KR20180101436A - 인플루엔자 a의 치료 방법 - Google Patents

인플루엔자 a의 치료 방법 Download PDF

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라번 말로리
가브리엘 로비
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Abstract

환자에서 인플루엔자 A 바이러스 감염의 치료, 감소 또는 예방 방법뿐만 아니라 환자에서 인플루엔자 A 바이러스 감염의 치료, 감소 또는 예방을 위한 조성물 및 제조 물품이 본원에 제공된다.

Description

인플루엔자 A의 치료 방법
전자 제출된 서열 목록에 대한 참조
본 출원과 함께 제출된 서열 목록의 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 본 출원은 2015년 1월 12일에 생성된 FLUA200P1_seq_listing으로 제출되고 5.21킬로바이트 크기를 갖는 텍스트로서 본 출원과 함께 제출된 서열 목록을 참조로 포함한다.
발명의 분야
본 발명은 대상체에서 인플루엔자 A 바이러스 감염의 치료, 감소 또는 예방을 위한 방법, 조성물 및 제조 물품에 관한 것이다.
인플루엔자 바이러스는 연간 인플루엔자 유행 및 때때로 범유행을 유도하며, 이는 세계적으로 공중 보건에 대해 큰 위협을 야기한다. 계절성 인플루엔자 감염은 특히 어린 아이, 면역약화 환자 및 노령층에서, 매년 200,000건 내지 500,000건의 사망과 연관된다. 사망률은 전형적으로 범유행 인플루엔자 돌발발생으로 계절 동안 추가로 증가된다. 특히 원조가 불충분한 집단에서, 인플루엔자 감염을 예방하고 치료하기 위한 강력한 항-바이러스 치료제에 대해 충족되지 못한 상당한 의학적 필요성이 여전히 존재한다.
A형, B형 및 C형의 3가지 유형의 인플루엔자 바이러스가 존재한다. 인플루엔자 A 바이러스는 인간, 돼지, 닭 및 흰족제비를 포함하는 매우 다양한 조류 및 포유류를 감염시킬 수 있다. 인플루엔자 A 바이러스는 표면 당단백질 헤마글루티닌(HA) 및 뉴라미니다제(NA)를 인코딩하는 2개 유전자의 항원성 영역에서의 대립유전자 변형에 기반하는 서브타입으로 분류될 수 있다. HA는 수용체-결합 및 막 융합 당단백질이며, 이는 바이러스 부착 및 표적 세포 내로의 진입을 매개한다; HA는 보호 체액성 면역 반응의 일차 표적이다. HA 단백질은 삼량체 구조이며 단일 폴리펩타이드 전구체, HA0의 3개 사본을 포함하고, 이는 단백분해 성숙 시 구형 헤드(HA1) 및 줄기 영역(HA2)을 함유하는 pH-의존적인 준안정형 중간체로 절단된다. 막 원위 "구형 헤드"는 대부분의 HA1 구조를 이루며 바이러스 진입을 위한 시알산 결합 포켓 및 주요 항원성 도메인을 함유한다. HA2 및 일부 HA1 잔기로부터 어셈블리되는 막 근위 "줄기" 구조는 융합 기구를 포함하며, 이는 후기 엔도좀의 낮은 pH 환경에서 입체형태 변화를 거쳐 막 융합 및 세포 내로의 침투를 유발한다. 인플루엔자 A 서브타입 간 서열 상동성 정도는 HA2 영역(51% 내지 80% 상동성)에 비해 HA1 (서브타입 간 34% 내지 59% 상동성)에서 더 작다. 인플루엔자 바이러스 감염에 의해 유발되는 중화 항체는 종종 바이러스 수용체 결합을 방지하기 위해 가변 HA1 구형 헤드로 표적화되며 빈번히 균주-특이적이다. HA의 구형 헤드를 표적화하는 소수의 광범위 교차-반응성 모노클로날 항체가 동정되었다(Krause et al., (2011) J. Virol.85; Whittle et al., (2011) PNAS 108; Ekiert et al., (2012) Nature 489; Lee et al., (2012) PNAS 109). 대조적으로, 줄기 영역의 구조는 상대적으로 보존되며, 바이러스 진입을 위한 pH-유발 융합 단계를 방지하기 위해 HA 줄기에 결합하는 소수의 광범위 중화 항체가 최근 동정되었다(Ekiert et al., (2009) Science 324; Sui et al., (2009) Nat. Struct. Mol. Biol. 16; Wrammert et al., (2011) J. Exp. Med. 208; Ekiert et al., (2011) Science 333; Corti et al., (2010) J. Clin. Invest. 120; Throsby M., (2008) PLoS One 3). 대부분의 이러한 줄기 반응성 중화 항체는 인플루엔자 A 1군 바이러스에 특이적이거나 2군 바이러스에 특이적이다. 매우 최근에, 1군 및 2군 바이러스에 모두 교차-반응성인 줄기 결합 항체가 단리되었다(Corti et al., (2011) Science 333(6044):850-856:; Li et al., (2012) PNAS 109: 9047-9052; 및 Dreyfus et al., (2012) Science 337(6100):1343-1348; Nakamura et al., (2013) Cell Host & Microbe 14: 93-103).
백신 및 소분자 항-바이러스 치료제에서의 진보에도 불구하고, 유병률 및 사망률에 대해 높은 위험에 처한 집단에서 인플루엔자의 보다 효과적인 치료에 대해 충족되지 않은 의학적 필요성이 여전히 존재한다. 이러한 환자에서, 인플루엔자 감염은 중증 합병증을 야기할 수 있고 전반적인 건강관리 시스템에 상당한 부담을 유도한다. 인플루엔자의 치료를 위한 케어의 현재 표준은 케어에 대한 늦은 제시로 인한 고령 성인에서의 감소된 효과 가능성, 내성에 대한 가능성 및 제한된 치료 윈도우를 포함하는 여러 제한을 갖는다.
MEDI8852(예를 들어, SEQ ID NO: 1 내지 SEQ ID NO: 10으로 나타냄)는 강력한 광범위 중화 IgG1 카파 모노클로날 항체이며, 이는 모든 18개 인플루엔자 A 바이러스 서브타입으로부터 바이러스에서 공유되는 고도로 보존된 헤마글루티닌 줄기 영역에 결합하고, 계절성 및 범유행 인플루엔자 A 서브타입 모두에 대한 커버를 실증한다. MEDI8852는 계절성 H1N1 및 H3N2 바이러스를 포함하는 바이러스뿐만 아니라 범유행을 유도할 가능성을 갖는 인플루엔자 A 서브타입, 예컨대 H2, H4, H5, H6, H7 및 H9의 바이러스의 대규모 패널을 강력히 중화한다. 또한, 감염된 세포는 Fc-효과기 기능(즉, 항체 의존적 세포 독성(ADCC), 항체-의존적 세포 식균작용(ADCP) 및 보체-의존적 세포독성(CDC))을 통해 MEDI8852를 사용하여 제거될 수 있으며, MEDI8852는 바이러스 융합, HA 프로테아제 절단(성숙) 및 세포-대-세포 전파의 억제에 의해 인플루엔자 A 바이러스 감염을 예방하는 것으로 나타났다.
현재까지, MEDI8852의 약리학적 평가는 제한되었다. 약리학적으로 관련된 동물 종 모델이 약동학 및 약력학 연구를 위해 사용되었으나, 이들 모델의 약리는 인간에서 MEDI8852의 약리와 상이하다. 따라서, 인간에서 MEDI8852 투여를 위한 시작 용량을 산정하기 위한 방법에 대한 필요성, 그리고 인간에서 인플루엔자 A 감염의 치료를 위한 MEDI8852의 효과적인, 그러나 안전한 용량에 대한 필요성이 여전히 존재한다.
요약
환자에서 인플루엔자 A 바이러스 감염의 치료, 감소 또는 예방을 위한 방법, 조성물 및 제조 물품이 본원에 제공된다.
하나의 구현예에서, 환자에서 인플루엔자 A 바이러스 감염의 치료, 감소 또는 예방 방법이 제공된다. 다른 구현예에서, 방법은 인플루엔자 A 바이러스의 적어도 하나의 1군 서브타입 및 적어도 하나의 2군 서브타입의 인플루엔자 A 바이러스 헤마글루티닌에 결합할 수 있는 적어도 약 200 ㎎ 내지 최대 약 3,500 ㎎의 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편을 환자에 투여하는 단계를 포함한다.
하나의 구현예에서, 환자는 인간이다. 하나의 구현예에서, 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편은 비경구 투여된다. 보다 특정한 구현예에서, 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편은 정맥내 투여된다. 하나의 구현예에서, 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편은 적어도 약 1 ㎎/분 내지 최대 약 50 ㎎/분, 적어도 약 5 ㎎/분 내지 최대 약 30 ㎎/분, 또는 적어도 약 15 ㎎/분 내지 최대 약 25 ㎎/분의 속도로 투여된다.
하나의 구현예에서, 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편은 환자가 인플루엔자 A 바이러스에 노출된 후, 인플루엔자 A 바이러스에 감염된 후, 인플루엔자 A 바이러스 감염 증상을 나타낸 후, 또는 그 조합 시 투여된다. 다른 구현예에서, 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편은 환자가 인플루엔자 A 바이러스에 노출되기 전, 인플루엔자 A 바이러스에 감염되기 전, 또는 인플루엔자 A 바이러스 감염 증상을 나타내기 전에 투여된다. 하나의 구현예에서, 환자는 인플루엔자 A 바이러스에 대해 혈청-음성이다. 다른 구현예에서, 환자는 인플루엔자 A 바이러스에 대해 혈청-양성이다. 다른 구현예에서, 환자의 혈청 상태는 알려져 있지 않다. 하나의 구현예에서, 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편은 노출, 감염, 증상 개시, 또는 이의 조합의 30일 내에 대상체에 투여된다.
보다 특정한 구현예에서, 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편은 SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 및 SEQ ID NO: 5에 나타낸 아미노산 서열로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 75% 동일한 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 중쇄 CDR을 포함한다. 다른 구현예에서, 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편은 SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 및 SEQ ID NO: 10에 나타낸 아미노산 서열로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 75% 동일한 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 경쇄 CDR을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편은 SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 및 SEQ ID NO: 5로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 75% 동일한 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 중쇄 CDR 및 SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 및 SEQ ID NO: 10에 나타낸 아미노산 서열로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 75% 동일한 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 경쇄 CDR을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편은 SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 및 SEQ ID NO: 5로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 중쇄 CDR을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편은 SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 및 SEQ ID NO: 10으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 경쇄 CDR을 포함한다. 다른 구현예에서, 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편은 SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 및 SEQ ID NO: 5로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 중쇄 CDR 및 SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 및 SEQ ID NO: 10으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 경쇄 CDR을 포함한다.
하나의 구현예에서, 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편은 SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열과 적어도 75% 동일한 아미노산 서열을 갖는 VH를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편은 SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열과 적어도 75% 동일한 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편은 SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열과 적어도 75% 동일한 아미노산 서열을 갖는 VH 및 SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열과 적어도 75% 동일한 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편은 SEQ ID NO: 2에 나타낸 아미노산 서열을 갖는 VH를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편은 SEQ ID NO: 7에 나타낸 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편은 SEQ ID NO: 2에 나타낸 아미노산 서열을 갖는 VH 및 SEQ ID NO: 7에 나타낸 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다.
보다 특정한 구현예에서, 항-인플루엔자 A 항체는 MEDI8852를 포함한다.
다른 구현예에서, 환자에서 인플루엔자 A 바이러스 감염의 치료, 감소 또는 예방을 위한 조성물이 제공된다. 하나의 구현예에서, 조성물은 인플루엔자 A 바이러스의 적어도 하나의 1군 서브타입 및 적어도 하나의 2군 서브타입의 인플루엔자 A 바이러스 헤마글루티닌에 결합할 수 있는 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편을 포함하며, 여기서 조성물은 적어도 약 200 ㎎ 내지 최대 약 3,500 ㎎의 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편의 투여를 위해 제형화된다. 하나의 구현예에서, 조성물은 인플루엔자 A 바이러스 헤마글루티닌에 결합할 수 있고 인플루엔자 A 바이러스의 적어도 하나의 1군 서브타입 및 적어도 하나의 2군 서브타입을 중화시킬 수 있는 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편을 포함하며, 여기서 조성물은 환자에 적어도 약 200 ㎎ 내지 최대 약 3,500 ㎎의 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편의 투여를 위해 제형화된다. 하나의 구현예에서, 조성물은 H1, H2, H5, H6, H8, H9, H11, H12, H13, H16, H17, H18 및 이의 변이체로부터 선택되는 하나 이상의 인플루엔자 A 바이러스 1군 서브타입; 및 H3, H4, H7, H10, H14 및 H15 및 이의 변이체로부터 선택되는 하나 이상의 인플루엔자 A 바이러스 2군 서브타입을 중화시킬 수 있는 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편을 포함한다.
하나의 구현예에서, 조성물은 인플루엔자 A 바이러스의 적어도 하나의 1군 서브타입 및 적어도 하나의 2군 서브타입의 인플루엔자 A 바이러스 헤마글루티닌에 결합할 수 있는 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편을 포함하며, 여기서 조성물은 적어도 약 200 ㎎ 내지 최대 약 3,500 ㎎의 양으로 정맥내 주입을 위해 제형화된다. 하나의 구현예에서, 조성물은 인플루엔자 A 바이러스의 적어도 하나의 1군 서브타입 및 적어도 하나의 2군 서브타입에 결합하고 이를 중화시킬 수 있는 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편을 포함하며, 여기서 조성물은 적어도 약 200 ㎎ 내지 최대 약 3,500 ㎎의 양으로 정맥내 주입을 위해 제형화된다. 하나의 구현예에서, 조성물은 H1, H2, H5, H6, H8, H9, H11, H12, H13, H16, H17, H18 및 이의 변이체로부터 선택되는 하나 이상의 인플루엔자 A 바이러스 1군 서브타입; 및 H3, H4, H7, H10, H14 및 H15 및 이의 변이체로부터 선택되는 하나 이상의 인플루엔자 A 바이러스 2군 서브타입을 중화시킬 수 있는 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편을 포함한다.
하나의 구현예에서, 조성물은 H1, H2, H5, H6, H8, H9, H11, H12, H13, H16, H17, H18 및 이의 변이체로부터 선택되는 하나 이상의 인플루엔자 A 바이러스 1군 서브타입; 및 H3, H4, H7, H10, H14, H15 및 이의 변이체로부터 선택되는 하나 이상의 인플루엔자 A 바이러스 2군 서브타입을 제거할 수 있는 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편은 ADCC, CDC, 또는 이의 조합을 포함하는 기전을 통해 하나 이상의 인플루엔자 A 바이러스 1군 서브타입을 제거할 수 있다.
보다 특정한 구현예에서, 조성물은 SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 및 SEQ ID NO: 5에 나타낸 아미노산 서열로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 75% 동일한 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 중쇄 CDR을 포함하는 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편을 포함한다. 다른 구현예에서, 조성물은 SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 및 SEQ ID NO: 10에 나타낸 아미노산 서열로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 75% 동일한 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 경쇄 CDR을 포함하는 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편을 포함한다. 하나의 구현예에서, 조성물은 SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 및 SEQ ID NO: 5로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 75% 동일한 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 중쇄 CDR 및 SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 및 SEQ ID NO: 10에 나타낸 아미노산 서열로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 75% 동일한 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 경쇄 CDR을 포함하는 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편을 포함한다. 하나의 구현예에서, 조성물은 SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 및 SEQ ID NO: 5로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 중쇄 CDR을 포함하는 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편을 포함한다. 하나의 구현예에서, 조성물은 SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 및 SEQ ID NO: 10으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 경쇄 CDR을 포함하는 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편을 포함한다. 다른 구현예에서, 조성물은 SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 및 SEQ ID NO: 5로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 중쇄 CDR 및 SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 및 SEQ ID NO: 10으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 경쇄 CDR을 포함하는 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편을 포함한다.
하나의 구현예에서, 조성물은 SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열과 적어도 75% 동일한 아미노산 서열을 갖는 VH를 포함하는 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편을 포함한다. 하나의 구현예에서, 조성물은 SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열과 적어도 75% 동일한 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하는 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편을 포함한다. 하나의 구현예에서, 조성물은 SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열과 적어도 75% 동일한 아미노산 서열을 갖는 VH 및 SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열과 적어도 75% 동일한 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하는 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편을 포함한다. 하나의 구현예에서, 조성물은 SEQ ID NO: 2에 나타낸 아미노산 서열을 갖는 VH를 포함하는 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편을 포함한다. 하나의 구현예에서, 조성물은 SEQ ID NO: 7에 나타낸 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하는 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편을 포함한다. 하나의 구현예에서, 조성물은 SEQ ID NO: 2에 나타낸 아미노산 서열을 갖는 VH 및 SEQ ID NO: 7에 나타낸 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하는 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편을 포함한다. 하나의 구현예에서, 조성물은 MEDI8852를 포함한다. 다른 구현예에서, 조성물은 MEDI8852 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함한다.
다른 구현예에서, 용기 및 용기 내 조성물을 포함하는 제조 물품이 제공되며, 여기서 조성물은 인플루엔자 A 바이러스의 적어도 하나의 1군 서브타입 및 적어도 하나의 2군 서브타입의 인플루엔자 A 바이러스 헤마글루티닌에 결합할 수 있는 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편 및 적어도 약 200 ㎎ 및 최대 약 3,500 ㎎의 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편을 환자에 투여하기 위한 지침을 포함하는 라벨 또는 패키지 삽입물을 포함한다. 다른 구현예에서, 용기 및 용기 내 조성물을 포함하는 제조 물품이 제공되며, 여기서 조성물은 인플루엔자 A 바이러스 헤마글루티닌에 결합하고 인플루엔자 A 바이러스의 적어도 하나의 1군 서브타입 및 적어도 하나의 2군 서브타입을 중화시킬 수 있는 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편 및 적어도 약 200 ㎎ 내지 최대 약 3,500 ㎎의 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편을 환자에 투여하기 위한 지침을 포함하는 라벨 또는 패키지 삽입물을 포함한다.
하나의 구현예에서, 제조 물품은 H1, H2, H5, H6, H8, H9, H11, H12, H13, H16, H17, H18 및 이의 변이체로부터 선택되는 하나 이상의 인플루엔자 A 바이러스 1군 서브타입; 및 H3, H4, H7, H10, H14, H15 및 이의 변이체로부터 선택되는 하나 이상의 인플루엔자 A 바이러스 2군 서브타입을 중화시킬 수 있는 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편을 포함하는 조성물을 포함한다.
보다 특정한 구현예에서, 제조 물품은 SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 및 SEQ ID NO: 5에 나타낸 아미노산 서열로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 75% 동일한 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 중쇄 CDR을 포함하는 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편을 포함하는 조성물을 포함한다. 다른 구현예에서, 제조 물품은 SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 및 SEQ ID NO: 10에 나타낸 아미노산 서열로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 75% 동일한 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 경쇄 CDR을 포함하는 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편을 포함하는 조성물을 포함한다. 하나의 구현예에서, 제조 물품은 SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 및 SEQ ID NO: 5로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 75% 동일한 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 중쇄 CDR 및 SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 및 SEQ ID NO: 10에 나타낸 아미노산 서열로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 75% 동일한 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 경쇄 CDR을 포함하는 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편을 포함하는 조성물을 포함한다. 하나의 구현예에서, 제조 물품은 SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 및 SEQ ID NO: 5로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 중쇄 CDR을 포함하는 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편을 포함하는 조성물을 포함한다. 하나의 구현예에서, 제조 물품은 SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 및 SEQ ID NO: 10으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 경쇄 CDR을 포함하는 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편을 포함하는 조성물을 포함한다. 다른 구현예에서, 제조 물품은 SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 및 SEQ ID NO: 5로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 중쇄 CDR 및 SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 및 SEQ ID NO: 10으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 경쇄 CDR을 포함하는 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편을 포함하는 조성물을 포함한다.
하나의 구현예에서, 제조 물품은 SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열과 적어도 75% 동일한 아미노산 서열을 갖는 VH를 포함하는 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편을 포함하는 조성물을 포함한다. 하나의 구현예에서, 제조 물품은 SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열과 적어도 75% 동일한 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하는 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편을 포함하는 조성물을 포함한다. 하나의 구현예에서, 제조 물품은 SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열과 적어도 75% 동일한 아미노산 서열을 갖는 VH 및 SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열과 적어도 75% 동일한 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하는 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편을 포함하는 조성물을 포함한다. 하나의 구현예에서, 제조 물품은 SEQ ID NO: 2에 나타낸 아미노산 서열을 갖는 VH를 포함하는 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편을 포함하는 조성물을 포함한다. 하나의 구현예에서, 제조 물품은 SEQ ID NO: 7에 나타낸 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하는 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편을 포함하는 조성물을 포함한다. 하나의 구현예에서, 제조 물품은 SEQ ID NO: 2에 나타낸 아미노산 서열을 갖는 VH 및 SEQ ID NO: 7에 나타낸 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하는 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편을 포함하는 조성물을 포함한다.
하나의 구현예에서, 제조 물품은 MEDI8852를 포함하는 조성물을 포함한다. 다른 구현예에서, 제조 물품은 MEDI8852 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 조성물을 포함한다.
도 1은 250 ㎎, 750 ㎎, 1,500 ㎎ 및 3,000 ㎎, IV로 MEDI8852로 치료받는 대상체에 대한 평균(+/- 표준 편차) 농도 프로필을 나타내는 그래프이다(n=5명 내지 10명/군/시점).
도 2는 750 ㎎ 또는 3,000 ㎎ MEDI8852로 치료받는 대상체 집단(n=1000명 대상체/군)에 대해 시뮬레이션된 농도를 나타내는 그래프이다. 밴드는 90% 신뢰도 구간을 나타낸다. 실선 및 점선은 각각 750 ㎎ 및 3000 ㎎ 군에 대한 중앙 값을 나타낸다.
도입
대상체에서 인플루엔자 A 바이러스 감염의 치료, 감소 및/또는 예방에 관한 방법, 조성물, 키트 및 제조 물품이 본원에 기재된다.
용어
본 발명을 상세히 설명하기 전에, 본 발명은 특정 조성물 또는 공정 단계가 변할 수 있으므로 이에 제한되지 않음이 이해되어야 한다. 본 명세서 및 첨부된 청구범위에서 사용되는 단수 부정관사 및 정관사("a", "an" 및 "the")에는 문맥 상 명확히 달리 나타내지 않는 한 복수의 참조물이 포함됨이 주지되어야 한다.
용어 "약"은, 예를 들어 화합물, 조성물, 농축물 또는 제형물의 제조를 위해 사용되는 전형적인 측정 및 취급 절차를 통해; 이들 절차에서의 우발적인 오류를 통해; 방법을 수행하기 위해 사용되는 원료 또는 성분의 제조, 원천, 또는 순도에서의 차이를 통해, 그리고 유사한 고려사항에서 일어날 수 있는 수치 양에서의 변화를 나타낸다. 용어 "약"은 또한 특정한 초기 농도 또는 혼합물을 갖는 화합물, 조성물, 농축물 또는 제형물의 에이징으로 인해 상이한 양 및 특정한 초기 농도 또는 혼합물을 갖는 화합물, 조성물, 농축물 또는 제형물의 혼합 또는 가공으로 인해 상이한 양을 포괄한다. 용어 "약"으로 수식되는 경우, 여기에 첨부되는 청구범위는 이러한 양의 균등부를 포함한다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용되는 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 발명이 관련되는 분야의 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 예를 들어, 문헌[the Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show (2002) 2nd ed. CRC Press; The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 3rd ed. (1999) Academic Press; 및 the Oxford Dictionary Of Biochemistry and Molecular Biology, Revised (2000) Oxford University Press]은 당업자에게 본 발명에서 사용되는 여러 용어의 일반 사전을 제공한다.
아미노산은 본원에서 IUPAC-IUB 생화학 명명 위원회에서 권장되는 이의 일반적으로 알려져 있는 3글자 기호 또는 1글자 기호로 나타낼 수 있다. 마찬가지로, 뉴클레오타이드는 이의 일반적으로 승인되는 1글자 코드로 나타낼 수 있다.
항체의 가변 도메인, 상보성 결정 영역(CDR) 및 프레임워크 영역(FR)에서의 아미노산의 넘버링은 달리 나타내지 않는 한, 문헌[the Kabat definition as set forth in Kabat et al., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD]을 따른다. 상기 넘버링 시스템을 사용하여, 실제 선형 아미노산 서열은 가변 도메인의 FR 또는 CDR의 단축, 또는 여기로의 삽입에 대응하는 더 적거나 추가적인 아미노산을 함유할 수 있다. 예를 들어, 중쇄 가변 도메인은 H2의 잔기 52 뒤 단일 아미노산 삽입(Kabat에 따른 잔기 52a) 및 중쇄 FR 잔기 82 뒤 삽입된 잔기(예컨대 Kabat에 따른 잔기 82a, 82b 및 82c 등)를 포함할 수 있다. 잔기의 Kabat 넘버링은 항체 서열의 상동성 영역에서 "표준" Kabat 넘버링된 서열과의 정렬에 의해 주어진 항체에 대해 결정될 수 있다. 프레임워크 잔기의 최대 정렬은 빈번하게는 Fv 영역에 대해 사용될, 넘버링 시스템에서의 "스페이서" 잔기의 삽입을 필요로 한다. 또한, 임의의 주어진 Kabat 부위 번호에서 소정 개별 잔기의 정체는 종간 또는 대립유전자 개산(divergence)으로 인해 항체 사슬에 따라 변할 수 있다.
정의
용어 "핵산" 또는 "폴리뉴클레오타이드"는 비제한적으로 DNA 및 RNA 중합체를 포함하는 뉴클레오타이드의 중합체 및 변형된 올리고뉴클레오타이드, 예를 들어, 용액 중 생물학적 RNA 또는 DNA에 전형적이지 않은 염기를 갖는 올리고뉴클레오타이드, 예컨대 2'-O-메틸화 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 뉴클레오타이드 스트링에 대응하는 단량체 단위의 임의의 물리적 스트링을 포괄한다. 폴리뉴클레오타이드는 통상적인 포스포디에스테르 결합 또는 비-통상적인 결합, 예를 들어, 펩타이드 핵산(PNA)에서 확인되는 아미드 결합을 포함할 수 있다. 핵산은 단일쇄 또는 이중쇄일 수 있다. 달리 나타내지 않는 한, 핵산 서열은 명시적으로 나타내는 서열에 부가하여, 상보적 서열을 포괄한다.
용어 "유전자"는 생물학적 기능과 연관되는 핵산을 나타내기 위해 광의적으로 사용된다. 따라서, 유전자는 이의 발현을 위해 요구되는 코딩 서열 및/또는 조절 서열을 포함한다. 용어 "유전자"는 특정 게놈 서열뿐만 아니라 cDNA 또는 그 게놈 서열에 의해 인코딩되는 mRNA에 적용된다. 유전자는 또한, 예를 들어 다른 단백질에 대한 인식 서열을 형성하는 비-발현 핵산 서열을 포함한다. 비-발현 조절 서열은 조절 단백질, 예컨대 전사 인자가 결합하여 인접한 또는 근처 서열의 전사를 일으키는 "프로모터" 및 "인핸서"를 포함한다. 예를 들어, 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하나 이상의 코딩 영역과 작동 가능하게 연관된 프로모터 및/또는 다른 전사 또는 번역 제어 요소를 포함할 수 있다. "작동 가능하게 연관된"은 유전자 산물의 발현을 조절 서열(들)의 영향 또는 제어 하에 배치하는 방식으로 하나 이상의 조절 서열과 연관되는 유전자 산물에 대한 코딩 영역을 나타낸다. "유전자의 발현" 또는 "핵산의 발현"은 문맥에 의해 나타나는, DNA의 RNA로의 전사, RNA의 폴리펩타이드로의 번역, 또는 전사 및 번역 모두를 나타낸다.
본원에서 사용되는 용어 "코딩 영역"은 번역된 아미노산일 수 있는 코돈을 포함하는 핵산 부분을 나타낸다. "정지 코돈"(TAG, TGA, 또는 TAA)은 아미노산으로 번역되지 않지만, 일반적으로 코딩 영역의 일부로 간주된다. 그러나, 인접 서열, 예를 들어 프로모터, 리보솜 결합 부위, 전사 종결자 및 인트론은 코딩 영역의 일부로 간주되지 않는다. 벡터는 단일 코딩 영역을 함유할 수 있거나, 2개 이상의 코딩 영역을 포함할 수 있다. 추가적으로, 벡터, 폴리뉴클레오타이드, 또는 핵산은 관심 유전자 산물, 예를 들어 항체, 또는 항원-결합 단편, 이의 변이체 또는 유도체를 인코딩하는 핵산에 융합되거나 융합되지 않은 이종성 코딩 영역을 인코딩할 수 있다. 이종성 코딩 영역은 비제한적으로 특화된 요소 또는 모티프, 예컨대 분비 신호 펩타이드 또는 이종성 기능적 도메인을 포함한다.
용어 "벡터"는 그에 의해 핵산이 증식하고/하거나 유기체, 세포 또는 세포 성분 간에 전달될 수 있는 수단을 나타낸다. 벡터는 비제한적으로 플라스미드, 바이러스, 박테리오파지, 프로-바이러스, 파지미드, 트랜스포존 및 인공 염색체를 포함하며, 이는 자율적으로 복제할 수 있거나 숙주 세포의 염색체 내로 통합될 수 있다. 벡터는 또한 비제한적으로 네이키드(naked) RNA 폴리뉴클레오타이드, 네이키드 DNA 폴리뉴클레오타이드, 동일한 가닥 내에 DNA 및 RNA를 모두 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 폴리-라이신-접합 DNA 또는 RNA, 펩타이드-접합 DNA 또는 RNA, 리포좀-접합 DNA를 포함하며, 이는 자율적으로 복제하지 않는다. "발현 벡터"는 벡터, 예컨대 플라스미드이며, 이는 내부에 통합된 핵산의 발현뿐만 아니라 복제를 촉진할 수 있다. 전형적으로, 발현될 핵산은 프로모터 및/또는 인핸서에 "작동 가능하게 연결되며", 프로모터 및/또는 인핸서에 의한 전사 조절 제어를 거친다.
용어 "숙주 세포"는 이종성 핵산, 예컨대 벡터를 함유하며, 이 핵산의 복제 및/또는 발현을 지지하는 세포를 나타낸다. 숙주 세포는 원핵 세포, 예컨대 대장균, 또는 진핵 세포, 예컨대 효모, 곤충, 양서류, 조류 또는 인간 세포를 포함하는 포유류 세포, 예를 들어, HEp-2 세포 및 Vero 세포일 수 있다.
이종성 또는 단리된 핵산에 대해 나타내는 경우, 용어 "도입된"은 핵산이 세포 게놈 내로 통합되어, 자율 레플리콘으로 전환되거나 일시적으로 발현될 수 있는 진핵 또는 원핵 세포 내로의 핵산 전달을 나타낸다. 이 용어는 "감염", "전달감염", "형질전환" 및 "형질도입"과 같은 방법을 포함한다. 비제한적으로 전기천공, 인산칼슘 침전, 지질 매개 전달감염 및 리포펙션을 포함하는 다양한 방법이 핵산을 숙주 세포 내로 도입하기 위해 채택될 수 있다.
용어 "발현"은 유전자로부터의 정보가 기능적 유전자 산물의 합성에서 사용되는 공정을 나타낸다. 유전자 산물은 종종 단백질이지만, 기능적 RNA일 수도 있다. 유전자 발현은 대응하는 rRNA, tRNA, mRNA, snRNA 및/또는 단백질 수준에서의 유전자 산물의 존재를 결정함으로써 검출될 수 있다.
용어 "폴리펩타이드"는 아미드 결합(펩타이드 결합으로도 알려져 있음)에 의해 선형으로 연결된 2개 이상의 아미노산 잔기, 예컨대 펩타이드 또는 단백질을 포함하는 분자를 나타낸다. 용어 "폴리펩타이드"는 2개 이상의 아미노산의 임의의 쇄 또는 쇄들을 나타내며, 특정 길이의 산물을 나타내는 것은 아니다. 따라서, 펩타이드, 디펩타이드, 트리펩타이드, 올리고펩타이드, "단백질", "아미노산쇄" 또는 2개 이상의 아미노산의 쇄 또는 쇄들을 나타내기 위해 사용되는 임의의 다른 용어가 "폴리펩타이드"의 정의 내에 포함되며, 용어 "폴리펩타이드"는 임의의 이러한 용어 대신에, 또는 이와 상호 교환 가능하게 사용될 수 있다. 용어 "폴리펩타이드"는 또한 비제한적으로 글리코실화, 아세틸화, 인산화, 아미드화, 공지된 보호기/차단기에 의한 유도체화, 단백분해 절단, 또는 비-자연적 생성 아미노산에 의한 변형을 포함하는, 폴리펩타이드의 발현-후 변형 산물을 나타내려는 것으로 의도된다. 폴리펩타이드는 자연적인 생물학적 원천으로부터 유래되거나 재조합 기술에 의해 생성될 수 있고, 반드시 지명된 핵산 서열로부터 번역되는 것은 아니다. 이는 화학적 합성에 의한 것을 포함하는 임의의 방식으로 생성될 수 있다. 폴리펩타이드의 아미노산 잔기는 자연적 또는 비-자연적일 수 있고, 비치환되거나, 비변형되거나, 치환되거나, 변형될 수 있다. "아미노산 서열"은 문맥에 따라, 아미노산 잔기의 중합체, 예를 들어, 단백질 또는 폴리펩타이드이거나, 또는 아미노산 중합체를 나타내는 특징적 스트링이다.
본원에서 사용되는 용어 "항체"는 항원의 항원 결정기의 특징부와 상보적인 내부 표면 형태 및 전하 분포를 갖는 3차원 결합 공간을 가지는 폴리펩타이드쇄의 폴딩으로 형성되는 적어도 하나의 결합 도메인을 포함하는 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드 그룹을 나타낸다. 항체는 전형적으로 두 쌍의 폴리펩타이드쇄를 포함하는 사량체 형태를 가지며, 각각의 쌍은 하나의 "경쇄" 및 하나의 "중쇄"를 갖고, 여기서 각각의 경쇄/중쇄 쌍의 가변 영역은 항체 결합 부위를 형성한다. 전형적으로, 각각의 경쇄는 하나의 공유 디설파이드 결합에 의해 중쇄에 연결되는 반면, 디설파이드 결합의 수는 상이한 면역글로불린 이소형의 중쇄 별로 다르다. 각각의 중쇄 및 경쇄는 또한 규칙적으로 배열된 사슬 내 디설파이드 가교를 갖는다. 전형적으로, 각각의 중쇄는 하나의 말단에 가변 도메인(VH)에 이어 여러 불변 도메인(CH)을 가지며 각각의 경쇄는 하나의 말단에 가변 도메인(VL) 및 그 다른 말단에 불변 도메인(CL)을 갖고, 경쇄의 불변 도메인은 중쇄의 제1 불변 도메인과 정렬되며, 경쇄 가변 도메인은 중쇄의 가변 도메인과 정렬된다.
본원에서 사용되는 용어 "항체", "항체들" 및 "면역글로불린"은 모노클로날 항체(전장 모노클로날 항체 포함), 폴리클로날 항체, 적어도 2개의 상이한 에피토프 결합 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체(예컨대, 이중특이적 항체), CDR-그래프팅, 인간 항체, 인간화 항체, 카멜화 항체, 키메라 항체, 단일쇄 Fv(scFv), 단일쇄 항체, 단일 도메인 항체, Fab 단편, Fab' 단편, F(ab')2 단편, 요망되는 생물학적 활성을 나타내는 항체 단편(예컨대, 항원 결합 부분), 디설파이드-결합 Fv(dsFv) 및 항-개별특이형(항-Id) 항체, 인트라바디 및 에피토프-결합 단편 또는 상기의 임의의 유도체를 포괄한다. 특히, 항체는 적어도 하나의 항원-결합 부위를 함유하는 면역글로불린 분자 및 면역글로불린 분자의 면역 활성 단편을 포함한다. 면역글로불린 분자는 임의의 이소형(예컨대, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 및 IgY), 하위이소형(예컨대, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2) 또는 동종이형(예컨대, Gm, 예컨대, G1m(f, z, a 또는 x), G2m(n), G3m(g, b, 또는 c), Am, Em 및 Km(1, 2 또는 3))일 수 있다. 항체는 비제한적으로 인간, 원숭이, 돼지, 말, 토끼, 개, 고양이 및 마우스를 포함하는 임의의 포유류 종, 또는 다른 동물, 예컨대 비제한적으로 닭을 포함하는 조류로부터 유래될 수 있다. 항체는, 예를 들어, 정제를 촉진하기 위한 태그인, 이종성 폴리펩타이드 서열로 융합될 수 있다.
항체는 요망되는 효과기 기능 또는 혈청 반감기를 제공하기 위해 Fc 영역이 변형될 수 있다. 아래 섹션에서 보다 상세히 논의된 바와 같이, 적절한 Fc 영역을 포함하며, 세포 표면 상에 결합된 네이키드 항체는 항체-의존적 세포성 세포독성(ADCC)을 통해, 보체 의존적 세포독성(CDC)으로 보체를 모집하여, 또는 인플루엔자 A 바이러스 상에서 결합된 항체를 인식하는 하나 이상의 효과기 리간드를 발현하는 비특이적 세포독성 세포를 모집한 후 항체 의존적 세포-매개 식균작용(ADCP)으로 세포의 식균작용을 유도하여, 또는 일부 다른 기전에 의해 세포독성을 유도할 수 있다. 대안적으로 효과기 기능을 제거하거나 감소시키는 것이 바람직한 경우, 예를 들어, 부작용 또는 치료 합병증을 감소시키기 위해, 변형된 Fc 영역이, 예를 들어 FcRn에 대한 결합 친화도를 증가시키고 혈청 반감기를 증가시키기 위해 사용될 수 있다. 대안적으로, Fc 영역은 혈청 반감기를 증가시키기 위한 모이어티, 예컨대 PEG 또는 알부민에 접합될 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "변이체"는 모체 항체 서열에서 하나 이상의 아미노산 잔기(들)의 부가, 결실 및/또는 치환에 의해 "모체" 항체 아미노산 서열과 아미노산 서열이 상이한 항체를 나타낸다. 변이체 항체는 하나 이상의 치환, 내부 결실을 포함하는 결실, 융합 단백질을 산출하는 부가를 포함하는 부가, 또는 예를 들어 MEDI8852를 포함하는 모체 항체 또는 SEQ ID NO: 2 또는 SEQ ID NO: 7에 나타낸 아미노산 서열에서 아미노산 잔기의 보존적 치환을 포함할 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "서열 동일성 백분율(%)", 또는 "상동성"은 서열을 정렬하고 필요한 경우 최대 서열 동일성 백분율을 달성하기 위해 갭을 도입한 후 그리고 서열 동일성의 일환으로 임의의 보존적 치환을 고려하지 않고, 참조 서열, 예를 들어, 모체 항체 서열에서 아미노산 잔기 또는 뉴클레오타이드와 동일한 후보 서열에서의 아미노산 잔기 또는 뉴클레오타이드의 백분율을 나타낸다. 서열의 정렬은 수동으로 또는 문헌[Smith and Waterman (1981) Ads App. Math. 2, 482]의 상동성 알고리즘; 문헌[Neddleman and Wunsch (1970) J. Mol. Biol. 48, 443]의 알고리즘; 문헌[Pearson and Lipman (1988) Proc. Natl Acad. Sci. USA 85, 2444]의 방법을 사용해서, 또는 이들 알고리즘에 기반하는 하나 이상의 컴퓨터 프로그램(GAP, BESTFIT, FASTA, BLAST P, BLAST N 및 TFASTA, Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Drive, Madison, Wis.)을 사용해서 생성될 수 있다.
용어 "보존적 아미노산 치환"은 제1 아미노산의 특성과 유사한 화학적 및/또는 물리적 특성(예컨대, 전하, 구조, 극성, 소수성/친수성)을 갖는 제2 아미노산에 의한 제1 아미노산의 대체를 나타낸다. 보존적 아미노산 치환은 관여되는 잔기의 극성, 전하, 용해도, 소수성, 친수성, 및/또는 양친매성 성질에서의 유사성에 근거하여 수행될 수 있다. 예를 들어, 무극성(소수성) 아미노산은 알라닌, 류신, 이소류신, 발린, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판 및 메티오닌을 포함하며; 극성 중성 아미노산은 글리신, 세린, 트레오닌, 시스테인, 티로신, 아스파라긴 및 글루타민을 포함하고; 양으로 하전된(염기성) 아미노산은 아르기닌, 라이신 및 히스티딘을 포함하고; 음으로 하전된(산성) 아미노산은 아스파르트산 및 글루탐산을 포함한다. 또한, 글리신 및 프롤린은 사슬 배향에 영향을 미칠 수 있는 잔기이다. 비-보존적 치환에는 이들 클래스 중 하나의 구성원의 다른 클래스의 구성원에 대한 교환이 수반될 것이다. 또한, 요망되는 경우, 비-전통적 아미노산 또는 화학적 아미노산 유사체가 항체 서열 내로의 치환 또는 부가로 도입될 수 있다. 비-전통적 아미노산은 비제한적으로 일반 아미노산의 D-이성질체, α-아미노 이소부티르산, 4-아미노부티르산, Abu, 2-아미노부티르산, γ-Abu, ε-Ahx, 6-아미노 헥산산, Aib, 2-아미노 이소부티르산, 3-아미노 프로피온산, 오르니틴, 노르류신, 노르발린, 하이드록시프롤린, 사르코신, 시트룰린, 시스테인산, t-부틸글리신, t-부틸알라닌, 페닐글리신, 사이클로헥실알라닌, β-알라닌, 플루오로-아미노산, 디자이너 아미노산, 예컨대 β-메틸 아미노산, Cα-메틸 아미노산, Nα-메틸 아미노산 및 일반적인 아미노산 유사체를 포함한다.
항체 변이체는 항체의 하나 이상의 가변 및/또는 프레임워크 영역에 도입된, 예를 들어, 하나 이상의 치환, 결실 및/또는 부가를 포함하는 하나 이상의 아미노산 변경에 의해 생성될 수 있다. 프레임워크 영역 잔기의 하나 이상의 변경은 항원에 대한 항체의 결합 친화도 개선을 일으킬 수 있다. 이는 이러한 변화가 인간화 항체에 대해 수행되는 경우 특히 해당될 수 있으며, 여기서 프레임워크 영역은 CDR 영역과 상이한 종으로부터 유래될 수 있다. 변형될 수 있는 프레임워크 영역 잔기의 예는 직접 항원에 비-공유 결합하며(Amit et al., (1986) Science, 233:747-753); CDR의 입체형태와 상호작용하고/이에 영향을 미치고(Chothia et al., (1987) J. Mol. Biol., 196:901-917); 및/또는 VL-VH 계면에 참여하는(US 특허 번호 5,225,539 및 6,548,640) 것들을 포함한다. 하나의 구현예에서, 약 1개 내지 약 5개 프레임워크 잔기가 변경될 수 있다.
변경된 항체를 생성하기 위한 하나의 유용한 절차는 "알라닌 스캐닝 돌연변이화"로 불린다(Cunningham and Wells, (1989) Science, 244:1081-1085). 이 방법에서, 아미노산과 표적 항원의 상호작용을 변경하기 위해 하나 이상의 고가변 영역 잔기(들)가 알라닌 또는 폴리알라닌 잔기(들)에 의해 대체된다. 이어서 치환에 대한 기능적 민감성을 실증하는 고가변 영역 잔기(들)가 치환 부위에서 또는 치환 부위를 위한 부가 또는 다른 돌연변이의 도입에 의해 정련된다. 따라서, 아미노산 서열 변화를 도입하기 위한 부위는 사전 결정되지만, 돌연변이 자체의 성질이 사전 결정될 필요는 없다. 그 후, 이러한 방식으로 생성되는 Ala-돌연변이체는 생물학적 활성에 대해 스크리닝될 수 있다.
용어 "특이적으로 결합한다"는 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 변이체, 또는 유도체가 무작위, 미관련 에피토프에 결합하는 것보다 더 쉽게 그 항원 결합 도메인을 통해 에피토프에 결합함을 나타낸다. 용어 "특이성"은 소정 항체 또는 이의 단편이 소정 에피토프에 결합하는 상대적 친화도를 정성적으로 나타내기 위해 본원에서 사용된다.
본원에서 사용되는 용어 "에피토프"는 항체 결합 도메인에 결합할 수 있는 단백질 결정기를 나타낸다. 에피토프는 보통 분자의 화학 활성 표면기, 예컨대 아미노산 또는 당 측쇄를 포함하며 보통 특정한 3차원 구조 특징뿐만 아니라 특정한 전하 특징을 갖는다. 입체형태 및 비-입체형태 에피토프는 후자가 아닌 전자에 대한 결합이 변성 용매의 존재 하에 소실된다는 점에서 구별된다. 본원에서 사용되는 용어 "불연속 에피토프"는 단백질의 일차 서열에서 적어도 2개의 별개 영역으로부터 형성되는 단백질 항원 상의 입체형태 에피토프를 나타낸다.
본원에서 사용되는 용어 "친화도"는 개별 에피토프의 면역글로불린 분자의 결합 도메인과의 결합 강도의 척도를 나타낸다.
용어 "단리된"은 생물학적 물질, 예컨대 핵산 또는 단백질을 나타내며, 이는 그 자연 생성 환경에서 이와 보통 동반되거나 상호작용하는 성분이 실질적으로 없다. 대안적으로, 단리된 물질은 그 자연 환경에서 그 물질과 함께 확인되지 않는 물질을 포함할 수 있다. 예를 들어, 물질이 그 자연 환경, 예컨대 세포에 있는 경우, 물질은 그 환경에서 확인되는 물질에 대해 원상태가 아닌 세포 내 위치에 배치되었을 수 있다. 예를 들어, 자연 생성 핵산은 이것이 비-자연 생성 수단에 의해 그 핵산에 대해 원상태가 아닌 게놈 자위(locus)로 도입되는 경우, 단리된 것으로 간주될 수 있다. 이러한 핵산을 또한 "이종성" 핵산으로 나타낼 수 있다.
용어 "재조합"은 인간 개입에 의해 인공적으로 또는 합성적으로 변경된 물질을 나타낸다. 변경은 그 자연 환경 또는 상태 내의 물질 상에서 수행될 수 있고 또는 이로부터 제거될 수 있다. 예를 들어, "재조합 핵산"은, 예를 들어, 클로닝, DNA 셔플링 또는 다른 절차 동안 핵산 재조합에 의해, 또는 화학적 또는 다른 돌연변이화에 의해 제조되는 핵산을 나타낼 수 있으며; "재조합 폴리펩타이드" 또는 "재조합 단백질"은 재조합 핵산의 발현에 의해 생성되는 폴리펩타이드 또는 단백질을 나타낼 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "조작된"은, 예를 들어, 재조합 기법, 시험관내 펩타이드 합성, 펩타이드의 효소적 또는 화학적 커플링 또는 이의 조합을 포함하는 합성 수단에 의한 핵산 또는 폴리펩타이드 분자의 조작을 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "유효량" 또는 "치료 유효량"은 주어진 조건 및 투여 요법에 있어서 요망되는 임상 결과를 실현하기 위해 필요하거나 충분한 치료 조성물의 양, 예를 들어, 대상체에서 인플루엔자 감염을 예방, 감소 및/또는 치료할 수 있는 화합물의 농도를 달성하기 충분한 양을 나타낸다. 이러한 양 및 농도는 당업자에 의해 결정될 수 있고, 전형적으로는 비제한적으로 치료받을 병태, 선택된 투여 경로, 투여되는 실제 화합물, 개별 환자의 연령, 체중 및 반응 및 환자 증상의 중증도를 포함하는 관련 상황의 견지에서, 의사에 의해 결정될 것이다.
본원에서 사용되는 용어 "치료 조성물"은 치료 용도를 갖는 화합물 또는 조성물을 나타내며, 비제한적으로 생물학적 화합물, 예컨대 항체, 단백질 및 핵산뿐만 아니라 화학적으로 합성되는 소형 유기 분자 화합물을 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "약학 조성물"은 약제학적으로 허용 가능한 담체 및 요망되는 경우, 하나 이상의 희석제 또는 부형제와 함께 치료제의 치료 유효량을 포함하는 조성물을 나타낸다. 본원에서 사용되는 용어 "약제학적으로 허용 가능한"은 포유류, 보다 구체적으로 인간에서의 사용에 대해 연방 또는 주 정부의 규제 당국에 의해 승인되거나 미국 약전, 유럽 약전 또는 다른 일반적으로 인식되는 약전에 등재되어 있음을 의미한다.
본원에서 사용되는 용어 "치료" 또는 "치료하는"은 치료적 처치 및 예방적 또는 방지적 조치를 모두 나타내며, 여기서 목적은 인플루엔자 감염의 하나 이상의 증상을 안정화하거나, 예방하거나, 완화하거나, 감소시키는 것이거나 인플루엔자 감염의 진행을 지연하거나, 예방하거나, 억제하는 것이다. 치료는 또한 대상체에서 감염성 제제, 예컨대 인플루엔자 A 바이러스의 제거 또는 감소를 나타낼 수 있으며, "치료"는 또한 치료를 받지 않는 경우 예상되는 생존 대비 생존의 연장을 의미할 수 있다. 치료는 감염이 완전 근치됨을 의미할 필요는 없다.
본원에서 사용되는 용어 "대상체" 또는 "환자"는 비제한적으로 인간 및 비-인간 영장류, 예컨대 침팬지 및 다른 유인원 및 원숭이 종을 포함하는 다른 영장류; 농장 동물, 예컨대 소, 양, 돼지, 염소 및 말; 가축 포유류, 예컨대 개 및 고양이; 설치류를 포함하는 실험실 동물, 예컨대 마우스, 래트 및 기니아픽; 가축, 야생 및 게임용 조류를 포함하는 조류, 예컨대 닭, 칠면조 및 다른 가금 조류, 오리 및 거위를 포함하는 원삭동물 아문의 임의의 구성원을 나타낸다. 용어 "포유류" 및 "동물"이 이 정의에 포함된다. 성체 및 신생 포유류가 모두 포함되는 것으로 의도된다.
본원에서 사용되는 용어 "중화시킨다"는 항체, 또는 이의 항원 결합 단편이 감염성 제제, 예컨대 인플루엔자 A 바이러스에 결합하고 감염성 제제의 생물학적 활성, 예를 들어, 병독성을 감소시키는 능력을 나타낸다. 하나의 구현예에서, 항체 또는 이의 단편은 인플루엔자 A 바이러스의 적어도 하나의 특정 에피토프 또는 항원 결정기에 면역특이적으로 결합한다. 보다 특정한 구현예에서, 항체 또는 이의 단편은 인플루엔자 A 바이러스 HA 줄기 단백질의 적어도 하나의 특정 에피토프 또는 항원 결정기에 면역특이적으로 결합한다.
항체는 바이러스의 생활주기 동안 다양한 시점에 감염성 제제, 예컨대 인플루엔자 A 바이러스의 활성을 중화시킬 수 있다. 예를 들어, 항체는 바이러스 및 하나 이상의 세포 표면 수용체의 상호작용을 방해함으로써 표적 세포에 대한 바이러스 부착을 방해할 수 있다. 대안적으로, 항체는, 예를 들어, 수용체-매개 세포내섭취에 의한 바이러스 내재화를 방해함으로써, 바이러스와 그 수용체의 하나 이상의 부착-후 상호작용을 방해할 수 있다.
항-인플루엔자 A 항체
인플루엔자 A 바이러스에 면역특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 단편을 포함하는 방법, 조성물 및 제조 물품이 본원에 기재된다. 하나의 구현예에서, 항체 또는 이의 단편은 인플루엔자 A 바이러스에 특이적인 적어도 하나의 에피토프에 면역특이적으로 결합한다. 보다 특정한 구현예에서, 항체 또는 이의 단편은 인플루엔자 A 바이러스 HA 줄기 단백질 상의 에피토프에 면역특이적으로 결합한다. 하나의 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 본원에 기재되는 인플루엔자 A 바이러스의 하나 이상의 1군 서브타입 및 하나 이상의 2군 서브타입에 결합하고/하거나 이를 중화시킬 수 있다. 하나의 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 적어도 H1, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, H11, H12, H13, H14, H15, H16, H17, H18 또는 모든 인플루엔자 A HA 서브타입 가운데 보존되는 에피토프에 결합한다. 다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 H1, H2, H5, H6, H8, H9, H11, H12, H13 및 H16으로부터 선택되는 하나 이상의, 또는 적어도 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 또는 10개의 인플루엔자 A 바이러스 1군 서브타입, 및 H3, H4, H7, H10, H14 및 H15로부터 선택되는 하나 이상의, 또는 적어도 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 6개의 2군 서브타입 가운데 보존되는 에피토프에 결합한다.
하나의 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 약 0.01 ㎍/㎖ 내지 약 5 ㎍/㎖, 또는 약 0.01 ㎍/㎖ 내지 약 0.5 ㎍/㎖, 또는 약 0.01 ㎍/㎖ 내지 약 0.1 ㎍/㎖, 또는 약 5 ㎍/㎖, 1 ㎍/㎖, 0.5 ㎍/㎖, 0.1 ㎍/㎖, 또는 0.05 ㎍/㎖ 미만의 EC50으로 적어도 H1, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, H11, H12, H13, H14, H15, H16, H17 또는 H18 또는 모든 인플루엔자 A 서브타입에 결합한다. 다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 약 0.01 ㎍/㎖ 내지 약 5 ㎍/㎖, 또는 약 0.01 ㎍/㎖ 내지 약 0.5 ㎍/㎖, 또는 약 0.01 ㎍/㎖ 내지 약 0.1 ㎍/㎖, 또는 약 5 ㎍/㎖, 1 ㎍/㎖, 0.5 ㎍/㎖, 0.1 ㎍/㎖, 또는 0.05 ㎍/㎖ 미만의 EC50으로 H1, H2, H5, H6, H8, H9, H11, H12, H13 및 H16으로부터 선택되는 하나 이상의, 또는 적어도 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 또는 10개의 인플루엔자 A 바이러스 1군 서브타입 및 H3, H4, H7, H10, H14 및 H15로부터 선택되는 하나 이상의, 또는 적어도 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 6개의 2군 서브타입에 결합한다. 하나의 구현예에서, 항체는 약 0.01 ㎍/㎖ 내지 약 5 ㎍/㎖, 또는 약 0.01 ㎍/㎖ 내지 약 0.5 ㎍/㎖, 또는 약 0.01 ㎍/㎖ 내지 약 0.1 ㎍/㎖, 또는 약 5 ㎍/㎖, 1 ㎍/㎖, 0.5 ㎍/㎖, 0.1 ㎍/㎖, 또는 0.05 ㎍/㎖ 미만의 EC50으로, 범유행을 유도할 가능성을 갖는 하나 이상의 인플루엔자 A 서브타입, 예컨대 H2, H4, H5, H6, H7 및 H9에 결합한다. 하나의 구현예에서, 항체는 약 0.01 ㎍/㎖ 내지 약 5 ㎍/㎖, 또는 약 0.01 ㎍/㎖ 내지 약 0.5 ㎍/㎖, 또는 약 0.01 ㎍/㎖ 내지 약 0.1 ㎍/㎖, 또는 약 5 ㎍/㎖, 1 ㎍/㎖, 0.5 ㎍/㎖, 0.1 ㎍/㎖, 또는 0.05 ㎍/㎖ 미만의 EC50으로 계절성 H1N1 및 H3N2 바이러스에 결합한다.
하나의 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 HA2의 줄기 영역에 배치된 에피토프를 인식한다. 보다 특정한 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 HA2의 보존된 줄기 영역에서 입체형태 에피토프에 결합한다. 하나의 구현예에서, 에피토프는 접촉 잔기로서 HA2의 줄기 영역에서 위치 18, 19, 42, 45로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산을 포함한다(위치는 문헌[Weiss et al., (1990) J. Mol. Biol. 212, 737-761]에 기재되는 H3 넘버링 시스템에 따라 넘버링됨). 보다 특정한 구현예에서, 에피토프는 접촉 잔기로서 HA2의 줄기 영역에서 18, 19, 42 및 45로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산을 포함한다. 추가 구현예에서, 에피토프는 접촉 잔기로서 HA2의 줄기 영역에서 아미노산 18, 19, 42 및 45를 포함한다. 다른 추가 구현예에서, 에피토프는 접촉 잔기로서 HA2의 줄기 영역에서 아미노산 18, 19 및 42를 포함한다.
하나의 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 바이러스 및 엔도좀 막 간의 HA 매개 융합을 위해 요구되는 pH 유도된 입체형태 변화를 억제함으로써 인플루엔자 A의 활성을 중화시킨다. 다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 HA0 단백질의 HA1 및 HA2 서브유닛으로의 프로테아제 절단을 억제하여 융합 펩타이드의 접근성을 방해함으로써 인플루엔자 A의 활성을 중화시킨다. 다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인플루엔자 A 바이러스의 세포-대-세포 전파를 억제한다.
다른 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 바이러스 제거에 의해 인플루엔자 A 바이러스 감염의 활성을 감소시킬 수 있다. 하나의 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은, 예를 들어, ADCC, ADCP 및 CDC를 포함하는 하나 이상의 Fc-효과기 기능을 통해 바이러스를 제거할 수 있다.
하나의 구현예에서, 인플루엔자 A 바이러스에 특이적으로 결합하는 항체는 2013년 10월 2일에 출원된 미국 가출원 번호 61/885,808 및 2014년 5월 23일에 출원된 62/002,414, 그리고 2014년 10월 1일에 출원된 PCT 출원 번호 PCT/US2014/058652에 기재되어 있다. 각각의 이러한 개시는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
MEDI8852
하나의 구현예에서, 항-인플루엔자 A 항체는 인플루엔자 HA 단백질의 보존된 줄기 영역에 결합하며 독감 바이러스의 다수 패널에 결합하고/하거나 이를 중화시킬 수 있는 인간 IgG1 카파 모노클로날 항체(mAb)인 MEDI8852를 포함한다.
하나의 구현예에서, 항체는 MEDI8852의 적어도 하나의 VH 및/또는 VL 서열과 적어도 언급되는 동일성 백분율을 갖는 VH 및/또는 VL을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체는 SEQ ID NO: 2의 VH 아미노산 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일성을 갖는 VH 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구현예에서, 항체는 SEQ ID NO: 2의 VH 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 VH 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구현예에서, 항체는 SEQ ID NO: 7의 VL 아미노산 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일성을 갖는 VL 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구현예에서, 항체는 SEQ ID NO: 7의 VL 아미노산 서열과 적어도, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 VL 아미노산 서열을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체는 SEQ ID NO: 2의 VH 아미노산 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일성을 갖는 VH 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 7의 VL 아미노산 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일성을 갖는 VL 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구현예에서, 항체는 SEQ ID NO: 2의 VH 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 VH 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 7의 VL 아미노산 서열과 적어도, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 VL 아미노산 서열을 포함한다.
상보성 결정 영역(CDR)
가변 도메인(VH 및 VL)은 항원-결합 영역을 포함하지만; 변동성이 항체의 가변 도메인에 걸쳐 균일하게 분포되지는 않는다. 이는 경쇄(VL 또는 VK) 및 중쇄(VH) 가변 도메인 모두에서, 상보성 결정 영역(CDR)으로 불리는 절편에 집중되어 있다. 가변 도메인의 보다 고도로 보존된 부분은 프레임워크 영역(FR)으로 불린다. 원상태 중쇄 및 경쇄 각각의 가변 도메인은 β-시트 구조를 연결하고 일부 경우 그 일부를 형성하는 루프를 형성하는 3개의 CDR에 의해 연결되는, 대략 β-시트 배치를 채택하는 4개의 FR을 포함한다. 각 쇄에서의 CDR은 FR에 의해 가까운 인근에서 함께 유지되며, 다른 쇄로부터의 CDR과 함께 항체의 항원-결합 부위 형성에 기여한다. 중쇄의 3개 CDR은 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3으로 명명되며, 경쇄의 3개 CDR은 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3으로 명명된다. Kabat 넘버링 시스템을 사용하여, HCDR1은 대략 아미노산 31(즉, 첫 번째 시스테인 잔기 후 대략 9개 잔기)에서 시작되며, 대략 5개 내지 7개 아미노산을 포함하고, 다음 티로신 잔기에서 끝난다. HCDR2는 HCDR1의 종료 후 15번째 잔기에서 시작되며, 대략 16개 내지 19개 아미노산을 포함하고, 다음 아르기닌 또는 라이신 잔기에서 끝난다. HCDR3은 HCDR2의 종료 후 대략 33번째 아미노산 잔기에서 시작되며; 3개 내지 25개 아미노산을 포함하고; 서열 W-G-X-G에서 끝나며, 식 중 X는 임의의 아미노산이다. LCDR1은 대략 잔기 24(즉, 시스테인 잔기 뒤)에서 시작되며, 대략 10개 내지 17개 잔기를 포함하고, 다음 티로신 잔기에서 끝난다. LCDR2는 LCDR1의 종료 후 대략 16번째 잔기에서 시작되며, 대략 7개 잔기를 포함한다. LCDR3은 LCDR2의 종료 후 대략 33번째 잔기에서 시작되며; 대략 7개 내지 11개 잔기를 포함하고; 서열 F-G-X-G에서 끝나며, 식 중 X는 임의의 아미노산이다. CDR은 항체에 따라 상당히 다르며, 정의 상, Kabat 공통 서열과 상동성을 나타내지 않을 것이다.
하나의 구현예에서, 항-인플루엔자 A 항체는 HCDR1(SEQ ID NO: 3), HCDR2(SEQ ID NO: 4) 및 HCDR3(SEQ ID NO: 5)으로부터 선택되는 중쇄 CDR과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 하나 이상의 중쇄 CDR을 포함한다. 다른 구현예에서, 항-인플루엔자 A 항체는 LCDR1(SEQ ID NO: 8), LCDR1(SEQ ID NO: 9) 및 LCDR1(SEQ ID NO: 10)로부터 선택되는 경쇄 CDR과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 하나 이상의 경쇄 CDR을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-인플루엔자 A 항체는 HCDR1(SEQ ID NO: 3), HCDR2(SEQ ID NO: 4) 및 HCDR3(SEQ ID NO: 5)으로부터 선택되는 중쇄 CDR과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 하나 이상의 중쇄 CDR 및 LCDR1(SEQ ID NO: 8), LCDR1(SEQ ID NO: 9) 및 LCDR1(SEQ ID NO: 10)로부터 선택되는 경쇄 CDR과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 하나 이상의 경쇄 CDR을 포함한다.
프레임워크 영역
중쇄 및 경쇄 각각의 가변 도메인은 4개의 프레임워크 영역(FR1, FR2, FR3, FR4)을 포함하며, 이는 가변 도메인의 보다 고도로 보존된 부분이다. 중쇄의 4개 FR은 FR-H1, FR-H2, FR-H3 및 FR-H4로 명명되며, 경쇄의 4개 FR은 FR-L1, FR-L2, FR-L3 및 FR-L4로 명명된다. Kabat 넘버링 시스템을 사용하여, FR-H1은 위치 1에서 시작하여 대략 아미노산 30에서 끝나며, FR-H2는 대략 아미노산 36 내지 49이고, FR-H3은 대략 아미노산 66 내지 94이고 FR-H4는 대략 아미노산 103 내지 113이다. FR-L1은 아미노산 1에서 시작하여 대략 아미노산 23에서 끝나며, FR-L2는 대략 아미노산 35 내지 49이고, FR-L3은 대략 아미노산 57 내지 88이고 FR-L4는 대략 아미노산 98 내지 107이다. 소정 구현예에서, 프레임워크 영역은 Kabat 넘버링 시스템에 따른 치환, 예컨대 FR-L1에서 106A에서의 삽입을 함유할 수 있다.
자연 생성 치환에 부가하여, FR 잔기의 하나 이상의 변경, 예를 들어, 하나 이상의 치환이 또한 인플루엔자 A 바이러스에 대한 항체의 결합 친화도를 개선하거나 최적화하기 위해 항체에 도입될 수 있다. 변형하기 위한 프레임워크 영역 잔기의 예는 항원에 직접 비공유 결합하고(Amit et al., (1986) Science, 233:747-753); CDR의 입체형태와 상호작용하고/이에 영향을 미치고(Chothia et al., (1987) J. Mol. Biol., 196:901-917); 및/또는 VL-VH 계면에 참여하는 것들(US 특허 번호 5,225,539)을 포함한다.
CDR 영역의 돌연변이는 친화도 및 기능을 개선할 수 있지만, 프레임워크 영역에서의 돌연변이는 면역원성의 위험을 증가시킬 수 있다. 상기 위험은 프레임워크 돌연변이를 생식계열로 복귀시킴으로써, 항체의 활성에 불리하게 영향을 미치지 않고 감소될 수 있다. 하나의 구현예에서, FR은 "생식계열화"의 목적을 위한 하나 이상의 아미노산 변화를 포함할 수 있다. 생식계열화에서, 선택된 항체 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열이 생식계열 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열과 비교되며, 생식계열 배치와 상이한 선택된 VL 및/또는 VH쇄의 소정 프레임워크 잔기는 프레임워크 아미노산 서열이 생식계열 프레임워크 아미노산 서열에서와 동일하게 다시 변하도록 생식계열 배치로 "역-돌연변이화"된다. 프레임워크 잔기의 이러한 "역-돌연변이" 또는 "생식계열화"는 비제한적으로 부위-지정 돌연변이화 및 PCR-매개 돌연변이화를 포함하는 특정 돌연변이의 도입을 위한 표준 분자 생물학 방법에 의해 달성될 수 있다.
뉴클레오타이드 서열
다른 구현예에서, 본원에 기재되는 아미노산 서열에 대응하고 그 항체를 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열이 제공된다. 따라서, 본원에 기재되는 항체의 CDR 및 FR을 포함하는 VH 및 VL 영역을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열뿐만 아니라 세포에서 이의 효율적 발현을 위한 발현 벡터가 제공된다.
하나의 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드는 SEQ ID NO: 2의 VH 아미노산 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일성을 갖는 VH 아미노산 서열을 인코딩한다. 다른 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드는 SEQ ID NO: 2의 VH 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 VH 아미노산 서열을 포함한다. 하나의 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드는 SEQ ID NO: 1의 핵산 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일성을 갖는 핵산 서열을 갖는다. 다른 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드는 SEQ ID NO: 1의 핵산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 핵산 서열을 갖는다.
다른 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드는 SEQ ID NO: 7의 VL 아미노산 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일성을 갖는 VL 아미노산 서열을 인코딩한다. 다른 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드는 SEQ ID NO: 7의 VL 아미노산 서열과 적어도, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 VL 아미노산 서열을 인코딩한다. 하나의 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드는 SEQ ID NO: 6의 핵산 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일성을 갖는 핵산 서열을 갖는다. 다른 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드는 SEQ ID NO: 6의 핵산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 핵산 서열을 갖는다.
하나의 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드는 SEQ ID NO: 2의 VH 아미노산 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일성을 갖는 VH 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 7의 VL 아미노산 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일성을 갖는 VL 아미노산 서열을 인코딩한다. 다른 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드는 SEQ ID NO: 2의 VH 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 VH 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 7의 VL 아미노산 서열과 적어도, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 포함한다.
본 발명은 또한 본원에 기재되는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에, 본원에 정의되는 엄격한 또는 더 낮은 엄격성의 혼성화 조건 하에 혼성화하는 폴리뉴클레오타이드를 포괄한다.
엄격한 혼성화 조건은 비제한적으로 약 45℃에서 6X 나트륨 클로라이드/나트륨 시트레이트(SSC)에 이어 약 50℃ 내지 65℃에서 0.2X SSC/0.1% SDS 중 1회 이상의 세척에서 필터-결합된 DNA에 대한 혼성화, 고도로 엄격한 조건, 예컨대 약 45℃에서 6X SSC에 이어 약 65℃에서 0.1X SSC/0.2% SDS 중 1회 이상의 세척에서 필터-결합된 DNA에 대한 혼성화, 또는 당업자에게 공지되어 있는 임의의 다른 엄격한 혼성화 조건(예를 들어, 문헌[Ausubel, F.M. et al., eds. (1989) Current Protocols in Molecular Biology, vol. 1, Green Publishing Associates, Inc. and John Wiley and Sons, Inc., NY at pages 6.3.1 to 6.3.6 and 2.10.3] 참고)을 포함한다.
실질적으로 동일한 서열은 다형성 서열(즉, 집단에서의 대안적 서열 또는 대립유전자)을 포함한다. 대립유전자 차이는 1개 염기쌍만큼 작을 수 있다. 실질적으로 동일한 서열은 또한 침묵 돌연변이를 포함하는 서열을 포함하는, 돌연변이화된 서열을 포함할 수 있다. 돌연변이는 하나 이상의 잔기 변화, 하나 이상의 잔기의 결실, 또는 하나 이상의 부가적 잔기의 삽입을 포함할 수 있다.
폴리뉴클레오타이드가 수득될 수 있고, 폴리뉴클레오타이드의 뉴클레오타이드 서열이 당분야에 공지된 임의의 방법에 의해 결정될 수 있다. 예를 들어, 항체의 뉴클레오타이드 서열이 알려져 있는 경우, 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 화학적으로 합성된 올리고뉴클레오타이드로부터 어셈블리될 수 있다(예를 들어, 문헌[Kutmeier et al., (1994) BioTechniques 17:242] 참고). 간략하게, 항체를 인코딩하는 서열의 중복 올리고뉴클레오타이드 함유 부분이 합성되고, 어닐링되고, 결찰된 후 PCR에 의해 증폭된다.
항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 또한 적합한 원천으로부터의 핵산으로부터 생성될 수 있다. 특정한 항체를 인코딩하는 핵산을 함유하는 클론이 이용 불가능하지만 항체 분자의 서열이 알려져 있는 경우, 면역글로불린을 인코딩하는 핵산은 화학적으로 합성되거나 적합한 원천, 예컨대 항체 cDNA 라이브러리, 또는 항체를 발현하는 임의의 조직 또는 세포, 예컨대 항체를 발현하기 위해 선택된 하이브리도마 세포로부터 생성된 cDNA 라이브러리, 또는 이로부터 단리된 핵산, 예를 들어, 폴리A+RNA로부터, 예를 들어 서열의 3' 및 5' 말단과 혼성화 가능한 합성 프라이머를 사용하는 PCR 증폭에 의해 또는 항체를 인코딩하는 cDNA 라이브러리로부터 cDNA 클론을 확인하기 위해 특정한 유전자 서열에 대해 특이적인 올리고뉴클레오타이드 탐침을 사용하는 클로닝에 의해 수득될 수 있다. 이어서 PCR에 의해 생성된 증폭 핵산은 당분야에 널리 공지된 임의의 방법을 사용하여 복제 가능한 클로닝 벡터 내로 클로닝될 수 있다.
일단 항체의 뉴클레오타이드 서열 및 대응하는 아미노산 서열이 결정되면, 항체의 뉴클레오타이드 서열은 비제한적으로 상이한 아미노산 서열을 갖는 항체를 생성하기 위해, 예를 들어 아미노산 치환, 결실, 및/또는 삽입을 생성하기 위해 재조합 DNA 기법, 부위 지정 돌연변이화 및 PCR을 포함하는, 당분야에 공지된 방법을 사용하여 조작될 수 있다(예를 들어, 문헌[Sambrook et al., (1990), Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2d Ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y. and Ausubel et al., eds., (1998) Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY]에 기재된 기법을 참고).
결합 특징
상술된 바와 같이, 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인플루엔자 A 바이러스의 적어도 하나의 특정 에피토프 또는 항원 결정기에 면역특이적으로 결합한다. 보다 특정한 구현예에서, 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 배타적으로 또는 다른 폴리펩타이드에 대해 우선적으로 인플루엔자 A 바이러스 HA 줄기 단백질, 펩타이드, 서브유닛, 단편, 부분 또는 이의 임의의 조합의 적어도 하나의 특정 에피토프 또는 항원 결정기에 결합한다.
비제한적으로 직접 결합 검정 또는 경쟁-결합 검정을 포함하는 결합 검정이 항체의 결합 특징을 결정하기 위해 수행될 수 있다. 하나의 구현예에서, 결합은 표준 ELISA 또는 유세포 측정 검정을 사용하여 검출될 수 있다. 직접적 결합 검정에서, 후보 항체는 그 인지체 항원으로의 결합에 대해 평가된다. 경쟁-결합 검정에서, 후보 항체는 인플루엔자 A 바이러스 HA 줄기에 결합하는 공지된 항체 또는 다른 화합물과 경쟁하는 능력이 평가된다. 일반적으로, 검출될 수 있는 인플루엔자 A 바이러스 HA 줄기와 항체의 결합을 허용하는 임의의 방법이 항체의 결합 특징의 검출 및 측정을 위해 사용될 수 있다.
항원 및 항체 간 결합의 친화도 상수 및 특이성의 결정은 항체 또는 이의 단편을 사용하는 예방, 치료, 진단 및 연구 방법의 유효성 확인에 도움이 될 수 있다. "결합 친화도"는 일반적으로 분자(예컨대, 항체)의 단일 결합 부위 및 그 결합 파트너(예컨대, 항원) 간 비공유 상호작용의 전체 합의 강도를 나타낸다. 달리 나타내지 않는 한, 본원에서 사용되는 "결합 친화도"는 결합쌍의 구성원(예컨대, 항체 및 항원) 간 1:1 상호작용을 반영하는 내재적 결합 친화도를 나타낸다. 분자 X의 그 파트너 Y에 대한 친화도는 일반적으로 평형 해리 상수(Kd)로 나타낼 수 있고, 이는 비 koff/kon으로 계산된다(문헌[Chen et al., (1999) J. Mol Biol 293:865-881] 참고). 저-친화도 항체는 일반적으로 항원에 느리게 결합하고 쉽게 해리하는 경향이 있는 반면, 고-친화도 항체는 일반적으로 항원에 빠르게 결합하고 더 오래 결합된 채 유지되는 경향이 있다. 항체의 결합 특징의 결정에 적합한 방법 및 시약은 당분야에 공지되어 있고/있거나 상업적으로 이용 가능하다(예를 들어, 미국 특허 번호 6,849,425; 6,632,926; 6,294,391; 6,143,574 참고). 또한, 이러한 동력학 분석을 위해 설계된 설비 및 소프트웨어가 상업적으로 이용 가능하다(예컨대 Biacore® A100 및 Biacore® 2000 기기; Biacore International AB, Uppsala, Sweden).
하나의 구현예에서, 이의 결합 단편 또는 변이체를 포함하는 본 발명의 항체는 또한 인플루엔자 A 바이러스에 대한 이의 결합 친화도 관점에서 기재되거나 특정될 수 있다. 전형적으로 높은 친화도를 갖는 항체는 10-7 M 미만의 Kd를 갖는다. 하나의 구현예에서, 항체 또는 이의 결합 단편은 5×10-7 M, 10-7 M, 5×10-8 M, 10-8 M, 5×10-9 M, 10-9 M, 5×10-10 M, 10-10 M, 5×10-11 M, 10-11 M, 5×10-12 M, 10-12 M, 5×10-13 M, 10-13 M, 5×10-14 M, 10-14 M, 5×10-15 M 또는 10-15 M 이하의 해리 상수 또는 Kd로 인플루엔자 A 바이러스, 또는 이의 단편 또는 변이체에 결합한다. 보다 특정한 구현예에서, 항체 또는 이의 결합 단편은 5×10-10 M, 10-10 M, 5×10-11 M, 10-11 M, 5×10-12 M 또는 10-12 M 이하의 해리 상수 또는 Kd로 인플루엔자 A 바이러스, 또는 이의 단편 또는 변이체에 결합한다. 본 발명은 임의의 개별 인용 값 사이의 범위 내에 있는 해리 상수 또는 Kd로 인플루엔자 A 바이러스에 결합하는 항체를 포괄한다.
다른 구현예에서, 항체 또는 이의 결합 단편은 5×10-2 초-1, 10-2 초-1, 5×10-3 초-1 또는 10-3 초-1, 5×10-4 초-1, 10-4 초-1, 5×10-5 초-1, 또는 10-5 초-1, 5×10-6 초-1, 10-6 초-1, 5×10-7 초-1 또는 10-7 초-1 이하의 오프율(koff)로 인플루엔자 A 바이러스 또는 이의 단편 또는 변이체에 결합한다. 보다 특정한 구현예에서, 항체 또는 이의 결합 단편은 5×10-4 초-1, 10-4 초-1, 5×10-5 초-1, 또는 10-5 초-1, 5×10-6 초-1, 10-6 초-1, 5×10-7 초-1 또는 10-7 초-1 이하의 오프율(koff)로 인플루엔자 A 바이러스 또는 이의 단편 또는 변이체에 결합한다. 본 발명은 또한 임의의 개별 인용 값 사이의 범위 내에 있는 오프율(koff)로 인플루엔자 A 바이러스에 결합하는 항체를 포괄한다.
다른 구현예에서, 항체 또는 이의 결합 단편은 103 M-1 초-1, 5×103 M-1 초-1, 104 M-1 초-1, 5×104 M-1 초-1, 105 M-1 초-1, 5×105 M-1 초-1, 106 M-1 초-1, 5×106 M-1 초-1, 107 M-1 초-1, 또는 5×107 M-1 초-1 이상의 온율(kon)로 인플루엔자 A 바이러스 또는 이의 단편 또는 변이체에 결합한다. 보다 특정한 구현예에서, 항체 또는 이의 결합 단편은 105 M-1 초-1, 5×105 M-1 초-1, 106 M-1 초-1, 5×106 M-1 초-1, 107 M-1 초-1 또는 5×107 M-1 초-1 이상의 온율(kon)로 인플루엔자 A 바이러스 또는 이의 단편 또는 변이체에 결합한다. 본 발명은 임의의 개별 인용 값 사이의 범위 내에 있는 온율(kon)로 인플루엔자 A 바이러스에 결합하는 항체를 포괄한다.
하나의 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인플루엔자 A 바이러스 HA 줄기에 면역특이적으로 결합하며 인플루엔자 A 바이러스 감염을 중화시킬 수 있다. 중화 검정은 당분야에 공지된 방법을 사용하여 수행될 수 있다. 용어 "50% 억제 농도"("IC50"으로 약칭됨)는 인플루엔자 A 바이러스의 50% 중화를 위해 요구되는 억제제(예컨대, 항체)의 농도를 나타낸다. 당업자에게는 IC50값이 낮을수록 더 강력한 억제제에 해당한다는 것이 이해될 것이다.
하나의 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 마이크로중화 검정에서 인플루엔자 A 바이러스의 중화에 대해 항체의 약 0.01 ㎍/㎖ 내지 약 50 ㎍/㎖ 범위, 또는 항체의 약 0.01 ㎍/㎖ 내지 약 5 ㎍/㎖ 범위, 또는 약 0.01 ㎍/㎖ 내지 약 0.1 ㎍/㎖ 범위의 50% 억제 농도(IC50 ㎍/㎖)로 표현되는 중화 역가를 갖는다.
소정 구현예에서, 본원에 기재되는 항체는 세포사를 유도할 수 있다. "세포사를 유도하는" 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 생활성 세포를 비생활성이 되도록 유도하는 것이다. 하나의 구현예에서, 본원에 기재되는 항체 또는 이의 단편은 ADCC, CDC, 및/또는 ADCP를 통해 세포사를 유도할 수 있다. ADCC, CDC 및 ADCP를 측정하기 위한 검정은 공지되어 있다.
하나의 구현예에서, 항체 또는 이의 단편은 아폽토시스를 통해 세포사를 유도한다. "아폽토시스를 유도하는" 항체 또는 이의 단편은 아넥신 V의 결합, DNA의 단편화, 세포 수축, 소포체 팽창, 세포 단편화, 및/또는 막 소수포(아폽토시스체로 불림)의 형성에 의해 결정되는 프로그래밍된 세포사를 유도하는 것이다. 아폽토시스와 연관된 세포 이벤트의 평가를 위해 다양한 방법이 이용 가능하다. 예를 들어, 포스파티딜 세린(PS) 전위는 아넥신 결합에 의해 측정될 수 있고; DNA 단편화는 DNA 사다리화(laddering)를 통해 평가될 수 있으며; DNA 단편화와 더불어 핵/염색질 응축은 저두배수체 세포의 임의의 증가에 의해 평가될 수 있다.
항체의 생산
다음은 본원에 기재되는 항체 및 이의 단편의 생산 기법을 기재한다.
모노클로날 항체
모노클로날 항체는 하이브리도마[Kohler et al., (1975) Nature, 256:495; Harlow et al., (1988) Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed.); Hammerling et al., (1981) in: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681 (Elsevier, N.Y.)], 재조합 및 파지 디스플레이 기술, 또는 이의 조합의 사용을 포함하는, 당분야에 공지된 매우 다양한 기법을 사용하여 생산될 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 "모노클로날 항체"는 실질적으로 균질한 집단으로부터 수득된 항체 또는 단리된 항체를 나타내며, 여기서 집단을 이루는 개별 항체는 소량으로 존재할 수 있는 가능한 자연 생성 돌연변이를 제외하고 동일하다. 모노클로날 항체는 고도로 특이적이며, 단일 항원 부위에 대해 유도된다. 또한, 상이한 결정기(에피토프)에 대해 유도된 상이한 항체를 포함하는 폴리클로날 항체 제조물과 대조적으로, 각각의 모노클로날 항체는 항원 상의 동일한 결정기에 대해 유도된다. 이의 특이성에 부가하여, 모노클로날 항체는 다른 항체에 의해 오염되지 않고 합성될 수 있다는 점에서 유리하다. 수식어 "모노클로날"은 임의의 특정 방법에 의한 항체의 생산을 필요로 하는 것으로 간주되어서는 안 된다. 다음은 제한하려는 것이 아니며, 예를 들어 모노클로날 포유류, 키메라, 인간화, 인간, 도메인, 디아바디(diabodies), 백시바디(vaccibodies), 선형 및 다중특이적 항체를 생산하기 위해 사용될 수 있는 모노클로날 항체의 대표적 생산 방법의 설명이다.
하이브리도마 기법
하이브리도마 기술을 사용하는 특이적 항체에 대한 생산 및 스크리닝 방법은 당분야에서 일상적이며 널리 공지되어 있다. 하이브리도마 방법에서, 마우스 또는 다른 적절한 숙주 동물, 예컨대 햄스터는 면역화를 위해 사용된 항원에 특이적으로 결합할 항체를 생산하거나 생산할 수 있는 림프구를 유발하기 위해 면역화된다. 대안적으로, 림프구는 시험관내 면역화될 수 있다. 면역화 후, 림프구는 단리되고 이어서 적합한 융합 제제 또는 융합 파트너, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜을 사용하여 골수종 세포주와 융합되어 하이브리도마 세포를 형성한다[Goding, (1986) Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp.59-103 (Academic Press)]. 소정 구현예에서, 선택된 골수종 세포는 효율적으로 융합하며, 선택된 항체-생산 세포에 의한 안정적인 고수준 항체 생산을 뒷받침하고, 융합되지 않은 모체 세포에 반해 선택하는 선택 배지에 대해 민감한 것들이다. 하나의 양태에서, 골수종 세포주는 뮤린 골수종 세포주, 예컨대 Salk Institute Cell Distribution Center, San Diego, Calif. USA에서 이용 가능한 MOPC-21 및 MPC-11 마우스 종양에서 유래된 것들 그리고 SP-2 및 유도체, 예컨대 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션(American Type Culture Collection)(록빌, 메릴랜드, 미국)에서 이용 가능한 X63-Ag8-653 세포이다. 인간 골수종 및 마우스-인간 헤테로골수종 세포주도 인간 모노클로날 항체의 생산을 위해 기재되었다[Kozbor, J. (1984) Immunol., 133:3001; 및 Brodeur et al., (1987) Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp.51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York)].
요망되는 특이성, 친화도, 및/또는 활성의 항체를 생산하는 하이브리도마 세포가 확인되면, 클론은 제한 희석 절차에 의해 서브클로닝되고 표준 방법에 의해 성장시킬 수 있다. 상기 목적을 위해 적합한 배양 배지는, 예를 들어, D-MEM 또는 RPMI-1640 배지를 포함한다. 또한, 하이브리도마 세포는 동물에서 복수 종양으로, 예컨대 마우스 내로 세포의 i.p. 주사에 의해 생체내에서 성장시킬 수 있다.
서브-클론에 의해 분비되는 모노클로날 항체는 배양 배지, 복수액, 또는 혈청으로부터 비제한적으로 친화도 크로마토그래피(예컨대, 단백질 A 또는 단백질 G-세파로스 사용) 또는 이온-교환 크로마토그래피, 친화도 태그, 하이드록실아파타이트 크로마토그래피, 겔 전기영동 및 투석을 포함하는 통상적인 항체 정제 절차에 의해 분리될 수 있다.
재조합 DNA 기법
재조합 DNA 기술을 사용하는 특이적 항체에 대한 생산 및 스크리닝 방법은 당분야에서 일상적이며 널리 공지된 것이다. 모노클로날 항체 또는 이의 단편을 인코딩하는 DNA는 통상적인 절차를 사용해서 쉽게 단리되고/되거나 서열분석될 수 있다. 단리되면, DNA는 발현 벡터 내에 배치될 수 있고, 이는 재조합 숙주 세포에서 모노클로날 항체의 합성을 수득하기 위해, 다른 경우 항체 단백질을 생산하지 않는 숙주 세포, 예컨대 대장균 세포, 원숭이(simian) COS 세포, 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포, 또는 골수종 세포 내로 전달감염될 수 있다.
항체 또는 이의 변이체의 재조합 발현은 일반적으로 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 함유하는 발현 벡터의 구축을 필요로 한다. 따라서, 프로모터에 작동 가능하게 연결된 항체 분자, 항체의 중쇄 또는 경쇄, 항체의 중쇄 또는 경쇄 가변 도메인 또는 이의 일부, 또는 중쇄 또는 경쇄 CDR을 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 복제 가능한 벡터가 본원에 제공된다. 이러한 벡터는 항체 분자의 불변 영역을 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함할 수 있고, 항체의 가변 도메인은 전체 중쇄, 전체 경쇄, 또는 전체 중쇄 및 경쇄 둘 다의 발현을 위해 이러한 벡터 내로 클로닝될 수 있다.
발현 벡터가 통상적인 기법에 의해 숙주 세포로 전달되면, 전달감염된 세포는 항체를 생산하기 위한 통상적 기법에 의해 배양될 수 있다. 따라서, 이종성 프로모터에 작동 가능하게 연결된, 본원에 기재되는 항체 또는 이의 단편, 또는 이의 중쇄 또는 경쇄, 또는 이의 일부 또는 단일쇄 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 함유하는 숙주 세포가 본원에 제공된다. 이중쇄 항체의 발현을 위한 소정 구현예에서, 중쇄 및 경쇄를 모두 인코딩하는 벡터는 전체 면역글로불린 분자의 발현을 위해 숙주 세포에서 공동-발현될 수 있다.
재조합 항체의 발현을 위한 숙주로서 이용 가능한 포유류 세포주는 당분야에 널리 공지되어 있으며, 비제한적으로 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포, HeLa 세포, 베이비 햄스터 신장(BHK) 세포, 원숭이 신장 세포(COS), 인간 간세포암종 세포(예컨대, Hep G2), 인간 상피 신장 293 세포 및 여러 다른 세포주를 포함하는, 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션(American Type Culture Collection, ATCC)에서 이용 가능한 여러 불멸화 세포주를 포함한다. 상이한 숙주 세포는 단백질 및 유전자 산물의 번역-후 가공 및 변형을 위해 특징적이고 특이적인 기전을 갖는다. 발현되는 항체 또는 이의 일부의 정확한 변형 및 가공을 보장하기 위해 적절한 세포주 또는 숙주 시스템이 선택될 수 있다. 상기 목적을 위해, 일차 전사체의 적절한 가공, 유전자 산물의 글리코실화 및 인산화 처리를 위한 세포 기구를 보유하는 진핵 숙주 세포가 사용될 수 있다. 이러한 포유류 숙주 세포는 비제한적으로 CHO, VERY, BHK, Hela, COS, MDCK, 293, 3T3, W138, BT483, Hs578T, HTB2, BT2O 및 T47D, NS0(내생적으로 임의의 기능적인 면역글로불린쇄를 생산하지 않는 뮤린 골수종 세포주), SP20, CRL7O3O 및 HsS78Bst 세포를 포함한다. 인간 림프구의 불멸화에 의해 개발된 인간 세포주가 모노클로날 항체를 재조합적으로 생산하기 위해 사용될 수 있다. 인간 세포주 PER.C6.(Crucell, Netherlands)이 모노클로날 항체를 재조합적으로 생산하기 위해 사용될 수 있다.
재조합 항체의 발현을 위한 숙주로 사용될 수 있는 추가적인 세포주는 비제한적으로 곤충 세포(예컨대 Sf21/Sf9, 트리코플러시아 나이(Trichoplusia ni) Bti-Tn5b1-4) 또는 효모 세포(예컨대 S. 세레비시애(S. cerevisiae), 피치아(Pichia), US7326681 등), 식물 세포; 및 닭 세포를 포함한다.
소정 구현예에서, 본원에 기재되는 항체 및 이의 단편은 세포주에서 안정적으로 발현될 수 있다. 안정적 발현은 재조합 단백질의 장기, 고수율 생산을 위해 사용될 수 있다. 숙주 세포는 비제한적으로 프로모터, 인핸서, 전사 종결자 및 폴리아데닐화 부위 그리고 선택 가능한 마커 유전자를 포함하는 발현 제어 요소를 포함하는 적절히 조작된 벡터로 형질전환될 수 있다. 외래 DNA의 도입 후, 세포는 농축된 배지에서 1 내지 2일 동안 성장하도록 둘 수 있고, 이어서 선택 배지로 전환된다. 재조합 플라스미드에서 선택 가능한 마커는 선택에 대한 내성을 부여하며, 이의 염색체 내로 플라스미드가 안정적으로 통합된 세포가 성장하여 다시 세포주로 클로닝되고 증식될 수 있는 초점부위를 형성할 수 있게 한다. 고수율로 안정한 세포주를 제조하는 방법은 당분야에 널리 공지되어 있고, 일반적으로 시약이 상업적으로 이용 가능하다.
소정 구현예에서, 본원에 기재되는 항체 및 이의 단편은 세포주에서 일시적으로 발현된다. 일시적 전달감염은 세포 내로 도입된 핵산이 그 세포의 게놈 또는 염색체 DNA 내로 통합되지 않는 공정이다. 이는 실제로, 세포에서 염색체-외 요소로, 예를 들어 에피좀으로 유지된다. 에피좀 핵산의 전사 공정은 영향받지 않으며 에피좀 핵산에 의해 인코딩되는 단백질이 생산된다.
안정적으로 또는 일시적으로 전달감염된 세포주는 모노클로날 항체의 발현 및 생산을 위해 당분야에 널리 공지된 세포 배양 배지 및 조건에서 유지된다. 소정 구현예에서, 포유류 세포 배양 배지는, 예를 들어 DMEM 또는 Ham's F12를 포함하는 상업적으로 이용 가능한 배지 제형물에 기반한다. 다른 구현예에서, 세포 배양 배지는 세포 성장 및 생물학적 단백질 발현 모두의 증가를 뒷받침하기 위해 변형된다. 본원에서 사용되는 용어 "세포 배양 배지", "배양 배지" 및 "배지 제형물"은 다세포 유기체 또는 조직 밖의 인공적인 시험관내 환경에서 세포의 유지, 성장, 번식 또는 증식을 위한 영양 용액을 나타낸다. 세포 배양 배지는, 예를 들어, 세포 성장을 촉진하기 위해 제형화된 세포 배양 성장 배지 또는 재조합 단백질 생산을 촉진하기 위해 제형화된 세포 배양 생산 배지를 포함하는, 특정한 세포 배양 용도를 위해 변형될 수 있다. 용어 영양분, 구성분 및 성분은 본원에서 상호 교환적으로 사용되어, 세포 배양 배지를 이루는 구성요소를 나타낸다.
하나의 구현예에서, 세포주는 공급 배치 방법을 사용하여 유지된다. 본원에서 사용되는 "공급 배치 방법"은 기본 배지로 최초 인큐베이션된 후 공급 배치 세포 배양에 추가적인 영양분이 공급되는 방법을 나타낸다. 예를 들어, 공급 배치 방법은 주어진 시기 내에 결정된 공급 일정에 따른 보충 배지를 첨가하는 단계를 포함할 수 있다. 따라서, "공급 배치 세포 배양"은 세포, 전형적으로 포유류 및 배양 배지가 배양 용기로 최초 공급되고, 배양 종료 전 주기적인 세포 및/또는 산물 수확을 포함하거나 포함하지 않고, 추가적인 배양 영양분이 배양 동안 배양에 연속적으로 또는 별개의 증분으로 공급되는 세포 배양을 나타낸다.
적합한 세포 배양 배지 및 여기에 함유되는 영양분은 당업자에게 공지되어 있다. 하나의 구현예에서, 세포 배양 배지는 기본 배지 및 적어도 하나의 가수분해물, 예컨대 대두-기반 가수분해물, 효모-기반 가수분해물, 또는 변형된 기본 배지를 생성하는 2가지 유형의 가수분해물의 조합을 포함한다. 다른 구현예에서, 추가적인 영양분은 기본 배지, 예컨대 농축된 기본 배지만을 포함할 수도 있고, 또는 가수분해물, 또는 농축된 가수분해물만을 포함할 수도 있다. 적합한 기본 배지는 비제한적으로 DMEM(둘베코 변형 이글(Dulbecco's Modified Eagle's) 배지), DME/F12, MEM(최소 필수(Minimal Essential) 배지), BME(기초 배지 이글(Basal Medium Eagle)), RPMI 1640, F-10, F-12, α-MEM(α-최소 필수 배지), G-MEM(글라스고우(Glasgow's) 최소 필수 배지), PF CHO(예컨대, CHO 단백질 비함유 배지(Sigma) 또는 CHO 세포 단백질-비함유 EX-CELL™ 325 PF CHO 혈청-비함유 배지(SAFC Bioscience) 참고) 및 이스코브(Iscove's) 변형 둘베코 배지를 포함한다. 기본 배지의 다른 예는 BME 기본 배지(Gibco-Invitrogen; 또한 문헌[Eagle, H (1965) Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 89, 36] 참고); DMEM(둘베코 변경 이글 배지, 분말)(Gibco-Invitrogen (# 31600); 또한 문헌[Dulbecco and Freeman (1959) Virology 8:396; Smith et al., (1960) Virology 12:185. Tissue Culture Standards Committee, In Vitro 6:2, 93] 참고); CMRL 1066 배지(Gibco-Invitrogen (#11530); 또한 문헌[Parker et al., (1957) Special Publications, N.Y. Academy of Sciences, 5:303)] 참고)를 포함한다.
기본 배지는 혈청-비함유일 수 있다, 즉 배지는 혈청(예컨대, 우태 혈청(FBS), 말 혈청, 염소 혈청, 또는 당업자에게 공지된 임의의 다른 동물-유래 혈청)을 함유하지 않거나 동물 단백질 비함유 배지 또는 화학적으로 한정된 배지임을 의미한다.
기본 배지는 표준 기본 배지에서 확인되는 소정 비-영양 성분, 예컨대 다양한 무기 및 유기 완충액, 계면활성제(들) 및 나트륨 클로라이드를 제거하기 위해 변형될 수 있다. 기본 세포 배지로부터 이러한 성분의 제거는 잔여 영양 성분의 농도 증가를 허용하며, 전반적인 세포 성장 및 단백질 발현을 개선할 수 있다. 추가로, 생략된 성분은 세포 배양 조건의 요건에 따라 변형된 기본 세포 배지를 함유하는 세포 배양 배지에 다시 첨가될 수 있다. 소정 구현예에서, 세포 배양 배지는 변형된 기본 세포 배지 및 다음 영양분: 철 공급원, 재조합 성장 인자, 완충액, 계면활성제, 삼투압 조절제, 에너지원 및 비-동물 가수분해물 중 적어도 하나를 함유한다. 추가로, 변형된 기본 세포 배지는 선택적으로 아미노산, 비타민 또는 아미노산 및 비타민 둘 다의 조합을 함유할 수 있다. 다른 구현예에서, 변형된 기본 배지는 글루타민, 예컨대 L-글루타민 및/또는 메토트렉세이트를 추가로 함유한다.
항체 생산은 당분야에 공지된 공급-배치, 배치, 관류 또는 연속 공급 바이오리액터 방법을 사용하여 바이오리액터에서 다량으로 수행될 수 있다. 대규모 바이오리액터는 적어도 1000리터 용량, 예를 들어, 약 1,000리터 내지 100,000리터 용량을 갖는다. 소규모 바이오리액터는 일반적으로 대략 100리터 이하 부피 용량의 세포 배양을 나타내며, 약 1리터 내지 약 100리터 범위일 수 있다. 대안적으로, 단회-사용 바이오리액터(SUB)가 대규모 또는 소규모 배양을 위해 사용될 수 있다.
온도, pH, 진탕, 통기 및 접종물 밀도는 사용되는 숙주 세포 및 발현될 재조합 단백질에 따라 변할 것이다. 예를 들어, 재조합 단백질 세포 배양은 30℃ 내지 45℃의 온도에서 유지될 수 있다. 배양 배지의 pH는 pH가 요망되는 수준으로 유지되도록 배양 공정 동안 모니터링될 수 있고, 이는 소정 숙주 세포에 있어서 6.0 내지 8.0의 pH 범위 내일 수 있다.
파지 디스플레이 기법
모노클로날 항체 또는 항체 단편은 문헌[McCafferty et al., (1990) Nature, 348:552-554. Clackson et al., (1991) Nature, 352:624-628 및 Marks et al., (1991) J. Mol. Biol., 222:581-597]에 기재된 기법을 사용하여 생성되는 항체 파지 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 이러한 방법을 사용하여, 항체는 재조합 조합 항체 라이브러리, 예를 들어, 인간 림프구로부터 유래되는 mRNA로부터 제조된 인간 VL 및 VH cDNA를 사용하여 제조된 scFv 파지 디스플레이 라이브러리의 스크리닝에 의해 단리될 수 있다. 이러한 라이브러리의 제조 및 스크리닝 방법은 당분야에 공지되어 있다.
파지 디스플레이 방법에서, 기능적 항체 도메인은 이를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 운반하는 파지 입자의 표면 상에 디스플레이된다. 하나의 특정한 구현예에서, 파지는 레퍼토리 또는 조합 항체 라이브러리(예컨대, 인간 또는 뮤린)로부터 발현된 항원-결합 도메인을 디스플레이하기 위해 이용될 수 있다. 관심 항원에 결합하는 항원 결합 도메인을 발현하는 파지는 표지된 항원 또는 고체 표면 또는 비드에 결합되거나 포획된 항원을 사용하여 선택되거나 확인될 수 있다. 이들 방법에서 사용되는 파지는 전형적으로 파지 유전자 III 또는 유전자 VIII 단백질에 재조합적으로 융합된 Fab, Fv 또는 디설파이드 안정화 Fv 항체 도메인을 포함하는 파지로부터 발현된 fd 및 M13 결합 도메인을 포함하는 필라멘트성 파지이다.
파지 선택 후, 파지로부터의 항체 코딩 영역이 인간 항체, 인간화 항체, 또는 임의의 다른 요망되는 항원 결합 단편을 포함하는 전체 항체를 생성하기 위해 단리되고 사용되며, 포유류 세포, 곤충 세포, 식물 세포, 효모 및 박테리아를 포함하는 임의의 요망되는 숙주에서 발현될 수 있다.
항체 정제 및 단리
항체 분자가 재조합 또는 하이브리도마 발현에 의해 생산되면, 이는 면역글로불린 분자의 정제를 위해 당분야에 공지된 임의의 방법에 의해, 예를 들어, 비제한적으로 이온 교환, 친화도, 특히 단백질 A 또는 단백질 G 친화도 및 크기선별 컬럼 크로마토그래피; 원심분리; 차별적 용해도를 포함하는 크로마토그래피에 의해; 또는 단백질의 정제를 위한 임의의 다른 표준 기법에 의해 정제될 수 있다. 또한, 항체 또는 이의 단편은 정제를 촉진하기 위해 이종성 폴리펩타이드 서열(본원에서 "태그"로 나타냄)에 융합될 수 있다.
재조합 기법을 사용하는 경우, 항체는 세포내로, 원형질막 주위 공간에서 생산되거나, 배지 내로 직접 분비될 수 있다. 항체가 세포내 생산되는 경우, 제1 단계로서, 숙주 세포 또는 용해된 단편인 입상 파편이, 예를 들어, 원심분리 또는 초여과에 의해 제거된다. 문헌[Carter et al., (1992) Bio/Technology, 10:163-167]은 대장균의 원형질막 주위 공간 내로 분비되는 항체의 단리 절차를 기재한다. 항체가 배지 내로 분비되면, 이러한 발현 시스템으로부터의 상청액은 일반적으로 먼저 상업적으로 이용 가능한 단백질 농축 필터, 예를 들어, Amicon 또는 Millipore Pellicon 초여과 장치를 사용하여 농축된다. 프로테아제 억제제, 예컨대 PMSF가 단백분해를 억제하기 위해 임의의 상기 단계에 포함될 수 있고, 항생제가 외래 오염물질의 성장을 방지하기 위해 포함될 수 있다.
세포로부터 생산된 항체 조성물은, 예를 들어, 하이드록실아파타이트 크로마토그래피, 소수성 상호작용 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석, 및/또는 친화도 크로마토그래피를 사용하여 단독으로 또는 다른 정제 단계와 조합되어 정제될 수 있다.
인간 항체
인간 항체는 당분야에 널리 공지된 방법을 사용하여 생성될 수 있다. 인간 항체는 항체 또는 이의 단편의 신속한 제거 또는 항체 또는 이의 단편에 대한 면역 반응의 생성을 야기할 수 있는, 뮤린 또는 래트 가변 및/또는 불변 영역을 보유하는 항체와 연관된 일부 문제를 회피한다.
인간 항체는 시험관내 방법에 의해 유도될 수 있다. 적합한 예는 비제한적으로 파지 디스플레이(MedImmune(예전 CAT), Morphosys, Dyax, Biosite/Medarex, Xoma, Symphogen, Alexion(예전 Proliferon), Affimed) 리보솜 디스플레이(MedImmune(예전 CAT)), 효모 디스플레이 등을 포함한다. 비면역화 공여체로부터의 면역글로불린 가변(V) 도메인 유전자 레퍼토리로부터, 인간 항체 및 항체 단편을 시험관내 생산하기 위해 파지 디스플레이 기술이 사용될 수 있다. 상기 기법에 따르면, 항체 V 도메인 유전자가 필라멘트성 박테리오파지, 예컨대 M13 또는 fd의 주요 또는 비주요 피막 단백질 유전자 내로 프레임에 맞춰 클로닝되고, 파지 입자의 표면 상에서 기능적 항체 단편으로 디스플레이된다. 필라멘트성 입자는 파지 게놈의 단일쇄 DNA 사본을 함유하므로, 항체의 기능적 특성에 기반한 선택은 또한 이러한 특성을 나타내는 항체를 인코딩하는 유전자의 선택을 일으킨다. 따라서, 파지는 B-세포의 일부 특성을 모사한다. 비면역화 인간 공여체로부터의 V 유전자 레퍼토리가 구축될 수 있고, 다양한 어레이의 항원(자가-항원 포함)에 대한 항체가 본질적으로 문헌[Marks et al., (1991) J. Mol. Biol. 222:581-597, 또는 Griffith et al., (1993) EMBO J. 12:725-734]에 기재된 기법에 따라 단리될 수 있다. 인간 항체는 또한 시험관내 활성화된 B 세포에 의해 생성될 수 있다(미국 특허 번호 5,567,610 및 5,229,275 참고).
항체 단편
소정 구현예에서, 본 발명의 항체는 항체 단편 또는 이러한 단편을 포함하는 항체를 포함한다. 전형적으로, 항체 단편은 전장 항체의 일부, 전형적으로 이의 항원 결합 또는 가변 영역을 포함한다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2, Fd 및 Fv 단편, 디아바디, 선형 항체 및 단일쇄 항체 분자를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체 단편은 항원 결합 단편을 포함한다.
전통적으로, 항체 단편은 당분야에 널리 공지된 기법을 사용하여 온전한 항체의 단백분해 소화를 통해 유도되었다. 그러나, 항체 단편은 또한 재조합 숙주 세포에 의해 직접 생산될 수 있다. Fab, Fv 및 scFv 항체 단편은 모두 대장균에서 발현되고 이로부터 분비될 수 있어서, 다량의 이들 단편의 손쉬운 생산을 허용한다. 하나의 구현예에서, 항체 단편은 항체 파지 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 대안적으로, Fab'-SH 단편은 또한 대장균으로부터 직접 회수되고 화학적으로 커플링되어 F(ab')2 단편을 형성할 수 있다(Carter et al., (1992) Bio/Technology, 10:163-167). 또 다른 접근에 따르면, F(ab')2 단편은 재조합 숙주 세포 배양으로부터 직접 단리될 수 있다. 항체 단편의 생산을 위한 다른 기법은 당업자에게 자명할 것이다. 다른 구현예에서, 항체는 단일쇄 Fv 단편(scFv)이다.
항체 단편은 또한 도메인 항체, 예컨대, 인간 항체 및 선형 항체의 중쇄(VH) 또는 경쇄(VL)의 가변 영역에 해당하는 항체의 소형 기능적 결합 단위를 함유하는 항체를 포함할 수 있고, 이는 항원-결합 영역 페어를 형성하는 일렬 Fd 절편(VH-CH1-VH-CH1)의 페어를 포함한다(문헌[Zapata et al., (1995) Protein Eng., 8(10):1057-1062] 참고).
변이체 Fc 영역
Fc 영역의 변이체는 항체의 효과기 기능을 증강시키거나 감소시킬 수 있고 약동학적 특성, 예를 들어, 항체의 반감기를 변경할 수 있다. 따라서 소정 구현예에서, 항체는 항체의 기능적 및/또는 약동학적 특성을 변화시키기 위해 Fc 영역에서 하나 이상의 변경이 수행된 변경된 Fc 영역(본원에서 "변이체 Fc 영역"으로도 나타냄)을 포함한다. 이러한 변경은 C1q 결합 및 CDC 또는 IgG에 있어서 FcγR의 결합 및 ADCC 또는 ADCP의 감소 또는 증가를 일으킬 수 있다. 본 발명은 효과기 기능을 미세 조정하여 요망되는 효과기 기능을 증강시키거나 감소시키거나 제공하기 위한 변화가 수행된 변이체 Fc 영역을 갖는 본원에 기재된 항체를 포괄한다. 변이체 Fc 영역을 포함하는 항체는 본원에서 "Fc 변이체 항체"로도 나타낸다. 본원에서 사용되는 원상태는 변형되지 않은 모체 서열을 나타내며 원상태 Fc 영역을 포함하는 항체는 본원에서 "원상태 Fc 항체"로 나타낸다. Fc 변이체 항체는 당업자에게 널리 공지된 방법에 의해 생성될 수 있다. 비제한적 예는 항체 코딩 영역의 단리(예컨대, 하이브리도마로부터) 및 Fc 영역에서 하나 이상의 요망되는 치환의 제조를 포함한다. 대안적으로, 항체의 항원-결합 부분 또는 가변 영역은 변이체 Fc 영역을 인코딩하는 벡터 내로 서브클로닝될 수 있다. 하나의 구현예에서, 변이체 Fc 영역은 원상태 Fc 영역에 비해 효과기 기능의 유사한 유도 수준을 나타낸다. 다른 구현예에서, 변이체 Fc 영역은 원상태 Fc에 비해 더 높은 효과기 기능 유도를 나타낸다. 효과기 기능의 측정 방법은 당분야에 널리 공지되어 있다.
Fc 영역의 변형은 비제한적으로 Fc 아미노산에 대한 아미노산 치환, 아미노산 부가, 아미노산 결실 및 번역-후 변형(예컨대 글리코실화)에서의 변화를 포함하며 효과기 기능을 미세 조정하기 위해 사용될 수 있다.
Fc 영역은 제1 불변 영역 면역글로불린 도메인을 제외하는 항체의 불변 영역을 포함한다. 따라서 Fc는 IgA, IgD 및 IgG의 마지막 2개 불변 영역 면역글로불린 도메인 및 IgE 및 IgM의 마지막 3개 불변 영역 면역글로불린 도메인, 그리고 이들 도메인의 가요성 힌지 N-말단을 나타낸다. IgA 및 IgM에 있어서, Fc는 J쇄를 포함할 수 있다. IgG에 있어서, Fc는 면역글로불린 도메인 C감마2 및 C감마3(Cγ2 및 Cγ3) 그리고 C감마1(Cγ1) 및 C감마2(Cγ2) 간 힌지를 포함한다. Fc 영역의 경계는 변할 수 있지만, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 보통 그 카복실-말단에 잔기 C226 또는 P230을 포함하는 것으로 정의되며, 여기서 넘버링은 Kabat에 나타낸 EU 인덱스에 따른다. Fc는 단리된 상기 영역, 또는 항체, 항체 단편, 또는 Fc 융합 단백질의 맥락에서의 상기 영역을 나타낼 수 있다. 비제한적으로 EU 인덱스에 의해 넘버링되는 위치 270, 272, 312, 315, 356 및 358을 포함하는 여러 상이한 Fc 위치에서 다형성이 관찰되었고, 이에 따라 나타낸 서열 및 선행 기술에서의 서열 간에 약간의 차이가 존재할 수 있다.
하나의 구현예에서, Fc 변이체 항체는 원상태 Fc 항체에 비해 비제한적으로 FcRn, 이소형 FcγRIA, FcγRIB 및 FcγRIC을 포함하는 FcγRI(CD64); FcγRII(이소형 FcγRIIA, FcγRIIB 및 FcγRIIC를 포함하는 CD32); 및 FcγRIII(이소형 FcγRIIIA 및 FcγRIIIB를 포함하는 CD16)를 포함하는 하나 이상의 Fc 수용체에 대해 변경된 결합 친화도를 나타낸다.
항체 효과기 기능은 소정 세포독성 세포(예컨대, 자연 살해(NK) 세포, 호중구 및 대식구) 상에 존재하는 Fc 수용체(FcR) 상에 결합된 분비된 Ig가 이러한 세포독성 효과기 세포로 하여금 항원-보유 세포에 특이적으로 결합한 후 그 세포를 세포독소로 사멸시킬 수 있게 하는 세포독성의 한 형태인 ADCC를 포함한다. 세포 표면으로 유도된 특이적인 고친화도 IgG 항체는 세포독성 세포를 "무장"시키며 이러한 사멸을 위해 필요하다. 세포의 용해는 세포외이며, 직접적인 세포-대-세포 접촉을 필요로 하고, 보체가 관여되지 않는다.
또 다른 항체 효과기 기능은 CDC로, 이는 보체 시스템에 의한 생화학적 세포 파괴 이벤트를 나타낸다. 보체 시스템은 항체와 조합하여 병원성 박테리아 및 다른 외래 세포를 파괴하는 정상 혈액 혈장에서 확인되는 복잡한 단백질 시스템이다.
용어 항체 효과기 기능에 의해 포괄되는 또 다른 공정은 ADCP로, 이는 하나 이상의 효과기 리간드를 발현하는 비특이적 세포독성 세포가 세포 상에 결합된 항체를 인식한 후 세포의 식균작용을 유도하는 세포-매개 반응을 나타낸다.
소정 구현예에서, Fc 변이체를 포함하는 항체는 원상태 Fc 영역을 포함하는 항체에 비해 증강된 세포독성 또는 식균작용 활성(예컨대, ADCC, CDC 및 ADCP)을 갖는다.
소정 구현예에서, Fc 변이체 항체는 원상태 Fc 항체에 비해 감소된 ADCC 활성을 나타낸다. 소정 구현예에서, Fc 변이체 항체는 검출 가능한 ADCC 활성을 갖지 않는다. 특정 구현예에서, ADCC 활성의 감소 및/또는 제거는 Fc 리간드 및/또는 수용체에 대해 Fc 변이체 항체가 나타내는 감소된 친화도에 기인할 수 있다.
대안적 구현예에서, Fc 변이체 항체는 원상태 Fc 항체에 비해 증가된 ADCC 활성을 나타낸다. 특정 구현예에서, 증가된 ADCC 활성은 Fc 리간드 및/또는 수용체에 대해 Fc 변이체 항체가 나타내는 증가된 친화도에 기인할 수 있다.
하나의 구현예에서, Fc 변이체 항체는 원상태 Fc 항체에 비해 Fc 수용체 FcγRIIIA에 대해 증강된 결합을 가지며 증강된 ADCC 활성을 갖는다.
소정 구현예에서, 세포독성은 CDC에 의해 매개되며 Fc 변이체 항체는 원상태 Fc 항체에 비해 증강되거나 감소된 CDC 활성을 갖는다. 하나의 구현예에서, 본원에 기재되는 항체는 원상태 Fc 항체에 비해 증가된 CDC 활성을 나타낸다. 특정 구현예에서, CDC 활성의 증가는 Fc 변이체 항체가 C1q에 대해 나타내는 증가된 친화도에 기인할 수 있다. 항체는 항체의 주요 작용 기전 중 하나인 CDC를 증강시키는 COMPLEGENT® 기술(Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd.) 덕에 원상태 Fc 항체에 비해 증가된 CDC 활성을 나타낼 수 있다. 항체의 이소형인 IgG3의 일부가 치료 항체에 대한 표준 이소형인 IgG1의 대응 영역 내로 도입되는 이소형 키메라성(chimerism)으로 불리는 접근을 이용해서, COMPLEGENT® 기술은 IgG1의 요망되는 특성, 예컨대 ADCC, PK 프로필 및 단백질 A 결합을 보유하면서, IgG1 또는 IgG3을 능가하여 CDC 활성을 크게 증강시킨다. 또한, 이는 증강된 ADCC 및 CDC 활성을 갖는 더욱 더 우수한 치료 Mab(ACCRETAMAB®)를 생성하는 POTELLIGENT® 기술과 함께 사용될 수 있다.
다른 구현예에서, Fc 변이체 항체는 원상태 Fc 항체에 비해 증강된 ADCC 활성 및 증강된 혈청 반감기를 가질 수 있다. 하나의 구현예에서, Fc 변이체 항체는 원상태 Fc 항체에 비해 증강된 CDC 활성 및 증강된 혈청 반감기를 나타낼 수 있다. 다른 구현예에서, Fc 변이체 항체는 원상태 Fc 항체에 비해 증강된 ADCC 활성, 증강된 CDC 활성 및 증강된 혈청 반감기를 가질 수 있다.
Fc 영역을 포함하는 단백질의 혈청 반감기는 FcRn에 대한 Fc 영역의 결합 친화도를 증가시킴으로써 증가될 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 "항체 반감기"는 이의 투여 후 항체 분자의 평균 생존 시간의 척도인 항체의 약동학적 특성을 의미한다. 항체 반감기는 환자의 신체 또는 이의 특정 구획으로부터, 예를 들어, 혈청에서, 즉 순환 반감기로, 또는 다른 조직에서 측정되는, 양을 아는 면역글로불린의 50%를 제거하기 위해 필요한 시간으로 표현될 수 있다. 반감기는 면역글로불린 간에 또는 면역글로불린의 클래스 간에 서로 다를 수 있다. 일반적으로, 항체 반감기의 증가는 투여되는 항체에 대한 순환 내 평균 체류 시간(MRT)을 증가시킨다.
반감기 증가는 환자에게 주어지는 약물의 양 감소뿐만 아니라 투여 빈도의 감소를 허용한다. 항체의 혈청 반감기를 증가시키기 위해, 구제(salvage) 수용체 결합 에피토프가 항체 또는 이의 단편 내로 통합될 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 "구제 수용체 결합 에피토프"는 IgG 분자의 생체내 혈청 반감기 증가에 관여되는 IgG 분자(예컨대, IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4)의 Fc 영역의 에피토프를 나타낸다.
대안적으로, 증가된 반감기를 갖는 항체는 Fc 및 FcRn 수용체 간 상호작용에 관여되는 것으로 확인되는 아미노산 잔기를 변형함으로써 생성될 수 있다. 또한, 본원에 기재되는 항체의 반감기는 당분야에서 널리 이용되는 기법에 의해 PEG 또는 알부민으로의 접합에 의해 증가될 수 있다.
하나의 구현예에서, 본 발명은 Fc 영역이 Kabat에 나타낸 바와 같은 EU 인덱스에 의해 넘버링된 221, 225, 228, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 243, 244, 245, 247, 250, 251, 252, 254, 255, 256, 257, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 268, 269, 279, 280, 284, 292, 296, 297, 298, 299, 305, 308, 313, 316, 318, 320, 322, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 339, 341, 343, 370, 373, 378, 392, 416, 419, 421, 428, 433, 434, 435, 436, 440 및 443으로부터 선택되는 하나 이상의 위치에 변형(예컨대, 아미노산 치환, 아미노산 삽입, 아미노산 결실)을 포함하는 Fc 변이체를 제공한다. 선택적으로, Fc 영역은 당업자에게 공지된 추가적 및/또는 대안적 위치에 변형을 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 본 발명은 Fc 변이체를 제공하며, 여기서 Fc 영역은 Kabat에 나타낸 바와 같은 EU 인덱스에 의해 넘버링된 221K, 221Y, 225E, 225K, 225W, 228P, 234D, 234E, 234N, 234Q, 234T, 234H, 234Y, 234I, 234V, 234F, 235A, 235D, 235R, 235W, 235P, 235S, 235N, 235Q, 235T, 235H, 235Y, 235I, 235V, 235E, 235F, 236E, 237L, 237M, 237P, 239D, 239E, 239N, 239Q, 239F, 239T, 239H, 239Y, 240I, 240A, 240T, 240M, 241W, 241L, 241Y, 241E, 241R. 243W, 243L 243Y, 243R, 243Q, 244H, 245A, 247L, 247V, 247G, 250E, 250Q, 251F, 252L, 252Y, 254S, 254T, 255L, 256E, 256F, 256M, 257C, 257M, 257N, 262I, 262A, 262T, 262E, 263I, 263A, 263T, 263M, 264L, 264I, 264W, 264T, 264R, 264F, 264M, 264Y, 264E, 265A, 265G, 265N, 265Q, 265Y, 265F, 265V, 265I, 265L, 265H, 265T, 266I, 266A, 266T, 266M, 267Q, 267L, 268E, 269H, 269Y, 269F, 269R, 270E, 280A, 284M, 292P, 292L, 296E, 296Q, 296D, 296N, 296S, 296T, 296L, 296I, 296H, 296G, 297S, 297D, 297E, 298A, 298H, 298I, 298T, 298F, 299I, 299L, 299A, 299S, 299V, 299H, 299F, 299E, 305I, 308F, 313F, 316D, 318A, 318S, 320A, 320S, 322A, 322S, 325Q, 325L, 325I, 325D, 325E, 325A, 325T, 325V, 325H, 326A, 326D, 326E, 326G, 326M, 326V, 327G, 327W, 327N, 327L, 328S, 328M, 328D, 328E, 328N, 328Q, 328F, 328I, 328V, 328T, 328H, 328A, 329F, 329H, 329Q, 330K, 330G, 330T, 330C, 330L, 330Y, 330V, 330I, 330F, 330R, 330H, 331G, 331A, 331L, 331M, 331F, 331W, 331K, 331Q, 331E, 331S, 331V, 331I, 331C, 331Y, 331H, 331R, 331N, 331D, 331T, 332D, 332S, 332W, 332F, 332E, 332N, 332Q, 332T, 332H, 332Y, 332A, 333A, 333D, 333G, 333Q, 333S, 333V, 334A, 334E, 334H, 334L, 334M, 334Q, 334V, 334Y, 339T, 370E, 370N, 378D, 392T, 396L, 416G, 419H, 421K, 428L, 428F, 433K, 433L, 434A, 424F, 434W, 434Y, 436H, 440Y 및 443W로부터 선택되는 적어도 하나의 치환을 포함한다. 선택적으로, Fc 영역은 당업자에게 공지된 추가적 및/또는 대안적 아미노산 치환을 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 본 발명은 Fc 변이체 항체를 제공하며, 여기서 Fc 영역은 Kabat에 나타낸 바와 같은 EU 인덱스에 의해 넘버링된 228, 234, 235 및 331로부터 선택되는 하나 이상의 위치에 적어도 하나의 변형(예컨대, 아미노산 치환, 아미노산 삽입, 아미노산 결실)을 포함한다. 하나의 구현예에서, 변형은 Kabat에 나타낸 바와 같은 EU 인덱스에 의해 넘버링된 228P, 234F, 235E, 235F, 235Y 및 331S로부터 선택되는 적어도 하나의 치환이다.
다른 특정 구현예에서, 본 발명은 Fc 변이체 항체를 제공하며, 여기서 Fc 영역은 IgG4 Fc 영역이고 Kabat에 나타낸 바와 같은 EU 인덱스에 의해 넘버링된 228 및 235로부터 선택되는 하나 이상의 위치에 적어도 하나의 변형을 포함한다. 또 다른 특정 구현예에서, Fc 영역은 IgG4 Fc 영역이며 비-자연 생성 아미노산이 Kabat에 나타낸 바와 같은 EU 인덱스에 의해 넘버링된 228P, 235E 및 235Y로부터 선택된다.
또 다른 특정 구현예에서, 본 발명은 Fc 변이체를 제공하며, 여기서 Fc 영역은 Kabat에 나타낸 바와 같은 EU 인덱스에 의해 넘버링된 239, 330 및 332로부터 선택되는 하나 이상의 위치에 적어도 하나의 비-자연 생성 아미노산을 포함한다. 하나의 구현예에서, 변형은 Kabat에 나타낸 바와 같은 EU 인덱스에 의해 넘버링된 239D, 330L, 330Y 및 332E로부터 선택되는 적어도 하나의 치환이다.
특정 구현예에서, 본 발명은 Fc 변이체 항체를 제공하며, 여기서 Fc 영역은 Kabat에 나타낸 바와 같은 EU 인덱스에 의해 넘버링된 252, 254 및 256으로부터 선택되는 하나 이상의 위치에 적어도 하나의 비-자연 생성 아미노산을 포함한다. 하나의 구현예에서, 변형은 Kabat에 나타낸 바와 같은 EU 인덱스에 의해 넘버링된 252Y, 254T 및 256E로부터 선택되는 적어도 하나의 치환이다. 하나의 구현예에서, 변형은 Kabat에 나타낸 바와 같은 EU 인덱스에 의해 넘버링된 3개의 치환 252Y, 254T 및 256E("YTE"로 알려져 있음)를 포함한다.
소정 구현예에서 IgG 항체에 의해 유발되는 효과기 기능은 단백질의 Fc 영역에 결합된 탄수화물 모이어티에 의존한다(Claudia Ferrara et al., (2006) Biotechnology and Bioengineering 93:851-861). 따라서, Fc 영역의 글리코실화가 효과기 기능을 증가시키거나 감소시키기 위해 변형될 수 있다. 따라서, 하나의 구현예에서 항체의 Fc 영역은 아미노산 잔기의 변경된 글리코실화를 포함한다. 다른 구현예에서, 아미노산 잔기의 변경된 글리코실화는 감소된 효과기 기능을 일으킨다. 다른 구현예에서, 아미노산 잔기의 변경된 글리코실화는 증가된 효과기 기능을 일으킨다. 하나의 구현예에서, Fc 영역에서 푸코실화가 감소된다. 다른 구현예에서, Fc 영역은 비푸코실화된다.
IgG 분자 상의 올리고당에 대한 시알산의 부가는 이의 항염증 활성을 증강시키고 세포독성을 변경할 수 있다(Keneko et al., Science (2006) 313:670-673; Scallon et al., (2007) Mol. Immuno. 44(7):1524-34). 특히, 시알릴화가 증가된 IgG 분자는 항염증 특성을 갖는 반면, 시알릴화가 감소된 IgG 분자는 증가된 면역자극 특성을 갖는다(예컨대, ADCC 활성이 증가한다). 따라서, 항체는 특정한 치료 적용을 위해 적절한 시알릴화 프로필로 변형될 수 있다. 하나의 구현예에서, 항체의 Fc 영역은 원상태 Fc 영역에 비해 변경된 시알릴화 프로필을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체의 Fc 영역은 원상태 Fc 영역에 비해 증가된 시알릴화 프로필을 포함한다. 다른 구현예에서, 항체의 Fc 영역은 원상태 Fc 영역에 비해 감소된 시알릴화 프로필을 포함한다. Fc 도메인의 다른 변형 및/또는 치환 및/또는 부가 및/또는 결실은 당업자에게 쉽게 자명할 것이다.
글리코실화
하나의 구현예에서, 본 발명의 항체의 가변 영역에서의 글리코실화 패턴은 항원에 대한 항체의 친화도를 변경하기 위해 변형된다. 하나의 구현예에서, 항체는 비글리코실화된다(즉, 항체에 글리코실화가 없다). 이러한 탄수화물 변형은, 예를 들어, 항체 서열 내의 하나 이상의 글리코실화 부위를 변경함으로써 달성될 수 있다. 예를 들어, 하나 이상의 가변 영역 프레임워크 글리코실화 부위의 제거를 일으켜서 그 부위에서의 글리코실화를 제거하는 하나 이상의 아미노산 치환이 수행될 수 있다. 이러한 비글리코실화는 항원에 대한 항체의 친화도를 증가시킬 수 있다. 또한, 비글리코실화된 항체는 필요한 글리코실화 기구가 없는 박테리아 세포에서 생산될 수 있다.
항체 컨쥬게이트
다른 구현예에서, 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편은 모이어티에 공유 부착되며, 항체 컨쥬게이트로 나타낼 수 있다. 항체에 대한 부착에 적합한 모이어티는 비제한적으로 단백질, 펩타이드, 약물, 표지 및 세포독소를 포함하며, 항체 또는 단편의 하나 이상의 특징(예컨대, 생화학적, 결합 및/또는 기능적 특징)을 변경하거나 미세 조정하기 위해 항체 또는 이의 단편에 접합될 수 있다. 컨쥬게이트 형성, 아미노산 및/또는 폴리펩타이드 변화 및 번역-후 변형의 제조 방법은 당분야에 널리 공지되어 있다.
하나의 구현예에서, 부착되는 물질은 치료제, 검출 가능한 표지(본원에서 리포터 분자로도 나타냄) 또는 고체 지지체이다. 항체로의 부착에 적합한 물질은 비제한적으로 아미노산, 펩타이드, 단백질, 다당류, 뉴클레오사이드, 뉴클레오타이드, 올리고뉴클레오타이드, 핵산, 합텐, 약물, 호르몬, 지질, 지질 어셈블리, 합성 중합체, 중합체성 마이크로입자, 생물 세포, 바이러스, 형광단, 발색단, 염료, 독소, 합텐, 효소, 항체, 항체 단편, 방사선동위원소, 고체 매트릭스, 반고체 매트릭스 및 이의 조합을 포함한다.
소정 구현예에서, 항체는 고체 지지체에 접합된다. 항체는 스크리닝 및/또는 정제 및/또는 제조 공정의 일환으로 고체 지지체에 접합될 수 있다. 대안적으로 항체는 진단 방법 또는 조성물의 일환으로 고체 지지체에 접합될 수 있다. 적합한 고체 지지체는 전형적으로 액상에서 실질적으로 불용성이다. 다수의 지지체가 이용 가능하며, 당업자에게 공지되어 있고, 고체 및 반고체 매트릭스, 예컨대 에어로겔 및 하이드로겔, 수지, 비드, 바이오칩(박막 코팅 바이오칩 포함), 마이크로유체 칩, 실리콘 칩, 멀티웰 플레이트(마이크로타이터 플레이트 또는 마이크로플레이트로도 나타냄), 막, 전도성 및 비-전도성 금속, 유리(현미경 슬라이드 포함) 및 자기 지지체를 포함한다. 고체 지지체의 보다 구체적인 예는 실리카 겔, 중합체성 막, 입자, 유도체화된 플라스틱 필름, 유리 비드, 면, 플라스틱 비드, 알루미나 겔, 다당류, 예컨대 세파로스, 폴리(아크릴레이트), 폴리스티렌, 폴리(아크릴아미드), 폴리올, 아가로스, 한천, 셀룰로스, 덱스트란, 전분, FICOLL, 헤파린, 글리코겐, 아밀로펙틴, 만난, 이눌린, 니트로셀룰로스, 디아조셀룰로스, 폴리비닐클로라이드, 폴리프로필렌, 폴리에틸렌(폴리(에틸렌 글리콜) 포함), 나일론, 라텍스 비드, 자성 비드, 상자성 비드, 초상자성 비드 및 전분을 포함한다.
일부 구현예에서, 고체 지지체는 항체 부착을 위해 비제한적으로 하이드록실, 카복실, 아미노, 티올, 알데하이드, 할로겐, 니트로, 시아노, 아미도, 요소, 카보네이트, 카바메이트, 이소시아네이트, 설폰, 설포네이트, 설폰아미드 및 설폭시드를 포함하는 반응성 작용기를 포함할 수 있다.
적합한 고상 지지체는 다양한 합성 프로토콜에 대해 요망되는 최종 용도 및 적합성에 기반하여 선택될 수 있다. 예를 들어, 고체 지지체로 항체를 부착하기 위해 아미드 결합 형성이 요망되는 경우, 펩타이드 합성에서 일반적으로 유용한 수지, 예컨대 폴리스티렌(예컨대, Bachem Inc., Peninsula Laboratories 등에서 입수되는 PAM-수지), POLYHIPE™ 수지(Aminotech(캐나다)에서 입수됨), 폴리아미드 수지(Peninsula Laboratories에서 입수됨), 폴리에틸렌 글리콜이 그래프팅된 폴리스티렌 수지(TentaGel™, Rapp Polymere, Tubingen(독일)), 폴리디메틸-아크릴아미드 수지(Milligen/Biosearch(캘리포니아)에서 이용 가능함), 또는 PEGA 비드(Polymer Laboratories에서 입수됨)가 채택될 수 있다.
소정 구현예에서, 항체 또는 이의 단편은 항체 및/또는 그 연관된 리간드가 검출될 수 있는 진단 또는 다른 검정을 위해 표지에 접합된다. 표지는 비제한적으로 발색단, 형광단, 형광 단백질, 인광 염료, 일렬 염료, 입자, 합텐, 효소 및 방사선동위원소를 포함한다.
소정 구현예에서, 항체는 비제한적으로 피렌, 안트라센, 나프탈렌, 아크리딘, 스틸벤, 인돌 또는 벤즈인돌, 옥사졸 또는 벤족사졸, 티아졸 또는 벤조티아졸, 4-아미노-7-니트로벤즈-2-옥사-1,3-디아졸(NBD), 시아닌, 카보시아닌, 카보스티릴, 포르피린, 살리실레이트, 안트라닐레이트, 아줄렌, 페릴렌, 피리딘, 퀴놀린, 보라폴리아자인다센, 잔텐, 옥사진, 벤족사진, 카바진, 페날레논, 쿠마린, 벤조푸란, 벤즈페날레논 및 이의 유도체를 포함하는 형광단에 접합된다. 본원에서 사용되는 옥사진은 레소루핀, 아미노옥사지논, 디아미노옥사진 및 이의 벤조-치환 유사체를 포함한다.
특정 구현예에서, 형광단은 잔텐(로돌, 로다민, 플루오레신 및 이의 유도체) 쿠마린, 시아닌, 피렌, 옥사진 및 보라폴리아자인다센을 포함한다. 다른 구현예에서, 이러한 형광단은 설폰화 잔텐, 플루오르화 잔텐, 설폰화 쿠마린, 플루오르화 쿠마린 및 설폰화 시아닌이다. 또한 상표명 ALEXA FLUOR®, DyLight, CY® Dyes, BODIPY®, OREGON GREEN®, PACIFIC BLUE™, IRDYE®, FAM, FITC 및 ROX™ 하에 판매되며 일반적으로 이렇게 알려져 있는 염료가 포함된다.
항체에 부착되는 형광단의 선택은 접합된 항체의 흡수 및 형광 방출 특성을 결정할 것이다. 항체 및 항체 결합된 리간드에 대해 사용될 수 있는 형광단 표지의 물리적 특성은 비제한적으로 분광 특징(흡수, 방출 및 스토크 이동), 형광 세기, 수명, 편광 및 광-표백 속도 또는 이의 조합을 포함한다. 모든 이러한 물리적 특성이 하나의 형광단을 다른 것과 구별하기 위해 사용될 수 있고, 이에 의해 멀티플렉스화 분석을 허용한다. 소정 구현예에서, 형광단은 480 nm 초과의 파장에서 최대 흡수를 갖는다. 다른 구현예에서, 형광단은 488 nm 내지 514 nm에서 또는 그 근처(아르곤-이온 레이저 여기 광원의 출력에 의한 여기에 특히 적합함) 또는 546 nm 근처(수은 아크 램프에 의한 여기에 특히 적합함)에서 흡수한다. 다른 구현예에서, 형광단은 조직 또는 전체 유기체 적용을 위해 NIR(근적외선 영역)에서 방출할 수 있다. 형광 표지의 다른 요망되는 특성은, 예를 들어 항체의 표지가 세포 또는 유기체(예컨대, 살아있는 동물)에서 수행되어야 하는 경우, 세포 투과성 및 낮은 독성을 포함할 수 있다.
소정 구현예에서, 효소가 표지이며 본원에 기재되는 항체에 접합된다. 효소는 검출 가능한 신호의 증폭이 수득되어 검정 감수성을 증가시킬 수 있으므로 바람직한 표지이다. 효소 자체가 검출 가능한 반응을 생성하지는 않지만, 이것이 적절한 기질에 의해 접촉되는 경우 전환된 기질이 형광, 비색 또는 발광 신호를 생성하도록 기질을 분해하는 기능을 한다. 표지 시약 상의 하나의 효소가 검출 가능한 신호로 전환되는 여러 기질을 생성할 수 있으므로, 효소는 검출 가능한 신호를 증폭한다. 효소 기질은 바람직한 측정 가능한 산물, 예컨대 비색, 형광 또는 화학발광을 산출하도록 선택된다. 이러한 기질은 당분야에서 널리 사용되며 당업자에게 널리 공지되어 있다.
하나의 구현예에서, 비색 또는 플루오로겐성(fluorogenic) 기질 및 효소 조합은 산화환원효소, 예컨대 홀스래디쉬 퍼옥시다제 및 기질, 예컨대 구별되는 색상(각각 갈색 및 빨간색)을 산출하는 3,3'-디아미노벤지딘(DAB) 및 3-아미노-9-에틸카바졸(AEC)을 사용한다. 검출 가능한 산물을 산출하는 다른 비색 산화환원효소 기질은 비제한적으로 2,2-아지노-비스(3-에틸벤조티아졸린-6-설폰산)(ABTS), o-페닐렌디아민(OPD), 3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘(TMB), o-디아니시딘, 5-아미노살리실산, 4-클로로-1-나프톨을 포함한다. 플루오로겐성 기질은 비제한적으로 호모바닐산 또는 4-하이드록시-3-메톡시페닐아세트산, 환원된 페녹사진 및 환원된 벤조티아진, 예컨대 Amplex® Red 시약 및 그 변이체 및 환원된 디하이드로잔텐, 예컨대 디하이드로플루오레신 및 디하이드로로다민, 예컨대 디하이드로로다민 123을 포함한다. 티라마이드인 퍼옥시다제 기질은 이들이 효소 작용 전에 내재적으로 검출 가능할 수 있지만 티라마이드 신호 증폭(TSA)으로 설명되는 공정에서 퍼옥시다제의 작용에 의해 "위치에 고정된다"는 점에서 독특한 퍼옥시다제 기질 클래스를 나타낸다. 이들 기질은 현미경, 유세포 측정, 광학 스캐닝 및 형광측정에 의한 이의 후속 검출을 위해 세포, 조직 또는 어레이인 샘플에서 항원을 표지하기 위해 널리 이용된다.
다른 구현예에서, 비색(및 일부 경우 플루오로겐성) 기질 및 효소 조합은 비색 기질, 예컨대 5-브로모-6-클로로-3-인돌릴 포스페이트(BCIP), 6-클로로-3-인돌릴 포스페이트, 5-브로모-6-클로로-3-인돌릴 포스페이트, p-니트로페닐 포스페이트, 또는 o-니트로페닐 포스페이트와 또는 플루오로겐성 기질, 예컨대 4-메틸움벨리페릴 포스페이트, 6,8-디플루오로-7-하이드록시-4-메틸쿠마리닐 포스페이트 플루오레신 디포스페이트, 3-O-메틸플루오레신 포스페이트, 레소루핀 포스페이트, 9H-(1,3-디클로로-9,9-디메틸아크리딘-2-온-7-일) 포스페이트(DDAO 포스페이트), 또는 ELF 97, ELF 39 또는 관련 포스페이트와 조합된 포스파타제 효소, 예컨대 산 포스파타제, 알칼리성 포스파타제 또는 이러한 포스파타제의 재조합 버전을 사용한다.
글리코시다제, 특히 베타-갈락토시다제, 베타-글루쿠로니다제 및 베타-글루코시다제가 추가로 적합한 효소이다. 적절한 비색 기질은 비제한적으로 5-브로모-4-클로로-3-인돌릴 베타-D-갈락토피라노시드(X-gal) 및 유사한 인돌릴 갈락토시드, 글루코시드 및 글루쿠로니드, o-니트로페닐 베타-D-갈락토피라노시드(ONPG) 및 p-니트로페닐 베타-D-갈락토피라노시드를 포함한다. 하나의 구현예에서, 플루오로겐성 기질은 레소루핀 베타-D-갈락토피라노시드, 플루오레신 디갈락토시드(FDG), 플루오레신 디글루쿠로니드 및 이의 구조적 변이체, 4-메틸움벨리페릴 베타-D-갈락토피라노시드, 카복시움벨리페릴 베타-D-갈락토피라노시드 및 플루오린화 쿠마린 베타-D-갈락토피라노시드를 포함한다.
추가적인 효소는 비제한적으로 적합한 기질이 알려져 있는 가수분해효소, 예컨대 콜린에스터라제 및 펩티다제, 산화효소, 예컨대 글루코스 산화효소 및 시토크롬 산화효소 및 환원효소를 포함한다.
일부 검정에 있어서 화학발광을 생성하는 효소 및 이의 적절한 기질이 바람직하다. 이들은 비제한적으로 루시퍼라제 및 애쿠오린의 천연 및 재조합 형태를 포함한다. 포스파타제, 글리코시다제 및 산화효소에 대한 화학발광-생성 기질, 예컨대 안정한 디옥세탄, 루미놀, 이소루미놀 및 아크리디늄 에스테르를 함유하는 것들이 추가로 유용하다.
다른 구현예에서, 합텐, 예컨대 바이오틴이 표지로 사용될 수 있다. 바이오틴은 효소 시스템에서 검출 가능한 신호를 추가 증폭하는 기능을 할 수 있고 단리 목적을 위해 친화도 크로마토그래피에서 사용될 태그로서 기능할 수 있으므로 유용하다. 검출 목적을 위해, 바이오틴에 대한 친화도를 갖는 효소 컨쥬게이트, 예컨대 아비딘-HRP가 사용된다. 이후 퍼옥시다제 기질이 첨가되어 검출 가능한 신호를 생성한다.
합텐은 또한 호르몬, 자연 생성 및 합성 약물, 오염물질, 알레르기원, 효과기 분자, 성장 인자, 케모카인, 사이토카인, 림포카인, 아미노산, 펩타이드, 화학적 중간체, 뉴클레오타이드 등을 포함한다.
소정 구현예에서, 형광 단백질이 표지로서 항체에 접합될 수 있다. 형광 단백질의 예는 녹색 형광 단백질(GFP) 및 피코빌리단백질 및 이의 유도체를 포함한다. 형광 단백질, 특히 피코빌리단백질은 일렬 염료 표지된 표지 시약의 생성을 위해 특히 유용하다. 이러한 일렬 염료는 방출 스펙트럼이 형광 단백질의 흡수 스펙트럼 파장에서 멀리 이동하는 경우 더 큰 스토크 이동을 수득하기 위한 목적으로 형광 단백질 및 형광단을 포함한다. 이는 방출된 형광 빛이 최대로 최적화되는, 다시 말하면 방출된 빛이 형광 단백질에 의해 거의 내지 전혀 재흡수되지 않는 샘플에서 적은 양의 항원을 검출하기 위해 특히 유리하다. 이것이 작용하기 위해, 형광 단백질 및 형광단은 형광단이 흡수하는 파장에서 형광 단백질이 방출한 후 형광 단백질로만 수득될 수 있었을 형광 단백질에서보다 먼 파장에서 형광단이 방출하는 에너지 전달 페어로서 기능한다. 대안적으로, 형광단은 에너지 공여체로 기능하며, 형광 단백질은 에너지 수신체(acceptor)이다.
의학적 치료 및 용도
본원에 기재되는 항-인플루엔자 A 항체 및 이의 결합 단편 및 변이체는 인플루엔자 A 바이러스 감염의 치료, 감소, 예방 및/또는 검출, 진단 및/또는 예진을 위해 사용될 수 있다.
진단 방법은 항체 또는 항체 단편과 샘플을 접촉시키는 단계를 포함할 수 있다. 이러한 샘플은, 예를 들어, 비강 통과물, 굴 강(sinus cavities), 침샘, 폐, 간, 췌장, 신장, 귀, 눈, 태반, 소화관, 심장, 난소, 뇌하수체, 부신, 갑상샘, 뇌 또는 피부로부터 취한 조직 샘플일 수 있다. 검출, 진단 및/또는 예진 방법은 또한 항원/항체 복합체의 검출을 포함할 수 있다.
하나의 구현예에서, 본 발명은 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 약학 조성물의 유효량을 대상체에 투여하는 대상체의 치료 방법을 제공한다. 하나의 구현예에서, 방법은 대상체에서 인플루엔자 A 바이러스 감염을 감소시킨다. 다른 구현예에서, 방법은 대상체에서 인플루엔자 A 바이러스 감염을 예방하거나, 그 위험을 감소시키거나, 이를 지연시킨다. 하나의 구현예에서, 대상체는 포유류이다. 보다 특정한 구현예에서, 대상체는 인간이다. 하나의 구현예에서, 대상체는 비제한적으로, 예를 들어, 면역손상 대상체를 포함하는, 특히 인플루엔자 A 바이러스 감염에 대해 위험에 처한 또는 이에 취약한 대상을 포함한다.
하나의 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 실질적으로 정제된다(즉, 그 효과를 제한하거나 바람직하지 않은 부작용을 생성하는 물질이 실질적으로 없다). 하나의 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 노출-후, 또는 대상체가 인플루엔자 A 바이러스에 노출된 후 또는 인플루엔자 A 바이러스에 감염된 후 투여된다. 다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 노출-전 또는 아직 인플루엔자 A 바이러스에 노출된 바 없거나 아직 인플루엔자 A 바이러스에 감염되지 않은 대상체에 투여된다. 하나의 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하나 이상의 인플루엔자 A 서브타입에 대해 혈청-음성인 대상체에 투여된다. 다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하나 이상의 인플루엔자 A 서브타입에 대해 혈청-양성인 대상체에 투여된다. 다른 구현예에서, 환자의 혈청 상태는 알려져 있지 않다. 하나의 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 노출, 감염 또는 증상 개시의 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일 또는 7일 내에 대상체에 투여된다. 다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 노출, 감염 또는 증상 개시 후의 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 10일, 15일, 20일, 25일, 30일 또는 이들 사이의 임의의 일수에 대상체에 투여될 수 있다.
치료는 단회 용량 일정 또는 다회 용량 일정일 수 있고, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 수동 면역화에서 사용될 수 있다.
하나의 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다른 항바이러스 약제의 투여 없이 대상체에 투여된다. 다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하나 이상의 항바이러스 약제와의 조합으로 대상체에 투여된다. 하나의 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하나 이상의 소분자 항바이러스 약제와의 조합으로 대상체에 투여된다. 소분자 항바이러스 약제는 뉴라미니다제 억제제, 예컨대 오셀타미비르(TAMIFLU®), 자나미비르(RELENZA®) 및 아다만탄, 예컨대 아만타딘(Amantadine) 및 리만타딘을 포함한다.
다른 구현예에서, 본 발명은 인플루엔자 A 바이러스 감염의 예방 또는 치료를 위한 약제로 사용하기 위한 조성물을 제공한다. 하나의 구현예에서, 조성물은 본원에 기재되는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 하나의 구현예에서, 조성물은 단독 항바이러스 약제로서 본원에 기재되는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 다른 구현예에서, 조성물은 하나 이상의 추가적인 항바이러스 약제와의 조합으로 본원에 기재되는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다.
본 발명은 또한 약학 조성물의 제조 방법을 제공하며, 이는 모노클로날 항체를 하나 이상의 약제학적으로 허용 가능한 담체와 혼합하는 단계를 포함하고, 항체는 모노클로날 항체이다.
본 발명은 또한 약학 조성물을 제공한다. 이러한 조성물은 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 치료 유효량 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함한다. 본원에서 사용되는 용어 "약제학적으로 허용 가능한"은 동물, 및 보다 구체적으로 인간에서의 사용에 대해 연방 또는 주 정부의 규제 당국에 의해 승인되거나 미국 약전 또는 다른 일반적으로 인식되는 약전에 등재되어 있음을 의미한다. 용어 "담체"는 치료제와 함께 투여되는 희석제, 아주반트, 부형제 또는 비히클을 나타낸다. 하나의 구현예에서, 약학 조성물은 환자에 대한 적절한 투여를 위한 형태를 제공하기 위해 적합한 양의 담체와 함께, 예를 들어, 정제된 형태의, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 치료 유효량을 함유한다. 제형물은 투여 방식에 적합해야 한다.
용량투여 및 투여
본원에서 사용되는 용어 "용량"은 특정된 시간 또는 특정된 간격에 취해지는 특정량의 항체 치료제를 나타낸다. 본원에서 사용되는 용어 "용량투여"는 치료 목적을 달성하기 위한 조성물, 예를 들어, 본원에 기재되는 항체 또는 항체 단편을 포함하는 약학 조성물의 투여를 나타낸다.
"용량투여 일정"은 용량 및 용량이 투여되는 시간 간격을 모두 나타낸다. 하나의 구현예에서, 용량투여 일정은 치료 사이클의 일환이다. 본원에서 사용되는 용어 "치료 사이클"은 항체가 투여된 후 항체를 투여하지 않는 기간이 뒤따르는 기간을 나타내며, 여기서 후속 사이클의 시작은 치료 사이클이 항체 투여일 간에 휴지기를 허용하도록 하는 항체 투여의 재-개시로 표시된다. 치료 사이클은 일수에 있어서, 예를 들어, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일, 21일, 22일, 23일, 24일, 25일, 26일, 27일, 28일, 29일, 또는 30일로 변할 수 있다.
하나의 구현예에서, 항체는 1일을 초과해서 투여될 수 있다. 예를 들어, 항체는 1일 동안 1일 1회, 또는 2일 이상의 연속 일로 1일 1회 투여될 수 있고, 예를 들어, 항체는 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 또는 10일 동안 1일 1회 투여될 수 있다. 하나의 구현예에서, 동일한 용량의 항체가 매일 투여된다. 다른 구현예에서, 상이한 용량의 항체가 하나 이상의 날에 투여된다. 예를 들어, 환자는 전날 수여받은 용량에 비해, 투여일에 더 높은 용량의 항체를 수여받을 수 있다. 대안적으로, 환자는 전날 수여받은 용량에 비해 하나의 투여일에 더 낮은 용량의 항체를 수여받을 수 있다. 다른 구현예에서, 항체 투여는 하나 이상의 치료 사이클에 걸쳐 일어날 수 있다. 하나의 구현예에서, 동일한 용량투여 일정이 후속 치료 사이클에서, 즉 첫 번째 치료 사이클이 완료된 후 반복될 수 있다.
하나의 구현예에서, 적어도 약 200 ㎎, 225 ㎎, 250 ㎎, 275 ㎎, 300 ㎎, 325 ㎎, 350 ㎎, 375 ㎎, 400 ㎎, 425 ㎎, 450 ㎎, 475 ㎎, 500 ㎎, 525 ㎎, 550 ㎎, 575 ㎎, 600 ㎎, 625 ㎎, 650 ㎎, 675 ㎎, 700 ㎎, 725 ㎎, 750 ㎎, 775 ㎎, 800 ㎎, 825 ㎎, 850 ㎎, 875 ㎎, 900 ㎎, 925 ㎎, 950 ㎎, 975 ㎎, 1,000 ㎎, 1,250 ㎎, 1,500 ㎎, 1,750 ㎎, 2,000 ㎎, 2,250 ㎎, 2,500 ㎎, 2,750 ㎎, 3,000 ㎎, 3,250 ㎎, 또는 3,500 ㎎의 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 환자에 투여된다.
하나의 구현예에서, 최대 200 ㎎, 225 ㎎, 250 ㎎, 275 ㎎, 300 ㎎, 325 ㎎, 350 ㎎, 375 ㎎, 400 ㎎, 425 ㎎, 450 ㎎, 475 ㎎, 500 ㎎, 525 ㎎, 550 ㎎, 575 ㎎, 600 ㎎, 625 ㎎, 650 ㎎, 675 ㎎, 700 ㎎, 725 ㎎, 750 ㎎, 775 ㎎, 800 ㎎, 825 ㎎, 850 ㎎, 875 ㎎, 900 ㎎, 925 ㎎, 950 ㎎, 975 ㎎, 1,000 ㎎, 1,250 ㎎, 1,500 ㎎, 1,750 ㎎, 2,000 ㎎, 2,250 ㎎, 2,500 ㎎, 2,750 ㎎, 3,000 ㎎, 3,250 ㎎ 또는 3,500 ㎎의 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 환자에 투여된다.
다른 구현예에서, 약 200 ㎎, 225 ㎎, 250 ㎎, 275 ㎎, 300 ㎎, 325 ㎎, 350 ㎎, 375 ㎎, 400 ㎎, 425 ㎎, 450 ㎎, 475 ㎎, 500 ㎎, 525 ㎎, 550 ㎎, 575 ㎎, 600 ㎎, 625 ㎎, 650 ㎎, 675 ㎎, 700 ㎎, 725 ㎎, 750 ㎎, 775 ㎎, 800 ㎎, 825 ㎎, 850 ㎎, 875 ㎎, 900 ㎎, 925 ㎎, 950 ㎎, 975 ㎎, 1,000 ㎎, 1,250 ㎎, 1,500 ㎎, 1,750 ㎎, 2,000 ㎎, 2,250 ㎎, 2,500 ㎎, 2,750 ㎎, 3,000 ㎎, 3,250 ㎎ 또는 3,500 ㎎의 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 환자에 투여된다.
다른 구현예에서, 200 ㎎, 225 ㎎, 250 ㎎, 275 ㎎, 300 ㎎, 325 ㎎, 350 ㎎, 375 ㎎, 400 ㎎, 425 ㎎, 450 ㎎, 475 ㎎, 500 ㎎, 525 ㎎, 550 ㎎, 575 ㎎, 600 ㎎, 625 ㎎, 650 ㎎, 675 ㎎, 700 ㎎, 725 ㎎, 750 ㎎, 775 ㎎, 800 ㎎, 825 ㎎, 850 ㎎, 875 ㎎, 900 ㎎, 925 ㎎, 950 ㎎, 975 ㎎, 1,000 ㎎, 1,250 ㎎, 1,500 ㎎, 1,750 ㎎, 2,000 ㎎, 2,250 ㎎, 2,500 ㎎, 2,750 ㎎, 3,000 ㎎, 3,250 ㎎ 또는 3,500 ㎎의 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 환자에 투여된다.
하나의 구현예에서, 본원에서 제공되는 용량은 평균 체중 및 다른 관련된 생물학적 특징을 갖는 성인으로의 투여를 위한 것이다. 다른 구현예에서, 용량은 평균 체중 또는 다른 관련된 생물학적 특징을 갖지 않는 성인(예를 들어, 비만 또는 소아 환자 포함)으로의 투여를 위한 것이며, 용량은 체중 또는 다른 관련된 생물학적 특징과 같은 것들을 보상하기 위해 조정된다. 다른 구현예에서, 본원에서 제공되는 용량은 유아 또는 어린이로의 투여를 위한 것이며, 용량은 체중 및 다른 관련된 생물학적 특징과 같은 것들을 보상하기 위해 조정된다.
항체는 임의의 편리한 경로에 의해 투여될 수 있으며, 다른 생물학적 활성 제제와 함께, 예를 들어 하나 이상의 항바이러스 약제, 예컨대 오셀타미비르(TAMIFLU®), 자나미비르(RELENZA®) 및 아다만탄, 예컨대 아만타딘 및 리만타딘과의 조합으로 투여될 수 있다.
투여는 전신 또는 국소일 수 있고 단회 용량 또는 다회 용량으로 투여될 수 있다.
다양한 전달 시스템이 알려져 있으며, 항-인플루엔자 A 항체를 투여하기 위해 사용될 수 있다. 투여 방법은 비제한적으로 피내, 근육내, 복강내, 정맥내 및 피하 투여를 포함하는 비경구 투여; 경막외 및 예를 들어 비내, 흡입 및 경구 경로를 포함하는 점막 경로를 포함한다. 보다 특정한 구현예에서, 항체는 비경구, 예를 들어, 근육내, 정맥내 또는 피하 투여된다.
하나의 구현예에서, 항체는 정맥내 투여된다. 보다 특정한 구현예에서, 항체는 정맥내(IV) 주입 펌프를 사용해서 투여된다. 하나의 구현예에서, 항체는 적어도 약 1 ㎎/분, 5 ㎎/분, 10 ㎎/분, 15 ㎎/분 또는 20 ㎎/분, 25 ㎎/분, 30 ㎎/분, 35 ㎎/분, 40 ㎎/분, 45 ㎎/분 또는 50 ㎎/분의 주입 속도로 정맥내 투여된다. 다른 구현예에서, 주입 속도는 약 10 ㎎/분, 15 ㎎/분 또는 20 ㎎/분, 25 ㎎/분, 30 ㎎/분, 40 ㎎/분, 또는 50 ㎎/분이다. 하나의 구현예에서, 항체는 일정 시기에 걸쳐, 예를 들어, 적어도 약 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간 또는 6시간 내지 최대 약 3시간, 4시간, 5시간 또는 6시간의 기간에 걸쳐 IV 주입에 의해 투여된다. 다른 구현예에서, 항체는 일정 시기, 예를 들어, 약 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간 또는 6시간에 걸쳐 IV 주입에 의해 투여된다.
키트 및 제조 물품
다른 구현예에서, 인플루엔자 A 바이러스 감염의 치료 및/또는 예방에 유용한 물질을 함유하는 제조 물품이 제공된다. 하나의 구현예에서, 제조 물품은 용기 및 용기 상의 또는 이와 연관된 라벨 또는 패키지 삽입물을 포함한다. 적합한 용기는, 예를 들어, 병, 바이알 및 시린지를 포함하며, 예를 들어, 유리 또는 플라스틱을 포함하는 다양한 물질로 형성될 수 있다. 하나의 구현예에서, 용기는 인플루엔자 A 바이러스 감염의 치료 및/또는 예방에 효과적인 조성물을 보유한다. 하나의 구현예에서, 조성물은 본원에 기재되는 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편을 포함한다.
하나의 구현예에서, 제조 물품은 조성물이 인플루엔자 A 바이러스 감염의 치료 및/또는 예방을 위해 사용됨을 시사하는 라벨 또는 패키지 삽입물을 포함한다. 하나의 구현예에서, 라벨 또는 패키지 삽입물은 항체 또는 항원 결합 단편이 노출-후, 또는 대상체가 인플루엔자 A 바이러스에 노출된 후 또는 인플루엔자 A 바이러스에 감염된 후 투여될 수 있음을 시사한다. 다른 구현예에서, 라벨 또는 패키지 삽입물은 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 노출-전에, 또는 아직 인플루엔자 A 바이러스에 노출된 바 없거나 아직 인플루엔자 A 바이러스에 감염되지 않은 대상체에 투여될 수 있음을 시사한다. 하나의 구현예에서, 라벨 또는 패키지 삽입물은 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 하나 이상의 인플루엔자 A 서브타입에 대해 혈청-음성인 대상체에 투여될 수 있음을 시사한다. 다른 구현예에서, 라벨 또는 패키지 삽입물은 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 하나 이상의 인플루엔자 A 서브타입에 대해 혈청-양성인 대상체에 투여될 수 있음을 시사한다. 다른 구현예에서, 조성물은 그 혈청 상태가 알려지지 않은 환자에 투여된다. 하나의 구현예에서, 라벨 또는 패키지 삽입물은 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 노출, 감염 또는 증상 개시의 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일 또는 7일 내에 대상체에 투여될 수 있음을 시사한다. 다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 노출, 감염 또는 증상 개시 후의 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 10일, 15일, 20일, 25일, 30일 또는 이들 사이의 임의의 일수에 대상체에 투여될 수 있다.
하나의 구현예에서, 제조 물품은 항-인플루엔자 A 항체 또는 단편에 부가하여, 비제한적으로 뉴라미니다제 억제제, 예컨대 오셀타미비르(TAMIFLU®), 자나미비르(RELENZA®) 및 아다만탄, 예컨대 아만타딘 및 리만타딘을 포함하는 하나 이상의 소분자 항바이러스 약제를 포함한다.
본 발명에 기재되는 항체 및 이의 단편은 또한 인플루엔자 A 바이러스 감염의 진단용 키트에 또는 백신 면역원성의 모니터링용 키트에 포함될 수 있다.
실시예
실시예 1
MEDI8852의 안전성 및 약동학을 건강한 성인에서의 이중 맹검, 단회-용량, 위약-대조, 용량-증량 연구에서 평가하였다.
A. 대상체
다음 포함 기준을 사용하여 40명의 대상체를 평가하였다: 건강한 남성 또는 여성, 18세 내지 65세, 45 kg 내지 110 kg 체중, 수축기 혈압(BP) 140 mm Hg 미만 및 이완기 혈압 90 mm Hg 미만.
B. 용량
40명의 대상체를 1일(용량투여 첫 번째 날)에 4개의 고정-용량 코호트에 걸쳐 코호트 별로 단회 IV 용량의 MEDI8852 또는 위약을 수여받도록 무작위화하였다. MEDI8852를 50 ㎎/㎖의 농도로 멸균 액체 완제 의약품으로 공급하고 2℃ 내지 8℃(36°F 내지 46°F)에 보관하였다. 투여 전에, MEDI8852를 IV 백에서 0.9%(w/v) 식염수 중에 희석하고 IV 주입으로 투여하였다. 위약/희석제는 주사용 0.9%(w/v) 식염수였다. 20 ㎎/분의 일정한 주입 속도로 저-단백질 결합 0.2 ㎛ 또는 0.22 ㎛ 필터를 통해 IV 주입 펌프를 사용하여 IV 주입액을 투여하였다.
40명의 대상체를 다음 4개 코호트로 무작위화하였다:
· 코호트 1: 단회 IV 주입으로 250 ㎎ MEDI8852(n = 6) 또는 위약(n = 2)
· 코호트 2: 단회 IV 주입으로 750 ㎎ MEDI8852(n = 10) 또는 위약(n = 2)
· 코호트 3: 단회 IV 주입으로 1,500 ㎎ MEDI8852(n = 10) 또는 위약(n = 2)
· 코호트 4: 단회 IV 주입으로 3,000 ㎎ MEDI8852(n = 6) 또는 위약(n = 2)
C. 약동학
검증된 샌드위치 효소-연관 면역흡착 검정 방법을 사용하여 MEDI8852의 약동학(PK)을 평가하기 위해 혈액 샘플을 수집하였다. 혈액 샘플을 미리-특정된 시점에 채혈하였다.
도 1에 나타낸 평균 ± 표준 편차 그래프는 MEDI8852 농도 프로필이 일반적으로 초기의 신속한 감소에 뒤따르는 더 느린 감소를 실증함을 나타낸다.
Phenix WinNonlin(Pharsight Corporation(세인트루이스, 미주리)을 사용하는 비-구획 분석(NCA)을 수행하여 다음 PK 파라미터를 산정하였다: 최대 혈청 농도(Cmax), 최대 혈청 농도까지의 시간(Tmax), 반감기(t1/2), 시간 0부터 t까지의 농도-시간 곡선 하 면적(AUC0-t), 시간 0부터 무한대까지의 농도-시간 곡선 하 면적(AUC0-inf), 항정 상태에서의 부피(Vss), 분포 부피(Vz) 및 제거율(CL). 표 1에 나타낸 결과는 단회 IV 용량 후 반감기가 대략 19.4일 내지 22.6일이었음을 시사한다. 또한, 용량군 간 반감기, 제거율(CL) 및 항정 상태에서의 분포 부피(Vss)에 대해 일관된 PK값은 MEDI8852 PK가 용량-비례임을 시사한다.
Figure pct00001
D. 집단 모델링 및 시뮬레이션
NONMEM(version 7.2)(ICON Development Solutions(더블린, 아일랜드)에서 상업적으로 이용 가능함)을 사용하여 집단 분석을 수행하였다. 1차수 제거를 이용하는 2구획 모델을 사용하여 데이터를 기술하였다. 이어서 NONMEM 집단 모델을 사용하여 MEDI8852 집단 PK를 시뮬레이션하였다(도 2). 결과는 750 ㎎ 군 내지 3,000 ㎎ 군 간에 우수한 농도 분리를 나타낸다.
E. 항-약물 항체
혈액 샘플을 15(±1)일, 29(±2)일 및 101(±5)일에 채혈하여 전기화학발광, 용액상, 가교 면역검정을 사용해서 혈청 중 MEDI8852에 대한 항-약물 항체(ADA) 반응을 평가하였다. 모든 ADA 결과는 음성이었다(즉, 항-약물 항체가 확인되지 않았다).
실시예 2
MEDI8852를 사용하여 1b/2a상 임상 연구를 다음과 같이 수행한다. 인플루엔자 A 바이러스 감염을 갖는 외래 환자 개인에게 750 ㎎ 또는 3000 ㎎ 용량으로 IV 투여에 의해 MEDI8852를 투여한다. 일부 개인에게 MEDI8852 투여 전에, 투여 시, 또는 후에, 현재 표준 케어인 오셀타미비르를 또한 투여한다. 감염은 연구 장소에서 양성 신속 항원 평가로 확인하거나 배양, PCR 또는 항원 평가로 확인할 수 있다. 치료 요법을 아래의 표 2에 나타낸다.
치료 요법
코호트 대상체의 수 치료 요법
1 40 5일 동안 75 ㎎ 오셀타미비르 PO BID 및 750 ㎎ MEDI8852 단회 IV 주입
2 40 5일 동안 75 ㎎ 오셀타미비르 PO BID 및 3,000 ㎎ MEDI8852 단회 IV 주입
3 40 5일 동안 75 ㎎ 오셀타미비르 PO BID 및 위약 단회 IV 주입
4 40 3,000 ㎎ MEDI8852 단회 IV 주입
후속 용량이 투여될 수 있지만, 일반적으로 항체의 1회 용량투여 요법이 고려된다.
MEDI8852의 유효성은 10일까지 1일 2회 7가지 인플루엔자 증상(기침, 코 막힘, 목 통증, 피로, 두통, 근육통 및 열감)에 대해 4-점 척도(0, 없음; 1, 경도; 2, 중등도; 3, 중증)를 사용해서; 그리고 10일까지 매일 11-점 시각적 아날로그 척도(0, 정상 활동을 수행할 수 없음; 10, 정상 활동을 충분히 수행할 수 있음)를 사용해서 평가할 수 있다.
인플루엔자 증상의 기간 및 중증도뿐만 아니라 일반 활동을 수행하는 능력으로의 회복까지의 시간은 서술적 통계를 사용해서 요약할 수 있다. 인플루엔자 증상 해소까지의 시간은 카플란-마이어(Kaplan-Meier) 곡선에 의해 요약할 수 있다.
MEDI8852+오셀타미비르의 안전성 프로필은 오셀타미비르 단독의 프로필과 유사하며, MEDI8852+오셀타미비르의 해소까지의 시간은 오셀타미비르 단독에서보다 빠르다.
실시예 3
MEDI8852를 사용하는 2b상 임상 연구를 다음과 같이 수행한다. 인플루엔자 A 바이러스 감염을 갖는 입원한 개인에게 250 ㎎, 750 ㎎, 1500 ㎎, 또는 3000 ㎎의 용량으로 MEDI8852를 정맥내 투여한다. 감염은 연구 장소에서 양성 신속 항원 평가로 확인할 수 있거나, 배양, PCR 또는 항원 평가로 확인할 수 있다. 일부 개인에게 MEDI8852 투여 전에, 투여 시, 또는 후에 현재 표준 케어인 오셀타미비르를 또한 투여할 수 있다. 투여 요법은 현지 처방 정보를 따라야 하며, 5일 동안 하루 2회(BID) 경구(PO) 75 ㎎ 오셀타미비르를 포함할 수 있다. 일부 대상체는 최대 10일 동안 최대 150 ㎎ PO BID의 용량으로 오셀타미비르를 수여받을 수 있고 다른 대상체는 또한 흡입 자나미비르를 수여받을 수 있다. 후속 용량이 투여될 수 있지만, 일반적으로 항체의 1회 용량투여 요법이 고려된다.
안전성 프로필은 오셀타미비르와 유사하며, 유효성은 오셀타미비르 단독에 비해 우수하다. 호흡 기능(일차 종결점)의 정상화까지의 시간에 의해 그리고 다른 이차 종결점에 의해 유효성을 평가할 수 있다.
참고문서로 포함
특허, 특허 출원, 논문, 교과서 등을 포함하는 본원에서 인용되는 모든 참고문헌 및 여기에서 인용되는 참고문헌은 기존의 내용이 아닌 정도까지, 이의 전문이 본원에 참조로 포함된다.
서열 정보
SEQ ID NO: 1(VH 뉴클레오타이드 서열)
Figure pct00002
SEQ ID NO: 2 (VH 아미노산 서열)
Figure pct00003
SEQ ID NO: 3 HCDR1
Figure pct00004
SEQ ID NO: 4 HCDR2
Figure pct00005
SEQ ID NO: 5 HCDR3
Figure pct00006
SEQ ID NO: 6(VL 뉴클레오타이드 서열)
Figure pct00007
SEQ ID NO: 7 (VL 아미노산 서열)
Figure pct00008
SEQ ID NO: 8 LCDR1
Figure pct00009
SEQ ID NO: 9 LCDR2
Figure pct00010
SEQ ID NO: 10 LCDR3
Figure pct00011
SEQUENCE LISTING <110> MedImmune, LLC Kallewaard-LeLay, Nicole Mallory, Rabum Robbie, Gabriel Ren, Song <120> METHOD OF TREATING INFLUENZA A <130> FLUA-200P1 <140> To Be Assigned <141> Herewith <160> 10 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 384 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 1 caggtccagc tgcagcagag cggccccgga ctggtcaagc cttcacagac actgagcctg 60 acatgcgcca ttagcggaga tagcgtgagc tcctacaatg ccgtgtggaa ctggatcagg 120 cagtctccaa gtcgaggact ggagtggctg ggacgaacat actatagatc cgggtggtac 180 aatgactatg ctgaatcagt gaaaagccga attactatca accccgatac ctccaagaat 240 cagttctctc tgcagctgaa cagtgtgacc cctgaggaca cagccgtgta ctactgcgcc 300 agaagcggcc atatcaccgt ctttggcgtc aatgtggatg ctttcgatat gtgggggcag 360 gggactatgg tcaccgtgtc aagc 384 <210> 2 <211> 128 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 2 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Tyr 20 25 30 Asn Ala Val Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Gly Trp Tyr Asn Asp Tyr Ala 50 55 60 Glu Ser Val Lys Ser Arg Ile Thr Ile Asn Pro Asp Thr Ser Lys Asn 65 70 75 80 Gln Phe Ser Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val 85 90 95 Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Gly His Ile Thr Val Phe Gly Val Asn Val 100 105 110 Asp Ala Phe Asp Met Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 3 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 3 Ser Tyr Asn Ala Val Trp Asn 1 5 <210> 4 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 4 Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Gly Trp Tyr Asn Asp Tyr Ala Glu Ser Val 1 5 10 15 Lys Ser <210> 5 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 5 Ser Gly His Ile Thr Val Phe Gly Val Asn Val Asp Ala Phe Asp Met 1 5 10 15 <210> 6 <211> 309 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 6 gatattcaga tgacccagag cccttccagc ctgtccgctt cagtggggga tcgagtgacc 60 attacctgcc gaaccagcca gagcctgagc tcctacacgc actggtatca gcagaagccc 120 ggcaaagccc ctaagctgct gatctacgcc gcttctagtc gggggtccgg agtgccaagc 180 cggttctccg gatctgggag tggaaccgac tttaccctga caatttcaag cctgcagccc 240 gaggatttcg ctacatacta ctgtcagcag agcagaactt tcgggcaggg cactaaggtg 300 gagatcaaa 309 <210> 7 <211> 103 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 7 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Ser Leu Ser Ser Tyr 20 25 30 Thr His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Arg Gly Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Arg Thr Phe Gly Gln 85 90 95 Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 <210> 8 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 8 Arg Thr Ser Gln Ser Leu Ser Ser Tyr Thr His 1 5 10 <210> 9 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 9 Ala Ala Ser Ser Arg Gly Ser 1 5 <210> 10 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 10 Gln Gln Ser Arg Thr 1 5

Claims (41)

  1. 환자에서 인플루엔자 A 바이러스 감염의 치료 방법으로서, 인플루엔자 A 바이러스의 적어도 하나의 1군 서브타입 및 적어도 하나의 2군 서브타입의 인플루엔자 A 바이러스 헤마글루티닌에 결합할 수 있는 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편 적어도 약 200 ㎎ 내지 최대 약 3500 ㎎을 환자에 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  2. 환자에서 인플루엔자 A 바이러스 감염의 감소 방법으로서, 인플루엔자 A 바이러스의 적어도 하나의 1군 서브타입 및 적어도 하나의 2군 서브타입의 인플루엔자 A 바이러스 헤마글루티닌에 결합할 수 있는 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편 적어도 약 200 ㎎ 내지 최대 약 3500 ㎎을 환자에 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  3. 환자에서 인플루엔자 A 바이러스 감염의 예방 방법으로서, 인플루엔자 A 바이러스의 적어도 하나의 1군 서브타입 및 적어도 하나의 2군 서브타입의 인플루엔자 A 바이러스 헤마글루티닌에 결합할 수 있는 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편 적어도 약 200 ㎎ 내지 최대 약 3500 ㎎을 환자에 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편이 적어도 약 250 ㎎ 내지 최대 약 3000 ㎎의 용량으로 투여되는 방법.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편이 인플루엔자 A 바이러스의 적어도 하나의 1군 서브타입 및 적어도 하나의 2군 서브타입을 중화시킬 수 있는 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 투여 단계가 비경구 투여를 포함하는 방법.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 투여 단계가 정맥내 투여를 포함하는 방법.
  8. 제7항에 있어서, 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편이 단회 용량으로 투여되는 방법.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 환자가 인플루엔자 A 바이러스에 노출되거나, 인플루엔자 A 바이러스에 감염되거나, 인플루엔자 A 바이러스 감염 증상을 나타내거나, 이의 조합 후에 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편이 투여되는 방법.
  10. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 환자가 인플루엔자 A 바이러스에 노출되거나, 인플루엔자 A 바이러스에 감염되거나, 인플루엔자 A 바이러스 감염 증상을 나타내거나, 이의 조합 전에 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편이 투여되는 방법.
  11. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편이 노출, 감염, 증상 개시 또는 이의 조합의 30일 내에 대상체에 투여되는 방법.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편이 H1, H2, H5, H6, H8, H9, H11, H12, H13, H16, H17, H18 및 이의 변이체로부터 선택되는 하나 이상의 인플루엔자 A 바이러스 1군 서브타입; 및 H3, H4, H7, H10, H14 및 H15 및 이의 변이체로부터 선택되는 하나 이상의 인플루엔자 A 바이러스 2군 서브타입을 중화시킬 수 있는 방법.
    [청구항 12]
    제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편이 SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 및 SEQ ID NO: 5로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 75% 동일한 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 중쇄 CDR 및 SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 및 SEQ ID NO: 10에 나타낸 아미노산 서열로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 75% 동일한 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 경쇄 CDR을 포함하는 방법.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편이 SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 및 SEQ ID NO: 5로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 중쇄 CDR 및 SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 및 SEQ ID NO: 10으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 경쇄 CDR을 포함하는 방법.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편이 SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열과 적어도 75% 동일한 아미노산 서열을 갖는 VH 및 SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열과 적어도 75% 동일한 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하는 방법.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편이 SEQ ID NO: 2에 나타낸 아미노산 서열을 갖는 VH 및 SEQ ID NO: 7에 나타낸 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하는 방법.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 항-인플루엔자 A 항체가 MEDI8852를 포함하는 방법.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 단편이 하나 이상의 소분자 항바이러스 약제와의 조합으로 투여되는 방법.
  18. 제17항에 있어서, 소분자 항바이러스 약제가 오셀타미비르(TAMIFLU®), 자나미비르(RELENZA®), 아만타딘 및 리만타딘으로부터 선택되는 방법.
  19. 환자에서 인플루엔자 A 바이러스 감염 치료용 조성물로서, 적어도 약 200 ㎎ 내지 최대 약 3500 ㎎의 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편을 환자에 투여하기 위해 제형화된 인플루엔자 A 바이러스의 적어도 하나의 1군 서브타입 및 적어도 하나의 2군 서브타입의 인플루엔자 A 바이러스 헤마글루티닌에 결합할 수 있는 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편을 포함하는 조성물.
  20. 환자에서 인플루엔자 A 바이러스 감염 감소용 조성물로서, 적어도 약 200 ㎎ 내지 최대 약 3500 ㎎의 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편을 환자에 투여하기 위해 제형화된 인플루엔자 A 바이러스의 적어도 하나의 1군 서브타입 및 적어도 하나의 2군 서브타입의 인플루엔자 A 바이러스 헤마글루티닌에 결합할 수 있는 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편을 포함하는 조성물.
  21. 환자에서 인플루엔자 A 바이러스 감염 예방용 조성물로서, 적어도 약 200 ㎎ 내지 최대 약 3500 ㎎의 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편을 환자에 투여하기 위해 제형화된 인플루엔자 A 바이러스의 적어도 하나의 1군 서브타입 및 적어도 하나의 2군 서브타입의 인플루엔자 A 바이러스 헤마글루티닌에 결합할 수 있는 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편을 포함하는 조성물.
  22. 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편이 H1, H2, H5, H6, H8, H9, H11, H12, H13, H16, H17, H18 및 이의 변이체로부터 선택되는 하나 이상의 인플루엔자 A 바이러스 1군 서브타입; 및 H3, H4, H7, H10, H14 및 H15 및 이의 변이체로부터 선택되는 하나 이상의 인플루엔자 A 바이러스 2군 서브타입을 중화시킬 수 있는 조성물.
  23. 제19항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편이 SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 및 SEQ ID NO: 5로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 75% 동일한 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 중쇄 CDR 및 SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 및 SEQ ID NO: 10에 나타낸 아미노산 서열로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 75% 동일한 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 경쇄 CDR을 포함하는 조성물.
  24. 제19항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편이 SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 및 SEQ ID NO: 5로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 중쇄 CDR 및 SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 및 SEQ ID NO: 10으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 경쇄 CDR을 포함하는 조성물.
  25. 제19항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편이 SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열과 적어도 75% 동일한 아미노산 서열을 갖는 VH 및 SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열과 적어도 75% 동일한 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하는 조성물.
  26. 제19항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편이 SEQ ID NO: 2에 나타낸 아미노산 서열을 갖는 VH 및 SEQ ID NO: 7에 나타낸 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하는 조성물.
  27. 제19항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 항-인플루엔자 A 항-인플루엔자 A 항체가 MEDI8852를 포함하는 조성물.
  28. 제19항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 약제학적으로 허용 가능한 담체를 추가로 포함하는 조성물.
  29. 제19항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 소분자 항바이러스 약제를 추가로 포함하는 조성물.
  30. 제29항에 있어서, 소분자 항바이러스 약제가 오셀타미비르(TAMIFLU®), 자나미비르(RELENZA®), 아만타딘 및 리만타딘으로부터 선택되는 조성물.
  31. 용기 및 용기 내에 조성물을 포함하는 제조 물품으로서, 조성물이 인플루엔자 A 바이러스의 적어도 하나의 1군 서브타입 및 적어도 하나의 2군 서브타입의 인플루엔자 A 바이러스 헤마글루티닌에 결합할 수 있는 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편 및 적어도 약 200 ㎎ 내지 최대 약 3500 ㎎의 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편을 환자에 투여하기 위한 지침을 포함하는 제조 물품.
  32. 제31항에 있어서, 라벨 또는 패키지 삽입물이 적어도 약 200 ㎎ 내지 최대 약 3500 ㎎의 용량으로 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편을 투여하기 위한 지침을 포함하는 제조 물품.
  33. 제31항 또는 제32항에 있어서, 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편이 H1, H2, H5, H6, H8, H9, H11, H12, H13, H16, H17, H18 및 이의 변이체로부터 선택되는 하나 이상의 인플루엔자 A 바이러스 1군 서브타입; 및 H3, H4, H7, H10, H14 및 H15 및 이의 변이체로부터 선택되는 하나 이상의 인플루엔자 A 바이러스 2군 서브타입을 중화시킬 수 있는 제조 물품.
  34. 제31항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편이 SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 및 SEQ ID NO: 5로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 75% 동일한 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 중쇄 CDR 및 SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 및 SEQ ID NO: 10에 나타낸 아미노산 서열로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 75% 동일한 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 경쇄 CDR을 포함하는 제조 물품.
  35. 제31항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편이 SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 및 SEQ ID NO: 5로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 중쇄 CDR 및 SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 및 SEQ ID NO: 10으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 경쇄 CDR을 포함하는 제조 물품.
  36. 제31항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편이 SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열과 적어도 75% 동일한 아미노산 서열을 갖는 VH 및 SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열과 적어도 75% 동일한 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하는 제조 물품.
  37. 제31항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 항-인플루엔자 A 항체 또는 이의 단편이 SEQ ID NO: 2에 나타낸 아미노산 서열을 갖는 VH 및 SEQ ID NO: 7에 나타낸 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하는 제조 물품.
  38. 제31항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 항-인플루엔자 A 항체가 MEDI8852를 포함하는 제조 물품.
  39. 제31항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 소분자 항바이러스 약제를 추가로 포함하는 제조 물품.
  40. 제39항에 있어서, 소분자 항바이러스 약제가 오셀타미비르(TAMIFLU®), 자나미비르(RELENZA®), 아만타딘 및 리만타딘으로부터 선택되는 제조 물품.
  41. 제31항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물이 약제학적으로 허용 가능한 담체를 추가로 포함하는 제조 물품.
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