JPH01110700A - 細胞間粘着分子およびその結合性リガンド - Google Patents

細胞間粘着分子およびその結合性リガンド

Info

Publication number
JPH01110700A
JPH01110700A JP63109818A JP10981888A JPH01110700A JP H01110700 A JPH01110700 A JP H01110700A JP 63109818 A JP63109818 A JP 63109818A JP 10981888 A JP10981888 A JP 10981888A JP H01110700 A JPH01110700 A JP H01110700A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
icam
cells
binding
antibody
lfa
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
JP63109818A
Other languages
English (en)
Other versions
JP2763030B2 (ja
Inventor
Aren Supuringaa Teimoshii
ティモシー　アレン　スプリンガー
Robert Rothlein
ロバート　ロースレイン
Steven D Marlin
スティーヴン　ディーン　マーリン
Michael L Dustin
マイケル　ローラン　ダスティン
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Dana Farber Cancer Institute Inc
Original Assignee
Dana Farber Cancer Institute Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Dana Farber Cancer Institute Inc filed Critical Dana Farber Cancer Institute Inc
Publication of JPH01110700A publication Critical patent/JPH01110700A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP2763030B2 publication Critical patent/JP2763030B2/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2821—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against ICAM molecules, e.g. CD50, CD54, CD102
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/70525—ICAM molecules, e.g. CD50, CD54, CD102
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2839—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the integrin superfamily
    • C07K16/2845—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the integrin superfamily against integrin beta2-subunit-containing molecules, e.g. CD11, CD18
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/5743—Specifically defined cancers of skin, e.g. melanoma
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 童栗上皇肌朋立■ 本発明はリンパ球の群が細胞基質を認識しそれに付着し
て炎症部位に浸透し炎症反応生細胞と反応する過程で含
まれるＩ　ＣＡＭ−１のような細胞間粘着分子に関する
。本発明はさらにそのような細胞間粘着分子に結合し得
るリガンド分子、これらリガンドのスクリーニングアッ
セイ、および該細胞間粘着分子、該リガンド分子および
該スクリーニングアッセイの使用に関する。
災来皮盪 白血球はホストをバクテリアまたはウィルスのような外
敵に対して適切に防御するために細胞基質に付着し得な
ければならない。防御システムの優れた見解はＥｉｓｅ
ｎ、Ｈ，Ｗ、により“旧ｃｒｏ−ｂｉｏｌｏｇｙ　＋第
３版、ペンシルバニア州フィラデルフィア、　Ｈａｒｐ
ｅ＆Ｒ咋社刊、（１９８０）　、２９０−２９５および
３８１−４１８”において提示されている。白血球は内
皮細胞に結合できて循環系から進行中の炎症部位に浸透
できなければならない。さらに、白血球は抗原提供細胞
に付着して正常な特異的免疫応答が起り得ねばならず、
さらに、リンパ球は、適当なターゲット細胞に付着して
ウィルス感染または１ｌ（ｆｉ蕩細胞の分解が起り得ね
ばならない。
最近、そのような付着の仲介において含まれる白血球表
面分子がハイブリドーマ技術を用いて同定された。要す
るに、ヒトＴ−細胞（Ｄａｖｉｇｎｏｎ、　Ｄ。
等、　　Ｐｒｏｃ、　　Ｎａｔｌ、　　Ａｃａｄ、　　
Ｓｅｔ、　　ＵＳＡ　　　ヱ旦　：４５　３５−４５３
９　　（１９８１））とマウスひ臓細胞（Ｓｐｒｉｎｇ
ｅｒ、　Ｔ、等、　Ｅｕｒ、　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、
　　９　　：　３０１−３０６　（１９７９））に対し
て向けられた各モノクローナル抗体は白血球表面に結合
し、上述の付着関連機能を抑制しているものと同定され
た（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ、　Ｔ、等、Ｆｅｄ、　Ｐｒｏｃ
、　　４４　：　２６６０−２６６３　（１９８５））
。これらの抗体により同定された分子はＭ　ａ　ｃ　−
１およびリンパ球機能会合抗原１　　（ＬＦＡ−１）と
称される。Ｍａｃ−１はマクロファージ、顆粒球および
顆粒状リンパ球上に見い出されたヘテロダイマーである
。ＬＦＡ−１は大部分のリンパ球に見い出されるヘテロ
ダイマーである（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ、Ｔ、Ａ、等、Ｉｍ
ｍｕｎｏｌ、Ｒｅｖ。
餞：ｔｔｔ−ｔ３ｓ　　（１９８２））。これらの２つ
の分子、および第３分子ｐ１５０．９５　（これはＭａ
ｃ−１と同様な組織分布を有する）は細胞粘着においで
ある役割を発揮する（Ｋｅｉｚｅｒ＋　Ｇ、等、Ｅｕｒ
、Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　　長：１１４２−１１４７
（１９８５）　）。
上記の白血球分子は糖たん白質の関連群の１員であるこ
とが見い出された（Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｍａｄｒｉｄ、　
Ｆ。
等、Ｊ、　Ｅｘ　ｅｒ、　Ｍｅｄ、　　１５８　：　　
１７８５−１８０３（Ｌ　９８３　）　　；　Ｋｅｉｚ
ｅｒ、　Ｇ、Ｄ、等、Ｅｕｒ、Ｊ、Ｔｍｍｕｎｏｌ。
長：　　１１４２−１１４７　　（１９８５））。この
主情たん白質群は１つのアルファー鎖と１つのベータ鎖
を有するヘテロダイマーからなっている。抗原の各々の
アルファー鎖は互いに異なるけれども、ベータ鎖は高度
に保護されていることが判明している（Ｓａｎｃｈｅｚ
−Ｍａｄｒｉｄ、　Ｆ、等、Ｌ−旦９且ラールｌユ１５
８　：　　１７８５−１８０３　（１９８３））。主唐
たん白質群のベータ鎖（ある場合には“ＣＤ１８”と称
す）は９５ＫＤの分子量を有することが見い出され、−
方アルファー鎖は１５０ＫＤ−１８０ＫＯで変化するこ
とが見い出された（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ、　Ｔ、等％　Ｆ
ｅｄ、Ｐｒｏｃ。
４４　：２６６０−２６６３　（１９８５）’）。膜た
ん白質のアルファサブユニットはベータサブユニットの
有する広い相同性を共有していないけれども、糖たん白
質のアルファーサブユニットの近似分析は両者の間に実
質的な類似性があることを示している。ＬＦＡ−４関連
糖たん白質のアルファーおよびベータサブユニット間の
類似性の検討はＳａｎｃｈｅｚ−Ｍａｄｒｉｄ、　Ｆ、
等によりなされているＣＪ、Ｈｘμ＝ｒ　、　Ｍｅｄよ
１５８　　：　５８６−６０２　（１９８３）；Ｊ、Ｅ
ｘ凹り一顕ム　肢：１７８５−１８０３　　（１９８３
））。
白血球表面上の上記粘着たん白質群のいずれの１員の正
常量も明らかにすることができない１群の人々が同定さ
れている〔＾ｎｄｅｒｓｏｎ＋Ｄ、　Ｃ，等、Ｆｅｄ、
Ｐｒｏｃ、　、　　４４　　：　２６７１−２６７７（
１９８５）；Ａｎｄｅｒｓｏｎ、Ｄ、　Ｃ，等、Ｊ、Ｉ
ｎｆｅｃｔ、　Ｄｉｓ、、　１’５２　：　６６８６８
９　（１９８５））。これらの患者からのリンパ球は分
子のＬＦＡ−１群が抗体により中和されている健常者に
類似するインビボ欠陥を示していた。さらにまた、上記
の患者は、その細胞の細胞基質への粘着能力なしにより
、正常な免疫応答を測定することができない（Ａｎｄｅ
ｒｓｏｎ、Ｄ、　Ｃ，等、Ｆｅｄ、Ｐｒｏｃ、　４４　
：　２６７１　２６７７　（１９８５）　１Ａｎｄｅｒ
ｓｏｎ、Ｄ、　Ｃ，等、Ｊ、Ｔｎｆｅｃｔ、　Ｄｉｓ、
、　１５２：　６６８−６８９　（１９８５）〕。これ
らのデータは免疫反応がリンパ球がＬＦＡ−１群の機能
的粘着分子の欠如により正常な形で粘着できない場合に
は緩和されることを示している。
即ち、要約すれば、動物の健康および生命力を維持する
リンパ球の能力はリンパ球が他の細胞（内皮細胞のよう
な）に粘着できることを必要とする。この粘着はリンパ
球の細胞表面上に存在する特異的レセプター分子を含む
細胞−細胞接触を必要とすることが判明している。これ
らのレセプターはリンパ球が他のリンパ球または内皮お
よび他の非血管細胞に粘着することを可能する。細胞表
面レセプター分子は相互に高度に関連することが判明し
ている。リンパ球が上記の細胞表面レセプター分子を欠
損しているヒトは慢性で再発性の感染症、および欠損抗
体応答を含む他の臨床的症状を示す。
リンパ球粘着は外来組織が認識され拒絶される過程で起
るので、この過程の理解が臓器移植、組織移植、アレル
ギーおよび腫瘍学の分野において著しく価値がある。
発凱■血容 本発明は細胞間粘着分子−１ＣＩＣＡＭ−１）およびそ
の官能性誘導体に関する。本発明はさらにＩ　ＣＡＭ−
１の機能を抑制し得る抗体および抗体フラグメント、お
よびＩＣＡＭ−１機能に対する他のインヒビター、並び
にそのようなインヒビターを同定し得るアッセイに関す
る。本発明はさらに上記°分子すべての診断および治療
上の用途に関する。
さらに詳細には、本発明は実質的に天然不純物を含まな
い細胞間粘着分子Ｉ　ＣＡＭ−１またはその官能性誘導
体を包含する。本発明はさらにリンパ球表面に存在する
分子に結合し得るそのような分子に関する。
本発明はさらに検量可能に楼識した細胞間粘着分子Ｉ　
ＣＡＭ−１およびその誘導体に関する。
本発明はさらにＩ　ＣＡＭ−１またはその官能性誘導体
を発現し得る組換えＤＮＡ分子を包含する。
本発明はまた次の各工程を含む実質的に純粋な形でＩ　
ＣＡＭ−１を回収する方法を包含する：（ａ）　　ＩＣ
ＡＭ−１を発現する細胞膜からＩ　ＣＡＭ−１を可溶化
して、可溶化Ｉ　ＣＡＭ−１調製物を調製すること、 （ｂ）　　上記可溶化Ｉ　ＣＡＭ−１調製物をＩＣＡＭ
−１に結合し得る抗体を含有するアフィニティマトリソ
クスに導入すること、 （Ｃ）　　ＩＣＡＭ−１を上記アフィニティマトリック
スの抗体に結合させること、 ！ｄ）　　上記マトリックスから抗体に結合し得ないす
べての化合物を除去すること、および （Ｑ）　　ＩＣＡＭ−１を上記マトリックスから溶出さ
せることによりＩ　ＣＡＭ−１を実質的に純粋な形で回
収すること。
本発明はさらにＩ　ＣＡＭ−１およびＩ　ＣＡＭ−１の
官能性誘導体からなる群から選ばれた分子に結合し得る
抗体を包含する。本発明はまたそのような抗体を産生じ
得るハイブリドーマ細胞を包含する。
本発明はさらにモノクローナル抗体Ｒ６５Ｄｂを産生じ
得るハイブリドーマ細胞を包含する。
本発明は、さらに、次の工程を含む、Ｉ　ＣＡＭ−１に
結合し得る抗体を産生ずる所望のハイブリドーマ細胞の
産生方法も包含する： （Ａ）動物をＩ　ＣＡＭ−１を発現する細胞で免疫する
こと、 （Ｂ）上記動物のひ臓細胞をミエローマ細胞系と融合さ
せること、 （Ｃ）融合させたひ臓およびミエローマ細胞から抗体分
泌性ハイブリドーマ細胞を調製すること、および （Ｄ）ハイブリドーマ細胞を所望のＩ　ＣＡＭ−１結合
性抗体を産生じ得るハイブリドーマ細胞にスクリーニン
グすること。
本発明はまた上記方法で取得したハイブリドーマ細胞お
よびそのハイブリドーマ細胞から産生させた抗体も包含
する。
本発明はまた細胞間粘着の非免疫グロブリンアンタゴニ
ストの同定方法にも関し、その方法に次の工程よりなる
： （Ａ）細胞間粘着のアンタゴニストであり得る非免疫グ
ロブリン剤を凝集可能な複数の細胞を含有するリンパ球
調製物とインキュベートすること；および （Ｂ）上記リンパ球調製物を検査して上記非免疫グロブ
リン剤の存在がリンパ球調製物の細胞凝集を抑制するか
どうかを測定すること；凝集抑制が上記非免疫グロブリ
ン剤を細胞間粘着のアンタゴニストとして同定する。
本発明はまた哺乳動物の特異的防御システムの応答に由
来する炎症を治療する方法にも関し、その方法はそのよ
うな治療の必要な対象物に上記炎症を抑制するのに十分
な量の抗炎症剤を与えることを含み、かつこの抗炎症剤
はＩ　ＣＡＭ−１に結合し得る抗体、Ｉ　ＣＡＭ−１に
結合し得る抗体のフラグメント、Ｉ　ＣＡＭ−１、Ｉ　
ＣＡＭ−１（７）官能性誘導体、およびＩ　ＣＡＭ−１
の非免疫グロブリンアンタゴニストからなる群より選ば
れる。
本発明はさらにＩ　ＣＡＭ−１の非免疫グロブリンアン
タゴニストがＬＦＡ−１以外のＩ　ＣＡＭ−１の非免疫
グロブリンアンタゴニストであル上述の炎症治療方法を
包含する。
本発明はまた浸透にＬＦＡ−１群の官能性−員を必要と
する造血腫瘍細胞の転移を抑制する方法にも関し、この
方法はそのような治療を必要とする患者に上記の転移を
抑制するのに十分な量の抗炎症剤を与えることを含み、
かっこの抗炎症剤はＩ　ＣＡＭ−１に結合し得る抗体、
夏ＣＡＭ−１に結合し得る抗体のフラグメント、Ｉ　Ｃ
ＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１の官能性誘導体、およびＩ　Ｃ
ＡＭ−１の非免疫グロブリンアンタゴニストからなる群
より選ばれる。
本発明はさらにＩ　ＣＡＭ−１の非免疫グロブリンアン
タゴニストがＬＦＡ−１以外の非免疫グロブリンアンタ
ゴニストである上記造血腫瘍細胞の転移を抑制する方法
も包含する。
本発明はまたＩ　６ＡＭ−１発現腫瘍細胞の成長を抑制
する方法も包含し、その方法はそのような治療を必要と
する患者に上記成長を抑制するのに十分な量の毒素を与
えることを含み、この毒素はＩ　ＣＡＭ−１に結合し得
る毒素誘導抗体、ＩＣＡＭ　−１に結合し得る抗体の毒
素誘導フラグメント、ＬＦＡ−１群分子の毒素誘導１員
、およびＬＦＡ−１群分子の１員の毒素誘導官能性誘導
体からなる群から選ばれる。
本発明はまたＬＦＡ−１発現腫瘍細胞の成長を抑制する
方法にも関し、その方法はそのような治療を必要とする
患者にかかる成長を抑制するのに十分な量の毒素を与え
ることを含み、この毒素は毒素誘導Ｉ　ＣＡＭ−１およ
びＩ　ＣＡＭ−１の毒素誘導官能性誘導体からなる群よ
り選ばれる。
本発明はさらに炎症を有する疑わしい哺乳動物対象体の
特異的防御系の応答に由来する炎症の存在および位置を
診断する方法に関し、その方法は、（ａｌ　　上記の対
象体にＩ　ＣＡＭ−１を発現する細胞を同定し得る検出
可能に標識した結合性リガンドを含有する組成物を投与
すること、および（ｂｌ　　上記結合性リガンドを検出
すること、を含む。
本発明はさらに炎症を有する疑わしい哺乳動物対象体の
特異的防御系の応答に由来する炎症の存在および位置を
診断する方法に関し、その方法は、（ａ）　　上記対象
体の組織のサンプルをＩ　ＣＡＭ−１を発現する細胞を
同定し得る検出可能に標識した結合性リガンドを含有す
る組成物とインキュベートすること、および （ｂ）　　上記結合性リガンドを検出すること、を含む
。
本発明はまたＩ　ＣＡＭ−１発現性腫瘍細胞を有する疑
わしい哺乳動物対象体のそのような細胞の存在および位
置を診断する方法にも関し、その方法は、 （ａ）　　上記対象体にＩ　ＣＡＭ−１に結合し得る検
出可能に標識した結合性リガンドを含有する組成物を投
与すること、このリガンドは抗体およびＩ　ＣＡＭ−１
に結合し得る抗体フラグメントからなる群より選ばれる
こと、および （ｂ）　　上記結合性リガンドを検出すること、を含む
。
本発明はまたＩ　ＣＡＭ−１発現性腫瘍細胞を有する疑
わしい哺乳動物対象体のそのような細胞の存在および位
置を診断する方法にも関し、その方法は （ａｌ　　上記対象体のａｌ織のサンプルをＩ　ＣＡＭ
−１に結合し得る検出可能に標識した結合性リガンドを
含有する組成物とインキュベートすること、このリガン
ドが抗体およびＩ　ＣＡＭ−１に結合し得る抗体フラグ
メントからなる群より選ばれること、および （ｂ）　　上記結合性リガンドを検出すること、を含む
。
本発明はまたＬＦＡ−１群分子の１員を発現する腫瘍細
胞を有する疑わしい対象体のそのような細胞の存在およ
び位置を診断する方法にも関し、その方法は、 （ａ）　　上記対象体にＬＦＡ−１群分子の１員に結合
し得る検出可能に標識した結合性リガンドを含有する組
成物を投与すること、このリガンドはＩ　ＣＡＭ−１お
よびＩ　ＣＡＭ−１の官能性誘導体からなる群より選ば
れること、および（ｂｌ　　上記結合性リガンドを検出
すること、を含む。
本発明はまたＬＦＡ−１群分子の１員を発現する腫瘍細
胞を有する疑わしい対象体のそのような細胞の存在およ
び位置を診断する方法にも関し、その方法は、 （ａｌ　　上記対象体の組織のサンプルを分子のＬＦＡ
−１群の１員に結合し得る検出可能に標識した結合性リ
ガンドの存在下にインキュベートすること、このリガン
ドはＩ　ＣＡＭ−１およびＩＣＡＭ−１の官能性誘導体
からなる群より選ばれること、および （ｂ）　　上記組織サンプル中に存在する分子のＬＦＡ
−１群のｌ員に結合している上記結合性リガンドを検出
すること、 を含む。
好ましい実施態様 本発明の１つの局面はＬＦＡ−１に対しての天然結合性
リガンドの発見に関する。ＬＦＡ−１群分子のような分
子は、細胞間粘着の過程に含まれており、パ粘着分子”
と称されている。
本発明の天然結合性リガンドは“細胞間粘着分子−１（
Ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒ　Ａｄｈｅｓｉｏｎ　Ｍｏ
１ｅｃｕｌｅ−１）　　”または“’ＩＣＡＭ−１″と
表示される。ＩＣＡＭ−１は７６１７ｋｄの糖たん白質
である。ＩＣＡＭ−１はヘテロダイマーではない。本発
明はＩＣＡＭ　　１およびその“官能性誘導体”に関す
る。
ＩＣＡＭ−１の“官能性誘導体”はＩＣＡＭ−１の生物
学的活性に実質的に同様な生物学的活性（機能的または
構造的に）を有する化合物である。
“官能性誘導体”なる用語は分子の“フラグメント”、
“変異体”、“同族体”または“化学誘導体”を包含す
るものとする。Ｉ　ＣＡＭ−１のような分子の“フラグ
メント”は分子の任意のポリペプチドサブセントを意味
する。Ｉ　ＣＡＭ−１のような分子の“変異体”とは全
分子またはそのフラグメントと構造上または機能上実質
的に同様である分子を称する。分子は他の分子と両分子
が実質的に同様な構造を有するかあるいは両分子が同様
な生物学的活性を有する場合に“実質的に同様”と称さ
れる。即ち、２つの分子が同様な活性を有する場合、こ
れらの分子は変異体であるとみなされ、該用語は本明細
書において分子の１つの構造が他の分子中に見い出され
ない場合あるいはアミノ酸残基配列が同じでない場合で
も使用される。
本明細書で使用するとき、分子が通常分子の１部でない
追加の化学的部分を含む場合、その分子は他の分子の“
化学的誘導体”であると称する。そのような部分は分子
の溶解性、吸収性、生物学的半減期等を改善する。これ
らの部分はまた分子の毒性を低減させ、分子の望ましく
ない副作用等を消去または減衰させる。そのような作用
を緩和させ得る部分は”　Ｒｅｍｉｇｔｏｎ’　ｓ　Ｐ
ｈａｒｍｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ　（１９８
０）”に記載されている。゛′毒素誘導”分子は“化学
誘導体″の特別のクラスを構成している。゛′毒素誘導
”分子は毒素部分を有する分子（ＩＣＡＭ−１または抗
体のような）である。そのような分子の細胞への結合は
細胞の極く近くに毒素部分を運びそれによって細胞死を
促進する。任意の適当な毒素部分を使用できるが、例え
ば、リシン毒素、ジフテリア毒素、ラジオアイソトープ
毒素、膜−チャンネル形成性毒素等の毒素を用いること
が好ましい。そのような部分を分子に結合させる方法は
当該技術において周知である。
ＩＣＡＭ−１または分子のＬＦＡ−１群の１員のような
抗原性分子はリンパ球表面に天然に発現している。即ち
、そのような細胞の適当な動物への腹腔内注射等による
ような導入はＩＣＡＭ−１または分子のＬＦＡ−１群の
１員に結合し得る抗体の産生をもたらすであろう。場合
によっては、そのような動物の血゛清を取り出しこれら
分子に結合し得るポリクローナル抗体の原料として使用
することもできる。しかしながら、好ましいのはそのよ
うな動物からひ魔球（ｓｐｌｅｎｏ　ｃｙｔｅｓ）を取
り出し、かかるひ臓細胞をミエローマ細胞系と融合させ
、得られた融合細胞からＩ　ＣＡＭ−１または分子のＬ
ＦＡ−１群の各−員に結合し得るモノクローナル抗体を
産生ずるハイブリドーマ細胞を確立することである。
上記の方法で得たハイブリドーマ細胞はＩＣＡＭ−１ま
たは分子のＬＦＡ−１群のメンバーのいずれかに結合し
得る抗体を産生ずる所望のハイブリドーマ細胞を同定す
る種々の方法によってスクリーニングできる。１つの好
ましいスクリーニングアッセイにおいては、そのような
分子はそのニブスティン−バールウィルス形質転換細胞
の凝集を抑制する能力によって同定される。そのような
凝集を抑制し得る抗体をざらにスクリーニングしてこれ
ら抗体がそのような凝集をＩ　ＣＡＭ−１または分子の
ＬＦＡ−１群の各−員への結合によって抑制したかどう
かを決定する。Ｉ　ＣＡＭ−１を分子のＬＦＡ−１群か
ら区別できる任意の手段をそのようなスクリーニングに
用いることができる。
例えば、抗体と結合した抗原は免疫沈降およびポリアク
リルアミドゲル電気泳動によるようにして分析できる。
結合抗原がＬＦＡ−１群の１員である場合には、免疫沈
降した抗原がダイマーとして見い出されるであろうし、
一方、結合抗原がＩＣＡＭ−１である場合には、単一分
子量種が免疫沈降して来るであろう。また、分子のＬＦ
Ａ−１群の１員に結合する抗体をＩ　ＣＡＭ−１に結合
する抗体からＬＦＡ−１を発現するがＩ　ＣＡＭ−１は
発現しない顆粒球のような細胞に結合する抗体の能力を
スクリーニングすることによっても区別できる。顆粒球
に結合する抗体（細胞凝集を抑制することが知られてい
る）の能力はその抗体がＬＦＡ−１に結合し得ることを
示す。そのような結合のない場合はＩ　ＣＡＭ−１を認
識し得る抗体を示し得る。顆粒球のような細胞に結合す
る抗体の能力は通常の熟練者により普通に用いられる方
法によっても検出し得る。そのような方法にはイムノア
ッセイ、細胞凝集、フィルター結合試験、抗体沈降等が
ある。
本発明の抗凝集抗体はまたそのＩ　ＣＡＭ−１を発現す
る細胞（活性化内皮細胞のような）に特異的に結合する
能力およびそのＩ　ＣＡＭ−１を発現しない細胞に結合
し得ない能力を測定することによっても同定し得る。当
業者によって容易に理解されるように、上記の各アッセ
イは修正して即ち、異なる順序で行って種々の可能性あ
るスクリーニングアッセイを提供でき、これらアッセイ
の各々はＩ　ＯＡ、ｔｖｌ−１に結合し得る抗体と分子
のＬＦＡ−１群の各１員との間で同定および区別化を行
い得るものである。
本発明の抗炎症剤は、天然方法（例えば、動物、植物、
真菌、バクテリア等をＩ　ＣＡＭ−１の非免疫グロブリ
ン　アンタゴニストを産生ずるよう誘導することによっ
であるいは動物をＩ　ＣＡＭ−１に結合し得るポリクロ
ーナル抗体を産生ずるよう誘導することによるような）
により、合成方法〔例えば、ポリペプチド合成用のメリ
フィールド法を用いてＩ　ＣＡＭ−１、Ｉ　ＣＡＭ−１
の官能性誘導体またはＩ　ＣＡＭ−１のたん白質アンタ
ゴニスト（免疫グロブリンまたは非免疫グロブリンのい
ずれか）を合成することによるような〕により、ハイブ
リドーマ技術（例えば、Ｉ　ＣＡＭ−１に結合し得るモ
ノクローナル抗体を産生させるような）により、または
組換え技術〔例えば、本発明の抗炎症剤を種々の宿主（
例えば、酵母、バクテリア、真菌、培養動物細胞等）中
で、あるいは組換えベクターまたはウィルスベクターか
ら産生させるような〕により得ることができる。用いる
方法の選択は便宜さ、所望の収率等のファクターによる
。
上記の方法、手法または技術の１つのみを用いて特定の
抗炎症剤を産生させる必要はなく、上記の方法、手法お
よび技術は組合せて特定の抗炎症剤を得てもよい。
１、　　ＬＦＡ−１依存凝集のアッセイ多くのエプスタ
イン−バールウィルス形質転換細胞は凝集を示す。この
凝集はホルボールエステルの存在下で促進できる。その
ような同型（ｈｏｍｏｔｙｐｉｃ）の凝集（即ち、１種
のみの細胞種を含む凝集）は抗ＬＦＡ−１抗体によって
ブロックされることが見い出された〔“Ｒｏｔｈｌｅｉ
ｎ。
Ｒｏ等、Ｌ上す旦しμ狙ユ１６３：１１３２−１１４９
（１９８６）　　”、該文献は参考として本明細書に引
用する〕。即ち、ＬＦＡ−１依存性績合の度合は自発性
またはホルボールエステル依存性凝集形成の度合を評価
することによって決定できる。
ＬＦＡ−１依存性凝集を干渉する試剤は該試剤がエプス
タイン−バールウィルス形質転換細胞の自発またはホル
ボールエステル依存のいずれの凝集を抑制するかどうか
を測定し得るアッセイを用いることによって同定できる
。殆んどのエプスタイン−バールウィルス形質転換細胞
はこれら細胞がＬＦＡ−ルセブター分子を発現し得る限
りそのようなアッセイに用い得る。
そのような細胞は“Ｓｐｒｉｎｇｅｒ、　Ｔ、へ１等、
Ｊ、Ｅｘ−ｅｒ、Ｍｅｄ、　１６０　：　１９０１　　
Ｌ　９１８　（１９８４）　”の方法によって調製でき
る。該文献は参考として本明細書に引用する。任意のそ
のような細胞を本発明のＬＦＡ−１依存性績合アッセイ
において使用できるけれども、好ましいのはＪＹ細胞系
の細胞を使用することであるＣＴｅｒｈｏｓｔ、Ｃ。
Ｔ１等、　Ｐｒｏｃ、Ｎａ口、八ｃａｄ、　　Ｓｃｉ、
［ＩＳＡ、７　３　　：　　９　１　０（１９７６））
。これらの細胞は任意の適当な培養培地で培養できるが
、最も好ましいのは１０％ウシ胎児血清および５０μｇ
　７ｍ　ｌのゲンタマイシン（ギブコラボラトリース社
、ニューヨーク）を加えたＲＭＰ１１６４０培地中で細
胞を培養することである。これらの細胞は動物細胞増殖
に適する条件（即ち、一般に３７℃の温度で、５％ＣＯ
２の雰囲気中で、９５％の相対湿度にてなど）下で培養
すべきである。
２、　　ＩＣＡＭ−１へのＬＦＡ−１の結合リンパ球が
ＬＦＡ−ルセプター分子の群を欠を員するヒト個人は同
定されている（Ａｎｄｅｒｓｏｎ　。
Ｄ、Ｃ，等、Ｆｅｄ、Ｐｒｏｃ、　　４４　：　２６７
１−２６７７（１９８５）　　；　Ａｎｄｅｒｓｏｎ、
　Ｄ、Ｃ，等、Ｊ、　Ｉｎｆｅｃｔ。
Ｄｉｓ、１５２：６６８　　６８９　　（１９８５））
　　。
そのような人は白血球粘着欠損症（ＬＡＤ）をこうむる
と云われている。そのような人のＥＢ■形質転換細胞は
上述の凝集アッセイにおいて自発またはホルボールエス
テル存在下のいずれにおいても凝集しない。そのような
細胞をＬＦＡ−１発現性細胞と混合したときは、凝集が
観察される（Ｒｏｔｈｌｅｉｎ、　Ｒ，等、Ｊ、Ｅｘ　
ｅｒ、Ｍｅｄ。
１６３：１１３２−１１４９　（１９８６））（第１図
）。重要なことは、これら凝集はこれらの細胞を抗ＬＦ
Ａ−１抗体の存在下でインキュベートした場合には形成
されなかったことである。即ち、凝集はＬＦＡ−１を必
要としたが、ＬＦＡ−１欠損細胞のＬＦＡ−１含有細胞
による凝集形成能力はＬＦＡ−１結合パートナーはＬＦ
Ａ−１ではなくむしろ従来未発見の細胞間粘着分子であ
ったことを示唆していた。第１図は細胞間粘着のメカニ
ズムを示す。
Ｂ、細胞間粘着＼　−１（ＩＣＡＭ−１）新規な細胞間
粘着分子Ｉ　ＣＡＭ−１はｌ１ｏｔｈｌｅｉｎ。
Ｒｏ等の手順（Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１３７　：　１
２７０−１２７４　（１９８６）　、該文献は参考とし
て本明細書に引用する〕によって最初同定され部分的に
特徴付された。Ｉ　ＣＡＭ−１分子を検出するために、
モノクローナル抗体をＬＦＡ−１発現が遺伝的に欠損し
ているヒトの細胞で免疫したマウスのひ臓細胞から調製
した。得られた抗体をそのＬＦＡ−１発現細胞の凝集を
抑制する能力についてスクリーニングしたく第２図）。
詳しくは、マウスをＬＦＡ−１抗原を発現しないＬＡＤ
患者からのＥＢＶ形質転換Ｂ細胞で免疫した。これら動
物からのひ臓細胞を取り出し、ミエローマ細胞と融合さ
せてモノクローナル抗体産生性ハイブリドーマ細胞にな
るようにした。次に、ＬＦＡ−１を発現する正常人から
のＥＢＶ形質転換Ｂ細胞を上記ハイブリドーマ細胞のモ
ノクローナル抗体の存在下でインキュベートしてＥＢＶ
形質転換Ｂ細胞のホルボールエステル媒介、ＬＦＡ−１
依存、自発性凝集を抑制し得る任意のモノクローナル抗
体を同定した。ハイブリドーマ細胞はＬＦＡ−１抗原を
全く含まない細胞から誘導したので、ＬＦＡ−１に対す
るモノクローナル抗体は産生されなかった。
従って、凝集を抑制することが判った抗体はいずれも、
ＬＦＡ−１ではないけれどもＬＦＡ−１粘着過程にかか
わっていた抗原に結合し得るものでなければならない。
そのようなモノクローナル抗体を取得する方法はいずれ
も使用できるけれども、好ましいのはＢＡＬＢ／Ｃマウ
スをＲｏｔｈｌｅｉｎ、　Ｒ。
等Ｕ、Ｉｍｍｕｎｏ１．１３７　：　１２７０−１２７
４（１９８６））により開示された経路およびスケジュ
ールを用いてＬＦＡ−１欠損者からのエプスタイン−パ
ールウィルス形質転換末梢血単核細胞でもって免疫する
ことによってＩ　ＣＡＭ−１結合性モノクローナル抗体
を得ることである。そのような細胞はＳｐｒｉｎｇｅｒ
、　Ｔ、Ａ、等により開示されている（Ｊ、Ｅｘ　ｅｒ
、Ｍｅｄ、　１６０　：　１９０１　１９１８（１９８
４））。
Ｉ　ＣＡＭ−１に結合し得る抗体の産生および検出のた
めの好ましい方法においては、マウスはＩＣＡＭ−１お
よびＬＦＡ、−１の両方を発現するＥＢＶ形質転換Ｂ細
胞によりあるいはより好ましくはＩＣＡＭ−１を発現す
るがＬＦＡ−１を発現しないＴＮＦ活性化内皮細胞によ
り免疫する。抗ＩＣＡＭ−１抗体を産生ずるハイブリド
ーマ細胞を調製する最も好ましい方法においては、Ｂａ
ｎｂ／ＣマウスをＪＹ細胞および特異化Ｕ９３７細胞（
ＡＴＣＣＣＲＬ−１５９３）により順次免疫する。その
ような動物からのひ臓細胞を取り出しミエローマ細胞と
融合させ抗体産生性ハイブリドーマ細胞に発展させる。
得られた抗体をそのＬＦＡ−１およびＩＣＡＭ−１の両
方を発現するＪＹ細胞のようなＥＢＶ形質転換細胞系の
ＬＦＡ−１依存、ホルボールエステル誘起凝集を抑制す
る能力についてスクリーニングする。Ｒｏｔｈｌｅｉｎ
、　Ｒ，等（Ｊ。
Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１３７　：　１２７０−１２７４　
（１９８７）　）により開示されているように、そのよ
うな凝集を抑制し得る抗体をＳ　Ｋ　Ｗ３［Ｄｕｓｔｉ
ｎ、　！Ａ、等、Ｊ。
ホルボールエステルの存在下で自発的に凝集するその能
力はＬＦＡ−１に結合し得る抗体によっては抑制される
が抗Ｉ　ＣＡＭ−１抗体によっては抑制されない〕のよ
うな細胞系のホルボールエステル誘起凝集を抑制する能
力について試験する。ＪＹ細胞のような細胞のホルボー
ルエステル誘起凝。
集を抑制し得るがＳ　Ｋ　Ｗ　ｚのような細胞のホルボ
ールエステル誘起凝集を抑制し得ない抗体は恐らく抗Ｉ
　ＣＡＭ−１抗体である。また、Ｉ　ＣＡＭ−１に結合
し得る抗体は、ＬＦＡ発現性細胞（ＪＹ細胞のような）
のＬＦＡ−１依存性凝集を抑制し得るがＬＦＡ−１を発
現するカ月ＣＡＭ−１を殆んどまたは全（発現しない細
胞（正常顆粒球のような）に結合し得ない抗体あるいは
Ｉ　ＣＡＭ−１を発現するがＬＦＡ−１を発現しない細
胞（ＴＮＦ活性化内皮細胞のような）に結合し得る抗体
のスクリーニングによっても同定し得る。別の方法はＩ
　ＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１または両方を発現する細胞か
らＪＹ細胞のような細胞のＬＦＡ−１依存性凝集を抑制
する抗体を用い５ＤＳ−ＰＡＧＥにより免疫沈降させる
こ士であり、あるいは等価の方法により抗体により沈降
した分子のいくつかの分子特性を測定する。その特性が
ＩＣＡＭ’−１の特性と同じであるならば、その抗体は
抗ＩＣＡＭ−１抗体であるとみなし得る。
上述の方法で調製したモノクローナル抗体を用いて、Ｉ
ＣＡＭ−１細胞表面分子を精製し特性付した。ＩＣＡＭ
−１はヒト細胞または組織からモノクローナル抗体アフ
ィニティークロマトグラフィーを用いて精製した。その
ような方法においては、ＩＣＡＭ−１と反応性のモノク
ローナル抗体を不活性カラムマトリックスに結合させる
。そのような結合を行う任意の方法を使用できるが、好
ましいのは”Ｏｅｔｔｇｅｎ、　Ｈ，Ｃ，等、　Ｊ、Ｂ
ｉｏｌ、Ｃｈｅｍ。
２５９：１２０３４　（１９８４）　　”の方法を用い
ることである。細胞溶解物を上記マ）　ＩＪソックス通
したとき、存在するＩＣＡＭ−１分子はマトリックスに
吸着され保持される。カラムのｐＨまたは　１、イオン
濃度を変えることにより、結合したＩＣＡＭ−１分子は
カラムから溶出し得る。任意の適当なマトリックスを使
用できるけれども、好ましいのはマトリックス材料とし
てセファローズ（ファルマシア）を用いることである。
カラムマトリックスの作製およびそのたん白質精製での
使用は当該技術において周知である。
当業者によって理解された方法において、上述のアッセ
イ法を用いて細胞粘着の速度または程度を減衰しあるい
は抑制し得る化合物を同定することができる。
Ｉ　ＣＡＭ−１は血管内皮細胞、胸腺上皮細胞、ある種
の他の上皮細胞、および繊維芽球のような非造血細胞上
並びにＭｉ織ママクロファージマイトジェン刺激Ｔリン
パ芽球、へん桃腺内の胚中心Ｂ細胞および樹枝状細胞、
リンパ節、およびバイエル板のような造血細胞上に発現
した細胞表面糖たん白質である。Ｉ　ＣＡＭ−１はリン
パ節および反応性増殖を示すへん桃腺内のＴ細胞領域の
血管内皮細胞状に高度に発現される。Ｉ　ＣＡＭ−１は
末梢血リンパ球上に少量発現される。ある骨すい単球細
胞系のホルボールエステル刺激特異化はＩＣＡＭ−１発
現を大きく増大させる。即ち、ＩＣＡＭ−１は炎症部位
に優先的に発現され静止状態の細胞には一般に発現され
ない。皮ふ繊維芽球上のＩ　ＣＡＭ−１発現は１０μ／
ｌｌ１１のレベルのインターロイキン１またはガンアー
インターフェロンによりそれぞれ４時間または１０時間
以上で３倍〜５倍増大する。その誘発はたん白質および
ｍ　ＲＮＡ合成に依存し可逆的である。
Ｉ　ＣＡＭ−１は繊維芽球上での９７ｋｄ、骨すい卓球
細胞系上での１１４ｋｄ、およびＢリンパ芽球細胞ＪＹ
上での９０ｋｃ＋の分子量を有異なる細胞種での分子量
異種抗原性を示す。Ｉ　ＣＡＭ−１生合成は約７３ｋｄ
の細胞間プレカーサーを含むことが判っている。ツニカ
マイシン処理から得られる非−Ｎ−グリコジル化形は分
子量５５ｋａを有する。
ホルボールエステル刺激Ｕ９３７細胞からあるいは繊維
芽球細胞から単離したＩ　ＣＡＭ−１は化学説グリコジ
ル化後同−の主要生成物を与える。
Ｉ　ＣＡＭ−１モノクロ一ナル抗体はフィトヘマグルチ
ニン芽球のＬＦＡ−１欠損細胞系への粘着を干渉する。
繊維芽球のＩ　ＣＡＭ−１に結合したモノクローナル抗
体による前処理（リンパ球は行わない）リンパ球−繊維
芽球粘着を抑制する。リンパ球のＬＦＡ−１に対する抗
体による前処理（繊維芽球は行なわない）もリンパ球−
繊維芽球粘着を抑制することが見い出されている。
従って、Ｉ　ＣＡＭ−１は白血球上のＣＤ１８複合体の
結合性リガンドである。Ｉ　ＣＡＭ−１は■Ｌ−１、ガ
ンマ−インターフェロンおよび腫瘍壊死因子のような炎
症メデイエータ−によりインビトロで繊維芽球および内
皮細胞上にインビボでの炎症領域中へのリンパ球の浸潤
と時間枠的に一致して誘起可能である（Ｄｕｓｔｉｎ、
　Ｍ、Ｌ、等、Ｊ、　Ｉｍｍｕ−ｎｏｌ、　１３７　：
　２４５　２５４、（１９８６）：Ｐｒｏｂｅｒ、　Ｊ
、Ｓ、等、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１３７　：　１８９
３−１８９６、（１９８６））。さらに、Ｉ　ＣＡＭ−
１は血管内皮細胞、脚線上皮細胞、他の上皮細胞０　お
よび繊維芽球のような非造血細胞上にまた組織マクロフ
ァージ、マイトジェン刺激Ｔリンパ芽球、へん桃腺内の
胚中心Ｂ細胞および樹枝状細胞、リンパ節およびバイエ
ル板のような造血細胞上にも発現される　（Ｄｕｓｔｉ
ｎ、　Ｍ、Ｌ、等、Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ。
１３７：２４５−２５４、（１９８６））。ＩＣＡＭ−
１はアレルギー性湿疹、扁平苔瑠、発疹、じんま疹およ
び水庖性疾患のような良性炎症のケラナノサイト上にも
発現される。アレルギー性である患者の皮ふへのハプテ
ンの適用により誘発させたアレルギー外皮ふ反応もケラ
ナノサイト上に多１１（７）　Ｉ　ＣＡＭ−１発現を生
した。これに対して、皮ふ上の有毒パッチはケラナノサ
イト上にＩＣＡＭ−１発現を生じなかったＩ　ＣＡＭ−
１は種々の皮ふ学士の不整からの皮ふ傷害の生検がらの
ケラナノサイト上に存在し、Ｉ　ＣＡＭ−１発現はアレ
ルギーパンチ試験からの傷害において誘発され毒性バッ
チ試験傷害からのケラチノサイトはＩＣＡＭ−１を発現
しない。
Ｉ　ＣＡＭ−１は、従って、リンパ球が付着できる細胞
基質であり、その結果、リンパ球は炎症部位に浸透し得
および／またはこの炎症に貢献する各種のエフェクター
機能を伝達し得る。そのような機能には抗体の産生、ウ
ィルス感染多−ゲット細胞の溶解等がある。本明細書で
使用する“炎症”なる用語は特異的防御系の反応のみを
含むことを意味する。“特異的防御系”なる用語は特異
的抗原の存在と反応する免疫系の成分を称するものとす
る。炎症は、特異的防御系の反応により生じ、媒介され
あるいはそれに伴う場合には、特異的防御系の応答に由
来するものといわれている。特異的防御系の応答に由来
する炎症の例には風疹ウィルス、自己免疫疾患、Ｔ細胞
によって仲介された遅延型過敏症（例えば、Ｍａｎｔａ
ｕｘ試験で“陽性”となる患者におけるような）等があ
る。
Ｃ，ＩＣＡＭ−１゛　云　のクローニング任意の多くの
方法を用いてＩ　ＣＡＭ−１遺伝子をクローニングでき
る。そのような方法の１つはＩ　ＣＡＭ−１遺伝子を含
有する挿入物の存在についてｃＤＮＡ挿入物のシャトル
ベクターライブラＩＪ−（ＩＣＡＭ発現性細胞由来の）
を分析することである。そのような分析は細胞を上記ベ
クターで移入し次いでＩ　ＣＡＭ−１発現についてアッ
セイすることによって実施できる。この遺伝子をクロー
ニングする好ましい方法はＩ　ＣＡＭ−１分子のアミノ
酸配列を決定することが必要である。これを行うには、
Ｉ　ＣＡＭ−またん白質を精製して自動化シークエネー
クーにより分析できる。また、分子は臭化シアンにより
あるいはパパイン、キモトリプシンまたはトリプシンの
ようなプロテアーゼによるようにして分解できる（Ｏ４
ｋｅ、Ｙ、等、ムＢｉｏ１．Ｃｈｅｍ、　２５７　：　
９７５１−９７５８　（１９Ｂ２）　；Ｌｉｕ、Ｃ，等
、ｒｎｔ、Ｊ、Ｐｅ　ｔ、Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｒｅｓ、　
　２１　：　２０９−２１５　　（１９８３））、ｒｃ
ＡＭ−１（７）全アミノ酸配列を決定できるけれども、
好ましいのは分子のペプチドフラグメントの配列を決定
することである。ペプチドが１０ケのアミノ酸より長い
場合、その配列情報は一般にＩ　ＣＡＭ−１の遺伝子の
ような遺伝子をクローニングするのに十分である。
ペプチド中のアミノ酸残基の配列は、普通用いられてい
る３文字表示または１文字表示を用いて本明細書におい
ても表示する。これら３文字および１文字表示の目録は
’Ｂｉｏｃｈｍｉｓｔｅｙ、　Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ。
Ａ、　、　Ｗｏｒｔｈ　Ｐｕｂｌ　１ｓｈｅｒｓ刊、ニ
ューヨーク、（１９７０）”のような教科書において見
い出される。そのような配列を縦に書くときには、アミ
ノ末端基は列の頂部にあるようにし、カルボキシ末端基
は列の底部にあるようにする。同様に、横方向に書くと
きには、アミノ末端は左にあるようにし、カルボキシ末
端は右末端にあるようにする。ペプチド中のアミノ酸残
基はハイホンによって分離できる。そのようなハイホン
は単に配列の存在を容易にすることを意図しているだけ
である。単なる例示としては、 −Ｇｆ！、ｙ−Δｎａ−３ｅ　ｒ−Ｐｈｅ　−と表示し
たアミノ酸配列はＡβａ残基がＧｌ、Ｙのカルボキシ基
に結合していることおよびＳｅｒ残基がＡβａ残基のカ
ルボキシ基およびＰｈｅ残基のアミノ基に結合している
ことを示している。この表示はさらにアミノ酸配列がテ
トラペプチドＧβｙ−Ａβａ−ｓｅｒ−Ｐｈｅ−を含有
していることも示している。この表示はアミノ酸配列を
この１つのテトラペプチドに限定するものではないが、
（１）アミノまたはカルボキシに結合した１種以上のア
ミノ酸残基を有するテトラペプチド、（２）アミノおよ
びカルボキシ末端の両方に結合した１種以上のアミノ酸
残基を有するテトラペプチド、（３）追加のアミノ酸残
基を有していないテトラペプチドを包含するものとする
。
１種以上の適当なペプチドフラグメントがシーケンシン
グされると、これらをコードし得るＤＮＡ配列を検査す
る。遺伝子コードは縮重するので、１種以上のコドンを
用いて特定のアミノ酸をコードできる［Ｗａｔｓｏｎ、
Ｊ’、Ｄ、、Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏ　　ｏｆ
ｔｈｅ　Ｇｅｎｅ、第３版、Ｗ、＾、Ｂｅｎｊａｍｉｎ
社、カルホルニア　メンローパーク、（１９７７）　、
ｐｐ３５６−３５７〕。ペプチドフラグメントを分析し
て最低度の縮重性を有するオリゴヌクレオチドによって
コードされ得るアミノ酸配列を同定する。これは好まし
くは単一コドンのみによってコードされているアミノ酸
を含有する配列を同定することによって行う。場合によ
っては、そのようなアミノ酸配列は単一オリゴヌクレオ
チドのみによってコードされ得るので、多くの場合、そ
のアミノ酸配列は任意の１セント（組）の同様なオリゴ
ヌクレオチドによってコードされ得る。重要なのは、上
記セットのすべてのメンバーがそのペプチドフラグメン
トをコードし得るオリゴヌクレオチドを含有し、かくし
てそのペプチドフラグメントをコードする遺伝子として
同じヌクレオチド配列を潜在的に含むのに対し、上記の
セットの１メンバーのみはこの遺伝子のヌクレオチド配
列と同一のヌクレオチド配列を含むことである。このメ
ンバーは上記のセット内に存在し、上記セントの他のメ
ンバーの存在においてさえもＤＮＡにハイブリッドし得
るので、単一オリゴヌクレオチドを用いて上記ペプチド
をコードする遺伝子をクローニングするのと同じ方法で
分解していないオリゴヌクレオチドセントを用いること
ができる。
上述の方法と正確に同じ方法において、ペプチドフラグ
メントをコードし得るオリゴヌクレオチド配列または配
列セントに相補的であるヌクレオチド配列を有するオリ
ゴヌクレオチド（またはオリゴヌクレオチドのセット）
を用い得る。
Ｉ　ＣＡＭ−１遺伝子のフラグメントをコードし得る適
当なオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドのセ
ット（またはそのようなオリゴヌクレオチドまたはオリ
ゴヌクレオチドに相補性であるもの）を同定しく上述の
手順を用いて）、ＤＮＡについて当該技術で周知の手段
を用いて、好ましくはＩ　ＣＡＭ−１遺伝子配列を発現
し得るヒト細胞由来のｃ　Ｄ　Ｎ　Ａ　１１製物により
合成しハイブリッド化する。核酸ハイブリッド化技術は
Ｍａｎｉａｔｉｓ。
Ｔ、等、によりＭｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ、
ａ　ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄｓｐ
ｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ（１９８２）　　”にお
いて、またｌｌａｙｍｅｓ、　Ｂ、Ｄ、等により”　Ｎ
ｕｃｌｅｉｃ　ａｃｉｄｌｌｙｂｒｉｚａｔｉｏｎ、ａ
　Ｐｒａｃｔｉｃａｌ　ａｐｐｒｏａｃｈ、ＩＲＬ　Ｐ
ｒｅｓｓ社、ワシントンＤ、Ｃ，（１９８５）　　”に
おいて開示されており、これら文献は参考として本明細
書に引用する。使用するＤＮＡまたはｃＤＮＡ源は好ま
しくはＩ　ＣＡＭ−１配列に冨む。そのような濃厚化は
Ｉ　ＣＡＭ−１合成を誘起する条件下で培養された細胞
（ホルボールエステルの存在下で増殖させたり９３７等
のような）からＲＮＡを抽出することによって得たｃＤ
ＮＡから最も容易になし得る。
上述した方法のようなあるいは同様な方法はヒト　アル
デヒド　デヒドロゲナーゼの遺伝子［１１ｓｕ、Ｌ、Ｃ
，等、　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ　　　
、ＵＳＡ８　２　　：３７７１−３７７５　（１９８５
））、フィブロネクチン（Ｓｕｚｕｋｉ、　Ｓ、等、Ｅ
ｕｒ、Ｍｏｌ、Ｂｉｏｌ、Ｏｒ　ａｎ、　Ｊ。
↓：２５１９−２５２４　（１９８５））、ヒトエスト
ロゲン　レセプスー遺伝子（Ｗａｉｔｅｒ、　Ｐ、等、
Ｐｒｏｃ、　　Ｎａｔｌ、八ｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ　
　８　２　　：　　７　８　８　９　−７８９３　（１
９８５））、！織型プラスミノーゲン　アクチベータ（
Ｐｅｎｎｉｃａ、　Ｄ、等、Ｎａｔｕｒｅ３０１　：２
１４−２２１　　（１９８３））およびヒト胎盤アルカ
リ　ホスファターゼ相補Ｄ　Ｎ　Ａ　（Ｋａｍ、　Ｗ、
等、ケル（ル１ｂ力狙もＪφよ」企ｔ８２ユニ８７１５
−８７１９　　（１９８５））のクローニングを可能に
している。
Ｉ　ＣＡＭ−１遺伝子をクローニングする別の好ましい
方法においては、発現ベクターのライブラリーをＩ　Ｃ
ＡＭ−１を発現ベクター中に発現できる細胞からＤＮＡ
または好ましくはｃＤＮＡをクローニングすることによ
って調製する。このライブラリーを次いで抗Ｉ　ＣＡＭ
−１抗体に結合しＩＣＡＭ−１またはＩ　ＣＡＭ−１フ
ラグメントと同じアミノ酸配列を有するポリペプチドを
コードし得るヌクレオチド配列を有するたん白質を発現
し得るメンバーについてスクリーニングする。
上記方法により得られたクローニングＩＣＡＭ−１遺伝
子は操作によって発現ベクターに結合させバクテリアま
たは真核生物細胞に組み込んでＩＣＡＭ−またん白質を
産生させる。そのような操作技術はＭａｎｉａｔｉｓ、
Ｔ、等（前出）により開示され、当該技術において周知
である。
Ｄ、ＬＦＡ−１子　集のアッセイの ＬＦＡ−１依存性凝集を測定し得る前述のアッセイを用
いてＬＦＡ−１依存性凝集の度合を抑制するアンタゴニ
ストとして作用する試剤を同定できる。そのようなアン
タゴニストは凝集に関係するＬＦＡ−１またはＩ　ＣＡ
Ｍ−１の能力を付与することによって作用し得る。即ち
、そのような試剤はＬＦＡ−１またはＩ　ＣＡＭ−１に
結合し得る抗体のような免疫グロブリンを包含する。さ
らに、非免疫グロブリン（卯ち、化学）剤も、上記アッ
セイを用いてこれらがＬＦＡ−１凝集のアンタゴニスト
であるかどうかを決定し得る。
１、抗炎症剤 ＣＤｌ８複合体の各１員に対するモノクローナル抗体は
内皮への結合（Ｈａｓｋａｒｄ、　Ｄ、等、ムｒｍｍｕ
ｎｏ１．１３７　＝　２９０１　２９０６　（１９８６
）　）、ホモタイプ粘着（Ｒｏｔｈｌｅｉｎ、　Ｒ，等
、ムハｈ朋虹１６３：１１３２−１１４９　（１９８６
））リンパ球の抗原およびマイトジェン誘起増殖（Ｄａ
ｖｉｇｏｎ、　ｏ、等、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ
、Ｓｃｉ、ＵＳＡ７８　：４５３５−４５３９　（１９
８１））、抗体形成（Ｆｉｓｈｅｒ＋＾０等、Ｊ、Ｉｍ
ｍｕｎｏｌ、　１３６　：　３１９８−３２０３　（１
９８６））、および細胞毒性Ｔ２１８０−２１８２　（
１９８４））、マクロファージ（ｓｔｒａｓｓｍａｎ、
　Ｇ、等、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１３６　：４３２８
−４３３３　（１９８６））、および抗体依存性細胞毒
反応に含まれるすべての細胞（Ｋｏｈｉ、Ｓｌ等、Ｊ、
Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１３３　：　２９７２−２９７８　
（１９８４））の溶解活性のようなすべての白血球のエ
フェクター機能を包含する白血球の多くの粘着依存性機
能を抑制する。これら機能のすべてにおいて、上記抗体
は白血球の適当な細胞基質への粘着能力（ここの能力は
最終結果を抑制する）を抑制する。
前述したように、Ｉ　ＣＡＭ−１分子のＬＦＡ−１群分
子の１員への結合は細胞粘着において極めて重要である
。粘着の過程において、リンパ球は外来抗原の存在につ
いて動物を連続的にモニターし得るものである。これら
の過程は通常は望ましいものであるけれども、これらの
過程はまた臓器移植拒絶、組織移植拒絶、および多くの
自己免疫患者の原因でもある。従って、細胞粘着を減衰
または抑制できる何らかの手段が臓器移植、組織移植ま
たは自己免疫患者の受は入れ者に大いに望まれている。
Ｉ　ＣＡＭ−１に結合し得るモノクローナル抗体は補乳
動吻の抗炎症剤として極めて適している。明らかに、そ
のような薬剤は粘着を選択的に抑制でき通常の薬剤で見
い出し得るネフロ毒性のような他の副作用を示さない点
で一般の抗炎症剤と異なっている。従って、Ｉ　ＣＡＭ
−１に結合し得るモノクローナル抗体を用いて補乳動吻
においてそのような副作用の恐れなしに臓器または組織
の拒絶反応を防止しあるいは自己免疫応答を修正できる
。
重要なことは、Ｉ　ＣＡＭ−１を認識し得るモノクロー
ナル抗体の使用はＨＬＡ不均衡を有する個々人間におい
てさえも臓器移植を行うことができるということである
。
２、゛　　正則゛・　　心のサプレッサーＩ　ＣＡＭ−
１分子は殆んど遅延型過敏反応に含まれる部位のような
炎症部位に発現するので、Ｉ　ＣＡＭ−１分子に結合し
得る抗体（特にモノクローナル抗体）はそのような反応
の減衰または排除において治療的潜在力を有する。この
潜在的治療用途は２つの方法のいずれかで活用できる。
第１は、Ｉ　ＣＡＭ−１に対するモノクローナル抗体を
含有する組成物を遅延型過敏反応を呈する患者に投与で
きる。例えば、そのような組成物は毒キッダ、毒オーク
等の抗原と接触した人に投与できるであろう。第２の態
様においては、Ｉ　ＣＡＭ−１に結合し得るモノクロー
ナル抗体を抗原と共に患者に投与してその後の炎症反応
を防止する。即ち、抗原とＩ　ＣＡＭ−１結合性モノク
ローナル抗体との共投与は人をその後の上記抗原の出現
を一時的に許容し得る。
３、慢性炎症疾患の治療 ＬＦＡ−１を欠損するＬＡＤ患者は炎症応答を示さない
ので、ＬＦＡ−１の天然リガンド、Ｉ　ＣＡＭ−１の拮
抗作用もまた炎症応答を抑制するものと信じている。Ｉ
　ＣＡＭ−１に対する抗体の炎症を抑制する能力は円板
状エリスマトーデス、自己免疫甲状線炎、実験的アレル
ギー外扇をずい炎（ＥＡＥ）　、多発性硬化症、糖尿病
レイナード症候群のある態様、リウマチ様関節炎等の慢
性炎症および自己免疫疾患の治療における治療用途の基
本を与える。一般に、ＩＣＡＭ−１に結合し得るモノク
ローナル抗体はステロイド療法により現在治療可能な疾
患の治療に用い得る。
４、診断および判定的用途 ＩＣＡＭ　　１は殆んど炎症部分に発現するので、Ｉ　
ＣＡＭ−１に結合し得るモノクローナル抗体は患者の感
染および炎症部位を画像化または可視化する手段として
使用できる。そのような用途においては、モノクローナ
ル抗体はラジオアイソトープ、アフィニティラベル（ビ
オチン、アビジン等のような）、螢光ラベル、常磁性原
子等の使用により検出可能に標識化する。
そのような標識化を行う手順は当該技術において周知で
ある。画像診断における抗体の臨床的応用は”　Ｇｒｏ
ｓｓｍａｎ、Ｉｌ、Ｂ、、Ｕｒｏｌ、Ｃｌ１ｎ、Ｎｏｒ
ｔｈ　Ａｍｅｒ。
１３　：　４６５−４７４　（１９８６）”、Ｕｎｇ−
ｅｒ、　Ｅ、　Ｃ，等、Ｉｎｖｅｓｔ、Ｒａｄｉｏｌ、
　２０　：　６９３−７００　（１９８５）”および’
　Ｋｈａｗ、　Ｂ、　Ａ、　等、５ｃｉｅｎｃｅ　　２
０９　：２９５−２９７　　（１９８０）　　”により
検討されている。
炎症の存在はまたＩＣＡＭＩを発現する細胞のＩＣＡＭ
−１遺伝子配列にまたはＩ　ＣＡＭ−１ｍＲＮＡ配列に
結合するｍＲＮＡ、ｃＤＮＡまたはＤＮＡのような結合
性リガンドの使用によっても検出できる。そのようなハ
イブリッド化アッセイを行う技術は！Ｊａｎｉａｔａｉ
ｓ、　Ｔ、　（前出）によって開示されている。
そのような検出可能に標識した抗体の病巣の検出は炎症
または腫瘍発現部位を示し得る。１つの実施態様におい
ては、この炎症検査は組織または血液のサンプルを取り
出しそのようなサンプルを上記検出可能に標識した抗体
の存在下にインキュベートすることによって行う。好ま
しい実施態様においては、この方法を磁性画像診断、フ
ルオログラフィ等を用いて非侵略的方法で行う。そのよ
うな診断試験は臓器移植受け入れ者を潜在的な組織拒絶
の早期発見のためにモニターするのに用い得る。そのよ
うなアッセイはまたリウマチ様関節炎または他の慢性炎
症疾、患に対する個々人の対応を決定するにも実施し得
る。
５、治療または診断目的で投与する抗原物質の導入の補
佐 例えば、ウシインシュリン、インターフェロン、組織型
ブラズミノーゲンアクチベーターまたはマウスモノクロ
ーナル抗体のような治療または診断剤への免疫応答はそ
のような薬剤の治療または診断価値を実質的に減少させ
、実際に、血清病のような疾患を生ずる。そのような事
情は本発明の抗体を用いて改善できる。この実施態様に
おいては、そのような抗体を治療剤または診断剤と組合
せて投与する。抗体の添加は受は入れ者を上記薬剤の認
識から防止し、従って、受は入れ者が薬剤に対する免疫
応答を開始するのを防止する。そのような免疫応答がな
いことは患者の治療剤または診断剤の追加の投与を受は
入れる能力をもたらす。
Ｆ、Ｊ胞１！着ノ’ｒ　　−１（ＩＭＡＣ−１）の（Ｉ
　ＣＡＭ−１はＬＦＡ−１の結合パートナ−である。か
くして、Ｉ　ＣＡＭ−１またはその官能性誘導体は患者
の治療においてＬＦＡ−１に結合し得る抗体と相互変化
的に使用できる。即ち、可溶化形において、そのような
分子は炎症、臓器拒絶、移植拒絶等を抑制するのに用い
得る。Ｉ　ＣＡＭ−１またはその官能性ＨＡ　’ＩＡ体
は抗ＩＣＡＭ抗体と同じ方法で用いて治療剤または診断
剤の免疫原性を減少させ得る。
Ｉ　ＣＡＭ−１、その官能性誘導体、およびそのアンタ
ゴニストを用いて表面上にＩ　ＣＡＭ−１またはＬＦＡ
−１を発現する腫瘍細胞の転移または増殖をブロックし
得る。種々の方法がそのような目的を達成するのに用い
得る。例えば、造血細胞の浸透はＬＦＡ−１−Ｉ　ＣＡ
Ｍ−１結合を必要とする。従って、そのような結合のア
ンタゴニストは上記の浸透を抑制し白血球由来の腫瘍細
胞の転移をブロックする。また、Ｉ　ＣＡＭ−１または
ＬＦＡ−１群分子の１員に結合し得る毒素誘導分子も患
者に投与し得る。そのような毒素誘導分子がＩ　ＣＡＭ
−１またはＬＦＡ−１群分子の１員と結合する場合、毒
素の存在がｌ１（ｆｉ瘍細胞を殺しそれによって腫瘍の
増殖を抑制する。
Ｉ　ＣＡＭ−１依存性粘着はＩ　ＣＡＭ−１またはＬＦ
Ａ−１に結合し得る非免疫グロブリンアンタゴニストに
より抑制し得る。ＬＦＡ−１の非免疫グロブリンアンタ
ゴニストの１つの例はＬＦＡ−１でる。ＬＦＡ−１に結
合する非免疫グロブリンアンタゴニストの例はＩＣＡＭ
−１である。前述のアッセイを使用することによって、
追加の非免疫グロブリンアンタゴニストを同定し精製で
きる。
Ｉ　ＣＡＭ−１依存粘着の非免疫グロブリンアンタゴニ
ストはＬＦＡ−１に対する抗体またはＩＣＡＭ−１に対
する抗体と同じ目的で使用できる。
Ｈ，ＩＪ口の、ハ　の７ Ｉ　ＣＡＭ−１の治療効果は患者に全Ｉ　ＣＡＭ−１ま
たはその任意の治療上活性なペプチドフラグメントを投
与することによって得られる。
Ｉ　ＣＡＭ−１およびその官能性誘導体は組換えＤＮＡ
を用いて合成的にあるいはたん白質分解により取得でき
る。Ｉ　ＣＡＭ−１の治療上の利点は追加のアミノ酸残
基を有してキャリヤーに対する結合性を改善しあるいは
Ｉ　ＣＡＭ−１の活性を改善したＩ　ＣＡＭ−１の官能
性誘導体の使用により増強され得る。本発明の範囲はさ
らにある種のアミノ酸残基を欠損しあるいは別のアミノ
酸残基を含む）　ＣＡＭ−１の官能性誘導体もそのよう
な誘導体が細胞粘着に作用する能力を示す限り包含する
ものとする。
本発明の抗体およびＩ　ＣＡＭ−１分子は、これらを含
有する調製物がこれらの生成物と共に通常天然に見出さ
れる物質を実質的に含まない場合、“天然不純物を実質
的に含まない”といえる。
本発明はＩ　ＣＡＭ−１に結合し得る抗体およびその生
物学的活性を有するフラグメント（ポリクローナルまた
はモノクローナル）にも及ぶ。
患者にＩ　ＣＡＭ−１に結合し得る抗体またはそのフラ
グメントを投与するには、あるいは、ＩＣＡＭ−１（ま
たはそのフラグメント、変異体または誘導体）を患者に
投与するには、その投与量は患者の年令、体重、身長、
性別、−船釣医療条件、病歴等のファクターによる。一
般には、患者に約ＩＰｇ／ｋｇ〜１０　ｍｇ／　ｋｇ　
（患者体重）の範囲の抗体投与量で投与することが望ま
しいが、それより低量または高量の投与量も投与できる
。Ｉ　ＣＡＭ−１分子またはその官能性誘導体を患者に
投与するときは、同じく約Ｉ　Ｐｇ／　ｋｇ　〜１０　
ｍｇ／　ｋｇ　（患者の体重基＊）の範囲の投与量でそ
のような分子を投与することが好ましいが、それより低
量または高量の投与量も使用できる。後述するように、
上記の有効投与量は抗Ｉ　ＣＡｔ−１抗体を抗ＬＡＭ−
１投与と共投与する場合は少なくすることができる。本
発明においては、２種の抗体（またはその官能性誘導体
）はこれらがこれら両化合物を患者血清中に検出できる
ような時間条件で投与される場合において患者に共投与
できると云える。
Ｉ　ＣＡＭ−１に結合し得る抗体及びＩ　ＣＡＭ−１自
体の両者は患者に静注、筋注、皮下、腸内または非経口
的に投与できる。抗体またはＩＣＡＭ−１を注射により
投与するときは、投与は連続注入によりあるいは１回ま
たは多数回ポーラスにより行い得る。
本発明の抗炎症剤は炎症を抑制するのに十分な量で受は
入れ対象体に投与するものである。その量は、薬剤の投
与量、投与経路等が炎症を減衰させあるいは防止するに
十分である場合において炎症を“抑制”するに十分であ
ると云える。
本発明の抗炎症剤は炎症の発症前（予想される炎症を抑
制するために）または炎症発症後のいずれにおいても投
与できる。
組成物はその投与が受は入れ患者に許容される場合に“
薬学上受は入れ可能である”と云える。
そのような薬剤はその投与量が生理学上有意である場合
に“治療上有効な量”で投与されると云える。薬剤はそ
の存在が受は入れ患者の生理に検知可能な変化をもたら
す場合に生理学上有意である。
本発明の抗体およびＩＣＡＭ−１分子は薬学上有用な組
成物を調製する公知の方法によって処方でき、それによ
ってこれらの物質またはその官能性誘導体を薬学上許容
できるキャリヤーベヒクルと混合物として組合せ得る。
適当なベヒクルおよびその調製物（例えば、他のヒトた
ん白質、例えば、ヒト血清アルブミンを含む）は、例え
ば、”Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ′ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ
ｉｃａｌ　５ｃｉｅｎｃｅｓ　　（第１６版、Ｄｓｏｌ
、　Ａ、絹、マーク、イーストン（ＰＡ）、（１９８０
）”に記載されている。有効な投与に適する薬学上許容
し得る組成物を調製するためには、そのような組成物は
適当量のキャリヤーベヒクルと共に有効量の抗ＩＣＡＭ
−１抗体またはＩＣＡＭ分子、またはその官能性誘導体
を含有する。
追加の薬学的方法を用いて活性の持続を制御することが
できる。制御放出性製剤は抗ＩＣＡＭ−１抗体またはＩ
ＣＡＭ−１、またはこれらの官能性誘導体を複合体化し
あるいは吸収するポリマーを使用することによって得る
ことができる。制御された伝達は適当なマクロ分子（例
えば、ポリエステル、ポリアミノ酸、ポリビニルピロリ
ドン、エチレン−酢酸ビニル、メチルセルロース、カル
ボキシメチルセルロース、またはプロタミン硫酸塩）お
よび該マクロ分子の濃度並びに放出を制御するための混
入方法を選択することによって達成できる。制御放出製
剤により活性持続を制御するもう１つの可能性ある方法
は抗Ｉ　ＣＡＭ−１抗体またはＩ　ＣＡＭ−１分子、ま
たはこれらの官能性誘導体をポリエステル、ポリアミノ
酸、ヒドロゲル、ポリラクトン酸またはエチレン−酢酸
ビニルコポリマーのような高分子物質の粒子に混入させ
ることである。また、これら薬剤を高分子粒子に混入さ
せる代りに、これらの薬剤を例えばコアセルベーション
法によりあるいは界面重合法により調製したマイクロカ
プセル例えばヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチ
ンマイクロカプセルおよび（メチルメタクリレート）マ
イクロカプセル中に、あるいはコロイド状薬物伝達系例
えばリポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイク
ロエマルジョン、ナノパーティクル、ナノカプセルマタ
ハマクロエマルジョン中に内包させることも可能である
。そのような方法も“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’　ｓＰｈａ
ｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　５ｃｉｅｎｃｅｓ　（ｌ　９
３　Ｑ）　”中に記載されている。
尖旌炎 これまで本発明を一般的に説明して来たが、以下の実施
例は本発明をより容易に理解できるであろう。これらの
実施例は例示を目的とするものであり本発明を限定する
ものではない。
実施例１ 動物細胞の培養 一般に、本発明のＥＢＶ形質転換およびハイブリドーマ
各細胞は２０ｍＭのし一グルタミン、５０μｇ／ｍｌの
ジエンタマイシン、および１０％のウシ胎児血清を加え
たＲＭＰ　Ｉ　１６４０培地中に保存した。細胞は３７
℃で、５％ＣＯ□、９５％湿度雰囲気下で培養した。
エプタタインーパールウィルス（ＥＢＶ）形！転換体を
確立するために、２０％ウシ胎児血清（Ｆｅ２）および
５０μｇ／ｍｅのジェンタマイシンを加えたＲＰＭ１１
６４０培地中の１０６個のＴ細胞放血末梢単核細胞７川
βを１６時間Ｂ９５−８細胞のＥＢＶ含有上清でインキ
ュベートした（Ｔｈｏｒｌｅｙ−ＬａｗｓｏｎＳＤ、＾
１等、Ｊ、Ｅｘｐｅｒ、Ｍｅｄ。
１４６：４９５　（１９７７））、０．２　ｍＲ中細胞
了りコートを１０マイクロタイターウエルに入れた。培
地をＲＰＭ１１６４０培地（２０％ウシ胎児血清および
５０μｍ／ｌジンタマイシンを加えた）で細胞増殖が見
られるまで置換えた。細胞は殆んどウェルで増殖し同じ
培地中に拡った。フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）芽球
をｌ：８００稀釈Ｐ　ＨＡ　−Ｐ　（Ｄｉｆｃｏ　Ｌａ
ｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社、デトロイト、Ｍｌ）を含有す
るＲＰＭ１１６４０培地（２０％ウシ胎児血清）中１０
６細胞／ｍβで確立した。
ＰＨＡ系はインターロイキン２　（［Ｌ−２）調整培地
で拡がりＰＨＡにより弱く脈動した（（：ａｌｔｒｅｌ
ｌ、Ｄ、Ａ、等、Ｊ、Ｅｘｐｅｒ、Ｍｅｄ、　　１５８
　：１８９５、（１９８３））、上記手順は”　Ｓｐｒ
ｉｎｇｅｒｓＴｌ等、Ｌ」工凹工討唖史エ　１６０　：
　１９０１−１９１８（１９８４）　　″により開示さ
れており、その記載は参考として本明細書に引用する。
上記手順で得た細胞を次いで抗ＬＦＡ−１抗体でスクリ
ーニングしてこれらがＬＦＡ−１抗原を発現するかどう
かを決定した。そのような抗体は”　Ｓａｎｃｈｅｙ−
Ｍａｄｒｉｄ、　Ｆ、等、Ｊ、Ｅｘｐｅｒ、Ｍｅｄ、　
　１５８　：　１７８５（１９８３）　　″に開示され
ている。
実施例２ 細胞凝集および粘着のアッセイ 細胞粘着の度合を評価するために、凝集アッセイを用い
た。かかるアッセイに用いた細胞系は５ｍＭの１ｌｅｐ
ｅｓバツフｙ　　（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａ１社、
セントルイス）を含有するＲＰＭ１１６４０培地で２回
洗浄し２Ｘ１０６細胞／ｍＲの濃度に再懸濁させた。平
底９６ウエルマイクロタイタープレート（１’ｈ　３５
９６　；　Ｃｏａｓｔａｒ社、ケンブリッジ、ＭＡ）に
５０μｌの適当なモノクローナル抗体上清、５０μｌの
精製モノクローナル抗体を含むまたは含まない完全培地
、５０μｌの２００ｎｇ／ｍｌホルボールエステルホル
ボールミリステートアセテ−）　（ＰＭＡ）含有完全培
地および１００μｌの完全培地中２Ｘ１０”細胞７ｍ１
ｆ６度の細胞を加えた。細胞を自然に沈降させ、凝集度
を各時点で計数した。度数は０〜５゛の範囲にあった。
ここで０は密集中に本質的に細胞がないことを示し；１
゛は１０％以下の細胞が凝集物中にあり；２゛は５０％
以下の細胞が凝集していることを示し；３゛は１００％
までの細胞が小さいゆるやかな密集中にあったことを示
し；４′″は１００％までの細胞が大密集中に凝集した
ことを示し；５゛は１００％の細胞が大きい極めて密な
凝集物中にあったことを示す。細胞粘着のより定量的な
評価を得るために、試剤および細胞を上記と同じ順序で
５ｍｌポリスチレンチューブに加えた。チューブを３７
℃でグリシトリ−シェーカー上の台中に置いた。約２０
０ｒｐｍで１時間後に、１０μｌの細胞懸濁液をヘモサ
イトメーター中に入れ遊離細胞の数を定量した。％凝集
を次の等式によって決定した。
上記等式中の入れた細胞の数はインキュベートしていな
い細胞と完全培地のみを含有するコントロールチューブ
中のｍｌ当りの細胞数である。上記等式中の遊離細胞の
数は試験チューブからのｍ１当りの非凝集細胞の数に等
しい。上記の手順は”Ｒｏｔｈｌｅｉｎ＋　Ｒ，等、Ｊ
、Ｅｘ　ｅｒ、Ｍｅｄ、　　１６３　：１１３２−１１
４９　（１９８６）　　”によって開示されている。
実施例３ ＬＦＡ−１依存性凝集 実施例２で記載した定量的凝集アッセイをエプスタイン
−バールウィルス形質転換細胞系ＪＹを用いて行った。
マイクロタイター中の培地にＰＭＡを加えて、細胞凝集
を観察した。時間経過ビデオ記録計はマイクロタイター
ウェル底部のＪＹ細胞が動いており活性な膜波動および
仮定運動を示していた。隣接細胞の仮定間の接触はしば
しば細胞−細胞粘着をもたらした。粘着が持続した場合
、細胞接触領域は尾脚（ｕｒｏｐｏｄ）に移動した。接
触は激しい細胞運動および双対方向への細胞の引っ張り
合いにも依らず維持できた。ＰＭＡ処理および未処理細
胞間の主な違いは１度形成された上記接触の安定性にお
いて現われていた。ＰＭＡにおいては、細胞密集が出現
し、その周りに粘着した追加の細胞として粒度の成長が
あった。
粘着を測定する第２の手段としては、実施例２で記載し
た定量的アッセイを用いた。細胞懸濁液を２時間、２ｏ
ｏｒｐｍで振り、ヘモサイトメーターに移し、凝集物中
に含まれない細胞を計数した。
ＰＭＡの不存在では、４２％（ＳＤ＝２０％、Ｎ−６）
のＪＹ細胞が２時間後、凝集物中にあったが、５０μｇ
／ｍβのＰＨＡと共に同じ条件下でインキュベートした
ＪＹ細胞は凝集物中に８７％（ＳＤ＝８％、Ｎ＝６）の
細胞を有していた。凝集の動力学的検討はＰ　Ｍ　Ａが
すべての試験時間で凝集速度および強度を促進している
ことを示した（第３図）。
実施例４ 抗ＬＦＡ−１モノクローナル抗体を用いての細胞の凝集
抑制 ＰＭＡ誘起細胞凝集への抗ＬＦＡ−１モノクローナル抗
体の効果を試験するために、そのような抗体を実施例２
の定量凝集アッセイに従ってインキュベートした細胞に
加えた。このモノクローナル抗体はＰＭＡの存在または
不存在下のいずれにおいても細胞凝集の形成を抑制して
いることが判った。ＬＦＡ−１のアルファー鎖に対する
モノクローナル抗体のＦ（ａｂ’）ｚおよびＦａｂ　’
フラグメントの２つの細胞凝集を抑制できた。一方、本
質的に１００％の細胞が抗ＬＦＡ−１抗体の不存在下で
は凝集を形成し、抗体を加えたときは２０％以下の細胞
が凝集物中に見い出された。この実験の結果はＲｏｔｈ
ｌｅｉｎ、　Ｒ等により開示された（Ｊ、Ｅｘｐｅｒ、
Ｍｅｄ、　　１６３　：　１１３２　１１４９（１９８
６））。
実施例５ 細胞凝集はＬＦＡ−ルセプターを必要とするＥＢＶ形質
転換リンパ芽球細胞を実施例１で記載した方法により患
者から調製した。この細胞をＬＦＡ−１を認識し得るモ
ノクローナル抗体に対してスクリーニングし、細胞がＬ
ＦＡ−１欠損であることを見い出した。
実施例２で記載した定量凝集アッセイを上記ＬＦＡ−１
欠損細胞を用いて行った。この細胞はＰＭＡの存在にお
いても自発的に凝集しなかった。
実施例６ Ｉ　ＣＡＭ−１の発現 実施例５のＬＦＡ−１欠損細胞をカルボキシフルオレス
セインジアセテートで標識した（Ｐａｔａｒｒｏｙｏ　
、　Ｍ、等、Ｃｅ１１．Ｉｍｍｕｎｏｌ、　　６３　：
　２３７−２４８　（１９８１））。標識細胞を同原ま
たはＪＹ細胞と１：１０の比で混合し凝集物中のフルオ
レスセイン標識細胞の割合を“Ｒｏｔｈｌｅｉｎ　、Ｒ
，等、Ｊ、Ｅｘｐｅｒ、Ｍｅｄ、　　１６３　：　１１
３２　１１４９（１９８６）　　”の方法に従って測定
した。ＬＦＡ−１欠損細胞はＬＦＡ−１発現性細胞と共
凝集し得ることを見い出した（第４図）。
ＬＦＡ−１が凝集形成またはその維持にのみに重要であ
るかどうかを決定するために、ＬＦＡ−１に結合し得る
抗体を上記の前以って形成させた凝集に加えた。抗体の
添加は上記の前以って形成させた凝集を強（分裂させる
ことが判った。時間経過ビデオ記録計は前以って形成さ
せた凝集へのモノクローナル抗体の添加が２時間以内で
分裂を生じ始めることを示した（第１表）。ＬＦＡ−１
に対するモノクローナル抗体の添加後、凝集中の個々の
細胞の従兄運動および形状変化は変らないまま続いた。
個々の細胞は凝集物の周囲から次第に解離し、８時間ま
でに細胞は殆んど分散した。
ビデオ時間経過によれば、ＬＦＡ−１モノクロ一ナル抗
体による前以って形成させた凝集の分裂は時間を逆のぼ
って行ったＬＦＡ−１モノクロ一ナル抗体の不存在下で
の凝集過程と等価であった。
第　　１　　表 抗ＬＦＡ−１モノクローナル抗体の前以って形成させた
ＰＭＡ誘起ＪＹ細胞凝集物の分裂８ｈ １　　　　４”　　　　　　　４’　　　　ｌ＋ｂ２　
　　３′″　　　　　　４４　　１′″０３　　　５゛
　　　　　　５・　　　１・ｄ定量マイクロタイタープ
レート中の凝集を観察的に計数した。アッセイ時間全体
を通じて存在した抗ＬＦＡ−１においては、凝集は１°
以下であった。
１モノクロ一ナル抗体添加２時間直前の凝集量ｂＴＳ　
１／１８　＋ＴＳ　１／２２ ’ＴＳＩ／１８ ｄＴＳＩ／２２ 実施例７ ＬＦＡ−１依存性凝集における２価イオンの必要性 細胞毒性Ｔ細胞とターゲット間のＬＦＡ−１依存性粘着
はマグネシウムの存在を必要とする（Ｍａｒｔｚ　、　
Ｅ、、Ｊ、Ｃｅ１１．Ｂｏｌｌ、　　８４　：　５８４
．５９８　（１９８０））。ＰＭＡ誘起ＪＹ細胞凝集を
２価カチオン依存性について試験した。ＪＹ細胞はカル
シウムまたはマグネシウムイオンを含まない培地中では
凝集しなかった（実施例２のアッセイを用いて）。２価
マグネシウムの添加は０．３ｍＭ程の低い濃度で６集を
行った。カルシウムイオン単独の添加は殆んど効果がな
かった。しがしながら、カルシウムイオンはマグネシウ
ムイオンのＰＭＡ誘起凝集を補佐する能力を増強するこ
とが判った。１．２５ｍＭのカルシウムイオンを培地に
加えたときは、０．０２ｍＭ程の低いマグネシウムイオ
ン濃度で凝集を補佐することが判った。これらのデータ
は細胞のＬＦＡ−１依存性凝集がマグネシウムイオンを
必要とすること、およびカルシウムイオンがそれ自体は
不十分であるけれどもマグネシウムイオンと共に凝集を
増大させることを示している。
実施例８ 抗Ｉ　ＣＡＭ−１モノクロ一ナル抗体を発現し得るハイ
ブリドーマ細胞の単離 Ｉ　ＣＡＭ−１に結合し得るモノクローナル抗体をＲｏ
ｔｈｌｅｉｎ　、Ｒ，等、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、　　１
３７　：　１２７０−１２７４　（１９８６）　　″の
方法に従って単離した。該文献は参考として本明細書に
引用する。即ち、３匹のＢＡＬＢ／ＣマウスをＬＦＡ−
１欠損患者からのＥＢＶ形質転換末梢血単核細胞で腹腔
内免疫した（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ　、　Ｔ、Ａ、　　等、
Ｊ、巳ｘｐｅｒ、　Ｍｅｄ。
１６０　：１９０１　　（１９８４））。１　ｍβＲＰ
ＭＬ１６４０培地中約１０７個の培地中容１０７個いた
。免疫はひ腫細胞をマウスから取り出す前の４５日、２
９日および４日で行い所望のハイブリドーマ細胞系を産
生させた。ひ腫細胞の取り出し前３日に、マウスに追加
の０．１５ｍβ培地中１０７細胞を投与した（静注）。
上記の動物からの単離ひ腫細胞をＰ３Ｘ７３Ａｇ８、６
５３　ミエローマ細胞と４：１の比率で”Ｇａ１ｆｒｅ
　、　Ｇｏ等、Ｎａｔｕｒｅ　　２６６　：　５５０（
１９７７）”のプロトコールに従って融合させた。得ら
れたハイブリドーマ細胞の各アリコートを９６ウエルマ
イクロクイタープレートに入れた。
各ハイブリドーマ上清を凝集についてスクリーニングし
、１つの抑制ハイブリドーマ（１００以上のウェル試験
のうちから）をクローニングし限定稀釈によりサブクロ
ーニングした。このサブクローンはＲＰＩ／１．１．１
．と表示した（以後゛ＲＰＩ／１′″と表示する）。
モノクローナル抗体ＲＰＩ／１はＬＦＡ−１発現性細胞
系ＪＹのＰＭＡ刺激凝集を一貫して抑制することを見い
出した。ＲＲ１／１モノクロ一ナル抗体はいくつかのＬ
ＦＡ−１αまたはβサブユニットに対するモノクローナ
ル抗体よりも等価かわずかに小さく凝集を抑制した。こ
れに対し、コントロールのＨＬ　Ａに対するモノクロー
ナル抗体（これはＪＹ細胞上に多量に発現する）は凝集
を抑制しなかった。モノクローナル抗体ＲＰＩ／１と結
合した抗原は細胞間粘着分子−１（ＩＣＡＭ−１）と定
義する。
実施例９ Ｉ　ＣＡＭ−１を特性化するための抗ＩＣＡＭ−１モノ
クローナル抗体の使用 Ｉ　ＣＡＭ−１の性質を限定するために、特にＩ　ＣＡ
Ｍ−１がＬＦＡ−１と異なるかどうかを決定するために
、細胞たん白質をモノクローナル抗体ＲＰＩ／１を用い
て免疫沈降させた。免疫沈降はＲｏｔｈｌｅｉｎ　Ｒ，
等の方法に従って行った（１９８６））、ＪＹ細胞を新
たに１ｍＭフェニルメチルスルホニルフルオライド、０
．２−１位／ｍｌｌのトリプシンインヒビターアプロチ
ニンを加えた１％トリトンＸ−１００，０，１４ｍのＮ
ａＣ１，１０ｍＭのトリス、ｐＨ８，０（溶解バッファ
ー）中で５Ｘ１０’細胞／ｍβで２０分間、４℃で溶解
させた。溶解物を１０，０ＯＯｘ　ｇで１０分間遠心し
ＣＮＢ　ｒ活性化グリシン抑制セファローズＣｌ−４Ｂ
の５０％懸濁液５０ｍ１で１時間、４℃で前処理した。
１ｍ７！の溶解物をセファローズＣ７！−４Ｂに結合さ
せたモノクローナル抗体（１ｍｇ／ｍＡ）の５０％懸濁
液の２０μｌで４℃で一夜免疫沈降させた（Ｓｐｒｉｎ
ｇｅｒ　、Ｔ、Ａ、等、Ｊ　、　Ｅｘｐｅｒ　、　Ｍｅ
ｄ。
１６０：１９０１　　（１９８４））。セファローズ結
合モノクローナル抗体は“Ｍａｒｃｈ　、Ｓ、等、の方
法ニ従って炭酸塩バッファー中のセファローズＣβ−４
ＢのＣＮＢ　ｒ活性化法を用いて調製した〔八ｎａ１．
Ｂｉｏｃｈｅｍ、　　　　６０：１４９　　（１９７４
））　　。
洗浄した免疫沈降物を５ＤＳ−ＰＡＧＥおよび銀染色に
“Ｍｏｒｒｉｓｓｅｙ　＋Ｊ、Ｈ，Ａｎａ１．Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ、　１１７　：３０７　　（１９８１）　　”の
手順に従って供した。
ＳＤＳサンプルバッファーＣＨＤ、門、に０等、ＪユＢ
ｉｏ１．Ｃｈｅｍ、　　２５８　：　６３６　（１９８
３）　）による１００°Ｃでのたん白質？容出後、各サ
ンプルを半分に分けて還元（第５Ａ図）または非還元（
第５Ｂ図）の各条件下で電気泳動（Ｓ　Ｄ　Ｓ　−８％
ＰＡＧＥ）に供した。分子（ｆ１５０ｋｄおよび２５ｋ
ｄを有するバンドはモノクローナル抗体セファローズか
らの免疫グロブリンの長鎖およず短鎖に相当した（第５
Ａ図、レーン３）。２５〜５０ｋｄ分子量範囲の可変量
の他のバンドも観察したが、ヘアリー白血病細胞からの
沈降物中では見られず、この白血病細胞は９０ｋｄ分子
量バンドのみを与えた。ＬＦＡ−１の１７７ｋｄαサブ
ユニツトおよび９５ｋｄβサブユニツトは還元（第５Ａ
図、レーン２）および非還元（第５Ｂ図、レーン２）の
両条件下でＩＣＡＭ　−１とは異なって浸透した。
ＰＨＡ−リンパ芽球凝集に対してのモノクローナル抗体
ＲＰ　１／１の効果を測定するために、実施例２で記載
した定量凝集アッセイを用いた。即ち、Ｔ細胞芽球細胞
をＰＨＡで４日間刺激し、十分に洗浄し、次いでＩＬ−
２状態調節培地の存在下に６日間培養した。ＰＨＡはこ
の６日間培養で取り込まれ凝集アッセイに寄与しなかっ
た。異なるＴ細胞芽球調製物による３種のアッセイにお
いて、Ｉ　ＣＡＭ−１モノクロ一ナル抗体は一貫して凝
集を抑制した（第２表）。
第２表 ＲＲ１／１モノクロ一ナル抗体１によるＰＭＡＩ’　　
一対照　　　　　　　　９ ＋　　Ｎ　　　　　　　　　５１　　　　０＋　　ＩＩ
ＬＡ−Ａ、Ｂ　　　　　　５８　　−１４’＋　　ＬＦ
Ａ−１アルフア　　３１　　　３９十　　ＩＣＡＭ−１
３１３９ ２＠　一対照　　　　　　　１０ ＋／／　　　　　　　　　７８　　　　０十ＬＦＡ−１
ベータ　　　１７　　７８＋　　　　ＩＣＡＭ−１５０
３６ ３ｆ　−−・−−−−−７ ＋　対照　　　　　　　７０ ＋　　ＨＬＡ−Ａ、Ｂ　　　　　　　８０　　−１４十
　　ＬＦＡ−３８３−１９ ＋　　ＬＦＡ−１アルファ　　　　２　　　９７＋　　
ＬＦＡ−１ベータ　　　　３　　９６−１−　　ＩＣＡ
Ｍ−１３４５１ ”　　５０ｎｇ／ｍ１のＰＨＡで刺激したＰＨＡ誘起リ
ンパ球の凝集は実施例２に記載したようにして非凝集細
胞の数を顕微鏡により計数することによって間接的に定
量した。
ｂ　ＰＭＡおよびＸ６３モノクロ一ナル抗体で処理した
細胞に対する％抑制 Ｃ凝集はモノクローナル抗体およびＰＭＡの刺激的添加
後１時間で測定した。
４　負の数は凝集の％促進を示す。
ａ　凝集はモノクローナル抗体およびＰＭＡの刺激的添
加後１時間で測定した。細胞は２００ＸＧで１分間でベ
レット化し、３７℃で１５分間インキュベートし、ゆる
やかに再懸濁し、１１００ｒｐで４５分間振とうした。
′　細胞はＰＨＡで３７℃、４時間前処理した。
モノクローナル抗体添加後、各チューブを３７°Ｃで２
０分間静置インキュベートし、７５ｒｐｍで１００分間
振とうさせた。
ＬＦＡ−１モノクロ一ナル抗体はＩ　ＣＡＭ−１モノク
ロ一ナル抗体より−も一貫して抑制的であり、一方ＨＬ
Ａ−Ａ、ＢおよびＬＦＡ−３モノクロ一ナル抗体は効果
なしであった。これらの結果は試験したモノクローナル
抗体のうち、ＬＦＡ−１またはＩ　ＣＡＭ−１に結合し
得るモノクローナル抗体のみが細胞粘着を抑制し得るこ
とを示している。
実施例１０ Ｉ　ＣＡＭ−１に対するモノクローナル抗体の調製 Ｂａ１ｂ／ｃマウスをＲＰＭＩ培地中の２Ｘ１０’ＪＹ
細胞０．５ｍｌで融合前の１０３日および２４日で腹腔
内（ｉ、ｐ、）免疫した。融合前４日および３日に、マ
ウスを０．５ｍ６のＲＰＭＩ培地中のＰＭＡ分化Ｕ９３
７細胞でｉ、ｐ、免疫した。
Ｕ９３７細胞の分化 Ｕ９３７細胞（ＡＴＣＣＣＲＬ−１５９３）を１０％の
ウシ胎児血清、１％グルタミンおよび５０＋＋／！の２
ｎｇ／ｎ／！ホルボールー１２−ミリステートアセテー
ト（ＰＭＡ）含有ジエタマイシン（完全培地）を含むＲ
ＰＭＩ中５ｘ　ｔ　Ｑｓ　／　ｍｌ！で滅菌ポリプロピ
レン容器中でインキュベートすることによって分化した
。このインキ１ベーシヨンの第３日で、１／２容量の培
地を除去し新しいＰＭＨ含有完全培地で置き換えた。４
日目で、細胞を取り出し、洗浄して免疫用に調製した。
軽 免疫マウスからのひ臓細胞をＧａ　Ｉ　ｆ　ｒｅ等に従
ってＰ３Ｘ６３　＾ｇ８．６５３ミエローマ細胞と４：
１の比で融合させた（Ｎａｔｕｒｅ　　２６６　：　５
５０（１９７７））。融合後、細胞を９６ウエル平底マ
イクロタイタープレートに１０５ひ臓細胞／ウェルで入
れた。
抗ＩＣＡＭ−１”性細胞の択 １週間後、５０μｉの上清を凝集用細胞系としてＪＹお
よび５ＫＷ−３の両方を用いて実施例２の定量凝集アッ
セイでスクリーニングした。ＪＹ細胞凝集を抑制するが
５ＫＷ−３凝集は抑制しない上清からの細胞を選択し限
定稀釈を用いて２回クローニングした。
この実験により、抗Ｉ　ＣＡＭ−１モノクロ一ナル抗体
を産生ずる３種のハイブリドーマ系の同定およびクロー
ニングができた。これらのハイブリドーマ系により産生
した抗体は、それぞれ、ＩｇＧｚｍ　、ＩｇＧｚｂおよ
びＩｇＭであった。ＩｇＧｚａ抗Ｉ　ＣＡＭ−１抗体を
産生ずるハイブリドーマ細胞系は表示Ｒ６’５’Ｄ６’
Ｅ９’Ｂ２とした。この好ましいハイブリドーマ細胞系
により産生した抗体はＲ６’　５’Ｄ６’Ｅ９’Ｂ２と
表示した（以下、”Ｒ６−５−０６″と称する）。ハイ
ブリドーマ細胞系Ｒ６’５’Ｄ６’Ｅ９’Ｂ２はアメリ
カンタイプカルチャーコレクシボン（ＡＴＣＣ）に１９
８７年１０月３０日寄託し、番号ＡＴＣＣＨＢ９５８０
を得た。
実施例１１ １ＣＡＭ−１の発現と規格化 Ｉ　ＣＡＭ−１発現を測定するすために、ラジオイムノ
アッセイを行った。このアッセイにおいては、精製ＲＰ
Ｉ／１をイオドゲンを用いて１０μＣｉ／μｇの特定の
活性にヨー素化した。内皮細胞を９６ウエルプレート中
で増殖させ各実験で述べたようにして処理した。各プレ
ートを直接氷上ではなく冷室に０．５〜１時間置くこと
によって４℃に冷却した。各単一層を冷完全培地で３回
洗浄し次いで４℃で３０分間”Ｊ　　ＲＰＩ／１でイン
キュベートした。””Ｉ　　ＲＰＩ／ｌの特異活性を未
標識ＲＰＩ／１を用いて調整して本試験において用いる
抗原密度範囲に亘って直線状シグナルを得た。非特異結
合を１．０００倍過剰の未標識ＲＰＩ／１の存在下で測
定し総結合から差引き特異性結合を得た。
上述のラジオイムノアッセイを用いて測定したＩＣＡＭ
発現はヒトヘソ帯静脈内皮細胞（ＨＩＪＶＥＣ）および
ヒト伏状静脈内皮細胞（Ｈ３ＶＥＣ）上でＴＬ−１、Ｔ
ＮＦ、ＬＰＳおよびＩＦＮガンマ−により増大する（第
３表）。状状静脈内皮細胞は本試験においては成人組織
由来の培養大静脈内皮細胞中のヘソ帯静脈内皮細胞から
の結果を確認するために用いた。ＩＣＡＭ−１の基礎的
発現はヘソ帯静脈内皮細胞よりも状状静脈内皮細胞上で
２倍高い。ヘソ帯静脈内皮細胞の組換えＩＬ−１アルフ
ア、ＩＬ−１ベータ、およびＴＮＦへの露出はＩＣＡＭ
発現を１０〜２０倍増大させる。ＩＬ−１アルフア、Ｔ
ＮＦおよびＬＰＳは最大効力インデューサーであり、Ｉ
Ｌ−１は重量基準および応答の飽和濃度では効力はそれ
より小さい。１１００ｎ／ｍ４でのＩＬ−１ベータはＩ
ＣＡＭ−１発現をＨＵＶＥＣ上で９倍、Ｈ３ＶＥＣ上で
７．３倍増大させ、半一最高増加は１５ｎｇ／　ｍｆで
起った。
５０ｎｇ／　ｍｆのｒＴＮＦはＩＣＡＭ−１発現をＨＵ
ＶＥＣ上で１６倍、Ｈ３ＶＥＣ上で１１倍増大させ、半
一最高効果は０．５ｎｇ／ｍβであった。
インターフェロンガンマ−はＩＣＡＭ−１発１において
１０．０００１／　ｍｆで）ＩＵＶＥＣ上で５．２倍ま
たはＨ３ＶＥＣ上で３．５倍の有意の増大を示した。
１０μｇ／　ｍ６でのＬＰＳの効果はｒＴＮＦの効果と
強さにおいて同じようであった。これら媒介物の対の組
合せはＩＣＡＭ−１発現において追加の効果または追加
の効果よりもわずかに小さい効果をもたらしたく第３表
）。ｒＴＮＦとｒＩＬ−１ベータまたはｒ　ＩＦＮガン
マ−との交差滴定は次善または最善の濃度での効果にお
いて共働作用を示さなかった。
ＬＰＳは培地中でときどき見い出される基準で内皮細胞
上でのＩ　ＣＡＭ−１発現を増大させたので、基礎的Ｉ
　ＣＡＭ−１発現がＬＰＳに基づき得る可能性を試験し
た。いくつかの血清バッチを試験したとき、低エンドト
キシン血清が２５％までの低Ｉ　ＣＡＭ−１基礎発現を
与えることを見い出した。ここで示した結果はすべて低
エンドトキシン血清中で増殖させた内皮細胞のものであ
った。
しかしながら、ＬＰＳ中相性抗生物質ポリミキシンＢの
１０μｇ／ｍｊ！での添加はＩＣＡＭ１発現をわずかに
追加の２５％に減少させた。ＩＬ−１またはＴＮＦによ
る処理時のＩ　ＣＡＭ−１発現の増大は１０μｇ／ｍｌ
ポリミキシンＢの存在によっては効果はなかった。上記
ポリミキシン濃度はこれらの調製物中で低エンドトキシ
ン濃度として一貫させている。
第３表 抗ＩＣＡＭ−１モノクローナル抗体 条件（１６ｈｒ）　　　　　　　　１２ＳＩ特異性結合
（ＣＰＭＨ１ＵＶＥｃ　　　　　　　　　　Ｈ３ＶＥＣ
対照　　　　　　　　　　６０３±１１　　−　　１１
３２±３１−１００　　ｎｇ／ｎｕ　　ｒｌＬ−１べ−
９５６８０±６３３　　　　９Ｘ　　　　８３２０±７
６６　　　７．３ｘ５０　　ｎｇ／ｍｌ　　ｒｌＬ−１
アルフｙ　　　　９９１０±５３８　　　１６Ｘ　　　
　−５０ｎｇ／ｍｌ　　ｒＴＮＦ　　アルフｙ　　　　
　９６５０±１５００　　１６Ｘ　　　１２６９０±６
５７　　　１１．２ｘ１０１Ｊｇ７ｍｌ　ＬＰＳ　　　
　　９５３０±５１２　１６Ｘ　　１０４５９±３８８
　　９．２ｘ１０　　ｎｇ／ｍｅ　　ｒｌＦＮ　　ガニ
／？−３１２０±３０８　　　５．２ｘ　　　４００２
±（±６４　　　　３．５ｘｒＩＬ−１べ→　＋　ｒＴ
ＮＦ　　　　　　　　１４６９±１４１０　　２４ｘ　
　　１６２６９±６６０　　　１４ｘｒＩＬ−１べ→　
＋　ＬＰＳ　　　　　　　’１３９８６±７６１　　　
２３Ｘ　　　１０８７０±８０５　　　１０ｘｒｌＬ−
１ベータ　＋　ｒＩＮＦ　　ガンマ−７８４９±６０１
　　　１３Ｘ　　　　８４０１±３９０　　　　７．４
ｘｒＴＮＦ＋　ＬＰＳ　　　　　　　１５３６４±１２
４１　２４Ｘ　　１６１４１±１２７２　１４ｘｒＴＮ
Ｆ＋　　ｒｌＦＮ　　ガンマ−１３４８０±１１８９　
　２２Ｘ　　　１３２３８±７６１　　　１２ｘＬＰＳ
　　＋　　ＩＦＮ　　ガンマ−１０２０６±３２０　　
　１７ｘ　　　１０９８７±６６８　　　１０ｘポリミ
キシン’Ｂ　　（１０μｇ／ｍＡり　　　　　４８０±
２３　　　−　　　　　−ポリミキシ：／　　Ｂ＋ｒＩ
Ｌ−１５３９０±９７　　　　１１Ｘ　　　　　−ポリ
ミキシｙ　　Ｂ＋ｒＴＮＦ　　　　　　　　　　９７８
５　　±３８９　　　２０Ｘ　　　　　−１μｇ７ｍｌ
！　ＬＰＳ　　　　　７５９Ｂ±４３２　１３Ｘ　　　
−ポリミキシン　Ｂ＋ＬＰＳ　　　　　−５１０±４４
　　　　１．ＩＸＨＶＥＣおよびＨ３ＶＥＣ−ＨＵＶＥ
ＣまたはＨ３ＶＥＣ上のＩ　ＣＡＭ−１発現の上方規格
化（ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ）は９６ウエルプレート
に１：３で融合性単一層から種付し融合状に増殖させた
。次いで細胞を各物質または培地で１６時間処理しＲＩ
Ａを方法的に行った。すべての数値は４回繰返しで行っ
た。
実施例１２ Ｉ　ＣＡＭ−１のインターロイキン１およびガンマ−イ
ンターフェロン誘起の動力学 皮ふ繊維芽細胞上でのＩ　ＣＡＭ−１発現へのインター
ロイキン−１およびガンマ−インターフェロン効果の動
力学をＤｕｓｔｉｎ　、　Ｍ几３等の１２５１ヤギ抗マ
ウスＩｇＧ結合アッセイを用いて測定した（Ｊ、Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ、　　１３７　：　２４５　２５４　（１９８
６）　　；該文献は参考として本明細書に引用する。〕
この結合アッセイを行うために、ヒト皮ふ繊維芽球を９
６ウエルマイクロタイタープレート中で２〜８ＸＩＯ’
細胞／ウエル（０，３２ｃａｌ）に増殖させた。
細胞を実施例１で記載したようにして補充したＲＰＭ１
１６４０培地で２回洗浄した。細胞をさらにハンクス平
衡塩溶液（ＨＢＳＳ）、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、０．０
５％ＮａＮ３および１０％の熱不活化ウシ胎児血清で１
回洗浄した。この結合用バッファーでの洗浄は４℃で行
った。各ウェルに上記の結合用バッファー５０μρおよ
びＸ６３およびＷ　６　／　３２による適当なハイブリ
ドーマ上清５０ｍｊ２を、それぞれ陰性および陽性コン
トロールとして加えた。３０分間、４℃でのインキュベ
ーション後、ウェルを２回結合用バッファーで洗浄し、
第２の抗体１２５■−ヤギ抗マウスＩｇＧを１００μβ
中５０ｎＣｉで加えた。１２５Ｉ−ヤギ抗マウス抗体は
イオドゲ７　（ｐｉｅｒｃｅ社）を用いてＦｒａｋｅｒ
　、　Ｐ、Ｊ。
で３０分後、ウェルを２回２００μβの結合用バッファ
ーで洗浄し、細胞層を１００μ！の０．ｌＮＮａ叶を加
えることによって可溶化した。この処理および１００μ
ｌ洗浄はベックマン５５００ガンマ−カウンター中で計
数した。分当り結合の特異的カウントを〔モノクローナ
ル抗体によるｃｐｍ　）−（Ｘ６３によるｃｐｍ　）と
して計算した。特異的試剤による誘起を含むすべての工
程は４回繰返しで行った。
Ｉ　ＣＡＭ−１誘起の半減期２時間のインターロイキン
１の効果は半減５３．７５時間のガンマ−インターフェ
ロンの効果よりも急速であった。ＩＣＡＭの静止レベル
に戻る時間は細胞サイクルまたは細胞増殖によっている
ようであった。静止状態細胞においては、インターロイ
キン１およびガンマ−インターフェロン効果は２〜３日
安定であり、−方対数期培養においては、ＩＣＡ−Ｍ−
１発現はこれら誘起剤の除去後２日で基本線に近い。
組換えマウスおよびヒトインターロイキン１によるＩ　
ＣＡＭ−１誘起および組換えガンマ−インターフェロン
によるＩＣＡＭ−１誘起のドーズレスポンス曲線を第７
図に示す。ガンマ−インターフェロンおよびインターロ
イキン１はｌｎｇ／ｍｘで殆んど同一の効果を有する同
じような濃度依存性を有することが判った。ヒトおよび
マウス組換えインターロイキン１も同様な曲線を有する
が、Ｉ　ＣＡＭ−１発現の誘起においてヒトインターロ
イキン１製剤よりもかなり低い効果を示している。
シクロへキサミド（たん白質合成のインヒビクー）およ
びアクチノマイシンＤ　（ｍＲＮＡ合成のインヒビター
）は繊維芽球上でのＩ　ＣＡＭ−１発現におけるインタ
ーロイキン１およびガンマ−インターフェロンの効果を
壊滅させる（第４表）。
さらにまた、ツニカマイシン（Ｎ結合グリコジル化のイ
ンヒビター）のみはインターロイキン１効果を４３％ま
で抑制した。これらの結果はたん白質およびｍＲＮＡ合
成がＩ　ＣＡＭ−１発現におけるインターロイキン１お
よびガンマ−インターフェロン誘起増大を必要とするが
Ｎ−結合グリコシル化の方はそれを必要としないことを
示している。
第４表 ヒト皮ふ繊維芽球上のＩＬＬおよびガンマ−ＩＦＮによ
るＩ　ＣＡＭ−１ｆｉ起におけるシクロヘキシミド、ア
クチノマイシンＤ、およびツニカマイシンの効果１ ＋２ｓＩヤギ抗マウスＩｇＧ特異性結合（ｃｐｍ）几　
　　　　　　　　　　　　　　　ｔ−ＩＣＡＣエト　　
　抗ＨＬへ−へ、Ｂ、Ｃ対照（４ｈｒ）　　　　　　　
１５２４±１４０　　１１９２８±６００＋シクａヘキ
シイミド　　　　　　　　　　１５１３±２１０　　　
　１０６７８±４７１＋アクチノマイシン　Ｄ　　　　
　　　　　　１５９０±　４６　　　　１２２．７６±
６０８＋ツニカマイシン　　　　　　　　　　　　１４
６１±１７６　　　　１２３４０±９４０ＴＬ−１（１
００／ｍ／）’（４ｈｒ）　　　４２６４±２４９　　
１２１５５±５１０＋シクロヘキシイミド　　　　　　
　　　　１６１９±３８１　　　　１２６７６±４４６
＋７クチノマイシン　Ｄ　　　　　　　　　　１６１３
±　８８　　　　１２２９４±１２３＋ツニカマイシン
　　　　　　　　　　　　３０８４±１１３　　　　１
３４３４±６６１１ＦＮ−ｒ（ＩＯＵ／　ｍｊり（１８
ｈｒ）　４６５９±１０９　　２３６７５±５００＋シ
クロヘキシミン　　　　　　　　　　　１４６１±　５
９　　　　１０６７５±８００８ヒト繊維芽球を８Ｘ１
０’細胞／　０．３２　ｃｎｌウェルの密度に増殖させ
た。処理は各試剤を含有する５０μｌ最終濃度で行った
。シクロヘキシイミド、アクチノマイシンＤおよびツニ
カマイシンは、それぞれ、サイト力インと同じ時間で２
０μｇ／ｍｊ！、１０ｍＭおよび２μｇ／ｍｅで加えた
。すべての数値は４回重複ウェルの平均上ＳＤである。
実施例１３ Ｉ　ＣＡＭ−１の組織分布 組織化学試験をヒト器官の凍結ｍ盛上で行い胸腺、リン
パ節、腸、皮ふ、じん臓および肝臓中のＩ　ＣＡＭ−１
の分布を測定した。そのような分析を行うために、正常
ヒト組織の凍結組織切片（４μｍ厚さ）をアセトン中で
１０分間固定しモノクローナル抗体、ＲＲＩ／１でＣｅ
ｒｆ−Ｂｅｎｓｕｓｓａｎ　。
Ｎｏ等により開示されたアビジンービオチンコンブレソ
クス法（Ｖｅｃｔｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社、
パーリンゲーム、ＣＡ）を用いたイムノパーオキシダー
ゼ法により染色した（Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、　　１３０
　：　２６１５（１９８３））。抗体とのインキュヘー
ション後、切片をビオチン化ウマ抗マウスＩｇＧおよび
アビチンービオチン化パーオキシダーゼ複合体で順次イ
ンキュベートした。各切片は最終的には３−アミノ−９
−エチル−カルバゾール（アルドリッチケミカル社、ミ
ルウォーキー、Ｗｌ）を含有する溶液に浸して呈色反応
を行った。次いで、各切片を４％ホルムアルデヒド中で
５分間固定させてヘマトキシリンで対向染色（ｃｏｕｎ
ｔｅｒｓｔａｉｎ）させた。
コントロール（対照）はＲＲ１／１抗体の代りに無関係
のモノクローナル抗体でインキュベートした切片を含ん
でいた。
ＩＣＡＭ−１は主要組織親和性コンプレックス（ＭＨＣ
）クラス■抗原の分布を殆んど同じ分布を有しているこ
とが判った。すべての組織中の血管（大および小共に）
の殆んどはＩ　ＣＡＭ−１抗体による内皮細胞染色を示
した。管内及染色はじん臓、肝臓および正常度ふ中の血
管に較べてリンパ節、へん桃腺およびバイヤー班中の小
胞間（バラコーチカル）領域でより強い。肝臓において
は、染色は殆んど洞様毛細血管ライニング細胞に限定さ
れ、門静脈および動脈の殆んどをライニングしているヘ
パトサイトおよび内皮細胞は染色されなかった。
胸腺ずい質においては、大細胞の拡散染色および樹木染
色模様がみられた。皮質においては、染色像は巣状であ
り主として樹木状であった。胸腺細胞は染色されてなか
った。末梢リンパ球組織においては、２次リンパ濾胞の
胚中心細胞は強く染色していた。あるリンパ濾胞におい
ては、染色像は殆んど樹木状であり、リンパ球の認識し
得る染色はなかった。
マントル領域の細胞のかすかな染色も観察された。さら
に、細胞質拡大（指間小網細胞）を有する樹木状細胞お
よび小胞内またはバラコーチカル領域のリンパ球の小数
はＩＣＡＭ−１結合性モノクローナル抗体で染色してい
た。
細胞様マクロファージはリンパ節および小腸の薄膜プロ
プリア内で染色されていた。試験した器官の殆んどのス
トローマ内に拡散している繊維芽球様細胞（スピンドル
形細胞）はＩＣＡＭ−１結合性抗体により染色していた
。外皮中のランゲルハンス／不定細胞中では染色は認め
られなかった。
平滑筋組織中でも染色は観察されなかった。
外皮細胞の染色はへん桃線の粘膜中で一貫して見られた
。肝細胞、肝管外皮、腸外皮細胞、およびじん窓中の管
状外皮細胞は殆んどの情況において染色されなかったが
、じん細胞がん腫を有するしん摘出片からの正常じん臓
組織の切片はＩＣＡＭ　−１の多くの隣接管状細胞の染
色を示した。これらの管状外皮細胞はまた抗ＨＬＡ−Ｄ
Ｒ結合性抗体によっても染色していた。
要するに、Ｉ　ＣＡＭ−１は管状外皮細胞のような非造
血細胞、および組織マクロファージおよびマイトジェン
刺激Ｔリンパ芽球のような造血細胞上に発現する。Ｉ　
ＣＡＭ−１は末梢血リンパ球に少量発現することが判っ
た。
実施例１４ モノクローナル抗体アフィニティクロマトグラフィーに
よるＩ　ＣＡＭ−１の精製 二孜煎拵袈千嵐 ＩＣＡＭ−１をヒト細胞または組織からモノクローナル
抗体アフィニティークロマトグラフィーを用いて精製し
た。Ｉ　ＣＡＭ−１と反応性のモノクローナル抗体ＲＲ
１／１を最初に精製して不活性カラムマトリックスに結
合させた。この抗体はＲｏｔｈｌｅｉｎ　、Ｒｏ等、Ｊ
、Ｔｍｍｕｎｏｌ、　　１３７　：　１２７０−１２７
４　（１９８６）”および“Ｄｕｓｔｉｎ　、Ｍ几０等
、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、１３７：２４５　（１９８６）
　　″に記載されている。Ｉ　ＣＡＭ−１を細胞膜から
細胞を非イオン性清浄剤トリトンＸ−１００中で近東性
ｐＨで溶解することによって可溶化した。可溶化Ｉ　Ｃ
ＡＭ−１を含有する細胞熔解物をカラムマトリックス材
料に非特異的に結合する物質を除去するように設計され
たプレカラムに通し、次いでモノクローナル抗体カラム
マトリックスに通してＩ　ＣＡＭ−１を抗体に結合させ
た。抗体カラムをｐＨをｐｔｒｔｔ、ｏまで上昇させた
一連の洗浄剤洗浄バッファーで洗浄した。これらの洗浄
中、ＩＣＡＭ−１は抗体マトリックスに結合したままで
あり、結合してないまた弱く結合している不純物は除去
された。次いで、結合Ｉ　ＣＡＭ−１をｐＨ１２，５の
洗浄剤バッファーを適用することによってカラムから特
異的に溶出させた。
抗Ｉ　ＣＡＭ−１モノクロ一ナル抗体ＲＲ１／１をハイ
ブリドーマ含有マウスの腹水またはハイブリドーマ培養
上清から標準の硫酸アンモニウム沈降法およびプロティ
ンＡアフィニティークロマトグラフィーにより精製した
（Ｅｙ等、Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ。
１５：４２９　（１９７８））。精製１ｇＧまたはラッ
トＩｇＧ　　（シグマケミカル社、セントルイス、ＭＯ
）をセファローズＣＬ−４Ｂ　（ファルマシア社、スウ
ェーデン）にＭａｒｃｈ等の方法（Ａｎａｌ。
Ｂｉｏｃｈｅｍ、６０　：　１４９　（１９７４）　）
の修正法を用いて共有結合させた。要するに、セファロ
ーズＣＬ−４Ｂを蒸留水中で洗浄し、５Ｍのに２１１Ｐ
Ｏ４（ｐ１１約１２）中の４０ｍｇ／　ｍ１ＣＮＢ　ｒ
で５分間活性化し、次いで０．１　ｍＭ　ＭＣβで４℃
にて長く洗浄した。濾過し活性化したセファローズを等
量の精製抗体（０，１Ｍ　ＮａＨＣＯｚ　、０．　Ｉ　
Ｍ　ＮａＣｊｌ！中２〜ｌＯ■／ｍｅ）で再懸濁させた
。懸濁液を４℃で１８時間ゆるやかな端から端までの回
転によりインキュベートした。次いで、上清を未結合抗
体について２８０ｎｍの吸収によりモニターし、活性化
セファローズの残りの反応部位をグリシンを０、０５　
Ｍに加えることによって飽和させた。結合効率は通常９
０％以上である。
ヒトひ臓から８゜製した膜の？ゞ剤可溶ヒすべての手順
を４℃で行った。毛状細胞白血病の患者からの凍結ヒト
ひ臓（２００ｇラフグメント）を氷上で１ｍＭのフェニ
ルメチルスルホニルフルオライド（Ｐ　Ｍ’Ｓ　Ｆ　）
　、０．２　Ｕ／　ｍｌのアプロチニンおよび５ｍＭの
イオドアセタミドを含有する２００ｍ／！）リス−塩水
（５０ｍＭのＴｒｉｓ、０．１４ＭのＮａＣｊｉ！、４
℃でｐＨ７．４　＞　　中に溶解させた。Ｍｉ織を小片
に切断し４℃でチクマー強力ホモジナイザーで均質化し
た。容量をトリス−塩水で３００ｎｌとし、トリス−塩
水中１０％トウィーン４０　（ポリオキシエチレンソル
ビタンモノパルミテートＨ００ｎ！！を加え最終濃度２
．５％トウィーン４０を得た。
膜を調製するため、均質化物を３ストロークのドンス（
Ｄｏｕｎｃｅ）またはより好ましくはテフロンポソター
エルプジャムホモジナイザーを用いて抽出し、次いで１
１０００Ｘで１５分間遠心した。
上清を残し、ベレットをトリス−塩水中の２．５％トウ
ィーン４０の２５０ｍｊｌ！で再抽出した。１１００Ｏ
ｘで１５分間の遠心後、両袖出物からの上清を一緒にし
１５０，０００　Ｘ　ｇで１時間遠心して膜をペレット
化した。膜を２００ｍｊｌ！のトリス−塩水中に再懸濁
させることによって洗浄し、１５０，０００　ｘ　ｇで
１時間遠心した。膜ペレットを２００ｍ６のトリス−塩
水中に再懸濁させ、モーター駆動ホモジナイザーおよび
テフロンペストルで懸濁液が濃密になるまで均質化した
。容量を次いでトリス−塩水で９００ｍＡまでにし、Ｎ
−ラウロイルサルコシンを最終濃度１％になるよう加え
た。４℃で３０分の攪拌後、洗浄剤溶解物中の不溶性物
質を１５０．０００　ｘ　ｇ、１時間での遠心により除
去した。
トリトンｘ−ｉｏｏを上清に最終濃度２％に加え、溶解
物を４℃で１時間攪拌した。
ＪＹＢ−リンパ芽球　胞の？′　Ｉ可溶ヒＥＢＹ形質転
換Ｂ−リンパ芽球細胞系ＪＹを１０％ウシ胎児血清（Ｆ
ｅ２）および１０　ｍＭ　ＨＥＰＥＳを含有するＲＰＭ
１１６４０中で０．８〜１．０×ｂ −１の細胞表面発現を増大させるため、ホルボール１２
−ミリステート１３−アセテ−１−（ＰＭＡ）を細胞を
収穫する前に２５ｎｇ／ｍｊ２で８〜１２時間で加えた
。バナジン酸ナトリウム（５０ＭＭ）もこの時間中に培
養物に加えた。細胞を５００ｘｇで１０分間遠心するこ
とによってペレット化しハンス平衡塩溶液（ＨＢ　Ｓ　
Ｓ）中で再懸濁および遠心することによって２回洗浄し
た。細胞（５Ｎの培養物当り約５ｇ）を５０　（ｆ／！
の溶解バッファー（０，１４Ｍ　ＮａＣ１，５０ｍＭ　
Ｔｒｉｓ　、　ｐＨ８，０，１％トリトンＸ−１００，
０，２，ｃｒ／ｍ！！アプロチニン、１ｍＭのＰＭＳＦ
、５０．ｃ＋Ｍバナジン酸ナトリウム）中に４℃で３０
分間攪拌することによって溶解させた。未溶解核および
不溶性片を１０，０００ｘｇで１５分間の遠心、次いで
１５０，０００　ｘ　ｇでの１時間の上清の遠心および
上清のフットマン３龍フイルタ一紙により濾過により除
去した。
構造検討に使用するＩ　ＣＡＭ−１の大規模精製として
、１０ｍ１のＲＲＩ／ｌ−セファローズＣＬ−４Ｂのカ
ラム（２，５ｍｇの抗体／ゲルのｍｌで結合）、および
ＣＮＢ　ｒ−活性化、グリシン安定化セファローズＣＬ
−４ＢおよびラットＩｇＧ結合セファローズＣＬ−４Ｂ
　（２ｍｇ／　ｍＡ）の２種のプレカラムを用いた。各
カラムに直列につなぎ、１０カラム容量の溶解バッファ
ー、１０カラム容量のｐＨ１２，５バツフアー（５０ｍ
Ｍトリエチルアミン、０．１％トリトンＸ−１００，４
℃でｐＨ１２，５）で予備洗浄し次いで１０カラム容量
の溶解バッファーで平衡させた。１１のヒトひ臓の洗浄
剤溶解物を０．５〜１．０ｍ１ｔ１分の流速で負荷させ
た。２つのプレカラムはＲＲ１／１−セファローズカラ
ムに通す前に溶解物から非特異結合物質を除去するのに
用いた。
負荷後、ＲＲ１／１−セファローズのカラムおよび結合
Ｉ　ＣＡＭ−１を（１）溶解バッファー、（２）２０ｍ
Ｍ　Ｔｒｉｓ　ｐＨ８，０１０，１４Ｍ　ＮａＣｊ！１
０．１％トリトンＸ−１００、（３１２０ｍＭグリシン
ｐｕｔｏ、ｏ１０．１％トリトンＸ−１００、および５
０ｍＭ）リエチルアミンｐＨ１１，０１０，１％トリト
ンＸ−１００の各々最低５カラム容量で１　　ｍｌ１分
の流速で順次洗浄した。すべての洗浄バッファーは１ｍ
ＭのＰＭＳＦと０．２μ／ｍｅのアフロチニンを含んで
いた。洗浄後、残留結合Ｉ　ＣＡＭ−１を５カラム容（
ｆｌの溶出バッファー（５０ｍＭトリエチルアミン１０
．１％トリトンＸ−１００／４℃でｐＨ１２，５）によ
り１ｍ（ｆ／３分の流速で溶出させた。溶出Ｉ　ＣＡＭ
−１を１　ｍｌフラクションに集め直ちに０．１ｍ／の
１Ｍトリス、ｐＨ６，７を加えて中和させた。Ｉ　ＣＡ
Ｍ−１を含有するフラクションをｌＯμｌのアリコート
の５ＤＳ−ポリアクリルアミド電気泳動（Ｓｐｒｉｎｇ
ｅｒ等、Ｊ、Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、　　ｌ　６０　：１９０
１　　（１９８４））により次いで銀染色［Ｍｏｒｒｉ
ｓｓｅｙ　　、Ｊ、Ｈ，、Ａｎａｌ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、
　　１　１７　　：３０７　　（１９８１））によって
同定した。これらの条件下で、Ｉ　ＣＡＭ−１のバルク
が約１カラム容量に溶出し、銀染色電気泳動から判断し
て９０％以上の純度であった（アフィニティーマトリッ
クスから漏出した少量のＩｇＧは主要不純物であった）
。Ｉ　ＣＡＭ−１を含有するフラクションをプールしセ
ントリコン−３０マイクロコンセントレータ−（アミコ
ン社、デンハース、ＭＡ）を用いて約２０倍に濃縮した
。精製Ｉ　ＣＡＭ−１をプールのエタノール沈降アリコ
ートのＬｏｗｒｙたん白質アッセイにより定量した。約
５００μｇの純ＩＣＡＭ−１を２００ｇのヒトひ臓から
調製できた。
約２００μｇの精製Ｉ　ＣＡＭ−１を分離用ＳＯ３−ポ
リアクリルアミドゲル電気泳動により第２段階の精製に
供した。Ｉ　ＣＡＭ−１を示すバンドはゲルをＩＭＫｔ
ｌ中にソーキングすることによって可視化させた。Ｉ　
ＣＡＭ−１を含むゲル領域を検査して“Ｈｕｎｋａｐｉ
ｌｌｅｒ等、Ｍｅｔｈ、Ｅｎｚｙｍｏｌ、　　９１：２
２１−２３６　（１９８３）　　”の方法によって電気
溶出させた。精製たん白質はＳ　Ｄ　Ｓ　−ＰＡＧＥお
よび銀染色で判断したとき９８％以上の純度であった。
官能性試験用のＩＣＡＭ　　１を前述したようなＪＹ細
胞からの洗浄剤溶解物から精製したが、小スケール（１
ｍｌのＲＲＩ／１−セファ０−ズ力ラム）で次の修正を
加えて行った。すべての溶液は５０μＭバナジン酸ナト
リウムを含んでいた。
カラムを０．１％トリトンＸ１００含有ｐｉ（１１，０
バツフアーで洗浄後、カラムを０，１％トリトンＸ−１
００に代えて１％のｎ−オクチル−ベーター−Ｄ−グル
コピラノサイド（オクチルグルコシド）含有の同じバッ
ファー５カラム容量で再洗浄した。
オクチルグルコシドはＩＣＡＭ−１に結合したトリトン
Ｘ−１００を除去し、トリトンＸ−１００と異なりその
後透析により除去できる。次いで、ＩＣＡＭ−１を０．
１％トリトンＸ−１００の代りに１％のオクチルグルコ
シドを含むｐＨ１２，５バッファーで溶出させ、分析し
、上述のようにして濃縮した。
実施例１５ 精製ＩＣＡＭ−１の　　ヒ ヒトひ臓から精製したＩ　ＣＡＭ−１は５ＤＳ−ポリア
クリルアミドゲル中でＭ　ｒ　７２．０００〜９１，０
００の広いバンドとして浸透する。ＪＹ細胞から精製し
たＩ　ＣＡＭ−１もＭ　ｒ　７６．５００〜９７，００
０の広いバンドとして浸透する。これらＭｒは種々の細
胞源から免疫沈降させたＩ　ＣＡＭ−１の報告された範
囲にある：ＪＹ細胞のＭ　ｒ　＝９０．０ＯＯ１骨すい
単球細胞系Ｕ９３７上の１１４，０００　、および繊維
芽球上の９７，０００　（Ｄｕｓｔｉｎ等、Ｊ、Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ、　　１３７　：　２４５（１９８６））。Ｍ
ｒのこの広い範囲は広汎であるが変化し得る度合のグリ
コジル化に貢献する。
非グリコジル化プレカーサーはＭ　ｒ　５５，０００を
有する（Ｄｕｓｔｉｎ等）。ＪＹ細胞またはヒトひ臓か
ら精製したたん白質は、その元のアフィニティカラムへ
の再結合能力によりまたＲＲＩ／１−セファローズによ
る免疫沈降および５ＤＳ−ポリアクリルアミド電気泳動
により明らかなように、その抗原活性を保持している。
Ｉ　ＣＡＭ−１のペプチドフラグメントを調製するため
には、約２００μｇを２ｍＭジチオスレイトール／２％
ＳＤＳで還元し、次いで５ｍＭの沃化酢酸でアルキル化
した。たん白質をエタノールで沈降させ、０．１　Ｍ　
ＮＨ４，ＣＯ３／　０．１　ｍＭ　Ｃａ（Ｊ！　ｚ　１
０．１％双性イオン剤（２ｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔ）　　
３　１４（カルビオケミ社）中に再溶解させ、１％ｗ／
ｎ　　トリプシンで３７℃、４時間消化し、次いで１％
トリプシンで３７℃、１２時間の追加の消化を行った。
トリプシンペプチドを逆相ＨＰＬＣにより０．４Ｘ１５
ｃｍＣｄカラム（Ｖｙｄａｃ社）を用いて精製した。ペ
プチドは０．１％トリフルオロ酢酸中で０％〜６０％ア
セトニトリルの直線勾配によって溶出した。選択したペ
プチドをガス相マイクロシーケネーター（アプライドバ
イオシステムズ社）での配列分析に供した。この試験か
ら得られた配列情報を第５表に示す。
実施例１６ ＩＣＡＭ−１遺伝子のクローニング ＩＣＡＭ−１の遺伝子は任意の種々の手順を用いてクロ
ーニングできる。例えば、ＩＣＡＭ−１のトリプシンフ
ラグメントのシニケンシング（第５表）から得られたア
ミノ酸配列情報を用いてＩＣＡＭ−１遺伝子に相当する
オリゴヌクレオチド配列を同定し得る。また、ＩＣＡＭ
−１遺伝子は抗ＩＣＡＭ−１抗体を用いてＩＣＡＭ−１
を産生ずるクローンを検出することによってもクローニ
ングできる。
遺伝子コード〔Ｗａｔｓｏｎ、　Ｊ、Ｄ、、　Ｍｏｌｅ
ｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｇｅｎｅ、
　　第３版、Ｗ、　Ａ、ベンジャミン社、メロノパーク
、ＣＡ（１９７７））を用いて、１種以上の異なるオリ
ゴヌクレオチドを同定でき、その各々はＩＣＡＭ−１）
ＩＪプシンペプチドをコードし得るものである。特定の
オリゴヌクレオチドが実際に現実のＩＣＡＭ−１コ一ド
配列を構成する可能性は異常な塩基対関係および特定の
コドンを現実に真核細胞に用いて（特定のアミノ酸をコ
ードする）＠度を考慮することによって評価できる。そ
のような“コドン利用法則”は“しａｔｈｅ、　　Ｒ，
等、　Ｊ、　　Ｍｅｌｅｃ、　　Ｂｉｏｌ、　　　１　
８　３　　：１−１２　（１９８５）”により開示され
ている。
１ａｔｈｅの“コドン利用法則″を用いて、理論的に′
最も可能性のある”ＩＣＡＭ−１）！Ｊプシンペプチド
配列をコードし得るヌクレオチド配列（即ち、最低の不
要物を有するヌクレオチド配列）を含有する単一オリゴ
ヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドのセットを同定
する。
ＩＣＡＭ−１フラグメントをコードし得る理論的に“最
も可能性のある″配列を含むオリゴヌクレオチドまたは
オリゴヌクレオチドのセットを用いて“最も可能性ある
”配列または配列のセットにハイブリッド化し得る相補
オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドのセット
の配列を同定する。そのような相補配列を含むオリゴヌ
クレオチドはＩＣＡＭ−１遺伝子を同定し単離するプロ
ーブとして使用できる（Ｍａｎｉａ′ｓ、　Ｔ、等、Ｍ
ｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ　Ａ　Ｌａｂｏｒａ
ｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ、コールド　スプリング　ハー
バ−プレス社、コールドスプリング、ＮＹ　（１９８２
））。
上記のセクションＣに記載されているように、Ｉ　ＣＡ
Ｍ−１遺伝子を含有する可能性ある真核ＤＮ　Ａ　３１
ｉ製物からＩ　ＣＡＭ−１遺伝子をクローニングするこ
とは可能である。Ｉ　ＣＡＭ−またん白質をコードする
遺伝子を同定しクローニングするためには、ＤＮＡライ
ブラリーをその上記のオリゴヌクレオチドプローブとハ
イプリント化する能力についてスクリーニングする。正
常な二倍体細胞中にはＩ　ＣＡＭ−１の遺伝子のほんの
２つのコピーしか存在しないようであるので、またＩ　
ＣＡＭ−１遺伝子はクローニングが望まれない大きな非
転写介在配列（イントロン）を有し得る可能性があるの
で、好ましいのはゲノムＤＮＡよりはむしろＩ　ＣＡＭ
−１産生性細胞のｍＲＮＡから調製したｃＤＮＡライブ
ラリーからＩＣＡＭ−１コ一ド配列を単離することであ
る。適当なりＮＡまたはｃＤＮＡ調製物は酵素的に開裂
させ、ランダムにせん断し、連結反応させて組換えベク
ターとする。
これら組換えベクターの上述のオリゴヌクレオチドプロ
ーブとハイブリッド化する能力を測定する。
ハイブリッド化の手順は、例えば、°“Ｍａｎｉａｔｉ
ｓ。
Ｔ、、　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ　Ａ　１
ａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ。
コールド　スプリング　ハーバ−プレス社、コールド　
スプリング　バーバー、ＮＹ　（１９８２）　’”また
は”）ｌａｙｍｅｓ、　Ｂ、Ｔ、等、Ｎｕｃｌｅｉｃ　
Ａｃ１ｄ　ｌ１ｙｂｒｉ−ｄｉｚａｔｉｏｎ　ａ　Ｐｒ
ａｃｔｉｃａｌ　Ａｐｐｒｏａｃｈ、　Ｉ　ＲＬプレス
社、オックスフォード、英国（１９８５）”において開
示されている。そのようなハイブリッド化ができること
が判っているベクターを分析してベクターが含有するＩ
　ＣＡＭ−１配列の程度および性質を分析する。純粋に
仮説的な考察によれば、ＩＣＡＭ−１分子をコードする
ような遺伝子はほんの１８ケのヌクレオチドを有するオ
リゴヌクレオチドを用いて明確に同定できるであろう（
ハイブリッド化スクリーニングにより）。
即ち、要約すれば、Ｉ　ＣＡＭ−１ペプチド配列の現実
の同定により、そのようなペプチドをコードし得る理論
的に“°最も可能性ある”ＤＮＡ配列またはそのような
配列のセットの同定ができる。
この理論的配列に相補性のオリゴヌクレオチドを構築す
ることにより（あるいはパ最も可能性ある”オリゴヌク
レオチドのセットに相補的なオリゴヌクレオチドのセッ
トを構築することにより）、ＩＣＡＭ−１遺伝子を同定
し単離するプローブとして機能し得るＤＮＡ分子（また
はＤＮＡ分子のセット）が得られる。
第５表のＩ　ＣＡＭ−１ペプチド配列を用いて、ＡＡお
よびＪペプチドをコードし得るオリゴヌクレオチドの最
も可能性ある゛配列の配列を決定した（それぞれ、第６
表および第７表）。これら配列に相補性のオリゴヌクレ
オチドを合成し精製してＩ　ＣＡＭ−１遺伝字配列を単
離するプローブとした。適当なサイズ選定ｃＤＮＡライ
ブラリーをＰＭＡ誘起誘起−６０細胞からおよびｐｓ刺
激へそ帯静脈内皮細胞からのポリ（Ａ）”　ＲＮＡから
調製した。サイズ選定ｃＤＮＡライブラリーは”Ｇｕｂ
ｌｅｒ、　Ｕ、等（Ｇｅｎｅ　　２５　：　２６３　２
６９（１９８３））およびＣｏｒｂｉ、　Ａ、等（ＥＭ
ＢＯム　６　：　４０２３−４０２８　（１９８７））
の方法に従ってＰＭＡ誘起ＨＬ−６０細胞からのポリ（
Ａ）”　ＲＮＡを用いて調製した。これらの文献は参考
として本明細書に引用する。
サイズ選定ｃＤＮＡライブラリーはｐｓ５μｇ／　ｍ　
ｌで４時間刺激したヘソ帯静脈上皮細胞からのポリ（Ａ
Ｈを用いて調製した。ＲＮＡは上記細胞を４Ｍグアニジ
ニウムイソシアネート中で均質化し上清をＣｓＣｌ勾配
により超遠心に供することによって抽出した（Ｃｈｉｒ
ｇｗｉｎ、　Ｊ、Ｍ、等、Ｂｉｏｃｈｅｍ、上８　：　
５２９４−５２９９　（１９７９））。
ポリ（Ａ）′″ＲＮＡは全ＲＮＡスペイシスの混合物か
らオリゴ（ｄＴ）−セルロースクロマトグラフィー（タ
イプ３、コラボラテイブ　リサーチ社）を用いて単離し
た（Ａｖｉｖ＋　Ｈｏ等、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ。
八ｃａｄ、　　Ｓｃｉ、　　（ＵＳＡ）　　６９　　：
１４０８−１４　１２（１９７２））。
００００＜ｕｕ←ｏａくｏ＜＜＜Ｏ←０旧←←Ｃ←００
＜０　　の＞０口０■：Ｉ　に−一 一　　　［Ｆ］　　　−ロ　　　ニ　　　−　　　　　
　ψ　　　≦　　　υ（ｊ　　　　−（ｊ　　　　−ｏ
−（ｊ　　　　　　（Ｅ−の■　　０　−　　へ　　リ
　　臂　　　　　０　　■　　さ■　　ｈ　　　ｔ−ｔ
−ｔ−ｔ−ｔ＋−ｔ′−酬４電− ００＜ｏｏ＜ｕ＜Ｕ←００←ｕｔｊ（ｊ（ｊＥ−［−ｕ
’）○ａＥ−ｕｕ［−ｏＦ−ｏ＜ｏｕ＜ｏｕｏｏ＜＜ω
１ｍ　　　　　　　　　リ　　　　　　　　Ｑ、　　　
　　　　　ｅ　　　　　　　　　Ｏψ■　　　　　＞　
　　　　ψ　　　　　−１＋　　　　　　＞■　　　　
　（−）　　　　　　＜　　　　　　ＯＬ　　　　　　
、ｗＷ　　　　　　　　Ｕつ　　　　　　　ｃｏ　　　
　　　　　ｔ’−ｏり　　　　　　　■Ｃｑ　　　　　
　　　Ｃぐ　　　　　　　　（’Ｊ　　　　　　　　　
（Ｎ　　　　　　　　　Ｃ％、ｌ　　　　　　　　　Ｃ
Ｊ第１のストランドｃＤＮＡをポリ（Ａ）”ＲＮＡ、ト
リ骨すい芽球症ウィルス逆転写酵素（ライフサイエンス
社）およびオリゴ（ｄＴ）ブライマーと用いて合成した
。ＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッドはラナーゼＨ（ＢＲＬ社
）で消化、第２ストランドはＤＮＡポリメラーゼＩにュ
ーイングランド　バイオラプス社）を用いて合成した。
生成物をＥｃｏＲＩメチラーゼにューイングランドバイ
オラプス社）でメチル化し、ＥｃｏＲ１リンカ−にュー
イングランド　バイオラプス社）にプラントエンド連結
反応させ、ＥｃｏＲｌで消化し低融点アガロースゲル上
でサイズ選定した。
５ｏｏｂｐより大きいｃＤＮＡを前取てＥｃ　ｏＲ１消
化させ脱リン酸化させているλｇｔｌｏに連結反応させ
た（ストラタジーン）。連結反応生成物を次いでパンケ
ージンクした（ストラタジーンゴールド）。
次に、ヘソ帯静脈内皮細胞およびＨＬ　−６０ｃＤＮＡ
ライブラリーを２０，０ＯＯＰＦμ／１５０ｍｍプレー
トで塗布した。組換えＤＮＡを複製中でニトロセルロー
スフィルターに移し、０．５Ｍ　ＮａＯＨ／１．Ｓ　Ｍ
　ＮａＣ１中で変性しＩＭＦリス、Ｐ　Ｈ７，５／　１
．Ｓ　Ｍ　ＮａＣ１中で中和し、８０°Ｃで２時間ベー
キングした（Ｂｅｎｔｏｎ、　Ｗ、Ｄ、等、５ｃｉｅｎ
ｃｅ１９６：１８０−１８２　（１９７７））。フィル
ターをブレハイフ゛リッド化し、５　Ｘ　Ｄｅｎｈａｒ
ｄｔ　ｉ容液、５０　ｍ　Ｍ　　ＮａＰＯ４および１ｇ
ｇ／ｍ１．のサケ精子ＤＮＡを含む５ｘｓｓｃ中でハイ
ブリッド化した。プレハイブリッド化は４５°Ｃで１時
間行なった。
ハイブリッド化は３２　ｂｐ　（’　５−ＴＴＧＧＧＣ
ＴＧＧＴＣＡＣＡＧＧＡＧＧＴＧＧＡＧＣＡＧＣ，Ｔ（
：、ＡＣ）または４７　ｂ　Ｐ　（５’　−ＧＡＧＣ；
ＴＧＴＴＣＴＣＡＡＡＣＡＧＣＴＣＣＡＧＧＣＣＣＴＧ
ＧＧＧＣＣＧＣＡＧＧＴＣＣＡＧＣＴＣ）抗惑覚オリゴ
ヌクレオチドを上述の方法で、それぞれＩＣＡＭ−１）
リプシンペプチドＪおよびＡＡ（第６表および第７表）
上で用いて行なった（Ｌａｔｈｅ、　Ｒ，Ｊ、　Ｍｅｌ
ｅｃ、　Ｂｉｏｌ、　　１８３　：　１−１２（１９８
５））。オリゴヌクレオチドはｒ−（”Ｐ）ＡＴＰでＴ
４ポリヌクレオチドキナーゼおよび製造者にューイング
ランド　バイオラプス社）に推奨される条件を用いて末
端標識した。オーバーナイトハイブリッド化に続いて、
フィルターを２　Ｘ　Ｓ　Ｓ　Ｃ１０，１％ＳＤＳで３
０分間、４５°Ｃで２回洗浄した。ファージをハイブリ
ッド化を示すプラーグから単離し、連続再塗布および再
スクリーニングにより精製した。
Ｉ　ＣＡＭ−１の遺伝子を別法として抗Ｉ　ＣＡＭ−１
抗体の使用によりクローニングできる。ＤＮＡまたはよ
り好ましくはｃＤＮＡをＩ　ＣＡＭ−１を発現し得る細
胞゛から抽出し精製する。精製ｃ、　ＤＮＡをフラグメ
ント化しくせん断化、エンドヌクレアーゼ消化等により
）ＤＮＡまたはｃＤＮＡフラグメントのブール のＤＮＡまたはｃＤＮＡフラグメントを発現ベクターに
クローニングして各々のメンバーが特異的クローン化Ｄ
ＮＡまたはｃＤＮＡフラグメントを含有する発現ベクタ
ーの遺伝子ライブラリーを調製する。
実施例１７ ｃＤＮＡクローンの分析 陽性クローンからのファージＤＮＡをＥｃｏＲｌで消化
し、１つのクローンからのｃＤＮＡを７’ローブとして
用いてサウサーン分析により試験した。交差ハイブリッ
ド化した最大サイズｃ　ＤＮＡ挿入物をプラスミドベク
ターｐＧＥＭ４Ｚ（プロメガ社）のＥｃｏＲ１サイトに
サブクローニングした。両配向にＣＤＮＡを含むＨＬ−
６０サブクローンをエンドヌクレアーゼ■消化［Ｈｅｎ
ｉｋｏ（ｆ。
ｓ．、辿　且：３５１−３５９　（１９８４）］により
製造者の推奨（エラスーアーベース、プロメガ社）に従
って欠落させた。漸次的に欠落させたｃＤＮＡを次いで
クローニングしてジデオキシヌクレオチド鎖終端ンーケ
ンシングに製造者の推奨（シーケナーゼ、Ｕ．Ｓ，バイ
オケミカル社）に従って供した（Ｓａｎｇｅｒ，　Ｆ，
等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ。
Ａｃａｄ，　Ｓｃｉ　　（　Ｕ　ＳＡ）ユ４　：　５４
６３−５４６７（１　９　７　７）　”Ｊ　。ＨＬ−６
　０　ｃＤＮＡ５　’およびコード用領域を両ストラン
ド上で完全にシーケンシングし、３′領域を両ストラン
ド上で約７０％シーケンシングした。代表的な内皮ｃＤ
ＮＡをその長さの殆どに亘って４ｂｐ認識制限酵素フラ
グメントのショトガンクローニングによりシーケンシン
グした。
１種のＨＬ−６０および１種の内皮細胞ｃＤＮＡのｃＤ
ＮＡ配列を確立した（第８図）　。３０２３ｂｐ配列は
短い５°未はん訳領域と位置２９６６に共通ポリアゾヒ
ル化シグナルを有する１．３ｋｂ３°未はん訳領域を含
む。最長開放読み枠は位置５８の第１ＡＴＧで始まり位
置１６５３のＴＧＡ終端トリプレットで終る。はん訳ア
ミノ酸配列と合計９１個のアミノ酸の８個の異なるトリ
プシンペプチドから決定した配列（第８図中でアンダー
ラインを施している）との間の同一性は信頼できるＩＣ
ＡＭ　　１ｃＤＮＡが単離されたことを確認した。配列
分析に基づき、ＬＦＡ−１により認識されたＩＣＡＭ　
　ｌ内の可能性あるペプチドを第８表に示す。
疏水性分析（Ｋｙｔｅ、　Ｊｏ等、Ｊ、　Ｍｅｌｅｃ、
　Ｂｉｏｌ。
１５７　：１０５−１３２　（１９８２））は２７残基
シグナル配列の存在を示唆している。＋１グルタミンの
役目は３種のＩ　ＣＡＭ−またん白質調製物上にＮ−末
端配列を本発明で得ることができないことと一致してお
り；グルタミンはフィログルタミン酸に環状化しブロッ
クしたＮ−末端をもたらす。１〜４５３のほん訳配列は
主として親水性であり２４残基の疏水性の推定トランス
メンブランドメインが続く。トランスメンブランドメイ
ンはその後すぐに２７残基の推定細胞質ドメイン内に含
まれた数個の荷電残基が続く。
成熟ポリペプチド鎖の予示すイズは５５，２１９ダルト
ンであり、脱グリコジル化Ｉ　ＣＡＭ−１の観察された
サイズ５５，０００と良好に一致している（Ｄｕｓｔｉ
ｎ、　Ｍ、Ｌ、等、Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　　１３７
　：　２４５−２５４　（１９８６））。８個のＮ−結
合グリコシル化部位が予示される。これらの部位の２の
トリプシンペプチド配列中のアスパラギンの不存在はそ
れらのグリコジル化とそれらの細胞外配向をに５１Ｊし
ている。高マンノースＮ−結合カルボノ１イドレート当
り２，５００ダルトンを想定すると、７５．０００ダル
トンのサイズカ月ＣＡＭ−１プレカーサーについて予示
され、観察されたサイズ７３．０００ダルドア　（Ｄｕ
ｓｔｉｎ、　Ｍ、Ｌ、等、Ｊ。
Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１３７　：　２４５−２５４　（１
９８６）〕に匹敵する。高マンノースのコンプレックス
カルボハイドレートへの転換後、成熟ＩＣＡＭ−１糖た
ん白質は細胞の種類により７６〜１１４ｋｄである〔Ｄ
ｕｓｔｉｎ、　Ｍ、Ｌ、等、Ｊ、　　Ｉｍｍｕｎｏｌ、
１３７　：２４５−２５４　（１９８６）’］。即ち、
ＩＣＡＭ−１は高度にグリコジル化されているのが典型
的な完全膜たん白質である。
実施例１８ Ｉ　ＣＡ　Ｍ　−１は免疫グロブリン超遺伝子群のイン
テグリン結合性１員である ＩＣＡＭ−１内部繰返し配列をミクロジー二（！、Ｉｉ
ｃｒｏｇｅｎｉｅ）たん白質配列プログラム（Ｑｕｅｅ
ｎ。
口１等、Ｎｕｃｌ、　Ａｃ１ｄ　Ｒｅｓ、　　１２　：
　５８１−５９９（１９８４＞）を用い次いて検査する
ことによって行なった。Ｉ　ＣＡＭ−１のＩ　ｇＭ、Ｎ
−ＣＡＭおよびＭＡＧへの配列をミクロジー二およびＡ
　ＬＩＧＮプログラム（Ｄａｙｐｏ（ｆ、　Ｍ、Ｏ，等
、Ｍｅ　ｔｈ　。
Ｅｎｚｍｏｌ、　９１　：５２４　５４５　（１９８３
）］を用いて行なった。ナショナル　バイオメゾカルリ
サーチ　ファンデーション（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｂｉｏ
ｍｅ−ｄｉｃａｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｆｏｕｎｄａｔ
ｉｏｎ）に保管されている４種のたん白質配列データベ
ースをＷｉｌｌｉａｍｓとＰｅａｒｓｏｎのＦＡＳＴＰ
プログラムを用いてたん白質配列の類似性について調査
した（Ｌｉｐｍａｎ、　Ｄ、Ｊ。
等、５ｃｉｅｎｃｅ　２２７　：１４３５−１４３９（
１９８５））。
Ｉ　ＣＡＭ−１はインテグリンのりガントであるので、
免疫グロブリン超遺伝子群の１員であることは予期され
なかった。しかしながら、Ｉ　ＣＡＭ−１配列の調査は
その配列が免疫グロブリン超遺伝子群中の身内関係に提
唱されたすべての規阜を満たすことを示している。これ
らの基準を以下に説明する。
Ｉ　ＣＡＭ−１の全細胞外ドメインを第９Ａ図に配列し
て示した５つの相同性免疫グロブリン様ドメインから構
築する。ドメイン１−４はそれぞれ８８．９７．９９お
よび９９の残基長であり、かくして典型的なＩｇドメイ
ンサイズを有しており；ドメイン５は６８個の残基中で
切り取られている。
ＦＡＳＴＰプログラムを用いてのＮＢＲＦデータベース
の調査はＩｇＭとＩｇＧ　　Ｃドメインを包含する免疫
グロブリン超遺伝子群の１員、Ｔ細胞レセプターαサブ
ユニット可変ドメイン、およびアルファ１ベータ糖たん
白質と有意の相同性を示していた（第９８−Ｄ図）。
上記の情報を用いて、Ｉ　ＣＡＭ−１のアミノ酸配列を
免疫グロブリン超遺伝子群の他の１員のアミノ酸配列と
比較した。
Ｉｇ超超遺伝子群メインの３つのタイプ、■、Ｃ１およ
びＣ２は分化されている。■とＣの両ドメインは内部ド
メインジスルフィド結合により一緒に結合している２β
−シートから構築されており；■ドメインは９つの抗千
行β−ストランドを有しＣドメインは７つ有している。
一定のドメインを第９Ａ図に示した特徴的残基に基づい
てＣ８およびＣ２−セットに分割した。Ｃ３−セットは
抗原認識中に含まれるたん白質を含んでいる。
Ｃ２−セットは数個のＦＣレセプターとＣＤ２、ＬＦＡ
−３、ＭＡＧおよびＮＣＡＭを包含する細胞粘着中に含
まれるたん白質とを含んでいる。ＩＣＡＭ−１ドメイン
はこのセット中でＩ　ＣＡＭ−１と置き変っているＣ２
−セットのドメインと最も強い相同性を有することが判
った；このことは第９図のβ−ストランドＢ−Ｆについ
て示されているように０１　ドメインよりもＣ２中の保
持残基により強く類似している点にも反映されている。
また、ＩＣＡＭ−１ドメインは■およびＣＩ　ドメイン
中の上記ストランドとよりもＣ２ドメインのβストラン
ドＡおよびＧとより一層良好に列んでおり、全Ｃ２ドメ
イン強度を横切って良好な配列を可能としている。ＮＣ
ＡＭ、ＭＡＧおよびアルファ１−β糖たん白質からのＣ
２ドメインとの配列は第９Ｂ図および第９Ｃ図に示され
ており；同一性は２８〜３３％の範囲であった。Ｔ細胞
レセプクー■α２７％同−性およびＩｇＭ　　Ｃドメイ
ン３３４％同一性との配列も示されている（第９Ｂ、９
Ｄ図）。
免疫グロブリンドメインの最も重要な特徴付の１つはβ
シートサンドイッチを安定化するＢおよびＦβストラン
ドを架橋するジスルフィド結合システィンであり；ＩＣ
ＡＭ−１においてはシスティンはすべての場合に保持さ
れているが、ロイシンが見出されるドメイン４のストラ
ンドｆにおいて上記サンドイッチに面しいくつかの他の
■−およびＣ２−セットドメインに提案されたような接
触を安定化している。システィン（４３，５０，５２お
よび３７残基）間の距離はＣ２セットについて述べたと
おりである。
ＩＣＡＭ−１中の鎖間ジスルフィド結合の存在について
試験するために、内皮細胞ＩＣＡＭ−１を還元および非
還元条件下で５ＤＳ−ＰＡＧＥに供した。内皮細胞ＩＣ
ＡＭ’−１はこれがＪＹまたは毛状ひ臓細胞ＩＣＡＭ−
１よりも小さいグリコンル化異種原性を示しＭｒ中のシ
フトにより太きな感応性を示すことから使用した。従っ
て、ＩＣＡＭ−１を１６時間ＬＰＳ　（５μｇ／ｍ（ｆ
１）刺激ヘソ帯静脈内皮細胞培養物から前述したような
イノムアフィニティークロマトグラフイーにより精製し
た。アセトン沈降Ｉ　ＣＡＭ−１を０．２５％２−メル
カプトエヌノールまたは２５ｍＭイオドアセタミド含有
のサンプルバッフｙ−［Ｌａｅｍｍｌｉ、　Ｕ。
Ｋ、、　Ｎａｔｕｒｅ　　２２７　：　６８０　６８５
　（１９７０）　）中に再懸濁させ１００°Ｃに５分間
もたらした。サンプルを５ＤＳ−ＰＡＣ；Ｅ４６７０お
よび銀染色４６１３に供した。内皮細胞Ｉ　ＣＡＭ−１
は還元条件下で１００ｋｄの見掛けのＭｒを非還元条件
下で９６ｋｄを示し天然Ｉ　ＣＡＭ−１中の鎖間ジスル
フィドの存在を強く示唆していた。
二次構造を予想するための一次配列の使用（Ｃｈｏｎ、
　Ｐ、Ｙ、等、Ｂｉｏｃｈｅｍ、±３：２１１−２４５
（１９７４））は、第９Ａ図上方にａ−ｇと表示され、
免疫グロブリンドメインについての予想を正確に満たし
また免疫グロブリン中のストランドＡ−Ｈの各位置（第
９Ａ図下方）に相応する各ＩＣＡＭ−１ドメイン中の７
つの予期されたβ−ストランドを示していた。ドメイン
５はＡおよびＣストランドを欠損しているが、これらは
シートの端部を形成しているので、各シートは依然とし
て恐らくはストランドＤと形成しておりいくつかの他の
０２　ドメインで提案されたようにストランドＣの代理
をしており；またＢおよびＦストランド間の特徴的ジス
ルフィド結合は影響を受けないであろう。即ち、ドメイ
ンサイズ、配列相同性、推定ドメイン間ジスルフィド結
合を形成する保持システィン、ジスルフィド結合の存在
、および予想βシート構造の基準はすべて免疫グロブリ
ン超遺伝子群中へのＩ　ＣＡＭ−１の内在を満たしてい
る。
Ｉ　ＣＡＭ−１は０２セツトのＮＣＡＭおよびＭＡＧ糖
たん白質と最も強く相同性であることが判明した。この
ことはＮＣＡＭとＭＡＧが共に細胞−細胞粘着を媒介す
るので特に重要である。ＮＣＡＭはニューロン−ニュー
ロンおよヒ神経−筋相互作用において重要であり（Ｃｕ
ｎｎｉｎｇｈａｍ、　Ｂ、Ａ、等、またＭＡ（１，はミ
ニリン化（ｍｙｅｌ　１ｎａｔｉｏｎ）中のニューロン
−オリゴデンドロサイトおよびオリゴデントロサイトー
オリゴデントロサイト相互作用において重要である（Ｐ
ｏｌｔｏｒａｋ、　Ｍ、等、Ｊ、　Ｃｅ１ｌ。
肛虹、１０５　：　１８９３−１８９９　（１９Ｂ？）
）。
ＮＣＡＭとＭＡＧの細胞表面発現は神経系形成およびミ
リエン化中に、それぞれ、炎症におけるＩＣＡＭ−１の
調整された誘起と類似して発展的に調整されている（Ｓ
ｐｒｉｎｇｅｒ、　Ｔ、Ａ、等、Ａｎｎ、　Ｒｅｖ。
Ｉｍｍｕｎｏｌ、　　５：２２３−２５２　（１９８７
））。
ＩＣＡＭ−１、Ｎ　ＣＡ　Ｍ　（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ
、　Ｂ、Ａ、等、５ｃｉｅｎｃｅ　２３６　：　７９９
−８０６　（１９８７）　）、およびＭＡＧ　（Ｓａｌ
ｚｅｒ、　Ｊ、Ｌ９等、Ｊ、　Ｃｅ１１．　Ｂｉｏｌ。
１０４：９５７−９６５　（１９８７））は全体構造並
びに相同性において類似している、何故ならば、各々は
Ｎ末端細胞外領域を形成する５つの０２　ドメインから
構成された完全脱糖たん白質であるからである。ただし
、ＮＣＡＭにおいては、ある追加の非Ｉｇ様配列が最後
の０２　ドメインとトランスメンブランドメイン間に存
在する。ＩＣＡＭ−１はトランスメンプランと細胞質ド
メインを含むその全体長に亘ってＭＡＧと２１％の同一
性を有して列んでおり；同じ％同一性がＩ　ＣＡＭ−１
とＮＣＡＭ−１の５つのドメインを比較したとき見出さ
れる。Ｉ　ＣＡＭ−１とＭＡＧの二次構造の図式的比較
は第１０図に示している。ドメイン対ドメインの比較は
Ｉ　ＣＡＭ−１とＮＣＡＭ内のドメイン間の相同性のレ
ベル（それぞれ、×±ｓ、ｄ、２１±２．８％および１
８．６±３．８％）はＩＣＡＭ−１ドメインをＮＣＡＭ
およびＭＡＧドメインと比較したときの相同性のレベル
（それぞれ、２０．４±３．７および２１．９±２．７
）と同じであることを示している。ＮＧＡＭ　（Ｃｕｎ
ｎｉｎｇｈａｍ、　Ｂ、へ０等、９１４　（１９８７）
）およびＭＡＧ　（Ｌａｉ、　Ｃ，等、Ｐｒｏｃ、　　
Ｎａｔｈ、　　八ｃａｄ、　　Ｓｃｉ　　　（ＵＳＡ）
　　８　４　　：４３７７−４３４１　（１９８７））
のＣ−末端領域における別の総合の証拠は存在するけれ
ども、これが内皮またはＨＬ−６０Ｉ　ＣＡＭ−１クロ
ーンのシーケンシングにおいであるいは種々のタイプの
ＩＣＡＭ−またん白質バックボーンおよびプレカーサー
の研究（Ｄｕｓｔｉｎ、　ＭＡ０等、Ｊ、　Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ、　　１３７　：２４５−２５４　（１９８６））
において見出されたという証拠はない。
Ｉ　ＣＡＭ−１は多くの種々の細胞種とのリンパ球相互
作用におけるＬＦＡ−１用のリガンドとして機能する。
リンパ球は人工膜２重層に含まれたＩ　ＣＡＭ−１と結
合し、これはリンパ球上にＬＦＡ−１を必要としＩ　Ｃ
ＡＭ−１とＬＦＡ−１の相互作用を直接示唆している（
Ｍａｒｌｉｎ、　Ｓ、Ｄ、等、Ｃｅ１ｌ　　５１　：８
１３−８１９　（１９８７））、ＬＦＡ−１は白血球イ
ンテグリンであり免疫グロブリン様特徴を有しない。白
血球インテグリンは１種のインテグリン亜族を含む。他
の２つの亜族は細胞マトリックス相互作用を媒介し、フ
ィブロネクチン、ビトロネクチン、コラーゲンおよびフ
ィフリノーゲンを包含するそのリガンド内の配列ＲＧＤ
を認識する（Ｄｙｎｅｓ、　Ｒ，０，、Ｃｅ１ｌ　　　
４８　：５４９−５５４　（１９８７）　；Ｒｕｏｓｌ
ａｈｔｉ、　Ｅ、等、５ｃｉｅｎｃｅ　　２３８：４９
１　　４９７　　（１９８７））。
白血球インテグリンは白血球上のみに発現し、細胞−細
胞相互作用に含まれ、わずかに公知のリガンドはＩ　Ｃ
ＡＭ−１と１Ｃ３ｂ（即ち免疫グロブリン様特徴を示さ
ない補体成分Ｃ３のフラグメント）であり、Ｍａｃ−１
によって認識される（Ｋｉｓｈｉｍｏｔｏ、　Ｔ、に、
等、Ｌｅｕｋｏｃ　ｔｅ　Ｔ　　ｉｎ　ＩＩ［＋Ｍ　ｃ
　Ｍ　ｉ　　Ｃｈａｅｌ、　Ｍ、鳩、スプリンガー　ベ
ルラーグ、ニューヨーク（１９８７）　　；　Ｓｐｒｉ
ｎｇｅｒ　Ｔ、Ａ。
等、Ａｎｎ、　Ｒｅｖ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　　５　：
　２２３　２５２（１９８７）　　　、　　八ｎｄｅｒ
ｓｏｎ、　　Ｄ、Ｃ，等、　Ａｎｎ、　　Ｒｅｖ。
ル世ニー支８　：１７５−１９４　（１９８７）　：ｌ
。配列分析により、ＬＦＡ−１により認識されるＩＣＡ
Ｍ−１配列内の潜在的ペプチドは第９表に示す。
第９表 ＬＦＡ−１に認識され得る Ｉ　ＣＡＭ−１内のポリペプチド −Ｌ−１？−Ｇ−Ｅ−に−Ｅ−Ｌ− −Ｒ−Ｇ−Ｅ−に−Ｅ−Ｌ−に−Ｒ−Ｅ−Ｐ−−Ｌ−Ｒ
−Ｇ−Ｅ−に−Ｅ−Ｌ−に−Ｒ−Ｅ−Ｐ−Ａ−Ｖ−Ｇ−
Ｅ−Ｐ−Ａ−Ｅ−−Ｐ−Ｒ−Ｇ−Ｇ−３− −Ｐ−Ｇ−Ｎ−Ｎ−Ｒ−に− 一ローＥ−Ｄ−５−Ｑ−Ｐ−門一 −Ｔ−Ｐ−Ｅ−Ｒ−Ｖ−Ｅ−Ｌ−Ａ−Ｐ−Ｌ−Ｐ−Ｓ−
−Ｒ−Ｒ−Ｄ−Ｈ−Ｈ−Ｇ−Ａ−Ｎ−Ｆ−５−−Ｄ−Ｌ
−Ｒ−Ｐ−Ｑ−Ｇ−Ｌ−Ｅ− Ｉ　ＣＡＭ−１はインテグリンに結合する免疫グロブリ
ン超遺伝子群の１員の最初の例である。これらの群の双
方は細胞粘着において重要な役割を発揮するけれども、
両者間の相互作用は以前には予期されてなかった。これ
に対し、免疫グロブリン超遺伝子群内の相互作用は全り
一般的である。
インテグリンと免疫グロブリン群との間の相互作用のさ
らなる例が発見されるであろうことは全く可能である。
ＬＦＡ−１はＩ　ＣＡＭ−１とは異なるリガンドを認識
しくＳｐｒｉｎｇｅｒ、　Ｔ、Ａ、等、Ａｎｎ。
Ｒｅｖ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　　５　：　２２３−２５
２　（１９８７）　：ｌ、白血球インテグリンＭａｃ−
１は好中球−好中球粘着のＣ３ｂ　ｉ　と異なるリガン
ドを認識する〔八ｎｄｅｒｓｏｎ、　　Ｄ、Ｃ，等、　
Ａｎｎ、　　Ｒｅｖ、　　Ｍｅｄ、　　　≦３８：１７
５−１９４　（１９８７））。さらにまた、精製したＭ
ＡＧ含有ベシクルはＭＡＧであるニューリット（ｎｅｕ
ｒｉｔｅｓ）に結合し、かくしてＭＡＧは異種レセプタ
ーと異姓性相互作用可能でなければならない［：Ｐｏ１
ｔｏｒａｋ、　Ｍ、等、Ｊ、　Ｃｅ１１．　Ｂｉｏｌ。
１０５　：１８９３−１８９９　（１９８７）〕。
神経−神経および神経−筋肉相互作用におけるＮＣＡＭ
の役割は同種親和性ＮＣＡＭ−ＮＣＡＭ相互作用に基づ
くことは示唆されている（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ、　Ｂ
、Ａ、等、５ｃｉｅｎｃｅ　２３６　：　７９９−８０
６　（１９８７））。ミニリン鞘形成中に軸索を取り囲
むシュヴアン細胞の隣辺回転ループ間の相互作用におけ
るＭＡＧの重要な役割は異種レセプターとの相互作用ま
たは同種親和性ＭＡＧ−ＭＡＧ相互作用に基づき得る。
ＮＣＡＭとの相同性および免疫グロブリン超遺伝子群内
でのドメイン−ドメイン相互作用の頻繁な出現はＩ　Ｃ
ＡＭ−１が同種親和性相互作用並びにＩ　ＣＡＭ−１−
ＬＦＡ−１異姓性相互作用に係わり得る可能性を引き起
す。しかしながら、同様な密度のＬ　ＦＡ−１とＩ　Ｃ
ＡＭ−１を共発現するＢリンパ芽球細胞の人工または細
胞単一層中のＩ　ＣＡＭ−１への結合はＢ−リンパ芽球
（７）　Ｌ　Ｆ　Ａ　　Ｉ　　Ｍ　Ａ　ｂ　ニヨル１７
１処理によって完全に抑制され得るが、粘着はｔＣＡＭ
−Ｉ　　ＭＡｂによるＢ−リンパ芽球前処理による影響
はない。ＩＣＡＭ−Ｉ　　Ｍａｂによる単−層の前処理
は結合を完全に壊滅させている（Ｄｕｓｔｉｎ、　Ｍル
８等、Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　　１３７　：　２４５
２５４　（１９８６）　；　Ｍａｒｌｉｎ、　Ｓ、Ｄ、
等、Ｃｅ１ｌ。
５１　：８１３−８１９　（１９８７））。これらの知
見はＩ　ＣＡＭ−１同種親和性相互作用が全く起した場
合、その作用はＬＦＡ−１との異姓性相互作用よりもか
なり弱（なければならないことを示している。
白血球インテグリンが基本的に異なる方法でリガンドを
認識する可能性はリガンド結合において重要でありＲＧ
Ｄ認識性インテグリン中には存在しないそれらのαサブ
ユニット中の１８０残基配列の存在と一致する（Ｃｏｒ
ｂｉ、　Ａ、等、ＥＭＢＯＪ、６：４０２３−４０２８
　（１９８７）］。
Ｍａｃ−１はｉ　Ｃ：＋ｂ５０８６中に存在するＲＧＤ
配列を認識することが提示されているけれども、Ｉ　Ｃ
ＡＭ−１中にはＲＧＤ配列はない（第８図）。
これはフィブロネクチンペプチドＧＲＧＤＳＰとコント
ロールペプチドＧＲＣ，ＥＳＰがＩ　ＣＡＭ−１−ＬＦ
Ａ−１粘着を抑制できないことと一致している（Ｍａｒ
ｌｉｎ、　Ｓ、Ｄ、等、鮭、立上：８１３−８１９　（
１９８７））。しかしながら、ＰＲＧＧＳおよびＲＧＥ
ＫＥのような関連配列はＩ　ＣＡＭ−１中に、それぞれ
、ドメイン２のβ−ストランドａとｂおよびドメイン２
のＣとｄ間のループに予示される領域において存在して
おり（第９図）、従って、認識について受は入れられ得
る。興味あることは相同性ＭＡＧ分子がドメイン１と２
の間にＲＧＤ配列を含むことである（Ｐｏｌｔｏｒａｋ
、　Ｍ、等、Ｊ、Ｃｅ１１．　Ｂｉｏｌ、１０５　：１
８９３−１８９９（１９８７）　；　５ａｌｚｅｒ、　
Ｊ、Ｌ、等、Ｊ、　Ｃｅ１１．　Ｂｉｏｌ。
１０４　：９５７−９６５　（１９８７））。
実施例１９ サウサーンおよびノウサーンプロット サウサーンプロットを３種の細胞系から抽出した５μｇ
の遺伝子ＤＮＡを用いて行なった：ＢＬ２、バーキット
リンパ腫細胞系（Ｄｒ、　Ｇ１１ｂｅｒｔＬｅｎｏｉｒ
から供与）、ＪＹおよびＥｒ−ＬＣＬ、ＥＢＶ形質転換
Ｂ−リンパ腫様細胞系。
各ＤＮＡを５×製造者が推奨する量のＢａｍＨｌ、！：
ＥＣ０ＲＩエンドヌクレアーゼにューイングランド　バ
イオラプス社）で消化した。０．８％アガロースゲルに
よる電気泳動に続いて、ＤＮＡをナイロン膜（ゼータプ
ローブ、バイオラド社）に移した。フィルターを予備ハ
イブリッド化およびα−（”Ｐ）ｄ　ＸＴＰ　”　ｓで
標識したＨＬ−６０からのＩＣＡＭ　　ｃＤＮＡを用い
ての標準手法に従ってランダムプライミングによりハイ
ブリッド化した。ノウサーンプロット２０μｇの全ＤＮ
Ａまたは６μｇのポリ（Ａ）”　ＲＮＡを用いて行なっ
た。ＲＮＡは変性し１％アガローズーホルムアルデヒド
ゲルにより電気泳動し、ゼータプローブに電気移動させ
た。各フィルターを予備ハイブリッド化し３２ｐ標識オ
リゴヌクレオチドプローブ（前述の）のＨＬ−６０ＣＤ
ＮＡプローブを用いて前述したようにしてハイブリッド
化した（Ｓｔａｕｔｏｎ、　Ｄ、Ｅｌ等、Ｅｍｂｏ　Ｊ
、　　６　：　３６９５−３７０１　（１９８７））。
３ｋｂ　　ｃＤＮＡプローブおよびＢａｍＨｌとＥＣ０
ＲＩで消化した遺伝子ＤＮＡを用いたサウサーンプロッ
トはそれぞれが単一遺伝子を示しまたコード化情報の殆
どが８ｋｂ内に存在することを示す２０および３ｋｂの
単一主要ハイブリッド化性フラグメントを示した。３種
の細胞系のプロットにおいては、制限フラグメント多形
性の証拠はなかった。
実施例２０ ＩＣＡＭ−１遺伝子の発現 “発現ベクター”は、（適当な転写性および／またはほ
ん訳性コントロール配列の存在に基づき）ベクターにク
ローニングされるＤＮＡ　（またはＣＤＮＡ）を発現し
得、それによってポリペプチドまたはたん白質を産生し
得るベクターである。クローニングした配列の発現は発
現ベクターを適当なホスト細胞に組み込んだときに起る
。原核細胞発現ベクターを用いる場合は、適当なホスト
細胞はクローニングした配列を発現し得る任意の原核細
胞であろう。同様に、真核発現ベクターを用いる場合、
適当なホスト細胞はクローニングした配列を発現し得る
任意の真核細胞である。重要なことは真核ＤＮＡは介在
配列を含み得るので、またそのような配列は原核細胞中
では正確に加工できないので、原核ゲノム発現ベクター
ライブラリーを産生ずるためには、Ｉ　ＣＡＭ−１を発
現し得る細胞からのｃＤＮＡを用いることが好ましい。
ｃＤＮＡを調製する方法およびゲノムライブラリーを産
生ずる方法はＭａｎｉａｔｉｓ、　Ｊ、等により開示さ
れている（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ　　：
　Ａ　ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ、コールド　
スプリング　ハーバ−プレス社、コールド　スプリング
　ハーバ−、ＮＹ（１９Ｂ２））。
上述の発現ベクターゲノムライブラリーを用いてホスト
細胞のバンクを創生ずる（その各々はライブラリーの１
員を含む）。発現ベクターはホスト細胞に任意の種々の
手段によって組み込し得る（即ち、形質転換、トランス
フェクション、原形質体融合、エレクトロポーレーショ
ン等）。発現ベクター含有細胞のバンクはクローン的に
増殖させ、その各員は個々にアッセイして（イムノアッ
セイを用いて）これらが抗Ｉ　ＣＡＭ−１抗体に結合し
得るかどうかを測定する。
抗Ｉ　ＣＡＭ−１抗体に結合し得るたん白質を産生ずる
細胞の発現ベクターはさらに分析してこれらのベクター
が全Ｉ　ＣＡＭ−１遺伝子を発現（または含有）するか
どうか、Ｉ　ＣＡＭ−１遺伝子のフラグメントのみを発
現（または含有）するかどうかあるいは生成物が免疫学
的にＩ　ＣＡＭ−１に関係したとしてもＩ　ＣＡＭ−１
ではない遺伝子を発現（または含有）するかどうかを決
定する。そのような分析は任意の都合の良い方法で行な
ってよいけれども、好ましいのは発現ベクターにクロー
ニングされるＤＮＡまたはｃＤＮＡのヌクレオチド配列
を決定することである。そのようなヌクレオチド配列を
検査してＩ　ＣＡＭ−１のトリプシン消化フラグメント
（第５表）と同じアミノ酸配列を有するポリペプチドを
コードし得るかどうかを決定する。
Ｉ　ＣＡＭ−１遺伝子をコードするＤＮＡまたはｃＤＮ
Ａ分子を含む発現ベクターは、かくして、（ｉ）抗Ｉ　
ＣＡＭ−１抗体に結合し得るたん白質の発現を行なう能
力；および（ｉｉ）ＩＣＡＭ−１のトリプシンフラグメ
ントの各々をコードし得るヌクレオチド配列の存在によ
って認識し得る。そのような発現ベクターのクローニン
グＤＮＡ分子は発現ベクターから取り出して純粋な形で
単離できる。
実施例２１ 精製ＩＣＡＭ−１の機能活性 細胞中では、ＩＣＡＭ−１は細胞膜と会合した表面たん
白質として通常は機能する。従って、精製ＩＣＡＭ−１
の機能は分子を人工脂質膜（リポソームまたはベシクル
）中にたん白質を洗浄剤可溶化脂質中に溶解し次いで洗
浄剤を透析により除去することによって再構成させたの
ち試験した。
ＪＹ細胞から精製し洗浄剤オクチルグリコシド中に上述
のようにして溶出したＩＣＡＭ−１をベシクル中に再構
成し、ＩＣＡＭ−１含有ベシクルをガラスカバースリッ
プまたはプラスチック培養ウェルに融合させたん白質に
結合する細胞の検出をできるようにした。
平坦膜およびプラスチック結合ベシクルの調製ベシクル
はＧａｙ等の方法により調製した〔」工Ｉｍｍｕｎｏｌ
、　　１３６：２０２６（１９８６））、即チ、タマゴ
ホスファチジルクロリンとコレステロールをクロロホル
ム中に溶解し７：２のモル比で混合した。脂質混合物を
チッ素ガス流下に回転させながら薄膜に乾燥させ、次い
で１時間で凍結乾燥させてすべての痕跡量のクロロホル
ムを除去した。脂質膜を１％オクチルグリコシド１０．
１４ＭＮａＣβ／２０ｍＭ）リス（ｐＨ７，２）中にホ
スファチジルクロリン最終濃度０．１　ｍ　Ｍに溶解し
た。約１０μｇの精製ＩＣＡＭ−１またはコントロール
脱糖たん白質としてのヒトグリコホリン（シグマケミカ
ル社、セントルイス、ＭＯ）を溶解脂質の各ｍβに加え
た。たん白質−脂質−洗浄剤溶液を２００容量の２０ｍ
Ｍ）リス１０．１４　Ｍ　ＮａＣｊ２、ｐＨ７，２の３
回交換およびＨＢＳＳの１回交換に対して４℃で透析し
た。
平坦膜はＢｒ１ａｎ等の方法により調製した［：Ｐｒｏ
ｃ。
Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、３ユニ６１５９　（１９
８４）：］。
ガラスカバースリップ（直径１１ｍｍ）を１７×洗浄剤
（Ｌｉｎｂｒｏ　）の１：６稀釈液中で１５分間煮沸し
、−夜蒸留水中で洗浄し、７０％エタノール中に浸し、
風乾させた。ＩＣＡＭ−１またはグリコホリンのいずれ
を含有するベシクル懸濁液の８０μβ小滴を２４ウエル
クルスクープレートのつ工ル底部に入れ、上記で調製し
たガラスカバースリップを静かに頂部に浮かした。室温
での２０〜３０分のインキュベーション後、ウェルをｌ
ｌＢｓ５で満し、カバースリップをひっくり返して平坦
面を上向きにした。次いでウェルをＨＢＳＳで十分洗浄
して未結合ベシクルを除去した。平坦膜表面は全く空気
にさらさなかった。
ガラス表面に融合させた平坦膜による実験途中で、Ｉ　
ＣＡＭ−１を含むベシクルはマルチウェルｍ織培養プレ
ートのプラスチック表面に直接結合し、特異的細胞結合
により明らかなような機能活性を保持していることが判
明した。そのようなベシクルは以後“プラスチック結合
ベシクル（ＰＢＶ）と称する。というのは、プラスチッ
クに結合した脂質ベシクルの性質を測定するのではない
からである。プラスチック結合ベシクルは３０μｌのベ
シクル懸濁液を直接９６ウ工ル組織培養トレイ（ファル
コン）中のウェル底部に加え次いで平坦膜について述べ
たようにしてインキュベーションおよび洗浄を行うこと
によって調製した。
細胞粘着アッセイ 平坦膜またはプラスチック結合ベシクルを用いた細胞粘
着アッセイの両方を本質的に同じ方法で行ったが、ＰＢ
Ｖアッセイの細胞数および容量は平坦膜アッセイに用い
だのの１７５に減した。
正常コントロールおよびＬＦＡ−１を発現できない白血
球粘着欠損（ＬＡＤ）患者（Ａｎｄｅｒｓｏｎ。
Ｄ、　Ｃ１等、Ｊ、　Ｉｎｆｅｃｔ、Ｄｉｓ、　　　１
５２　：　６６８　（１９８５）　〕からのＴリンパ球
を、１μｇ／ｍβのコンカナバリン−Ａ　（Ｃｏｎ−Ａ
）を含む末梢血単核細胞をＲＰ　！Ｊ　１−１６４０＋
２０％ＦＣ３中で５Ｘ１０５細胞／ｍｌｌで３日間培養
することによって調製した。次いで、細胞をＲＰＭＩで
２回；５ｍＭメチル−アルファーｂ−マノフィラノシド
で１回洗浄して残留レクチンを細胞表面から除去した。
細胞をｌｎｇ／ｍｆの組換えＩＬ−２を含むＲＰＭＩ／
２０％ＦＣ３中で増殖させ、培養開始後１０および２２
日の間で使用した。
平坦膜またはＰＢＶに結合する細胞を検出するため、Ｃ
ｏｎ　Ａ芽球、Ｔ−リンパ腫５ＫＷ−３、ＥＢＶ形質転
換Ｂ　−ＩＪンパ腫様細胞系ＪＹ（ＬＦＡ−１陽性）お
よびＬＦＡ−１欠損リンパ腫様細胞系（ＢＢＮ）（患者
１由来、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ＋Ｔ、Ａ、等、ムハ匣り傾虹
　１６０：１９０１−１９１８（１９８６））を１　ｍ
ｌのＲＰＭＩ−１６４０／１０％ＦＣ３中のｌＸｌ０’
細胞を１００μＣｉのＮａ”　ＣｒＯ４で３７℃、１時
間インギュベートし、次いでＲＰＭＩ−１６４０で４回
洗浄し未結合標識を除去することによって放射性標識さ
せた。モーツクローナルブロッキング試験においては、
細胞またはプラスチック鯵吉合ベシクルはＲＰＭＩ−１
６４０／１０％ＦＣ３中の２０℃ｇ／ｎｌの精製抗体で
４℃にて３０分間前処理し、次いで４回洗浄して未結合
抗体を除去した。細胞結合に関しての２価イオンの効果
の実験においては、細胞をＣａ”　、Ｍｇ”＋を含まな
いＨＢＳＳ＋１０％透析ＦＣ３で１回洗浄し、ＣａＣｌ
とＭｇＣｌを決められた濃度に加えた。すべての実験に
おいて、細胞および平坦膜またはＰＢＶは適当な温度（
４℃、２２℃または３７℃）で適当なアッセイバッファ
ー中で予備平衡させた。
精製ＩＣＡＭ−１に結合する細胞を測定するために、５
ＩＣｒ標識細胞（平坦膜アッセイでの５×１０’ＥＢＶ
形質転換体；　ＰＢＶアッセイでの１Ｘ１０’ＥＢＶ形
質転換体マタハＳ　Ｋ　Ｗ　−３１［１胞、２　Ｘ　１
０’　Ｃｏｎ−Ａ芽球）を平坦膜またはＰＢＶ上で２５
Ｘｇで２分間遠心し、次いで４℃、２２℃または３７℃
で１時間インキュベーションした。
インキュベーション後、未結合細胞を適当な温度での予
備平衡させたバッフブーによる充填、吸引の８回のサイ
クルによって除去した。結合細胞はウェル内容物の０．
１　Ｎ　ＮａＯＨ／　１％トリトンＸ−１００による可
溶化およびガンマ−カウンターでの計数によって定量し
た。％細胞結合は結合細胞からのｃｐｓを入力と細胞の
ｃｐＩｌｌで割ることによって決定した。平坦膜アッセ
イにおいては、入力ｃｐｓはカバースリップの表面積を
培養ウェルの表面積と比較した比に対して集めた。
これらのアッセイにおいて、ＥＢＶ形質転換Ｂ−リンパ
腫細胞、５ＫＷ−３７−リンパ腫細胞、およびＣｏｎ−
ＡＴリンパ芽球は人工膜中のＩＣＡＭ　−１に特異的に
結合した（第１１図および第１２図）。
結合は、細胞が等価の量の他のヒト細胞表面糖たん白質
グリコホリンを含んだコントロールの平坦膜またはベシ
クルに極めて貧弱にしか結合しなかったことから特異的
であった。さらにまた、ＬＦＡ−１陽性ＥＢＶ形質転換
体およびＣｏｎ　Ａ芽球も結合したが、それらのＬＦＡ
−１陰性等価物は何ら有意の程度に結合せず、結合が細
胞上のＬＦＡ−１の存在に依存していることを示した。
細胞結合の特異性および細胞ＬＦＡ−１への依存性の両
方はモノクローナル抗体のブロッキング試験において確
認した（第１３図）。ＪＹ細胞の結合はＩ　ＣＡＭ−１
含有ＰＢＶを抗Ｉ　ＣＡＭ−１モノクロ一ナル抗体ＲＲ
Ｉ／１前処理したとき９７％まで抑制できた。同じ抗体
による細胞の前処理は殆んど効果がなかった。逆に、抗
ＬＦＡ−モノクローナル抗体ＴＳ　１／１８は９６％ま
で結合を抑制したがＰＢＶでなく細胞を前処理したとき
はわずかであった。ＬＦＡ−３と反応性のコントロール
抗体ＴＳ２／９（異なるリンパ球表面抗原）は細胞また
はＰＢＶのいずれを前処理したときも有意の抑制効果は
なかった。この実験は人工膜の若干量の不純物のないＩ
　ＣＡＭ−１自体が観察された細胞粘着を媒介している
ことおよび粘着は結合性細胞上のＬＦＡ−１に依存して
いることを示している。
人工膜中のＩ　ＣＡＭ−１への細胞の結合もＬＦＡ−１
依存性粘着系の２つの他の特性：Ｃ度依存性と２価カチ
オンの必要性を示した。第１４図に示すように、Ｃｏｎ
−Ａ芽球はＰＢＶ中のＩ　ＣＡＭ−１に３７℃で最も効
果的に、２２℃で部分的に、４℃で極めて貧弱に結合し
た。第１５図に示すように、結合は完全に２価カチオン
の存在に依存している。生理学上の濃度においては、Ｍ
ｇ２゛は単独で最高の細胞結合を示したが、Ｃａ”の単
独は極めて低レベルの結合を示した。しかしながら、Ｃ
２＋と組合せた通常濃度の１７１０のＭ　ｇ　２”は共
働効果を有し最高の結合を示した。
要約すれば、人工膜中に混入させた精製ＩＣＡＭ−１に
対する細胞結合の特性性、モノクローナル抗体による特
異的抑制、および温度および２価カチオンの必要性はＩ
　ＣＡＭ−１がＬＦＡ−１依存性の粘着系の特異的リガ
ンドであることを示している。
実施例２２ アレルギーおよび毒性バッチ試験反応におけるＩ　ＣＡ
Ｍ−１とＨＬＡ−ＤＲの発現 ５人の正常人の皮ふ生検をそのｒｃＡＭ−１およびＨＬ
Ａ−ＤＲについて行った。ある血管中の内皮細胞は通常
ｒｃＡＭ−１を発現するけれども、正常度ふからのケラ
チン細胞にはＩ　ＣＡＭ−１は発現しないことが判った
。正常度ふ生検からの任意ケラチン細胞上のＨＬＡ−Ｄ
Ｒの染色は観察されなかった。Ｉ　ＣＡＭ−１とクラス
■抗原の発現動力学をアレルギー性および毒外皮ふ傷害
の生検の細胞において検討した。検討した６人の対象者
の半分がハプテンの適用後４時間でＩ　ＣＡＭ−１を発
現したケラチン細胞を有していることが判った（第１Ｏ
表）。ハプテンへの露出時間によりケラチン細胞上にＩ
　ＣＡＭ−１を発現する人の割合が増大し、また４８時
間までにケラチン細胞当りより多くのＩ　ＣＡＭ−１発
現を示す染色強度も増大した。事実、この時点で、すべ
ての生検のケラチン細胞の部分がＩ　ＣＡＭ−１に対し
て陽性に染色した。７２時間（ハプテン除去後２４時間
）で、８人の対象者の７人がケラチン細胞にＩ　ＣＡＭ
−１を発現しており、１人の対象者のＩ　ＣＡＭ−１発
現は４８〜７２時間の間に弱くなった。
正常度ふ　　　５　　　０　　０　　０４８ｂ８　　　
　５　　　０　　　３ １サンプルは少なくとも小群のケラチン細胞が染色した
場合に陽性とみなした。
ｂすべてのパッチはこの時点で除去した。
組織学上、ハプテンの適用後４時間で採取した生検から
のケラチン細胞上のＩ　ＣＡＭ−１の染色像は通常小群
生状であった。４８時間後、ＩＣＡＭ−１はケラチン細
胞の大部分の表面上に発現し、傷害の中心および周辺間
に差異はなかった。染色強度はケラチン細胞が爪角質層
に近づいたとき減少した。これは傷害の中心および周辺
から採られた生検において見い出された。また、この時
間でも、パッチ試験は陽性であった（浸潤、紅斑、小胞
）。
異なるハプテンを感受性個人に適用してもＩＣＡＭ　−
１発現における差異は見られなかった。ケラチン細胞以
外にも、Ｉ　ＣＡＭ−１は傷害部位のいくつかの単核細
胞および内皮細胞上にも発現した。
アレルギー皮ふ傷害のケラチン細胞上での肛Ａ−ＤＲの
発現はＩ　ＣＡＭ−１の発現よりも頻度は小さかった。
検討した対象者のうち、ハプテン適用後２４時間までに
ＨＬＡ−ＤＲに陽性に染色したケラチン細胞による傷害
を有するものはなかった。事実、わずかに４人の生検サ
ンプルがＨＬ　Ａ−ＤＲを発現したケラチン細胞を有す
るに過ぎず、ＨＬＡ−ＤＲに陽性でＩ　ＣＡＭ−１に陽
性でないケラチン細胞を有する生検はなかった。
アレルギーパッチ試験傷害と対照的に、はず油またはラ
ウリル硫酸ナトリウムで誘発させた毒性パッチ試験傷害
は試験のすべての時点でその表面にＩ　ＣＡＭ−１を殆
んど示さないケラチン細胞を有していた。実際に、バッ
チ適用後４８時間で、これはアレルギー性パッチ試験対
象者における最適の時点であるが、１４人の毒性パッチ
試験対象者のうちの１人が傷害中にＩ　ＣＡＭ−１を発
現するケラチン細胞を有していた。また、アレルギー性
パッチ試験生検と対照的に、毒性パッチ試験傷害のケラ
チン細胞上にＨＬＡ−ＤＲは発現しなかった。
これらのデータはＩ　ＣＡＭ−１が免疫系炎症中で発現
し毒性系炎症では発現しないことを示しており、かくし
て、Ｉ　ＣＡＭ−１の発現は、疾患が免疫抑制治療剤の
拒絶または服毒性によるのかどうかの判断が難しい場合
の急性腎疾患のような免疫系および毒性系炎症を区別す
るのに使用できる。
腎生検およびＩ　ＣＡＭ−１発現の向上の評価が免疫系
拒絶と非免疫系毒性反応の区別を可能にするであろう。
第１１表 毒性パッチ試験生検からのケラチン細胞上のＩ　ＣＡＭ
−１およびＨＬＡ−ＤＲの誘起動力学８　　　　３　　
　　１”０Ｏ ４８ｂ１４　　　　１　　　０　　　０為サンプルは少
なくともケラチン細胞の小群が染色された場合陽性とみ
なした。
１すぺでのパッチはこの時点で除去した。
実施例２３ 良外皮ふ病中のＩＣＡＭ　　１とＨＬＡ−ＤＲの発現 種々のタイプの炎症性成ふ病を有する患者からの傷害の
皮膚ふ生検からの細胞をそのＩＣＡＭ−１とＨＬＡ−Ｄ
Ｒの発現について検討した。アレルギー性接触湿疹、天
庖癒、および扁平苔をの生検中のケラチン細胞の１部は
ＩＣＡＭ−１を発現した。扁平苔蜜は４８時間アレルギ
ー性パッチ試験生検で見られた結果と同等か幾分強い像
による最も強く染色を示した（第１２表）。アレルギー
性パッチ試験の結果と同様に、最も強いＩＣＡＭ−１染
色は高単核細胞浸潤部位で見られた。さらにまた、試験
した１１の扁平苔痒生検のうちの８つはケラチン細胞上
でＨＬＡ−ＤＲ発現について陽性であった。
発疹とじんま疹を有する患者の皮ふ生検からのケラチン
細胞上のＩＣＡＭ−１の発現は少なかった。これらの疾
患を有する試験した７人の患者のうち４人のみが傷害部
位でＩＣＡＭ−１を発現したケラチン細胞を有していた
。ＨＬＡ−ＤＲ全発現１人の患者においてのみであり、
これはＩＣＡＭ−１と関連していた。
試験した良性炎症皮ふ病のすべてからの内皮細胞および
単核細胞浸潤の部分は変化度合でＩＣＡＭ−１を発現し
ていた。
第１２表 良外皮ふ病からのケラチン細胞上の ＩＣＡＭ−１とＨＬＡ−ＤＲの発現 扁平苔簿　　１１　　　３　　　０　　　　８天庖☆　
　２　２　０　　０ 発　　　疹　　　　３　　　　２　　　　０　　　　　
０じんま疹　　　４　　　１　　　０　　　　１６サン
プルは少なくともケラチン細胞の小群が染色された場合
陽性とみなした。
実施例２４ 悪外皮ふ病中のＩＣＡＭ−１とＨＬＡ−ＤＲの発現 良外皮ふ状態からの傷害とは異なり、悪外皮ふ傷害から
のケラチン細胞上のＩＣＡＭ−１の発現は変化に富んで
いた（第１３表）。試験した皮ふＴ−細胞リンパ腫２３
例のうち、ＩＣＡＭ−１陽性ケラチン細胞は１４例のみ
において同定された。
菌状息肉腫傷害の生検からのケラチン細胞では、病気の
進行がより前の段階に進むにつれてそのＩＣＡＭ−１発
現を消失する傾向にあった。しがしながら、ＩＣＡＭ−
１発現は皮ふＴ細胞リンパ腫傷害の殆んどからの変化割
合の単核細胞浸潤上に見られた。試験した残りのリンパ
腫のうちでは、８つのうち４つがＩＣＡＭ−１を発現し
たケラチン細胞を有していた。試験した悪外皮ふ病を有
する２９人の患者のうち、５例はＩＣＡＭ−１を発現す
ることなしにＨＬＡ−ＤＲを発現したケラチン細胞を有
していた。
第１３表 悪外皮ふ病からのケラチン細胞上の Ｉ　ＣＡＭ−１およびＨＬＡ−ＤＲの発現ＣＴＣＬ、Ｍ
Ｆｒ　　　　　　８　　１”　　　　０　　　　４ＣＴ
ＣＬ、門ＦＩＩ−ＩＩＩ　　　１０　　１　　　２．　
　　　５ＣＴＣＬ、ＳＳ　　　　　　　３　　１　　　
０　　　　２ＣＴＣＬ、　ラージ細胞　２　０　　２　
　　０ＣＢＣＬ　　　　　　　　２　　０　　　０　　
　　１皮ふ白血病　　　　３　　ｌ　　　１　　　１１
サンプルは少なくともケラチン細胞の小群が染色された
場合陽性とみなした。
実施例２５ ヒト末梢血単核細胞の増殖上の抗Ｉ　ＣＡＭ−１抗体の
効果 ヒト末梢血単核細胞を抗原またはマイトジェンの存在お
よび認識より誘起させ増殖させる。マイトジェン・コン
カナバリンＡまたはＴ細胞結合性抗体の０ＫＴ３のよう
なある種の分子は末梢血単核細胞の非特異的増殖を引き
起す。
ヒト末梢血単核細胞はこれらが特異的抗原を認識し得る
細胞の細個体群（ｓｕｂｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ）からな
る点で不均質である。特定の特異抗原を認識し得る末梢
血単核細胞がその抗原に出会った場合、単核細胞の上記
細個体群の増殖は誘起される。破傷風トキソイドおよび
キーポールリンペットヘモシアニンは末梢単核細胞の細
個体群により認識される抗原の例であるが怒応化した個
体中のすべて末梢単核細胞によって認識されるものでは
ない。
細胞−細胞粘着を必要とすることが知られている系中で
のヒト末梢血単核細胞の増殖的応答を抑制する抗ＩＣＡ
Ｍ−１モノクローナル抗体Ｒ６−５−Ｄ６の能力を試験
した。
末梢血単核細胞をフイコールーペーグ（Ｆｉｃｏｌｌ−
Ｐａｑｕｅ　％ファルマシア社）で製造者が推奨するよ
うな勾配で精製した。界面を集めたのち、細胞をＲＰＭ
１１６４０培地で３回洗浄し平底９６ウェルマイクロタ
イクープレート中で１０％ウシ胎児血清、２ｍＭグルタ
ミンおよびジェンタマイシン（５（ｌμｇ／　ｍｌを含
むＲＰＭ１１６４０培地中で１０’細胞／ｍｆｌの濃度
で培養した。
抗Ｌ　Ｔ−細胞マイトジェン、コンカナバリンＡのいず
れか（０，２５，ｕｇ／　ｍｊｉり；Ｔ−細胞結合性抗
体０ＫＴ３　　（０，００１μｇ／　ｍＪ）；キーホー
ルリンペットヘモシアニン（１０ｇ／ｍβ）または破傷
風トキソイド（供給源からの稀釈１：１００）を上記の
ようにして培養した細胞中に抗ＩＣＡＭ−１抗体（Ｒ６
−、，５−Ｄ６；最終濃度５ｇ／ｍｌ）の存在または不
存在下に加えた。細胞はアッセイが終了する前の３．５
日（コンカナバリンＡ試験）、２．５日（ＯＫＴ３試験
）、または５．５日（キーホールリンペットヘモシアニ
ンおよび破傷風トキソイド試験）で培養した。アッセイ
終了前１８時間で、２．５μＣｉの３Ｈ−チミジンを培
養物に加えた。細胞増殖を末梢血単核細胞によりＤＮＡ
へのチミジンの取り込みを測定することによってアッセ
イした。取り込まれたチミジンを集め液体シンチレーシ
ョンカウンター中で計数した（Ｍｅｒｌｕｚｚｉ等、Ｊ
、Ｉｍｍｕｎｏｌ、　　１３９　：　１６６−１６８　
（１９８７））。これらの実験の結果は第１６図（コン
カナバリンＡ試験）、第１７図（ＯＫＴ、試験）、第１
８図（キーホールリンペットヘモシアニン試験）、およ
び第１９図（破傷風トキソイド試験）に示す。
抗Ｉ　ＣＡＭ−１抗体は単核細胞中の非特異Ｔ−細胞マ
イトジエン、Ｃｏ　ｎ　Ａ　；非特異的Ｔ−細胞会合抗
原、０ＫＴ−３；および特異抗原、キーホールリンペッ
トヘモシアニンおよび破傷風トキソイドに対する増殖的
応答を抑制することが判明した。
抗Ｉ　ＣＡＭ−１抗体による抑制は抗ＬＦＡ−１抗体の
抑制効果と匹敵し、Ｉ　ＣＡＭ−１はＬＦＡ−１の官能
性リガンドであることおよびＩＣＡＭ−１のアンタゴニ
ストは特異的防御系応答を抑制するであろうことを示唆
している。
実施例２６ 乾固皮ふ傷害のケラチン細胞上のＩ　ＣＡＭ−１発現 乾磨を有する５例の患者からの皮ふ生検中のＩ　ＣＡＭ
−１発現を開始前およびＰＵＶＡ治療の途中で周期的に
検討した。生検は組織学によって確認した古典的乾廚を
有する５例の患者から得た。
生検は実質的にＰＵＶＡ治療の前および指示された時間
中に採取した。ＰＵＶＡは週に３〜４回投与された。生
検は５例の患者の乾窟斑の周囲から採取し、生検以外に
、これら患者の４人の臨床的に正常な皮ふからも採取し
た。
新しい皮ふ生検試料を凍結した液体チッ素中に保存した
。６ミクロンの保存切片を一夜室温で風乾し、アセトン
中で１０分間固定し、直ちに染色しまたはアルミニウム
ホイルで包み染色するまで一８０℃で保存した。
染色は次の方法で作った。切片をモノクローナル抗体で
インキュベートし、ジアミノベンジジンＨ□０□、基質
を用いて３段階イムノパーオキシダーゼ法により染色し
た（Ｓｔｅｉｎ、Ｈ，等、Ａｄｙ、（：ａｎｃｅｒ監−
４２：６７−１４７、（１９８４））。へん桃腺および
リンパ節を抗Ｉ　ＣＡＭ−１およびＨＬＡ−ＤＲ染色用
の陽性コントロールとして用いた。−次抗体の不存在下
で染色した組織は陰性コントロールであった。
ＨＬＡ−ＤＲに対するモノクローナル抗体をＢｅｃｔｏ
ｎ　Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社（カリホルニア州マウンテン
ビュー）から購入した。抗Ｉ　ＣＡＭ−１モノクロ一ナ
ル抗体はＲ６−５−Ｄ６であった。パーオキシダーゼ−
コンジュゲートウサギ抗マウスＩｇおよびパーオキシダ
ーゼ−コンジュゲートブタ抗ウサギＩｇはスウェーデン
、コペンハーゲンのＤＡＫＡＰＡＴＴＳより購入した。
ジアミノベンジジン−テトラヒドロクロリドはシグマ社
（セントルイス）より得た。
試験の結果は数種の血管の内皮細胞が疾患および正常皮
ふの両方でＩ　ＣＡＭ−１を発現していることを示した
が、染色強度およびＩ　ＣＡＭ−１を発現する血管の数
は乾盲皮ふ傷害内で増大した。
さらに、５例の患者からの未治療乾廚皮ふ傷害のケラチ
ン細胞中のＩ　ＣＡＭ−１の発現像はわずかに小量の細
胞染色から多数のケラチン細胞が染色されているまでに
変化した。ＰＵＶＡ治療の途中では、患者の２人（患者
２と３）のＩＣＡＭ−１発現は臨床的軽快さに先行しあ
るいは一致した著しい低減を示した。患者１．４および
５は、それぞれ、臨床的軽快あるいは悪化に関連してＰ
［ＩＶＡ治療中ＩＣＡＭ−１発現を減少あるいは増大さ
せた。ＰＵＶＡＵＶ前後の正常度ふからのケラチン細胞
上にｒｃＡＭ−１発現はなかった。このことはＰＵＶＡ
は正常度ふからのケラチン細胞上にＩＣＡＭ−１を誘起
しないことを示している。
注目すべきことは単核細胞浸潤密度はケラチン細胞上の
ＩＣＡＭ−１発現量と関連していることであった。この
ことはＩＣＡＭ−１発現も弱まったときＰＵＶＡＵＶ中
の傷害中の単核細胞の数も減少することおよびケラセン
細胞上のＩＣＡＭ−１発現がより顕著になったときＰＵ
ＶＡＵＶ中単核細胞の数が増大することの両方に関係し
ている。
内皮細胞および皮ふ単核細胞はまたＩＣＡＭ−１陽性で
ある。臨床的に正常な皮ふにおいては、ＩＣＡＭｉ発現
はケラチン細胞の標識化なしで内皮細胞に確認された。
ケラチン細胞上のＨＬＡ−ＤＲの発現は可変的であった
。ＩＣＡＭ−１陽性でないＨＬＡ−ＤＲ陽性生検は存在
しなかった。
要約すれば、これらの結果は、治療前では、ＩＣＡＭ−
１発現はケラチン細胞上で高く、単核細胞浸潤密度と相
関していることを示している。
ＰＵＶＡＵＶ中は、ＩＣＡＭ−１染色の著しい減少が臨
床的改善と平行して見られる。組織学上でも、皮ふ浸潤
は消失した。臨床的悪化が治療中に見られる場合には、
ケラチン細胞上のＩＣＡＭ−１の発現並びに皮ふ浸潤密
度も増大した。臨床的軽快が治療中に見られたときは、
ケラチン細胞上のＩＣＡＭ−１染色における一致した減
少並びに皮ふ浸潤の減少があった。即ち、ケラチン細胞
上のＩＣＡＭ−１の発現は皮ふの単核細胞浸潤密度に相
応する。これらのデータはＰＵＶＡ治療に対する臨床的
応答は単核細胞のよりおだやかな下降と平行してケラチ
ン細胞上のＩＣＡＭ−１発現のはっきりした減少をもた
らすことを示している。
このことはケラチン細胞上のＩＣＡＭ−１発現が皮ふ浸
潤の開始および持続に応答性であること、および行なわ
れたＰＵＶＡ治療はＩ　ＣＡＭ−１を調整し皮ふ浸潤お
よび炎症応答を緩和していることを示している。データ
はまたＰＵＶＡＵＶ中のケラチン細胞上に可変性のＨＬ
Ａ−ＤＲがあったことも示している。
乾府傷害のケラセン細胞上のＩ　ＣＡＭ−１発現は傷害
臨床上の厳格さおよび皮ふ浸潤の大きさと相関している
。即ち、Ｉ　ＣＡＭ−１は乾盲において中心的役割を発
揮し、その発現の抑制および／またはその単核細胞上で
のＣＤ１８コンプレツクスとの相互作用の抑制は本病変
の有効な治療となるであろう。さらにまた、ケラチン細
胞上のＩ　ＣＡＭ−１発現をモニターすることは乾唐の
診断、予防、および治療経過を評価するため有効な手段
となるであろう。
第１３表 ＰＵＶＡＵＶ中および治療前の乾唐皮傷害および臣３床
的に正常な皮ふのケラチン細胞によるＩ　ＣＡＭ−１発
現 ０　　　　　＋　　　＋　　　−＋＋−＋＋−＋＋＋−
１日　　十 １週　　＋　＋−−−＋＋−＋− ２週　　＋＋　　　　　＋−＋−＋− ５〜６週 ７週　　＊　　　　　　　　（＋＋）（＋）　＋＋＋　
　−１０週　（÷） ＋＋＋　多（の陽性ケラチン細胞 ＋＋　部分的陽性ケラチン細胞 ＋　　わずかな陽性ケラチン細胞 （＋）　　極めてわずかな拡散した陽性ケラチン細−　
　陽性染色なし ＊　　臨床的軽快 ０　　　〃　悪化 実施例２７ 混合リンパ球反応についての抗Ｉ　ＣＡＭ−１の効果 前述したように、Ｉ　ＣＡＭ−１はＬＦＡ−１依存性細
胞粘着より媒介された免疫応答中の有効な細胞相互作用
のために必要である。免疫応答または炎症疾患中のＩ　
ＣＡＭ−１の誘起は白血球の相互または内皮細胞との相
互作用を可能にする。
２人の無関係の個人からのリンパ球を各互いの存在下で
培養したときは、芽球形質転換およびリンパ球の細胞増
殖が観察される。１つの集団の白血球を第２集団の白血
球の存在へのこの応答は混合リンパ球反応（、Ｍ　Ｌ　
Ｒ）として公知であり、リンパ球のマイトジェンの添加
に対する応答と類似である（Ｉｍｍｕｎｏｌｏ　　Ｔｈ
ｅ　５ｃｉｅｎｃｅ　ｏｆ　Ｓｅｌｆ−Ｎｏｎｓｅｌｆ
Ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｉｏｎ＋　　Ｋｌｅｉｎ、Ｊ、
Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　５ｏｎｓ社、ＮＹ　（１９
８２）　、ｐｐ４５３−４５８）。
抗ＩＣＡＭモノクローナル抗体のヒトＭＬＲ上の効果に
ついて試験した。これらの実験は次のようにして行った
。未削血を正常な健康ドナーから静脈穿刺により採取し
た。血液をヘパリン化チューブに集め、室温でＰｕｎｋ
′ｓ　Ｇ（ＧＩＢＣＯ社）平衡塩溶液（ＢＳＳ）でｌ：
ｌに稀釈した。血液混合物（２０ｍｊりを１５ＩＩ＋１
のＦｉｃｏｌｌ／ＨｙＰａｑｕｅ密度勾配（ファルマシ
ア社、密度１．０７８、室温）上に層化し、１１０００
Ｘで２０分間遠心した。次いで界面を集め、Ｐｕｎｋ′
ｓ　Ｇ中で３回洗浄した。細胞をヘラシトメーター上で
計数し、０．５％のジエンタマイシ、１ｍＭＬ−グルタ
ミン（Ｇ　Ｉ　ＢＣＯ社）および５％加熱不活化（５６
℃、３０分）ヒトＡＢ血清（フローラボラトリーズ社）
とを含むＲＰＭＩ−１６４０培地（ＧＩＢＣＯ社）（以
下、ＲＰＭＩ培地と呼ぶ）中に再懸濁させた。
マウス抗−ＩＣＡＭ−１（Ｒ６−５−Ｄ６）をこの実験
で用いた。すべてのモノクローナル抗体（ジャックソン
イムノリサーチラボラトリーズ、ボストン、ＭＡにより
腹水から調製された）を精製１ｇＧ調製物として用いた
。別々のドナーからのスチミュレーター細胞を１００Ｏ
Ｒで照射し、レスポンダ−細胞と同じ濃度で培養した。
培養当りの総容量は０．２ｍｊ！であった。コントロー
ルはレスポンダ−細胞単独およびスチミュレーター細胞
単独を含んでいた。培養プレートを３７℃で５％ＣＯｚ
−湿潤空気雰囲気中で５日間インキュベーとした。各ウ
ェルを０．５μＣｉのトリチウム化チミジン（”ＨＴ）
にューイングランドニュクレア社）で培養の最後の１８
時間脈動させた。ある場合には、２通りのＭＬＲを行っ
た。プロトコールは第２ドナー細胞を照射により不活化
されてない以外は同じであった。
細胞をガラス繊維フィルター上に自動化マルチプルサン
プルハーベスタ（Ｓｋａｔｒｏｎ社、ノルウェー）を用
いて採取し、水およびメタノールですすいだ、フィルタ
ーをオーブン乾燥させ、アクアゾル中でベツグマン（Ｌ
Ｓ−３８０１）液体シンチレーションカウンターで計数
した。結果は６ケの個々の培養物について平均ＣＰＭ士
標準標準誤差て示している。
第１４表は精製抗ＩＣＡＭ−１モノクローナル抗体が２
０ｎｇ／　ｍｌｌで明らかな有意の抑制でもって投与量
依存の形でＭＬＲを抑制していた。精製マウスＩｇＧは
殆んどあるいは全く抑制効果を示さなかった。抗ＩＣＡ
Ｍ−１モノクロ一ナル抗体によるＭＬＲの抑制は抗体を
培養の最初の２４時間以内で加えたとき生じる（第１５
表）第１４表 ＋　　　＋　　　　　　−４２，６２６±１．５７９ル
スボンダー細胞（６，２５Ｘ　１０’　／　ｍＩり５ス
チミュレークー細胞（６，２５Ｘ　１０’／ｍ　１．１
００αＲでの照射） Ｃ最終濃度（μｇ／ｍｊりでのＩ　ＣＡＭ−１に対する
精製モノクローナル抗体（Ｒ６−５−Ｄ６）または精製
マウスＩｇＧ　（ｍｌｇＧ）′５〜６培養物の平均上標
準誤差、 （）内の数はＭＬＲの％抑制を示す 第１５表 日Ｏ日１　　　　日２ −−　　培地　２０５４　±１４　４７６±１３２　　
２４７±７５−　十　　培地　　１８９±１６ｎｄ”　
　　　　　ｎｄ十　−培地　１，８６０±６１５　　　
ｎｄ　　　　　　ｎｄ千　十　　培地　４１　、０６３
±２．９４０４５．９５５±２．９４７５０．９４３±
３．０７２ルスボンダー細胞（６，２５ｘ　ｌ　Ｏ’　
／　ｍｊり５スチミュレーター細胞（６，２５ｘｌＯ’
／ｍｚ　）Ｃ培養培地またはＩ　ＣＡＭ−１に対する精
製モノクローナル抗体（Ｒ６−５−Ｄ６）　、１’Ｏμ
ｇ／ｍ１で日０で２４時間間隔で加えた。
ｄ４〜６培養物の平均値上標準誤差 ”　ｎｄ−測定せず １％抑制 要約すれば、Ｉ　ＣＡＭ−１に対する抗体のＭＬＲを抑
制する能力はＩ　ＣＡＭ−１モノクロ一ナル抗体が急性
移植拒絶に治療的利用性を有していることを示している
。Ｉ　ＣＡＭ−１モノクロ一ナル抗体はまたＬＦＡ−１
／ＩＣＡＭ−１調整細胞−細胞相互作用に依有する関連
免疫媒介不整における治療的利用性を有している。
本実験はＩ　ＣＡＭ−１に対するモノクローナル抗体の
添加が反応の最初２４時間中に加えたときに混合リンパ
球反応（ＭＬＲ）を抑制することを示している。さらに
また、Ｉ　ＣＡＭ−１は４７ビトロ培養中のヒト末梢血
単核細胞について状態向上なる。
さらにまた、Ｉ　ＣＡＭ−１は静止ヒト末梢血リンパ球
または単核細胞上には発現しないことが見い出された。
Ｉ　ＣＡＭ−１は単独培養細胞または混合リンパ球反応
中の未調整ドナー細胞との共培養細胞の単核細胞上で、
通常のフローサイトメトリック分析を用いることにより
状態向上される。
単核細胞上でのこのＩ　ＣＡＭ−１の状態向上は炎症の
指示剤として、特にＩＣＡＭ−１が急性または慢性炎症
を有するヒトの新鮮単核細胞上で発現する場合に使用で
きる。
活性化単核細胞に対するＩ　ＣＡＭ−１の特異性および
Ｉ　ＣＡＭ−１に対する抗体のＭＬＲを抑制する能力と
はＩ　ＣＡＭ−１モノクロ一ナル抗体が急性移植拒絶お
よび細胞−細胞相互作用を必要とする関連免疫媒介不整
における診断上および治療上の潜在力を有し得ることを
示している。
実施例２８ 抗Ｉ　ＣＡＭ−１および抗ＬＦＡ−１抗体の混合投与の
相乗効果 実施例２７で示したように、ＭＬＲは抗ＩＣＡＭ　−１
抗体によって抑制される。ＭＬＲはまた抗ＬＦＡ−１抗
体によっても抑制できる。抗Ｉ　ＣＡＭ−１および抗Ｌ
ＦＡ−１抗体の組合せ投与が促進されたあるいは相乗的
効果を有するかどうかを決定するために、ＭＬＲアッセ
イ　（実施例２７に記載したようにして行った）を２つ
の抗体の種々の濃度の存在下で行った。
このＭＬＲアッセイは抗Ｉ　ＣＡＭ−１＋抗ＬＰ八−１
の組合せが、抗体単独ではｉｌｌ的にＭＬＲを抑制しな
い濃度において、ＭＬＲ応答を抑制するのに著しい効力
があることを示した（第１６表）。
この結果は抗Ｉ　ＣＡＭ−１抗体（またはそのフラグメ
ント）と抗ＬＦＡ−１抗体（またはそのフラグメント）
の共投与を包含する治療が改善された抗炎症治療を与え
る能力を有することを示している。そのような改善され
た治療は治療上有効である他の場合よりもより低い抗体
投与量の投与を可能にし、また高濃度の個々の抗体が抗
イデオタイプ応答を誘起するような場合に重要性を示す
。
第１６表 混合リンパ球反応についての各種投与量での抗Ｉ　ＣＡ
Ｍ−１と（Ｒ３，１）抗ＬＦＡ−１の効果０．０　　　
　０　　　　？　　　３１　５４　６９　　７００．０
００８　　１　　　７　　２８　４８　６２　　７１０
．００４　　　０　　１３　　３０　５０　６４　　７
２０．０２　　　２９　　３８　　６４　７５　８４　
　　Ｂ２Ｏ，１９２，５９０９１９２９２９２ ０，５９３９０９０９２９３９１ 実施例２９ 移植した同種異系臓器の拒絶を抑制するのに抗Ｉ　ＣＡ
Ｍ−１抗体の効果 同種異系移植臓器の拒絶を抑制における抗ＩＣＡＭ−１
抗体の効果を示すために、カニクイザルにＣｏ５１ｍ１
等の方法（Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ、Ｐｒｏｃ、　１３：
４９９−５０３（１９８１））に従って同種異系の腎臓
を移植した、ただし、麻酔薬としてバリウム（ｖａｌｉ
ｕｍ）とケタミンを用いる修正を加えた。
即ち、腎臓移植を本質的に次のようにして行った。異型
腎アロゲラストを３〜５　ｋｇのカニクイザルに、バリ
ウムとケタミンによる麻酔の誘起後、本質的にＭａｒｑ
ｕｅｔにより記載されたようにして行った（Ｍａｒｑｕ
ｅｔ等、Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｐｒｉｍａｔｏｌｏｇｙ、　
Ｐａｒｔ　ＩＩ　％Ｂａ５ｅｌ、Ｋａｒｇｅｒ、ｐ、　
　１２５　（１９７２）　）　、大動脈または大静脈の
パッチ上のドナー腎臓の末端−側面アナストモーシス（
ａｎａｓｔｏｍｏｓｅｓ）を７−〇プロレン縫合線を用
いて構築した。ドナー尿管をスパチュラ処理し外のう他
方法によってブラソダー中に埋め込んだ（Ｔａｇｕｃｈ
ｉ、Ｙ、等、Ｄａｕｓｓｅｔ等編、Ａｄｖａｎｃｅｓ　
ｉｎ　Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ　、、バルチモ
ア、ウィリアムス　アンド　ゥィルキンス、ｐ３９３（
１９６８））。腎機能を１週毎にまたは２週間毎の血清
クリアチニン測定によって評価した。さらに、頻ばんな
アログラフト生検を組織病理学検査用に採取し、完全解
剖をすべての死んだ受容体で行った。殆んどの受容体に
おいて、両側性腎摘出を移植時に行い、その後の尿毒症
列をアログラフト生存の終点で考慮した。ある受容体に
おいては、片側の生腎摘出と対何尿管ライゲーションを
移植時点で行った。アログラフト拒絶が生したときは、
同層尿管上のライゲーチュアを除去し、正常腎機能の再
生と受容動物の免疫学的モニターを続ける機会を得た。
モノクローナル抗体Ｒ６−５−Ｄ６を１２日間毎日投与
したが、移出前２日から１〜２■／ｋｇ／日の投与量で
開始した。タレアチニンの血清量を周期的試験して拒絶
をモニターした。同種異系腎の免疫系拒絶に対する抗Ｉ
　ＣＡＭ−１抗体の効果は第１７図に示す。
第１７表 同種異系移植臓器の生存時間 ４動物は移植前２日から１２日間毎日１−２　ｍｇ／ｋ
ｇ／日で投与した。
ｂ　１９８８年４月８日でまだ生存している。
【図面の簡単な説明】
第１図は正常細胞とＬＦＡ−１欠損細胞間の粘着を図式
的に示す。 第２図は正常細胞／正常細胞粘着過程を図式的に示す。 第３図は５０ｎｇ／　ｍｌ！のＰＭＡの不存在（×）ま
たは存在（○）下の細胞凝集の動力学を示す。 第４図はＬＦＡ−１−細胞とＬＦＡ−１＋細胞間の凝集
を示す。図中に示すようにカルボキシフルオレスセイン
ジアセテート標識ＥＢＶ−形質転換細胞（１０’）を１
０５未標識同元細胞（黒枠）またはＪＹ（白枠）とＰＭ
Ａの存在下に混合した。 １．５時間後、凝集物中または遊離の標識細胞を実施例
２の定量アッセイを用いて計数した。凝集物中の標識細
胞の％を示す。２つの内の１つの代表的な試験を示して
いる。 第５図はＪＹ細胞からのＩＣＡＭ−１とＬＦＡ　　　’
−１の免疫沈降を示す。ＪＹ細胞のトリトンＸ−１００
溶解物（レーン１および２）または対照溶解バッファー
（レーン３および４）をＩＣＡＭ−１に結合し得られる
抗体（レーン１および３）またはＬＦＡ−１に結合し得
る抗体（レーン２および４）で免疫沈降させた。パネル
Ａは還元条件下での結果を示し、パネルＢは非還元条件
下で得られた結果を示す。分子量標準物はレーンＳに示
した。 第６図はヒト皮ふ繊維芽細胞上のＩ　ＣＡＭ−１発現に
対してのＩＬ−１とガンマ−インターフェロンの効果の
動力学を示す。ヒト皮ふ繊維芽細胞は８Ｘ１０’細胞１
０．３２ｃｒＪのウェルの密度に増殖させた。ＩＬ−１
（１０ｐ／　ｍｌ、黒丸）または組換えガンマ−インタ
ーフェロン（１０μ７ｍｌ、白四角）を加え、示した時
間で、４℃に冷却し間接結合アッセイを実施した。標準
偏差は１０％を越えなかった。 第７図はＩ　ＣＡＭ−１へのＩＬ−１とガンマ−インタ
ーフェロン効果の濃度依存性を示す。ヒト皮ふ繊維芽細
胞は８Ｘ１０’細胞／　０．３２　ｃｒＡ／ウェルの密
度に増殖させた。ＩＬ−２（白丸）、組換えヒトＩＬ−
１（白四角）、組換マウスＩＬ−１（黒画角）および組
換えベータインターフェロン（白玉角）を示した稀釈率
で４時間（Ｉ　Ｌ−１）または１６時間（ベータおよび
ガンマ−インターフェロン）インキュベートした。示し
た結果は４回測定の平均を示し、標準偏差は１０％を越
えなかった。 第８図はＩ　ＣＡＭ−１ｃＤＮＡのヌクレオチドおよび
アミノ酸配列を示す。第１　ＡＴＧは位置５８にある。 ＩＣＡＭ−１）リプシンペプチドに相当する翻訳配列は
アンダーラインを施しである。 疎水性推定シグナルペプチドおよびトランスメンプラン
配列は肉太アンダーラインを施している。 Ｎ−結合グリコシル化部位は囲っている。位置２９７６
のポリアデニリル化シグナルＡＡＴＡＡはオーバーライ
ンを施している。図示した配列はＨＬ−６０ｃＤＮＡク
ローン用である。内皮細胞ｃＤＮＡはその長さの大部分
に亘って配列されており小さな差異のみを示した。 第９図はＩ　ＣＡＭ−１相同ドメインおよび免疫グロブ
リン超遺伝子群への相関を示す。（Ａ）５つの相同ドメ
インの配列（Ｄ＋−ｓ　）　　：列んだ２以上の同じ残
基は囲っている。ＮＣＡＭドメインに２回以上含まれる
残基、およびセラ）ＣｚおよびＣ１のドメイン中に含ま
れる残基はＩ　ＣＡＭ−１内部繰返しによって配列して
いる。Ｉ　ＣＡＭ−１のドメイン中の予想βストランド
の位置は棒線および配列上の小文字でマークしており、
また免疫グロブリンＣドメイン中のβ−ストランドの公
知の位置は棒線および配列下の大文字でマークしている
。Ｉ　ＣＡＭ−１ドメイン内の推定ジスルフィド架橋の
位置はＳ−８によって示している。 Ｉ　ＣＡＭ−１に相同性のたん白質ドメインの（Ｂ−Ｄ
）配列：各たん白質はＦＡＳＴＰプログラムを用いてＮ
ＢＲＦデータベースを調査することによって先ず配列す
る。各たん白質配列はＭＡＧ、ＮＣＡＮ、Ｔ細胞レセプ
ターαサブユニットＶドメイン、１８Ｍμ鎖およびα−
１−Ｂ１１たん白質である。 第１０図はＩ　ＣＡＭ−１とＭＡＧの二次構造の比較図
である。 第１１図は平坦膜中でＩ　ＣＡＭ−１に結合しているＬ
ＦＡ−１陽性ＥＢＶ−形質転換Ｂ−リンパ芽球種（ｌｙ
ｍｐｈｏｂｌａｓｔｏｉｄ）細胞を示す。 第１２図はプラスチック結合ベシクル中のＩ　ＣＡＭ−
１に結合しているＬＦＡ−１陽性Ｔ−リンパ芽球および
Ｔ−リンパ球を示す。 第１３図はプラスチック結合ベシクル中のＩ　ＣＡＭ−
１に結合しているＪＹ　　Ｂ−リンパ芽球種の細胞また
はベシクルのモノクローナル抗体による前処理による結
合抑制を示す。 第１４図はプラスチック結合ベシクル中のＩ　ＣＡＭ−
１へのＴ−リンパ芽球の結合に対しての温度の効果を示
す。 第１５図はプラスチック結合ベシクル中のＩ　ＣＡＭ−
１へのＴ−リンパ芽球の結合における二価のカチオンの
必要性を示す。 第１６図は末梢血液単核細胞がＴ−細胞会合抗原０ＫＴ
３の認識に応答して増殖する能力に及ぼす抗接着性抗体
の効果を示す。“０ＫＴ３“は抗原の添加を示す。 第１７図は、末梢血液単核細胞が、非特異的Ｔ−細胞分
裂促進物質である、コンカナバリンＡの認識に応答して
増殖する能力に及ぼす抗接着性抗体の効果を示す。“Ｃ
０ＮＡ″はコンカナバリンＡの添加を示す。 第１８図は、末梢血液単核細胞が、鍵穴カサガイヘモシ
アニン（ｋｅｙｈｏｌｅ　ｌｉｍｐｅｔ　ｈｅｍｏｃｙ
ａｎｉｎ）抗原の認識に応答して増殖する能力に及ぼす
抗接着性抗体の効果を示す。“ＫＬＨ”は、鍵穴カサガ
イヘモシアニンの、細胞への添加を示している。 第１９図は末梢血液単核細胞が、破傷風菌トキソイド抗
原の認識に応答して増殖する能力に及ぼす抗接着性抗体
の効果を示す。“ＡＧＮ”は破傷風菌トキソイド抗原の
、細胞への添加を示す。 第２０図は、ヒト末梢単核細胞におけるＩＣＡＭ−１の
発現を示してんる。（Ａ）応答細胞は培養されない：　
（Ｂ）応答Ｘ刺激細胞は培養されない；（Ｃ）応答細胞
は２４時間培養される；　（Ｄ）応答Ｘ刺激細胞は２４
時間培養される。（−−−−−モノクローナル抗体なし
；・・・・・マウスイムノグロブリン；□マウス抗−Ｉ
　ＣＡＭ−１）。 第３図 時　　間　　（分） 麿、自番号 ＥＢＶ−影質転↑員　Ｂ−赤田用？ 特開平１−１１０７００　（ｓｓ） 特開平１（１０７００（５Ｂ）　　　　−Ｆ−ｒコ　　
　　　　　　　　ｑ １１０＝コと：ヨ　　　　　　　　　　　　　　　　＆
　８偶〉ト一一 ％ＣＥＬＩＳ　ＢＯＵＮＤ

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １、実質的に天然不純物を含まないＩＣＡＭ−１または
    その官能性誘導体。 ２、前記ＩＣＡＭ−１がさらにリンパ球表面に存在する
    分子に結合可能である請求項１記載のＩＣＡＭ−１。 ３、前記分子が、さらに、 （ａ）−Ｖ−Ｔ−Ｃ−Ｓ−Ｔ−Ｓ−Ｃ−Ｄ−Ｑ−Ｐ−ｋ
    ；（ｂ）−Ｘ−Ｇ−Ｓ−Ｖ−Ｌ−Ｖ−Ｔ−Ｃ−Ｓ−Ｔ−
    Ｓ−Ｃ−Ｄ−Ｑ−Ｐ−Ｋ；（ｃ）−Ｌ−Ｌ−Ｇ−Ｉ−Ｅ
    −Ｔ−Ｐ−Ｌ；（ｄ）−Ｆ−Ｌ−Ｔ−Ｖ−Ｙ−Ｘ−Ｔ； （ｅ）−Ｖ−Ｅ−Ｌ−Ａ−Ｐ−Ｌ−Ｐ； （ｆ）−Ｅ−Ｌ−Ｄ−Ｌ−Ｒ−Ｐ−Ｑ−Ｇ−Ｌ−Ｅ−Ｌ
    −Ｆ−Ｅ；（ｇ）−Ｌ−Ｎ−Ｐ−Ｔ−Ｖ−Ｔ−Ｙ−Ｇ−
    Ｘ−Ｄ−Ｓ−Ｆ−Ｓ−Ａ−Ｋ；（ｈ）−Ｓ−Ｆ−Ｐ−Ａ
    −Ｐ−Ｎ−Ｖ； （ｉ）−Ｌ−Ｒ−Ｇ−Ｅ−Ｋ−Ｅ−Ｌ； （ｊ）−Ｒ−Ｇ−Ｅ−Ｋ−Ｅ−Ｌ−Ｋ−Ｒ−Ｅ−Ｐ；（
    ｋ）−Ｌ−Ｒ−Ｇ−Ｅ−Ｋ−Ｅ−Ｌ−Ｋ−Ｒ−Ｅ−Ｐ−
    Ａ−Ｖ−Ｇ−Ｅ−Ｐ−Ａ−Ｅ；（ｌ）−Ｐ−Ｒ−Ｇ−Ｇ
    −Ｓ； （ｍ）−Ｐ−Ｇ−Ｎ−Ｎ−Ｒ−Ｋ； （ｎ）−Ｑ−Ｅ−Ｄ−Ｓ−Ｑ−Ｐ−Ｍ； （ｏ）−Ｔ−Ｐ−Ｅ−Ｒ−Ｖ−Ｅ−Ｌ−Ａ−Ｐ−Ｌ−Ｐ
    −Ｓ；（ｐ）−Ｒ−Ｒ−Ｄ−Ｈ−Ｈ−Ｇ−Ａ−Ｎ−Ｆ−
    Ｓ；および（ｑ）−Ｄ−Ｌ−Ｒ−Ｐ−Ｑ−Ｇ−Ｌ−Ｅ からなる群から選ばれた少なくとも１種のポリペプチド
    を含有する請求項２記載のＩＣＡＭ−１分子。 ４、前記官能性誘導体がリンパ球表面に存在する分子に
    結合可能であるＩＣＡＭ−１のフラグメントである請求
    項２記載のＩＣＡＭ−１の官能性誘導体。 ５、前記官能性誘導体がリンパ球表面に存在する分子に
    結合可能であるＩＣＡＭ−１の変異体である請求項２記
    載のＩＣＡＭ−１の官能性誘導体。 ６、前記官能性誘導体がリンパ球表面に存在する分子に
    結合可能であるＩＣＡＭ−１の同族体である請求項２記
    載のＩＣＡＭ−１の官能性誘導体。 ７、前記官能性誘導体がリンパ球表面に存在する分子に
    結合可能であるＩＣＡＭ−１の化合的誘導体である請求
    項２記載のＩＣＡＭ−１の官能性誘導体。 ８、前記分子が検出可能に標識されている請求項１ない
    し７のいずれか１項に記載のＩＣＡＭ−１分子またはそ
    の官能性誘導体。 ９、前記標識がラジオアイソトープ、酵素、アフィニテ
    ィーラベル、螢光ラベル、常磁性ラベル、抗体およびフ
    リーラジカルラベルからなる群より選ばれる請求項８記
    載のＩＣＡＭ−１。 １０、ＩＣＡＭ−１またはその官能性誘導体を発現し得
    る組換えＤＮＡ分子。 １１、前記ＩＣＡＭ−１またはその官能性誘導体が、（
    ａ）−Ｖ−Ｔ−Ｃ−Ｓ−Ｔ−Ｓ−Ｃ−Ｄ−Ｑ−Ｐ−Ｋ；
    （ｂ）−Ｘ−Ｇ−Ｓ−Ｖ−Ｌ−Ｖ−Ｔ−Ｃ−Ｓ−Ｔ−Ｓ
    −Ｃ−Ｄ−Ｑ−Ｐ−Ｋ；（ｃ）−Ｌ−Ｌ−Ｇ−Ｉ−Ｅ−
    Ｔ−Ｐ−Ｌ；（ｄ）−Ｆ−Ｌ−Ｔ−Ｖ−Ｙ−Ｘ−Ｔ； （ｅ）−Ｖ−Ｅ−Ｌ−Ａ−Ｐ−Ｌ−Ｐ； （ｆ）−Ｅ−Ｌ−Ｄ−Ｌ−Ｒ−Ｐ−Ｑ−Ｇ−Ｌ−Ｅ−Ｌ
    −Ｆ−Ｅ；（ｇ）−Ｌ−Ｎ−Ｐ−Ｔ−Ｖ−Ｔ−Ｙ−Ｇ−
    Ｘ−Ｄ−Ｓ−Ｆ−Ｓ−Ａ−Ｋ；（ｈ）−Ｓ−Ｆ−Ｐ−Ａ
    −Ｐ−Ｎ−Ｖ； （ｉ）−Ｌ−Ｒ−Ｇ−Ｅ−Ｋ−Ｅ−Ｌ； （ｊ）−Ｒ−Ｇ−Ｅ−Ｋ−Ｅ−Ｌ−Ｋ−Ｒ−Ｅ−Ｐ；（
    ｋ）−Ｌ−Ｒ−Ｇ−Ｅ−Ｋ−Ｅ−Ｌ−Ｋ−Ｒ−Ｅ−Ｐ−
    Ａ−Ｖ−Ｇ−Ｅ−Ｐ−Ａ−Ｅ；（ｌ）−Ｐ−Ｒ−Ｇ−Ｇ
    −Ｓ； （ｍ）−Ｐ−Ｇ−Ｎ−Ｎ−Ｒ−Ｋ； （ｎ）−Ｑ−Ｅ−Ｄ−Ｓ−Ｑ−Ｐ−Ｍ； （ｏ）−Ｔ−Ｐ−Ｅ−Ｒ−Ｖ−Ｅ−Ｌ−Ａ−Ｐ−Ｌ−Ｐ
    −Ｓ；（ｐ）−Ｒ−Ｒ−Ｄ−Ｈ−Ｈ−Ｇ−Ａ−Ｎ−Ｆ−
    Ｓ；および（ｑ）−Ｄ−Ｌ−Ｒ−Ｐ−Ｑ−Ｇ−Ｌ−Ｅ からなる群より選ばれた少なくとも１種のポリペプチド
    をコードし得る請求項１０記載のＤＮＡ分子。 １２、（ａ）ＩＣＡＭ−１を発現する膜からＩＣＡＭ−
    １を可溶化して可溶化ＩＣＡＭ−１調製物を調製するこ
    と、 （ｂ）上記可溶化ＩＣＡＭ−１調製物をＩＣＡＭ−１に
    結合し得る固定化抗体を含有するアフィニティーマトリ
    ックスに導入すること、 （ｃ）上記ＩＣＡＭ−１を上記アフィニティーマトリッ
    クスの上記抗体に結合させること、 （ｄ）上記マトリックスから上記抗体に結合し得ないす
    べての化合物を除去すること、および（ｅ）上記ＩＣＡ
    Ｍ−１を実質的に純粋形にて上記ＩＣＡＭ−１を上記マ
    トリックスから溶出することによって回収すること、 の各工程を含むことを特徴とする実質的に純粋形でＩＣ
    ＡＭ−１を回収する方法。 １３、前記方法が、さらに、次の各工程： （ｆ）前記工程（ｅ）の回収ＩＣＡＭ−１を分離用ゲル
    電気泳動により精製すること、および （ｇ）前記回収ＩＣＡＭ−１を工程（ｆ）で用いたゲル
    から溶出すること、 を含む請求項１２記載の方法。 １４、請求項１２ないし１３のいずれか１項記載の方法
    によって生成したＩＣＡＭ−１。 １５、ＩＣＡＭ−１およびＩＣＡＭ−１の官能性誘導体
    からなる群より選ばれた分子に結合し得る抗体。 １６、前記抗体がモノクローナル抗体である請求項１５
    記載の抗体。 １７、Ｒ＿６−５−Ｄ＿６である請求項１６記載のモノ
    クローナル抗体。 １８、前記分子がリンパ球表面に存在するレセプターに
    結合可能であり、前記抗体の前記分子への結合が前記分
    子のリンパ球の上記レセプター分子への結合能力を与え
    る請求項１５記載の抗体。 １９、前記抗体がモノクローナル抗体である請求項１８
    記載の抗体。 ２０、標識した形の請求項１５ないし１９のいずれか１
    項記載の抗体。 ２１、請求項１６、１７または１９のいずれか１項記載
    のモノクローナル抗体を産生し得るハイブリドーマ細胞
    。 ２２、ＡＴＣＣＨＢ９５８０である、モノクローナル抗
    体Ｒ＿６−５−Ｄ＿６を産生し得るハイブリドーマ細胞
    。 ２３、前記分子を結合し得る請求項１５ないし１９のい
    ずれか１項記載の抗体フラグメント。 ２４、標識した形の請求項２３記載の抗体フラグメント
    。 ２５、次の各工程： （Ａ）動物をＩＣＡＭ−１を発現する細胞で免疫するこ
    と、 （Ｂ）上記動物のひ臓細胞をミエローマ細胞系と融合さ
    せること、 （Ｃ）融合させたひ臓細胞とミエローマ細胞に抗体産生
    性ハイブリドーマ細胞を生成させること、および （Ｄ）上記ハイブリドーマ細胞をＩＣＡＭ−１に結合し
    得る抗体を産生し得る所望のハイブリドーマ細胞にスク
    リーニングすること、 を含むことを特徴とするＩＣＡＭ−１またはその官能性
    誘導体に結合し得る抗体を産生する所望のハイブリドー
    マ細胞の調製方法。 ２６、工程（Ａ）において、前記動物をＩＣＡＭ−１を
    発現するがＬＦＡ−１を発現しない細胞で免疫し、前記
    スクリーニング工程（Ｄ）が次の各工程： （１）前記ハイブリドーマ細胞のいずれかから産生した
    抗体を複数の凝集し得る細胞を含有するリンパ球調製物
    とインキュベートすること、（２）上記産生した抗体を
    上記リンパ球調製物の上記細胞の凝集を抑制する能力に
    ついて検査すること、および （３）前記所望のハイブリドーマ細胞として、上記リン
    パ球調製物の上記細胞の凝集を抑制し得る抗体を産生す
    るハイブリドーマ細胞を選択すること、 を含む請求項２５記載の方法。 ２７、前記スクリーニング工程（Ｄ）が次の各工程：（
    １）前記ハイブリドーマ細胞のいずれかから産生した抗
    体を、（ａ）凝集することができるが（ｂ）ＩＣＡＭ−
    １を結合し得る抗体の存在下では凝集することができな
    い特徴を有する複数の細胞を含有するリンパ球調製物と
    インキュベートすること、 （２）前記ハイブリドーマ細胞から産生した抗体が分子
    のＬＦＡ−１群の１員に結合しないことを確認すること
    、 （３）前記所望のハイブリドーマ細胞として、上記リン
    パ球調製物の細胞の自発的凝集を抑制し得る抗体を産生
    するハイブリドーマ細胞を選択すること、および （４）上記ハイブリドーマ細胞から産生した抗体が分子
    のＬＦＡ−１群の１員に結合しないことを確認すること
    、 を含む請求項２５記載の方法。 ２８、請求項２５ないし２７のいずれか１項に記載の方
    法から得られたハイブリドーマ細胞。 ２９、請求項２８記載のハイブリドーマ細胞により産生
    させた抗体。 ３０、（Ａ）細胞間粘着のアンタゴニストであり得る非
    免疫グロブリン試剤を複数の凝集し得る細胞を含有する
    リンパ球調製物とインキュベートすること、 （Ｂ）上記リンパ球調製物を検査して上記試剤の存在が
    上記リンパ球調製物の上記細胞の凝集を抑制するかどう
    かを測定すること、この凝集の抑制により上記試剤を細
    胞間粘着のアンタゴニストとして同定すること、 を特徴とする細胞間粘着の非免疫グロブリンアンタゴニ
    ストの同定方法。 ３１、哺乳動物対象体の特異的防御系の応答に由来する
    炎症を治療する方法において、そのような治療の必要な
    対象体に上記炎症を抑制するのに十分な量の抗炎症剤を
    投与することを含み、この抗炎症剤をＩＣＡＭ−１に結
    合し得る抗体、ＩＣＡＭ−１に結合し得る抗体フラグメ
    ント、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１の官能性誘導体、お
    よびＩＣＡＭ−１の非免疫グロブリンアンタゴニストか
    らなる群から選ぶことを特徴とする上記方法。 ３２、前記ＩＣＡＭ−１の非免疫グロブリンアンタゴニ
    ストがＬＦＡ−１以外の非免疫グロブリンアンタゴニス
    トである請求項３１記載の方法。 ３３、前記抗炎症剤がＩＣＡＭ−１に結合し得る抗体で
    ある請求項３１記載の方法。 ３４、前記抗体がモノクローナル抗体である請求項３３
    の方法。 ３５、前記モノクローナル抗体がモノクローナル抗体Ｒ
    ＿６−５−Ｄ＿６である請求項３４記載の方法。 ３６、前記抗炎症剤がＩＣＡＭ−１に結合し得る抗体フ
    ラグメントである請求項３１記載の方法。 ３７、前記フラグメントが抗体Ｒ＿６−５−Ｄ＿６のフ
    ラグメントである請求項３１記載の方法。 ３８、前記炎症が特異的防御系の反応である請求項３１
    記載の方法。 ３９、前記炎症が遅延型過敏反応である請求項３１記載
    の方法。 ４０、前記炎症が自己免疫疾患症である請求項３１記載
    の方法。 ４１、前記自己免疫疾患がレイナード（Ｒｅｙｎａｕｄ
    ′ｓ）症候群、自己免疫甲状線炎、ＥＡＥ、多発性硬化
    症、リウマチ様関節炎および紅斑性ろうそうからなる群
    から選ばれる請求項４０記載の方法。 ４２、前記炎症が臓器移植拒絶に応答する請求項３１記
    載の方法。 ４３、前記炎症が組織移植拒絶に応答する請求項３１記
    載の方法。 ４４、浸透にＬＦＡ−１群の機能性１員を必要とする造
    血腫瘍細胞の転移を抑制する方法において、そのような
    治療を必要とする患者に上記転移を抑制するのに十分な
    量の抗炎症剤を投与することを含み、この抗炎症剤がＩ
    ＣＡＭ−１に結合し得る抗体、ＩＣＡＭ−１に結合し得
    る抗体フラグメント、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１の官
    能性誘導体、およびＩＣＡＭ−１の非免疫グロブリンア
    ンタゴニストからなる群から選ばれることを特徴とする
    上記方法。 ４５、前記ＩＣＡＭ−１の非免疫グロブリンアンタゴニ
    ストがＬＦＡ−１以外のＩＣＡＭ−１の非免疫グロブリ
    ンアンタゴニストである請求項４４記載の方法。 ４６、前記抗炎症剤がＩＣＡＭ−１に結合し得る抗体で
    ある請求項４４記載の方法。 ４７、前記抗体がモノクローナル抗体である請求項４６
    記載の方法。 ４８、前記モノクローナル抗体がモノクローナル抗体Ｒ
    ＿６−５−Ｄ＿６である請求項４７記載の方法。 ４９、前記抗炎症剤がＩＣＡＭ−１に結合し得る抗体フ
    ラグメントである請求項４４記載の方法。 ５０、前記フラグメントが抗体Ｒ＿６−５−Ｄ＿６のフ
    ラグメントである請求項４９記載の方法。 ５１、ＩＣＡＭ−１発現性腫瘍細胞の増殖を抑制する方
    法において、そのような治療を必要とする患者に上記成
    長を抑制するのに十分な量の毒素を投与することを含み
    、この毒素がＩＣＡＭ−１に結合し得る毒素誘導抗体、
    ＩＣＡＭ−１に結合し得る抗体の毒素誘導フラグメント
    、分子のＬＦＡ−１群の毒素誘導１員、および分子のＬ
    ＦＡ−１群の１員の毒素誘導官能性誘導体からなる群よ
    り選ばれることを特徴とする上記方法。 ５２、ＬＦＡ−１発現性腫瘍細胞の成長を抑制する方法
    において、そのような治療を必要とする患者に上記成長
    を抑制するのに十分な量の毒素を投与することを含み、
    この毒素が毒素誘導ＩＣＡＭ−１およびＩＣＡＭ−１の
    毒素誘導官能性誘導体からなる群より選ばれることを特
    徴とする上記方法。 ５３、特異的防御系の応答に由来する炎症を有する疑い
    のある哺乳動物対象体のそのような炎症の存在および位
    置を診断する方法において、 （ａ）上記対象体にＩＣＡＭ−１を発現する細胞を同定
    し得る検出可能に標識した結合性リガンドを含有する組
    成物を投与すること、および （ｂ）上記結合性リガンドを検出すること、を特徴とす
    る上記方法。 ５４、特異的防御系の応答に由来する炎症を有する疑い
    のある哺乳動物対象体のそのような炎症の存在および位
    置を診断する方法において、 （ａ）上記対象体の組織のサンプルをＩＣＡＭ−１を発
    現する細胞を同定し得る検出可能に標識した結合性リガ
    ンドを含有する組成物とインキュベートすること、およ
    び （ｂ）上記結合性リガンドを検出すること、を特徴とす
    る上記方法。 ５５、前記結合性リガンドが上記組織のサンプル中に結
    合している請求項５３または５４のいずれか１項記載の
    方法。 ５６、前記結合性リガンドがＩＣＡＭ−１に結合可能で
    あり、該リガンドが抗体および抗体フラグメントからな
    る群より選ばれる請求項５３または５４いずれか１項に
    記載の方法。 ５７、前記抗体がモノクローナル抗体である請求項５６
    記載の方法。 ５８、前記モノクローナル抗体がモノクローナル抗体Ｒ
    ＿６−５−Ｄ＿６である請求項５７記載の方法。 ５９、前記結合性リガンドがＩＣＡＭ−１のＤＮＡ配列
    およびＩＣＡＭ−１の遺伝子のｍＲＮＡ配列からなる群
    より選ばれた分子に結合し得る核酸分子である請求項５
    ３または５４いずれか１項記載の方法。 ６０、前記核酸分子が、 （ａ）−Ｖ−Ｔ−Ｃ−Ｓ−Ｔ−Ｓ−Ｃ−Ｄ−Ｑ−Ｐ−Ｋ
    ；（ｂ）−Ｘ−Ｇ−Ｓ−Ｖ−Ｌ−Ｖ−Ｔ−Ｃ−Ｓ−Ｔ−
    Ｓ−Ｃ−Ｄ−Ｑ−Ｐ−Ｋ；（ｃ）−Ｌ−Ｌ−Ｇ−Ｉ−Ｅ
    −Ｔ−Ｐ−Ｌ；（ｄ）−Ｆ−Ｌ−Ｔ−Ｖ−Ｙ−Ｘ−Ｔ； （ｅ）−Ｖ−Ｅ−Ｌ−Ａ−Ｐ−Ｌ−Ｐ； （ｆ）−Ｅ−Ｌ−Ｄ−Ｌ−Ｒ−Ｐ−Ｑ−Ｇ−Ｌ−Ｅ−Ｌ
    −Ｆ−Ｅ；（ｇ）−Ｌ−Ｎ−Ｐ−Ｔ−Ｖ−Ｔ−Ｙ−Ｇ−
    Ｘ−Ｄ−Ｓ−Ｆ−Ｓ−Ａ−Ｋ；（ｈ）−Ｓ−Ｆ−Ｐ−Ａ
    −Ｐ−Ｎ−Ｖ； （ｉ）−Ｌ−Ｒ−Ｇ−Ｅ−Ｋ−Ｅ−Ｌ； （ｊ）−Ｒ−Ｇ−Ｅ−Ｋ−Ｅ−Ｌ−Ｋ−Ｒ−Ｅ−Ｐ；（
    ｋ）−Ｌ−Ｒ−Ｇ−Ｅ−Ｋ−Ｅ−Ｌ−Ｋ−Ｒ−Ｅ−Ｐ−
    Ａ−Ｖ−Ｇ−Ｅ−Ｐ−Ａ−Ｅ；（ｌ）−Ｐ−Ｒ−Ｇ−Ｇ
    −Ｓ； （ｍ）−Ｐ−Ｇ−Ｎ−Ｎ−Ｒ−Ｋ； （ｎ）−Ｑ−Ｅ−Ｄ−Ｓ−Ｑ−Ｐ−Ｍ； （ｏ）−Ｔ−Ｐ−Ｅ−Ｒ−Ｖ−Ｅ−Ｌ−Ａ−Ｐ−Ｌ−Ｐ
    −Ｓ；（ｐ）−Ｒ−Ｒ−Ｄ−Ｈ−Ｈ−Ｇ−Ａ−Ｎ−Ｆ−
    Ｓ；および（ｑ）−Ｄ−Ｌ−Ｒ−Ｐ−Ｑ−Ｇ−Ｌ−Ｅ からなる群から選ばれた少なくとも１種のポリペプチド
    をコードしている請求項５９記載の方法。 ６１、ＩＣＡＭ−１発現性腫瘍細胞を有する疑いのある
    哺乳動物対象体のそのような細胞の存在および位置を診
    断する方法において、 （ａ）上記対象体にＩＣＡＭ−１に結合し得る検出可能
    に標識した結合性リガンドを投与すること、このリガン
    ドを抗体およびＩＣＡＭ−１に結合し得る抗体フラグメ
    ントからなる群より選ぶこと、および （ｂ）上記結合性リガンドを検出すること、を特徴とす
    る上記方法。 ６２、ＩＣＡＭ−１発現性腫瘍細胞を有する疑いのある
    哺乳動物対象体のそのような細胞の存在および位置を診
    断する方法において、 （ａ）上記対象体の組織のサンプルをＩＣＡＭ−１に結
    合し得る検出可能に標識した結合性リガンドを含有する
    組成物とインキュベートすること、このリガンドを抗体
    およびＩＣＡＭ−１に結合し得る抗体フラグメントから
    選ぶこと、および （ｂ）上記結合性リガンドを検出すること、を特徴とす
    る上記方法。 ６３、前記結合性リガンドが上記組織のサンプル中に存
    在するＩＣＡＭ−１に結合している請求項６１または６
    ２のいずれか１項に記載の方法。 ６４、前記結合性リガンドがＩＣＡＭ−１に結合し得る
    モノクローナル抗体、および該モノクローナル抗体のＩ
    ＣＡＭ−１に結合し得るフラグメントからなる群から選
    ばれる請求項６１または６２のいずれかに記載の方法。 ６５、前記モノクローナル抗体がモノクローナル抗体Ｒ
    ＿６−５−Ｄ＿６である請求項６４記載の方法。 ６６、分子のＬＦＡ−１群の１員を発現する腫瘍細胞を
    有する疑いのある対象体のそのような細胞の存在および
    位置を診断する方法において、（ａ）上記対象体に分子
    のＬＦＡ−１群の１員に結合し得る検出可能に標識した
    結合性リガンドを含有する組成物を投与すること、この
    リガンドをＩＣＡＭ−１およびＩＣＡＭ−１の官能性誘
    導体よりなる群より選ぶこと、および （ｂ）上記結合性リガンドを検出すること、を特徴とす
    る上記方法。 ６７、分子のＬＦＡ−１群の１員を発現する腫瘍細胞を
    有する疑いのある対象体のかかる細胞の存在および位置
    を診断する方法において、 （ａ）上記対象体の組織のサンプルを分子のＬＦＡ−１
    群の１員に結合し得る検出可能に標識した結合性リガン
    ドを含有する組成物とインキュベートすること、このリ
    ガンドをＩＣＡＭ−１およびＩＣＡＭ−１の官能性誘導
    体よりなる群から選ぶこと、および （ｂ）上記組織のサンプル中に存在する分子のＬＦＡ−
    １群の１員に結合している上記結合性リガンドを検出す
    ること、 を特徴とする上記方法。
JP63109818A 1987-05-04 1988-05-02 細胞間粘着分子およびその結合性リガンド Expired - Lifetime JP2763030B2 (ja)

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US4596387A 1987-05-04 1987-05-04
US45963 1987-05-04
US11579887A 1987-11-02 1987-11-02
US15594388A 1988-02-16 1988-02-16
US115798 1988-02-16
US155943 1993-11-19

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP9240418A Division JP2874861B2 (ja) 1987-05-04 1997-08-21 Ｉｃａｍ−１又はその機能性フラグメントに結合し得る抗体を産生するハイブリドーマ細胞の調製方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPH01110700A true JPH01110700A (ja) 1989-04-27
JP2763030B2 JP2763030B2 (ja) 1998-06-11

Family

ID=27366801

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP63109818A Expired - Lifetime JP2763030B2 (ja) 1987-05-04 1988-05-02 細胞間粘着分子およびその結合性リガンド
JP9240418A Expired - Lifetime JP2874861B2 (ja) 1987-05-04 1997-08-21 Ｉｃａｍ−１又はその機能性フラグメントに結合し得る抗体を産生するハイブリドーマ細胞の調製方法

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP9240418A Expired - Lifetime JP2874861B2 (ja) 1987-05-04 1997-08-21 Ｉｃａｍ−１又はその機能性フラグメントに結合し得る抗体を産生するハイブリドーマ細胞の調製方法

Country Status (16)

Country Link
EP (1) EP0289949B1 (ja)
JP (2) JP2763030B2 (ja)
AT (1) ATE128727T1 (ja)
AU (1) AU1551888A (ja)
CA (1) CA1341399C (ja)
DE (1) DE3854536T2 (ja)
DK (1) DK174629B1 (ja)
ES (1) ES2080044T3 (ja)
FI (1) FI882037A (ja)
GR (1) GR3018298T3 (ja)
HK (1) HK1003117A1 (ja)
IE (1) IE69976B1 (ja)
IL (1) IL86246A (ja)
MX (1) MX9203033A (ja)
NZ (2) NZ237036A (ja)
PT (1) PT87390B (ja)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH01135724A (ja) * 1987-11-02 1989-05-29 Baylor College Medicine 非特異的炎症の治療法
JP2014508745A (ja) * 2011-02-02 2014-04-10 メディポスト・カンパニー・リミテッド 神経疾患の予防または処置のためのｉｃａｍ−１の使用

Families Citing this family (61)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5284931A (en) * 1987-05-04 1994-02-08 Dana Farber Cancer Institute Intercellular adhesion molecules, and their binding ligands
US6218525B1 (en) 1988-02-25 2001-04-17 The General Hospital Corporation Nucleic acid encoding CD28
US5506126A (en) * 1988-02-25 1996-04-09 The General Hospital Corporation Rapid immunoselection cloning method
DE68925032T2 (de) * 1988-08-15 1996-04-25 Brigham & Womens Hospital Leukozyten-adhäsions-inhibitor.
US6514936B1 (en) 1988-09-01 2003-02-04 Bayer Corporation Antiviral methods using human rhinovirus receptor (ICAM-1)
US6051231A (en) * 1988-09-01 2000-04-18 Bayer Corporation Antiviral methods and prepations
ATE186552T1 (de) * 1988-09-01 1999-11-15 Bayer Ag Menschliches rhinovirusrezeptorprotein, das die virusinfektionsanfälligkeit hemmt
US6143298A (en) * 1988-09-01 2000-11-07 Bayer Corporation Soluble truncated forms of ICAM-1
ZA896668B (en) * 1988-09-01 1990-06-27 Molecular Therapeutics Inc A human rhinovirus receptor protein that inhibits virus infectivity
HU218904B (hu) * 1988-09-28 2000-12-28 Dana-Farber Cancer Institute Eljárás ICAM-1-et kódoló rekombináns DNS előállítására, ICAM-1-et kifejező sejtek vagy ezzel kapcsolatos betegségek diagnosztizálására és a specifikus védekező rendszer válaszából eredő gyulladások kezelésére szolgáló gyógyszerkészítmények előállítására
ES2201052T3 (es) * 1988-09-28 2004-03-16 Dana Farber Cancer Institute Moleculas de adhesion intercelular y sus ligandos de union.
US5081034A (en) * 1988-11-14 1992-01-14 Brigham & Women's Hospital Cloned genes which encode elam-1
US5235049A (en) * 1989-01-24 1993-08-10 Molecular Therapeutics, Inc. Nucleic acid sequences encoding a soluble molecule (SICAM-1) related to but distinct from ICAM-1
CA2008368C (en) * 1989-01-24 2003-04-08 Jeffrey Greve Soluble molecule related to but distinct from icam-1
NO900155L (no) * 1989-01-24 1990-07-25 Molecular Therapeutics Inc Et opploeselig molekyl som er relatert til, men forskjellig fra icam-1.
US5776775A (en) * 1989-02-21 1998-07-07 Dana-Farber Cancer Institute Anti-LAM 1-3 antibody and hybridoma
DK0387701T3 (da) * 1989-03-09 1992-12-07 Boehringer Ingelheim Pharma Anvendelse af intercellulære adhæsionsmolekyler samt deres bindende ligander ved behandling af astma
CA2011633C (en) * 1989-03-09 2007-05-15 Timothy A. Springer Intercellular adhesion molecule - 2 and its binding ligands
US6797270B1 (en) 1989-03-16 2004-09-28 Center For Blood Research, Inc. Functional derivatives of the intercellular adhesion molecule ICAM-1 in anti-viral therapy
ATE146968T1 (de) * 1989-03-16 1997-01-15 Blood Res Center Verwendung von funkionellen derivaten des interzellulär-adhäsions-moleküls icam-1 in einer antivirus-therapie
ZA903258B (en) * 1989-04-28 1991-02-27 Baylor College Medicine Method of suppressing hiv infection
ZA903223B (en) * 1989-04-28 1991-02-27 Baylor College Medicine Dissemination of hiv-1 infected cells
GB9009548D0 (en) * 1990-04-27 1990-06-20 Celltech Ltd Chimeric antibody and method
WO1991018010A1 (en) * 1990-05-15 1991-11-28 Swinburne Limited Inhibition of viral infection using intercellular adhesion molecule-1-like peptides and/or analogues thereof
WO1991018011A1 (en) * 1990-05-15 1991-11-28 Swinburne Limited Inhibition of cell adhesion using intercellular adhesion molecule-1-like peptides and/or analogues thereof
ATE184049T1 (de) * 1990-07-20 1999-09-15 Bayer Ag Multimere formen des menschlichen rhinovirus- rezeptorproteins
US5871733A (en) * 1990-07-20 1999-02-16 Bayer Corporation Multimeric forms of human rhinovirus receptor protein
US6107461A (en) * 1990-07-20 2000-08-22 Bayer Corporation Multimeric forms of human rhinovirus receptor and fragments thereof, and method of use
US6130202A (en) * 1990-07-20 2000-10-10 Bayer Corporation Antiviral methods
US5674982A (en) * 1990-07-20 1997-10-07 Bayer Corporation Multimeric form of human rhinovirus receptor protein
US5223396A (en) * 1991-05-03 1993-06-29 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Method for detecting organ transplant rejection
US5629162A (en) * 1991-06-11 1997-05-13 The Center For Blood Research Method of identifying agents which modulate ICAM-3 binding to LFA-1
WO1993006865A1 (en) * 1991-10-04 1993-04-15 The United States of America, represented by The Secretary, Department of Health & Human Services Treatment of ocular inflammation by blockage of cell adhesion molecules
US5989843A (en) * 1992-01-27 1999-11-23 Icos Corporation Methods for identifying modulators of protein kinase C phosphorylation of ICAM-related protein
US5773218A (en) * 1992-01-27 1998-06-30 Icos Corporation Method to identify compounds which modulate ICAM-related protein interactions
US5702917A (en) * 1992-01-27 1997-12-30 Icos Corporation Polynucleotides encoding human ICAM-4
US5700658A (en) * 1992-01-27 1997-12-23 Icos Corporation ICAM-4 materials and methods
WO1993014776A1 (en) * 1992-01-27 1993-08-05 Icos Corporation Icam-related protein
US5525487A (en) * 1992-01-27 1996-06-11 Icos Corporation DNA encoding I-CAM related protein
US6153395A (en) * 1992-01-27 2000-11-28 Icos Corporation ICAM-related protein
US6100383A (en) * 1992-01-27 2000-08-08 Icos Corporation Fusion proteins comprising ICAM-R polypeptides and immunoglobulin constant regions
US5837822A (en) * 1992-01-27 1998-11-17 Icos Corporation Humanized antibodies specific for ICAM related protein
US6818743B1 (en) 1992-01-27 2004-11-16 Icos Corporation I-CAM related protein
US5532127A (en) * 1992-01-27 1996-07-02 Icos Corporation Assay for 1-CAM related protein expression
US5708141A (en) * 1992-05-11 1998-01-13 Corvas International, Inc. Neutrophil inhibitors
US5580780A (en) * 1992-06-09 1996-12-03 Jalkanen; Sirpa Vascular adhesion protein-(VAP-1) and VAP-1-specific antibodies
US5602307A (en) * 1992-08-12 1997-02-11 Baylor College Of Medicine Non-human animal having predefined allele of a cellular adhesion gene
ATE161192T1 (de) * 1992-08-21 1998-01-15 Genentech Inc Verfahren zur behandlung einer durch lfa-1 vermittelten störung
WO1994013312A1 (en) * 1992-12-15 1994-06-23 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Mucosal vascular addressin, dna and expression
DE4335273A1 (de) * 1993-10-15 1995-04-20 Univ Ludwigs Albert Peptide zur Tumortherapie
CA2187360A1 (en) * 1994-04-12 1995-10-19 Craig D. Wegner Use of agents which block intercellular adhesion molecule/receptor interaction in the treatment of respiratory viral infection
US20020081294A1 (en) 1996-01-23 2002-06-27 Genentech, Inc. Co-administration of a thrombolytic and an anti-CD18 antibody in stroke
US5914112A (en) * 1996-01-23 1999-06-22 Genentech, Inc. Anti-CD18 antibodies in stroke
AU754117B2 (en) * 1998-08-04 2002-11-07 Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College Targeting and prolonging association of drugs to the luminal surface of the pulmonary vascular endothelial cells
US20030035798A1 (en) 2000-08-16 2003-02-20 Fang Fang Humanized antibodies
WO2000056363A1 (en) 1999-03-19 2000-09-28 Genentech, Inc. Treatment of lfa-1 associated disorders with increasing doses of lfa-1 antagonist
US6582698B1 (en) 1999-03-19 2003-06-24 Genentech, Inc. Treatment method
US7674466B2 (en) 1999-08-05 2010-03-09 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Targeting and prolonging association of drugs to the luminal surface of the pulmonary vascular endothelial cells using antibodies that bind to ICAM-1
WO2001051084A1 (en) * 2000-01-14 2001-07-19 Genentech, Inc. Diagnosis and treatment of hepatic inflammatory disorders by inhibiting the binding of lfa-1 to icam-1
US20030138440A1 (en) 2001-07-19 2003-07-24 Fang Fang Multimeric proteins and methods of making and using same
ES2536747T3 (es) 2009-01-20 2015-05-28 Transgene Sa ICAM 1 soluble como biomarcador para predicción de respuesta terapéutica

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
THE JOURNAL OF IMMUNOLOGY=1986 *
THE JOURNAL OF IMMUNOLOGY-1986 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH01135724A (ja) * 1987-11-02 1989-05-29 Baylor College Medicine 非特異的炎症の治療法
JP2014508745A (ja) * 2011-02-02 2014-04-10 メディポスト・カンパニー・リミテッド 神経疾患の予防または処置のためのｉｃａｍ−１の使用

Also Published As

Publication number Publication date
JP2763030B2 (ja) 1998-06-11
IE69976B1 (en) 1996-10-16
EP0289949B1 (en) 1995-10-04
AU1551888A (en) 1988-11-10
NZ237036A (en) 1997-09-22
DK239488D0 (da) 1988-05-03
PT87390B (pt) 1993-11-30
IL86246A0 (en) 1988-11-15
JPH10101699A (ja) 1998-04-21
CA1341399C (en) 2002-11-19
IL86246A (en) 1994-06-24
MX9203033A (es) 1992-07-01
HK1003117A1 (en) 1998-10-09
DE3854536D1 (de) 1995-11-09
FI882037A0 (fi) 1988-05-02
DK239488A (da) 1988-11-05
DK174629B1 (da) 2003-07-28
EP0289949A2 (en) 1988-11-09
EP0289949A3 (en) 1990-09-26
PT87390A (pt) 1989-05-31
NZ224490A (en) 1991-11-26
IE881322L (en) 1988-11-04
ES2080044T3 (es) 1996-02-01
ATE128727T1 (de) 1995-10-15
FI882037A (fi) 1988-11-05
GR3018298T3 (en) 1996-03-31
DE3854536T2 (de) 1996-03-07
JP2874861B2 (ja) 1999-03-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JPH01110700A (ja) 細胞間粘着分子およびその結合性リガンド
US6358510B1 (en) ICAM-1 derivatives with altered ability to bind LFA-1
AU679506B2 (en) Intercellular adhesion molecules, and their binding ligands
EP0606518B1 (en) Intercellular adhesion molecules and their binding ligands
RU2130782C1 (ru) Рекомбинантная молекула днк, кодирующая молекулу iсам-3, молекула адгезии iсам-3, антитело, способное связываться с такой молекулой, фармацевтическая композиция
US5831036A (en) Soluble fragments of human intercellular adhesion molecule-1
JP3778922B2 (ja) 細胞間粘着分子およびその結合性リガンド
AU629189B2 (en) Intercellular adhesion molecules and their binding ligands
US20090035321A1 (en) Intercellular adhesion molecules and their binding ligands
DK176020B1 (da) Monoklonale antistoffer og fragmenter deraf, hybridomaceller til fremstilling af monoklonale antistoffer, fremgangsmåder til diagnosticering af tumorceller, anvendelse af antistoffer samt farmaceutiske præparater indeholdende samme
IE19960275A1 (en) Intercellular adhesion molecules, and their binding ligands
IE83840B1 (en) Intercellular adhesion molecules, and their binding ligands
NZ244853A (en) Antibodies and fragments to icam-1, pharmaceutical composition

Legal Events

Date Code Title Description
R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080327

Year of fee payment: 10

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090327

Year of fee payment: 11

EXPY Cancellation because of completion of term
FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090327

Year of fee payment: 11