WO1998011876A1 - Bioflavonol-glykosid-perester und ihre aufarbeitung zu pharmakologisch wirksamen konzentraten und ultramikroemulsionen - Google Patents

Bioflavonol-glykosid-perester und ihre aufarbeitung zu pharmakologisch wirksamen konzentraten und ultramikroemulsionen Download PDF

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Carl Eugster
Conrad Hans Eugster
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Marigen S.A.
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Definitions

  • Patent application CH-2088/95 describes ultramicroemulsions from spontaneously dispersible concentrates with antitumoral, antiviral and virucidal esters of selected bioflavonoid compounds. Thanks to the demonstrated solubilization of the active substances in the form of thermostable oil-in-water emulsions with very small micelles in the lowest nm range, excellent bioavailability can be achieved. In the course of intensive work on this class of compounds, it has been shown that even their glycoside peresters have comparable pharmacological properties if they have been formulated appropriately. They can then be used in both curative and preventive ways.
  • R H is a saturated or an unsaturated, straight-chain carboxylic acid of the type C G - 22 alkyl, C 6 - 22 alkenyl or C c -22 alkapolyen.
  • the new method is applied to naturally occurring flavonol glycosides that are widespread in plants.
  • (IV) can be prepared by the following processes: 1.31 fatty acid esters of spiraeoside. according to formula (I), 2.
  • Spiraeoside is a flavonol glycoside that is found in the dried flowers of Spiraea Ulmaria L., sive Filipendula Ulmaria (L.) Maxim, at around 1.2%. It was discovered by E. Steinegger and P. Caspararis [Pharm. Acta Helv. 1945. 20. 154, 174]; later investigations revealed an extensive occurrence in the plant kingdom, especially in those plants that have been known for folk medicinal use since ancient times, e.g. 1% in onion skin lAllium Cepa L.) [K. Hermann, Natural Sciences 1956. 43, 158; Arch. Pharm. 1958, 291, 238]; 3% in dried flowers of Hamamelis iaponica S. 8 ⁇ Z. [L.
  • (V) Sufficient quantities of (V) can be obtained from the sources mentioned by relatively simple enrichment steps.
  • the commercially available drug 'Flos Spiraeae Ulmariae' was used as the starting material.
  • the compound (V) was isolated by mild extraction, distribution method, column chromatography and crystallization and then esterified to (VI) using fatty acid chlorides.
  • the increased stability of the ester function at C (5) is remarkable compared to the quercetin esters.
  • Very pure spiraeoside can be obtained by repeated chromatography on cellulose powder (Avicel®, Merck, Art. 2331) with 13% acetic acid. Light yellow needles are obtained, mp (vac., Uncorr.) 211, 5-212.5 ° C.
  • C-NMR (CDCI_. 75 MHz): inter alia 9 carbonyl signals at 173.1 / 172.6 / 171.9 (triple intensity) / 171, 1 / 170.7 / 170.4 / 169.9 ppm.
  • Combustion analysis :
  • the peresters with the caproic acid, undecylenic acid, palmitic acid and stearic acid chlorides can also be prepared in a comparable manner.
  • ißi (dichloroethane): no bands in the OH range; 3045w, 2625ss, 2855s, 1750s, 1646m, 1629m, 1504w.
  • the compounds of the formulas (I) to (VI) described are water-insoluble as a result of their pronounced lipophilicity. So they centering by the Membranbar ⁇ diffuse from tumor or host cells and the protein coat (capsid) of viruses and in the cytoplasm, or may be effective in the virus inside the body, they must be solubllinstrument suitably in the aqueous medium for the time being. According to the invention, this takes place in two stages: the preparation of spontaneously dispersible concentrates which contain the active substance as an integrating system component, and the addition of distilled water, 5% glucose solution or physiological saline (Ringer's solution) in a ratio of 1:20 to 1: 1 ' 000,000.
  • thermodynamically stable oil-in-water ultramicroemulsions With the help of specially selected cosurfactants or solubilizers on the one hand and suitable surfactants on the other hand, it is possible to achieve an optimal degree of solubilization of the esters described.
  • All experimental observations on ultramicroemulsions designed in this way can be interpreted uniformly by the assumption that the selected surfactants and cosurfactants, taken as a balanced system, form organized aggregates, so-called micelles, in the aqueous phase. These have a more or less spherical shape, with a hydrodynamic radius of 2.2 to 3.0 nm. See “Mode-selective dynamic light scattering; theory versus experimental realization", Thomas Gisler, et al., Applied Optics / Vol. 34, No. 18/20 June 1995, pp. 3546-3553.
  • the surfactants and hydrotropes create a boundary layer between the outer, aqueous phase and the inner, oily phase of the microemulsion [containing the esters of the formulas (I) to (VI), dissolved in the biosurfactant solubilizer], as a result of which the mixture of these two Phases is omitted.
  • the molecules of the selected esters are in monomeric or in oligomeric agglomerated form.
  • the micelles of the flavonol glycoside ester-containing inner phase of the ultramicroemulsions according to the invention are accordingly on their surface, i.e.
  • the direction that a specific diffusion process takes is determined by the difference in concentration that exists on the (fractal) plasma membrane between outside and inside the tumor or host cell. The diffusion continues along the concentration gradient until it is broken down.
  • concentration of active substance or the active substance system (“multiple drug system") is balanced between the extracellular zone and the interior of the individual host cell or the virus, whereby delayed release effects can also occur.
  • Such diffusion processes take place independently of any energy supply. They have no relation to cellular metabolic energy.
  • a globular "micelle" with a hydrodynamic radius of one centimeter has a volume of 4.189 cm 3 and a phase surface area of 12.564 cm2.
  • the "packing density" of a spontaneously dispersible, stable MARIGENOL® concentrate increases in exponential function with the smaller particle size of the micelles.
  • the decisive factors are the correct formation of the inner phase (ie the micellar core), its balanced relationship to the total concentrate and the selection of the appropriate surfactants.
  • the concentrates which can be dispersed spontaneously according to the invention contain: 0.5 to 5% by weight of individual esters of the formulas (I) or (II), or a combination of such esters, and
  • a pharmaceutically acceptable solvent or solvent mixture serving as hydrotrope or co-emulsifier 0 to 5% by weight of a good buffer or 3 - [(3-cholamido-propyl) -dimethylammonio] propane sulfonate (CHAPS) and / or DMSO (dimethyl sulfoxide), 5 to 90% by weight of a pharmaceutically acceptable surfactant or surfactant mixture, and optionally
  • a stabilizer 0 to 10% by weight of a stabilizer, radical scavenger or penetration enhancer.
  • aqueous ultramicroemulsions which can be used according to the invention contain:
  • the active substances are therefore found in monomeric or oligomeric solution in the inner phase of the micelles, packed in the micellar core ("micellar core").
  • the tenside coat enveloping the individual micelles remains intact despite the strong dilution; accordingly there are no so-called “instability or marangoni effects”. Thanks to these properties, high capillary diffusion can be achieved with such ultra-microemulsions. They have a pronounced permeability on the cell membrane of defective or abnormal cells and a very good spreading (rheological distribution, "spreading") inside the cell. This leads to an excellent bio- - 1 2 -
  • the surfactants or surfactant mixtures to be used according to the invention can be anionic, cationic, amphoteric or non-ionic. They are preferably amphoteric or non-ionic and have an HLB ratio (i.e. a "hydrophilic-lipophilic balance") between 2 and 18; in the case of mixtures, it is preferably between 2 to 6 on the one hand and 10 to 15 on the other.
  • HLB ratio i.e. a "hydrophilic-lipophilic balance”
  • highly preferred for the production of spontaneously dispersible concentrates according to the invention are phosphoric acid ester surfactants, such as, for example: the practically anhydrous tristyrylphenol polyoxyethylene-18-phosphoric acid
  • Diphasol® 3873 (CIBA-GEIGY), an alkylphenol polyglycol ether phosphate surfactant Surfactant 508 (CIBA-GEIGY)
  • Tinovetin® JU (CIBA-GEIGY), a hydroxybiphenyl-10-ethoxy-phosphoric acid ester
  • Butyl mono-4-ethoxy-phosphoric acid ester (Zerostat® AT, CIBA-GEIGY), or
  • betaine compounds i.e. amphoteric, salt and water-free imidazole derivatives, such as:
  • multi-functional glucose derivatives are also used, such as e.g. Glucate® SS (methyl glucose sesquistearate, in the CTFA classification) and Glucamate® SSE-20 (PEG-20 methyl glucose sesquistearate, in the CTFA classification) by Amerchol, Edison, N.J., U.S.A.
  • solvents which can be used as hydrotropes or as co-emulsifiers can be used, e.g .:
  • esters of an aliphatic alcohol (C 12 _ 22 ) with lactic acid such as
  • Myristyl or preferably lauryl lactate Mono-, di- or triesters of glycerol with an aliphatic carboxylic acid (C 6, 22 ), such as glyceryl caprylate, or Miglyol® 812 neutral oil (neutral oleum).
  • C 6, 22 aliphatic carboxylic acid
  • Miglyol® 812 neutral oil neutral oleum
  • an aliphatic carboxylic acid C ⁇ . 22
  • aliphatic alcohols C 12. 22
  • Esters with at least one free hydroxyl group from poly (2-10) glycol with an aliphatic carboxylic acid (C ⁇ . 22 ), monoethers from a polyethylene glycol with an aliphatic alcohol (C 12. 18 ), such as polyoxyethylene (C 10 ) - octyl ether.
  • R6 is a C 2 _ 31 alkyl, a C,. 31 -Alkenyl or a C,. 31 -Alkapolyenition and R 7 Citronellyl-, Farnesyl-, Geranyl-, Isophytyl- or Phytyl- mean.
  • isopropyl myristate, isopropyl palmitate, or neutral oil e.g. Miglyol® 812 (Dynamite Nobel or Hüls)
  • a good buffer or 3 - [(3-choiamidopropyl) dimethylammonio] propane sulfonate (CHAPS) and / or DMSO (dimethyl sulfoxide) 5
  • R 6 is a C 2 . 31 alkyl, a C 3 . 31 is alkenyl or a C, 31 alkapolyen group and R represents citronellyl, farnesyl, geranyl, isophytyl or phytyl,
  • Soprophor® FL or Diphasol® 3873 30 to 45% by weight of Soprophor® FL or Diphasol® 3873.
  • Citronellyl-10-undecenoate (Cn .i-Citronellylester) 30% by weight Invadin® JFC 800% and / or Tween®-20, 45% by weight Soprophor® FL or Diphasol® 3873.
  • Metolose® 90 SH-4000 (Shin-Etsu Chemical) 90.0 g
  • MSR gastric juice resistance.
  • the pellets / granules according to a) can also be filled directly into capsules, which are made from AQOAT® (HPMC-AS-M or HPMC-AS-N), and sealed with acetone / ethanol 1: 1, and so the functions appropriately control the MSR and the delayed release (slow release formulation).
  • a biological assay system has been developed that works with microtiter plates and dilution series.
  • Each 1 ⁇ 4 / ml tumor cells are inactivated in culture medium RPMI 1640 with 10% fetal calf serum (GIBCO); they are sown so leaky that they can grow during the assay in so-called non-confluent monolayers.
  • the sample is added after 6 to 24 hours, with 100 ⁇ l per row, which is mixed with 100 ⁇ l medium in the 1st hole. Half of this is removed and placed in the following hole, again mixed with 100 ⁇ l medium, etc.
  • a geometric dilution series n% is formed.
  • the samples are incubated in the plaque assay, 3 to 5 days at 37 * C with 3 %% CO2. Then dye / fix with 0.1% crystal violet (Fluka, Buchs) in a solution of 70% methanol, 1% formaldehyde, 29% water. The evaluation is carried out on a microscope, magnification 300 times. The largest cytotoxic dilution is determined. The quantitative evaluation can also be carried out by means of scanning and absorption measurement on a spectrophotometer.

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Abstract

Spontan dispergierbares Konzentrat, welches mit Wasser, mit 5 %-Glucoselösung oder mit Ringerlösung verdünnt, thermodynamisch stabile Ultramikroemulsionen ergibt, die Mizellen mit einem hydrodynamischen Radius von 2,2 bis 3,0 nm aufweisen, dadurch gekennzeichnet, dass folgende Bestandteile zu einem pharmazeutisch verwendbaren System zusammengefügt sind: 0,1 bis 5 Gewichts-% einzelner Ester der Formeln (I) oder (II), wobei für alle R=H eine gesättigte oder eine ungesättigte Carbonsäure vom Typus C6-22-Alkyl, C6-22-Alkenyl oder C6-22-Alkapolyen steht, bzw. eine Kombination solcher Ester, sowie 1 bis 25 Gewichts-% eines als Hydrotrop, bzw. Co-Emulgator dienenden, pharmaverträglichen Lösungsmittels oder Lösungsmittelgemisches, 0 bis 5 Gewichts-% eines Good-Puffers oder 3-[(3-Cholamido-propyl)-dimethylammonio]-propansulfonat (CHAPS) und/oder DMSO (Dimethylsulfoxyd), 5 bis 90 Gewichts-% eines pharmaverträglichen Tensides oder Tensidgemisches, 0 bis 10 Gewichts-% eines Vitamins oder Provitamins, 0 bis 10 Gewichts-% eines Stabilisators, Radikalfängers oder Penetrationsverbesserers und Trägerstoffe und/oder Verdünnungsmittel.

Description

BIOFLAVONOL-GLYKOSID-PERESTER und ihre AUFARBEITUNG zu PHARMAKOLOGISCH WIRKSAMEN
KONZENTRATEN und ULTRAMIKROEMULSIONEN
EINLEITUNG
In der Patentanmeldung CH-2088/95 werden Ultramikroemulsionen aus spontan dispergierbaren Konzentraten mit antitumoral, antiviral und viruzid wirksamen Estern von ausgewählten Bioflavonoid-Verbindungen beschrieben. Dank der aufgezeigten Solubilisierung der Wirksubstanzen in der Form von thermostabilen Öl-in-Wasser Emulsionen mit sehr kleinen Mizellen im untersten nm-Bereich lässt sich eine ausgezeichnete Bioverfügbarkeit erzielen. Im Laufe einer intensiven Bearbeitung dieser Verbindungsklasse hat sich erwiesen, dass auch ihren Glykosid-Perestern durchaus vergleichbare pharma- kologische Eigenschaften zukommen, wenn sie angemessen formuliert worden sind. Sie lassen sich dann sowohl in kurativer, wie auch in vorbeugender Hinsicht nutzen. Weil sie nicht-toxisch und dennoch hoch aktiv sind, öffnet sich für diese noch wenig erforschte Naturstoffgruppe dank der Anwendung des Fettschwanzprinzips für die Esterbildung und der Überführung dieser Glykosidester in erfindungsgemässe spontan dispergierbare Konzentrate - wie sie auch bereits in der Patentschrift CH 683'426 und in der CH-Patent- anmeldung 2239-95 im Grundsatz gekennzeichnet wurden - ein breites therapeutisches Fenster. Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind demzufolge die nachstehend umschriebenen Flavonolglykosid-Perester selber, ihre Einarbeitung in pharmazeutisch anwendbare Darreichungsformen, sowie ihre Verwendung als Mittel mit Wirksamkeit gegen Tumore, Ekzeme, Psoriasis, virale und parasitäre Erkrankungen, wie auch gegen Stoffwechselstörungen.
BESCHREIBUNG der Erfindung 1.0 Bestimmung des U fangs
Unter Flavonol-Glykosid-Perestern werden für diese Erfindung folgende Ver¬ bindungen verstanden:
Figure imgf000004_0001
1. QUERCETIN (R1 - R5 = H); Merck-Index 11.8047
2. SPIRAEOSID (R1, R3 - R5 = H; R2 = Glucose) 4'-ß-D-Glucopyranosidoquercetin
3. ISOQUERCETIN (R2 - R5 = H; R1 = Glucose) 3-ß-D-Glucopyranosidoquercetin
4. QUERCITRIN (R2 - R5 = H; R1 = Rhamnose) 3-α-L-Rhamnopyranosidoquercetin; Merck-Index 11.8044
5. RUTIN (R2 - R5 = H; R1 = Rutinose)
3-(α-L-Rhamnopyranosyl (1-. 6)-ß-glucopyranosyl]-quercetin 3-α-L-Rutinosylquercetin; Merck-Index 11.8276
Figure imgf000004_0002
6. ERIODICTYOL (R1 - R4 = H); Merck-Index 11.3616
7. ERIODICTIN (R1, R2, R4 = H; R3 = Rhamnose) 7-α-L-Rhamnopyranosido-eriodictyol
8. HESPERIDIN (R2, R4 - H; (R1 = CH3; R3 = Rutinose) 7-ß-Rutinosyl-4'-methyl-eriodictyol; Merck-Index 11.4591 ,
wobei für alle R=H eine gesättigte oder eine ungesättigte, geradkettige Carbonsäure vom Typus CG-22-Alkyl, C6-22-Alkenyl oder Cc -22-Alkapolyen steht. 1.1 Grundlagen
Ausgewählte Derivate von QUERCETIN laut Formel (l),i mit den Glycosiden 2, 3, 4, 5, sowie seines biogenetischen Vorläufers ERIODICTYOL (II), 6 mit den Glycosiden 7 und 8 wurden in die Untersuchung einbezogen, weil diese Verbindungen erstens in Dicotyledonen weitverbreitet vorkommen (vgl. die Tabellen 8.15 und 11.1 in "The Flavonoids", Ed. J.B. Harborne, T.J. Mabry, H. Mabry, Acade ic Press, N.Y. 1975) und teilweise auch leicht zugänglich sind, und zweitens, weil mehrere davon zudem medizinisch eingehend untersucht worden sind (vgl. V. Cody, E. Middleton, J.B. Harborne: "Plant Flavonoids in Biology and Medicine", A.R. Liss, N.Y., 1986). So sind die Verbindungen 4, 7 und 8 Bestandteil des früher intensiv untersuchten "Vitamins P" (Permeabilitätsvitamin); vgl. H. Vogel: "Chemie und Technik der Vitamine", Enke, Stuttgart, 1940, sowie H. Wagner in "Recent Advances in Phytochemistry", Vol. 12, S. 589; Ed. T. Swain, J.B. Harborne, C.F. VanSumere; Plenum Press, N.Y., 1979. Vgl. auch Jirina Spilkova und Josef Hubik: Biologische Wirkungen von Flavonoiden. Pharmazie in unserer Zeit, 1/1988, 1-9; 4/1992, 174-182.
1.2 Bedeutung der angemessenen Solubilisierung der Wirkprinzipien
Wie im CASE CH-2088/95 für Bioflavonoid-Ester dargelegt, führt die Befolgung des Fettschwanzprinzips bei der Bildung der Derivate zu tiefgreifenden physikochemischen Veränderungen und vorab zu einer wesentlich verstärkten Lipophilie, verbunden mit einer (im Vergleich zu den Grundkörpern) beachtlichen Senkung der Schmelzpunkte; die dergestalt erleichterte Emulgierung setzt sich in eine sehr gute Stabilität der daraus hergestellten, wässerigen Ultramikroemulsionen um. Massgeblich verbessert werden demzufolge auch die Abgabe der Trägermizellen und die gezielte Freisetzung der darin enthaltenen Wirkstoffe, als Bioverfügbarkeit verstanden. Auf diese Weise wird für die erfindungsgemässen Wirkprinzipien volle Bioreaktivität erreicht.
1.3 Herstellung der Perester
Das neue Verfahren wird auf natürlich vorkommende und in Pflanzen weitverbreitete Flavonolglykoside angewandt. Die Glykosidperester-Verbindun- gen der Formeln (III) und (IV) :
Figure imgf000006_0001
(III)
Figure imgf000006_0002
(IV) lassen sich nach folgenden Verfahren herstellen: 1.31 Fettsäureester von Spiraeosid. laut Formel (I), 2.
Als Spiraeosid wird ein Flavonolglykosid bezeichnet, das zu ca. 1,2% in den getrockneten Blüten von Spiraea Ulmaria L., sive Filipendula Ulmaria (L.) Maxim, vorkommt. Seine Entdeckung erfolgte durch E. Steinegger und P. Caspa- ris [Pharm. Acta Helv. 1945. 20. 154, 174]; spätere Untersuchungen brachten ein umfangreiches Vorkommen im Pflanzenreich zutage, vor allem in solchen Pflanzen, die seit alters für eine volksmedizinische Verwendung bekannt sind, so z.B. zu 1% in Zwiebelschalen lAllium Cepa L.) [K. Hermann, Natur- wiss. 1956. 43. 158; Arch. Pharm. 1958. 291. 238]; zu 3% in getrockneten Blüten von Hamamelis iaponica S. 8ι Z. [L. Hörhammer und R. Griesinger, Na- turwiss. 1959. 46. 427], in den Samen der Rosskastanie (Aesculus Hippocas- tanum L. [J. Wagner, Naturwiss. 1960. 47. 158], in den Blättern verschiedener Hamamelidaceen [K. Egger und H. Reznik, Planta, 1961. 57. 239] und in den Blüten des Stechginsters (Ulex europaeus L. [J.B. Harborne, Phytochem. 1962. i. 203].
Aus neueren Arbeiten sei das Vorkommen erwähnt in Blüten von gärtnerisch verwendeten Fuchsia-Hvbriden [Y. Yasaki, Botanical Magazine (Tokyo) 1976. 89. 45], sowie in zahlreichen Hybriden von Gartenrosen [K. Nayeshiro und CH. Eugster, Helv.Chim.Acta 1989. 72. 985]. In diesen zuletzt angeführten Fällen trägt Spiraeosid entscheidend zur Stabilisierung der farbgebenden An- thocyaninkomplexe bei.
Trotz des verbreiteten Vorkommens in volksmedizinisch verwendeten Pflanzen ist jedoch reines Spiraeosid wissenschaftlich noch kaum auf seine eigentliche Rolle in den populären Anwendungen und schon gar nicht als pharmazeutisch verwendbare Wirksubstanz untersucht worden. Die Struktur von Spiraeosid als 4'-ß-D-Glucopyranosylquercetin ist von E. Steinegger et al. (loc.c.) und von L. Hörhammer und R. Hansel, Arch. Pharm. 19S4. 287. 36 mit klassischen Methoden festgelegt worden. Eine analytische Nachprüfung mittels modernen Geräten, im Zusammenhang mit der Reinheitskontrolle des als Ausgangsmaterial für die erfindungsgemässe Esterbildung frisch isolierten Spiraeosids, ergab die Bestätigung der Struktur gemäss Formet (V) :
Figure imgf000007_0001
(V) Genügende Mengen von (V) lassen sich aus den erwähnten Quellen durch relativ einfache Anreicherungsschritte gewinnen. Als Ausgangsmaterial wurde die kommerziell erhältliche Droge 'Flos Spiraeae Ulmariae' eingesetzt. Durch milde Extraktion, Verteilungsverfahren, Säulenchromatographie und Kristallisation wurde die Verbindung (V) isoliert und anschliessend unter Einsatz von Fettsäurechloriden zu (VI) verestert. Bemerkenswert ist die gegenüber den Quercetinestern erhöhte Stabilität der Esterfunktion an C(5).
Isolierung von Spiraeosid (V)
500 g 'Flos Spiraeae' (Dixa St.Gallen, gerebelt) werden im Perkolator mit 4 L Methanol-Wasser 4:1 während 2 Tagen stehen gelassen. Das erhaltene, gelblichbraune Perkolat wird im Vakuum auf ca. 250 ml eingeengt und darauf 4 x mit je 250 ml n-Butanol im Scheidetrichter extrahiert. Die vereinigten Butanol- lösungen werden hierauf bei 5 Torr eingedampft und der lige Rückstand in 250 ml Essigsäure-Wasser-Methanol-Essigsäureethylester 6:34:20:10 gelöst und an einer Säule von 0,8 kg Polyamidpulver (Macherey-Nagel, SC6) oder wahlweise mit Wasser-Pyridin 97,5:2,5 an Sephadex G-10 (Pharmacia) chroma- tographiert. Die erhaltenen, spiraeosidhaltigen Fraktionen werden zusammen genommen, i.V. eingedampft und der Rückstand aus wenig heisser 15%-iger Essigsäure umkristallisiert.
Ganz reines Spiraeosid kann durch wiederholte Chromatographie an Cellu- losepulver (Avicel®, Merck, Art. 2331 ) mit 13%-iger Essigsäure gewonnen werden. Man erhält hellgelbe Nadeln, Smp. (Vak., unkorr.) 211 ,5 - 212,5 °C.
Herstellung und Charakterisierung von Octalauroylspiraeosid:
Figure imgf000008_0001
(VI)
In einem kleinen Dreihalskolben, versehen mit N2-Einleitrohr, Magnetrührer, Tropftrichter und Kühler werden 214 mg Spiraeosid in 2 ml wasserfreiem Pyri- din durch leichtes Erwärmen gelöst, dann die Lösung mit 5 ml 1,2-Dichlor- ethan verdünnt und mit 10 mg 4-Dimethylaminopyridin versetzt. Nun wird unter N2 auf 0aC gekühlt, dann langsam und unter gutem Rühren tropfenweise mit einer Lösung von 0,87 ml Lauroylchlorid in 5 ml 1,2-Dichlorethan versetzt. Hierauf lässt man auf RT kommen und lässt 12h stehen. Die klare, fast farblose Lösung wird mit Et20 verdünnt und die entstandene Suspension im Scheidetrichter 5 x mit stark verdünnter H2SO4 und zuletzt mit Sole ausgeschüttelt. Eine Behandlung mit verdünnter Hydrogencarbonatlö- sung kann, sofern der Ansatz überschüssige Laurinsäure enthält, zu starker Emulsionsbildung führen. Um dies auf einfache Art und Weise zu vermeiden, empfiehlt sich langsames Filtrieren der getrockneten Lösung durch eine kurze Säule aus Calciumcarbonat, Lösungsmittel: Et20 oder ein Gemisch von Dichlormethan/Essigsäureethylester. Nach dem Trocknen über a2Sθ und der üblichen Aufarbeitung erhält man einen blassgelben, blasigen Schaum, Ausbeute 0,94 g. Er lässt sich aus CH2CI2/CH3CN oder aus 2-Propanol kristallisieren. Kristalle mit schwachem Gelbstich, Smp. 82,5 - 85°C. fαl -11.70 (c= 1,034; CHCh).
UVι (CH2CI2): 232 (26'900), 254 (20'400), 311 (26'100) iRl (CH2CI2): 3048w, 2932ss, 2853s, 1762s, 1651m, 1622m, 1510m. 1H-NMR: (CDCIj, 300 MHz): 0,8-2,7 (Protonensignale der Esterkomponente); 3,8 bis 5,8 (Signale der Protonen am Zuckerteil); 6,76 (d, J=2,4, H-C(5)). 7,02 {d, J=8,8, H-C(5')}; 7,22 {d, J=2,4, H-C(8)}; 7,44 {d, J=2,2, H-C(2')}; 7,59 (dd, J=8,8 und 2,2, H-C(5')); die ursprünglichen OH-Protonen bei 8,59/9,50/10,79 und 12,41 ppm sind verschwunden.
"C-NMR: (CDCI_. 75 MHz): u.a. 9 Carbonylsignale bei 173,1/172,6/171,9 (dreifache lntensität)/171 , 1/170,7/170,4/169,9 ppm. Verbrennungsanalyse:
Cn7H1t«02o (1922,74) Ber. C 73,08 H 10,28 %
Gef. C 72,89 H 10,91 %
Auf vergleichbare Weise lassen sich auch die Perester mit den Capronsäure-, Undecylensäure-, Palmitinsäure- und Stearinsäurechloriden herstellen.
1.32 Fettsäureester von Vitamin P (Quercetin-3-rutinosid) Herstellung von Rutindecalaurat
Figure imgf000009_0001
Käufliches Rutintrihydrat (Fluka 84082) ge äss Formel (VI), wobei R » H ist
Figure imgf000010_0001
wurde während 20h bei
100°C/0.01 Torr getrocknet. 0.92 g wasserfreies Rutin wurden dann in 5 ml abs. Pyridin und 5 ml abs. Dimethylformamid durch Erwärmen gelöst und hiernach mit 10 ml 1 ,2-Dichlorethan verdünnt. Nach Kühlen unter N2 und Rühren erfolgte die tröpfchenweise Zugabe von 3,59 ml Lauroylchlorid in 10 ml 1 ,2-Dichlorethan. Anschliessend lässt man den Ansatz langsam auf RT kommen, worauf man ihn unter stetem Rühren während 20h stehen lässt. Dann gibt man genügend Ether zu, damit sich beim Ausschütteln mit stark verdünnter H2S04 und Wasser eine gut abgetrennte obere Phase bildet. Nach Trocknen über Na2S04 und üblicher Aufarbeitung, sowie Trocknen des Rückstandes im Hochvakuum erhält man ein honigartiges, hellbräunliches Öl. Ausbeute ca. 90%. Analytische Daten:
UV: (Hexan, qualitativ): λmax 202 nm, 250, sh 293, sh 306 fαlrv = -28,5° (c = 0.82 in Chloroform) ißi (Dichlorethan): keine Banden im OH-Bereich; 3045w, 2625ss, 2855s, 1750s, 1646m, 1629m, 1504w.
2.0 Herstellung von spontan disoeroierbaren Konzentraten und von wässerigen Ultramikroemulsionen
Die beschriebenen Verbindungen der Formeln (I) bis (VI) sind als Folge ihrer ausgeprägten Lipophiiie wasserunlöslich. Damit sie durch die Membranbar¬ riere von Tumor- oder Wirtzellen und durch die Proteinhülle (das Capsid) von Viren diffundieren und im Zellplasma, bzw. im Virus-Innenkörper wirksam werden können, müssen sie vorerst in geeigneter Weise im wässerigen Medium solubllisiert werden. Dies geschieht erfindungsgemäss über zwei Stufen: die Herstellung von spontan disper gierbaren Konzentraten, welche die Wirksubstanz als integrierenden Systembestandteil enthalten, und die Zugabe von destilliertem Wasser, 5%-Glucoselösung oder physiologischer Kochsalzlösung (Ringerlösung) im Verhältnis 1 :20 bis 1 :1 '000'000. Im Wege der Bildung von thermodynamisch stabilen Oel-in-Wasser Ultramikroemulsionen mithilfe von besonders ausgewählten Cotensiden oder Lösungsvermittlern einerseits und geeigneten Tensiden anderseits gelingt es, einen optimalen Solubilisierungsgrad der bezeichneten Ester zu erzielen. Alle experimentellen Beobachtungen an dergestalt ausgebildeten Ultramikroemulsionen lassen sich einheitlich durch die Annahme deuten, dass die ausgewählten Tenside und Cotenside, als ausgewogenes System genommen, in der wässerigen Phase organisierte Aggregate, sog. Mizellen bilden. Diese besitzen mehr oder weniger kugelförmige Gestalt, mit einem hydrodynamischen Radius von 2.2 bis 3.0 nm. Vgl. "Mode-selective dynamic light scattering; theory versus experimental realization", Thomas Gisler, et al., Applied Optics/Vol. 34, No. 18/ 20 June 1995, pp. 3546-3553.
Die Tenside und Hydrotrope (Cotenside) lassen zwischen der äusseren, wässerigen Phase und der inneren, öligen Phase der Mikroemulsion [enthaltend die Ester der Formeln (I) bis (VI), gelöst im biotensiden Lösungsvermittler] eine Grenzschicht entstehen, wodurch die Mischung dieser beiden Phasen unterbleibt. In der öligen, inneren Phase liegen die Moleküle der ausgewählten Ester in monomerer oder in oligomer agglomerierter Form vor. Die Mizellen der Flavonolglykosidester-haltigen inneren Phase der erfin- dungsgemässen Ultramikroemulsionen sind demnach an ihrer Oberfläche, d.h. an ihrer Grenzschicht mit einem Tensidmantel geschützt, was sie instand setzt, leicht und selektiv durch die Zellmembran ins Innere der tumoralen oder Virus-infizierten und somit "defekten" oder "abnormen" Zellen zu diffundieren. Diese Diffusion erfolgt ausschliesslich aufgrund thermischer Molekularbewegungen.
Die Richtung, die ein konkreter Diffusionsvorgang einschlägt, wird vom Konzentrationsunterschied bestimmt, welcher an der (fraktalen) Plasmamembran zwischen ausserhalb und innerhalb der Tumor- oder Wirtzelle besteht. Die Diffusion verläuft solange entlang dem Konzentrationsgefälle, bis es abgebaut ist. Zwischen der extrazellulären Zone und dem Inneren der einzelnen Wirtzelle oder des Virus wird die Konzentration an Wirksubstanz, bzw. des Wirkstoffsystems ("multiple drug system") ausgeglichen, wobei auch verzögerte Abgabeeffekte auftreten können. Derartige Diffusionsvorgänge verlaufen unabhängig von jeglicher Energiezufuhr. Sie haben keinen Bezug auf die zelluläre Stoffwechselenergie.
Wie aus der nachstehenden Tabelle ersichtlich ist, hat eine globuläre "Mizelle" mit einem hydrodynamischen Radius von einem Centi meter ein Volumen von 4,189 cm3 und eine Phasenoberfläche von 12,564 cm2. Demgegenüber weisen 1018 Mizellen mit einem hydrodynamischen Radius von nur 1 x 10-6 cm (10 nm), welche zusammen das gleiche Volumen von 4,187 cm3 ausmachen, schon eine Gesamt-Phasenoberfläche von 1 *256,4 π.2 auf.
MIZELLEN: VERHÄLTNIS VOLUMEN ZU GESAMTOBERFLÄCHE
Figure imgf000012_0001
Kugelvolumen = — π i"3 3
Kugeloberfläche = 4 π f2
Fazit: Durch die enorm grosse Phasenoberfläche, welche die Mizellen mit einem hydrodynamischen Radius von 1.8 bis 5 nm in Ultramikroemulsionen ausbilden, wird zusätzlich zu deren gesteigertem Diffusionsvermögen die rheologlsche Verteilung ("spreadlng") und somit die Bioverfügbarkelt und Bioaktivität der Wirkstoffe, welche in der Inneren Phase der Mizellen In mono- merer oder in ollgomer agglomerierter Form vorliegen, ebenfalls stark verbessert. Das kann eine beträchtliche Ermässigung der kritischen Dosierung erlauben und damit unerwünschte Nebenwirkungen ganz vermeiden oder wenigstens verringern helfen.
Die "Packungsdichte" eines spontan dispergierbaren, stabilen MARIGENOL®- Konzentrates nimmt in exponentieiler Funktion mit der kleiner werdenden Teilchengrösse der Mizellen zu. Entscheidend sind die richtige Ausbildung der inneren Phase (d.h. des mizellaren Kerns), ihr ausgewogenes Verhältnis zum Gesamtkonzentrat und die Auswahl der je dazu passenden Tenside. 2.1 Die erfindungsgemäss spontan disperαierbaren Konzentrate enthalten: 0,5 bis 5 Gewichts-% einzelner Ester der Formeln (I) oder (II), bzw. eine Kombination solcher Ester, sowie
1 bis 25 Gewichts-% eines als Hydrotrop, bzw. Co-Emulgator dienenden, pharmaverträglichen Lösungsmittels oder Lösungsmittelgemisches, 0 bis 5 Gewichts-% eines Good-Puffers oder 3-[(3-Cholamido-propyl)-dime- thylammonio]-propansulfonat (CHAPS) und/oder DMSO (Dimethylsulfoxyd), 5 bis 90 Gewichts-% eines pharmaverträglichen Tensides oder Tensidgemisches, und wahlweise
0 bis 10 Gewichts-% eines Vitamins oder Provitamins,
0 bis 10 Gewichts-% eines Stabilisators, Radikalfängers oder Penetrations- verbesserers.
Die erfindungsgemäss anwendbaren, wässerigen Ultramikroemulsionen enthalten:
0,1 bis 5 Gewichts-% eines spontan dispergierbaren Konzentrates wie oben beschrieben,
85 bis 99,9 Gewichts-% dest. Wasser, physiologische Kochsalzlösung (Ringerlösung) oder 5% Glucoselösung, 0 bis 10 Gewichts-% pharmazeutische Hilfsmittel.
Diese wässerigen Ultramikroemulsionen zeichnen sich aus durch eine ermäs- sigte Oberflächenspannung von 28-32 mNm- , einen geringen inneren Reibungswiderstand (mit einer dynamischen Viskosität η bei 20*C um 1.0 cP = 10-3 Pa.s), eine sehr kleine Teilchengrösse und eine gute thermodynamische Stabilität (kein Koaleszieren, bzw. Agglomerieren der Mizellen, bzw. keine Autokondensation der Tenside; d.h. es tritt kein "seif assembly" infolge einer chemischen Veränderung der Tenside ein). Die Wirksubstanzen finden sich demnach monomer oder oligomer gelöst in der inneren Phase der Mizellen vor, im mizellaren Kern ("micellar core") verpackt. Wegen des ausgewogenen Verhältnisses bleibt auch trotz starker Verdünnung der die einzelnen Mizellen umhüllende Tensidmantel unversehrt; demnach unterbleiben sog. "instability or Marangoni effects". Dank diesen Eigenschaften lässt sich mit derartigen Ultramikroemulsionen eine hohe kapillare Diffusion erreichen. Sie besitzen ein ausgeprägtes Permeationsvermögen an der Zellmembran von defekten oder abnormen Zellen und eine sehr gute Spreitung (rheologische Verteilung, "spreading") im Zellinneren. Dies führt zu einer ausgezeichneten Biover- - 1 2 --
fügbarkeit und als Folge davon auch zu einer ausgeprägten Bioreaktivität der darin enthaltenen Wirkstoffe, gekoppelt mit geringer oder keiner Toxizität.
Die erfindungsgemäss einzusetzenden Tenside oder Tensidgemische können anionaktiv, kationaktiv, amphoter oder nicht-ionogen sein. Bevorzugt sind sie amphoter oder nicht-ionogen und haben ein HLB-Verhältnis (d.h. eine "hydro- philic-lipophilic balance") zwischen 2 und 18; bei Gemischen liegt es vorzugsweise zwischen 2 bis 6 einerseits und 10 bis 15 anderseits. In hohem Masse bevorzugt zur Herstellung von erfindungsgemässen, spontan dispergierbaren Konzentraten sind einerseits Phosphorsäureestertenside, wie z.B.: das praktisch wasserfreie Tristyrylphenolpolyoxyethylen-18-phosphor- säure
Figure imgf000014_0001
(Soprophor® FL, RHÖNE-POULENC); Diphasol® 3873 (CIBA-GEIGY), bzw. das identische Sermul® EA 188 (SERVO), ein Mischemulgator, bestehend aus je 50 % der beiden Verbindungen mit den Formeln:
Figure imgf000014_0002
Diphasol® 3873 (CIBA-GEIGY), ein Alkylphenol-polyglycolether-phos- phat-Tensid Tensid 508 (CIBA-GEIGY)
Figure imgf000015_0001
(Tensid 508, CIBA-GEIGY);
Tinovetin® JU (CIBA-GEIGY), ein Hydroxybiphenyl-10-ethoxy-phosphorsäure- ester
Butyl-mono-4-ethoxy-phosphorsäureester (Zerostat® AT, CIBA-GEIGY), bzw.
O
CH,-{ CH2 Js-CM-CHj-O (-CH2— CH2-O )6- IPI OCH,
C_H5
OCH,
(Zerostat ® AN, CIBA-GEIGY) und anderseits Betainverbindungen, d.h. amphotere, salz- und wasserfreie Imidazolderivate, wie z.B.:
Figure imgf000015_0002
worin Mel+1 für Wasserstoff, Alkali- und Erdalkaliatome und Rx für eine Cι.32- Alkyl- oder eine C2>32-Alkenylgruppe stehen.
Verwendung finden auch sog. "multi-functional glucose derivatives", wie z.B. Glucate® SS (Methyl-Glucose-Sesquistβarat, in der CTFA-Classification) und Glucamate® SSE-20 (PEG-20 Methyl-Glucose-Sesquistearat, in der CTFA- Classification) von Amerchol, Edison, N.J., U.S.A.
Gute Ergebnisse sind fallweise auch zu erzielen unter Mitverwendung von nicht-ionogenen Tensiden der "TWEEN®"-Reihe (Atlas Chem. Ind. Inc., bzw. ICI Speciality Chemicals), sog. Polyoxyethylen-Sorbitan-Monoestern oder "Polysorbate" 20-85 in der CTFA Classification.
Als Hydrotrop, bzw. als Co-Emulgator dienende, pharmaverträgliche Lösungsmittel lassen sich einsetzen, z.B.:
Ester eines aliphatischen Alkohols (C3.18) mit einer aliphatischen Carbonsäure (C10.22), wie etwa Isopropyllaurat, Hexyllaurat, Decyllaurat, Iso- propyimyristat, Isopropylpalmitat und Laurylmyristat; Kohlenwasserstoffe mit einer geraden Kohlenstoffkette (C12-32). welche mit 6-16 Methylgruppen substituiert ist und 1 -6 Doppelbindungen aufweisen kann, wofür Terpene wie Polymethylbutane und Polymethylbutene als Beispiele dienen mögen. Mono-Ester aus Ethylenglykol oder Propylenglykol mit einer aliphatischen Carbonsäure (Cβ.22), wie etwa Propylenglykolmonolaurat und Propylen- glykolmonomyristat.
Ester aus einem aliphatischen Alkohol (C12_22) mit Milchsäure, wie z.B.
Myristyl- oder vorzugsweise Lauryl-Lactat; Mono-, Di- oder Triester des Gly- cerins mit einer aliphatischen Carbonsäure (C6.22), wie z.B. Glyceryl-Caprylat, oder Miglyol® 812 Neutralöl (Oleum neutrale).
Ester aus einem Poly(2-7)ethylenglykolglyzerinether mit mindestens einer freien Hydroxylgruppe mit einer aliphatischen Carbonsäure (Cβ.22), wie z.B. aliphatische Alkohole (C12.22), somit u.a. Dodecanol, Tetradecanol, Oleylal- kohol, 2-Hexyldecanol und 2-Octyldecanol.
Ester mit mindestens einer freien Hydroxylgruppe, aus Poly-(2-10)glykol mit einer aliphatischen Carbonsäure (Cβ.22), Monoether aus einem Polyethyleπ- glykol mit einem aliphatischen Alkohol (C12.18), wie z.B. Polyoxyethylen (C10)- octylether.
Heterocyclische Verbindungen, wie z.B. 1 -Methyl-2-pyrrolidon. Biotenside Terpinylester der allgemeinen Formel (VII) : R6 COO R 7
(VII) worin R6 eine C2_31-Alkyl, eine C,.31-Alkenyl- oder eine C,,31-Alkapolyen- gruppe und R7 Citronellyl-, Farnesyl-, Geranyl-, Isophytyl- oder Phytyl- bedeuten.
Alle technischen Tenside wurden vor dem Eintrag in die spontan dispergierbaren Konzentrate mittels Filtration, bzw. Chromatographie über neutralem Aluminiumoxyd mit einem inerten Lösungsmittel wie z.B. Tetrahydro- furan, Ethanol oder Dichlormethan gereinigt. 2.2 ZUSAMMENSETZUNGSBEISPIELE von erfindungsgemässen, spontan dispergierbaren KONZENTRATEN
a) 0,1 bis 5 Gewichts-% einer Verbindung gemäss Formel (I) oder (II),
1 bis 25 Gewichts-% Isopropylmyristat, Isopropylpalmitat, oder Neutralöl, wie z.B. Miglyol® 812 (Dynamit Nobel oder Hüls)
0 bis 5 Gewichts-% eines Good-Puffers oder 3-[(3-Choiamido-propyl)-dime- thylammonio]-propansulfonat (CHAPS) und/oder DMSO (Dimethylsulfoxyd), 5 bis 45 Gewichts-% eines Phosphorsäureester-Tensides, wie z.B. Diphasol® 3873 (CIBA-GEIGY), Tensid 508 (CIBA-GEIGY), Zerostat® AN oder AT (CIBA- GEIGY), Tinovetin® JU (CIBA-GEIGY), Soprophor® FL (RHONE-POULENC), und/oder Tween®-20 (Polyoxyethylen-(20)-sorbitan-monolaurat, ICI), 5 bis 90 Gewichts-% Invadin JFC 800% (CIBA-GEIGY),
0 bis 10 Gewichts-% eines Vitamins oder Provitamins.
b) 0,1 bis 5 Gewichts-% einer Verbindung laut Formel (I) oder (II),
1 bis 25 Gewichts-% eines oder mehrerer biotensider Terpinylester der allgemeinen Formel (VII):
R6 COO— R (V||)
worin R6 eine C2.31-Alkyl-, eine C3.31-Alkenyl- oder eine C, 31-Alkapolyen- gruppe ist und R für Citronellyl-, Farnesyl-, Geranyl-, Isophytyl- oder Phytyl- steht,
30 bis 45 Gewichts-% Invadin® JFC 800% und/oder Tween®-20,
30 bis 45 Gewichts-% Soprophor® FL oder Diphasol® 3873.
c) 1 Gewichts-% einer Verbindung gemäss den Formeln (I) oder (II), 4 bis 9 Gewichts-% 2-Pentanol oder Glycerin wasserfrei oder DMSO
15 bis 20 Gewichts-% Citronellyl-10-undecenoat (Cn .i-Citronellylester) 30 Gewichts-% Invadin® JFC 800% und/oder Tween®-20, 45 Gewichts-% Soprophor® FL oder Diphasol® 3873.
N.B.: INVADIN® JFC 800% (CIBA-GEIGY) ist ein wasserfreies tert. Octyl- phenylpolyoxyethylenether-Tensid mit 9 bis 10 Oxyethylengruppen. 2.3 BEISPIEL für die pharmazeutische Herstellung eines Systempräparates mit erfindungsgemässen Konzentraten in der Form von "multiple units". a) Granulierung
Metolose® 90 SH-4000 (Shin-Etsu Chemical) 90.0 g
Avicel® PH-101 80.3 g
Erfindungsgemässes MARIGENOL®-KONZENTRAT 139.4 g
Aerosil® 200 80.3 g
∑ 390.0 g
Granulieren/formen im Schnellmixer oder im Rotationsbett unter Zusatz von 110 g Ethanol, brechen, sieben 18 bis 42 mesh, trocknen 24 h bei 40 °C.
b) MSR- und RETARD-Ausrüstung im Rotationsbett mit AQOAT® AS-HG (Shin-Etsu Chemical) und Talk
c) Zusammensetzung fertiges Granulat/bzw. Micropellets Kernmaterial 44 % Erfindungsgemässes KONZENTRAT 25 % MSR-Beschichtung 31 %
Σ 100 %
N.B.: MSR = Magensaft-Resistenz. Die Pellets/Granulate gemäss a) können auch ohne Befilmung unmittelbar in Kapseln abgefüllt werden, welche aus AQOAT® (HPMC-AS-M oder HPMC-AS-N) hergestellt sind, mit Aceton/Ethanol 1 :1 verschlossen werden und so die Funktionen der MSR und der verzögerten Abgabe (Retard-Formulierung) angemessen steuern.
3.0 BIOLOGISCHE PRÜFUNGEN
Die antitumorale Wirkung von spontan dispergierbaren Konzentraten mit Wirkstoffen gemäss den a) bis c) wird anhand folgender Prüfungsergebnisse bestätigt:
3.1 In vltro-Tests auf Zytotoxizltät mit geeigneten Tumorzell-Linien
Es wurde ein biologisches Assay-System entwickelt, das mit Mikrotiter- platten und Verdünnungsreihen arbeitet. Angesetzt werden je 1θ4/ml Tumorzellen in Kulturmedium RPMI 1640 mit 10% fötalem Kalbserum inaktiviert (GIBCO); sie werden so undicht ausgesät, dass sie während des Assays wachsen können, in sog. nichtkonfluenten Monolayers. Die Probenzugabe erfolgt nach 6 bis 24 Stunden, mit 100 μl pro Reihe, die man im 1. Loch mit 100 μl Medium versetzt. Davon wird die Hälfte entnommen und in das folgende Loch eingebracht, wieder mit 100 μl Medium versetzt, usf. Es entsteht eine geometrische Verdünnungsreihe n%.
Die Proben werden im Plaque Assay während 3 bis 5 Tagen bei 37*C mit 3%% CO2 inkubiert. Anschliessend färben/fixieren mit 0,1% Kristallviolett (Fluka, Buchs) in einer Lösung von 70% Methanol, 1% Formaldehyd, 29% Wasser. Die Auswertung wird am Mikroskop vorgenommen, Vergrösserung 300-fach. Man bestimmt die grösste cytotoxische Verdünnung. Die quantitative Auswertung lässt sich auch mittels Scanning und Absorptionsmessung am Spektrophoto- meter vornehmen.
3.2 Prüfung auf Zelltoxizltät
3.21 Zelltoxizität der MARIGENOL®-KONZENTRATE geprüft an Py6-Zellen (Polyoma Virus transformierten 3T3 Maus-Fibrobiasten)
Py6 Zytotoxizltäts-Test 11. - 15.12.1995
1%-Konzentrate 24 h 48 h 72 h Exposition Exposition Exposition Konzentrat Konzentrat Konzentrat
W.S. .S. W.S.
OCTALAUROYL- SPIRAEOSID 32*000 64*000 128*000 (mit CHAPS) 3.2 Mio. 6.4 Mio. 12.8 Mio.
OCTALAUROYL- SPIRAEOSID 16*000 64*000 128*000 (mit Tween-20) 1.6 Mio. 6.4 Mio. 12.8 Mio.
Grösste zytotoxische Verdünnung: auf Konzentrat, bzw. W.S. -Gehalt berechnet.
Zu den eternalisierten Py6-Zellen vgl.: "Biochemistry", Coordinating Editor Geoffrey L. Zubay, Addison-Wesiey Publishing Company, 1983. p. 1079. Vgl. auch "Molecular Cell Biology", second Edition, by J. Darnell, H. Lodish, D. Baltimore; Scientific American Books, Chapter 5: Viruses, Structure and Functions, pp. 177-188. New York, 1990 (W.H. Freeman & Co.)
3.22 Zelltoxizität der MARIGENOL®-KONZENTRATE (Fortsetzung)
Py6 Zytotoxizitäts-Test 28.3. - 2.4.1996
Figure imgf000021_0001
Grösste zytotoxische Verdünnung: auf Konzentrat, bzw. W.S.-Gehalt berechnet; Konzentrations-Angabe in μMol. N.B.: Zusammensetzung der 1%-Konzentrate: 1 Gewichts-% Wirksubstanz
12 Gewichts-% Cn:i-CITRONELLYL-ESTER
87 Gewichts-% Invadin JFC 800%/Soprophor FL 1 :1

Claims

P A T E N T A N S P R Ü C H E
1. Spontan dispergierbares Konzentrat, welches mit Wasser, mit 5%-Glu- coselösung oder mit Ringerlösung verdünnt, thermodynamisch stabile Ultramikroemulsionen ergibt, die Mizellen mit einem hydrodynamischen Radius von 2.2 bis 3.0 nm aufweisen, dadurch gekennzeichnet, dass folgende Bestandteile zu einem pharmazeutisch verwendbaren System zusammengefügt sind: 0,1 bis 5 Gewichts-% einzelner Ester der Formeln (I) oder (II):
Figure imgf000022_0001
(!)
Figure imgf000022_0002
(ll) wobei für alle R=H eine gesättigte oder eine ungesättigte Carbonsäure vom
Typus Cβ-22-Alkyl, C«.22-Alkenyl oder Cβ-22-Alkapolyen steht, bzw. eine Kombination solcher Ester, sowie
1 bis 25 Gewichts-% eines als Hydrotrop, bzw. Co-Emulgator dienenden, pharmaverträglichen Lösungsmittels oder Lösungsmittelgemisches, 0 bis 5 Gewichts-% eines Good-Puffers oder 3-[(3-Cholamido-propyl)-dime- thylammonio]-propansulfonat (CHAPS) und/oder DMSO (Dimethylsulfoxyd), 5 bis 90 Gewichts-% eines pharmaverträglichen Tensides oder Tensidgemisches,
0 bis 10 Gewichts-% eines Vitamins oder Provitamins,
0 bis 10 Gewichts-% eines Stabilisators, Radikalfängers oder Penetrations- verbesserers und Trägerstoffe und/oder Verdünnungsmittel.
2. Spontan dispergierbares Konzentrat gemäss Anspruch 1, enthaltend Ester der Formeln (I) oder (II), zur Verwendung in der Vorbeugung und therapeutischen Behandlung von Tumoren, Ekzemen, Psoriasis, viralen und parasitären Erkrankungen, metabolischen Störungen, sowie zu verbesserten Aufnahme externer Aktivatoren, Modulatoren und/oder Regulatoren.
3. Wässerige Ultramikroemulsion von hervorragender Phasenstabilität und überaus deutlich erhöhtem Permeations- und Spreitungsvermögen, enthaltend ein Konzentrat gemäss Anspruch 1, verdünnt mit destilliertem Wasser, 5%-Glucoselösung oder Ringerlösung im Verhältnis 1 :20 bis 1 :1 *000*000, zur Verwendung als Arzneimittel mit antitumoraler, antiviraler, viruzider oder antiparasitärer Wirksamkeit, zur verbesserten Aufnahme externer Aktivatoren, Modulatoren und/oder Regulatoren und zur Behandlung von metabolischen Störungen.
4. Spontan dispergierbares Konzentrat gemäss Anspruch 1, zur Verwendung als Arzneimittel mit antitumoraler, antiviraler, viruzider oder antiparasitärer Wirksamkeit und zur verbesserten Aufnahme externer Aktivatoren, dadurch bestimmt, dass es als Wirkstoff Octalauroylspiraeosid oder Rutin- decalaurat enthält.
5. Spontan dispergierbares Konzentrat gemäss Anspruch 1 , dadurch festgelegt, dass es
0,1 bis 5 Gewichts-% einer Verbindung der Formeln (I) und (II), 1 bis 25 Gewichts-% Isopropylmyristat, Isopropylpalmitat, Neutralöl, DMSO, und/oder eines oder mehrerer biotensider Terpinylester der allgemeinen Formel (VII):
R6 COO— R (V||) worin R6 eine C2 -ji-Alkyl-, eine Cj.ji-Alkenyl- oder eine C3.3 -Alkapolyen- gruppe ist und R7 für Citronellyl-, Farnesyl-, Geranyl-, Isophytyl- oder Phytyl- steht,
0,2 bis 2 Gewichts-% DMSO,
5 bis 45 Gewichts-% eines Phosphorsäureester Tensides und/oder einer
Polyoxyethylen-(20)-sorbitanester-Verbindung,
5 bis 90 Gewichts-% des wasserfreien tert. Octylphenylpolyoxyethylenether
Tensids mit 9 bis 10 Oxyethylengruppen,
0 bis 10 Gewichts-% eines Vitamins oder Provitamins enthält. Fettsäureperester der Verbindungen gemäss den Formeln (III) und (IV):
Figure imgf000024_0001
(III)
Figure imgf000024_0002
(IV) welche mit einer gesättigten oder einer ungesättigten, geradkettigen Carbonsäure C«.22-Alkyl, Cc.22-Alkenyl oder Cf. 2-Alkapolyen gebildet worden sind.
7. Verfahren zur Bildung von Perestern der Verbindungen gemäss den Formeln (III) und (IV) unter Anwendung des Fettschwanzprinzips, dadurch gekennzeichnet, dass die Reaktion in wasserfreiem Pyridin und 1 ,2-Dichlor- ethan mit dem Chlorid einer gesättigten oder einer ungesättigten Carbonsäure C(.22-Alkyl, C(.22-Alkenyl oder C«.22-Alkapolyen unter Zusatz von 4-Di- methylaminopyridin und unter Schutzgas vorgenommen wird.
8. Therapeutisches Systempräparat, welches 1 bis 95 Gewichts-% des spontan dispergierbaren Konzentrates gemäss einem der Ansprüche 1 , 4 und 5 enthält und welches in Dosis-Einheitsform als Micropellets, Granulat, Dragees, Suppositorien, Ampullen oder als Kapseln vorliegt.
9. Therapeutisches Systempräparat gemäss Anspruch 8, welches 44 Teile Kernmaterial für die Granulat-, bzw. Pellet-Bildung, 25 Teile eines erfindungsgemässen Konzentrates und 31 Teile magensaftresistente und retardie- rende Beschichtung mit Hydroxylpropyl-Methylcelluiose-Acetat-Succinat enthält.
10. Therapeutisches Systempräparat gemäss den Ansprüchen 8 und 9, welches 64 Teile Kernmaterial für die Granulat-, bzw. Pellet-Bildung und 36 Teile eines erfindungsgemässen Konzentrates enthält und in pharmazeutisch geeignete Kapseln aus Hydroxylpropyl-Methylcellulose-Acetat-Succinat abgefüllt ist.
PCT/CH1997/000169 1996-09-18 1997-04-28 Bioflavonol-glykosid-perester und ihre aufarbeitung zu pharmakologisch wirksamen konzentraten und ultramikroemulsionen WO1998011876A1 (de)

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