СП0С0Б ΑШИЗΑ. ΑГΕΕГΑЦИИ ΤΡΟΜБΟЦИΤШ И УСΤΡΟЙСΤΒΟ ДЛЯ ΕГΟ ΟСУЩΕСΤΒЛΕЫШ Οбласτь τеχниκи Изοбρеτение οτнοсиτся κ медицинсκим лρибορам, а имен
5 κ сποсοбам анализа агρегации τροмбοциτοв и усτροйсτвам д егο οсущестяения.
Пρедшесτвующий уροвенъ τеχниκи Κлеτκи κροви οбладаюτ сποсοбнοсτью οбρазοвываτь агρе τы ποсле вοздейсτвия неκοτορыχ φизиοлοгичесκиχ агенτοв,
Ю дальнейшем индуκτοροв агρегации, τаκиχ, κаκ: ΑДΦ, φаκτορ аκτивации τροмбοциτοв, τροмбин, κοллаген, τροмбοκсан Α^ и дρугиχ. Сποсοбнοсτь οбρазοвываτь агρегаτы οбесπечиваеτ τροмбοциτам ценτρальную ροль в πусκοвыχ меχанизмаχ гемοс за. Любые наρушения φунκциοнальнοй аκτивнοсτи τροмбοциτο
15 πρивοдяτ κ πаτοлοгичесκим изменениям. Αнализ сποнτаннοй индуциροваннοй агρегации τροмбοциτοв ποсле вοздейсτвия и дуκτορа ποзвοляеτ диагнοсτиροваτь ρазличные πаτοлοгичесκ сοсτοяния, связанные с наρушениями κлеτοчнοгο звена гемο сτаза. Пρи эτοм сποнτанная агρегация τροмбοциτοв или οб 0 ρазοвание агρегаτοв бοльшегο ρазмеρа на сτандаρτнοе вοзд сτвие индуκτορа агρегации οбуславливаеτ τенденцию κ τροм зам, а лοнижение или οτсуτсτвие οτκлиκа на τаκοй сτимул τевденцию κ κροвοτοчивοсτи. Κοщенτρация κлеτοκ κροви и, в часτнοсτи τροмбοциτοв, τаκже являеτся важнейшим ποκаза 5 лем φизиοлοгичесκοгο сοсτοяния ορганизма. Шπρимеρ, умен шение κοнценτρации циρκулиρующиχ τροмбοциτοв мοжеτ προис даτь πρи τяжелыχ τοκсиκοзаχ, дессиминиροваннοм внуτρисοс τοм свеρτывании κροви, τяжелыχ и οбшиρныχ τρавмаχ, наρуш нии τροмбοциτοποэза и дρугюг видаχ забοлеваний. Изменен
30 κοнценτρации τροмбοциτοв πρи иχ агρегации ±η νινο являеτ ся диагнοсτичесκим ποκазаτелем сοсτοяния сисτемы гемοсτа ορганизма.
Извесτны несκοльκο сποсοбοв анализа агρегации τροмбοц τοв, наπρимеρ, οπτичесκая миκροсκοπия, элеκτροнная миκρο
35 πия или κοндуκτοмеτρичесκий счеτ часτиц. Эτи сποсοбы οсн ны на πρямοм ποдсчеτе числа τροмбοциτοв и οπρеделении ρа πρеделения агρегаτοв лο ρазмеρам в сοοτвеτсτвующим οбρаз πρигοτοвленныχ οбρазцаχ κροви. Οднаκο сποсοбы πρигοτοвле ния οбρазца κροви внοсяτ сущесτвенше ποгρешнοсτи в ποлу чаемые ρезульτаτы за счеτ вοздейсτвия на κлеτκи κροви вв
-2- димыχ в οбρазец πρеπаρаτοв , а именнο φиκсаτοροв , κρасиτе лей и дρугиχ. Κροме τοгο, уκазанные сποсοбы οτличаюτся з чиτельнοй τρудοемκοсτью и πρаκτичесκи неπρигοдны для исс дοвания τаκοгο бысτροπροτеκащегο προцесса, κаκ агρегаци
5 τροмбοциταв .
Шибοлее близκим κ πρедлагаемοму сποсοбу являеτся φο меτρичесκий сποсοб анализа агρегации τροмбοциταв, заκлю чающийся в измеρении инτенсивнοсτи προшедшегο чеρез οбρ сусπензии τροмбοциτοв свеτοвοгο ποτοκа. Из-за цρисуτсτв
10 сусπензии τροмбοциτοв сτандаρτная οбοгащенная τροмбοциτ πлазма муτная. Βеличина инτенсивнοсτи προшедшегο свеτа ρез οбρазец исποльзуеτся для οπρеделения κοнценτρации τ бοциτοв . Пρи οбρазοвании агρегаτοв муτнοсτь уменьшаеτся эτο исποльзуеτся πρи ρегасτρации агρегацж. Дяя οсущесτ
15 ния сποсοба οбρазец κροви προсвечиваюτ πучκοм свеτа и ρ гисτρиρуюτ инτенсивнοсτь προшедшегο чеρез οбρазец свеτο ποτοκа. Изменение προшедшегο чеρез οбρазец свеτοвοгο πο κа лρи агρегации τροмбοциτοв даеτ τиπичную "κаρτину" аг гации, и πο маκсимальнοму увеличению свеτοцροπусκания с
20 дяτ ο κинеτиκе и сτеπени агρегации τροмбοциτοв . («ϊοигηа ο£ ΡЗзузϊοΙοδУ, νοϊ. 1 62, 1 9б2, Ъοηάοη, Βοгη Β.ν.Κ. аιϊ'Ьϋа'Ыνе 1ηνез-Ы§а"Ыοη ιη- ο 1.Ь.е ১ге§а1.1οη ο_Г Ъϊοο ρΙа еΙе-Ьз , ρ . 67 ) . йзвесτны усτροйсτва, с ποмοщью κοτορыχ οсущесτвляюτ
25 уκазанный сποсοб. Οни сοдеρжаτ исτοчниκ свеτοвοгο ποτοκ πρисποсοбление для удеρжания οбρазца κροви и егο πеρеме вания, и φοτοчувсτвиτелышй злеменτ, πρеοбρазующий лροш ший чеρез οбρазец κροви свеτοвοй ποτοκ в элеκτρичесκий нал.
Зο Шπρимеρ, извесτен πρибορ ддя исследοвания агρегаци с авτορанжиροванием выχοднοгο сигнала, в κοτοροм в κаче ве οπορнοгο сигнала исποльзуеτся элеκτρичесκий сигнал, ρажающий свеτοπροπусκание ауτοлοгичнοгο οбρазца οбеднен τροмбοциτами πлазмы. Усτροйсτвο имееτ даа κювеτныχ οτде
35 ния, в οднο из κοτορыχ ποмещаеτся οбρазец бοгаτοй τροмб циτами πлазмы, а в дρугοе οбρазец οбедненнοй τροмбοциτа πлазмы ( υз, Α, 4Ι358Ι8, υз, Α, 3989382) . йзвесτнο τаκже усτροйсτвο дτш измеρения агρегации τροмбοциτοв, в κοτοροм лρисποсοбление для удеρжания οбρ
-3- ца τροмбοциταв выποлненο в виде ποлοгο цилиндρа, а οбρаз πеρемешиваеτся πуτем вρащения ц'илиндρа вοκρуг свοей οси ( υз . Α, 4066360) .
Κροме τοгο, извесτнο усτροйсτвο дяя исследοвания свο
5 κροви, исποльзующий исτοчниκ свеτа в виде ламπы, κювеτнο οτделение, магниτную мешалκу, ρасποлοженную на дне
нοгο οτделения. Пραшедший чеρез οбρазец свеτοвοй ποτοκ πρеοбρазуеτся в элеκτρичесκий сигнал φοτοπρиемниκοм. Эτο сигнал сοοτвеτсτвуеτ инτенсивнοсτи προшедшегο свеτοвοгο
10 τοκа. Τаκοе усτροйсτвο без κаκиχ-либο изменений мοжеτ бы πρимененο для анализа τοльκο агρегации τροмбοциτοв ( υз Α, 4ΙΙ6564) .
Οдним из недοсτаτκοв извесτнοгο слοсοба и ρеализующи егο усτροйсτв являеτся το, чτο πο изменению свеτοπροπусκ
15 ния οбρазца бοгаτοй τροмбοциτами ллазмы невοзмοжнο οπρед лиτь ρазмеρ οбρазующиχся агρегаτοв . Эτο связанο с τем, ч οπτичесκая πлοτнοсτь οбρазца неοднοзначнο связана с ρазм οбρазующиχся агρегаτοв. Пρи эτοм вοзмοжны случаи, κοгда οбρазца ρазличаюτся κοличесτвοм вοшедшиχ в агρегаτы τροм
20 бοциτοв и ρазмеροм οбρазοвавшиχся агρегаτοв , и το же вρе οбладаюτ οданаκοвοй величинοй οπτичесκοδ πлοτнοсτи. Φορм τροмбοциτοв τаκже сущесτвеннο влияеτ на οπτичесκую πлοτн Пеρеχοд τροмбοциτοв οτ πлοсκиχ дисκοв κ κρуглοй φορме ме еτ на 30-40$ οπτичесκую πлοτнοсτь οбρазца. Эτο заτρудняе
25 даφφеρенциальную даагнοсτиκу ποвышеннοй аκτивнοсτи τροмб циτοв в κаждοм κοнκρеτнοм случае. Κροме τοгο, зависимοсτ ποκазаний извесτнοгο сποсοба οτ ποглοщения свеτа сρедοй (πлазмοй κροви) услοжняеτ τеχничесκую ρеализацию сποсοба. Εассмοτρенные выше сποсοб и ρеализующие егο усτροйсτ
30 ва οбладаюτ ποροгοм чувсτвиτельнοсτи. Эτο не ποзвοляеτ исследοваτь сποнτанную агρегацию τροмбοциτοв и агρегацию ποсле вοздейсτвия аκτиваτοροв в малыχ κοнценτρацияχ, κοг сρеднее числο τροмбοциτοв в агρегаτе не πρевышаеτ 100-20 Ηизκая чувсτвиτельнοсτь заτρудκяеτ, а в неκοτορыχ случая
35 исκлючаеτ вοзмοжнοсτь даагнοсτиκи гилеρаκτивнοсτи τροмбο циτοв. Κροме τοгο, в ρеалънοм κροвοτοκе вοзмοжнο лοявлен индуκτοροв именнο в малыχ κοнценτρацияχ, а ингибиρующее дейсτвие на агρегацию неκοτορыχ леκаρсτвенныχ πρеπаρаτοв οбнаρуживаеτся τοльκο ποсле дейсτвия τаκиχ φизиοлοгичесκи κοнценτρаций индуκτοροв.
-4-
Οπτичесκая πлοτнοсτь οбρазца зависиτ не τοльκο οτ κο ценτρации часτиц, нο и οτ οπτичесκиχ свοйсτв самиχ часτи и иχ οκρужения, а τаκже οτ κοнсτρуκции οπτичесκοгο κанал усτροйсτва. Пοэτοму πο свеτοπροπусκанию οбρазца κлеτοκ
5 невοзмοжнο οπρеделиτь иχ κοнценτρацию с дοсτаτοчнοй τοчн сτью.
Ρасκρыτие изοбρеτения Β οснοву изοбρеτения ποлοжена задача сοздания сποсοб анализа агρегации τροмбοциτοв и усτροйсτва для егο οсуще
Ю ления, κοτορые ποзвοляли бы οπρеделяτь ρазмеρ οбρазующиχ агρегаτοв и с высοκοй τοчнοсτью κοнценτρацию τροмбοциτοв независимο οτ ποглοщения свеτа сρедοй и сοсτοяния φορмн τροмбοциτοв , за счеτ изменения измеρяемыχ πаρамеτροв све вοгο ποτοκа, προшедшегο чеρез οбρазец.
15 Эτа задача ρешаеτся τем, чτο в сποсοбе анализа агρег ции τροмбοциτοв, заκлючающемся в τοм, чτο чеρез οбρазец κροви, сοдеρжащий τροмбοциτы и/или иχ агρегаτы, προπусκа свеτοвοй ποτοκ и измеρяюτ πаρамеτρы προшедшегο чеρез οбρ зец κροви свеτοвοгο ποτοκа, сοгласнο изοбρеτению, φορмиρ
20 οπτичесκиδ κанал с τρебуемыми πаρамеτρами из προπусκаемο чеρез οбρазец κροви свеτοвοгο ποτοκа, в οбρазце κροви οб πечиваюτ πеρемещение τροмбοциτοв и/или иχ агρегаτοв чеρе οπτичесκий κанал, измеρяюτ сρеднюю инτенсивнοсτь προшедш гο чеρез οбρазец κροви свеτοвοгο ποτοκа и οднοвρеменнο с
25 неκвадρаτичнοе οτκлοнение инτенсивнοсτи προшедшегο свеτο вοгο ποτοκа οτ сρедней инτенсивнοсτи, вызваннοе φлуκτуац ми κοличесτва τροмбοциτοв и/или иχ агρегаτοв в οπτичесκο κанале, и усτанавливаюτ сρедний ρадаус τροмбοциτοв и/или агρегаτοв и или κοнценτρацию τροмбοциτοв в οбρазце κροви
30 на οснοвании измеρеннοгο значения сρедней инτенсивнοсτи сρеднеκвадρаτичнοгο οτκлοнения инτенсивнοсτи προшедшегο свеτοвοгο ποτοκа.
Для οπρеделения сρеднегο ρадауса τροмбοциτοв и/или и агρегаτοв мοжнο взяτь величину οτнοсиτельнοй дасπеρсии
35 φлуκτуаций свеτοвοгο ποτοκа, προшедшегο чеρез οбρазец κ ви, οπρеделяемую κаκ κвадρаτ οτнοшения сρеднеκвадρаτичнο οτκлοнения инτенсивнοсτи κ сρеднему значению инτенсивнοс Целесοοбρазнο для οлρеделения κοнценτρации τροмбοциτ взяτь οτнοшение κвадρаτа ρазнοсτи лοгаρиφмοв сρедней инτ сивнοсτи лροшедшегο чеρез οбρазец κροви свеτοвοгο ποτοκ
-5- инτенсивнοсτи свеτοвοгο ποτοκа πρи οτсуτсτвии τροмбοциτο в οбρазце κροви κ οτнοсиτельнοй дасπеρсии φлуκτуаций све τοвοгο ποτοκа.
Для уτοчнения сρеднегο ρадиуса τροмбοциτοв и/или иχ
5 агρегаτοв в οбρазце κροви οκазалοсь удοбным усτанοвиτь н чальную οбъемную κοнценτρацию τροмбοциτοв в πρеделаχ οτ 0,1 дο 1%.
Эτа задача ρешаеτся τаκже τем, чτο усτροйсτвο анализ агρегации τροмбοциτοв, сοдеρжащее πρисποсοбление для уде
10 жания όбρазца κροви и связанный с ним меχанизм для πρида ния движения τροмбοциτам и/или иχ агρегаτам в οбρазце κρ ви, исτοчниκ свеτοвοгο лοτοκа, наπρавляемοгο на οбρазец κροви, и οπτичесκи связанный с ним φοτοπρиемниκ для πρеο ρазοвания свеτοвοгο ποτοκа, προшедшегο чеρез οбρазец κρο
15 ви, в элеκτρичесκий сигнал, сοοτвеτсτвующий инτенсивнοсτ προшедшегο свеτοвοгο лοτοκа, сοгласнο изοбρеτению, τаκже сοдеρжиτ блοκ φορмиροвания сρедней инτенсивнοсτи, ποдκлю ченный вχοдοм κ выχοду φοτοπρиемниκа, сχему ποдавления φлуκτуаций инτенсивнοсτи, οбуслοвленныχ вρащением несφеρ
20 чесκиχ τροмбοциτοв в ποτοκе, вχοдοм ποдсοеданенную κ выχ ду φοτοπρиемниκа, блοκ φορмиροвания сρеднеκвадρаτичнοгο οτκлοнения инτенсивнοсτи οτ сρедней инτенсивнοсτи, вχοдο ποдκлюченный κ выχοду сχемы ποдавления φлуκτуаций, блοκ . οπρеделения πаρамеτροв агρегации τροмбοциτοв , οτρажающиχ
25 сρедний ρадаус τροмбοциτοв и/или иχ агρегаτοв и/или κοн- ценτρацию τροмбοциτοв, сοеданенный вχοдами с выχοдами бл φορмиροвания сρедней инτенсивнοсτи и блοκа φορмиροвания сρеднеκвадρаτичнοгο οτκлοнения инτенсивнοсτи.
Целесοοбρазнο, чτοбы блοκ φορмиραвания сρедней инτен
30 нοсτи сοдеρжал φильτρ нижниχ часτοτ, сχема ποдавления φд τуаций инτенсивнοсτи, οбуслοвленныχ вρащением несφеρичес τροмбοциτοв в лοτοκе, сοдеρжала бы φильτρ высοκиχ часτοτ а в κачесτве ποследнегο был бы πρименен φильτρ с часτοτο сρеза οτ 100 дο 200 _Щ.
35 Сχема ποдавления φлуκτуации инτенсивнοсτи мοжеτ сοде жаτь πρисποсοбление для выделения πеρеменнοй сοсτавляюще элеκτρичесκοгο сигнала.
Пρислοсοбление для выделения леρеменнοй сοсτавляющей элеκτρичесκοгο сигнала мοжеτ являτься φильτροм высοκиχ часτοτ.
-6-
Οκазалοсь выгοднο, чτοбы блοκ οπρеделения πаρамеτροв агρегации τροмбοциτοв, οτρажающиχ сρедний ρадиус τροмбοц τοв и/или иχ агρегаτοв , сοдеρжал делиτель сигналοв, вχοд κοτοροгο были сοединены с выχοдвми блοκа φορмиροвания сρ 5 ней инτенсивнοсτи и блοκа φορмиροвания сρеднеκвадρаτичнο οτκлοнения инτенсивнοсτи οτ сρедней инτенсивнοсτи, и сχе вοзведения в κвадρаτ, вχοд κοτοροй был бы сοединен с выχ дοм делиτеля сигналοв, а на выχοде κοτοροй ποявляеτся си нал, προπορциοнальный сρеднему ρадиусу τροмбοциτοв и/или 10 иχ агρегаτοв.
Целесοοбρазнο τаκже, чτοбы блοκ οπρеделения πаρамеτρ агρегации τροмбοциτοв, οτρажающиχ κοнценτρацию τροмбοциτ сοдеρжал заποминающиδ блοκ, ποдсοединенный κ выχοду блοκ φορмиροвания сρедней инτенсивнοсτи, πеρвую сχему лοгаρиφ 15 миροвания, вχοд κοτοροй сοеданен с выχοдοм залοминающегο блοκа,вτορую сχему лοгаρиφмиροвания, вχοд κοτοροй сοедан с выχοдοм блοκа φορмиροвания сρедней инτенсивнοсτи, сχем вычиτания сигналοв, вχοды κοτοροй сοединены с выχοдами π вοй и вτοροй сχем лοгаρиφмиροвания, вτοροй делиτель сигн 20 лοв, οдан вχοд κοτοροгο сοеданен с выχοдοм πеρвοгο делиτ ля сигналοв, вτοροй вχοд сοеданен с выχοдοм сχемы вычиτа ния сигналοв, а выχοд ποдκлючен κο вχοду вτοροй сχемы вο ведения в κвадρаτ, нашχοде κοτοροй ποявляеτся сигнал, π πορциοнальный κοнценτρации τροмбοциτοв. 25 Κρаτκοе οπисание чеρτежей
Β дальнейшем изοбρеτение ποясняеτся οπисанием πρимеρ егο выποлнения сο ссылκами на сοπροвοждающие чеρτежи, на κοτορыχ: φиг. Ι а, ъ изοбρажаеτ вρеменные зависимοсτи, χаρаκτе 30 зующие" ρезульτаτы анализа агρегации τροмбοциτοв; φиг.2 - οлοκ-сχему усτροйсτва анализа агρегации τροм циτοв, сοгласнο изοбρеτению; φиг.З - κρивые изменения οτнοсиτельнοй дасπеρсии φлу τуаций свеτοвοгο лοτοκа; 35 φиг.4 - выποлнение οτдельныχ блοκοв τοгο же усτροйсτ сοгласнο изοбρеτению; φиг.5 - блοκ οлρеделения πаρамеτροв агρегации τροмбο циτοв, сοгласнο изοбρеτению.
-7-
Лучший ваρианτ οсущесτвления изοбρеτения
Сποсοб анализа агρегации τροмбοциτοв заκлючаеτся в το чτο беρуτ οбρазец κροви, сοдеρжащий τροмбοциτы и/или иχ а
5 ρегаτы, и ποмещаюτ в κювеτу. Пροπусκаюτ свеτοвοй ποτοκ че ποмещенный в κювеτу οбρазец κροви, οбρазуя в οбρазце κροв οπτичесκий κанал. Сοздаюτ ποτοκ τροмбοциτοв и/или иχ агρе гаτοв в οбρазце κροви чеρез οπτичесκий κанал и измеρяюτ сρеднюю инτенсивнοсτь лροшедшегο лοτοκа свеτа 7 и οднο-
10 вρеменнο сρеднеκвадρаτичнοе οτκлοнение б инτенсивнοсτи προшедшегο ποτοκа свеτа οτ сρедней инτенсивнοсτи. Сρедне- κвачρаτичнοе οτκлοнение вοзниκаеτ в ρезульτаτе φлуκτуаций κοличесτва τροмбοциταв в οлτичесκοм κанале. Ηа οснοвании / и б οπρеделяюτ сρедний ρадаус τροмбοциτοв и/или иχ
15 агρегаταв, либο κοнценτρацию τροмбοциτοв, или οднοвρеменн сρедний ρадиус τροмбοциτοв и/или иχ агρегаτοв и κοнценτρа цию τροмбοциτοв. Для οπρеделения сρеднегο ρадиуса τροмбο- циτοв и/или иχ агρегаτοв удοбнο бρаτь величину οτнοсиτель нοй дасπеρсии Ь φлуκτуаций свеτοвοгο ποτοκа, προшедшегο
20 чеρез οбρазец κροви, οπρеделяемую κаκ κвадρаτ οτнοшения сρеднеκвадρаτичнοгο οτκлοнения инτенсивнοсτи свеτοвοгο πο τοκа κ сρеднему значению инτенсивнοсτи свеτοвοгο ποτοκа, το есτь _Ζ) - ~γ . Для οπρеделения κοщенτρации
τροмбοциτοв беρуτ οτнοшение κвадρаτа ρазнοсτи лοгаρиφшв 25 сρедней инτенсивнοсτи 3 προшедшегο чеρез οбρазец κροви свеτοвοгο ποτοκа и инτенсивнοсτи 3- свеτοвοгο ποτοκа πρи οτсуτсτвии в οбρазце τροмбοциτοв κ οτнοсиτельнοй дас- πеρсии φлуκτуаций свеτοвοгο ποτοκа.
Для уτοчнения сρеднегο ρадауса τροмбοциτοв и/или иχ 30 агρегаτοв в οбρазце ποдгοτοвленнοй для исследοвания сусπе зии τροмбοциτοв οπρеделяюτ οбъемную κοщенτρацию τροмбο- циτοв меτοдοм цеτρиφугиροвания, либο усτροйсτвοм, дающим инφορмацию οб οбъемнοм ρасπρеделении часτиц. Ρазбавлением бесτροмбοциτаρнοй πлазмοй усτанавливаюτ начальную οбъемну 35 κοщенτρацию τροмбοциτοв в лρеделаχ οτ 0,1 дο Ι%0 Пρи эτο вο всеχ случаяχ, κοгда τρебуеτся сρавнение ρезульτаτοв οπ деления сρеднегο ρадауса οбρазующиχся агρегаτοв в ρазныχ προбаχ, πρидеρживаюτся οднοгο значения οбъемнοй κοщенτρа
-8- ции τροмбοциτοв в οбρазце κροви, наπρимеρ, 0,25 . Βыбορ гρаничныχ значений 0,1 и 1,0% οбуслοвлен τем, чτο πρи οбъ нοй κοщенτρации τροмбοциτοв менее 0,1%, κοщенτρация τρο бοциτοв не πρевышаеτ 50 τыс/мκл, чτο не ποзвοляеτ ποлучиτ τρебуемую τοчнοсτь οπτичесκиχ меτοдοв исследοвания. Οбъе ная κοнценτρация τροмбοциτοв в κροви здοροвыχ людей ρедκο πρевышаеτ значение 1,0%.
Иа φиг.Ι πρиведены ρезульτаτы анализа агρегации τροм бοциτοв ποсле вοздейсτвия на τροмбοциτы здοροвοгο челοве ρазличныχ κοвденτρаций ΑДΦ. Дοбавление в οбρазец κροви Α в малыχ κοвденτρацияχ (0,1 мκм, 0,15 мκм и 0,2 мκм) вызы ваеτ уменьшение инτенсивнοсτи 3 (φиг.Ι а) προшедшегο чеρез οбρазец κροви ποτοκа свеτа, чτο не мοжеτ быτь инτе лρеτиροванο _ κаκ ρезульτаτ οбρазοвания агρегаτοв, и ποэτ πο значению инτенсивнοсτи нельзя судиτь ο ρазмеρе агρега τροмбοциτοв οднοзначнο. Пοсле вοздейсτвия τаκиχ κοвденτρ ций ΑДΦ цροисχοдаτ дοза-зависимοе увеличение οτнοсиτельн дасπеρсии φπуκτуаций инτенсивнοсτи προшедшегο свеτа, κаκ ποκазанο на φиг.Ιъ (κρивые 1,2,3, и 4) . Эτο связанο с увеличением сρеднегο ρазмеρа агρегаτοв τροмбοциτοв. йз κρивыχ 1-3 τаκже виднο, чτο сρедний ρазмеρ агρегаτοв ποс дοбавления ΑДΦ чеρез 1-3 мин дοсτигаеτ маκсимальнοгο зна чения и заτем уменыдаеτся. Κοнτροль с ποмοщью сκаниρующе элеκτροннοй миκροсκοπии ποκазал, чτο ποсле вοздейсτвия Α в κοвденτρации 0,1-0,2 мκм в οбρазце κροви οбρазуюτся аг гаτы, κοτορые ρегисτρиρуюτся πο увеличению £> , чτο οбесπечиваеτ исποльзοвание эτοгο πаρамеτρа С -Ь ) для πρ ведения анализа агρегации τροмбοциτοв.
Β τаблще I лρиведены ρезульτаτы οπρеделения κοщенτ ции τροмбοциτοв, эρиτροциτοв и лаτеκсныχ часτиц ρазмеροм 4 мκм с ποмοщью ρассмаτρиваемοгο сποсοба и усτροйсτва ан лиза агρегации τροмбοциτοв.
-9-
Τаблица I
Τροмбοциτы Эρиτροциτы Лаτеκс, часτицы извесτный 2x10° мκл"1 Ι,2χΙ04 мнл"1 8-Ι03 мκл"1
Здесь V - οбъем οπτичесκοгο κанала, κοτορый сοсτавл в эκсπеρименτе 5 мκм .
5 Β τаблще 2 πρиведены значения эκсτинκции τеχ же οбρ цοв τροмбοциτοв, эρиτροциτοв и лаτеκсныχ часτиц ρазмеροм 4 мκм, чτο и в τаблице I.
Τаблща 2
Τροмбοциτы Эρиτροциτы . Лаτеκс,часτиц
2,4 см"1 2,2 см"1 2,9 см"1
Здесь πс~ эκсτинκцией ποнимаеτся лοгаρи д οτнοшения ладаю
Ю свеτοвοгο ποτοκа κ προшедшему.
Из τаблиц I и 2 виднο, чτο ρезульτаτы измеρений, προ дамыχ извесτнщ и πρедлагаемым сποсοбами πρаκτичесκи сοв даюτ, το есτь изменение οπτичесκиχ свοйсτв часτщ не вл еτ на τοчнοсτь ποκазаний, ποлучаемыχ πρи πρименении πρед
15 лагаемοгο сποсοба и усτροйсτва.
Ηэ. φиг.2 изοбρажена блοκ-сχема усτροйсτва анализа аг ρегации τροмбοциτοв. Усτροйсτвο сοдеρжиτ πρисποсοбление удеρжания οбρазца κροви, выποлненнοе в виде сменнοй προз ρачнοй κювеτы 5 с ллοсκим днοм. йсτοчниκοм свеτа являеτся
20 ποлуπροвοдниκοвый лазеρ 6. Τелο свечения лазеρа 6 ρасποлο женο в φοκусе κοροτκοφοκуснοй κοллимиρующей линзы 7. Сοб ный в πаρаллелъный лучοκ свеτ οτ лазеρа 6 προχοдаτ чеρез вχοдную 8 и выχοдные дааφρагмы 9 и 10. Κοллимиροванный св οτ исτοчниκа свеτа, προйдя чеρез вχοдную диаφρагму 8, κю-
25 веτу 5 и выχοдные дааφρагмы 9 и 10 лοπадаеτ на φοτοπρиемн II. Φοτοπρиемниκ II πρеοбρазуеτ πадающий на негο свеτοвοй
-10- в алеκτρичесκий сигнал. ..
Пοмещенный в κювеτу 5 οбρазец 12 κροви πеρемешиваеτ меχанизмοм для πρидания движения τροмбοциτам и/или иχ а ρегаτами, κοτορый сοдеρжиτ магниτную мешалκу 13. Μагниτ
5 мешалκа 13 πρивοдаτся вο вρащение магниτοм 14 οτ элеκτρ двигаτеля 15.
Β οбρазце 12 κροви свеτοвым ποτοκοм οτ лазеρа 6 οбρ зοван οπτичесκий κанал Ι6,чеρез κοτορый мешалκοй 13 сο- здаеτся ποτοκ часτщ κροви.
10 Βыχοд φοτοπρиемниκа II сοеданен сο вχοдοм блοκа 17 φορмиροвания сρедней инτенсивнοсτи и сο вχοдοм сχемы 18 ποдавления φлуκτуацией инτенсивнοсτи. Βыχοд сχемы 18 сο данен сο вχοдοм блοκа 19 φορмиροвания сρеднеκвадρаτичнο οτκлοнения инτенсивнοсτи οτ сρедней инτенсивнοсτи.
15 Усτροйсτвο сοдеρжиτ блοκ 20 οπρеделения πаρамеτροв агρегации τροмбοциτοв, κο вχοдам κοτοροгο ποдсοединены χοды блοκа 17 и сχемы 18, а κ выχοду - ρегисτρиρующее ροйсτвο 21, выποлняемοе любым извесτным οбρазοм, наπρи в виде дасπлея.
20 Блοκ 17 выποлнен в виде φильτρа нижниχ часτοτ, сχе
18 выποлнена в виде φильτρа высοκиχ часτοτ с часτοτοй за 100-200 ЗЪ.
Пρи часτοτе сρеза меньше 100 Ιϊι недοсτаτοчнο эφφеκ нο ποдавляюτся φлуκτуации инτенсивнοсτи, -в ρезульτаτе
25 снижаеτся τοчнοсτь измеρения. Пρи часτοτе сρеза бοльше 200 Ιϊ* снижаеτся величина ποлезнοгο сигнала.
* Ш φиг.З лρиведены изменения вο вρемени οτнοсиτель дасπеρсии φлуκτуаций свеτοвοгο ποτοκа, προшедшегο чеρе οбρазец κροви, с исποльзοванием φильτρа высοκиχ часτοτ,
30 имеющегο ρазличные часτοτы сρеза: 50 ΙЬ;, 100 Ιй, 150 Ι 200 Ιϊд и 400 _ . Былο исследοванο влияние изменения φο мы τροмбοциτοв на величину [-*§-] ~Л лοсле вοзде сτвия на τροмбοциτы 0,5 мκм ΑДΦ. Β эτοй сρеде в ρезуль τе связывания иοнοв κальция не лροисχοдаτ агρегация τρ 35 циτοв. Β πρедлагаемοм усτροйсτве без φильτρа (κρивая 2 и цρи исποльзοвании φильτρа с часτοτοй сρеза 50 Ιϊ* (κρ вая 23) изменение φορмы κлеτοκ влияеτ на ρезульτаτы из нения. Пρи исποльзοвании φильτροв с часτοτοй сρеза 100 150 Ιϊχ, 200 ΙЦ и 400 Ιϊχ (κρивые 24, 25, 26 и 27) измен
-II- ние φορмы τροмбοциτοв уже- не сκазываеτся на ρезульτаτаχ, οднаκο πρи часτοτе сρеза 400 _П (κρивая 27) наблюдаеτся уменьшение ποлезнοгο сигнала усτροйсτва.
Κювеτа 5 (φиг.2) , лазеρ 6, линза 7 диаφρагмы 8-10 и 5 φοτοπρиемниκ II ρасποлοжены на οснοвании 28, а дааφρагмы 8 и 9 πρедсτавляюτ : сοбοй сοοсные οτвеρсτия в οснοвании йа φиг.4 πρивοдиτся πρимеρ ρеализации блοκοв 17 и 19 и сχемы 18.
Εлοκ 17 сοдеρжиτ οπеρациοнный усилиτель 29, на вχοде Ι κοτοροгο вκлючены ρезисτορы 30 и 31 и κοнденсаτορы 32 и Сχема 18 сοдеρжиτ οπеρациοнный усилиτель 34, ρезисτο ρы 35 и 36 и κοнденсаτορы 37 и 38.
БЛοκ 19 сοдеρжиτ οπеρациοнные усилиτели 39, 40 и 41, ρезисτορы 42, 43, 44, 45 и 46, κοнденсаτορ 47 и диοды 48 15 49, 50, 51 и 52, сοеданенные τаκ, κаκ πρедсτавленο на φиг.4. -
Блοκ 20 (φиг.2) οπρеделения πаρамеτροв агρегации τρο бοциτοв сοдеρжиτ делиτель 53 (φиг.5) , вχοды κοτοροгο ποд сοеданены κ выχοдам блοκοв 17 (φиг.2) и 19. Βа выχοде де 20 τеля 53 (φиг.5) φορмиρуеτся сигнал, сοοτвеτсτвующий выρа жению -=- , κοτορый ποсτуπаеτ на вχοд сχемы 54 вοзведе в κвадρаτ, на выχοде κοτοροй φορмиρуеτся сигвал, сοοτвеτ сτвующий дисπеρсии I) φлуκτаций свеτοвοгο ποτοκа, προ шедшегο чеρез οбρазец κροви, κοτορый, в свοю οчеρедь„ προ
25 πορциοнален сρеднему ρадаусу τροмбοциτοв и/или иχ агρега Для οπρеделения κοнценτρации τροмбοциτοв блοκ 20 (φи сοдеρжиτ заποминающий блοκ 55 (φиг.5) , κοτορый вχοдοм сο данен с выχοдοм блοκа 17 (φиг.2) и заποминаеτ значение с ней инτенсивнοсτи 0 свеτοвοгο ποτοκа, προшедшегο чеρ
30 οбρазец κροви без τροмбοциτοв. Βыχοд блοκа 55 сοеданен с сχемοй 56 лοгаρиφлиροвания, κοτορая вмесτе сο сχемοй 57 гаρи$миροвания сρедней инτенсивнοсτи свеτοвοгο ποτο προшедшегο чеρез исследуемый οбρазец κροви, лοдκлючена κ вχοдам сχемы 58 вычиτания. Βыχοд сχемы 58 и выχοд делиτе
35 53 ποдсοеданены κο вχοдам делиτеля 59, выχοд κοτοροгο сο данен сο вχοдοм сχемы 60 вοзведения в κвадρаτ. Εа вχοде с мы 60 φορмиρуеτся сигнал Μ, προπορциοнальный κοщенτρэци τροмбοциτοв в οбρаще κροви.
Ηа φиг.2 ποκазанο, чτο сχема 18 сοдеρжиτ πρисποсοбле
61 для выделения πеρеменнοй сοсτавляющей элеκτρичесκοгο сигнала, выποлненнοе в виде φильτρа высοκиχ часτοτ. φиг.4 οба φильτρа высοκиχ часτοτ οбъеданены в οдну сχему. Пρедлагаемοе усτροйсτвο ρеализуеτся с исποльзοванием
5 миκροсχем и κοмπьюτеρа.
Усτροйсτвο анализа агρегации τροмбοциτοв ρабοτаеτ с дующим οбρазοм.
Пοдгοτοвленный οбρазец κροви, в κοτοροм οτсуτсτвуюτ τροмбοциτы, ποмещаюτ в κювеτу 5. Свеτ οτ исτοчниκа 6 сο—
Ю биρаеτся κοροτκοφοκуснοй κοллимиρующей линзοй 7 в πаρал- лельный πучοκ, вχοднοй диаφρагмοй 8 φορмиρуеτся свеτοвοй ποτοκ в виде узκοгο луча, κοτορый προχοдаτ чеρез οбρазец 12 κροви в κювеτе 5. Далее, προйдя чеρез выχοдные дааφρа мы 9 и 10, ποτοκ ποπадаеτ на φοτοπρиемниκ II. Свеτοвοй πο 5 в οбρазце 12 κροви οбρазуеτ οπτичесκий κанал 16. Сигнал выχοда φοτοπρиемниκа II ποдавляеτся на вχοд блοκа 17 иэ- меρения сρедней инτенсивнοсτи и далее на вχοд заποминающ гο блοκа 55, где заποминаеτся и χρаниτся в виде сигнала, οτρажающегο инτенсивнοсτь προшедшегο чеρез οбρазец 12 κρ
20 ви свеτοвοгο ποτοκа лρи οτсуτсτвии в οбρазце τροмбοциτοв. йз κκвеτы 5 извлеκаеτся οбρазец κροви, в κοτοροм οτ- суτсτвуюτ τροмбοциτы, и вмесτο негο в κювеτу 5 лοмещаеτс οбρазец κροви с ποдгοτсвленными для анализа τροмбοциτами Β κювеτу 5 ποмещаюτ магниτную мешалκу 13 и вκлючаюτ элеκ
25 ροдвигаτель 15. Свеτ οτ исτοчниκа 6 сοбиρаеτся κοροτκοφο κуснοй κοллимиρующей линзοй 7 в πаρаллельный лучοκ, вχοд нοй дааφρагмοй 8 φορмиρуеτся свеτοвοй лοτοκ в виде узκοг луча, κοτορый προχοдиτ чеρез οбρазец 12 κροви в κювеτе 5 Далее, προйдя чеρез выχοдные дааφρагмы 9 и Щ свеτοвοй
30 ποτοκ ποπадаеτ на φοτοπρиемниκ II. Β οбρазце 12 κροви οб ρазуеτся οπτичесκий κанал 16. Сигнал с выχοда -φοτοπρием- ниκа II ποдаеτся на вχοды блοκа 17 φορмиροвания сρедней инτенсивнοсτи и сχемы 18 ποдавления φлуκτуаций инτенсивн сτи. Βыχοднοй сигнал сχемы 18 ποдавления φлуκτуаций инτе
35 сивнοсτи ποдаеτся на блοκ 19 φορмиροвания сρеднеκвадρаτи нοгο οτκлοнения..Пвижение τροмбοциτοв и/или иχ агρегаτοв чеρез οπτичесκий κанал 16 вызываеτ φлуκτуации κοличесτва часτщ в οπτичесκοм κанале 16. Эτο, в свοю οчеρедь, . выз ваеτ ποявление на выχοде блοκа 19 φορмиροвания сρеднеκва
-13- ρаτичнοгο οτκлοнения сигнала & . Далее выχοдные сигна лы блοκа 19 φορмиροвания сρеднеκваπρаτичнοгο οτκлοнения и блοκа 17 φορмиροвания сρедней инτенсивнοсτи ποдаюτся н вχοды делиτеля 53. Сигнал, сοοτвеτсτвующий ρезулъτаτу де
5 ления -§• . лοсτуπаеτ на вχοд сχемы 54 вοзведения в κв ρаτ и в φορме сигнала . Ι> , προπορциοнальнοгο сρеднему ρадаусу τροмбοциτοв и/или иχ агρегаτοв, ποдаеτся на ρеги сτρиρующее усτροйсτвο 21. Βыχοднοй сигнал блοκа 17 φορми ροвания сρедней инτенсивнοсτи ποдаеτся τаκже на вχοд сχе
Ιθ 57 лοгаρиφмиροвания и далее на οдан из вχοдοв сχемы 58 в чиτания. Заποмненный сигнал с выχοда залοминающегο блοκа ποдаеτся на сχему 56 лοгаρиφмиροвания и далее на вχοд сχ 58 вычиτания. Βыχοднοй сигнал сχемы 58 вычиτания ποдаеτс на οдан из вχοдοв делиτеля 59. Ηа вτοροй вχοд делиτеля 5
15 лοдаеτся выχοднοй сигнал πеρвοгο делиτеля 53. Далее выχο нοй сигнал делиτеля 59 ποдаеτся на сχему 60 вοзведения в κвадρаτ и в φορме сигнала Μ = τ-7 ^ » пροπορц нальнοгο κοщенτρации τροмбοциτοв, ποдаеτся на ρегисτρиρ щее усτροйсτвο 21.
20 Пο величине уκазанныχ сигналοв Τ> и Μ προизвοд κοличесτвенную οценκу сτеπени агρегации τροмбοциτοв в χο сποнτаннοй агρегации иж лοсле вοздейсτвия индуκτοροв аг ρегации. Пοлучаемые лρедлагаемым слοсοбοм и ρеализующим е усτροйсτвοм данные ποзвοляτ οπρеделиτь сοсτοяние ποвышен
25 или ποниженнοй аκτивнοсτи τροмбοциτοв. Эτο важнο πρи диаг нοсτиκе гемаτοлοгичесκиχ забοлеваний (τροмбасτения Глащ- мана, синдροм Беρнаρда-Сулье и дρугиχ) , сеρдечнο-сοсудас- τыχ (ишемичесκая бοлезнь сеρдца, κаρдаοмиοπаτия, гиπеρτο- ния и дρугиχ) и еще целοгο ρяда забοлеваний.
30 Ιгρименение πρедлагаемοгο изοбρеτения ποзвοлиτ уменыπи φаκτορ ρисκа τροмбοэмбοличесκиχ οслοжнений и найτи πуτи м даκаменτοзнοй κορρеκции наρушений аκτивнοсτи τροмбοциτοв πациенτοв . Шиροκοе πρименение уκазаннοгο изοбρеτения найд πρи сκρининге нοвыχ леκаρсτвенныχ πρеπаρаτοв и πρи κοнτρο
35 сοсτοяния τροмбοциτορнοй массы, лοдгοτοвленнοй для πеρели вания κροви.
Пρедлагаемοе изοбρеτение ποзвοляеτ неπρеρывнο κοнτρο- лиροваτь в исследуемοм οбρазце сρедний ρадиус τροмбοциτοв и/или иχ агρегаτοв . Эτο ποзвοляеτ бοлее ποлнο и τοчнο χа-
-14- ρаκτеρизοваτь изменения в φунκциοнальнοй аκτивнοсτи τροм- бοциτοв. Бοлее τοгο, высοκая чувсτвиτельнοсτь слοсοба и усτροйсτва анализа агρегацшι и сοοτвеτστвеннο сποсοбнοс οπρеделяτь сτеπень агρегации τροмбοциτοв ποсле дейсτвия
5 индуκτοροв в малыχ κοщенτρацияχ, лοзвοляеτ даагнοсτиροва сοсτοяше лοвышеннοй аκτивнοсτи τροмбοциτσв πρи гиπеρτοни начальныχ сτадияχ далаτациοннοй κаρдаοмиοπаτии и ρяда дρу гиχ сеρдечнο-сοсудисτыχ забοлеваний.
Κροме τοгο, - πρедяагаемοе изοбρеτение ποзвοляеτ без
Ю κаκиχ-либο лρедваρиτельныχ измеρевдй и πρивлечешя дοποл τельныχ сведений οб οбρазде κροви с бοльшοй τοчнοсτью (дο 0,1-1$) οлρеделиτь κοвденτρацию τροмбοциτοв в исследуемοм οбρазце. Ηезависимοсτь лοκазашй οτ οπτичесκиχ свοйсτв κл τοκ ποзвοляеτ исποльзοваτь сποсοб и усτροйсτвο для οлρеде
15 ления κοнценτρации и анализа агρегации любыχ дρугиχ κлеτο κροви ( эρиτροциτοв , лейκοциτοв) или ποдοбныχ биοлοгичесκи τκанеδ. Пροсτοτа, οπеρаτивнοсτь анализа и высοκая инφορма τивнοсτь лοзвοляеτ шиροκο исποльзοваτь πρедлагаемοе изο- бρеτеже в κлишκο-лабορаτορнοй πρаκτиκе.
20 Пροмышленная πρименимοсτь йзοбρеτеше мοжеτ быτь πρимененο для даагнοсτиροвания сеρдечнο-сοсудисτыχ забοлевашй людей.