WO1998014213A1

WO1998014213A1 - Stabilisateur de la membrane mitochondriale

Info

Publication number: WO1998014213A1
Application number: PCT/JP1997/003485
Authority: WO
Inventors: Mitsunobu Yoshii; Shigeo Watabe
Original assignee: Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd.
Priority date: 1996-10-01
Filing date: 1997-09-30
Publication date: 1998-04-09
Also published as: NO991570L; EP0953356A4; AU4323097A; EP0953356A1; US6417220B2; CN1239437A; AU727482B2; US20010051641A1; NO991570D0; KR20000048847A; CA2267375A1

Description

明細書ミトコンドリア膜安定化剤

技術分野

本発明は、ミトコンドリアの機能異常に起因する、又はミトコンドリアの機能異常を伴う疾患の予防及び/又は治療剤に関するものである。背景技術

細胞内のカルシウムイオン（Ca^2T) は、生理的条件下では重要な情報伝達物質として作用するが、ある濃度以上に増加すると細胞障害因子となりうることが知られている。特に、虚血時の神経系では、グルタミン酸の過剰によりその受容体（NMDA 型）を介してカルシウムイオンが細胞内に流入し、神経壊死が誘発される（Choi,

D, W, , Trends in Neurosciences, 11, 465 - 469， 1988) 。通常、細胞内にある濃度以上のカルシウムイオンが流入すると余剰のカルシウムイオンは小胞体とミトコンドリァに取り込まれ、細胞内のカルシウムイオン濃度は恒常的に維持される。しかしながら、ミトコンドリア内に高濃度のカルシウムイオンが長期に蓄積されミトコンドリァ内部の低酸素状態が慢性化すると、ミトコンドリアのエネルギー産生機能 (ATP合成能）が低下し、細胞膜に存在する種々のイオンポンプが停止してしまう (Nicotera et al. , Chem. Res. Toxico. , 3, 484 - 494, 1990 ; Zaiden et al. , J. eurochem. , 63, 1812-1819, 1994) 。また、カルシウムイオン流入状態が維持されると、細胞膜は脱分極し、このためにマグネシウムイオンにより抑制状態にある NMDA型グルタミン酸受容体一イオンチャンネル複合体が脱抑制されて、さらにカルシウムイオンの流入が促進されるという悪循環をまねく。

ミトコンドリア内部に高濃度のカルシウムイオンが流入 .蓄積している状態においてもミトコンドリアのエネルギー産生機能（ATP合成）を維持させることができれば、細胞膜に存在するカルシウムイオンボンプの機能が健全に保たれるので、細胞内に流入 ·蓄積するカルシウムイオン濃度を低下させることができ、その結果、細胞の生理的な状態が回復する可能性がある。しかしながら、カルシウムィオンの流入時にミトコンドリァを活性化させることは下記の理由から実質的に困難であると考えられてきた。

すなわち、ミトコンドリア内では好気性解糖プロセス（TCA サイクル:；によりエネルギーが産生されているが、このプロセス（電子伝達系）で水素イオン（H+ ) が生じ、得られたエネルギーはこの水素イオンをミトコンドリア内部より外部へ輸送するために使われる。

そのために、ミトコンドリア内膜と外部には非常に高い電気化学ポテンシャル

[①- 150 mV 程度のミトコンドリァ膜電位（Ψ πι)、及び、 ②ミトコンドリア内膜を介する水素イオン（Η+ ) 濃度の差に由来する化学ポテンシャル] が発生しており

(Loew et al. , Pro Natl. Acad. Sci.， USA, 91, 12579 12583， 1994)、この水素イオン（H⁺ ) 能動輸送による高ポテンシャルエネルギーを基にして ATP が合成される（kagawa, Y. , 細胞工学， 11, 3-11, 1992)。

一方、ミトコンドリア内部に正電荷のカルシウムイオンが流入すると、生理的条件下では、ミトコンドリア内部の ATPase により発生したエネルギーを用いて流入したカルシウムイオンがくみ出され、ミトコンドリア膜電位差が維持されるが、 ATP 活性が低下するような病的条件下では、 ATPase 活性が低下し、カルシウムィオンのくみ出しが不十分となり、そのためにミトコンドリア内部の電位がプラス方向に移動し、 Ψ ηι が低下（電気ポテンシャルが減少）すると予想される。このような病的状態（ミトコンドリア膜が脱分極した状態）では、仮に水素ィオン（Η+ ) 濃度差に由来する化学ポテンシャルが存在するとしても、 Ψηι の電気ポテンシャルの減少による電気化学ポテンシャルの低下が原因して ΑΤΡ 合成酵素の活性が抑制され、最終的にミトコンドリアでの ΑΤΡ 合成が停止してしまう。

種々の外的要因又は内的要因によってミトコンドリア膜の脱分極が引き起こされ、その脱分極が一因となってミトコンドリアの機能異常が生じる可能性が示唆されている。また、種々の疾患でミトコンドリアの機能異常が認められており、一部の疾患ではミトコンドリァの機能異常が重要な病因になっていると考えられている。例えば、虚血性脳疾患及び虚血性心疾患などの虚血性疾患、パーキンソン病、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ALS ) 、及びミトコンドリァ脳筋症などのミトコンドリァ異常による変性疾患、並びに一酸化炭素などによる各種中毒症などでは、一般的にミトコンドリァの機能異常が認められる。種々の外的又は内的要因の作用からミトコンドリア膜を保護し、生理的な膜電位を維持することによりミトコンドリア膜を安定化する物質が提供されれば、これらの疾患の治療や予防に極めて有用であることが期待される。発明の開示

本発明の目的は、種々の外的又は内的要因の作用からミトコンドリア膜を保護し、ミトコンドリア膜の脱分極を抑制ないし排除することによって、ミトコンドリァ膜を安定化する作用を有する物質を提供することにある。本発明の別の目的は、ミトコンドリァ膜を安定化させ、ミトコンドリァ膜の脱分極を伴うミトコンドリアの機能異常を防止する作用を有する物質を提供することにある。また、本発明のさらに別の目的は、上記の作用を有する物質を有効成分として含み、ミトコンドリアの機能異常に起因する、又はミトコンドリアの機能異常を伴う疾患の予防及び/又は治療剤を提供することにある。

本発明者らは上記の課題を解決すベく鋭意努力した結果、ミトコンドリァ膜の脱分極を抑制ないし排除することによってミトコンドリア膜を安定化する作用を有する物質が存在することを初めて確認した。本発明者らはさらに研究を行い、ミトコンドリア膜を安定化することによってミトコンドリア膜を外的要因又は内的要因による脱分極から保護することができること、及び/又はミトコンドリア膜の生理的な分極状態を維持ないし回復し、ミトコンドリァの生理的なエネルギー産生を維持ないし回復できることを見出した。また、このような作用を有する物質がミトコンドリァ膜に存在するべンゾジァゼピンレセプターにアンタゴニストとして結合することにより、ミトコンドリア膜を不安定化するァゴニストの作用を抑制できることを見出した。本発明はこれらの知見を基にして完成されたものである。

すなわち本発明は、ミトコンドリア膜に対する安定化作用を有する物質を有効成分として含む、ミトコンドリァ機能異常に起因する、又はミトコンドリァ機能異常を伴う疾患の予防及び/又は治療剤を提供するものである。上記発明の好ましい態様によれば、ミトコンドリァ膜に対する安定化作用がミトコンドリァ膜の脱分極を抑制又は排除する作用である上記予防及び/又は治療剤；ミトコンドリァ膜の脱分極が細胞内カルシウムィォン濃度の上昇により惹起される上記予防及び/又は治療剤；ミトコンドリア膜に対する安定化作用が、細胞内カルシウムィォン濃度の上昇時においてミトコンドリァの ATP産生能を生理的な状態に維持ないしは回復させる作用である上記予防及び又は治療剤；並びに、該疾患が、虚血性疾患、中毒症、及び変性疾患からなる群から選ばれる上記予防及びノ又は治療剤が提供される。また、該物質がミドコンドリアべンゾジァゼピンレセプターァンタゴ二ストである上記予防及び/又は治療剤が提供される。

上記発明の好ましい態様によれば、虚血性疾患が、脳神経系若しくは脳血管系の虚血性障害、虚血性心疾患、腎不全、又は肝不全である上記予防及び/又は治療剤；変性疾患が、ミトコンドリァ酵素活性異常、ミトコンドリァ遺伝子変異症、パーキンソン病、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ALS ) 、ミトコンドリァ脳筋症、又は二—マン · ピック病である上記予防及び Z又は治療剤；並びに、中毒症が、ガス中毒、アルコ -ル中毒、薬物中毒、農薬中毒、重金属中毒、又は天然の動物若しくは植物の毒素による中毒症である上記予防及びノ又は治療剤が提供される。

別の観点からは、本発明により、ミトコンドリア膜を安定化する作用を有する物質の有効量をヒトを含む哺乳類動物に投与する工程を含む、ミトコンドリァ機能異常に起因する、又はミトコンドリア機能異常を伴う疾患の予防及び/又は治療方法が提供される。

さらに別の観点からは、本発明により、ミトコンドリアベンゾジァゼピンレセプ夕ーアンタゴニストを有効成分として含むミトコンドリアの膜安定化剤；並びに、ミトコンドリアベンゾジァゼピンレセプタ一アンタゴニストを有効成分として含む、ミトコンドリア機能異常に起因する、又はミトコンドリア機能異常を伴う疾患の予防及び/又は治療剤が提供される。図面の簡単な説明

第 1図は、細胞内 Ca²⁺濃度に及ぼす Ro5-4864の作用を示す図である。

第 2図は、ミトコンドリア膜電位に及ぼす Ro5- 4864の作用を示す図である。第 3図は、ブラジキニン処理及び力フヱイン処理を施した NG108- 15神経細胞において、細胞内 Ca⁰⁺濃度に及ぼす Ro5- 4864の作用を示した図である。

第 4図は、ブラジキニン処理及びカフヱイン処理を施した NG108-15神経細胞において、ミトコンドリア膜電位に及ぼす Ro5 - 4864の作用を示した図である。

第 5図は、本発明の医薬（ネフィラセタム）が Ro5- 4864 による細胞内 Ca²⁺濃度の上昇を阻害することを示した図である。

第 6図は、本発明の医薬（ネフィラセタム）がミトコンドリア膜に対する Ro5 - 4864の脱分極作用を阻害することを示した図である。

第 7図は、本発明の医薬（PK11195)がミトコンドリア膜に対する Ro5-4864の脱分極作用を阻害することを示しており、ミトコンドリアベンゾジァゼピンレセプター（MBR)の活性化によりミトコンドリア膜脱分極と細胞内 Ca ⁺濃度とが連動している結果を示す図である。

第 8図は、本発明の医薬（PK11195)がミトコンドリア膜電位に及ぼす Ro5- 4864 の作用を阻害することを示しており、本発明の医薬と Ro5-4864とが MBR に対して競合的に作用している結果を示す図である。

第 9図は、本発明の医薬（NCS- 1044-90)で処理した細胞における細胞内 Ca^2T濃度に及ぼす Ro5- 4864の影響を示した図である。

第 10図は、 NCS-1044-90 処理細胞における細胞内ミトコンドリア膜電位に及ぼす Ro5- 4864の影響を示した図である。発明の実施するための最良の形態

本発明の医薬は、ミトコンドリア膜に作用して膜（特に内膜）を安定化する作用を有している。その結果として、本発明の医薬は、種々の外的要因（中毒性物質への被曝など）又は内的要因（遺伝子の異常発現などによる細胞膜構成成分の異常など）による脱分極作用などからミトコンドリァ膜を保護するとともに、ミトコンドリァ膜の生理的な分極状態を維持ないし回復して、ミトコンドリアでの生理的なエネルギー産生を維持ないし回復する作用を有している。本明細書において「ミ卜コンドリアの機能異常」という場合には、上記のようなエネルギ—産生能の低下（機能低下）を含めて、ミトコンドリアの機能に実質的になんらかの異常が生じているものを全て包含する概念として用いる。また、本明細書において「生理的」という用語は、正常な生命活動が維持されている平均的な細胞内環境と実質的に同じ状態にあることを意味している。

いかなる特定の理論に拘泥するわけではないが、外的又は内的要因により細胞内のカルシウムイオン濃度が上昇すると、ミトコンドリア内部のカルシウムィォン濃度も高まり、ミトコンドリァ膜の脱分極が生じて ATP 産生能が低下する。本発明の医薬は、特に細胞内のカルシウムイオン濃度が上昇した場合においてミトコンドリア膜を安定化する作用を有しており、膜の脱分極を実質的に完全に抑制し、又はその脱分極を抑制するとともに、ミトコンドリアの ATP 産生能を生理的な状態に維持ないしは回復させる。

また、いかなる特定の理論に拘泥するわけではないが、本発明の医薬は、ミトコンドリアべンゾジァゼピンレセプタ一（MBR)に結合することができ、このレセプターに結合してミトコンドリア膜電位を不安定化させる MBR ァゴニスト [例えば 7 - クロロ- 5 -（4 -クロロフヱニル） -1, 3-ジヒドロ- 1- メチル - 2H- 1, 4-ベンゾジァゼピン- 2- オン： TIPS, December, pp. 506-511, 1986] に対して競合的アンタゴニス卜として作用する。本発明の医薬は、 MBR に対するアンタゴニスト作用によってミトコンドリァの膜を安定化させ、上記の生理作用を発揮するものと考えられる。従って、本発明の医薬は、（a) ミトコンドリア膜を安定化する作用によって特徴付けられるものであり、この安定化作用に基づいて、（b) ミトコンドリア膜を外的要因又は内的要因による脱分極作用から保護し；及び/又は（c) ミトコンドリア膜の生理的な分極状態を維持ないし回復して、ミトコンドリァの生理的なェネルギ一産生を維持ないし回復する作用を有することを特徴としている。従って、本発明の医薬は、特定の化学構造の物質に限定されることはなく、上記の生理学的特徴を有する物質を含む医薬はいずれも本発明の範囲に包含されることを理解すべきである。なお、上記の生理学的特徴の確認手段は本明細書の実施例に詳細に記載されている。

また、本発明の医薬はミトコンドリアベンゾジァゼピンレセプタ一アンタゴニストを有効成分として含み、ミトコンドリア膜を安定化することによって、ミトコンドリアの機能異常に起因し、又はミトコンドリアの機能異常を伴う疾患の予防及び/又は治療を有効に達成することができる。ミ卜コンドリアべンゾジァゼピンレセプター .アンタゴニストとしての作用の確認手段も本明細書の実施例に具体的に説明されている。

ミトコンドリアの機能異常に起因し、又はミトコンドリアの機能異常を伴う疾患としては、例えば、肝臓、心臓、脳、又は腎臓などの臓器やそれらを支配する血管系の虚血性疾患、より具体的には、感覚，運動障害、言語障害、記憶障害、痴呆、痙攣発作、精神障害などの症状の 1又は 2以上を伴う血管性脳障害などの脳神経系の虚血性障害；心筋梗塞などの虚血性心疾患；腎不全などの虚血性腎障害；肝不全などの虚血性肝障害はその代表的な疾患である。これらの疾患には血圧低下、低酸素症、及び薬物中毒により惹起されたものも含まれる。他の疾患の例として、ミトコンドリァ酵素異常、ミトコンドリァ遺伝子変異などのミトコンドリア異常による変性疾患（Shigenaga et al. , Pro Natl. Acad. Sci. , USA, 91, 10771-10778, 1994 ; Tanaka, M. , et al. , 内科, 77、 88卜 887， 1996) 、及び各種中毒症を挙げることができる。

ミトコンドリァの機能異常の関与が証明ないし示唆されている変性疾患としては、パーキンソン病、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ALS ) 、ミトコンドリア脳筋症 (Ohnishi, H. et al. , 脳神経， 44, 259 - 264, 1992)、ニーマン ' ピック病などを挙げることができる。中毒症の例としては、一酸化炭素ガス、二酸化炭素ガス、シアンガスなどによるガス中毒、アルコール中毒、薬物中毒、ピレスロイド系農薬や有機リン系農薬などによる農薬中毒、重金属中毒、又はフグ毒やキノコ毒などの天然の動物 ·植物の毒素による中毒症を挙げることができる。虚血性疾患や各種中毒症などにおいては、細胞内にカルシウムイオンが流入することが知られている (Zaidan, E. et al. , J. Neurochem. , 63, pp. 1812-1819, 1994) o 一方、ミトコンドリにおける ATP 合成は、ミトコンドリァ内外水素ィォン（H+ ) 濃度の電気化学的ポテンシャルの差に依存することが知られている (Michell, P. , Science, 206, 1148, 1979 ; Michell, P. , FEBS Lett. , 43, 184， 1974)。従って、このようなミトコンドリ内へのカルシウムイオンの流入がミトコンドリア膜の脱分極をもたらすことが予測されたが、本発明者は本発明の完成に際してこの事実を実験的に証明した。

また、この事実を基にすると、前記の病的条件下におけるミトコンドリア内へのカルシウムイオンの流入によりミトコンドリア膜が脱分極し、ミトコンドリアでのエネルギー産生が低下することが予測される。従って、生理的濃度よりも高い細胞内カルシウムイオン濃度を伴う疾患、特に、細胞内カルシウムイオン濃度の上昇により引き起こされるミトコンドリア膜の脱分極を伴う疾患は、本発明の医薬の特に好適な対象となる。

本発明の医薬の有効成分として好適な化合物群の第一の例としては、下記の式：

で表される 2—ォキソ一 1 —ピロリジニルアルキルカルボン酸ァミド化合物を挙げることができる。

式中、 R は水素原子または水酸基を示し、 R¹は水素原子またはメチル基を示し、 R²はピリジル基又は 1〜3 個の同一又は異なる置換基で置換された置換フヱニル基を示す。フニル基上の置換基としては、ハロゲン原子（本明細書において「ハロゲン原子」という場合には、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、又はヨウ素原子のいずれでもよい）、トリフルォロメチル基、ニトロ基、ァセチル基、 1〜4 個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のアルキル基、 1〜4 個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のアルコキシル基、 1〜7 個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のアルキルメルカプト基、一般式： - S- (CH₂)_n -CH(R³) (R⁴) 〔式中の n は 1又は 2を示し、は水素原子又はメチル基を示し、 R⁴は水酸基又は一般式： -N(R⁸) (R³) (式中の R⁸は水素原子又はメチル基を示し、 R⁹はメチル基、ベンジル基、又は置換ベンジル基を示し、あるいは R "及び R⁹が一緒になつて式中の窒素原子と共に置換ピロリジン環を示す）で表されるアミノ基を示す〕で表される置換アルキルメルカプト基、次の一般式： - S0₂R⁵ (式中の R⁵はァミノ基又は 1〜3 個の炭素原子を有するァルキル基を示す）で表されるスルホニル基、及び次の一般式： - COO(CH₂) ₂- N(R⁶) (R⁷) (式中の R⁶及び R'はそれぞれ独立に水素原子、メチル基、又はェチル基を示す）で表されるァミノェトキシカルボニル基からなる群から選ばれる。

フユニル基の置換基の具体例としては、塩素原子又はフッ素原子などのハロゲン原子；メチル基、ェチル基、 n-プロピル基、 sec-ブチル基、又は n-ブチル基などのアルキル基；メトキシ基又はィソプロポキシ基などのアルコキシル基；メチルメルカプト基、 n-プロピルメ 'レカプト基、イソプロピルメルカプト基、 sec -ブチルメルカプト基、又は n -へプチルメルカプト基などのアルキルメルカプト基； 2-ヒドロキシプロピルメルカプト基、 2 -（N，N- ジメチルァミノ）-プロピルメルカプト基、又は 2 -（N- メチル- N- ベンジルァミノ） -ェチルメルカプト基などの置換アルキルメルカプト基；一般式： - S-(CH₀) -CH(R³)-N(R⁸) (R⁹) において式中 R⁹で表される置換ベンジル基がメトキシ基で置換されたべンジル基である、例えば 2 - N -メチル- N -(3, 4 -ジメトキシベンジル） -ァミノ） -ェチルメルカプト基などの N -メチル- N- ベンジルァミノアルキルメルカプト基；一般式： - S -（CH₂)_n -CH(R³)-N(R°) (R⁹) において R⁸及び R⁹が示す置換ピロリジン環が 2-ォキソ基で置換されたものである、例えば 2 -（2- ォキソ - 1- ピロリジニル） -ェチルメルカプト基などの 1-ピロリジニルアルキルメルカプ卜基；及び 2- (N, N- ジェチルァミノ） -ェトキシカルボニル基などを挙げることができる。 R²で表されるピリジル基は好適には未置換のものを用いることができ、 2-ピリジル基、 3-ピリジル基、又は 4-ピリジル基のいずれを用いてもよい。本発明の医薬の有効成分として好適な化合物群の第二の例として、

(1) 2-ォキソ -卜ピロリジニル酢酸 2, 6- ジメチルァニリド；

(2) 4-ヒドロキシ- 2- ォキソ - 1- ピロリジニル酢酸 2， 6- ジェチルァニリド； (3) 4-ヒドロキシ- 2- ォキソ - 1- ピロリジニル酢酸 2, 6- ジメチルァニリド；

(4) 2- [2- ォキソ- ピロリジニル] プロピオン酸 N- 3- ピリジニルアミド；

(5) 2 -ォキソ - 1- ピロリジニル酢酸 4- イソプロピルメルカプトァニリド；

(6) 2 - [2- ォキソ - 1- ピロリジニル] - 1-プロピオン酸 4-(2 -プチルメルカプト） - ァニリド；

(7) 2- [2- ォキソ - 1- ピロリジニル] -プロピオン酸- 4- イソプロピルァニリド；

(8) 2- [2- ォキソ - 1- ピロリジニル] -プロピオン酸- 2, 4- ジメチルァニリド；

(9) 2- [2- ォキソ - 1- ピロリジニル] -プロピオン酸- 2, 4， 6- トリメチルァニリド；

(10) 2- [2- ォキソ - 1- ピロリジニル] -プロピオン酸- 2- メトキシ- 5_ メチルァニリ K ；

(11) 2- [2- ォキソ -卜ピロリジニル] -プロピオン酸- 2， 6_ ジクロロア二リド；

(12) 2—ピロリドン- ァセタミド；

(13) 1-ァニソィル- 2_ ピロリジノン；及び

(14) 4 ヒドロキシ- 2- ォキソ -卜ピロリジンァセタミド

などからなる化合物群を挙げることができる。上記の具体的化合物のほか、特公平 3- 46466号公報の第 10〜19頁の表 3に開示された化合物も第二の化合物群に含まれる代表的化合物である。

上記の第二の化合物群に属する化合物のうち特に好適な化合物は、 2-ォキソ -1 - ピロリジニル酢酸 2, 6- ジメチルァニリド [Ν-( 2 , 6- ジメチルフエニル） -2 -（2 - ォキソ - 1- ピロリジニル）ァセタミド，一般名：ネフイラセタム] ； 2-ピロリドン- ァセタミド；卜ァニソィル- 2- ピロリジノン；及び 4-ヒドロキシ -2- ォキソ - 1 - ピロリジンァセタミドである。

本発明の医薬の有効成分として好適な化合物群の第三の例としては、下記の式：

で表される化合物群を挙げることができる。

式中、 R^{1 1} 及び!?¹² はそれぞれ独立に 1〜6 個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のアルキル基、 3〜7 個の炭素原子を有するシクロアルキル基、アルキル部分の炭素原子数が 1〜 3個であるフヱニルアルキル基若しくはシクロアルキル置換ァルキル基、又は 3〜6 個の炭素原子を有するアルケニル基若しくはアルキニル基（ただし、二重結合又は三重結合は窒素原子に関して 1-2 位に位置しない）を示し； A および B はそれぞれ独立に N 又は CH を示し； X¹ 及び X² はそれぞれ独立にハロゲン原子、 1〜3 個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のアルキル基、 1〜3 個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のアルコキシ基、二ト口基、又はトリフルォロメチル基を示し； Arはフヱニル基、ピリジル基、チェニル基、又は置換フヱニル基（フニル基上の置換基は、ハロゲン原子、 1〜4 個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のアルキル基、 1〜4 個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のアルコキシ基、 1〜4 個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のアルキルチオ基、トリフルォロメチル基、及び二ト口基からなる群から選ばれた 1個又は 2個の置換基である）を示す。

この化合物群に含まれる化合物のうち、 X¹ 及び X² が水素原子であり、 Arが置換フヱニル基であり、 B が CH であり、 A が N であり、 R¹¹ 及び R¹² がそれぞれ独立に〜 6 個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のアルキル基である化合物が好ましい。さらに好ましい化合物として、 X¹ 及び X² が水素原子であり、 Arがクロ口フエニル基であり、 B が CH であり、 A 力^ であり、 R¹¹ がメチル基であり、 R¹² が 1〜6 個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のアルキル基である化合物を挙げることができる。特に好ましい化合物は、 N-メチル- N -（1-メチルプロピル） -（2 - クロ口フエニル）イソキノリン -3- カルボキサミド、並びにその光学活性体であるである N-メチル -N -（1 -（S) -メチルプロピル） -（2- クロロフヱニル）イソキノリン- 3- カルボキサミド及び N -メチル -N -（1 -（R) -メチルプロピル） -（2- クロロフヱニル）イソキノリン- 3- カルボキサミドである。これらの化合物は特開昭 58-201756 号公報の実施例 44及び 45に記載されている。

本発明の医薬の有効成分として好適な化合物群の第四の例としては、下記の式：

で表される化合物群を挙げることができる。

式中、 R²¹ は未置換フニル基、置換フエニル基（フエニル基上の置換基は、ハロゲン原子、 1〜6 個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のアルキル基、及び 1〜6 個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のアルコキシ基からなる群から選ばれる 1個又は 2個の置換基である）、又はチェ二ル基を示し； 1^² は水素原子又はハロゲン原子、置換基を有していてもよい 1〜6 個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のアルキル基（置換基はァミノ基、アルキルァミノ基、及びジアルキルァミノ基から選ばれる）を示し； R²³ は（R²⁴) (R²⁵)N-CO-Q- で表される基（式中、 Q は 1〜6 個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のアルキレン基であり、 R²⁴ 及び R²³ はそれぞれ独立に 1 ~6 個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のアルキル基、未置換フヱニル基、又は置換フニル基（フニル基上の置換基は、ハロゲン原子、

1〜6 個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のアルキル基、及び 1〜6 個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のアルコキシ基からなる群から選ばれる 1個又は 2 個の置換基である）を示し； X³は水素原子又はハロゲン原子を示し； Y は酸素原子又は硫黄原子を示す。

この化合物群に含まれる化合物のうち、 R²¹ が置換フエニル基（フヱ二ル基上の置換基は、ハロゲン原子、 1〜6 個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のアルキル基、及び 1〜6 個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のアルコキシ基からなる群から選ばれる 1個又は 2個の置換基である）であり； R²² がハロゲン原子であり； R²° が（R²⁴) (R²⁵)N - C0-Q- で表される基（式中、 Q は 1〜6 個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のアルキレン基であり、 R²⁴ が 1〜6 個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のアルキル基であり、 R²⁵ が未置換フヱニル基又は置換フヱニル基（フヱニル基上の置換基は、ハロゲン原子、 1〜6 個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のアルキル基、及び 1〜6 個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のアルコキシ基からなる群から選ばれる 1個又は 2個の置換基である）であり； X³が水素原子であり； Y が酸素原子である化合物が好ましい。また、 R ¹ がクロロフヱニル基であり； 1^² が臭素原子であり； R²³ が（R²⁴) (R²³)N- CO- Q- で表される基（式中、 Q は 1〜6 個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のアルキレン基であり、 R²⁴ が 1〜6 個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のアルキル基であり、 R²⁵ が未置換フエニル基であり； X³が水素原子であり； Y が酸素原子である化合物がより好ましい。

特に好ましい化合物として、 2_(3- クロロフヱニル） -3 -プロモ- 6- (N-メチル- N ― フヱニルァセトアミド）- 5-ォキソ - 5， 6- ジヒドロイミダゾ [1, 2-c] キナゾリンを挙げることができる。この化合物は、特開平 4 - 217682号公報の実施例中に 42番目の化合物として記載されている。

上記に例示した化合物群に含まれる化合物は、特開昭 56-2960 号公報、特開昭 61 -280470 号公報、特開平 4- 160496号公報、特開昭 58- 201756 号公報、特開平 4- 217682 号公報などに記載されている方法に従って容易に製造可能である。なお、特公平 3-46466 号公報に開示された上記ピロリジニルァセ卜アミド誘導体については、脳機能改善作用（特公昭 62-5404 号公報）、アルツハイマー型痴呆改善作用（特開平 5 - 163144号公報）、脳血管性痴呆改善作用（特開平 5- 163145号公報）、及び E1マウスでの杭けいれん作用（中本ら、第 17回日本神経科学大会、 1993年 12月 7日〜 9日、名古屋市、プログラム抄録集第 84頁、演題番号 P1A20)などの生物学的作用が知られている。また、この化合物が、ミトコンドリア膜に存在するミトコンドリアベンゾジァゼピンレセプター（MBR)に対して親和性を有することが知られているが (Neurosci. Res. Suppl. 17, S88, 1992, 2-71)、この化合物のミトコンドリア膜電位に対する作用は従来知られていない。

本発明の医薬の有効成分としては、遊離形態の化合物又は生理学的に許容される塩の形態の化合物のいずれを用いてもよい。また、その任意の水和物若しくは溶媒和物を用いることもできる。生理学的に許容される塩としては、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩等の鉱酸塩、あるいは、酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、クェン酸塩、シユウ酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、リンゴ酸塩、マンデル酸塩、メタンスルホン酸塩、 P-トルエンスルホン酸塩、 10—カンファースルホン酸塩等の有機酸塩などの酸付加塩を挙げることができる。本発明の医薬の有効成分として用いる化合物が 1又は 2以上の不斉炭素を有する場合には、それぞれの不斉炭素の立体配置は特に限定されず、任意の光学活性体、光学異性体の任意の混合物、又はラセミ体のいずれを用いてもよい。また、 2個以上の不斉炭素に基づくジァステレオ異性体の任意の混合物を用いてもよい。

本発明の医薬の投与形態は特に制限されず、経口的 ·非経口的に投与することができる。本発明の医薬としては、有効成分である化合物、例えば上記式（ I ) の化合物をそのまま用いてもよいが、有効成分の化合物と薬理学的及び製剤学的に許容しうる製剤用添加物とを含む医薬組成物の形態で提供されることが好ましい。薬理学的及び製剤学的に許容しうる添加物としては、例えば、賦形剤、崩壊剤ないし崩壊補助剤、結合剤、滑沢剤、コ—ティング剤、色素、希釈剤、基剤、溶解剤ないし溶解補助剤、等張化剤、 pH調節剂、安定化剤、噴射剤、及び粘着剤等を用いることができる。経口投与に適する製剤の例としては、例えば、錠剤、力プセル剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、液剤、又はシロップ剤等を挙げることができる。非経口投与に適する製剤としては、例えば、注射剤、点滴剤、坐剤、吸入剤、又は貼付剤等を挙げることができる。なお、本発明の医薬には 1種又は 2種以上の有効成分を配合することが可能である。

本発明の医薬の投与量は特に限定されず、治療又は予防の目的、疾患の種類、患者の年齢や症状、投与経路などの種々の条件に応じて適宜の投与量を選択することが可能である。一般的には、経口投与の場合に成人一日あたり約 10 mg〜l， 000 mg程度、好ましくは、約 60 mg〜900 mg程度である。なお、本発明に特に好適に用いられる 2-ォキソ -1- ピロリジニル酢酸 2, 6- ジメチルァニリド[一般名：ネフィラセタム] の急性毒性は 2, 005 mg/kg (雄性マウス， ρ· ο· ) であり、安全性が高いことが証明されている（特開平 5- 163144号公報）。実施例

以下、本発明を実施例によりさらに具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらの実施例に限定されることはない。実施例の試験方法は、特に言及のない場合は、ヘールら (Hare, M. F. , et. al. , J PET, 266, pp. 1626-1635, 1993) の方法に従って行った。また、実施例中、「ネフィラセタム」は 2 -ォキソ -1- ピロリジニル酢酸 2, 6- ジメチルァニリドを示し、「Ro5 - 4864」はミトコンドリアべンゾジァゼピンレセプタ一 . ァゴニスト [7-クロロ- 5 -（4 -クロロフヱニル） - 1， 3-ジヒドロ- 1 - メチル -2H- 1, 4-ベンゾジァゼピン- 2- オン： TIPS, December, pp. 506-511, 1986] を示す。例 1 ：細胞内 Ca^{2 +}濃度の測定

細胞内 Ca^+濃度に及ぼす Ro5-4864の添加の影響を検討した。培養細胞（NG108 - 15細胞：神経細胞 X神経膠細胞ハイプリッド）を DMEM培地を用いて培養し、さらにカバーグラスを装着せたフレキシパ一ムディスク（Heraeus Biotechnology社製）内で培養して以下の実験に用いた。培養した NG108 - 15細胞に、 Ro5 - 4864を 50 mM の濃度になるように添加した。蛍光試薬 f ura2- AM [1- [6- Amino- 2- (5- carboxy - 2- oxazolyl) - 5 - benzofuranyloxy」-2-(2-amino-5-methylphenox} -ethane-N, N， Ν ' , N ' -tetraacetic acid, pentaacetoxymethyl ester, 同仁ィ匕学研究所製] を D S0

(Dimethylsulfoxide, 半井化学製）に溶解して 1 mM溶液を作製し、次にこの溶液を HBS Hen^es- saline液，組成： NaCl : 130 mM ; C1 : 5. 4 mM ; CaCl₂ : 1. 8 mM ;

MgS0₄： 0. 8 mM ; D- glucose: 20 mM ; Na ⁺ - HEPES : 20 mM, pH 7. 3)で 200 倍に希釈して蛍光試薬溶液とした（fura2- AMの最終濃度： 5 / M)。

細胞内 Ca²⁺濃度の測定は、 NG108-15細胞を培養したシャーレ（Petri dish) 内の培養液を除き、 HBSで 2 回洗浄し、上記により調製した 5 n t の fura2 - AM溶液を培養細胞に添加し、炭酸ガスインキュベータ一内に 30分間静置し、その後、添加した fura2- AM溶液を取り除くために HBS で 5 回洗浄した。最後にフレキシパームに HBS lml を添加し、 ARGUS- 50/CA (浜松ホトニクス社製) により細胞内 Ca²⁺濃度を測定した。この測定法は、 fura- 2がロードされた培養細胞において、 340nm の励起波長で発する Ca²⁺結合型 fura - 2の蛍光と 380nm の励起波長で発する Ca²⁺遊離型 fura - 2の蛍光とを一定時間毎にペアで測定し、その相対比（蛍光強度の比）をもって、細胞内 Ca²⁺動態（濃度）を解析する方法である。細胞内カルシウムイオンと fura2 - AMとの結合による 340 nm励起蛍光の増大と、 380 nm励起蛍光の減少を画像記録し、蛍光画像間の蛍光強度の比を求めた。第 1図に細胞内 Ca ⁺濃度に及ぼす Ro5-4864 の効果を示した。この結果によれば、 Ro5- 4864の添加により細胞内 Ca²⁺濃度が急激に上昇することが明らかである。例 2 ：ミトコンドリァ膜電位の測定

ローダミン 123 (2 - [6-Amino-3-imino-3H-xanthen-9-yl ] -benzoicacid methylester, Sigma社製）を HBS で溶解および希釈し、最終濃度 10 M の溶液を調製した。ペトリ皿内に培養した NG108- 細胞の培養液を除き HBSで 2 回洗浄した。ローダミン 123 溶液を再度撹拌した後、培養細胞に添加して細胞を炭酸ガスインキュベータ一内に 10分間静置した。その後、添加したローダミン 123 溶液を取り除くために HBS で 5 回洗浄した。つぎに、この細胞を含むフレキシパームディスク内に HBS (1 ml)を添加し、再び炭酸ガスインキュベータ一内で 10分間静置した。最後に細胞を HBS で 1回洗浄して実験に供した。細胞内 Ca²⁺濃度の測定には ARGUS- 50/CA (浜松ホトニクス社製）を使用した。ミトコンドリァ膜電位の測定の実験は、培養した NG108- 15神経細胞に Ro5- 4864 (50 / M)を添加し、以後経時的に ARGUS- 50/CA により電位変化を測定した。第 2図に示す結果から、 Ro5-4864の添加によりミトコンドリアの膜電位は顕著に減少し、膜の脱分極が生じることが判明した。図中、縦軸は第 1図と同様に蛍光強度の比を示しているが、この実験では、初めの画像から蛍光強度を記録しておき、それを基準 (ratio=1. 0) としてそれ以降に観測される画像の蛍光強度の比を縦軸に示した。

細胞内の Ca²⁺調節に関与するオルガネラとして小胞体が知られているが、小胞体からの Ca²—放出機構として、イノシトール三リン酸による Ca² 放出（刺激薬：ブラジキニン（BK)) 、 Ca²⁺誘発性の Ca²⁺放出（刺激薬：カフヱイン（Caff) ) の 2つが知られている。例 1により観測された Ro5- 4864の添加による細胞内 Ca²⁺濃度の上昇と例 2で観測されたミトコンドリア膜電位の減少との関連を調べるために、ブラジキニン及びカフヱイン処理により小胞体に由来する細胞内 Ca^2Tを枯渴させて同様の実験を行い、例 1で観測された Ca^2Tがミトコンドリア内部に蓄積されていた Ca^2T であるか否かを検討した。例 1に記載した方法と同様な方法により、細胞内 Ca²⁺ 濃度を測定した。例 3 ：ブラジキニン及びカフヱイン処理細胞における Ro5 - 4864の影響

第 3図は、 NG108- 神経細胞にブラジキニン処理及び力フヱイン処理した細胞において、細胞内 Ca²⁺濃度に及ぼす Ro5- 4864の効果を示した図である。はじめに、受容体を介して小胞体から細胞内へ Ca^2Tを遊離させることで知られているブラジキニン（BK 1 / M)を適用すると顕著な細胞内 Ca²⁺濃度の上昇が観察された。続いて力フェイン（Caff/ 10〃M)を適用し、続いて第二回目の BKを適用をしたが、これらのいずれによっても細胞内 Ca²⁺濃度の上昇は認められなかった。これは、第一回目の BK により小胞体に由来する細胞内 Ca が枯渴したためであると考えられる。この条件下で Ro5- 4864(50 を適用したところ細胞内 Ca^2T濃度は顕著に上昇した。ブラジキニンは、細胞内 Ca²⁺のもうひとつの貯蔵部位であるミトコンドリアに対しては作用しないものと考えられている。従って、 Ro5 - 4864による細胞内 Ca²⁺濃度の上昇はミトコンドリァに由来するものであることが示された。

例 2と同様の方法によりミトコンドリア膜電位を測定した。カフヱイン（10 μ Μ)およびブラジキニン（Ι ^ Μ)を適用してもミトコンドリァの膜電位に変化は認められなかったが、 Ro5- 4864(50 〃M)を適用したところ顕著なミトコンドリア膜電位の低下が認められ、ミトコンドリア膜が脱分極していることが確認された（第 4図）例 4 ：ネフイラセタム処理細胞における細胞内 Ca²⁺濃度に及ぼす Ro5- 4864の影響 Ro5 - 4864(25 M)を適用して細胞内 Ca²⁺濃度の上昇を確認した（第 5図：最初のピーク）。上記の反応が起きることを確認した後、その細胞を洗浄し、さらに本発明の医薬としてネフイラセタム（50 ^ M)を適用したところ、細胞内 Ca²⁺濃度に変化は認められず、ネフイラセタム存在下で Ro5 - 4864(25 M)を添加したところ、細胞内 Ca²⁺濃度はほとんど変化しなかった（第 5図）。この結果は、本発明の医薬が Ro5- 4864(25 M)による細胞内 Ca²⁺濃度の上昇を阻害することを示している。例 5 ：ネフイラセタム処理細胞におけるミトコンドリア膜電位に及ぼす Ro5- 4864 ミトコンドリァ膜電位に及ぼす本発明の医薬の作用を例 2と同様の方法により検討した。はじめに、ネフイラセタム（50 〃M)を適用したところミトコンドリアの膜電位には何ら変化が認められなかった。さらに、ネフイラセタムの存在下で Ro5 - 4864(25 を適用したところ、ミトコンドリアの膜電位にはほとんど変化が認められなかった（第 6図）。この結果は、 Ro5- 4864(25 M)のミトコンドリア膜に対する脱分極作用を本発明の医薬が阻害していることを示唆している。同様な実験においてさらに高濃度の Ro5- 4864(50 M)を適用すると、弱いながらもミトコンドリア膜脱分極作用が認められた（第 6図）。例 6 ： P 11195 処理細胞における細胞内 Ca²⁺濃度に及ぼす Ro5- 4864の影響特開昭 58- 201756 号公報の実施例 45に記載された方法と同様にして、 N-メチル -Ν-α-メチルプロピル） -（2- クロロフヱニル）イソキノリン - 3- カルボキサミド (PK11195, ラセミ体）を製造した。 m. p. 133- 134°C (CHClg-EtOH) 、 Anal. Calcd. for C₂₁H₂₁ClN_o0₂ C， 71. 48% ; H, 6. 00% ; N， 7. 94¾ Found C， 71. 19% ; H， 5. 94 ¾ ; N, 8. 06%

Ro5 - 4864 (50 / M)を適用して細胞内 Ca²⁺濃度の上昇を確認した（第 7図：最初のピーク）。その後、 PK11195 (20 M)を前処置した後に Ro5 - 4864を適用したところ Ca²⁺濃度の上昇作用が抑制された。この結果は、 PK11195 による MBR (ミトコンドリアべンゾジァゼピンレセプタ一）の活性化によってミトコンドリア膜脱分極作用と細胞内 Ca²⁺濃度とが連動していることを示している。例 7 ： PK11195 処理細胞におけるミトコンドリァ膜電位に及ぼす Ro5- 4864の影響ミトコンドリァ膜電位に及ぼす本発明の医薬の作用を例 2と同様の方法により検討した。はじめに PK11195 (20 / M)を適用したところミトコンドリアの膜電位にはなんら変化が認められなかった。さらに PK11195 (20 M)の存在下で Ro5-4864 (50〃M)を適用したところ、ミトコンドリア膜電位にはほとんど影響を与えなかつた。しかしながら、その後、 Ro5- 4864の投与を繰り返すと脱分極が促進されてミトコンドリア膜電位が上昇した。この結果は、本発明の医薬と Ro5-4864が MBR において競合的に作用している可能性を示唆している（第 8図）。例 8 ： NCS- 1044 - 90 処理細胞における細胞内 Ca²⁺濃度に及ぼす Ro5- 4864の影響特開平 4-217682号公報の実施例 42に示された方法と同様にして、 2- (3- クロ口フエニル） -3 -プロモ- 6- (N-メチルフヱニルァセトアミド）- 5-ォキソ -5, 6- ジヒドロイミダゾ [1， 2-c] キナゾリン（NCS- 1044- 90)を製造した。 m. p. 225- 227 °C

(Et。0)、 Anal. Calcd. for C^H^BrClN^ C, 57. 55% ; H, 3. 48% ; N, 10. 74%

Found C, 57. 93% ; H, 3. 53% ; N， 10. 91%

NCS- 1044 - 90 (10 μ Μ)を前投与した細胞に Ro5- 4864 (100 M)を適用して細胞内 Ca²⁺濃度の変化を検討したところ、 Ro5- 4864 の添加後にも細胞内 Ca²⁺濃度の上昇は極めてわずかに認められたのみであった（第 9図）。例 9 ： NCS-1044-90 処理細胞における細胞内ミトコンドリァ膜電位に及ぼす Ro5 - 4864の影響

NCS-1044-90 (10 の処理により細胞内ミトコンドリア膜電位には変化は認められなかった。 NCS-1044- 90 (lO ^ M)の処理細胞に Ro5 - 4864 (50 M)を投与した場合には、細胞内ミトコンドリア膜電位の上昇は極めてわずかに認められたにすぎなかったが、さらに Ro5 - 4864 (100 M)で処理すると、膜電位の若千の穏やかな上昇が認められた（第 10図）。産業上の利用可能性

本発明の医薬はミトコンドリァ膜を安定化させ、ミトコンドリァ膜の脱分極などのミトコンドリア膜の不安定化により惹起されるミトコンドリアの機能異常を防止する作用を有しており、ミトコンドリアの機能異常に起因する、又はミトコンドリァの機能異常を伴う虚血性疾患や中毒症などの疾患の予防及びノ又は治療剤の有効成分として有用である。

Claims

請求の範囲

1 . ミトコンドリァ膜に対する安定化作用を有する物質を有効成分として含む、ミトコンドリア機能異常に起因する、又はミトコンドリア機能異常を伴う疾患の予防及び/又は治療剤。

2 . ミトコンドリァ膜に対する安定化作用がミトコンドリァ膜の脱分極を抑制又は排除する作用である、請求の範囲第 1項に記載の予防及び/又は治療剤。

3 . ミトコンドリア膜の脱分極が細胞内カルシウムイオン濃度の上昇により惹起されるものである、請求の範囲第 2項に記載の予防及び Z又は治療剤。

4 . 細胞内カルシウムイオン濃度の上昇時においてミトコンドリアの ATP産生能を生理的な状態に維持ないしは回復させるミトコンドリア膜に対する安定化作用を有する物質を有効成分として含む、ミトコンドリア機能異常に起因する、又はミ卜コンドリァ機能異常を伴う疾患の予防及び/又は治療剤。

5 . ミトコンドリアべンゾジァゼピンレセプ夕一アンタゴニス卜を有効成分として含む、ミトコンドリア機能異常に起因する、又はミトコンドリア機能異常を伴う疾患の予防及び/又は治療剤。

6 . 疾患が、虚血性疾患、中毒症、及び変性疾患からなる群から選ばれる請求の範囲第 1項ないし第 5項のいずれか 1項に記載の予防及び/又は治療剤。

7 . 虚血性疾患が、脳神経系若しくは脳血管系の虚血性障害、虚血性心疾患、腎不全、又は肝不全である請求の範囲第 6項に記載の予防及び/又は治療剤。

8 . 変性疾患が、ミトコンドリァ酵素異常、ミトコンドリァ遺伝子変異症、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症 (ALS ) 、ミトコンドリァ脳筋症、又は二一マン · ピック病である請求の範囲第 6項に記載の予防及び Z又は治療剤。

9 . 中毒症が、ガス中毒、アルコール中毒、薬物中毒、農薬中毒、重金属中毒、又は天然の動物若しくは植物の毒素による中毒症である請求の範囲第 6項に記載の予防及び/又は治療剤。

10. 疾患が細胞内カルシウムイオン濃度の上昇を伴う疾患である、請求の範囲第 6 項ないし第 9項のいずれか 1項に記載の予防及び/又は治療剤。

11. 下記の式：

〔式中、 R は水素原子または水酸基を示し、 R¹は水素原子またはメチル基を示し、 R²はピリジル基又は 1〜3 個の同一又は異なる置換基で置換された置換フヱニル基を示す。フヱニル基上の置換基としては、ハロゲン原子、トリフルォロメチル基、ニトロ基、ァセチル基、 i〜4 個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のアルキル基、

1〜4 個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のアルコキシル基、 1〜7 個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のアルキルメルカプト基、一般式： - S - (CH₉) - CH(R³) (R⁴) [式中の n は 1又は 2を示し、 R³は水素原子又はメチル基を示し、 R⁴は水酸基又は一般式： -N(R^U) (R⁹) (式中の R⁸は水素原子又はメチル基を示し、 R⁹はメチル基、ベンジル基、又は置換ベンジル基を示し、あるいは R⁸及び R⁹が一緒になつて式中の窒素原子と共に置換ピロリジン環を示す）で表されるアミノ基を示す] で表される置換アルキルメルカプト基、次の一般式： - S0₂R⁵ (式中の R⁵はァミノ基又は 1〜3 個の炭素原子を有するアルキル基を示す）で表されるスルホニル基、及び次の一般式： -COO(CH₂)₂- N(R⁶) (R⁷) (式中の R^D及び R 'はそれぞれ独立に水素原子、メチル基、又はェチル基を示す）で表されるァミノェトキシカルボニル基からなる群から選ばれる〕で表される化合物を有効成分として含む請求の範囲第 1項ないし第 10項のいずれか 1項に記載の予防及び/又は治療剤。

12. 下記の化合物：

2-ォキソ -卜ピロリジニル酢酸 2, 6- ジメチルァニリド；

4 -ヒドロキシ- 2- ォキソ - 1- ピロリジニル酢酸 2， 6- ジェチルァニリド； 4-ヒドロキシ -2- ォキソ - 1- ピロリジニル酢酸 2, 6- ジメチルァニリド； 2- [2- ォキソ- ピロリジニル] プロピオン酸 N- 3- ピリジニルァミド；

2-ォキソ -1- ピロリジニル酢酸 4_ イソプロピルメルカプトァニリド； 2- [2- ォキソ - 1- ピロリジニル] -1-プロピオン酸 4- (2 -プチルメルカプト） -ァニリ K ；

2- [2- ォキソ - 1- ピロリジニル] -プロピオン酸- 4- イソプロピルァニリド；

2 - [2- ォキソ - 1 - ピロリジニル] -プロピオン酸- 2， 4- ジメチルァニリド；

2 - [2- ォキソ - 1 - ピロリジニル] -プロピオン酸- 2， 4， 6- トリメチルァニリド；

2- [2- ォキソ - 1- ピロリジニル] -プロピオン酸- 2- メトキシ- 5- メチルァニリド；

2 - [2- ォキソ - 1 - ピロリジニル] -プロピオン酸- 2, 6- ジクロロアニリド；

2 -ピロリドン- ァセタミド；

1 -ァニソィル- 2- ピロリジノン；及び

4-ヒドロキシ- 2- ォキソ -1 - ピロリジンァセタミド

からなる群から選ばれる物質を有効成分として含む請求の範囲第 1項ないし第 10 項のいずれか 1項に記載の予防及び又は治療剤。

13. 2-ォキソ -1- ピロリジニル酢酸 2, 6- ジメチルァニリド、 2-ピロリドンァセ夕ミド、卜ァニソィル -2- ピロリジノン、及び 4 -ヒドロキシ- 2- ォキソ -卜ピロリジンァセタミドからなる群から選ばれる物質を有効成分として含む請求の範囲第 1項ないし第 10項のいずれか 1項に記載の予防及び/又は治療剤。

14. 2 -ォキソ - 1- ピロリジニル酢酸 2, 6- ジメチルァニリドを有効成分として含む請求の範囲第 1項ないし第 10項のいずれか 1項に記載の予防及び/又は治療剤。

15. 下記の式：

〔式中、 R^{1 1} 及びはそれぞれ独立に 1〜6 個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のアルキル基、 3〜7 個の炭素原子を有するシクロアルキル基、アルキル部分の炭素原子数が 1〜 3個であるフヱニルアルキル基若しくはシクロアルキル置換アルキル基、又は 3〜6 個の炭素原子を有するアルケニル基若しくはアルキニル基（ただし、二重結合又は三重結合は窒素原子に関して 1 - 2 位に位置しない）を示し； A および B はそれぞれ独立に N 又は CH を示し； X¹ 及び X² はそれぞれ独立にハロゲン原子、 1 ~ 3 個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のアルキル基、 1〜3 個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のアルコキシ基、ニトロ基、又はトリフルォロメチル基を示し； Arはフヱニル基、ピリジル基、チェニル基、又は置換フヱニル基（フニル基上の置換基は、ハロゲン原子、 1〜4 個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のアルキル基、 1〜4 個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のアルコキシ基、 1〜4 個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のアルキルチオ基、トリフルォロメチル基、及び二ト口基からなる群から選ばれた 1個又は 2個の置換基である）を示す〕で表される化合物を有効成分として含む請求の範囲第 1項ないし第 10項のいずれか 1項に記載の予防及び/又は治療剤。

16. N -メチル -N -（1 -メチルプロピル） -（2- クロロフヱニル）イソキノリン- 3- カルボキサミド、 N -メチル -N- (卜（S) -メチルプロピル） -(2- クロロフヱニル）イソキノリン - 3- カルボキサミド、及び N-メチル -N-(1-(R) -メチルプロピル） - (2- クロロフェニル）イソキノリン- 3- カルボキサミドからなる群から選ばれる化合物を有効成分として含む請求の範囲第 15項に記載の予防及び Z又は治療剤。

17. 下記の式：

〔式中、 R ¹ は未置換フ -ニル基、置換フエニル基（フニニル基上の置換基は、ハロゲン原子、 1〜6 個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のアルキル基、及び 1 〜6 個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のアルコキシ基からなる群から選ばれる 1個又は 2個の置換基である）、又はチェ二ル基を示し； R²² は水素原子又はハロゲン原子、置換基を有していてもよい 1〜6 個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のアルキル基（置換基はァミノ基、アルキルァミノ基、及びジアルキルァミノ基から選ばれる）を示し； R²³ は（R²⁴) (R²⁵)N_CO - Q- で表される基（式中、 Q は 1 〜6 個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のアルキレン基であり、 R²⁴ 及び R²⁵ はそれぞれ独立に 1〜6 個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のアルキル基、未置換フエ二ル基、又は置換フニル基（フエニル基上の置換基は、ハロゲン原子、

1〜6 個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のアルキル基、及び〜 6 個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のアルコキシ基からなる群から選ばれる 1個又は 2 個の置換基である）を示し； X³は水素原子又はハロゲン原子を示し； Y は酸素原子又は硫黄原子を示す〕で表される化合物を有効成分として含む請求の範囲第 1項ないし第 10項のいずれか 1項に記載の予防及び Z又は治療剤。

18. 2- (3- クロロフヱ二ル）- 3 -ブロモ -6-(N-メチル -N- フニルァセトアミド） - 5-ォキソ -5, 6- ジヒドロイミダゾ [1, 2 - c] キナゾリンを有効成分として含む請求の範囲第 Π項に記載の予防及び/又は治療剤。

19. ミトコンドリアべンゾジァゼピンレセプタ一アン夕ゴニストを有効成分として含むミトコンドリァの膜安定化剤。

20. ミトコンドリアべンゾジァゼピンレセプタ一アンタゴニストを有効成分として含むミトコンドリァの膜電位安定化剤。