WO1989008115A1 - NOUVEAUX DERIVES DE LA DEOXY-2'-URIDINE SUBSTITUEE EN POSITION 5, 3' ou 5' PAR DES GROUPEMENTS alpha-AMINO ACYLES, PROCEDE POUR LEUR OBTENTION ET MEDICAMENTS LES CONTENANT - Google Patents

NOUVEAUX DERIVES DE LA DEOXY-2'-URIDINE SUBSTITUEE EN POSITION 5, 3' ou 5' PAR DES GROUPEMENTS alpha-AMINO ACYLES, PROCEDE POUR LEUR OBTENTION ET MEDICAMENTS LES CONTENANT

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WO1989008115A1
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uridine
radical
alanyl
dideoxy
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PCT/FR1989/000072
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Inventor
Jean-Luc Moriniere
Michelle Faulques
Claude Rousseau
Bernard Danree
Claude Marquer
Patrick Saur
Jean Lemoine
Jean-Yves Lacolle
Original Assignee
Institut De Recherches Chimiques Et Biologiques Ap
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/06—Pyrimidine radicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K9/00—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K9/001—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof the peptide sequence having less than 12 amino acids and not being part of a ring structure
    • C07K9/003—Peptides being substituted by heterocyclic radicals, e.g. bleomycin, phleomycin

Definitions

  • the subject of the present invention is new derivatives of deoxy-2'-uridine substituted in position 5, 3 'or 5' by acylated ⁇ -amino groups, a process for their preparation and pharmaceutical compositions containing them.
  • R is an alkyl or alkenyl radical having from 1 to 4 carbon atoms, an aryl radical or a halogen, said alkyl and aryl radicals being able to comprise at least one halogen substituent.
  • the present invention relates to a new class of derivatives of deoxy-2'-uridine substituted in position 5, 3 'or 5' by acylated ⁇ -amino groups, corresponding to the following general formula:
  • R is chosen from an alkyl or alkenyl radical having from 1 to 4 carbon atoms, an aryl radical or a halogen, said alkyl, alkenyl and aryl radicals being able to comprise at least one halogen substituent; and a radical of formula -NH-R 1 , in which R 1 represents an amino acid or peptide residue comprising from 2 to 6 amino acids; .
  • the invention also includes within its scope all the possible optical isomers of the compounds of formula (I) as well as their mixtures.
  • a halogen atom is preferably a chlorine or bromine atom.
  • the alkyl or alkenyl groups can be straight or branched chain groups.
  • An alkyl group having from 1 to 4 carbon atoms is for example a methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, sec.-butyl or tert.-butyl group, preferably methyl or ethyl.
  • alkenyl group having from 1 to 4 carbon atoms is for example a vinyl, prephenyl or butenyl group, preferably vinyl.
  • the pharmaceutically acceptable salts of the compounds of formula (I) include those formed with a mineral acid, for example hydrochloric acid or sulfuric acid or with an organic acid, for example citric, tartaric, maleic, maleic acid or fumaric.
  • these new derivatives have the advantageous pharmacological property of being inhibitors of fetal thymidine kinase present in human cancerous tissues and are thus inhibitors of DNA synthesis of proliferating cancer cells.
  • the invention relates to the new class of derivatives of deoxy-2'-uridine substituted in the 5 'position, that is to say the compounds of general formula (I), in which R' is a hydroxy group and R "is a group -NH-R 1 .
  • the invention relates to the new class of derivatives of deoxy-2'-uridine substituted in the 3 'position, that is to say the compounds of general formula (I), in which R' is a group -NH-R 1 and R "is a hydroxy group.
  • the invention relates to the new class of derivatives of deoxy-2'-uridine substituted in position 5, that is to say the compounds of general formula (I), in which R is a group -NH-R 1 , R 'and R "being simultaneously hydroxy groups.
  • the new compounds of formula (I) according to the invention are, depending on the structure of the above-mentioned amino acid or peptide, in the form D or L, or also DL.
  • the general process for the preparation of the compounds according to the invention of general formula (I) as defined above comprises the reaction, by enzymatic or by chemical route, of an amino derivative corresponding to the general formula: in which R a is chosen from an alkyl or alkenyl radical having from 1 to
  • alkyl, alkenyl and aryl radicals being able to comprise at least one halogen substituent, and a radical -NH 2 ;
  • R ' a and R " a being chosen from a hydroxy radical and a radical
  • R ' a and R " a are not simultaneously -NH 2 and that when R a , is -NH 2 , R' a and R" a are simultaneously a hydroxy group; with an amino acid or a peptide comprising from 2 to 6 amino acids, and, if desired, the conversion of a compound thus obtained into a pharmaceutically acceptable salt.
  • the compounds of form L are preferably prepared by enzymatic reaction of the amino derivatives of formula (Ia) with an amino acid or a peptide of form L or DL, in the presence of an enzyme chosen from papain and chymopapain, the reaction being carried out at a temperature of around 10 to around 70oC in an acid medium. Under these conditions, there is a reaction between the amino function of the amino derivative in 5, 3 ′ or 5 ′ and the free acid function of the amino acid or of the peptide, it being understood that the amino functions of said amino acid or peptide are blocked beforehand using known reagents such as benzyloxycarbonyl, paramethoxybenzyloxycarbonyl, t-butoxycarbonyl or fluorenomethyloxycarbonyl.
  • Compounds of form L, D or DL can also be prepared using a purely chemical process comprising optionally separating a mixture of isomers of the compounds of formula (I) into the isolated isomers.
  • the compounds of formula (I) according to the invention have been found to be active by inhibiting the synthesis of DNA from cancer cells and from certain viral particles.
  • the oral route is generally used for all conditions requiring such compounds.
  • the compounds of the invention can be administered at doses of, for example, between approximately 30 mg / m 2 and approximately 100 mg / m 2 per day in the treatment of cancers, and for example between approximately 50 mg / kg and approximately 250 mg / kg per day, in the treatment of viral infections.
  • these dosages can be adjusted to ensure the optimal therapeutic response.
  • the present invention relates to pharmaceutical compositions, in particular with activity of inhibitor of the synthesis of the DNA of cancerous cells in the process of proliferation, characterized in that they contain, as active ingredient , at least one of the compounds defined above of general formula I, in combination with a non-toxic pharmaceutically acceptable vehicle or support.
  • compositions of the invention are generally prepared according to conventional methods and are administered in a suitable pharmaceutical form, for example a solid oral form can contain, with the active compound, diluents, for example lactose, cellulose; lubricants, for example stearic acid or polyethylene glycols; binding agents such as starches, methylcellulose; dyes; sweeteners; wetting agents such as, for example, polysorbates; and, in general, the non-toxic and pharmacologically inert substances used in pharmaceutical compositions.
  • diluents for example lactose, cellulose
  • lubricants for example stearic acid or polyethylene glycols
  • binding agents such as starches, methylcellulose
  • dyes such as starches, methylcellulose
  • sweeteners sweeteners
  • wetting agents such as, for example, polysorbates
  • Example 1 Enzymatic route Synthesis of N- (L-alanyl) -amino-5'-dideoxy-2 ', 5'-methyl-5-uridine
  • Step A Synthesis of N- [(N-benzyloxycarbonyl) -L-alanyl] -amino-5'- dideoxy-2 ', 5'-methyl-5-uridine
  • the reaction medium the pH of which is 8.98, is heated to 50 ° C; from 30 ° C, the mixture is clear.
  • reaction medium is cooled, filtered and the precipitate is washed with water. After drying at 60oC under vacuum, 4.3 g of
  • This compound is dissolved in methanol and hydrogenated in the presence of 400 mg of 10% palladium on carbon. After filtration of the catalyst and concentration of the solvent, the residue is taken up in ethyl ether and the precipitate obtained is filtered.
  • Step A Synthesis of N- [(N-benzyloxycarbony l) -Da lanyl] -amino 5 '- di deoxy-2', 5 '-methyl-5-ur idine.
  • Step A Synthesis of N - [(N-benzyloxycarbonyl) -D-alanyl] amino-3'- dideoxy-2'-3'-methyl-5-uridine (1)
  • the starting materials are as follows:
  • This compound (1) is dissolved in methanol and hydrogenated in the presence of 200 mg of 10% palladium on carbon.
  • Step A Synthesis of N [(N-benzyloxycarbonyl) -L-alanyl] -amino-3 'dideoxy-2', 3'-methyl-5-uridine (2)
  • Step A Synthesis of N - [(N-benzyloxycarbonyl) -L-alanyl] amino-5-deoxy-2'-uridine (3)
  • reaction medium is stored at room temperature for 12 hours. After evaporation of the solvents under vacuum at 20oC, the oil obtained is carefully triturated in the presence of petroleum ether until a paste is obtained. The addition of chloroform gives rise to a precipitate which, after filtration, is carefully washed several times with chloroform and finally with ether. After drying under vacuum at 20 ° C., 8 g (18 mmol) of N - [(N-benzyloxycabonyl) -L-alanyl] amino-5-deoxy-2'-uridine are obtained.
  • Examples 18 to 31 Using experimental procedures analogous to those described in Example 3 and which the skilled person will easily find, the following compounds were prepared: N-CL-alanyl) -amino-3'-dideoxy-2 ', 3'-methyl-5-uridine N-CL-alanyl) -amino-3'-dideoxy-2', 3'-ethyl-5-uridine N-CL-alanyl) -amino-3'-dideoxy-2 ', 3'-butyl-5-uridine N-CL-alanyl) -amino-3'-dideoxy-2', 3'-propyl-5-uridine N-CL-valyl) -amino-3'-dideoxy-2 ', 3'
  • MCF7 cells come from a pleural metastasis from a human breast cancer CRéf. H. SOULE, J. VASQUEZ, A. LONG, S. ALBERT and M. BREUNAN. J. Natl. Cancer Instit., 51, 1409-1416,
  • the protein concentration of the cytosol obtained is measured and adjusted by dilution to 1.5 mg of proteins per ml of cytosol. This is incubated at 37 ° C. for 10 minutes in a Tris CpH buffer: 7.6) in the presence of thymidine [C 14 -2] C40 ⁇ molar), ATP C8 mMolar) and magnesium chloride. The enzymatic reaction is stopped by the addition. perchloric acid.
  • the nucleotides formed are separated by high voltage electrophoresis, the spots are cut and counted.
  • This biochemical test is based on the knowledge that thymidine kinase occupies a strategic position in the biochemical processes leading to the synthesis of DNA, which uses thymidine triphosphate (TTP) which can be considered as the final product of a complex reaction initiated by thymidine kinase.
  • TTP thymidine triphosphate
  • the compounds according to the invention act as inhibitors of the synthesis of TTP, and therefore probably of the synthesis of the DNA of cancer cells in the process of proliferation.
  • MCF-7 cells are grown in vials of
  • Each flask is seeded with 0.6 ⁇ 10 6 cells suspended in 10 ml of RPMI-1640 medium to which 2 mM of
  • the cells are cultured for 72 hours at 37 ° C. in a CO 2 incubator (EG 110, IR. Jouan).
  • the culture media are changed every 48 hours.
  • the cells are harvested by detachment using a rubber-policeman and the cell suspension is centrifuged at 200 g in a refrigerated centrifuge to get a cell pellet.
  • the various inhibitors to be tested are dissolved in RPMI-1640 at a concentration of 1 mM. Their effects are tested for 48 and 72 hours.
  • Example 2 The working solution is prepared by diluting the commercial solution to 1 / 11th. Its volume activity is 10 ⁇ Ci / 0.1 ml. Example 1.
  • Example 2 The working solution is prepared by diluting the commercial solution to 1 / 11th. Its volume activity is 10 ⁇ Ci / 0.1 ml. Example 1.
  • the "Absolute Control" batch receives 0.1 ml of 0.9% NaCl intraperitoneally.
  • the other batches receive 800 ng / animal of estradiol in a volume of 0.1 ml.
  • the "Inhibitors" batches receive the products to be tested in a volume of 0.1 ml intraperitoneally.
  • the uterus is ground in 0.5 ml of 0.6 N Perchloric Acid using the Potter.
  • the grinder piston is rinsed 3 times with 0.3 ml of 0.6 N perchloric acid.
  • the homogenate and the rinsing liquids are combined in conical glass tubes, then centrifuged at 800 g for 10 minutes.
  • the base is washed twice with 1 ml of 0.3 N perchloric acid
  • This pellet is taken up in 0.6 ml of 0.3 N KOH; the tubes are placed in a bain-marie at 37oC for 2.5 hours.
  • the tubes are cooled in ice and then centrifuged at 4200 g for 10 minutes.
  • the pellet is washed twice with 1 ml of 0.3 N perchloric acid.
  • the last pellet is taken up in 0.6 ml of 0.6 N perchloric acid.
  • the tubes are placed for 10 minutes at 80 ° C. After cooling in ice for a few minutes, they are centrifuged for 10 minutes at 4200 g.
  • the tubes are placed for 10 minutes in a boiling water bath.
  • the Optical Density is read at 595 nm.
  • the calibration is carried out using a Thymus calf DNA solution.

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Abstract

La présente invention a pour objet de nouveaux dérivés de la déoxy-2'-uridine substituée en position 5, 3' ou 5' par des groupements alpha-amino acylés, un procédé pour leur obtention et des médicaments les contenant. Ces dérivés répondent à la formule générale (I), dans laquelle R est choisi parmi un radical alkyle ou alcényle ayant de 1 à 4 atomes de carbone, un radical aryle ou un halogène, lesdits radicaux alkyle, alcényle et aryle pouvant comporter au moins un substituant halogène; et un radical de formule -NH-R1, dans lequel R1 représente un reste d'acide aminé ou de peptide comportant de 2 à 6 acides aminés; R' et R'' étant choisis parmi un radical hydroxy et un radical de formule -NH-R1, dans lequel R1 a la même signification que ci-dessus; à la condition que R' et R'' ne soient pas simultanément -NH-R1 et que, lorsque R est -NH-R1, R' et R'' soient simultanément un groupe hydroxy. Application: traitement de cancers et d'infections virales.

Description

Nouveaux dérivés de la déoxy-2'-uridine substituée en position 5, 3' ou 5' par des groupements α-amino acylés, procédé pour leur obtention et médicaments les contenant.
La présente invention a pour objet de nouveaux dérivés de la déoxy-2'-uridine substituée en position 5, 3' ou 5' par des groupements α-amino acylés, un procédé pour les préparer et des compositions pharmaceutiques les contenant.
On connaît déjà certains dérivés de la déoxy-2'-uridine. C'est ainsi qu'ont été décrits des dérivés de la déoxy- 2'-uridine substituée en position 5, et répondant à la formule chimique générale suivante :
Figure imgf000003_0001
dans laquelle
R est un radical a lky le ou alcényle ayant de 1 à 4 atomes de carbone, un radical aryle ou un halogène, lesdits radicaux alkyle et aryle pouvant comporter au moins un substituant halogène.
On connaît également, notamment par le brevet américain 4 093 716, l'amino-5'-didéoxy-2',5,-méthyl-5-uridine de formule :
Figure imgf000003_0002
qui est présenté comme inhibiteur potentiel du virus de l'herpès. La préparation de ce composé est décrite dans un article d'Horwitz et a l . , dans la revue "J . Am. Chem. Soc . " 27 3045, (1962) .
On connaît également, notamment par une publication de LIN et PRUSOFF (J . Med. Chem. 21 109 (1978)), l'amino-3'-didéoxy-2',3'-méthyl-5-uridine de formule :
Figure imgf000004_0001
On connaît enfin, notamment par une publication de BELTZ et VISSER (J. Biol. Chem., 226, 1035, (1957)), l'amino-5-déoxy-2,-uridine de formule :
Figure imgf000004_0002
La présente invention concerne une nouvelle classe de dérivés de la déoxy-2'-uridine substituée en position 5, 3' ou 5' par des groupements α-amino acylés, répondant à la formule générale suivante :
Figure imgf000005_0001
dans laquelle
. R est choisi parmi un radical alkyle ou alcényle ayant de 1 à 4 atomes de carbone, un radical aryle ou un halogène, lesdits radicaux alkyle, alcényle et aryle pouvant comporter au moins un substituant halogène ; et un radical de formule -NH-R1, dans lequel R1 représente un reste d'acide aminé ou de peptide comportant de 2 à 6 acides aminés ; . R' et R" étant choisis parmi un radical hydroxy et un radical de formule -NM-R1, dans lequel R1 a la même signification que ci-dessus ; à la condition que R' et R" ne soient pas simultanement -NH-R1 et que, lorsque R est -NH-R1, R' et R" soient simultanement un groupe hydroxy; et leurs sels acceptables en pharmacie.
L'invention comprend également dans son cadre tous les isomères optiques possibles des composés de formule (I) ainsi que leurs mélanges.
Dans la formule générale (I), un atome d'halogène est de préférence un atome de chlore ou de brome.
Les groupes alkyles, alcényles peuvent être des groupes à chaîne droite ou ramifiée. Un groupe alkyle ayant de 1 à 4 atomes de carbone est par exemple un groupe méthyle, éthyle, propyle, isopropyle, butyle, sec.-butyle ou tert.-butyle, de préférence méthyle ou éthyle.
Un groupe alcényle ayant de 1 à 4 atomes de carbone est par exemple un groupe vinyle, prbpényle ou butényle, de préférence vinyle. Les sels acceptables en pharmacie des composés de formule (I) comprennent ceux formés avec un acide minéral, par exemple l'acide chlorhydrique ou l'acide sulfurique ou avec un acide organique, par exemple l'acide citrique, tartrique, malique, maléique ou fumarique.
Il a été découvert, de façon tout à fait surprenante, que ces nouveaux dérivés possèdent la propriété pharmacologique intéressante d'être des inhibiteurs de la thymidine kinase foetale présente dans les tissus cancéreux humains et sont ainsi des inhibiteurs de la synthèse de l'ADN des cellules cancéreuses en voie de prolifération.
Selon une caractéristique particulière, l'invention concerne la nouvelle classe de dérivés de la déoxy-2'-uridine substituée en position 5', c'est-à-dire les composés de formule générale (I), dans laquelle R' est un groupe hydroxy et R" est un groupe -NH-R1.
Selon une autre caractéristique particulière, l'invention concerne la nouvelle classe de dérivés de la déoxy-2'-uridine substituée en position 3', c'est-à-dire les composés de formule générale (I), dans laquelle R' est un groupe -NH-R1 et R" est un groupe hydroxy.
Selon encore une autre caractéristique particulière, l'invention concerne la nouvelle classe de dérivés de la déoxy-2'-uridine substituée en position 5, c'est-à-dire les composés de formule générale (I), dans laquelle R est un groupe -NH-R1, R' et R" étant simultanement des groupes hydroxy.
Les nouveaux composés de formule (I) selon l'invention se présentent, suivant la structure de l'acide aminé ou du peptide précité, sous la forme D ou L, ou encore DL. Le procédé général pour la préparation des composés selon l'invention de formule générale (I) telle que définie précédemment comporte la réaction, par voie enzymatique ou par voie chimique, d'un dérivé aminé répondant à la formule générale :
Figure imgf000007_0001
dans laquelle Ra est choisi parmi un radical alkyle ou alcényle ayant de 1 à
4 atomes de carbone, un radical aryle ou un halogène, lesdits radicaux alkyle, alcényle et aryle pouvant comporter au moins un substituant halogène, et un radical -NH2 ; R'a et R"a étant choisis parmi un radical hydroxy et un radical
-NH2, à la condition que R'a et R"a ne soient pas simultanement -NH2 et que. lorsque Ra, est -NH2, R'a et R"a soient simultanement un groupe hydroxy ; avec un acide aminé ou un peptide comportant de 2 à 6 acides aminés, et, si on le désire, la conversion d'un composé ainsi obtenu en un sel acceptable en pharmacie.
Les composés de forme L sont préparés de préférence par réaction enzymatique des dérivés aminés de formule (Ia) avec un acide aminé ou un peptide de forme L ou DL, en présence d'une enzyme choisie parmi la papaine et la chymopapaîne, la réaction étant effectuée à une température d'environ 10 à environ 70ºC en milieu acide. Dans ces conditions, il y a réaction entre la fonction aminé du dérivé aminé en 5, en 3' ou en 5' et la fonction acide libre de l'acide aminé ou du peptide, étant entendu que les fonctions aminés dudit acide aminé ou peptide sont préalablement bloquées à l'aide de réactifs connus tels que le benzyloxycarbonyle, le paraméthoxybenzyloxycarbonyle, le t-butoxycarbonyle ou le fluorénométhyloxycarbonyle.
Les composés de forme L, D ou DL peuvent également être préparés en utilisant un procédé purement chimique comportant éventuellement la séparation d'un mélange d'isomères des composés de formule (I) en les isomères isolés.
De façon surprenante, les composés de formule (I) selon l'invention se sont révélés actifs en inhibant la synthèse de l'ADN des cellules cancéreuses et de certaines particules virales.
Ces composés sont donc notamment utiles dans le traitement des cancers hormonodépendants et d'infections d'origine virale.
On emploie en général la voie orale pour tous les états nécessitant de tels composés. A cet effet, les composés de l'invention peuvent être administrés à des doses comprises par exemple entre environ 30 mg/m2 et environ 100 mg/m2 par jour dans le traitement des cancers, et par exemple entre environ 50 mg/kg et environ 250 mg/kg par jour, dans le traitement d'infections d'origine virale. Bien entendu, ces posologîes peuvent être ajustées pour assurer la réponse thérapeutique optimale.
Ainsi, selon un dernier aspect, la présente invention concerne des compositions pharmaceutiques, notamment à activité d'inhibiteur de la synthèse de l'ADN des cellules cancéreuses en voie de prolifération, caractérisées en ce qu'elles contiennent, à titre d'ingrédient actif, au moins l'un des composés définis précédemment de formule générale I, en association avec un véhicule ou support non toxique pharmaceutiquement acceptable.
Les compositions pharmaceutiques de l'invention sont généralement préparées selon des procédés classiques et sont administrées sous une forme pharmaceutique appropriée, par exemple une forme orale solide peut contenir, avec le composé actif des diluants, par exemple le lactose, la cellulose ; des lubrifiants, par exemple l'acide stéarique ou des polyéthylèneglycols ; des agents liants tels que des amidons, la méthylcellulose ; des colorants ; des édulcorants ; des agents mouillants comme par exemple les polysorbates ; et, en général, les substances non toxiques et pharmacologiquement inertes utilisées dans les compositions pharmaceutiques. L'invention sera illustrée plus en détail par les exemples non-limitatifs suivants : Exemple 1 : Voie enzymatique Synthèse de N-(L-alanyl)-amino-5'-didéoxy-2',5'-méthyl-5-uridine
Figure imgf000009_0001
Etape A : Synthèse de N-[ (N-benzyloxycarbonyl)-L-alanyl]-amino-5'- didéoxy-2',5'-méthyl-5-uridine
Dans un tricol de 100 ml équipé d'une agitation magnétique, d'un thermomètre et d'un réfrigérant, on introduit successivement :
- 16 ml de soude normale
- 3,57 g de (N-benzyloxycarbonyl)-L-alanine (0,016 mole)
- 3,86 g d'amino-5'-didéoxy-2,,5'-méthyl-5-uridine (0,016 mole)
- 188 mg de chlorhydrate de L-cystéine dissous dans 2,4 ml d'eau distillée
- 20 ml de solution tampon citrique pH : 5
Le milieu réactionnel dont le pH est 8,98 est chauffé à 50°C ; à partir de 30°C, le mélange est limpide.
A 50°C, on additionne une solution de 3,6 g de papaîne (2,9 Ul/mg) dans 8 ml d'eau. Le pH évolue lentement vers 8,41.
Par additon d'acide citrique en poudre (m = 1,2 g) on amène le pH à 4,6 et laisse sous vive agitation pendant 24 h.
La réaction terminée, on refroidit le milieu réactionnel, filtre et lave le précipité à l'eau. Après séchage à 60ºC sous vide, on obtient 4,3 g de
N-[(N-benzyloxycarbonyl)-L-alanyl]-amino-5'-didéoxy-2',5'-méthyl-5 -uridine.
La purification est effectuée par cristallisation dans 50 ml de méthanol. m = 3,9 g Rdt = 55 % Pureté : 95 %
Etape B :
Ce composé est mis en solution dans le méthanol et hydrogéné en présence de 400 mg de charbon palladié à 10 %. Après filtration du catalyseur et concentration du solvant, on reprend le résidu par l'éther éthylique et filtre le précipité obtenu.
On obtient après séchage 7,9 mmoles de
N-(L-alanyl)-amîno-5'-didéoxy-2',5'-méthyl-5-uridîne CRdt : 90 %). La recristallisatîon dans 20 ml de méthanol du produit précédent conduit à 7,11 mmoles du composé désiré optiquement pur. m = 2,21 g
Rdt global : 44 % ; F = 190-193°C (Thermovar) ; [α]D 20 = +28°5
(C = 0,5 MeOH) ; IR (KBR) : 1670 cm-1 (C = 0) ; 1275 cm-1,
1580 cm-1, 3250 cm-1 (N - H). RMN (200 MHz, CD3OD) : 1,30 C3H, d, Me ala) ; 1,90 (3H, s, Me) ; 2,22 à 2,28 (2H, m, C-2'-H) ; 3,47 à
3,51 (3H, m, C-5'-H, C-ala-H) ;
3,90 à 3,92 (1H, m, C-4'-H) ; 4,25 à 4,27 (1H, m, C-3'-H) ; 6,18
(1H, t, C-T-H) ; 7,49 (1H, s, C-6-H).
Exemple 2 : Voie chimique Synthèse de N-(D-alanyl)-amino-5'-didéoxy-2',5'-méthyl-5-uridine
Figure imgf000010_0001
Etape A : Synthèse de N-[ (N-benzyloxycarbony l )-D-a lanyl]-amino 5 ' - di déoxy-2 ' ,5 ' -méthyl-5-ur idine.
Dans un t ri col de 100 ml équipé d ' une agi tat ion magnétique, d' un thermomètre et d ' une garde de ch lorure de ca lcium, on introdui t :
- 20 ml de dichlorométhane sec (tamis 4 Å)
- 893 mg de (N-benzyloxycarbonyl)-D-alanine (4 mmoles)
- 0,6 ml de triéthylamine (4,3 mmoles) On refroidit la solution obtenue à -5°C et ajoute 0,4 ml de chloroformiate d'éthyle (4,2 mmoles).
Après 90 minutes d'agitation, on additionne 964 mg d'amino-5'-didéoxy-2',5'-méthyl-5-uridine et laisse 60 minutes à
-5ºC puis une nuit à température ambiante. On filtre le précipité formé et le lave par 15 ml d'eau permutée. Après séchage à l'étuve sous vide à 60ºC, on obtient
1,33 g de N-[(N-benzyloxycarbonyl)-D-alanyl]-amino-5'-didéoxy-2',
5'-méthyl-5-uridine. Une cristallisation dans 50 ml de méthanol conduit à 1,2 g d'un composé de pureté satisfaisante (Rdt : 67 %). Etape B :
L'hydrogénolyse et une purification analogues à celles décrites dans l'exemple 1, conduisent au N-(D-alanyl)-amino-5'-didéoxy-2',5'-méthyl-5-uridine optiquement pur [m = 715 mg ;
2,3 mmoles ; Rdt 57 %_ F = 180-184°C (Thermovar) αD 20 = + 22,6° (C = 1, MeOH) IR (KBr) : 1670 cm -1 CC = 0) ; 1275 cm-1, 1580 cm-1,
3250 cm-1 (N-H) ; C.C.M. : (MeOH, H2O : 80/20) rf = 0,21 silice
60 F 254.
RMN (200 MHz, D2O) : 1,23 - 1,30 (3H, d, Me ala) ;
1,90 (3H, s ; Me) ; 2,35 à 2,41 (2H, m, C-2'-H) ; 3,52 à 3,57 (3H, m C- 5 'H, C ala - H) ; 4,02 à 4,04 Cl H, m, C-4'-H) ; 4,37 à
4,40 (1H, m, C-3'H) ; 6,25 (1H, t, C-1'-H) ; 7,48 (11 H, s, C-6-H)
Exemple 3
Synthèse de N-(D-alanyl)amino-3'-didéoxy-2',3'-méthyl-5-uridine
Figure imgf000012_0001
Le protocole opératoire est identique à celui décrit dans l'exemple 2.
Etape A : Synthèse de N-[(N-benzyloxycarbonyl)-D-alanyl ]amino-3'- didéoxy-2'-3'-méthyl-5-uridine (1) Les produits de départ sont les suivants :
- 20 ml de dîchlorométhane sec Ctamis 4 Å)
- 925.mg de (N-benzyloxycarbonyl)-D-alanine (4,15 mmoles)
- 0,62 ml de triéthylamine (4,4 mmoles)
On obtient ainsi 0,95 g du composé (1) avec une pureté satisfaisante (Rdt : 64 %) .
F = 124-128°C (thermovar) : α 20 D = + 25° (c=0,1 , MeOH) RMN (200 MHz, CD3 OD) : 1,2 à 1,3 (3H, d. Me, ala) ; 1,7 (3H, s, Me) ; 2,29 à 2,32 (2H, m, C-2'-H) ; 3,7 à 3,9 (3H, m, C-5'-H, C4'-H) 4 à 4,1 (1H, d, C-ala H) ; 6,2 C1H, t, C-T-H) ; 7,3 à 7,4 (5H, m) ; 7,9 (1H, s, C-6-H) Etape B :
Ce composé (1) est mis en solution dans le méthanol et hydrogéné en présence de 200 mg de charbon palladié à 10 %.
Après filtration du catalyseur et concentration du solvant, on reprend le résidu par l'éther éthylique et filtre le précipité obtenu.
On obtient après séchage 502 mg de N-(D-alanyl)-amino-3'-didéoxy-2'-3'-méthyl-5-uridine (Rdt 90 %) F = 182-184°C α20 D = +22,5° (C=1, H2O) ccm :(MeOH, H2O : 80/20) rf = 0,26 Silice 60 F 254 RMN (200 MHz, D2O) : 1,2 à 1,3 (3H, d, Me-ala) ; 1,9 (3H, s, Me) ; 2,4 (2H,m, C-2'-H) ; 3,7 (1 H, m, C-ala) ; 3,8 à 3,9 (2H, m, C-5'-H) ; 4 (1H, m, C-4'-H) ; 4,4 à 4,6 (1H, m, C-3'-H) ; 6,2 à 6,3 (1H, t, C-T-H) ; 7,7 (1H, s, C-6-H) Exemple 4 : Voie chimique
Synthèse de N-(L-alanyl)-amιno-3'-didéoxy-2',3'-méthyl-5-uridine
Figure imgf000013_0001
Le protocole opératoire est identique à celui décrit dans l'exemple 2.
Etape A : Synthèse de N[(N-benzyloxycarbonyl)-L-alanyl]-amino-3' didéoxy-2',3'-méthyl-5-uridine (2)
On utilise au départ 5 g (20,7 mmoles) d'amino-3'-didéoxy-2',3'-methyl-5-uridine.
On obtient ainsi 6,14 g (13,7 mmoles) du composé (2), avec une pureté satisfaisante (Rdt : 66,5 %) F (thermova r) : 145-148°C [α]20 D = +5°9 (c = 1, MeOH) RMN (200 MHz, CD3OD) : 1,30 à 1,34 (3H, d, Me-ala) 1,68 (3H, s, C-5-4) ; 2,28 à 2,34 (2H, t, C-2'-H) 3,7 à 3,8 (3H, m, C-4'-H, C-5'-H) ; 4,07 à 4,11 (1H, m, C-) 4,47 à 4,51 (1H, m, C-3'-H), 5,07 (2H, s, CH2) 6,19 à 6,22 (1H, t, C-1'-H) ; 7,27 à 7,33 (5H, m, C6H5) 7,87 (1H, s, C-6-H)
Etape B
On obtient à partir du composé (2), 3,66 g (11,7 mmoles) de N-(L-alanyl)-amino-3'-didéoxy-2',3'-méthyl-5-uridine (Rdt : 85,9 %) F (thermovar) : 180°-185°C [α]D 20 = + 32°4 (C = 1, MeOH) RMN (200 Mz, D2O) : 1,28 à 1,31 (3H, d, Me-ala) 1,90 (3H, s, C-5-H) ; 2,41 à 2,50 (2H, m, C-2'-H) ; 3,54 à 3,58 (1H, m, C-ala H) ; 3,76 à 4,00 (3H, m, C-4'-H C-5'-H) ; 4,49 à 4,53 (1H, m, C-3-H) ; 6,22 à 6,26 (1H, t, C-1'-H) ; 7,70 (1H, s, C-6-H)
Exemple 5 : Voie chimique
Synthèse de N-(L-alanyl)-amino-5-déoxy-2'-uridine
Figure imgf000014_0001
Etape A : Synthèse de N-[(N-benzyloxycarbonyl)-L-alanyl]amino-5- déoxy-2'-uridine (3)
A une solution de 6 g (21 mmoles) de chlorhydrate d'amino-5-déoxy-2'-uridine dans 220 ml de méthanol et d'eau (4 : 1) et 2,8 ml de triéthylamine sont ajoutés 10,38 g (42 mmoles) de N-(éthoxy-carbonyl)-2-éthoxy-1,2-dihydroquinoline et 9,36 g (42 mmoles) de (N-benzyloxycarbonyl)-L-alanine.
Le milieu réactionnel est conservé à température ambiante 12 heures. Après évaporation sous vide à 20ºC des solvants, l'huile obtenue est soigneusement triturée en présence d'éther de pétrole jusqu'à obtention d'une pâte. L'addition de chloroforme donne naissance à un précipité qui, après -filtration, est soigneusement lavé plusieurs fois par du chloroforme et enfin par de l'éther. Après séchage sous vide à 20°C on obtient 8 g (18 mmoles) de N-[(N-benzyloxycabonyl)-L-alanyl] amino-5-déoxy-2'-uridine. La recristallisation dans un mélange de chloroforme et de méthanol conduit à 7,2 g (16,5 mmoles) d'un composé de pureté satisfaisante (Rdt : 77 %) Pureté CHPLC) : 100 % [α]D 20 = - 30° CC = 0,5, MeOH) F Cthermovar) = 104-107°C CCM Silice 60 F 254 CCHCl3, EtOH : 90/10) rf = 0,176 RMN C200 MHz, CD3OD) :
1,36 à 1,39 C3H, d, CH3 ala) ; 2,23 à 2,26 C2H, m, C-2'-H) ; 3,72 à 3,74 C2H, d, C-5'-H) ; 3,91 à 3,93 C1H, m, C-4'-H) ;
4,31 à 4,35 C2H, m, C-3'H, CH-ala) ; 6,29 à 6,36 C1H, t, C-1'H) ;
8,61 C1H, s, C-6H)
Etape B
4 g C9 mmoles) du composé C3) sont mis en solution dans 300 ml de méthanol et hydrogénés en présence de 400 mg de charbon palladié à
10 % pendant 3 heures. Après filtration du catalyseur et concentration du solvant, on reprend le résidu par de l'éther éthylique et filtre le précipité obtenu. On obtient après séchage
2,7 g C8,6 mmoles) de N-CL-alanyl)-amino-5-déoxy-2'-uridine CRdt : 94 %) . La recristallisation dans le n-butanol conduit à 2,1 g C6,7 mmoles) du composé désiré CRdt = 73 %)
Rdt global : 56 %
Pureté CHPLC) : 96 % [α]D 20 = + 15° CC = 0,5 MeOH) F Cthermovar) : 166-168°C CCM silice 60F254 CMeOH, H20 : 80/20) rf = 0,303
IR CHBr) : 1670 cm-1 CC = 0) ; 1275 cm-1, 1580 cm-1, 3250 cm -1 CN-H)
RMN C200 MHz, CD3OD) : 1,55 C3H, d, CH3ala), 2,20 à 2,31 C2H, m, C-2'-H) ; 3,72 à 3,74 C2H, d, C-5'-H) ; 3,92 à 3,93 C1H, m, C-4'-H) ; 4,14 à 4,18 C1H, m, C-ala-H) ; 4,35 à 4,38 C1H, m, C-3'-H) ; 6,28 à 6,34 C1H, t, C-1'-H) ; 8,60 C1H, s, C-6-H).
Exemples 6 à 17 En utilisant des processus expérimentaux analogues à ceux décrits dans les exemples 1 et 2 et que l'homme de métier retrouvera facilement, on a préparé les composés suivants : N-CL-a lanyl)-amino 5'-didéoxy-2',5'-ethyl-5-uridine N-CL-alanyl)-amino-5'-didéoxy-2',5'-butyl-5-urîdine N-CL-a lanyl)-amino-5'-didéoxy-2',5'-propyl-5-uridine N-CL-valyl)-amino-5'-didéoxy-2',5'-méthyl-5-uridine N-CL-leucyl)-amono-5'-didéoxy-2',5'-méthyl-5-uridîne N-Csarcosyl)-amino-5'-didéoxy-2',5'-méthyl-5-uridine N-Cβ-alanyl)-amino-5'-didéoxy-2',5'-méthyl-5-uridine N-CL-alanyl-L-alanyl)-amino-5'-dîdéoxy-2',5'-méthyl-5-uridine N-CL-alanyl-L-alanyl-L-alanyl)-amino-5'-didéoxy-2',5'-méthyl-5-uridîne
N-CL-alanyl)-amino-5'-didéoxy-2',5'-vinyl-5-uridine N-CL-alanyl)-amιno-5'-didéoxy-2',5'-bromovinyl-5-uridine Exemples 18 à 31 En utilisant des processus expérimentaux analogues à ceux décrits dans l'exemple 3 et que l'homme de métier retrouvera facilement, on a préparé les composés suivants : N-CL-alanyl)-amino-3'-didéoxy-2',3'-méthyl-5-uridine N-CL-alanyl)-amino-3'-didéoxy-2',3'-éthyl-5-uridine N-CL-alanyl)-amino-3'-didéoxy-2',3'-butyl-5-uridine N-CL-alanyl)-amino-3'-didéoxy-2',3'-propyl-5-uridine N-CL-valyl)-amino-3'-didéoxy-2',3'-méthyl-5-uridine N-CL-leucyl)-amino-3'-didéoxy-2,,3'-méthyl-5-uridine N-Csarcosyl)-amino-3'-didéoxy-2',3'-méthyl-5-uridine N-Cβ-alanyl)-amino-3'-didéoxy-2',3'-méthyl-5-uridine
N-CL-alanyl-L-alanyl)-amino-3'-didéoxy-2',3'-méthyl-5-uridine
N-CL-alanyl-L-alanyl-L-alanyl)-amino-3'-didéoxy-2',3'-méthyl-5-uridine
N-CL-glycyl)-amino-3'-didéoxy-2',3'-méthyl-5-uridine N-CL-alanyl)6-amîno-3'-dîdéoxy-2',3'-méthyl-5-uridine N-CL-alanyl)-amino-3'-didéoxy-2',3'-vinyl-5-uridine N-CL-alanyl)-amino-3'-didéoxy-2,3'-bromovinyl-5-uridine Exemples 32 à 38
En utilisant des processus expérimentaux analogues à celui décrit dans l'exemple 5 et que l'homme de métier retrouvera facilement, on a préparé les composés suivants : N-(L-va lyl)-amino-5 déoxy-2 ' -uri dine
N- (L-Leucyl)-amino-5 déoxy-2 ' -uridine
N-(sarcosyl )-amino-5-déoxy-2 '-uridi ne
N-Cβ-alanyl)-amino-5-déoxy-2'-uridine N-CL-alanyl-L-alanyl)-amino-5-déoxy-2'-uridine
N-CL-alanyl)6-amino-5-déoxy-2'-uridine
N-CL-glycyl-L-alanyl)-amino-5-déoxy-2'-uridine
L'activité des composés selon l'invention, comme inhibiteurs de la synthèse de l'ADN des cellules cancéreuses a été évaluée :
- "in vitro" sur la TKF cytosolique Cétude 1)
- "in vivo" sur les cellules MCF7 en culture Cétude 2)
- "in vivo" sur des rats femelles WISTAR immatures Cétude 3) Etude 1 Des cellules du cancer du sein hormonodépendantes CMCF7) qui contiennent 95-96 % de thymidine kinase foetale, sont traitées par les ultrasons et centrifugées à 105.000 g.
Les cellules MCF7 proviennent d'une métastase pleurale d'un cancer du sein humain CRéf. H. SOULE, J. VASQUEZ, A. LONG, S. ALBERT and M. BREUNAN. J. Natl. Cancer Instit., 51, 1409-1416,
1973) et sont par exemple disponibles à l'A.T.C.C. CAmerican Type Culture Collection).
La concentration des protéines du cytosol obtenu est mesurée et ajustée par dilution à 1,5 mg de protéines par ml de cytosol. Celui-ci est incubé, à 37 C pendant 10 minutes, dans un tampon Tris CpH : 7,6) en présence de thymidine [C14-2] C40 μmolaire), d'ATP C8 mMolaire) et de chlorure de magnésium. La réaction enzymatique est stoppée par l'addition. d'acide perchlorique.
Les nucléotides formés sont séparés par électrophorèse haute tension, les taches sont découpées et comptées.
On a donné au Tableau I les résultats des essais réalisés avec les composés des exemples 1 et 2 ainsi qu'avec des témoins sans inhibiteur, à titre de comparaison.
Les valeurs données sont exprimées en picomoles par millilitre de cytosol par minute.
Figure imgf000018_0001
Ce test biochimique est basé sur la connaissance du fait que la thymidine kinase occupe une position stratégique dans les processus biochimiques aboutissant à la synthèse de l'ADN, qui utilise le thymidine triphosphate (TTP) qui peut être considéré comme le produit final d'une réaction complexe initiée par la thymidine kinase.
Comme le montre le tableau 1, les composés selon l'invention agissent comme inhibiteurs de la synthèse du TTP, et donc vraisemblablement de la synthèse de l'ADN des cellules cancéreuses en voie de prolifération.
Etude 2 Culture des cellules MCF-7
Des cellules MCF-7 sont cultivées dans des flacons de
75 cm2. Chaque flacon est ensemencé avec 0,6 × 106 cellules en suspension dans 10 ml de milieu RPMI-1640 auquel on ajoute 2 mM de
L-glutamîne, 2,5 μg/ml de Fungizone, 15 U/ml de Pénicilline, 50 μg/ml de Streptomycine et 5 % de sérum de veau foetal.
Les cellules sont cultivées pendant 72 heures à 37°C dans un incubateur à CO2 (EG 110, IR. Jouan). Les milieux de culture sont changés toutes les 48 heures.
La récolte des cellules est effectuée par décollement au moyen d'un rubber-policeman et la suspension de cellules est centrifugée à 200 g dans une centrifugeuse réfrigérée pour obtenir un culot de cellules.
Essais des inhibiteurs
Les différents inhibiteurs à tester sont dissous dans du RPMI-1640 à la concentration de 1 mM. Leurs effets sont testés pendant 48 et 72 heures.
Tests analytiques
- Comptage des cellules : Les tapis cellulaires sont lavés, 3 fois, avec 5 ml d'un tampon phosphate salin CPBS). Le contenu de chaque flacon de culture est, ensuite, mis en suspension dans 10 ml de tampon PBS. Les cellules sont comptées au moyen d'un compteur Hycel Counter H.C. 202 R.
- Dosage de l'ADN : Il est effectué sur une partie aliquote du sonicat de cellules et par spectrofluorimétrie selon la technique de C. Brunk et al., Analyst. Biochem., 92, 497-500 1979.
Figure imgf000019_0001
Etude 3
PROTOCOLE
Animaux Rats femelles WISTAR (IFFA CREDO) âgés de 22 jours de poids moyen compris entre 30 et 50 g.
Ils sont séparés de la mère 2 jours avant le début de l'essai.
Ils ont libre accès à la nourriture et à l'eau de boisson pendant la durée de l'essai.
Produits . NaCl à 0,9 %
. Alcool absolu
. Dipropionate de 17 β oestradiol (Sigma référence
E.9125) Une solution à 2 mg.ml-1 dans NaCl à 0,9 % est effectuée . 6 -[3H] Déoxythymidine (Amersham référence TRK61 à 24
Ci/mmole
La solution de travail est préparée par dilution de la solution commerciale au 1/11ème. Son activité volumique est de 10 μCi/0,1 ml . Exemple 1 . Exemple 2
Ces produits sont mis en solution dans NaCl 0,9 % de façon à administrer un volume de 0,1 ml/animal
. NaOH 5 ml . HClO4 0,6 N . KOH 0,6 N
. Diphenylamine CSigma référence D.2285) en solution dans l'acide acétique glacial (1 %)
. H2SO4 concentré . ADN de Thymus de veau (Borhinger référence 104 175) en solution dans NaOH 5 mM . Instagel® Mode Opératoire
1. Traitements et sacrifice
Ils sont effectués selon le schéma suivant
Figure imgf000021_0001
t0 Le lot "Témoin Absolu" reçoit 0,1 ml de NaCl à 0,9 % par voie intrapéritonéale. Les autres lots reçoivent 800 ng/animal d'oestradiol sous un volume de 0,1 ml.
t23h Tous les animaux reçoivent 10 μCi de [3H]dTh sous un volume de 0,1 ml par voie intrapéritonéale. Le lot "Témoin Oestradiol" et le lot "Témoin Absolu" reçoivent 0,1 ml de NaCl à 0,9 %.
Les lots "Inhibiteurs" reçoivent les produits à tester sous un volume de 0,1 ml par voie intrapéritonéale.
t24h Tous les animaux sont sacrifiés par dislocation cervicale. Les utérus sont prélevés, essuyés sur papier filtre, pesés et congelés.
2. Traitement des utérus
L'utérus est broyé dans 0,5 ml d'Acide Perchlorique 0,6 N à l'aide du Potter. Le piston du broyeur est rincé à 3 reprises avec 0,3 ml d'Acide Perchlorique 0,6 N. L'homogénat et les liquides de rinçage sont rassemblés dans des tubes coniques en verre, puis centrifugés à 800 g pendant 10 minutes. Le culot est lavé 2 fois avec 1 ml d'Acide Perchlorique 0,3 N.
Ce culot est repris par 0,6 ml de KOH 0,3 N ; les tubes sont placés au baîn-marîe à 37ºC pendant 2 heures 30.
Après hydrolyse alcaline (Hydrolyse de l ΑRN) 30 μl d'Acide Perchlorique 11 N sont ajoutés afin de précipiter l'ADN.
Les tubes sont refroidis dans la glace puis centrifugés à 4200 g pendant 10 minutes.
Le culot est lavé 2 fois avec 1 ml d'Acide Perchlorique 0,3 N.
Le dernier culot est repris par 0,6 ml d'Acide Perchlorique 0,6 N. Les tubes sont placés 10 minutes à 80°C. Après refroidissement dans la glace pendant quelques minutes ils sont centrifugés pendant 10 minutes à 4200 g.
3. Détermination de la radioactivité incorporée dans l'ADN
50 μl de surnageant sont placés dans des fioles de comptage. Après addition de 5 ml d'Instagel, le comptage est effectué sur 10 minutes.
Les c.p.m. (coups par minute) sont convertis en d.p.m.
(d.p.m. = désintégrations par minute)
Figure imgf000022_0001
E = efficacité de comptage = 0,37
Les d.p.m. en picomoles de [3H] dTh selon la formule
Figure imgf000022_0002
Activité spécifique de la [3H] dTh : 25 nCi/picomole
1nCi = 2220 d.p.m.
Les résultats sont exprimés en pmole de Déoxythymidine incorporée par utérus. 4. Dosage de l ' A . D . N.
A 100 μl de surnageant, dilué au 1/6 dans l'Acide Perchlorique 0,6 N sont ajoutés 1,2 ml d'une solution de diphenylamine dans l'Acide Acétique glacial (1 g/100 ml).
Les tubes sont placés 10 minutes au bain-marie bouillant.
Après refroidissement, la Densité Optique est lue à 595 nm.
L'étalonnage est effectué à l'aide d'une solution d'ADN de Thymus de Veau.
Les résultats sont exprimés en μg/utérus.
Figure imgf000024_0001

Claims

REVENDICATIONS
1. Dérivés de la déoxy-2'-uridine, caractérisés en ce qu'ils répondent à la formule générale suivante :
dans laquelle
Figure imgf000025_0001
. R est choisi parmi un radical alkyle ou alcényle ayant de 1 à 4 atomes de carbone, un radical aryle ou un halogène, lesdits radicaux alkyle, alcényle et aryle pouvant comporter au moins un substituant halogène ; et un radical de formule -NH-R1, dans lequel R1 représente un reste d'acide aminé ou de peptide comportant de 2 à 6 acides aminés ; . R' et R" étant choisis parmi un radical hydroxy et un radical de formule -NH-R1, dans lequel R1 a la même signification que ci-dessus ; à la condition que R' et R" ne soient pas simultanément -NH-R1 et que, lorsque R est -NH-R1, R' et R" soient simultanément un groupe hydroxy ; et leurs sels acceptables en pharmacie.
2. Dérivés selon la revendication 1, de formule générale (I), dans laquelle R' est un groupe hydroxy et R" est un groupe -NH-R1.
3. Dérivés selon la revendication 1, de formule générale (I), dans laquelle R" est un groupe hydroxy et R' est un groupe
-NH-R1.
4. Dérivés selon la revendication 1, de formule générale (I), dans laquelle R est un groupe -NH-R1.
5. Dérivés selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisés en ce que le reste d'acide aminé ou de peptide précité se présente sous la forme L ou D.
6. Dérivés selon la revendication 1, caractérisés en ce qu'il s'agit des composés suivants :
. N-(L-alanyl)-amino-5,-didéoxy-2',5,-méthyl-5-uridine . N-(D-alanyl)-amino-5'-didéoxy-2',5'-méthyl-5-uridine . N-(D-alanyl)-amino-3'-dîdéoxy-2',3'-méthyl-5-uridine
. N-(L-alanyl)-amino-3'-didéoxy-2',3'-méthyl-5-uridine . N-(L-alanyl)-amino-5-déoxy-2,-uridine.
7. Procédé de préparation des dérivés répondant à la formule générale (I), caractérisé en ce qu'il comporte la réaction, par voie enzymatique ou par voie chimique, d'un dérivé aminé répondant à la formule générale :
Figure imgf000026_0001
dans laquelle
Ra est choisi parmi un radical alkyle ou alcényle ayant de 1 à
4 atomes de carbone, un radical aryle ou un halogène, lesdits radicaux alkyle, alcényle et aryle pouvant comporter au moins un substituant halogène, et un radical -NH2 ;
R'a et R"a étant choisis parmi un radical hydroxy et un radical
-NH2, à la condition que R'a et R"a ne soient pas simultanément -NH2 et que, lorsque Ra est -NH2, R'a et R"a soient simultanément un groupe hydroxy ; avec un acide aminé ou un peptide comportant de 2 à 6 acides aminés, et, si on le désire, la conversion d'un composé ainsi obtenu en un sel acceptable en pharmacie.
8. Procédé de préparation des dérivés répondant à la formule générale (I), dans laquelle le reste d'acide aminé ou de peptide se présente sous la forme L, caractérisé en ce qu'il comporte la réaction enzymatique des dérivés de formule générale (la) telle que définie à la revendication 7 avec un acide aminé ou un peptide comportant de 2 à 6 acides aminés, en présence d'une enzyme choisie parmi la papaîne et la chymopapaïne, la réaction étant effectuée à une température d'environ 10 à environ 70ºC en milieu acide, les fonctions aminés dudit acide aminé ou dudit peptide ayant été préalablement bloquées.
9. Composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle contient, à titre d'ingrédient actif, au moins un composé selon l'une des revendications 1 à 6, en association avec un véhicule ou support non toxique, pharmaceutiquement acceptable.
10. Composition pharmaceutique à activité d'inhibiteur de la synthèse de l'ADN des cellules cancéreuses en voie de prolifération, caractérisée en ce qu'elle contient, à titre d'ingrédient actif, au moins un composé selon l'une des revendications 1 à 6, en association avec un véhicule ou support non toxique, pharmaceutiquement acceptable.
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0586298A1 (fr) * 1992-09-02 1994-03-09 Bristol-Myers Squibb Company Inhibiteur de thymidine kinase du virus herpes simplex
WO1997049717A1 (fr) * 1996-06-25 1997-12-31 Ivan Igorevich Fedorov 3'-oxymino-2',3'-didesoxynucleosides et derives de ces derniers
EP1425022A1 (fr) * 2001-08-24 2004-06-09 Koronis Pharmaceuticals, Inc. Analogues de nucleoside mutagene pour le traitement d'une maladie virale

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ATE413881T1 (de) 1997-08-08 2008-11-15 Celmed Oncology Usa Inc Verfahren und zubereitungen um resistenz gegen biologische oder chemische therapien zu überwinden
EP1240922B1 (fr) * 1997-08-08 2008-11-12 Celmed Oncology (USA), Inc. Méthodes et composés de combattre la résistance à la thérapie biologique et chimique
US7462605B2 (en) * 1998-01-23 2008-12-09 Celmed Oncology (Usa), Inc. Phosphoramidate compounds and methods of use
EP1167972B1 (fr) * 1998-01-23 2017-03-08 Kiadis Pharma Intellectual Property B.V. Agents thérapeutiques catalysés par les enzymes
CN1391486A (zh) * 1999-07-22 2003-01-15 新生物公司 治疗对治疗有抗性的肿瘤的方法
US6683061B1 (en) 1999-07-22 2004-01-27 Newbiotics, Inc. Enzyme catalyzed therapeutic activation
US20030212037A1 (en) * 2000-12-21 2003-11-13 Christopher Boyer Use of bvdu for inhibiting the growth of hyperproliferative cells
CA2441350A1 (fr) * 2001-01-19 2002-07-25 Newbiotics, Inc. Procedes relatifs au traitement des maladies auto-immunes et inflammatoires
AU2001258694A1 (en) * 2001-03-16 2002-10-03 G. Holdings Ltd. System and method for replacing identification data on a portable transaction device
KR100540509B1 (ko) * 2004-01-07 2006-01-11 학교법인 포항공과대학교 수화젤레이터로 사용되는 2'-데옥시우리딘 유도체

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3853845A (en) * 1971-08-18 1974-12-10 Icn Pharmaceuticals 5-n-aminoacyl-5-aminouridines
US4128639A (en) * 1977-12-14 1978-12-05 Research Corporation Nitrosourea analogs of thymidine

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4093716A (en) * 1977-04-28 1978-06-06 Research Corporation Compositions containing 5-amino-5-deoxythymidine and pharmaceutically acceptable salts thereof
US4849513A (en) * 1983-12-20 1989-07-18 California Institute Of Technology Deoxyribonucleoside phosphoramidites in which an aliphatic amino group is attached to the sugar ring and their use for the preparation of oligonucleotides containing aliphatic amino groups
SE8605503D0 (sv) * 1986-12-19 1986-12-19 Astra Laekemedel Ab Novel medicinal use
SE8701605D0 (sv) * 1987-04-16 1987-04-16 Astra Ab Novel medicinal compounds

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3853845A (en) * 1971-08-18 1974-12-10 Icn Pharmaceuticals 5-n-aminoacyl-5-aminouridines
US4128639A (en) * 1977-12-14 1978-12-05 Research Corporation Nitrosourea analogs of thymidine

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Journal of Medicinal Chemistry, volume 21, no. 1, 1978, American Chemical Society, Columbus, Ohio (US), T.-S. Lin et al.: 'Synthesis and biological activity of several amino analogues of thymidine', pages 109 - 112 *
Journal of Medicinal Chemistry, volume 22, no. 12, 1979, American Chemical Society, Columbus, Ohio (US), A. Hampton et al.: 'Design of species-or isozyme-specific enzyme inhibitors. 2. Differences between a bacterial and a mammalian thymidine kinase in the effect of thymidine substituents on affinity for the thymidine site', pages 1524 - 1528 *
Journal of Medicinal Chemistry, volume 22, no. 6, 1979, American Chemical Society, Columbus, Ohio (US), A. Hampton et al.: 'Design of species or isozyme-specific enzyme inhibitors. 1. Effect of thymidine substituents on affinity for the thymidine site of hamster cytoplasmic thymidine kinase', pages 621 - 631 *
Journal of Medicinal Chemistry, volume 29, no. 6. 1986, American Chemical Society, Columbus, Ohio (US), R.D. Elliott et al.: 'Reactive 5' -substituted thymidine derivatives as potential inhibitors of nucelotide biosynthesis', pages 1052 - 1056 *
Journal of Medicinal Chemistry, volume 30, no. 5, 1987, American Chemical Society, Columbus, Ohio (US), R.D. Elliott et al.: 'Reactive 5' - substituted 2', 5' -dideoxyuridine derivatives as potential inhibitors of nucleotide biosynthesis, pages 927 - 930 *
Journal of the American Chemical Society, volume 93, no. 6, 24 mars 1971, Columbus, Ohio (US), M.J. Robbins et al.: 'Nucleoside peptides. I. The synthesis of 5'- deoxy-5'-amino-5'-N-aminoacyl peptide derivatives of guanosine, adenosine and 2'-deoxyadenosine and their effect on cell-free protein synthesis', pages 1474 - 1480 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0586298A1 (fr) * 1992-09-02 1994-03-09 Bristol-Myers Squibb Company Inhibiteur de thymidine kinase du virus herpes simplex
WO1997049717A1 (fr) * 1996-06-25 1997-12-31 Ivan Igorevich Fedorov 3'-oxymino-2',3'-didesoxynucleosides et derives de ces derniers
EP1425022A1 (fr) * 2001-08-24 2004-06-09 Koronis Pharmaceuticals, Inc. Analogues de nucleoside mutagene pour le traitement d'une maladie virale
EP1425022A4 (fr) * 2001-08-24 2009-04-29 Koronis Pharmaceuticals Inc Analogues de nucleoside mutagene pour le traitement d'une maladie virale

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