UA127829C2 - Стабільна ліофілізована імуногенна композиція, яка містить живий атенуйований рекомбінантний флавівірус, спосіб і набір для її отримання та застосування - Google Patents
Стабільна ліофілізована імуногенна композиція, яка містить живий атенуйований рекомбінантний флавівірус, спосіб і набір для її отримання та застосування Download PDFInfo
- Publication number
- UA127829C2 UA127829C2 UAA202002972A UAA202002972A UA127829C2 UA 127829 C2 UA127829 C2 UA 127829C2 UA A202002972 A UAA202002972 A UA A202002972A UA A202002972 A UAA202002972 A UA A202002972A UA 127829 C2 UA127829 C2 UA 127829C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- dengue virus
- virus
- oem
- serotype
- volume
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 165
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 title claims abstract description 57
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 40
- 241000710831 Flavivirus Species 0.000 title abstract description 37
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title description 56
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 14
- 230000008569 process Effects 0.000 title description 10
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 88
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims abstract description 62
- 241000710829 Dengue virus group Species 0.000 claims abstract description 13
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 claims abstract description 13
- 230000035899 viability Effects 0.000 claims abstract description 12
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 9
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 6
- 241000725619 Dengue virus Species 0.000 claims description 149
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 72
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 56
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 40
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 40
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 38
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 37
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 35
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 35
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 23
- 206010012310 Dengue fever Diseases 0.000 claims description 21
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 21
- 208000025729 dengue disease Diseases 0.000 claims description 20
- 208000001490 Dengue Diseases 0.000 claims description 19
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 19
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 18
- 108010034546 Serratia marcescens nuclease Proteins 0.000 claims description 16
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 13
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 12
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 11
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 11
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 10
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 10
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 8
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims description 7
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 6
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims description 5
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 claims description 5
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 claims description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 4
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 claims description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 3
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000007758 minimum essential medium Substances 0.000 claims description 3
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 3
- 108091036066 Three prime untranslated region Proteins 0.000 claims description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 claims description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims 2
- 239000011190 CEM-3 Substances 0.000 claims 1
- 241000629719 Oat dwarf virus Species 0.000 claims 1
- 101000577938 Xenopus laevis Midkine-B Proteins 0.000 claims 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 claims 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 claims 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims 1
- 229910052754 neon Inorganic materials 0.000 claims 1
- GKAOGPIIYCISHV-UHFFFAOYSA-N neon atom Chemical compound [Ne] GKAOGPIIYCISHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 claims 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 claims 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 claims 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 abstract description 64
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 abstract description 21
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 abstract description 17
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 abstract description 6
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 abstract description 6
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 abstract description 3
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 24
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 24
- 229940031346 monovalent vaccine Drugs 0.000 description 23
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 20
- XCSGPAVHZFQHGE-UHFFFAOYSA-N alachlor Chemical compound CCC1=CC=CC(CC)=C1N(COC)C(=O)CCl XCSGPAVHZFQHGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 17
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 17
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 17
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 16
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 16
- 229940023605 dengue virus vaccine Drugs 0.000 description 16
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 16
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 15
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 14
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 14
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 14
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 14
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 14
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 13
- -1 polyoxyethylene Polymers 0.000 description 13
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 12
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 12
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 11
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 11
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 11
- 229940031351 tetravalent vaccine Drugs 0.000 description 11
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 9
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 101100314454 Caenorhabditis elegans tra-1 gene Proteins 0.000 description 7
- 208000004006 Tick-borne encephalitis Diseases 0.000 description 7
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 7
- 208000003152 Yellow Fever Diseases 0.000 description 7
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 7
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 7
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 7
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 7
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 7
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 7
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 7
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 7
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 6
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 5
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 5
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- 241000710842 Japanese encephalitis virus Species 0.000 description 5
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 5
- 241001244708 Moroccan pepper virus Species 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 5
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 5
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 5
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 5
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 5
- 238000005096 rolling process Methods 0.000 description 5
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101100123850 Caenorhabditis elegans her-1 gene Proteins 0.000 description 4
- 206010014596 Encephalitis Japanese B Diseases 0.000 description 4
- 201000005807 Japanese encephalitis Diseases 0.000 description 4
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 4
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 4
- 108700010756 Viral Polyproteins Proteins 0.000 description 4
- 241000710772 Yellow fever virus Species 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 4
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 4
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 4
- 108091092356 cellular DNA Proteins 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 230000036541 health Effects 0.000 description 4
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 4
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 4
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 4
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 4
- 229940051021 yellow-fever virus Drugs 0.000 description 4
- KLLLJCACIRKBDT-UHFFFAOYSA-N 2-phenyl-1H-indole Chemical compound N1C2=CC=CC=C2C=C1C1=CC=CC=C1 KLLLJCACIRKBDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000255925 Diptera Species 0.000 description 3
- 102100031780 Endonuclease Human genes 0.000 description 3
- 102000004407 Lactalbumin Human genes 0.000 description 3
- 108090000942 Lactalbumin Proteins 0.000 description 3
- 201000006449 West Nile encephalitis Diseases 0.000 description 3
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 3
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 3
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 3
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 241000238876 Acari Species 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 2
- 101710094648 Coat protein Proteins 0.000 description 2
- 208000020406 Creutzfeldt Jacob disease Diseases 0.000 description 2
- 208000003407 Creutzfeldt-Jakob Syndrome Diseases 0.000 description 2
- 208000010859 Creutzfeldt-Jakob disease Diseases 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 101710204837 Envelope small membrane protein Proteins 0.000 description 2
- 108010040721 Flagellin Proteins 0.000 description 2
- 102100021181 Golgi phosphoprotein 3 Human genes 0.000 description 2
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- 241000710912 Kunjin virus Species 0.000 description 2
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 2
- 101710145006 Lysis protein Proteins 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 description 2
- NBGXQZRRLOGAJF-UHFFFAOYSA-N Maltulose Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)(CO)OCC1O NBGXQZRRLOGAJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 2
- 101710085938 Matrix protein Proteins 0.000 description 2
- 101710127721 Membrane protein Proteins 0.000 description 2
- SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N N-tris(hydroxymethyl)methylglycine Chemical compound OCC(CO)(CO)[NH2+]CC([O-])=O SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710083689 Probable capsid protein Proteins 0.000 description 2
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 description 2
- 241000022563 Rema Species 0.000 description 2
- 208000009714 Severe Dengue Diseases 0.000 description 2
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 229960003589 arginine hydrochloride Drugs 0.000 description 2
- UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M benzethonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(C(C)(C)CC(C)(C)C)=CC=C1OCCOCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 229920001400 block copolymer Polymers 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Chemical group 0.000 description 2
- OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N chlorobutanol Chemical compound CC(C)(O)C(Cl)(Cl)Cl OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 2
- 230000001687 destabilization Effects 0.000 description 2
- KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N dihydrochrysin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2)=C1 KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 239000004174 erythrosine Substances 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 2
- JCQLYHFGKNRPGE-FCVZTGTOSA-N lactulose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 JCQLYHFGKNRPGE-FCVZTGTOSA-N 0.000 description 2
- 229960000511 lactulose Drugs 0.000 description 2
- PFCRQPBOOFTZGQ-UHFFFAOYSA-N lactulose keto form Natural products OCC(=O)C(O)C(C(O)CO)OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O PFCRQPBOOFTZGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N lipid A (E. coli) Chemical compound O1[C@H](CO)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCC)[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](OP(O)(O)=O)O1 GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 239000012280 lithium aluminium hydride Substances 0.000 description 2
- JCQLYHFGKNRPGE-HFZVAGMNSA-N maltulose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 JCQLYHFGKNRPGE-HFZVAGMNSA-N 0.000 description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 2
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 2
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 2
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 2
- 229920002503 polyoxyethylene-polyoxypropylene Polymers 0.000 description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 2
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 2
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 2
- 238000000859 sublimation Methods 0.000 description 2
- 230000008022 sublimation Effects 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- 238000004017 vitrification Methods 0.000 description 2
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 1
- GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N (R)-alpha-Tocopherol Natural products OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N 0.000 description 1
- 101150072531 10 gene Proteins 0.000 description 1
- QCDWFXQBSFUVSP-UHFFFAOYSA-N 2-phenoxyethanol Chemical compound OCCOC1=CC=CC=C1 QCDWFXQBSFUVSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HRGUSFBJBOKSML-UHFFFAOYSA-N 3',5'-di-O-methyltricetin Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC(C=2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C=2)=C1 HRGUSFBJBOKSML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UOQHWNPVNXSDDO-UHFFFAOYSA-N 3-bromoimidazo[1,2-a]pyridine-6-carbonitrile Chemical compound C1=CC(C#N)=CN2C(Br)=CN=C21 UOQHWNPVNXSDDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PZPXDAEZSA-N 4β-mannobiose Chemical compound O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PZPXDAEZSA-N 0.000 description 1
- VUPOTURDKDMIGQ-UHFFFAOYSA-N 5-chloro-1-[(4-chlorophenyl)methyl]-3-phenylsulfanylindole-2-carboxylic acid Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N(CC=2C=CC(Cl)=CC=2)C(C(=O)O)=C1SC1=CC=CC=C1 VUPOTURDKDMIGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PVXPPJIGRGXGCY-TZLCEDOOSA-N 6-O-alpha-D-glucopyranosyl-D-fructofuranose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)C(O)(CO)O1 PVXPPJIGRGXGCY-TZLCEDOOSA-N 0.000 description 1
- 108010042708 Acetylmuramyl-Alanyl-Isoglutamine Proteins 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 241000238421 Arthropoda Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M D-gluconate Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QWIZNVHXZXRPDR-UHFFFAOYSA-N D-melezitose Natural products O1C(CO)C(O)C(O)C(O)C1OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O QWIZNVHXZXRPDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 208000005156 Dehydration Diseases 0.000 description 1
- 241000710827 Dengue virus 1 Species 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N Fucose Natural products C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 1
- 102100027362 GTP-binding protein REM 2 Human genes 0.000 description 1
- 101000581787 Homo sapiens GTP-binding protein REM 2 Proteins 0.000 description 1
- 229920001612 Hydroxyethyl starch Chemical class 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241000710908 Murray Valley encephalitis virus Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- FCSHMCFRCYZTRQ-UHFFFAOYSA-N N,N'-diphenylthiourea Chemical compound C=1C=CC=CC=1NC(=S)NC1=CC=CC=C1 FCSHMCFRCYZTRQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- DKXNBNKWCZZMJT-UHFFFAOYSA-N O4-alpha-D-Mannopyranosyl-D-mannose Natural products O=CC(O)C(O)C(C(O)CO)OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O DKXNBNKWCZZMJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- IDDMFNIRSJVBHE-UHFFFAOYSA-N Piscigenin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C=2C(C3=C(O)C=C(O)C=C3OC=2)=O)=C1 IDDMFNIRSJVBHE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N Poloxamer Chemical compound C1CO1.CC1CO1 RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 108010076039 Polyproteins Proteins 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 102000029797 Prion Human genes 0.000 description 1
- 108091000054 Prion Proteins 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 235000011449 Rosa Nutrition 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- 206010041896 St. Louis Encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 241000710888 St. Louis encephalitis virus Species 0.000 description 1
- UQZIYBXSHAGNOE-USOSMYMVSA-N Stachyose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO[C@@H]2[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O2)O1 UQZIYBXSHAGNOE-USOSMYMVSA-N 0.000 description 1
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 description 1
- UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N Syringetin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N Tin Chemical compound [Sn] ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007997 Tricine buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 108091023045 Untranslated Region Proteins 0.000 description 1
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010057293 West Nile viral infection Diseases 0.000 description 1
- 241000710886 West Nile virus Species 0.000 description 1
- 208000001455 Zika Virus Infection Diseases 0.000 description 1
- 201000004296 Zika fever Diseases 0.000 description 1
- 241000907316 Zika virus Species 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 150000005215 alkyl ethers Chemical class 0.000 description 1
- 208000030961 allergic reaction Diseases 0.000 description 1
- 229940087168 alpha tocopherol Drugs 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940024545 aluminum hydroxide Drugs 0.000 description 1
- 229940047712 aluminum hydroxyphosphate Drugs 0.000 description 1
- 229940009859 aluminum phosphate Drugs 0.000 description 1
- 229940103272 aluminum potassium sulfate Drugs 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003121 arginine Drugs 0.000 description 1
- 229940031567 attenuated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 1
- 229960001950 benzethonium chloride Drugs 0.000 description 1
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- 229960004217 benzyl alcohol Drugs 0.000 description 1
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 229920005557 bromobutyl Polymers 0.000 description 1
- HQABUPZFAYXKJW-UHFFFAOYSA-N butan-1-amine Chemical compound CCCCN HQABUPZFAYXKJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 150000001719 carbohydrate derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 230000006800 cellular catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 229960004926 chlorobutanol Drugs 0.000 description 1
- 229940001468 citrate Drugs 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000009295 crossflow filtration Methods 0.000 description 1
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 201000002950 dengue hemorrhagic fever Diseases 0.000 description 1
- 201000009892 dengue shock syndrome Diseases 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229920001971 elastomer Polymers 0.000 description 1
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 244000309457 enveloped RNA virus Species 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 210000003495 flagella Anatomy 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000009477 glass transition Effects 0.000 description 1
- 229940050410 gluconate Drugs 0.000 description 1
- 229960001031 glucose Drugs 0.000 description 1
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 1
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 229940050526 hydroxyethylstarch Drugs 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000013072 incoming material Substances 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940001447 lactate Drugs 0.000 description 1
- 239000000832 lactitol Substances 0.000 description 1
- VQHSOMBJVWLPSR-JVCRWLNRSA-N lactitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O VQHSOMBJVWLPSR-JVCRWLNRSA-N 0.000 description 1
- 235000010448 lactitol Nutrition 0.000 description 1
- 229960003451 lactitol Drugs 0.000 description 1
- 229940099563 lactobionic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 238000012792 lyophilization process Methods 0.000 description 1
- 239000012931 lyophilized formulation Substances 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- QWIZNVHXZXRPDR-WSCXOGSTSA-N melezitose Chemical compound O([C@@]1(O[C@@H]([C@H]([C@@H]1O[C@@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)O)CO)CO)[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O QWIZNVHXZXRPDR-WSCXOGSTSA-N 0.000 description 1
- 210000004779 membrane envelope Anatomy 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N muramyl dipeptide Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@@H]1NC(C)=O BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 229960005323 phenoxyethanol Drugs 0.000 description 1
- WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N phenyl(114C)methanol Chemical compound O[14CH2]C1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229960000502 poloxamer Drugs 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 239000001194 polyoxyethylene (40) stearate Substances 0.000 description 1
- 235000011185 polyoxyethylene (40) stearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229940068977 polysorbate 20 Drugs 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 1
- GRLPQNLYRHEGIJ-UHFFFAOYSA-J potassium aluminium sulfate Chemical compound [Al+3].[K+].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O GRLPQNLYRHEGIJ-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 230000020175 protein destabilization Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000008864 scrapie Diseases 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000004071 soot Substances 0.000 description 1
- UQZIYBXSHAGNOE-XNSRJBNMSA-N stachyose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO[C@@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O3)O)O2)O)O1 UQZIYBXSHAGNOE-XNSRJBNMSA-N 0.000 description 1
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 description 1
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 150000003573 thiols Chemical group 0.000 description 1
- 229960004906 thiomersal Drugs 0.000 description 1
- AOBORMOPSGHCAX-DGHZZKTQSA-N tocofersolan Chemical compound OCCOC(=O)CCC(=O)OC1=C(C)C(C)=C2O[C@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C AOBORMOPSGHCAX-DGHZZKTQSA-N 0.000 description 1
- 229960000984 tocofersolan Drugs 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- BMCJATLPEJCACU-UHFFFAOYSA-N tricin Natural products COc1cc(OC)c(O)c(c1)C2=CC(=O)c3c(O)cc(O)cc3O2 BMCJATLPEJCACU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004043 trisaccharides Chemical class 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 229960004854 viral vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000002569 water oil cream Substances 0.000 description 1
- 230000002087 whitening effect Effects 0.000 description 1
- 239000002076 α-tocopherol Substances 0.000 description 1
- 235000004835 α-tocopherol Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
- A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
- A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
- C07K14/08—RNA viruses
- C07K14/18—Togaviridae; Flaviviridae
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
- C12N7/04—Inactivation or attenuation; Producing viral sub-units
- C12N7/06—Inactivation or attenuation by chemical treatment
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55561—CpG containing adjuvants; Oligonucleotide containing adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55572—Lipopolysaccharides; Lipid A; Monophosphoryl lipid A
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55577—Saponins; Quil A; QS21; ISCOMS
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55583—Polysaccharides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/70—Multivalent vaccine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/24011—Flaviviridae
- C12N2770/24111—Flavivirus, e.g. yellow fever virus, dengue, JEV
- C12N2770/24134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Immunology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Mycology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Винахід стосується стабільної ліофілізованої імуногенної композиції, яка містить щонайменше один живий атенуйований вірус денге (DEN), сахарозу, 3-6 % об’ємної маси, гліцин, 3-6 % об’ємної маси, причому відновлена композиція зберігає бажані характеристики вірусу, в тому числі його життєздатність, імуногенність і стабільність. 8
Description
Даний винахід відноситься до галузі біотехнології, зокрема, до живої атенуйованої композиції вакцини проти флавівірусу та способу її отримання. Даний винахід, що заявляється, відноситься до вдосконаленої методології виробництва живої атенуйованої вакцини проти флавівірусу.
Геном флавівірусу складається з однониткової молекули РНК з позитивною полярністю, розміром 11 кілобаз, що містить єдину відкриту рамку зчитування. РНК транслюється в поліпротеїн, який переробляється щонайменше на 10 генних продуктів: З структурних білка - нуклеокапсидний або ядерний (С), премембранний (ргМ), оболонковий (Е) та 7 неструктурних (М5) білків - М5 1, 2А, 28, 3, 4А, АВ, 8, 5. (І іпаепбасні ВО, еї аї., Іп: Рієїде Мігоіоду. Едітейд Бу Кпіре
ОМ, Ноулеу РМ, агійніп РЕ, еї а. РийадеїІрніа: М/онегв Кішмег, Гіррепсой Матв апа УМіїКкіп5; 2007. рр. 1101-1152). Ряд цих флавівірусів використовують членистоногих (наприклад, кліщів та/або комарів) як засоби передачі реципієнтам. Такі віруси, що переносяться членистоногими (тобто арбовіруси), являють собою серйозну проблему у всьому світі через їх високу патогенність для людини. (Регпапде;-Сагсіа МО, еї аї., СеїїЇ Нозі Місгтобе, 2009, 5:318-328).
Зокрема, до патогенних для людини арбовірусів належать збудники жовтої лихоманки (УР), японського енцефаліту СЕ), вірусу денге (ОЕМ), енцефаліту Західного Нілу (МУМ) та кліщового енцефаліту (ТВЕ), в життєві цикли яких у природі залучені комарі чи кліщі як вектори та птахи та/або ссавці як резервуари. (сибіег 0, еї аї., Іп: Рієїд5 Мігоіїоду. Едікеа ру Кпіре ОМ, Ноулеу РМ,
Стійіп РЕ, еї аЇ. Бій єд. Рпийадеї!рнпіа: Ууонегв Кішмег, Гіррепсой УМШатв апа УмїКіп5; 2007. рр. 1153-1252).
Вірус денге (0ЕММ) став найважливішим арбовірусом людини у всьому світі, так як, за підрахунками, щорічно трапляються 500 мільйонів випадків інфікування, що призводить до понад 2 мільйонів випадків важкого захворювання, відомого як геморагічна лихоманка денге / шоковий синдром денге, та 21000 смертей. Існує чотири серотипи вірусу денге (ОЕММ1, ОЕММ2,
РЕММЗ та ОЕММ4).
Відомі численні способи отримання препаратів атенуйованих живих рекомбінантних флавівірусів з метою створення вакцини чи для інших цілей. Також відомі композиції та способи, придатні для заморожування, ліофілізації або зберігання життєздатних вірусних препаратів для лабораторного використання або використання в якості вакцини з метою збереження їх
Зо активності.
Водні композиції флавівірусів не забезпечують хорошої стабільності вірусів у довготерміновій перспективі та при температурі вище 5 "С. Наприклад, нефасовані водні композиції химерного вірусу МЕ-ОЕМ (жовтої лихоманки-денге) втрачають більше 4 од, стабілізованих в рідині після зберігання протягом 1 доби при 37 "С. Тепер термостабільність є серйозною проблемою в ендемічних для денге субтропічних країнах, де транспортування в умовах "холодового ланцюга" утруднене.
Ліофілізація - поширений спосіб стабілізації вакцин. Однак ліофілізація викликає ослаблення вірусу. Вакцини з часом втрачають активність, а швидкість її втрати залежить від температури.
Живі віруси чутливі до впливу осмотичних, теплових та вакуумних стресових факторів.
Двошарова ліпідна вірусна оболонка вважається менш стабільним компонентом оболонкових вірусів через високу уразливість. Живі віруси чутливі до різних впливів під час етапів ліофілізації, а саме - заморожування, первинного осушення, вторинного осушення, що може вплинути на їх фізико-хімічну стійкість. У зв'язку зі структурними особливостями ослаблення вірусів при ліофілізації може бути спричинене дестабілізацією білка (наприклад, розгортанням, деградацією та агрегацією), деградацією нуклеїнової кислоти, пошкодженням ліпідного шару (наприклад, фазовим переходом, механічним пошкодженням) та стресами, пов'язаними зі змінами у внутрішньому (утворення льоду) та зовнішньому (зміна рН та осмолярності) середовищі вірусу. При ліофілізації на стадії зневоднення руйнується структура водневих зв'язків білків, що супроводжується підвищеною рухливістю амінокислотних компонентів вірусних епітопів. Повідомлялося, що в деяких випадках ліофілізація викликає до 40 95 втрати активності вірусу.
Доступно багато інформації про стресові механізми та стратегії стабілізації фармацевтичних пептидів, білків та ДНК під час ліофілізації. Але через молекулярну складність вірусів, різні шляхи дестабілізації та відсутність аналітичних прийомів, що дозволяють вимірювати фізико- хімічні зміни структури антигену під час і після ліофілізації, віруси становлять особливу проблему при ліофілізації. Механізми дестабілізації а також механізми захисту живих атенуйованих вірусних вакцин під час ліофілізації недостатньо відомі.
Напзеп та ін., 2015 р., (Ргееге-агуїпа ої Іме міги5 массіпев: А геміем, Напзеп 6вї аї., Массіпе 33 (2015) 5507-5519) повідомив про формування складу декількох ліофілізованих вірусних бо вакцинних препаратів, для більшості з яких згадується про використання цукрової спиртової /
білкової добавки (тобто сахароза ж трегалоза, сорбіт, гідролізований желатин, гідролізати лактальбуміну), як таке, що має перевагу для отримання ліофілізованої вакцини проти вірусу.
Було повідомлено про наступні варіанти складу вакцини проти флавівірусу: 1) сорбіт, трегалоза, сечовина, 2) лактоза, сорбіт, НБА (людський сироватковий альбумін); 3) лактоза, манітол, НЗА; 4) полоксамер, альбумін людини, трегалоза, РВЗ (буферний фосфат); 5) трегалоза, рекомбінантний Н5А, Е127 (блок-сополімер поліоксиетилену поліоксипропілену).
У випадку з НБЗА включення цих матеріалів може викликати потенційні занепокоєння щодо безпеки, якщо ці матеріали отримані від людей або тварин, які піддавались ризику. Такі додані білки викликають занепокоєння з двох основних причин. Перша проблема виникає через здатність білка тваринного і людського походження містити один або кілька випадкових агентів.
Друга проблема полягає у можливості білка, отриманого від тварин або людини, викликати алергічну реакцію у сприйнятливих людей. Крім того, у раніше згаданій ліофілізованій вакцинній композиції використано білки, які виробляються з використанням процесів, що підтримують високий вихід кінцевого продукту, проте мають васоку вартість. "для широкого застосування вакцини в регіонах з низьким рівнем доходу вкрай важливо підтримувати низьку вартість вакцини і її компонентів, зокрема стабілізаторів. З точки зору регулювання і безпеки також важливо, щоб використовувані допоміжні речовини і стабілізатори не містили ні речовин тваринного походження, ні тваринних компонентів. Сполуки, які є похідними від тварин, представляють потенційну небезпеку через можливе зараження пріонним білком у патогенній формі скрейпі (РгРЗС) та новим варіантом хвороби Кройцфельда-Якоба (СОЮ).
Неіїоногенні поверхнево-активні речовини, що застосовуються у фармацевтичних рецептурах, включають ТІйоп'м Х-100, РіигопісФф Е-68, Е-88, та Е-127 (полоксамери), Вгі) 35 (поліоксіетилен алкіловий ефір), поліокси-етилен (40) стеарат, Сгеторпог? ЕЇ та альфа- токоферол ТРО5. Кожна з цих поверхнево-активних речовин має спільну рису. Всі вони містять поліоксіетиленові фрагменти і, таким чином, у більшій чи меншій мірі становлять подібну проблему -- поліоксіетиленовий фрагмент автоматично окислюється, утворюючи реакційноздатні пероксиди, що спричиняє збільшення небажаної імуногенності білка (див.
Едмжата Т. Масддіо єї аї; Роїузогбраїез, регохідев5, ргоївїп аддгедайоп, іттиподепісйу-а дгомжміпд сопсепт; Уошитаї ої Ехсірієпів апа Роса Спетіса!5 3(2):46-53; 2012).
Зо Полівінілпіролідон (ПВП) дестабілізує живі ослаблені вірусні препарати (див. УА УУпіе еї аї;
Оемеіортетпі ої а 5іабіє Іди топтшиїайноп ої ме апйепиаїей іпїшепга массіпе; Массіпе Моїште 34,
Іб65це 32, 12 Ушу 2016, Радез 3676-3683; 2016).
Трегалоза є високовартісною; для досягнення стабільності її потрібно поєднувати з іншими цукрами та білюювими добавками (желатин). Також для підвищення стабільності зберігання ліофілізованої вакцини інші стабілізатори є кращими, ніж трегалоза.
Сорбіт має низьку температуру склування (Та) (-1,6 "С), тому не може використовуватися як основний компонент рецептури. Низький Т9 сорбіту обмежує його використання. Для досягнення стабільності сорбіт необхідно поєднувати з іншими цукрами та білковими добавками (желатин).
Як правило, рекомбінантні віруси зберігають у вигляді ліофілізованих гранул, що містять гідролізати казеїну та/або колаген у фосфатно-буферному фізіологічному сольовому розчині (РВ5). Потім ці гранули повторно регідратують у фармацевтично прийнятному розчині, такому як 0,4-0,9 96 Масі. Однак існують значні недоліки, пов'язані з такими рецептурами, і вони є відомими в даній сфері. До них належать не повністю визначені компоненти, складні процедури приготування, висока вартість і нездатність підтримувати певні бажані характеристики вірусу.
Розроблені раніше препарати вакцини проти флавівірусу були стабільними при 2-87 протягом 6 місяців, при 25 "С протягом 7 днів і при 37 "С протягом 1-2 днів. Існує потреба у розробці рецептур, які містять мінімальну кількість допоміжних речовин і надають тривалу термостабільність вакцинам проти флавівірусів, зокрема тим, що містять живі атенуйовані рекомбінантні / химерні віруси денге.
Тут описані рецептури таких композицій та спосіб їх отримання.
Даний винахід є імуногенною композицією, що містить щонайменше один живий атенуйований флавівірус, щонайменше один вуглевод та щонайменше одну амінокислоту, при цьому композицію піддають ліофільній обробці, а відновлена імуногенна композиція характеризується необхідними характеристиками вірусу, зокрема життєздатністю, імуногенністю та стабільністю вірусу.
Конкретніше даний винахід стосується ліофілізованих імуногенних композицій, що містять: а) живий атенуйований рекомбінантний / химерний вірус денге, де використані живі атенуйовані штами вірусу денге гОєЕМ1А30-1545'70ОЕМ2/4АЗ0О(МЕ)-1495, 7163; юЕМЗАЗО/31- бо 7164 та гОєМа4дЗ30-7132, 7163, 8308, отримані від Національного інституту охорони здоров'я
США (МІН); р) сахарозу, вміст якої обирають з діапазону приблизно З -- 6 95 об'ємної маси; с) гліцин, вміст якого обирають з діапазону приблизно З -- 6 95 об'ємної маси.
Даний винахід також розкриває спосіб виготовлення такої вакцинної композиції, набір для здійснення способу та застосування імуногенної композиції.
Далі описані деякі завдання винаходу, яким задовольняє щонайменше один варіант здійснення винаходу.
Одним завданням даного винаходу є усунення однієї або декількох проблем рівня техніки або щонайменше надання прийнятної альтернативи.
Іншим завданням винаходу є створення стабілізуючої ліофілізованої вакцинної композиції, яка містять щонайменше один флавівірус, щонайменше один вуглевод, щонайменше одну амінокислоту та, необов'язково, основу. При цьому композиція зберігає необхідні характеристики вірусу, зокрема життєздатність, імуногенність та стабільність.
Ще одним завданням винаходу є створення стабілізуючої ліофілізованої вакцинної композиції, яка містять, серед іншого, живі атенуйовані рекомбінантні/химерні серотипи вірусу денге (ОЕМ 1, ОЕМ 2, ОЕМ 3, ОЕМ 4) та придатна для лікування або попередження інфекції денге, або для запобігання, купірування або затримки виникнення або прогресування її клінічних проявів.
Також завданням винаходу є розробка способу виготовлення такої вакцинної композиції.
Інші завдання та переваги даного винаходу стануть більш зрозумілими з подальшого опису, який жодним чином не обмежує об'єму винаходу.
Хоча даний винахід є придатним для різних варіантів його втілення, на фігурах показані і детально описані деякі варіанти, причому слід розуміти, що наведені варіанти здійснення винаходу є лише ілюстративними прикладами принципів винаходу і жодним чином не обмежують його об'єму.
Згідно з першим варіантом здійснення даного винаходу, імуногенна композиція, що містить щонайменше один живий атенуйований флавівірус, щонайменше один вуглевод та щонайменше одну амінокислоту, при цьому згадану композицію піддають швидкій ліофільній обробці, і відновлена композиція зберігає необхідні характеристики вірусу, зокрема його життєздатність, імуногенність та стабільність.
Термін "живий" вживається в його загальноприйнятому значенні, живий вірус - це вірус, який не був інактивований, тобто вірус, здатний реплікуватися в пермісивних клітинах. Живий атенуйований флавівірус - це вірус, який не індукує захворювання, що спричиняється відповідним диким вірусом у тварин або людей, і який здатний викликати специфічну імунну відповідь.
Згідно з другим варіантом здійснення даного винаходу, щонайменше один живий атенуйований флавівірус або більша кількість живих атенуйованих флавівірусів є рекомбінантним флавівірусом та/або химерним флавівірусом.
Згідно з третім варіантом здійснення даного винаходу, щонайменше один живий атенуйований флавівірус або більша кількість живих атенуйованих флавівірусів обрано з групи, яка включає вірус денге (ОЕМ), вірус жовтої лихоманки (УРЕ), вірус японського енцефаліту (ЧЕ), вірус Кунджин, вірус лихоманки Західного Нілу (М/М), вірус кліщового енцефаліту (ТВЕ), вірус енцефаліту Сент-Луїс, вірус енцефаліту долини Муррея, вірус Зіка або будь-який пов'язаний з ними флавівірус.
Крім того, відповідно до кращого аспекту третього варіанту здійснення винаходу щонайменше один живий атенуйований флавівірус або більша кількість живих атенуйованих флавівірусів містить вірус денге (ОЕМ), а в деяких випадках містить багато живих атенуйованих вірусів денге (ОЕМ) різних серотипів, вибраних з групи вірусів ФЕМ-1, ЕМ-2, ОЕМ-3 та ОЕМ-4.
Згідно з четвертим варіантом здійснення даного винаходу, щонайменше один живий атенуйований флавівірус або більша кількість живих атенуйованих флавівірусів обрано з групи, яка включає живий атенуйований химерний/рекомбінантний вірус жовтої лихоманки (УРЕ) та/або живий атенуйований химерний/рекомбінантний вірус японського енцефаліту (ЧЕ), та/або живий атенуйований химерний/рекомбінантний вірус денге (ОЕМ), та/або живий атенуйований химерний/рекомбінантний вірус лихоманки Західного Нілу (М/М), та/"або живий атенуйований химерний/рекомбінантний вірус кліщового енцефаліту (ТВЕ), тал"або химерний вірус денге (жовта лихоманка-денге), та/або химерний вірус ХЕ-МУМ (жовта лихоманка-лихоманка Західного
Нілу), та/або химерний вірус ЖЕ-УОЕ (жовта лихоманка-японський енцефаліт), або будь-який пов'язаний з ними флавівірус.
Крім того, відповідно до кращого аспекту четвертого варіанту здійснення винаходу бо щонайменше один живий атенуйований флавівірус або більша кількість живих атенуйованих флавівірусів являє собою живий атенуйований химерний/рекомбінантний вірус денге (ОЕМ).
Згідно з п'ятим варіантом здійснення даного винаходу живі атенуйовані рекомбінантні/химерні віруси денге, які застосовують в імуногенній композиції, описані нижче:
А) Короткий опис рекомбінантних штамів МІН / їхня конструкція:
Усі дії, пов'язані з отриманням атенуйованих вакцинних штамів усіх чотирьох серотипів вірусу денге (ОЕМ 1, ОЕМ 2, ОЕМ 3, ОЕМ 4), пояснені нижче, були проведені в МІН, США. Зміст
УМО2002095075 та УМО2008022196 включено тут у повному обсязі.
Походження гена 1. Кожен атенуйований штам вірусу денге серотипу 1-4 (ГОЕМ1ТАЗО, гЕМ2/4АЗО(МЕ),
ГОЕМЗАЗО/31 8 гОєЕМ4АЗО) був розроблений шляхом делеції приблизно 30 нуклеотидів (АЗ0) (додатково 31 нуклеотид (АЗ1) у випадку ОЕМ-3) з нетрансльованої ділянки З '-кінця диких штамів. Мутація АЗ1 також може генеруватися окремо, щоб визначити внесок або АЗО, або дЗ31 у комбіновану делеційну мутацію ДЗ / 31. 2. Серотип вірусу ЮОЕМ-2 був розроблений шляхом заміни білка М і Е атенуйованого серотипу ОЕМ-4 на протеїн М і Е ОЕЄМ-2. 3. Структурно всі чотири штами є оболонковими РНК-вірусами з позитивною полярністю розміром 35-50 нанометрів. 4. Штам гОЕМ1АЗ30-1545, використаний тут, містить одну мутацію Гуз-Аг9 при амінокислотному залишку 484 (мутація А154505) у вірусному поліпротеїні. 5. Штам гєЕМ2/4АЗО(МЕ)-1495, 7163, використаний тут, містить мутацію Бег-»РПпе при амінокислотному залишку 186 (мутація С1495Т) і мутацію Геш-»Рпе при амінокислотному залишку 112 (мутація А7163С) у вірусному поліпротеїні. 6. г0ОЕМЗАЗ0/31 включає первісну делецію ДЗО та непостійну делецію нуклеотиду 31, яка видаляє обидві вихідні структури ТІ-2 і ТІ-3. Отриманий тут штам г0ОЕМЗ3АЗ0/31-7164 містить мутацію МаІ-:АІа при амінокислотному залишку 115 (мутація Т7164С) у вірусному поліпротеїні. 7. Штам гєЕМ4дД30-7132, 7163, 8308, використаний тут, містить мутацію Тпг--Пе при амінокислотному залишку 102 (мутація С7132Т), мутацію Геш--»Рпе при амінокислотному залишку 112 (мутація А7163С) і мутацію Губ5- Агуд при амінокислотному залишку 249 (мутація
А83085) у вірусному поліпротеїні.
Зо Зображення послідовності РНК та структури вакцинного штаму вірусу ОЕМ показані на фігурах 1, 2 та 3.
Дикі штами, які використовують для генерації вакцинних штамів, наведені в таблиці 1.
Таблиця 1
Номенклатура диких та вакцинних штамів
Б) Процедура трансформації:
Для отримання вакцинних штамів вірусу денге були виконані наступні кроки: 1. Плазміду, що містить повнорозмірну копію кКДНК вірусу ОЕМ дикого типу, отримували шляхом генерації коротких сегментів ДНК з використанням зворотної транскриптази та полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР). Отримані таким чином фрагменти відповідно лігували для отримання неушкодженої дволанцюгової ДНК, що містить повнорозмірний ланцюг геномної
КДНК вірусу ОЕМ дикого типу, яка була клонована в плазміду. 2. Мутацію 430 вносили шляхом мутації субфрагмента 3' нетрансльованої області геному (МТК) і заміни 3 МТ вірусу СЕМ дикого типу на субфрагмент, що містить ділянку АЗО.
Специфічні мутації були введені шляхом сайт-специфічного мутагенезу ПЛР.
З. Для створення вакцинного штаму ОЕМ 2, структурні гени М ії Е ОЕМ 2 клонували в плазміду і використовували для заміни структурних генів в клонованій плазміді ОЕМ 4, що містить мутацію АЗО. Для отримання вакцинного штаму ОЕМ З в клон дикого типу були введені дві делеції 30 і 31 нуклеотидів. 4. Транскрипти РНК, обмежені довжиною генома, синтезували з лінеаризованих плазмід з використанням набору Атріїсар ЗРб Меззаде МакКег Кії (ерісепієг Тесппоїодіє5, Мадізоп) і очищали РНК з використанням набору КМеазу Міпі Киї (Оіадеп, МаІепсіа, СА). Клітини Мего (С6 /
36 для денге 3) трансфіковані очищеними РНК-транскриптами з використанням реагентів для ліпосомальної трансфекції ООТАР (Роспе, Іпаіапароїї5, ІМ) для відновлення потрібного вірусу.
Відновлені віруси піддавали ампліфікації, клонуванню методом лімітуючих розведень і кінцевій ампліфікації для генерації посівного вірусу в клітинах Мего. Докладні дані про кількість циклів ампліфікації і термінального розведення, зроблених для кожного штаму, наведені в таблиці 2.
Таблиця 2
Цикл ампліфікації та лімітуюче розведення для підготовки посівного вірусу лімітуючих розведень " Уся подальша робота з ампліфікації та клонування методом лімітуючих розведень проводилася в клітинах Мего.
Згідно з першим аспектом п'ятого варіанту здійснення даного винаходу, химерні віруси мають особливість проявляти характеристики живих атенуйованих вірусів, як визначено вище.
Тому в контексті винаходу можливо використовувати будь-який химерний вірус, що експресує білок оболонки або епітоп або епітопи одного білка або декількох білків оболонки одного флавівірусу або декількох флавівірусів та індукує специфічну імунну відповідь, що включає антитіла, які нейтралізують штам або, принаймні, один із штамів, з якого отримують білок оболонки або зазначений епітоп.
Згідно з другим аспектом п'ятого варіанту здійснення даного винаходу, нуклеїнова кислота живого атенуйованого рекомбінантного вірусу денге додатково містить мутацію, яка генерує мутантний вірус з фенотипом, що належить до групи, що складається з температурної чутливості в клітинах Мего або лінії клітин печінки людини НинН-7, обмеження клітини-господаря в клітинах комарів або лінії клітин печінки людини НинН-7, адаптацію клітин-господарів для поліпшення реплікації в клітинах Мего, або ослаблення у мишей або мавп, де композиція містить елемент, відібраний із групи, яка включає: (1) гОєМІАЗО, гОєМ2АЗ0, гОЕМЗАЗО, гОЕМА4АЗО, (2) ОЄМІАЗО, гОЕМ2АЗ0, гОЕМЗАЗО, гОєМАЛАЗО, (3) ГОЄМІАЗО, гОЕєМ2АЗ0, гОЕМЗАЗО, гОЕМа4/2А30, (4) гОЄМІАЗО, гОЕМ2АЗ0, гОЕМЗАЗО, гОєЕМа4/ЗАЗО, (5) ГОЄМІАЗО, гОєМ2АЗ0, гОєМЗЛАЗО, гОєЕМААЗО, (6) ГОЄМІАЗО, гОєМ2АЗ0, гОєМЗЛАЗО, гОєМАЛАЗО, (7) ОЄМІАЗО, гОЕМ2АЗ0, гОєМЗЛАЗО, гОєЕМ4/2А30, (8) ГОЄМІАЗО, гОєМ2АЗ0, гОєМЗЛАЗО, гОєЕМА/ЗАЗО,
Зо (9) гОєЄМІАЗО, гОєМ2АЗО, гОєМЗ/2430, гОЄМаАДЗО, (10) гГОЕМІАЗО, гОЄМ2АЗО, гОєМЗ/2А30, гОЕМАЛАЗО, (11) гОЄМІАЗО, г0ОЄМ2АЗО, гОєЕМЗ/2А30, гОЕМА4/2А30, (12) ГОЕМІАЗО, г0ОЄМ2АЗО, гОєЕМЗ/2А30, грОЕМА4/ЗАЗО, (13) ГОЕМІАЗО, гОЄМ2АЗО, гОєМЗ3/4А30, гОЕМААЗО, (14) ГОЄМІАЗО, гОЄМ2АЗО, г0ОєМЗ/4А30, гОєМАЛАЗО, (15) гГОЕМАЗ0О, гОЕМ2АЗО, грЕМЗ/4АЗ0О, гОєЕМА4/2А30, (16) гОЕМІАЗО, г0ОЄМ2АЗО, гОєМЗ3/4АЗ30, гОЕМА4/ЗАЗО, (17) ГОЕМІАЗО, гОЄМ2ЛАЗО, гОєМЗАЗО, гОєМААЗО, (18) ГОЕМІАЗО, гОЄМ2ЛАЗО, гОєМЗАЗО, гОєМАЛАЗО, (19) ГОЕМІАЗО, гОЄМ2ЛАЗО, гОєМЗАЗО, гОєМа4/2А30, (20) гГОЕМІАЗО, гОЄМ2ЛАЗО, гОєМЗАЗО, гОєМА/ЗАЗО, (21) гГОЄЕМІАЗО, гОЄМ2ЛАЗО, гОєМЗЛАЗО, гОєМААЗО, (22) ГОЕМІАЗО, гОЄМ2ЛАЗО, гОєМЗЛАЗО, гОєМАЛАЗО, (23) ГОЕМІАЗО, гОЄМ2ЛАЗО, гОєМЗЛАЗО, гОєМа4/2А30, (24) ГОЕМІАЗО, гОЄМ2ЛАЗО, гОєМЗЛАЗО, гОєМаА/ЗАЗО, (25) ГОЄЕМІАЗО, гОЄМ2ЛАЗО, гОєМЗ3/2А30, гОєЕМААЗО,
(26) ГОЕМІАЗО, гОЄМ2ЛАЗО, гОєМЗ/24А30, гОєМАЛАЗО, (27) ФЕМАЗО, гОєЕМ2ЛАЗО, гОєМЗ/2А30, гОєМаА/2А30, (28) ГОЕМІАЗО, гОЄєМ2ЛАЗО, гОєМЗ/2А30, гОєМа4/ЗАЗО, (29) ГОЕМІАДЗО, гОЄМ2ЛАЗО, гОєМЗ/4АЗ0, гОєМАДЗО, (30) ГОЕМІАЗО, гОЄМ2ЛАЗО, гОєМЗ/4АЗ30, гОєМАЛАЗО, (31) гОЄМІАЗО, гОєМ2ЛАЗО, гОєМЗ3/4АЗ30, гОєМ4/2А430, (32) ГОЕМІАЗО, гОєМ2ЛАЗО, гОєМЗ3/4АЗ30, гОєМа4/ЗАЗО, (33) ГОЕМІАЗО, гОєМ2/3АЗО, гОЕМЗАЗО, гОєМА4ДЗО, (34) ГОЕМІДЗО, гОєМ2/ЗАЗО, гОєЕМЗАЗО, гОєМАЛАЗО, (35) ГОЕМІАЗО, гОЄМ2/З3АЗО, гОЕМЗАЗО, гОєЕМ4/2Д30, (36) ГОЕМІАЗО, гОєМ2/3АЗО, гОЕМЗАЗО, гОєМ4/ЗАЗО, (37) ГОЕМІДЗО, гОєМ2/ЗАЗО, гОєЕМЗЛАЗО, гОєМАДЗО, (38) ГОЕМІАЗО, гОєМ2/ЗАЗО, гОєМЗЛАЗО, гОєМАЛАЗО, (39) ГОЕМІАЗО, гОєМ2/3АЗО, гОєМЗЛАЗО, гОєМ4/2А430, (40) ГОЄЕМІАЗО, гОєМ2/3АЗО, гОЕМЗЛАЗО, гОєМ4/ЗАЗО, (41) гОЄМІАЗО, гОєМ2/З3АЗО, гОєЕМЗ3/2А30, гОЄМАДЗО, (42) ГОЄЕМІАЗО, гОєМ2/3АЗО, гОєМЗ/2А30, гОєМАЛАЗО, (43) ГОЄЕМІДЗО, гОєМ2/З3АЗО, гОєМЗ3/2А30, гОєМаА/2А30, (44) ГОЄЕМІДЗО, гОЄМ2/З3АЗО, гОєМЗ3/2А30, гОєМаА/ЗДЗО, (45) ГОЄЕМІАЗО, гОєМ2/3АЗО, гОєМЗ/4АЗ30, г0ОєМАДЗО, (46) ГОЄМІАЗО, гОєМ2/3АЗО, гОєМЗ3/4Д30, гОєМАЛАЗО, (47) ГОЄЕМІДЗО, гОєМ2/З3АЗО, гОєМЗ3/4Д30, гОєМаА/2АЗ30, (48) ГОЕМІДЗО, гОєМ2/З3АЗО, гОєМЗ3/4Д30, гОєМА/ЗДЗО, (49) ГОЄЕМІАДЗО, гОєМ2/4Д30, гОЕМЗАЗО, гОєМА4ДЗО, (50) ГОЕМІАДЗО, гОєМ2/4Д30, гОєМЗАЗО, гОєМАЛАЗО, (51) гОЄМІАЗО, гОєМ2/4А30, гОЕМЗАЗО, гОєМ4/2А430, (52) ГОЕМІАЗО, гОєМ2/4А30, гОЕМЗАЗО, гОєМ4/ЗАЗО, (53) ГОЕМІДЗО, гОєМ2/4Д30, гОєМЗЛАЗО, гОєМАДЗО, (54) ГОЕМІАЗО, гОєМ2/4А30, гОЄМЗЛАЗО, гОєМАЛАЗО, (55) ГОЕМІАЗО, гОєМ2/4А30, гОЄЕМЗЛАЗО, гОєЕМА/2А30, (56) гОЄЕМІАЗО, гОєМ2/4А30, гОЕМЗЛАЗО, гОєМа4/ЗАЗО, (57) ГОЕМІАЗО, гОєМ2/4Д30, гОєЕМЗ3/2А30, гОЄМАДЗО, (58) ГОЕМІАЗО, гОєМ2/4А30, гОєМЗ/2А30, гОєМАЛАЗО, (59) ГОЕМІАДЗО, гОєМ2/4Д30, гОєМЗ3/2А30, гОєМаА/2А30, (60) ГОЄМІАЗО, гОєМ2/4Д30, гОєМЗ3/2А30, гОєМаА/ЗАЗО, (61) гОЄМІАЗО, гОєМ2/4Д30, гОєЕМЗ3/4ДЗ30, гОєМАДЗО, (62) ГОЕМІАЗО, гОєМ2/4А30, гОєМЗ3/4Д30, гОєМАЛАЗО, (63) ГОЕМІАЗО, гОєМ2/4Д30, гОєМЗ3/4Д30, гОєМаА/2АЗ30, (64) ГОЄЕМІАЗО, гОєМ2/4Д30, гОєМЗ3/4Д30, гОєМаА/ЗДЗО, (65) ГОЄЕМИ2АЗО, гОєМ2АЗО, гОЕМЗАЗО, гОєМА4ДЗО, (66) ГОЄМИ2АЗО, гОєМ2АЗО, гОЕМЗАЗО, гОєМАЛАЗО, (67) ГОЄЕМИ2АЗО, гОєМ2АЗО, гОЕМЗАЗО, гОєМ4/2А430, (68) ГОЄЕМИ2АЗО, гОєМ2АЗО, гОЕМЗАЗО, гОєМ4/ЗАЗО, (69) ГОЕМИ2АЗО, гОєМ2АЗО, гОЕМЗЛАЗО, гОєМАДЗО, (70) ГОЄМИУ2АЗО, гОєМ2АЗО, гОєМЗЛАЗО, гОєМАЛАЗО, (71) "«ОЕМИ2АЗО, гОєЕМ2АЗО, гОЕМЗЛАЗО, гОєМ4/2А430, (72) ГОЄЕМИУ2АЗО, гОєЕМ2АЗО, гОЄЕМЗЛАЗО, гОєМа4/ЗАЗО, (73) ГОЄЕМИУ2АЗО, гОєМ2АЗО, гОєЕМЗ3/2А30, гОєМАДЗО, (74) ГОЄМИУ2АЗО, гОєЕМ2АЗО, гОєМЗ/2А30, гОєМАЛАЗО, (75) ГОЄЕМИ2АЗО, гОєМ2АЗО, гОєЕМЗ3/2А30, гОєМаА/2А30, (76) "ОЕМУ2АЗО, гОєМ2АЗО, гОєЕМЗ3/2А30, гОєМаА/ЗАЗО, (77) ГОЄЕМИУ2АЗО, гОєЕМ2АЗО, гОєЕМЗ3/4ДЗ30, гОєМАДЗО, (78) ГОЄЕМИ2АЗО, гОєЕМ2АЗО, гОєМЗ3/4Д30, гОєМАЛАЗО, (79) ГОЄЕМИ2АЗО, гОєМ2АЗО, гОєМЗ3/4Д30, гОєЕМА/2АЗО, і (80) ГОЕМІИ2АЗО, гОєМ2АЗО, гОєМЗ3/4ДЗ30, гОєМА/ЗДЗО, (81) "«ОЕМУ2АЗО, гОєМ2/ЛАЗО, гОєЕМЗАЗО, гОєМАДЗО, (82) ГОЕМИ2АЗО, гОєМ2/ЛАЗО, гОЕМЗАЗО, гОЄМАЛ/ЛАЗО, (83) ГОЄЕМИ2АЗО, гОєМ2/ЛАЗО, гОЕМЗАЗО, гОєМА4/2А430, (84) ГОЄЕМИ2АЗО, гОєМ2/ЛАЗО, гОЕМЗАЗО, гОєМа4/ЗАЗО, бо (85) ГОЄЕМИ2АЗО, гОєМ2/ЛАЗО, гОЕМЗЛАЗО, гОєЕМАДЗО,
(86) ГОЄМИ2АЗО, гОєМ2/ЛАЗО, гОЕМЗЛАЗО, гОєМАЛАЗО, (87) ГОЕМИ2АЗО, гОєМ2/ЛАЗО, гОЕМЗЛАЗО, гОЕМА/2АЗ0, (88) ГОЕМИ2АЗО, гОєМ2/ЛАЗО, гОЕМЗЛАЗО, гОЕМА/ЗАЗО, (89) ГОЕМИ2АЗО, гОєМ2/ЛАЗО, гОЕМЗ3/2А30, гОЕМААЗО, 1 (90) ГОЕМИ2АЗО, гОєМ2/ЛАЗО, гОЕМЗ3/2А30, гОєМА/ЛАЗО, (91) ГОЄМИ2АЗО, гОєМ2/ЛАЗО, гОєЕМЗ3/2А30, ГОЕМ4/2Д30, (92) ГОЕМИ2АЗО, гОєМ2/ЛАЗО, гОЕМЗ3/2А305 ГОЕМА/ЗАЗО, (93) ГОЕМИ2АЗО, гОєМ2/ЛАЗО, гОЕМЗ3/4ДЗО, гОЕМАДЗО, (94) ГОЕМИ2АЗО, гОєМ2/ЛАЗО, гОЕМЗ3/4ДЗО, гОєМАЛ/ЛАЗО, (95) ГОЕМИ2АЗО, гОєМ2/ЛАЗО, гОЕМЗ3/А4ДЗО, гОєЕМ4/2Д30, (96) ГОЄМИ2АЗО, гОєМ2/ЛАЗО, гОЕМЗ3/А4ДЗО, гОєЕМ4/3ДЗО, (97) ГОЕМИ2АЗО, гОєМ2/3АЗО, гЕМЗАЗО, гОєЕМАДЗО, (98) ГОЕМИ2АЗО, гОєМ2/3АЗО, ПЕМЗАЗО, гОєЕМАЛАЗО, (99) ГОЕМИ2АЗО, гОєМ2/3АЗО, гЕМЗАЗО, гОєЕМА4/2А30, 1 (100) ГОЄМІИ2АЗО, гОєМ2/3АЗО, гОєМЗАЗО, гОєМ4/ЗДЗО, (101) гОЕМІИ2АЗО, гОєМ2/3АЗО, гОєМЗЛАЗО, гОєМАДЗО, (102) ГОЕМІ/2АЗО, гОєМ2/3АЗО, гОєМЗЛАЗО, гОЄМАЛАЗО, (103) ГОЕМІ/2АЗО, гОєМ2/3АЗО, гОєМЗЛАЗО, гОєМА/2А30, (104) ГОЕМІ/2АЗО, гОєМ2/3АЗО, гОєМЗЛАЗО, гОєМА/ЗАЗО, (105) ГОЄМІИ2АЗО, гОєМ2/3АЗО, гОєМЗ/2А30, гОєМАДЗО, (106) ГОЄМІ/2АЗО, гОєМ2/3АЗО, гОєМЗ/2А30, гОєЕМАЛАЗО, (107) ГОЕМІ2АЗО, гОєМ2/3АЗО, гОєМЗ/2А30, гОЕМ4/2А430, (108) ГОЄМІ/2АЗО, гОєМ2/3АЗО, гОєМЗ/2А30, гОЕМ4/ЗАЗО, (109) ГОЄМІ/2АЗО, гОєМ2/3АЗО, гОєМЗ3/4АЗ30, гОєЕМАДЗО, (110) ГОЕМИ2АЗО, гОєМ2/3АЗО, гОЄМЗ3/4Д30, гОєМАЛАЗО, (111) гОЕМИ2АЗО, гОєМ2/3АЗО, гОєМЗ3/4АЗ0, гОЕМ4/2А30, (112) ГОЕМІ2АЗО, гОєМ2/3АЗО, гОєМЗ3/4АЗ0, гОЕМ4/ЗАЗО, (113) ГОЕМІИ2АЗО, гОєМ2/4Д30, гОЄМЗАЗО, гОєМАДЗО, (114) ГОЕМИ2АЗО, гОєМ2/4ДА30, гОЄМЗАЗО, гОЄМАЛ/ЛАЗО, (115) гОЕМИ2АЗО, гОЄМ2/4Д30, гОєМЗАЗО, гОєМ4/2А430, (116) гОЄМИ2АЗО, гОєМ2/4Д30, гОєМЗАЗО, гОєМа4/ЗАЗО, (117) ГОЕМИ2АЗО, гОєМ2/4Д30, гОєМЗЛАЗО, гОєМАДЗО, (118) ГОЕМИ2АЗО, гОєМ2/4Д30, гОєМЗЛАЗО, гОєЄМАЛАЗО, (119) ГОЄМІИ2АЗО, гОєМ2/4Д30, гОЄМЗЛАЗО, гОєМА/2А430, (120) "ПЕМІ/2АЗ0, гОєМ2/4Д30, ГгОЕМЗЛАЗО, ПОєМА4/ЗАЗО, (121) ГОЕМИ2АЗО, гОєМ2/4Д30, гОєМЗ/2А305 ГОЕМАДЗО, (122) ГОЕМІ/2АЗ0, гОєМ2/4А30, гОЄМЗ/2А30, гОєЕМАЛАЗО, (123) ГОЕМІ/2АЗ0, гОєМ2/4А30, гОЄМЗ/2А30, гОЕМ4/2А430, (124) ГОЕМІ/2АЗ0, гОєМ2/4А30, гОєМЗ/2А30, гОєЕМ4/ЗАЗО, (125) ГОЕМІ/2АЗ0О, гОєМ2/4Д30, гОєМЗ3/4АЗ30, гОєЕМАДЗО, (126) ГОЕМІ/2АЗ0, гОєМ2/4А30, гОЄМЗ3/4ДЗ30, гОєМАЛАЗО, (127) ГОЕМІ/2АЗО, гОєМ2/4А30, гОЄМЗ/4АЗ0, гОЕМ4/2А430, (128) ГОЕМІ/2АЗ0, гОєМ2/4А30, гОЄМЗ/4АЗ0, гОєЕМ4/ЗАЗО, (129) ГОЄЕМІЗАЗО, гОєМ2АЗО, гОЕМЗАЗО, гОєМАДЗО, (130) ГОЄМІЗАЗО, гОєМ2АЗО, гОЕМЗАЗО, гОєМАЛАЗО, (131) ГОЄМИЗАЗО, гОєМ2АЗО, гОЕМЗАЗО, ПєЕМА4/2А30, (132) ГОЕМІЗАЗО, гОєМ2АЗО, гОЕМЗАЗО, гОєМА4/ЗАЗО, (133) ГОЕМІЗАЗО, гОєМ2АЗО, гОєЕМЗЛАЗО, гОєМАДЗО, (134) ГОЄЕМІЗАЗО, гОєМ2АЗО, гОЕМЗЛАЗО, гОєМАЛАЗО, (135) ГОЕМІЗАЗО, гОєМ2АЗО, гОєЕМЗЛАЗО, гОєМА/2А30, (136) ГОЄМІ/ЗАЗО, гОєМ2АЗО, гОєЕМЗЛАЗО, гОєМА/ЗАЗО, (137) ГОЕМІЗАЗО, гОєМ2АЗО, гОєЕМЗ3/2А30, гОєМА4ДЗО, (138) ГОЕМІЗАЗО, гОєМ2АЗО, гОєЕМЗ/2А30, гОЄМАЛАЗО, (139) ГОЄЕМІИЗАЗО, гОєМ2АЗО, гОєЕМЗ/2А30, гОєМА/2А30, (140) ГОЕМІЗАЗО, гОєМ2АЗО, гОєЕМЗ/2А30, гОєМа4/ЗАЗО, (141) ГОЄМИЗАЗО, гОєМ2АЗО, гОєЕМЗ3/4АЗ0, гОєМАДЗО, (142) ГОЕМІЗАЗО, гОєМ2АЗО, гОЕМЗ3/4АЗ30, гОЄМАЛАЗО, (143) ГОЕМІЗАЗО, гОєМ2АЗО, гОєЕМЗ/4АЗ30, гОєМ4/2А430, (144) ГОЄЕМІЗАЗО, гОєМ2АЗО, гОєЕМЗ3/4АЗ30, гОєЕМА/ЗАЗО, бо (145) ГОЄМІЗАЗО, гОЄєМ2ЛАЗО, гОєМЗАЗО, гОєМАДЗО,
(146) ГОЄМІ/ЗАЗО, гОєМ2ЛАЗО, гОєМЗАЗО, гОєМАЛАЗО, (147) ГОЕМІЗАЗО, гОєМ2ЛАЗО, гОєМЗАЗО, гОєМА/2А30, (148) ГОЕМІ/ЗАЗО, гОєМ2ЛАЗО, гОєМЗАЗО, гОєМА/ЗАЗО, (149) ГОЕМІЗАЗО, гОєМ2ЛАЗО, гОєМЗЛАЗО, гОєМА4ДЗО, (150) ГОЕМИЗАЗО, гОєМ2ЛАЗО, гОєМЗЛАЗО, гОєМАЛАЗО, (151) гОЄМИЗАЗО, гОєМ2ЛАЗО, гОєМЗЛАЗО, гОєМаА/2А30, (152) ГОЕМІЗАЗО, гОєМ2ЛАЗО, гОєМЗЛАЗО, гОєМА/ЗАЗО, (153) ГОЄЕМІЗАЗО, гОєМ2ЛАЗО, гОєМЗ/24А30, гОєМАДЗО, (154) ГОЕМІЗАЗО, гОєМ2ЛАЗО, гОєМЗ/2А30, ГОЄМАЛАЗО, (155) ГОЄЕМІИЗАЗО, гОєМ2ЛАЗО, гОєМЗ/2А30, гОєМ4/2А430, (156) гОЄМІЗАЗО, гОєМ2ЛАЗО, гОєМЗ/2А30, гОєМа4/ЗАЗО, (157) ГОЕМИЗАЗО, гОєМ2ЛАЗО, гОєМЗ/4АЗ30, гОєМАДЗО, (158) ГОЕМІЗАЗО, гОєМ2ЛАЗО, гОєМЗ/4ДЗ30, гОєМАЛАЗО, (159) ГОЄЕМІИЗАЗО, гОєЄМ2ЛАЗО, гОєМЗ3/4АЗ30, гОєМ4/2А430, (160) ГОЕМІИЗАЗО, гОєМ2ЛАЗО, гОєМЗ/4АЗ30, гОєМ4/ЗАЗО, (161) гОЄМИЗАЗО, гОєМ2/3АЗО, гОєМЗАЗО, гОєМАДЗО, (162) ГОЕМІЗАЗО, гОєМ2/3АЗО, гОєМЗАЗО, гОЄМАЛАЗО, (163) ГОЕМІЗАЗО, гОєМ2/3АЗО, гОєМЗАЗО, гОєМА4/2А30, (164) "ОЕМІ/ЗАЗО, гОєМ2/3АЗО, гОєМЗАЗО, гОєМА4/ЗАЗО, (165) ГОЄМІЗАЗО, гОєМ2/3АЗО, гОєМЗЛАЗО, гОєМАДЗО, (166) ГОЄМІЗАЗО, гОєМ2/3АЗО, гОєМЗЛАЗО, гОЄМАЛАЗО, (167) ГОЕМІИЗАЗО, гОєМ2/3АЗО, гОєМЗЛАЗО, гОєМА/2А430, (168) ГОЕМІ/ЗАЗО, гОєМ2/3АЗО, гОєМЗЛАЗО, гОєМА/ЗАЗО, (169) ГОЄМІ/ЗАЗО, гОєМ2/3АЗО, гОєМЗ3/2А30, гОєЕМАДЗО, (170) ГОЄЕМИЗАЗО, гОєМ2/3АЗО, гОєМЗ/2А30, гОєЕМАЛАЗО, (171) гОЄМИУЗАЗО, гОєМ2/3АЗО, гОєМЗ/2А30, гОЕМ4/2А430, (172) ГОЕМИЗАЗО, гОєМ2/3АЗО, гОєМЗ/2А30, гОЕМ4/ЗАЗО, (173) ГОЕМИЗАЗО, гОєМ2/3АЗО, гОєМЗ3/4АЗ30, гОєЕМАДЗО, (174) ГОЄЕМІЗАЗО, гОєМ2/3АЗО, гОєМЗ3/4АЗ30, гОєЕМАЛАЗО, (175) ГОЕМИЗАЗО, гОєМ2/3АЗО, гОєМЗ3/4АЗ0, гОЕМ4/2А30, (176) ГОЄМИЗАЗО, гОєМ2/3АЗО, гОєМЗ3/4АЗ0, гОЕМ4/ЗАЗО, (177) ГОЕМИЗАЗО, гОєМ2/4Д30, гОЄМЗАЗО, гОєМАДЗО, (178) ГОЕМІЗАЗО, гОєМ2/4Д30, гОєМЗАЗО, гОєМАЛАЗО, (179) ГОЄЕМИЗАЗО, гОєМ2/4Д30, гОєМЗАЗО, гОєМА4/2А30, (180) ГОЕМІЗАЗО, гОєМ2/4Д30, гОєМЗАЗО, гОєМа4/ЗАЗО, (181) ГОЄМИЗАЗО, гОєМ2/4А30, гОєМЗЛАЗО, гОєМАДЗО, (182) ГОЕМІЗАЗО, гОєМ2/4Д30, гОєМЗЛАЗО, гОєЄМАЛАЗО, (183) ГОЕМІЗАЗО, гОєМ2/4Д30, ГОЄМЗЛАЗО, гОєМ4/2А430, (184) ГОЕМІЗАЗО, гОєМ2/4Д30, гОЄМЗЛАЗО, гОєМаА/ЗАЗО, (185) ГОЄМІЗАЗО, гОєМ2/4Д30, гОєМЗ/2А30, гОєЕМАДЗО, (186) ГОЄМІ/ЗАЗО, гОєМ2/4А30, гОЄМЗ/2А30, гОєЕМАЛАЗО, (187) ГОЕМИЗАЗО, гОєМ2/4А30, гОєМЗ/2А30, гОЕМ4/2А430, (188) ГОЕМІЗАЗО, гОєМ2/4А30, гОєМЗ3/2А30, гОєМаА/ЗАЗО, (189) ГОЄЕМІЗАЗО, гОєМ2/4Д30, гОєМЗ3/4АЗ30, гОєЕМАДЗО, (190) ГОЄЕМІЗАЗО, гОєМ2/4А30, гОЄМЗ3/4ДЗ30, гОєМАЛАЗО, (191) ГОЄМИЗАЗО, гОєМ2/4А30, гОЄМЗ/4АЗ0, гОЕМ4/2А430, (192) ГОЕМІЗАЗО, гОєМ2/4А30, гОЄМЗ/4АЗ0, гОєЕМ4/ЗАЗО, (193) ГОЕМІ/4ДЗО, гОєМ2АЗО, гОЕМЗАЗО, г0ОєМАДЗО, (194) ГОЕМІ/4ДЗО, гОєМ2АЗО, гОЕМЗАЗО, гОєМАЛАЗО, (195) ГОЕМІ/4ДЗО, гОєМ2АЗО, гОЕМЗАЗО, ПєЕМА4/2А30, (196) ГОЕМІ/4ДЗО, гОєМ2АЗО, гОЕМЗАЗО, гОєМА4/ЗАЗО, (197) ГОЕМІ/4ДЗО, гОєМ2АЗО, гОєЕМЗЛАЗО, гОєМАДЗО, (198) "ОЕМІ/4ДЗО, гОєМ2АЗО, гОЕМЗЛАЗО, гОєМАЛАЗО, (199) ГОЕМІ/4ДЗО, гОєМ2АЗО, гОєЕМЗЛАЗО, гОєМА/2А30, (200) ГОЕМІ/4ДЗО, гОєМ2АЗО, гОєЕМЗЛАЗО, гОєМА/ЗАЗО, (201) ГОЕМІ/4дДЗО, гОєМ2АЗО, гОєЕМЗ3/2А30, гОєМА4ДЗО, (202) ГОЕМІ/4ДЗО, гОєМ2АЗО, гОєЕМЗ/2А30, гОЄМАЛАЗО, (203) "ОЕМІ/4ДЗ0, гОЕМ2АЗО, гОєЕМЗ/2А30, гОєЕМ4/2А430, (204) ГОЕМІ/4ДЗО, гОєМ2АЗО, гОєЕМЗ/2А30, гОєМа4/ЗАЗО, бо (205) ГОЕМІ/4ДЗО, гОєМ2АЗО, гОєЕМЗ3/4АЗ0, гОєМАДЗО,
(206) ГОЕМІИ4АЗ0О, гОЕМ2АЗ0, гОЕМЗ/4АЗ0О, гОєМАЛАЗО, (207) ГОЕМІИ4АЗО, гОЕМ2АЗ0, гОЕМЗ/4АЗО, гОєМа4/2А30, (208) ГОЄМІ/4АЗО, г0ОєМ2АЗО, гОЄМЗ/4АЗ30, гОєЕМа4/ЗАЗО, (209) ГОЕМІ/4АЗ0О, гОЄМ2ЛАЗО, гОєМЗАЗО, гОЕМААЗО, (210) ГОЕМІИ4АЗО, гОєМ2ЛАЗО, гОєЕМЗАЗО, гОЄМАЛАЗО, (211) ГОЕМИ4АЗО, гОЄМ2ЛАЗО, гОЕМЗАЗО, гОєЕМа4/2А30, (212) ГОЕМІИ4АЗ0О, гОЄМ2ЛАЗО, гОєМЗАЗО, гОєЕМа4/ЗАЗО, (213) "ОЕМІ/4АЗ0, гОЄМ2ЛАЗО, гОєЕМЗЛАЗО, гОєМААдЗО, (214) ГОЕМІИ4АЗО, гОЄМ2ЛАЗО, гОєМЗЛАЗО, гОєМАЛАЗО, (215) ГОЕМІИ4АЗО, гОєМ2/ЛАЗО, гОєМЗЛАЗО, гОєМа4/2А30, (216) ГОЕМІИ4АЗ0О, гОЄМ2ЛАЗО, гОєМЗЛАЗО, гОєМа4/ЗАЗО, (217) ГОЕМИ4АЗО, г0ОєМ2/ЛАЗО, гОєМЗ/2А30, гОЕМА4АЗО, (218) ГОЕМІ4АЗОБгОєЕМ2ЛАЗО, єЕМЗ/24А30, ГОЄМАЛАЗО, (219) ГОЕМІИ4АЗО, гОЄМ2ЛАЗО, гОєМЗ/2А30, гОєМа4/2А30, (220) ГОЕМІ/4ДЗО, гОєМ2ЛАЗО, гОєМЗ/2А30, гОЕМа/ЗАЗО, (221) ГОЕМІИ4АЗО, гОЄМ2ЛАЗО, гОєМЗ/4АЗ0, гОєМААЗО, (222) ГОЕМІ4АЗ0, гОЕМ2ЛАЗО, гОєМЗ/4АЗ30, гОєМАЛАЗО, (223) ГОЕМІ4АЗО, гОєМ2ЛАЗО5 гОєМЗ3/4А30, гОєМа4/2А30, (224) ГОЕМІ/4АЗ0, гОЄМ2ЛАЗО, гОєЕМЗ/4АЗ0, гОєМА/ЗАЗО, (225) ГОЕМІ/4АЗО, г0ОєМ2/3А30, гОЄМЗАЗО, г0ОєМАДЗО, (226) ГОЕМІИ4АЗ0О, гОєМ2/3АЗО, гОєМЗАЗО, гОєМАЛАЗО, (227) ГОЕМІИ4АЗО, гОєМ2/3АЗО, гОЕМЗАЗО, гЕМ4/2А30, (228) ГОЕМІ4АЗ0, гОєМ2/3АЗО, гОєМЗАЗО, гОєМА/ЗАЗО, (229) ГОЕМІИ4АЗО, гОєМ2/3АЗО, гОЄМЗЛАЗО, гОєЕМААЗО, (230) ГОЕМІ/4АДЗО, г0ОєМ2/3АЗ30, ГОЄМЗЛАЗО, гОєМАЛАЗО, (231) ГОЕМІИ4АЗО, гОєМ2/3АЗО, гОЄМЗЛАЗО, гОЕМ4/2А30, (232) ГОЕМІ4АЗ0, гОєМ2/3АЗО, гОєМЗЛАЗО, гОєМА/ЗАЗО, (233) ГОЕМІ/4АЗ0, гОєМ2/3АЗО, гОєМЗ3/2А4А30, гОЕМА ЗО, (234) ГОЕМІ/4АЗ0О, гОєМ2/3АЗО, гОєМЗ3/24А30, гОЄєМАЛАЗО,
Зо (235) ГОЕМІ4АЗО, г0ОєЕМ2/3АЗ30, гОЄМЗ/2А30, гОЕМ4/2Д430, (236) ГОЕМІ/4АЗ0О, гОєМ2/3АЗО, гОєМЗ3/2А30, гОЕМА4/ЗАЗО, (237) ГОЕМІ/4АЗО, г0ОєМ2/3АЗ30, гОЄМЗ/4АЗ30, г0ОєМАДЗО, (238) ГОЕМІ/4АЗ0, гОєМ2/3АЗО, гОєМЗ3/4А30, гОєМАЛАЗО, (239) ГОЕМІ/4АЗ0О, гОєМ2/3АЗО, гОєЕМЗ3/4А30, гОЕМА4/2А30, (240) ГОЕМІ4АЗО, г0ОєЕМ2/3АЗ30, гОЄМЗ3/4АЗ30, гОєМа4/ЗАЗО, (241) ГОЕМІИ4АЗО, гОЕМ2/4А30, гОЄМЗАЗО, гОєМААЗО, (242) ГОЕМІИ4АЗ0, гОЕМ2/4А30, гОЄМЗАЗО, гОєМАЛАЗО, (243) ГОЕМІИ4АЗ0, гОЕМ2/4А30, гОЄЕМЗАЗО, гОєМА/2А30, (244) ГОЕМІИ4АЗО, гОЕМ2/4А30, гОЄЕМЗАЗО, гОєМА/ЗАЗО, (245) ГОЕМІ4АЗО, г0ОєЕМ2/4А30, гОЄМЗЛАЗО, г0ОєЕМАДЗО, (246) ГОЕМІИ4АЗ0, гОЕМ2/4А30, гОЄМЗЛАЗО, гОєЕМАЛАЗО, (247) ГОЕМІИ4АЗО, гОЕМ2/4А30, гОЄМЗЛАЗО, гОЕМ4/2А30, (248) ГОЕМІ4АЗ0, гОЕМ2/4А30, ГОЄМЗЛАЗО, гОєЕМА4/ЗАЗО, (249) ГОЕМІ4АЗО, гОЕМ2/4А30, гОЄМЗ3/2А4А30, гОЕМА ЗО, (250) ГОЕМІ/4АдЗО, г0ОєМ2/4А30, гОЄМЗ/24А30, гОЄМАЛАЗО, (251) ГОЕМІИ4АЗО, гОЕМ2/4АЗ30, гОЄЕМЗ3/2А30, гОєЕМ4/2А30, (252) ГОЕМІ4АЗ0, гОЕМ2/4А30, гОЄЕМЗ3/2А30, гОЕМА4/ЗАЗО, (253) ГОЕМІ/4АЗ0, гОЕМ2/4А30, гОЄМЗ3/4А30, гОєМА ЗО, (254) ГОЕМІ4АЗ0, гОЕМ2/4А30, гОЄМЗ3/4А30, гОєМАЛАЗО, (255) ГОЕМІ4АЗО, г0ОєЕМ2/4А30, гОЄМЗ3/4АЗ30, гОєЕМа4/2А30, і (256) ГОЕМІ4АЗ0О, гОЕМ2/4АЗ30, гОЄМЗ3/4А30, гОєЕМА4/ЗАЗ0.
Згідно з шостим варіантом здійснення даного винаходу, вуглевод чи кожен з вуглеводів обрано із групи, яка включає, але не обмежуються ними, природні вуглеводи, синтетичні вуглеводи, поліоли, агенти, що полегшують склування, моносахариди, дисахариди, трисахариди, олігосахариди та відповідні їм цукрові спирти, полігідроксильні сполуки, такі як похідні вуглеводів та хімічно модифіковані вуглеводи, гідроксіетилкрохмаль і сополімери цукру.
Для використання придатні як природні, так і синтетичні вуглеводи. Синтетичні вуглеводи включають, але не обмежуються ними, ті, у яких глікозидний зв'язок заміщений тіоловим або бо вуглецевим зв'язком. Можна використовувати обидва види вуглеводів як О, так і Ї ряду.
Вуглевод може бути невідновлюючим або відновлюючим. Якщо використовують відновлюючий вуглевод, кращим є додавання інгібіторів реакції Майяра. Відновлюючі вуглеводи, придатні для використання в композиції, є відомими в цій галузі і включають, але не обмежуються ними, глюкозу, сахарозу, мальтозу, лактозу, фруктозу, галактозу, маннозу, мальтолозу та лактулозу.
Невідновлюючі вуглеводи включають, але не обмежуються ними, невідновлюючі глікозиди полігідроксильних сполук, вибраних із цукрових спиртів та інших прямоланцюгових поліалкоголів. Інші придатні вуглеводи включають рафінозу, стахіозу, мелезитозу, декстран, целібіозу, маннобіозу та цукрові спирти. Глікозиди цукрового спирту є переважно моноглікозидами, зокрема сполуками, які одержують відновленням дисахаридів, таких як лактоза, мальтоза, лактулоза та мальтулоза. Агент склування вибирають із групи, яка включає сахарозу, маніт, трегалозу, маннозу, рафінозу, лактитол, лактобіонову кислоту, глюкозу, мальтулозу, ізомальтулозу, мальтозу, лактозу, сорбіт, декстрозу, фукозу або будь-яку їх комбінацію.
Також відповідно до оптимального аспекту шостого варіанту здійснення винаходу, імуногенна композиція містить сахарозу як стабілізатор вуглеводів, вміст якої обирають з діапазону 1 9 - 20 95 об'ємної маси, при цьому оптимальним діапазоном є 1-10 95 об'ємної маси, ще більш оптимальним є 3-6 95 об'ємної маси, а найбільш оптимальним -- менше або рівно 5 95 об'ємної маси.
Відповідно до сьомого варіанту здійснення даного винаходу, амінокислота чи кожна з амінокислот обрана з групи, яка включає, але не обмежуються ними, лейцин, ізолейцин, гістидин, гліцин, глутамін, аргінін, лізин, аланін або комбінацію амінокислот, пептид, гідролізований білок або білок, такий як сироватковий альбумін.
Ще відповідно до оптимального аспекту сьомого варіанту здійснення, імуногенна композиція містить гліцин як стабілізатор амінокислот, вміст якого обирають з діапазону 1 95 - 20 95 об'ємної маси, при цьому оптимальним діапазоном є 1-10 95 об'ємної маси, ще більш оптимальним є 3- б 95 об'ємної маси, а найбільш оптимальним -- менше або рівно 5 95 об'ємної маси.
Відповідно до восьмого варіанту здійснення даного винаходу, імуногенна композиція може додатково містити буферний агент, обраний із групи, яка включає карбонатні, фосфатні, цитратні, лактатні, глюконатні і тартратні буферні агенти, а також складніші органічні буферні
Зо агенти, включаючи фосфатний буферний агент, що містить фосфат натрію та/або фосфат калію у співвідношенні, вибраному для досягнення бажаного рН. В іншому випадку буферний агент містить тріс (гідроксиметил) амінометан, або "тріс" виготовлений для досягнення бажаного рН. Ще в іншому випадку буферний агент може бути мінімальним необхідним середовищем із солями Хенка.
Відповідно до дев'ятого варіанту здійснення даного винаходу, імуногенна композиція може додатково містити консервант, обраний із групи, яка включає 2-феноксіетанол, бензетоній хлорид (фемерол), фенол, т-крезол, тіомерсал, формальдегід, метил та пропілпарабени, бензалконій хлорид, бензиловий спирт, хлорбутанол, р-Хлор-т-крезол або бензиловий спирт або будь-яку їх комбінацію.
Відповідно до десятого варіанту здійснення даного винаходу, імуногенна композиція може додатково містити фармацевтично прийнятні допоміжні речовини, вибрані з групи, до якої входять поверхнево-активні речовини, полімери та солі. Зразки поверхнево-активних речовин можуть містити неіонні поверхнево-активні речовини, такі як полісорбат 20, полісорбат 80 тощо.
Зразки полімерів можуть містити декстран, карбоксиметилцелюлозу, гіалуронову кислоту, циклодекстрин тощо. Зразки солей можуть містити масі, МосС12, КСІ, СасС12 тощо.
Відповідно до одинадцятого варіанту здійснення даного винаходу, імуногенна композиція може додатково містити ад'ювант, обраний із групи, що включає сіль алюмінію, гідроксид алюмінію, фосфат алюмінію, гідроксифосфат алюмінію та сульфат алюмінію-калію.
Відповідно до дванадцятого варіанту здійснення даного винаходу, імуногенна композиція може додатково містити імуностимулюючий компонент, обраний із групи, яка включає водно- олійну емульсію, МЕ-59, ліпосому, ліпополісахарид, сапонін, ліпід А, похідні ліпіду А, монофосфорил-ліпід А, З-деадцильований монофосфорил-ліпід А, АЗОТ, АБОЗ, олігонуклеотид, олігонуклеотид, що містить щонайменше один неметильований Сро та/або ліпосому, ад'ювант
Фрейнда, повний ад'ювант Фрейнда, неповний ад'ювант Фрейнда, полімери, кополімери такі як поліоксиетилен-поліоксипропіленові кополімери, включаючи блоккополімери, полімер р 1005, ад'ювант СКІ-8300, мурамілдіпептид, агоністи ТІ К-4, флагелін, флагеліни, отримані з грамнегативних бактерій, агоністи ТІ К-5, фрагменти джгутиків, здатних зв'язуватися з рецепторами ТІ К-5, 05-21, ІЗЄСОМЗ5, комбінація сапоніну зі стеролами та ліпідами.
Відповідно до тринадцятого варіанту здійснення даного винаходу, зазначена імуногенна бо композиція є ліофілізована (осушена холодом).
Відповідно до чотирнадцятого варіанту здійснення даного винаходу, ліофілізована імуногенна композиція є стабільною від 12 до 36 місяців при 2-8 С; при 25"С - від 2 до 6 місяців; при 37 "С - від 1 тижня до 4 тижнів, при 42 "С - протягом 2-7 днів, при 55 "С - протягом 2-7 днів.
Відповідно до п'ятнадцятого варіанту здійснення даного винаходу, спосіб відновлення ліофілізованої імуногенної композиції включає етап її відновлення водним розчином, як варіант - фізіологічним розчином або водою для ін'єкцій (МР).
Відповідно до шістнадцятого варіанту здійснення даного винаходу, кінцевий рН імуногенної композиції після відновлення знаходиться в діапазоні від рН 6,0 до рН 8,0; оптимально в межах від рН 7,0 до рН 8,0; оптимальніше в межах від рН 7,2 до рН 7,9; і найоптимальніше в діапазоні від рН 7,5 до рН 7,9.
Відповідно до сімнадцятого варіанту здійснення даного винаходу, процес приготування живої атенуйованої химерної / рекомбінантної чотиривалентної вакцини проти вірусу денге (ОЕМ) включає будь-яку сукупність етапів або всі наступні етапи: а) Клітини Мего були відновлені та пристосовані для вирощування в мінімальному ессенціальному середовищі (МЕМ) за допомогою сольового розчину Хенка та 10 95 фетальної бичачої сироватки; р) Клітини Мего спочатку ампліфікували в колбах для тканинної культури (ТСЕ з 175 см2 площі поверхні, доступної для росту клітин), створюючи головний та робочий банки клітин Мего; с) Кріоконсервовані клітини з робочого банку клітин були відновлені, ампліфіковані і далі пересіяні у ролерні пляшки (площа 850 см2, доступна для росту клітин) та інкубовані при 37-11 7С для отримання моношарів; а) Моношари клітин Мего в ролерних пляшках були інфіковані робочим посівним вірусом денге серотипів 1, 2, З та 4; е) Всі ролерні пляшки інкубували при 3421 "С протягом 20 хв; і наповнили до 120 мл на пляшку, використовуючи мінімальне ессенціальне середовище (МЕМ) з сольовим розчином
Хенка та 2 95 фетальною бичачою сироваткою. Далі всі ролерні пляшки інкубували при 34:21 "С протягом 2 днів та зі швидкістю прокатки 0,7 об/хв;
У На другий день моношари в ролерних пляшках промивали свіжим культуральним
Зо середовищем, позбавленим фетальної бичачої сироватки, і пляшки інкубували при 3451 "С протягом трьох днів при швидкості прокатки 0,7 об/хв; 9) На п'ятий день після інфікування був зібраний супернатант клітин із усіх заражених ролерних пляшок, а в пляшки було повторно подане свіже культуральне середовище, позбавлене фетальної бичачої сироватки;
РИ) Було взято кілька зборів, які були оброблені окремо для отримання очищених одновалентних вірусних пулів (СММР); ї) Вірусний збір фільтрували шляхом прямої фільтрації (ОБЕРЕ) через щонайменше один очисний фільтр;
Ї) Вірусний збір піддали обробці неспецифічною ендонуклеазою для деградації клітинної
ДНК;
К) Оброблений вірусний збір був підданий тангенціальній фільтрації;
І) Вірусний збір стабілізували стабілізуючим агентом, який включає щонайменше одну амінокислоту і щонайменше один вуглевод, утворила стабілізований вірусний збір; т) Стабілізований вірусний збір стерилізували прямою фільтрацією за допомогою щонайменше одного стерилізуючого фільтра; п) Очищені моновалентні вірусні пули (СММУР) кожного з серотипів вірусу денге зберігали у пляшках з полікарбонату при -60 "С або нижче; о) Очищені моновалентні вірусні пули (СММР) всіх чотирьох вірусних серотипів змішували разом для отримання кінцевої нефасованої вакцини, яку вносили у флакони та ліофілізували для отримання лікарського препарату, тобто рекомбінантної тетравалентної вакцини проти вірусу денге (жива атенуйована).
Відповідно до першого аспекту сімнадцятого варіанту здійснення даного винаходу, використовувана лінія клітин Мего була АТСС СС -81 (сСОМРМего, клітини нирок, отримані від африканської зеленої мавпи (Сегсоріпесив аєоїпіоре; доступна в АТСС, Мапаззавз, Ма., ОА).
Відповідно до другого аспекту сімнадцятого варіанту здійснення даного винаходу, багаторазові збори проводилось у відповідний часовий проміжок приблизно 4-5 разів -- оптимально 4 рази на 5-й день, 7-й день, 9-й день і 11-й день до виключення вхідного матеріалу та оброблялись окремо для отримання очищених моновалентних вірусних пулів (СММР). У випадку багаторазових зборів однакова кількість введеного матеріалу сприяє більшому збору бо порівняно зі звичайним методом одноразового збору. Це також економить час та загальну виробничу собівартість подальшої обробки, тобто ампліфікації клітин для інфікування.
Відповідно до третього аспекту сімнадцятого варіанту здійснення даного винаходу, вірусне середовище складається з мінімального ессенціального середовища (МЕМ) з сольовим розчином Хенка, що додатково містить декстрозу, І -глютамін та бікарбонат натрію.
Відповідно до четвертого аспекту сімнадцятого варіанту здійснення даного винаходу, середовище, що містить вірус, очищується, як правило, через фільтри зі зменшенням розмірів пор (наприклад, 6 мкм, 0,8 мкм, 0,45 мкм, 0,2 мкм). Відповідні комерційно доступні фільтри та фільтруючі пристрої добре відомі в даній галузі техніки і можуть бути обрані фахівцями.
Типовими пристроями фільтрації є, наприклад, фільтри Мійїрак (МійПіроге), КіІеепрак (Раї)) та
Запобгап "м р.
Відповідно до п'ятого аспекту сімнадцятого варіанту здійснення даного винаходу, відфільтрований збір обробляли неспецифічною ендонуклеазою, переважно бензоназою з концентрацією, що змінюється між 1-10 од/мл, при температурі між 4-37 "С і з інтервалами в межах від 2 до 12 годин.
Відповідно до шостого аспекту сімнадцятого варіанту здійснення даного винаходу, оброблений бензоназою збір додатково піддавали тангенціальній фільтрації (ТЕР), як правило, через фільтри з відсіченням молекулярної маси (МУУСО) 500 кД, оптимальніше 300 кД та найоптимальніше 100 кД.
Відповідно до сьомого аспекту сімнадцятого варіанту здійснення даного винаходу, вірусний збір піддавали тангенціальній фільтрації (ТЕР), в результаті чого концентрація вірусного збору збільшилась щонайменше в 10 разів та додатково призвела до видалення залишкових домішок.
Ще оптимальніше залишкові домішки містять залишкову ДНК, залишковий альбумін сироватки бика (В5А) та залишковий білок клітини-господаря.
Відповідно до восьмого аспекту сімнадцятого варіанту здійснення даного винаходу, в результаті описаного вище процесу отримують очищений та концентрований препарат флавівірусу, оптимальніше -- препарат вірусу денге, при цьому препарати містять концентровані живі атенуйовані частинки вірусу денге, сліди залишкової клітинної ДНК («10 нг/доза), залишковий ВА («50 нг/доза) і залишкових клітинних білків. Крім того, згідно з описаним вище процесом, загальне відновлення очищених вірусів становить щонайменше
Зо 50 об.
Відповідно до дев'ятого аспекту сімнадцятого варіанту здійснення даного винаходу, стабілізатори, що містять розчин однієї або декількох амінокислот і одного або декількох вуглеводів, змішували з концентрованим запасом вірусу (концентрат ТЕР) у співвідношенні 60:40 або 50:50, або 40:60 вірусного складу до стабілізатора для отримання кінцевої композиції.
Ще оптимальніше стабілізатори, що містять розчин сахарози в концентрації 7,5-15 95 (об'ємної маси) і гліцину в концентрації 7,5-15 95 (об'ємної маси), змішували з концентрованим запасом вірусу (концентрат ТЕР) у пропорції 60:40 або 50:50, або 40:60 запасу вірусу до стабілізатора для отримання кінцевої композиції, що включає сахарозу в концентрації від З до 6 95 (об'ємної маси) та гліцину в концентрації від З до 6 95 (об'ємної маси).
Ще оптимальніше стабілізатори, що містять розчин сахарози в концентрації 12,5 95 (об'ємної маси) і гліцин в концентрації 12,5 956 (об'ємної маси), змішували з концентрованим запасом вірусу (концентрат ТЕР) у пропорції 60:40 до стабілізатора, щоб отримати кінцеву композицію, що включає сахарозу в концентрації 5 95 (об'ємної маси) і гліцин в концентрації 5 95 (об'ємної маси).
Ще оптимальніше стабілізатори, що містять розчин сахарози в концентрації 11,25 95 (об'ємної маси) і гліцин в концентрації 12,5 95 (об'ємної маси), змішували з концентрованим запасом вірусу (концентрат ТЕР) у пропорції 60:40 вірусного складу до стабілізатора, щоб отримати кінцеву композицію, що включає сахарозу в концентрації 4,5 95 (об'ємної маси) і гліцин в концентрації 5 95 (об'ємної маси).
Ще оптимальніше стабілізатори, що містять розчин сахарози в концентрації 15 95 (об'ємної маси) і гліцин в концентрації 15 95 (об'ємної маси), змішували з концентрованим запасом вірусу (концентрат ТЕР) у пропорції 60:40 вірусного складу до стабілізатора, щоб отримати кінцеву композицію, що включає сахарозу в концентрації 6 95 (об'ємної маси) і гліцин в концентрації 6 95 (об'ємної маси).
Відповідно до десятого аспекту сімнадцятого варіанту здійснення даного винаходу, множинність зараження (МОЇ) флавівірусу, оптимальніше, вірусу денге, для отримання головного посіву та робочого посіву знаходиться в інтервалі від 0,01 до 0,1 для кожного серотипу денге.
Ще оптимальніше множинність зараження (МОЇ) вірусу денге для отримання головного 60 посіву та робочого посіву є 0.01.
Відповідно до одинадцятого аспекту сімнадцятого варіанту здійснення даного винаходу, імуногенна композиція включає флавівірус, оптимальніше, вірус денге в дозі не менше до 2,5
БУО на 0,5 мл кожного серотипу вірусу денге 1, 2, З і 4.
Відповідно до дванадцятого аспекту сімнадцятого варіанту здійснення даного винаходу, імуногенна композиція включає вірус денге в дозі від дію З до іОдіо 5 БУО на 0,5 мл, оптимальніше Іоа:то З до І0дто 4 БУО на 0,5 мл, найоптимальніше Іодіо З БУО на 0,5 мл кожного вірусу денге серотипу 1,2, 314.
Відповідно до вісімнадцятого варіанту здійснення даного винаходу, спосіб ліофілізації (осушення холодом) імуногенної композиції включає етапи заморожування, первинне осушення та вторинне осушення.
Ще оптимальніше спосіб ліофілізації (осушення холодом) композиції живої атенуйованої химерної/ рекомбінантної тетравалентної вакцини проти вірусу денге (ОЕМ) містить будь-який різновид або всі наступні етапи: а) Завантаження продукту при температурі від 20 до 5 С; р) Поетапне заморожування з тимчасовим утримуванням при кожній температурі, де етап заморожування включає заморожування при температурі від -30 С до -45 "С зі швидкістю заморожування від 0,5 до 1 "С за хвилину від приблизно 60 хвилин до 930 хвилин; с) Відпал при -20 "С протягом 5 годин з подальшим заморожуванням при -45" С; а) Первинне осушення включає ступінчасте нарощування температури приблизно від 0,5 "С за хвилину до 1,0 "С за хвилину для досягнення температури полиці приблизно від -25 "С до - 32 "С, утримуючи протягом близько 600 хвилин до 1980 хвилин під тиском близько 55 мкбар; е) Вторинне осушення передбачає нагрівання продукту зі швидкістю 0,5-1,0 "С за хвилину, щоб досягти температури полиці приблизно від 25 "С до 30 "С, утримуючи протягом близько 360 хвилин до 600 хвилин під тиском 55 мкбар.
Загальна тривалість циклу ліофілізації приблизно становить від 48 до 56 годин.
Передбачається зміна температури та тривалості циклу відповідно до специфікацій флакона та конструкції ліофілізатора. Продукт ліофілізується на основі заздалегідь визначеного циклу для досягнення цільового вмісту вологи приблизно від 2,0 95 об'ємної маси до 3,5 95 об'ємної маси.
Використовуваний тут термін "осушення холодом" або "ліофілізація" включає ліофілізацію і
Зо відноситься до процесу, при якому суспензія заморожується, після чого вода видаляється шляхом сублімації при низькому тиску. "Сублімація" відноситься до зміни фізичних властивостей композиції, де композиція змінюється безпосередньо з твердого стану в газоподібний стан, не перетворюючись на рідину.
Відповідно до дев'ятнадцятого варіанту здійснення даного винаходу, імуногенна композиція розроблена для застосування з метою зменшення настання або запобігання стану здоров'я шляхом введення ефективної кількості імуногенної композиції людині-суб'єкту внутрішньом'язово або внутрішньовенно, підшкірно або черезшкірно, або внутрішньошкірно.
Відповідно до двадцятого варіанту здійснення цього винаходу, стан здоров'я вибирають із групи, яка включає лихоманку денге, лихоманку Зіка, лихоманку Західного Нілу, японський енцефаліт, вірус Кунджин, кліщовий енцефаліт, енцефаліт Сент-Луїс, енцефаліт долини
Муррея, жовту лихоманку.
Відповідно до двадцять першого варіанту здійснення даного винаходу, імуногенну композицію можна вводити підшкірно, внутрішньошкірно або внутрішньом'язово в дозі, ефективній для продукування нейтралізуючих антитіл і захисту. Вакцини вводять у спосіб, сумісний з лікарською формою, і в такій кількості, яке буде профілактично та/або терапевтично ефективною. Імуногенна композиція даного винаходу може вводитися як первинний профілактичний засіб дорослим або дітям з ризиком інфікування або може використовуватися в якості вторинного засобу для лікування інфікованих пацієнтів. Наприклад, композиція тетравалентної вакцини з живим атенуйованим вірусом денге (ОЕМ), описана в даному документі, може використовуватися у дорослих або дітей з ризиком інфікування вірусом денге або в якості вторинного засобу для лікування пацієнтів, інфікованих вірусом ОЕМ.
Відповідно до двадцять другого варіанту здійснення даного винаходу, імуногенна композиція може бути сформована в лікарській формі у вигляді флаконів з одноразовою дозою, багатодозових флаконів або у вигляді попередньо заповнених шприців, в яких зазначена імуногенна композиція може бути введена у вигляді одноразової дози або, краще, схеми багаторазових доз, при якій первинний курс вакцинації може проводитися з 1-2 окремими дозами, за якими слідують інші дози, призначувані через наступні інтервали часу, необхідні для підтримки і/чи посилення імунної відповіді, наприклад, через 1-4 місяці для другої дози, і якщо необхідна подальша дозац(и) через кілька місяців або років. Режим дозування також, принаймні 60 частково, буде визначатися в залежності від необхідності в бустерній дозі, потрібній для надання захисного імунітету.
Інші варіанти здійснення, розкриті тут, також охоплюють вакцинний набір, який включає перший контейнер, що містить ліофілізовану імуногенну композицію, і другий контейнер, що містить водний розчин, наприклад, але не обмежуючись цим, фізіологічний розчин або воду для ін'єкцій для відновлення ліофілізованої імуногенної композиції.
В даному описі під терміном "складають" або його варіантом "містить" розуміється, що вони включають вказаний елемент, кількісне значення або етап, або групу елементів, кількісних значень чи етапів, але не виключаючи будь-якого іншого елемента, кількісного значення чи етапу, або групи елементів, кількісних значень або етапів і може означати "включає", "включаючи" тощо; "По суті складається з" або "складається по суті", так само має значення, визначене патентним законодавством США, і термін є відкритим, що дозволяє мати більше, ніж те, що декларується до тих пір, поки основні або нові характеристики того, що декларується, не змінюються наявністю більшого, ніж зазначене, але виключає варіанти здійснення попереднього рівня техніки.
В даному описі слово "імуногенна композиція" охоплює будь-яку композицію, яка викликає імунну відповідь проти антигена або імуногена, що представляє інтерес, експресованого векторами; наприклад, після введення суб'єкту викликається імунна відповідь проти цільового імуногена або антигена, що представляє інтерес. Терміни "вакцинна композиція" та "вакцина" охоплюють будь-яку композицію, яка викликає захисну імунну відповідь проти антигена, що становить інтерес, або яка ефективно захищає від антигена; наприклад, після введення або ін'єкції суб'єкту викликає захисну імунну відповідь проти цільового антигена або імуногена або забезпечує ефективний захист від антигена або імуногена, експресованого векторами.
Використання виразу "цонайменше" або "цонайменше один" передбачає використання одного або декількох елементів, або інгредієнтів, або кількостей, оскільки у різних варіантах здійснення винаходу може використовуватися одне або кілька об'єктів або результатів. Хоча були описані певні варіанти здійснення винаходу, ці варіанти здійснення були наведені лише в якості прикладів і не обмежують заявлений об'єм прав на винахід. Зміни або модифікації складу за даним винаходом в межах винаходу можуть виникнути у фахівців в даній області техніки при розгляді винаходу в даному документі. Такі варіації або модифікації знаходяться в межах об'єму даного винаходу.
Числові значення, наведені для різних фізичних параметрів, розмірів і кількості, є тільки приблизними значеннями, і передбачається, що значення, що перевищують числове значення, присвоєне фізичним параметрам, розмірам і кількостей, підпадають під обсяг винаходу, якщо не вказано інше в описі навпаки.
Аналогічно, компоненти, які використовуються при очищенні, наприклад, фільтри, колони, не повинні бути жодним чином обмежуючими або ексклюзивними, і можуть бути замінені іншими компонентами для досягнення тієї ж мети на розсуд фахівця.
Незважаючи на те, що тут було зроблено значний акцент на конкретних особливостях оптимального варіанту здійснення, слід розуміти, що багато додаткових функцій можна додати та що багато варіантів можна внести в оптимальний варіант здійснення, не відхиляючись від принципів винаходу. Ці та інші зміни в оптимальному варіанті здійснення винаходу стануть очевидними для фахівців у цій галузі з наданого опису, завдяки чому слід чітко розуміти, що вищевказаний описовий матеріал слід інтерпретувати лише як ілюстрацію винаходу, а не як обмеження.
Переваги
Винахід, описаний вище, має ряд технічних досягнень та переваг, включаючи, але не обмежуючись ними, реалізацію стабільної ліофілізованої імуногенної композиції, що включає живі атенуйовані рекомбінантні віруси денге, щонайменше один вуглевод, щонайменше одну амінокислоту, та спосіб їх отримання. У порівнянні з іншими ліофілізованими імуногенними композиціями, цей винахід надає наступні переваги: 1. Мінімальна кількість компонентів, що входять до складу вакцини. 2. Відновлена вакцина зберігає бажані характеристики вірусу, включаючи життєздатність вірусу, імуногенність та стабільність. 3. Підвищена стабільність при 2-8 "С, 25 "С, 37 "С, 42 7С і 55 "С протягом тривалого часу. 4. Без консервантів, полімерів та поверхнево активних речовин (ПАР). 5. Удосконалений спосіб виготовлення такої стабільної композиції / рецептури, що забезпечує кращий результат.
Приклади:
Щоб продемонструвати кращі варіанту здійснення винаходу, подані наступні приклади. бо Фахівці у даній галузі повинні розуміти, що композиції та методи, розкриті в поданих нижче прикладах, є методами, визначеними винахідником для кращого функціонування на практиці, описаній у цьому документі, і, таким чином, вони можуть вважатися такими, що рекомендовані до застосування в цій практиці. Однак, фахівці в цій галузі повинні, зважаючи на цей винахід, враховувати, що в конкретних варіантах здійснення, які розробляються і все ще отримують подібний або аналогічний результат, не можна відступати від суті та обсягу винаходу.
Приклад 1
Багаторазовий та одноразовий збір
Були проведені певні експерименти з метою визначення методу виробництва імуногенної композиції, придатної для доклінічного та клінічного тестування, а також використання імуногенних флавівірусних композицій або вакцин. У деяких показових методах живі атенуйовані рекомбінантні / химерні віруси денге були використані як показові флавівіруси в різних композиціях для доклінічного та клінічного тестування. Варіанти вакцинного штаму денге були розроблені Національним інститутом охорони здоров'я (МІН), США.
Процес виготовлення живої атенуйованої химерної / рекомбінантної тетравалентной вакцини проти денге (ОЕМ) містить будь-яку сукупність етапів чи всі наступні етапи: 1. Клітини Мего відновили та пристосовали для вирощування в мінімальному ессенціальному середовищі (МЕМ) за допомогою сольового розчину Хенка та 10 95 фетальної бичачої сироватки (ЕВ5); 2. Клітини Мего спочатку ампліфікували у колбах для тканинної культури (ТСЕ з 175 см2 площі поверхні, доступної для росту клітин), створюючи головний та робочий банки клітин Мего; 3. Кріоконсервовані клітини з робочого банку клітин відновили, ампліфіковали, а потім пересіяли у ролерні пляшки (площа 850 см2, доступна для росту клітин) та інкубували при швидкості прокатки 0,7 об/хв та при температурі 37-41 "С для отримання моношарів. 4. Моношари клітин Мего в ролерних пляшках інфікували робочим посівним вірусом денге серотипів 1, 2, З та 4 при 0,01 МОЇ. 5. Всі ролерні пляшки інкубували при температурі 3421 "С протягом 20 хв; і наповнили до 120 мл на пляшку, використовуючи мінімальне ессенціальне середовище (МЕМ) з сольовим розчином Хенка та 295 фетальною бичачою сироваткою. Після того всі ролерні пляшки інкубували при температурі 34:21 "С протягом двох днів зі швидкостю прокатки 0,7 об/хв.
Зо 6. На другий день моношари в ролерних пляшках промили свіжим культуральним середовищем, позбавленим фетальної бичачої сироватки з метою видалення слідів ЕВ5, та інкубували при температурі 34:21 "С протягом трьох днів зі швидкостю прокатки 0,7 об/хв; 7. На п'ятий день після інфікування зібрали супернатант клітин з усіх інфікованих ролерних пляшок, а пляшки повторно заповнили свіжим культуральним середовищем з використанням
МЕМ з сольовим розчином Хенка з додаванням декстрози, І-глютаміну та бікарбонат натрію, але без додавання фетальної бичачої сироватки (див. таблицю 3).
Таблиця З
Композиція мінімального ессенціального середовища з сольовим розчином Хенка
Сульфат магнію(безводний)ї 11111111 Ї111198,0
Дигідрофосфат калію (безводний) 00060
Динатрію гідрофосфат (безводний)
Різні підходи застосовували при зборі вірусу денге, а саме одноразовий збір та багаторазовий збір вірусу в різні часові проміжки (з 4 по 12 день після інфікування, див. таблицю 4); щоденний збір, збів в парні дні, збір у непарні дні, тощо. Здійснено порівняння вірусних титрів щодо результативності при одноразовому та багаторазовому зборі.
Таблиця 4
Часові проміжки вірусного збору
Мо ролерної . . 6 1 3 |Одноразовийзбірна?7йдень./:/ ("777772
Починаючи з 4-го дня інфіковані ролерні пляшки зібрали у встановленому порядку (від 1 до 4) у відповідні дні. Після збору вірусу ролерні пляшки повторно наповнили свіжим вірусним середовищем (ММ) та інкубували при температурі 34 "С до наступного збору. До того ж, одноразовий збір супернатанту зібрали на 6-й (збір 5) та на 7-й день (збір 6) відповідно.
Ці зразки були протестовані на вірусні титри (ССІЮво) методом Спірмена-Карбера (див.
таблицю 5).
Таблиця 5
Вірусні титри ОЕМ 1 (ССІО5о)
День4/// | ///777/ |11755 | 55 | (| 6
День | 6125 | (| 63755. Й|.ЮюЮюЮЙЛ7ЩЬЬ 111163
Деньб,/// | (| 6б25 | 06375 | 6975 ДЩД | 7
День? | 7375 | (БФ | 7 | 71 | 75
Деньв8////| 777770 |717725 | 66251771 7625
День9 | 725 | | 65 2 ( (| 7
Деньт0////| (0 | 7711765 | 6125 |177777777777777771116875
Деньїї | 625 | (/(ЙБДГ(Ї 65. ЙДЙї....ЄЄєЄєЄєЄСЄєї
ІДеньл2/// | 7 Ї7777111111171ЇС1111111г1111111111116
Крива росту, отримана за допомогою вірусу денге серотипу 1 (ОЕМ 1), показала, що багаторазовий збір на 5, 7, 9 та 11-й день дав хороші вірусні титри, а отже це міг би бути хороший вибір для подальших проб (показані на фіг. 4).
Ще одне тестування для порівняння багаторазового і одноразового зборів було проведено з використанням 18 ролерних пляшок для ОЕМ 2, З і 4 (див. таблицю 6).
Таблиця 6
Вірусні титри ОЕМ 2, 3, 4 (ССІЮво) 001 внзбору С вет ууи Кд-
Багаторазовий збір
На фіг. 5 показано логаритм виходу вірусних титрів ОЕМ 2, 3, 4 з використанням 90 ролерних пляшок (багаторазовий і одноразовий збір)
Сумарний вихід при багаторазових зборах з однієї проби був набагато вищим (приблизно від 0,4 Ісд до 0,6 Ісд), ніж при одноразовому зборі. Оскільки показник 0,3 Ід еквівалентний подвійному абсолютному значенню, ця різниця є більш суттєвою. Таким чином, багаторазовий збір є більш вигідним та бажаним у порівнянні з одноразовим збором.
Приклад 2:
Вірус денге вирощують на клітинах Мего. Таким чином, потрібно вилучити домішки зі збору.
Домішки, такі як ДНК клітини-господаря, обробляють бензоназою.
Вплив концентрації бензонази та температури на склад клітинної ДНК та вірусний титр
Багаторазові збори взяли та окремо опрацювали для отримання очищених моновалентних вірусних пулів (СММР). 1. Ці багаторазові збори очищували через фільтр 6 н «ж 0,45 | і обробляли бензоназою для деградації клітинної ДНК. 2. Провели чимало експериментів, щоб визначити ідеальну концентрацію бензонази та ідеальну температуру для обробки збору.
Під час цього експерименту бензоназу додавали в чотирьох різних концентраціях: 500 од/л, 1250 од/л, 2500 од/л та 5000 од/л при температурі 34 1 "С протягом двох 2 год. Було помічено, що при концентрації бензонази 1250, 2500 та 5000 од/л відбувалась оптимальна деградація
Зо ДНК. На основі результатів було обрано концентрацію 1250 од/л в якості робочої концентрації (див. таблицю 7).
Таблиця 7
Вплив концентрації бензонази на склад ДНК (нг/мл) 11111111 (Контроль // | 5ббод/л | 1250од/л. | 2500од/л. | 500бод/л9
День5/// | 127. | 5 | 5 | 6 | 4
День? | 30 | 93 | 7 | 9 | з
На фіг. 6 показано вплив концентрації бензонази на склад ДНК.
На фіг. 7 показано вплив температури на склад клітинної ДНК та вірусний титр.
Вірус денге чутливий до тривалого впливу температури, тому в експерименті був використаний короткий період впливу, тобто дві години при різній температурі. Було помічено, що при температурі 37 "С відбувається втрата титру при низькому складі ДНК. При температурі 34 "С втрати вірусного титру не було, хоча склад ДНК був низький. Крім того, при температурі 25 "С та від 2 до 8 "С втрати вірусного титру не було, а деградація ДНК також була меншою.
Таким чином, температуру 34 "С було визначено як оптимальну температуру.
Приклад 3: Фільтрація та концентрація 1. Вірус денге вирощувади на клітинах Мего. Таким чином, потрібно вилучити домішки зі збору. 2. Домішками є ДНК клітини-господаря, білок клітини-господаря, залишковий альбумін сироватки бика (ВЗА) та залишкова бензоназа. 3. Для видалення цих домішок використовували процес тангенціальної фільтрації (ТЕР). 4. Збір, оброблений бензоназою, був підданий ТЕЕ для видалення домішок.
У перших експериментах тангенціальну фільтрацію потоку проводили за допомогою ситової касети Мійїроге М 300 КО та Раї! серії Т 300 КО. Було помічено, що у фільтраті відбувається втрата вірусу 2 3,5 0д. Таким чином вирішили замінити на касету 100 КО. Під час цих експериментів було помічено, що в касеті Мійроге не було вірусу у фільтраті.
В результаті проведення різних тестувань тангенціальної фільтрації потоку, тільки ситові касети Мегок Мійроге 100 КО з 10-кратною концентрацією допомогли отримати бажаний продукт. Вірус концентрують з метою зменшення простору, необхідного для його зберігання у формі нефасованої вакцини, та видалення домішок. З таблиць 8-10 є зрозумілим, що після обробки бензоназою та проведення тангенціальної фільтрації не відбулось суттєвих втрат у вірусному титрі та значного видалення ДНК клітини-господаря.
Таблиця 8
Концентрація ДНК клітини-господаря в нг/мл 11111111 Деньзбору./:47/7/7/:/:/ ЗУ/еЖД З
Проміжнийетапвиробництваїд -/-:/ | 5 | 7 /| 9
Очищений вірусний пул (вторинна фільтрація збору)
ВСМР:
СМР: Очищений вірусний пул (вторинна фільтрація збору)
ВСМР: Очищений вірусний пул, оброблений бензоназою
СММУР: Очищений моновалентний вірусний пул (після ТЕР, додавання стабілізатора та вторинної фільтрації (0.2нм)
Таблиця 9
ДНК клітини-господаря в кінцевому продукті
ДНК (нг/доза)
Проба 1 0.345
Проба 2 0.043
Проба З 0.580
Таблиця 10
Середній ступінь одужання від вірусу в результаті трьох проб (95) одужання
ОЕМ 1
ОЕМ 2 77891 юю. .ЮюЮЙБЙЮЮвБ8 | рю 947 2 ющ | 968 2щ
РЕМ З
ОЕМ 4 101.4
Приклад 4:
Вивчення різних стабілізаторів та оптимізація стабілізуючих рецептур
Стабільність живих атенуйованих імуногенних флавівірусних композицій перевіряли як функцію втрати активності, використовуючи різні стабілізуючі рецептури (наприклад, втрату титру або І 0910БУО / доза).
Моновалентні вакцини проти вірусу денге були створені за допомогою різних стабілізуючих комбінацій, як показано в таблицях 11 і 12. Основними компонентами цих стабілізаторів були желатин, сорбіт, сахароза, гліцин, фосфати (КН»РОз, К»НРО»), глутамат, гідралізат лакталбуміну (ГАН) та амінокислоти, такі як І -гістидин, І -аргінін гідрохлорид, І-аланін, трицин, тощо.
Таблиця 11
Різні стабілізуючі комбінації
Ме | 77771711 Складстабілваторад//:///ССС:К4ЛСССССССС:/СС(еСЇ
Желатин 2 95 - Сахароза 20 95 я Амінокислоти (2Х)
В 00 |Желатин 2 95 - Сахароза 10 95 - Амінокислоти (2Х)
Желатин 2 95 4 Алюмогідрид літію 0.70 95 - Сахароза 20 95 - Амінокислоти (2Х)
Сахароза-Фосфат-Глютамат (2Х) ї- Алюмогідрид літію 4 95 ж Гліцин 10 Фо --
Амінокислоти (2Х)
Желатин 12.5 95 - Сорбіт 25 965 я Стабілізатор-І! - Пропорція 80:20:10
Желатин 12.5 95 - Сорбіт 25 965 я Стабілізатор-І! - Пропорція 1:1
Сахароза 12.5 95 об'ємної маси « Гліцин 12.5 95 об'ємної маси (60:40)
Стабілізатор-І! містить І -гістидин (2,1 Ос), І -аланін 1 95, трицин (З 95), І -аргінін гідрохлорид (16 95), гідролізат лакталбуміну (3,5 Об).
Отриманий об'єм вірусної концентрації методом тангенціальної фільтрації стабілізували, використовуючи різні стабілізуючі комбінації, як описано нижче:
Таблиця 12
Остаточні стабілізуючі рецептури
Ме ЇЇ 77777717 Рецепурда./7///////////7777СССсС в | 5ОмлконцентратуТРРе5О мл Стабілізаторав(2Х)100мл.:/:/(/!я-:::/:ЗИ 01101 | 71111111 5бмлюконцентратуТтРРе5О мл Стабілізаторар(2Х)е100мл./:х/Х/У/)/:И
Всі ці рецептури досліджували на термостабільність при температурі 37 "С протягом 7 днів.
Зразки тестували на титри інфекційності за допомогою ССІЮзо з певною періодичністю на 0, 1, 3, 5 та 7-й день.
Результати титрів інфекційності різних рідких рецептур показали значне зниження з подальшою повною втратою (через 1-5 днів) у відповідних вірусних титрах денге.
Ця неспроможність рідкої рецептури втримати стабільність спонукала до створення ліофілізованих препаратів. Моновалентні вакцини проти денге, що містять желатин ж сорбіт їх стабілізатор І! (стабілізатор Е) ліофілізували та перевіряли на термостабільність при температурі 37 "С протягом 7 днів. Зразки тестували на титри інфекційності за допомогою
ССіЮбо з певною періодичністю на 0, 1, 3, 5 та 7-й день. Результати титрів інфекційності показали кращу стабільність порівняно з рідкими рецептурами та значно зберегли вірусні титри.
Таким чином, метод ліофілізації моновалентної вакцини проти вірусу денге успішно вирішив проблему слабкої стабільності та виявив значне зниження втрат у вірусних титрах.
Крім того, випробували інший стабілізатор С, що включає сахарозу «т гліцин, і з'ясували, що він чудово підходить в якості ліофілізованої рецептури для всіх чотирьох вірусів денге. Зразки тестували на титри інфекційності за допомогою ССІЮзхо з певною періодичністю на 0, 1, 3, 5 та 7- й день. Результати титрів інфекційності показали кращу стабільність порівняно з іншими стабілізаторами, такими як желатин ж сорбіт ж стабілізатор ІІ (див. таблиці 13-16). Крім того, його легко готувати та використовувати, оскільки він є нетваринного походження.
Таблиця 13
Титр ОЕМ 1 з використанням СсСіОзо/мл (рідкі та ліофілізовані форми) зераня | А | В с) о | є є | вот | ого зберігання 770 | 721 | 7.35 | 707 | 7.07 | 7821 | 721 | 578 | 562 7795 | 292 | 2.78 | 0 | 2.64 | 264 | 264 | 535 | 546 75 | 0 10 10 1 0 1 0 | 0 | 478 | 531 717-717 А А - 1717717 -А 1711777 - 11464 | 5лв
На фіг. 8 показаний титр ОЕМ 1 з використанням ССіОбво/мл (рідкі та ліофілізовані форми).
Таблиця 14
Титр ОЕМ 2 з використанням СсСіОзо/мл (рідкі та ліофілізовані форми) о Часзбергання| А | В | С | 0 | ХО Гог 770 | 5625 1171010 1 0 1 0 | 421 | 452 9817-1111 -171111407 | 4 2517-1111 -1111119375 | 426 7117-1171 -1711111535 | 45
На фіг. 9 показаний титр ОЕМ 2 з використанням ССіОбво/мл (рідкі та ліофілізовані форми).
Таблиця 15
Титр ОЕМ З з використанням СсСіОзо/мл (рідкі та ліофілізовані форми) 7.70 | 692 | 707 | 635 | 692 | 678 | 683 |676 7271. 421 | 492 | 36 | 407 | 0 | 669 |665 773 0 11 0 11 0 11 0 (|м' | 658 2 |65
МТ- Непротестований
На фіг. 10 показаний титр ОЕМ З з використанням ССіІЮОбво/мл (рідкі та ліофілізовані форми).
Таблиця 16
Титр ОЕМ 4 з використанням СсСіОзо/мл (рідкі та ліофілізовані форми)
ГУО 1 ГУОг 01111111 464111171 11111111 478
На фіг. 11 показаний титр ОЕМ 4 з використанням ССіІЮвзо/мл (ліофілізовані форми).
Враховуючи результати дослідження стабільності, наведені нижче, краща стабільність була отримана за допомогою МО 2 (сазароза «т гліцин). Отже, стабілізуюча композиція на основі сахарози та гліцину була обрана для розробки більш стабільної рецептури.
Приклад 5:
Умови ліофілізації
Спочатку для розробки вакцини проти вірусу денге були випробувані різні стабілізуючі рецептури для рідкої вакцини, проте було виявлено, що вірус не є стабільним у рідкій рецептурі, і за 5 днів при 37 "С відбулися значні втрати титру. Рідка рецептура не працює як вакцина проти вірусу денге. Тому подальші тестування були проведені з нефасованою вакциною проти денге методом ліофілізації.
Були заплановані і проведені різні тестування методом ліофілізації моновалентної та тетравалентної вакцини проти денге, щоб дослідити відповідність стабілізатора рецептурі вакцини та стабільність усіх чотирьох вірусних серотипів у тетравалентній композиції в процесі зберігання при низькій температурі.
Наші дослідження показали, що вірус залишається більш стабільним у ліофілізованій, ніж у рідкій формі, а втрати вірусного титру після ліофілізації не спостерігаються, як це показано в прикладі 4.
Тому було прийнято рішення використовувати ліофілізовану форму вакцини проти вірусу денге для отримання кращої стабільності продукту. Випробування методом ліофілізації проводили на нефасованій вакцині проти денге з використанням очищених моновалентних вірусних пулів, яка містить желатин-сорбіт або сахарозу-гліцин в якості стабілізаторів, що описано в прикладі 4. Оскільки желатин походить від свині, в даний час є деякі етичні проблеми його використання у вакцині. Також існує певна складність в його приготуванні, оскільки необхідний гідроліз желатину при високій температурі. При застосуванні желатинно- сорбітолового стабілізатора не помічено стабільності титрів інфекційності всіх чотирьох серотипів та виявлена значна втрати вірусу між етапами танення та ліофілізації.
Після деяких тестувань методом ліофілізації вакцини проти денге, желатин ж сорбіт ж стабілізатор ІІ були замінені на сахарозу «я гліцин, як показано в прикладі 4. В результаті таких тестувань було отримано кращу стабільність вірусу у рецептурі ЇМО 2 порівняно з рецептурою
ЇМО 1 (див. таблицю 17).
Таблиця 17
Оптимізація циклу ліофілізації олово 71171776. 4б5гтюд. | -: 0282 | --.-.р/ 281477 27111111 5бгюд./// | 77777707 17171711 2495..ЮШ.-:
У тестуванні Ме1 тривалість циклу ліофілізації була змінена відносно стандартного 56- годинного циклу. Скорочення тривалості циклу ліофілізації вплинуло на втрату титру та вміст вологи. Однак серйозної втрати у вірусному титрі не відбулось, а вміст вологи збільшився з 2,50 95 до 3,34 95 об'ємної маси, оскільки відбулося скорочення тривалості циклу (див. таблицю 18). Отже, тривалість циклу ліофілізації - 56 год.
Таблиця 18
Параметри процесу ліофілізації
На фіг. 12 показано цикл ліофілізації.
Приклад 6:
Дані щодо стабільності моновалентної вакцини проти вірусу денге при температурі 37-41 С протягом 14 днів після ліофілізації.
Моновалентні нефасовані вакцини проти вірусу денге (ОЕМ 1,2,3,4) розробляли з використанням різних концентрацій сахарози та гліцину для отримання остаточної вакциннної композиції, що містить концентрацію сахарози та гліцину, як передбачено в таблиці 19 (501, 562, 503, 504, 565, 506). Стабілізовані моновалентні композиції були ліофілізовані відповідно до стандартного протоколу ліофілізації. Всі ліофілізовані моновалентні та тетравалентні композиції вірусу денге піддавали тестуванню на термостабільність при температурі 3751 С протягом 14 днів. Зразки збирали у відповідні часові проміжки та перевіряли на титри інфекційності (див. таблиці 19, 20 (А - Е), 21 (А - Е), 22 (А- Е), 23 (А - Е), 24 - 33 та фіг. 13-16).
Таблиця 19
Рецептура вакцини з відповідною концентрацією сахарози та гліцину 10 95 об'ємної маси 4,5 96 об'ємної маси
Таблиця 20А
Композиція моновалентної вакцини проти вірусу денге 501
Вірус денге серотип 1 (ГОЕЄЕМ 1430) МІ-Т Іодто 2,5 БУО
Таблиця 20Б: Композиція моновалентної вакцини проти вірусу денге 5052
Вірус денге серотип 1 (ГОЕЄЕМ 1430) МІ-Т Іодто 2,5 БУО
Таблиця 208
Композиція моновалентної вакцини проти вірусу денге 5053
Вірус денге серотип 1 (ГОЕЄЕМ 1430) МІ-Т Іодто 2,5 БОУ
Таблиця 20Г
Композиція моновалентної вакцини проти вірусу денге 5054
Вірус денге серотип 1 (ГОЕЄЕМ 1430) МІ-Т Іодто 2,5 БУО 10 95 об'ємної маси
Таблиця 20Д
Композиція моновалентної вакцини проти вірусу денге 5055
Вірус денге серотип 1 (ГОЕЄЕМ 1430) МІ-Т Іодто 2,5 БУО 4,5 96 об'ємної маси
Таблиця 20Е
Композиція моновалентної вакцини проти вірусу денге 5056
Вірус денге серотип 1 (ГОЕЄЕМ 1430) МІ-Т Іодто 2,5 БУО
Таблиця 21А
Композиція моновалентної вакцини проти вірусу денге 501
Вірус денге серотип 2 (ОЕМ 2/4430 МІ-Т Іодчо 3,0 БУО
Таблиця 21Б
Композиція моновалентної вакцини проти вірусу денге 5652
Вірус денге серотип 2 (ОЕМ 2/4А30) МІ-Т Іодто 3,0 БУО
Таблиця 218
Композиція моновалентної вакцини проти вірусу денге 5053
Вірус денге серотип 2 (ОЕМ 2/4А30) МІ-Т Іодто 3,0 БУО
Таблиця 21Г
Композиція моновалентної вакцини проти вірусу денге 5054
Вірус денге серотип 2 (ОЕМ 2/4А30) МІ-Т Іодто 3,0 БУО 95 об'ємної маси
Таблиця 21Д: Композиція моновалентної вакцини проти вірусу денге 555
Вірус денге серотип 2 (ОЕМ 2/4А30) МІ-Т Іодто 3,0 БУО 4.5 9ь об'ємної маси
Таблиця 21Е:
Композиція моновалентної вакцини проти вірусу денге 506
Вірус денге серотип 2 (ОЕМ 2/4А30) МІ-Т Іодто 3,0 БУО
Таблиця 22А
Композиція моновалентної вакцини проти вірусу денге 501
Вірус денге серотип З (ОЕМ ЗАЗ0/31) МІ-Т Іодто 2,5 БУО
Таблиця 22Б
Композиція моновалентної вакцини проти вірусу денге 5652
Вірус денге серотип З (ГОЕМ ЗАЗ30/31 МІ-Т одно 2,5 БУО
Таблиця 228
Композиція моновалентної вакцини проти вірусу денге 5053
Вірус денге серотип З (ОЕМ ЗАЗ0/31) МІ-Т Іодто 2,5 БУО
Таблиця 22Г
Композиція моновалентної вакцини проти вірусу денге 5054
Вірус денге серотип З (ОЕМ ЗАЗ0/31) МІ-Т Іодто 2,5 БУО 10 95 об'ємної маси
Таблиця 22Д
Композиція моновалентної вакцини проти вірусу денге 5055
Вірус денге серотип З (ОЕМ ЗАЗ0/31) МІ-Т Іодто 2,5 БУО 4,5 96 об'ємної маси
Таблиця 22Е: Композиція моновалентної вакцини проти вірусу денге 5И6
Вірус денге серотип З (ОЕМ ЗАЗ0/31) МІ-Т Іодто 2,5 БУО
Таблиця 23А
Композиція моновалентної вакцини проти вірусу денге 501
Вірус денге серотип 4 (ГОЄЕМ 4430) МІ-Т Іодто 2,5 БУО
Таблиця 23Б
Композиція моновалентної вакцини проти вірусу денге 5652
Вірус денге серотип 4 (ГгОЄЕМ 4430) МІ-Т Іодто 2,5 БУО
Таблиця 238
Композиція моновалентної вакцини проти вірусу денге 5053
Вірус денге серотип 4 (ГгОЄЕМ 4430) МІ-Т Іодто 2,5 БУО
Таблиця 23Г
Композиція моновалентної вакцини проти вірусу денге 5054
Вірус денге серотип 4 (ГгОЄЕМ 4430) МІ-Т Іодто 2,5 БУО 10 95 об'ємної маси
Таблиця 23Д
Композиція моновалентної вакцини проти вірусу денге 50215
Вірус денге серотип 4 (ГгОЄЕМ 4430) МІ-Т Іодто 2,5 БУО 4,5 96 об'ємної маси нню""н"нвншннииинннининнннншшшн
Таблиця 23Е
Композиція моновалентної вакцини проти вірусу денге 5056
Вірус денге серотип 4 (ГгОЕМ 4430) МІ-Т Іодто 2,5 БУО
Таблиця 24
Композиція тетравалентної вакцини проти вірусу денге 501
Вірус денге серотип 1 (ГОЕЄЕМ 1430) МІ-Т Іодто 2,5 БУО
Вірус денге серотип 2 (ГОЕМ 2/4А30) МІ-Т Іодто 3,0 БУО
Вірус денге серотип З (ОЕМ ЗАЗ0/31) МІ-Т Іодто 2,5 БУО
Вірус денге серотип 4 (ГгОЄЕМ 4430) МІ-Т Іодто 2,5 БУО
Таблиця 25
Композиція тетравалентної вакцини проти вірусу денге 5052
Вірус денге серотип 1 (ГОЕЄЕМ 1430) МІ-Т Іодто 2,5 БУО
Вірус денге серотип 2 (ОЕМ 2/4А30) МІ-Т Іодто 3,0 БУО
Вірус денге серотип З (ОЕМ ЗАЗ0/31) МІ-Т Іодто 2,5 БУО
Вірус денге серотип 4 (ГгОЄЕМ 4430) МІ-Т Іодто 2,5 БУО
Таблиця 26
Композиція тетравалентної вакцини проти вірусу денге 5053
Вірус денге серотип 1 (ГОЕЄЕМ 1430) МІ-Т Іодто 2,5 БУО
Вірус денге серотип 2 (ОЕМ 2/4А30) МІ-Т Іодто 3,0 БУО
Вірус денге серотип З (ОЕМ ЗАЗ0/31) МІ-Т Іодто 2,5 БУО
Вірус денге серотип 4 (ГгОЄЕМ 4430) МІ-Т Іодто 2,5 БУО
Таблиця 27
Композиція тетравалентної вакцини проти вірусу денге 504
Вірус денге серотип 1 (ГОЕЄЕМ 1430) МІ-Т Іодто 2,5 БУО
Вірус денге серотип 2 (ОЕМ 2/4А30) МІ-Т Іодто 3,0 БУО
Вірус денге серотип З (ОЕМ ЗАЗ0/31) МІ-Т Іодто 2,5 БУО
Вірус денге серотип 4 (ГгОЄЕМ 4430) МІ-Т Іодто 2,5 БУО 10 95 об'ємної маси
Таблиця 28
Композиція тетравалентної вакцини проти вірусу денге 505
Вірус денге серотип 1 (ГОЕЄЕМ 1430) МІ-Т Іодто 2,5 БУО
Вірус денге серотип 2 (ОЕМ 2/4А30) МІ-Т Іодто 3,0 БУО
Вірус денге серотип З (ОЕМ ЗАЗ0/31) МІ-Т Іодто 2,5 БУО
Вірус денге серотип 4 (ГгОЄЕМ 4430) МІ-Т Іодто 2,5 БУО 4.5 9ь об'ємної маси
Таблиця 29
Композиція тетравалентної вакцини проти вірусу денге 506
Вірус денге серотип 1 (ГОЕМ 1430) МІ-Т Іодто 2,5 БУО
Вірус денге серотип 2 (ОЕМ 2/4А30) МІ-Т Іодто 3,0 БУО
Вірус денге серотип З (ОЕМ ЗАЗ0/31) МІ-Т Іодто 2,5 БУО
Вірус денге серотип 4 (ГгОЄЕМ 4430) МІ-Т Іодто 2,5 БУО
Таблиця 30
Титр ОЕМ 1 в дозі ГГ одіо БУО / мл після ліофілізації 0017105 7.024 7.217 7.185 7.060 6.994 7.020 7.051 7.300 7.242 7.021 6.950 6.898 6.917 7.152 7.082 6.935 6.886 6.925 6.720 6.954 6.981 6.724 6.817 6.700 6.510 6.872 6.732 6.600 6.746 6.346 6.180 6.585 6.500 6.312 6.395
На фіг. 13 показано титр ОЕМ 1 в дозі І одіо БУО / мл після ліофілізації.
Таблиця 31
Титр ОЕМ 2 в дозі ГГ одіо БУО / мл після ліофілізації 01 6.775 6.821 6.824 6.780 6.900 6.772 6.650 6.760 6.797 6.802 6.855 6.780 6.684 6.617 6.712 6.689 6.723 6.665 6.521 6.588 6.610 6.584 6.692 6.610 6.246 6.405 6.482 6.410 6.536 6.538 6.060 6.144 6.227 6.197 6.272 6.294
На фіг. 14 показано титр ОЕМ 2 в дозі І одіо БУО / мл після ліофілізації.
Таблиця 32
Титр ОЕМ З в дозі ГІ одіо БУО / мл після ліофілізації 7.70 | 5929 | 5864 | 5882 | 5877 | 5765 | 5800
На фіг. 15 показано титр ОЕМ З в дозі І одіо БУО / мл після ліофілізації.
Таблиця 33
Титр ОЕМ 4 в дозі ГІ одіо БУО / мл після ліофілізації 7770. 7429 | 7441 | 752 | 7464 | 7500 | 747 714 | 6809 | 672 | 7021 | 696 | 6880 | 6782
На фіг. 16 показано титр ОЕМ 4 в дозі І одіо БУО / мл після ліофілізації.
Результати термостабільності для ліофілізованих моновалентних композицій, що містять різні концентрації сахарози та гліцину в якості стабілізаторів, наведені в таблицях 20 (А - Е), 21 (А - Е), 22 (А - Е), 23 (А - Е), 24 - 33 та на фіг. 13 - 16, показують, що концентрація сахарози та гліцину відіграє ключову роль у збереженні титру інфекційності.
Спостерігалася порівняно велика різниця у вірусних титрах у композиціях 501 та 502. При цьому у композиціях 503, 5054, 503 5, 50 6 у всіх чотирьох серотипах не спостерігалося суттєвої різниці. Проте, композиція 553 з концентрацією сахарози 5 95 та гліцину 5 95 була обрана для подальших проб.
Приклад 7:
Дані щодо стабільності тетравалентної живої атенуйованої (рекомбінантної, ліофілізованої) вакцини проти вірусу денге
Тетравалентна (жива атенуйована рекомбінантна) вакцина проти вірусу денге (ОТМ), що містить комбінацію серотипів (0ЕМ-1, ЮЕМ-2, ЮЕМ-3, ОЕМ-4), стабілізованих за допомогою композиції сахарози-гліцину (50), як показано в прикладі 6, та ліофілізованих, відповідно до прикладу 5, в скляні трубчасті флакони О5Р типу 1 об'ємом З мл. У систему упаковки входять також корки з бромобутилової гуми та ущільнювачі із алюмінієвих та пластикових ковпачків з відривною накладкою. Була проведена оцінка стабільності та якості стабілізованої вакцини 50 у вищезгаданій системі упаковки з метою проведення подальших досліджень відповідно до вимог
ІСН, які передбачають врахування терміну придатності лікарського препарату.
Параметри, що вказують на стабільність препарату в процесі довготривалих / реальних досліджень: 1. Вірусні титри кожного серотипу 2. Рівень рН
Зо 3. Вміст вологи 1. Дані щодо стабільності тетравалентної вакцини від вірусу денге при температурі 2-87 протягом 12 місяців після ліофілізації показані в таблицях 34 (А - Г).
Таблиця 34А
Титр ОЕМ-1 в дозі І одіо БУО / 0,5 мл при 2-8 "С протягом 12 місяців після ліофілізації
Ме ЇЇ 0 Її 1 ЇЇ 2 | 3 | 6 | 9 | 2
Проба 4
Проба 5
Проба 6
На фіг. 17 а) показано титр ОЕМ-1 І одіо ри / 0,5 мл при 2-8 "С протягом 12 місяців після ліофілізації.
Таблиця 34Б
Титр ОЕМ-2 в дозі І одто БУО / 0,5 мл при 2-8 "С протягом 12 місяців після ліофілізації
Ме ЇЇ 0 Її 1 ЇЇ 2 | 3 | 6 | 9 | 2
Проба 4
Проба 5
Проба 6
На фіг. 17 б) показано титр ОЕМ-2 в дозі І одіо БУО / 0,5 мл при 2-8 "С протягом 12 місяців після ліофілізації.
Таблиця 348
Титр ОЕМ-3 в дозі І одто БУО / 0,5 мл при 2-8 "С протягом 12 місяців після ліофілізації ее ЇЇ 0 Її 1 ЇЇ 2 | 3 | 6 | 9 | 2
Проба 6
На фіг. 17 в) показано титр ОЕМ-3 в дозі І одіо БУО / 0,5 мл при 2-8 "С протягом 12 місяців після ліофілізації.
Таблиця 34Г
Титр ОЕМ-4 в дозі І одіо БУО / 0,5 мл при 2-8 "С протягом 12 місяців після ліофілізації
Ме ЇЇ 0 Її 1 ЇЇ 2 | 3 | 6 | 9 | 2
Проба 4
Проба 5
Проба 6
На фіг. 17 г) показано титр ОЕМ-4 в дозі І одіо БУО / 0,5 мл при 2-8 "С протягом 12 місяців після ліофілізації.
Рівень рН та вміст вологи оцінювалися при температурі 2-8 "С протягом 12 місяців. Рівень рН залишався в межах від 7,6 до 7,8 (фіг. 18). Вміст залишкової вологи протягом 12 місяців зберігався нижче 3,0 95 об'ємної маси (фіг. 19). 2. Дані про стабільність тетравалентної вакцини проти вірусу денге при 25:52 та 60ж5 95 відносної вологості протягом 6 місяців після ліофілізації показані в таблицях 35 (А - Г).
Таблиця З35А
Титр ОЕМ-1 в дозі І одіо БУО / 0,5 мл при 25:52 протягом 6 місяців після ліофілізації ме ЇЇ 70 11 Її 2 ! з | 6
Проба 4
Проба 5
Проба 6
На фіг. 20 а) показано титр ОЕМ-1 в дозі І одіо БУО / 0,5 мл при 25:22 протягом 6 місяців після ліофілізації.
Таблиця 35Б
Титр ОЕМ-2 в дозі І одто БУО / 0,5 мл при 25-2 протягом 6 місяців після ліофілізації ме ЇЇ 70 171 Її 2 ЇЇ 3 | 6
Проба 4
Проба 5
Проба 6
На фіг. 20 б) показано титр ОЕМ-2 в дозі І 0910 БУО / 0,5 мл при температурі 25:22 протягом 6 місяців після ліофілізації.
Таблиця 358
Титр ОЕМ-3 в дозі І одіо БУО / 0,5 мл при 25:52 протягом 6 місяців після ліофілізації ме Го 11711112 Її 3 | 6
Проба 6
На фіг. 20 в) показано титр ОЕМ-3 в дозі І 0910 БУО / 0,5 мл при температурі 25:22 протягом 6 місяців після ліофілізації.
Таблиця 35Г
Титр ОЕМ-4 в дозі І одіо БУО / 0,5 мл при 25:52 протягом 6 місяців після ліофілізації ме ЇЇ 70 171 Її 2 ЇЇ 3 | 6
Проба 4
Проба 5
Проба 6
На фіг. 20 г) показано титр ОЕМ-4 в дозі І 0од1іо БУО / 0,5 мл при 25:22 протягом 6 місяців після ліофілізації.
Рівень рН та вміст вологи оцінювалися у початковий та кінцевий момент часу при температурі 25:2 7С протягом 6 місяців (6 місяців після експозиції). Не змінювалося значення рН при зберіганні в умовах прискореного тестування протягом б місяців порівняно з початковими значеннями (р «0,001); Середнє значення х 350 змістилося з 7,60-7,79 до 7,54- 7,71 (фіг. 21). Вміст залишкової вологи залишався в межах верхньої межі З 95 об'ємної маса, середнє значення хз 350 1,845-2,774 95 об'ємної маси 6 місяців після зберігання (фіг. 22). 3. Дані щодо стабільності тетравалентної вакцини проти вірусу денге за 37521 протягом 7 днів після ліофілізації:
Проби витримували при температурі 37-11 "С протягом 7 днів. Серотипи вірусу (СЕМ1-4) титрували і обчислювали втрати в титрах (див. таблицю 36). Втрати в титрах були послідовними у всіх пробах. Середня втрата І одіо у вірусних титрах та стандартне відхилення серотипів
Оепдие 1 до ОЮОепдие 4 у ліофілізованій вакцині ЮТМ склали 0,604:0,117, 0,607-0,066,
0,548:50,130, 0,6840,109 відповідно (фіг. 23).
Таблиця 36
Дані щодо стабільності тетравалентної вакцини проти вірусу денге за 37-21 протягом 7 днів після ліофілізації нини т ОЕМІ РЕМ2 РЕМЗ РЕМА
Проба 1 060 | -(ЮюД068 2 ющф"| 060 | 068
Проба 2 068 | .-.ЮюЮЙ061 5 4ющю | 069 2 щ | 062
Проба З
Проба 4
Проба 5 069 | .ЮЦЮюЮЙ050 2 щ | 065 | 069
Проба 6
На фіг. 23 показані дні щодо стабільності тетравалентної вакцини проти вірусу денге за 3751 протягом 7 днів після ліофілізації. 4. Дані про стабільність тетравалентної вакцини проти вірусу денге за 42 х 1 протягом 7 днів після ліофілізації (показані на фіг. 24):
Стабільність тетравалентної вакцини проти вірусу денге (ОТМ) (живої атенуйованої) оцінювали на репрезентативній пробі. Ліофілізовані флакони з готовим продуктом протягом 7 днів піддавали температурному впливу при температурі 42 "С. Кожен серотип вірусу (ОЕМ1-4) титрували наприкінці періоду впливу порівняно з початковим титром та обчислювали втрати в титрах (див. таблицю 37).
Таблиця 37
Дані про стабільність тетравалентної вакцини проти вірусу денге за 4211 протягом 7 днів після ліофілізації
Днів після І 091о втрати у вірусних титрах ОТМ (БУО/О.5 мл) експозиції РЕМІ рЕМ2 РЕМЗ РЕМА
Втрати у титрах 5. Дані щодо стабільності тетравалентної вакцини проти вірусу денге 55:41 "С протягом 2 днів після ліофілізації:
Стабільність тетравалентної вакцини проти вірусу денге ЮОТМ (живої атенуйованої) оцінювали на репрезентативній пробі. Ліофілізовані флакони з готовим продуктом піддавали температурному впливу при температурі 55 "С протягом 2 днів. Кожен серотип вірусу (ОЕМ1-4) титрували наприкінці періоду впливу порівняно з початковим титром та обчислювали втрати в титрах.
Хоча даний винахід було описано відповідно до певних бажаних варіантів здійснення, фахівцям в цій галузі буде очевидно, що винахід може зазнавати різних змін та модифікацій, не відхиляючись від обсягу прав, визначеного в наступній формулі винаходу.
Claims (25)
1. Стабільна ліофілізована імуногенна композиція, що містить: а) щонайменше один живий атенуйований вірус денге (ОЕМ), Зо Б) сахарозу, 3-6 95 об'ємної маси, с) гліцин, 3-6 95 об'ємної маси, причому відновлена композиція зберігає бажані характеристики вірусу, в тому числі його життєздатність, імуногенність і стабільність.
2. Імуногенна композиція за п. 1, в якій щонайменше один живий атенуйований вірус денге (ОЕМ) являє собою живі атенуйовані віруси денге (ОЕМ) різних серотипів, вибрані із групи ОЕМ- 1, ОЄМ-2, ОЕМ-3 та ОЕМ-4.
3. Імуногенна композиція за п. 1, в якій живі атенуйовані віруси денге (ОЕМ) є тетравалентними і являють собою серотипи вірусу денге ОЕМ-1, ОЕЄМ-2, СЕМ-3 ії ОЕМ-4.
4. Імуногенна композиція за п. 1, в якій живі атенуйовані віруси денге (ОЕМ) є рекомбінантними вірусами денге та/або химерними вірусами денге, які містять першу нуклеотидну послідовність, що кодує структурні білки першого вірусу денге, та другу нуклеотидну послідовність, що кодує неструктурні білки другого вірусу денге.
5. Імуногенна композиція за будь-яким з пп. 1-4, в якій живі атенуйовані віруси денге серотипів РЕМ-1, СЕМ-2, СЕМ-3 ії ОЕМ-4 мають делецію 30 нуклеотидів, позначену ДЗО мутацією, та/або мають делецію 31 нуклеотиду, позначену ДЗ1 мутацією, в 3' нетрансльованій області геному вірусу денге.
6. Імуногенна композиція за будь-яким з пп. 1-5, в якій живі атенуйовані віруси денге серотипу БЕМ-1, ОЕМ-2, СЕМ-3 ії СБЕМ-4 мають фенотип з температурною чутливістю у клітинах Мего або у лінії клітин печінки людини НиН-7.
7. Імуногенна композиція за будь-яким з пп. 1-6, яка є ліофілізованою (осушена холодом).
8. Імуногенна композиція за п. 7, в якій ліофілізована композиція відновлена фізіологічним розчином або водою для ін'єкцій (МУР), а її кінцевий рівень рН становить 7-8.
9. Імуногенна композиція за будь-яким з пп. 1-8, в якій вірус денге присутній у дозі щонайменше 2,5 |0дто БУО (бляшкоутворюючі одиниці) на 0,5 мл.
10. Імуногенна композиція за п. 1, що містить: а) серотип 1 вірусу денге (ОЕМ 1430), р) серотип 2 вірусу денге (ОЕМ 2/4А3З0), с) серотип З вірусу денге (ОЕМ ЗАЗ0/31), а) серотип 4 вірусу денге (ОЕМ 4430), е) сахарозу, 3-6 95 об'ємної маси, У) гліцин, 3-6 95 об'ємної маси, причому відновлена композиція зберігає бажані характеристики вірусу, в тому числі його життєздатність, імуногенність і стабільність.
11. Імуногенна композиція за п. 10, що містить: а) серотип 1 вірусу денге (ОЕМ 1430), р) серотип 2 вірусу денге (ОЕМ 2/4А3З0), с) серотип З вірусу денге (ГОЕМ ЗАЗ0/31), Зо а) серотип 4 вірусу денге (ГОЕМ 4430), е) сахарозу, 4-5 95 об'ємної маси, У) гліцин, 4-5 95 об'ємної маси, причому відновлена композиція зберігає бажані характеристики вірусу, в тому числі його життєздатність, імуногенність і стабільність.
12. Імуногенна композиція за п. 10, що містить: а) серотип 1 вірусу денге (ГОЕМ 1430), не менше ніж 2,5 Іодіо БУЄ на 0,5 мл, р) серотип 2 вірусу денге (ОЕМ 2/4А30), не менше ніж 2,5 Іодто БУО на 0,5 мл, с) серотип З вірусу денге (ОЕМ ЗАЗ0/31), не менше ніж 2,5 Іодто БУО на 0,5 мл, а) серотип 4 вірусу денге (ОЕМ 4430), не менше ніж 2,5 Іод:іо БУО на 0,5 мл, е) сахарозу, 5 95 об'ємної маси, У) гліцин, 5 95 об'ємної маси, причому відновлена композиція зберігає бажані характеристики вірусу, в тому числі його життєздатність, імуногенність і стабільність.
13. Імуногенна композиція за п. 10, що містить: а) серотип 1 вірусу денге (ГОЕМ 1430), не менше ніж 2,5 Іодіо БУЄ на 0,5 мл, р) серотип 2 вірусу денге (ОЕМ 2/4А30), не менше ніж 2,5 Іодто БУО на 0,5 мл, с) серотип З вірусу денге (ОЕМ ЗАЗ0/31), не менше ніж 2,5 Іодто БУО на 0,5 мл, а) серотип 4 вірусу денге (ОЕМ 4430), не менше ніж 2,5 Іод:о БУО на 0,5 мл, д) сахарозу, 4,5 95 об'ємної маси, БО М) гліцин, 5 95 об'ємної маси, причому відновлена композиція зберігає бажані характеристики вірусу, в тому числі його життєздатність, імуногенність і стабільність.
14. Імуногенна композиція за п. 10, що містить: а) серотип 1 вірусу денге (ГОЕМ 1430), не менше ніж 2,5 Іодіо БУЄ на 0,5 мл, р) серотип 2 вірусу денге (ОЕМ 2/4А30), не менше ніж 2,5 Іодто БУО на 0,5 мл, с) серотип З вірусу денге (ОЕМ ЗАЗ0/31), не менше ніж 2,5 Іодто БУО на 0,5 мл, а) серотип 4 вірусу денге (ОЕМ 4430), не менше ніж 2,5 Іод:о БУО на 0,5 мл, е) сахарозу, 6 95 об'ємної маси, У) гліцин, 6 95 об'ємної маси, бо причому відновлена композиція зберігає бажані характеристики вірусу,
в тому числі його життєздатність, імуногенність і стабільність.
15. Спосіб виготовлення стабільної ліофілізованої імуногенної композиції за пп. 1-14, який включає: а) багаторазове збирання супернатанту, що містить щонайменше один серотип вірусу денге в МЕМ (мінімальне есенціальне середовище) з сольовим розчином Хенка з додаванням декстрози, І -глутаміну та бікарбонату натрію, при цьому багаторазове збирання здійснюють з однієї проби; р) фільтрування вірусного збору шляхом прямої фільтрації (ОРЕ) через щонайменше один очищувальний фільтр, що характеризується розміром пор від 6 до 0,45 (|; с) обробку вірусного збору бензоназою з концентрацією 1-10 од./мл при температурі 3431 "С протягом 2 годин; а) концентрування вірусного збору шляхом тангенціальної фільтрації (ТЕР) з використанням мембрани з відсіченою молекулярною масою (МУУСО) 100 кДа; е) стабілізацію вірусного збору стабілізуючим агентом, що включає 3-6 95 об'ємної маси сахарози та 3-6 95 об'ємної маси гліцину, для формування стабілізованого вірусного збору; І) стерилізацію стабілізованого вірусного збору шляхом прямої фільтрації через очищувальний фільтр з розміром пор відО0в до 0,2 ц; з отриманням загального відновлення очищених вірусів щонайменше 50 95, і д) осушення холодом стерилізованого вірусного збору, яке включає етап заморожування, етап первинного осушення і етап вторинного осушення, при цьому: а) етап заморожування здійснюють при температурі -45 "С протягом 690-930 хв, в) етап первинного осушення включає нагрівання від 0,5 до 1,0 "С/хв до досягнення температури -25 "С та витримку протягом 1800-1980 хв. с) етап вторинного осушення включає нагрівання від 0,5 до 1,0 "С/хв до досягнення температури 25 "С та витримку протягом 420-540 хв.
16. Спосіб за п. 15, в якому вірусний збір обробляють бензоназою, яка має концентрацію 1,25 од./мл.
17. Спосіб за п. 15, в якому вірусний збір піддають тангенціальній фільтрації (ТЕР), що призводить до 10-разової концентрації вірусного збору. Зо
18. Спосіб за п. 15, в якому стабілізуючий агент містить сахарозу у кількості від 4 до 5 95 об'ємної маси і гліцин у кількості від 4 до 5 95 об'ємної маси.
19. Спосіб за п. 15, в якому стабілізуючий агент містить сахарозу у кількості 5 95 об'ємної маси і гліцин у кількості 5 95 об'ємної маси.
20. Спосіб за п. 15, в якому стабілізуючий агент містить сахарозу у кількості 4,5 95 об'ємної маси і гліцин у кількості 5 95 об'ємної маси.
21. Спосіб за п. 15, в якому стабілізуючий агент містить сахарозу у кількості 6 95 об'ємної маси і гліцин у кількості 6 95 об'ємної маси.
22. Спосіб за будь-яким з пп. 15-21, в якому ліофілізовану імуногенну композицію зберігають при 25 "С протягом шести місяців.
23. Спосіб за будь-яким з пп. 15-21, в якому ліофілізовану імуногенну композицію зберігають при 37 "С протягом чотирнадцяти днів.
24. Спосіб за будь-яким з пп. 15-21, в якому ліофілізовану імуногенну композицію зберігають при 42 "С протягом двох днів.
25. Набір для застосування стабільної ліофілізованої імуногенної композиції, який включає перший контейнер, що містить стабільну ліофілізовану імуногенну композицію за п. 1, яка містить: а) щонайменше один живий атенуйований вірус денге (ОЕМ), е) сахарозу, 3-6 95 об'ємної маси, У) гліцин, 3-6 95 об'ємної маси, і другий контейнер, який містить фізіологічний розчин або воду для ін'єкцій (М/РІ), для відновлення ліофілізованої імуногенної композиції, причому відновлена композиція зберігає бажані характеристики вірусу, в тому числі його життєздатність, імуногенність і стабільність.
ТНК поснідовність шовнів вірусу деанжхе Штам віртсу денгае 3 й ! її щк в девї | Негтруювані вона - Та ї ї а С шо Долеців 30 нуклеотидів МТА : репі і Нести пен Снез ї іш і о Пррам віруєу дент З іХимера) І нн т є є ТТОВуЄ ВИ ПБЛих ооороваюкя 7 дес ш деп ооо о СПАЛА ту й і ! мізки опнех г оцінна Наствунтурні поеми я я З : і дення що : Делецій 30 нуклестидів з МТВ . і. ! Еманіевнг і оцінна й ; зі кова х ГА : Е : і їбам вірусу дент З . Іво он ря о Спрястурні геню» "Неструютурні гени бер З Я : ОМ репз нн ння санок шої і
! . ! ' Делеців З03І нуклеєтидів а З'ЯТВ і у г: де пнннннонивннонньннн ут жах сш руюурнітени ВеВЯ що Щекамм віруси дент, Я т й шИ ! р нн осн коріння інн неон їв «ев Нагцуииєтувні пена є йо Я ї ха : Делеція ЗО нуклевтидів з У'МТВ її і ПЕД нн ГУ Єтруктурвітени | но ши й еровюя 0000000 Нетрикпрнітнисоввя ЩО
Янг. я Ссоруювури віріона вірусу денте щ о ее - ВЖК пкчнку Оу Вр Е и кЖЕ оч Протвін Є Проте РЕМЛЯ
Фіг. 2
Структура штаму віріона зірусу дента аленуйовані шани вірусу демо серотнмву я і ПА А и и а В МН 0 долото клалауначнккнк КАК кн, Зв ек туї й Девеція 0 нукпоствдів Ї че си МУК ЗВ МУ 00 Кахллллляткдллллтллндняянятяннннннинтнтнттит є тютююєюююєюттююттй І Ва АНА і х й шо БУ й НО т Ах З Ек и жі пз Гете шосх Гек ні КЗ соокомнннннн і зі КУ,
що. ню А Ех й В с : Оу З ЗИ ТЕ Зще ох КВ СО МК Б що со о. с п Бош с о се КЗ кі КІ 5 К щі 5-ез ЕМ
Фіг. З Погзриом шекодУ віруюшних сеебрів ВЕН ОЗ (СТО ми) тІбараворяинсямй тв однорвесвний збір ї с хо : Б дек ЕВ Ще Як . я. . жи рук ща : ка М В ох Бе Фрнтравенні Ж шо и ЕК 5-Х Ж С ЩО ЯК ке СХ Ж ок: щоб п ши ше ше Дт ї ї М ББЖ З Ж ЗО 8 5 г СУ | Еш іш и ЩЕ я ! ї ХВ ЗК З ВХ ОВ З 53- Щ ЗЖ ВЖ ЗБ В Я ССсСсСсС о даюеа с дна : Дяк: : Док у : дей І дяки: ідекь ій "Врвхі іван!
Фіг. 4 досарнисм зиходу вірусних витрів ПЕН Я, З, й поши евуве нти багторазвнео за одно В Вега КУ. 0 зо г : о, ЩО 4 «борів ! ї Мюгжрктх киход - мч КОХ Ї (до Зинораювнкйювів ЩЕНЯ З Ох і вмиа ши : же Я ВВВВОХ Кох о.
ХХ / : : : ЧЕ : ВНІ : ЖІ : : " Лоеврння вібоду вднеразення зорі ох в га шк Янг В
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
IN201721036696 | 2017-10-16 | ||
PCT/IN2018/050645 WO2019077622A1 (en) | 2017-10-16 | 2018-10-10 | STABLE VACCINE COMPOSITIONS COMPRISING, BOTH, A LIVING RECOMBINANT FLAVIVUS ATTENUATED AND PROCESS FOR PREPARING THE SAME |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
UA127829C2 true UA127829C2 (uk) | 2024-01-17 |
Family
ID=66173564
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
UAA202002972A UA127829C2 (uk) | 2017-10-16 | 2018-10-10 | Стабільна ліофілізована імуногенна композиція, яка містить живий атенуйований рекомбінантний флавівірус, спосіб і набір для її отримання та застосування |
Country Status (23)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11660333B2 (uk) |
EP (1) | EP3697897A4 (uk) |
JP (1) | JP7261239B2 (uk) |
KR (1) | KR20200088326A (uk) |
CN (1) | CN111655844B (uk) |
AR (1) | AR114138A1 (uk) |
AU (1) | AU2018352447A1 (uk) |
BR (1) | BR112020007513A2 (uk) |
CA (1) | CA3079151A1 (uk) |
CO (1) | CO2020006037A2 (uk) |
CR (1) | CR20200212A (uk) |
CU (1) | CU24701B1 (uk) |
EA (1) | EA202090967A1 (uk) |
GE (1) | GEP20237575B (uk) |
MX (1) | MX2020004085A (uk) |
PE (1) | PE20210106A1 (uk) |
PH (1) | PH12020550266A1 (uk) |
SA (1) | SA520411768B1 (uk) |
SG (1) | SG11202003408TA (uk) |
TW (1) | TWI812650B (uk) |
UA (1) | UA127829C2 (uk) |
WO (1) | WO2019077622A1 (uk) |
ZA (1) | ZA202002852B (uk) |
Families Citing this family (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA3177574A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-25 | Takeda Vaccines, Inc. | Compositions and methods for dengue virus chimeric constructs in vaccines |
WO2019112921A1 (en) | 2017-12-07 | 2019-06-13 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Formulations of dengue virus vaccine compositions |
KR20220077927A (ko) * | 2019-12-10 | 2022-06-09 | 리플리겐 코포레이션 | 바이러스 벡터를 제조하는 방법 |
GB2600468A (en) * | 2020-10-30 | 2022-05-04 | Excivion Ltd | Adjuvant composition |
WO2023037387A2 (en) * | 2021-09-08 | 2023-03-16 | Serum Institute Of India Private Limited | Freeze-dried viral combination vaccine compositions and process for preparation thereof |
WO2023158989A1 (en) * | 2022-02-15 | 2023-08-24 | Takeda Vaccines, Inc. | Dengue vaccine batch mixing process |
EP4356925A3 (en) * | 2022-10-18 | 2024-05-01 | Takeda Vaccines, Inc. | Dengue vaccine formulation |
WO2024118740A1 (en) * | 2022-11-29 | 2024-06-06 | Takeda Vaccines, Inc. | Large-scale flaviviral vaccine production and manufacture |
Family Cites Families (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2008118691A2 (en) * | 2007-03-22 | 2008-10-02 | The Regents Of The University Of Colorado | Method of preparing an immunologically-active adjuvant-bound dried vaccine composition |
EP2143440A1 (fr) * | 2008-07-09 | 2010-01-13 | Sanofi Pasteur | Agent stabilisant et composition vaccinale comprenant un ou plusieurs flavivirus vivants atténués |
KR20110074563A (ko) * | 2008-09-24 | 2011-06-30 | 메디뮨 엘엘씨 | 바이러스의 정제 방법 |
BRPI0915696B8 (pt) * | 2008-11-07 | 2021-05-25 | Serum Institute Of India Ltd | composição de vacina de rotavírus liofilizada e método de preparar a referida composição |
US9044498B2 (en) | 2010-12-02 | 2015-06-02 | Oncolytics Biotech Inc. | Lyophilized viral formulations |
EP2802650A4 (en) | 2012-01-09 | 2015-09-30 | Sanofi Pasteur Biologics Llc | PURIFICATION OF FLAVIVIRUS |
US10004795B2 (en) | 2015-09-08 | 2018-06-26 | Fundacao Butantan | Process for preparing an attenuated tetravalent dengue vaccine |
EP3355916A4 (en) | 2015-09-30 | 2018-08-29 | Panacea Biotec Limited | Stable live attenuated recombinant dengue vaccine |
EP3419659A1 (en) * | 2016-02-23 | 2019-01-02 | The Regents of the University of Colorado, A Body Corporate | Compositions and methods for making and using thermostable immunogenic formulations with increased compatibility of use as vaccines against one or more pathogens |
-
2018
- 2018-10-10 PE PE2020000644A patent/PE20210106A1/es unknown
- 2018-10-10 US US16/756,227 patent/US11660333B2/en active Active
- 2018-10-10 EA EA202090967A patent/EA202090967A1/ru unknown
- 2018-10-10 CR CR20200212A patent/CR20200212A/es unknown
- 2018-10-10 GE GEAP201815338A patent/GEP20237575B/en unknown
- 2018-10-10 JP JP2020542220A patent/JP7261239B2/ja active Active
- 2018-10-10 BR BR112020007513-2A patent/BR112020007513A2/pt unknown
- 2018-10-10 KR KR1020207014037A patent/KR20200088326A/ko not_active Application Discontinuation
- 2018-10-10 CA CA3079151A patent/CA3079151A1/en active Pending
- 2018-10-10 WO PCT/IN2018/050645 patent/WO2019077622A1/en unknown
- 2018-10-10 SG SG11202003408TA patent/SG11202003408TA/en unknown
- 2018-10-10 MX MX2020004085A patent/MX2020004085A/es unknown
- 2018-10-10 UA UAA202002972A patent/UA127829C2/uk unknown
- 2018-10-10 CU CU2020000036A patent/CU24701B1/es unknown
- 2018-10-10 EP EP18867836.1A patent/EP3697897A4/en active Pending
- 2018-10-10 CN CN201880078804.XA patent/CN111655844B/zh active Active
- 2018-10-10 AU AU2018352447A patent/AU2018352447A1/en active Pending
- 2018-10-12 AR ARP180102954A patent/AR114138A1/es unknown
- 2018-10-12 TW TW107135951A patent/TWI812650B/zh active
-
2020
- 2020-04-14 SA SA520411768A patent/SA520411768B1/ar unknown
- 2020-04-14 PH PH12020550266A patent/PH12020550266A1/en unknown
- 2020-05-15 CO CONC2020/0006037A patent/CO2020006037A2/es unknown
- 2020-05-15 ZA ZA2020/02852A patent/ZA202002852B/en unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2020537691A (ja) | 2020-12-24 |
MX2020004085A (es) | 2020-12-03 |
BR112020007513A2 (pt) | 2020-10-06 |
EP3697897A1 (en) | 2020-08-26 |
ZA202002852B (en) | 2021-03-31 |
SG11202003408TA (en) | 2020-05-28 |
US11660333B2 (en) | 2023-05-30 |
AR114138A1 (es) | 2020-07-29 |
JP7261239B2 (ja) | 2023-04-19 |
EP3697897A4 (en) | 2022-02-23 |
TW201922272A (zh) | 2019-06-16 |
CN111655844B (zh) | 2024-05-24 |
CN111655844A (zh) | 2020-09-11 |
SA520411768B1 (ar) | 2023-12-21 |
PH12020550266A1 (en) | 2021-03-01 |
AU2018352447A1 (en) | 2020-06-11 |
TWI812650B (zh) | 2023-08-21 |
CA3079151A1 (en) | 2019-04-25 |
CU24701B1 (es) | 2024-04-08 |
EA202090967A1 (ru) | 2020-08-12 |
CO2020006037A2 (es) | 2020-08-10 |
US20210187092A1 (en) | 2021-06-24 |
CR20200212A (es) | 2020-07-17 |
PE20210106A1 (es) | 2021-01-19 |
KR20200088326A (ko) | 2020-07-22 |
CU20200036A7 (es) | 2021-03-11 |
WO2019077622A1 (en) | 2019-04-25 |
GEP20237575B (en) | 2023-12-25 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
UA127829C2 (uk) | Стабільна ліофілізована імуногенна композиція, яка містить живий атенуйований рекомбінантний флавівірус, спосіб і набір для її отримання та застосування | |
JP6817370B2 (ja) | 弱毒生ウイルス組成物 | |
US11406698B2 (en) | Vaccine compositions | |
RU2541784C2 (ru) | Лиофилизированная композиция для индукции иммунного ответа на флавивирус, композиция и способ для ее получения | |
WO2000023104A1 (fr) | Vaccin lyophilise a virus vivant modifie d'hepatite a et son stabilisant | |
MX2013013862A (es) | Vacuna de virus de dengue inactivado. | |
US10806781B2 (en) | Compositions and methods for live, attenuated alphavirus formulations | |
TW201718008A (zh) | 製備減毒四價登革熱疫苗的方法 | |
KR20180041761A (ko) | 안정한 약독화된 재조합 뎅기 생백신 | |
EP3866847A1 (en) | Virus vaccine | |
JP2024501984A (ja) | フラビウイルス属ウイルスの弱毒化ウイルス及びその使用 | |
EA046342B1 (ru) | Стабильные составы вакцин, включающих, в частности, живой аттенуированный рекомбинантный флавивирус и процесс их приготовления |