UA75036C2 - Спосіб радіоактивного мічення кон'югованого з комплексоном антитіла або фрагмента антитіла радіоактивним ізотопом ітрій-90 та комплект для здійснення способу - Google Patents
Спосіб радіоактивного мічення кон'югованого з комплексоном антитіла або фрагмента антитіла радіоактивним ізотопом ітрій-90 та комплект для здійснення способу Download PDFInfo
- Publication number
- UA75036C2 UA75036C2 UA2001086058A UA2001086058A UA75036C2 UA 75036 C2 UA75036 C2 UA 75036C2 UA 2001086058 A UA2001086058 A UA 2001086058A UA 2001086058 A UA2001086058 A UA 2001086058A UA 75036 C2 UA75036 C2 UA 75036C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- antibody
- radioactive
- labeling
- reaction
- buffer
- Prior art date
Links
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 title abstract description 62
- 238000000034 method Methods 0.000 title abstract description 46
- 239000012634 fragment Substances 0.000 title abstract description 10
- VWQVUPCCIRVNHF-OUBTZVSYSA-N Yttrium-90 Chemical compound [90Y] VWQVUPCCIRVNHF-OUBTZVSYSA-N 0.000 title description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 44
- 238000000746 purification Methods 0.000 abstract description 20
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 55
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 54
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 50
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 50
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 50
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 47
- 238000009739 binding Methods 0.000 description 47
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 44
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 42
- 238000000163 radioactive labelling Methods 0.000 description 32
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 28
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 24
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 20
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 20
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 18
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 18
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 18
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 18
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 17
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- UEUXEKPTXMALOB-UHFFFAOYSA-J tetrasodium;2-[2-[bis(carboxylatomethyl)amino]ethyl-(carboxylatomethyl)amino]acetate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC([O-])=O)CC([O-])=O UEUXEKPTXMALOB-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 14
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 12
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 12
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical group CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 11
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 11
- 238000003608 radiolysis reaction Methods 0.000 description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 11
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 10
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 10
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 description 9
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 8
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 8
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 8
- -1 benzyl- Chemical group 0.000 description 8
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 8
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 8
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 8
- 229910052727 yttrium Inorganic materials 0.000 description 8
- VWQVUPCCIRVNHF-UHFFFAOYSA-N yttrium atom Chemical compound [Y] VWQVUPCCIRVNHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 7
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 6
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 6
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 6
- 230000009471 action Effects 0.000 description 6
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 6
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 6
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 6
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 6
- 239000013024 dilution buffer Substances 0.000 description 6
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 6
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 6
- 230000003537 radioprotector Effects 0.000 description 6
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 5
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 5
- 229940072107 ascorbate Drugs 0.000 description 5
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 5
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 5
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 5
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 5
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 4
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 4
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 4
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 4
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 4
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 4
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 3
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- WXTMDXOMEHJXQO-UHFFFAOYSA-N 2,5-dihydroxybenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(O)=CC=C1O WXTMDXOMEHJXQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 2
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 125000003289 ascorbyl group Chemical group [H]O[C@@]([H])(C([H])([H])O*)[C@@]1([H])OC(=O)C(O*)=C1O* 0.000 description 2
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 2
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 2
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 2
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 description 2
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 2
- 239000002510 pyrogen Substances 0.000 description 2
- 238000011363 radioimmunotherapy Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-L sulfite Chemical class [O-]S([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 2
- QDZOEBFLNHCSSF-PFFBOGFISA-N (2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-1-[(2S)-6-amino-2-[[(2S)-1-[(2R)-2-amino-5-carbamimidamidopentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]hexanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-N-[(2R)-1-[[(2S)-1-[[(2R)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-amino-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)-1-oxopropan-2-yl]pentanediamide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](N)CCCNC(N)=N)C1=CC=CC=C1 QDZOEBFLNHCSSF-PFFBOGFISA-N 0.000 description 1
- 208000003950 B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 241000283153 Cetacea Species 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 206010012335 Dependence Diseases 0.000 description 1
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 1
- 208000021519 Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 241000251511 Holothuroidea Species 0.000 description 1
- 101000958041 Homo sapiens Musculin Proteins 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001527806 Iti Species 0.000 description 1
- 239000011786 L-ascorbyl-6-palmitate Substances 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000037062 Polyps Diseases 0.000 description 1
- 102000005157 Somatostatin Human genes 0.000 description 1
- 108010056088 Somatostatin Proteins 0.000 description 1
- 102400000096 Substance P Human genes 0.000 description 1
- 101800003906 Substance P Proteins 0.000 description 1
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 1
- 241001419232 Tornos Species 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010385 ascorbyl palmitate Nutrition 0.000 description 1
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 1
- 229920005549 butyl rubber Polymers 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000001055 chewing effect Effects 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 150000003841 chloride salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 210000003022 colostrum Anatomy 0.000 description 1
- 235000021277 colostrum Nutrition 0.000 description 1
- 230000002301 combined effect Effects 0.000 description 1
- 238000010668 complexation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010411 cooking Methods 0.000 description 1
- 229960002433 cysteine Drugs 0.000 description 1
- 230000001934 delay Effects 0.000 description 1
- 239000002274 desiccant Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- HRKQOINLCJTGBK-UHFFFAOYSA-L dioxidosulfate(2-) Chemical compound [O-]S[O-] HRKQOINLCJTGBK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 238000007667 floating Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 229960005219 gentisic acid Drugs 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 208000014951 hematologic disease Diseases 0.000 description 1
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-M hexadecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000046949 human MSC Human genes 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical class [H]* 0.000 description 1
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000002262 irrigation Effects 0.000 description 1
- 238000003973 irrigation Methods 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 231100000636 lethal dose Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 210000003041 ligament Anatomy 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 229940127554 medical product Drugs 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- 208000001491 myopia Diseases 0.000 description 1
- 230000004379 myopia Effects 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000007026 protein scission Effects 0.000 description 1
- 230000005258 radioactive decay Effects 0.000 description 1
- 239000012857 radioactive material Substances 0.000 description 1
- 239000000700 radioactive tracer Substances 0.000 description 1
- 230000003439 radiotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052705 radium Inorganic materials 0.000 description 1
- HCWPIIXVSYCSAN-UHFFFAOYSA-N radium atom Chemical compound [Ra] HCWPIIXVSYCSAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011535 reaction buffer Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 238000013341 scale-up Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 239000004460 silage Substances 0.000 description 1
- 238000004088 simulation Methods 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JVBXVOWTABLYPX-UHFFFAOYSA-L sodium dithionite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S(=O)S([O-])=O JVBXVOWTABLYPX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N somatostatin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)[C@@H](C)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N)C(O)=O)=O)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N 0.000 description 1
- 229960000553 somatostatin Drugs 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 238000011285 therapeutic regimen Methods 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 201000011531 vascular cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010055031 vascular neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
- G01N33/534—Production of labelled immunochemicals with radioactive label
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
- A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
- A61K51/1027—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against receptors, cell-surface antigens or cell-surface determinants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
- A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
- A61K51/1093—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody conjugates with carriers being antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Спосіб та набір для радіоактивного мічення кон’югованого з комплексоном антитіла або фрагмента антитіла радіоактивним ізотопом 90Y, що передбачають одержання радіоактивно міченого антитіла або фрагмента антитіла, що має радіоактивне включення більше ніж 95%, достатню питому активність і специфічність зв’язування принаймні 50% та може бути введене безпосередньо пацієнту без додаткового очищення.
Description
19. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що 30. Комплект за п. 20, який відрізняється тим, що співвідношення комплексону і антитіла або фраг- зазначена специфічність зв'язування становить мента антитіла коливається від 1,5 до 1. принаймні 70 905. 20. Комплект для радіоактивного мічення кон'юго- 31. Комплект за п. 20, який відрізняється тим, що ваного з комплексоном антитіла або фрагмента антитіло або фрагмент антитіла мітять до питомої антитіла за допомогою 29Уу для введення пацієнту, активності принаймні 5 мКі/мг. що включає 32. Комплект за п. 20, який відрізняється тим, що ї) флакон, який містить антитіло або фрагмент додатково містить флакон стерильного буфера антитіла, що кон'юговане з біфункціональним ком- для коригування рівня рН радіоізотопу. плексоном, вибраним із групи, яка включає МХ- 33. Комплект за п. 32, який відрізняється тим, що
ОТРА, феніл-ОТРА, бензил-ОТРА, СНХ-ОТРА, зазначений флакон містить ацетатний буфер.
РОТА та їх похідні, у прийнятному буфері, 34. Комплект за п. 20, який відрізняється тим, що ії) флакон, який містить буферну композицію для зазначена буферна композиція містить фізіологіч- стабілізації і введення радіоактивно міченого ан- ний сольовий розчин, радіопротектор та некон'ю- титіла або фрагмента антитіла пацієнту, та гований комплексон. ії) інструкції для виконання процедури радіоактив- 35. Комплект за п. 34, який відрізняється тим, що ного мічення, відповідно до якої кон'юговане з радіопротектор вибирають з групи, яка включає комплексоном антитіло або фрагмент антитіла альбумін сироватки людини (Н5ЗА), аскорбат, ас- експонується Оу або його сіллю протягом достат- корбінову кислоту, фенол, сульфіти, глутатіон, нього, відносно короткого періоду часу за умов цистеїн, гентизинову кислоту, нікотинову кислоту, прийнятної температури і рівня рН, рекомендова- аскорбілпальмітат, НОР(О)Н», гліцерин, форма- них у зазначених інструкціях, з одержанням радіо- льдегідсульфоксилат натрію, Маг52О5, Маг52Оз та активно міченого антитіла або фрагмента антиті- ЗО». ла, що має радіоактивне включення більше ніж 95 36. Комплект за п. 35, який відрізняється тим, що до, достатню питому активність і специфічність радіопротектор являє собою аскорбат. зв'язування принаймні 50 95, так що радіоактивно 37. Комплект за п. 36, який відрізняється тим, що мічене антитіло або фрагмент антитіла може бути концентрація аскорбату становить від 1 до 100 розбавлене до придатної концентрації у зазначе- мг/мл. ній буферній композиції і безпосередньо введене 38. Комплект за п. 35, який відрізняється тим, що пацієнту без додаткового очищення, спрямованого некон'югований комплексон являє собою ОТРА. на відділення радіоактивного антитіла або фраг- 39. Комплект за п. 38, який відрізняється тим, що мента антитіла від невключеного У0У, концентрація ОТРА становить 1 мм. 21. Комплект за п. 20, який відрізняється тим, що 40. Комплект за п. 20, який відрізняється тим, що зазначений достатній час інкубування є меншим додатково містить реакційний флакон. ніж вісім хвилин. 41. Комплект за п. 20, який відрізняється тим, що 22. Комплект за п. 21, який відрізняється тим, що додатково містить флакон з радіоізотопом. зазначений достатній час інкубування становить 42. Комплект за п. 20, який відрізняється тим, що від двох двох до п'яти хвилин. антитіло або фрагмент антитіла специфічно 23. Комплект за п. 20, який відрізняється тим, що зв'язують СО20. зазначений комплексон являє собою МХ-ОТРА. 43. Комплект за п. 20, який відрізняється тим, що 24. Комплект за п. 20, який відрізняється тим, що антитіло являє собою 288. зазначена прийнятна температура становить від 44. Комплект за п. 43, який відрізняється тим, що 25"С до 4376. комплексон являє собою МХ-ОТРА. 25. Комплект за п. 20, який відрізняється тим, що 45. Комплект за п. 44, який відрізняється тим, що зазначений прийнятний рівень рН становить від досягають рівня радіоактивного включення більше
ЗО до 6,0. ніж 9690. 26. Комплект за п. 20, який відрізняється тим, що 46. Комплект за п. 44, який відрізняється тим, що зазначений прийнятний буфер являє собою аце- досягають рівня радіоактивного включення від татний буфер. 96,3 до 99,595. 27. Комплект за п. 26, який відрізняється тим, що 47. Комплект за п. 20, який відрізняється тим, що в зазначеному ацетатному буфері концентрація фрагмент антитіла вибраний із групи, яка включає ацетату натрію складає від 10 до 1000 мм. фрагменти Раб, (ар )» і Гм. 28. Комплект за п. 20, який відрізняється тим, що 48. Комплект за п. 20, який відрізняється тим, що зазначений прийнятний буфер містить м'який ра- співвідношення комплексону і антитіла або фраг- діопротектор. мента антитіла коливається від 1,5 до 1. 29. Комплект за п. 28, який відрізняється тим, що зазначений м'який радіопротектор являє собою аскорбат.
Даний винахід стосується комплектів та спо- щоб ці радіоактивно мічені білки могли бути вве- собів для радіоактивного мічення білків та пепти- дені безпосередньо пацієнтам без додаткового дів терапевтичними радіоїзотопами таким чином, очищення. Такі комплекти та способи зокрема за-
стосовуються для мічення білків та пептидів ітрі- вання. Зокрема, описано кон'югат 288, який міс- єм-90 (у). Завдяки оптимізації протоколу радіоа- тить антилюдське СО20 мишаче моноклональне ктивного мічення, при якому не вимагається пода- антитіло 288, приєднане до, У через біфункціо- льшого очищення радіоактивно міченого білка, нальний комплексон МХ-ЮОТРА. даний винахід вирішує основну потребу галузі - Патенти, які стосуються комплексонів та кон'ю- мічені ітрієм ліки забезпечуються прийнятною для гатів комплексонів, відомі фахівцям галузі. Напри- користувача формою таким чином, щоб ці ліки клад, патент США Ме4,831,175, сзапзом/ стосується можна було легко виготовляти та приймати паціє- полізаміщених комплексонів діетилентріамінпен- нтам в умовах стаціонару та амбулаторно. таоцтової кислоти та білкових кон'югатів, які їх
На всі публікації та патентні заявки нами ро- містять, та способів їх одержання. Патенти США биться посилання таким чином, якби кожна публі- МоМо 5,099,069, 5,246,692, 5,286,850 та 5,124,471 кація або патентна заявка була окремо наведеним Сбапзом також стосуються полізаміщених комплек- посиланням. сонів ОТРА. У роботі Коак еї аїЇ. описано кілька
Радіоактивно мічені білки, зокрема антитіла, комплексонів ОТРА, включаючи МХ-ОТРА, які ви- багато років оцінюються як потенційні діагностичні явили себе придатними до радіоімунотерапії з та терапевтичні реагенти. Тепер, коли дослідники застосуванням мічених ітрієм моноклональних починають розрізняти специфічні пухлинні антиге- антитіл (1989. Маїйште ої Ше бБішпсопа! спеїіайпа ни та споріднені ліганди або антитіла, які зв'язу- адепі ивей юг гадіоїттипоїйегару м/п упшішт-90 ються з такими антигенами, ці реагенти вважають- топосіопа! апіїродієв: Стпіїса! гасіогз іп десептіпіпд ся особливо дієвими терапевтичними засобами іп мімо зигміма! апа огдап їохісій. Сапсег Ке5. 49; проти раку. Шляхом введення радіоактивно міче- 2639-2644|. Ці посилання наведено тут в їх повно- ного ліганду або антитіла, що зв'язаний зі специ- му обсязі. фічним пухлинним антигеном, сполученого з ра- Ітрій-90 найефективніший в радіоімунотерапії діоізотопом, який має короткодіюче, та радіопептидній терапії з кількох причин. 64- високоенергетичне й інтенсивне корпускулярне годинний період напіврозпаду У є достатньо дов- випромінювання, летальну дозу радіації можна гим для накопичення антитіла пухлиною і на відмі- спрямовувати безпосередньо до клітин пухлини. ну від, наприклад, "З, він є чистим бета-
Залежно від діапазону частинок конкретного випромінювачем високої енергії (Е тах 2,27МеВ) ізотопу, мітки вибирають залежно від очікуваного без паралельного гамма-випромінювання під час результату їх дії на конкретний вид клітин. Напри- його розпаду. Його діапазон корпускулярного ви- клад, гамма-випромінювачі, як правило, застосо- промінювання становить від 100 до 1000 діаметрів вуються з метою діагностики, тобто для візуаліза- клітини, що є практично мінімальною кількістю ції пухлин, але зазвичай вони неефективні як проникної радіації, можливою для введення амбу- знищувальні агенти. На відміну від них альфа- та латорному пацієнтові. Крім того, для знищення бета-випромінювачі можуть використовуватися клітин не потрібно засвоєння мічених антитіл, і для знищення клітин. Альфа-випромінювачі мо- місцеве випромінювання іонізуючої радіації має жуть бути особливо дієвими при хворобах крові бути летальним для сусідніх клітин пухлин, яким або пухлинах судин, завдяки своїй здатності про- може не вистачити антигену-мішені. никності; однак у деяких випадках для знищення Однак, незважаючи на визнання ефективності клітин може бути достатньо тільки корпускулярно- мічених ітрієм антитіл та непогані клінічні резуль- го випромінювання, як правило, альфа- тати, отримані з деякими міченими ітрієм терапев- випромінювач має бути розташований прямо на тичними засобами, багато пацієнтів не може ско- поверхні клітини. На відміну від нього бета- ристатися перевагами, які дають ці терапевтичні випромінювачі, тобто ЗУ, є особливо придатними засоби через характерні труднощі як при здійснен- для великих, більш локалізованих хвороб, оскільки ні радіоактивного мічення, так і при введенні у ви- вони, як правило, мають довший діапазон випро- значене місце. Ця проблема є причиною майже мінювання. повної відсутності комплектів та продуктів, які до-
Мічені ітріем-90 антитіла та пептиди, зокрема, зволяють здійснювати локальне мічення реагентів виявили непогані результати у протоколах клініч- альфа- та бета-випромінюючими радіоізотопами і ної терапії (Ппотах еї аІ. 7995. баттач-іпіетегп за інших умов могли демонструвати комерційне адтіпізігайоп айег зу гадіоіареїей апііроду Іпегару; застосування цієї технології. зигмімаї апа петаїйороїіеїіс їтохісйу 5ішаїев. пі. 9. Проблема з забезпеченням комплектів для
Вадіаї. Опсої. Віої. Рпу5. 37. 529-534; ОеМагао єї радіоактивного мічення та наступного введення а!. 7995. МКгішт-90/Іпаїшт-!! СОТА рерііде спітейс терапевтичних засобів, мічених деструктивними
ІЇ6. рНаптасокКіпеїйсв, аовітейу апа іпіаї! ізотопами, існує в галузі вже давно, оскільки перед
Шегарешіс зішаїез іп райепів м/п Бгеаві сапсег., 9. введенням таких терапевтичних засобів пацієнт мисі. Мей. 36: 97РІ. Такі кон'югати зазвичай одер- повинен пройти процес очищення для видалення жують шляхом приєднання біфункціонального незв'язаної мітки, щоб не піддавати пацієнта дії комплексону до білка або антитіла, а потім об'єд- вільного радіоіїзотопу, який може накопичуватися в нання радіоактивної мітки з білковою послідовніс- кістках та інших органах, не призначених для ліку- тю через біфункціональний комплексон. Напри- вання. Навіть комплекти, нині доступні для мічення клад, у заявках 08/475,813, 08/475,815 та антитіл ітрієм, потребують складного очищення, 08/478,967, які перебувають на стадії розгляду і на перш ніж терапевтичний засіб буде готовий до які ми посилаємося, описано радіоактивно мічені введення. терапевтичні антитіла для спрямування на лімфо- Наприклад, Апіїзота пропонує комплект для ми В-клітин та клітини пухлин з метою їх руйну- радіоактивного мічення моноклонального антитіла
НМЕС!! (Тнегадуп?) 30 для наступного введення таких як ЗУ, тим більше шансів, що білок збереже пацієнтам при раку яєчника. Тривалі дослідження, структурну цілісність та специфічність зв'язування, які включали І-ІЇ фази, показали, що це лікування які потрібні для взаємодії з антигеном-мішенню до може бути особливо дієвим, якщо його застосову- часу його введення та після досягнення ним потрі- вати як додатковий захід до традиційних хірургіч- бного місця дії. них заходів та хіміотерапії (Нік еї аї. 7993. Радіолітичний характер У відомий фахівцям
Адіимапі (егару ої оуагпап сапсег м/йп гадіоасіїме уже багато років, і чимало з них намагалися вирі- топосіопа! апіїроду. Вг. У. Сапсег 68: 403-406). шити проблему, яку являє 20У для комерційного
Однак спосіб мічення за Апіїзота вимагає вида- застосування цих терапевтичних засобів. Напри- лення незв'язаної мітки шляхом бБерпадех 50 клад, у роботах баїако еї а!., та Спакгабапі еї аї. гель-фільтрації, що є значною перешкодою у дося- дається оцінка застосуванню засобів захисту від гненні комерційного успіху комплекту мічення радіоактивного опромінення у мічених У компо-
ТпегадупУ, а також недоступність цієї терапії для зиціях антитіла як засобів зменшення пошкоджень всіх пацієнтів з раком яєчника, яким вона могла антитіла. Заїако еї аі. зокрема повідомляють, що допомогти. альбумін сироватки людини дозволяє підтримува-
Той факт, що ці реагенти нині вимагають ко- ти імунореакгивність міченого У антитіла до 72 лонкового очищення перед введенням, є й зали- годин. Однак питома активність, яку виявляють шається головною перешкодою їх доступності для композиції Ззаїако, є досить низькою (менше ніж пацієнтів, які могли скористатися цією технологією, 2мКі/мл). Крім того, ні у заїако, ні у Спакгараплі не за умови спрощеного способу, що дозволяє ліка- повідомляється про спроби утриматися від довгого рям швидко, ефективно й безпечно вводити такі процесу очищення, який вимагається після мічен- реагенти. Наприклад, лікар, який працює амбула- ня антитіла. Мічення у заїако еї аї. триває від 45 торно з пацієнтами, не має часу або обладнання хвилин до години, потім вони очищують антитіло для очищення реагенту шляхом НРІС або гель- шляхом хроматографії на молекулярних ситах, а фільтраційної хроматографії перед введенням Спактгараті здійснює мічення протягом майже реагенту пацієнтові. Це означає, що мають бути трьох годин ої очищення шляхом -/-гель- передбачені додаткові можливості для паралель- фільтраційної хроматографії. Жоден з цих спосо- ного одержання реагенту та безпосередньої дос- бів не сприяє застосуванню мічених у терапев- тавки його лікарю, що значно збільшує витрати на тичних засобів пацієнтам амбулаторно. Спіпо! та терапію і в деяких випадках може вимагати від Нпаулспи вдалося досягти 90905 радіохімічного пацієнта поїздок на значні відстані для лікування. очищення для мічених ЗУ білків з питомою актив-
В альтернативному варіанті ліки можуть бути мі- ністю від 1-3мКі/мг без очищення після мічення, чені не на місці, що вимагає попереднього приго- застосовуючи власний генерований у 1|1987. тування та принаймні короткотермінового збері- Сепегайюг-ргодисей ушіт-90 Цед гання терапевтичних засобів. Це не тільки гадіоїттипоїпегару. У). Мисі. Мей 28(9): 1465-1470). послаблює радіоїзотоп через радіоактивний роз- Однак розробки цих авторів не можна вважати пад під час зберігання, але також призводить до ідеальними, бо їх композиції мають менш ніж 9595 значного пошкодження структурної цілісності білка очищення, і вони вказують, що важливим і "мож- внаслідок надмірного впливу радіоізотопу. ливо, необхідним" етапом може бути НРІ С (рідин-
У багатьох повідомленнях обговорюється ра- на хроматографія високої роздільної здатності). діолітичний характер ЗУ та подібних радіоізотопів Ті, хто вважали, що НРІ-С та інші типи очи-
Інаприклад, зЗаїако еї аї!., 1993. ЕНесів ої гадіоувів щення для амбулаторних та стаціонарних пацієн- оп уйиішт-90-Іареївд Гит-1 апіроду ргерагайопв. .). тів повинні бути виключені, не змогли розробити мисі. Мей. 39: 667-670; Спакгарапі еї а. 1996. достатній протокол мічення для ЗУ, при якому
Ргемепіп ої гадіоіувіє ої топосіопа! апіроду досягається високий рівень включення мітки та дигіпо Іабеїїпд. У. Мисі. Меа. 37; 1384-1386). Як за- прийнятний рівень підтримання стабільності анти- значено у роботі Спакгабрапі еї аї., радіонукліди, тіла. Якщо не досягнуто високого рівня включення такі як У, дають велике радіаційне випромінення радіоактивної мітки, пацієнт зазнає дії надвисокого антитілу під час мічення, а також під час зберіган- рівня вільної незв'язаної радіоактивної мітки, якщо ня. Відомо що радіація може призвести до значно- ця мітка не є очищеною від реагенту. До того ж, го пошкодження антитіла, воно буде спрямовува- якщо структурну цілісність антитіла пошкоджено тися не на клітини пухлини, а піддавати інші таким чином що це антитіло втрачає спрямовану тканини дії токсичності. специфічність, такі реагенти не мають специфічно-
Механізм радіаційного пошкодження поясню- го зв'язування з їхніми спорідненими лігандами. ється утворенням вільних радикалів (Ріг7агеїІо. Маїнег з колегами брали за мету мічення спе- 1975. Оігесі апа Іпаїгесі асіоп. Іп; Ріглагено апа цифічних до пухлин антитіл У таким чином, щоб
Муйсої5кі, ей5. Вавзіс Райіайоп Віоюду. 279 ей. можна було уникнути очищення після мічення
РПийааде!рніа; Геа 85. Рердег, рр.20-29|. Але, як за- (1989. І ареїїпуд топосіопа! апіродієез у упіт- значено у роботі Заїако еї аї!., при 2,2МеВ бета- 90. Еиг. У. Мисі. Мей. 15. 307-312). Однак Маїпег частинки, що випромінюються з У, можуть легко виявив, що висока ефективність мічення (понад розірвати більшість хімічних зв'язків, включаючи 9595) може бути досягнута лише при низькій пито- дисульфідні антитіла, які мають міцність зв'язку мій активності (1мКі/мг). Крім того, у роботі Матег лише 4,4еВ |бБкКоод. 1985. Ргіпсіріез ої Іпзігитепіа! еї аІ. повідомляється, що їхні композиції антитіла
Апаїузів. 3"! еййіоп. Зап Егапсізсо; Зашпаег5|. Та- виявляють ознаки руйнування (внаслідок радіолі- ким чином, чим менше білок, який потрібно помі- зу) через лічені години. Причиною цього може бути тити, піддається дії деструктивних радіоізотопів, те, що Маїпег еї аї., як і багато інших фахівців га-
лузі, здійснювали реакцію мічення протягом однієї радіоактивно міченого антитіла пацієнтові та (ії) години. інструкцію з виконання процедури радіоактивного
Наприклад, було запропоновано способи мі- мічення, щоб кон'югований комплексон білка або чення білкових реагентів менш деструктивними пептиду під час дії радіоіїзотопу або його солі про- мітками, такими як "п, які пройшли додаткові тягом певного періоду за сприятливих умов, як етапи очищення. У роботі Кіспагазоп еї аї, пропо- рекомендує вищезгадана інструкція, можна було нується процедура мічення антитіла "п, щоб одержати радіоактивно мічений білок або пептид, утворити комплект для діагностичного застосуван- який має достатню чистоту, питому активність та ня ІКіспагазоп еї а!., 1987. Оріїтігаєноп апа раїсп специфічне зв'язування, щоб радіоактивно мічене ргодисіп ої ОТРА-Іареївєй апіїроду Кіїв юг гошіпе антитіло могло бути розведене до відповідної кон- иве іп Пп іттипозсгіріодгарпу. Мисі. Мей Сотт. центрації у вищезгаданому буфері й введене без- 8: 347-356). Однак спосіб мічення, запропонований посередньо пацієнтові без подальшого очищення. у роботі Ріспагазоп еї аїЇ., здійснюють протягом Фігура 1. А) 5В-клітини промивали й ресуспен- однієї години, що є можливим з 1111п, який не надто дували до 90 Х 1092 клітин/мл з розріджувальним радіолітичний, але він непридатний для мічення буфером (1Х РВ5, рН 7,4, що містив 195 (ма- зоу, про що свідчать труднощі, про які повідомля- са/об'єм) альбуміну сироватки великої рогатої ху- ється у роботі Маїпег еї аї. доби. Зростаючу концентрацію клітин інкубували
Це дає нам несподівані переваги даного вина- протягом З годин з 2нг/мл У288, одержаного з за- ходу, що дозволяє глибше дослідити процес ра- стосуванням 288-МХ-ОТРА, партія Ж 0165А. В) діоактивного мічення білків У, чого ще ніхто не Взаємообернений графік залежності концентрації робив у даній галузі Нами було виявлено, що клітин від зв'язаної радіоактивності/загальної ра- процеси НРІ С або інші етапи очищення, які довгий діоактивності (В/АТ). імунореактивність розрахову- час вважалися необхідними для одержання чисто- вали як 1/у-відрізок х 100. Значення імунореактив- го реагенту, та тривалий період інкубації, який за- ності та коефіцієнта кореляції (К) становили стосовувався з метою збільшення питомої актив- відповідно 72,295 та 0,999. ності їхніх реагентів, насправді заважають процесу Якщо спеціально не вказано іншого, всі засто- одержання мічених У реагентів. Ці тривалі про- совані нами технічні та наукові терміни мають зна- цеси лише пошкоджують білок внаслідок дії радіо- чення, загальноприйнятих у галузі, до якої нале- лізу, що призводить до зниження специфічності та жить цей винахід. Хоча у дослідах та під час посилює розщеплення білка ще до готовності ра- практичного застосування даного винаходу можуть діоактивно міченого білка для ін'єкції. Нами було бути використані будь-які способи та матеріали, виявлено, що ефективне мічення ЗУ (29595 вклю- подібні або до описаних нами або їх еквіваленти, чення та питома активність принаймні 15мКі/мг) нами описуються оптимальні способи та матеріа- здійснюється протягом від двох до п'яти хвилин, і ли. таке мічення фактично втрачає свою ефектив- Даний винахід включає в себе спосіб радіоак- ність, якщо час реакції перевищує вісім хвилин. тивного мічення кон'югованого комплексону білка
Той факт, що мічення У тепер можна провес- або пептиду з терапевтичним радіоіїзотопом для ти згідно зі способами даного винаходу лише за введення пацієнтові й охоплює (і) змішування дві хвилин, вже не дає підстав для скептицизму кон'юЮюгованого комплексону білка або пептиду з щодо придатності до застосування комплектів для розчином, який містить радіоізотоп або його сіль, радіоактивного мічення ітрієм в амбулаторних та та (і) інкубування суміші протягом певного періоду стаціонарних умовах. Комплекти згідно з даним за сприятливих умов, щоб одержати радіоактивно винаходом, можуть задовольняти потребу, яка мічений білок або пептид, який має достатнє очи- існувала протягом багатьох років для онкологічних щення, тобто рівень включення радіоактивної міт- хворих та лікарів-онкологів, комерційної придатно- ки, питому активність та специфічність зв'язуван- сті та доступності терапевтичних засобів проти ня, щоб радіоактивно мічене антитіло могло бути раку на основі радіоактивного мічення білків. введене безпосередньо пацієнтові без подальшо-
Даний винахід стосується способів та компле- го очищення. "Подальше очищення" включає в ктів для радіоактивного мічення кон'югованого себе НРІ С, гель-фільтрацію, інші типи колонкової комплексону білка або пептиду з терапевтичним хроматографії та будь-яку іншу технологію відо- радіоїзотопом для введення пацієнтові. Способи кремлення, яку застосовують з метою видалення згідно з даним винаходом головним чином вклю- вільної або зв'язаної некон'югованої радіоактивної чають (і) змішування кон'югованого комплексону мітки. білка або пептиду з розчином, який містить радіоі- Способи даного винаходу можуть бути засто- зотоп або його сіль, та (ії) інкубування суміші про- совані зокрема до терапевтичних радіоізотопів, тягом певного періоду за сприятливих умов таким які, як правило, є радіолітичними, а отже, станов- чином, щоб одержати радіаційно мічений білок або лять потенційну загрозу для структурної цілісності пептид, що має достатню чистоту, тобто рівень білка. Такі терапевтичні радіоізотопи, як правило, включення радіоактивної мітки, питому активність, вибирають з групи, яка включає в себе альфа- та специфічність зв'язування, щоб радіаційно мічене бета-випромінювачі. До оптимальних терапевтич- антитіло можна було безпосередньо ввести паціє- них радіонуклідів належать 209Рр, 212рРр, 212Ві 109964 нтові без подальшого очищення. баби, би, у, Ву, ПД, ЗВ, 195АН, 155Ау та 139ду
Комплекти згідно з даним винаходом, голов- або 177Ї й, Інші радіонукліди, що мають терапевти- ним чином, мають (ї) флакон, що містить кон'юго- чне застосування, описано у патенті США ваний комплексон білок або пептид, (ії) флакон, 5,541,287, на який нами робиться посилання. Най- що містить буфер для стабілізації та введення кращими радіонуклідами є сильні випромінювачі бета-променів, які можуть викликати внутрішньо- лом фактично може бути збільшене, але це не- молекулярне розщеплення, такі як Оу, 67, 191І, обов'язково потрібно, оскільки відповідний рівень 186ре та "88Ре. Хоча термін "терапевтичний" радіоі- включення радіоактивної мітки та питомої актив- зотоп здебільшого стосується таких радіоізотопів, ності досягається за нетривалий період мічення. як бета- та гамма-випромінювачі, які мають цито- Зважаючи на це відкриття, такі параметри, як кон- токсичний вплив, але такі радіоїзотопи також мо- центрація комплексону в білку, фахівці можуть жуть бути застосовані для діагностичних цілей, легко визначити емпірично й для інших білків та отже такі цілі не виключають ці ізотопи з обсягу пептидів, залежно від вибору терапевтичної мітки, даного винаходу, оскільки саме радіолітичних ха- від вибору комплексону кількість сайтів, доступних рактер цих ізотопів робить їх придатними для опи- для приєднання комплексону, сприйнятливості саних способів та комплектів. білка до радіолізу, потрібного рівня ефективності
Способи даного винаходу можуть бути корис- тощо. ним для мічення білків або пептидів, зокрема, коли Будь-який біфункціональний комплексен може структурна цілісність має бути збереженою для бути використаний для втілення способу даного заданої специфічності. Оптимальними білками є винаходу, якщо він має здатність зв'язуватись і з антитіла або фрагменти антитіл, такі як Раб, (Раб) відповідним білком, і з відповідним радіоіїзотопом. та фрагменти Гм, які розпізнають пухлин або асо- Оптимальні комплексони вибирають з групи МХ- ційовані з пухлинами антигени. Оптимальні пепти- ОТРА, феніл-ОТРА, бензил-«ОТРА, СНХ-ОТРА, ди містять соматостатин, вазоінтестинальний пеп- БОТА та їх похідних. Найкращим комплексоном є тид (МІР), речовину Р та інші, які зв'язуються з МХ-ОТРА. клітинними рецепторами. Такі пептиди та кон'юго- До "сприятливих умов" згідно з представлени- ваний комплексон похідні таких пептидів описано у ми способами належать прийнятна температура, патенті США Ме5,830,431, на який нами робиться рН та буферні умови. Фахівцеві має бути зрозумі- посилання. ло, що умови реакції мають бути такими, щоб не "Достатній час інкубації" згідно зі способами уповільнювати або якимось іншим чином не впли- даного винаходу, це певний проміжок часу протя- вати на реакцію мічення. У роботі І ем/і5 еї аї!. обго- гом якого досягається достатній рівень включення ворюються умови реакції, які мають братися до радіоактивної мітки та радіохімічного очищення, уваги при радіоактивному міченні імунокон'югатів, і щоб реагент міг бути введений безпосередньо на цю роботу нами робиться посилання (1994. А пацієнтові без необхідності подальшого очищення. Тасіє, умагег-зоЇШбіеє теїШой ог тодаійсайоп ої
Достатнім включенням та очищенням радіоактив- ргоїєїпз м/п ООТА. зве ої еІемайеа Гетрегайшге апа ної мітки фахівці, як правило, вважають таке, що орійтігей рН ю аспіеме підп 5ресійс асіїміу апа підп становить принаймні 9595, але ці показники мо- спеїасге віарійу іп гадіоіабеІєд іттипосопіцдагезв. жуть бути різними залежно від токсичності мітки. Віосопіцдаге Спет. 5: 565-576).
Фахівцям також має бути зрозуміло, що рівень Прийнятна температура для реакції може бути включення радіоактивної мітки, який вважається різною, залежно від білка, який має бути мічений, достатнім, також залежить від потрібного рівня але, як правило, становить приблизно від 257С до ефективності. Для у, зокрема мічених ЗУ антитіл 43"С . 1 ем/із єї а!., виявили, що підвищення темпе- даного винаходу, такий достатній час, як правило, ратури реакції радіоактивного мічення від 257С до становить приблизно менше ніж вісім хвилин, 43"С сприяє як ефективності включення радіоме- краще - приблизно від двох до п'яти хвилин, зале- талу, так і кінетичній стабільності досліджуваних жно від молярного співвідношення комплексону з рОТА радіокон'югатів. білком у кон'югованому комплексоному білку, який Прийнятний рівень рН може бути різним у до- має бути мічений. сить широкому діапазоні, залежно від застосову-
Фахівцеві має бути зрозуміло, що оптималь- ваної радіоактивної мітки. Рекомендований рівень ний час, який потрібен для мічення конкретного рН для мічення різними радіонуклідами, як прави- білка, може бути різним: залежно від білка, конк- ло, відомий, і його вибирають з огляду на той чи ретної радіоактивної мітки та конкретного кон'юга- інший радіоіїзотоп. Наприклад, для У прийнятний та. Основним чинником оптимізації часу, відведе- рівень рН може становити приблизно від З до 6, ного на радіоактивне мічення, є співвідношення але оптимальним є рівень приблизно 4.2. комплексону з білком у реагенті, який має бути Прийнятні буфери також можуть бути різними, міченим. Наприклад, співвідношення комплексону залежно від конкретної радіоактивної мітки. На- з білком має бути достатньо високим для досяг- приклад, І ем/і5 еї а!., а також інші автори виявили, нення терапевтично придатного рівня включення, що присутність цитрату затримує реакцію мічення тобто 9595, але й не повинно бути надто високим, зоу, Таким чином, цитратний буфер не може бути щоб це не шкодило структурній цілісності або іму- прийнятним, якщо за радіоактивну мітку взяти 90, нореактивності білка. Це потребує процесу врівно- При міченні 9 оптимальним буфером є ацетат- важення, що у деяких випадках може призводити ний буфер, точніше, натрієвоацетатний буфер у до зниження рівня кон'югованого комплексону та концентрації приблизно від 10 до 1000мММ. подовження часу мічення. Якщо це не затримує і якимось іншим чином
Наприклад, нами було виявлено, що мічення не перешкоджає реакції мічення, також можна зоу до потрібного рівня очищення може бути здійс- включити у реакційний буфер м'який (нешкідли- нене менше ніж за п'ять хвилин при застосуванні вий) радіопротектор. Згідно з Спакгабагії, одним з
МХ-ОТРА як комплексону й при молярному спів- таких радіопротекторів є аскорбінова кислота, яка відношенні комплексону з антитілом лише від 15 не заважає процесу мічення. Однак, слід бути до 1. Хоча співвідношення комплексону з антиті- обережними при застосуванні альбуміну сироват-
ки людини в реакції мічення через присутність ме- без подальшого очищення. Вищезгаданий кон'ю- талів, які можуть втрутитись у процес мічення. гований з комплексоном білок або пептид може
Оскільки даний винахід стосується радіоакти- постачатися у ліофілізованій формі. вного мічення білків конкретними радіолітичними Слід розуміти, що комплекти згідно з даним ізотопами, може існувати певний баланс між спе- винаходом призначено для здійснення описаних цифічністю зв'язування та питомою активністю, нами способів і, таким чином, можуть бути засто- який фахівці можуть спостерігати при практичному совані з цією метою. Відповідним чином, після застосуванні способів даного винаходу. Напри- ознайомлення з винаходом фахівцеві має бути клад, якщо питома активність є дуже високою зрозуміло, що інструкцію до комплекту складено (тобто, відповідно понад 5мКі/мг, краще - понад на основі описаних вище способів, і що вищевка- 10мКі/мг, ще краще - понад 15мКі/мг), білкова пос- зані міркування мають враховуватися з огляду на лідовність, яка має потрібну специфічність зв'язу- втілення комплекту. Крім того, після ознайомлення вання, має значну знищувальну здатність на діля- з описом в цілому фахівцеві має бути зрозуміло, нці пухлини. Однак частина білків у популяції, яка що даний винахід охоплює також альтернативні в цілому зберігає свою імунореактивність, може варіанти комплекту, які можуть включати в себе бути нижчою ніж в популяції, що має нижчу питому такі компоненти, як ацетатний буфер для регулю- активність, внаслідок радіолізу радіоактивної міт- вання рівня рН радіоактивної мітки, як описано ки. Залежно від потрібного рівня питомої активно- вище. сті, фахівець може визначати відповідний рівень Особливо важливим компонентом комплекту є імунореактивності. буфер для стабілізації від впливу радіолізу та вве-
Наприклад, нами було виявлено, що при ЗУ, дення радіоактивно міченого кон'югованого анти- коли антитіло є міченим до питомої активності тіла пацієнтові. Цей буфер є фармацевтично при- приблизно 15мКі/мг, питомість зв'язування або йнятним носієм, який служить і як розріджувач для імунореактивність білка, як правило, становить міченого антитіла, і як буфер для введення. Хоча приблизно не менше ніж 7095. Зазвичай вона, мо- для введення терапевтичного або діагностичного же бути різною, залежно від чутливості антитіла та антитіла пацієнтові може застосовуватися будь- радіолітичного характеру застосовуваного радіоі- який фармацевтично прийнятний розріджувач, зотопу, і може змінюватися досвідченим фахівцем, буфер даного винаходу є особливо придатним для якщо потрібен більш високий рівень імунореактив- введення радіоактивно міченого антитіла. ності або питомої активності. Нами було досягнуто Наприклад, буфер даного винаходу має ра- питомої активності для ЗУ приблизно 20ОмКі/мг. діопротектор, такий як альбумін сироватки людини
Специфічність зв'язування для терапевтичного (НБА) або аскорбат, який мінімізує радіоліз через застосування потрібна не менше ніж 50905. ітрій та інші сильні радіонукліди, інші засоби захи-
У заявках, які ще на стадії розгляду, 09/.:-: А. сту від радіоактивного опромінення фахівцям та- та 09/ , і які подавалися нами разом з даною кож відомі й можуть бути застосовані у буфері да- заявкою, описано аналізи зв'язування, які можуть ного винаходу, наприклад, поглиначі вільних бути корисними у разі необхідності для визначен- радикалів (фенол, сульфіти, глутатіон, цистеїн, ня відсотка зв'язувальної спорідненості та імуно- гентизинова кислота, нікотинова кислота, аскорбі- реактивності кон'югатів після мічення. Слід зазна- лпальмітат, НОР(СО)Н», гліцерин, формальдегід- чити, що хоча після мічення за способом даного сульфоксилат натрію, Маг52О5, Магб2Оз та 502 винаходу подальше очищення необов'язкове, але тощо). завжди має робитися аналіз на основі ТС для Буфер даного винаходу також має надлишко- перевірки рівня включення радіоактивної мітки, вий некон'югований комплексон. Включення неко- щоб не піддавати ризику здоров'я пацієнта. Такий н'югованого комплексону служить для захоплення аналіз здійснюють приблизно за 3-4 хвилини, і він будь-якої незв'язаної з білком радіоактивної мітки не має значного впливу на стабільність ефектив- в організмі пацієнта та виділення радіоактивної ності радіотерапевтичного засобу. мітки, таким чином зменшуючи поглинання "докіст-
Даний винахід також включає в себе комплек- кових" ізотопів, тобто ЗУ, кістками пацієнта. На- ти для радіоактивного мічення кон'югованого ком- приклад, коли антитіло комплекту є кон'югованим плексону білка або пептиду з терапевтичним ра- до комплексону ОТРА, надлишковий ОТРА або діоізотопом для введення пацієнтові, які мають (Її) будь-який інший комплексон може бути включений флакон, що містить кон'югований комплексон білка у буфер. Буфер також в оптимальному варіанти або пептиду, (і) флакон, що містить буфер для пропонується в такому об'ємі, щоб увесь вміст стабілізації та введення радіоактивно міченого можна було перелити в реакційний флакон. Як антитіла пацієнтові, та (ії) інструкцію щодо вико- було вказано вище, це полегшує застосування та нання процедури радіоактивного мічення, за якою здатність до відтворювання: не потрібно вимірю- кон'югований комплексон білка або пептиду зазна- вати й переливати точний об'єм. вав дії радіоізотопу або його солі протягом достат- Оптимальний буфер має фосфатний буфер- нього часу за сприятливих умов, рекомендованих ний або фізіологічний розчин, альбумін сироватки у вищезгаданій інструкції й докладніше описаних людини та ОТРА. Альбумін сироватки людини в вище, можна було б одержати радіоактивно міче- оптимальному варіанті має концентрацію прибли- ний білок або пептид, який має достатнє очищен- зно від 5 до 2595 (маса/об'єм), краще - приблизно ня, питому активність та специфічність зв'язуван- 7,595 (маса/об'єм). Концентрація ОТРА в оптима- ня, щоб радіоактивно мічене антитіло могло бути льному варіанті становить приблизно 1мМ. Аскор- розведене у відповідній концентрації у вищезгада- бат можна застосовувати як альтернативу альбу- ному буфері і введене безпосередньо пацієнтові міну сироватки людини, і його, як правило,
застосовують у концентрації приблизно від 1 до го комплекту для радіоактивного мічення, який є 100мг/мл. Втім концентрацію можна змінювати в легким у користуванні і який забезпечує вихід ра- широкому діапазоні без ризику для пацієнта. діоактивно мічених антитіл при 29595 включення
Комплект може пропонуватися в інших альте- радіоактивної мітки та прийнятному збереженні рнативних варіантах втілення, залежно від поба- зв'язування 3 антигенопозитивними клітинами. жань замовника. Наприклад, цей комплект може Проводили також оцінку параметрів експерименту, також мати стерильний реакційний флакон, у яко- які впливають на зв'язування та включення радіоа- му можна здійснювати і реакцію мічення, і розве- ктивної мітки. дення в буфері. Можливі й інші варіанти втілення, Приклад 1. Комплект для радіоактивного мі- у яких буфер для регулювання рівня рН радіоак- чення та спосіб мічення 288 20у тивної мітки з міркувань економії пропонується А. Реагенти у комплекті для радіоактивного розташовувати у самому реакційному флаконі. До мічення того ж, можуть передбачатися комплекти, які та- 1. 288-МХ-ОТРА, ІЕС; партія Мео82395Е5М2 кож мають флакон радіоіїзотопу, хоча зручніше 2. 5БОММ ацетату натрію, з низьким вмістом ме- було б замовляти комплект для мічення заздале- талів, ІОЕС; партія Ме082395ЕМ3 гідь і окремо замовляти радіоізотоп пізніше, перед 3. Буфер (ІХ РВ5, рН 7.4, містить 7,595 (ма- самим введенням. Також можуть передбачатися са/об'єм) альбуміну сироватки людини та їмМ комплекти, які містять флакон вторинного білка ОТРА), ІОЕС, партія Ме0823954КМ1 або пептиду, що служить для контролю за визна- 4. Реакційний флакон, 1Омл, ІЕС ченням зв'язувальної спорідненості радіоактивно В. Матеріали та обладнання міченого продукту або у деяких випадках застосо- 1. ВіодехТес-Сопігої, комплект для включення вується у комбінованому терапевтичному режимі з радіоактивної мітки, кат. Ме151-770 радіоактивно міченим білком або пептидом. 2. Рукавички: без порошку
Мічене ЗУ мишаче моноклональне антитіло 3. Стерильні поліпропіленові шприці анти-СО20 (у288) нині проходить клінічні випробу- 4. Стерильні голки для шприців вання на лікування рецидивів лімфоми В-клітин. 5. Маленькі пробірки з кришками; 1,5мл С
Антитіло 288 є мишаче антитіло, яке розпізнає Способи
СО20 людини. Дикий варіант цього антитіла 1. Одержання У288 з застосуванням комплек- (Айихап") нещодавно було ухвалено Управлінням ту для радіоактивного мічення з контролю за продуктами та ліками (ЕОА) для Реагенти комплекту одержували й поміщали у лікування лімфоми, яка не є лімфомою Ходжкіна. скляні флакони з мембранами. Боросилікатні фла-
У заявці США Ме08/475,813, на яку нами робиться кони типу І (2 або 10мл) промивали стерильною посилання, описано послідовне введення Ейихап? водою для ін'єкцій (М/РІ) і перед заповненням ав- з міченим ітрієм мишачим моноклональним анти- токлавували. Бутилкаучукові мембрани промивали тілом у комбінованому терапевтичному режимі, стерильною МУРІ і перед використанням автокла- при якому введення міченого ітрієм антитіла анти- вували. Реагент заливали вручну, ущільнювали у
СО20 після введення Рйшхап? є достатнім для (а) камері Сіаз5 100 і випробували на пірогенність та відокремлення всіх периферійних В-клітин крові, стерильність, застосовуючи способи ОБР. не відокремлених диким антитілом анти-СО20; (б) Додаткові реагенти: початку очищення В-клітин від лімфатичних вузлів; 1. Ітрій-(90|: хлоридна сіль, без носія, в НОСІ. або (в) початку очищення В-клітин від інших тка- Заходи безпеки: нин. 1. Усі етапи мають здійснюватися з застосу-
Таким чином, після доведення ефективності ванням асептичних технологій. антитіла анти-СО20 у лікуванні лімфоми, яка не є 2. Компоненти комплекту для радіоактивного лімфомою Ходжкіна, і при відомій чутливості лім- мічення перед застосуванням повинні бути кімнат- фоцитів до радіоактивності потрібно, щоб такі те- ної температури. рапевтичні антитіла були запущені у промислове Протокол радіоактивного мічення виробництво у формі комплектів, завдяки чому 1. Об'єм з0уУСіІз для додавання у реакційний вони можуть бути легко модифіковані радіоактив- флакон розраховували так: ною міткою і введені безпосередньо пацієнтові у а. Концентрація радіоактивності на час радіоа- клінічних умовах. ктивного міЧЕЄеННЯ:
Комплект для радіоактивного мічення для ан- Со - Концентрація радіоактивності на час гра- титіла 288 в оптимальному варіанті складається з дуювання (див. Свідоцтво про проведення аналізу чотирьох компонентів: 1) 288-МХ-ОТРА у норма- від виробника). льному соляному розчині з низьким вмістом мета- Лі х Зміна у часі (додатне число - після граду- лів при 2мг/мл, 2) 5ОММ ацетату натрію, який за- ювання, від'ємне число - перед градуюванням). стосовують для доведення розчину радіоізотопу Концентрація радіоактивностіна часмічення ------50---- до прийнятного для мічення рН, 3) буфер (ІХ РВ5, еОотов(ло) рН 7,4, який містить 7,595 альбуміну сироватки людини та 1ММ ОТРА), і необов'язково, 4) порож- б. Об'єм 9уСіІз для додавання у реакційний ній 1ТОмл скляний флакон (реакційний флакон) флакон: ("Омл" реакційний флакон насправді легко вміщує ст А З МК... Об'єм доданий уреакційний флакон бом . . . Концентрація радіоактивності на час мічення 1ТОмл, і його технічна місткість становить дещо більше ніж "1О0мл"). Усі компоненти перевірено на стерильність та відсутність пірогенів. . у цьому розділі лодано дані випробувань цьо- 2. Об'єм 50мММ ацетату натрію для додавання у реакційний флакон розраховували так: 6. Гамма-лічильник або сцинтиляційний лічи- а. Для ЗУ Сіз у 0,040М НС. (Атег5пат): льник
Об'єм З0УСіз (Етап 16)х(0,8):об'єм ацетату на- 7. Піпетка трію, який має додаватися Процедура: б. Для 0УСіз у 0,050М НСІ (Могаїіоп): 1. Спочатку слід повністю прочитати Посібник
Об'єм 90УСіз (Етап 16)х(1,0)-об'єм ацетату на- Віодех. трію, який має додаватися 2. Кожен радіоактивно мічений зразок у трьох 3. Мембрани реакційного флакона та флакона примірниках випробували згідно з вказівками до з ацетатом натрію протирали спиртом. Застосову- комплекту; передбачено одну смужку на флакон. ючи 1см3 шприц, розрахований об'єм (Етап 1а або З. Для нанесення радіоактивно міченого зраз- 16) 50мММ ацетату натрію (Етап 2) переносили до ка на хроматографічну смужку застосовували піпе- реакційного флакона. Вміст флакона перемішува- тку, щоб нанести мкл на джерело. В альтернати- ли, перевертаючи його кілька разів. вному варіанті наносять невеличку краплю через 4. Мембрану флакона з 90УСіІз протирали 260 голку стерильного 1см? шприца. Антитіло за- спиртом. Флакон з голкою оснащали стерильним лишається у джерелі, і невключений У-ОТРА 0,2мкм фільтром. Застосовуючи їсм3 шприц, не- рухається разом з розчинником. обхідний об'єм (Етап 16) 90УСіІз переносили до 4. Для кожної ділянки визначали активність, реакційного флакона. Вміст флакона перемішува- застосовуючи відповідний лічильник, тобто сцин- ли, перевертаючи його кілька разів. тиляційний лічильник для 90У, з регулюванням за 5. Мембрану 288-МХ-ОТРА флакона протира- фоном. ли спиртом, застосовуючи Зсм3 стерильний 5. Виконували вказівки Віодех для розрахунку шприц, 1,хмл 288-МХ-ОТРА переносили до реак- відсотка радіоактивно міченого антитіла. ційного флакона. Вміст флакона перемішували, З. Аналіз зв'язування перевертаючи його кілька разів. Додаткові реагенти 6. Загальний об'єм реакційної суміші розрахо- 1. зоу288-МХ-ОТРА вували шляхом додавання кількості доданого У-90 2. Ліофілізовані клітини хлориду (Етап 4) до кількості Х0ММ доданого аце- Лінії клітин людини 5В (СО20-позитивні) та тату натрію (Етап 3) та кількості доданого 288-МХ- НВ (С020-негативні) отримували від Американ-
ОТРА (Етап 5). ського зібрання типових культур і культивували у 7. Об'єм буфера для додавання до реакційно- Т-подібних колбах, застосовуючи ОБ./ХВ.-1640, що го флакона до остаточного об'єму 10мл розрахо- містить 1095 сироватки ембріона великої рогатої вували шляхом віднімання загального реакційного худоби з 275 глутаміну. Культури тримали при 377С об'єму, розрахованого на етапах з 6 по 10. у середовищі 595 СО». Співвідношення клітини, як 8. Флакон для буфера протирали спиртом і з правило, доводили до 1:2 кожен другий день і зби- флакона відводили повітря. Через в'язкість буфе- рали при 0,5-2,5х10бклітин/мл та життєздатності ра реакційний флакон з голкою оснащали 0,20мкм 28095. Концентрацію клітин визначали, застосову- фільтром. Застосовуючи 10см3 стерильний шприц, ючи гемацитометр, а життєздатність визначали оснащений голкою відповідного розміру, об'єм шляхом виключення трипанового синього. буфера, розрахований на Етапі 7, переносили до Клітини збирали при навколишній температурі реакційного флакона. Голку для відведення повіт- й густині клітин 0,5-2х1О0бклітин/мл шляхом ря забирали з реакційного флакона і вміст флако- центрифугування (1300об./хв. у центрифузі на перемішували, перевертаючи його кілька разів зогмаї!) і двічі промивали у ЇХ НВ55. Гранульовані (кінцевий продукт). Флакон інкубували принаймні 5 клітини ресуспендували до 50х10бклітин/мл у ІХ хвилин перед "аналізом включення радіоактивної НВ55, що містить 195 (маса/об'єм) альбуміну си- мітки". Колір розчину був бурштиновий, реакційний роватки великої рогатої худоби (В5А) та 1095 (ма- флакон був повний, що підтверджувало додавання са/об'єм) маніту (ліофілізуючий буфер), по 0,5мл буфера. розподіляли у 1,5мл поліпропіленові мікроцентри- 9. Загальна радіоактивність флакона для кін- фугувальні пробірки з кільцевими прокладками, цевого продукту вимірювали, застосовуючи відпо- зберігали при - 707С і ліофілізували протягом ночі відний набір інструментів для вимірювання су. при 30-60 тіПйогг. Пробірки з ліофілізованими клі- 10. Кінцевий продукт безпосередньо зберігали тинами зберігали у сухому вигляді при 2-82С і від- при 2-8"С, доки не застосовували для введення новлювали вологовміст у стерильній воді для ана- пацієнтові. лізів; пробірки з клітинами, ліофілізованими у 2. Аналіз включення радіоактивної мітки мікроцентрифугувальних пробірках, зберігали з
Відсоток включення радіоактивної мітки ви- десикантом. значали шляхом моментальної тонкошарової хро- 3. Стерильна вода для промивання або стери- матографії (ІТС), застосовуючи радіохроматог- льна вода для ін'єкцій рафічний комплект Віодех Тес-Сопіго! згідно з 4. Розріджувальний буфер (ІХ РВ5, рН 7,2-7,4, таким протоколом: містить 195 альбуміну сироватки великої рогатої
Додаткові матеріали та обладнання: худоби (В5А) та 0,0295 азиду натрію) 1. зоу-радіоактивно мічений 288-МХ-ОТРА Процедура: 2. Пробірки для підрахунку радіоактивних ТІ С Одержання зразка радіоактивно міченого ан- смужок титіла
З. Ножиці 1. Отримували радіоактивно мічене антитіло, 4. Стерильний шприц, 1см3 яке зберігали при 2-876. 5. Стерильні голки, 260 2. Об'єм 10мкл забирали за допомогою Р20 і додавали у 1,5мл мікроцентрифугувальну пробір- Таблиця 1 ку, що містила 990мкл розріджувального буфера (розведення 1:100). Кінчик промивали і пробірку Результати реліз-аналізу для перевірки 288 злегка струшували.
З. Брали 5Омл стерильну поліпропіленову Номер (95 включення радіоа- о; зв'язування пробірку з кришкою і 1О0мл розріджувального бу- партії ктивної мітки Й У фера поміщали у пробірку, застосовуючи 10мл серологічну піпетку. 4. Об'єм ЗБмкл забирали за допомогою Р200 з пробірки для 17100 розведення й додавали у коні- чну пробірку, що містила Томл розріджувального буфера. Ретельно перемішували. пе 17 968.01. 808
Одержання ліофілізованих клітин ИЗ--502020205 Середн.-98 8 Середн.-82 З 1. Брали три пробірки з ліофілізованими 5В- Стандартне відхи- |Стандартне відхи- ку, і пробірки струшували, доки не отримували ші врувтевь СУ ать
Сусленвю ОДНОрІДНИХ КИТИ, мікроцентрифугу- Для шести підготовлених партій відсоток зв'я- . ' ГП о, о, - озрі вального буфера, який являв собою конт- ді у ба. ред ре розріджу У ' іоактивної мітки для 288 становило 98,85 (ві роль, що не містив клітин. д д й 975 (ВІД
Протокол аналізу 96,390 до 99,595). Разом ці результати підтвер- 1. У кожну пробірку додавали 0,5мл розведе- джують здатність до відтворювання та стійкість ного о Кр У ! способів застосування комплекту для радіоактив- 2. Пробірки помі али на 45 хвилин у міксер зі ного мічення для препаратів 288, а також пока- щільно закритими кришками У зують, що 288, одержані з застосуванням цього кдд не комплекту для радіоактивного мічення, є придат- 3. Через 45 хвилин інкубації при навколишній ними для використання у клінічних умовах ще температурі клітини гранулювали шляхом мікро- Приклад 2. Попередня оцінка параметрів реа- центрифугування протягом 5 хвилин. кції - рН та часу реакції до сно єм них фанів шару переносили Кінетичні досліди спочатку здійснювали для в Сцинтиляційний коктейль додавали у кожен оцінки включення радіоактивної мітки та зв'язу- флакон вання міченого 20У антитіла (288) після реакцій 6. Кількість радіоактивності у кожному флаконі мічення, здійснених за різних умов рН та часу реа- в, кції. Для реакцій радіоактивного мічення у межах визначали, застосовуючи сцинтиляційний лічиль- сівня си від 35 до 47 з часом інкубації в. хвилин
ПИ о Результати за фоном. включення радіоактивної мітки становило 296965
Й : : не при 28095 збереженні зв'язування з СО20-
Здатність до відтворювання та стійкість прото- позитивними клинами (табтиня 2). Подібні ре- колів радіоактивного мічення для у288 визначали, зультати отримували для часу інк ба ї 3 5 та 10 здійснюючи кілька етапів перевірок, застосовуючи хвипин межах івня ОН ві їй 9 о ав (табли я різні партії кожного радіоіїзотопу. Шість партій для З У р р де, ДО я, ц перевірки, кожна з 288, одержували п'ять опера- ). торів. Ці партії мали позначення, вказані нижче, таблиця ? випробування здійснювали на такому обладнанні: ц щі Ес ррагласеиков! Кінетика радіоактивного мічення 288: Вплив рн
Мез: ІЕС Рпагтасецйсаї5 на включення радіоактивної мітки та зв'язування з 9. - і 1
Мо4: МО Апаегзоп Неайп Сепіег СоО20-позитивними клітинами
Мов. свуо по рН реак- | Включення радіоактивної | Зв'язування по: "у ої поре - - ція мітки (90) су
Результати випробувань кожної партії наведе- 2 антитіла та 4:11 молярне співвідношення комплек-
Таблиця З сону з антитілом, як описано в одночасно поданій нами заявці за номером 09/ , яка також на
Кінетика радіоактивного мічення 288: Вплив часу стадії розгляду й на яку нами робиться посилання. інкубації на включення радіоактивної мітки та зв'я- Імунореактивність для композицій М288 ви- зування з СО20-позитивними клітинами! значали, застосовуючи спосіб згідно з І іпато еї аї.
Збільшуючи кількість щойно зібраних СО20-
Час інкубації| Включення радіоактив- | Зв'язування позитивних 5В-клітин, інкубували їх з незмінною кількістю 288 за умов надлишку антигену. Аналіз взаємооберненого графіка даних зв'язування по- казав імунореактивність 72,295 для М288 після одного пробного приготування (Фігура 1).
Приклад 3. Визначення інших параметрів реа- кції
І. Вступ й
В експериментах, описаних у цьому розділі, ! Результати реакції мічення та досліди з ви- досліджували вплив відхилень від протоколу на значення параметрів, вказані у Таблицях 2 та 3, зв'язування У288, одержаного з застосуванням здійснювали з 288, що походить від системи екс- комплекту для радіоактивного мічення ч288. На пресії клітин СНО; Кон'югат МХ-ОТРА одержували, зв'язування радіоактивно міченого антитіла мо- застосовуючи протокол, подібний до застосовува- жуть впливати кілька параметрів під час процесу ного для охарактеризованого вище 2888-49. Реак- радіоактивного мічення (Таблиця 4). цію здійснювали, застосовуючи приблизно Змг
Таблиця 4
Відхилення від комплекту для радіоактивного мічення . й умови мічення зв'язування лит 0 ошешярадоду Дниеня////- . о. зниження збільшення радіоліз 1 Н . зниження радіолізу 1 Н . зниження радіоліз
СбленетенюоваМам обльшеннярадольу ниеня . о. зниження збільшення радіолізу без змін для рн; 5) Додавання надлишкового об'єму 288-МХ- ОТРА зниження радіолізу(нижча| збільшення питома активність без змін для рН; збіль- 6) Додавання меншого об'єму 288-МХ-ОТРА шення радіолізу (вища| зниження питома активність)
Нижчеподані відхилення від протоколу радіоа- вивільнення. На відміну від них, дози, приготовлені ктивного мічення були визнані такими, що найімо- з застосуванням протоколу мічення "п'ятниця", вірніше матимуть негативний вплив на зв'язуван- зберігали прийнятні показники зв'язування, незва- ня, до них належать: 1) додавання меншого об'єму жаючи на сумарний вплив відхилення в усіх чоти- ацетату натрію 2) додавання надлишкової кількос- рьох параметрах (пп.1-4). Для всіх відхилень, і ті розчину хлориду У 3) додавання меншого об'- окремо, і разом, включення радіоактивної мітки єму 288-МХ ОТРА та 4) перевищення максималь- було вищим за норму клінічного вивільнення 9595. ного часу реакції інкубації. Вплив цих відхилень ІІ. Вибір параметрів визначали окремо й одночасно. Ми вирішили що 2095 відхилення від необхід-
При окремому визначенні 2095 відхилення від ного об'єму реагенту або перевищення звичайного об'єму у вищезазначених пунктах 1-3 в результаті максимального часу реакції бхв. на 3095 являло давало перевищення норми вивільнення для собою потенційно критичне відхилення від прото-
ІОЕС-Уу288, встановленої для зв'язування у клініч- колу, який застосовують у радіофармації. У цьому них випробуваннях, навіть при інкубуванні протя- досліді ми визначали вплив цих відхилень на зв'я- гом 8 хвилин. У досліді, коли всі три відхилення від зування ІОЕС-У288. Ми моделювали мічення "по- об'єму (пп.1-3) робилися одночасно, лише дози, неділок" та "п'ятниця" для того щоб гарантувати, приготовлені з застосуванням протоколу мічення що оцінювані умови являли собою граничні зна- "понеділок" (потенційно найбільш радіолітичного) чення приготування дози за цілий тиждень. Ми й інкубовані протягом 8хв. (на 6095 довше за нор- також визначали комбінований вплив на зв'язу- му) були ледь нижчими («3905) за норму клінічного вання, коли всі відхилення траплялися у приготу-
ванні одиничної дози, та вплив цих відхилень на ти) у пластмасових мікроцентрифугувальних про- включення радіоактивної мітки Оу. бірках "без металу". НСІ від Шнгех (високої чисто-
Мічення "понеділок" та "п'ятниця" представля- ти) розводили до 50МмМ стерильною водою для ють концепцію стосовно того що, оскільки розчин промивання (ЗУМРІ). Реакції радіоактивного мічен- хлориду у має нетривалий період напіврозпаду ня проводили у пластмасових мікроцентрифугува- (б4год.), об'єм застосовуваного радіоізотопу зале- льних конічних пробірках "без металу", 15мл або у жить від дня тижня, коли було приготовлено дозу. 10мл скляних реакційних флаконах з мембраною,
З цієї причини реакційний об'єм для дози, пригото- передбачених у комплекті для радіоактивного мі- вленої у понеділок, є меншим, що в результаті дає чення 288. вищу концентрацію 90, це можливо в результаті а. Маломасштабне мічення для прогнозування веде до збільшення радіолізу. Отже, ми моделю- повномасштабного приготування дози вали процедури мічення "понеділок" та "п'ятниця" Реакції радіоактивного мічення 1, 3, 10 та для того щоб гарантувати, що оцінювані умови 40мкКі виконували, застосовуючи умови реакції, що являли собою граничні значення приготування моделюють приготування дози "понеділок". Об'єми дози за цілий тиждень. реагентів у мл для кожної реакції подано у Табли-
ПІ. Матеріали та способи ці 5.
А. Реагенти 1. 90уУСіз у 0,05М НС; Расійс Могпйуеві Таблиця 5
Майопа! І арогаїогу, геадепі дгаде; Р.О.й 08016, 08118 Об'єм реагентів (мл) 2. Цех НОСІ; .Т. ВаКкег, Продукт Мо6900, Пар- тія Мо.)22539 Кількість у Х воу | Ацетат на-| 288-МХ-
З. Стерильна вода для промивання; Вахіег, МКІ порид трію ОТРА
Рапі2Е7114, Партія Мес924092 4. Розріджувальний буфер; містить 10мММ фо- сфатнобуферного соляного розчину, рН 7,4, 195
ВЗА; бідта, Рагпій Р-3688, Партія Ме076Н8913 5. Комплект для радіоактивного мічення від
ІОЕС; ШОЕС Рапж 130018, Партія Ме0129, включає Через 5хв. інкубування 20мкл зразка видаляли в себе такі компоненти: , й розводили буфером до остаточної концентрації а) 288-МХ-ОТРА; ІЕС Рапж 129017, Партія антитіла 0,21мг/мл і зберігали при 2-8"С до аналі-
Ме0165 І зу. Показники зв'язування нормалізували до реак- б) 50ММ ацетату натрію; ІЕС Рагне 121017, ції 1мКі, оскільки реакцію 1мКі використовували як
Партія Ме0209А | контроль в усіх наступних описаних нами експери- в) Буфер; ІЕС Рагіж 120015, Партія Ме0202 ментах. Вказані значення нормалізували до конт-
Г) Реакційний флакон; ЕС Рагпж 122015, рольного зразка 1мкКі, ділячи значення зв'язування
Партія Ме0218 | | для кожної реакції на значення зв'язування для 6. Ліофілізовані 5В-клітини, ІПОЕС Рагіж 127, контролю, виражене у відсотках.
Партія Ме127-0012 б. Вплив додавання об'єму ацетату натрію
В. Матеріали та обладнання Для мічення "понеділок" 10мКі хлориду 99у 1. Піпетки (20, 200 та 1000гл) (0,119мл) змішували з 0,114мл 50ММ ацетату на- 2. Вихровий апарат | трію. Цей об'єм 50мМ ацетату натрію представляє 3. Наконечники піпетки без металу (Віогай; без 2095 зниження кількості буфера, який зазвичай металу) | застосовують для приготування клінічної дози 4. Гамма-лічильник (Ізодаїа, модель Ме20-10) ІОЕС-У288. Додавали кон'юговане антитіло (288- 5. Скляні пробірки (12х75ММ) МХ-ОТРА) (0,33Змл), зразок перемішували, а потім 6. Поліпропіленові пробірки (Совіаг; 15мл та інкубували при навколишній температурі. Питома зОмл, конічні, стерильні) активність розчину для радіоактивного мічення 7. Радіохроматографічний комплект Тес- становила 18,9мКі/мг антитіла. На 2хв. 0,020мл
Сопігої (Віодех; Кат. Ме151-770) забирали, рецептували до 0,24мг/мл буфером і 8. Мікроцентрифуга (Замап) зберігали при 2-8С Решту розчину для радіоакти- 9. Поліпропіленові мікроцентрифугувальні вного мічення рецептували через 8хв. до пробірки, без металу (Віогай; Кат. Ме223-9480) О,24мг/мл і зберігали при 2-8 Протокол повто-
С. Способи рювали для моделювання мічення "п'ятниця", за- 1. Одержання у288 стосовуючи 0,33бмл хлориду 90У, 0,323мл ацетату
Мічений ху 288-МХ-ОТРА одержували, засто- натрію та 0,333мл 288-МХ-ОТРА. Для обох дослі- совуючи лабораторну версію протоколу комплекту дів виконували контрольну реакцію 1мКі, застосо- для радіоактивного мічення, описаного вище, мо- вуючи "стандартні" умови, описані вище (5хв. реа- дифікованого згідно зі змінами, описаними нижче. кція).
Радіоактивне мічення виконували, застосовуючи в. Вплив додавання надлишкового об'єму хло- концентрацію джерела хлориду 29 84мКі/мл або риду У 29,8мКі/мл для моделювання, відповідно приготу- Для мічення "понеділок" 12мКі хлориду У вання доз "понеділок" або "п'ятниця" (на основі (0,14Змл) змішували з 0,14З3мл 50мМ ацетату на- градуювання "Середа", 5з0мкКі/мл). трію. Цей об'єм у представляє 20965 збільшення
Концентрований розчин хлориду "У розводи- кількості З0у, яка потрібна для приготування типо- ли, застосовуючи 5О0ММ Не (Ойгех, високої чисто- вої дози Ууг288. Додавали кон'юговане антитіло і зразок розчину перемішували й інкубували при загальну радіоактивність, виявлену у верхній та навколишній температурі. Остаточна питома акти- нижній половинах. Це значення виражали як від- вність становила 22,5мМКі/мг антитіла. На 2хв. соток і визначене середнє значення. 0,020мл забирали, рецептували до 0,24мг/мл з 3. Визначення зв'язування буфером і зберігали при 2-8"С Через 8хв. решту Зразки аналізували на відсоток зв'язування з розчину для радіоактивного мічення рецептували СО20-позитивних клітин після протоколу, описано- до 0,24мг/мл і зберігали при 2-8"С. Мічення "п'ят- го вище. Однак зразки негативних контрольних ниця" виконували подібним чином, застосовуючи НЗВ-клітин у цих експериментах не використову- 0,40Змл хлориду "Оу, 0,40Змл 50ММ ацетату на- вали, і ЗВ-клітини ліофілізували в 5мл флаконах трію та 0,33З3мл 288-МХ-ОТРА (питома активність замість мікроцентрифугувальних пробірок. 22,5МмКі/мг антитіла). Для обох дослідів виконували Практично всі остаточно рецептовані У288 1мКі контрольну реакцію, застосовуючи "стандар- зразки розводили 1:100 розріджувальним буфером тні" умови, описані вище (5хв. реакція). (10,Омкл антитіла ї- 990мкл буфера). Потім антиті- г. Вплив додавання меншого об'єму кон'югату ло знову розводили до концентрації приблизно антитіла Знг/мл шляхом додавання З5мкл 1:100 розведення
Для мічення "понеділок" 10мКі хлориду У до 1О0мл розріджувального буфера в 50мл поліп- (0,119мл) змішували з 0,143мл 50мММ ацетату на- ропіленовій пробірці. трію. Додавали кон'юговане антитіло (0,267мл), що За допомогою 5МУРІ відновлювали вологовміст було на 2095 менше ніж зазвичай застосовують, від шести до семи флаконів з ліофілізованими розчин перемішували й інкубували при навколиш- клітинами і їх вміст виливали у 50мл конічну пробі- ній температурі. На 2 та хв. 0,020мл забирали, рку. Потім брали аліквотну кількість клітин з відно- рецептували буфером до остаточної концентрації вленим вологовмістом (0,5мл) у трьох примірниках антитіла 0,21мг/мл і зберігали при 2-87С до аналі- і поміщали утри 1,5мл мікроцентрифугувальні зу. Мічення "п'ятниця" виконували подібним чином, пробірки, по три пробірки на випробуваний зразок. застосовуючи 0,33бмл хлориду У, 0,40З3мл 50ММ У три порожні мікроцентрифугувальні пробірки ацетату натрію та 0,27мл кон'югату. Для обох дос- додавали розріджувальний буфер (0,5мл). Розве- лідів виконували 1мКі контрольну реакцію, засто- дене антитіло (0,5мл) додавали у кожну пробірку, совуючи "стандартні" умови, описані вище (5хв. щільно закривали кришкою й інкубували при на- реакція). вколишній температурі протягом 45хв., перемішу- д. Вплив комбінованого відхилення кількості ючи шляхом перевертання. Після інкубації клітини реагентів гранулювали шляхом центрифугування протягом
Вплив 2095 відхилення об'єму ацетату натрію, бхв. у положенні "6" (4000 Х г), застосовуючи мік- хлориду 20У та кон'югату визначали одночасно для роцентрифугу Замапі. Спливаючі шари зразків протоколів мічення "понеділок" або "п'ятниця". Для (0,75мл) переносили у 12 Х 75мм скляні пробірки мічення "понеділок" 12мКі зу (0,14Змл) змішували для підрахунку радіоактивності, застосовуючи га- 3 0,114мл 50мММ ацетату натрію, що було на 2095 мма-лічильник Ізодаїа з діапазоном 100-1000 Кем. більше ніж кількість хлориду ОМ і на 2095 менше Радіоактивність, зв'язану (В) з клітинами, роз- ніж кількість ацетату натрію, що зазвичай застосо- раховували шляхом віднімання незв'язаної радіоа- вують. Додавали 288-МХ-ОТРА (0,267мл), що є на ктивності (спливаючий шар) від загальної доданої 2095 менше ніж кількість антитіла, що зазвичай радіоактивності. Загальну радіоактивність розра- застосовують, і реакційну суміш інкубували при ховували за радіоактивністю, яку показував лічи- навколишній температурі. На 2, 4, 6 та дхв. льник у пробірках без клітини. Відсоток зв'язуван- 0,020мл забирали з реакційної суміші, рецептува- ня розраховували, виражаючи зв'язану ли буфером до остаточної концентрації антитіла радіоактивність як відсоток від загальної. 0,21мг/мл і зберігали при 2-8"С до аналізу. Мічен- Для зведення до мінімуму впливу мінливості ня "п'ятниця" виконували подібним чином, засто- використовуваних для визначення зв'язування совуючи 0,40З3мл хлориду У, 0,387мл ацетату ліофілізованих клітин залежно від партії значення натрію та 0,267мл кон'югату; у зазначений час за- зв'язування нормалізували до 1мКі М288 контро- бирали 40мкл зразків й рецептували буфером. лів, одержаних із застосуванням "стандартних"
Для обох дослідів виконували 1мКі контрольну умов мічення. Контрольні зразки готували, як було реакцію, застосовуючи "стандартні" умови, описані вказано вище у цьому розділі, для кожної серії вище (5хв. реакція). експериментів. 2. Визначення включення радіоактивної мітки О. Результати
Кількість радіоактивності, пов'язаної з кон'юга- 40 1. Маломасштабне мічення для прогнозу- тами, визначали згідно з аналізом, описаним ви- вання повномасштабяого приготування доз ще, застосовуючи комплект серійного виробництва Для забезпечення прогнозу за маломасштаб- від Віодех (Радіохроматографічний комплект Тес- ними реакціями радіоактивного мічення даних для
Сопігої). Взагалі 0,5-1Імкл зразків наносили на дві повномасштабного приготування (40мКі) доз, при- смужки, застосовуючи мікропіпетку й проявляли готовляли дози 288 1,3, 10 та 40мКі, застосовую- згідно з інструкцією Віодех. Половинки смужок пе- чи протоколи радіоактивного мічення, описані ви- ревіряли на радіоактивність у скляних пробірках, ще. Ці результати показано у Таблиці 6, і вони застосовуючи гамма-лічильник Ізодаїа з діапазо- демонструють, що збільшення масштабу реакцій- ном 100-1000 кілоелектронвольт (Кем). Включення ної суміші від їмКі до 40мКі не має негативного радіоактивної мітки розраховували, ділячи кіль- впливу на зв'язування або включення радіоактив- кість радіоактивності у верхній половині смужки на ної мітки.
риду у
Таблиця 6 Коли 288 готували, застосовуючи на 2095 бі- льший об'єм хлориду "Оу, у поєднанні з часом ін-
Кількість |95 від контрольного| 95 включення ра- кубації, на 6095 довшим за норму, зв'язування практично зберігалося порівняно з контролем, одержаним згідно зі "стандартними" умовами мі- чення (див. Таблицю 7 нижче). Коли час реакції 101986. | 990. (| мічення збільшували до 8хв., зв'язування все одно | 982... 6ж...990.....| залишалося 29095 порівняно з контролем у разі приготуванні доз "понеділок" або "п'ятниця". Дода- 2. Вплив додавання меншого об'єму ацетату вання на 2096 більшого об'єму хлориду У не натрію впливало на включення радіоактивної мітки, неза-
Коли У288 готували, застосовуючи на 20965 лежно від дня, у який готували дозу. менший ніж об'єм 50ММ ацетату натрію й подов- 4. Вплив додавання меншого об'єму кон'югату жуючи час інкубації на 6095, зв'язування практично антитіла зберігалося порівняно з радіоактивно міченим ан- Коли У288 готували, застосовуючи на 2095 титілом, одержаним за "стандартних" умов мічення менший об'єм кон'югату (288-МХ-ОТРА) і подов- (див. Таблицю 7 нижче). Навіть коли реакцію мі- жуючи час інкубації на боор, зв'язування не зазна- чення проводили, застосовуючи умови мічення вало суттєвого впливу порівняно з у2В8, одержа- "понеділок", зберігалося »8995 контрольного зв'я- Ним згідно зі стандартними умовами мічення зування. Подібні результати отримували при при- (Таблиця 7 нижче). Додавання на 20965 меншого готуванні дози "п'ятниця". Ці відхилення не впли- об'єму кон'югату не впливало на включення радіо- вали на включення радіоактивної мітки, незалежно активної мітки, незалежно від дня, у якии готували від дня, у який готували дозу. дозу. 3. Вплив додавання надлишкового об'єму хло-
Таблиця 7 77711111 | Приготуваннядози"понеділок? | Приготуваннядози"пятниця?
Відхилення мічення й с. й й о, ного зв'язування активної мітки го зв'язування | діоактивної мітки 1) 2095 зменшення об'єму ацетату натрію 89,4 99,1 92,5 98,7 2) 6095 збільшення часу реа- кції (дхв.) 1) 2095 надлишковий об'єм зу 2) 6095 збільшення часу реа- 99 91,8 98,6 кції (дхв.) 1) 2095 зменшення об'єму ан- типла 98,9 98,7 98,6 2) 6095 збільшення часу реа- кції (хв. 2 Для приготування дози "понеділок" концентрація 90У у реакційному розчині становить 17мКі/мл; конце- нтрація 20У для мічення "п'ятниця" становить 8мКі/мл.
Значення зв'язування нормалізовані до міче- ного антитіла, одержаного згідно з протоколом Таблиця 8 клінічної дози (КЗВК-005) з застосуванням "стан- дартних" об'ємів реагенту при часі реакції 5хв. 5. Вплив комбінованого відхилення кількості реагентів (хв.) зв'язування активної мітки
Коли 288 готували, застосовуючи протокол, у якому всі чотири відхилення відбувалися одночас- но, зв'язування все одно практично зберігалося 6 15 89556ЮБ-| 9886... порівняно з радіоактивно міченим антитілом, оде- 580000 1783251.6...5.986.. ржаним із застосуванням "стандартних" умов мі- одно становило "8355, навіть коли препарат тпо- мин ' . р) зв'язування активної мітки неділок" інкубували на 3095 довше ніж максималь- 219880 |.6...990.... ний час бхв., який зазвичай застосовують. Вклю- чення радіоактивної мітки не зазнавало значного з з впливу цих сумарних відхилень, навіть через хв. 6 | 960 | щ 9 Ж ЖК(«К інкубації незалежно від дня, у який готували дозу. 78 1 9 | ж ж СК/С
20956 меншого об'єму ацетату натрію й інкубовані
М. Обговорення протягом 8хв., значною мірою зберігали зв'язуван-
Для зменшення дії радіації на операторів за- ня (28990) порівняно зі стандартними умовами мість повномасштабного приготування доз прово- мічення. Подібні результати були отримані для дили маломасштабні реакції мічення. Таким чи- доз, приготовлених у понеділок або п'ятницю. Це ном, нами було доведено, що на основі мічень при відхилення об'єму ацетату натрію не вплинуло на 1мКі та 1ОмкКі, які ми оцінювали в цьому досліді, включення радіоактивної мітки. можна було спрогнозувати повномасштабні приго- Додавання на 2095 більшого об'єму хлориду тування при 40мКі. Результати не виявили значної зоу та інкубування до 8хв. знижувало зв'язування різниці у зв'язуванні та включенні радіоактивної порівняно зі стандартними умовами приготування мітки у діапазоні від 1мКі до 4ОмкКІі. дози і для понеділка, і для п'ятниці. Однак зв'язу-
Ми вирішили що 2095 похибки об'єму для аце- вання все ж становило 290905, що було більшим за тату натрію, хлориду ЗУ та кон'югованого антитіла норму вивільнення. Зв'язування було трохи кра- являли собою потенційно критичні відхилення у щим для п'ятниці. Включення радіоактивної мітки протоколі радіоактивного мічення. Додаткове інку- не зазнавало суттєвого впливу збільшення об'єму бування протягом 8хв. (на Зхв. довше за норму) хлориду ЗУ. вбачалося як значне відхилення від протоколу. Для оцінки впливу всіх одночасних відхилень
Взагалі, через нетривалий період напіврозпаду від об'єму дози понеділка та п'ятниці готували з хлориду У, об'єм радіоізотопу може бути різним, часом інкубування 2, 4, 6 та дЗхв. Лише коли 288 залежно від дня приготування дози. Отже, експе- готували у понеділок, інкубуючи 8хв., зв'язування рименти, описані в цьому повідомленні, проводи- незначною мірою не відповідало нормі (83,295 по- ли, застосовуючи хлорид 20У у концентраціях, які рівняно з нормою вивільнення 86,395). представляли понеділок та п'ятницю, тобто повний Посилання діапазон можливих препаратів. Усі нижчеподані цитати включені нами як по-
У288 дози, приготовлені з застосуванням на силання:
Фіг А
Зв'язування 7288 з СО2О-позитивними. клітинами 100 80 80 70 хх рт 2 Во 5О
М 40 шо 30 20 2) 7 о) 10 20 30 540 50 Ж 50
Концентрація клітин (ХО? клітин/мл)
ФігіБ .
Зв'язування 288 з СЮ20-позитивними клітинами б шення у 1 ВАХ НеО.99908. 5 хи 4 - - З 2. 1 водневі нон дон о 20 що во во 100 1/концентрація клітин об'єм
Міністерство освіти і науки України
Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна
ДП "Український інститут промислової власності", вул. Глазунова, 1, м. Київ - 42, 01601
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US25933899A | 1999-03-01 | 1999-03-01 | |
PCT/US2000/005078 WO2000052031A2 (en) | 1999-03-01 | 2000-02-29 | Kit for radiolabeling proteins with yttrium-90 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
UA75036C2 true UA75036C2 (uk) | 2006-03-15 |
Family
ID=22984528
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
UA2001086058A UA75036C2 (uk) | 1999-03-01 | 2000-02-29 | Спосіб радіоактивного мічення кон'югованого з комплексоном антитіла або фрагмента антитіла радіоактивним ізотопом ітрій-90 та комплект для здійснення способу |
Country Status (36)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US6994840B1 (uk) |
EP (2) | EP2011520A1 (uk) |
JP (1) | JP4558947B2 (uk) |
KR (1) | KR100734023B1 (uk) |
CN (1) | CN1251767C (uk) |
AT (1) | ATE428446T1 (uk) |
AU (1) | AU780311B2 (uk) |
BG (1) | BG65568B1 (uk) |
BR (1) | BR0008635A (uk) |
CA (1) | CA2362908C (uk) |
CY (1) | CY1109211T1 (uk) |
CZ (1) | CZ20013127A3 (uk) |
DE (2) | DE60042014D1 (uk) |
DK (1) | DK1156835T3 (uk) |
EE (1) | EE05582B1 (uk) |
ES (1) | ES2165830T3 (uk) |
GR (1) | GR20010300078T1 (uk) |
HK (1) | HK1045656B (uk) |
HR (1) | HRP20010713A2 (uk) |
HU (1) | HU227986B1 (uk) |
IL (2) | IL145112A0 (uk) |
ME (1) | ME00783B (uk) |
MX (1) | MXPA01008745A (uk) |
MY (1) | MY133346A (uk) |
NO (1) | NO330728B1 (uk) |
NZ (1) | NZ513667A (uk) |
PL (1) | PL204239B1 (uk) |
PT (1) | PT1156835E (uk) |
RS (1) | RS50342B (uk) |
RU (1) | RU2221807C2 (uk) |
SI (1) | SI1156835T1 (uk) |
SK (1) | SK287650B6 (uk) |
TW (1) | TWI283178B (uk) |
UA (1) | UA75036C2 (uk) |
WO (1) | WO2000052031A2 (uk) |
ZA (1) | ZA200106945B (uk) |
Families Citing this family (53)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
MY133346A (en) * | 1999-03-01 | 2007-11-30 | Biogen Inc | Kit for radiolabeling ligands with yttrium-90 |
US20020102208A1 (en) * | 1999-03-01 | 2002-08-01 | Paul Chinn | Radiolabeling kit and binding assay |
WO2002028905A2 (en) | 2000-10-02 | 2002-04-11 | Chiron Corporation | Human anti-cd40 antibodies |
US6696060B2 (en) * | 2001-06-14 | 2004-02-24 | Clearant, Inc. | Methods for sterilizing preparations of monoclonal immunoglobulins |
US7252799B2 (en) | 2001-08-31 | 2007-08-07 | Clearant, Inc. | Methods for sterilizing preparations containing albumin |
US6783968B2 (en) | 2001-09-24 | 2004-08-31 | Clearant, Inc. | Methods for sterilizing preparations of glycosidases |
US6974563B2 (en) | 2002-06-18 | 2005-12-13 | Lynntech, Inc. | Ion exchange materials for the separation of 90Y from 90SR |
MXPA05007940A (es) * | 2003-01-27 | 2007-06-14 | Biogen Idec Inc | Composiciones y metodos para el tratamiento del cancer usando igsf9 y liv-1. |
KR101274867B1 (ko) * | 2003-04-15 | 2013-06-13 | 알게타 에이에스 | 연조직 질환의 방사선 치료에 사용하기 위한 토륨-227 |
ATE447412T1 (de) | 2003-11-04 | 2009-11-15 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Antagonist-anti-cd40-monoklonale antikörper und anwendungsverfahren |
WO2005044855A2 (en) | 2003-11-04 | 2005-05-19 | Chiron Corporation | Use of antagonist anti-cd40 monoclonal antibodies for treatment of multiple myeloma |
DE602004028643D1 (de) | 2003-11-04 | 2010-09-23 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Verfahren zur behandlung von soliden tumoren mit expression des cd40-zelloberflächen-antigens |
EP1844815B1 (en) | 2003-11-04 | 2011-09-14 | Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. | Combination therapy comprising anti-CD20 and anti-CD40 antibodies for the treatment of B cell-related cancers |
PL1682177T3 (pl) | 2003-11-04 | 2011-03-31 | Novartis Vaccines & Diagnostics Inc | Zastosowanie antagonistycznych przeciwciał anty-CD40 do leczenia przewlekłej białaczki limfocytowej |
DK1889065T3 (da) | 2005-05-18 | 2013-09-02 | Xoma Technology Ltd | Metoder til diagnostisering og behandling af sygdomme med en autoimmun- og/eller inflammationskomponent |
CN101426817B (zh) | 2006-04-21 | 2013-07-10 | 诺华有限公司 | 拮抗性抗-cd40抗体药物组合物 |
GB0700133D0 (en) | 2007-01-04 | 2007-02-14 | Humabs Llc | Human cytomegalovirus neutralising antibodies and use thereof |
SG10201706350PA (en) | 2008-07-16 | 2017-09-28 | Inst For Res In Biomedicine | Human cytomegalovirus neutralizing antibodies and use thereof |
EP2960250A1 (en) | 2008-07-16 | 2015-12-30 | Institute for Research in Biomedicine | Human cytomegalovirus neutralising antibodies and use thereof |
JP5607620B2 (ja) | 2008-07-25 | 2014-10-15 | インスティテュート・フォー・リサーチ・イン・バイオメディシン | 抗a型インフルエンザウイルス中和抗体およびその使用 |
US8871207B2 (en) | 2008-07-25 | 2014-10-28 | Humabs, LLC | Neutralizing anti-influenza A virus antibodies and uses thereof |
JP5814790B2 (ja) | 2008-10-13 | 2015-11-17 | インスティテュート・フォー・リサーチ・イン・バイオメディシンInstitute For Research In Biomedicine | デングウイルス中和抗体およびその使用 |
US20110212106A1 (en) | 2010-01-20 | 2011-09-01 | Institute For Research In Bioscience | Hiv-1 neutralizing antibodies and uses thereof |
GB201002508D0 (en) | 2010-02-12 | 2010-03-31 | Algeta As | Product |
WO2011147762A2 (en) * | 2010-05-25 | 2011-12-01 | Bayer Pharma Aktiengesellschaft | Stabilized radiopharmaceutical composition |
CA2822815A1 (en) * | 2010-12-22 | 2012-06-28 | Ge Healthcare Limited | Her2 binding peptides labeled with aluminium-[18] fluoride complexed by nota |
ES2841899T3 (es) | 2011-07-18 | 2021-07-12 | Inst Res Biomedicine | Anticuerpos neutralizantes del virus de la influenza A y usos de los mismos |
PL2828293T3 (pl) | 2012-03-20 | 2018-03-30 | Humabs Biomed S.A. | Przeciwciała, które neutralizują RSV, MPV i PVM oraz ich zastosowania |
RU2537175C2 (ru) * | 2013-03-26 | 2014-12-27 | Российская Федерация, От Имени Которой Выступает Министерство Образования И Науки Российской Федерации | Способ получения радиоиммунного препарата для диагностики и терапии онкологических заболеваний |
SG10201710013RA (en) | 2013-08-13 | 2018-01-30 | Sanofi Sa | Antibodies to plasminogen activator inhibitor-1 (pai-1) and uses thereof |
CN118005782A (zh) | 2013-10-02 | 2024-05-10 | 免疫医疗有限责任公司 | 中和抗甲型流感抗体及其用途 |
CN113563462A (zh) | 2014-07-15 | 2021-10-29 | 免疫医疗有限责任公司 | 中和抗乙型流感抗体及其用途 |
WO2016055950A1 (en) | 2014-10-08 | 2016-04-14 | Novartis Ag | Combination of human cytomegalovirus neutralizing antibodies |
WO2016075546A2 (en) | 2014-11-14 | 2016-05-19 | Antonio Lanzavecchia | Antibodies that neutralize ebola virus and uses thereof |
BR122020023406B1 (pt) | 2014-11-18 | 2023-10-31 | Institut Pasteur | Anticorpos que neutralizam de modo potente vírus da raiva e outros lissavírus, moléculas de ácido nucleico, vetor, célula isolada, composição farmacêutica, usos dos mesmos, e kit de partes |
IL237525A (en) * | 2015-03-03 | 2017-05-29 | Shalom Eli | Method for labeling a prostate-specific membrane antigen with a radioactive isotope |
GB201504064D0 (en) | 2015-03-10 | 2015-04-22 | Accretion Biotechnology Ltd | Method and kits for preparing radionuclide complexes |
SI3303384T1 (sl) | 2015-06-01 | 2021-11-30 | Medimmune Llc | Nevtralizirajoče vezavne molekule proti-influenci in njihova uporaba |
WO2017059878A1 (en) | 2015-10-07 | 2017-04-13 | Humabs Biomed Sa | Antibodies that potently neutralize hepatitis b virus and uses thereof |
KR20180101436A (ko) | 2016-01-13 | 2018-09-12 | 메디뮨 엘엘씨 | 인플루엔자 a의 치료 방법 |
WO2018010789A1 (en) | 2016-07-13 | 2018-01-18 | Humabs Biomed Sa | Novel antibodies specifically binding to zika virus epitopes and uses thereof |
EA201992434A1 (ru) | 2017-04-19 | 2020-03-30 | Инститьют Фор Рисерч Ин Байомедисин | Новые противомалярийные вакцины и антитела, связывающиеся со спорозоитами плазмодия |
KR20200008580A (ko) * | 2017-05-12 | 2020-01-28 | 메모리얼 슬로안 케터링 캔서 센터 | 중추 신경계에서의 암을 치료하기 위한 항-b7h3 항체의 용도 |
WO2019042555A1 (en) | 2017-08-31 | 2019-03-07 | Humabs Biomed Sa | MULTISPECIFIC ANTIBODIES SPECIFICALLY BINDING TO ZIKA VIRUS EPITOPES AND USES THEREOF |
CN109550061A (zh) * | 2017-09-26 | 2019-04-02 | 南京江原安迪科正电子研究发展有限公司 | 一种用于放射性核素标记抗体的试剂盒及应用 |
CN118108836A (zh) | 2018-12-19 | 2024-05-31 | 胡默波斯生物医学公司 | 中和乙型肝炎病毒的抗体和其用途 |
BR112022003698A2 (pt) | 2019-08-29 | 2022-05-24 | Vir Biotechnology Inc | Método de tratamento de uma infecção pelo vírus da hepatite b e composição farmacêutica |
CN111116701A (zh) * | 2019-11-14 | 2020-05-08 | 浙江普罗亭健康科技有限公司 | 一种用于蛋白金属标记的中间体及其制备方法、用途 |
JP2023531520A (ja) | 2020-06-24 | 2023-07-24 | ヴィア・バイオテクノロジー・インコーポレイテッド | 操作されたb型肝炎ウイルス中和抗体およびその使用 |
EP4284428A1 (en) | 2021-01-26 | 2023-12-06 | VIR Biotechnology, Inc. | Compositions and methods for treating hepatitis b virus infection |
WO2024068944A1 (en) | 2022-09-30 | 2024-04-04 | Sanofi | Anti-cd28 antibodies |
WO2024089609A1 (en) | 2022-10-25 | 2024-05-02 | Ablynx N.V. | Glycoengineered fc variant polypeptides with enhanced effector function |
US20240209107A1 (en) | 2022-12-19 | 2024-06-27 | Sanofi | Cd28/ox40 bispecific antibodies |
Family Cites Families (65)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3994966A (en) | 1972-09-28 | 1976-11-30 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Chelating agents |
US4043998A (en) | 1974-10-09 | 1977-08-23 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | 1-(P-benzenediazonium)-ethylenediamine tetraacetic acid |
US4315851A (en) | 1978-12-29 | 1982-02-16 | Kureha Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha | Pharmaceutical composition having antitumor activity |
US4460561A (en) | 1980-03-03 | 1984-07-17 | Goldenberg M David | Tumor localization and therapy with labeled antibodies specific to intracellular tumor-associated markers |
US4348376A (en) | 1980-03-03 | 1982-09-07 | Goldenberg Milton David | Tumor localization and therapy with labeled anti-CEA antibody |
US4331647A (en) | 1980-03-03 | 1982-05-25 | Goldenberg Milton David | Tumor localization and therapy with labeled antibody fragments specific to tumor-associated markers |
US4361544A (en) | 1980-03-03 | 1982-11-30 | Goldenberg Milton David | Tumor localization and therapy with labeled antibodies specific to intracellular tumor-associated markers |
US4460559A (en) | 1980-03-03 | 1984-07-17 | Goldenberg Milton David | Tumor localization and therapy with labeled antibodies specific to intracellular tumor-associated markers |
US4444744A (en) | 1980-03-03 | 1984-04-24 | Goldenberg Milton David | Tumor localization and therapy with labeled antibodies to cell surface antigens |
US4622420A (en) | 1980-03-18 | 1986-11-11 | The Regents Of The University Of California | Chelating agents and method |
US4472509A (en) | 1982-06-07 | 1984-09-18 | Gansow Otto A | Metal chelate conjugated monoclonal antibodies |
US4454106A (en) | 1982-06-07 | 1984-06-12 | Gansow Otto A | Use of metal chelate conjugated monoclonal antibodies |
US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
US4707352A (en) | 1984-01-30 | 1987-11-17 | Enzo Biochem, Inc. | Method of radioactively labeling diagnostic and therapeutic agents containing a chelating group |
US4636380A (en) | 1984-04-23 | 1987-01-13 | Wong Dennis W | Novel physiologic chemical method of labeling protein substances with the radionuclides of indium |
US4634586A (en) | 1984-05-21 | 1987-01-06 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Reagent and method for radioimaging leukocytes |
US4722892A (en) | 1984-08-31 | 1988-02-02 | Meares Claude F | Monoclonal antibodies against metal chelates |
US4824986A (en) | 1985-04-26 | 1989-04-25 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Metal chelate protein conjugate |
US4735210A (en) | 1985-07-05 | 1988-04-05 | Immunomedics, Inc. | Lymphographic and organ imaging method and kit |
US5101827A (en) | 1985-07-05 | 1992-04-07 | Immunomedics, Inc. | Lymphographic and organ imaging method and kit |
US4926869A (en) | 1986-01-16 | 1990-05-22 | The General Hospital Corporation | Method for the diagnosis and treatment of inflammation |
DK172629B1 (da) | 1986-02-14 | 1999-03-22 | Nihon Mediphysics Co Ltd | Reaktive højmolekylære forbindelser med mindst én fri aminogruppe, højmolekylære forbindelser kombineret med et fysiologisk |
US5099069A (en) | 1986-09-05 | 1992-03-24 | Gansow Otto A | Backbone polysubstituted chelates for forming a metal chelate-protein conjugate |
US5246692A (en) | 1986-09-05 | 1993-09-21 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Health And Human Services | Backbone polysubstituted chelates for forming a metal chelate-protein conjugate |
EP0484989B1 (en) * | 1986-09-05 | 1996-04-24 | GANSOW, Otto A. | Polysubstituted diethylenetriamine chelates for forming a metal-chelate-protein conjugate |
US4831175A (en) | 1986-09-05 | 1989-05-16 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Backbone polysubstituted chelates for forming a metal chelate-protein conjugate |
US5034223A (en) | 1986-10-09 | 1991-07-23 | Neorx Corporation | Methods for improved targeting of antibody, antibody fragments, hormones and other targeting agents, and conjugates thereof |
US4921690A (en) | 1986-12-29 | 1990-05-01 | City Of Hope | Method of enhancing the biodistribution of antibody for localization in lesions |
IL85035A0 (en) | 1987-01-08 | 1988-06-30 | Int Genetic Eng | Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same |
US5217704A (en) | 1987-11-06 | 1993-06-08 | Abbott Laboratories | Methods and materials for the preparation of metal labelled antibody solutions |
AU619218B2 (en) | 1987-11-06 | 1992-01-23 | Abbott Laboratories | Methods and materials for the preparation of metal labelled antibody solutions |
US5130118A (en) | 1987-11-06 | 1992-07-14 | Abbott Laboratories | Methods and materials for the preparation of metal labelled antibody solutions |
US4861579A (en) | 1988-03-17 | 1989-08-29 | American Cyanamid Company | Suppression of B-lymphocytes in mammals by administration of anti-B-lymphocyte antibodies |
WO1992011864A1 (en) | 1991-01-11 | 1992-07-23 | Cryopharm Corporation | Method of detecting circulating antibody types using dried or lyophilized cells or cell-like material |
DE68925904T2 (de) | 1988-05-25 | 1996-10-31 | The United States Of America, Represented By The Secretary, U.S. Department Of Commerce, Springfield, Va. | Makrocyclische chelate und verwendungsverfahren |
US4923985A (en) | 1988-05-25 | 1990-05-08 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health & Human Services | Process for synthesizing macrocyclic chelates |
US5059518A (en) | 1988-10-20 | 1991-10-22 | Coulter Corporation | Stabilized lyophilized mammalian cells and method of making same |
CA2010511A1 (en) | 1989-03-01 | 1990-09-01 | Roberto L. Ceriani | Method of enhancing cancer therapy by administration of unsaturated fatty acids |
US5376356A (en) | 1989-03-14 | 1994-12-27 | Neorx Corporation | Imaging tissue sites of inflammation |
US5162115A (en) | 1989-05-09 | 1992-11-10 | Pietronigro Dennis D | Antineoplastic solution and method for treating neoplasms |
US5460785A (en) | 1989-08-09 | 1995-10-24 | Rhomed Incorporated | Direct labeling of antibodies and other protein with metal ions |
US5124471A (en) | 1990-03-26 | 1992-06-23 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Bifunctional dtpa-type ligand |
US5219556A (en) | 1990-07-09 | 1993-06-15 | Mallinckrodt Medical, Inc. | Stabilized therapeutic radiopharmaceutical complexes |
US5009069A (en) | 1990-08-24 | 1991-04-23 | Molini Alberto E | Method of recovering energy from ocean water |
GB9022543D0 (en) | 1990-10-17 | 1990-11-28 | Wellcome Found | Antibody production |
WO1992007466A1 (en) | 1990-11-05 | 1992-05-14 | Bristol-Myers Squibb Company | Synergistic therapy with combinations of anti-tumor antibodies and biologically active agents |
US5208008A (en) | 1990-11-14 | 1993-05-04 | University Of Pittsburgh | Regioselective chemical modification of monoclonal antibodies |
US5403573A (en) | 1992-04-23 | 1995-04-04 | The Curators Of The University Of Missouri | Radiolabeled protein composition and method for radiation synovectomy |
US5541287A (en) | 1992-06-09 | 1996-07-30 | Neorx Corporation | Pretargeting methods and compounds |
US5716596A (en) | 1992-06-23 | 1998-02-10 | Diatide, Inc. | Radioactively labeled somatostatin-derived peptides for imaging and therapeutic uses |
US5620675A (en) | 1992-06-23 | 1997-04-15 | Diatech, Inc. | Radioactive peptides |
US5736137A (en) * | 1992-11-13 | 1998-04-07 | Idec Pharmaceuticals Corporation | Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma |
ES2091684T3 (es) | 1992-11-13 | 1996-11-01 | Idec Pharma Corp | Aplicacion terapeutica de anticuerpos quimericos y radiomarcados contra el antigeno de diferenciacion restringida de los linfocitos b humanos para el tratamiento del linfoma de las celulas b. |
US5650134A (en) * | 1993-01-12 | 1997-07-22 | Novartis Ag (Formerly Sandoz Ltd.) | Peptides |
US5595721A (en) * | 1993-09-16 | 1997-01-21 | Coulter Pharmaceutical, Inc. | Radioimmunotherapy of lymphoma using anti-CD20 |
AU686305B2 (en) * | 1994-01-24 | 1998-02-05 | Sumitomo Chemical Company, Limited | Laminate, laminated film and molding |
IL113610A0 (en) | 1994-06-03 | 1995-08-31 | Immunomedics Inc | A method of radiolabeling a protein, radiolabeled proteins prepared thereby and diagnostic kits containing the same |
US5686578A (en) | 1994-08-05 | 1997-11-11 | Immunomedics, Inc. | Polyspecific immunoconjugates and antibody composites for targeting the multidrug resistant phenotype |
US5874540A (en) * | 1994-10-05 | 1999-02-23 | Immunomedics, Inc. | CDR-grafted type III anti-CEA humanized mouse monoclonal antibodies |
US5728369A (en) | 1994-10-05 | 1998-03-17 | Immunomedics, Inc. | Radioactive phosphorus labeling of proteins for targeted radiotherapy |
US5942210A (en) | 1994-11-15 | 1999-08-24 | Cytogen Corporation | Methods for lyoprotecting a macromolecule using tricine |
US5830431A (en) | 1995-06-07 | 1998-11-03 | Mallinckrodt Medical, Inc. | Radiolabeled peptide compositions for site-specific targeting |
US20020102208A1 (en) | 1999-03-01 | 2002-08-01 | Paul Chinn | Radiolabeling kit and binding assay |
MY133346A (en) * | 1999-03-01 | 2007-11-30 | Biogen Inc | Kit for radiolabeling ligands with yttrium-90 |
US6300143B1 (en) | 1999-03-01 | 2001-10-09 | Idec Pharmaceuticals Corporation | Electrochemiluminescent assays for eukaryotic cells |
-
2000
- 2000-02-28 MY MYPI20000752A patent/MY133346A/en unknown
- 2000-02-29 DE DE60042014T patent/DE60042014D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-02-29 RS YUP-617/01A patent/RS50342B/sr unknown
- 2000-02-29 UA UA2001086058A patent/UA75036C2/uk unknown
- 2000-02-29 SI SI200031032T patent/SI1156835T1/sl unknown
- 2000-02-29 MX MXPA01008745A patent/MXPA01008745A/es active IP Right Grant
- 2000-02-29 WO PCT/US2000/005078 patent/WO2000052031A2/en active IP Right Grant
- 2000-02-29 KR KR1020017011085A patent/KR100734023B1/ko active IP Right Grant
- 2000-02-29 BR BR0008635-5A patent/BR0008635A/pt not_active Application Discontinuation
- 2000-02-29 DK DK00919345T patent/DK1156835T3/da active
- 2000-02-29 ES ES00919345T patent/ES2165830T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-02-29 EP EP08105278A patent/EP2011520A1/en not_active Withdrawn
- 2000-02-29 ME MEP-2009-22A patent/ME00783B/me unknown
- 2000-02-29 JP JP2000602256A patent/JP4558947B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2000-02-29 DE DE1156835T patent/DE1156835T1/de active Pending
- 2000-02-29 SK SK1217-2001A patent/SK287650B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2000-02-29 EP EP00919345A patent/EP1156835B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-02-29 TW TW089103477A patent/TWI283178B/zh not_active IP Right Cessation
- 2000-02-29 RU RU2001126396/04A patent/RU2221807C2/ru active
- 2000-02-29 PL PL350551A patent/PL204239B1/pl unknown
- 2000-02-29 HU HU0105489A patent/HU227986B1/hu unknown
- 2000-02-29 AT AT00919345T patent/ATE428446T1/de active
- 2000-02-29 CZ CZ20013127A patent/CZ20013127A3/cs unknown
- 2000-02-29 PT PT00919345T patent/PT1156835E/pt unknown
- 2000-02-29 CA CA2362908A patent/CA2362908C/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-02-29 EE EEP200100461A patent/EE05582B1/xx unknown
- 2000-02-29 IL IL14511200A patent/IL145112A0/xx active IP Right Grant
- 2000-02-29 NZ NZ513667A patent/NZ513667A/en not_active IP Right Cessation
- 2000-02-29 AU AU40046/00A patent/AU780311B2/en not_active Expired
- 2000-02-29 CN CNB00805729XA patent/CN1251767C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2000-07-28 US US09/628,186 patent/US6994840B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2001
- 2001-08-22 ZA ZA200106945A patent/ZA200106945B/en unknown
- 2001-08-24 IL IL145112A patent/IL145112A/en not_active IP Right Cessation
- 2001-08-29 BG BG105853A patent/BG65568B1/bg unknown
- 2001-08-31 NO NO20014239A patent/NO330728B1/no not_active IP Right Cessation
- 2001-10-01 HR HR20010713A patent/HRP20010713A2/hr active Application Revival
-
2002
- 2002-01-31 GR GR20010300078T patent/GR20010300078T1/el unknown
- 2002-10-03 HK HK02107257.1A patent/HK1045656B/zh not_active IP Right Cessation
-
2005
- 2005-07-15 US US11/181,811 patent/US7229620B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2007
- 2007-06-08 US US11/760,503 patent/US7618613B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2009
- 2009-07-07 CY CY20091100722T patent/CY1109211T1/el unknown
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
UA75036C2 (uk) | Спосіб радіоактивного мічення кон'югованого з комплексоном антитіла або фрагмента антитіла радіоактивним ізотопом ітрій-90 та комплект для здійснення способу | |
KR100729247B1 (ko) | 방사선표지 키트 및 결합 분석 | |
Eary et al. | Imaging and treatment of B-cell lymphoma | |
US5660811A (en) | Isotopic tracer composition and method for making and using same | |
Order et al. | Hepatoma: Model for Radiolabeled Antibody in Cancer Treatment¹ | |
JP4880854B2 (ja) | 高い免疫反応性を有するタンパク質及びその製造方法 | |
Hinkle et al. | Radioiodination, quality assessment, in vitro and in vivo stability of iodine‐125 nofetumomab |