WO1997010261A1 - Derives peptidiques - Google Patents

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WO1997010261A1
WO1997010261A1 PCT/JP1996/002572 JP9602572W WO9710261A1 WO 1997010261 A1 WO1997010261 A1 WO 1997010261A1 JP 9602572 W JP9602572 W JP 9602572W WO 9710261 A1 WO9710261 A1 WO 9710261A1
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WO
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group
hydrogen atom
alkyl group
salt
arg
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Application number
PCT/JP1996/002572
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English (en)
French (fr)
Inventor
Shinobu Sakurada
Toru Okayama
Eriko Nukui
Kazuya Hongo
Tadashi Ogawa
Tomoko Hongo
Satoko Takeshima
Nobuhiro Take
Masaharu Nakano
Original Assignee
Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd.
Fuji Chemical Industries, Ltd.
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    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K5/00Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08Tripeptides
    • C07K5/0802Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0812Tripeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K7/00Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/02Linear peptides containing at least one abnormal peptide link
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K5/00Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/0202Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-X-X-C(=0)-, X being an optionally substituted carbon atom or a heteroatom, e.g. beta-amino acids
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00Medicinal preparations containing peptides

Definitions

  • the present invention relates to a peptide derivative that exerts a pharmacological action such as analgesia through an action on an obioide receptor or the like.
  • Obioid receptors to which morphine and other obioids bind, were proven to exist in the early 1970s.
  • Opioid receptors are currently roughly classified into three types: (5 and / c.)
  • Morphine mainly acts as an agonist on the receptor and exhibits pharmacological effects such as analgesia, intestinal motility suppression, and respiratory depression. I do.
  • obioid peptides peptides, collectively referred to as obioid peptides.
  • the pharmacological effect of the obioid peptide is considered to be basically the same as that of morphine, and since it is a substance that originally exists in the living body, it is expected that it will be a drug with a safety level higher than that of morphine.
  • natural opioid peptides have problems in pharmacokinetics and are not yet used as pharmaceuticals.
  • delmorphin containing D-alanine was isolated from frog skin.
  • the analgesic effect of delmorphin was approximately 1,000 times stronger than that of morphine when administered intraventricularly, and was found to be relatively stable in the body.
  • synthetic opioid peptides containing D-amino acids were produced.
  • synthetic / receptor-selective synthetic obioid peptides are expected to be non-narcotic analgesics, and have been tested in clinical trials, are effective, have side effects that may be attributed to being / c agonists, and Possibilities as a pharmaceutical in terms of profitability have been questioned.
  • the present inventors have diligently searched for an obioid doptide derivative having an excellent analgesic effect and oral absorption that can solve the above-mentioned problems. As a result, they found that oligopeptide derivatives and their salts having L-Tyr- (L or D) -Arg-Phe as the basic skeleton and having an amidino group at the N-terminus retain such properties. Patent applications have been filed (Japanese Patent Application No. 40989/1994 and Japanese Patent Application No. 49894/1995). As a result of further studies, the present inventors have found that the above-mentioned oligopeptide derivative having a modified amidino moiety at the N-terminus has preferable characteristics and completed the present invention.
  • the peptide derivative of the present invention has the following formula I:
  • a medicine comprising the above compound or a salt thereof, and an analgesic pharmaceutical composition comprising the compound or a salt thereof as an active ingredient.
  • the present invention also provides a method of preventing and / or treating analgesia, which comprises the use of the compound or salt for producing the above pharmaceutical composition, and a step of administering an effective amount of the compound or salt thereof to a mammal.
  • Q is meant D-Arg (D-arginine residue) or L-Arg (L-arginine residue), R 1 is a hydrogen atom or a (: Bok 6 (carbon number 1 refers to six) alkyl groups of these, Q force D-Arg, in Ah Ru compounds are preferred herein R 1 is a hydrogen atom, -.. the alkyl group, a linear Alkyl group, branched alkyl group, cyclic alkyl group, or directly substituted with cyclic alkyl group Is used in a concept including any of branched alkyl groups.
  • alkyl group examples include a methyl group, an ethyl group, an n-propyl group, an isopropyl group, a cyclopropyl group, an n-butyl group, a sec-butyl group, a tert-butyl group, a cyclopropylmethyl group, and a cyclobutyl group Etc. can be suitably used.
  • R 2 represents a benzyl group which may have a substituent.
  • the benzyl group has a substituent, one or more substituents may be present at any position. When it has two or more substituents, they may be the same or different.
  • the substituent on the full Weniru ring for example, ( ⁇ _ 6 alkyl group, an amino group which may have a substituent group, which may have a substituent group Guanijino group, and the like can be used arsenate Dorokishiru group. These Of these, an unsubstituted benzyl group is preferred.
  • Y represents two hydrogen atoms of the N-terminal amino group of L-Tyr or a substituent in which one or two hydrogen atoms of these two hydrogen atoms have been substituted .
  • Y represents ( ⁇ _ 6 alkyl group, a methyl group, Echiru group, an isopropyl group, cyclo propyl methyl groups are preferred.
  • Y is alkyl group represented by or amino groups which may have a carboxyl group examples, H 2 N- CH 0 -, H 2 N- (CH 2) 2 -, H00C- CH 2 -, H00C- (CH 2) 2 - can be exemplified groups such as, (: Bok 6 examples of the case where the alkyl group has an amino group, for example, H.N- CH 9 -. CO-, H 2 N- (CH 9) 2 -C0- etc. can ani gel _ 6
  • Examples of the alkyl-containing sulfonyl group include, for example, groups such as CH 3 SO 2- .
  • the pyrimidyl and imidazolinyl groups represented by Y are 2-pyrimidyl, respectively. And a 2-imidazolin-2-yl group and the like can be suitably used.
  • the pyrimidyl group or the imidazolinyl group may be substituted or unsubstituted.
  • an alkyl group or the like can be used as the substituent.
  • these groups have two or more substituents, they are the same or different. May be.
  • Examples of the substituted pyrimidyl group include a 4,6-dimethyl-2-pyrimidyl group, and examples of the substituted imidazolinyl group include 4-methyl-2-imidazolin-2-yl And the like.
  • R 3 is a hydrogen atom, - 6 alkyl group, which may have a substituent Fuweniru group; indicates which may have a substituent human Dorokin'a Mi amino group, or a human de piperazino group which may have a substituent.
  • R 3 shows —.
  • As the alkyl group a methyl group, an ethyl group, an n-propyl group, or the like is preferable, and a methyl group is particularly preferable.
  • Phenyl group, arsenate Doroki shear Mi amino group (H0 - NH -), or human Dorajino group (H 2 N-NH-) is the force that can be suitably used for unsubstituted, ', for example, one or two it may be used to also substituted by the above _ 6 alkyl group.
  • Y represents two hydrogen atoms, or one of Y is a hydrogen atom and the other is the above substituent. It is also preferred that both Y and two are the above substituents, for example, the same or different alkyl groups. A compound in which the two substituents represented by Y are both methyl groups is a preferred embodiment of the present invention.
  • X is - 0R 4, -N (R J ) (R 6), or - NR '-.
  • C (R 8) ( indicating either of R (R 10)
  • R 4 represents a hydrogen atom or an alkyl group
  • R u are hydroxycarboxylic alkyl group or a sulfonic acid-substituted ( ⁇ - even showing a 6 alkyl group hydroxyl group or a sulfonic acid group substituted at any position of the alkyl group..
  • R 3 and R are hydroxycarboxylic alkyl group or a sulfonic acid-substituted
  • R 3 and R 6 may together represent a 5- or 6-membered nitrogen-containing saturated heterocyclic group
  • Heterocycles may contain more than one nitrogen atom, for example, -N (R 3 ) (R U ) using a topiperazinyl group, 1-pyrrolidinyl group, or a topidridinyl group be able to.
  • R 7 is substituted with a hydrogen atom, a _ 6 alkyl group, or an aryl group such as a phenyl group.
  • the Ararukiru group represented by 6 alkyl group can either be given a benzyl group
  • R 8 are hydrogen atoms Carboxyl group; carbonyl group substituted by alkoxy group such as methoxycarbonyl, ethoxycarbonyl, etc .; substituted or unsubstituted rubamoyl group; carboxyl group substituted; substituted or unsubstituted rubamoyl group
  • a C 1-6 alkyl group or a C 1-6 alkyl group having a carboxy group substituted by a C i-6 alkoxy group.
  • Such a heterocyclic ring may be a 2-carboxy-pyrrolidinyl group (-Pro-0H) or a 3-carboquino-biperidinyl group.
  • R 8 is carboxymethyl group or Scarpa 'Moirumechiru group, the combination R 15 is a hydrogen atom.
  • R 1 G represents a hydrogen atom or a _ 6 alkyl group In the substituents mentioned above, alkyl group, alkoxy group, or an alkanol I le group may be either straight or branched.
  • the compounds of the present invention represented by the above formula I are represented by L-tyrosine residue and Q! ) - Other Arg or two asymmetric carbons derived from the L-Arg residue, the asymmetric carbon (although an asymmetric carbon derived from the unloading two Ruaranin radicals attached to Q, R 8 and R J are substituted Except that R 8 and R 9 simultaneously represent the same substituent), and one or more asymmetric carbon atoms optionally present in each of the above substituents and Y.
  • Asymmetric carbons other than those derived from L-Tyr, D-Arg, and Arg residues may be in either R- or S- configuration.
  • the compound represented by the formula I of the present invention also includes any optically active substance or racemic form, diastereoisomer or any mixture thereof represented by the above formula.
  • the compounds of the present invention also include acid addition salts such as hydrochloride, acetate or paratoluenesulfonic acid, and base addition salts such as ammonium salt or organic amine salt.
  • acid addition salts such as hydrochloride, acetate or paratoluenesulfonic acid
  • base addition salts such as ammonium salt or organic amine salt.
  • compounds which are dimers or multimers of the above compounds, and cyclic compounds in which the C-terminal and the N-terminal of these compounds are bonded are included.
  • the peptide of the present invention has an analgesic effect exceeding that of morphine. Histamine release and heart rate lowering due to analgesia are relatively weak compared to morphine, and the degree of cross-resistance with morphine is low, so it is expected to be suitable for use in the treatment of cancer pain. Is done.
  • the present invention provides a medicine comprising the above compound.
  • the administration route includes intravenous administration, subcutaneous administration, oral administration and the like. Mucosal absorption preparations including nasal absorption and transdermal absorption preparations are also expected to be useful.
  • the dose is not particularly limited.For example, a single dose is 0.1 to 10 mg for subcutaneous administration, and a single dose is 1 to 100 mg for oral administration. It may be administered two or three times.
  • the peptide derivative of the present invention can be synthesized by a solid phase method and a liquid phase method usually used for peptide synthesis.
  • Various excellent protecting groups such as an amino group and a condensing agent for a condensation reaction are known. For example, see the following examples. For example, see “Protein Engineering—Basics and Application” edited by Hiroshi Suzuki. Maruzen (1992) and references cited therein;
  • the present invention will be described more specifically with reference to Examples. However, the present invention is not limited to these Examples.
  • the desired present invention of the present invention encompassed by the general formula I is obtained.
  • the peptide derivative can be easily produced.
  • the meanings of the amino acid groups are the same as those usually used. If the amino acid in which the D-form and the L-form are present is mentioned, especially if!) Is not indicated, the amino acid means an L-amino acid.
  • the following abbreviations may be used, and similar abbreviations will be used unless otherwise indicated. May be.
  • WSC1 1-Ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) -carposimid
  • DIPEA N, N-diisopropyl
  • DIPC1 N, N-diisopro pill carbodiimide
  • the second cycle was repeated using Fmoc-D-Arg (Pmc) -0H instead of Fmoc-Phe-0H, and the third cycle was performed using Fmoc Tyr (t-Bu) -OH.
  • the groups used were F3 ⁇ 4c for D-Arg and t-Bu for Tyr.
  • the resulting Fmoc- / S-MeAla-Alko resin was washed three times with 6 ml of DMF, then three times with 6 ml of methanol and three times with 6 ml of DCM, and the unreacted hydroxymethyl group was removed by DCM 6 In this ml, 0.0891 ml of benzoyl chloride and 0.0847 ml of pyridine were added, and the mixture was shaken for 1 hour to benzoylate. Further, the amino acid resin was washed three times with 6 ml of DCM, three times with 6 ml of MF, and three times with 6 ml of methanol, and dried in vacuum in a potassium hydroxide solution overnight.
  • the Fmoc group was removed by treating the Fmoc- / 3-MeAla-Alko resin three times with 12 ml of DMF, then three times with 12 ml of DMF containing 20 3 ⁇ 4 piperidine, and then six times with 12 ml of DMF.
  • -Phe-OH 0.262 g, PyBropC Watanabe Chemical Industry
  • DIPEA 0.273 ml were added and shaken for 24 hours to produce Fraoc-Phe-3-MeAla-Alko resin. .
  • the Fmoc group is removed from the Fraoc-Phe- / 3-MeAla-Alko resin by the same operation as above, and Fmoc-D-Arg (Pmc) -OH 0.557 g, HOBt 0.121 g, HBTU 0.299 g Then, 0.274 ml of DIPEA was added, and the mixture was shaken for 1 hour to produce Fmoc-D-Arg (Pmc) -Phe-S-MeAla-Alko resin. Then, after filtration and washing as in the previous section, unreacted amino groups were capped.
  • the Fmoc group was removed from the Fmoc-D-Arg (Prac) -Phe- ⁇ -MeAla-Alko resin by the same operation as above, and Fmoc-Tyr (t-Bu) -0H 0.310 g, HOBt 0.103 g , HBTU 0.25 g, DI PEA 0.235 ml, shake for 1 hour, Fmoc-Tyr (t-Bu) -D-Arg (Pmc) -Phe- / S-MeAla-Alko A resin was formed. After filtration and washing as in the previous section, unreacted amino groups were capped. In the same manner as in the above (1), the peptide was separated from the resin, and at the same time, the protecting group was removed.
  • the resulting Fmoc-9-EtAla-Alko resin was washed three times with 12 ml of NMP, then three times with 12 ml of methanol and three times with 12 ml of DCM, and the unreacted hydroxymethyl group was removed by DCM 12 0.178 ml of benzoyl chloride and 0.170 ml of pyridine were added in 1 ml, and the mixture was shaken for 1 hour to benzoylate. Further, the resin was washed three times with 12 ml of DCM, three times with 12 ml of DMF, and three times with 12 ml of methanol, and dried in a calcium hydroxide desiccator under vacuum.
  • the Fmoc-Phe is removed by treating the Fmoc-EtAla-Alko resin three times with 20 ml of DMF, then three times with 12 ml of DMF containing 203 ⁇ 4piperidine, and then six times with 12 ml of DMF. -0.37 g of 0H, 0.466 g of PyBrop, 12 ml of NMP, and 0.523 ral of D1PEA were added and shaken for 24 hours to produce a Fmoc-Phe--EtAla-Alko resin.
  • the Fmoc group was removed from the Fmoc-Phe-, 3-EtAla-Alko resin by the same operation as described above. Add Fmoc- D-Arg (Pmc)-0H 0.707 g, ⁇ 0.153 g, HBTU 0.379 g, DI PEA 0.348 ml to the resin, shake for 1 hour and shake Fraoc-D-Arg (Pmc) -Phe-/ 3-EtAia-Alko resin was produced. After filtration and washing as in the previous section, unreacted amino groups were capped.
  • the Fmoc group was removed from Fmoc-D-Arg (Pmc) -Phe- ⁇ -EtAla-Alko resin by the same operation as above, and Fmoc-Tyr (t-Bu) -0.460 g, HOBt 0.153 g , HBTU (0.399 g) and DI PEA (0.348 ml) were added and shaken for 1 hour to produce Fraoc-Tyr (t-Bu) -D-Arg (Pmc) -Phe- / 3-EtAla-Alko resin. After filtration and washing as described above, unreacted amino groups were capped. In the same manner as in (1) above, the peptide is separated from the resin and at the same time the protecting group is removed. I left.
  • 254 g of the starting material, Z-Phe-OTce was treated with 900 ml of 253 ⁇ 4 hydrogen bromide acetic acid to eliminate the Z group, and then dissolved in 1000 ml of CH 9 C 19 in an ice bath.
  • To this solution were added 288 g of Boc-D-Arg (Z 2 ) -OH and 85 g of HOBt, neutralized with 77 ml of TEA, and condensed with 121 g of EDC ⁇ HC1 to obtain Boc-! ) -Arg (Z 0 ) -Phe-OTce.
  • Boc-D-Arg (Z 2 ) -Phe-OTce was treated with 1000 ml of 4N HC1-ethyl acetate to remove the Boc group, and dissolved in 1300 ml of DMF in an ice bath.
  • To this solution were added 108 g of Boc-Tyr (Bzl) -0H and ⁇ 46 g, neutralized with 42 ml of TEA, and then condensed with 65 g of EDC / HC1 to obtain a protected peptide represented by the following formula: Boc- Tyr (Bzl) -D-Arg (Z 2 ) -Phe-OTce was obtained.
  • 48 g of Boc-Tyr (Bzl) -D-Arg (Z 2 ) -Phe-OTce was treated with 250 ml of 4N HCl-ethyl acetate to remove the Boc group.
  • TosOH ⁇ Me ⁇ SAla-OBzl was used as a starting material, and was produced sequentially from the C-terminal by the liquid phase method.
  • the resulting product was condensed with Boc-D-Arg (Z 2 ) -0H by the EDC-HOBt method to obtain Boc-D-Arg (Z 2 ) -MePhe-Me / 3Ala-0Bzl.
  • Boc-Phe-OH and TosOH ⁇ Me ⁇ Ala-OBzl are condensed by EDC-HOBt method to obtain Boc-Phe-MeS Ala-OBzl, and 4N HC1-ethyl acetate from Boc-Phe-Me / 3Ala-0Bzl after leaving the Boc group using, Boc-D- Arg (Z 2 ) - condensation by 0H and EDC-HOBt method, Boc- D- Arg (Z 2) - Phe- was Me Ala- OBzl.
  • Boc-D-Arg (Z 2 ) -Phe-MeySAla-OBzl (4.76 g, 5.50 mmol) was dissolved in a 4N-HC1 Z ethyl acetate solution (20 ml) and stirred at room temperature for 25 minutes. Crystals precipitated by adding getyl ether to the reaction solution were collected by filtration. The crystals were dissolved in dimethylformamide (10 ml), and Boc-N-methyl-Tyr (Bzl) -0H (1.93 g, 5.00 readings ol), trihydroxybenzotriazole (743 mg ⁇ 5.50 mmol) and Triethylamine (0.84 ml, 6.0 mmol) was dissolved.
  • This protective peptide (0.84 g, 0.74 mmol) was dissolved in 4N-HC1 ethyl acetate solution (5 ml) and stirred at room temperature for 30 minutes. Getyl ether was added to the reaction solution, and the precipitated crystals were collected by filtration. The crystals were dissolved in acetic acid (5 ml), and 0.3 g of 5-Pd-C (water content: 50%) was added as a catalyst, followed by catalytic reduction for 3 hours to remove the protecting group. The catalyst was filtered off and freeze-dried to obtain 396 mg of the title compound as a white powder.
  • Boc-D-Arg (Z 2 ) -Phe-Me ⁇ Ala-OBzl (1.30 g, 1.50 mmol) was dissolved in a 4N-HC1 ethyl acetate solution (15 ml) and stirred at room temperature for 40 minutes. Crystals precipitated by adding getyl ether to the reaction solution were collected by filtration. The crystals were dissolved in dimethylformamide (10 ml), and N, N-dimethyl-Tyr (Bzl) -0H (419 rag, 1.40 mmol), hydroxybenzotriazole (189 mg, 1.40 fraction) and Triethylamine (0.21 ml, 1.5 mmol) was dissolved.
  • This protective peptide (450 rag. 0.43 mtnol) was dissolved in acetic acid (5 ml), 0.29 g of 53 ⁇ 4 Pd-C (water content 50V) was added as a catalyst, and the protecting group was removed by catalytic reduction for 4 hours. . The catalyst was filtered off and lyophilized to give 193 mg of the title compound as a white powder.
  • Boc-Tyr (Bzl) -D-Arg (Z 2 ) -Phe-Me SAla-OBzl (2.20 g, 2.00 mmol) was dissolved in a 4N-HC1 ethyl acetate solution (10 ml) and stirred at room temperature for 1 hour. Crystals precipitated by adding getyl ether to the reaction solution were collected by filtration. The crystals were dissolved in methanol (10 ml), and acetone aldehyde (134 ⁇ m, 2.40 mmol) and sodium cyanoborohydride (132 mg, 2.00 mmol) were dissolved under ice-cooling and stirring.
  • This protected peptide (0.84 g, 0.74 mmol) was dissolved in acetic acid (5 ml), and 0.30 g of 5% Pd-C (water content 503 ⁇ 4) was added as a catalyst, followed by catalytic reduction for 3 hours to remove the protecting group. .
  • the catalyst was separated and freeze-dried to obtain 396 mg of the title compound as a white powder.
  • H-Tyr (Bzl) -OMe hydrochloride (4.83 g, 15.0 mmol) and cyclopropylmethylpromide (2.43 g, 18.0 ol) were dissolved in dimethylformamide (20 ml), and diisopropylethylamine was added. (3.48 ml, 20.0 IMOI) and the mixture was stirred at room temperature for 24 hours. After concentrating the reaction solution, the residue was dissolved in ethyl acetate (100 ml), and the mixture was washed successively with a 10% aqueous solution of citric acid and a saturated aqueous solution of sodium bicarbonate.
  • Boc-D-Arg (Z 2 ) -Phe-Me ⁇ Ala-OBzl (1.82 g, 2.10 mraol) with 4N-HC1 ethyl acetate It was dissolved in a solution (20 ml) and stirred at room temperature for 30 minutes. Getyl ether was added to the reaction solution, and the precipitated crystals were collected by filtration. The crystals were dissolved in dimethylformamide (20 ml), and N-cyclopropylmethyl-N-benzyloxycarbonyl-Tyr (Bzl) -OH (919 mg, 2.00 mmol) obtained in (1) above was obtained.
  • Trihydroxybenzotriazole (297 mg ⁇ 2.20 ramol) and triethylamine (0.32 ml, 2.2 mmol) were dissolved. After the solution was cooled to -10 ° C, tolethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbopimimid hydrochloride (460 mg , 2.4 mmol) was added. The mixture was stirred at room temperature for 20 hours. Ethyl acetate (100 ml) was added to the reaction solution, and the mixture was washed with IN HC1, and then with saturated aqueous sodium hydrogen carbonate.
  • the above protective peptide (1.24 g, 1.00 mmol) was dissolved in anhydrous hydrogen fluoride (5 ml) and anisol (1 ml), and the mixture was stirred for 1 hour under ice cooling.
  • the reaction mixture is concentrated under reduced pressure, and the residue is washed with ethyl acetate and then with getyl ether.
  • the residue is dissolved in water (5 ml) and charged into an ion exchange resin (Diaion PA-308 acetate, 100 ml). Water eluted.
  • the fractions containing the target compound are collected, the solvent is concentrated under reduced pressure, and the acetate of the obtained crude product is charged to 0DS column chromatography (Fuji Siricia DM1020T, 50 g), and then charged with 4 to 5 ⁇ acetone. Gradient elution with 0.1N acetic acid solution. The fractions containing the target compound were collected and freeze-dried to obtain the title compound as a white powder (33).
  • Boc-D-Arg (Z 2 ) -Phe-Me ⁇ Ala-OBzl (1.73 g, 2.00 mL), N-benzyloxycarbonyl-N- (2-!;-Butoxycarbonyl obtained in the above (1)
  • Aminoethyl)-Tyr-OH (1.10 g, 2.00 I IO1), 1-hydroxybenzotriazole (270 mg, 2.00 mmol), triethylamine (0.228 ml, 2.0 mmol), and
  • the target product was obtained in the same manner as in Example 1 by using triethyl 3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride (479 mg, 2.5 mmol).
  • N-benzyloxycarbonyl-N-butoxycarbonylmethyl-Tyr (Bzl) -0H Nt-butoxycarbonylmethyl-Tyr (Bzl) -OMe obtained in (1) above (2.00 g, 5.00 was dissolved in methylene chloride (20 ml), 10% aqueous sodium carbonate solution (11 ml) and benzyloxycarbonyl chloride (0.96 ml, 6.00 mmol) were added, and the mixture was stirred at room temperature for 2 hours and 30 minutes. The mixture was stirred vigorously.
  • the title compound was prepared in the same manner as in Example 1 using tilamine (0.21 ml, 1.5 mmol), and triethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride (276 mg, 1.4 mmol). 187 mg was obtained as a white powder.
  • Boc-Tyr (Bzl) -D-Arg (Z 2 ) -Phe-MeSAla-OBzl (2.24 g, 2.00 mmol) was dissolved in 4N-HC1 ethyl acetate solution (15 ml), and the mixture was stirred at room temperature for 30 minutes. Crystals precipitated by adding getyl ether to the reaction solution were collected by filtration. The crystals were dissolved in dimethylformamide (5 ml), diisopropylethylamine (0.5 ml) was added, and then methanesulfonyl chloride (193 l, 2.5 mmol) was added under ice-cooling and stirring. Was added.
  • This protective peptide (0.82 g, 0.75 mmol) was dissolved in acetic acid (5 ml), and 0.7 g of 53 ⁇ 4 Pd-C (water content 503 ⁇ 4) was added as a catalyst, followed by catalytic reduction for 24 hours to remove the protecting group. did.
  • the catalyst was filtered off and lyophilized to give 400 mg of the title compound as a white powder.
  • H-Tyr (Bzl) -OMe hydrochloride (6.43 g, 20.0 mmol) and isopropylpropylformimid hydrochloride (8.24 g, 60.0 ramol) mixed with dimethylformamide (15 ml) and methylene chloride (60 ml) Dissolve in the solution and add triethylamine (12 ml, 86 mmol) at room temperature for 7 hours. While stirring. After filtering off the insolubles, a saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution (50 ml) and benzyloxycarbonyl chloride (4.8 ml, 30.0 mmol) were added to the reaction solution, and the mixture was vigorously stirred at room temperature for 25 minutes.
  • Boc-D-Arg (Z 2 ) -Phe-Me / 3Ala-OBzl (1.47 g, 1.70 mmol).
  • the obtained crude product was purified by 0DS column chromatography (Fuji Siricia DM1020T, 50 g) and eluted stepwise with a 3 to 15-acetonitrile / 0.1N acetic acid solution. The fractions containing the target compound were collected and freeze-dried to obtain the title compound as a white powder (177 m).
  • H-Tyr-D-Arg-Phe-Me / 3Ala-OH 690 mg, 1.00 mmol
  • acetimidoethyl hydrochloride 161 mg, 1.30 mmol
  • dimethylformamide 2 ml
  • triethylamine 0.42 ml. 3.0 mmol
  • Jettlje in the reaction solution Ter (100 ml) was added and decanted to remove the solvent.
  • the obtained crude product was charged into a 0DS column chromatography (Fujishirishi DM1020T, 50 g) and eluted stepwise with a 4 to 10-acetonitrile / 0.1N acetic acid solution.
  • the fractions containing the desired compound were collected and freeze-dried to obtain 388 mg of the title compound as a white powder.
  • NC-Tyr (t-Bu) -D-Arg (Tos) -Phe-Me ⁇ Ala-Ot-Bu (1.00 g, 1.16 mmol) was dissolved in ethanol (5 ml), and hydrazine hydrochloride was added. (158 mg, 2.3 mmol) and triethylamine (0.42 ml, 3.0 mmol). After stirring at room temperature for 3 hours, the solvent was distilled off under reduced pressure, benzene (50 ml) was further added, and concentration under reduced pressure was repeated twice to remove residual ethanol.
  • Boc-Tyr (Bzl) -D-Arg (Z 9 ) -Phe-Me ⁇ SAla-OBzl (3.32 g, 3.00 mmol) was dissolved in 4N HC1 ethyl acetate solution (10 ml) and stirred at room temperature for 40 minutes. Jechelle A The crystals precipitated by adding ter were collected by filtration. The crystals were dissolved in dimethylformamide (10 ml), and triethylamine (1, 68 ml, 12 mmol), ⁇ , ⁇ '-bis-t-butoxycarbonylthiourea (229 mg, 3.00 mmol) were stirred under ice-cooling.
  • the crystals were dissolved in dimethylformamide (10 ml), and triethylamine (0.2 ml, 1.4 mmol), 2,4-pentanedione (1.05 ml, 10.0 mmol) and sodium carbonate were stirred under ice-cooling. Lium (6 ml) was added, and the mixture was stirred at room temperature for 10 days. Water (40 ml) was added to the reaction solution, and the precipitated solid was collected by filtration.
  • the analgesic effect of the peptide derivative of the present invention was evaluated by a pressure stimulation method as follows.
  • Ma A pressure stimulus was applied to the ridge of the mouse at a rate of 10 mniHg seconds, and the pressure indicating behavior such as stroking and stimulating the stimulation site was measured, and this was used as the pain response threshold.
  • mice that responded to a pressure of 40 to 50 mmHg in advance were used.
  • the maximum stimulation pressure was 100 mmHg.
  • the analgesic effect is:
  • Subcutaneous administration was tested by (dorsal subcutaneous) and oral administration for example 1 1 compound, ED Q (mg kg) were respectively 0. 093 mg kg and 2. 65 mg kg.
  • the morphine ED ⁇ ng kg used as a control was 4.6 rag kg and 29.6 mg kg, respectively, when administered subcutaneously (subcutaneously on the back) and orally.
  • the peptide derivative of the present invention is useful because it can be used for treating cancer pain and the like.

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Description

明 細 書 ぺプチド誘導体 技術分野
本発明は、 オビオイ ド受容体等に対する作用を介して、 鎮痛等の薬理作用を発 揮するべプチ ド誘導体に関する。 背景技術
モルヒネ等のオビオイ ドが結合するオビオイ ド受容体は、 1970年代前半にその存 在が証明された。 ォピオイ ド受容体は現在 、 (5および/ cの 3種に大別されてい る。 モルヒネは主に 受容体にァゴニストとして作用し、 鎮痛、 腸管運動抑制、 呼吸抑制等の薬理学的効果を発現する。
1975年以降、 オビオイ ド受容体に結合する内因性のモルヒネ様物質が相次いで 発見された。 現在までのところ、 これらの物質は全てペプチドであり、 オビオイ ドペプチドと総称されている。 オビオイ ドペプチドの薬理学的効果は基本的には モルヒネと同様と考えられ、 元来生体内に存在する物質であることから、 モルヒ ネ以上の安全性を有する薬剤となる可能性が予想される。 しかし、 天然のォピオ ィ ドペプチドでは体内動態面での問題もあり、 未だ医薬品として使用はされてい ない。
1980年代には D-体のァラニンを含有するデルモルフィ ンがカエルの皮膚から単離 された。 デルモルフイ ンの鎮痛効果は脳室内投与でモルヒネの約 1, 000 倍強力であ り、 体内で比較的安定であることが判明した。 その後 D-体のアミ ノ酸を含む合成ォ ピオイ ドペプチドが作られた。 特に/ 受容体選択性の高い合成オビオイ ドぺプチ ドは麻薬性のない鎮痛薬として期待され、 臨床試験も実施されているか、 効果、 /cァゴニス トであることに起因すると思われる副作用、 および採算性の面で医薬 品としての可能性は疑問視されてきている。
さらに、 これらの合成オビオイ ドペプチドは経口剤としての利用が困難であり、 例えば近年癌疼痛治療薬として広く使用されている硫酸モルヒネの徐放性経口剤 である MSコンチンの代替薬とはなり得ない。 一方、 MSコンチンは一日投与量かグラ ム単位にまで増加することもあり、 その服用に困難を伴う場合がある。 また、 ヒ ス夕 ミ ン遊離作用に起因すると考えられるかゆみ等の副作用が発現し、 投与の中 止を余儀なくされる場合もある。 したがって、 モルヒネ以上の安全性および薬効 を有する代替薬が望まれる。 発明の開示
本発明者らは、 上記課題を解決すベく優れた鎮痛効果および経口吸収性を有す るオビオイ ドペプチ ド誘導体を鋭意探索した。 その結果、 L-Tyr- (L又は D) - Arg - Phe を基本骨格とし、 N 末端にアミ ジノ基を有するオリゴペプチド誘導体およびそ の塩がかかる特性を保持することを見いだし、 それらの発明について特許出願し た (平成 6年特許願第 40989 号及び平成 7年特許願第 49894 号) 。 本発明者らはさ らに研究を続けた結果、 N 末端のァミジノ部分を修飾した上記ォリゴぺプチド誘導 体が好ましい特性を有していることを見いだし、 本発明を完成した。
すなわち、 本発明のペプチド誘導体は次の式 I :
Y-L- Tyr- Q- NR1 - CH (CH0C6H5) - CO- X
で表すことができる。
本発明により、 上記化合物又はその塩からなる医薬、 並びに該化合物又はその 塩を有効成分として含む鎮痛性の医薬組成物が提供される。 また、 上記医薬組成 物の製造のための該化合物又は塩の使用、 並びに該化合物及びその塩の有効量を 哺乳類動物に投与する工程を含む鎮痛の予防及びノ又は治療方法も本発明により 提供される。 発明を実施するための最良の形態
上記式中の置換基について述べると、 Q は D-Arg (D-アルギニン残基) または L-Arg (L- アルギニン残基) を意味し、 R1は水素原子または (:卜 6 (炭素数 1〜 6個 の) アルキル基を意味する。 これらのうち、 Q 力 D- Argであり、 R1が水素原子であ る化合物が好ましい。 本明細書において、 — 6アルキル基とは、 直鎖アルキル基、 分枝鎖アルキル基、 環状アルキル基、 又は環状アルキル基が置換した直鎮若しく は分枝鎖アルキル基のいずれをも含む概念で用いる。 アルキル基としては、 例 えば、 メチル基、 ェチル基、 n -プロピル基、 イソプロピル基、 シクロプロピル基、 n -ブチル基、 sec -ブチル基、 tert- ブチル基、 シクロプロピルメチル基、 又はシク ロブチル基などを好適に用いることができる。
R2は置換基を有することのあるベンジル基を示す。 ベンジル基が置換基を有す る場合、 1個ないし 2個以上の置換基を任意の位置に有していてもよい。 2個以 上の置換基を有する場合には、 それらは同一でも異なっていてもよい。 フ ヱニル 環上の置換基としては、 例えば (^ _6アルキル基、 置換基を有することのあるアミ ノ 基、 置換基を有することのあるグァニジノ基、 ヒ ドロキシル基などを用いること ができる。 これらのうち、 無置換べンジル基が好ましい。
Y は L-Tyr の N-末端ア ミ ノ基の 2個の水素原子を示すか、 又はこれら 2個の水 素原子のうちの 1個若しくは 2個の水素原子が置換された置換基を示す。 該置換 基は、 以下の群: ァミ ノ基を有することのある アルキル基、 カルボキシル基を 有することのある (^—6アルキル基、 了ミ ノ基を有することのある アルキルカル ボニル基、 アルキル基を有することのあるスルホニル基、 置換基を有することの あるピリ ミ ジル基、 置換基を有することのあるイ ミ ダゾリニル基、 及び下記の式 で示される基 : HN=C (R3 ) - (式中、 R3は水素原子、 _6アルキル基、 置換基を有す ることのあるフヱニル基 ;置換基を有することのあるヒ ドロキシァ ミ ノ基、 又は 置換基を有することのあるヒ ドラジノ基を示す) から選ばれる。 2個の水素原子 が上記置換基により置換されている場合、 それらの置換基はそれぞれ上記の群か ら独立に選ばれ、 同一であっても異なっていてもよい。
Y が示す (^ _6アルキル基としては、 メチル基、 ェチル基、 イソプロピル基、 シ クロプロピルメチル基などが好適である。 Y が示す 6アルキル基がアミ ノ基また はカルボキシル基を有する場合の例としては、 H2N- CH0-, H2N- (CH2) 2 -, H00C- CH2 -, H00C- (CH2) 2 -などの基を挙げることができ、 (:卜 6アルキルカルボニル基がアミ ノ基を有する場合の例としては、 例えば、 H。N- CH9- CO-, H2N- (CH9) 2-C0- などを挙 げることができる。 _6アルキルを有するスルホニル基の例としては、 例えば CH3S02 - などの基を挙げることができる。
Y が示すピリ ミ ジル基及びィ ミ ダゾリニル基としては、 それぞれ 2-ピリ ミ ジル 基及び 2-ィ ミ ダゾリ ン -2- ィル基などを好適に用いることができる。 ピリ ミ ジル基 またはイ ミ ダゾリニル基は置換若しく は無置換のいずれでもよい。 ピリ ミ ジル基 またはィ ミ ダゾリニル基が置換基を有する場合、 置換基として例えば アルキル 基などを用いることかでき、 これらの基が 2個以上の置換基を有する場合には、 それらは同一でも異なっていてもよい。 置換ピリ ミ ジル基としては、 例えば 4, 6- ジメチル -2- ピリ ミ ジル基などを挙げることができ、 置換イ ミ ダゾリニル基として は 4-メチル -2- ィ ミ ダゾリ ン- 2- ィル基などを挙げることができる。
R3は水素原子、 — 6アルキル基、 置換基を有することのあるフヱニル基 ; 置換 基を有することのあるヒ ドロキンア ミ ノ基、 又は置換基を有することのあるヒ ド ラジノ基を示す。 R3が示す —。アルキル基としては、 メチル基、 ェチル基、 又は n -プロビル基などが好適であり、 メチル基が特に好ましい。 フエニル基、 ヒ ドロキ シア ミ ノ基(H0 - NH -)、 又はヒ ドラジノ基(H2N-NH- ) は無置換のものを好適に用いる ことができる力、'、 例えば 1個または 2個以上の _6アルキル基により置換されたも のを用いてもよい。
なお、 Y が 2個の水素原子を示すか、 または Y のうち 1個が水素原子であり他の 1個が上記置換基であることが好ま しい。 また、 Y か 2個とも上記置換基、 例えば 同一若しくは異なる アルキル基である場合も好ましい。 Y か示す 2個の置換基 が共にメチル基である化合物は本発明の好ま しい態様である。
X は- 0R4、 -N(RJ) (R6) , 又は- NR ' - C(R8) (R (R10 ) のいずれかを示す。 R4は水 素原子または アルキル基を示し、 は水素原子または アルキル基を示す。 Ruは ヒ ドロキシアルキル基またはスルホン酸置換 (^—6アルキル基を示す。 水酸 基またはスルホン酸基はアルキル基のいかなる位置に置換していてもよいが、 末 端置換のアルキル基が好ましい。 R3及び R。は一緒になつて R3及び R6が置換する窒素 原子と共に 5または 6 員含窒素飽和複素環基を示してもよく、 該複素環は 2個以上 の窒素原子を含んでいてもよい。 例えば、 -N(R3 ) (RU)として卜ピペラジニル基、 1 -ピロ リ ジニル基、 または卜ピぺリ ジニル基などを用いることができる。
また、 X が NR7- C(R8) (R9) (R1 ())を示す場合、 R7は水素原子、 _6アルキル基、 又 はフエニル基等のァリール基が置換した (^—6アルキル基 (ァラルキル基) を示す。 ァラルキル基としては、 例えば、 ベンジル基など挙げることかできる。 R8は水素原 子; カルボキシル基; メ トキシカルボニル、 ェ 卜キシカルボニルなどの アルコ キシ基が置換したカルボニル基;置換若しくは無置換力ルバモイル基; カルボキ シル基が置換 ;置換若しくは無置換力ルバモイル基が置換した
Figure imgf000007_0001
Cl -6アルキル基; または ci—6アルコキシ基が置換したカルボ二ル基を有する cl- アルキル基を示す。
R。は水素原子;(^_6アルキル基; ァミノ アルキル基; ァミジノ基が置換した アルキル基 ; グァニジノ基が置換した _6アルキル基、 ヒ ドロキシ アルキ ル基; カルボキシル基が置換した アルキル基、 又は置換若しくは無置換力ルバ モイルが置換した —6アルキル基を示す。 あるいは、 R '及び R"3が一緒になつて R ' が置換する窒素原子とともに環上にカルボキシル基を有する 5 または 6 員の含窒素 飽和複素環基を形成してもよい。 このような複素環としては、 2 カルボキシ-卜 ピロリジニル基 (-Pro- 0H)や 3-カルボキン-卜 ビペリジニル基を挙げることができ る。 これらのうち、 例えば、 R8がカルボキシメチル基またはカルパ'モイルメチル基 であり、 R15が水素原子である組合せが好ましい。 R1 G は水素原子又は _6アルキル 基を示す。 上記の各置換基において、 アルキル基、 アルコキシ基、 又はアルカノ ィル基は直鎖または分枝のいずれでもよい。
上記の式 Iで示される本発明の化合物は、 L-チロシン残基及び Q が示す!)- Arg または L- Arg 残基に由来する 2個の不斉炭素の他、 Q に結合するフニ二ルァラニン 残基に由来する不斉炭素、 R8および RJが置換する不斉炭素 (ただし R8および R9が同 時に同一の置換基を示す場合を除く) 、 並びに上記の各置換基及び Y に任意に存在 する 1以上の不斉炭素を有する。 L-Tyr 、 D-Arg 、 及びい Arg 残基に由来するもの 以外の不斉炭素は R-または S -のいずれの配置でもよい。 また、 本発明の式 Iで示さ れる化合物には、 上記の式で示される任意の光学活性体またはラセミ体、 ジァス テレオ異性体またはそれらの任意の混合物もすベて包含される。
また本発明の化合物には、 塩酸塩、 酢酸塩、 又はパラ トルエンスルホン酸など の酸付加塩や、 アンモニゥム塩又は有機アミ ン塩などの塩基付加塩が含まれる。 さらに上記の一般式で示される化合物の他、 上記化合物の 2量体ないし多量体で ある化合物、 及びこれらの化合物の C-末端と N-末端が結合した環状の化合物が包含 される。 本発明のぺプチ ドは、 モルヒネを凌駕する鎮痛効果を有する。 鎮痛作用に伴う ヒスタミ ン遊離作用や心拍数の低下作用がモルヒネに比して相対的に弱く、 モル ヒネとの交差耐性の程度も低いので、 癌疼痛治療に使用するのに適することが予 想される。 従って、 本発明により上記化合物からなる医薬が提供される。 投与経 路としては静脈内投与、 皮下投与、 経口投与等が挙げられるが、 経鼻吸収を含む 粘膜吸収製剤および経皮吸収製剤も有用性が期待される。 投与量は特に限定され ないが、 例えば、 皮下投与の場合には単回投与量を 0. 1〜10 mg とし、 経口投与の 場合には単回投与量を 1〜100 mgとして、 一日あたり 2〜3 回投与するればよい。 本発明のぺプチド誘導体は、 ぺプチド合成に通常用いられる固相法および液相 法で合成することができる。 アミ ノ基等の保護基および縮合反応の縮合剤等は、 優れたものが種々知られており、 以下の実施例を参考に、 また、 例えば: 鈴木紘ー 編 「タンパク質工学—基礎と応用」 丸善 (株) (1992)及びそこに引用された文献;
M. Bondanszky, et al. , "Peptide Synthesis", John Wi ley & Sons, N. Y. , 1976 ; 並びに J. M. Stewart and D. J . Young, "Solid Phase Pept ide Synthesis " , ». H. Freeman and Co. , San Francisco, 1969 等を参照して適宜選択使用することが できる。 固相法では市販の各種べプチド合成装置、 例えばパーキン · エルマ— · ジャ ン製(Perkin Elmer Japan,旧社名 Applied Biosystems )の Model 430Aを利用 するのが便利なこともある。 合成に使用する樹脂、 試薬等は市販品等を容易に入 手でき、 それらの例は実施例に示した。 実施例
以下に実施例により本発明をさらに具体的に説明するか、 本発明はこれら実施 例に限定されるものではない。 本実施例を参照し、 あるいは本実施例の方法を修 飾 ·変更することによって、 あるいは出発原料または反応試薬を適宜選択するこ とにより、 一般式 I に包含される本発明の所望の本発明べプチド誘導体を容易に 製造することができる。 なお、 実施例においては、 アミ ノ酸基の意味は通常用い られているものと同様である。 D -体と L -体とが存在するァミノ酸が言及されている 場合、 特に!) -と表示されていない場合には、 そのアミノ酸は L-アミノ酸を意味する。 また、 以下の略号を使うことがあり、 特に示していない場合にも同様な略号を用 いる場合かある。
Z : ベンジルォキシカルボニル基
OTce : ト リ ク ロ口ェチルエステル基
Boc : t-ブ トキシカルボニル基
WSC1 : 1-ェチル- 3- (3 -ジメチルァ ミ ノ プロピル) -カルポジイ ミ ド
TosOH : パラ トルエンスルホン酸
OBzl : ベンジルォキシ基
Me SAla 又は /3MeAla : N -メ チル- β- ァラニン
H-ySAla-ol: NH CH CHoCH2OH
Fmoc : 9-フルォレニルメ チルォキシカルボニル
Pmc : 2, 2, 5, 7, 8-ペンタ メ チルク ロマン一 6 -スルホニル
t-Bu :三級ブチル
NMP : N-メチルピロ リ ドン
DMF : ジメチルホルムァ ミ ド
DMS0 : ジメチルスルホキシ ド
TFA : 卜 リ フルォロ酢酸
TEA : ト リエチルァ ミ ン
DCM : ジクロロメ タ ン
DMAP : N, N -ジメ チルァ ミ ノ ピリ ジン
DIPEA : N, N -ジイ ソプロ ピルェチルァ ミ ン
DIPC1 : N, N-ジイ ソプロ ピルカルボジイ ミ ド
ΗΟΒΐ : 1-ヒ ドロキシベンゾ ト リ アゾ一ル
EDC : 1-(3- ジメチルア ミ ノ プロ ピル) -3 -ェチル- カルボジィ ミ ド
HBTU : 2 -(1H -べンゾ卜 リァゾール一卜ィル) - 1, 1, 3, 3-テ トラメチルゥロニゥ厶 . へキサフルォロホスフヱ一 ト
PyBrop: ブロモ ト リ ス (ピロ リ ジノ) ホスホニゥム . へキサフルォロホスフエ一 ト Alko樹脂: p -アルコキシベンジルアルコール樹脂 [4-ヒ ドロキシメチルフヱノキシ メチルコポリ スチレン ジビニルベンゼン樹脂、 J. Am. Chem. So , 95, 1328 (1974)], 渡辺化学工業 Fmoc- NH- SAL 樹脂: 4 -(2',4' - ジメ 卜キシフヱニル— 9 フルォレニルメ 卜キシカ ルポニルァミ ノ メチル) フュノキシ樹脂:渡辺化学工業
また、 以下の実施例において、 薄層クロマ トグラフィ一の条件は以下の通りで ある。
Rfa : n-ブタノール :酢酸:精製水 =4 :1:5を混合し、 その上層を展開溶媒として用 いた。
Rfb : n-ブ夕ノール :酢酸:精製水: ピリジン = 15:3:10:12 を展開溶媒として用い た。
薄層板 : シ リ 力ゲル (Merck F254)
(A) 原料化合物の製造
(1) H-Tyr-D-Arg-Phe- β -Ala-OH
Applied Biosystems (ABI)社の Model 430A ぺプチド合成装置を用いて、 固相 法(Original Autoprogram for the Fmoc NMP method) (こより以下のよう こ合成した。 Fmoc- /S-Ala-Alko 樹脂 0.25 tnmol 675 mg を NMP で 1回洗浄し、 20% ピペリ ジン 含有 NMP で 4分間、 さらに同じく 20¾ ピぺリ ジン含有 NMP で 16分間処理した。 NMP で 5回洗浄した後、 61分間 Fmoc-Phe- 0Hと反応させた。 次いで NMP にて 4回洗浄 し、 4回目の洗浄液より樹脂を回収し、 未反応のアミ ノ基は無水酢酸と反応させ た。 以上の 1サイクルを 120 分で行い、 同様の操作を 2サイクル目は Fmoc-Phe- 0Hの代わりに Fmoc- D- Arg(Pmc)- 0H を用いて、 3サイ クル目は Fmoc Tyr(t- Bu) - OHを用いて繰り返した。 側鎖保護基は、 D-Arg に対しては F¾c を、 Tyr に対しては t - Buを用いた。
上記の操作により得られた樹脂 500 mgをフエノール (結晶) 0.75 g、 エタンジ チオール 0.25 ml. チオア二ソール 0.50 ml、 水 0.50 mlおよび TFA 10.0 ml の混 合液中で室温にて 3時間撹拌処理し、 樹脂からぺプチ ドを分離させると同時に保 護基を除去した。 次いで 3/ m のフィルタ一 (ADVANTEC - Polyflon フィ ルタ一) で濾過し、 濾液に冷ジェチルエーテル 200 ml を加え、 生じた沈殿を のフィ ルター (ADVANTEC- Polyflon フィルタ一) で濾取した。 フィルタ一上の沈殿は 2 酢酸 10〜20 ml に溶解し、 凍結乾燥して式: H- Tyr- D- Arg-Phe- /3 - Ala- 0H の粗べ プチ ドを得た。
(2) H-Tyr-D-Arg-Phe-NHCHnCH0CONH2
合成開始時に Fmoc- NH-SAL 樹脂 0. 25 ramol 385 mgを用いを用いたこと以外は 上記(1 ) と同様な操作により得た。
(3) H-Tyr-D-Arg-Phe- β - eAla-OH
Fmoc NMP法による固相法で以下のように合成した。 濾過にはグラスフ ィ ル夕一 を用いた。 Alko樹脂 0. 500 gを MF 6 ml で膨潤させた後、 Fmoc- メチル- β - ァラニン (Fmoc- /3 -MeAla-OH ) 0. 228 g およびピリジン 0. 093 ml を樹脂に加 え、 1分間振盪し、 次いで塩化 2, 6- ジクロロベンゾィル 0. 147 gを加えて 24時間 振盪した。 生成した Fmoc- /S - MeAla - Alko 樹脂を 6 ml の DMF で 3回、 次いで 6 ml のメタノールで 3回、 さらに 6 ml の DCM で 3回洗浄し、 未反応のヒ ドロキ シメチル基は DCM 6 ml中で塩化ベンゾィル 0. 0891 mlおよびピリ ジン 0. 0847 ml を加え 1時間振盪しベンゾィル化した。 さらにアミ ノ酸樹脂を 6 mlの DCM で 3回、 6 mlの MF で 3 回、 6 ml のメ タノールで 3 回順次洗浄し、 水酸化力リウムデシケー 夕一中で真空乾燥した。
Fmoc- /3 -MeAla-Alko 樹脂を 12 mlの DMF で 3回、 次いで 20 ¾ ピペリジンを 含む DMF 12 ml で 3回、 さらに 12 mlの DMF で 6回処理することにより Fmoc 基を 除去し、 Fmoc-Phe-OH 0. 262 g 、 PyBropC 渡辺化学工業) 0. 315 g 、 NMP 6 ral、 DIPEA 0. 273 mlを加え、 24時間振盪し、 Fraoc-Phe- 3 -MeAla-Alko樹脂を生成させ た。 濾過し、 6 mlの NMP による洗浄後、 未反応のァミノ基は 卜 ァセチルイミダゾ一 ル 0. 248 g、 DI PEA 0. 0784 ml を含む DMF 6 ml中で 1 時間処理しキヤップした。 次 いで、 得られた樹脂を 6 ml の NMP で洗浄した。
Fraoc-Phe- /3 -MeAla-Alko 樹脂から上記と同様な操作により Fmoc基を除去し、 Fmoc-D-Arg(Pmc)-OH 0. 557 g、 HOBt 0. 121 g、 HBTU 0. 299 g、 DIPEA 0. 274 mlを加 え、 】時間振盪し Fmoc - D- Arg(Pmc)-Phe- S - MeAla- Alko樹脂を生成させた。 次いで 前項と同様に濾過、 洗浄後、 未反応のアミ ノ基をキャップした。
Fmoc-D-Arg(Prac)-Phe- β -MeAla-Alko 樹脂から上記と同様な操作により Fmoc基 を除去し、 Fmoc- Tyr (t-Bu)- 0H 0. 310 g 、 HOBt 0. 103 g、 HBTU 0. 256 g、 DI PEA 0. 235 mlを加え、 1時間振盪し Fmoc - Tyr(t - Bu)-D - Arg(Pmc) -Phe- /S - MeAla- Alko 樹脂を生成させた。 前項と同様に濾過、 洗浄後、 未反応のアミ ノ基をキャ ップし た。 上記(1 ) と同様の方法により、 樹脂からペプチドを分離させると同時に保護基 を除去した。
(4 ) H-Tyr-D-Arg-Phe- β -EtAla-OH
Fmoc NMP法による固相法で以下のように合成した。 濾過にはグラスフィルター を用いた。 Alko樹脂 1. 000 gを NMP 12 ml で膨潤させた後、 Fmoc-N- ェチル- β - ァラニン (Ftnoc- /3 -EtAla-OH) 0. 475 gおよび AP 0. 017 gを加え、 1分間振盪 し、 次いで DI PCI 0. 177 を添加して 24時間振盪した。 生成した Fmoc- 9 -EtAla -Alko 樹脂を NMP 12 ml で 3回、 次いで 12 ml のメ タ ノールで 3回、 さ らに DCM 12 ml で 3回洗浄し、 未反応のヒ ドロキシメチル基は DCM 12 ml 中で塩化べンゾィ ル 0. 178mlおよびピリジン 0. 170 mlを加え 1時間振盪しベンゾィル化した。 さらに 了 ミ ノ酸樹脂を 12 mlの DCM で 3回、 12 ml の DMF で 3回、 12 ml のメ タノールで 3 回順次洗浄し、 水酸化カ リ ウムデシケータ一中で真空乾燥した。
Fmoc- EtAla- Alko 樹脂を 20 mlの DMF で 3回、 次いで 20¾ピペリ ジンを含 む DMF 12 ml で 3 回、 さらに 12 ml の DMF で 6回処理することにより Fmoc基を除去 し、 Fmoc- Phe- 0H 0. 387 g, PyBrop 0. 466 g, NMP 12 ml, 及び D1 PEA 0. 523 ralを加 え、 24時間振盪し、 Fmoc - Phe- -EtAla-Alko 樹脂を生成させた。 濾過後、 12 ml の NMP で洗浄し、 未反応のアミ ノ基は卜ァセチルイ ミダゾ—ル 0. 551 g、 DI PEA 0. 174 mlを含む DMF 12 ml 中で 1時間処理しキャップした。 次いで、 得られた樹 脂を再度 12 mlの NMP で洗浄した。
Fmoc -Phe- ,3 -EtAla-Alko 樹脂から上記と同様な操作により Fmoc基を除去した。 樹脂に Fmoc- D- Arg ( Pmc ) - 0H 0. 707 g、 ΗΟΒΐ 0. 153 g、 HBTU 0. 379 g、 DI PEA 0. 348 mlを加え、 1 時間振盪し Fraoc-D-Arg(Pmc)- Phe - /3 - EtAia- Alko樹脂を生成させた。 前項と同様に濾過、 洗浄後、 未反応のアミ ノ基をキャ ップした。
Fmoc-D-Arg(Pmc)-Phe- β -EtAla-Alko樹脂から上記と同様な操作により Fmoc基を 除去し、 Fmoc- Tyr( t-Bu) - 0H 0. 460 g 、 HOBt 0. 153 g、 HBTU 0. 399 g、 DI PEA 0. 348 mlを加え、 1時間振盪し Fraoc- Tyr(t- Bu)- D- Arg(Pmc)-Phe- /3 - EtAla- Alko 樹脂 を生成させた。 上記と同様に濾過、 洗浄後、 未反応のアミ ノ基をキャ ップした。 上記(1 ) と同様の方法により、 樹脂からペプチドを分離させると同時に保護基を除 去した。
(5) H- Tyr(Bzl)- D-Arg(Z2)- Phe- OTce
出発原料である Z-Phe- OTce 254 g を 25¾臭化水素一酢酸 900 ml で処理して Z 基を脱離した後、 氷浴下で CH9C19 1000 mlに溶解した。 この溶液に Boc - D-Arg (Z2)-OH 288 g, HOBt 85 gを加え、 TEA 77 ml で中和した後、 EDC · HC1 121 g により縮合し Boc -!) -Arg(Z0)- Phe- OTceとした。 次いで、 Boc - D- Arg(Z2)- Phe- OTce241 g を 4N HC1—酢酸ェチルエステル 1000 mlで処理して Boc基を脱離し、 氷浴下で DMF 1300 mlに溶解した。 この溶液に Boc- Tyr(Bzl)- 0H 108 g, ΗΟΒΐ 46 gを加え、 TEA 42 ml で中和した後、 EDC · HC1 65 gにより縮合し、 次式で示される保護ぺプ チド : Boc- Tyr(Bzl)-D-Arg(Z2)- Phe- OTce を得た。 Boc- Tyr (Bzl)- D-Arg(Z2 )- Phe -OTce 48 gを 4N HC1—酢酸ェチルエステル 250 mlで処理して Boc 基を脱離した。
(6) H- Tyr(Bzl) - D- Arg(Z2) - MePhe -Me /S Ala-OBzl
TosOH · Me^SAla - OBzlを出発原料として、 C-末端より順次液相法により製造し た。 Boc- MePhe- 0Hと TosOH · Me^Ala-OBzlを EDC-HOBt 法により縮合し、 Boc - MePhe - Me^SAla- OBzlを得て、 Boc- MePhe- MeyS Ala-OBzlより 4N HC1—酢酸ェチルエステル を用いて Boc基を脱離後、 Boc- D- Arg(Z2)-0Hと EDC- HOBt法により縮合して、 Boc- D- Arg(Z2)- MePhe- Me/3Ala-0Bzlとした。 次いで、 Boc- D-Arg(Z2)- MePhe- Me /S Ala- OBzlより 4N HC1 —酢酸ェチルエステルを用いて Boc基を脱離後、 Boc- Tyr(Bzl) -OH と EDC- HOBr法により縮合して、 保護べプチド: Boc- Tyr(Bzl)-D-Arg(Z2)- MePhe - Me ;S Ala- OBzlを得、 4N HC1—酢酸ェチルエステル 250 mlで処理して Boc 基を脱 離した。
(B) 本発明の化合物の製造
例 1
N -メチル -Tyr-D-Arg-Phe-Me/SAla-OH - 2酢酸塩
Boc - Phe-OHと TosOH · Me ^ Ala - OBzlを EDC-HOBt 法により縮合し、 Boc- Phe- Me S Ala- OBzlを得て、 Boc-Phe-Me/3Ala-0Bzlより 4N HC1—酢酸ェチルエステルを用い て Boc基を脱離後、 Boc-D- Arg(Z2)- 0Hと EDC-HOBt法により縮合して、 Boc- D- Arg(Z2) - Phe- Me Ala- OBzlとした。 Boc-D- Arg(Z2)- Phe- MeySAla- OBzl (4.76 g、 5.50 mmol)を 4N-HC1 Z酢酸ェチル 溶液 (20 ml)に溶解し、 室温で 25 分間攪拌した。 反応液にジェチルエーテルを加 えて析出した結晶を濾取した。 この結晶をジメチルホルムアミ ド (10 ml)に溶解し、 Boc-N-メチル -Tyr(Bzl)-0H (1.93 g 、 5.00 読 ol)、 卜ヒ ドロキシベンゾト リアゾ一 ル (743 mgゝ 5.50 mmol)及びトリェチルアミ ン (0.84 ml 、 6.0 mmol) を溶解した。 この溶液を - 10°Cに冷却後、 1 -ェチル -3-(3- ジメチルァ ミ ノプロピル) カルポジ ィ ミ ド塩酸塩 (1.15 g、 6.00 mmol)を加え、 - 10°Cで 1時間、 さらに室温で 20 時間攪拌した。 反応液に酢酸ェチル (40 ml)を加え、 IN HC1 、 次いで飽和重曹水 で洗浄した。 溶媒を減圧濃縮して得られた油状物をシリカゲルカラムクロマトグ ラフィ 一 (ベンゼン :酢酸ェチル = 2:1 (V v.)) にて精製して、 Boc N-メチル - Tyr (Bzl)- D - Arg(Z2)- Phe- Me SAla-OBzlを無色油状物として 5.01 g得た。
この保護べプチド (0.84 g、 0.74 mmol)を 4N- HC1 酢酸ェチル溶液 (5 ml) に 溶解し、 室温で 30 分間攪拌した。 反応液にジェチルエーテルを加えて析出した結 晶を濾取した。 この結晶を酢酸 (5 ml) に溶解し、 触媒として 5¾ Pd-C (含水率 50¾) 0.3 g を加えて、 3時間接触還元を行って保護基を除去した。 触媒を濾別後 凍結乾燥し、 標題の化合物を白色粉末として 396 mg 得た。
FAB マススペク トル m z : 584 (M+H+ )
[a ] D 23 +44.4° (c= 1. OK IN- 酢酸)
Rf b : 0.59 例 2
N, N-ジメ チル -Tyr-D-Arg-Phe-Me β Ala - OH · 2酢酸塩
Boc-D-Arg(Z2)-Phe-Me β Ala-OBzl (1.30 g、 1.50 mmol)を 4N- HC1 酢酸ェチル溶 液 (15 ml)に溶解し、 室温で 40 分間攪拌した。 反応液にジェチルエーテルを加え て析出した結晶を濾取した。 この結晶をジメチルホルムア ミ ド (10 ml)に溶解し、 N, N -ジメチル - Tyr(Bzl) - 0H (419 rag 、 1.40 mmol), 卜ヒ ドロキシベンゾト リアゾ一 ル (189 mg、 1.40 画 ol)及び卜 リエチルァミ ン (0.21 ml 、 1.5 mmol) を溶解した。 この溶液を -10°Cに冷却後、 卜ェチル -3 -(3- ジメチルアミ ノプロピル) カルポジ ィ ミ ド塩酸塩 (349 mg、 1.82 mmol)を加え、 - 10°Cで 1時間、 さ らに室温で 20 時間攪拌した。 反応液に酢酸ェチル (40 ml)を加え、 IN HC1、 次いで飽和重曹水で 洗浄した。 ¾媒を減圧濃縮して得られた油状物をシリ力ゲルカラムク ロマ 卜グラ フィ ー (ベンゼン :酢酸ェチル = 2:1 (V V)) にて精製して、 N, N-ジメチル -Tyr (Bzl)- D-Arg(Z2)-Phe-Me/SAla- OBzlを無色無定型固体として 974 mg得た。
この保護べプチド (450 rag. 0.43 mtnol)を酢酸 (5 ml) に溶解し、 触媒として 5¾ Pd- C (含水率 50V) 0.29 gを加えて、 4時間接触還元を行って保護基を除去 した。 触媒を濾別後凍結乾燥し、 標題の化合物を白色粉末として 193 mg得た。
FABマススぺク トル m z : 598 (M+H )
[ひ ] D 23 +44.4。 (c= 1.08、 IN- 酢酸)
Rf b : 0.37 例 3
N-ェチル - Tyr-D- Arg- Phe- Me 3 Ala- OH . 2酢酸塩
Boc-Tyr(Bzl)- D- Arg(Z2)-Phe- Me SAla-OBzl (2.20 g、 2.00 mmol)を 4N- HC1 酢酸ェチル溶液 (10 ml)に溶解し、 室温で 1時間攪拌した。 反応液にジェチルエー テルを加えて析出した結晶を濾取した。 この結晶をメ タノール (10 ml)に溶解し、 氷冷攪拌下ァセ卜アルデヒ ド (134 μΐ 、 2.40 mmol)及びシァノ水素化ホウ素ナト リウム (132 mg、 2.00 mmol)を溶解した。 この溶液を室温で 17時間攪拌後、 同量の ァセトアルデヒ ドとシァノ水素化ホウ素ナトリゥムを追加し、 室温にてさらに 19 時間攪拌した。 反応液を減圧濃縮し、 クロ口ホルム (50 ml)を加え、 水で洗浄した。 クロ口ホルムを減圧濃縮して得られた油状物をシリカゲルカラムクロマ トグラフ ィ 一 (ベンゼン :酢酸ェチル = 1:3 (V V)) にて精製して、 N-ェチル - Tyr(Bzl)- D - Arg(Z9)-Phe-Me Ala-0Bzlを無色油状物として 1.37 g得た。
この保護ペプチド (0.84 g、 0.74 mmol)を酢酸 (5 ml) に溶解し、 触媒として 5% Pd-C (含水率 50¾) 0.30 gを加えて、 3時間接触還元を行って保護基を除去 した。 触媒を滹別後凍結乾燥し、 標題の化合物を白色粉末として 396 mg得た。
FABマススぺク トル m z : 598 (M+H+ )
[ひ ] D 3 +42.1° (c= 1.02、 IN- 酢酸)
Rf b : 0.53 例 4
N -イ ソプロ ピル - Tyr- D - Arg- Phe- Me^Ala- 0H . 2酢酸塩
Boc-Tyr(Bzl)-D-Arg(Z0)-Phe- Me/SAla-OBzl (2.00 g、 2.00 mmol)、 ァセト ン (147 1 、 2.00 mmol)及びシァノ水素化ホウ素ナ ト リ ウム (138 mg、 2.00 mraol) を用い、 例 3と同様の方法にて標題の化合物を白色粉末として 754 mg得た。
FABマススぺク トル m z : 612 (M+H" )
[ひ] D 23 +48.7° (c= 1.02、 IN- 酢酸)
f b : 0.60 例 5
N -シクロプロピルメチル - Tyr - D-Arg - Phe- Me^SAla- 0H . 2酢酸塩
(1) N-シク ロプロ ピルメ チル - N -ベンジルォキンカルボ二ル- Tyr(Bzl)- 0H
H- Tyr(Bzl)-OMe塩酸塩 (4.83 g、 15.0 mmol)及びシク ロプロ ピルメチルプロ ミ ド (2.43 g、 18.0 匪 ol)をジメチルホルムア ミ ド (20 ml)に溶角早し、 ジイ ソプロピ ルェチルァミ ン (3.48 ml 、 20.0 IMOI)を加え室温で 24時間攪拌した。 反応液を濃 縮後残渣を酢酸ェチル (100 ml) に溶解し、 10¾ クェン酸水溶液、 飽和重曹水の順 に洗浄した。 酢酸ヱチルを減圧留去し、 得られた粗生成物をシ リ カゲルカラ厶ク ロマ 卜グラフィ 一 (クロ口ホルム : メ タノール : 50:1 (V V))にて精製して無色油 状物 1.91 gを得た。
この油状物を塩化メチレン (20 ml)に溶解し、 10¾ 炭酸ナ ト リ ウム水溶液とベ ンジルォキシカルボニルクロリ ド (1.03 ml 、 7.28 mmol)を加え、 室温で 22時間激 しく攪拌した。 塩化メ千レン層を濃縮し、 得られた粗生成物をメタノール (5.7 ml) に溶解し、 2N水酸化ナ卜リゥム水溶液 (5.7 ml) を加え室温で 18時間攪拌した。 溶媒を減圧留去後、 氷冷攬拌下 IN HC1 を加えて pH を約 2に調整し、 クロ口ホル ムにて抽出した。 溶媒を減圧留去し、 無色油状物 2.60 g を得た。
FABマススぺク トル m z : 624 (Μ+Ητ )
(2) N-シクロプロ ピルメチル -Tyr-D- Arg-Phe-Me/SAla- 0H · 2酢酸塩
Boc-D-Arg(Z2)-Phe-Me β Ala-OBzl (1.82 g、 2.10 mraol)を 4N - HC1 酢酸ェチル 溶液 (20 ml )に溶解し、 室温で 30分攪拌した。 反応液にジェチルエーテルを加えて 析出した結晶を瀘取した。 この結晶をジメチルホルムアミ ド (20 ml )に溶解し、 上 記(1 ) で得た N- シクロプロピルメチル - N-ベンジルォキシカルボニル- Tyr(Bzl ) -OH (919 mg、 2. 00 mmol)、 卜ヒ ドロキシベンゾト リアゾール (297 mgヽ 2. 20 ramol) 及びトリェチルァ ミ ン (0. 32 ml 、 2. 2 mmol) を溶解した。 この溶液を - 10°Cに冷 却後、 卜ェチル - 3-(3- ジメ チルァ ミ ノプロ ピル) カルポジイ ミ ド塩酸塩 (460 mg、 2. 4 mmol ) を加え、 - 10°Cで 1時間、 さらに室温で 20 時間攪拌した。 反応液 に酢酸ェチル (100 ml) を加え、 IN HC1、 次いで飽和重曹水で洗浄した。 溶媒を減 圧濃縮して得られた油状物をシリ力ゲルカラムクロマ 卜グラフィー (クロロホル ム : メ タノール = 100 : 1 (V V) ) にて精製して N- シクロプロピルメチル縮合体を 無色油状物として 2. 27 gを得た。
上記保護べプチ ド (1. 24 g、 1. 00 mmol)を無水フッ化水素 (5 ml ) 及びァニソ一 ル (1 ml ) に溶解し、 氷冷下 1時間攪拌した。 反応液を減圧濃縮して残渣を酢酸ェ チル、 次いでジェチルエーテルにて洗浄後、 水 (5 ml ) に溶解してイオン交換樹脂 (ダイヤイオン PA- 308 酢酸塩、 100 ml) にチャージして水溶出した。 目的物を含 む画分を集め溶媒を減圧濃縮し、 得られた粗生成物の酢酸塩を 0DSカラムクロマト グラフィ一 (富士シ リ シァ DM1020T、 50 g) にチャージして 4〜5 ¾ ァセトニト リ ル /0. 1N酢酸溶液にて段階的グラジェン卜溶出した。 目的物を含む画分を集めて凍 結乾燥し、 標題の化合物を白色粉末として 33 得た。
FABマススぺク トル m z : 624 (M+H+ )
[ひ ] D 23 -38. 3 ( c= 1. 05、 I N- 酢酸)
Rf b : 0. 64 例 6
N- (2- ア ミ ノエチル) - Tyr- D - Arg- Phe - Me /3 Ala-0H · 2酢酸塩
( 1) N-ベンジルォキシカルボニル- N- (2-t-ブ トキシカルボニルァ ミ ノエチル) -Tyr
-OH
Try (Bzl) - OMe塩酸塩 (2. 57 g、 8. 00 mmol)をメ タ ノール (15 ml)に溶解し、 氷 冷攪拌下 Boc_ グリシノール (1. 20 g、 7. 50 mmol)及びシァノ水素化ホウ素ナトリ ゥム (0.47 g、 7.50 mraol)を溶解した。 この溶液を室温で 17時間攪拌後、 減圧濃縮 し、 クロ口ホルム (50 ml)を加え、 水で洗浄した。 このクロ口ホルム溶液に飽和重 曹水 (15 ml)及びべンジルォキシカルボニルクロリ ド(0.96 ml, 6.00 mmol)を加え、 室温で 1時間 30分間激しく攪拌した。 クロ口ホルム層を濃縮し、 得られた粗生成物 をメ タノール (20 ml)に溶解し、 2N水酸化ナ 卜 リ ゥム水溶液 (2.1 ml) を加え室温 で 11時間攪拌した。 溶媒を減圧留去後、 氷冷攪拌下 IN HC1 を加えて pH を約 2に 調整し、 酢酸ェチルにて抽出した。 溶媒を減圧留去し、 無色油状物 1.66 g を得た。
FABマススぺク トル m z : 613 (Μ+Ητ )
(2) N-(2 - ア ミ ノエチル) - Tyr- D- Arg- Phe - Me 5Ala- 0H · 2酢酸塩
Boc-D-Arg(Z2 )-Phe-Me β Ala-OBzl (1.73 g、 2.00 讓 ol)、 上記(1) で得た N - ベンジルォキシカルボニル -N-(2 -!; -ブトキシカルボニルァ ミ ノェチル) - Tyr-OH (1. 10 g、 2.00 I IO1)、 1-ヒ ドロキシベンゾ ト リアゾ一ル (270 mg、 2.00 mmol)、 ト リ ェチルァミ ン(0· 28 ml、 2.0 mmol) 、 及び卜ェチル 3- (3 -ジメチルァミ ノプロピル) カルボジィ ミ ド塩酸塩 (479 mg、 2.5 mmol) を用い、 例 1と同様の方法にて目的物 を得た。 これを 0DS力ラムク ロマ ト グラフ ィ ー (富士シリ シァ M1020T、 50 g) にチャージして 1〜 10¾ ァセ卜二トリル Ζ0· 1N酢酸溶液にて段階的グラジヱン 卜溶 出した。 目的物を含む画分を集めて凍結乾燥し、 標題の化合物を白色粉末として 259 m 得た。
FABマススぺク トル m z : 613 (M+H+ )
[a D 23 +36.8° (c: 0.96、 IN- 酢酸)
Rf b : 0.51 例 7
H-Gly-Tyr-D-Arg-Phe-Me β Ala-OH · 2酢酸塩
Boc- Tyr(Bzl)- D- Arg(Z2)- Phe- Me yS Ala-OBzl (3.35 g、 3.00 麵 ol)、 Boc-Gly- OH (0.52 g、 3.00 mmol). 卜ヒ ドロキシベンゾト リアゾ一ル (405 m , 3.00 mmol), トリェチルァ ミ ン (0.42 ml . 3.0 mmol) 、 及び 1-ェチル -3- (3-ジメチルア ミ ノブ 口ピル) カルボジィ ミ ド塩酸塩 (690 mg、 3.60 nwiol)を用い、 例 1と同様の方法に て保護べプチド Boc- Gly-Tyr(Bzl)- D- Arg(Z2)-Phe- Me/3Ala- OBzl (2.92 g) を得、 このうち 741 mg (0.63 mmol)を脱保護して目的物を白色粉末として 370 mg 得た。 FABマススぺク トル m z : 627 (M+H+ )
[ひ] D 23 +31.5° (c= 1.00、 IN- 酢酸)
Rf b : 0.58 例 8
N-カルボキシメチル- Tyr-D - Arg- Phe - Me /S Ala- OH
(1) N-t-ブ トキシカルボニルメ チル -Tyr(Bzl)- OMe
H - Try(Bzl)- OMe塩酸塩 (16.1 g、 50.0 mmol)及びブロモ酢酸 t-ブチル (19.5 g、 100 mmol) をジメチルホルムア ミ ド (50 ml)に溶解し、 この溶液にジイ ソプロピル ェチルアミ ン (27 ml 、 155 mmol) を室温で 20分かけて滴下した。 室温で 17時間攪 拌後、 不溶物を濾別し、 濾液を減圧濃縮した。 残渣を酢酸ェチル (100 ml) に溶解 し、 IN HC1、 次いで飽和重曹水で洗浄した。 溶媒を減圧濃縮してへキサンより再結 晶.して白色結晶 15.3 g を得た。 融点 66- 67°C。
(2) N-ベンジルォキシカルボニル - N- -ブ トキシカルボニルメチル- Tyr(Bzl)-0H 上記(1) で得た N-t-ブ 卜キシカルボニルメチル- Tyr(Bzl)- OMe (2.00 g 、 5.00 mmol)を塩化メチレン (20 ml)に溶解し、 10¾ 炭酸ナ ト リ ウム水溶液 (11 ml)及 びべンジルォキシカルボニルクロリ ド (0.96 ml 、 6.00 mmol)を加え、 室温で 2時 間 30分間激しく攬拌した。 塩化メチレン層を濃縮し、 得られた粗生成物をシ リ カゲ ルカラムクロマ トグラフ ィ ー (ベンゼン :酢酸ェチル = 30:1 (V V) )にて精製して 無色油状物を得た。 このメチルエステルをメ タノール (40 ml)に溶解し、 2N水酸化 ナトリウム水溶液 (20 ml)を加え室温で 7時間攪拌した。 溶媒を減圧留去後、 氷冷 搜拌下 IN HC1 を加えて pH を約 2に調整し、 ジェチルエーテルにて抽出した。 溶 媒を減圧留去し、 無色油状物 2.51 g を得た。
FABマススぺク トル m z : 520 (M+H+ )
(3) N-カルボキシメチル- Tyr- D-Arg- Phe- Me /3Ala-0H
Boc-D-Arg(Z2)-Phe-Me β Ala-OBzl (1.04 g、 1.20 mmol), 上記(2) で得た N- ベンジルォキシカルボニル - N- 1-ブ トキシカルボニルメ チル- Tyr(Bzl)- 0H (624 mg、 1.20 mmol). 1-ヒ ドロキシベンゾト リアゾール (162 mg, 1.20 mmol). 卜 リエ チルァ ミ ン (0.21 ml 、 1.5 mmol) 、 及び卜ェチル- 3 -(3 ジメチルァ ミ ノプロピル) カルボジィ ミ ド塩酸塩 (276 mg、 1.4 mmol) を用い、 例 1 と同様の方法にて標題の 化合物を白色粉末として 187 mg 得た。
FABマススぺク トル m z : 628 (M+H+ )
[a] D ώ3 +32.8。 (c= 0.98、 IN- 酢酸)
Rf b : 0.54 例 9
N-メ タ ンスルホニル -Tyr-D- Arg- Phe-Me SAla-OH - 2酢酸塩
Boc-Tyr(Bzl)-D-Arg(Z2)-Phe- MeSAla-OBzl (2.24 g、 2.00 mmol)を 4N- HC1 酢酸ェチル溶液 (15 ml)に溶解し、 室温で 30分間攬拌した。 反応液にジェチルエー テルを加えて析出した結晶を濾取した。 この結晶をジメチルホルムアミ ド (5 ml) に溶解し、 ジイ ソプロピルェチルァ ミ ン(0.5 ml)を加えた後、 氷冷搜拌下メ タ ン スルホニルクロリ ド (193 l 、 2.5 mmol) を加えた。 室温で 1時間攪拌後、 ジェ チルエーテルを加えて不溶物を濾過して N-メ タ ンスルホニル -Tyr(Bzl)-D- Arg(Z2) -Phe-Me /3Ala-0Bzl 1.13 g を得た。
この保護べプチ ド (0.82 g、 0.75 mmol)を酢酸 (5 ml) に溶解し、 触媒として 5¾ Pd-C (含水率 50¾) 0.7 g を加えて、 24時間接触還元を行って保護基を除去 した。 触媒を濾別後凍結乾燥し、 標題の化合物を白色粉末として 400 mg得た。
FABマススぺク トル m z : 648 (M+H+ )
[ひ] D 23 +20.4。 (c= 1.06、 IN- 酢酸)
Rf b : 0.67 例 10
N -ホル厶ィ ミ ドイル- Tyr- D- Arg-Phe- Me Ala- OH . 2酢酸塩
(1) N-ホルムィ ミ ドイル -N-ベンジルォキシカルボニル -Tyr(Bzl) - OH
H - Tyr(Bzl)- OMe塩酸塩 (6.43 g、 20.0 mmol)及びホルムィ ミ ド酸ィソプロ ピル 塩酸塩 (8.24 g、 60.0 ramol)をジメチルホルムア ミ ド (15 ml)及び塩化メチレン (60 ml)混合液に溶解し、 トリエチルアミ ン (12 ml 、 86 mmol)を加え室温で 7時 間攪拌した。 不溶物を濾別後、 反応液に飽和重曹水 (50 ml)及びベンジルォキシカ ルポニルクロリ ド (4.8 ml、 30.0 mmol)を加え、 室温で 25分間激しく撹拌した。 塩 化メチレン層を濃縮し、 得られた粗生成物をシリ力ゲルカラムクロマ卜グラフィ ー (クロ口ホルム : メタノール = 40:1 (V V))にて精製して無色油状物 3.45 gを得た。 このメチルエステル (1· 03 g、 2.31 mmol)をエタノール (10 ml)及びジメチル ホルムアミ ド (5 ml) 混合液に溶解し、 2N水酸化ナトリゥム水溶液 (2 ml) を加え 室温で 2時間 30分間攪拌した。 溶媒を減圧留去後、 氷冷攪拌下 1N 塩酸を加えて pH を約 2に調整し、 ジェチルエーテルにて抽出した。 溶媒を減圧留去し、 無色油 状物 0.71 g を得た。
FABマススぺク トル m z : 433 (M+H+ )
(2) N-ホルムィ ミ ドイル- Tyr- D- Arg- Phe- Me /3Ala- OH . 2酢酸塩
Boc-D-Arg(Z2)-Phe-Me/3Ala-OBzl (1.47 g、 1.70 mmol). 上記(1) で得た N - ホルムィ ミ ドイル - N-ベンジルォキシカルボニル- Tyr(Bzl)- 0H (650 mg、 1.50 mmol)、 卜ヒ ドロキシベンゾト リアゾール (216 mg、 1.60 mmol), ト リェチルアミ ン (0.24 ml 、 1.8 raraol) 及び卜ェチル -3- (3- ジメチルァミノプロピル) カルボ ジィミ ド塩酸塩 (383 mg、 2.00 mmol)を用い、 例 2と同様の方法にて反応を行った。 得られた粗生成物を 0DSカラムク口マトグラフィ 一 (富士シリシァ DM1020T、 50 g) にチヤ一ジして 3〜15¾ ァセトニ ト リル /0.1N酢酸溶液にて段階的グラジェ ン ト溶出した。 目的物を含む画分を集めて凍結乾燥し、 標題の化合物を白色粉末 として 177 m 得た。
FABマススぺク トル m z : 597 (Μ+Ητ )
[ ] D 23 +34.3° (c= 1.00、 IN- 酢酸)
Rf b : 0.64 例 11
N-ァセトイ ミ ドイル- Tyr- D - Arg- Phe- Me /SAla- OH . 2酢酸塩
H- Tyr- D- Arg- Phe- Me /3 Ala- OH (690 mg、 1.00 mmol)及びァセ トイ ミ ド酸ェチル 塩酸塩 (161 mg、 1.30 mmol)をジメチルホルムアミ ド (2 ml) に溶解し、 ト リェチ ルアミン(0.42 ml. 3.0 mmol) を加え室温で 2日間攪拌した。 反応液にジェチルェ一 テル (100 ml) を加え、 デカンテ一シヨンして溶媒を除去した。 得られた粗生成物 を 0DSカラムクロマ トグラフ ィ一 (富士シ リ シァ DM1020T、 50 g) にチャージして 4〜10¾ ァセ トニ 卜 リル /0.1N酢酸溶液にて段階的グラジヱ ン ト溶出した。 目的物 を含む画分を集めて凍結乾燥し、 標題の化合物を白色粉末として 388 mg 得た。
FABマススぺク トル m z : 611 (M+H+ )
[a] D 23 +23.1。 (c= 1.06、 IN- 酢酸)
Rf b : 0.58 例 12
N-プロ ピオンィ ミ ドイル - Tyr -!)- Arg - Phe-Me /SAla-OH - 2酢酸塩
H-Tyr-D-Arg-Phe- e β Ala-OH (690 mg, 1.00 mmul )及びプロ ピオンィ ミ ド酸ェ チル塩酸塩 (303 rag、 2.20 mmol)及び卜リェチル了 ミ ン (0.56 ml、 4.0 inmol ) を用 い、 例 11と同様に反応を行った。 粗生成物を 0DSカラムクロマ トグラフ ィ ー (富士 シ リ シァ DM1020T、 25 g) にチャージして 0〜10¾ ァセ トニ ト リル /0.1N酢酸溶液 にて段階的グラジュン ト溶出した。 目的物を含む画分を集めて凍結乾燥し、 標題 の化合物を白色粉末として 200 mg 得た。
FABマススぺク トル m z : 625 (M+H十 )
[a] D 23 +21.5° (c= 1.0 、 IN- 酢酸)
Rf b : 0.62 例 13
N-ブチルイ ミ ドイル- Tyr-D- Arg- Phe- Me Ala-OH - 2酢酸塩
H-Tyr-D-Arg-Phe-Me β Ala-OH (510 mg, 0.76 mmol)及びプチルイ ミ ド酸ェチル 塩酸塩 (256 mg. 1.66 mmol)及び卜リェチルァミ ン(0.44 ml、 3.0 mmol) を用い、 例 11と同様に反応を行った。 粗生成物を 0DSカラムクロマ トグラフ ィ ー (富士シ リ シァ DM1020T、 60 g) にチャージして 6〜8¾ァセトニトリル/ 0.1N酢酸溶液にて段 階的グラジェン ト溶出した。 目的物を含む画分を集めて凍結乾燥し、 標題の化合 物を白色粉末として 173 mg 得た。
FABマススぺク トル m z : 639 (M+H+ ) [ ] + 17.0° (c= 1.01、 IN- 酢酸)
Rf b : 0.63 例 14
N-ベンゾィ ミ ドイル- Tyr- D - Arg - Phe- Me /S Ala-OH - 2酢酸塩
H-Tyr-D-Arg-Phe-Me β Ala-OH (690 rag, 1.00 mmol)及びべンゾィ ミ ド酸ェチル 塩酸塩 (378 mg、 2.20 mmol)及びトリエチルァ ミ ン(0.56 ml、 4.0 mmol) を用い、 例 11と同様に反応を行った。 粗生成物を 0DSカラムクロマ卜グラフィー (富士シリ シァ DM1020T、 25 g) にチャージして 0〜14¾ ァセ トニ ト リル./ 0.1N酢酸溶液にて 段階的グラジュン ト溶出した。 目的物を含む画分を集めて凍結乾燥し、 標題の化 合物を白色粉末として 83 mg得た。
FABマススぺク トル m z : 673 (M+H+ )
[a D +17.2。 (c= 1.0 、 IN- 酢酸)
Rf b : 0.66 例 15
N-[H2NHNC(NH)]-Tyr-D-Arg-Phe- Me /3 Ala-OH - 2 酢酸
(DNC-Tyr(t-Bu)-D-Arg (Tos)- Phe- Me β Ala- 0- 1 - Bu
Z- Phe- OH (29.9 g、 100 mmol) 、 Me /Q Ala- 0-t-Bu(16.0 g、 110 mmol) 、 3-ヒ ドロキシ- 4 ォキソ -3,4- ジヒ ドロ- 1,2, 3- ベンゾ 卜 リアジン (17.9 g、 110 mmol) を塩化メ チレン (200 ml) に溶解した。 この溶液を - 10てに冷却後 1- ェチル- 3-(3-ジメチルァ ミ ノプロピル) カルポジイ ミ ド塩酸塩 (21.1 g、 110 mmol) を加 え、 - 10°Cで 1時間、 さらに室温で 20時間攪拌した。 溶媒を減圧留去後、 反応液に 酢酸ェチル (100 ml) を加え、 1N塩酸、 次いで飽和重曹水で洗浄した。 溶媒を減 圧濃縮して得られた油状物をシ リ カゲルカラムク ロマ ト グラフ ィ ー (ベンゼン : 酢酸ェチル =: 10 : 1 (V V) ) にて精製して Z_Phe - Me/SAla O-t-Bu を無色油状物 として 42.6 g 得た。
(2) Z - Phe - Me /3 Ala- O-t-Bu (21.0 g ,47.6 mmol) をメ タノール (200 ml) に溶解 し、 触媒として 5¾ Pd-C (含水率 50¾) 21 gを加えて 4時間接触還元を行って保護 基を除去した。 触媒を濾別後溶媒を減圧留去し、 ジメチルホルムアミ ド (100 ml) に溶解した。 この溶液に Z- D-Arg(Tos)- 0H (20.0 g、 43.2 mmol)および 卜 ヒ ド ロキシベンゾ卜 リ アゾール (6.43 g、 47.6 mmol)を溶解した。 この溶液を -10°Cに 冷却後 1- ェチル -3 -(3 -ジメ チルァ ミ ノ プロ ピル) カルポジイ ミ ド塩酸塩 (9.12 g、 47.6 ramol)を加え、 - 10°Cで 1時間、 さらに室温で 18時間攪拌した。 溶媒を 減圧留去後、 反応液に酢酸ェチル(100 ml)を加え、 1N 塩酸、 次いで飽和重曹水で 洗浄した。 溶媒を減圧濃縮して Z-D- Arg(Tos)- Phe- Me/SAla-ϋ- t-Buを無色油状物と して 31.9 g得た。
(3) Z-D-Arg(Tos)-Phe- Me 3 Ala - 0 - 1- Bu (31.9 g、 41.0 mmol)をメ 夕ノール (200 ml) に溶解し、 触媒として 5¾ Pd-C (含水率 50V) 32 gを加えて 4時間接触還元 を行って保護基を除去した。 触媒を濾別後溶媒を減圧留去し、 ジメ チルホルムァ ミ ド (100 ml) に溶解した。 この溶液に Z- Tyr(t- Bu)- 0H (13.7 g 、 36.9 mmol) および 1- ヒ ドロキシベンゾ ト リアゾール (5.54 g、 41.0 ol)を溶解した。 この 溶液を -10°Cに冷却後 卜 ェチル -3 -(3 -ジメチルァ ミ ノプロ ピル) カルポジイ ミ ド 塩酸塩 (7.86 g、 41.0 mmol)を加え、 - 10°Cで 1時間、 さらに室温で 20時間攪拌し た。 溶媒を減圧留去後、 反応液に酢酸ェチル (100 ml) を加え、 1N 塩酸、 次いで 飽和重曹水で洗浄した。 溶媒を減圧濃縮して得られた油状物をシリカゲルカラム クロマ トグラフ ィ 一 ( クロ口ホルム : メ タノール = 40 : 1 (V V) ) にて精製し、 Z-Tyr(t-Bu)-D-Arg(Tos)-Phe- Me/3Ala- O-t-Bu を白色粉末として 27.8 g得た。
[ ] D 23 +18.8; (c - 1.01 、 ェタ ノール)
(4) Z-Tyr(t - Bu)_D - Arg(Tos)- Phe- Me ^Ala- 0十 Bu (11.6 g 、 12.0 tnmol)をエタ ノール(60 ml) に溶解し、 触媒として 5 % Pd-C (含水率 50 ¾ ) 6 g を加えて 3 時間 30分接触還元を行って Z基を除去した。 触媒を濾別後溶媒を減圧留去し、 さら にベンゼン (50 ml)を加えて減圧濃縮を 2回繰り返して残留するエタノールを除去 した。 得られた無色の残渣を乾燥テトラヒ ドロフラン (100 ml) に溶解し、 室温攪 拌下臭化シアン (1.69 g、 14.4 mmol)/塩化メチレン (15 ml)溶液を加え、 さらに ト リェチルア ミ ン(2.02 ral、 14.4 mmol)を加えた。 室温で 40分攪拌後、 析出した不 溶物を濾過した。 濾液を減圧濃縮し、 得られた油状物をシ リ カゲルカラムクロマ 卜グラフィー (クロロホルム : メ 夕ノール = 40 : 1 (v V) ) にて精製して無色無 定型固体 5.70 g を得た。
FABマススぺク トル m z : 862(M + H+ )
(5) NC-Tyr(t-Bu)-D-Arg(Tos)-Phe-Me β Ala-O-t-Bu (1.00 g、 1.16 mmol)をエタノー ル (5 ml) に溶解し、 ヒ ドラジン塩酸塩 (158 mg、 2.3 mmol) を加え、 さらに ト リ ェチルアミ ン(0.42 ml、 3.0 mmol) を加えた。 室温で 3時間攪拌後、 溶媒を減圧留 去し、 さらにベンゼン (50 ml)を加えて減圧濃縮を 2回繰り返して残留するェタノ一 ルを除去した。 得られた残渣を 4N HC1 ジォキサン溶液 (10 ml)に溶解し、 室温で 3時間攪拌後、 溶媒を減圧留去した。 残さにジェチルエーテルを加えて析出した 結晶を濾取した。
この結晶を無水フッ素化水素 (10 ml)およびァニツール (1 ml) に溶解し、 氷 冷下 1時間攪拌した。 反応液を減圧濃縮して残渣を酢酸ェチル、 次いでジェチルエー テルにて洗浄後、 水 (100 ml) に溶解してイオン交換樹脂 (ダイヤイオン PA- 308 酢酸塩、 100 ml) にチャージして水溶出した。 目的物を含む画分を集め ¾媒を減 圧濃縮し、 得られた粗成生物の酢酸塩を 0DSカラムクロマ トグラフィー (富士シリ シァ DM 1020T, 25 g)にチャージして 2〜10 ¾ァセ トニ卜 リル 0.1N 酢酸溶液にて 段階的グラジュン ト溶出した。 目的物を含む画分を集めて凍結乾燥し、 標題の化 合物を白色粉末として 48 mg得た。
FABマススぺク トル m z : 628(M+H+ )
[ひ] D 20 +25.28 (c = 0.720, IN酢酸)
Rf a : 0.25
Rf b : 0.65 例 16
N- [HOHNC(NH)] -Tyr-D-Arg-Phe-Me β Ala-OH · 2 酢酸
NC-Tvr(t-Bu)-D-Arg(Tos)-Phe-Me/SAla-0-t-Bu (1.00 g、 1.16 mmol)およびヒ ド 口キシルアミ ン塩酸塩 (347 mg、 5.0 mmol) を用い、 例 と同様の方法にて標題の 化合物を白色粉末として 288 mg 得た。
FABマススぺク トル m z : 629(M+H+ )
[a] D 20 +20.73 (c = 0.965, IN酢酸) Rf 0.38
Rf 0.69 例 17
N-(2- ィ ミ ダゾリル)- Tyr- D- Arg - Phe- Me/3Ala - OH · 1 酢酸
H-Tyr-D-Arg-Phe-Me β Ala-OH (400 mg、 0.58 mmol)、 2 メチルチオ- 2- ィ ミダゾ リ ンヨウ化水素酸塩 (354 mg、 1.45 mmol)およびト リエチルアミ ン(0.28 ml, 2. 0 mmol) をジメチルホルムアミ ド (20 ml)に溶解し、 60 てで 24 時間搜拌した。 反応液にジェチルエーテル (100 ml) を加え、 デカンテ一シ ヨ ンして溶媒を除去し た。 得られた油状物を 0DSカラムクロマ 卜グラフィ一 (富士シリ シ Ύ DM 1020T 、 50 g) にチャージして 3〜13 ¾ァセトニトリル /0.1 N 酢酸溶液にて段階的グラジ ェン 卜溶出した。 目的物を含む画分を集めて凍結乾燥し、 標題の化合物を白色粉 末として 14 mg得た。
FABマススぺク トル m z : 639(M+H )
[a] D 20 +11.14 (c = 0.700, IN酢酸)
Rf a : 0.25
Rf b : 0.65 例 18
N- [2- (4, 6-ジメチル) ピリ ミ ジル] -Tyr-D-Arg-Phe- He /3 Ala-OH
(1) Boc - Phe- OHと TosOH · Me /3 Ala-OBzlを EDC-HOBt 法により縮合し、 Boc-P e- Me SAla-OBzlを得て、 Boc- Phe-Me Ala- OBzlより 4N HCi—酢酸ェチルエステルを用 いて Boc基を脱離後、 Boc- D- Arg(Zo)- 0Hと EDC-HOBt法により縮合して、 Boc- D- Arg (Z2)- Phe-Me/3Ala- OBzlと した。 次いで、 Boc- D-Arg(Z2)- Phe- Me /S Ala- OBzlより 4N HC1—酢酸ェチルエステルを用いて Boc基を脱離後、 Boc- Tyr(Bzl)-0H と EDC-HOBt 法により縮合して、 保護べプチド : Boc- Tyr(Bzl)- D- Arg(Z2)- Phe -Me^SAla-OBzl を得た。
Boc- Tyr(Bzl)- D- Arg(Z9)- Phe- Me^SAla-OBzl (3.32 g、 3.00 mmol)を 4N HC1 酢酸ェチル溶液 (10 ml)に溶解し、 室温で 40分攪拌した。 反応液にジェチェルエー テルを加えて析出した結晶を濾取した。 この結晶をジメチルホルムアミ ド (10 ml) に溶解し、 氷冷攪拌下トリエチルァミ ン(1, 68 ml、 12 mmol), Ν, Ν'- ビス t-ブトキ シカルボ二ルチオ尿素 (229 mg、 3.00 mmol)および塩化銀(1) (896 mg 、 3.3 mmol) を加え、 室温で 20分攪拌した。 反応液に酢酸ェチル (100 ml) を加え、 析出した 不溶物を濾過した。 濾液を水洗後、 減圧濃縮して得られた油状物をシリカゲル力 ラムクロマ トグラフィー (クロ口ホルム : メタノール =40 : l(v V) ) にて精製し て Boc- HNC-(N- Boc)-Tyr(Bzl)- D- Arg(Z2)- Phe- Me /3 Ala-OBzlの無色無定型固体 2. 54 g を得た。
(2) 上記(1) で得た Boc- HNC(N- Boc)- Tyr(Bzl)- D- Arg(Z2)-Phe- Me/3Ala-0Bzl (1. 25 g、 1.00 mmol)を 4N HCl 酢酸ェチル溶液 (10 ml)に溶解し、 室温で 2時間 30 分攪拌した。 反応液にジェチルエーテルを加え、 析出した結晶を濾取した。 この 結晶をジメチルホルムアミ ド (10 ml)に溶解し、 氷冷攪拌下卜 リエチルアミ ン (0. 2 ml、 1.4 mmol ) 、 2, 4-ペンタンジオン(1.05 ml、 10.0 mmol)および 1¾ 炭酸ナ 卜 リウム (6 ml) を加え、 室温で 10日間攪拌した。 反応液に水 (40 ml)を加え、 析出 した固体を濾取した。 得られた固体をジリカゲルカラムクロマ トグラフィー (ク ロロホルム : メ タノール二 100 : 1 (V V) ) にて精製して 2 -(4, 6-ジメチル) ピリ ミ ジル— Tyr(Bzl)- D- Arg(Z2)-Phe- Me /3 Ala - OBzlを無色無定型固体として 0.55 g 得た。
(3) 上記(2) で得られた化合物 477 mg (0.43 mmol) をメ タノール (20 ml)に溶解 し、 触媒として 5¾ Pd-C (含水率 50¾) 0.3 g を加えて 6時間接触還元した。 触媒 を濾別後溶媒を減圧留去し、 水 (50 ml)に溶解して凍結乾燥し、 標題の化合物を白 色粉末として 259 mg得た。
FABマススぺク トル m z : 663(M+H+ )
[ a ] D 20 +11.84 (c = 0.999, IN酢酸)
Rf a : 0.58
Rf b : 0.73 試験例
本発明のぺプチド誘導体の鎮痛効果を圧刺激法にて以下のように評価した。 マ ウスの尾根部に 10 mniHg 秒の割合で圧刺激を加え、 もかき、 刺激部位への嚙みつ きなどの行動を示す圧力を測定し、 これを疼痛反応閾値とした。 実験には予め 40 〜50 mmHg の圧力に反応するマウスを用いた。 また最大刺激圧は 100 mmHg とした。 鎮痛効果は次式:
Ρΐ 一 Ρο
% of MPE = x 100
Pc ― Po
(式中、 Poは薬物処理前の疼痛反応閾値、 Ptは薬物処理 t分後の疼痛反応閾値、 Pc (ま最大审 IJ激圧である) に ¾έい、 ercent of maximum possible effect (% of MPE) として算出した。 用量反応曲線から 50 % の ¾ ofMPE を与える薬物投与量を ED5() 値として求め、 薬物の鎮痛効力を比較した。
例 1 1の化合物について皮下投与 (背部皮下) 及び経口投与により試験を行った ところ、 ED Q (mg kg) はそれぞれ 0. 093 mg kg及び 2. 65 mg kg であった。 対照と して用いたモルヒネの ED^ ng kg) は皮下投与 (背部皮下) 及び経口投与の場合に それぞれ 4. 6 rag kg及び 29. 6 mg kg であった。 産業上の利用可能性
本発明のぺプチド誘導体は癌疼痛等の治療に使用することができるので有用で ある。

Claims

l . 下記の式 :
Y- L-Tyr- Q- NRし CH (R2) - CO- X
〔式中、
R1は水素原子または C^— 6アルキル基を示し ;
R2は置換基を有することのあるベンジル基を示し ;
Q は D- Arg または L- Arg を示し ;
Y は L - Tyr の N-末端アミ ノ基の 2個の水素原子またはこれ (ら) が置換された置換 の
基を示し、 該置換基は ( 2個の場合はそれぞれ独立に) 以下の群 :
アミ ノ基を有することのある (:卜6アルキル基、
カルボキシル基を有することのある (:卜 6アルキル基、
Ύミ ノ基を有することのある C, 6アルキルカルボニル基、
アルキル基を有することのあるスルホニル基、
置換基を有することのあるピリ ミ ジル基、
置換基を有することのあるイ ミ ダゾリニル基、 及び
下記の式で示される基 :
HN=C(R3 ) -
(式中、 1?ϋは水素原子、 6アルキル基、 置換基を有することのあるフヱ二ル基; 置換基を有することのあるヒ ドロキシァ ミ ノ基、 又は置換基を有することのある ヒ ドラジノ基を示す)
から選ばれる置換基であり ;
X は OR4 (式中、 R4は水素原子または アルキル基を示す) 、
N (R5) (R6) (式中、 R5は水素原子または —6アルキル基を示し、 Ruは — 6ヒ ドロキシ 了ルキル基またはスルホン酸置換 (^_6アルキル基を示し、 あるいは R5及び R6がー緒 になってそれらが置換する窒素原子と共に 5 または 6 員含窒素飽和複素環を示す) 、 又は
NR ' -C(R°) (R9) (R10) (式中、 R7は水素原子、 _6アルキル基、 またはァリール置換 _6アルキル基を示し、 R8は水素原子、 カルボキシル基、 アルコキシカルボ二 ル基、 置換若しくは無置換力ルバモイル基、 カルボキシ ー6アルキル基、 置換若し くは無置換力ルバモイル アルキル基、 または アルコキシ力ルポニル (:卜 6 アルキル基を示し、 RJは水素原子、 —。アルキル基、 アミ ノ アルキル基、 アミ ジノ _6アルキル基、 グァニジノ 6アルキル基、 ヒ ドロキン アルキル基、 力 ルポキシ (^_6アルキル基、 又は置換若しくは無置換力ルバモイル _6アルキル基を 示し、 あるいは R7及び Raがー緒になって R 'が置換する窒素原子とともに 5 または 6 員カルボキシ置換含窒素飽和複素環を示し、 R1 () は水素原子または (^ アルキル 基を示す) を示す〕
で表される化合物およびその塩。
2 . Y が水素原子、 アミノ基またはカルボキシル基を有することのある —6アルキ ル基、 ァミ ノ基を有する アルキルカルボニル基; アルキルスルホニル基、 Ci—6アルキル基を有する 2-ピリ ミジル基、 2-ィ ミダゾリン- 2- ィル基、 及び下記の 式で示される基:
HN-CCR3)-
(式中、 R3は水素原子、 アルキル基、 フヱニル基、 ヒ ドロキシアミ ノ基、 又は ヒ ドラジノ基を示す) からなる群から選ばれる請求の範囲第 1項に記載の化合物 およびその塩。
3 . Y のうち 1個の置換基が水素原子または C} アルキル基である請求の範囲第 1 項又は第 2項に記載の化合物およびその塩。
4 . ^がメチル基である請求の範囲第 1項ないし第 3項のいずれか 1項に記載の化 合物およびその塩。
5 . R1が水素原子である請求の範囲第 1項ないし第 4項のいずれか 1項に記載の化 合物およびその塩。
6 . R7かメチルまたはェチルである請求の範囲第 1項ないし第 5項のいずれか 1項 に化合物およびその塩。
7 . R8がカルボキシル基または力ルバモイル基である請求の範囲第 1項ないし第 6 項のいずれか 1項に記載の化合物およびその塩。
8 . R8がカルボキンメチル基または力ルバモイルメチル基である請求の範囲第 1項 ないし第 7項のいずれか 1項に記載の化合物およびその塩。
9 . Q が!)- Arg である請求の範囲第 1項ないし第 8項のいずれか 1項に記載の化合 物およびその塩。
10. R1が水素原子であり、 R7が水素原子であり、 R8がカルボキシメチル基であり、 R3が水素原子である請求の範囲第 9項に記載の化合物およびその塩。
11. R1か水素原子であり、 R 'が水素原子であり、 R8が力ルバモイルメチル基であり、 R9が水素原子である請求の範囲第 9項に記載の化合物およびその塩。
12. R1が水素原子であり、 R7がメチル基であり、 R8がカルボキシメチル基であり、 R。が水素原子である請求の範囲第 9項に記載の化合物およびその塩。
13. R 1が水素原子であり、 R7がェチル基であり、 R8がカルボキシメチル基であり、 Raが水素原子である請求の範囲第 9項に記載の化合物およびその塩。
14. R2が無置換べンジル基である請求の範囲第 1項ないし第 13項のいずれか 1項に 記載の化合物およびその塩。
15. HN-C(CHo)-L-Tyr-D-Arg-L-Phe-N (CH3) -CH -CH2-C00H で表される請求の範囲第 1項に記載の化合物及びその塩。
16. 塩酸塩又は酢酸塩である請求の範囲第 1項ないし第 15項のいずれか 1項に記載 の化合物の塩。
17. 請求の範囲第 1項ないし第 15項のいずれか 1項に記載の化合物及びその塩から なる医薬。
18. 請求の範囲第 1項ないし第 15項のいずれか 1項に記載の化合物又はその塩を有 効成分として含む鎮痛性の医薬組成物。
19. 請求の範囲第 18項に記載の医薬組成物の製造のための請求の範囲第 1項ないし 第 15項のいずれか 1項に記載の化合物又はその塩の使用。
20. 請求の範囲第 1項ないし第 15項のいずれか 1項に記載の化合物又はその塩の有 効量を哺乳類動物に投与する工程を含む疼痛の予防及び/又は治療方法。
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