UA128250C2 - Ліганди інтегринів і їх застосування - Google Patents

Ліганди інтегринів і їх застосування Download PDF

Info

Publication number
UA128250C2
UA128250C2 UAA202003246A UAA202003246A UA128250C2 UA 128250 C2 UA128250 C2 UA 128250C2 UA A202003246 A UAA202003246 A UA A202003246A UA A202003246 A UAA202003246 A UA A202003246A UA 128250 C2 UA128250 C2 UA 128250C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
mmol
integrin
compound
equiv
reactive group
Prior art date
Application number
UAA202003246A
Other languages
English (en)
Inventor
Чжень Лі
Чжень Ли
Сяокай Лі
Сяокай Ли
Ерік У. Буш
Эрик У. Буш
Жуй ЧЖУ
Дунсюй Шу
Джонатан Бенсон
Патрік Шейо
Патрик Шейо
Меттью Фаулер-Уоттерс
Мэттью Фаулер-Уоттерс
Original Assignee
Ерроухед Фармасьютикалс, Інк.
Ерроухед Фармасьютикалс, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ерроухед Фармасьютикалс, Інк., Ерроухед Фармасьютикалс, Инк. filed Critical Ерроухед Фармасьютикалс, Інк.
Publication of UA128250C2 publication Critical patent/UA128250C2/uk

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/545—Heterocyclic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/72—Nitrogen atoms
    • C07D213/74—Amino or imino radicals substituted by hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D409/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D413/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/111—General methods applicable to biologically active non-coding nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1138—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against receptors or cell surface proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/315—Phosphorothioates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/321—2'-O-R Modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/322—2'-R Modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
    • C12N2310/344—Position-specific modifications, e.g. on every purine, at the 3'-end
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
    • C12N2310/346—Spatial arrangement of the modifications having a combination of backbone and sugar modifications
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/351—Conjugate
    • C12N2310/3513—Protein; Peptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/352—Nature of the modification linked to the nucleic acid via a carbon atom
    • C12N2310/3521—Methyl
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/353—Nature of the modification linked to the nucleic acid via an atom other than carbon
    • C12N2310/3533—Halogen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2320/00—Applications; Uses
    • C12N2320/30—Special therapeutic applications
    • C12N2320/32—Special delivery means, e.g. tissue-specific

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Pyridine Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Запропоновані синтетичні ліганди інтегрину αvβ6 формули I, які мають стабільність в сироватці і афінність до інтегрину αvβ6, який є рецептором, що експресується в різних типах клітин. Описані ліганди корисні для доставки транспортованих молекул, таких як засоби РНКі або інших сполук на основі олігонуклеотидів, до клітин, які експресують інтегрин αvβ6, полегшуючи тим самим поглинання транспортованих молекул цими клітинами. Також описані композиції, які включають ліганди інтегрину αvβ6 і способи їх застосування. формула І

Description

Перехресне посилання на споріднені заявки
Дана заявка заявляє пріоритет попередньої заявки на патент США 05 62/580398, поданої 1 листопада 2017 року, попередньої заявки на патент США 5 62/646739, поданої 22 березня 2018 року, і попередньої заявки на патент США 05 62/679549, поданої 1 червня 2018 року, зміст кожної з яких у всій їх повноті включений в цей документ за допомогою посилання.
Рівень техніки
Інтегрин альфа-м бета-б (сурб), який експресується в різних типах клітин, включаючи епітеліальні клітини, являє собою рецептор для латентно-асоційованого пептиду (АР) ТОБЕ- бета і для білків позаклітинного матриксу (ЕСМ), вітронектину і тенасцину. Хоча ледве виявлюваний в епітелії у нормальних здорових дорослих людей, інтегрин ауирВб активується під час загоєння ран і при різних видах раку (наприклад, раку ободової кишки, яєчника, ендометрію і шлунка), і він часто асоціюється з поганим прогнозом раку. Було показано, що інтегрин аурВб може стимулювати інвазію і міграцію клітин при метастазуванні, і він може інгібувати апоптоз.
Інтегрин смВб також може регулювати експресію матриксних металопротеїназ (ММР) і активувати ТОЕ-В1. Існує все більше доказів, насамперед з досліджень іп мйго, які підтверджують, що інтегрин ауВб може промотувати розвиток раку. Таким чином, інтегрин сурб є привабливим як біомаркер пухлини і як потенційна терапевтична мішень, а також через його роль в експресії матриксних металопротеїназ (ММР) і в активації ТОЕ-Д1.
Доставка в умовах іп мімо терапевтично ефективних сполук, таких як лікарські сполуки, в бажані клітини і/або тканини продовжує бути загальною проблемою при розробці лікарських продуктів. Продовжує існувати потреба в стабільних і ефективних націлювальних лігандах, які можуть бути селективно націлені на клітини або тканини, і які можуть бути використані для полегшення направленої доставки транспортованих молекул (наприклад, терапевтично активної сполуки або інгредієнта) до конкретних клітин або тканин. Дійсно, існує загальна потреба в націлювальних лігандах, які можуть бути кон'юговані з однією або декількома транспортованими молекулами, такими як один або декілька лікарських продуктів або інших корисних речовин, для полегшення їх доставки в необхідні клітини або тканини в умовах іп мімо.
Крім того, існує потреба в сполуках, які продукують інтегрин альфа-м бета-6б, які придатні для кон'югування з транспортованими молекулами, для доставки їх в клітини, які експресують інтегрин альфа-м бета-6, в умовах іп мімо. Що стосується конкретних транспортованих молекул, таких як терапевтичних олігонуклеотидних сполук (наприклад, антисмислових олігонуклеотидів або засобів для РНК-інтерференції (засоби РНКІ)), то існує потреба в націлювальних лігандах, які здатні націлюватися на мішень, таку як інтегрин альфа-у бета-6, і які можуть бути кон'юговані зі сполуками на основі олігонуклеотидів для доставки терапевтичного агента до клітин і/або тканин, які експресують інтегрин альфа-м бета-6, і полегшення введення цього терапевтичного агента в клітину через рецептор-опосередкований ендоцитоз, піноцитоз або з допомогою інших механізмів.
Суть винаходу
Тут описані нові синтетичні ліганди інтегрину смВб (які також називаються тут лігандами суВб). Описані тут ліганди інтегрину сурб є стабільними в сироватці, вони мають афінність до інтегринів сурб, і внаслідок цього вони можуть специфічно зв'язуватися з інтегрином амрб.
Ліганди інтегрину сауВб можуть бути кон'юговані з транспортованими молекулами для полегшення доставки транспортованих молекул в бажані клітини або тканини, які експресують інтегрин сурб, наприклад, в епітеліальні клітини.
Тут також розкриті способи доставки транспортованих молекул до тканини і/або клітини, що експресує інтегрин ауВрб в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту одного або декількох лігандів суВбЄ, розкритих тут, які кон'юговані з однією або декількома транспортованими молекулами. Крім того, описані способи лікування суб'єкта, що має захворювання, симптом або розлад, для яких доставка терапевтичної транспортованої молекули (наприклад, активного фармацевтичного інгредієнта) в клітину, яка експресує інтегрин суВб, здатні забезпечити лікування суб'єкта, де способи включають введення суб'єкту одного або декількох лігандів сурВб, розкритих тут, які кон'юговані з однією або декількома терапевтичними транспортованими молекулами.
У деяких варіантах здійснення винаходу, описаних тут, представлені способи інгібування експресії гена-мішені в клітині, де способи включають введення в клітину ефективної кількості одного або декількох лігандів інтегрину сурб, які кон'юговані з однією або декількома сполуками на основі олігонуклеотидів (наприклад, терапевтичним засобом на основі олігонуклеотиду), здатними інгібувати експресію гена-мішені в клітині, такими як засоби РНКІ. У деяких варіантах здійснення винаходу, описаних тут, представлені способи інгібування експресії гена-мішені в 60 клітині суб'єкта, де суб'єкту вводять ефективну кількість одного або декількох лігандів інтегрину суб, які кон'юговані з однією або декількома сполуками на основі олігонуклеотидів, здатними інгібувати експресію гена-мішені в клітині, такими як засоби РНКІ.
Крім того, тут описані композиції, які містять ліганди інтегрину сурб. Описані тут композиції можуть являти собою фармацевтичні композиції, які містять один або декілька лігандів інтегрину амВб, розкритих тут, кон'югованих з одним або декількома терапевтичними речовинами, такими як засіб РНКІ або інша транспортована молекула.
У деяких варіантах здійснення винаходу, які описані тут, представлені способи лікування суб'єкта, що має захворювання або порушення, опосередковане, щонайменше частково, експресією гена-мішені, де способи включають введення суб'єкту, який потребує цього, ефективної кількості фармацевтичної композиції, де фармацевтична композиція містить один або декілька лігандів інтегрину ауВб, розкритих тут, кон'юЮгованих з однією або декількома сполуками на основі олігонуклеотидів, такими як засоби РНКІ.
У першому аспекті даний винахід стосується синтетичних лігандів інтегрину амрб.
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину суВб, розкритий тут, являє собою сполуку зі структурою, що описується наступною формулою: о в' ря ро 2 -х М п в"
Кк
Ки КР? (Формула І) або її фармацевтично прийнятну сіль, де п являє собою ціле число від 0 до 7;
У являє собою С-Н або М; 7 являє собою ОВ'З, М(В З)» або 583;
А' являє собою необов'язково заміщений С:і-Свалкіл, ОН, СООН, СОМ(КУ5)2, ОН, або Е" включає транспортовану молекулу, де кожний ЕКЗ незалежно являє собою Н або С.і-Свалкіл, і ке являє собою Н або Сі-Свалкіл; кожний 2, ВР' Її В2 незалежно являє собою Н, галоген, необов'язково заміщений циклоалкілен, необов'язково заміщений арилен, необов'язково заміщений гетероциклоалкілен або необов'язково заміщений гетероарилен, або Кг, ВР! ї КЕ? можуть включати транспортовану молекулу;
В"? являє собою Н або необов'язково заміщений алкіл;
А" являє собою Н або необов'язково заміщений алкіл, або ВК і ВЕ! разом з атомами, до яких вони приєднані, утворюють необов'язково заміщений гетероцикл;
В"? являє собою Н або необов'язково заміщений алкіл; кожний КЗ незалежно являє собою Н, необов'язково заміщений алкіл, або КЗ являє собою транспортовану молекулу;
В"" являє собою необов'язково заміщений алкіл; і при цьому щонайменше один з ЕК", Н2, ВЗ, ВР! ї ВР2 включає транспортовану молекулу.
У деяких варіантах здійснення винаходу, ліганд інтегрину сурВб, розкритий тут, може бути кон'югований з однією або декількома (наприклад, 32, 3,4,5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 або 30; або від 1 до 30, від 1 до 25, від 1 до 20, від 1 до 15, від 1 до 10, від 1 до 5, від 5 до 30, від 5 до 25, від 5 до 20, від 5 до 15, від 5 до 10, від 10 до 30, від 10 до 25, від 10 до 20, від 10 до 15, від 15 до 30, від 15 до 25, від 15 до 20, від2оО до 30, від 20 до 25 або від 25 до 30) транспортованими молекулами (наприклад, будь-якою з описаних тут або відомих в даній галузі техніки).
У деяких варіантах здійснення винаходу, більше ніж один ліганд інтегрину аурВб, описаний тут (наприклад, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 або від 1 до 8, від 1 до 7, від 1 до 6, від 1 до 5, від 1 до 4, від 1 до 3, від 1 до 2, від 2 до 8, від 2 до 7, від 2 до Є, від 2 до 5, від 2 до 4, від 2 до 3, від З до 8, від З до 7, від З до 6, від З до 5, від З до 4, від 4 до 8, від 4 до 7, від 4 до 6 або від 4 до 5 лігандів інтегрину аб) може бути кон'югований з однією транспортованою молекулою (наприклад, з будь-якою з описаних тут або відомих в даній галузі техніки).
У іншому аспекті даний винахід стосується композицій, які містять один або декілька лігандів інтегрину сурб, описаних тут. Наприклад, в деяких варіантах здійснення винаходу, композиції, що містять один або декілька лігандів інтегрину аурВб, описаних тут, містять одну або декілька сполук на основі олігонуклеотиду, наприклад, один або декілька засобів РНКІ, які повинні доставлятися в клітину в умовах іп мімо. У деяких варіантах здійснення винаходу, композиції, описані тут, являють собою композиції для доставки засобу РНКІ до клітини в умовах іп мімо, де засіб РНКІ зв'язаний з одним або декількома лігандами інтегрину сурб.
Описані композиції, які містять один або декілька лігандів інтегрину сурб. У деяких варіантах здійснення композиція містить фармацевтично прийнятний ексципієнт. У деяких варіантах здійснення винаходу, композиція, яка містить один або декілька лігандів інтегрину суб, також містить одну або декілька інших фармацевтичних речовин або фармацевтично активних інгредієнтів або сполук. У деяких варіантах здійснення винаходу, які описані тут, лікарські засоби містять один або декілька лігандів інтегрину ау Вб.
Композиції, які містять один або декілька лігандів інтегрину амВб, розкритих тут, кон'югованих з однією або декількома транспортованими молекулами, можуть полегшити доставку транспортованої молекули в умовах іп мімо або іп мйго до клітин, які експресують інтегрин сурб. Наприклад, композиції, які містять один або декілька лігандів інтегрину сурб, описаних тут, можуть доставляти транспортовані молекули, такі як сполуки на основі олігонуклеотидів, в умовах іп мімо або іп міїго, в альвеолярні епітеліальні клітини | і ЇЇ типу, келихоподібні клітини, секреторні епітеліальні клітини, війчасті епітеліальні клітини, епітеліальні клітини рогівки і кон'юнктиви, епітеліальні клітини шкіри, холангіоцити, ентероцити, епітеліальні клітини протоків, залозисті епітеліальні клітини і епітеліальні пухлини (карциноми).
У іншому аспекті даний винахід стосується способів, що включають застосування одного або декількох лігандів інтегринів ауВб і/або композицій, як описано тут, і, при необхідності, доставку розкритих лігандів інтегринів сурб і/або композицій в формі, прийнятній для введення як фармацевтичного продукту. У інших варіантах здійснення, винахід стосується способів отримання лігандів і композицій, наприклад лікарських засобів, описаних тут.
Композиції, які містять один або декілька лігандів інтегрину сурб, можна вводити суб'єктам в умовах іп мімо з використанням способів введення, відомих в даній галузі, які придатними для такого введення з точки зору призначеної для введення транспортованої молекули, включаючи, наприклад, інгаляційне (для аерозольних композицій або композицій у вигляді сухого порошку), інтраназальне, підшкірне, внутрішньовенне, внутрішньоочеревинне, інтрадермальне, трансдермальне, пероральне, сублінгвальне, місцеве або внутрішньопухлинне введення. У деяких варіантах здійснення винаходу, композиції, які містять один або декілька лігандів інтегрину аурб, можна вводити методами для системної доставки, наприклад, шляхом внутрішньовенного або підшкірного введення. У деяких варіантах здійснення винаходу, композиції, які містять один або декілька лігандів інтегрину сурб, можна вводити методами для локалізованої доставки, наприклад, шляхом інгаляційної доставки за допомогою інгалятора для сухого порошку або небулайзера. У деяких варіантах здійснення винаходу, композиції, які містять один або декілька лігандів інтегрину ауВб, можна вводити методами для локалізованої доставки шляхом місцевого введення.
У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи доставки однієї або декількох бажаних транспортованих молекул в альвеолярну епітеліальну клітину типу І в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту одного або декількох лігандів інтегрину суб, кон'югованих з однією або декількома транспортованими молекулами.
У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи доставки однієї або декількох бажаних транспортованих молекул в альвеолярну епітеліальну клітину типу ЇЇ в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту одного або декількох лігандів інтегрину суб, кон'югованих з однією або декількома транспортованими молекулами.
У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи доставки
БО однієї або декількох бажаних транспортованих молекул в келихоподібну клітину в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту одного або декількох лігандів інтегрину сурб, кон'югованих з однією або декількома транспортованими молекулами.
У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи доставки однієї або декількох бажаних транспортованих молекул в секреторну епітеліальну клітину в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту одного або декількох лігандів інтегрину сурб, кон'югованих з однією або декількома транспортованими молекулами.
У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи доставки однієї або декількох бажаних транспортованих молекул у війчасту епітеліальну клітину в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту одного або декількох лігандів інтегрину сурб, бо кон'югованих з однією або декількома транспортованими молекулами.
У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи доставки однієї або декількох бажаних транспортованих молекул в епітеліальну клітину рогової оболонки в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту одного або декількох лігандів інтегрину суб, кон'югованих з однією або декількома транспортованими молекулами.
У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи доставки однієї або декількох бажаних транспортованих молекул в епітеліальну клітину кон'юнктиви в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту одного або декількох лігандів інтегрину сурб, кон'югованих з однією або декількома транспортованими молекулами.
У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи доставки однієї або декількох бажаних транспортованих молекул в епітеліальну клітину шкіри в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту одного або декількох лігандів інтегрину сурб, кон'югованих з однією або декількома транспортованими молекулами.
У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи доставки однієї або декількох бажаних транспортованих молекул в холангіоцит в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту одного або декількох лігандів інтегрину смрб, кон'югованих з однією або декількома транспортованими молекулами.
У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи доставки однієї або декількох бажаних транспортованих молекул в ентероцит в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту одного або декількох лігандів інтегрину амурб, кон'югованих з однією або декількома транспортованими молекулами.
У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи доставки однієї або декількох бажаних транспортованих молекул в епітеліальну клітину протоків в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту одного або декількох лігандів інтегрину сурб, кон'югованих з однією або декількома транспортованими молекулами.
У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи доставки однієї або декількох бажаних транспортованих молекул в залозисту епітеліальну клітину в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту одного або декількох лігандів інтегрину сурб, кон'югованих з однією або декількома транспортованими молекулами.
У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи доставки однієї або декількох бажаних транспортованих молекул в епітеліальну пухлину (карциному) в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту одного або декількох лігандів інтегрину сурб, кон'югованих з однією або декількома транспортованими молекулами.
У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи доставки сполуки на основі олігонуклеотиду в альвеолярну епітеліальну клітину типу І в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту одного або декількох лігандів інтегрину смрб, кон'югованих з однією або декількома сполуками на основі олігонуклеотидів. У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи доставки засобу РНКІ в альвеолярну епітеліальну клітину типу І в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту одного або декількох лігандів інтегрину смрб, кон'югованих з одним або декількома засобами РНКІ. У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи інгібування експресії гена-мішені в альвеолярній епітеліальній клітині типу І в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту засобу РНКІ, кон'югованого з одним або декількома лігандами, які мають афінність до інтегрину суб.
У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи доставки сполуки на основі олігонуклеотиду в альвеолярну епітеліальну клітину типу Ії в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту одного або декількох лігандів інтегрину сурб, кон'югованих з однією або декількома сполуками на основі олігонуклеотидів. У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи доставки засобу РНКІ в альвеолярну епітеліальну клітину типу ІЇ в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту одного або декількох лігандів інтегрину сурб, кон'югованих з одним або декількома засобами РНКІ. У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи інгібування експресії гена-мішені в альвеолярній епітеліальній клітині типу ЇЇ в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту засобу РНКІ, кон'югованого з одним або декількома лігандами, які мають афінність до інтегрину аурВб.
У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи доставки сполуки на основі олігонуклеотиду в келихоподібну клітину в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту одного або декількох лігандів інтегрину сурб, кон'югованих з однією або декількома сполуками на основі олігонуклеотидів. У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи доставки засобу РНКІ в келихоподібну клітину в 60 умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту одного або декількох лігандів інтегрину суб, кон'югованих з одним або декількома засобами РНКІі. У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи інгібування експресії гена-мішені в келихоподібній клітині в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту засобу РНКІ, кон'югованого з одним або декількома лігандами, які мають афінність до інтегрину сурб.
У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи доставки сполуки на основі олігонуклеотиду в секреторну епітеліальну клітину в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту сполуки на основі олігонуклеотиду одного або декількох лігандів інтегрину смрб, кон'югованих з однією або декількома сполуками на основі олігонуклеотидів. У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи доставки засобу РНКІ в секреторну епітеліальну клітину в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту одного або декількох лігандів інтегрину суВб, кон'югованих з одним або декількома засобами РНКі. У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи інгібування експресії гена-мішені в секреторній епітеліальній клітині в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту засобу РНКІ, кон'югованого з одним або декількома лігандами, які мають афінність до інтегрину сурб.
У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи доставки сполуки на основі олігонуклеотиду у війчасту епітеліальну клітину в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту одного або декількох лігандів інтегрину сурб, кон'югованих з однією або декількома сполуками на основі олігонуклеотидів. У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи доставки засобу РНКІ у війчасту епітеліальну клітину в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту одного або декількох лігандів інтегрину суб, кон'югованих з одним або декількома засобами РНКіІ. У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи інгібування експресії гена-мішені у війчастій епітеліальній клітині в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту засобу
РНКІ, кон'югованого з одним або декількома лігандами, які мають афінність до інтегрину суб.
У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи доставки сполуки на основі олігонуклеотиду в епітеліальну клітину рогівки оболонки в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту одного або декількох лігандів інтегрину смрб, кон'югованих з однією або декількома сполуками на основі олігонуклеотидів. У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи доставки засобу РНКІ в епітеліальну клітину рогівки в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту одного або декількох лігандів інтегрину суВб, кон'югованих з одним або декількома засобами РНКі. У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи інгібування експресії гена- мішені в епітеліальній клітині рогівки в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту засобу РНКІ, кон'югованого з одним або декількома лігандами, які мають афінність до інтегрину аурб.
У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи доставки сполуки на основі олігонуклеотиду в епітеліальну клітину кон'юнктиви в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту одного або декількох лігандів інтегрину амурб, кон'югованих з однією або декількома сполуками на основі олігонуклеотидів. У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи доставки засобу РНКІ в епітеліальну клітину кон'юнктиви в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту одного або декількох лігандів інтегрину смрб, кон'югованих з одним або декількома засобами РНКІ. У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи інгібування експресії гена-мішені в епітеліальній клітині кон'юнктиви в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту засобу РНКІ, кон'югованого з одним або декількома лігандами, які мають афінність до інтегрину сурб.
У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи доставки сполуки на основі олігонуклеотиду в епітелі«альну клітину шкіри в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту одного або декількох лігандів інтегрину сурб, кон'югованих з однією або декількома сполуками на основі олігонуклеотидів. У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи доставки засобу РНКІі в епітеліальну клітину шкіри в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту одного або декількох лігандів інтегрину суб, кон'югованих з одним або декількома засобами РНКі. У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи інгібування експресії гена-мішені в епітеліальній клітині шкіри в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту засобу
РНКІ, кон'югованого з одним або декількома лігандами, які мають афінність до інтегрину сурб.
У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи доставки сполуки на основі олігонуклеотиду в холангіоцит в умовах іп мімо, де способи включають 60 введення суб'єкту одного або декількох лігандів інтегрину суВб, кон'юЮтгованих з однією або декількома сполуками на основі олігонуклеотидів. У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи доставки засобу РНКІ в холангіоцит в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту одного або декількох лігандів інтегрину смрб, кон'югованих з одним або декількома засобами РНКІ. У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи інгібування експресії гена-мішені в холангіоцитах в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту засобу РНКІі, кон'югованого з одним або декількома лігандами, які мають афінність до інтегрину сурб.
У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи доставки сполуки на основі олігонуклеотиду в ентероцит в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту одного або декількох лігандів інтегрину суВб, кон'югованих з однією або декількома сполуками на основі олігонуклеотидів. У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи доставки засобу РНКІі в ентероцит в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту одного або декількох лігандів інтегрину смрб, кон'югованих з одним або декількома засобами РНКІ. У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи інгібування експресії гена-мішені в ентероцитах в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту засобу РНКІі, кон'югованого з одним або декількома лігандами, які мають афінність до інтегрину сурб.
У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи доставки сполуки на основі олігонуклеотиду в епітеліальну клітину протоків в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту одного або декількох лігандів інтегрину сурб, кон'югованих з однією або декількома сполуками на основі олігонуклеотидів. У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи доставки засобу РНКІі в епітеліальну клітину протоку в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту одного або декількох лігандів інтегрину суб, кон'югованих з одним або декількома засобами РНКіІ. У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи інгібування експресії гена-мішені в епітеліальній клітині протоку в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту засобу
РНКІ, кон'югованого з одним або декількома лігандами, які мають афінність до інтегрину суб.
У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи доставки сполуки на основі олігонуклеотиду в залозисту епітеліальну клітину в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту одного або декількох лігандів інтегрину сурб, кон'югованих з однією або декількома сполуками на основі олігонуклеотидів. У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи доставки засобу РНКІ в залозисту епітеліальну клітину в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту одного або декількох лігандів інтегрину суб, кон'югованих з одним або декількома засобами РНКіІ. У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи інгібування експресії гена-мішені в залозистій епітелі«альній клітині в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту засобу РНКІ, кон'югованого з одним або декількома лігандами, які мають афінність до інтегрину аурб.
У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи доставки сполуки на основі олігонуклеотиду в епітеліальну пухлину (карциному) в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту одного або декількох лігандів інтегрину смрб, кон'югованих з однією або декількома сполуками на основі олігонуклеотидів. У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи доставки засобу РНКІ в епітеліальну пухлину (карциному) в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту одного або декількох лігандів інтегрину смрб, кон'югованих з одним або декількома засобами РНКІ. У деяких варіантах здійснення винаходу, розкритих тут, представлені способи інгібування експресії гена-мішені в епітеліальній пухлині (карциномі) в умовах іп мімо, де способи включають введення суб'єкту засобу РНКІ, кон'югованого з одним або декількома лігандами, які мають афінність до інтегрину сурб.
Якщо не вказане інше, всі технічні і наукові терміни, що використовуються в даному описі, мають значення, які звичайно розуміються фахівцем в галузі техніки, до якої належить даний винахід. Хоча способи і матеріали, аналогічні або еквівалентні тим, які описані тут, можуть бути використані в практиці або при тестуванні даного винаходу, відповідні способи і матеріали описані нижче. Всі публікації, патентні заявки, патенти і інші посилання, згадані тут, включені в дану заявку за допомогою посилання. У разі конфлікту, даний опис, включаючи визначення, буде головним. Крім того, матеріали, способи і приклади є тільки ілюстративними і не призначені для яких-небудь обмежень.
Інші призначення, ознаки, аспекти і переваги винаходу будуть очевидні з наступного детального опису і формули винаходу. 60 Детальний опис винаходу
Ліганди інтегрину суб
Тут описані синтетичні ліганди інтегрину аурб, стабільні в сироватці, і які мають афінність до інтегрину сурб. Ліганди інтегрину суб можна використовувати для націлювання на клітині- мішені, які експресують інтегрин суВб в умовах іп міїго, іп зйи, ех мімо і/або в умовах іп мімо. У деяких варіантах здійснення винаходу, описані тут ліганди інтегрину сомВб можуть бути кон'юговані з однією або декількома транспортованими молекулами, щоб переважно направляти і націлювати транспортовані молекули на клітини, які експресують інтегрин сурВб в умовах іп міїго, іп 5йи, ех мімо і/або в умовах іп мімо.У деяких варіантах здійснення винаходу, транспортовані молекули включають або складаються з фармацевтично активних сполук. У деяких варіантах здійснення транспортовані молекули включають або складаються із сполук на основі олігонуклеотиду, таких як агенти РНКІ. У деяких варіантах здійснення винаходу, описані тут ліганди інтегрину сурб кон'юговані з транспортованими молекулами для націлювання і направлення їх в епітеліальні клітини-мішені в умовах іп мімо.
У першому аспекті даний винахід стосується синтетичних лігандів інтегрину амрб.
У деяких варіантах здійснення винаходу, ліганд інтегрину сурб, розкритий тут, включає сполуку, що має структуру наступної формули: о в' ря ро 7? чх М п в
Кк
Ки КР? (Формула І) або її фармацевтично прийнятну сіль, де п являє собою ціле число від 0 до 7;
У являє собою С-Н або М; 7 являє собою ОК"З, М(В'3)» або ЗКЗ;
А' являє собою необов'язково заміщений С:і-Свалкіл, ОН, СООН, СОМ(КУ)2, ОНеЄ, або Е" включає транспортовану молекулу, де кожний ЕЗ незалежно являє собою Н або С.і-Свалкіл, і ке являє собою Н або Сі-Свалкіл; кожний 2, ВР' Її В2 незалежно являє собою Н, галоген, необов'язково заміщений циклоалкілен, необов'язково заміщений арилен, необов'язково заміщений гетероциклоалкілен або необов'язково заміщений гетероарилен, або Рг, ВР! ії КЕ? можуть включати транспортовану молекулу;
В"? являє собою Н або необов'язково заміщений алкіл;
А" являє собою Н або необов'язково заміщений алкіл, або ВК і ВЕ! разом з атомами, до яких вони приєднані, утворюють необов'язково заміщений гетероцикл;
В"? являє собою Н або необов'язково заміщений алкіл; кожний КЗ незалежно являє собою Н, необов'язково заміщений алкіл, або КЗ являє собою транспортовану молекулу;
В"" являє собою необов'язково заміщений алкіл; і при цьому щонайменше один з ЕК", Н2, ВЗ, ВР! ї ВР2 включає транспортовану молекулу.
У деяких варіантах здійснення винаходу в Формулі І п-3. В деяких варіантах в Формулі І п-4.
У деяких варіантах здійснення винаходу К2 в Формулі І являє собою нафтален. У деяких варіантах здійснення винаходу К? в Формулі | являє собою заміщений нафтил, і БК? також містить транспортовану молекулу.
У деяких варіантах здійснення винаходу, ліганд інтегрину сурб, розкритий тут, включає сполуку, що має структуру наступної формули:
в) в" ря ро Кк?
М М. а ОВ. з х М п в ут о о в? (Формула Ії) або її фармацевтично прийнятну сіль, де п являє собою ціле число від 0 до 7 (тобто п дорівнює 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6 або 7);
У являє собою С-Н або М;
А" являє собою Н, С:і-Свалкіл, СН(КЗ)(В), ОН, СООН, СНгСнНгСНаМН», СОМНЕ», ОН, де КЗ являє собою Н або Сі-Свалкіл, КЕ" являє собою Н, С:-Свалкіл, 25 являє собою Н або С:-Свалкіл, і
В? являє собою Н або С:-Свалкіл;
В? являє собою необов'язково заміщений циклоалкілен, необов'язково заміщений арилен, необов'язково заміщений гетероциклоалкілен або необов'язково заміщений гетероарилен;
В"? являє собою Н або необов'язково заміщений алкіл;
А" являє собою Н або необов'язково заміщений алкіл або В і В", разом з атомами, до яких вони приєднані, утворюють необов'язково заміщений гетероцикл;
В"? являє собою Н або необов'язково заміщений алкіл;
В! являє собою Н або необов'язково заміщений алкіл;
В"" являє собою необов'язково заміщений алкіл; де щонайменше один з ВЕ! або К2? включає транспортовану молекулу.
У деяких варіантах здійснення винаходу в Формулі ІЇ п-3. В деяких варіантах в Формулі ІЇ п-4.
У деяких варіантах здійснення винаходу, ліганд інтегрину сурб, розкритий тут, включає сполуку, що має структуру наступної формули: о в
Н
ЧА Му 8) он
М я
М о о в? (Формула ЇЇ) або її фармацевтично прийнятну сіль, де п являє собою ціле число від 1 до 7 (тобто п дорівнює 1, 2, 3, 4, 5, б або 7);
В" включає одну або декілька транспортованих молекул; і
ВАЗ являє собою одну або декілька необов'язково заміщених двовалентних циклічних груп, що містять 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 або 10 атомів вуглецю, таких як циклоалкіл (наприклад, циклопропіл, циклобутил, циклопентил, циклогексил або циклогептил), циклоалкеніл (наприклад, циклопентеніл, циклобутеніл, циклопентеніл, циклогексеніл або циклогептеніл), арил (наприклад, феніл), гетероарил (наприклад, піридил, піримідиніл, піридазиніл, пірол, піразол, імідазол, тіофен, бензотіофен, тіазол, бензотіазол, фуран, оксазол, ізоксазол, бензофуран, індол, індазол, бензімідазол, оксадіазол, 1,2,3-триазол, 1,2,4-триазол, тетразол, хінолініл, ізохінолініл або хіноксалініл), або гетероцикліл (наприклад, тетрагідрофуран, тетрагідропіран, піперидин, піролідин, діоксан або діоксолан).
У деяких варіантах здійснення винаходу в Формулі ІП п-3. В деяких варіантах в Формулі ПІ п-4.
У деяких варіантах здійснення винаходу, ліганд інтегрину сурб, розкритий тут, включає сполуку, що має структуру наступної формули:
о
Н чу МУ (8 он
М ек й т
М о і о
О-Е щ (Формула ІМ) або її фармацевтично прийнятну сіль, де п являє собою ціле число від 1 до 7 (тобто п дорівнює 1, 2, 3, 4, 5,6 або 7);
КУ включає одну або декілька транспортованих молекул.
У деяких варіантах здійснення винаходу в Формулі ІМ п-3. В деяких варіантах в Формулі ІМ п-4.
У деяких варіантах винахід стосується попередника націлювального ліганду, що має наступну структуру: о в ря то 2
М М 7 чу М п в дл о о 2 в в (Формула ІБ) або його фармацевтично прийнятної солі, де п являє собою ціле число від 0 до 7;
У являє собою С-Н або М; 7 являє собою ОК"З, М(В'3)» або ЗКЗ;
А' являє собою Н, необов'язково заміщений Сі-Свалкіл, ОН, СООН, СОМ(КУ)», ОН, або Е" включає лінкерну групу, зв'язану з реакційноздатною групою, де кожний 2? незалежно являє собою Н або С.:-Свалкіл, і 29 являє собою Н або С:-Свалкіл; кожний 2, ВР' Її ВР? незалежно являє собою Н, галоген, необов'язково заміщений циклоалкілен, необов'язково заміщений арилен, необов'язково заміщений гетероциклоалкілен або необов'язково заміщений гетероарилен, або Б2, ВР! і ЕР? можуть включати лінкерну групу, зв'язану з реакційноздатною групою;
В"? являє собою Н або необов'язково заміщений алкіл;
А" являє собою Н або необов'язково заміщений алкіл, або К!' і Е", разом з атомами, до яких вони приєднані, утворюють необов'язково заміщений гетероцикл;
В"? являє собою Н або необов'язково заміщений алкіл; кожний ВЗ незалежно являє собою Н, необов'язково заміщений алкіл, або КЗ включає лінкерну групу, зв'язану з реакційноздатною групою;
А" являє собою необов'язково заміщений алкіл; і де щонайменше один з Б, В, ВЗ, ВР ї КР? включає лінкерну групу, зв'язану з реакційноздатною групою.
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину суВб, розкритий тут, може бути кон'югований з однією або декількома (наприклад, з 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 або 30; або від 1 до 30, від 1 до 25, від 1 до 20, від 1 до 15, від 1 до 10, від 1 до 5, від 5 до 30, від 5 до 25, від 5 до 20, від 5 до 15, від 5 до 10, від 10 до 30, від 10 до 25, від 10 до 20, від 10 до 15, від 15 до 30, від 15 до 25, від 15 до 20, від2оО до
ЗО, від 20 до 25 або 25 до 30) транспортованими молекулами (наприклад, з будь-якою з описаних тут або відомих в даній галузі техніки).
У деяких варіантах здійснення винаходу, більше ніж один ліганд інтегрину аурВб, описаний тут (наприклад, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, або 1 до 8, від 1 до 7, від 1 до б, від 1 до 5, від 1 до 4, від 1 до 3, віді!до 2, від2 до 8, від 2 до 7, від 2 до 6, від 2 до 5, від 2 до 4, від 2 до 3, від З до 8, від З до 7, від З до 6, від З до 5, від З до 4, від 4 до 8, від 4 до 7, від 4 до 6 або 4 до 5 лігандів інтегрину суВб) може бути кон'югований з однією транспортованою молекулою (наприклад, з будь-якою з описаних тут або відомих в даній галузі техніки).
У деяких варіантах здійснення винаходу, описаних тут, ліганди інтегрину ауВб необов'язково кон'юговані з однією або декількома транспортованими молекулами через лінкерну групу, наприклад таку, як група поліетиленгліколю (ПЕГ, РЕ).
У деяких варіантах здійснення винаходу, описаних тут, ліганди інтегрину ауВб необов'язково кон'юговані з однією або декількома транспортованими молекулами через каркас, який включає, щонайменше, одну точку приєднання для кожного ліганду і, щонайменше, одну точку приєднання для кожної транспортованої молекули. У деяких варіантах здійснення винаходу ліганди інтегрину сурб містять, складаються або по суті складаються з однієї транспортованої молекули. У деяких варіантах здійснення винаходу ліганди інтегрину сурб містять, складаються або по суті складаються більше ніж з однієї транспортованої молекули.
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину аурВб містить, складається з або по суті складається з будь-якої зі Структури 1, Структури 2, Структури 5, Структури 5.1, Структури 5.2, Структури 6, Структури 6.1, Структури 6.2, Структури 6.3, Структури 6, Структури 7,
Структури 8, Структури 9, Структури 10, Структури 11, Структури 12, Структури 13, Структури 14, Структури 15, Структури 16, Структури 17, Структури 18, Структури 19, Структури 20,
Структури 22, Структури 23, Структури 24, Структури 19, Структури 20, Структури 22, Структури 23, Структури 24, Структури 25, Структури 27, Структури 29, Структури 30, Структури 31,
Структури 32, Структури 33, Структури 34, Структури 35, Структури 36 або Структур 37, кожна з яких описана тут.
Будь-який з розкритих тут лігандів інтегрину суб може бути з'єднаний або зв'язаний з транспортованою молекулою, реакційноздатною групою і/або захищеною реакційноздатною групою. Реакційноздатна група може бути використана для полегшення кон'югаці ліганду інтегрину смВб з транспортованою молекулою. Описані тут ліганди інтегрину смрб можуть поліпшувати націлювання і направлення транспортованих молекул на інтегрин суб або в клітину, яка експресує інтегрин суВб. Транспортована молекула може являти собою, без обмеження, фармацевтично активний інгредієнт або сполуку, проліки або іншу речовину з відомою терапевтичною або діагностичною дією. У деяких варіантах здійснення винаходу транспортована молекула може являти собою, без обмеження, малу молекулу, антитіло, фрагмент антитіла, імуноглобулін, моноклональне антитіло, мітку або маркер, ліпід, природну або модифіковану сполуку на основі олігонуклеотиду (наприклад, антисмисловий олігонуклеотид або засіб РНКІ), природну або модифіковану нуклеїнову кислоту, пептид, аптамер, полімер, поліамін, білок, токсин, вітамін, поліетиленгліколь, гаптен, дигоксигенін, біотин, радіоактивний атом або молекулу, або флуорофор. У деяких варіантах здійснення винаходу транспортована молекула включає фармацевтично активний інгредієнт або проліки. У деяких варіантах здійснення винаходу транспортована молекула включає сполуку на основі олігонуклеотиду як фармацевтично активний інгредієнт. У деяких варіантах здійснення винаходу транспортована молекула включає засіб РНКІі як фармацевтично активний інгредієнт.
Використовуваний тут термін "алкіл" стосується насиченої аліфатичної вуглеводневої групи з нерозгалуженим або розгалуженим ланцюгом, що має від 1 до 10 атомів вуглецю, якщо не вказане інше. Наприклад, "Сі-Свалкіл" включає алкільні групи, що містять 1, 2, 3, 4, 5 або 6 атомів вуглецю з лінійною або розгалуженою структурою. Необмежувальні приклади алкільних груп включають метил, етил, ізопропіл, трет-бутил, п-гексил. Використовуваний тут термін "аміноалкіл" стосується алкільної групи, як визначено вище, заміщеної в будь-якому положенні однієї або декількома аміногрупами, як допускає нормальна валентність. Аміногрупи можуть бути незаміщеними, монозаміщеними або дизаміщеними. Необмежувальні приклади аміноалкільних груп включають амінометил, диметиламінометил і 2-амінопроп-1-іл.
Використовуваний тут термін "циклоалкіл" означає насичену або ненасичену неароматичну вуглеводневу кільцеву групу, що містить від З до 14 атомів вуглецю, якщо не вказане інше.
Необмежувальні приклади циклоалкільних груп включають, без обмеження, циклопропіл, метилциклопропіл, 2,2-диметилциклобутил, 2-етилциклопентил і циклогексил. Циклоалкіли можуть містити безліч спіро- або зчленованих кілець. Циклоалкільні групи необов'язково є моно- бо ; ди-, три-, тетра- або пента-заміщеними в будь-якому положенні, як допускає нормальна валентність.
Використовуваний тут термін "циклоалкілен' стосується двовалентного радикала циклоалкільної групи, як описано тут. Циклоалкілен являє собою підгрупу циклоалкілу, що стосується таких же залишків, як і циклоалкіл, але з двома точками заміщення. Приклади циклоалкілену включають циклопропілен, ; 1,4-циклогексилен, О, і 1,5-циклоксилен . Циклоалкіленові групи являють собою необов'язково заміщені моно-, ди- ; три-, тетра- або пента-заміщені групи, які заміщені в будь-якому положенні, як допускає нормальна валентність. Циклоалкіленові групи можуть бути моно-, ди- або трьома-циклічними.
Використовуваний тут термін "алкеніл" стосується неароматичного вуглеводневого радикала, нерозгалуженого або розгалуженого, що містить щонайменше один подвійний зв'язок вуглець-вуглець і містить від 2 до 10 атомів вуглецю, якщо не указано інакше. У таких групах може бути присутнім до п'яти вуглець-вуглецевих подвійних зв'язків. Наприклад. "С2о-Св" алкеніл визначається, як алкенільний радикал з 2-6 атомами вуглецю. Приклади алкенільних груп включають, без обмеження, етенільну, пропенільну, бутенільну і циклогексенільну.
Нерозгалужена, розгалужена або циклічна частина алкенільної групи може містити подвійні зв'язки, і вона необов'язково є моно-, ди-, три-, тетра- або пента-заміщеною в будь-якому положенні, як допускає нормальна валентність. Термін "циклоалкеніл" означає моноциклічну вуглеводневу групу, що має певну кількість атомів вуглецю і щонайменше один подвійний зв'язок вуглець-вуглець.
Використовуваний тут термін "алкініл" стосується вуглеводневого радикала, нерозгалуженого або розгалуженого, що містить від 2 до 10 атомів вуглецю, якщо не вказане інше, і що містить щонайменше один вуглець-вуглецевий потрійний зв'язок. Можуть бути присутніми до 5 вуглець-вуглецевих потрійних зв'язків. Таким чином, "Со-Свалкініл" означає алкінільний радикала, що містить від 2 до б атомів вуглецю. Приклади алкінільних груп включають, але без обмеження, етиніл, 2-пропініл і 2-бутиніл. Нерозгалужена або розгалужена частина алкінільної групи може бути необов'язково моно-, ди-, три-, тетра- або пента- заміщеною в будь-якому положенні, як допускає нормальна валентність.
Використовуваний тут термін "алкоксил" або "алкокси" стосується -О-алкільного радикала, що містить вказану кількість атомів вуглецю. Наприклад, мається на увазі, що Сі-6є алкокси включає Сі, Сг, Сз, См, Сх або Св алкоксигрупи. Наприклад, мається на увазі, що Сі-в алкокси включає Сі, С2, Сз, Сили, Св, Св, С7 і Св алкоксигрупи. Приклади алкокси включають, без обмеження, метокси, етокси, п-пропокси, і-пропокси, п-бутокси, втор-бутокси, трет-бутокси, п- пентокси, втор-пентокси, п-гептокси і п-октокси.
Використовуваний тут термін "кето" стосується будь-якої алкільної, алкенільної, алкінільної, циклоалкільної, циклоалкенільної, гетероциклільної, гетероарильної або арильної групи, як визначено тут, приєднаної через карбонільний місток. Приклади кетогруп включають, без обмеження, алканоїльну (наприклад, ацетильну, пропіонільну, бутаноїльну, пентаноїльну або гексаноїльну групи), алкеноїльну (наприклад, акрилоїльну групу) алкіноїльну (наприклад, етиноїльну, пропіонільну, бутиноїльну, пентиноїльну або гексиноїльну групи), арилоїльну (наприклад, бензоїльну групу), гетероарилоїльну (наприклад, піролоїльну, імідазолоїльну, квіноліноїльну або піридиноїльну групи) групи.
Використовуваний тут термін "алкоксикарбоніл" стосується будь-якої алкоксигрупи, як визначений вище, приєднаної через карбонільний місток (тобто -5(0)О-алкіл). Приклади алкоксикарбонільних груп включають, без обмеження, метоксикарбонільну, етоксикарбонільну, ізопропоксикарбонільну, п-пропоксикарбонільну, трет-бутоксикарбонільну, бензилоксикарбонільну або п-пентоксикарбонільну групи.
Використовуваний тут термін "арилоксикарбоніл" стосується будь-якої арильної групи, як визначено тут, приєднаної через оксикарбонільний місток (тобто -С(0)О-арил). Приклади арилоксикарбонільних груп включають, без обмеження, феноксикарбоніл і нафтилоксикарбоніл.
Використовуваний тут термін "гетероарилоксикарбоніл" стосується будь-якої гетероарильної групи, визначеної тут, приєднаної через оксикарбонільний місток (тобто -С(О)О-гетероарил).
Приклади гетероарилоксикарбонільних груп включають, без обмеження, 2-піридилоксикарбоніл, 2-оксазолоксикарбоніл, 4-тіазолоксикарбоніл або піримідинілоксикарбоніл.
Використовуваний тут термін "арил" або "ароматичний" означає будь-яке стабільне моноциклічне або поліциклічне вуглецеве кільце, що містить до б атомів в кожному кільці, де щонайменше одне кільце є ароматичним. Приклади арильних груп включають, без обмеження, фенільну, нафтильну, антраценільну, тетрагідронафтильну, інданільну і бірфенільну групи. У випадках, коли арильний замісник біциклічний, а одне кільце неароматичне, зрозуміло, що приєднання відбувається через ароматичне кільце. Арильні групи необов'язково є моно-, ди-, три-, тетра- або пента-заміщеними в будь-якому положенні, як допускає нормальна валентність.
Використовуваний тут термін "арилен" стосується двовалентного радикала арильної групи, як описано тут. Арилен являє собою підгрупу арилу, що має такі ж групи як і арил, але з двома точками заміщення. Приклади арилену включають фенілен, який стосується двовалентної фенільної групи. Ариленові групи необов'язково є моно-, ди-, три-, тетра- або пента-заміщеними в будь-якому положенні, як допускає нормальна валентність.
Використовуваний тут термін "галоген" стосується радикала галогену. Наприклад, "галоген" може стосуватися радикала фтору (РЕ), хлору (СІ), брому (Вг) або йоду (1).
Використовуваний тут термін "гетероарил" стосується стабільного моноциклічного або поліциклічного кільця, яке містить до 7 атомів в кожному кільці, де щонайменше одне кільце є ароматичним, і що містить від 1 до 4 гетероатомів, вибраних з групи, яка складається зо, Мі 5.
Приклади гетероарильних груп включають, без обмеження, акридиніл, карбазоліл, цинолініл, хіноксалініл, піразоліл, індоліл, бензотриазол, фураніл, тієніл, бензотієніл, бензофураніл, бензімідазоліл, бензоксазолоніл, хінолініл, ізохінолініл, дигідроізоіндоніл, імідазопіридиніл, ізоіїндолініл, індазоліл, оксазоліл, оксадіазоліл, ізоксазоліл, індоліл, піразиніл, піридазиніл, піридиніл, піримідиніл, піроліл і тетрагідрохінолін. Термін "гетероарил" також стосується М- оксидного похідного будь-якого азотовмісного гетероарилу. У тих випадках, коли гетероарильний замісник є біциклічним, і одне кільце є неароматичним або не містить гетероатомів, зрозуміло, що приєднання здійснюється через ароматичне кільце або через кільце, що містить гетероатом. Гетероарильні групи необов'язково є моно-, ди-, три-, тетра- або пента-заміщеними в будь-якому положенні, як допускає нормальна валентність.
Використовуваний тут термін "гетероарилен" стосується двовалентного радикала гетероарильної групи, як описано тут. Гетероарилен являє собою підгрупу гетероарилу, що має такі ж групи як і гетероарил, але з двома точками заміщення. Приклади гетероарилу включають піридинілен, піримідинілен і піролілен. Гетероариленові групи необов'язково є моно-, ди-, три-, тетра- або пента-заміщеними в будь-якому положенні, як допускає нормальна валентність.
Термін "гетероцикл", "гетероциклічний" або "гетероцикліл" означає 3-14-членний ароматичний або неароматичний гетероцикл, що містить від 1 до 4 гетероатомів, вибраних з групи, яка складається з 0, М і 5, включаючи поліциклічні групи. Використовуваний тут термін "гетероциклічний" також вважається синонімом термінів "гетероцикл" і "гетероцикліл", і розуміється як також такий, що має такі ж визначення, які вказані тут. "Гетероцикліл" включає вказані вище гетероарили, а також їх дигідро- і тетрагідроаналоги. Приклади гетероциклільних груп включають, без обмеження, азетидиніл, бензоіїмідазоліл, бензофураніл, бензофуразаніл, бензопіразоліл, бензотриазоліл, бензотіофеніл, бензоксазоліл, карбазоліл, карболініл, цинолініл, фураніл, імідазоліл, індолініл, індоліл, індолініл, індазоліл.ізохіноліл, ізотіазоліл, ізоксазоліл, нафтипіридиніл, оксадіазоліл, оксооксазолідиніл, оксазоліл, оксазолін, оксопіперазиніл, оксопіролідиніл, оксоморфолініл, ізоксазолін, оксетаніл, піраніл, піразиніл, піразоліл, піридазиніл, піридилпіридиніл, піридазиніл, піридил, піридиніл, пиримидил, піримідиніл, піроліл, хіназолініл, хіноліл, хіноксалініл, тетрагідропіраніл, тетрагідрофураніл, тетрагідротіопіраніл, тетрагідроізохінолініл, тетразоліл, тетразопіридилтіадіазоліл, тіазоліл, тієніл, триазоліл, 1,4-діоксаніл, гексагідроазепініл, піперазиніл, піперидиніл, піридин-2-іл, піролідиніл, морфолініл, тіоморфолініл, дигідробензоіїмідазоліл, дигідробензофураніл, дигідробензотіофеніл, дигідробензоксазоліл, дигідрофураніл, дигідроімідазоліл, дигідроіндоліл, дигідроізооксазоліл, дигідроізотіазоліл, дигідрооксадіазоліл, дигідрооксазоліл, дигідропіразиніл, дигідропіразоліл, дигідропіридиніл, дигідропіримідиніл, дигідропіроліл, дигідрохінолінілдигідротетра/олеїл, дигідротіадіазоліл, дигідротіазоліл, дигідротієніл, дигідротриазоліл, дигідроазетидиніл, діоксидтіоморфолініл, метилендіоксибензоїл, тетрагідрофураніл і тетрагідротієніл, а також їх М-оксиди. Приєднання гетероциклільного замісника може відбуватися через атом вуглецю або через гетероатом. Гетероциклільні групи бо необов'язково є моно-, ди-, три-, тетра- або пента-заміщеними в будь-якому положенні, як допускає нормальна валентність.
Використовуваний тут термін "гетероциклоалкіл" означає 3-14--ленний неароматичний гетероцикл, що містить від 1 до 4 гетероатомів, вибраних з групи, яка складається зо, Мі 5, включаючи поліциклічні групи. Приклади гетероциклільних груп включають, без обмеження, азетидиніл, оксопіперазиніл, оксопіролідиніл, оксоморфолініл, оксетаніл, піраніл, піридиніл, піримідиніл, тетрагідропіраніл, тетрагідрофураніл, тетрагідротіопіраніл, тетрагідроізохінолініл, 1,4-діоксаніл, тетрагідроазепініл, піперазиніл, піперидиніл, піролідиніл, морфолініл, тіоморфолініл, дигідрофураніл, дигідроімідазоліл, дигідроізооксазоліл, дигідроізотіазоліл, дигідрооксадіазоліл, дигідрооксазоліл, дигідропіразиніл, дигідропіразоліл, дигідропіридиніл, дигідропіримідиніл, дигідропіроліл, дигідротетразоліл, дигідротіадіазоліл, дигідротіазоліл, дигідротієніл, дигідротриазоліл, діоксидотіоморфолініл і тетрагідротієніл, і їх М-оксиди.
Приєднання гетероциклоалкільного замісника може відбуватися через атом вуглецю або через гетероатом. Гетероциклільні групи необов'язково є моно-, ди-, три-, тетра- або пента- заміщеними в будь-якому положенні, як допускає нормальна валентність.
Використовуваний тут термін "гетероциклоалкілен" стосується двовалентного радикала гетероциклоалкільної групи, як описано тут. Гетероциклоалкілен являє собою підгрупу гетероциклоалкілу, що має такі ж залишки, як гетероциклоалкіл, але що має дві точки заміщення. Приклади гетероциклоалкілену включають піперидинілен, азетидинілен і тетрагідрофуранілен. Гетероциклоалкіленові групи необов'язково є моно-, ди-, три-, тетра- або пента-заміщеними в будь-якому положенні, як допускає нормальна валентність.
Використовувані тут терміни "лікувати", "лікування" і т.п. означають способи або етапи, призначені для забезпечення ослаблення або полегшення кількості, тяжкості і/або частоти одного або декількох симптомів захворювання у суб'єкта. Використовуваний тут термін "лікувати" і "лікування" може включати запобігання, лікування, профілактичне лікування і/або інгібування кількості, тяжкості і/або частоти одного або декількох симптомів захворювання у суб'єкта.
Як використовується тут, вказівка "введення в клітину" при посиланні на засіб РНКІ, означає функціональну доставку засобу РНКІ в клітину. Вказівка "функціональна доставка" означає, що доставка засобу РНКІ в клітину здійснюється таким чином, що дозволяє засобу РНКІі виявляти очікувану біологічну активність, наприклад, послідовність-специфічне інгібування експресії гена.
Якщо не вказане інше, під використанням тут символу Я мають на увазі, що будь-яка група або групи можуть бути зв'язані або з'єднані з вказаним фрагментом, який охоплюється об'ємом винаходу, як описано тут.
Використовуваний тут термін "ізомери" стосується сполук, які мають ідентичні молекулярні формули, але які відрізняються по властивостях або по послідовності зв'язування атомів в них, або по розташуванню атомів в просторі. Ізомери, які відрізняються по розташуванню атомів в просторі, називаються "стереоїзомерами". "Стереоіїзомери", які не є дзеркальними зображеннями один одного, означають як "діастереоїзомери", а стереоізомери, які є неспівпадаючими при накладенні дзеркальних відображень, називаються "енантіомерами" або, іноді, оптичними ізомерами. Атом вуглецю, з'єднаний з чотирма неідентичними замісниками, називається "хіральним центром". Коли сполуки, описані тут, містять олефінові подвійні зв'язки або інші центри геометричної асиметрії, для яких ізомерна структура не визначена спеціально, мається на увазі, що сполуки можуть включати як Е-, так і 2-геометричні ізомери, як окремо, так і у вигляді суміші. Мається на увазі, що сполуки Формули І або їх фармацевтично прийнятні солі включають всі можливі ізомери, а також їх рацемати і оптично чисті форми. Подібним чином, якщо не вказане інше, всі таутомерні форми також включені в об'єм винаходу.
Як використовується тут, лінкерна група являє собою один або декілька атомів, які з'єднують одну молекулу або частину молекули з іншою молекулою або другою частиною молекули. У даній галузі техніки терміни лінкерна група і спейсери іноді використовуються взаємозамінно.
Подібним чином, як використовується в даній галузі техніки, термін "каркас" іноді використовується взаємозамінно з лінкерною групою. У деяких варіантах здійснення лінкерна група може включати пептид-розщеплювану лінкерну групу. У деяких варіантах здійснення винаходу лінкерна група може містити або складатися з пептиду фенілаланін-цитрулін- фенілаланін-пролін. У деяких варіантах здійснення винаходу лінкерна група може містити або складатися з групи ПЕГ.
Використовуваний тут термін "зв'язаний" або "з'єднаний", при посиланні на сполуку між двома молекулами, означає, що дві молекули з'єднані ковалентним зв'язком або що дві молекули зв'язані через нековалентні зв'язки (наприклад, водневими зв'язками або іонними зв'язками). У деяких прикладах, де термін "зв'язаний" стосується асоціації між двома молекулами за допомогою нековалентних зв'язків, зв'язок між двома різними молекулами має
Ко менше ніж 1х107 М (наприклад, менше ніж 1х105 М, менше ніж 1 х10-9 М або менш ніж 1х10-7
М) в фізіологічно прийнятному буфері (наприклад, в фосфатному буферному сольовому розчині). Якщо не указано, термін "зв'язаний" або "з'єднаний" в рамках даного винаходу може стосуватися зв'язку між першою сполукою і другою сполукою або з будь-якими проміжними атомами або групами атомів, або без них.
Звичайний фахівець в даній галузі техніки розуміє і бере до уваги, що сполуки і композиції, описані тут, можуть включати деякі атоми (наприклад, атоми М, О або 5) в протонованому або депротонованому стані, залежно від середовища, в якому знаходиться сполука або композиція.
Відповідно, розкриті тут структури передбачають, що деякі функціональні групи, такі як, наприклад, ОН, 5Н або МН, можуть бути протоновані або депротоновані. Розкриття винаходу призначене для охоплення розкритих сполук і композицій незалежно від їх стану протонування на основі рН середовища, що зрозуміло фахівцеві в даній галузі.
Структури можуть бути представлені як такі, що мають "плаваючий" зв'язок для кільцевих структур, які вказують на зв'язок з будь-яким атомом вуглецю або гетероатомом кільці, як с. допускається валентністю. Наприклад, структура вказує, що К може замінювати будь-який атом водню в будь-якому з п'яти доступних положень кільця. "Плаваючі" зв'язки також можуть бути використані для біциклічних структур при вказівці зв'язку з будь-яким положенням на будь-якому біциклічному кільці, як допускається валентністю. У разі біциклічних кілець зв'язок, показаний як "плаваючий" для обох кілець, наприклад, як, вказує на те, що К може замінювати будь-який атом водню в будь-якому з семи доступних положень кільця.
При використанні в формулі винаходу вказівка "що складається з" виключає будь-яку ознаку, стадію або інгредієнти, не визначену конкретно в формулі винаходу. При використанні в формулі винаходу вказівки що "складається по суті з", вона обмежує об'єм формули винаходу вказаними матеріалами або стадіями, і включає такі, які не впливають істотним чином на основні і нові характеристики заявленого винаходу.
Тут описане застосування лігандів інтегрину суВб для націлювання і доставки транспортованих молекул в клітину, яка експресує інтегрин суВб. Транспортована молекула може доставлятися в клітину в умовах іп міїго, іп зи, ех мімо або іп мімо.
У деяких варіантах здійснення винаходу, лінкерна група в Формулі ІБ являє собою групу
ПЕГ, що містить 2-20 етиленгліколевих ланок.
У деяких варіантах здійснення винаходу, реакційноздатна група в Формулі ІБ являє собою азид.
У деяких варіантах здійснення винаходу, ліганд інтегрину суб має структуру, яка включають, складається або по суті складається з будь-якої структури, представленої наступними формулами:
й. о - | Ії
Ж М с М он
М М М
Н Н о і о (Структура 1); пет ит о о
КА Ж М он тх М
Н
М о і о «А (Структура 2);
Ух о
Ж М с М он
М М М
! ІЙ о о
СІ СІ о пря 7 ит 5 (Структура 5);
Фі ААД
Н хх, М он
М М М
! щ
СІ СІ о о. о те и то (Структура 5.1);
У о до М хо М он
М М М ї й о о сі СІ
УТ
(Структура 5.2); о
М: М г о о
ТТ а о (Структура 6); о
М: М г ють ит (Структура 6.1);
о
Н Н
У и он
М о 8 о ль (Структура 6.2); о ж у он
Н де о г» о кг Об о о о щу -ИТтау ит (Структура 6.3); о
Н Н
! ку у он дей о г» о клетту бо отит до о о о щу -илтатт мая (Структура 6.4);
о хх
ДМ о ; о т тат о (Структура 7); о
КА Ж М он ху п
Н воші о м (Структура 8); пе о ут о о
КАК х
М М он сх
М о о (Структура 9);
о се М и ЖК то,
М
Н
С о і о о о о жи ДИТ и ди хх о о (Структура 10);
М
Н у М М он г о о і о о о о о о (Структура 11); о сх Ки Ж З он
М
Н
ОС о і о о
З
М о о о 5 на о й (Структура 12);
о
Н Н
Ж и он
М о і о тм та ит ато (Структура 13); о ф є
М о і о о Е і ТК,
Е тити ит (Структура 14); о ох Ки ка ОН
М
Н о о с в кут иа (Структура 15);
ем а» г н
М- М М он о о і о титан ит акти (Структура 16); о
Н Н хх жу он
Н
М о і о
Фо ти ит иа (Структура 17); о
Н Н хх лу он
М о і о кита тот 5 (Структура 18);
о хх у он
Н і о о би отит ил (Структура 19); о хх у он
Н
ЛО о . о . о о б пора ьо ил (Структура 20); е) прак и он
Те М ;
Н
ОО о і о о о в Жутчуєт ил о (Структура 22);
о
М
Н ло о і о о о о на о З (Структура 23); о
М о і о мито бути (Структура 24); о о
КА Ж М он
М о і о а и и (Структура 25);
о
КА Ж М он
Ух г
М о о мито ит (Структура 27); о -х г
М о і о ; АКА
Кут Италии (Структура 29); о
Се Ки я ори
М о о 7 1
Фо д о
Б о кит (Структура 30); он о сх
Н
М о і о чи мито мито (Структура 31);
он о о
КА Ж М ОН й: М
Н
М о і о чи мито ит от (Структура 32);
МН. о
М: М
Н
М о і |) ми мито ит (Структура 33); о
Те М
ОО М
М о і |) ми мито ит (Структура 34);
он о
Тх М
Н
М о і о ми ит ит (Структура 35); о й М
Н
М о і о ми мито ит (Структура З6); і 90 ху й
Н
М о і о ми ит ит (Структура 37), або їх фармацевтично прийнятними солями, де т вказує точку приєднання до частини, що містить транспортовану молекулу.
У деяких варіантах здійснення винаходу, ліганд інтегрину аурб, розкритий тут, може бути кон'югований з однією або декількома (наприклад, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16,
17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 або 30; або від 1 до 30, від 1 до 25, від 1 до 20, від 1 до 15, від 1 до 10, від 1 до 5, від 5 до 30, від 5 до 25, від 5 до 20, від 5 до 15, від 5 до 10, від 10 до 30, від 10 до 25, від 10 до 20, від 10 до 15, від 15 до 30, від 15 до 25, від 15 до 20, від2оО до 30, від 20 до 25 або від 25 до 30) транспортованими молекулами (наприклад, з будь-якою з описаних тут або відомих в даній галузі техніки).
У деяких варіантах здійснення винаходу, більше ніж один ліганд інтегрину аурВб, описаний тут (наприклад, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 або від 1 до 8, від 1 до 7, від 1 до 6, від 1 до 5, від 1 до 4, від 1 до 3, від! до2, від2 до 8, від2 до 7, від2 до 6, від 2 до 5, від 2 до 4, від 2 до 3, від З до 8, від З до 7, від З до 6, від З до 5, від З до 4, від 4 до 8, від 4 до 7, від 4 до 6 або від 4 до 5 лігандів інтегрину аб) може бути кон'югований з однією транспортованою молекулою (наприклад, з будь-якою з описаних тут або відомих в даній галузі техніки).
У деяких варіантах здійснення винаходу, описаних тут, ліганди інтегрину ауВб необов'язково кон'юговані з однією або декількома транспортованими молекулами через лінкерну групу, таку як, наприклад, група поліетиленгліколю (ПЕГ).
У деяких варіантах здійснення винаходу, описаних тут, ліганди інтегрину ауВб необов'язково кон'юговані з однією або декількома транспортованими молекулами через каркас, який включає, щонайменше, одну точку приєднання для кожного ліганду і, щонайменше, одну точку приєднання для кожної транспортовані молекули. У деяких варіантах здійснення винаходу ліганди інтегрину сурб містять, складаються або по суті складаються з однієї транспортованої молекули. У деяких варіантах здійснення винаходу ліганди інтегрину сурб містять, знаходяться або по суті знаходяться з більш ніж однієї транспортованої молекули.
У деяких варіантах здійснення винаходу, сурб інтегрин-ліганд містить, складається або по суті складається з Структури 1, Структури 2, Структури 5, Структури 5.1, Структури 5.2,
Структури 6, Структури 6.1, Структури 6.2, Структури 6.3, Структури 6.4, Структури 7, Структури 8, Структури 9, Структури 10, Структури 11, Структури 12, Структури 13, Структури 14,
Структури 15, Структури 16, Структури 17, Структури 18, Структури 19, Структури 20, Структури 22, Структури 23, Структури 24, Структури 25, Структури 27, Структури 29, Структури 30,
Структури 31, Структури 32, Структури 33, Структури 34, Структури 35, Структури 36 або
Структур 37, кожна з яких описана тут.
Будь-який з розкритих тут лігандів інтегрину «мб може бути з'єднаний або зв'язаний з транспортованою молекулою, реакційноздатною групою і/або захищеною реакційноздатною групою. Реакційноздатна група може бути використана для полегшення кон'югаці ліганду інтегрину смВб з транспортованою молекулою. Описані тут ліганди інтегрину смВб можуть поліпшувати націлювання транспортованих молекул на інтегрин сурб або на клітину, яка експресує інтегрин суВб. Транспортована молекула може являти собою, без обмеження, фармацевтично активний інгредієнт або сполуку, проліки або іншу речовину з відомою терапевтичною дією. У деяких варіантах здійснення винаходу транспортована молекула може являти собою, без обмеження, малу молекулу, антитіло, фрагмент антитіла, імуноглобулін, моноклональне антитіло, мітку або маркер, ліпід, природну або модифіковану сполуку на основі олігонуклеотиду (наприклад, антисмисловий олігонуклеотид або засіб РНКІі), природну або модифіковану нуклеїнову кислоту, пептид, аптамер, полімер, поліамін, білок, токсин, вітамін, поліетиленгліколь, гаптен, дигоксигенін, біотин, радіоактивний атом або молекулу, або флуорофор. У деяких варіантах здійснення винаходу транспортована молекула включає фармацевтично активний інгредієнт або проліки. У деяких варіантах здійснення винаходу транспортована молекула включає сполуку на основі олігонуклеотиду як фармацевтично активний інгредієнт. У деяких варіантах здійснення винаходу транспортована молекула включає засіб РНКІі як фармацевтично активний інгредієнт.
У одному аспекті винахід стосується структури, що містить ліганд інтегрину сурб, як описано тут, лінкерну групу і каркас, де каркас з'єднаний з транспортованою молекулою. У деяких варіантах здійснення структура може містити ліганд в монодентатній формі. У деяких варіантах здійснення структура може містити ліганд в бідентатній формі. У деяких варіантах здійснення структура може містити ліганд в тридентатній формі. У деяких варіантах здійснення структура може містити ліганд в тетрадентатній формі.
У деяких варіантах здійснення даного винаходу ліганд інтегрину сурб має наступну структуру:
Що й. о 0 о н м чт Ж м он й Н о і о (Структура 1).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину суб Структури 1 зв'язаний з однією або декількома транспортованими молекулами (наприклад, засобом РНКІі (засобами
РНКІ)).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так, щоб він включав реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу, і при цьому він має наступну структуру: й о х н
М й й о і о (Структура а), де Х включає реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу (наприклад, засіб РНКІ).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так, щоб він включав поліетиленгліколь(ПЕГ)-азидну реакційноздатну групу, і при цьому він має наступну структуру:
Ма у й. о й о н
М й й о і о (Структура 15).
У деяких варіантах здійснення даного винаходу ліганд інтегрину сурб має наступну структуру: пре ит о о
М я ЖК я
М М он та М
Н р о і о (Структура 2).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину суб Структури 2 зв'язаний з однією або декількома транспортованими молекулами (наприклад, засобом РНКІі (засобами
РНКІ)).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так, щоб він включав реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу, і при цьому він має наступну структуру:
о Х
М Ж я
М М он чх пак
Н
М о і о (Структура га), де Х включає реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу (наприклад, засіб РНКІ).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину суВб може бути синтезований так, щоб він включав поліетиленгліколь(ПЕГ)-азидну реакційноздатну групу, і при цьому він має наступну структуру: о М ре -илалтят з о о
Н Н
М ху си М що
Н
М о і о
А (Структура 25).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так, так, щоб він включав поліетиленгліколь(ПЕГ)-азидну реакційноздатну групу, і при цьому він має наступну структуру:
Згод х що М он
М М М
М й о о
СІ СІ о о ил ет (Структура 5).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину суб Структури 5 зв'язаний з однією або декількома транспортованими молекулами (наприклад, засобом РНКІі (засобами
РНКІ)).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину суВб може бути синтезований так, щоб він включав реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу, і при цьому він має наступну структуру:
Зо
З Ї ще М он
М М М
М й ) |)
СІ СІ
Х
(Структура 5а), де Х включає реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу (наприклад, засіб РНКІ).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так, щоб він включав поліетиленгліколь(ПЕГ)-азидну реакційноздатну групу, і при цьому він має наступну структуру: сх
Ж М ху м М он
М м й о о сі сі ит з (Структура 56).
У деяких варіантах здійснення даного винаходу ліганд інтегрину сурб має наступну структуру: с о с | гг М он
М М тр о о с с о о о 9 9 --х (Структура 5.1).
У деяких варіантах здійснення винаходу довжина ПЕГ в ПЕГ-азидній реакційноздатній групі може варіюватися. У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину суб Структури 5.1 може бути синтезований так, щоб він включав поліетиленгліколь(ПЕГ)-азидну реакційноздатну групу, і при цьому він має наступну структуру:
З
СУ. Ж М он
М м тр о о
СІ СІ о. о о о и те ит (Структура 5.1 Б).
Реакційноздатна група (або захищена реакційноздатна група) може бути використана для полегшення кон'югаці ліганду інтегрину суВб з представляючою інтерес молекулою, наприклад, з транспортованою молекулою (або безпосередньо, або через один або декілька каркасів і/або лінкер).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину аурб має наступну структуру:
У о ги М с М он
М М тр о о сі СІ
ТИ
(Структура 5.2).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб Структури 5.2 зв'язаний з однією або декількома транспортованими молекулами (наприклад, засобом РНКІі (засобами
РНКІ)).
У деяких варіантах ПЕГ-азидна реакційноздатна група може бути заміщена алкіл-азидною реакційноздатною групою. У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину амВб може бути синтезований так, щоб він включав алкіл-азидну реакційноздатну групу, і при цьому він має наступну структуру: й о го ЖД М с М он
М У тр о о
СІ с о ит утри
М (Структура 5.2 Б).
У деяких варіантах здійснення даного винаходу ліганд інтегрину сурб має наступну структуру:
о ху й
Н др о Ф о о. и ра ча ьо о (Структура 6).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину суб Структури б зв'язаний з однією або декількома транспортованими молекулами (наприклад, засобом РНКІі (засобами
РНКІ)).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так, щоб він включав реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу, і при цьому він має наступну структуру: о ху й
Н
М о і о х (Структура ба), де Х включає реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу (наприклад, засіб РНКІ).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так, щоб він включав поліетиленгліколь(ПЕГ)-азидну реакційноздатну групу, і при цьому він має наступну структуру: о
М АЖ х
М М он ху й
Н
М о і о мит ит ит
З
(Структура 65).
У деяких варіантах здійснення даного винаходу ліганд інтегрину сурб має наступну структуру: о ща я
М М он
Тх М
Н
М о і о о
Мт ит иа (Структура 6.1).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб Структури 6.1 зв'язаний з однією або декількома транспортованими молекулами (наприклад, засобом РНКІі (засобами
РНКІ)).
У деяких варіантах здійснення винаходу довжина ПЕГ в ПЕГ-азидній реакційноздатній групі може варіюватися. У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину аурб може бути синтезовані так, щоб він включав поліетиленгліколь(ПЕГ)-азидну реакційноздатну групу, і при цьому він має наступну структуру: о
М я ЖК я
М М он ох М
Н
М о і о мим ит им бить ит
З (Структура 6.1 Б).
Реакційноздатна група (або захищена реакційноздатна група) може бути використана для полегшення кон'югаці ліганду інтегрину суВб з представляючою інтерес молекулою, наприклад, з транспортованою молекулою (або безпосередньо, або через один або декілька каркасів і/або лінкер).
У деяких варіантах здійснення даного винаходу ліганд інтегрину сурб має наступну структуру:
о т М
Н
М о і о
Мо (Структура 6.2).
У деяких варіантах здійснення винаходу, ліганд інтегрину ауВб Структури 6.2 зв'язаний з однією або декількома транспортованими молекулами (наприклад, засобом РНКІі (засобами
РНКІ)).
У деяких варіантах здійснення винаходу, ПЕГ-азидна реакційноздатна група може бути заміщена алкіл-азидною реакційноздатною групою. У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину см8Вб може бути синтезований так, щоб він включав алкіл-азидну реакційноздатну групу, і при цьому він має наступну структуру: о
АЖ я
М М он 5 М
Н
М о і о
Тит
М (Структура 6.2 Б).
Реакційноздатна група (або захищена реакційноздатна група) може бути використана для полегшення кон'югаці ліганду інтегрину суВб з представляючою інтерес молекулою, наприклад, з транспортованою молекулою (або безпосередньо, або через один або декілька каркасів і/або лінкер).
У деяких варіантах здійснення даного винаходу ліганд інтегрину сурб має наступну структуру:
о ху й
Н
М о | о ; Фо 7 а чи; (Структура 6.3).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб Структури 6.3 зв'язаний з однією або декількома транспортованими молекулами (наприклад, засобом РНКІ або засобами
РНКІ).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так, щоб він включав реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу. У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину амрб може бути синтезований так, щоб він включав алкіл-азидну реакційноздатну групу, і при цьому він має наступну структуру: о ху й
Н
М о | о отит, сі о
Ї о о тт то то (Структура 6.3 Б).
У деяких варіантах здійснення даного винаходу ліганд інтегрину сурб має наступну структуру: 6) ху й
Н р о С о лету оо отит дит
М о дику дну (Структура 6.4);
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб Структури 6.4 зв'язаний з однією або декількома транспортованими молекулами (наприклад, засобом РНКІі або засобами
РНКІ).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину суВб може бути синтезований так, щоб він включав азид-реакційноздатний групу, і при цьому він має наступну структуру: о
М и Ж я
М М он ху й
Н
М о | о тет то Фе отити
С ох дику о днини (Структура 6.4 б).
У деяких варіантах здійснення даного винаходу ліганд інтегрину омрфб має наступну структуру: о хх й те
Н :
М о | о о о ля (Структура 7).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину смрб Структури 7 зв'язаний з однією або декількома транспортованими молекулами (наприклад, засобом РНКІі (засобами
РНКІ)).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так, щоб він включав реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу, і при цьому він має наступну структуру:
о
М и Ж !
М М он ху й г
Н :
М о | о х (Структура 7а), де Х включає реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу (наприклад, засіб РНКІ).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину суВб може бути синтезований так, щоб він включав ПЕГ-азидну реакційноздатну групу, і при цьому він має наступну структуру: о
АЖ я
М М он
ХУ й г ;
М о А о ль
З
(Структура 75).
У деяких варіантах здійснення даного винаходу ліганд інтегрину смрВб має наступну структуру: о хх М
Н
М о і о
Фо Щі о ли (Структура 8).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину суб Структури 8 зв'язаний з однією або декількома транспортованими молекулами (наприклад, засобом РНКІі (засобами
РНКІ)).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так, щоб він включав реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу, і при цьому він має наступну структуру: о
КАК М он 6-х М
Н
М о і о
Фо (Структура 8а), де Х включає реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу (наприклад, засіб РНКІ).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так, щоб він включав ПЕГ-азидну реакційноздатну групу, і при цьому він має наступну структуру: о сх М
Н
М о) і о
Фо З о рату
Му (Структура 85).
У деяких варіантах здійснення даного винаходу ліганд інтегрину сурб має наступну структуру:
пет тити о о
М ЖК я
М М он ху М те !
ДА о А о (Структура 9).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину суб Структури 9 зв'язаний з однією або декількома транспортованими молекулами (наприклад, засобом РНКІі (засобами
РНКІ)).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так, щоб він включав реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу, і при цьому він має наступну структуру: о Х чав я
М М он х М ; ;
М о о (Структура 8а), де Х включає реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу (наприклад, засіб РНКІ).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину суВб може бути синтезований так, щоб він включав поліетиленгліколь(ПЕГ)-азидну реакційноздатну групу, і при цьому він має наступну структуру:
о М кл -Иилаттт о о
КА ЖК М
М ху м зт і
М о х о (Структура 95).
У деяких варіантах здійснення даного винаходу ліганд інтегрину сурб має наступну структуру: 6)
Ки Ж !
М М он ху й
Н
М о і о тм та ит ато (Структура 10).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину смВб Структури 10 зв'язаний з однією або декількома транспортованими молекулами (наприклад, засобом РНКІі (засобами
РНКІ)).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так, щоб він включав реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу, і при цьому він має наступну структуру: о ху й
Н
М о і о х (Структура 10а), де Х включає реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу (наприклад, засіб РНКІ).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так, щоб він включав поліетиленгліколь(ПЕГ)-азидну реакційноздатну групу, і при цьому він має наступну структуру: о
М АЖ я
М М он ху г
Н
М о і о ул ли а
З (Структура 105).
У деяких варіантах здійснення даного винаходу ліганд інтегрину сурб має наступну структуру: н р М М он
М г о о і о ти ит ти (Структура 11).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину смВб Структури 11 зв'язаний з однією або декількома транспортованими молекулами (наприклад, засобом РНКІі (засобами
РНКІ)).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину суВб може бути синтезований так, щоб він включав реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу, і при цьому він має наступну структуру:
н р М М он
М тр о о і о х (Структура 114), де Х включає реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу (наприклад, засіб РНКІ).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину суВб може бути синтезований так, щоб він включав поліетиленгліколь(ПЕГ)-азидну реакційноздатну групу, і при цьому він має наступну структуру: н уУ-Еб М М он
М т о о і о мм ит атм ит дит
З (Структура 115).
У деяких варіантах здійснення даного винаходу ліганд інтегрину сурб має наступну структуру: о хх й
Н
М о і о о
ФО;
М т ит ит (Структура 12).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину смВб Структури 12 зв'язаний з однією або декількома транспортованими молекулами (наприклад, засобом РНКІі (засобами
РНКІ)).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так, щоб він включав реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу, і при цьому він має наступну структуру: о ху й
Н
М о і о 6)
Фо;
М х (Структура 12а), де Х включає реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу (наприклад, засіб РНКІ).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так, щоб він включав поліетиленгліколь(ПЕГ)-азидну реакційноздатну групу, і при цьому він має наступну структуру: о ху й
Н
М о і о 6)
Фо;
М мим ит ум ит дити 3 (Структура 125).
У деяких варіантах здійснення даного винаходу ліганд інтегрину смВб має наступну структуру:
Ки Ж !
М М он ху й
Н
М о Ф о тм та ит ато (Структура 13).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину смВб Структури 13 зв'язаний з однією або декількома транспортованими молекулами (наприклад, засобом РНКІі (засобами
РНКІ)).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так, щоб він включав реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу, і при цьому він має наступну структуру: о ху й
Н
М о і о х (Структура 13а), де Х включає реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу (наприклад, засіб РНКІ).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так, щоб він включав поліетиленгліколь(ПЕГ)-азидну реакційноздатну групу, і при цьому він має наступну структуру: о
АЖ М
М М он ху г
Н р о Ф о мит ит мити
З (Структура 135).
У деяких варіантах здійснення даного винаходу ліганд інтегрину сурб має наступну структуру: о ху й
Н
М о і о о Е
Кк,
Е тити ит (Структура 14).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину смВб Структури 14 зв'язаний з однією або декількома транспортованими молекулами (наприклад, засобом РНКІі (засобами
РНКІ)).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину суВб може бути синтезований так, щоб він включав реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу, і при цьому він має наступну структуру: о чав !
М М он
ХУ й
Н
М о і о о Е
Кк,
Е
Х
(Структура 14а), де Х включає реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу (наприклад, засіб РНКІ).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так, щоб він включав поліетиленгліколь(ПЕГ)-азидну реакційноздатну групу, і при цьому він має наступну структуру:
о хх й
Н
М о і о о Е
Кк,
Е мит биту рити 3 (Структура 145).
У деяких варіантах здійснення даного винаходу ліганд інтегрину сурб має наступну структуру: о ху й
Н дм о Ф о о о хор
Ж уч ето (Структура 15).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину смВб Структури 15 зв'язаний з однією або декількома транспортованими молекулами (наприклад, засобом РНКІі (засобами
РНКІ)).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так, щоб він включав реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу, і при цьому він має наступну структуру: о
АЖ !
М М он ху й
Н
М о і о
Х (Структура 15а), де Х включає реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу (наприклад, засіб РНКІ).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так,
щоб він включав поліетиленгліколь(ПЕГ)-азидну реакційноздатну групу, і при цьому він має наступну структуру: о чав !
М М он сх й
Н
М о і о о ворот дику (Структура 155).
У деяких варіантах здійснення даного винаходу ліганд інтегрину сурб має наступну структуру:
СХ С
Гн у М- М он
М ит тре о о і о тити ти (Структура 16).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину смВб Структури 16 зв'язаний з однією або декількома транспортованими молекулами (наприклад, засобом РНКІ (засобами
РНКІ)).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так, щоб він включав реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу, і при цьому він має наступну структуру:
ро С: он р М-- М он
М тр отр о о і о х (Структура 16а), де Х включає реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу (наприклад, засіб РНКІ).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину суВб може бути синтезований так, щоб він включав поліетиленгліколь(ПЕГ)-азидну реакційноздатну групу, і при цьому він має наступну структуру:
ХХ с он уУ-Еб М-- М он
М тр ср о о і о мм ит атм ит дит
З (Структура 165).
У деяких варіантах здійснення даного винаходу ліганд інтегрину сурб має наступну структуру: о
М АЖ !
М М он ху й
Н
ДМ о Ф о с
З па а п а аа (Структура 17).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину смВб Структури 17 зв'язаний з однією або декількома транспортованими молекулами (наприклад, засобом РНКІі (засобами
РНКІ)).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так, щоб він включав реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу, і при цьому він має наступну структуру: о ху й
Н
М о і о і З х (Структура 17а), де Х включає реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу (наприклад, засіб РНКІ).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так, щоб він включав поліетиленгліколь(ПЕГ)-азидну реакційноздатну групу, і при цьому він має наступну структуру: о ху й
Н
М о і о
Фф З мим ит ум ит дити
З (Структура 175).
У деяких варіантах здійснення даного винаходу ліганд інтегрину сурб має наступну структуру: 5О0 о
Ки Ж я
М М он ху й
Н
М о і о а а а аа (Структура 18).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину смВб Структури 18 зв'язаний з однією або декількома транспортованими молекулами (наприклад, засобом РНКІі (засобами
РНКІ)).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так, щоб він включав реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу, і при цьому він має наступну структуру: о
М я Ж !
М М он ху й
Н
М о і |)
Х
(Структура 18а), де Х включає реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу (наприклад, засіб РНКІ).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так, щоб він включав поліетиленгліколь(ПЕГ)-азидну реакційноздатну групу, і при цьому він має наступну структуру:
о
КА Ж !
М М он
У й
Н
М о і о мит биту ит дити
З (Структура 185).
У деяких варіантах здійснення даного винаходу ліганд інтегрину сурб має наступну структуру: о
М АЖ я
М М он ху й
Н
М о | о о о схов ут ил (структура 19).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину смВб Структури 19 зв'язаний з однією або декількома транспортованими молекулами (наприклад, засобом РНКІ (засобами
РНКІ)).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так, щоб він включав реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу, і при цьому він має наступну структуру: о
Ки Ж х
М М он ху й
Н
М о | о
Х (Структура 19а), де Х включає реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу (наприклад, засіб РНКІ).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так, щоб він включав поліетиленгліколь(ПЕГ)-азидну реакційноздатну групу, і при цьому він має наступну структуру: о
АЖ !
М М он ху й
Н
М о | о ) пори рр (Структура 195).
У деяких варіантах здійснення даного винаходу ліганд інтегрину сурб має наступну структуру: о
КАК я
М М он ху пи
Н
М о | о і о о. у схов жуть о (Структура 20).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину смВб Структури 20 зв'язаний з однією або декількома транспортованими молекулами (наприклад, засобом РНКІі (засобами
РНКІ)).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину суВб може бути синтезований так, щоб він включав реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу, і при цьому він має наступну структуру: о
М АЖ я
М М он ху й
Н
М о | о і х (Структура 20а), де Х включає реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу (наприклад, засіб РНКІ).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так,
щоб він включав поліетиленгліколь(ПЕГ)-азидну реакційноздатну групу, і при цьому він має наступну структуру: о
М я Ж я
М М он
У й
Н
М о | о і о порив дику (Структура 205).
У деяких варіантах здійснення даного винаходу ліганд інтегрину сурб має наступну структуру: о т М
Н
М о і о о. ди т и було о о (Структура 22).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину суВб Структури 22 зв'язаний з однією або декількома транспортованими молекулами (наприклад, засобом РНКІі (засобами
РНКІ)).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так, щоб він включав реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу, і при цьому він має наступну структуру: о й: М
Н р І) і о х (Структура 22а), де Х включає реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу (наприклад, засіб РНКІ).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так, щоб він включав поліетиленгліколь(ПЕГ)-азидну реакційноздатну групу, і при цьому він має наступну структуру: о
М АЖ !
М М он
У йо
Н ря І) і о мит бити ит дини
З (Структура 225).
У деяких варіантах здійснення даного винаходу ліганд інтегрину омрфб має наступну структуру: о т М
Н
М І) і о
Тит ит ато (Структура 23).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину смВб Структури 23 зв'язаний з однією або декількома транспортованими молекулами (наприклад, засобом РНКІі (засобами
РНКІ)).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину суВб може бути синтезований так, щоб він включав реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу, і при цьому він має наступну структуру:
Те М
Н
М о і о х (Структура 23а), де Х включає реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу (наприклад, засіб РНКІ).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину суВб може бути синтезований так, щоб він включав поліетиленгліколь(ПЕГ)-азидну реакційноздатну групу, і при цьому він має наступну структуру: о ри і
М М он та М
Н
М о і о мит бити ит дини 3 (Структура 235).
У деяких варіантах здійснення даного винаходу ліганд інтегрину сурб має наступну структуру:
о
М: М
Н
ДА о Ф о ми мито ит (Структура 24).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину смВб Структури 24 зв'язаний з однією або декількома транспортованими молекулами (наприклад, засобом РНКІі (засобами
РНКІ)).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину суВб може бути синтезований так, щоб він включав реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу, і при цьому він має наступну структуру: о
КА Ж х
М М он сх М
Н р о Ф о х (Структура 24а), де Х включає реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу (наприклад, засіб РНКІ).
І0205| У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину смВб може бути синтезований так, щоб він включав поліетиленгліколь(ПЕГ)-азидну реакційноздатну групу, і при цьому він має наступну структуру:
о
Те М
Н
М о і о мим биту ит и 3 (Структура 245).
У деяких варіантах здійснення даного винаходу ліганд інтегрину сурб має наступну структуру: ) о
М АЖ я
М М он
Тх М
Н р о Ф о о а и (Структура 25).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину охрб Структури 25 зв'язаний з однією або декількома транспортованими молекулами (наприклад, засобом РНКІі (засобами
РНКІ)).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так, щоб він включав реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу, і при цьому він має наступну структуру:
) о
М я Ж !
М М он
Тх М
Н
М о і о
Х
(Структура 25а), де Х включає реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу (наприклад, засіб РНКІ).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину суВб може бути синтезований так, щоб він включав поліетиленгліколь(ПЕГ)-азидну реакційноздатну групу, і при цьому він має наступну структуру: ) о т М
Н
ЯМ о і о мим битим ит дити
З (Структура 255).
У деяких варіантах здійснення даного винаходу ліганд інтегрину сурб має наступну структуру:
о ху р
Н
М о о
М
7 хх
НН о ми ит мито (Структура 27).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину смВб Структури 27 зв'язаний з однією або декількома транспортованими молекулами (наприклад, засобом РНКІі (засобами
РНКІ)).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так, щоб він включав реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу, і при цьому він має наступну структуру: о
У й
Н
М о о
М чт х шНн
Х (Структура 27а), де Х включає реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу (наприклад, засіб РНКІ).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так, щоб він включав поліетиленгліколь(ПЕГ)-азидну реакційноздатну групу, і при цьому він має наступну структуру: о ху й
Н
М о о
М чт хх шен
І) мит ит ит
З (Структура 275).
У деяких варіантах здійснення даного винаходу ліганд інтегрину смрВб має наступну структуру:
У деяких варіантах здійснення даного винаходу ліганд інтегрину сурб має наступну структуру:
Ки Ж М он ху й
Н
М о і о ти то и Фо
Кто о о (Структура 29).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину смВб Структури 29 зв'язаний з однією або декількома транспортованими молекулами (наприклад, засобом РНКІі (засобами
РНКІ)).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так, щоб він включав реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу, і при цьому він має наступну структуру: о
М я Ж !
М М он
У п
Н
М о і о х (Структура 29а), де Х включає реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу (наприклад, засіб РНКІ).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину суВб може бути синтезований так, щоб він включав поліетиленгліколь(ПЕГ)-азидну реакційноздатну групу, і при цьому він має наступну структуру: 6)
Ки Ж я
М М он ху п
Н
М о і о мит ум ит у ит о Фо (Структура 295).
У деяких варіантах здійснення даного винаходу ліганд інтегрину смВб має наступну структуру:
о
Що г -
М о о 7
В о
М о аа (Структура 30).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину смВб Структури 30 зв'язаний з однією або декількома транспортованими молекулами (наприклад, засобом РНКІі (засобами
РНКІ)).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так, щоб він включав реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу, і при цьому він має наступну структуру: о хх тр ет
М о | о (Структура За), де Х включає реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу (наприклад, засіб РНКІ).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так, щоб він включав поліетиленгліколь(ПЕГ)-азидну реакційноздатну групу, і при цьому він має наступну структуру: о
Н н Н
Ще или охо
М о о й
В оо о Ма то (Структура ЗОБ).
У деяких варіантах здійснення даного винаходу ліганд інтегрину смрВб має наступну структуру:
он о
Те М
Н
М І) Ф І) чити ит (Структура 31).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину смВб Структури 31 зв'язаний з однією або декількома транспортованими молекулами (наприклад, засобом РНКІі (засобами
РНКІ)).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так, щоб він включав реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу, і при цьому він має наступну структуру: он о
М А Ж М
М М он т М
Н ря І) і о х (Структура За), де Х включає реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу (наприклад, засіб РНКІ).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так, щоб він включав поліетиленгліколь(ПЕГ)-азидну реакційноздатну групу, і при цьому він має наступну структуру:
он 6)
М: М
Н
М о і о мити ит ит ди
З (Структура 315).
У деяких варіантах здійснення даного винаходу ліганд інтегрину сурб має наступну структуру:
Он о о
КАК М он ху М
Н
М о) і о о чи ит мито (Структура 32).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину смВб Структури 32 зв'язаний з однією або декількома транспортованими молекулами (наприклад, засобом РНКІі (засобами
РНКІ)).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так, щоб він включав реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу, і при цьому він має наступну структуру:
он о о --х М
Н
М о і о
Х
(Структура З32а), де Х включає реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу (наприклад, засіб РНКІ).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ахрб може бути синтезований так, щоб він включав поліетиленгліколь(ПЕГ)-азидну реакційноздатну групу, і при цьому він має наступну структуру: он о о
Щх М
Н
М о) і о о
МИТ ит ати
З (Структура 325).
У деяких варіантах здійснення даного винаходу ліганд інтегрину сурб має наступну структуру:
МН, о се М
Н
М о і о ми ит мито (Структура 33).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину смВб Структури 33 зв'язаний з однією або декількома транспортованими молекулами (наприклад, засобом РНКІі (засобами
РНКІ)).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так, щоб він включав реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу, і при цьому він має наступну структуру:
Мн, о й: М
Н
М о і о х (Структура ЗЗа), де Х включає реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу (наприклад, засіб РНКІ).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так, щоб він включав поліетиленгліколь(ПЕГ)-азидну реакційноздатну групу, і при цьому він має наступну структуру:
МН. о те М
Н
М о і о мим ит ум ит дити 3 (Структура 335).
У деяких варіантах здійснення даного винаходу ліганд інтегрину сурб має наступну структуру: о
М я Ж !
М М он
М: М
Н
М о і о
МИ ит ит (Структура 34).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину смВб Структури 34 зв'язаний з однією або декількома транспортованими молекулами (наприклад, засобом РНКІі (засобами
РНКІ)).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так, щоб він включав реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу, і при цьому він має наступну структуру:
АЖ х
М М он
Й: М
Н
М о і о х (Структура З4а), де Х включає реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу (наприклад, засіб РНКІ).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину суВб може бути синтезований так, щоб він включав поліетиленгліколь(ПЕГ)-азидну реакційноздатну групу, і при цьому він має наступну структуру: о
Те М
Н р о і |) мит биту ит умо
З (Структура 345).
У деяких варіантах здійснення даного винаходу ліганд інтегрину сурб має наступну структуру:
он о т М
Н
М о і о ми ит ит (Структура 35).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину смВб Структури 35 зв'язаний з однією або декількома транспортованими молекулами (наприклад, засобом РНКІі (засобами
РНКІ)).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так, щоб він включав реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу, і при цьому він має наступну структуру: он 6) сх М
Н
М о і о х (Структура З5а), де Х включає реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу (наприклад, засіб РНКІ).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину суВб може бути синтезований так, щоб він включав поліетиленгліколь(ПЕГ)-азидну реакційноздатну групу, і при цьому він має наступну структуру:
он о
КА Ж М он те М
Н
М о і о мит биту ит умо
З (Структура З35Б).
У деяких варіантах здійснення даного винаходу ліганд інтегрину сумрб має наступну структуру: о те М
Н
М |) і о ми мито ит (Структура 36).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину смВб Структури 36 зв'язаний з однією або декількома транспортованими молекулами (наприклад, засобом РНКІі (засобами
РНКІ)).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так, щоб він включав реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу, і при цьому він має наступну структуру:
о рак х
М М он й: М
Н
М о і о х (Структура Зба), де Х включає реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу (наприклад, засіб РНКІ).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так, щоб він включав поліетиленгліколь(ПЕГ)-азидну реакційноздатну групу, і при цьому він має наступну структуру: о
КА Ж М он
М: М
Н
М |) і о мм ит им ит ут
З (Структура З36Б).
У деяких варіантах здійснення даного винаходу ліганд інтегрину сурб має наступну структуру:
о - ху й
Н
М о і о ми ит ит (Структура 37).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину смВб Структури 37 зв'язаний з однією або декількома транспортованими молекулами (наприклад, засобом РНКІі (засобами
РНКІ)).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так, щоб він включав реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу, і при цьому він має наступну структуру: о - ху й
Н др о Ф о х (Структура 37а), де Х включає реакційноздатну групу, захищену реакційноздатну групу або транспортовану молекулу (наприклад, засіб РНКІ).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб може бути синтезований так, щоб він включав поліетиленгліколь(ПЕГ)-азидну реакційноздатну групу, і при цьому він має наступну структуру:
о у
Н
М о і о мит биту ит умо
З (Структура 375).
Реакційна група, представлена в Структурі Та, Структурі 16, Структурі 2а, Структурі 26,
Структурі 5а, Структурі 50, Структурі ба, Структурі 60, Структурі 7а, Структурі 70, Структурі ва,
Структурі 86, Структурі За, Структурі 906, Структурі 1ба, Структурі 106, Структурі 11а, Структурі 116, Структурі 12а, Структурі 120, Структурі 1За, Структурі 136, Структурі 14а, Структурі 146,
Структурі 15а, Структурі 156, Структурі 1ба, Структурі 166, Структурі 17а, Структурі 176,
Структурі 18а, Структурі 1ба, Структурі 160, Структурі 17а, Структурі 17р, Структурі 18а,
Структурі ба, Структурі 160, Структурі 17а, Структурі 170, Структурі 18а, Структурі 1ба,
Структурі 16б, Структурі 17а, Структурі 17р, Структурі 1ва, Структурі ба, Структурі 1665,
Структурі 17а, Структурі 176, Структурі 18а, Структурі 1ба, Структурі 16р, Структурі 17а,
Структурі 1765, Структурі 18а, Структурі 1ба, Структурі 166, Структурі 17а, Структурі 176,
Структурі 18а, Структурі 1ба, Структурі 160, Структурі 17а, Структурі 176, Структурі 18а,
Структурі 1Тба, Структурі 160, Структурі 17а, Структурі 176, Структурі 26, Структурі 19а,
Структурі 1965, Структурі 20а, Структурі 20р, Структурі 22а, Структурі 2205, Структурі 23За,
Структурі 236, Структурі 24а, Структурі 2406, Структурі 25а, Структурі 2306, Структурі 27а,
Структурі 2765, Структурі 25а, Структурі 250, Структурі 27а, Структурі 27р, Структурі 29а,
Структурі 2960, Структурі Зба, Структурі 3006, Структурі З1а, Структурі ЗІБ, Структурі З2а,
Структурі 325, Структурі ЗЗа, Структурі З33р, Структурі З4а, Структурі 346, Структурі З5а,
Структурі 3565, Структурі Зба, Структурі 36р, Структурі З7а, Структурі З5а, Структурі 356,
Структурі Зба, Структурі 360, Структурі 37а або Структурі 376, може бути використана для приєднання ліганду інтегрину ауВб до цікавлячої молекули, тобто до транспортованої молекули, такої як засіб РНКІ. Транспортована молекула може являти собою будь-яку молекулу, яка бажана для націлювання на клітину, яка експресує аурб інтегрин.
Мультидентатні ліганди інтегрину сурб і каркаси
Як розкрито тут, в деяких варіантах здійснення один або декілька лігандів інтегрину сурб можуть бути з'єднані або зв'язані з однією або декількома транспортованими молекулами. У деяких варіантах здійснення винаходу тільки один ліганд інтегрину сурВб кон'югований з транспортованою молекулою (визначено тут як "Монодентатний" або "одновалентний" ліганд). У деяких варіантах здійснення винаходу два ліганду інтегрину смВб кон'юговані з транспортованою молекулою (визначено тут як "бідентатний" або "двовалентний" ліганд). У деяких варіантах здійснення три ліганду інтегрину сурб кон'юговані з транспортованою молекулою (визначено тут як "тридентатний" або "тривалентний" ліганд). У деяких варіантах здійснення винаходу чотири ліганду інтегрину ауВб кон'юговані з транспортованою молекулою (визначено тут як "тетрадентатний" або "чотиривалентний" ліганд). У деяких варіантах здійснення винаходу з транспортованою молекулою можуть бути кон'юговані більше чотирьох лігандів інтегрину суб.
У деяких варіантах здійснення винаходу, коли тільки один ліганд інтегрину амрВб кон'югований з транспортованою молекулою (визначено тут як "монодентатний" ліганд), ліганд інтегрину ахрб може бути кон'югований безпосередньо з транспортованою молекулою. У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину суВб, розкритий тут, може бути кон'югований з транспортованою молекулою через каркас або іншу лінкерну структуру.
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганди інтегрину сурб, описані тут, включають один або декілька каркасів. Каркаси, також що іноді згадуються в даній галузі як лінкерні групи або лінкери, можуть бути використані для полегшення зв'язування однієї або декількох транспортованих молекул з одним або декількома лігандами інтегрину суВб, описаними тут.
Прийнятні каркаси, сумісні з описаними тут лігандами, відомі в даній галузі техніки.
Необмежувальні приклади каркасів, які можуть бути використані з лігандами інтегрину сурб, описаними тут, включають, без обмеження, полімери і поліамінокислоти (наприклад, біс- глутамінову кислоту, полі-І -лізин і т.п.). У деяких варіантах здійснення винаходу каркаси можуть включати цистеїнові лінкери або групи, ОВСО-РЕСІ-24-МН5, пропаргил-РЕСи-24-МН і/або мультидентатні ОВСО і/або пропаргільні фрагменти.
У деяких варіантах здійснення винаходу каркас, що використовується для зв'язування одного або декількох лігандів сурбЄ, розкритих тут, з однією або декількома транспортованими молекулами, має наступну структуру:
Я о МН ом о о ХО
Нн 2 5-Х о |)
І Х. ) 2
М: (Каркас 1).
Використання Каркаса 1 полегшує, наприклад, ефективну кон'югацію як з мономерними лігандами сурб, так і з однією або декількома транспортованими молекулами. Каркас 1 включає амін-реакційноздатний п-нітрофенол (який також називається 4-нітрофенолом), амідний зв'язок і три одиниці ПЕГго, а також кінцеві алкіни. Ефір 4-нітрофенолу може бути кон'югований з первинним аміном на транспортованій молекулі, таким як первинний амін на РНК-тригері, з кінцевою аміногрупою (наприклад, МНег-Св), шляхом утворення аміду. Кінцевий алкін може бути кон'югований з азидо-модифікованими лігандами (як з пептидами, так і з малими молекулами) за допомогою клік-хімії з використанням каталізатора на основі міді.
У деяких варіантах здійснення винаходу транспортована молекула являє собою засіб РНКІ.
У деяких варіантах здійснення винаходу Каркас 1 може бути прикріплений до кінця засобу РНКІ, наприклад до 5-кінця смислового ланцюга засобу РНКІі. Наприклад, 5'-кінцевий кінець смислового ланцюга засобу РНКі може бути модифікований так, щоб він включав Св-амін (-Св-
МН»), приєднаний до 5'-кінця 5'-кінцевого нуклеотида засобу РНКІ. Засіб РНКІ, що має таку Св- аміномодифікацію (або іншу модифікацію, що приводить до кінцевого аміну), може бути легкий кон'югований з Каркасом 1, як показано на наступній структурі:
ЗМ - пу м о о
Б ах о о Ве ую деко ер т прути сни МН їн н ето я я т (Структура 380), та тУх
МАО . . де 7 мм означає засіб РНКІ.
Алкінові групи Структури 380, показаної вище, потім можуть бути кон'юговані з лігандами інтегрину сурб, описаними тут, з утворенням тридентатних лігандів інтегрину сурб.
У деяких варіантах здійснення винаходу, каркас може бути синтезований з використанням рвсо (дибензоциклооктин), і він може бути представлений наступною структурою: си, с і о МН А о /б нм о /4 у // о о о о о МН К х
Х
М М пре о о (Структура 381), де означає приєднання до реакційноздатної групи або до фрагмента, що включає транспортовану молекулу.
У деяких варіантах здійснення винаходу, між засобом РНКІ і ауВб-інтегриновими лігандами, описаними тут, використовуються триазольні групи, як показано на наступній загальній структурі:
Й: пигандауре М, о о й Ж АЖ
М ; г з с
М- Мн мналя- ДИКИМ пиганд ви. тм ш-й в / пигана ауое (Структура 390), ллл, . й . . . . де означають будь-які прийнятні каркаси або лінкерні групи, які можуть бути використані для зв'язування ліганду із засобом РНКІ, і МОВ К. означає засіб РНКІ.
У деяких варіантах здійснення винаходу каркас може бути синтезований у вигляді фосфорамідитної сполуки, яка може дозволити тридентатному ліганду легко з'єднуватися з 5'- кінцем смислового ланцюга засобу РНКІ, за допомогою фосфорамідитного синтезу, як показано на наступній структурі:
НМ о ЇЇ
ШУ т г о М о о | ЖК
М, Р го М | | (Структура 400).
Після синтезу з приєднанням сполуки Структури 400 до 5'-кінця смислового ланцюга засобу
РНКІ, кінцеві алкіни можуть бути з'єднані з лігандами інтегрину аурб, описаними тут.
У деяких варіантах здійснення винаходу, описаний тут ліганд інтегрину сурб містить
Структуру 1, Структуру 2, Структуру 5, Структуру 5.1, Структуру 2, Структуру 6, Структуру 6.1,
Структуру 6,2, Структуру 6.3, Структуру 6, Структуру 7, Структуру 8, Структуру 9, Структуру 10,
Структуру 11, Структуру 12, Структуру 13, Структуру 14, Структуру 15, Структуру 16, Структуру 17, Структуру 18, Структуру 19, Структуру 20, Структуру 22, Структуру 23, Структуру 24,
Структуру 25, Структуру 27, Структуру 29, Структуру 23, Структуру 24, Структуру 25, Структуру 27, Структуру 29, Структуру 30, Структуру 31, Структуру 32, Структуру 33, Структуру 34,
Структуру 35, Структуру 36 або Структуру 37, де ліганд інтегрину сомрб являє собою тридентатний ліганд, з'єднаний через каркас.
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину сурб, розкритий тут, включає
Структуру 2 в тридентатній формі, як представлено на наступній структурі:
х я бен Ще х А они як и 2 у хо ни дини тя ройтов У я но Є а 2
Мт но М Ж мак " дитя ЙО у фу ще ун - - я К не до яти ях ра З я о х уд ! т У й а щі з ж, я ях ек ие и " К Х а г ї щи г КЕ з о й За о
Кн в т у щит шийний ин
ХУ 5-й у. 7 ту Мт щм-ня х лен -й но
АКА 4 й тей Май -3 (Структура 700).
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину сурб, розкритий тут, включає
Структуру 6.1 в тридентатній формі, як представлено на наступній структурі: 5 но г бо ни с: ле, - й кад о чу й Ще в. н й вті ї
Ї в. о я Е
ГИ х и но тео му і туя, Я их Й Ме С . ий п ти оно, Й що у кв. . ша ден ле т ра сну с Ме а. Е ( Жак дойтт ме ат р» -й "в | ня я те хе чи
Ко вва дея ь нн і по 7 їй Ма
М і ! в ди еВ й 2 Шк пк вх
Нд
Н--Я ней (Структура 701).
У деяких варіантах здійснення винаходу, ліганд інтегрину суВб, розкритий тут, включає
Структуру 6.1 в тридентатній формі, як представлено на наступній структурі:
в ; ни Кк З о х ту ЕК
З. дн то у ; ! - т ! ех й З в 9 ме й т у о я о т е ї т чи З -ї2 ул ч. Зх як. дю нм дн г бува - мем З щ у боті ві й ть - мно, і ші : о ) А ь, що шт й : ї В ма яв -ї д-ни Я кт
НН о вв-й -щН сш хо Ме
Нм і - (Структура 70142).
У деяких варіантах здійснення винаходу, ліганд інтегрину сурб, розкритий тут, включає
Структуру 6.1 в тридентатній формі, яка включає глутаровий лінкер, як представлена на наступній структурі:
січе «но
Є ша ї ї бої т вас то
А т і о ни ц пк о ва і бо 7
Те у о. ї й фути тика яв, п нем ч У і що ї ун ; Же 7 І
НК в т
Її У ще /! и пат терні кн " (Структура 7015).
У деяких варіантах здійснення винаходу, антагоніст інтегрину ауВб включає Структуру 6.1 в тридентатній формі, кон'юговану із засобом РНКІ, як представлено на наступній структурі:
но ие га се к є ох я с су іт лет , і я Че р 77 Я
Я у же
Її з У влити сб з Бас
НО со о вк М» ря о ; п й КК, де і туняд рун . Мен зи : у-Кк4 з ше ШИ в Е ві т ма їхЯ пк У у плн, Ве з у. й
Сх тк б ди ит х у АДМ нереке і т. . т 4 же ши ї - і пи дя
М НУ ни «й як Я Й ул х 5 й не й де но с си Що як я - Хе (Структура 701с),
ЧК м ши, их
ААУ де означає засіб РНКІ.
У деяких варіантах здійснення винаходу, ліганд інтегрину сурб, розкритий тут, включає
Структуру 6.1 в тридентатній формі як представлено на наступній структурі:
о нт ЗК З то яю бод тт ! -
Мей і я. о а «Ти : їі - б
Се й, в
НО, сн р, - наше : пит, ї Оу веж М,
Ос ня мих - З зе ЧИ в. чо мя яв о
Р дяк Мем я х УМ дети яхуу подяки тек Врееии плетєююиях
В - Я ех й
Ши н. КЕ 7 гм дей я в. ю с я -к к- же вну " (Структура 7019), гДАДАДИЛАЛАГЛМ У У У У де означає будь-який прийнятний каркас, який можна використовувати для зв'язування ліганду і транспортованої молекули.
У деяких варіантах здійснення винаходу, ліганд інтегрину ауВб включає Структуру 6.1 в тридентатній формі, кон'юговану із засобом РНКІ, як представлено на наступній структурі:
но ше що тек кт я ід ї ща чит се, Й то ї У щі з ї в. неї . 1 з
У й
Є К
К Ух мч
Но дока бю Кв, і тя 4 Ї Мам Бе нн», Ї -7 о пн о : нн ех й
КМ. р м уко о - Ж т жк ко дитя піп тічттнх плити. ми ши пили щу ; 2 БИЙ ше є Кт вк й ги і не, ий : т М ли
Й ит 5-й ен Р, до 77 7 й
А ие в ит мок уд я як б век
Ну й х (Структура 701е), гдАДЛАДОИЛЛАГМ У м т м де означає будь-який прийнятний каркас, який можна використовувати для жк вх ВК и , . . РЕ УМ, : : зв'язування ліганду і засобу РНКІ, і означає засіб РНКІ.
Реакційноздатні групи і захищені реакційноздатні групи
Реакційноздатні групи добре відомі в даній галузі, і вони забезпечують утворення ковалентних зв'язків між двома молекулами або реагентами. Прийнятні реакційноздатні групи для використання в рамках винаходу включають, без обмеження: аміногрупи, амідні групи, групи карбонових кислот, азиди, алкіни, пропаргільні групи, ВСМ(біцикло|б.1.Ф|ноніл, М- гідроксисукцинімід (МН) або інший активований складний ефір (наприклад, РМР, ТЕР, РЕР), бром-групи, альдегіди, карбонати, тозилати, тетразини, транс-циклооктен (ТСО), гідразиди, гідроксильні групи, дисульфіди і ортопіридилдисульфідні групи.
Введення реакційноздатних груп може полегшити кон'югацію ліганду інтегрину амрб, розкритого тут, з транспортованою молекулою. Реакції кон'югаці добре відомі в даній галузі, і вони забезпечують утворення ковалентних зв'язків між двома молекулами або реагентами.
Прийнятні реакції кон'югаці для використання в рамках винаходу включають, без обмеження, реакцію амідного сполучення, реакцію приєднання Міхаеля, реакцію з утворенням гідразону і реакцію циклоприєднання методами клік-хімії.
У деяких варіантах здійснення винаходу, описаних тут, ліганди, націлені на інтегрин сурб, синтезують у вигляді складного ефіру тетрафторфенілу (ТЕР), який може бути заміщений реакційноздатною аміногрупою для приєднання до транспортованої молекули. У деяких варіантах здійснення винаходу ліганди, націлені на інтегрин, описані тут, синтезують у вигляді азиду, який може бути кон'югований з пропаргільною або ОВСО групою, наприклад, за допомогою реакції циклоприєднання методами клік-хімії для приєднання транспортовані молекули.
Захищені реакційноздатні групи також широко використовуються в даній галузі. Захисна група забезпечує тимчасове хімічне перетворення реакційноздатної групи на групу, яка не взаємодіє в умовах, коли реагує незахищена група, наприклад, щоб забезпечити хіміо- селективність в подальшій хімічній реакції. Прийнятні захищені реакційноздатні групи для використання в рамках винаходу включають, без обмеження, групи ВОС (трет-бутоксикарбоніл),
Етос (9-флуоренілметоксикарбоніл), карбоксибензильні (СВ) групи, бензилові ефіри і РВЕ (2,2,4,6,7-пентаметилдигідробензофуран-5-сульфоніл).
Транспортовані молекули (включаючи засоби РНКІ)
Транспортована молекула являє собою будь-яку молекулу, яка при відділенні від описаних тут лігандів інтегрину суВб буде надавати бажаний вплив на клітину, що містить рецептор інтегрину ам8Вб. Транспортована молекула може являти собою, без обмеження, фармацевтичний інгредієнт, лікарський продукт, проліки, речовину з відомою терапевтичною дією, малу молекулу, антитіло, фрагмент антитіла, імуноглобулін, моноклональне антитіло, мітку або маркер, ліпід, природну або модифіковану нуклеїнову кислоту або полінуклеотид, пептид, полімер, поліамін, білок, аптамер, токсин, вітамін, ПЕГ, гаптен, дигоксигенін, біотин, радіоактивний атом або молекулу, або флуорофор. У деяких варіантах здійснення винаходу одна або декілька транспортованих молекул (наприклад, однакові або різні транспортовані молекули) пов'язані з одним або декількома лігандами інтегрину суВб для націлювання на клітину, яка експресує інтегрин су Вб.
У деяких варіантах здійснення одна або декілька транспортованих молекул являють собою фармацевтичний інгредієнт або фармацевтичну композицію. У деяких варіантах здійснення одна або декілька транспортованих молекул являє собою сполуку на основі олігонуклеотиду.
Використовуваний тут термін "сполука на основі олігонуклеотиду" стосується нуклеотидної послідовності, що містить приблизно 10-50 (наприклад, від 10 до 48, від 10 до 46, від 10 до 44, від 10 до 42, від 10 до 40, від 10 до 38, від 10 до З6, від 10 до 34, від 10 до 32, від 10 до 30, від 10 до 28, від 10 до 26, від 10 до 24, від 10 до 22, від 10 до 20, від 10 до 18, від 10 до 16, від' до 14, від 10 до 12, від 12 до 50, від 12 до 48, від 12 до 46, від 12 до 44, від 12 до 42, від 12 до 40, від 12 до 38, від 12 до З6, від 12 до 34, від 12 до 32, від 12 до 30, від 12 до 28, від 12 до 26, від 12 до 24, від 12 до 22, від 12 до 20, від 12 до 18, від 12 до 16, от 12 до 14, от 14 до 50, от 14 до 48, от 14 до 46, от 14 до 44, от 14 до 42, от 14 до 40, от 14 до 38, от 14 до Зб, от 14 до 34, від 14 до 32, від 14 до 30, від 14 до 28, від 14 до 26, від 14 до 24, від 14 до 22, від 14 до 20, від 4 до 18, від 14 до 16, від 16 до 50, від 16 до 48, від 16 до 46, від 16 до 44, від 16 до 42, від 16 до 40, від 16 до 38, від 16 до З6, від 16 до 34, від 16 до 32, від 16 до 30, від 16 до 28, від 16 до 26, від 16 до 24, від 16 до 22, від 16 до 20, від 16 до 18, від 18 до 50, від 18 до 48, від 18 до 46, від 18 до 44, від 18 до 42, від 18 до 40, від 18 до 38, від 18 до 36, від 18 до 34, від 18 до 32, від 18 до 30, від 18 до 28, від 18 до 26, від 18 до 24, от 18 до 22, от 18 до 20, от 20 до 50, от 20 до 48, от 20 до 46, от 20 до 44, от 20 до 42, от 20 до 40, от 20 до 38, от 20 до Зб, від 20 до 34, від 20 до 32, від 20 до 30, від 20 до 28, від 20 до 26, від 20 до 24, від 20 до 22, від 22 до 50, від 22 до 48, від 22 до 46, від 22 до 44, від 22 до 42, від 22 до 40, від 22 до 38, від 22 до 36, від 22 до 34, від 22 до 32, від 22 до 30, від 22 до 28, від 22 до 26, від 22 до 24, від 24 до 50, від 24 до 48, від 24 до 46, від 24 до 44, від 24 до 42, від 24 до 40, від 24 до 38, від 24 до З6, від 24 до 34, від 24 до 32, від 24 до 30, від 24 до 28, від 24 до 26, від 26 до 50, від 26 до 48, від 26 до 46, від 26 до 44, від 26 до 42, від 26 до 40, от 26 до 38, от 26 до Зб, от 26 до 34, от 26 до 32, от 26 до 30, от 26 до 28, от 28 до 50, от 28 до 48, от 28 до 46, от 28 до 44, від 28 до 42, від 28 до 40, від 28 до 38, від 28 до 36, від 28 до 34, від 28 до 32, від до 28 до 30, від 30 до 50, від 30 до 48, від 30 до 46, від 30 до 44, від 30 до 42, від 30 до 40, від 30 до 38, від 30 до 36, від 30 до 34, від 30 до 32, від 32 до 50, від 32 до 48, від 32 до 46, від 32 до 44, від 32 до 42, від 32 до 40, від 32 до 38, від 32 до Зб, від 32 до 34, від 34 до 50, від 34 до 48, від 34 до 46, від 34 до 44, від 34 до 42, від 34 до 40, від 34 до 38, від 34 до 36, від 36 до 50, від 36 до 48, від 36 до 46, від 36 до 44, від 36 до 42, від 36 до 40, от 36 до 38, от 38 до 50, от 38 до 48, от 38 до 46, от 38 до 44, от 38 до 42, от 38 до 40, от 40 до 50, от 40 до 48, от 40 до 46, від 40 до 44, від 40 до 42, від 42 до 50, від 42 до 48, від 42 до 46, від 42 до 44, від 44 до 50, від 44 до 48, від 44 до 46, від 46 до 50, від 46 до 48 або від 48 до 50) нуклеотидів або пар нуклеотидних основ. У деяких варіантах здійснення сполука на основі олігонуклеотиду має нуклеотидну послідовність яка, щонайменше, частково комплементарна кодуючій послідовності в експресованій нуклеїновій кислоті-мішені або в гені-мішені в клітині. У деяких варіантах здійснення винаходу, сполуки на основі олігонуклеотиду при доставці в клітину, яка експресує генів, здатні інгібувати експресію вказаного гена, і вони називаються тут сполуками на 60 основі олігонуклеотиду, які інгібують експресію. Експресія гена може бути інгібована в умовах іп міїго або іп мімо. "Сполуки на основі олігонуклеотиду" включають, без обмеження наступні сполуки: одноланцюжкові олігонуклеотиди, одноланцюжкові антисмислові олігонуклеотиди, короткі інтерферуючі РНК (зікМА), дволанцюжкові РНК (аз5КМА), мікро РНК (тікМА), короткошпилькові
РНК (зпяКМА), рибозими, інтерферуючі молекули РНК і дайсер-субстрати. У деяких варіантах здійснення винаходу сполука на основі олігонуклеотиду являє собою одноланцюжковий олігонуклеотид, такий як антисмисловий олігонуклеотид. У деяких варіантах здійснення винаходу сполука на основі олігонуклеотиду являє собою дволанцюжковий олігонуклеотид. У деяких варіантах здійснення винаходу сполука на основі олігонуклеотиду являє собою дволанцюжковий олігонуклеотид, який є засобом РНКІ.
У деяких варіантах здійснення винаходу одна або декілька транспортованих молекул являють собою "засіб РНКІі", який, як визначено тут, являє собою композицію, яка містить молекулу олігонуклеотиду РНК або РНК-подібної сполуки (наприклад, хімічно модифікованої
РНК), яка здатна руйнувати або інгібувати трансляцію транскриптів інформаційної РНК (мРНК) цільової МРНК специфічним для послідовності чином. Як використовується тут, засоби РНКІ можуть діяти через РНК-інтерференційний механізм (тобто індукуючи РНК-інтерференцію за допомогою взаємодії з апаратом шляху РНК-інтерференції (ндукований РНК комплекс сайленсингу або КІЗС) клітин ссавців) або за допомогою будь-якого альтернативного механізму (механізмів) або шляху (шляхів). Хоча вважається, що засоби РНКІ, як визначено тут, діють в основному через механізм РНК-інтерференції, розкриті засоби РНКІі не пов'язані або не обмежені яким-небудь конкретним шляхом або механізмом дії. Засоби РНКі включають, без обмеження: одноланцюжкові олігонуклеотиди, одноланцюжкові антисмислові олігонуклеотиди, короткі інтерферуючі КМА (зікМА), дволанцюжкові КМА (а5КМА), мікро КМА (тікМА), короткошпилькові РНК (зпПКМА) і дайсер-субстрати. Антисмисловий ланцюг засобів РНКІ, описаних тут, щонайменше частково комплементарний мРНК, яка є мішенню. Засоби РНКІ можуть включати один або декілька модифікованих нуклеотидів і/або один або декілька зв'язків, які не є фосфодіефірними зв'язками.
Як правило, засоби РНКі можуть складатися, щонайменше, зі смислового ланцюга (який також називається супроводжуючим ланцюгом), який включає першу послідовність, і антисмислового ланцюга (який також називається напрямним ланцюгом), який включає другу послідовність. Довжина смислового і антисмислового ланцюгів засобу РНКІі може мати довжину з від 16 до 49 нуклеотидів. У деяких варіантах здійснення винаходу смислові і антисмислові ланцюги засобу РНКІі незалежно мають довжину, що складає від 17 до 26 нуклеотидів. У деяких варіантах здійснення винаходу смислові і антисмислові ланцюги мають довжину з від 19 до 26 нуклеотидів. У деяких варіантах здійснення винаходу смислові і антисмислові ланцюги незалежно мають довжину з від 21 до 26 нуклеотидів. У деяких варіантах здійснення винаходу смислові і антисмислові ланцюги незалежно мають довжину з від 21 до 24 нуклеотидів.
Смислові і антисмислові ланцюги можуть мати однакову довжину або різну довжину. Засоби
РНКі включають послідовність антисмислового ланцюга, яка щонайменше частково комплементарна послідовності в гені-мішені, і при доставці в клітину, яка експресує мішень, засоби РНКІ можуть інгібувати експресію одного або декількох генів-мішеней в умовах іп мімо або іп міїго.
Сполуки на основі олігонуклеотиду, як правило, і, зокрема, засоби РНКІі можуть складатися з модифікованих нуклеотидів і/або одного або декількох зв'язків, які не є фосфодіефірними зв'язками. Використовуваний тут термін "модифікований нуклеотид" являє собою нуклеотид, відмінний від рибонуклеотиду (2'-гідроксильного нуклеотиду). У деяких варіантах здійснення винаходу щонайменше 50 95 (наприклад, щонайменше 60 9565, щонайменше 70 95, щонайменше 80956, щонайменше 9095, щонайменше 9595, щонайменше 9795, щонайменше 98 95, щонайменше 99 95 або 100 95) нуклеотидів являють собою модифіковані нуклеотиди. У рамках даного винаходу модифіковані нуклеотиди включають, без обмеження, дезоксирибонуклеотиди, нуклеотидні міметики, нуклеотиди з видаленими основами, 2'-модифіковані нуклеотиди, (інвертовані) нуклеотиди із 3-3 зв'язками, нуклеотиди, що містять неприродні основи, місточкові нуклеотиди, пептид-нуклеїнові кислоти, 27, 3-секо нуклеотидні міметики (незамкнені аналоги нуклеїнових основ, замкнені нуклеотиди, нуклеотиди з 3'-О-метокси (2' інтернуклеозидними зв'язками), 2'-Е-арабіно-нуклеотиди, 5-Ме, 2-фтор-нуклеотиди, морфоліно-нуклеотиди, вінілфосфонат-деоксирибонуклеотиди, що містять вінілфосфонат нуклеотиди і містять циклопропілфосфонат нуклеотиди. 2'-модифіковані нуклеотиди (тобто нуклеотиди з групою, що не є гідроксильною групою, в положенні 2" п'ятичленного кільця цукрів) включають, без обмеження, 2--О-метил нуклеотиди, 2'-деокси-2'-фтор нуклеотиди, 2'--деокси нуклеотиди, 2- 60 метоксіетил (2-О-2-метоксіетил) нуклеотиди, 2'-аміно нуклеотиди і 2'-алкіл нуклеотиди.
Крім того, один або декілька нуклеотидів в сполуці на основі олігонуклеотиду, такого як засіб
РНКІ, можуть бути зв'язані нестандартними зв'язками або каркасами (тобто модифікованими міжнуклеозидними зв'язками або модифікованими каркасами). Модифікований міжнуклеозидний зв'язок може являти собою нефосфатний ковалентний міжнуклеозидний зв'язок. Модифіковані міжнуклеозидні зв'язки або каркаси включають, без обмеження, 5'-фосфоротіоатні групи, хіральні фосфоротіоати, тіофосфати, фосфоротіоати, фосфотриефіри, аміноалкіл- фосфотриефіри, алкілфосфонати (наприклад, метилфосфонати або 3'-алкіленфосфонати), хіральні фосфонати, фосфінати, фосфорамати (наприклад, 3'-амінофосфорамідат, аміноалкілфосфорамідати або тіонофосфорамідати), тіоноалкілфосфонати, тіоноалкілфосфотриефіри, морфолінові зв'язки, боранфосфати, що мають нормальні 3'-5'- зв'язки, 2'-5'-зв'язані аналоги боранфосфатів, або боранфосфати з інвертованою полярністю, де суміжні пари нуклеозидних ланок зв'язані як 3-5 з 5-3 або 2-5 3 5-27.
Не обов'язково, щоб всі положення в такій сполуці були однаково модифіковані. Навпаки, в одну сполуку на основі олігонуклеотиду або навіть в один її нуклеотид може бути включена більше ніж одна модифікація.
У деяких варіантах здійснення винаходу транспортована молекула являє собою засіб РНКІ для інгібування експресії гена альфа-ЕМас. Транспортована молекула може являти собою засіб
РНКІ, описаний в міжнародній патентній заявці РСТ/О518/40874, яка включена у всій своїй повноті в даний опис шляхом посилання.
Смислові і антисмислові ланцюги засобу РНКІі можуть бути синтезовані і/або модифіковані відомими в даній галузі методами. Наприклад, дані про засоби РНКІ, направлені на інгібування експресії альфа-ЕМас, можна знайти, наприклад, в публікації міжнародної патентної заявки УМО 2008/152131, яка включена у всій своїй повноті в даний опис шляхом посилання. Додаткові відомості, що стосуються засобу РНКІ, можуть бути знайдені, наприклад, при описі модифікацій, наприклад, в міжнародній патентній заявці РСТ/О52017/045446 (заявник Агтомпеай
Рпаттасецшіїса!в, Іпс), зміст якої включений в даний опис у всій своїй повноті за допомогою посилання. У деяких варіантах здійснення винаходу одна або декілька транспортованих молекул можуть включати або складатися з фрагмента ПЕГ (РЕС), який може діяти як фармакокінетичний (ФК) модулятор. У деяких варіантах здійснення винаходу дна або декілька транспортованих молекул можуть включати фрагмент ПЕГ, що має приблизно 20-900 ланок етиленоксиду (СН2-СН2-О) (наприклад, від 20 до 850, від 20 до 800, від 20 до 750, від 20 до 700, від 20 до 650, від 20 до 600, від 20 до 550, від 20 до 500, від 20 до 450, від 20 до 400, від 20 до 350, від 20 до 300, від 20 до 250, від 20 до 200, від 20 до 150, від 20 до 100, від 20 до 75, від 20 до 50, від 100 до 850, від 100 до 800, від 100 до 750, від 100 до 700, від 100 до 650, від 100 до 600, від 100 до 550, від 100 до 500, від 100 до 450, від 100 до 400, від 100 до 350, від 100 до 300, від 100 до 250, від 100 до 200, від 100 до 150, від 200 до 850, від 200 до 800, від 200 до 750, от 200 до 700, от 200 до 650, от 200 до 600, от 200 до 550, от 200 до 500, от 200 до 450, от 200 до 400, от 200 до 350, от 200 до 300, от 200 до 250, від 250 до 900, від 250 до 850, від 250 до 800, від 250 до 750, від 250 до 700, від 250 до 650, від 250 до 600, від 250 до 550, від 250 до 500, від 250 до 450, від 250 до 400, від 250 до 350, від 250 до 300, від З00 до 900, від 300 до 850, від З00 до 800, від 300 до 750, від 300 до 700, від 300 до 650, від 300 до 600, від 300 до 550, від 300 до 500, від 300 до 450, від 300 до 400, від 300 до 350, від 350 до 900, від 350 до 850, від 350 до 800, від 350 до 750, від 350 до 700, від 350 до 650, від 350 до 600, від 350 до 550, від 350 до 500, від 350 до 450, від 350 до 400, від 400 до 900, від 400 до 850, від 400 до 800, від 400 до 750, от 400 до 700, от 400 до 650, от 400 до 600, от 400 до 550, от 400 до 500, от 400 до 450, от 450 до 900, от 450 до 850, от 450 до 800, от 450 до 750, від 450 до 700, від 450 до 650, від 450 до 600, від 450 до 550, від 450 до 500, від 500 до 900, від 500 до 850, від 500 до 800, від 500 до 750, від 500 до 700, від 500 до 650, від 500 до 600, від 500 до 550, від 550 до 900, від 550 до 850, від 550 до 800, від 550 до 750, від 550 до 700, від 550 до 650, від 550 до 600, від 600 до 900, від 600 до 850, від 600 до 800, від 600 до 750, від 600 до 700, від 600 до 650, від 650 до 900, від 650 до 850, від 650 до 800, від 650 до 750, від 650 до 700, від 700 до 900, від 700 до 850, від 700 до 800, від 700 до 750, від 750 до 900, від 750 до 850, від 750 до 800, від 800 до 900, від 850 до 900 або 850 до 900 ланок етиленоксиду). У деяких варіантах здійснення винаходу одна або декілька транспортованих молекул складаються з фрагмента ПЕГ, що містить приблизно 455 ланок етиленоксиду (молекулярна маса - приблизно 20 кілодальтон (кДа)). У деяких варіантах здійснення винаходу фрагмент ПЕГ має молекулярну масу приблизно 2 кДа. У деяких варіантах здійснення винаходу фрагмент ПЕГ має молекулярну масу приблизно 20 кДа. У деяких варіантах здійснення винаходу фрагмент ПЕГ має молекулярну масу приблизно 40 кДа.
Фрагменти ПЕГ, описані тут, можуть бути лінійними або розгалуженими. Фрагменти ПЕГ можуть 60 бути дискретними (монодисперсними) або недискретними (полідисперсними). Фрагмент ПЕГ для використання як засіб, який поліпшує ФК транспортованих молекул, можуть бути придбані з числа тих, що є в продажу. У деяких варіантах здійснення винаходу одна або декілька транспортованих молекул включають фрагмент ПЕГ, який може діяти як модулятор ФК або енхансер, а також вони можуть включати іншу транспортовану молекулу, таку як фармацевтично активний інгредієнт або сполука.
Описані ліганди інтегрину смВб включають солі або їх сольвати. Під сольватами ліганду інтегрину аурб розуміють аддукти молекул інертного розчинника і ліганду інтегрину сурб, які утворюються завдяки їх взаємній силі тяжіння. Сольвати являють собою, наприклад, моно- або дигідрати або аддитивні сполуки зі спиртами, наприклад, такими як, метанол або етанол.
Вільні аміногрупи або вільні гідроксильні групи можуть бути представлені як замісники лігандів інтегрину сурбЄ з відповідними захисними групами.
Ліганди інтегрину сурб також включають, наприклад, похідні, тобто ліганди інтегрину аурб, які модифіковані, наприклад, алкільними або ацильними групами, цукрами або олігопептидами, які розщеплюються в умовах іп міїго або в організмі.
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину ауВб, розкритий тут, полегшує доставку транспортованої молекули в цитозоль клітини, що презентує інтегрин суВб на своїй поверхні, через опосередкований лігандом ендоцитоз, піноцитоз, або по інших механізмах. У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину суВб, розкритий тут, полегшує доставку транспортованої молекули до плазматичної мембрани клітини, яка презентує інтегрин аурВб.
Фармацевтичні композиції
У деяких варіантах здійснення даний винахід стосується фармацевтичних композицій, які містять, або складаються, або по суті складаються з одного або декількох лігандів інтегрину ауВб, описаних тут.
Використовуваний тут термін "фармацевтична композиція" включає фармакологічно ефективна кількість активного фармацевтичного інгредієнта (АРІ) і, необов'язково, один або декілька фармацевтично прийнятних ексципієнтів. Фармацевтично прийнятні ексципієнти (допоміжні добавки) являють собою речовини, відмінні від активного фармацевтичного інгредієнта (АРІ, терапевтичного продукту), які спеціально включені в систему доставки лікарського засобу. Ексципієнти не надають або не призначені для того, щоб надавати терапевтичну дію на передбачувану дозу. Ексципієнти можуть діяти як допоміжний засіб а) для допомоги при обробці системи доставки лікарських засобів під час їх виготовлення, б) для захисту, підтримки або збільшення стабільності, біодоступності або прийнятності АРІ для пацієнта, с) для допомоги при ідентифікації продукту і/або а) для поліпшення будь-якої іншої характеристики, що стосується загальної безпеки, ефективності і доставок АРІ під час зберігання або використання. Фармацевтично прийнятний ексципієнт може бути інертною або не інертною речовиною.
Ексципієнти включають, без обмеження: підсилювачі всмоктування, антиадгезиви, протиспінювальні агенти, антиоксиданти, зв'язуючі, буферні агенти, носії, засоби для покриття, барвники, підсилювачі доставки, полімери для доставки, декстран, декстрозу, розріджувачі, дезінтегранти, емульгатори, засоби для збільшення об'єму продукту, наповнювачі, ароматизатори, гліданти, зволожувачі, мастильні речовини, масла, полімери, консерванти, сольовий розчин, солі, розчинники, цукри, суспендуючі агенти, матриці з уповільненим вивільненням, підсолоджувачі, загусники, регулятори тонічності, носії, водовідштовхувальні агенти і змочувачі.
Фармацевтичні композиції, описані тут, можуть містити інші додаткові компоненти, що звичайно зустрічаються в фармацевтичних композиціях. У деяких варіантах здійснення винаходу додатковий компонент являє собою фармацевтично активний матеріал.
Фармацевтично активні матеріали включають, без обмеження: протисвербіжні засоби, в'яжучі, місцеві анестетики або протизапальні засоби (наприклад, антигістамін, дифенгідрамін і т.п.), лікарський засіб на основі малих молекул, антитіло, фрагмент антитіла, аптамери і/або вакцину.
Фармацевтичні композиції можуть також містити консерванти, солюбілізатори, стабілізатори, змочувальні агенти, емульгатори, підсолоджувачі, барвники, одоранти, солі, для зміни осмотичного тиску, буфери, засоби для покриття або антиоксиданти. Композиції також можуть містити інший агент з відомою терапевтичною дією.
Фармацевтичні композиції можна вводити різними способами, залежно від того, чи потрібне місцеве або системне лікування, а також від ділянки, що підлягає лікуванню. Введення може бути здійснене будь-яким способом, відомим в даній галузі, таким як, але без обмеження, місцевим (наприклад, з використанням трансдермального пластиру), пульмональним (наприклад, шляхом інгаляції або інсуфляці порошків або аерозолів, в тому числі з допомогою бо небулайзера, шляхом внутрішньотрахеального, інтраназального введення), епідермальним,
трансдермальним, пероральним або парентеральним. Парентеральне введення включає, без обмеження, внутрішньовенне, внутрішньоартеріальне, підшкірне, внутрішньоочеревинне або внутрішньом'язове введення або інфузію; підшкірне (наприклад, через імплантований пристрій), інтракраніальне, інтрапаренхімальне, інтратекальне і інтравентрикулярне введення. У деяких варіантах здійснення винаходу фармацевтичні композиції, описані тут, вводять за допомогою підшкірної ін'єкції. Фармацевтичні композиції можна вводити перорально, наприклад, в формі таблеток, таблеток з покриттям, драже, твердих або м'яких желатинових капсул, розчинів, емульсій або суспензій. Введення також може бути здійснене ректально, наприклад, з використанням супозиторіїв; локально або черезшкірно, наприклад, з використанням мазей, кремів, гелів або розчинів; або парентерально, наприклад, використовуючи розчини для ін'єкцій.
Фармацевтичні композиції, придатні для ін'єкційного застосування, містять стерильні водні розчини (коли композиції розчинні у воді) або дисперсії і стерильну порошки для екстратемпорального приготування стерильних ін'єкційних розчинів або дисперсій. Прийнятні носії для внутрішньовенного введення включають фізіологічний сольовий розчин, бактеріостатичну воду, Сгепторпог ЕМ (ВА5Е, Рагзіррапу, МУ) або забуферений фосфатом фізіологічний розчин. Композиція повинна бути стабільною в умовах виробництва і зберігання, і вона повинна бути захищена від забруднюючої дії мікроорганізмів, таких як бактерії і грибки.
Носій може являти собою розчинник або дисперсійне середовище, що містить, наприклад, воду, етанол, поліол (наприклад, гліцерин, пропіленгліколь і рідкий поліетиленгліколь) і їх прийнятні суміші. Необхідна текучість може підтримуватися, наприклад, за рахунок використання засобів для покриття, такого як лецитин, шляхом підтримки необхідного розміру частинок у разі дисперсії, і за рахунок використання поверхнево-активних речовин. У багатьох випадках в композиції переважно включати засоби для підтримки ізотонічності, наприклад, цукри, поліспирти, такий як маніт, сорбіт, і хлорид натрію. Пролонговане всмоктування ін'єктованих композицій може бути досягнуте шляхом включення в композицію засобу, який затримує поглинання, наприклад, моностеарату алюмінію і желатину.
Стерильні розчини для ін'єкцій можуть бути отримані шляхом введення активної сполуки в необхідній кількості у прийнятному розчиннику разом з одним або комбінацією інгредієнтів, перерахованих вище, з подальшою стерилізацією фільтруванням. Звичайно дисперсії отримують шляхом введення активної сполуки в стерильний носій, який містить основне дисперсійне середовище і необхідні інші інгредієнти з числа перерахованих вище. У разі стерильних порошків для приготування стерильних ін'єкційних розчинів, способи їх отримання включають вакуумне сушіння і сублімаційне сушіння заздалегідь стерилізованого в стерильних умовах розчину, які забезпечують отримання порошку активного інгредієнта, з додаванням будь-якого додаткового бажаного інгредієнта.
Композиції, придатні для внутрішньосуглобового введення, можуть бути представлені в формі стерильної водної композиції будь-якого з описаних тут лігандів, які можуть знаходитися в мікрокристалічній формі, наприклад в формі водної мікрокристалічній суспензії. Ліпосомні композиції або полімерні системи, що біологічно розкладаються, також можуть бути використані для представлення будь-якого описаного тут ліганду в формах для внутрішньосуглобового і для офтальмологічного введення.
Активні сполуки можуть бути використані разом з носіями, які захищають сполуку від швидкої елімінаці з організму, наприклад, у вигляді препарата з контрольованим вивільненням, включаючи імплантати і мікрокапсульовані системи доставки. Можуть бути використані біорозкладані біосумісні полімери, такі як етиленвінілацетат, поліангідриди, полігліколева кислота, колаген, поліортоефіри і полімолочна кислота. Способи отримання таких композицій відомі фахівцям в даній галузі техніки. Ліпосомні суспензії також можуть бути використані як фармацевтично прийнятні носії. Вони можуть бути отримані відповідно до способів, відомих фахівцям в даній галузі техніки, наприклад, як описано в патенті США 05 452811.
Фармацевтична композиція може містити і інші додаткові компоненти, що звичайно використовуються в складі фармацевтичних композицій. Такі додаткові компоненти включають без обмеження: протисвербіжні засоби, в'яжучі, місцеві анестетики або протизапальні засоби (наприклад, антигістамін, дифенгідрамін і т.п.). Використовуваний тут термін "фармакологічно ефективна кількість", "терапевтично ефективна кількість" або просто "ефективна кількість" стосується кількості фармацевтично активного агента для отримання фармакологічного, терапевтичного або профілактичного результату.
Лікарські засоби, що містять інтегрин сурб, також є об'єктом даного винаходу, як і способи отримання таких лікарських засобів, які передбачають включення однієї або декількох сполук, що містять інтегрин смВб, і, якщо бажано, однієї або декількох інших речовин з відомою 60 терапевтичною дією, в фармацевтично прийнятну форму.
Ліганди інтегрину смрВб і фармацевтичні композиції, що містять ліганди інтегрину смрб, описані тут, можуть бути упаковані або включені в набір, контейнер, упаковку або дозатор.
Ліганди інтегрину аурб і фармацевтичні композиції, що містять ліганди інтегрину сурб, можуть бути упаковані в заздалегідь заповнені шприци або флакони.
Клітини, тканини і організми, що не належать до людей
Клітини, тканини і організми, що не належать до людей, які містять або включають щонайменше один з лігандів інтегрину суб, описаних тут, охоплюються даним винаходом.
Клітину, тканину або організм, що не належить до людей, отримують шляхом доставки ліганду інтегрину сурб в клітину, тканину або організм будь-яким способом, відомим і доступним в даній галузі техніки. У деяких варіантах здійснення винаходу клітина являє собою клітину ссавця, включаючи, але без обмеження, клітину людини.
Націлювальні групи, з'єднувальні групи, модулятори фармакокінетики (ФК) і носії для доставки
У деяких варіантах здійснення винаходу, ліганд інтегрину суб кон'югований з однією або декількома ненуклеотидними групами, включаючи, але без обмеження, лінкерну групу, фармакокінетичний (ФК) модулятор, полімер для доставки або носій для доставки.
Ненуклеотидна група може посилювати націлювання, направлення, доставку або приєднання транспортованих молекул. Приклади націлювальних і лінкерних груп представлені в Таблиці А.
Ненуклеотидна група може бути ковалентно зв'язана з 3'- і/або 5'-кінцем смислового ланцюга і/або антисмислового ланцюга. У варіантах здійснення винаходу, де транспортована молекула являє собою засіб РНКІ, цей засіб РНКІ містить ненуклеотидну групу, зв'язану з 3- і/або 5- кінцем смислового ланцюга. У деяких варіантах здійснення винаходу ненуклеотидна група зв'язана з 5'-кінцем смислового ланцюга засобу РНКІ. Ліганд інтегрину сурб може бути зв'язаний з транспортованою молекулою безпосередньо або опосередковано через лінкер/лінкерну групу.
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину сурб зв'язаний з транспортованою молекулою через лабільний, розщеплюванйи або оборотний зв'язок або лінкер.
У деяких варіантах здійснення винаходу ненуклеотидна група посилює фармакокінетичні властивості або властивості біорозподілу засобу РНКІ або кон'югата, до якого він приєднаний, для поліпшення клітиноспецифічного або тканиноспецифічного розподілу і клітиноспецифічного захоплення кон'югата. У деяких варіантах здійснення ненуклеотидна група збільшує ендоцитоз засобу РНКІ.
Націлювальні групи або націлювальні фрагменти поліпшують фармакокінетичні або показники біорозподілу транспортованих молекул, до якої вони приєднані, для поліпшення клітиноспецифічного (включаючи, в деяких випадках, органоспецифічного) розподілу і клітиноспецифічного (або органоспецифічного) захоплення транспортованих молекул. У деяких варіантах здійснення винаходу націлювальна група може містити ліганд інтегрину смрб, як описано тут. У деяких варіантах здійснення винаходу націлювальна група містить лінкер. У деяких варіантах здійснення винаходу націлювальна група містить модулятор ФК. У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину сурВб пов'язаний з транспортованою молекулою через лінкер, такий як ПЕГ лінкер, або через один, два або три залишки з видаленими основами ілабо через рибіол (рибоза з видаленими основами) які в деяких випадках можуть служити як лінкер.
Можуть бути синтезовані транспортні молекули, що мають реакційноздатну групу, таку як аміногрупа (також звана тут аміном). У варіантах здійснення винаходу, де транспортована молекула являє собою засіб РНКІ, реакційноздатна група може бути зв'язана по 5'-кінцю і/або 3'- кінцю. Реакційноздатна група може бути використана потім для приєднання ліганду сурб з використанням методів, відомих в даній галузі.
Наприклад, в деяких варіантах здійснення винаходи синтезують засіб РНКІі, що має МНе-Св- групу на 5"-кінці смислового ланцюга засобу РНКІ. Потім кінцева аміногрупа може бути введена в реакцію утворення кон'югата, наприклад, з групою, яка включає ліганд, направлений на інтегрин сурб. У деяких варіантах здійснення винаходи синтезують засіб РНКІ, що має одну або декілька алкінових груп на 5'-кінці смислового ланцюга засобу РНКІ. Кінцева алкінова група (групи) потім може бути введена в реакцію утворення кон'югата, наприклад, з групою, яка включає ліганд, направлений на інтегрин суб.
У деяких варіантах здійснення лінкерна група кон'югована з лігандом сурВб. Лінкерна група полегшує ковалентний зв'язок ліганду суВб з транспортованою молекулою, фармакокінетичним (ФК) модулятором, полімером для доставки або носієм для доставки. Приклади лінкерних груп включають, без обмеження: АІК-5МРТ-С6, АІК-55-С26, ОВСО-ТЕС, Ме-АїІК-55-С6 і С6-55-АЇК-Ме, реакційноздатні групи, такі як первинні аміни і алкіни, алкільні групи, АВС-залишки/нуклеотиди, 60 амінокислоти, три-алкін-функціоналізовані групи, рибіол і/або групи ПЕГ.
Лінкер або лінкерна група являє собою сполуку, розташовану між двома атомами, яка зв'язує одну хімічну групу (таку як засіб РНКІ) або представляючий інтерес сегмент, з іншою хімічною групою (такою як ліганд інтегрину сурб, фармакокінетичний модулятор або полімер для доставки) або представляючий інтерес сегмент за допомогою одного або декількох ковалентних зв'язків. Лабільний лінкер містить лабільний зв'язок. Зв'язок може необов'язково включати спейсер, який збільшує відстань між двома з'єднаними атомами. Спейсер може додатково збільшувати гнучкість і/або довжину зв'язку. Спейсери включають, без обмеження, алкільні групи, алкенільні групи, алкінільні групи, арильні групи, аралкільні групи, аралкенільні групи їі аралкілалкінільні групи; кожна з яких може містити один або декілька гетероатомів, гетероциклів, амінокислот, нуклеотидів і сахаридів. Спейсерні групи добре відомі в даній галузі техніки, і представлений перелік не призначений для обмеження об'єму винаходу.-
У деяких варіантах здійснення винаходу ліганди інтегрину смВб пов'язані з транспортованими молекулами без використання додаткового лінкера. У деяких варіантах здійснення винаходу ліганд інтегрину см8Вб містить лінкер, що полегшує зв'язування з транспортованою молекулою. У деяких варіантах здійснення винаходу, коли в композицію включені два або більше засобів РНКІ, ці два або більше засобів РНКІі можуть бути зв'язані з відповідними націлювальними групами однаковими лінкерами. У деяких варіантах здійснення винаходу, коли в композицію включені два або більше засобів РНКІ, ці два або більше засобів
РНКІ можуть бути зв'язані з їх відповідними націлювальними групами різними лінкерами.
Приклади деяких лінкерних груп представлені в Таблиці А.
Таблиця А
Структури, які представляють різні лінкерні групи он
М й о о м о
Ф
РА7
У разі розташування на 3'-кінці олігонуклеотиду:
З
АТ ИН и
Див он с6-55-06
У разі розташування всередовищані олігонуклеотиду: зв'язування з 5'-кінцем нуклеотида зв'язування з 3'-кінцем нуклеотида
З ра - АТ и отв о с6-55-06
У разі розташування на 3'-кінці олігонуклеотиду:
З о у льс й у
Хто 8 - ит тон
У разі розташування всередовищані олігонуклеотиду: зв'язування з 5'-кінцем нуклеотида зв'язування з 3'-кінцем нуклеотида
Жов ит и ит о
С6-55-6 и
С, ! 5 ї Її 7 м тр -ИТИ и в о
С6-55-АІК) або (АІК-55-026
Я с М о о
М о | о
М З МБ тат ТАТИ о З М о с6-55-АІК-Ме
Ї р-о З о і-ї иа ти ТИ ТОН 5-
РЕС-С3-55
М й о
МН»г-Св о - пит ут ри Хо о
МН»г-Св)5 о о 9 т 9 т тд од он о он о ох? о, ох и о,
Я хв У хо: сРгрив сРгри
ОО ро о о
МН М
/ о Ї
І 5-1 ра о
ТиідІКІ
ОО ро о о
МН М
/ Со Ї й 2-7 ра о
ТИідІК1)5 ко ро о о
У.
МН М "і / І Ф й й 2-7 ра о тіідік2
ОО оо 9 о
МН й
М то- ту о 8
Ттідікг)5
Ж ро 9 о
ХА А Й
Мн М о-5- / , кі о ттідікЗ
Ж ро 9 о
ХА А Й
МН М о-5--4 / ; і о
Ттідік3)5
С Н ва а о т-х о о о ї
ХМ М
М Н о по-в-3 о 4. фло тк о
ТгідікА
Сх и утри ? лини о о о ї
Й хв М / і 9 З "о-р . што и о З
ТиПАЇКІ)5 во; ? /опдЗ 9 о о о
Й да ря / і 9 4 то-р . што у о о
ТИАЇК5 воно; й
У 9 о о о
Й М в / і я з "о- в . шк тету о 5
ТПАЇКБ)5
Сх и тки ? /лтИх о нн чи Ху Ї / МН М - што ту о
ТИАїКб
С воаа о т о нич ХА / МН М 1 шк тот ит о
ТИАІКб)5
Сх и ут ? лтИОх о о ЧИ ї
Ж Мн М / і о о-2- шк тот ит о о.
ТАКУ воно; й тт о о ЧИ ї
Й МН М
/ і о о-5-3 шк тот ит о 5
ТПАЇК7)5 воно ? м З о о о о І / мус
М Н о што у о
ТИАїКВ
С Н и ит ? хх З 9 о о о
ОХ М о--4
З
МИ і шт тету о
ТПАЇКВ)5
Ж орав 9 ох я уз оо о о што ти о
ТАКУ
Ж во о охо ук бо о о што у о
ТПАЇКУ)5 во о /лошУхУ їх о о о гло
Фа што ик о і -
Тидікто во; о / 9 о о о го
Фа што тк о 5-2- і
ТАКО) вом о т 9 о о о ду в
М Я шо о о-Р тт ї што у о
ТАКТ
Сх и тич ? /тт 9 о о о
Й ХХ р / "ЦО 4 о-Р . што у о 5
ТИАЇКІ 1)5 и ко ? ти о о ЧИ П
Й МН М Й
/ 5
Це што у о
ТИАІКТ2
С и ит й лтИтИОх о о ЧИ П
Й МН М Й
/ 5-0
І што у о
ТИАЇК12)5
Сх и тич ? / 9 о о о
Й да р / "ГТ а -ц што у о о.
ТИАЇКТЗ
Н хо М о иа т 9 о я А
МН МО
/ й о
ЩІ о ш шт То м о ? дО Н
ТиИАЇК13)5 о Н во о тА о о о а 7 7 ХА АХ - о-р
М Н Н о т ит о шк М о
ТИАІК14
С Н и тот о
У о о о 2 7 7 ХА ЖД - о-р
М Н Н г т ит о М р М о
ТиИАЇК14)5 де означає точку приєднання до транспортованої молекули.
Альтернативно, можуть бути використані інші лінкерні групи, відомі в даній галузі.
Наведені вище варіанти здійснення і елементи далі ілюструються наступними необмежувальними прикладами.
ПРИКЛАДИ
Наступні приклади не є обмежувальними, і вони призначені для ілюстрації деяких варіантів здійснення винаходу, описаних тут.
Приклад 1
Синтез лігандів інтегрину суб
Деякі зі скорочень, які використовуються при описі деталей експериментальних синтезів, представлених в нижченаведений прикладів, визначені таким чином: габо год.-година (години) хв.-хвилина (хвилини) моль-моль (молі) ммоль-мілімоль (мілімолі)
М-молярний;
МКМ або нНМ-мікромолярний; геграм (грами); мкг-мікрограм (мікрограми); кімн. темп. або КТ-кімнатна температура; л-літр (літри); мл.мілілітр (мілілітри); мас. або МН-маса;
ЕсО-діетиловий ефір;
ТНЕ-тетрагідрофуран;
ОМ5О-диметилсульфоксид;
ЕЮАс-етилацетат;
ЕМ або ТЕА-триєтиламін; і-РІ"-МЕГ або ПІРЕА або ПІЕА:діїзопропілетиламін;
СНосі» або ОСМ-метиленхлорид;
СНеОіз-хлороформ;
СОсСіз-дейтерований хлороформ;
СсСіг-чотирихлористий вуглець;
МеОоН-:метанол;
ЕКОН: етанол;
ОМЕ-:диметилформамід;
ВОС-трет-бутоксикарбоніл;
СВ7-бензилоксикарбоніл;
ТВ5-трет-бутилдиметилсиліл;
ТВЗСІ або ТВОМ5СІ-трет-бутилдиметилсилілхлорид;
ТЕА-трифтороцтова кислота;
ОМАР-4-диметиламінопіридин;
Мамз-азид натрію;
Маг5О0.-сульфат натрію;
МанНсСоОз:бікарбонат натрію
МаонН-гідроксид натрію;
Ма5О:-:сульфат магнію;
КгСОз-карбонат калію;
КОНе-гідроксид калію;
МНАаОН-гідроксид амонію;
МНАаСі«хлорид амонію; 5іОг-діоксид кремнію; рРа-С-паладій на вугіллі;
НеСі-хлористий водень, хлористоводнева або соляна кислота;
МММ-М-метилморфолін;
Нег-газоподібний водень;
КЕ:фторид калію;
ЕОС-УНеі-гідрохлорид М-(З-диметиламінопропіл))-М'-етилкарбодіїміду;
МТВЕ-метил-трет-бутиловий ефір;
Аг-аргон;
Мг-азот;
КТ-час утримування.
Хімічні назви структур 1-37 автоматично генерувалися з використанням програмного забезпечення СпетОгам/Ф).
Синтез Структури 16 ((145, 175)-1-азидо-14-(5-((4-метилпіридин-2-іл)аміно)пентанамідо)- 1 7- (4-(нафталін-1-іл)феніл)-15-оксо-3,6,9,12-тетраокса-16-азанонадекан-19-ова кислота)
о о рай а 1. ТЕА, і-РВІН су
М сн.сі, М 2. Етос-О5и А.
СА пи 3. Колонка а се ГО 2
Сполуку 1 метил(зЗ)-(-)-1-тритилазиридин-2-карбоксилат (4,204 г, 12,24 ммоль, 1,0 екв.) і триїзопропілсилан (3,877 г, 5,02 мл, 24,48 ммоль, 2 екв.) розчиняли в ОСМ (40 мл), розчин охолоджували до 0 "С і потім додавали по краплях ТЕА (8,5 екв.). Розчин залишали протягом 1 години при 0 "С. Реакцію контролювали з допомогою ТШХ, гексан:етилацетат (8: 2). Розчин сушили з отриманням суміші білого осаду і світло-жовтого масла. Додавали гексан (40 мл) і обережно нагрівали над тепловою гарматою до розчинення усього білого осаду. Додавання гексану привело до утворення двох шарів: прозорого верхнього шару і масляного шару.
Гексановий шар зливали і масляний шар зберігали. Додавання гексану повторювали, і знов зливали гексановий шар. Маслу давали висохти. Азиридин (1,06 г, 10. 5 ммоль) розчиняли в
ТНЕ/НгО (2/1), до об'єму 60 мл. До суміші при кімнатній температурі додавали Етос-О5и (5,912 г, 15,75 ммоль, 1,5 екв.) і для підтримки рН-8,5 додавали Мансоз (2,646 г, 31,5 ммоль, З екв.), і залишали реагувати протягом ночі. Реакцію контролювали з допомогою ТШХ, гексан'еєтилацетат 8:2. Суміш концентрували до повного видалення ТНЕ, потім розбавляли етилацетатом (350 мл) і НгО (25 мл). Шари розділяли і органічну фазу промивали НгО (40 мл).
Органічний шар промивали водою (2 х 40 мл), потім ще раз водою (40 мл), а потім насиченим водним розчином Мас! (40 мл). Органічну фазу сушили над Ма250О4, фільтрували і концентрували. Продукт очищали на колонці з силікагелем, при 10 95-20 95 етилацетату в гексані. 48 год. при ВТ о уж - Отит то м о о о еитат з м НО-РЕС, М, КА Ж о
А. з» с о М те
ВЕЗЕБО Н оо сн,с, о при 00С К) 48 час при КТ 2
Сполуку 2 (Етос-азиридин) (1,46 г, 4,52 ммоль) і НО-РЕС4-Мз»з (1,983 Г, 9,04 ммоль, 2 екв.) розчиняли в ОСМ. Суміш охолоджували до 0 "С і по краплях (12 крапель) додавали діетиловий ефірат трифториду бору. Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 48 годин.
Реакцію контролювали з допомогою ТШХ, ОСМ з 5595 МеонН. Реакцію гасили насиченим розчином МНАеСІ (5 мл), розбавляли ОЮОСМ (60 мл) і промивали НгО (3 х 20 мл), насиченим водним розчином МасСі (20 мл), сушили над Маг50»., фільтрували і концентрували. Продукт очищали на колонці з силікагелем, 40-60 95 етилацетату в гексані.
ОЗ ї ит ит тити ит ат ут дит лить о « о Й То вич (20 96 об) во о 6 о
І.
Сполуку З розчиняли в розчині 20 95 триетиламіну в ЮОМЕ. Реакцію контролювали за допомогою тонкошарової хроматографії (ТШХ). Продукт концентрували.
Й щи
ААГЖ и
Н Ве от. ж хх М о 1 ж й дк хх М о
М о
А о 5 7
Сполуку 5 (трет-бутил-(4-метилпіридин-2-іл)укарбамат) (0,501 г, 2,406 ммоль, 1,0 екв. розчиняли в ЮОМЕ (17 мл). До суміші додавали Ман (0,116 мг, 3,01 ммоль, 1,25 екв. 60 95 дисперсія в мінеральному маслі) при кімнатній температурі. Суміш перемішували протягом 10 хвилин, потім додавали етил-5-бромвалерат (0,798 г, 3,82 ммоль, 0,604 мл). Через З години реакцію гасили етанолом (18 мл) і концентрували. Продукт розчиняли в ОСМ (50 мл) і промивали насиченим водним розчином МасСі (50 мл), сушили над Ма5О», фільтрували і концентрували. Продукт очищали на колонці з силікагелем, градієнт від 0 до 5 95 метанолу в ром се г о
М о маон ва
С тр - о 11111111ж | хх ит "Й о дк о 7 8
Сполуку 7 (0,80 г, 2,378 ммоль) розчиняли в суміші 100 мл ацетону і 0,1 М Маон (1:1).
Реакцію контролювали з допомогою ТШХ (5595 етилацетат в гексані). Органічні шари концентрували, і суміш підкислювали до рН 3-4 0,3 М лимонною кислотою (40 мл). Продукт екстрагували ОСМ (3 х 75 мл). Органічні шари об'єднували, сушили над Маг5О», фільтрували і концентрували. Продукт використовували без додаткового очищення.
с зи ве 12 е4 о о о ТВТИ (1.8. екв.), ОІРЕА (2 екв.) мама а аа оМЕ во Колонка. отит ди ди г т ;
У ди
Х о ' о о
К.
Сполуку 4 розчиняли (0,340 г, 1,104 ммоль) в ОМЕ (10 мл). До розчину додавали ТВТО (0,531 г, 1,655 ммоль) і дізопропілетиламін (0,320 мл, 1,839 ммоль). Потім додавали Сполуку 8 (0,229 г, 0,9197 ммоль). Реакцію контролювали з допомогою І С-М5 і ТШХ (ОСМ з 5 95 МЕОН).
Реакція протікала протягом 2 годин. Продукт концентрували і розчиняли в етилацетаті (150 мл) і промивали рН 3-4 НгО (2 х 12 мл). Потім продукт промивали НгО (2 х 12 мл), насиченим водним розчином МанНсо»з (12 мл), а потім насиченим водним розчином Масі (12 мл). Органічну фазу сушили над Маг5О»5, фільтрували і концентрували. Продукт очищали на колонці з силікагелем, 20 95 гексану в етилацетаті до 100 95 етилацетату. тет ит с ОО ой 7 тет ит ле з г о 2 обробка М ОО - Хм 5 о о
Ж»
Сполуку 9 розчиняли (0,330 г, 0,540 ммоль) в 10 мл суміші МеОН:діоксан (1 11 і 1 М розчини
ПОН (10 мл). Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 2 годин, контролювали з допомогою І С-М5 і ТШХ (ЕЮАс). Органічний шар концентрували, суміш розбавляли НгО (5 мл) і підкислювали до рН 4. Продукт екстрагували етилацетатом (2 х 50 мл). Органічні шари об'єднували, промивали насиченим водним розчином МасСі (10 мл), сушили над Маг5О, фільтрували і концентрували. Продукт використовували без додаткового очищення.
н
А он Утворення Нн метилового ефіру о М о -
ПД лев р
КСО, о о й 11
Вг
Вг вон),
Е
1. Реакція Сузукі 2. Колонка 15 о М о нм о х з їх ' і: о о ТЕА о 14
Сполуку 11 ((5)-3-(4-бромфеніл)-3-(трет-бутоксикарбоніл)аміно)пропіонова кислота) (2,0 г, 5,81 ммоль) розчиняли в ЮОМЕ (40 мл). До суміші додавали КгСОз (1,2 г, 8,72 ммоль). Потім додавали йодметан (1,65 г, 11,62 ммоль, 0,72 мл). Реакцію контролювали з допомогою ТШХ (гексан'етилацетат (7:3)). Після завершення суміш охолоджували до 0 "С і додавали НгО (20 мл) і МТВЕ (40 мл). Продукт екстрагували з допомогою МТВЕ (4 х 40 мл). Об'єднану органічну фазу промивали насиченим водним Мансоз (40 мл), потім НгО (4 х 40 мл). Суміш сушили над
Маг50», фільтрували і концентрували.
До висушеного продукту Сполуку 12 (1,0 г, 2,7915 ммоль) додавали Сполуку 13 (1- нафталінборонову кислоту (0,960 г, 5,583 ммоль, 2 екв.)). До суміші додавали (1,1'- бісідифенілфосфіно)фероценідихлорпаладій (1!) (Ра(арросСіг) (0,0817 г, 0,1117 ммоль, 0,4 екв.) разом з МагСОз (0,888 г, 8,375 ммоль, З екв.). Потім додавали 1,4-діоксан (5 мл) і НгО (0,2 мл), і суміш перемішували при 100 "С протягом 4 годин. Реакцію контролювали з допомогою ТШХ (гексан:'етилацетат (7:3)). Продукт очищали хроматографією на силікагелі, градієнт від 0 95 до 50 95 етилацетату в гексані.
Сполуку 14 (0,200 г, 0,493 ммоль) розчиняли в ОСМ (2,5 мл), потім додавали ТЕА (0,45 мл).
Реакцію контролювали з допомогою ТШХ (ОСМ:метанол (9:1)). Після завершення реакції суміш концентрували. Залишок розчиняли в ОСМ (4 мл) і промивали насиченим водним розчином
Мансоз (2 х 2 мл), а потім насиченим водним розчином Масі (2 х 2 мл). Органічну фазу сушили над Маг5О4, фільтрували і концентрували. Продукт використовували без додаткового очищення.
нм о и те ит С с мати, он твти (15. ке), ПІРЕА (2 зкв.)
А ! бро о о Обробка
А 10 Колонка те ит о 47 о р ги Ж Хо о с м м - нН
А. У о о
Хо. о
Сполуку 10 (0,322 г, 0,54 ммоль) розчиняли В ОМЕ (7 мл). До суміші додавали ТВТИ (0,236 г, 0,735 ммоль) і дізопропілетиламін (0,170 мл, 0,98 ммоль). Потім додавали Сполуку 15 (0,1496 г, 0,49 ммоль). Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 2 годин.
Реакційну суміш контролювали з допомогою І С-М5, суміш концентрували і залишок розчиняли в етилацетаті (90 мл) і промивали НгО (З х 10 мл) до рН 3-4. Продукт промивали НгО (2 х 10 мл), насиченим водним розчином МанНсо»з (10 мл) і потім насиченим водним розчином Масі (1 х мл). Органічну фазу сушили над Маг50», фільтрували і концентрували. Продукт очищали 10 хроматографією на силікагелі, використовуючи ОСМ, градієнт до 5 96 МЕОН. ре ит тет р о о ж завав; о 1. пон я В о
Сполуку 16 розчиняли (0,250 г, 0,2828 ммоль) в суміші МеОН:діоксан |1:1) (4 мл) і 1 М ОН (4 мл). Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 2 годин. Органічний шар концентрували, і залишок розбавляли НгО (3 мл) і підкислювали до рН 4. Продукт екстрагували етилацетатом (3 х 20 мл). Органічні шари об'єднували і промивали насиченим водним розчином
Масі (10 мл). Продукт сушили над Маг5О4. Продукт розчиняли (0,200 г, 0,2299 ммоль) в 2 мл
ОСМ:ТЕА 125: 75) і перемішували при кімнатній температурі протягом 2 годин. До суміші додавали толуол (4 мл). Суміш концентрували, потім упарювали спільно з ацетонітрилом (2 х 4 мл). Продукт очищали з допомогою НРІ С, градієнт від 35 95 до 50 95 АСМ протягом 30 хвилин, буфер 0,1 95 ТРА. |МеАНІк: обчислено для Си НьіМ7Ов: 769,90, визначено: 770. "Н ЯМР (400 МГц,
ОМ5О) 5 8,64 (д, 1Н), 8,07 (д, 1Н), 8,00 (д, 1Н), 7,95 (д, 1Н), 7,78 (с, 2Н), 7,60-7,40 (м, 1Н), 6,80 (с, 1Н), 6,67 (д, 1Н), 5,31 (с, 1Н), 4,55 (с, 1Н), 3,62-3,45 (м, 18Н), 3,40 (с, 2Н), 3,25 (м, 2Н), 2,80 (дд, 2Н), 2,30 (с, ЗН), 2,20 (с, 2Н), 1,55 (м, 4Н).
Синтез Структури 25 (145, 175)-1-азидо-14-(4-((4-метилпіридин-2-іл)аміно)бутанамідо)-17-
(4-(нафталін-1-іл)феніл)-15-оксо-3,6,9,12-тетраокса-16-азанонадекан-19-ова кислота) о р о о вич о о й о7» АЖ ---ся --йй-л-ї 3 ку МН | ху ол
М Хр 5 Сполуку 5 (трет-бутил(4-метилпіридин-2-іл)укарбамат) (0,501 г, 2,406 ммоль, 1 екв. розчиняли в ЮОМЕ (17 мл). До суміші додавали Ман (0,116 мг, 3,01 ммоль, 1,25 екв. 60 95 дисперсія в маслі). Суміш перемішували протягом 10 хвилин перед додаванням Сполуки 20 (етил-4-бромбутират (0,745 г, 3,82 ммоль, 0,547 мл)) (Зідта 167118). Через З години реакцію гасили етанолом (18 мл) і концентрували. Концентрат розчиняв в ОСМ (50 мл) і промивав насиченим водним розчином МасСі (1 х 50 мл), сушили над Ма»бО», фільтрували і концентрували. Продукт очищали на колонці з силікагелем, градієнт від 0 до 5 95 метанолу в ром. а 21 в 22
Її би? о т он др дк
Сполуку 21 розчиняли (0,80 г, 2,378 ммоль) в суміші 100 мл ацетону, М Ммаон п :11.
Реакцію контролювали з допомогою ТШХ (5595 етилацетат в гексані). Органічні шари концентрували, і залишок підкислювали до рН 3-4 0,3 М лимонною кислотою (40 мл). Продукт екстрагували ОСМ (3 х 75 мл). Органічні шари об'єднували, сушили над Маг5О», фільтрували і концентрували. Продукт використовували без додаткового очищення.
ТИ ит дит дить
Кор» 10 щи 22 о ох о ТВТИи (1.8. екв.), ОІРЕА (2 екв.)
ОМЕ ху ки Обробка (12 ев) Колонка
ЯМ се о ут ут дит ри
Же и о нН р о 23
Сполуку 22 розчиняли (0,340 г, 1,104 ммоль) в ОМЕ (10 мл). До суміші додавали ТВТИи (0,531 г, 1,655 ммоль) і діззопропілетиламін (0,320 мл, 1,839 ммоль). Потім додавали Сполуку 10 (0,229 г, 0,9197 ммоль). Реакцію контролювали з допомогою І С-М5 і ТШХ (ОСМ з 5 95 МЕОН). Реакцію завершували протягом 2 годин. Суміш концентрували, розчиняли в етилацетаті (150 мл) і промивали НгО (2 х 12 мл) до рН 3-4. Потім суміш промивали НгО (2 х 12 мл), насиченим водним розчином МаНсоз (12 мл), потім насиченим водним розчином Масі (12 мл). Органічну фазу сушили над Маг5О:, фільтрували і концентрували. Продукт очищали на колонці з силікагелем, гексан 20 95 в етилацетаті до 100 95 етилацетату. те о ит ит дити
С т я Ї Обробка А о ут ит ут дит ри г СААКД м и о
Сполуку 23 розчиняли (0,330 г, 0,540 ммоль) в 10 мл суміші МеОН:діоксан (1:11 1 М ПОН (10 мл). Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 2 годин і контролювали з допомогою І С-М5 і ТШХ (100 95 ЕТАс). Органічний шар концентрували, залишок розбавляли
НгО (5 мл) і підкислювали до рН 4. Продукт екстрагували етилацетатом (2 х 50 мл). Об'єднану органічну фазу промивали насиченим водним розчином Масі (1 х 10 мл). Органічну фазу сушили над Маг250О54, фільтрували і концентрували. Продукт використовували без додаткового очищення. нм о и дл СС
У го он -Б. зкв. зкв.
М її твто Си ), СІРЕА (2 )
ХК 5 тт о о Обробка
А. 10 Колонка тет ит о
ОМ о
ДЕ го М о сх М М т нН
А. У о о д т сі 15
Сполуку 24 (0,322 г, 0,54 ммоль) розчиняли в ОМЕ (7 мл). До суміші додавали ТВТИи (0,236 г, 0,735 ммоль) і дізопропілетиламін (0,170 мл, 0,98 ммоль). Потім додавали Сполуку 15 (0,1496 г, 0,49 ммоль). Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 2 годин. Реакційну суміш контролювали з допомогою І С-М5, суміш концентрували, залишок розчиняли в етилацетаті (90 мл) і промивали НгО (З х 10 мл) до рН 3-4. Концентрат промивав НгО (2 х 10 мл), насиченим водним розчином МанНсо»з (10 мл) і потім насиченим водним розчином Масі (10 мл). Органічну фазу сушили над Маг5О:, фільтрували і концентрували. Продукт очищали на колонці з силікагелем, ОСМ, градієнт до 5 96 МЕОН.
тет те ит о о о о т їі Ї
Нн у о. . цон еру он й о ці -6363636525253--- ДО о о 25 с Структура 25 Ф
СО о
Сполуку 25 розчиняли (0,250 г, 0,2828 ммоль) в суміші МеОН:діоксан |1:1) (4 мл) і 1 М ОН (4 мл). Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 2 годин, контролювали з 5 допомогою 1С-М5, органічні шари концентрували, залишок розбавляли НгО (3 мл) і підкислювали до рН 4. Продукт екстрагували етилацетатом (3 х 20 мл). Органічні шари об'єднували і промивали насиченим водним розчином Масі (1 х 10 мл). Органічну фазу сушили над Ма»бОх і концентрували. Залишок (0,200 г, 0,2299 ммоль) розчиняли в 2 мл суміші ОСМ/ТЕА (25/75), перемішували при кімнатній температурі протягом 2 годин, а потім додавали толуол (4 мл) і суміш концентрували. Потім додавали ацетонітрил (2? 4 мл) і суміш концентрували.
Продукт очищали з допомогою НРІС, градієнт від 3595 до 5095 АСМ протягом 30 хвилин, буфер 0,1 95 ТЕА. "Н-ЯМР (400 МГц, ОМ5О) 5 8,64 (с, 1Н), 8,17-8,10 (м, 1Н), 8,00 (д, 1Н), 7,95 (д, 1Н), 7,80 (д, 1Н), 7,75 (д, 1Н), 7,60-7,40 (м, 1Н), 4,55 (с, 1Н), 3,62-3,45 (м, 2Н), 3,40 (с, 2Н), 3,25 (м, 2Н), 2,80 (дд, 2Н), 2,30 (с, ЗН), 2,26 (с, 2Н), 1,80 (м, 2Н).
Синтез Структур 50, 5.16 і 525
Структура 5Ь (3-(4-(2-(2-(2-азидоетокси)етокси)етокси)-3,5-дихлорфеніл)-3-(2-(5-((4- метилпіридин-2-іл)аміно)пентанамідо)дацетамідо)пропанова кислота) хх о
СД ни АХ д А ра в от авт о7»
М М о н о ? Я
До розчину Сполуки 5 (0,98 г, 4,70 ммоль, 1 екв. в сухому ОМЕ (10 мл) додавали Ман (0,226 г, 5,647 ммоль, 1,2 екв. 6095 масляна дисперсія) по частинах при 0 "С в атмосфері М».
Реакційну суміш витримували при 0 "С протягом 30 хвилин з подальшим додаванням Сполуки 6 (1,18 мл, 5,647 ммоль, 1,2 екв.) при тій же температурі. Після додаткового перемішування при
ОС протягом 30 хвилин суміші давали нагрітися до кімнатної температури. Після перемішування при кімнатній температурі протягом 1 години реакцію гасили насиченим водним розчином МНАСІ. Водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 20 мл) і органічні шари об'єднували, сушили над Маг5Ох і концентрували. Продукт відділяли з допомогою СотрбівІазиФ), з використанням силікагелю як нерухомої фази. І С-М5: МАНІ 337,20, знайдено 337,39.
Ух о 2 ол
М м 077 пон Но | - го
А. -3х М М ОН о о А.
Ж, 5
Я- 8
До розчину Сполуки 7 (1,347 г, 4,00 ммоль, 1 екв.) в ТНЕ (5 мл) і НгО (5 мл) додавали моногідрат гідроксиду літію (0,505 г, 12,01 ммоль, 5 екв. при 0 "С. Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури. Після перемішування при кімнатній температурі протягом 1 години реакційну суміш підкислювали НС (6 Н) до рН 4,0. Водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 20 мл), органічні шари об'єднували, сушили над Маг50Ох і концентрували. І С-М: МАНІ 309,17, знайдено 309,39. сли 5 і
М чи ГТ! | я го о с твти -
Х бич тт т
Ї А 7 І е А 46
До розчину Сполуки 8 (1,163 г, 3,77 ммоль, 1 екв.), Сполуки 45 (568 мг, 4,52 ммоль, 1,2 екв.) і
ТВТИи (1,453 г, 4,52 ммоль, 1,2 екв.) в безводному ОМЕ (10 мл) додавали діізопропілетиламін (1,97 мл, 11,31 ммоль, З екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом З годин. Реакцію гасили насиченим розчином Мансо»з (20 мл). Водний шар екстрагували етилацетатом (З х 10 мл), органічні фази об'єднували, сушили над безводним
Маг5О4 і концентрували. Продукт відділяли з допомогою СотрбБіРіазпйФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази. | С-Ме: обчислено (МАНІ 380,21, знайдено 380,51. 48 о Н о о нм он о о -- ---з2 сі сі МН,ОАс СІ СІ он он 47 49
До розчину Сполуки 47 (1,0 г, 5,23 ммоль, 1 екв.) і малонової кислоти (1,09 г, 10,47 ммоль, 2 екв.) в етанолі (10 мл) додавали ацетат амонію (0,807 мг, 10,47 ммоль, 2,0 екв.) при кімнатній температурі. Реакційну суміш перемішували при температурі кипіння із зворотним холодильником протягом 20 хвилин. Тверду речовину відфільтровувати і промивали холодним етанолом. Продукт використовували на подальших стадіях без додаткового очищення. І С-Мо: обчислено (МАНІ. 250,00, знайдено 250,16. сх | сх Ї й орд о
М М М те Понно 4 ор он
Н М М М дор у о о о о
Те 46 ле 5О0
До розчину Сполуки 46 (1,412 г, 3,72 ммоль, 1 екв.) в ТНЕ (5 мл) і НгО (5 мл) додавали при 0 С моногідрат гідроксиду літію (0,469 г, 11,16 ммоль, З екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури. Після перемішування при кімнатній температурі протягом З годин реакційну суміш підкислювали НС (6 Н) до рН 4,0. Водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 20 мл), органічні шари об'єднували, сушили над Маг5О»5 і концентрували. ЇЇ С-Ме: обчислено
ІМАНІ»- 366,20, знайдено 366,46. нм он
Нм о о о
Осі,
СІ СІ он он 49 91
До суспензії Сполуки 49 (0,531 г, 2,12 ммоль, 1 екв.) в безводному метанолі (10 мл) на крижаній бані додавали тіонилхлорид (308 мкл, 4,24 ммоль, 2,0 екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом ночі. Розчинник видаляли при зниженому тиску, і продукт використовували далі без додаткового очищення. І! С-Ме: обчислено (МАНІ 264,01, знайдено 264,20.
Фі П сіном о ох -Сіжну о
М ут І т твту | Кк. ки, М о оо о 7 ПІРЕА А. же о
А- сі сі о ? зо он Я- во сі сі
З он
До розчину Сполуки 50 (150 мг, 0,410 ммоль, 1 екв.), Сполуки 51 (148 мг, 0,492 ммоль, 1,2 екв.) Її ТВТО (158 мг, 0,492 ммоль, 1,2 екв.) в безводному ЮОМЕ (5 мл) при 0 "С додавали дізопропілетиламін (0,214 мл, 1,23 ммоль, З екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом З годин. Реакцію гасили насиченим водним розчином
Мансо:з (10 мл) і продукт екстрагували етилацетатом (3 х 20 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг5О:4 і концентрували. Продукт очищали з допомогою СотрБіБіазНФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 2-4 95 метанолом в ОСМ. ві
Н
- го Ж М о 7а о " Ї р т М.-РЕС-То5 | - го М о
А, о о пильний Мом тр Ве о КСО»
Я- вк . " 52 сі СІ он Я- СІ СІ шити тить 53
До розчину Сполуки 52 (80 мг, 0,130 ммоль, 1 екв.) і азидо-РЕС3-ОТз (86 мг, 0,262 ммоль, 2 екв.) в безводному ОМЕ (2 мл) додавали КгСОз (36 мг, 0,262 ммоль, 2 екв.). Реакційну суміш перемішували протягом 1 години при 80 "С. розчинник видаляли за допомогою роторного випарника. Продукт очищали з допомогою СотрівБіазй?, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 2-495 метанолом в ЮСМ. ГГ 0-М5: обчислено |МеНІ- 768,28, знайдено 769.
М Х а - понно С. м т он о о ТЕА о о
Я- ТРА
СІ СІ сі сі о о
От пит утоитнио 53
Структура 55
До розчину Сполуки 53 (58 мг, 0,0755 ммоль, 1,0 екв.) в ТНЕ (2 мл) і воді (2 мл) при кімнатній температурі додавали моногідрат гідроксиду літію (10 мг, 0,226 ммоль, 3,0 екв.). Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще 2 годин. рН доводили до 3,0 з допомогою
НС (6 Н), і водну фазу екстрагували ЕТОАс (З х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над
Маг5О:4 і концентрували. До залишку додавали ТЕА (0,25 мл) і ОСМ (0,75 мл), і суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще 1 години. Розчинник видаляли за допомогою роторного випарника. І С-Мо: обчислено (МАНІ 654,21, знайдено 655.
Структура 5.1 Б (3-(4-(14-азидо-3,6,9,12-тетраоксатетрадецил)окси)-3,5-дихлорфеніл)-3-(2- (5-(4-метилпіридин-2-іл)аміно)пентанамідо)ацетамідо)пропанова кислота) о
М У ваза 99955
А. Н Її Її МУРЕС,-То5 Мч т о о о косо, А. й о о ї- о о 52 сі а
Он т- СІ СІ ши ит и мито 55
До розчину Сполуки 52 (100 мг, 0,163 ммоль, 1 екв.) і азидо-РЕС5-ОТ5 (205 мг, 0,491 ммоль,
З екв.) в безводному ОМЕ (2 мл) додавали КоСОз (68 мг, 0,491 ммоль, 2 екв.). Реакційну суміш перемішували протягом 1 години при 80 "С і розчинник видаляли за допомогою роторного випарника. Продукт очищали з допомогою СотрівБіазй?, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 2-3 95 метанолом в ЮСМ. І С-Ме8: обчислено |М--НІ- 856,33, знайдено 857,07. сх Ї сх АЖ М н т М он
М у о М М тр
А. о о пон о о о о -- 56565 6565- Структура 5.16 ї- а сі т а а о о о
Ин ми иа и ит о вв ТРА
До розчину Сполуки 55 (119 мг, 0,139 ммоль, 1,0 екв.) в ТНЕ (4 мл) і воді (4 мл) при кімнатній температурі додавали гідроксид літію (10 мг, 0,417 ммоль, 3,0 екв.). Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще 1 години. рН доводили до 3,0 з допомогою НСІ (6 Н), і водну фазу екстрагували ЕТОАс (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Ма250Ох і концентрували. До залишку додавали ТЕА (2 мл) і ОСМ (2 мл), і суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще З годин. Розчинник видаляли за допомогою роторного випарника. І С-Ме: обчислено (М.--НІ- 742,27, знайдено 743,02.
Структура 5.25 (3-(4-((в-азидооктил)окси)-3,5-дихлорфеніл)-3-(2-(5-(4-метилпіридин-2- іл)аміно)пентанамідо)ацетамідо)пропанова кислота)
М хх
С ит й | А АФЖ М о
ХХ. І " вИсНеВг М м г - о о косо, А. й о о л- о о 52 сі сі он А- сі сі
УТТо
Вг 57
До розчину Сполуки 52 (89 мг, 0,14 ммоль, 1 екв.) і 1,8-дибромоктана (80 мкл, 0,436 ммоль, З екв.) в ацетоні (2 мл) при кімнатній температурі додавали К»СОз (60 мг, 0,436 ммоль, З екв.).
Реакційну суміш перемішували протягом 6 годин при 55 "С, реакцію гасили насиченим розчином
Мансоз і водний шар екстрагували етилацетатом (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг50 і концентрували. І С-Мо: обчислено |М-НІ-- 801,23, знайдено 801,98. і ААМХ ч й М о
МЕ ут о М м й к
А Ї Ї мам, оо 5 5 о о -е9535-к ї- с с ї4- с сі
УТ ио вино м
Б7 58
До розчину Сполуки 57 (97 мг, 0,114 ммоль, 1 екв.) в безводному ОМЕ (2 мл) при кімнатній температурі додавали азид натрію (15 мг, 0,229 ммоль, 2 екв.). Реакційну суміш перемішували протягом 2 годин при 80 "С, реакцію гасили водою і водний шар екстрагували етилацетатом (З х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг5О: і концентрували. Продукт використовували далі без додаткового очищення. І С-М5: обчислено ІМ-АНІн- 764,32, знайдено 765,07.
С Ї сх А АЖ М
Н й М он 2 го М о Мом тр
М М М Н Н
Ж ще о пон о о о о ТРА Структура 5.26
А- СІ СІ сі с
УТА
Мито М
ТРА
58
До розчину Сполуки 58 (78 мг, 0,101 ммоль, 1,0 екв.) в ТНЕ (2 мл) і воді (2 мл) при кімнатній температурі додавали гідроксид літію (7 мг, 0,304 ммоль, 3,0 екв.). Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще 1 години. рН доводили до 3,0 з допомогою НСІ (6 Н), і водну фазу екстрагували ЕТОАс (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Ма250Ох і концентрували. До залишку додавали ТЕА (2 мл) і ОСМ (2 мл), і суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще З годин. Розчинник видаляли за допомогою роторного випарника. І С-Ме: обчислено (МАНІ 650,25, знайдено 650,83.
Синтез Структурбр, 6.16,6.25,6.35 і 645
Структура бр (5)-3-(4-(4-(2-(2-(2-азидоетокси)етокси)етокси)нафталін-1-іл)феніл)-3-(2-(4-((4- метилпіридин-2-іл)аміно)дбутанамідо)ацетамідо)пропанова кислота)
хх й: о о | КД 7 т ДЖ ан «св А у М ша 07 " гм 6 То " ПІРЕА Ж Щ (в) о 9 45 о о бо
Я- 7 Я-
До розчину Сполуки 22 (1,1 г, 3,95 ммоль, 1 екв.) Сполуки 45 (595 мг, 4,74 ммоль, 1,2 екв.) і
ТВТИи (1,52 г, 4,74 ммоль, 1,2 екв.) в безводному ОМЕ (10 мл) додавали діїзопропілетиламін (2,06 мл, 11,85 ммоль, З екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом З годин. Реакцію гасили насиченим розчином МанНсоОз (10 мл). Водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 10 мл) і органічні фази об'єднували, сушили над безводним Маг5О4 і концентрували. Продукт відділяли з допомогою СотріБіазпФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази. І С-Мое: обчислено (МАНІ 366,20, знайдено 361.
Вг Вг
Вг косо» я ---- он о 61 62 63
До розчину Сполуки 61 (2 г, 8,96 ммоль, 1 екв.) і Сполуки 62 (2,13 мл, 17,93 ммоль, 2 екв.) в безводному ЮМЕ (10 мл) додавали К»СОз (2,48 г, 17,93 ммоль, 2 екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом ночі. Реакцію гасили водою (10 мл). Водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 10 мл), органічні фази об'єднували, сушили над безводним Маг25О4 і концентрували. Продукт відділяли з допомогою СотрБігБіазнФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази. ху о | х о
Ж й Ж я М М понно Мі тр ОН
М тр о 7 А. о - 7 Я-
До розчину Сполуки 60 (1,77 г, 4,84 ммоль, 1 екв.) в ТНЕ (5 мл) і Н2гО (5 мл) при 0"С додавали моногідрат гідроксиду літію (0,61 г, 14,53 ммоль, З екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури. Після перемішування при кімнатній температурі протягом З годин реакційну суміш підкислювали НСІ (6 Н) до рН 3,0. Водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 20 мл), органічні шари об'єднували, сушили над Маг5О»5 і концентрували. ЇЇ С-Ме: обчислено
ІМАНІ»- 352,18, знайдено 352.
Вг но Ан в о й п-Вигі -н-----к о Кенз»снОВ о 63 65
До розчину Сполуки 63 (1,88 г, 6,0 ммоль, 1,0 екв.) в безводному ТНЕ (20 мл) при -78 "С по краплях додавали п-Виї і в гексані (3,6 мл, 9,0 ммоль, 1,5 екв.). Реакційну суміш витримували при -78 "С протягом ще 1 години. Потім до суміші при -78 "С додавали триіїзопропілборат (2,08 мл, 9,0 ммоль, 1,5 екв.). Потім реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом ще 1 години. Реакцію гасили насиченим розчином МНАСІ (20 мл) і рн доводили до 3. Водну фазу екстрагували ЕАс (З х 20 мл), органічні фази об'єднували, сушили над Ма»5Ох і концентрували. о М о
Н НО. ДОН Ве о М о. -в7 й З
З Її І є (Се я 5 ХРпіов Ра с2 - н '-- -- 7 - .7Т- 6 4 1345 ; ст, Фо 12 о 66 65
Сполуку 12 (300 мг, 0,837 ммоль, 1,0 екв.), Сполуку 65 (349 мг, 1,256 ммоль, 1,5 екв.), ХРпо5 ра сб2 (13 мг, 0,0167 ммоль, 0,02 екв.) і КзРОа4 (355 мг, 1,65 ммоль, 2,0 екв.) змішували в круглодонній колбі. Колбу закривали нагвинчуваною кришкою, колбу вакуумували і заповнювали азотом (цей процес повторювали З рази). Потім через шприц додавали ТНЕ (8 мл) і воду (2 мл). Суміш барботували азотом протягом 20 хвилин, і реакційну суміш витримували при кімнатній температурі протягом ночі. Реакцію гасили водою (10 мл), і водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 10 мл). Органічну фазу сушили над Маг50О», концентрували і очищали з допомогою СотрБіБіазнФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 15 95 ЕОАс в гексані. І! С-М5: обчислено МАНІ 512,24, знайдено 512,56.
Н р о «сіном о о | о Ге!
У -- З --- -яя-2ьжж-е і З 66 67
Сполуку 66 (858 мг, 1,677 ммоль, 1,0 екв.) охолоджували на крижаній бані. У колбу додавали
НСІ в діоксані (8,4 мл, 33,54 ммоль, 20 екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом ще 1 години. Розчинник видалили за допомогою роторного випарника, і продукт використовували далі без додаткового очищення. ІС-М5: обчислено (МАНІ 412,18, знайдено 412,46. -сенУМ о и о н сх Ж і рр
М тр он твту - о о 7 о х ПІРЕА вв Щ » С о
З
; У
До розчину Сполуки 64 (500 мг, 1,423 ммоль, 1 екв.), Сполуки 67 (669 мг, 1,494 ммоль, 1,05 екв.) ії ТВТИ (548 мг, 0,492 ммоль, 1,2 екв.) в безводному ОМЕ (15 мл) при 0 "С додавали дізопропілетиламін (0,744 мл, 4,268 ммоль, З екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом ще 1 години. Реакцію гасили насиченим водним розчином МанНсСоО»з (10 мл) і продукт екстрагували етилацетатом (3 х 20 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг5О і концентрували. Продукт очищали з допомогою СотрбіБІазНФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 3-4 95 метанолом в ОСМ. Вихід становив 96,23 95. І! С-М5: обчислено (МАНІ 745,35, знайдено 746,08.
о Я йо ай о з : н М М М о "іх би о | сх сут зе в р г ї- о о
Рас ; З : С
З он
До розчину Сполуки 68 (1,02 г, 1,369 ммоль, 1 екв.) в етилацетаті (10 мл) при кімнатній температурі додавали 10 95 Ра/С (0,15 г, 50 95 НгО). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури, і реакцію контролювали з допомогою І С-М5. Реакційну суміш витримували при кімнатній температурі протягом ночі. Тверді речовини фільтрували через Сеїйефб, і розчинник видаляли за допомогою роторного випарника. Продукт використовували далі без додаткового очищення. І С-М: ІМ-А-НІ- 655,31, знайдено 655,87. і о ва о, о 5 о
Гі
Н М М М о й ит о ї ут --
Н -- о о - о о Ма-РЕСз-Тов во Ці косо, то Ся 69 он а в ай
До розчину Сполуки 69 (100 мг, 0,152 ммоль, 1 екв.) і азидо-РЕСз-ОТз5 (100 мг, 0,305 ммоль, 2 екв.) в безводному ОМЕ (2 мл) додавали КгСОз (42 мг, 0,305 ммоль, 2 екв.). Реакційну суміш перемішували протягом б годин при 80 "С. Реакцію гасили насиченим розчином Мансо», і водний шар екстрагували етилацетатом (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над
Маг5О4 і концентрували. Продукт відділяли з допомогою СотбріБіа5нФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази. І С-М5: обчислено (МАНІ 812,39, знайдено 813,14.
я о,
АХ н й или он
М М м М о | Н
Н й о о - о о
Щі он Я
ТЕА мити ит
МИ ит йти ТЕА 70
До розчину Сполуки 70 (77 мг, 0,0948 ммоль, 1,0 екв.) в ТНЕ (2 мл) і воді (2 мл) при кімнатні й температурі додавали гідроксид літію (7 мг, 0,284 ммоль, 3,0 екв.). Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще 2 годин. рН доводили до 3,0 з допомогою НСІ (6 Н), і водну фазу екстрагували ЕТОАс (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Ма5Ох і концентрували. До залишку додавали ТЕА (0,5 мл) і ОСМ (0,5 мл), і суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще З годин. Розчинник видаляли за допомогою роторного випарника. І С-Ме: обчислено (М--НІ|-- 698,32, знайдено 698,81.
Структура 6.1.5 (5)-3-(4-(4-((14-азидо-3,6,9,12-тетраоксатетрадецил)окси)нафталін-1- ілуфеніл)-3-(2-(4-((4-метилпіридин-2-іл)аміно)бутанамідо)ацетамідо)пропанова кислота)
З й зе о о щ о
Гі
Н М М М о хх ит о | хх сут --
Н й о о - о о МУ-РЕС-ТО8
ЩФ косо, 72 ЩФ 69 он и ит ит
До розчину Сполуки 69 (100 мг, 0,152 ммоль, 1 екв.) і азидо-РЕС5-ОТ5 (128 мг, 0,305 ммоль, 2 екв.) в безводному ОМЕ (2 мл) додавали КгСОз (42 мг, 0,305 ммоль, 2 екв.). Реакційну суміш перемішували протягом б годин при 80 "С. Реакцію гасили насиченим розчином Мансо», і водний шар екстрагували етилацетатом (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над
Маг5Ох» і концентрували. І! С-Ме: обчислено (М--НІ|- 900,40, знайдено 901,46.
Ії АХ М
М М он й ки я о що а її й - о о о с
ПОН Структура 6.16
ОВ а о о І МИТ ит отити
Ми мито мито к 72
До розчину Сполуки 72 (59 мг, 0,0656 ммоль, 1,0 екв.) в ТНЕ (2 мл) і воді (2 мл) при кімнатній температурі додавали гідроксид літію (5 мг, 0,197 ммоль, 3,0 екв.). Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще 1 години. рН доводили до 3,0 з допомогою НСІ (6 Н), і водну фазу екстрагували ЕТОАс (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Ма250Ох і концентрували. До залишку додавали ТЕА (0,5 мл) і ОСМ (0,5 мл), і суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще З годин. Розчинник видаляли за допомогою роторного випарника. І С-Ме: обчислено (М--НІ- 786,37, знайдено 786,95.
Структура 6.25 (5)-3-(4-(4-((8-азидооктил)окси)нафталін-1-іл)феніл)-3-(2-(4-((4- метилпіридин-2-іл)аміно)бутанамідо)дацетамідо)пропанова кислота) о о о Я же Баш н
М ра М о Му кит о ві - о о -- о о в(сН,)»Вг
ЩФ косо, 74 Щі 69 що УТТТМО
Вг
До розчину Сполуки 69 (150 мг, 0,229 ммоль, 1 екв.) і 1,8-дибромоктану (127 мкл, 0,687 ммоль, З екв.) в ацетоні (2 мл) при кімнатній температурі додавали К»СОз (95 мг, 0,687 ммоль, З екв.). Реакційну суміш перемішували протягом ночі при 55 "С. Реакцію гасили насиченим розчином МанНсСоОз, і водний шар екстрагували етилацетатом (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг250О5 і концентрували. І С-М5: обчислено МАНІ» 845,34, знайдено 845,91. н
М М М о Н
І сут - слу о - о о
Щ - о о мам. 74 75 і вимити Мити
До розчину Сполуки 74 (97 мг, 0,114 ммоль, 1 екв.) в безводному ОМЕ (2 мл) при кімнатній температурі додавали азид натрію (15 мг, 0,229 ммоль, 2 екв.). Реакційну суміш перемішували протягом 2 годин при 80 "С. Реакцію гасили водою і водний шар екстрагували етилацетатом (З х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг50О» і концентрували. І! С-Ме: обчислено
ІМ-АНІ- 808,43, знайдено 809,00.
и о о о н н
АХ у | м ки он му М а о я / Ц
ФІ
- о о і Пон - --32- Структура 6.26
Й Фо чо УТ
Му о
МИТИ и ТЕА 75
До розчину Сполуки 75 (92 мг, 0,114 ммоль, 1,0 екв.) в ТНЕ (2 мл) і воді (2 мл) при кімнатній температурі додавали гідроксид літію (8 мг, 0,342 ммоль, 3,0 екв.). Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще 1 години. рН доводили до 3,0 з допомогою НСІ (6 Н), і водну фазу екстрагували ЕТОАс (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Ма250Ох і концентрували. До залишку додавали ТЕА (0,5 мл) і ОСМ (0,5 мл), і суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще З годин. Розчинник видаляли за допомогою роторного випарника. І С-Ме: обчислено (М--НІ|-- 694,36, знайдено 694,94.
Структура 6.36 (5)-3-(4-(4-(20-азидо-3,6,9,12,15,18-гексаоксаїкозил)окси)нафталін-1- ілуфеніл)-3-(2-(4-((4-метилпіридин-2-іл)аміно)бутанамідо)ацетамідо)пропанова кислота)
АХ Н бут о
М М М о н
З й з Мід кити о - о о | н
М-РЕС Тов - о о ія С8вжо,» і ва 77 он ши ит и мито и ит
До розчину Сполуки 69 (100 мг, 0,152 ммоль, 1 екв.) і азидо-РЕС7-ОТз5 (154 мг, 0,305 ммоль, 2 екв.) в безводному ОМЕ (2 мл) додавали С520Оз (100 мг, 0,305 ммоль, 2 екв.). Реакційну суміш перемішували при 40 "С протягом ночі. Реакцію гасили насиченим розчином МаНсоОз (10 мл), і водний шар екстрагували етилацетатом (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Ма»5О4 і концентрували. Продукт виділяли з допомогою СотрбБіРІазпФ, використовуючи силікагель як нерухому фазу, і продукт елюювали 2-3 95 метанолом в ОСМ. І С-Ме: обчислено
ІМ-АНІ»- 988,50, знайдено 989,14.
Н о м мання з м й АЖ Ч он її | І й - о о - о о
ТРА
Структура 6.30 : СЯ сет джу о о. о ето мито и. 77 ТЕА
До розчину Сполуки 21 (112 мг, 0,113 ммоль, 1,0 екв.) в ТНЕ (2 мл) і воді (2 мл) при кімнатній температурі додавали гідроксид літію (8 мг, 0,340 ммоль, 3,0 екв.). Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще 1 години. рН доводили до 3,0 з допомогою НСІ (6 Н), і водну фазу екстрагували ЕТОАс (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Ма250Ох і концентрували. До залишку додавали ТЕА (4 мл) і ОСМ (2 мл), і суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще З годин. Розчинник видаляли за допомогою роторного випарника. І С-Ме: обчислено (МАНІ 874,43, знайдено 875,08.
Структура 6.45 ((5)-3-(4-(4-((35-азидо-3,6,9,12,15,18,21,24,33,33- ундекаоксапентатриаконтил)окси)нафталін-1-іл)феніл)-3-(2-(4-(4-метилпіридин-2- іл)аміно)бутанамідо)дацетамідо)упропанова кислота)
АХ Н й о
М М М о н ї г Ье мод кити о - о о | Н
М3-РЕС, Тов - о о
Ф С82СО»з Ц 69
С То ит о С духо он С, отиту ати 79
До розчину Сполуки 69 (80 мг, 0,122 ммоль, 1 екв.) і азидо-РЕСиі2-ОТ5 (184 мг, 0,244 ммоль, 2 екв.) в безводному ОМЕ (2 мл) додавали С52СОз (80 мг, 0,244 ммоль, 2 екв.). Реакційну суміш перемішували при 40 "С протягом 5 годин. Реакцію гасили насиченим розчином Мансо»з (10 мл), і водний шар екстрагували етилацетатом (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг5О4 і концентрували. Продукт виділяли з допомогою СотрбіБіа5НнФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 2-3 95 метанолом в ОСМ. І С-М5о: обчислено (МАНІ 1208,63, знайдено 120921.
ХЕ Ї САМ М
Н М М М он
М ки о | Хо й
Н - о о - о о о шо. пон
ТРА Му и а сл бо со Ос о. о.
Ну фе ит о о. о
С у очи чи о тет ит
ТРА
79
До розчину Сполуки 82 (100 мг, 0,0972 ммоль, 1,0 екв.) в ТНЕ (2 мл) їі воді (2 мл) при кімнатній температурі додавали гідроксид літію (7 мг, 0,292 ммоль, 3,0 екв.). Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще 1 години. рН доводили до 3,0 з допомогою НСІ (6 Н), і водну фазу екстрагували ЕТОАс (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Ма5О5 і концентрували. До залишку додавали ТЕА (4 мл) і ОСМ (2 мл), і суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще З годин. Розчинник видаляли за допомогою роторного випарника. І С-Мо: обчислено (М--НІ- 1094,56,1095,05.
Синтез Структури 75 ((К)-3-(4-(4-(2-(2-(2-азидоетокси)етокси)етокси)нафталін-1-іл)феніл)-3- (2-(4-(4-метилпіридин-2-іл)аміно)бутанамідо)ацетамідо)пропанова кислота)
М о М о тре Ж З у - о х о о : о
Ме! ---жк косо,
Вг Вг 84 85
До розчину Сполуки 84 (1,0 г, 2,90 ммоль, 1 екв.) і карбонату калію (0,60 г, 4,36 ммоль, 1,5 екв.) в безводному ОМЕ (10 мл) при кімнатній температурі додавали метилиодид (362 мкл, 5,81 ммоль, 2,0 екв.). Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 1 години.
І О-М5: обчислено (М--НІ|-- 358,06, знайдено 358,34.
М о р тр - тур о З о НС - о --ь
Вг Ве 29 85 86
Сполуку 85 (1,0 г, 2,791 ммоль, 1,0 екв.) охолоджували на крижаній бані. У колбу додавали
НОСІ в діоксані (7,0 мл, 27,91 ммоль, 10 екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом ще 1 години. Розчинник видалили за допомогою роторного випарника, і продукт використовували далі без додаткового очищення. ІС-М5: обчислено (МАНІ. 258,01, знайдено 257,97.
Н -сі" о 2- М з тр - о
М М он Н твти Н
Я. й ? " в4 Вг С 86 87 Вг
До розчину Сполуки 64 (790 мг, 2,248 ммоль, 1 екв.), Сполуки 86 728 мг, 2,473 ммоль, 1,10 екв.) Її ТВТИ (866 мг, 2,698 ммоль, 1,20 екв.) в безводному ОМЕ (15 мл) при 0 "С додавали дізопропілетиламін (1,175 мл, 6,744 ммоль, З екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом ще 1 години. Реакцію гасили насиченим водним розчином МанНсоО»з (10 мл), і продукт екстрагували етилацетатом (3 х 20 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг5О і концентрували. Продукт очищали з допомогою СотрбіБІазНФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 3-4 95 метанолом в ОСМ. І С-М5: обчислено (МАНІ. 591,17, знайдено 591,49. и но Йон У
У о в и о н н й поли М о С М пи Ж Ше о - Сг то ХРноз Ра 52 | - С о (3 т о КоРО, Щі
Вг
З Ос 65
З
Сполуку 87 (200 мг, 0,338 ммоль, 1,0 екв.), Сполуку 65 (141 мг, 0,507 ммоль, 1,5 екв.), ХРпо5 ра 2 (5,3 мг, 0,068 ммоль, 0,02 екв.) і КзРО4 (143 мг, 0,676 ммоль, 2,0 екв.) змішували в круглодонній колбі. Колбу закривали нагвинчуваною кришкою, колбу вакуумували (і заповнювали азотом (цей процес повторювали З рази). Потім через шприц додавали ТНЕ (8 мл) і воду (2 мл). Суміш барботували азотом протягом 20 хвилин, і реакційну суміш витримували при кімнатній температурі протягом ночі. Реакцію гасили водою(10 мл), і водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 10 мл). Органічну фазу сушили над Маг5Ох і концентрували.
І О-М5: обчислено (МАНІ 745,35, знайдено 746,08.
Я че кр, с м ки, М і о М о ц я н | І | М пи уче ря
Щі Ра/С ві Н у Е у 88
ОС о он
До розчину Сполуки 88 (0,247 г, 0,331 ммоль, 1 екв.) в етилацетаті (10 мл) при кімнатній температурі додавали 1095 Ра/С (100 мг). Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ночі. Каталізатор видаляли фільтрацією через СеїйефФ, і продукт використовували далі без додаткового очищення. І С-М5: обчислено ІМ-АНІ- 655,31, знайдено 655,96. з. ря о
М ки Ж М о о о х чия Са : Н
ЙО ше окр (Я МУ РЕ» Тов | Н : 88-х р о д о
СвСО, Щі шо
ОСС он шити ит
До розчину Сполуки 89 (50 мг, 0,076 ммоль, 1 екв.) і азидо-РЕСз3-ОТ5 (50 мг, 0,152 ммоль, 2 екв.) в безводному ОМЕ (2 мл) додавали С52СОз (50 мг, 0,152 ммоль, 2 екв.). Реакційну суміш перемішували протягом 72 годин при кімнатній температурі. Реакцію гасили насиченим розчином МанНсоз (10 мл) і водний шар екстрагували етилацетатом (З х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг5Ох і концентрували. Продукт відділяли з допомогою СотрбівІазиФ), з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 495 МеОН в ОСМ. І С-М5: обчислено (МАНІ 812,39, знайдено 813,14. ч АМЖ
ІФ) н Н
Н М М М он
М чок М о те М : - Н : - о х о Ще й А
М--- 2525252 ТЕА воші тити шити М о
Структура 765 90
До розчину Сполуки 90 (36 мг, 0,0443 ммоль, 1,0 екв.) в ТНЕ (2 мл) і воді (2 мл) при кімнатній температурі додавали гідроксид літію (З мг, 0,133 ммоль, 3,0 екв.). Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще 1 години. рН доводили до 3,0 з допомогою НСІ (6 Н), і водну фазу екстрагували ЕТОАс (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Ма250Ох і концентрували. До залишку додавали ТЕА (0,5 мл) і ОСМ (0,5 мл), і суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще З годин. Розчинник видаляли за допомогою роторного випарника. І С-Ме: обчислено (М--НІ|-- 698,32, знайдено 698,90.
Синтез Структури 856 ((5)-3-(4-(7-(2-(2-(2-азидоетокси)етокси)етокси)нафталін-1-іл)феніл)-3- (2-(4-(4-метилпіридин-2-іл)аміно)бутанамідо)ацетамідо)пропанова кислота)
Вг Ве Вг он косо, о
Ж Фо 92 во 93
До розчину Сполуки 92 (1,0 г, 4,48 ммоль, 1 екв.) і Сполуки 62 (1,06 мл, 8,96 ммоль, 2 екв.) в безводному ОМЕ (10 мл) при кімнатній температурі додавали КоСоОз (1,24 г, 8,96 ммоль, 2 екв.).
Реакційну суміш перемішували при 80 "С протягом ночі. Реакцію гасили насиченим розчином
МансСоОз (10 мл), і водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг5О:5 і концентрували. Продукт розділяли за допомогою
СотбрігБіа5нФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 5 9Уо-ним етилацетатом в гексані.
Но. вин
Вг о п-ВОГі о - 3-33
ФІФф (сНнУЬсНОвВ ФІ 94 95
До розчину Сполуки 94 (0,5 г, 1,596 ммоль, 1,0 екв.) в безводному ТНЕ (10 мл) при -78 С додавали по краплях п-Виїі в гексані (0,96 мл, 2,394 ммоль, 1,5 екв.). Реакційну суміш витримували при -78"С протягом ще 1 години. До суміші при -78"С додавали триізопропілборат (0,553 мл, 2,394 ммоль, 1,5 екв.). Потім реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом ще 1 години. Реакцію гасили насиченим розчином МНАСІ (20 мл) і рН доводили до 3. Водну фазу екстрагували ЕТАс (3 х 20 мл), органічні фази об'єднували, сушили над Маг505 і концентрували. Тверду речовину розтирали з гексаном і фільтрували. Продукт використовували далі без додаткового очищення. ІС-М5: обчислено ІМ-НІ-277,11, знайдено 277,35. (9) но пох и о тв ві г І сс 7 ве30000 95
Вг 96 У йо ай о н сл ек
ХРіоз Ра 52 | Н ---и - о о
КоРО, 97 Щі
С
Сполуку 96 (100 мг, 0,169 ммоль, 1,0 екв.), Сполуку 95 (70 мг, 0,253 ммоль, 1,5 екв.), ХРпо5 ра 2 (2,7 мг, 0,0034 ммоль, 0,02 екв.) і КзРО4 (72 мг, 0,338 ммоль, 2,0 екв.) змішували в круглодонній колбі. Колбу закривали нагвинчуваною кришкою, колбу вакуумували (і заповнювали азотом (цей процес повторювали З рази). Потім через шприц додавали ТНЕ (8 мл) і воду (2 мл). Суміш барботували азотом протягом 20 хвилин, і реакційну суміш витримували при кімнатній температурі протягом ночі. Реакцію гасили водою (10 мл), і водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг50Ох і концентрували. Сполуку виділяли з допомогою СотрбіБіа5пФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали З 95 метанолом в ОСМ. о з т о ва с су
М М М о М М М о шу вл - о о й-- о о
РАС
С 5 СО
С ОО
До розчину Сполуки 97 (0,116 г, 0,157 ммоль, 1 екв.) в етилацетаті (10 мл) при кімнатній температурі додавали 1095 Ра/С (100 мг). Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ночі. Каталізатор видаляли фільтрацією через СеїйефФ, і продукт використовували далі без додаткового очищення. І С-М5: обчислено ІМ-АНІ- 655,31, знайдено 655,87. о о о й и М о
М М М о
ФІ тр а С -- о о
Ф Ма-РЕС» -То5 С во вв он Св, СО» о
З
С
До розчину Сполуки 98 (87 мг, 0,133 ммоль, 1 екв.) і азидо-РЕСз3з-ОТ5 (87 мг, 0,266 ммоль, 2 екв.) в безводному ОМЕ (2 мл) при кімнатній температурі додавали С52СОз (87 мг, 0,266 ммоль, 2 екв.). Реакційну суміш перемішували при 40 "С протягом 6 годин. Реакцію гасили насиченим розчином МанНсо»з (10 мл), і водний шар екстрагували етилацетатом (З х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг50Ох і концентрували. Продукт виділяли з допомогою СотрбівїІазНФ), з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 3-495 МЕОН В ОСМ. І С-М5: обчислено (МАНІ 812,39, знайдено 813,05.
н н
М М М о Му и Ж М он
І сур - ві й Ї -- о о о ТРА т воще У 99 5 Структура 85 5 о п
С Ма
До розчину Сполуки 99 (65 мг, 0,0801 ммоль, 1,0 екв.) в ТНЕ (2 мл) і воді (2 мл) при кімнатній температурі додавали гідроксид літію (6 мг, 0,240 ммоль, 3,0 екв.). Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще 1 години. рН доводили до 3,0 з допомогою НСІ (6 Н), і водну фазу екстрагували ЕТОАс (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Ма250Ох і концентрували. До залишку додавали ТЕА (0,5 мл) і ОСМ (0,5 мл), і суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще З годин. Розчинник видаляли за допомогою роторного випарника. І С-Ме: обчислено (М--НІ|-- 698,32, знайдено 698,99.
Синтез Структури 96 (145, 17К)-1-азидо-14-(4-((4-метилпіридин-2-іл)аміно)бутанамідо)-17- (4-(нафталін-1-іл)феніл)-15-оксо-3,6,9,12-тетраокса-16-азанонадекан-19-ова кислота) о М о -СтноМ г з те - з зр о Х о х о ----- июо. 102 103
Сполуку 102 (0,19 г, 0,468 ммоль, 1,0 екв.) охолоджували на крижаній бані. Додавали в колбу НСІ в діоксані (2,35 мл, 9,37 ммоль, 20 екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом ще 1 години. Розчинник видалили за допомогою роторного випарника, і продукт використовували далі без додаткового очищення. ІС-М5: обчислено (МАНІ. 306,14, знайдено 306,51.
щи тет Пт о о о :
ВИШ; З й с и он
Н гр о » Фо 103 тет о о о г твту во М тр -к
РЕА СД н :
ПІРЕА дм 5 Е о 104 ї
До розчину Сполуки 23 (110 мг, 0,188 ммоль, 1 екв.), Сполуки 103 (71 мг, 0,207 ммоль, 1,10 екв.) і ТВТИ (72,7 мг, 0,226 ммоль, 1,20 екв.) в безводному ЮОМЕ (2 мл) при 0 "С додавали 5 діззопропілетиламін (0,1 мл, 0,566 ммоль, З екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом ще 1 години. Реакцію гасили насиченим водним розчином МанНсоО»з (10 мл), і продукт екстрагували етилацетатом (З х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг5О і концентрували. Продукт очищали з допомогою СотрбіБІазНФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 3-4 95 метанолом в ОСМ. І С-М5: обчислено МАНІ» 870,43, знайдено 871,12. щи тет тити те тити ой о о о о м М о М М он чер сс рогу й" 9 о пон д" о 7 о
Ф ТРА Ф Структура 96
ТРА а С о
До розчину Сполуки 104 (110 мг, 0,126 ммоль, 1,0 екв.) в ТНЕ (2 мл) і воді (2 мл) при кімнатній температурі додавали гідроксид літію (9 мг, 0,379 ммоль, 3,0 екв.). Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще 1 години. рН доводили до 3,0 з допомогою НСІ (6 Н), і водну фазу екстрагували ЕІЮдДс (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Ма5О5 і концентрували. До залишку додавали ТЕА (4 мл) і ОСМ (2 мл), і суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще З годин. Розчинник видаляли за допомогою роторного випарника. І С-Мо: обчислено (МАНІ 756,36, знайдено 756,88.
Синтез Структури 10р ((5)-3-(4-(5-(14-азидо-3,6,9,12-тетраоксатетрадецил)окси)нафталін-1- ілуфеніл)-3-(2-(4-((4-метилпіридин-2-іл)аміно)бутанамідо)ацетамідо)пропанова кислота)
Вг
Вг
Вг
С52СО» ФІ -- - - -ях т 107 о он 62 106
До розчину Сполуки 106 (1,0 г, 4,48 ммоль, 1 екв.) і Сполуки 62 (1,06 мл, 8,96 ммоль, 2 екв.) в безводному ОМЕ (10 мл) при кімнатній температурі додавали С52СОз (2,92 г, 8,96 ммоль, 2 екв.). Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ночі. Реакцію гасили водним розчином (20 мл), і водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг5О:5 і концентрували. Продукт розділяли за допомогою
СотбрігБіа5нФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 5 9Уо-ним етилацетатом в гексані. но уд
Вг п-Виг і ---їт-зь
ФІ (снуьснОВ ФІ о о 107 108
До розчину Сполуки 107 (1,188 г, 3,793 ммоль, 1,0 екв.) в безводному ТНЕ (10 мл) при -78 С додавали по краплях п-Виїі в гексані (2,27 мл, 5,689 ммоль, 1,5 екв.). Реакційну суміш витримували при -78"С протягом ще 1 години. До суміші при -78"С додавали триізопропілборат (1,31 мл, 5,689 ммоль, 1,5 екв.). Потім реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом ще 1 години. Реакцію гасили насиченим розчином МНАаСІ (20 мл) і рН доводили до 3. Водну фазу екстрагували ЕТОАс (3 х 20 мл), органічні фази об'єднували, сушили над Маг5О: і концентрували. Тверду речовину розтирали з гексаном і фільтрували. Продукт використовували далі без додаткового очищення. І С-Ме: обчислено |М-
НЕ, 277,11, знайдено 277,26.
но он «КА учи СО су
І 7 сур т я ХРПпов Ра 62 | і: вити о - о о б ково, ж од о І. 96 108 У
Вг 109
З
Сполуку 96 (100 мг, 0,169 ммоль, 1,0 екв.), Сполуку 108 (70 мг, 0,253 ммоль, 1,5 екв.), ХРпо5 ра 2 (2,7 мг, 0,0034 ммоль, 0,02 екв.) і КзРОх4 (72 мг, 0,338 ммоль, 2,0 екв.) змішували в круглодонній колбі. Колбу закривали нагвинчуваною кришкою, колбу вакуумували і заповнювали азотом (цей процес повторювали З рази). Потім через шприц додавали ТНЕ (8 мл) і воду (2 мл). Суміш барботували азотом протягом 20 хвилин, і реакційну суміш витримували при кімнатній температурі протягом ночі. Реакцію гасили водою (10 мл) і водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг50Ох і концентрували. Сполуку виділяли з допомогою СотрбіБіа5пФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали З 95 метанолом в ОСМ. І С-М5: обчислено МАНІ 745,35, знайдено 745,99. о Ї Й а
ВИШ о "іх ки ще м АХ М з ! | г - о о ія РИС ш о С о 109 110 ї он
До розчину Сполуки 109 (0,135 г, 0,181 ммоль, 1 екв.) в етилацетаті (10 мл) при кімнатній температурі додавали 1095 Ра/С (100 мг). Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ночі. Каталізатор видаляли фільтрацією через СеїйефФ, і продукт використовували далі без додаткового очищення. І С-М5: обчислено ІМ-АНІ- 655,31, знайдено 655,87.
і і
Н Н
Ех ки ще "ах ки ще т о о Ма -РЕС» -Тов ш о о (Я я фі о 111 що Ми ит ит
До розчину Сполуки 110 (50 мг, 0,0764 ммоль, 1 екв.) і азидо-РЕС5-О15 (64 мг, 0,152 ммоль, 2 екв.) в безводному ОМЕ (2 мл) при кімнатній температурі додавали С52СОз (50 мг, 0,152 ммоль, 2 екв.). Реакційну суміш перемішували протягом З годин при 40 "С. Реакцію гасили насиченим розчином МанНсоО»з (10 мл), і водний шар екстрагували етилацетатом (З х 10 мл).
Органічні фази об'єднували, сушили над Маг25О4 і концентрували. Продукт очищали з допомогою СотрБіБіазйФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 4 95 метанолом в ОСМ. Вихід становив 62 9». І! С-М5: обчислено (М--НІ-- 900,44, знайдено 901,19. о н с и о с Ки ЖК М о. ! ве й
М о о М о о
Щ пон Щ
ТРА
СЯ ОО ши ит кити МИТ ут отити 111 Структура 106
До розчину Сполуки 111 (43 мг, 0,0478 ммоль, 1,0 екв.) в ТНЕ (2 мл) і воді (2 мл) при кімнатній температурі додавали гідроксид літію (3,4 мг, 0,143 ммоль, 3,0 екв.). Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще 1 години. рН доводили до 3,0 з допомогою НСІ (6 Н), і водну фазу екстрагували Ес (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Ма5О5 і концентрували. До залишку додавали ТЕА (4 мл) і ОСМ (2 мл), і суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще З годин. Розчинник видаляли за допомогою роторного випарника. І С-Мо: обчислено (МАНІ 786,37, знайдено 787,04.
Синтез Структури 116 ((5)-3-(4-(4-((14-азидо-3,6,9,12-тетраоксатетрадецил)окси)нафталін-1- ілуфеніл)-3-((5)-1-(4-(4-метилпіридин-2-іл)яаміно)бутаноил)пирролидин-2- карбоксамідо)пропанова кислота) ч я о с вод - он т ке м г . м о твти хх ки Х о о в ПІРЕА | 0, сі "Й
Я "з 114 22
До розчину Сполуки 22 (500 мг, 1,698 ммоль, 1 екв.), Сполуки 113 (295 мг, 1,783 ммоль, 1,05 екв.) ії ТВТИ (654 мг, 2,038 ммоль, 1,2 екв.) в безводному ОМЕ (10 мл) при 0 "С додавали дізопропілетиламін (0,888 мл, 5,096 ммоль, З екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом ще 1 години. Реакцію гасили насиченим водним розчином МанНсСоО»з (10 мл) і продукт екстрагували етилацетатом (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг5О і концентрували. Продукт очищали з допомогою СотрбіБІазНФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 2-3 96 метанолом в ОСМ. Вихід становив 98,72 9». І! С-М5: обчислено (М--НІ-- 406,23, знайдено 406,07. 5 о Я о бо о Зу-о ви о 00 оН ох пон : чує х - 65 те " " т у, ЛО ГУ
М
М
Ж- 115 114
До розчину Сполуки 114 (0,68 г, 1,676 ммоль, 1 екв.) в ТНЕ (5 мл) і НгО (5 мл) при 0" додавали гідроксид літію (0,12 г, 5,030 ммоль, З екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури. Після перемішування при кімнатній температурі протягом 1 години реакційну суміш підкислювали НСЇІ (6 Н) до рН 3,0. Водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 10 мл)і органічні шари об'єднували, сушили над Маг505 і концентрували. Продукт використовували без додаткового очищення. І С-Мо: обчислено (МАНІ 392,21, знайдено 392,39.
М "сНУМ о хм - М он т ХХ М М о о о ? о ПІРЕА оо о о о - Вг Я- 117 115 116 Вг
До розчину Сполуки 115 (300 мг, 0,766 ммоль, 1 екв.), Сполуки 116 (237 мг, 0,804 ммоль, 1,05 екв.) і ТВТО (295 мг, 0,919 ммоль, 1,2 екв.) в безводному ОМЕ (10 мл) при 0 "С додавали дізопропілетиламін (0,400 мл, 2,299 ммоль, З екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом ще 1 години. Реакцію гасили насиченим водним розчином МанНсСоО»з (10 мл) і продукт екстрагували етилацетатом (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг5О і концентрували. Продукт очищали з допомогою СотрбіБІазНФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 3-4 95 метанолом в ОСМ. Вихід становив 83 95. | С-МО: обчислено |М--НІ- 631,21, знайдено 631,46.
ро а т
Н
- М М о
М о о
А- 5 118 Ве 65 м
ХА АТ р»
М
ХРпоз Ра 652 ща о о Ф о
КоРО, - 119
З
Сполуку 118 (100 мг, 0,158 ммоль, 1,0 екв.), Сполуку 65 (66 мг, 0,237 ммоль, 1,5 екв.), ХРпо5 ра 2 (2,5 мг, 0,0032 ммоль, 0,02 екв.) і КзРО4 (67 мг, 0,316 ммоль, 2,0 екв.) змішували в круглодонній колбі. Колбу закривали нагвинчуваною кришкою, колбу вакуумували і заповнювали азотом (цей процес повторювали З рази). Потім через шприц додавали ТНЕ (5 мл) і воду (1 мл). Суміш барботували азотом протягом 20 хвилин, і реакційну суміш витримували при 40 "С протягом 1 години. Реакцію гасили водою (10 мл), і водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Ма5Ох і концентрували.
Сполуку виділяли з допомогою СотрбіРІазНФ), з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 395 метанолом в ЮСМ. Вихід становив 96 95. Ї0-М5: обчислено ІМ--НІ|- 785,38, знайдено 785,69. м
М ух М М о о о Фф о о о о л- 119 Рас 4. - ж 120 о.
У он
До розчину Сполуки 119 (0,120 г, 0,153 ммоль, 1 екв.) в етилацетаті (10 мл) при кімнатній температурі додавали 1095 Ра/С (100 мг). Реакційну уміш перемішували при кімнатній температурі протягом ночі. Каталізатор видаляли фільтрацією через СеїйефФ, і продукт використовували далі без додаткового очищення. І С-М5: обчислено МАНІ 695,34, знайдено 695,66.
ХХ а о дХ а й - Н
М й-Е М М на о Ж Ф МУРЕС,-Тов о о о о Фф о 120 -НИННН
Св5,СО,
Я- 121 он
Мити ит и ит
До розчину Сполуки 120 (83 мг, 0,119 ммоль, 1 екв.) і азидо-РЕС5-ОТ5 (100 мг, 0,239 ммоль, 2 екв.) в безводному ОМЕ (2 мл) при кімнатній температурі додавали С52СОз (78 мг, 0,239 ммоль, 2 екв.). Реакційну суміш перемішували протягом З годин при 40 "С. Реакцію гасили насиченим розчином МанНсоО»з (10 мл), і водний шар екстрагували етилацетатом (З х 10 мл).
Органічні фази об'єднували, сушили над Маг25О4 і концентрували. Продукт очищали з допомогою СотрБіБіазйФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 4 95 метанолом в ОСМ. Вихід становив 79 95. І! С-М: обчислено 940,47, знайдено 941,16.
Н Н
- М М о - М М он ту - ту
А. о о о о о о о о
Я Фф пон Фф 121 ТРА Структура 115
С -00
Микити ит Микити ит
До розчину Сполуки 121 (89 мг, 0,0947 ммоль, 1,0 екв.) в ТНЕ (2 мл) і воді (2 мл) при кімнатній температурі додавали гідроксид літію (6,8 мг, 0,284 ммоль, 3,0 екв.). Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще 1 години. рН доводили до 3,0 з допомогою НСІ (6 Н), і водну фазу екстрагували Ес (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Ма5О5 і концентрували. До залишку додавали ТЕА (4 мл) і ОСМ (2 мл), і суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще З годин. Розчинник видаляли за допомогою роторного випарника. І С-Мо: обчислено (МАНІ 826,41, знайдено 827,10.
Синтез Структури 125 ((5)-3-(4-(4-((14-азидо-3,6,9,12- тетраоксатетрадецил)окси)бензо|д|оксазол-7-ілуфеніл)-3-(2-(4-(4-метилпіридин-2- іл)аміно)бутанамідо)дацетамідо)упропанова кислота) о
Вг /
М в) С5.060,. - -- - о ; я 124
М он 62 123
До розчину Сполуки 123 (1,0 г, 7,40 ммоль, 1 екв.) і Сполуки 62 (1,32 мл, 11,10 ммоль, 1,5 екв.) в безводному ЮОМЕ (10 мл) додавали С52СОз (3,62 г, 11,10 ммоль, 1,5 екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом ночі. Реакцію гасили водою
(10 мл). Водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 10 мл), органічні фази об'єднували, сушили над безводним Ма250Ох і концентрували. Продукт розділяли за допомогою СотрбіБІазНФ), з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 5-7 95 етилацетатом в гексані. Вихід становив 85 95.
Вг о о у у
М М
Мв5 о з» о 125 124
До розчину Сполуки 124 (1,425 г, 6,326 ммоль, 1 екв.) в безводному ацетонітрилі (20 мл) при 0 "С додавали М-бромсукцинімід (1,216 г, 6,832 ммоль, 1,08 екв.). Реакційну суміш витримували при 0"С протягом ще 30 хвилин, потім давали нагрітися до кімнатної температури і перемішували протягом ночі. Розчинник видаляли при зниженому тиску, і залишок очищали з допомогою СотрбіРІаз пФ), з використанням силікагелю як нерухомої фази. Продукт елюювали 4- 5 95 етилацетатом в гексані. Вихід 65 95. І! С-Мо5: обчислено МАНІ» 303,99. Знайдено 304,08. о о о Зв7 р Воріп» о
М КОАс
Ра(аррОСІ, » --л Я - о М 125 о 126
Суміш Сполуки 125 (1,339 г, 4,402 ммоль, 1 екв.), біс(пінаколато)диборону (2,236 г, 8,805 ммоль, 2 екв.), ацетату калію (0,864 г, 8,805 ммоль, 2 екв.) і Ра(аррОсСі» (161 мг, 0,220 ммоль, 0,05 екв. У 15 мл безводного 1,4-діоксану перемішували при 100 "С в атмосфері азоту протягом 8 годин. Після концентрування залишок розподіляли між водою і ОСМ, водну фазу екстрагували
ОСМ, об'єднаний органічний шар промивали насиченим сольовим розчином, сушили над
Маг5О4 і концентрували. Продукт очищали з допомогою СотрбріБіа5йФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 15-20 95 етилацетатом в гексані. ЇС-Ме: обчислено
ІМАНІ»- 352,16, знайдено 352,06.
Ми й о Ї М ХА й о
І ут й я со ХРНоє Ра 22 І тр І й ' є ' т с " З со
Сполуку 96 (200 мг, 0,338 ммоль, 1,0 екв.), Сполуку 126 (178 мг, 0,507 ммоль, 1,5 екв.),
ХРПоз Ра 2 (5,3 мг, 0,0068 ммоль, 0,02 екв.) і КзРОх5 143 мг, 0,676 ммоль, 2,0 екв.) змішували в круглодонній колбі. Колбу закривали нагвинчуваною кришкою, колбу вакуумували і заповнювали азотом (цей процес повторювали З рази). Потім через шприц додавали ТНЕ (5 мл) і воду (1 мл). Суміш барботували азотом протягом 20 хвилин, і реакційну суміш витримували при 40 С протягом 1 години. Реакцію гасили насиченим МанНСОз (10 мл), і водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг50Ох і концентрували. Сполуку виділяли з допомогою СотрбіБіа5пФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 2-3 95 метанолом в ЮСМ. | С-М8: обчислено |М-аНІн 736,33, знайдено 736,89. «Я в о н
Ех били о йо ай о - Н о о М ки Ж М о.
Фі у стру 127 РИС | Н --к - о о ї 128 ія о
Со
М о
Ї С
У он
До розчину Сполуки 127 (0,219 г, 0,297 ммоль, 1 екв.) в етилацетаті (10 мл) додавали 10 95
Ра/С (100 мг) при кімнатній температурі. Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ночі. Каталізатор видаляли фільтрацією через СеїйефФ, і продукт використовували далі без додаткового очищення. І С-М5: обчислено МАНІ 646,28, знайдено 646,78.
г 1 ті
Н Н
М ки о му и о
Н | м я о о М.РЕС,-То5 - о о
Св5,сО, 129 (Фі о
С С
М М он МИ ит ит
До розчину Сполуки 128 (73 мг, 0,113 ммоль, 1 екв.) і азидо-РЕС5-О1Т5 (94 мг, 0,226 ммоль, 2 екв.) в безводному ОМЕ (2 мл) при кімнатній температурі додавали С52СОз (74 мг, 0,226 ммоль, 2 екв.). Реакційну суміш перемішували протягом З годин при 40 "С. Реакцію гасили насиченим розчином МанНсо»з (10 мл), і водний шар екстрагували етилацетатом (З х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг5О і концентрували. Продукт очищали з допомогою СотрбБігіазпФ), з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 4 95 метанолом в ОСМ. Вихід 80 95.
І О-М5: обчислено |М--НІ|-- 891,42, знайдено 892,00. о о
Н Н
М мання о М ит он
Н | М й о о - о о і пон і 128 ТРА Структура 1265 о о с 2 ТЕА с 2 и и ль и МИ то ит итио
До розчину Сполуки 129 (43 мг, 0,0478 ммоль, 1,0 екв.) в ТНЕ (2 мл) і воді (2 мл) при кімнатній температурі додавали гідроксид літію (3,4 мг, 0,143 ммоль, 3,0 екв.). Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 1 години. рН доводили до 3,0 з допомогою
НС (6 Н), і водну фазу екстрагували ЕТОАс (З х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над
Маг5О» і концентрували. До залишку додавали ТРЕА (4 мл) і ОСМ (2 мл), і суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще З годин. Розчинник видаляли за допомогою роторного випарника. І С-Ме: обчислено (М.--НІ- 777,35, знайдено 777,94.
Синтез Структури 13р ((5)-3-(4-(4-(14-азидо-3,6,9,12-тетраоксатетрадецил)окси)-5,6,7,8- тетрагідронафталін-1-іл)феніл)-3-(2-(4-((4-метилпіридин-2- іл)аміно)бутанамідо)дацетамідо)упропанова кислота)
Вг Воріп о 2 2
КОАСс Зв'
Рас(арросіІ, -- - -з- он 1 он
Суміш Сполуки 1 (300 мг, 1,321 ммоль, 1 екв.), біс(пінаколато)удиборону (671 мг, 2,642 ммоль, 2 екв.), ацетату калію (389 мг, 3,963 ммоль, 2 екв.) і РасарросСі?» (48 мг, 0,066 ммоль, 0,05 екв.) в 10 мл безводного 1,4-діоксана перемішували при 80 "С в атмосфері азоту протягом ночі.
Після концентрування залишок розподіляли між водою і ОСМ, водну фазу екстрагували ОСМ і об'єднаний органічний шар промивали насиченим сольовим розчином, сушили над Маг250х і концентрували. Продукт очищали з допомогою СотрбігБІазпФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 10 95-ним етилацетатом в гексані. Ї С-Ме: обчислено (М-НІ-273,17, знайдено 273,29. о о
Н Зв' М чук М о т сир То в ХРпов Ра 62 | 7 й ї - о о КоРО, 4 о іа он шо о он
Сполуку 1 (100 мг, 0,169 ммоль, 1,0 екв.), Сполуку 2 (70 мг, 0,253 ммоль, 1,5 екв.), ХРпоз Ра 2 (2,7 мг, 0,0034 ммоль, 0,02 екв.) і КзРО4 (72 мг, 0,338 ммоль, 2,0 екв.) змішували в круглодонній колбі. Колбу закривали нагвинчуваною кришкою, колбу вакуумували (і заповнювали азотом (цей процес повторювали З рази). Потім через шприц додавали ТНЕ (5 мл) і воду (1 мл). Суміш барботували азотом протягом 20 хвилин, і реакційну суміш витримували при 40 "С протягом З годин. Потім реакційну суміш охолоджували до кімнатної температури і залишали на ніч. Реакцію гасили насиченим МанНСОз (10 мл), і водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Ма5Ох і концентрували.
Сполуку виділяли з допомогою СотрбінБІазнО), з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 4-5 95 метанолом в ОСМІ С-Мо: обчислено ІМ--НІ- 659,34, знайдено 659,57.
г 1 ті
Н Н
М ки о М р М о
Н | м я о о М.РЕС,-То5 - о о
Щі Св5,сО, ія
ОО СОЮ он МИ ит ит
До розчину Сполуки 1 (30 мг, 0,0455 ммоль, 1 екв.) і азидо-РЕС5-ОТз5 (38 мг, 0,0911 ммоль, 2 екв.) в безводному ЮМЕ (2 мл) при кімнатній температурі додавали С52СОз3 (30 мг, 0,0911 ммоль, 2 екв.). Реакційну суміш перемішували протягом З годин при 40 "С. Реакцію гасили насиченим розчином МанНсСоОз (10 мл) і водний шар екстрагували етилацетатом (З х 10 мл).
Органічні фази об'єднували, сушили над Маг25О4 і концентрували. Продукт очищали з допомогою СотрБіБіазйФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 4 95 метанолом в ОСМ. Вихід становив 70 9». І! С-М5: обчислено (М--НІ-- 904,47, знайдено 904,88. о о ка кити о. м Ки М он ! | є - о о й о о
Щі пон Щі
ТРА
ОО СО ми ит отити мито ит оитио ' Структура 136
До розчину Сполуки 1 (29 мг, 0,0321 ммоль, 1,0 екв.) в ТНЕ (2 мл) і воді (2 мл) при кімнатній температурі додавали гідроксид літію (2,3 мг, 0,0962 ммоль, 3,0 екв.). Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще 1 години. рН доводили до 3,0 з допомогою НСІ (6 Н), і водну фазу екстрагували ЕТОАс (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Ма250Ох і концентрували. До залишку додавали ТЕА (4 мл) і ОСМ (2 мл), і суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще З годин. Розчинник видаляли за допомогою роторного випарника. І С-Ме: обчислено (МАНІ 790,41, знайдено 790,64.
Синтез Структури 146 ((5)-3-(2-(14-азидо-3,6,9,12-тетраоксатетрадецил)окси)-2'- (трифторметокси)-І1,1"-біфеніл|-4-іл)-3-(2-(4-((4-метилпіридин-2- іл)аміно)бутанамідо)дацетамідо)упропанова кислота)
о
Н ноу Рон ж. ки Ж М но о ва В во тр
Х Зк А о о
М М М о Е фі
З т - Е
ХХ о о к о ХРпоз Ра 652 о Е
КоРО, Фф й
Вг о 2
Сполуку 1 (150 мг, 0,253 ммоль, 1,0 екв.), Сполуку 2 (118 мг, 0,380 ммоль, 1,5 екв.), ХРпо5 ра с2 (4 мг, 0,0051 ммоль, 0,02 екв.) і КзРОї (107 мг, 0,507 ммоль, 2,0 екв.) змішували в круглодонній колбі. Колбу закривали нагвинчуваною кришкою, колбу вакуумували і заповнювали азотом (цей процес повторювали З рази). Потім через шприц додавали ТНЕ (5 мл) і воду (1 мл). Суміш барботували азотом протягом 10 хвилин, і реакційну суміш витримували при 40 "С протягом ночі. Реакцію гасили водою (10 мл) і водну фазу екстрагували етилацетатом (З х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Ма250О5 і концентрували. Сполуку виділяли з допомогою СотрбіРіазпФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 2-4 95 метанолом в ОСМ. І. С-М5: обчислено |М.-НІ- 779,32, знайдено 779,65.
І Х
ІФ) о о н о
Ех кит о м її н о
Н Х й - - о С о рас | р Н Ї тк, о Е се тут
Е о
У он
До розчину Сполуки 1 (0,19 г, 0,244 ммоль, 1 екв.) в етилацетаті (10 мл) при кімнатній температурі додавали 10 95 Ра/С (100 мг). Реакційну суміш колбу вакуумували і заповнювали воднем (цей процес повторювали З рази.). Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ночі. Каталізатор видаляли фільтрацією через Сеїйеб, і продукт використовували далі без додаткового очищення. І С-М5: обчислено ІМ-А-НІ- 689,27, знайдено 689,54.
рові рові н Н
М М М о М М М о. т г тре - о о МУ РЕС,-То8 й-х2о о о
Я С
1 о Е 2 о Е сур СЕ що ми ит и ит
До розчину Сполуки 1 (80 мг, 0,116 ммоль, 1 екв.) і азидо-РЕС5-ОТ5 (97 мг, 0,232 ммоль, 2 екв.) в безводному ОМЕ (2 мл) при кімнатній температурі додавали С52СОз (76 мг, 0,232 ммоль, 2 екв.). Реакційну суміш перемішували протягом З годин при 40 "С. Реакцію гасили насиченим розчином МанНсо»з (10 мл) і водний шар екстрагували етилацетатом (3 х 5 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг5О і концентрували. Продукт очищали з допомогою СотрбіБІазНФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 3-4 95 метанолом в ОСМ. Вихід становив 82 95. | С-М5: обчислено (М--НІ|- 934,41, знайдено 935,04. 9 о хе биті о с АЖ М он р о о М о о і шо С
АС о Е ТЕА о Е
Фк ср
Е о о о мими мито и мито пити и и тити ' Структура 1465
До розчину Сполуки 1 (90 мг, 0,0964 ммоль, 1,0 екв.) в ТНЕ (2 мл) і воді (2 мл) при кімнатній температурі додавали гідроксид літію (7 мг, 0,289 ммоль, 3,0 екв.). Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще 1 години. рН доводили до 3,0 з допомогою НСІ (6 Н), і водну фазу екстрагували ЕТОАс (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Ма250Ох і концентрували. До залишку додавали ТЕА (4 мл) і ОСМ (2 мл), і суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще З годин. Розчинник видаляли за допомогою роторного випарника. І С-Ме: обчислено (МАНІ 820,34, знайдено 820,89.
Синтез Структури 156 ((5)-3-(3-(5-(14-азидо-3,6,9,12-тетраоксатетрадецил)окси)нафталін-1- ілуфеніл)-3-(2-(4-((4-метилпіридин-2-іл)аміно)бутанамідо)ацетамідо)пропанова кислота) о М он М г з г о о о Меї о о ---23к косо»
Вг Вг 1
До розчину Сполуки 1 (1,0 г, 2,90 ммоль, 1 екв.) і карбонату калію (0,60 г, 4,36 ммоль, 1,5 екв.) в безводному ОМЕ (10 мл) при кімнатній температурі додавали метилиодид (362 мкл, 5,81 ммоль, 2,0 екв.). Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 1 години.
Потім реакцію гасили водою (20 мл), і водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 10 мл).
Органічні фази об'єднували, сушили над безводним Маг50Ох і концентрували. Продукт розділяли за допомогою СотрбрінРіІазНФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 15 95 етилацетатом в гексані. | С-Ме: обчислено ІМ--НІ|- 358,06, знайдено 358,18.
Н "СігНоМ о з ср о
НС о о о - - -»к
Вг
Вг 1
Сполуку 1 (858 мг, 1,677 ммоль, 1,0 екв.) охолоджували на крижаній бані. Додавали в колбу
НСІ в діоксані (8,4 мл, 33,54 ммоль, 20 екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом ще 1 години. Розчинник видалили за допомогою роторного випарника, і продукт використовували далі без додаткового очищення. І|С-М5: обчислено (МАНІ. 258,01, знайдено 258,08. ем о о ря
АД тер» у - М Н
М он твти М М о г я І СоРБАТ й стр - о о т о о ї- Вг 1 2 Вг
До розчину Сполуки 1 (640 мг, 1,821 ммоль, 1 екв.), Сполуки 2 (590 мг, 2,003 ммоль, 1,10 екв.) Її ТВТИ (702 мг, 2,185 ммоль, 1,20 екв.) в безводному ОМЕ (10 мл) при 0 "С додавали дізопропілетиламін (0,952 мл, 5,464 ммоль, З екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом ще 1 години. Реакцію гасили насиченим водним розчином МанНсСоО»з (10 мл) і продукт екстрагували етилацетатом (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг5О і концентрували. Продукт очищали з допомогою СотрбіБІазНФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 3-4 95 метанолом в ОСМ. І С-М5: обчислено (МАНІ. 591,17, знайдено 591,40. о о ноу Йон о о ре о Ї ХУ ХАЖАИ о
М ХХ КМ о. С | яд г о о
ТА о - 9 о к о
ХРпоз Ра 52 вг КРО, Хо 1 су
Сполуку 1 (150 мг, 0,253 ммоль, 1,0 екв.), Сполуку 2 (106 мг, 0,380 ммоль, 1,5 екв.), ХРпо5 ра с2 (4 мг, 0,0051 ммоль, 0,02 екв.) і КзРОї (107 мг, 0,507 ммоль, 2,0 екв.) змішували в круглодонній колбі. Колбу закривали нагвинчуваною кришкою, колбу вакуумували і заповнювали азотом (цей процес повторювали З рази). Потім через шприц додавали ТНЕ (5 мл) і воду (1 мл). Суміш барботували азотом протягом 10 хвилин, і реакційну суміш витримували при 40"С протягом 2 годин. Реакцію гасили водою (10 мл), і водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Ма5Ох і концентрували.
Сполуку виділяли з допомогою СотрбінБІазнО), з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 3-4 95 метанолом в ОСМ. І С-М5: обчислено ІМ--НІ- 745,35, знайдено 745,99. р ру о
Н о о "ах и о 5 о Н
Н
С о о "з ки о
Ф РОС ї щі нн - о | о 0, о су он
До розчину Сполуки 1 (0,189 г, 0,253 ммоль, 1 екв.) в етилацетаті (10 мл) при кімнатній температурі додавали 10 95 Ра/С (100 мг). Реакційну суміш колбу вакуумували і заповнювали воднем (цей процес повторювали З рази.). Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ночі. Каталізатор видаляли фільтрацією через СеїйефФ, і продукт використовували далі без додаткового очищення. І С-М5: обчислено ІМ-АНІ- 655,31, знайдено 655,42.
І ва
ВИШ Ї н
Шк кити о Му ки о і | і -- о о М3-РЕС5-Тов - о о с с он о норку и ро
До розчину Сполуки 1 (80 мг, 0,122 ммоль, 1 екв.) і азидо-РЕС5-ОТ5 (102 мг, 0,244 ммоль, 2 екв.) в безводному ОМЕ (2 мл) при кімнатній температурі додавали С52СОз (80 мг, 0,244 ммоль, 2 екв.). Реакційну суміш перемішували протягом З годин при 40 "С. Реакцію гасили насиченим розчином МанНсо»з (10 мл) і водний шар екстрагували етилацетатом (3 х 5 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг5О і концентрували. Продукт очищали з допомогою СотрбіБІазНФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 1-2 95 метанолом в ОСМ. Вихід становив 90 95. І! С0-М5: обчислено 900,44, знайдено 901,1010.
(9) о
Н Н Н
Ех кит ох ох ит он
Н | н - о о р о о
Се с 4 Фі
СЯ шо о о норки дичиною уки вх дику 1 Структура 1565
До розчину Сполуки 1 (100 мг, 0,111 ммоль, 1,0 екв.) в ТНЕ (2 мл) і воді (2 мл) при кімнатній температурі додавали гідроксид літію (8 мг, 0,333 ммоль, 3,0 екв.). Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще 1 години. рН доводили до 3,0 з допомогою НСІ (6 Н), і водну фазу екстрагували ЕТОАс (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Ма250Ох і концентрували. До залишку додавали ТЕА (4 мл) і ОСМ (2 мл), і суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще З годин. Розчинник видаляли за допомогою роторного випарника. І С-Ме: обчислено (М--НІ- 786,37, знайдено 786,95.
Синтез Структури 166р ((5)-3-(4-(4-((14-азидо-3,6,9,12-тетраоксатетрадецил)окси)нафталін-1- ілуфеніл)-3-(2)-1-(4-(4-метилпіридин-2-іл)яаміно)бутаноил)пирролидин-2- карбоксамідо)пропанова кислота) з о о ре о - он шк ж о о,
М ту , я щ вт, АЖ
А. о н, ПІРЕА В: М 07 о .
КО 7 2 1
До розчину Сполуки 1 (500 мг, 1,698 ммоль, 1 екв.), Сполуки 2 (295 мг, 1,783 ммоль, 1,05 екв.) ії ТВТИ (654 мг, 2,038 ммоль, 1,2 екв.) в безводному ЮОМЕ (10 мл) при 0 "С додавали дізопропілетиламін (0,888 мл, 5,096 ммоль, З екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом ще 1 години. Реакцію гасили насиченим водним розчином МанНсСоО»з (10 мл) і продукт екстрагували етилацетатом (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг5О і концентрували. Продукт очищали з допомогою СотрбіБІазНФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 2-3 96 метанолом в ОСМ. Вихід становив 98,43 95. І С-Мо5: обчислено (М--НІ-- 406,23, знайдено 406,34. о о о о о о 5 о о, и о он и Ж -- чук тох М | сх М др р 1
До розчину Сполуки 1 (0,678 г, 1,672 ммоль, 1 екв.) в ТНЕ (10 мл) їі НгО (10 мл) при 0"С додавали гідроксид літію (0,12 г, 5,016 ммоль, З екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури. Після перемішування при кімнатній температурі протягом 1 години реакційну суміш підкислювали НС (6 Н) до рН 3,0. Водну фазу екстрагували етилацетатом (З х 10 мл), органічні шари об'єднували, сушили над Маг505 і концентрували. Продукт використовували без додаткового очищення. І С-Мо: обчислено (МАНІ 392,21, знайдено 392,39. ч- ся М Т
М х о ід о ХМ ПІРЕА о Ж Ф
СА Фо он 2 он
До розчину Сполуки 1 (130 мг, 0,332 ммоль, 1 екв.), Сполуки 2 (125 мг, 0,348 ммоль, 1,05 екв.) Її ТВТИ (128 мг, 0,398 ммоль, 1,2 екв.) в безводному ОМЕ (5 мл) при 0 С додавали дізопропілетиламін (0,174 мл, 0,996 ммоль, З екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом ще 1 години. Реакцію гасили насиченим водним розчином МанНсоО»з (10 мл), і продукт екстрагували етилацетатом (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг5О і концентрували. Продукт очищали з допомогою СотрбіБІазНФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 3-4 95 метанолом в ОСМ. Вихід становив 86 95. | С-Мо: обчислено (М.--НІ|- 695,34, знайдено 695,93. -х
ХХ до Ше ХХ В М
М ух М-А- М о
ЖК Ї г ре о о о о о с М3-РЕО5-То5 о о
Х ше Ко
ОО
ОС он ми ит ит
До розчину Сполуки 1 (80 мг, 0,115 ммоль, 1 екв.) і азидо-РЕС5-ОТ5 (96 мг, 0,230 ммоль, 2 екв.) в безводному ОМЕ (2 мл) при кімнатній температурі додавали С52СОз (75 мг, 0,230 ммоль, 2 екв.). Реакційну суміш перемішували протягом З годин при 40 "С. Реакцію гасили насиченим розчином МанНсоз (10 мл) і водний шар екстрагували етилацетатом (З х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг5О і концентрували. Продукт очищали з допомогою СотрбіБІазНФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 4-595 метанолом в ОСМ. Вихід становив 60 95. тем » м 5 о 7 с пон с л- ТРА
СО ОО
Микити ит ми ит ит 1 Структура 1660
До розчину Сполуки 1 (65 мг, 0,0691 ммоль, 1,0 екв.) в ТНЕ (2 мл) і воді (2 мл) при кімнатній температурі додавали гідроксид літію (5 мг, 0,207 ммоль, 3,0 екв.). Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще 1 години. рН доводили до 3,0 з допомогою НСІ (6 Н), і водну фазу екстрагували ЕТОАс (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Ма250Ох і концентрували. До залишку додавали ТЕА (4 мл) і ОСМ (2 мл), і суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще З годин. Розчинник видаляли за допомогою роторного випарника. І С-Ме: обчислено (МАНІ 826,41, знайдено 827,01.
Синтез Структури 175 ((5)-3-(4-(7-(14-азидо-3,6,9,12- тетраоксатетрадецил)окси)бензо|Б|Ітиофен-4-іл)уфеніл)-3-(2-(4-(4-метилпіридин-2- іл)яаміно)бутанамідо)ацетамідо)пропанова кислота)
Вг
ВГ. 5 З о о
Я Ьь,ч 1
Розчин брому (1,877 г, 11,745 ммоль, 1,05 екв.) в сухому тетрахлорметане (20 мл) при 0 С додавали по краплях протягом 1,5 годин до розчину перемішуваної Сполуки 1 (1,837 г, 11,186 ммоль, 1 екв.) в тетрахлорметані (20 мл). Через одну годину органічний шар при 0"сС промивали водою і насиченим сольовим розчином, сушили над Маг»5О»:4, концентрували з отриманням залишку, який очищали з допомогою СотрбіРІазНФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази. Продукт з домішками елюювали чистим гексаном.
Вг
Вг
Ї З Ме 5ВЕ 2 З хх нн
З
З о
Я он 1
До розчину Сполуки 1 (2,70 г, 11,105 ммоль, 1,0 екв.) в дихлорметані (20 мл) в атмосфері азоту при 0 "С додавали комплекс трифториду бору з диметилсульфідом (3,5 мл, 33,317 ммоль, 3,0 екв.), і перемішували при кімнатній температурі протягом 20 годин. Реакційну суміш охолоджували до 0 "С і гасили насиченим розчином МНАСІ (20 мл). Водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 20 мл), органічні фази об'єднували, сушили над Маг5054 і концентрували.
Продукт розділяли за допомогою СотрбівРІазНФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 5 95-ним етилацетатом в гексані. | С-Ме: обчислено (М-НІ|- 226,92, знайдено 227,03.
Зо
Вг
Вг Вг х х С5,СО, З -- -- - т о он 1 2
До розчину Сполуки 1 (1,838 г, 8,023 ммоль, 1 екв.) і Сполуки 2 (1,906 мл, 16,04 ммоль, 2 екв.) в безводному ОМЕ (10 мл) при кімнатній температурі додавали С520Оз (5,228 г, 16,04 5 ммоль, 2 екв.). Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ночі. Реакцію гасили водою (20 мл), і водну фазу екстрагували етилацетатом (З х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг5О:5 і концентрували. Продукт розділяли за допомогою
СотрбігіІа5Не), з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 2-3 о етилацетатом в гексані. но он
Вг Зв п-Вигі ---2--.-2 х (снзЬснОьВ х
З 5 : 1
До розчину Сполуки 1 (2,22 г, 6,954 ммоль, 1,0 екв.) в безводному ТНЕ (20 мл) при -78 С додавали по краплях п-Виїі в гексані (4,17 мл, 10,43 ммоль, 1,5 екв.). Реакційну суміш витримували при -78 "С протягом ще 1 години. Потім при -78 "С додавали триізопропілборат (2,40 мл, 10,43 ммоль, 1,5 екв.). Потім реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом ще 1 години. Реакційну суміш гасили насиченим розчином МНАСІ (20 мл) і рН доводили до З. Водну фазу екстрагували ЕТОАс (3 х 20 мл), органічні фази об'єднували, сушили над Маг50Ох і концентрували. Продукт виділяли з допомогою СотрбівїІазНФ), з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 4-6 95 метанолом в ОСМ. І С-М5: обчислено ІМ-НІ-283,07, знайдено 283,20.
в о. вон с кити о о о | Н щ о х Ж о о н г кит ек 5 і - о о я о ХРнов Ра с2 те ОО
Вг б 2
Сполуку 1 (400 мг, 0,676 ммоль, 1,0 екв.), Сполуку 2 (288 мг, 1,01 ммоль, 1,5 екв.), ХРпоз Ра 5 2 (10 мг, 0,0135 ммоль, 0,02 екв.) і КзРОа4 (287 мг, 1,352 ммоль, 2,0 екв.) змішували в круглодонній колбі. Колбу закривали нагвинчуваною кришкою, колбу вакуумували (і заповнювали азотом (цей процес повторювали З рази). Потім через шприц додавали ТНЕ (8 мл) і воду (2 мл). Суміш барботували азотом протягом 10 хвилин, і реакційну суміш витримували при 40 "С протягом 2 годин. Реакцію гасили насиченим розчином МанНсо»з (10 мл), і водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг50Ох і концентрували. Сполуку виділяли з допомогою СотрбБіБіазпйФ), з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 3-495 метанолом в ЮСМ. І 0-М5: обчислено (МАНІ 751,31, знайдено 751,84.
Х У о о о н (9) "ах ит ще м о Ч о
Н Хе й - -д о С о рос | р Н І ! Ф х 2 с Х 5 5 о
У он
До розчину Сполуки 1 (0,50 г, 0,666 ммоль, 1 екв.) в етилацетаті (10 мл) при кімнатній температурі додавали 10 95 Ра/С (100 мг). Реакційну суміш колбу вакуумували і заповнювали воднем (цей процес повторювали З рази.) Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ночі. Каталізатор видаляли фільтрацією через Сеїїеєф), і продукт виділяли з допомогою СотрбігРіазНФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 5 95 метанолом в ОСМІ С-Мо: обчислено (М--НІ-- 661,26, знайдено 661,73.
і
Н Н
М р М о Мах р М о
Н | Н - о о М3-РЕС5-То5 -д о о
ЩФ Св,сО, Ще 1 2
ОЗ Фо
З з он ши ит от ит
До розчину Сполуки 1 (130 мг, 0,196 ммоль, 1 екв.) і азидо-РЕСь-ОТ5 (164 мг, 0,393 ммоль, 2 екв.) в безводному ЮМЕ (2 мл) при кімнатній температурі додавали С52СОз (128 мг, 0,393 ммоль, 2 екв.). Реакційну суміш перемішували протягом З годин при 40 "С. Реакцію гасили насиченим розчином МанНсСоО»з (10 мл) і водний шар екстрагували етилацетатом (3 х 5 мл).
Органічні фази об'єднували, сушили над Маг25О4 і концентрували. Продукт очищали з допомогою СотрівРіазнФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 3-4 95 метанолом в ОСМ. Вихід становив 82 9». І! С-М5: обчислено (М--НІ- 906,40, знайдено 906,95. о о хх ит ще с рак М он
М о о М о о
Щі пон і
ТЕА
Ф Х ТРА х
З 8
Щи ит ит МИ ут ит ото 1 Структура 176
До розчину Сполуки 1 (147 мг, 0,162 ммоль, 1,0 екв.) в ТНЕ (2 мл) і воді (2 мл) при кімнатній температурі додавали гідроксид літію (12 мг, 0,486 ммоль, 3,0 екв.). Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще 1 години. рН доводили до 3,0 з допомогою НІ (6 Н), і водну фазу екстрагували ЕТОАс (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Ма250Ох і концентрували. До залишку додавали ТЕА (2 мл) і ОСМ (2 мл) і суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще З годин. Розчинник видаляли за допомогою роторного випарника, і продукт виділяли з допомогою СотріБіазпФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази. І! С-М5: обчислено ІМ--НІ|-- 792,33, знайдено 792,89.
Синтез Структури 186 ((5)-3-(4-(6-(14-азидо-3,6,9,12-тетраоксатетрадецил)окси)нафталін-2- ілуфеніл)-3-(2-(4-((4-метилпіридин-2-іл)аміно)бутанамідо)ацетамідо)пропанова кислота)
о, о но он о о, ре о Ї ХУ АД ои о
М АД КМ о ФІ | РА г о о йАго й й о о в
ХРноз Ра 62 вг ; ОН КоРО, Ф он
Сполуку 1 (150 мг, 0,253 ммоль, 1,0 екв.), Сполуку 2 (71,5 мг, 0,380 ммоль, 1,5 екв.), ХРпо5 ра с2 (4 мг, 0,0051 ммоль, 0,02 екв.) і КзРОї (107 мг, 0,507 ммоль, 2,0 екв.) змішували в круглодонній колбі. Колбу закривали нагвинчуваною кришкою, колбу вакуумували і заповнювали азотом (цей процес повторювали З рази). Потім через шприц додавали ТНЕ (5 мл) і воду (1 мл). Суміш барботували азотом протягом 10 хвилин, і реакційну суміш витримували при 40"С протягом 2 годин. Реакцію гасили водою (10 мл), і водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Ма5Ох і концентрували.
Сполуку виділяли з допомогою СотрбіРІазНФ), з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 2-3 95 метанолом в ОСМ. І С-М5: обчислено ІМ--НІ- 655,31, знайдено 655,87.
І ва
ВИШ Ї н й кит о "ах кити о і | і - о о М3-РЕСБ5-Тов5 - о о ша Ф он Ми ит ит
До розчину Сполуки 1 (160 мг, 0,244 ммоль, 1 екв.) і азидо-РЕС5-ОТз5 (204 мг, 0,488 ммоль, 2 екв.) в безводному ЮМЕ (2 мл) при кімнатній температурі додавали С52СОз3 (160 мг, 0,488 ммоль, 2 екв.). Реакційну суміш перемішували протягом З годин при 60 "С. Реакцію гасили насиченим розчином МанНсСО»з (10 мл) і водний шар екстрагували етилацетатом (З х 5 мл).
Органічні фази об'єднували, сушили над Маг25О4 і концентрували. Продукт очищали з допомогою СотрівРіазнФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 3-4 95 метанолом в ОСМ. Вихід становив 30 9». І! С-Ме: обчислено (М--НІ- 900,44, знайдено 901,01.
о
Нн Н Нн й мання о й ит о
Ой й - о о - о о пон ре - ВО
Мо ут у ит уитюто ми ит ит 1
До розчину Сполуки 1 (67 мг, 0,0744 ммоль, 1,0 екв.) в ТНЕ (2 мл) і воді (2 мл) при кімнатній температурі додавали гідроксид літію (5 мг, 0,223 ммоль, 3,0 екв.). Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще 1 години. рН доводили до 3,0 з допомогою НСІ (6 Н), і водну фазу екстрагували ЕТОАс (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Ма250Ох і концентрували. До залишку додавали ТЕА (2 мл) і ОСМ (2 мл), і суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще З годин. Розчинник видаляли за допомогою роторного випарника, і продукт виділяли з допомогою СотріБіазпФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 1095 метанолом в ЮСМ. | С-М5: обчислено (МАНІ. 786,37, знайдено 786,86.
Синтез Структури 196 ((5)-3-(3-(6-(14-азидо-3,6,9,12-тетраоксатетрадецил)окси)нафталін-2- ілуфеніл)-3-(2-(4-((4-метилпіридин-2-іл)аміно)бутанамідо)ацетамідо)пропанова кислота) і о ва с і і ТТ Х и о Но. ди ОН хх кити о
ТО, -о С я ХРпоз5 Ра с2
Вг | б А он
Сполуку 1 (150 мг, 0,253 ммоль, 1,0 екв.), Сполуку 2 (71,5 мг, 0,380 ммоль, 1,5 екв.), ХРпо5 ра с2 (4 мг, 0,0051 ммоль, 0,02 екв.) і КзРОї (107 мг, 0,507 ммоль, 2,0 екв.) змішували в круглодонній колбі. Колбу закривали нагвинчуваною кришкою, колбу вакуумували (і заповнювали азотом (цей процес повторювали З рази). Потім ТНЕ (5мл) і воду (1 мл) за допомогою шприца. Суміш барботували азотом протягом 10 хвилин, і реакційну суміш витримували при 40 С протягом 2 годин. Реакцію гасили водою (10 мл), і водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг5Ох і концентрували. Сполуку виділяли з допомогою СотрбіБІіазйФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 2-3 95 метанолом в ЮСМ. | С-М8: обчислено |М-НІ. 655,31, знайдено 655,78.
о а а її Н хо АД М о
З и о йо є дк н | | М3-РЕСБ5-Тов д" о о ія Св,СО,
С ве 8 ; он пари
До розчину Сполуки 1 (104 мг, 0,158 ммоль, 1 екв.) і азидо-РЕС5-ОТз5 (132 мг, 0,317 ммоль, 2 екв.) в безводному ЮМЕ (2 мл) при кімнатній температурі додавали С52СОз (103 мг, 0,317 ммоль, 2 екв.). Реакційну суміш перемішували протягом З годин при 60 "С. Реакцію гасили насиченим розчином МанНсСоО»з (10 мл) і водний шар екстрагували етилацетатом (З х 5 мл).
Органічні фази об'єднували, сушили над Маг25О4 і концентрували. Продукт очищали з допомогою СотрівРіазнФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 3-4 95 метанолом в ОСМ. І. С-М5: обчислено |М.-НІ-- 900,44, знайдено 901,01. о
М К о ки ЖД М о - же єрре сесу ї
М о о де о о і пон і
ТРА о о норку рр норку рр 1 Структура 196
До розчину Сполуки 1 (125 мг, 0,138 ммоль, 1,0 екв.) в ТНЕ (2 мл) і воді (2 мл) при кімнатній температурі додавали гідроксид літію (10 мг, 0,416 ммоль, 3,0 екв.). Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще 1 години. рН доводили до 3,0 з допомогою НСІ (6 Н), і водну фазу екстрагували ЕТОАс (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Ма250Ох і концентрували. До залишку додавали ТЕА (4 мл) і ОСМ (2 мл) і суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще З годин. Розчинник видаляли за допомогою роторного випарника, продукт виділяли з допомогою СотріБІа5йФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 1295 метанолом в ЮСМ. Ї0-М5: обчислено (МАНІ. 786,37, знайдено 786,86.
Синтез Структури 206р ((5)-3-(3-(4-(14-азидо-3,6,9,12-тетраоксатетрадецил)окси)нафталін-1- ілуфеніл)-3-(2-(4-((4-метилпіридин-2-іл)аміно)бутанамідо)ацетамідо)пропанова кислота)
З о а й ки о хви ОО г т
Н ДА о о ух о о , ві І Ффф ХРпоз Ра 652 ія Фф
Вг КоРО, (Я ' он он 2
Сполуку 1 (150 мг, 0,253 ммоль, 1,0 екв.), Сполуку 2 (102 мг, 0,380 ммоль, 1,5 екв.), ХРпо5 ра с2 (4 мг, 0,0051 ммоль, 0,02 екв.) і КзРОї (107 мг, 0,507 ммоль, 2,0 екв.) змішували в круглодонній колбі. Колбу закривали нагвинчуваною кришкою, колбу вакуумували (і заповнювали азотом (цей процес повторювали З рази). Потім через шприц додавали ТНЕ (5 мл) і воду (1 мл). Суміш барботували азотом протягом 10 хвилин, і реакційну суміш витримували при 40"С протягом 2 годин. Реакцію гасили водою (10 мл), і водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Ма5Ох і концентрували.
Сполуку виділяли з допомогою СотрбінБІазнО), з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 2-3 95 метанолом в ОСМ. І С-М5: обчислено ІМ--НІ- 655,31, знайдено 655,78. а
Н Н т силу о марЕввтов те биті й н т н
М о о СвСО, ДА о о
СХ б
Ф Ф он о пи
До розчину Сполуки 1 (160 мг, 0,244 ммоль, 1 екв.) і азидо-РЕС5-ОТз5 (204 мг, 0,488 ммоль, 2 екв.) в безводному ЮМЕ (2 мл) при кімнатній температурі додавали С52СОз3 (159 мг, 0,488 ммоль, 2 екв.). Реакційну суміш перемішували протягом З годин при 60 "С. Реакцію гасили насиченим розчином МанНсСоО»з (10 мл) і водний шар екстрагували етилацетатом (З х 5 мл).
Органічні фази об'єднували, сушили над Маг25О4 і концентрували. Продукт очищали з допомогою СотрівРіазНйФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 3-4 95 метанолом в ОСМ. І. С-М5: обчислено |М.-НІ-- 900,44, знайдено 901,01. «Ж о о
Н Н
Хе кит о Ех ит он н | н
М о о пон ли о о
СОС ве ія ТЕА (Я о о поро ув рн пи 1 Структура 206
До розчину Сполуки 1 (125 мг, 0,138 ммоль, 1,0 екв.) в ТНЕ (2 мл) і воді (2 мл) при кімнатній температурі додавали гідроксид літію (10 мг, 0,416 ммоль, 3,0 екв.). Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще 1 години. рН доводили до 3,0 з допомогою НСІ (6 Н), і водну фазу екстрагували ЕТОАс (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Ма250Ох і концентрували. До залишку додавали ТЕА (4 мл) і ОСМ (2 мл), і суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще З годин. Розчинник видаляли на роторном випарнику, і продукт виділяли з допомогою СотрбіРїІазпФ), з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 8-12 95 метанолом в ОСМ. І С-Мо5: обчислено (МАНІ 786,37, знайдено 786,86.
Синтез Структури 226р ((5)-3-(4-(4-((14-азидо-3,6,9,12-тетраоксатетрадецил)окси)нафталін-1- ілуфеніл)-3-((5)-2-(4-(4-метилпіридин-2-іл)яаміно)бутанамідо)пропанамідо)пропанова кислота)
ва р о в) 6)
АД ОМЕ, твти 5 о те " си Ж
ОІЕА М о йо о 7 б 7
М Н
- дк о
Сполука 1 Сполука 2
До розчину Сполуки 1 (250 мг, 0,85 ммоль), гідрохлориду метилового ефіру І -аланіну (130 мг, 0,93 ммоль) і ТВТИ (327 мг, 1,02 ммоль) в ОМЕ (2 мл) при 0 "С додавали ОІРЕА (329 мг, 444 мкл, 2,55 ммоль). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом 1 години. Реакцію гасили насиченим розчином МанНсСОз. Додавали розчин МНАСІ (водн.) (0,75 мл) і деіонізовану воду (1 мл), а потім екстрагували етилацетатом (3 мл). Водний шар додатково екстрагували етилацетатом (2 х З мл). Об'єднану органічну фазу промивали насиченим сольовим розчином МанНсСоОз (водн.) (2 мл). Органічний шар сушили над Ма»5Ох, фільтрували і концентрували. Неочищену суміш розділяли з допомогою СотрігБіа5НФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 0-595 метанолом в ОСМ. Вихід сполуки 2: 294 мг (91 95). (МАНІ обчислено для СтоНгоМзО5: 380,46; знайдено 380,33. о о о р 5 о пон Б о хи Ж о хх о т ТНЕ/НО КУ а
Н Н др о С о
Соединение ? Соединение З
До розчину Сполуки 2 (294 мг, 0,77 ммоль) в ТНЕ (4,5 мл) і деіонізованій воді (З мл) при 07 С додавали розчин гідроксиду літію (56 мг, 2,32 ммоль) в деіонізованій воді (1 мл). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом 40 хвилин. Реакційну суміш підкислювали 6 М НСЇ (водн.) до рН 3. Водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 10 мл).
Об'єднану органічну фазу сушили над Маг5О:4, фільтрували і концентрували. Сполуку З використали далі без додаткового очищення. Вихід сполуки 3: 267 мг (94 95). Обчислено для
СівНа7МзО5: 366,43, знайдено: 366,19. «нм о а 5 2 о ж о с Сполука За ж ки о ло Н ЇЇ І
Б ; ОО о
ОМЕ, ТВТО
ЧЧДхХ у ПІЕА Сполука 4 ОН
М о
Сполука З
До розчину Сполуки З (267 мг, 0,73 ммоль), Сполуки За (288 мг, 0,80 ммоль) і ТВТИи (282 мг, 0,88 ммоль) в ОМЕ (З мл) при 0 "С додавали ОІРЕА (283 мг, 382 мкл, 2,19 ммоль). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом 1 години. Реакційну суміш гасили насиченим водним розчином Мансо»з (1,5 мл). Додавали деїіонізовану воду (1,5 мл), а потім екстрагували етилацетатом (12 мл). Водний шар додатково екстрагували етилацетатом (2 х 12 мл). Об'єднану органічну фазу промивали напівнасиченим водним розчином МНАСІ (10 мл), напівнасиченим водним розчином МаНсоз (10 мл) і насиченим водним розчином Масі (10 мл).
Органічний шар сушили над Маг50О», фільтрували і концентрували. Неочищену суміш розділяли з допомогою СотрбіРіазпФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 0-5 95 метанолом в ОСМ. Вихід сполуки 4: 342 мг (70 95). МАНІ обчислено для СзвіНлаМаО;: 669,79, знайдено: 669,74. « Ба о н хх КАХ о ОМЕ чер о ----- Н
ЛО ЩО у ве а
Сполука 4 С С іа мит ит и и
Сполука 5
До розчину Сполуки 4 (150 мг, 0,22 ммоль) і азидо-РЕС5-ОТ5 (187 мг, 0,49 ммоль) в безводному ОМЕ (1,2 мл) додавали С52С0О3з (146 мг, 0,49 ммоль). Реакційну суміш перемішували при 60 "С протягом З годин. Реакційну суміш гасили насиченим водним розчином
Мансо:з (10 мл) і додавали деїіонізовану воду (5 мл), а потім екстрагували етилацетатом (7,5 мл). Водний шар додатково екстрагували етилацетатом (2 х 7,5 мл). Об'єднану органічну фазу сушили над Ма»5О»4, фільтрували і концентрували. Неочищену суміш розділяли з допомогою
СотрбігРіІа5нФ), з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 0-4 95 метанолом в
ОСМ. Вихід сполуки 5: 142 мг (69 95). Обчислено для СавНезіМ7Оч1: 915,06, знайдено: 914,96. г о н о
М М о н н йо си - хх ку он - ? 9 і. ПОН, ТНЕ/НО М о о
Її. ТРА Фф
С со
Мити ит и ит а а а а
Сполука 5 Сполука 225
До розчину Сполуки 5 (142 мг, 0,16 ммоль) в ТНЕ (2 мл) і деіонізованій воді (1,5 мл) при 07 додавали розчин гідроксиду літію (11 мг, 0,47 ммоль) в деїіонізованій воді (0,5 мл). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом 1 години. Реакційну суміш підкислювали 6 М НСЇІ (водн.) до рН 3. Водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 8 мл).
Об'єднану органічну фазу сушили над Маг5О», фільтрували і концентрували. До неочищеного залишку додавали ТЕА (2,0 мл) і воду (100 мкл). Реакційну суміш перемішували протягом 1,5 годин при кімнатній температурі. Розчинник видаляли при зниженому тиску, і залишок піддавали спільному випаровуванню зі сумішшю ацетонітрил:толуол (|1:1)| (2 х 20 мл).
Неочищену суміш розділяли з допомогою СотбБіБіазйФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 0-13 956 метанолом в ОСМ. Вихід Структури 22р: 100 мг (80 95).
ІМ-АНІ обчислено для Са2Н5зіМ7О»: 800,92, знайдено: 800,81.
Синтез Структури 2360 ((5)-3-(4-(4-((14-азидо-3,6,9,12-тетраоксатетрадецил)окси)нафталін-1- ілуфеніл)-3-((5)-3-метил-2-(4-((4-метилпіридин-2-іл)яаміно)бутанамідо)бутанамідо)пропанова кислота) що р о о о о
ОМЕ, ТВТи
ТАК АД, ху он ОІЕА | ж. М -
Н др дум о
Б Сполука 1 Сполука 2
До розчину Сполуки 1 (250 мг, 0,85 ммоль), гідрохлориду метилового ефіру І -валина (157 мг, 0,93 ммоль) і ТВТИ (327 мг, 1,02 ммоль) в ОМЕ (2 мл) при 0 "С додавали ОІРЕА (329 мг, 444 мкл, 2,55 ммоль). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом 1 години. Реакцію гасили насиченим розчином МансСоОз. Реакцію гасили додаванням водного розчину МНАСІ (0,75 мл), додавали деїіонізовану воду (1 мл) і потім екстрагували етилацетатом (З мл). Водний шар додатково екстрагували етилацетатом (2 х З мл). Об'єднану органічну фазу промивали насиченим водним розчином МанНсоОз (2 мл). Органічний шар сушили над Ма5О, фільтрували і концентрували. Неочищену суміш розділяли з допомогою СотріБіа5НФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 0-595 метанолом в ОСМ. Вихід сполуки 2: 297 мг (86 95). Обчислено для СгіНззМзО5: 408,51, знайдено: 407,87. о 2 о о Ре
МАХ пон зу ?
М о -- - - юю а М 7-00 тТНвНО жу ки Ж он
Фі "й | ! - М о
Сполука 2 Сполука З
До розчину Сполуки 2 (297 мг, 0,73 ммоль) в ТНЕ (4,5 мл) і деіонізованій воді (З мл) при 0 "С додавали розчин гідроксиду літію (52 мг, 2,19 ммоль) в деіонізованій воді (1 мл). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом 40 хвилин. Реакційну суміш підкислювали М НСЇІ (водн.) до рН 3-6. Водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 10 мл).
Об'єднану органічну фазу сушили над Маг5О:4, фільтрували і концентрували. Сполуку З використовували без додаткового очищення з виходом 100 95. Обчислено для СгоНзіМзОб5: 394,49, знайдено 393,83.
НМ о
С
Ї ж
У щ о н
А СА щ нН
А Є! Дт
ОМЕ, ТВТО м -- др о
Сполука 4
Сполука З он
До розчину Сполуки З (287 мг, 0,73 ммоль), сполуки За (287 мг, 0,80 ммоль) і ТВТИ (281 мг, 0,88 ммоль) в ОМЕ (3 мл) додавали ОІРЕА (283 мг, 382 мкл, 2,19 ммоль) при 0" С. Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом 1 години. Реакційну суміш гасили насиченим розчином МНАСІ (водн.), додавали деіонізовану воду (2,5 мл), а потім екстрагували етилацетатом (12 мл). Водний шар додатково екстрагували етилацетатом (2 х 12 мл). Об'єднану органічну фазу промивали напівнасиченим розчином МНАСІ (водн.) (10 мл), напівнасиченим розчином МанНсоз (водн.) (10 мл) і насиченим розчином Масі (водн.) (10 мл).
Органічний шар сушили над Маг50О», фільтрували і концентрували. Неочищену суміш розділяли з допомогою СотрбіРіазпФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 0-5 95 метанолом в ОСМ. Вихід сполуки 4: 374 мг (74 95). Обчислено для СлоНавМаО;: 697,84, знайдено: 697,46.
Н о
Н зо» дм о Ф о Ме РЕСтв в Н Її ЇЇ п он Мити биту и
Сполука 5
До розчину Сполуки 4 (150 мг, 0,215 ммоль) і азидо-РЕС5-ОТ5 (180 мг, 0,43 ммоль) в безводному ОМЕ (1,2 мл) додавали С52С0О3з (140 мг, 0,43 ммоль). Реакційну суміш перемішували при 60 "С протягом З годин. Реакційну суміш гасили насиченим розчином
МанНсСоОз (водн.) (10 мл). Добавлялии деіонізовану воду (5 мл), а потім екстрагували етилацетатом (7,5 мл). Водний шар додатково екстрагували етилацетатом (2 х 7,5 мл).
Об'єднану органічну фазу сушили над Маг5О», фільтрували і концентрували. Неочищену суміш розділяли з допомогою СотрБріБіазпФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 0-4 95 метанолом в ЮОСМ. Вихід сполуки 5: 134 мг (66 95). МАНІ обчислено для
СвоНе?М7Оч1: 943,12, знайдено: 942,96. с о о з Ї о сх ААХИ он
ЩІ Н де" о о ї. ПОН, ТНЕ/НО ло о о і ї. ТА Ф 5-5 оо мит у ит и ит, Мити ит уки,
Сполука 5 Сполука 235
До розчину Сполуки 5 (134 мг, 0,14 ммоль) в ТНЕ (2 мл) і деіонізованій воді (1,5 мл) при 07 додавали розчин гідроксиду літію (10 мг, 0,43 ммоль) в деіонізованій воді (0,5 мл). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом 1 години. Реакційну суміш підкислювали 6 М НСЇІ (водн.) до рН 3. Водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 8 мл).
Об'єднану органічну фазу сушили над Маг5О», фільтрували і концентрували. До неочищеного залишку додавали ТЕА (1,9 мл) і воду (95 мкл). Реакційну суміш перемішували протягом 1,5 годин при кімнатній температурі. Розчинник видаляли при зниженому тиску, і залишок піддавали спільному випаровуванню зі сумішшю ацетонітрил:толуол (|1:1)| (2 х 20 мл).
Неочищену суміш розділяли з допомогою СотбБіБіазпФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 0-10 956 метанолом в ОСМ. Вихід Структури 23р: 36 мг (30,5 95).
ІМ-АНІ обчислено для С44Н57М709: 828,97, знайдено 828,90.
Синтез Структури 246р ((5)-3-(4-(4-((14-азидо-3,6,9,12-тетраоксатетрадецил)окси)нафталін-1- ілуфеніл)-3-((5)-2-(4-(4-метилпіридин-2-іл)яаміно)бутанамідо)-3-фенілпропанамідо)пропанова кислота) 5 в - он о о
М г й о. твту ж о о -сеНнУМ пит о о ОІРЕА с и Ж, о о | Н 1 2 М о
До розчину Сполуки 1 (200 мг, 0,679 ммоль, 1 екв.), сполуки 2 (161 мг, 0,747 ммоль, 1,2 екв.) і ТвтТИ (261 мг, 0,815 ммоль, 1,2 екв.) в безводному ЮОМЕ (4 мл) при 0"С додавали дізопропілетиламін (0,355 мл, 2,038 ммоль, З екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом ще 1 години. Реакцію гасили насиченим розчином
МансСоОз (10 мл), і водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг5Ох і концентрували. Продукт відділяли з допомогою СотрбівІазиФ), з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 2-3 96 метанолом в ОСМ. І С-М5: обчислено (МАНІ 456,24, знайдено 456,12. о о о ре 5 9 ПОН 5 о ---3
Те о б Б и що ! | !
М о М о 1
До розчину Сполуки 1 (300 мг, 0,658 ммоль, 1 екв.) в ТНЕ (5 мл) і НгО (5 мл) при 0" додавали гідроксид літію (47 мг, 1,975 ммоль, З екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури. Після перемішування при кімнатній температурі протягом 1 години реакційну суміш підкислювали НСІ (6 Н) до рН 3,0. Водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 10 мл), органічні шари об'єднували, сушили над Маг505 і концентрували. Продукт використовували без додаткового очищення. І С-Мо: обчислено (МАНІ 442,23, знайдено 442,08. «сном о у
Я | щ о і ІЙ нова Мч сх и он тв, М о о бро ОО О
ЕМ о 1 он 2-х он
До розчину Сполуки 1 (290 мг, 0,656 ммоль, 1 екв.), Сполуки 2 (258 мг, 0,722 ммоль, 1,1 екв.) і ТвтТИ (253 мг, 0,788 ммоль, 1,2 екв.) в безводному ЮМЕ (5 мл) при 0"С додавали дізопропілетиламін (0,343 мл, 1,970 ммоль, З екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом ще 1 години. Реакцію гасили насиченим розчином
МансСоОз (10 мл), і водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг50Ох і концентрували. Продукт виділяли з допомогою СотрбівїІазНФ), з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 3-4 95 метанолом в ОСМ. І С-М5: обчислено (МАНІ. 745,35, знайдено 745,63. гі з
Н Н
ХУ ки М о МЗ-РЕСБ-То5 ху и М о
М о | о С8,сО, ДА о | о
СОЯ СЯ он мити отит ото
До розчину Сполуки 1 (113 мг, 0,151 ммоль, 1 екв.) і азидо-РЕС5-ОТз5 (126 мг, 0,303 ммоль, 2 екв.) в безводному ОМЕ (2 мл) при кімнатній температурі додавали С52СОз (99 мг, 0,303 ммоль, 2 екв.). Реакційну суміш перемішували протягом З годин при 40 "С. Реакцію гасили насиченим розчином МанНсоз (10 мл), і водний шар екстрагували етилацетатом (З х 5 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг5О і концентрували. Продукт очищали з допомогою СотрбіБІазНФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 3-4 95 метанолом в ОСМ. І С-М5: обчислено (МАНІ 990,49, знайдено 990,87. о о с» ко, М о. и КМ он
М о о пон в " о о і ТЕА фі
С Ії мити ит ин ит и кити 1 Структура 240
До розчину Сполуки 1 (140 мг, 0,141 ммоль, 1,0 екв.) в ТНЕ (2 мл) і воді (2 мл) при кімнатній температурі додавали гідроксид літію (10 мг, 0,424 ммоль, 3,0 екв.). Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще 1 години. рН доводили до 3,0 з допомогою НСІ (6 Н), і водну фазу екстрагували ЕТОАс (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Ма250Ох і концентрували. До залишку додавали ТЕА (4 мл) і ОСМ (2 мл), і суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще З годин. Розчинник видаляли за допомогою роторного випарника, і продукт виділяли з допомогою СотріБіазпФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 6-10 95 метанолом в ЮОСМ. І С-М5: обчислено ІМаАНІ|.- 876,42, знайдено 876,88.
Синтез Структури 256 ((5)-3-(4-(4-((14-азидо-3,6,9,12-тетраоксатетрадецил)окси)нафталін-1- іл)феніл)-3-((5)-3-(бензилокси)-2-(4-((4-метилпіридин-2- іл)яаміно)бутанамідо)пропанамідо)пропанова кислота)
хх сх ам - он о о о
М М твти о о о З | хх М т
Я- 1 2 М о
До розчину Сполуки 1 (100 мг, 0,339 ммоль, 1 екв.), Сполуки 2 (92 мг, 0,373 ммоль, 1,1 екв.) і
ТВТО (131 мг, 0,407 ммоль, 1,2 екв.) в безводному ЮОМЕ (4 мл) при 0 "С додавали дізопропілетиламін (0,178 мл, 1,019 ммоль, З екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом ще 1 години. Реакцію гасили насиченим розчином
МансСоОз (10 мл), і водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг50Ох і концентрували. Продукт виділяли з допомогою СотрбігіІазНФ), з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 2-4 95 метанолом в ОСМ. І С-М5: обчислено (МАНІ 486,25, знайдено 486,37. о ре о 5 о о о
А пон 5 о м о -- 7 й ки Ж он пов я
М о 1 М о
До розчину Сполуки 1 (160 мг, 0,329 ммоль, 1 екв.) в ТНЕ (5 мл) і НгО (5 мл) при 0" додавали гідроксид літію (23 мг, 0,988 ммоль, З екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури. Після перемішування при кімнатній температурі протягом 1 години реакційну суміш підкислювали НС (6 Н) до рН 3,0. Водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 10 мл), органічні шари об'єднували, сушили над Маг505 і концентрували. Продукт використовували без додаткового очищення. І С-Мо: обчислено (МАНІ 472,24, знайдено 472,32. «сен о и лі да Ус о щи сі ХУ САДИ о в си СЯ твту - о о
У САДАХ Фо ПІРЕА ФІ й о ' он
Фо он
До розчину Сполуки 1 (1600 мг, 0,339 ммоль, 1 екв.), Сполуки 2 (133 мг, 0,373 ммоль, 1,1 екв.) Її ТВТО (130 мг, 0,815 ммоль, 1,2 екв.) в безводному ЮОМЕ (3 мл) при 0 "С додавали дізопропілетиламін (0,177 мл, 1,018 ммоль, З екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом ще 1 години. Реакцію гасили насиченим розчином
МансСоОз (10 мл), і водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг50Ох і концентрували. Продукт виділяли з допомогою СотрбівїІазНФ), з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 2-3 96 метанолом в ОСМ. І С-М5: обчислено (МАНІ. 775,36, знайдено 775,87.
ой о о йо ай о о н в ки м о щх ки М о н М3-РЕСБ-Тов | н
М о | о сво, ДА о | о 0 С он шити ит
До розчину Сполуки 1 (140 мг, 0,180 ммоль, 1 екв.) і азидо-РЕС5-ОТз5 (150 мг, 0,361 ммоль, 2 екв.) в безводному ЮМЕ (2 мл) при кімнатній температурі додавали С52СОз3 (117 мг, 0,361 ммоль, 2 екв.). Реакційну суміш перемішували протягом З годин при 40 "С. Реакцію гасили насиченим розчином МанНсСоОз (10 мл), і водний шар екстрагували етилацетатом (З х 5 мл).
Органічні фази об'єднували, сушили над Маг25О4 і концентрували. Продукт очищали з допомогою СотрівРіазнФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 3-4 95 метанолом в ОСМ. І С-М5: обчислено |М.-НІ- 1020,50, знайдено 1020,88. йо ай о о ой о о
М о о 8 о о пон
Я СА
ТЕА ми ит ит ми ит ит 1 Структура 25р
До розчину Сполуки 1 (170 мг, 0,166 ммоль, 1,0 екв.) в ТНЕ (2 мл) і воді (2 мл) при кімнатній температурі додавали гідроксид літію (12 мг, 0,499 ммоль, 3,0 екв.). Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще 1 години. рН доводили до 3,0 з допомогою НСІ (6 Н), і водну фазу екстрагували ЕТОАс (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Ма250Ох і концентрували. До залишку додавали ТЕА (4 мл) і ОСМ (2 мл), і суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще З годин. Розчинник видаляли за допомогою роторного випарника, і продукт виділяли з допомогою СотріБіазпФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 6-10 95 метанолом в ЮОСМ. І С-М5: обчислено |ІМеНІ|.- 906,43, знайдено 906,95.
Синтез Структури ((5)-3-(3-(4-(14-азидо-3,6,9,12-тетраоксатетрадецил)окси)-3,5-диметил- 1Н-піразол-1-іл)феніл)-3-(2-(4-((4-метилпіридин-2-іл)аміно)бутанамідо)дацетамідо)пропанова кислота)
о М он Ч р й г о о о Ме! о о -- 3» косо,
Вг Вг 1
До розчину Сполуки 1 (3,0 г, 8,71 ммоль, 1 екв.) і карбонату калію (1,806 г, 13,073 ммоль, 1,5 екв.) в безводному ЮОМЕ (10 мл) при кімнатній температурі додавали метилийодид (1,085 мл, 17,431 ммоль, 2,0 екв.). Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 1 години. Потім реакцію гасили водою (20 мл), і водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над безводним Маг5О4 і концентрували. Продукт розділяли за допомогою СотрБіБІіазпФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 15 95 етилацетатом в гексані. Ї С-М5: обчислено ІМ.-АНІ- 358,06, знайдено 358,15. о М о
Н - Ве г о ОЗ косо, Кр з
У СеНувМ. о о о о й ----- 25- о к-х
Вг ш- 2 й
Суміш Сполуки 1 (200 мг, 0,558 ммоль, 1 екв.), Сполуки 2 (169 мг, 0,837 ммоль, 1,5 екв.), йодида міді (І) (106 мг, 0,558 ммоль, 1,0 екв.), карбонату калію (154 мг, 1,116 ммоль, 2,0 екв.) і транс-М, М'-диметилциклогексан-1,2-діаміну (88 мкл, 0,558 ммоль, 1,0 екв.) в безводному ОМЕ (5 мл) продували азотом три рази. Суміш перемішували при 120 "С протягом 24 годин. Суміш охолоджували до кімнатної температури і концентрували. Продукт розділяли за допомогою
СотбрігРіа5нФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 30-40 95 етилацетатом в гексані. | С-Ме: обчислено ІМ--НІ|-- 480,24, знайдено 480,43.
Н оре сн итчуием, о о
НС о --3 м М іх Мт Х ш-- -. о о ' З
Сполуку 1 (30 мг, 0,0626 ммоль, 1,0 екв.) охолоджували на крижаній бані. У колбу додавали
НСІ в діоксані (0,313 мл, 1,25 ммоль, 20 екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом ще 1 години. Розчинник видалили за допомогою роторного випарника, і продукт використовували далі без додаткового очищення. ІС-М5: обчислено (МАНІ. 380,19, знайдено 380,33. «сНнУМ о З Х ц о о М М о р он о Н о р твти о о
Н я - й -ьь о ек ОПІРЕА их 2-М 1 - ях о о
До розчину Сполуки 1 (10 мг, 0,0571 ммоль, 1 екв.), Сполуки 2 (26 мг, 0,0628 ммоль, 1,1 екв.) і ТвтТИ (22 мг, 0,0685 ммоль, 1,2 екв.) в безводному ЮОМЕ (1 мл) при 0"С додавали дізопропілетиламін (0,030 мл, 0,171 ммоль, З екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом ще 1 години. Реакцію гасили насиченим розчином
Мансоз (5 мл), і водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 5 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг5О:4 і концентрували. Продукт виділяли з допомогою СотрБіБіазпФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 3-4 95 метанолом в ОСМ. І С-М5: обчислено (МАНІ. 537,26, знайдено 537,41. й н
Н о вич о ся -
А о о о о на М
А з о о
Сполуку 1 (30 мг, 0,0626 ммоль, 1,0 екв.) охолоджували на крижаній бані. У колбу додавали
НСІ в діоксані (0,313 мл, 1,25 ммоль, 20 екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом ще 1 години. Розчинник видалили за допомогою роторного випарника, і продукт використовували далі без додаткового очищення. І С-М5: обчислено (МАНІ 437,21, знайдено 437,31.
о о о
Й ва «сіНнУМ о хх КАДАи о
А он 7 твти Фо й о о во ро. шия
М о Жо- м-7 м 1 Бе со 2 З З
До розчину Сполуки 1 (20 мг, 0,0569 ммоль, 1 екв.), Сполуки 2 (26 мг, 0,0626 ммоль, 1,1 екв.) і ТвтТИ (22 мг, 0,0683 ммоль, 1,2 екв.) в безводному ЮМЕ (2 мл) при 0"С додавали дізопропілетиламін (0,03 мл, 0,170 ммоль, З екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом ще 1 години. Реакцію гасили насиченим розчином
Мансоз (5 мл), і водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 5 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг5О:4 і концентрували. Продукт виділяли з допомогою СотрБіБіазпФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 4-5 95 метанолом в ОСМ. І С-М5: обчислено (МАНІ 713,36, знайдено 713,85. о г о ре в г й
Н Н
М М о ху си Ж М о ср т ех о о рас ЯМ о о ю- що- с що о он
До розчину Сполуки 1 (0,033 г, 0,0463 ммоль, 1 екв.) в етилацетаті (10 мл) при кімнатній температурі додавали 10 95 Ра/С (20 мг). Реакційну суміш перемішували газоподібним воднем при кімнатній температурі протягом ночі. Каталізатор видаляли фільтрацією через Сеїйеб, і продукт використовували далі без додаткового очищення. І С-М5: обчислено МАНІ». 623,31, знайдено 623,56. , ве Й ве ж о ж о
Н Н
М М о хх АЖ М о чу а
ЕМ о о МУ-РЕС5-То8 М о о
Св8сО»
Од д- шШе- дО он о о о се ин ие и
До розчину Сполуки 1 (16 мг, 0,0257 ммоль, 1 екв.) і азидо-РЕС5-ОТз5 (22 мг, 0,0514 ммоль, 2 екв.) в безводному ЮМЕ (2 мл) при кімнатній температурі додавали С52СОз3 (17 мг, 0,0514 ммоль, 2 екв.). Реакційну суміш перемішували протягом З годин при 40 "С. Реакцію гасили насиченим розчином МанНсСоО»з (10 мл) і водний шар екстрагували етилацетатом (З х 5 мл).
Органічні фази об'єднували, сушили над Маг25О4 і концентрували. Продукт очищали з допомогою СотрівРіазнФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 3-4 95 метанолом в ОСМ. І. С-М5: обчислено |М.-НІ-- 868,45, знайдено 868,96. ще о о
Н Н Н
М М о й АЖ М он у т
М о о ж о о пон - ТРА ТЕА - п с пити ит МИ тити 1 Структура 276
До розчину Сполуки 1 (5 мг, 0,0058 ммоль, 1,0 екв.) в ТНЕ (1 мл) і воді (1 мл) при кімнатній температурі додавали гідроксид літію (1 мг, 0,0346 ммоль, 6,0 екв.). Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще 1 години. рН доводили до 3,0 з допомогою НСІ (6 Н), і водну фазу екстрагували ЕТОАс (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Ма250Ох і концентрували. До залишку додавали ТЕА (1 мл) і ОСМ (1 мл), і суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще З годин. Розчинник видаляли за допомогою роторного випарника. І С-Ме: обчислено (М.--НІ|-- 754,38, знайдено 755.
Синтез Структури 2960 ((5)-3-(4-(3-(14-азидо-3,6,9,12-тетраоксатетрадецил)окси)нафталін-1- ілуфеніл)-3-(2-(4-((4-метилпіридин-2-іл)аміно)бутанамідо)ацетамідо)пропанова кислота) и о а зи Ух ХА о М М о й р о о - о о ХРПов Ра 2 доле в но ша о но
Сполуку 1 (100 мг, 0,169 ммоль, 1,0 екв.), Сполуку 2 (68 мг, 0,253 ммоль, 1,5 екв.), ХРпоз Ра 2 (3 мг, 0,0034 ммоль, 0,02 екв.) і КзРО4 (72 мг, 0,338 ммоль, 2,0 екв.) змішували в круглодонній колбі. Колбу закривали пробкою з нагвинчуваною кришкою, колбу вакуумували і заповнювали азотом (цей процес повторювали З рази). Потім через шприц додавали ТНЕ (5 мл) і воду (1 мл). Суміш барботували азотом протягом 10 хвилин, і реакційну суміш витримували при 40"С протягом 2 годин. Реакцію гасили водою (10 мл), і водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Ма5Ох і концентрували.
Сполуку розділяли з допомогою СотрбінБІазпФ), використовуючи силікагель як нерухому фазу, і елюювали 4 95 метанолом в ОСМ. І С-М5: обчислено |М--НІ- 655,31, знайдено 656.
о ре о ря ув вОш н с ки М о хх мана о во г МУ-РЕСБ-Тов | Н
М о о - - Я - - ДА о о ія С8,СО, ія
С но Фо Мити ит у то
До розчину Сполуки 1 (100 мг, 0,152 ммоль, 1 екв.) і азидо-РЕС5-ОТз5 (127 мг, 0,305 ммоль, 2 екв.) в безводному ЮМЕ (2 мл) при кімнатній температурі додавали С52СОз3 (100 мг, 0,305 ммоль, 2 екв.). Реакційну суміш перемішували протягом З годин при 40 "С. Реакцію гасили насиченим розчином МанНсСоО»з (10 мл) і водний шар екстрагували етилацетатом (З х 5 мл).
Органічні фази об'єднували, сушили над Маг25О4 і концентрували. Продукт очищали з допомогою СотрБіБіазНйФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 3-4 95 метанолом в ОСМ. І С-М5: обчислено |ІМ.-НІ-- 900,44, знайдено 901. «ХЕ о о
К Ки ЖК я
М М о М М он ше трор лоу й о о М о о пон
Я -- Ф
ТЕА
Мити ит у то Я Мити ит у то Фо 1 Структура 290
До розчину Сполуки 1 (125 мг, 0,138 ммоль, 1,0 екв.) в ТНЕ (1 мл) і воді (1 мл) при кімнатні й температурі додавали гідроксид літію (10 мг, 0,416 ммоль, 3,0 екв.). Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще 1 години. рН доводили до 3,0 з допомогою НСІ (6 Н), і водну фазу екстрагували ЕТОАс (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Ма5Ох і концентрували. До залишку додавали ТЕА (З мл) і ОСМ (2 мл), і суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще З годин. Розчинник видаляли за допомогою роторного випарника. Продукт використовували далі без додаткового очищення. | С-Ме: обчислено
ІМАНІ-- 786,37, знайдено 787.
Синтез Структури З0Б ((5)-М-(1-азидо-21-(4-(нафталін-1-ілуфеніл)-19,23-диоксо-3,6,9,12,15- пентаокса-18,22-діазатетракозан-24-іл)-4-((4-метилпіридин-2-іл)аміно)бутанамід) о о о ря гі с. н
М куті о но. ОН ект Шк он - о о РАМ о о в ХРпов5 Ра С2 в Сол О ши С
Сполуку 1 (100 мг, 0,169 ммоль, 1,0 екв.), Сполуку 2 (43 мг, 0,253 ммоль, 1,5 екв.), ХРпоз Ра 2 (3 мг, 0,0034 ммоль, 0,02 екв.) і КзРО4 (72 мг, 0,338 ммоль, 2,0 екв.) змішували в круглодонній колбі. Колбу закривали пробкою з нагвинчуваною кришкою, колбу вакуумували і заповнювали азотом (цей процес повторювали З рази). Потім через шприц додавали ТНЕ (5 мл) і воду (1 мл). Суміш барботували азотом протягом 10 хвилин, і реакційну суміш витримували при 40"С протягом 2 годин. Реакцію гасили водою (10 мл), і водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Ма5Ох і концентрували.
Сполуку виділяли з допомогою СотрбіРІазНФ), з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 3-4 95 метанолом в ОСМ. І С-М5: обчислено (М'-НІ- 639,31, знайдено 640. и о о а о я а
М М о М 5 суті шо | хх куті он
М о о о р о | о
ОК С
До розчину Сполуки 1 (90 мг, 0,140 ммоль, 1 екв.) в ТНЕ (5 мл) і НгО (5 мл) додавали гідроксид літію (10 мг, 0,422 ммоль, З екв.) при 0 "С. Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури. Після перемішування при кімнатній температурі протягом 1 години реакційну суміш підкислювали НСЇІ (6 Н) до рН 3,0. Водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 10 мл)і органічні шари об'єднували, сушили над Маг505 і концентрували. Продукт використовували без додаткового очищення. І С-Мо: обчислено (МАНІ 625,29, знайдено 625,36. и Ж М он сх тр о о о
Н я шити Ти иа Н
М о ) о З З 2
С
Н Н в, чу Мито
ПІРЕА | Н А
ДМ о о
А ; о
М о. ркуичь
До розчину Сполуки 1 (88 мг, 0,140 ммоль, 1 екв.), Сполуки 2 (48 мг, 0,154 ммоль, 1,1 екв.) і
ТВТО (54 мг, 0,169 ммоль, 1,2 екв.) в безводному ЮОМЕ (3 мл) при 0"С додавали дізопропілетиламін (0,074 мл, 0,422 ммоль, З екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом ще 1 години. Реакцію гасили насиченим розчином
МансСоОз (10 мл), і водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 5 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг50Ох і концентрували. Продукт виділяли з допомогою СотрбівїІазНФ), з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 4-6 95 метанолом в ОСМ. І С-М5: обчислено (МАНІ 913,47, знайдено 913,70.
Н Н хх кити М утча
Н А
М о о
В ош
М ро. дних 1 о
Н Н Н
У ання Мито
Нн др о о
ТЕА і ст б
ТЕА З о
Структура ЗОБ М рю. дики
До розчину Сполуки 1 (93 мг, 0,101 ммоль, 1,0 екв.) в ОСМ (2 мл) додавали ТЕА (3 мл), їі суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще З годин. Розчинник видаляли за допомогою роторного випарника, і продукт виділяли з допомогою СотрігріазпФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази. Продукт елюювали 10-1295 метанолом в дихлорметані. І С-М: обчислено ІМ--НІ-- 813,42, знайдено 813,68.
Синтез Структури З1Б ((5)-3-(4-(4-((14-азидо-3,6,9,12-тетраоксатетрадецил)окси)нафталін-1- ілуфеніл)-3-((5)-3-гідрокси-2-(4-((4-метилпіридин-2-іл)яаміно)бутанамідо)упропанамідо)пропанова кислота) о ря о і
ТА о о он о ох " ОН 00СсНУМ о В, ТА о т Н ПІРЕА | ж М - 1 2 ДК о
До розчину Сполуки 1 (150 мг, 0,509 ммоль, 1 екв.), Сполуки 2 (87 мг, 0,560 ммоль, 1,1 екв.) і
ТВТО (196 мг, 0,196 ммоль, 1,2 екв.) в безводному ЮОМЕ (3 мл) при 0 "С додавали дізопропілетиламін (0,074 мл, 0,422 ммоль, З екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом ще 1 години. Реакцію гасили насиченим розчином
МансСоОз (10 мл), і водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 5 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг50Ох і концентрували. Продукт виділяли з допомогою СотрбівїІазНФ), з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 4-6 95 метанолом в ОСМ. І С-М5: обчислено (МАНІ. 396,21, знайдено 396,17.
щи о Я он о й о он АХ
М он с р о Шон | й: м
Н М о р о 1
До розчину Сполуки 1 (196 мг, 0,495 ммоль, 1 екв.) в ТНЕ (5 мл) і НгО (5 мл) при 0" додавали гідроксид літію (35 мг, 1,486 ммоль, З екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури. Після перемішування при кімнатній температурі протягом 1 години реакційну суміш підкислювали НСЇІ (6 Н) до рН 3,0. Водну фазу екстрагували етилацетатом (З х 10 мл) і органічні шари об'єднували, сушили над Маг505 і концентрували. Продукт використовували без додаткового очищення. І С-Ме: обчислено (МАНІ 382,19, знайдено 382,13. нм о «и о он і ц бос. Шо о
Й ОІРЕА о 1 ї оо 2 он
До розчину Сполуки 1 (189 мг, 0,495 ммоль, 1 екв.), Сполуки 2 (195 мг, 0,545 ммоль, 1,1 екв.) і ТвТО (190 мг, 0,595 ммоль, 1,2 екв.) в безводному ЮОМЕ (5 мл) при 0"С додавали дізопропілетиламін (0,259 мл, 1,486 ммоль, З екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом ще 1 години. Реакцію гасили насиченим розчином
МансСоОз (10 мл), і водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг50Ох і концентрували. Продукт виділяли з допомогою СотрбівБіІазпФ), з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 4-6 95 метанолом в ОСМ. І С-М5: обчислено (МАНІ. 685,32, знайдено 685,58. йо ай о он йо ай о он
Н Н
М р М о Му и М о
Н Н
С о о М3-РЕС5-То5 ї о о
Св,СО, Ф шо СО що п и
До розчину Сполуки 1 (75 мг, 0,109 ммоль, 1 екв.) і азидо-РЕС5-ОТ5 (91 мг, 0,219 ммоль, 2 екв.) в безводному ОМЕ (2 мл) при кімнатній температурі додавали С52СОз (71 мг, 0,219 ммоль, 2 екв.). Реакційну суміш перемішували протягом ночі при 40 "С. Реакцію гасили насиченим розчином МанНсо»з (10 мл) і водний шар екстрагували етилацетатом (З х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг5О і концентрували. Продукт очищали з допомогою СотрбіБІазНФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 4 96 метанолом в ОСМ. Вихід становив 29 95. | С-М5: обчислено |М--НІ- 930,45, знайдено 930,90.
«ХЕ о он он о ха САЖА о Ех кА он й г о о й " о о
Щ пон Щі
ТЕА
ТЕА
Микити ит ит пити ит тини 1 Структура 316
До розчину Сполуки 1 (30 мг, 0,0323 ммоль, 1,0 екв.) в ТНЕ (1 мл) і воді (1 мл) при кімнатній температурі додавали гідроксид літію (2,3 мг, 0,0968 ммоль, 3,0 екв.). Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще 1 години. рН доводили до 3,0 з допомогою НСІ (6 Н), і водну фазу екстрагували ЕТОАс (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Ма250Ох і концентрували. До залишку додавали ТЕА (2 мл) і ОСМ (1 мл), і суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще З годин. Розчинник видаляли за допомогою роторного випарника, і продукт виділяли з допомогою СотріБіазпФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази. Продукт елюювали 12-15 95 метанолом в дихлорметані. ЇС-М5: обчислено
ІМ-АНІ-- 816,39, знайдено 816,92.
Синтез Структури 32р ((5)-4-(((5)-1-(4-(4-(14-азидо-3,6,9,12- тетраоксатетрадецил)окси)нафталін-1-ілуфеніл)-2-карбоксиетил)аміно)-3-(4-((4-метилпіридин-2- іл)аміно)бутанамідо)-4-оксобутанова кислота) о
Сен, о о 97 о Н
А Ф о хо о о о о о ре АХ оно з ви, о Й ПВІРЕА ос 1 я о он
До розчину Сполуки 1 (100 мг, 0,404 ммоль, 1 екв.), Сполуки 2 (160 мг, 0,444 ммоль, 1,1 екв.) і ТвТ (155 мг, 0,485 ммоль, 1,2 екв.) в безводному ЮОМЕ (2 мл) при 0"С додавали дізопропілетиламін (0,211 мл, 1,213 ммоль, З екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом ще 1 години. Реакцію гасили насиченим розчином
МансСоОз (10 мл), і водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 5 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг50Ох і концентрували. Продукт виділяли з допомогою СотрбівїІазНФ), з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 2-3 96 метанолом в ОСМ. І С-М5: обчислено (МАНІ. 551,23, знайдено 551,45.
о о о о7 о7 о М то «сн - о о на о о он он 1
Сполуку 1 (0,164 г, 0,297 ммоль, 1,0 екв.) охолоджували на крижаній бані. Додавали в колбу
НСІ в діоксані (0,745 мл, 2,978 ммоль, 10 екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом ще 1 години. Розчинник видаляли за допомогою роторного випарника і отриманий продукт використовували далі без додаткового очищення. І С-
М5: обчислено (М--НІ-- 451,18; знайдено 451,35. о я 7о ря и г 4 н Н йо ай о й ще ноша 7 о
ХУ ки я о о твту "У о о де і ПІРЕА і 1 он он 2
До розчину Сполуки 1 (100 мг, 0,404 ммоль, 1 екв.), Сполуки 2 (160 мг, 0,444 ммоль, 1,1 екв.) і ТвТ (155 мг, 0,485 ммоль, 1,2 екв.) в безводному ЮОМЕ (2 мл) при 0"С додавали дізопропілетиламін (0,211 мл, 1,213 ммоль, З екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом ще 1 години. Реакцію гасили насиченим розчином
МансСоОз (10 мл), і водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 5 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг50Ох і концентрували. Продукт виділяли з допомогою СотрбігіІазНФ), з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 3-5 95 метанолом в ОСМ. І С-М5: обчислено (МАНІ. 727,33, знайдено 727,53. щу 7о й с ва ж о о о
Н г и, І й, г ки, і о - о о (я МУ-РЕСБ5-То5 ві о о
С5СО, і
ОЗ он ши ит отити
До розчину Сполуки 1 (150 мг, 0,206 ммоль, 1 екв.) і азидо-РЕС5-ОТз5 (172 мг, 0,412 ммоль, 2 екв.) в безводному ЮМЕ (2 мл) при кімнатній температурі додавали С52СОз (134 мг, 0,412 ммоль, 2 екв.). Реакційну суміш перемішували протягом ночі при кімнатній температурі. Реакцію гасили насиченим розчином МанНсоО»з (10 мл) і водний шар екстрагували етилацетатом (З х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг5О: і концентрували. Продукт очищали з допомогою СотрБіБіазйФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 4 95 метанолом в ОСМ. Вихід становив 29 9». І! С-М5: обчислено (МАНІ 940,45, знайдено 940,71. щи он он о о ж о о о о не САД о. - САДКУ он й о о й о о
ОЗ. С
ТЕА
СО ОЗ
Микити ит ли и а в 1 Структура 326
До розчину Сполуки 1 (30 мг, 0,0344 ммоль, 1,0 екв.) в ТНЕ (1 мл) і воді (1 мл) при кімнатній температурі додавали гідроксид літію (2,5 мг, 0,103 ммоль, 3,0 екв.). Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще 1 години. рН доводили до 3,0 з допомогою НСІ (6 Н), і водну фазу екстрагували ЕТОАс (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Ма250Ох і концентрували. До залишку додавали ТЕА (2 мл) і ОСМ (1 мл), і суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще З годин. Розчинник видаляли за допомогою роторного випарника, і продукт виділяли з допомогою СотріБіазпФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази. Продукт елюювали 20 95 метанолом в дихлорметані. І С-М5: обчислено (МАНІ 844,38, знайдено 844,56.
Синтез Структури з3р ((5)-3-(5)-6-аміно-2-(4-((4-метилпіридин-2- іл)аміно)бутанамідо)гексанамідо)-3-(4-(4-(14-азидо-3,6,9,12- тетраоксатетрадецил)окси)нафталін-1-іл)феніл)пропанова кислота) о , ЖЖ щи дО щи а ва г Ї у. як Оу г о й" ' -стнМ о о 2
До розчину Сполуки 1 (150 мг, 0,509 ммоль, 1 екв.), Сполуки 2 (166 мг, 0,560 ммоль, 1,1 екв.) і ТвТИО (196 мг, 0,611 ммоль, 1,2 екв.) в безводному ЮОМЕ (3 мл) при 0"С додавали дізопропілетиламін (0,266 мл, 1,528 ммоль, З екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом ще 1 години. Реакцію гасили насиченим розчином
МансСоОз (10 мл), і водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 5 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг50Ох і концентрували. Продукт виділяли з допомогою СотрбівБіІазпФ), з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 3-5 95 метанолом в ОСМ. І С-М5: обчислено (МАНІ. 537,32, знайдено 537,23.
о о Ж
Ж ни
С маш ваш
М он ху Хі ПОН ху ід
М " о ДМ о 1
До розчину Сполуки 1 (230 мг, 0,428 ммоль, 1 екв.) в ТНЕ (5 мл) і НгО (5 мл) при 0" додавали гідроксид літію (31 мг, 1,285 ммоль, З екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури. Після перемішування при кімнатній температурі протягом 1 години реакційну суміш підкислювали НСЇІ (6 Н) до рН 3,0. Водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 10 мл) і органічні шари об'єднували, сушили над Маг505 і концентрували. Продукт використовували без додаткового очищення. І С-Мо: обчислено (МАНІ 523,31, знайдено 523,55. о
Доки
НМ о ве и о о 5 о юр ОС
Сх М .
Н
1 он п АХ 2 п о ре ж о нн ж и М о нН твти М о о
ПІРЕА с що
До розчину Сполуки 1 (230 мг, 0,440 ммоль, 1 екв.), Сполуки 2 (173 мг, 0,484 ммоль, 1,1 екв.) і ТвтТИ (170 мг, 0,528 ммоль, 1,2 екв.) в безводному ЮОМЕ (2 мл) при 0"С додавали дізопропілетиламін (0,230 мл, 1,320 ммоль, З екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом ще 1 години. Реакцію гасили насиченим розчином
МансСоОз (10 мл), і водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 5 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг50Ох і концентрували. Продукт виділяли з допомогою СотрбівїІазНФ), з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 4-6 95 метанолом в ОСМ. І С-М5: обчислено (МАНІ 826,43, знайдено 826,65.
о о «Кк «Кк а їі
Н Н м их М о Мт р М о нН й о о | - о о
Ц МУ-РЕС5-То5 Фф
Св,СО,
С С он п ав в
До розчину Сполуки 1 (150 мг, 0,181 ммоль, 1 екв.) і азидо-РЕС5-ОТ5 (113 мг, 0,272 ммоль, 1,5 екв.) в безводному ОМЕ (2 мл) додавали С52СОз (118 мг, 0,363 ммоль, 2 екв.) при кімнатній температурі. Реакційну суміш перемішували при 40 "С протягом З годин. Реакцію гасили насиченим розчином МанНСОз (5 мл) і водний шар екстрагували етилацетатом (3 х 5 мл).
Органічні фази об'єднували, сушили над Маг25О4 і концентрували. Продукт очищали з допомогою СотрБіБіазйФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 4 95 метанолом в ОСМ. Вихід становив 66 9». І С-М5: обчислено (МАНІ 1071,57, знайдено 1071,89. о «Кк МН, о о ху ки ЖК, М о У ра М он
Н д" о 9 пон | й" і о 9
Я -- СА
ТРА а и с а Ми ит о ит ! Структура 3360
До розчину Сполуки 1 (130 мг, 0,121 ммоль, 1,0 екв.) в ТНЕ (2 мл) і воді (2 мл) при кімнатній температурі додавали гідроксид літію (8,7 мг, 0,364 ммоль, 3,0 екв.). Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще 1 години. рН доводили до 3,0 з допомогою НСІ (6 Н), і водну фазу екстрагували ЕТОАс (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Ма250Ох і концентрували. До залишку додавали ТЕА (З мл) і ОСМ (2 мл), і суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще З годин. Розчинник видаляли за допомогою роторного випарника, і продукт виділяли з допомогою СотріБіазпФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази. Продукт елюювали 20 95 метанолом в дихлорметані. | С-М5: обчислено (МАНІ 857,45, знайдено 857,64.
Синтез Структури 346р ((5)-3-(4-(4-((14-азидо-3,6,9,12-тетраоксатетрадецил)окси)нафталін-1- ілуфеніл)-3-((5)-4-метил-2-(4-((4-метилпіридин-2-іл)іаміно)бутанамідо)пентанамідо)пропанова кислота)
о а Й а
Гі і
М ж сх си Ж ки Ж о он сени о твту хх М М:
М ЩІ ПСІРЕА М о 1 2
До розчину Сполуки 1 (150 мг, 0,509 ммоль, 1 екв.), Сполуки 2 (101 мг, 0,560 ммоль, 1,1 екв.) і ТвТИО (196 мг, 0,611 ммоль, 1,2 екв.) в безводному ЮОМЕ (3 мл) при 0"С додавали дізопропілетиламін (0,266 мл, 1,528 ммоль, З екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом ще 1 години. Реакцію гасили насиченим розчином
Мансоз (5 мл), і водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 5 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг5О:4 і концентрували. Продукт виділяли з допомогою СотрБіБіазпФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 3-5 95 метанолом в ОСМ. І С-М5: обчислено (МАНІ 422,26, знайдено 422,36. щу ва о о 5 о 5 о
М о . хх си Ж - Пон я Ж он йо ! 5-5 !
М о де о 1
До розчину Сполуки 1 (186 мг, 0,441 ммоль, 1 екв.) в ТНЕ (3 мл) і НгО (3 мл) при 0" додавали гідроксид літію (31 мг, 1,323 ммоль, З екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури. Після перемішування при кімнатній температурі протягом 1 години реакційну суміш підкислювали НСЇІ (6 Н) до рН 3,0. Водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 10 мл)і органічні шари об'єднували, сушили над Маг505 і концентрували. Продукт використовували без додаткового очищення. І С-Мо: обчислено (М'-НІ- 408,24, знайдено 408,23. "сн. о и о
Н
Х С | о " о о о Н о . твту де" о о
У АЖ он ПІРЕА Ф ог Ос
С он 2 он
До розчину Сполуки 1 (168 мг, 0,412 ммоль, 1 екв.), Сполуки 2 (162 мг, 0,453 ммоль, 1,1 екв.) і ТвТИ (159 мг, 0,494 ммоль, 1,2 екв.) в безводному ЮМЕ (2 мл) при 0"С додавали дізопропілетиламін (0,215 мл, 1,237 ммоль, З екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом ще 1 години. Реакцію гасили насиченим розчином
МансСоОз (10 мл), і водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 5 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг50Ох і концентрували. Продукт виділяли з допомогою СотрбівїІазНФ), з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 2-4 95 метанолом в ОСМ. І С-М5: обчислено (МАНІ 711,37, знайдено 711,69.
і і
Н
ХУ ки М М о | Мох ки К ев
Н Н д" о о Ма-РЕСБ-Тов С о о
Щ С8,сО, і
СО С он мити тити ит
До розчину Сполуки 1 (150 мг, 0,206 ммоль, 1 екв.) і азидо-РЕС5-ОТ5 (132 мг, 0,317 ммоль, 1,5 екв.) в безводному ОМЕ (2 мл) при кімнатній температурі додавали С52СОз (137 мг, 0,422 ммоль, 2 екв.). Реакційну суміш перемішували при 40 "С протягом З годин. Реакцію гасили насиченим розчином МанНсСоОз (10 мл) і водний шар екстрагували етилацетатом (З х 10 мл).
Органічні фази об'єднували, сушили над Маг25О4 і концентрували. Продукт очищали з допомогою СотрівРіазнФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 3-4 95 метанолом в ОСМ. Вихід становив 82 9». І! С-М5: обчислено (МАНІ 956,51, знайдено 956,64. о о с ки К о с Ки М он
Нн яд о о о " о о і пон Щі
ТЕА
ТЕА ши ит ит ит ит и тот 1 Структура 345
До розчину Сполуки 1 (160 мг, 0,167 ммоль, 1,0 екв.) в ТНЕ (2 мл) і воді (2 мл) при кімнатній температурі додавали гідроксид літію (12 мг, 0,502 ммоль, 3,0 екв.). Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще 1 години. рН доводили до 3,0 з допомогою НСІ (6 Н), і водну фазу екстрагували ЕТОАс (3 х 10 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Ма250Ох і концентрували. До залишку додавали ТЕА (З мл) і ОСМ (2 мл), і суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ще З годин. Розчинник видаляли за допомогою роторного випарника, і продукт виділяли з допомогою СотріБіазпФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази. Продукт елюювали 8-10 95 метанолом в дихлорметані. ЇС-М5: обчислено
ІМАНІ- 842,44, знайдено 842,67.
Синтез Структури 356 ((5)-3-(4-(4-((14-азидо-3,6,9,12-тетраоксатетрадецил)окси)нафталін-1- іл)феніл)-3-(25, З)-3-гідрокси-2-(4-((4-метилпіридин-2- іл)яаміно)бутанамідо)бутанамідо)пропанова кислота) о о о он о о он 5 о со о ЕС. НСІ, ОІБА ж о 8 | - ко «5 - Ь т й ки г ек сь псдо ВТ | хх АХ о
М о М о 1
У посудину, що містить І-треонін--ОМе НСІ (1,000 г, 5,896 ммоль, 1,3 екв.), додавали
Сполуку 1 (1,335 г, 4,535 ммоль, 1 екв.), диметиламінопіридин (0,277 г, 2,268 ммоль, 0,5 екв.) і
СНоСіг (13,3 мл). До суміші додавали діїзопропіламін (2,054 мл, 11,792 ммоль, 2,6 екв.), і отриманий розчин охолоджували до 0 "С. Додавали ЕОС-НСІ (1,130 г, 5,896 ммоль, 1,3 екв.) і реакційну суміш перемішували при 0 "С протягом 30 хвилин перед нагріванням до кімнатної температури. Реакцію визначали як завершену через 16 годин з допомогою НРІ С, і продукти переносили в ділильну лійку, промивали 66 95 насиченим МНЕеСІ (4 х 20 мл) і насиченим МНС (20 мл). Органічний шар сушили над Маг5О: і концентрували з отриманням в'язкого масла (1,7588 г, 94,7 90), яке безпосередньо переносили на наступну стадію. ЇС-М5: обчислено
ІМАНІк: 410,22, знайдено 410,03. ря Км и о он ж о ра в о меон, 2.0 М Пон ки Ж он о м - вт й Н
М о М о 1 3
Сполуку 1 розчиняли в МЕОН (4,5 мл), і до суміші додавали 2,0 М розчин ГіІОН (9,1 мл).
Реакційну суміш перемішували протягом 1,5 години, і концентрували для видалення МЕОН.
Потім суміш підкислювали 20 95 КНЗОЯ4 до рн 4, і екстрагували ЕЮАс (3 х 15 мл). Об'єднаний органічний шар промивали насиченим сольовим розчином (20 мл), сушили над Маг250Ох і концентрували, з отриманням Сполуку З у вигляді твердої речовини (1,5095 г, вихід 88,9 95). І С-
М5: обчислено |М-НІ-: 394,21, знайдено 394,37. "Н-ЯМР (400 МГц, хлороформ-а) 5 8,26 (д, 1Н), 721-124 (м, 1Н), 7,23 (с, 1Н), 6,95 (ддд, 1Н), 4,60 (дд, 1Н), 4,39 (кв, 1Н), 3,97-3,77 (м, 2Н), 2,36 (с, ЗН), 2,41-2,23 (м, 2Н), 1,98-1,84 (м, 2Н), 1,45 (с, 9Н), 1,19 (с, ЗН).
Ф чи нм о щу о о о он о о он а Фф й ва ГІ Н
АХ он ТВТО, ОІЕА ноаа " ек
А й чо що Фо он
У посудину завантажували Сполуку 1 (0,200 г, 0,506 ммоль, 1 екв.), ТВТО (0,195 г, 0,607 ммоль, 1,2 екв.), ОМЕ (2,0 мл) і СІЕА (0,264 мл, 1,517 ммоль, 3,0 екв.). Реакційну суміш перемішували протягом 2 хвилин перед додаванням Сполуки 2 (0,253 г, 0,708 ммоль, 1,4 екв.).
Після завершення реакції реакційну суміш розбавляли насиченим розчином МанНсоОз (10 мл) і екстрагували ЕОАс (З х 5 мл). Об'єднані органічні шари промивали сольовим розчином (10 мл), сушили над Маг5О5 і концентрували. Неочищений матеріал очищали колонковою хроматографією, елююючи 0-2095 МЕОН в СНесСі», отримуючи кінцевий продукт (150,8 мг, 42,7 95 вихід). Ї С-М5: обчислено (МАНІ к: 699,33, знайдено 699,53.
тво о, Я он / о, ре он
ВИШ їі ху СА о о хх СААХИ о 2 а / ОМЕ, 400с о оо он / ми ит ит ото
Ма
У посудину, що містить Сполуку 1 (0,151 г, 0,216 ммоль, 1 екв.), додавали С520Оз (0,106 г, 0,324 ммоль, 1,5 екв.) і ОМЕ (1,9 мл). До суміші додавали Мз-РЕСЬ-ОТ5 (0,135 г, 0,324 ммоль, 5 1,5 екв.) і реакційну суміш перемішували при 40 "С. Після завершення реакції реакційну суміш розбавляли Е(ОАс (10 мл), насиченим розчином МаНсоз (5 мл) і водою (5 мл). Шари розділяли і водну фазу екстрагували ЕЮАс (3 х 10 мл). Об'єднані органічні шари сушили над Маг250О і концентрували. Неочищений матеріал очищали колонковою хроматографією, елююючи 0-20 95
МЕОН в СНеосі», отримуючи кінцевий продукт (103 мг, вихід 50,4 95). |! 0-Ме: обчислено |М'-НІк: 944,47, знайдено 944,56. о о он щи о Бе " о о ще с КАХ он н
ДЬ о о й Н | Ії 1 с меон, 2.0 М ПОН Ф ет мити ит о и ит от нити ти
У посудину, що містить Сполуку 1 (0,103 г, 0,109 ммоль, 1 екв.), додавали Меон (1,5 мл) і 2,0 М ПОН (2,0 мл). Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі, потім концентрували для видалення МЕОН, підкислювали до рН-2 розчином 20 95 КН5бО»х. До суміші додавали ЕЮдАс (5 мл) і воду (4 мл). Водний шар екстрагували ЕЮАс (3 х 5 мл). Об'єднані органічні шари промивали сольовим розчином (10 мл), сушили над Маг50О5 і концентрували з отриманням продукту (0,0879 г, 86,9 95). Ї С-М8: обчислено (МАНІ хк: 930,45, знайдено 930,56. «КЕ он о он о ху САЖА о -У САДАХ он 1 і ТЕА, СН.СЇ, Ф вт ТРА
Ми ит ит аа и а а
Структура 356
У посудину, що містить Сполуку 1 (0,0879 г, 0,0945 ммоль, 1 екв.), додавали СНосСіг (0,3 мл) і трифтороцтову кислоту (0,64 мл). Розчин перемішували при кімнатній температурі протягом 20 хвилин. Після завершення реакції (утворення продукту 297 95) реакційну суміш концентрували, випаровуванням з толуолом (3 мл), а потім з ацетонітрилом (2 х З мл). Продукт отримували з додатковою кількістю ТЕА (115,6 мг).
Синтез Структури З6бр ((5)-3-(4-(4-((14-азидо-3,6,9,12-тетраоксатетрадецил)окси)нафталін-1- іл)феніл)-3-(25, 35)-3-метил-2-(4-((4-метилпіридин-2- іл)аміно)дбутанамідо)пентанамідо)пропанова кислота) о о о о о ж 9 сі в) ЕС НСЇ, ОЇІЕА ви о
Фе | - юн Н- 55-х 5 и, р сс ото до ЕТ | 5 САДАХ
ДА о М о 1
У посудину, що містить І-ізолейцин-ОМе НСІ (1,000 г, 5,505 ммоль, 1,3 екв.), додавали
Сполуку 1 (1,246 г, 4,234 ммоль, 1 екв.), диметиламінопіридин (0,259 г, 2,117 ммоль, 0,5 екв.) і
СНоСі» (12,5 мл). До суміші додавали діїзопропіламін (2,054 мл, 11,792 ммоль, 2,6 екв. і отриманий розчин охолоджували до 0 "С. Додавали ЕОС-НСЇІ (1,055 г, 5,505 ммоль, 1,3 екв.) і реакційну суміш перемішували при 0 "С протягом 30 хвилин перед нагріванням до кімнатної температури. Реакцію визначали як завершену через 16 годин з допомогою НРІ С, і продукти переносили в ділильну лійку, промивали 66 95 розчином МНАСІ (4 х 20 мл) і насиченим МНАСІ (1 х 20 мл). Органічний шар сушили над Маг50» і концентрували, отримуючи в'язке масло (1,8634 г, вологе, з СНеСіг), яке безпосередньо переносили на наступну стадію. ЇС-М5: обчислено
ІМАНІк: 422,26, знайдено 422,00. ре ща о о 5 о ж о меон, 2.0 М ПОН М он чає бо -- - - - си Ж з пан ве я дк о р о 1
Сполуку 1 розчиняли в МеОн (4,2 мл) і до суміші додавали 2,0 мл розчини ІОН (8,5 мл).
Реакційну суміш перемішували протягом 1,5 ч і концентрували для видалення МЕОН. Потім суміш підкислювали розчином 2095 КН5БО4 до рН 4, і екстрагували ЕТОАс (3 х 15 мл).
Об'єднаний органічний шар промивали насиченим сольовим розчином (20 мл), сушили над
Маг50О» і концентрували, з отриманням продукту у вигляді в'язкого масла (1,6123 г, 93,4 95 вихід по двох стадіях). ЇС-М5: обчислено|М-НІ|-: 406,24, знайдено 406,43. "Н-ЯМР (400 МГЦ, хлороформ-4) б 8,23 (д, 1Н), 7,12 (д, 1Н), 6,95-6,88 (м, 1Н), 4,58 (дд, 1Н), 3,99-3,83 (м, 2Н), 2,35- 2,34 (с, ЗН), 2,30 (гепт. 2Н), 2,00-1,84 (м, АН), 1,45 (с, 9Н), 0,91 (м, ЄН).
Ф
І. НМ о у о о о сі о ва о о о н
Ту н ФІ ТВТИ СІсА СХ о й: М ОМЕ, Кт ди о о о у 1 що Фо он
У посудину завантажували Сполуку 1 (0,200 г, 0,491 ммоль, 1 екв.), ТВТО (0,189 г, 0,589 ммоль, 1,2 екв.), ОМЕ (2,0 мл) і СІЕА (0,256 мл, 1,472 ммоль, 3,0 екв.). Реакційну суміш перемішували протягом 2 хвилин перед додаванням Сполуки 2 (0,246 г, 0,687 ммоль, 1,4 екв.).
Після завершення реакції реакційну суміш розбавляли насиченим розчином МанНсоз (10 мл), екстрагували ЕЮАс (З х 5 мл). Об'єднані органічні шари промивали сольовим розчином (10 мл), сушили над Маг5О5 і концентрували. Неочищений матеріал очищали колонковою хроматографією, елююючи 0-20 95 МЕОН в СНесСі», отримуючи кінцевий продукт (0,3024 мг, вихід 86,7 95). | С-М5: обчислено (МАНІ к: 711,37, знайдено 711,51. тво , а , з
ВИШ й їі хх С о о с ки, М о дк Н о о | й о о 5 я З т / ОМЕ, 400с 3 С он / МИТИ кити ит з
У посудину, що містить Сполуку 1 (0,170 г, 0,238 ммоль, 1 екв.), додавали С520Оз (0,116 г, 0,358 ммоль, 1,5 екв.) і ОМЕ (2,1 мл). До суміші додавали Мз-РЕСЬ-ОТ5 (0,149 г, 0,358 ммоль, 1,5 екв.) і реакційну суміш перемішували при 40 "С. Після завершення реакції реакційну суміш розбавляли Е(ОАс (10 мл), насиченим розчином МаНсоз (5 мл) і водою (5 мл). Шари розділяли і водну фазу екстрагували ЕЮАс (3 х 10 мл). Об'єднані органічні шари сушили над Маг250Ох і концентрували. Неочищений матеріал очищали колонковою хроматографією, елююючи 0-20 95
МЕОН в СНесіг, отримуючи кінцевий продукт (0,1645 г, вихід 72,1 95). | С-М5: обчислено (МАНІ к: 956,51, знайдено 956,78. м І о
Н о ноша М о коша М он
ІД о о | н й о о
Ф меон, 2.0 м ПОН ФІ кт чо Фо ут у ит уинто " о о ши ит отити
У посудину, що містить Сполуку 1 (0,164 г, 0,172 ммоль, 1 екв.), додавали Мен (2,0 мл) і 2,0 М ЦПОН (3,0 мл). Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі і реакцію контролювали з допомогою НРІ С. Додавали додаткову кількість ГІОН (33 мг, 1,38 ммоль, 8 екв.), води (5 мл) і МЕОН (4 мл) для розчинення матеріалу і протікання реакції. НРІ С показала наявність двох нових піків, які, швидше усього, стосуються діастереомерів. Після досягнення 9095 перетворення, реакційну суміш концентрували для видалення МЕОН, підкислювали розчином 2095 КНБО», і до суміші додавали ЕЮОАс (5 мл) і воду (4 мл). Водний шар екстрагували Ес (4 х 5 мл). Об'єднані органічні шари промивали сольовим розчином (10 мл), сушили над Маг5О:4 і концентрували, з отриманням продукту (0,1417 г, 87,4 95). І 0-М5: обчислено (МАНІ к: 942,49, знайдено 942,56.
9 о м М он Н Н
Же си Ж М М он в м во ки, --- о о ра о о 1 ФІ ТРА, СН.СІ, Ф кт ТЕА мито ит от ни бути тити
Структура 3665
У посудину, що містить Сполуку 1 (0,1417 г, 0,1504 ммоль, 1 екв.), додавали СНосСіг (0,5 мл) і трифтороцтову кислоту (1,0 мл). Розчин перемішували при кімнатній температурі протягом 20 хвилин. Після завершення реакції (утворення продукту х97 95) реакційну суміш концентрували, випарювали з толуолом (3 мл), а потім з ацетонітрилом (2 х З мл). Продукт отримували з додатковою кількістю ТЕА (150,3 мг). У продуктах реакції були присутні два піки, як і у вихідному матеріалі, так і в кінцевому продукті. ЇС-М5: обчислено МАНІ: 842,44, знайдено 842,56.
Обидва піки продукту мають однакову масу, що вказує на присутність діастереомерів.
Синтез Структури З37Б ((5)-3-(4-(4-((14-азидо-3,6,9,12-тетраоксатетрадецил)окси)нафталін-1- ілуфеніл)-3-(А)-З-метил-2-(4-((4-метилпіридин-2-іл)яаміно)бутанамідо)бутанамідо)пропанова кислота) ваш ва Я : у : о - хе и . сер в, АХ о лк І ПІРЕА | ех у - 1 2 ДА о (0509) До розчину Сполуки 1 (150 мг, 0,509 ммоль, 1 екв.), Сполуки 2 (94 мг, 0,560 ммоль, 1,1 екв.) Її ТВТИО (196 мг, 0,611 ммоль, 1,2 екв.) в безводному ЮОМЕ (3 мл) при 0 "С додавали дізопропілетиламін (0,266 мл, 1,528 ммоль, З екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом ще 1 години. Реакцію гасили насиченим розчином
МансСоОз (10 мл), і водну фазу екстрагували етилацетатом (3 х 5 мл). Органічні фази об'єднували, сушили над Маг50Ох і концентрували. Продукт виділяли з допомогою СотрбівїІазНФ), і елюювали 2-3 96 метанолом в ОСМ. Вихід: 205 мг (99 95). а Я о о -во мя в А : : М ; он ху учи пон | тя я н М о
Хр о !
До розчину Сполуки 1 (207 мг, 0,508 ммоль, 1 екв. У ТНЕ (5 мл) і НгО (5 мл) при 0" додавали гідроксид літію (36 мг, 1,523 ммоль, З екв.). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури. Після перемішування при кімнатній температурі протягом 1 години реакційну суміш підкислювали НСЇІ (6 Н) до рН 3,0. Водну фазу екстрагували етилацетатом (З х 10 мл) |і органічні шари об'єднували, сушили над Маг5О4 і концентрували. Отриманий продукт використовували далі без додаткового очищення. Вихід: 180 мг (91 95).
Ти о шо ах
М ; М о МЕ кана - в ж С ду о о М.-РЕС-ТВ : он ер ОМЕ, твти С дек о ОІЕА
Сполука З Сполука 4 он йо ай о нь ху или о хх й я Ж А М он рова же - о о М о о
Ф і. СОН, ТНР/НО Ф
Ї. ТРА
ХА шо
ТИ теє тет МИТО ут ит ото
Сполука 5 Сполука 376 5
До розчину Сполуки З (180 мг, 0,46 ммоль), Сполуки За (180 мг, 0,50 ммоль) і ТВТИи (176 мг, 0,55 ммоль) в ОМЕ (2,5 мл) при 0 "С додавали ОІРЕА (177 мг, 239 мкл, 1,37 ммоль). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури і перемішували протягом 1 години. Реакційну суміш гасили насиченим водним розчином МанНсСоОз. Додавали деїіонізовану воду (1,75 мл), а потім екстрагували етилацетатом (8 мл). Водний шар додатково екстрагували етилацетатом (2 х 8 мл). Об'єднані органічні фази промивали напівнасиченим водним розчином МНаАСіІ (б мл) і напівнасиченим розчином МаНсСОз (водн.) (б мл). Органічний шар сушили над Маг5О»м, фільтрували і концентрували. Неочищену суміш розділяли з допомогою СотрігБіа5НФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 0-595 метанолом в ОСМ. Вихід сполуки 4: 295 мг (92 95). Обчислено для С40Н48М407: 697,84, знайдено: 697,82.
До розчину Сполуки 4 (200 мг, 0,29 ммоль) і азидо-РЕС5-ОТ5 (240 мг, 0,57 ммоль) в безводному ОМЕ (2,5 мл) додавали С52С0О3з (187 мг, 0,57 ммоль). Реакційну суміш перемішували при 60 "С протягом 2 годин. Реакційну суміш гасили насиченим розчином
Мансо:з (водн.) (15 мл), додавали деіонізовану воду (7,5 мл) і екстрагували етилацетатом (10 мл). Водний шар додатково екстрагували етилацетатом (2 х 10 мл). Об'єднані органічні фази сушили над Ма»5О»4, фільтрували і концентрували. Неочищену суміш розділяли з допомогою
СотрбігРіІа5нФ), з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 0-5 95 метанолом в
ОСМ. Вихід сполуки 5: 97 мг (36 95). Обчислено для С5оНе?М7Оч1: 943,15, знайдено: 942,96.
До розчину Сполуки 5 (94 мг, 0,10 ммоль) в ТНЕ (1,5 мл) і деіонізованій воді (1 мл) додавали розчин гідроксиду літію (7,2 мг, 0,30 ммоль) в деіонізованій воді (0,5 мл). Реакційну суміш перемішували протягом 1 години, потім підкислювали 6 М НСЇІ (водн.) до рН 3. Водну фазу екстрагували єтилацетатом (3 х 5 мл). Об'єднану органічну фазу сушили над Маг50О», фільтрували і концентрували. До неочищеного залишку додавали ТЕА (1,34 мл) і воду (67 мкл).
Реакційну суміш перемішували протягом 1,5 години при кімнатній температурі. Розчинник видаляли при зниженому тиску і залишок піддавали випарюванню зі сумішшю ацетонітрил:толуол (|1:1) (2 х 20 мл). Неочищену суміш розділяли з допомогою СотрбігБіІазнФ, з використанням силікагелю як нерухомої фази, і елюювали 0-10 96 метанолом в ОСМ. Вихід
Структури 3765: 44 мг (53 95). МАНІ. обчислено для С44Нь7М7О»в: 828,97, знайдено: 828,63.
Приклад 2
Синтез тридентатних лігандів інтегрину сом8Вб і кон'югація лігандів інтегрину сурб з транспортованими молекулами (засобами РНКІ)
Ліганди інтегрину суВб можуть бути кон'юговані з одним або декількома засобами РНКІ, придатними для інгібування експресії одного або декількох цільових генів-мішеней. Ліганди інтегрину ахрб полегшують доставку засобів РНКІ до клітин-мішеней і/або до тканин. Приклад 1, представлений вище, описує синтез ряду лігандів інтегрину амиВб, описаних тут. Нижче описані загальні методики синтезу деяких кон'югатів лігандів інтегрину смрб з антитілом, які проілюстровані в необмежувальних прикладах, представлених тут.
А. Синтез засобів РНКі. Засоби РНКі можуть бути синтезовані з використанням методів, відомих в даній галузі техніки. Для синтезу засобів РНКІі, проілюстрованих в Прикладах, представлених тут, смислові і антисмислові ланцюги засобів РНКІі синтезували твердофазною фосфорамідитною технологією, що використовується в олігонуклеотидному синтезі. Залежно від масштабу використовували МегМаде9бЕФ (Віоашотаїйоп), МегМаде!І29 (Віосашотайоп) або
ОР Ріої 100 (СЕ НеайНсаге). Синтези проводили на твердій підкладці, виготовленій з скла з контрольованим розміром пор (СРО, 500А або 600А, від Ргіте Зупіпевзіз, Авіоп, РА, О5А). Всі
РНК ії 2--модифіковані РНК-фосфорамідити купували у Тпепто Різпег Зсіепійіс (Мім"айКее, УМ,
БА). Зокрема, використовували наступні 2'-О-метилфосфорамідити: (5'-О-диметокситритил-
Ме-(бензоїл)-2'-О-метиладенозин-3-О-(2-ціаноетил-М, М-діїізопропіламіно)-фосфорамідит, 5'-О- диметокси-тритил-М"-(ацетил)-2'-О-метил-цитидин-3-О-(2-ціаноетил-М, М-діїзопропіл- аміно)фосфорамідит, (5'-О-диметокситритил-М2-(ізобутирил)-2-О-метилгуанозин-3'-О-(2- ціаноетил-М, М-діїізопропіламіно)фосфорамідит і 5'-О-метил-диметокситритил-2"-О-уридин-3'-О- (2-ціаноетил-М, М-діїззопропіламіно)фосфорамідит. 2'-дезокси-2'-фтор-фосфорамідити несли такі ж захисні групи, як 2'-О-метил-РНК-амідити. 5- диметокситритил-2'-О-метилінозин-3'-0-(2- ціаноетил-М, М-дізопропіламіно)фосфорамідити купували у Сіеп Кезеагсі (Мігдіпіа). Інвертовані фосфорамідити з видаленими основами, такі як (3''О-диметокситритил-2'-дезоксирибоза-5-0- (2-ціаноетил-М, М-діїізопропіламіно)»-фосфорамідити купували у СпетбсСепевз (УмМіїтіпдіоп, МА,
БА). Використовували наступні ОМА фосфорамідити: 5'-(4,4"-диметокситритил)-Ме-(бензоїл)- 2,3-секо-аденозин, /2'-бензоїл-3-((2-ціаноетил)-(М, М-діїзопропіл)|-фосфорамідит, /5-(4,4- диметокситритил)-М-ацетил-2',3'-секо-цитозин, 2'-бензоїл-3-((2-ціаноетил)-(М, М-діїзопропіл)|- фосфорамідит, //5'-(4,4-диметокситритил)-М-ізобутирил-2',3'і--секо-гуанозин, /2'-бензоїл-3-((2- ціаноетил)-(М, М-діззопропіл)|-фосфорамідит і 5'-(4,4-диметокситритил)-2',3'-секо-уридин, 2- бензоїл-3-((2-ціаноетил)-(М, М-діїзопропіл)|-фосфорамідит. ТЕА-амінолінкерні фосфорамідити також купували на комерційній основі у ТпептоРізпег.
У деяких прикладах ліганди суб інтегринів, розкриті тут, кон'югували з засобами РНКІ за
З5 допомогою зв'язування компонентів з каркасом, який включає триалкінову групу. У деяких прикладах триалкінову групу додавали з використанням триалкін-вмісного фосфорамідиту, який може бути доданий на 5'-кінець смислового ланцюга засобу РНКІ. При використанні в поєднанні з засобами РНКІі, представленими тут в деяких прикладах, триалкін-вмісні фосфорамідити розчиняли в безводному дихлорметані або безводному ацетонітрилі (50 мМ), в той час як всі інші амідити розчиняли в безводному ацетонітрилі (50 мМ), і додавали молекулярні сита (ЗА).
Як активатор використовували розчин 5-бензилтіо-1Н-тетразолу (ВТТ, 250 мМ в ацетонітрилі) або 5-етилтіо-1Н-тетразолу (ЕТТ, 250 мМ в ацетонітрилі). Час зв'язування становив 10 хвилин (РНЮ, 90 секунд (20-Ме) і 60 секунд (2'Я). Для введення фосфортіоатних зв'язків використовували 100 мМ розчин З3-феніл-1 ,2,4-дитіазолін-5о-ону (РОБ5, отриманий від РоїуОга,
Іпс. І еовієег, МА, О5А) в безводному ацетонітрилі.
Альтернативно, коли ліганди інтегрину сурб кон'югували з засобами РНКІі через триалкін- каркас, то замість використання фосфорамідитного підходу, то триалкін-вмісні сполуки вводили після синтезу (див. наприклад, Розділ Е, нижче). 5'-кінцевого нуклеотид смислового ланцюга функціоналізували нуклеотидом, який включав первинний амін на 5'-кінці для полегшення приєднання до триалкін-вмісного каркаса. ТЕРА-амінолінкерний фосфорамідит розчиняли в безводному ацетонітрилі (50 мМ) і додавали молекулярні сита (ЗА). Як активатор використовували розчин 5-бензилтіо-1Н-тетразол (ВТТ, 250 мМ в ацетонітрилі) або 5-етилтіо- 1Н-тетразол (ЕТТ, 250 мМ в ацетонітрилі). Час зв'язування становив 10 хвилин (РНК), 90 секунд (2'О-Ме) і 60 секунд (2'Є). Для введення фосфортіоатних зв'язків використовували 100 мМ розчин З-феніл-1,2,4-дитіазолін-5--ону (РОБ, отриманий від РоїуОго, Іпс. Геовієг, МА, О5А) в безводному ацетонітрилі.
В. Відщеплення і зняття захисту у зв'язаного з підкладкою олігомера. Після завершення твердофазного синтезу висушений твердий носій (підкладку) обробляли при 30 "С розчином, що містить 1:1 по об'єму 40 мас. 95 метиламіну у воді і 28-31 95 розчином гідроксиду амонію 60 (Аіагісн) протягом 1,5 годин. Розчин випарювали, і твердий залишок відновлювали у воді (див.
нижче). б. Очищення. Неочищені олігомери очищали з допомогою аніонообмінної НРІС з використанням колонки Т5Каєї ЗирегО-5РМУУ 13 мкм, і системи ЗНітайд2и І. С-8. Буфер А містив 20 мМ Тті5, 5 ММ ЕОТА, рН 9,0 і 20 95 ацетонітрилу, а буфер В був таким же, як і буфер А, але з додаванням 1,5 М хлориду натрію. УФ-сигнали реєстрували при 260 нм. Відповідні фракції об'єднували, а потім аналізували з допомогою ексклюзійної НРІ С з використанням колонки СЕ
Неайсаге ХК 16/40 з Берпадех О-25 іїпе, і буфером, що містить 100 мМ бікарбонату амонію, рн 6,7, і 20 95 ацетонітрилу або фільтрованої води. р. Відпал. Комплементарні нитки змішували шляхом об'єднання еквімолярних розчинів РНК (смислових і антисмислових) в 1Х РВ5 (забуферений фосфатом фізіологічний розчин, 1Х,
Согпіпд, СеЇдго), отримуючи засоби РНКІі. Деякі засоби РНКІі ліофілізували і зберігали при температурі від -157С до -25 "С. Концентрацию дуплексів визначали шляхом вимірювання поглинання розчину на спектрометрі ШМ-Міє в 1Х РВ5. Потім, для визначення концентрації дуплексів, оптичну густину розчину при 260 нм множили на коефіцієнт перетворення і на коефіцієнт розбавлення. Використовували коефіцієнт перетворення, який дорівнюєй 0,037 мг/(мл:см), або, для деяких експериментів, коефіцієнт перетворення альтернативно розраховували на основі експериментально визначеного коефіцієнта екстинкці.
Е. Кон'югування триалкінових каркасів. До або після відпалу 5- або 3- амінофункціоналізований смисловий ланцюг засобу РНКІ кон'югували з триалкіновим каркасом.
Приклади 3-алкінових каркасних структур, які можуть бути використані для отримання описаних тут конструкцій, включають наступні:
Же у
Нм о о о 2 Н туя о о нм о 2
МО, о жк це зу. ах
НМ о 5 Мо, о
З 5 М у ду 2 Н 7
М НМ о вана о
НМ о ве і ж ї. зу.
НМ о МО, о
З 5 М у Ж ду 2 Н 2
М НМ о у о нм о хх де-о
Нижче описана кон'югация триалкінового каркаса з випаленим дуплексом: функціоналізований аміном дуплекс розчиняли в 90 95 ЮОМ50/10 95 НгО до концентрації 50-70 мг/мл. Додавали 40 екв. триетиламіну, а потім З екв. триалкін-РМР. Після завершення реакції кон'югат двічі осаджували в системі розчинників з 1Х забуферений фосфатом фізіологічний розчин/ацетонітрил (співвідношення 1:14) і сушили.
Е. Кон'югация лігандів інтегрину сурб. До або після відпалу 5- або 3- тридентатний функціоналізований алкіном смисловий ланцюг кон'югували з лігандами інтегрину сурб.
Наступний приклад описує кон'югацію лігандів інтегрину смВб з випаленим дуплексом: в деіонізованій воді готували вихідні розчини 0,5 М тріс(З-гідроксипропілтриазолілметил)аміну (ТНРТА), 0,5 М пентагідрату сульфату міді (Ії) (Си5О4а"5Н2гО) і 2 М розчину аскорбату натрію.
Готували розчин ліганду інтегрину ахрб в ОМ5О (75 мг/мл). У центрифугальну пробірку ємністю 1,5 мл, що містить триалкін-функціоналізований дуплекс (З мг, 75 мкл, 40 мг/мл в деіонізованій воді, 715000 г/моль), додавали 25 мкл 1 М буфера НЕРЕ5, рН 8,5. Після перемішування додавали 35 мкл ОМ5О, і розчин перемішували. До реакційної суміші додавали ліганд інтегрину аурВб (6 екв./дуплекс, 2 екв./алкін, «15 мкл), і розчин перемішували на вортексі. Використовуючи паперовий індикатор рН, перевіряли рН і підтверджували, що значення рН доведене до 8. В окремій центрифугальній пробірці об'ємом 1,5 мл змішували 50 мкл 0,5 М ТНРТА з 10 мкл 0,5 М
СщіІ)5Ог5НгО, перемішували на вортексі і інкубували при кімнатній температурі протягом 5 хвилин. Через 5 хвилин в реакційну посудину додавали розчин ТНРТА/Си (7,2 мкл, 6 екв. 571
ТНРТА:Си) і перемішували. Відразу після цього в реакційну посудину додавали 2 М аскорбат (5 мкл, 50 екв./дуплекс, 16,7 на алкін), і перемішували протягом ночі. Після завершення реакції (як правило, протягом 0,5-1 години) реакційну суміш негайно очищали з допомогою неденатуруючої аніонообмінної хроматографії. б. Функціоналізація тіолової групи на цистеїновому лінкері У деяких прикладах, для полегшення кон'югаці лігандів інтегрину суб із засобом РНКІ, використовували цистеїновий лінкер. До або після відпалу 5'- або 3- тридентатну алкін-Субз(еІри)-РЕС2-функціоналізований смисловий ланцюг функціоналізували малеїнвмісним фрагментом, або відновлювали його і залишали у вигляді вільного тіолу, як показано на наступній структурі: піганд УВО, м ; о
КО вен 5
За зва с, 7
І. Вж Мо оетклиаленція І М- ча 7 ї ГКІ зу ве
НЯ. я й о й їх з в р а р і ць о а окис лігана ли пл Во
Мем а я т но
Віжесї - з ай людно ВВ ку
Наступний приклад описує модифікацію триалкін-Суз(5іри)-РЕСег-дуплекса з М- етилмалеїмідом: триалкін-Сув(5іри)-РЕСзг-дуплекс (35 мг) розчиняли в 500 мкл деїіонізованій води. До реакційної суміші додавали буфер НЕРЕЗ (1 М, рН 8,5, 82 мкл) і розчин перемішували на вортексі. Додавали розчин 1 М дитіотреїтолу (ОТ, 100 екв. 236 мкл), і розчин вміщували на вихровий шейкер для перемішування протягом З годин. Після підтвердження відновлення дисульфіду з допомогою денатуруючої КР-НРІ С, кон'югат осаджували три рази в системі розчинників 1Х забуферений фосфатом фізіологічний розчин/ацетонітрил (співвідношення 1:14). Осад у вигляді пелети відновлювали в 0,5 мл 0,1 М НЕРЕЗ5, рН 6,5, до розчину додавали
М-етилмалеїмід (З мг, 10 екв.) і вміщували у вихровий змішувач для перемішування протягом -15 хвилин. Після завершення реакції кон'югат осаджували три рази в системі розчинників 1Х забуферений фосфатом фізіологічний розчин/ацетонітрил (співвідношення 1:14), знесолювали і сушили.
Приклад З
Активність зв'язування ліганду інтегрину мб
У Таблиці 1 представлені значення ІСво зв'язування лігандів інтегрину сурб структур 1 і 2.
Таблиця 1
Активність зв'язування, ІСво
Значення ІС5О для азид-функціоналізованих структур (тобто для Структур 7156 ї 2) отримували в умовах, відомих і звичайно використовуваних в даній галузі техніки. Як випливає з результатів, представлених вище в Таблиці 1, Структури 1 і 2 показали селективне зв'язування з інтегрином суб.
Приклад 4
Інтратрахеальне введення щурам засобів РНКІ, націлених на альфа-ЕМас, кон'югованих з лігандом інтегрину суб, в умовах іп мімо
Засоби РНКі, що включають смисловий і антисмисловий ланцюги, синтезували по фосфорамідитній технології на твердій фазі відповідно до загальних процедур, відомих в даній галузі техніки, і які звичайно використовують для синтезу олігонуклеотидів, як описано тут в
Прикладі 2. Засоби РНКІі включають антисмисловий ланцюг, що має нуклеотидну послідовність, щонайменше частково комплементарну гену, який експресує альфа-субодиницю амілорид- чутливого епітеліального натрієвого каналу (який звичайно називається альфа-ЕМаС або
ЗСММ1А). Засоби РНКІі до альфа-ЕМаС були сконструйовані таким чином, щоб вони мали можливість блокувати або інгібувати трансляцію транскриптів інформаційної РНК (мРНК) альфа-ЕМасС специфічним для послідовності чином, інгібуючи за допомогою цього експресію гена альфа-ЕМасС. Засіб РНКі, що використовується в цьому Прикладі (АБО4835), містить модифіковані нуклеотиди і більше ніж один нефосфодіефірний зв'язок, і він включає наступні нуклеотидні послідовності.
Послідовність смислового ланцюга (5' -з 3): (МНг-Св)зазсидидсал!СтСтадаасааацав(іпмАВ) (5ЕО 10 МО 1);
Последовательность антисмислового ланцюга (5' -з 3): сРгризАїзиз Листи Лета сти Отдстастаствс (5ЕО ІО МО г); де (іпуАбБ) - інвертований (3'-3'-зв'язаний) дезоксирибонуклеотид з видаленими основами; 5 являє собою фосфортіоатний зв'язок; а, с, ді и являють собою відповідно 2'-О-метиладенозин, цитидин, гуанозин або уридин;
АЇї, СЯ, Ст ії ОГ являють собою відповідно 2'--фтораденозин, цитидин, гуанозин або уридин; сРгри являє собою 5'-циклопропілфосфонат-2"-О-метилуридин (див. наприклад, Таблицю А); і (МН2-Св) являє собою Св-кінцевий амін, що полегшує цілеспрямоване кон'югування ліганду, описаного тут (див., наприклад, Таблицю А).
Звичайному фахівцеві в даній галузі техніки зрозуміло, що нуклеотидні мономери зв'язані стандартними фосфодіефірними зв'язками, за винятком включення фосфортіоатного зв'язку, як показано в модифікованих нуклеотидних послідовностях, розкритих тут, який замінює фосфодіефірний зв'язок, звичайно присутній в олігонуклеотиді.
Самцям щурів 5ргадое-Оаулеу в день 1 і в день 2 дослідження, через мікророзпилювальний пристрій (Репп Сепішйгу, РійПааеїрніа, РА) інтратрахеально (ІТ) вводили дозу об'ємом 200 мкл, яка у відповідних групах дозування включала наступне. (1) 5 95 розчин декстрози у воді (й5м/); (2) 3,0 мг/кг засобу РНКі до альфа-ЕМасС (АБО4835) без ліганду (толий засіб РНКІ") в 5 95 розчині декстрози у воді (а5м/); або (3) 3,0 мг/кг засобу РНКІі до альфа-ЕмМас (АбО4835), кон'югованого з тридентатним лігандом інтегрину ауВб Структури 1, приготованим в д5му.
У групах 2 і З використовували однаковий засіб РНКі до альфа-ЕМас. Для групи З кінцевий амін (МНо-Св), присутній на 5'-кінці смислового ланцюга засобу РНКІ, кон'югували з каркасом, який включав три кінцеві алкінові групи. Алкінові групи потім кон'югували з азидною функціональною групою, присутньою в Структурі 1р, утворюючи тим самим тридентатний ліганд інтегрину суб Структури 1. Загальні способи синтезу описані в Прикладі 2, наведеному вище.
Препарати вводили чотирьом (4) щурам в кожній групі. Щурів умертвляли на 5 день дослідження, відбирали проби з обох легенів, проби гомогенізували і з них виділяли загальну
РНК. Вміст мРНК альфа-ЕМмас кількісно визначали з допомогою кількісної ПЛР з використанням зонда, нормували по експресії САРОН і виражали у вигляді частки відносно контрольної групи, що отримувала носій (середнє геометричне значення х 95 95 довірчий інтервал).
Таблиця 2
Відносна експресія МРНК альфа-ЕМас, нормалізована до контролю Прикладу 4 (середнє геометричне) | довірчий інтервал (2) голий засіб РНКІ (без ліганда) (3) тридентатний ліганд інтегрину смрб
Структури 1 Мліганд інтегрину смрб 0,19 0,05/0,59
Структури 1)з - засіб РНКІЇ
Як показано в Таблиці 2, наведеній вище, ліганд інтегрину аурб Структури 1 в тридентатній формі, кон'юЮюгований із засобом РНКі до альфа-ЕМасС (тобто група 3), продемонстрував підвищений відносний нокдаун мРНК альфа-ЕмМас (нокдаун приблизно 81 95) порівняно з голим засобом РНКІ (нокдауну 64 95) без якого-небудь ліганду (тобто група 2) і групою контролю, що отримала носій, в рамках експеримента, виконаного в умовах іп мімо.
Приклад 5
Орофарингеальне аспіраційне введення щурам засобів РНКІі, націлених на альфа-ЕМас, кон'югованих з лігандами інтегрину суВб, в умовах іп мімо
У наступних прикладах тестували різні засоби РНКІ, які використовували як транспортовані молекули, для доставки цих транспортованих молекул з допомогою ліганду інтегрину суВб в цікавлячу клітину. Деякі з засобів РНКІ, які використовували тут, описані в патенті США 05 62/679549, який включений в даний опис у всій своїй повноті за допомогою посилання.
Самцям щурів 5ргадое ЮаулЛеу, шляхом орофарингеального ("ОФ") аспіраційного ведення в день 1 дослідження вводили, використовуючи піпетку, дозу 200 мікролітрів, яка у відповідних групах дозування включала наступне.
Таблиця З
Дози, що вводяться групам щурів в Прикладі 5 дозування
Ізотонічний сольовий розчин (без засобу РНКІ) Однократна ОФ доза в день 1 0,5 мг/кг двопланцюжкового засобу РНКІ Кк альфа-ЕМас Однократна. ОФ 2 (АБО4835), кон'югованого з тридентатним лігандом інтегрину . . . доза в день 1 ауВб Структури 2, в ізотонічному сольовому розчині. 0,5 мг/кг дволанцюжкового засобу РНКІі к альфа-ЕМас , . . Однократна ОФ
З (АБО4835), кон'югованого з тридентатним лігандом інтегрину , : ; доза в день 1 ауВб Структури 5.1, в ізотонічному сольовому розчині. 0,5 мг/кг дволанцюжкового засобу РНКІі к альфа-ЕМас , . . Однократна ОФ 4 (АБО4835), кон'югованого з тридентатним лігандом інтегрину , : ; доза в день 1 ауВб Структури 5.2, в ізотонічному сольовому розчині. 0,5 мг/кг дволанцюжкового засобу РНКІ к альфа-ЕМасС , . . Однократна ОФ 5 (АБО4835), кон'югованого з тридентатним лігандом інтегрину . . . доза в день 1 ауВб Структури 6, в ізотонічному сольовому розчині. 0,5 мг/кг дволанцюжкового засобу РНКІі к альфа-ЕМас , . . Однократна ОФ (АБО4835), кон'югованого з тридентатним лігандом інтегрину , : й доза в день 1 сауВб Структури 6.1, в ізотонічному сольовому розчині. 0,5 мг/кг дволанцюжкового засобу 7 РНКІ к альфа-ЕМас (АБО4835), кон'югованого з тридентатним Однократна ОФ лігандом інтегрину сурВб Структури 6.2, в ізотонічному доза в день 1 сольовому розчині.
Синтезували засоби РНКі, що мають нуклеотидні послідовності, націлені на ген-мішень альфа-ЕМасС людини, і для полегшення кон'югаці з лігандами інтегрину суб вони включали функціональні групи (МНео-Св) на 5-кінці смислового ланцюга. Відповідні ліганди інтегрину ахрб потім кон'югували з засобами РНКі через тридентатний каркас, який включав цистеїн-п- етилмалеїмідний лінкер. Тваринам кожної з груп 2-7 вводили кон'югати "засіб РНКІ-ліганд інтегрину амВб" за Прикладом 5, що містять також структури каркаса/лінкера. Таким чином, єдиним змінним чинником для Груп 2-7 був конкретний ліганд інтегрину суВб (кожний з яких представлений в тридентатній формі). Кон'югати "засіб РНКІі-ліганд інтегрину сурб" за
Прикладом 5 мали наступну структуру.
ЩА хо шк
Ще З
Нк чий щ А . зх я - см і - М и сут ї чом
ШТАНИ МАО оо ляти УК нені й я ! я, т
КО у я щем ще г х .
Мах - З Й де КИ - означає засіб РНКІі, а "ліганд сурб" являє собою відповідну лігандну структуру. Структура засобу РНКі, що використовується в цьому прикладі (АБО4835), представлена вище в Прикладі 4.
Кожна група включала п'ять (5) щурів (п-5). Щурів умертвляли на 9-й день дослідження, відбирали проби з обох легенів, проби гомогенізували і з них виділяли загальну РНК. Експресію
МРНК альфа-Емас (ЗСММТА) кількісно визначали з допомогою кількісної ПЛР з використанням зонда, нормували по експресії САРОН і виражали у вигляді частки відносно контрольної групи, що отримувала носій (середнє геометричне значення х 95 9о довірчий інтервал).
Таблиця 4
Середня відносна експресія МРНК гЕМас в день умертвіння (день 9) в Прикладі 5
Середня ВіДНОСНа Низька Висока
Група експресія МРНК
ТЕМаС (помилка) (помилка)
Група 2 (РНКІ-агент-Сувз-(п-етил-Маї)-
РЕС2 -тридентатний ліганд інтегрину 0,543 0,114 0,145 ауВб, Структура 2)
Група З (засіб РНКІі-Сувз-(п-етил-Маї)-
РЕС2 -тридентатний ліганд інтегрину 0,541 0,138 0,185 ауВб, Структура 5.1)
Група 4 (засіб РНКІі-Сувз-(п-етил-Маї)-
РЕС2 -тридентатний ліганд інтегрину 0,522 0,151 0212 ауВб, Структура 5.2)
Група 5 (засіб РНКІі-Сувз-(п-етил-Маї)-
РЕС2 -тридентатний ліганд інтегрину 0,399 0108 0,148 ауВб, Структура 6)
Група 6 (засіб РНКІі-Сувз-(п-етил-Маї)-
РЕС2 -тридентатний ліганд інтегрину 0,351 0100 0,139 ауВб, Структура 6.1)
Група 7 (засіб РНКІі-Сувз-(п-етил-Маї)-
РЕС2 -тридентатний ліганд інтегрину 0,568 0,061 0,068 ауВб, Структура 6.2)
Як показано вище в Таблиці 4, кожний засіб РНКі до альфа-ЕМасС показав зниження експресії МРНК у щурів порівняно з контролем. Наприклад, група 6 (АбО4835-тридентатна
Структура 6.1) показала зниження середньої експресії МРНК гЕМаС приблизно 65 95 (0,351) порівняно з контролем; група 2 (АБО4835-тридентатна Структура 2) показала зниження середньої експресії МРНК гЕМасС приблизно 46 95 (0,543 порівняно з контролем; і група 4 (АрО4835-тридентатна Структура 5.2) показала зниження середньої експресії МРНК гЕМаС приблизно 48 95 (0,522) порівняно з контролем.
Приклад 6
Орофарингеальне аспіраційне введення щурам засобів РНКІі, націлених на альфа-ЕМас, кон'югованих з лігандами інтегрину суВб, в умовах іп мімо
Самцям щурів 5ргадое ЮаулЛеу, шляхом орофарингеального ("ОФ") аспіраційного ведення в день 1 дослідження вводили, використовуючи піпетку, дозу 200 мікролітрів, яка у відповідних групах дозування включала наступне.
Таблиця 5
Дози, що вводяться групам щурів в Прикладі 6 дозування
Ізотонічний сольовий розчин (без засобу РНКІ) Однократна ОФ дозав день 1 0,5 мг/кг дволанцюжкового засобу РНКІі к альфа-ЕМас (АБО5347), кон'югованого з тридентатним лігандом інтегрину , Однократна ОФ 2 сурВб Структури 2 з глутаровим лінкером (тобто має структуру, , ! . дозав день 1 представлену в структурі ЗОба), в ізотонічному сольовому розчині. 0,5 мг/кг дволанцюжкового засобу РНКІі к альфа-ЕМас (АБО5453), кон'югованого з тридентатним лігандом інтегрину . Сингл ЕП доза в
З суб Структури 2 з глутаровим лінкером (тобто має структуру, ень 1 представлену в структурі ЗОба), в ізотонічному сольовому А розчині. 0,5 мг/кг дволанцюжкового засобу РНКІі к альфа-ЕМас (АБО5453), кон'югованого з тридентатним лігандом інтегрину Однократна. ОФ 4 сурВб Структури 6 з глутаровим лінкером (тобто має структуру, . г. й дозав день 1 представлену в структурі ЗОба), у вигляді ізотонічного сольового розчину. 0,5 мг/кг дволанцюжкового засобу РНКІі к альфа-ЕМас (АБО5453), кон'югованого з тридентатним лігандом інтегрину Однократна. ОФ 5 суб Структури 6.1 з глутаровим лінкером (тобто має : Я . дозав день 1 структуру, представлену в структурі З Оба), в ізотонічному сольовому розчині. 0,5 мг/кг дволанцюжкового засобу РНКІі к альфа-ЕМас (АБО5453), кон'югованого з тридентатним лігандом інтегрину Однократна. ОФ сурВб Структури 7 з глутаровим лінкером (тобто має структуру, , ! . дозав день 1 представлену в структурі ЗОба), в ізотонічному сольовому розчині.
Синтезували засоби РНКі, що мають нуклеотидні послідовності, націлені на ген-мішень альфа-ЕМаС людини, і вони включали функціональні групи (МНо-Св) на 5'- кінці смислового ланцюга для полегшення кон'югаці з лігандами інтегрину сурб. Засоби РНКІі, що використовуються в даному Прикладі, містили модифіковані нуклеотиди і більше ніж один зв'язок, який не був нефосфодіефірним, і вони включали наступні нуклеотидні послідовності:
А0ОБ5З47:
Послідовність смислового ланцюга (5' -з 3): (МНг-Св)сзсидидсалй!СіСТтадаасааацав(іпуАВ) (ЗЕО І МОЗ)
Послідовність смислового ланцюга (5' -з 3): сРгризАїзиз Листи ета сти ХасСтастастівс (ЗЕО ІО МО 2), і
А0рОБ5453:
Послідовність смислового ланцюга (5' -з 3): (МНг-Св)сзсидидсалй!СіСТтадаасааацав(іпуАВ) (ЗЕО І МОЗ)
Послідовність антисмислового ланцюга (5 » 3):
изАїзиз Шисти Ле тЯ сти ОтасСтастаєтва (ЗЕО ІО МО 4), де (іпу"АБ) являють собою інвертований (3'-3'-зв'язаний) дезоксирибонуклеотид з видаленими основами; з являє собою фосфортіосатний зв'язок; а, с, ді и являють собою відповідно 2'-О-метиладенозин, цитидин, гуанозин або уридин;
АТ, СТІ, сті ОТ являють собою відповідно 2'-фтораденозин, цитидин, гуанозин або уридин; сРгри являє собою 5'-циклопропілфосфонат-2"-О-метилуридин (див. наприклад, Таблицю А); і (МН2-Св) являє собою Св-кінцевий амін, що полегшує цілеспрямоване кон'югування ліганду, описаного тут (див., наприклад, Таблицю А).
Для Груп 2,34, 5 і Є відповідні ліганди інтегрину суВб кон'югували з засобами РНКІ через тридентатний каркас/лінкер, який включав глутаровий лінкер (тобто за допомогою додавання глутарової кислоти), як показано на Структурі З0ба. м-М ший о а , ! ох и дл не т -йй ре
І ек ; ! І І ож ливалоО УМО за бу і; З" -й я | н М
М га в г щі р ий
Меса т
Ми лігнндо ЧО ПО -о (Структура 3008), ке В де 7 се же. означає засіб РНКІі, а "ліганд суб" являє собою відповідну лігандну структуру. . . . . . . .
Для Груп 7 і 8 відповідні ліганди інтегрину суб кон'югували з засобами РНКІі через тридентатний каркас/лінкер, як показано на Структурі ЗЗба.
віганд ша . мя щи о А щі і. оо
НМ шо 5 у о, о ! К Е - у у у ра їх Ко и м, чт н ЕЕ тнв : С й 2 її п І х днищ ЗКВВ он ри Дт т і а ї ще в З г хо мл й
Мох 7 Ме й
ЯМ ші х півня ПУЕ -Е Бе
ВИСШМХ ди
М іЄСтруктура З3П8).
ДЕК Б КАХ. - - "- " : Н Н де означає засіб РНКІ, а "ліганд сурб" являє собою відповідну лігандну структуру.
Препарати вводили чотирьом (4) щурам груп 1,3,4, 6 і 7 (п-4); п'яти (5) щурам груп 5 і 8 (п-5); і трьом (3) щурам група 2 (п-3). Щурів умертвляли на 9-й день дослідження, відбирали проби з обох легенів, проби гомогенізували і з них виділяли загальну РНК. Експресію мРНК альфа-Емас (ЗСММТА) кількісно визначали з допомогою кількісної ПЛР з використанням зонда, нормували по експресії ЗАРОН і виражали як частину контрольної групи (середнє геометричне значення х 95 95 довірчий інтервал).
Таблиця 6
Середня відносна експресія МРНК гЕМас в день умертвіння (день 9) в Прикладі 6
Количество Середня відносна Низька Висока
Група животних експресія мРНК
М - ТЕМаС (помилка) (помилка) сольовий розчин
Група 2 (0,5. мг/кг
АрО5З347-глутарин- тридентатний ліганд З 0,486 0,090 0,110 інтегрину сурб,
Структура 2)
Група З (0,5 мг/кг
АрО5453-глутарин- тридентатний ліганд 4 0,615 0,066 0,074 інтегрину аУурб,
Структура 2)
Група 4 (0,5 мг/кг
АрО5453-глутарин- тридентатний ліганд 4 0,512 0,119 0,156 інтегрину аУурб,
Структура 6)
Група 5 (0,5 мг/кг
АрО5453-глутарин- тридентатний ліганд 5 0,494 0,101 0,127 інтегрину аУурб,
Структура 6.1)
Група 6 (0,5 мг/кг
АрО5453-глутарин- тридентатний ліганд 4 0,743 0,104 0,121 інтегрину аУурб,
Структура 7)
Як показано в наведеній вище Таблиці 6, кожний засіб РНКІі до альфа-ЕМас показав у щурів зниження експресії МРНК порівняно з контролем. Наприклад, група 5 (АБО5453-тридентатний ліганд інтегрину смрВб Структури 6.1) показала середнє зниження експресії мРНК гЕМмМасС приблизно 51 95 (0,494) порівняно з контролем, і група З (АБО5453-тридентатний ліганд інтегрину ауВб Структури 2) показала середнє зниження експресії МРНК гЕМас приблизно 38 95 (0,615) порівняно з контролем. Крім того, група 5 (яка отримувала ліганд інтегрину оурб
Структури 6.1) показала кращі результати порівняно з групою б (яка отримувала ліганд інтегрину ауВб Структури 7), що свідчить про хіральність (5), як випливає з Структури 6.1, порівняно з (г), як випливає з Структури 7 для лігандів інтегрину суб.
Приклад 7
Орофарингеальне аспіраційне введення щурам засобів РНКІі, націлених на альфа-ЕМас, кон'югованих з лігандами інтегрину суВб, в умовах іп мімо
Самцям щурів Зргадне Оам/іеу, шляхом орофарингеального ("ОФ") аспіраційного ведення в день 1 дослідження вводили, використовуючи піпетку, дозу 200 мікролітрів, яка у відповідних групах дозування включала наступне.
Таблиця 7
Дози, що вводяться групам щурів в Прикладі 7 доза в день 1 0,5 мг/кг засобу РНКІі к альфа-ЕМасС АБО5347, кон'югованого 2 з тридентатним лігандом інтегрину сурб Структури 2 з| Однократна ОФ глутаровим лінкером (тобто має Структуру 300ба), в | дозав день 1 ізотонічному фізіологічному розчині. 0,5 мг/кг засобу РНКІі к альфа-ЕМасС АБО5347, кон'югованого
З з тридентатним лігандом інтегрину сурб Структури 6.1 з | Однократна ОФ глутаровим лінкером (тобто має Структуру 300ба), в | дозав день 1 ізотонічному фізіологічному розчині. 0,5 мг/кг засобу РНКІі к альфа-ЕМасС АБОБ5453, кон'югованого
А з тридентатним лігандом інтегрину сурб Структури 2 з| Однократна ОФ глутаровим лінкером (тобто має Структуру 300ба), в | дозав день 1 ізотонічному фізіологічному розчині. 0,5 мг/кг засобу РНКІі к альфа-ЕМасС АБО5453, кон'югованого з тридентатним лігандом інтегрину сурб Структури 9 з | Однократна ОФ глутаровим лінкером (тобто має структуру, представлену в | доза в день 1 структурі ЗООа), в ізотонічному фізіологічному розчині. 0,5 мг/кг засобу РНКІі к альфа-ЕМасС АБО5453, кон'югованого з тридентатним лігандом інтегрину сурб Структури б з | Однократна ОФ глутаровим лінкером (тобто має Структуру 300ба), в | дозав день 1 ізотонічному фізіологічному розчині. 0,5 мг/кг засобу РНКІі к альфа-ЕМасС АБОБ5453, кон'югованого 7 з тридентатним лігандом інтегрину сурб Структури 8 з | Однократна ОФ глутаровим лінкером (тобто має Структуру 300ба), в | дозав день 1 ізотонічному сольовому розчині. 0,5 мг/кг засобу РНКІі к альфа-ЕМасС АБОБ5453, кон'югованого з тридентатним лігандом інтегрину суб Структури 6.1 з | Однократна ОФ глутаровим лінкером (тобто має Структуру 300ба), в | дозав день 1 ізотонічному фізіологічному розчині. 0,5 мг/кг засобу РНКІі к альфа-ЕМасС АБОБ5453, кон'югованого з тридентатним лігандом інтегрину смВб Структури 10 з| Однократна ОФ глутаровим лінкером (тобто має Структуру 300ба), в | дозав день 1 ізотонічному сольовому розчині. 0,5 мг/кг засобу РНКІі к альфа-ЕМасС АБОБ5453, кон'югованого з тридентатним лігандом інтегрину суб Структури 11 з | Однократна ОФ глутаровим лінкером (тобто має Структуру З00ба), в | дозав день 1 ізотонічному фізіологічному розчині. 0,5 мг/кг засобу РНКі ко альфа-ЕМасб (АБОБ453), кон'югованого з тридентатним лігандом на основі пептиду, 14 націленого на епітеліальні клітини, через амінний (МНо2-Сєв) | Однократна Оф зв'язок на термінальному 5'-кінці смислового ланцюга, що | доза в день 1 додатково включає фрагмент РЕС 20 кілодальтон (кДа), в ізотонічному сольовому розчині.
Синтезували засоби РНКі, що мають нуклеотидні послідовності, націлені на ген-мішень альфа-ЕМасС людини, і для полегшення кон'югаці з лігандами інтегрину суб вони включали 5 функціональні групи (МНг-Св) на 5-кінці смислового ланцюга. Нуклеотидні послідовності для засобів РНКІі, що використовуються в цьому Прикладі, представлені в Прикладі Є вище. Для груп 2, 3,4,5,6,7,8, 9 і 10 відповідні ліганди інтегрину суВб кон'югували з засобами РНКІ через тридентатний каркас/лінкер, який включав глутаровий лінкер, як показано на Структурі З0ба в
Прикладі б, вище. Для групи 11 ліганди до епітеліальним клітин включали пептиди КОО- 10 міметики, які, як відомо, зв'язуються з інтегрином суб, і вони включали фрагмент РЕС 20 кДа як фармакокінетичний (ФК) модулятор.
Препарати вводили чотирьом (4) щурам в кожній групі (п-4). Щурів умертвляли на 9-й день дослідження, відбирали проби з обох легенів, проби гомогенізували і з них виділяли загальну
РНК. Експресію мРНК альфа-Емас (5СММТА) кількісно визначали з допомогою кількісної ПЛР з використанням зонда, нормували по експресії САРОН і виражали як частину контрольної групи (середнє геометричне значення х 95 95 довірчий інтервал).
Таблиця 8
Середня відносна експресія МРНК гЕМас в день умертвіння (день 9) в Прикладі 7
Середня ВіДНОСНа Низька Висока
Група експресія МРНК
ТЕМАС (помилка) (помилка)
Група 2 (0,5 мг/кг АБО5347-глутарин- тридентатний ліганд інтегрину амрб, 0,469 0,101 0,129
Структура 2)
Група З (0,5 мг/кг АБО5347-глутарин- тридентатний ліганд інтегрину смрб, 0,358 0,078 0,100
Структура 6.1)
Група 4 (0,5 мг/кг АБО5453-глутарин- тридентатний ліганд інтегрину смрб, 0,562 0,086 0,102
Структура 2)
Група 5 (0,5 мг/кг АБО5453-глутарин- тридентатний ліганд інтегрину смрб, 0,620 0,168 0,230
Структура 9)
Група 6 (0,5 мг/кг АБО5453-глутарин- тридентатний ліганд інтегрину самрб, 0,559 0,099 0,120
Структура 6)
Група 7 (0,5 мг/кг АБО5453-глутарин- тридентатний ліганд інтегрину смрб, 0,691 0,072 0,081
Структура 8)
Група 8 (0,5 мг/кг АБО5453-глутарин- тридентатний ліганд інтегрину смрб, 0,454 0,055 0,063
Структура 6.1)
Група 9 (0,5 мг/кг АБО5453-глутарин- тридентатний ліганд інтегрину смрб, 0,454 0,080 0,097
Структура 10)
Група 10 (0,5 мг/кг АБО5453-глутарин- тридентатний ліганд інтегрину амрб, 0,577 0113 0,140
Структура 11
Група 11 (0,5 мг/кг АБОБ5453- тридентатний ліганд на основі пептиду, 0,558 0,057 0,064 націленого на епітеліальні клітини, РЕС 20 кДа)
Як показано в наведеній вище Таблиці 8, кожний засіб РНКІі до альфа-ЕМас показав у щурів зниження експресії мРНК порівняно з контролем. Наприклад, група З (АБОБ5347-глутарин- тридентатний ліганд інтегрину сурб, Структура 6.1) показала середнє зниження експресії МРНК
ГЕМасС приблизно 6495 (0,358) порівняно з контролем, а група 8 (АБО5453-глутарин- тридентатний ліганд інтегрину суб, Структура 6.1) показала середнє зниження експресії МРНК
ГЕМас приблизно 55 95 (0,454) порівняно з контролем. Крім того, все ліганди інтегрину аурВб в
Прикладі 7 (тобто Структура 2, Структура 6, Структура 6.1, Структура 8, Структура 9, Структура 10 ї Структура 11) показали рівні нокдауну, порівнянні з тридентатним лігандом на основі пептиду, націленого на епітеліальні клітини, який додатково містив фрагмент РЕС 20 кДа для посилення фармакокінетичного ефекту, який вводили тваринам в групі 11.
Приклад 8
Інтратрахеальне введення щурам засобів РНКІ, націлених на альфа-ЕмМас, кон'югованих з лігандами інтегрину амурб, в умовах іп мімо
Самцям щурів Зргадпне-Оау/еу в день 1 і в день 2 дослідження через мікророзпилювальний пристрій (Репп Сепіцигу, Рійадеї!рніа, РА) інтратрахеально (ІТ) вводили дозу об'ємом 200 мкл, яка у відповідних групах дозування включала наступне.
Таблиця 9
Дози, що вводяться групам щурів в Прикладі 8 дозування 1,5 мг/кг засобу РНКІі к альфа-ЕмасС АБО4835, кон'югованого з монодентатним лігандом на основі пептиду, націленого на 2 епітеліальні клітини, через амінний (МНео-Св) зв'язок на 5"-кінці | ІТ доза в день 1 смислового ланцюга, що додатково включає фрагмент РЕС 20 | і день 2 кілодальтон (кДа), цистеїновий лінкер і пептидний лінкер
ЕСЕР, в ізотонічному сольовому розчині. 0,5 мг/кг засобу РНКІі к альфа-ЕМасС АБО4835, кон'югованого з
З тридентатним лігандом інтегрину смВб Структури 1, що | ІТ доза в день 1 включає цистеїновий лінкер (тобто має Структуру 331а), в | ідень2 ізотонічному сольовому розчині. 1,5 мг/кг засобу РНКІі к альфа-ЕмасС АБО4835, кон'югованого з
А тридентатним лігандом інтегрину смВб Структури 1, що | ІТ доза в день 1 включає цистеїновий лінкер (тобто має Структуру 331а), в | ідень2 ізотонічному фізіологічному розчині. 1,5 мг/кг альфа-ЕМасС-РНК-агента АБО4835, кон'югованого з тридентатним лігандом інтегрину смВб Структури 1, що | ІТ доза в день 1 включає цистеїн-п-етилмалеімідний лінкер (тобто має | і день2
Структуру ЗЗба), в ізотонічному сольовому розчині. 1,5 мг/кг засобу РНКІі к альфа-ЕмасС АБО4835, кон'югованого з тридентатним лігандом на основі пептиду, націленого на ІТ т 2. ; . , в, доза в день 1 епітеліальні клітини, через амінний (МНе-Св) зв'язок на 5'-кінці | . і день 2 смислового ланцюга, що додатково включає фрагмент РЕС 20
КДа і цистеїновий лінкер, в ізотонічному сольовому розчині 1,5 мг/кг засобу РНКІі к альфа-ЕмасС АБО4835, кон'югованого з 7 тридентатним лігандом інтегрину суВб Структури 1 з) ІТ дозав день 1 глутаровим лінкером (тобто має Структуру 300ба), в| ідень2 ізотонічному фізіологічному розчині. 5 Синтезували засоби РНКі, що мають нуклеотидні послідовності, націлені на ген-мішень альфа-ЕМасС людини, і для полегшення кон'югаці з лігандами інтегрину суб вони включали функціональні групи (МНг-Св) на 5-кінці смислового ланцюга. Нуклеотидні послідовності для засобів РНКІ, що використовуються в цьому Прикладі, показані вище в Прикладі 4.
Для Груп З ії 4 відповідні ліганди інтегрину сурб Структури 1 кон'югували з засобами РНКІ через тридентатний каркас і лінкерну структуру, що містить цистеїновий лінкер, як показано нижче на Структурі 331а.
лизяд суда ок
МН, ай ка о
НМ. на. ах з кт ше ди
Н ! му ть і с 5, Я го ї й но у птганяо се ве я, а: шк) дня ЕМ пен п У т М пи З й
М З ї У ча з ям то ц , Ск У
Мах т т й -- М ей х. х з х плідна еВ Є я - їй дя яке ев (Структура 5318), пр с. У «ех ЗЕ де схе означає засіб РНКІі, а "ліганд сурВб" являє собою відповідну лігандну структуру. , , , ,
Для групи 5 ліганди інтегрину ауВб кон'югували з засобами РНКІ через тридентатний каркас і лінкерну структуру, яка включала цистеїн-п-етилмалеїмідний лінкер, як показано на Структурі
ЗЗба Приклади 6, вище. Для групи 7 ліганди інтегрину сурб кон'югували з засобами РНКІ через тридентатний каркас і лінкерну структуру, яка включала лінкер з глутарової кислоти, як показано на Структурі Прикладу 6, вище. Для Груп 2 і 6 націлювальні ліганди включали пептиди КОЮ- міметики і фрагмент РЕС 20 кДа як фармакокінетичний (ФК) модулятор.
Для кожної з груп 2-7 використовували однакові засоби РНКІі до альфа-ЕМас.
Препарати вводили п'яти (5) щурам груп 1, 3, 4, 5 ї 6 (п-5) і чотирьом (4) щурам групи 7 (п-4). Щурів умертвляли на 9-й день дослідження, відбирали проби з обох легенів, проби гомогенізували і з них виділяли загальну РНК. Експресію МРНК альфа-ЕМас (5СММ1А) кількісно визначали з допомогою кількісної ПЛР з використанням зонда, нормували по експресії САРОН і виражали як частину контрольної групи (середнє геометричне значення ж 95 95 довірчий інтервал).
Таблиця 10
Середня відносна експресія МРНК гЕМас в день умертвіння (день 8) в Прикладі 8
Середня відносна Низька Висока
Група експресія МРНК (помилка) (помилка) "ЕМаС
Група 2 (1,5 мг/кг АБО4835-Сув-ЕСЕР- монодентатний ліганд на основі 0,354 0,078 0100 пептиду-РЕС 20 кДа)
Група З (0,5 мг/кг АБО4835-Сув- тридентатний ліганд інтегрину смрВб 0,695 0,215 0,912
Структури 1)
Група 4 (1,5 мг/кг АБО4835-Сув- тридентатний ліганд інтегрину смрВб 0,438 0,077 0,093
Структури 1)
Група 5 (1,5 мг/кг АБО4835-Сузв-(п-етил-
Маї)-тридентатний ліганд інтегрину 0,349 0. 083 0108 ауВб Структури 1)
Група 6 (1,5 мг/кг АЮО4835-Субз-РЕС 20 кКДа-тридентатний ліганд на основі 0,643 0,070 0,079 пептиду)
Група 7 (1,5 мг/кг АБО4835-глутарин- тридентатний ліганд інтегрину амрб 0,648 0,184 0,256
Структури 1)
Як показано в наведеній вище Таблиці 10, кожний засіб РНКі до альфа-ЕМасС показав зниження експресії мРНК у щурів порівняно з контролем. Наприклад, група 5 (АБО4835-Су5-(п- етил-Маї)-тридентатний ліганд інтегрину суб Структури 1) показала середнє зниження експресії МРНК гЕМасС приблизно 65 95 (0,358) порівняно з контролем, що порівняно з рівнем нокдауну для групи 2, де використовували ліганд на основі пептиду, націленого на епітеліальні клітини, і фрагмент РЕС 20 кДа як фармакокінетичний модулятор.
Приклад 9
Інтратрахеальне введення щурам засобів РНКІ, націлених на альфа-ЕМас, кон'югованих з лігандами інтегрину амрб, в умовах іп мімо
Самцям щурів 5ргадое-Оаулеу в день 1 і в день 2 дослідження, через мікророзпилювальний пристрій (Репп Сепіцигу, Рійадеї!рніа, РА) інтратрахеально (ІТ) вводили дозу об'ємом 200 мкл, яка у відповідних групах дозування включала наступне.
Таблиця 11
Дози, що вводяться групам щурів в Прикладі 9 1,5 мг/кг засобу РНКі к альфа-ЕМаС А0О4835, 2 кон'югованого з тридентатним лігандом інтегрину смрб | Ії доза в день 1 і
Структури 1 з глутаровим лінкером (тобто має Структуру | день2
ЗОба), в ізотонічному фізіологічному розчині. 1,5 мг/кг засобу РНКі к альфа-ЕМаС А0О4835,
З кон'югованого з тридентатним лігандом інтегрину смрб | Ії доза в день 1 і
Структури 2 з глутаровим лінкером (тобто має Структуру | день2
ЗОба), в ізотонічному фізіологічному розчині. 1,5 мг/кг засобу РНКі к альфа-ЕМаС А0О4835, кон'югованого з тридентатним лігандом інтегрину смрб | Ії доза в день 1 і
Структури 2, що включає цистеїновий лінкер (тобто має | день 2
Структуру 331а), в ізотонічному фізіологічному розчині.
Синтезували засоби РНКі, що мають нуклеотидні послідовності, націлені на ген-мішень альфа-ЕМасС людини, і для полегшення кон'югаці з лігандами інтегрину суб вони включали функціональні групи (МНг-Св) на 5-кінці смислового ланцюга. Нуклеотидні послідовності для засобів РНКІі, що використовуються в цьому Прикладі, показані вище в Прикладі 4. Для Груп 2 і
З відповідні інтегринові ліганди сурб кон'югували з засобами РНКі через тридентатний каркас/лінкер, який включав глутаровий лінкер, як показано вище на Структурі ЗОба Приклади 6.
Для групи 6 відповідний ліганд інтегрину аурб кон'югували з засобами РНКІі через тридентатну каркасну/лінкерну структуру, яка включала цистеїновий лінкер, як показано вище на Структурі 331а Приклади 8.
Для кожної з груп 2-8 використовували однакові засоби РНКІ до альфа-ЕМас.
Препарати вводили п'яти (5) щурам групи 1 (п-:5) і чотирьом (4) щурам в кожній з груп 2 і З (п-4). Щурів умертвляли на 9-й день дослідження, відбирали проби з обох легенів, проби гомогенізували і з них виділяли загальну РНК. Експресію МРНК альфа-ЕмМас (5СММ1А) кількісно визначали з допомогою кількісної ПЛР з використанням зонда, нормували по експресії САРОН і виражали як частину контрольної групи (середнє геометричне значення ж 95 95 довірчий інтервал).
Таблиця 12
Середня відносна експресія МРНК гЕМас в день умертвіння (день 9) в Прикладі 9.
Середня відносна Низька Висока
Група експресія МРНК "ЕМаС (помилка) (помилка)
Група 2 (1,5 мг/кг АБО4835-глутарин- тридентатний ліганд інтегрину сурб, 0,545 0121 0,156
Структура 1)
Група З (1,5 мг/кг АрО4835-глутарин- тридентатний ліганд інтегрину сурб, 0,483 0. 038 0,041
Структура 2)
Група б (1,5 мг/кг АБО4835-Сув- тридентатний ліганд інтегрину, сурб 0237 0,125 0,267
Структура 2)
Як показано в наведеній вище Таблиці 12, кожний засіб РНКі до альфа-ЕМасС показав зниження експресії МРНК у щурів порівняно з контролем. Наприклад, група З (засіб РНКІ- глутарін-трідентатний ліганд інтегрину суб, Структура 2) показала середнє зниження експресії
МРНК гтЕМасС приблизно 52 95 (0,483) порівняно з контролем, і група 6 (засіб РНКІі-Сувз- трідентатний ліганд інтегрину, осмВб Структура 2) показала середнє зниження експресії мРНК
ГЕМас приблизно 76 95 (0,237) порівняно з контролем.
Приклад 10
Інтратрахеальне введення щурам засобів РНКІ, націлених на альфа-ЕМас, кон'югованих з лігандами інтегрину амрб, в умовах іп мімо
Самцям щурів 5ргадое-Оаулеу в день 1 і в день 2 дослідження, через мікророзпилювальний пристрій (Репп Сепішйгу, РійПааеїрніа, РА) інтратрахеально (ІТ) вводили дозу об'ємом 200 мкл, яка у відповідних групах дозування включала наступне.
Таблиця 13
Дози, що вводяться групам щурів в Прикладі 10. 1,0 мг/кг засобу РНК Кк альфа-ЕМмаС А0О4835, кон'юЮгованого з монодентатним лігандом на основі пептиду, націленого на епітеліальні клітини, через амінний ІТ . ! т, доза в день 1 |і 2 (МН2-Св) зв'язок на 5-кінці смислового ланцюга, що 2 додатково включає фрагмент РЕС 20 кДа, цистеїтновий день лінкер і пептидний лінкер ЕСЕР, в ізотонічному сольовому розчині. 1,5 мг/кг засобу РНК Кк альфа-ЕМмаС А0О4835,
З кон'югованого з тридентатним лігандом інтегрину сомрб | ІТ доза в день 1 і
Структури 1, що включає цистеїновий лінкер (тобто має | день2
Структуру 331а), в ізотонічному фізіологічному розчині. 1,5 мг/кг засобу РНК Кк альфа-ЕМмаС А0О4835,
А кон'югованого з тридентатним лігандом інтегрину сомрб | ІТ доза в день 1 і
Структури 2, що включає цистеїновий лінкер (тобто має | день2
Структуру 331а), в ізотонічному фізіологічному розчині. 1,0 мг/кг засобу РНК Кк альфа-ЕМмаС А0О4835, кон'югованого з тридентатним лігандом інтегрину сомрб | ІТ доза в день 1 і
Структури 2, що включає цистеїновий лінкер (тобто має | день2
Структуру 331а), в ізотонічному сольовому розчині. 0,50 мг/кг засобу РНКі к альфа-ЕМаС АбБО4835, кон'югованого з тридентатним лігандом інтегрину сомрб | ІТ доза в день 1 і
Структури 2, що включає цистеїновий лінкер (тобто має | день2
Структуру 331а), в ізотонічному сольовому розчині. 0,10 мг/кг засобу РНКі к альфа-ЕМаС АбБО4835, 7 кон'югованого з тридентатним лігандом інтегрину сомрб | ІТ доза на день 1 і
Структури 2, що включає цистеїновий лінкер (тобто має | день2
Структуру 331а), в ізотонічному сольовому розчині.
Синтезували засоби РНКі, що мають нуклеотидні послідовності, націлені на ген-мішень альфа-ЕМасС людини, і для полегшення кон'югаці з лігандами інтегрину суб вони включали 5 функціональні групи (МНг-Св) на 5-кінці смислового ланцюга. Нуклеотидні послідовності для засобів РНКІ, що використовуються в цьому Прикладі, показані вище в Прикладі 4. Для груп 3, 4, 5 і б відповідні ліганди інтегрину сурб кон'югували з засобами РНКІі через тридентатну каркасну/лінкерну структуру, яка включала цистеїновий лінкер, як показано вище на Структурі 331а в Прикладі 8. Для групи 2 націлювальні ліганди включали пептиди КОЮО-міметики і фрагмент РЕС 20 кДа як фармакокінетичний (ФК) модулятор, і пептидний лінкер ЕСЕР.
Для кожної з груп 2-7 використовували однакові засоби РНКІі до альфа-ЕМас.
Препарати вводили п'яти (5) щурам в кожній групі (п-5). Щурів умертвляли на 9-й день дослідження, відбирали проби з обох легенів, проби гомогенізували і з них виділяли загальну
РНК. Експресію мРНК альфа-Емас (5СММТА) кількісно визначали з допомогою кількісної ПЛР з використанням зонда, нормували по експресії СОАРОН і виражали як частину контрольної групи (середнє геометричне значення - 95 95 довірчий інтервал).
Таблиця 14
Середня відносна експресія МРНК гЕМас в день умертвіння (день 8) в Прикладі 10 експресія МРНК гЕМасС (помилка) (помилка) розчин)
Група 2 (1,0 мг/кг АрО4835-Сув-
РЕС2ОкДа-РСЕР-РЕСі2о-ліганд на 0,531 0,132 0,176 основі пептиду, націленого на епітеліальні клітини)
Група З (1,5 мг/кг АрО4835-Сув- тридентатний ліганд інтегрину 0,451 0,156 0,238 ауВб, Структура 1)
Група 4 (1,5 мг/кг АрО4835-Сув- тридентатний ліганд інтегрину 0,418 0,077 0,094 ауВб, Структура 2)
Група 5 (1,0 мг/кг АрО4835-Сув- тридентатний ліганд інтегрину 0,436 0,043 0,048 ауВб, Структура 2)
Група 6 (0,5 мг/кг АрО4835-Сув- тридентатний ліганд інтегрину 0,537 0,049 0,054 ауВб, Структура 2)
Група 7 (01 мг/кг АрО4835-Сув- тридентатний ліганд інтегрину 0,616 0,069 0,078 ауВб, Структура 2)
Як показано в наведеній вище Таблиці 14, кожний засіб РНКі до альфа-ЕМасС показав зниження експресії МРНК у щурів порівняно з контролем. Зокрема, група 5 (1,0 мг/кг АБО4835-
Суз-тридентатний ліганду інтегрину суб, Структура 2) показала значний рівень інгібування експресії альфа-ЕМасС порівняно з групою 2 (1,0 мг/кг АрО4835-Суз-РЕС2О0кДа-ЕСЕР-РЕС20- ліганд на основі пептиду, націленого на епітеліальні клітини), незважаючи на те, що використовуваний засіб не включав великий фрагмент РЕС 20 кДа як фармакокінетичний модулятор (група 5-нокдаун приблизно 56 95 (0,436); група 2-нокдаун приблизно 47 95 (0,531)).
Приклад 11
Орофарингеальне аспіраційне введення щурам засобів РНКІі, націлених на альфа-ЕМас, кон'югованих з лігандами інтегрину суВб, в умовах іп мімо
Самцям щурів 5ргадое ЮаулЛеу, шляхом орофарингеального ("ОФ") аспіраційного ведення в дні 1, 2 і З дослідження вводили, використовуючи піпетку, дозу 200 мікролітрів, яка у відповідних групах дозування включала наступне.
Таблиця 15
Дози, що вводяться групам щурів в Прикладі 11 ізотонічному сольовому розчині. днів1,2і 3 ізотонічному сольовому розчині днів1,2і3 ізотонічному сольовому розчині днів1,2і 3 ізотонічному сольовому розчині днів1,2і 3 0,01 мг/кг АБО5453, кон'югованого З тридентатним лігандом інтегрину амВб,| ОФ дозу вводили в кожен з
Структура 6.1, в ізотонічному фізіологічному | днів 1,213 розчині. 0,05 мг/кг АБО5453, кон'югованого З 7 тридентатним лігандом інтегрину амВб,| ОФ дозу вводили в кожен з
Структура 6.1, в ізотонічному фізіологічному | днів 1,213 розчині. 0,15 мг/кг АБО5453, кон'югованого З тридентатним лігандом інтегрину ам8Вб,| ОФ дозу вводили в кожен з
Структура 6.1, в ізотонічному фізіологічному | днів 1,213 розчині. 0,50 мг/кг АБО5453, кон'югованого З тридентатним лігандом інтегрину амВб,| ОФ дозу вводили в кожен з
Структура 6.1, в ізотонічному фізіологічному | днів 1,213 розчині.
Синтезували засоби РНКі, що мають нуклеотидні послідовності, націлені на ген-мішень альфа-ЕМасС людини, і для полегшення кон'югаці з лігандами інтегрину суб вони включали функціональні групи (МНг-Св) на 5-кінці смислового ланцюга. Нуклеотидні послідовності для засобів РНКі, що використовуються в цьому Прикладі, представлені вище в Прикладі 6.
Відповідні ліганди інтегрину сомрб кон'югували з засобами РНКі через тридентатний каркас/лінкер, який включав глутаровий лінкер, як показано вище на Структурі ЗОба в Прикладі б.
Препарати вводили п'яти (5) щурам груп 1, 3, 4, 5, 8 і 9 (п-5) і шести (6) щурам груп 2, бі 7 (п-б). Щурів умертвляли на 9-й день дослідження, відбирали проби з обох легенів, проби гомогенізували і з них виділяли загальну РНК. Експресію МРНК альфа-ЕмМас (5СММ1А) кількісно визначали з допомогою кількісної ПЛР з використанням зонда, нормували по експресії САРОН і виражали як частину контрольної групи (середнє геометричне значення ж 95 95 довірчий інтервал).
Таблиця 16
Середня відносна експресія МРНК гЕМас в день умертвіння (день 9) в Прикладі 11.
Середня ВіДНОСНа Низька Висока
Група експресія МРНК "ЕМаС (помилка) (помилка)
Група 1 (ізотонічний сольовий розчин) 1,000 0,199 0,249
Група 2 (0,01 мг/кг АБО5347 ("голий 1,016 0,219 0,279 засіб РНКІ
Група З (0,05 мг/кг АБО5347 ("голий
Група 4 (0,15 мг/кг АБО5347 ("голий
Група 5 (0,50 мг/кг АБО5347 ("голий
Група 6 (0,01 мг/кг АрО5453-глутарин- тридентатний ліганд інтегрину самрб, 0,646 0,058 0,063
Структура 6.1)
Група 7 (0,05 мг/кг АБО5453-глутарин- тридентатний ліганд інтегрину самрб, 0,432 0,044 0,049
Структура 6.1)
Група 8 (0,15 мг/кг АБО5453-глутарин- тридентатний ліганд інтегрину амрб, 0,319 0,034 0,038
Структура 6.1)
Група 9 (0,50 мг/кг АБО5453-глутарин- тридентатний ліганд інтегрину самрб, 0,254 0,043 0,052
Структура 6.1)
Як показано в наведеній вище Таблиці 16, кожний засіб РНКІі до альфа-ЕМас, кон'югований з лігандом інтегрину суВб, що має Структуру 6.1 (в тридентатній формі), показав зниження експресії мРНК у щурів порівняно з контролем. Крім того, для кожного рівня дозування засобів
РНКІ до альфа-ЕМас, кон'югованих з лігандом інтегрину сурб, що має Структуру 6.1, отримані результати перевершують результати для "голих" засобів РНКі до альфа-ЕМас (це видно при порівнянні груп 2 і б; груп Зі 7; груп4 і 8; і груп 5 і 9).
Приклад 12
Додаткова активність зв'язування інтегрину амВб
Як показано
Для лігандів інтегрину суб Структур 2, 6.1, 7 ії 23, що використовуються в деяких прикладах, були отримані додаткові дані по зв'язуванню з інтегрином аурб. У наведеній нижче Таблиці 17 представлені дані по активності зв'язування у вигляді значень ІС50.
Таблиця 17
Активність зв'язування ІС5О0
ІС50 (НМ) аурб
Структура 2 205,4
Структура 6.1
Структура 7 381,5
Структура 23 759,7
Величини ІС50 для азид-функціоналізованих структур (тобто Структур 25 і 6.Б, 75 і 235) визначали в умовах, відомих і звичайно використовуваних в даній галузі. Як показано в Таблиці 17, Структура 6.1 показала дуже високу активність відносно зв'язування з інтегрином аурб (ІС50-1,6 нМ).
Приклад 13
Орофарингеальне аспіраційне введення щурам засобів РНКІі, націлених на альфа-ЕМас, кон'югованих з лігандами інтегрину суВб, в умовах іп мімо
Самцям щурів 5ргадое ЮаулЛеу, шляхом орофарингеального ("ОФ") аспіраційного ведення в день 1 дослідження вводили, використовуючи піпетку, дозу 200 мікролітрів, яка у відповідних групах дозування включала наступне.
Таблиця 18
Дози, що вводяться групам щурів в Прикладі 13.
Засіб РНКІ і доза
Ізотонічний сольовий розчин (без засобу РНКІ) ден еетна ОФ доза в (0,5 мг/кг АБО5347, тридентатний ліганд інтегрину суВб, | Однократна ОФ доза в
Структура 1) день 1 (0,5 мг/кг АБО5347, тридентатний ліганд інтегрину суВб, | Однократна ОФ доза в
Структура 2) день 1 7 (0,5 мг/кг АБО5347 тридентатний ліганд інтегрину суВб, | Однократна ОФ доза в
Структура 5) день 1 5
Синтезували засоби РНКі, що мають нуклеотидні послідовності, націлені на ген-мішень альфа-ЕМаС людини, що включають дуплекс АБО5347, які, для полегшення кон'югаці з лігандами інтегрину суВб включали функціональні групи (МН2-Св) на 5'-кінці смислового ланцюга. Нуклеотидні послідовності для засобу РНКІ АБО5347 описані вище в Прикладі 6.
Відповідні ліганди інтегрину самрб окон'югували з засобами РНКі через тридентатний каркас/лінкер, який включав глутаровий лінкер, як показано вище на Структурі З0ба в Прикладі б.
Препарати вводили п'яти (5) щурам в кожній групі (п-5). Щурів умертвляли на 9-й день дослідження, відбирали проби з обох легенів, проби гомогенізували і з них виділяли загальну
РНК. Експресію мРНК альфа-ЕМас (5СММЛ1А) кількісно визначали з допомогою кількісної ПЛР з використанням зонда, нормували по експресії САРОН їі виражали як частину контрольної групи (середнє геометричне значення - 95 95 довірчий інтервал).
Таблиця 19
Середня відносна експресія МРНК гЕМас в день умертвіння (день 9) в Прикладі 13.
Середня відносна Низька Висока
Група експресія МРНК (помилка) (помилка) "'ЕМаС 1,000 0,044 0,046
Група 5 (0,5 мг/кг АБО5347, тридентатний 0,449 0,088 0,109 ліганд інтегрину ауВб, Структура 1)
Група 6 (0,5 мг/кг АБО5347 тридентатний 0,487 0,049 0,055 ліганд інтегрину ауВб, Структура 2)
Група 7 (0,5 мг/кг АБО5347 тридентатний 0,715 0,078 0,087 ліганд інтегрину ауВб, Структура 5)
Приклад 14
Орофарингеальне аспіраційне введення щурам засобів РНКІі, націлених на альфа-ЕМас, кон'югованих з лігандами інтегрину асмрб, в умовах іп мімо
Самцям щурів 5ргадое ЮаулЛеу, шляхом орофарингеального ("ОФ") аспіраційного ведення в день 1 дослідження вводили, використовуючи піпетку, дозу 200 мікролітрів, яка у відповідних групах дозування включала наступне.
Таблиця 20
Дози, що вводяться групам щурів в Прикладі 14
Засіб РНКІ і доза
Ізотонічний сольовий розчин (без засобу РНКІ) дек етна ОФ доза в 2 (0,5 мг/кг АБО5347-тридентатний ліганд інтегрину суб, | Однократна ОФ доза в
Структура 2) день 1
З (0,5 мг/кг АБО5453-тридентатний ліганд інтегрину суб, | Однократна ОФ доза в
Структура 6.1 день 1
А (0,5 мг/кг АБО5453-тридентатний ліганд інтегрину суб, | Однократна ОФ доза в
Структура 6.3) день 1 (0,5 мг/кг АБО5453-тридентатний ліганд інтегрину смВб, | Однократна ОФ доза в
Структура 6.4) день 1
Синтезували засоби РНКі, що мають нуклеотидні послідовності, націлені на ген-мішень альфа-ЕМасС людини, що включають дуплекс АБО5347 і АБО5453. Для полегшення кон'югаці з 5 лігандами інтегрину суВб вони включали функціональні групи (МНе2-Св) на 5-кінці смислового ланцюга. Нуклеотидні послідовності для засобів РНКІі, що використовуються в цьому Прикладі, представлені вище в Прикладі 6. Відповідні ліганди інтегрину ауВб кон'югували з засобами РНКІ через тридентатний каркас/лінкер, який включав глутаровий лінкер, як показано вище на
Структурі ЗОба Приклади 6.
Препарати вводили чотирьом (4) щурам кожної групи (п-4). Щурів умертвляли на 9-й день дослідження, відбирали проби з обох легенів, проби гомогенізували і з них виділяли загальну
РНК. Експресію мРНК альфа-Емас (5СММТА) кількісно визначали з допомогою кількісної ПЛР з використанням зонда, нормували по експресії САРОН і виражали як частину контрольної групи (середнє геометричне значення - 95 95 довірчий інтервал).
Таблиця 21
Середня відносна експресія МРНК гЕМас в день умертвіння (день 9) в Прикладі 14
Середня ВіДдНОСНа Низька Висока
Група експресія МРНК (помилка) (помилка) "ЕМаС
Група 1 (ізотонічний сольовий розчин) 1,000 0,164 0,197
Група 2 (0,5 мг/кг АБО5347-тридентатний 0,418 0,051 0,058 ліганд інтегрину ауВб, Структура 2)
Група З (0,5 мг/кг АБО5453-тридентатний ліганд інтегрину суб, Структура 6.1) 0,472 0,071 0,084
Група 4 (0,5 мг/кг АБО5453-тридентатний 0,534 0,059 0,066 ліганд інтегрину суб, Структура 6.3)
Група 5 (0,5 мг/кг АБО5453-тридентатний 0,620 0105 0,127 ліганд інтегрину суб, Структура 6.4)
Приклад 15
Орофарингеальне аспіраційне введення щурам засобів РНКІі, націлених на альфа-ЕМас, кон'югованих з лігандами інтегрину сурб, в умовах іп мімо
Самцям щурів Зргадне Оам/іеу, шляхом орофарингеального ("ОФ") аспіраційного ведення в день 1 дослідження вводили, використовуючи піпетку, дозу 200 мікролітрів, яка у відповідних групах дозування включала наступне.
Таблиця 22
Дози, що вводяться групам щурів в Прикладі 15
Засіб РНКІ і доза
Ізотонічний сольовий розчин (без засобу РНКІ) депретна ОФ доза в
А (0,5 мг/кг АБО5453-тридентатний ліганд інтегрину | Однократна ОФ доза в ауВб, Структура 6.1) день 1 (0,5 мг/кг АБОБ545З-тридентатний ліганд інтегрину | Однократна ОФ доза в сауВб, Структура 2 день 1 14 (0,5 мг/кг АБО5453-тридентатний ліганд інтегрину | Однократна ОФ доза в аб, Структура 12) день 1 12 (0,5 мг/кг АБО5453-тридентатний ліганд інтегрину | Однократна ОФ доза в суб, Структура 13 день 1
Синтезували засоби РНКі, що мають нуклеотидні послідовності, націлені на ген-мішень альфа-ЕМаС людини, що включають функціональні групи (МНе2-Свє) на 5'-кінці смислового ланцюга для полегшення кон'югаці з лігандами інтегрину аурб. Нуклеотидні послідовності для засобу РНК АБО5453 представлені вище в Прикладі 6. Відповідні ліганди інтегрину сурВб кон'югували з засобами РНКі через тридентатний каркас/лінкер, який включав глутаровий лінкер, як показано вище на Структурі ЗОба Приклади 6.
Препарати вводили чотирьом (4) щурам в кожній з груп 1-9 ї 12 (п-4) і трьом (3) щурам в групах 10 і 11 (п-3). Щурів умертвляли на 7-й день дослідження, відбирали проби з обох легенів, проби гомогенізували і з них виділяли загальну РНК. Експресію мРНК альфа-ЕМас (ЗСММТА) кількісно визначали з допомогою кількісної ПЛР з використанням зонда, нормували по експресії САРОН і виражали як частину контрольної групи (середнє геометричне значення х 95 95 довірчий інтервал).
Таблиця 23
Середня відносна експресія МРНК гЕМас в день умертвіння (день 7) в Прикладі 15
Середня відносна Низька Висока
Група експресія МРНК "ЕМаС (помилка) (помилка)
Група 1 (ізотонічний сольовий розчин) 1,000 0,058 0,062
Група 4 (0,5 мг/кг АБО5453-тридентатний 0,606 0,217 0,338 ліганд інтегрину суб, Структура 6.1)
Група 9 (0,5 мг/кг АБО5453-тридентатний ліганд інтегрину ауВб, Структура 2) 0,705 0,136 0,169
Група 11 (0,5 мг/кг А0ОБ5453- тридентатний ліганд інтегрину самрб, 0,703 0,093 0,108
Структура 12)
Група 12 (0,5 мг/кг А0ОБ5453- тридентатний ліганд інтегрину самрб, 0,711 0,086 0,098
Структура 13)
Приклад 16
Орофарингеальне аспіраційне введення щурам засобів РНКІі, націлених на альфа-ЕМас, кон'югованих з лігандами інтегрину сурб, в умовах іп мімо
Самцям щурів Зргадне Оам/іеу, шляхом орофарингеального ("ОФ") аспіраційного ведення в день 1 дослідження вводили, використовуючи піпетку, дозу 200 мікролітрів, яка у відповідних групах дозування включала наступне.
Таблиця 24
Дози, що вводяться групам щурів в Прикладі 16
Засіб РНКІ і доза
Ізотонічний сольовий розчин (без засобу РНКІ) влвнва ОФ доза 2 (0,5 мг/кг АБО5453, тридентатний ліганд інтегрину ауВб, | Однократна ОФ доза
Структура 6.1) в день 1 (0,5 мг/кг АБО5453, тридентатний ліганд інтегрину сурб, | Однократна ОФ доза
Структура 14 в день 1
А (0,5 мг/кг АБО5453, тридентатний ліганд інтегрину ауВб, | Однократна ОФ доза
Структура 15) в день 1
Синтезували засоби РНКі, що мають нуклеотидні послідовності, націлені на ген-мішень альфа-ЕМаС людини. Для полегшення кон'югаці з лігандами інтегрину суВб вони включали функціональні групи (МНг-Св) на 5-кінці смислового ланцюга. Нуклеотидні послідовності для засобу РНК АБО5453 представлені вище в Прикладі 6. Відповідні ліганди інтегрину сурВб кон'югували з засобами РНКі через тридентатний каркас/лінкер, який включав глутаровий лінкер, як показано вище на Структурі ЗОба Приклади 6.
Препарати вводили чотирьом (4) щурам в кожній групі. Щурів умертвляли на 9-й день дослідження, відбирали проби з обох легенів, проби гомогенізували і з них виділяли загальну
РНК. Експресію мРНК альфа-Емас (5СММТА) кількісно визначали з допомогою кількісної ПЛР з використанням зонда, нормували по експресії САРОН і виражали як частину контрольної групи (середнє геометричне значення - 95 95 довірчий інтервал).
Таблиця 25
Середня відносна експресія МРНК гЕМас в день умертвіння (день 9) в Прикладі 16
Середня ВіДдНОСНа Низька Висока
Група експресія МРНК "ЕМаС (помилка) (помилка)
Група 1 (ізотонічний сольовий розчин) 1,000 0,084 0,092
Група 2 (0,5 мг/кг АБОБ5453, тридентатний ліганд інтегрину смрб, 0,597 0,163 0,224
Структура 6.1)
Група З (0,5 мг/кг АБОБ5453, тридентатний ліганд інтегрину смрб, 0,674 0,115 0,139
Структура 14
Група 4 (0,5 мг/кг АБОБ5453, тридентатний ліганд інтегрину смрб, 0,533 0,047 0,052
Структура 15)
Приклад 17
Орофарингеальне аспіраційне введення щурам засобів РНКІі, націлених на альфа-ЕМас, кон'югованих з лігандами інтегрину суВб, в умовах іп мімо
Самцям щурів 5ргадое ЮаулЛеу, шляхом орофарингеального ("ОФ") аспіраційного ведення в день 1 дослідження вводили, використовуючи піпетку, дозу 200 мікролітрів, яка у відповідних групах дозування включала наступне.
Таблиця 26
Дози, що вводяться групам щурів в Прикладі 17
Засіб РНКІ і доза
Ізотонічний сольовий розчин (без засобу РНКІ) влвнва ОФ доза 2 (0,5 мг/кг АБО5453, тридентатний ліганд інтегрину суВб, | Однократна ОФ доза
Структура 6.1) в день 1 (0,5 мг/кг АБО5453, тридентатний ліганд інтегрину ам8б, | Однократна ОФ доза
Структура 16 в день 1
А (0,5 мг/кг АБО5453, тридентатний ліганд інтегрину суВб, | Однократна ОФ доза
Структура 11) в день 1
Синтезували засоби РНКі, що мають нуклеотидні послідовності, націлені на ген-мішень альфа-ЕМаС людини. Для полегшення кон'югаці з лігандами інтегрину ауВб вони включали функціональні реакційноздатні групи (МН2-Сє) на 5-кінці смислового ланцюга. Нуклеотидні послідовності для засобу РНКі АБО5453 представлені вище в Прикладі 6. Відповідні ліганди інтегрину сурб кон'югували з засобами РНКІі через тридентатний каркас/лінкер, який включав глутаровий лінкер, як показано вище на Структурі З0б0а Приклади 6.
Препарати вводили п'яти (5) щурам в кожній групі, за винятком групи 4, де дозу препарата вводили чотирьом (4) щурам. Щурів умертвляли на 9-й день дослідження, відбирали проби з обох легенів, проби гомогенізували і з них виділяли загальну РНК. Експресію мРНК альфа-
ЕМасС (ЗСММТА) кількісно визначали з допомогою кількісної ПЛР з використанням зонда, нормували по експресії ЗАРОН і виражали як частину контрольної групи (середнє геометричне значення - 95 95 довірчий інтервал).
Таблиця 27
Середня відносна експресія МРНК гЕМас в день умертвіння (день 9) в Прикладі 17
Середня відносна Низька Висока
Група експресія МРНК "ЕМаС (помилка) (помилка)
Група 1 (ізотонічний сольовий розчин) 1,000 0,195 0,242
Група 2 (0,5 мг/кг А0БО5453, тридентатний ліганд інтегрину смрб, 0,489 0,168 0,257
Структура 6.1)
Група З (0,5 мг/кг А0БО5453, тридентатний ліганд інтегрину смрб, 0,872 0,104 0,118
Структура 16)
Група 4 (0,5 мг/кг АБОБ5453, тридентатний ліганд інтегрину смрб, 0,625 0,126 0,158
Структура 11)
Приклад 18
Орофарингеальне аспіраційне введення щурам засобів РНКІі, націлених на альфа-ЕМас, кон'югованих з лігандами інтегрину суВб, в умовах іп мімо
Самцям щурів Зргадне ОЮОамжеу, шляхом орофарингеального ("ОФ") аспіраційного ведення в день 1 дослідження вводили, використовуючи піпетку, дозу 200 мікролітрів, яка у відповідних групах дозування включала наступне.
Таблиця 28
Дози, що вводяться групам щурів в Прикладі 18
Засіб РНКІ і доза
Ізотонічний сольовий розчин (без засобу РНКІ) дек етна ОФ доза в 2 (0,5 мг/кг АБО5453, тридентатний ліганд інтегрину | Однократна ОФ доза в ауВб, Структура 6.1) день 1
З (0,5 мг/кг АБО5453, тридентатний ліганд інтегрину | Однократна ОФ доза в суб, Структура 17 день 1
А (0,5 мг/кг АБО5453, тридентатний ліганд інтегрину | Однократна ОФ доза в аб, Структура 15) день 1
Синтезували засоби РНКі, що мають нуклеотидні послідовності, націлені на ген-мішень альфа-ЕМаС людини. Для полегшення кон'югаці з лігандами інтегрину смрб вони включали функціональні реакційноздатні групи (МН2-Сє) на 5-кінці смислового ланцюга. Нуклеотидні послідовності для засобу РНКі АБО5453 представлені вище в Прикладі 6. Відповідні ліганди інтегрину сурб кон'югували з засобами РНКІ через тридентатний каркас/лінкер, який включав глутаровий лінкер, як показано вище на Структурі З0б0а Приклади 6.
Препарати вводили чотирьом (4) щурам в кожній групі. Щурів умертвляли на 9-й день дослідження, відбирали проби з обох легенів, проби гомогенізували і з них виділяли загальну
РНК. Експресію мРНК альфа-Емас (5СММТА) кількісно визначали з допомогою кількісної ПЛР з використанням зонда, нормували по експресії САРОН і виражали як частину контрольної групи (середнє геометричне значення - 95 95 довірчий інтервал).
Таблиця 29
Середня відносна експресія МРНК гЕМас в день умертвіння (день 9) в Прикладі 18
Середня відносна Низька Висока
Група експресія МРНК "ЕМаС (помилка) (помилка)
Група 1 (ізотонічний сольовий розчин) 1,000 0,140 0,162
Група 2 (0,5 мг/кг АБО5453, тридентатний 0,622 0,035 0,037 ліганд інтегрину суб, Структура 6.1)
Група З (0,5 мг/кг АБО5453, тридентатний 0,818 0,101 016 ліганд інтегрину ауВб, Структура 17)
Група 4 (0,5 мг/кг АБО5453, тридентатний 0,628 0,101 0,120 ліганд інтегрину ауВб, Структура 15)
Приклад 19
Орофарингеальне аспіраційне введення щурам засобів РНКІі, націлених на альфа-ЕМас, кон'югованих з лігандами інтегрину суВб, в умовах іп мімо
Самцям щурів 5ргадое ЮаулЛеу, шляхом орофарингеального ("ОФ") аспіраційного ведення в день 1 дослідження вводили, використовуючи піпетку, дозу 200 мікролітрів, яка у відповідних групах дозування включала наступне.
Таблиця 30
Дози, що вводяться групам щурів в Прикладі 19
Структура 6.1) день 1
Структура 15 день 1
Структура 18) день 1
Структура 19) день 1 тота Доресекя
Структура 20) день 1
Синтезували засоби РНКі, що мають нуклеотидні послідовності, націлені на ген-мішень альфа-ЕМаС людини. Для полегшення кон'югаці з лігандами інтегрину смВб вони включали функціональні реакційноздатні групи (МН2-Сє) на 5-кінці смислового ланцюга. Нуклеотидні послідовності для засобу РНКі АБО5453 представлені вище в Прикладі 6. Відповідні ліганди інтегрину сурб кон'югували з засобами РНКІ через тридентатний каркас/лінкер, який включав глутаровий лінкер, як показано вище на Структурі З0б0а Приклади 6.
Препарати вводили чотирьом (4) щурам в кожній групі. Щурів умертвляли на 9-й день дослідження, відбирали проби з обох легенів, проби гомогенізували і з них виділяли загальну
РНК. Експресію мРНК альфа-Емас (5СММТА) кількісно визначали з допомогою кількісної ПЛР з використанням зонда, нормували по експресії САРОН і виражали як частину контрольної групи (середнє геометричне значення - 95 95 довірчий інтервал).
Таблиця 31
Середня відносна експресія МРНК гЕМас в день умертвіння (день 9) в Прикладі 19 експресія МРНК гЕМасС (помилка) (помилка) розчин)
Група 2 (0,5 мг/кг А0ОБ5453, тридентатний ліганд інтегрину сурб, 0,503 0,074 0,086
Структура 6.1)
Група З (0,5 мг/кг А0ОБ5453, тридентатний ліганд інтегрину сурб, 0,700 0,079 0,089
Структура 15)
Група 4 (0,5 мг/кг А0ОБ5453, тридентатний ліганд інтегрину сурб, 0,742 0,137 0,169
Структура 18)
Група 5 (0,5 мг/кг А0ОБ5453, тридентатний ліганд інтегрину сурб, 0,837 0,186 0,239
Структура 19)
Група 6 (0,5 мг/кг А0ОБ5453, тридентатний ліганд інтегрину сурб, 0,589 0,078 0,090
Структура 20)
Приклад 20
Орофарингеальне аспіраційне введення щурам засобів РНКІі, націлених на альфа-ЕМас, кон'югованих з лігандами інтегрину суВб, в умовах іп мімо
Самцям щурів 5ргадое ЮаулЛеу, шляхом орофарингеального ("ОФ") аспіраційного ведення в дні 1 і 2 дослідження вводили, використовуючи піпетку, дозу 200 мікролітрів, яка у відповідних групах дозування включала наступне.
Таблиця 32
Дози, що вводяться групам щурів в Прикладі 20
Засіб РНКІ і доза
Ізотонічний сольовий розчин (без засобу РНКІ) во доза в дні 1 ї 2 (0,5 мг/кг АБО5453, тридентатний ліганд інтегрину смВб,) ОФ доза в дні 1 і
Структура 6.1 2
З (0,5 мг/кг АБО5453, тридентатний ліганд інтегрину соуВб,) ОФ доза в дні 1 і
Структура 22) 2
А (0,5 мг/кг АБО5453, тридентатний ліганд інтегрину сомрб,| ОФ доза в дні 1 і
Структура 23) 2 (0,5 мг/кг АБО5453, тридентатний ліганд інтегрину сомрб,| ОФ доза в дні 1 і
Структура 24) 2 (0,5 мг/кг АБО5453, тридентатний ліганд інтегрину соуВб,) ОФ доза в дні 1 і
Структура 25) 2 7 (0,5 мг/кг АБО5453, тридентатний ліганд інтегрину соуВб,) ОФ доза в дні 1 і
Структура 15) 2
Синтезували засоби РНКі, що мають нуклеотидні послідовності, націлені на ген-мішень 5 альфа-ЕМаС людини. Для полегшення кон'югаці з лігандами інтегрину смрб вони включали функціональні реакційноздатні групи (МНо-Св) на 5-кінці смислового ланцюга. Нуклеотидні послідовності для засобу РНКі АБО5453 представлені вище в Прикладі 6. Відповідні ліганди інтегрину сурб кон'югували з засобами РНКІ через тридентатний каркас/лінкер, який включав глутаровий лінкер, як показано вище на Структурі З0б0а Приклади 6.
Препарати вводили чотирьом (4) щурам в кожній групі, за винятком групи 1, де дозу препарата вводили трьом (3) щурам. Щурів умертвляли на 9-й день дослідження, відбирали проби з обох легенів, проби гомогенізували і з них виділяли загальну РНК. Експресію мРНК альфа-Емас (ЗСММТА) кількісно визначали з допомогою кількісної ПЛР з використанням зонда, нормували по експресії ЗАРОН і виражали як частину контрольної групи (середнє геометричне значення х 95 95 довірчий інтервал).
Таблиця 33
Середня відносна експресія МРНК гЕМас в день умертвіння (день 9) в Прикладі 20
Група Середня відносна Низька Висока
РУ експресія МРНК гЕМаС помилка помилка 1,000 0,164 0,197
Група 2 (0,5 мг/кг АБОБ5453, тридентатний 0,400 0,057 0,066 ліганд інтегрину смв8б, Структура 6.1
Група З (0,5 мг/кг АБОБ5453, тридентатний 0,483 0,170 0,263 ліганд інтегрину см8б, Структура 22
Група 4 (0,5 мг/кг АБО5453, тридентатний ліганд інтегрину смб8б, Структура 23 0,333 0,042 0,048
Група З (0,5 мг/кг АБОБ5453, тридентатний 0,493 0,125 0168 ліганд інтегрину смВ8б, Структура 24
Група 6 (0,5 мг/кг АБОБ5453, тридентатний 0,416 0,089 013 ліганд інтегрину см8б, Структура 25
Група 7 (0,5 мг/кг АБО5453, тридентатний ліганд інтегрину см8б, Структура 15 0,473 0,052 0,058
Приклад 21
Орофарингеальне аспіраційне введення щурам засобів РНКІі, націлених на альфа-ЕМас, кон'югованих з лігандами інтегрину сурб, в умовах іп мімо
Самцям щурів 5ргадое ЮаулЛеу, шляхом орофарингеального ("ОФ") аспіраційного ведення в дні 1 і 2 дослідження вводили, використовуючи піпетку, дозу 200 мікролітрів, яка у відповідних групах дозування включала наступне.
Таблиця 34
Дози, що вводяться групам щурів в Прикладі 21 дозування
Ізотонічний сольовий розчин (без засобу РНКІ) о доза в дні 1 2 (0,5 мг/кг АБО5453, тридентатний ліганд інтегрину сомрВб,| ОФ доза в дні 1
Структура 6.1) і2
А (0,5 мг/кг АБО5453, тридентатний ліганд інтегрину сомрВб,| ОФ доза в дні 1
Структура 27) і2
Синтезували засоби РНКі, що мають нуклеотидні послідовності, націлені на ген-мішень альфа-ЕМаС людини. Для полегшення кон'югаці з лігандами інтегрину смВб вони включали функціональні реакційноздатні групи (МН2-Сє) на 5-кінці смислового ланцюга. Нуклеотидні послідовності для засобу РНКіІ АБО5453 представлені вище в Прикладі 6. Відповідні ліганди інтегрину сурб кон'югували з засобами РНКІ через тридентатний каркас/лінкер, який включав глутаровий лінкер, як показано вище на Структурі З0б0а Приклади 6.
Препарати вводили п'яти (5) щурам в кожній групі, за винятком групи 2, де дозу препарата вводили шести (б) щурам. Щурів умертвляли на 9-й день дослідження, відбирали проби з обох легенів, проби гомогенізували і з них виділяли загальну РНК. Експресію мРНК альфа-ЕМас (ЗСММТА) кількісно визначали з допомогою кількісної ПЛР з використанням зонда, нормували по експресії САРОН і виражали як частину контрольної групи (середнє геометричне значення х 95 95 довірчий інтервал).
Таблиця 35
Середня відносна експресія МРНК гЕМас в день умертвіння (день 9) в Прикладі 21
Середня ВіДНОСНа Низька Висока
Група експресія МРНК "ЕМаС (помилка) (помилка)
Група 1 (ізотонічний сольовий розчин) 1,000 0,150 0,176
Група 2 (0,5 мг/кг А0ОБ5453, тридентатний ліганд інтегрину смурб, 0,380 0,108 0,151
Структура 6.1)
Група 4 (0,5 мг/кг АЮ0ОБ5453, тридентатний ліганд інтегрину сурб, 0,411 0,051 0,058
Структура 27)
Приклад 22
Орофарингеальне аспіраційне введення щурам засобів РНКІі, націлених на альфа-ЕМас, кон'югованих з лігандами інтегрину суВб, в умовах іп мімо
Самцям щурів 5ргадсое Юамеу, шляхом орофарингеального ("ОФ") аспіраційного ведення в дні 1 і 2 дослідження вводили, використовуючи піпетку, дозу 200 мікролітрів, яка у відповідних групах дозування включала наступне.
Таблиця 36
Дози, що вводяться групам щурів в Прикладі 22
Засіб РНКІ і доза
Ізотонічний сольовий розчин (без засобу РНКІ) в доза в дні 1 і 2 (0,5 мг/кг АБО5453, тридентатний ліганд інтегрину омрВб,| ОФ доза в дні 1 і
Структура 6.1) 2
З (0,5 мг/кг АБО5453, тридентатний ліганд інтегрину сомВб,| ОФ доза в дні 1 і
Структура 29 2
А (0,5 мг/кг АБО5453, тридентатний ліганд інтегрину омрВб,| ОФ доза в дні 1 і
Структура 30) 2 (0,5 мг/кг АБО5453, тридентатний ліганд інтегрину омрВб,| ОФ доза в дні 1 і
Структура 31) 2 (0,5 мг/кг АБО5453, тридентатний ліганд інтегрину сомрВб,| ОФ доза в дні 1 і
Структура 32) 2 7 (0,5 мг/кг АБО5453, тридентатний ліганд інтегрину омрВб,| ОФ доза в дні 1 і
Структура 33) 2
Синтезували засоби РНКІ, що мають нуклеотидні послідовності, націлені на ген-мішень альфа-ЕМаС людини. Для полегшення кон'югаці з 5 лігандами інтегрину суВб вони включали функціональні реакційноздатні групи (МН2-Св) на 5'- кінці смислового ланцюга. Нуклеотидні послідовності для засобу РНКІ АБО5453 представлені вище в Прикладі 6. Відповідні ліганди інтегрину аурб кон'югували з засобами РНКІі через тридентатний каркас/лінкер, який включав глутаровий лінкер, як показано вище на Структурі
ЗОба Приклади 6.
Препарати вводили чотирьом (4) щурам в кожній групі. Щурів умертвляли на 9-й день дослідження, відбирали проби з обох легенів, проби гомогенізували і з них виділяли загальну
РНК. Експресію мРНК альфа-Емас (5СММТА) кількісно визначали з допомогою кількісної ПЛР з використанням зонда, нормували по експресії САРОН і виражали як частину контрольної групи (середнє геометричне значення - 95 95 довірчий інтервал).
Таблиця 37
Середня відносна експресія МРНК гЕМас в день умертвіння (день 9) в Прикладі 22
Середня ВіДдНОСНа Низька Висока
Група експресія МРНК "ЕМаС (помилка) (помилка)
Група 1 (ізотонічний сольовий розчин) 1,000 0,179 0,218
Група 2 (0,5 мг/кг АБО5453, тридентатний 0,511 0132 0,178 ліганд інтегрину суб, Структура 6.1)
Група З (0,5 мг/кг АБО5453, тридентатний 0,455 0,024 0,025 ліганд інтегрину суб, Структура 29)
Група 4 (0,5 мг/кг АБО5453, тридентатний 0,637 0,047 0,050 ліганд інтегрину суб, Структура 30)
Група 5 (0,5 мг/кг АБО5453, тридентатний 0,505 0,079 0,093 ліганд інтегрину ауВб, Структура 31)
Група 6 (0,5 мг/кг АБО5453, тридентатний 0,534 0,135 0,181 ліганд інтегрину суб, Структура 32)
Група 7 (0,5 мг/кг АБО5453, тридентатний 0,560 0,145 0,196 ліганд інтегрину суб, Структура 33)
Приклад 23
Орофарингеальне аспіраційне введення щурам засобів РНКІі, націлених на альфа-ЕМас, кон'югованих з лігандами інтегрину суВб, в умовах іп мімо
Самцям щурів Зргадне Оам/іеу, шляхом орофарингеального ("ОФ") аспіраційного ведення в дні 1 і 2 дослідження вводили, використовуючи піпетку, дозу 200 мікролітрів, яка у відповідних групах дозування включала наступне.
Таблиця 38
Дози, що вводяться групам щурів в Прикладі 23 дозування
Ізотонічний сольовий розчин (без засобу РНКІ) во доза в дні 1 і 2 (0,5 мг/кг АБО5453, тридентатний ліганд інтегрину амВб,| ОФ дозав дні і
Структура 6.1) 2
З (0,5 мг/кг АБО5453, тридентатний ліганд інтегрину сурб,| ОФ дозав дні і
Структура 29) 2
А (0,5 мг/кг АБО5453, тридентатний ліганд інтегрину амВб,| ОФ дозав дні і
Структура 34) 2 (0,5 мг/кг АБО5453, тридентатний ліганд інтегрину амВб,| ОФ дозав дні і
Структура 35) 2 (0,5 мг/кг АБО5453, тридентатний ліганд інтегрину смрб,| ОФ дозав дні і
Структура 36) 2 7 (0,5 мг/кг АБО5453, тридентатний ліганд інтегрину амВб,| ОФ дозав дні і
Структура 37) 2
Синтезували засоби РНКі, що мають нуклеотидні послідовності, націлені на ген-мішень 5 альфа-ЕМаС людини. Для полегшення кон'югаці з лігандами інтегрину смрб вони включали функціональні реакційноздатні групи (МН2-Сє) на 5-кінці смислового ланцюга. Нуклеотидні послідовності для засобу РНКі АБО5453 представлені вище в Прикладі 6. Відповідні ліганди інтегрину сурб кон'югували з засобами РНКІ через тридентатний каркас/лінкер, який включав глутаровий лінкер, як показано вище на Структурі З0б0а Приклади 6.
Препарати вводили чотирьом (4) щурам в кожній групі. Щурів умертвляли на 9-й день дослідження, відбирали проби з обох легенів, проби гомогенізували і з них виділяли загальну
РНК. Експресію мРНК альфа-Емас (5СММТА) кількісно визначали з допомогою кількісної ПЛР з використанням зонда, нормували по експресії САРОН і виражали як частину контрольної групи (середнє геометричне значення - 95 95 довірчий інтервал).
Таблиця 39
Середня відносна експресія МРНК гЕМас в день умертвіння (день 9) в Прикладі 23
Група Середня відносна Низька Висока
РУ експресія МРНК гЕМаС помилка помилка 1,000 0,117 0,132
Група 2 (0,5 мг/кг АБО5453, тридентатний 0,368 0,079 0100 ліганд інтегрину смв8б, Структура 6.1
Група З (0,5 мг/кг АБО5453, тридентатний 0,429 0,033 0,036 ліганд інтегрину см8б, Структура 29
Група 4 (0,5 мг/кг АБО5453, тридентатний ліганд інтегрину смВ8б, Структура 34 0,465 0,103 0,132
Група 5 (0,5 мг/кг АБО5453, тридентатний 0,449 0,053 0,060 ліганд інтегрину смб8б, Структура 35
Група 6 (0,5 мг/кг АБО5453, тридентатний 0,5О1 0,043 0,047 ліганд інтегрину см8б, Структура 36
Група 7 (0,5 мг/кг АБОБ5453, тридентатний ліганд інтегрину см8б, Структура 37 0,443 0,043 0,055
Інші варіанти здійснення винаходу
Потрібно розуміти, що хоч винахід розкритий в поєднанні з його детальним описом, цей опис призначений тільки для ілюстрації, і він не обмежує об'єм домагань, який визначений формулою винаходу. Інші аспекти, переваги і модифікації даного винаходу знаходяться в межах об'єму наступної формули винаходу.
ПЕРЕШК ПОСЛІДОВНО СТ ЕЙ
«1105 АКВОМНЕАС БНАВМАСЕТТІСАТД, ЇМО. «іп» ЛІГАНДИ ІНТЕГРИНІВ ХХ ЗАСТОСУВАННЯ «13» зовбі-НОЮ «1502 ЕІИЗВО, ЗВ «131» 207-11-01 «150» взиває, 738 «15і» 2018-33-22 «150» вп ЕтЗ,54 «151» ЗйіВ-08-0 «1 й зхії» МЩШтучна посліловність «223» Молифікована послідовність смислового ланцюга засобу РНКІі псчоапсазос салазозаацч А «2179 РЯК кіз» ПЦтучна послідовність «га» Молдифікована послідовність антисмислового ланцюга засобу РНКІ «Ф005 3
МІУ алла спра ПІ «2і1ї ЕНК ст.» ЗНтучна посліловність «аа» Меоднфжавана послідовність смислового ланцюга засобу РНКІ шпенопзоасайс сазопайсалаа й Ж
«вій» 4 «813» ТШтучна послідовність «3213» Молдифікована послідовність антисмислового ланцюга засобу РНКІі лем ацс зупидсесяатроз хі

Claims (20)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Ліганд інтегрину сурб, який має структуру: Ки Ж М он -к М Н М о і о х ; структура ба або його фармацевтично прийнятна сіль, де Х включає транспортувальну молекулу.
2. Ліганд інтегрину саурб, вибраний з групи, яка складається з: о хх М Н М о і о Улнх о ; структура 6 о М ЖК х М М он й М г ; ЛО о і о мити ит ото ; структура 6.1 о прак М он Те М г М о і о ул ; структура 6.2 о
М: М г
М о | о
; Фо о7х ит ; структура 6.3
М и я М М он -е М Н М о | о о ко то Фе о о 7 рт 7 о о о щу ил алтм иа ; структура 6.4 або його фармацевтично прийнятна сіль, де вказує точку приєднання до частини, що містить транспортувальну молекулу.
3. Ліганд інтегрину сурб за будь-яким з пп. 1-2, де транспортувальна молекула містить засіб РНКІ.
4. Сполука, яка має формулу: но шия З - А Я днини чи ї г й ї з. Я ж 1 ин Н чт Кн я Ї В й Ме ши но г З ру З ОЙ о, МИ в щей ї дек; тв - ї» . Ки щі х т чех по х 7 Нд ден З в. 7 Ми подо ті ооям у С шитчо дм і ет р є ех р - шт З вх ня ней з-д Ку пал мн А мя ; структура 701с ОО де означає засіб РНКІ.
5. Композиція, яка містить ліганд інтегрину суВб за будь-яким з пп. 1-3 їі фармацевтично прийнятний ексципієнт.
6. Композиція, яка містить сполуку за п. 4 і фармацевтично прийнятний ексципієнт.
7. Композиція за п. 5 або б, де ліганд інтегрину ам8Вб кон'югований зі сполукою на основі олігонуклеотиду, яка здатна інгібувати експресію гена-мішені в епітеліальній клітині.
8. Композиція за п. 5 або 6, де ліганд інтегрину суВб кон'югований із засобом РНКІ, який здатний інгібувати експресію гена-мішені в епітеліальній клітині.
9. Композиція за п. 5 або 6, де ліганд інтегрину суВб кон'югований із засобом РНКІ, який здатний інгібувати експресію гена-мішені в бронхіолярній епітеліальній клітині.
10. Композиція, яка містить ліганд інтегрину суб за будь-яким з пп. 1-3 для застосування у способі доставки однієї або більше транспортувальних молекул в клітину, де спосіб включає введення в клітину ліганду інтегрину суб.
11. Композиція, яка містить сполуку за п. 4, для застосування у способі доставки однієї або більше транспортувальних молекул в клітину, де спосіб включає введення в клітину сполуки.
12. Композиція, яка містить ліганд інтегрину суВб за будь-яким з пп. 1-3, для застосування в доставці однієї або більше транспортувальних молекул в клітину або тканину суб'єкта в умовах іп умо.
13. Композиція, яка містить сполуку за п. 4, для застосування в доставці однієї або більше транспортувальних молекул в клітину або тканину суб'єкта в умовах /п у//о.
14. Композиція за будь-яким з пп. 5-9 для застосування в доставці однієї або більше транспортувальних молекул в клітину або тканину суб'єкта в умовах /п у//о.
15. Композиція за будь-яким з пп. 10-14, де клітина вибрана з групи, яка складається з: альвеолярних епітеліальних клітин І і ІЇ типів, келихоподібних клітин, секреторних епітеліальних клітин, війчастих епітеліальних клітин, епітеліальних клітин рогівки і кон'юнктиви, епітеліальних клітин шкіри, холангіоцитів, ентероцитів, епітеліальних клітин протоків, залозистих епітеліальних клітин і клітин епітеліальних пухлин (карцином).
16. Композиція за будь-яким з пп. 10-14, де одна або більше транспортувальних молекул містять сполуки на основі олігонуклеотиду.
17. Композиція за п. 16, де сполука на основі олігонуклеотиду являє собою засіб РНКІ.
18. Композиція для інгібування експресії гена-мішені в клітині в умовах /л у//о, яка містить сполуку на основі олігонуклеотиду, кон'юговану з лігандом інтегрину аурб за будь-яким з пп. 1-3.
19. Композиція за п. 18, де клітина вибрана з групи, яка складається з: альвеолярних епітеліальних клітин | ії ЇЇ типів, келихоподібних клітин, секреторних епітеліальних клітин, війчастих епітеліальних клітин, епітеліальних клітин рогівки і кон'юнктиви, епітеліальних клітин шкіри, холангіоцитів, ентероцитів, епітеліальних клітин протоків, залозистих епітеліальних клітин і клітин епітеліальних пухлин (карцином).
20. Композиція за п. 18 або 19, де сполука на основі олігонуклеотиду являє собою засіб РНКІ.
UAA202003246A 2017-11-01 2018-10-31 Ліганди інтегринів і їх застосування UA128250C2 (uk)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762580398P 2017-11-01 2017-11-01
US201862646739P 2018-03-22 2018-03-22
US201862679549P 2018-06-01 2018-06-01
PCT/US2018/058471 WO2019089765A1 (en) 2017-11-01 2018-10-31 Integrin ligands and uses thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA128250C2 true UA128250C2 (uk) 2024-05-22

Family

ID=66332633

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA202003246A UA128250C2 (uk) 2017-11-01 2018-10-31 Ліганди інтегринів і їх застосування

Country Status (20)

Country Link
US (2) US11597701B2 (uk)
EP (1) EP3703700A4 (uk)
JP (2) JP7445594B2 (uk)
KR (1) KR20200083523A (uk)
CN (1) CN111526880A (uk)
AU (1) AU2018359515B2 (uk)
BR (1) BR112020006901A2 (uk)
CA (1) CA3079402A1 (uk)
CL (1) CL2020001125A1 (uk)
CR (1) CR20200178A (uk)
EC (1) ECSP20028090A (uk)
IL (1) IL274300B2 (uk)
JO (1) JOP20200102A1 (uk)
MX (2) MX2020004554A (uk)
PH (1) PH12020550263A1 (uk)
SG (1) SG11202002967SA (uk)
TN (1) TN2020000059A1 (uk)
TW (1) TWI825039B (uk)
UA (1) UA128250C2 (uk)
WO (1) WO2019089765A1 (uk)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10590416B2 (en) * 2017-07-06 2020-03-17 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. RNAi agents for inhibiting expression of alpha-ENaC and methods of use
US12065458B2 (en) 2018-02-17 2024-08-20 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. Trialkyne linking agents and methods of use
CN114058623B (zh) * 2020-08-06 2023-12-12 中国科学院化学研究所 一种核酸适体识别并结合整合素α3亚基及其相关功能
KR20230064620A (ko) * 2020-09-11 2023-05-10 애로우헤드 파마슈티컬스 인코포레이티드 DUX4의 발현을 억제하기 위한 RNAi 작용제, 그의 조성물, 및 사용 방법
AU2021342163A1 (en) * 2020-09-11 2023-04-06 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. Integrin targeting ligands and uses thereof
WO2024129931A1 (en) * 2022-12-14 2024-06-20 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. ALPHA-V BETA-6(ανβ6) INTEGRIN LIGANDS FOR EXTRAHEPATIC DELIVERY

Family Cites Families (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4522811A (en) 1982-07-08 1985-06-11 Syntex (U.S.A.) Inc. Serial injection of muramyldipeptides and liposomes enhances the anti-infective activity of muramyldipeptides
DE19831710A1 (de) 1998-07-15 2000-01-20 Merck Patent Gmbh Diacylhydrazinderivate
CA2371824A1 (en) 1999-02-20 2000-08-24 Merck Patent Gesellschaft Mit Beschraenkter Haftung .beta.-alanine derivatives
DE19929410A1 (de) 1999-06-26 2000-12-28 Merck Patent Gmbh Inhibitoren des Integrins avß6
DE10028402A1 (de) 2000-06-13 2001-12-20 Merck Patent Gmbh Pyridin-2-yl-aminoalkycarbonylglycyl-beta-alanin und Derivate
EP2990410A1 (en) 2004-08-10 2016-03-02 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Chemically modified oligonucleotides
GB0520068D0 (en) 2005-10-03 2005-11-09 Cancer Res Technology av peptide ligand
US20080213249A1 (en) * 2006-07-07 2008-09-04 The Scripps Research Insitute Use of Retro-Aldol Reaction to Generate Reactive Vinyl Ketone for Attachment to Antibody Molecules by Michael Addition Reaction for Use in Immunostaining and Immunotargeting
US20110003858A1 (en) 2006-09-04 2011-01-06 Bergstroem Lena Multimeric heterocyclic compounds useful as neutrophil elastase inhibitors
AR066984A1 (es) * 2007-06-15 2009-09-23 Novartis Ag Inhibicion de la expresion de la subunidad alfa del canal epitelial de sodio (enac) por medio de arni (arn de interferencia)
EP2221334B1 (en) 2007-11-28 2016-12-28 FUJIFILM Corporation Method for chemically modifying biopolymer and polypeptide
JP5623384B2 (ja) * 2008-04-21 2014-11-12 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア 選択的高親和性リガンドおよびこれらを作製する方法
EP2486023A4 (en) 2009-10-06 2014-05-07 Immunogen Inc EFFICIENT CONJUGATES AND HYDROPHILIC BINDER
GB0922014D0 (en) 2009-12-17 2010-02-03 Ge Healthcare Ltd Novel integrin binders
US9161948B2 (en) * 2011-05-05 2015-10-20 Sarepta Therapeutics, Inc. Peptide oligonucleotide conjugates
MX360141B (es) * 2012-02-17 2018-10-24 Seattle Genetics Inc Anticuerpos contra integrina alfavhbeta6 y uso de los mismos para tratar cancer.
JP2014029990A (ja) 2012-06-29 2014-02-13 Sharp Corp 窒化物半導体装置の電極構造およびその製造方法並びに窒化物半導体電界効果トランジスタ
EP2913064A1 (en) * 2014-02-26 2015-09-02 celares GmbH Branched drug-linker conjugates for the coupling to biological targeting molecules
CN106573031B (zh) 2014-04-15 2021-05-28 加利福尼亚大学董事会 双末端聚乙二醇化整合素-结合肽及其使用方法
WO2015179823A2 (en) * 2014-05-23 2015-11-26 The California Institute For Biomedical Research Lung localized inhibitors of alpha(v)beta 6
WO2016149313A1 (en) * 2015-03-17 2016-09-22 Arrowhead Research Corporation Improved disulfide-containing alkyne linking agents
EA201792103A1 (ru) * 2015-05-29 2018-06-29 Эрроухэд Фармасьютикалз, Инк. Композиции и способы для ингибирования экспрессии генов hif2альфа
JOP20170161A1 (ar) 2016-08-04 2019-01-30 Arrowhead Pharmaceuticals Inc عوامل RNAi للعدوى بفيروس التهاب الكبد ب

Also Published As

Publication number Publication date
AU2018359515A1 (en) 2020-06-18
TWI825039B (zh) 2023-12-11
EP3703700A4 (en) 2021-08-04
CN111526880A (zh) 2020-08-11
MX2020004554A (es) 2020-08-13
EP3703700A1 (en) 2020-09-09
US11597701B2 (en) 2023-03-07
US20200369613A1 (en) 2020-11-26
SG11202002967SA (en) 2020-05-28
TW202017570A (zh) 2020-05-16
WO2019089765A1 (en) 2019-05-09
TN2020000059A1 (en) 2022-01-06
IL274300B1 (en) 2024-05-01
AU2018359515B2 (en) 2024-09-19
JP2023073520A (ja) 2023-05-25
MX2023007368A (es) 2023-07-04
US20240076270A1 (en) 2024-03-07
BR112020006901A2 (pt) 2020-10-13
JP7445594B2 (ja) 2024-03-07
JP2021501754A (ja) 2021-01-21
KR20200083523A (ko) 2020-07-08
CL2020001125A1 (es) 2020-08-28
IL274300A (en) 2020-06-30
ECSP20028090A (es) 2020-07-31
CA3079402A1 (en) 2019-05-09
PH12020550263A1 (en) 2021-03-01
CR20200178A (es) 2020-06-28
IL274300B2 (en) 2024-09-01
JOP20200102A1 (ar) 2022-10-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7510403B2 (ja) 標的化リガンド
JP7485642B2 (ja) 治療化合物用の標的化リガンド
UA128250C2 (uk) Ліганди інтегринів і їх застосування
EP4211101A1 (en) Integrin targeting ligands and uses thereof
TW202434560A (zh) 整合素配體及其用途
OA20532A (en) Integrin ligands and uses thereof.
EA043375B1 (ru) Нацеливающие лиганды
NZ785880A (en) Targeting ligands for therapeutic compounds
NZ785763A (en) Targeting ligands
EA045605B1 (ru) Нацеливающие лиганды для терапевтических соединений