UA126889C2 - Сконструйований катіонний нейротоксин - Google Patents
Сконструйований катіонний нейротоксин Download PDFInfo
- Publication number
- UA126889C2 UA126889C2 UAA201601094A UAA201601094A UA126889C2 UA 126889 C2 UA126889 C2 UA 126889C2 UA A201601094 A UAA201601094 A UA A201601094A UA A201601094 A UAA201601094 A UA A201601094A UA 126889 C2 UA126889 C2 UA 126889C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- amino acid
- abm
- clostridial toxin
- iie
- abp
- Prior art date
Links
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 title description 3
- 239000002581 neurotoxin Substances 0.000 title description 3
- 231100000618 neurotoxin Toxicity 0.000 title description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 490
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims abstract description 468
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims abstract description 468
- 231100001102 clostridial toxin Toxicity 0.000 claims abstract description 332
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 490
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims description 487
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 claims description 116
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims description 116
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 105
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 71
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 69
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 68
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 39
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 claims description 38
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims description 27
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 27
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 25
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 24
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 23
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 23
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims description 21
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 18
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 claims description 17
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 17
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 17
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 17
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 15
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 15
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 12
- 208000005392 Spasm Diseases 0.000 claims description 10
- 208000004350 Strabismus Diseases 0.000 claims description 10
- 208000008238 Muscle Spasticity Diseases 0.000 claims description 9
- 206010044074 Torticollis Diseases 0.000 claims description 9
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N aspartic acid group Chemical group N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 9
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims description 9
- 208000010118 dystonia Diseases 0.000 claims description 9
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 9
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 9
- 208000018198 spasticity Diseases 0.000 claims description 9
- 208000014094 Dystonic disease Diseases 0.000 claims description 8
- 108010057266 Type A Botulinum Toxins Proteins 0.000 claims description 7
- 206010005159 blepharospasm Diseases 0.000 claims description 7
- 230000000744 blepharospasm Effects 0.000 claims description 7
- 230000001148 spastic effect Effects 0.000 claims description 7
- 230000001256 tonic effect Effects 0.000 claims description 7
- 208000007101 Muscle Cramp Diseases 0.000 claims description 6
- 230000036407 pain Effects 0.000 claims description 6
- 208000019505 Deglutition disease Diseases 0.000 claims description 5
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 claims description 5
- 206010043269 Tension headache Diseases 0.000 claims description 5
- 208000008548 Tension-Type Headache Diseases 0.000 claims description 5
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 claims description 5
- 208000018197 inherited torticollis Diseases 0.000 claims description 5
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 claims description 4
- 208000021642 Muscular disease Diseases 0.000 claims description 4
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 claims description 4
- 206010043118 Tardive Dyskinesia Diseases 0.000 claims description 4
- 206010044565 Tremor Diseases 0.000 claims description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 4
- 206010006514 bruxism Diseases 0.000 claims description 4
- 201000002866 cervical dystonia Diseases 0.000 claims description 4
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 claims description 4
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 4
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 claims description 4
- 125000000404 glutamine group Chemical group N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)* 0.000 claims description 4
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 claims description 4
- 208000018360 neuromuscular disease Diseases 0.000 claims description 4
- 206010002153 Anal fissure Diseases 0.000 claims description 3
- 208000016583 Anus disease Diseases 0.000 claims description 3
- 208000000289 Esophageal Achalasia Diseases 0.000 claims description 3
- 206010063006 Facial spasm Diseases 0.000 claims description 3
- 208000009531 Fissure in Ano Diseases 0.000 claims description 3
- 208000004095 Hemifacial Spasm Diseases 0.000 claims description 3
- 208000008454 Hyperhidrosis Diseases 0.000 claims description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 claims description 3
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 claims description 3
- 206010030136 Oesophageal achalasia Diseases 0.000 claims description 3
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 claims description 3
- 208000016599 Uterine disease Diseases 0.000 claims description 3
- 201000000621 achalasia Diseases 0.000 claims description 3
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 3
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 claims description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 3
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 claims description 3
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 claims description 3
- 230000037315 hyperhidrosis Effects 0.000 claims description 3
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 claims description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 claims description 3
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 claims description 3
- 210000002460 smooth muscle Anatomy 0.000 claims description 3
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims description 3
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims description 3
- 208000029728 Eyelid disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000002972 Hepatolenticular Degeneration Diseases 0.000 claims description 2
- 206010023644 Lacrimation increased Diseases 0.000 claims description 2
- 208000029578 Muscle disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000000112 Myalgia Diseases 0.000 claims description 2
- 208000002033 Myoclonus Diseases 0.000 claims description 2
- 201000009623 Myopathy Diseases 0.000 claims description 2
- 208000007920 Neurogenic Inflammation Diseases 0.000 claims description 2
- 208000000693 Neurogenic Urinary Bladder Diseases 0.000 claims description 2
- 206010029279 Neurogenic bladder Diseases 0.000 claims description 2
- 208000036496 Pelvic floor dyssynergia Diseases 0.000 claims description 2
- 206010039424 Salivary hypersecretion Diseases 0.000 claims description 2
- 201000010829 Spina bifida Diseases 0.000 claims description 2
- 208000006097 Spinal Dysraphism Diseases 0.000 claims description 2
- 208000003028 Stuttering Diseases 0.000 claims description 2
- 208000018839 Wilson disease Diseases 0.000 claims description 2
- 201000002898 anismus Diseases 0.000 claims description 2
- 210000005252 bulbus oculi Anatomy 0.000 claims description 2
- 206010009887 colitis Diseases 0.000 claims description 2
- 201000002904 focal dystonia Diseases 0.000 claims description 2
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 2
- 230000004317 lacrimation Effects 0.000 claims description 2
- 210000004717 laryngeal muscle Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 claims description 2
- 208000013465 muscle pain Diseases 0.000 claims description 2
- 206010029864 nystagmus Diseases 0.000 claims description 2
- 201000002851 oromandibular dystonia Diseases 0.000 claims description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 2
- 208000026451 salivation Diseases 0.000 claims description 2
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 claims description 2
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 claims 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 claims 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 abstract description 7
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 22
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 22
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 21
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 21
- 108030001720 Bontoxilysin Proteins 0.000 description 20
- 231100001103 botulinum neurotoxin Toxicity 0.000 description 15
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 13
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 13
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 12
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 12
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 11
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 10
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 10
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 9
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 8
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 8
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 8
- 108010069023 botulinum toxin type E Proteins 0.000 description 8
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 8
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 7
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 7
- 210000002683 foot Anatomy 0.000 description 7
- 231100000065 noncytotoxic Toxicity 0.000 description 7
- 230000002020 noncytotoxic effect Effects 0.000 description 7
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 7
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 6
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 6
- 108030001722 Tentoxilysin Proteins 0.000 description 6
- 230000009471 action Effects 0.000 description 6
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 6
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 210000003371 toe Anatomy 0.000 description 6
- 241001112695 Clostridiales Species 0.000 description 5
- 108010010469 Qa-SNARE Proteins Proteins 0.000 description 5
- 102000050389 Syntaxin Human genes 0.000 description 5
- 108010055044 Tetanus Toxin Proteins 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 5
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 5
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 5
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- 101710117524 Botulinum neurotoxin type B Proteins 0.000 description 4
- 101710117523 Botulinum neurotoxin type C Proteins 0.000 description 4
- 101000985023 Clostridium botulinum C phage Botulinum neurotoxin type C Proteins 0.000 description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101100396982 Mus musculus Inmt gene Proteins 0.000 description 4
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- 244000309466 calf Species 0.000 description 4
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 4
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 4
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 4
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 4
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 4
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 4
- MYWUZJCMWCOHBA-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-phenylpropan-2-amine Chemical compound CNC(C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 3
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 229940053031 botulinum toxin Drugs 0.000 description 3
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 3
- 206010008129 cerebral palsy Diseases 0.000 description 3
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 3
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 3
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 3
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 210000003105 phrenic nerve Anatomy 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 3
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 3
- 230000034512 ubiquitination Effects 0.000 description 3
- 238000010798 ubiquitination Methods 0.000 description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 3
- PDRJLZDUOULRHE-ZETCQYMHSA-N (2s)-2-amino-3-pyridin-2-ylpropanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=N1 PDRJLZDUOULRHE-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 2
- DFZVZEMNPGABKO-ZETCQYMHSA-N (2s)-2-amino-3-pyridin-3-ylpropanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CN=C1 DFZVZEMNPGABKO-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 2
- FQFVANSXYKWQOT-ZETCQYMHSA-N (2s)-2-azaniumyl-3-pyridin-4-ylpropanoate Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=NC=C1 FQFVANSXYKWQOT-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 2
- XWHHYOYVRVGJJY-QMMMGPOBSA-N 4-fluoro-L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(F)C=C1 XWHHYOYVRVGJJY-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- -1 6-M-methyllysine Chemical compound 0.000 description 2
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 2
- 206010013952 Dysphonia Diseases 0.000 description 2
- 206010015995 Eyelid ptosis Diseases 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 206010028372 Muscular weakness Diseases 0.000 description 2
- 108020004485 Nonsense Codon Proteins 0.000 description 2
- 108091060545 Nonsense suppressor Proteins 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 230000001713 cholinergic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- PMMYEEVYMWASQN-IMJSIDKUSA-N cis-4-Hydroxy-L-proline Chemical compound O[C@@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 230000009881 electrostatic interaction Effects 0.000 description 2
- 210000001508 eye Anatomy 0.000 description 2
- 210000000744 eyelid Anatomy 0.000 description 2
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 230000005021 gait Effects 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 210000004237 neck muscle Anatomy 0.000 description 2
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 2
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 2
- 230000037434 nonsense mutation Effects 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 2
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 2
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 2
- 201000003004 ptosis Diseases 0.000 description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 2
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 2
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 2
- 238000000547 structure data Methods 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000009747 swallowing Effects 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 229940118376 tetanus toxin Drugs 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 2
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 2
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- UJXJZOCXEZPHIE-YFKPBYRVSA-N (2s)-2-(2-hydroxyethylamino)-4-sulfanylbutanoic acid Chemical compound OCCN[C@H](C(O)=O)CCS UJXJZOCXEZPHIE-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FXGZFWDCXQRZKI-VKHMYHEASA-N (2s)-5-amino-2-nitramido-5-oxopentanoic acid Chemical compound NC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)N[N+]([O-])=O FXGZFWDCXQRZKI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- CCAIIPMIAFGKSI-DMTCNVIQSA-N (2s,3r)-3-hydroxy-2-(methylazaniumyl)butanoate Chemical compound CN[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O CCAIIPMIAFGKSI-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 1
- CNPSFBUUYIVHAP-WHFBIAKZSA-N (2s,3s)-3-methylpyrrolidin-1-ium-2-carboxylate Chemical compound C[C@H]1CCN[C@@H]1C(O)=O CNPSFBUUYIVHAP-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FUOOLUPWFVMBKG-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoisobutyric acid Chemical compound CC(C)(N)C(O)=O FUOOLUPWFVMBKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CDUUKBXTEOFITR-BYPYZUCNSA-N 2-methyl-L-serine Chemical compound OC[C@@]([NH3+])(C)C([O-])=O CDUUKBXTEOFITR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- XEVFXAFXZZYFSX-UHFFFAOYSA-N 3-azabicyclo[2.1.1]hexane-4-carboxylic acid Chemical compound C1C2CC1(C(=O)O)NC2 XEVFXAFXZZYFSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000004384 Alopecia Diseases 0.000 description 1
- 206010061666 Autonomic neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 208000008035 Back Pain Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 208000004130 Blepharoptosis Diseases 0.000 description 1
- 208000018084 Bone neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- 208000003164 Diplopia Diseases 0.000 description 1
- 206010013887 Dysarthria Diseases 0.000 description 1
- 206010013975 Dyspnoeas Diseases 0.000 description 1
- 241001184731 Eira Species 0.000 description 1
- 208000017701 Endocrine disease Diseases 0.000 description 1
- 108010013369 Enteropeptidase Proteins 0.000 description 1
- 102100029727 Enteropeptidase Human genes 0.000 description 1
- 108010074860 Factor Xa Proteins 0.000 description 1
- 208000001640 Fibromyalgia Diseases 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 229920002971 Heparan sulfate Polymers 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000629921 Homo sapiens Translocon-associated protein subunit delta Proteins 0.000 description 1
- YZJSUQQZGCHHNQ-UHFFFAOYSA-N Homoglutamine Chemical compound OC(=O)C(N)CCCC(N)=O YZJSUQQZGCHHNQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010020400 Hostility Diseases 0.000 description 1
- 206010020853 Hypertonic bladder Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- SNDPXSYFESPGGJ-BYPYZUCNSA-N L-2-aminopentanoic acid Chemical compound CCC[C@H](N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical class NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical class NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical class NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N L-norVal-OH Natural products CCCC(N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 1
- 208000008930 Low Back Pain Diseases 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 208000019695 Migraine disease Diseases 0.000 description 1
- 208000034819 Mobility Limitation Diseases 0.000 description 1
- 208000010428 Muscle Weakness Diseases 0.000 description 1
- 208000029549 Muscle injury Diseases 0.000 description 1
- 235000009421 Myristica fragrans Nutrition 0.000 description 1
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 description 1
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Chemical class NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Chemical class OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000009722 Overactive Urinary Bladder Diseases 0.000 description 1
- 208000016222 Pancreatic disease Diseases 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 102000016611 Proteoglycans Human genes 0.000 description 1
- 108010067787 Proteoglycans Proteins 0.000 description 1
- 206010038687 Respiratory distress Diseases 0.000 description 1
- 241000555745 Sciuridae Species 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010040744 Sinus headache Diseases 0.000 description 1
- 206010067672 Spasmodic dysphonia Diseases 0.000 description 1
- 241001201520 Stolephorus brachycephalus Species 0.000 description 1
- 102000016253 Synaptobrevin/Vesicle-associated membrane proteins Human genes 0.000 description 1
- 108050004777 Synaptobrevin/Vesicle-associated membrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- 108091032917 Transfer-messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 102100026226 Translocon-associated protein subunit delta Human genes 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010046543 Urinary incontinence Diseases 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 102000036861 Zinc-dependent endopeptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091006982 Zinc-dependent endopeptidases Proteins 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N acetylcholine Chemical compound CC(=O)OCC[N+](C)(C)C OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004373 acetylcholine Drugs 0.000 description 1
- 230000002730 additional effect Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- CDUUKBXTEOFITR-UHFFFAOYSA-N alpha-methylserine Natural products OCC([NH3+])(C)C([O-])=O CDUUKBXTEOFITR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical group 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000036528 appetite Effects 0.000 description 1
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 description 1
- 206010003549 asthenia Diseases 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 239000003899 bactericide agent Substances 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 125000002843 carboxylic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003729 cation exchange resin Substances 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000004671 cell-free system Anatomy 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 230000007012 clinical effect Effects 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 1
- 230000008602 contraction Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 208000037765 diseases and disorders Diseases 0.000 description 1
- 208000032625 disorder of ear Diseases 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 230000005684 electric field Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 210000003372 endocrine gland Anatomy 0.000 description 1
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 210000003499 exocrine gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000006277 exogenous ligand Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 208000030533 eye disease Diseases 0.000 description 1
- 230000001815 facial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 108010055409 ganglioside receptor Proteins 0.000 description 1
- 150000002270 gangliosides Chemical class 0.000 description 1
- 208000021302 gastroesophageal reflux disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003779 hair growth Effects 0.000 description 1
- 208000024963 hair loss Diseases 0.000 description 1
- 230000003676 hair loss Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 1
- MWFRVMDVLYIXJF-BYPYZUCNSA-N hydroxyethylcysteine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CSCCO MWFRVMDVLYIXJF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 1
- 230000001660 hyperkinetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000030214 innervation Effects 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- GCHPUFAZSONQIV-UHFFFAOYSA-N isovaline Chemical compound CCC(C)(N)C(O)=O GCHPUFAZSONQIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000366 juvenile effect Effects 0.000 description 1
- HXEACLLIILLPRG-RXMQYKEDSA-N l-pipecolic acid Natural products OC(=O)[C@H]1CCCCN1 HXEACLLIILLPRG-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 1
- 231100000636 lethal dose Toxicity 0.000 description 1
- 239000008297 liquid dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000002690 local anesthesia Methods 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 239000001115 mace Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 206010027599 migraine Diseases 0.000 description 1
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 238000002887 multiple sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 230000002151 myoclonic effect Effects 0.000 description 1
- 239000006199 nebulizer Substances 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 210000001640 nerve ending Anatomy 0.000 description 1
- 230000001272 neurogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 description 1
- 210000000715 neuromuscular junction Anatomy 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000957 no side effect Toxicity 0.000 description 1
- 230000009437 off-target effect Effects 0.000 description 1
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 210000003300 oropharynx Anatomy 0.000 description 1
- 208000020629 overactive bladder Diseases 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 208000021090 palsy Diseases 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 210000001428 peripheral nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- HXEACLLIILLPRG-UHFFFAOYSA-N pipecolic acid Chemical compound OC(=O)C1CCCCN1 HXEACLLIILLPRG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000003518 presynaptic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 239000003380 propellant Substances 0.000 description 1
- 230000009145 protein modification Effects 0.000 description 1
- 231100000654 protein toxin Toxicity 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 230000011514 reflex Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000004626 scanning electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 230000018448 secretion by cell Effects 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 210000004927 skin cell Anatomy 0.000 description 1
- 206010040882 skin lesion Diseases 0.000 description 1
- 231100000444 skin lesion Toxicity 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 230000003381 solubilizing effect Effects 0.000 description 1
- 201000002849 spasmodic dystonia Diseases 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 208000028684 sweat gland disease Diseases 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000016978 synaptic transmission, cholinergic Effects 0.000 description 1
- 102000003137 synaptotagmin Human genes 0.000 description 1
- 108060008004 synaptotagmin Proteins 0.000 description 1
- 230000001839 systemic circulation Effects 0.000 description 1
- 230000006231 tRNA aminoacylation Effects 0.000 description 1
- NPDBDJFLKKQMCM-UHFFFAOYSA-N tert-butylglycine Chemical compound CC(C)(C)C(N)C(O)=O NPDBDJFLKKQMCM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100001274 therapeutic index Toxicity 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000009827 uniform distribution Methods 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 238000002424 x-ray crystallography Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/52—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from bacteria or Archaea
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
- A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- A61K38/4886—Metalloendopeptidases (3.4.24), e.g. collagenase
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
- A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- A61K38/4886—Metalloendopeptidases (3.4.24), e.g. collagenase
- A61K38/4893—Botulinum neurotoxin (3.4.24.69)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/10—Drugs for disorders of the urinary system of the bladder
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
- A61P21/02—Muscle relaxants, e.g. for tetanus or cramps
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
- A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P39/00—General protective or antinoxious agents
- A61P39/04—Chelating agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/33—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Clostridium (G)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/24—Metalloendopeptidases (3.4.24)
- C12Y304/24068—Tentoxilysin (3.4.24.68), i.e. tetanus neurotoxin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/24—Metalloendopeptidases (3.4.24)
- C12Y304/24069—Bontoxilysin (3.4.24.69), i.e. botulinum neurotoxin
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Psychology (AREA)
Abstract
Винахід стосується сконструйованого клостридіального токсину, що містить від 5 до 40 амінокислотних модифікацій, які знаходяться в домені HCN клостридіального токсину, причому вказаний сконструйований клостридіальний токсин являє собою сконструйований ботулінічний нейротоксин типу А (BoNT/A), який має pI щонайменше 6,6 і де вказані амінокислотні модифікації вибрані з: заміни кислого амінокислотного залишку основним амінокислотним залишком та заміни незарядженого амінокислотного залишку основним амінокислотним залишком. Також винахід належить до способу отримання одноланцюгового білка сконструйованого клостридіального токсину, способу активації сконструйованого клостридіального токсину та його застосування.
Description
Винахід стосується сконструйованого клостридіального токсину, що містить від 5 до 40 амінокислотних модифікацій, які знаходяться в домені Нсм клостридіального токсину, причому вказаний сконструйований клостридіальний токсин являє собою сконструйований ботулінічний нейротоксин типу А (ВоМТ/А), який має рі щонайменше 6,6 і де вказані амінокислотні модифікації вибрані з: заміни кислого амінокислотного залишку основним амінокислотним залишком та заміни незарядженого амінокислотного залишку основним амінокислотним залишком.
Також винахід належить до способу отримання одноланцюгового білка сконструйованого клостридіального токсину, способу активації сконструйованого клостридіального токсину та його застосування.
Даний винахід стосується сконструйованих клостридіальних токсинів, що містять щонайменше одну амінокислотну модифікацію, а також використання таких сконструйованих клостридіальних токсинів у медицині та терапії.
Бактерії роду Сіозігідіа виробляють надзвичайно сильнодіючі та специфічні білкові токсини, які можуть отруювати нейрони та інші клітини, до яких вони доставляються. Приклади таких клостридіальних токсинів включають нейротоксини, що виробляються С. їеїапі (ТемМТт) та С. рошіїпит (ВоМТ) серотипів А-С, а також ті, що виробляються С. Брагаїїйї та С. ршїугісит.
Серед клостридіальних токсинів є деякі з найбільш сильнодіючих відомих токсинів.
Наприклад, ботулінічні нейротоксини мають значення середньої летальної дози (050) для мишей у діапазоні 0,5-5 нг/кг, в залежності від серотипу. Як правцеві токсини, так і ботулінічні токсини діють шляхом інгібування функції уражених нейронів, зокрема, вивільнення нейромедіаторів. В той час як ботулінічний токсин діє у нервово-м'язовому з'єднанні та інгібує холінергічну передачу у периферичній нервовій системі, правцевий токсин діє у центральній нервовій системі.
У природі клостридіальні токсини синтезуються у вигляді одноланцюгового поліпептиду, який піддається посттрансляційній модифікації за допомогою явища протеолітичного розщеплення з утворенням двох поліпептидних ланцюгів, з'єднаних разом дисульфідним зв'язком. Розщеплення відбувається за конкретним сайтом розщеплення, який часто називають сайтом активації який знаходиться між цистеїновими залишками, які забезпечують міжланцюговий дисульфідний зв'язок. Це та дволанцюгова форма, яка є активною формою токсину. Два ланцюги називають важким ланцюгом (Н-ланцюг), який має молекулярну масу приблизно 100 кДа, та легким ланцюгом (І-ланцюг), який має молекулярну масу приблизно 50 кДа. Н-ланцюг містить М-кінцевий транслокаційний компонент (домен НМ) та С-кінцевий націлювальний компонент (домен НС). Сайт розщеплення знаходиться між І-ланцюгом та компонентами транслокаційного домену. Після зв'язування домену НС з його нейроном- мішенню та інтерналізації зв'язаного токсину у клітину через ендосому домен НМ переносить І - ланцюг через ендосомальну мембрану та у цитозоль, та | -ланцюг забезпечує функцію протеази (також відомої як нецитотоксична протеаза).
Нецитотоксичні протеази діють шляхом протеолітичного розщеплення внутрішньоклітинних
Зо транспортних білків, відомих як білки ЗМАКЕ (наприклад, 5МАР-25, МАМР або синтаксин), див.
Сегаїд К (2002) "Се апа МоїІесшаг Віоіоду" (4 еайіоп) допп УмМіеу 5 Зоп5, Іпс. Абревіатура
ЗМАКЕ походить від виразу розчинний М5ОЕ-зв'язувальний рецептор, де М5Е означає фактор, чутливий до М-етилмалеіїміду. Білки ЗМАКЕ є невід'ємною частиною / злиття внутрішньоклітинних везикул і, отже, секреції молекул шляхом транспорту везикул із клітини.
Протеазна функція являє собою цинк-залежну ендопептидазну активність та проявляє високу субстратну специфічність щодо білків ЗМАРЕ. Відповідно, після доставки у потрібну клітину- мішень нецитотоксична протеаза здатна інгібувати клітинну секрецію із клітини-мішені.
Ї-ланцюгові протеази клостридіальних токсинів являють собою нецитотоксичні протеази, які розщеплюють білки ЗМАКЕ.
З огляду на повсюдне поширення білків з«МАКЕ клостридіальні токсини, такі як ботулінічний токсин, успішно використовуються у широкому діапазоні методів терапії.
Наприклад, автори звертаються до УМШіат 9. Гірпат, Соб5теїіс апа Сіїпіса! Арріїсайоп5 ої
Вошіїпит Тохіп (Зіаск, Іпс., 2004), де описане використання клостридіальних токсинів, таких як ботулінічні нейротоксини (ВоМТ), ВоМТ/А, ВоМТ/В, ВоМТт/Сі, ВоМтТ/О, ВоМТ/Е, ВоМТт/Е та
ВоМтТ/б, а також правцевий нейротоксин (ТемМТ), для інгібування нейрональної передачі у широкому різноманітті видів терапевтичного та косметичного застосування - наприклад,
ВОТОХМ на даний час затверджений як терапевтичний засіб при наступних показаннях: ахалазія, спастичність у дорослих, анальна тріщина, біль у спині, тонічний блефароспазм, бруксизм, цервікальна дистонія, спадкове тремтіння, зморшки надперенісся або гіперкінетичні зморшки на обличчі, головний біль, геміфаціальний спазм, гіперактивність сечового міхура, гіпергідроз, ювенільний церебральний параліч, розсіяний склероз, міоклонічні розлади, носогубні зморшки, спастична дисфонія, косоокість та розлад МІ! нерва. На додаток, методи терапії із застосуванням клостридіальних токсинів описані для лікування нервово-м'язових розладів (див. патентний документ О5 6872397); для лікування розладів матки (див. патентний документ 05 2004/0175399); для лікування виразок та гастроезофагеальної рефлюксної хвороби (див. патентний документ О5 2004/0086531); для лікування дистонії (див. патентний документ 05 6319505); для лікування розладів ока (див. патентний документ 05 2004/0234532); для лікування тонічного блефароспазму (див. патентний документ 05 2004/0151740); для лікування косоокості (див. патентний документ О5 2004/0126396); для лікування болю (див. 60 патентний документ 5 6869610, патентний документ 05 6641820, патентний документ 05
6464986 та патентний документ 05 6113915); для лікування фіброміалгії (див. патентний документ 05 6623742, патентний документ 5 2004/0062776); для лікування болю в попереку (див. патентний документ 05 2004/0037852); для лікування м'язових ушкоджень (див. патентний документ ОЗ 6423319); для лікування синусового головного болю (див. патентний документ 5 6838434); для лікування головного болю напруги (див. патентний документ ОЗ 6776992); для лікування головного болю (див. патентний документ 05 6458365); для зменшення мігренозного головного болю (див. патентний документ ОЗ 5714469); для лікування серцево-судинних захворювань (див. патентний документ 05 6767544); для лікування неврологічних розладів, таких як хвороба Паркінсона (див. патентний документ ОЗ 6620415, патентний документ 56306403); для лікування нейропсихіатричних розладів (див. патентний документ 5 2004/0180061, патентний документ О5 2003/0211121); для лікування ендокринних розладів (див. патентний документ 05 6827931); для лікування розладів щитовидної залози (див. патентний документ И5 6740321); для лікування розладів роботи потових залоз під холінергічним впливом (див. патентний документ ОЗ 6683049); для лікування діабету (див. патентний документ 05 6337075, патентний документ ОЗ 6416765); для лікування розладу підшлункової залози (див. патентний документ 05 6261572, патентний документ О5 6143306); для лікування форм раку, таких як пухлини кісток (див. патентний документ 05 6565870, патентний документ 5 6368605, патентний документ 05 6139845, патентний документ 05 2005/0031648); для лікування вушних розладів (див. патентний документ 5 6358926, патентний документ 05 6265379); для лікування розладів вегетативної нервової ситеми, таких як розлади м'язів шлунково-кишкового тракту та дисфункція іншої гладкої мускулатури (див. патентний документ О5 5437291); для лікування уражень шкіри, пов'язаних з проліферативними розладами клітин шкіри (див. патентний документ 05 5670484); для контролю нейрогенних запальних захворювань (див. патентний документ 05 6063768); для зменшення випадіння волосся та стимуляції росту волосся (див. патентний документ 05 6299893); для лікування опущених донизу кутиків рота (див. патентний документ 05 6358917); для зменшення апетиту (див. патентний документ 05 2004/40253274); для стоматологічних методів терапії та процедур (див. патентний документ 05 2004/0115139); для лікування нервово-м'язових розладів та станів (див. патентний документ 05 2002/0010138); для лікування різноманітних розладів та станів та пов'язаного з ними болю (див. патентний документ 5 2004/0013692); для лікування станів, що є наслідком гіперсекреції слизу, таких як астма та СОРО (див. патентний документ
МО 00/10598); та для лікування станів, що не є нейрональними, таких як запалення, стани ендокринних залоз, стани екзокринних залоз, імунологічні стани, серцево-судинні стани, стани кісток (див. патент М/О 01/21213). Усі вищевказані публікації включені у даний документ за допомогою посилання у їх повному обсязі.
Передбачається, що використання нецитотоксичних протеаз, таких як клостридіальні токсини (наприклад, ВОМТ та ТемМмтТ), у методах терапевтичного та косметичного лікування людей та інших ссавців поширюється на дедалі більший діапазон захворювань та нездужань, при яких можуть приносити користь властивості цих токсинів.
Щоб уникнути системних неврологічних ефектів, у багатьох методах терапії із застосуванням клостридіальних токсинів використовується безпосереднє введення терапевтичного засобу з клостридіальним токсином у задану ділянку-мішень (наприклад, тканину-мішень). Проблемою при введенні терапевтичних засобів на основі клостридіальних токсинів таким способом є розповсюдження токсину від місця введення та в оточуючі тканини або системний кровообіг. Дифузія токсину від тканини-мішені, як вважають, відповідає за небажані побічні ефекти, які у крайніх випадках можуть бути небезпечними для життя. Це може викликати особливе занепокоєння при використанні терапевтичних засобів з клостридіальним токсином (таких як терапевтичні засоби з ВоМТ) у великих дозах, концентраціях та об'ємах ін'єкції. Небажані явища, пов'язані з цією проблемою, що були зареєстровані для комерційних терапевтичних засобів з ВоОоМТ/А, включають астенію, генералізовану м'язову слабкість, диплопію, птоз, дисфагію, дисфонію, дизартрію, нетримання сечі та утруднення дихання.
Утруднення ковтання та дихання можуть загрожувати життю, та були зареєстровані смерті, пов'язані з ефектами розповсюдження токсину.
Отже, в даній галузі існує потреба в клостридіальних токсинах, які мають властивості підвищеного утримання в тканині у місці введення та які, відповідно, демонструють знижену дифузію від місця введення у порівнянні з відомими клостридіальними токсинами.
Даний винахід вирішує вищевказану проблему шляхом забезпечення сконструйованих клостридіальних токсинів, які зазначені у формулі винаходу.
В одному аспекті даний винахід передбачає сконструйований клостридіальний токсин, що бо містить щонайменше одну амінокислотну модифікацію, де вказана щонайменше одна амінокислотна модифікація підвищує ізоелектричну точку (рі) сконструйованого клостридіального токсину до значення, яке є щонайменше на 0,2 (наприклад, щонайменше 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 або 1) одиниці рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому клостридіального токсину, якому не вистачає указаної щонайменше однієї амінокислотної модифікації. В одному варіанті здійснення вказана щонайменше одна амінокислотна модифікація підвищує рі сконструйованого клостридіального токсину до значення, яке є щонайменше на 0,4 одиниці рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому клостридіального токсину, якому не вистачає вказаної щонайменше однієї амінокислотної модифікації. В одному варіанті здійснення вказана щонайменше одна амінокислотна модифікація підвищує рі сконструйованого клостридіального токсину до значення, яке є щонайменше на 0,5 одиниці рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому клостридіального токсину, якому не вистачає вказаної щонайменше однієї амінокислотної модифікації. В одному варіанті здійснення вказана щонайменше одна амінокислотна модифікація підвищує рі сконструйованого клостридіального токсину до значення, яке є щонайменше на 0,6 одиниці рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому клостридіального токсину, якому не вистачає вказаної щонайменше однієї амінокислотної модифікації. В одному варіанті здійснення вказана щонайменше одна амінокислотна модифікація підвищує рі сконструйованого клостридіального токсину до значення, яке є щонайменше на 0,8 одиниці рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому клостридіального токсину, якому не вистачає вказаної щонайменше однієї амінокислотної модифікації. В одному варіанті здійснення вказана щонайменше одна амінокислотна модифікація підвищує рі сконструйованого клостридіального токсину до значення, яке є щонайменше на 1 одиницю рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому клостридіального токсину, якому не вистачає вказаної щонайменше однієї амінокислотної модифікації.
В одному аспекті даний винахід передбачає сконструйований клостридіальний токсин, що містить щонайменше одну амінокислотну модифікацію, де вказана щонайменше одна амінокислотна модифікація підвищує ізоелектричну точку (рі) сконструйованого клостридіального токсину до значення, яке є щонайменше на одну одиницю рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому клостридіального токсину, якому не вистачає вказаної щонайменше однієї амінокислотної модифікації.
Зо У визначених варіантах здійснення сконструйований клостридіальний токсин містить щонайменше 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75 або 80 амінокислотних модифікацій.
У визначених варіантах здійснення вказана щонайменше одна амінокислотна модифікація підвищує рі сконструйованого клостридіального токсину до значення, яке є щонайменше на 2, 3, 4 або 5 одиниць рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому клостридіального токсину, якому не вистачає вказаної щонайменше однієї амінокислотної модифікації.
Автори даного винаходу виявили, що при збільшенні рі клостридіального токсину, наприклад, щонайменше на 0,2 одиниці рі, або на 0,5 одиниці рі, або одну одиницю рі (шляхом введення в білок клостридіального токсину щонайменше однієї амінокислотної модифікації) отримуваний в результаті сконструйований клостридіальний токсин переважно демонструє властивості підвищеного утримання у тканині та зниженої дифузії від місць введення, водночас зберігаючи здатності до зв'язування з клітиною-мішенню, переміщення та розщеплення білка- мішені(білків-мішеней) ЗМАКЕ. Таким чином, поширення клостридіального токсину від місця введення значно зменшується в порівнянні з ідентичним у всьому іншому клостридіаальним токсином, якому не вистачає вказаної щонайменше однієї амінокислотної модифікації.
Сконструйовані клостридіальні токсини за даним винаходом придатні для застосування у будь-якому з методів терапії, описаних вище, та переважно можуть демонструвати зниження або відсутність побічних ефектів в порівнянні з використанням відомих терапевтичних засобів з клостридіальними токсинами.
Властивості підвищеного утримання в тканині сконструйованих клостридіальних токсинів за даним винаходом також забезпечують підвищену ефективність та/або тривалість дії та можуть забезпечити можливість використання знижених доз в порівнянні з відомими терапевтичними засобами з клостридіальними токсинами (або підвищених доз без будь-яких додаткових побічних ефектів), таким чином забезпечуючи додаткові переваги.
Як обговорюється нижче більш докладно, підвищення рі, отримане завдяки щонайменше одній амінокислотній модифікації, означає, що сконструйований клостридіальний токсин за даним винаходом має, при заданому рН, сумарний заряд, який є більш позитивним, ніж сумарний заряд ідентичного в усьому іншому клостридіального токсину, якому не вистачає вказаної щонайменше однієї амінокислотної модифікації. Не бажаючи бути зв'язаними будь- 60 якою теорією, автори даного винаходу вважають, що даний підвищений позитивний заряд дозволяє сконструйованим клостридіальним токсинам за даним винаходом демонструвати більш тривалий час утримання в тканині в місці введення внаслідок сприятливих електростатичних взаємодій між сконструйованим клостридіальним токсином та аніонними позаклітинними компонентами (такими як клітинні мембрани та гепаринсульфат протеоглікани) у місці введення. Дані поліпшені електростатичні взаємодії слугують для зменшення дифузії сконструйованого клостридіального токсину від місця введення, таким чином покращуючи утримання в тканині.
Наприклад, властивості поліпшеного утримання в тканині сконструйованого клостридіального токсину за даним винаходом можуть забезпечити (ї) введення більш високих доз в окремі м'язи, такі як грудино-ключично-соскоподібний, без поширення на сусідні м'язи в шиї з обумовленням утрудненого ковтання та (ії) введення більш високих загальних доз (в усі м'язи) за одну процедуру без поширення у кровообіг та обумовлення системних ефектів, таких як утруднене дихання. Переваги для пацієнтів можуть включати більш ефективне лікування великих м'язів, таких як грудино-ключично-соскоподібний м'яз, збільшення можливості ін'єктгування декількох різних м'язів під час кожної процедури та можливий більш тривалий термін ефективного лікування (довший строк перед тим, як знадобиться повторне лікування) з причини підвищеного введення доз.
В одному варіанті здійснення сконструйований клостридіальний токсин за даним винаходом має, при використанні, позитивний сумарний заряд (наприклад, коли сконструйований клостридіальний токсин, при використанні, знаходиться в необхідному місці введення в тканині).
Ізоелектрична точка (рі) є специфічною властивістю даного білка. Як добре відомо в даній галузі, білки складаються з певної послідовності амінокислот (які також звуться амінокислотними залишками, коли знаходяться у складі білка). Кожна амінокислота зі стандартного набору з двадцяти має відмінний бічний ланцюг (або Е-групу), що означає, що кожний амінокислотний залишок у білку показує відмінні хімічні властивості, такі як заряд та гідрофобність. На дані властивості може впливати оточуюче хімічне середовище, наприклад, температура та рн. Загальні хімічні характеристики білка залежатимуть від суми даних різних факторів.
Певні амінокислотні залишки (які в деталях описані нижче) мають бічні ланцюги, що
Зо іонізуються, які можуть демонструвати електричний заряд в залежності від навколишнього рн.
Чи є такий бічний ланцюг зарядженим, чи ні при заданому рН залежить від рКа відповідного фрагменту, що іонізується, де рКа являє собою негативний логарифм константи дисоціації кислоти (Ка) для визначеного протона зі сполученої основи.
Наприклад, кислотні залишки, такі як залишки аспарагінової кислоти та глутамінової кислоти, мають карбоксильні кислотні групи бічних ланцюгів зі значенням рКа приблизно 4,1 (точні значення рКа можуть залежати від температури, іонної сили та мікрооточення групи, що іонізується). Таким чином, дані бічні ланцюги демонструють негативний заряд при рн 7,4 (який часто називають "фізіологічним рН"). При низьких значеннях рН дані бічні ланцюги стануть протонованими та втратять свій заряд.
Ї навпаки, основні залишки, як, наприклад, лізин та аргінін, мають азотвмісні групи бічних ланцюгів зі значеннями рКа приблизно 10-12. Отже, дані бічні ланцюги демонструють позитивний заряд при рН 7,4. Дані бічні ланцюги стануть депротонованими та втратять свій заряд при високих значеннях рн.
Отже, загальний (сумарний) заряд білкової молекули залежить від кількості кислих та основних залишків, що присутні в білку (та їх ступеня поверхневої доступності), та від навколишнього рН. Зміна навколишнього рН змінює загальний заряд білка. Відповідно, для кожного білка існує заданий рн, при якому кількість позитивних та негативних зарядів є рівною та білок не показує загального сумарного заряду. Дана точка відома як ізоелектрична точка (рі).
Ізоелектрична точка є стандартним поняттям в біохімії білків, з яким фахівець в даній галузі є обізнаним.
Отже, ізоелектрична точка (рі) визначається як значення рН, при якому білок показує сумарний заряд, що дорівнює нулю. Підвищення рі означає, що для того, щоб білок показав сумарний заряд, що дорівнює нулю, потрібне більш високе значення рН. Таким чином, підвищення рі представляє підвищення сумарного позитивного заряду білка при заданому рн. навпаки, зниження рі означає, що для того, щоб білок показав сумарний заряд, що дорівнює нулю, потрібно більш низьке значення рН. Таким чином, зниження рі представляє зниження сумарного позитивного заряду білка при заданому рн.
Способи визначення рі білка відомі в даній галузі та знайомі фахівцеві в даній галузі.
Наприклад, рі білка можна розрахувати за середніми значеннями рКа кожної амінокислоти, що бо присутня в білку. Альтернативно, рі білка можна визначити експериментально за допомогою методу ізоелектричного фокусування. Даний метод використовує електрофорез для розділення білків в залежності від їх рі. Ізоелектричне фокусування зазвичай виконують за допомогою гелю, який має іммобілізований градієнт рН. Коли застосовують електричне поле, білок мігрує через градієнт рН до тих пір, поки він не досягне рН, при якому він має нульовий сумарний заряд, при цьому дана точка представляє собою рі білка. рі білка можна збільшувати або зменшувати шляхом зміни кількості основних та/або кислотних груп, які представлені на його поверхні. Цього можна досягти за допомогою модифікації однієї або декількох амінокислот білка. Наприклад, підвищення рі можна отримати шляхом зменшення кількості кислотних залишків або шляхом збільшення кількості основних залишків. Такі амінокислотні модифікації обговорюються більш детально нижче.
Природні (немодифіковані) клостридіальні токсини мають рі приблизно 5-6. Таким чином, при рН 7,4 природні ботулінічні токсини мають негативний сумарний заряд. Нариклад, рі ВОМТ/А складає 6,4,а молекула ВоМТ/А має сумарний заряд -8 при рН 7,4. Дані значення рі розраховуються, як описано вище.
Таблиця 1 00111111 Клостридіальнийтоксин.//://////ССЇ7777771717171СрісСсСщС
ВоМуУЄ 11111111111111111111111111111111601
Як описано вище, в одному варіанті здійснення сконструйований клостридіальний токсин за даним винаходом містить щонайменше одну амінокислотну модифікацію, де вказана щонайменше одна амінокислотна модифікація підвищує ізоелектричну точку (рі) сконструйованого клостридіального токсину до значення, яке є щонайменше на 0,2 одиниці рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому клостридіального токсину, якому не вистачає вказаної щонайменше однієї амінокислотної модифікації.
Таким чином, в контексті даного винаходу підвищення рі на 0,2 одиниці у випадку сконструйованого клостридіального токсину ВоМТ/А буде являти собою підвищення рі від 6,4 до 6,6.
Як описано вище, в одному варіанті здійснення сконструйований клостридіальний токсин за даним винаходом містить щонайменше одну амінокислотну модифікацію, де вказана щонайменше одна амінокислотна модифікація підвищує ізоелектричну точку (рі) сконструйованого клостридіального токсину до значення, яке є щонайменше на одну одиницю
Зо рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому клостридіального токсину, якому не вистачає вказаної щонайменше однієї амінокислотної модифікації.
Таким чином, в контексті даного винаходу підвищення рі на 1 одиницю у випадку сконструйованого клостридіального токсину ВоМТ/А буде являти собою підвищення рі від 6,4 до 7 А.
В одному варіанті здійснення вказана щонайменше одна амінокислотна модифікація підвищує ізоелектричну точку (рі) сконструйованого клостридіального токсину до значення, яке є щонайменше на дві одиниці рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому клостридіального токсину, якому не вистачає вказаної щонайменше однієї амінокислотної модифікації.
В одному варіанті здійснення вказана щонайменше одна амінокислотна модифікація підвищує ізоелектричну точку (рі) сконструйованого клостридіального токсину до значення, яке є на 2-5 рі одиниць вищим за рі ідентичного в усьому іншому клостридіального токсину, якому не вистачає вказаної щонайменше однієї амінокислотної модифікації.
В одному варіанті здійснення сконструйований клостридіальний токсин має рі, що складає щонайменше 6 (наприклад, щонайменше 6 щонайменше 7 щонайменше 8 або щонайменше 9).
В одному варіанті здійснення сконструйований клостридіальний токсин має рі, що складає щонайменше 7.
В одному варіанті здійснення сконструйований клостридіальний токсин має рі, що складає від б до 10 (наприклад, рі від 7 до 9 або рі від 8 до 9).
Як обговорювалось вище, сконструйовані клостридіальні токсини за даним винаходом мають властивості підвищеного утримання у тканині, які також забезпечують підвищену ефективність та/або тривалість дії та можуть забезпечити можливість використання знижених доз у порівнянні з відомими терапевтичними засобами з клостридіальними токсинами (або підвищених доз без будь-яких додаткових ефектів). Один зі шляхів, яким можна визначити дані корисні властивості (які представляють підвищення терапевтичного індексу), виражається через відношення безпеки сконструйованого клостридіального токсину. У зв'язку з цим, небажані ефекти клостридіального токсину (зумовлені дифузією токсину від місця введення) можна оцінити експериментально шляхом визначення процентного відношення втрати маси тіла у відповідній моделі на тваринах (наприклад, мишах, де втрату маси тіла виявляють впродовж семи днів введення). І навпаки, бажані цільові ефекти клостридіального токсину можна оцінити експериментально за допомогою аналізу показника відведення пальців (ОіднкаІ Абаисіоп Зсоге) (АБ), вимірювання м'язового паралічу. Аналіз ОА можна виконати за допомогою ін'єкції 20 мкл клостридіального токсину у складі з желатино-фосфатним буфером у комплекс литкового/камбаловидного м'язів мишей, з подальшою оцінкою показника відведення пальців, за допомогою способу Аокі (Аокі КК, Тохісоп 39: 1815-1820; 2001). Під час аналізу ПОА5 мишей ненадовго підвішували за хвіст, щоб викликати характерний стартл-рефлекс, у якому миша витягує свої задні кінцівки та відводить пальці на задніх кінцівках. Після ін'єкції клостридіального токсину підраховують різні ступені відведення пальців за п'ятибальною шкалою (від
О-нормальне до 4-максимальне зменшення відведення пальців та витягування ніг).
Відношення безпеки клостридіального токсину тоді можна відобразити як відношення кількості токсину, необхідної для 10 95 зниження маси тіла (що вимірюється під час пікового ефекту впродовж перших семи днів після введення дози мишії) до кількості токсину, необхідної для показника СА5, що дорівнює 2. Отже, високі показники відношення безпеки є бажаними та вказують на токсин, здатний ефективно паралізувати м'яз-мішень з невеликими небажаними нецільовими ефектами. Сконструйований токсин за даним винаходом має відношення безпеки, яке є більш високим, ніж відношення безпеки еквівалентного немодифікованого (природного) ботулінічного токсину.
Таким чином, в одному варіанті здійснення сконструйований клостридіальний токсин за даним винаходом має відношення безпеки, що складає щонайменше 8 (наприклад, щонайменше 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 або 50), де відношення безпеки розраховують як: доза токсину, необхідна для -10 95 зміни маси тіла (пг/умишу), поділена на ЕО5О БАЗ (пг/мишу)
ІЕО5О «- доза, необхідна для отримання показника БА5, що дорівнює 21.
В одному варіанті здійснення сконструйований клостридіальний токсин за даним винаходом має відношення безпеки, що складає щонайменше 10. В одному варіанті здійснення сконструйований клостридіальний токсин за даним винаходом має відношення безпеки, що складає щонайменше 15.
Сконструйований клостридіальний токсин за даним винаходом містить щонайменше одну амінокислотну модифікацію. Вказана щонайменше одна амінокислотна модифікація підвищує рі клостридіального токсину, як обговорювалося вище. В контексті даного винаходу амінокислотна модифікація являє собою модифікацію амінокислотної послідовності клостридіального токсину.
Таку модифікацію можна здійснити шляхом заміни однієї амінокислоти в послідовності іншою (тобто заміщення), шляхом вставляння нової амінокислоти в послідовність або шляхом видалення амінокислоти з послідовності. Амінокислоти, включені в амінокислотну послідовність в білку, також називають амінокислотними залишками.
Нижче наведено 20 стандартних амінокислот, знайдених в білках.
Таблиця 2 01111111 Амінокислотад///// | 777 | 77717771 Бічнийлацюг/////////:ГО
Аспарагновакислота |Авр (0 |Заряджена(кисля).//-:/ /-//:::////С( (С
Аргінін 77777777 ФА ІА |Заряджена(основна)//:/2//:2ССГЩТ
Глутамін. 77777777 |С 00 | |Незаряджена(полярна)д//:/К/СС:(п/СС(ОУ
Таблиця 2 (продовження) 00101111 Амінокислотаїд///// | 777 | 77771 | 71111111 Бічнийлацюг//////////:ГУО/
Пзолейцин. 77777777 Ше 07 |Незаряджена (гідрофобна).ї7//://:/С//
Пролін.///////7777777777771111111 |Рю ІРО |Незаряджена(ідрофобна)їд//://:2С
Наступні амінокислоти вважаються зарядженими амінокислотами: аспарагінова кислота (негативно), глутамінова кислота (негативно), аргінін (позитивно) та лізин (позитивно).
При рн 7,4 бічні ланцюги аспарагінової кислоти (рКа 3,1) та глутамінової кислоти (рКа 4,1) мають негативний заряд, в той час як бічні ланцюги аргініну (рКа 12,5) та лізину (рКа 10,8) мають позитивний заряд. Аспарагінову кислоту та глутамінову кислоту називають кислими амінокислотними залишками. Аргінін та лізин називають основними амінокислотними залишками.
Наступні амінокислоти вважають незарядженими полярними (тобто вони можуть брати участь в утворенні водневого зв'язку) амінокислотами: аспарагін, глутамін, гістидин, серин, треонін, тирозин, цистеїн, метіонін, триптофан.
Наступні амінокислоти вважають незарядженими гідрофобними амінокислотами: аланін, валін, лейцин, ізолейцин, фенілаланін, пролін та гліцин.
Підвищення рі клостридіального токсину може здійснюватися шляхом введення в клостридіальний токсин однієї або декількох амінокислотних модифікацій, які підвищують відношення позитивного до негативного зарядів в клостридіальному токсині.
В одному варіанті здійснення щонайменше одну амінокислотну модифікацію вибирають з амінокислотної заміни, амінокислотної вставки та амінокислотної делеції.
При амінокислотній заміні амінокислотний залишок, який формує частину амінокислотної послідовності клостридіального токсину, заміщується іншим амінокислотним залишком.
Амінокислотний залишок для заміни може являти собою одну з 20 стандартних амінокислот, які описані вище.
Альтернативно, амінокислотний залишок для заміни при амінокислотній заміни може являти собою нестандартною амінокислотою (амінокислотою, яка не є частиною стандартного набору з 20, які описані вище). Наприклад, амінокислотний залишок для заміни може являти собою основну нестандартну амінокислоту, наприклад, І! -орнітин, /-2-аміно-3-гуанідинпропіонову кислоту або ОЮ-ізомери лізину, аргініну та орнітину). Способи введення нестандартних амінокислот в білки відомі в даній галузі та включають синтез рекомбінантного білка з
Зо використанням ауксотрофних хазяїв для експресії Е. соїї.
При амінокислотній вставці додатковий амінокислотний залишок (той, який зазвичай відсутній) вставляється в амінокислотну послідовность клостридіального токсину, таким чином збільшуючи загальну кількість амінокислотних залишків у вказаній послідовності. При амінокислотній делеції амінокислотний залишок видаляється з амінокислотної послідовності клостридіального токсину, таким чином зменшуючи загальну кількість амінокислотних залишків у вказаній послідовності.
Способи модифікації білків шляхом заміни, вставки або делеції амінокислотних залишків відомі в даній галузі. Наприклад, амінокислотні модифікації можна вводити шляхом модифікації послідовності ДНК, що кодує клостридіальний токсин. Цього можна досягти з використанням стандартних методик молекулярного клонування, наприклад, шляхом сайт-спрямованого мутагенезу, де короткі нитки ДНК (олігонуклеотиди), що кодують потрібну(потрібні) амінокислоту(амінокислоти), використовуються для заміщення початкової кодувальної послідовності з використанням ферменту полімерази або шляхом вставки/видалення частин гена за допомогою різних ферментів (наприклад, лігаз та ендонуклеаз рестрикції).
Альтернативно, модифіковану послідовність гена можна хімічно синтезувати.
В одному варіанті здійснення щонайменше одну амінокислотну модифікацію вибирають з заміни кислого амінокислотного залишку основним амінокислотним залишком; заміни кислого амінокислотного залишку незарядженим амінокислотним залишком; заміни незарядженого амінокислотного залишку основним амінокислотним залишком; вставки основного амінокислотного залишку та делеції кислого амінокислотного залишку.
У переважному варіанті здійснення щонайменше одна амінокислотна модифікація є заміною, яка переважно зберігає таку саме кількість амінокислотних залишків у клостридіальному токсині. В одному варіанті здійснення заміну вибирають з заміни кислого амінокислотного залишку основним амінокислотним залишком, заміни кислого амінокислотного залишку незарядженим амінокислотним залишком та заміни незарядженого амінокислотного залишку основним амінокислотним залишком. В одному варіанті здійснення основний амінокислотний залишок являє собою залишок лізину або залишок аргініну. В одному варіанті здійснення основний амінокислотний залишок являє собою залишок лізину. В одному варіанті здійснення основний амінокислотний залишок являє собою залишок аргініну. В одному варіанті здійснення, де заміною є заміна кислого амінокислотного залишку незарядженим амінокислотним залишком, кислий амінокислотний залишок заміщується відповідним йому незарядженим залишком аміду амінокислоти (тобто аспарагінова кислота заміщується аспарагіном, а глутамінова кислота заміщується глутаміном).
Сконструйований клостридіальний токсин за даним винаходом може містити більше ніж одну амінокислотну модифікацію. Таким чином, в одному варіанті здійснення сконструйований клостридіальний токсин (що описаний вище) містить від 1 до 80 амінокислотних модифікацій (наприклад, від 1 до 70, від 1 до 60, від 1 до 50, від 4 до 40, від 4 до ЗО, від 5 до 40, від 5 до 30 або від 10 до 25 амінокислотних модифікацій). В одному варіанті здійснення сконструйований клостридіальний токсин (що описаний вище) містить від 4 до 40 амінокислотних модифікацій. В одному варіанті здійснення сконструйований клостридіальний токсин містить щонайменше 2, щонайменше 3, щонайменше 4, щонайменше 5 або щонайменше 10 амінокислотних модифікацій. В одному варіанті здійснення сконструйований клостридіальний токсин містить щонайменше 4 амінокислотні модифікації (наприклад, щонайменше 4 амінокислотні заміни).
Кожна з вказаних амінокислотних модифікацій є амінокислотною модифікацією, яка описана вище. Таким чином, кожна з вказаних амінокислотних модифікацій сприяє підвищенню рі сконструйованого клостридіального токсину (порівняно з рі ідентичного в усьому іншому
Зо клостридіального токсину, якому не вистачає вказаних амінокислотних модифікацій).
Будь-яку амінокислоту клостридіального токсину (тобто амінокислотний залишок) можна модифікувати як описано вище, до тих пір, поки результатом вказаної модифікації є підвищення рі клостридіального токсину (як описано вище). Однак автори даного винаходу визначили підгрупи амінокислот клостридіальних токсинів, які є особливо придатними мішенями для модифікації.
Переважні амінокислоти-мішені можуть володіти певними якостями. Наприклад, переважною амінокислотою може бути: (ії) поверхнево доступна амінокислота; (ії) розташована на зовнішній поверхні вторинної структури білка клостридіального токсину; (іїї) розташована в ділянці білка клостридіального токсину, яка не є істотно важливою для функції білка; (ім) амінокислота, ідентичність якої не є консервативною серед типів, підтипів або серотипів клостридіального токсину; (ім) амінокислота, модифікація якої не створює прогнозованого сайту убіквітинування; або (м) будь-яка комбінація вищевикладеного.
Як обговорювалося вище, клостридіальні токсини сформовані з двох поліпептидних ланцюгів, важкого ланцюга (Н-ланцюг), який має молекулярну масу приблизно 100 кДа, та легкого ланцюга (І -ланцюг), який має молекулярну масу приблизно 50 кДа. Н-ланцюг містить С- кінцевий націлювальний компонент (рецептор-зв'язувальний домен або домен НС) та М- кінцевий транслокаційний компонент (домен НМ).
В одному варіанті здійснення щонайменше одна амінокислотна модифікація (що описана вище) знаходиться у рецептор-зв'язувальному домені клостридіального токсину (домені НС).
Приклади еталонних послідовностей легкого ланцюга включають: ботулінічний нейротоксин типу А: амінокислотні залишки 1-448, ботулінічний нейротоксин типу В: амінокислотні залишки 1-440, ботулінічний нейротоксин типу С1: амінокислотні залишки 1-441, ботулінічний нейротоксин типу О: амінокислотні залишки 1-445. ботулінічний нейротоксин типу Е: амінокислотні залишки 1-422, ботулінічний нейротоксин типу Е: амінокислотні залишки 1-439, ботулінічний нейротоксин типу С: амінокислотні залишки 1-441, правцевий нейротоксин: амінокислотні залишки 1-457.
Указані вище еталонні послідовності слід розглядати у якості керівництва, так як можуть бо зустрічатися незначні варіації відповідно до підсеротипів. Наприклад, у патентному документі
ОБ 2007/0166332 (включеному у даний документ за допомогою посилання у своєму повному обсязі) викладені дещо інші клостридіальні послідовності: ботулінічний нейротоксин типу А: амінокислотні залишки М1-К4А48, ботулінічний нейротоксин типу В: амінокислотні залишки М1-К441, ботулінічний нейротоксин типу С1: амінокислотні залишки М1-КА49, ботулінічний нейротоксин типу О: амінокислотні залишки М1-Н4А45, ботулінічний нейротоксин типу Е: амінокислотні залишки М1-Н422, ботулінічний нейротоксин типу Е: амінокислотні залишки М1-К439, ботулінічний нейротоксин типу С: амінокислотні залишки М1-К4А46, правцевий нейротоксин: амінокислотні залишки М1-А457.
Приклади еталонних послідовностей домену НС клостридіального токсину включають:
ВоМТ/А - М872-І11296,
ВоМТ/В - Е859-Е1291,
ВоМТ/С1 -М867-Е1291,
ВоМТ/0 - 5863-Е1276,
ВоМТ/Е - Н8В46-К1252,
ВоМт/Е - К865-Е1274,
ВоМт/с - М864-Е1297,
ВОМ - І880-01315.
Домен НС клостридіального токсину (такого як ВоМТ) включає дві відмінні структурні особливості, які називають доменами НСС та НСМ. Амінокислотні залишки, що беруть участь у зв'язуванні рецептора, як вважають, переважно розташовані у домені НСС.
В одному варіанті здійснення, де щонайменше одна амінокислотна модифікація (що описана вище) розташована у рецептор-зв'язувальному домені клостридіального токсину (домен НС), вказана щонайменше одна амінокислотна модифікація знаходиться у домені НСМ клостридіального токсину (який також називають доменом, що сприяє переміщенню). В одному варіанті здійснення, де щонайменше одна амінокислотна модифікація (що описана вище) знаходиться у рецептор-зв'язувальному домені клостридіального токсину (домен НС), вказана щонайменше одна амінокислотна модифікація знаходиться у домені НСС клостридіального
Зо токсину.
Приклади еталонних послідовностей домену НСМ клостридіального токсину включають: ботулінічний нейротоксин типу А: амінокислотні залишки 872-1110, ботулінічний нейротоксин типу В: амінокислотні залишки 859-1097, ботулінічний нейротоксин типу С1: амінокислотні залишки 867-1111, ботулінічний нейротоксин типу О: амінокислотні залишки 863-1098, ботулінічний нейротоксин типу Е: амінокислотні залишки 846-1085, ботулінічний нейротоксин типу Е: амінокислотні залишки 8865-1105, ботулінічний нейротоксин типу С: амінокислотні залишки 864-1105, правцевий нейротоксин: амінокислотні залишки 880-1127.
Положення у зазначених вище послідовностях можуть у незначній мірі варіювати відповідно до серотипу/підтипу, та додаткові приклади придатних (еталонних) доменів НСМ клостридіального токсину включають: ботулінічний нейротоксин типу А: амінокислотні залишки 874-1110, ботулінічний нейротоксин типу В: амінокислотні залишки 8611-1097, ботулінічний нейротоксин типу С1: амінокислотні залишки 869-1111, ботулінічний нейротоксин типу О: амінокислотні залишки 865-1098, ботулінічний нейротоксин типу Е: амінокислотні залишки 848-1085, ботулінічний нейротоксин типу Е: амінокислотні залишки 867-1105, ботулінічний нейротоксин типу С: амінокислотні залишки 866-1105, правцевий нейротоксин: амінокислотні залишки 882-1127.
В одному варіанті здійснення щонайменше одна амінокислотна модифікація (що описана вище) є модифікацією поверхнево доступного амінокислотного залишку. Поверхнево доступні амінокислотні залишки є такими, що присутні на зовнішній поверхні укладеного білка, та тому доступні для оточуючого розчинника, на відміну від тих амінокислотних залишків, які знаходяться у внутрішній частині укладеного білка. Ступінь поверхневої доступності амінокислотного залишку і, таким чином, його доступність для оточуючого розчинника залежить від його положення в укладеному білку, а також від конформації, яку прийняв білок. Отже, модифікація амінокислотного залишку з високим ступенем поверхневої доступності може мати більший вплив на ізоелектричну точку білка, ніж модифікація амінокислотного залишку з 60 низьким ступенем поверхневої доступності. Способи визначення ступеня поверхневої доступності амінокислотного залишку відомі в даній галузі. Наприклад, можна використовувати комп'ютерну програму Агеа!МоОї (частину набору ССРА комп'ютерних програм) для розрахунку ступеня поверхневої доступності амінокислотних залишків у заданому білку. Поверхнево доступні амінокислотні залишки також можна визначити шляхом візуального огляду кристалічної структури білка (наприклад, отриманої за допомогою рентгеноструктурної кристалографії). В одному варіанті здійснення поверхнево доступний амінокислотний залишок має значення суми АгеаІМоОїЇ щонайменше 40.
В одному варіанті здійснення щонайменше одна амінокислотна модифікація містить модифікацію амінокислотного залишку, вибраного з залишку аспарагінової кислоти, залишку глутамінової кислоти, залишку гістидину, залишку серину, залишку треоніну, залишку аспарагіну, залишку глутаміну, залишку цистеїну або залишку тирозину. Автори даного винаходу визначили, що амінокислотні залишки з даної групи (негативно заряджені залишки та полярні залишки) представляють особливо придатні мішені для модифікації відповідно до даного винаходу. Не бажаючи бути пов'язаними будь-якою теорією, автори даного винаходу вважають, що амінокислотні залишки з даної групи з'являються на поверхні клостридіального токсину з більшою частотою, ніж гідрофобні залишки, які не зазначені в списку.
В одному варіанті здійснення, де амінокислотна модифікація містить модифікацію амінокислотного залишку, вибраного з залишку аспарагінової кислоти, залишку глутамінової кислоти, залишку гістидину, залишку серину, залишку треоніну, залишку аспарагіну, залишку глутаміну, залишку цистеїну або залишку тирозину (які описані вище), амінокислотний залишок заміщується залишком лізину або залишком аргініну. Таким чином, в одному варіанті здійснення негативно заряджений залишок або полярний залишок заміщується позитивно зарядженим залишком, таким чином підвищуючи співвідношення позитивних та негативних зарядів та підвищуючи рі клостридіального токсину.
В одному варіанті здійснення щонайменше одна амінокислотна модифікація (яка описана вище) містить модифікацію амінокислотного залишку аспарагіну або амінокислотного залишку глутаміну (обидва незаряджені, полярні залишки). В одному варіанті здійснення амінокислотний залишок аспарагіну або глутаміну заміщується залишком лізину або залишком аргініну (обидва позитивно заряджені залишки). В одному варіанті здійснення амінокислотний залишок
Зо аспарагіну або глутаміну заміщується залишком лізину. В одному варіанті здійснення амінокислотний залишок аспарагіну або глутаміну заміщується залишком аргініну.
Залишки аспарагіну та глутаміну є переважно придатними для модифікації, оскільки вони є полярними, утворюють лише слабкі дипольні взаємодії з іншими залишками та складають 14 95 типової молекули клостридіального токсину (такої як ВОМТ/А).
В одному варіанті здійснення сконструйованим клостридіальним токсином є ВоОоМТ/А.
Еталонна послідовність ВОМТ/А має обліковий номер ОпіРгоїКкВ Р10845.
Автори даного винаходу визначили певні амінокислоти, які представляють переважні мішені для амінокислотної модифікації у клостридіальному токсині ВОМТ/А.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВОоМТ/А, вказаний сконструйований ВоМТ/А містить модифікацію щонайменше однієї (наприклад, щонайменше 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20 або 25) амінокислоти(амінокислот), вибраної(вибраних) з
АБМ 886, АБМ 905, СІ М 915, АБМ 918, СО 920, АБМ 930, А5М 954, 5ЕВН 955, СІМ 991, СГ ОО 992, СІ М 995, АБМ 1006, АБМ 1025, АБМ 1026, АБМ 1032, АБМ 1043, АБМ 1046, А5М 1052, АР 1058, НІ5 1064, АБМ 1080, БІО 1081, ГО 1083, АБР 1086 та СІМ 1229; та вказана(вказані) амінокислотна(амінокислотні) модифікація(модифікації) підвищує(підвищують) ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВоМТ/А до значення, яке є щонайменше на 0,2 (наприклад, щонайменше 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 або 1) одиниці рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому ВоМТ/А, якому не вистачає вказаної(вказаних) амінокислотної(амінокислотних) модифікації модифікацій). В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВоМТ/А, вказаний сконструйований ВоМТ/А містить модифікацію щонайменше однієї (наприклад, щонайменше 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20 або 25) амінокислоти(амінокислот), вибраної(вибраних) з
АБМ 886, АБМ 905, СІ М 915, АБМ 918, СО 920, АБМ 930, А5М 954, 5ЕВН 955,21 М 991, СО 992, СІ М 995, АБМ 1006, АБМ 1025, АБМ 1026, АБМ 1032, АБМ 1043, АБМ 1046, А5М 1052, АР 1058, НІ5 1064, АБМ 1080, 21 ОО 1081, СІ О 1083, АБР 1086, АЗМ 886, АБМ 905, СІ М 915, АБМ 918, ГО 920, А5М 930, А5М 954, ЕН 955, СІ М 991, СІ О 992, СІ М 995, АБМ 1006, АБ5М 1025, 60 АБМ 1026, АБМ 1032, АБМ 1043, АБМ 1046, АБМ 1052, АБР 1058, НІ 1064, А5М 1080, СП ОО
1081, 5 1083, АБР 1086 та СІМ 1229; та вказана(вказані) амінокислотна(амінокислотні) модифікація (модифікації) підвищує(підвищують) ізоелектричну точку (рі) сконструйованого
ВоМТ/А до значення, яке є щонайменше на 0,5 (наприклад, щонайменше 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 або 1) одиниці рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому ВоМТ/А, якому не вистачає вказаної(вказаних) амінокислотної(амінокислотних) модифікаціїїмодифікацій). В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. Воодному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВОоМТ/А, вказаний сконструйований ВоМТ/А містить модифікацію щонайменше однієї (наприклад, щонайменше 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20 або 25) амінокислоти(амінокислот), вибраної(вибраних) з
АБМ 886, АБМ 905, СІ М 915, АБМ 918, СО 920, АБМ 930, А5М 954, 5ЕВН 955, СІМ 991, СГ ОО 992, СІ М 995, АБМ 1006, АБМ 1025, АБМ 1026, АБМ 1032, АБМ 1043, АБМ 1046, А5М 1052, АР 1058, НІ5 1064, АБМ 1080, 50 1081, ГО 1083, АБР 1086 та СІМ 1229; та вказана(вказані) амінокислотна(амінокислотні) модифікація (модифікації) підвищує(підвищують) ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВоМТ/А до значення, яке є щонайменше на одну одиницю рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому ВоМТ/А, якому не вистачає вказаної(вказаних) амінокислотної(амінокислотних) модифікаціїїмодифікацій). В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВоМТ/А, вказаний сконструйований ВоМТ/А містить модифікацію щонайменше однієї (наприклад, щонайменше 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15 або 20) амінокислоти(амінокислот), вибраної(вибраних) з А5М 886, АБМ 905, СІМ 915, АБМ 918, ГО 920, АБМ 930, АБМ 954, 5ЕН 955, СІМ 991, СГ 992,
СІМ 995, АБМ 1006, А5М 1025, АБМ 1026, А5М 1032, АБМ 1043, АБМ 1046, АБМ 1052, АБР 1058,
НІЗ 1064, АБМ 1080, (100 1081, СО 1083 та АБР 1086; та вказана(вказані)
Зо амінокислотна(амінокислотні) модифікація (модифікації) підвищує(підвищують) ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВоМТ/А до значення, яке є щонайменше на одну одиницю рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому ВоМТ/А, якому не вистачає вказаної(вказаних) амінокислотної(амінокислотних) модифікаціїїмодифікацій). В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину.
В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВОоМТ/А, вказаний сконструйований ВоМТ/А містить модифікацію щонайменше однієї (наприклад, щонайменше 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25 або 30) амінокислоти(амінокислот), вибраної(вибраних) з
АБМ 886, АБМ 905, СІ М 915, АБМ 918, СО 920, АБМ 930, А5М 954, 5ЕВН 955, СІМ 991, СГ ОО 992, СІ М 995, АБМ 1006, АБМ 1025, АБМ 1026, АБМ 1032, АБМ 1043, АБМ 1046, А5М 1052, АР 1058, НІ5 1064, А5М 1080, 2 ОО 1081, СІ О 1083, АБР 1086, АБМ 1188, АБР 1213, СІ М 1215, АБМ 1216, ІМ 1229, АБМ 1242, АБМ 1243, 5ЕК 1274 та ТНК 1277; та вказана(вказані) амінокислотна(амінокислотні) модифікація (модифікації) підвищує(підвищують) ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВоМТ/А до значення, яке є щонайменше на 0,2 (наприклад, щонайменше 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 або 1) одиниці рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому ВоМТ/А, якому не вистачає вказаної(вказаних) амінокислотної(амінокислотних) модифікації модифікацій). В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВОоМТ/А, вказаний сконструйований ВоМТ/А містить модифікацію щонайменше однієї (наприклад, щонайменше 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25 або 30) амінокислоти(амінокислот), вибраної(вибраних) з
АБМ 886, АБМ 905, СІ М 915, АБМ 918, СО 920, АБМ 930, А5М 954, 5ЕВН 955, СІМ 991, СГ ОО 992, СІ М 995, АБМ 1006, АБМ 1025, АБМ 1026, АБМ 1032, АБМ 1043, АБМ 1046, А5М 1052, АР 1058, НІ5 1064, А5М 1080, 2 О 1081, СІ О 1083, А5Р 1086, АБМ 1188, АБР 1213, СІ М 1215, АБМ 1216, ІМ 1229, АБМ 1242, АБМ 1243, 5ЕК 1274 та ТНК 1277; та вказана(вказані) бо амінокислотна(амінокислотні) модифікація (модифікації) підвищує(підвищують) ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВоМТ/А до значення, яке є щонайменше на 0,5 (наприклад, щонайменше 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 або 1) одиниці рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому
ВоМТА, якому не вистачає вказаної(вказаних) амінокислотної(амінокислотних) модифікації модифікацій). В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВОоМТ/А, вказаний сконструйований ВоМТ/А містить модифікацію щонайменше однієї (наприклад, щонайменше 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25 або 30) амінокислоти(амінокислот), вибраної(вибраних) з
АБМ 886, АБМ 905, СІ М 915, АБМ 918, ГО 920, АБМ 930, АБМ 954, 5ЕН 955, СІМ 991, ССО 992, СІ М 995, АБМ 1006, АБМ 1025, АБМ 1026, АБМ 1032, АБМ 1043, АБМ 1046, А5М 1052, АР 1058, НІ5 1064, А5М 1080, 2 О 1081, СІ О 1083, АР 1086, АБМ 1188, АБР 1213, СІ М 1215, АБМ 1216, ІМ 1229, АБМ 1242, АБМ 1243, 5ЕК 1274 та ТНК 1277; та вказана(вказані) амінокислотна(амінокислотні) модифікація (модифікації) підвищує(підвищують) ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВОоОМТ/А до значення, яке є щонайменше на 1 одиницю рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому ВоМТ/А, якому не вистачає вказаної(вказаних) амінокислотної(амінокислотних) модифікаціїїмодифікацій). В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину.
В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВОоМТ/А, вказаний сконструйований ВоМТ/А містить модифікацію щонайменше однієї (наприклад, щонайменше 1, 2, 3, 4, 5 або 6) амінокислоти(амінокислот), вибраної(вибраних) з АЗМ 886, АЗМ 930, ЗЕК 955, СІМ 991, АБМ 1026, АБМ 1052 або СІМ 1229; та вказана(вказані) амінокислотна(амінокислотні) модифікація (модифікації) підвищує(підвищують) ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВоМТ/А до значення, яке є щонайменше на 0,2 (наприклад, щонайменше 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 або 1) одиниці рі вищим за рі ідентичного в
Зо усьому іншому ВОоМТ/А, якому не вистачає вказаної(вказаних) амінокислотної(амінокислотних) модифікації модифікацій). В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВОоМТ/А, вказаний сконструйований ВоМТ/А містить модифікацію щонайменше однієї (наприклад, щонайменше 1, 2, 3, 4, 5 або 6) амінокислоти(амінокислот), вибраної(вибраних) з А5М 886, АЗМ 930, ЕК 955, СІМ 991, АБМ 1026, АБМ 1052 або СІМ 1229; та вказана(вказані) амінокислотна(амінокислотні) модифікація (модифікації) підвищує(підвищують) ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВоМТ/А до значення, яке є щонайменше на 0,5 (наприклад, щонайменше 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 або 1) одиниці рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому
ВоМТА, якому не вистачає вказаної(вказаних) амінокислотної(амінокислотних) модифікації модифікацій). В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВОоМТ/А, вказаний сконструйований ВоМТ/А містить модифікацію щонайменше однієї (наприклад, щонайменше 1, 2, 3, 4, 5 або 6) амінокислоти(амінокислот), вибраної(вибраних) з А5М 886, АЗМ 930, БЕН 955, СІМ 991, АБМ 1026, АБМ 1052 або СІМ 1229; та вказана(вказані) амінокислотна(амінокислотні) модифікація (модифікації) підвищує(підвищують) ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВоМТ/А до значення, яке є щонайменше на одну одиницю рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому ВоМТ/А, якому не вистачає вказаної(вказаних) амінокислотної(амінокислотних) модифікаціїїмодифікацій). В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВОоМТ/А, бо вказаний сконструйований ВоМТ/А містить модифікацію наступних семи амінокислот: АБМ 886,
АЗМ 930, ЗЕК 955, ІМ 991, АЗМ 1026, АБМ 1052 або СІМ 1229; та вказані амінокислотні модифікації підвищують ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВОоМТ/А до значення, яке є щонайменше на 0,2 (наприклад, щонайменше 0,2,0,3,0,4,0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 або 1) одиниці рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому ВоМТ/А, якому не вистачає вказаних амінокислотних модифікацій. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВОоМТ/А, вказаний сконструйований ВоМТ/А містить модифікацію наступних семи амінокислот: АБМ 886,
АЗМ 930, 5ЕК 955, ІМ 991, АЗМ 1026, АБМ 1052, або СІМ 1229; та вказані амінокислотні модифікації підвищують ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВоМТ/А до значення, яке є щонайменше на 0,5 (наприклад, щонайменше 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 або 1) одиниці рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому ВоМТ/А, якому не вистачає вказаних амінокислотних модифікацій.
В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВОоМТ/А, вказаний сконструйований ВоМТ/А містить модифікацію наступних семи амінокислот: АБМ 886,
АБМ 930, БЕК 955, СІМ 991, АБМ 1026, АБМ 1052; та вказані амінокислотні модифікації підвищують ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВоМТ/А до значення, яке є щонайменше на одну одиницю рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому ВоМТ/А, якому не вистачає вказаних амінокислотних модифікацій. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВОоМТ/А, вказаний сконструйований ВоМТ/А містить модифікацію щонайменше однієї (наприклад,
Зо щонайменше 1, 2, 3, 4, 5 або 6) амінокислоти(амінокислот), вибраної(вибраних) з АЗМ 930, АЗМ 954, ЗЕК 955, СІМ 991, АБМ 1026, АБМ 1052 або СІМ 1229; та вказана(вказані) амінокислотна(амінокислотні) модифікація (модифікації) підвищує(підвищують) ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВоМТ/А до значення, яке є щонайменше на 0,2 (наприклад, щонайменше 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 або 1) одиниці рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому ВОоМТ/А, якому не вистачає вказаної(вказаних) амінокислотної(амінокислотних) модифікації модифікацій). В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВОоМТ/А, вказаний сконструйований ВоМТ/А містить модифікацію щонайменше однієї (наприклад, щонайменше 1, 2, 3, 4, 5 або 6) амінокислоти(амінокислот), вибраної(вибраних) з А5М 930, А5М 954, ЗЕК 955, СІМ 991, АБМ 1026, АБМ 1052 або СІМ 1229; та вказана(вказані) амінокислотна(амінокислотні) модифікація (модифікації) підвищує(підвищують) ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВоМТ/А до значення, яке є щонайменше на 0,5 (наприклад, щонайменше 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 або 1) одиниці рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому
ВоМТА, якому не вистачає вказаної(вказаних) амінокислотної(амінокислотних) модифікації модифікацій). В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВОоМТ/А, вказаний сконструйований ВоМТ/А містить модифікацію щонайменше однієї (наприклад, щонайменше 1, 2, 3, 4, 5 або 6) амінокислоти(амінокислот), вибраної(вибраних) з А5М 930, А5М 954, ЗЕК 955, СІМ 991, АБМ 1026, АБМ 1052 або СІМ 1229; та вказана(вказані) амінокислотна(амінокислотні) модифікація (модифікації) підвищує(підвищують) ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВОМТ/А до значення, яке є щонайменше на одну одиницю рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому ВоМТ/А, якому не вистачає вказаної(вказаних) амінокислотної(амінокислотних) модифікаціїїмодифікацій). В одному варіанті здійснення бо вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВОоМТ/А, вказаний сконструйований ВоМТ/А містить модифікацію наступних семи амінокислот: АБМ 930,
АЗМ 954, ЗЕК 955, ІМ 991, АЗМ 1026, АБМ 1052 або СІМ 1229; та вказані амінокислотні модифікації підвищують ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВоМТ/А до значення, яке є щонайменше на 0,2 (наприклад, щонайменше 0,2,0,3,0,4,0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 або 1) одиниці рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому ВоМТ/А, якому не вистачає вказаних амінокислотних модифікацій. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. Воодному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВОоМТ/А, вказаний сконструйований ВоМТ/А містить модифікацію наступних семи амінокислот: АБМ 930,
АЗМ 954, ЗЕК 955, ІМ 991, АЗМ 1026, АБМ 1052 або СІМ 1229; та вказані амінокислотні модифікації підвищують ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВоМТ/А до значення, яке є щонайменше на 0,5 (наприклад, щонайменше 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 або 1) одиниці рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому ВоМТ/А, якому не вистачає вказаних амінокислотних модифікацій.
В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВОоМТ/А, вказаний сконструйований ВоМТ/А містить модифікацію наступних семи амінокислот: АБМ 930,
АЗМ 954, ЗЕК 955, ІМ 991, АЗМ 1026, АБМ 1052 або СІМ 1229; та вказані амінокислотні модифікації підвищують ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВОоМТ/А до значення, яке є щонайменше на одну одиницю рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому ВоМТ/А, якому не вистачає вказаних амінокислотних модифікацій. В одному варіанті здійснення вказана
Зо модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВоМТ/А, вказаний сконструйований ВоМТ/А містить модифікацію щонайменше однієї (наприклад, щонайменше 1, 2, 3, 4, 5 або 6) амінокислоти(амінокислот), вибраної(вибраних) з АЗМ 930, 5ЕК 955, СІМ 991, АБМ 1025, АЗМ 1026, АБМ 1052 або СІМ 1229; та вказана(вказані) амінокислотна(амінокислотні) модифікація (модифікації) підвищує(підвищують) ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВоМТ/А до значення, яке є щонайменше на 0,2 (наприклад, щонайменше 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 або 1) одиниці рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому ВОоМТ/А, якому не вистачає вказаної(вказаних) амінокислотної(амінокислотних) модифікації модифікацій). В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВоМТ/А, вказаний сконструйований ВоМТ/А містить модифікацію щонайменше однієї (наприклад, щонайменше 1, 2, 3, 4, 5 або 6) амінокислоти(амінокислот), вибраної(вибраних) з А5М 930, ЗЕ 955, СІМ 991, АБМ 1025, АЗМ 1026, АБМ 1052 або СІМ 1229; та вказана(вказані) амінокислотна(амінокислотні) модифікація (модифікації) підвищує(підвищують) ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВоМТ/А до значення, яке є щонайменше на 0,5 (наприклад, щонайменше 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 або 1) одиниці рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому
ВоМТА, якому не вистачає вказаної(вказаних) амінокислотної(амінокислотних) модифікації модифікацій). В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВОоМТ/А, вказаний сконструйований ВоМТ/А містить модифікацію щонайменше однієї (наприклад, щонайменше 1, 2, 3, 4, 5 або 6) амінокислоти(амінокислот), вибраної(вибраних) з А5М 930, ЗЕ 60 955, СІМ 991, АБМ 1025, АЗМ 1026, АБМ 1052 або СІМ 1229; та вказана(вказані)
амінокислотна(амінокислотні) модифікація (модифікації) підвищує(підвищують) ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВоМТ/А до значення, яке є щонайменше на одну одиницю рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому ВоМТ/А, якому не вистачає вказаної(вказаних) амінокислотної(амінокислотних) модифікаціїїмодифікацій). В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВОоМТ/А, вказаний сконструйований ВоМТ/А містить модифікацію наступних семи амінокислот: АБМ 930,
ЗЕН 955, СІ М 991, АБМ 1025, АБМ 1026, А5М 1052,А5М 930, ЕВ 955, СІ М 991, АБМ 1025, АБМ 1026, АБМ 1052 або СІ М 1229; та вказані амінокислотні модифікації підвищують ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВоМТ/А до значення, яке є щонайменше на 0,2 (наприклад, щонайменше 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 або 1) одиниці рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому ВоМТ/А, якому не вистачає вказаних амінокислотних модифікацій. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВОоМТ/А, вказаний сконструйований ВоМТ/А містить модифікацію наступних семи амінокислот: АЗМ 930,
ЗЕК 955, ІМ 991, АЗМ 1025, АБМ 1026, АБМ 1052 або СІ М 1229; та вказані амінокислотні модифікації підвищують ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВоМТ/А до значення, яке є щонайменше на 0,5 (наприклад, щонайменше 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 або 1) одиниці рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому ВоМТ/А, якому не вистачає вказаних амінокислотних модифікацій.
В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВОоМТ/А, вказаний сконструйований ВоМТ/А містить модифікацію наступних семи амінокислот: АЗМ 930,
ЗЕН 955, СІМ 991, АЗМ 1025, АБМ 1026, АБМ 1052 або СІ М 1229; та вказані амінокислотні модифікації підвищують ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВоМТ/А до значення, яке є щонайменше на одну одиницю рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому ВоМТ/А, якому не вистачає вказаних амінокислотних модифікацій. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину.
В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВОоМТ/А, вказаний сконструйований ВоМТ/А містить модифікацію щонайменше однієї (наприклад, щонайменше 1, 2, 3, 4, 5, 6 або 7) амінокислоти(амінокислот), вибраної(вибраних) з АБМ 1188,
АЗР 1213, СІ М 1215, АЗМ 1216, АЗМ 1242, АЗМ 1243, ЗЕК 1274, ТНЕ 1277; та вказана(вказані) амінокислотна(амінокислотні) модифікація (модифікації) підвищує(підвищують) ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВоМТ/А до значення, яке є щонайменше на 0,2 (наприклад, щонайменше 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 або 1) одиниці рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому ВоМТ/А, якому не вистачає вказаної(вказаних) амінокислотної(амінокислотних) модифікації модифікацій). В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВОоМТ/А, вказаний сконструйований ВоМТ/А містить модифікацію щонайменше однієї (наприклад, щонайменше 1, 2, 3, 4, 5, 6 або 7) амінокислоти(амінокислот), вибраної(вибраних) з АБМ 1188,
АБР 1213, СІ М 1215, АБМ 1216, АБМ 1242, АБ5М 1243, БЕК 1274, ТНК 1277; та вказана(вказані) амінокислотна(амінокислотні) модифікація (модифікації) підвищує(підвищують) ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВоМТ/А до значення, яке є щонайменше на 0,5 (наприклад, щонайменше 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 або 1) одиниці рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому
ВоМТА, якому не вистачає вказаної(вказаних) амінокислотної(амінокислотних) бо модифікації(модифікацій). В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВОоМТ/А, вказаний сконструйований ВоМТ/А містить модифікацію щонайменше однієї (наприклад, щонайменше 1, 2, 3, 4, 5, 6 або 7) амінокислоти(амінокислот), вибраної(вибраних) з АБМ 1188,
АЗР 1213, СІ М 1215, АЗМ 1216, АЗМ 1242, АЗМ 1243, ЗЕК 1274, ТНЕ 1277; та вказана(вказані) амінокислотна(амінокислотні) модифікація (модифікації) підвищує(підвищують) ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВоМТ/А до значення, яке є щонайменше на одну одиницю рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому ВоМтТ/А, якому не вистачає вказаної(вказаних) амінокислотної(амінокислотних) модифікації модифікацій). Водному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. Воодному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВОоМТ/А, вказаний сконструйований ВоМТ/А містить модифікацію наступних восьми амінокислот: АБЗМ 1188, АБР 1213, СІ М 1215, АБМ 1216, АБМ 1242, АБМ 1243, ЕК 1274, ТНК 1277; та вказані амінокислотні модифікації підвищують ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВоОМТ/А до значення, яке є щонайменше на 0,2 (наприклад, щонайменше 0,2,0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 або 1) одиниці рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому ВОоМТ/А, якому не вистачає вказаних амінокислотних модифікацій. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВОоМТ/А, вказаний сконструйований ВоМТ/А містить модифікацію наступних восьми амінокислот: АЗМ 1188, АБР 1213, СІМ 1215, АЗМ 1216, АЗМ 1242, АБМ 1243, 5ЕК 1274, ТНЕ 1277; та вказані амінокислотні модифікації підвищують ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВоОМТ/А до значення, яке є щонайменше на 0,5 (наприклад, щонайменше 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 або 1) одиниці рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому ВОоМТ/А, якому не вистачає вказаних амінокислотних модифікацій. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВОоМТ/А, вказаний сконструйований ВоМТ/А містить модифікацію наступних восьми амінокислот: АБЗМ 1188, АБР 1213, СІМ 1215, АЗМ 1216, АЗМ 1242, АБМ 1243, 5ЕК 1274, ТНЕ 1277; та вказані амінокислотні модифікації підвищують ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВоОМТ/А до значення, яке є щонайменше на одну одиницю рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому
ВоОМТ/А, якому не вистачає вказаних амінокислотних модифікацій. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВОоМТ/А, вказаний сконструйований ВоМТ/А містить модифікацію щонайменше однієї (наприклад, щонайменше 1, 2, 3, 4, 5, 6 або всіх 7) амінокислоти(амінокислот), вибраної(вибраних) з АБМ 930, 5ЕК 955, ІМ 991, АБМ 1026, АЗМ 1052, НІ5 1064, та СІ М 1229; та вказана(вказані) амінокислотна(амінокислотні) модифікація (модифікації) підвищує(підвищують) ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВоМТ/А до значення, яке є щонайменше на одну одиницю рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому ВоМТ/А, якому не вистачає вказаної(вказаних) амінокислотної(амінокислотних) модифікаціїїмодифікацій). В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину.
В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВоОоМТ/А, вказаний сконструйований ВоМТ/А містить модифікацію щонайменше однієї (наприклад, 60 щонайменше 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 або всіх 11) амінокислоти(амінокислот),
вибраної(вибраних) з АЗМ 886, АБМ 930, АЗМ 954, 5ЕН 955, СІ М 991, АБМ 1026, АЗМ 1052, НІ 1064, АБМ 1080, АБМ 1147 та СІМ 1229; та вказана(вказані) амінокислотна(амінокислотні) модифікація (модифікації) підвищує(підвищують) ізоелектричну точку (рі) сконструйованого
ВоМТ/А до значення, яке є щонайменше на одну одиницю рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому ВоМТ/А, якому не вистачає вказаної(вказаних) амінокислотної(амінокислотних) модифікації модифікацій). В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВоОоМТ/А, вказаний сконструйований ВоМТ/А містить модифікацію щонайменше однієї (наприклад, щонайменше 1, 2, 3, 4, 5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 або всіх 13) амінокислоти(амінокислот), вибраної(вибраних) з АЗМ 886, АЗМ 905, АЗМ 930, АБМ 954, 5ЕНВ 955, СІ М 991, АБМ 1025, АБМ 1026, АБМ 1052, НІ5Б 1064, АБМ 1080, АЗМ 1147 та СІМ 1229; та вказана(вказані) амінокислотна(амінокислотні) модифікація (модифікації) підвищує(підвищують) ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВоМТ/А до значення, яке є щонайменше на одну одиницю рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому ВоМТ/А, якому не вистачає вказаної(вказаних) амінокислотної(амінокислотних) модифікаціїїмодифікацій). В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. Воодному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення сконструйованим клостридіальним токсином є ВоМТ/В.
Еталонна послідовність ВОМТ/В має обліковий номер ОпіРгоїкВ Р10844.
Автори даного винаходу визначили певні амінокислоти, які представляють переважні мішені для амінокислотної модифікації у клостридіальному токсині ВОМТ/В.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВОоМТ/В, вказаний сконструйований ВоМтТ/В містить модифікацію щонайменше однієї (наприклад, щонайменше 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20 або 25) амінокислоти, вибраної з А5М 873, АБМ 874, ОГО 892, АБР 895, АБМ 906, АР 940, АБМ 948, СИ Ш 949, АБМ 958, АБМ 959, АБМ 979, АБМ 990, СИ 993, АБР 994, С Ш 997, АБМ 1012, АБМ 1019, АБР 1030, АБР 1047, АБР 1049, 2 ОО 1065, СО 1072, СІМ 1176, 100 01189, СО 01252 та АЗМ 1273; та вказана(вказані) амінокислотна(амінокислотні) модифікація (модифікації) підвищує(підвищують) ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВоМТ/В до значення, яке є щонайменше на 0,2 (наприклад, щонайменше 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 або 1) одиниці рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому ВоМТ/В, якому не вистачає вказаної(вказаних) амінокислотної(амінокислотних) модифікації модифікацій). В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВоМТ/В, вказаний сконструйований ВоМтТ/В містить модифікацію щонайменше однієї (наприклад, щонайменше 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20 або 25) амінокислоти, вибраної з АБМ 873, АЗМ 874, СИ 892, АБР 895, АБМ 906, АБ5Р 940, АБМ 948, СІ 0 949, А5М 958, АЗМ 959, АБМ 979, АБМ 990, СИ ОО 993, АБР 994, С Ш 997, АБМ 1012, АБМ 1019, АБР 1030, АБР 1047, АБР 1049, 2 ОО 1065, СО 1072, СІМ 1 176, 100 01 189, 610 1252 та А5ЗМ 1273; та вказана(вказані) амінокислотна(амінокислотні) модифікація (модифікації) підвищує(підвищують) ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВоМТ/В до значення, яке є щонайменше на 0,5 (наприклад, щонайменше 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 або 1) одиниці рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому
ВоМт/В, якому не вистачає вказаної(вказаних) амінокислотної(амінокислотних) модифікації модифікацій). В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВОоМТ/В, вказаний сконструйований ВоМтТ/В містить модифікацію щонайменше однієї (наприклад, щонайменше 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20 або 25) амінокислоти, вибраної з АБМ 873, АЗМ 874, СИ 892, АБР 895, АБМ 906, АБ5Р 940, АБМ 948, С 0 949, А5М 958, АЗМ 959, АБМ 979, АБМ 990, С 993, АБР 994, С Ш 997, АБМ 1012, АБМ 1019, АБР 1030, АР 1047, АБР 1049, СГ ОО 1065, СІ О 60 1072, СІМ 1 176, ОО 01 189, 610 01252 та АБМ 1273; та вказана(вказані)
амінокислотна(амінокислотні) модифікація (модифікації) підвищує(підвищують) ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВоМТ/В до значення, яке є щонайменше на одну одиницю рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому ВоМТтТ/В, якому не вистачає вказаної(вказаних) амінокислотної(амінокислотних) модифікаціїїмодифікацій). В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення сконструйованим клостридіальним токсином є ВоМТт/С1.
Еталонна послідовність ВОМТ/С1 має обліковий номер ОпіРгоїкВ Р18640.
Автори даного винаходу визначили певні амінокислоти, які представляють переважні мішені для амінокислотної модифікації у клостридіальному токсині ВОМТ/С1.
Таким чином, в одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВоМТ/С1, вказаний сконструйований ВоМТ/С1 містить модифікацію щонайменше однієї (наприклад, щонайменше 1, 2, 3, 4, 5, 10 або 15) амінокислоти, вибраної з А5М 881, А5Р 898,
СГ 916, 20 927, АБМ 952, АБМ 964, АБМ 965, А5М 984, СІ 0 985, АБР 986, АБР 996, АБМ 1000, БІО 1036, АЗМ 1041, АБР 1062, АБР 1064, 5100) 1079 та АБР 1081; та вказана амінокислотна модифікація(амінокислотні модифікації) підвищує(підвищують) ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВоМТ/С1 до значення, яке є щонайменше на 0,2 (наприклад, щонайменше 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 або 1) одиниці рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому ВоМТ/Сі, якому не вистачає вказаної амінокислотної(амінокислотних) модифікації модифікацій). В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
Таким чином, в одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВоМТ/С1, вказаний сконструйований ВоМТ/С1 містить модифікацію щонайменше однієї (наприклад, щонайменше 1, 2, 3, 4, 5, 10 або 15) амінокислоти, вибраної з А5М 881, А5Р 898,
СО 916, ГО 927, АБМ 952, АБМ 964, АБМ 965, А5М 984, 21 985, АР 986, АБР 996, АБМ
Зо 1000, ГО 1036, АБМ 1041, АБР 1062, АБР 1064, БІ Ш 1079 та АБ5БР 1081; та вказана(вказані) амінокислотна(амінокислотні) модифікація (модифікації) підвищує(підвищують) ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВоМТ/С1 до значення, яке є щонайменше на 0,5 (наприклад, щонайменше 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 або 1) одиниці рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому
ВоМТ/С1, якому не вистачає вказаної(вказаних) амінокислотної(амінокислотних) модифікації(модифікацій). В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВоМТ/С1, вказаний сконструйований ВоМТ/С1 містить модифікацію щонайменше однієї (наприклад, щонайменше 1, 2, 3, 4, 5, 10 або 15) амінокислоти, вибраної з АБМ 881, АБР 898, ЗО 916, Гу 927, АБМ 952, АБМ 964, АБМ 965, А5М 984, СІ 0 985, АБР 986, АБР 996, А5БМ 1000, С О 1036,
АБМ 1041, АБР 1062, АБР 1064, СИ 1079, та АБР 1081; та вказана(вказані) амінокислотна(амінокислотні) модифікація (модифікації) підвищує(підвищують) ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВоМТ/С1 до значення, яке є щонайменше на одну одиницю рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому ВоМТ/С1, якому не вистачає вказаної(вказаних) амінокислотної(амінокислотних) модифікаціїїмодифікацій). В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення сконструйованим клостридіальним токсином є ВоМТ/О.
Еталонна послідовність ВОМТ/О має обліковий номер ОпіРгоїКкВ Р19321.
Автори даного винаходу визначили певні амінокислоти, які представляють переважні мішені для амінокислотної модифікації у клостридіальному токсині ВОМТ/О.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВоМТ/О, вказаний сконструйований ВоМТ/О містить модифікацію щонайменше однієї (наприклад, щонайменше 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15 або 20) амінокислоти, вибраної з А5М 877, АБР 893, АБМ 894,
АБМ 898, АБМ 920, А5М 945, АБМ 948, 21 957, СІ М 958, АБМ 959, АБМ 968, АБЗМ 979, СП О 60 1030, АБР 1031, АБР 1033, СО 1047, Б 1051, АБМ 1052, ОЦ 1066 та СІ М 1122; та вказана амінокислотна модифікація(амінокислотні модифікації) підвищує(підвищують) ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВоМТ/О до значення, яке є щонайменше на 0,2 (наприклад, щонайменше 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 або 1) одиниці рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому ВоМТ/О, якому не вистачає вказаної амінокислотної(амінокислотних) модифікації(модифікацій). В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВоМТ/О, вказаний сконструйований ВоМТ/О містить модифікацію щонайменше однієї (наприклад, щонайменше 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15 або 20) амінокислоти, вибраної з А5М 877, АР 893, АБМ 894,
АБМ 898, АБМ 920, А5М 945, АБМ 948, СІ ОО 957, СІМ 958, А5М 959, АБМ 968, АБМ 979, СИ О 1030, АБР 1031, АБР 1033, 5 1047, 5 О 1051, АБМ 1052, БІО 1066 та СІМ 1122; та вказана(вказані) амінокислотна(амінокислотні) модифікація (модифікації) підвищує(підвищують) ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВоМТ/О до значення, яке є щонайменше на 0,5 (наприклад, щонайменше 0,5, 0,6, 0,7, 0,68, 0,9 або 1) одиниці рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому ВоМТ/О, якому не вистачає вказаної(вказаних) амінокислотної(амінокислотних) модифікації модифікацій). В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВоМТ/О, вказаний сконструйований ВоМТ/О містить модифікацію щонайменше однієї (наприклад, щонайменше 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15 або 20) амінокислоти, вибраної з А5М 877, АБР 893, АБМ 894,
АБМ 898, АБМ 920, А5М 945, АБМ 948, СІ ОО 957, СІМ 958, А5М 959, АБМ 968, АБМ 979, СИ О 1030, АБР 1031, АБР 1033, 510 1047, БО 1051, А5М 1052, БІО 1066 та СІМ 1122; та вказана(вказані) амінокислотна(амінокислотні) модифікація (модифікації) підвищує(підвищують) ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВоОМТ/О до значення, яке є щонайменше на одну одиницю рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому ВоМтТ/О, якому не вистачає
Зо вказаної(вказаних) амінокислотної(амінокислотних) модифікації модифікацій). В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення сконструйованим клостридіальним токсином є ВоМТт/Е.
Еталонна послідовність ВОМТ/Е має обліковий номер ОпіРгоїкВ 2000496.
Автори даного винаходу визначили певні амінокислоти, які представляють переважні мішені для амінокислотної модифікації у клостридіальному токсині ВОМТ/Е.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВОоМТ/Е, вказаний сконструйований ВоМТ/Е містить модифікацію щонайменше однієї (наприклад, щонайменше 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20 або 25) амінокислоти, вибраної з А5М 859, АБР 860, АБМ 892, АБР 893, АБР 904, АБ5Р 909, АБМ 928, АБМ 932, АБМ 934, АБМ 935, СІ ШО 936, АБР 945, АБМ 946, АБМ 947, А5М 966, АБМ 976, АБМ 979, АБМ 981, АБР 985, 1 М 1014, АБМ 1019, АБМ 1022,
АБР 1027, АБМ 1035 та вказана амінокислотна модифікація(амінокислотні модифікації) підвищує(підвищують) ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВоОМТ/Е до значення, яке є щонайменше на 0,2 (наприклад, щонайменше 0,2,0,3,0,4,0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 або 1) одиниці рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому ВоМТ/Е, якому не вистачає вказаної(вказаних) амінокислотної(амінокислотних) модифікаціїїмодифікацій). В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну.
Воодному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВОМТ/Е, вказаний сконструйований ВоМТ/Е містить модифікацію щонайменше однієї (наприклад, щонайменше 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20 або 25) амінокислоти, вибраної з А5М 859, АБР 860, АБМ 892, АБР 893, АБР 904, АР 909, АБМ 928, АЗМ 932, АБМ 934, АБМ 935, С ШО 936, АБР 945, АБМ 946, АБМ 947, А5М 966, АБМ 976, АБМ 979, АБМ 981, АР 985, СІ М 1014, АБМ 1019, АБМ 1022,
АБР 1027, АБМ 1035 та АБМ 1140; та вказана(вказані) амінокислотна(амінокислотні) модифікація (модифікації) підвищує(підвищують) ізоелектричну точку (рі) сконструйованого 60 ВОМ /Е до значення, яке є щонайменше на 0,5 (наприклад, щонайменше 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 або 1) одиниці рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому ВоМТ/Е, якому не вистачає вказаної(вказаних) амінокислотної(амінокислотних) модифікаціїмодифікацій). В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВОМТ/Е, вказаний сконструйований ВоМТ/Е містить модифікацію щонайменше однієї (наприклад, щонайменше 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20 або 25) амінокислоти, вибраної з А5М 859, АБР 860, АБМ 892, АБР 893, АБР 904, АР 909, АБМ 928, АЗМ 932, АБМ 934, АБМ 935, С ШО 936, АР 945, АБМ 946, АБМ 947, А5М 966, АБМ 976, АБМ 979, АБМ 981, АБР 985, 1 М 1014, АБМ 1019, АБМ 1022,
АБР 1027, АБМ 1035 та АБМ 1140; та вказана(вказані) амінокислотна(амінокислотні) модифікація (модифікації) підвищує(підвищують) ізоелектричну точку (рі) сконструйованого
ВОМ /Е до значення, яке є щонайменше на одну одиницю рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому ВоМТ/Е, якому не вистачає вказаної(вказаних) амінокислотної(амінокислотних) модифікації модифікацій). В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення сконструйованим клостридіальним токсином є ВоМтТ/кг.
Еталонна послідовність ВОМТ/Е має обліковий номер ОпіРгоїКкВ УР 001390123.
Автори даного винаходу визначили певні амінокислоти, які представляють переважні мішені для амінокислотної модифікації у клостридіальному токсині ВОМТ/Е.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВоОоМТ/Е, вказаний сконструйований ВоМТ/Е містить модифікацію щонайменше однієї (наприклад, щонайменше 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15 або 20) амінокислоти, вибраної з А5М 879, АБР 896, АБМ 922,
АБМ 923, АБМ 928, АЗМ 947, АБМ 950, А5М 952, АБМ 953, СІ ШО 954, АБМ 963, АБМ 964, АБ5М 965, АБМ 987, БІ М 997, АБМ 1037, АБР 1040, АЗР 1045, АБМ 1055 та АБР 1056; та вказана амінокислотна модифікація(амінокислотні модифікації) підвищує(підвищують) ізоелектричну
Зо точку (рі) сконструйованого ВоМТ/Е до значення, яке є щонайменше на 0,2 (наприклад, щонайменше 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 або 1) одиниці рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому ВоМТ/Е, якому не вистачає вказаної(вказаних) амінокислотної(амінокислотних) модифікації модифікацій). В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВОМТ/Е, вказаний сконструйований ВоМТтТ/Е містить модифікацію щонайменше однієї (наприклад, щонайменше 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15 або 20) амінокислоти, вибраної з А5М 879, АБР 896, АБМ 922,
АБМ 923, АБМ 928, АЗМ 947, АБМ 950, АБМ 952, АБМ 953, 1 ШО 954, АБМ 963, АБМ 964, АБМ 965, АЗМ 987, ІМ 997, АЗМ 1037, АБР 1040, АБР 1045, А5ЗМ 1055 та АБР 1056; та вказана(вказані) амінокислотна(амінокислотні) модифікація (модифікації) підвищує(підвищують) ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВоОМТ/Е до значення, яке є щонайменше на 0,5 (наприклад, щонайменше 0,5, 0,6, 0,7, 0,68, 0,9 або 1) одиниці рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому ВоМТ/Е, якому не вистачає вказаної(вказаних) амінокислотної(амінокислотних) модифікації модифікацій). В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВоОоМТ/Е, вказаний сконструйований ВоМТтТ/Е містить модифікацію щонайменше однієї (наприклад, щонайменше 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15 або 20) амінокислоти, вибраної з А5М 879, АБР 896, АЗМ 922,
АБМ 923, АБМ 928, АЗМ 947, АБМ 950, А5М 952, АБМ 953, СІ ШО 954, АБМ 963, АБМ 964, АБ5М 965, АЗМ 987, ІМ 997, АЗМ 1037, АБР 1040, АБР 1045, А5ЗМ 1055 та АБР 1056; та вказана(вказані) амінокислотна(амінокислотні) модифікація (модифікації) підвищує(підвищують) ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВоОМТ/Е до значення, яке є щонайменше на одну одиницю рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому ВоМТ/Е, якому не вистачає вказаної(вказаних) амінокислотної(амінокислотних) модифікаціїмодифікацій). В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком бо аргініну. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення сконструйованим клостриді(альним токсином є ВоМТ/(5.
Еталонна послідовність ВОМТ/5 має обліковий номер ОпіРгоїКкВ 060393.
Автори даного винаходу визначили певні амінокислоти, які представляють переважні мішені для амінокислотної модифікації у клостридіальному токсині ВОМТ/5.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВоМТ/, вказаний сконструйований ВоМТ/5 містить модифікацію щонайменше однієї (наприклад, щонайменше 1, 2, 3, 4, 5, 10 або 15) амінокислоти, вибраної з АБР 900, АБМ 909, АЗМ 910, СГ Ш 912, АБ5М 913, АБМ 945, АБМ 947, 1 0 956, АБМ 965, АБР 966, АЗМ 986, АБМ 1001, АБМ 1038,
АБР 1040, А5М 1046, АБР 1057, І ОО 1073, АБМ 1075 та АЗМ 1090; та вказана амінокислотна модифікація(амінокислотні модифікації) підвищує(підвищують) ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВоМТ/5 до значення, яке є щонайменше на 0,2 (наприклад, щонайменше 0,2, 0,3,0,4,0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 або 1) одиниці рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому ВОМТ/, якому не вистачає вказаної(вказаних) амінокислотної(амінокислотних) модифікації модифікацій). В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВоМТ/5, вказаний сконструйований ВоМТ/З містить модифікацію щонайменше однієї (наприклад, щонайменше 1, 2, 3, 4, 5, 10 або 15) амінокислоти, вибраної з АБР 900, АБМ 909, АЗМ 910, СГ Ш 912, АБМ 913, АБМ 945, АБМ 947, СІ ШО 956, АБМ 965, АБР 966, АБМ 986, АБМ 1001, А5М 1038,
АБР 1040, АЗМ 1046, АБР 1057, 5(И 1073, АЗМ 1075 та АЗМ 1090; та вказана(вказані) амінокислотна(амінокислотні) модифікація (модифікації) підвищує(підвищують) ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВоМТ/З до значення, яке є щонайменше на 0,5 (наприклад, щонайменше 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 або 1) одиниці рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому
ВоМт/б, якому не вистачає вказаної(вказаних) амінокислотної(амінокислотних) модифікації модифікацій). В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну
Зо амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ВоМТ/, вказаний сконструйований ВоМТ/З містить модифікацію щонайменше однієї (наприклад, щонайменше 1, 2, 3, 4, 5, 10 або 15) амінокислоти, вибраної з АБР 900, АБМ 909, АБМ 910, СИ 912, АБ5М 913, АБМ 945, АБМ 947, 1 0 956, АБМ 965, АБР 966, АЗМ 986, АБМ 1001, АБМ 1038,
АБР 1040, АЗМ 1046, АБР 1057, 5(И 1073, АЗМ 1075 та АЗМ 1090; та вказана(вказані) амінокислотна(амінокислотні) модифікація(модифікації) підвищує(підвищують) ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ВоМТ/З до значення, яке є щонайменше на одну одиницю рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому ВоМтТ/5, якому не вистачає вказаної(вказаних) амінокислотної(амінокислотних) модифікаціїмодифікацій). В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину.
В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення сконструйованим клостридіальним токсином є ТеМТ. Еталонна послідовність ТеМмТтТ має обліковий номер ОпіРгоїкВ РО4958.
Автори даного винаходу визначили певні амінокислоти, які представляють переважні мішені для амінокислотної модифікації у клостридіальному токсині ТемтТ.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ТемТтТ, вказаний сконструйований ТемМмт містить модифікацію щонайменше однієї (наприклад, щонайменше 1, 2, 3, 4, 5, 10 або 15) амінокислоти, вибраної з А5М 893, АБР 894, АБР 911, А5М 919, АБМ 927, АБМ 928, 21 Ш 929, СІ М 968, АЗМ 972, 210 973, 21 О 1010, АБР 1018, АБ5М 1079,
АБМ 1080, АБМ 1081 та АБМ 1097; та вказана амінокислотна модифікація(амінокислотні модифікації) підвищує(підвищують) ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ТемМт до значення, яке є щонайменше на 0,2 (наприклад, щонайменше 0,2,0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 або 1) одиниці рІ вищим за рі ідентичного в усьому іншому ВоМТ/5, якому не вистачає вказаної(вказаних) амінокислотної(амінокислотних) модифікації(модифікацій). В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком бо аргініну. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ТемТтТ, вказаний сконструйований ТемМмт містить модифікацію щонайменше однієї (наприклад, щонайменше 1, 2, 3, 4, 5, 10 або 15) амінокислоти, вибраної з А5М 893, АБР 894, АБР 911, А5М 919, АБМ 927, АБМ 928, 21 Ш 929, СІ М 968, АЗМ 972, 210 973, 21 О 1010, АБР 1018, АБ5М 1079,
АБМ 1080, АБМ 1081 та АБМ 1097; та вказана амінокислотна модифікація(амінокислотні модифікації) підвищує(підвищують) ізоелектричну точку (рі) сконструйованого ТемМт' до значення, яке є щонайменше на 0,5 (наприклад, щонайменше 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 або 1) одиниці рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому ВоМтТ/5, якому не вистачає вказаної(вказаних) амінокислотної(амінокислотних) модифікації(модифікацій). В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
В одному варіанті здійснення, де сконструйованим клостридіальним токсином є ТемтТ, вказаний сконструйований ТемМмт містить модифікацію щонайменше однієї (наприклад, щонайменше 1, 2, 3, 4, 5, 10 або 15) амінокислоти, вибраної з А5М 893, АБР 894, АБР 911, А5М 919, АБМ 927, АБМ 928, 21 Ш 929, СІ М 968, АЗМ 972, 210 973, СГ О 1010, АБР 1018, АБМ 1079,
АБМ 1080, АБМ 1081 та АБМ 1097; та вказана(вказані) амінокислотна(амінокислотні) модифікація(модифікації) підвищує(підвищують) ізоелектричну точку (рі) сконструйованого
Темт до значення, яке є щонайменше на одну одиницю рі вищим за рі ідентичного в усьому іншому ТемМмт, якому не вистачає вказаної(вказаних) амінокислотної(амінокислотних) модифікації модифікацій). В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину або залишком аргініну. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком лізину. В одному варіанті здійснення вказана модифікація містить заміну амінокислоти залишком аргініну.
Даний винахід придатний для застосування до багатьох відмінних різновидів клостридіального токсину. Таким чином, в контексті даного винаходу, термін "клостридіальний
Зо токсин" охоплює токсини, що виробляються С. Боїцшіїпит (ботулінічні нейротоксини серотипів А,
В, С1, 0, Е, Е та С), С. геіапі (правцевий нейротоксин), С. рбшугісит (ботулінічний нейротоксин серотипу Е) та С. Багаїй (ботулінічний нейротоксин серотипу Р), а також модифіковані клостридіальні токсини або похідні, отримані з будь-якого з перелічених вище. Термін "клостридіальний токсин" також охоплює ботулінічний нейротоксин серотипу Н.
Ботулінічний нейротоксин (ВОМТ) виробляється С. Боїшіпит у формі великого білкового комплексу, що містить сам ВоОМТ, зв'язаний з рядом додаткових білків. Наразі існує вісім різних класів ботулінічного нейротоксину, а саме: ботулінічний нейротоксин серотипів А, В, С1, 0, Е, Е,
С та Н, всі з яких мають подібні структури та способи дії. Різні серотипи ВОМТ можна розрізняти за інактивацією конкретними нейтралізуючими антисироватками, причому така класифікація за серотипом корелює з процентною ідентичністю послідовностей на амінокислотному рівні. Білки
ВоМТт даного серотипу додатково ділять на різні підтипи на основі амінокислотної процентної ідентичності послідовностей.
ВоМТ всмоктуються в шлунково-кишковому тракті, та, після потрапляння у загальний кровообіг, зв'язуються з пресинаптичною мембраною холінергічних нервових закінчень та запобігають вивільненню їх нейромедіатору ацетилхоліну. ВОМТ/В, ВоМТ/О, ВоМТ/Е та ВоМтТ/5 розщеплюють синаптобревін/асоційований з везикулами мембранний білок (МАМР); ВоМТ/С1,
ВоМТ/А та ВоМТ/Е розщеплюють синаптосомально-асоційований білок 25 кДа (5МАР-25); та
ВоМТ/С1 розщеплює синтаксин.
Правцевий токсин виробляється С. їеїапі в одному серотипі. С. бшугісит виробляє ВОМТ/Е, в той час як С. Багаїййї виробляє ВоМТ/БЕ.
Термін "клостридіальний токсин" також призначений для охоплення модифікованих клостридіальних токсинів та їх похідних, включаючи, але без обмежень, ті, що описані нижче.
Модифікований клостридіальний токсин або похідне може містити одну або декілька амінокислот, які були модифіковані в порівнянні з нативною (немодифікованою) формою клостридіального токсину, або може містити одну або декілька вставлених амінокислот, які не присутні в нативний (немодифікованій) формі клостридіального токсину. Наприклад, модифікований клостридіальний токсин може мати модифіковані амінокислотні послідовності в одному або декількох доменах відносно нативної (немодифікованої) послідовності клостридіального токсину. Такі модифікації можуть модифікувати функціональні аспекти бо токсину, наприклад, біологічну активність або витривалість. Таким чином, в одному варіанті здійснення сконструйований клостридіальний токсин за даним винаходом є сконструйованим модифікованим клостридіальним токсином або похідним сконструйованого модифікованого клостридіального токсину, або похідним сконструйованого клостридіального токсину.
Модифікований клостридіальний токсин може мати одну або декілька модифікацій у амінокислотній послідовності важкого ланцюга (наприклад, модифікований домен НС), де вказаний модифікований важкий ланцюг зв'язується з нервовими клітинами-мішенями з більш високою або більш низькою афінністю, ніж нативний (немодифікованій) клостридіальний токсин.
Такі модифікації в домені НС можуть включати модифікування залишків у сайті зв'язування гангліозидів домену НС або у сайті зв'язування білка (5М2 або синаптотагміну), яке змінює зв'язування з гангліозидним рецептором та/або білковим рецептором нервової клітини-мішені.
Приклади таких модифікованих клостридіальних токсинів описані в патентних документах УМО 2006/027207 та МО 2006/114308, обидва з яких включені в даний документ за допомогою посилання у їх повному обсязі.
Модифікований клостридіальний токсин може мати одну або декілька модифікацій у амінокислотній послідовності легкого ланцюга, наприклад, модифікацій у субстрат-зв'язуючому або каталітичному домені, які можуть змінювати або модифікувати специфічність модифікованого І С до білків ЗМАКЕ. Приклади таких модифікованих клостридіальних токсинів описані в патентних документах МО 2010/120766 та 05 2011/0318385, обидва з яких включені в даний документ за допомогою посилання у їх повному обсязі.
Модифікований клостридіальний токсин може містити одну або декілька модифікацій, які підвищують або знижують біологічну активність та/або біологічну витривалість модифікованого клостридіального токсину. Наприклад, модифікований клостридіальний токсин може містити мотив на основі лейцину або тирозину, де вказаний мотив підвищує або знижує біологічну активність та/або біологічну витривалість модифікованого клостридіального токсину. Придатні мотиви на основі лейцину включають хОхххі І, хЕХХХхІ І, хЕХХХіЇ. та ХхХЕХХХх! М (де х являє собою будь-яку амінокислоту). Придатні мотиви на основі тирозину включають У-х-х-Ну (де Ну є гідрофобною амінокислотою). Приклади модифікованих клостридіальних токсинів, які містять мотиви на основі лейцину та тирозину, описані в патентному документі УМО 2002/08268, який включений в даний документ за допомогою посилання у своєму повному обсязі.
Зо Термін "клостридіальний токсин" призначений для охоплення гібридних та химерних клостридіальних токсиниів. Гібридний клостридіальний токсин містить щонайменше частину легкого ланцюга від одного клостридіального токсину або його підтипу та щонайменше частину важкого ланцюга від іншого клостридіального токсину або підтипу клостридіального токсину. В одному варіанті здійснення гібридний клостридіальний токсин може містити цілий легкий ланцюг з легкого ланцюга від одного підтипу клостридіального токсину та важкий ланцюг від іншого підтипу клостридіального токсину. В іншому варіанті здійснення химерний клостридіальний токсин може містити частину (наприклад, зв'язувальний домен) важкого ланцюга одного підтипу клостридіального токсину з іншою частиною важкого ланцюга, що походить від іншого підтипу клостридіального токсину. Аналогічно або альтернативно, терапевтичний елемент може містити частини легкого ланцюга від різних клостридіальних токсинів. Такі гібридні або химерні клостридіальні токсини є придатними, наприклад, як засоби надання терапевтичних ефектів таких клостридіальних токсинів пацієнтам, які є імунологічно стійкими до даного підтипу клостридіального токсину, пацієнтам, які можуть мати нижчу за середню концентрацію рецепторів до зв'язуючого домену важкого ланцюга даного клостридіального токсину, або пацієнтам, які можуть мати стійкий до дії протеаз варіант мембранного або везикулярного субстрату токсину (наприклад, ЗМАР-25, МАМР та синтаксин). Гібридні та химерні клостридіальні токсини описані в патентному документі 05 8071110, публікація якого включена в даний документ за допомогою посилання у своєму повному обсязі. Таким чином, у одному варіанті здійснення сконструйований клостридіальний токсин за даним винаходом є сконструйованим гібридним клостридіальним токсином або сконструйований химерним клостридіальним токсином.
Термін "клостридіальний токсин" призначений для охоплення перенацілених клостридіальних токсинів. У перенаціленому клостридіальному токсині клостридіальний токсин модифікований з включенням екзогенного ліганду, відомого як націлювальний фрагмент (ТМ).
ТМ вибирають для отримання специфічності зв'язування з потрібною клітиною-мішенню, і, в якості частини процесу перенацілення, нативну зв'язуючу частину клостридіального токсину (наприклад, домен НС або домент НСС) можна видаляти. Технологія перенацілювання описана, наприклад, у патентних документах: ЕР-8-0689459; МО 1994/021300; ЕР-В-0939818;
ОБ 6461617; 05 7192596; М/О 1998/007864; ЕР-В-0826051; 005 5989545; 05 6395513; 05 60 6962703; МО 1996/033273; ЕР-В-0996468; 005 7052702; МО 1999/017806; ЕР-В-1107794; 5
6632440; МО 2000/010598; МО 2001/21213; МО 2006/059093; МО 2000/62814; МО 2000/04926;
УМО 1993/15766; УМО 2000/61192; та УМО 1999/58571, всі з яких включені в даний документ за допомогою посилання у їх повному обсязі. Таким чином, в одному варіанті здійснення сконструйований клостридіальний токсин за даним винаходом є сконструйованим перенаціленим клостридіальним токсином.
Даний винахід також охоплює клостридіальні токсини, які мають ненативний сайт розщеплення для протеази. У таких клостридіальних токсинах нативний сайт розщеплення для протеази (також відомий як сайт активації, який описаний вище) модифікований або замінений сайтом розщеплення для протеази, яка не є нативною для цього клостридіального токсину (тобто екзогенним сайтом розщеплення). Такий сайт потребуватиме екзогенної протеази для розщеплення, що забезпечує можливість поліпшення контролю над часом та місцем подій розщеплення. Ненативні сайти розщеплення для протеази, які можна застосовувати у клостридіальних токсинах, включають: ентерокіназу (0ОСОК |), фактор Ха ПЕОК.), / ІООК)),
ТЕМ(вірус гравіювання тютюну) (ЕМІ МБО), тромбін (І МРЕК/|О5),
Ргезсізвіоп (ІЕМ РО)|ОР).
Додаткові сайти розщеплення для протеази включають послідовності розпізнавання, які розщеплюються нецитотоксичною протеазою, наприклад, легсим ланцюгом клостридіального нейротоксину. Вони включають послідовності розпізнавання білків 5МАКЕ (наприклад, 5МАР- 25, синтаксин, МАМР), які розщеплюються нецитотоксичними протеазами, такими як легкий ланцюг клостридіального нейротоксину. Клостридіальні токсини, що містять ненативні сайти розщеплення для протеази, описані в патентних документах О5 7132259, ЕР 1206554-82 та 05 2007/0166332, всі з яких включені у даний документ за допомогою посилання у їх повному обсязі. Вираз "сайт розщеплення для протеази" також охоплює інтетїн, що являє собою послідовність, здатну до саморозщеплення. Реакцію самосплайсингу можна регулювати, наприклад, за допомогою зміни концентрації присутнього відновника.
Даний винахід також охоплює клостридіальні токсини, які містять "деструктивний сайт
Зо розщеплення". У вказаних клостридіальних токсинах ненативний сайт розщеплення для протеази включений у клостридіальний токсин у положенні, обраному таким чином, що розщеплення у вказаному сайті буде знижувати активність або інактивувати клостридіальний токсин. Деструктивна сайт розщеплення для протеази може бути чутливим до розщеплення місцевою протеазою в тому випадку, якщо клостридіальний токсин, після введення, мігрує до місцеположення, що не є мішенню. Придатні ненативні сайти розщеплення для протеази включають ті, що описані вище. Клостридіальні токсини, що містять деструктивний сайт розщеплення для протеази, описані в патентних документах М/О 2010/094905 та УМО 2002/044199, обидва з яких включені в даний документ за допомогою посилання у їх повному обсязі.
Сконструйовані клостридіальні токсини за даним винаходом, особливо їх компонент легкого ланцюга, можуть бути пегільованими -це може сприяти підвищенню стабільності, наприклад, тривалості дії компонента легкого ланцюга. Пегілювання є особливо переважним, коли легкий ланцюг містить протеазу ВОМТ/А, В або С1. Пегілювання переважно включає додавання РЕО (поліетиленгліколю) до М-кінця компонента легкого ланцюга. Наприклад, М-кінець легкого ланцюга можна подовжити одним або кількома амінокислотними (наприклад, цистеїну) залишками, які можуть бути однаковими або різними. Один або декілька вказаних амінокислотних залишків можуть мати власну молекулу РЕС, приєднану (наприклад, ковалентно приєднану) до них. Приклад цієї технології описаний у патентному документі
ММО2007/104567, який включений у даний документ за допомогою посилання у його повному обсязі.
Сконструйовані клостридіальні токсини за даним винаходом можуть бути вільними від комплексоутворюючих білків, які присутні в природному комплексі клостридіального токсину.
Сконструйований клостриді(альний токсин за даним винаходом може також містити обмежену кількість нестандартних амінокислот. Таким чином, на додаток до 20 стандартних амінокислот, амінокислотними залишками сконструйованих клостридіальних токсинів за даним винаходом можна замінити нестандартні амінокислоти (такі як 4-гідроксипролін, 6-М-метиллізин, 2-аміноїзомасляна кислота, ізовалін та а-метилсерин). Амінокислотними залишками клостридіального поліпептиду можна замінити обмежену кількість неконсервативних амінокислот, амінокислот, які не кодуються генетичним кодом, та амінокислот, які не відносяться до природних. Сконструйовані клостридіальні токсини за даним винаходом також можуть містити амінокислотні залишки, які не зустрічаються в природі.
Амінокислоти, які не зустрічаються в природі, без обмеження включають транс-3- метилпролін, 2,4-метанопролін, цис-4-гідроксипролін, транс-4-гідроксипролін, М-метилгліцин, аллотреонін, метилтреонін, гідроксіетилцистеїн, гідроксіетилгомоцистеїн, нітроглутамін, гомоглутамін, піпеколінову кислоту, трет-лейцин, норвалін, 2-азафенілаланін, З-азафенілаланін, 4-азафенілаланін та 4-фторфенілаланін. У даній галузі відомо декілька способів для включення амінокислотних залишків, які не зустрічаються в природі, у білки. Наприклад, можна використовувати систему іп міїго, у якій забезпечують супресію нонсенс-мутацій за допомогою хімічно аміноацильованих супресорних тРНК. У даній галузі відомі способи синтезу амінокислот та аміннацилювання тРНК... Транскрипцію та трансляцію плазмід, що містять нонсенс-мутації, здійснюють у безклітинній системі, що містить екстракт Е. соїї 530 та комерційно доступні ферменти та інші реагенти. Білюи очищують за допомогою хроматографії. Див., наприклад,
Вобрегізоп вії а!., У. Ат. Спет. бос. 113:2722, 1991; ЕІПтап єї аі, Меїййод» Епгутої!. 202:301, 1991;
Спипа єї а), Зсієпсе 259:806-9, 1993 та Спипа еї аї, Ргос. Май. Асад. Зсі. ОБА 90: 10145-9, 1993).
У другому способі трансляцію здійснюють в ооцитах Хепори5 шляхом мікроін'єкції мутованої
МРНК та хімічно аміноацильованих супресорних тРНК (Тигсаці еї аї, 9. Віої. Спет. 271: 19991-8, 1996). У третьому способі клітини Е. соїї культивують за відсутності природної амінокислоти, яку потрібно замінити (наприклад, фенілаланін), та у присутності необхідної(необхідних) амінокислоти(амінокислот), які не зустрічаються в природі (наприклад, 2-азафенілаланін, 3- азафенілаланін, 4-азафенілаланін або 4-фторфенілаланін). Амінокислоту, яка не зустрічається в природі, вводять у поліпептид на місце її природного аналога. Див. Коїде еї аї, Віоспет. 33:7470-6, 1994.
Сконструйовані клостридіальні токсини за даним винаходом можна отримувати за допомогою технологій рекомбінантних нуклеїнових кислот. Таким чином, в одному варіанті здійснення сконструйований клостридіальний токсин (який описано вище) являє собою рекомбінантний сконструйований клостридіальний токсин.
В іншому аспекті даний винахід передбачає нуклеїнову кислоту (наприклад, ДНК), яка містить послідовність нуклеїнової кислоти, що кодує сконструйований клостридіальний токсин,
Зо який описано вище. В одному варіанті здійснення послідовність нуклеїнової кислоти отримують як частину ДНК-вектора, що містить промотор та термінатор.
У переважному варіанті здійснення вектор має промотор, який вибирають з наступних.
Промотор Засіб індукції Типові умови індукції
Тас (гібридний) ІРТО 0,2 мМ (0,05-2,0 мм)
Агавдбр І -арабіноза 0,2 95 (0,002-0,4 95) оператор Т7-Іас ІРТО 0,2 мМ (0,05-2,0 мМ)
У іншому переважному варіанті здійснення вектор містить промотор, який вибирають з наступних.
Промотор Засіб індукції Типові умови індукції
Тас (гібридний) ІРТО 0,2 мМ (0,05-2,0 мм)
Агавдбр І -арабіноза 0,2 95 (0,002-0,4 95) оператор Т7-Іас ІРТО 0,2 мМ (0,05-2,0 мМ) оператор Т5-Іас ІРТО 0,2 мМ (0,05-2,0 мМ)
Молекули нуклеїнових кислот за даним винаходом можна створити за допомогою будь-якого придатного способу, відомого в даній галузі. Таким чином, молекули нуклеїнових кислот можна створити за допомогою методів хімічного синтезу. Альтернативно, молекули нуклеїнових кислот за даним винаходом можна створити за допомогою методів молекулярної біології.
Розробку ДНК-конструкції за даним винаходом переважно здійснюють іп б5іїйсо, а потім синтезують за допомогою звичайних методик синтезу ДНК.
Інформацію згаданої вище послідовності нуклеїнової кислоти необов'язково модифікують по відношенню до відхилення за використанням синонімічних кодонів відповідно до кінцевої системи експресії клітини-хазяїна (наприклад, Е. соїї), яку будуть використовувати.
В одному варіанті здійснення послідовність нуклеїнової кислоти, що кодує сконструйований клостридіальний токсин, описаний вище, являє собою послідовність нуклеїнової кислоти, яка характеризується щонайменше 70 95 (наприклад, щонайменше 75, 80, 85, 90, 95, 97, 98 або 99 95) ідентичністю послідовностей відносно послідовності нуклеїнової кислоти, вибраної з БЕО
ІО МО: 3, 5, 7 та 9.
В одному аспекті даний винахід передбачає послідовність нуклеїнової кислоти, яка характеризується щонайменше 70 95 (наприклад, щонайменше 75, 80, 85, 90, 95, 97, 98 або 60 99 95) ідентичністю послідовностей відносно послідовності нуклеїнової кислоти, вибраної з ЗЕО
ІЮ МО: 3, 5, 7 та 9. В одному варіанті здійснення послідовність нуклеїнової кислоти характеризується щонайменше 90 95 ідентичності послідовності з послідовністю нуклеїнової кислоти, вибраною з 5ЕО ІЮО МО: 3, 5, 7 та 9.
Даний винахід також передбачає поліпептиди, які кодуються послідовностями нуклеїнових кислот, які описані вище. Таким чином, в одному аспекті даний винахід передбачає поліпептид, що містить амінокислотну послідовність, яка характеризується щонайменше 70 95 (наприклад, щонайменше 75, 80, 85, 90, 95, 97, 98 або 99 95) ідентичністю послідовностей відносно амінокислотної послідовністі, вибраної з ФЕО ІЮ МО: 4, 6, 8 та 10. В одному варіанті здійснення амінокислотна послідовність характеризується щонайменше 90 95 ідентичністю послідовностей відносно амінокислотної послідовністі, вибраної з ЗЕО ІЮ МО: 4, 6, 8 та 10.
В одному варіанті здійснення сконструйований клостридіальний токсин за даним винаходом являє собою сконструйований ВОоМТ/А, описаний вище, та вказаний сконструйований ВОМТ/А містить (або складається з) амінокислотну послідовність, яка характеризується щонайменше 70 95 (наприклад, щонайменше 75, 80, 85, 90, 95, 97, 98, 99, 99,5 або 99,9 95) ідентичністю послідовностей відносно амінокислотної послідовністі, вибраної з ЗЕО ІЮО МО: 4, 6, 8 та 10.
В одному варіанті здійснення сконструйований клостридіальний токсин за даним винаходом являє собою сконструйований ВоМТ/А, описаний вище, та вказаний сконструйований ВоМТ/А містить (або складається з) амінокислотну послідовність з БЕО ІЮ МО: 4, 6, 8 або 10.
В одному аспекті даний винахід передбачає поліпептид, який містить (або складається 3) амінокислотну послідовність з ФЕО ІЮ МО: 4, 6, 8 або 10.
В одному аспекті даний винахід передбачає нуклеїнову кислоту, що кодує сконструйований клостридіальний токсин, описаний вище, де вказана нуклеїнова кислота містить послідовність нуклеїнової кислоти, яка характеризується щонайменше 70 95 (наприклад, щонайменше 75, 80, 85, 90, 95, 97, 98, 99, 99,5 або 99,9 95) ідентичністю послідовностей відносно послідовності нуклеїнової кислоти, вибраної з 5ЕО ІЮ МО: 3, 5, 7 та 9. В одному варіанті здійснення нуклеїнова кислота містить (або складається з) послідовність нуклеїнової кислоти з БЕО ІО МО:
З, 5, 7 або 9.
В одному аспекті даний винахід передбачає нуклеїнову кислоту, що містить (або складається з) послідовність нуклеїнової кислоти з БЕО ІО МО: 3, 5, 7 або 9. "Відсоток ідентичності послідовностей" між двома або більше послідовностями нуклеїнових кислот або амінокислот є функцією числа ідентичних положень, загальних для послідовностей.
Таким чином, 95 ідентичності можна вирахувати як число ідентичних нуклеотидів / амінокислот, поділене на загальне число нуклеотидів / амінокислот, помножене на 100. Розрахунки 95 ідентичності послідовностей також можуть враховувати кількість пропусків та довжину кожного гепу, що потрібно ввести для оптимізації вирівнювання двох або більше послідовностей.
Порівняння послідовностей та визначення відсотка ідентичності між двома або більше послідовностями можна здійснювати з використанням специфічних математичних алгоритмів, таких як ВІ А5Т, які будуть знайомі фахівцеві в даній області.
В одному аспекті даний винахід передбачає спосіб отримання одноланцюгового білка сконструйованого клостридіального токсину, що містить легкий ланцюг та важкий ланцюг, при цьому спосіб включає експресію нуклеїнової кислоти (вказана нуклеїнова кислота є такою, яка описана вище) в придатній клітині-хазяїні, руйнування клітини-хазяїна з отриманням гомогенату клітини-хазяїна, що містить одноланцюговий білок сконструйованого клостридіального токсину, та виділення одноланцюгового білка сконструйованого клостридіального токсину.
В іншому аспекті даний винахід передбачає спосіб активації сконструйованого клостридіального токсину, при цьому спосіб включає отримання одноланцюгового білка сконструйованого клостридіального токсину, одержуваного за допомогою способу отримання одноланцюгового білка сконструйованого клостридіального токсину, що описаний вище, контактування поліпептиду з протеазою, яка розщеплює поліпептид в сайті розпізнавання (сайті розщеплення), що знаходиться між легким ланцюгом та важким ланцюгом, тим самим перетворюючи поліпептид на дволанцюговий поліпептид, де легкий ланцюг та важкий ланцюг з'єднані один з одним за допомогою дисульфідного зв'язку.
Сконструйовані клостридіальні токсини за даним винаходом можна використовувати для попередження або лікування певних внутрішніх або зовнішніх захворювань та станів. Таким чином, в додатковому аспекті даний винахід передбачає сконструйований клостридіальний токсин, описаний вище, для застосування в медицині.
У пов'язаному аспекті даний винахід передбачає сконструйований клостридіальний токсин, описаний вище, для застосування у попередженні або лікуванні захворювання або стану, вибраного з косоокості, тонічного блефароспазму, страбізму, дистонії (наприклад, спастичної 60 дистонії, оромандибулярної дистонії, фокальної дистонії, пізньої дистонії, дистонії м'язів гортані,
дистонії м'язів кінцівок, цервікальної дистонії), кривошиї (наприклад, спастичної кривошиїЇ), косметологічного (косметичного) застосування, з одержанням позитивного результату від порушення працездатності клітин/м'язів (через пригнічення або інактивацію ЗМАРКЕ), нервово- м'язового розладу або стану рухів очного яблука (наприклад, співдружньої косоокості, вертикальної косоокості, паралічу латерального прямого м'яза, ністагму, дистиреоїдної міопатії), писального спазму, тонічного блефароспазму, бруксизму, хвороби Вільсона, тремтіння, різновидів тику, сегментарної міоклонії, спазмів, спастичності внаслідок хронічного розсіяного склерозу, спастичності, що призводить до порушення контролю сечового міхура, ворожості, спазму м'язів спини, судоми литкового м'яза, головних болів напруги, синдрому леваторів таза, розщілини хребців, пізньої дискінезії, хвороби Паркінсона, заїкання, геміфаціального спазму, розладу повік, церебрального паралічу, фокальної спастичності, спастичного коліту, нейрогенного сечового міхура, анізмусу, спастичності кінцівок, різновидів тику, тремтіння, бруксизму, анальної тріщини, ахалазії, дисфагії, сльозотечі, гіпергідрозу, надмірного слиновиділення, надмірної шлунково-кишкової секреції, м'язового болю (наприклад, болю внаслідок м'язових спазмів), головного болю (наприклад, головного болю напруги), міжбрівних глибоких зморшок, шкірних складок, раку, розладів матки, сечостатевих розладів, сечостатевих- неврологічних розладів, хронічного нейрогенного запалення та розладів гладкої мускулатури.
При застосуванні у даному винаході використовують фармацевтичну композицію, що містить сконструйований клостридіальний токсин, разом з щонайменше одним компонентом, який вибирають із фармацевтично прийнятного носія, наповнювача, допоміжного засобу, пропелента та/або солі.
Сконструйовані клостридіальні токсини за даним винаходом можна скласти для перорального, парентерального застосування, застосування із використанням безперервної інфузії, інгаляції або місцевого застосування. Композиції, придатні для ін'єкції, можуть знаходитися у формі розчинів, суспензій, або емульсій, або сухих порошків, які перед застосуванням розчиняють або суспендують у придатному середовищі.
У випадку застосування сконструйованого клостридіального токсину, який має бути доставлений локально, сконструйований клостридіальний токсин можна скласти у вигляді крему (наприклад, для місцевого застосування) або для субдермальної ін'єкції.
Зо Засоби для локальної доставки можуть включати аерозоль або інший спрей (наприклад, небулайзер). У зв'язку з цим, аерозольний склад на основі сконструйованого клостридіального токсину забезпечує доставку у легені, та/або інші носові ходи, та/або бронхіальні або дихальні шляхи.
Сконструйований клостридіальні токсини за даним винаходом можна вводити пацієнту шляхом внутрішньооболонкового введення або епідуральної ін'єкції у хребетний стовп на рівні сегмента хребта, який бере участь в іннервації ураженого органу.
Переважним шляхом введення є введення за допомогою лапароскопічної та/ або локалізованої, зокрема внутрішньом'язової, ін'єкції.
Діапазони доз для введення сконструйованих клостридіальних токсинів за даним винаходом є такими, які забезпечують отримання необхідного терапевтичного ефекту. Буде зрозуміло, що необхідний діапазон доз залежить від точно визначених властивостей сконструйованого клостридіального токсину або композиції, шляху введення, властивостей складу, віку пацієнта, природи, ступеня або важкості стану пацієнта, протипоказань, якщо такі є, та рішення лікаря.
Варіації цих рівнів доз можна регулювати із використанням стандартних емпіричних методик для оптимізації.
Придатні добові дози (на кг ваги пацієнта) знаходяться у діапазоні 0,0001-1 нг/кг, переважно 0,0001-0,5 нг/кг, більш переважно 0,002-0,5 нг/кг та особливо переважно 0,004-0,5 нг/кг.
Одинична доза може варіювати від менше 1 пікограма до 30 нг, але звичайно буде знаходитися у діапазоні від приблизно 0,01 до 1 нг на дозу, яку можна вводити один раз на добу або переважно менш часто, наприклад, один раз на тиждень або на шість місяців.
Особливо переважний режим введення доз базується на 0,05нг сконструйованого клостридіального токсину в якості 1Х дози. У зв'язку із цим, переважні дози знаходяться у діапазоні 1Х-100Х (тобто 0,05-5 нг).
Рідкі лікарські форми зазвичай отримують із використанням сконструйованого клостридіального токсину та стерильного середовища без пірогенів. Сконструйований клостридіальний токсин в залежності від використовуваних середовища та концентрації може бути або розчиненим, або суспендованим у середовищі. При отриманні розчину сконструйований клостридіальний токсин можна розчиняти у середовищі, причому при необхідності розчин роблять ізотонічним шляхом додавання хлориду натрію, та стерилізувати бо шляхом фільтрації за допомогою стерильного фільтра із використанням методик з асептичними умовами перед заповненням придатних стерильних флаконів або ампул та запечатуванням.
В альтернативному випадку, якщо стабільність розчину є задовільною, розчин у запечатаних контейнерах можна стерилізувати за допомогою автоклавування. Переважно добавки, такі як буферні, розчиняючі, стабілізуючі засоби, консерванти або бактерицидні, суспендуючі або емульгуючі засоби та/або засоби для місцевої анестезії, можно розчиняти у середовищі.
Сухі порошки, які розчиняють або суспендують у придатному середовищі перед застосуванням, можна одержати шляхом заповнення стерильного контейнера попередньо стерилізованими інгредієнтами із використанням асептичної методики у стерильній зоні.
У альтернативному випадку, інгредієнти можна розчиняти у придатних контейнерах із використанням асептичної методики у стерильній зоні. Продукт потім ліофілізують та контейнери запечатують в асептичних умовах.
Суспензії для парентерального застосування, придатні для внутрішньом'язової, підшкірної або внутрішньошкірної ін'єкції, одержують практично таким самим чином за винятком того, що стерильні компоненти суспендують у стерильному середовищі замість розчинення та стерилізацію не можна здійснювати за допомогою фільтрації. Компоненти можна виділяти у стерильному стані або в альтернативному випадку їх можна стерилізувати після виділення, наприклад, за допомогою гамма-опромінення.
Переважно, суспендуючий засіб, наприклад, полівінілліролідон, включають "у композицію(композиції) для забезпечення рівномірного розподілу компонентів.
При введенні відповідно до даного винаходу можна використовувати різні технології доставки, в тому числі інкапсуляцію в мікрочастинки, вірусні системи доставки або аерозольний удар під високим тиском.
Короткий опис фігур
Фігура 1
Гель з катіонними конструкціями після ізоелектричного фокусування (ІЕР).
Фігура 2
Процентне відношення розщеплення 5МАР-25 в ембріональних нейронах спинного мозку (езсм) щурів для Саї5м2(К1064Н/МО54К) (А), Саї5м2(К1064нН/М886К) (В) та Саїб5м2(К1064Н/
М1025К) (С), а також узагальнені результати рЕС5О порівняно з пВОоМТтТ/А1. (А, В, С)
Зо Ембріональні нейрони спинного мозку щурів культивували протягом трьох тижнів та обробляли з використанням Саї5м4 протягом 24 годин перед вестерн-блотингом зі специфічним до 5МАР- 25 антитілом. Дані представлені як середнє значення ї5ЄЕМ (дані скануючої електронної мікроскопії) з трьох незалежних експериментів у трикратній повторності. (0) Відносна ефективність Саїбм2(К1064Н/М886К), Саїб5м2(К1064Н/М954К) та Саїб5м2(К1064Н/ М1025К) порівняно з ПВОМТ/А1 (І ізї Віоіодіса! І арогайгіе5) у аналізі ефективності розщеплення 5МАР-25 в езСМ щурів. Кожна точка відповідає окремій пробі та являє собою середнє значення з З незалежних визначень рЕС5О, що засновані на кривій концентрація-ефект (СКС) з 8 точок.
Кожну концентрацію на СКС оцінювали у трикратній повторності. Порівняння ефективності виконані відносно середнього значення переліку проб, об'єднані дані з п-24. Дані представлені як середнє значення «ЗЕМ з п-З3 проб на Саїбма4.
Фігура З
Ефективність (150) пВоМТ/Аї та Саїбм4 в аналізі на препараті діафрагмальний нерв - правий/лівий купол діафрагми миші (ТПРМНО). Тканину діафрагмального нерву - правого/лівого куполу діафрагми миші інкубували з Саїбм4 або нативним ВоМтТ/Аї, як зазначено.
Скорочувальну силу діафрагми реєстрували допоки скорочення більше не виявлялося або через 140 хвилин. Кожна точка відповідає окремим визначенням. Значення 150 є часом, необхідним для інгібування скорочувальної сили правого/лівого куполу діафрагми миші на 50 95.
Послідовності
ЗЕО ІЮ МО: 1. Послідовність нуклеїнової кислоти ВОМТ/А1.
АТаССАТТСИаТСААСАДасСААТТСААСТАСАААСАСССАаТСААСсИаваСа,аТопАСАТСССАТА
САТСААСАТТоСаААСсассаатТСАААтТасаяассасТ ТААДаССТТТТААвАТОСАСААСААСАТТТ сааттТАтТосСссасАдаСатаАСАССТТСАСаААсССаспААдаАдАааСаАатоТаААСсоСасСссСсАссво
ААдаСаААдаСААХа,атооСстаТатСАасСтТАСТАСаАТттоаАСатАССтадасСАСацпАТААСаААААдаА
ТААСТАССТаАААаСОС Та тТаАССААааСТаТаттсаААСаТтАТСТАСАаСАСОСаАтотТасатСасСАТа стастТаАСтТАааСАТИтТттсасСса,аатАтоссатстасаатасаТАаСАСаАТТаАСАССаААСТад
АЧатТТАТССАСАСТААСТаСАТТААСИаТТАТТСААСССОСсАТаатТАасСтТАТтоСТАасСаААдапАаста
ААТСТИСТСАТСАТТВССССОС;аАССасСАСАСАТТАТССААТТоОСАИ,СТасСААааАастТааТСАСИА сагпстТаААТСТаАСССасСААТтТаасСтТАТааТАаСАСССАСаТАСАТТОСТ ТТ ТтсаССацпсАТТТТА ссттосастттаАдАдадаХасставАааТТаАТАССААТОССЯТТОСТОСОТаСаааСАААТТСИаС 60 тТАССОЯАТСОСОСССТИТСАСОрСТДИАСССАТОААСТадтосСАСсасСАаа,а,оСАссасстатАсаасСАТТ
СССАТСААСССААДАССаТтатат САТ ТААТАСИААТаСАТАСТАССЯАСАТаласааосСстас
ААДСЧТСАастТТсСаААаААСстТасСсасСсАсстааТтааЙсССАТаАСаСТтТАААТТСАТТаАСАаСТТасСАА
САСААТаАаИТТоСаТатстТатАСТАСТАТААСАААТТСАААСАСАТТаСААДаСАСИТТОААСААцОС
САДААДаСАТСОЯТТааТтТАСТАССОаСИ,аТСаИттасАсаТтТАТАТОААСААТатТтатТТАААСАСпСААаТтАсс тастатосСаАдаСпйАТАССТОСаСаСААСТТТАаСаТтТаАТААасСтТаААаТТТаАСАААСТатТАСАДОИ
АТаСТОАССОАСАТТТАСАССОВАЧСАСААСТТТаТаАААТТСТТСАААИаИтТатТаААТСИаТААААСс
ТАТСТОаААТТТТОАСАДАДаСасТПТТСААСАТТААСАТСИаТасСсспвААааТаААСТАСАССАТСТАТ
САСОСТТТТААССТаСаИтТААСАССААССТАаСаСИасасСсаААСТТТААСИаСТСАСААТАСаСАААТСАА
СААСАТОаААТТТСАСОААИаТТаААпААСТТСАСОЯсаТатстаТат СаАаТСсТАТААХОСТИАСТатТасса тасасСаатТАТСАТСАССАССААААССААААаТасСссСстапАСАААаасСТАСААСААаасСаТастаААТОаА
ССТатТаСАТТААССТАААСААТТаСаАТСТат ст ттСасССАТСССИААСАТААТТТТАССААдСаА
ССТОААСААппИаТаААпСАААТСАССАаСИаАТАСОААТАТТаАдАаСАаСаслААцпАСаААТАТСАСС
СстТааАТСТаАТССАаСАаСТАСТАТСТОАССТТТААСТТСИАСААТОААССОаСпСАСААСАТТАССАТ
ТОАСпААтТСТадасСсАасСаАСАТТАТСИВИаТСАаСТапйААСТаАТаССОаААТАТССААСИТТТоСсСаИ
ААС,ЧИСАААААаИтТАСаластавАСААаТАСАСТАТИаТТСсСАТТАССТОаСатасСАСАаааАаТтТтад
АСАСОССТАААдАДаССаТАТоаВСастаАССААСАаасСатТААдСа,сХаа,аостастТаААссС,аАасса
ТаТСстТАТАССТТСТТСАаСАаСаАСТАТИаТТААСААДАаТОААСАААасССАСТОаАаСаИаТссасСаАТаТт тостасастасаТасААсАдасСтТасТтАТАТаАСТТСАСасАСадсАС,адасСсаАдАатаАасСАСТА
ССОАСААдААТТаСТОаАТАТТАССАТСАТТАТСССОТАТАТ ТО ТОСИ,аСаСАСТОаААСАТТИССААСА тТасСстТатТАСААДАДСАСаАтта,атасатасссталтстстсастассастаАтстастааАатто
АТТОСсСОаСАСАТтта,асаАатоссастаттсаатАасстсасастататСсСтТАСАТСИСОААТАДОС
ТСТаАСОИСТТСАСАССАТСОАТААСаСаТастатСАААСИаТИтТААТОАААААтТаваАСадсаТатТтАс
АААТАСАТТаТтТАСИААТТЧааСТайСаАААаТСААТАСССАСАТСИАССТОаАТССОИТААДСААААТ вААдаАдсасаставпАвААтсАа,ааСапАааССАССАААДаСААТТАТСААСТАССААТАСААССАС
ТАСАСОССААСААпАдаАдАСААТААСАТТААСТТСААТАТСОАТаАТТ ТОАДаСАССАДаСТаААТИаА
АТСТАТСААСАААДаСаАТОаАТСААТАТСААСААСИТ ТТ ТТОААТСАС,СТатАасСаТат ТтСИаТтАССТОАТ
СААТАССАТОаАТТОоСатАТасаСаТтСАдАСсатставАас,ааАастсаАСсассАассСстТаАААаАТаса
ТТастОаАААТАСАТТТАССАСААТоОСТасатТАСсастТаАТаасСсСААаТтТаАССаТастт зАДАСАСААд
АСТТААСААТАСССТаАаСАССВАСАТСССАТТ ТСААСТаАДИаСААСТАТОТТОаАТААТСААСИтТтестТ
Зо СТТОАдаСАСТТ ТСАССОАСТАТАТСАААААСАТСАТСААТАСТАИСАТТСТаОаААССтТасСаИТтТАСаХА
САССААТСАТСТаАТТаАТСТаАдаССаТатТАТаСААаСААСАТСААСАТСОСТАСаСААСаТСААТТ
ТаАСССОАТСОАТААСААССАвАТССАОСТатТТТААТСТаСААТСОСАССААААТТаАХИааТтТАТС
СТаААДААСасСсСАТТаТтсСТАСААСТОСАТИаТАСИАаААТТТСТСОСАССАИаСТТСТаСАТТСОаСАТ
СССОААдАТАСТТСААСАаСАТТАаССТаААСААСИаАИаТАТАСТАТСАТСААСТатАТаСАСААСА
АсАДасасттапААдасататсТсТаААСТАТаатТаАсаАТСАТТапАССТТасСАасАСАСССААаА
САТСАДаСАаСаСатсатаТтСсААаИТтТАСТСОТСАААТаАТСААСАТТТСССОАТТАСАТТААТСИТТОа
САТСТТСаТтОАССАТТАСИААТААССИОаТСТОААТААСАССААСАТТТАСАТСААТИаИаСТСОаСТТаАТ
СОАТСАСААДАССОАТТАаСААССТаааТААТАТССАСаСААаСААСААСАТТАТОТТСАААТТОС
АсаатасСссасСоаАТАСССАТСОТТАТАТСТаСАТСААОТАТТТСААССТатТТтаАТАААСААСТаА
АТОАСАДАССАСпСАТСАААСАТТТаТтТАТИАСААССААТСТААСАаСИаИаасСАТТ ТТ ОААСаАСсСТТСТОас сасСсаАТТАТСТаСААТАСЯАТААаССаТатАСТАТАТаСТОААССТатАТОАТССОСААСААДАТАТОТ
СОАТОТСААТААТО ТаСОТАТТСИТИасСТтТАСАТатТАТТ ТОАдАаОсСсатоСсаса,атааСАасСаТтТАТИаА
СОАССААСАТТТАССТаААСТСТАаССТатАССаТааЙтТАСаАААТТСАТСАТТААСАААТАТИаССА аСааСААСААДАСАТААСАТТИТаСаТтААТААСОАТСИТататСсТАСАТСААСИЯТааТСаИатаААаААТ
ААдсАаатТАссатсотааСаАССААдсастса,аСсАааасасааТаТгаАвААААтсотадасасаттася
АСАТСССТОаАТатСсааТААТСТаАдаССААДСТСИаТаСТТАТОААдаАдаСААпСААСаАССАспастТАТ
САСТААСААДСТаСААпаАТаААССТаСААаАСААСААТИСТААСОАСАТСЯасСТТТАТТОСТТТОС
АССАСТТСААСААТАТТаСТАААСТаСТАаСОаАаСААТТаСТАСААТСИатСсАпаАтТтаАдаСасСАас да,ассатастт,асастатаасСстаааАаТтТАТтоСсСсаатсСаАТ сАТОСТТОасСсасСаААСа,аТоСаста
ЗЕО ІЮ МО: 2. Амінокислотна послідовність ВОМТ/А1.
МРЕКОЕМУКОРИЕМОІЇАМІКІРМАСОМОРМУКАЕКІНМКІМ МІРЕВОТЕТМРЕЕСОЇ МРРРЕАКОМ РМ
ЗУХОБТМІ 5ТОМЕКОММІ КаИМУТКІ ГЕВІМЗТОЇ САМІ ТІМ РЕМ СИаБТІОТЕЇ КМІОТМСІММІОР равмА5ЕЕЇ МІ МІСРЗАОПОРЕСКОЕОНЕМІ МСТАМамМавТОМІВЕЗ5РОЕТЕСЕЕЕБІ ЕМОТМРІ ЇЇ СА
СКЕАТОРАМТІ АНЕГІНАСНВІ МСІАІМРМАМЕКТМАММЕМЗОИГЕМЗЕЕБЕІ АТЕСОНОАКРІОБІ ОЕЄМЕ
ЕВГУУУМКЕКОІА5ТІ МКАКБІМИа ТТАБІ ОММКММЕКЕКМИ ЇЇ 5ЕОТ5ОаКЕБМОКІ КЕОКІ МКМ ТЕІМТЕ
ОМЕМКЕЕКМІ МАКТУМІ МЕОКАМЕКІМІМРКМТІМОСЕМСАМТ МІ ААМЕМИа ОМ ЕІММММЕТКІКМЕТИї.
ЕЕЕРЕМКГ СУВИапт5КктТкК5І ОКамМКкАЇ МОЇ СІКМУ/ОГЕЕЗРБОЕОМЕТМОЇ МКОЕЕІТЗОТМІЕААЕЕМІ
ЗГОПООММІ ТЕМЕОМЕРЕМІБІЕМІ 55БОПСОЇ ЕІ МРМЕВЕРМОаККМЕЇ ОКУТМЕНМІ ВАОЕРГЕНОК5 60 ВІАСТМ5ЕАГ І МРОВМУТЕЕ550УУКККАТЕААМЕЇ СУМУМЕОЇ ММОЄТОЕТ5ЕМОТТОКІАСІТШРМІСР
А МІСММІ УКОВЕМИаАПІЕЗСАМІ ГГ ЕРІРЕЇАІРМІ аТЕАГ МЗ5МІАМКУ ТМОТІОМАЇ ЗКАМЕКУМУ СЕУУК
ММТМУМГАКТОІОГІАККМКЕАГЕМОАЕАТКАПММОМ МОМ ГТЕЕЕКММІМЕМІ ОЇ 5ЗКІМЕБІМКАМІМІ
МКЕРГМОСЗУБЗМІ ММОМІРУИУКАГЕОРОАБІ КОАГІ КМІМОМАаИТИаОМОВІ КОКМТІ ЗТОІРЕОЇ ЗК
МУМОМОВГ ЗТЕТЕМІКМІМТЗІ М АМЕЗМНІЛОЇ 5ЗАМАЗКІМИаЗКЕОРІОКМОЇОЇ ЕМІЕЗЗКІЕМІ КМА
ІМУМЗМУЕМЕЗТЗЕМІВІРКМЕМ5ІБІММЕМ ПІМСМЕММОЗОИмМ КУБ ММ ЕП ТТ ООТОБІКОВУМгКУ
ОМІМІЗОМІМАУМЕМТІТММАСММЗКІМІМЕ ВІТООКРІЗМ СМІНАЗММІМЕК ССС ВОТНАМІМІКМЕМІ.
ЕОКЕГМЕКЕІКОЇ МОМОМЗСКОРУСОМ ОМОКРУУМІ МЕМОРМКУУрМСаТВа УМ КаРНОаБУ
МІТТМІМІ 55 УВаТткепкКкМАВамкомМммАММОВУМІМУУМУКМКЕМВІ АТМАБОАСМЕКІЇ ЗАГЕІРОМ ам 5БОМУМКкКкМрОосІ ТЯКоКММ ОСОММаТмоіс РІСЕНОЄММІАКІ МАМУ УМАВОІЕНЗЗАТІ С5
ЖМЕРІРМОРОМ/СЕВРІ.
ЗЕО ІЮ МО: 3. Послідовність нуклеїнової кислоти сконструйованого ВОМТ/АТ "СагА".
АТаССАТТСИаТСААСАДасСААТТСААСТАСАААСАСССАаТСААСсИаваСа,аТопАСАТСССАТА
САТСААСАТТоСаААСсассаатТСАААтТасаяассасТ ТААДаССТТТТААвАТОСАСААСААСАТТТ сааттТАтТосСссасАдаСатаАСАССТТСАСаААСсСсСасААаААлаасСсадтстадАссСсассАссиася
ААдаСадАаСААдатооСтаТатсАасСтТАСТАСаАтТтоаАСатАССтТадасСАСацпАТААСПАААДАсСА
ТААСТАССТОАААСсОаСТаТатаасСАдастаттСадАСаТтАТСТАСАССАСсасвАатставатСасСАТО стастаАСстТАааСсАТТатсасСсатАатоссатстасасатаатАасСАСаАТТалАСАССаААСТад
АЧатТТАТССАСАСТААСТаСАТТААСИаТТАТТСААСССОСАТтаатТАастТАтоастАаСсАА,АасСтТа
ААТСТИСТСАТСАТТВССССОС|АаСасСАСАСАТТАТССААТТоОСАс,СтТасСААасАаст ТтааТСАСИА сагпстТаААТСТаАСССасСААТтТаасСтТАТааТАаСАСССАСаТАСАТТОСТ ТТ ТтсаССацпсАТТТТА ссттосастттаААдададласстасааатТаАТАССААТСССТТаСТОССаТОаСсасасСАААТТСЯС тТАССОЯАТСОСОСССТИТСАСООСТДАСССАТОаААСТаАтТоСсАСОЯСАсаСаТассАассасстатАСассАТТ
СССАТСААСССАААССИЯтатат т СААасаТтТААТАСаААТаСАТАСТАССЯАИаАтОсДасаасстас
ААдатоАдасттсаААаААСстТасасАасстсаатааССАТаАСасСтТАААТТСАТТаАСсАасттТасАА вАСААТаАдаТТоСаТатстТатАСТАСТАТААСАААТТСАААСАСАТТаСААаСАСИ,ТТаААСААСцаТс
САДААаСАТССТТааТАСТАССОЯСИатосТТаСАаТтТАТАТИААСААТататТ т ТАААпАпААаТтТАСо тастатобаАдаспсАТАССТОССсасСААдатттАасСаТТаАТААаСТаААаттТаАСАААСТатАСАДа
АТаСтТаАССОаАСАТТТАСАССаАапАСААСТТ ТаТаАААТТСТТСАААИСТатТаААТСИТААААСС
ТАТСТаААТТТТаАСАААаСОас ГП ТСААСАТТААСАТСИВТассСпААаатаААСТАСАССАТСТАТ
АСИСТ ТТААССТасСатААСАССААССТОС,СС,ВасСсААСТТТААСасТСАПААТАСИ,пАААТСАА
СААСАТаААТТТСАС,АДАСТТІААСААСТТСАСОЯЬВИатотаТаттосАаТСстТАТААДОаСТОСТИаТасСа тасасаатТАТСАТСАССАСаСААААССАААдАдасставАСАААвасСстАСААСААа,аасрастаААТаА сстатаСАТТААааТАААСААТТаааАТСТаТат ст тсассСАТОССОСААСАТААТТТТАССААСОИА
ССТОААСАДааа ТААпАААТСАССАаСОАТАССОСААТАТТаААаСаСА,СОааААпАСААТАТСАСС
СстапАТСТаАТССАаСАаТтТАСТАТСТОаАССТТТААСТТСОАСААТаААССа,ацсАСААСАТТАС,САТ таАСААТОоТаАДаСАаСаАСАТТАТССЯСЬТСАааСТасААСТадТассвААТАТССААСИТТтоСсСа
ААСОааСААААдАатТАСа,адаставАСААаТАСАСТАТаТТСсССсАТТАССТОССОСТаСАСАСИ,А,ТТТаА
АСАСОЯЧТААААаСсСсатАтсасСсастаАССААСАаасСсаТТААСссАааа,сооСстастаАдассСадассСо татСсТтАТАССТТСТТСАаСАаСОсАСТАТИТТААпАААаТаААСААдАассСАстадла,аассассАТаТт 4 тостасостасатасвсААСАаасСтТаатТАТАТаАСТТСсАСасАасаАсАСсадасовАлдатадасАСТА
ССОаАСААДААТТаСТаАТтТАТТАССАТСАТТАТСССИатАТАТТОС ТОСО,аСАСТОААСАТТаСаСААСА тастатАСАдДаАдсаАаттта,атасатассстаАтстстоссессатассатаатстастааАатто
АТтТоСОЯСАСАТтеаСсалтосссататтасатАссттасастастатсСТАСАТСасСаААТААДИС тстТаАССаСТТСАСАССАТССАТААСОЯСОаСТатосАААСатТтААТаАААААТавсИаАСа,аАаа ТАС
АААТАСАТТатТттТАСаААттааставпйсСОаАААаТСААТАСССАпАТСВАССТаАТССИтТААСАдДААТ вАААСАасасастапАаААТСАСсСасацАаасСАССАААаСААТТАТСААСТАССААТАСААССАС
ТАСАСОИСААДПААСпАСААСААТААСАТТААСТТСААТАТССАТаАтттадасСАасСААдастаААТОИаА
АТСТАТСААСААДАаСаАТаАТСААТАТСААСААСТ ГП ТТОаААТСсАСТатТАаСаТаттоаТАССТОаАТ
СААТАССАТОАТттоСсатАТааСИаТСАААСОЯатотТасасаАсттоваАС,аоСАасстаААдАадтаси ттастаАААТАСАТТТАСОАСААТССТавИТГтАсастаАтааССААаТТаАССаТсттаАААСпАСАА
А,ЧТТААСААТАСССТаАаСАССОСАСАТОССАТТТСААСТОАаСААСТАТаТТаАТААТСААСИТСТ аТТаАдаСАСТТТСАССОСАСТАТАТСАААДААСАТСАТСААТАСТАаСАТТСТаААСсСТОаСаТтТАССА вАаСАдасСАТСТаАТТаАТоТОАаССаТтТАТастАаСААпАТСААСАТСССИТАаСААдааТтСААТТ ттадСССапАТСаАТААвААССАпАТССАасСтТтаТ ТТ ТААТСТапААТССПСАаСААААТтТаАааТтТАТО
СТОаАААДАпаИсСсСАТТатосТАСААСТОСАТИатТАСВАСААТТТоТоСАССАССТ То тТасвАТТСОаСАТ
СССОААДАТАСТТСААСААСПСАТТАаССТаААСААСОаАсаТАТАСТАТСАТСААСТатАТИСАСААСАА сласаастта,асАадаататстСстТаААСТАТаатадлаАТсАттапАсСстасСАааАСАССАААИ да
АТСААдаСсАаа,аСсасатсата ТСААатАСТСОТСАААТАТСААСАТТТОССОСАТТАСАТТААТССЯТТИаС
АТСТТСИаТаАССАТТАССВААТААССаТтстТаААТААЧАаСААсСАТТТАСАТСААТОСТОССТТаАТО 60 вАТСАСАААССаАТТАаСААССтТасасаИаТААТАТССАСИаСААаСААСААсСАТТАТИаТТСАААТТаСаА
Зо ссетпасСсасСсаАТАСССАТССОСТТАТАТСТаСАТСААИТАТТТСААССТатТтаАТАААСААСТОадА таАСАДасСАСАТСАААВАТТТатАТаАСААССААТСТААСАаССаасСАТТТТаААсааХастоТацвсаея аСсаАТТАТСТаСААТАССАТАДасСссСаТтАСТАТАТаСТаААССТатАТаАТОСО,ААСАААТАТИОТО вСАТаТСААТААТОТаСОСТАТТСоСЯСТОааТТАСАТатТАТТТаАаАсСосатоСса,аса,атаа,аАа,аСатТАТОаАС аАССААСАТТТАССТаААСТОТАаССТатАССатааТАССАААТТСАТСАТТААСАААТАТАССАС
СаспСААСАААСАТААСАТТатасСатТААТААСВАТоСТтТатСстТАСАТСААСЯТаатоаТаААСпААТА
АдадатассатотаасСсаАСсСААСОЯСТТСЯвССсАасСасссататтаАвпААААТТоТОДасСсасаттасла вАТОССТОАТОатТСсСОаТААТтотТадасСсСсААлатса7атай ТАТаААаАаСААпААСсАСАда,аа,ТАТС
АСТААСААИТасСААаАТаААССТасСААаАСААСААТааТААСсАСАТСССаст ГТАТТаСТТТОоСА
ССАаТТСААСААТАТТаСТАААСТОИТАаСОсАаСААТТасаТтТАСААТСЯТСАсаАТТаАааСаСАасСА сссатАст"ІтасеастатаастасадатттТАТтосСсаватосАтТаТадтааттасаеСаАдАса,атосаст с
ЗЕО ІЮ МО: 4. Амінокислотна послідовність сконструйованого ВОМТ/А1 "Саї-А".
МРЕКОЕМУКОРЕМОІАМІКІРМАСОМОРМУКАЕКІНМКІМ МІРЕВОТЕТМРЕЕСОЇ МРРРЕАКОМУРМУ
ЗУХОБТМІ З ТОМЕКОММІ КОМТКІ РЕВІУЗТОГ САМІ ТВІМВаг?РЕМаЦавтІотТЕ!ї КМІОТМСІММІОР рав;увзЕБЕЇ М МІСРЗАЮНПОРЕСКОЗЕОСНЕМІ МЕ ТАМамМОавТОМІВЕЗРОЕТЕРСИРЕЕБІ ЕМОТМРІ СА
СКЕАТОРАМТІ АНЕГІНАСНВЇ Ма!лйІМРМАМЕКТМАМУМЕМ5аИї ЕМЗЕЕЄІ ВТЕаСНОАКРІОБЗІ ОЄМЕ
ЕВГУМУМКЕКОІАЗТІ МКАКОІМИ ТТ ТАБ ОУМКМУЕКЕКМИЇ ЗЕОТЗакКеЕЗМОКІ КЕОКІ МКМ ТЕІМТЕ
ОМЕМКЕРКМІ МАКТУІ МЕОКАМЕКІМІМРКУТІМОСЕМ АМТ М ААМЕМС ОМ ТТ ЕІММММЕТКІ КМЕТаї.
ЕЕРУКГ . СУВИаптеКктТкКІ ОКамУмМКАЇ МОЇ СІКМУ/О ЕЕЗРЗЕОМЕТМОЇ МКОЕЕІТЗОТМІЕААЕЕМІ
ЗІ ОПООММІ ТЕМЕОМЕРЕМІВІЄМІ ББОПСОЇ ЕЇМРМІЕВЕРМаККкКУЄ ОКУ ТМЕНМІ ВАОЄЕРЕНОК5
ВІАС/ТМ5ЕАСІ МРОВУМУТЕЕЗ5ОМУКККАТЕААМЕЇ СУУМЕОЇ ММОЄТОЕТЗЕМЗТТОКІАВІТШРМІСР
А МСММІ УКОВЕМИаАПІЕЗСАМІ ГГ ЕРІРЕЇАІРМІ аТЕАГ МЗ5МІАМКУ ТМОТІОМАЇ ЗКАМЕКУМУ СЕУУК
ММТМУМГАКТОІОГІАККМКЕАГЕМОАЕАТКАПММОМ МОМ ГТЕЕЕКММІМЕМІ ОЇ 5ЗКІМЕБІМКАМІМІ
МКЕРГМОСБУВЗМІ ММОМІРУИУКАГЕОРОАБІ КОАГІ КМІМОМАаИтТИаОМОВІ КОКМТІ ЗТОІРЕОЇ ЗК
МУМОМОВГ ЗТЕТЕМІКМІМТЗІ М АМЕЗКНІИОЇ ЗАМАЗКІМОИЗКЕОРІОКМОЇЮЇ ЕМІГЕЗЗКІЕМИ ККА
ІМУМЗМУЕМЕЗТЗЕМІВІРКУЕМКІБСММЕМ ПІМСМЕММЗОИм КУБ ММ ЕП ТТ ООТКЕІКОВУУЕКМ
ОМІМІБЗОМІМАУМЕМТІТММАМКЗКІМІМСа ВГІООКРІЗМІ СМІНАЗМКІМЕК ССС ВОТНАМІУММІКУЕМІ.
ЕОКЕГМЕКЕІКОЇ МОМОМЗСКОРУСОМ ОМОКРУУМІ МЕМОРМКУУОМУСІВа МІ КаРВНОаБМ
Зо МІТТМІМІ 55 УВаТткеккмМАЗамМкоОМммуАММОВУМІМУУМУКМКЕМВІ АТМАБОАСМЕКІЇ ЗАГ ЕІРОМ ам'зомУумМкеКкМоКкаТі гпЯкокММ СОоММамоісвІБЕНОЄММІАКІ МАМУ УМАОІЕНЗЗАТІ аО5
МЕРІРМОРОМУСЕВРІ.
ЗЕО ІЮО МО: 5. Послідовність нуклеїнової кислоти сконструйованого ВоМТ/А1 "Саї-В".
АТаССАТТСИаТСААСАДасСААТТСААСТАСАААСАСССАаТСААСсваСа ГОСП АСАТСИаСАТА
САТСААСАТТоСаААСсассаатТСАААтТасаяассасТ ТААДаССТТТТААвАТОСАСААСААСАТТТ сааттТАтТосСссасАдаСатаАСАССТТСАСаААСсСсСасААаААлаасСсадтстадАссСсассАссиася
ААдаСаААдаСААХа,атооСстаТатСАасСтТАСТАСаАТттоаАСатАССтадасСАСацпАТААСаААААдаА
ТААСТАССТОАААСсОаСТаТатаасСАдастаттСсаААСаТтАТСТАСАасСАСавАТоТваатСасСАТО стастаАСстТАааСсАТТатсасСсатАатоссатстасасатаатАасСАСаАТТалАСАССаААСТад
АаатТАТСВАСАСТААСТаСАТТААСИаТТАТТСААСССОСОСАТтаатТАастАтостАаСсААд,Ааста
ААТСТИСТСАТСАТТВССССОС;аАССасСАСАСАТТАТССААТТоОСАИ,СТасСААааАастТааТСАСИА сагпстТаААТСТаАСССасСААтТаасСтТАТаИтТАаСАСССАСТАСАТТССТттоИ,аССасАТТТТА ссттосастттаААдададласстасааатТаАТАССААТСССТТаСТОССаТОаСсасасСАААТТСЯС тТАССОЯАТСОСОСССТИТСАСООСТДАСССАТОаААСТаАтТоСсАСОЯСАсаСаТассАассасстатАСассАТТ
СССАТСААСССАААССИЯТтататТСААасаТтТААТАСаААТаСАТАСТАСЬЯА СА ТИаДОаСсввасстас
ААдатоАдасттсаААаААСстТасасАасстсаатааССАТаАСаТстАААТТСАТТаАСАаСтТТасАА вАСААТаАдаТТоСаТатстТатАСТАСТАТААСАААТТСАААСАСАТТаСААаСАСИ,ТТаААСААСцаТс
САДААаСАТССТТааТАСТАССОЯСИатосТТаСАаТтТАТАТИААСААТататТ т ТАААпАпААаТтТАСо тастатобадаспсАТАССТОССсасСсААдатттАасСатТаАТААдасСтТаААаТтТТаАСАААСТатАСада
АТаСсСтТаАССаАСАТТТАСАССаАапАСААСТТ ТаТаАААТТСТТСАААИТаИатТаААТСИТААААССо
ТАТСТаААТТТТаАСАААаСОас ГП ТСААСАТТААСАТСИВТассСпААаатаААСТАСАССАТСТАТ
АСИСТ ТТААССТасСатААСАССААССТОС,СС,ВасСсААСТТТААСасТСАПААТАСИ,пАААТСАА
СААСАТаААТТТСАС,ААСТ ТІААСААСТТСАСОЯЬ,ТотТаттоаАатСстТАТААССТИСТО ТИС тасасаатТАТСАТСАССАСаСААААССАААдАасстацвАСАААаасСстАСААСААдаасасТаААТИаА сстатаСАТТААааТАААСААТТаааАТСТаТат ст тсассСАТОССОСААСАТААТТТТАССААСОИА
ССТОААСАДааа ТААпАААТСАССАаСОАТАССОСААТАТТаААаСаСА,СОааААпАСААТАТСАСС
СстТапАТСТаАТССАаСАаТАСТАТСТаАССТТТААСТТССАСААТОААССОаспсАсСААСАТТАСаСАТ таАСААТОТаОАДИаСАаСаАСАТТАТССЯСЬТСсАаССТаспААСТаАТасСсСаААТАТСИААСИТТТоССа
ААСОааСААААдАатТАСа,адаставАСААаТАСАСТАТаТТСсССсАТТАССТОССОСТаСАСАСИ,А,ТТТаА 60 АСАСОССТААААааСсСсатАтсасастаАССААСсАаасСсаТТААСссАаасооСстастаАдассСсадассСо татСсТтАТАССТТСТТСАаСАаСОасАСТАТИаТТААпАААаСТаААСАААдасССАСстТаласосасцАТат тоставастасатасААасАдастастАТАТаАСтТТсСАСасасаАдаАСсаА,СаддатадасСАСТА
ССОаАСААДААТТаСТаАТтТАТТАССАТСАТТАТСССИатАТАТТОС ТОСО,аСАСТОААСАТТаСаСААСА тастатАСАдДаАдсаАаттта,атасатассстаАтстстоссессатассатаатстастааАатто
АТтССаваАсаАтассАатосссататтасатАассттсасастастатоСТтАСАТСаСОААТАДИС тетТаАССаСТТСАСАССАТССАТААСОЯСОаСТатспАААСаТААТаАААААТапааАСаАаа ТАС
АААТАСАТТаТтТТАСОаААТтТаасСстаасСИаАААаТСААТАСССАпАТСВАССТаАТССИТААСАдДААТ вАААСАасасастапАаААТСАСсСасацАаасСАССАААаСААТТАТСААСТАССААТАСААССАС
ТАСАСОИСААДПААСпАСААСААТААСАТТААСТТСААТАТССАТОА тт ТадасСАаСАдДастаААТОаА
АТСТАТСААСАДАдаСаАТаАТСААТАТСААСААИаТтТ тт ТаААТСсАСТатТА,аСаТатттоатТАССТаАТ
СААТАССАТОАТттоСсатАТааСИаТСАААСОЯатотТасасаАсттоваАС,аоСАасстаААдАадтаси тастаАААТАСАТТТАСОСАСАатсатастасастадтаасССААатТаАССастІ аАААсСАСАА
А,ТТААСААТАСССТаАаСАССОСАСАТОССАТТ ТСААСТОаАаСААСаТАТаИТтТаАТААТСААСИтТтстТ аТТаАдаСАСТТТСАССОСАСТАТАТСААДАААСАТСАТСААТАСТАаСАТТСТаААСсСсТаСОаТтТТАСИА вАаСААТСАТСТаАТТаАТОТОАаа,аССаТтТАТасСтТАаСААпАТСААСАТСОСаТАаСААсСаТтсСААТТ ттадСССапАТСаАТААвААССАпАТССАасСтТтаТ ТТ ТААТСТапААТССПСАаСААААТтТаАааТтТАТО
СТОаАААДАпаИссСАТТатоТАСААСТОСАТатТАССОСАСААТТ ТСТоСАССАС,ССТТоТасАТТСаСАТ
СССОААДАТАСТТСААСААСПАТТАаССТаААСААСОСАсСТАТАСТАТСАТСААСТатАТИАСАСААСА
АсАасссаттасАда,аататсоТСстТаААСТАТИаИСТаАСАТСАТТТапАССтТТаСАаспСАСАССАдДАСА вАТСААССАССаСаТтсататГСААатТАСТОТСАААТаАТСААСАТТТОССОСАТТАСАТТААТССИТТО вАТСТТСатаАССАТТАСИААТААССатсСстаААТААСАаСААСАТТТАСАТСААТОСТСОСТТОАТ
СаАТСАСАААССаАТТАаСААССтТасаИаТтААТАТССАСИаСААаСААСААСАТТАТИаТТСАААТТОаС дсаата,асСсассаАТАСССАТСИТТАТАТСТаСаАТСААСТАТТТСААССТаТтТТаАТАААСпСААСТад
АтТаАпАддапАСпАТСАААаАТТТаТатАТаАСААССААТСТААСАа,СОасасАТТТТаААасаАСТТСТас аасСапАТТАТСТаСААТАССАТААаССОаТАСТАТАТАСТаААССТатАТИАТССО,ААСАААТАТИатТ саАтТатСААТААТОТаОССОЯТАТТСсСТасаТТАСАТатТАТТТаААХСсССсатТоСса,аса,атаасСАа,асСаТтТАТаА
СаАССААСАТТТАССТаААСТОтТАаССтТаТатАССатааТАССПСАААТТСАТСАТТААСАААТАТаССА ,вСааСААСААДАпАТААСАТТатасСсаТтТААТААСаАТоИаСТатСстТАСАТСААСЯТаатоаТтаААСААТ
ААдадИатТАссатстаасСсаАССААСсасттсаСсАааассавататтаАаААААТТСТОДИ,аСасСсаИттася зо АаАТСССТаАТатоаатААтТотТадасССАдатсатас ТАТаААпАаСААпААСпАСААс,асаТтАТ
САСТААСААдИаТаСААаАТаААССТасСААаАСААСААтТасстААСИАСАТтоваТсттТАТТОаТтттос
АССАСТТСААСААТАТТасСтТАААСТОСТАаСО,АаСААТТаСТАСААТтоаТтСАаАтТтаАда,аСасАас дассатасттасастатластассАаТтТТАтссаватсаАдтаАатсатасасааСаААСсатоСас та
ЗЕО ІЮ МО: 6. Амінокислотна послідовність сконструйованого ВОМТ/А1 "Саї-В".
МРЕКОЕМУКОРЕМОІАМІКІРМАСОМОРМУКАЕКІНМКІМ МІРЕВОТЕТМРЕЕСОЇ МРРРЕАКОМУРМУ
ЗУХОБТМІ З ТОМЕКОММІ КОМТКІ РЕВІЗТОГ САМІ ТВІУВаг?РЕМаЦавтІютЕІ КМІОТМСІММІОЮР рав;увзЕБЕЇ М МІСРЗАВНОРЕСКЗЕСОСНЕМІ МІ ТАМамМавтомМІВЕЗРОЄТЕРСЕЕЕБІ ЕМОТМРІ І СА
СКЕАТОРАМТІ АНЕГІНАСНВЇ Ма!лйІМРМАМЕКТМАМУМЕМ5аИї ЕМЗЕЕЄІ ВТЕаСНОАКРІОБЗІ ОЄМЕ
ЕВГУМУМКЕКОІАЗТІ МКАКОІМИ ТТ ТАБ ОУМКМУЕКЕКМИЇ ЗЕОТЗакКеЕЗМОКІ КЕОКІ МКМ ТЕІМТЕ
ОМЕМКЕРКМІ МАКТУІ МЕОКАМЕКІМІМРКУТІМОСЕМІ АВМ МІ ААМЕМСОМ ГЕІММММЕТКІ КМЕТаИї.
ЕЕРУКГ . СУВИапт5ктТкКІ ОКаММКАЇ МОЇ СІКМУ/ ОЇ ЕЕЗРЗЕОМЕТМОЇ МКИаЕЕІ!ТЗОТМІЕААЕЕМІ
ЗІ ОПООММІ ТЕМЕОМЕРЕМІВІЄМІ ББОПСОЇ ЕЇМРМІЕВЕРМаККкКУЄ ОКУ ТМЕНМІ ВАОЄЕРЕНОК5
ВІАС/ТМ5ЕАСІ МРОВУМУТЕЕЗ5ОМУКККАТЕААМЕЇ СУУМЕОЇ ММОЄТОЕТЗЕМЗТТОКІАВІТШРМІСР
АГ МІСММІ УКОВЕМаАПІЕЗСАМІ ЇЇ ЕРІРЕІАІРМІ ТЕАГ МЗ5МІАМКУ ТМОТІОМАЇ ЗКАМЕКУМ ОЕМУК
ММТМУМГАКТОІОГІАККМКЕАГЕМОАЕАТКАПММОМ МОМ ГТЕЕЕКММІМЕМІ ОЇ 5ЗКІМЕБІМКАМІМІ
МКЕРГМОСБУВЗМІ ММОМІРУИУКАГЕОРОАБІ КОАГІ КМІМОМАаИтТИаОМОВІ КОКМТІ ЗТОІРЕОЇ ЗК
МУМОМОВГ ЗТЕТЕМІКМІМТЗІ М АМЕЗМНІЛОЇ 5ЗАМАЗКІМаИаЗКЕОРІОКМОЇОЇ ЕМІЕЗЗКІЕМІЇ ККА
ІМУМЗМУЕМЕЗТЗЕМ ІВІРКУЕККІБІ ММЕМ ПІМСМЕММЗИамМкУБІ ММС, ЕПМТ ООТКЕІКОВМ ЕК
ОМІМІБЗОМІМАУМЕМТІТММАМКЗКІМІМСа ВГІООКРІЗМІ СМІНАЗМКІМЕК ССС ВОТНАМІУММІКУЕМІ.
ЕОКЕГМЕКЕІКОЇ МОМОМЗСКОРУСОМ ОМОКРУУМІ МЕМОРМКУУОМУСІВа МІ КаРВНОаБМ
МІТТМІМІ 55 УВаТткепкКкМАВамкомМммАММОВУМІМУУМУКМКЕМВІ АТМАБОАСМЕКІЇ ЗАГЕІРОМ аМм'зомУумМкеКкМмоКаТа! пЯкокММ СОоММамоісвгІБЕНОЄЕММІАКІ МАМУ УМАОІЕНЗЗАТІ аО5
МЕРІРМОРОМУСЕВРІ.
ЗЕО ІЮ МО: 7. Послідовність нуклеїнової кислоти сконструйованого ВОМТ/А1 "Саї-С".
АТаССАТТСИаТСААСАДасСААТТСААСТАСАААСАСССАаТСААСсИаваСа,аТопАСАТСССАТА
САТСААСАТТоСаААСсассааТтСАААтТасаассасТТААаасСТТТААпАТОСАСААСААСАТТТ сааттТАтТосСссасАдаСатаАСАССТТСАСаААСсСсСасААаААлаасСсадтстадАссСсассАссиася
ААдаСаААдаСААХа,атооСстаТатСАасСтТАСТАСаАТттоаАСатАССтадасСАСацпАТААСаААААдаА 60 ТААСТАССТаАдААдаататааССАдастаттСадАСаТтАТСТАСАССАСасвАатстасватСасСАТО стастаАСтТАаасСАТТИатсасСссасатАатоссатстаасвсатааТАасСсАСаАТТаАСАССИААСТад
АЧатТТАТССАСАСТААСТаСАТТААСИаТТАТТСААСССОСАТтаатТАастТАтоастАаСсАА,АасСтТа
ААТСТИСТСАТСАТТВССССОС;аАССасСАСАСАТТАТССААТТоОСАИ,СТасСААааАастТааТСАСИА сагпстТаААТСТаАСССасСААТтТаасСтТАТааТАаСАСССАСаТАСАТТОСТ ТТ ТтсаССацпсАТТТТА ссттовастттаддадсдасстасдасатвАТАССААТСССОТТаСсТОСатасасасСАААТТСИЯС тТАССОЯАТСОСОСССТИТСАСООСТДАСССАТОаААСТаАтТоСсАСОЯСАсаСаТассАассасстатАСассАТТ
СССАТСААСССАААССИЯТтататТСААасаТтТААТАСаААТаСАТАСТАСЬЯА СА ТИаДОаСсввасстас
ААдатоАдасттсаААаААСстТасасАасстсаатааССАТаАСасСтТАААТТСАТТаАСсАасттТасАА вАСААТаАдаТТоСа7атстТатАСТАСТАТААСААДАТТСАААСАСАТТасСААдаСАСИ,ТТаААСААСсас 1, САААДасСАТоСТТастТАСТАСССЯССЯТСаТттасСАсСТАТАТОААСААТатТтаТтТТАААСпАСААаТтТтАСс тастатобаАдаспсАТАССТОССсасСААлдатттАасСаТтТаАТААасСтТаААаТтТТаАСАААСТатАСААС
АТаСтТаАССОаАСАТТТАСАССаАапАСААСТТ ТаТаАААТТСТТСАААИСТатТаААТСИТААААСС
ТАТСТаААТТТТаАСАААаСОасТТ ПТСААСАТТААСАТСЯТаССсААсааТаААСТАСАССАТСТАТ
АСИСТ ТТААССТасСатААСАССААССТОС,СС,ВасСсААСТТТААСасТСАПААТАСИ,пАААТСАА
СААСАТОААТТТСАСОСААаТтТаААпААСТТСАССОСОСЯТотТа,аттоаАаТТстТАТААДИаСТОСТаТасСа тасасаатТАТСАТСАССАСаСААААССАААдАдасставАСАААвасСстАСААСААа,аасрастаААТаА сстатаСАТТААааТАААСААТТасаАТСТаТат ст ттсасСссСАТСС,ААСАТААТТТТАССААССИА
ССТОААСАДааа ТААпАААТСАССАаСОАТАССОСААТАТТаААаСаСА,СОааААпАСААТАТСАСС
СстТапАТСТаАТССАаСАаТАСТАТСТаАССТТТААСТТССАСААТОААССОаспсАсСААСАТТАСаСАТ таАВААТОоТОАДОаСАаСаАСАТТАТССЯСЬТСАааСТасААСТадтассаААТАТССААСИаТТтоСсСа
ААСОааСААААдАаТтАС,аАдастацАСААаТАСАСТАТаТТсССАТТАССТОСЯтТаСАСАСИаАаТтттах
АСАСОЯЧТААААаСсСсатАтсасСсастаАССААСАаасСсаТТААСссАааа,сооСстастаАдассСадассСо татСсТтАТАССТТСТТСАаСАаСОасАСТАТИаТТААпАААаСТаААСАААдасССАСстТаласосасцАТат тоставастасатасААасАастастАТАТаАСстТсАСа,саАСадаАСсад,аСадАда,тТаласСАСТА
ССаАСААААТТастТаАТАТТАССАТСАТТАТОСССОТАТАТТОаСТоСИасССАСТИААСАТТаССААСА тастатАСАдДаАдсаАаттта,атасатассстаАтстстоссессатассатаатстастааАатто
АТттТоСОЯаЇЄВАСАТтТтеаСсалтосссататасатАссттасастаататссСтТАСАТСасСаААТААДИС тстТаАССаСТТСАСАССАТССАТААСОЯСОаСТатосАААСатТтААТаАААААТавсИаАСа,аАаа ТАС
АААТАСАТТаТтТТАСОаААТТВССТааСОСАААаТСААТАСССАЧАТСС,АССТаАТССИТААСпАдДААТ зо аААДАСАлСсСаСсаставАаААтТсАа,сСавАааССАССАААДасСсААТТАТСААСТАССААТАСААССАСІ
ТАСАСОИСААДПААСпАСААСААТААСАТТААСТТСААТАТССАТОА тт ТадасСАаСАдДастаААТОаА
АТСТАТСААСААДАаСаАТаАТСААТАТСААСААСТ ГП ТТОаААТСсАСТатТАаСаТаттоаТАССТОаАТ
СААТАССАТОАТтоСсатАтТааСИаТСАААСатотасасаАстСоаАС,аоСАасстаААдАадтаси тастаАААТАСАТТТАСОАСААТССТОИатТАСастАтааССААаТтТаАССаТсттаАААпАСАА
АаттТААСААТАСССТаАдасСАССаАСАТОССАТТ ТСААСТаАаСААаТАТаТтТаАТААТСААСИтТтстТ аТТаАдаСАСТТТСАССОСАСТАТАТСАААДААСАТСАТСААТАСТАаСАТТСТаААСсСТОаСаТтТАССА вАаСААТСАТСТаАТТаАТОТОАаа,аССаТттАТасСтТАаСААпАТСААСАТСОСаТАаСААсСаТтсСААТТ ттадСССапАТСаАТААвААССАпАТССАасСтТтаТ ТТ ТААТСТапААТССПСАаСААААТтТаАааТтТАТО
СТОаАААДАпаИссСАТТатоТАСААСТОСАТатТАССОСАСААТТ ТСТоСАССАС,ССТТоТасАТТСаСАТ
СССОпАААТАСТТСААСААСАТТАаССТаААСААСО,АаТАТАСТАТСАТСААСТатАТаСпСАСААСАА сласаастта,асАадаататстСстТаААСТАТаатадлаАТсАттапАсСстасСАааАСАССАААИ да
АТСААдаСсАаа,аСсасатсата ТСААатАСТСОТСАААТАТСААСАТТТОССОСАТТАСАТТААТССЯТТИаС
АТСТТСИаТаАССАТТАСВААТААССИаТСТаААпААспАаСААСАТТТАСАТСААТОСТОСОСТТаАТ
СаАТСАСАААССаАТТАаСААССтТасаИатААТАТССАСИаСААаСААСААСсСАТТАТИаТТСАААТТОС
АСсСсатасСсассАТАСССАТСИТТАТАТСТаСаАТСААСТАТТТСААССТИаТТТаАТААДАСпСААСТад
АтТаАпАддапАСпАТСАААаАТТТаТатАТаАСААССААТСТААСАа,СОасасАТТТТаААасаАСТТСТас аасСапАТТАТСТаСААТАССАТААаССОаТАСТАТАТАСТаААССТатАТИАТССО,ААСАААТАТИатТ саАтТатСААТААТОТаССОЯТАТТСсСТасаТТАСАТатТАТТТаААХСсСсатоСса,аса,атаасСАа,сСаТтТАТаА
СаАССААСАТТТАССТаААСТОтТАаССтТаТатАССатааТАССПСАААТТСАТСАТТААСАААТАТаССА арааСААСАААСАТААСАТТатассТтААТААСаАТоИа,ататСТАСАТСААССЯТастоатаААСААТ
ААдалдИатТАссатстаасСсаАССААСсаСсттоаСАаавассвататтаАаААААТТСТОАДИ,аСаСсаИттас
АаАТСССтТаАТатТосаатААтТотТадасССАдатоатас ТАТА АаСААпААСсАСАдааатТАТ
САСТААСААдИаТаСААаАТаААССТасСААаАСААСААтТасстААСИАСАТтоваТсттТАТТОаТтттос
АССАСТТСААСААТАТТасСтТАААСТОСТАаСО,АаСААТТаСТАСААТтоаТтСАаАтТтаАда,аСасАас 5ББ лассатАсттасастатаастасаАатТТАтТсСсосатоаАтТадтааасвссаСсвААсатоссас та
ЗЕО ІЮ МО: 8. Амінокислотна послідовність сконструйованого ВОМТ/А1 "СаО".
МРЕКОЕМУКОРОМОІАМІКІРМАСОМОРУКАРЕКІНМКІМ МІРЕВОТЕТМРЕЕСОЇ МРРРЕАКОМРМУ
ЗУХОБТМІ З ТОМЕКОММІ КОМТКІ РЕВІЗТОГ САМІ ТВІУВаг?РЕМаЦавтІютЕІ КМІОТМСІММІОЮР бо рав;увзЕБЕЇ М МІСРЗАЮНПОРЕСКОЗЕОСНЕМІ МЕ ТАМамМОавТОМІВЕЗРОЕТЕРСИРЕЕБІ ЕМОТМРІ СА
СКЕАТОРАМТІ АНЕГІНАСНВЇ УСІАІМРМАМЕКТМАММЕМ5Иї ЕМЗЕРЕЕГ АТРаСаНОАКРІОБЗІ ОЄМЕ
ЕВГУМУМКЕКОІАЗТІ МКАКОІМИ ТТ ТАБ ОУМКМУЕКЕКМИЇ ЗЕОТЗакКеЕЗМОКІ КЕОКІ МКМ ТЕІМТЕ
ОМЕМКЕРКМІ МАКТУІ МЕОКАМЕКІМІМРКУТІМОСЕМІ АВМ МІ ААМЕМСОМ ГЕІММММЕТКІ КМЕТаИї.
ЕЕРУКІ . СУВИаптеКктТкКІ ОКамУмМКАЇ МОЇ СІКМУ/ ОО ЕЕЗРЗЕОМЕТМОЇ МКОЕЕІТЗОТМІЕААЕЕМІ
З'ОПООМУМІ ТЕМЕОМЕРЕМІБІЕМІ 5БОПСОЇ ЕІ МРМІЕВЕРМОаККМУЕ ОКУ МЕНМІ ВАОЕРЕНОКО
ВІАС/ТМ5ЕАСІ МРОВУМУТЕЕЗ5ОМУКККАТЕААМЕЇ СУУМЕОЇ ММОЄТОЕТЗЕМЗТТОКІАВІТШРМІСР
А МІСММІ УКОВЕМИаАПІЕЗСАМІ ГГ ЕРІРЕЇАІРМІ аТЕАГ МЗ5МІАМКУ ТМОТІОМАЇ ЗКАМЕКУМУ СЕУУК
ММТМУМГАКТОІОГІАККМКЕАГЕМОАЕАТКАПММОМ МОМ ТЕЕЕКММІМЕМІООВІ З5КІ.МЕБІМКАМІМІ
МКЕРГМОСБУВЗМІ ММОМІРУИУКАГЕОРОАБІ КОАГІ КМІМОМАаИтТИаОМОВІ КОКМТІ ЗТОІРЕОЇ ЗК
ММОМОВ ЗТЕТЕМІКМІМТЗІИІ М АМЕЗМНІОЇ 5АМАЗКІМИаЗКЕОРІОКМОЇОЇ ЕМІЕЗЗКІЕМІЇ ККА
ІМУМЗМУЕМЕЗТЗЕМІВІРКУЕМКІБСММЕМ ПІМСМЕММЗОИм КУБ ММ ЕП ТТ ООТКЕІКОВУУЕКМ
ОМІМІЗОМІМАУМЕМТІТММАІ ККЗКІМІМавВИ ОКРІМ СМІНАЗМКІМЕК ОССВОТНАМІУМІКМЕМІ.
ЕОКЕГМЕКЕІКОЇ МОМОМЗСКОРУСОМ ОМОКРУУМІ МЕМОРМКУУОМУСІВа МІ КаРВНОаБМ
МІТТМІМІ 55 УВаТткепкКкМАВамкомМммАММОВУМІМУУМУКМКЕМВІ АТМАБОАСМЕКІЇ ЗАГЕІРОМ ам'зомУумМмкеКкМмоКкаТа!гМкокММ СОоММамо!свІБЕНОЄЕММІАКІ МАМУ УМАОІЕНЗЗАТ ас
МЕРІРМОРОМУСЕВРІ.
ЗЕО ІЮО МО: 9. Послідовність нуклеїнової кислоти сконструйованого ВоМТ/А1 "Саї-О".
АТаССАТТСИаТСААСАДасСААТТСААСТАСАААСАСССАаТСААСсИаваСа,аТопАСАТСССАТА
САТСААСАТТоСаААСсассаатТСАААтТасаяассасТ ТААДаССТТТТААвАТОСАСААСААСАТТТ сааттТАтТосСссасАдасСатаАСАССТТСАСаААСССавААлаАдАаааСаАатсТадАссСсасСссСсАссво
ААдаСаААдаСААХа,атооСстаТатСАасСтТАСТАСаАТттоаАСатАССтадасСАСацпАТААСаААААдаА
ТААСТАССТОАААСсОаСТаТатаасСАдастаттСадАСаТтАТСТАСАССАСсасвАатставатСасСАТО стастаАСстТАааСсАТТатсасСсатАатоссатстасасатаатАасСАСаАТТалАСАССаААСТад
АЧатТТАТССАСАСТААСТаСАТТААСИатТАТТСААСССОССОСАТтаатТАасСтТАтТостАаСаААдапАаста
ААТотТааТСАТСАТТаСОСССОпСАаСасСАСАСАТТАТССААТТоОСАа,аТасСсААа,аАасттТтааТСАСИА сагпстТаААТСТаАСССасСААТтТаасСтТАТааТАаСАСССАСаТАСАТТОСТ ТТ ТтсаССацпсАТТТТА ссттосастттаААдададласстасааатТаАТАССААТСССТТаСТОССаТОаСсасасСАААТТСЯС тТАССОЯАТСОСОСССТИТСАСОрСТДИАСССАТОаААСТаАТоСсАСсасааИаоСАссасстатАсаасСАТТ ,ССАТСААСССАААССИаТтатат г СААааТТААТАСААТаСАТАСТАСЬЯАСАТОАаСССассСТааА зо датсдасттсадАаАдАстТасасАассєтсаатааССАТаАСастАААТТСАТТаАСАасСтТТасАА вАСААТаАдаТТоСаТатстТатАСТАСТАТААСАААТТСАААСАСАТТаСААаСАСИ,ТТаААСААСцаТс
САДААаСАТССЯСТТааТАСТАСССОСС,ТС,аТтТасАаТтАТАТИААСААТИатТтат ГгТАААпАпААаТАССо тастатобаАдаспсАТАССТОССсасСААлдатттАасСаТтТаАТААасСтТаААаТтТТаАСАААСТатАСААС
АТаСтТаАССаАСАТТТАСАССаАапАСААСТТ ТИТаАААТТСТТСААаата т ГаААТСИТААААССО
ТАТСТаААТТТТаАСААдАааСа,сТт Пт СагдаАТТААСАТОСТаССсААа,саТААСТАСАССАТСТАТ
АСИСТ ТТААССТасСсатТААСАССААССТОСС,ассААСТТТААСИ,ааТСАСААТАСОСИПАААТСАА
СААСАТаААТТТСАС,ААСТ ТІААСААСТТСАСОЯЬ,ТотТаттоаАатСстТАТААССТИСТО ТИС тасасаатТАТСАТСАССАСаСААААССАААдАдасставАСАААвасСстАСААСААа,аасрастаААТаА сстатаСАТТААааТАААСААТТаааАТСТаТат ст тсассСАТОССОСААСАТААТТТТАССААСОИА
ССТОААСАДаИааТаААпАААТСАССАаСОАТАСОСААТАТТаАдАда,аСсАаа,СасААпАСААТАТСАСС
СстТапАТСТаАТССАаСАаТАСТАТСТаАССТТТААСТТССАСААТОААССОаспсАсСААСАТТАСаСАТ таАСААТОоТаАДаСАаСаАСАТТАТССЯСЬТСАааСТасААСТадТассвААТАТССААСИТТтоСсСа
ААСОааСААААдАатТАСа,адаставАСААаТАСАСТАТаТТСсССсАТТАССТОССОСТаСАСАСИ,А,ТТТаА
АСАСОЯЧТААААаСсСсатАтсасСсастаАССААСАаасСаТТААСсАаааооСстастаАдассСсадасса тТатСсТтТАТАССТТСТТСАаСАаСОсАСТАТИаТТААпАААаТаААСАААдасССАСталасссасцАТат тоставастасатасААасАастастАТАТаАСстТсАСа,саАСадаАСсад,аСадАда,тТаласСАСТА
ССпАСААдАаттастаАТтТатТАССАТСАТТАТСССИаТАТАТТавИАТОССаСАСТОаААСАТТОСаССААСА тастатАСАддадСсаАаттта,атасатассстаАтстстоссессатассатаатстастааАатТто
АТттТоСОЯаЇЄВАСАТтТтеаСсалтосссататасатАссттасастаататссСтТАСАТСасСаААТААДИС пот аАССаСТТСАСАССАТССАТААСОССОаСТаТатссАААСатТААТаАААААтТасИаАСа,аАааТтТТАС
АААТАСАТТаТтТТАСОаААТТааСсТавасСИ,ААдАсаТтСааАтТАСССАСАТСИАССТаАТОССИСТААСААААТ вАААвСАасаСсастацАаААТСАСИСсацсАаасССАССАААаСААТТАТСААСТАССААТАСААССАС
ТАСАСОИСААДПААСпАСААСААТААСАТТААСТТСААТАТССАТОА тт ТадасСАаСАдДастаААТОаА
АТСТАТСААСААДАаСаАТаАТСААТАТСААСААСТ ГП ТТОаААТСсАСТатТАаСаТаттоаТАССТОаАТ
СААТАССАТОАТттоСсатАТааСИаТСАААСОЯатотТасасаАсттоваАС,аоСАасстаААдАадтаси тастаАААТАСАТТТАСОАСААТССТОСтТАСсасСтТаАтааССААа,аТТаАССаТсттаАААСпСАСАА
А,ТТААСААТАСССТаАаСАССОСАСАТОССАТТ ТСААСТОаАаСААСаТАТаИТтТаАТААТСААСИтТтстТ аТТаАдаСАСТТТСАССОСАСТАТАТСАААДААСАТСАТСААТАСТАаСАТТСТаААСсСТОаСаТтТАССА вАаСААТСАТСТаАТСАТСТадасССатТАТаСААДаСААпАТСААСАТСССатАаСААсаТСААТТТ во тТаАСССаАтТСаАТААаААССАпАТССАасСтТаТпТААТСТапААТС,АаСААААТТаАдааТТАТОС
ТаАДАДААСассСАТТатСсТАСААСТОСАТаТтТАСИАСААТТТСТоСАССАИССТТСоТасАТТСОаСАТС
ССОАДАТАСТТСААСАС,САТТАаССТаААСААСИаАсаТАТАСТАТСАТСААСТатАТИСАСААСАА салассаттапйААлдсататСстсТаААСТАТаИТаАСАТСАТТТаСАССТТаСАааАСАСССААСАС
АТСААдаСсАаа,аСсасатсата ТСААатАСТСОТСАААТАТСААСАТТТОССОСАТТАСАТТААТССЯТТИаС
АТСТТСатТаАССАТТАСОААТААССИаТСТаААТААСАаСААСАТТТАСАТСААТОССТОСаСТТаАТС вАТСАСАААССаАТТАаСААССтТасвсатТААТАТССАСИаСААаСААСААСАТТАТОТТСАААТТааА ссетпасСсасСсаАТАСССАТССОСТТАТАТСТаСАТСААаИТАТТТСААССТатТтаАТАААСаААСТадА таАСАДасСАСАТСАААВАТТТатАТаАСААССААТСТААСАаССаасСАТТТТаААсааХастоТацвсаея аСсаАТТАТСТаСААТАСОАТАдасССаТтАСТАТАТаСТаААССТатАТаАТССО,СААСАААТАТОТОа вСАТаТСААТААТОТаСОСТАТТСоСЯСТОааТТАСАТатТАТТТаАаАсСосатоСса,аса,атаа,аАа,аСатТАТОаАС
САССААСАТТТАССТаААСТотТАааССстТаТатАССаТасйТАССАААТТСАТСАТТААСАААТАТАССАС
СаспСААСАААСАТААСАТТатТасСатААТААСаАТоСсСТатСсТАСАТСААСЯТОаСтТостаАдасСатА
ААпчАаТтАсСсатотаасСсаАССААСсасттсасавсас,асатагтАпААААТТоТОвАаа,аСсасаттацА слтосстса,7ататосатса7атстадасСсСАда,атоатас ТАТаААдаАдаСААсаААСаАССАсааса ТАТО
АСТААСААХССТтТасСААаАТаААССтасСААдаАасСсатоатааТААСсАСАТоСсаст ТАТТааТтТТТОСА
ССАаТТСААСААТАТТаСТАААСТОИтТАаСОсАаСААТТааТтТАСААТСЯТСАсаАТТ,аАа,аСасССаТтА ссатсостттасеастатааСстасаАаТтТАТоСсСссатсаАтТаАтТасттасааСпААСатоСас та
ЗЕО ІЮ МО: 10. Амінокислотна послідовність сконструйованого ВОМТ/А1 "Саї-О".
МРЕКОЕМУКОРЕМОІАМІКІРМАСОМОРМУКАЕКІНМКІММІРЕВОТЕТМРЕЕСОЇ МЕРРРЕАКОМРМУ
ЗУХОБТМІ З ТОМЕКОММІ КОМТКІ РЕВІЗТОГ САМІ ТВІУВаг?РЕМаЦавтІютЕІ КМІОТМСІММІОЮР рав;увзЕБЕЇ М МІСРЗАЮНПОРЕСКОЗЕОСНЕМІ МЕ ТАМамМОавТОМІВЕЗРОЕТЕРСИРЕЕБІ ЕМОТМРІ СА
СКЕАТОРАМТІ АНЕГІНАСНВЇ Ма!лйІМРМАМЕКТМАМУМЕМ5аИї ЕМЗЕЕЄІ ВТЕаСНОАКРІОБЗІ ОЄМЕ
ЕВГУМУМКЕКОІАЗТІ МКАКОІМИ ТТ ТАБ ОУМКМУЕКЕКМИЇ ЗЕОТЗакКеЕЗМОКІ КЕОКІ МКМ ТЕІМТЕ
ОМЕМКЕРКМІ МАКТУІ МЕОКАМЕКІМІМРКУТІМОСЕМІ АВМ МІ ААМЕМСОМ ГЕІММММЕТКІ КМЕТаИї.
ЕЕРУКГ . СУВИаптеКктТкКІ ОКамУмМКАЇ МОЇ СІКМУ/О ЕЕЗРЗЕОМЕТМОЇ МКОЕЕІТЗОТМІЕААЕЕМІ
ЗІ ОПООММІ ТЕМЕОМЕРЕМІВІЄМІ ББОПСОЇ ЕЇМРМІЕВЕРМаККУЄЕ ОКУ МЕНМІ ВАОЕРЕНОКО
ВІАС/ТМ5ЕАСІ МРОВУМУТЕЕЗ5ОМУКККАТЕААМЕЇ СУУМЕОЇ ММОЄТОЕТЗЕМЗТТОКІАВІТШРМІСР
А МІСММІ УКОВЕМИаАПІЕЗСАМІ ГГ ЕРІРЕЇАІРМІ аТЕАГ МЗ5МІАМКУ ТМОТІОМАЇ ЗКАМЕКУМУ СЕУУК
ММТМУМГАКТОІОГІАККМКЕАГЕМОАЕАТКАПММОМ МОМ ГТЕЕЕКММІМЕМІ ОЇ 5ЗКІМЕБІМКАМІМІ
МКРГМОСБУВЗМІ ММОМІРУМИУКАГЕОБЕРАБІ КОСА КМІМОМАСаИТИаИомМоОвІ КОКМТІ ЗТОІРЕОЇ ЗК
МУМОМОВГ ЗТЕТЕМІКМІМТЗІ М АМЕЗМНІЛОЇ 5ЗАМАЗКІМИаЗКЕОРІОКМОЇОЇ ЕМІЕЗЗКІЕМІ КМА
ІМУМЗМУЕМЕЗТЗЕМІВІРКМЕМ5ІБІММЕМ ПІМСМЕММОЗОИмМ КУБ ММ ЕП ТТ ООТОБІКОВУМгКУ
ОМІМІБЗОМІМАУМЕМ ТІ ТММАСММЗКІМІМИЕ ВІТООКРІЗМ СМІНАЗММІМЕК ССС ВОТНАМІМІКМУЕМІ.
ЕОКЕГМЕКЕІКОЇ МОМОМЗСКОРУСОМ ОМОКРУУМІ МЕМОРМКУУОМУСІВа МІ КаРВНОаБМ
МІТТМІМІ 55 УВаТткепкКкМАВамкоМммАММОВУМІМУУМУКАКЕМВІ АТМАБЗОАСМЕКІЇ ЗАГ ЕІРА М вв ЗОУМУМКЗКМрОос ПМКоКММ ОВБАВаМОІаСЕІСЕНОЄЕММІАКІ МАЗМУ УМА!ОСІЕНАЗАН ас
МЕРІРМОРОМУСЕВРІ.
Приклади
Наступні приклади слугують для ілюстрації конкретних варіантів здійснення даного винаходу та не обмежують обсяг даного винаходу, визначеного у формулі винаходу будь-яким чином.
Приклад 1
Отримували три різні зразка молекули сконструйованого ВоМТ/АтТ відповідно до даного винаходу.
Амінокислоти, вибрані для модифікації (сайти мутацій), обирали з використанням низки різних критеріїв.
Критерії заміни залишків були наступними: 1. тип залишку; 2. ступінь поверхневої доступності; 3. положення відносно вторинної/третинної структури; 4. положення відносно відомих функціональних доменів ВоМТ; 5. ступінь консервативності послідовності серед підтипів ВОМТ/А або ВоМТт/Е; 6. Імовірність введення додаткового сайту убіквітинування.
У цьому прикладі для мутації обирали аспарагін (Авзп, М) та глутамін (Сіп, 0), тому що вони є полярними, подібними за розмірами до Гу, утворюють тільки більш слабкі дипольні взаємодії з іншими залишками та 14 95 молекули складається з цих двох залишків.
Залишки Азп та Сп, видимі на поверхні молекули, ідентифікували з кристалічної структури
ВоМТ/А1 (РОВ ІС: ЗВТА). Це гарантує, що всі заміщені залишки зможуть показувати свій заряд зовні. На підставі цього переліку можна було виключити ті, що менш придатні для заміни, за бо допомогою застосування пунктів 3-5 вищезазначених критеріїв вибору (повторюваний спосіб).
Неконсервативні залишки в ВоМТ/Аї ідентифікували на підставі вирівнювань з іншими підтипами ВоМТ/А та функціонально подібним серотипом ВОМТ/Е. Ті, що зустрічалися як основний залишок в інших послідовностях, обирали як кращих кандидатів для заміни.
Після послідовних повторюваних циклів відбору за допомогою критеріїв вибору, зазначених у попередніх розділах, визначили остаточний список залишків-кандидатів. Їх перевіряли на потенційне утворення додаткових консенсусних послідовностей убіквітинування (з використанням серверу СКБААР ОрЗйе). Незначну кількість тих, що були ідентифіковані, вилучили шляхом заміни лізину, що підлягає заміні, на аргінін.
Остаточні ілюстративні катіонні конструкції, синтезовані для послідовності ВОМТ/АТ, вказані нижче під назвою СаїгА, Саі-В та Саї-С. Кожна конструкція має молекулярну масу 149637 дальтон.
Саї-А: МОЗОК, 5955К, 0991К, М1026К, М1О52К, 01229К, М886К.
Саї-в: МОЗОК, 5955К, 0991К, М1026К, М1052К, 01229К, МО5АК.
Саї-С: МОЗОК, 5955К, 0991К, Мт026К, М1052К, 01229К, М1025К.
Приклад 2
Амінокислотні послідовності ВОоОМТ/В, Е та Е оцінювали на наявність потенційних залишків, які можна замінити на ГГ ух або Агуд. Ця початкова оцінка визначала залишки, які можна замінити з отриманням білка ВОоМТ/В, Е або Е з підвищеною рі.
Аналізували початкову послідовність ВОМТ/В (Ас: Р10844), ВоОМТ/Е (Ас: 200496), а також
ВоМТт/Е (Ас: РЗО996), та амінокислотна композиція наведена в таблиці нижче.
Таблиця З
З таблиці зрозуміло, що в амінокислотній послідовності була присутня однаково велика кількість полярних залишків Авп/ЗіІп, як спостерігалось для ВОоМТ/А1. Також існувала відносно велика кількість кислих (Азр/Зіи) залишків, які потенційно можна було змінити або на відповідні їм нейтральні залишки (Авп/сіп), або на основні залишки (Гу або Аго).
Приклад З
Ідентифікація переважних амінокислот клостридіальних токсинів для модифікації
Для ВоМТ/А, ВоМТ/В та ВоМТ/Е були доступні дані структури повної довжини; однак, для
Зо інших чотирьох серотипів створили теоретичну модель на основі послідовності та відповідної структурної гомології з використанням комп'ютерної програми ГООРР.
Кожну структуру аналізували за допомогою АгеаіІМо!ї (набір ССР4), а доступні залишки ідентифікували як ті, що мають значення суми більше, ніж 40. Залишки з полярними бічними ланцюгами вибирали з даного списку та на основі цього цього перевагу надавали залишкам, які або були кислими (А5р 4 Сіш), або мали бічний ланцюг - акцептор Н-зв'язку (А5п й іп).
Заключний обчислювальний крок полягав у виборі залишків між а«-спіралями та ВД-нитками на основі аналітичних даних з серверу 5ігіде. Структуру кожної молекули візуально перевіряли з ідентифікацією залишків, що знаходяться в межах граничної області -таких уникали.
Для ВоМТ/Аї список переважних залишків доповнювали залишками, що є функціонально неконсервативними щонайменше у 90 95 всіх вирівняних послідовностей |великі неполярні бічні ланцюги (Меї, Рго, Ріє, Тгтр) вважалися еквівалентними, невеликі неполярні бічні ланцюги (су,
Аа, МаІ, Ге, Не) вважалися еквівалентними, кислі бічні ланцюги (А5р, Сійш) вважалися еквівалентними, та основні бічні ланцюги (Аг9у, Губ5) вважалися еквівалентними). Більш конкретно, дані неконсервативні залишки, які зустрічалися як основні залишки у щонайменше 1095 послідовностей, та неконсервативні Абп, Сіп, Ар або Сі у еталонній послідовності обирали в якості кандидатів.
Для решти серотипів проводили багаторазові вирівнювання послідовностей між підтипами для ідентифікації функціонально неконсервативних залишків, які зустрічалися як основні залишки у щонайменше 10 95 послідовностей.
Переважні амінокислоти клостридіальних токсинів для модифікації:
ВоМТ/А:
АБМ 886, АБМ 905, СІ М 915, АБМ 918, СІ Ш 920, АБМ 930, АБМ 954, 5ЕНВ 955, СІ М 991, СИ О 992, СІ М 995, АБМ 1006, АБМ 1025, АБМ 1026, АБМ 1032, АБМ 1043, АБМ 1046, А5М 1052, АР 1058, НІ5 1064, А5М 1080, СІ О 1081, СІ О 1083, АР 1086.
ВоОоМт/В:
АБМ 873, АБМ 874, С ШО 892, АБР 895, АБМ 906, АБР 940, АБМ 948, СІ ШО 949, АБМ 958, АБМ 959, АБМ 979, А5М 990, С Ш 993, АБР 994, СІ 0 997, АБМ 1012, АБМ 1019, АБР 1030, АБ5Р 1047,
АБР 1049, 210 1065, 210 1072, СІ М 1176, БО 1189, СІ О 1252, АБМ 1273.
АБМ 881, АБР 898, 2 916, СІ ШО 927, АБМ 952, АБМ 964, АБМ 965, АБМ 984, СІ ШО 985, АР 986, АБР 996, АБМ 1000, СІ О 1036, АБМ 1041, АБР 1062, АБР 1064, 2 ШО 1079, АБ5Р 1081.
ВоМТ/0:
АБМ 877, АБР 893, А5М 894, А5М 898, А5М 920, АБМ 945, АБМ 948, СІ О 957, СІ М 958, АБМ 959, АБМ 968, АБМ 979, СІ О 1030, АБР 1031, АР 1033, СО 1047, СГ О 1051, АБМ 1052, 21 1066, І М 1122.
ВоМТ/Е:
АБМ 859, А5Р 860, АБМ 892, АБР 893, АБР 904, АБР 909, АБМ 928, АБМ 932, АЗМ 934, АБМ 935, СІ Ш 936, АБР 945, АБМ 946, АБМ 947, АБМ 966, А5М 976, АБМ 979, АБМ 981, АБР 985, СІ М 1014, АБМ 1019, АБМ 1022, АБР 1027, АБМ 1035 та АБМ 1140.
ВоМТ/Е:
АБМ 879, АБР 896, АБМ 922, АБМ 923, АБМ 928, АБМ 947, АЗБМ 950, А5М 952, АБМ 953, СТ О 954, АБМ 963, АБМ 964, АБМ 965, АБМ 987, (І М 997, АБМ 1037, АБР 1040, АБР 1045, АБМ 1055,
АБР 1056.
ВоМт/а:
АБР 900, А5М 909, АБМ 910, СІ О 912, АБМ 913, АБМ 945, АБМ 947, СІ ШО 956, АБМ 965, АР 966, А5М 986, АБМ 1001, АБМ 1038, АР 1040, АБМ 1046, АБР 1057, 2 О 1073, А5М 1075, АБМ 1090.
Темт:
АБМ 893, АБР 894, АБР 91 1, АБМ 919, АБМ 927, АБМ 928, С Ш 929, СІ М 968, АЗМ 972, 2 973, 21 ШО 1010, АБР 1018, АБМ 1079, АБМ 1080, АЗМ 1081, АБМ 1097.
Послідовності, що використовуються
Облікові номери:
ВоМТ/А: Р10845,
ВоМТ/В: Р1О0844,
ВоМт/С1: Р18640,
ВоМт/0: Р19321,
ВоМТ/Е: 000496,
ВоМТ/Р: МР 001390123,
ВомМт/а: 060393,
ТемМмт: РО4958.
Джерело даних структури
Кристалічні структури ВОМТ/А (ЗВТА. раб), ВоМмТт/В (1ТЕРММ) та ВОМТ/Е (ЗЕЕ2.раб) отримували з КСЗВ.
Гомологічне моделювання ВоМТт/Сі, ВоМТ/О0, ВоМТ/Е, ВоМТ/З та ТемМмт здійснювали з використанням ГООРР та наступних послідовностей, відповідно: Р18640, Р19321,
УР 001390123, 060393 та РО4958.
Аналіз структури
Доступні залишки визначали з використанням АгеаЇМої з набору ССРА4.
Розміщення вторинних структур визначали з використанням 5Іігіає.
Залишки граничної області визначали за допомогою візуальної перевірки з використанням
Вавмо!ї.
Аналіз послідовностей
Послідовності повної довжини ВОМТ отримували з МСВІ.
Вирівнювання здійснювали з використанням Сіивіаїх.
Приклад 4
Клонування, експресія та очистка
ДНК-конструкції, які кодують молекули сконструйованих ВоМТ/А, описані в прикладі 1, синтезували, клонували у вектор експресії руУ401, а потім трансфікували у ВІ 21 (ОЕЗ) Е. соїї. Це забезпечило можливість надекспресії розчинних форм рекомбінантних білків СагА, Саї-В та
Саї-С у ВІ 21(ОЕЗ) Е. соїї.
Рекомбінантні сконструйовані ВоМТ очищували з використанням класичних методів хроматографії з лізатів Е. соїї. Застосовували перший етап очищення з використанням катіонообмінної смоли з подальшим проміжним етапом очищення з використанням смоли з гідрофобною взаємодією. Один ланцюг рекомбінантного сконструйованого ВоМтТ потім 60 розщеплювали шляхом протеолізу з отриманням в результаті активованого дволанцюгового сконструйованого ВоМтТ. Потім застосовували заключний етап очищення з видаленням забруднень, що залишилися.
Приклад 5
Визначення характеристик очищених сконструйованих ВОоМТ
Характеристики сконструйованих ВоМтТ, описаних вище в прикладі 1, визначали експериментально наступним чином.
Вимірювання рі показали, що сконструйовані ВоОМТ мали ізоелектричну точку більшу, ніж така у немодифікованого (нативного) ВоОМТ/А1 - див. фігуру 1 та таблицю нижче.
Таблиця 4
БЕ 23231009
Саїб5уг(Кк1064нН/М886К ' пек 32323300
Саїбу2г(К1064/М954К "
ПЕКИ 33230000
Саїбу2г(К1064нН/М1025К о
Нативний ВоМТ/А1
Здатність сконструйованих ВоОМТ проникати в нейрони та розщеплювати 5МАР-25 (мішень
ВоМТ/Ат1) оцінювали з використанням ембріональних нейронів спинного мозку щурів (езСМ). На фігурі 2 продемонстровано, що сконструйовані ВоМТ зберігали таку саму здатність проникати в нейрони та розщеплювати 5МАР-25, як нативний ВОМТ/А1.
Ефективність сконструйованих ВоМТ додатково оцінювали із застосуванням аналізу на препараті діафрагмальний нерв - правий/лівий купол діафрагми миші (тпРМНО). На фігурі З продемонстровано, що сконструйовані ВоМтТ зберігали таку саму здатність інгібувати скорочувальну здатність правого/лівого куполу діафрагми миші, як нативний ВОМТ/А1.
Аналіз показника відведення пальців (АБ) у мишей іп мімо використовували для оцінки ефективності, а також безпеки в порівнянні з нативним ВоМТ/Аї. Обидві молекули демонстрували більш високе відношення безпеки в порівнянні з нативним ВОоМТ/А1 та були дещо більш активними. Ці дані представлені нижче (таблиця 4).
Таблиця 4 пг/миш пг/миш пг/миш безпеки -ЯАВА5 ЕО50: розрахована доза, що індукує ОАБЗ 2, -доза ОА5 4: експериментальна доза, що індукує САЗ 4, -ВУУ: маса тіла, -доза для -10 95 ДВМУ: розрахована доза, що індукує зниження на 10 95 від ВМУ в порівнянні з
ВУУ при БО, -відношення безпеки: доза для -10 95 АВУМ / ОА5 ЕО50О.
Відношення безпеки є мірою негативного ефекту лікування за допомогою ВоМТт (втрата ваги) відносно ефективності (половина максимального показника відведення пальців (ОАБ)).
Його розраховують як відношення -10 95 маси тіла (ВУМ) до ОА5 ЕО50О, де -10 95ВМУ відноситься до кількості ВОМТ (пг/тварину), необхідної для 10 95 зниження маси тіла, та ЕО50 відноситься до кількості ВОМТ (пг/тварину), що забезпечить ОАЗ 2.
Зо Аналіз ПОА5 виконують за допомогою ін'єкції 20 мкл сконструйованого клостридіального токсину у складі з желатино-фосфатним буфером у комплекс литкового/камбаловидного м'язів мишей, з подальшою оцінкою відведення пальців, як раніше повідомляв АокКі (АокКі КК, Тохісоп 39: 1815-1820; 2001).
Приклад 6
Додатковий сконструйований клостридіальний токсин відповідно до даного винаходу розробляли з використанням критеріїв, викладених вище в прикладі 1.
Дана катіонна конструкція також була похідним від ВОМТ/А1 та мала розраховану рі 7,4 та молекулярну масу 149859. Конструкцію назвали Саї-Ор. У той час як конструкції Саї-А, Саї-В та
Саї-сС містили залишки, змінені на лізин, Саїі-О містила залишки, змінені на аргінін.
СаО: М11888, 012138, Сс12158, М12168, М12428, М12438, 512748, Т12778.
Приклад 7
Лікування пацієнта, що страждає на цервікальну дистонію
БО-річна жінка, що страждала на спастичну кривошию, знаходилася в клініці, причому її попередньо лікували терапевтично ефективною кількістю стандартного препарату ВоМТ/А у м'язи шиї; однак, пацієнтка відчувала дисфагію внаслідок поширення токсину до ротоглотки.
Пацієнтку лікували за допомогою ін'єкції у м'язи шиї приблизно 1,5 нг (або більше) сконструйованого ВоМТ/А за даним винаходом. Кривошия пацієнтки значно зменшилася через 3-7 днів без розвитку дисфагії, та пацієнтка здатна була тримати голову та плече в нормальному положенні протягом щонайменше п'яти місяців. У зв'язку з посиленням утримання в тканині молекул сконструйованого ВОМТ/А та зниженням поширення лікар має можливість ін'єккгувати більше продукту, не боячись побічних ефектів; підвищення дози призводить до подовження тривалості дії.
Приклад 8
Лікування пацієнта, що страждає на тонічний блефароспазм 47-річний чоловік знаходився в клініці з тонічний блефароспазмом. Пацієнта лікували за допомогою ін'єкції від 5 пг до 25 пг сконструйованого ВоМТ/А за даним винаходом у латеральну претарзальну область кругового м'яза ока верхньої повіки та латеральну претарзальну область кругового м'яза ока нижньої повіки. Полегшення симптомів пацієнта відбувалося приблизно через тиждень та продовжувалося щонайменше п'ять місяців без птозу повіки. Підвищення безпеки поліпептиду за даним винаходом надає можливість лікарю збільшити дозу та, отже, подовжити тривалість клінічного ефекту.
Приклад 9 27-річний чоловік, який страждав на церебральний параліч, знаходився в клініці з важкою
Зо формою кінської стопи та мав утруднення при ходьбі. Пацієнта попередньо лікували терапевтично ефективною кількістю ВоМтТ/А, причому часткове поліпшення його ходи супроводжувалося м'язовою слабкістю та болем в кінцівках. Пацієнта лікували за допомогою ін'єкції приблизно 20 пг/кг сконструйованого ВоМТ/А за даним винаходом в кожну з двох ділянок у медіальній та латеральній голівках литкового м'яза ураженої нижньої(нижніх) кінцівки(кінцівок).
Протягом тижня хода пацієнта покращувалася без побічних ефектів, які спостерігалися раніше, та симптоматичне полегшення тривало щонайменше чотири місяці. Можливість дозування лікарського засобу в більш високих кількостях призводило до варіантів лікування, які зумовлювали подовження тривалості дії.
ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
«1105 СИНТАКСИН ЛІМІТЕД «1205 КАТІОННІ НЕЙРОТОКСИНИ «1305 РАаООВОщШО «1505 св 1312317.9
«1515 2013-07-09
«1605 10 «1705 РабепсІп версії 3.5
«2105 1
«2115 3888
«2125 ДНК «213» С1іовЕгідійт роємііпит
«4005 1 асдссаєссу Ссаасаадса асссаассас ааацасссад ЄсаасуддсуєЄ сдасаєсддса бо басаєсаада СсСссдаасудс сддЕсаааєсд садссуддЕСбСа аддсеєсеЕсаа даєссасаас 120 аачаєсєдуду сСбаєсссуда дсусєдасасс сСЕСасдаасс судаачаад счаєсєдаас 180 ссдссассдда аадсдаадса адсссссдсс адссасврасуд аєссдасдба ссєдадсасд 240 чаєаасчааа аачасаасса ссєдааадудс деЕдассаадс ЄДдЕсССЧТаасу Сасссасадс 300 асчччаєссудуд дЕСЧЯсасусєє дсєдасвтадс ассуєєссу дсассссуаєсє сєдоадоаєЄоаЧє 360 адсасчассд асассдаасс дааддеєбасєс дасассаасс дсаєсаасує Сарєсаассд 420 чаєдчасадсс аєсусадсда ачадссчдаасє сєддссаєса ЄсСуддсссдад сдсадасаєсс 480 асссааєссу адсудсаачад сссєсуддеЕсас дадчаеЕєсєда асссдасссу сааєддсває 540 ддЕадсассс адрасаєєсу єсЕсссдссу дарєссассс єЄсддасеЕеєєда адададссоід 6о0 чаччєсЧавєа ссаасссуєє дсЕдадЧчєдсу дадсааасєсу ссассаєсс ддсеЕдеЕсасу ббо сЕддсссаєбд аассбдаєсса сдсаддссас сдссеєдсасуд дсаєєсєдссає саасссааас 720 сдєЕдЕдсЕєса аддсеєаасас дааєдсаєвас сасудадаєда дсддссеЕдда адесадсесес 780 чаачаассус дсассЕссуд Єддссаєдас дссааасєсса Єсудасадсес дсаададаає 840 чадеЕсссудєс Єдеассасса бЄаасааасєсс ааадасаєсд саадсасуєсе даасааддес 900 аааадсасєсу Сєддсасвас сусуєсдуєвєд садсаєаєда адааєдеЕдеЕс сааададаад 960 басссдсвєдЕ ссудауддаєас сессуддсаад ЕЄсадсуєєду аєаадсєдаа дЕсСсдасааа 1020 сЕдбасаада Єдсєдассда дасєсасасс даудасаасе ЕсдеЕдааавс сеЕссааачід 1080 сбеЕдааєсуєа ааасстаєсе дааєєсєєдас ааадсудееєс ссаадаєсаа саєсдєдссд 1140 ааддєдаасе асассассса єдасудеЕєвєє аасседсуєа асассаассо ддасддсдаас 1200
СЕсаасуддес адаасасуда аассаасаас аєдааєеєсса саадсєдаа даассєсас 1260
ЧаєседеЕєсу адсеєсвтаєсаа дсеЕдсЕдЕдс дЕдсдсуддбеа ссаєсасса саааассааа 1320 адсссддаса ааддстасаа сааддсусеєд ааєдасссдс дсаєсаадде ааасааєсвєд 1380 чассеєдееєсе сеЕссудссаєс сдаадаєаає єсвассаасу ассєдаасаа дддеЕдаадаа 1440 аєсассадсу абасудаасає Єдаадсадсуд даачадааса сСсадссєдда Єсєдаєссад 1500 садсасваєс Єдассеєєсаа сеЕссдасаає даассуддада асаєсадсає Єдадааєсьд 1550 адсадсудаса ссаєсєсуддеса дсеЕддаасвєд аєдссдааса сСсудаасусеєс сссдаасддс 1620 аааааусасу адсєддасаа дсасасвтаєд ЕЄСсаєвтасс сдсудєдсаса даадсеЕсдаа 1680 сасддеаааа дссудеаєсдс дсєдассаас адсудеЕсаасуд аддсссеєдсеЕ даасссдадс 1740 сдЕдЕСсСвава ссеЕєсЕсса садсудасває дчесаадааад Єдаасааадс сасєдаддсс 1800 чсчаєдеєсс сддадсЕдоадЕ ддаасадсвєд деаєаєдасо ссасудасуда дасдадсдаа 1860 чЧЕдадсасса ссдасаааає Єдсєдаваєсє ассаєсаєвта ссссубаєсає сдудессуддса 1920 сЕдаасаєєд дсаасаєдсс деасааадас дасЕстЕдвєддд дЕдсссяєдає сеєсеєссдадве 1980 чдссуєдаєєс сдсєдчдадеє саєєссудад аєєдсдаєсс суддеЕдеЕсдуау бассеєсоасд 2040 сЕддЕдЕсСсЕ асаєсусудаа сааддеЕсссу асудсбєсада ссаєсдаєаа судсдсєдЕсу 2100 ааасудєаасу аааагаєсддда сдаддеЕєсас ааасасаєєдд сСвеасудааєсу дссддсдааа 2160
ЧдсЕсаасассс адаєсчдассеє даєссуєаа аааасучааач аддсудсєдча дЧааєсадс 2220 чаддссасса аадсаассає саассассаа Сасаассадс асасудаача ачачаадаає 2280 аасаєєаасе ссаасаєсуда єдаєєєдадс адсаадссда аєдааєссає саасааадсд 2340 аєдаєсааса сСсаасаадсє єЕсЕдааєсад Едеадсуєес субассеєдає даасадсаєд 2400 аєсссуєбаєдд дсдеЕсааасу ЕСЕддаддас ЕЄсдасудсса дссєдааада СодсєстЕдссд 2460 аааєасаєссє асдасааєсу Єддсасусєд аєєддссаа сСєЄдассудсес дааадасааа 2520
ЧдЕсаасааса сссебдадсас сдасаєссса ЕЄЄсаасєда дсаадсаєдеі сдаєааєссаа 2580 судЕСЕдЕєда дсасеЕєесас сдадсасаєс ааааасаєса саасассад саєєсєдаас 2640 сЕдсдЕбасуд ададсааєса єссдаєсдає седадссудсє абдсаадсаа даєсаасаєс 2700 чЧдасадсаадуд Єсаасеєсєда сссдаєсдає аадаассада Сссадссєудєє сСааєсєддаа 2760 бсдадсаааа ссдаддеває сседааааас дссаєєдесс асаасеєссає дсасдадаає 2820 рЕСсСЕсСсасса дссЕссддає Есдсаєсссу аааєсасесса асадсаєса сссдаасаас 2880 чадеаєасса ссаєсаассд баєддадаас аасадсЯдеЕс дчаааддаєдеЕс Єседаастає 2940 часЧдачаєса сесддассьс дсаддасасс саададаєса адсадсудсудє сдєдесЕесаад 3000 басеєсєсааа сдаєсаасає єсссдаєсас аєсааєсуєс дччаєссєссудє дассаєсас 3060 аасаассуєс Єдаасаасад саадаєєсас аєсааєсдуєс дсеєдаєсда Ссадааассд 3120 аєсадсаасс сЄдддбаасає ссасудсаадс аасаасаєста суєєсаааєс ддасуддадеєєдас 3180 сдсудасассс аєсуєсаєсає сєддаєсаа Сасєссаасс єдЕЄєдаєаа адаассдаає 3240 чадаачдада Ссааадаєсє дсаєдасаас сааєссааса дсудсаєсес дааддасеьєсс 3300 бдодддсудаєє аєссдсааса сдаєаадссу бассасаєдс сдаассєдса сЄдаєссдаас 3360 ааваєаєдедчч аєдесааєсаа єдеЕдддЕаєсє суєддеЕвнаса судсасєсдаа ддададЕссдсе 3420 часадсуєса сдасудассаа саєсєвсассвд аасєссадсс сЄдсассуєдч басдаааєєсс 3480 аєсаєсаада аасасдссад сддсаасааа дчаєсаасасєєд Судсуєаасаа сдаєсдєдес 3540 басаєсаасу сддЕсдсдаа даасааадад бассудєссдащ сдассаасудс сЕСдсаддсд 3600 чЧчасЧдеЕєдада аааєсссдад сдсдеЕєддадад аєсссєдаєд ссуддєаасєсо дадссаадес 3660 чЧдЕддЕвсаєда ададсаадаа судассаддує аєсассааса адсусаадає даассеєдсаа 3720 часаасааєсу десаасдасає суддсеЕєвавєс ддеЕєеЕссасс адсєсаасаа сассдссааа 3780 сеЕддЕадсда дсааєєдуєа сааєсуєса аєсдадсдса дсадссубас ЕсєддадсеЧе 3840 адсєдддадеЕ ссаєсссудуді сдаєдаєдуає Єдддадсддаас дЕССсдсбд 3888 «2105 2 «2115 1296 «2125 БІЛОК «213» СіоБЕгідіат рБоєц1ііпит «4005 2
Меє Ркго Рбе Уаі Авп пуб біп Рпбе АвБп Туг Куб АБр Рго Уаі АБп с01У 1 5 10 15
Уаї АБр І1їе Аїа Тує І1їе Пу5 І1е Рго Авп Аїа СсСіу Сіп Меє сСіп Рго 20 25 Зо
Уаї гув Аза Рбе Пу5 Іїе Нів А5п Пу5 І1ї1е Тгр Маі Іїе Рго біц Агд 35 40 45
АБр ТпПЕ Рре ТПг АБп Рго біч бі біу Авр Гей А5п Рго Рго Рго січ 5о0 55 бо
Аза Ппув біп УМа1і Рко Маії бек Туг Туг Авр бек ТПг Туг Геч бек Тс 65 70 75 80
АБр АБп бій Ппуз Авр о Авп Туг Теч Ппув біу Маї ТПг Ппуз Ге Рое сі 85 90 95
Агуд Іїе Туг Бек ТПг АБр Теч біу Акуд Меє Геч Геї ТіПг бек І1е Уаї 100 105 110
Агуд сб1іу Іїе Ркго Роре Тгр біу біу бек ТПг Іїе АбБр ТПг січ Іеч Гуз 115 120 125
Уаї І1їе АБр ТБг АвБп Суб І1їе А5п Уаі Іїе сіп Рго АвБр біу бек Туг 130 135 140
Агкуд Бек бій бій Гей А5Бп ІТеч Уа! Іїе Іїе сбіу Рго бек Аїа АБр І1еє 145 150 155 160
Іїе сбіп Рпбе січ Сув Гуз бек Рпе сбіу Ні сі Уаії Геї АБп Іеч Тс 165 170 175
Агуд Авп сіу Тугк біу бек ТПг біп Туг І1їе Аку Рпе Бек Рго АБр Ріе 180 185 190
ТПЕ Рре бі1у Рбе бічЧ біц бек Ге сі УМаі АБр ТПг АБп Рго Іеч Гец 195 200 205 біу Аїа сіу пуб Рпе Аза ТПг АБр Рго Аїа Уа! Трг Гец Аза Ні сій 210 215 220
Теч І1е Нів Аїа сі1у Нів Агуд Іїеч Тує С1у Іїе Аза І1їе Авп Рго Авп 225 230 235 240
Агуд Уа1і Рбе Ппув Маі АБп ТБг АБп Аза Туг Тук сі Меє бек б1у Іеч 245 250 255 біч Уаії бек Рпе сі сіцп Геї Агу Тс Рбе біу біу Ніб5 Авр Аза Гув5 260 265 270
Рпе Іїе АБр бек Іеч біп бічЧ АбБп біц Рпре Акуд Геч Туг Тугк Тук АБп 275 280 285
Пув Рпе ПЦув Авр І1е Аїа Бег ТрПг Тез Авп Гпув Аїа Пув бБег І1е Уаї 290 295 300 біу Тс ТБ Аза бек Геї біп Тук Меє Гуз АБп Уаі Рпе Ппув січ ГПув 305 310 315 320
Тук Геч ІГеч бек біЧ Авр ТПг бек сіу Ппув Роре бек УМаі! АБр ГПУув5 Гец 325 330 335
Туз Рпе Авр пуб Геч Тук Ппув Меє Іеч Тс бічЧ І1е Тує ТПг бій Авр 340 345 350
АБп о Рпе Маії Ппув Рпе Рпе пув Уаі Гей Авп Агу Пуз Тк Тук Геч Ап 355 360 365
Рпе Авр Пув Аїа УМаі! Рбе Гуз Іїе Авп Іїе Уа1і Рго Ппув МУМа1і АБп Туг 370 375 З8о
ТПг І1ї1е Тук АБвр біу Рпе Абп Гей Агуд АбБп ТБ АБп Теп Аза Аза Ап 385 390 395 400
Рпе Авп сіу біп АБп ТБ біч Іїе Авп Авп Меє А5п Рре ТПг Гув5 Іеч 405 410 415
Туз АБп Рпе ТпПг сіу Гечш Рбе сії Робе Тук їув Геч Гей Суб Уа1і Агд 420 425 430 с1у Іїе Іїе ТП бек Ппуз ТПг Ппувз бБег ІГеч Авр Пув біу Тугк Авп Гуз 435 440 445
Аа Ггеч Авп АБр о Геч Суб5 І1їе їув УМаі Авп Авп Тер Авр Геч Роре Ре 450 455 460
Бек Ркго Бек біп АБр АБп Ропе ТПг Абп Ар о Геч Ап Ппув сіу біч січ 465 470 475 480
І1їе Тпг Бек АБр Тс АБп І1їе біц Аза Аза сій сій АБп І1е бек Іеч 485 490 495
АБр Теч І1е Сіп Сбіп Туг Тує їеч ТПг Рре Авп Рпе Авр Авп Січ Рго 500 505 510 біч АвБп Іїе бек Іїе сії АБп Геч бек бек АБр Іїе Іїе сіу сіп Гей 515 520 525 біч Те Меє Рго Абп Іїе сії Аку Робе Рго АБп о біу Пув пуб Тук с1ц 530 535 540
Теч АБр Пув Тук ТпПг Меє Рре Ні Туг Іеч Агу Аїа сбіп сі Рпе сій 545 550 555 560
Нів біу Ппув бек Акуд Іїе Аїа Пеїп ТПг АБп бБег УМаі АБп бій Аїа Іеч 565 570 575
Теч АБп Рго бек Акуд Уа1і Туг ТП Роре Рібе бек бек Авр Тук Уа1ї! Гув 580 585 590
Туз Маі АвБп пуб Аза ТПг сії Аза Аза Месє Рбе Ге сіу Тер Уа1і сій 595 6о0 605 біп Теч Уаі Тук Авр Рре ТПг АБр бій ТБг бег біц Уаї бек ТПг Тс 610 615 620
АвБр пуб Іїе Аза АБр І1е ТБПг Іїе Ії1е Іїе Рго Туг Іїе сіу Рго Аза 625 630 635 640
Теч Авп о І1е сіу Авп Меє Іеч Туг їув Авр Авр Рре Уаї С1у А1їа Ієч 645 650 655
І1їе Рпе бек біу Аїа Уа! Іїе Гецш Ге сі Рбе І1їе Рго біцп Іїе Аза 66о 665 670
Іїе Ркго Уаії ІГеч біу ТБг Рбе Аза Гей Уа! бек Туг Іїе Аїа АБп Гуз 675 680 685
Уаї Іеч ТБ Уаії біп ТрПг Іїе А5вр А5п Аїа Геч бек Туз Агу АБп бі 690 695 700
Пув Тер Авр бі УМаї Тукг Ппуз Туг І1їе Уаі! Трпг Авзп Тер Гечп Аза БПув 705 710 715 720
Уаї АБп ТП біп Іїе Авр Гей Іїе Аку Ппу5 Ппуб5 Меє Туз біч Аїа Гец 725 730 735 бічЧ АБп біп Аза сіш Аза ТПг губ Азїа Іїе Іїе АвБп Ту біп Тугк АБп 740 745 750 біп Тує ТЕ біц бій бій пуб АБп АБп І1е АБп Рпе А5п І1е Ар Ар 755 760 765
Пес бек бек Пув Пе АБп бі бБег І1е АБп Гуз Аза Меє Іїе Ав5п І1е 770 775 780
Авп оПпув Рбпе Геї АБп обіп Сувз бек Уаі бек Тук Гечп Меє АБп бег Меє 785 790 795 800
Іїе Рго Тук сіу Маії Гуз Агкуд Гец біц Авр Рпе АбБр Аїа бек Іеч Гуз 805 810 815
АвБр Аїа Геї Геч пуб Тук Іїе Туг Авр АБп Агуд сіу Тс Іеї І1е С1Уу 820 825 830 біп Уаі Авр Акуд Геч пуб АвроГпув Маі АБп АБп о ТПг Гей бек ТПг Ар 835 840 845
І1е Рго Рбе біп Гей бек Пув Туг Уаі Авр Авп біп Агу Гей Гей 5бег 850 855 860
ТПЕ Рре Тс бі Тук Іїе пуб Авп Іїе Іїе АБп ТПг бек Іїе Іеч Авп 865 870 875 880
Теч Аку Тук біц бек АвБп Нів Геч І1їе АвБр Іеч бег Агуд Туг Аза бБег 885 890 895
Туз І1їе АБп Іїе сіу Бек Ппув Маі АБп Робе АБр Рго І1їе Авр ПувБ АБпП 900 905 910 сСіп І1їе Сіп еп Рре АБп Іїеч Сі бЗег бек Ппув І1е Січ МУаї І1е Ієч 915 920 925
Туз АБп Аза Іїе Уа1і Тугк АБп бек Меє Тук біц Абп Рре бек ТпПг 5бег 930 935 940
Рпе Тер Іїе Аку Іїе Рго Пу5 Тук Рре Авп бек Іїе Бек Геї АБп АБп 945 950 955 960 біч Тук ТЕ Іїе Іїе АвБп Суб Меє біц АБбБп Абп бек сіу Тер Пув Уаї 965 970 975 зек Геч АБп Туг біу біїц Іїе Іїе Тер ТПг Гей біп АвБр ТПг сіп сій 980 985 990
Іїе пув сбіп Аку Маї УМаї Рбе Гуз Тук бек біп Меє І1е АБп І1е 5ег 9395 1000 1005
Авр о Тук І1е АБп Агуд Тгр Іїе Рпе Уа! ТПг Іїе Тбг АвБп Ап Агд 1010 1015 1020
Теч АБп о АвБп о бег пуб ІТ1е Ту Ії1е АБп біу Акд Ге Іїе АБр сіп 1025 1030 1035
Туз Рго Іїе 5ег АБп Гец біу АБп І1їе Ніз5 Аза бек АвБп АБп І1е 1040 1045 1050
Меє Рпе Ппув їеч Авр о біу Сув Агу Авр Тпг Нів Агу Туг І1е Тер 1055 1060 1065
Іїе пуб Тук Рбе АвБп Геї Рпе Авр пуб біц Ге АбБп о бі Ппув 1 1070 1075 1080
Іїе пуб Авр Геї Туг АБр АБп о біп бег Аб5п бек сіу Іїе Геч Гув 1085 1090 1095
Авр Рпе Тер б1іу АБр Тук Геї біп Тук Авр пуб Рго Тук Тук Меє 1100 1105 1110
Пес Авп о Ппечп Тук Авр Рго Авп о Ппубз Тук УМаі АБр Маі Авп Авп Уаї 1115 1120 1125 біу Іїе Агу біу Тук Меє Тук Іеч Гуз біу Рго Акуд біу бек Уаї 1130 1135 1140
Меє Тс Тс Авп І1їе Туг Гецш А5п бБег бек ІГеч Ту Агу біу ТПг 1145 1150 1155
Туз Рпе Іїе Іїе пуз Ппуб5 Тук Аїа бек біу АБп губ АБр АБп І1е 1160 1165 1170
Уаі1 Акуд АвБп АвБп Авр Акуд Уаї Туг Іїе Авп Уаі Уаї Уаї Пу5в Авп 1175 1180 1185
Туз бі Тук Агд Ге Аза ТБг о АБп Аза бек біп Аїа біу Уаї сіц 1190 1195 1200
Туз Ії1е ТІеч бек Аїа Геп біц І1їе Рго АБр Уаі біу АвБп Іеч 5бег 1205 1210 1215 біп Уаії Уаї Уаї Меє пуб бек пуб АБп АБр біп біу Іїе ТК АБп 1220 1225 1230
Туз Сув Гуз Месб АБп Гей біп о АБр АБп АБп о біу АБп о АБр І1е с1Уу 1235 1240 1245
Рпе Іїе Сіу Рре Нів Сіп Рре Авп Авп І1е Аза Пу5 ТІеч Ма1ї А1а 1250 1255 1260 зек Авп о Тгр Ту АБп Агуд біп о Іїе бі Агуд бБег Бек Агуд ТБг Гей 1265 1270 1275 біу Сув Бек Тгр бі Робе І1е Рко Маі АБр АБр біу Тгр б1у біц 1280 1285 1290
Ага Ркго ТІечч 1295 «2105 З «2115 3888 «2125 ДНК «213» штучна послідовність «220» «223» Сконструйований ВОМТ/А1 «4005 З асдссаєссу Ссаасаадса асссаассас ааацасссад ЄсаасуддсуєЄ сдасаєсддса бо
Басаєсаацча СЕссдаасус суддссаааєд садссудЕсСа аддсЕсеєсаа даєссасаас 120 аачаєсєдуду сСбаєсссуда дсусєдасасс сСЕСасдаасс судаачаад счаєсєдаас 180 ссдссассдда аадсдаадса адсссссдсс адссасврасуд аєссдасдба ссєдадсасд 240 чаєаасчааа аачасаасса ссєдааадудс деЕдассаадс ЄДдЕсССЧТаасу Сасссасадс 300 асчччаєссудуд дЕСЧЯсасусєє дсєдасвтадс ассуєєссу дсассссуаєсє сєдоадоаєЄоаЧє 360 адсасчассд асассдаасс дааддеєбасєс дасассаасс дсаєсаасує Сарєсаассд 420 чаєдчасадсс аєсусадсда ачадссчдаасє сєддссаєса ЄсСуддсссдад сдсадасаєсс 480 асссааєссу адсудсаачад сссєсуддеЕсас дадчаеЕєсєда асссдасссу сааєддсває 540
Ччаєадсассс адсСсасасеєсу єСсСЕСЕСУОСсСсУУ дасеєстассеє ЄсуддсесЕєсда ададчадсстд 6о0 чаччєсЧавєа ссаасссуєє дсЕдадЧчєдсу дадсааасєсу ссассаєсс ддсеЕдеЕсасу ббо сЕддсссаєд аассдассса сдсаддссас сдссЕдсасуд дсассдссає саасссааас 720 сдєЕдЕдсЕєса аддсеєаасас дааєдсаєвас сасудадаєда дсддссеЕдда адесадсесес 780 чаачаассус дсассЕссуд Єддссаєдас дссааасєсса Єсудасадсес дсаададаає 840 чадсєссуєс Сдсасвасса єЄаасааасеєс ааадасаєсд саадсасуєсє даасааддес 900 аааадсасєсу Сєддсасвас сусуєсдуєвєд садсаєаєда адааєдеЕдеЕс сааададаад 960 басссдсвєдЕ ссудауддаєас сессуддсаад ЕЄсадсуєєду аєаадсєдаа дЕсСсдасааа 1020 сЕдбасаада Єдсєдассда дасєсасасс даудасаасе ЕсдеЕдааавс сеЕссааачід 1080 сбеЕдааєсуєа ааасстаєсе дааєєсєєдас ааадсудееєс ссаадаєсаа саєсдєдссд 1140 ааддєдаасе асассассса єдасудеЕєвєє аасседсуєа асассаассо ддасддсдаас 1200
СЕсаасуддес адаасасуда аассаасаас аєдааєеєсса саадсєдаа даассєсас 1260
ЧаєседеЕєсу адсеєсвтаєсаа дсеЕдсЕдЕдс дЕдсдсуддбеа ссаєсасса саааассааа 1320 адсссбддаса ааддсбасаа сааддсудсєд ааєдасссдс дсаєсааудбсі ааасааєєд 1380 чассеєдееєсе сеЕссудссаєс сдаадаєаає єсвассаасу ассєдаасаа дддеЕдаадаа 1440 аєсассадсу асасуаасає Єдаадсадсуд даададааса Ссадссєдда Сссдаєссад 1500 садсасваєс Єдассеєєсаа сеЕссдасаає даассуддада асаєсадсає Єдадааєсьд 1550 адсадсудаса Єбаєсддесєса дсЕддаассуд аєдссдааса сСсдаасувес сссдаасудс 1620 ааааасасу адсєддасаа дсасасвтаєд ЕєЄссаєвтасс сдсуєдсаса ддадесесдаа 1680 сасддеаааа дссудеаєсдс дсєдассаас адсудеЕсаасуд аддсссеєдсеЕ даасссдадс 1740 сдЕдЕСсСвава ссеЕєсЕсса садсудасває дчесаадааад Єдаасааадс сасєдаддсс 1800 чсчаєдеєсс сддадсЕдоадЕ ддаасадсвєд деаєаєдасо ссасудасуда дасдадсдаа 1860 чЧЕдадсасса ссдасаааає Єдсєдаваєсє ассаєсаєвта ссссубаєсає сдудессуддса 1920 сЕдаасаєєд дсаасаєдсс деасааадас дасЕстЕдвєддд дЕдсссяєдає сеєсеєссдадве 1980 чдссуєдаєєс сдсєдчдадеє саєєссудад аєєдсдаєсс суддеЕдеЕсдуау бассеєсоасд 2040 сЕддЕдЕсСсЕ асаєсусудаа сааддеЕсссу асудсбєсада ссаєсдаєаа судсдсєдЕсу 2100 ааасудєааєсу аааааєддда судаддеЕєсас аааєсасаєєу свбасудааєсу дссддсдааа 2160
ЧдсЕсаасассс адаєсчдассеє даєссуєаа аааасучааач аддсудсєдча дЧааєсадс 2220 чЧаддссасса аадсааєсає саассассаа Сасаассадс асасудаада ададаадааєс 2280 аасаєєаасе ссаасаєсуда єдаєєєдадс адсаадссда аєдааєссає саасааадсд 2340 аєдаєсааса сСсаасаадсє єЕсЕдааєсад Едеадсуєес субассеєдає даасадсаєд 2400 аєсссуєбаєдд дсудеєсааасу Есєддаддас єЕєсдасудсса дссєдааада Сдсдеєєдсед 2460 аааєасаєссє асдасааєсу Єддсасусєд аєєддссаа сСєЄдассудсес дааадасааа 2520
ЧдЕсаасааса сссебдадсас сдасаєссса ЕЄЄсаасєда дсаадсаєдеі сдаєааєссаа 2580 судЕСЕдЕєда дсасеЕєесас сдадсасаєс ааааасаєса саасассад саєєсєдаас 2640 сЕдсдЕбасуд ададсаадса Єссдаєсдає седадссудєє абдссадсаа даєсаасаєс 2700 чЧдасадсаадуд Єсаасеєсєда сссдаєсдає аадаассада Сссадссєудєє сСааєсєддаа 2760 бсдадсаааа ссдаддеває ссеєдааааад дссаєєдесс асаасєссає дсасдадаає 2820 рЕСсСЕСсСсасса дссЕссддає Есдсаєсссу аааєсасесса асаадаєса сссдаасаас 2880 чадеаєасса ссаєсаассд баєддадаас аасадсуддеЕє дчааддеєдеЕс Єссдаастає 2940 часЧдачаєса сесддассьє дсаддасасс ааададаєса адсадсудсудє сдєдесєсаад 3000 басеєсєсааа Єдаєсаасає єсссддаєстас аєсааєсуєє дчаєсєссяє дассаєсас 3060 аасаассуєс Єдаасаадад саадаєєсас аєсааєсдуєс дсеєдаєсда Ссадааассд 3120 аєсадсаасс сЄдддбаасає ссасудсаадс аасаадаєса суєєсаааєс ддасуддеєдас 3180 сдсудабассс аєсуєсаєсає сєдчдаєсаа сасеєссаасс єЕдЕсєдаєаа адаассдаає 3240 чадаачдада Ссааадаєсє дсаєдасаас сааєссааса дсудсаєсес дааддасеьєсс 3300 бдодддсудаєє аєссдсааса сдаєаадссу бассасаєдс сдаассєдса сЄдаєссдаас 3360 ааваєаєдедчч аєдесааєсаа єдеЕдддЕаєсє суєддеЕвнаса судсасєсдаа ддададЕссдсе 3420 часадсуєса сдасудассаа саєсєвсассвд аасєссадсс сЄдсассуєдч басдаааєєсс 3480 аєсаєсаада аасасдссад сддсаасааа дчаєсаасасєєд Судсуєаасаа сдаєсдєдес 3540 басаєсаасу сддЕсдсдаа даасааадад бассудєссдащ сдассаасудс сЕСдсаддсд 3600 чЧчасЧдеЕєдада аааєсссдад сдсдеЕєддадад аєсссєдаєд ссуддєаасєсо дадссаадес 3660 чЧчЕдЧдебаєда ададсаадаа судасааддде аєсассааса адсдсаадає даассєдсаа 3720 часаасааєсу десаасдасає суддсеЕєвавєс ддеЕєеЕссасс адсєсаасаа сассдссааа 3780 сеЕддеадсда дсааєєсдуєа сааєсуєсад аєсдадсдса дсадссубас єЕсСЕдадсеєде 3840 адсєдддадеЕ ссаєсссудуді сдаєдаєдуає Єдддадсддаас дЕССсдсбд 3888 «2105 4
«2115 1296
«2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «2205 «223» Сконструйований ВОМТ/А1 «4005 4
Меє Ркго Рбе Уаі Авп пуб біп Рпбе АвБп Туг Куб АБр Рго Уаі АБп с01У 1 5 10 15
Уаї АБр Іїе Аїа Тук Іїе пуб Іїе Рго АБп Аїа Сбіу біп Меє сбіп Рго 20 25 Зо
Уаї гув Аза Рбе Пу5 Іїе Нів А5п Пу5 І1ї1е Тгр Маі Іїе Рго біц Агд 35 40 45
АБр ТпПЕ Рре ТПг АБп Рго біч бі біу Авр Гей А5п Рго Рго Рго січ 5о0 55 бо
Аза пуз біп Уаії Рко Уа1! бек Туг Туг Авр бек ТПг Тук Гей Бек ТЕГ 65 70 75 80
АвБр Авп о біч пуб АБр о АБп о Тукє Теч Ппуз сіу Уа1і ТпПг Ппу5 Тез Ре січ 85 90 95
Агуд Іїе Туг Бек ТПг АБр Теч біу Акуд Меє Геч Геї ТіПг бек І1е Уаї 100 105 110
Агуд сб1іу Іїе Ркго Роре Тгр біу біу бек ТПг Іїе АбБр ТПг січ Іеч Гуз 115 120 125
Уаї Іїе Авр Трг Авп о Сув І1їе Авп Уаі1ї І1е Сбіп Рго АБр Сіу бег Туг 130 135 140
Агуд Бек бій бі Геї АБп о Течп Уа! Іїе Іїе сіу Рго Бек Аїа АБр І1е 145 150 155 160
Іїе сбіп Рпбе січ Сув Гуз бек Рпе сбіу Ні сі Уаії Геї АБп Іеч Тс 165 170 175
Агуд Авп сіу Тугк біу бек ТПг біп Туг І1їе Аку Рпе Бек Рго АБр Ріе 180 185 190
ТЕ Рпе біу Рпе бій бій бек Пеп бі Маії АБр ТПг АвБп Рго Іеч Іеч 195 200 205 біу Аїа сіу пуб Рпе Аза ТПг АБр Рго Аїа Уа! Трг Гец Аза Ні сій 210 215 220
Теч І1їе Ні5 Аза сіу Ніб Агкуд Іеч Тук біу Ії1е Аїа І1їе АвБп Рго АБпП 225 230 235 240
Агуд Уа1і Рбе Ппув Маі АБп ТБг АБп Аза Туг Тук сі Меє бек б1у Іеч 245 250 255 біч Уаії бек Рпе сі сіцп Геї Агу Тс Рбе біу біу Ніб5 Авр Аза Гув5 260 265 270
Рпе І1їе АБр 5ег Гей біп бій Авзп бій Рпбе Агу Гей Тук Тук Тук Авп 275 280 285
Туз Рпе пуб Ар Іїе Аза бек ТПг Іечп АБп Гуз Аза Ппув Бек І1їе Уаї 290 295 300 біу Тс ТБ Аза бек Геї біп Тук Меє Гуз АБп Уаі Рпе Ппув січ ГПув 305 310 315 320
Тук Геч ІГеч бек біЧ Авр ТПг бек сіу Ппув Роре бек УМаі! АБр ГПУув5 Гец 325 330 335
Пув Рпе Авр Пув Теч Тук пуб Меє Іїеч ТПг бі І1е Тугє ТПг січ Авр 340 345 350
АвБп о Рпе Уа1і Ппув Роре Рбе Гуз Уаі! Ге Абп Агуд пуб Тс Тугк Іеч АБп 355 360 365
Рпе Авр Пув Аїа УМаі! Рбе Гуз Іїе Авп Іїе Уа1і Рго Ппув МУМа1і АБп Туг 370 375 З8о
ТПг І1ї1е Тук АБвр біу Рпе Абп Гей Агуд АбБп ТБ АБп Теп Аза Аза Ап 385 390 395 400
Рпе АБп біу біп АбБп Тпг бій Іїе Авп Авп Меє Авп Роре ТПг Ппуз Іецй 405 410 415
Туз АБп Рпе ТпПг сіу Гечш Рбе сії Робе Тук їув Геч Гей Суб Уа1і Агд 420 425 430 бі1у Іїе І1їе ТпПг бек Ппу5 ТПг пуб бек ТГеч АБр Пув с1іу Тук Авп Гув 435 440 445
Аа Ггеч Авп АБр о Геч Суб5 І1їе їув УМаі Авп Авп Тер Авр Геч Роре Ре 450 455 460
Бек Ркго Бек біп АБр АБп Ропе ТПг Абп Ар о Геч Ап Ппув сіу біч січ 465 470 475 480
І1е Трг бек Авр ТПг Авп І1е Сі Аза Аза Січ бі АвБп І1е бег Іеч 485 490 495
АБр Геч Іїе сіп сіп Тук Тук ТГеч ТБ Рре Авп Рпе Авр АБп січ Рго 500 505 510 біч АвБп Іїе бек Іїе сії АБп Геч бек бек АБр Іїе Іїе сіу сіп Гей 515 520 525 біч Те Меє Рго Абп Іїе сії Аку Робе Рго АБп о біу Пув пуб Тук с1ц 530 535 540
Теч Авр ПЦув Туг Тпг Меє Рпе Нів Тує їеч Агуд Аза Сіп Січ Рре Січ 545 550 555 560
Нів сіу Ппув Бек Агуд І1їе Аза Гей ТПг Аб5п бек УМаі АБп біч Аїа Гец 565 570 575
Теч АБп Рго бек Акуд Уа1і Туг ТП Роре Рібе бек бек Авр Тук Уа1ї! Гув 580 585 590
Туз Маі АвБп пуб Аза ТПг сії Аза Аза Месє Рбе Ге сіу Тер Уа1і сій 595 6о0 605 біп реп Уаї Тук Авр Робе ТПг АБр бій Тбг бек бій Уа1і! бег ТПгс ТПг 610 615 620
АвБр пуб Іїе Аза АБр І1е ТБПг Іїе Ії1е Іїе Рго Туг Іїе сіу Рго Аза 625 630 635 640
Теч АБп Іїе сіу Авп Меє Геч Тук Гуз АБр АБр Рпе Уаі! сіу Аїа Гей 645 650 655
І1їе Рпе бек біу Аїа Уа! Іїе Гецш Ге сі Рбе І1їе Рго біцп Іїе Аза 66о 665 670
Іїе Ркго Уаії ІГеч біу ТБг Рбе Аза Гей Уа! бек Туг Іїе Аїа АБп Гуз 675 680 685
Уаї їеч Тпг Маї Сіп Тпйг І1їе Авр Авп Азїа ІТеч бек Муз Агд АвБп Січ 690 695 700
Тув Тер Авр бі Уа1ї Тук Ппув Тук І1ї1е Уа! ТБг Авп Тер Геч Аза Гув5 705 710 715 720
Уаї АБп ТП біп Іїе Авр Гей Іїе Аку Ппу5 Ппуб5 Меє Туз біч Аїа Гец 725 730 735 бічЧ АБп біп Аза сіш Аза ТПг губ Азїа Іїе Іїе АвБп Ту біп Тугк АБп 740 745 750 сіп Тує Тпс біч сії біч Гпуб Авп Авп о І1е Авп Рре АБп І1е Авр Авр 755 760 765
Теч бек бек Пув Геч Аб5п бі бек І1їе АБп Гуз Аїа Меє Іїе А5Бп Ше 77о 775 780
Авп оПпув Рбпе Геї АБп обіп Сувз бек Уаі бек Тук Гечп Меє АБп бег Меє 785 790 795 800
Іїе Рго Тук сіу Маії Гуз Агкуд Гец біц Авр Рпе АбБр Аїа бек Іеч Гуз 805 810 815
АБвр Аїа Гей Гей Пуз Туг Іїе Туг Авр АвБп Агу біу ТПг Ге Іїе сС1У 820 825 830 біп Уаі Авр Акуд Геч пуб АвроГпув Маі АБп АБп о ТПг Гей бек ТПг Ар 835 840 845
І1їе Ркго Рре сіп Ге бек Гув Тук Уаі Авр Авп сбіп Акуд Геч Іеч 5ег 850 855 860
ТПЕ Рре Тс бі Тук Іїе пуб Авп Іїе Іїе АБп ТПг бек Іїе Іеч Авп 865 870 875 880
Теч Аку Тук бій бек Ппув Нів Геї І1їе АБр Іеч бег Агуд Туг Аза бБег 885 890 895
Пув Іїе АвБп Іїе сіу Бек Ппув Маі АБп Рпе Авр Рго Іїе Авр Пу5 Авп 900 905 910 біп Іїе біп Пец Рпе А5п Гечп бій бек бек Туз І1їе біц Уа1ї Іїе Гей 915 920 925
Туз їув Аза Іїе Уа1і Тугк АБп бек Меє Тук біц Абп Рре бек ТпПг 5бег 930 935 940
Рпе Тер Іїе Аку Іїе Рго Пу5 Тук Рпе Авп Пув Іїе Бек Геї АБп АБпП 945 950 955 960 сі Тує Тпс І1їе І1е АБп Суб Меє Січ Авп Авп бек С1іу Тгр Пув Уаї 965 970 975
Ззек Геч АБп Тугк біу біш Іїе І1їе Тер ТПг Гей сбіп АБр Тс Гу5 б1Ч 980 985 990
Іїе пув сбіп Аку Маї УМаї Рбе Гуз Тук бек біп Меє І1е АБп І1е 5ег 995 1000 1005
Авр о Тук І1е АБп Агуд Тгр Іїе Рпе Уа! ТПг Іїе Тбг АвБп Ап Агд 1010 1015 1020
Пес Авп о Ппув бек Пув ІїІе Ту Іїе АвБп біу Агуд Ге Іїе Авр сіп 1025 1030 1035
Туз Рго Іїе 5ег АБп Гец біу АБп І1їе Нібз Аза бек Ап Гуз І1е 1040 1045 1050
Меє Рбе Ппу5 Геч Авр о біу Суб Агуд АБр ТБ Нібз Агуд Тук Ії1е Тгр 1055 1060 1065
Іїе пуб Тук Рбе АвБп Геї Рпе Авр пуб біц Ге АбБп о бі Ппув 1 1070 1075 1080
Іїе пуб Авр Геї Туг АБр АБп о біп бег Аб5п бек сіу Іїе Геч Гув 1085 1090 1095
АБр Рпе Тер біу Авр Тук їеч біп Туг Авр Пув Рго Туг Туг Меє 1100 1105 1110
Теч АБп о ТГеч Туг АБр Рго АБп о Гуз Тук Уаі Авр Уаі АБп Ап Уаї 1115 1120 1125 біу Іїе Агу біу Тук Меє Тук Іеч Гуз біу Рго Акуд біу бек Уаї 1130 1135 1140
Меє Тс Тс Авп І1їе Туг Гецш А5п бБег бек ІГеч Ту Агу біу ТПг 1145 1150 1155 пув Ре І1їе І1їе Пув пуб Туг Аїа бек б1іу Авп Гув АБр Ап І1є 1160 1165 1170
Уаї Аку АБп о Авп Азр Агуд Уа! Туг Іїе АБп Уаі Уаї Уаї Гув5 Авп 1175 1180 1185
Туз бі Тук Агд Ге Аза ТБг о АБп Аза бек біп Аїа біу Уаї сіц 1190 1195 1200
Туз Ії1е ТІеч бек Аїа Геп біц І1їе Рго АБр Уаі біу АвБп Іеч 5бег 1205 1210 1215 біп Уаї Уаї Уаї Меє Ппуз Бек Ппув Авп Авр Пуз біу Іїе ТПг Авп 1220 1225 1230
Туз Сув Гуз Месб АБп Гей біп о АБр АБп АБп о біу АБп о АБр І1е с1Уу 1235 1240 1245
Рпе Іїе сіу Рбе Ні5 сіп Рбе Авзп Аб5п Іїе Аїа Гпу5 Геч Уаії Аза 1250 1255 1260 зек Авп о Тгр Ту АБп Агуд біп о Іїе бі Агуд бБег Бек Агуд ТБг Гей 1265 1270 1275 біу Сув Бек Тгр бі Робе І1е Рко Маі АБр АБр біу Тгр б1у біц 1280 1285 1290
Агуд Рго Іеч 1295
«2105 15 «2115 3888 «2125 ДНК «213» штучна послідовність «2205 «223» Сконструйований ВОМТ/А1 «4005 15 асдссаєссу Ссаасаадса асссаассас ааацасссад ЄсаасуддсуєЄ сдасаєсддса бо
Басаєсаацча СЕссдаасус суддссаааєд садссудЕсСа аддсЕсеєсаа даєссасаас 120 аачаєсєдуду сСбаєсссуда дсусєдасасс сСЕСасдаасс судаачаад счаєсєдаас 180 ссдссассдда аадсдаадса адсссссдсс адссасврасуд аєссдасдба ссєдадсасд 240 чаєаасдааа аачасаасса ссЄдаааддє дсдассаадс ЄдеЕєсдаасу Саєссасадс 300 асчччаєссудуд дЕСЧЯсасусєє дсєдасвтадс ассуєєссу дсассссуаєсє сєдоадоаєЄоаЧє 360 адсасчасєдд асассдаасє дааддсваєс дасасєаасеє дсасєаасує сасеєсаассу 420 чаєдчасадсс аєсусадсда ачадссчдаасє сєддссаєса ЄсСуддсссдад сдсадасаєсс 480 асссааєссу адсудсаачад сссєсуддеЕсас дадчаеЕєсєда асссдасссу сааєддсває 540
Ччаєадсассс адсСсасасеєсу єСсСЕСЕСУОСсСсУУ дасеєстассеє ЄсуддсесЕєсда ададчадсстд 6о0 чаччєсЧавєа ссаасссуєє дсЕдадЧчєдсу дадсааасєсу ссассаєсс ддсеЕдеЕсасу ббо сЕддсссаєбд аассбдаєсса сдсаддссас сдссеєдсасуд дсаєєсєдссає саасссааас 720 сЧдєдЕДсЕєСсСа аддсєаасас даасдсасбсас басудадаєда дсддсессєдда адеЕсадссес 780 чаачаассус дсассЕссуд Єддссаєдас дссааасєсса Єсудасадсес дсаададаає 840 чадсєссуєс Сдсасвасса єЄаасааасеєс ааадасаєсд саадсасуєсє даасааддес 900 аааадсасєсу Сєддсасвас сусуєсдуєвєд садсаєаєда адааєдеЕдеЕс сааададаад 960 басссдсвєдЕ ссудауддаєас сессуддсаад ЕЄсадсуєєду аєаадсєдаа дЕсСсдасааа 1020 сеЕдсасаада Єдсєдассда дасєсасасс даддасаасе ЕСЯдсдааавєє сеЕєсааадед 1080 сбеЕдааєсуєа ааасстаєсе дааєєсєєдас ааадсудееєс ссаадаєсаа саєсдєдссд 1140 аадчдєдаасе асассаєсса сдасудє аассеєдсуба асассаассє ддсуддсдаас 1200
СЕсаасуддес адаасасуда аассаасаас аєдааєеєсса саадсєдаа даассєсас 1260
ЧаєседеЕєсу адсеєсвтаєсаа дсеЕдсЕдЕдс дЕдсдсуддбеа ссаєсасса саааассааа 1320 адсссбддаса ааддсбасаа сааддсудсєд ааєдасссдс дсаєсааудбсі ааасааєєд 1380 чассеєдееєсе сеЕссудссаєс сдаадаєаає єсвассаасу ассєдаасаа дддеЕдаадаа 1440 аєсассадсу абасудаасає Єдаадсадсуд даачадааса сСсадссєдда Єсєдаєссад 1500 садсасвтаєс Едассеєєсаа сеЕсСсудасаає даассуддада асастадсає Едадааєсед 1550 адсадсудаса ссаєсєсуддеса дсеЕддаасвєд аєдссдааса сСсудаасусеєс сссдаасддс 1620 ааааасасу адсєддасаа дсасасвтаєд ЕєЄссаєвтасс сдсуєдсаса ддадесесдаа 1680 сасддеаааа дссудеаєсдс дсєдассаас адсудеЕсаасуд аддсссеєдсеЕ даасссдадс 1740 сдЕдЕСсСвава ссеЕєсЕсса садсудасває дчесаадааад Єдаасааадс сасєдаддсс 1800 чдсчаєдеЕєсс сдддасЕдЯадЕ ддаасадсвд деасаєдасо сСсасуддасда дасдадсдаа 1860 чЧЕдадсасса ссдасаааає Єдсєдаваєсє ассаєсаєвта ссссубаєсає сдудессуддса 1920 сєЕдаасаєєд дсаасаєдсс деасааадас чЧчасеЕседедуч дЕдсссЕдає сеесеЕсСсаче 1980 чдссуєдаєєс сдсєдчдадеє саєєссудад аєєдсдаєсс суддеЕдеЕсдуау бассеєсоасд 2040 сЕддЕдЕсСсЕ асаєсусудаа сааддеЕсссу асудсбєсада ссаєсдаєаа судсдсєдЕсу 2100 ааасудєааєсу аааааєддда судаддеЕєсас аааєсасаєєу свбасудааєсу дссддсдааа 2160
ЧдсЕсаасассс адаєсчдассеє даєссуєаа аааасучааач аддсудсєдча дЧааєсадс 2220 чаддссасса аадсаассає саассассаа Сасаассадс асасудаача ачачаадаає 2280 аасаєссєаасе ссаасаєсуда єдаєєєдадс адсаадссдда аєдааєссає саасааадсд 2340 аєдаєсааса сСсаасаадсє єЕсЕдааєсад Едеадсуєес субассеєдає даасадсаєд 2400 аєсссуєбаєдд дсудеєсааасу Есєддаддас єЕєсдасудсса дссєдааада Сдсдеєєдсед 2460 аааєасаєссє асдасааєсу Єддсасусєд аєєддссаа сСєЄдассудсес дааадасааа 2520
ЧдЕсаасааса сссебдадсас сдасаєссса ЕЄЄсаасєда дсаадсаєдеі сдаєааєссаа 2580 сСуЕСЕДЕЄєДда дсасеЕєєсас сдадсасаєс ааааасаєса Есаасассад саєєсєдаас 2640 сЕдсдЕбасуд ададсааєса Єссдаєсдає седадссудєє абдссадсаа даєсаасаєс 2700 часадсааду Єсаасеєсєда сссудаєсдає аадаассада сСссадсеєуеєс сааєсеєддаа 2760 бсдадсаааа ссдаддеває ссеєдааааад дссаєєдесс асаасєссає дсасдадаає 2820 рЕСсСЕСсСсасса дссЕссддає Есдсаєсссу аааєсасесса адаадаєса сссдаасаас 2880 чадеаєасса ссаєсаассд баєддадаас аасадсуддеЕє дчааддеєдеЕс Єссдаастає 2940 часЧдачаєса сесддассьє дсаддасасс ааададаєса адсадсудсудє сдєдесєсаад 3000 басеєсєсааа сдаєсаасає єсссдаєсас аєсааєсуєс дччаєссєссудє дассаєсас 3060 аасаассуєс Єдаасаадад саадаєєстас аєсаасуддЕс дссєєдаєсда Ссадааассу 3120 аєсадсаасс сЄдддбаасає ссасудсаадс аасаадаєса суєєсаааєс ддасуддеєдас 3180 сдсудабассс аєсуєсаєсає сєдчдаєсаа сасеєссаасс єЕдЕсєдаєаа адаассдаає 3240 чадаачдада Ссааадаєсє дсаєдасаас сааєссааса дсудсаєсес дааддасеьєсс 3300 бдодддсудаєє аєссдсааса сдаєаадссу бассасаєдс сдаассєдса сЄдаєссдаас 3360 авгаєсаєдедч аєдеЕсааєаа ЕдЕдЯддтаєє суєддеєваса сСуасасєсдаа ддадЕСсдсдае 3420 часадсуєса сдасудассаа саєсєвсассвд аасєссадсс сЄдсассуєдч басдаааєєсс 3480 аєсаєсаада аасасдссад сддсаасааа даєсаасаєє бдсуєаасаа сдаєсддедес 3540 басаєсаасу сддЕсдсдаа даасааадад бассудєссдащ сдассаасудс сЕСдсаддсд 3600 чЧчасЧдеЕєдада аааєсссдад сдсдеЕєддадад аєсссєдаєд ссуддєаасєсо дадссаадес 3660 чЧчЕдЧдебаєда ададсаадаа судасааддде аєсассааса адсдсаадає даассєдсаа 3720 часаасааєсу десаасдасає суддсеЕєвавєс ддеЕєеЕссасс адсєсаасаа сассдссааа 3780 сеЕддЕадсда дсааєєдуєа сааєсуєса аєсдадсдса дсадссубас ЕсєддадсеЧе 3840 адсєдддаде ссаєсссоддЕ сдаєдаєдує Еддддсдаас деЕСссдсєд 3888 «2105 6 «2115 1296 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «2205 «223» Сконструйований ВОМТ/А1 «4005 6
Меє Ркго Рбе Уаі Авп пуб біп Рпбе АвБп Туг Куб АБр Рго Уаі АБп с01У 1 5 10 15
Уаї АБр Іїе Аїа Тук Іїе пуб Іїе Рго АБп Аїа Сбіу біп Меє сбіп Рго 20 25 Зо
Уаї пув Аїа Рпе Ппуз Іїе Ніз АвБп Ппуз І1е Тер Уаі Іїе Рго біч Агд 35 40 45
АБр ТпПЕ Рре ТПг АБп Рго біч бі біу Авр Гей А5п Рго Рго Рго січ 50 55 бо
Аза Ппув біп УМа1і Рко Маії бек Туг Туг Авр бек ТПг Туг Геч бек Тс 65 70 75 80
АвБр Авп о біч пуб АБр о АБп о Тукє Теч Ппуз сіу Уа1і ТпПг Ппу5 Тез Ре січ 85 90 95
Агуд Іїе Туг Бек ТПг АБр Теч біу Акуд Меє Геч Геї ТіПг бек І1е Уаї 100 105 110
Агуд б1у І1е Рго Рпе Тер Сіу Сіу Бег Трг І1їе Авр ТрПг Січ Геч Був 115 120 125
Уаї І1їе АБр ТБг АвБп Суб І1їе А5п Уаі Іїе сіп Рго АвБр біу бек Туг 130 135 140
Агуд Бек бій бі Геї АБп о Течп Уа! Іїе Іїе сіу Рго Бек Аїа АБр І1е 145 150 155 160
Іїе сбіп Рпбе січ Сув Гуз бек Рпе сбіу Ні сі Уаії Геї АБп Іеч Тс 165 170 175
Агуд Авп сСіу Тує біу бБег Тпг Сіп Туг І1е Аку Рпе бБег Рго Авр Ріре 180 185 190
ТПЕ Рре бі1у Рбе бічЧ біц бек Ге сі УМаі АБр ТПг АБп Рго Іеч Гец 195 200 205 біу Аїа сіу пуб Рпе Аза ТПг АБр Рго Аїа Уа! Трг Гец Аза Ні сій 210 215 220
Теч І1їе Ні5 Аза сіу Ніб Агкуд Іеч Тук біу Ії1е Аїа І1їе АвБп Рго АБпП 225 230 235 240
Агкуд Маїії Роре Ппуз УМаії Авп ТПг Авзп Аза Туг Тук бі Меє бек с1у Гей 245 250 255 біч Уаії бек Рпе сі сіцп Геї Агу Тс Рбе біу біу Ніб5 Авр Аза Гув5 260 265 270
Рпе Іїе АБр бек Іеч біп бічЧ АбБп біц Рпре Акуд Геч Туг Тугк Тук АБп 275 280 285
Туз Рпе пуб Ар Іїе Аза бек ТПг Іечп АБп Гуз Аза Ппув Бек І1їе Уаї 290 295 300 біу Тс ТБ Аза бек Геї біп Тук Меє Гуз АБп Уаі Рпе Ппув січ ГПув 305 310 315 320
Тукє Ген Гей бек бі Авр ТПг бек біу Ппуз Роіре бБег Уаії АБр Гув5 Іеч 325 330 335
Туз Рпе Авр пуб Геч Тук Ппув Меє Іеч Тс бічЧ І1е Тує ТПг бій Авр 340 345 350
АвБп о Рпе Уа1і Ппув Роре Рбе Гуз Уаі! Ге Абп Агуд пуб Тс Тугк Іеч АБп 355 360 365
Рпе Авр Пув Аїа УМаі! Рбе Гуз Іїе Авп Іїе Уа1і Рго Ппув МУМа1і АБп Туг 370 375 З8о
Тис І1е Туг Авр С1іу Рбре Авп Тец Агуд Авп Тс Абп Теч Аїа Аїа Ап 385 390 395 400
Рпе Авп сіу біп АБп ТБ біч Іїе Авп Авп Меє А5п Рре ТПг Гув5 Іеч 405 410 415
Туз АБп Рпе ТпПг сіу Гечш Рбе сії Робе Тук їув Геч Гей Суб Уа1і Агд 420 425 430 бі1у Іїе І1їе ТпПг бек Ппу5 ТПг пуб бек ТГеч АБр Пув с1іу Тук Авп Гув 435 440 445
А1а пе АБп АБр о Геч Сув Іїе Пув Уаі Авп Авп Тер Авр Гей Рое Ріе 450 455 460
Бек Ркго Бек біп АБр АБп Ропе ТПг Абп Ар о Геч Ап Ппув сіу біч січ 465 470 475 480
І1їе Тпг Бек АБр Тс АБп І1їе біц Аза Аза сій сій АБп І1е бек Іеч 485 490 495
АБр Геч Іїе сіп сіп Тук Тук ТГеч ТБ Рре Авп Рпе Авр АБп січ Рго 500 505 510 біч АвБп Іїе бек Іїе сії АБп Геч бек бек АБр Іїе Іїе сіу сіп Гей 515 520 525 сій Те Меє Рго Авп І1їе бі Акуд Рре Рго Авп сС1у Пув Пув Туг Січ 530 535 540
Теч АБр Пув Тук ТпПг Меє Рре Ні Туг Іеч Агу Аїа сбіп сі Рпе сій 545 550 555 560
Нів сіу Ппув Бек Агуд І1їе Аза Гей ТПг Аб5п бек УМаі АБп біч Аїа Гец 565 570 575
Теч АБп Рго бек Акуд Уа1і Туг ТП Роре Рібе бек бек Авр Тук Уа1ї! Гув 580 585 590 пув Маі Авп пуб Аїа Тйг бі Аїа Аїа Меє Рпе Ге Сіу Тгр Маї січ 595 6о0 605 біп Теч Уаі Тук Авр Рре ТПг АБр бій ТБг бег біц Уаї бек ТПг Тс 610 615 620
АвБр пуб Іїе Аза АБр І1е ТБПг Іїе Ії1е Іїе Рго Туг Іїе сіу Рго Аза 625 630 635 640
Теч АБп Іїе сіу Авп Меє Геч Тук Гуз АБр АБр Рпе Уаі! сіу Аїа Гей 645 650 655
І1е Ріре б5ег біу Аїа Уаі Іїе їеп Гешп біп Робе І1е Рго сій Іїе Аї1а 66о 665 670
Іїе Ркго Уаії ІГеч біу ТБг Рбе Аза Гей Уа! бек Туг Іїе Аїа АБп Гуз 675 680 685
Уаї Іеч ТБ Уаії біп ТрПг Іїе А5вр А5п Аїа Геч бек Туз Агу АБп бі 690 695 700
Тув Тер Авр бі Уа1ї Тук Ппув Тук І1ї1е Уа! ТБг Авп Тер Геч Аза Гув5 705 710 715 720
Уаї АБп ТП біп Іїе Авр Гей Іїе Аку Ппу5 Ппуб5 Меє Туз біч Аїа Гец 725 730 735 сі Авп о біп Аза сі Атїа ТПг о Гуз Атїа І1е І1їе Авп Тугє біп Туг Авп 740 745 750 біп Тує ТЕ біц бій бій пуб АБп АБп І1е АБп Рпе А5п І1е Ар Ар 755 760 765
Теч бек бек Пув Геч Аб5п бі бек І1їе АБп Гуз Аїа Меє Іїе А5Бп Ше 770 775 780
Авп оПпув Рбпе Геї АБп обіп Сувз бек Уаі бек Тук Гечп Меє АБп бег Меє 785 790 795 800
І1е Рго Тук біу УМаі! пув Акд Геї бій Авр Рбе Авр Аїа бБег Геч Гуз 805 810 815
АвБр Аїа Геї Геч пуб Тук Іїе Туг Авр АБп Агуд сіу Тс Іеї І1е С1Уу 820 825 830 біп Уаі Авр Акуд Геч пуб АвроГпув Маі АБп АБп о ТПг Гей бек ТПг Ар 835 840 845
І1їе Ркго Рре сіп Ге бек Гув Тук Уаі Авр Авп сбіп Акуд Геч Іеч 5ег 850 855 860
ТВ Рпе Тпг бій Туг Іїе Ппу5 АвБп І1їе І1е АБп ТПг б5ег І1е Іеч Авп 865 870 875 880
Теч Аку Тук біц бек АвБп Нів Геч І1їе АвБр Іеч бег Агуд Туг Аза бБег 885 890 895
Туз І1їе АБп Іїе сіу Бек Ппув Маі АБп Робе АБр Рго І1їе Авр ПувБ АБпП 900 905 910 біп Іїе біп Пец Рпе А5п Гечп бій бек бек Туз І1їе біц Уа1ї Іїе Гей 915 920 925
Туз їув Аза Іїе Уа1і Тугк АБп бек Меє Тук біц Абп Рре бек ТпПг 5бег 930 935 940
Рпе Тер Іїе Аку Іїе Рко Пув Тук Рпе Ппуз Ппу5 Іїе бек Гей АБп АБп 945 950 955 960 біч Тук ТЕ Іїе Іїе АвБп Суб Меє біц АБбБп Абп бек сіу Тер Пув Уаї 965 970 975
Ззек Геч АБп Тугк біу біш Іїе І1їе Тер ТПг Гей сбіп АБр Тс Гу5 б1Ч 980 985 990
Іїе пув сбіп Аку Маї УМаї Рбе Гуз Тук бек біп Меє І1е АБп І1е 5ег 995 1000 1005
Авр о Туг Іїе Авп Агуд Тгр І1е Рпе Ма1і Тс І1е ТбПг о Авп Авп Агд 1010 1015 1020
Теч АБп о Гуз бек Ппуз І1е Ту Ії1е АБп біу Акд Ге Іїе АБр сіп 1025 1030 1035
Туз Рго Іїе 5ег АБп Гец біу АБп І1їе Нібз Аза бек Ап Гуз І1е 1040 1045 1050
Меє Рбе Ппу5 Геч Авр о біу Суб Агуд АБр ТБ Нібз Агуд Тук Ії1е Тгр 1055 1060 1065
ІТ1е Ппув Тук Рбе АБп Гей Робе АвБр Гуз бій Те Ахп бій Ппувз бій 1070 1075 1080
Іїе пуб Авр Геї Туг АБр АБп о біп бег Аб5п бек сіу Іїе Геч Гув 1085 1090 1095
Авр Рпе Тер б1іу АБр Тук Геї біп Тук Авр пуб Рго Тук Тук Меє 1100 1105 1110
Теч АБп о ТГеч Туг АБр Рго АБп о Гуз Тук Уаі Авр Уаі АБп Ап Уаї 1115 1120 1125 біу Іїе Агу біу Тук Меє Тук Іеч Гуз біу Рго Акуд біу бек Уаї 1130 1135 1140
Меє Таг о Тс Авп о ч11е Туг їеш о Авп о бег бБег Те Ту Агуд С1іу Тіг 1145 1150 1155
Туз Рпе Іїе Іїе пуз Ппуб5 Тук Аїа бек біу АБп губ АБр АБп І1е 1160 1165 1170
Уаї Аку АБп о Авп Азр Агуд Уа! Туг Іїе АБп Уаі Уаї Уаї Гув5 Авп 1175 1180 1185
Туз бі Тук Агд Ге Аза ТБг о АБп Аза бек біп Аїа біу Уаї сіц 1190 1195 1200
Пув І1е Геч бек Аїа їеч Сіш І1е Рго Авр Уаії Сіу Авп Ієч бег 1205 1210 1215 біп Уаії Уаї Уаї Меє пуб бек пуб АБп АБр Тїу5 біу Іїе ТК АБп 1220 1225 1230
Туз Сув Гуз Месб АБп Гей біп о АБр АБп АБп о біу АБп о АБр І1е с1Уу 1235 1240 1245
Рпе Іїе сіу Рбе Ні5 сіп Рбе Авзп Аб5п Іїе Аїа Гпу5 Геч Уаії Аза 1250 1255 1260 век АвБп о Тер Туг АБп Агуд біп о І1їе бій Агуд бег бБег Агу Тбг Гей 1265 1270 1275 біу Сув Бек Тгр бі Робе І1е Рко Маі АБр АБр біу Тгр б1у біц 1280 1285 1290
Ага Ркго ТІечч 1295 «2105 7 «2115 3888 «2125 ДНК «213» штучна послідовність «2205 «223» Сконструйований ВОМТ/А1 «4005 7 асдссаєссу Ссаасаадса асссаассас ааацасссад ЄсаасуддсуєЄ сдасаєсддса бо
Басаєсаацча СЕссдаасус суддссаааєд садссудЕсСа аддсЕсеєсаа даєссасаас 120 аачаєсєдуду сСбаєсссуда дсусєдасасс сСЕСасдаасс судаачаад счаєсєдаас 180 ссдссассдда аадсдаадса адсссссдсс адссасврасуд аєссдасдба ссєдадсасд 240 чаєаасчааа аачасаасса ссєдааадудс деЕдассаадс ЄДдЕсССЧТаасу Сасссасадс 300 асдчаєссдд дЕсдсаєдсес дсєдастадс асєдсссодсу дсаєсссуєє сєддоадЕдЧе 360 адсасчасєдд асассдаасє дааддсваєс дасасєаасеє дсасєаасує сасеєсаассу 420 чаєдчасадсс аєсусадсда ачадссчдаасє сєддссаєса ЄсСуддсссдад сдсадасаєсс 480 асссааєссу адсудсаачад сссєсуддеЕсас дадчаеЕєсєда асссдасссу сааєддсває 540
Ччаєадсассс адсСсасасеєсу єСсСЕСЕСУОСсСсУУ дасеєстассеє ЄсуддсесЕєсда ададчадсстд 6о0 чаддсєдаса ссаасссуєс дсєдддЕдса ддсаааєєсу ссассдаєсс ддсеЕдссасу ббо сЕддсссаєбд аассбдаєсса сдсаддссас сдссеєдсасуд дсаєєсєдссає саасссааас 720 сдєЕдЕдсЕєса аддсеєаасас дааєдсаєвас сасудадаєда дсддссеЕдда адесадсесес 780 чаачаассус дсассЕссуд Єддссаєдас дссааасєсса Єсудасадсес дсаададаає 840 чадсєссуєс Сдсасвасса єЄаасааасеєс ааадасаєсд саадсасуєсє даасааддес 900 аааадсасєсу Сєддсасвас сусуєсдуєвєд садсаєаєда адааєдеЕдеЕс сааададаад 960 басссдсвєдЕ ссудауддаєас сессуддсаад ЕЄсадсуєєду аєаадсєдаа дЕсСсдасааа 1020 сЕдбасаада Єдсєдассда дасєсасасс даудасаасе ЕсдеЕдааавс сеЕссааачід 1080 сеєдааєсуєа ааасстаєсеЕ даасєєєдас ааадсудес ссаадаєсаа сассудєдсс 1140 ааддєдаасеє асассаєсса єдасуддеЕеєвс аасседсуєа асассаассо ддсддсдаас 1200
СЕсаасуддес адаасасуда аассаасаас аєдааєеєсса саадсєдаа даассєсас 1260
ЧаєседеЕєсу адсеєсвтаєсаа дсеЕдсЕдЕдс дЕдсдсуддбеа ссаєсасса саааассааа 1320 адсссбддаса ааддсбасаа сааддсудсєд ааєдасссдс дсаєсааудбсі ааасааєєд 1380 часссдесєсе сеЕсСсудссаєс сдаадаєаає ЕсЄвассаасу ассєдаасаа доддеЕдаадаа 1440 аєсассадсу абасудаасає Єдаадсадсуд даачадааса сСсадссєдда Єсєдаєссад 1500 садсасваєс Єдассеєєсаа сеЕссдасаає даассуддада асаєсадсає Єдадааєсьд 1550 адсадсудаса ссаєсєсуддеса дсеЕддаасвєд аєдссдааса сСсудаасусеєс сссдаасддс 1620 ааааасасу адсєддасаа дсасасвтаєд ЕєЄссаєвтасс сдсуєдсаса ддадесесдаа 1680 сасддеаааа дссудеаєсдс дсєдассаас адсудеЕсаасуд аддсссеєдсеЕ даасссдадс 1740 сдЕдЕСсСвава ссеЕєсЕсса садсудасває дчесаадааад Єдаасааадс сасєдаддсс 1800 чсчаєдеєсс сддадсЕдоадЕ ддаасадсвєд деаєаєдасо ссасудасуда дасдадсдаа 1860
ЧдЕдадсасса ссдасаааає Едссдаваєє ассаєсаєвта сСсссдудбєаєсає сддЕСсСддса 1920 сєЕдаасаєєд дсаасаєдсс деасааадас чЧчасеЕседедуч дЕдсссЕдає сеесеЕсСсаче 1980 чдссуєдаєєс сдсєдчдадеє саєєссудад аєєдсдаєсс суддеЕдеЕсдуау бассеєсоасд 2040 сЕддЕдЕсСсЕ асаєсусудаа сааддеЕсссу асудсбєсада ссаєсдаєаа судсдсєдЕсу 2100 ааасудєааєсу аааааєддда судаддеЕєсас аааєсасаєєу свбасудааєсу дссддсдааа 2160
ЧЕсаасассс адаєсдасссї даєссдбЕаад аааасдааад аддсудсєдчда дааєсаддсд 2220 чаддссасса аадсаассає саассассаа Сасаассадс асасудаача ачачаадаає 2280 аасаєєаасе ссаасаєсуда єдаєєєдадс адсаадссда аєдааєссає саасааадсд 2340 аєдаєсааса сСсаасаадсє єЕсЕдааєсад Едеадсуєес субассеєдає даасадсаєд 2400 аєсссуєбаєдд дсудеєсааасу Есєддаддас єЕєсдасудсса дссєдааада Сдсдеєєдсед 2460 аааєасаєссє асдасааєсу Єддсасусєд аєєддссаа сСєЄдассудсес дааадасааа 2520
ЧдЕсаасааса сссебдадсас сдасаєссса ЕЄЄсаасєда дсаадсаєдеі сдаєааєссаа 2580 судЕСЕдЕєда дсасеЕєесас сдадсасаєс ааааасаєса саасассад саєєсєдаас 2640 сеЕдсдеєвасу ададсааєса Єссудаєсуає седадссуєєЕ асдсврадсаа даєсаасаєс 2700 часадсааду Єсаасеєсєда сссудаєсдає аадаассада сСссадсеєуеєс сааєсеєддаа 2760 бсдадсаааа ссдаддеває ссеєдааааад дссаєєдесс асаасєссає дсасдадаає 2820 рЕСсСЕСсСсасса дссЕссддає Есдсаєсссу аааєсасесса асаадаєса сссдаасаас 2880 чадеаєасса ссаєсаассд баєддадаас аасадсуддеЕє дчааддеєдеЕс Єссдаастає 2940 часЄЧдачаєса ЄСссдддасссє дсаддасасс ааададаєса адсадсдсудє сдєдсєсаад 3000 басеєсєсааа сдаєсаасає єсссдаєсас аєсааєсуєс дччаєссєссудє дассаєсас 3060 аасаассуєс Єдаадаадад саадаєєсас аєсааєсдудєс дсеєдаєсда Ссадааассд 3120 аєсадсаасс сЄдддбаасає ссасудсаадс аасаадаєса суєєсаааєс ддасуддеєдас 3180 сдсудабассс аєсуєсаєсає сєдчдаєсаа сасеєссаасс єЕдЕсєдаєаа адаассдаає 3240 чадаачдада Ссааадаєсє дсаєдасаас сааєссааса дсудсаєсес дааддасеьєсс 3300 бдодддсудаєє аєссдсааса сдаєаадссу бассасаєдс сдаассєдса сЄдаєссдаас 3360 ааваєаєдедчч аєдесааєсаа єдеЕдддЕаєсє суєддеЕвнаса судсасєсдаа ддададЕссдсе 3420 чдасадсудєса сЄдасудассаа саєсєвтассвд аасєссадсес Єдсассуєда Сасдаааєсс 3480 аєсаєсаада аасасдссад сддсаасааа даєсаасаєє бдсуєаасаа сдаєсддедес 3540 басаєсаасу сддЕсдсдаа даасааадад бассудєссдащ сдассаасудс сЕСдсаддсд 3600 чЧчасЧдеЕєдада аааєсссдад сдсдеЕєддадад аєсссєдаєд ссуддєаасєсо дадссаадес 3660 чЧчЕдЧдебаєда ададсаадаа судасааддде аєсассааса адсдсаадає даассєдсаа 3720 часаасаасу дсаасдасає суддсеЕєвавєє дудєєеєссасс адсєсаасаа Сасєдссааа 3780 сеЕддЕадсда дсааєєдуєа сааєсуєса аєсдадсдса дсадссубас ЕсєддадсеЧе 3840 адсєдддадеЕ ссаєсссудуді сдаєдаєдуає Єдддадсддаас дЕССсдсбд 3888
«2105 8 «2115 1296 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «2205 «223» Сконструйований ВОМТ/А1 «4005 8
Меє Ркго Рбе Уаі Авп пуб біп Рпбе АвБп Туг Куб АБр Рго Уаі АБп с01У 1 5 10 15
Уаї АБр І1їе Аїа Тує І1їе Пу5 І1е Рго Авп Аїа СсСіу Сіп Меє сСіп Рго
Зо
Уаї гув Аза Рбе Пу5 Іїе Нів А5п Пу5 І1ї1е Тгр Маі Іїе Рго біц Агд 20 35 40 45
АБр ТпПЕ Рре ТПг АБп Рго біч бі біу Авр Гей А5п Рго Рго Рго січ 5о0 55 бо 25
Аза Ппув біп УМа1і Рко Маії бек Туг Туг Авр бек ТПг Туг Геч бек Тс 65 70 75 80
АБр АБп бій Ппуз Авр о Авп Туг Теч Ппув біу Маї ТПг Ппуз Ге Рое сі 85 90 95
Агуд Іїе Туг Бек ТПг АБр Теч біу Акуд Меє Геч Геї ТіПг бек І1е Уаї 100 105 110
Агуд сб1іу Іїе Ркго Роре Тгр біу біу бек ТПг Іїе АбБр ТПг січ Іеч Гуз 115 120 125
Уаї І1їе АБр ТБг АвБп Суб І1їе А5п Уаі Іїе сіп Рго АвБр біу бек Туг 130 135 140
Агуд Бек бій бі Геї АБп о Течп Уа! Іїе Іїе сіу Рго Бек Аїа АБр І1е 145 150 155 160
І1е біп Рре Січ Сув Ппув бек Рпе сіу Нів Сіц Ма1ї Геч Авп Іеч ТЕГ 165 170 175
Агуд Авп сіу Тугк біу бек ТПг біп Туг І1їе Аку Рпе Бек Рго АБр Ріе 180 185 190
ТПЕ Рре бі1у Рбе бічЧ біц бек Ге сі УМаі АБр ТПг АБп Рго Іеч Гец 195 200 205 біу Аїа сіу пуб Рпе Аза ТПг АБр Рго Аїа Уа! Трг Гец Аза Ні сій 210 215 220
Теч І1е Нів Аїа сі1у Нів Агуд Іїеч Тує С1у Іїе Аза І1їе Авп Рго Авп 225 230 235 240
Агуд Уа1і Рбе Ппув Маі АБп ТБг АБп Аза Туг Тук сі Меє бек б1у Іеч 245 250 255 біч Уаії бек Рпе сі сіцп Геї Агу Тс Рбе біу біу Ніб5 Авр Аза Гув5 260 265 270
Рпе Іїе АБр бек Іеч біп бічЧ АбБп біц Рпре Акуд Геч Туг Тугк Тук АБп 275 280 285
Пув Рпе Ппуз Авр І1ї1е Аїа бБег ТПг ІТеч Авп їув Аїа Ппувз бек Іїе Уаї 290 295 300 біу Тс ТБ Аза бек Геї біп Тук Меє Гуз АБп Уаі Рпе Ппув січ ГПув 305 310 315 320
Тук Геч ІГеч бек біЧ Авр ТПг бек сіу Ппув Роре бек УМаі! АБр ГПУув5 Гец 325 330 335
Туз Рпе Авр пуб Геч Тук Ппув Меє Іеч Тс бічЧ І1е Тує ТПг бій Авр 340 345 350
АвБп о Рпе Уа1і Ппув Роре Рбе Гуз Уаі! Ге Абп Агуд пуб Тс Тугк Іеч АБп 355 360 365
Рпе Авр пув Аїа Ма1 Рре Пув І1е Авп І1е Уа1ї Рго Ппув Уа1і Авп Туг 370 375 З8о
ТПг І1ї1е Тук АБвр біу Рпе Абп Гей Агуд АбБп ТБ АБп Теп Аза Аза Ап 385 390 395 400
Рпе Авп сіу біп АБп ТБ біч Іїе Авп Авп Меє А5п Рре ТПг Гув5 Іеч 405 410 415
Туз АБп Рпе ТпПг сіу Гечш Рбе сії Робе Тук їув Геч Гей Суб Уа1і Агд 420 425 430 с1у Іїе Іїе ТП бек Ппуз ТПг Ппувз бБег ІГеч Авр Пув біу Тугк Авп Гуз 435 440 445
Аа Ггеч Авп АБр о Геч Суб5 І1їе їув УМаі Авп Авп Тер Авр Геч Роре Ре 450 455 460
Бек Ркго Бек біп АБр АБп Ропе ТПг Абп Ар о Геч Ап Ппув сіу біч січ 465 470 475 480
І1їе Тпг Бек АБр Тс АБп І1їе біц Аза Аза сій сій АБп І1е бек Іеч 485 490 495
АБр Геч І1ї1е біп біп Туг Тук їеч Трг Рпбе Авп Рпбе Авр АБп бій Рго 500 505 510 біч АвБп Іїе бек Іїе сії АБп Геч бек бек АБр Іїе Іїе сіу сіп Гей 515 520 525 біч Те Меє Рго Абп Іїе сії Аку Робе Рго АБп о біу Пув пуб Тук с1ц 530 535 540
Теч АБр Пув Тук ТпПг Меє Рре Ні Туг Іеч Агу Аїа сбіп сі Рпе сій 545 550 555 560
Нів сіу Ппув Бек Агуд І1їе Аза Гей ТПг Аб5п бек УМаі АБп біч Аїа Гец 565 570 575
Пес Авп Рго бек Агуд Маі Туг ТПг Рібе Рібе бег бег Авр Тук Уаї Пув 580 585 590
Туз Маі АвБп пуб Аза ТПг сії Аза Аза Месє Рбе Ге сіу Тер Уа1і сій 595 6о0 605 біп Теч Уаі Тук Авр Рре ТПг АБр бій ТБг бег біц Уаї бек ТПг Тс 610 615 620
АвБр пуб Іїе Аза АБр І1е ТБПг Іїе Ії1е Іїе Рго Туг Іїе сіу Рго Аза 625 630 635 640
Теч Авп о І1е сіу Авп Меє Іеч Туг їув Авр Авр Рре Уаї С1у А1їа Ієч 645 650 655
І1їе Рпе бек біу Аїа Уа! Іїе Гецш Ге сі Рбе І1їе Рго біцп Іїе Аза бо 665 670
Іїе Ркго Уаії ІГеч біу ТБг Рбе Аза Гей Уа! бек Туг Іїе Аїа АБп Гуз 675 680 685
Уаї Іеч ТБ Уаії біп ТрПг Іїе А5вр А5п Аїа Геч бек Туз Агу АБп бі 690 695 700
Пув Тер Авр бі УМаї Тукг Ппуз Туг І1їе Уаі! Трпг Авзп Тер Гечп Аза БПув 705 710 715 720
Уаї АБп ТП біп Іїе Авр Гей Іїе Аку Ппу5 Ппуб5 Меє Туз біч Аїа Гец 725 730 735 бічЧ АБп біп Аза сіш Аза ТПг губ Азїа Іїе Іїе АвБп Ту біп Тугк АБп 740 745 750 біп Тує ТЕ біц бій бій пуб АБп АБп І1е АБп Рпе А5п І1е Ар Ар 755 760 765
Теч бек бек Пув Геч Аб5п бі бек І1їе АБп Гуз Аїа Меє Іїе А5Бп Ше 770 775 780
АБп оПпувз Роре Гей АБп о біп Суб бек Уаі! бБег Туг Ппеп Меє Авп бек Меє 785 790 795 800
Іїе Рго Тук сіу Маії Гуз Агкуд Гец біц Авр Рпе АбБр Аїа бек Іеч Гуз 805 810 815
АвБр Аїа Геї Геч пуб Тук Іїе Туг Авр АБп Агуд сіу Тс Іеї І1е С1Уу 820 825 830 біп Уаі Авр Акуд Геч пуб АвроГпув Маі АБп АБп о ТПг Гей бек ТПг Ар 835 840 845
І1е Рго Рбе біп Гей бек Пув Туг Уаі Авр Авп біп Агу Гей Гей 5бег 850 855 860
ТПЕ Рре Тс бі Тук Іїе пуб Авп Іїе Іїе АБп ТПг бек Іїе Іеч Авп 865 870 875 880
Теч Аку Тук біц бек АвБп Нів Геч І1їе АвБр Іеч бег Агуд Туг Аза бБег 885 890 895
Туз І1їе АБп Іїе сіу Бек Ппув Маі АБп Робе АБр Рго І1їе Авр ПувБ АБпП 900 905 910 біп Іїе біп Пеп Рбе АБп Гей бій бБег бБег Гув Іїе біп Уаії І1їе Гей 915 920 925
Туз їув Аза Іїе Уа1і Тугк АБп бек Меє Тук біц Абп Рре бек ТпПг 5бег 930 935 940
Рпе Тер Іїе Аку Іїе Рго Пу5 Тук Рпе Авп Пув Іїе Бек Геї АБп АБпП 945 950 955 960 біч Тук ТЕ Іїе Іїе АвБп Суб Меє біц АБбБп Абп бек сіу Тер Пув Уаї 965 970 975
Ззек Геч АБп Тугк біу біш Іїе І1їе Тер ТПг Гей сбіп АБр Тс Гу5 б1Ч 980 985 990
І1е Ппув сСіп Агуд Ма1і Маї Рре Пув Туг бек біп Меє І1їе АвБп І1е 5бег 995 1000 1005
Авр о Тук І1е АБп Агуд Тгр Іїе Рпе Уа! ТПг Іїе Тбг АвБп Ап Агд 1010 1015 1020
Теч пув Гуз Бек Ппуз І1е Тук ІїІе АБп біу Акд Ге Іїе АБр сіп 1025 1030 1035
Туз Рго Іїе 5ег АБп Гец біу АБп І1їе Нібз Аза бек Ап Гуз І1е 1040 1045 1050
Меє Рпе Ппув їеч Авр о біу Сув Агу Авр Тпг Нів Агу Туг І1е Тер 1055 1060 1065
Іїе пуб Тук Рбе АвБп Геї Рпе Авр пуб біц Ге АбБп о бі Ппув 1 1070 1075 1080
Іїе пуб Авр Геї Туг АБр АБп о біп бег Аб5п бек сіу Іїе Геч Гув 1085 1090 1095
Авр Рпе Тер б1іу АБр Тук Геї біп Тук Авр пуб Рго Тук Тук Меє 1100 1105 1110
Пес Авп о Ппечп Тук Авр Рго Авп о Ппубз Тук УМаі АБр Маі Авп Авп Уаї 1115 1120 1125 біу Іїе Агу біу Тук Меє Тук Іеч Гуз біу Рго Акуд біу бек Уаї 1130 1135 1140
Меє Тс Тс Авп І1їе Туг Гецш А5п бБег бек ІГеч Ту Агу біу ТПг 1145 1150 1155
Туз Рпе Іїе Іїе пуз Ппуб5 Тук Аїа бек біу АБп губ АБр АБп І1е 1160 1165 1170
Уаї Аку АБп о Авп Азр Агуд Уа! Туг Іїе АБп Уаі Уаї Уаї Гув5 Авп 1175 1180 1185 пув бі Туг Агуд Ге Аїа Тпйг о Ав5п Аза бБег Сіп Аїа сіу Уаї січ 1190 1195 1200
Туз Ії1е ТІеч бек Аїа Геп біц І1їе Рго АБр Уаі біу АвБп Іеч 5бег 1205 1210 1215 біп Уаії Уаї Уаї Меє пуб бек пуб АБп АБр Тїу5 біу Іїе ТК АБп 1220 1225 1230
Туз Сув Гуз Месб АБп Гей біп о АБр АБп АБп о біу АБп о АБр І1е с1Уу 1235 1240 1245
Рпе Іїе Сіу Рре Нів Сіп Рре Авп Авп І1е Аза Пу5 ТІеч Ма1ї А1а 1250 1255 1260 зек Авп о Тгр Ту АБп Агуд біп о Іїе бі Агуд бБег Бек Агуд ТБг Гей 1265 1270 1275 біу Сув Бек Тгр бі Робе І1е Рко Маі АБр АБр біу Тгр б1у біц 1280 1285 1290
Ага Ркго ТІечч «2105 39 «2115 3888 «2125 ДНК «213» штучна послідовність «220» «223» Сконструйований ВОМТ/А1 «4005 19 асдссаєссу Ссаасаадса асссаассас ааацасссад ЄсаасуддсуєЄ сдасаєсддса бо
Басаєсаацча СЕссдаасус суддссаааєд садссудЕсСа аддсЕсеєсаа даєссасаас 120 аачаєсєдуду сСбаєсссуда дсусєдасасс сСЕСасдаасс судаачаад счаєсєдаас 180 ссдссассду аадсдаадса адеЕсссеєдеЕс адссассасу аєєсдасудба ссєдадсасд 240 чаєаасчааа аачасаасса ссєдааадудс деЕдассаадс ЄДдЕсССЧТаасу Сасссасадс 300 асчччаєссудуд дЕСЧЯсасусєє дсєдасвтадс ассуєєссу дсассссуаєсє сєдоадоаєЄоаЧє 360 адсасчасєдд асассдаасє дааддсваєс дасасєаасеє дсасєаасує сасеєсаассу 420 чаєдчасадсс аєсусадсда ачадссчдаасє сєддссаєса ЄсСуддсссдад сдсадасаєсс 480 асссааєссу адсудсаачад сссєсуддеЕсас дадчаеЕєсєда асссдасссу сааєддсває 540
Ччаєадсассс адсСсасасеєсу єСсСЕСЕСУОСсСсУУ дасеєстассеє ЄсуддсесЕєсда ададчадсстд 6о0 чаччєсЧавєа ссаасссуєє дсЕдадЧчєдсу дадсааасєсу ссассаєсс ддсеЕдеЕсасу ббо сЕддсссаєд аассдассса сдсаддссас сдссЕдсасуд дсассдссає саасссааас 720 сдєЕдЕдсЕєса аддсеєаасас дааєдсаєвас сасудадаєда дсддссеЕдда адесадсесес 780 чаачаассус дсассЕссуд Єддссаєдас дссааасєсса Єсудасадсес дсаададаає 840 чадсєссуєс Сдсасвасса єЄаасааасеєс ааадасаєсд саадсасуєсє даасааддес 900 аааадсасєсу Сєддсасвас сусуєсдуєвєд садсаєаєда адааєдеЕдеЕс сааададаад 960 басссдсєдЕ ссдаддаєас сессддсаад ЕЄЕадсуаєвєд аєаадссдаа дЕсСєдасааа 1020 сЕдбасаада Єдсєдассда дасєсасасс даудасаасе ЕсдеЕдааавс сеЕссааачід 1080 сбеЕдааєсуєа ааасстаєсе дааєєсєєдас ааадсудееєс ссаадаєсаа саєсдєдссд 1140 ааддєдаасеє асассаєсса єдасуддеЕеєвс аасседсуєа асассаассо ддсддсдаас 1200
СЕсаасуддес адаасасуда аассаасаас аєдааєеєсса саадсєдаа даассєсас 1260
ЧаєседеЕєсу адсеєсвтаєсаа дсеЕдсЕдЕдс дЕдсдсуддбеа ссаєсасса саааассааа 1320 адсссбддаса ааддсбасаа сааддсудсєд ааєдасссдс дсаєсааудбсі ааасааєєд 1380 чассеєдееєсе сеЕссудссаєс сдаадаєаає єсвассаасу ассєдаасаа дддеЕдаадаа 1440 аєсассадсу асасуаасає Єдаадсадсуд даададааса Ссадссєдда Сссдаєссад 1500 садсасваєс Єдассеєєсаа сеЕссдасаає даассуддада асаєсадсає Єдадааєсьд 1550 адсадсудаса ссаєсєсуддеса дсеЕддаасвєд аєдссдааса сСсудаасусеєс сссдаасддс 1620 ааааасасу адсєддасаа дсасасвтаєд ЕєЄссаєвтасс сдсуєдсаса ддадесесдаа 1680 сасддеаааа дссудеаєсдс дсєдассаас адсудеЕсаасуд аддсссеєдсеЕ даасссдадс 1740 суєдЕСвава ссЕЄСЄєСсСад садсудасває десаадааад Єдаасааадс сасєдаддсес 1800 чсчаєдеєсс сддадсЕдоадЕ ддаасадсвєд деаєаєдасо ссасудасуда дасдадсдаа 1860 чЧЕдадсасса ссдасаааає Єдсєдаваєсє ассаєсаєвта ссссубаєсає сдудессуддса 1920 сєЕдаасаєєд дсаасаєдсс деасааадас чЧчасеЕседедуч дЕдсссЕдає сеесеЕсСсаче 1980 чдссуєдаєєс сдсєдчдадеє саєєссудад аєєдсдаєсс суддеЕдеЕсдуау бассеєсоасд 2040 сЕддЕдЕсСсЕ асаєсусудаа сааддеЕсссу асудсбєсада ссаєсдаєаа судсдсєдЕсу 2100 ааасудєааєсу аааааєддда судаддеЕєсас аааєсасаєєу свбасудааєсу дссддсдааа 2160
ЧдсЕсаасассс адаєсчдассеє даєссуєаа аааасучааач аддсудсєдча дЧааєсадс 2220 чЧаддссасса аадсааєсає саассассаа Сасаассадс асасудаада ададаадааєс 2280 аасаєєаасе ссаасаєсуда єдаєєєдадс адсаадссда аєдааєссає саасааадсд 2340 аєдаєсааса сСсаасаадсє єЕсЕдааєсад Едеадсуєес субассеєдає даасадсаєд 2400 аєсссуєбаєдд дсудеєсааасу Есєддаддас єЕєсдасудсса дссєдааада Сдсдеєєдсед 2460 аааєасаєссє асдасааєсу Єддсасусєд аєєддссаа сСєЄдассудсес дааадасааа 2520 дЕсаасааса сссєдадсас сдасаєссса ЕЄЕЄСЯяассда дсаадсаєде сСдаєааєссаа 2580 судЕСЕдЕєда дсасеЕєесас сдадсасаєс ааааасаєса саасассад саєєсєдаас 2640 сЕдсдЕбасуд ададсааєса єссдаєсдає седадссудсє абдсаадсаа даєсаасаєс 2700 часадсааду Єсаасеєсєда сссудаєсдає аадаассада сСссадсеєуеєс сааєсеєддаа 2760 бсдадсаааа ссдаддеває сседааааас дссаєєдесс асаасеєссає дсасдадаає 2820 рЕСсСЕсСсасса дссЕссддає Есдсаєсссу аааєсасесса асадсаєса сссдаасаас 2880 чадеаєасса ссаєсаассд баєддадаас аасадсуддеЕє дчааддеєдеЕс Єссдаастає 2940 часЧдачаєса сесддассьс дсаддасасс саададаєса адсадсудсудє сдєдесЕесаад 3000 басеєсєсааа Єдаєсаасає єсссддаєстас аєсааєсуєє дчаєсєссяє дассаєсас 3060 аасаассуєс Єдаасаасад саадаєєсас аєсааєсдуєс дсеєдаєсда Ссадааассд 3120 аєсадсаасс сЄдддбаасає ссасудсаадс аасаасаєста суєєсаааєс ддасуддадеєєдас 3180 сдсудабассс аєсуєсаєсає сєдчдаєсаа сасеєссаасс єЕдЕсєдаєаа адаассдаає 3240 чадаачдада Ссааадаєсє дсаєдасаас сааєссааса дсудсаєсес дааддасеьєсс 3300 сдодаддсдаєсє ассеєдсааса сдаєсаадссу бассасаєсдс Єдаассєдста Сдаєссдаас 3360 ааваєаєдедчч аєдесааєсаа єдеЕдддЕаєсє суєддеЕвнаса судсасєсдаа ддададЕссдсе 3420 часадсуєса сдасудассаа саєсєвсассвд аасєссадсс сЄдсассуєдч басдаааєєсс 3480 аєсаєсаада аасасдссад сддсаасааа даєсаасаєє бдсуєаасаа сдаєсддедес 3540 басаєсаасу сддЕсдсдаа дсдсааадад бассудєссдащ сдассаасудс сЕСдсаддсд 3600 часЧдеЕєдада аааєсссдад сдсдеЕєддадад аєсссєсуєд Єссуєсудєсє дадссаадес 3660 чЧчЕдЧдебаєда ададсаадаа судассаддде аєсассааса адсдсаадає даассєдсаа 3720 чассдЕсуєд деаасдасає суддсеЕєвавєс ддеЕвєеЕссасс адсєсаасаа сассдссааа 3780 сеЕддеадсда дсааєєсдуєа сааєсуєсад аєсдадсдсес деЕадссуєся ЕсСЕддддсєде 3840 адсєдддадеЕ ссаєсссудуді сдаєдаєдуає Єдддадсддаас дЕССсдсбд 3888 «2105 10 «2115 1296 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «223» Сконструйований ВОМТ/А1 «4005 10
Меє Рго Рпе Маї Авп о Пув біп Рре Авп Туг Пув Авр Рго Маї АвБп С1У 1 5 10 15
Уаї АБр Іїе Аїа Тук Іїе пуб Іїе Рго АБп Аїа Сбіу біп Меє сбіп Рго 20 25 Зо
Уаї гув Аза Рбе Пу5 Іїе Нів А5п Пу5 І1ї1е Тгр Маі Іїе Рго біц Агд 35 40 45
АБр ТпПЕ Рре ТПг АБп Рго біч бі біу Авр Гей А5п Рго Рго Рго січ 5о0 55 бо
Аза пуз біп Уаії Рко Уа1! бек Туг Туг Авр бек ТПг Тук Гей Бек ТЕГ 65 70 75 80
АвБр Авп о біч пуб АБр о АБп о Тукє Теч Ппуз сіу Уа1і ТпПг Ппу5 Тез Ре січ 85 90 95
Агуд Іїе Туг Бек ТПг АБр Теч біу Акуд Меє Геч Геї ТіПг бек І1е Уаї 100 105 110
Агуд сб1іу Іїе Ркго Роре Тгр біу біу бек ТПг Іїе АбБр ТПг січ Іеч Гуз 115 120 125
Уаї Іїе Авр ТПг Авп Су5 Іїе АвБп Уаі! І1їе сбіп Рго Авр біу бег Туг 130 135 140
Агуд Бек бій бі Геї АБп о Течп Уа! Іїе Іїе сіу Рго Бек Аїа АБр І1е 145 150 155 160
Іїе сбіп Рпбе січ Сув Гуз бек Рпе сбіу Ні сі Уаії Геї АБп Іеч Тс 165 170 175
Агуд Авп сіу Тугк біу бек ТПг біп Туг І1їе Аку Рпе Бек Рго АБр Ріе 180 185 190
ТПЕ Рре бі1у Рбе бічЧ біц бек Ге сі УМаі АБр ТПг АБп Рго Іеч Гец 195 200 205 сі1у Аїа с1у Ппув Рре Аїа ТіПг Авр Рго Аїа Ма1 Тбг Іеч Аза Нів Січ 210 215 220
Теч І1їе Ні5 Аза сіу Ніб Агкуд Іеч Тук біу Ії1е Аїа І1їе АвБп Рго АБпП 225 230 235 240
Агуд Уа1і Рбе Ппув Маі АБп ТБг АБп Аза Туг Тук сі Меє бек б1у Іеч 245 250 255 біч Уаії бек Рпе сі сіцп Геї Агу Тс Рбе біу біу Ніб5 Авр Аза Гув5 260 265 270
Рпе І1їе АБр 5ег Гей біп бій Авзп бій Рпбе Агу Гей Тук Тук Тук Авп 275 280 285
Туз Рпе пуб Ар Іїе Аза бек ТПг Іечп АБп Гуз Аза Ппув Бек І1їе Уаї 290 295 300 біу Тс ТБ Аза бек Геї біп Тук Меє Гуз АБп Уаі Рпе Ппув січ ГПув 305 310 315 320
Тук Геч ІГеч бек біЧ Авр ТПг бек сіу Ппув Роре бек УМаі! АБр ГПУув5 Гец 325 330 335
Пув Рпе Авр Ппуз ГПечп Тук Ппуз Меє Гей ТПг бій Іїе Туг Трг бій Авр 340 345 350
АвБп о Рпе Уа1і Ппув Роре Рбе Гуз Уаі! Ге Абп Агуд пуб Тс Тугк Іеч АБп 355 360 365
Рпе Авр Пув Аїа УМаі! Рбе Гуз Іїе Авп Іїе Уа1і Рго Ппув МУМа1і АБп Туг 370 375 З8о
ТПг І1ї1е Тук АБвр біу Рпе Абп Гей Агуд АбБп ТБ АБп Теп Аза Аза Ап 385 390 395 400
Рпе Авп сіу біп АБп ТБ біч Іїе Авп Авп Меє А5п Рре ТПг Гув5 Іеч 405 410 415
Пув Авп оРпе Тпг сС1іу їеч Рпе сій Рре Тугє Пув Теч Іеч Сув Маї Агд 420 425 430 бі1у Іїе І1їе ТпПг бек Ппу5 ТПг пуб бек ТГеч АБр Пув с1іу Тук Авп Гув 435 440 445
Аа Ггеч Авп АБр о Геч Суб5 І1їе їув УМаі Авп Авп Тер Авр Геч Роре Ре 450 455 460
Бек Ркго Бек біп АБр АБп Ропе ТПг Абп Ар о Геч Ап Ппув сіу біч січ 465 470 475 480
І1е Трг бек Авр ТПг Авп І1е Сі Аза Аза Січ бі АвБп І1е бег Іеч 485 490 495
АБр Геч Іїе сіп сіп Тук Тук ТГеч ТБ Рре Авп Рпе Авр АБп січ Рго 500 505 510 біч АвБп Іїе бек Іїе сії АБп Геч бек бек АБр Іїе Іїе сіу сіп Гей 515 520 525 біч Те Меє Рго Абп Іїе сії Аку Робе Рго АБп о біу Пув пуб Тук с1ц 530 535 540
Пес Авр Ппувз Тук ТП Мес Ріре Нівз Туг Іей Агкуд Аїа Сбіп бій Рпе бій 545 550 555 560
Нів сіу Ппув Бек Агуд І1їе Аза Гей ТПг Аб5п бек УМаі АБп біч Аїа Гец 565 570 575
Теч АБп Рго бек Акуд Уа1і Туг ТП Роре Рібе бек бек Авр Тук Уа1ї! Гув 580 585 590
Туз Маі АвБп пуб Аза ТПг сії Аза Аза Месє Рбе Ге сіу Тер Уа1і сій 595 6о0 605 біп Теч Уаі Тук Авр Рре ТПг АБр бій ТБг бег біц Уаї бек ТПг Тс 610 615 620
АБр Пув І1е Аза АБр Іїе ТіПг Іїе Іїе І1їе Рго Туг Іїе СсС1у Рго А1а 625 630 635 640
Теч АБп Іїе сіу Авп Меє Геч Тук Гуз АБр АБр Рпе Уаі! сіу Аїа Гей 645 650 655
І1їе Рпе бек біу Аїа Уа! Іїе Гецш Ге сі Рбе І1їе Рго біцп Іїе Аза 66о 665 670
Іїе Ркго Уаії ІГеч біу ТБг Рбе Аза Гей Уа! бек Туг Іїе Аїа АБп Гуз 675 680 685
Уаї їеч Тпг Маї Сіп Тпйг І1їе Авр Авп Азїа ІТеч бек Муз Агд АвБп Січ 690 695 700
Тув Тер Авр бі Уа1ї Тук Ппув Тук І1ї1е Уа! ТБг Авп Тер Геч Аза Гув5 705 710 715 720
Уаї АБп ТП біп Іїе Авр Гей Іїе Аку Ппу5 Ппуб5 Меє Туз біч Аїа Гец 725 730 735 бічЧ АБп біп Аза сіш Аза ТПг губ Азїа Іїе Іїе АвБп Ту біп Тугк АБп 740 745 750 біп Тує ТПг бі бі бі Ппуз АвБп АБп І1е АБп Рре Авзп Іїе Авр Авр 755 760 765
Теч бек бек Пув Геч Аб5п бі бек І1їе АБп Гуз Аїа Меє Іїе А5Бп Ше 77о 715 780
Авп оПпув Рбпе Геї АБп обіп Сувз бек Уаі бек Тук Гечп Меє АБп бег Меє 785 790 795 800
Іїе Рго Тук сіу Маії Гуз Агкуд Гец біц Авр Рпе АбБр Аїа бек Іеч Гуз 805 810 815
АвБр Аїа Геї Геч пуб Тук Іїе Туг Авр АБп Агуд сіу Тс Іеї І1е С1Уу 820 825 830 біп Маі Авр Агу Ге Ппуз Авр оПпуз Уаі АБп АБп Тпг о Течй бег ТПг Авр 835 840 845
І1їе Ркго Рре сіп Ге бек Гув Тук Уаі Авр Авп сбіп Акуд Геч Іеч 5ег 850 855 860
ТПЕ Рре Тс бі Тук Іїе пуб Авп Іїе Іїе АБп ТПг бек Іїе Іеч Авп 865 870 875 880
Теч Аку Тук біц бек АвБп Нів Геч І1їе АвБр Іеч бег Агуд Туг Аза бБег 885 890 895
Пув Іїе АвБп Іїе сіу Бек Ппув Маі АБп Рпе Авр Рго Іїе Авр Пу5 Авп 900 905 910 біп Іїе біп Пец Рпе А5п Гечп бій бек бек Туз І1їе біц Уа1ї Іїе Гей 915 920 925
Туз АБп Аза Іїе Уа1і Тугк АБп бек Меє Тук біц Абп Рре бек ТпПг 5бег 930 935 940
Рпе Тер Іїе Аку Іїе Рго Пу5 Тук Рре Авп бек Іїе Бек Геї АБп АБп 945 950 955 960 біц Тук ТПг І1їе І1ї1е АБп Суз Меє бій Авп Авзп бек біу Тер Пуз Уаї 965 970 975
Ззек Геч АБп Тугк біу біш Іїе І1їе Тер ТПг Гей сбіп АБр Тс біп січ 980 985 990
Іїе пув сбіп Аку Маї УМаї Рбе Гуз Тук бек біп Меє І1е АБп І1е 5ег 995 1000 1005
Авр о Тук І1е АБп Агуд Тгр Іїе Рпе Уа! ТПг Іїе Тбг АвБп Ап Агд 1010 1015 1020
Теч АБп о АвБп о бег пуб ІТ1е Ту Ії1е АБп біу Акд Ге Іїе АБр сіп 1025 1030 1035
Пув Рго І1їе бек Авп Геч Сіу Авп І1е Нів Аїа бек АБп Ап І1є 1040 1045 1050
Меє Рбе Ппу5 Геч Авр о біу Суб Агуд АБр ТБ Нібз Агуд Тук Ії1е Тгр 1055 1060 1065
Іїе пуб Тук Рбе АвБп Геї Рпе Авр пуб біц Ге АбБп о бі Ппув 1 1070 1075 1080
Іїе пуб Авр Геї Туг АБр АБп о біп бег Аб5п бек сіу Іїе Геч Гув 1085 1090 1095
АБр Рпе Тер біу Авр Тук їеч біп Туг Авр Пув Рго Туг Туг Меє 1100 1105 1110
Теч АБп о ТГеч Туг АБр Рго АБп о Гуз Тук Уаі Авр Уаі АБп Ап Уаї 1115 1120 1125 біу Іїе Агу біу Тук Меє Тук Іеч Гуз біу Рго Акуд біу бек Уаї 1130 1135 1140
Меє Тс Тс Авп І1їе Туг Гецш А5п бБег бек ІГеч Ту Агу біу ТПг 1145 1150 1155 пПув Рпе Іїе Іїе Ппуз Ппузв Туг Аїа бек біу АБп Ппуз АвБр АБп І1є 1160 1165 1170
Уаї Аку АБп о Авп Азр Агуд Уа! Туг Іїе АБп Уаі Уаії Уаї Гу5 Агд 1175 1180 1185
Туз бі Тук Агд Ге Аза ТБг о АБп Аза бек біп Аїа біу Уаї сіц 1190 1195 1200
Туз Ії1е ТІеч б5ег Аїа Ге біц І1е Рго Акуд Уаі Акд Агуд Іецч 5бег 1205 1210 1215 біп Уаії Уаї Уаї Меє пуб бек пуб АБп АБр біп біу Іїе ТК АБп 1220 1225 1230 пув Сув пуб Меє Авп Геч Сіп Авр Агуд Агуд С1у АБп о Авр І1е С1У 1235 1240 1245
Рпе Іїе сіу Рбе Ні5 сіп Рбе Авзп Аб5п Іїе Аїа Гпу5 Геч Уаії Аза 1250 1255 1260 зек Авп о Тгр Туг АБп Агуд біп о Іїе бій Агуд Агуд бБег Агуд Агуд Гей 1265 1270 1275 біу Сув Бек Тгр бі Робе І1е Рко Маі АБр АБр біу Тгр б1у біц 1280 1285 1290
Агуд Рго Іеч
Claims (1)
- ФОРМУЛА ВИНАХОДУ1. Сконструйований клостридіальний токсин, що містить від 5 до 40 амінокислотних модифікацій, які знаходяться в домені Нсм клостридіального токсину, причому вказаний сконструйований клостридіальний токсин являє собою сконструйований ботулінічний нейротоксин типу А (ВоМТ/А), який має рі щонайменше 6,6, і вказані від 5 до 40 амінокислотних модифікацій містять модифікацію п'яти або більше з: АБМ 886, АБМ 905, І М 915, АБМ 918, СО 920, АБМ 930, АБМ 954, БЕН 955, СІ М 991, І 0 992, СІ М 995, АБМ 1006, АБМ 1025, АБМ 1026, АБМ 1032, А5БМ 1043, А5М 1046, АБМ 1052, АБР 1058, НІ5 1064, А5М 1080, СГ ОО 1081, СІ 1083 та АБР 1086; де вказані п'ять або більше амінокислотних модифікацій вибрані 3: заміни кислого амінокислотного залишку основним амінокислотним залишком та заміни незарядженого амінокислотного залишку основним амінокислотним залишком, і Зо де вказаний сконструйований клостридіальний токсин кодується послідовністю нуклеїнової кислоти, яка характеризується щонайменше 90 95 ідентичністю послідовності відносно послідовності нуклеїнової кислоти, вибраної з 5ЕО ІЮ МО: 3, 5 та 7, або де вказаний сконструйований клостридіальний токсин містить амінокислотну послідовність, яка характеризується щонайменше 90 95 ідентичністю послідовності відносно амінокислотної послідовності, вибраної з 5ЕО ІЮ МО: 4, 6 та 8.2. Сконструйований клостридіальний токсин за п. 1, де сконструйований клостридіальний токсин має рі від 7 до 9.3. Сконструйований клостридіальний токсин за п. 1 або 2, де сконструйований клостридіальний токсин має рі від 8 до 9.4. Сконструйований клостридіальний токсин за будь-яким з попередніх пунктів, де сконструйований клостридіальний токсин містить щонайменше одну амінокислотну модифікацію, яка знаходиться в домені Нсс клостридіального токсину.5. Сконструйований клостридіальний токсин за будь-яким з попередніх пунктів, де сконструйований клостридіальний токсин являє собою сконструйований ВоМТ/А, який містить модифікацію семи наступних амінокислот: А5М 886, АБМ 930, 5ЕК 955, СІМ 991, АБМ 1026, АЗМ 1052 та СІ М 1229.6. Сконструйований клостридіальний токсин за будь-яким з пп. 1-4, де сконструйований клостридіальний токсин являє собою сконструйований ВоМТ/А, який містить модифікацію семи наступних амінокислот: АЗМ 930, АЗМ 954, ЕК 955, СІМ 991, АБМ 1026, АБМ 1052 та СІМ 1229.7. Сконструйований клостридіальний токсин за будь-яким з пп. 1-4, де сконструйований клостридіальний токсин являє собою сконструйований ВоМТ/А, який містить модифікацію семи наступних амінокислот: АЗМ 930, 5ЕК 955, СІ М 991, АЗМ 1025, АЗМ 1026, АБМ 1052 та СІМ 1229.8. Сконструйований клостридіальний токсин за будь-яким з попередніх пунктів, де від 5 до 40 амінокислотних модифікацій містять модифікацію амінокислотного залишку, вибраного із залишку аспарагінової кислоти, залишку глутамінової кислоти, залишку гістидину, залишку серину, залишку треоніну, залишку аспарагіну, залишку глутаміну, залишку цистеїну або залишку тирозину.9. Сконструйований клостридіальний токсин за п. 8, де амінокислотний залишок заміщений залишком лізину або залишком аргініну.10. Сконструйований клостридіальний токсин за будь-яким з попередніх пунктів, де рі розраховують за середніми значеннями рКа кожної амінокислоти, яка присутня у клостридіальному токсині.11. Сконструйований клостридіальний токсин, що містить амінокислотну послідовність, модифіковану з 5ЕО ІЮО МО: 2 шляхом щонайменше п'яти амінокислотних модифікацій, які Зо знаходяться у рецептор-зв'язувальному домені (домені Нс) клостридіального токсину, де вказані щонайменше п'ять амінокислотних модифікацій являють собою модифікації п'яти або більше амінокислот, вибраних з А5М 886, АБМ 905, СІ М 915, АБМ 918, СІ 0 920, А5М 930, АБМ 954, 5ЕН 955, СІМ 991, 2 О 992, СІ М 995, АБМ 1006, АБМ 1025, А5БМ 1026, АБМ 1032, АБМ 1043, АБМ 1046, АБМ 1052, АБР 1058, НІ5 1064, А5М 1080, ОО 1081, СГ О 1083, АР 1086, АБМ 1188, АБР 1213, СІ М 1215, АБМ 1216, СІ М 1229, АЗМ 1242, АЗМ 1243, ЕК 1274 та ТНК 1277, де вказані щонайменше п'ять амінокислотних модифікацій вибрані 3: заміни кислого амінокислотного залишку основним амінокислотним залишком та заміни незарядженого амінокислотного залишку основним амінокислотним залишком, і при цьому сконструйований клостридіальний токсин являє собою сконструйований ботулінічний нейротоксин типу А (ВоМТ/А), який має рі щонайменше 6,6.12. Нуклеїнова кислота, що містить послідовність нуклеїнової кислоти, що характеризується щонайменше 90 95 ідентичністю послідовності відносно послідовності нуклеїнової кислоти, вибраної з ЗЕО ІЮ МО: 3, 5 та 7, і кодує сконструйований клостридіальний токсин за будь-яким з пп. 1-10.13. Нуклеїнова кислота, що містить послідовність нуклеїнової кислоти, що характеризується щонайменше 98 95 ідентичністю послідовності відносно послідовності нуклеїнової кислоти, вибраної з БЕО ІЮ МО: 3, 5, 7 та 9, і кодує сконструйований клостридіальний токсин за п. 11.14. Спосіб отримання одноланцюгового білка сконструйованого клостридіального токсину, який містить легкий ланцюг і важкий ланцюг, при цьому спосіб включає експресію нуклеїнової кислоти за п. 12 або 13 у придатній клітині-хазяїні, руйнування клітини-хазяїна з отриманням гомогенату клітини-хазяїна, який містить одноланцюговий білок сконструйованого клостридіального токсину, та виділення одноланцюгового білка сконструйованого клостридіального токсину.15. Спосіб активації сконструйованого клостридіального токсину, при цьому спосіб включає отримання одноланцюгового білка сконструйованого клостридіального токсину, одержуваного за допомогою способу за п.14, контактування поліпептиду з протеазою, що розщеплює поліпептид у сайті розпізнавання (сайті розщеплення), який знаходиться між легким ланцюгом і важким ланцюгом, та перетворення поліпептиду на дволанцюговий поліпептид, де легкий 60 ланцюг і важкий ланцюг з'єднані один з одним за допомогою дисульфідного зв'язку.16. Дволанцюговий сконструйований клостридіальний токсин, отриманий за допомогою способу зап. 15.17. Застосування сконструйованого клостридіального токсину за будь-яким з пп. 1-11 або дволанцюгового сконструйованого клостридіального токсину за п. 16 у попередженні або Б лікуванні захворювання або стану, вибраного 3: косоокості, тонічного блефароспазму, страбізму, дистонії, спастичної дистонії, оромандибулярної дистонії, фокальної дистонії, пізньої дистонії, дистонії м'язів гортані, дистонії м'язів кінцівок, цервікальної дистонії, кривошиї, спастичної кривошиї, косметологічного або косметичного застосування з одержанням позитивного результату від порушення працездатності клітин/м'язів, нервово-м'язового розладу або стану рухів очного яблука, співдружньої косоокості, вертикальної косоокості, паралічу латерального прямого м'яза, ністагму, дистиреоїдної міопатії, писального спазму, бруксизму, хвороби Вільсона, тремтіння, різновидів тику, сегментарної міоклонії, спазмів, спастичності внаслідок хронічного розсіяного склерозу, спастичності, що призводить до порушення контролю сечового міхура, спазму м'язів спини, судоми м'яза або удару, головних болів напруги, синдрому піднімаючого м'яза таза, розщілини дужок хребців, пізньої дискінезії, хвороби Паркінсона, заїкання, геміфаціального спазму, розладу повік, церебрального паралічу, фокальної спастичності, спастичного коліту, нейрогенного сечового міхура, анізмусу, спастичності кінцівок, анальної тріщини, ахалазії, дисфагії, сльозотечі, гіпергідрозу, надмірного слиновиділення, видів надмірної шлунково-кишкової секреції, м'язового болю, болю внаслідок м'язових спазмів, головного болю, головного болю напруги, міжбрівних глибоких зморщок, шкірних складок, раку, розладів матки, сечостатевих розладів, сечостатевих неврологічних розладів, хронічного нейрогенного запалення та розладу гладкої мускулатури. Ж се ж (ХЕ тк ве 5 Кк що С) їчУ є ях Ж Кк ще Я Ні ю що) КІ 5 йо де «Коди Ку п о ее рі Фо с о ИПКИ НИ т с Ян Я ТЯ т" о с ; м В ння 6,0Фіг. 1 зо сж-я ді гро ї « Є Ж я З 5 ОО Жоссня Порфирій о УНК Яну канБеочІ М зве ВОМ я пак ВН Кі43. докт рай отв 2 ку 7 / -е ї : ї В ж ї Ж шк Я ПОВ хо яянянння пл ТЗ. фетр ренні нфеннннндреннннн нн нфеннннреннннорнчннннн, Пора нет оз о вою Оу іі М -е МЕДУ -й КВК КОВІ ОАФіг. 2
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GBGB1312317.9A GB201312317D0 (en) | 2013-07-09 | 2013-07-09 | Cationic neurotoxins |
| PCT/GB2014/052097 WO2015004461A1 (en) | 2013-07-09 | 2014-07-09 | Cationic neurotoxins |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA126889C2 true UA126889C2 (uk) | 2023-02-22 |
Family
ID=49033565
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAA201601094A UA126889C2 (uk) | 2013-07-09 | 2014-07-09 | Сконструйований катіонний нейротоксин |
Country Status (24)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US9920310B2 (uk) |
| EP (2) | EP3019190B1 (uk) |
| JP (4) | JP6850127B2 (uk) |
| KR (3) | KR20240005140A (uk) |
| CN (2) | CN105492020B (uk) |
| AR (2) | AR096869A1 (uk) |
| AU (1) | AU2014288953C1 (uk) |
| CA (1) | CA2917009A1 (uk) |
| DK (1) | DK3019190T3 (uk) |
| EA (2) | EA039105B1 (uk) |
| ES (1) | ES2881301T3 (uk) |
| GB (1) | GB201312317D0 (uk) |
| HK (1) | HK1222795A1 (uk) |
| HU (1) | HUE055733T2 (uk) |
| IL (3) | IL243330B (uk) |
| MX (2) | MX2016000047A (uk) |
| PL (1) | PL3019190T3 (uk) |
| PT (1) | PT3019190T (uk) |
| SA (1) | SA516370371B1 (uk) |
| SG (2) | SG10202005416PA (uk) |
| TW (3) | TWI694081B (uk) |
| UA (1) | UA126889C2 (uk) |
| WO (1) | WO2015004461A1 (uk) |
| ZA (1) | ZA201801413B (uk) |
Families Citing this family (28)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB201312317D0 (en) * | 2013-07-09 | 2013-08-21 | Syntaxin Ltd | Cationic neurotoxins |
| AU2015301737B2 (en) * | 2014-08-12 | 2021-01-28 | Biomadison, Inc. | Botulinum neurotoxins with modified light chain specifity and methods for producing same |
| EP3242884B1 (en) * | 2015-01-09 | 2021-02-24 | Ipsen Bioinnovation Limited | Cationic neurotoxins |
| GB201517450D0 (en) * | 2015-10-02 | 2015-11-18 | Ipsen Biopharm Ltd | Method |
| GB201607901D0 (en) * | 2016-05-05 | 2016-06-22 | Ipsen Biopharm Ltd | Chimeric neurotoxins |
| DK3481852T3 (da) * | 2016-07-08 | 2023-02-27 | Childrens Medical Center | Hidtil ukendt botulinum-neurotoksin og dets derivater |
| TW201814045A (zh) * | 2016-09-16 | 2018-04-16 | 英商艾普森生物製藥有限公司 | 製造雙鏈梭狀芽孢桿菌神經毒素之方法 |
| EP3752128A1 (de) * | 2018-02-16 | 2020-12-23 | Bontana Therapies Gmbh | Nukleinsäure-basiertes botulinum neurotoxin zur therapeutischen anwendung |
| US20220016221A1 (en) | 2018-12-05 | 2022-01-20 | Ipsen Biopharm Limited | Treatment of symptoms of traumatic brain injury |
| GB201914034D0 (en) | 2019-09-30 | 2019-11-13 | Ipsen Biopharm Ltd | Treatment of neurological disorders |
| GB202001353D0 (en) | 2020-01-31 | 2020-03-18 | Ipsen Biopharm Ltd | Treatment of skin conditions |
| GB202003813D0 (en) | 2020-03-16 | 2020-04-29 | Ipsen Biopharm Ltd | Treatment of upper facial lines |
| KR20220154738A (ko) * | 2020-03-16 | 2022-11-22 | 입센 바이오팜 리미티드 | 사지 경직을 치료하기 위한 변형된 보툴리눔 신경독소 |
| GB202011055D0 (en) | 2020-07-17 | 2020-09-02 | Ipsen Bioinnovation Ltd | Treatment of post-operative pain |
| WO2022073360A1 (zh) * | 2020-10-10 | 2022-04-14 | 广州东盛生物科技有限公司 | 构建新型冠状病毒疫苗的方法及其应用 |
| GB202100566D0 (en) | 2021-01-15 | 2021-03-03 | Ipsen Biopharm Ltd | Treatment of brain damage |
| GB202103372D0 (en) | 2021-03-11 | 2021-04-28 | Ipsen Biopharm Ltd | Modified clostridial neurotoxins |
| AU2021438810A1 (en) | 2021-03-30 | 2023-09-21 | Ipsen Biopharm Limited | Catalytically inactive clostridial neurotoxins for the treatment of pain & inflammatory disorders |
| AU2022247196A1 (en) | 2021-03-30 | 2023-10-05 | Ipsen Biopharm Limited | Treatment of pain & inflammatory disorders |
| WO2023041934A1 (en) | 2021-09-16 | 2023-03-23 | Ipsen Biopharm Limited | Modified bont/a for use in the treatment of cervical dystonia |
| GB202113602D0 (en) | 2021-09-23 | 2021-11-10 | Ipsen Biopharm Ltd | Treatment of a disorder affecting an eyelid muscle of a subject |
| WO2023047127A1 (en) | 2021-09-23 | 2023-03-30 | Ipsen Biopharm Limited | Modified bont/a for use in the treatment of a disorder affecting an eyelid muscle of a subject |
| WO2023075060A1 (ko) * | 2021-10-25 | 2023-05-04 | 비피메드(주) | 보툴리눔 유래 펩타이드를 포함하는 통증개선용 조성물 |
| GB202116795D0 (en) | 2021-11-22 | 2022-01-05 | Ipsen Biopharm Ltd | Treatment of visceral pain |
| GB202206353D0 (en) | 2022-04-29 | 2022-06-15 | Ipsen Biopharm Ltd | Treatment of cervical dystonia |
| GB202206348D0 (en) | 2022-04-29 | 2022-06-15 | Ipsen Biopharm Ltd | Treatment of limb spasticity |
| GB202213479D0 (en) | 2022-09-14 | 2022-10-26 | Ipsen Biopharm Ltd | Cell-free clostridial neurotoxin assays |
| CN115819526A (zh) * | 2022-12-02 | 2023-03-21 | 海雅美生物技术(珠海)有限公司 | 一种重组肉毒杆菌神经毒素及其制备方法和应用 |
Family Cites Families (74)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU3658093A (en) | 1992-02-10 | 1993-09-03 | Seragen, Inc. | Desensitization to specific allergens |
| GB9305735D0 (en) | 1993-03-19 | 1993-05-05 | North John R | Novel agent for controlling cell activity |
| JPH08511536A (ja) | 1993-06-10 | 1996-12-03 | アラーガン、インコーポレイテッド | 複数の血清型のボツリヌス毒素により、神経筋疾患および症状を処置する方法 |
| US5437291A (en) | 1993-08-26 | 1995-08-01 | Univ Johns Hopkins | Method for treating gastrointestinal muscle disorders and other smooth muscle dysfunction |
| US6974578B1 (en) | 1993-12-28 | 2005-12-13 | Allergan, Inc. | Method for treating secretions and glands using botulinum toxin |
| US20040126396A1 (en) | 1993-12-28 | 2004-07-01 | Allergan, Inc. | Botulinum toxin treatment for strabismus |
| US5670484A (en) | 1994-05-09 | 1997-09-23 | Binder; William J. | Method for treatment of skin lesions associated with cutaneous cell-proliferative disorders |
| US5714469A (en) | 1994-09-01 | 1998-02-03 | Smithkline Beecham Corporation | Method of treating sepsis |
| GB9508204D0 (en) | 1995-04-21 | 1995-06-07 | Speywood Lab Ltd | A novel agent able to modify peripheral afferent function |
| US7192596B2 (en) | 1996-08-23 | 2007-03-20 | The Health Protection Agency Ipsen Limited | Recombinant toxin fragments |
| GB9617671D0 (en) | 1996-08-23 | 1996-10-02 | Microbiological Res Authority | Recombinant toxin fragments |
| US6063768A (en) | 1997-09-04 | 2000-05-16 | First; Eric R. | Application of botulinum toxin to the management of neurogenic inflammatory disorders |
| GB9721189D0 (en) | 1997-10-08 | 1997-12-03 | Speywood Lab The Limited | Analgesic conjugates |
| WO1999058571A2 (de) | 1998-05-13 | 1999-11-18 | BioteCon Gesellschaft für Biotechnologische Entwicklung und Consulting mbH | Hybridprotein zur hemmung der mastzelldegranulation und dessen verwendung |
| DK1098664T3 (da) | 1998-07-22 | 2003-11-17 | Osprey Pharmaceuticals Ltd | Sammensætninger og deres anvendelser til at behandle sekundær vævsskade og andre inflammatoriske tilstande og forstyrrelser |
| GB9818548D0 (en) | 1998-08-25 | 1998-10-21 | Microbiological Res Authority | Treatment of mucas hypersecretion |
| US6776990B2 (en) | 1999-04-08 | 2004-08-17 | Allergan, Inc. | Methods and compositions for the treatment of pancreatitis |
| US6358697B2 (en) | 1999-04-21 | 2002-03-19 | Children's Hospital Medical Center | Intracellular pharmaceutical targeting |
| AU783450B2 (en) * | 1999-05-12 | 2005-10-27 | United States Army Medical Research Materiel Command (Usamrmc) | Recombinant vaccine against botulinum neurotoxin |
| US6767544B2 (en) | 2002-04-01 | 2004-07-27 | Allergan, Inc. | Methods for treating cardiovascular diseases with botulinum toxin |
| US6358917B1 (en) | 1999-08-24 | 2002-03-19 | Jean D. A. Carruthers | Cosmetic use of botulinum toxin for treatment of downturned mouth |
| CA2380457A1 (en) | 1999-08-25 | 2001-03-01 | Allergan Sales, Inc. | Activatable recombinant neurotoxins |
| GB9922554D0 (en) | 1999-09-23 | 1999-11-24 | Microbiological Res Authority | Inhibition of secretion from non-neuronal cells |
| US6113915A (en) | 1999-10-12 | 2000-09-05 | Allergan Sales, Inc. | Methods for treating pain |
| US6265379B1 (en) | 1999-10-13 | 2001-07-24 | Allergan Sales, Inc. | Method for treating otic disorders |
| US6139845A (en) | 1999-12-07 | 2000-10-31 | Allergan Sales, Inc. | Method for treating cancer with a neurotoxin |
| US7838008B2 (en) | 1999-12-07 | 2010-11-23 | Allergan, Inc. | Methods for treating diverse cancers |
| US6143306A (en) | 2000-01-11 | 2000-11-07 | Allergan Sales, Inc. | Methods for treating pancreatic disorders |
| US6337075B1 (en) | 2000-01-11 | 2002-01-08 | Allergan Sales, Inc. | Methods for treating diabetes |
| US6261572B1 (en) | 2000-01-11 | 2001-07-17 | Allergan Sales, Inc. | Method for treating a pancreatic disorder with a neurotoxin |
| US6641820B1 (en) | 2000-01-19 | 2003-11-04 | Allergan, Inc. | Clostridial toxin derivatives and methods to treat pain |
| US6524580B1 (en) | 2000-02-15 | 2003-02-25 | Allergan Sales, Inc. | Method for treating thyroid disorders |
| US6464986B1 (en) | 2000-04-14 | 2002-10-15 | Allegan Sales, Inc. | Method for treating pain by peripheral administration of a neurotoxin |
| US6299893B1 (en) | 2000-04-17 | 2001-10-09 | Marvin Schwartz | Method to reduce hair loss and stimulate hair regrowth |
| US6565870B1 (en) | 2000-04-28 | 2003-05-20 | Allergan, Inc. | Methods for treating bone tumors |
| US6306403B1 (en) | 2000-06-14 | 2001-10-23 | Allergan Sales, Inc. | Method for treating parkinson's disease with a botulinum toxin |
| US6903187B1 (en) | 2000-07-21 | 2005-06-07 | Allergan, Inc. | Leucine-based motif and clostridial neurotoxins |
| US6423319B1 (en) | 2000-10-04 | 2002-07-23 | Allergan Sales, Inc. | Methods for treating muscle injuries |
| US6827931B1 (en) | 2000-10-20 | 2004-12-07 | Allergan, Inc. | Method for treating endocrine disorders |
| US7273722B2 (en) | 2000-11-29 | 2007-09-25 | Allergan, Inc. | Neurotoxins with enhanced target specificity |
| US20040028613A1 (en) | 2001-06-25 | 2004-02-12 | Nastech Pharmaceutical Company Inc | Dopamine agonist formulations for enhanced central nervous system delivery |
| US6623742B2 (en) | 2001-09-17 | 2003-09-23 | Allergan, Inc. | Methods for treating fibromyalgia |
| US7255866B2 (en) | 2001-09-17 | 2007-08-14 | Allergan, Inc. | Botulinum toxin therapy for fibromyalgia |
| US6921538B2 (en) | 2002-05-10 | 2005-07-26 | Allergan, Inc. | Therapeutic treatments for neuropsychiatric disorders |
| MXPA05003936A (es) | 2002-10-15 | 2005-06-17 | Allergan Inc | Terapias y procedimientos odontologicos con toxina botulinica. |
| US7238357B2 (en) | 2002-11-05 | 2007-07-03 | Allergan, Inc. | Methods for treating ulcers and gastroesophageal reflux disease |
| US7166575B2 (en) | 2002-12-17 | 2007-01-23 | Nastech Pharmaceutical Company Inc. | Compositions and methods for enhanced mucosal delivery of peptide YY and methods for treating and preventing obesity |
| US8071550B2 (en) | 2003-03-03 | 2011-12-06 | Allergan, Inc. | Methods for treating uterine disorders |
| US6838434B2 (en) | 2003-05-02 | 2005-01-04 | Allergan, Inc. | Methods for treating sinus headache |
| US7220422B2 (en) | 2003-05-20 | 2007-05-22 | Allergan, Inc. | Methods and compositions for treating eye disorders |
| US20040253274A1 (en) | 2003-06-11 | 2004-12-16 | Allergan, Inc. | Use of a clostridial toxin to reduce appetite |
| DE102004043009A1 (de) | 2004-09-06 | 2006-03-23 | Toxogen Gmbh | Transportprotein zum Einbringen chemischer Verbindungen in Nervenzellen |
| CA2595115C (en) | 2004-12-01 | 2014-01-21 | Health Protection Agency | Fusion proteins for treating, preventing or ameliorating pain |
| EP1861112A4 (en) * | 2005-03-03 | 2009-07-22 | Revance Therapeutics Inc | COMPOSITIONS AND METHODS FOR TOPICAL APPLICATION AND TRANSDERMAL DELIVERY OF BOTULINUM TOXINS |
| WO2006099590A2 (en) * | 2005-03-15 | 2006-09-21 | Allergan, Inc. | Modified clostridial toxins with altered targeting capabilities for clostridial toxin target cells |
| DE102005019302A1 (de) | 2005-04-26 | 2006-11-16 | Toxogen Gmbh | Carrier zum Targeting von Nervenzellen |
| DK2154151T3 (da) | 2005-09-19 | 2011-09-05 | Allergan Inc | Clostridiumtoksinaktiverbare clostridiumtoksiner |
| EP1834962A1 (de) | 2006-03-15 | 2007-09-19 | Biotecon Therapeutics GmbH | PEGyliertes mutiertes Clostridium botulinum Toxin |
| AU2007347781B2 (en) * | 2006-07-11 | 2013-10-03 | Allergan, Inc. | Modified clostridial toxins with enhanced translocation capability and enhanced targeting activity |
| EP2178905B1 (en) * | 2007-07-26 | 2013-11-06 | Allergan, Inc. | Methods of activiting clostridial toxins |
| WO2009015840A2 (en) * | 2007-07-27 | 2009-02-05 | Merz Pharma Gmbh & Co. Kgaa | Polypeptide for targeting of neural cells |
| WO2009042165A2 (en) * | 2007-09-25 | 2009-04-02 | Thomas Jefferson University | Mutant botulinum neurotoxin serotype a polypeptide and uses thereof |
| US9370548B2 (en) * | 2007-10-23 | 2016-06-21 | Allergan, Inc. | Methods of treating urogenital-neurological disorders using modified Clostridial toxins |
| NO2379104T3 (uk) * | 2008-12-31 | 2018-07-28 | ||
| GB0903006D0 (en) | 2009-02-23 | 2009-04-08 | Syntaxin Ltd | Modified non-cytotoxic proteases |
| WO2010120766A1 (en) | 2009-04-14 | 2010-10-21 | Mcw Research Foundation, Inc. | Engineered botulinum neurotoxin |
| JP4900443B2 (ja) | 2009-09-30 | 2012-03-21 | 大日本印刷株式会社 | 色素増感型太陽電池 |
| EP2571509B1 (en) * | 2010-05-20 | 2016-07-06 | Allergan, Inc. | Degradable clostridial toxins |
| US8853360B2 (en) | 2010-06-23 | 2014-10-07 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Engineered botulinum neurotoxin C1 with selective substrate specificity |
| US20120189677A1 (en) | 2011-01-20 | 2012-07-26 | Stephen Tonge | Formulations |
| ES2638333T3 (es) * | 2011-11-09 | 2017-10-19 | Merz Pharma Gmbh & Co. Kgaa | Neurotoxinas que presentan una actividad biológica reducida |
| DK3372239T3 (da) | 2012-05-30 | 2021-02-01 | Harvard College | Manipuleret botulinumneurotoksin |
| GB201312317D0 (en) * | 2013-07-09 | 2013-08-21 | Syntaxin Ltd | Cationic neurotoxins |
| GB201407525D0 (en) * | 2014-04-29 | 2014-06-11 | Syntaxin Ltd | Manufacture of recombinant clostridium botulinum neurotoxins |
-
2013
- 2013-07-09 GB GBGB1312317.9A patent/GB201312317D0/en not_active Ceased
-
2014
- 2014-07-09 CA CA2917009A patent/CA2917009A1/en active Pending
- 2014-07-09 PL PL14747697T patent/PL3019190T3/pl unknown
- 2014-07-09 TW TW103123643A patent/TWI694081B/zh active
- 2014-07-09 MX MX2016000047A patent/MX2016000047A/es unknown
- 2014-07-09 US US14/903,458 patent/US9920310B2/en active Active
- 2014-07-09 UA UAA201601094A patent/UA126889C2/uk unknown
- 2014-07-09 CN CN201480043806.7A patent/CN105492020B/zh active Active
- 2014-07-09 ES ES14747697T patent/ES2881301T3/es active Active
- 2014-07-09 HU HUE14747697A patent/HUE055733T2/hu unknown
- 2014-07-09 DK DK14747697.2T patent/DK3019190T3/da active
- 2014-07-09 KR KR1020237044106A patent/KR20240005140A/ko active Application Filing
- 2014-07-09 PT PT147476972T patent/PT3019190T/pt unknown
- 2014-07-09 KR KR1020217040836A patent/KR102617830B1/ko active IP Right Grant
- 2014-07-09 EP EP14747697.2A patent/EP3019190B1/en active Active
- 2014-07-09 CN CN202110239457.8A patent/CN112961227A/zh active Pending
- 2014-07-09 WO PCT/GB2014/052097 patent/WO2015004461A1/en active Application Filing
- 2014-07-09 TW TW109114599A patent/TWI776147B/zh active
- 2014-07-09 JP JP2016524894A patent/JP6850127B2/ja active Active
- 2014-07-09 KR KR1020167003051A patent/KR102340476B1/ko active IP Right Grant
- 2014-07-09 TW TW111118323A patent/TWI813291B/zh active
- 2014-07-09 EA EA201690189A patent/EA039105B1/ru unknown
- 2014-07-09 SG SG10202005416PA patent/SG10202005416PA/en unknown
- 2014-07-09 SG SG11201600150UA patent/SG11201600150UA/en unknown
- 2014-07-09 EP EP21167912.1A patent/EP3943105A3/en active Pending
- 2014-07-09 EA EA202191745A patent/EA202191745A1/ru unknown
- 2014-07-09 AU AU2014288953A patent/AU2014288953C1/en active Active
- 2014-07-10 AR ARP140102553A patent/AR096869A1/es unknown
-
2015
- 2015-12-24 IL IL243330A patent/IL243330B/en active IP Right Grant
-
2016
- 2016-01-07 SA SA516370371A patent/SA516370371B1/ar unknown
- 2016-01-07 MX MX2021006714A patent/MX2021006714A/es unknown
- 2016-09-20 HK HK16111009.8A patent/HK1222795A1/zh unknown
-
2018
- 2018-02-06 US US15/889,317 patent/US11034947B2/en active Active
- 2018-03-01 ZA ZA2018/01413A patent/ZA201801413B/en unknown
-
2019
- 2019-04-01 JP JP2019069960A patent/JP7360802B2/ja active Active
- 2019-11-19 IL IL270769A patent/IL270769B/en active IP Right Grant
-
2020
- 2020-04-24 AR ARP200101165A patent/AR118777A2/es unknown
- 2020-08-25 IL IL276915A patent/IL276915B/en unknown
-
2021
- 2021-12-21 JP JP2021206753A patent/JP7434263B2/ja active Active
-
2024
- 2024-02-07 JP JP2024016868A patent/JP2024054234A/ja active Pending
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| UA126889C2 (uk) | Сконструйований катіонний нейротоксин | |
| US20200291073A1 (en) | Cationic neurotoxins | |
| CN101903035A (zh) | 使用经修饰的梭菌毒素治疗慢性神经源性炎症的方法 | |
| JP2024510786A (ja) | 外来性の活性化ループを含むクロストリジウム神経毒素 | |
| US20240082368A1 (en) | Treatment of Brain Damage | |
| RU2800604C2 (ru) | Терапевтическое и косметическое применение нейротоксина ботулина серотипа e | |
| US20210353725A1 (en) | Therapeutic and Cosmetic Uses of Botulinum Neurotoxin Serotype E | |
| NZ715570B2 (en) | Cationic neurotoxins |