WO1994000593A1 - Procede de preparation d'aryl-1 alcanols substitues optiquement purs - Google Patents

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WO1994000593A1
WO1994000593A1 PCT/FR1993/000632 FR9300632W WO9400593A1 WO 1994000593 A1 WO1994000593 A1 WO 1994000593A1 FR 9300632 W FR9300632 W FR 9300632W WO 9400593 A1 WO9400593 A1 WO 9400593A1
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lipase
optically pure
mixture
ethanol
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PCT/FR1993/000632
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Christine Dumas
Jean-Luc Moriniere
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Institut De Recherches Chimiques Et Biologiques Appliquees (I.R.C.E.B.A.)
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    • C12P7/02—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group
    • C12P7/22—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group aromatic

Definitions

  • the present invention essentially relates to a process for the preparation of optically pure substituted aryl-1 alkanols. It also relates to the pure products obtained by this process.
  • the process in accordance with the present invention makes it possible to prepare products useful in particular in the pharmaceutical field, and in particular of drugs intended for the treatment of bladder instability, either because these products have a pharmacological profile making it possible to envisage their use in this purpose, either because they can be used as an intermediate for the stereospecific synthesis of known products having pharmacological properties.
  • the present invention aims to cover a process for the preparation of optically pure substituted aryl-1 alkanols of formula:
  • R ] _ R2, identical or different, represent a hydrogen atom, a hydroxy, methyl or methoxy radical
  • R3 represents a radical -NH2 or ⁇ N ⁇ 5 ⁇ 6 da ⁇ leq el R5, Rg considered in isolation independently represent an alkyl radical having from 1 to
  • Rj, R2, R3, R4 and n have the meaning indicated above; R3 possibly representing an N-protected group; c) carrying out an enzymatic hydrolysis of the ester of formula (H) thus obtained in the presence of an enzyme chosen from the group consisting of Candida cylindracea lipase, Porcine pancreas lipase, Pseudomonas fluorescens lipase,
  • R] _, R2, R3, R4 and n have the meaning indicated above; R3 possibly representing an N-protected group; dl) separating, for example on a silica column, the compounds (ffl) and (IV) thus obtained; optionally deprotecting the nitrogen atom of the compound of formula (in), thereby obtaining a first pure enantiomer of formula (I); optionally reacting the above-mentioned compound of formula (TV) with an agent allowing its methanolysis, such as in particular sodium methanolate, to obtain, after a possible deprotection of the nitrogen atom, the second pure enantiomer of formula (I) ; or d2) subjecting the mixture of the compounds (D3) and (TV) obtained at the end of step c) to an esterification reaction using agents making it possible to reverse the configuration of the alcohol (HT) such as, for example, a mixture of triphenylphosphine, diethylazodicarboxylate and benzoic acid or a mixture
  • the compounds of formula (I), in which R3 represents an NH2 radical, can in particular serve as intermediate products for the synthesis of the compounds defined above.
  • This compound is in particular useful as an intermediate for the stereospecific synthesis of (2,5-dimethoxyphenyl) monohydrochloride-2 glycylamino-2 ethanol optically pure configuration (R) or (S) known (in the form of racemic) under the name Midodrine , the synthesis of which in the form of a racemic has been described in particular in Belgian patent No. 838512 incorporated here by reference.
  • the optically pure Midodrine, in form (R) or (S) can be obtained from the abovementioned compound (A) by a coupling reaction of peptide type, according to the following reaction scheme:
  • the optically pure compound A of configuration (R) or (S) will be obtained by enzymatic hydrolysis in the presence of Candida cylindracea lipase, preferably at a temperature of approximately 40 ° C and a pH of approximately 5 in a potassium hydrogen phosphate buffer solution.
  • this enzymatic hydrolysis will be carried out in the presence of Candida cylindracea lipase, at a temperature of approximately 40 ° C. in a mixture of a buffer solution of potassium hydrogen phosphate phosphate of pH equal to 5 and of toluene.
  • the enzymatic hydrolysis will be carried out in the presence of Candida antartica lipase immobilized preferably at a temperature of around 40 ° C. in toluene.
  • R5 represents a hydrogen atom or a phenyl radical substituted in position 2 by an alkoxy group having from 1 to 5 carbon atoms, and R, R2 have the meaning indicated above.
  • This reduction can be carried out in a manner known per se using a reducing agent such as for example sodium borohydride in a solvent such as ethanol.
  • a reducing agent such as for example sodium borohydride in a solvent such as ethanol.
  • Ri and R2 are defined as above and X represents a halogen atom, preferably bromine or chlorine, on a piperazine of formula:
  • R5 has the meaning indicated above.
  • This reaction will preferably be carried out in a solvent such as a mixture of triethylamine and tetrahydrofuran.
  • the compounds of formula (VI) can be obtained by halogenation of the corresponding substituted acetophenone, for example according to the following reaction scheme and reference:
  • R7 being an alkyl group having from 1 to 5 carbon atoms
  • R3 represents a radical -NR5R6 in which R5 and Rg independently represent an alkyl radical having from 1 to 4 carbon atoms
  • R5 and Rg independently represent an alkyl radical having from 1 to 4 carbon atoms
  • the enzymes used in the process according to the present invention will be chosen from the group consisting of Candida cylindracea lipase, Porcine pancreas lipase, Pseudomonas fluorescens lipase, Mucor miehei lipase, Candida antartica lipase, Pig liver esterase and Subtilisin hydrolase.
  • step d when the substituent Rj is in position 2, it is preferable to use the enzymes originating from a Candida strain and more particularly Candida cylindracea and Candida antartica iipases.
  • the possible protection and deprotection operations of the nitrogen atom in the case where R3 represents an —NH2 radical (steps a and f) are entirely conventional, in particular in the chemistry of the peptides to which the person skilled in the art can report to. The same is also true for the separation operation (step d).
  • the compounds lu and IV can be separated on a silica column, or by other methods known to those skilled in the art, such as for example by preparative HPLC or by fractional crystallization of diastereomeric salts.
  • the esterification operation (step b) is also carried out in a manner known per se, but constitutes one of the original steps of the process according to the invention.
  • the process according to the present invention makes it possible to split the above-mentioned compounds of formula (I), that is to say to obtain in optically pure form each of the (R) and (S) enantiomers.
  • one of the enantiomers is not interesting, for example because it is not endowed with an interesting pharmacological profile, it can be modified by a configuration inversion in order to obtain the other more active enantiomer.
  • reaction medium thus obtained is washed with 150 ml of a 0.5N aqueous hydrochloric acid solution and then with 150 ml of water.
  • Step b Synthesis of (benzyloxycarbonylamino) -2 (2,5-dimethoxyphenyl) -l ethanol butanoate
  • the pearly white precipitate thus obtained is taken up in petroleum ether (70-100) with magnetic stirring for two hours.
  • the mixture obtained is filtered through sintered glass and dried.
  • the temperature of the suspension obtained is brought to 40 ° C., then, with magnetic stirring, 97.2 mg (3500 units) of Candida cylindracea lipase are added (Ref. Ruka n 0 62302).
  • reaction medium After 4 days of stirring at 40 ° C., the reaction medium is extracted with diethyl ether. The organic phase is dried over magnesium sulfate, filtered and concentrated in vacuo.
  • Step d Methanolysis of (benzyloxycarbonylamino) -2 (dimethoxy-2,5 phenyl) -l ethanol butanoate
  • Step e Deprotection of the amino function.
  • a solution of (benzyloxycarbonylamino) -2 (2,5-dimethoxy-phenyl) -1 ethanol at 10% in methanol is prepared.
  • Step f Synthesis of 2-amino hydrochloride (2,5-dimethoxyphenyl) -l ethanol.
  • This solution is cooled in a mixture of ice and salt. About 0.4 ml of a saturated solution of hydrogen chloride in ethanol is added to this mixture in order to obtain a pH of the order of 1 to 2.
  • the medium is precipitated by adding 27 ml of diethyl ether, then filtered, rinsed with diethyl ether and dried under vacuum.
  • the reaction medium is brought to 40 ° C. and 180 units of Candida cylindracea lipase are added (SIGMA ref. * L-1754 Type VU).
  • the latter can be isolated by decantation of the medium, concentration and separation on a silica column with a chloroform / acetone mixture (95/5) as eluent.
  • Example 3 Duplication by immobilized Candida antartica lipase of (benzyloxycarbonylamino) -2 (dimethoxy-2,5 phenyl) butanoate butanoate ethanol in toluene.
  • Step a Esterification according to the Mitsunobu method.
  • a solution of 5.10 " ⁇ mol of benzoic acid and 6.10 ⁇ 4 mol of DEAD (diethylazodicarboxylate) is produced in 1 ml of anhydrous tetrahydrofuran.
  • reaction mixture After three hours of magnetic stirring at -13 ° C, the reaction mixture is concentrated in vacuo, and taken up in diethyl ether on an ice bath. The precipitate of triphenylphosphine oxide and of diethoxycarbonylurea is removed by filtration.
  • the ethereal phase obtained is washed with water, dried over magnesium sulfate, then filtered and concentrated in vacuo.
  • step b The product obtained is used without additional purification in step b.
  • Step b The benzoate previously obtained is saponified according to the procedure indicated in Example 1, step d.
  • the analyzes are in accordance with those of the product obtained in step a of Example 1.
  • reaction mixture After 2 h of stirring at room temperature, the reaction mixture is concentrated to dryness, the residue is taken up in chloroform and washed with a saturated aqueous solution of sodium chloride. After decantation, drying of the organic phase over magnesium sulphate, filtration and concentration under vacuum.
  • Step b Deprotection of the amino function.
  • Step £ Synthesis of (2,5-dimethoxyphenyl) hydrochloride-1 glycylamino-2 chiral ethanol.
  • Example 6 Synthesis of the levorotatory enantiomer of (benzyloxycarbonylamino) -2 (dimethoxy-2,5-phenyl) -1 ethanol from its racemic butanoate.
  • the temperature of the suspension obtained is brought to 40 ° C., then the ultra turrax is replaced by pneumatic agitation and 34.7 g (3.14.10 7 units) of Candida cylindracea lipase (Ref. Sigma n * L 1754 type) are added. SEEN).
  • Step b_ '• Reverse configuration of (benzyloxycarbonylamino) -2 (2,5-dimethoxyphenyl) -l chiral ethanol obtained in step a.
  • step a In a 1 1 three-necked flask equipped with magnetic stirring and placed under a stream of nitrogen, a solution of 15 g of mixture obtained in step a is produced with 8.05 g (3.07.10 -2 mol) of triphenylphosphine and 3.75 g (3.07.10 " 2 mol) benzoic acid in 500 ml of an anhydrous methyl tert-butyl-dichloromethane (80/20) mixture.
  • reaction medium is concentrated under vacuum and then the triphenylphosphine oxide and the diisopropoxycarbonylurea are eliminated by passage over silica, using a dichloromethane-acetone mixture (90/10) as eluent. A mixture of levorotatory benzoate and butanoate is thus obtained.
  • the methanol is removed by concentration in vacuo; the precipitate obtained is filtered, washed with water and then dried.
  • the analyzes are in accordance with those obtained in step a of Example 1.
  • the levogyre hydrochloride of 2-amino (2,5-dimethoxyphenyl) -l ethanol can then be obtained easily according to the deprotection and salification processes described in Example 1, steps e and f.
  • the suspension obtained is brought to 40 ° C. and then, with magnetic stirring, 340 mg (3.11 ⁇ 10 5 units) of Candida cylindracea lipase (Ref. Sigma n * L 1754 type VU) are added.
  • reaction medium is extracted with diethyl ether.
  • the organic phase is dried over sodium sulfate, filtered and concentrated in vacuo.
  • the mixture of chiral ester and alcohol obtained can be separated on a silica column.

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Abstract

La présente invention a essentiellement pour objet un procédé de préparation d'aryl-1 alcanols substitués optiquement purs et les produits en résultant. Ce procédé est essentiellement caractérisé par une hydrolyse enzymatique d'un ester de formule (II) en présence d'une enzyme choisie dans le groupe constitué de Candida cylindracea lipase, Porcine pancreas lipase, Pseudomonas fluorescens lipase, Mucor miehei lipase, Candida antartica lipase, Pig liver esterase, Subtilisin hydrolase, dans des conditions de température et de pH permettant l'obtention de composés optiquement purs de formules (III) et (IV). Ces composés trouvent notamment application dans le domaine pharmacologique.

Description

Procédé de préparation d'aryl-1 alcanols substitués optiquement purs.
La présente invention concerne essentiellement un procédé de préparation d'aryl-1 alcanols substitués optiquement purs. Elle concerne également les produits purs obtenus par ce procédé. Le procédé conforme à la présente invention permet de préparer des produits utiles notamment dans le domaine pharmaceutique, et en particulier de médicaments destinés au traitement de l'instabilité vésicale, soit parce que ces produits présentent un profil pharmacologique permettant d'envisager leur utilisation dans ce but, soit parce qu'ils peuvent être utilisés comme intermédiaire pour la synthèse stéréospécifique de produits connus présentant des propriétés pharmacologiques.
Ainsi, dans son aspect le plus général, la présente invention vise à couvrir un procédé de préparation d'aryl-1 alcanols substitués optiquement purs de formule :
OH
Figure imgf000003_0001
dans laquelle :
R]_, R2 identiques ou différents représentent un atome d'hydrogène, un radical hydroxy, méthyl ou méthoxy ;
R3 représente un radical -NH2 ou ~N^5^6 da^ leq el R5, Rg considérés isolément représentent indépendamment un radical alkyl ayant de 1 à
4 atomes de carbone, ou pris ensemble avec l'atome d'azote auquel ils sont rattachés représentent une pipérazine non substituée ou N-substituée par un radical phényl substitué en position 2 par un groupe alcoxy ayant de 1 à 5 atomes de carbone ; n représente un nombre entier variant de 1 à 3 ; caractérisé en ce qu'il consiste a) dans le cas où R3 représente un radical -NH2» a protéger l'atome d'azote au moyen d'un groupement protecteur tel que le tert-butyloxycarbonyle ou le benzyloxycarbonyle. ; b) à faire réagir un composé de formule (I), sous forme de racémique, avec un anhydride d'acide de formule O(CO-R4)2, dans laquelle R4 représente un radical alkyl ayant de 3 à 11 atomes de carbone pour former ainsi un ester de formule :
0
II
C
Figure imgf000004_0001
dans laquelle :
Rj, R2, R3, R4 et n ont la signification indiquée précédemment ; R3 représentant éventuellement un groupe N-protégé ; c) à réaliser une hydrolyse enzymatique de l'ester de formule (H) ainsi obtenu en présence d'une enzyme choisie dans le groupe constitué de Candida cylindracea lipase, Porcine pancréas lipase, Pseudomonas fluorescens lipase,
Mucor miehei lipase, Candida antartica lipase, Pig liver esterase, Subtilisin hydrolase, et dans des conditions de température et de pH permettant l'obtention des composés optiquement purs de formules :
0
II
Figure imgf000004_0002
car- (iv) dans lesquelles :
R]_, R2, R3, R4 et n ont la signification indiquée précédemment ; R3 représentant éventuellement un groupe N-protégé ; dl) à séparer, par exemple sur colonne de silice, les composés (ffl) et (IV) ainsi obtenus ; éventuellement à déprotéger l'atome d'azote du composé de formule (in), en obtenant ainsi un premier énantiomère pur de formule (I) ; éventuellement à faire réagir le composé de formule (TV) précitée avec un agent permettant sa methanolyse, comme notamment le methanolate de sodium, pour obtenir, après une éventuelle déprotection de l'atome d'azote, le second énantiomère pur de formule (I) ; ou d2) à soumettre le mélange des composés (D3) et (TV) obtenu à l'issue de l'étape c) à une réaction d'estérification à l'aide d'agents permettant d'inverser la configuration de l'alcool (HT) tels que, par exemple, un mélange triphénylphosphine, diéthylazodicarboxylate et acide benzoïque ou un mélange triphénylphosphine, diisopropylazodicarboxylate et acide benzoïque, à soumettre ainsi le mélange d'esters ainsi obtenu à un agent permettant leur methanolyse, comme par exemple le methanolate de sodium, ou un agent permettant leur saponification tel que, par exemple, le carbonate de potassium pour obtenir, après une éventuelle déprotection de l'atome d'azote, le second énantiomère de l'alcool de formule (T).
Les composés de formule (I), dans laquelle R3 représente un groupement -NR5R6, tel que défini précédemment, sont doués de propriétés pharmacologiques particulièrement intéressantes dans le domaine de l'urologie.
Les composés de formule (I), dans laquelle R3 représente un radical NH2, peuvent notamment servir de produits intermédiaires pour la synthèse des composés définis précédemment.
Ces composés pouvant en outre être utilisés comme intermédiaires pour la synthèse stéréospécifique de composés également connus sous forme racémique, dont la structure n'entre pas dans le cadre de la formule (I) précitée. Selon une caractéristique particulière de l'invention, le procédé décrit ci-dessus peut également être utilisé pour la préparation du composé optiquement pur de configuration (R) ou (S) répondant à la formule :
Figure imgf000005_0001
Ce composé est notamment utile comme intermédiaire pour la synthèse stéréospécifique du monochlorhydrate de (diméthoxy-2,5 phényl)-l glycylamino-2 éthanol optiquement pur de configuration (R) ou (S) connu (sous forme de racémique) sous la dénomination Midodrine, dont la synthèse sous forme de racémique a notamment été décrite dans le brevet belge n° 838512 incorporé ici par référence. La Midodrine optiquement pure, sous forme (R) ou (S), pourra être obtenue à partir du composé (A) précité par une réaction de couplage de type peptidique, selon le schéma réactionnel suivant :
Figure imgf000006_0001
OMe Z = Benzyloxycarbonyl
Figure imgf000006_0002
Selon une première variante de réalisation, le composé A optiquement pur de configuration (R) ou (S) sera obtenu par hydrolyse enzymatique en présence de Candida cylindracea lipase, de préférence à une température d'environ 40°C et un pH d'environ 5 dans une solution tampon d'hydrogénophosphate de potassium. Selon une variante de réalisation, cette hydrolyse enzymatique sera réalisée en présence de Candida cylindracea lipase, à une température d'environ 40°C dans un mélange d'une solution tampon d'hydrogénophosphate de potassium de pH égal à 5 et de toluène.
Selon encore une autre variante de réalisation, l'hydrolyse enzyma¬ tique sera réalisée en présence de Candida antartica lipase immobilisée de préférence à une température d'environ 40°C dans le toluène.
Les composés de formule (I) dans laquelle R3 représente une pipérazine non substituée ou N-substituée telle que définie précédemment seront obtenus, sous forme de racémique par réduction des cétones de formule (V) :
( V )
Figure imgf000006_0003
dans laquelle :
R5 représente un atome d'hydrogène ou un radical phényl substitué en position 2 par un groupe alcoxy ayant de 1 à 5 atomes de carbone, et R , R2 ont la signification indiquée précédemment.
Cette réduction pourra être réalisée de façon connue en soi à l'aide d'un agent réducteur comme par exemple le borohydrure de sodium dans un solvant comme l'éthanol.
Les composés de formule (V) précitée seront obtenus par réaction d'une cétone halogénée de formule (VI) :
Figure imgf000007_0001
dans laquelle :
Ri et R2 sont définis comme précédemment et X représente un atome d'halogène, de préférence le brome ou le chlore, sur une pipérazine de formule :
Figure imgf000007_0002
dans laquelle :
R5 a la signification indiquée précédemment.
Cette réaction sera de préférence réalisée dans un solvant tel qu'un mélange de triéthylamine et de tétrahydrofuranne.
D'une façon générale, les composés de formule (VI) pourront être obtenus par halogénation de l'acétophénone substituée correspondante, par exemple selon le schéma réactionnel et la référence suivants :
Figure imgf000007_0003
M.L. MALIK et al, (1976) Indian J. Chemistry, vol 14B, 513-515. De même, les composés de formule (VU) pourront être obtenus à partir d'une alcoxy-2 aniline selon le schéma réactionnel et les références suivants :
Figure imgf000008_0001
R7 étant un groupe alkyl ayant de 1 à 5 atomes de carbone
BYSOUTTL PeterT. CLARKE, Robert W.
- S. African 6804, 082, 28 jan 1969.
- Brit. Apρl. 05jul l967.
L'alcoxy-2 aniline précitée pourra être facilement obtenue par alkylation et déprotection subséquente d'acétamido-2 phénol selon des processus expérimentaux connus de l'homme de l'art.
Les composés de formule (I) dans laquelle R3 représente un radical
-NH2 pourront être obtenus selon le schéma réactionnel et les références suivants :
Figure imgf000008_0002
X étant un atome d'halogène. * E. A. Nodiff, J. M. Hulsizer et K. Tanabé ; Chemistry and Industry, 962-963, 1974
* E. Epifani, A. Lapucci, B. Macehia, F. Macchia, P. Tognetti, M. C. Breschi, M. Del Tacea, E. Martinotti et L. Giovanni ; J. Med. Chem., 26, 254-259, 1983.
Les composés de formule (I) dans laquelle R3 représente un radical -NR5R6 dans lequel R5 et Rg représentent indépendamment un radical alkyl ayant de 1 à 4 atomes de carbone pourront être obtenus selon le schéma réactionnel et la référence suivants :
Figure imgf000009_0001
X étant un atome d'halogène,
J. Am. Chem. SOC, 82, 6163, 1960.
Figure imgf000009_0002
Les enzymes utilisées dans le cadre du procédé conforme à la présente invention seront choisies dans le groupe constitué de Candida cylindracea lipase, Porcine pancréas lipase, Pseudomonas fluorescens lipase, Mucor miehei lipase, Candida antartica lipase, Pig liver esterase et Subtilisin hydrolase.
Ces enzymes sont commerciales et sont notamment commercialisées par les sociétés : Fluka, Aldrich, Sigma, Novo Industries, Biocatalysts Ltd.
Le choix de l'enzyme à utiliser et l'optimisation des conditions de réaction seront déterminés par l'homme de métier pour chaque composé parti¬ culier.
Mais il faut noter que, lorsque le substituant Rj est en position 2, il est préférable d'utiliser les enzymes issues d'une souche de Candida et plus particu¬ lièrement Candida cylindracea et Candida antartica iipases. Les opérations de protection et déprotection éventuelles de l'atome d'azote dans le cas où R3 représente un radical -NH2 (étapes a et f) sont tout à fait classiques, notamment dans la chimie des peptides à laquelle l'homme de métier pourra se reporter. II en est également de même pour l'opération de séparation (étape d).
D'une façon générale, les composés lu et IV pourront être séparés sur colonne de silice, ou par d'autres méthodes connues de l'homme de l'art, comme par exemple par HPLC préparative ou par cristallisation fractionnée de sels diastéréoisomères. L'opération d'estérification (étape b) est également réalisée de façon connue en soi, mais constitue l'une des étapes originales du procédé conforme à l'invention.
Le procédé conforme à la présente invention permet de dédoubler des composés de formule (I) précités, c'est-à-dire d'obtenir sous forme optiquement pure chacun des énantiomères (R) et (S).
Si l'un des énantiomères n'est pas intéressant, par exemple parce qu'il n'est pas doué d'un profil pharmacologique intéressant, il peut être modifié par une inversion de configuration afin d'obtenir l'autre énantiomère plus actif.
On utilisera par exemple à cet effet la réaction décrite par Mitsunobu publiée notamment dans Synthesis, 1, pages 1 à 28, 1981, auquel l'homme de métier pourra se reporter.
D'autres caractéristiques et avantages de l'invention seront mieux compris à la lecture qui va suivre de quelques exemples de préparation nullement limitatifs, mais donnés à titre d'illustration.
Exemple 1 Etape â : Synthèse du (benzyloxycarbonylamino)-2 (diméthoxy-2,5 phényl)-l éthanol.
Dans un tricol de 250 ml équipé d'une agitation magnétique, d'un thermomètre, d'une garde à chlorure de calcium et d'une ampoule à brome, on dissout 15,0 g (7.60.10-2 mol) d'amino-2 (diméthoxy-2,5 phényl)-l éthanol dans 150 ml de dichlorométhane anhydre.
On refroidit le mélange ainsi obtenu sur bain de glace à 0°C puis on ajoute 10,88 g (7,60.10~2 mol) de triéthylamine. On ajoute alors goutte à goutte, à l'ampoule à brome, 11,64 ml (8,36.10~2 mol) de chlorure de benzyloxycarbonyle en maintenant la température entre 0 et 5°C. Après addition, on laisse remonter progressivement la température jusqu'à la température ambiante.
On lave le milieu réactionnel ainsi obtenu avec 150 ml d'une solution aqueuse d'acide chlorhydrique 0,5 N puis avec 150 ml d'eau.
Après décantation, on sèche la phase organique sur sulfate de magné¬ sium, puis on filtre et concentre sous vide.
On obtient ainsi un composé de couleur beige clair qui, après recristal¬ lisation dans un mélange d'isobutanol et d'éther de pétrole (40-60), donne le (benzyloxycarbonylamino)-2 (diméthoxy-2,5 phényl)-l éthanol attendu :
Figure imgf000011_0001
m = 15,4 g
Rdt = 61 %
F = 89-90°C (Kôfler)
Pureté = 97,8 % (déterminée en HPLC) LR (KBr) : 1225 cm"!, 1260 cm"1, 1500 cm"1, 1550 cm~l, 1690 cm"1 (C = O carbamate), 3340 cm-! (OH et NH carbamate).
RMN (200 MHz, CDC13) :
3,5 ppm (2H, multiplet, CH2 (2))
3,75 et 3,79 (7H, 2 singulets, 2 OCH3 et OH) 5,0 (1H, multiplet, CH (1))
5,11 (2H, singulet, OCH2Ph)
5,20 (1H, singulet, NH)
6,8 à 7,0 (3H, noyau aromatique trisubstitué)
7,35 (5H, singulet, phényl).
Etape b : Synthèse du butanoate de (benzyloxycarbonylamino)-2 (diméthoxy-2,5 phényl)-l éthanol.
Dans un tricol de 250 ml équipé d'une agitation magnétique, d'un réfrigérant, d'une garde à chlorure de calcium et d'une ampoule à brome, on dissout 10,0 g (3.02.10-1 mol) de (benzyloxycarbonylamino)-2 (diméthoxy-2,5- phényl)-! éthanol obtenu à l'étape a dans 100 ml de dichlorométhane anhydre. On ajoute 4,7 ml (3,32.10"2 mol) de triéthylamine, puis goutte à goutte, à l'ampoule à brome, 6,7 ml (4,11.10~2 mol) d'anhydride butanoïque puis 0,37 g (3,02.10~3 mol) de diméthylamino-4 pyridine.
On laisse une nuit sous agitation magnétique et on lave avec deux fois 175 ml d'une solution aqueuse d'acide chlorhydrique 0,5 N, puis deux fois 175 ml d'une solution aqueuse à 5 % d'hydrogénocarbonate de sodium, et enfin deux fois 175 ml d'eau.
On sèche la phase organique sur sulfate de magnésium, filtre et con¬ centre sous vide.
Le précipité blanc nacré ainsi obtenu est repris dans de l'éther de pétrole (70-100) sous agitation magnétique pendant deux heures. Le mélange obtenu est filtré sur verre fritte et séché.
On obtient l'ester attendu :
Figure imgf000012_0001
m = 10,9 g
Rdt = 90 %
Pureté = 99 % (déterminée en HPLC)
F = 65-66°C (Kôfler)
IR (KBr) : 1050 cm"1, 1225 cm"1, 1275 cm"1, 1500 cm"1, 1545 cm"1,
1690 cm"1 (C = O carbamate), 1730 cm"1 (C = O ester), 3340 cm"1 (NH carbamate).
RMN (200 MHz, CDC13) :
0,90 à 0,97 ppm (3H, triplet, CH3 (a))
1,64 à 1,68 (2H, multiplet, CH2 (b))
2,30 à 2,34 (2H, triplet, CH2 (c))
3,60 (2H, multiplet, CH2 (2))
3,75 et 3,80 (6H, 2 singulets, 2 OCH3)
4,90 (1H, singulet, NH)
5,08 (2H, singulet, CH2 (d)) 6,10 (1H, multiplet, CH (1))
6,79 à 6,90 (3H, noyau aromatique trisubstitué)
7,34 (5H, singulet, phényl).
Etape £ : Dédoublement par Candida cylindracea lipase du butanoate de (benzyl- oxycarbonylamino)-2 (diméthoxy-2,5 phényl)-l éthanol dans une solution tampon 0,05 M d'hydrogénophosphate de potassium à pH = 5.
Dans un ballon de 500 ml équipé d'une agitation magnétique, on met en suspension 2,0 g (5,0.10~3 mol) de butanoate de (benzyloxycarbonylamino)-2 (diméthoxy-2,5 phényl)-l éthanol obtenu à l'étape b dans 160 ml de tampon
0,05 M d'hydrogénophosphate de potassium à pH = 5 en plongeant cinq minutes dans une cuve à ultrasons.
On porte la température de la suspension obtenue à 40°C, puis sous agitation magnétique on ajoute 97,2 mg (3500 unités) de Candida cylindracea lipase (Réf. Ruka n062302).
On maintient le milieu réactionnel à pH = 5 par des additions succes¬ sives d'une solution aqueuse d'hydroxyde de sodium IN.
Après 4 jours d'agitation à 40°C, on extrait le milieu réactionnel par de l'éther diéthylique. La phase organique est séchée sur sulfate de magnésium, filtrée et concentrée sous vide.
On sépare alors le mélange de substrat (ester de formule (IV) dans laquelle Rj = R2 = OCH3 ; R3 = -NHZ ; R4 = C3H7 ; n = 1) et de produit (alcool de formule HI, dans laquelle Rj = R2 = OCH3 ; R3 = -NHZ, n = 1) obtenu sur colonne de silice en utilisant comme éluant un mélange chloroforme/acétone (95/5). Dans les formules précitées, Z représente le groupe protecteur benzyloxy- carbonyle.
On obtient alors : msubstrat = i»0 S mρroduit = °>8 S
Rdt = 51 % Rdt = 47 %. Après methanolyse, déprotection et salification du substrat selon les procédés indiqués aux étapes d, e et f, on obtient le chlorhydrate lévogyre d'amino-2 (diméthoxy-2,5 phényl)-l éthanol :
Rdt global = 37 % (calculé à partir de l'ester racémique).
21 [α]D = -60,1 ± 2,5° (c = 1, méthanol) F = 165-167°C (Kôfler) ee = 95,5 % (déterminé en HPLC sur colonne chirale).
Après déprotection et salification du produit selon les procédés indiqués aux étapes e et f, on obtient le chlorhydrate dextrogyre d'amino-2 (diméthoxy-2,5 phényl)-l éthanol :
Rdt global = 35 % (calculé à partir de l'ester racémique).
21 [α]D = +62,2 ± 2,5° (c = 1, méthanol)
F = 166-168°C (Kôfler) ee = 96,5 % (déterminé en HPLC sur colonne chirale). Les caractéristiques infrarouge et RMN sont communes aux deux énantiomères :
IR (KBr) : 1050 cm"1, 1215 cm"1, 1500 cm"1, 1585 cm"1, bande large centrée sur 3060 cm"1 (-N ), 3420 cm"1 (OH).
RMN (200 MHz, CD3OD) : 2,82 à 2,92 ppm (1H, doublet dédoublé, CH (2'))
3,17 à 3,31 (1H, doublet dédoublé, CH (2))
3,75 et 3,80 (6H, deux singulets, 2 OCH3)
5,15 à 5,21 (1H, doublet dédoublé, CH (1))
6,84 à 6,86 (1H, doublet dédoublé, Hb) 6,89 (1H, doublet, Hc)
7,12 (1H, doublet, Ha)
Figure imgf000014_0001
Etape d : Methanolyse du butanoate de (benzyloxycarbonylamino)-2 (diméthoxy- 2,5 phényl)-l éthanol.
Dans un ballon à évaporer de 500 ml équipé d'une agitation magnétique, on dissout 0,5 mol de butanoate de (benzyloxycarbonylamino)-2 (diméthoxy-2,5 phényl)-! éthanol dans 250 ml de méthanol. On ajoute 6 ml de methanolate de sodium en solution à 25 % dans du méthanol.
Après douze heures d'agitation, on concentre sous vide afin d'éliminer le butanoate de méthyle qui s'est formé durant la réaction. Le (benzyloxycarbonylamino)-2 (diméthoxy-2,5 phényl)-l éthanol ainsi obtenu est remis en réaction dans l'étape e sans purification supplémentaire. Rdt = 98 %.
Etape e : Déprotection de la fonction aminé. Dans une fiole à filtrer équipée d'une agitation magnétique, on prépare une solution de (benzyloxycarbonylamino)-2 (diméthoxy-2,5 phényl)-l éthanol à 10 % dans du méthanol.
On ajoute 10 % (par rapport à la masse de substrat) de charbon palladié à 10 %. On met sous hydrogène à pression atmosphérique et on laisse sous agitation jusqu'à cessation d'absorption.
On filtre sur Bùchner et on concentre sous vide. L'amino-2 (diméthoxy-2,5 phényl)-l éthanol obtenu est utilisé sans purification supplémentaire dans l'étape f. Rdt = 98 %.
Etape f : Synthèse du chlorhydrate d'amino-2 (diméthoxy-2,5 phényl)-l éthanol.
Dans un bêcher équipé d'une agitation magnétique, on met en solution 0,5 g (2,5.10-3 mol) d'amino-2 (diméthoxy-2,5 phényl)-l éthanol dans 3,8 ml d'éthanol.
Cette solution est refroidie dans un mélange de glace et de sel. On ajoute à ce mélange environ 0,4 ml d'une solution saturée de chlorure d'hydrogène dans l'éthanol afin d'obtenir un pH de l'ordre de 1 à 2.
On fait précipiter le milieu en ajoutant 27 ml d'éther diéthylique, puis on filtre, rince à l'éther diéthylique et sèche sous vide.
On obtient alors le chlorhydrate attendu (produit de l'étape c de l'exemple 1) : m = 0,45 g Rdt = 76 %. Exemple 2 Dédoublement par Candida cylindracea lipase du butanoate de (benzyloxy- carbonylamino)-2 (diméthoxy-2,5 phényl)-l éthanol en milieu biphasique tampon/toluène. Dans un réacteur de 10 ml équipé d'une agitation magnétique, on met
2,5.10~ mol de butanoate de (benzyloxycarbonylamino)-2 (diméthoxy-2,5 phényl)-l éthanol préparé à l'exemple 1, étape b, dans 5 ml d'un mélange tampon : 0,05 M d'hydrogénophosphate de potassium pH 5/toluène (80/20).
On porte le milieu réactionnel à 40°C et on ajoute 180 unités de Candida cylindracea lipase (Réf. SIGMA n* L-1754 Type VU).
Après sept jours d'agitation à 40°C, on observe la formation de (+) (benzyloxycarbonylamino)-2 (diméthoxy-2,5 phényl)-l éthanol avec : taux de conversion = 17 % ee > 99,9 . Ce dernier peut être isolé par décantation du milieu, concentration et séparation sur colonne de silice avec comme éluant un mélange chloroforme/ acétone (95/5).
Exemple 3 Dédoublement par Candida antartica lipase immobilisée du butanoate de (benzyl- oxycarbonylamino)-2 (diméthoxy-2,5 phényl)-l éthanol dans le toluène.
Dans un réacteur de 10 ml, on dissout 2,5.10"^ mol de butanoate de (benzyloxycarbonylamino)-2 (diméthoxy-2,5 phényl)-l éthanol dans 5 ml de toluène. On porte le milieu à 40°C et on ajoute 23 mg (90 unités) de Candida antartica lipase immobilisée sur résine (Réf. Novo SP435L).
Après sept jours d'agitation on observe la formation de (+) (benzyl- oxycarbonylamino)-2 (diméthoxy-2,5 phényl)-l éthanol avec : taux de conversion = 18,6 % ee > 99,9 %.
Ce dernier peut être isolé par filtration de l'enzyme, concentration du filtrat et séparation sur colonne de silice avec comme éluant un mélange chloro¬ forme/acétone (95/5). Exemple 4
Inversion de configuration du (benzyloxycarbonylamino)-2 (diméthoxy-2,5- phényl)-l éthanol chiral.
Etape a : Estérification selon la méthode de Mitsunobu. Dans un réacteur de 10 ml équipé d'une agitation magnétique et placé sur bain de glace et sel à -13°C, on réalise une solution de 5.10"^ mol d'acide benzoïque et 6.10~4 mol de DEAD (diéthylazodicarboxylate) dans 1 ml de tétrahydrofuranne anhydre.
On ajoute goutte à goutte une solution de 5.10~4 mol de triphényl- phosphine et 5.10"^ mol de (+) (benzyloxycarbonylamino)-2 (diméthoxy-2,5- phényl)-l éthanol (ee = 99,8 %) dans 1 ml de tétrahydrofuranne.
Après trois heures d'agitation magnétique à -13°C, on concentre le milieu réactionnel sous vide, et on reprend à l'éther diéthylique sur bain de glace. On élimine le précipité d'oxyde de triphénylphosphine et de diéthoxy- carbonylurée par filtration.
On lave à l'eau la phase éthérée obtenue, on sèche sur sulfate de magnésium, puis on filtre et concentre sous vide.
Après purification sur colonne de silice, on obtient le (-) benzoate de
(benzyloxycarbonylamino)-2 (diméthoxy-2,5 phényl)-l éthanol avec : Rdt = 70 %
Pureté chimique = 88 % (déterminée en HPLC) ee = 85 % (déterminé en HPLC sur colonne chirale).
IR (pur entre plaques NaCl) : 720 cm"1, 1275 cm"1, 1500 cm"1, 1730 cm"1
(C = O carbamate et ester), 3360 cm"1 (NH carbamate). RMN (200 MHz, CDCI3) :
3,75 à 3,85 (8H, 2 singulets et 1 multiplet, CH2 (2) et 2 OCH3)
5,07 (3H, singulet, CH2 (3) et NH)
6,42 (1H, doublet dédoublé, CH2 (1))
6,80 à 6,97 (3H, noyau aromatique trisubstitué) 7,30 (5H, singulet, phényl du groupement benzyloxycarbonyle)
7,41 à 8,12 (5H, phényl du groupement benzoyle)
Figure imgf000018_0001
Le produit obtenu est utilisé sans purification supplémentaire dans l'étape b.
Etape b, : Le benzoate précédemment obtenu est saponifié selon le mode opératoire indiqué dans l'exemple 1, étape d.
On obtient, après purification sur colonne de silice, le (-) (benzyloxy- carbonylamino)-2 (diméthoxy-2,5 phényl)-l éthanol. Rdt = 85 % ee = 85 % (déterminé en HPLC sur colonne chirale).
Les analyses sont conformes à celles du produit obtenu à l'étape a de l'exemple 1.
Exemple 5 Etape a : Synthèse du (benzyloxycarbonylglycylamino) (diméthoxy-2,5 phényl)- 1 éthanol.
Dans un tricol de 250 ml équipé d'une agitation magnétique et d'une garde à chlorure de calcium, on met en suspension 3,84 g (1,64.10~2 mol) de chlorhydrate d'amino-2 (diméthoxy-2,5 phényl)-l éthanol chiral dans 70 ml de diméthoxy-1,2 éthane anhydre.
On ajoute 5,03 g (1,64.10-2 mol) de succinimide de benzyloxycarbonylglycine et 2,30 ml (1,64.10~2 mol) de triéthylamine.
Après 2 h d'agitation à température ambiante, on concentre à sec le milieu réactionnel, on reprend par du chloroforme et lave avec une solution aqueuse saturée en chlorure de sodium. Après décantation, séchage de la phase organique sur sulfate de magnésium, on filtre et concentre sous vide.
On obtient ainsi 5,8 g d'un composé huileux qui, par purification sur colonne de silice avec comme éluant un mélange chloroforme/acétone (60/40), permet d'isoler le (benzyloxycarbonylglycylamino)-2 (diméthoxy-2,5 phényl)-l éthanol.
En partant du chlorhydrate d'amino-2 (diméthoxy-2,5 phényl)-l éthanol lévogyre (ee : 95,5 %), on obtient : m = 3,0 g Rdt = 60 %
Pureté = 99 % (déterminée en HPLC) ee = 95,5 % (déterminé en HPLC sur colonne chirale)
[α]2 } 2 = -24,3±2,5* (c = 1, éthanol)
F = 91-93#C (Kôfler) En partant du chlorhydrate d'amino-2 (diméthoxy-2,5 phényl)-l éthanol dextrogyre (ee = 96,5 %), on obtient : m = 3,0 g
Rdt = 60 %
Pureté = 99 % (déterminée en HPLC) ee = 96,5 % (déterminé en HPLC sur colonne chirale)
[α]2 } 2 = +24,6±2,5* (c = 1, éthanol)
F = 92-93*C (Kôfler).
Les analyses infrarouge et RMN sont communes aux deux énantio¬ mères : IR (KBr) : 1175 cm"1, 1240 cm"1, 1495 cm"1, 1670 cm"1 (C = O d'amide),
1735 cm"1 (C = O de carbamate), 3290 et 3480 cm"1 (2 NH et OH).
RMN (200 MHz, CDCI3) :
2,57 ppm (1H, OH benzylique)
3,37 à 3,50 ppm (1H, multiplet, H de CH2 (2)) 3,68 à 3,79 ppm (1H, multiplet, H de CH2 (2))
3,77 et 3,80 ppm (6H, 2 singulets, 2 OCH3)
3,87 et 3,89 ppm (2H, 2 singulets, CH2 (3))
4,95 à 5,0 ppm (1H, doublet dédoublé, CH (1)) RMN (200 MHz, CDC13 + CD3OD) :
3,14 ppm (2H, singulet, CH2 (3))
3,17 à 3,51 ppm (2H, 2 doublets dédoublés, CH2 (2))
3,62 et 3,64 ppm (6H, 2 singulets, 2 OCH3)
4,87 et 4,92 ppm (1H, doublet dédoublé, CH(1))
6,62 à 6,89 ppm (3H, noyau aromatique trisubstitué)
Figure imgf000020_0001
5,12 ppm (2H, singulet, CH2(4))
5,41 ppm (lH, NH b)
6,43 ppm (lH, NH a)
6,79 à 6,98 ppm (3H, noyau aromatique trisubstitué)
7,26 à 7,37 (5H, noyau phényle)
Figure imgf000020_0002
Etape b : Déprotection de la fonction aminé.
Le composé chiral précédemment obtenu est déprotégé selon le mode opératoire indiqué dans l'exemple 1 étape e afin d'obtenir le (diméthoxy-2,5 phényl)-l glycylamino-2 éthanol chiral correspondant.
En partant du (benzyloxycarbonylglycylamino)-2 (diméthoxy-2,5 phényl)-l éthanol lévogyre on obtient : Rdt : 92 %
[α]2 } 1 = -36,7±2,5# (c = 1,16, éthanol)
F = 102-104'C (Kôfler)
En partant du (benzyloxycarbonylglycylamino)-2 (diméthoxy-2,5- phényl)-! éthanol dextrogyre on obtient : Rdt = 93 %
[α]^1 = +37,l+2,5# (c = 1,1, éthanol) F = 103-105#C (Kôfler).
Etape £ : Synthèse du chlorhydrate de (diméthoxy-2,5 phényl)-l glycylamino-2 éthanol chiral.
A partir du composé précédemment obtenu et en suivant le mode opératoire décrit dans . exemple 1 étape f, on obtient le chlorhydrate de (diméthoxy-2,5 phényl)-l glycylamino-2 éthanol chiral. A partir du (diméthoxy-2,5 phényl)-l glycylamino-2 éthanol levogyre, on obtient : Rdt : 85 %
[a]2 ) 1 = -34,6+2,5* (c = 1,05, méthanol) ee = 98 % (déterminé en HPLC sur colonne chirale avec dérivation) F = 179-181#C (Kôfler)
Pureté = 98 % (déterminée en HPLC).
A partir du (diméthoxy-2,5 phényl)-l glycylamino-2 éthanol dextrogyre, on obtient : Rdt : 84 % [a]2 } 1 = +35,0+2,5 (c = 1, méthanol) ee = 98,4 % (déterminé en HPLC sur colonne chirale avec dérivation)
F = 180-182#C (Kôfler)
Pureté = 98,5 % (déterminée en HPLC).
Les caractéristiques infrarouge et RMN sont communes aux deux énantiomères :
IR (KBr) : 1040 cm"1, 1215 cm"1, 1500 cm"1, 1570 cm"1, 1655 cm"1 (C = O
Λ + d'amide), bande large centrée sur 3300 cm-1 (OH et N H-,)
Exemple 6 Synthèse de l'énantiomere levogyre du (benzyloxycarbonylamino)-2 (diméthoxy- 2,5-phényl)-l éthanol à partir de son butanoate racémique. Etape a : Dédoublement par Candida cylindracea lipase du butanoate de (benzyloxycarbonylamino)-2 (diméthoxy-2,5 phényl)-l éthanol dans une solution tampon d'hydrogénophosphate de potassium 0,05 M à pH = 5.
Dans un réacteur de 101 on met en suspension à l'aide d'un ultra turrax 100 g (0,25 mol) de butanoate de (benzyloxycarbonylamino)-2 (diméthoxy-2,5 phényl)-l éthanol obtenu dans l'exemple 1 étape b dans 8 1 de tampon 0,05 M d'hydrogénophosphate de potassium à pH = 5.
On porte la température de la suspension obtenue à 40'C puis on remplace l'ultra turrax par une agitation pneumatique et on ajoute 34,7 g (3.14.107 unités) de Candida cylindracea lipase (Réf. Sigma n* L 1754 type VU).
On maintient le milieu réactionnel à pH = 5 par des additions successives d'une solution aqueuse d'hydroxyde de sodium IN.
Après 24 h d'agitation à 40*C on filtre le milieu réactionnel sur verre fritte de porosité 4. On reprend le précipité obtenu par du dichlorométhane puis on effectue deux lavages à l'eau.
La phase organique est séchée sur sulfate de magnésium, filtrée et concentrée sous vide.
On obtient alors un mélange d'ester de formule IV dans laquelle Rx = 2-OCH3 ; R2 = 5-OCH3 ; R3 = NHz ; R4 = C3H7 ; n = 1 et d'alcool de formule IÏÏ dans laquelle Rx = 2-OCH3 ; R2 = 5-OCH3 ; R3 = NHz ; n = 1 ayant les caractéristiques suivantes : teneur en alcool = 50,2 % (déterminée en HPLC) ^alcool = 97,3 % (déterminé en HPLC sur colonne chirale) teneur en ester = 49,8 % (déterminée en HPLC)
^ester = 97,1 % (déterminé en HPLC sur colonne chirale) Rdt global = 97 %.
Etape b_ '• Inversion de configuration du (benzyloxycarbonylamino)-2 (diméthoxy- 2,5 phényl)-l éthanol chiral obtenu à l'étape a.
b-1 : Estérification selon la méthode de Mitsunobu.
Dans un tricol de 1 1 équipé d'une agitation magnétique et placé sous courant d'azote, on réalise une solution de 15 g de mélange obtenu dans l'étape a avec 8,05 g (3,07.10-2 mol) de triphénylphosphine et 3,75 g (3.07.10"2 mol) d'acide benzoïque dans 500 ml d'un mélange éther méthyl tertbutylique-dichloro- méthane (80/20) anhydre.
On ajoute goutte à goutte 25,3 ml d'une solution à 25 % d'azobis- dicarboxylate d'isopropyle (DIAD) (3.17.10"2 mol) dans le mélange d'éther méthyl tertbutylique-dichlorométhane (80/20) anhydre.
Après 2 h d'agitation on concentre le milieu réactionnel sous vide puis on élimine l'oxyde de triphénylphosphine et la diisopropoxycarbonylurée par passage sur silice en utilisant comme éluant un mélange dichlorométhane-acétone (90/10). On obtient ainsi un mélange de benzoate et de butanoate lévogyres du
(benzyloxycarbonylamino)-2 (diméthoxy-2,5 phényl)-l éthanol ayant les carac¬ téristiques suivantes : m = 17 g eebenzoate = 90 % (déterminé en HPLC sur colonne chirale) eebutanoate = 97,1 % (inchangé) pureté chimique = environ 92 % (déterminée en HPLC).
b-2 : Obtention du (benzyloxycarbonylamino)-2 (diméthoxy-2,5 phényl)-l éthanol levogyre par saponification. Dans un tricol de 250 ml équipé d'une agitation magnétique, on met en suspension les 17 g du mélange précédemment obtenu dans 100 ml d'un mélange méthanol-eau (80/20).
On ajoute 11,32 g (8,2.10~2 mol) de carbonate de potassium puis on porte à 30'C. Après 3 h d'agitation à 30*C, l'alcool obtenu a précipité dans le milieu.
On élimine le méthanol par concentration sous vide ; le précipité obtenu est filtré, lavé à l'eau puis séché.
On obtient le (benzyloxycarbonylamino)-2 (diméthoxy-2,5 phényl)- 1 éthanol levogyre avec : m = 11,5 g
Rdt global sur les étapes b-1 et b-2 = 85 % Pureté chimique = 97 % (déterminée en HPLC) ee = 93 % (déterminé en HPLC sur colonne chirale).
Les analyses sont conformes à celles obtenues à l'étape a de l'exemple 1. Le chlorhydrate levogyre d'amino-2 (diméthoxy-2,5 phényl)-l éthanol peut alors être obtenu facilement selon les procédés de déprotection et de salification décrits dans l'exemple 1, étapes e et f.
Exemple 7
Procédure de dédoublement de butanoates d'(alcoxy-2 phényl-4 pipérazinyl-l)-2 (diméthoxy-2,5 phényl)-l éthanols.
Dans un réacteur de 50 ml équipé d'une agitation magnétique, on met en suspension 4,4.10"^ mol d'ester racémique dans 16 ml d'une solution tampon d'hydrogénophosphate de potassium 0,05 M à pH = 5.
On porte la suspension obtenue à 40*C puis, sous agitation magné¬ tique, on ajoute 340 mg (3.11.105 unités) de Candida cylindracea lipase (Réf. Sigma n* L 1754 type VU).
On maintient le milieu réactionnel à pH = 5 par des additions succes- sives d'une solution aqueuse d'hydroxyde de sodium 1 N.
Lorsque le taux de conversion est jugé satisfaisant, le milieu réactionnel est extrait par de l'éther diéthylique.
La phase organique est séchée sur sulfate de sodium, filtrée et concentrée sous vide. Le mélange d'ester et d'alcool chiraux obtenus peut être séparé sur colonne de silice.
L'hydrolyse du butanoate de (diméthoxy-2,5 phényl)-l (o-éthoxy- phényl-4 pipérazinyl-l)-2 éthanol selon ce procédé permet d'obtenir un mélange d'ester de formule IV dans laquelle R = 2-OCH3 ; R2 = 5-OCH3 ; R3 = (o- éthoxyphényl-4 pipérazinyl-1) ; R4 = C3H7 ; n = 1 et d'alcool de formule III dans laquelle R = 2-OCH3 ; R2 = 5-OCH3 ; R3 = (o-éthoxyphényl-4 pipérazinyl- 1) ; n = 1 ayant les caractéristiques suivantes après 72 h de réaction : taux de conversion = 33,8 % (déterminé en HPLC) eealcool = 89,1 % (déterminé en HPLC sur colonne chirale) eeester = 45,5 % (déterminé en HPLC sur colonne chirale).
L'hydrolyse du butanoate de (diméthoxy-2,5 phényl)-l (o-iso- propoxyphényl-4 pipérazinyl-l)-2 éthanol selon ce procédé permet d'obtenir un mélange d'ester de formule IV dans laquelle Rx = 2-OCH3 ; R2 = 5-OCH3 ;
R3 = (o-isopropoxyphényl-4 pipérazinyl-1) ; R4 = C3H7; n = 1 et d'alcool de formule III dans laquelle Rx = 2-OCH3 ; R2 = 5-OCH3 ; R3 = (o-isopropoxy- phényl-4 pipérazinyl-1) ; n = 1 ayant les caractéristiques suivantes après 22 h de réaction : taux de conversion = 35,3 % (déterminé en HPLC) eealcool = 96,3 % (déterminé en HPLC sur colonne chirale) eeester = 52,6 % (déterminé en HPLC sur colonne chirale).

Claims

R E V E N D I C A T I O N S
1. Procédé de préparation d'aryl-1 alcanols substitués optiquement purs de formule :
OH
Figure imgf000026_0001
dans laquelle :
Rχ} R2 identiques ou différents représentent un atome d'hydrogène, un radical hydroxy, méthyl ou méthoxy ; R3 représente un radical -NH2 ou -NR5R6 dans lequel R5, R considérés isolément représentent indépendamment un radical alkyl ayant de 1 à 4 atomes de carbone, ou pris ensemble avec l'atome d'azote auquel ils sont rattachés représentent une pipérazine non substituée ou N-substituée par un radical phényl substitué en position 2 par un groupe alcoxy ayant de 1 à 5 atomes de carbone ; n représente un nombre entier variant de 1 à 3 ; caractérisé en ce qu'il consiste a) dans le cas où R3 représente un radical -NH2, à protéger l'atome d'azote au moyen d'un groupement protecteur tel que le tert-butyloxycarbonyle ou le benzyloxycarbonyle ; b) à faire réagir un composé de formule (I), sous forme de racémique, avec un anhydride d'acide de formule O(CO-R4)2, dans laquelle R4 représente un radical alkyle ayant de 3 à 11 atomes de carbone pour former ainsi un ester de formule :
3 <n>
Figure imgf000026_0002
dans laquelle :
Rχ> R2, R3, R4 et n ont la signification indiquée précédemment, R3 représentant éventuellement un groupe N-protégé ; c) à réaliser une hydrolyse enzymatique de l'ester de formule (H) ainsi obtenu en présence d'une enzyme choisie dans le groupe constitué de Candida cylindracea lipase, Porcine pancréas lipase, Pseudomonas fluorescens .ipase, Mucor miehei lipase, Candida antartica lipase, Pig liver esterase, Subtilisin hydrolase, et dans des conditions de température et de pH permettant l'obtention des composés optiquement purs de formules :
Figure imgf000027_0001
dans lesquelles :
Rχ> R2, R3, R4 et n ont la signification indiquée précédemment, R3 représentant éventuellement un groupe N-protégé ; dl) à séparer, par exemple sur colonne de silice, les composés (HI) et
(IV) ainsi obtenus ; éventuellement à déprotéger l'atome d'azote du composé de formule (in), en obtenant ainsi un premier énantiomère pur de formule (I) ; éventuellement à faire réagir le composé de formule (TV) précitée avec un agent permettant sa methanolyse, comme notamment le methanolate de sodium, pour obtenir, après une éventuelle déprotection de l'atome d'azote, le second énantiomère pur de formule (I) ; ou d2 à soumettre le mélange des composés (III) et (IV) obtenu à l'issue de l'étape c) à une réaction d'estérification à l'aide d'agents permettant d'inverser la configuration de l'alcool (IH) tels que, par exemple, un mélange triphénylphosphine, diéthylazodicarboxylate et acide benzoïque ou un mélange triphénylphosphine, diisopropylazodicarboxylate et acide benzoïque, à soumettre ainsi le mélange d'esters ainsi obtenu à un agent permettant leur methanolyse, comme par exemple le methanolate de sodium, ou un agent permettant leur saponification tel que, par exemple, le carbonate de potassium pour obtenir, après obtenir, après une éventuelle déprotection de l'atome d'azote, le second énantiomère de l'alcool de formule (I).
2. Procédé selon la revendication 1, pour la préparation du composé optiquement pur de configuration (R) ou (S), répondant à la formule :
Figure imgf000028_0001
caractérisé en ce que l'hydrolyse enzymatique précitée est réalisée en présence de Candida cylindracea lipase, de préférence à une température d'environ 40°C et un pH d'environ 5 dans une solution tampon d'hydrogénophosphate de potassium.
3. Procédé selon la revendication 1, pour la préparation du composé optiquement pur de configuration R ou S, répondant à la formule :
Figure imgf000028_0002
caractérisé en ce que l'hydrolyse enzymatique précitée est réalisée en présence de Candida cylindracea lipase, à une température d'environ 40°C dans un mélange d'une solution tampon, par exemple d'hydrogénophosphate de potassium de pH égal à 5 et de toluène.
4. Procédé selon la revendication 1, pour la préparation du composé optiquement pur de configuration (R) ou (S), répondant à la formule :
Figure imgf000028_0003
caractérisé en ce que l'hydrolyse enzymatique précitée est réalisée en présence de Candida antartica lipase immobilisé de préférence à une température d'environ 40°C dans du toluène.
5. Composés dérivés --d'aryl-1 alcanols (R) ou (S) optiquement purs, caractérisés en ce qu'ils sont obtenus par la mise en oeuvre du procédé selon la revendication 1 et répondent à la formule (I) telle que définie à la revendication 1.
6. Composés selon la revendication 5, caractérisés en ce qu'il s'agit d'un composé optiquement pur de configuration (R) ou (S) répondant à la formule :
Figure imgf000029_0001
7. Utilisation des composés selon la revendication 6, comme intermé¬ diaire pour la synthèse stéréospécifique du (diméthoxy-2,5 phényl)-l glycylamino-2 éthanol, éventuellement sous forme de monochlorhydrate, optiquement pur de configuration (R) ou (S).
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