WO1999015200A1

WO1999015200A1 - COMPOSITION MEDICINALE DONT LE PRINCIPE ACTIF EST UN INHIBITEUR DE LIAISON DE gp34

Info

Publication number: WO1999015200A1
Application number: PCT/JP1998/004282
Authority: WO
Inventors: Kazuo Sugamura; Kazuko Murata; Norikazu Higashimura
Original assignee: Mitsui Chemicals, Inc.
Priority date: 1997-09-25
Filing date: 1998-09-24
Publication date: 1999-04-01
Also published as: EP0978287A4; EP0978287A1; JP3914342B2; US6333035B1; JPH11180893A; CA2272605A1

Description

明細書 g P 34結合阻害物を有効成分として含有する医薬組成物技術分野

本発明は、免疫細胞を媒介する疾病の治療用医薬組成物に関し、詳しくは、 g p 34抗原に対して結合し、 g p 34抗原、 0X40抗原膜蛋白質間の有する生物活性を阻害する能力を有する物質を有効成分とする医薬組成物に関するものであリ、より詳細には、 g P 34を介する細胞情報伝達機構に関与しリウマチ、多発性硬化症、サルコイドーシス、自己免疫性眼疾患、炎症性ボーエル病を含む自己免疫疾患および移植片対宿主病に対する治療作用を有する新規な医薬組成物に関するものである。

従来の技術

ヒト g p 34抗原は、サイト力インとして分類される腫瘍壊死因子（以下 T NFと称する。）リガンドファミリ一に属し、当初ヒト T細胞白血病ウィルス

(以下 HTLV—ェと称する。）由来転写活性化因子 P 4 OT a _Xにより誘導される 34キロダルトンの T細胞膜糖蛋白質として同定され、現在ではそのァミノ酸配列及ぴ遺伝子の DMA塩基配列も知られている（Tanakaら： Int. J.

Cancer 36, 549(1985)， Miuraら： Mol. Cell. Biol. 11, 1313(1991))。一方、 OX40抗原はラットの活性化 T細胞抗原として同定された（Patersonら

： Mol. Immunol. 24, 1281 (1987))。その後この g P 34抗原が、 OX40 抗原とリガンドとリセプターの関係にあることがヒト及びマウスにおいて明らかになリ、マウスの g p 34のァミノ酸配列及ぴ遺伝子の D N A塩基配列も知られている（Godfreyら： J. Exp. Med. 180, 757 (1994)、 Bauniら： EMBO J. 13, 3992 (1994))。また、本 OX40抗原が、多発性硬化症、リウマチ、サルコイド一シス、自己免疫性眼疾患、炎症性ボーエル病を含む自己免疫疾患および移植片対宿主病に含まれる自己免疫として働く活性化 C D 4陽性 T細胞に発現しており、これらの OX40抗原を認識する物質に細胞毒素を結合させてこの自己を攻撃する活性化した状態の C D 4陽性 T細胞を特異的に消滅させることによリ治療方法として有効であると期待されることが、ラットを用いた実験的自己免疫性脳脊髄炎（以下 EAEと称する。）実験によって検討され、特許出願及び報告がなされている（CANTAB PHARM, Res, Lim. ： «095/21251、 We inbergら： Nature Med. 2, 183(1996)) 。当該報告には、 C D 4陽性活性化細胞の中の自己反応性を持つ活性化 C D 陽性 T細胞の中に〇 X 40陽性細胞群があり、それらに対する抗 0X40免疫療法が、急性あるいは慢性の CD4 陽性 T細胞を媒介する自己免疫疾患に処置することに効果があるだろうと記載されている。しかし、この報告では、この OX40の発現はあくまでも自己免疫疾患に関係する細胞の目印であり、標的となる活性化 T細胞を消滅させることによる治療効果を述べている。この治療方法では、 g p 34と OX40の結合のみを阻害することによって炎症状態や、自己免疫の状態が抑制できるかどうかは明らかでなく、細胞毒素を結合しなかつた抗 0 X抗体の単独添加が、病態悪化の原因に関係する活性化 CD 4陽性 Tリンパ球細胞の細胞増殖を抑制しなかったことを報告している。また、 EAEにおいて、細胞毒素を結合させた抗マウス OX40ゥサギポリクロ一ナル抗体ではその病態評価点数の上昇が阻害されたと報告されているが、同時に検討された抗マウス〇X40ゥサギポリクローナル抗体のみの投与群での効果は陰性対照と同様に述べられていない。これらのことからも、 g p 34と OX40の結合のみを阻害することによって炎症状態や、自己免疫の状態が抑制できるかどうかは明らかでなかった。また、活性化 Tリンパ球細胞による媒介が考えられている疾患について、その患者の生検標本を調べることによる患者の炎症症状を検出する方法についても、特許出願がされている (CANTAB PHARM , Res, lim. ： W095/21251) 。

以上述べたとおり、 g P 3 4と 0 X 4 0の機能は、一部分しか明らかになつておらず、 g _P 3 4と 0 X 4 0の関係と種々の自己免疫疾患における役割は現在まで全く明らかにされていない。抗ヒト g P 3 4モノクローナル抗体によりこの 2分子間で媒介される機能を g p 3 4側において特異的に阻害することも全く予測されていない。即ち、リウマチ、多発性硬化症、サルコイドーシス、自己免疫性眼疾患、炎症性ボーエル病を含む自己免疫疾患および移植片対宿主病の治療に効果があるかどうかと言うことは不明であった。

発明が解決しょうとする課題

本発明の目的は、リウマチあるいは、多発性硬化症、サルコイドーシス、自己免疫性眼疾患、炎症性ボーエル病を含む自己免疫疾患もしくは移植片対宿主病に対する治療剤としてヒト g p 3 4結合阻害物、詳しくは抗ヒト _g p 3 4ヒト化モノクローナル抗体を有効成分として含有する新規な医薬組成物、及び g P 3 4に対する結合、特に 0 X 4 0に対する結合を阻害することにより、免疫或いは自己免疫疾患を治療する方法を提供することにある。

課題を解決するための手段

本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討を行った結果、ヒト g p 3 4に結合するヒト化モノクローナル抗体と同様の性質を有すると考えられる抗マウス g P 3 4ラットモノクローナル抗体を取得した。そして、倫理上ヒト g P 3 4を用いてのリゥマチ患者および多発性硬化症患者での実験は出来ないため、得られた抗マウス g p 3 4ラットモノクローナル抗体をコラーゲン関節炎惹起モデルマゥスおよび実験的自己免疫性脳脊髄炎惹起モデルマウスに投与することにより、リゥマチモデルおよび多発性硬化症モデルの病態発症が抑制されることを確認した。本知見は、 0X40陽性な活性化 T細胞上の 0X4 O と g P 34の結合が、リウマチ等の自己免疫疾患を惹起していることを初めて示すものである。本知見は、マウスを用いた実験により得られたものであるが、 g P 34と〇X40とがリガンドとリセプターの関係にあることなど、マウス g P 34及びマウス OX 40とヒト g P 34及びヒト 0X40の性質が共通していることからして、マウスでの効果は、ヒトの場合にも当然あるべきものと考え得る。即ち、ヒト g P 34に結合性を有するモノクローナル抗体は、リウマチ、多発性硬化症、サルコイドーシス、自己免疫性眼疾患、炎症性ボーエル病を含む自己免疫疾患および移植片対宿主病に対する治療剤として有効であることが、本知見より一義的に導かれる。

即ち、本発明は、 g p 34結合阻害物を有効成分として含有する自己免疫疾患治療用医薬組成物、或いは g P 34結合阻害物を有効成分として含有する免疫疾患治療用医薬組成物である。

図面の簡単な説明

図 1はマウス g P 34発現細胞に対する s hOX40— F cの結合特異性を示す図である。

図 2は抗マウス g p 34ラットモノクロ一ナル抗体のマウス g P 34と s h 0X40— F _Cの結合阻害を示す図である。白抜きの部分は、抗マウス g _P 3 4ラットモノクローナル抗体添加前の蛍光強度を、黒塗りの部分は、抗マウス g P 34ラットモノクロ一ナル抗体添加後の蛍光強度を示す。

図 3は抗マウス g p 34ラッ卜モノクローナル抗体のゥシタイプ 2コラーゲン関節炎発症抑制の有効性を示す図である。コラーゲン関節炎誘導後の個々の検体における関節炎評価点数の経時変化である。図中、各シンボルは一頭一頭の個体を示している。

図 4は抗マウス _g p 3 4ラットモノクローナル抗体の実験的自己免疫性脳脊髄炎発症抑制の有効性を示す図である。実験的自己免疫性脳脊髄炎誘導後の各群の検体における実験的自己免疫性脳脊髄炎評価点数の平均値の経時変化である。図中、白抜きの部分は、抗マウス g p 3 4ラットモノクローナル抗体投与群を、黒塗りの部分は、ラットイムノグロブリン G投与群を示す。

発明の実施の形態

g P 3 4結合阻害物とは、 _g p 3 4との結合を阻害しリガンドとリセプターの細胞情報伝達を阻害するものであり特に g P 3 4側に作用し結合を阻害するものである。 g P 3 4に結合するものとしては特に O X 4 0が代表的である。 g P 3 4結合阻害物とは例えば _g p 3 4に特異的な抗体、特にモノクローナル抗体である。本発明に係るモノクローナル抗体は、例えばラットモノクロ一ナル抗体を含む他種の動物由来で作製した抗ヒト g p 3 4モノクローナル抗体の抗原結合部位とヒト抗体の定常部位を組み換えて各種公知の方法を用いてキメラ抗体あるいはヒト化抗体を作製することにより取得できる。

ヒト及ぴマウスの g P 3 4はそのアミノ酸配列、その遺伝子の D N A塩基配列を含めて公知である。故に、これらに対するモノクローナル抗体を産出する細胞、特にハイプリドーマは通常知られている方法により作製することが可能であり、該細胞を用いて抗 g P 3 4モノクロ一ナル抗体を生産することも可能である。

本発明に係るモノクローナル抗体の生産は、例えば上記の抗ヒト g P 3 4ヒト化モノクローナルを産生する細胞株を各種公知の方法を用いて培養し、得られた粗抗体を精製すればよく、細胞の増殖及び抗ヒ卜 g p 3 4ヒト化モノクローナル抗体の産生を阻害しない方法であれば特に制限はない。本発明の組成物は、 g p 34モノクローナル抗体等の g p 34結合阻害物を有効成分として含有するものであり、その他医薬的に許容される添加物を含むことができる。本発明の医薬組成物は、移植片対宿主病等の免疫疾患、リウマチ、多発性硬化症、サルコイドーシス、自己免疫性眼疾患、炎症性ボーエル病等の自己免疫疾患の患者に投与される。

実施例

以下実施例を示して本発明を説明するが、本発明はこれに限られるものではない。

実施例 1 抗マウス g p 34ラットモノクロ一ナル抗体の作製

a ) マウス g p 34の免疫

マウス _g P 34遺伝子は、 Co n A刺激を加えたマウス脾臓細胞から抽出した RNAから逆転写酵素を用いクローニングした（Baumら： EMBO J. 13, PP. 399 z-4001, (1994)) 。このマウス g P 34遺伝子断片を B CMG S N e oプラスミド（Karasuyamaら： J. Exp. Med. 172, 969， (1990)) 中に導入し、 B CMGSNe o— mg p 34プラスミドを作製した。次に、このプラスミドを、 WKA/H o cラット T細胞株 TART— 1 (Tatenoら： J. Exp. Med. 159, 1105(1984)) に、エレクト口ポレーシヨン法により遺伝子導入した。その後、ネオマイシン耐性により耐性細胞株を選抜した。マウス _g P 34遺伝子の発現は選抜した細胞株より抽出した RN Aを RT— PC R法を用いて確認しマウス g P 34発現細胞株 TART— mg P 34を得た。本マウス g P 34発現細胞株 TART— mg p 34を、 8週齢ウイスタ一ラット（日本エス 'エル 'シ一社製）の後肢肉丘部分に 1 X 10^s個づっ 2週間毎に 7度植え込み免疫した。その後、最終免疫日から 3日後に、このラッ卜から脾臓を取り出した。取り出した脾臓細胞を RPMI— 1640培地（日水製薬製）により 3度洗浄した。また、マウスミエローマ細胞株 S P 2Z0— Ag 14 (Schulmanら： Nature 276, 269(1978)) を対数増殖期になるように細胞増殖させ R PM I— 1640 培地により 3度洗浄した。マウスミエローマ細胞株 S P 2/0-Ag 14と脾臓細胞を 1 ： 3になるように混和し l O O O r pmで 10分間遠心分離し上清を除いた。沈澱した細胞に、 37°Cに暖めておいた RPMI— 1640培地 1 m 1を 1分間かけゆつくリと静かに撹拌しながら加えた。再度、 37°Cに暖めておいた RPMI— 1640培地 lmlを 1分間かけゆつくりと静かに撹拌しながら加えた。さらに、 37 °Cに暖めておいた 50%ポリエチレングリコール 4000 (メルク社製）液 lm 1を 1分間かけて撹拌しながらゆっくり加え、更に 1分間ゆつくり撹拌した。さらに 37°Cに暖めておいた RPMI— 164 0培地 7m 1を 3分間かけて静かに撹拌しながら加えた。室温で、 1000 r pm、 5分間遠心沈降し、上清を取り除いた。細胞濃度が、 5 X 10^E個 Zm 1になるように 37 °Cに暖めておいた 10 %牛胎児血清（以下、 F C Sと称する。）を含む RPMI— 1640培地を加え、静かに撹拌し細胞を浮遊させた。浮遊細胞を 96穴の培養プレートに、各ゥヱルあたり 50 1ずつ分注し細胞培養装置で一晩培養した。翌日に、 HAT培地（0. ImMヒポキサンチン、 0. 4 Mアミノブテリン、 16 Mチミジン、 15%FCSを含有する RP MI - 1640培地）を 100 μ 1ずつ添加した。その後、細胞の増殖状態を観察しながら、 100 ^ 1ずつ HAT培地に交換した。このような中、増殖してくる融合細胞をハイブリド一マとして作製した。

b) 抗体産生の確認

上記 a) で作製したハイプリドーマを培養し、培養開始から 12日後に全ての培養上清を回収した。その上清中の抗体活性を、マウス g P 34遺伝子を導入し発現させたマウス T細胞由来細胞株 BW5147-mg p 34とその親細胞株マウス T細胞由来細胞株 BW5147 (Kondoら： SCIENCE 262, 1874(19 93)) をそれぞれ抗原発現細胞及びその陰性対照細胞として用いラジオィムノアツセィ（以下、 RIAと称する。）により測定した。 BW5147— mg p 34、 BW5147を培養後、リン酸緩衝液（PBS (—） ) で洗浄し 96穴 U底プレートにそれぞれ 1 X 10^ε個づっ細胞を播種した。これに、 40 μ 1 のハイプリドーマ培養上清を添加し混合した。この 96穴 U底プレートを氷上で 30分間保温し抗原とよく反応させた。その後、予め 4°Cに保温しておいた冷 PBS (—）を用いて細胞を 2度洗浄した。遠心分離によりペレットとした細胞塊に I^1ZS 放射性ョード標識抗マウスィムノグロブリン Gヒッジ抗体（Am ersham社製）を 30 1添加しさらに氷上で 30分間反応させた。その後、予め 4°Cに保温しておいた冷 PB S (-) を用いて細胞を 3度洗浄した。乾燥器を用い 90°Cで 10分間乾燥させて水分を蒸発させた。その後、 96穴 U底プレートを 1穴づっハサミにより切り分けてガンマ一線測定器（ァロカ社製、 A RC600) により測定した。ガンマ一線検出の値において、 BW5147— m g P 34細胞を用いたもので 1◦ 00以上、 BW5147細胞を用いたもので 50前後と差の認められたハイプリドーマ培養上清を陽性穴とし、再現性を確かめた。抗体活性の確認できた細胞については、限界希釈法によるクロ一二ングを行った。その結果、抗マウス gp 34ラットモノクローナル抗体産生ハイブリドーマ株を取得した。このハイプリドーマ株を T〇L— 1と命名し、生命工学工業技術研究所に FERM BP— 6509として寄託した。

c) 抗体の調製

BALBZc— n uヌードマウス（日本エス ·エル · シ一社製）に 0. 5m 1プリスタン（2， 6， 10， 14—テトラメチルペンタデカン）を 1日目と 7日目の 2度腹腔内に投与した。 2度目の投与 3日後に、 20%FCSを含有する RPMI— 1640培地で培養した上記取得のハイブリドーマ株 T〇 L— 1 (FERM B P— 6509) を一匹当たり 10^s個腹腔内投与した。そして、 2週間後に腹水を回収した。回収した腹水には、終濃度が 0. 02%になるようにァジ化ナトリウムを添加し室温で一晩放置した。翌日放置した腹水を

4 °C、 3000 r p mで 20分間遠心分離し上清を回収した。この培養上清を、直径 0. 45 mのフィルターに通した後、プロテイン Aカラムキット（バイオラッド社製）にかけィムノグロブリン画分を回収した。この回収溶液に対し、

50%飽和硫酸アンモニゥム（和光純度社製）分画を行った後、生理的濃度の PB S (—）に再溶解した。これを、 PB S (—）に対して透析処理後、 0. 2 μ mのフィルタ一により濾過し無菌処理した後、使用した。

実施例 2 フローサイトメ一ター解析による抗マウス g P 34ラットモノクローナル抗体のマウス g p 34抗原結合性の確認

マウス g P 34抗原に結合するヒト OX40細胞外領域とヒトイムノグロブリン F c領域の融合蛋白質（以下 s hOX40-F cと称する。米 I mmu n e x社より供与）を用いてマウス g P 34抗原を発現している BW5147- m_g p 34細胞に対する結合性を検討した。 1. 5m 1マイクロチューブに 1 X 10^s個の細胞を回収し 5000 r p m、 30秒間遠心分離し細胞を沈澱させた。その沈澱細胞に、 0. 5%仔牛血清アルブミン（以下 B S Aと称する。）含有 PB S (—） 500 1を添加し洗浄した。再度、 5000 r pm、 30 秒間遠心分離し細胞を沈殿させた。その後、これらの細胞を 3 1ヒト血清、 16 1 0. 5%B SA含有 PB S (―) に懸濁して、 4°C、 30分間保温した。さらに、それらのチューブの一方に s h OX40— F c (2. 5 μ s/m 1) 20 lを添加'懸濁し、 4°C、 30分間保温させ、マウス g p 34とヒ卜 0X40を結合させた。再度、 0. 5%83 含有？83 (—） 500 ^ 1 を添加し 5000 r p m、 30秒間遠心分離により 2度洗浄した。それらのチユーブに F l u o r e s c e i n i s o t h i o c, y a n a t e (以下 F I TCと称する）。標識ャギ抗ヒト I g G ( F c ) 抗体（CAP PE L社製） (25 μ g/m l ) を 20 1添加 '懸濁し、 4°C、 20分間保温した。そして、 0. 5 %85 含有？83 (—） 500 μ 1に懸濁し FAC S c a n (ベクトンディッキンソン社製）によりフローサイトメ一ター解析を行った。その結果、 s h 0X4 0 - F Gのみがマウス g P 34発現細胞 BW5 14 7 一 m g p 34細胞に結合した。このことから、 BW5 14 7細胞でのマウス g p 34の発現が確認できた（図 1) 。

次に、本マウス g p 34発現細胞 BW 5 14 7— m g p 34と s h OX40 - F cとの結合反応系に 1 0 μ g/m 1となるように抗マウス g P 34ラットモノクロ一ナル抗体を添加し反応させた。そして、フローサイトメータ一解析を行った。その結果、 s h 0X4 0— F cと結合することにより標識された B W5 14 7 -m g p 34細胞の蛍光強度が抗マウス g P 34ラットモノクロ一ナル抗体の添加により低下した。このことより、 BW5 14 7— m _g p 34細胞と s h OX40— F cとの結合反応が抗マウス g p 34ラットモノクローナル抗体により阻害されることが明らかになった（図 2) 。

実施例 3 抗マウス g _P 34ラットモノクローナル抗体のゥシタイプ 2コラ一ゲン誘導性関節炎モデルに対する有効性の検討

自己免疫疾患の一つであるヒトリゥマチのモデル · ゥシタイプ 2コラーゲン誘導性関節炎に対する抗マウス g P 34ラットモノクローナル抗体の効果を検討した。

7週齢で購入した雄性 DB AZ l Jマウス（日本エス 'エル 'シ一社製）を S P F条件下で飼育し、以下に示すように、コラーゲン関節炎を誘導した。ゥシ関節由来 K42タイプ 2コラ一ゲン（コラーゲン技術研修会製）を 0. 3% 酢酸水溶液に溶解し 4m_g/ m 1とした。等量のフロントコンプリートアジュパント（和光純薬工業社製）を加え氷中で超音波破砕装置を用いてミセル化した。このコラーゲン 200 μ g当量のコラーゲン液 1〇 0 1をマウス尾根部に皮内投与した。さらに、初期感作後 21日目に再度尾根部に同量のコラーゲン液を投与し追加感作した。

抗マウス g p 34ラットモノクローナル抗体の投与については、追加感作のコラーゲン投与開始後、 3 OmgZk g重の抗体量で 1週間に 5回ずつ 4週間腹腔内投与した。病態発症の陽性対照投与群は、ラットイムノグロブリン G

(c a p p e l社製）画分を同量同様に投与した。試験及びコント口一ルをそれぞれ 8個体ずつ供試した。

関節炎症状の評価は、以下のような 5段階の判定を行い、四肢合わせて最高 16点として行った。関節炎点数をつけ経時的に行った。

0点：症状なし

1点：四肢のうち指などの小関節が 1本のみ腫脹発赤

2点：小関節 2本以上、あるいは手、足首の比較的大きな関節が腫脹発赤

3点： 1本の手、足全体が発赤腫脹

4点：さらにその 1本の手、足の腫脹発赤が最大限に達している

但し、マウスの関節炎の症状は 1本の手、足の腫脹発赤が最大に達しその後腫脹が徐々に衰退して関節が変形剛直化する場合が多かった。この場合その後の症状の改善を判断できなかったので、評価点数を 3とした。

その結果、図 3に示すとおり、抗マウス g P 34ラットモノクローナル抗体の投与群では、ラットイムノグロブリン G投与群に比べコラ一ゲン関節炎の病態発症が抑制された。実施例 4 抗マウス g _P 34ラットモノクローナル抗体のマウス実験的自己免疫性脳脊髄炎に対する有効性の検討

自己免疫疾患の一つであるヒト多発性硬化症のモデル ·実験的自己免疫性脳脊髄炎に対する抗マウス g P 34ラットモノクロ一ナル抗体の効果を検討した。

9〜 14週齢で購入した雌性 S J L Jマウス（ゴキタブリ一ディングサ一ビス社製）を SPF条件下で飼育し、以下に示すように、実験的自己免疫性脳脊髄炎を誘導した。 150 1 PB S (—）中に溶解したプロテオリピッドタンパク質（以下 P L Pと称する。サヮディ一テクノロジ一社製） 200 と等量のフロン卜コンプリートアジュバント（ャトロン社製）を加え、連結針を用いてミセル化し P L P乳化液を作製した。この P LP 200 β g乳化液 30 0 μ 1を後 2肢肉丘部分と尾根部 4箇所に試験開始日に皮下投与した。さらに、初期感作 7日後に再度同量の P L Ρ乳化液を投与し、追加感作した。この間、 200 ii l PBS (一）中に溶解した百日咳毒素（Bordetel la pertussis to xin、シグマ社製） 30 On gを試験開始日および試験開始 2日後に腹腔内投与した。抗マウス g P 34ラットモノクローナル抗体の投与については、 5m g/k g体重の用量で初回感作の PL P乳化液投与開始から 2日毎に 8回 14 日後まで腹腔内投与した。病態発症の陽性対照投与群は、ラットイムノグロフリン G (Ca p p e l社製）画分の同量を同様に投与した。試験群及びコントロール群のそれぞれに 4個体ずつ供試した。

実験的自己免疫性脳脊髄炎症状の評価は、以下のような 6段階の判定を行い、最高 5点として行った。

0点：症状なし

1点：尾の緊張低下

2点：軽度な後肢の不全対麻痺および運動失調 3点：重度な後肢の不全対麻痺および運動失調

4点：四肢麻痺

5点：実験的自己免疫性脳脊髄炎による死亡

但し、それぞれの群において実験的自己免疫性脳脊髄炎によつて死亡した動物については、試験終了まで評価点数を 5点とした。

その結果を図 4に示す。各群の評価点数を平均して示した。抗マウス g _P 3 4ラットモノクローナル抗体の投与群では、ラットイムノグロブリン G投与群に比べ実験的自己免疫性脳脊髄炎の病態発症が抑制された。

発明の効果

本発明により、マウス g p 3 4に対して結合しマウス〇X 4 0との結合を阻害する抗マウス g P 3 4ラットモノクローナル抗体がリゥマチ疾患のモデルであるゥシタイプ 2コラーゲン関節炎の発症と多発性硬化症の疾患モデルである実験的自己免疫性脳脊髄炎の発症を抑制することが明らかになつた。そこで、ヒト化した抗ヒト g P 3 4モノクローナル抗体を用いることにより、少なくとも現在知られている免疫細胞を含めた g p 3 4と 0 X 4 0の雨膜結合型蛋白質を通して行う両抗原の細胞情報伝達を阻害することにより、リウマチを含めた多発性硬化症、サルコイドーシス、自己免疫性眼疾患、炎症性ボーエル病等の自己免疫疾患、および移植片対宿主病に対する予防、治療効果が期待できる。このような特性から、本発明によリ提供される抗ヒト g P 3 4モノクローナルヒト化抗体を含有する医薬組成物は、ヒト自己免疫疾患に対する有用な薬剤となることが期待される。規則第 13規則の 2の寄託された微生物への言及

1. TOL- 1

ィ当該微生物を寄託した寄託機関の名称及びあて名

名称通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究所あて名〒 305- 0046 日本国茨城県つくば市東 1丁目 1番 3号口ィの寄託機関に寄託した日付

平成 10年（1998年） 9月 18日

ノ、ィの寄託機関が寄託について付した寄託番号

FERM BP— 6509

Claims

請求の範囲

1. S P 34結合阻害物を有効成分として含有する自己免疫疾患治療用医薬組成物。

2. g P 34結合阻害物が _g p 34抗体である第 1項に記載の自己免疫疾患治療用医薬組成物。

3. 自己免疫疾患が、リウマチ、多発性硬化症、サルコイドーシス、自己免疫性眼疾患、炎症性ボーエル病のうち少なくとも一つである第 1項に記載の自己免疫疾患治療用医薬組成物。

4. 自己免疫疾患が、多発性硬化症である第 3項に記載の自己免疫疾患治療用医薬組成物。

5. 自己免疫疾患が、リウマチである第 3項に記載の自己免疫疾患治療用医薬組成物。

6. g p 34結合阻害物を有効成分として含有する免疫疾患治療用医薬組成物。

7. g _P 34結合阻害物が _g p 34抗体である第 6項に記載の免疫疾患治療用医薬組成物。

8. 免疫疾患が、移植片対宿主病である第 6項又は第 7項に記載の免疫疾患治療用医薬組成物。