CN101903035A - 使用经修饰的梭菌毒素治疗慢性神经源性炎症的方法 - Google Patents

使用经修饰的梭菌毒素治疗慢性神经源性炎症的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN101903035A
CN101903035A CN2008801212895A CN200880121289A CN101903035A CN 101903035 A CN101903035 A CN 101903035A CN 2008801212895 A CN2008801212895 A CN 2008801212895A CN 200880121289 A CN200880121289 A CN 200880121289A CN 101903035 A CN101903035 A CN 101903035A
Authority
CN
China
Prior art keywords
seq
bont
aminoacid
clostridial toxin
amino acid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN2008801212895A
Other languages
English (en)
Inventor
K·R·奥基
J·弗朗西斯
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Allergan Inc
Original Assignee
Allergan Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Allergan Inc filed Critical Allergan Inc
Publication of CN101903035A publication Critical patent/CN101903035A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A61K38/4886—Metalloendopeptidases (3.4.24), e.g. collagenase
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本说明书公开了经修饰的梭菌毒素，含有这种毒素的组合物，以及使用这种经修饰的梭菌毒素和组合物治疗哺乳动物的慢性神经源性炎症的方法。

Description

使用经修饰的梭菌毒素治疗慢性神经源性炎症的方法
本专利申请根据35U.S.C.§119(e)，要求以2007年10月23日提交的美国临时专利申请No.60/982,021、2008年6月27日提交的美国临时专利申请No.61/076,228和2008年9月10日提交的美国临时专利申请No.61/090,692作为优先权基础，上述临时申请的全部内容均以援引的方式纳入本文。
梭菌毒素，例如肉毒神经毒素(BoNT)(BoNT/A、BoNT/B、BoNT/C1、BoNT/D、BoNT/E、BoNT/F和BoNT/G)以及破伤风神经毒素(TeNT)，它们抑制神经传递的能力已经被用于多种治疗和美容用途，参见例如，William J.Lipham，COSMETIC AND CLINICAL APPLICATIONS OF BOTULINUM TOXIN(Slack、Inc.，2004)。市售的梭菌毒素药物组合物包括：BoNT/A制剂，例如，
Figure GPA00001159614000011
(Allergan、Inc.，Irvine，CA)、
Figure GPA00001159614000012
(Beaufour Ipsen，Porton Down，England)、
Figure GPA00001159614000013
(Prollenium、Inc.，Ontario，Canada)、
Figure GPA00001159614000014
(Medy-Tox，Inc.，Ochang-myeon，South Korea)、BTX-A(Lanzhou Institute BiologicalProducts，China)和
Figure GPA00001159614000015
(Merz Pharmaceuticals，GmbH.，Frankfurt，Germany)；以及BoNT/B制剂，例如，MyoBlocTM/NeuroBlocTM(ElanPharmaceuticals，San Francisco，CA)。例如，
Figure GPA00001159614000016
目前已被一个或多个国家批准用于治疗下列适应症：弛缓不能、成人痉挛、肛裂、背痛、睑痉挛、磨牙症、子宫颈肌张力异常、特发性震颤、眉间皱纹或运动机能亢奋性脸部皱纹、头痛、半面痉挛、膀胱过度活动症、剧汗、青少年大脑麻痹、多发性硬化、肌阵挛障碍、鼻唇皱纹、痉挛性语言障碍、斜视和VII神经障碍。
梭菌毒素疗法在多种适应症的治疗中获得成功。通常，患者对给予梭菌毒素治疗的耐受性良好。然而在某些应用中，给予毒素治疗可能是有争议的，因为要获得有益效果需要较大剂量。较大剂量会增加毒素通过间隙液体和循环系统(例如心血管系统和淋巴系统)的可能性，导致毒素不利地扩散到毒素治疗的非目标区域。这样的扩散会导致不良的副作用，例如，抑制在非治疗目标区域的神经元中的神经递质释放，或者非治疗目标区域的肌肉麻痹。例如，向患者颈部肌肉给予治疗有效量的BoNT/A来治疗斜颈时，可能会由于毒素扩散到口咽部而引发吞咽障碍。又例如，向患者的膀胱给予治疗有效量的BoNT/A来治疗膀胱过度活动症时可能会引发口干和/或干眼症。因此，仍然需要改进的梭菌毒素，所述改进的梭菌毒素应能够在治疗位置起作用，而在毒素治疗的非目标区域仅产生可忽略的或最小的影响。
梭菌毒素疗法通过切断用于将神经递质分泌至突触间隙的胞吐过程，从而抑制神经递质的释放。对于制药工业来说，非常需要在梭菌毒素疗法目前的肌肉弛缓应用的基础上再进一步拓展其用途，以治疗与感觉神经相关的疾患，例如各种慢性疼痛、神经源性炎症和泌尿生殖器障碍，以及其他障碍，例如胰腺炎。目前被用来拓展基于梭菌毒素的疗法的一种方法涉及对梭菌毒素进行修饰，以使得所述经修饰的毒素对于非梭菌毒素靶细胞具有改变的细胞靶向能力。通过用一种对于非梭菌毒素靶细胞中存在的非梭菌毒素受体具有选择性结合活性的靶向结构域置换梭菌毒素中天然存在的靶向结构域，来获得上述改变的靶向能力。对靶向结构域这样的修饰可产生具有以下能力的经修饰的毒素，所述经修饰的毒素能够选择性地结合非梭菌毒素靶细胞中存在的非梭菌毒素受体(靶受体)(改变的靶向能力)。对非梭菌毒素靶细胞具有靶向活性的经修饰的梭菌毒素能够结合非梭菌毒素靶细胞上存在的受体，易位至细胞质中，并发挥其对于非梭菌毒素靶细胞中的SNARE复合物的蛋白水解作用。
神经源性炎症涵盖一系列由复杂的生物过程介导的血管性和非血管性的炎性反应，所述生物过程导致炎性介质和致敏化合物从感觉神经元中局部释放。当受到有害刺激(例如病原体、细胞损伤或刺激物)的损伤时，炎症介导细胞(例如肥大细胞、免疫细胞、血管内皮细胞和血管平滑肌细胞)会释放炎症介导和致敏分子，例如，组胺、前列腺素、白三烯、5-羟色胺、中性蛋白酶、细胞因子、缓激肽和一氧化氮。参见Jennelle DurnettRichardson and Michael R.Vasko，Cellular Mechanisms of NeurogenicInflammation，302(3)J.Pharmacol.Exp.Ther.839-845(2002)，该文献的全部内容以援引的方式纳入本文。这些炎症介导和致敏分子作用于感觉神经元，从而刺激炎症诱导分子从周围神经末梢释放，所述炎症诱导分子例如，神经肽例如P物质(SP)和降血钙素基因相关肽(CGRP)、前列腺素，以及氨基酸例如谷氨酸。这些炎症诱导分子一旦被释放就会引发炎性反应，炎性反应的特征通常为水肿(血浆外渗而产生的肿胀)，过敏(由于某些感觉神经元的兴奋性改变而引起)，以及红斑(由于血管舒张而引起的发红和发热)，所述炎性反应可蔓延至刺激部位以外的范围(潮红应答)。Id.由于潜在的炎症症状是由初级感觉神经元的激活和随后的炎症诱导分子的释放而引发的，因此这种反应被称为神经源性炎症。
通常，神经源性炎症是机体用于清除有害刺激物和启动受损组织愈合过程的一种保护性机制。这种急性神经源性炎症形成了维持组织完整性并有助于组织修复的第一道防线。事实上，如果没有急性神经源性炎症，损伤和感染将永远不会愈合，组织将不断被破坏从而危及机体的生命安全。然而，严重的或长时间的有害刺激会导致慢性神经源性炎性反应，这种慢性神经源性炎性反应反而会引发损伤而不是帮助修复。这种慢性神经源性炎症与多种人类疾病中存在的许多看似不相关的障碍的病理生理学都有着千丝万缕的联系。
治疗慢性神经源性炎症的尝试仅取得了有限的成功。这其中一部分的原因是慢性神经源性炎症的病因学是一个复杂的应答过程，它部分地基于似乎通过多种机制引发炎症的各种炎症诱导分子以及大量炎症介导和致敏分子。参见Richardson & Vasko，302(3)J.Pharmacol.Exp.Ther.839-845(2002)。因此，非常需要能够防止炎症诱导分子从感觉神经元慢性释放从而用于治疗慢性神经源性炎症的化合物和方法。
本申请说明书公开了用于治疗患有慢性神经源性炎症的个体的经修饰的梭菌毒素组合物和方法。这一目的通过向需要该治疗的个体给予治疗有效量的含有经修饰的梭菌毒素的组合物而实现。本文公开的方法提供了一种用于治疗慢性神经源性炎症并且基于门诊患者的安全、低廉的方法。
因此，本发明的一个方面提供了一种含有经修饰的梭菌毒素的组合物，所述经修饰的梭菌毒素包括阿片样肽结合结构域、梭菌毒素易位结构域和梭菌毒素酶促结构域。可用于开发这类组合物的经修饰的梭菌毒素记载于例如下列文献：Steward，L.E.et al.，Modified Clostridial Toxins withEnhanced Translocation Capabilities and Altered Targeting Activity ForNon-Clostridial Toxin Target Cells，美国专利申请No.11/776,075(Jul.11，2007)；Dolly，J.O.et al.，Activatable Clostridial Toxins，美国专利申请No.11/829,475(Jul.27，2007)；Foster，K.A.et al.，Fusion Proteins，国际申请公布WO 2006/059093(Jun.8，2006)；以及Foster，K.A.et al.，Non-Cytotoxic Protein Conjugates，国际申请公布WO 2006/059105(Jun.8，2006)，上述每篇文献的全部内容均以援引的方式纳入本文。含有经修饰的梭菌毒素的组合物可为药物组合物。这类药物组合物中除了含有经修饰的梭菌毒素之外，还可包括药物载体、药物组分或两者均有。
在本发明的另一方面，提供了一种用于治疗哺乳动物的神经源性炎症的方法，所述方法包括给予需要该治疗的哺乳动物治疗有效量的含有经修饰的梭菌毒素的组合物的步骤，所述经修饰的梭菌毒素包括阿片样肽结合结构域、梭菌毒素易位结构域和梭菌毒素酶促结构域，其中给予所述组合物可减少炎症诱导分子的释放，由此减轻慢性神经源性炎症相关的症状。可以预见的是，可以使用本说明书中公开的任何经修饰的梭菌毒素，包括例如下列文献中公开的那些经修饰的梭菌毒素：Steward，(2007)见上文；Dolly，(2007)见上文；Foster，WO 2006/059093(2006)见上文；和Foster，WO 2006/059105(Jun.8，2006)见上文。
在另一方面，本发明提供了一种用于治疗哺乳动物的神经源性炎症的方法，所述方法包括给予需要该治疗的哺乳动物治疗有效量的含有经修饰的梭菌毒素的组合物的步骤，所述经修饰的梭菌毒素包括阿片样肽结合结构域、梭菌毒素易位结构域、梭菌毒素酶促结构域和外源性蛋白酶切割位点，其中给予所述组合物可减少炎症诱导分子的释放，由此减轻慢性神经源性炎症相关的症状。可以预见的是，可以使用本说明书中公开的任何经修饰的梭菌毒素，包括例如下列文献中公开的那些经修饰的梭菌毒素：Steward，(2007)见上文；Dolly，(2007)见上文；Foster，WO 2006/059093(2006)见上文；和Foster，WO 2006/059105(Jun.8，2006)见上文。
在另一方面，本发明提供了经修饰的梭菌毒素用于制备治疗需要该治疗的哺乳动物的慢性神经源性炎症的药物的用途，其中所述经修饰的梭菌毒素包括阿片样肽结合结构域、梭菌毒素易位结构域和梭菌毒素酶促结构域，并且其中给予治疗有效量的所述药物可减少炎症诱导分子的释放，由此减轻慢性神经源性炎症相关的症状。可以预见的是，可以使用本说明书中公开的任何经修饰的梭菌毒素，包括例如下列文献中公开的那些经修饰的梭菌毒素：Steward，(2007)见上文；Dolly，(2007)见上文；Foster，WO 2006/059093(2006)见上文；和Foster，WO 2006/059105(Jun.8，2006)见上文。
在另一方面，本发明提供了经修饰的梭菌毒素用于治疗需要该治疗的哺乳动物的慢性神经源性炎症的用途，所述用途包括给予需要该治疗的哺乳动物治疗有效量的经修饰的梭菌毒素的步骤，其中所述经修饰的梭菌毒素包括阿片样肽结合结构域、梭菌毒素易位结构域和梭菌毒素酶促结构域，并且其中给予所述经修饰的梭菌毒素可减少炎症诱导分子的释放，由此减轻慢性神经源性炎症相关的症状。可以预见的是，可以使用本说明书中公开的任何经修饰的梭菌毒素，包括例如下列文献中公开的那些经修饰的梭菌毒素：Steward，(2007)见上文；Dolly，(2007)见上文；Foster，WO 2006/059093(2006)见上文；和Foster，WO 2006/059105(Jun.8，2006)见上文。
附图说明
图1为中枢和周围神经元中的神经递质释放和梭菌毒素中毒作用的流行解释的示意图。图1A为中枢和周围神经元中的神经递质释放机制的示意图。所述释放过程可被描述为包括两个步骤：1)囊泡驻留，其中含有神经递质分子的囊泡上的与囊泡结合的SNARE蛋白和位于质膜上的与膜结合的SNARE蛋白相联接；和2)神经递质释放，其中囊泡与质膜相融合，从而以胞吐方式释放神经递质分子。图1B为破伤风毒素和肉毒毒素在中枢和周围神经元中起作用的中毒机制的示意图。这一中毒过程可被描述为包括四个步骤：1)受体结合，其中梭菌毒素与梭菌受体系统相结合并启动中毒过程；2)复合物内化，其中在毒素结合之后，含有毒素/受体系统复合物的囊泡被胞吞至细胞内；3)轻链易位，认为其中发生了多个事件，包括例如，囊泡内部pH的改变、包括梭菌毒素重链的HN结构域的通道孔的形成、梭菌毒素轻链和重链的分离以及活性轻链的释放；和4)酶促靶向修饰，其中被激活的梭菌毒素的轻链对其目标SNARE底物(例如SNAP-25、VAMP或突触融合蛋白)进行蛋白水解、由此阻止囊泡驻留和神经递质释放。
图2显示了天然存在的梭菌毒素的结构域排列。用单链形式说明了从氨基端至羧基端的线性排列包括：酶促结构域、易位结构域和阿片样肽结合结构域。[SS]表示位于易位结构域和酶促结构域之间的二链环状区域。这一区域包括一个内源性二链环蛋白酶切割位点，该位点一旦被天然存在的蛋白酶(例如内源性梭菌毒素蛋白酶或环境中产生的天然存在的蛋白酶)以蛋白水解方式切割之后，就会使单链形式的毒素转化为二链形式。在单链形式的图上方显示的是梭菌毒素结合结构域的HCC区域。这一区域包括β-三叶草型结构域，该结构域按照从氨基端至羧基端的线性排列包括：一个α-折叠、一个β4/β5发夹回旋、一个β-折叠、一个β8/β9发夹回旋和一个γ-折叠。
图3显示了在其氨基端带有一个增强的靶向结构域的经修饰的梭菌毒素。图3A显示了经修饰的梭菌毒素的单链多肽形式，该经修饰的梭菌毒素从氨基端至羧基端的线性排列包括：结合元件、易位元件、含有外源性蛋白酶切割位点(P)的二链环状区域和治疗性元件。一旦被P蛋白酶切割，就使得单链形式的毒素转化为二链形式。图3B显示了经修饰的梭菌毒素的单链多肽形式，该经修饰的梭菌毒素从氨基端至羧基端的线性排列包括：结合元件、治疗性元件、含有外源性蛋白酶切割位点(P)的二链环状区域和易位元件。一旦被P蛋白酶切割，就使得单链形式的毒素转化为二链形式。
图4显示了在另两个结构域之间带有一个增强的靶向结构域的经修饰的梭菌毒素。图4A显示了经修饰的梭菌毒素的单链多肽形式，该经修饰的梭菌毒素从氨基端至羧基端的线性排列包括：治疗性元件、含有外源性蛋白酶切割位点(P)的二链环状区域、结合元件和易位元件。一旦被P蛋白酶切割，就使得单链形式的毒素转化为二链形式。图4B显示了经修饰的梭菌毒素的单链多肽形式，该经修饰的梭菌毒素从氨基端至羧基端的线性排列包括：易位元件、含有外源性蛋白酶切割位点(P)的二链环状区域、结合元件和治疗性元件。一旦被P蛋白酶切割，就使得单链形式的毒素转化为二链形式。图4C显示了经修饰的梭菌毒素的单链多肽形式，该经修饰的梭菌毒素从氨基端至羧基端的线性排列包括：治疗性元件、结合元件、含有外源性蛋白酶切割位点(P)的二链环状区域和易位元件。一旦被P蛋白酶切割，就使得单链形式的毒素转化为二链形式。图4D显示了经修饰的梭菌毒素的单链多肽形式，该经修饰的梭菌毒素从氨基端至羧基端的线性排列包括：易位元件、结合元件、含有外源性蛋白酶切割位点(P)的二链环状区域和治疗性元件。一旦被P蛋白酶切割，就使得单链形式的毒素转化为二链形式。
图5显示了在其羧基端带有一个增强的靶向结构域的经修饰的梭菌毒素。图5A显示了经修饰的梭菌毒素的单链多肽形式，该经修饰的梭菌毒素从氨基端至羧基端的线性排列包括：治疗性元件、含有外源性蛋白酶切割位点(P)的二链环状区域、易位元件和结合元件。一旦被P蛋白酶切割，就使得单链形式的毒素转化为二链形式。图5B显示了经修饰的梭菌毒素的单链多肽形式，该经修饰的梭菌毒素从氨基端至羧基端的线性排列包括：易位元件、含有外源性蛋白酶切割位点(P)的二链环状区域、治疗性元件和结合元件。一旦被P蛋白酶切割，就使得单链形式的毒素转化为二链形式。
本发明的各个方面在某种程度上提供了一种经修饰的梭菌毒素。本文所使用的术语“经修饰的梭菌毒素”意为含有阿片样肽结合结构域、梭菌毒素易位结构域和梭菌毒素酶促结构域的任何分子。可用于实施本发明各方面的示例性的经修饰的梭菌毒素记载于例如下列文献：Steward，(2007)见上文；Dolly，(2007)见上文；Foster，WO 2006/059093(2006)见上文；和Foster，WO 2006/059105(Jun.8，2006)见上文。
由肉毒梭菌(Clostridium botulinum)、破伤风梭菌(Clostridiumtetani)、巴氏梭菌(Clostridium baratii)和丁酸梭菌(Clostridiumbutyricum)产生的梭菌毒素已最广泛地用于人类和其他哺乳动物的治疗和美容学应用。肉毒梭菌(C.botulinum)菌株产生七种具有不同抗原性肉毒毒素(BoNT)，它们分别通过研究人类(BoNT/A、/B、/E和/F)和动物(BoNT/C1和/D)的肉毒毒素中毒事件而被识别或从土壤中分离得到(BoNT/G)。各种BoNT彼此之间的氨基酸同一性大约为35％，并且它们具有相同的功能性结构域排列和总体结构特征。本领域技术人员已经知道，每种梭菌毒素还可分为不同亚型，各亚型之间的氨基酸序列和编码这些蛋白的核酸序列都有些许不同。例如，目前已知四种BoNT/A亚型，分别为BoNT/A1、BoNT/A2、BoNT/A3和BoNT/A4，各具体亚型彼此之间的氨基酸同一性大约为89％。虽然七种BoNT血清型都具有相似的结构和药物学活性，但它们也会表现出一些不相同的细菌生物学特性。与之相反，破伤风毒素(TeNT)由破伤风梭菌(C.tetani)的唯一类群产生。其他两种梭菌——巴氏梭菌(C.baratii)和丁酸梭菌(C.butyricum)——分别产生毒素BaNT和BuNT，这两种毒素分别与BoNT/F和BoNT/E相类似。
每种成熟的二链分子均包括三个功能上不同的结构域：1)酶促结构域，位于含有金属蛋白酶区域的LC上，所述金属蛋白酶区域具有锌依赖性的内肽酶活性，可特异性地靶向于神经递质释放装置的核心组件；2)易位结构域，位于HC上更接近氨基端的一侧(HN)，它促进LC从细胞内的囊泡中释放至靶细胞的胞质中；和3)结合结构域，位于HC上更接近羧基端的一侧(HC)，它决定了毒素与位于靶细胞表面的受体复合物的结合活性和结合特异性。HC结构域包括两个表示功能的、大小接近但结构不同的特征组件，按照它们被称为HCN亚结构域和HCC亚结构域。表1示出了在示例性梭菌毒素中存在的每一结构域的近边界区域。
Figure GPA00001159614000081
这三个功能性结构域的结合活性、易位活性和酶促活性都是毒素产生毒性所必需的。虽然尚未精确地获知这一过程中的所有细节，但是所有血清型或亚型的梭菌毒素进入神经元并抑制神经递质释放的细胞中毒机制都是类似的。虽然本申请并不希望被下列描述所限制，该中毒机制可被描述为包括至少四个步骤：1)受体结合；2)复合物内化；3)轻链易位；和4)酶促靶向修饰(见图1)。这一过程开始于梭菌毒素的HC结构域与位于靶细胞的质膜表面的毒素特异性受体系统相结合。认为受体复合物的结合特异性部分地来自于似乎分别独特地构成每种梭菌毒素受体复合物的神经节苷脂和蛋白受体的特定组合。在结合后，所述毒素/受体复合物通过胞吞作用内化，内化的囊泡通过特异性的胞内途径进行分选。易位步骤似乎是通过囊泡区室的酸化而被引发。这一过程似乎可以启动两次重要的依赖于pH值的结构重排，所述结构重排增加毒素的疏水性并促进二链形式的形成。在被激活后，毒素轻链内肽酶从胞内的囊泡释放至细胞液中，此时它似乎能特异性地靶向至神经递质释放装置的三种已知的核心组件中的一种。这些核心蛋白为囊泡相关膜蛋白(VAMP)/突触小泡蛋白、25kDa的突触体相关蛋白(SNAP-25)和突触融合蛋白，它们是囊泡在突触上驻留和在神经末梢融合所必需的蛋白，它们都属于可溶性N-乙酰马来酰亚胺敏感性因子附着蛋白受体(soluble N-ethylmaleimide-sensitive factorattachment protein-receptor，SNARE)家族的成员。BoNT/A和BoNT/E切割SNAP-25的羧基端区域，分别释放九个氨基酸或二十六个氨基酸的片段，BoNT/C1也切割SNAP-25的靠近羧基端的区域。肉毒毒素血清型BoNT/B、BoNT/D、BoNT/F和BoNT/G以及破伤风毒素作用于VAMP的保守的中心部分，并使得VAMP的氨基端部分释放至胞质溶胶中。BoNT/C1切割突触融合蛋白中接近胞质溶胶膜表面的一个单一位点。突触SNARE蛋白被选择性地蛋白水解使得梭菌毒素可以在体内阻断神经递质释放。在多种非神经类型细胞的胞吐作用中，梭菌毒素的SNARE蛋白靶标是相同的；和神经元性细胞一样，在这些细胞中轻链肽酶活性抑制胞吐作用，参见例如，Yann Humeau et al.，How Botulinum and TetanusNeurotoxins Block Neurotransmitter Release，82(5)Biochimie.427-446(2000)；Kathryn Turton et al.，Botulinum and Tetanus Neurotoxins：Structure，Function and Therapeutic Utility，27(11)Trends Biochem.Sci.552-558.(2002)；Giovanna Lalli et al.，The Journey of Tetanus andBotulinum Neurotoxins in Neurons，11(9)Trends Microbiol.431-437，(2003)。
在本发明的一个方面，经修饰的梭菌毒素部分地包括梭菌毒素酶促结构域。本文所使用的术语“梭菌毒素酶促结构域”意指能够在梭菌毒素中毒作用过程中完成酶促靶向修饰步骤的任何梭菌毒素多肽。因此，梭菌毒素酶促结构域特异性地靶向于梭菌毒素底物，并能够实现梭菌毒素底物的蛋白水解性切割，所述梭菌毒素底物例如SNARE蛋白，例如SNAP-25底物、VAMP底物和突触融合蛋白底物。梭菌毒素酶促结构域的非限制性实例包括例如：BoNT/A酶促结构域、BoNT/B酶促结构域、BoNT/C1酶促结构域、BoNT/D酶促结构域、BoNT/E酶促结构域、BoNT/F酶促结构域、BoNT/G酶促结构域、TeNT酶促结构域、BaNT酶促结构域和BuNT酶促结构域。梭菌毒素酶促结构域的其他非限制性实例包括例如：SEQ IDNO：1的氨基酸1-448、SEQ ID NO：2的氨基酸1-441、SEQ ID NO：3的氨基酸1-449、SEQ ID NO：4的氨基酸1-445、SEQ ID NO：5的氨基酸1-422、SEQ ID NO：6的氨基酸1-439、SEQ ID NO：7的氨基酸1-446、SEQ ID NO：8的氨基酸1-457、SEQ ID NO：9的氨基酸1-431和SEQ IDNO：10的氨基酸1-422。
梭菌毒素酶促结构域包括但不限于：天然存在的梭菌毒素酶促结构域变体，例如梭菌毒素酶促结构域同种型和梭菌毒素酶促结构域亚型；非天然存在的梭菌毒素酶促结构域变体，例如，保守性梭菌毒素酶促结构域变体、非保守性梭菌毒素酶促结构域变体、梭菌毒素酶促结构域嵌合体、它们的梭菌毒素酶促结构域的活性片段，或上述变体的任意组合。
本文所使用的术语“梭菌毒素酶促结构域变体”，无论是天然存在的还是非天然存在的，均意指与公开的参照序列(表1)的相应区域相比至少具有一个氨基酸改变、并且可以用与参照序列相应区域的同一性百分比来描述的梭菌毒素酶促结构域。除非特别指明，可用于实施本发明实施方案的梭菌毒素酶促结构域变体为能够在梭菌毒素中毒作用过程中完成酶促靶向修饰步骤的变体。作为非限制性实例，BoNT/A酶促结构域变体包括与SEQ ID NO：1的氨基酸1-448相比至少有一处氨基酸不同的变体，例如与SEQ ID NO：1的氨基酸1-448相比有一处氨基酸置换、缺失或插入的变体；BoNT/B酶促结构域变体包括与SEQ ID NO：2的氨基酸1-441相比至少有一处氨基酸不同的变体，例如与SEQ ID NO：2的氨基酸1-441相比有一处氨基酸置换、缺失或插入的变体；BoNT/C1酶促结构域变体包括与SEQ ID NO：3的氨基酸1-449相比至少有一处氨基酸不同的变体，例如与SEQ ID NO：3的氨基酸1-449相比有一处氨基酸置换、缺失或插入的变体；BoNT/D酶促结构域变体包括与SEQ ID NO：4的氨基酸1-445相比至少有一处氨基酸不同的变体，例如与SEQ ID NO：4的氨基酸1-445相比有一处氨基酸置换、缺失或插入的变体；BoNT/E酶促结构域变体包括与SEQ ID NO：5的氨基酸1-422相比至少有一处氨基酸不同的变体，例如与SEQ ID NO：5的氨基酸1-422相比有一处氨基酸置换、缺失或插入的变体；BoNT/F酶促结构域变体包括与SEQ ID NO：6的氨基酸1-439相比至少有一处氨基酸不同的变体，例如与SEQ ID NO：6的氨基酸1-439相比有一处氨基酸置换、缺失或插入的变体；BoNT/G酶促结构域变体包括与SEQ ID NO：7的氨基酸1-446相比至少有一处氨基酸不同的变体，例如与SEQ ID NO：7的氨基酸1-446相比有一处氨基酸置换、缺失或插入的变体；TeNT酶促结构域变体包括与SEQ ID NO：8的氨基酸1-457相比至少有一处氨基酸不同的变体，例如与SEQ ID NO：8的氨基酸1-457相比有一处氨基酸置换、缺失或插入的变体。
本领域技术人员已经知道，在梭菌毒素的每种血清型中，都可以有一些天然存在的梭菌毒素酶促结构域变体，它们在氨基酸序列和编码这些蛋白的核酸序列中都具有一定程度的差异。例如，目前存在五种BoNT/A亚型，分别为BoNT/A1、BoNT/A2、BoNT/A3、BoNT/A4和BoNT/A5，它们具体酶促结构域亚型彼此之间的氨基酸同一性约为95％。本文所使用的术语“天然存在的梭菌毒素酶促结构域变体”意指通过天然存在的过程产生的任何梭菌毒素酶促结构域，包括但不限于：由可变剪接转录物产生的梭菌毒素酶促结构域同种型、由自发突变产生的梭菌毒素酶促结构域同种型和梭菌毒素酶促结构域亚型。天然存在的梭菌毒素酶促结构域变体能够与其源自的参照梭菌毒素酶促结构域以基本相同的方式发挥功能，并且在本发明的任何方面都能够替代所述参照梭菌毒素酶促结构域。天然存在的梭菌毒素酶促结构域变体与其源自的参照梭菌毒素酶促结构域相比，可以含有一个或更多氨基酸、两个或更多氨基酸、三个或更多氨基酸、四个或更多氨基酸、五个或更多氨基酸、十个或更多氨基酸、20个或更多氨基酸、30个或更多氨基酸、40个或更多氨基酸、50个或更多氨基酸或100个或更多氨基酸的氨基酸置换。天然存在的梭菌毒素酶促结构域变体与其源自的参照梭菌毒素酶促结构域相比，也可以含有至少10个连续氨基酸、至少15个连续氨基酸、至少20个连续氨基酸或至少25个连续氨基酸的氨基酸置换；该天然存在的梭菌毒素酶促结构域变体与其源自的参照梭菌毒素酶促结构域相比，具有至少50％氨基酸同一性、65％氨基酸同一性、75％氨基酸同一性、85％氨基酸同一性或95％氨基酸同一性。
天然存在的梭菌毒素酶促结构域变体的非限制性实例为梭菌毒素酶促结构域同种型，例如BoNT/A酶促结构域同种型、BoNT/B酶促结构域同种型、BoNT/C1酶促结构域同种型、BoNT/D酶促结构域同种型、BoNT/E酶促结构域同种型、BoNT/F酶促结构域同种型、BoNT/G酶促结构域同种型和TeNT酶促结构域同种型。梭菌毒素酶促结构域同种型能够与其源自的参照梭菌毒素酶促结构域以基本相同的方式发挥功能，并且在本发明的任何方面都能够替代所述参照梭菌毒素酶促结构域。
天然存在的梭菌毒素酶促结构域变体的其他非限制性实例为梭菌毒素酶促结构域亚型，例如，来源于亚型BoNT/A1、BoNT/A2、BoNT/A3、BoNT/A4和BoNT/A5的酶促结构域；来源于亚型BoNT/B1、BoNT/B2、二价BoNT/B和非蛋白水解性BoNT/B的酶促结构域；来源于亚型BoNT/C1-1和BoNT/C1-2的酶促结构域；来源于亚型BoNT/E1、BoNT/E2和BoNT/E3的酶促结构域；和来源于亚型BoNT/F1、BoNT/F2、BoNT/F3和BoNT/F4的酶促结构域。梭菌毒素酶促结构域亚型能够与其源自的参照梭菌毒素酶促结构域以基本相同的方式发挥功能，并且在本发明的任何方面都能够替代所述参照梭菌毒素酶促结构域。
本文所使用的术语“非天然存在的梭菌毒素酶促结构域变体”意为通过人类的加工产生的任何梭菌毒素酶促结构域，包括但不限于使用随机诱变或合理设计通过基因工程产生的梭菌毒素酶促结构域以及通过化学合成产生的梭菌毒素酶促结构域。非天然存在的梭菌毒素酶促结构域变体的非限制性实例包括例如：保守性梭菌毒素酶促结构域变体、非保守性梭菌毒素酶促结构域变体、梭菌毒素酶促结构域嵌合变体和梭菌毒素酶促结构域的活性片段。
本文所使用的术语“保守性梭菌毒素酶促结构域变体”意指与参照梭菌毒素酶促结构域序列(表1)相比具有至少一个氨基酸置换的梭菌毒素酶促结构域，所述氨基酸置换是将参照序列中的原始氨基酸置换为与该原始氨基酸具有至少一方面的相似属性的另一氨基酸或氨基酸类似物。所述相似属性的实例包括但不限于相似的大小、拓扑学、电荷、疏水性、亲水性、亲脂性、共价键合能力、氢键合能力、物理化学属性等等，或者上述属性的组合。保守性梭菌毒素酶促结构域变体能够与其源自的参照梭菌毒素酶促结构域以基本相同的方式发挥功能，并且在本发明的任何方面都能够替代所述参照梭菌毒素酶促结构域。保守性梭菌毒素酶促结构域变体与其源自的参照梭菌毒素酶促结构域相比，可以含有一个或更多氨基酸、两个或更多氨基酸、三个或更多氨基酸、四个或更多氨基酸、五个或更多氨基酸、十个或更多氨基酸、20个或更多氨基酸、30个或更多氨基酸、40个或更多氨基酸、50个或更多氨基酸、100个或更多氨基酸的氨基酸置换或200个或更多氨基酸的氨基酸置换。保守性梭菌毒素酶促结构域变体与其源自的参照梭菌毒素酶促结构域相比，也可以含有至少10个连续氨基酸、至少15个连续氨基酸、至少20个连续氨基酸或至少25个连续氨基酸的氨基酸置换；该保守性梭菌毒素酶促结构域变体与其源自的参照梭菌毒素酶促结构域相比，具有至少50％氨基酸同一性、65％氨基酸同一性、75％氨基酸同一性、85％氨基酸同一性或95％氨基酸同一性。保守性梭菌毒素酶促结构域变体的非限制性实例包括例如：保守性BoNT/A酶促结构域变体、保守性BoNT/B酶促结构域变体、保守性BoNT/C1酶促结构域变体、保守性BoNT/D酶促结构域变体、保守性BoNT/E酶促结构域变体、保守性BoNT/F酶促结构域变体、保守性BoNT/G酶促结构域变体和保守性TeNT酶促结构域变体。
本文所使用的术语“非保守性梭菌毒素酶促结构域变体”意指这样的梭菌毒素酶促结构域，其中：1)该非保守性梭菌毒素酶促结构域变体与其源自的参照梭菌毒素酶促结构域相比，具有至少一个氨基酸的缺失；2)该非保守性梭菌毒素酶促结构域变体与其源自的参照梭菌毒素酶促结构域相比，具有至少一个氨基酸的插入；或3)该非保守性梭菌毒素酶促结构域变体与其源自的参照梭菌毒素酶促结构域序列(表1)相比，具有至少一个氨基酸的置换，所述氨基酸置换是将参照序列中的原始氨基酸置换为与该原始氨基酸在任意方面属性均不相似的另一氨基酸或氨基酸类似物。非保守性梭菌毒素酶促结构域变体能够与其源自的参照梭菌毒素酶促结构域以基本相同的方式发挥功能，并且在本发明的任何方面都能够替代所述参照梭菌毒素酶促结构域。非保守性梭菌毒素酶促结构域变体与其源自的参照梭菌毒素酶促结构域相比，可具有一个或更多氨基酸、两个或更多氨基酸、三个或更多氨基酸、四个或更多氨基酸、五个或更多氨基酸和十个或更多氨基酸的缺失。非保守性梭菌毒素酶促结构域变体与其源自的参照梭菌毒素酶促结构域相比，可具有一个或更多氨基酸、两个或更多氨基酸、三个或更多氨基酸、四个或更多氨基酸、五个或更多氨基酸和十个或更多氨基酸的插入。非保守性梭菌毒素酶促结构域变体与其源自的参照梭菌毒素酶促结构域相比，可具有一个或更多氨基酸、两个或更多氨基酸、三个或更多氨基酸、四个或更多氨基酸、五个或更多氨基酸、10个或更多氨基酸、20个或更多氨基酸、30个或更多氨基酸、40个或更多氨基酸、50个或更多氨基酸、100个或更多氨基酸或200个或更多氨基酸的置换。非保守性梭菌毒素酶促结构域变体与其源自的参照梭菌毒素酶促结构域相比，也可以含有至少10个连续氨基酸、至少15个连续氨基酸、至少20个连续氨基酸或至少25个连续氨基酸的氨基酸置换；该非保守性梭菌毒素酶促结构域变体与其源自的参照梭菌毒素酶促结构域相比，具有至少50％氨基酸同一性、65％氨基酸同一性、75％氨基酸同一性、85％氨基酸同一性或95％氨基酸同一性。非保守性梭菌毒素酶促结构域变体的非限制性实例包括例如，非保守性BoNT/A酶促结构域变体、非保守性BoNT/B酶促结构域变体、非保守性BoNT/C1酶促结构域变体、非保守性BoNT/D酶促结构域变体、非保守性BoNT/E酶促结构域变体、非保守性BoNT/F酶促结构域变体、非保守性BoNT/G酶促结构域变体和非保守性TeNT酶促结构域变体。
本文所使用的术语“梭菌毒素酶促结构域嵌合体”意指这样的多肽，所述多肽包括梭菌毒素酶促结构域的至少一部分和至少另一种多肽的至少一部分，从而形成与表1所示的参照毒素酶促结构域相比至少一种属性不同的梭菌毒素酶促结构域，但前提条件是这种梭菌毒素酶促结构域嵌合体仍然能够特异性地靶向神经递质释放装置的核心组件，因此能够参与执行梭菌毒素蛋白水解性切割底物的整个细胞机制。这类梭菌毒素酶促结构域嵌合体记载于例如：Lance E.Steward et al.，Leucine-based Motif andClostridial Toxins，美国专利公布2003/0027752(Feb.6，2003)；Lance E.Steward et al.，Clostridial Neurotoxin Compositions and ModifiedClostridial Neurotoxins，美国专利公布2003/0219462(Nov.27，2003)；andLance E.Steward et al.，Clostridial Neurotoxin Compositions and ModifiedClostridial Neurotoxins，美国专利公布2004/0220386(Nov.4，2004)，上述每篇文献的全部内容均以援引的方式纳入本文。
本文所使用的术语“梭菌毒素酶促结构域活性片段”意指任何这样的梭菌毒素片段，所述片段包括可用于本发明任意方面的酶促结构域，前提条件是这些酶促结构域片段能够特异性地靶向神经递质释放装置的核心组件，因此能够参与执行梭菌毒素蛋白水解性切割底物的整个细胞机制。所述梭菌毒素的酶促结构域的长度约为420-460个氨基酸，并能形成一个酶促结构域(表1)。研究显示，发挥梭菌毒素酶促结构域的活性并不必需全长酶促结构域。作为一个非限制性实例，BoNT/A酶促结构域的前八个氨基酸(SEQ ID NO：1的残基1-8)就不是酶促活性所必需的。作为另一个非限制性实例，TeNT酶促结构域的前八个氨基酸(SEQ ID NO：8的残基1-8)也不是酶促活性所必需的。类似地，酶促结构域的羧基端并不是活性所必需的。作为一个非限制性实例，BoNT/A酶促结构域的最后32个氨基酸(SEQ ID NO：1的残基417-448)就不是酶促活性所必需的。作为另一个非限制性实例，TeNT酶促结构域的最后31个氨基酸(SEQ ID NO：8的残基427-457)也不是酶促活性所必需的。因此，这一实施方案的某些方面可以包括如下所述的梭菌毒素酶促结构域，其中包括长度为例如至少350个氨基酸、至少375个氨基酸、至少400个氨基酸、至少425个氨基酸和至少450个氨基酸的酶促结构域。这一实施方案的其他方面可包括如下所述的梭菌毒素酶促结构域，其中包括长度为例如最多350个氨基酸、最多375个氨基酸、最多400个氨基酸、最多425个氨基酸和最多450个氨基酸的酶促结构域。
任何序列比对方法都可用于测定天然存在的梭菌毒素酶促结构域变体和非天然存在的梭菌毒素酶促结构域变体的同一性百分比，所述方法包括但不限于全长比较法(global method)、局部比较法(local method)和混合比较法(hybrid method)，例如区段比较法(segment approachmethod)。测定同一性百分比的方法对于本领域技术人员而言是常规方法，本文也有所教导。
全长比较法(global method)是将分子从头到尾进行比对，并通过累加每一残基对的评分再加上空位罚分来确定最佳比对，非限制性方法包括例如：CLUSTAL W，参见例如Julie D.Thompson et al.，CL USTAL W：Improving the Sensitivity of Progressive Multiple Sequence AlignmentThrough Sequence Weighting，Position-Specific Gap Penalties and WeigntMatrix Choice，22(22)Nucleic Acids Research 4673-4680(1994)；以及迭代细化法，参见例如Osamu Gotoh，Significant Improvement in Accuracy ofMultiple Protein Sequence Alignments by Iterative Refinement as Assessedby Reference to Structural Alignments，264(4)J.Mol.Biol.823-838(1996)。
局部比较法(local method)通过识别一个或多个在所有输入序列中均保守的基序而进行序列比对。非限制性方法包括例如：Match-box法，参见例如Eric Depiereux and Ernest Feytmans，Match-Box：AFundamentally New Algorithm for the Simultaneous Alignment of SeveralProtein Sequences，8(5)CABIOS 501-509(1992)；Gibbs采样法，参见例如C.E.Lawrence et al.，Detecting Subtle Sequence Signals：A GibbsSampling Strategy for Multiple Alignment，262(5131)Science 208-214(1993)；Align-M法，参见例如Ivo Van Walle et al.，Align-M-A NewAlgorithm for Multiple Alignment of Highly Divergent Sequences，20(9)Bioinformatics，：1428-1435(2004)。
混合比较法(hybrid method)结合了全长比较法和局部比较法的功能。非限制性方法包括例如：区段与区段比较法，参见例如BurkhardMorgenstern et al.，Multiple DNA and Protein Sequence Alignment BasedOn Segment-To-Segment Comparison，93(22)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.12098-12103(1996)；T-Coffee法，参见例如Cédric Notredame et al.，T-Coffee：A Novel Algorithm for Multiple Sequence Alignment，302(1)J.Mol.Biol.205-217(2000)；MUSCLE法，参见例如Robert C.Edgar，MUSCLE：Multiple Sequence Alignment With High Score Accuracy andHigh Throughput，32(5)Nucleic Acids Res.1792-1797(2004)；以及DIALIGN-T法，参见例如Amarendran R Subramanian et al.，DIALIGN-T：An Improved Algorithm for Segment-Based MultipleSequence Alignment，6(1)BMC Bioinformatics 66(2005)。
因此，在一个实施方案中，本申请说明书公开的经修饰的梭菌毒素包括梭菌毒素酶促结构域。在这一实施方案的一个方面，梭菌毒素酶促结构域包括天然存在的梭菌毒素酶促结构域变体，例如梭菌毒素酶促结构域同种型或梭菌毒素酶促结构域亚型。在这一实施方案的另一个方面，梭菌毒素酶促结构域包括非天然存在的梭菌毒素酶促结构域变体，例如，保守性梭菌毒素酶促结构域变体、非保守性梭菌毒素酶促结构域变体、梭菌毒素嵌合酶促结构域、梭菌毒素酶促结构域活性片段，或它们的任意组合。
在另一个实施方案中，梭菌毒素酶促结构域包括BoNT/A酶促结构域。在这一实施方案的一个方面，BoNT/A酶促结构域包括SEQ ID NO：1的氨基酸1-448。在这一实施方案的另一个方面，BoNT/A酶促结构域包括天然存在的BoNT/A酶促结构域变体，例如，来源于BoNT/A同种型的酶促结构域或来源于BoNT/A亚型的酶促结构域。在这一实施方案的另一个方面，BoNT/A酶促结构域包括SEQ ID NO：1的天然存在的BoNT/A酶促结构域变体的氨基酸1-448，例如，SEQ ID NO：1的BoNT/A同种型的氨基酸1-448或SEQ ID NO：1的BoNT/A亚型的氨基酸1-448。在这一实施方案的又另一个方面，BoNT/A酶促结构域包括非天然存在的BoNT/A酶促结构域变体，例如，保守性BoNT/A酶促结构域变体、非保守性BoNT/A酶促结构域变体、BoNT/A嵌合体酶促结构域、BoNT/A酶促结构域活性片段或它们的任意组合。在这一实施方案的又另一个方面，BoNT/A酶促结构域包括SEQ ID NO：1的非天然存在的BoNT/A酶促结构域变体的氨基酸1-448，例如SEQ ID NO：1的保守性BoNT/A酶促结构域变体的氨基酸1-448、SEQ ID NO：1的非保守性BoNT/A酶促结构域变体的氨基酸1-448、SEQ ID NO：1的BoNT/A酶促结构域活性片段的氨基酸1-448，或它们的任意组合。
在这一实施方案的其他方面，BoNT/A酶促结构域包括与SEQ IDNO：1的氨基酸1-448具有例如至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％氨基酸同一性的多肽。在这一实施方案的再其他方面，BoNT/A酶促结构域包括与SEQ ID NO：1的氨基酸1-448具有例如最多70％、最多75％、最多80％、最多85％、最多90％或最多95％氨基酸同一性的多肽。
在这一实施方案的其他方面，BoNT/A酶促结构域包括：与SEQ IDNO：1的氨基酸1-448相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：1的氨基酸1-448相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：1的氨基酸1-448相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：1的氨基酸1-448相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：1的氨基酸1-448相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ ID NO：1的氨基酸1-448相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸插入的多肽。
在这一实施方案的其他方面，BoNT/A酶促结构域包括：与SEQ IDNO：1的氨基酸1-448相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：1的氨基酸1-448相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：1的氨基酸1-448相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：1的氨基酸1-448相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：1的氨基酸1-448相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ ID NO：1的氨基酸1-448相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸插入的多肽。
在另一个实施方案中，梭菌毒素酶促结构域包括BoNT/B酶促结构域。在这一实施方案的一个方面，BoNT/B酶促结构域包括SEQ ID NO：2的氨基酸1-441。在这一实施方案的另一个方面，BoNT/B酶促结构域包括天然存在的BoNT/B酶促结构域变体，例如，来源于BoNT/B同种型的酶促结构域或来源于BoNT/B亚型的酶促结构域。在这一实施方案的另一个方面，BoNT/B酶促结构域包括SEQ ID NO：2的天然存在的BoNT/B酶促结构域变体的氨基酸1-441，例如，SEQ ID NO：2的BoNT/B同种型的氨基酸1-441或SEQ ID NO：2的BoNT/B亚型的氨基酸1-441。在这一实施方案的又另一个方面，BoNT/B酶促结构域包括非天然存在的BoNT/B酶促结构域变体，例如，保守性BoNT/B酶促结构域变体、非保守性BoNT/B酶促结构域变体、BoNT/B嵌合体酶促结构域、BoNT/B酶促结构域活性片段或它们的任意组合。在这一实施方案的又另一个方面，BoNT/B酶促结构域包括SEQ ID NO：2的非天然存在的BoNT/B酶促结构域变体的氨基酸1-441，例如SEQ ID NO：2的保守性BoNT/B酶促结构域变体的氨基酸1-441、SEQ ID NO：2的非保守性BoNT/B酶促结构域变体的氨基酸1-441、SEQ ID NO：2的BoNT/B酶促结构域活性片段的氨基酸1-441，或它们的任意组合。
在这一实施方案的其他方面，BoNT/B酶促结构域包括与SEQ IDNO：2的氨基酸1-441具有例如至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％氨基酸同一性的多肽。在这一实施方案的再其他方面，BoNT/B酶促结构域包括与SEQ ID NO：2的氨基酸1-441具有例如最多70％、最多75％、最多80％、最多85％、最多90％或最多95％氨基酸同一性的多肽。
在这一实施方案的其他方面，BoNT/B酶促结构域包括：与SEQ IDNO：2的氨基酸1-441相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：2的氨基酸1-441相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：2的氨基酸1-441相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：2的氨基酸1-441相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：2的氨基酸1-441相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ ID NO：2的氨基酸1-441相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸插入的多肽。
在这一实施方案的其他方面，BoNT/B酶促结构域包括：与SEQ IDNO：2的氨基酸1-441相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：2的氨基酸1-441相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：2的氨基酸1-441相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：2的氨基酸1-441相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：2的氨基酸1-441相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ ID NO：2的氨基酸1-441相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸插入的多肽。
在另一个实施方案中，梭菌毒素酶促结构域包括BoNT/C1酶促结构域。在这一实施方案的一个方面，BoNT/C1酶促结构域包括SEQ ID NO：3的氨基酸1-449。在这一实施方案的另一个方面，BoNT/C1酶促结构域包括天然存在的BoNT/C1酶促结构域变体，例如，来源于BoNT/C1同种型的酶促结构域或来源于BoNT/C1亚型的酶促结构域。在这一实施方案的另一个方面，BoNT/C1酶促结构域包括SEQ ID NO：3的天然存在的BoNT/C1酶促结构域变体的氨基酸1-449，例如，SEQ ID NO：3的BoNT/C1同种型的氨基酸1-449或SEQ ID NO：3的BoNT/C1亚型的氨基酸1-449。在这一实施方案的又另一个方面，BoNT/C1酶促结构域包括非天然存在的BoNT/C1酶促结构域变体，例如，保守性BoNT/C1酶促结构域变体、非保守性BoNT/C1酶促结构域变体、BoNT/C1嵌合体酶促结构域、BoNT/C1酶促结构域活性片段或它们的任意组合。在这一实施方案的又另一个方面，BoNT/C1酶促结构域包括SEQ ID NO：3的非天然存在的BoNT/C1酶促结构域变体的氨基酸1-449，例如SEQ ID NO：3的保守性BoNT/C1酶促结构域变体的氨基酸1-449、SEQ ID NO：3的非保守性BoNT/C1酶促结构域变体的氨基酸1-449、SEQ ID NO：3的BoNT/C1酶促结构域活性片段的氨基酸1-449，或它们的任意组合。
在这一实施方案的其他方面，BoNT/C1酶促结构域包括与SEQ IDNO：3的氨基酸1-449具有例如至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％氨基酸同一性的多肽。在这一实施方案的再其他方面，BoNT/C1酶促结构域包括与SEQ ID NO：3的氨基酸1-449具有例如最多70％、最多75％、最多80％、最多85％、最多90％或最多95％氨基酸同一性的多肽。
在这一实施方案的其他方面，BoNT/C1酶促结构域包括：与SEQ IDNO：3的氨基酸1-449相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：3的氨基酸1-449相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：3的氨基酸1-449相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：3的氨基酸1-449相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：3的氨基酸1-449相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ ID NO：3的氨基酸1-449相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸插入的多肽。
在这一实施方案的其他方面，BoNT/C1酶促结构域包括：与SEQ IDNO：3的氨基酸1-449相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：3的氨基酸1-449相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：3的氨基酸1-449相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：3的氨基酸1-449相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：3的氨基酸1-449相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ ID NO：3的氨基酸1-449相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸插入的多肽。
在另一个实施方案中，梭菌毒素酶促结构域包括BoNT/D酶促结构域。在这一实施方案的一个方面，BoNT/D酶促结构域包括SEQ ID NO：4的氨基酸1-445。在这一实施方案的另一个方面，BoNT/D酶促结构域包括天然存在的BoNT/D酶促结构域变体，例如，来源于BoNT/D同种型的酶促结构域或来源于BoNT/D亚型的酶促结构域。在这一实施方案的另一个方面，BoNT/D酶促结构域包括SEQ ID NO：4的天然存在的BoNT/D酶促结构域变体的氨基酸1-445，例如，SEQ ID NO：4的BoNT/D同种型的氨基酸1-445或SEQ ID NO：4的BoNT/D亚型的氨基酸1-445。在这一实施方案的又另一个方面，BoNT/D酶促结构域包括非天然存在的BoNT/D酶促结构域变体，例如，保守性BoNT/D酶促结构域变体、非保守性BoNT/D酶促结构域变体、BoNT/D嵌合体酶促结构域、BoNT/D酶促结构域活性片段或它们的任意组合。在这一实施方案的又另一个方面，BoNT/D酶促结构域包括SEQ ID NO：4的非天然存在的BoNT/D酶促结构域变体的氨基酸1-445，例如SEQ ID NO：4的保守性BoNT/D酶促结构域变体的氨基酸1-445、SEQ ID NO：4的非保守性BoNT/D酶促结构域变体的氨基酸1-445、SEQ ID NO：4的BoNT/D酶促结构域活性片段的氨基酸1-445，或它们的任意组合。
在这一实施方案的其他方面，BoNT/D酶促结构域包括与SEQ IDNO：4的氨基酸1-445具有例如至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％氨基酸同一性的多肽。在这一实施方案的再其他方面，BoNT/D酶促结构域包括与SEQ ID NO：4的氨基酸1-445具有例如最多70％、最多75％、最多80％、最多85％、最多90％或最多95％氨基酸同一性的多肽。
在这一实施方案的其他方面，BoNT/D酶促结构域包括：与SEQ IDNO：4的氨基酸1-445相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：4的氨基酸1-445相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：4的氨基酸1-445相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：4的氨基酸1-445相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：4的氨基酸1-445相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ ID NO：4的氨基酸1-445相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸插入的多肽。
在这一实施方案的其他方面，BoNT/D酶促结构域包括：与SEQ IDNO：4的氨基酸1-445相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：4的氨基酸1-445相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：4的氨基酸1-445相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：4的氨基酸1-445相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：4的氨基酸1-445相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ ID NO：4的氨基酸1-445相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸插入的多肽。
在另一个实施方案中，梭菌毒素酶促结构域包括BoNT/E酶促结构域。在这一实施方案的一个方面，BoNT/E酶促结构域包括SEQ ID NO：5的氨基酸1-422。在这一实施方案的另一个方面，BoNT/E酶促结构域包括天然存在的BoNT/E酶促结构域变体，例如，来源于BoNT/E同种型的酶促结构域或来源于BoNT/E亚型的酶促结构域。在这一实施方案的另一个方面，BoNT/E酶促结构域包括SEQ ID NO：5的天然存在的BoNT/E酶促结构域变体的氨基酸1-422，例如，SEQ ID NO：5的BoNT/E同种型的氨基酸1-422或SEQ ID NO：5的BoNT/E亚型的氨基酸1-422。在这一实施方案的又另一个方面，BoNT/E酶促结构域包括非天然存在的BoNT/E酶促结构域变体，例如，保守性BoNT/E酶促结构域变体、非保守性BoNT/E酶促结构域变体、BoNT/E嵌合体酶促结构域、BoNT/E酶促结构域活性片段或它们的任意组合。在这一实施方案的又另一个方面，BoNT/E酶促结构域包括SEQ ID NO：5的非天然存在的BoNT/E酶促结构域变体的氨基酸1-422，例如SEQ ID NO：5的保守性BoNT/E酶促结构域变体的氨基酸1-422、SEQ ID NO：5的非保守性BoNT/E酶促结构域变体的氨基酸1-422、SEQ ID NO：5的BoNT/E酶促结构域活性片段的氨基酸1-422，或它们的任意组合。
在这一实施方案的其他方面，BoNT/E酶促结构域包括与SEQ IDNO：5的氨基酸1-422具有例如至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％氨基酸同一性的多肽。在这一实施方案的再其他方面，BoNT/E酶促结构域包括与SEQ ID NO：5的氨基酸1-422具有例如最多70％、最多75％、最多80％、最多85％、最多90％或最多95％氨基酸同一性的多肽。
在这一实施方案的其他方面，BoNT/E酶促结构域包括：与SEQ IDNO：5的氨基酸1-422相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：5的氨基酸1-422相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：5的氨基酸1-422相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：5的氨基酸1-422相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：5的氨基酸1-422相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ ID NO：5的氨基酸1-422相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸插入的多肽。
在这一实施方案的其他方面，BoNT/E酶促结构域包括：与SEQ IDNO：5的氨基酸1-422相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：5的氨基酸1-422相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：5的氨基酸1-422相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：5的氨基酸1-422相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：5的氨基酸1-422相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ ID NO：5的氨基酸1-422相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸插入的多肽。
在另一个实施方案中，梭菌毒素酶促结构域包括BoNT/F酶促结构域。在这一实施方案的一个方面，BoNT/F酶促结构域包括SEQ ID NO：6的氨基酸1-439。在这一实施方案的另一个方面，BoNT/F酶促结构域包括天然存在的BoNT/F酶促结构域变体，例如，来源于BoNT/F同种型的酶促结构域或来源于BoNT/F亚型的酶促结构域。在这一实施方案的另一个方面，BoNT/F酶促结构域包括SEQ ID NO：6的天然存在的BoNT/F酶促结构域变体的氨基酸1-439，例如，SEQ ID NO：6的BoNT/F同种型的氨基酸1-439或SEQ ID NO：6的BoNT/F亚型的氨基酸1-439。在这一实施方案的又另一个方面，BoNT/F酶促结构域包括非天然存在的BoNT/F酶促结构域变体，例如，保守性BoNT/F酶促结构域变体、非保守性BoNT/F酶促结构域变体、BoNT/F嵌合体酶促结构域、BoNT/F酶促结构域活性片段或它们的任意组合。在这一实施方案的又另一个方面，BoNT/F酶促结构域包括SEQ ID NO：6的非天然存在的BoNT/F酶促结构域变体的氨基酸1-439，例如SEQ ID NO：6的保守性BoNT/F酶促结构域变体的氨基酸1-439、SEQ ID NO：6的非保守性BoNT/F酶促结构域变体的氨基酸1-439、SEQ ID NO：6的BoNT/F酶促结构域活性片段的氨基酸1-439，或它们的任意组合。
在这一实施方案的其他方面，BoNT/F酶促结构域包括与SEQ IDNO：6的氨基酸1-439具有例如至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％氨基酸同一性的多肽。在这一实施方案的再其他方面，BoNT/F酶促结构域包括与SEQ ID NO：6的氨基酸1-439具有例如最多70％、最多75％、最多80％、最多85％、最多90％或最多95％氨基酸同一性的多肽。
在这一实施方案的其他方面，BoNT/F酶促结构域包括：与SEQ IDNO：6的氨基酸1-439相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：6的氨基酸1-439相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：6的氨基酸1-439相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：6的氨基酸1-439相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：6的氨基酸1-439相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ ID NO：6的氨基酸1-439相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸插入的多肽。
在这一实施方案的其他方面，BoNT/F酶促结构域包括：与SEQ IDNO：6的氨基酸1-439相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：6的氨基酸1-439相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：6的氨基酸1-439相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：6的氨基酸1-439相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：6的氨基酸1-439相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ ID NO：6的氨基酸1-439相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸插入的多肽。
在另一个实施方案中，梭菌毒素酶促结构域包括BoNT/G酶促结构域。在这一实施方案的一个方面，BoNT/G酶促结构域包括SEQ ID NO：7的氨基酸1-446。在这一实施方案的另一个方面，BoNT/G酶促结构域包括天然存在的BoNT/G酶促结构域变体，例如，来源于BoNT/G同种型的酶促结构域或来源于BoNT/G亚型的酶促结构域。在这一实施方案的另一个方面，BoNT/G酶促结构域包括SEQ ID NO：7的天然存在的BoNT/G酶促结构域变体的氨基酸1-446，例如，SEQ ID NO：7的BoNT/G同种型的氨基酸1-446或SEQ ID NO：7的BoNT/G亚型的氨基酸1-446。在这一实施方案的又另一个方面，BoNT/G酶促结构域包括非天然存在的BoNT/G酶促结构域变体，例如，保守性BoNT/G酶促结构域变体、非保守性BoNT/G酶促结构域变体、BoNT/G嵌合体酶促结构域、BoNT/G酶促结构域活性片段或它们的任意组合。在这一实施方案的又另一个方面，BoNT/G酶促结构域包括SEQ ID NO：7的非天然存在的BoNT/G酶促结构域变体的氨基酸1-446，例如SEQ ID NO：7的保守性BoNT/G酶促结构域变体的氨基酸1-446、SEQ ID NO：7的非保守性BoNT/G酶促结构域变体的氨基酸1-446、SEQ ID NO：7的BoNT/G酶促结构域活性片段的氨基酸1-446，或它们的任意组合。
在这一实施方案的其他方面，BoNT/G酶促结构域包括与SEQ IDNO：7的氨基酸1-446具有例如至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％氨基酸同一性的多肽。在这一实施方案的再其他方面，BoNT/G酶促结构域包括与SEQ ID NO：7的氨基酸1-446具有例如最多70％、最多75％、最多80％、最多85％、最多90％或最多95％氨基酸同一性的多肽。
在这一实施方案的其他方面，BoNT/G酶促结构域包括：与SEQ IDNO：7的氨基酸1-446相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：7的氨基酸1-446相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：7的氨基酸1-446相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：7的氨基酸1-446相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：7的氨基酸1-446相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ ID NO：7的氨基酸1-446相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸插入的多肽。
在这一实施方案的其他方面，BoNT/G酶促结构域包括：与SEQ IDNO：7的氨基酸1-446相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：7的氨基酸1-446相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：7的氨基酸1-446相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：7的氨基酸1-446相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：7的氨基酸1-446相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ ID NO：7的氨基酸1-446相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸插入的多肽。
在另一个实施方案中，梭菌毒素酶促结构域包括TeNT酶促结构域。在这一实施方案的一个方面，TeNT酶促结构域包括SEQ ID NO：8的氨基酸1-457。在这一实施方案的另一个方面，TeNT酶促结构域包括天然存在的TeNT酶促结构域变体，例如，来源于TeNT同种型的酶促结构域或来源于TeNT亚型的酶促结构域。在这一实施方案的另一个方面，TeNT酶促结构域包括SEQ ID NO：8的天然存在的TeNT酶促结构域变体的氨基酸1-457，例如，SEQ ID NO：8的TeNT同种型的氨基酸1-457或SEQID NO：8的TeNT亚型的氨基酸1-457。在这一实施方案的又另一个方面，TeNT酶促结构域包括非天然存在的TeNT酶促结构域变体，例如，保守性TeNT酶促结构域变体、非保守性TeNT酶促结构域变体、TeNT嵌合体酶促结构域、TeNT酶促结构域活性片段或它们的任意组合。在这一实施方案的又另一个方面，TeNT酶促结构域包括SEQ ID NO：8的非天然存在的TeNT酶促结构域变体的氨基酸1-457，例如SEQ ID NO：8的保守性TeNT酶促结构域变体的氨基酸1-457、SEQ ID NO：8的非保守性TeNT酶促结构域变体的氨基酸1-457、SEQ ID NO：8的TeNT酶促结构域活性片段的氨基酸1-457，或它们的任意组合。
在这一实施方案的其他方面，TeNT酶促结构域包括与SEQ ID NO：8的氨基酸1-457具有例如至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％氨基酸同一性的多肽。在这一实施方案的再其他方面，TeNT酶促结构域包括与SEQ ID NO：8的氨基酸1-457具有例如最多70％、最多75％、最多80％、最多85％、最多90％或最多95％氨基酸同一性的多肽。
在这一实施方案的其他方面，TeNT酶促结构域包括：与SEQ ID NO：8的氨基酸1-457相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：8的氨基酸1-457相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：8的氨基酸1-457相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：8的氨基酸1-457相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：8的氨基酸1-457相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ ID NO：8的氨基酸1-457相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸插入的多肽。
在这一实施方案的其他方面，TeNT酶促结构域包括：与SEQ ID NO：8的氨基酸1-457相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：8的氨基酸1-457相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：8的氨基酸1-457相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：8的氨基酸1-457相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：8的氨基酸1-457相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ ID NO：8的氨基酸1-457相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸插入的多肽。
在另一个实施方案中，梭菌毒素酶促结构域包括BaNT酶促结构域。在这一实施方案的一个方面，BaNT酶促结构域包括SEQ ID NO：9的氨基酸1-431。在这一实施方案的另一个方面，BaNT酶促结构域包括天然存在的BaNT酶促结构域变体，例如，来源于BaNT同种型的酶促结构域或来源于BaNT亚型的酶促结构域。在这一实施方案的另一个方面，BaNT酶促结构域包括SEQ ID NO：9的天然存在的BaNT酶促结构域变体的氨基酸1-431，例如，SEQ ID NO：9的BaNT同种型的氨基酸1-431或SEQ ID NO：9的BaNT亚型的氨基酸1-431。在这一实施方案的又另一个方面，BaNT酶促结构域包括非天然存在的BaNT酶促结构域变体，例如，保守性BaNT酶促结构域变体、非保守性BaNT酶促结构域变体、BaNT嵌合体酶促结构域、BaNT酶促结构域活性片段或它们的任意组合。在这一实施方案的又另一个方面，BaNT酶促结构域包括SEQ ID NO：9的非天然存在的BaNT酶促结构域变体的氨基酸1-431，例如SEQ ID NO：9的保守性BaNT酶促结构域变体的氨基酸1-431、SEQ ID NO：9的非保守性BaNT酶促结构域变体的氨基酸1-431、SEQ ID NO：9的BaNT酶促结构域活性片段的氨基酸1-431，或它们的任意组合。
在这一实施方案的其他方面，BaNT酶促结构域包括与SEQ ID NO：9的氨基酸1-431具有例如至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％氨基酸同一性的多肽。在这一实施方案的再其他方面，BaNT酶促结构域包括与SEQ ID NO：9的氨基酸1-431具有例如最多70％、最多75％、最多80％、最多85％、最多90％或最多95％氨基酸同一性的多肽。
在这一实施方案的其他方面，BaNT酶促结构域包括：与SEQ ID NO：9的氨基酸1-431相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：9的氨基酸1-431相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：9的氨基酸1-431相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：9的氨基酸1-431相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：9的氨基酸1-431相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ ID NO：9的氨基酸1-431相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸插入的多肽。
在这一实施方案的其他方面，BaNT酶促结构域包括：与SEQ ID NO：9的氨基酸1-431相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：9的氨基酸1-431相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：9的氨基酸1-431相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：9的氨基酸1-431相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：9的氨基酸1-431相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ ID NO：9的氨基酸1-431相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸插入的多肽。
在另一个实施方案中，梭菌毒素酶促结构域包括BuNT酶促结构域。在这一实施方案的一个方面，BuNT酶促结构域包括SEQ ID NO：10的氨基酸1-422。在这一实施方案的另一个方面，BuNT酶促结构域包括天然存在的BuNT酶促结构域变体，例如，来源于BuNT同种型的酶促结构域或来源于BuNT亚型的酶促结构域。在这一实施方案的另一个方面，BuNT酶促结构域包括SEQ ID NO：10的天然存在的BuNT酶促结构域变体的氨基酸1-422，例如，SEQ ID NO：10的BuNT同种型的氨基酸1-422或SEQ ID NO：10的BuNT亚型的氨基酸1-422。在这一实施方案的又另一个方面，BuNT酶促结构域包括非天然存在的BuNT酶促结构域变体，例如，保守性BuNT酶促结构域变体、非保守性BuNT酶促结构域变体、BuNT嵌合体酶促结构域、BuNT酶促结构域活性片段或它们的任意组合。在这一实施方案的又另一个方面，BuNT酶促结构域包括SEQ ID NO：10的非天然存在的BuNT酶促结构域变体的氨基酸1-422，例如SEQ ID NO：10的保守性BuNT酶促结构域变体的氨基酸1-422、SEQ ID NO：10的非保守性BuNT酶促结构域变体的氨基酸1-422、SEQ ID NO：10的BuNT酶促结构域活性片段的氨基酸1-422，或它们的任意组合。
在这一实施方案的其他方面，BuNT酶促结构域包括与SEQ ID NO：10的氨基酸1-422具有例如至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％氨基酸同一性的多肽。在这一实施方案的再其他方面，BuNT酶促结构域包括与SEQ ID NO：10的氨基酸1-422具有例如最多70％、最多75％、最多80％、最多85％、最多90％或最多95％氨基酸同一性的多肽。
在这一实施方案的其他方面，BuNT酶促结构域包括：与SEQ ID NO：10的氨基酸1-422相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：10的氨基酸1-422相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：10的氨基酸1-422相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：10的氨基酸1-422相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：10的氨基酸1-422相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ ID NO：10的氨基酸1-422相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸插入的多肽。
在这一实施方案的其他方面，BuNT酶促结构域包括与SEQ ID NO：10的氨基酸1-422相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、100或200个连续氨基酸置换的多肽。在这一实施方案的其他方面，BuNT酶促结构域包括与SEQ ID NO：10的氨基酸1-422相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、100或200个连续氨基酸置换的多肽。在这一实施方案的又其他方面，BuNT酶促结构域包括与SEQ ID NO：10的氨基酸1-422相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、100或200个连续氨基酸缺失的多肽。在这一实施方案的其他方面，BuNT酶促结构域包括与SEQ ID NO：10的氨基酸1-422相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、100或200个连续氨基酸缺失的多肽。在这一实施方案的再其他方面，BuNT酶促结构域包括与SEQ ID NO：10的氨基酸1-422相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、100或200个连续氨基酸插入的多肽。在这一实施方案的其他方面，BuNT酶促结构域包括与SEQ ID NO：10的氨基酸1-422相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、100或200个连续氨基酸插入的多肽。
术语“易位结构域”包括梭菌神经毒素重链中具有易位活性的部分。术语“易位”意指促进多肽转运穿过囊泡膜以使得部分或全部多肽与细胞质接触的能力。据认为，在各种肉毒神经毒素中，易位过程包括由内含体中pH值下降而引起的重链的变构性构象改变的过程。这种构象改变似乎涉及重链靠近N端的部分并由该部分介导，导致在囊泡膜上形成孔；这种改变使得蛋白水解性轻链能够从内含体囊泡中移动到细胞质中。参见例如，Lacy，et al.，Nature Struct.Biol.5：898-902(October 1998)。
在肉毒神经毒素的重链中，具有易位介导活性的部分的氨基酸序列是本领域技术人员已知的；而且，在该部分中产生易位活性所必须的那些氨基酸残基也是已知的。因此，本领域技术人员完全能够例如使用天然存在的任意的各种破伤风梭菌或肉毒梭菌神经毒素亚型的重链的靠近N端的肽部分作为易位结构域，或通过比对各种重链靠近N端的部分的一级序列并基于序列之间的保守性氨基酸、极性、立体化学特征和疏水性特征来筛选共有的易位活性一级序列，从而设计出类似的易位结构域。
在本发明的另一方面，经修饰的梭菌毒素部分地包括梭菌毒素易位结构域。本文所使用的术语“梭菌毒素易位结构域”意指能够完成梭菌毒素中毒作用过程中的易位步骤从而介导梭菌毒素轻链的易位的任何梭菌毒素多肽。因此，梭菌毒素易位结构域促进梭菌毒素轻链移动穿过膜，并且包括梭菌毒素轻链穿过胞内的囊泡膜而进入细胞质的过程。梭菌毒素易位结构域的非限制性实例包括例如：BoNT/A易位结构域、BoNT/B易位结构域、BoNT/C1易位结构域、BoNT/D易位结构域、BoNT/E易位结构域、BoNT/F易位结构域、BoNT/G易位结构域、TeNT易位结构域、BaNT易位结构域和BuNT易位结构域。梭菌毒素易位结构域的其他非限制性实例包括例如：SEQ ID NO：1的氨基酸449-873、SEQ ID NO：2的氨基酸442-860、SEQ ID NO：3的氨基酸450-868、SEQ ID NO：4的氨基酸446-864、SEQ ID NO：5的氨基酸423-847、SEQ ID NO：6的氨基酸440-866、SEQ ID NO：7的氨基酸447-865、SEQ ID NO：8的氨基酸458-881、SEQ ID NO：9的氨基酸432-857和SEQ ID NO：10的氨基酸423-847。
梭菌毒素易位结构域包括但不限于：天然存在的梭菌毒素易位结构域变体，例如梭菌毒素易位结构域同种型和梭菌毒素易位结构域亚型；非天然存在的梭菌毒素易位结构域变体，例如保守性梭菌毒素易位结构域变体、非保守性梭菌毒素易位结构域变体、梭菌毒素易位结构域嵌合体、梭菌毒素易位结构域活性片段，或它们的任意组合。
本文所使用的术语“梭菌毒素易位结构域变体”，无论是天然存在的或非天然存在的，均意指与公开的参照序列(表1)的相应区域相比至少具有一个氨基酸改变、并且可以用与参照序列相应区域的同一性百分比来描述的梭菌毒素易位结构域。除非特别指明，可用于实施所公开的本发明实施方案的梭菌毒素易位结构域变体为能够完成梭菌毒素中毒作用过程中的易位步骤从而介导梭菌毒素轻链的易位的变体。作为非限制性实例，BoNT/A易位结构域变体包括与SEQ ID NO：1的氨基酸449-873相比至少有一处氨基酸不同的变体，例如与SEQ ID NO：1的氨基酸449-873相比有一处氨基酸置换、缺失或插入的变体；BoNT/B易位结构域变体包括与SEQ ID NO：2的氨基酸442-860相比至少有一处氨基酸不同的变体，例如与SEQ ID NO：2的氨基酸442-860相比有一处氨基酸置换、缺失或插入的变体；BoNT/C1易位结构域变体包括与SEQ ID NO：3的氨基酸450-868相比至少有一处氨基酸不同的变体，例如与SEQ ID NO：3的氨基酸450-868相比有一处氨基酸置换、缺失或插入的变体；BoNT/D易位结构域变体包括与SEQ ID NO：4的氨基酸446-864相比至少有一处氨基酸不同的变体，例如与SEQ ID NO：4的氨基酸446-864相比有一处氨基酸置换、缺失或插入的变体；BoNT/E易位结构域变体包括与SEQ ID NO：5的氨基酸423-847相比至少有一处氨基酸不同的变体，例如与SEQ IDNO：5的氨基酸423-847相比有一处氨基酸置换、缺失或插入的变体；BoNT/F易位结构域变体包括与SEQ ID NO：6的氨基酸440-866相比至少有一处氨基酸不同的变体，例如与SEQ ID NO：6的氨基酸440-866相比有一处氨基酸置换、缺失或插入的变体；BoNT/G易位结构域变体包括与SEQ ID NO：7的氨基酸447-865相比至少有一处氨基酸不同的变体，例如与SEQ ID NO：7的氨基酸447-865相比有一处氨基酸置换、缺失或插入的变体；TeNT易位结构域变体包括与SEQ ID NO：8的氨基酸458-881相比至少有一处氨基酸不同的变体，例如与SEQ ID NO：8的氨基酸458-881相比有一处氨基酸置换、缺失或插入的变体；BaNT易位结构域变体包括与SEQ ID NO：9的氨基酸432-857相比至少有一处氨基酸不同的变体，例如与SEQ ID NO：9的氨基酸432-857相比有一处氨基酸置换、缺失或插入的变体；以及BuNT易位结构域变体包括与SEQ ID NO：10的氨基酸423-847相比至少有一处氨基酸不同的变体，例如与SEQ IDNO：10的氨基酸423-847相比有一处氨基酸置换、缺失或插入的变体。
本领域技术人员已经知道，在梭菌毒素的每种血清型中，都可以有一些天然存在的梭菌毒素易位结构域变体，它们在氨基酸序列和编码这些蛋白的核酸序列中都具有一定程度的差异。例如，目前存在五种BoNT/A亚型，分别为BoNT/A1、BoNT/A2、BoNT/A3、BoNT/A4和BoNT/A5，它们具体易位结构域亚型彼此之间的氨基酸同一性约为87％。本文所使用的术语“天然存在的梭菌毒素易位结构域变体”意指通过天然存在的过程产生的任何梭菌毒素易位结构域，包括但不限于：由可变剪接转录物产生的梭菌毒素易位结构域同种型、由自发突变产生的梭菌毒素易位结构域同种型和梭菌毒素易位结构域亚型。天然存在的梭菌毒素易位结构域变体能够与其源自的参照梭菌毒素易位结构域以基本相同的方式发挥功能，并且在本发明的任何方面都能够替代所述参照梭菌毒素易位结构域。天然存在的梭菌毒素易位结构域变体与其源自的参照梭菌毒素易位结构域相比，可以含有一个或更多氨基酸、两个或更多氨基酸、三个或更多氨基酸、四个或更多氨基酸、五个或更多氨基酸、十个或更多氨基酸、20个或更多氨基酸、30个或更多氨基酸、40个或更多氨基酸、50个或更多氨基酸或100个或更多氨基酸的氨基酸置换。天然存在的梭菌毒素易位结构域变体与其源自的参照梭菌毒素易位结构域相比，也可以含有至少10个连续氨基酸、至少15个连续氨基酸、至少20个连续氨基酸或至少25个连续氨基酸的氨基酸置换；该天然存在的梭菌毒素易位结构域变体与其源自的参照梭菌毒素易位结构域相比，具有至少50％氨基酸同一性、65％氨基酸同一性、75％氨基酸同一性、85％氨基酸同一性或95％氨基酸同一性。
天然存在的梭菌毒素易位结构域变体的非限制性实例为梭菌毒素易位结构域同种型，例如，BoNT/A易位结构域同种型、BoNT/B易位结构域同种型、BoNT/C1易位结构域同种型、BoNT/D易位结构域同种型、BoNT/E易位结构域同种型、BoNT/F易位结构域同种型、BoNT/G易位结构域同种型、TeNT易位结构域同种型、BaNT易位结构域同种型和BuNT易位结构域同种型。梭菌毒素易位结构域同种型能够与其源自的参照梭菌毒素易位结构域以基本相同的方式发挥功能，并且在本发明的任何方面都能够替代所述参照梭菌毒素易位结构域。
天然存在的梭菌毒素易位结构域变体的另一非限制性实例为梭菌毒素易位结构域亚型，例如，来源于亚型BoNT/A1、BoNT/A2、BoNT/A3、BoNT/A4和BoNT/A5的易位结构域；来源于亚型BoNT/B1、BoNT/B2、二价BoNT/B和非蛋白水解性BoNT/B的易位结构域；来源于亚型BoNT/C1-1和BoNT/C1-2的易位结构域；来源于亚型BoNT/E1、BoNT/E2和BoNT/E3的易位结构域；和来源于亚型BoNT/F1、BoNT/F2、BoNT/F3和BoNT/F4的易位结构域。梭菌毒素易位结构域亚型能够与其源自的参照梭菌毒素易位结构域以基本相同的方式发挥功能，并且在本发明的任何方面都能够替代所述参照梭菌毒素易位结构域。
本文所使用的术语“非天然存在的梭菌毒素易位结构域变体”意为通过人类的加工产生的任何梭菌毒素易位结构域，包括但不限于，随机诱变或合理设计通过基因工程产生的梭菌毒素易位结构域以及通过化学合成产生的梭菌毒素易位结构域。非天然存在的梭菌毒素易位结构域变体的非限制性实例包括例如：保守性梭菌毒素易位结构域变体、非保守性梭菌毒素易位结构域变体、梭菌毒素易位结构域嵌合体变体和梭菌毒素易位结构域活性片段。
本文所使用的术语“保守性梭菌毒素易位结构域变体”意指与参照梭菌毒素易位结构域序列(表1)相比具有至少一个氨基酸置换的梭菌毒素易位结构域，所述氨基酸置换是将参照序列中的原始氨基酸置换为与该原始氨基酸具有至少一方面的相似属性的另一氨基酸或氨基酸类似物。所述相似属性的实例包括但不限于相似的大小、拓扑学、电荷、疏水性、亲水性、亲脂性、共价键合能力、氢键合能力、物理化学属性等等，或者上述属性的组合。保守性梭菌毒素易位结构域变体能够与其源自的参照梭菌毒素易位结构域以基本相同的方式发挥功能，并且在本发明的任何方面都能够替代所述参照梭菌毒素易位结构域。保守性梭菌毒素易位结构域变体与其源自的参照梭菌毒素易位结构域相比，可以含有一个或更多氨基酸、两个或更多氨基酸、三个或更多氨基酸、四个或更多氨基酸、五个或更多氨基酸、十个或更多氨基酸、20个或更多氨基酸、30个或更多氨基酸、40个或更多氨基酸、50个或更多氨基酸、100个或更多氨基酸或200个或更多氨基酸的氨基酸置换。保守性梭菌毒素易位结构域变体与其源自的参照梭菌毒素易位结构域相比，也可以含有至少10个连续氨基酸、至少15个连续氨基酸、至少20个连续氨基酸或至少25个连续氨基酸的氨基酸置换；该保守性梭菌毒素易位结构域变体与其源自的参照梭菌毒素易位结构域相比，具有至少50％氨基酸同一性、65％氨基酸同一性、75％氨基酸同一性、85％氨基酸同一性或95％氨基酸同一性。保守性梭菌毒素易位结构域变体的非限制性实例包括例如：保守性BoNT/A易位结构域变体、保守性BoNT/B易位结构域变体、保守性BoNT/C1易位结构域变体、保守性BoNT/D易位结构域变体、保守性BoNT/E易位结构域变体、保守性BoNT/F易位结构域变体、保守性BoNT/G易位结构域变体、保守性TeNT易位结构域变体、保守性BaNT易位结构域变体和保守性BuNT易位结构域变体。
本文所使用的术语“非保守性梭菌毒素易位结构域变体”意指这样的梭菌毒素易位结构域，其中：1)该非保守性梭菌毒素易位结构域变体与其源自的参照梭菌毒素易位结构域相比，具有至少一个氨基酸的缺失；2)该非保守性梭菌毒素易位结构域变体与其源自的参照梭菌毒素易位结构域相比，具有至少一个氨基酸的插入；或3)该非保守性梭菌毒素易位结构域变体与其源自的参照梭菌毒素易位结构域序列(表1)相比，具有至少一个氨基酸的的置换，所述氨基酸置换是将参照序列中的原始氨基酸置换为与该原始氨基酸在任意方面属性均不相似的另一氨基酸或氨基酸类似物。非保守性梭菌毒素易位结构域变体能够与其源自的参照梭菌毒素易位结构域以基本相同的方式发挥功能，并且在本发明的任何方面都能够替代所述参照梭菌毒素易位结构域。非保守性梭菌毒素易位结构域变体与其源自的参照梭菌毒素易位结构域相比，可具有一个或更多氨基酸、两个或更多氨基酸、三个或更多氨基酸、四个或更多氨基酸、五个或更多氨基酸和十个或更多氨基酸的缺失。非保守性梭菌毒素易位结构域变体与其源自的参照梭菌毒素易位结构域相比，可具有一个或更多氨基酸、两个或更多氨基酸、三个或更多氨基酸、四个或更多氨基酸、五个或更多氨基酸和十个或更多氨基酸的插入。非保守性梭菌毒素易位结构域变体与其源自的参照梭菌毒素易位结构域相比，可具有一个或更多氨基酸、两个或更多氨基酸、三个或更多氨基酸、四个或更多氨基酸、五个或更多氨基酸、10个或更多氨基酸、20个或更多氨基酸、30个或更多氨基酸、40个或更多氨基酸、50个或更多氨基酸、100个或更多氨基酸或200个或更多氨基酸的置换。非保守性梭菌毒素易位结构域变体与其源自的参照梭菌毒素易位结构域相比，也可以含有至少10个连续氨基酸、至少15个连续氨基酸、至少20个连续氨基酸或至少25个连续氨基酸的氨基酸置换；该非保守性梭菌毒素易位结构域变体与其源自的参照梭菌毒素易位结构域相比，具有至少50％氨基酸同一性、65％氨基酸同一性、75％氨基酸同一性、85％氨基酸同一性或95％氨基酸同一性。非保守性梭菌毒素易位结构域变体的非限制性实例包括例如，非保守性BoNT/A易位结构域变体、非保守性BoNT/B易位结构域变体、非保守性BoNT/C1易位结构域变体、非保守性BoNT/D易位结构域变体、非保守性BoNT/E易位结构域变体、非保守性BoNT/F易位结构域变体、非保守性BoNT/G易位结构域变体和非保守性TeNT易位结构域变体、非保守性BaNT易位结构域变体和非保守性BuNT易位结构域变体。
本文所使用的术语“梭菌毒素易位结构域嵌合体”意指这样的多肽，所述多肽包括梭菌毒素易位结构域的至少一部分和至少另一种多肽的至少一部分，从而形成与表1所示的参照毒素易位结构域相比至少一种属性不同的梭菌毒素易位结构域，但前提条件是这种梭菌毒素易位结构域嵌合体仍然能够特异性地靶向神经递质释放装置的核心组件，因此能够参与执行梭菌毒素蛋白水解性切割底物的整个细胞机制。
本文所使用的术语“梭菌毒素易位结构域活性片段”意指任何这样的梭菌毒素片段，所述片段包括可用于本发明任意方面的易位结构域，前提条件是这些活性片段能够促进LC从靶细胞的胞内囊泡释放至细胞质中，因此能够参与执行梭菌毒素蛋白水解性切割底物的整个细胞机制。来源于梭菌毒素重链的易位结构域的长度约为410-430个氨基酸，并形成一个易位结构域(表1)。研究显示，发挥所述易位结构域的易位活性并不必需来源于梭菌毒素重链的全长易位结构域。因此，这一实施方案的某些方面可包括如下所述的梭菌毒素易位结构域，其中包括长度为例如至少350个氨基酸、至少375个氨基酸、至少400个氨基酸和至少425个氨基酸的易位结构域。这一实施方案的其他方面可包括如下所述的梭菌毒素易位结构域，其中包括长度为例如最多350个氨基酸、最多375个氨基酸、最多400个氨基酸和最多425个氨基酸的易位结构域。
任何序列比对方法都可用于测定天然存在的梭菌毒素易位结构域变体和非天然存在的梭菌毒素易位结构域变体的同一性百分比，所述方法包括但不限于全长比较法(global method)、局部比较法(local method)和混合比较法(hybrid method)，例如区段比较法(segment approachmethod)。测定同一性百分比的方法对于本领域技术人员而言是常规方法，本文也有所教导。
因此，在一个实施方案中，本申请说明书公开的经修饰的梭菌毒素包括梭菌毒素易位结构域。在这一实施方案的一个方面，梭菌毒素易位结构域包括天然存在的梭菌毒素易位结构域变体，例如梭菌毒素易位结构域同种型或梭菌毒素易位结构域亚型。在这一实施方案的另一个方面，梭菌毒素易位结构域包括非天然存在的梭菌毒素易位结构域变体，例如，保守性梭菌毒素易位结构域变体、非保守性梭菌毒素易位结构域变体、梭菌毒素嵌合易位结构域、梭菌毒素易位结构域活性片段，或它们的任意组合。
在另一个实施方案中，梭菌毒素易位结构域包括BoNT/A易位结构域。在这一实施方案的一个方面，BoNT/A易位结构域包括SEQ ID NO：1的氨基酸449-873。在这一实施方案的另一个方面，BoNT/A易位结构域包括天然存在的BoNT/A易位结构域变体，例如，来源于BoNT/A同种型的易位结构域或来源于BoNT/A亚型的易位结构域。在这一实施方案的另一个方面，BoNT/A易位结构域包括SEQ ID NO：1的天然存在的BoNT/A易位结构域变体的氨基酸449-873，例如，SEQ ID NO：1的BoNT/A同种型的氨基酸449-873或SEQ ID NO：1的BoNT/A亚型的氨基酸449-873。在这一实施方案的又另一个方面，BoNT/A易位结构域包括非天然存在的BoNT/A易位结构域变体，例如，保守性BoNT/A易位结构域变体、非保守性BoNT/A易位结构域变体、BoNT/A嵌合体易位结构域、BoNT/A易位结构域活性片段或它们的任意组合。在这一实施方案的又另一个方面，BoNT/A易位结构域包括SEQ ID NO：1的非天然存在的BoNT/A易位结构域变体的氨基酸449-873，例如，SEQ ID NO：1的保守性BoNT/A易位结构域变体的氨基酸449-873、SEQ ID NO：1的非保守性BoNT/A易位结构域变体的氨基酸449-873、SEQ ID NO：1的BoNT/A易位结构域活性片段的氨基酸449-873，或它们的任意组合。
在这一实施方案的其他方面，BoNT/A易位结构域包括与SEQ IDNO：1的氨基酸449-873具有例如至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％氨基酸同一性的多肽。在这一实施方案的再其他方面，BoNT/A易位结构域包括与SEQ ID NO：1的氨基酸449-873具有例如最多70％、最多75％、最多80％、最多85％、最多90％或最多95％氨基酸同一性的多肽。
在这一实施方案的其他方面，BoNT/A易位结构域包括：与SEQ IDNO：1的氨基酸449-873相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ IDNO：1的氨基酸449-873相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ IDNO：1的氨基酸449-873相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ IDNO：1的氨基酸449-873相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ IDNO：1的氨基酸449-873相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ IDNO：1的氨基酸449-873相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸插入的多肽。
在这一实施方案的其他方面，BoNT/A易位结构域包括：与SEQ IDNO：1的氨基酸449-873相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：1的氨基酸449-873相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、100或200个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ IDNO：1的氨基酸449-873相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：1的氨基酸449-873相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：1的氨基酸449-873相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ ID NO：1的氨基酸449-873相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸插入的多肽。
在另一个实施方案中，梭菌毒素易位结构域包括BoNT/B易位结构域。在这一实施方案的一个方面，BoNT/B易位结构域包括SEQ ID NO：2的氨基酸442-860。在这一实施方案的另一个方面，BoNT/B易位结构域包括天然存在的BoNT/B易位结构域变体，例如，来源于BoNT/B同种型的易位结构域或来源于BoNT/B亚型的易位结构域。在这一实施方案的另一个方面，BoNT/B易位结构域包括SEQ ID NO：2的天然存在的BoNT/B易位结构域变体的氨基酸442-860，例如，SEQ ID NO：2的BoNT/B同种型的氨基酸442-860或SEQ ID NO：2的BoNT/B亚型的氨基酸442-860。在这一实施方案的又另一个方面，BoNT/B易位结构域包括非天然存在的BoNT/B易位结构域变体，例如，保守性BoNT/B易位结构域变体、非保守性BoNT/B易位结构域变体、BoNT/B嵌合体易位结构域、BoNT/B易位结构域活性片段或它们的任意组合。在这一实施方案的又另一个方面，BoNT/B易位结构域包括SEQ ID NO：2的非天然存在的BoNT/B易位结构域变体的氨基酸442-860，例如，SEQ ID NO：2的保守性BoNT/B易位结构域变体的氨基酸442-860、SEQ ID NO：2的非保守性BoNT/B易位结构域变体的氨基酸442-860、SEQ ID NO：2的BoNT/B易位结构域活性片段的氨基酸442-860，或它们的任意组合。
在这一实施方案的其他方面，BoNT/B易位结构域包括与SEQ IDNO：2的氨基酸442-860具有例如至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％氨基酸同一性的多肽。在这一实施方案的再其他方面，BoNT/B易位结构域包括与SEQ ID NO：2的氨基酸442-860具有例如最多70％、最多75％、最多80％、最多85％、最多90％或最多95％氨基酸同一性的多肽。
在这一实施方案的其他方面，BoNT/B易位结构域包括：与SEQ IDNO：2的氨基酸442-860相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ IDNO：2的氨基酸442-860相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、100或200个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQID NO：2的氨基酸442-860相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQID NO：2的氨基酸442-860相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQID NO：2的氨基酸442-860相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸插入的多肽；或与SEQID NO：2的氨基酸442-860相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸插入的多肽。
在这一实施方案的其他方面，BoNT/B易位结构域包括：与SEQ IDNO：2的氨基酸442-860相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：2的氨基酸442-860相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：2的氨基酸442-860相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：2的氨基酸442-860相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：2的氨基酸442-860相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ ID NO：2的氨基酸442-860相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸插入的多肽。
在另一个实施方案中，梭菌毒素易位结构域包括BoNT/C1易位结构域。在这一实施方案的一个方面，BoNT/C1易位结构域包括SEQ ID NO：3的氨基酸450-868。在这一实施方案的另一个方面，BoNT/C1易位结构域包括天然存在的BoNT/C1易位结构域变体，例如，来源于BoNT/C1同种型的易位结构域或来源于BoNT/C1亚型的易位结构域。在这一实施方案的另一个方面，BoNT/C1易位结构域包括SEQ ID NO：3的天然存在的BoNT/C1易位结构域变体的氨基酸450-868，例如，SEQ ID NO：3的BoNT/C1同种型的氨基酸450-868或SEQ ID NO：3的BoNT/C1亚型的氨基酸450-868。在这一实施方案的又另一个方面，BoNT/C1易位结构域包括非天然存在的BoNT/C1易位结构域变体，例如，保守性BoNT/C1易位结构域变体、非保守性BoNT/C1易位结构域变体、BoNT/C1嵌合体易位结构域、BoNT/C1易位结构域活性片段或它们的任意组合。在这一实施方案的又另一个方面，BoNT/C1易位结构域包括SEQ ID NO：3的非天然存在的BoNT/C1易位结构域变体的氨基酸450-868，例如，SEQ IDNO：3的保守性BoNT/C1易位结构域变体的氨基酸450-868、SEQ ID NO：3的非保守性BoNT/C1易位结构域变体的氨基酸450-868、SEQ ID NO：3的BoNT/C1易位结构域活性片段的氨基酸450-868，或它们的任意组合。
在这一实施方案的其他方面，BoNT/C1易位结构域包括与SEQ IDNO：3的氨基酸450-868具有例如至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％氨基酸同一性的多肽。在这一实施方案的再其他方面，BoNT/C1易位结构域包括与SEQ ID NO：3的氨基酸450-868具有例如最多70％、最多75％、最多80％、最多85％、最多90％或最多95％氨基酸同一性的多肽。
在这一实施方案的其他方面，BoNT/C1易位结构域包括：与SEQ IDNO：3的氨基酸450-868相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ IDNO：3的氨基酸450-868相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ IDNO：3的氨基酸450-868相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ IDNO：3的氨基酸450-868相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ IDNO：3的氨基酸450-868相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ IDNO：3的氨基酸450-868相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸插入的多肽。
在这一实施方案的其他方面，BoNT/C1易位结构域包括：与SEQ IDNO：3的氨基酸450-868相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：3的氨基酸450-868相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：3的氨基酸450-868相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：3的氨基酸450-868相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：3的氨基酸450-868相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ ID NO：3的氨基酸450-868相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸插入的多肽。
在另一个实施方案中，梭菌毒素易位结构域包括BoNT/D易位结构域。在这一实施方案的一个方面，BoNT/D易位结构域包括SEQ ID NO：4的氨基酸446-864。在这一实施方案的另一个方面，BoNT/D易位结构域包括天然存在的BoNT/D易位结构域变体，例如，来源于BoNT/D同种型的易位结构域或来源于BoNT/D亚型的易位结构域。在这一实施方案的另一个方面，BoNT/D易位结构域包括SEQ ID NO：4的天然存在的BoNT/D易位结构域变体的氨基酸446-864，例如，SEQ ID NO：4的BoNT/D同种型的氨基酸446-864或SEQ ID NO：4的BoNT/D亚型的氨基酸446-864。在这一实施方案的又另一个方面，BoNT/D易位结构域包括非天然存在的BoNT/D易位结构域变体，例如，保守性BoNT/D易位结构域变体、非保守性BoNT/D易位结构域变体、BoNT/D嵌合体易位结构域、BoNT/D易位结构域活性片段或它们的任意组合。在这一实施方案的又另一个方面，BoNT/D易位结构域包括SEQ ID NO：4的非天然存在的BoNT/D易位结构域变体的氨基酸446-864，例如，SEQ ID NO：4的保守性BoNT/D易位结构域变体的氨基酸446-864、SEQ ID NO：4的非保守性BoNT/D易位结构域变体的氨基酸446-864、SEQ ID NO：4的BoNT/D易位结构域活性片段的氨基酸446-864，或它们的任意组合。
在这一实施方案的其他方面，BoNT/D易位结构域包括与SEQ IDNO：4的氨基酸446-864具有例如至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％氨基酸同一性的多肽。在这一实施方案的再其他方面，BoNT/D易位结构域包括与SEQ ID NO：4的氨基酸446-864具有例如最多70％、最多75％、最多80％、最多85％、最多90％或最多95％氨基酸同一性的多肽。
在这一实施方案的其他方面，BoNT/D易位结构域包括：与SEQ IDNO：4的氨基酸446-864相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ IDNO：4的氨基酸446-864相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ IDNO：4的氨基酸446-864相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ IDNO：4的氨基酸446-864相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ IDNO：4的氨基酸446-864相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ IDNO：4的氨基酸446-864相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸插入的多肽。
在这一实施方案的其他方面，BoNT/D易位结构域包括：与SEQ IDNO：4的氨基酸446-864相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：4的氨基酸446-864相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：4的氨基酸446-864相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：4的氨基酸446-864相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：4的氨基酸446-864相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ ID NO：4的氨基酸446-864相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸插入的多肽。
在另一个实施方案中，梭菌毒素易位结构域包括BoNT/E易位结构域。在这一实施方案的一个方面，BoNT/E易位结构域包括SEQ ID NO：5的氨基酸423-847。在这一实施方案的另一个方面，BoNT/E易位结构域包括天然存在的BoNT/E易位结构域变体，例如，来源于BoNT/E同种型的易位结构域或来源于BoNT/E亚型的易位结构域。在这一实施方案的另一个方面，BoNT/E易位结构域包括SEQ ID NO：5的天然存在的BoNT/E易位结构域变体的氨基酸423-847，例如，SEQ ID NO：5的BoNT/E同种型的氨基酸423-847或SEQ ID NO：5的BoNT/E亚型的氨基酸423-847。在这一实施方案的又另一个方面，BoNT/E易位结构域包括非天然存在的BoNT/E易位结构域变体，例如，保守性BoNT/E易位结构域变体、非保守性BoNT/E易位结构域变体、BoNT/E嵌合体易位结构域、BoNT/E易位结构域活性片段或它们的任意组合。在这一实施方案的又另一个方面，BoNT/E易位结构域包括SEQ ID NO：5的非天然存在的BoNT/E易位结构域变体的氨基酸423-847，例如，SEQ ID NO：5的保守性BoNT/E易位结构域变体的氨基酸423-847、SEQ ID NO：5的非保守性BoNT/E易位结构域变体的氨基酸423-847、SEQ ID NO：5的BoNT/E易位结构域活性片段的氨基酸423-847，或它们的任意组合。
在这一实施方案的其他方面，BoNT/E易位结构域包括与SEQ IDNO：5的氨基酸423-847具有例如至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％氨基酸同一性的多肽。在这一实施方案的再其他方面，BoNT/E易位结构域包括与SEQ ID NO：5的氨基酸423-847具有例如最多70％、最多75％、最多80％、最多85％、最多90％或最多95％氨基酸同一性的多肽。
在这一实施方案的其他方面，BoNT/E易位结构域包括：与SEQ IDNO：5的氨基酸423-847相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ IDNO：5的氨基酸423-847相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ IDNO：5的氨基酸423-847相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ IDNO：5的氨基酸423-847相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ IDNO：5的氨基酸423-847相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ IDNO：5的氨基酸423-847相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸插入的多肽。
在这一实施方案的其他方面，BoNT/E易位结构域包括：与SEQ IDNO：5的氨基酸423-847相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：5的氨基酸423-847相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：5的氨基酸423-847相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：5的氨基酸423-847相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：5的氨基酸423-847相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ ID NO：5的氨基酸423-847相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸插入的多肽。
在另一个实施方案中，梭菌毒素易位结构域包括BoNT/F易位结构域。在这一实施方案的一个方面，BoNT/F易位结构域包括SEQ ID NO：6的氨基酸440-866。在这一实施方案的另一个方面，BoNT/F易位结构域包括天然存在的BoNT/F易位结构域变体，例如，来源于BoNT/F同种型的易位结构域或来源于BoNT/F亚型的易位结构域。在这一实施方案的另一个方面，BoNT/F易位结构域包括SEQ ID NO：6的天然存在的BoNT/F易位结构域变体的氨基酸440-866，例如，SEQ ID NO：6的BoNT/F同种型的氨基酸440-866或SEQ ID NO：6的BoNT/F亚型的氨基酸440-866。在这一实施方案的又另一个方面，BoNT/F易位结构域包括非天然存在的BoNT/F易位结构域变体，例如，保守性BoNT/F易位结构域变体、非保守性BoNT/F易位结构域变体、BoNT/F嵌合体易位结构域、BoNT/F易位结构域活性片段或它们的任意组合。在这一实施方案的又另一个方面，BoNT/F易位结构域包括SEQ ID NO：6的非天然存在的BoNT/F易位结构域变体的氨基酸440-866，例如，SEQ ID NO：6的保守性BoNT/F易位结构域变体的氨基酸440-866、SEQ ID NO：6的非保守性BoNT/F易位结构域变体的氨基酸440-866、SEQ ID NO：6的BoNT/F易位结构域活性片段的氨基酸440-866，或它们的任意组合。
在这一实施方案的其他方面，BoNT/F易位结构域包括与SEQ IDNO：6的氨基酸440-866具有例如至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％氨基酸同一性的多肽。在这一实施方案的再其他方面，BoNT/F易位结构域包括与SEQ ID NO：6的氨基酸440-866具有例如最多70％、最多75％、最多80％、最多85％、最多90％或最多95％氨基酸同一性的多肽。
在这一实施方案的其他方面，BoNT/F易位结构域包括：与SEQ IDNO：6的氨基酸440-866相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ IDNO：6的氨基酸440-866相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ IDNO：6的氨基酸440-866相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ IDNO：6的氨基酸440-866相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ IDNO：6的氨基酸440-866相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ IDNO：6的氨基酸440-866相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸插入的多肽。
在这一实施方案的其他方面，BoNT/F易位结构域包括：与SEQ IDNO：6的氨基酸440-866相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：6的氨基酸440-866相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：6的氨基酸440-866相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：6的氨基酸440-866相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：6的氨基酸440-866相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ ID NO：6的氨基酸440-866相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸插入的多肽。
在另一个实施方案中，梭菌毒素易位结构域包括BoNT/G易位结构域。在这一实施方案的一个方面，BoNT/G易位结构域包括SEQ ID NO：7的氨基酸447-865。在这一实施方案的另一个方面，BoNT/G易位结构域包括天然存在的BoNT/G易位结构域变体，例如，来源于BoNT/G同种型的易位结构域或来源于BoNT/G亚型的易位结构域。在这一实施方案的另一个方面，BoNT/G易位结构域包括SEQ ID NO：7的天然存在的BoNT/G易位结构域变体的氨基酸447-865，例如，SEQ ID NO：7的BoNT/G同种型的氨基酸447-865或SEQ ID NO：7的BoNT/G亚型的氨基酸447-865。在这一实施方案的又另一个方面，BoNT/G易位结构域包括非天然存在的BoNT/G易位结构域变体，例如，保守性BoNT/G易位结构域变体、非保守性BoNT/G易位结构域变体、BoNT/G嵌合体易位结构域、BoNT/G易位结构域活性片段或它们的任意组合。在这一实施方案的又另一个方面，BoNT/G易位结构域包括SEQ ID NO：7的非天然存在的BoNT/G易位结构域变体的氨基酸447-865，例如，SEQ ID NO：7的保守性BoNT/G易位结构域变体的氨基酸447-865、SEQ ID NO：7的非保守性BoNT/G易位结构域变体的氨基酸447-865、SEQ ID NO：7的BoNT/G易位结构域活性片段的氨基酸447-865，或它们的任意组合。
在这一实施方案的其他方面，BoNT/G易位结构域包括与SEQ IDNO：7的氨基酸447-865具有例如至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％氨基酸同一性的多肽。在这一实施方案的再其他方面，BoNT/G易位结构域包括与SEQ ID NO：7的氨基酸447-865具有例如最多70％、最多75％、最多80％、最多85％、最多90％或最多95％氨基酸同一性的多肽。
在这一实施方案的其他方面，BoNT/G易位结构域包括：与SEQ IDNO：7的氨基酸447-865相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ IDNO：7的氨基酸447-865相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ IDNO：7的氨基酸447-865相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ IDNO：7的氨基酸447-865相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ IDNO：7的氨基酸447-865相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ IDNO：7的氨基酸447-865相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸插入的多肽。
在这一实施方案的其他方面，BoNT/G易位结构域包括：与SEQ IDNO：7的氨基酸447-865相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：7的氨基酸447-865相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：7的氨基酸447-865相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：7的氨基酸447-865相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：7的氨基酸447-865相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ ID NO：7的氨基酸447-865相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸插入的多肽。
在另一个实施方案中，梭菌毒素易位结构域包括TeNT易位结构域。在这一实施方案的一个方面，TeNT易位结构域包括SEQ ID NO：8的氨基酸458-881。在这一实施方案的另一个方面，TeNT易位结构域包括天然存在的TeNT易位结构域变体，例如，来源于TeNT同种型的易位结构域或来源于TeNT亚型的易位结构域。在这一实施方案的另一个方面，TeNT易位结构域包括SEQ ID NO：8的天然存在的TeNT易位结构域变体的氨基酸458-881，例如，SEQ ID NO：8的TeNT同种型的氨基酸458-881或SEQ ID NO：8的TeNT亚型的氨基酸458-881。在这一实施方案的又另一个方面，TeNT易位结构域包括非天然存在的TeNT易位结构域变体，例如，保守性TeNT易位结构域变体、非保守性TeNT易位结构域变体、TeNT嵌合体易位结构域、TeNT易位结构域活性片段或它们的任意组合。在这一实施方案的又另一个方面，TeNT易位结构域包括SEQID NO：8的非天然存在的TeNT易位结构域变体的氨基酸458-881，例如，SEQ ID NO：8的保守性TeNT易位结构域变体的氨基酸458-881、SEQ IDNO：8的非保守性TeNT易位结构域变体的氨基酸458-881、SEQ ID NO：8的TeNT易位结构域活性片段的氨基酸458-881，或它们的任意组合。
在这一实施方案的其他方面，TeNT易位结构域包括与SEQ ID NO：8的氨基酸458-881具有例如至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％氨基酸同一性的多肽。在这一实施方案的再其他方面，TeNT易位结构域包括与SEQ ID NO：8的氨基酸458-881具有例如最多70％、最多75％、最多80％、最多85％、最多90％或最多95％氨基酸同一性的多肽。
在这一实施方案的其他方面，TeNT易位结构域包括：与SEQ ID NO：8的氨基酸458-881相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：8的氨基酸458-881相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：8的氨基酸458-881相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：8的氨基酸458-881相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：8的氨基酸458-881相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ IDNO：8的氨基酸458-881相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸插入的多肽。
在这一实施方案的其他方面，TeNT易位结构域包括：与SEQ ID NO：8的氨基酸458-881相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：8的氨基酸458-881相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：8的氨基酸458-881相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：8的氨基酸458-881相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：8的氨基酸458-881相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ ID NO：8的氨基酸458-881相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸插入的多肽。
在另一个实施方案中，梭菌毒素易位结构域包括BaNT易位结构域。在这一实施方案的一个方面，BaNT易位结构域包括SEQ ID NO：9的氨基酸432-857。在这一实施方案的另一个方面，BaNT易位结构域包括天然存在的BaNT易位结构域变体，例如，来源于BaNT同种型的易位结构域或来源于BaNT亚型的易位结构域。在这一实施方案的另一个方面，BaNT易位结构域包括SEQ ID NO：9的天然存在的BaNT易位结构域变体的氨基酸432-857，例如，SEQ ID NO：9的BaNT同种型的氨基酸432-857或SEQ ID NO：9的BaNT亚型的氨基酸432-857。在这一实施方案的又另一个方面，BaNT易位结构域包括非天然存在的BaNT易位结构域变体，例如，保守性BaNT易位结构域变体、非保守性BaNT易位结构域变体、BaNT嵌合体易位结构域、BaNT易位结构域活性片段或它们的任意组合。在这一实施方案的又另一个方面，BaNT易位结构域包括SEQ ID NO：9的非天然存在的BaNT易位结构域变体的氨基酸432-857，例如，SEQ ID NO：9的保守性BaNT易位结构域变体的氨基酸432-857、SEQ ID NO：9的非保守性BaNT易位结构域变体的氨基酸432-857、SEQID NO：9的BaNT易位结构域活性片段的氨基酸432-857，或它们的任意组合。
在这一实施方案的其他方面，BaNT易位结构域包括与SEQ ID NO：9的氨基酸432-857具有例如至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％氨基酸同一性的多肽。在这一实施方案的再其他方面，BaNT易位结构域包括与SEQ ID NO：9的氨基酸432-857具有例如最多70％、最多75％、最多80％、最多85％、最多90％或最多95％氨基酸同一性的多肽。
在这一实施方案的其他方面，BaNT易位结构域包括：与SEQ ID NO：9的氨基酸432-857相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：9的氨基酸432-857相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：9的氨基酸432-857相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：9的氨基酸432-857相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：9的氨基酸432-857相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ IDNO：9的氨基酸432-857相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸插入的多肽。
在这一实施方案的其他方面，BaNT易位结构域包括：与SEQ ID NO：9的氨基酸432-857相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：9的氨基酸432-857相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：9的氨基酸432-857相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：9的氨基酸432-857相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：9的氨基酸432-857相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ ID NO：9的氨基酸432-857相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸插入的多肽。
在另一个实施方案中，梭菌毒素易位结构域包括BuNT易位结构域。在这一实施方案的一个方面，BuNT易位结构域包括SEQ ID NO：10的氨基酸423-847。在这一实施方案的另一个方面，BuNT易位结构域包括天然存在的BuNT易位结构域变体，例如，来源于BuNT同种型的易位结构域或来源于BuNT亚型的易位结构域。在这一实施方案的另一个方面，BuNT易位结构域包括SEQ ID NO：10的天然存在的BuNT易位结构域变体的氨基酸423-847，例如，SEQ ID NO：10的BuNT同种型的氨基酸423-847或SEQ ID NO：10的BuNT亚型的氨基酸423-847。在这一实施方案的又另一个方面，BuNT易位结构域包括非天然存在的BuNT易位结构域变体，例如，保守性BuNT易位结构域变体、非保守性BuNT易位结构域变体、BuNT嵌合体易位结构域、BuNT易位结构域活性片段或它们的任意组合。在这一实施方案的又另一个方面，BuNT易位结构域包括SEQ ID NO：10的非天然存在的BuNT易位结构域变体的氨基酸423-847，例如，SEQ ID NO：10的保守性BuNT易位结构域变体的氨基酸423-847、SEQ ID NO：10的非保守性BuNT易位结构域变体的氨基酸423-847、SEQ ID NO：10的BuNT易位结构域活性片段的氨基酸423-847，或它们的任意组合。
在这一实施方案的其他方面，BuNT易位结构域包括与SEQ ID NO：10的氨基酸423-847具有例如至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％氨基酸同一性的多肽。在这一实施方案的再其他方面，BuNT易位结构域包括与SEQ ID NO：10的氨基酸423-847具有例如最多70％、最多75％、最多80％、最多85％、最多90％或最多95％氨基酸同一性的多肽。
在这一实施方案的其他方面，BuNT易位结构域包括：与SEQ ID NO：10的氨基酸423-847相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：10的氨基酸423-847相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：10的氨基酸423-847相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：10的氨基酸423-847相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：10的氨基酸423-847相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ IDNO：10的氨基酸423-847相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个非连续氨基酸插入的多肽。
在这一实施方案的其他方面，BuNT易位结构域包括：与SEQ ID NO：10的氨基酸423-847相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：10的氨基酸423-847相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：10的氨基酸423-847相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：10的氨基酸423-847相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：10的氨基酸423-847相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ ID NO：10的氨基酸423-847相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或100个连续氨基酸插入的多肽。
在本发明的另一方面，经修饰的梭菌毒素部分地包括阿片样肽结合结构域。术语“结合结构域”意为能够在生理条件下优先结合至靶细胞的细胞表面标志物特征的氨基酸序列区域。所述细胞表面标志物可包括多肽、多糖、脂类、糖蛋白、脂蛋白，或者上述多种结构特征的组合。术语“优选相互作用”意为所述结合结构域对于所述细胞表面标志物的解离常数(Kd)比所述结合结构域对于任何其他细胞表面标志物的解离常数要低至少一个数量级。优选地，所述结合结构域对于所述细胞表面标志物的解离常数比所述结合结构域对于任何其他与暴露于所述神经毒素或经修饰的神经毒素下的细胞表面标志物的解离常数要低至少2个数量级、更优选地低至少3个数量级。结合结构域的实例记载于例如Steward，L.E.et al.，Modified Clostridial Toxins with Enhanced Translocation Capability andEnhanced Targeting Activity，美国专利申请No.11/776,043(Jul.11，2007)；Steward，L.E.et al.，Modified Clostridial Toxins with EnhancedTranslocation Capabilities and Altered Targeting Activity For ClostridialToxin Target Cells，美国专利申请No.11/776,052(Jul.11，2007)；和Steward，L.E.et  al.，Modified Clostridial Toxins with EnhancedTranslocation Capabilities and Altered Targeting Activity ForNon-Clostridial Toxin Target Cells，美国专利申请No.11/776,075(Jul.11，2007)中，上述每篇文献的全部内容均以援引的方式纳入本文。
本申请说明书中公开的阿片样肽结合结构域的非限制性实例例如为脑啡肽、内啡素(endomorphin)、内啡肽(endorphin)、强啡肽、伤害感受肽(nociceptin)或血啡肽(hemorphin)。因此，在一个实施方案中，结合结构域包括阿片样肽。
在另一个实施方案中，阿片样肽包括脑啡肽。在这一实施方案的某些方面，脑啡肽包括Leu-脑啡肽、Met-脑啡肽、Met-脑啡肽MRGL或Met-脑啡肽MRF。在这一实施方案的其他方面，脑啡肽包括SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：54或SEQ ID NO：55。
在这一实施方案的其他方面，脑啡肽包括与SEQ ID NO：52、SEQ IDNO：53、SEQ ID NO：54或SEQ ID NO：55具有例如至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％氨基酸同一性的多肽。在这一实施方案的再其他方面，脑啡肽包括与SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：54或SEQ ID NO：55具有例如最多70％、最多75％、最多80％、最多85％、最多90％或最多95％氨基酸同一性的多肽。
在这一实施方案的其他方面，脑啡肽包括：与SEQ ID NO：52、SEQID NO：53、SEQ ID NO：54或SEQ ID NO：55相比具有例如至少1、2或3个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：54或SEQ ID NO：55相比具有例如最多1、2或3个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：54或SEQ ID NO：55相比具有例如至少1、2或3个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：54或SEQ IDNO：55相比具有例如最多1、2或3个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQID NO：52、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：54或SEQ ID NO：55相比具有例如至少1、2或3个非连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：54或SEQ ID NO：55相比具有例如最多1、2或3非连续氨基酸插入的多肽。
在这一实施方案的其他方面，脑啡肽包括：与SEQ ID NO：52、SEQID NO：53、SEQ ID NO：54或SEQ ID NO：55相比具有例如至少1、2或3个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：54或SEQ ID NO：55相比具有例如最多1、2或3个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：54或SEQ ID NO：55相比具有例如至少1、2或3个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：54或SEQ ID NO：55相比具有例如最多1、2或3个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：54或SEQ ID NO：55相比具有例如至少1、2或3连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：54或SEQ ID NO：55相比具有例如最多1、2或3连续氨基酸插入的多肽。
在另一个实施方案中，阿片样肽包括牛肾上腺髓质-22(BAM22)肽。在这一实施方案的某些方面，BAM22肽包括BAM22肽(1-12)、BAM22肽(6-22)、BAM22肽(8-22)或BAM22肽(1-22)。在这一实施方案的其他方面，BAM22肽包括SEQ ID NO：56的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：57的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：58的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：59的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：60的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；或SEQ ID NO：61的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22。
在这一实施方案的其他方面，BAM22包括与SEQ ID NO：56的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：57的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：58的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：59的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：60的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；或SEQ ID NO：61的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22具有例如至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％氨基酸同一性的多肽。在这一实施方案的再其他方面，BAM22肽结合结构域包括与SEQ ID NO：56的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：57的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：58的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：59的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：60的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；或SEQ ID NO：61的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22具有例如最多70％、最多75％、最多80％、最多85％、最多90％或最多95％氨基酸同一性的多肽。
在这一实施方案的其他方面，BAM22肽包括：与SEQ ID NO：56的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：57的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：58的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：59的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：60的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；或SEQ ID NO：61的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22相比，具有例如至少1、2、3、4或5个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：56的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：57的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：58的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：59的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：60的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；或SEQ ID NO：61的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22相比，具有例如最多1、2、3、4或5个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：56的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：57的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：58的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：59的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：60的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；或SEQ ID NO：61的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22相比，具有例如至少1、2、3、4或5个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：56的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：57的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：58的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：59的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：60的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；或SEQ ID NO：61的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22相比，具有例如最多1、2、3、4或5个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：56的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：57的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：58的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：59的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：60的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；或SEQ ID NO：61的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22相比，具有例如至少1、2、3、4或5个非连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ ID NO：56的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：57的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：58的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：59的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：60的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；或SEQ IDNO：61的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22相比，具有例如最多1、2、3、4或5非连续氨基酸插入的多肽。
在这一实施方案的其他方面，BAM22包括：与SEQ ID NO：56的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：57的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：58的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：59的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：60的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；或SEQ ID NO：61的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22相比，具有例如至少1、2、3、4或5个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：56的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：57的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：58的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：59的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：60的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；或SEQ ID NO：61的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22相比，具有例如最多1、2、3、4或5个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：56的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：57的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：58的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：59的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：60的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；或SEQ ID NO：61的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22相比，具有例如至少1、2、3、4或5个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：56的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：57的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：58的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：59的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：60的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；或SEQ ID NO：61的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22相比，具有例如最多1、2、3、4或5个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：56的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：57的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：58的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：59的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：60的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；或SEQ ID NO：61的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22相比，具有例如至少1、2、3、4或5个连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ ID NO：56的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：57的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：58的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：59的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：60的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；或SEQ ID NO：61的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22相比，具有例如最多1、2、3、4或5个连续氨基酸插入的多肽。
在另一个实施方案中，阿片样肽包括内啡素(endomorphin)肽。在这一实施方案的某些方面，内啡素肽包括内啡素-1或内啡素-2。在这一实施方案的其他方面，内啡素肽包括SEQ ID NO：62或SEQ ID NO：63。
在这一实施方案的其他方面，内啡素包括与SEQ ID NO：62或SEQID NO：63具有例如至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％氨基酸同一性的多肽。在这一实施方案的再其他方面，内啡素包括与SEQ ID NO：62或SEQ ID NO：63具有例如最多70％、最多75％、最多80％、最多85％、最多90％或最多95％氨基酸同一性的多肽。
在这一实施方案的其他方面，内啡素包括：与SEQ ID NO：62或SEQID NO：63相比具有例如至少1、2或3个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：62或SEQ ID NO：63相比具有例如最多1、2或3个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：62或SEQ ID NO：63相比具有例如至少1、2或3个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：62或SEQ IDNO：63相比具有例如最多1、2或3个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQID NO：62或SEQ ID NO：63相比具有例如至少1、2或3个非连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ ID NO：62或SEQ ID NO：63相比具有例如最多1、2或3个非连续氨基酸插入的多肽。
在这一实施方案的其他方面，内啡素包括：与SEQ ID NO：62或SEQID NO：63相比具有例如至少1、2或3个连续氨基酸置换的多肽；与SEQID NO：62或SEQ ID NO：63相比具有例如最多1、2或3个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：62或SEQ ID NO：63相比具有例如至少1、2或3个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：62或SEQ ID NO：63相比具有例如最多1、2或3个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：62或SEQ ID NO：63相比具有例如至少1、2或3个连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ ID NO：62或SEQ ID NO：63相比具有例如最多1、2或3个连续氨基酸插入的多肽。
在另一个实施方案中，阿片样肽包括内啡肽。在这一实施方案的某些方面，内啡肽包括内啡肽-α、新内啡肽-α、内啡肽-β、新内啡肽-β或内啡肽-γ。在这一实施方案的其他方面，内啡肽包括SEQ ID NO：64、SEQ IDNO：65、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：68或SEQ ID NO：69。
在这一实施方案的其他方面，内啡肽包括与SEQ ID NO：64、SEQID NO：65、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：68或SEQID NO：69具有例如至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％氨基酸同一性的多肽。在这一实施方案的再其他方面，内啡肽包括与SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：66、SEQID NO：67、SEQ ID NO：68或SEQ ID NO：69具有例如最多70％、最多75％、最多80％、最多85％、最多90％或最多95％氨基酸同一性的多肽。
在这一实施方案的其他方面，内啡肽包括：与SEQ ID NO：64、SEQID NO：65、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：68或SEQID NO：69相比具有例如至少1、2、3、4或5个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：68或SEQ ID NO：69相比具有例如最多1、2、3、4或5个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：68或SEQ ID NO：69相比具有例如至少1、2、3、4或5个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ IDNO：64、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：67、SEQ IDNO：68或SEQ ID NO：69相比具有例如最多1、2、3、4或5个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：68或SEQ ID NO：69相比具有例如至少1、2、3、4或5个非连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：68或SEQ ID NO：69相比具有例如最多1、2、3、4或5个非连续氨基酸插入的多肽。
在这一实施方案的其他方面，内啡肽包括：与SEQ ID NO：64、SEQID NO：65、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：68或SEQID NO：69相比具有例如至少1、2、3、4或5个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：68或SEQ ID NO：69相比具有例如最多1、2、3、4或5个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：65、SEQID NO：66、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：68或SEQ ID NO：69相比具有例如至少1、2、3、4或5个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：68或SEQ ID NO：69相比具有例如最多1、2、3、4或5个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：66、SEQID NO：67、SEQ ID NO：68或SEQ ID NO：69相比具有例如至少1、2、3、4或5个连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：68或SEQ ID NO：69相比具有例如最多1、2、3、4或5个连续氨基酸插入的多肽。
在另一个实施方案中，阿片样肽包括强啡肽。在这一实施方案的某些方面，强啡肽包括强啡肽A、强啡肽B(leumorphin)或rimorphin。在这一实施方案的其他方面，强啡肽包括SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：75、SEQID NO：76、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：78、SEQ ID NO：79、SEQ IDNO：80、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：86、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：92、SEQID NO：93、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：96、SEQ IDNO：97、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：99或SEQ ID NO：100。
在这一实施方案的其他方面，强啡肽包括与SEQ ID NO：70、SEQID NO：79或SEQ ID NO：95具有例如至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％氨基酸同一性的多肽。在这一实施方案的再其他方面，强啡肽包括与SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：79或SEQ ID NO：95具有例如最多70％、最多75％、最多80％、最多85％、最多90％或最多95％氨基酸同一性的多肽。
在这一实施方案的其他方面，强啡肽包括：与SEQ ID NO：70、SEQID NO：79或SEQ ID NO：95相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：79或SEQ ID NO：95相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：79或SEQ ID NO：95相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：79或SEQID NO：95相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：79或SEQ ID NO：95相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个非连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：79或SEQ ID NO：95相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个非连续氨基酸插入的多肽。
在这一实施方案的其他方面，强啡肽包括：与SEQ ID NO：70、SEQID NO：79或SEQ ID NO：95相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：79或SEQ ID NO：95相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：79或SEQID NO：95相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：79或SEQ ID NO：95相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：79或SEQ ID NO：95相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：79或SEQ ID NO：95相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个连续氨基酸插入的多肽。
在另一个实施方案中，阿片样肽包括伤害感受肽。在这一实施方案的某些方面，伤害感受肽包括伤害感受肽RK、伤害感受肽、神经肽1、神经肽2或神经肽3。在这一实施方案的其他方面，伤害感受肽包括SEQ IDNO：101、SEQ ID NO：102、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：104、SEQ IDNO：105、SEQ ID NO：106、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：108、SEQ IDNO：109或SEQ ID NO：110。
在这一实施方案的其他方面，伤害感受肽包括与SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：108、SEQ ID NO：109或SEQ ID NO：110具有例如至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％氨基酸同一性的多肽。在这一实施方案的再其他方面，伤害感受肽包括与SEQID NO：101、SEQ ID NO：108、SEQ ID NO：109或SEQ ID NO：110具有例如最多70％、最多75％、最多80％、最多85％、最多90％或最多95％氨基酸同一性的多肽。
在这一实施方案的其他方面，伤害感受肽包括：与SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：108、SEQ ID NO：109或SEQ ID NO：110相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：108、SEQ ID NO：109或SEQ ID NO：110相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个非连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：108、SEQ ID NO：109或SEQ ID NO：110相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：108、SEQ ID NO：109或SEQ ID NO：110相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个非连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：101、SEQID NO：108、SEQ ID NO：109或SEQ ID NO：110相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个非连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ IDNO：101、SEQ ID NO：108、SEQ ID NO：109或SEQ ID NO：110相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个非连续氨基酸插入的多肽。
在这一实施方案的其他方面，伤害感受肽包括：与SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：108、SEQ ID NO：109或SEQ ID NO：110相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：108、SEQ ID NO：109或SEQ ID NO：110相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个连续氨基酸置换的多肽；与SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：108、SEQ ID NO：109或SEQ ID NO：110相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：108、SEQID NO：109或SEQ ID NO：110相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个连续氨基酸缺失的多肽；与SEQ ID NO：101、SEQ IDNO：108、SEQ ID NO：109或SEQ ID NO：110相比具有例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个连续氨基酸插入的多肽；或与SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：108、SEQ ID NO：109或SEQ ID NO：110相比具有例如最多1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个连续氨基酸插入的多肽。
每种梭菌毒素均被翻译为约150kD的单链多肽，并随后被天然存在的蛋白酶在二硫环中进行蛋白水解性切割(图18)。这种切割发生在形成二硫桥的两个半胱氨酸残基所产生的分离的二链环状区域中。这种翻译后加工生成一个二链分子，该二链分子包括一个约50kDa的轻链(LC)和一个约100kDa的重链(HC)，轻链和重链之间通过一个二硫键和非共价相互作用彼此连接(图2)。为了促进经修饰的梭菌毒素的重组产生过程，可以使用外源性蛋白酶切割位点，从而将本申请说明书中公开的经修饰的梭菌毒素的单链多肽形式转化为二链形式。参见例如，Steward，L.E.et al.，Modified Clostridial Toxins with Enhanced Targeting Capabilities ForEndogenous Clostridial Toxin Receptor Systems，美国专利公布No.US2008/0096248(Apr.24，2008)；Steward，L.E.et al.，Activatable ClostridialToxins，美国专利公布No.US 2008/0032930(Feb.7，2008)；Steward，(2007)见上文；Dolly，(2007)见上文；Foster，WO 2006/059093(2006)见上文；和Foster，WO 2006/059105(2006)见上文；上述每一篇文献的全部内容均通过援引的方式纳入本文。
可以预见，任意和所有蛋白酶切割位点均可以用于将梭菌毒素的单链多肽形式转化为二链形式，所述蛋白酶切割位点包括但不限于内源性二链环蛋白酶切割位点和外源性蛋白酶切割位点。因此，在本发明的一个方面，经修饰的梭菌毒素在二链环状区域内部分地包括内源性蛋白酶切割位点。在本发明的另一方面，经修饰的梭菌毒素在二链环状区域内部分地包括外源性蛋白酶切割位点。本文所使用的术语“二链环状区域”意为梭菌毒素中含有用于将梭菌毒素的单链多肽形式转化为二链形式的蛋白酶切割位点的氨基酸序列。梭菌毒素二链环状区域的非限制性实例包括：BoNT/A的二链环状区域(包括SEQ ID NO：1的氨基酸430-454)；BoNT/B的二链环状区域(包括SEQ ID NO：2的氨基酸437-446)；BoNT/C1的二链环状区域(包括SEQ ID NO：3的氨基酸437-453)；BoNT/D的二链环状区域(包括SEQ ID NO：4的氨基酸437-450)；BoNT/E的二链环状区域(包括SEQ ID NO：5的氨基酸412-426)；BoNT/F的二链环状区域(包括SEQ ID NO：6的氨基酸429-445)；BoNT/G的二链环状区域(包括SEQ ID NO：7的氨基酸436-450)；和TeNT的二链环状区域(包括SEQID NO：8的氨基酸439-467)(表2)。
Figure GPA00001159614000651
Figure GPA00001159614000661
本文所使用的术语“内源性二链环蛋白酶切割位点”与“天然存在的二链环蛋白酶切割位点”的含义相同，均表示在天然存在的梭菌毒素的二链环状区域中天然存在的蛋白酶切割位点，这些位点包括但不限于：天然存在的梭菌毒素二链环蛋白酶切割位点变体，例如，梭菌毒素二链环蛋白酶切割位点同种型和梭菌毒素二链环蛋白酶切割位点亚型。内源性蛋白酶切割位点的非限制性实例包括例如：BoNT/A二链环蛋白酶切割位点、BoNT/B二链环蛋白酶切割位点、BoNT/C1二链环蛋白酶切割位点、BoNT/D二链环蛋白酶切割位点、BoNT/E二链环蛋白酶切割位点、BoNT/F二链环蛋白酶切割位点、BoNT/G二链环蛋白酶切割位点和TeNT二链环蛋白酶切割位点。
如上所述，梭菌毒素被翻译为约150kD的单链多肽，然后该单链多肽被天然存在的蛋白酶在二硫环中进行蛋白水解性切割。这种翻译后加工生成一个二链分子，该二链分子包括一个约50kDa的轻链(LC)和一个约100kDa的重链(HC)，轻链和重链之间通过一个二硫键和非共价相互作用彼此连接。虽然目前并未清楚地识别蛋白酶，但是已经确定了多种梭菌毒素的二链环蛋白酶切割位点。在BoNT中，位于K448-A449处的切割使得单链多肽形式的BoNT/A转化为二链形式；位于K441-A442处的切割使得单链多肽形式的BoNT/B转化为二链形式；位于K449-T450处的切割使得单链多肽形式的BoNT/C1转化为二链形式；位于R445-D446处的切割使得单链多肽形式的BoNT/D转化为二链形式；位于R422-K423处的切割使得单链多肽形式的BoNT/E转化为二链形式；位于K439-A440处的切割使得单链多肽形式的BoNT/F转化为二链形式；以及位于K446-S447处的切割使得单链多肽形式的BoNT/G转化为二链形式。位于A457-S458处的蛋白水解性切割使得单链多肽形式的TeNT转化为二链形式。位于K431-N432处的蛋白水解性切割使得单链多肽形式的BaNT转化为二链形式。位于R422-K423处的蛋白水解性切割使得单链多肽形式的BuNT转化为二链形式。将这类二链环蛋白酶切割位点与所述经修饰的梭菌毒素框内可操作地连接，从而形成融合蛋白。然而也应该注意到，在二链环中似乎还存在其他被切割的切割位点，这使得产生小肽片段的丢失。作为一个非限制性实例，BoNT/A单链多肽的切割会最终在所述二链环中丢失一个10个氨基酸的片段。
因此，在一个实施方案中，包含内源性梭菌毒素二链环蛋白酶切割位点的蛋白酶切割位点用于将单链毒素转化为二链形式。在这一实施方案的某些方面，通过蛋白水解性切割转化为二链形式的转化发生在包含例如下列位点的位点：BoNT/A二链环蛋白酶切割位点、BoNT/B二链环蛋白酶切割位点、BoNT/C1二链环蛋白酶切割位点、BoNT/D二链环蛋白酶切割位点、BoNT/E二链环蛋白酶切割位点、BoNT/F二链环蛋白酶切割位点、BoNT/G二链环蛋白酶切割位点、TeNT二链环蛋白酶切割位点、BaNT二链环蛋白酶切割位点或BuNT二链环蛋白酶切割位点。
在这一实施方案的其他方面，通过蛋白水解性切割转化为二链形式的转化发生在包含例如下列区域的位点：BoNT/A的二链环状区域(包括SEQ ID NO：1的氨基酸430-454)；BoNT/B的二链环状区域(包括SEQID NO：2的氨基酸437-446)；BoNT/C1的二链环状区域(包括SEQ IDNO：3的氨基酸437-453)；BoNT/D的二链环状区域(包括SEQ ID NO：4的氨基酸437-450)；BoNT/E的二链环状区域(包括SEQ ID NO：5的氨基酸412-426)；BoNT/F的二链环状区域(包括SEQ ID NO：6的氨基酸429-445)；BoNT/G的二链环状区域(包括SEQ ID NO：7的氨基酸436-450)；或TeNT的二链环状区域(包括SEQ ID NO：8的氨基酸439-467)；BaNT的二链环状区域(包括SEQ ID NO：9的氨基酸421-435)；或BuNT的二链环状区域(包括SEQ ID NO：10的氨基酸412-426)。
可以预见的是，也可以使用外源性蛋白酶切割位点来将本申请说明书中公开的经修饰的梭菌毒素的单链多肽形式转化为二链形式。本文所使用的术语“外源性蛋白酶切割位点”与“非天然存在的蛋白酶切割位点”或“非天然蛋白酶切割位点”的含义均相同，均表示在正常情况下并不存在于天然存在的梭菌毒素的二链环状区域中的蛋白酶切割位点，前提条件是所述外源性蛋白酶切割位点不是人类蛋白酶切割位点，也不是用于表达编码本申请说明书中公开的可激活多肽的构建体的宿主细胞中表达的蛋白酶易切割的蛋白酶切割位点。可以预见，任意和所有的外源性蛋白酶切割位点都可用于将梭菌毒素的单链多肽形式转化为可用于实施本发明各方面的二链形式。外源性蛋白酶切割位点的非限制性实例包括例如：植物木瓜蛋白酶切割位点、昆虫木瓜蛋白酶切割位点、甲壳类木瓜蛋白酶切割位点、肠激酶切割位点、人类鼻病毒3C蛋白酶切割位点、人类肠病毒3C蛋白酶切割位点、烟草蚀刻病毒(TEV)蛋白酶切割位点、烟草叶脉斑点病毒(TVMV)蛋白酶切割位点、枯草杆菌蛋白酶切割位点、羟胺切割位点或半胱天冬酶3切割位点。
可以预见，任意和所有长度的外源性蛋白酶切割位点都可用于本发明的各方面，前提条件是所述外源性蛋白酶切割位点能够被其相应蛋白酶切割即可。因此，在这一实施方案的某些方面，外源性蛋白酶切割位点的长度可为例如至少6个氨基酸、至少7个氨基酸、至少8个氨基酸、至少9个氨基酸、至少10个氨基酸、至少15个氨基酸、至少20个氨基酸、至少25个氨基酸、至少30个氨基酸、至少40个氨基酸、至少50个氨基酸或至少60个氨基酸。在这一实施方案的其他方面，外源性蛋白酶切割位点的长度可为例如最多6个氨基酸、最多7个氨基酸、最多8个氨基酸、最多9个氨基酸、最多10个氨基酸、最多15个氨基酸、最多20个氨基酸、最多25个氨基酸、最多30个氨基酸、最多40个氨基酸、最多50个氨基酸或最多60个氨基酸。
在一个实施方案中，外源性蛋白酶切割位点位于经修饰的梭菌毒素的二链环内。在这一实施方案的某些方面，经修饰的梭菌毒素包括例如如下所述的外源性蛋白酶切割位点：植物木瓜蛋白酶切割位点、昆虫木瓜蛋白酶切割位点、甲壳类木瓜蛋白酶切割位点、非人类肠激酶蛋白酶切割位点、烟草蚀刻病毒蛋白酶切割位点、烟草叶脉斑点病毒蛋白酶切割位点、人类鼻病毒3C蛋白酶切割位点、人类肠病毒3C蛋白酶切割位点、枯草杆菌蛋白酶切割位点、羟胺切割位点、SUMO/ULP-1蛋白酶切割位点和非人类半胱天冬酶3切割位点。在这一实施方案的其他方面，外源性蛋白酶切割位点位于例如经修饰的BoNT/A、经修饰的BoNT/B、经修饰的BoNT/C1、经修饰的BoNT/D、经修饰的BoNT/E、经修饰的BoNT/F、经修饰的BoNT/G、经修饰的TeNT、经修饰的BaNT或经修饰的BuNT的二链环内。
在这一实施方案的一个方面，外源性蛋白酶切割位点可包括例如位于经修饰的梭菌毒素的二链环内的非人类肠激酶切割位点。在这一实施方案的另一些方面，外源性蛋白酶切割位点可包括例如位于经修饰的梭菌毒素的二链环内的牛肠激酶切割位点。在这一实施方案的另一些方面，外源性蛋白酶切割位点可包括位于经修饰的梭菌毒素的二链环内并包括SEQ IDNO：21的牛肠激酶切割位点。在这一实施方案的又另一些方面，牛肠激酶蛋白酶切割位点位于例如经修饰的BoNT/A、经修饰的BoNT/B、经修饰的BoNT/C1、经修饰的BoNT/D、经修饰的BoNT/E、经修饰的BoNT/F、经修饰的BoNT/G、经修饰的TeNT、经修饰的BaNT或经修饰的BuNT的二链环内。
在这一实施方案的另一个方面，外源性蛋白酶切割位点可包括例如位于经修饰的梭菌毒素的二链环内的烟草蚀刻病毒蛋白酶切割位点。在这一实施方案的另一些方面，外源性蛋白酶切割位点可包括例如位于经修饰的梭菌毒素的二链环内并包括共有序列：E-P5-P4-Y-P2-Q＊-G(SEQ ID NO：22)或E-P5-P4-Y-P2-Q＊-S(SEQ ID NO：23)的烟草蚀刻病毒蛋白酶切割位点，其中P2、P4和P5可为任意氨基酸。在这一实施方案的另一些方面，外源性蛋白酶切割位点可包括例如位于经修饰的梭菌毒素的二链环内并包括SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32或SEQ ID NO：33的烟草蚀刻病毒蛋白酶切割位点。在这一实施方案的又另一些方面，烟草蚀刻病毒蛋白酶切割位点位于例如经修饰的BoNT/A、经修饰的BoNT/B、经修饰的BoNT/C1、经修饰的BoNT/D、经修饰的BoNT/E、经修饰的BoNT/F、经修饰的BoNT/G、经修饰的TeNT、经修饰的BaNT或经修饰的BuNT的二链环内。
在这一实施方案的另一个方面，外源性蛋白酶切割位点可包括例如位于经修饰的梭菌毒素的二链环内的烟草叶脉斑点病毒蛋白酶切割位点。在这一实施方案的另一些方面，外源性蛋白酶切割位点可包括例如位于经修饰的梭菌毒素的二链环内并包括共有序列：P6-P5-V-R-F-Q＊-G(SEQ IDNO：113)或P6-P5-V-R-F-Q＊-S(SEQ ID NO：114)的烟草叶脉斑点病毒蛋白酶切割位点，其中P5和P6可为任意氨基酸。在这一实施方案的另一些方面，外源性蛋白酶切割位点可包括例如位于经修饰的梭菌毒素的二链环内并包括SEQ ID NO：115、SEQ ID NO：116、SEQ ID NO：117或SEQ ID NO：118的烟草叶脉斑点病毒蛋白酶切割位点。在这一实施方案的又另一些方面，烟草叶脉斑点病毒蛋白酶切割位点位于例如经修饰的BoNT/A、经修饰的BoNT/B、经修饰的BoNT/C1、经修饰的BoNT/D、经修饰的BoNT/E、经修饰的BoNT/F、经修饰的BoNT/G、经修饰的TeNT、经修饰的BaNT或经修饰的BuNT的二链环内。
在这一实施方案的又另一个方面，外源性蛋白酶切割位点可包括例如位于经修饰的梭菌毒素的二链环内的人类鼻病毒3C蛋白酶切割位点。在这一实施方案的另一些方面，外源性蛋白酶切割位点可包括例如位于经修饰的梭菌毒素的二链环内并包括共有序列：P5-P4-L-F-Q＊-G-P(SEQ IDNO：34)的人类鼻病毒3C蛋白酶切割位点，其中P4为G、A、V、L、I、M、S或T，并且P5可为任意氨基酸，优选地为D或E。在这一实施方案的另一些方面，外源性蛋白酶切割位点可包括例如位于经修饰的梭菌毒素的二链环内并包括SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：39或SEQ ID NO：40的人类鼻病毒3C蛋白酶切割位点。在这一实施方案的另一些方面，外源性蛋白酶切割位点可包括例如位于经修饰的梭菌毒素的二链环内的可被
Figure GPA00001159614000701
切割的人类鼻病毒3C蛋白酶切位点。在这一实施方案的又另一些方面，人类鼻病毒3C蛋白酶切割位点位于例如经修饰的BoNT/A、经修饰的BoNT/B、经修饰的BoNT/C1、经修饰的BoNT/D、经修饰的BoNT/E、经修饰的BoNT/F、经修饰的BoNT/G、经修饰的TeNT、经修饰的BaNT或经修饰的BuNT的二链环内。
在这一实施方案的再另一方面，外源性蛋白酶切割位点可包括例如位于经修饰的梭菌毒素的二链环内的枯草杆菌蛋白酶切割位点。在这一实施方案的另一些方面，外源性蛋白酶切割位点可包括例如位于经修饰的梭菌毒素的二链环内并包括共有序列：P6-P5-P4-P3-H＊-Y(SEQ ID NO：41)或P6-P5-P4-P3-Y-H＊(SEQ ID NO：42)的枯草杆菌蛋白酶切割位点，其中P3、P4和P5和P6可为任意氨基酸。在这一实施方案的另一些方面，外源性蛋白酶切割位点可包括例如位于经修饰的梭菌毒素的二链环内并包括SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：44或SEQ ID NO：45的枯草杆菌蛋白酶切割位点。在这一实施方案的另一些方面，外源性蛋白酶切割位点可包括例如位于经修饰的梭菌毒素的二链环内可被
Figure GPA00001159614000711
切割的枯草杆菌蛋白酶切割位点。在这一实施方案的又另一些方面，枯草杆菌蛋白酶切割位点位于例如经修饰的BoNT/A、经修饰的BoNT/B、经修饰的BoNT/C1、经修饰的BoNT/D、经修饰的BoNT/E、经修饰的BoNT/F、经修饰的BoNT/G、经修饰的TeNT、经修饰的BaNT或经修饰的BuNT的二链环内。
在这一实施方案的再另一方面，外源性蛋白酶切割位点可包括例如位于经修饰的梭菌毒素的二链环内的羟胺切割位点。在这一实施方案的另一些方面，外源性蛋白酶切割位点可包括例如包括多个N＊G二肽的羟胺切割位点。在这一实施方案的另一些方面，外源性蛋白酶切割位点可包括例如位于经修饰的梭菌毒素的二链环内并包括SEQ ID NO：46或SEQ IDNO：47的羟胺切割位点。在这一实施方案的又另一些方面，羟胺切割位点位于例如经修饰的BoNT/A、经修饰的BoNT/B、经修饰的BoNT/C1、经修饰的BoNT/D、经修饰的BoNT/E、经修饰的BoNT/F、经修饰的BoNT/G、经修饰的TeNT、经修饰的BaNT或经修饰的BuNT的二链环内。
在这一实施方案的再另一方面，外源性蛋白酶切割位点可包括例如位于经修饰的梭菌毒素的二链环内的SUMO/ULP-1蛋白酶切割位点。在这一实施方案的另一些方面，外源性蛋白酶切割位点可包括例如位于经修饰的梭菌毒素的二链环内并包括共有序列：G-G＊-P1’-P2’-P3’(SEQ ID NO：112)的SUMO/ULP-1蛋白酶切割位点，其中P1’、P2’和P3’可为任意氨基酸。在这一实施方案的另一些方面，外源性蛋白酶切割位点可包括例如位于经修饰的梭菌毒素的二链环内并包括SEQ ID NO：48的SUMO/ULP-1蛋白酶切割位点。在这一实施方案的又另一些方面，SUMO/ULP-1蛋白酶切割位点位于例如经修饰的BoNT/A、经修饰的BoNT/B、经修饰的BoNT/C1、经修饰的BoNT/D、经修饰的BoNT/E、经修饰的BoNT/F、经修饰的BoNT/G、经修饰的TeNT、经修饰的BaNT或经修饰的BuNT的二链环内。
在这一实施方案的一个方面，外源性蛋白酶切割位点可包括例如位于经修饰的梭菌毒素的二链环内的非人类半胱天冬酶3切割位点。在这一实施方案的另一些方面，外源性蛋白酶切割位点可包括例如位于经修饰的梭菌毒素的二链环内的小鼠半胱天冬酶3蛋白酶切割位点。在这一实施方案的另一些方面，外源性蛋白酶切割位点可包括例如位于经修饰的梭菌毒素的二链环内并包括共有序列D-P3-P2-D＊P1’(SEQ ID NO：119)的非人类半胱天冬酶3蛋白酶切割位点，其中P3可为任意氨基酸，优选地为E，P2可为任意氨基酸，P1’可为任意氨基酸，优选地为G或S。在这一实施方案的另一些方面，外源性蛋白酶切割位点可包括例如位于经修饰的梭菌毒素的二链环内并包括SEQ ID NO：120、SEQ ID NO：121、SEQ ID NO：122、SEQ ID NO：123、SEQ ID NO：124或SEQ ID NO：125的非人类半胱天冬酶3蛋白酶切割位点。在这一实施方案的又另一些方面，牛肠激酶蛋白酶切割位点位于例如经修饰的BoNT/A、经修饰的BoNT/B、经修饰的BoNT/C1、经修饰的BoNT/D、经修饰的BoNT/E、经修饰的BoNT/F、经修饰的BoNT/G、经修饰的TeNT、经修饰的BaNT或经修饰的BuNT的二链环内。
将二链环状区域进行修饰，从而用外源性蛋白酶切割位点代替天然存在的二链环蛋白酶切割位点。在这种修饰中，将所述天然存在的二链环蛋白酶切割位点修饰为不可操作的，从而使其不能被其蛋白酶切割。这样，仅有外源性蛋白酶切割位点可被其相应的外源性蛋白酶切割。在这种类型的修饰中，将外源性蛋白酶切割位点与经修饰的梭菌毒素框内可操作地连接，从而形成融合蛋白，使得该位点可被其相应的外源性蛋白酶切割。用外源性蛋白酶切割位点代替内源性二链环蛋白酶切割位点的操作可为位点置换操作，其中在近似所述内源性位点的切割位点处的位置安置一个外源性位点。用外源性蛋白酶切割位点代替内源性二链环蛋白酶切割位点的操作也可为外源性位点的插入，其中在与所述内源性位点的切割位点不同的位置安置一个外源性位点，并使得所述内源性位点不能再被切割。蛋白酶切割位点的位置和种类可能很关键，因为某些结合结构域需要有氨基端或羧基端游离的氨基酸。例如，如果所述阿片样肽结合结构域位于另两个结构域中间(例如见图4)，那么选择所述蛋白酶切割位点的标准就应该是该蛋白酶切割其位点后应留下一个平端切口，使得结合结构域与其受体发生选择性结合所必需的游离氨基端或羧基端暴露出来。
可以通过改变天然存在的二链环蛋白酶所切割的肽键侧旁的至少两个氨基酸来使得所述天然存在的蛋白酶切割位点变得不可被切割。也可以进行更大程度的改变，但要保证所述二链环状区域的两个半胱氨酸残基是不变的，并且该区域仍能形成二硫桥。氨基酸改变的非限制性实例包括氨基酸的缺失或用其他氨基酸代替原始氨基酸。因此，在一个实施方案中，通过改变天然存在的二链环蛋白酶所切割的肽键侧旁的两个氨基酸来使得所述天然存在的蛋白酶切割位点变得不可被切割。在这一实施方案的其他方面，改变天然存在的蛋白酶所切割的肽键侧旁包括所述两个氨基酸在内的例如至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个、至少八个、至少九个、至少十个、至少15个或至少20个氨基酸，从而使得所述天然存在的蛋白酶切割位点变得不可被切割。
在这一实施方案的又另一些方面，改变天然存在的二链环蛋白酶所切割的肽键侧旁包括所述两个氨基酸在内的例如最多三个、最多四个、最多五个、最多六个、最多七个、最多八个、最多九个、最多十个、最多15个或最多20个氨基酸，从而使得所述天然存在的蛋白酶切割位点变得不可被切割。
应当理解的是，本申请说明书公开的经修饰的梭菌毒素还可任选地含有一个柔性区域，该区域中含有柔性间隔物。含有柔性间隔物的柔性区域可用于调整多肽区域的长度，从而优化多肽的特征、特性或属性。作为一个非限制性实例，可以使用含有一个或多个串联的柔性间隔物的多肽区域来使得所述蛋白酶切割位点能更好地暴露，从而促进该位点被蛋白酶的切割。作为另一个非限制性实例，可以使用含有一个或多个串联的柔性间隔物的多肽区域来使得阿片样肽结合结构域更好地呈现，从而促进结合结构域与其受体的结合。
包括肽的柔性间隔物的长度为至少一个氨基酸，并且应包括带有小侧链R基团的不带电氨基酸，例如，甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸或丝氨酸。因此，在一个实施方案中，柔性间隔物的长度可为例如至少1个氨基酸、至少2个氨基酸、至少3个氨基酸、至少4个氨基酸、至少5个氨基酸、至少6个氨基酸、至少7个氨基酸、至少8个氨基酸、至少9个氨基酸或至少10个氨基酸。在另一个实施方案中，柔性间隔物的长度可为例如最多1个氨基酸、最多2个氨基酸、最多3个氨基酸、最多4个氨基酸、最多5个氨基酸、最多6个氨基酸、最多7个氨基酸、最多8个氨基酸、最多9个氨基酸或最多10个氨基酸。在再另一个实施方案中，柔性间隔物的长度可为例如，1-3个氨基酸、2-4个氨基酸、3-5个氨基酸、4-6个氨基酸或5-7个氨基酸。柔性间隔物的非限制性实例包括例如，G-间隔物：例如GGG、GGGG(SEQ ID NO：49)和GGGGS(SEQ ID NO：50)；或A-间隔物：例如AAA、AAAA(SEQ ID NO：51)和AAAAV(SEQID NO：111)。这样的柔性区域与所述经修饰的梭菌毒素经过框内可操作地连接，形成融合蛋白。
因此，在一个实施方案中，本申请说明书公开的经修饰的梭菌毒素还可含有一个柔性区域，该区域中含有柔性间隔物。在另一个实施方案中，本申请说明书公开的经修饰的梭菌毒素还可含有一个柔性区域，该区域中含有多个串联的柔性间隔物。在这一实施方案的某些方面，柔性区域可包括例如至少1个、至少2个、至少3个、至少4个或至少5个串联的G-间隔物。在这一实施方案的其他方面，柔性区域可包括例如最多1个、最多2个、最多3个、最多4个或最多5个串联的G-间隔物。在这一实施方案的又另一些方面，柔性区域可包括例如至少1个、至少2个、至少3个、至少4个或至少5个串联的A-间隔物。在这一实施方案的又另一些方面，柔性区域可包括例如最多1个、最多2个、最多3个、最多4个或最多5个串联的A-间隔物。在这一实施方案的另一个方面，经修饰的梭菌毒素可包括柔性区域，该柔性区域包括相同的柔性间隔物的一个或多个拷贝、不同的间隔物区域的一个或多个拷贝或者或它们的任意组合。
在这一实施方案的其他方面，含有柔性间隔物的经修饰的梭菌毒素可为例如经修饰的BoNT/A、经修饰的BoNT/B、经修饰的BoNT/C1、经修饰的BoNT/D、经修饰的BoNT/E、经修饰的BoNT/F、经修饰的BoNT/G、经修饰的TeNT、经修饰的BaNT或经修饰的BuNT。
可以预见，本申请说明书公开的经修饰的梭菌毒素可在任何和所有位置含有柔性间隔物，前提条件是该经修饰的梭菌毒素仍能够执行毒素作用。在这一实施方案的某些方面，柔性间隔物位于例如酶促结构域和易位结构域之间，酶促结构域和阿片样肽结合结构域之间，酶促结构域和外源性蛋白酶切割位点之间。在这一实施方案的其他方面，G-间隔物位于例如酶促结构域和易位结构域之间，酶促结构域和阿片样肽结合结构域之间，酶促结构域和外源性蛋白酶切割位点之间。在这一实施方案的其他方面，A-间隔物位于例如酶促结构域和易位结构域之间，酶促结构域和阿片样肽结合结构域之间，酶促结构域和外源性蛋白酶切割位点之间。
在这一实施方案的其他方面，柔性间隔物位于例如阿片样肽结合结构域和易位结构域之间，阿片样肽结合结构域和酶促结构域之间，阿片样肽结合结构域和外源性蛋白酶切割位点之间。在这一实施方案的其他方面，G-间隔物位于例如阿片样肽结合结构域和易位结构域之间，阿片样肽结合结构域和酶促结构域之间，阿片样肽结合结构域和外源性蛋白酶切割位点之间。在这一实施方案的其他方面，A-间隔物位于例如阿片样肽结合结构域和易位结构域之间，阿片样肽结合结构域和酶促结构域之间，阿片样肽结合结构域和外源性蛋白酶切割位点之间。
在这一实施方案的再其他方面，柔性间隔物位于例如易位结构域和酶促结构域之间，易位结构域和阿片样肽结合结构域之间，易位结构域和外源性蛋白酶切割位点之间。在这一实施方案的其他方面，G-间隔物位于例如易位结构域和酶促结构域之间，易位结构域和阿片样肽结合结构域之间，易位结构域和外源性蛋白酶切割位点之间。在这一实施方案的其他方面，A-间隔物位于例如易位结构域和酶促结构域之间，易位结构域和阿片样肽结合结构域之间，易位结构域和外源性蛋白酶切割位点。
可以预见，本申请说明书公开的经修饰的梭菌毒素可在任意和所有位置包括阿片样肽结合结构域，前提条件是所述经修饰的梭菌毒素仍能执行毒素作用。非限制性实例包括：阿片样肽结合结构域位于经修饰的梭菌毒素的氨基端；阿片样肽结合结构域位于经修饰的梭菌毒素的梭菌毒素酶促结构域和易位结构域之间；以及阿片样肽结合结构域位于经修饰的梭菌毒素的羧基端。其他的非限制性实例包括：阿片样肽结合结构域位于经修饰的梭菌毒素的梭菌毒素酶促结构域和梭菌毒素易位结构域之间。天然存在的梭菌毒素的酶促结构域含有天然的起始甲硫氨酸。因此，在酶促结构域不处于氨基端位置的结构域排列中，应该在氨基端结构域的前面安置一个含有起始甲硫氨酸的氨基酸序列。类似地，当阿片样肽结合结构域处于氨基端位置并且该阿片样肽结合结构域还需要具有游离的氨基端时，应该可操作地连接一个含有起始甲硫氨酸的氨基酸序列和一个蛋白酶切割位点，参见例如，Shengwen Li et al.，Degradable Clostridial Toxins，美国专利申请11/572,512(Jan.23、2007)，该文献的全部内容通过援引的方式纳入本文。另外，在本领域中已知，当在一个含有起始甲硫氨酸的多肽的氨基端可操作地连接另一个多肽时，原先多肽中含有的起始甲硫氨酸应被缺失。
因此，在一个实施方案中，经修饰的梭菌毒素可包括如下的氨基端至羧基端单链多肽线性顺序，所述线性顺序包括：阿片样肽结合结构域、易位结构域、外源性蛋白酶切割位点和酶促结构域(图3A)。在这一实施方案的一个方面，经修饰的梭菌毒素可包括如下的氨基端至羧基端单链多肽线性顺序，所述线性顺序包括：阿片样肽结合结构域、梭菌毒素易位结构域、外源性蛋白酶切割位点和梭菌毒素酶促结构域。
在另一个实施方案中，经修饰的梭菌毒素可包括如下的氨基端至羧基端单链多肽线性顺序，所述线性顺序包括：阿片样肽结合结构域、酶促结构域、外源性蛋白酶切割位点和易位结构域(图3B)。在这一实施方案的一个方面，经修饰的梭菌毒素可包括如下的氨基端至羧基端单链多肽线性顺序，所述线性顺序包括：阿片样肽结合结构域、梭菌毒素酶促结构域、外源性蛋白酶切割位点、梭菌毒素易位结构域。
在又另一个实施方案中，经修饰的梭菌毒素可包括一段如下的氨基端至羧基端单链多肽线性顺序，所述线性顺序包括：酶促结构域、外源性蛋白酶切割位点、阿片样肽结合结构域和易位结构域(图4A)。在这一实施方案的一个方面，经修饰的梭菌毒素可包括如下的氨基端至羧基端单链多肽线性顺序，所述线性顺序包括：梭菌毒素酶促结构域、外源性蛋白酶切割位点、阿片样肽结合结构域和梭菌毒素易位结构域。
在又另一个实施方案中，经修饰的梭菌毒素可如下的氨基端至羧基端单链多肽线性顺序，所述线性顺序包括：易位结构域、外源性蛋白酶切割位点、阿片样肽结合结构域和酶促结构域(图4B)。在这一实施方案的一个方面，经修饰的梭菌毒素可包括如下的氨基端至羧基端单链多肽线性顺序，所述线性顺序包括：梭菌毒素易位结构域、阿片样肽结合结构域、外源性蛋白酶切割位点和梭菌毒素酶促结构域。
在另一个实施方案中，经修饰的梭菌毒素可包括如下的氨基端至羧基端单链多肽线性顺序，所述线性顺序包括：酶促结构域、阿片样肽结合结构域、外源性蛋白酶切割位点和易位结构域(图4C)。在这一实施方案的一个方面，经修饰的梭菌毒素可包括如下的氨基端至羧基端单链多肽线性顺序，所述线性顺序包括：梭菌毒素酶促结构域、阿片样肽结合结构域、外源性蛋白酶切割位点、梭菌毒素易位结构域。
在又另一个实施方案中，经修饰的梭菌毒素可包括如下的氨基端至羧基端单链多肽线性顺序，所述线性顺序包括：易位结构域、阿片样肽结合结构域、外源性蛋白酶切割位点和酶促结构域(图4D)。在这一实施方案的一个方面，经修饰的梭菌毒素可包括如下的氨基端至羧基端单链多肽线性顺序，所述线性顺序包括：梭菌毒素易位结构域、阿片样肽结合结构域、外源性蛋白酶切割位点和梭菌毒素酶促结构域。
在再另一个实施方案中，经修饰的梭菌毒素可包括如下的氨基端至羧基端单链多肽线性顺序，所述线性顺序包括：酶促结构域、外源性蛋白酶切割位点、易位结构域和阿片样肽结合结构域(图5A)。在这一实施方案的一个方面，经修饰的梭菌毒素可包括如下的氨基端至羧基端单链多肽线性顺序，所述线性顺序包括：梭菌毒素酶促结构域、外源性蛋白酶切割位点、梭菌毒素易位结构域和阿片样肽结合结构域。
在再另一个实施方案中，经修饰的梭菌毒素可包括氨基端至羧基端单链多肽线性顺序，所述线性顺序包括：易位结构域、外源性蛋白酶切割位点、酶促结构域和阿片样肽结合结构域(图5B)。在这一实施方案的一个方面，经修饰的梭菌毒素可包括如下的氨基端至羧基端单链多肽线性顺序，所述线性顺序包括：梭菌毒素易位结构域、阿片样肽结合结构域、外源性蛋白酶切割位点和梭菌毒素酶促结构域。
可用于本发明的组合物通常以含有经修饰的梭菌毒素的可药用组合物的形式进行给药。本文所使用的术语“可药用”意为当被给予至个体时不产生任何不利的、过敏性的或其他不良的或不想要的反应的任何分子实体或组合物。本文所使用的术语“可药用组合物”与“药物组合物”的含义相同，均表示活性成分(例如本申请说明书公开的任何经修饰的梭菌毒素)的治疗有效浓度。含有经修饰的梭菌毒素的药物组合物可用于医学应用和兽医学应用。可以将药物组合物单独给予患者，或与其他附加的活性成分、药剂、药物或激素组合在一起给予患者。所述药物组合物可以通过多种方法中的任何方法制备，所述方法包括但不限于常规的混合、溶解、制粒、制糖衣、粉化、乳化、胶囊化、包埋和冻干。所述药物组合物可以是多种形式中的任何一种，所述形式包括但不限于无菌的溶液、悬液、乳液、冻干粉、片剂、药丸、药片、胶囊、粉剂、糖浆、酏剂或其他任何适于给药的剂型。
本发明的某些方面部分地提供了含有经修饰的梭菌毒素的组合物。可以预见，本申请说明书中公开的任何组合物都可用治疗需要该治疗的哺乳动物神经源性炎症的方法中，前提条件是所述组合物能够预防或减轻神经源性炎症的相关症状。含有经修饰的梭菌毒素的组合物的非限制性实例含有如下的经修饰的梭菌毒素，所述经修饰的梭菌毒素包括阿片样肽结合结构域、梭菌毒素易位结构域和梭菌毒素酶促结构域。可以预见，可以使用本申请说明书公开的任何经修饰的梭菌毒素，包括下列文献中公开的那些经修饰的梭菌毒素：例如，Steward，(2007)见上文；Dolly，(2007)见上文；Foster，WO 2006/059093(2006)见上文；和Foster，WO 2006/059105(Jun.8、2006)见上文。还应理解的是，两种或更多种不同的经修饰的梭菌毒素可以以分离的组合物形式或作为单一组合物的各部分提供。
还可以预见的是，含有经修饰的梭菌毒素的药物组合物可以任选地含有能够有利于将活性成分加工为可药用组合物的可药用载体。本文所使用的术语“可药用载体”与“药物学载体”是同义词，均表示在给药后基本不会产生长期或永久性不良反应的任何载体，并且该术语涵盖例如“可药用运载体、稳定剂、稀释剂、添加剂、辅剂或赋形剂”等术语的范围。通常，将这类载体与活性化合物混合或用于稀释或包封所述活性化合物，这类载体可为固体、半固体或液体物质。应当理解的是，所述活性成分可为可溶性的，或者可以以悬浮于所需载体或稀释剂中的悬液形式送递。可以使用多种可药用载体的任何形式，所述载体包括但不限于：水性介质例如水、盐水、甘氨酸、透明质酸等等；固体载体例如甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、滑石、纤维素、葡萄糖、蔗糖、碳酸镁等等；溶剂；分散介质；包衣；抗细菌剂和抗真菌剂；等张剂和吸收延迟剂；或者任何其他无活性成分。可药用载体的选择可依赖于给药的方式。任何可药用载体只要不是与活性成分不相容，其在可药用组合物中的用途均被考虑。这类药物载体的具体用途的非限制性实例可见于PHARMACEUTICAL DOSAGEFORMS AND DRUG DELIVERY SYSTEMS(Howard C.Ansel et al.，eds.，Lippincott Williams & Wilkins Publishers，7th ed.1999)；REMINGTON：THE SCIENCE AND PRACTICE OF PHARMACY(Alfonso R.Gennaro ed.，Lippincott，Williams & Wilkins，20th ed.2000)；GOODMAN & GILMAN′STHE PHARMACOLOGICAL BASIS OF THERAPEUTICS(Joel G.Hardman etal.，eds.，McGraw-Hill Professional，10th ed.2001)；和HANDBOOK OFPHARMACEUTICAL EXCIPIENTS(Raymond C.Rowe et al.，APhAPublications，4th edition 2003)。上述方法都是常规的方法，并且本领域技术人员根据本文的教导完全可以进行任何变化。
还可以预见的是，本申请说明书中公开的药物组合物可以任选地含有但不限于其他可药用组分(或制药组分)，所述组分包括但不限于：缓冲剂、防腐剂、张力调节剂、盐类、抗氧化剂、渗透压调节剂、生理物质、药理学物质、填充剂、乳化剂、润湿剂、甜味剂或香味剂等等。可以使用各种缓冲剂以及调节pH的手段来制备本申请说明书中公开的药物组合物，前提条件是所得的制剂为可药用制剂即可。这类缓冲剂包括但不限于：乙酸盐缓冲剂、柠檬酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂、中性缓冲盐溶液、磷酸盐缓冲盐溶液和硼酸盐缓冲剂。应当理解的是，根据需要，可以使用酸或碱来调节组合物的pH值。可药用的抗氧化剂包括但不限于：偏亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、乙酰半胱氨酸、丁基化的羟基苯甲醚和丁基化的羟基甲苯。可用的防腐剂包括但不限于：苯扎氯铵、氯丁醇、硫柳汞(thimerosal)、乙酸苯汞、硝酸苯汞、稳定化的氧氯组合物例如以及螯合剂例如DTPA或DTPA-双酰胺、DTPA钙和CaNaDTPA-双酰胺。药物组合物中的张力调节剂包括但不限于：盐类例如氯化钠、氯化钾，甘露醇或甘油，以及其他可药用的张力调节剂。所述药物组合物可以以盐的形式提供，所述盐可以由多种酸形成，所述酸包括但不限于：盐酸、硫酸、乙酸、乳酸、酒石酸、苹果酸、琥珀酸等等。盐类与其相应游离碱形式的化合物相比，在水中或其他质子溶剂中的溶解度应当更高。应当理解，上述物质和药学领域中已知的其他物质均可包含在本发明的药物组合物中。
在一个实施方案中，含有经修饰的梭菌毒素的组合物为含有经修饰的梭菌毒素的药物组合物。在这一实施方案的某些方面，含有经修饰的梭菌毒素的药物组合物还含有药物学载体或药物学组分，或药物学载体和药物学组分二者均有。在这一实施方案的其他方面，含有经修饰的梭菌毒素药物组合物还含有至少一种药物学载体、至少一种药物学组分或至少一种药物学载体和至少一种药物学组分。
炎症指的是组织对于有害刺激产生的实际的反应(水肿、红斑等等)。神经源性炎症指的是下述事实，即这一组织反应是通过从周围感觉神经末梢释放炎性介质(即传出功能，与正常的从这些神经传入至脊髓的传入信号相对)而被引发和/或通过从周围感觉神经末梢释放炎性介质而保持。
本发明的某些方面部分地涉及慢性神经源性炎症。本文所使用的术语“慢性神经源性炎症”意为如下所述的具有病理生理学效应的炎性反应，其中至少一种待治疗的潜在症状的病因与伤害性疼痛感觉神经相关，例如所述病因是由于炎症诱导分子的释放。慢性神经源性炎症包括原发性神经源性炎症和继发性神经源性炎症。本文所使用的术语“原发性”神经源性炎症指的是由初级感觉神经末梢(例如C和A-Δ纤维)释放的物质引发或导致的组织炎症(炎性症状)。本文所使用的术语“继发性”神经源性炎症指的是：由于非神经来源(例如，来自血管床的外溢或来源于组织间质，例如来源于肥大细胞或免疫细胞)的炎性介质(例如肽或细胞因子)刺激感觉神经末梢并导致神经释放炎性介质，从而引发的组织炎症。这些来源于神经的炎性介质反过来还能够刺激感觉神经并作用于非神经目标(例如肥大细胞)。两种形式的神经源性炎症(原发性和继发性)的净效应是通过周围感觉神经纤维的致敏化而保持的炎症状态。所导致的神经源性炎症的生理结果依赖于受损组织，并产生例如皮肤疼痛(异常性疼痛、痛觉过敏)、关节炎、内脏痛和功能障碍，例如肺功能障碍(哮喘、COPD)和膀胱功能障碍(疼痛、膀胱过度活动症)。
本文所使用的术语“炎症诱导分子”意为由感觉神经元释放并以某些方式起作用而刺激炎性反应的任何分子。炎症诱导分子的非限制性实例包括但不限于：神经肽例如物质P(SP)和降血钙素基因相关肽(CGRP)、前列腺素和氨基酸例如谷氨酸。本文所使用的术语“炎症介导分子”意为能够通过直接刺激感觉神经末梢释放炎症诱导分子而影响神经源性炎症的任何分子。如果在感觉神经元中表达炎症介导分子的受体，该炎症介导分子就能够直接刺激感觉神经元。炎症介导分子的非限制性实例包括但不限于：组胺、缓激肽、ATP、乙酰胆碱、5-羟色胺、一氧化氮、白三烯、细胞因子、趋化因子、类二十烷酸和酶类例如中性蛋白酶、类胰蛋白酶和溶酶体(lysosyme)。本文所使用的术语“炎症致敏分子”意为能够通过致敏感觉神经末梢而增加针对某种给定刺激的炎症诱导分子的释放、从而影响神经源性炎症的任何分子。炎症致敏分子的非限制性实例包括但不限于：前列腺素、ATP、缓激肽、白细胞介素-1β、白细胞介素-6、肿瘤坏死因子-α、神经生长因子、5-羟色胺和一氧化氮。
慢性神经源性炎症的症状包括但不限于：水肿、充血、红斑、瘀伤、脆弱、僵硬、肿胀、发烧、发冷、鼻塞、头晕、呼吸障碍，体液堆积，血液凝块、食欲不振、心率增加、肉芽肿形成、纤维形成、流脓、非粘性浆液形成或溃疡和疼痛。与慢性神经源性炎症相关的实际症状是公知的，并且可以由本领域普通技术人员通过考虑下列因素而确定，所述因素包括但不限于：神经源性炎症的部位、神经源性炎症的病因、神经源性炎症的严重程度、受影响的组织或器官以及相关的障碍。
慢性神经源性炎症症状可能与多种人类疾病中存在的看似不相关的多种障碍有关联。具有慢性神经源性炎症症状的障碍的非限制性实例包括但不限于：痤疮、胃酸倒流/胃灼热、阿尔茨海默氏症、阑尾炎、动脉炎、关节炎、哮喘、动脉硬化、自身免疫性疾病、龟头炎、睑缘炎、细支气管炎、支气管炎、粘液囊炎、癌症、心脏炎、乳糜泻、蜂窝组织炎、宫颈炎、胆管炎、胆囊炎、绒毛膜羊膜炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、肝硬化、结肠炎、结膜炎、膀胱炎、感冒、泪腺炎、痴呆症、皮炎、皮肌炎、肺气肿、脑炎、心内膜炎、子宫内膜炎、小肠炎、小肠结肠炎、上髁炎、附睾炎、筋膜炎、纤维组织炎、胃炎、肠胃炎、牙龈炎、肾小球肾炎、舌炎、心脏病、肝炎、化脓性汗腺炎、高血压、回肠炎、炎性神经病变、胰岛素抵抗、间质性膀胱炎、虹膜炎、缺血性心脏疾病、角膜炎、角膜结膜炎、喉炎、乳腺炎、乳突炎、脑膜炎、代谢综合征(X综合征)、偏头痛、脊髓炎、心肌炎、肌炎、肾炎、肥胖、脐炎、卵巢炎、睾丸炎、骨软骨炎、骨质减少、骨质疏松、骨炎、耳炎、胰腺炎、帕金森氏症、腮腺炎、盆腔炎症、心包炎、腹膜炎、咽炎、静脉炎、胸膜炎、肺炎、直肠炎、前列腺炎、牙髓炎、肾盂肾炎、门静脉炎、风湿热、鼻炎、输卵管炎或咽鼓管炎、涎腺炎、鼻窦炎、结肠痉挛、口腔炎、滑膜炎、肌腱炎、肌腱末端病(tendinosis)、腱鞘炎、血栓性静脉炎、扁桃体炎、膀胱三角区炎、肿瘤、尿道炎、葡萄膜炎、阴道炎、脉管炎和外阴炎。还可参见Eric R.First，Application of Botulinum Toxin to the Management of NeurogenicInflammatory Disorders，美国专利6,063,768，该文献全部内容以援引的方式纳入本文。
一类具有慢性神经源性炎症症状的障碍为关节炎。关节炎包括一大类涉及由于滑膜炎症而产生身体关节损伤的病症，包括但不限于：骨关节炎、类风湿性关节炎、幼年特发性关节炎、脊柱关节病变例如强直性脊椎炎、反应性关节炎(Reiter氏综合征)、银屑病关节炎、与炎性肠病相关的肠病型关节炎、Whipple氏病和Behcet氏病、脓毒性关节炎、痛风(也被称为痛风性关节炎、结晶性滑膜炎、代谢性关节炎)、假性痛风(焦磷酸钙沉积病)和Still氏病。关节炎可能影响单个关节(单关节型关节炎)、二至四个关节(少关节型关节炎)或五个或更多关节(多关节型关节炎)，并可能为自身免疫性疾病或非自身免疫性疾病。
另一类具有慢性神经源性炎症症状的障碍为自身免疫性疾病。根据每种疾病的主要临床病理特征，可以将自身免疫性疾病粗略地分为全身性自身免疫性疾病和器官特异性自身免疫性疾病。全身性自身免疫性疾病包括但不限于：全身性红斑狼疮(SLE)、
Figure GPA00001159614000821
氏综合征、硬皮病、类风湿性关节炎和多肌炎。局部自身免疫性疾病可为内分泌性自身免疫性疾病(1型糖尿病、Hashimoto氏甲状腺炎、Addison氏病等)、皮肤性自身免疫性疾病(寻常性天疱疮)、血液性自身免疫性疾病(自身免疫性溶血性贫血)、神经性自身免疫性疾病(多发性硬化)，或者可以几乎累及任何局部的身体组织。自身免疫性疾病的类型包括但不限于：急性播散性脑脊髓炎(ADEM)、Addison氏病、变态反应或敏感、抗磷脂抗体综合征(APS)、关节炎、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、自身免疫性内耳疾病、大疱性类天疱疮、乳糜泻、南美锥虫病、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、1型糖尿病(IDDM)、子宫内膜异位症、纤维肌痛、肺出血肾炎综合症、Graves氏病、Guillain-Barré综合征(GBS)、Hashimoto甲状腺炎、化脓性汗腺炎、特发性血小板减少性紫癜、炎性肠病、间质性膀胱炎、狼疮(包括盘状红斑狼疮、药源性红斑狼疮、狼疮肾炎、新生儿狼疮、亚急性皮肤红斑性狼疮和全身性红斑狼疮)、硬斑病(morphea)、多发性硬化症(MS)、重症肌无力、肌病、发作性睡病、神经性肌强直、寻常型天疱疮、恶性贫血、原发性胆汁性肝硬化、复发性播散性脑脊髓炎(多相播散性脑脊髓炎)、风湿热、精神分裂症、硬皮病、氏综合征、腱鞘炎、脉管炎以及白癜风。参见Pamela D.Van Schaack & Kenneth L.Tong，Treatment of Autoimmune Disorder with a Neurotoxin，美国专利公布2006/138059，该文献的全部内容通过援引的方式纳入本文。
另一类具有慢性神经源性炎症症状的障碍为炎性肌病。炎性肌病的病因是由于免疫系统攻击肌肉组分，从而导致肌肉中出现炎症症状。炎性肌病包括但不限于：皮肌炎、内含体肌炎和多肌炎。
另一类具有慢性神经源性炎症症状的障碍为脉管炎。脉管炎是以白细胞迁移导致损伤的脉管壁炎症为特征的一大类疾病，所述脉管包括淋巴管和血管，例如静脉(静脉炎)、动脉(动脉炎)和毛细血管。炎症可以影响身体任何部位的任何大小的血管。所述炎症可以影响动脉和/或静脉。所述炎症可为局灶性的(即只影响脉管中的单一部位)或可为散播性的(即炎症的区域扩散到遍及具体的器官或组织，甚至影响身体内的一个以上的器官系统)。脉管炎包括但不限于：Buerger氏疾病(闭塞性血栓脉管炎)、脑脉管炎(中枢神经系统脉管炎)、Churg-Strauss动脉炎、冷球蛋白血症、原发性冷球蛋白血症性脉管炎、巨细胞性动脉炎(颞动脉炎)、Golfer氏脉管炎、Henoch-Schonlein紫癜、超敏性脉管炎(过敏性脉管炎)、川崎病、显微镜下多动脉炎/多血管炎、结节性多动脉炎、风湿性多肌痛(PMR)、类风湿性脉管炎、Takayasu动脉炎、Wegener氏肉芽肿病，以及结缔组织疾病引起的脉管炎障碍，例如全身性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎(RA)、复发性多软骨炎、
Figure GPA00001159614000832
氏病或其他结缔组织障碍，以及病毒感染引起的脉管炎。
另一类具有慢性神经源性炎症症状的障碍为皮肤病。皮肤病包括但不限于：皮炎，包括慢性日光性皮炎；湿疹例如特应性湿疹、接触性湿疹、干燥性湿疹、脂溢性皮炎、出汗不良(dyshidrosis)、盘状湿疹、静脉湿疹、疱疹性皮炎、神经性皮炎和自体湿疹化；以及淤积性皮炎、化脓性汗腺炎；银屑病，包括斑块型银屑病、指甲银屑病、点滴状银屑病、头皮银屑病，逆向型银屑病、脓疱型银屑病和红斑型银屑病(erythrodermispsoriasis)，红斑痤疮，硬皮病包括硬斑病。
另一类具有慢性神经源性炎症症状的障碍为胃肠疾病。胃肠疾病包括但不限于：易激性肠病，炎性肠病，包括克罗恩病和溃疡性结肠炎，例如溃疡性直肠炎、左侧结肠炎(left-sided colitis)、全结肠炎和爆发性结肠炎。
因此，在一个实施方案中，使用含有治疗有效量的经修饰的梭菌毒素的组合物来治疗患有慢性神经源性炎症的哺乳动物，其中这种给药减少炎症诱导分子的释放，由此减轻与慢性神经源性炎症相关的症状。在这一实施方案的一个方面，使用含有治疗有效量的经修饰的梭菌毒素的组合物来治疗患有慢性神经源性炎症的哺乳动物，其中这种给药减少炎症诱导分子的释放，由此减轻与慢性神经源性炎症相关的症状。在这一实施方案的一个方面，使用含有治疗有效量的经修饰的梭菌毒素的组合物来治疗患有慢性神经源性炎症的哺乳动物，其中这种给药减少SP的释放，由此减轻与慢性神经源性炎症相关的症状。在这一实施方案的一个方面，使用含有治疗有效量的经修饰的梭菌毒素的组合物来治疗患有慢性神经源性炎症的哺乳动物，其中这种给药减少CGRP的释放，由此减轻与慢性神经源性炎症相关的症状。在这一实施方案的另一个方面，使用含有治疗有效量的经修饰的梭菌毒素的组合物来治疗患有慢性神经源性炎症的哺乳动物，其中这种给药减少前列腺素的释放，由此减轻与慢性神经源性炎症相关的症状。在这一实施方案的另一个方面，使用含有治疗有效量的经修饰的梭菌毒素的组合物来治疗患有慢性神经源性炎症的哺乳动物，其中这种给药减少谷氨酸的释放，由此减轻与慢性神经源性炎症相关的症状。
本发明的某些方面部分地涉及哺乳动物。哺乳动物包括人类，人类可为患者。本发明的另一些方面部分地涉及个体。个体包括人类，人类可为患者。
本发明的某些方面部分地涉及含有经修饰的梭菌毒素的组合物的给药。本文所使用的术语“给药”意为将含有经修饰的梭菌毒素的组合物提供给患者并可能产生临床的、治疗的或试验性的有益效果的任何送递机制。可以使用细胞摄取方法将经修饰的梭菌毒素送递至患者，其中经修饰的梭菌毒素通过细胞内送递或基因疗法而被送递，在所述基因疗法中，表达载体表达前体RNA，而前体RNA表达产生经修饰的梭菌毒素。
可以使用细胞摄取方法将含有本申请说明书公开的经修饰的梭菌毒素的组合物给予哺乳动物。使用细胞摄取方法进行的含有经修饰的梭菌毒素的组合物的给药包括多种经肠的或肠胃外的方法，包括但不限于：以任何可接受的形式口服给药，所述形式例如片剂、液体、胶囊、粉剂等等；以任何可接受的形式局部给药，所述形式例如滴剂、喷剂、霜剂、凝胶剂或软膏；以任何可接受的形式血管内给药，所述形式例如静脉内快速浓注、静脉内输注、动脉内快速浓注、动脉内输注和用导管向脉管系统内滴注；以任何可接受的形式组织周围和组织内给药，所述形式例如腹膜内注射、肌内注射、皮下注射、皮下输注、眼内注射、视网膜注射或视网膜下注射或硬膜外注射；以任何可接受的形式脉管内给药，所述形式例如导管滴注；以及通过放置装置给药，所述装置例如植入物、贴片、药片、导管、渗透泵、栓剂、可生物蚀解的送递系统、不可生物蚀解的送递系统或其他的植入性延长释放系统或缓释系统。可生物蚀解聚合物的示例性列表和使用方法记载于例如，Handbook of Biodegradable Polymers(Abraham J.Dombet al.，eds.，Overseas Publishers Association，1997)。
含有经修饰的梭菌毒素的组合物可以通过本领域技术人员已知的各种方法给予至哺乳动物，所述方法包括但不限于脂质体包封法、离子电泳法或通过装入其他运载体(例如水凝胶、环糊精、可生物降解的纳米胶囊和生物黏附性微球)的方法或通过蛋白载体的方法。用于将含有经修饰的梭菌毒素的组合物给药至患者的送递机制记载于例如下列文献：LeonidBeigelman et al.，Compositions for the Delivery of Negatively ChargedMolecules，美国专利6,395,713(May 28，2002)；和Achim Aigner，DeliverySystems for the Direct Application of siRN As to Induce RNA Interference(RNAi)in vivo，2006(716559)J.Biomed.Biotech.1-15(2006)；ControlledDrug Delivery：Designing Technologies for the Future(Kinam Park &Randy J.Mrsny eds.，American Chemical Association，2000)；Vernon G.Wong & Mae W.L.Hu，Methods for Treating Inflammation-mediatedConditions of the Eye，美国专利No.6,726,918(Apr.27，2004)；David A.Weber et al.，Methods and Apparatus for Delivery of Ocular Implants，美国专利公布No.US2004/0054374(Mar.18，2004)；Thierry Nivaggioli et al.，Biodegradable Ocular Implant，美国专利公布No.US2004/0137059(Jul.15，2004)；Patrick M.Hughes et al.，Anti-Angiogenic Sustained ReleaseIntraocular Implants and Related Methods，美国专利申请11/364,687(Feb.27，2006)；和Patrick M.Hughes et al.，Sustained Release Intraocular DrugDelivery Systems，美国专利公布2006/0182783(Aug.17，2006)；上述每一篇文献的全部内容均通过援引的方式纳入本文。
也可以使用基因疗法将含有本申请说明书中公开的经修饰的梭菌毒素的组合物给予患者，所述基因疗法是通过在与神经源性炎症疾病的基于神经的病因学相关的细胞中表达经修饰的梭菌毒素而实现。可以使用与表达载体可操作地连接的核酸分子表达经修饰的梭菌毒素，参见例如，P.D.Good et al.，Expression of Small，Therapeutic RNAs in Human Cell Nuclei，4(1)Gene Ther.45-54(1997)；James D.Thompson，Polymerase III-basedexpression of therapeutic RNAs，美国专利6,852,535(Feb.8，2005)；MaciejWiznerowicz et al.，Tuning Silence：Conditional Systems for RNAInterference，3(9)Nat.Methods 682-688m(2006)；Ola
Figure GPA00001159614000861
and John J.Rossi，Expressing Short Hairpin RNAi in vivo，3(9)Nat.Methods 689-698(2006)；以及Charles X.Li et al.，Delivery of RNA Interference，5(18)CellCycle 2103-2109(2006)。本领域普通技术人员能够意识到，使用合适的表达载体，可以在真核细胞中表达任何经修饰的梭菌毒素。
能够表达经修饰的梭菌毒素的表达载体可以在与神经源性炎症疾病的基于神经的病因学相关的细胞中持续或稳定地表达经修饰的梭菌毒素。或者，能够表达经修饰的梭菌毒素的表达载体可以在与神经源性炎症疾病的基于神经的病因学相关的细胞中瞬时性地表达经修饰的梭菌毒素。在必要的情况下，可以重复给予这种瞬时性的表达载体。经修饰的梭菌毒素表达载体可以通过上述的给药途径和送递机制进行给药，可以通过对从患者体内移植出靶细胞给药然后再将其重新导入患者体内进行给药，或者通过能够将载体导入所需靶细胞的任何其他手段进行给药，参见例如，Larry A.Couture and Dan T.Stinchcomb，Anti-gene Therapy：The Use ofRibozymes to Inhibit Gene Function，12(12)Trends Genet.510-515(1996)。
将含有经修饰的梭菌毒素的组合物给予哺乳动物所使用的实际送递机制可以由本领域普通技术人员通过考虑下列因素而确定，所述因素包括但不限于：所述神经源性炎症障碍的类型、所述神经源性炎症障碍的部位、所述神经源性炎症障碍的病因、所述神经源性炎症障碍的严重程度、所需要缓解的程度、所需要缓解的时间、所使用的具体的经修饰的梭菌毒素、所使用的经修饰的梭菌毒素的排泄速度、所使用的经修饰的梭菌毒素的药效学、所述组合物中含有的其他化合物的性质、给药的具体途径，以及所述患者的具体特征、病史和危险因素，例如年龄、体重、总体健康状况等等，以及上述因素的任意组合。
在一个实施方案中，通过注射将含有经修饰的梭菌毒素的组合物给药至待治疗的部位。在这一实施方案的某些方面，含有经修饰的梭菌毒素的组合物的注射是通过例如肌内注射、皮下注射或经皮注射而实现。在这一实施方案的某些方面，将含有经修饰的梭菌毒素的组合物注射至下泌尿道，包括膀胱壁、尿道括约肌或膀胱颈。
可以使用多种途径将含有经修饰的梭菌毒素的组合物给予哺乳动物。对本申请说明书中公开的治疗神经源性炎症障碍的方法而言，合适的给药途径包括局部给药和全身给药。局部给药可以使得组合物在哺乳动物体内某一具体部位的送递浓度比其全身浓度要高得多，而全身给药使得组合物主要送递到患者的全身。对本申请说明书中公开的治疗神经源性炎症障碍的方法而言，合适的给药途径包括中枢给药和周围给药。中枢给药可以将组合物主要送递至患者的中枢神经系统，这种给药方式包括例如鞘内给药、硬膜外给药和颅内注射或植入物。周围给药可以将组合物主要送递至患者中枢神经系统之外的任何区域，这种给药方式涵盖除去直接向脊柱或脑给药之外的任何给药途径。将含有经修饰的梭菌毒素的组合物给予哺乳动物所使用的实际给药途径可以由本领域普通技术人员通过考虑下列因素而确定，所述因素包括但不限于：所述神经源性炎症障碍的类型、所述神经源性炎症障碍的部位、所述神经源性炎症障碍的病因、所述神经源性炎症障碍的严重程度、所需要缓解的程度、所需要缓解的时间、所使用的具体的经修饰的梭菌毒素、所使用的经修饰的梭菌毒素的排泄速度、所使用的经修饰的梭菌毒素的药效学、所述组合物中含有的其他化合物的性质、给药的具体途径，以及所述患者的具体特征、病史和危险因素，例如年龄、体重、总体健康状况等等，以及上述因素的任意组合。
在一个实施方案中，含有经修饰的梭菌毒素的组合物通过全身给药给予哺乳动物。在另一个实施方案中，含有经修饰的梭菌毒素的组合物通过局部给药给予哺乳动物。在这一实施方案的一个方面，将含有经修饰的梭菌毒素的组合物给药至哺乳动物的膀胱。在这一实施方案的另一个方面，将含有经修饰的梭菌毒素的组合物给药至哺乳动物的前列腺。在这一实施方案的另一个方面，将含有经修饰的梭菌毒素的组合物给药至哺乳动物的子宫。
本发明的某些方面部分地涉及给予治疗有效量的含有经修饰的梭菌毒素的组合物。本文所使用的术语“治疗有效量”与“治疗有效剂量”是同义词，均在用于描述神经源性炎症障碍的治疗时表示获得所需治疗效果所必需的经修饰的梭菌毒素的最小剂量，并包括足以缓解神经源性炎症障碍的某一相关症状的剂量。在这一实施方案的某些方面，治疗有效量的含有经修饰的梭菌毒素的组合物可以缓解神经源性炎症障碍的某一相关症状的例如至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少100％。在这一实施方案的其他方面，治疗有效量的含有经修饰的梭菌毒素的组合物可以缓解神经源性炎症障碍的某一相关症状的例如最多10％、最多20％、最多30％、最多40％、最多50％、最多60％、最多70％、最多80％、最多90％或最多100％。在这一实施方案的再其他方面，治疗有效量的含有经修饰的梭菌毒素的组合物可以缓解神经源性炎症障碍的某一相关症状的例如约10％至约100％、约10％至约90％、约10％至约80％、约10％至约70％、约10％至约60％、约10％至约50％、约10％至约40％、约20％至约100％、约20％至约90％、约20％至约80％、约20％至约20％、约20％至约60％、约20％至约50％、约20％至约40％、约30％至约100％、约30％至约90％、约30％至约80％、约30％至约70％、约30％至约60％或约30％至约50％。本文所使用的术语“约”当用于定性表示指定的项目、数字、百分比或时间的数值时，指的是所指定的项目、百分比、参数或时间的数值±10％的范围。在这一实施方案的又另一些方面，经修饰的梭菌毒素的治疗有效量为足以抑制神经活性长达一定时间段的剂量，所述时间段例如至少一周、至少一个月、至少两个月、至少三个月、至少四个月、至少五个月、至少六个月、至少七个月、至少八个月、至少九个月、至少十个月、至少十一个月或至少十二个月。
用于给予哺乳动物的含有经修饰的梭菌毒素的组合物的实际治疗有效量可以由本领域普通技术人员通过考虑下列因素而确定，所述因素包括但不限于：所述神经源性炎症障碍的类型、所述神经源性炎症障碍的部位、所述神经源性炎症障碍的病因、所述神经源性炎症障碍的严重程度、所需要缓解的程度、所需要缓解的时间、所使用的具体的经修饰的梭菌毒素、所使用的经修饰的梭菌毒素的排泄速度、所使用的经修饰的梭菌毒素的药效学、所述组合物中含有的其他化合物的性质、给药的具体途径，以及所述患者的具体特征、病史和危险因素，例如年龄、体重、总体健康状况等等，以及上述因素的任意组合。此外，当重复给予含有经修饰的梭菌毒素的组合物时，含有经修饰的梭菌毒素的组合物的实际有效量还应依赖于下列因素，所述因素包括但不限于：给药频率、含有经修饰的梭菌毒素的组合物的半衰期，或上述因素的任意组合。本领域普通技术人员已知，在对人类给药之前，可以由体外试验或者由使用动物模型进行的体内给药研究外推而得到含有经修饰的梭菌毒素的组合物的有效量。考虑到各种给药途径的效率不同，可以预见的是，必需有效量也会在宽范围内变化。例如，可以预见，口服给药通常要比静脉内或玻璃体内注射所需的剂量水平更高。上述剂量变化可以通过本领域普通技术人员公知的用于优化的常规经验性标准来进行调整。优选地，由主治医生根据上述的各种因素来确定精确的治疗有效剂量水平和剂量形式。
作为一个非限制性实例，当将含有经修饰的梭菌毒素的组合物给予哺乳动物时，治疗有效量的通常范围为约1fg至约3.0mg。在这一实施方案的某些方面，含有经修饰的梭菌毒素的组合物的有效量可为例如约100fg至约3.0mg、约100pg至约3.0mg、约100ng至约3.0mg或约100μg至约3.0mg。在这一实施方案的其他方面，含有经修饰的梭菌毒素的组合物的有效量可为例如约100fg至约750μg、约100pg至约750μg、约100ng至约750μg或约1μg至约750μg。在这一实施方案的再其他方面，含有经修饰的梭菌毒素的组合物的有效量可为例如至少1fg、至少250fg、至少500fg、至少750fg、至少1pg、至少250pg、至少500pg、至少750pg、至少1ng、至少250ng、至少500ng、至少750ng、至少1μg、至少250μg、至少500μg、至少750μg或至少1mg。在这一实施方案的又另一些方面，含有经修饰的梭菌毒素的组合物的有效量可为例如最多1fg、最多250fg、最多500fg、最多750fg、最多1pg、最多250pg、最多500pg、最多750pg、最多1ng、最多250ng、最多500ng、最多750ng、最多1μg、至少250μg、最多500μg、最多750μg或最多1mg。
作为另一个非限制性实例，当将含有经修饰的梭菌毒素的组合物给予哺乳动物时，治疗有效量的通常范围为约0.00001mg/kg至约3.0mg/kg。在这一实施方案的某些方面，含有经修饰的梭菌毒素的组合物的有效量可为例如约0.0001mg/kg至约0.001mg/kg、约0.03mg/kg至约3.0mg/kg、约0.1mg/kg至约3.0mg/kg或约0.3mg/kg至约3.0mg/kg。在这一实施方案的再其他方面，含有经修饰的梭菌毒素的组合物的有效量可为例如至少0.00001mg/kg、至少0.0001mg/kg、至少0.001mg/kg、至少0.01mg/kg、至少0.1mg/kg或至少1mg/kg。在这一实施方案的再其他方面，含有经修饰的梭菌毒素的组合物的有效量可为例如最多0.00001mg/kg、最多0.0001mg/kg、最多0.001mg/kg、最多0.01mg/kg、最多0.1mg/kg或最多1mg/kg。
剂量可为单一剂量或累积剂量(连续剂量)，并可以由本领域技术人员容易地确定。例如，对神经源性炎症障碍的治疗可以包括一次性给予有效剂量的含有经修饰的梭菌毒素的组合物。作为一个非限制性实例，可以将有效剂量的含有经修饰的梭菌毒素的组合物一次性给予患者，例如以单次注射或在表现神经源性炎症障碍症状的位置或其附近沉积的形式。或者对神经源性炎症障碍的治疗可以包括在一段时间内多次给予有效剂量的含有经修饰的梭菌毒素的组合物，例如每日一次、每几日一次、每周一次、每月一次或每年一次。作为一个非限制性实例，可以将含有经修饰的梭菌毒素的组合物每年一次或每年两次地给予哺乳动物。对于不同的哺乳动物而言，根据例如哺乳动物症状的严重程度的因素，给药的时间方案可以有所变化。例如，可以每月一次地给予哺乳动物有效剂量的含有经修饰的梭菌毒素的组合物，给药持续一段不确定的时间或直至所述患者不再需要治疗为止。本领域普通技术人员应当知晓，可以在整个治疗过程中监测所述哺乳动物的状况，并相应调整含有经修饰的梭菌毒素的组合物的有效量。
含有本申请说明书中公开的经修饰的梭菌毒素的组合物也可以与其他治疗性化合物一起联合给予哺乳动物，以提高治疗的总体效果。使用多种化合物治疗一种适应症可以增加有益效果并减少副作用。
本发明的各个方面也可以按如下方式描述：
1.一种治疗哺乳动物的神经源性炎症的方法，所述方法包括给予需要该治疗的哺乳动物治疗有效量的含有经修饰的梭菌毒素的组合物的步骤，所述经修饰的梭菌毒素包括阿片样肽结合结构域、梭菌毒素易位结构域和梭菌毒素酶促结构域，其中给予所述组合物可减少炎症诱导分子的释放，由此减轻与慢性神经源性炎症相关的症状。
2.一种治疗哺乳动物的神经源性炎症的方法，所述方法包括给予需要该治疗的哺乳动物治疗有效量的含有经修饰的梭菌毒素的组合物的步骤，所述经修饰的梭菌毒素包括阿片样肽结合结构域、梭菌毒素易位结构域和梭菌毒素酶促结构域，其中给予所述组合物可减少炎症诱导神经肽的释放，由此减轻与慢性神经源性炎症相关的症状。
3.一种治疗哺乳动物的神经源性炎症的方法，所述方法包括给予需要该治疗的哺乳动物治疗有效量的含有经修饰的梭菌毒素的组合物的步骤，所述经修饰的梭菌毒素包括阿片样肽结合结构域、梭菌毒素易位结构域和梭菌毒素酶促结构域，其中给予所述组合物可减少炎症诱导性前列腺素或谷氨酸的释放，由此减轻与慢性神经源性炎症相关的症状。
4.1-3的方法，其中所述经修饰的梭菌毒素包括如下的氨基端至羧基端线性单链多肽结构顺序：1)梭菌毒素酶促结构域、梭菌毒素易位结构域、阿片样肽结合结构域；2)梭菌毒素酶促结构域、阿片样肽结合结构域、梭菌毒素易位结构域；3)阿片样肽结合结构域、梭菌毒素易位结构域和梭菌毒素酶促结构域；4)阿片样肽结合结构域、梭菌毒素酶促结构域、梭菌毒素易位结构域；5)梭菌毒素易位结构域、梭菌毒素酶促结构域和阿片样肽结合结构域；或6)梭菌毒素易位结构域、阿片样肽结合结构域和梭菌毒素酶促结构域。
5.1-3的方法，其中所述阿片样肽结合结构域为脑啡肽、BAM22肽、内啡素、内啡肽、强啡肽、伤害感受肽或血啡肽。
6.5的方法，其中所述脑啡肽为Leu-脑啡肽、Met-脑啡肽、Met-脑啡肽MRGL或Met-脑啡肽MRF。
7.5的方法，其中所述脑啡肽包括SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：54或SEQ ID NO：55。
8.5的方法，其中所述BAM22肽为BAM22肽(1-12)、BAM22肽(6-22)、BAM22肽(8-22)或BAM22肽(1-22)。
9.5的方法，其中所述BAM22肽包括SEQ ID NO：56的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：57的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：58的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：59的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：60的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；或SEQ ID NO：61的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22。
10.5的方法，其中所述内啡素为内啡素-1或内啡素-2。
11.5的方法，其中所述内啡素包括SEQ ID NO：62或SEQ ID NO：63。
12.5的方法，其中所述内啡肽为内啡肽-α、新内啡肽-α、内啡肽-β、新内啡肽-β或内啡肽-γ。
13.5的方法，其中所述内啡肽包括SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：68或SEQ ID NO：69。
14.5的方法，其中所述强啡肽为强啡肽A、强啡肽B(leumorphin)或rimorphin。
15.5的方法，其中所述强啡肽包括SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：76、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：78、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：86、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：99或SEQ ID NO：100。
16.5的方法，其中所述伤害感受肽为伤害感受肽RK、伤害感受肽、神经肽1、神经肽2或神经肽3。
17.5的方法，其中所述伤害感受肽包括SEQ ID NO：101、SEQ IDNO：102、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：105、SEQID NO：106、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：108、SEQ ID NO：109或SEQ ID NO：110。
18.1-3的方法，其中所述梭菌毒素易位结构域为BoNT/A易位结构域、BoNT/B易位结构域、BoNT/C1易位结构域、BoNT/D易位结构域、BoNT/E易位结构域、BoNT/F易位结构域、BoNT/G易位结构域、TeNT易位结构域、BaNT易位结构域或BuNT易位结构域。
19.1-3的方法，其中所述梭菌毒素酶促结构域为BoNT/A酶促结构域、BoNT/B酶促结构域、BoNT/C1酶促结构域、BoNT/D酶促结构域、BoNT/E酶促结构域、BoNT/F酶促结构域、BoNT/G酶促结构域、TeNT酶促结构域、BaNT酶促结构域或BuNT酶促结构域。
20.1-3的方法，其中所述神经源性炎症与下列疾病或障碍相关：痤疮、胃酸倒流/胃灼热、阿尔茨海默氏症、阑尾炎、动脉炎、关节炎、哮喘、动脉硬化、自身免疫性疾病、龟头炎、睑缘炎、细支气管炎、支气管炎、粘液囊炎、癌症、心脏炎、乳糜泻、蜂窝组织炎、宫颈炎、胆管炎、胆囊炎、绒毛膜羊膜炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、肝硬化、结肠炎、结膜炎、膀胱炎、感冒、泪腺炎、痴呆症、皮炎、皮肌炎、肺气肿、脑炎、心内膜炎、子宫内膜炎、小肠炎、小肠结肠炎、上髁炎、附睾炎、筋膜炎、纤维组织炎、胃炎、肠胃炎、牙龈炎、肾小球肾炎、舌炎、心脏病、肝炎、化脓性汗腺炎、高血压、回肠炎、炎性神经病变、胰岛素抵抗、间质性膀胱炎、虹膜炎、缺血性心脏疾病、角膜炎、角膜结膜炎、喉炎、乳腺炎、乳突炎、脑膜炎、代谢综合征(X综合征)、偏头痛、脊髓炎、心肌炎、肌炎、肾炎、肥胖、脐炎、卵巢炎、睾丸炎、骨软骨炎、骨质减少、骨质疏松、骨炎、耳炎、胰腺炎、帕金森氏症、腮腺炎、盆腔炎症、心包炎、腹膜炎、咽炎、静脉炎、胸膜炎、肺炎、直肠炎、前列腺炎、牙髓炎、肾盂肾炎、门静脉炎、风湿热、鼻炎、输卵管炎、涎腺炎、鼻窦炎、结肠痉挛、口腔炎、滑膜炎、肌腱炎、肌腱末端病、腱鞘炎、血栓性静脉炎、扁桃体炎、膀胱三角区炎、肿瘤、尿道炎、葡萄膜炎、阴道炎、脉管炎或外阴炎。
21.1-3的方法，其中所述神经源性炎症与关节炎相关。
22.21的方法，其中所述关节炎为单关节型关节炎、少关节型关节炎或多关节型关节炎。
23.21的方法，其中所述关节炎为自身免疫性疾病或非自身免疫性疾病。
24.21的方法，其中所述关节炎为骨关节炎、类风湿性关节炎、幼年特发性关节炎、脓毒性关节炎、脊柱关节病变、痛风、假性痛风或Still氏病。
25.24的方法，其中所述脊柱关节病变为强直性脊椎炎、反应性关节炎(Reiter氏综合征)、银屑病关节炎、与炎性肠病相关的肠病型关节炎、Whipple氏病或Behcet氏病。
26.1-3的方法，其中所述神经源性炎症与自身免疫性疾病相关。
27.26的方法，其中所述自身免疫性疾病为全身性自身免疫性疾病或器官特异性自身免疫性疾病。
28.26的方法，其中所述自身免疫性疾病为急性播散性脑脊髓炎(ADEM)、Addison氏病、变态反应、抗磷脂抗体综合征(APS)、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、自身免疫性内耳疾病、大疱性类天疱疮、乳糜泻、南美锥虫病、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、1型糖尿病(IDDM)、子宫内膜异位症、肺出血肾炎综合症、Graves氏病、Guillain-Barré综合征(GBS)、Hashimoto甲状腺炎、化脓性汗腺炎、特发性血小板减少性紫癜、炎性肠病、间质性膀胱炎、狼疮(包括盘状红斑狼疮、药源性红斑狼疮、狼疮肾炎、新生儿狼疮、亚急性皮肤红斑性狼疮和全身性红斑狼疮)、硬斑病、多发性硬化症(MS)、重症肌无力、肌病、发作性睡病、神经性肌强直、寻常型天疱疮、恶性贫血、原发性胆汁性肝硬化、复发性播散性脑脊髓炎、风湿热、精神分裂症、硬皮病、氏综合征、腱鞘炎、脉管炎或白癜风。
29.1-3的方法，其中所述神经源性炎症与炎性肌病相关。
30.29的方法，其中所述炎性肌病为皮肌炎、内含体肌炎或多肌炎。
31.1-3的方法，其中所述神经源性炎症与脉管炎相关。
32.31的方法，其中所述脉管炎为Buerger氏疾病、脑脉管炎、Churg-Strauss动脉炎、冷球蛋白血症、原发性冷球蛋白血症性脉管炎、巨细胞性动脉炎、Golfer氏脉管炎、Henoch-Schonlein紫癜、超敏性脉管炎、川崎病、显微镜下多动脉炎/多血管炎、结节性多动脉炎、风湿性多肌痛(PMR)、类风湿性脉管炎、Takayasu动脉炎或Wegener氏肉芽肿病。
33.1-3的方法，其中所述神经源性炎症与皮肤病相关。
34.33的方法，其中所述皮肤病为皮炎、湿疹、淤积性皮炎、化脓性汗腺炎、银屑病、红斑痤疮或硬斑病。
35.34的方法，其中所述湿疹为特应性湿疹、接触性湿疹、干燥性湿疹、脂溢性皮炎、出汗不良、盘状湿疹、静脉湿疹、疱疹性皮炎、神经性皮炎或自体湿疹化。
36.34的方法，其中所述银屑病为斑块型银屑病、指甲银屑病、点滴状银屑病、头皮银屑病，逆向型银屑病、脓疱型银屑病或红斑型银屑病。
37.1-3的方法，其中所述神经源性炎症与胃肠疾病相关。
38.37的方法，其中所述胃肠疾病为易激性肠病或炎性肠病。
39.37的方法，其中所述炎性肠病为克罗恩病或溃疡性结肠炎。
40.一种治疗哺乳动物的神经源性炎症的方法，所述方法包括给予需要该治疗的哺乳动物治疗有效量的含有经修饰的梭菌毒素的组合物的步骤，所述梭菌毒素包括阿片样肽结合结构域、梭菌毒素易位结构域、梭菌毒素酶促结构域和外源性蛋白酶切割位点，其中给予所述组合物可减少炎症诱导分子的释放，由此减轻与慢性神经源性炎症有关的症状。
41.一种治疗哺乳动物的神经源性炎症的方法，所述方法包括给予需要该治疗的哺乳动物治疗有效量的含有经修饰的梭菌毒素的组合物的步骤，所述梭菌毒素包括阿片样肽结合结构域、梭菌毒素易位结构域、梭菌毒素酶促结构域和外源性蛋白酶切割位点，其中给予所述组合物可减少炎症诱导性神经肽的释放，由此减轻与慢性神经源性炎症相关的症状。
42.一种治疗哺乳动物的神经源性炎症的方法，所述方法包括给予需要该治疗的哺乳动物治疗有效量的含有经修饰的梭菌毒素的组合物的步骤，所述梭菌毒素包括阿片样肽结合结构域、梭菌毒素易位结构域、梭菌毒素酶促结构域和外源性蛋白酶切割位点，其中给予所述组合物可减少炎症诱导性前列腺素或谷氨酸的释放，由此减轻与慢性神经源性炎症相关的症状。
43.40-42的方法，其中所述经修饰的梭菌毒素包括如下的氨基端至羧基端线性单链多肽结构顺序：1)梭菌毒素酶促结构域、外源性蛋白酶切割位点、梭菌毒素易位结构域、阿片样肽结合结构域；2)梭菌毒素酶促结构域、外源性蛋白酶切割位点、阿片样肽结合结构域、梭菌毒素易位结构域；3)阿片样肽结合结构域、梭菌毒素易位结构域、外源性蛋白酶切割位点和梭菌毒素酶促结构域；4)阿片样肽结合结构域、梭菌毒素酶促结构域、外源性蛋白酶切割位点、梭菌毒素易位结构域；5)梭菌毒素易位结构域、外源性蛋白酶切割位点、梭菌毒素酶促结构域和阿片样肽结合结构域；或6)梭菌毒素易位结构域、外源性蛋白酶切割位点、阿片样肽结合结构域和梭菌毒素酶促结构域。
44.40-42的方法，其中所述阿片样肽结合结构域为脑啡肽、BAM22肽、内啡素、内啡肽、强啡肽、伤害感受肽或血啡肽。
45.44的方法，其中所述脑啡肽为Leu-脑啡肽、Met-脑啡肽、Met-脑啡肽MRGL或Met-脑啡肽MRF。
46.44的方法，其中所述脑啡肽包括SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：54或SEQ ID NO：55。
47.44的方法，其中所述BAM22肽为BAM22肽(1-12)、BAM22肽(6-22)、BAM22肽(8-22)或BAM22肽(1-22)。
48.44的方法，其中所述BAM22肽包括SEQ ID NO：56的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：57的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：58的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：59的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：60的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；或SEQ ID NO：61的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22。
49.44的方法，其中所述内啡素为内啡素-1或内啡素-2。
50.44的方法，其中所述内啡素包括SEQ ID NO：62或SEQ ID NO：63。
51.44的方法，其中所述内啡肽为内啡肽-α、新内啡肽-α、内啡肽-β、新内啡肽-β或内啡肽-γ。
52.44的方法，其中所述内啡肽包括SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：68或SEQ ID NO：69。
53.44的方法，其中所述强啡肽为强啡肽A、强啡肽B(leumorphin)或rimorphin。
54.44的方法，其中所述强啡肽包括SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：76、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：78、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：86、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：99或SEQ ID NO：100。
55.44的方法，其中所述伤害感受肽为伤害感受肽RK、伤害感受肽、神经肽1、神经肽2或神经肽3。
56.44的方法，其中所述伤害感受肽包括SEQ ID NO：101、SEQID NO：102、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：106、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：108、SEQ ID NO：109或SEQ ID NO：110。
57.40-42的方法，其中所述梭菌毒素易位结构域为BoNT/A易位结构域、BoNT/B易位结构域、BoNT/C1易位结构域、BoNT/D易位结构域、BoNT/E易位结构域、BoNT/F易位结构域、BoNT/G易位结构域、TeNT易位结构域、BaNT易位结构域或BuNT易位结构域。
58.40-42的方法，其中所述梭菌毒素酶促结构域为BoNT/A酶促结构域、BoNT/B酶促结构域、BoNT/C1酶促结构域、BoNT/D酶促结构域、BoNT/E酶促结构域、BoNT/F酶促结构域、BoNT/G酶促结构域、TeNT酶促结构域、BaNT酶促结构域或BuNT酶促结构域。
59.40-42的方法，其中所述外源性蛋白酶切割位点为植物木瓜蛋白酶切割位点、昆虫木瓜蛋白酶切割位点、甲壳类木瓜蛋白酶切割位点、肠激酶切割位点、人类鼻病毒3C蛋白酶切割位点、人类肠病毒3C蛋白酶切割位点、烟草蚀刻病毒蛋白酶切割位点、烟草叶脉斑点病毒蛋白酶切割位点、枯草杆菌蛋白酶切割位点、羟胺切割位点或半胱天冬酶3切割位点。
60.40-42的方法，其中所述神经源性炎症与下列的疾病或障碍相关：痤疮、胃酸倒流/胃灼热、阿尔茨海默氏症、阑尾炎、动脉炎、关节炎、哮喘、动脉硬化、自身免疫性疾病、龟头炎、睑缘炎、细支气管炎、支气管炎、粘液囊炎、癌症、心脏炎、乳糜泻、蜂窝组织炎、宫颈炎、胆管炎、胆囊炎、绒毛膜羊膜炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、肝硬化、结肠炎、结膜炎、膀胱炎、感冒、泪腺炎、痴呆症、皮炎、皮肌炎、肺气肿、脑炎、心内膜炎、子宫内膜炎、小肠炎、小肠结肠炎、上髁炎、附睾炎、筋膜炎、纤维组织炎、胃炎、肠胃炎、牙龈炎、肾小球肾炎、舌炎、心脏病、肝炎、化脓性汗腺炎、高血压、回肠炎、炎性神经病变、胰岛素抵抗、间质性膀胱炎、虹膜炎、缺血性心脏疾病、角膜炎、角膜结膜炎、喉炎、乳腺炎、乳突炎、脑膜炎、代谢综合征(X综合征)、偏头痛、脊髓炎、心肌炎、肌炎、肾炎、肥胖、脐炎、卵巢炎、睾丸炎、骨软骨炎、骨质减少、骨质疏松、骨炎、耳炎、胰腺炎、帕金森氏症、腮腺炎、盆腔炎症、心包炎、腹膜炎、咽炎、静脉炎、胸膜炎、肺炎、直肠炎、前列腺炎、牙髓炎、肾盂肾炎、门静脉炎、风湿热、鼻炎、输卵管炎、涎腺炎、鼻窦炎、结肠痉挛、口腔炎、滑膜炎、肌腱炎、肌腱末端病、腱鞘炎、血栓性静脉炎、扁桃体炎、膀胱三角区炎、肿瘤、尿道炎、葡萄膜炎、阴道炎、脉管炎或外阴炎。
61.40-42的方法，其中所述神经源性炎症与关节炎相关。
62.61的方法，其中所述关节炎为单关节型关节炎、少关节型关节炎或多关节型关节炎。
63.61的方法，其中所述关节炎为自身免疫性疾病或非自身免疫性疾病。
64.61的方法，其中所述关节炎为骨关节炎、类风湿性关节炎、幼年特发性关节炎、脓毒性关节炎、脊柱关节病变、痛风、假性痛风或Still氏病。
65.64的方法，其中所述脊柱关节病变为强直性脊椎炎、反应性关节炎(Reiter氏综合征)、银屑病关节炎、与炎性肠病相关的肠病型关节炎、Whipple氏病或Behcet氏病。
66.40-42的方法，其中所述神经源性炎症与自身免疫性疾病相关。
67.66的方法，其中所述自身免疫性疾病为全身性自身免疫性疾病或器官特异性自身免疫性疾病。
68.67的方法，其中所述自身免疫性疾病为急性播散性脑脊髓炎(ADEM)、Addison氏病、变态反应、抗磷脂抗体综合征(APS)、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、自身免疫性内耳疾病、大疱性类天疱疮、乳糜泻、南美锥虫病、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、1型糖尿病(IDDM)、子宫内膜异位症、肺出血肾炎综合症、Graves氏病、Guillain-Barré综合征(GBS)、Hashimoto甲状腺炎、化脓性汗腺炎、特发性血小板减少性紫癜、炎性肠病、间质性膀胱炎、狼疮(包括盘状红斑狼疮、药源性红斑狼疮、狼疮肾炎、新生儿狼疮、亚急性皮肤红斑性狼疮和全身性红斑狼疮)、硬斑病、多发性硬化症(MS)、重症肌无力、肌病、发作性睡病、神经性肌强直、寻常型天疱疮、恶性贫血、原发性胆汁性肝硬化、复发性播散性脑脊髓炎、风湿热、精神分裂症、硬皮病、氏综合征、腱鞘炎、脉管炎或白癜风。
69.40-42的方法，其中所述神经源性炎症与炎性肌病相关。
70.69的方法，其中所述炎性肌病为皮肌炎、内含体肌炎或多肌炎。
71.40-42的方法，其中所述神经源性炎症与脉管炎相关。
72.71的方法，其中所述脉管炎为Buerger氏疾病、脑脉管炎、Churg-Strauss动脉炎、冷球蛋白血症、原发性冷球蛋白血症性脉管炎、巨细胞性动脉炎、Golfer氏脉管炎、Henoch-Schonlein紫癜、超敏性脉管炎、川崎病、显微镜下多动脉炎/多血管炎、结节性多动脉炎、风湿性多肌痛(PMR)、类风湿性脉管炎、Takayasu动脉炎或Wegener氏肉芽肿病。
73.40-42的方法，其中所述神经源性炎症与皮肤病相关。
74.73的方法，其中所述皮肤病为皮炎、湿疹、淤积性皮炎、化脓性汗腺炎、银屑病、红斑痤疮或硬斑病。
75.74的方法，其中所述湿疹为变应性湿疹、接触性湿疹、干燥性湿疹、脂溢性皮炎、出汗不良、盘状湿疹、静脉湿疹、疱疹性皮炎、神经性皮炎或自体湿疹化。
76.74的方法，其中所述银屑病为斑块型银屑病、指甲银屑病、点滴状银屑病、头皮银屑病，逆向型银屑病、脓疱型银屑病或红斑型银屑病。
77.40-42的方法，其中所述神经源性炎症与胃肠疾病相关。
78.77的方法，其中所述胃肠疾病为易激性肠病或炎性肠病。
79.77的方法，其中所述炎性肠病为克罗恩病或溃疡性结肠炎。
80.经修饰的梭菌毒素用于制备治疗需要该治疗的哺乳动物的慢性神经源性炎症的药物的用途，其中所述经修饰的梭菌毒素包括阿片样肽结合结构域、梭菌毒素易位结构域和梭菌毒素酶促结构域，并且其中给予所述哺乳动物治疗有效量的所述药物能够减少炎症诱导分子的释放，由此减轻与慢性神经源性炎症相关的症状。
81.经修饰的梭菌毒素用于制备治疗需要该治疗的哺乳动物的慢性神经源性炎症的药物的用途，其中所述经修饰的梭菌毒素包括阿片样肽结合结构域、梭菌毒素易位结构域和梭菌毒素酶促结构域，并且其中给予所述哺乳动物治疗有效量的所述药物能够减少炎症诱导性神经肽的释放，由此减轻与慢性神经源性炎症相关的症状。
82.经修饰的梭菌毒素用于制备治疗需要该治疗的哺乳动物的慢性神经源性炎症的药物的用途，其中所述经修饰的梭菌毒素包括阿片样肽结合结构域、梭菌毒素易位结构域和梭菌毒素酶促结构域，并且其中给予所述哺乳动物治疗有效量的所述药物能够减少炎症诱导性前列腺素或谷氨酸的释放，由此减轻与慢性神经源性炎症相关的症状。
83.经修饰的梭菌毒素用于制备治疗需要该治疗的哺乳动物的慢性神经源性炎症的药物的用途，其中所述经修饰的梭菌毒素包括阿片样肽结合结构域、梭菌毒素易位结构域和梭菌毒素酶促结构域和外源性蛋白酶切割位点，并且其中给予所述哺乳动物治疗有效量的所述药物能够减少炎症诱导分子的释放，由此减轻与慢性神经源性炎症相关的症状。
84.经修饰的梭菌毒素用于制备治疗需要该治疗的哺乳动物的慢性神经源性炎症的药物的用途，其中所述经修饰的梭菌毒素包括阿片样肽结合结构域、梭菌毒素易位结构域和梭菌毒素酶促结构域和外源性蛋白酶切割位点，并且其中给予所述哺乳动物治疗有效量的所述药物能够减少炎症诱导性神经肽的释放，由此减轻与慢性神经源性炎症相关的症状。
85.经修饰的梭菌毒素用于制备治疗需要该治疗的哺乳动物的慢性神经源性炎症的药物的用途，其中所述经修饰的梭菌毒素包括阿片样肽结合结构域、梭菌毒素易位结构域和梭菌毒素酶促结构域和外源性蛋白酶切割位点，并且其中给予所述哺乳动物治疗有效量的所述药物能够减少炎症诱导性前列腺素或谷氨酸的释放，由此减轻与慢性神经源性炎症相关的症状。
86.经修饰的梭菌毒素用于治疗需要该治疗的哺乳动物的慢性神经源性炎症的用途，所述用途包括给予所述哺乳动物治疗有效量的经修饰的梭菌毒素的步骤，其中所述经修饰的梭菌毒素包括阿片样肽结合结构域、梭菌毒素易位结构域和梭菌毒素酶促结构域，并且其中给予所述经修饰的梭菌毒素能够减少炎症诱导分子的释放，由此减轻与慢性神经源性炎症相关的症状。
87.经修饰的梭菌毒素用于治疗需要该治疗的哺乳动物的慢性神经源性炎症的用途，所述用途包括给予所述哺乳动物治疗有效量的经修饰的梭菌毒素的步骤，其中所述经修饰的梭菌毒素包括阿片样肽结合结构域、梭菌毒素易位结构域和梭菌毒素酶促结构域，并且其中给予所述经修饰的梭菌毒素能够减少炎症诱导性神经肽的释放，由此减轻与慢性神经源性炎症相关的症状。
88.经修饰的梭菌毒素用于治疗需要该治疗的哺乳动物的慢性神经源性炎症的用途，所述用途包括给予所述哺乳动物治疗有效量的经修饰的梭菌毒素的步骤，其中所述经修饰的梭菌毒素包括阿片样肽结合结构域、梭菌毒素易位结构域和梭菌毒素酶促结构域，并且其中给予所述经修饰的梭菌毒素能够减少炎症诱导性前列腺素或谷氨酸的释放，由此减轻与慢性神经源性炎症相关的症状。
89.经修饰的梭菌毒素用于治疗需要该治疗的哺乳动物的慢性神经源性炎症的用途，所述用途包括给予所述哺乳动物治疗有效量的经修饰的梭菌毒素的步骤，其中所述经修饰的梭菌毒素包括阿片样肽结合结构域、梭菌毒素易位结构域、梭菌毒素酶促结构域和外源性蛋白酶切割位点，并且其中给予所述经修饰的梭菌毒素能够减少炎症诱导分子的释放，由此减轻与慢性神经源性炎症相关的症状。
90.经修饰的梭菌毒素用于治疗需要该治疗的哺乳动物的慢性神经源性炎症的用途，所述用途包括给予所述哺乳动物治疗有效量的经修饰的梭菌毒素的步骤，其中所述经修饰的梭菌毒素包括阿片样肽结合结构域、梭菌毒素易位结构域、梭菌毒素酶促结构域和外源性蛋白酶切割位点，并且其中给予所述经修饰的梭菌毒素能够减少炎症诱导性神经肽的释放，由此减轻与慢性神经源性炎症相关的症状。
91.经修饰的梭菌毒素用于治疗需要该治疗的哺乳动物的慢性神经源性炎症的用途，所述用途包括给予所述哺乳动物治疗有效量的经修饰的梭菌毒素的步骤，其中所述经修饰的梭菌毒素包括阿片样肽结合结构域、梭菌毒素易位结构域、梭菌毒素酶促结构域和外源性蛋白酶切割位点，并且其中给予所述经修饰的梭菌毒素能够减少炎症诱导性前列腺素或谷氨酸的释放，由此减轻与慢性神经源性炎症相关的症状。
92.80-91的方法，其中所述经修饰的梭菌毒素包括如下的氨基端至羧基端线性单链多肽结构顺序：1)梭菌毒素酶促结构域、外源性蛋白酶切割位点、梭菌毒素易位结构域、阿片样肽结合结构域；2)梭菌毒素酶促结构域、外源性蛋白酶切割位点、阿片样肽结合结构域、梭菌毒素易位结构域；3)阿片样肽结合结构域、梭菌毒素易位结构域、外源性蛋白酶切割位点和梭菌毒素酶促结构域；4)阿片样肽结合结构域、梭菌毒素酶促结构域、外源性蛋白酶切割位点、梭菌毒素易位结构域；5)梭菌毒素易位结构域、外源性蛋白酶切割位点、梭菌毒素酶促结构域和阿片样肽结合结构域；或6)梭菌毒素易位结构域、外源性蛋白酶切割位点、阿片样肽结合结构域和梭菌毒素酶促结构域。
93.80-91的方法，其中所述阿片样肽结合结构域为脑啡肽、BAM22肽、内啡素、内啡肽、强啡肽、伤害感受肽或血啡肽。
94.93的方法，其中所述脑啡肽为Leu-脑啡肽、Met-脑啡肽、Met-脑啡肽MRGL或Met-脑啡肽MRF。
95.93的方法，其中所述脑啡肽包括SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：54或SEQ ID NO：55。
96.93的方法，其中所述BAM22肽为BAM22肽(1-12)、BAM22肽(6-22)、BAM22肽(8-22)或BAM22肽(1-22)。
97.93的方法，其中所述BAM22肽包括SEQ ID NO：56的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：57的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：58的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：59的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；SEQ ID NO：60的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22；或SEQ ID NO：61的氨基酸1-12、氨基酸6-22、氨基酸8-22或氨基酸1-22。
98.93的方法，其中所述内啡素为内啡素-1或内啡素-2。
99.93的方法，其中所述内啡素包括SEQ ID NO：62或SEQ ID NO：63。
100.93的方法，其中所述内啡肽为内啡肽-α、新内啡肽-α、内啡肽-β、新内啡肽-β或内啡肽-γ。
101.93的方法，其中所述内啡肽包括SEQ ID NO：64、SEQ IDNO：65、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：68或SEQ IDNO：69。
102.93的方法，其中所述强啡肽为强啡肽A、强啡肽B(leumorphin)或rimorphin。
103.93的方法，其中所述强啡肽包括SEQ ID NO：70、SEQ IDNO：71、SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：74、SEQ IDNO：75、SEQ ID NO：76、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：78、SEQ IDNO：79、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ IDNO：83、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：86、SEQ IDNO：87、SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：90、SEQ IDNO：91、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：94、SEQ IDNO：95、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：98、SEQ IDNO：99或SEQ ID NO：100。
104.93的方法，其中所述伤害感受肽为伤害感受肽RK、伤害感受肽、神经肽1、神经肽2或神经肽3。
105.93的方法，其中所述伤害感受肽包括SEQ ID NO：101、SEQID NO：102、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：106、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：108、SEQ ID NO：109或SEQ ID NO：110。
106.93的方法，其中所述梭菌毒素易位结构域为BoNT/A易位结构域、BoNT/B易位结构域、BoNT/C1易位结构域、BoNT/D易位结构域、BoNT/E易位结构域、BoNT/F易位结构域、BoNT/G易位结构域、TeNT易位结构域、BaNT易位结构域或BuNT易位结构域。
107.93的方法，其中所述梭菌毒素酶促结构域为BoNT/A酶促结构域、BoNT/B酶促结构域、BoNT/C1酶促结构域、BoNT/D酶促结构域、BoNT/E酶促结构域、BoNT/F酶促结构域、BoNT/G酶促结构域、TeNT酶促结构域、BaNT酶促结构域或BuNT酶促结构域。
108.83-85和89-91的方法，其中所述外源性蛋白酶切割位点为植物木瓜蛋白酶切割位点、昆虫木瓜蛋白酶切割位点、甲壳类木瓜蛋白酶切割位点、肠激酶切割位点、人类鼻病毒3C蛋白酶切割位点、人类肠病毒3C蛋白酶切割位点、烟草蚀刻病毒蛋白酶切割位点、烟草叶脉斑点病毒蛋白酶切割位点、枯草杆菌蛋白酶切割位点、羟胺切割位点或半胱天冬酶3切割位点。
109.80-91的方法，其中所述神经源性炎症与下列的疾病或障碍相关：痤疮、胃酸倒流/胃灼热、阿尔茨海默氏症、阑尾炎、动脉炎、关节炎、哮喘、动脉硬化、自身免疫性疾病、龟头炎、睑缘炎、细支气管炎、支气管炎、粘液囊炎、癌症、心脏炎、乳糜泻、蜂窝组织炎、宫颈炎、胆管炎、胆囊炎、绒毛膜羊膜炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、肝硬化、结肠炎、结膜炎、膀胱炎、感冒、泪腺炎、痴呆症、皮炎、皮肌炎、肺气肿、脑炎、心内膜炎、子宫内膜炎、小肠炎、小肠结肠炎、上髁炎、附睾炎、筋膜炎、纤维组织炎、胃炎、肠胃炎、牙龈炎、肾小球肾炎、舌炎、心脏病、肝炎、化脓性汗腺炎、高血压、回肠炎、炎性神经病变、胰岛素抵抗、间质性膀胱炎、虹膜炎、缺血性心脏疾病、角膜炎、角膜结膜炎、喉炎、乳腺炎、乳突炎、脑膜炎、代谢综合征(X综合征)、偏头痛、脊髓炎、心肌炎、肌炎、肾炎、肥胖、脐炎、卵巢炎、睾丸炎、骨软骨炎、骨质减少、骨质疏松、骨炎、耳炎、胰腺炎、帕金森氏症、腮腺炎、盆腔炎症、心包炎、腹膜炎、咽炎、静脉炎、胸膜炎、肺炎、直肠炎、前列腺炎、牙髓炎、肾盂肾炎、门静脉炎、风湿热、鼻炎、输卵管炎、涎腺炎、鼻窦炎、结肠痉挛、口腔炎、滑膜炎、肌腱炎、肌腱末端病、腱鞘炎、血栓性静脉炎、扁桃体炎、膀胱三角区炎、肿瘤、尿道炎、葡萄膜炎、阴道炎、脉管炎或外阴炎。
110.80-91的方法，其中所述神经源性炎症与关节炎相关。
111.110的方法，其中所述关节炎为单关节型关节炎、少关节型关节炎或多关节型关节炎。
112.110的方法，其中所述关节炎为自身免疫性疾病或非自身免疫性疾病。
113.110的方法，其中所述关节炎为骨关节炎、类风湿性关节炎、幼年特发性关节炎、脓毒性关节炎、脊柱关节病变、痛风、假性痛风或Still氏病。
114.113的方法，其中所述脊柱关节病变为强直性脊椎炎、反应性关节炎(Reiter氏综合征)、银屑病关节炎、由于炎性肠病引起的肠病型关节炎、Whipple氏病或Behcet氏病。
115.80-91的方法，其中所述神经源性炎症与自身免疫性疾病相关。
116.115的方法，其中所述自身免疫性疾病为全身性自身免疫性疾病或器官特异性自身免疫性疾病。
117.115的方法，其中所述自身免疫性疾病为急性播散性脑脊髓炎(ADEM)、Addison氏病、变态反应、抗磷脂抗体综合征(APS)、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、自身免疫性内耳疾病、大疱性类天疱疮、腹腔病、南美锥虫病、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、1型糖尿病(IDDM)、子宫内膜异位症、肺出血肾炎综合症、Graves氏病、Guillain-Barré综合征(GBS)、Hashimoto甲状腺炎、化脓性汗腺炎、特发性血小板减少性紫癜、炎性肠病、间质性膀胱炎、狼疮(包括盘状红斑狼疮、药源性红斑狼疮、狼疮肾炎、亚急性皮肤红斑性狼疮、新生儿狼疮和全身性红斑狼疮)、硬斑病、多发性硬化症(MS)、重症肌无力、肌病、发作性睡病、神经性肌强直、寻常型天疱疮、恶性贫血、原发性胆汁性肝硬化、复发性播散性脑脊髓炎、风湿热、精神分裂症、硬皮病、
Figure GPA00001159614001041
氏综合征、腱鞘炎、脉管炎或白癜风。
118.80-91的方法，其中所述神经源性炎症与炎性肌病相关。
119.118的方法，其中所述炎性肌病为皮肌炎、内含体肌炎或多肌炎。
120.80-91的方法，其中所述神经源性炎症与脉管炎相关。
121.120的方法，其中所述脉管炎为Buerger氏疾病、脑脉管炎、Churg-Strauss动脉炎、冷球蛋白血症、原发性冷球蛋白血症性脉管炎、巨细胞性动脉炎、Golfer氏脉管炎、Henoch-Schonlein紫癜、超敏性脉管炎、川崎病、显微镜下多动脉炎/多血管炎、结节性多动脉炎、风湿性多肌痛(PMR)、类风湿性脉管炎、Takayasu动脉炎或Wegener氏肉芽肿病。
122.80-91的方法，其中所述神经源性炎症与皮肤病相关。
123.122的方法，其中所述皮肤病为皮炎、湿疹、淤积性皮炎、化脓性汗腺炎、银屑病、红斑痤疮或硬斑病。
124.122的方法，其中所述湿疹为特应性湿疹、接触性湿疹、干燥性湿疹、脂溢性皮炎、出汗不良、盘状湿疹、静脉湿疹、疱疹性皮炎、神经性皮炎或自体湿疹化。
125.122的方法，其中所述银屑病为斑块型银屑病、指甲银屑病、点滴状银屑病、头皮银屑病，逆向型银屑病、脓疱型银屑病或红斑型银屑病。
126.80-91的方法，其中所述神经源性炎症与胃肠疾病相关。
127.126的方法，其中所述胃肠疾病为易激性肠病或炎性肠病。
128.126的方法，其中所述炎性肠病为克罗恩病或溃疡性结肠炎。
实施例
慢性神经源性炎症的治疗
提供下述实施例以描述本发明的具体实施方案，但并不意在以任何方式限制本发明的范围。
一位62岁的女性患者被诊断为类风湿性关节炎，主诉关节僵硬和肿胀。医生确定其关节僵硬和肿胀是由于慢性神经源性炎症所引起。通过使用含有本申请说明书公开的经修饰的梭菌毒素的组合物，在受损区域附近进行局部给药来治疗该患者。监测患者的状况，在治疗后约1-3天后患者表现出关节僵硬和肿胀程度的减轻。在一个月和三个月后进行体检时，该患者表示其在接受治疗的区域仍具有减轻程度的关节僵硬和肿胀。这种慢性神经源性炎症症状的减轻表明使用含有经修饰的梭菌毒素的组合物进行治疗是成功的。通过使用本申请说明书公开的经修饰的梭菌毒素进行类似形式的局部给药可以治疗患有与下列疾病相关的慢性神经源性炎症的患者，所述疾病为：任何的单关节型关节炎、少关节型关节炎或多关节型关节炎，例如骨关节炎、幼年特发性关节炎、脓毒性关节炎、脊柱关节病变(包括强直性脊椎炎、反应性关节炎(Reiter氏综合征)、银屑病关节炎、与炎性肠病相关的肠病型关节炎、Whipple氏病或Behcet氏病)、滑膜炎、痛风、假性痛风或Still氏病，以及粘液囊炎、风湿热或腱鞘炎。此外，本申请公开的经修饰的梭菌毒素也可采用全身性给药以治疗慢性神经源性炎症。
一位58岁的男性患者被诊断为慢性阻塞性肺病(COPD)，主诉呼吸困难。医生确定其呼吸困难是由于慢性神经源性炎症所引起。使用含有本申请说明书公开的经修饰的梭菌毒素的组合物，通过静脉内给药的全身性给药方式来治疗该患者。监测患者的状况，在治疗后约1-3天后患者表现出呼吸能力的改善。在一个月和三个月后进行体检时，该患者表示其仍具有改善的呼吸状况。这种慢性神经源性炎症症状的减轻表明使用含有经修饰的梭菌毒素的组合物进行治疗是成功的。通过使用本申请说明书公开的经修饰的梭菌毒素进行类似形式的全身给药可以治疗患有与下列疾病相关的慢性神经源性炎症的患者，所述疾病为：哮喘、细支气管炎、支气管炎、肺气肿、喉炎、咽炎、胸膜炎、肺炎、鼻炎、窦炎或其他任何形式的慢性呼吸系统疾病。此外，本申请公开的经修饰的梭菌毒素也可采用吸入给药以治疗慢性神经源性炎症。
一位67岁的男性患者被诊断为皮肌炎，主诉肌肉酸痛。医生确定其肌肉酸痛是由于慢性神经源性炎症所引起。通过使用含有本申请说明书公开的经修饰的梭菌毒素的组合物，在受损区域附近进行局部给药来治疗该患者。监测患者的状况，在治疗后约1-3天后患者表现出酸痛程度的减轻。在一个月和三个月后进行体检时，该患者表示其仍具有肌肉运动能力的改善和减轻的酸痛。这种慢性神经源性炎症症状的减轻表明使用含有经修饰的梭菌毒素的组合物进行治疗是成功的。通过使用本申请说明书公开的经修饰的梭菌毒素进行类似形式的局部给药可以用于治疗患有与下列疾病相关的慢性神经源性炎症的患者，所述疾病为：内含体肌炎、重症肌无力、多肌炎或任何其他形式的炎性肌肉病变，以及筋膜炎、纤维组织炎、肌炎、神经性肌强直、肌腱末端病或肌腱炎。此外，本申请公开的经修饰的梭菌毒素也可采用全身性给药以治疗慢性神经源性炎症。
一位73岁的女性患者被诊断为Churg-Strauss动脉炎，主诉呼吸时气喘。医生确定其气喘是由于慢性神经源性炎症所引起。使用含有本申请说明书公开的经修饰的梭菌毒素的组合物，通过静脉内给药的全身性给药方式来治疗该患者。监测患者的状况，在治疗后约1-3天后患者表现出不再气喘。在一个月和三个月后进行体检时，该患者表示其呼吸时仍不会气喘。这种慢性神经源性炎症症状的减轻表明使用含有经修饰的梭菌毒素的组合物进行治疗是成功的。通过使用本申请说明书公开的经修饰的梭菌毒素进行类似形式的全身给药可以治疗患有与任何脉管炎相关的慢性神经源性炎症的患者，所述脉管炎例如Buerger氏病、脑脉管炎、冷球蛋白血症、原发性冷球蛋白血症性脉管炎、巨细胞性动脉炎、Golfer氏脉管炎、Henoch-Schonlein紫癜、超敏性脉管炎、川崎病、显微镜下多动脉炎/多血管炎、结节性多动脉炎、风湿性多肌痛(PMR)、类风湿性脉管炎、Takayasu动脉炎或Wegener氏肉芽肿病，以及动脉炎、心脏炎、心内膜炎、心脏病、高血压、缺血性心脏病、心肌炎、心包炎、静脉炎、门静脉炎或血栓静脉炎。
一位37岁的男性患者被诊断为红斑痤疮，主诉皮肤发红。医生确定其皮肤发红是由于慢性神经源性炎症所引起。通过使用含有本申请说明书公开的经修饰的梭菌毒素的组合物，在受损区域附近进行局部给药来治疗该患者。监测患者的状况，在治疗后约1-3天后患者表现出皮肤发红程度的减轻。在一个月和三个月后进行体检时，该患者表示其仍具有改善的肤色状况和减轻的皮肤发红程度。这种慢性神经源性炎症症状的减轻表明使用含有经修饰的梭菌毒素的组合物进行治疗是成功的。通过使用本申请说明书公开的经修饰的梭菌毒素进行类似形式的局部给药可以治疗患有与下列疾病相关的慢性神经源性炎症的患者，所述疾病为：痤疮、子宫颈炎、皮炎、湿疹(包括特应性湿疹、接触性湿疹、干燥性湿疹、脂溢性皮炎、出汗不良、盘状湿疹、静脉湿疹、疱疹性皮炎、神经性皮炎或自体湿疹化)、子宫内膜炎、牙龈炎、舌炎、化脓性汗腺炎、角膜炎、角膜结膜炎、乳腺炎、银屑病(包括斑块型银屑病、指甲银屑病、点滴状银屑病、头皮银屑病，逆向型银屑病、脓疱型银屑病或红斑型银屑病)、硬皮病、淤积性皮炎、口腔炎、扁桃腺炎、阴道炎、白癜风或外阴炎。此外，本申请公开的经修饰的梭菌毒素也可采用全身性给药以治疗慢性神经源性炎症。
一位33岁的女性患者被诊断为克罗恩病，主诉腹痛和腹泻。医生确定其腹痛和腹泻是由于慢性神经源性炎症所引起。使用含有本申请说明书公开的经修饰的梭菌毒素的组合物，通过静脉内给药的全身性给药方式来治疗该患者。监测患者的状况，在治疗后约1-3天后患者表现出腹痛程度减轻并且不再腹泻。在一个月和三个月后进行体检时，该患者表示其仍具有减轻的腹痛和腹泻程度。这种慢性神经源性炎症症状的减轻表明使用含有经修饰的梭菌毒素的组合物进行治疗是成功的。通过使用本申请说明书公开的经修饰的梭菌毒素进行类似形式的全身给药可以治疗患有与以下疾病相关的慢性神经源性炎症的患者：任何炎性肠病例如溃疡性结肠炎(包括溃疡性直肠炎、左侧结肠炎、全结肠炎和爆发性结肠炎)、任何易激性肠病，以及结肠炎、小肠炎、小肠结肠炎、胃炎、肠胃炎、代谢综合征(X综合征)、结肠痉挛或任何其他胃肠疾病。
一位46岁的男性患者被诊断为全身性红斑狼疮，主诉发烧、关节痛和疲劳。医生确定这些症状是由于慢性神经源性炎症所引起。使用含有本申请说明书公开的经修饰的梭菌毒素的组合物，通过静脉内给药的全身性给药方式来治疗该患者。监测患者的状况，在治疗后约1-3天后患者表现出健康状况的改善，不再发烧、关节痛有所减轻并且不再像以前那样疲劳。在一个月和三个月后进行体检时，该患者表示其仍具有减轻的关节痛并且不再发烧和疲劳。这种慢性神经源性炎症症状的减轻表明使用含有经修饰的梭菌毒素的组合物进行治疗是成功的。通过使用本申请说明书公开的经修饰的梭菌毒素进行类似形式的全身给药可以治疗患有与任何自身免疫性疾病相关的慢性神经源性炎症的患者，所述自身免疫性疾病包括但不限于：抗磷脂抗体综合征(APS)、大疱性类天疱疮、南美锥虫病、盘状红斑狼疮、药源性红斑狼疮、肺出血肾炎综合症、Guillain-Barre综合征、特发性血小板减少性紫癜、重症肌无力、新生儿狼疮、恶性贫血、风湿性多肌痛、风湿性关节炎、硬皮病、
Figure GPA00001159614001081
综合征、亚急性皮肤红斑性狼疮、Wegener氏肉芽肿病。
一位58岁的男性患者被诊断为Hashimoto甲状腺炎，主诉抑郁、畏寒、体重增加、健忘和便秘。医生确定这些症状是由于慢性神经源性炎症所引起。通过使用含有本申请说明书公开的经修饰的梭菌毒素的组合物，在受损区域附近进行局部给药来治疗该患者。监测患者的状况，在治疗后约1-3天后患者表现出所有上述主诉症状的减轻。在一个月和三个月后进行体检时，该患者表示其仍未重新出现抑郁、畏寒、体重增加、健忘和便秘的症状。这种慢性神经源性炎症症状的减轻表明使用含有经修饰的梭菌毒素的组合物进行治疗是成功的。通过使用本申请说明书公开的经修饰的梭菌毒素进行类似形式的局部给药可以治疗患有与下列任何局部自身免疫性疾病相关的慢性神经源性炎症的患者，所述局部自身免疫性疾病包括但不限于：急性播散性脑脊髓炎(ADEM)、Addison氏病、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎(包括原发性胆汁性肝硬化)、自身免疫性内耳疾病、乳糜泻、克罗恩病、1型糖尿病、子宫内膜异位症、巨细胞性动脉炎、Graves氏病、间质性膀胱炎、狼疮肾炎、多发性硬化症、硬斑病、寻常型天疱疮、复发性播散性脑脊髓炎、硬化性胆管炎、溃疡性结肠炎或白癜风。此外，本申请公开的经修饰的梭菌毒素也可采用全身性给药以治疗慢性神经源性炎症。
一位59岁的男性患者被诊断为类风湿性关节炎，主诉关节僵硬和肿胀。医生确定其关节僵硬和肿胀是由于慢性神经源性炎症所引起。通过使用含有本申请说明书公开的经修饰的梭菌毒素的组合物，在受损区域附近进行局部给药来治疗该患者。监测患者的状况，在治疗后约1-3天后患者表现出关节僵硬和肿胀程度的减轻。在一个月和三个月后进行体检时，该患者表示其在接受治疗的区域仍具有减轻程度的关节僵硬和肿胀。这种慢性神经源性炎症症状的减轻表明使用含有经修饰的梭菌毒素的组合物进行治疗是成功的。通过使用本申请说明书公开的经修饰的梭菌毒素进行类似形式的局部给药可以治疗患有与下列疾病相关的慢性神经源性炎症的患者，所述疾病为：任何的单关节炎、少关节炎或多关节炎，例如骨关节炎、幼年特发性关节炎、脓毒性关节炎、脊柱关节病变(包括强直性脊椎炎、反应性关节炎(Reiter氏综合征)、银屑病关节炎、与炎性肠病相关的肠病型关节炎、Whipple氏病或Behcet氏病)、滑膜炎、痛风、假性痛风或Still氏病，以及粘液囊炎、风湿热或腱鞘炎。此外，本申请公开的经修饰的梭菌毒素也可采用全身性给药以治疗慢性神经源性炎症。
本发明的上述描述是出于说明和解释目的的示例性描述。对于本领域技术人员显而易见的是，在不背离本发明精神和范围的前提下可以进行改变和修饰。本文所引用的所有文献均通过援引的方式纳入本文。后附的权利要求应被解释为涵盖所有的这类改变和修饰。
序列表
<110>阿勒根公司
 
<120>使用经修饰的梭菌毒素治疗慢性神经源性炎症的方法
 
<130>18447(BOT)
 
<150>US 60/982,021
<151>2007-10-23
 
<150>US 61/076,228
<151>2008-06-27
 
<150>US 61/090,692
<151>2008-09-10
 
<160>125
 
<170>FastSEQ for Windows Version 4.0
 
<210>1
<211>1296
<212>PRT
<213>肉毒梭菌毒素血清型A
 
<220>
<221>结构域
<222>(1)...(448)
<223>含有酶促结构域的轻链
 
<221>结构域
<222>(449)...(860)
<223>含有易位结构域的重链的氨基端一侧
 
<221>结构域
<222>(861)...(1296)
<223>含有结合结构域的重链的羧基端一侧
 
<400>1
Met Pro Phe Val Asn Lys Gln Phe Asn Tyr Lys Asp Pro Val Asn Gly
 1               5                  10                  15
Val Asp Ile Ala Tyr Ile Lys Ile Pro Asn Ala Gly Gln Met Gln Pro
            20                  25                  30
Val Lys Ala Phe Lys Ile His Asn Lys Ile Trp Val Ile Pro Glu Arg
        35                  40                  45
Asp Thr Phe Thr Asn Pro Glu Glu Gly Asp Leu Asn Pro Pro Pro Glu
    50                  55                  60
Ala Lys Gln Val Pro Val Ser Tyr Tyr Asp Ser Thr Tyr Leu Ser Thr
65                  70                  75                  80
Asp Asn Glu Lys Asp Asn Tyr Leu Lys Gly Val Thr Lys Leu Phe Glu
                85                  90                  95
Arg Ile Tyr Ser Thr Asp Leu Gly Arg Met Leu Leu Thr Ser Ile Val
            100                 105                 110
Arg Gly Ile Pro Phe Trp Gly Gly Ser Thr Ile Asp Thr Glu Leu Lys
        115                 120                 125
Val Ile Asp Thr Asn Cys Ile Asn Val Ile Gln Pro Asp Gly Ser Tyr
    130                 135                 140
Arg Ser Glu Glu Leu Asn Leu Val Ile Ile Gly Pro Ser Ala Asp Ile
145                 150                 155                 160
Ile Gln Phe Glu Cys Lys Ser Phe Gly His Glu Val Leu Asn Leu Thr
                165                 170                 175
Arg Asn Gly Tyr Gly Ser Thr Gln Tyr Ile Arg Phe Ser Pro Asp Phe
            180                 185                 190
Thr Phe Gly Phe Glu Glu Ser Leu Glu Val Asp Thr Asn Pro Leu Leu
        195                 200                 205
Gly Ala Gly Lys Phe Ala Thr Asp Pro Ala Val Thr Leu Ala His Glu
    210                 215                 220
Leu Ile His Ala Gly His Arg Leu Tyr Gly Ile Ala Ile Asn Pro Asn
225                 230                 235                 240
Arg Val Phe Lys Val Asn Thr Asn Ala Tyr Tyr Glu Met Ser Gly Leu
                245                 250                 255
Glu Val Ser Phe Glu Glu Leu Arg Thr Phe Gly Gly His Asp Ala Lys
            260                 265                 270
Phe Ile Asp Ser Leu Gln Glu Asn Glu Phe Arg Leu Tyr Tyr Tyr Asn
        275                 280                 285
Lys Phe Lys Asp Ile Ala Ser Thr Leu Asn Lys Ala Lys Ser Ile Val
    290                 295                 300
Gly Thr Thr Ala Ser Leu Gln Tyr Met Lys Asn Val Phe Lys Glu Lys
305                 310                 315                 320
Tyr Leu Leu Ser Glu Asp Thr Ser Gly Lys Phe Ser Val Asp Lys Leu
                325                 330                 335
Lys Phe Asp Lys Leu Tyr Lys Met Leu Thr Glu Ile Tyr Thr Glu Asp
            340                 345                 350
Asn Phe Val Lys Phe Phe Lys Val Leu Asn Arg Lys Thr Tyr Leu Asn
        355                 360                 365
Phe Asp Lys Ala Val Phe Lys Ile Asn Ile Val Pro Lys Val Asn Tyr
    370                 375                 380
Thr Ile Tyr Asp Gly Phe Asn Leu Arg Asn Thr Asn Leu Ala Ala Asn
385                 390                 395                 400
Phe Asn Gly Gln Asn Thr Glu Ile Asn Asn Met Asn Phe Thr Lys Leu
                405                 410                 415
Lys Asn Phe Thr Gly Leu Phe Glu Phe Tyr Lys Leu Leu Cys Val Arg
            420                 425                 430
Gly Ile Ile Thr Ser Lys Thr Lys Ser Leu Asp Lys Gly Tyr Asn Lys
        435                 440                 445
Ala Leu Asn Asp Leu Cys Ile Lys Val Asn Asn Trp Asp Leu Phe Phe
    450                 455                 460
Ser Pro Ser Glu Asp Asn Phe Thr Asn Asp Leu Asn Lys Gly Glu Glu
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Asp Thr Asn Ile Glu Ala Ala Glu Glu Asn Ile Ser Leu
                485                 490                 495
Asp Leu Ile Gln Gln Tyr Tyr Leu Thr Phe Asn Phe Asp Asn Glu Pro
            500                 505                 510
Glu Asn Ile Ser Ile Glu Asn Leu Ser Ser Asp Ile Ile Gly Gln Leu
        515                 520                 525
Glu Leu Met Pro Asn Ile Glu Arg Phe Pro Asn Gly Lys Lys Tyr Glu
    530                 535                 540
Leu Asp Lys Tyr Thr Met Phe His Tyr Leu Arg Ala Gln Glu Phe Glu
545                 550                 555                 560
His Gly Lys Ser Arg Ile Ala Leu Thr Asn Ser Val Asn Glu Ala Leu
                565                 570                 575
Leu Asn Pro Ser Arg Val Tyr Thr Phe Phe Ser Ser Asp Tyr Val Lys
            580                 585                 590
Lys Val Asn Lys Ala Thr Glu Ala Ala Met Phe Leu Gly Trp Val Glu
        595                 600                 605
Gln Leu Val Tyr Asp Phe Thr Asp Glu Thr Ser Glu Val Ser Thr Thr
    610                 615                 620
Asp Lys Ile Ala Asp Ile Thr Ile Ile Ile Pro Tyr Ile Gly Pro Ala
625                 630                 635                 640
Leu Asn Ile Gly Asn Met Leu Tyr Lys Asp Asp Phe Val Gly Ala Leu
                645                 650                 655
Ile Phe Ser Gly Ala Val Ile Leu Leu Glu Phe Ile Pro Glu Ile Ala
            660                 665                 670
Ile Pro Val Leu Gly Thr Phe Ala Leu Val Ser Tyr Ile Ala Asn Lys
        675                 680                 685
Val Leu Thr Val Gln Thr Ile Asp Asn Ala Leu Ser Lys Arg Asn Glu
    690                 695                 700
Lys Trp Asp Glu Val Tyr Lys Tyr Ile Val Thr Asn Trp Leu Ala Lys
705                 710                 715                 720
Val Asn Thr Gln Ile Asp Leu Ile Arg Lys Lys Met Lys Glu Ala Leu
                725                 730                 735
Glu Asn Gln Ala Glu Ala Thr Lys Ala Ile Ile Asn Tyr Gln Tyr Asn
            740                 745                 750
Gln Tyr Thr Glu Glu Glu Lys Asn Asn Ile Asn Phe Asn Ile Asp Asp
        755                 760                 765
Leu Ser Ser Lys Leu Asn Glu Ser Ile Asn Lys Ala Met Ile Asn Ile
    770                 775                 780
Asn Lys Phe Leu Asn Gln Cys Ser Val Ser Tyr Leu Met Asn Ser Met
785                 790                 795                 800
Ile Pro Tyr Gly Val Lys Arg Leu Glu Asp Phe Asp Ala Ser Leu Lys
                805                 810                 815
Asp Ala Leu Leu Lys Tyr Ile Tyr Asp Asn Arg Gly Thr Leu Ile Gly
            820                 825                 830
Gln Val Asp Arg Leu Lys Asp Lys Val Asn Asn Thr Leu Ser Thr Asp
        835                 840                 845
Ile Pro Phe Gln Leu Ser Lys Tyr Val Asp Asn Gln Arg Leu Leu Ser
    850                 855                 860
Thr Phe Thr Glu Tyr Ile Lys Asn Ile Ile Asn Thr Ser Ile Leu Asn
865                 870                 875                 880
Leu Arg Tyr Glu Ser Asn His Leu Ile Asp Leu Ser Arg Tyr Ala Ser
                885                 890                 895
Lys Ile Asn Ile Gly Ser Lys Val Asn Phe Asp Pro Ile Asp Lys Asn
            900                 905                 910
Gln Ile Gln Leu Phe Asn Leu Glu Ser Ser Lys Ile Glu Val Ile Leu
        915                 920                 925
Lys Asn Ala Ile Val Tyr Asn Ser Met Tyr Glu Asn Phe Ser Thr Ser
    930                 935                 940
Phe Trp Ile Arg Ile Pro Lys Tyr Phe Asn Ser Ile Ser Leu Asn Asn
945                 950                 955                 960
Glu Tyr Thr Ile Ile Asn Cys Met Glu Asn Asn Ser Gly Trp Lys Val
                965                 970                 975
Ser Leu Asn Tyr Gly Glu Ile Ile Trp Thr Leu Gln Asp Thr Gln Glu
            980                 985                 990
Ile Lys Gln Arg Val Val Phe Lys Tyr Ser Gln Met Ile Asn Ile Ser
        995                 1000                1005
Asp Tyr Ile Asn Arg Trp Ile Phe Val Thr Ile Thr Asn Asn Arg Leu
    1010                1015                1020
Asn Asn Ser Lys Ile Tyr Ile Asn Gly Arg Leu Ile Asp Gln Lys Pro
1025                1030                1035                1040
Ile Ser Asn Leu Gly Asn Ile His Ala Ser Asn Asn Ile Met Phe Lys
                1045                1050                1055
Leu Asp Gly Cys Arg Asp Thr His Arg Tyr Ile Trp Ile Lys Tyr Phe
            1060                1065                1070
Asn Leu Phe Asp Lys Glu Leu Asn Glu Lys Glu Ile Lys Asp Leu Tyr
        1075                1080                1085
Asp Asn Gln Ser Asn Ser Gly Ile Leu Lys Asp Phe Trp Gly Asp Tyr
    1090                1095                1100
Leu Gln Tyr Asp Lys Pro Tyr Tyr Met Leu Asn Leu Tyr Asp Pro Asn
1105                1110                1115                1120
Lys Tyr Val Asp Val Asn Asn Val Gly Ile Arg Gly Tyr Met Tyr Leu
                1125                1130                1135
Lys Gly Pro Arg Gly Ser Val Met Thr Thr Asn Ile Tyr Leu Asn Ser
            1140                1145                1150
Ser Leu Tyr Arg Gly Thr Lys Phe Ile Ile Lys Lys Tyr Ala Ser Gly
        1155                1160                1165
Asn Lys Asp Asn Ile Val Arg Asn Asn Asp Arg Val Tyr Ile Asn Val
    1170                1175                1180
Val Val Lys Asn Lys Glu Tyr Arg Leu Ala Thr Asn Ala Ser Gln Ala
1185                1190                1195                1200
Gly Val Glu Lys Ile Leu Ser Ala Leu Glu Ile Pro Asp Val Gly Asn
                1205                1210                1215
Leu Ser Gln Val Val Val Met Lys Ser Lys Asn Asp Gln Gly Ile Thr
            1220                1225                1230
Asn Lys Cys Lys Met Asn Leu Gln Asp Asn Asn Gly Asn Asp Ile Gly
        1235                1240                1245
Phe Ile Gly Phe His Gln Phe Asn Asn Ile Ala Lys Leu Val Ala Ser
    1250                1255                1260
Asn Trp Tyr Asn Arg Gln Ile Glu Arg Ser Ser Arg Thr Leu Gly Cys
1265                1270                1275                1280
Ser Trp Glu Phe Ile Pro Val Asp Asp Gly Trp Gly Glu Arg Pro Leu
                1285                1290                1295
 
<210>2
<211>1291
<212>PRT
<213>肉毒梭菌毒素血清型B
 
<220>
<221>结构域
<222>(1)...(441)
<223>含有酶促结构域的轻链
 
<221>结构域
<222>(442)...(847)
<223>含有易位结构域的重链的氨基端一侧
 
<221>结构域
<222>(848)...(1291)
<223>含有结合结构域的重链的羧基端一侧
 
<400>2
Met Pro Val Thr Ile Asn Asn Phe Asn Tyr Asn Asp Pro Ile Asp Asn
 1               5                  10                  15
Asn Asn Ile Ile Met Met Glu Pro Pro Phe Ala Arg Gly Thr Gly Arg
            20                  25                  30
Tyr Tyr Lys Ala Phe Lys Ile Thr Asp Arg Ile Trp Ile Ile Pro Glu
        35                  40                  45
Arg Tyr Thr Phe Gly Tyr Lys Pro Glu Asp Phe Asn Lys Ser Ser Gly
    50                  55                  60
Ile Phe Asn Arg Asp Val Cys Glu Tyr Tyr Asp Pro Asp Tyr Leu Asn
65                  70                  75                  80
Thr Asn Asp Lys Lys Asn Ile Phe Leu Gln Thr Met Ile Lys Leu Phe
                85                  90                  95
Asn Arg Ile Lys Ser Lys Pro Leu Gly Glu Lys Leu Leu Glu Met Ile
            100                 105                 110
Ile Asn Gly Ile Pro Tyr Leu Gly Asp Arg Arg Val Pro Leu Glu Glu
        115                 120                 125
Phe Asn Thr Asn Ile Ala Ser Val Thr Val Asn Lys Leu Ile Ser Asn
    130                 135                 140
Pro Gly Glu Val Glu Arg Lys Lys Gly Ile Phe Ala Asn Leu Ile Ile
145                 150                 155                 160
Phe Gly Pro Gly Pro Val Leu Asn Glu Asn Glu Thr Ile Asp Ile Gly
                165                 170                 175
Ile Gln Asn His Phe Ala Ser Arg Glu Gly Phe Gly Gly Ile Met Gln
            180                 185                 190
Met Lys Phe Cys Pro Glu Tyr Val Ser Val Phe Asn Asn Val Gln Glu
        195                 200                 205
Asn Lys Gly Ala Ser Ile Phe Asn Arg Arg Gly Tyr Phe Ser Asp Pro
    210                 215                 220
Ala Leu Ile Leu Met His Glu Leu Ile His Val Leu His Gly Leu Tyr
225                 230                 235                 240
Gly Ile Lys Val Asp Asp Leu Pro Ile Val Pro Asn Glu Lys Lys Phe
                245                 250                 255
Phe Met Gln Ser Thr Asp Ala Ile Gln Ala Glu Glu Leu Tyr Thr Phe
            260                 265                 270
Gly Gly Gln Asp Pro Ser Ile Ile Thr Pro Ser Thr Asp Lys Ser Ile
        275                 280                 285
Tyr Asp Lys Val Leu Gln Asn Phe Arg Gly Ile Val Asp Arg Leu Asn
    290                 295                 300
Lys Val Leu Val Cys Ile Ser Asp Pro Asn Ile Asn Ile Asn Ile Tyr
305                 310                 315                 320
Lys Asn Lys Phe Lys Asp Lys Tyr Lys Phe Val Glu Asp Ser Glu Gly
                325                 330                 335
Lys Tyr Ser Ile Asp Val Glu Ser Phe Asp Lys Leu Tyr Lys Ser Leu
            340                 345                 350
Met Phe Gly Phe Thr Glu Thr Asn Ile Ala Glu Asn Tyr Lys Ile Lys
        355                 360                 365
Thr Arg Ala Ser Tyr Phe Ser Asp Ser Leu Pro Pro Val Lys Ile Lys
    370                 375                 380
Asn Leu Leu Asp Asn Glu Ile Tyr Thr Ile Glu Glu Gly Phe Asn Ile
385                 390                 395                 400
Ser Asp Lys Asp Met Glu Lys Glu Tyr Arg Gly Gln Asn Lys Ala Ile
                405                 410                 415
Asn Lys Gln Ala Tyr Glu Glu Ile Ser Lys Glu His Leu Ala Val Tyr
            420                 425                 430
Lys Ile Gln Met Cys Lys Ser Val Lys Ala Pro Gly Ile Cys Ile Asp
        435                 440                 445
Val Asp Asn Glu Asp Leu Phe Phe Ile Ala Asp Lys Asn Ser Phe Ser
    450                 455                 460
Asp Asp Leu Ser Lys Asn Glu Arg Ile Glu Tyr Asn Thr Gln Ser Asn
465                 470                 475                 480
Tyr Ile Glu Asn Asp Phe Pro Ile Asn Glu Leu Ile Leu Asp Thr Asp
                485                 490                 495
Leu Ile Ser Lys Ile Glu Leu Pro Ser Glu Asn Thr Glu Ser Leu Thr
            500                 505                 510
Asp Phe Asn Val Asp Val Pro Val Tyr Glu Lys Gln Pro Ala Ile Lys
        515                 520                 525
Lys Ile Phe Thr Asp Glu Asn Thr Ile Phe Gln Tyr Leu Tyr Ser Gln
    530                 535                 540
Thr Phe Pro Leu Asp Ile Arg Asp Ile Ser Leu Thr Ser Ser Phe Asp
545                 550                 555                 560
Asp Ala Leu Leu Phe Ser Asn Lys Val Tyr Ser Phe Phe Ser Met Asp
                565                 570                 575
Tyr Ile Lys Thr Ala Asn Lys Val Val Glu Ala Gly Leu Phe Ala Gly
            580                 585                 590
Trp Val Lys Gln Ile Val Asn Asp Phe Val Ile Glu Ala Asn Lys Ser
        595                 600                 605
Asn Thr Met Asp Lys Ile Ala Asp Ile Ser Leu Ile Val Pro Tyr Ile
    610                 615                 620
Gly Leu Ala Leu Asn Val Gly Asn Glu Thr Ala Lys Gly Asn Phe Glu
625                 630                 635                 640
Asn Ala Phe Glu Ile Ala Gly Ala Ser Ile Leu Leu Glu Phe Ile Pro
                645                 650                 655
Glu Leu Leu Ile Pro Val Val Gly Ala Phe Leu Leu Glu Ser Tyr Ile
            660                 665                 670
Asp Asn Lys Asn Lys Ile Ile Lys Thr Ile Asp Asn Ala Leu Thr Lys
        675                 680                 685
Arg Asn Glu Lys Trp Ser Asp Met Tyr Gly Leu Ile Val Ala Gln Trp
    690                 695                 700
Leu Ser Thr Val Asn Thr Gln Phe Tyr Thr Ile Lys Glu Gly Met Tyr
705                 710                 715                 720
Lys Ala Leu Asn Tyr Gln Ala Gln Ala Leu Glu Glu Ile Ile Lys Tyr
                725                 730                 735
Arg Tyr Asn Ile Tyr Ser Glu Lys Glu Lys Ser Asn Ile Asn Ile Asp
            740                 745                 750
Phe Asn Asp Ile Asn Ser Lys Leu Asn Glu Gly Ile Asn Gln Ala Ile
        755                 760                 765
Asp Asn Ile Asn Asn Phe Ile Asn Gly Cys Ser Val Ser Tyr Leu Met
    770                 775                 780
Lys Lys Met Ile Pro Leu Ala Val Glu Lys Leu Leu Asp Phe Asp Asn
785                 790                 795                 800
Thr Leu Lys Lys Asn Leu Leu Asn Tyr Ile Asp Glu Asn Lys Leu Tyr
                805                 810                 815
Leu Ile Gly Ser Ala Glu Tyr Glu Lys Ser Lys Val Asn Lys Tyr Leu
            820                 825                 830
Lys Thr Ile Met Pro Phe Asp Leu Ser Ile Tyr Thr Asn Asp Thr Ile
        835                 840                 845
Leu Ile Glu Met Phe Asn Lys Tyr Asn Ser Glu Ile Leu Asn Asn Ile
    850                 855                 860
Ile Leu Asn Leu Arg Tyr Lys Asp Asn Asn Leu Ile Asp Leu Ser Gly
865                 870                 875                 880
Tyr Gly Ala Lys Val Glu Val Tyr Asp Gly Val Glu Leu Asn Asp Lys
                885                 890                 895
Asn Gln Phe Lys Leu Thr Ser Ser Ala Asn Ser Lys Ile Arg Val Thr
            900                 905                 910
Gln Asn Gln Asn Ile Ile Phe Asn Ser Val Phe Leu Asp Phe Ser Val
        915                 920                 925
Ser Phe Trp Ile Arg Ile Pro Lys Tyr Lys Asn Asp Gly Ile Gln Asn
    930                 935                 940
Tyr Ile His Asn Glu Tyr Thr Ile Ile Asn Cys Met Lys Asn Asn Ser
945                 950                 955                 960
Gly Trp Lys Ile Ser Ile Arg Gly Asn Arg Ile Ile Trp Thr Leu Ile
                965                 970                 975
Asp Ile Asn Gly Lys Thr Lys Ser Val Phe Phe Glu Tyr Asn Ile Arg
            980                 985                 990
Glu Asp Ile Ser Glu Tyr Ile Asn Arg Trp Phe Phe Val Thr Ile Thr
        995                 1000                1005
Asn Asn Leu Asn Asn Ala Lys Ile Tyr Ile Asn Gly Lys Leu Glu Ser
    1010                1015                1020
Asn Thr Asp Ile Lys Asp Ile Arg Glu Val Ile Ala Asn Gly Glu Ile
1025                1030                1035                1040
Ile Phe Lys Leu Asp Gly Asp Ile Asp Arg Thr Gln Phe Ile Trp Met
                1045                1050                1055
Lys Tyr Phe Ser Ile Phe Asn Thr Glu Leu Ser Gln Ser Asn Ile Glu
            1060                1065                1070
Glu Arg Tyr Lys Ile Gln Ser Tyr Ser Glu Tyr Leu Lys Asp Phe Trp
        1075                1080                1085
Gly Asn Pro Leu Met Tyr Asn Lys Glu Tyr Tyr Met Phe Asn Ala Gly
    1090                1095                1100
Asn Lys Asn Ser Tyr Ile Lys Leu Lys Lys Asp Ser Pro Val Gly Glu
1105                1110                1115                1120
Ile Leu Thr Arg Ser Lys Tyr Asn Gln Asn Ser Lys Tyr Ile Asn Tyr
                1125                1130                1135
Arg Asp Leu Tyr Ile Gly Glu Lys Phe Ile Ile Arg Arg Lys Ser Asn
            1140                1145                1150
Ser Gln Ser Ile Asn Asp Asp Ile Val Arg Lys Glu Asp Tyr Ile Tyr
        1155                1160                1165
Leu Asp Phe Phe Asn Leu Asn Gln Glu Trp Arg Val Tyr Thr Tyr Lys
    1170                1175                1180
Tyr Phe Lys Lys Glu Glu Glu Lys Leu Phe Leu Ala Pro Ile Ser Asp
1185                1190                1195                1200
Ser Asp Glu Phe Tyr Asn Thr Ile Gln Ile Lys Glu Tyr Asp Glu Gln
                1205                1210                1215
Pro Thr Tyr Ser Cys Gln Leu Leu Phe Lys Lys Asp Glu Glu Ser Thr
            1220                1225                1230
Asp Glu Ile Gly Leu Ile Gly Ile His Arg Phe Tyr Glu Ser Gly Ile
        1235                1240                1245
Val Phe Glu Glu Tyr Lys Asp Tyr Phe Cys Ile Ser Lys Trp Tyr Leu
    1250                1255                1260
Lys Glu Val Lys Arg Lys Pro Tyr Asn Leu Lys Leu Gly Cys Asn Trp
1265                1270                1275                1280
Gln Phe Ile Pro Lys Asp Glu Gly Trp Thr Glu
                1285                1290
 
<210>3
<211>1291
<212>PRT
<213>肉毒梭菌毒素血清型C1
 
<220>
<221>结构域
<222>(1)...(449)
<223>含有酶促结构域的轻链
 
<221>结构域
<222>(450)...(855)
<223>含有易位结构域的重链的氨基端一侧
 
<221>结构域
<222>(856)...(1291)
<223>含有结合结构域的重链的羧基端一侧
 
<400>3
Met Pro Ile Thr Ile Asn Asn Phe Asn Tyr Ser Asp Pro Val Asp Asn
 1               5                  10                  15
Lys Asn Ile Leu Tyr Leu Asp Thr His Leu Asn Thr Leu Ala Asn Glu
            20                  25                  30
Pro Glu Lys Ala Phe Arg Ile Thr Gly Asn Ile Trp Val Ile Pro Asp
        35                  40                  45
Arg Phe Ser Arg Asn Ser Asn Pro Asn Leu Asn Lys Pro Pro Arg Val
    50                  55                  60
Thr Ser Pro Lys Ser Gly Tyr Tyr Asp Pro Asn Tyr Leu Ser Thr Asp
65                  70                  75                  80
Ser Asp Lys Asp Pro Phe Leu Lys Glu Ile Ile Lys Leu Phe Lys Arg
                85                  90                  95
Ile Asn Ser Arg Glu Ile Gly Glu Glu Leu Ile Tyr Arg Leu Ser Thr
            100                 105                 110
Asp Ile Pro Phe Pro Gly Asn Asn Asn Thr Pro Ile Asn Thr Phe Asp
        115                 120                 125
Phe Asp Val Asp Phe Asn Ser Val Asp Val Lys Thr Arg Gln Gly Asn
    130                 135                 140
Asn Trp Val Lys Thr Gly Ser Ile Asn Pro Ser Val IleIle Thr Gly
145                 150                 155                 160
Pro Arg Glu Asn Ile Ile Asp Pro Glu Thr Ser Thr Phe Lys Leu Thr
                165                 170                 175
Asn Asn Thr Phe Ala Ala Gln Glu Gly Phe Gly Ala Leu Ser Ile Ile
            180                 185                 190
Ser Ile Ser Pro Arg Phe Met Leu Thr Tyr Ser Asn Ala Thr Asn Asp
        195                 200                 205
Val Gly Glu Gly Arg Phe Ser Lys Ser Glu Phe Cys Met Asp Pro Ile
    210                 215                 220
Leu Ile Leu Met His Glu Leu Asn His Ala Met His Asn Leu Tyr Gly
225                 230                 235                 240
Ile Ala Ile Pro Asn Asp Gln Thr Ile Ser Ser Val Thr Ser Asn Ile
                245                 250                 255
Phe Tyr Ser Gln Tyr Asn Val Lys Leu Glu Tyr Ala Glu Ile Tyr Ala
            260                 265                 270
Phe Gly Gly Pro Thr Ile Asp Leu Ile Pro Lys Ser Ala Arg Lys Tyr
        275                 280                 285
Phe Glu Glu Lys Ala Leu Asp Tyr Tyr Arg Ser Ile Ala Lys Arg Leu
    290                 295                 300
Asn Ser Ile Thr Thr Ala Asn Pro Ser Ser Phe Asn Lys Tyr Ile Gly
305                 310                 315                 320
Glu Tyr Lys Gln Lys Leu Ile Arg Lys Tyr Arg Phe Val Val Glu Ser
                325                 330                 335
Ser Gly Glu Val Thr Val Asn Arg Asn Lys Phe Val Glu Leu Tyr Asn
            340                 345                 350
Glu Leu Thr Gln Ile Phe Thr Glu Phe Asn Tyr Ala Lys Ile Tyr Asn
        355                 360                 365
Val Gln Asn Arg Lys Ile Tyr Leu Ser Asn Val Tyr Thr Pro Val Thr
    370                 375                 380
Ala Asn Ile Leu Asp Asp Asn Val Tyr Asp Ile Gln Asn Gly Phe Asn
385                 390                 395                 400
Ile Pro Lys Ser Asn Leu Asn Val Leu Phe Met Gly Gln Asn Leu Ser
                405                 410                 415
Arg Asn Pro Ala Leu Arg Lys Val Asn Pro Glu Asn Met Leu Tyr Leu
            420                 425                 430
Phe Thr Lys Phe Cys His Lys Ala Ile Asp Gly Arg Ser Leu Tyr Asn
        435                 440                 445
Lys Thr Leu Asp Cys Arg Glu Leu Leu Val Lys Asn Thr Asp Leu Pro
    450                 455                 460
Phe Ile Gly Asp Ile Ser Asp Val Lys Thr Asp Ile Phe Leu Arg Lys
465                 470                 475                 480
Asp Ile Asn Glu Glu Thr Glu Val Ile Tyr Tyr Pro Asp Asn Val Ser
                485                 490                 495
Val Asp Gln Val Ile Leu Ser Lys Asn Thr Ser Glu His Gly Gln Leu
            500                 505                 510
Asp Leu Leu Tyr Pro Ser Ile Asp Ser Glu Ser Glu Ile Leu Pro Gly
        515                 520                 525
Glu Asn Gln Val Phe Tyr Asp Asn Arg Thr Gln Asn Val Asp Tyr Leu
    530                 535                 540
Asn Ser Tyr Tyr Tyr Leu Glu Ser Gln Lys Leu Ser Asp Asn Val Glu
545                 550                 555                 560
Asp Phe Thr Phe Thr Arg Ser Ile Glu Glu Ala Leu Asp Asn Ser Ala
                565                 570                 575
Lys Val Tyr Thr Tyr Phe Pro Thr Leu Ala Asn Lys Val Asn Ala Gly
            580                 585                 590
Val Gln Gly Gly Leu Phe Leu Met Trp Ala Asn Asp Val Val Glu Asp
        595                 600                 605
Phe Thr Thr Asn Ile Leu Arg Lys Asp Thr Leu Asp Lys Ile Ser Asp
    610                 615                 620
Val Ser Ala Ile Ile Pro Tyr Ile Gly Pro Ala Leu Asn Ile Ser Asn
625                 630                 635                 640
Ser Val Arg Arg Gly Asn Phe Thr Glu Ala Phe Ala Val Thr Gly Val
                645                 650                 655
Thr Ile Leu Leu Glu Ala Phe Pro Glu Phe Thr Ile Pro Ala Leu Gly
            660                 665                 670
Ala Phe Val Ile Tyr Ser Lys Val Gln Glu Arg Asn Glu Ile Ile Lys
        675                 680                 685
Thr Ile Asp Asn Cys Leu Glu Gln Arg Ile Lys Arg Trp Lys Asp Ser
    690                 695                 700
Tyr Glu Trp Met Met Gly Thr Trp Leu Ser Arg Ile Ile Thr Gln Phe
705                 710                 715                 720
Asn Asn Ile Ser Tyr Gln Met Tyr Asp Ser Leu Asn Tyr Gln Ala Gly
                725                 730                 735
Ala Ile Lys Ala Lys Ile Asp Leu Glu Tyr Lys Lys Tyr Ser Gly Ser
            740                 745                 750
Asp Lys Glu Asn Ile Lys Ser Gln Val Glu Asn Leu Lys Asn Ser Leu
        755                 760                 765
Asp Val Lys Ile Ser Glu Ala Met Asn Asn Ile Asn Lys Phe Ile Arg
    770                 775                 780
Glu Cys Ser Val Thr Tyr Leu Phe Lys Asn Met Leu Pro Lys Val Ile
785                 790                 795                 800
Asp Glu Leu Asn Glu Phe Asp Arg Asn Thr Lys Ala Lys Leu Ile Asn
                805                 810                 815
Leu Ile Asp Ser His Asn Ile Ile Leu Val Gly Glu Val Asp Lys Leu
            820                 825                 830
Lys Ala Lys Val Asn Asn Ser Phe Gln Asn Thr Ile Pro Phe Asn Ile
        835                 840                 845
Phe Ser Tyr Thr Asn Asn Ser Leu Leu Lys Asp Ile Ile Asn Glu Tyr
    850                 855                 860
Phe Asn Asn Ile Asn Asp Ser Lys Ile Leu Ser Leu Gln Asn Arg Lys
865                 870                 875                 880
Asn Thr Leu Val Asp Thr Ser Gly Tyr Asn Ala Glu Val Ser Glu Glu
                885                 890                 895
Gly Asp Val Gln Leu Asn Pro Ile Phe Pro Phe Asp Phe Lys Leu Gly
            900                 905                 910
Ser Ser Gly Glu Asp Arg Gly Lys Val Ile Val Thr Gln Asn Glu Asn
        915                 920                 925
Ile Val Tyr Asn Ser Met Tyr Glu Ser Phe Ser Ile Ser Phe Trp Ile
    930                 935                 940
Arg Ile Asn Lys Trp Val Ser Asn Leu Pro Gly Tyr Thr Ile Ile Asp
945                 950                 955                 960
Ser Val Lys Asn Asn Ser Gly Trp Ser Ile Gly Ile Ile Ser Asn Phe
                965                 970                 975
Leu Val Phe Thr Leu Lys Gln Asn Glu Asp Ser Glu Gln Ser Ile Asn
            980                 985                 990
Phe Ser Tyr Asp Ile Ser Asn Asn Ala Pro Gly Tyr Asn Lys Trp Phe
        995                 1000                1005
Phe Val Thr Val Thr Asn Asn Met Met Gly Asn Met Lys Ile Tyr Ile
    1010                1015                1020
Asn Gly Lys Leu Ile Asp Thr Ile Lys Val Lys Glu Leu Thr Gly Ile
1025                1030                1035                1040
Asn Phe Ser Lys Thr Ile Thr Phe Glu Ile Asn Lys Ile Pro Asp Thr
                1045                1050                1055
Gly Leu Ile Thr Ser Asp Ser Asp Asn Ile Asn Met Trp Ile Arg Asp
            1060                1065                1070
Phe Tyr Ile Phe Ala Lys Glu Leu Asp Gly Lys Asp Ile Asn Ile Leu
        1075                1080                1085
Phe Asn Ser Leu Gln Tyr Thr Asn Val Val Lys Asp Tyr Trp Gly Asn
    1090                1095                1100
Asp Leu Arg Tyr Asn Lys Glu Tyr Tyr Met Val Asn Ile Asp Tyr Leu
1105                1110                1115                1120
Asn Arg Tyr Met Tyr Ala Asn Ser Arg Gln Ile Val Phe Asn Thr Arg
                1125                1130                1135
Arg Asn Asn Asn Asp Phe Asn Glu Gly Tyr Lys Ile Ile Ile Lys Arg
            1140                1145                1150
Ile Arg Gly Asn Thr Asn Asp Thr Arg Val Arg Gly Gly Asp Ile Leu
        1155                1160                1165
Tyr Phe Asp Met Thr Ile Asn Asn Lys Ala Tyr Asn Leu Phe Met Lys
    1170                1175                1180
Asn Glu Thr Met Tyr Ala Asp Asn His Ser Thr Glu Asp Ile Tyr Ala
1185                1190                1195                1200
Ile Gly Leu Arg Glu Gln Thr Lys Asp Ile Asn Asp Asn Ile Ile Phe
                1205                1210                1215
Gln Ile Gln Pro Met Asn Asn Thr Tyr Tyr Tyr Ala Ser Gln Ile Phe
            1220                1225                1230
Lys Ser Asn Phe Asn Gly Glu Asn Ile Ser Gly Ile Cys Ser Ile Gly
        1235                1240                1245
Thr Tyr Arg Phe Arg Leu Gly Gly Asp Trp Tyr Arg His Asn Tyr Leu
    1250                1255                1260
Val Pro Thr Val Lys Gln Gly Asn Tyr Ala Ser Leu Leu Glu Ser Thr
1265                1270                1275                1280
Ser Thr His Trp Gly Phe Val Pro Val Ser Glu
                1285                1290
 
<210>4
<211>1276
<212>PRT
<213>肉毒梭菌毒素血清型D
 
<220>
<221>结构域
<222>(1)...(442)
<223>含有酶促结构域的轻链
 
<221>结构域
<222>(443)...(851)
<223>含有易位结构域的重链的氨基端一侧
 
<221>结构域
<222>(852)...(1276)
<223>含有结合结构域的重链的羧基端一侧
 
<400>4
Met Thr Trp Pro Val Lys Asp Phe Asn Tyr Ser Asp Pro Val Asn Asp
 1               5                  10                  15
Asn Asp Ile Leu Tyr Leu Arg Ile Pro Gln Asn Lys Leu Ile Thr Thr
            20                  25                  30
Pro Val Lys Ala Phe Met Ile Thr Gln Asn Ile Trp Val Ile Pro Glu
        35                  40                  45
Arg Phe Ser Ser Asp Thr Asn Pro Ser Leu Ser Lys Pro Pro Arg Pro
    50                  55                  60
Thr Ser Lys Tyr Gln Ser Tyr Tyr Asp Pro Ser Tyr Leu Ser Thr Asp
65                  70                  75                  80
Glu Gln Lys Asp Thr Phe Leu Lys Gly Ile Ile Lys Leu Phe Lys Arg
                85                  90                  95
Ile Asn Glu Arg Asp Ile Gly Lys Lys Leu IIe Asn Tyr Leu Val Val
            100                 105                 110
Gly Ser Pro Phe Met Gly Asp Ser Ser Thr Pro Glu Asp Thr Phe Asp
        115                 120                 125
Phe Thr Arg His Thr Thr Asn Ile Ala Val Glu Lys Phe Glu Asn Gly
    130                 135                 140
Ser Trp Lys Val Thr Asn Ile Ile Thr Pro Ser Val Leu Ile Phe Gly
145                 150                 155                 160
Pro Leu Pro Asn Ile Leu Asp Tyr Thr Ala Ser Leu Thr Leu Gln Gly
                165                 170                 175
Gln Gln Ser Asn Pro Ser Phe Glu Gly Phe Gly Thr Leu Ser Ile Leu
            180                 185                 190
Lys Val Ala Pro Glu Phe Leu Leu Thr Phe Ser Asp Val Thr Ser Asn
        195                 200                 205
Gln Ser Ser Ala Val Leu Gly Lys Ser Ile Phe Cys Met Asp Pro Val
    210                 215                 220
Ile Ala Leu Met His Glu Leu Thr His Ser Leu His Gln Leu Tyr Gly
225                 230                 235                 240
Ile Asn Ile Pro Ser Asp Lys Arg Ile Arg Pro Gln Val Ser Glu Gly
                245                 250                 255
Phe Phe Ser Gln Asp Gly Pro Asn Val Gln Phe Glu Glu Leu Tyr Thr
            260                 265                 270
Phe Gly Gly Leu Asp Val Glu Ile Ile Pro Gln Ile Glu Arg Ser Gln
        275                 280                 285
Leu Arg Glu Lys Ala Leu Gly His Tyr Lys Asp Ile Ala Lys Arg Leu
    290                 295                 300
Asn Asn Ile Asn Lys Thr Ile Pro Ser Ser Trp Ile Ser Asn Ile Asp
305                 310                 315                 320
Lys Tyr Lys Lys Ile Phe Ser Glu Lys Tyr Asn Phe Asp Lys Asp Asn
                325                 330                 335
Thr Gly Asn Phe Val Val Asn Ile Asp Lys Phe Asn Ser Leu Tyr Ser
            340                 345                 350
Asp Leu Thr Asn Val Met Ser Glu Val Val Tyr Ser Ser Gln Tyr Asn
        355                 360                 365
Val Lys Asn Arg Thr His Tyr Phe Ser Arg His Tyr Leu Pro Val Phe
    370                 375                 380
Ala Asn Ile Leu Asp Asp Asn Ile Tyr Thr Ile Arg Asp Gly Phe Asn
385                 390                 395                 400
Leu Thr Asn Lys Gly Phe Asn Ile Glu Asn Ser Gly Gln Asn Ile Glu
                405                 410                 415
Arg Asn Pro Ala Leu Gln Lys Leu Ser Ser Glu Ser Val Val Asp Leu
            420                 425                 430
Phe Thr Lys Val Cys Leu Arg Leu Thr Lys Asn Ser Arg Asp Asp Ser
        435                 440                 445
Thr Cys Ile Lys Val Lys Asn Asn Arg Leu Pro Tyr Val Ala Asp Lys
    450                 455                 460
Asp Ser Ile Ser Gln Glu Ile Phe Glu Asn Lys Ile Ile Thr Asp Glu
465                 470                 475                 480
Thr Asn Val Gln Asn Tyr Ser Asp Lys Phe Ser Leu Asp Glu Ser Ile
                485                 490                 495
Leu Asp Gly Gln Val Pro Ile Asn Pro Glu Ile Val Asp Pro Leu Leu
            500                 505                 510
Pro Asn Val Asn Met Glu Pro Leu Asn Leu Pro Gly Glu Glu Ile Val
        515                 520                 525
Phe Tyr Asp Asp Ile Thr Lys Tyr Val Asp Tyr Leu Asn Ser Tyr Tyr
    530                 535                 540
Tyr Leu Glu Ser Gln Lys Leu Ser Asn Asn Val Glu Asn Ile Thr Leu
545                 550                 555                 560
Thr Thr Ser Val Glu Glu Ala Leu Gly Tyr Ser Asn Lys Ile Tyr Thr
                565                 570                 575
Phe Leu Pro Ser Leu Ala Glu Lys Val Asn Lys Gly Val Gln Ala Gly
            580                 585                 590
Leu Phe Leu Asn Trp Ala Asn Glu Val Val Glu Asp Phe Thr Thr Asn
        595                 600                 605
Ile Met Lys Lys Asp Thr Leu Asp Lys Ile Ser Asp Val Ser Val Ile
    610                 615                 620
Ile Pro Tyr Ile Gly Pro Ala Leu Asn Ile Gly Asn Ser Ala Leu Arg
625                 630                 635                 640
Gly Asn Phe Asn Gln Ala Phe Ala Thr Ala Gly Val Ala Phe Leu Leu
                645                 650                 655
Glu Gly Phe Pro Glu Phe Thr Ile Pro Ala Leu Gly Val Phe Thr Phe
            660                 665                 670
Tyr Ser Ser Ile Gln Glu Arg Glu Lys Ile Ile Lys Thr Ile Glu Asn
        675                 680                 685
Cys Leu Glu Gln Arg Val Lys Arg Trp Lys Asp Ser Tyr Gln Trp Met
    690                 695                 700
Val Ser Asn Trp Leu Ser Arg Ile Thr Thr Gln Phe Asn His Ile Asn
705                 710                 715                 720
Tyr Gln Met Tyr Asp Ser Leu Ser Tyr Gln Ala Asp Ala Ile Lys Ala
                725                 730                 735
Lys Ile Asp Leu Glu Tyr Lys Lys Tyr Ser Gly Ser Asp Lys Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Lys Ser Gln Val Glu Asn Leu Lys Asn Ser Leu Asp Val Lys Ile
        755                 760                 765
Ser Glu Ala Met Asn Asn Ile Asn Lys Phe Ile Arg Glu Cys Ser Val
    770                 775                 780
Thr Tyr Leu Phe Lys Asn Met Leu Pro Lys Val Ile Asp Glu Leu Asn
785                 790                 795                 800
Lys Phe Asp Leu Arg Thr Lys Thr Glu Leu Ile Asn Leu Ile Asp Ser
                805                 810                 815
His Asn Ile Ile Leu Val Gly Glu Val Asp Arg Leu Lys Ala Lys Val
            820                 825                 830
Asn Glu Ser Phe Glu Asn Thr Met Pro Phe Asn Ile Phe Ser Tyr Thr
        835                 840                 845
Asn Asn Ser Leu Leu Lys Asp Ile Ile Asn Glu Tyr Phe Asn Ser Ile
    850                 855                 860
Asn Asp Ser Lys Ile Leu Ser Leu Gln Asn Lys Lys Asn Ala Leu Val
865                 870                 875                 880
Asp Thr Ser Gly Tyr Asn Ala Glu Val Arg Val Gly Asp Asn Val Gln
                885                 890                 895
Leu Asn Thr Ile Tyr Thr Asn Asp Phe Lys Leu Ser Ser Ser Gly Asp
            900                 905                 910
Lys Ile Ile Val Asn Leu Asn Asn Asn Ile Leu Tyr Ser Ala Ile Tyr
        915                 920                 925
Glu Asn Ser Ser Val Ser Phe Trp Ile Lys Ile Ser Lys Asp Leu Thr
    930                 935                 940
Asn Ser His Asn Glu Tyr Thr Ile Ile Asn Ser Ile Glu Gln Asn Ser
945                 950                 955                 960
Gly Trp Lys Leu Cys Ile Arg Asn Gly Asn Ile Glu Trp Ile Leu Gln
                965                 970                 975
Asp Val Asn Arg Lys Tyr Lys Ser Leu Ile Phe Asp Tyr Ser Glu Ser
            980                 985                 990
Leu Ser His Thr Gly Tyr Thr Asn Lys Trp Phe Phe Val Thr Ile Thr
        995                 1000                1005
Asn Asn Ile Met Gly Tyr Met Lys Leu Tyr Ile Asn Gly Glu Leu Lys
    1010                1015                1020
Gln Ser Gln Lys Ile Glu Asp Leu Asp Glu Val Lys Leu Asp Lys Thr
1025                1030                1035                1040
Ile Val Phe Gly Ile Asp Glu Asn Ile Asp Glu Asn Gln Met Leu Trp
                1045                1050                1055
Ile Arg Asp Phe Asn Ile Phe Ser Lys Glu Leu Ser Asn Glu Asp Ile
            1060                1065                1070
Asn Ile Val Tyr Glu Gly Gln Ile Leu Arg Asn Val Ile Lys Asp Tyr
        1075                1080                1085
Trp Gly Asn Pro Leu Lys Phe Asp Thr Glu Tyr Tyr Ile Ile Asn Asp
    1090                1095                1100
Asn Tyr Ile Asp Arg Tyr Ile Ala Pro Glu Ser Asn Val Leu Val Leu
1105                1110                1115                1120
Val Gln Tyr Pro Asp Arg Ser Lys Leu Tyr Thr Gly Asn Pro Ile Thr
                1125                1130                1135
Ile Lys Ser Val Ser Asp Lys Asn Pro Tyr Ser Arg Ile Leu Asn Gly
            1140                1145                1150
Asp Asn Ile Ile Leu His Met Leu Tyr Asn Ser Arg Lys Tyr Met Ile
        1155                1160                1165
Ile Arg Asp Thr Asp Thr Ile Tyr Ala Thr Gln Gly Gly Glu Cys Ser
    1170                1175                1180
Gln Asn Cys Val Tyr Ala Leu Lys Leu Gln Ser Asn Leu Gly Asn Tyr
1185                1190                1195                1200
Gly Ile Gly Ile Phe Ser Ile Lys Asn Ile Val Ser Lys Asn Lys Tyr
                1205                1210                1215
Cys Ser Gln Ile Phe Ser Ser Phe Arg Glu Asn Thr Met Leu Leu Ala
            1220                1225                1230
Asp Ile Tyr Lys Pro Trp Arg Phe Ser Phe Lys Asn Ala Tyr Thr Pro
        1235                1240                1245
Val Ala Val Thr Asn Tyr Glu Thr Lys Leu Leu Ser Thr Ser Ser Phe
    1250                1255                1260
Trp Lys Phe Ile Ser Arg Asp Pro Gly Trp Val Glu
1265                1270                1275
 
<210>5
<211>1252
<212>PRT
<213>肉毒梭菌毒素血清型E
 
<220>
<221>结构域
<222>(1)...(422)
<223>含有酶促结构域的轻链
 
<221>结构域
<222>(423)...(834)
<223>含有易位结构域的重链的氨基端一侧
 
<221>结构域
<222>(835)...(1252)
<223>含有结合结构域的重链的羧基端一侧
 
<400>5
Met Pro Lys Ile Asn Ser Phe Asn Tyr Asn Asp Pro Val Asn Asp Arg
 1               5                  10                  15
Thr Ile Leu Tyr Ile Lys Pro Gly Gly Cys Gln Glu Phe Tyr Lys Ser
            20                  25                  30
Phe Asn Ile Met Lys Asn Ile Trp Ile Ile Pro Glu Arg Asn Val Ile
        35                  40                  45
Gly Thr Thr Pro Gln Asp Phe His Pro Pro Thr Ser Leu Lys Asn Gly
    50                  55                  60
Asp Ser Ser Tyr Tyr Asp Pro Asn Tyr Leu Gln Ser Asp Glu Glu Lys
65                  70                  75                  80
Asp Arg Phe Leu Lys Ile Val Thr Lys Ile Phe Asn Arg Ile Asn Asn
                85                  90                  95
Asn Leu Ser Gly Gly Ile Leu Leu Glu Glu Leu Ser Lys Ala Asn Pro
            100                 105                 110
Tyr Leu Gly Asn Asp Asn Thr Pro Asp Asn Gln Phe His Ile Gly Asp
        115                 120                 125
Ala Ser Ala Val Glu Ile Lys Phe Ser Asn Gly Ser Gln Asp Ile Leu
    130                 135                 140
Leu Pro Asn Val Ile Ile Met Gly Ala Glu Pro Asp Leu Phe Glu Thr
145                 150                 155                 160
Asn Ser Ser Asn Ile Ser Leu Arg Asn Asn Tyr Met Pro Ser Asn His
                165                 170                 175
Gly Phe Gly Ser Ile Ala Ile Val Thr Phe Ser Pro Glu Tyr Ser Phe
            180                 185                 190
Arg Phe Asn Asp Asn Ser Met Asn Glu Phe Ile Gln Asp Pro Ala Leu
        195                 200                 205
Thr Leu Met His Glu Leu Ile His Ser Leu His Gly Leu Tyr Gly Ala
    210                 215                 220
Lys Gly Ile Thr Thr Lys Tyr Thr Ile Thr Gln Lys Gln Asn Pro Leu
225                 230                 235                 240
Ile Thr Asn Ile Arg Gly Thr Asn Ile Glu Glu Phe Leu Thr Phe Gly
                245                 250                 255
Gly Thr Asp Leu Asn Ile Ile Thr Ser Ala Gln Ser Asn Asp Ile Tyr
            260                 265                 270
Thr Asn Leu Leu Ala Asp Tyr Lys Lys Ile Ala Ser Lys Leu Ser Lys
        275                 280                 285
Val Gln Val Ser Asn Pro Leu Leu Asn Pro Tyr Lys Asp Val Phe Glu
    290                 295                 300
Ala Lys Tyr Gly Leu Asp Lys Asp Ala Ser Gly Ile Tyr Ser Val Asn
305                 310                 315                 320
Ile Asn Lys Phe Asn Asp Ile Phe Lys Lys Leu Tyr Ser Phe Thr Glu
                325                 330                 335
Phe Asp Leu Ala Thr Lys Phe Gln Val Lys Cys Arg Gln Thr Tyr Ile
            340                 345                 350
Gly Gln Tyr Lys Tyr Phe Lys Leu Ser Asn Leu Leu Asn Asp Ser Ile
        355                 360                 365
Tyr Asn Ile Ser Glu Gly Tyr Asn Ile Asn Asn Leu Lys Val Asn Phe
    370                 375                 380
Arg Gly Gln Asn Ala Asn Leu Asn Pro Arg Ile Ile Thr Pro Ile Thr
385                 390                 395                 400
Gly Arg Gly Leu Val Lys Lys Ile Ile Arg Phe Cys Lys Asn Ile Val
                405                 410                 415
Ser Val Lys Gly Ile Arg Lys Ser Ile Cys Ile Glu Ile Asn Asn Gly
            420                 425                 430
Glu Leu Phe Phe Val Ala Ser Glu Asn Ser Tyr Asn Asp Asp Asn Ile
        435                 440                 445
Asn Thr Pro Lys Glu Ile Asp Asp Thr Val Thr Ser Asn Asn Asn Tyr
    450                 455                 460
Glu Asn Asp Leu Asp Gln Val Ile Leu Asn Phe Asn Ser Glu Ser Ala
465                 470                 475                 480
Pro Gly Leu Ser Asp Glu Lys Leu Asn Leu Thr Ile Gln Asn Asp Ala
                485                 490                 495
Tyr Ile Pro Lys Tyr Asp Ser Asn Gly Thr Ser Asp Ile Glu Gln His
            500                 505                 510
Asp Val Asn Glu Leu Asn Val Phe Phe Tyr Leu Asp Ala Gln Lys Val
        515                 520                 525
Pro Glu Gly Glu Asn Asn Val Asn Leu Thr Ser Ser Ile Asp Thr Ala
    530                 535                 540
Leu Leu Glu Gln Pro Lys Ile Tyr Thr Phe Phe Ser Ser Glu Phe Ile
545                 550                 555                 560
Asn Asn Val Asn Lys Pro Val Gln Ala Ala Leu Phe Val Ser Trp Ile
                565                 570                 575
Gln Gln Val Leu Val Asp Phe Thr Thr Glu Ala Asn Gln Lys Ser Thr
            580                 585                 590
Val Asp Lys Ile Ala Asp Ile Ser Ile Val Val Pro Tyr Ile Gly Leu
        595                 600                 605
Ala Leu Asn Ile Gly Asn Glu Ala Gln Lys Gly Asn Phe Lys Asp Ala
    610                 615                 620
Leu Glu Leu Leu Gly Ala Gly Ile Leu Leu Glu Phe Glu Pro Glu Leu
625                 630                 635                 640
Leu Ile Pro Thr Ile Leu Val Phe Thr Ile Lys Ser Phe Leu Gly Ser
                645                 650                 655
Ser Asp Asn Lys Asn Lys Val Ile Lys Ala Ile Asn Asn Ala Leu Lys
            660                 665                 670
Glu Arg Asp Glu Lys Trp Lys Glu Val Tyr Ser Phe Ile Val Ser Asn
        675                 680                 685
Trp Met Thr Lys Ile Asn Thr Gln Phe Asn Lys Arg Lys Glu Gln Met
    690                 695                 700
Tyr Gln Ala Leu Gln Asn Gln Val Asn Ala Ile Lys Thr Ile Ile Glu
705                 710                 715                 720
Ser Lys Tyr Asn Ser Tyr Thr Leu Glu Glu Lys Asn Glu Leu Thr Asn
                725                 730                 735
Lys Tyr Asp Ile Lys Gln Ile Glu Asn Glu Leu Asn Gln Lys Val Ser
            740                 745                 750
Ile Ala Met Asn Asn Ile Asp Arg Phe Leu Thr Glu Ser Ser Ile Ser
        755                 760                 765
Tyr Leu Met Lys Leu Ile Asn Glu Val Lys Ile Asn Lys Leu Arg Glu
    770                 775                 780
Tyr Asp Glu Asn Val Lys Thr Tyr Leu Leu Asn Tyr Ile Ile Gln His
785                 790                 795                 800
Gly Ser Ile Leu Gly Glu Ser Gln Gln Glu Leu Asn Ser Met Val Thr
                805                 810                 815
Asp Thr Leu Asn Asn Ser Ile Pro Phe Lys Leu Ser Ser Tyr Thr Asp
            820                 825                 830
Asp Lys Ile Leu Ile Ser Tyr Phe Asn Lys Phe Phe Lys Arg Ile Lys
        835                 840                 845
Ser Ser Ser Val Leu Asn Met Arg Tyr Lys Asn Asp Lys Tyr Val Asp
    850                 855                 860
Thr Ser Gly Tyr Asp Ser Asn Ile Asn Ile Asn Gly Asp Val Tyr Lys
865                 870                 875                 880
Tyr Pro Thr Asn Lys Asn Gln Phe Gly Ile Tyr Asn Asp Lys Leu Ser
                885                 890                 895
Glu Val Asn Ile Ser Gln Asn Asp Tyr Ile Ile Tyr Asp Asn Lys Tyr
            900                 905                 910
Lys Asn Phe Ser Ile Ser Phe Trp Val Arg Ile Pro Asn Tyr Asp Asn
        915                 920                 925
Lys Ile Val Asn Val Asn Asn Glu Tyr Thr Ile Ile Asn Cys Met Arg
    930                 935                 940
Asp Asn Asn Ser Gly Trp Lys Val Ser Leu Asn His Asn Glu Ile Ile
945                 950                 955                 960
Trp Thr Leu Gln Asp Asn Ala Gly Ile Asn Gln Lys Leu Ala Phe Asn
                965                 970                 975
Tyr Gly Asn Ala Asn Gly Ile Ser Asp Tyr Ile Asn Lys Trp Ile Phe
            980                 985                 990
Val Thr Ile Thr Asn Asp Arg Leu Gly Asp Ser Lys Leu Tyr Ile Asn
        995                 1000                1005
Gly Asn Leu Ile Asp Gln Lys Ser Ile Leu Asn Leu Gly Asn Ile His
    1010                1015                1020
Val Ser Asp Asn Ile Leu Phe Lys Ile Val Asn Cys Ser Tyr Thr Arg
1025                1030                1035                1040
Tyr Ile Gly Ile Arg Tyr Phe Asn Ile Phe Asp Lys Glu Leu Asp Glu
                1045                1050                1055
Thr Glu Ile Gln Thr Leu Tyr Ser Asn Glu Pro Asn Thr Asn Ile Leu
            1060                1065                1070
Lys Asp Phe Trp Gly Asn Tyr Leu Leu Tyr Asp Lys Glu Tyr Tyr Leu
        1075                1080                1085
Leu Asn Val Leu Lys Pro Asn Asn Phe Ile Asp Arg Arg Lys Asp Ser
    1090                1095                1100
Thr Leu Ser Ile Asn Asn Ile Arg Ser Thr Ile Leu Leu Ala Asn Arg
1105                1110                1115                1120
Leu Tyr Ser Gly Ile Lys Val Lys Ile Gln Arg Val Asn Asn Ser Ser
1               125                 1130                1135
Thr Asn Asp Asn Leu Val Arg Lys Asn Asp Gln Val Tyr Ile Asn Phe
            1140                1145                1150
Val Ala Ser Lys Thr His Leu Phe Pro Leu Tyr Ala Asp Thr Ala Thr
        1155                1160                1165
Thr Asn Lys Glu Lys Thr Ile Lys Ile Ser Ser Ser Gly Asn Arg Phe
    1170                1175                1180
Asn Gln Val Val Val Met Asn Ser Val Gly Asn Asn Cys Thr Met Asn
1185                1190                1195                1200
Phe Lys Asn Asn Asn Gly Asn Asn Ile Gly Leu Leu Gly Phe Lys Ala
                1205                1210                1215
Asp Thr Val Val Ala Ser Thr Trp Tyr Tyr Thr His Met Arg Asp His
            1220                1225                1230
Thr Asn Ser Asn Gly Cys Phe Trp Asn Phe Ile Ser Glu Glu His Gly
        1235                1240                1245
Trp Gln Glu Lys
    1250
 
<210>6
<211>1274
<212>PRT
<213>肉毒梭菌毒素血清型F
 
<220>
<221>结构域
<222>(1)...(436)
<223>含有酶促结构域的轻链
 
<221>结构域
<222>(437)...(852)
<223>含有易位结构域的重链的氨基端一侧
 
<221>结构域
<222>(853)...(1274)
<223>含有结合结构域的重链的羧基端一侧
 
<400>6
Met Pro Val Ala Ile Asn Ser Phe Asn Tyr Asn Asp Pro Val Asn Asp
 1               5                  10                  15
Asp Thr Ile Leu Tyr Met Gln Ile Pro Tyr Glu Glu Lys Ser Lys Lys
            20                  25                  30
Tyr Tyr Lys Ala Phe Glu Ile Met Arg Asn Val Trp Ile Ile Pro Glu
        35                  40                  45
Arg Asn Thr Ile Gly Thr Asn Pro Ser Asp Phe Asp Pro Pro Ala Ser
    50                  55                  60
Leu Lys Asn Gly Ser Ser Ala Tyr Tyr Asp Pro Asn Tyr Leu Thr Thr
65                  70                  75                  80
Asp Ala Glu Lys Asp Arg Tyr Leu Lys Thr Thr Ile Lys Leu Phe Lys
                85                  90                  95
Arg Ile Asn Ser Asn Pro Ala Gly Lys Val Leu Leu Gln Glu Ile Ser
            100                 105                 110
Tyr Ala Lys Pro Tyr Leu Gly Asn Asp His Thr Pro Ile Asp Glu Phe
        115                 120                 125
Ser Pro Val Thr Arg Thr Thr Ser Val Asn Ile Lys Leu Ser Thr Asn
    130                 135                 140
Val Glu Ser Ser Met Leu Leu Asn Leu Leu Val Leu Gly Ala Gly Pro
145                 150                 155                 160
Asp Ile Phe Glu Ser Cys Cys Tyr Pro Val Arg Lys Leu Ile Asp Pro
                165                 170                 175
Asp Val Val Tyr Asp Pro Ser Asn Tyr Gly Phe Gly Ser Ile Asn Ile
            180                 185                 190
Val Thr Phe Ser Pro Glu Tyr Glu Tyr Thr Phe Asn Asp Ile Ser Gly
        195                 200                 205
Gly His Asn Ser Ser Thr Glu Ser Phe Ile Ala Asp Pro Ala Ile Ser
    210                 215                 220
Leu Ala His Glu Leu Ile His Ala Leu His Gly Leu Tyr Gly Ala Arg
225                 230                 235                 240
Gly Val Thr Tyr Glu Glu Thr Ile Glu Val Lys Gln Ala Pro Leu Met
                245                 250                 255
Ile Ala Glu Lys Pro Ile Arg Leu Glu Glu Phe Leu Thr Phe Gly Gly
            260                 265                 270
Gln Asp Leu Asn Ile Ile Thr Ser Ala Met Lys Glu Lys Ile Tyr Asn
        275                 280                 285
Asn Leu Leu Ala Asn Tyr Glu Lys Ile Ala Thr Arg Leu Ser Glu Val
    290                 295                 300
Asn Ser Ala Pro Pro Glu Tyr Asp Ile Asn Glu Tyr Lys Asp Tyr Phe
305                 310                 315                 320
Gln Trp Lys Tyr Gly Leu Asp Lys Asn Ala Asp Gly Ser Tyr Thr Val
                325                 330                 335
Asn Glu Asn Lys Phe Asn Glu Ile Tyr Lys Lys Leu Tyr Ser Phe Thr
            340                 345                 350
Glu Ser Asp Leu Ala Asn Lys Phe Lys Val Lys Cys Arg Asn Thr Tyr
        355                 360                 365
Phe Ile Lys Tyr Glu Phe Leu Lys Val Pro Asn Leu Leu Asp Asp Asp
    370                 375                 380
Ile Tyr Thr Val Ser Glu Gly Phe Asn Ile Gly Asn Leu Ala Val Asn
385                 390                 395                 400
Asn Arg Gly Gln Ser Ile Lys Leu Asn Pro Lys Ile Ile Asp Ser Ile
                405                 410                 415
Pro Asp Lys Gly Leu Val Glu Lys Ile Val Lys Phe Cys Lys Ser Val
            420                 425                 430
Ile Pro Arg Lys Gly Thr Lys Ala Pro Pro Arg Leu Cys Ile Arg Val
        435                 440                 445
Asn Asn Ser Glu Leu Phe Phe Val Ala Ser Glu Ser Ser Tyr Asn Glu
    450                 455                 460
Asn Asp Ile Asn Thr Pro Lys Glu Ile Asp Asp Thr Thr Asn Leu Asn
465                 470                 475                 480
Asn Asn Tyr Arg Asn Asn Leu Asp Glu Val Ile Leu Asp Tyr Asn Ser
                485                 490                 495
Gln Thr Ile Pro Gln Ile Ser Asn Arg Thr Leu Asn Thr Leu Val Gln
            500                 505                 510
Asp Asn Ser Tyr Val Pro Arg Tyr Asp Ser Asn Gly Thr Ser Glu Ile
        515                 520                 525
Glu Glu Tyr Asp Val Val Asp Phe Asn Val Phe Phe Tyr Leu His Ala
    530                 535                 540
Gln Lys Val Pro Glu Gly Glu Thr Asn Ile Ser Leu Thr Ser Ser Ile
545                 550                 555                 560
Asp Thr Ala Leu Leu Glu Glu Ser Lys Asp Ile Phe Phe Ser Ser Glu
                565                 570                 575
Phe Ile Asp Thr Ile Asn Lys Pro Val Asn Ala Ala Leu Phe Ile Asp
            580                 585                 590
Trp Ile Ser Lys Val Ile Arg Asp Phe Thr Thr Glu Ala Thr Gln Lys
        595                 600                 605
Ser Thr Val Asp Lys Ile Ala Asp Ile Ser Leu Ile Val Pro Tyr Val
    610                 615                 620
Gly Leu Ala Leu Asn Ile Ile Ile Glu Ala Glu Lys Gly Asn Phe Glu
625                 630                 635                 640
Glu Ala Phe Glu Leu Leu Gly Val Gly Ile Leu Leu Glu Phe Val Pro
                645                 650                 655
Glu Leu Thr Ile Pro Val Ile Leu Val Phe Thr Ile Lys Ser Tyr Ile
            660                 665                 670
Asp Ser Tyr Glu Asn Lys Asn Lys Ala Ile Lys Ala Ile Asn Asn Ser
        675                 680                 685
Leu Ile Glu Arg Glu Ala Lys Trp Lys Glu Ile Tyr Ser Trp Ile Val
    690                 695                 700
Ser Asn Trp Leu Thr Arg Ile Asn Thr Gln Phe Asn Lys Arg Lys Glu
705                 710                 715                 720
Gln Met Tyr Gln Ala Leu Gln Asn Gln Val Asp Ala Ile Lys Thr Ala
                725                 730                 735
Ile Glu Tyr Lys Tyr Asn Asn Tyr Thr Ser Asp Glu Lys Asn Arg Leu
            740                 745                 750
Glu Ser Glu Tyr Asn Ile Asn Asn Ile Glu Glu Glu Leu Asn Lys Lys
        755                 760                 765
Val Ser Leu Ala Met Lys Asn Ile Glu Arg Phe Met Thr Glu Ser Ser
    770                 775                 780
Ile Ser Tyr Leu Met Lys Leu Ile Asn Glu Ala Lys Val Gly Lys Leu
785                 790                 795                 800
Lys Lys Tyr Asp Asn His Val Lys Ser Asp Leu Leu Asn Tyr Ile Leu
                805                 810                 815
Asp His Arg Ser Ile Leu Gly Glu Gln Thr Asn Glu Leu Ser Asp Leu
            820                 825                 830
Val Thr Ser Thr Leu Asn Ser Ser Ile Pro Phe Glu Leu Ser Ser Tyr
        835                 840                 845
Thr Asn Asp Lys Ile Leu Ile Ile Tyr Phe Asn Arg Leu Tyr Lys Lys
    850                 855                 860
Ile Lys Asp Ser Ser Ile Leu Asp Met Arg Tyr Glu Asn Asn Lys Phe
865                 870                 875                 880
Ile Asp Ile Ser Gly Tyr Gly Ser Asn Ile Ser Ile Asn Gly Asn Val
                885                 890                 895
Tyr Ile Tyr Ser Thr Asn Arg Asn Gln Phe Gly Ile Tyr Asn Ser Arg
            900                 905                 910
Leu Ser Glu Val Asn Ile Ala Gln Asn Asn Asp Ile Ile Tyr Asn Ser
        915                 920                 925
Arg Tyr Gln Asn Phe Ser Ile Ser Phe Trp Val Arg Ile Pro Lys His
    930                 935                 940
Tyr Lys Pro Met Asn His Asn Arg Glu Tyr Thr Ile Ile Asn Cys Met
945                 950                 955                 960
Gly Asn Asn Asn Ser Gly Trp Lys Ile Ser Leu Arg Thr Val Arg Asp
                965                 970                 975
Cys Glu Ile Ile Trp Thr Leu Gln Asp Thr Ser Gly Asn Lys Glu Asn
            980                 985                 990
Leu Ile Phe Arg Tyr Glu Glu Leu Asn Arg Ile Ser Asn Tyr Ile Asn
        995                 1000                1005
Lys Trp Ile Phe Val Thr Ile Thr Asn Asn Arg Leu Gly Asn Ser Arg
    1010                1015                1020
Ile Tyr Ile Asn Gly Asn Leu Ile Val Glu Lys Ser Ile Ser Asn Leu
1025                1030                1035                1040
Gly Asp Ile His Val Ser Asp Asn Ile Leu Phe Lys Ile Val Gly Cys
                1045                1050                1055
Asp Asp Glu Thr Tyr Val Gly Ile Arg Tyr Phe Lys Val Phe Asn Thr
            1060                1065                1070
Glu Leu Asp Lys Thr Glu Ile Glu Thr Leu Tyr Ser Asn Glu Pro Asp
        1075                1080                1085
Pro Ser Ile Leu Lys Asn Tyr Trp Gly Asn Tyr Leu Leu Tyr Asn Lys
    1090                1095                1100
Lys Tyr Tyr Leu Phe Asn Leu Leu Arg Lys Asp Lys Tyr Ile Thr Leu
1105                1110                1115                1120
Asn Ser Gly Ile Leu Asn Ile Asn Gln Gln Arg Gly Val Thr Glu Gly
                1125                1130                1135
Ser Val Phe Leu Asn Tyr Lys Leu Tyr Glu Gly Val Glu Val Ile Ile
            1140                1145                1150
Arg Lys Asn Gly Pro Ile Asp Ile Ser Asn Thr Asp Asn Phe Val Arg
        1155                1160                1165
Lys Asn Asp Leu Ala Tyr Ile Asn Val Val Asp Arg Gly Val Glu Tyr
    1170                1175                1180
Arg Leu Tyr Ala Asp Thr Lys Ser Glu Lys Glu Lys Ile Ile Arg Thr
1185                1190                1195                1200
Ser Asn Leu Asn Asp Ser Leu Gly Gln Ile Ile Val Met Asp Ser Ile
                1205                1210                1215
Gly Asn Asn Cys Thr Met Asn Phe Gln Asn Asn Asn Gly Ser Asn Ile
            1220                1225                1230
Gly Leu Leu Gly Phe His Ser Asn Asn Leu Val Ala Ser Ser Trp Tyr
        1235                1240                1245
Tyr Asn Asn Ile Arg Arg Asn Thr Ser Ser Asn Gly Cys Phe Trp Ser
    1250                1255                1260
Ser Ile Ser Lys Glu Asn Gly Trp Lys Glu
1265                1270
 
<210>7
<211>1297
<212>PRT
<213>肉毒梭菌毒素血清型G
 
<220>
<221>结构域
<222>(1)...(442)
<223>含有酶促结构域的轻链
 
<221>结构域
<222>(443)...(852)
<223>含有易位结构域的重链的氨基端一侧
 
<221>结构域
<222>(853)...(1297)
<223>含有结合结构域的重链的羧基端一侧
 
<400>7
Met Pro Val Asn Ile Lys Asn Phe Asn Tyr Asn Asp Pro Ile Asn Asn
 1               5                  10                  15
Asp Asp Ile Ile Met Met Glu Pro Phe Asn Asp Pro Gly Pro Gly Thr
            20                  25                  30
Tyr Tyr Lys Ala Phe Arg Ile Ile Asp Arg Ile Trp Ile Val Pro Glu
        35                  40                  45
Arg Phe Thr Tyr Gly Phe Gln Pro Asp Gln Phe Asn Ala Ser Thr Gly
    50                  55                  60
Val Phe Ser Lys Asp Val Tyr Glu Tyr Tyr Asp Pro Thr Tyr Leu Lys
65                  70                  75                  80
Thr Asp Ala Glu Lys Asp Lys Phe Leu Lys Thr Met Ile Lys Leu Phe
                85                  90                  95
Asn Arg Ile Asn Ser Lys Pro Ser Gly Gln Arg Leu Leu Asp Met Ile
            100                 105                 110
Val Asp Ala Ile Pro Tyr Leu Gly Asn Ala Ser Thr Pro Pro Asp Lys
        115                 120                 125
Phe Ala Ala Asn Val Ala Asn Val Ser Ile Asn Lys Lys Ile Ile Gln
    130                 135                 140
Pro Gly Ala Glu Asp Gln Ile Lys Gly Leu Met Thr Asn Leu Ile Ile
145                 150                 155                 160
Phe Gly Pro Gly Pro Val Leu Ser Asp Asn Phe Thr Asp Ser Met Ile
                165                 170                 175
Met Asn Gly His Ser Pro Ile Ser Glu Gly Phe Gly Ala Arg Met Met
            180                 185                 190
Ile Arg Phe Cys Pro Ser Cys Leu Asn Val Phe Asn Asn Val Gln Glu
        195                 200                 205
Asn Lys Asp Thr Ser Ile Phe Ser Arg Arg Ala Tyr Phe Ala Asp Pro
    210                 215                 220
Ala Leu Thr Leu Met His Glu Leu Ile His Val Leu His Gly Leu Tyr
225                 230                 235                 240
Gly Ile Lys Ile Ser Asn Leu Pro Ile Thr Pro Asn Thr Lys Glu Phe
                245                 250                 255
Phe Met Gln His Ser Asp Pro Val Gln Ala Glu Glu Leu Tyr Thr Phe
            260                 265                 270
Gly Gly His Asp Pro Ser Val Ile Ser Pro Ser Thr Asp Met Asn Ile
        275                 280                 285
Tyr Asn Lys Ala Leu Gln Asn Phe Gln Asp Ile Ala Asn Arg Leu Asn
    290                 295                 300
Ile Val Ser Ser Ala Gln Gly Ser Gly Ile Asp Ile Ser Leu Tyr Lys
305                 310                 315                 320
Gln Ile Tyr Lys Asn Lys Tyr Asp Phe Val Glu Asp Pro Asn Gly Lys
                325                 330                 335
Tyr Ser Val Asp Lys Asp Lys Phe Asp Lys Leu Tyr Lys Ala Leu Met
            340                 345                 350
Phe Gly Phe Thr Glu Thr Asn Leu Ala Gly Glu Tyr Gly Ile Lys Thr
        355                 360                 365
Arg Tyr Ser Tyr Phe Ser Glu Tyr Leu Pro Pro Ile Lys Thr Glu Lys
    370                 375                 380
Leu Leu Asp Asn Thr Ile Tyr Thr Gln Asn Glu Gly Phe Asn Ile Ala
385                 390                 395                 400
Ser Lys Asn Leu Lys Thr Glu Phe Asn Gly Gln Asn Lys Ala Val Asn
                405                 410                 415
Lys Glu Ala Tyr Glu Glu Ile Ser Leu Glu His Leu Val Ile Tyr Arg
            420                 425                 430
Ile Ala Met Cys Lys Pro Val Met Tyr Lys Asn Thr Gly Lys Ser Glu
        435                 440                 445
Gln Cys Ile Ile Val Asn Asn Glu Asp Leu Phe Phe Ile Ala Asn Lys
    450                 455                 460
Asp Ser Phe Ser Lys Asp Leu Ala Lys Ala Glu Thr Ile Ala Tyr Asn
465                 470                 475                 480
Thr Gln Asn Asn Thr Ile Glu Asn Asn Phe Ser Ile Asp Gln Leu Ile
                485                 490                 495
Leu Asp Asn Asp Leu Ser Ser Gly Ile Asp Leu Pro Asn Glu Asn Thr
            500                 505                 510
Glu Pro Phe Thr Asn Phe Asp Asp Ile Asp Ile Pro Val Tyr Ile Lys
        515                 520                 525
Gln Ser Ala Leu Lys Lys Ile Phe Val Asp Gly Asp Ser Leu Phe Glu
    530                 535                 540
Tyr Leu His Ala Gln Thr Phe Pro Ser Asn Ile Glu Asn Leu Gln Leu
545                 550                 555                 560
Thr Asn Ser Leu Asn Asp Ala Leu Arg Asn Asn Asn Lys Val Tyr Thr
                565                 570                 575
Phe Phe Ser Thr Asn Leu Val Glu Lys Ala Asn Thr Val Val Gly Ala
            580                 585                 590
Ser Leu Phe Val Asn Trp Val Lys Gly Val Ile Asp Asp Phe Thr Ser
        595                 600                 605
Glu Ser Thr Gln Lys Ser Thr Ile Asp Lys Val Ser Asp Val Ser Ile
    610                 615                 620
Ile Ile Pro Tyr Ile Gly Pro Ala Leu Asn Val Gly Asn Glu Thr Ala
625                 630                 635                 640
Lys Glu Asn Phe Lys Asn Ala Phe Glu Ile Gly Gly Ala Ala Ile Leu
                645                 650                 655
Met Glu Phe Ile Pro Glu Leu Ile Val Pro Ile Val Gly Phe Phe Thr
            660                 665                 670
Leu Glu Ser Tyr Val Gly Asn Lys Gly His Ile Ile Met Thr Ile Ser
        675                 680                 685
Asn Ala Leu Lys Lys Arg Asp Gln Lys Trp Thr Asp Met Tyr Gly Leu
    690                 695                 700
Ile Val Ser Gln Trp Leu Ser Thr Val Asn Thr Gln Phe Tyr Thr Ile
705                 710                 715                 720
Lys Glu Arg Met Tyr Asn Ala Leu Asn Asn Gln Ser Gln Ala Ile Glu
                725                 730                 735
Lys Ile Ile Glu Asp Gln Tyr Asn Arg Tyr Ser Glu Glu Asp Lys Met
            740                 745                 750
Asn Ile Asn Ile Asp Phe Asn Asp Ile Asp Phe Lys Leu Asn Gln Ser
        755                 760                 765
Ile Asn Leu Ala Ile Asn Asn Ile Asp Asp Phe Ile Asn Gln Cys Ser
    770                 775                 780
Ile Ser Tyr Leu Met Asn Arg Met Ile Pro Leu Ala Val Lys Lys Leu
785                 790                 795                 800
Lys Asp Phe Asp Asp Asn Leu Lys Arg Asp Leu Leu Glu Tyr Ile Asp
                805                 810                 815
Thr Asn Glu Leu Tyr Leu Leu Asp Glu Val Asn Ile Leu Lys Ser Lys
            820                 825                 830
Val Asn Arg His Leu Lys Asp Ser Ile Pro Phe Asp Leu Ser Leu Tyr
        835                 840                 845
Thr Lys Asp Thr Ile Leu Ile Gln Val Phe Asn Asn Tyr Ile Ser Asn
    850                 855                 860
Ile Ser Ser Asn Ala Ile Leu Ser Leu Ser Tyr Arg Gly Gly Arg Leu
865                 870                 875                 880
Ile Asp Ser Ser Gly Tyr Gly Ala Thr Met Asn Val Gly Ser Asp Val
                885                 890                 895
Ile Phe Asn Asp Ile Gly Asn Gly Gln Phe Lys Leu Asn Asn Ser Glu
            900                 905                 910
Asn Ser Asn Ile Thr Ala His Gln Ser Lys Phe Val Val Tyr Asp Ser
        915                 920                 925
Met Phe Asp Asn Phe Ser Ile Asn Phe Trp Val Arg Thr Pro Lys Tyr
    930                 935                 940
Asn Asn Asn Asp Ile Gln Thr Tyr Leu Gln Asn Glu Tyr Thr Ile Ile
945                 950                 955                 960
Ser Cys Ile Lys Asn Asp Ser Gly Trp Lys Val Ser Ile Lys Gly Asn
                965                 970                 975
Arg Ile Ile Trp Thr Leu Ile Asp Val Asn Ala Lys Ser Lys Ser Ile
            980                 985                 990
Phe Phe Glu Tyr Ser Ile Lys Asp Asn Ile Ser Asp Tyr Ile Asn Lys
        995                 1000                1005
Trp Phe Ser Ile Thr Ile Thr Asn Asp Arg Leu Gly Asn Ala Asn Ile
    1010                1015                1020
Tyr Ile Asn Gly Ser Leu Lys Lys Ser Glu Lys Ile Leu Asn Leu Asp
1025                1030                1035                1040
Arg Ile Asn Ser Ser Asn Asp Ile Asp Phe Lys Leu Ile Asn Cys Thr
                1045                1050                1055
Asp Thr Thr Lys Phe Val Trp Ile Lys Asp Phe Asn Ile Phe Gly Arg
            1060                1065                1070
Glu Leu Asn Ala Thr Glu Val Ser Ser Leu Tyr Trp Ile Gln Ser Ser
        1075                1080                1085
Thr Asn Thr Leu Lys Asp Phe Trp Gly Asn Pro Leu Arg Tyr Asp Thr
    1090                1095                1100
Gln Tyr Tyr Leu Phe Asn Gln Gly Met Gln Asn Ile Tyr Ile Lys Tyr
1105                1110                1115                1120
Phe Ser Lys Ala Ser Met Gly Glu Thr Ala Pro Arg Thr Asn Phe Asn
                1125                1130                1135
Asn Ala Ala Ile Asn Tyr Gln Asn Leu Tyr Leu Gly Leu Arg Phe Ile
            1140                1145                1150
Ile Lys Lys Ala Ser Asn Ser Arg Asn Ile Asn Asn Asp Asn Ile Val
        1155                1160                1165
Arg Glu Gly Asp Tyr Ile Tyr Leu Asn Ile Asp Asn Ile Ser Asp Glu
    1170                1175                1180
Ser Tyr Arg Val Tyr Val Leu Val Asn Ser Lys Glu Ile Gln Thr Gln
1185                1190                1195                1200
Leu Phe Leu Ala Pro Ile Asn Asp Asp Pro Thr Phe Tyr Asp Val Leu
                1205                1210                1215
Gln Ile Lys Lys Tyr Tyr Glu Lys Thr Thr Tyr Asn Cys Gln Ile Leu
            1220                1225                1230
Cys Glu Lys Asp Thr Lys Thr Phe Gly Leu Phe Gly Ile Gly Lys Phe
        1235                1240                1245
Val Lys Asp Tyr Gly Tyr Val Trp Asp Thr Tyr Asp Asn Tyr Phe Cys
    1250                1255                1260
Ile Ser Gln Trp Tyr Leu Arg Arg Ile Ser Glu Asn Ile Asn Lys Leu
1265                1270                1275                1280
Arg Leu Gly Cys Asn Trp Gln Phe Ile Pro Val Asp Glu Gly Trp Thr
                1285                1290                1295
Glu
 
<210>8
<211>1315
<212>PRT
<213>破伤风梭菌(Clostridium tetani)
 
<220>
<221>结构域
<222>(1)...(441)
<223>含有酶促结构域的轻链
 
<221>结构域
<222>(442)...(870)
<223>含有易位结构域的重链的氨基端一侧
<221>结构域
<222>(871)...(1315)
<223>含有结合结构域的重链的羧基端一侧
 
<400>8
Met Pro Ile Thr Ile Asn Asn Phe Arg Tyr Ser Asp Pro Val Asn Asn
 1               5                  10                  15
Asp Thr Ile Ile Met Met Glu Pro Pro Tyr Cys Lys Gly Leu Asp Ile
            20                  25                  30
Tyr Tyr Lys Ala Phe Lys Ile Thr Asp Arg Ile Trp Ile Val Pro Glu
        35                  40                  45
Arg Tyr Glu Phe Gly Thr Lys Pro Glu Asp Phe Asn Pro Pro Ser Ser
    50                  55                  60
Leu Ile Glu Gly Ala Ser Glu Tyr Tyr Asp Pro Asn Tyr Leu Arg Thr
65                  70                  75                  80
Asp Ser Asp Lys Asp Arg Phe Leu Gln Thr Met Val Lys Leu Phe Asn
                85                  90                  95
Arg Ile Lys Asn Asn Val Ala Gly Glu Ala Leu Leu Asp Lys Ile Ile
            100                 105                 110
Asn Ala Ile Pro Tyr Leu Gly Asn Ser Tyr Ser Leu Leu Asp Lys Phe
        115                 120                 125
Asp Thr Asn Ser Asn Ser Val Ser Phe Asn Leu Leu Glu Gln Asp Pro
    130                 135                 140
Ser Gly Ala Thr Thr Lys Ser Ala Met Leu Thr Asn Leu Ile Ile Phe
145                 150                 155                 160
Gly Pro Gly Pro Val Leu Asn Lys Asn Glu Val Arg Gly Ile Val Leu
                165                 170                 175
Arg Val Asp Asn Lys Asn Tyr Phe Pro Cys Arg Asp Gly Phe Gly Ser
            180                 185                 190
Ile Met Gln Met Ala Phe Cys Pro Glu Tyr Val Pro Thr Phe Asp Asn
        195                 200                 205
Val Ile Glu Asn Ile Thr Ser Leu Thr Ile Gly Lys Ser Lys Tyr Phe
    210                 215                 220
Gln Asp Pro Ala Leu Leu Leu Met His Glu Leu Ile His Val Leu His
225                 230                 235                 240
Gly Leu Tyr Gly Met Gln Val Ser Ser His Glu Ile Ile Pro Ser Lys
                245                 250                 255
Gln Glu Ile Tyr Met Gln His Thr Tyr Pro Ile Ser Ala Glu Glu Leu
            260                 265                 270
Phe Thr Phe Gly Gly Gln Asp Ala Asn Leu Ile Ser Ile Asp Ile Lys
        275                 280                 285
Asn Asp Leu Tyr Glu Lys Thr Leu Asn Asp Tyr Lys Ala Ile Ala Asn
    290                 295                 300
Lys Leu Ser Gln Val Thr Ser Cys Asn Asp Pro Asn Ile Asp Ile Asp
305                 310                 315                 320
Ser Tyr Lys Gln Ile Tyr Gln Gln Lys Tyr Gln Phe Asp Lys Asp Ser
                325                 330                 335
Asn Gly Gln Tyr Ile Val Asn Glu Asp Lys Phe Gln Ile Leu Tyr Asn
            340                 345                 350
Ser Ile Met Tyr Gly Phe Thr Glu Ile Glu Leu Gly Lys Lys Phe Asn
        355                 360                 365
Ile Lys Thr Arg Leu Ser Tyr Phe Ser Met Asn His Asp Pro Val Lys
    370                 375                 380
Ile Pro Asn Leu Leu Asp Asp Thr Ile Tyr Asn Asp Thr Glu Gly Phe
385                 390                 395                 400
Asn Ile Glu Ser Lys Asp Leu Lys Ser Glu Tyr Lys Gly Gln Asn Met
                405                 410                 415
Arg Val Asn Thr Asn Ala Phe Arg Asn Val Asp Gly Ser Gly Leu Val
            420                 425                 430
Ser Lys Leu Ile Gly Leu Cys Lys Lys Ile Ile Pro Pro Thr Asn Ile
        435                 440                 445
Arg Glu Asn Leu Tyr Asn Arg Thr Ala Ser Leu Thr Asp Leu Gly Gly
    450                 455                 460
Glu Leu Cys Ile Lys Ile Lys Asn Glu Asp Leu Thr Phe Ile Ala Glu
465                 470                 475                 480
Lys Asn Ser Phe Ser Glu Glu Pro Phe Gln Asp Glu Ile Val Ser Tyr
                485                 490                 495
Asn Thr Lys Asn Lys Pro Leu Asn Phe Asn Tyr Ser Leu Asp Lys Ile
            500                 505                 510
Ile Val Asp Tyr Asn Leu Gln Ser Lys Ile Thr Leu Pro Asn Asp Arg
        515                 520                 525
Thr Thr Pro Val Thr Lys Gly Ile Pro Tyr Ala Pro Glu Tyr Lys Ser
    530                 535                 540
Asn Ala Ala Ser Thr Ile Glu Ile His Asn Ile Asp Asp Asn Thr Ile
545                 550                 555                 560
Tyr Gln Tyr Leu Tyr Ala Gln Lys Ser Pro Thr Thr Leu Gln Arg Ile
                565                 570                 575
Thr Met Thr Asn Ser Val Asp Asp Ala Leu Ile Asn Ser Thr Lys Ile
            580                 585                 590
Tyr Ser Tyr Phe Pro Ser Val Ile Ser Lys Val Asn Gln Gly Ala Gln
        595                 600                 605
Gly Ile Leu Phe Leu Gln Trp Val Arg Asp Ile Ile Asp Asp Phe Thr
    610                 615                 620
Asn Glu Ser Ser Gln Lys Thr Thr Ile Asp Lys Ile Ser Asp Val Ser
625                 630                 635                 640
Thr Ile Val Pro Tyr Ile Gly Pro Ala Leu Asn Ile Val Lys Gln Gly
                645                 650                 655
Tyr Glu Gly Asn Phe Ile Gly Ala Leu Glu Thr Thr Gly Val Val Leu
            660                 665                 670
Leu Leu Glu Tyr Ile Pro Glu Ile Thr Leu Pro Val Ile Ala Ala Leu
        675                 680                 685
Ser Ile Ala Glu Ser Ser Thr Gln Lys Glu Lys Ile Ile Lys Thr Ile
    690                 695                 700
Asp Asn Phe Leu Glu Lys Arg Tyr Glu Lys Trp Ile Glu Val Tyr Lys
705                 710                 715                 720
Leu Val Lys Ala Lys Trp Leu Gly Thr Val Asn Thr Gln Phe Gln Lys
                725                 730                 735
Arg Ser Tyr Gln Met Tyr Arg Ser Leu Glu Tyr Gln Val Asp Ala Ile
            740                 745                 750
Lys Lys Ile Ile Asp Tyr Glu Tyr Lys Ile Tyr Ser Gly Pro Asp Lys
        755                 760                 765
Glu Gln Ile Ala Asp Glu Ile Asn Asn Leu Lys Asn Lys Leu Glu Glu
    770                 775                 780
Lys Ala Asn Lys Ala Met Ile Asn Ile Asn Ile Phe Met Arg Glu Ser
785                 790                 795                 800
Ser Arg Ser Phe Leu Val Asn Gln Met Ile Asn Glu Ala Lys Lys Gln
                805                 810                 815
Leu Leu Glu Phe Asp Thr Gln Ser Lys Asn Ile Leu Met Gln Tyr Ile
            820                 825                 830
Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu Lys Lys Leu Glu
        835                 840                 845
Ser Lys Ile Asn Lys Val Phe Ser Thr Pro Ile Pro Phe Ser Tyr Ser
    850                 855                 860
Lys Asn Leu Asp Cys Trp Val Asp Asn Glu Glu Asp Ile Asp Val Ile
865                 870                 875                 880
Leu Lys Lys Ser Thr Ile Leu Asn Leu Asp Ile Asn Asn Asp Ile Ile
                885                 890                 895
Ser Asp Ile Ser Gly Phe Asn Ser Ser Val Ile Thr Tyr Pro Asp Ala
            900                 905                 910
Gln Leu Val Pro Gly Ile Asn Gly Lys Ala Ile His Leu Val Asn Asn
        915                 920                 925
Glu Ser Ser Glu Val Ile Val His Lys Ala Met Asp Ile Glu Tyr Asn
    930                 935                 940
Asp Met Phe Asn Asn Phe Thr Val Ser Phe Trp Leu Arg Val Pro Lys
945                 950                 955                 960
Val Ser Ala Ser His Leu Glu Gln Tyr Gly Thr Asn Glu Tyr Ser Ile
                965                 970                 975
Ile Ser Ser Met Lys Lys His Ser Leu Ser Ile Gly Ser Gly Trp Ser
            980                 985                 990
Val Ser Leu Lys Gly Asn Asn Leu Ile Trp Thr Leu Lys Asp Ser Ala
        995                 1000                1005
Gly Glu Val Arg Gln Ile Thr Phe Arg Asp Leu Pro Asp Lys Phe Asn
    1010                1015                1020
Ala Tyr Leu Ala Asn Lys Trp Val Phe Ile Thr Ile Thr Asn Asp Arg
1025                1030                1035                1040
Leu Ser Ser Ala Asn Leu Tyr Ile Asn Gly Val Leu Met Gly Ser Ala
                1045                1050                1055
Glu Ile Thr Gly Leu Gly Ala Ile Arg Glu Asp Asn Asn Ile Thr Leu
            1060                1065                1070
Lys Leu Asp Arg Cys Asn Asn Asn Asn Gln Tyr Val Ser Ile Asp Lys
        1075                1080                1085
Phe Arg Ile Phe Cys Lys Ala Leu Asn Pro Lys Glu Ile Glu Lys Leu
    1090                1095                1100
Tyr Thr Ser Tyr Leu Ser Ile Thr Phe Leu Arg Asp Phe Trp Gly Asn
1105                1110                1115                1120
Pro Leu Arg Tyr Asp Thr Glu Tyr Tyr Leu Ile Pro Val Ala Ser Ser
                1125                1130                1135
Ser Lys Asp Val Gln Leu Lys Asn Ile Thr Asp Tyr Met Tyr Leu Thr
            1140                1145                1150
Asn Ala Pro Ser Tyr Thr Asn Gly Lys Leu Asn Ile Tyr Tyr Arg Arg
        1155                1160                1165
Leu Tyr Asn Gly Leu Lys Phe Ile Ile Lys Arg Tyr Thr Pro Asn Asn
    1170                1175                1180
Glu Ile Asp Ser Phe Val Lys Ser Gly Asp Phe Ile Lys Leu Tyr Val
1185                1190                1195                1200
Ser Tyr Asn Asn Asn Glu His Ile Val Gly Tyr Pro Lys Asp Gly Asn
                1205                1210                1215
Ala Phe Asn Asn Leu Asp Arg Ile Leu Arg Val Gly Tyr Asn Ala Pro
            1220                1225                1230
Gly Ile Pro Leu Tyr Lys Lys Met Glu Ala Val Lys Leu Arg Asp Leu
        1235                1240                1245
Lys Thr Tyr Ser Val Gln Leu Lys Leu Tyr Asp Asp Lys Asn Ala Ser
    1250                1255                1260
Leu Gly Leu Val Gly Thr His Asn Gly Gln Ile Gly Asn Asp Pro Asn
1265                1270                1275                1280
Arg Asp Ile Leu Ile Ala Ser Asn Trp Tyr Phe Asn His Leu Lys Asp
                1285                1290                1295
Lys Ile Leu Gly Cys Asp Trp Tyr Phe Val Pro Thr Asp Glu Gly Trp
            1300                1305                1310
Thr Asn Asp
        1315
 
<210>9
<211>1268
<212>PRT
<213>巴氏梭菌(Clostridium baratii)
 
<400>9
Met Pro Val Asn Ile Asn Asn Phe Asn Tyr Asn Asp Pro Ile Asn Asn
 1               5                  10                  15
Thr Thr Ile Leu Tyr Met Lys Met Pro Tyr Tyr Glu Asp Ser Asn Lys
            20                  25                  30
Tyr Tyr Lys Ala Phe Glu Ile Met Asp Asn Val Trp Ile Ile Pro Glu
        35                  40                  45
Arg Asn Ile Ile Gly Lys Lys Pro Ser Asp Phe Tyr Pro Pro Ile Ser
    50                  55                  60
Leu Asp Ser Gly Ser Ser Ala Tyr Tyr Asp Pro Asn Tyr Leu Thr Thr
65                  70                  75                  80
Asp Ala Glu Lys Asp Arg Phe Leu Lys Thr Val Ile Lys Leu Phe Asn
                85                  90                  95
Arg Ile Asn Ser Asn Pro Ala Gly Gln Val Leu Leu Glu Glu Ile Lys
            100                 105                 110
Asn Gly Lys Pro Tyr Leu Gly Asn Asp His Thr Ala Val Asn Glu Phe
        115                 120                 125
Cys Ala Asn Asn Arg Ser Thr Ser Val Glu Ile Lys Glu Ser Asn Gly
    130                 135                 140
Thr Thr Asp Ser Met Leu Leu Asn Leu Val Ile Leu Gly Pro Gly Pro
145                 150                 155                 160
Asn Ile Leu Glu Cys Ser Thr Phe Pro Val Arg Ile Phe Pro Asn Asn
                165                 170                 175
Ile Ala Tyr Asp Pro Ser Glu Lys Gly Phe Gly Ser Ile Gln Leu Met
            180                 185                 190
Ser Phe Ser Thr Glu Tyr Glu Tyr Ala Phe Asn Asp Asn Thr Asp Leu
        195                 200                 205
Phe Ile Ala Asp Pro Ala Ile Ser Leu Ala His Glu Leu Ile His Val
    210                 215                 220
Leu His Gly Leu Tyr Gly Ala Lys Gly Val Thr Asn Lys Lys Val Ile
225                 230                 235                 240
Glu Val Asp Gln Gly Ala Leu Met Ala Ala Glu Lys Asp Ile Lys Ile
                245                 250                 255
Glu Glu Phe Ile Thr Phe Gly Gly Gln Asp Leu Asn Ile Ile Thr Asn
            260                 265                 270
Ser Thr Asn Gln Lys Ile Tyr Val Ile Leu Leu Ser Asn Tyr Thr Ala
        275                 280                 285
Ile Ala Ser Arg Leu Ser Gln Val Asn Arg Asn Asn Ser Ala Leu Asn
    290                 295                 300
Thr Thr Tyr Tyr Lys Asn Phe Phe Gln Trp Lys Tyr Gly Leu Asp Gln
305                 310                 315                 320
Asp Ser Asn Gly Asn Tyr Thr Val Asn Ile Ser Lys Phe Asn Ala Ile
                325                 330                 335
Tyr Lys Lys Leu Phe Ser Phe Thr Glu Cys Asp Leu Ala Gln Lys Phe
            340                 345                 350
Gln Val Lys Asn Arg Ser Asn Tyr Leu Phe His Phe Lys Pro Phe Arg
        355                 360                 365
Leu Leu Asp Leu Leu Asp Asp Asn Ile Tyr Ser Ile Ser Glu Gly Phe
    370                 375                 380
Asn Ile Gly Ser Leu Arg Val Asn Asn Asn Gly Gln Asn Ile Asn Leu
385                 390                 395                 400
Asn Ser Arg Ile Val Gly Pro Ile Pro Asp Asn Gly Leu Val Glu Arg
                405                 410                 415
Phe Val Gly Leu Cys Lys Ser Ile Val Ser Lys Lys Gly Thr Lys Asn
            420                 425                 430
Ser Leu Cys Ile Lys Val Asn Asn Arg Asp Leu Phe Phe Val Ala Ser
        435                 440                 445
Glu Ser Ser Tyr Asn Glu Asn Gly Ile Asn Ser Pro Lys Glu Ile Asp
    450                 455                 460
Asp Thr Thr Ile Thr Asn Asn Asn Tyr Lys Lys Asn Leu Asp Glu Val
465                 470                 475                 480
Ile Leu Asp Tyr Asn Ser Asp Ala Ile Pro Asn Leu Ser Ser Arg Leu
                485                 490                 495
Leu Asn Thr Thr Ala Gln Asn Asp Ser Tyr Val Pro Lys Tyr Asp Ser
            500                 505                 510
Asn Gly Thr Ser Glu Ile Lys Glu Tyr Thr Val Asp Lys Leu Asn Val
        515                 520                 525
Phe Phe Tyr Leu Tyr Ala Gln Lys Ala Pro Glu Gly Glu Ser Ala Ile
    530                 535                 540
Ser Leu Thr Ser Ser Val Asn Thr Ala Leu Leu Asp Ala Ser Lys Val
545                 550                 555                 560
Tyr Thr Phe Phe Ser Ser Asp Phe Ile Asn Thr Val Asn Lys Pro Val
                565                 570                 575
Gln Ala Ala Leu Phe Ile Ser Trp Ile Gln Gln Val Ile Asn Asp Phe
            580                 585                 590
Thr Thr Glu Ala Thr Gln Lys Ser Thr Ile Asp Lys Ile Ala Asp Ile
        595                 600                 605
Ser Leu Ile Val Pro Tyr Val Gly Leu Ala Leu Asn Ile Gly Asn Glu
    610                 615                 620
Val Gln Lys Gly Asn Phe Lys Glu Ala Ile Glu Leu Leu Gly Ala Gly
625                 630                 635                 640
Ile Leu Leu Glu Phe Val Pro Glu Leu Leu Ile Pro Thr Ile Leu Val
                645                 650                 655
Phe Thr Ile Lys Ser Phe Ile Asn Ser Asp Asp Ser Lys Asn Lys Ile
            660                 665                 670
Ile Lys Ala Ile Asn Asn Ala Leu Arg Glu Arg Glu Leu Lys Trp Lys
        675                 680                 685
Glu Val Tyr Ser Trp Ile Val Ser Asn Trp Leu Thr Arg Ile Asn Thr
    690                 695                 700
Gln Phe Asn Lys Arg Lys Glu Gln Met Tyr Gln Ala Leu Gln Asn Gln
705                 710                 715                 720
Val Asp Gly Ile Lys Lys Ile Ile Glu Tyr Lys Tyr Asn Asn Tyr Thr
                725                 730                 735
Leu Asp Glu Lys Asn Arg Leu Arg Ala Glu Tyr Asn Ile Tyr Ser Ile
            740                 745                 750
Lys Glu Glu Leu Asn Lys Lys Val Ser Leu Ala Met Gln Asn Ile Asp
        755                 760                 765
Arg Phe Leu Thr Glu Ser Ser Ile Ser Tyr Leu Met Lys Leu Ile Asn
    770                 775                 780
Glu Ala Lys Ile Asn Lys Leu Ser Glu Tyr Asp Lys Arg Val Asn Gln
785                 790                 795                 800
Tyr Leu Leu Asn Tyr Ile Leu Glu Asn Ser Ser Thr Leu Gly Thr Ser
                805                 810                 815
Ser Val Pro Glu Leu Asn Asn Leu Val Ser Asn Thr Leu Asn Asn Ser
            820                 825                 830
Ile Pro Phe Glu Leu Ser Glu Tyr Thr Asn Asp Lys Ile Leu Ile His
        835                 840                 845
Ile Leu Ile Arg Phe Tyr Lys Arg Ile Ile Asp Ser Ser Ile Leu Asn
    850                 855                 860
Met Lys Tyr Glu Asn Asn Arg Phe Ile Asp Ser Ser Gly Tyr Gly Ser
865                 870                 875                 880
Asn Ile Ser Ile Asn Gly Asp Ile Tyr Ile Tyr Ser Thr Asn Arg Asn
                885                 890                 895
Gln Phe Gly Ile Tyr Ser Ser Arg Leu Ser Glu Val Asn Ile Thr Gln
            900                 905                 910
Asn Asn Thr Ile Ile Tyr Asn Ser Arg Tyr Gln Asn Phe Ser Val Ser
        915                 920                 925
Phe Trp Val Arg Ile Pro Lys Tyr Asn Asn Leu Lys Asn Leu Asn Asn
    930                 935                 940
Glu Tyr Thr Ile Ile Asn Cys Met Arg Asn Asn Asn Ser Gly Trp Lys
945                 950                 955                 960
Ile Ser Leu Asn Tyr Asn Asn Ile Ile Trp Thr Leu Gln Asp Thr Thr
                965                 970                 975
Gly Asn Asn Gln Lys Leu Val Phe Asn Tyr Thr Gln Met Ile Asp Ile
            980                 985                 990
Ser Asp Tyr Ile Asn Lys Trp Thr Phe Val Thr Ile Thr Asn Asn Arg
        995                 1000                1005
Leu Gly His Ser Lys Leu Tyr Ile Asn Gly Asn Leu Thr Asp Gln Lys
    1010                1015                1020
Ser Ile Leu Asn Leu Gly Asn Ile His Val Asp Asp Asn Ile Leu Phe
1025                1030                1035                1040
Lys Ile Val Gly Cys Asn Asp Thr Arg Tyr Val Gly Ile Arg Tyr Phe
                1045                1050                1055
Lys Ile Phe Asn Met Glu Leu Asp Lys Thr Glu Ile Glu Thr Leu Tyr
            1060                1065                1070
His Ser Glu Pro Asp Ser Thr Ile Leu Lys Asp Phe Trp Gly Asn Tyr
        1075                1080                1085
Leu Leu Tyr Asn Lys Lys Tyr Tyr Leu Leu Asn Leu Leu Lys Pro Asn
    1090                1095                1100
Met Ser Val Thr Lys Asn Ser Asp Ile Leu Asn Ile Asn Arg Gln Arg
1105                1110                1115                1120
Gly Ile Tyr Ser Lys Thr Asn Ile Phe Ser Asn Ala Arg Leu Tyr Thr
                1125                1130                1135
Gly Val Glu Val Ile Ile Arg Lys Val Gly Ser Thr Asp Thr Ser Asn
            1140                1145                1150
Thr Asp Asn Phe Val Arg Lys Asn Asp Thr Val Tyr Ile Asn Val Val
        1155                1160                1165
Asp Gly Asn Ser Glu Tyr Gln Leu Tyr Ala Asp Val Ser Thr Ser Ala
    1170                1175                1180
Val Glu Lys Thr Ile Lys Leu Arg Arg Ile Ser Asn Ser Asn Tyr Asn
1185                1190                1195                1200
Ser Asn Gln Met Ile Ile Met Asp Ser Ile Gly Asp Asn Cys Thr Met
                1205                1210                1215
Asn Phe Lys Thr Asn Asn Gly Asn Asp Ile Gly Leu Leu Gly Phe His
            1220                1225                1230
Leu Asn Asn Leu Val Ala Ser Ser Trp Tyr Tyr Lys Asn Ile Arg Asn
        1235                1240                1245
Asn Thr Arg Asn Asn Gly Cys Phe Trp Ser Phe Ile Ser Lys Glu His
    1250                1255                1260
Gly Trp Gln Glu
1265
 
<210>10
<211>1251
<212>PRT
<213>丁酸梭菌(Clostridium butyricum)
 
<400>10
Met Pro Thr Ile Asn Ser Phe Asn Tyr Asn Asp Pro Val Asn Asn Arg
 1               5                  10                  15
Thr Ile Leu Tyr Ile Lys Pro Gly Gly Cys Gln Gln Phe Tyr Lys Ser
            20                  25                  30
Phe Asn Ile Met Lys Asn Ile Trp Ile Ile Pro Glu Arg Asn Val Ile
        35                  40                  45
Gly Thr Ile Pro Gln Asp Phe Leu Pro Pro Thr Ser Leu Lys Asn Gly
    50                  55                  60
Asp Ser Ser Tyr Tyr Asp Pro Asn Tyr Leu Gln Ser Asp Gln Glu Lys
65                  70                  75                  80
Asp Lys Phe Leu Lys Ile Val Thr Lys Ile Phe Asn Arg Ile Asn Asp
                85                  90                  95
Asn Leu Ser Gly Arg Ile Leu Leu Glu Glu Leu Ser Lys Ala Asn Pro
            100                 105                 110
Tyr Leu Gly Asn Asp Asn Thr Pro Asp Gly Asp Phe Ile Ile Asn Asp
        115                 120                 125
Ala Ser Ala Val Pro Ile Gln Phe Ser Asn Gly Ser Gln Ser Ile Leu
    130                 135                 140
Leu Pro Asn Val Ile Ile Met Gly Ala Glu Pro Asp Leu Phe Glu Thr
145                 150                 155                 160
Asn Ser Ser Asn Ile Ser Leu Arg Asn Asn Tyr Met Pro Ser Asn His
                165                 170                 175
Gly Phe Gly Ser Ile Ala Ile Val Thr Phe Ser Pro Glu Tyr Ser Phe
            180                 185                 190
Arg Phe Lys Asp Asn Ser Met Asn Glu Phe Ile Gln Asp Pro Ala Leu
        195                 200                 205
Thr Leu Met His Glu Leu Ile His Ser Leu His Gly Leu Tyr Gly Ala
    210                 215                 220
Lys Gly Ile Thr Thr Lys Tyr Thr Ile Thr Gln Lys Gln Asn Pro Leu
225                 230                 235                 240
Ile Thr Asn Ile Arg Gly Thr Asn Ile Glu Glu Phe Leu Thr Phe Gly
                245                 250                 255
Gly Thr Asp Leu Asn Ile Ile Thr Ser Ala Gln Ser Asn Asp Ile Tyr
            260                 265                 270
Thr Asn Leu Leu Ala Asp Tyr Lys Lys Ile Ala Ser Lys Leu Ser Lys
        275                 280                 285
Val Gln Val Ser Asn Pro Leu Leu Asn Pro Tyr Lys Asp Val Phe Glu
    290                 295                 300
Ala Lys Tyr Gly Leu Asp Lys Asp Ala Ser Gly Ile Tyr Ser Val Asn
305                 310                 315                 320
lle Asn Lys Phe Asn Asp Ile Phe Lys Lys Leu Tyr Ser Phe Thr Glu
                325                 330                 335
Phe Asp Leu Ala Thr Lys Phe Gln Val Lys Cys Arg Gln Thr Tyr Ile
            340                 345                 350
Gly Gln Tyr Lys Tyr Phe Lys Leu Ser Asn Leu Leu Asn Asp Ser Ile
        355                 360                 365
Tyr Asn Ile Ser Glu Gly Tyr Asn Ile Asn Asn Leu Lys Val Asn Phe
    370                 375                 380
Arg Gly Gln Asn Ala Asn Leu Asn Pro Arg Ile Ile Thr Pro Ile Thr
385                 390                 395                 400
Gly Arg Gly Leu Val Lys Lys Ile Ile Arg Phe Cys Lys Asn Ile Val
                405                 410                 415
Ser Val Lys Gly Ile Arg Lys Ser Ile Cys Ile Glu Ile Asn Asn Gly
            420                 425                 430
Glu Leu Phe Phe Val Ala Ser Glu Asn Ser Tyr Asn Asp Asp Asn Ile
        435                 440                 445
Asn Thr Pro Lys Glu Ile Asp Asp Thr Val Thr Ser Asn Asn Asn Tyr
    450                 455                 460
Glu Asn Asp Leu Asp Gln Val Ile Leu Asn Phe Asn Ser Glu Ser Ala
465                 470                 475                 480
Pro Gly Leu Ser Asp Glu Lys Leu Asn Leu Thr Ile Gln Asn Asp Ala
                485                 490                 495
Tyr Ile Pro Lys Tyr Asp Ser Asn Gly Thr Ser Asp Ile Glu Gln His
            500                 505                 510
Asp Val Asn Glu Leu Asn Val Phe Phe Tyr Leu Asp Ala Gln Lys Val
        515                 520                 525
Pro Glu Gly Glu Asn Asn Val Asn Leu Thr Ser Ser Ile Asp Thr Ala
    530                 535                 540
Leu Leu Glu Gln Pro Lys Ile Tyr Thr Phe Phe Ser Ser Glu Phe Ile
545                 550                 555                 560
Asn Asn Val Asn Lys Pro Val Gln Ala Ala Leu Phe Val Gly Trp Ile
                565                 570                 575
Gln Gln Val Leu Val Asp Phe Thr Thr Glu Ala Asn Gln Lys Ser Thr
            580                 585                 590
Val Asp Lys Ile Ala Asp Ile Ser Ile Val Val Pro Tyr Ile Gly Leu
        595                 600                 605
Ala Leu Asn Ile Gly Asn Glu Ala Gln Lys Gly Asn Phe Lys Asp Ala
    610                 615                 620
Leu Glu Leu Leu Gly Ala Gly Ile Leu Leu Glu Phe Glu Pro Glu Leu
625                 630                 635                 640
Leu Ile Pro Thr Ile Leu Val Phe Thr Ile Lys Ser Phe Leu Gly Ser
                645                 650                 655
Ser Asp Asn Lys Asn Lys Val Ile Lys Ala Ile Asn Asn Ala Leu Lys
            660                 665                 670
Glu Arg Asp Glu Lys Trp Lys Glu Val Tyr Ser Phe Ile Val Ser Asn
        675                 680                 685
Trp Met Thr Lys Ile Asn Thr Gln Phe Asn Lys Arg Lys Glu Gln Met
    690                 695                 700
Tyr Gln Ala Leu Gln Asn Gln Val Asn Ala Leu Lys Ala Ile Ile Glu
705                 710                 715                 720
Ser Lys Tyr Asn Ser Tyr Thr Leu Glu Glu Lys Asn Glu Leu Thr Asn
                725                 730                 735
Lys Tyr Asp Ile Glu Gln Ile Glu Asn Glu Leu Asn Gln Lys Val Ser
            740                 745                 750
Ile Ala Met Asn Asn Ile Asp Arg Phe Leu Thr Glu Ser Ser Ile Ser
        755                 760                 765
Tyr Leu Met Lys Leu Ile Asn Glu Val Lys Ile Asn Lys Leu Arg Glu
    770                 775                 780
Tyr Asp Glu Asn Val Lys Thr Tyr Leu Leu Asp Tyr Ile Ile Lys His
785                 790                 795                 800
Gly Ser Ile Leu Gly Glu Ser Gln Gln Glu Leu Asn Ser Met Val Ile
                805                 810                 815
Asp Thr Leu Asn Asn Ser Ile Pro Phe Lys Leu Ser Ser Tyr Thr Asp
            820                 825                 830
Asp Lys Ile Leu Ile Ser Tyr Phe Asn Lys Phe Phe Lys Arg Ile Lys
        835                 840                 845
Ser Ser Ser Val Leu Asn Met Arg Tyr Lys Asn Asp Lys Tyr Val Asp
    850                 855                 860
Thr Ser Gly Tyr Asp Ser Asn Ile Asn Ile Asn Gly Asp Val Tyr Lys
865                 870                 875                 880
Tyr Pro Thr Asn Lys Asn Gln Phe Gly Ile Tyr Asn Asp Lys Leu Ser
                885                 890                 895
Glu Val Asn Ile Ser Gln Asn Asp Tyr Ile Ile Tyr Asp Asn Lys Tyr
            900                 905                 910
Lys Asn Phe Ser Ile Ser Phe Trp Val Arg Ile Pro Asn Tyr Asp Asn
        915                 920                 925
Lys Ile Val Asn Val Asn Asn Glu Tyr Thr Ile Ile Asn Cys Met Arg
    930                 935                 940
Asp Asn Asn Ser Gly Trp Lys Val Ser Leu Asn His Asn Glu Ile Ile
945                 950                 955                 960
Trp Thr Leu Gln Asp Asn Ser GlyIle Asn Gln Lys Leu Ala Phe Asn
                965                 970                 975
Tyr Gly Asn Ala Asn Gly Ile Ser Asp Tyr Ile Asn Lys Trp Ile Phe
            980                 985                 990
Val Thr Ile Thr Asn Asp Arg Leu Gly Asp Ser Lys Leu Tyr Ile Asn
        995                 1000                1005
Gly Asn Leu Ile Asp Lys Lys Ser Ile Leu Asn Leu Gly Asn Ile His
    1010                1015                1020
Val Ser Asp Asn Ile Leu Phe Lys Ile Val Asn Cys Ser Tyr Thr Arg
1025                1030                1035                1040
Tyr Ile Gly Ile Arg Tyr Phe Asn Ile Phe Asp Lys Glu Leu Asp Glu
                1045                1050                1055
Thr Glu Ile Gln Thr Leu Tyr Asn Asn Glu Pro Asn Ala Asn Ile Leu
            1060                1065                1070
Lys Asp Phe Trp Gly Asn Tyr Leu Leu Tyr Asp Lys Glu Tyr Tyr Leu
        1075                1080                1085
Leu Asn Val Leu Lys Pro Asn Asn Phe Ile Asn Arg Arg Thr Asp Ser
    1090                1095                1100
Thr Leu Ser Ile Asn Asn Ile Arg Ser Thr Ile Leu Leu Ala Asn Arg
1105                1110                1115                1120
Leu Tyr Ser Gly Ile Lys Val Lys Ile Gln Arg Val Asn Asn Ser Ser
                1125                1130                1135
Thr Asn Asp Asn Leu Val Arg Lys Asn Asp Gln Val Tyr Ile Asn Phe
            1140                1145                1150
Val Ala Ser Lys Thr His Leu Leu Pro Leu Tyr Ala Asp Thr Ala Thr
        1155                1160                1165
Thr Asn Lys Glu Lys Thr Ile Lys Ile Ser Ser Ser Gly Asn Arg Phe
    1170                1175                1180
Asn Gln Val Val Val Met Asn Ser Val Gly Asn Cys Thr Met Asn Phe
1185                1190                1195                1200
Lys Asn Asn Asn Gly Asn Asn Ile Gly Leu Leu Gly Phe Lys Ala Asp
                1205                1210                1215
Thr Val Val Ala Ser Thr Trp Tyr Tyr Thr His Met Arg Asp Asn Thr
            1220                1225                1230
Asn Ser Asn Gly Phe Phe Trp Asn Phe Ile Ser Glu Glu His Gly Trp
        1235                1240                1245
Gln Glu Lys
    1250
 
<210>11
<211>25
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>结构域
<222>(1)...(25)
<223>BoNT/A二链环状区域
 
<400>11
Cys Val Arg Gly Ile Ile Thr Ser Lys Thr Lys Ser Leu Asp Lys Gly
 1               5                  10                  15
Tyr Asn Lys Ala Leu Asn Asp Leu Cys
            20                  25
 
<210>12
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>结构域
<222>(1)...(10)
<223>BoNT/B二链环状区域
 
<400>12
Cys Lys Ser Val Lys Ala Pro Gly Ile Cys
 1               5                  10
 
<210>13
<211>17
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>结构域
<222>(1)...(17)
<223>BoNT/C1二链环状区域
 
<400>13
Cys His Lys Ala Ile Asp Gly Arg Ser Leu Tyr Asn Lys Thr Leu Asp
 1               5                  10                  15
Cys
 
<210>14
<211>14
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>结构域
<222>(1)...(14)
<223>BoNT/D二链环状区域
 
<400>14
Cys Leu Arg Leu Thr Lys Asn Ser Arg Asp Asp Ser Thr Cys
 1               5                  10
 
<210>15
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>结构域
<222>(1)...(15)
<223>BoNT/E二链环状区域
 
<400>15
Cys Lys Asn Ile Val Ser Val Lys Gly Ile Arg Lys Ser Ile Cys
 1               5                  10                  15
 
<210>16
<211>17
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>结构域
<222>(1)...(17)
<223>BoNT/F二链环状区域
 
<400>16
Cys Lys Ser Val Ile Pro Arg Lys Gly Thr Lys Ala Pro Pro Arg Leu
 1               5                  10                  15
Cys
 
<210>17
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>结构域
<222>(1)...(15)
<223>BoNT/G二链环状区域
 
<400>17
Cys Lys Pro Val Met Tyr Lys Asn Thr Gly Lys Ser Glu Gln Cys
 1               5                  10                  15
 
<210>18
<211>29
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>结构域
<222>(1)...(29)
<223>TeNT二链环状区域
 
<400>18
Cys Lys Lys Ile Ile Pro Pro Thr Asn Ile Arg Glu Asn Leu Tyr Asn
 1               5                  10                  15
Arg Thr Ala Ser Leu Thr Asp Leu Gly Gly Glu Leu Cys
            20                  25
 
<210>19
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>结构域
<222>(1)...(15)
<223>BaNT二链环状区域
 
<400>19
Cys Lys Ser Ile Val Ser Lys Lys Gly Thr Lys Asn Ser Leu Cys
 1               5                  10                  15
 
<210>20
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>结构域
<222>(1)...(15)
<223>BuNT二链环状区域
 
<400>20
Cys Lys Asn Ile Val Ser Val Lys Gly Ile Arg Lys Ser Ile Cys
 1               5                  10                  15
 
<210>21
<211>5
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>位点
<222>(1)...(5)
<223>牛肠激酶蛋白酶切割位点
 
<400>21
Asp Asp Asp Asp Lys
 1               5
 
<210>22
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>位点
<222>(1)...(1)
<223>烟草蚀刻病毒蛋白酶切割位点共有序列
<221>变体
<222>(2)...(3)
<223>Xaa可为任意氨基酸
 
<221>变体
<222>(5)...(5)
<223>Xaa可为任意氨基酸
 
<400>22
Glu Xaa Xaa Tyr Xaa Gln Gly
 1               5
 
<210>23
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>位点
<222>(1)...(7)
<223>烟草蚀刻病毒蛋白酶切割位点共有序列
 
<221>变体
<222>(2)...(3)
<223>Xaa可为任意氨基酸
 
<221>变体
<222>(5)...(5)
<223>Xaa可为任意氨基酸
 
<400>23
Glu Xaa Xaa Tyr Xaa Gln Ser
 1               5
 
<210>24
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>位点
<222>(1)...(7)
<223>烟草蚀刻病毒蛋白酶切割位点
 
<400>24
Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly
 1               5
 
<210>25
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>位点
<222>(1)...(7)
<223>烟草蚀刻病毒蛋白酶切割位点
 
<400>25
Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Ser
 1               5
 
<210>26
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>位点
<222>(1)...(7)
<223>烟草蚀纹病毒蛋白酶切割位点
 
<400>26
Glu Asn Ile Tyr Thr Gln Gly
 1               5
 
<210>27
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>位点
<222>(1)...(7)
<223>烟草蚀刻病毒蛋白酶切割位点
 
<400>27
Glu Asn Ile Tyr Thr Gln Ser
 1               5
 
<210>28
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>位点
<222>(1)...(7)
<223>烟草蚀刻病毒蛋白酶切割位点
 
<400>28
Glu Asn Ile Tyr Leu Gln Gly
 1               5
 
<210>29
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>位点
<222>(1)...(7)
<223>烟草蚀刻病毒蛋白酶切割位点
 
<400>29
Glu Asn Ile Tyr Leu Gln Ser
 1               5
 
<210>30
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>位点
<222>(1)...(7)
<223>烟草蚀刻病毒蛋白酶切割位点
 
<400>30
Glu Asn Val Tyr Phe Gln Gly
 1               5
 
<210>31
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>位点
<222>(1)...(7)
<223>烟草蚀刻病毒蛋白酶切割位点
 
<400>31
Glu Asn Val Tyr Ser Gln Ser
 1               5
 
<210>32
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>位点
<222>(1)...(7)
<223>烟草蚀刻病毒蛋白酶切割位点
 
<400>32
Glu Asn Val Tyr Ser Gln Gly
 1               5
 
<210>33
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>位点
<222>(0)...(0)
<223>烟草蚀刻病毒蛋白酶切割位点
 
<400>33
Glu Asn Val Tyr Ser Gln Ser
 1               5
 
<210>34
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>位点
<222>(1)...(7)
<223>人类鼻病毒3C蛋白酶切割位点共有序列
 
<221>变体
<222>(1)...(1)
<223>Xaa可为氨基酸，优选地为D或E
 
<221>变体
<222>(2)...(2)
<223>Xaa可为G、A、V、L、I、M、S或T
 
<400>34
Xaa Xaa Leu Phe Gln Gly Pro
 1               5
 
<210>35
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>位点
<222>(1)...(7)
<223>人类鼻病毒3C蛋白酶切割位点
 
<400>35
Glu Ala Leu Phe Gln Gly Pro
 1               5
 
<210>36
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>位点
<222>(1)...(7)
<223>人类鼻病毒3C蛋白酶切割位点
 
<400>36
Glu Val Leu Phe Gln Gly Pro
 1               5
 
<210>37
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>位点
<222>(1)...(7)
<223>人类鼻病毒3C蛋白酶切割位点
 
<400>37
Glu Leu Leu Phe Gln Gly Pro
 1               5
 
<210>38
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>位点
<222>(1)...(7)
<223>人类鼻病毒3C蛋白酶切割位点
 
<400>38
Asp Ala Leu Phe Gln Gly Pro
 1               5
 
<210>39
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>位点
<222>(1)...(7)
<223>人类鼻病毒3C蛋白酶切割位点
 
<400>39
Asp Val Leu Phe Gln Gly Pro
 1               5
 
<210>40
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>位点
<222>(0)...(0)
<223>人类鼻病毒3C蛋白酶切割位点
 
<400>40
Asp Leu Leu Phe Gln Gly Pro
 1               5
 
<210>41
<211>6
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>位点
<222>(1)...(6)
<223>枯草杆菌蛋白酶切割位点共有序列
 
<221>变体
<222>(1)...(4)
<223>Xaa可为任意氨基酸
 
<400>41
Xaa Xaa Xaa Xaa His Tyr
 1               5
 
<210>42
<211>6
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>位点
<222>(1)...(6)
<223>枯草杆菌蛋白酶切割位点共有序列
 
<221>变体
<222>(1)...(4)
<223>Xaa可为任意氨基酸
 
<400>42
Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr His
 1               5
 
<210>43
<211>2
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>位点
<222>(1)...(2)
<223>枯草杆菌蛋白酶切割位点
 
<400>43
His Tyr
 1
 
<210>44
<211>2
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>位点
<222>(1)...(2)
<223>枯草杆菌蛋白酶切割位点
 
<400>44
Tyr His
 1
 
<210>45
<211>6
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>位点
<222>(1)...(6)
<223>枯草杆菌蛋白酶切割位点
 
<400>45
Pro Gly Ala Ala His Tyr
 1               5
 
<210>46
<211>6
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>位点
<222>(1)...(6)
<223>羟胺切割位点
 
<400>46
Asn Gly Asn Gly Asn Gly
 1               5
 
<210>47
<211>2
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>位点
<222>(1)...(2)
<223>羟胺切割位点
 
<400>47
Asn Gly
 1
 
<210>48
<211>98
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>位点
<222>(1)...(98)
<223>SUMO/ULP-1蛋白酶切割位点
 
<400>48
Met Ala Asp Ser Glu Val Asn Gln Glu Ala Lys Pro Glu Val Lys Pro
 1               5                  10                  15
Glu Val Lys Pro Glu Thr His Ile Asn Leu Lys Val Ser Asp Gly Ser
            20                  25                  30
Ser Glu Ile Phe Phe Lys Ile Lys Lys Thr Thr Pro Leu Arg Arg Leu
        35                  40                  45
Met Glu Ala Phe Ala Lys Arg Gln Gly Lys Glu Met Asp Ser Leu Arg
    50                  55                  60
Phe Leu Tyr Asp Gly Ile Arg Ile Gln Ala Asp Gln Thr Pro Glu Asp
65                  70                  75                  80
Leu Asp Met Glu Asp Asn Asp Ile Ile Glu Ala His Arg Glu Gln Ile
                85                  90                  95
Gly Gly
 
<210>49
<211>4
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>柔性G-间隔物
 
<400>49
Gly Gly Gly Gly
 1
 
<210>50
<211>5
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>柔性G-间隔物
 
<400>50
Gly Gly Gly Gly Ser
 1               5
 
<210>51
<211>4
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>柔性A-间隔物
 
<400>51
Ala Ala Ala Ala
 1
 
<210>52
<211>5
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
<400>52
Tyr Gly Gly Phe Leu
 1               5
 
<210>53
<211>5
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
 
<400>53
Tyr Gly Gly Phe Met
 1               5
 
<210>54
<211>8
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
 
<400>54
Tyr Gly Gly Phe Met Arg Gly Leu
 1               5
 
<210>55
<211>7
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
 
<400>55
Tyr Gly Gly Phe Met Arg Phe
 1               5
 
<210>56
<211>22
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
 
<400>56
Tyr Gly Gly Phe Met Arg Arg Val Gly Arg Pro Glu Trp Trp Met Asp
 1               5                  10                  15
Tyr Gln Lys Arg Tyr Gly
            20
 
<210>57
<211>22
<212>PRT
<213>斑泥螈(Necturus maculosus)
 
<400>57
Tyr Gly Gly Phe Met Arg Arg Val Gly Arg Pro Glu Trp Trp Leu Asp
 1               5                  10                  15
Tyr Gln Lys Arg Tyr Gly
            20
 
<210>58
<211>22
<212>PRT
<213>东方铃蟾(Bombina orientalis)
 
<400>58
Tyr Gly Gly Phe Met Arg Arg Val Gly Arg Pro Glu Trp Trp Gln Asp
 1               5                  10                  15
Tyr Gln Lys Arg Tyr Gly
            20
 
<210>59
<211>22
<212>PRT
<213>爪蟾(Xenopus Laevis)
 
<400>59
Tyr Gly Gly Phe Met Arg Arg Val Gly Arg Pro Glu Trp Trp Glu Asp
 1               5                  10                  15
Tyr Gln Lys Arg Tyr Gly
            20
 
<210>60
<211>22
<212>PRT
<213>澳洲肺鱼(Neoceratodus forsteri)
 
<400>60
Tyr Gly Gly Phe Met Arg Arg Val Gly Arg Pro Glu Trp Lys Leu Asp
 1               5                  10                  15
Asn Gln Lys Arg Tyr Gly
            20
 
<210>61
<211>21
<212>PRT
<213>斑马鱼(Danio rerio)
 
<400>61
Tyr Gly Gly Phe Met Arg Arg Val Gly Arg Pro Asp Trp Trp Gln Glu
 1               5                  10                  15
Ser Lys Arg Tyr Gly
            20
 
<210>62
<211>4
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
 
<400>62
Tyr Pro Trp Phe
 1
 
<210>63
<211>4
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
 
<400>63
Tyr Pro Phe Phe
 1
 
<210>64
<211>16
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
 
<400>64
Tyr Gly Gly Phe Met Thr Ser Glu Lys Ser Gln Thr Pro Leu Val Thr
 1               5                  10                  15
<210>65
<211>10
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
 
<400>65
Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Lys Tyr Pro Lys
 1               5                  10
 
<210>66
<211>31
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
 
<400>66
Tyr Gly Gly Phe Met Thr Ser Glu Lys Ser Gln Thr Pro Leu Val Thr
 1               5                  10                  15
Leu Phe Lys Asn Ala Ile Ile Lys Asn Ala Tyr Lys Lys Gly Glu
            20                  25                  30
 
<210>67
<211>31
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
 
<400>67
Tyr Gly Gly Phe Met Ser Ser Glu Lys Ser Gln Thr Pro Leu Val Thr
 1               5                  10                  15
Leu Phe Lys Asn Ala Ile Ile Lys Asn Ala His Lys Lys Gly Gln
            20                  25                  30
 
<210>68
<211>9
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
 
<400>68
Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Lys Tyr Pro
 1               5
 
<210>69
<211>17
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
 
<400>69
Tyr Gly Gly Phe Met Thr Ser Glu Lys Ser Gln Thr Pro Leu Val Thr
 1               5                  10                  15
Leu
 
<210>70
<211>17
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
 
<400>70
Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Ile Arg Pro Lys Leu Lys Trp Asp Asn
 1               5                  10                  15
Gln
 
<210>71
<211>13
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
 
<400>71
Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Ile Arg Pro Lys Leu Lys
 1               5                  10
 
<210>72
<211>16
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
 
<400>72
Gly Gly Phe Leu Arg Arg Ile Arg Pro Lys Leu Lys Trp Asp Asn Gln
 1               5                  10                  15
 
<210>73
<211>12
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
 
<400>73
Gly Gly Phe Leu Arg Arg Ile Arg Pro Lys Leu Lys
 1               5                  10
 
<210>74
<211>17
<212>PRT
<213>爪蟾(Xenopus laevis)
 
<400>74
Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Ile Arg Pro Lys Leu Arg Trp Asp Asn
 1               5                  10                  15
Gln
 
<210>75
<211>17
<212>PRT
<213>爪蟾(Xenopus laevis)
 
<400>75
Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Ile Arg Pro Arg Leu Arg Trp Asp Asn
 1               5                  10                  15
Gln
 
<210>76
<211>17
<212>PRT
<213>非洲肺鱼(Protopterus annectens)
 
<400>76
Tyr Gly Gly Phe Met Arg Arg Ile Arg Pro Lys Ile Arg Trp Asp Asn
 1               5                  10                  15
Gln
 
<210>77
<211>17
<212>PRT
<213>斑马鱼(Danio rerio)
<400>77
Tyr Gly Gly Phe Met Arg Arg I1e Arg Pro Lys Leu Arg Trp Asp Asn
 1               5                  10                  15
Gln
 
<210>78
<211>17
<212>PRT
<213>美洲鳗鲡(Anguilla rostrata)
 
<400>78
Tyr Gly Gly Phe Met Arg Arg Ile Arg Pro Lys Leu Lys Trp Asp Ser
 1               5                  10                  15
Gln
 
<210>79
<211>29
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
 
<400>79
Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Gln Phe Lys Val Val Thr Arg Ser Gln
 1               5                  10                  15
Glu Asp Pro Asn Ala Tyr Ser Gly Glu Leu Phe Asp Ala
            20                  25
 
<210>80
<211>28
<212>PRT
<213>褐家鼠(Rattus norvegicus)
 
<400>80
Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Gln Phe Lys Val Val Thr Arg Ser Gln
 1               5                  10                  15
Glu Asn Pro Asn Thr Tyr Ser Glu Asp Leu Asp Val
            20                  25
 
<210>81
<211>28
<212>PRT
<213>小家鼠(Mus musculus)
 
<400>81
Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Gln Phe Lys Val Val Thr Arg Ser Gln
 1               5                  10                  15
Glu Ser Pro Asn Thr Tyr Ser Glu Asp Leu Asp Val
            20                  25
 
<210>82
<211>29
<212>PRT
<213>豚鼠(Cavia porcellus)
 
<400>82
Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Gln Phe Lys Val Val Thr Arg Ser Gln
 1               5                  10                  15
Glu Asp Pro Asn Ala Tyr Ser Glu Glu Phe Phe Asp Val
            20                  25
 
<210>83
<211>29
<212>PRT
<213>野猪(Sus scrofa)
 
<400>83
Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Gln Phe Lys Val Val Thr Arg Ser Gln
 1               5                  10                  15
Glu Asp Pro Asn Ala Tyr Tyr Glu Glu Leu Phe Asp Val
            20                  25
 
<210>84
<211>29
<212>PRT
<213>狗(Canis familiaris)
 
<400>84
Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Gln Phe Lys Val Val Thr Arg Ser Gln
 1               5                  10                  15
Glu Asp Pro Asn Ala Tyr Ser Gly Glu Leu Leu Asp Gly
            20                  25
 
<210>85
<211>29
<212>PRT
<213>黄牛(Bos taurus)
 
<400>85
Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Gln Phe Lys Val Val Thr Arg Ser Gln
 1               5                  10                  15
Glu Asp Pro Ser Ala Tyr Tyr Glu Glu Leu Phe Asp Val
            20                  25
 
<210>86
<211>29
<212>PRT
<213>美洲巨蟾蜍(Bufo marinus)
 
<400>86
Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Gln Phe Lys Val Thr Thr Arg Ser Glu
 1               5                  10                  15
Glu Asp Pro Ser Thr Phe Ser Gly Glu Leu Ser Asn Leu
            20                  25
 
<210>87
<211>29
<212>PRT
<213>东方铃蟾(Bombina orientalis)
 
<400>87
Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Gln Phe Lys Val Thr Thr Arg Ser Glu
 1               5                  10                  15
Glu Glu Pro Gly Ser Phe Ser Gly Glu Ile Ser Asn Leu
            20                  25
 
<210>88
<211>29
<212>PRT
<213>爪蟾(Xenopus laevis)
 
<400>88
Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Gln Phe Lys Val Asn Ala Arg Ser Glu
 1               5                  10                  15
Glu Asp Pro Thr Met Phe Ser Asp Glu Leu Ser Tyr Leu
            20                  25
<210>89
<211>29
<212>PRT
<213>爪蟾(Xenopus laevis)
 
<400>89
Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Gln Phe Lys Val Asn Ala Arg Ser Glu
 1               5                  10                  15
Glu Asp Pro Thr Met Phe Ser Gly Glu Leu Ser Tyr Leu
            20                  25
 
<210>90
<211>29
<212>PRT
<213>塞内加尔多鳍鱼(Polypterus senegalus)
 
<400>90
Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg His Phe Lys Ile Ser Val Arg Ser Asp
 1               5                  10                  15
Glu Glu Pro Ser Ser Tyr Ser Asp Glu Val Leu Glu Leu
            20                  25
 
<210>91
<211>27
<212>PRT
<213>斑马鱼(Danio rerio)
 
<400>91
Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg His Phe Lys Ile Ser VaI Arg Ser Asp
 1               5                  10                  15
Glu Glu Pro Ser Ser Tyr Glu Asp Tyr Ala Leu
            20                  25
 
<210>92
<211>27
<212>PRT
<213>美洲鳗鲡(Anguilla rostrata)
 
<400>92
Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg His Phe Lys Ile Ser Val Arg Ser Asp
 1               5                  10                  15
Glu Glu Pro Gly Ser Tyr Asp Val Ile Gly Leu
            20                  25
 
<210>93
<211>29
<212>PRT
<213>澳洲肺鱼(Neoceratodus forsteri)
 
<400>93
Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg His Phe Lys Ile Thr Val Arg Ser Asp
 1               5                  10                  15
Glu Asp Pro Ser Pro Tyr Leu Asp Glu Phe Ser Asp Leu
            20                  25
 
<210>94
<211>27
<212>PRT
<213>山女鳟(0ncorhynchus masou masou)
 
<400>94
Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg His Tyr Lys Leu Ser Val Arg Ser Asp
 1               5                  10                  15
Glu Glu Pro Ser Ser Tyr Asp Asp Phe Gly Leu
            20                  25
 
<210>95
<211>13
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
 
<400>95
Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Gln Phe Lys Val Val Thr
 1               5                  10
 
<210>96
<211>13
<212>PRT
<213>美洲巨蟾蜍(Bufo marinus)
 
<400>96
Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Gln Phe Lys Val Thr Thr
 1               5                  10
 
<210>97
<211>13
<212>PRT
<213>爪蟾(Xenopus laevis)
 
<400>97
Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Gln Phe Lys Val Asn Ala
 1               5                  10
 
<210>98
<211>13
<212>PRT
<213>塞内加尔多鳍鱼(Polypterus senegalus)
 
<400>98
Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg His Phe Lys Ile Ser Val
 1               5                  10
 
<210>99
<211>13
<212>PRT
<213>澳洲肺鱼(Neoceratodus forsteri)
 
<400>99
Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg His Phe Lys Ile Thr Val
 1               5                  10
 
<210>100
<211>13
<212>PRT
<213>山女鳟(0ncorhynchus masou masou)
 
<400>100
Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg His Tyr Lys Leu Ser Val
 1               5                  10
 
<210>101
<211>17
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
<400>101
Phe Gly Gly Phe Thr Gly Ala Arg Lys Ser Ala Arg Lys Arg Lys Asn
 1               5                  10                  15
Gln
 
<210>102
<211>17
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
 
<400>102
Phe Gly Gly Phe Thr Gly Ala Arg Lys Ser Ala Arg Lys Leu AIa Asn
 1               5                  10                  15
Gln
 
<210>103
<211>17
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
 
<400>103
Phe Gly Gly Phe Thr Gly Ala Arg Lys Ser AIa Arg Lys Tyr Ala Asn
 1               5                  10                  15
Gln
 
<210>104
<211>11
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
 
<400>104
Phe Gly Gly Phe Thr Gly Ala Arg Lys Ser Ala
 1               5                  10
 
<210>105
<211>11
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
 
<400>105
Phe Gly Gly Phe Thr Gly Ala Arg Lys Tyr Ala
 1               5                  10
 
<210>106
<211>11
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
 
<400>106
Phe Gly Gly Phe Thr Gly Ala Arg Lys Ser Tyr
 1               5                  10
 
<210>107
<211>13
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
 
<400>107
Phe Gly Gly Phe Thr Gly Ala Arg Lys Ser Ala Arg Lys
 1               5                  10
 
<210>108
<211>30
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
 
<400>108
Met Pro Arg Val Arg Ser Leu Phe Gln Glu Gln Glu Glu Pro Glu Pro
 1               5                  10                  15
Gly Met Glu Glu Ala Gly Glu Met Glu Gln Lys Gln Leu Gln
            20                  25                  30
 
<210>109
<211>17
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
 
<400>109
Phe Ser Glu Phe Met Arg Gln Tyr Leu Val Leu Ser Met Gln Ser Ser
 1               5                  10                  15
Gln
 
<210>110
<211>8
<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)
 
<400>110
Thr Leu His Gln Asn Gly Asn Val
 1               5
 
<210>111
<211>5
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>柔性A-间隔物
 
<400>111
Ala Ala Ala Ala Val
 1               5
 
<210>112
<211>5
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>位点
<222>(1)...(5)
<223>SUMO/ULP-1蛋白酶切割位点的共有序列
 
<221>变体
<222>(3)...(5)
<223>Xaa可为任意氨基酸
 
<400>112
Gly Gly Xaa Xaa Xaa
 1               5
<210>113
<21l>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>位点
<222>(1)...(7)
<223>烟草叶脉斑点病毒蛋白酶切割位点的共有序列
 
<221>变体
<222>(1)...(2)
<223>Xaa可为任意氨基酸
 
<400>113
Xaa Xaa Val Arg Phe Gln Gly
 1               5
 
<210>114
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>位点
<222>(1)...(7)
<223>烟草叶脉斑点病毒蛋白酶切割位点的共有序列
 
<221>变体
<222>(1)...(2)
<223>Xaa可为任意氨基酸
 
<400>114
Xaa Xaa Val Arg Phe Gln Ser
 1               5
 
<210>115
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>位点
<222>(1)...(7)
<223>烟草叶脉斑点病毒蛋白酶切割位点
 
<400>115
Glu Thr Val Arg Phe Gln Gly
 1               5
 
<210>116
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>位点
<222>(0)...(0)
<223>烟草叶脉斑点病毒蛋白酶切割位点
 
<400>116
Glu Thr Val Arg Phe Gln Ser
 1               5
 
<210>117
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>位点
<222>(1)...(7)
<223>烟草叶脉斑点病毒蛋白酶切割位点
 
<400>117
Asn Asn Val Arg Phe Gln Gly
 1               5
 
<210>118
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>位点
<222>(1)...(7)
<223>烟草叶脉斑点病毒蛋白酶切割位点
 
<400>118
Asn Asn Val Arg Phe Gln Ser
 1               5
 
<210>119
<211>5
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>位点
<222>(1)...(5)
<223>非人类半胱天冬酶3蛋白酶切割位点的共有序列
 
<221>变体
<222>(2)...(2)
<223>Xaa可为任意氨基酸，优选地为E
 
<221>变体
<222>(3)...(3)
<223>Xaa可为任意氨基酸
 
<221>变体
<222>(5)...(5)
<223>Xaa可为任意氨基酸，优选地为G或S
 
<400>119
Asp Xaa Xaa Asp Xaa
 1               5
 
<210>120
<211>5
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>位点
<222>(1)...(5)
<223>非人类半胱天冬酶3蛋白酶切割位点
 
<400>120
Asp Glu Val Asp Gly
 1               5
<210>121
<211>5
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>位点
<222>(1)...(5)
<223>非人类半胱天冬酶3蛋白酶切割位点
 
<400>121
Asp Glu Val Asp Ser
 1               5
 
<210>122
<211>5
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>位点
<222>(1)...(5)
<223>非人类半胱天冬酶3蛋白酶切割位点
 
<400>122
Asp Glu Pro Asp Gly
 1               5
 
<210>123
<211>5
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>位点
<222>(1)...(5)
<223>非人类半胱天冬酶3蛋白酶切割位点
 
<400>123
Asp Glu Pro Asp Ser
 1               5
 
<210>124
<211>5
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>位点
<222>(1)...(5)
<223>非人类半胱天冬酶3蛋白酶切割位点
 
<400>124
Asp Glu Leu Asp Gly
 1               5
 
<210>125
<211>5
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<221>位点
<222>(1)...(5)
<223>非人类半胱天冬酶3蛋白酶切割位点
 
<400>125
Asp Glu Leu Asp Ser
 1               5

Claims (13)

1.一种治疗哺乳动物的慢性神经源性炎症的方法，所述方法包括给予需要该治疗的哺乳动物治疗有效量的含有经修饰的梭菌毒素的组合物的步骤，所述梭菌毒素包括阿片样肽结合结构域、梭菌毒素易位结构域和梭菌毒素酶促结构域，其中给予所述组合物可减少炎症诱导分子的释放，由此减轻慢性神经源性炎症相关的症状。
2.权利要求1的方法，其中所述经修饰的梭菌毒素包括如下的氨基端至羧基端线性单链多肽结构顺序：1)梭菌毒素酶促结构域、梭菌毒素易位结构域、阿片样肽结合结构域；2)梭菌毒素酶促结构域、阿片样肽结合结构域、梭菌毒素易位结构域；3)阿片样肽结合结构域、梭菌毒素易位结构域和梭菌毒素酶促结构域；4)阿片样肽结合结构域、梭菌毒素酶促结构域、梭菌毒素易位结构域；5)梭菌毒素易位结构域、梭菌毒素酶促结构域和阿片样肽结合结构域；或6)梭菌毒素易位结构域、阿片样肽结合结构域和梭菌毒素酶促结构域。
3.权利要求1的方法，其中所述阿片样肽结合结构域为脑啡肽、BAM22肽、内啡素、内啡肽、强啡肽、伤害感受肽或血啡肽。
4.权利要求1的方法，其中所述梭菌毒素易位结构域为：BoNT/A易位结构域、BoNT/B易位结构域、BoNT/C1易位结构域、BoNT/D易位结构域、BoNT/E易位结构域、BoNT/F易位结构域、BoNT/G易位结构域、TeNT易位结构域、BaNT易位结构域或BuNT易位结构域。
5.权利要求1的方法，其中所述梭菌毒素酶促结构域为：BoNT/A酶促结构域、BoNT/B酶促结构域、BoNT/C1酶促结构域、BoNT/D酶促结构域、BoNT/E酶促结构域、BoNT/F酶促结构域、BoNT/G酶促结构域、TeNT酶促结构域、BaNT酶促结构域或BuNT酶促结构域。
6.一种治疗哺乳动物的慢性神经源性炎症的方法，所述方法包括给予需要该治疗的哺乳动物治疗有效量的含有经修饰的梭菌毒素的组合物的步骤，所述梭菌毒素包括阿片样肽结合结构域、梭菌毒素易位结构域、梭菌毒素酶促结构域和外源性蛋白酶切割位点，其中给予所述组合物可减少炎症诱导分子的释放，由此减轻慢性神经源性炎症相关的症状。
7.权利要求6的方法，其中所述经修饰的梭菌毒素包括如下的氨基端至羧基端线性单链多肽结构顺序：1)梭菌毒素酶促结构域、外源性蛋白酶切割位点、梭菌毒素易位结构域、阿片样肽结合结构域；2)梭菌毒素酶促结构域、外源性蛋白酶切割位点、阿片样肽结合结构域、梭菌毒素易位结构域；3)阿片样肽结合结构域、梭菌毒素易位结构域、外源性蛋白酶切割位点和梭菌毒素酶促结构域；4)阿片样肽结合结构域、梭菌毒素酶促结构域、外源性蛋白酶切割位点、梭菌毒素易位结构域；5)梭菌毒素易位结构域、外源性蛋白酶切割位点、梭菌毒素酶促结构域和阿片样肽结合结构域；或6)梭菌毒素易位结构域、外源性蛋白酶切割位点、阿片样肽结合结构域和梭菌毒素酶促结构域。
8.权利要求6的方法，其中所述阿片样肽结合结构域为脑啡肽、BAM22肽、内啡素、内啡肽、强啡肽、伤害感受肽或血啡肽。
9.权利要求6的方法，其中所述梭菌毒素易位结构域为：BoNT/A易位结构域、BoNT/B易位结构域、BoNT/C1易位结构域、BoNT/D易位结构域、BoNT/E易位结构域、BoNT/F易位结构域、BoNT/G易位结构域、TeNT易位结构域、BaNT易位结构域或BuNT易位结构域。
10.权利要求6的方法，其中所述梭菌毒素酶促结构域为：BoNT/A酶促结构域、BoNT/B酶促结构域、BoNT/C1酶促结构域、BoNT/D酶促结构域、BoNT/E酶促结构域、BoNT/F酶促结构域、BoNT/G酶促结构域、TeNT酶促结构域、BaNT酶促结构域或BuNT酶促结构域。
11.权利要求6的方法，其中所述外源性蛋白酶切割位点为：植物木瓜蛋白酶切割位点、昆虫木瓜蛋白酶切割位点、甲壳类木瓜蛋白酶切割位点、肠激酶切割位点、人类鼻病毒3C蛋白酶切割位点、人类肠病毒3C蛋白酶切割位点、烟草蚀刻病毒蛋白酶切割位点、烟草叶脉斑点病毒蛋白酶切割位点、枯草杆菌蛋白酶切割位点、羟胺切割位点或半胱天冬酶3切割位点。
12.经修饰的梭菌毒素用于制备治疗需要该治疗的哺乳动物的慢性神经源性炎症的药物的用途，其中所述经修饰的梭菌毒素包括阿片样肽结合结构域、梭菌毒素易位结构域、梭菌毒素酶促结构域和外源性蛋白酶切割位点，并且其中给予所述哺乳动物治疗有效量的所述药物能够减少炎症诱导分子的释放，由此减轻慢性神经源性炎症相关的症状。
13.经修饰的梭菌毒素用于治疗需要该治疗的哺乳动物的慢性神经源性炎症的用途，所述用途包括给予所述哺乳动物治疗有效量的经修饰的梭菌毒素的步骤，其中所述经修饰的梭菌毒素包括阿片样肽结合结构域、梭菌毒素易位结构域、梭菌毒素酶促结构域和外源性蛋白酶切割位点，并且其中给予所述经修饰的梭菌毒素能够减少炎症诱导分子的释放，由此减轻慢性神经源性炎症相关的症状。
CN2008801212895A 2007-10-23 2008-10-21 使用经修饰的梭菌毒素治疗慢性神经源性炎症的方法 Pending CN101903035A (zh)

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US98202107P 2007-10-23 2007-10-23
US60/982,021 2007-10-23
US7622808P 2008-06-27 2008-06-27
US61/076,228 2008-06-27
US9069208P 2008-09-10 2008-09-10
US61/090,692 2008-09-10
PCT/US2008/080570 WO2009055350A1 (en) 2007-10-23 2008-10-21 Methods of treating chronic neurogenic inflammation using modified clostridial toxins

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN101903035A true CN101903035A (zh) 2010-12-01

Family

ID=40218954

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2008801212895A Pending CN101903035A (zh) 2007-10-23 2008-10-21 使用经修饰的梭菌毒素治疗慢性神经源性炎症的方法

Country Status (11)

Country Link
US (1) US20090104234A1 (zh)
EP (1) EP2214696A1 (zh)
JP (1) JP2011514307A (zh)
KR (1) KR20100088683A (zh)
CN (1) CN101903035A (zh)
AU (1) AU2008316988A1 (zh)
BR (1) BRPI0819212A2 (zh)
CA (1) CA2703364A1 (zh)
IL (1) IL205280A0 (zh)
MX (1) MX2010004488A (zh)
WO (1) WO2009055350A1 (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108137654A (zh) * 2015-05-15 2018-06-08 内布拉斯加大学董事会 适用于将分子递送进入选定细胞的工程改造的肉毒梭菌毒素
CN110072880A (zh) * 2016-08-24 2019-07-30 哈佛大学校长及研究员协会 工程化肉毒杆菌神经毒素

Families Citing this family (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7811584B2 (en) * 2004-06-30 2010-10-12 Allergan, Inc. Multivalent clostridial toxins
US8399400B2 (en) * 2004-12-01 2013-03-19 Syntaxin, Ltd. Fusion proteins
US8512984B2 (en) 2004-12-01 2013-08-20 Syntaxin, Ltd. Non-cytotoxic protein conjugates
US8778634B2 (en) 2004-12-01 2014-07-15 Syntaxin, Ltd. Non-cytotoxic protein conjugates
GB0426394D0 (en) * 2004-12-01 2005-01-05 Health Prot Agency Fusion proteins
US8603779B2 (en) 2004-12-01 2013-12-10 Syntaxin, Ltd. Non-cytotoxic protein conjugates
GB0610867D0 (en) 2006-06-01 2006-07-12 Syntaxin Ltd Treatment of pain
JP5537441B2 (ja) 2008-03-04 2014-07-02 ファイザー・リミテッド 慢性疼痛を治療する方法
US20100303756A1 (en) * 2009-05-29 2010-12-02 Allergan, Inc. Methods of Treating Urogenital-Neurological Disorders Using Interleukin Retargeted Endopepidases
US20100303791A1 (en) * 2009-05-29 2010-12-02 Allergan, Inc. Methods of Treating Chronic Neurogenic Inflammation Using Glucagon Like Hormone Retargeted Endopepidases
US20100303789A1 (en) * 2009-05-29 2010-12-02 Allergan, Inc. Methods of Treating Chronic Neurogenic Inflammation Using Neurotrophin Retargeted Endopepidases
US20100303757A1 (en) * 2009-05-29 2010-12-02 Allergan, Inc. Methods of Treating Chronic Neurogenic Inflammation Using Interleukin Retargeted Endopepidases
US20100303798A1 (en) * 2009-05-29 2010-12-02 Allergan, Inc. Methods of Treating Urogenital-Neurological Disorders Using Neurotrophin Retargeted Endopepidases
US20100303794A1 (en) * 2009-05-29 2010-12-02 Allergan, Inc. Methods of Treating Urogenital-Neurological Disorders Using Glucagon Like Hormone Retargeted Endopepidases
US20100303788A1 (en) * 2009-05-29 2010-12-02 Allergan, Inc. Methods of Treating Chronic Neurogenic Inflammation Using Galanin Retargeted Endopepidases
US20100303783A1 (en) * 2009-05-29 2010-12-02 Allergan, Inc. Methods of Treating Urogenital-Neurological Disorders Using Tachykinin Retargeted Endopepidases
US8198229B2 (en) * 2009-05-29 2012-06-12 Allergan, Inc. Methods of treating urogenital-neurological disorders using galanin retargeted endopepidases
MX2012002464A (es) 2009-08-28 2012-03-14 Rinat Neuroscience Corp El uso de anticuerpos antagonistas dirigidos contra el peptido relacionado con el gen de la calcitonina para tratar dolor visceral.
US20120207734A1 (en) * 2011-02-14 2012-08-16 Allergan, Inc. Methods of Inhibiting Aberrant Blood Vessel Formation Using Opioid Retargeted Endpeptidases
US20120207743A1 (en) * 2011-02-14 2012-08-16 Allergan, Inc. Inhibiting Aberrant Blood Vessel Formation Using Retargeted Endopeptidases
US20140056870A1 (en) 2012-08-27 2014-02-27 Allergan, Inc. Fusion proteins
MX370929B (es) 2012-10-28 2020-01-08 Revance Therapeutics Inc Composiciones y usos de las mismas para el tratamiento seguro de la rinitis.
JP6156954B2 (ja) * 2012-11-21 2017-07-05 イプセン バイオイノベーション リミテッド タンパク分解性にプロセシングされたポリペプチドの製造方法
US10556945B2 (en) 2014-03-21 2020-02-11 Teva Pharmaceuticals International Gmbh Antagonist antibodies directed against calcitonin gene-related peptide and methods using same
JP6568099B2 (ja) 2014-03-21 2019-08-28 テバ・ファーマシューティカルズ・インターナショナル・ゲーエムベーハーＴｅｖａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＧｍｂＨ カルシトニン遺伝子関連ペプチドに対するアンタゴニスト抗体及びその使用方法
US11484580B2 (en) 2014-07-18 2022-11-01 Revance Therapeutics, Inc. Topical ocular preparation of botulinum toxin for use in ocular surface disease
CA3036632A1 (en) 2016-09-23 2018-03-29 Teva Pharmaceuticals International Gmbh Treating refractory migraine
WO2020020878A1 (en) * 2018-07-23 2020-01-30 Universitetssykehuset Nord-Norge Hf Neurotoxin b for use in the treatment of skin diseases
KR102174197B1 (ko) * 2019-06-12 2020-11-04 주식회사 앤씨비아이티 생산성이 향상된 비독성 프로테아제

Family Cites Families (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2006A (en) * 1841-03-16 Clamp for crimping leather
US4189426A (en) * 1976-04-12 1980-02-19 Hoffmann-La Roche, Inc. Recombinant hormonal compositions and method
US4481139A (en) * 1983-04-13 1984-11-06 Board Of Regents, The University Of Texas System Peptide antagonists of substance P
US4664911A (en) * 1983-06-21 1987-05-12 Board Of Regents, University Of Texas System Immunotoxin conjugates employing toxin B chain moieties
JPS60248659A (ja) * 1984-05-25 1985-12-09 Microbial Chem Res Found ３−〔ｎ−（メルカプトアシル）〕アミノ−４−アリ−ル酪酸誘導体及びそれを有効成分とする鎮痛剤
US5668255A (en) * 1984-06-07 1997-09-16 Seragen, Inc. Hybrid molecules having translocation region and cell-binding region
US4683202A (en) * 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
US4800159A (en) * 1986-02-07 1989-01-24 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or cloning nucleic acid sequences
US5410019A (en) * 1987-09-24 1995-04-25 The Administrators Of The Tulane-Educational Fund Therapeutic peptides
US5919665A (en) * 1989-10-31 1999-07-06 Ophidian Pharmaceuticals, Inc. Vaccine for clostridium botulinum neurotoxin
ATE138102T1 (de) * 1991-02-19 1996-06-15 Takeda Chemical Industries Ltd Verfahren zur herstellung von cysteinfreien peptiden
ES2117050T3 (es) * 1991-06-27 1998-08-01 Genelabs Tech Inc Ensayo de cribado para la deteccion de moleculas de union al adn.
US5891842A (en) * 1993-04-09 1999-04-06 Trustees Of Tufts College Methodology for eliciting an analgesic response in a living subject
US5766605A (en) * 1994-04-15 1998-06-16 Mount Sinai School Of Medicine Of The City University Of New York Treatment of autonomic nerve dysfunction with botulinum toxin
JP3122319B2 (ja) * 1994-05-02 2001-01-09 アソシエーティド ユニバーシティーズ，インコーポレイティド 錫−１１７ｍ−含有放射性治療剤
ATE215832T1 (de) * 1994-05-09 2002-04-15 William J Binder Botulinumtoxin zur reduktion von migraine - kopfschmerzen
US5538733A (en) * 1994-07-07 1996-07-23 Willmar Poultry Company, Inc. Method of priming an immune response in a one-day old animal
US5846216A (en) * 1995-04-06 1998-12-08 G & P Technologies, Inc. Mucous membrane infusor and method of use for dispensing medications
GB9508204D0 (en) * 1995-04-21 1995-06-07 Speywood Lab Ltd A novel agent able to modify peripheral afferent function
GB9617671D0 (en) * 1996-08-23 1996-10-02 Microbiological Res Authority Recombinant toxin fragments
US6063768A (en) * 1997-09-04 2000-05-16 First; Eric R. Application of botulinum toxin to the management of neurogenic inflammatory disorders
GB9818548D0 (en) * 1998-08-25 1998-10-21 Microbiological Res Authority Treatment of mucas hypersecretion
EP1206554B2 (en) * 1999-08-25 2010-10-20 Allergan, Inc. Activatable recombinant neurotoxins
US6641820B1 (en) * 2000-01-19 2003-11-04 Allergan, Inc. Clostridial toxin derivatives and methods to treat pain
US6500436B2 (en) * 2000-01-19 2002-12-31 Allergan, Inc. Clostridial toxin derivatives and methods for treating pain
US7138127B1 (en) * 2000-01-19 2006-11-21 Allergan, Inc. Clostridial toxin derivatives and methods for treating pain
US7022329B2 (en) * 2002-02-25 2006-04-04 Allergan, Inc. Method for treating neurogenic inflammation pain with botulinum toxin and substance P components
WO2006059093A2 (en) * 2004-12-01 2006-06-08 Health Protection Agency Fusion proteins
GB0610867D0 (en) 2006-06-01 2006-07-12 Syntaxin Ltd Treatment of pain

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108137654A (zh) * 2015-05-15 2018-06-08 内布拉斯加大学董事会 适用于将分子递送进入选定细胞的工程改造的肉毒梭菌毒素
CN110072880A (zh) * 2016-08-24 2019-07-30 哈佛大学校长及研究员协会 工程化肉毒杆菌神经毒素

Also Published As

Publication number Publication date
MX2010004488A (es) 2010-06-17
JP2011514307A (ja) 2011-05-06
BRPI0819212A2 (pt) 2015-06-16
WO2009055350A1 (en) 2009-04-30
US20090104234A1 (en) 2009-04-23
KR20100088683A (ko) 2010-08-10
CA2703364A1 (en) 2009-04-30
AU2008316988A1 (en) 2009-04-30
EP2214696A1 (en) 2010-08-11
IL205280A0 (en) 2010-12-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101903035A (zh) 使用经修饰的梭菌毒素治疗慢性神经源性炎症的方法
US20100303791A1 (en) Methods of Treating Chronic Neurogenic Inflammation Using Glucagon Like Hormone Retargeted Endopepidases
US11034947B2 (en) Cationic neurotoxins
US20100303788A1 (en) Methods of Treating Chronic Neurogenic Inflammation Using Galanin Retargeted Endopepidases
US9072736B2 (en) Treatment of pain
US20100303757A1 (en) Methods of Treating Chronic Neurogenic Inflammation Using Interleukin Retargeted Endopepidases
US20100303789A1 (en) Methods of Treating Chronic Neurogenic Inflammation Using Neurotrophin Retargeted Endopepidases
CN101918021A (zh) 使用经修饰的梭菌毒素治疗泌尿生殖系统神经疾病的方法
AU2022247196A1 (en) Treatment of pain &amp; inflammatory disorders
TW202304502A (zh) 疼痛及發炎性病症之治療
NZ715570B2 (en) Cationic neurotoxins

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20101201