剤は経口的に投与しても非経口的に投与してもよく、いずれの場合にも、感受性疾患の治瘐，予防に効果を発揮する。感受性疾患の種類や症状にもよるが、具体的には、患者の症状や投与後の経過を観察しながら、成人当り約 1 i g Z回乃至〗 g Z回、通常、約 1 O w g /回乃至 1 O O m g Z回の I L— 1 8結合蛋白質を 1 乃至 4回日又は 1 乃至 5回週の用量で〗日乃至半年に互って経口投与するか、あるいは、皮内、皮下、筋肉内又は静脈内に非経口投与すればよい。

ところで、この発明の I し一 1 8結合蛋白をコードする D N Aは、いわゆる、「遺伝子療法」にも有用である。すなわち、通常の ¾伝子療法においては、この発明の D N Aを、例えば、レトロウイルス、アデノウィルス、アデノ随伴ウィルスなどのウィルス由来のベクターに挿入するか、カチォニックポリマーや膜融合型リボソームなどのリボソームに包埋し、この状態で I L 一 1 8結合蛋白質に感受性を有する疾患に罹患 11 した患者に直接注入するか、あるいは、患者からリンパ球を採取し、生体外で導入した後、患者に自家移植するのである。斯くして、この発明の D N Aは、例えば、自己免疫疾患やアレルギー性疾患などの免疫疾患や、肝機能障害及び神経系疾患を含む各種疾患の遺伝子療法、さらには、臓器移植に伴う拒絶反応や過剰な免疫反応の抑制に著効を発揮することとなる。なお、これらの遺伝子療法を実施するための一般的手順は、例えば、島田隆、斉藤泉、小澤敏也編集、『実験医学別冊バイオマ二ユアル U Pシリーズ遺伝子治療の基礎技術』、 1 996年、羊土社発行にも詳述されている。

以下、実施例に沿ってこの発明の実施の形態を説明するが、斯界の技術水準においては、斯かる実施例は多種多様に改変可能である。斯かる技術水準に鑑み、この発明がこれらの実施例のみに限定されないことは言うまでもない。なお、この発明による蛋白質の I L一 1 8結合能は、後記実施例においては、次の結合アツセィにより決定される阻害率を指標にして判定した。

すなわち、 I L— 〗 8受容体をコードする D N Aをチャイニーズハムスター卵巣由来の C H O— K 1 細胞（AT C C C R L—96 1 8) 導入することによつて、 I L一 1 8受容体が細胞表面に過剰に発現した効果細胞を調製する。別途、 0. 1 % ( w / V ) アジ化ナトリウム、 0. 1 % ( V Z V ) ゥシ血清アルブミン及び 1 00 mM N— 2—ヒドロキシェチルビペラジン一 N ' 一 2—エタンスルホン酸をそれぞれ含む R P M l — 1 640培地（ p H 7. 2) を調製し、これをアツセィ用培地とする。次いで、試験区として、アツセィ用培地により適宜希釈した被検試料を 50 u I とり、これにアツセィ用培地によリ適宜希釈した¹²⁵ I 標識 I L一 1 8を 50 I 加え、 4 °Cで 1 時間振邊した後、アツセィ用培地に細胞密度 1 X 1 0⁷個 Zm I になるように浮遊させた効果細胞を 50 12

I 加え、 4°Cでさらに 1 時間振 ¾する。その後、 1 . 5m l 容遠心管にジブチルフタレー卜 Zジォクチルフタレ一ト混液（容稹比〗：〗）を Z O O υ I とり、その上部に効果細胞の浮遊液を重層し、 4°Cで 5分間遠心分離し、吸引により上清を除去した後、細胞残渣を遠心管ごと切り取り、ガンマカウンター（商品名『 A RC— 300型』、ァロカ株式会社製造）によリ放射能強度を測定する。併行して、 Ή I 標識 I し— 〗 ₈ とともに未標識 I L— 1 8を 5 w g加える系（非特異的結合区）と、被験試料のみ省略する系（総結合区）をそれぞれ設け、これらを試験区と同様に処置する。そして、試験区、総結合区及び非特異的吸着区において得られた放射能強度を下記の式にそれぞれ代入して阻害率（％) を計算した。

総結合区一試験区

阻害率（％) = X 1 00

総結合区一非特異的結合区実施例〗：ヒ卜由来の I L一 1 8結合蛋白 ¾

く実施例 1 一 1 ： I L - 1 8結合蛋白 Sの調製〉

人尿 3 I を膜澳縮した後、 2 OmM燐酸緩衝液（ p H 7. 0) に対して 4°Cで 20時間透析した。透析内液を採取し、これをあらかじめ 20 mM燐酸緩衝液 ( p H 7. 0) により平衡化しておいたァフィニティークロマ卜グラフィ一用ゲル（商品名『ウイ一ト ' ジャーム ' レクチン ' セファロース 6M B』、アマシャム · フアルマシア ' バイオテク株式会社販売） 230m I のカラムに負荷して I L— 1 8結合蛋白 ¾を吸着せしめ、カラムを 2 OmM燐酸緩衝液（ p H 7. 0) により洗浄した後、 0. 5 M N—ァセチルー D—グルコサミンを含有する 2 OmM燐酸緩衝液 ( p H 7. 0) を通液しつつ、カラムからの溶出液を一定量ずつ採 13 取した。

各溶出画分の I L一 1 8結合能を前記結合ァッセィによリ調べた後、 I L - 1 8結合能が認められた画分を合一し、 2 OmM燐酸緩衝液 ( p H 7. 0) に対して 4°Cで 1 6時間透析した。透析内液を採取し、適宜濃縮した後、あらかじめ 20mM燐酸緩衝液（ p H 7. 0) により平衡化しておいたイオン交換クロマトグラフィー用ゲル（商品名『 T S K— g e l D EAE— 5 PW』、東ソ一株式会社製造） 54 m I のカラムに負荷し、塩化ナトリウムの濃度が 1 00分間で OMから 0. 5Mまで直線的に上昇する塩化ナ卜リゥムの濃度勾 K下にて 2 OmM燐酸緩衝液 ( p H 7. 0) を 2 m I /分の流速で通液し、塩化ナトリウム濃度が 0. 2 M付近で溶出した画分を採取した。

この画分を膜濃縮した後、あらかじめ 2 OmM燐酸一食塩緩衝液（以下、「 P B S」という。）によリ平衡化しておいたゲル濂過クロマ卜グラフィ一用ゲル（商品名『 H i L o a d S u p e r d e x 200』，アマシャム ' フアルマシア ' バイオテク株式会社販売） 1 20m l の力ラムに負荷し、カラムに P B Sを通液しつつ、ゲル ¾過クロマトグラフィ一における分子量が 70, 000ダルトン付近の画分を採取した。この新たに得られた画分をあらかじめ 0. 1 % ( ν Ζ ν ) トリフルォロ酢酸水溶液によリ平衡化しておいた逆相クロマ卜グラフィ一用ゲル（商品名『V y d a c 2 1 4 T P 54』、サイプレス ' インターナショナル株式会社販売） 4 m I に負荷し、ァセトニトリル濃度が 0% ( V / V ) から 90% ( V / V ) まで直線的に上昇するァセトニトリルの濃度勾配下にてカラムに 0. 1 % ( v Z v ) トリフルォロ酢酸水溶液を通液しつつ、カラムからの溶出液を一定量ずつ分画した。各溶出画分の I L一 1 8結合能を前記結合アツセィにより調べた後、 I L一 1 8結合能が確認された、ァセ卜二トリル;農度が 70% ( V / V ) 付近で溶出した画分を 14 採取し、澳縮したところ、ヒ卜由来の精製 I ヒー 1 8結合蛋白が約 3 u g得られた。

その後、この精製 I L— 1 8結合蛋白質につき、ジチ才卜レイトール存在下の S D S— P A G Eにより分子量を測定したところ、約 40, 0 00乃至 60, 000ダルトンに I し一〗 8結合能を伴う蛋白質の単一バンドが観察された。また、大麦胚芽レクチンをリガンドとする『ウイ — ト · ジャーム · レクチン ' セファロース 6MB』に吸着することは、本例の I L一 1 8結合蛋白が糖蛋白質であることを示している。く実施例 1 一 2 ： N末端アミノ酸配列〉

実施例 1 一 1 の方法によリ得た精製 I L一 1 8結合蛋白を遠心儂縮機により乾固した後、 8M尿素及び 1 0mM E DTAをそれぞれ含有する 0. 1 M 卜リス一塩酸緩衝液（ p H 8. 1 ) に溶解し、窒素気流下, 50 °Cで 30分間処理した。次いで、ジチォ卜レイトールを適量加え、窒素気流下、 50°Cで 2時間還元した後、反応物にモノョード酢酸を適量加え、室温下、暗所にて 30分間反応させて I L一 1 8結合蛋白をアルキル化した。

得られたアルキル化物にジチオトレイトール存在下の S D S— P AG Eを適用することによって分子量約 40, 000乃至 60, 000ダルトンに相当する蛋白 ¾を分離し、以後、常法にしたがって、分離した I L - 1 8結合蛋白質のバンドを P V D F膜へ転写後、その膜をプロティンシーケンサ一（商品名『473A型』、アプライド ' バイオシステムズ社製造）を用いるアミノ酸分析に供して N末端アミノ酸配列を決定した。その結果、実施例 1 一 1 の方法によリ得たこの発明の I L— 1 8結合蛋白質は、 N末端アミノ酸 K列として、配列表における S列番号 3に示すアミノ酸配列を含有していることが判明した（なお、「 X a a」は 15 未同定のアミノ酸であることを意味している）。く実施例 1 一 3 ：ぺプチドマッピング>

ウルフ ' ヘルマンら『アナリティカル ' ノィォケミストリー』、第 2 24卷、 451 乃至 455頁（ 1 995年）に記載された『イン . ゲル • ダイジ：!：スシヨン法』により、実施例 1 一 2の方まにより還元アルキル化した I L一〗 8結合蛋白質のトリプシン消化後及びトリプシン/ベプシン消化後のぺプチドマップをそれぞれ作成するとともに、卜リブシン消化により得られたペプチド断片 1 乃至 8及び卜リブシン/ペプシン消化により得られたペプチド断片 9乃至 20のアミノ酸 S列をそれぞれ決定した。その結果、ペプチド断片 1 乃至 20は、それぞれ、配列表における配列番号 4乃至 23に示すアミノ酸配列を有していることが判明した（なお、「X a a」は未同定のアミノ酸であることを意味している）。このとき得られたペプチドマップを第 1 図に示す。く実施例 1 — 4 ： I L一 1 8抑制作用 >

免疫担当細胞及び I L一 1 8として、それぞれ、腱常者のリンパ球及び組換え型ヒト I ヒー 1 8を、また、 I F N— rの標準品として米国国立衛生研究所から入手した標準ヒト I F N— r (G g 02 - 901 一 5 30) をそれぞれ用いた以外は、後記実施例 3— 3におけると同様に試験した。

その結果、本例の I L―〗 8結合蛋白質が共存すると、ヒ卜 I し一 1 8による I F N— r産生の誘導が有意に抑制された。このことは、本例の I し一〗 8結合蛋白 Sが I L一 1 8の生理作用を抑制することを示している。 16 実施例 2 ：ヒ卜由来の I L— 1 8結合蛋白質をコードする D N A

く実施例 2— 1 ：ヒ卜由来の I L一 1 8結合蛋白質をコードする D N

A>

く実施例 2— 1 ( a ) ：ヒ卜由来の I L一 1 8結合蛋白質をコードする

D N Aの塩基配列〉

ポリ（ A ) 付加ヒト肝臓 R N A (クローンテック製） 1 0 n gに 1 0 X P C R緩衝液 2 u \ , 25 mM塩化マグネシウム 2 / I 、 0. 1 Mジチオトレイトール 2 w I 、 25 m M d N T Pミックス 1 u I 、 200 単位 w I 逆転写酵素（商品名『スーパ一スクリプト I I 』、ライフテック ' オリエンタル株式会社製造） l w l 及び 2. 5 ϋΜランダムへキサマー 1 υ I をそれぞれ加え、滅菌蒸留水で全量を 20 w I とした。この混合物を 0. 5m l 容反応管にとり、 42°Cで 50分間、 70°Cで 1 5分間、この順序で、それぞれインキュベートすることによって逆転写酵素反応させ、第一ストランド c D N Aを含む反応物を得た。

この反応物に体積比で 2. 5倍量のエタノールと 3 M酢酸ナトリウム 2 u I をそれぞれ加え、一 2 CTCで 2時間静置して c D N Aを沈激させた。沈 ¾を採取し、 75% ( V / V ) 水性エタノールにより洗浄した後、滅菌蒸留水に溶解し、 2. 5単位/ I D N Aポリメラーゼ（商品名『クローンド P f uポリメラ一ゼ』、ストラタジーン製造） 0. 5 w l 、専用緩衝液 1 0 ju I 及び 25 mM d N T Pミックス 1 w I をそれぞれ加え、さらに、センスプライマーとして、配列表における配列番号 3に示すアミノ酸配列に基づき化学合成した 5 ' — AC N C C N G T NWS N C A— 3 ' で表わされる塩基配列の才リゴヌクレオチドと、アンチセンスプライマーとして、配列表における記列番号 8に示すァミノ酸配列に基づき化学合成した 5 " -T G N G C N A R N AC N AC RTG - 3 ' で表わされる塩基配列のオリゴヌクレオチドをそれぞれ 1 O wM加え、 17 滅菌蒸留水で全量を 1 O O w I とした。この混合物を 94°C、 40°C及び 72°Cで、この順序で、それぞれ 1 分間インキュベートするサイクルを 40回繰返して P C R反応させた。

次いで、 P C R産物の一部をとリ、常法にしたがって、〗％ (w/ V ) ァガロースゲル上で霪気泳動することによって D N A断片を分画し、ナイロン膜に転写し、 0. 4 N水酸化ナトリウムにより固定し、 2 X S S Cにより洗浄し、風乾した後、 6 X S S P E、 5 Xデンハル卜液、 0. 5% ( w/ V ) S D S及び 1 O O gZm I 変性サケ精子 D N Aをそれぞれ含有するプレハイプリダイゼーション液に浸滇し、 65°Cで 3時間インキュベートした。別途、常法にしたがって、配列表における配列番号 3に示すアミノ酸配列に基づき 5 " -G G RC AN G G RTC Y TT 一 3 ' で表わされる塩基配列のォリゴヌクレオチドを化学合成し、これを [ r一³² P] AT P及び T 4ポリヌクレオチドキナーゼにより同位体標識することによってプローブを調製した。前記ナイ口ン膜を ¾>¾したプレハイブリダィゼ一シヨン液にこのプローブを 1 p m o I 加え、ナイロン膜を 40 °Cでさらに 20時間ィンキュベ一卜してハイブリダィズさせた。その後、 6 X S S Cによりナイロン膜を洗浄し、常法にしたがつてオートラジオグラフィ一した。その結果、プローブの特異的なハイブリダイゼ一ションを示すシグナルが認められ、上記 P C R産物が目的とする D N A断片を含むことが確認された。

その後、残りの P C R産物にプラスミドベクター（商品名『 p C R— S c r i p t C a m S K (十）』、ス卜ラタジーン社製造）を 1 n g加え、 D N Aライゲ一シヨン ' キット（商品名『D N Aライゲ一ション ' キット Zパージヨン 2』、宝酒造株式会社製造）を用いてプラスミドベクタ一内に P C R産物である D N A断片を挿入した。反応物の一部をとリ、大腸菌株（商品名『X L 1 — B l u e MR F ' K a n』、ス 18 卜ラタジーン社製造）を形 «転換した後、形質転換体をクロラムフ X二コール 30 « gZm I を含む L B培地（ p H 7. 5 ) に接種し、 37 °C で 1 8時間培養し、培養物から菌体を採取し、これを常法にしたがって処理してプラスミド D N Aを採取した。ジデ才キシ法により調べたところ、このプラスミド D N Aは、 P C R産物の D N A断片の塩基 S列として、配列表における配列番号 34に示す塩基配列を含んでいた。その塩基配列がコードする、配列表における配列番号 34に併記したアミノ酸配列と、配列表における配列番号 3乃至 23に示す、実施例 1 一 2乃至 1 一 3で決定した部分アミノ酸 S列とを照合したところ、これらの部分ァミノ酸記列は、いずれもその全部又は一部が S列番号 34に併記したアミノ酸配列に含まれていた。このことは、配列表における E列番号 3 4に示す塩基配列が、ヒ卜由来の当該 I L— 1 8結合蛋白質の少なくとも一部分をコードするものであることを示唆している。く実施例 2— 1 ( b) ：ヒト由来の I L一〗 8結合蛋白質をコードする

D N Aの塩基配列〉

ポリ（ A ) 付加ヒ卜肝臓 R N A (クローンテック製） 1 0 n gを、市販の 5 ' RAC Eキッ卜（商品名『5 ' R A C Eシステム、バージョン 2. 0』、ギブコ ' ビー ' アール ' エル製）を用いて、 P C Rの一変法である 5 " RAC Eに供した。すなわち、先ず、上記 R N Aを、配列表における配列番号 34に示す塩基配列に基づき化学合成した 5 '— GG TC AC TT C C AAT GC T G G AC A- 3 " で表される塩基 S列のオリゴヌクレオチドをプライマーとして用いる逆転写酵素反応に供し、引き続いてターミナル · デォキシヌクレオチジル · 卜ランスフ：！：ラーゼを作用させて、生成した第一ストランド c D N Aの 5 ' 末端に Cティルを付加した。この第一ストランド c D N Aを、次に、センスプライマー 19 として、上記キッ卜に添付の 5 " - G G C C AC G C GTC GAC TA GT AC G G G I I G G G I I G G G I I G— 3 ' で表される塩基配列の才リゴヌクレオチドと、アンチセンスプライマ一として、配列表における配列番号 34に示す塩基配列に基づき化学合成した 5 '— GTC C TTT GT G CT T C T AAC TG A- 3 " とを用いて P C R反応させた。以上の 5 ' R AC Eで得られた反応産物を一部とリ、常法にしたがい 1 % (w/ V ) ァガロースゲル電気泳動に供したところ、特定の D N A断片の増幅が確認された。実施例 2— 1 ( a ) におけると同様にして塲基配列を調べたところ、この D N A断片は、 K列表における配列番号 35に示す塩基配列を含有していた。この塩基列における第 1 60乃至 2 1 6番目の塩基からなる配列は、実施例 2— 〗（ a ) で決定した、配列表の配列番号 34に示す塩基配列における第〗乃至 57番目の塩基からなる配列と完全に一致した。このことは、配列表における S列番号 35に示す塩基配列が、 S列番号 34に示す、ヒト由来の当該 I L一 1 8結合蛋白質の少なくとも一部をコードする塩基配列とオーバーラップし、かつ、その 5 ' 末端側上流域に相当する塩基配列を含んでいることを示唆している。く実施例 2— 1 ( c ) ：ヒト由来の I L一 1 8結合蛋白 ®をコードする

D N Aの塩基配列 >

ポリ（A) 付加ヒ卜肝臓 R N A (クローンテック製） l O n gを、斎藤隆監訳、『 P C R実験マニュアル』、 H B J出版発行（ 1 99 1 年） 25乃至 33に記載の方法にしたがって、 P C Rの一変法である 3 ' R AC Eに供した。すなわち、先ず、上記 R N Aを、 5 ' — GAC T C G AG T C G AC AT C G A ( T ) , ₇— 3 — で表される塩基 SB列のヌクレォチドをプライマーとして用いる逆転写酵素反応に供し、得られた第一 20 ストランド c D N Aを、実施例 2— 1 ( a ) で決定した、配列表における BB列番号 34に示す塩基配列に基づき化学合成した 5 ' — T T C丁 C C T G T G TG C T C G TG G A- 3 " で表される塩基配列のォリゴヌクレ才チドをセンスプライマーとして、 5 " -G AC T C GAGT C G AC AT C G-3 " で表される塩基 S列のォリゴヌクレオチドをアンチセンスプライマーとして用いて P C R反応させた。以上の 3 " RAC E で得られた反応産物を一部とリ、常法にしたがい 1 % (wノ V ) ァガロースゲル電気泳動に供したところ、特定の D N A断片の増幅が確認された。実施例 2— 〗（ a ) におけると同様にして塩基配列を調べたところ、この D N A断片は、配列表における配列番号 36に示す塩基配列を含有していた。この塩基配列における第 1 乃至 60番目の塩基からなる配列は、実施例 2— 〗（ a ) で決定した、配列表の配列番号 34に示す塩基配列における第 352乃至 4 1 〗番目の塩基からなる配列と完全に一致した。このことは、配列表における配列番号 36に示す塩基配列が、配列番号 34に示す、ヒ卜由来の当該 I L— 1 8結合蛋白質の少なくとも —部をコードする塩基配列とオーバーラップし、かつ、その 3 -末端側下流域に相当する塩基 E列を含んでいることを示唆している。

以上に示したように、実施例 2— 1 ( a ) 乃至 2— 1 ( c ) で、ヒト由来の当該 I L— 1 8結合蛋白をコードする、互いにオーバ一ラップする塩基列として、配列表における配列番号 34乃至 36に示す塩基配列を決定した。互いにオーバーラップする部分の塩基配列を勘案すると、これらの塩基配列は、配列表における配列番号 37に示す一連の塩基配列に由来する部分配列と考えられた。く実施例 2— 1 ( d ) ：ヒ卜由来の I L一 1 8結合蛋白をコードする

D N Aの塩基配列 > 21 実施例 2— 1 ( a ) の方法にしたがって、ポリ（A) 付加ヒ卜肝 SIR N Aを逆転写酵素反応させた後、センスプライマーとして、配列表における配列番号 37に示す塩基配列に基づき化学合成した 5 ' -T G T G T G AC T G GA GAAGAG GA C— 3 ' で表される塩基配列のォリゴヌクレオチドを、また、アンチセンスプライマーとして、配列表における配列番号 37に示す塩基配列に基づき化学合成した 5 " -T A C A G G CAGTC A G G G AC T GTT C AC T C C AG— 3 'で表される塩基 S列のオリゴヌクレオチドをそれぞれ用いたこと以外は、実施例 2 - ] ( b ) におけると同様にして P C R反応させた。この P C R産物の一部をとり、常法にしたがい 1 % ( w/ V ) ァガロースゲル電気泳動に供したところ、特定の D N A断片の増幅が確認された。引き統き、実施例 2— 1 ( a ) におけると同様にして塩基配列を調べたところ、この D N A断片は、 £列表における列番号 37に示す塩基配列を有していた。これにより、実施例 2— 1 ( a ) 乃至 2— 1 (c ) で決定した、配列表における配列番号 34乃至 36に示す塩基配列が、配列番号 37に示す一連の塩基配列の、それぞれ部分配列であることが裏付けられた。

—方、配列表における配列番号 37に示す塩基 E列によリコードされる、そこに併記したアミノ酸配列と、 S列表における配列番号 4乃至 2 3に示す、実施例 1 一 3で決定した部分ァミノ酸配列とを照合したところ、これらの部分アミノ酸配列は、すべて配列番号 37に併記したアミノ酸 E列における第 1 乃至 1 64番目のアミノ酸からなる部分に含まれていた。また、 S列表における配列番号 3に示す、実施例 1 一 2で決定した N末端アミノ酸配列は、配列表における配列番号 37に併記したァミノ酸列における第 1 乃至 22番目のアミノ酸からなる配列とよく一致した。したがって、以上のことは、配列表の配列番号 37に示す塩基配列における第 1 60乃至 65 1 番目の塩基からなる配列がヒ卜由来の 22 当該 I し一〗 8結合蛋白 ¾をコードし得るものであり、そして、当該 I L一〗 8結合蛋白質が、全体としては、斯かる塩基 K列に併記した第 1 乃至 1 64番目のアミノ酸からなる S列を有する場合があることを示唆している。なお、以上のごとく示唆された、ヒ卜由来の当該 I L一 1 8 結合蛋白質のアミノ酸配列とそれをコードする塩基配列は、配列表における S列番号〗及び 32にそれぞれ別記している。く実施例 2— 2 ：形転換体によるヒ卜由来の I ヒー 1 8結合蛋白質の産生〉

く実施例 2— 2 ( a ) ：組換え D N Aの調製 >

0. 5 m I 反応管に、実施例 2— 1 (d ) の方法で得た、ヒト由来の当該 I L一 1 8結合蛋白質をコ一ドし得る D N Aを 1 n gとり、これに, 1 0 I の 1 0 X P C R緩衝液、 I w l の 25mM d N T Pミックス及び 2. 5単位 I D N Aポリメラ一ゼ（商品名『クローンド P f uポリメラーゼ』、ストラタジーン製造）を加え、センスプライマーとして、配列表における配列番号 32に示す塩基配列に基づき化学合成した 5 ' - C T C G AG G C CAC C ATG AC C AT GAGACAC A A C— 3 ' で表される塩基配列のォリゴヌクレオチドを、また、アンチセンスプライマーとして、配列表における配列番号 32に示す塩基配列に基づき化学合成した 5 " — G C G G C C G CT CATTAGTGAT G G T G AT G G T G AT GAC C C TG CTG C T GT G GAC T- 3 ' で表される塩基記列のォリゴヌクレオチドをそれぞれ適量加えて、滅菌蒸留水で全量を l O O l とした。この混合物を、 94°Cで 1 分間 42 °Cで 2分間及び 72 °Cで 3分間ィンキュベー卜するサイクルを 3回繰返した後、さらに 94°Cで 1 分間、 60°Cで 2分間及び 72°Cで 3分間ィンキュベー卜するサイクルを 35回繰り返して P C R反応させた。 23 実施例 2— 1 ( a ) におけると同様にして P C R産物中に目的とする D N A断片が存在することを確認する一方、実施例 2— 1 ( a ) におけると同様にして当該 D N A断片を挿入してなるプラスミドベクターを採取した。引き統き実施例 2— 1 ( a ) におけると同様にして塩基配列を調ベ、このプラスミド D N Aが、配列表における K列番号 32に示す塩基配列を含むことを確認した。

常法にしたがって、上記で得たプラスミド D N Aに制限酵素 X h 0 I 及び N o t I を作用させて得た D N A断片 1 O O n gに、エス ' ミズシマら、『ニュークレイック ' アシッド ' リサーチ』、第 1 7号、第 1 8 卷、 5， 332頁 U 990年）に記載された方法に準じて調製し、予め制限酵素 X h 0 I 及び N 0 t I で切断しておいたプラスミドベクター『 p E F— B O SJ を 1 O n g加え、 D N Aライゲーシヨン ' キッ卜 (商品名『D N Aライゲーシヨン · キッ卜ノパージヨン 2』、宝酒造株式会社製造）を用いてプラスミドベクター内に D N A断片を挿入した。実施例 2— 〗（ a ) におけると同様にして、ライゲーシヨン反応産物で大腸菌株を形質転換し、得られた形質転換体から組換え D N Aを採取し、この組換え D N Aを『 p E F H 1 8 B P H 6』と命名した。常法にしたがって分析したところ、第 3図に示すように、組換え D N A 『 p E F H 1 8 B P H 6』においては、ヒ卜由来の当該 I L— 1 8結合蛋白 «をコ — ドし得る、配列表における配列番号 32に示す塩基配列を含有する c D N A 『E F H 1 8 B P H 6 c D N A』が、延長因子 1 プロモーター『 E F 1 α P』の下流に連結されていた。く実施例 2— 2 ( b ) ：形貧転換体によるヒト由来の I L一 1 8結合蛋白質の産生〉

実施例 2— 2 ( a ) で得た、組換え D N A 『 p E F H 1 8 B P H 6』 24 を含む形質転換大腸菌株を、 1 00 w g/m l アンピシリンを含むし B培地（ p H 7. 2) に接種し、 37 で 1 8時間通気撹拌培養した後、培養物から常法にしたがいプラスミド D N Aを採取して、組換え D N A 『 p E F H 1 8 B P H 6』を得た。この組換え D N Aを 20 w gとり、予め常法にしたがい増殖させておいた、 1 X 1 0⁷個のアフリカミドリザルの^臓由来の繊維芽細胞株 C 0 S - 1細胞（AT C C C R L— 1 6 50) に、エレクト口ポレーシヨン法により導入して、この発明の D N Aが導入された形質転換体を得た。

平底培養瓶に培地（商品名『 A S F 〗 04』、味の素製）をとリ、これに、上記で得た形質転換体を 1 X 1 05個 /_m | の割合で接種し、 5% C 0₂インキュベータ一中、 37 °Cで 3日間培養した。培養物から培養上清を採取し、ァフィ二ティークロマトグラフィー用ゲル（商品名『N i 一 N TA』、キアジヱン製）のカラムに負荷した。このカラムに、 20 mMィミダゾールを含む P B Sを通液して非吸着画分を除去した後、 2 50 mMイミダゾ一ルを含む P B Sを通液し、カラムからの溶出液を一定量ずつ分画採取した。それぞれの画分における I L一〗 8結合蛋白質の有無を前記結合アツセィにより調べ、当該蛋白質の存在の確認された画分を採取し、合一して、 1 X 1 0⁷個の当該形質転換体より、約 2 m I の精製 I L一 1 8結合蛋白質の水溶液を得た。この水溶液の蛋白質含量は約 1 0 w g / m I であった。この水溶液を、実施例 1 — 2の方法にしたがって処理し、 N末端アミノ酸配列を分析したところ、配列表における配列番号 3と同一のアミノ酸 S列が得られた。なお、対照として、組換え D N A 『 p E F H 1 8 B P H 6』に代えてプラスミドベクター『 p E F— B O S』を用いて、本実施例と同様に処置したところ、 I L— 1 8結合蛋白質の存在は確認されなかった。以上の結果は、ヒ卜由来の当該 I L— 1 8結合蛋白 Sが配列表における配列番号 1 に示すアミノ酸配 25 列を有する場合があり、そして、当該蛋白質が、 S列番号 32に示す塩基配列によリコ一ドされ得ることを裏付けている。実施例 3 ：マウス由来の I L一 1 8結合蛋白 S

く実施例 3— 〗： I L一 1 8結合蛋白質の調製〉

コリネバクテリウ厶 · パルバム（ A T C C 1 1 827) を 60 °Cで 1 時間加熱して得た死菌体を 8週齢の雌 C D - 1 マウス 600匹の腹腔内に 1 m gZ匹の割合で注射投与し、通常の方法で 7日間飼育した後、静脈内に大腸菌由来の精製リポ多糖を 1 u g Z匹の割合で注射投与した。

2時間後、マウスの心臓から血液を採取し、これを常法にしたがって処理して血清 200m l を得た。その後、この血清を実施例 1 一 1 の方法により精製したところ、マウス由来の精製 I L一 1 8結合蛋白質が約 3 U g得られた。

その後、この精製 I L一〗 8結合蛋白質につき、ジチオトレイトール存在下の S D S— P A G Eによリ分子量を測定したところ、約 40， 0 00乃至 60, 000ダルトンに I L一 1 8結合能を伴う蛋白質の単一バンドが観察された。なお、大麦胚芽レクチンをリガンドとする『ウイ — ト ' ジャーム，レクチン ' セファロース 6MB』に吸着することは、本例の I L一 1 8結合蛋白質が糖蛋白質であることを示している。く実施例 3— 2 ：ぺプチドマッピング〉

実施例 3— 1 の方法にょリ得た精製 I L一〗 8結合蛋白質につき、実施例 1 一 3におけると同様にしてぺプチドマップを作成するとともに、トリプシン消化によリ得られたぺプチド断片 1 乃至 5及び卜リブシンノペプシン消化により得られたペプチド断片 6乃至 8のアミノ酸配列を調ベたところ、ぺプチド断片 1 乃至 8は、それぞれ、配列表における配列 26 番号 24乃至 3 1 に示すアミノ酸配列を有していた（なお、「X a a」は未同定のアミノ酸であることを意味している）。このとき得られたぺプチドマップを第 2図に示す。く実施例 3— 3 ： I L— 1 8抑制作用〉

1 4週齢の雌 C 3 HZH e Jマウスから脾臓を摘出し、分散し、付着細胞を除去した後、脾細胞を〗 0% ( V / V ) ゥシ胎児血清を補足した R P M I - 1 640培地（ p H 7. 4 ) に細胞密度 1 X 1 0⁷個/ m I になるように浮遊させ、免疫担当細胞とした。次いで、脾細胞及び 2. 5 w gZm I コンカナパリン Aをマイクロプレー卜にそれぞれ 0. 1 5m

1 Zゥエル及び 0. 05 m I ずつ分注し、組換え型マウス I L一〗 8を

25 n /m I と、 I し— 1 8に対して過剰量の、実施例 3— 1 の方法により得た精製 I L一〗 8結合蛋白 Sとを含む新鮮な同一培地を 0. 0 5^1 1 ノゥ 1ル加ぇた後、 5%C 0₂インキュベータ一中、 37°Cで 24 時間培養した。培養後、各ゥエルから培養上清を 0. 1 m l ずつ採取し、産生した I F N— rを通常の酵素免疫法によリ測定した。併行して、 I L - 1 8結合蛋白質及びマウス I L一〗 8のいずれかを省略した系をそれぞれ設け、これを上記と同様に処置して対照とした。なお、 I F N— rの標準品には、米国国立衛生研究所から入手した標準マウス I F N— r (G g 02-90 1 - 533) を用い、国際単位（ I U) に換算して表示し/こ。

その結果、 I L一 1 8結合蛋白質を省略した対照における I F N— r の産生量が約 600 I UZm l であり、また、マウス I L一〗 8を省略した対照における I F N— rの産生量が 0 I U/m I であったのに対して、 I L一〗 8結合蛋白 ¾を加えた系においては、僅かに 60 I U Zm I 前後であった。このことは、本例の I L— 1 8結合蛋白質が I L一 1 27

8の生理作用を抑制することを示している。実施例 4 ：マウス由来の I L一 1 8結合蛋白 Sをコ一ドする D N A く実施例 4一 1 ：マウス由来の I L一 1 8結合蛋白質をコードする D N

A>

く実施例 4一 1 ( a ) ：マウス由来の I L— 1 8結合蛋白質をコードする D N Aの塩基 E列〉

コリネバクテリウム · ノルバ厶（ A T C C 1 1 827) を 60°Cで 1 時間加熱し、得られた死菌体を 8週齡の雌 C D— 1 マウスの腹腔内に 1 m g/匹の割合で注射投与した。 7日間飼育した後、静脈内に大臊菌由来の精製リポ多糖を 1 w 匹の割合で注射投与し、 2時間後、類推を脱臼させて屠殺し、肝臓を摘出した。摘出した肝臓を湿重で 3 gとり、これを 6Mグァニジンイソチオシアナート、 1 OmMクェン酸ナ卜リウム及び 0. 5% ( w/ V ) S D Sからなる混液（ p H 7. 0) 20m l に浸滾し、ホモゲナイザーにより破砕した。次いで、 35m l 容遠心管に 5. 7 M塩化セシウムを含有する 0. 1 M E D T A ( p H 7. 5 ) を 25m I ずつ注入し、その上部に細胞破砕物を〗 Om I ずつ重層し、この状態で 20 、 25, 000 r p mで 20時間超遠心分離した。その後、 R N A画分を採取し、これを 1 5 m I 容遠心管にとリ、等量のクロロホルムイソブタノール混液（体積比 4 ： 1 ) を加え、 5分間振盪し、 4°C、 1 0， 000 r p mでさらに 1 0分間遠心分離した後、水雇部を採取した。採取した水層に 2. 5倍容のエタノールを加え、一 20 °Cで 2時間静置することによって全 R N Aを沈瀕させた後、沈激を採取し、 75% ( V / V ) 水性エタノールで洗浄し、滅菌蒸留水 0. 5m I に溶解した。

以後、この全 R N Aを実施例 2— 1 ( a ) におけると同様にして逆転 28 写酵素反応させ、得られた第一ス卜ランド c D N Aを含む反応物を、センスプライマーとして、 S5列表における配列番号 27に示すァミノ酸配列に基づき化学合成した 5 " -G C N GT N C C N AC N AA-3 'で表わされる塩基配列のオリゴヌクレオチドを、また、アンチセンスブライマ一として、配列表における配列番号 30に示すァミノ酸 E列に基づき化学合成した 5 ' -G T YTT N A R N C C R TC - 3 - で表わされる塩基列のォリゴヌクレオチドをそれぞれ用いた以外は実施例 2— 1

(a ) におけると同様にして P C R反応させた。その後、プローブの調製に、 S列表における配列番号 24に示すアミノ酸配列に基づき化学合成した 5 ' - SWN G T RTG N C C Y T C Y T T- 3 " で表わされる塩基配列の才リゴヌクレオチドを用いた以外は、実施例 2におけると同様にして P C R産物中に目的とする D N A断片が存在することを確認する一方、実施例 2— 1 ( a ) におけると同様にして当該 D N A断片の塩基配列を調べたところ、当該 D N A断片は配列表における E列番号 38 に示す塩基列を有していた。配列表における配列番号 38に併記したァミノ酸 E列と、 S列表における配列番号 24乃至 3 1 に示す、実施例 3— 2で決定した部分ァミノ酸 K列とを照合したところ、これらの部分ァミノ酸配列は、いずれもその全部又は一部が配列番号 38に併記したアミノ酸配列に含まれていた。このことは、配列表における配列番号 3

8に示す塩基配列が、マウス由来の当該 I L一 1 8結合蛋白質の少なくとも一部分をコードするものであることを示唆している。く実施例 4— 1 ( b ) ：マウス由来の I L一 1 8結合蛋白質をコードする D N Aの塩基配列 >

実施例 4 - 1 ( a ) の方法にしたがって、コリネバクテリウム · パルバムの死菌体とリポ多糖で処理した雌性 C D— 〗マウスより採取した全 29

R N A 1 υ gを、市販の 5 ' R A C Eキッ卜（商品名『 5 - R A C Eシステム、バージョン 2. 0』、ギブコ ' ビー ' アール ' エル製）を用いて、 P C Rの一変法である 5 ' R A C Eに供した。すなわち、先ず、上記全 R N Aを、配列表における配列番号 38に示す塩基配列に基づき化学合成した 5 " - T G C A G G C A G T A C A G G A C A A G G - 3 ' で表される塩基配列の才リゴヌクレオチドをプライマーとして用いる逆転写酵素反応に供し、引き続いてターミナル · デォキシヌクレオチジル • トランスフ： 1：ラーゼを作用させて、生成した第一ス卜ランド c D N A の 5 ' 末端に Cティルを付加した。この第一ストランド c D N Aを、次に、センスプライマーとして、上記キットに添付の 5 " - G G C C A C G C G T C G AC T AG T A C G G G I I G G G I I G G G I I G - 3 " で表される塩基配列のオリゴヌクレオチドと、アンチセンスプライマ一として、配列表における S列番号 38に示す塩基 S列に基づき化学合成した 5 ' - G T G C T G G G T A C T G C TT A G T T G - 3 ' とを用いて P C R反応させた。以上の 5 ' R A C Eで得られた反応産物を一部とリ、常法にしたがい 1 % (wZ V ) ァガロースゲル電気泳動に供したところ、特定の D N A断片の増幅が確認された。実施例 2— 1 ( a ) におけると同様にして塩基 S列を調べたところ、この D N A断片は、配列表における配列番号 39に示す塩基配列を含有していた。この塩基配列における第 307乃至 336番目の塩基からなる K列は、実施例 4一 1 ( a ) で決定した、 S列表の配列番号 38に示す塩基配列における第 1 乃至 30番目の塩基からなる配列と完全に一致した。このことは、配列表における配列番号 39に示す塩基配列が、配列番号 38に示す、マウス由来の当該 I L— 1 8結合蛋白質の少なくとも一部をコードする塩基配列とオーバ一ラップし、かつ、その 5 '末端側上流域に相当する塩基配列を含んでいることを示唆している。 30

く実施例 4— 1 ( c ) ：マウス由来の I し一 1 8結合蛋白質をコードする D N Aの塩基 K列〉

実施例 4— 1 ( a ) の方法にしたがって、コリネバクテリウム · ノ《ルバムの死菌体とリポ多糖で処理した雌性 C D— 1 マウスより採取した全 R N A 1 w gを、斎藤隆監訳、『P C R実験マニュアル』、 H B J出版発行（ 1 99 1年）、 25乃至 33に記載の方法にしたがって、 P C R の一変法である 3 ' RA C Eに供した。すなわち、先ず、上記 R N Aを、 5 " - G AC TC G AG T C G AC AT C GA (T) ,₇— 3 'で表される塩基配列のヌクレ才チドをプライマーとして用いる逆転写酵素反応に供し、得られた第一ストランド c D N Aを、実施例 4 - 1 ( a ) で決定した、配列表における配列番号 38に示す塩基配列に基づき化学合成した 5 " - GAT C C T G GAC AAGTG GC C - 3 ' で表される塩基配列の才リゴヌクレオチドをセンスプライマ一として、 5 ' ― GACT C G AGT C GAC AT C G- 3 " で表される塩基 S列のォリゴヌクレ才チドをアンチセンスプライマーとして用いて P C R反応させた。以上の 3 " R A C Eで得られた反応産物を一部とリ、常法にしたがい〗 % (w/ V ) ァガロースゲル霉気泳動に供したところ、特異的な D N A断片の増幅が確認された。実施例 2— 1 ( a ) におけると同様にして塩基配列を調べたところ、この D N A断片は、 K列表における配列番号 40 に示す塩基配列を含有していた。この塩基配列における第 1 乃至 63番目の塩基からなる配列は、実施例 4 - 1 ( a ) で決定した、配列表の配列番号 38に示す塩基 SB列における第 289乃至 35 1 番目の塩基からなる配列と完全に一致した。このことは、 K列表における S列番号 40 に示す塩基配列が、配列番号 38に示す、マウス由来の当該 I L— 1 8 結合蛋白 ®の少なくとも一部をコ一ドする塩基配列とォ一バーラップし 31 かつ、その 3 '末端側下流域に相当する塩基配列を含んでいることを示唆している。

以上に示したように、実施例 4一 1 (a ) 乃至 4— 1 (c ) で、マウス由来の当該 I L一 1 8結合蛋白質をコードする、互いに才ーバーラッブする塩基配列として、配列表における配列番号 38乃至 40に示す塩基 S列を決定した。互いにオーバーラップする部分の塩基配列を勘案すると、これらの塩基配列は、配列表における配列番号 4 1 に示す一連の塩基 S列に由来する部分配列と考えられた。く実施例 4— 1 ( d ) ：マウス由来の I L一 1 8結合蛋白 ¾をコードする D N Aの塩基配列〉

実施例 4— 1 ( a ) の方法にしたがって、コリネバクテリウム · ノルバムの死菌体とリポ多糖で処理した雌性 C D— 1 マウスより採取した全 R N Aを逆転写酵素反応させた後、センスプライマーとして、配列表における配列番号 4 〗に示す塩基配列に基づき化学合成した 5 —— C T G AG C C TTAG AG C TC C AA G- 3 ' で表される塩基配列のォリゴヌクレオチドを、また、アンチセンスプライマーとして、配列表における S列番号 4 1 に示す塩基 K列に基づき化学合成した 5 " -GT G A AG C TT GAG TTT GAG GTTC- 3 " で表される塩基配列のォリゴヌクレオチドをそれぞれ用いたこと以外は、実施例 4— 1 (c ) におけると同様にして P C R反応させた。この P C R産物の一部をとリ、常法にしたがい〗％ (wZ V ) ァガロースゲル鼇気泳動に供したところ. 特異的な D N A断片の増幅が確認された。引き統き、実施例 2— 1 (a ) におけると同様にして塩基配列を調べたところ、この D N A断片は、配列表における配列番号 4 1 に示す塩基配列を有していた。これにより、実施例 4一 1 ( a ) 乃至 4— 1 ( c ) で決定した、配列表における配列 32 番号 3 8乃至 4 0に示す塩基列が、配列番号 4 1 に示す一連の塩基 E 列の、それぞれ部分配列であることが裏付けられた。

—方、配列表における K列番号 4 1 に示す塩基配列によリコードされる、そこに併記したアミノ酸列と、配列表における配列番号 2 4乃至 3 1 に示す、実施例 3— 2で決定した部分ァミノ酸配列とを照合したところ、これらの部分アミノ酸配列は、すべて配列番号 4 1 に併記したァミノ酸配列における第〗乃至 1 6 5番目のアミノ酸からなる部分に含まれていた。また、配列表における配列番号〗に示す、ヒト由来の当該 I L - 1 8結合蛋白質のアミノ酸配列は、配列表における配列番号 4 1 に併記したアミノ酸 S列における第 1 乃至〗 6 5番目のアミノ酸からなる配列と約 6 1 %の相同性を示した。したがって、以上のことは、配列表の配列番号 4 1 に示す塩基列における第 2 3 5乃至 7 2 9番目の塩基からなる配列がマウス由来の当該 I L— 1 8結合蛋白質をコードし得るものであり、そして、当該 I L一 1 8結合蛋白質が、全体としては、斯かる塩基配列に併記した第 1 乃至 1 6 5番目のアミノ酸からなる配列を有する場合があることを示唆している。なお、以上のごとく示唆されたマウス由来の当該 I L一 1 8結合蛋白質のアミノ酸配列とそれをコードする塩基配列は、配列表における配列番号 2及び 3 3にそれぞれ別記している。く実施例 4一 2 ：形 ¾転換体によるマウス由来の I L一 1 8結合蛋白質の産生 >

く実施例 4一 2 ( a ) ：組換え D N Aの調製〉

0 . 5 m I 反応管に、実施例 4— 1 ( d ) の方法で得た、マウス由来の当該 I L一 1 8結合蛋白質をコードし得る D N Aを 1 n gとり、これを、配列表における配列番号 3 3に示す塩基 K列に基づき化学合成した 33

5 ' - C T C GAC G C C AC C ATGAC CATG AGACAC TG C - 3 ' で表される塩基配列のォリゴヌクレオチドをセンスプライマーとして、また、配列表における配列番号 33に示す塩基配列に基づき化学合成した 5 '— GC G G C C G C TC ATTAGT GAT GGT GA TG G TG ATG T G C AAC C C CTG G G C C T G C— 3 'で表される塩基配列の才リゴヌクレオチドをアンチセンスプライマーとして用いたこと以外は実施例 2— 2 ( a ) におけると同様に処置して P C R反応させた。実施例 4一〗（ a ) におけると同様にして P C R産物中に目的とする D N A断片が存在することを確認する一方、当該 D N A断片を挿入してなるプラスミドベクターを採取した。引き統き実施例 2— 1 ( a ) におけると同様にして塩基配列を調べ、このプラスミド D N Aが, 配列表における配列番号 33に示す塩基配列を含むことを確認した。上記で得たプラスミド D N Aを、実施例 2— 2 (a ) におけると同樺にしてプラスミドベクター『 p E F— BO S』に挿入して組換え D N A とし、得られた組換え D N Aを『 p E FM 1 8 B P H— MK 2』と命名した。常法にしたがって分析したところ、第 4図に示すように、組換え D N A 『 p E FM l 8 B P H—MK 2』においては、マウス由来の当該 I L - 1 8結合蛋白質をコードし得る、配列表における配列番号 33に示す塩基配列を含有する c D N A 『E FM 1 8 B P H— MK 2 c D N A』が、延長因子〗プロモーター『E F l a P』の下流に連結されていた。く実施例 4一 2 ( b ) ：形質転換体によるマウス由来の I L一 1 8結合蛋白 Kの産生〉

実施例 4 - 2 ( a ) で得た組換え D N A 『 p E FM l 8 B P H— MK 2』を含む形 S転換大腸菌株の培養物より、常法にしたがいプラスミド 34

D N Aを採取して、組換え D N A 『 p E F M 1 8 B P H— M K 2』を得た。この組換え D N Aを 20 w gとり、実施例 2— 2 ( b ) におけると同様にして C O S— 1 細胞（A T C C C R L— 1 650) に導入して、この発明の D N Aが導入された形質転換体を得た。

引き続き実施例 2— 2 ( b ) におけると同様にして、上記で得た形質転換体を培養し、培養物から培養上清を採取し、ァフィ二ティークロマトグラフィー用ゲル（商品名『N i — N T A』、キアジヱン製）のカラ厶を用いてこの培養上清を分画し、 I し一 1 8結合蛋白質の存在が確認された画分を採 ¾ · 合一し、 I X 〗 0⁷個の上記形質転換体よリ約 2 m I の、精製 I L一 1 8結合蛋白 Sを含む水溶液を得た。この水溶液の蛋白質含量は約〗 u s /m I であった。この水溶液を、実施例 1 一 2の方法にしたがって処理し、 N末端アミノ酸配列を分析したところ、配列表における E列番号 2における N末端部分のものと同一のアミノ酸配列が得られた。なお、対照として、組換え D N A 『 p E F H l 8 B P H 6』に代えてプラスミドベクター『 p E F— BO S』を用いて、本実施例と同様に処置したところ、 I L一 1 8結合蛋白質の存在は確認されなかった, 以上の結果は、マウス由来の当該 I L一 1 8結合蛋白質が配列表における E列番号 2に示すアミノ酸配列を有する場合があり、そして、当該蛋白質が、配列番号 33に示す塩基配列によリコードされ得ることを裏付けている。以下、この発明の I L一 1 8結合蛋白質を有効成分として含有する感受性疾患剤の実施例を具体的に説明する。

実施例 5 ：液剤

安定剤としてパイロジェン除去した結晶性卜レハロース粉末（商品名『トレハオース』、株式会社林原商事販売）を 1 % ( w/ V ) 含む生理 35 食塩水に実施例 1 一 1 又は実施例 2— 2の方法によリ得た精製 I L一 1 8結合蛋白質を 1 m gZm I になるように溶解した後、常法にしたがつて除菌して、 2種類の液剤を得た。

安定性に優れた本品は、いずれも、自己免疫疾患、炎症性疾患及びァレルギ一性疾患を含む感受性疾患を治療 · 予防するための注射剤、点眼剤、点鼻剤などとして有用である。実施例 6 ：乾燥注射剤

安定剤としてパイ口ジヱン除去したシュクロースを〗％ (w/ V ) 含む生理食塩水 1 00m l に実施例〗一 1 又は実施例 2— 2の方法によリ得た精製 I L一〗 8結合蛋白質を 1 O Om g溶解し、それぞれ、常法にしたがって除菌した後、バイアル瓶に〗 m I ずつ分注し、凍結乾燥し、密栓した。

安定性に優れた本品は、いずれも、自己免疫疾患、炎症性疾患及びァレルギ一性疾患を含む感受性疾患を治療 · 予防するための乾燥注射剤として有用である。実施例 7 ：軟膏剤

滅菌蒸留水に力ルポキシビ二ルポリマー（商品名『ハイビスヮコ一』，和光純薬工業株式会社製造）及びパイ口ジェンを除去した結晶性トレハロース粉末（商品名『卜レハオース』、株式会社林原商事販売）をそれぞれ澳度 1 . 4% (wZw) 及び 2. 0% (wZw) になるように溶解し、実施例 1 一 1 又は実施例 2— 2の方法によリ得た精製 I L— 1 8結合蛋白質を均一に混合した後、 p H 7. 2に調整して、 1 g当リ I L一 1 8結合蛋白 ¾を約 1 m g含む 2種類のペース卜状物を得た。

延展性と安定性に優れた本品は、いずれも、自己免疫疾患、炎症性疾 36 患及びアレルギー性疾患を含む感受性疾患を治療 · 予防するための軟膏剤として有用である。実施例 8 ：錠剤

パイロジヱンを除去した無水結晶 α—マルトース粉末（商品名『ファイントース』、株式会社林原商事販売）に実施例 1 一 1 又は実施例 2— 2の方法により得た精製 I L一〗 8結合蛋白質及び細胞賦活剤としてのルミンを均一に混合し、得られた混合物を常法にしたがって打錠して、製品 1 錠（約 2 0 0 m g ) 当り I L— 1 8結合蛋白質及びルミン（日本感光色素株式会社製）をそれぞれ約 1 m g含む 2種類の錠剤を得た。摂取性、安定性に優れ、細胞賦活作用も兼備する本品は、いずれも、自己免疫疾患、炎症性疾患及びアレルギー性疾患を含む感受性疾患を治療 · 予防するための錠剤として有用である。実験：急性毒性試験

常法にしたがって、 5週齢の d d yマウス（体重 2 0乃至 2 5 g ) に実施例〗 — 〗、 2— 2、 3— 1 及び 4— 2の方法により得た精製 I L— 1 8結合蛋白質を経口投与するか、腹腔内又は静脈内に注射投与した。その結果、これらの精製 I L一〗 8結合蛋白質の L D 5 0は、いずれの投与経路によっても、約 1 m g /マウス 1 匹体重以上であった。ことことは、この発明の I L一 1 8結合蛋白質がヒ卜を含む哺乳類に投与する医薬品に配合して安全であることを物語っている。産業上の利用可能性

以上説明したとおリ、この発明は I L 一 1 8に結合する新規な蛋白質の発見に基づくものである。この発明の蛋白質は、ヒ卜を含む哺乳類に 37 おいて、免疫系を活性化する I L― 〗 8の生理作用を抑制する性 ®を有するので、臓器移植に伴う拒絶反応の緩和や、過剰な免疫反応に起因する種々の疾患の治療 · 予防に著効を発揮する。

Claims

38 請求の範囲配列表における配列番号 1 及び 2に示すいずれかのアミノ酸配列の全部又は一部を含有するィンタ一ロイキン一 1 8結合蛋白質。

部分アミノ酸配列として、配列表における配列番号 3乃至 3 1 に示すいずれかのアミノ酸配列の全部又は一部を含有する請求の範囲第 1 項に記載のィンターロイキン一 1 8結合蛋白 ¾。

S D S—ポリアクリルアミドゲル電気泳動により測定すると、約 4 0， 0 0 0乃至 6 0 , 0 0 0ダルトンの分子 Sを示す請求の範囲第 1 項又は第 2項に記載のィンタ一ロイキン— 1 8結合蛋白質。

哺乳類の体液から得ることのできる請求の範囲第 1 項、第 2項又は第 3項に記載のインターロイキン一〗 8結合蛋白質。

請求の範囲第 1項乃至第 4項に記載のィンターロイキン一 1 8結合蛋白 Sをコードする D N A。

S列表における配列番号 3 2又は 3 3に示すいずれかの塩基配列若しくはその塩基配列に相同的な塩基配列又はそれらの塩基配列に相補的な塩基配列を含有する請求の範囲第 5項に記載の D N A。

有効成分として、請求の範囲第 1項乃至第 4項に記載のインター口ィキン一 1 8結合蛋白黄を含有するィンターロイキン一 1 8抑制剤 < 有効成分として、請求の範囲第 1 項乃至第 4項に記載のインター口ィキン一〗 8結合蛋白 ¾を含有する抗感受性疾患剤。

抗免疫疾患剤としての請求の範囲第 8項に記載の抗感受性疾患剤。