CN1200736A - 肽衍生物 - Google Patents

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温井江里子
本乡和也
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竹岛智子
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Abstract

用下式表示的化合物及其盐:Y－L－Tyr－Q－NR1－CH(R2)－CO－X[式中,R1为氢原子或C1－6烷基;R2为有取代基的苄基;Q为D－或L－Arg;Y为L－Tyr的N末端氨基的2个氢原子或它(它们)被取代的取代基(该取代基为有氨基或羧基的C1－6烷基等);X为N－甲基－β－丙氨酸等]。因其有镇痛作用,可用作癌症疼痛的治疗。

Description

肽衍生物
技术领域
本发明涉及通过对类鸦片受体等的作用发挥镇痛等药理作用的肽衍生物。
背景技术
结合吗啡等类鸦片的类鸦片受体，已证明在70年代前半期已经存在。现在，类鸦片受体可大致划分为μ、δ及κ三种。吗啡主要作为μ受体的激动剂作用，发现有镇痛、抑制肠道运动和抑制呼吸等药理效果。
1975年以后，相继发现了结合在类鸦片受体上的内生性吗啡样物质。至今，这些物质全部是肽，统称为类鸦片肽。类鸦片肽的药理效果基本上与吗啡相同，由于是原来存在于生物体内的物质，因此，可以预测其所生成的药品较吗啡有更好的安全性。然而，天然的类鸦片肽在体内动态行为有问题，还未作为药品使用。
在80年代，含有D-体丙氨酸的山道年吗啡(デルモルフィン)从青蛙的皮肤分离出来。山道年吗啡的镇痛效果，已判明投与脑内时比吗啡强约1000倍，其在体内比较稳定。以后，完成了含D-体氨基酸的合成类鸦片肽。特别是κ受体选择性高的类鸦片肽的合成，人们期待它作为非麻药性的镇痛药，也进行了临床试验，从其效果、起因于κ激动剂的副作用以及有利性方面考虑，作为医药品的可能性还有不少问题。
并且，利用这些合成的类鸦片肽作口服剂有困难，尚不能取代例如，近年来用作治疗癌症疼痛的广泛使用的硫酸吗啡缓释性口服剂MS康汀(コンチン)。另一方面，MS康汀的每日口服量增加到以克计，其服用时困难。另外，考虑到因组胺的游离作用而发生搔痒等副作用而必须中止服用。因此，希望有较吗啡更安全以及药效更好的代用药。
发明的公开
本发明人为了解决上述课题，精心探讨具有优良的镇痛效果以及口服吸收性能好的类鸦片肽。结果是，以L-Tyr-(L或D)-Arg-Phe为基本骨架，在N末端上有脒基的低聚肽衍生物及其盐发现保持这样的特性，关于这类发明已有专利申请(平成6年专利申请第40989号以及平成7年专利申请第49894号)。本发明人继续进一步的研究结果是，改变N末端的脒基部分得到的上述低聚肽衍生物发现有理想的特性，完成本发明。
即，本发明的肽衍生物可用下式I表示：
Y-L-Tyr-Q-NR1-CH(CH2C6H5)-CO-X。
本发明提供，由上述化合物或其盐构成的医药，以及含该化合物或其盐作有效成分的镇痛性的医药组合物。另外，本发明还提供，该化合物或其盐在制造上述医药组合物中的应用，以及包括将该化合物及其盐的有效量投给哺乳动物的步骤在内的疼痛预防及/或治疗方法。实施本发明的最佳形态
当说明上述式中的取代基时，Q表示D-Arg(D-精氨酸残基)或L-Arg(L-精氨酸残基)，R1表示氢原子或C1-6(碳原子数1～6个的)烷基。其中，Q为D-Arg，R1为氢原子的化合物是理想的。在本说明书中，所谓C1-6烷基，系指直链烷基、支链烷基、环烷基，或环烷基取代的直链或支链烷基的任何一种。作为C1-6烷基，适用的有，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、环丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、环丙甲基、或者环丁基等。
R2表示有取代基的苄基。当苄基有取代基时，可在任意位置上有1～2个以上的取代基。在有2个以上取代基时，它们可以相同，也可以不同。作为苯环上的取代基，可以采用，例如C1-6烷基、有取代基的氨基、有取代基的胍基、羟基等。其中，理想的是未取代的苄基。
Y表示L-Tyr的N末端氨基的2个氢原子，或者表示该2个氢原子中的1个或2个氢原子被取代的取代基。该取代基从以下的一组中选取：具有氨基的C1-6烷基、具有羧基的C1-6烷基、具有氨基的C1-6烷基羰基、具有烷基的磺酰基、有取代基的嘧啶基、具取代基的咪唑啉基、以及用下式表示的基团：NH＝C(R3)-(式中R3是氢原子、C1-6烷基、有取代基的苯基；有取代基的羟胺基或有取代基的肼基)。2个氢原子被上述取代基取代的场合，这些取代基可分别独立地从上述一组中选取，既可以相同也可以相异。
Y表示C1-6烷基时，合适的是甲基、乙基、异丙基、环丙甲基等。Y表示C1-6烷基时，作为具有氨基或羧基的例子可以举出H2N-CH2-，H2N-(CH2)2-，HOOC-CH2-，HOOC-(CH2)2-等。C1-6烷基羰基作为其具有氨基的例子，可以举出，例如，H2N-CH2-CO-，H2N-(CH2)2-CO-等。作为具有C1-6烷基的磺酰基的例子，可以举出例如CH3SO2-等。
作为Y表示嘧啶基及咪唑啉基时，最好分别采用2-嘧啶基以及2-咪唑啉-2-基等。嘧啶基或咪唑啉基，既可以是取代的，也可用未取代的。在嘧啶基或咪唑啉基有取代基的场合，作为取代基，可以采用，例如C1-6烷基等，在这些基中有2个以上取代基时，该取代基可以相同，也可以不同。作为取代的嘧啶基，可以举出例如4，6-二甲基2-嘧啶基等，作为取代的咪唑啉基可以举出4-甲基-2-咪唑啉-2-基等。
R3是氢原子、C1-6烷基、有取代基的苯基；有取代基的羟胺基，或有取代基的肼基。作为R3表示的C1-6烷基，合适的有甲基、乙基或正丙基等，特别理想的是甲基。苯基、羟胺基(HO-NH-)或肼基(H2N-NH-)最好使用未取代的，但是，也可以用由例如1个或2个以上的C1-6烷基取代的。
又，Y表示2个氢原子，或者Y中的1个是氢原子，而另1个是上述取代基，这是理想的。另外，Y的2个均为上述取代基，例如是相同的或不同的C1-6烷基时也是理想的。本发明最好的状态是Y表示的2个取代基同是甲基的化合物。
X表示-OR4、-N(R5)(R6)或-NR7-C(R8)(R9)(R10)中的任何一种。R4表示氢原子或C1-6烷基，R5表示氢原子或C1-6烷基。R6表示C1-6羟烷基或磺酸取代的C1-6烷基。羟基或磺酸基可在烷基的任何位置取代，但未端取代的烷基是理想的。R5及R6一同，与其取代的氮原子一起，表示5元或6元饱和含氮饱和杂环基，该杂环也可含有2个以上的氮原子。例如，作为-N(R5)(R6)可以采用1-哌嗪基、1-吡咯烷基或1-哌啶基等。
另外，X用NR7-C(R8)(R9)(R10)表示时，R7表示氢原子、C1-6烷基，或苯基等芳基取代的C1-6烷基(芳烷基)。作为芳烷基，例如可以举出苄基等。R8表示氢原子、羧基、甲氧羰基、乙氧羰基等C1-6烷氧基取代的羰基；取代或未取代的氨基甲酰基；羧基取代的C1-6烷基；取代的或未取代的氨基甲酰基取代的C1-6烷基；或者具有C1-6烷氧基取代的羰基的C1-6烷基。
R9表示氢原子；C1-6烷基；氨基C1-6烷基；脒基取代的C1-6烷基；胍基取代的C1-6烷基、羟基C1-6烷基；羧基取代的C1-6烷基、或者，取代的或未取代的氨基甲酰基取代的C1-6烷基。或者，R7及R9一同，与R7取代的氮原子一起，形成在环上有羧基的5或6元含氮饱和杂环。作为这样的杂环，可以举出2-羧基-1-吡咯烷基(-Pro-OH)及3-羧基-1-哌啶基。其中，例如，R8是羧甲基或氨基甲酰甲基，R9是氢原子的组合是理想的。R10表示氢原子或C1-6烷基。在上述各种取代基中，烷基、烷氧基或烷酰基是直链或支链的任何一种均可。
上述式I表示的本发明的化合物，除了来自L-酪氨酸残基及Q表示的D-Arg或L-Arg残基的2个不对称碳原子外，还有来自结合在Q上苯基丙氨酸残基的不对称碳原子、R8及R9取代的不对称碳原子(式中R8及R9为相同取代基时除外)以及上述各取代基和Y上任意存在的1个以上的不对称碳原子。除了来自L-Tyr、D-Arg及L-Arg残基以外的不对称碳原子，还可以进行R-或S-的任何一种排列。另外，在本发明式I表示的化合物中，还包含所有的用上式表示的任意的具光学活性的化合物或外消旋体，非对映异构物或其任意的混合物。
另外，在本发明的化合物中，包括盐酸盐、醋酸盐或对甲苯基磺酸等的酸加成盐，以及铵盐或有机胺盐等碱加成盐。进而，除用上述通式表示的化合物外，还包含上述化合物的二聚体或多聚体化合物，以及这些化合物的C-末端和N-末端结合的环状化合物。
本发明的肽具有超越吗啡的镇痛效果。伴随着镇痛作用的组胺游离作用及心律数的下降作用，与吗啡比，相对较弱，因为与吗啡的交叉抗药性能的程度低，可以预测其适于癌的疼痛治疗。因此，提供了由本发明的上述化合物构成的医药。作为给药途径可以举出静脉注射、皮下注射和口服等，但还期待含鼻腔吸收的粘膜吸收制剂以及经皮吸收制剂的使用。给药量未作特别限制，例如，在皮下注射时，每次给药量0.1～10mg，而在口服时，每次给药量为1～100mg，每天给药2～3次就行。
本发明的肽衍生物，可以采用肽合成时通用的固相法及液相法。氨基等的保护基团以及缩合反应的缩合剂等，已知有许多种，在以下的实施例中作为参考，另外，可以参照，例如铃木绂一编《蛋白质工学-基础和应用》丸善(株)(1992)以及该书引用的文献：M.Bondanszky，et al.，“Peptide Synthesis”，John Wiley&Sons，N.Y.，1996；以及J.M.Stewart and D.J.Young，“Solid Phase PeptideSynthesis”，W.H.Freeman and Co.，San Francisco，1969等，加以适当选择使用。采用固相法时，使用市售的各种肽合成装置，例如帕金·埃尔马·日本制造的(Perkin Elmer Japan，公司原名为Applied Biosystems)型号为430A的装置是方便的。合成时使用的树脂和试剂等很容易从市场购得，其具体例子示于实施例中。
实施例
通过下面的实施例来更具体地说明本发明，但本发明又不被这些实施例所限制。参照本实施例，或者通过改变、变更本实施例的方法，或者通过适当选择起始原料或反应试剂，可以容易地制造出通式I中包含的本发明所希望的肽衍生物。另外，在实施例中，氨基酸基团的含义与通常所用的同样。说到D-体和L-体存在的氨基酸的场合，特别是在未表示为D-的情况下，该氨基酸意义是L-氨基酸。另外，下面使用的简写，未作特别说明时均用同样的简写：
Z：苄氧羰基
OTce：三氯乙酯基
Boc：叔丁氧基羰基
WSCI：1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)-碳化二亚胺
TosOH：甲苯磺酸
OBzl：苄氧基
MeβAla或者βMeAla：N-甲基-β-丙氨酸
H-βAla-ol：NH2CH2CH2CH2OH
Fmoc：9-芴基甲氧羰基
Pmc：2，2，5，7，8-五甲基色满-6-磺酰
t-Bu：叔丁基
NMP：N-甲基吡咯烷酮
DMF：二甲基甲酰胺
DMSO：二甲基亚砜
TFA：三氟醋酸
TEA：三乙胺
DCM：二氯甲烷
DMAP：N，N-二甲胺基吡啶
DIPEA：N，N-二异丙基乙胺
DIPCI：N，N-二异丙基碳化二亚胺
HOBt：1-羟基苯并三唑
EDC：1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基-碳化二亚胺
HBTU：2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓·
     六氟磷酸酯
PyBrop：溴-三(吡咯烷基)鏻·六氟磷酸酯
Alko树脂：对烷氧基苄基醇树脂[4-羟甲基苯氧甲基共聚苯乙烯
          1％二乙烯基苯树脂，J.Am.Chem.Soc.，95，1328
          (1974)]，渡边化学工业。
Fmoc-NH-SAL树脂：4-(2′，4′-二甲氧苯基-9-芴基甲氧羰基
                 氨甲基)苯氧基树脂：渡边化学工业
另外，在下面的实施例中，薄层色谱法条件如下所示。
Rfa：正丁醇∶醋酸∶蒸馏水＝4∶1∶5混合，用其上层作为展开溶剂。
Rfb：正丁醇∶醋酸∶蒸馏水∶吡啶＝15∶3∶10∶12，以其作为展开溶剂。
薄层板：硅胶(Merck F254)
(A)原料化合物的制造
(1)H-Tyr-D-Arg-Phe-β-Ala-OH
使用Applied Biosystems(ABI)公司430A型肽合成装置，用固相法(Original Autoprogram for the Fmoc/NMP method)按下述进行合成。Fmoc-β-Ala-Alko树脂0.25mmol/675mg用NMP洗涤1次，用含20％哌啶的NMP处理4分钟，再同样地用含20％哌啶的NMP处理16分钟。用NMP洗涤5次后，与Fmoc-Phe-OH反应61分钟。然后，用NMP洗涤4次，从第4次洗涤液回收树脂，未反应的氨基与醋酐反应。用120分钟进行以上循环1次；同样的操作进行第2次循环，但用Fmoc-D-Arg(Pmc)-OH代替Fmoc-Phe-OH；用Fmoc-Tyr(t-Bu)-OH重复第3次循环。侧链保护基团是，用Pmc保护D-Arg，用t-Bu保护Tyr。
将上述操作所得到的树脂500mg，于室温下在苯酚(结晶)0.75g、乙二硫醇0.25ml、茴香硫醚0.51ml、水0.50ml以及TFA10.0ml的混合溶液中搅拌处理3小时，从树脂分离出肽，同时去除保护基。然后，用3μm过滤器(ADVANTEC-Polyflon过滤器)过滤，加冷乙醚200ml于滤液，所生成的沉淀用3μm过滤器(ADVANTEC-Polyflon过滤器)过滤。过滤器上的沉淀溶于2N醋酸10～20ml中，冷冻干燥，得到式为H-Tyr-D-Arg-Phe-β-Ala-OH的粗品肽。
(2)H-Tyr-D-Arg-Phe-NHCH2CH2CONH2
除在合成开始时使用Fmoc-NH-SAL树脂0.25mmol/385mg外，与上述(1)同样操作制得。
(3)H-Tyr-D-Arg-Phe-β-MeAla-OH
按照Fmoc/NMP法，用固相法按下述进行合成。过滤时采用玻璃过滤器。Alko树脂0.500g用DMF 6ml膨润后，往树脂添加Fmoc-N-甲基-β-丙氨酸(Fmoc-β-MeAla-OH)0.228g及吡啶0.093ml，振荡1分钟，然后，添加氯化2，6-二氯苯酰0.147g，振荡24小时。生成的Fmoc-β-MeAla-Alko树脂用6ml的DMF洗涤3次，然后用6ml甲醇洗涤3次，再用6ml的DCM洗涤3次，未反应的羟甲基，在DCM 6ml中加入氯化苯甲酰0.0891ml及吡啶0.0847ml，以此振荡1小时，使其苯甲酰化。再依次把氨基酸树脂用6ml的DCM洗涤3次、6ml的DMF洗涤3次、6ml甲醇洗涤3次，于氢氧化钾干燥器中真空干燥。
Fmoc-β-MeAla-Alko树脂用12ml的DMF处理3次，然后用含20％哌啶的DMF 12ml处理3次，再用12ml的DMF处理6次，除去Fmoc基，添加Fmoc-Phe-OH 0.262g、PyBrop(渡边化学工业)0.315g、NMP 6ml和DIPEA 0.273ml，振荡24小时，使生成Fmoc-Phe-β-MeAla-Alko树脂。过滤，用6ml的NMP洗涤后，未反应的氨基，在含有1-乙酰基咪唑0.248g、DIPEA 0.0784ml的DMF 6ml中处理1小时，进行保护，然后，把得到的树脂用6ml的NMP洗涤。
用与上述同样的操作，从Fmoc-Phe-β-MeAla-Alko树脂中除去Fmoc基。添加Fmoc-D-Arg(Pmc)-OH 0.557g、HOBt 0.121g、HBTU0.299g、DIPEA 0.274ml，振荡1小时，使生成Fmoc-D-Arg(Pmc)-Phe-β-MeAla-Alko树脂。然后与前项同样过滤、洗净后，保护未反应的氨基。
用与上述同样的操作，从Fmoc-D-Arg(Pmc)-Phe-β-MeAla-Alko树脂除去Fmoc基，添加Fmoc-Tyr(t-Bu)-OH 0.310g、HOBt 0.103g、HBTU 0.256g和DIPEA 0.235ml，振荡1小时，使生成Fmoc-Tyr(t-Bu)-D-Arg(Pmc)-Phe-β-MeAla-Alko树脂。与前项同样过滤、洗净后，把未反应的氨基保护。采用上述(1)同样的方法，从树脂分离出肽的同时，除去保护基。
(4)H-Tyr-D-Arg-Phe-β-EtAla-OH
采用Fmoc/NMP法的固相法，用以下方法合成。用玻璃过滤器过滤。Alko树脂1.000g用12ml的NMP膨润后，添加Fmoc-N-乙基-β-丙氨酸(Fmoc-β-EtAla-OH)0.475g以及DMAP 0.017g，振荡1分钟，然后，添加DIPCI 0.177g，振荡24小时。生成的Fmoc-β-EtAla-Alko树脂用NMP 12ml洗涤3次、接着用甲醇12ml洗3次、再用DCM 12ml洗3次，未反应的羟甲基于12ml的DCM中，添加氯化苯甲酰0.178ml及吡啶0.170ml，振荡1小时进行苯甲酰化。再依次将氨基酸树脂用12mlDCM洗3次、12ml的DMF洗3次、12ml甲醇洗3次，于氢氧化钾干燥器中真空干燥。
Fmoc-β-EtAla-Alko树脂用20ml的DMF处理3次，然后用含20％哌啶的DMF 12ml处理3次，再用12ml的DMF处理6次，除去Fmoc基，添加Fmoc-Phe-OH 0.387g、PyBrop 0.466g、NMP 12ml以及DIPEA 0.523ml，振荡24小时，使生成Fmoc-Phe-β-EtAla-Alko树脂。过滤后，用12ml的NMP洗涤，未反应的氨基在含有1-乙酰咪唑0.551g、DIPEA 0.174ml的12ml的DMF中处理1小时，将其保护。然后，将所得到的树脂再次用12ml的NMP洗净。
用与上述同样的操作，从Fmoc-Phe-β-EtAla-Alko树脂中除去Fmoc基。往树脂中添加Fmoc-D-Arg(Pmc)-OH 0.707g、HOBt 0.153g、HBTU 0.379g、DIPEA 0.348ml，振荡1小时，使生成Fmoc-D-Arg(Pmc)-Phe-β-EtAla-Alko树脂。与前项同样过滤、洗净后，保护未反应的氨基。
按上述同样操作，从Fmoc-D-Arg(Pmc)-Phe-β-EtAla-Alko树脂除去Fmoc基，添加Fmoc-Tyr(t-Bu)-OH 0.460g、HOBt 0.153g、HBTU0.399g和DIPEA 0.348ml，振荡1小时，使之生成Fmoc-Tyr(t-Bu)-D-Arg(Pmc)-Phe-β-EtAla-Alko树脂。与上述同样过滤、洗净后，保护未反应的氨基。按上述(1)同样的方法，从树脂中分离出胺的同时除去保护基。
(5)H-Tyr(Bzl)-D-Arg(Z2)-Phe-OTce
原料-Z-Phe-OTce 254g，用25％溴化氢-醋酸900ml处理，脱除Z基后，冰浴下溶解于1000ml CH2Cl2中。往该溶液添加Boc-D-Arg(Z2)-OH 288g和HOBt 85g，用TEA 77ml中和后，用EDC·HCl121g缩合，得到Boc-D-Arg(Z2)-Phe-OTce。然后，Boc-D-Arg(Z2)-Phe-OTce 241g，用4N HCl-醋酸乙酯1000ml处理，脱除Boc基，冰浴下溶于DMF 1300ml。往该溶液添加Boc-Tyr(Bzl)-OH 108g和HOBt46g，用TEA 42ml中和后，用EDC·HCl 65g缩合，得到用下式表示的保护肽：Boc-Tyr(Bzl)-D-Arg(Z2)-Phe-OTce。Boc-Tyr(Bzl)-D-Arg(Z2)-Phe-OTce 48g，用4N HCl-醋酸乙酯250ml处理，脱除Boc基。
(6)H-Tyr(Bzl)-D-Arg(Z2)-MePhe-MeβAla-OBzl
以TosOH·MeβAla-OBzl作为起始原料，由C-末端依次用液相法制造。用EDC-HOBt法缩合Boc-MePhe-OH和TosOH-MeβAla-OBzl，得到Boc-MePhe-MeβAla-OBzl，用4N HCl-醋酸乙酯从Boc-MePhe-MeβAla-OBzl脱除Boc基后，用EDC-HOBt法和Boc-D-Arg(Z2)-OH缩合，得到Boc-D-Arg(Z2)-MePhe-MeβAla-OBzl。然后，用4N HCl-醋酸乙酯从Boc-D-Arg(Z2)-MePhe-MeβAla-OBzl脱除Boc基后，用EDC-HOBt法，和Boc-Tyr(Bzl)-OH缩合，得到保护肽：Boc-Tyr(Bzl)-D-Arg(Z2)-MePhe-MeβAla-OBzl，用4N HCl-醋酸乙酯250ml处理，脱除Boc基。(B)本发明化合物的制造例1N-甲基-Tyr-D-Arg-Phe-MeβAla-OH·2醋酸盐
Boc-Phe-OH和TosOH·MeβAla-OBzl，用EDC-HOBt法缩合，得到Boc-Phe-MeβAla-OBzl，用4N的HCl-醋酸乙酯从Boc-Phe-MeβAla-OBzl脱除Boc基后，用EDC-HOBt法，和Boc-D-Arg(Z2)-OH缩合，得到Boc-D-Arg(Z2)-Phe-MeβAla-OBzl。
Boc-D-Arg(Z2)-Phe-MeβAla-OBzl(4.76g，5.50mmol)溶于4N-HCl/醋酸乙酯溶液(20ml)中，于室温搅拌25分钟。加乙醚于反应液，滤取所析出的结晶。该结晶溶于二甲基甲酰胺(10ml)中，再溶解Boc-N-甲基-Tyr(Bzl)-OH(1.93g，5.00mmol)、1-羟基苯并三唑(743mg，5.50mmol)以及三乙胺(0.84ml，6.0mmol)。该溶液冷却至-10℃后，添加1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(1.15g，6.0mmol)，-10℃搅拌1小时，再于室温搅拌20小时。添加醋酸乙酯(40ml)于反应液，用1N的HCl洗涤后，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。减压浓缩溶剂，所得到的油状物用硅胶柱色谱(苯∶醋酸乙酯＝2∶1(v/v))精制，得到5.01g无色油状物Boc-N-甲基-Tyr(Bzl)-D-Arg(Z2)-Phe-MeβAla-OBzl。
该保护肽(0.84g，0.74mmol)溶解于4N-HCl/醋酸乙酯溶液(5ml)中，于室温搅拌30分钟。加乙醚于反应液，滤取所析出的结晶。该结晶溶于醋酸(5ml)，加5％Pd-C(含水率50％)0.3g作为催化剂，进行接触还原3小时，除去保护基。滤出催化剂后冷冻干燥，得到396mg标题化合物白色粉末。
FAB质谱m/z：584(M+H+)
[α]D 23+44.4°(c＝1.01，1N醋酸)
Rfb：0.59例2N，N-二甲基-Tyr-D-Arg-Phe-MeβAla-OH·2醋酸盐
Boc-D-Arg(Z2)-Phe-MeβAla-OBzl(1.30g，1.50mmol)溶于4N-HCl/醋酸乙酯溶液(15ml)，于室温搅拌40分钟。加乙醚于反应液，滤取所析出的结晶。该结晶溶于二甲基甲酰胺(10ml)，再溶解N，N-二甲基-Tyr(Bzl)-OH(419mg，1.40mmol)、1-羟基苯并三唑(189mg，1.40mmol)以及三乙胺(0.21ml，1.5mmol)。该溶液冷却至-10℃后，添加1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(349mg，1.82mmol)，于-10℃搅拌1小时，再于室温搅拌20小时。加醋酸乙酯(40ml)于反应液，然后，用1N HCl洗涤，再用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。减压、浓缩溶剂，得到的油状物用硅胶柱色谱精制(苯∶醋酸乙酯＝2∶1(v/v))，得到无色无定型固体N，N-二甲基-Tyr(Bzl)-D-Arg(Z2)-Phe-MeβAla-OBzl 974g。
该保护肽(450mg，0.43mmol)溶于醋酸(5ml)，添加5％Pd-C(含水率50％)0.29g作催化剂，进行接触还原4小时，除去保护基。滤出催化剂后，冷冻干燥，得到标题化合物白色粉末193mg。
FAB质谱m/z：598(M+H+)
[α]D 23+44.4°(c＝1.08，1N-醋酸)
Rfb：0.37例3
N-乙基-Tyr-D-Arg-Phe-MeβAla-OH·2醋酸盐
Boc-Tyr(Bzl)-D-Arg(Z2)-Phe-MeβAla-OBzl(2.20g，2.00mol)溶于4N-HCl/醋酸乙酯溶液(10ml)中，于室温搅拌1小时。加乙醚于反应液，滤取析出来的结晶。该结晶溶于甲醇(10ml)，在冰冷却下搅拌，再溶解乙醛(134μl，2.40mmol)及氰基硼氢化钠(132mg，2.00mmol)。该溶解于室温下搅拌17小时后，追加等量的乙醛和氰基硼氢化钠，于室温再搅拌19小时。减压、浓缩反应液，加氯仿(50ml)，用水洗净。减压浓缩氯仿，得到的油状物用硅胶柱色谱精制(苯∶醋酸乙醋＝1∶3(v/v))，得到无色油状物N-乙基-Tyr(Bzl)-D-Arg(Z2)-Phe-MeβAla-OBzl1.37g。
该保护肽(0.84g，0.74mmol)溶于醋酸(5ml)，添加5％Pd-C(含水率50％)0.30g作催化剂，进行接触还原3小时，除去保护基。滤除催化剂后，冷冻干燥，得到标题化合物白色粉末396mg。
FAB质谱m/z：598(M+H+)
[α]D 23+42.1°(c＝1.02，1N-醋酸)
Rfb：0.53
例4N-异丙基-Tyr-D-Arg-Phe-MeβAla-OH·2醋酸盐
用Boc-Tyr(Bzl)-D-Arg(Z2)-Phe-MeβAla-OBzl(2.00g，2.00mmol)、丙酮(147μl，2.00mmol)以及氰基硼氢化钠(138mg，2.00mmol)，采用与例3同样的方法，得到标题化合物白色粉末754mg。
FAB质谱m/z：612(M+H+)
[α]D 23+48.7°(c＝1.02，1N-醋酸)
Rfb：0.60
例5
N-环丙甲基-Tyr-D-Arg-Phe-MeβAla-OH·2醋酸盐
(1)N-环丙甲基-N-苄氧羰基-Tyr(Bzl)-OH
把H-Tyr(Bzl)-OMe盐酸盐(4.83g，15.0mmol)及环丙甲基溴(2.43g，18.0mmol)溶于二甲基甲酰胺(20ml)，添加二异丙基乙胺(3.48ml，20.0mmol)，于室温搅拌24小时。反应液浓缩后，把残渣溶于醋酸乙酯(100ml)，依次用10％柠檬酸水溶液、饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。减压蒸去醋酸乙酯，所得到的粗生成物用硅胶柱色谱精制(氯仿∶甲醇＝50∶1(v/v))，得到无色油状物1.91g。
该油状物溶于二氯甲烷(20ml)，添加10％碳酸钠水溶液和苄氧羰基氯化物(1.03ml，7.28mmol)，于室温激烈搅拌22小时。浓缩二氯甲烷后，把得到的粗生成物溶于甲醇(5.7ml)，加2N氢氧化钠水溶液(5.7ml)，于室温搅拌18小时。减压蒸去溶剂后，在冰冷却搅拌下添加1N HCl，调节pH至约2，用氯仿萃取。减压蒸去溶剂，得到无色油状物2.60g。
FAB质谱m/z：624(M+H+)
(2)N-环丙甲基Tyr-D-Arg-Phe-MeβAla-OH·2醋酸盐
Boc-D-Arg(Z2)-Phe-MeβAla-OBzl(1.82g，2.10mmol)溶于4N-HCl/醋酸乙酯溶液(20ml)，于室温搅拌30分钟。加乙醚于反应液，滤取析出来的结晶。该结晶溶于二甲基甲酰胺(20ml)、再溶解上述(1)中得到的N-环丙甲基-N-苄氧羰基-Tyr(Bzl)-OH(919mg，2.00mmol)、1-羟基苯并三唑(297mg，2.20mmol)以及三乙胺(0.32ml，2.2mmol)。该溶液冷却至-10℃后，添加1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(460mg，2.4mmol)，于-10℃搅拌1小时，再于室温搅拌20小时。加醋酸乙酯(100ml)于反应液，依次用1N HCl、饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。减压浓缩溶剂，得到的油状物用硅胶柱色谱精制(氯仿∶甲醇＝100∶1(v/v))，得到N-环丙基甲基缩合物无色油状物2.27g。
上述保护肽(1.24g，1.00mmol)溶于无水氟化氢(5ml)及茴香醚(1ml)，于冰冷却下搅拌1小时。减压浓缩反应液，残渣依次用醋酸乙醋、乙醚洗净后，溶于水(5ml)，通过离子交换树脂(ダィャ离子PA-308醋酸盐，100ml)，用水将其洗脱。减压浓缩浓集含目的物的馏分的溶剂，得到的粗生成物醋酸盐作为ODS柱色谱进料(富士シリシァDM 1020T，50g)，4～5％乙腈/0.1N醋酸溶液，逐级分段洗脱。收集含目的物的馏分，冷冻干燥，得到标题化合物白色粉末33mg。
FAB质谱m/z：624(M+H+)
[α]D 23+38.3°(c＝1.05，1N-醋酸)
Rfb：0.64例6N-(2-氨乙基)-Tyr-D-Arg-Phe-MeβAla-OH·2醋酸盐(1)N-苄氧羰基-N-(2-叔丁氧基羰基氨乙基)-Tyr-OH
Tyr(Bzl)-OMe盐酸盐(2.57g，8.00mmol)溶于甲醇(15ml)。于冰冷冻搅拌下溶解Boc-甘油(1.20g，7.50mmol)以及氰基硼氢化钠(0.47g，7.50mmol)。该溶液于室温搅拌17小时后，减压浓缩，加氯仿(50ml)，用水冼净。在该氯仿溶液中，加入饱和碳酸氢钠水溶液(15ml)和苄氧羰基氯化物(0.96ml，6.00mmol)，于室温激烈搅拌1.5小时。浓缩氯仿层后，把得到的粗生成物溶于甲醇(20ml)，添加2N氢氧化钠水溶液(2.1ml)，于室温搅拌11小时。减压蒸去溶剂后，于冰冷却搅拌下加1N HCl，调节pH至约2，用醋酸乙酯萃取。减压蒸去溶剂，得到无色油状物1.66g。
FAB质谱m/z：613(M+H+)(2)N-(2-氨乙基)-Tyr-D-Arg-Phe-MeβAla-OH·2醋酸盐
使用Boc-D-Arg(Z2)-Phe-MeβAla-OBzl(1.73g，2.00mmol)、上述(1)中得到的N-苄氧羰基-N-(2-叔丁氧基羰基氨乙基)-Tyr-OH(1.10g，2.00mmol)、1-羟基苯并三唑(270mg，2.00mmol)、三乙胺(0.28ml，2.0mmol)以及1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(479mg，2.5mmol)，用与例1同样的方法制得目的物。将其作为ODS柱色谱(富士シリシァDM 1020T，50g)的进料，用1～10％乙腈/0.1醋酸溶液，逐级分段洗脱。收集含目的物的馏分，冷冻干燥，得到标题化合物白色粉末259mg。
FAB质谱m/z：613(M+H+)
[α]D 23+36.8°(c＝0.96，1N-醋酸)
Rfb：0.51例7H-Gly-Tyr-D-Arg-Phe-MeβAla-OH·2醋酸盐
使用Boc-Tyr(Bzl)-D-Arg(Z2)-Phe-MeβAla-OBzl(3.35g，3.00mmol)、Boc-Gly-OH(0.52g，3.00mmol)、1-羟基苯并三唑(405mg，3.00mmol)、三乙胺(0.42ml，3.0mmol)以及1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(690mg，3.60mmol)，用与例1同样的方法，得到保护肽Boc-Gly-Tyr(Bzl)-D-Arg(Z2)-Phe-MeβAla-OBzl(2.92g)，其中741mg(0.63mmol)脱保护，得到目的物白色粉末370mg.
FAB质谱m/z：627(M+H+)
[α]D 23+31.5°(c＝1.00，1N-醋酸)
Rfb：0.58例8N-羧甲基-Tyr-D-Arg-Phe-MeβAla-OH
(1)N-叔丁氧基羰基甲基-Tyr(Bzl)-OMe
将H-Tyr(Bzl)-OMe盐酸盐(16.1g，50.0mmol)及溴代醋酸叔丁酯(19.5g，100mmol)溶于二甲基甲酰胺(50ml)，往该溶液于室温20分钟内滴加二异丙基乙胺(27ml，155mmol)。于室温搅拌17小时后，滤出不溶物质，减压浓缩滤液。将残渣溶于醋酸乙酯(100ml)，依次用1N HCl，饱和碳酸氢钠水溶液洗净。减压浓缩溶剂，用己烷重结晶，得到白色结晶15.3g。熔点66～67℃。(2)N-苄氧羰基-N-叔丁氧羰基甲基-Tyr(Bzl)-OH
将上述(1)得到的N-叔丁氧羰甲基-Tyr(Bzl)-OMe(2.00g，5.00mmol)溶于二氯乙烷(20ml)，添加10％碳酸钠水溶液(11ml)及苄氧羰基氯(0.96ml，6.00mmol)，于室温激烈搅拌2.5小时。浓缩二氯乙烷层，所得到的粗生成物用硅胶柱色谱(苯∶醋酸乙酯＝30∶1(v/v))精制，得到无色油状物。将该甲酯溶于甲醇(40ml)，添加2N氢氧化钠水溶液(20ml)，于室温搅拌7小时。减压蒸去溶剂后，于冰冷却搅拌下添加1N HCl，调节pH至约2，用乙醚萃取。减压蒸去溶剂，得到无色油状物2.51g。
FAB质谱m/z：520(M+H+)
(3)N-羧甲基-Tyr-D-Arg-Phe-MeβAla-OH
使用Boc-D-Arg(Z2)-Phe-MeβAla-OBzl(1.04g，1.20mmol)、上述(2)中得到的N-苄氧羰基-N-叔丁氧羰基甲基-Tyr(Bzl)-OH(624mg，1.20mmol)、1-羟基苯并三唑(162mg，1.20mmol)、三乙胺(0.21ml，1.5mmol)以及1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(276mg，1.4mmol)，用与例1同样的方法，得到标题化合物白色粉末187mg.
FAB质谱m/z：628(M+H+)
[α]D 23+32.8°(c＝0.98，1N-醋酸)
Rfb：0.54例9N-甲磺酰-Tyr-D-Arg-Phe-MeβAla-OH·2醋酸盐
Boc-Tyr(Bzl)-D-Arg(Z2)-Phe-MeβAla-OBzl(2.24g，2.00mmol)溶于4N-HCl/醋酸乙酯溶液(15ml)，于室温搅拌30分钟。往反应液中添加乙醚，滤取所析出的结晶。该结晶溶于二甲基甲酰胺(5ml)，添加二异丙基乙胺(0.5ml)后，冰冷却搅拌下添加甲磺酰氯(193μl，2.5mmol)。于室温搅拌1小时后，添加乙醚，过滤不溶物质，得到N-甲磺酰-Tyr(Bzl)-D-Arg(Z2)-Phe-MeβAla-OBzl 1.13g。
将该保护肽(0.82g，0.75mmol)溶于醋酸(5ml)中，添加5％Pd-C(含水率50％)0.7g作催化剂，进行接触还原24小时，除去保护基。滤出催化剂，冷冻干燥，得到标题化合物白色粉末400mg。
FAB质谱m/z：648(M+H+)
[α]D 23+20.4°(c＝1.06，1N-醋酸)
Rfb：0.67例10N-亚胺甲基-Tyr-D-Arg-Phe-MeβAla-OH·2醋酸盐(1)N-亚胺甲基-N-苄氧羰基-Tyr(Bzl)-OH
将H-Tyr(Bzl)-OMe盐酸盐(6.43g，20.0mmol)以及甲酰亚胺酸异丙酯盐酸盐(8.24g，60.0mmol)溶于二甲基甲酰胺(15ml)和二氯甲烷(60ml)的混合液中，添加三乙胺(12ml，86mmol)，于室温搅拌7小时。滤出不溶物后，往反应液添加饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)以及苄氧羰基氯(4.8ml，30.0mmol)，于室温激烈搅拌25分钟。浓缩二氯甲烷层后，得到的粗生成物用硅胶柱色谱(氯仿∶甲醇＝40∶1(v/v))，得到无色油状物3.45g。
该甲酯(1.03g，2.31mmol)溶于乙醇(10ml)及二甲基甲酰胺(5ml)的混合液中，添加2N氢氧化钠水溶液(2ml)，于室温搅拌2.5小时。减压蒸出溶剂后，在冰冷却搅拌下，加1N盐酸，调节pH至约2，用乙醚萃取。减压蒸出溶剂，得到无色油状物0.71g。
FAB质谱m/z：433(M+H+)
(2)N-亚胺甲基Tyr-D-Arg-Phe-MeβAla-OH·2醋酸盐
使用Boc-D-Arg(Z2)-Phe-MeβAla-OBzl(1.47g，1.70mmol)，上述(1)中得到的N-亚胺甲基-N-苄氧羰基Tyr(Bzl)-OH(650mg，1.50mmol)、1-羟基苯并三唑(216mg，1.60mmol)、三乙胺(0.24ml，1.8mmol)以及1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳化二亚胺基盐酸盐(383mg，2.00mmol)，用与例2同样的方法进行反应。得到的粗产品用作ODS柱色谱(富士シリシァDM 1020T，50g)的进料，用3～15％乙腈/0.1N醋酸溶液逐级分段洗脱。收集含目的物的馏分，冷冻干燥，得到标题化合物的白色粉末177mg。
FAB质谱m/z：597(M+H+)
[α]D 23+34.3°(c＝1.00，1N-醋酸)
Rfb：0.64例11N-亚氨代乙酰基-Tyr-D-Arg-Phe-MeβAla-OH·2醋酸盐
把H-Tyr-D-Arg-Phe-MeβAla-OH(690mg，1.00mmol)及亚氨代乙酸乙酯的盐酸盐(161mg，1.30mmol)溶于二甲基甲酰胺(2ml)，加三乙胺(0.42ml，3.0mmol)，于室温搅拌2天。加乙醚(100ml)于反应液，倾析除去溶剂。得到的粗产品用作DOS柱色谱(富士シリシァDM 1020T，50g)的进料，用4～10％乙腈/0.1N醋酸溶液逐级分段洗脱，收集含目的物的馏分，冷冻干燥，得到标题化合物白色粉末388g。
FAB质谱m/z：611(M+H+)
[α]D 23+23.1°(c＝1.06，1N-醋酸)
Rfb：0.58例12N-亚氨代丙酰基-Tyr-D-Arg-Phe-MeβAla-OH·2醋酸盐
采用H-Tyr-D-Arg-Phe-MeβAla-OH(690mg，1.00mmol)以及亚氨代丙酸乙酯盐酸盐(303mg，2.20mmol)和三乙胺(0.56ml，4.0mmol)，与例11同样进行反应。粗产品作为ODS柱色谱(富士シリシァDM 1020T，25g)的进料，用0～10％乙腈/0.1N醋酸溶液逐级分段洗脱。收集含目的物的馏分，冷冻干燥，得到标题化合物白色粉末200mg。
FAB质谱m/z：625(M+H+)
[α]D 23+21.5°(c＝1.0，1N-醋酸)
Rfb：0.62例13N-亚氨代丁酰基-Tyr-D-Arg-Phe-MeβAla-OH·2醋酸盐
使用H-Tyr-D-Arg-Phe-MeβAla-OH(510mg，0.76mmol)及亚氨代丁酸乙酯盐酸盐(256mg，1.66mmol)和三乙胺(0.44ml，3.0mmol)，与例11同样进行反应。粗产品作为ODS柱色谱(富士シリシァDM 1020T，60g)的进料，用6～8％乙腈/0.1N醋酸溶液逐级分段洗脱。收集含目的物的馏分，冷冻干燥，得到标题化合物白色粉末173mg。
FAB质谱m/z：639(M+H+)
[α]D 23+17.0°(c＝1.01，1N-醋酸)
Rfb：0.63例14N-亚氨苄基-Tyr-D-Arg-Phe-MeβAla-OH·2醋酸盐
使用H-Tyr-D-Arg-Phe-MeβAla-OH(690mg，1.00mmol)及亚氨代苯甲酸乙酯盐酸盐(378mg，2.20mmol)和三乙胺(0.56ml，4.0mmol)，与例11同样进行反应。粗产品作为到ODS柱色谱(富士シリシァDM1020T，25g)进料，用0～14％乙腈/0.1N醋酸溶液逐级分段洗脱。收集含目的物的馏分，冷冻干燥，得到标题化合物白色粉末83mg。
FAB质谱m/z：673(M+H+)
[α]D 23+17.2°(c＝1.0，1N-醋酸)
Rfb：0.66例15N-[H2NHNC(NH)]-Tyr-D-Arg-Phe-MeβAla-OH·2醋酸(1)NC-Tyr(t-Bu)-D-Arg(Tos)-Phe-MeβAla-O-t-Bu
把Z-Phe-OH(29.9g，100mmol)、MeβAla-O-t-Bu(16.0g，110mmol)、3-羟基-4-氧代-3，4-二氢-1，2，3-苯并三嗪(17.9g，110mmol)溶于二氯甲烷(200ml)中。该溶液冷却至-10℃后，添加1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(21.1g，110mmol)，-10℃搅拌1小时，再在室温搅拌20小时。减压蒸出溶剂后，加醋酸乙酯(100ml)于反应液，依次用1N盐酸和饱和碳酸氢钠水溶液洗净。减压浓缩溶剂，得到的油状物用硅胶柱色谱(苯∶醋酸乙酯＝10∶1(v/v))精制，得到Z-Phe-MeβAla-O-t-Bu无色油状物42.6g。(2)Z-Phe-MeβAla-O-t-Bu(21.0g，47.6mmol)溶于甲醇(200ml)，添加5％Pd-C(含水率50％)21g作为催化剂，进行接触还原4小时，除去保护基。滤出催化剂后，减压蒸出溶剂，溶解于二甲基甲酰胺(100ml)中。Z-D-Arg(Tos)-OH(20.0g，43.2mmol)以及1-羟基苯并三唑(6.43g，47.6mmol)溶于该溶液中。此溶液冷却至-10℃后，添加1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(9.12g，47.6mmol)，于-10℃搅拌1小时，再于室温搅拌18小时。减压蒸出溶剂后，加醋酸乙酯(100ml)于反应液，依次用1N盐酸和饱和碳酸氢钠水溶液洗净。减压浓缩溶剂，得到Z-D-Arg(Tos)-Phe-MeβAla-O-t-Bu无色油状物31.9g。(3)Z-D-Arg(Tos)-Phe-MeβAla-O-t-Bu(31.9g，41.0mmol)溶于甲醇(200ml)，添加5％Pd-C(含水率50％)32g作催化剂，进行接触还原4小时以除去保护基。滤出催化剂后，减压蒸出溶剂，溶于二甲基甲酰胺(100ml)中。将Z-Tyr-(t-Bu)-OH(13.7g，36.9mmol)以及1-羟基苯并三唑(5.54g，41.0mmol)溶解在该溶液中。此溶液冷却至-10℃后，添加1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(7.86g，41.0mmol)，于-10℃搅拌1小时，再于室温搅拌20小时。减压蒸出溶剂后，加醋酸乙醋(100ml)于反应液，依次用1N盐酸和饱和碳酸氢钠水溶液洗净。减压浓缩溶剂，得到的油状物用硅胶柱色谱(氯仿∶甲醇＝40∶1(v/v))精制，得到Z-Tyr(t-Bu)-D-Arg(Tos)-Phe-MeβAla-O-t-Bu白色粉末27.8g。
[α]D 23+18.8°(c＝1.01，乙醇)(4)Z-Tyr(t-Bu)-D-Arg(Tos)-Phe-MeβAla-O-t-Bu(11.6g，12.0mmol)溶于乙醇(60ml)，添加5％Pd-C(含水率50％)6g作催化剂，进行接触还原3.5小时以除去Z基。滤出催化剂后，减压蒸出溶剂，再添加苯(50ml)，减压浓缩，重复2次，除去乙醇。得到的无色残渣溶于干燥的四氢呋喃(100ml)，于室温搅拌下添加溴化氰(1.69g，14.4mmol)/二氯甲烷(15ml)溶液，再添加三乙胺(2.02ml，14.4mmol)。于室温搅拌40分钟后，滤出所析出的不溶物。减压浓缩滤液，得到的油状物用硅胶柱色谱(氯仿∶甲醇＝40∶1(v/v))精制，得到无色无定型固体5.70g。
  FAB质谱m/z：862(M+H+)(5)NC-Tyr(t-Bu)-D-Arg(Tos)-Phe-MeβAla-O-t-Bu(1.00g，1.16mmol)溶于乙醇(5ml)，添加肼的盐酸盐(158mg，2.3mmol)，再加三乙胺(0.42ml，3.0mmol)。于室温搅拌3小时后，减压蒸出溶剂，再加苯(50ml)，减压浓缩，重复2次，除去残留乙醇。得到的残渣溶于4N HCl/二噁烷溶液(10ml)，于室温搅拌3小时后，减压蒸出溶剂。加乙醚于残留物，滤取所析出的结晶。
该结晶溶于无水氟化氢(10ml)及茴香醚(1ml)，于冰冷却下搅拌1小时。减压浓缩反应液，残渣依次用醋酸乙酯和乙醚洗净后，溶于水(100ml)，加入离子交换树脂(ダイャィオンPA-308醋酸盐，100ml)中，水洗脱。收集含目的物的馏分，减压浓缩溶剂，所得到的粗产物醋酸盐加入ODS柱色谱(富士シリシァDM 1020T，25g)中，用2～10％乙腈/0.1N醋酸溶液逐级分段洗脱。收集含目的物的馏分，冷冻干燥，得到标题化合物白色粉末48mg。
FAB质谱m/z：628(M+H+)
[α]D 20+25.28°(c＝0.720，1N醋酸)
Rfa：0.25
Rfb：0.65例16N-[HOHNC(NH)]-Tyr-D-Arg-Phe-MeβAla-OH·2醋酸
使用NC-Tyr(t-Bu)-D-Arg(Tos)-Phe-MeβAla-O-t-Bu(1.00g，1.16mmol)以及羟胺盐酸盐(347mg，5.0mmol)，用与例15同样的方法，得到标题化合物白色粉末288mg。
FAB质谱m/z：629(M+H+)
[α]D 20+20.73°(c＝0.965，1N醋酸)
Rfa：0.38
Rfb：0.69例17N-(2-咪唑基)-Tyr-D-Arg-Phe-MeβAla-OH·醋酸
H-Tyr-D-Arg-Phe-MeβAla-OH(400mg，0.58mmol)、2-甲硫基-2-咪唑啉氢碘酸盐(354mg，1.45mmol)以及三乙胺(0.28ml，2.0mmol)溶于二甲基甲酰胺(20ml)，于60℃搅拌24小时。加乙醚(100ml)于反应液，倾析除去溶剂。得到的油状物加入ODS柱色谱(富士シリシァDM 1020T，50g)中，用3～13％乙腈/0.1N醋酸溶液逐级分段洗脱。收集含目的物的馏分，冷冻干燥，得到标题化合物白色粉末14mg。
FAB质谱m/z：639(M+H+)
[α]D 20+11.14°(c＝0.700，1N醋酸)
Rfa：0.25
Rfb：0.65例18N-[2-(4，6-二甲基)嘧啶基]-Tyr-D-Arg-Phe-MeβAla-OH(1)Boc-Phe-OH和TosOH·MeβAla-OBzl用EDC-HOBt法缩合，得到Boc-Phe-MeβAla-OBzl，用4N HCl-醋酸乙酯从Boc-Phe-MeβAla-OBzl脱除Boc基后，采用EDC-HOBt法与Boc-D-Arg(Z2)-OH缩合，得到Boc-D-Arg(Z2)-Phe-MeβAla-OBzl。然后，用4N HCl-醋酸乙酯从Boc-D-Arg(Z2)-Phe-MeβAla-OBzl脱除Boc基后，用EDC-HOBt法与Boc-Tyr(Bzl)-OH缩合，得到保护肽：Boc-Tyr(Bzl)-D-Arg(Z2)-Phe-MeβAla-OBzl。
将Boc-Tyr(Bzl)-D-Arg(Z2)-Phe-MeβAla-OBzl(3.32g，3.00mmol)溶于4N HCl/醋酸乙酯溶液(10ml)，于室温搅拌40分钟。加乙醚于反应液中，滤取所析出来的结晶。该结晶溶于二甲基甲酰胺(10ml)，在冰冷却搅拌下，添加三乙胺(1.68ml，12mmol)、N，N′-双叔丁氧基羰基硫脲(229mg，3.00mmol)以及氯化银(I)(896mg，3.3mmol)，于室温搅拌20分钟。加醋酸乙酯(100ml)于反应液，滤出析出来的不溶物。水洗滤液后，减压浓缩，得到的油状物用硅胶柱色谱(氯仿∶甲醇＝40∶1(v/v))精制，得到Boc-HNC-(N-Boc)-Tyr(Bzl)-D-Arg(Z2)-Phe-MeβAla-OBzl的无色无定型固体2.54g。(2)把上述(1)中得到的Boc-HNC(N-Boc)-Tyr(Bzl)-D-Arg(Z2)-Phe-MeβAla-OBzl(1.25g，1.00mmol)溶于4N HCl/醋酸乙酯溶液(10ml)，于室温搅拌2.5小时。加乙醚于反应液，滤取析出的结晶。该结晶溶于二甲基甲酰胺(10ml)，在冰冷却搅拌下添加三乙胺(0.2ml，1.4mmol)，2，4-戊二酮(1.05ml，10.0mmol)以及1％碳酸钠(6ml)，于室温搅拌10天。加水(40ml)于反应液，滤取析出的固体。得到的固体用硅胶柱色谱(氯仿∶甲醇＝100∶1(v/v))精制，得到2-(4，6-二甲基)嘧啶基-Tyr(Bzl)-D-Arg(Z2)-Phe-MeβAla-OBzl无色无定型固体0.55g。(3)把上述(2)中得到的化合物477mg(0.43mmol)溶于甲醇(20ml)，添加5％Pd-C(含水率50％)0.3g作为催化剂，接触还原6小时。滤出催化剂后，减压蒸出溶剂，溶于水(50ml)，冷冻干燥，得到标题化合物白色粉末259mg。
FAB质谱m/z：663(M+H+)
[α]D 20+11.84(c＝0.999，1N醋酸)
Rfa：0.58
Rfb：0.73试验例
本发明的肽衍生物的镇痛效果，用压刺激法评价如下。在小鼠的尾部，以10mmHg/秒的比例加压刺激，测定显示拼死挣扎、咬住受刺激部位行动的压力，以此作为疼痛反应的阈值。实验时使用了预先在40～50mmHg压力下有反应的小鼠。另外，以100mmHg作为最大刺激压。镇痛效果用下式算出最大可能效应的百分率(percent of maxinumpossible effect)(MPE％)。 MPE % = Pt - Po Pc - Po × 100 (式中，Po为药物处理前的疼痛反应阈值，Pt为药物处理t分钟后的疼痛反应阈值，Pc为最大刺激压)。从用量反应曲线求出MPE％达到50％时的药物投给量，作为ED50值，比较药物的镇痛效果。
用例11的化合物，从皮下注射(背部皮下)以及口服进行试验，结果是ED50(mg/kg)分别为0.093mg/kg及2.65mg/kg。用吗啡作对照，皮下注射(背部注射)以及口服时，ED50(mg/kg)分别为4.6mg/kg及29.6mg/kg。
工业上利用的可能性
本发明的肽衍生物因可用于癌疼痛等的治疗，是有用的。

Claims (20)

1.用下述通式表示的化合物及其盐，
Y-L-Tyr-Q-NR1-CH(R2)-CO-X[式中，R1表示氢原子或C1-6烷基；R2表示具有取代基的苄基；Q表示D-Arg或L-Arg；Y表示L-Tyr的N末端氨基的2个氢原子或将其置换的取代基，该取代基(有2个时，分别独立地)从以下选择：
具有氨基的C1-6烷基、
具有羧基的C1-6烷基、
具有氨基的C1-6烷基羰基、
具有烷基的磺酰基、
具有取代基的嘧啶基、
具有取代基的咪唑啉基、以及
用下式表示的基：
HN＝C(R3)-
(式中，R3表示氢原子、C1-6烷基、有取代基的苯基；具有
取代基的羟氨基、或有取代基的肼基)；X表示OR4(式中，R4表示氢原子或C1-6烷基)、N(R5)(R6)(式中，
R5表示氢原子或C1-6烷基，R6表示C1-6羟烷基或磺酸取代的C1-6烷基，或者R5及R6一同与取代的氮原子一起，形成5或6元含氮饱和杂环)、以及NR7-C(R8)(R9)(R10)(式中，R7表示氢原子、C1-6烷基或芳基取代的C1-6烷基；R8表示氢原子、羧基、C1-6烷氧羰基、取代的或未取代的氨基甲酰基、羧基C1-6烷基、取代的或未取代的氨基甲酰C1-6烷基或C1-6烷氧羰基C1-6烷基；R9表示氢原子、C1-6烷基、氨基C1-6烷基、脒基C1-6烷基、胍基C1-6烷基、羟基C1-6烷基、羧基C1-6烷基或取代的或者未取代的氨基甲酰基C1-6烷基；或者R7及R9一同，与R7取代的氮原子一起，表示羧基取代的含氮饱和5或6元杂环；R10表示氢原子或C1-6烷基)]。
2.权利要求1中所述的化合物及其盐，其中Y表示氢原子、具有氨基或羧基的C1-6烷基、具有氨基的C1-6烷基羰基；从C1-6烷基磺酰基、具有C1-6烷基的2-嘧啶基、2-咪唑啉-2-基、以及下式表示的基：HN＝C(R3)-(式中，R3表示氢原子、C1-6烷基、苯基、羧氨基或肼基)的一组中选择的基。
3.权利要求1或2中所述的化合物及其盐，其中，Y中的一个取代基为氢原子或C1-6烷基。
4.权利要求1～3中的任何一项所述的化合物及其盐，其中R3是甲基。
5.权利要求1～4中的任何一项所述的化合物及其盐，其中R1是氢原子。
6.权利要求1～5中的任何一项所述的化合物及其盐，其中R7是甲基或乙基。
7.权利要求1～6中的任何一项所述的化合物及其盐，其中R8为羧基或氨基甲酰基。
8.权利要求1～7中的任何一项所述的化合物及其盐，其中R8为羧甲基或氨基甲酰甲基。
9.权利要求1～8中的任何一项所述的化合物及其盐，其中Q为D-Arg。
10.权利要求9所述的化合物及其盐，其中R1是氢原子，R7为氢原子，R8为羧甲基，′R9是氢原子。
11.权利要求9所述的化合物及其盐，其中R1是氢原子，R7是氢原子，R8为氨基甲酰甲基，R9为氢原子。
12.权利要求9所述的化合物及其盐，其中R1是氢原子，R7为甲基，R8为羧甲基，R9为氢原子。
13.权利要求9记载的化合物及其盐，其中R1为氢原子，R7为乙基，R8为羧甲基，R9为氢原子。
14.权利要求1～13中的任何一项所述的化合物及其盐，其中R2为未取代的苄基。
15.权利要求1所述的化合物及其盐，可用HN＝C(CH3)-L-Tyr-D-Arg-L-Phe-N(CH3)-CH2-CH2-COOH表示。
16.权利要求1～15的任何一项所述的化合物的盐是盐酸盐或醋酸盐。
17.权利要求1～15的任何一项所述的化合物及其盐所构成的医药。
18.含有权利要求1～15任何一项所述的化合物及其盐作为有效成分的镇痛性医药组合物。
19.权利要求1～15任何一项记载的化合物或其盐在制造权利要求18记载的医药组合物中的用途。
20.疼痛的预防及/或治疗方法，其包括把权利要求1～15的任何一项所述的化合物或其盐的有效量投给哺乳类动物的步骤。
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