KR20100088683A - 변형 클로스트리듐 독소를 사용한 만성 신경성 염증의 치료 방법 - Google Patents

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Abstract

본 명세서는 변형 클로스트리듐 독소, 이러한 독소를 포함하는 조성물 및 이러한 변형 클로스트리듐 독소 및 조성물을 사용하여 포유류에서 만성 신경성 염증을 치료하는 방법을 개시한다.

Description

변형 클로스트리듐 독소를 사용한 만성 신경성 염증의 치료 방법 {Methods of Treating Chronic Neurogenic Inflammation Using Modified Clostridial Toxins}
본 발명은 35 U.S.C. §119(e)에 따라 2007년 10월 23일 출원된 미국 가특허 출원 제60/982,021호, 2008년 6월 27일 출원된 미국 가특허 출 원제61/076,228호, 및 2008년 9월 10일 출원된 미국 가특허 출원 제61/090,692호의 우선권을 주장하며, 이들은 본 명세서에 전체적으로 참고로 포함된다.
클로스트리듐 독소, 예를 들어, 보툴리늄 신경독 (BoNTs), BoNT/A, BoNT/B, BoNT/C1, BoNT/D, BoNT/E, BoNT/F 및 BoNT/G, 및 파상풍 신경독 (TeNT)이 신경 전달을 억제하는 능력이 광범위하게 다양한 치료적 및 미용적 응용에 활용되고 있다, 예를 들어, 문헌 [William J. Lipham, Cosmetic and Clinical Applications of Botulinum Toxin (Slack, Inc., 2004)] 참조. 약학적 조성물로서 구매가능한 클로스트리듐 독소에는, BoNT/A 제제, 예를 들어, 보톡스(BOTOX® (미국 캘리포니아 이르빈 소재의 알러간, 인크.(Allergan, Inc.)), 디스포르트/릴록신(Dysport®/Reloxin® (영국 포턴 다운 소재의 뷰포 입센(Beaufour Ipsen)), 리누라제(Linurase®(캐나다 온타리오 소재의 프롤레늄, 인크.(Prollenium, Inc.)), 뉴로녹스(Neuronox®(한국 오창면 소재의 메디-톡스, 인크.(Medy-Tox, Inc.)), BTX-A (중국 소재의 란저우 인스티튜트 바이올로지컬 프로덕츠(Lanzhou Institute Biological Products)) 및 크세오민(Xeomin®(독일 프랑크푸르트 소재의 메르츠 파마슈티칼스, 게엠베하(Merz Pharmaceuticals, GmbH.)); 및BoNT/B 제제, 예를 들어, 미오블록/뉴로블록(MyoBloc®/NeuroBloc® (미국 캘리포니아주 샌프란시스코 소재의 엘란 파마슈티칼스(Elan Pharmaceuticals))가 포함된다. 예로서, 보톡스(BOTOX®)는 최근 하나 이상의 국가에서 다음 증상(indication)에 대해 승인되었다: 이완불능증(achalasia), 성인성 경직(adult spasticity), 치열(anal fissure), 등 통증(back pain), 안검경련(blepharospasm), 이갈이(bruxism), 경부 디스토니아(cervical dystonia), 본태성 진전(essential tremor), 미간 주름(glabellar line) 또는 과운동성 안면 주름(hyperkinetic facial line), 두통, 반측안면 경련(hemifacial spasm), 방광의 활동과잉(hyperactivity of bladder), 다한증(hyperhidrosis), 소아 뇌성 마비(juvenile cerebral palsy), 다발성 경화증(multiple sclerosis), 근간대성 질환(myoclonic disorder), 코 입술 주름(nasal labial line), 경련성 발성 질환(spasmodic dysphonia), 사시(strabismus) 및 VII 신경 질환.
클로스트리듐 독소 요법은 많은 증상에 성공적으로 사용된다. 일반적으로, 클로스트리듐 독소 치료제의 투여는 잘 허용된다(well tolerated). 그러나, 일부 응용에서의 독소 투여는 이로운 효과를 달성하기 위해서는 더 많은 투여량이 필요하기 때문에 도전적일 수 있다. 더 많은 투여량은 독소가 신체의, 간질액(interstitial fluid) 및 순환계, 예를 들어, 심혈관계 및 림프계를 통해 이동할 수 있는 가능성을 증가시켜서, 독소 치료의 표적 아닌 영역으로 바람직하지 않게 독소를 확산시킬 것이다. 이러한 확산은 바람직하지 않은 부작용, 예를 들어, 치료의 표적이 아닌 뉴런에서의 신경전달물질 방출의 억제 또는 치료의 표적이 아닌 근육의 마비를 야기할 수 있다. 예를 들어, 사경의 치료를 위해 치료적 유효량의 BoNT/A 치료제를 목 근육에 투여한 환자는 구인두(oropharynx)로의 독소의 확산으로 인하여 연하곤란(dysphagia)을 겪을 수 있다. 다른 예로서, 과민성 방광의 치료를 위해 치료적 유효량의 BoNT/A 치료제를 방광에 투여한 환자는 구강건조증(dry month) 및/또는 안구건조증(dry eye)을 겪을 수 있다. 따라서, 치료 부위에서는 효과적이나 독소 치료의 표적이 아닌 영역에서의 효과는 무시할 수 있을 정도 내지 최소인 개선된 클로스트리듐 독소가 여전히 필요하다.
클로스트리듐 독소 치료제는 신경전달물질을 시냅스 틈(synaptic cleft)으로 방출하는 데 사용되는 엑소시토시스 과정을 방해하여 신경전달물질 방출을 억제한다. 현재의 근육-이완(myo-relaxant) 응용을 넘어서서 감각 신경계 질환, 예를 들어, 다양한 종류의 만성 통증, 신경성 염증(neurogenic inflammation) 및 비뇨생식기 질환, 뿐만 아니라, 다른 질환, 예를 들어, 췌장염을 처치하는 것으로 클로스트리듐 독소 요법의 사용을 확장하는 것이 약학 산업에서 크게 요구된다. 클로스트리듐 독소-기반 요법을 확장하는 데 현재 활용되고 있는 한 가지 접근법은 클로스트리듐 독소을 변형하여, 변형 독소(modified toxin)가 비-클로스트리듐 독소 표적 세포에 대해 변경된 세포 표적 능력을 갖도록 하는 것을 수반한다. 이러한 재-표적화(re-targeted) 능력은 클로스트리듐 독소의 자연 발생적 표적 도메인(naturally-occurring targeting domain)을, 비-클로스트리듐 독소 표적 세포 중에 존재하는 비-클로스트리듐 독소 수용체에 대한 선택적인 결합 활성을 나타내는 표적 도메인으로 대체하여 달성된다. 표적 도메인에 대한 이러한 변형은 비-클로스트리듐 독소 표적 세포 상에 존재하는 비-클로스트리듐 독소 수용체 (표적 수용체)에 선택적으로 결합할 수 있는 변형 독소를 야기한다(재-표적화). 비-클로스트리듐 독소 표적 세포에 대한 활성을 표적 활성을 갖는 변형 클로스트리듐 독소는 비-클로스트리듐 독소 표적 세포 상에 존재하는 수용체에 결합할 수 있으며, 세포질로 전위(translocate)될 수 있고, 비-클로스트리듐 독소 표적 세포의 SNARE 복합체에 대해 단백분해 효과를 발휘할 수 있다.
신경성 염증은 궁극적으로는 감각 뉴런으로부터의 염증 매개체 및 감작 화합물(sensitizing compound)의 국부적인 방출을 야기하는 복합적인 생물학적 과정에 의해 야기되는 일련의 혈관 및 비-혈관 염증 반응을 망라한다. 유해 자극, 예를 들어, 병원체, 세포의 손상, 또는 자극물 에 의한 공격시, 염증 매개 또는 감작 분자, 예를 들어, 히스타민, 프로스타글란딘, 류코트리엔, 세로토닌, 중성 프로테아제, 시토킨, 브리디키닌 및 산화질소(nitric oxide)가 염증 매개 세포, 예를 들어, 비만 세포, 면역 세포, 혈관 내피 세포, 및 혈관 평활근 세포 로부터 방출된다. 본 명세서에 전체적으로 참고로 포함되어 있는, 문헌 [Jennelle Durnett Richardson and Michael R. Vasko, Cellular Mechanisms of neurogenic inflammation, 302(3) J. Pharmacol. Exp. Ther. 839-845 (2002)]을 참조한다. 이러한 염증 매개 및 감작 분자는 감각 뉴런에 작용하여 말초 신경 말단으로부터, 염증 유도 분자, 예를 들어, 물질 P (SP) 및 칼시토닌 유전자-관련 펩티드 (CGRP)와 같은 뉴로펩티드, 프로스타글란딘 및 글루타메이트와 같은 아미노산의 방출을 자극한다. 방출시, 이러한 염증 유도 분자는 염증 반응을 이끌어내는 데 책임이 있으며, 전형적으로 자극 부위를 넘어 확장하는(플레어 반응(flare response)), 부종 (혈장 삼출에 속발된 종창), 과민증(소정 감각 뉴런의 흥분성(excitability)의 변화에 속발됨), 및 홍반 (혈관확장에 속발된 발적 및 온기)를 특징으로 한다. 상기 문헌과 같음. 근본적인 염증 증상이 일차 감각 뉴런의 활성 및 이어지는 염증 유도 분자의 방출에 의해서 유발되기 때문에, 이 반응을 신경성 염증이라고 한다.
정상적으로, 신경성 염증은 유기체에 의한 보호 메커니즘의 역할을 하여 유해 자극을 제거할 뿐만 아니라 손상 조직의 치유 과정을 개시한다. 이러한 급성 신경성 염증은 조직 완결성(integrity)을 유지하고 조직 회복에 기여하여 제1 방어 라인을 형성한다. 사실상, 급성 신경성 염증이 없으면, 상처 및 감염이 전혀 치유되지 않을 것이며 조직의 진행성 파괴가 유기체의 생존을 위태롭게 할 것이다. 그러나, 심각하거나 연장된 유해 자극은 회복을 매개하기보다는 오히려 손상을 일으키는 만성 신경성 염증 반응을 야기한다. 이러한 만성 신경성 염증은 매우 다양한 사람의 질환의 근간을 이루는 광범위한 관련이 없는 질환들의 병리생리학에 있어서 밀접하게 결부되었다.
만성 신경성 염증을 치료하려는 시도는 제한된 성공을 거두었다. 이는, 일부분, 만성 신경성 염증의 병인이 과다한(redundant) 메커니즘을 통해 염증을 유발하는 것으로 보이는 다양한 염증 유도 분자 및 다수의 염증 매개 및 감작 분자에 일부분 기초하는 복합 반응이라는 사실에 기인한다. 문헌 [Richardson & Vasko, 302(3) J. Pharmacol. Exp. Ther. 839-845 (2002)]을 참고한다. 따라서, 감각 뉴런으로부터 염증 유도 분자의 만성적인 방출을 방지할 수 있는 화합물 및 방법이 만성 신경성 염증의 치료에 매우 바람직할 것이다.
본 명세서는 만성 신경성 염증을 겪는 개체(individual)를 치료하기 위한 변형 클로스트리듐 독소 조성물 및 방법을 개시한다. 이는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 치료적 유효량으로 이를 필요로 하는 개체에 투여하여 달성될 수 있다. 개시된 방법은 만성 신경성 염증을 치료를 위한 안전하고, 저가이며, 외래 환자에 기반한 치료를 제공한다.
따라서, 본 발명의 태양은 오피오이드(opioid) 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 포함하는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 제공한다. 이러한 조성물의 개발에 유용한 변형 클로스트리듐 독소는, 예를 들어, 문헌 [Steward, L.E. et al., Modified Clostridial Toxins with Enhanced Translocation Capabilities and Altered Targeting Activity For Non-Clostridial Toxin Target Cells, 미국 특허출원 제11/776,075호 (2007년 7월 11일); Dolly, J.O. et al., Activatable Clostridial Toxins, 미국 특허출원 제11/829,475 (2007년 7월 27일); Foster, K.A. et al., Fusion Proteins, 국제특허출원 공개 WO 2006/059093 (2006년 6월 8일); 및 Foster, K.A. et al., non - Cytotoxic Protein Conjugates, 국제특허출원 공개 WO 2006/059105호 (2006년 6월 8일)]에 기재되어 있으며, 각각은 본 명세서에 전체적으로 참고로 포함된다. 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물은 약학적 조성물일 수 있다. 이러한 약학적 조성물은, 변형 클로스트리듐 독소에 더하여, 약학적 캐리어(pharmaceutical carrier), 약학적 성분, 또는 둘 모두를 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 태양은 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 포함하는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 치료적 유효량으로 이를 필요로 하는 포유류에 투여하는 단계를 포함하며, 조성물의 투여는 염증 유도 분자의 방출을 감소시킴으로써 만성 신경성 염증과 관련된 증상을 감소시키는, 포유류에서 신경성 염증을 치료하는 방법을 제공한다. 예를 들어, 문헌[Steward, supra, (2007); Dolly, supra, (2007); Foster, supra , WO 2006/059093 (2006); 및 Foster, supra, WO 2006/059105 (Jun. 8, 2006)]에 기재된 것들을 포함하여, 본 명세서에 개시된 임의의 변형 클로스트리듐 독소를 사용할 수 있는 것으로 생각된다.
본 발명의 다른 태양은 포유류에서 신경성 염증을 치료하는 방법으로서, 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 및 외인성 프로테아제 절단 부위(exogenous protease cleavage site)를 포함하는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 치료적 유효량으로 이를 필요로 하는 포유류에 투여하는 단계를 포함하며, 조성물의 투여는 염증 유도 분자의 방출을 감소시킴으로써 만성 신경성 염증과 관련된 증상을 감소시키는, 포유류에서 신경성 염증을 치료하는 방법을 제공한다. 예를 들어, 문헌[Steward, supra, (2007); Dolly, supra, (2007); Foster, supra, WO 2006/059093 (2006); 및 Foster, supra, WO 2006/059105 (Jun. 8, 2006)]에 기재된 것들을 포함하여, 본 명세서에 개시된 임의의 변형 클로스트리듐 독소를 사용할 수 있는 것으로 생각된다.
본 발명의 또 다른 태양은 이를 필요로 하는 포유류에서 만성 신경성 염증을 치료하기 위한 의약품의 제조에 있어서 변형 클로스트리듐 독소의 사용 방법을 제공하며, 변형 클로스트리듐 독소는 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 포함하고, 의약품을 치료적 유효량으로 포유류에 투여하여 염증 유도 분자의 방출을 감소시킴으로써 만성 신경성 염증과 관련된 증상을 감소시킨다. 예를 들어, 문헌[Steward, supra, (2007); Dolly, supra, (2007); Foster, supra , WO 2006/059093 (2006); 및 Foster, supra, WO 2006/059105 (Jun. 8, 2006)]에 기재된 것들을 포함하여, 본 명세서에 개시된 임의의 변형 클로스트리듐 독소를 사용할 수 있는 것으로 생각된다.
본 발명의 또 다른 태양은 이를 필요로 하는 포유류에서 만성 신경성 염증의 치료에 있어서 변형 클로스트리듐 독소의 사용방법을 제공하며, 사용방법은 치료적 유효량의 변형 클로스트리듐 독소를 포유류에 투여하는 단계를 포함하고, 변형 클로스트리듐 독소는 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 포함하고, 변형 클로스트리듐 독소의 투여는 염증 유도 분자의 방출을 감소시킴으로써 만성 신경성 염증과 관련된 증상을 감소시킨다. 예를 들어, 문헌[Steward, supra, (2007); Dolly, supra, (2007); Foster, supra , WO 2006/059093 (2006); 및 Foster, supra, WO 2006/059105 (Jun. 8, 2006)]에 기재된 것들을 포함하여, 본 명세서에 개시된 임의의 변형 클로스트리듐 독소를 사용할 수 있는 것으로 생각된다.
도 1은 중추 및 말초 뉴런에서의 신경전달물질 방출 및 클로스트리듐 독소 중독(intoxication)의 현재의 패러다임의 개략도를 나타낸다. 도 1A는 중추 및 말초 뉴런의 신경전달물질 방출 메커니즘에 대한 개략도를 나타낸다. 방출 프로세스는 다음 2단계를 포함하는 것으로 설명될 수 있다: 1) 소포 도킹(vesicle docking), 여기서는, 신경전달물질 분자를 함유하는 소포의 소포-결합 SNARE 단백질이 원혈질 막에 위치하는 막-결합 SNARE 단백질과 연합한다; 및 2) 신경전달물질 방출, 여기서는, 소포가 원형질 막과 융합하고 신경전달물질 분자가 엑소시토시스된다. 도 1B은 중추 및 말초 뉴런에서의 파상풍 및 보툴리늄 독소 활성에 대한 중독 메커니즘의 개략도를 나타낸다. 중독 프로세스는 다음 4 단계를 포함하는 것으로서 설명될 수 있다: 1) 수용체 결합, 여기서는, 클로스트리듐 독소가 클로스트리듐 수용체 시스템에 결합하고 중독 프로세스를 개시한다; 2) 복합체 내재화(complex internalization), 여기서는, 독소 결합 후에, 독소/수용체 시스템 콤플렉스를 함유하는 소포가 세포 내에 엔도시토시스된다(endocytosed); 3) 경쇄 전위(light chain translocation), 여기서는, 예를 들어, 소포의 내부 pH의 변화, 클로스트리듐 독소 중쇄의 HN 도메인을 포함하는 채널 포어(channel pore)의 형성, 중쇄로부터 클로스트리듐 독소 경쇄의, 및 활성 경쇄의 방출을 포함하는 다수의 사건이 일어나는 것으로 여겨진다; 그리고 4) 효소 표적 변형(enzymatic target modification), 여기서는, 클로스트리듐 독소의 활성 경쇄가 그의 표적SNARE 기질, 예를 들어, SNAP-25, VAMP 또는 신택신 단백분해적으로 절단하여, 소포 도킹 및 신경전달물질 방출을 방지한다.
도 2는 자연 발생적 클로스트리듐 독소의 도메인 구조(domain organization)를 나타낸다. 단일-사슬 형태는 효소 도메인, 전위 도메인, 및 오피오이드 펩티드 결합 도메인을 포함하는 아미노 내지 카르복실 선형 구조를 나타낸다. 전위 및 효소 도메인 사이에 위치하는 이중-사슬(di-chain) 루프 영역은 더블 SS 브래킷으로 나타내었다. 이러한 영역은 자연 발생적 프로테아제, 예를 들어, 내인성 클로스트리듐 독소 프로테아제 또는 자연에서 생성되는 자연 발생적 프로테아제에 의한 단백분해 절단시, 독소의 단일-사슬 형태를 이중-사슬 형태로 변환시키는 내인성 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위를 포함한다. 단일-사슬 형태 위에, 클로스트리듐 독소 결합 도메인의 HCC 영역이 나타나있다. 이 영역은 아미노 내지 카르복실 선형 구조에서 α-폴드, β4/β5 헤어핀 턴, β-폴드, β8/ β9 헤어핀 턴 및 γ-폴드를 포함하는 β-트레포일(trefoil) 도메인을 나타낸다.
도 3은 변형 독소의 아미노 말단에 위치한 향상된 표적 도메인을 갖는 변형 클로스트리듐 독소를 나타낸다. 도 3A는 결합 요소, 전위 요소, 외인성 프로테아제 절단 부위 (P)를 포함하는 이중-사슬 루프 영역, 및 치료 요소를 포함하는 아미노 내지 카르복실 선형 구조를 갖는 변형 클로스트리듐 독소의 단일-사슬 폴리펩티드 형태를 나타낸다. P 프로테아제에 의한 단백분해 절단시, 독소의 단일사슬 형태가 이중-사슬 형태로 변환된다. 도 3B는 결합 요소, 전위 요소, 외인성 프로테아제 절단 부위 (P)를 포함하는 이중-사슬 루프 영역, 및 치료 요소를 포함하는 아미노 내지 카르복실 선형 구조를 갖는 변형 클로스트리듐 독소의 단일 폴리펩티드 형태를 나타낸다. P 프로테아제 에 의한 단백분해 절단시, 독소의 단일 사슬 이중-사슬 형태로 변환된다.
도 4는 다른 두 도메인 사이에 위치한 향상된 표적 도메인을 갖는 변형 클로스트리듐 독소를 나타낸다. 도 4A는 치료 요소, 외인성 프로테아제 절단 부위 (P)를 포함하는 이중-사슬 루프 영역, 결합 요소, 및 전위 요소를 포함하는 아미노 내지 카르복실 선형 구조를 갖는 변형 클로스트리듐 독소의 단일 폴리펩티드 형태를 나타낸다. P 프로테아제에 의한 단백분해 절단시, 독소의 단일-사슬 형태가 이중-사슬 형태로 변환된다. 도 4B는 전위 요소, 외인성 프로테아제 절단 부위 (P)를 포함하는 이중-사슬 루프 영역, 결합 요소, 및 치료 요소를 포함하는 아미노 내지 카르복실 선형 구조를 갖는 변형 클로스트리듐 독소의 단일 폴리펩티드 형태를 나타낸다. P 프로테아제에 의한 단백분해 절단시, 독소의 단일-사슬 형태가 이중-사슬 형태로 변환된다. 도 4C는 치료 요소, 결합 요소, 외인성 프로테아제 절단 부위 (P)를 포함하는 이중-사슬 루프 영역, 및 전위 요소를 포함하는 아미노 내지 카르복실 선형 구조를 갖는 변형 클로스트리듐 독소의 단일 폴리펩티드 형태를 나타낸다. P 프로테아제에 의한 단백분해 절단시, 독소의 단일-사슬 형태가 이중-사슬 형태로 변환된다. 도 4D는 전위 요소, 결합 요소, 외인성 프로테아제 절단 부위 (P)를 포함하는 이중-사슬 루프 영역, 및 치료 요소를 포함하는 아미노 내지 카르복실 선형 구조를 갖는 변형 클로스트리듐 독소의 단일 폴리펩티드 형태를 나타낸다. P 프로테아제에 의한 단백분해 절단시, 독소의 단일-사슬 형태가 이중-사슬 형태로 변환된다.
도 5는 변형 독소의 카르복실 말단에 위치한 향상된 표적 도메인을 갖는 변형 클로스트리듐 독소를 나타낸다. 도 5A는 치료 요소, 외인성 프로테아제 절단 부위 (P)를 포함하는 이중-사슬 루프 영역, 전위 요소, 및 결합 요소를 포함하는 아미노 내지 카르복실 선형 구조를 갖는 변형 클로스트리듐 독소의 단일 폴리펩티드 형태를 나타낸다. P 프로테아제에 의한 단백분해 절단시, 독소의 단일-사슬 형태가 이중-사슬 형태로 변환된다. 도 5B는 전위 요소, 외인성 프로테아제 절단 부위 (P)를 포함하는 이중-사슬 루프 영역, 치료 요소, 및 결합 요소를 포함하는 아미노 내지 카르복실 선형 구조를 갖는 변형 클로스트리듐 독소의 단일 폴리펩티드 형태를 나타낸다. P 프로테아제에 의한 단백분해 절단시, 독소의 단일-사슬 형태가 이중-사슬 형태로 변환된다.
본 발명의 태양은, 일부분, 변형 클로스트리듐 독소를 제공한다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "변형 클로스트리듐 독소"는 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 포함하는 임의의 분자를 의미한다. 본 발명의 태양을 실시하는 데 유용한 예시적인 변형 클로스트리듐 독소가 예를 들어, 문헌[Steward, supra, (2007); Dolly, supra, (2007); Foster, supra , WO 2006/059093 (2006); Foster, supra, WO 2006/059105 (Jun. 8, 2006)]에 기재되어 있다.
클로스트리듐 보툴리늄(Clostridium botulinum ), 클로스트리듐 테타니(Clostridium tetani ), 클로스트리듐 바라티(Clostridium baratii) 및 클로스트리듐 부티리쿰(Clostridium butyricum)에 의해 생성되는 클로스트리듐 독소가 사람 및 다른 포유류의 치료적 및 미용적 처치에 있어서 가장 널리 사용된다. C. 보툴리늄 균주는 7가지 항원적으로 식별되는 유형의 보툴리늄 독소 (BoNT)를 생성하며, 이는 사람 (BoNT/A, /B, /E 및 /F), 동물 (BoNT/C1 및 /D) 보툴리즘 발생을 조사하여 확인되거나, 토양으로부터 분리되었다(BoNT/G). BoNT들은 서로 대략 35%의 아미노산 일치율(identity)을 가지며, 동일한 기능성 도메인 구조 및 전체 구조적 뼈대를 공유한다. 각 유형의 클로스트리듐 독소에는 아미노산 서열 및 또한 이러한 단백질을 인코딩하는 핵산에 있어서 다소 상이한 서브타입이 속할 수 있음을 당업자는 알 것이다. 예를 들어, 현재 4가지 BoNT/A 서브타입, BoNT/A1, BoNT/A2, BoNT/A3 및 BoNT/A4가 있으며, 특정 서브타입은 다른 BoNT/A 서브타입과 비교할 때 대략 89% 아미노산 일치율을 나타낸다. 7가지의 모든 BoNT 세로타입이 유사한 구조 및 약리학적 특성을 가지며, 각각은 또한 이질적인 세균학적 특성을 나타낸다. 대조적으로, 파상풍 독소 (TeNT)는 C. 테타니(C. tetani)의 균일한 군에 의해 생성된다. 2가지 다른 종의 클로스트리디아(Clostridia), C. 바라티 및 C. 부티리쿰은 또한 각각 독소, BaNT 및 BuNT를 생성하며, 이들은 각각 BoNT/F 및 BoNT/E와 유사하다.
각각의 성숙한 이중-사슬 분자는 3가지의 기능적으로 구분되는 도메인: 1) 신경전달물질 방출기구의 코어 구성요소를 특이적으로 표적화하는 아연-의존성 엔도펩티다아제 활성을 포함하는 메탈로프로테아제 영역을 포함하는 LC에 위치하는 효소 도메인; 2) 세포내 소포로부터 표적 세포의 세포질로 LC의 방출을 촉진하는 HC (HN)의 아미노-말단 반쪽에 포함되는 전위 도메인; 및 3) 표적 세포의 표면에 위치하는 수용체 복합체에 대한 독소의 결합 활성 및 결합 특이성을 결정하는 HC (HC)의 카르복실-말단 반쪽에서 발견되는 결합 도메인을 포함한다. HC 도메인은 기능을 나타내는 대략 동일한 크기의 2가지 개별적인 구조적 특징부를 포함하며, HCN 및 HCC 서브도메인으로 지정된다. 표 1은 예시적인 클로스트리듐 독소에서 발견되는 각 도메인에 대한 대략적인 경계 영역을 제공한다.
표 1. 클로스트리듐 독소 참조 서열 및 영역
독소 SEQ ID NO : LC H N H C
BoNT/A 1 M1-K448 A449-K871 N872-L1296
BoNT/B 2 M1-K441 A442-S858 E859-E1291
BoNT/C1 3 M1-K449 T450-N866 N867-E1291
BoNT/D 4 M1-R445 D446-N862 S863-E1276
BoNT/E 5 M1-R422 K423-K845 R846-K1252
BoNT/F 6 M1-K439 A440-K864 K865-E1274
BoNT/G 7 M1-K446 S447-S863 N864-E1297
TeNT 8 M1-A457 S458-V879 I880-D1315
BaNT 9 M1-K431 N432-I857 I858-E1268
BuNT 10 M1-R422 K423-I847 Y1086-K1251
이러한 3가지 기능성 도메인의 결합, 전위 및 효소 활성이 모두 독성을 위해 필요하다. 이러한 프로세스의 모든 상세는 정확히 알려져 있지 않지만, 클로스트리듐 독소가 뉴런으로 들어가서 신경전달물질 방출을 억제하는 전반적인 세포 중독 메커니즘은 세로타입 및 서브타입에 관계 없이 유사하다. 출원인은 하기 설명으로 제한하는 것을 원하지 않지만, 중독 메커니즘은 적어도 4 단계를 포함하는 것으로 설명될 수 있다: 1) 수용체 결합, 2) 복합체 내재화, 3) 경쇄 전위, 및 4) 효소 표적 변형 (도 1 참조). 프로세스는 클로스트리듐 독소의 HC 도메인이 표적 세포의 원형질 막 표면에 위치하는 독소-특이적인 수용체 시스템에 결합할 때 개시된다. 수용체 복합체의 결합 특이성은, 각각 클로스트리듐 독소 수용체 복합체를 확실히 포함하는 것으로 여겨지는 강글리오사이드와 단백질 수용체의 특이적인 조합에 의해 일부분 달성되는 것으로 생각된다. 일단 결합되면, 독소 /수용체 복합체는 엔도시토시스에 의해 내재화되고 내재화된 소포는 특이적인 세포내 경로에 의해서 분류된다(sorted). 전위 단계는 소포 격막(vesicle compartment)의 산성화에 의해 유발되는 것으로 보인다. 이러한 프로세스는 소수성을 증가시키는 2가지 중요한 pH-의존성 구조 재배열을 개시하고 독소의 이중-사슬 형태의 형성을 촉진하는 것으로 생각된다. 일단 활성화되면, 독소의 경쇄 엔도펩티다아제가 세포내 소포로부터 세포질로 방출되고, 여기서 신경전달물질 방출 기구의 3가지 알려진 코어 구성요소 중 하나를 특이적으로 표적화하는 것으로 보인다. 이러한 코어 단백질, 소포-관련 막 단백질 (VAMP)/시냅토브레빈, 25 kDa의 시냅토소말-관련 단백질 (SNAP-25) 및 신택신(Syntaxin)은 시냅스 소포 도킹 및 신경 말단에서의 융합에 필수적이이며, 수용성 N-에틸말레이미드-감응성 인자-부착 단백질-수용체 (soluble N -ethylmaleimide-sensitive factor-attachment protein-receptor; SNARE) 패밀리의 구성원을 이룬다. BoNT/A 및 BoNT/E는 SNAP-25를 카르복실-말단 영역에서 절단하여, 각각 9개 또는 26개의 아미노산 세그먼트를 방출하고, BoNT/C1은 또한 SNAP-25를 카르복실-말단 근처에서 절단한다. 보툴리늄 세로타입 BoNT/B, BoNT/D, BoNT/F 및 BoNT/G, 및 파상풍 독소는, VAMP의 보존된 중앙 부분에서 작용하며, VAMP의 아미노-말단 부분을 세포질로 방출한다. BoNT/C1는 신택신을 세포질 막 표면 근처의 단일 부위에서 절단한다. 시냅스SNARE의 선택적인 단백분해는 생체 내(in vivo)에서 클로스트리듐 독소에 의해 야기되는 신경전달물질 방출의 차단을 설명한다. 클로스트리듐 독소의 SNARE 단백질 표적은 다양한 비-뉴런 유형에서의 엑소시토시스에 일반적이며; 이러한 세포에서는, 뉴런에서와 같이, 경쇄 펩티다아제 활성이 엑소시토시스를 억제한다, 예를 들어, 문헌[Yann Humeau et al., How Botulinum and Tetanus Neurotoxins Block Neurotransmitter Release, 82(5) Biochimie. 427-446 (2000); Kathryn Turton et al., Botulinum and Tetanus Neurotoxins : Structure , Function and Therapeutic Utility, 27(11) Trends Biochem. Sci. 552-558. (2002); Giovanna Lalli et al., The Journey of Tetanus and Botulinum Neurotoxins in Neurons, 11(9) Trends Microbiol. 431-437, (2003)]을 참고한다.
본 발명의 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소는 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 일부분 포함한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "클로스트리듐 독소 효소 도메인"은 중독 프로세스의 효소 표적 변형 단계를 행할 수 있는 임의의 클로스트리듐 독소 폴리펩티드를 의미한다. 따라서, 클로스트리듐 독소 효소 도메인은 클로스트리듐 독소 기질을 특이적으로 표적화하며 클로스트리듐 독소 기질, 예를 들어, SNARE 단밸질, 예를 들어, SNAP-25 기질, VAMP 기질 및 신택신 기질의 단백분해 절단을 포함한다. 클로스트리듐 독소 효소 도메인의 비-제한적인 예는, 예를 들어, BoNT/A 효소 도메인, BoNT/B 효소 도메인, BoNT/C1 효소 도메인, BoNT/D 효소 도메인, BoNT/E 효소 도메인, BoNT/F 효소 도메인, BoNT/G 효소 도메인, TeNT 효소 도메인, BaNT 효소 도메인, 및 BuNT 효소 도메인을 포함한다. 클로스트리듐 독소 효소 도메인의 다른 비-제한적인 예는, 예를 들어, SEQ ID NO: 1의 아미노산 1-448, SEQ ID NO: 2의 아미노산 1-441, SEQ ID NO: 3의 아미노산 1-449, SEQ ID NO: 4의 아미노산 1-445, SEQ ID NO: 5의 아미노산 1-422, SEQ ID NO: 6의 아미노산 1-439, SEQ ID NO: 7의 아미노산 1-446, SEQ ID NO: 8의 아미노산 1-457, SEQ ID NO: 9의 아미노산 1-431, 및 SEQ ID NO: 10의 아미노산 1-422을 포함한다.
클로스트리듐 독소 효소 도메인은, 제한없이, 자연 발생적 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체, 예를 들어, 클로스트리듐 독소 효소 도메인 이소형 (isoform) 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인 서브타입; 비-자연 발생적 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성(conservative) 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체, 비-보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체, 클로스트리듐 독소 효소 도메인 키메라(chimeric), 이의 활성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체"는, 자연 발생적이든 또는 비- 자연 발생적이든, 개시된 참조 서열(표1)의 상응하는 영역으로부터 적어도 하나의 아미노산이 바뀐 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 의미하며, 참조 서열의 상응하는 영역에 대한 %일치율로 설명될 수 있다. 달리 명확하게 표시되지 않는다면, 개시된 실시 형태를 실시하는 데 유용한 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체는 중독 프로세스의 효소 표적 변형 단계를 행하는 변이체이다. 비-제한적인 예로서, SEQ ID NO: 1의 아미노산 1-448을 포함하는 BoNT/A 효소 도메인 변이체는 SEQ ID NO: 1의 아미노산 영역 1-448과 비교하여, 적어도 하나의 아미노산 상이성(difference), 예를 들어, 아미노산 치환(substitution), 제거(deletion) 또는 추가(addition)을 가지며; SEQ ID NO: 2의 아미노산 1-441 를 포함하는 BoNT/B 효소 도메인 변이체는 SEQ ID NO: 2의 아미노산 영역 1-441과 비교하여 적어도 하나의 아미노산 상이성, 예를 들어, 아미노산 치환, 제거 또는 추가를 가질 것이며; SEQ ID NO: 3의 아미노산 1-449을 포함하는 BoNT/C1 효소 도메인 변이체는 SEQ ID NO: 3의 아미노산 영역 1-449과 비교하여 적어도 하나의 아미노산 상이성, 예를 들어, 아미노산 치환, 제거 또는 추가를 가질 것이며; SEQ ID NO: 4의 아미노산 1-445을 포함하는 BoNT/D 효소 도메인 변이체는 SEQ ID NO: 4의 아미노산 영역 1-445과 비교하여 적어도 하나의 아미노산 상이성, 예를 들어, 아미노산 치환, 제거 또는 추가를 가질 것이며; SEQ ID NO: 5의 아미노산 1-422를 포함하는 BoNT/E 효소 도메인 변이체는 SEQ ID NO: 5의 아미노산 영역 1-422과 비교하여 적어도 하나의 아미노산 상이성, 예를 들어, 아미노산 치환, 제거 또는 추가를 가질 것이며; SEQ ID NO: 6의 아미노산 1-439을 포함하는 BoNT/F 효소 도메인 변이체는 SEQ ID NO: 6의 아미노산 영역 1-439과 비교하여 적어도 하나의 아미노산 상이성, 예를 들어, 아미노산 치환, 제거 또는 추가를 가질 것이며; BoNT/G 효소 도메인 변이체는 SEQ ID NO: 7의 아미노산 영역 1-446과 비교하여, 적어도 하나의 아미노산 상이성, 예를 들어, 아미노산 치환, 제거 또는 추가를 가질 것이며; 그리고, SEQ ID NO: 8의 아미노산 1-457을 포함하는 TeNT 효소 도메인 변이체 는 SEQ ID NO: 8의 아미노산 영역 1-457과 비교하여, 적어도 하나의 아미노산 상이성, 예를 들어, 아미노산 치환, 제거 또는 추가를 가질 것이다.
클로스트리듐 독소의 각각의 세로타입에는 아미노산 서열 및 이러한 단백질을 인코딩하는 핵산에 있어서 다소 상이한 자연 발생적 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체가 속할 수 있음을 당업자는 알고 있다. 예를 들어, 현재 5가지 BoNT/A 서브타입, BoNT/A1, BoNT/A2, BoNT/A3, BoNT/A4 및 BoNT/A5가 있으며, 특이적인 효소 도메인 서브타입은 다른 BoNT/A 효소 도메인 서브타입과 비교했을 때 대략 95%의 아미노산 일치율을 나타낸다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "자연 발생적 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체"는, 제한없이, 대안적으로-스플라이싱된 전사(alternatively-spliced transcript)에 의해 생성된 클로스트리듐 독소 효소 도메인 이소형, 자발적인 돌연변이에 의해 생성된 클로스트리듐 독소 효소 도메인 이소형 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인 서브타입을 포함하는, 자연 발생적 프로세스에 의해 생성된 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 의미한다. 자연 발생적 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체는 자연 발생적 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인과 실질적으로 동일한 방식으로 기능할 수 있으며, 본 발명의 임의의 태양에서 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 대신할 수 있다. 자연 발생적 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체는 자연 발생적 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인으로부터 1개 이상의 아미노산, 2개 이상의 아미노산, 3개 이상의 아미노산, 4개 이상의 아미노산, 5개 이상의 아미노산, 10개 이상의 아미노산, 20개 이상의 아미노산, 30개 이상의 아미노산, 40개 이상의 아미노산, 50개 이상의 아미노산 또는 100개 이상의 아미노산을 치환할 수 있다. 자연 발생적 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체는 또한 자연 발생적 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인으로부터 적어도 10개의 인접한(contiguous) 아미노산, 적어도 15 개의 인접한 아미노산, 적어도 20 개의 인접한 아미노산, 또는 적어도 25 개의 인접한 아미노산을 치환할 수 있으며, 이는 자연 발생적 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인에 대해 적어도 50%의 아미노산 일치율, 65%의 아미노산 일치율, 75%의 아미노산 일치율, 85%의 아미노산 일치율 또는 95%의 아미노산 일치율을 가질 수 있다.
자연 발생적 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체의 비-제한적인 예는 클로스트리듐 독소 효소 도메인 이소형, 예를 들어, BoNT/A 효소 도메인 이소형, BoNT/B 효소 도메인 이소형, BoNT/C1 효소 도메인 이소형, BoNT/D 효소 도메인 이소형, BoNT/E 효소 도메인 이소형, BoNT/F 효소 도메인 이소형, BoNT/G 효소 도메인 이소형, 및 TeNT 효소 도메인 이소형이다. 클로스트리듐 독소 효소 도메인 이소형은 클로스트리듐 독소 효소 도메인 이소형이 기초한 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인과 실질적으로 동일한 방식으로 기능할 수 있으며, 본 발명의 임의의 태양에서 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 대신할 수 있다.
자연 발생적 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체의 다른 비-제한적인 예는 클로스트리듐 독소 효소 도메인 서브타입, 예를 들어, 서브타입 BoNT/A1, BoNT/A2, BoNT/A3, BoNT/A4 및 BoNT/A5로부터의 효소 도메인; 서브타입 BoNT/B1, BoNT/B2, BoNT/B 2가(bivalent) 및 BoNT/B 비단백가수분해성(nonproteolytic)으로부터의 효소 도메인; 서브타입 BoNT/C1-1 및 BoNT/C1-2 로부터의 효소 도메인; 서브타입 BoNT/E1, BoNT/E2 및 BoNT/E3 로부터의 효소 도메인; 및 서브타입 BoNT/F1, BoNT/F2, BoNT/F3 및 BoNT/F4 로부터의 효소 도메인을 포함한다. 클로스트리듐 독소 효소 도메인 서브타입은 클로스트리듐 독소 효소 도메인 서브타입이 기초한 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인과 실질적으로 동일한 방식으로 기능할 수 있으며 본 발명의 임의의 태양에서 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인 도메인을 대신할 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "비-자연 발생적 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체"는, 제한없이, 무작위 돌연변이유발 또는 합리적인 디자인(rational design)을 사용하여 유전자 공학에 의해 생성된 클로스트리듐 독소 효소 도메인 및 화학 합성에 의해 생성된 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 포함하는 인공적인 조작의 도움으로 생성된 임의의 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 의미한다. 비-자연 발생적 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체의 비-제한적인 예는, 예를 들어, 보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체, 비-보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체, 클로스트리듐 독소 효소 도메인 키메라 변이체 및 활성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 단편을 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체"는, 적어도 하나의 아미노산이 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인 서열(표 1)로부터의 원래의 아미노산과 유사한 적어도 하나의 특성을 갖는 다른 아미노산 또는 아미노산 유사체에 의해 치환된 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 의미한다. 특성의 예는, 제한없이, 유사한 크기, 토포그래피(topography), 전하, 소수성, 친수성, 친유성, 공유 결합 능력, 수소 결합 능력, 물리화학적 특성 등, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체는 보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인과 실질적으로 동일한 방식으로 기능할 수 있으며, 본 발명의 임의의 태양에서 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 대신할 수 있다. 보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체는 보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인으로부터 1개 이상의 아미노산, 2개 이상의 아미노산, 3개 이상의 아미노산, 4개 이상의 아미노산, 5개 이상의 아미노산, 10개 이상의 아미노산, 20개 이상의 아미노산, 30개 이상의 아미노산, 40개 이상의 아미노산, 50개 이상의 아미노산, 100개 이상의 아미노산, 또는 200개 이상의 아미노산을 치환할 수 있다. 보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체는 또한 보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인으로부터 적어도 10개의 인접한 아미노산, 적어도 15 개의 인접한 아미노산, 적어도 20 개의 인접한 아미노산, 또는 적어도 25 개의 인접한 아미노산을 치환할 수 있으며, 이는 보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인에 대해 적어도 50%의 아미노산 일치율, 65%의 아미노산 일치율, 75%의 아미노산 일치율, 85%의 아미노산 일치율 또는 95% 아미노산 일치율을 갖는다. 보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체의 비-제한적인 예는, 예를 들어, 보존성 BoNT/A 효소 도메인 변이체, 보존성 BoNT/B 효소 도메인 변이체, 보존성 BoNT/C1 효소 도메인 변이체, 보존성 BoNT/D 효소 도메인 변이체, 보존성 BoNT/E 효소 도메인 변이체, 보존성 BoNT/F 효소 도메인 변이체, 보존성 BoNT/G 효소 도메인 변이체, 및 보존성 TeNT 효소 도메인 변이체이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "비-보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체"는 다음과 같은 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 의미한다; 1) 적어도 하나의 아미노산이 비-보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인으로부터 제거되거나; 2) 적어도 하나의 아미노산이 비-보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인이 기초한 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인에 추가되거나; 또는 3) 적어도 하나의 아미노산이, 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인 서열(표 1)로부터의 원래 아미노산과 유사한 어떠한 특성도 공유하지 않는 다른 아미노산 또는 아미노산 유사체로 치환된다. 비-보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 비-보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체 가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인과 실질적으로 동일한 방식으로 기능할 수 있으며, 본 발명의 임의의 태양에서 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 대신할 수 있다. 비-보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체는 1개 이상의 아미노산, 2개 이상의 아미노산, 3개 이상의 아미노산, 4개 이상의 아미노산, 5개 이상의 아미노산, 및 10개 이상의 아미노산을, 비-보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인으로부터 제거할 수 있다. 비-보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체는 1개 이상의 아미노산, 2개 이상의 아미노산, 3개 이상의 아미노산, 4개 이상의 아미노산, 5개 이상의 아미노산, 및 10개 이상의 아미노산을 비-보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인에 추가할 수 있다. 비-보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체는 1개 이상의 아미노산, 2개 이상의 아미노산, 3개 이상의 아미노산, 4개 이상의 아미노산, 5개 이상의 아미노산, 10개 이상의 아미노산, 20개 이상의 아미노산, 30개 이상의 아미노산, 40개 이상의 아미노산, 50개 이상의 아미노산, 100개 이상의 아미노산, 또는 200개 이상의 아미노산을 비-보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인으로부터 치환할 수 있다. 비-보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체는 또한 적어도 10개의 인접한 아미노산, 적어도 15 개의 인접한 아미노산, 적어도 20 개의 인접한 아미노산, 또는적어도 25개의 인접한 아미노산을 비-보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인으로부터 치환할 수 있으며, 이는 비-보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체이 기초한 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인에 대해 적어도 50%의 아미노산 일치율, 65% 의 아미노산 일치율, 75% 의 아미노산 일치율, 85% 의 아미노산 일치율 또는 95% 의 아미노산 일치율을 갖는다. 비-보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체의 비-제한적인 예는, 예를 들어, 비-보존성 BoNT/A 효소 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/B 효소 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/C1 효소 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/D 효소 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/E 효소 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/F 효소 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/G 효소 도메인 변이체, 및 비-보존성 TeNT 효소 도메인 변이체를 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "클로스트리듐 독소 효소 도메인 키메라"는 클로스트리듐 독소 효소 도메인의 적어도 일부분 및 적어도 하나의 다른 폴리펩티드의 적어도 일부분을 포함하여 독소 효소 도메인 을 형성하는, 적어도 하나의 특성이 표 1의 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인과 상이한 폴리펩티드를 의미하며, 단, 이러한 클로스트리듐 독소 효소 도메인 키메라는 여전히 신경전달물질 방출 기구의 코어 구성 요소를 특이적으로 표적화할 수 있으므로 전체 세포 메커니즘을 행하는 데 참여하여 클로스트리듐 독소가 기질을 단백분해적으로 절단한다. 이러한 클로스트리듐 독소 효소 도메인 키메라는, 예를 들어, 문헌[Lance E. Steward et al., Leucine - based Motif and Clostridial Totoxins, U.S. Patent Publication 2003/0027752 (Feb. 6, 2003); Lance E. Steward et al., Clostridial Neurotoxin Compositions and Modified Clostridial Neurotoxins, U.S. Patent Publication 2003/0219462 (Nov. 27, 2003); and Lance E. Steward et al., Clostridial Neurotoxin Compositions and Modified Clostridial Neurotoxins, U.S. Patent Publication 2004/0220386 (Nov. 4, 2004)]에 기재되어 있으며, 이들 각각은 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "활성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 단편"은 본 발명의 태양에 유용할 수 있는 효소 도메인을 포함하는 임의의 다양한 클로스트리듐 독소 단편을 의미하며, 단, 이러한 효소 도메인 단편은 신경전달물질 방출 기구의 코어 구성요소를 특이적으로 표적화할 수 있으므로 전체 세포 메커니즘을 행하는 데 참여하여 클로스트리듐 독소가 기질을 단백분해적으로 절단한다. 클로스트리듐 독소의 효소 도메인은 길이가 대략 420-460개의 아미노산이며 효소 도메인 (표 1)을 포함한다. 연구는 효소 도메인의 효소 활성을 위해 클로스트리듐 독소 효소 도메인의 전체 길이가 필요하지 않다는 것을 보여주었다. 비-제한적인 예로서, BoNT/A 효소 도메인의 처음 8개의 아미노산 (SEQ ID NO: 1의 잔기 1-8)은 효소적 활성을 위해 필요하지 않다. 다른 비-제한적인 예로서, TeNT 효소 도메인의 처음 8개의 아미노산 (SEQ ID NO: 8의 잔기 1-8) 효소적 활성을 위해 필요하지 않다. 마찬가지로, 효소 도메인의 카르복실-말단은 활성을 위해 필요하지 않다. 비-제한적인 예로서, BoNT/A 효소 도메인의 마지막 32개의 아미노산 (SEQ ID NO: 1의 잔기 417-448)은 효소 활성을 위해 필요하지 않다. 다른 비-제한적인 예로서, TeNT 효소 도메인의 마지막 31개의 아미노산 (SEQ ID NO: 8의 잔기 427-457)은 효소 활성을 위해 필요하지 않다. 따라서, 본 실시 형태의 태양은 길이가, 예를 들어, 적어도 350개의 아미노산, 적어도 375개의 아미노산, 적어도 400개의 아미노산, 적어도 425개의 아미노산 및 적어도 450개의 아미노산인 효소 도메인을 포함하는 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 포함할 수 있다. 본 발명의 다른 태양는 길이가, 예를 들어, 최대 350 개의 아미노산, 최대 375 개의 아미노산, 최대 400 개의 아미노산, 최대 425 개의 아미노산 및 최대 450 개의 아미노산인 효소 도메인을 포함하는 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 포함할 수 있다.
임의의 다양한 서열 정렬(sequence alignment) 방법이 자연 발생적 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체 및 비-자연 발생적 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체의 %일치율을 결정하는 데 사용될 수 있으며, 제한없이, 글로벌(global) 방법, 로컬(local) 방법 및 하이브리드(hybrid) 방법, 예를 들어, 세그먼트 접근(segment approach) 방법이 포함된다. %일치율을 결정하는 프로토콜은 본 명세서의 교시로부터 당업자가 결정할 수 있는 범주에 속하는 일상적인 절차이다.
글로벌 방법은 분자의 처음부터 끝까지의 서열을 정렬하며 개별적인 잔기 쌍의 점수를 더하고 갭 패널티(gap penalty)를 부여하여 최상의 정렬을 결정한다. 비-제한적인 방법은, 예를 들어, CLUSTAL W, 예를 들어, 문헌[Julie D. Thompson et al., CLUSTAL W: Improving the Sensitivity of Progressive Multiple Sequence Alignment Through Sequence Weighting , Position - Specific Gap Penalties and Weight Matrix Choice, 22(22) Nucleic Acids Research 4673-4680 (1994)] 참조; 그리고 반복 세분(iterative refinement) 을 포함한다, 예를 들어, 문헌 [Osamu Gotoh, Significant Improvement in Accuracy of Multiple Protein Sequence Alignments by Iterative Refinement as Assessed by Reference to Structural Alignments, 264(4) J. Mol. Biol. 823-838 (1996)]참조.
로컬 방법은 모든 입력 서열이 공유하는 1개 이상의 보존된 모티프(motif)를 확인하여 서열을 정렬한다. 비-제한적인 방법은, 예를 들어, Match-box , 예를 들어, 문헌[Eric Depiereux and Ernest Feytmans, Match-Box: A Fundamentally New Algorithm for the Simultaneous Alignment of Several Protein Sequences, 8(5) CABIOS 501-509 (1992)] 참조; 깁스 샘플링(Gibbs sampling), 예를 들어, 문헌 [C. E. Lawrence et al., Detecting Subtle Sequence Signals : A Gibbs Sampling Strategy for Multiple Alignment, 262(5131) Science 208-214 (1993)] 참조; Align-M을 포함한다, 예를 들어, 문헌 [Ivo Van Walle et al., Align -M A New Algorithm for Multiple Alignment of Highly Divergent Sequences, 20(9) Bioinformatics,:1428-1435 (2004)] 참조.
하이브리드 방법은 글로벌 정렬 방법과 로컬 정렬 방법의 기능적 측면을 조합한 것이다. 비-제한적인 방법은, 예를 들어, 세그먼트-투-세그먼트 비교(segment-to-segment comparison), 예를 들어, 문헌 [Burkhard Morgenstern et al., Multiple DNA and Protein Sequence Alignment Based 0n Segment - To -Segment Comparison, 93(22) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 12098-12103 (1996)] 참조; T-Coffee, 예를 들어, 문헌 [Ceric Notredame et al., T- Coffee : A Novel Algorithm for Multiple Sequence Alignment, 302(1) J. Mol. Biol. 205-217 (2000)] 참조; MUSCLE, 예를 들어, 문헌 [Robert C. Edgar, MUSCLE : Multiple Sequence Alignment With High Score Accuracy and High Throughput, 32(5) Nucleic Acids Res. 1792-1797 (2004)] 참조; 및 DIALIGN-T를 포함한다, 예를 들어, 문헌 [Amarendran R Subramanian et al., DIALIGN -T: An Improved Algorithm for Segment - Based Multiple Sequence Alignment, 6(1) BMC Bioinformatics 66 (2005)] 참조.
따라서, 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 변형 클로스트리듐 독소는 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, 클로스트리듐 독소 효소 도메인은 자연 발생적 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체, 예를 들어, 클로스트리듐 독소 효소 도메인 이소형 또는 클로스트리듐 독소 효소 도메인 서브타입을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 클로스트리듐 독소 효소 도메인은 비-자연 발생적 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체, 비-보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체, 클로스트리듐 독소 키메라 효소 도메인, 활성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
다른 실시 형태에서, 클로스트리듐 독소 효소 도메인은 BoNT/A 효소 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, BoNT/A 효소 도메인은 SEQ ID NO: 1의 아미노산 1-448을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/A 효소 도메인은 자연 발생적 BoNT/A 효소 도메인 변이체, 예를 들어, BoNT/A 이소형으로부터의 효소 도메인 또는 BoNT/A 서브타입로부터의 효소 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/A 효소 도메인은 SEQ ID NO: 1의 자연 발생적 BoNT/A 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-448, 예를 들어, SEQ ID NO: 1의 BoNT/A 이소형의 아미노산 1-448 또는 SEQ ID NO: 1의 BoNT/A 서브타입의 아미노산 1-448을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/A 효소 도메인은 비-자연 발생적 BoNT/A 효소 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성 BoNT/A 효소 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/A 효소 도메인 변이체, BoNT/A 키메라 효소 도메인, 활성 BoNT/A 효소 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/A 효소 도메인은 SEQ ID NO: 1의 비-자연 발생적 BoNT/A 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-448, 예를 들어, SEQ ID NO: 1의 보존성 BoNT/A 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-448, SEQ ID NO: 1의 비-보존성 BoNT/A 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-448, SEQ ID NO: 1의 활성 BoNT/A 효소 도메인 단편의 아미노산 1-448, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/A 효소 도메인은 SEQ ID NO: 1의 아미노산 1-448에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/A 효소 도메인은 SEQ ID NO: 1의 아미노산 1-448에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95%인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/A 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 1의 아미노산 1-448에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 1의 아미노산 1-448에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 1의 아미노산 1-448에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 1의 아미노산 1-448에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 1의 아미노산 1-448에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 1의 아미노산 1-448에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/A 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 1의 아미노산 1-448에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 1의 아미노산 1-448에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 1의 아미노산 1-448에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 1의 아미노산 1-448에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 1의 아미노산 1-448에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 1의 아미노산 1-448에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 클로스트리듐 독소 효소 도메인은BoNT/B 효소 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, BoNT/B 효소 도메인은 SEQ ID NO: 2의 아미노산 1-441을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/B 효소 도메인은 자연 발생적 BoNT/B 효소 도메인 변이체, 예를 들어, BoNT/B 이소형으로부터의 효소 도메인 또는BoNT/B 서브타입으로부터의 효소 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/B 효소 도메인은 SEQ ID NO: 2의 자연 발생적 BoNT/B 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-441, 예를 들어, SEQ ID NO: 2의 BoNT/B 이소형의 아미노산 1-441 또는 SEQ ID NO: 2의 BoNT/B 서브타입의 아미노산 1-441을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/B 효소 도메인은 비-자연 발생적 BoNT/B 효소 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성 BoNT/B 효소 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/B 효소 도메인 변이체, BoNT/B 키메라 효소 도메인, 활성 BoNT/B 효소 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/B 효소 도메인은 SEQ ID NO: 2의 비-자연 발생적 BoNT/B 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-441, 예를 들어, SEQ ID NO: 2의 보존성 BoNT/B 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-441, SEQ ID NO: 2의 비-보존성 BoNT/B 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-441, SEQ ID NO: 2의 활성 BoNT/B 효소 도메인 단편의 아미노산 1-441, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/B 효소 도메인은 SEQ ID NO: 2의 아미노산 1-441에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95% 인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/B 효소 도메인은 SEQ ID NO: 2의 아미노산 1-441에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95% 인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/B 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 2의 아미노산 1-441에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 2의 아미노산 1-441에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 2의 아미노산 1-441에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 2의 아미노산 1-441에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 2의 아미노산 1-441에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 2의 아미노산 1-441에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/B 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 2의 아미노산 1-441에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 2의 아미노산 1-441에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 2의 아미노산 1-441에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 2의 아미노산 1-441에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 2의 아미노산 1-441에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 2의 아미노산 1-441에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 클로스트리듐 독소 효소 도메인은 BoNT/C1 효소 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, BoNT/C1 효소 도메인은 SEQ ID NO: 3의 아미노산 1-449를 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/C1 효소 도메인은 자연 발생적 BoNT/C1 효소 도메인 변이체, 예를 들어, BoNT/C1 이소형으로부터의 효소 도메인 또는 BoNT/C1 서브타입으로부터의 효소 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/C1 효소 도메인은 SEQ ID NO: 3의 자연 발생적 BoNT/C1 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-449, 예를 들어, SEQ ID NO: 3의 BoNT/C1 이소형의 아미노산 1-449 또는 SEQ ID NO: 3의 BoNT/C1 서브타입의 아미노산 1-449를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/C1 효소 도메인은 비-자연 발생적 BoNT/C1 효소 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성 BoNT/C1 효소 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/C1 효소 도메인 변이체, BoNT/C1 키메라 효소 도메인, 활성 BoNT/C1 효소 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/C1 효소 도메인은 SEQ ID NO: 3의 비-자연 발생적 BoNT/C1 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-449, 예를 들어, SEQ ID NO: 3의 보존성 BoNT/C1 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-449, SEQ ID NO: 3의 비-보존성 BoNT/C1 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-449, SEQ ID NO: 3의 활성 BoNT/C1 효소 도메인 단편의 아미노산 1-449, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/C1 효소 도메인은 SEQ ID NO: 3의 아미노산 1-449에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/C1 효소 도메인은 SEQ ID NO: 3의 아미노산 1-449에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95%인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/C1 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 3의 아미노산 1-449에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 3의 아미노산 1-449에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 3의 아미노산 1-449에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 3의 아미노산 1-449에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 3의 아미노산 1-449에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 3의 아미노산 1-449에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/C1 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 3의 아미노산 1-449에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 3의 아미노산 1-449에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 3의 아미노산 1-449에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 3의 아미노산 1-449에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 3의 아미노산 1-449에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 3의 아미노산 1-449에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 클로스트리듐 독소 효소 도메인은 BoNT/D 효소 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, BoNT/D 효소 도메인은 SEQ ID NO: 4의 아미노산 1-445를 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/D 효소 도메인은 자연 발생적 BoNT/D 효소 도메인 변이체, 예를 들어, BoNT/D 이소형으로부터의 효소 도메인 또는 BoNT/D 서브타입으로부터의 효소 도메인를 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/D 효소 도메인은 SEQ ID NO: 4의 자연 발생적 BoNT/D 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-445, 예를 들어, SEQ ID NO: 4의 BoNT/D 이소형의 아미노산 1-445 또는 SEQ ID NO: 4의 BoNT/D 서브타입의 아미노산 1-445를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/D 효소 도메인은 비-자연 발생적 BoNT/D 효소 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성 BoNT/D 효소 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/D 효소 도메인 변이체, BoNT/D 키메라 효소 도메인, 활성 BoNT/D 효소 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/D 효소 도메인은 SEQ ID NO: 4의 비-자연 발생적 BoNT/D 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-445, 예를 들어, SEQ ID NO: 4의 보존성 BoNT/D 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-445, SEQ ID NO: 4의 비-보존성 BoNT/D 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-445, SEQ ID NO: 4의 활성 BoNT/D 효소 도메인 단편의 아미노산 1-445, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/D 효소 도메인은 SEQ ID NO: 4의 아미노산 1-445에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/D 효소 도메인은 SEQ ID NO: 4의 아미노산 1-445에 대한 아미노산 일치율, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95%인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/D 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 4의 아미노산 1-445에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 4의 아미노산 1-445에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 4의 아미노산 1-445에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 4의 아미노산 1-445에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 4의 아미노산 1-445에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 4의 아미노산 1-445에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/D 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 4의 아미노산 1-445에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 4의 아미노산 1-445에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 4의 아미노산 1-445에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 4의 아미노산 1-445에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 4의 아미노산 1-445에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 4의 아미노산 1-445에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 클로스트리듐 독소 효소 도메인은 BoNT/E 효소 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, BoNT/E 효소 도메인은 SEQ ID NO: 5의 아미노산 1-422를 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/E 효소 도메인은 자연 발생적 BoNT/E 효소 도메인 변이체, 예를 들어, BoNT/E 이소형으로부터의 효소 도메인 또는 BoNT/E 서브타입으로부터의 효소 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/E 효소 도메인은 SEQ ID NO: 5의 자연 발생적 BoNT/E 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-422, 예를 들어, SEQ ID NO: 5의 BoNT/E 이소형의 아미노산 1-422 또는 SEQ ID NO: 5의 BoNT/E 서브타입의 아미노산 1-422을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/E 효소 도메인은 비-자연 발생적 BoNT/E 효소 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성 BoNT/E 효소 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/E 효소 도메인 변이체, BoNT/E 키메라 효소 도메인, 활성 BoNT/E 효소 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/E 효소 도메인은 SEQ ID NO: 5의 비-자연 발생적 BoNT/E 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-422, 예를 들어, SEQ ID NO: 5의 보존성 BoNT/E 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-422, SEQ ID NO: 5의 비-보존성 BoNT/E 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-422, SEQ ID NO: 5의 활성 BoNT/E 효소 도메인 단편의 아미노산 1-422, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/E 효소 도메인은 SEQ ID NO: 5의 아미노산 1-422에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/E 효소 도메인은 SEQ ID NO: 5의 아미노산 1-422에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95% 인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/E 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 5의 아미노산 1-422에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 5의 아미노산 1-422에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 5의 아미노산 1-422에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 5의 아미노산 1-422에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 5의 아미노산 1-422에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 5의 아미노산 1-422에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/E 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 5의 아미노산 1-422에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 5의 아미노산 1-422에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 5의 아미노산 1-422에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 5의 아미노산 1-422에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 5의 아미노산 1-422에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 5의 아미노산 1-422에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 클로스트리듐 독소 효소 도메인은 BoNT/F 효소 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, BoNT/F 효소 도메인은 SEQ ID NO: 6의 아미노산 1-439를 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/F 효소 도메인은 자연 발생적 BoNT/F 효소 도메인 변이체, 예를 들어, BoNT/F 이소형으로부터의 효소 도메인 또는BoNT/F 서브타입으로부터의 효소 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/F 효소 도메인은 SEQ ID NO: 6의 자연 발생적 BoNT/F 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-439, 예를 들어, SEQ ID NO: 6의 BoNT/F 이소형의 아미노산 1-439 또는 SEQ ID NO: 6의 BoNT/F 서브타입의 아미노산 1-439을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/F 효소 도메인은 비-자연 발생적 BoNT/F 효소 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성 BoNT/F 효소 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/F 효소 도메인 변이체, BoNT/F 키메라 효소 도메인, 활성 BoNT/F 효소 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/F 효소 도메인은 SEQ ID NO: 6의 비-자연 발생적 BoNT/F 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-439, 예를 들어, SEQ ID NO: 6의 보존성 BoNT/F 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-439, SEQ ID NO: 6의 비-보존성 BoNT/F 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-439, SEQ ID NO: 6의 활성 BoNT/F 효소 도메인 단편의 아미노산 1-439, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/F 효소 도메인은 SEQ ID NO: 6의 아미노산 1-439에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/F 효소 도메인은 SEQ ID NO: 6의 아미노산 1-439에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95% 인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/F 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 6의 아미노산 1-439에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 6의 아미노산 1-439에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 6의 아미노산 1-439에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 6의 아미노산 1-439에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 6의 아미노산 1-439에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 6의 아미노산 1-439에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/F 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 6의 아미노산 1-439에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 6의 아미노산 1-439에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 6의 아미노산 1-439에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 6의 아미노산 1-439에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 6의 아미노산 1-439에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 6의 아미노산 1-439에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 클로스트리듐 독소 효소 도메인은 BoNT/G 효소 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, BoNT/G 효소 도메인은 SEQ ID NO: 7의 아미노산 1-446을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/G 효소 도메인은 자연 발생적 BoNT/G 효소 도메인 변이체, 예를 들어, BoNT/G 이소형으로부터의 효소 도메인 또는 BoNT/G 서브타입으로부터의 효소 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/G 효소 도메인은 SEQ ID NO: 7의 자연 발생적 BoNT/G 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-446, 예를 들어, SEQ ID NO: 7의 BoNT/G 이소형의 아미노산 1-446 또는 SEQ ID NO: 7의 BoNT/G 서브타입의 아미노산 1-446을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/G 효소 도메인은 비-자연 발생적 BoNT/G 효소 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성 BoNT/G 효소 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/G 효소 도메인 변이체, BoNT/G 키메라 효소 도메인, 활성 BoNT/G 효소 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/G 효소 도메인은 SEQ ID NO: 7의 비-자연 발생적 BoNT/G 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-446, 예를 들어, SEQ ID NO: 7의 보존성 BoNT/G 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-446, SEQ ID NO: 7의 비-보존성 BoNT/G 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-446, SEQ ID NO: 7의 활성 BoNT/G 효소 도메인 단편의 아미노산 1-446, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/G 효소 도메인은 SEQ ID NO: 7의 아미노산 1-446에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/G 효소 도메인은 SEQ ID NO: 7의 아미노산 1-446에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95%인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/G 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 7의 아미노산 1-446에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 7의 아미노산 1-446에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 7의 아미노산 1-446에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 7의 아미노산 1-446에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 7의 아미노산 1-446에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 7의 아미노산 1-446에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/G 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 7의 아미노산 1-446에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 7의 아미노산 1-446에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 7의 아미노산 1-446에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 7의 아미노산 1-446에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 7의 아미노산 1-446에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 7의 아미노산 1-446에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 클로스트리듐 독소 효소 도메인은TeNT 효소 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, TeNT 효소 도메인은 SEQ ID NO: 8의 아미노산 1-457을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, TeNT 효소 도메인은 자연 발생적 TeNT 효소 도메인 변이체, 예를 들어, TeNT 이소형으로부터의 효소 도메인 또는 TeNT 서브타입으로부터의 효소 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, TeNT 효소 도메인은 SEQ ID NO: 8의 자연 발생적 TeNT 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-457, 예를 들어, SEQ ID NO: 8의 TeNT 이소형의 아미노산 1-457 또는 SEQ ID NO: 8의 TeNT 서브타입의 아미노산 1-457을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, TeNT 효소 도메인은 비-자연 발생적 TeNT 효소 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성 TeNT 효소 도메인 변이체, 비-보존성 TeNT 효소 도메인 변이체, TeNT 키메라 효소 도메인, 활성 TeNT 효소 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, TeNT 효소 도메인은 SEQ ID NO: 8의 비-자연 발생적 TeNT 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-457, 예를 들어, SEQ ID NO: 8의 보존성 TeNT 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-457, SEQ ID NO: 8의 비-보존성 TeNT 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-457, SEQ ID NO: 8의 활성 TeNT 효소 도메인 단편의 아미노산 1-457, 또는 이들의 임의의 조합.
본 실시 형태의 다른 태양에서, TeNT 효소 도메인은 SEQ ID NO: 8의 아미노산 1-457에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, TeNT 효소 도메인은 SEQ ID NO: 8의 아미노산 1-457에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95%인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, TeNT 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 8의 아미노산 1-457에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 8의 아미노산 1-457에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 8의 아미노산 1-457에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 8의 아미노산 1-457에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 8의 아미노산 1-457에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 8의 아미노산 1-457에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, TeNT 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 8의 아미노산 1-457에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 8의 아미노산 1-457에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 8의 아미노산 1-457에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 8의 아미노산 1-457에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 8의 아미노산 1-457에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 8의 아미노산 1-457에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 클로스트리듐 독소 효소 도메인은 BaNT 효소 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, BaNT 효소 도메인은 SEQ ID NO: 9의 아미노산 1-431을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BaNT 효소 도메인은 자연 발생적 BaNT 효소 도메인 변이체, 예를 들어, BaNT 이소형으로부터의 효소 도메인 또는BaNT 서브타입으로부터의 효소 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BaNT 효소 도메인은 SEQ ID NO: 9의 자연 발생적 BaNT 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-431, 예를 들어, SEQ ID NO: 9의 BaNT 이소형의 아미노산 1-431 또는 SEQ ID NO: 9의 BaNT 서브타입의 아미노산 1-431을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BaNT 효소 도메인은 비-자연 발생적 BaNT 효소 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성 BaNT 효소 도메인 변이체, 비-보존성 BaNT 효소 도메인 변이체, BaNT 키메라 효소 도메인, 활성 BaNT 효소 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BaNT 효소 도메인은 SEQ ID NO: 9의 비-자연 발생적 BaNT 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-431, 예를 들어, SEQ ID NO: 9의 보존성 BaNT 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-431, SEQ ID NO: 9의 비-보존성 BaNT 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-431, SEQ ID NO: 9의 활성 BaNT 효소 도메인 단편의 아미노산 1-431, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BaNT 효소 도메인은 SEQ ID NO: 9의 아미노산 1-431에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BaNT 효소 도메인은 SEQ ID NO: 9의 아미노산 1-431에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95%인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BaNT 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 9의 아미노산 1-431에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 9의 아미노산 1-431에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 9의 아미노산 1-431에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 9의 아미노산 1-431에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 9의 아미노산 1-431에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 1-431에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BaNT 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 9의 아미노산 1-431에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 9의 아미노산 1-431에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 9의 아미노산 1-431에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 9의 아미노산 1-431에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 9의 아미노산 1-431에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 1-431에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 클로스트리듐 독소 효소 도메인은 BuNT 효소 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, BuNT 효소 도메인은 SEQ ID NO: 10의 아미노산 1-422을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BuNT 효소 도메인은 자연 발생적 BuNT 효소 도메인 변이체, 예를 들어, BuNT 이소형으로부터의 효소 도메인 또는BuNT 서브타입으로부터의 효소 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BuNT 효소 도메인은 SEQ ID NO: 10의 자연 발생적 BuNT 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-422, 예를 들어, SEQ ID NO: 10의 BuNT 이소형의 아미노산 1-422 또는 SEQ ID NO: 10의 BuNT 서브타입의 아미노산 1-422을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BuNT 효소 도메인은 비-자연 발생적 BuNT 효소 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성 BuNT 효소 도메인 변이체, 비-보존성 BuNT 효소 도메인 변이체, BuNT 키메라 효소 도메인, 활성 BuNT 효소 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BuNT 효소 도메인은 SEQ ID NO: 10의 비-자연 발생적 BuNT 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-422, 예를 들어, SEQ ID NO: 10의 보존성 BuNT 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-422, SEQ ID NO: 10의 비-보존성 BuNT 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-422, SEQ ID NO: 10의 활성 BuNT 효소 도메인 단편의 아미노산 1-422, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BuNT 효소 도메인은 SEQ ID NO: 10의 아미노산 1-422 에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BuNT 효소 도메인은 SEQ ID NO: 10의 아미노산 1-422 에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95%인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BuNT 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 10의 아미노산 1-422에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 10의 아미노산 1-422에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 10의 아미노산 1-422에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 10의 아미노산 1-422에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 10의 아미노산 1-422에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 10의 아미노산 1-422에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BuNT 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 10의 아미노산 1-422에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 100 또는 200개의 인접한 아미노산 치환을 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BuNT 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 10의 아미노산 1-422에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 100 또는 200개의 인접한 아미노산 치환을 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BuNT 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 10의 아미노산 1-422에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 100 또는 200개의 인접한 아미노산 제거를 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BuNT 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 10의 아미노산 1-422에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 100 또는 200개의 인접한 아미노산 제거를 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BuNT 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 10의 아미노산 1-422에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 100 또는 200개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BuNT 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 10의 아미노산 1-422에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 100 또는 200개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
"전위 도메인"은 전위 활성을 갖는 클로스트리듐 신경독중쇄의 일부분을 포함한다. "전위"는 혈관 막을 통한 폴리펩티드의 이동을 용이하게 하여, 폴리펩티드의 일부 또는 전부를 세포질에 노출시키는 능력을 말한다. 다양한 보툴리늄 신경독 전위가 엔도솜(endosome) 내부의 pH의 감소에 의해 야기되는 중쇄의 알로스테릭 배좌 변화(allosteric conformational change)를 수반하는 것으로 생각된다. 이러한 배좌 변화는 중쇄의 N 말단 반쪽에 의해 매개되는 것으로 여겨지며, 그 결과 혈관 막에 포어가 형성되는 것으로 여겨진다; 이러한 변화는 엔도솜 소포 안으로부터 세포질로 단백분해성 경쇄의 이동을 허용한다. 예를 들어, 문헌 [Lacy, et al., Nature Struct . Biol . 5:898-902 (October 1998)] 참조.
보툴리늄 신경독 중쇄의 전위-매개 부분의 아미노산 서열은 당업자에게 알려져 있으며; 추가적으로, 전위 활성을 제공하는 데 필수적이라고 알려진 이러한 부분 내의 아미노산 잔기가 또한 알려져 있다. 따라서, 예를 들어, 전위 도메인으로서 임의의 다양한 클로스트리듐 테타너스 또는 클로스트리듐 보툴리늄 신경독 서브타입의 중쇄의 자연 발생적 N-말단 펩티드 반쪽을 사용하는 것, 또는 다양한 중쇄의 N-말단 반쪽의 일차 서열을 정렬하고 보존된 아미노산, 극성, 서열들 사이의 입체구조 및 소수성 특성에 기초하여 공통 일차 전위 서열(consensus primary translocation sequence)을 선택해 유사한 전위 도메인을 디자인하는 것은 당업자의 능력 범위에 속한다.
본 발명의 다른 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소는 클로스트리듐 독소 전위 도메인을 일부분 포함한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "클로스트리듐 독소 전위 도메인"은 클로스트리듐 독소 경쇄 전위를 매개하는 중독 프로세스의 전위 단계를 행할 수 있는 임의의 클로스트리듐 독소 폴리펩티드를 의미한다. 따라서, 클로스트리듐 독소 전위 도메인은 막을 가로지른 클로스트리듐 독소 경쇄의 이동을 용이하게 하며, 세포내 소포의 막을 통과하여 세포의 세포질로 이동하는 클로스트리듐 독소 경쇄의 이동을 포괄한다. 클로스트리듐 독소 전위 도메인의 비-제한적인 예는, 예를 들어, BoNT/A 전위 도메인, BoNT/B 전위 도메인, BoNT/C1 전위 도메인, BoNT/D 전위 도메인, BoNT/E 전위 도메인, BoNT/F 전위 도메인, BoNT/G 전위 도메인, TeNT 전위 도메인, BaNT 전위 도메인, 및BuNT 전위 도메인을 포함한다. 클로스트리듐 독소 전위 도메인의 다른 비-제한적인 예는, 예를 들어, SEQ ID NO: 1의 아미노산 449-873, SEQ ID NO: 2의 아미노산 442-860, SEQ ID NO: 3의 아미노산 450-868, SEQ ID NO: 4의 아미노산 446-864, SEQ ID NO: 5의 아미노산 423-847, SEQ ID NO: 6의 아미노산 440-866, SEQ ID NO: 7의 아미노산 447-865, SEQ ID NO: 8의 아미노산 458-881, SEQ ID NO: 9의 아미노산 432-857, 및 SEQ ID NO: 10의 아미노산 423-847를 포함한다.
클로스트리듐 독소 전위 도메인은, 제한없이, 자연 발생적 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체, 예를 들어, 클로스트리듐 독소 전위 도메인 이소형 및 클로스트리듐 독소 전위 도메인 서브타입; 비-자연 발생적 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체, 비-보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체, 클로스트리듐 독소 전위 도메인 키메라, 이들의 활성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체"는 자연 발생적이든 또는 비- 자연 발생적이든, 개시된 참조 서열(표1)의 상응하는 영역으로부터 적어도 하나의 아미노산이 바뀐 클로스트리듐 독소 전위 도메인을 의미하며, 참조 서열의 상응하는 영역에 대한 %일치율로 설명될 수 있다. 달리 명확하게 표시되지 않는다면, 개시된 실시 형태를 실시하는 데 유용한 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체는 클로스트리듐 독소 경쇄 전위를 매개하는 중독 프로세스의 전위 단계를 행하는 변형체이다. 비-제한적인 예로서, SEQ ID NO: 1의 아미노산 449-873을 포함하는 BoNT/A 전위 도메인 변이체는 SEQ ID NO: 1의 아미노산 영역 449-873과 비교할 때 적어도 하나의 아미노산 상이성, 예를 들어, 아미노산 치환, 제거 또는 추가를 가질 것이다; SEQ ID NO: 2의 아미노산 442-860을 포함하는 BoNT/B 전위 도메인 변이체는 SEQ ID NO: 2의 아미노산 영역 442-860과 비교할 때 적어도 하나의 아미노산 상이성, 예를 들어, 아미노산 치환, 제거 또는 추가를 가질 것이다; SEQ ID NO: 3의 아미노산 450-868을 포함하는 BoNT/C1 전위 도메인 변이는 SEQ ID NO: 3의 아미노산 영역 450-868과 비교할 때 적어도 하나의 아미노산 상이성, 예를 들어, 아미노산 치환, 제거 또는 추가를 가질 것이다 ; SEQ ID NO: 4 의 아미노산 446-864을 포함하는 BoNT/D 전위 도메인 변이체는 SEQ ID NO: 4의 아미노산 영역 446-864 과 비교할 때 적어도 하나의 아미노산 상이성, 예를 들어, 아미노산 치환, 제거 또는 추가를 가질 것이다; SEQ ID NO: 5의 아미노산 423-847을 포함하는 BoNT/E 전위 도메인 변이체는 SEQ ID NO: 5의 아미노산 영역 423-847과 비교할 때 적어도 하나의 아미노산 상이성, 예를 들어, 아미노산 치환, 제거 또는 추가를 가질 것이다; SEQ ID NO: 6의 아미노산 440-866을 포함하는 BoNT/F 전위 도메인 변이체는 SEQ ID NO: 6의 아미노산 영역 440-866 과 비교할 때 적어도 하나의 아미노산 상이성, 예를 들어, 아미노산 치환, 제거 또는 추가를 가질 것이다; SEQ ID NO: 7의 아미노산 447-865을 포함하는 BoNT/G 전위 도메인 변이체는 SEQ ID NO: 7의 아미노산 영역 447-865 과 비교할 때 적어도 하나의 아미노산 상이성, 예를 들어, 아미노산 치환, 제거 또는 추가를 가질 것이다; SEQ ID NO: 8 의 아미노산 458-881을 포함하는 TeNT 전위 도메인 변이체는 SEQ ID NO: 8의 아미노산 영역 458-881과 비교할 때 적어도 하나의 아미노산 상이성, 예를 들어, 아미노산 치환, 제거 또는 추가를 가질 것이다; SEQ ID NO: 9의 아미노산 432-857을 포함하는 BaNT 전위 도메인 변이체는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 영역 432-857 과 비교할 때 적어도 하나의 아미노산 상이성, 예를 들어, 아미노산 치환, 제거 또는 추가를 가질 것이다; 그리고 SEQ ID NO: 10의 아미노산 423-847을 포함하는 BuNT 전위 도메인 변이체는 SEQ ID NO: 10의 아미노산 영역 423-847 과 비교할 때 적어도 하나의 아미노산 상이성, 예를 들어, 아미노산 치환, 제거 또는 추가를 가질 것이다.
클로스트리듐 독소의 각각의 세로타입에는 아미노산 서열 및 이러한 단백질을 인코딩하는 핵산에 있어서 다소 상이한 자연 발생적 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체가 속할 수 있음을 당업자는 알고 있다. 예를 들어, 현재 5가지 BoNT/A 서브타입, BoNT/A1, BoNT/A2, BoNT/A3, BoNT/A4, 및 BoNT/A5이 있으며, 특이적인 전위 도메인 서브타입은 다른 BoNT/A 전위 도메인 서브타입과 비교할 때 대략 87%의 아미노산 일치율을 나타낸다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "자연 발생적 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체"는 제한없이, 대안적으로-스플라이싱된 전사로부터 생성된 클로스트리듐 독소 전위 도메인 이소형, 자발적인 돌연변이에 의해 생성된 클로스트리듐 독소 전위 도메인 이소형 및 클로스트리듐 독소 전위 도메인 서브타입을 포함하는 자연 발생적 프로세스에 의해 생성된 임의의 클로스트리듐 독소 전위 도메인을 의미한다. 자연 발생적 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체는 자연 발생적 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인과 실질적으로 동일한 방식으로 기능할 수 있으며 본 발명의 임의의 태양에서 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인을 대신할 수 있다. 자연 발생적 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체는 자연 발생적 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체 가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인으로부터 1개 이상의 아미노산, 2개 이상의 아미노산, 3개 이상의 아미노산, 4개 이상의 아미노산, 5개 이상의 아미노산, 10개 이상의 아미노산, 20개 이상의 아미노산, 30개 이상의 아미노산, 40개 이상의 아미노산, 50개 이상의 아미노산 또는 100개의개 이상의 아미노산을 치환할 수 있다. 자연 발생적 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체는 또한 자연 발생적 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체 가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인으로부터 적어도 10개의 인접한 아미노산, 적어도 15 개의 인접한 아미노산, 적어도 20 개의 인접한 아미노산, 또는 적어도 25 개의 인접한 아미노산을 치환할 수 있으며, 이는 자연 발생적 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인에 대해 적어도 50%의 아미노산 일치율, 65%의 아미노산 일치율, 75%의 아미노산 일치율, 85% 의 아미노산 일치율 또는 95%의 아미노산 일치율을 갖는다.
자연 발생적 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체의 비-제한적인 예는 클로스트리듐 독소 전위 도메인 이소형, 예를 들어, BoNT/A 전위 도메인 이소형, BoNT/B 전위 도메인 이소형, BoNT/C1 전위 도메인 이소형, BoNT/D 전위 도메인 이소형, BoNT/E 전위 도메인 이소형, BoNT/F 전위 도메인 이소형, BoNT/G 전위 도메인 이소형, TeNT 전위 도메인 이소형, BaNT 전위 도메인 이소형, 및 BuNT 전위 도메인 이소형이다. 클로스트리듐 독소 전위 도메인 이소형은 클로스트리듐 독소 전위 도메인 이소형이 기초한 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인과 실질저긍로 동일한 방식으로 기능할 수 있으며, 본 발명의 임의의 태양에서 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인을 대신할 수 있다.
자연 발생적 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체다른 비-제한적인 예는 클로스트리듐 독소 전위 도메인 서브타입, 예를 들어, 서브타입 BoNT/A1, BoNT/A2, BoNT/A3, BoNT/A4, 및 BoNT/A5으로부터의 전위 도메인; 서브타입 BoNT/B1, BoNT/B2, BoNT/B 2가 및 BoNT/B 비단백분해성으로부터의 전위 도메인; 서브타입 BoNT/C1-1 및 BoNT/C1-2로부터의 전위 도메인; 서브타입 BoNT/E1, BoNT/E2 및 BoNT/E3으로부터의 전위 도메인; 및 서브타입 BoNT/F1, BoNT/F2, BoNT/F3 및 BoNT/F4로부터의 전위 도메인이다. 클로스트리듐 독소 전위 도메인 서브타입은 클로스트리듐 독소 전위 도메인 서브타입이 기초한 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인과 실질적으로 동일한 방식으로 기능할 수 있으며, 본 발명의 임의의 태양에서 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인을 대신할 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "비-자연 발생적 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체"는, 제한없이, 무작위 돌연변이유발 또는 합리적인 디자인을 사용하여 유전자 공학에 의해 생성된 클로스트리듐 독소 전위 도메인 및 화학 합성에 의해 생성된 클로스트리듐 독소 전위 도메인을 포함하는 인공적인 조작의 도움으로 생성된 임의의 클로스트리듐 독소 전위 도메인을 의미한다. 비-자연 발생적 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체의 비-제한적인 예는, 예를 들어, 보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체, 비-보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체, 클로스트리듐 독소 전위 도메인 키메라 변이체 및 활성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 단편을 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체"는, 적어도 하나의 아미노산이 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인 서열(표 1)로부터의 원래의 아미노산과 유사한 적어도 하나의 특성을 갖는 다른 아미노산 또는 아미노산 유사체에 의해 치환된 클로스트리듐 독소 전위 도메인을 의미한다. 특성의 예는, 제한없이, 유사한 크기, 토포그래피, 전하, 소수성, 친수성, 친유성, 공유 결합 능력, 수소 결합 능력, 물리화학적 특성 등, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체는 보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체 가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인과 실질적으로 동일한 기능을 할 수 있으며, 본 발명의 임의의 태양에서 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인을 대신할 수 있다. 보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체는 보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인으로푸버 1개 이상의 아미노산, 2개 이상의 아미노산, 3개 이상의 아미노산, 4개 이상의 아미노산, 5개 이상의 아미노산, 10개 이상의 아미노산, 20개 이상의 아미노산, 30개 이상의 아미노산, 40개 이상의 아미노산, 50개 이상의 아미노산, 100개 이상의 아미노산, 또는 200개 이상의 아미노산을 치환할 수 있다. 보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체는 또한 보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인으로부터 적어도 10개의 인접한 아미노산, 적어도 15 개의 인접한 아미노산, 적어도 20 개의 인접한 아미노산, 또는 적어도 25 개의 인접한 아미노산을 치환할 수 있으며, 이는 보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인에 대해 적어도 50%의 아미노산 일치율, 65%의 아미노산 일치율, 75%의 아미노산 일치율, 85%의 아미노산 일치율 또는 95%의 아미노산 일치율을 갖는다. 보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체의 비-제한적인예는, 예를 들어, 보존성 BoNT/A 전위 도메인 변이체, 보존성 BoNT/B 전위 도메인 변이체, 보존성 BoNT/C1 전위 도메인 변이체, 보존성 BoNT/D 전위 도메인 변이체, 보존성 BoNT/E 전위 도메인 변이체, 보존성 BoNT/F 전위 도메인 변이체, 보존성 BoNT/G 전위 도메인 변이체, 보존성 TeNT 전위 도메인 변이체, 보존성 BaNT 전위 도메인 변이체, 및 보존성 BuNT 전위 도메인 변이체를 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "비-보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체"는, 다음과 같은 클로스트리듐 독소 전위 도메인을 의미한다; 1) 적어도 하나의 아미노산이 비-보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인으로부터 삭제되거나; 2) 적어도 하나의 아미노산이 비-보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인이 기초한 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인에 추가되거나 또는 3) 적어도 하나의 아미노산이 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인 서열(표 1)로부터의 원래 아미노산과 유사한 어떠한 특성도 공유하지 않는 다른 아미노산 또는 아미노산 유사체로 치환된다. 비-보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체는 비-보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인과 실질적으로 동일한 방식으로 기능할 수 있으며, 본 발명의 임의의 태양에서 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인을 대신할 수 있다. 비-보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체는 1개 이상의 아미노산, 2개 이상의 아미노산, 3개 이상의 아미노산, 4개 이상의 아미노산, 5개 이상의 아미노산, 및 10개 이상의 아미노산을, 비-보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인으로부터 삭제할 수 있다. 비-보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체는 1개 이상의 아미노산, 2개 이상의 아미노산, 3개 이상의 아미노산, 4개 이상의 아미노산, 5개 이상의 아미노산, 및 10개 이상의 아미노산을, 비-보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인에 추가할 수 있다. 비-보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체는 1개 이상의 아미노산, 2개 이상의 아미노산, 3개 이상의 아미노산, 4개 이상의 아미노산, 5개 이상의 아미노산, 10개 이상의 아미노산, 20개 이상의 아미노산, 30개 이상의 아미노산, 40개 이상의 아미노산, 50개 이상의 아미노산, 100개 이상의 아미노산, 또는 200개 이상의 아미노산을, 비-보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인으로부터 치환할 수 있다. 비-보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체는 또한 적어도 10개의 인접한 아미노산, 적어도 15 개의 인접한 아미노산, 적어도 20 개의 인접한 아미노산, 또는 적어도 25 개의 인접한 아미노산을, 비-보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인으로부터 치환할 수 있으며, 이는 비-보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인에 대해 적어도 50%의 아미노산 일치율, 65%의 아미노산 일치율, 75%의 아미노산 일치율, 85%의 아미노산 일치율 또는95%의 아미노산 일치율을 가질 수 있다. 비-보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체의 비-제한적인 예는, 예를 들어, 비-보존성 BoNT/A 전위 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/B 전위 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/C1 전위 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/D 전위 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/E 전위 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/F 전위 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/G 전위 도메인 변이체, 및 비-보존성 TeNT 전위 도메인 변이체, 비-보존성 BaNT 전위 도메인 변이체, 및 비-보존성 BuNT 전위 도메인 변이체를 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "클로스트리듐 독소 전위 도메인 키메라"는 클로스트리듐 독소 전위 도메인의 적어도 일부분 및 적어도 하나의 다른 폴리펩티드의 적어도 일부분을 포함하여 독소 전위 도메인을 형성하는, 적어도 하나의 특성이 표 1의 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인과 상이한 폴리펩티드를 의미하며, 단, 이러한 클로스트리듐 독소 전위 도메인 키메라는 여전히 신경전달물질 방출 기구의 코어 구성요소를 특이적으로 표적화할 수 있으므로 전체 세포 메커니즘을 행하는 데 참여하여 클로스트리듐 독소가 기질을 단백분해적으로 절단한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "활성 클로스트리듐 전위 도메인 단편"은 발명의 태양에 유용할 수 있는 전위 도메인을 포함하는 임의의 다양한 클로스트리듐 독소 단편을 의미하며, 단, 이러한 활성 단편은 세포내 소포로부터 표적 세포의 세포질로 LC의 방출을 촉진할 수 있으므로, 전체 세포 메커니즘을 행하는 데 참여하여 클로스트리듐 독소가 기질을 단백분해적으로 절단한다. 클로스트리듐 독소의 중쇄로부터의 전위 도메인은 길이가 대략 410-430개의 아미노산이고, 전위 도메인 (표 1)을 포함한다. 연구는 전위 도메인의 전위 활성을 위해 클로스트리듐 독소 중쇄로부터의 전위 도메인의 전체 길이가 필요하지 않다는 것을 보여주었다. 따라서, 본 실시 형태의 태양은 길이가, 예를 들어, 적어도 350개의 아미노산, 적어도 375개의 아미노산, 적어도 400개의 아미노산 및 적어도 425개의 아미노산인 전위 도메인을 포함하는 클로스트리듐 독소 전위 도메인을 포함할 수 있다. 이러한 실시 형태의 다른 태양은 길이가, 예를 들어, 최대 350개의 아미노산, 최대 375개의 아미노산, 최대 400개의 아미노산 및 최대 425개의 아미노산인 전위 도메인을 포함하는 클로스트리듐 독소 전위 도메인을 포함한다.
임의의 다양한 서열 정렬 방법이 자연 발생적 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체 및 비-자연 발생적 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체의 %일치율을 결정하는 데 사용될 수 있으며, 제한없이, 글로벌 방법, 로컬 방법 및 하이브리드 방법, 예를 들어, 세그먼트 접근 방법이 포함된다. %일치율을 결정하는 프로토콜은 본 명세서의 교시로부터 당업자가 결정할 수 있는 범주에 속하는 일상적인 절차이다.
따라서, 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 변형 클로스트리듐 독소는 클로스트리듐 독소 전위 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, 클로스트리듐 독소 전위 도메인은 자연 발생적 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체, 예를 들어, 클로스트리듐 독소 전위 도메인 이소형 또는 클로스트리듐 독소 전위 도메인 서브타입을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 클로스트리듐 독소 전위 도메인은 비-자연 발생적 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체, 비-보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체, 클로스트리듐 독소 키메라 전위 도메인, 활성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
다른 실시 형태에서, 클로스트리듐 독소 전위 도메인은 BoNT/A 전위 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, BoNT/A 전위 도메인은 SEQ ID NO: 1의 아미노산 449-873을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/A 전위 도메인은 자연 발생적 BoNT/A 전위 도메인 변이체, 예를 들어, BoNT/A 이소형으로부터의 전위 도메인 또는 BoNT/A 서브타입으로부터의 전위 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/A 전위 도메인은 SEQ ID NO: 1의 자연 발생적 BoNT/A 전위 도메인 변이체의 아미노산 449-873, 예를 들어, SEQ ID NO: 1의 BoNT/A 이소형의 아미노산 449-873 또는 SEQ ID NO: 1의 BoNT/A 서브타입의 아미노산 449-873을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/A 전위 도메인은 비-자연 발생적 BoNT/A 전위 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성 BoNT/A 전위 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/A 전위 도메인 변이체, BoNT/A 키메라 전위 도메인, 활성 BoNT/A 전위 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/A 전위 도메인은 SEQ ID NO: 1의 비-자연 발생적 BoNT/A 전위 도메인 변이체의 아미노산 449-873, 예를 들어, SEQ ID NO: 1의 보존성 BoNT/A 전위 도메인 변이체의 아미노산 449-873, SEQ ID NO: 1의 비-보존성 BoNT/A 전위 도메인 변이체의 아미노산 449-873, SEQ ID NO: 1의 활성 BoNT/A 전위 도메인 단편의 아미노산 449-873, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/A 전위 도메인은 SEQ ID NO: 1의 아미노산 449-873에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/A 전위 도메인은 SEQ ID NO: 1의 아미노산 449-873에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95%인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/A 전위 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 1의 아미노산 449-873에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 1의 아미노산 449-873에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 1의 아미노산 449-873에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 1의 아미노산 449-873에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 1의 아미노산 449-873에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 1의 아미노산 449-873에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가 를 가진 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/A 전위 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 1의 아미노산 449-873에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 1의 아미노산 449-873에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 100 또는 200개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 1의 아미노산 449-873에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 1의 아미노산 449-873에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 1의 아미노산 449-873에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 1의 아미노산 449-873에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가를 가진 폴리펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 클로스트리듐 독소 전위 도메인은 BoNT/B 전위 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, BoNT/B 전위 도메인은 SEQ ID NO: 2의 아미노산 442-860을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/B 전위 도메인은 자연 발생적 BoNT/B 전위 도메인 변이체, 예를 들어, BoNT/B 이소형으로부터의 전위 도메인 또는 BoNT/B 서브타입으로부터의 전위 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/B 전위 도메인은 SEQ ID NO: 2의 자연 발생적 BoNT/B 전위 도메인 변이체의 아미노산 442-860, 예를 들어, SEQ ID NO: 2의 BoNT/B 이소형의 아미노산 442-860 또는 SEQ ID NO: 2의 BoNT/B 서브타입의 아미노산 442-860을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/B 전위 도메인은 비-자연 발생적 BoNT/B 전위 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성 BoNT/B 전위 도메인 변이체, -보존성 BoNT/B 전위 도메인 변이체, BoNT/B 키메라 전위 도메인, 활성 BoNT/B 전위 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/B 전위 도메인은 SEQ ID NO: 2의 비-자연 발생적 BoNT/B 전위 도메인 변이체의 아미노산 442-860, 예를 들어, SEQ ID NO: 2의 보존성 BoNT/B 전위 도메인 변이체의 아미노산 442-860, SEQ ID NO: 2의 비-보존성 BoNT/B 전위 도메인 변이체의 아미노산 442-860, SEQ ID NO: 2의 활성 BoNT/B 전위 도메인 단편의 아미노산 442-860, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/B 전위 도메인은 SEQ ID NO: 2의 아미노산 442-860에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/B 전위 도메인은 SEQ ID NO: 2의 아미노산 442-860에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95%인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/B 전위 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 2의 아미노산 442-860에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 2의 아미노산 442-860에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 100 또는 200개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 2의 아미노산 442-860에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 2의 아미노산 442-860에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 2의 아미노산 442-860에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 2의 아미노산 442-860에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/B 전위 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 2의 아미노산 442-860에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 2의 아미노산 442-860에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 2의 아미노산 442-860에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 2의 아미노산 442-860에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 2의 아미노산 442-860에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 2의 아미노산 442-860에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 클로스트리듐 독소 전위 도메인은 BoNT/C1 전위 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, BoNT/C1 전위 도메인은 SEQ ID NO: 3의 아미노산 450-868을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/C1 전위 도메인은 자연 발생적 BoNT/C1 전위 도메인 변이체, 예를 들어, BoNT/C1 이소형으로부터의 전위 도메인 또는 BoNT/C1 서브타입으로부터의 전위 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/C1 전위 도메인은 SEQ ID NO: 3의 자연 발생적 BoNT/C1 전위 도메인 변이체의 아미노산 450-868, 예를 들어, SEQ ID NO: 3의 BoNT/C1 이소형의 아미노산 450-868 또는 SEQ ID NO: 3의 BoNT/C1 서브타입의 아미노산 450-868을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/C1 전위 도메인은 비-자연 발생적 BoNT/C1 전위 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성 BoNT/C1 전위 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/C1 전위 도메인 변이체, BoNT/C1 키메라 전위 도메인, 활성 BoNT/C1 전위 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/C1 전위 도메인은 SEQ ID NO: 3의 비-자연 발생적 BoNT/C1 전위 도메인 변이체의 아미노산 450-868, 예를 들어, SEQ ID NO: 3의 보존성 BoNT/C1 전위 도메인 변이체의 아미노산 450-868, SEQ ID NO: 3의 비-보존성 BoNT/C1 전위 도메인 변이체의 아미노산 450-868, SEQ ID NO: 3의 활성 BoNT/C1 전위 도메인 단편의 아미노산 450-868, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/C1 전위 도메인은 SEQ ID NO: 3의 아미노산 450-868에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/C1 전위 도메인은 SEQ ID NO: 3의 아미노산 450-868에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95%인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/C1 전위 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 3의 아미노산 450-868에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 3의 아미노산 450-868에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 3의 아미노산 450-868에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 3의 아미노산 450-868에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 3의 아미노산 450-868에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 3의 아미노산 450-868에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/C1 전위 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 3의 아미노산 450-868에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 3의 아미노산 450-868에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 3의 아미노산 450-868에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 3의 아미노산 450-868에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 3의 아미노산 450-868에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가; SEQ ID NO: 3의 아미노산 450-868에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 클로스트리듐 독소 전위 도메인은 BoNT/D 전위 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, BoNT/D 전위 도메인은 SEQ ID NO: 4의 아미노산 446-864을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/D 전위 도메인은 자연 발생적 BoNT/D 전위 도메인 변이체, 예를 들어, BoNT/D 이소형으로부터의 전위 도메인 또는 BoNT/D 서브타입으로부터의 전위 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/D 전위 도메인은 SEQ ID NO: 4의 자연 발생적 BoNT/D 전위 도메인 변이체의 아미노산 446-864, 예를 들어, SEQ ID NO: 4의 BoNT/D 이소형의 아미노산 446-864 또는 SEQ ID NO: 4의 BoNT/D 서브타입의 아미노산 446-864을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/D 전위 도메인은 비-자연 발생적 BoNT/D 전위 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성 BoNT/D 전위 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/D 전위 도메인 변이체, BoNT/D 키메라 전위 도메인, 활성 BoNT/D 전위 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/D 전위 도메인은 SEQ ID NO: 4의 비-자연 발생적 BoNT/D 전위 도메인 변이체의 아미노산 446-864, 예를 들어, SEQ ID NO: 4의 보존성 BoNT/D 전위 도메인 변이체의 아미노산 446-864, SEQ ID NO: 4의 비-보존성 BoNT/D 전위 도메인 변이체의 아미노산 446-864, SEQ ID NO: 4의 활성 BoNT/D 전위 도메인 단편의 아미노산 446-864, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/D 전위 도메인은 SEQ ID NO: 4의 아미노산 446-864에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/D 전위 도메인은 SEQ ID NO: 4의 아미노산 446-864에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95%인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/D 전위 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 4의 아미노산 446-864에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 4의 아미노산 446-864에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 4의 아미노산 446-864에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 4의 아미노산 446-864에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 4의 아미노산 446-864에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 4의 아미노산 446-864에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/D 전위 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 4의 아미노산 446-864에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 4의 아미노산 446-864에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 4의 아미노산 446-864에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 4의 아미노산 446-864에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 4의 아미노산 446-864에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 4의 아미노산 446-864에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 클로스트리듐 독소 전위 도메인은 BoNT/E 전위 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, BoNT/E 전위 도메인은 SEQ ID NO: 5의 아미노산 423-847을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/E 전위 도메인은 자연 발생적 BoNT/E 전위 도메인 변이체, 예를 들어, BoNT/E 이소형으로부터의 전위 도메인 또는 BoNT/E 서브타입으로부터의 전위 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/E 전위 도메인은 SEQ ID NO: 5의 자연 발생적 BoNT/E 전위 도메인 변이체의 아미노산 423-847, 예를 들어, SEQ ID NO: 5의 BoNT/E 이소형의 아미노산 423-847 또는 SEQ ID NO: 5의 BoNT/E 서브타입의 아미노산 423-847을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/E 전위 도메인은 비-자연 발생적 BoNT/E 전위 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성 BoNT/E 전위 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/E 전위 도메인 변이체, BoNT/E 키메라 전위 도메인, 활성 BoNT/E 전위 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/E 전위 도메인은 SEQ ID NO: 5의 비-자연 발생적 BoNT/E 전위 도메인 변이체의 아미노산 423-847, 예를 들어, SEQ ID NO: 5의 보존성 BoNT/E 전위 도메인 변이체의 아미노산 423-847, SEQ ID NO: 5의 비-보존성 BoNT/E 전위 도메인 변이체의 아미노산 423-847, SEQ ID NO: 5의 활성 BoNT/E 전위 도메인 단편의 아미노산 423-847, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/E 전위 도메인은 SEQ ID NO: 5의 아미노산 423-847에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/E 전위 도메인은 SEQ ID NO: 5의 아미노산 423-847에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95%인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/E 전위 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 5의 아미노산 423-847에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 5의 아미노산 423-847에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 5의 아미노산 423-847에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 5의 아미노산 423-847에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 5의 아미노산 423-847에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 5의 아미노산 423-847에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/E 전위 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 5의 아미노산 423-847에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 5의 아미노산 423-847에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 5의 아미노산 423-847에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 5의 아미노산 423-847에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 5의 아미노산 423-847에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 5의 아미노산 423-847에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 클로스트리듐 독소 전위 도메인은 BoNT/F 전위 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, BoNT/F 전위 도메인은 SEQ ID NO: 6의 아미노산 440-866을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/F 전위 도메인은 자연 발생적 BoNT/F 전위 도메인 변이체, 예를 들어, BoNT/F 이소형으로부터의 전위 도메인 또는BoNT/F 서브타입으로부터의 전위 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/F 전위 도메인은 SEQ ID NO: 6의 자연 발생적 BoNT/F 전위 도메인 변이체의 아미노산 440-866, 예를 들어, SEQ ID NO: 6의 BoNT/F 이소형의 아미노산 440-866 또는 SEQ ID NO: 6의 BoNT/F 서브타입의 아미노산 440-866을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/F 전위 도메인은 비-자연 발생적 BoNT/F 전위 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성 BoNT/F 전위 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/F 전위 도메인 변이체, BoNT/F 키메라 전위 도메인, 활성 BoNT/F 전위 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/F 전위 도메인은 SEQ ID NO: 6의 비-자연 발생적 BoNT/F 전위 도메인 변이체의 아미노산 440-866, 예를 들어, SEQ ID NO: 6의 보존성 BoNT/F 전위 도메인 변이체의 아미노산 440-866, SEQ ID NO: 6의 비-보존성 BoNT/F 전위 도메인 변이체 의 아미노산 440-866, SEQ ID NO: 6의 활성 BoNT/F 전위 도메인 단편의 아미노산 440-866, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/F 전위 도메인은 SEQ ID NO: 6의 아미노산 440-866에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/F 전위 도메인은 SEQ ID NO: 6의 아미노산 440-866에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95%인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/F 전위 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 6의 아미노산 440-866에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 6의 아미노산 440-866에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 6의 아미노산 440-866에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 6의 아미노산 440-866에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 6의 아미노산 440-866에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 6의 아미노산 440-866에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/F 전위 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 6의 아미노산 440-866에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 6의 아미노산 440-866에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 6의 아미노산 440-866에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 6의 아미노산 440-866에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 6의 아미노산 440-866에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 6의 아미노산 440-866에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 클로스트리듐 독소 전위 도메인은 BoNT/G 전위 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, BoNT/G 전위 도메인은 SEQ ID NO: 7의 아미노산 447-865을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/G 전위 도메인은 자연 발생적 BoNT/G 전위 도메인 변이체, 예를 들어, BoNT/G 이소형으로부터의 전위 도메인 또는 BoNT/G 서브타입으로부터의 전위 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/G 전위 도메인은 SEQ ID NO: 7의 자연 발생적 BoNT/G 전위 도메인 변이체의 아미노산 447-865, 예를 들어, SEQ ID NO: 7의 BoNT/G 이소형의 아미노산 447-865 또는 SEQ ID NO: 7의 BoNT/G 서브타입의 아미노산 447-865을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/G 전위 도메인은 비-자연 발생적 BoNT/G 전위 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성 BoNT/G 전위 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/G 전위 도메인 변이체, BoNT/G 키메라 전위 도메인, 활성 BoNT/G 전위 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/G 전위 도메인은 SEQ ID NO: 7의 비-자연 발생적 BoNT/G 전위 도메인 변이체의 아미노산 447-865, 예를 들어, SEQ ID NO: 7의 보존성 BoNT/G 전위 도메인 변이체의 아미노산 447-865, SEQ ID NO: 7의 비-보존성 BoNT/G 전위 도메인 변이체의 아미노산 447-865, SEQ ID NO: 7의 활성 BoNT/G 전위 도메인 단편의 아미노산 447-865, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/G 전위 도메인은 SEQ ID NO: 7의 아미노산 447-865에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/G 전위 도메인은 SEQ ID NO: 7의 아미노산 447-865에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95%인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/G 전위 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 7의 아미노산 447-865에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 7의 아미노산 447-865에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 7의 아미노산 447-865에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 7의 아미노산 447-865에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 7의 아미노산 447-865에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 7의 아미노산 447-865에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/G 전위 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 7의 아미노산 447-865에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 7의 아미노산 447-865에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 7의 아미노산 447-865에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 7의 아미노산 447-865에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 7의 아미노산 447-865에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 7의 아미노산 447-865에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 클로스트리듐 독소 전위 도메인은 TeNT 전위 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, TeNT 전위 도메인은 SEQ ID NO: 8의 아미노산 458-881을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, TeNT 전위 도메인은 자연 발생적 TeNT 전위 도메인 변이체, 예를 들어, TeNT 이소형으로부터의 전위 도메인 또는 TeNT 서브타입으로부터의 전위 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, TeNT 전위 도메인은 SEQ ID NO: 8의 자연 발생적 TeNT 전위 도메인 변이체의 아미노산 458-881, 예를 들어, SEQ ID NO: 8의 TeNT 이소형의 아미노산 458-881 또는 SEQ ID NO: 8의 TeNT 서브타입의 아미노산 458-881을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, TeNT 전위 도메인은 비-자연 발생적 TeNT 전위 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성 TeNT 전위 도메인 변이체, 비-보존성 TeNT 전위 도메인 변이체, TeNT 키메라 전위 도메인, 활성 TeNT 전위 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, TeNT 전위 도메인은 SEQ ID NO: 8의 비-자연 발생적 TeNT 전위 도메인 변이체의 아미노산 458-881, 예를 들어, SEQ ID NO: 8의 보존성 TeNT 전위 도메인 변이체의 아미노산 458-881, SEQ ID NO: 8의 비-보존성 TeNT 전위 도메인 변이체의 아미노산 458-881, SEQ ID NO: 8의 활성 TeNT 전위 도메인 단편의 아미노산 458-881, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, TeNT 전위 도메인은 SEQ ID NO: 8의 아미노산 458-881에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, TeNT 전위 도메인은 SEQ ID NO: 8의 아미노산 458-881에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95%인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, TeNT 전위 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 8의 아미노산 458-881에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 8의 아미노산 458-881에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 8의 아미노산 458-881에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 8의 아미노산 458-881에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 8의 아미노산 458-881에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 8의 아미노산 458-881에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, TeNT 전위 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 8의 아미노산 458-881에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 8의 아미노산 458-881에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 8의 아미노산 458-881에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 8의 아미노산 458-881에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 8의 아미노산 458-881에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 8의 아미노산 458-881에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 클로스트리듐 독소 전위 도메인은 BaNT 전위 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, BaNT 전위 도메인은 SEQ ID NO: 9의 아미노산 432-857을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BaNT 전위 도메인은 자연 발생적 BaNT 전위 도메인 변이체, 예를 들어, BaNT 이소형으로부터의 전위 도메인 또는 BaNT 서브타입으로부터의 전위 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BaNT 전위 도메인은 SEQ ID NO: 9의 자연 발생적 BaNT 전위 도메인 변이체의 아미노산 432-857, 예를 들어, SEQ ID NO: 9의 BaNT 이소형의 아미노산 432-857 또는 SEQ ID NO: 9의 BaNT 서브타입의 아미노산 432-857을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BaNT 전위 도메인은 비-자연 발생적 BaNT 전위 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성 BaNT 전위 도메인 변이체, 비-보존성 BaNT 전위 도메인 변이체, BaNT 키메라 전위 도메인, 활성 BaNT 전위 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BaNT 전위 도메인은 SEQ ID NO: 9의 비-자연 발생적 BaNT 전위 도메인 변이체의 아미노산 432-857, 예를 들어, SEQ ID NO: 9의 보존성 BaNT 전위 도메인 변이체의 아미노산 432-857, SEQ ID NO: 9의 비-보존성 BaNT 전위 도메인 변이체의 아미노산 432-857, SEQ ID NO: 9의 활성 BaNT 전위 도메인 단편의 아미노산 432-857, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BaNT 전위 도메인은 SEQ ID NO: 9의 아미노산 432-857에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BaNT 전위 도메인은 SEQ ID NO: 9의 아미노산 432-857에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95% 인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BaNT 전위 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 9의 아미노산 432-857에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 9의 아미노산 432-857에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 9의 아미노산 432-857에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 9의 아미노산 432-857에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 9의 아미노산 432-857에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 432-857에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BaNT 전위 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 9의 아미노산 432-857에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 9의 아미노산 432-857에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 9의 아미노산 432-857에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 9의 아미노산 432-857에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 9의 아미노산 432-857에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 432-857에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 클로스트리듐 독소 전위 도메인은 BuNT 전위 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, BuNT 전위 도메인은 SEQ ID NO: 10의 아미노산 423-847을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BuNT 전위 도메인은 자연 발생적 BuNT 전위 도메인 변이체, 예를 들어, BuNT 이소형으로부터의 전위 도메인 또는 BuNT 서브타입으로부터의 전위 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BuNT 전위 도메인은 SEQ ID NO: 10의 자연 발생적 BuNT 전위 도메인 변이체의 아미노산 423-847, 예를 들어, SEQ ID NO: 10의 BuNT 이소형의 아미노산 423-847 또는 SEQ ID NO: 10의 BuNT 서브타입의 아미노산 423-847을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BuNT 전위 도메인은 비-자연 발생적 BuNT 전위 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성 BuNT 전위 도메인 변이체, 비-보존성 BuNT 전위 도메인 변이체, BuNT 키메라 전위 도메인, 활성 BuNT 전위 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BuNT 전위 도메인은 SEQ ID NO: 10의 비-자연 발생적 BuNT 전위 도메인 변이체의 아미노산 423-847, 예를 들어, SEQ ID NO: 10의 보존성 BuNT 전위 도메인 변이체의 아미노산 423-847, SEQ ID NO: 10의 비-보존성 BuNT 전위 도메인 변이체의 아미노산 423-847, SEQ ID NO: 10의 활성 BuNT 전위 도메인 단편의 아미노산 423-847, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BuNT 전위 도메인은 SEQ ID NO: 10의 아미노산 423-847에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BuNT 전위 SEQ ID NO: 10의 아미노산 423-847에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95%인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BuNT 전위 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 10의 아미노산 423-847에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 10의 아미노산 423-847에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 10의 아미노산 423-847에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 10의 아미노산 423-847에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 10의 아미노산 423-847에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 10의 아미노산 423-847에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BuNT 전위 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 10의 아미노산 423-847에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 10의 아미노산 423-847에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 10의 아미노산 423-847에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 10의 아미노산 423-847에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 10의 아미노산 423-847에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 10의 아미노산 423-847에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 발명의 다른 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소는, 일부분, 오피오이드 펩티드 결합 도메인을 포함한다. "결합 도메인"은 생리학적 조건 하에서 표적 세포의 세포 표면 마커 특성부(marker characteristic)에 우선적으로 결합하는 아미노산 서열 영역을 의미한다. 세포 표면 마커는 폴리펩티드, 폴리사카라이드, 지질, 글리코프로테인, 리포프로테인을 포함할 수 있거나, 또는 이들 중 하나 이상의 구조적 특성을 가질 수 있다. "우선적으로 상호작용한다(preferentially interact)"는 세포 표면 마커에 대한 결합 도메인의 해리 상수(disassociation constant) (Kd)가 임의의 다른 세포 표면 마커에 대한 결합 도메인의 해리 상수보다 적어도 1차수 더 작은 것을 의미한다. 바람직하게는, 해리 상수는 신경독 또는 변형 신경독이 노출되는 임의의 다른 세포 표면 마커에 대한 결합 도메인의 해리 상수보다 적어도 2 차수 더 작으며, 훨씬 더욱 바람직하게는 해리 상수는 적어도 3 차수 더 작다. 결합 도메인의 예는, 예를 들어, 문헌 [Steward, L.E. et al., Modified Clostridial Toxins with Enhanced Translocation Capability and Enhanced Targeting Activity, U.S. Patent Application No. 11/776,043 (Jul. 11, 2007); Steward, L.E. et al., Modified Clostridial Toxins with Enhanced Translocation Capabilities and Altered Targeting Activity For Clostridial Toxin Target Cells, U.S. Patent Application No. 11/776,052 (Jul. 11, 2007); 및 Steward, L.E. et al., Modified Clostridial Toxins with Enhanced Translocation Capabilities and Altered Targeting Activity For Non-Clostridial Toxin Target Cells, U.S. Patent Application No. 11/776,075 (Jul. 11, 2007)]에 기재되어 있으며, 이들 각각은 본 명세서에 전체적으로 참고로 포함된다.
본 명세서에 개시된 오피오이드 펩티드 결합 도메인의 비-제한적인 예는, 예를 들어, 엔케팔린(enkephalin), 엔도모르핀(endomorphin), 엔도르핀, 디노르핀(dynorphin), 노시셉틴(nociceptin) 또는 헤모르핀(hemorphin)이다. 따라서, 실시 형태에서, 결합 도메인은 오피오이드 펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 오피오이드 펩티드는 엔케팔린 펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, 엔케팔린 펩티드는 Leu-엔케팔린, Met-엔케팔린, Met-엔케팔린 MRGL 또는 Met-엔케팔린 MRF를 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 엔케팔린 펩티드는 SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54 또는 SEQ ID NO: 55를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, 엔케팔린은 SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54 또는 SEQ ID NO: 55에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 엔케팔린은 SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54 또는 SEQ ID NO: 55에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95%인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, 엔케팔린은, 예를 들어, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54 또는 SEQ ID NO: 55에 대해 적어도 1, 2, 또는 3개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54 또는 SEQ ID NO: 55에 대해 최대 1, 2, 또는 3개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54 또는 SEQ ID NO: 55에 대해 적어도 1, 2, 또는 3개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54 또는 SEQ ID NO: 55에 대해 최대 1, 2, 또는 3개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54 또는 SEQ ID NO: 55에 대해 적어도 1, 2, 또는 3개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54 또는 SEQ ID NO: 55에 대해 최대 1, 2, 또는 3개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, 엔케팔린은, 예를 들어, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54 또는 SEQ ID NO: 55에 대해 적어도 1, 2, 또는 3개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54 또는 SEQ ID NO: 55에 대해 최대 1, 2, 또는 3개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54 또는 SEQ ID NO: 55에 대해 적어도 1, 2, 또는 3개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54 또는 SEQ ID NO: 55에 대해 최대 1, 2, 또는 3개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54 또는 SEQ ID NO: 55에 대해 적어도 1, 2, 또는 3개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54 또는 SEQ ID NO: 55에 대해 최대 1, 2, 또는 3개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 오피오이드 펩티드는 소 부신수질(bovine adrenomedullary)-22 (BAM22) 펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, BAM22 펩티드는 BAM22 펩티드 (1-12), BAM22 펩티드 (6-22), BAM22 펩티드 (8-22) 또는 BAM22 펩티드 (1-22)를 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BAM22 펩티드는 SEQ ID NO: 56의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 57의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 58의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 59의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 60의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22 또는 SEQ ID NO: 61의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BAM22는 SEQ ID NO: 56의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 57의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 58의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 59의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 60의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; 또는 SEQ ID NO: 61의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BAM22 펩티드 결합 도메인은 SEQ ID NO: 56의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 57의아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 58의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 59의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 60의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; 또는 SEQ ID NO: 61의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95% 인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BAM22 펩티드는, 예를 들어, SEQ ID NO: 56의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 57의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 58의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 59의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 60의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; 또는 SEQ ID NO: 61의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 56의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 57의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 58 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 59의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 60의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; 또는 SEQ ID NO: 61의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 56의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 57의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 58의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 59의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 60의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; 또는 SEQ ID NO: 61의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 56에 대해아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 57의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 58의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 59의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 60의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; 또는 SEQ ID NO: 61의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 56의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 57의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 58의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 59의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 60의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; 또는 SEQ ID NO: 61의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 56의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 57의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 58의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 59의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 60의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; 또는 SEQ ID NO: 61의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리 펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BAM22는, 예를 들어, SEQ ID NO: 56의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 57의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 58의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 59의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 60의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; 또는 SEQ ID NO: 61의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 56의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 57의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 58의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 59의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 60의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; 또는 SEQ ID NO: 61의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 56의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 57의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 58의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 59의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 60의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; 또는 SEQ ID NO: 61의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 56의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 57의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 58의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 59의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 60의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; 또는 SEQ ID NO: 61의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 56의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 57의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 58의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 59의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 60의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; 또는 SEQ ID NO: 61의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 56의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 57의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 58의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 59의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 60의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; 또는 SEQ ID NO: 61의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리 펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 오피오이드 펩티드는 엔도모르핀 펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, 엔도모르핀 펩티드는 엔도모르핀-1 또는 엔도모르핀-2를 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 엔도모르핀 펩티드는 SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, 엔도모르핀은 SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 엔도모르핀은 SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95%인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, 엔도모르핀은, SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63에 대해 예를 들어, 적어도 1, 2, 또는 3개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63에 대해 최대 1, 2, 또는 3개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63에 대해 적어도 1, 2, 또는 3개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63에 대해 최대 1, 2, 또는 3개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63에 대해 적어도 1, 2, 또는 3개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63에 대해 최대 1, 2, 또는 3개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, 엔도모르핀은, 예를 들어, SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63에 대해 적어도 1, 2, 또는 3개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63에 대해 최대 1, 2, 또는 3개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63에 대해 적어도 1, 2, 또는 3개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63에 대해 최대 1, 2, 또는 3개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63에 대해 적어도 1, 2, 또는 3개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63에 대해 최대 1, 2, 또는 3개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 오피오이드 펩티드는 엔도르핀 펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, 엔도르핀 펩티드는 엔도르핀-α, 네오엔도르핀-α, 엔도르핀-β, 네오엔도르핀-β 또는 엔도르핀- γ를 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 엔도르핀 펩티드는 SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 또는 SEQ ID NO: 69를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, 엔도르핀은 SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 또는 SEQ ID NO: 69에 대한 아미노산 일치율, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 엔도르핀은 SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 또는 SEQ ID NO: 69에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95% 인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, 엔도르핀은, 예를 들어, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 또는 SEQ ID NO: 69에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 또는 SEQ ID NO: 69에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 또는 SEQ ID NO: 69에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 또는 SEQ ID NO: 69에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 또는 SEQ ID NO: 69에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 또는 SEQ ID NO: 69에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, 엔도르핀은, 예를 들어, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 또는 SEQ ID NO: 69에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 또는 SEQ ID NO: 69 에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 또는 SEQ ID NO: 69 에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 또는 SEQ ID NO: 69에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 또는 SEQ ID NO: 69 에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 또는 SEQ ID NO: 69 에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 오피오이드 펩티드는 디노르핀 펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, 디노르핀 펩티드는 디노르핀 A, 디노르핀 B (류모르핀(leumorphin)) 또는 리모르핀(rimorphin)을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 디노르핀 펩티드는SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 83, SEQ ID NO: 84, SEQ ID NO: 85, SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 87, SEQ ID NO: 88, SEQ ID NO: 89, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO: 91, SEQ ID NO: 92, SEQ ID NO: 93, SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO: 96, SEQ ID NO: 97, SEQ ID NO: 98, SEQ ID NO: 99 또는 SEQ ID NO: 100를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, 디노르핀은 SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 79 또는 SEQ ID NO: 95에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 디노르핀은 SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 79 또는 SEQ ID NO: 95에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95% 인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, 디노르핀은, 예를 들어, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 79 또는 SEQ ID NO: 95에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 79 또는 SEQ ID NO: 95에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 79 또는 SEQ ID NO: 95에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 79 또는 SEQ ID NO: 95에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 79 또는 SEQ ID NO: 95에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 79 또는 SEQ ID NO: 95에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, 디노르핀은, 예를 들어, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 79 또는 SEQ ID NO: 95에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 79 또는 SEQ ID NO: 95에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 79 또는 SEQ ID NO: 95에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 79 또는 SEQ ID NO: 95에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 79 또는 SEQ ID NO: 95에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 79 또는 SEQ ID NO: 95에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 오피오이드 펩티드는 노시셉틴 펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, 노시셉틴 펩티드는 노시셉틴 RK, 노시셉틴, 뉴로펩티드 1, 뉴로펩티드 2 또는 뉴로펩티드 3을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 노시셉틴 펩티드는 SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 102, SEQ ID NO: 103, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109 또는 SEQ ID NO: 110을 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, 노시셉틴은 SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109 또는 SEQ ID NO: 110에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 노시셉틴은SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109 또는 SEQ ID NO: 110에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95% 인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, 노시셉틴은, 예를 들어, SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109 또는 SEQ ID NO: 110에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109 또는 SEQ ID NO: 110에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109 또는 SEQ ID NO: 110에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109 또는 SEQ ID NO: 110에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109 또는 SEQ ID NO: 110에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109 또는 SEQ ID NO: 110에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, 노시셉틴은, 예를 들어, SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109 또는 SEQ ID NO: 110에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109 또는 SEQ ID NO: 110에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109 또는 SEQ ID NO: 110에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109 또는 SEQ ID NO: 110에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109 또는 SEQ ID NO: 110에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109 또는 SEQ ID NO: 110에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
클로스트리듐 독소는 각각 대략 150 kDa의 단일-사슬 폴리펩티드로서 번역되며(translated), 이후에 자연 발생적 프로테아제에 의해 다이설파이드 루프 내의 단백분해 분할(proteolytic scission)에 의해서 절단된다(도 18). 절단은 다이설파이드 브릿지를 형성하는 2개의 시스테인 잔기 사이에 생성된 개별적인 이중-사슬 루프 영역 내에서 일어난다. 이러한 번역후 (posttranslational) 프로세싱은 두 사슬 사이의 단일 다이설파이드 결합 및 비-공유적 상호작용에 의해서 함께 결합되어 있는 대략 50 kDa의 경쇄(LC) 및 대략 100 kDa의 중쇄 (HC)를 포함하는 이중-사슬 분자를 제공한다(도 2). 변형 클로스트리듐 독소의 재조합 생성을 용이하게 하기 위하여, 외인성 프로테아제 절단 부위는 본 명세서에 개시된 변형 클로스트리듐 독소의 단일-사슬 폴리펩티드 형태를 이중-사슬 형태로 변환하는 데 사용될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Steward, L.E. et al., Modified Clostridial Toxins with Enhanced Targeting Capabilities For Endogenous Clostridial Toxin Receptor Systems, U.S. Patent Publication No. US 2008/0096248 (Apr. 24, 2008); Steward, L.E. et al., Activatable Clostridial Toxins, U.S. Patent Publication No. US 2008/0032930 (Feb. 7, 2008); Steward, supra, (2007); Dolly, supra, (2007); Foster, supra , WO 2006/059093 (2006); and Foster, supra, WO 2006/059105 (2006)]을 참조하며, 이들 각각은 본 명세서에 전체적으로 참고로 포함된다.
제한없이, 내인성 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위 및 외인성 프로테아제 절단 부위를 포함한, 임의의 및 모든 프로테아제 절단 부위가 클로스트리듐 독소의 단일-사슬 폴리펩티드 형태를 이중-사슬 형태로 변환하는 데 사용될 수 있는 것으로 생각된다. 따라서, 본 발명의 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소는, 일부분, 내인성 프로테아제 절단 부위를 이중-사슬 루프 영역 내에 포함한다. 본 발명의 다른 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소는, 일부분, 외인성 프로테아제 절단 부위를 이중-사슬 루프 영역 내에 포함한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어"이중-사슬 루프 영역"은 클로스트리듐 독소의 단일-사슬 형태를 이중-사슬 형태로 변환하는 데 사용되는 프로테아제 절단 부위를 포함하는 클로스트리듐 독소의 아미노산 서열을 의미한다. 클로스트리듐 독소 이중-사슬 루프 영역의 비-제한적인 예는, SEQ ID NO: 1의 아미노산 430-454을 포함하는 BoNT/A의 이중-사슬 루프 영역; SEQ ID NO: 2의 아미노산 437-446을 포함하는 BoNT/B의 이중-사슬 루프 영역; SEQ ID NO: 3의 아미노산 437-453을 포함하는 BoNT/C1의 이중-사슬 루프 영역; SEQ ID NO: 4의 아미노산 437-450을 포함하는 BoNT/D의 이중-사슬 루프 영역; SEQ ID NO: 5의 아미노산 412-426을 포함하는 BoNT/E의 이중-사슬 루프 영역; SEQ ID NO: 6의 아미노산 429-445을 포함하는 BoNT/F의 이중-사슬 루프 영역; SEQ ID NO: 7의 아미노산 436-450을 포함하는 BoNT/G의 이중-사슬 루프 영역; 및 SEQ ID NO: 8의 아미노산 439-467을 포함하는 TeNT의 이중-사슬 루프 영역 (표 2) 을 포함한다.
표 2. 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 영역
독소 SEQ ID NO : 경쇄
영역 		자연 발생적 프로테아제 절단 부위를 포함하는 이중-사슬 루프 영역 중쇄 영역
BoNT/A 11 NMNFTKLKNFTGLFEFYKLL CVRGIITSKTKSLDKGYNK*----ALNDLC IKVNNWDL
BoNT/B 12 KQAYEEISKEHLAVYKIQM CKSVK*-------------------APGIC IDVDNEDL
BoNT/C1 13 PALRKVNPENMLYLFTKF CHKAIDGRSLYNK*------------TLDC RELLVKNTDL
BoNT/D 14 PALQKLSSESVVDLFTKV CLRLTKNSR*---------------DDSTC IKVKNNRL
BoNT/E 15 PRIITPITGRGLVKKIIRF CKNIVSVKGIR*--------------KSIC IEINNGEL
BoNT/F 16 PKIIDSIPDKGLVEKIVKF CKSVIPRKGTK*------------APPRLC IRVNNSEL
BoNT/G 17 KEAYEEISLEHLVIYRIAM CKPVMYKNTGK*--------------SEQC IIVNNEDL
TeNT 18 TNAFRNVDGSGLVSKLIGL CKKIIPPTNIRENLYNRTA*SLTDLGGELC IKIKNEDL
BaNT 19 SRIVGPIPDNGLVERFVGL CKS-IVSKKGTK*------------NSLC IKVNNRDL
BuNT 20 PRIITPITGRGLVKKIIRF CKN-IVSVKGIR*--------------KSIC IEINNGEL
나타낸 아미노산 서열은 다음과 같다: BoNT/A, SEQ ID No: 1의 잔기 410-462; BoNT/B, SEQ ID No: 2의 잔기 418-454; BoNT/C1, SEQ ID No: 3의 잔기 419-463; BoNT/D, SEQ ID No: 4의 잔기 419-458; BoNT/E, SEQ ID No: 5의 잔기 393-434; BoNT/F, SEQ ID No: 6의 잔기 410-453; BoNT/G, SEQ ID No: 7의 잔기 419-458; TeNT, SEQ ID No: 8의 잔기 422-475; BaNT, SEQ ID No: 9의 잔기 402-443; 및 BuNT, SEQ ID No: 10의 잔기 393-434. 별표 (*)는 클로스트리듐 독소 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 결합을 나타낸다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "내인성 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위"는 "자연 발생적 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위"와 동의어이며, 자연 발생적 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 영역 내 에서 발견되는 자연 발생적 프로테아제 절단 부위를 의미하며, 제한없이, 자연 발생적 클로스트리듐 독소 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위 변이체, 예를 들어, 클로스트리듐 독소 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위 이소형 및 클로스트리듐 독소 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위 서브타입을 포함한다. 내인성 프로테아제 절단 부위의 비-제한적인 예는, 예를 들어, BoNT/A 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위, BoNT/B 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위, BoNT/C1 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위, BoNT/D 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위, BoNT/E 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위, BoNT/F 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위, BoNT/G 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위 및 TeNT 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위를 포함한다.
전술한 바와 같이, 클로스트리듐 독소는 대략 150 kDa의 단일-사슬 폴리펩티드로서 번역되며, 이후에 자연 발생적 프로테아제에 의해 다이설파이드 루프 내의 단백분해 분할에 의해서 절단된다. 이러한 번역후 프로세싱은 단일 다이설파이드 결합 및 비-공유적 상호작용에 의해서 함께 결합되어 있는 대략 50 kDa의 경쇄(LC) 및 대략 100 kDa의 중쇄 (HC)를 포함하는 이중-사슬 분자를 제공한다. 프로테아제의 정체는 현재 알려져 있지 않지만, 많은 클로스트리듐 독소에 대한 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위가 결정되었다. BoNT에서는, K448-A449에서의 절단이 BoNT/A의 단일 폴리펩티드 형태를 이중-사슬 형태로 변환시키고; K441-A442에서의 절단이 BoNT/B의 단일 폴리펩티드 형태를 이중-사슬 형태로 변환시키고; K449-T450에서의 절단이 BoNT/C1의 단일 폴리펩티드 형태를 이중-사슬 형태로 변환시키고; R445-D446에서의 절단이 BoNT/D의 단일 폴리펩티드 형태를 이중-사슬 형태로 변환시키고; R422-K423에서의 절단이 BoNT/E의 단일 폴리펩티드 형태를 이중-사슬 형태로 변환시키고; K439-A440에서의 절단이 BoNT/F의 단일 폴리펩티드 형태를 이중-사슬 형태로 변환시키고; K446-S447에서의 절단이 BoNT/G의 단일 폴리펩티드 형태를 이중-사슬 형태로 변환시킨다. A457-S458에서 TeNT의 단일 폴리펩티드 형태의 단백분해 절단은 이중-사슬 형태를 야기한다. K431-N432에서 BaNT의 단일 폴리펩티드 형태의 단백분해 절단은 이중-사슬 형태를 야기한다. R422-K423에서 BuNT의 단일 폴리펩티드 형태의 단백분해 절단은 이중-사슬 형태를 야기한다. 이러한 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위는 융합 단백질로서 변형 클로스트리듐 독소에 인-프레임(in-frame)으로 작동가능하게 연결된다(operably-linked). 그러나, 이중-사슬 루프 내의 추가적인 절단 부위가 또한 절단되어, 손실되는 작은 펩티드 단편의 발생을 야기하는 것으로 여겨진다는 것에 또한 주목하여야만 한다. 비-제한적인 예로서, BoNT/A 단일-사슬 폴리펩티드는 궁극적으로 절단되어 이중-사슬루프 내의 10개의 아미노산의 단편의 손실을 가져온다.
따라서, 실시 형태에서, 내인성 클로스트리듐 독소 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위를 포함한 프로테아제 절단 부위는 단일-사슬 독소를 이중-사슬 형태로 변환하는 데 사용된다. 본 실시 형태의 태양에서, 단백분해 절단에 의한 이중-사슬 형태로의 변환은, 예를 들어, BoNT/A 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위, BoNT/B 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위, BoNT/C1 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위, BoNT/D 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위, BoNT/E 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위, BoNT/F 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위, BoNT/G 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위, TeNT 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위, BaNT 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위, 또는 BuNT 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위를 포함하는 부위로부터 일어난다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, 단백분해 절단에 의한 이중-사슬 형태로의 변환은, 예를 들어, SEQ ID NO: 1의 아미노산 430-454를 포함하는 BoNT/A의 이중-사슬 루프 영역; SEQ ID NO: 2의 아미노산 437-446을 포함하는 BoNT/B의 이중-사슬 루프 영역; SEQ ID NO: 3의 아미노산 437-453을 포함하는 BoNT/C1의 이중-사슬 루프 영역; SEQ ID NO: 4의 아미노산 437-450을 포함하는 BoNT/D의 이중-사슬 루프 영역; SEQ ID NO: 5의 아미노산 412-426을 포함하는 BoNT/E의 이중-사슬 루프 영역; SEQ ID NO: 6의 아미노산 429-445를 포함하는 BoNT/F의 이중-사슬 루프 영역; SEQ ID NO: 7의 아미노산 436-450을 포함하는 BoNT/G의 이중-사슬 루프 영역; 또는 SEQ ID NO: 8의 아미노산 439-467을 포함하는 TeNT의 이중-사슬 루프 영역; SEQ ID NO: 9의 아미노산 421-435를 포함하는 BaNT의 이중-사슬 루프 영역; 또는 SEQ ID NO: 10의 아미노산 412-426을 포함하는 BuNT의 이중-사슬 루프 영역을 포함하는 부위로부터 일어난다.
외인성 프로테아제 절단 부위가 사용되어 본 명세서에 개시된 변형 클로스트리듐 독소의 단일-사슬 폴리펩티드 형태가 이중-사슬 형태로 변환되는 것으로 생각된다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "외인성 프로테아제 절단 부위"는 "비-자연 발생적 프로테아제 절단 부위" 또는 "비-천연(non-native) 프로테아제 절단 부위"와 동의어이며, 자연 발생적 클로스트리듐 독소로부터의 이중-사슬 루프 영역에는 정상적으로는 존재하지 않는 프로테아제 절단 부위를 의미하고, 단, 외인성 프로테아제 절단 부위는 사람 프로테아제 절단 부위 또는 본 명세서에 개시된 활성화가능한 폴리펩티드를 인코팅하는 구조를 발현하는 숙주 세포에서 발현되는 프로테아제에 대해 감수성(susceptible)인 프로테아제 절단 부위가 아니다. 임의의 및 모든 외인성 프로테아제 절단 부위가 클로스트리듐 독소의 단일-사슬 폴리펩티드 형태를 본 발명의 태양을 실시하는 데 유용한 이중-사슬 형태로 변환하는 데 사용될 수 있는 것으로 생각된다. 외인성 프로테아제 절단 부위의 비-제한적인 예는, 예를 들어, 식물 파파인(papain) 절단 부위, 곤충 파파인 절단 부위, 갑각류 파파인 절단 부위, 엔테로키아나제 절단 부위, 사람 리노바이러스 3C 프로테아제 절단 부위, 사람 엔테로바이러스 3C 프로테아제 절단 부위, 담배 식각 바이러스 (TEV) 프로테아제 절단 부위, 담배 엽맥 반점 바이러스(Tobacco Vein Mottling Virus; TVMV) 절단 부위, 서브틸리신(subtilisin) 절단 부위, 하이드록실아민 절단 부위, 또는 카스파아제 3 절단 부위를 포함한다.
임의의 및 모든 길이의 외인성 프로테아제 절단 부위가 본 발명의 태양에 유용할 수 있으며, 단, 외인성 프로테아제 절단 부위는 그의 각각의 프로테아제에 의해 절단될 수 있다. 따라서, 본 실시 형태의 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는 길이가, 예를 들어, 적어도 6개의 아미노산, 적어도 7 개의 아미노산, 적어도 8 개의 아미노산, 적어도 9 개의 아미노산, 적어도 10 개의 아미노산, 적어도 15 개의 아미노산, 적어도 20 개의 아미노산, 적어도 25 개의 아미노산, 적어도 30 개의 아미노산, 적어도 40 개의 아미노산, 적어도 50 개의 아미노산, 또는 적어도 60 개의 아미노산일 수 있다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는 길이가, 예를 들어, 최대 6 개의 아미노산, 최대 7 개의 아미노산, 최대 8 개의 아미노산, 최대 9 개의 아미노산, 최대 10 개의 아미노산, 최대 15 개의 아미노산, 최대 20 개의 아미노산, 최대 25 개의 아미노산, 최대 30 개의 아미노산, 최대 40 개의 아미노산, 최대 50 개의 아미노산, 또는 최대 60 개의 아미노산일 수 있다.
실시 형태에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치한다. 본 실시 형태의 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소는, 예를 들어, 식물 파파인 절단 부위, 곤충 파파인 절단 부위, 갑각류 파파인 절단 부위, 비-사람 엔테로키아나제 프로테아제 절단 부위, 담배 식각 바이러스 프로테아제 절단 부위, 담배 엽맥 반점 바이러스 프로테아제 절단 부위, 사람 리노바이러스 3C 프로테아제 절단 부위, 사람 엔테로바이러스 3C 프로테아제 절단 부위, 서브틸리신 절단 부위, 하이드록실 아민 절단 부위, SUMO/ULP-1 프로테아제 절단 부위, 및 비-사람 카스파아제 3 절단 부위를 포함하는 외인성 프로테아제 절단 부위를 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 변형 BoNT/A, 변형 BoNT/B, 변형 BoNT/C1, 변형 BoNT/D, 변형 BoNT/E, 변형 BoNT/F, 변형 BoNT/G, 변형 TeNT, 변형 BaNT, 또는 변형 BuNT의 이중-사슬 루프 내에 위치한다.
본 실시 형태의 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 비-사람 엔테로키나아제 절단 부위를 포함할 수 있다. 실시 형태의 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 소 엔테로키나아제 프로테아제 절단 부위를 포함할 수 있다. 실시 형태의 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, SEQ ID NO: 21를 포함하는 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 소 엔테로키나아제 프로테아제 절단 부위를 포함할 수 있다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 소 엔테로키나아제 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 변형 BoNT/A, 변형 BoNT/B, 변형 BoNT/C1, 변형 BoNT/D, 변형 BoNT/E, 변형 BoNT/F, 변형 BoNT/G, 변형 TeNT, 변형 BaNT, 또는 변형 BuNT의 이중-사슬 루프 내에 위치할 수 있다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 담배 식각 바이러스 프로테아제 절단 부위를 포함할 수 있다. 실시 형태의 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 공통 서열E-P5-P4-Y-P2-Q*-G (SEQ ID NO: 22) 또는 E-P5-P4-Y-P2-Q*-S (SEQ ID NO: 23) (여기서, P2, P4 및 P5는 임의의 아미노산일 수 있음)를 포함하는 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 담배 식각 바이러스 프로테아제 절단 부위를 포함할 수 있다. 실시 형태의 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32 또는 SEQ ID NO: 33를 포함하는 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 담배 식각 바이러스 프로테아제 절단 부위를 포함할 수 있다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 담배 식각 바이러스 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 변형 BoNT/A, 변형 BoNT/B, 변형 BoNT/C1, 변형 BoNT/D, 변형 BoNT/E, 변형 BoNT/F, 변형 BoNT/G, 변형 TeNT, 변형 BaNT, 또는 변형 BuNT의 이중-사슬 루프 내에 위치한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 담배 엽맥 반점 바이러스 프로테아제 절단 부위를 포함할 수 있다. 실시 형태의 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 공통 서열 P6-P5-V-R-F-Q*-G (SEQ ID NO: 113) 또는 P6-P5-V-R-F-Q*-S (SEQ ID NO: 114) (여기서, P5 및P6은 임의의 아미노산일 수 있음)을 포함하는 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 담배 엽맥 반점 바이러스 프로테아제 절단 부위를 포함할 수 있다. 실시 형태의 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, SEQ ID NO: 115, SEQ ID NO: 116, SEQ ID NO: 117, 또는 SEQ ID NO: 118를 포함하는 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 담배 엽맥 반점 바이러스 프로테아제 절단 부위를 포함할 수 있다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 담배 엽맥 반점 바이러스 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 변형 BoNT/A, 변형 BoNT/B, 변형 BoNT/C1, 변형 BoNT/D, 변형 BoNT/E, 변형 BoNT/F, 변형 BoNT/G, 변형 TeNT, 변형 BaNT, 또는 변형 BuNT의 이중-사슬 루프 내에 위치한다.
본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 사람 리노바이러스 3C 프로테아제 절단 부위를 포함할 수 있다. 실시 형태의 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 공통 서열 P5-P4-L-F-Q*-G-P (SEQ ID NO: 34) (여기서, P4는 G, A, V, L, I, M, S 또는 T이고 P5는 임의의 아미노산일 수 있되, D 또는 E가 선호됨)을 포함하는 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 사람 리노바이러스 3C 프로테아제 절단 부위를 포함할 수 있다. 실시 형태의 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 또는 SEQ ID NO: 40를 포함하는 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 사람 리노바이러스 3C 프로테아제 절단 부위를 포함할 수 있다. 실시 형태의 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 프리시션(PRESCISSION®)에 의해 절단될 수 있는 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 사람 리노바이러스 3C 프로테아제를 포함할 수 있다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 사람 리노바이러스 3C 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 변형 BoNT/A, 변형 BoNT/B, 변형 BoNT/C1, 변형 BoNT/D, 변형 BoNT/E, 변형 BoNT/F, 변형 BoNT/G, 변형 TeNT, 변형 BaNT, 또는 변형 BuNT의 이중-사슬 루프 내에 위치한다.
본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 서브틸리신 절단 부위를 포함할 수 있다. 실시 형태의 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 공통 서열 P6-P5-P4-P3-H*-Y (SEQ ID NO: 41) 또는 P6-P5-P4-P3-Y-H* (SEQ ID NO: 42), (여기서, P3, P4 및 P5 및 P6은 임의의 아미노산일 수 있음)을 포함하는 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 서브틸리신 절단 부위를 포함할 수 있다. 실시 형태의 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, 또는 SEQ ID NO: 45를 포함하는 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 서브틸리신 절단 부위를 포함할 수 있다. 실시 형태의 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 제네나아제(GENENASE®)에 의해 절단될 수 있는 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 서브틸리신 절단 부위를 포함할 수 있다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 서브틸리신 절단 부위는, 예를 들어, 변형 BoNT/A, 변형 BoNT/B, 변형 BoNT/C1, 변형 BoNT/D, 변형 BoNT/E, 변형 BoNT/F, 변형 BoNT/G, 변형 TeNT, 변형 BaNT, 또는 변형 BuNT의 이중-사슬 루프 내에 위치할 수 있다.
본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 하이드록실아민 절단 부위를 포함할 수 있다. 실시 형태의 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 다수의 다이펩티드 N*G를 포함하는 하이드록실아민 절단 부위를 포함할 수 있다. 실시 형태의 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, SEQ ID NO: 46, 또는 SEQ ID NO: 47를 포함하는 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 하이드록실아민 절단 부위를 포함할 수 있다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 하이드록실아민 절단 부위는, 예를 들어, 변형 BoNT/A, 변형 BoNT/B, 변형 BoNT/C1, 변형 BoNT/D, 변형 BoNT/E, 변형 BoNT/F, 변형 BoNT/G, 변형 TeNT, 변형 BaNT, 또는 변형 BuNT의 이중-사슬 루프 내에 위치한다.
본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 SUMO/ULP-1 프로테아제 절단 부위를 포함할 수 있다. 실시 형태의 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 공통 서열 G-G*-P1'P2'P3'(SEQ ID NO: 112) (여기서, P1' P2' 및 P3'는 임의의 아미노산일 수 있음)을 포함하는 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 SUMO/ULP-1 프로테아제 절단 부위를 포함할 수 있다. 실시 형태의 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, SEQ ID NO: 48를 포함하는 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 SUMO/ULP-1 프로테아제 절단 부위를 포함할 수 있다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, SUMO/ULP-1 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 변형 BoNT/A, 변형 BoNT/B, 변형 BoNT/C1, 변형 BoNT/D, 변형 BoNT/E, 변형 BoNT/F, 변형 BoNT/G, 변형 TeNT, 변형 BaNT, 또는 변형 BuNT의 이중-사슬 루프 내에 위치한다.
본 실시 형태의 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 비-사람 카스파아제 3 절단 부위를 포함할 수 있다. 실시 형태의 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 절단 부위 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 마우스 카스파아제 3 프로테아제를 포함할 수 있다. 실시 형태의 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 공통 서열 D-P3-P2-D*P1'(SEQ ID NO: 119) (여기서, P3는 임의의 아미노산일 수 있되, E가 선호되고, P2는 임의의 아미노산일 수 있으며 P1'은 임의의 아미노산일 수 있되, G 또는 S가 선호됨)을 포함하는 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 비-사람 카스파아제 3 프로테아제 절단 부위를 포함할 수 있다. 실시 형태의 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, SEQ ID NO: 120, SEQ ID NO: 121, SEQ ID NO: 122, SEQ ID NO: 123, SEQ ID NO: 124, 또는 SEQ ID NO: 125를 포함하는 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 비-사람 카스파아제 3 프로테아제 절단 부위를 포함할 수 있다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 소 엔테로키나아제 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 변형 BoNT/A, 변형 BoNT/B, 변형 BoNT/C1, 변형 BoNT/D, 변형 BoNT/E, 변형 BoNT/F, 변형 BoNT/G, 변형 TeNT, 변형 BaNT, 또는 변형 BuNT의 이중-사슬 루프 내에 위치한다.
외인성 프로테아제 절단 부위를 위해 이중-사슬 루프 영역을 변형하여 자연 발생적 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위를 대신한다. 이러한 변형에서, 자연 발생적 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위는 작동불가능하게(inoperable)되므로 그의 프로테아제에 의해 절단될 수 없다. 오직 외인성 프로테아제 절단 부위만이 그의 상응하는 외인성 프로테아제에 의해 절단될 수 있다. 이러한 유형의 변형에서, 외인성 프로테아제 부위는 융합 단백질로서 변형 클로스트리듐 독소에 인-프레임으로 작동가능하게 연결되고, 부위는 그의 각각의 외인성 프로테아제에 의해 절단될 수 있다. 내인성 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위를 외인성 프로테아제 절단 부위로 대체하는 것은 부위를 치환하는 것일 수 있으며, 여기서, 외인성 부위는 내인성 부위의 절단 부위 위치에 가까운 곳에서 조작된다(engineered). 내인성 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위를 외인성 프로테아제 절단 부위로 치환하는 것은 외인성 부위를 추가하는 것일 수 있으며, 여기서, 외인성 부위는 내인성 부위의 절단 부위 위치와 상이한 곳에서 조작되며, 내인성 부위는 작동불가능하게 되도록 조작된다. 프로테아제 절단 부위의 위치 및 종류가 중요할 수 있으며, 소정의 결합 도메인은 유리 아미노-말단 또는 카르복시-말단 아미노산을 필요로 하기 때문이다. 예를 들어, 오피오이드 펩티드 결합 도메인이 두 가지 다른 도메인 사이에 위치한다, 예를 들어, 도 4 참조, 프로테아제 절단 부위의 선택 기준은 부위를 절단하는 프로테아제가 플러시 컷(flush cut)을 남겨서, 수용체에 대한 결합 도메인의 선택적인 결합에 필요한 결합 도메인의 유리 아미노-말단 또는 카르복실-말단을 노출시키는 지의 여부일 수 있다.
자연 발생적 이중-사슬 루프 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 결합 옆에 있는 적어도 2개의 아미노산을 변경하여 자연 발생적 프로테아제 절단 부위를 작동불가능하게 만들 수 있다. 더욱 확장된 변경이 이루어질 수 있되, 단, 이중-사슬 루프 영역의 2개의 시스테인 잔기는 그대로 남아있어 영역은 여전히 다이설파이드 브릿지를 형성할 수 있다. 아미노산 변경의 비-제한적인 예는 아미노산을 제거하는 것 또는 원래의 아미노산을 상이한 아미노산으로 치환하는 것을 포함한다. 따라서, 일 실시 형태에서, 자연 발생적 프로테아제 절단 부위는 자연 발생적 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 결합의 옆에 있는 2개의 아미노산을 변경함으로써 작동불가능하게 만든다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 자연 발생적 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 자연 발생적 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 결합 옆에 있는 2개의 아미노산을 포함하는 적어도 3개의 아미노산; 자연 발생적 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 결합 옆에 있는 2개의 아미노산을 포함하는 적어도 4개의 아미노산; 자연 발생적 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 결합 옆에 있는 2개의 아미노산을 포함하는 적어도 5개의아미노산; 자연 발생적 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 결합 옆에 있는 2개의 아미노산을 포함하는 적어도 6개의 아미노산; 자연 발생적 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 결합 옆에 있는 2개의 아미노산을 포함하는 적어도 7개의 아미노산; 자연 발생적 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 결합 옆에 있는 2개의 아미노산을 포함하는 적어도 8개의 아미노산; 자연 발생적 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 결합 옆에 있는 2개의 아미노산을 포함하는 적어도 9개의 아미노산; 자연 발생적 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 결합 옆에 있는 2개의 아미노산을 포함하는 적어도 10개의 아미노산; 자연 발생적 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 결합 옆에 있는 2개의 아미노산을 포함하는 적어도 15개의 아미노산; 또는 자연 발생적 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 결합 옆에 있는 2개의 아미노산을 포함하는 적어도 20개의 아미노산을 변경하여 작동불가능하게 만든다.
본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 자연 발생적 이중-사슬 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 자연 발생적 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 결합 옆에 있는 2개의 아미노산을 포함하는 최대 3개의 아미노산; 자연 발생적 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 결합 옆에 있는 2개의 아미노산을 포함하는 최대 4개의 아미노산; 자연 발생적 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 결합 옆에 있는 2개의 아미노산을 포함하는 최대 5개의 아미노산; 자연 발생적 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 결합 옆에 있는 2개의 아미노산을 포함하는 최대 6개의 아미노산; 자연 발생적 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 결합 옆에 있는 2개의 아미노산을 포함하는 최대 7개의 아미노산; 자연 발생적 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 결합 옆에 있는 2개의 아미노산을 포함하는 최대 8개의 아미노산; 자연 발생적 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 결합 옆에 있는 2개의 아미노산을 포함하는 최대 9개의 아미노산; 자연 발생적 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 결합 옆에 있는 2개의 아미노산을 포함하는 최대 10개의 아미노산; 자연 발생적 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 결합 옆에 있는 2개의 아미노산을 포함하는 최대 15개의 아미노산; 또는 자연 발생적 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 결합 옆에 있는 2개의 아미노산을 포함하는 최대 20개의 아미노산을 변경하여 작동불가능하게 만든다.
본 발명에 개시된 변형 클로스트리듐 독소는 선택적으로 유연성 스페이서(flexible spacer)를 포함하는 유연성 영역을 추가로 포함할 수 있다. 유연성 스페이서를 포함하는 유연성 영역은 폴리펩티드의 특성, 속성 또는 성질을 최적화하도록 폴리펩티드 영역의 길이를 조절하는 데 사용될 수 있다. 비-제한적인 예로서, 1개 이상의 유연성 스페이서를 나란히(in tandem) 포함하는 폴리펩티드 영역을 사용하여 프로테아제 절단 부위을 더욱 잘 노출시켜 프로테아제에 의한 부위의 절단을 용이하게 할 수 있다. 다른 비-제한적인 예로서, 1개 이상의 유연성 스페이서를 나란히 포함하는 폴리펩티드 영역을 사용하여 오피오이드 펩티드 결합 도메인을 더욱 잘 제공함으로써, 수용체에 대한 그 결합 도메인의 결합을 용이하게 할 수 있다.
펩티드를 포함하는 유연성 스페이서는 길이가 적어도 1개의 아미노산이며 작은 측쇄 R 기를 갖는 비-하전된 아미노산으로, 예를 들어, 글리신, 알라닌, 발린, 류신, 또는 세린이다. 따라서, 실시 형태에서, 유연성 스페이서는 길이가, 예를 들어, 적어도 1개의 아미노산, 적어도 2 개의 아미노산, 적어도 3 개의 아미노산, 적어도 4 개의 아미노산, 적어도 5 개의 아미노산, 적어도 6 개의 아미노산, 적어도 7 개의 아미노산, 적어도 8 개의 아미노산, 적어도 9 개의 아미노산, 또는 적어도 10 개의 아미노산일 수 있다. 다른 실시 형태에서, 유연성 스페이서는 길이가, 예를 들어, 최대 1 개의 아미노산, 최대 2 개의 아미노산, 최대 3 개의 아미노산, 최대 4 개의 아미노산, 최대 5 개의 아미노산, 최대 6 개의 아미노산, 최대 7 개의 아미노산, 최대 8 개의 아미노산, 최대 9 개의 아미노산, 또는 최대 10 개의 아미노산일 수 있다. 여전히 다른 실시 형태에서, 유연성 스페이서는, 예를 들어, 1 내지 3 개의 아미노산, 2 내지 4 개의 아미노산, 3 내지 5 개의 아미노산, 4 내지 6 개의 아미노산, 또는 5 내지 7 아미노산일 수 있다. 유연성 스페이서의 비-제한적인 예는, 예를 들어, GGG, GGGG (SEQ ID NO: 49), 및 GGGGS (SEQ ID NO: 50)와 같은 G-스페이서 또는 AAA, AAAA (SEQ ID NO: 51) 및 AAAAV (SEQ ID NO: 111)와 같은 A-스페이서를 포함한다. 이러한 유연성 영역은 융합 단백질로서 변형 클로스트리듐 독소에 인-프레임으로 작동가능하게-연결된다.
따라서, 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 변형 클로스트리듐 독소는 유연성 스페이서를 포함하는 유연성 영역을 추가로 포함할 수 있다. 다른 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 변형 클로스트리듐 독소는다수의 유연성 스페이서를 나란히 포함하는 유연성 영역을 추가로 포함할 수 있다. 본 실시 형태의 태양에서, 유연성 영역은 나란히, 예를 들어, 적어도 1개의 G-스페이서, 적어도 2 개의 G-스페이서, 적어도 3 개의 G-스페이서, 적어도 4 개의 G-스페이서 또는 적어도 5 개의 G-스페이서를 포함할 수 있다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 유연성 영역은 나란히, 예를 들어, 최대 1 개의 G-스페이서, 최대 2 개의 G-스페이서, 최대 3 개의 G-스페이서, 최대 4 개의 G-스페이서 또는 최대 5 개의 G-스페이서를 포함할 수 있다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 유연성 영역은 나란히, 예를 들어, 적어도 1 개의 A-스페이서, 적어도 2 개의 A-스페이서, 적어도 3 개의 A-스페이서, 적어도 4 개의 A-스페이서 또는 적어도 5 개의 A-스페이서를 포함할 수 있다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 유연성 영역은 나란히, 예를 들어, 최대 1 개의 A-스페이서, 최대 2 개의 A-스페이서, 최대 3 개의 A-스페이서, 최대 4 개의 A-스페이서 또는 최대 5 개의 A-스페이서를 포함할 수 있다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소는 동일한 유연성 스페이서의 1개 이상의 카피, 상이한 유연성 스페이서의 1개 이상의, 또는 이들의 임의의 조합. 를 포함하는 유연성 영역을 포함할 수 있다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, 유연성 스페이서를 포함하는 변형 클로스트리듐 독소는, 예를 들어, 변형 BoNT/A, 변형 BoNT/B, 변형 BoNT/C1, 변형 BoNT/D, 변형 BoNT/E, 변형 BoNT/F, 변형 BoNT/G, 변형 TeNT, 변형 BaNT, 또는 변형 BuNT일 수 있다.
본 명세서에 개시된 변형 클로스트리듐 독소는, 변형 클로스트리듐 독소가 중독 프로세스를 실행할 수 있다는 조건부로, 유연성 스페이서를 임의의 및 모든 위치에 포함할 수 있는 것으로 생각된다. 본 실시 형태의 태양에서, 유연성 스페이서는, 예를 들어, 효소 도메인과 전위 도메인, 효소 도메인과 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 효소 도메인과 외인성 프로테아제 절단 부위 사이에 위치한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, G-스페이서는, 예를 들어, 효소 도메인과 전위 도메인, 효소 도메인과 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 효소 도메인과 외인성 프로테아제 절단 부위 사이에 위치한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, A-스페이서는, 예를 들어, 효소 도메인과 전위 도메인, 효소 도메인과 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 효소 도메인과 외인성 프로테아제 절단 부위 사이에 위치한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, 유연성 스페이서는, 예를 들어, 오피오이드 펩티드 결합 도메인과 전위 도메인, 오피오이드 펩티드 결합 도메인과 효소 도메인, 오피오이드 펩티드 결합 도메인과 외인성 프로테아제 절단 부위 사이에 위치한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, G-스페이서는, 예를 들어, 오피오이드 펩티드 결합 도메인과 전위 도메인, 오피오이드 펩티드 결합 도메인과 효소 도메인, 오피오이드 펩티드 결합 도메인과 외인성 프로테아제 절단 부위 사이에 위치한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, A-스페이서는, 예를 들어, 오피오이드 펩티드 결합 도메인과 전위 도메인, 오피오이드 펩티드 결합 도메인과 효소 도메인, 오피오이드 펩티드 결합 도메인과 외인성 프로테아제 절단 부위 사이에 위치한다.
본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 유연성 스페이서는, 예를 들어, 전위 도메인과 효소 도메인, 전위 도메인과 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 전위 도메인과 외인성 프로테아제 절단 부위 사이에 위치한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, G-스페이서는, 예를 들어, 전위 도메인과 효소 도메인, 전위 도메인과 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 전위 도메인과 외인성 프로테아제 절단 부위 사이에 위치한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, A-스페이서는, 예를 들어, 전위 도메인과 효소 도메인, 전위 도메인과 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 전위 도메인과 외인성 프로테아제 절단 부위 사이에 위치한다.
본 명세서에 개시된 변형 클로스트리듐 독소는 변형 클로스트리듐 독소가 중독 프로세스를 실행할 수 있다는 조건부로, 오피오이드 펩티드 결합 도메인을 임의의 및 모든 위치에 포함할 수 있는 것으로 생각된다. 비-제한적인 예는, 오피오이드 펩티드 결합 도메인을 변형 클로스트리듐 독소의 아미노 말단에 위치시키는 것; 오피오이드 펩티드 결합 도메인을 변형 클로스트리듐 독소의 클로스트리듐 독소 효소 도메인과 전위 도메인 사이에 위치시키는 것; 및 오피오이드 펩티드 결합 도메인을 변형 클로스트리듐 독소의 카르복실 말단에 위치시키는 것을 포함한다. 다른 비-제한적인 예에는, 오피오이드 펩티드 결합 도메인을 변형 클로스트리듐 독소의 클로스트리듐 독소 효소 도메인과 클로스트리듐 독소 전위 도메인 사이에 위치시키는 것이 포함된다. 자연 발생적 클로스트리듐 독소의 효소 도메인은 천연 개시 메티오닌(native start methionine)을 포함한다. 따라서, 효소 도메인이 아미노 말단 위치에 있지 않은 도메인 구조에서, 개시 메티오닌을 포함하는 아미노산 서열은 아미노-말단 도메인의 앞에 위치하여야 한다. 마찬가지로, 오피오이드 펩티드 결합 도메인이 아미노-말단 위치에 있는 경우, 오피오이드 펩티드 결합 도메인이 유리 아미노 말단을 필요로 하는 상황에서 개시 메티오닌 및 프로테아제 절단 부위를 포함하는 아미노산 서열은 작동가능하게-연결될 수 있다, 예를 들어, 문헌 [Shengwen Li et al., Degradable Clostridial Toxins, U.S. Patent Application 11/572,512 (Jan. 23, 2007)]을 참조하며, 이는 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다. 또한, 개시 메티오닌을 포함하는 다른 폴리펩티드의 아미노 말단에 작동가능하게-연결된 폴리펩티드가 추가되는 경우, 원래의 메티오닌 잔기가 제거될 수 있음이 본 기술 분야에 알려져 있다.
따라서, 실시 형태에서, 변형 클로스트리듐 독소는 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 전위 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위 및 효소 도메인을 포함하는 아미노 내지 카르복실 단일 폴리펩티드 선형 오더(linear order)를 포함할 수 있다 (도 3A). 본 실시 형태의 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소는 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 포함하는 아미노 내지 카르복실 단일 폴리펩티드 선형 오더를 포함할 수 있다.
다른 실시 형태에서, 변형 클로스트리듐 독소는 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 효소 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 및 전위 도메인을 포함하는 아미노 내지 카르복실 단일 폴리펩티드 선형 오더를 포함할 수 있다 (도 3B). 본 실시 형태의 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소는 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 클로스트리듐 독소 전위 도메인을 포함하는 아미노 내지 카르복실 단일 폴리펩티드 선형 오더를 포함할 수 있다.
또 다른 실시 형태에서, 변형 클로스트리듐 독소는 효소 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 및 전위 도메인을 포함하는 아미노 내지 카르복실 단일 폴리펩티드 선형 오더를 포함할 수 있다 (도 4A). 본 실시 형태의 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소는 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 및 클로스트리듐 독소 전위 도메인을 포함하는 아미노 내지 카르복실 단일 폴리펩티드 선형 오더를 포함할 수 있다.
또 다른 실시 형태에서, 변형 클로스트리듐 독소는 전위 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 및 효소 도메인을 포함하는 아미노 내지 카르복실 단일 폴리펩티드 선형 오더를 포함할 수 있다 (도 4B). 본 실시 형태의 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소는 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 포함하는 아미노 내지 카르복실 단일 폴리펩티드 선형 오더를 포함할 수 있다.
다른 실시 형태에서, 변형 클로스트리듐 독소는 효소 도메인, 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 및 전위 도메인을 포함하는 아미노 내지 카르복실 단일 폴리펩티드 선형 오더를 포함할 수 있다 (도 4C). 본 실시 형태의 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소는 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 클로스트리듐 독소 전위 도메인을 포함하는 아미노 내지 카르복실 단일 폴리펩티드 선형 오더를 포함할 수 있다.
또 다른 실시 형태에서, 변형 클로스트리듐 독소는 전위 도메인, 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위 및 효소 도메인 (도 4D)을 포함하는 아미노 내지 카르복실 단일 폴리펩티드 선형 오더를 포함할 수 있다. 본 실시 형태의 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소는 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 포함하는 아미노 내지 카르복실 단일 폴리펩티드 선형 오더를 포함할 수 있다.
또 다른 실시 형태에서, 변형 클로스트리듐 독소는 효소 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 전위 도메인, 및 오피오이드 펩티드 결합을 포함하는 아미노 내지 카르복실 단일 폴리펩티드 선형 오더를 포함할 수 있다 (도 5A). 본 실시 형태의 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소는 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 및 오피오이드 펩티드 결합 도메인을 포함하는 아미노 내지 카르복실 단일 폴리펩티드 선형 오더를 포함할 수 있다.
또 다른 실시 형태에서, 변형 클로스트리듐 독소는 전위 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 효소 도메인 및 오피오이드 펩티드 결합 도메인을 포함하는 아미노 내지 카르복실 단일 폴리펩티드 선형 오더를 포함할 수 있다 (도 5B). 본 실시 형태의 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소는 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 포함하는 아미노 내지 카르복실 단일 폴리펩티드 선형 오더를 포함할 수 있다.
본 발명에 유용한 조성물은 일반적으로 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 약학적으로 허용가능한 조성물로서 투여된다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "약학적으로 허용가능한"은 개체에 투여시 유해한, 알러지성 또는 다른 바람직하지 않거나 원치않는 반응을 제공하지 않는 임의의 분자 실체(entity) 또는 조성물을 의미한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "약학적으로 허용가능한 조성물"은 "약학적 조성물"과 동의어이며 치료적으로 유효한 농도의 활성 성분, 예를 들어, 본 명세서에 개시된 임의의 변형 클로스트리듐 독소를 의미한다. 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 약학적 조성물은 의학 및 수의학 응용에 유용하다. 약학적 조성물은 환자에 단독으로, 또는 다른 보충 활성 성분, 제제, 약물 또는 호르몬과 조합하여 투여될 수 있다. 약학적 조성물은, 제한없이, 종래의 혼합, 용해, 과립화, 드래지-제조 (dragee-making), 레비게이팅(levigating), 에멀젼화, 캡슐화, 인트랩핑(entrapping) 및 동결건조를 포함하는 임의의 다양한 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 약학적 조성물은 제한없이, 멸균 용액, 현탁액, 에멀젼, 동결건조물, 정제, 환제(pill), 펠렛, 캡슐, 분말, 시럽, 엘릭서(elixir) 또는 투여에 적합한 임의의 다른 투여 형태를 포함하는 임의의 다양한 형태를 취할 수 있다.
본 발명의 태양은, 일부분, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 제공한다. 조성물은 신경성 염증과 관련된 증상을 방지 또는 감소시킨다는 조건부로, 임의의 본 명세서에 개시된 조성물이 이를 필요로하는 포유류에서 신경성 염증을 치료하는 방법에 유용할 수 있을 것으로 생각된다. 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 비-제한적인 예는 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 포함하는 변형 클로스트리듐 독소를 포함한다. 예를 들어, 문헌 [Steward, supra, (2007); Dolly, supra, (2007); Foster, supra , WO 2006/059093 (2006); Foster, supra, WO 2006/059105 (Jun. 8, 2006)]에 개시된 것들을 포함하는, 임의의 본 명세서에 개시된 변형 클로스트리듐 독소를 사용할 수 있는 것으로 생각된다. 2개 이상의 상이한 변형 클로스트리듐 독소가 별도의 조성물로서 또는 단일 조성물의 일부로서 제공될 수 있는 것으로 또한 이해된다.
변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 약학적 조성물은 약학적으로 허용가능한 조성물로의 활성 성분의 프로세싱을 용이하게 하는 약학적으로 허용가능한 캐리어를 선택적으로 포함할 수 있다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "약학적으로 허용가능한 캐리어"는 "약학적 캐리어"와 동의어이며, 투여시 장기간 또는 영구적인 유해한 효과를 실질적으로 갖지 않는 임의의 캐리어를 의미하며, "약학적으로 허용가능한 비히클, 안정제, 희석제, 첨가제, 보조제 또는 부형제"와 같은 용어를 망라한다. 이러한 캐리어는 일반적으로 활성 화합물과 혼합되거나, 또는 활성 화합물을 희석 또는 봉입(enclose)하는 데 허용되며 고체, 반고체, 또는 액체 제제일 수 있다. 활성 성분은 요구되는 캐리어 또는 희석제에 용해성일 수 있거나 또는 현탁액으로서 송달될 수 있는 것으로 이해된다. 제한없이, 수성 매질, 예를 들어, 물, 염수, 글리신, 히알루론산 등; 고체 캐리어 예를 들어, 만니톨, 락토오스, 전분, 마그네슘 스테아레이트, 소듐 사카린, 탤컴(talcum), 셀룰로오스, 글루코오스, 수크로오스, 마그네슘 카르보네이트 등; 용매; 분산 매질; 코팅; 항균제 및 항진균제; 등장제 및 흡수 지연제; 또는 임의의 다른 불활성 성분을 포함하는 임의의 다양한 약학적으로 허용가능한 캐리어가 사용될수 있다. 약학적으로 허용가능한 캐리어의 선택은 투여 방식에 따라 좌우될 수 있다. 임의의 약학적으로 허용가능한 담체가 활성 성분과 상용성이 없는 경우를 제외하고는, 약학적으로 허용가능한 조성물 중에 이를 사용하는 것이 고려된다. 이러한 약학적 담체의 특정 사용의 비-제한적인 예는 문헌 [Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems (Howard C. Ansel et al., eds., Lippincott Williams & Wilkins Publishers, 7th ed. 1999); Remington: The Science and Practice of Pharmacy (Alfonso R. Gennaro ed., Lippincott, Williams & Wilkins, 20th ed. 2000); Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics (Joel G. Hardman et al., eds., McGraw-Hill Professional, 10th ed. 2001); 및 Handbook of Pharmaceutical Excipients (Raymond C. Rowe et al., APhA Publications, 4th edition 2003)]에서 찾을 수 있다. 이러한 프로토콜은 일상적인 절차이며 본 명세서의 교시로부터 당업자가 결정할 수 있는 범주에 속한다.
본 명세서에 개시된 약학적 조성물은, 제한없이, 완충제, 방부제, 장성 조절제(tonicity adjuster), 염, 산화방지제, 삼투압 조절제, 생리학적 물질, 약학적 물질, 벌크제(bulking agent), 유화제, 습윤제, 감미제 또는 향미제 등을 포함하는 다른 약학적으로 허용가능한 성분 (또는 약학적 성분)을 선택적으로, 제한없이, 포함할 수 있는 것으로 또한 생각된다. 얻어지는 제제가 약학적으로 허용가능하다면, 다양한 완충제 및 pH 조절 수단이 본 명세서의 약학적 조성물을 제조하는 데 사용될 수 있다. 이러한 완충제는, 제한없이, 아세테이트 완충제, 시트레이트 완충제, 포스페이트 완충제, 중성 완충된 염수, 포스페이트 완충된 염수 및 보레이트 완충제를 포함한다. 필요하다면 산 또는 염기가 조성물의 pH를 조절하는 데 사용될 수 있는 것으로 이해된다. 약학적으로 허용가능한 산화방지제는, 제한없이, 소듐 메타바이설파이트, 소듐 티오설페이트, 아세틸시스테인, 부틸화 하이드록시아니솔 및 부틸화 하이드록시톨루엔을 포함한다. 유용한 방부제는, 제한없이, 벤즈알코늄 클로라이드, 클로로부탄올, 티메로살, 페닐수은 아세테이트, 페닐수은 니트레이트, 안정화된 옥시 클로로 조성물, 예를 들어, 퓨라이트(PURITE®) 및 킬란트(chelant), 예를 들어, DTPA 또는 DTPA-비스아미드, 칼슘 DTPA, 및 CaNaDTPA-비스아미드를 포함한다. 약학적 조성물에 유용한 장성 조절제는, 제한없이, 염, 예를 들어, 염화나트륨, 염화칼륨, 만니톨 또는 글리세린 및 다른 약학적으로 허용가능한 장성 조절제를 포함한다. 약학적 조성물은 염으로서 제공될 수 있으며 염산, 황산, 아세트산, 락트산, 타르타르산, 말산, 석신산 등을 포함하나 이로 한정되지 않는 다수의 산을 사용하여 형성될 수 있다. 염은 상응하는 유리 염기 형태보다 수성 또는 다른 양성자성 용매 중에서 더욱 안정한 경향이 있다. 약학 기술 분야에 알려진 이러한 및 다른 물질이 본 발명에 유용한 약학적 조성물에 포함될 수 있는 것으로 이해된다.
실시 형태에서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 약학적 조성물이다. 본 실시 형태의 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 약학적 조성물은 약학적 캐리어, 약학적 성분, 또는 약학적 캐리어와 약학적 성분 둘 모두를 추가로 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 약학적 조성물는 적어도 하나의 약학적 캐리어, 적어도 하나의 약학적 성분, 또는 적어도 하나의 약학적 캐리어와 적어도 하나의 약학적 성분을 추가로 포함한다.
염증은 유해 자극에 대한 급성 조질 반응(부종, 홍반 등)을 말한다. 신경성 염증은 이러한 조직 반응이 개시되고/개시되거나 말초 감각 신경 말단으로부터의 염증 매개체의 방출을 통해 유지되는 것을 말한다 (즉, 이러한 신경에 있어서 척수로의 정상적인 구심성 신호와 대조적으로, 원심성 기능).
본 발명의 태양은, 일부분, 만성 신경성 염증에 제공된다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "만성 신경성 염증"은 병리생리학 효과를 갖는 염증성 반응을 의미하며, 여기서, 처치되는 적어도 하나의 근본적인 증상은 침해수용성(nociceptive) 감각 신경-기반 병인, 예를 들어, 염증 유도 분자의 방출로 인한 것이다. 만성 신경성 염증은 일차성 신경성 염증 및 이차성 신경성 염증 둘 모두를 포함한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "일차성" 신경성 염증은 일차 감각 신경 말단(예를 들어, C 및 A-델타 섬유)으로부터의 물질의 방출에 의해 개시되는, 또는 그로부터 야기되는 조직 염증(염증 증상)을 말한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "이차성" 신경성 염증은 감각 신경 말단을 자극하고 신경으로부터 염증 매개체의 방출을 야기하는 염증 매개체, 예를 들어, 펩티드 또는 시토킨의 비-뉴런성 소스(non-neuronal source)(예를 들어, 예를 들어, 비만 세포 또는 면역 세포로부터, 혈관 베드로부터의 삼출 또는 간질(interstitium)-유래 조직)에 의해 개시되는 조직 염증을 말한다. 이러한 신경-유래 염증 매개체는, 한편으로, 감각 신경을 자극할 뿐만 아니라 비-뉴런성 표적 (예를 들어, 비만 세포) 에 작용한다. 신경성 염증의 두 가지 형태(일차성 및 이차성) 모두의 순 효과는 말초 감각 신경 섬유의 감작에 의해 유지되는 염증 상태를 갖는 것이다. 생성된 신경성 염증의 생리학적 결과는 예를 들어, 피부 통증 (이질통(allodynia), 통각과민증(hyperalgesia)), 관절염, 내장통 및 내장 질환, 폐부전 (천식, COPD), 및 방광 부전 (통증, 과민성 방광)을 생성하는 문제의 조직에 따라 좌우된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "염증 유도 분자"는 염증 반응을 자극하는 어떠한 방식으로 감각 뉴런에 의해 방출되는 임의의 분자를 의미한다. 염증 유도 분자의 비-제한적인 예는, 제한없이, 물질 P (SP) 및 칼시토닌 유전자-관련 펩티드 (CGRP)와 같은 뉴로펩티드, 프로스타글란딘, 및 글루타메이트와 같은 아미노산을 포함한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "염증 매개 분자"는 감각 뉴런 말단을 직접 자극하여 염증 유도 분자를 방출함으로써 신경성 염증에 영향을 주는 임의의 분자를 의미한다. 염증 매개 분자를 위한 수용체가 감각 뉴런에서 발현되는 경우에 분자는 감각 뉴런에 대해 직접적인 자극 효과를 갖는다. 염증 매개 분자의 비-제한적인 예는, 제한없이, 히스타민, 브래디키닌, ATP, 아세틸콜린, 세로토닌, 산화질소, 류코트리엔, 시토킨, 케모킨(chemokine), 에이코사노이드, 및 효소, 예를 들어, 중성 프로테아제, 트립타아제, 및 리소자임을 포함한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "염증 감작 분자(inflammation sensitizing molecule)"은 감각 신경 말단을 감작하여 소정 자극에 의한 염증 유도 분자의 방출을 증가시킴으로써 신경성 염증에 영향을 주는 임의의 분자를 의미한다. 염증 감작 분자의 비-제한적인 예는, 제한없이, 프로스타글란딘, ATP, 브래디키닌, 인터류킨 -1β, 인터류킨-6, 종양 괴사 인자- α, 신경 성장 인자, 세로토닌, 및 산화질소를 포함한다.
만성 신경성 염증 증상은, 제한없이, 부종, 충혈, 홍반, 멍(bruising), 압통(tenderness), 단단함(stiffness), 부기(swollenness), 열, 한기(chill), 코막힘(stuffy nose), 머리의 무거움(stuffy head), 호흡 문제, 체액 저류(fluid retention), 혈전(blood clot), 식욕부진, 심박 증가, 육아종 형성, 섬유소(fibrinous), 고름, 비-점성 장액, 또는 궤양 및 통증을 포함한다. 만성 신경성 염증과 관련된 실제 증상이 잘 알려져 있으며, 제한없이, 신경성 염증의 위치, 신경성 염증의 원인, 신경성 염증의 위중도, 영향을 받는 조직 또는 기관, 및 관련 질환을 포함하는 인자들을 고려하여 당업자에 의해서 결정될 수 있다.
만성 신경성 염증 증상은 다양한 사람의 질환을 기반으로 하는 질환의 큰, 무관한 그룹과 관련될 수 있다. 증상으로서 만성 신경성 염증을 나타내는 질환의 비-제한적인 예는, 제한없이, 여드름(acne), 산 역류/속쓰림(acid reflux/heartburn), 알츠하이머병(Alzheimer's disease), 충수염(appendicitis), 동맥염(arteritis), 관절염, 천식. 죽상동맥경화증, 자가면역 질환, 귀두염, 안검염, 세기관지염, 기관지염, 활액낭염(bursitis), 암, 심장염, 셀리악 병(celiac disease), 소포염(cellulitis), 자궁경관염(cervicitis), 담관염, 담낭염, 융모양막염(chorioamnionitis), 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD), 간경변, 대장염, 결막염, 방광염, 일반 감기, 누선염, 치매, 피부염, 피부근염, 폐기종, 뇌염, 심내막염, 자궁내막염, 장염, 소장결장염, 상과염(epicondylitis), 부고환염, 근막염, 섬유조직염(fibrositis), 위염, 위장염, 치은염, 사구체신염, 설염, 심장 질환, 간염, 화농성 한선염(hidradenitis suppurativa), 고혈압, 회장염, 염증성 신경병증, 인슐린 저항성, 간질성 방광염, 홍채염, 허혈성 심장 질환, 각막염, 각결막염, 후두염, 유방염, 유양돌기염(mastoiditis), 수막염, 대사 증후군(증후군 X), 편두통, 척수염, 심근염, 근염, 신장염, 비만, 제대염(omphalitis), 난소염, 고환염, 골연골염, 골감소증(osteopenia), 골다공증, 골염, 이염, 췌장염, 파킨슨 병(Parkinson's disease), 이하선염, 골반 염증 질환, 심낭염, 복막염, 인두염, 정맥염, 늑막염, 간질성 폐렴(pneumonitis), 직장염(proctitis), 전립선염, 치수염(pulpitis), 신우신염, 문맥염(pylephlebitis), 류마티즘 열, 비염, 난관염, 타액선염, 부비강염, 경직 대장(spastic colon), 구내염, 활막염(synovitis), 건염, 건병증(tendinosis), 건초염, 혈전정맥염(thrombophlebitis), 편도선염, 삼각부염(trigonitis), 종양, 요도염, 포도막염, 질염, 혈관염, 및 외음염(vulvitis)을 포함한다. 또한, 문헌[Eric R. First, Application of Botulinum Toxin to the Management of Neurogenic Inflammatory Disorders, U.S. Patent 6,063,768]을 참조하며, 이는 본 명세서에 전체적으로 참고로 포함된다.
만성 신경성 염증의 증상을 나타내는 질환 중 한 가지는 관절염이다. 관절염은 골관절염, 류마티스 관절염, 소아 특발성 관절염(juvenile idiopathic arthritis), 척추관절증(spondyloarthropathy), 예를 들어, 강직성 척추염, 반응성 관절염(라이터 증후군(Reiter's syndrome)), 건선성 관절염(psoriatic arthritis), 염증성 장 질환과 관련된 장병증성 관절염(enteropathic arthritis), 휘플 병(Whipple disease) 및 베체트 병, 패혈성 관절염(septic arthritis), 통풍 (통풍성 관절염, 결정성 활막염(crystal synovitis), 대사성 관절염으로도 알려져 있음), 가성 통풍 (칼슘 피로포스페이트 축적 질환) 및 스틸 병(Still's disease)을 포함하나 이로 한정되지 않는, 활막(synovium)의 염증으로 인한 신체의 관절에 대한 손상을 수반하는 상태의 그룹을 포함한다. 관절염은 하나의 관절(단일관절염(monoarthritis)), 2 내지 4개의 관절 (소수관절염(oligoarthritis)) 또는 5개 이상의 관절 (다발성관절염(polyarthritis))에 영향을 줄 수 있으며, 자가면역 질환 또는 비-자가면역 질환일 수 있다.
만성 신경성 염증의 증상을 나타내는 다른 유형의 질환은 자가면역 질환이다. 자가면역 질환은 각각의 질환의 임상적-병리학적 특성에 따라, 크게 전신성 및 기관-특이적 자가면역 질환으로 구분될 수 있다. 전신성 자가면역 질환은, 제한없이, 전신성 홍반성 낭창 (SLE), 쇼그렌 증후군(Sjoegren's syndrome), 경피증(Scleroderma), 류마티스 관절염 및 다발성근염을 포함한다. 국부적 자가면역 질환은 내분비학적 질환 (당뇨병 타입 1, 하시모토 갑상선염(Hashimoto's thyroiditis), 에디슨 병(Addison's disease) 등), 피부학적 질환 (심상성 천포창(pemphigus vulgaris)), 혈액학적 질환(자가면역 용혈성 빈혈), 신경 질환(다발성 경화증)일 수 있거나, 또는 실제로 신체 조직의 임의의 한정된 덩어리를 포함할 수 있다. 자가면역 질환의 유형은, 제한없이, 급성 파종성 뇌척수염 (ADEM), 에디슨 병, 알러지 또는 민감증, 항-인지질 항체 증후군(APS), 관절염, 자가면역 용혈성 빈혈, 자가면역 간염, 자가면역 내이 질환, 물집유사천포창(bullous pemphigoid), 셀리악 병, 샤가스 병(Chagas disease), 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD), 당뇨병 타입 1 (IDDM), 자궁내막증, 섬유근통(fibromyalgia), 굿패스쳐 증후군(Goodpasture's syndrome), 그레이브스 병(Graves' disease), 길란-바레 증후군(Guillain-Barre syndrome; GBS), 하시모토 갑상선염, 화농성 한선염, 특발성 혈소판감소성 자반증(idiopathic thrombocytopenic purpura), 염증성 장 질환, 간질성 방광염, 낭창 (원판상 홍반성 낭창(discoid lupus erythematosus), 약물-유도 홍반성 낭창(drug-induced lupus erythematosus), 낭창성 신염, 신생아 낭창(neonatal lupus), 아급성 피부 홍반성 낭창(subacute cutaneous lupus erythematosus) 및 전신성 홍반성 낭창 포함), 반상경피증(morphea), 다발성 경화증 (MS), 중증 근무력증, 근병증, 기면증(narcolepsy), 신경근육긴장증(neuromyotonia), 심상성 천포창, 악성 빈혈, 원발성 담즙성 간경변증(primary biliary cirrhosis), 재발성파종성뇌척수염(recurrent disseminated encephalomyelitis) (다상성 파종성 뇌척수염(multiphasic disseminated encephalomyelitis)), 류마티즘 열, 정신분열증, 경피증, 쇼그렌 증후군, 건초염, 혈관염, 및 백반증을 포함한다. 문헌 [Pamela D. Van Schaack & Kenneth L. Tong, Treatment of Autoimmune Disorder with a Neurotoxin, U.S. Patent Publication 2006/138059]을 참고하며, 이는 본 명세서에 전체적으로 참고로 포함된다.
만성 신경성 염증의 증상을 나타내는 다른 유형의 질환은 염증성 근육병이다. 염증성 근육병은 면역계가 근육의 구성요소를 공격하여 근육에 염증의 징후를 일으키는 문제에 의해 야기된다. 염증성 근육병은, 제한없이, 피부근염, 포함체 근염(inclusion body myositis), 및 다발성 근염을 포함한다.
만성 신경성 염증의 증상을 나타내는 질환의 다른 유형은 혈관염이다. 혈관염은 백혈구 이동 및 그에 따른 손상으로 인한 림프관 및 혈관, 예를 들어, 정맥(정맥염), 동맥(동맥염) 및 모세혈관을 포함하는 혈관 벽의 염증을 특징으로 하는 다양한 그룹의 질환이다. 염증은 신체 어디에서든지 임의의 크기의 혈관에 영향을 줄 수 있다. 염증은 동맥 및/정맥에 영향을 줄 수 있다. 염증은 병소성(focal)일 수 있는 데, 이는 염증이 혈관 내부의 단일 위치에 영향을 줌을 의미한다; 또는 염증은 널리 펴져 있을 수 있어, 염증의 영역이 특정 기관 또는 조직 전반에 산재되거나, 또는 심지어 신체의 하나 이상의 기관 시스템에 영향을 줄 수 있다. 혈관염은, 제한없이, 버거씨 병(Buerger's disease) (폐쇄성 혈전혈관염), 뇌혈관염(cerebral vasculitis) (중추신경계 혈관염), 처그-스트라우스 동맥염(Churg-Strauss arteritis), 크리오글로불린혈증(cryoglobulinemia), 본태성 크리오글로불린혈증 혈관염(essential cryoglobulinemic vasculitis), 거대 세포(측두) 동맥염, 골퍼 혈관염(Golfer's vasculitis), 헤노흐-쇤라인 자반증(Henoch-Schonlein purpura), 과민증 혈관염 (알러지성 혈관염), 가와사키 병(Kawasaki disease), 현미경적 다발동맥염/다발맥관염(microscopic polyarteritis/polyangiitis), 결절성 다발동맥염(polyarteritis nodosa), 류마티스성 다발성근육통(polymyalgia rheumatica; PMR), 류마티스성 혈관염, 다카야스 관절염(Takayasu arteritis), 베게너 육아종증(Wegener's granulomatosis), 및 전신성 홍반성 낭창(SLE), 류마티스성 관절염(RA), 재발성 다발연골염, 베체트 병, 또는 다른 연결 조직 질환과 같은 연결 조직 질환에 속발된 혈관염, 바이러스 감염에 속발된 혈관염을 포함한다.
만성 신경성 염증의 증상을 나타내는 질환의 다른 유형은 피부 질환이다. 피부 질환은, 제한없이, 만성 화학선 피부염을 포함하는 피부염, 습진, 예를 들어, 아토피성 습진, 접촉성 습진, 건성 습진, 지루 피부염(seborrhoeic dermatitis), 발한이상증(dyshidrosis), 화폐상 습진(discoid eczema), 정맥 습진(venous eczema), 포진성 피부염(dermatitis herpetiformis), 신경피부염(neurodermatitis), 및 자가습진화(autoeczematization), 및 울체 피부염(statis dermatitis), 화농성 한선염, 판상형 건선, 손발톱 건선, 물방울양 건선(guttate psoriasis), 두피 건선, 간찰부 건선(inverse psoriasis), 농포성 건선, 및 홍피성 건선을 포함한 건선, 주사(rosacea) 및 반상경피증을 포함한 경피증을 포함한다.
만성 신경성 염증의 증상을 나타내는 질환의 다른 유형은 위장 질환이다. 위장 질환은, 제한없이, 과민성 대장 질환, 크론씨 병을 포함한 염증성 장 질환 및 궤양성 대장염, 예를 들어, 궤양성 직장염, 좌측 대장염(left-sided colitis), 범대장염(pancolitis) 및 전격성 대장염(fulminant colitis)을 포함한다.
따라서, 실시 형태에서는, 만성 신경성 염증을 겪는 포유류를 치료적 유효량의 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 염증 유도 분자의 방출을 감소시킴으로써, 만성 신경성 염증과 관련된 증상을 감소시킨다. 본 실시 형태의 태양에서, 만성 신경성 염증을 겪는 포유류를 치료적 유효량의 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 염증 유도 분자의 방출을 감소시킴으로써, 만성 신경성 염증과 관련된 증상을 감소시킨다. 본 실시 형태의 태양에서, 만성 신경성 염증 질환을 겪는 포유류를 치료적 유효량의 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 SP의 방출을 감소시킴으로써, 만성 신경성 염증과 관련된 증상을 감소시킨다. 본 실시 형태의 태양에서, 만성 신경성 염증 질환을 겪는 포유류를 치료적 유효량의 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 CGRP의 방출을 감소시킴으로써, 만성 신경성 염증과 관련된 증상을 감소시킨다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 만성 신경성 염증 질환을 겪는 포유류를 치료적 유효량의 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 프로스타글란딘의 방출을 감소시킴으로써, 만성 신경성 염증과 관련된 증상을 감소시킨다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 만성 신경성 염증 질환을 겪는 포유류를 치료적 유효량의 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 글루타메이트의 방출을 감소시킴으로써, 만성 신경성 염증과 관련된 증상을 감소시킨다.
본 발명의 태양은, 일부분, 포유류에 제공된다. 포유류는 사람을 포함하며, 사람은 환자일 수 있다. 본 발명의 다른 태양은, 일부분, 개체에 재공된다. 개체는 사람을 포함하며, 사람은 환자일 수 있다.
본 발명의 태양은, 일부분, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "투여하다"는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 환자에 제공하여 잠재적으로 임상적, 치료적, 또는 실험적으로 유익한 결과를 얻는 임의의 송달 메커니즘을 의미한다. 변형 클로스트리듐 독소는 세포 흡수 접근법(cellular uptake approach)을 사용하여 환자에 송달될 수 있으며, 변형 클로스트리듐 독소는 세포내 또는 유전자 요법 접근법에 의해 송달되며, 여기서, 변형 클로스트리듐 독소는 발현 벡터로부터 발현된 전구체 RNA로부터 발현 유도된다.
본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물은 세포 흡수 접근법을 사용하여 포유류에 투여될 수 있다. 세포 흡수 접근법을 사용한 변형 클로스트리듐 독소를 포하하는 조성물의 투여는, 제한없이, 임의의 허용가능한 형태의 경구 투여, 예를 들어, 정제, 액제, 캡슐, 분말 등; 임의의 허용가능한 형태의 국소 투여, 예를 들어, 드롭제(drop), 스프레이, 크림, 젤 또는 연고; 임의의 허용가능한 형태의 혈관내 투여, 예를 들어, 정맥내 볼루스 주사(intravenous bolus injection), 정맥내 주입(intravenous infusion), 동맥내 볼루스 주사(intra-arterial bolus injection), 동맥내 주입(intra-arterial infusion) 및 혈관계로의 카테터 설치(catheter instillation into the vasculature); 임의의 허용가능한 형태의 조직 주면 및 조직내 투여(peri- and intra-tissue administration), 예를 들어, 복강내 주사, 근육내 주사, 피하 주사, 피하 주입, 안내 주사, 망막 주사, 또는 망막하 주사(sub-retinal injection) 또는 경막외 주사(epidural injection); 임의의 허용가능한 형태의 소포내 (intravesicular) 투여, 예를 들어, 카테터 설치; 및 배치 장치(placement device)에 의한 것, 예를 들어, 임플란트(implant), 패치, 펠렛, 카테터, 삼투압 펌프, 좌약, 생부식성 송달 시스템, 비-생부식성 송달 시스템 또는 다른 이식된 연장 또는 저속 방출 시스템을 포함하는 다양한 장관 또는 비경구 접근법을 포함한다. 생침식성 중합체 및 사용 방법의 예시적인 목록이, 예를 들어, 문헌 [Handbook of Biodegradable Polymers (Abraham J. Domb et al., eds., Overseas Publishers Association, 1997)]에 기재되어 있다.
변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물은 리포솜 내의 캡슐화, 이온영동(ionophoresis), 또는 하이드로젤, 사이클로덱스트린, 생분해성 나노캡슐 및 생접착성 미소구체와 같은 다른 비히클 내로의 혼입, 또는 단백질성 벡터에 의한 것을 포함하나 이로 한정되지 않는 당업자에게 알려진 다양한 방법에 의해 포유류에 투여될 수 있다. 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 환자에 투여하기 위한 송달 메커니즘은, 예를 들어, 문헌 [Leonid Beigelman et al., Compositions for the Delivery of Negatively Charged Molecules, U.S. Patent 6,395,713 (May 28, 2002); and Achim Aigner, Delivery Systems for the Direct Application of siRNAs to Induce RNA Interference ( RNAi ) in vivo, 2006(716559) J. Biomed. Biotech. 1-15 (2006); Controlled Drug Delivery : Designing Technologies for the Future (Kinam Park & Randy J. Mrsny eds., American Chemical Association, 2000); Vernon G. Wong & Mae W. L. Hu, Methods for Treating Inflammation - mediated Conditions of the Eye, U.S. Patent No. 6,726,918 (Apr. 27, 2004); David A. Weber et al., Methods and Apparatus for Delivery of Ocular Implants, U.S. Patent Publication No. US2004/0054374 (Mar. 18, 2004); Thierry Nivaggioli et al., Biodegradable Ocular Implant, U.S. Patent Publication No. US2004/0137059 (Jul. 15, 2004); Patrick M. Hughes et al., Anti - Angiogenic Sustained Release Intraocular Implants and Related Methods, U.S. Patent Application 11/364,687 (Feb. 27, 2006); 및 Patrick M. Hughes et al., Sustained Release Intraocular Drug Delivery Systems, U.S. Patent Publication 2006/0182783 (Aug. 17, 2006)]에 기재되어 있으며, 이들 각각은 본 명세서에 전체적으로 참고로 포함된다.
본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물은 또한 세포 내에서 변형 클로스트리듐 독소를 발현시켜 신경성 염증 질환에 기여하는 신경-기반 병인을 명백히 함으로써 유전자 요법 접근법(gene therapy approach)을 사용하여 환자에 투여될 수 있다. 변형 클로스트리듐 독소는 발현 벡터에 작동적으로-연결되는 핵산 분자로부터 발현될 수 있다, 예를 들어, 문헌 [P. D. Good et al., Expression of Small , Therapeutic RNAs in Human Cell Nuclei, 4(1) Gene Ther. 45-54 (1997); James D. Thompson, Polymerase III-based expression of therapeutic RNAs, U.S. Patent 6,852,535 (Feb. 8, 2005); Maciej Wiznerowicz et al., Tuning Silence : Conditional Systems for RNA Interference, 3(9) Nat. Methods 682-688m (2006); Ola Snove and John J. Rossi, Expressing Short Hairpin RNAi in vivo, 3(9) Nat. Methods 689-698 (2006); 및 Charles X. Li et al., Delivery of RNA Interference, 5(18) Cell Cycle 2103-2109 (2006)]을 참조한다. 당업자는 적합한 발현 벡터를 사용하여 진핵 세포에서 임의의 변형 클로스트리듐 독소를 발현시킬 수 있음을 알 것이다.
변형 클로스트리듐 독소를 발현시킬 수 있는 발현 벡터는 세포에서 변형 클로스트리듐 독소의 지속적인(persistent) 또는 안정한 발현을 제공하여 신경성 염증 질환에 기여하는 신경-기반 변인을 명확히 할 수 있다. 대안적으로, 변형 클로스트리듐 독소를 발현시킬 수 있는 발현 벡터는 세포에서 변형 클로스트리듐 독소의 일시적 발현(transient expression)을 제공하여 신경성 염증 질환에 기여하는 신경-기반 변인을 명확히 할 수 있다. 이러한 일시적으로 발현하는 벡터는 필요한 대로 반복적으로 투여될 수 있다. 변형 클로스트리듐 독소-발현 벡터는 환자로부터 외식된(ex-planted) 표적 세포에 투여한 후 환자에 재도입함으로써, 또는 원하는 표적 세포로의 도입이 허용되는 임의 다른 수단에 의해서 상기에 논의된 송달 메커니즘 및 투여 경로에 의해서 투여될 수 있다, 예를 들어, 문헌 [Larry A. Couture and Dan T. Stinchcomb, Anti - gene Therapy : The Use of Ribozymes to Inhibit Gene Function, 12(12) Trends Genet. 510-515 (1996)]을 참조한다.
변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 포유류에 투여하는 데 사용되는 실제 송달 메커니즘은, 제한없이, 신경성 염증 질환의 유형, 신경성 염증 질환의 위치, 신경성 염증 질환의 원인, 신경성 염증 질환의 위중도, 원하는 치유 정도, 원하는 치유 지속 시간, 사용된 구체적인 변형 클로스트리듐 독소, 사용된 변형 클로스트리듐 독소의 배설 속도, 사용된 변형 클로스트리듐 독소의 약력학, 조성물에 포함된 다른 화합물의 성질, 구체적인 투여 경로, 환자의 구체적인 특성, 병력 및 위험 인자를 포함하는 인자들, 예를 들어, 연령, 체중, 일반적인 건강 등, 또는 이들의 임의의 조합을 고려하여 당업자에 의해서 결정될 수 있다.
실시 형태에서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물은 주사에 의해서 처치할 부위에 투여된다. 본 실시 형태의 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 주사는, 예를 들어, 근육내 주사, 피하 주사, 또는 피부 주사(dermal injection)이다. 본 실시 형태의 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 주사는 방광 벽, 요도 괄약근, 또는 방광 경부를 포함한 하부 요로의 주사이다.
변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물은 다양한 경로를 사용하여 포유류에 투여될 수 있다. 본 명세서에 개시된 것과 같은 신경성 염증 질환을 치료하는 방법에 적합한 투여 경로는 국부적 (local) 및 전신적 투여를 둘 모두 포함한다. 국부적 투여는 포유류의 전신과 비교하여 특정 위치로 상당히 더 많이 조성물을 송달하는 반면, 전신적 투여는 본질적으로 환자의 전신에 조성물을 송달한다. 본 명세서에 개시된 것과 같은 신경성 염증 질환을 치료하는 방법에 적합한 투여 경로는 또한 중추적 및 말초적 투여를 둘 모두 포함한다. 중추적 투여는 본질적으로 환자의 중추 신경계에 조성물을 송달하며, 예를 들어, 척추강내(intrathecal) 투여, 경막외(epidural) 투여뿐만 아니라 두개(cranial) 주사 또는 임플란트를 포함한다. 말초 투여는 본질적으로 중추 신경계 밖의 환자의 임의의 영역에 조성물을 송달하며 척수 또는 뇌에 직접 투여하는 것 이외의 임의의 투여 경로를 포함한다. 포유류에 사용되는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 실제 투여 경로는, 제한없이, 신경성 염증 질환의 유형, 신경성 염증 질환의 위치, 신경성 염증 질환의 원인, 신경성 염증 질환의 위중도, 원하는 치유 정도, 원하는 치유 지속 시간, 사용된 구체적인 변형 클로스트리듐 독소, 사용된 변형 클로스트리듐 독소의 배설 속도, 사용된 변형 클로스트리듐 독소의 약력학, 조성물에 포함된 다른 화합물의 성질, 구체적인 투여 경로, 포유류의 구체적인 특성, 병력 및 위험 인자를 포함하는 인자들, 예를 들어, 연령, 체중, 일반적인 건강 등, 또는 이들의 임의의 조합을 고려하여 당업자에 의해 결정될 수 있다.
실시 형태에서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물은 전신적으로 포유류에 투여된다. 다른 실시 형태에서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물은 국부적으로 포유류에 투여된다. 본 실시 형태의 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물은 포유류의 방광에 투여된다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물은 포유류의 전립선에 투여된다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물은 포유류의 자궁에 투여된다.
본 발명의 태양은, 일부분, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 제공한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어"치료적 유효량"은 "치료적 유효 투여량"과 동의어이며, 신경성 염증 질환을 치료하는 데 언급되어 사용되는 경우, 원하는 치료적 효과를 달성하는 데 필요한 변형 클로스트리듐 독소의 최소 투여량을 의미하며, 신경성 염증 질환과 관련된 증상을 감소시키기에 충분한 투여량을 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 치료적 유효량은 신경성 염증 질환과 관련된 증상을, 예를 들어, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 또는 적어도 100% 감소시킨다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 치료적 유효량은 신경성 염증 질환과 관련된 증상을, 예를 들어, 최대 10%, 최대 20%, 최대 30%, 최대 40%, 최대 50%, 최대 60%, 최대 70%, 최대 80%, 최대 90% 또는 최대 100% 감소시킨다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 치료적 유효량은 신경성 염증 질환과 관련된 증상을, 예를 들어, 약 10% 내지 약 100%, 약 10% 내지 약 90%, 약 10% 내지 약 80%, 약 10% 내지 약 70%, 약 10% 내지 약 60%, 약 10% 내지 약 50%, 약 10% 내지 약 40%, 약 20% 내지 약 100%, 약 20% 내지 약 90%, 약 20% 내지 약 80%, 약 20% 내지 약 20%, 약 20% 내지 약 60%, 약 20% 내지 약 50%, 약 20% 내지 약 40%, 약 30% 내지 약 100%, 약 30% 내지 약 90%, 약 30% 내지 약 80%, 약 30% 내지 약 70%, 약 30% 내지 약 60%, 또는 약 30% 내지 약 50% 감소시킨다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "약"은 언급된 아이템, 숫자, 백분율, 또는 기간의 값을 한정할 때, 언급된 아이템, 백분율, 파라미터, 또는 기간의 값의 ± 10%의 범위를 말한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량은 뉴런 활성을, 예를 들어, 적어도 1주일, 적어도 1 개월, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 4개월, 적어도 5개월, 적어도 6개월, 적어도 7개월, 적어도 8개월, 적어도 9개월, 적어도 10개월, 적어도 11개월, 또는 적어도 12개월 동안 억제 하는 데 충분한 투여량이다.
포유류에 투여될 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 실제 치료적 유효량은, 제한없이, 신경성 염증 질환의 유형, 신경성 염증 질환의 위치, 신경성 염증 질환의 원인, 신경성 염증 질환의 위중도, 원하는 치유 정도, 원하는 치유 지속 시간, 사용된 구체적인 변형 클로스트리듐 독소, 사용된 변형 클로스트리듐 독소의 배설 속도, 사용된 변형 클로스트리듐 독소의 약력학, 조성물에 포함된 다른 화합물의 성질, 구체적인 투여 경로, 환자의 구체적인 특성, 병력 및 위험 인자를 포함하는 인자들, 예를 들어, 연령, 체중, 일반적인 건강 등, 또는 이들의 임의의 조합을 고려하여 당업자에 의해 결정될 수 있다. 또한, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 반복적인 투여가 사용되는 경우, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 실제 유효량은, 제한없이, 투여 빈도, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 반감기, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는 인자에 따라 또한 좌우될 수 있다. 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 유효량은 사람에 투여하기 전에 시험관내 분석 및 동물 모델을 사용하는 생체내 투여 연구로부터 추정될 수 있음을 당업자는 알고 있다. 다양한 투여 경로의 상이한 효능의 관점에서 필요한 유효량은 매우 다양할 것으로 예상된다. 예를 들어, 경구 투여는 정맥내 또는 유리체내 주사에 의한 투여보다 일반적으로 더 높은 투여량 레벨을 필요로 할 것으로 예상된다. 이러한 투여량 레벨의 변동은 당업자에게 잘 알려져 있는 최적화의 표준 실험 경로를 사용하여 조정될 수 있다. 정확한 치료적으로 유효한 투여량 레벨 및 패턴은 바람직하게는 주치의에 의해서 상기에 확인된 인자들을 고려하여 결정된다.
비-제한적인 예로서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 포유류에 투여할 때, 치료적 유효량은 일반적으로 약 1 fg 내지 약 3.0 mg의 범위이다. 본 실시 형태의 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 유효량은, 예를 들어, 약 100 fg 내지 약 3.0 mg, 약 100 pg 내지 약 3.0 mg, 약 100 ng 내지 약 3.0 mg, 또는 약 100 ㎍ 내지 약 3.0 mg일 수 있다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 유효량은, 예를 들어, 약 100 fg 내지 약 750 ㎍, 약 100 pg 내지 약 750 ㎍, 약 100 ng 내지 약 750 ㎍, 또는 약 1 ㎍ 내지 약 750 ㎍ 일 수 있다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 치료적 유효량은, 예를 들어, 적어도 1 fg, 적어도 250 fg, 적어도 500 fg, 적어도 750 fg, 적어도 1 pg, 적어도 250 pg, 적어도 500 pg, 적어도 750 pg, 적어도 1 ng, 적어도 250 ng, 적어도 500 ng, 적어도 750 ng, 적어도 1 ㎍, 적어도 250 ㎍, 적어도 500 ㎍, 적어도 750 ㎍, 또는 적어도 1 mg일 수 있다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 치료적 유효량은, 예를 들어, 최대 1 fg, 최대 250 fg, 최대 500 fg, 최대 750 fg, 최대 1 pg, 최대 250 pg, 최대 500 pg, 최대 750 pg, 최대 1 ng, 최대 250 ng, 최대 500 ng, 최대 750 ng, 최대 1 ㎍, 적어도 250 ㎍, 최대 500 ㎍, 최대 750 ㎍, 또는 최대 1 mg일 수 있다.
다른 비-제한적인 예로서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 포유류에 투여할 때, 치료적 유효량은 일반적으로 약 0.00001 mg/kg 내지 약 3.0 mg/kg의 범위이다. 본 실시 형태의 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 유효량은, 예를 들어, 약 0.0001 mg/kg 내지 약 0.001 mg/kg, 약 0.03 mg/kg 내지 약 3.0 mg/kg, 약 0.1 mg/kg 내지 약 3.0 mg/kg, 또는 약 0.3 mg/kg 내지 약 3.0 mg/kg일 수 있다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 치료적 유효량은, 예를 들어, 적어도 0.00001 mg/kg, 적어도 0.0001 mg/kg, 적어도 0.001 mg/kg, 적어도 0.01 mg/kg, 적어도 0.1 mg/kg, 또는 적어도 1 mg/kg일 수 있다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 치료적 유효량은, 예를 들어, 최대 0.00001 mg/kg, 최대 0.0001 mg/kg, 최대 0.001 mg/kg, 최대 0.01 mg/kg, 최대 0.1 mg/kg, 또는 최대 1 mg/kg일 수 있다.
투여는 단일 투여 또는 누적 (일련의 투여) 투여일 수 있으며, 당업자에 의해 쉽게 결정될 수 있다. 예를 들어, 신경성 염증 질환의 치료는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 유효 투여량을 1회 투여하는 것을 포함할 수 있다. 비-제한적인 예로서, 예를 들어, 신경성 염증 질환의 증상이 나타난 부위에서 또는 그 근처에서 단일 주사 또는 침적(deposition)으로서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 유효 투여량을 환자에 1회 투여할 수 있다. 대안적으로, 신경성 염증 질환의 치료는 일정 범위의 기간에 걸쳐, 예를 들어, 매일, 수일마다 1회, 매주, 매월 또는 매년 행해지는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 유효량의 다회 투여를 포함할 수 있다. 비-제한적인 예로서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물은 매년 1회 또는 2회 포유류에 투여될 수 있다. 투여 타이밍은 포유류의 증상의 위중도와 같은 인자에 따라 포유류마다 다를 수 있다. 예를 들어, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 유효 투여량을 포유류에 무기한으로 또는 환자가 더 이상 치료를 필요로 하지 않을 때까지 1개월에 1회 투여할 수 있다. 당업자는 치료 기간 전반에 걸쳐 포유류의 상태를 모니터링하고, 그에 따라 투여되는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 유효량을 조절할 수 있음을 알 것이다.
본 명세서에 개시된 바와 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물은 또한 처치의 전체 치료 효과를 증가시키기 위하여 다른 치료적 화합물과 조합하여 포유류에 투여될 수 있다. 증상을 처치하기 위하여 다수의 화합물을 사용하는 것이 부작용의 존재는 감소시키면서 이로운 효과는 증가시킬 수 있다.
본 발명의 태양은 또한 다음과 같이 설명될 수 있다:
1. 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 포함하는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 포유류에 투여하는 단계를 포함하며, 조성물의 투여는 염증 유도 분자의 방출을 감소시킴으로써 만성 신경성 염증과 관련된 증상을 감소시키는, 포유류에서 신경성 염증을 치료하는 방법.
2. 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 포함하는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 포유류에 투여하는 단계를 포함하며, 조성물의 투여는 염증 유도 뉴로펩티드의 방출을 감소시킴으로써 만성 신경성 염증과 관련된 증상을 감소시키는, 포유류에서 신경성 염증을 치료하는 방법.
3. 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 포함하는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 포유류에 투여하는 단계를 포함하며, 조성물의 투여는 염증 유도 프로스타글란딘 또는 글루타메이트의 방출을 감소시킴으로써 만성 신경성 염증과 관련된 증상을 감소시키는, 포유류에서 신경성 염증을 치료하는 방법.
4. 1 내지 3의 방법에 있어서, 변형 클로스트리듐 독소는 1) 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 2) 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 3) 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 4) 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 5) 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 클로스트리듐 독소 효소 도메인 및 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 또는 6) 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 오피오이드 펩티드 결합 도메인 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인의 선형 아미노-내지-카르복실 단일 폴리펩티드 오더를 포함하는 방법.
5. 1 내지 3의 방법에 있어서, 오피오이드 펩티드 결합 도메인은 엔케팔린, BAM22 펩티드, 엔도모르핀, 엔도르핀, 디노르핀, 노시셉틴 또는 헤모르핀인 방법.
6. 5의 방법에 있어서, 엔케팔린은 Leu-엔케팔린, Met-엔케팔린, Met-엔케팔린 MRGL 또는 Met-엔케팔린 MRF인 방법.
7. 5의 방법에 있어서, 엔케팔린은 SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54 또는 SEQ ID NO: 55를 포함하는 방법.
8. 5의 방법에 있어서, BAM22 펩티드는 BAM22 펩티드 (1-12), BAM22 펩티드 (6-22), BAM22 펩티드 (8-22) 또는 BAM22 펩티드 (1-22)인 방법.
9. 5의 방법에 있어서, BAM22 펩티드는 SEQ ID NO: 56의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 57의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 58의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 59의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 60의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22 또는 SEQ ID NO: 61의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22을 포함하는 방법.
10. 5의 방법에 있어서, 엔도모르핀은 엔도모르핀-1 또는 엔도모르핀-2인 방법.
11. 5의 방법에 있어서, 엔도모르핀은 SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63을 포함하는 방법.
12. 5의 방법에 있어서, 엔도르핀은 엔도르핀-α, 네오엔도르핀 -α, 엔도르핀-β, 네오엔도르핀-β 또는 엔도르핀-γ인 방법.
13. 5의 방법에 있어서, 엔도르핀은 SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 또는 SEQ ID NO: 69를 포함하는 방법.
14. 5의 방법에 있어서, 디노르핀은 디노르핀 A, 디노르핀 B (류모르핀) 또는 리모르핀인 방법.
15. 5의 방법에 있어서, 디노르핀은 SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 83, SEQ ID NO: 84, SEQ ID NO: 85, SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 87, SEQ ID NO: 88, SEQ ID NO: 89, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO: 91, SEQ ID NO: 92, SEQ ID NO: 93, SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO: 96, SEQ ID NO: 97, SEQ ID NO: 98, SEQ ID NO: 99 또는 SEQ ID NO: 100을 포함하는 방법.
16. 5의 방법에 있어서, 노시셉틴은 노시셉틴 RK, 노시셉틴, 뉴로펩티드 1, 뉴로펩티드 2 또는 뉴로 펩티드 3인 방법.
17. 5의 방법에 있어서, 노시셉틴은 SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 102, SEQ ID NO: 103, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109 또는 SEQ ID NO: 110을 포함하는 방법.
18. 1 내지 3의 방법에 있어서, 클로스트리듐 독소 전위 도메인은 BoNT/A 전위 도메인, BoNT/B 전위 도메인, BoNT/C1 전위 도메인, BoNT/D 전위 도메인, BoNT/E 전위 도메인, BoNT/F 전위 도메인, BoNT/G 전위 도메인, TeNT 전위 도메인, BaNT 전위 도메인, 또는 BuNT 전위 도메인인 방법.
19. 1 내지 3의 방법에 있어서, 클로스트리듐 독소 효소 도메인은 BoNT/A 효소 도메인, BoNT/B 효소 도메인, BoNT/C1 효소 도메인, BoNT/D 효소 도메인, BoNT/E 효소 도메인, BoNT/F 효소 도메인, BoNT/G 효소 도메인, TeNT 효소 도메인, BaNT 효소 도메인, 또는 BuNT 효소 도메인인 방법.
20. 1 내지 3의 방법에 있어서, 신경성 염증은 여드름(acne), 산 역류/속쓰림(acid reflux/heartburn), 알츠하이머병(Alzheimer's disease), 충수염(appendicitis), 동맥염(arteritis), 관절염, 천식. 죽상동맥경화증, 자가면역 질환, 귀두염, 안검염, 세기관지염, 기관지염, 활액낭염(bursitis), 암, 심장염, 셀리악 병(celiac disease), 소포염(cellulitis), 자궁경관염(cervicitis), 담관염, 담낭염, 융모양막염(chorioamnionitis), 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD), 간경변, 대장염, 결막염, 방광염, 일반 감기, 누선염, 치매, 피부염, 피부근염, 폐기종, 뇌염, 심내막염, 자궁내막염, 장염, 소장결장염, 상과염(epicondylitis), 부고환염, 근막염, 섬유조직염, 위염, 위장염, 치은염, 사구체신염, 설염, 심장 질환, 간염, 화농성 한선염(hidradenitis suppurativa), 고혈압, 회장염, 염증성 신경병증, 인슐린 저항성, 간질성 방광염, 홍채염, 허혈성 심장 질환, 각막염, 각결막염, 후두염, 유방염, 유양돌기염(mastoiditis), 수막염, 대사 증후군(증후군 X), 편두통, 척수염, 심근염, 근염, 신장염, 비만, 제대염(omphalitis), 난소염, 고환염, 골연골염, 골감소증(osteopenia), 골다공증, 골염, 이염, 췌장염, 파킨슨 병(Parkinson's disease), 이하선염, 골반 염증 질환, 심낭염, 복막염, 인두염, 정맥염, 늑막염, 간질성 폐렴(pneumonitis), 직장염(proctitis), 전립선염, 치수염(pulpitis), 신우신염, 문맥염(pylephlebitis), 류마티즘 열, 비염, 난관염, 타액선염, 부비강염, 경직 대장(spastic colon), 구내염, 활막염(synovitis), 건염, 건병증(tendinosis), 건초염, 혈전정맥염(thrombophlebitis), 편도선염, 삼각부염(trigonitis), 종양, 요도염, 포도막염, 질염, 혈관염, 또는 외음염(vulvitis)과 관련되는 방법.
21. 1 내지 3의 방법에 있어서, 신경성 염증은 관절염과 관련되는 방법.
22. 21의 방법에 있어서, 관절염은 단일관절염, 소수관절염, 또는 다발성관절염인 방법.
23. 21의 방법에 있어서, 관절염은 자가면역 질환 또는 비-자가면역 질환인 방법.
24. 21의 방법에 있어서, 관절염은 골관절염, 류마티스 관절염, 소아 특발성 관절염(juvenile idiopathic arthritis), 패혈성 관절염, 척추관절증(spondyloarthropathy), 통풍, 가성통풍, 또는 스틸병인 방법.
25. 24의 방법에서, 척추관절증은 강직성 척추염, 반응성 관절염(라이터 증후군), 건선성 관절염, 염증성 장 질환과 관련된 장병증성 관절염(enteropathic arthritis), 휘플병(Whipple disease) 또는 베체트 병인 방법.
26. 1 내지 3의 방법에 있어서, 신경성 염증은 자가면역 질환과 관련되는 방법.
27. 26의 방법에 있어서, 자가면역 질환은 전신성 자가면역 질환 또는 기관-특이적 자가면역 질환인 방법.
28. 26의 방법에 있어서, 자가면역 질환은 급성 파종성 뇌척수염 (ADEM), 에디슨 병, 알러지, 항-인지질 항체 증후군(APS), 자가면역 용혈성 빈혈, 자가면역 간염, 자가면역 내이 질환, 물집유사천포창(bullous pemphigoid), 셀리악 병, 샤가스 병(Chagas disease), 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD), 당뇨병 타입 1 (IDDM), 자궁내막증, 굿패스쳐 증후군(Goodpasture's syndrome), 그레이브스 병(Graves' disease), 길란-바레 증후군(Guillain-Barre syndrome; GBS), 하시모토 갑상선염, 화농성 한선염, 특발성 혈소판감소성 자반증(idiopathic thrombocytopenic purpura), 염증성 장 질환, 간질성 방광염, 낭창 (원판상 홍반성 낭창(discoid lupus erythematosus), 약물-유도 홍반성 낭창(drug-induced lupus erythematosus), 낭창성 신염, 신생아 낭창(neonatal lupus), 아급성 피부 홍반성 낭창(subacute cutaneous lupus erythematosus) 및 전신성 홍반성 낭창 포함), 반상경피증(morphea), 다발성 경화증 (MS), 중증 근무력증, 근병증, 기면증(narcolepsy), 신경근육긴장증(neuromyotonia), 심상성 천포창, 악성 빈혈, 원발성 담즙성 간경변증(primary biliary cirrhosis), 재발성파종성뇌척수염(recurrent disseminated encephalomyelitis) (다상성 파종성 뇌척수염(multiphasic disseminated encephalomyelitis)), 류마티즘 열, 정신분열증, 경피증, 쇼그렌 증후군, 건초염, 혈관염, 또는 백반증인 방법.
29. 1 내지 3의 방법에 있어서, 신경성 염증은 염증성 근육병(inflammatory myopathy)과 관련되는 방법.
30. 29의 방법에 있어서, 염증성 근육병은 피부근염, 포함체 근염(inclusion body myositis), 또는 다발성 근염인 방법.
31. 1 내지 3의 방법에 있어서, 신경성 염증은 혈관염과 관련되는 방법.
32. 31의 방법에 있어서, 혈관염은 버거씨 병(Buerger's disease), 뇌혈관염(cerebral vasculitis), 처그-스트라우스 동맥염(Churg-Strauss arteritis), 크리오글로불린혈증(cryoglobulinemia), 본태성 크리오글로불린혈증 혈관염(essential cryoglobulinemic vasculitis), 거대 세포 동맥염, 골퍼 혈관염(Golfer's vasculitis), 헤노흐-쇤라인 자반증(Henoch-Schonlein purpura), 과민증 혈관염, 가와사키 병(Kawasaki disease), 현미경적 다발동맥염/다발맥관염(microscopic polyarteritis/polyangiitis), 결절성 다발동맥염(polyarteritis nodosa), 류마티스성 다발성근육통(polymyalgia rheumatica; PMR), 류마티스성 혈관염, 다카야스 관절염(Takayasu arteritis) 또는 베게너 육아종증(Wegener's granulomatosis)인 방법.
33. 1 내지 3의 방법에 있어서, 신경성 염증은 피부 질환과 관련되는 방법.
34. 33의 방법에 있어서, 피부 질환은 피부염, 습진, 울체 피부염(statis dermatitis), 화농성 한선염(hidradenitis suppurativa), 건선, 주사(rosacea) 또는 경피증인 방법.
35. 34의 방법에 있어서, 습진은 아토피성 습진, 접촉성 습진, 건성 습진, 지루 피부염(seborrhoeic dermatitis), 발한이상증(dyshidrosis), 화폐상 습진(discoid eczema), 정맥 습진(venous eczema), 포진성 피부염(dermatitis herpetiformis), 신경피부염(neurodermatitis), 또는 자가습진화(autoeczematization)인 방법.
36. 34의 방법에 있어서, 건선은 판상형 건선, 손발톱 건선, 물방울양 건선(guttate psoriasis), 두피 건선, 간찰부 건선(inverse psoriasis), 농포성 건선, 또는 홍피성 건선인 방법.
37. 1 내지 3의 방법에 있어서, 신경성 염증은 위장 질환과 관련되는 방법.
38. 37의 방법에 있어서, 위장 질환은 과민성 대장 질환 또는 염증성 장(inflammatory bowel)인 방법.
39. 37의 방법에 있어서, 염증성 장은 크론씨 병 또는 궤양성 대장염인 방법.
40. 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인 및 외인성 프로테아제 절단 부위를 포함하는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 포유류에 투여하는 단계를 포함하며, 조성물의 투여는 염증 유도 분자의 방출을 감소시킴으로써 만성 신경성 염증과 관련된 증상을 감소시키는, 포유류에서 신경성 염증을 치료하는 방법.
41. 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인 및 외인성 프로테아제 절단 부위를 포함하는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 포유류에 투여하는 단계를 포함하며, 조성물의 투여는 염증 유도 뉴로펩티드의 방출을 감소시킴으로써 만성 신경성 염증과 관련된 증상을 감소시키는, 포유류에서 신경성 염증을 치료하는 방법.
42. 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인 및 외인성 프로테아제 절단 부위를 포함하는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 포유류에 투여하는 단계를 포함하며, 조성물의 투여는 염증 유도 프로스타글란딘 또는 글루타메이트의 방출을 감소시킴으로써 만성 신경성 염증과 관련된 증상을 감소시키는, 포유류에서 신경성 염증을 치료하는 방법.
43. 40 내지 42의 방법에 있어서, 변형 클로스트리듐 독소는 1) 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 2) 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 3) 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 4) 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 5) 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 클로스트리듐 독소 효소 도메인 및 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 또는 6) 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 오피오이드 펩티드 결합 도메인 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인의 선형 아미노-내지-카르복실 단일 폴리펩티드 오더를 포함하는 방법.
44. 40 내지 42의 방법에 있어서, 오피오이드 펩티드 결합 도메인은 엔케팔린, BAM22 펩티드, 엔도모르핀, 엔도르핀, 디노르핀, 노시셉틴 또는 헤모르핀인 방법.
45. 44의 방법에 있어서, 엔케팔린은 Leu-엔케팔린, Met-엔케팔린, Met-엔케팔린 MRGL 또는Met-엔케팔린 MRF인 방법.
46. 44의 방법에 있어서, 엔케팔린은 SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54 또는 SEQ ID NO: 55을 포함하는 방법.
47. 44의 방법에 있어서, BAM22 펩티드는 BAM22 펩티드 (1-12), BAM22 펩티드 (6-22), BAM22 펩티드 (8-22) 또는 BAM22 펩티드 (1-22)인 방법.
48. 44의 방법에 있어서, BAM22 펩티드는 SEQ ID NO: 56의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 57의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 58의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 59의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 60의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22 또는 SEQ ID NO: 61의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22를 포함하는 방법.
49. 44의 방법에 있어서, 엔도모르핀은 엔도모르핀-1 또는 엔도모르핀-2인 방법
50. 44의 방법에 있어서, 엔도모르핀은 SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63을 포함하는 방법.
51. 44의 방법에 있어서, 엔도르핀은 엔도르핀-α, 네오엔도르핀-α, 엔도르핀-β, 네오엔도르핀-β 또는 엔도르핀-γ인 방법
52. 44의 방법에 있어서, 엔도르핀은 SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 또는 SEQ ID NO: 69을 포함하는 방법.
53. 44의 방법에 있어서, 디노르핀은 디노르핀 A, 디노르핀 B (류모르핀) 또는 리모르핀인 방법.
54. 44의 방법에 있어서, 디노르핀은 SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 83, SEQ ID NO: 84, SEQ ID NO: 85, SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 87, SEQ ID NO: 88, SEQ ID NO: 89, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO: 91, SEQ ID NO: 92, SEQ ID NO: 93, SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO: 96, SEQ ID NO: 97, SEQ ID NO: 98, SEQ ID NO: 99 또는 SEQ ID NO: 100을 포함하는 방법.
55. 44의 방법에 있어서, 노시셉틴은 노시셉틴 RK, 노시셉틴, 뉴로펩티드 1, 뉴로펩티드 2 또는 뉴로펩티드 3인 방법.
56. 44의 방법에 있어서, 노시셉틴은 SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 102, SEQ ID NO: 103, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109 또는 SEQ ID NO: 110을 포함하는 방법.
57. 40 내지 42의 방법에 있어서, 클로스트리듐 독소 전위 도메인은 BoNT/A 전위 도메인, BoNT/B 전위 도메인, BoNT/C1 전위 도메인, BoNT/D 전위 도메인, BoNT/E 전위 도메인, BoNT/F 전위 도메인, BoNT/G 전위 도메인, TeNT 전위 도메인, BaNT 전위 도메인, 또는 BuNT 전위 도메인인 방법.
58. 40 내지 42의 방법에 있어서, 클로스트리듐 독소 효소 도메인은 BoNT/A 효소 도메인, BoNT/B 효소 도메인, BoNT/C1 효소 도메인, BoNT/D 효소 도메인, BoNT/E 효소 도메인, BoNT/F 효소 도메인, BoNT/G 효소 도메인, TeNT 효소 도메인, BaNT 효소 도메인, 또는 BuNT 효소 도메인인 방법.
59. 40 내지 42의 방법에 있어서, 외인성 프로테아제 절단 부위는 식물 파파인(papain) 절단 부위, 곤충 파파인 절단 부위, 갑각류 파파인 절단 부위, 엔테로키나아제 절단 부위, 사람 리노바이러스 3C 프로테아제 절단 부위, 사람 엔테로바이러스 3C 프로테아제 절단 부위, 담배 식각 바이러스 프로테아제 절단 부위, 담배 엽맥 반점 바이러스 절단 부위, 서브틸리신 절단 부위, 하이드록실아민 절단 부위, 또는 카스파아제 3 절단 부위인 방법.
60. 40 내지 42의 방법에 있어서, 신경성 염증은 여드름(acne), 산 역류/속쓰림(acid reflux/heartburn), 알츠하이머병(Alzheimer's disease), 충수염(appendicitis), 동맥염(arteritis), 관절염, 천식. 죽상동맥경화증, 자가면역 질환, 귀두염, 안검염, 세기관지염, 기관지염, 활액낭염(bursitis), 암, 심장염, 셀리악 병(celiac disease), 소포염(cellulitis), 자궁경관염(cervicitis), 담관염, 담낭염, 융모양막염(chorioamnionitis), 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD), 간경변, 대장염, 결막염, 방광염, 일반 감기, 누선염, 치매, 피부염, 피부근염, 폐기종, 뇌염, 심내막염, 자궁내막염, 장염, 소장결장염, 상과염(epicondylitis), 부고환염, 근막염, 섬유조직염, 위염, 위장염, 치은염, 사구체신염, 설염, 심장 질환, 간염, 화농성 한선염(hidradenitis suppurativa), 고혈압, 회장염, 염증성 신경병증, 인슐린 저항성, 간질성 방광염, 홍채염, 허혈성 심장 질환, 각막염, 각결막염, 후두염, 유방염, 유양돌기염(mastoiditis), 수막염, 대사 증후군(증후군 X), 편두통, 척수염, 심근염, 근염, 신장염, 비만, 제대염(omphalitis), 난소염, 고환염, 골연골염, 골감소증(osteopenia), 골다공증, 골염, 이염, 췌장염, 파킨슨 병(Parkinson's disease), 이하선염, 골반 염증 질환, 심낭염, 복막염, 인두염, 정맥염, 늑막염, 간질성 폐렴(pneumonitis), 직장염(proctitis), 전립선염, 치수염(pulpitis), 신우신염, 문맥염(pylephlebitis), 류마티즘 열, 비염, 난관염, 타액선염, 부비강염, 경직 대장(spastic colon), 구내염, 활막염(synovitis), 건염, 건병증(tendinosis), 건초염, 혈전정맥염(thrombophlebitis), 편도선염, 삼각부염(trigonitis), 종양, 요도염, 포도막염, 질염, 혈관염, 또는 외음염(vulvitis)과 관련되는 방법.
61. 40 내지 42의 방법에 있어서, 신경성 염증은 관절염과 관련되는 방법.
62. 61의 방법에 있어서, 관절염은 단일관절염, 소수관절염, 또는 다발성관절염인 방법.
63. 61의 방법에 있어서, 관절염은 자가면역 질환 또는 비-자가면역 질환인 방법.
64. 61의 방법에 있어서, 관절염은 골관절염, 류마티스 관절염, 소아 특발성 관절염(juvenile idiopathic arthritis), 패혈성 관절염, 척추관절증(spondyloarthropathy), 통풍, 가성통풍, 또는 스틸병인 방법.
65. 64 의 방법에 있어서, 척추관절증은 강직성 척추염, 반응성 관절염(라이터 증후군), 건선성 관절염, 염증성 장 질환과 관련된 장병증성 관절염(enteropathic arthritis), 휘플병(Whipple disease) 또는 베체트 병인 방법.
66. 40 내지 42의 방법에 있어서, 신경성 염증은 자가면역 질환과 관련되는 방법.
67. 66 의 방법에 있어서, 자가면역 질환은 전신성 자가면역 질환 또는 기관-특이적 자가면역 질환인 방법.
68. 67 의 방법에 있어서, 자가면역 질환은 급성 파종성 뇌척수염 (ADEM), 에디슨 병, 알러지, 항-인지질 항체 증후군(APS), 자가면역 용혈성 빈혈, 자가면역 간염, 자가면역 내이 질환, 물집유사천포창(bullous pemphigoid), 셀리악 병, 샤가스 병(Chagas disease), 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD), 당뇨병 타입 1 (IDDM), 자궁내막증, 굿패스쳐 증후군(Goodpasture's syndrome), 그레이브스 병(Graves' disease), 길란-바레 증후군(Guillain-Barre syndrome; GBS), 하시모토 갑상선염, 화농성 한선염, 특발성 혈소판감소성 자반증(idiopathic thrombocytopenic purpura), 염증성 장 질환, 간질성 방광염, 낭창 (원판상 홍반성 낭창(discoid lupus erythematosus), 약물-유도 홍반성 낭창(drug-induced lupus erythematosus), 낭창성 신염, 신생아 낭창(neonatal lupus), 아급성 피부 홍반성 낭창(subacute cutaneous lupus erythematosus) 및 전신성 홍반성 낭창 포함), 반상경피증(morphea), 다발성 경화증 (MS), 중증 근무력증, 근병증, 기면증(narcolepsy), 신경근육긴장증(neuromyotonia), 심상성 천포창, 악성 빈혈, 원발성 담즙성 간경변증(primary biliary cirrhosis), 재발성파종성뇌척수염(recurrent disseminated encephalomyelitis) (다상성 파종성 뇌척수염(multiphasic disseminated encephalomyelitis)), 류마티즘 열, 정신분열증, 경피증, 쇼그렌 증후군, 건초염, 혈관염, 또는 백반증인 방법.
69. 40 내지 42의 방법에 있어서, 신경성 염증은 염증성 근육병과 관련되는 방법.
70. 69 의 방법에 있어서, 염증성 근육병은 피부근염, 포함체 근염 또는 다발성 근염인 방법.
71. 40 내지 42의 방법에 있어서, 신경성 염증은 혈관염과 관련되는 방법.
72. 71 의 방법에 있어서, 혈관염은 버거씨 병(Buerger's disease), 뇌혈관염(cerebral vasculitis), 처그-스트라우스 동맥염(Churg-Strauss arteritis), 크리오글로불린혈증(cryoglobulinemia), 본태성 크리오글로불린혈증 혈관염(essential cryoglobulinemic vasculitis), 거대 세포 동맥염, 골퍼 혈관염(Golfer's vasculitis), 헤노흐-쇤라인 자반증(Henoch-Schonlein purpura), 과민증 혈관염, 가와사키 병(Kawasaki disease), 현미경적 다발동맥염/다발맥관염(microscopic polyarteritis/polyangiitis), 결절성 다발동맥염(polyarteritis nodosa), 류마티스성 다발성근육통(polymyalgia rheumatica; PMR), 류마티스성 혈관염, 다카야스 관절염(Takayasu arteritis) 또는 베게너 육아종증(Wegener's granulomatosis)인 방법.
73. 40 내지 42의 방법에 있어서, 신경성 염증은 피부 질환과 관련되는 방법.
74. 73 의 방법에 있어서, 피부 질환은 피부염, 습진, 울체 피부염(statis dermatitis), 화농성 한선염(hidradenitis suppurativa), 건선, 주사(rosacea) 또는 경피증인 방법.
75. 74 의 방법에 있어서, 습진은 아토피성 습진, 접촉성 습진, 건성 습진, 지루 피부염(seborrhoeic dermatitis), 발한이상증(dyshidrosis), 화폐상 습진(discoid eczema), 정맥 습진(venous eczema), 포진성 피부염(dermatitis herpetiformis), 신경피부염(neurodermatitis), 또는 자가습진화(autoeczematization)인 방법.
76. 74 의 방법에 있어서, 건선은 판상형 건선, 손발톱 건선, 물방울양 건선(guttate psoriasis), 두피 건선, 간찰부 건선(inverse psoriasis), 농포성 건선, 또는 홍피성 건선인 방법.
77. 40 내지 42의 방법에 있어서, 신경성 염증은 위장 질환과 관련되는 방법.
78. 77 의 방법에 있어서, 위장 질환은 과민성 대장 질환 또는 염증성 장인 방법.
79. 77 의 방법에 있어서, 염증성 장은 크론씨 병 또는 궤양성 대장염인 방법.
80. 변형 클로스트리듐 독소를 사용하여 만성 신경성 염증의 치료가 필요한 포유류에서 만성 신경성 염증 치료하기 위한 의약품을 제조하는 방법으로서, 변형 클로스트리듐 독소는 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 포함하며, 포유류에 대한 치료적 유효량의 의약품의 투여는 염증 유도 분자의 방출을 감소시킴으로써 만성 신경성 염증과 관련된 증상을 감소시키는 방법.
81. 변형 클로스트리듐 독소를 사용하여 만성 신경성 염증의 치료가 필요한 포유류에서 만성 신경성 염증 치료하기 위한 의약품을 제조하는 방법으로서, 변형 클로스트리듐 독소는 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 포함하며, 포유류에 대한 치료적 유효량의 의약품의 투여는 염증 유도 뉴로펩티드의 방출을 감소시킴으로써 만성 신경성 염증과 관련된 증상을 감소시키는 방법.
82. 변형 클로스트리듐 독소를 사용하여 만성 신경성 염증의 치료가 필요한 포유류에서 만성 신경성 염증 치료하기 위한 의약품을 제조하는 방법으로서, 변형 클로스트리듐 독소는 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 포함하며, 포유류에 대한 치료적 유효량의 의약품의 투여는 염증 유도 프로스타글란딘 또는 글루타메이트의 방출을 감소시킴으로써 만성 신경성 염증과 관련된 증상을 감소시키는 방법.
83. 변형 클로스트리듐 독소를 사용하여 만성 신경성 염증의 치료가 필요한 포유류에서 만성 신경성 염증 치료하기 위한 의약품을 제조하는 방법으로서, 변형 클로스트리듐 독소는 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 및 외인성 프로테아제 절단 부위를 포함하며, 포유류에 대한 치료적 유효량의 의약품의 투여는 염증 유도 분자의 방출을 감소시킴으로써 만성 신경성 염증과 관련된 증상을 감소시키는 방법.
84. 변형 클로스트리듐 독소를 사용하여 만성 신경성 염증의 치료가 필요한 포유류에서 만성 신경성 염증 치료하기 위한 의약품을 제조하는 방법으로서, 변형 클로스트리듐 독소는 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 및 외인성 프로테아제 절단 부위를 포함하며, 포유류에 대한 치료적 유효량의 의약품의 투여는 염증 유도 뉴로펩티드의 방출을 감소시킴으로써 만성 신경성 염증과 관련된 증상을 감소시키는 방법.
85. 변형 클로스트리듐 독소를 사용하여 만성 신경성 염증의 치료가 필요한 포유류에서 만성 신경성 염증 치료하기 위한 의약품을 제조하는 방법으로서, 변형 클로스트리듐 독소는 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 및 외인성 프로테아제 절단 부위를 포함하며, 포유류에 대한 치료적 유효량의 의약품의 투여는 염증 유도 프로스타글란딘 또는 글루타메이트의 방출을 감소시킴으로써 만성 신경성 염증과 관련된 증상을 감소시키는 방법.
86. 변형 클로스트리듐 독소를 사용하여 만성 신경성 염증의 치료가 필요한 포유류에서 만성 신경성 염증을 치료하는 방법으로서, 치료적 유효량의 변형 클로스트리듐 독소를 포유류에 투여하는 단계를 포함함며, 변형 클로스트리듐 독소는 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 포함하며, 변형 클로스트리듐 독소의 투여는 염증 유도 분자의 방출을 감소시킴으로써 만성 신경성 염증과 관련된 증상을 감소시키는 방법.
87. 변형 클로스트리듐 독소를 사용하여 만성 신경성 염증의 치료가 필요한 포유류에서 만성 신경성 염증을 치료하는 방법으로서, 치료적 유효량의 변형 클로스트리듐 독소를 포유류에 투여하는 단계를 포함함며, 변형 클로스트리듐 독소는 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 포함하며, 변형 클로스트리듐 독소의 투여는 염증 유도 뉴로펩티드의 방출을 감소시킴으로써 만성 신경성 염증과 관련된 증상을 감소시키는 방법.
88. 변형 클로스트리듐 독소를 사용하여 만성 신경성 염증의 치료가 필요한 포유류에서 만성 신경성 염증을 치료하는 방법으로서, 치료적 유효량의 변형 클로스트리듐 독소를 포유류에 투여하는 단계를 포함함며, 변형 클로스트리듐 독소는 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 포함하며, 변형 클로스트리듐 독소의 투여는 염증 유도 프로스타글란딘 또는 글루타메이트의 방출을 감소시킴으로써 만성 신경성 염증과 관련된 증상을 감소시키는 방법.
89. 변형 클로스트리듐 독소를 사용하여 만성 신경성 염증의 치료가 필요한 포유류에서 만성 신경성 염증을 치료하는 방법으로서, 치료적 유효량의 변형 클로스트리듐 독소를 포유류에 투여하는 단계를 포함함며, 변형 클로스트리듐 독소는 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 및 외인성 프로테아제 절단 부위를 포함하며, 변형 클로스트리듐 독소의 투여는 염증 유도 분자의 방출을 감소시킴으로써 만성 신경성 염증과 관련된 증상을 감소시키는 방법.
90. 변형 클로스트리듐 독소를 사용하여 만성 신경성 염증의 치료가 필요한 포유류에서 만성 신경성 염증을 치료하는 방법으로서, 치료적 유효량의 변형 클로스트리듐 독소를 포유류에 투여하는 단계를 포함함며, 변형 클로스트리듐 독소는 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 및 외인성 프로테아제 절단 부위를 포함하며, 변형 클로스트리듐 독소의 투여는 염증 유도 뉴로펩티드의 방출을 감소시킴으로써 만성 신경성 염증과 관련된 증상을 감소시키는 방법.
91. 변형 클로스트리듐 독소를 사용하여 만성 신경성 염증의 치료가 필요한 포유류에서 만성 신경성 염증을 치료하는 방법으로서, 치료적 유효량의 변형 클로스트리듐 독소를 포유류에 투여하는 단계를 포함함며, 변형 클로스트리듐 독소는 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 및 외인성 프로테아제 절단 부위를 포함하며, 변형 클로스트리듐 독소의 투여는 염증 유도 프로스타글란딘 또는 글루타메이트의 방출을 감소시킴으로써 만성 신경성 염증과 관련된 증상을 감소시키는 방법.
92. 80 내지 91의 방법에 있어서, 변형 클로스트리듐 독소는 1) 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 2) 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 3) 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 4) 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 5) 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 클로스트리듐 독소 효소 도메인 및 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 또는 6) 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 오피오이드 펩티드 결합 도메인 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인의 선형 아미노-내지-카르복실 단일 폴리펩티드 오더를 포함하는 방법.
93. 80 내지 91의 방법에 있어서, 오피오이드 펩티드 결합 도메인은 엔케팔린, BAM22 펩티드, 엔도모르핀, 엔도르핀, 디노르핀, 노시셉틴 또는 헤모르핀인 방법.
94. 93의 방법에 있어서, 엔케팔린은 Leu-엔케팔린, Met-엔케팔린, Met-엔케팔린 MRGL 또는 Met-엔케팔린 MRF인 방법.
95. 93의 방법에 있어서, 엔케팔린은 SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54 또는 SEQ ID NO: 55을 포함하는 방법.
96. 93의 방법에 있어서, BAM22 펩티드는 BAM22 펩티드 (1-12), BAM22 펩티드 (6-22), BAM22 펩티드 (8-22) 또는 BAM22 펩티드 (1-22)인 방법.
97. 93의 방법에 있어서, BAM22 펩티드는 SEQ ID NO: 56의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 57의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 58의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 59의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 60의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22 또는 SEQ ID NO: 61의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22을 포함하는 방법.
98. 93의 방법에 있어서, 엔도모르핀은 엔도모르핀-1 또는 엔도모르핀-2인 방법.
99. 93의 방법에 있어서, 엔도모르핀은 SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63을 포함하는 방법.
100. 93의 방법에 있어서, 엔도르핀은 엔도르핀-α, 네오엔도르핀-α, 엔도르핀-β, 네오엔도르핀-β 또는 엔도르핀-γ인 방법.
101. 93의 방법에 있어서, 엔도르핀은 SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 또는 SEQ ID NO: 69을 포함하는 방법.
102. 93의 방법에 있어서, 디노르핀은 디노르핀 A, 디노르핀 B (류모르핀) 또는 리모르핀인 방법.
103. 93의 방법에 있어서, 디노르핀은 SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 83, SEQ ID NO: 84, SEQ ID NO: 85, SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 87, SEQ ID NO: 88, SEQ ID NO: 89, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO: 91, SEQ ID NO: 92, SEQ ID NO: 93, SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO: 96, SEQ ID NO: 97, SEQ ID NO: 98, SEQ ID NO: 99 또는 SEQ ID NO: 100을 포함하는 방법.
104. 93의 방법에 있어서, 노시셉틴은 노시셉틴 RK, 노시셉틴, 뉴로펩티드 1, 뉴로펩티드 2 또는 뉴로펩티드 3인 방법.
105. 93의 방법에 있어서, 노시셉틴은 SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 102, SEQ ID NO: 103, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109 또는 SEQ ID NO: 110을 포함하는 방법.
106. 93의 방법에 있어서, 클로스트리듐 독소 전위 도메인은 BoNT/A 전위 도메인, BoNT/B 전위 도메인, BoNT/C1 전위 도메인, BoNT/D 전위 도메인, BoNT/E 전위 도메인, BoNT/F 전위 도메인, BoNT/G 전위 도메인, TeNT 전위 도메인, BaNT 전위 도메인, 또는 BuNT 전위 도메인인 방법.
107. 93의 방법에 있어서, 클로스트리듐 독소 효소 도메인은 BoNT/A 효소 도메인, BoNT/B 효소 도메인, BoNT/C1 효소 도메인, BoNT/D 효소 도메인, BoNT/E 효소 도메인, BoNT/F 효소 도메인, BoNT/G 효소 도메인, TeNT 효소 도메인, BaNT 효소 도메인, 또는 BuNT 효소 도메인인 방법.
108. 83 내지 85 및 89 내지 91 의 방법에 있어서, 외인성 프로테아제 절단 부위는 식물 파파인 절단 부위, 곤충 파파인 절단 부위, 갑각류 파파인 절단 부위, 엔테로키나아제 절단 부위, 사람 리노바이러스 3C 프로테아제 절단 부위, 사람 엔테로바이러스 3C 프로테아제 절단 부위, 담배 식각 바이러스 프로테아제 절단 부위, 담배 엽맥 반점 바이러스 절단 부위, 서브틸리신 절단 부위, 하이드록실아민 절단 부위, 또는 카스파아제 3 절단 부위인 방법.
109. 80 내지 91의 방법에 있어서, 신경성 염증은 여드름(acne), 산 역류/속쓰림(acid reflux/heartburn), 알츠하이머병(Alzheimer's disease), 충수염(appendicitis), 동맥염(arteritis), 관절염, 천식. 죽상동맥경화증, 자가면역 질환, 귀두염, 안검염, 세기관지염, 기관지염, 활액낭염(bursitis), 암, 심장염, 셀리악 병(celiac disease), 소포염(cellulitis), 자궁경관염(cervicitis), 담관염, 담낭염, 융모양막염(chorioamnionitis), 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD), 간경변, 대장염, 결막염, 방광염, 일반 감기, 누선염, 치매, 피부염, 피부근염, 폐기종, 뇌염, 심내막염, 자궁내막염, 장염, 소장결장염, 상과염(epicondylitis), 부고환염, 근막염, 섬유조직염, 위염, 위장염, 치은염, 사구체신염, 설염, 심장 질환, 간염, 화농성 한선염(hidradenitis suppurativa), 고혈압, 회장염, 염증성 신경병증, 인슐린 저항성, 간질성 방광염, 홍채염, 허혈성 심장 질환, 각막염, 각결막염, 후두염, 유방염, 유양돌기염(mastoiditis), 수막염, 대사 증후군(증후군 X), 편두통, 척수염, 심근염, 근염, 신장염, 비만, 제대염(omphalitis), 난소염, 고환염, 골연골염, 골감소증(osteopenia), 골다공증, 골염, 이염, 췌장염, 파킨슨 병(Parkinson's disease), 이하선염, 골반 염증 질환, 심낭염, 복막염, 인두염, 정맥염, 늑막염, 간질성 폐렴(pneumonitis), 직장염(proctitis), 전립선염, 치수염(pulpitis), 신우신염, 문맥염(pylephlebitis), 류마티즘 열, 비염, 난관염, 타액선염, 부비강염, 경직 대장(spastic colon), 구내염, 활막염(synovitis), 건염, 건병증(tendinosis), 건초염, 혈전정맥염(thrombophlebitis), 편도선염, 삼각부염(trigonitis), 종양, 요도염, 포도막염, 질염, 혈관염, 또는 외음염(vulvitis)과 관련되는 방법.
110. 80 내지 91의 방법에 있어서, 신경성 염증은 관절염과 관련되는 방법.
111. 110의 방법에 있어서, 관절염은 단일관절염, 소수관절염, 또는 다발성관절염인 방법.
112. 110의 방법에 있어서, 관절염은 자가면역 질환 또는 비-자가면역 질환인 방법.
113. 110의 방법에 있어서, 관절염은 골관절염, 류마티스 관절염, 소아 특발성 관절염(juvenile idiopathic arthritis), 패혈성 관절염, 척추관절증(spondyloarthropathy), 통풍, 가성통풍, 또는 스틸병인 방법.
114. The method of 113, 척추관절증은 강직성 척추염, 반응성 관절염(라이터 증후군), 건선성 관절염, 염증성 장 질환과 관련된 장병증성 관절염(enteropathic arthritis), 휘플병(Whipple disease) 또는 베체트 병인 방법.
115. 80 내지 91의 방법에 있어서, 신경성 염증은 자가면역 질환과 관련되는 방법.
116. 115 의 방법에 있어서, 자가면역 질환은 전신성 자가면역 질환 또는 기관-특이적 자가면역 질환인 방법.
117. 115 의 방법에 있어서, 자가면역 질환은 급성 파종성 뇌척수염 (ADEM), 에디슨 병, 알러지, 항-인지질 항체 증후군(APS), 자가면역 용혈성 빈혈, 자가면역 간염, 자가면역 내이 질환, 물집유사천포창(bullous pemphigoid), 셀리악 병, 샤가스 병(Chagas disease), 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD), 당뇨병 타입 1 (IDDM), 자궁내막증, 굿패스쳐 증후군(Goodpasture's syndrome), 그레이브스 병(Graves' disease), 길란-바레 증후군(Guillain-Barre syndrome; GBS), 하시모토 갑상선염, 화농성 한선염, 특발성 혈소판감소성 자반증(idiopathic thrombocytopenic purpura), 염증성 장 질환, 간질성 방광염, 낭창 (원판상 홍반성 낭창(discoid lupus erythematosus), 약물-유도 홍반성 낭창(drug-induced lupus erythematosus), 낭창성 신염, 신생아 낭창(neonatal lupus), 아급성 피부 홍반성 낭창(subacute cutaneous lupus erythematosus) 및 전신성 홍반성 낭창 포함), 반상경피증(morphea), 다발성 경화증 (MS), 중증 근무력증, 근병증, 기면증(narcolepsy), 신경근육긴장증(neuromyotonia), 심상성 천포창, 악성 빈혈, 원발성 담즙성 간경변증(primary biliary cirrhosis), 재발성파종성뇌척수염(recurrent disseminated encephalomyelitis) (다상성 파종성 뇌척수염(multiphasic disseminated encephalomyelitis)), 류마티즘 열, 정신분열증, 경피증, 쇼그렌 증후군, 건초염, 혈관염, 또는 백반증인 방법.
118. 80 내지 91의 방법에 있어서, 신경성 염증은 염증성 근육병과 관련되는 방법.
119. 118 의 방법에 있어서, 염증성 근육병은 피부근염, 포함체 근염 또는 다발성 근염인 방법.
120. 80 내지 91의 방법에 있어서, 신경성 염증은 혈관염과 관련되는 방법.
121. 120의 방법에 있어서, 혈관염은 버거씨 병(Buerger's disease), 뇌혈관염(cerebral vasculitis), 처그-스트라우스 동맥염(Churg-Strauss arteritis), 크리오글로불린혈증(cryoglobulinemia), 본태성 크리오글로불린혈증 혈관염(essential cryoglobulinemic vasculitis), 거대 세포 동맥염, 골퍼 혈관염(Golfer's vasculitis), 헤노흐-쇤라인 자반증(Henoch-Schonlein purpura), 과민증 혈관염, 가와사키 병(Kawasaki disease), 현미경적 다발동맥염/다발맥관염(microscopic polyarteritis/polyangiitis), 결절성 다발동맥염(polyarteritis nodosa), 류마티스성 다발성근육통(polymyalgia rheumatica; PMR), 류마티스성 혈관염, 다카야스 관절염(Takayasu arteritis) 또는 베게너 육아종증(Wegener's granulomatosis)인 방법.
122. 80 내지 91의 방법에 있어서, 신경성 염증은 피부 질환과 관련되는 방법.
123. 122의 방법에 있어서, 피부 질환은 피부염, 습진, 울체 피부염(statis dermatitis), 화농성 한선염(hidradenitis suppurativa), 건선, 주사(rosacea) 또는 경피증인 방법.
124. 122의 방법에 있어서, 습진은 아토피성 습진, 접촉성 습진, 건성 습진, 지루 피부염(seborrhoeic dermatitis), 발한이상증(dyshidrosis), 화폐상 습진(discoid eczema), 정맥 습진(venous eczema), 포진성 피부염(dermatitis herpetiformis), 신경피부염(neurodermatitis), 또는 자가습진화(autoeczematization)인 방법.
125. 122의 방법에 있어서, 건선은 판상형 건선, 손발톱 건선, 물방울양 건선(guttate psoriasis), 두피 건선, 간찰부 건선(inverse psoriasis), 농포성 건선, 또는 홍피성 건선인 방법.
126. 80 내지 91의 방법에 있어서, 신경성 염증은 위장 질환과 관련되는 방법.
127. 126의 방법에 있어서, 위장 질환은 과민성 대장 질환 또는 염증성 장인 방법.
128. 126의 방법에 있어서, 염증성 장은 크론씨 병 또는 궤양성 대장염인 방법.
실시예
만성 신경성 염증의 치료
하기 실시예는 특정 실시 형태를 설명하기 위해 제공되며, 본 발명의 범주를 어떤 식으로든 제한하지 않는다.
류마티스 관절염으로 진단된 62세 여성이 관절 강직(joint stiffness) 및 종창(swelling)을 호소하였다. 의사는 관절 강직 및 종창이 만성 신경성 염증으로 인한 것이라고 판단하였다. 이 여성을 본 명세서에 개시된 바와 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 국부 투여 조성물로 병변 영역 근처에서 처치하였다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치후 약 1 내지 3일 후에 이 여성은 관절 강직 및 종창이 감소된 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월 체크-업 시에, 이 여성은 처치된 영역에서 감소된 관절 강직 및 종창이 계속되는 것으로 나타났다. 만성 신경성 염증 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다. 본 명세서에 개시된 바와 같은 변형 클로스트리듐 독소의 유사한 유형의 국부 투여가 임의의 단일관절염, 소수관절염, 또는 다발성관절염, 예를 들어, 골관절염, 소아 특발성 관절염, 패혈성 관절염, 척추관절증 (강직성 척추염, 반응성 관절염(라이터 증후군), 건선성 관절염, 염증성 장 질환과 관련된 장병증성 관절염, 휘플 병 또는 베체트 병 포함), 활막염, 통풍, 가성통풍, 또는 스틸병, 뿐만 아니라, 활액낭염, 류마티즘 열, 또는 건초염과 관련된 만성 신경성 염증을 겪는 환자를 처치하는 데 사용될 수 있다. 게다가, 전신 투여를 또한 사용해 개시된 변형 클로스트리듐 독소를 투여하여 만성 신경성 염증을 처치할 수 있다.
만성 폐쇄성 폐질환 (COPD)으로 진단된 58 세 남성이 호흡 곤란을 호소하였다. 의사는 호흡 곤란이 만성 신경성 염증으로 인한 것이라고 판단하였다. 이 남성을, 본 명세서에 개시된 바와 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 정맥내 투여하여 전신적으로 처치하였다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치후 약 1 내지 3일 후에, 이 남성은 호흡하는 능력이 개선된 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월 체크-업 시에, 이 남성은 개선된 호흡이 계속되는 것으로 나타났다. 만성 신경성 염증 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다. 본 명세서에 개시된 바와 같은 변형 클로스트리듐 독소의 유사한 유형의 전신 투여가 천식, 세기관지염, 기관지염, 폐기종, 후두염, 인두염, 늑막염, 간질성 폐렴, 비염, 부비강염, 또는 임의의 다른 유형의 만성 호흡기 질환과 관련된 만성 신경성 염증을 겪는 환자를 처치하는 데 사용될 수 있다. 게다가, 흡입에 의한 투여를 또한 사용해 개시된 변형 클로스트리듐 독소를 투여하여 만성 신경성 염증을 처치할 수 있다.
피부근염으로 진단된 67세 남성이 근육 통증(muscle soreness)을 호소하였다. 의사는 통증이 만성 신경성 염증으로 인한 것이라고 판단하였다. 이 남성을, 본 명세서에 개시된 바와 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 국부 투여 조성물로 병변 영역 근처에서 처치하였다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치후 약 1 내지 3일 후에 이 남성은 통증이 감소된 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월 체크-업 시에, 이 남성은 개선된 근육 운동 및 감소된 통증이 계속되는 것으로 나타났다. 만성 신경성 염증 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다. 본 명세서에 개시된 바와 같은 변형 클로스트리듐 독소의 유사한 유형의 국부 투여가 포함체 근염, 중증 근무력증, 다발성근염, 또는 임의의 다른 유형의 염증성 근육병, 뿐만 아니라, 근막염, 섬유조직염, 근염, 신경근육긴장증, 건병증, 또는 건염과 관련된 만성 신경성 염증을 겪는 환자를 처치하는 데 사용될 수 있다. 게다가, 전신 투여를 또한 사용해 개시된 변형 클로스트리듐 독소를 투여하여 만성 신경성 염증을 처치할 수 있다.
처그-스트라우스 동맥염으로 진단된 73세 여성이 호흡할 때 색색거린다(wheezing)고 호소하였다. 의사는 색색거림이 만성 신경성 염증으로 인한 것이라고 판단하였다. 이 여성을, 본 명세서에 개시된 바와 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 정맥내 투여하여 전신적으로 처치하였다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치후 약 1 내지 3일 후에 이 여성은 색색거림이 더 이상 없는 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월 체크-업 시에, 이 여성은 호흡할 때 여전히 색색거림이 없는 것으로 나타났다. 만성 신경성 염증 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다. 본 명세서에 개시된 바와 같은 변형 클로스트리듐 독소의 유사한 유형의 전신 투여가 임의의 혈관염, 예를 들어, 버거씨 병, 뇌혈관염, 크리오글로불린혈증, 본태성 크리오글로불린혈증 혈관염, 거대 세포 동맥염, 골퍼 혈관염, 헤노흐-쇤라인 자반증, 과민증 혈관염, 가와사키 병, 현미경적 다발동맥염/다발맥관염, 결절성 다발동맥염, 류마티스성 다발성근육통(PMR), 류마티스성 혈관염, 다카야스 관절염, 또는 베게너 육아종증, 뿐만 아니라, 동맥염, 심장염, 심내막염, 심장 질환, 고혈압, 허혈성 심장 질환, 심근염, 심낭염, 정맥염, 문맥염, 또는 혈전정맥염과 관련된 만성 신경성 염증을 겪는 환자를 처치하는 데 사용될 수 있다.
주사로 진단받은 37세 남성이 피부 발적(redness)을 호소하였다. 의사는 발적이 만성 신경성 염증으로 인한 것이라고 판단하였다. 이 남성을, 본 명세서에 개시된 바와 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 국부 투여 조성물로 병변 영역 근처에서 처치하였다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치후 약 1 내지 3일 후에, 이 남성은 피부 발적이 감소된 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월 체크-업 시에, 이 남성은 개선된 피부 톤 및 감소된 발적이 계속되는 것으로 나타났다. 만성 신경성 염증 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다. 본 명세서에 개시된 바와 같은 변형 클로스트리듐 독소의 유사한 유형의 국부 투여가 여드름, 자궁경관염, 피부염, 습진 (아토피성 습진, 접촉성 습진, 건성 습진, 지루 피부염, 발한이상증, 화폐상 습진, 정맥 습진, 포진성 피부염, 신경피부염, 및 자가습진화 포함), 자궁내막염, 치은염, 설염, 화농성 한선염, 각막염, 각결막염, 유방염, 건선 (판상형 건선, 손발톱 건선, 물방울양 건선, 두피 건선, 간찰부 건선, 농포성 건선, 또는 홍피성 건선), 경피증, 울체 피부염, 구내염, 편도선염, 질염, 백반증 또는 외음염과 관련된 만성 신경성 염증을 겪는 환자를 처치하는 데 사용될 수 있다. 게다가, 전신 투여를 또한 사용해 개시된 변형 클로스트리듐 독소를 투여하여 만성 신경성 염증을 처치할 수 있다.
크론씨 병으로 진단된 33세 여성이 복부 통증 및 설사를 호소하였다. 의사는 복부 통증 및 설사가 만성 신경성 염증으로 인한 것이라고 판단하였다. 이 여성을, 본 명세서에 개시된 바와 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 정맥내 투여하여 전신적으로 처치하였다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치후 약 1 내지 3일 후에 이 여성은 복부 통증이 감소되고 더 이상 설사가 없는 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월 체크-업 시에, 이 여성은 복부 통증 및 설사의 감소가 계속되는 것으로 나타났다. 만성 신경성 염증 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다. 본 명세서에 개시된 바와 같은 변형 클로스트리듐 독소의 유사한 유형의 전신 투여가 임의의 염증성 장 질환, 예를 들어, 궤양성 대장염 (궤양성 직장염, 좌측 대장염, 범대장염 및 전격성 대장염 포함), 임의의 과민성 장 질환, 뿐만 아니라, 장염, 소장결장염, 위염, 위장염, 대사 증후군(증후군 X), 경직 대장, 또는 임의의 다른 위장 질환과 관련된 만성 신경성 염증을 겪는 환자를 처치하는 데 사용될 수 있다.
전신성 홍반성 낭창으로 진단된 46세 남성이 열, 관절통 및 피로를 호소하였다. 의사는 이러한 증상이 만성 신경성 염증으로 인한 것이라고 판단하였다. 이 남성을, 본 명세서에 개시된 바와 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 정맥내 투여하여 전신적으로 처치하였다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치후 약 1 내지 3일 후에 이 남성은 건강이 개선되었고, 열이 사라졌으며, 관절의 통증이 감소되었고 전처럼 피곤하지 않은 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월 체크-업 시에, 이 남성은 감소된 관절통이 계속되고 열이나 피로가 없는 것으로 나타났다. 만성 신경성 염증 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다. 본 명세서에 개시된 바와 같은 변형 클로스트리듐 독소의 유사한 유형의 전신 투여가, 제한없이, 항-인지질 항체 증후군(APS), 물집유사천포창, 샤가스 병, 원판상 홍반성 낭창, 약물-유도 홍반성 낭창, 굿패스쳐 증후군, 길란-바레 증후군, 특발성 혈소판감소성 자반증, 중증 근무력증, 신생아 낭창, 악성 빈혈, 류마티스성 다발성근육통, 류마티스 관절염, 쇼그렌 증후군, 아급성 피부 홍반성 낭창, 베게너 육아종증을 포함하는 임의의 다른 전신성 자가면역 질환과 관련된 만성 신경성 염증을 겪는 환자를 처치하는 데 사용될 수 있다.
하시모토 갑상선염으로 진단된 58세 남성이 우울감, 추위에 대한 민감성(sensitivity to cold), 체중 증가, 건망증, 및 변비를 호소하였다. 의사는 이러한 증상이 만성 신경성 염증으로 인한 것이라고 판단하였다. 이 남성을, 본 명세서에 개시된 바와 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 국부 투여 조성물로 병변 영역 근처에서 처치하였다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치후 약 1 내지 3일 후에 이 남성은 호소한 모든 증상이 감소된 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월 체크-업 시에, 이 남성은 여전히 우울감, 추위에 대한 민감성, 체중 증가, 건망증, 및 변비를 겪지 않는 것으로 나타났다. 만성 신경성 염증 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다. 본 명세서에 개시된 바와 같은 변형 클로스트리듐 독소의 유사한 유형의 전신 투여가, 제한없이, 급성 파종성 뇌척수염 (ADEM), 에디슨 병, 자가면역 용혈성 빈혈, 자가면역 간염(원발성 담즙성 간경변증 포함), 자가면역 내이 질환, 셀리악 병, 크론씨 병, 당뇨병 타입 1, 자궁내막증, 거대 세포 동맥염, 그레이브스 병, 간질성 방광염, 낭창성 신염, 다발성 경화증, 반상경피증, 심상성 천포창, 재발성파종성뇌척수염, 경화성 담관염(sclerosing cholangitis), 궤양성 대장염, 또는 백반증을 포함하는 임의의 다른 국부적 자가면역 질환과 관련된 만성 신경성 염증을 겪는 환자를 처치하는 데 사용될 수 있다. 게다가, 전신 투여를 또한 사용해 개시된 변형 클로스트리듐 독소를 투여하여 만성 신경성 염증을 처치할 수 있다.
류마티스 관절염으로 진단된 59 세 남성이 관절 강직 및 종창을 호소하였다. 의사는 관절 강직 및 종창이 만성 신경성 염증으로 인한 것이라고 판단하였다. 이 남성을 본 명세서에 개시된 바와 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 국부 투여 조성물로 병변 영역 근처에서 처치하였다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치후 약 1 내지 3일 후에 이 남성은 관절 강직 및 종창이 감소된 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월 체크-업 시에, 이 남성은 처치된 영역에서 감소된 관절 강직 및 종창이 계속되는 것으로 나타났다. 만성 신경성 염증 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다. 본 명세서에 개시된 바와 같은 변형 클로스트리듐 독소의 유사한 유형의 국부 투여가 임의의 단일관절염, 소수관절염, 또는 다발성관절염, 예를 들어, 골관절염, 소아 특발성 관절염, 패혈성 관절염, 척추관절증 (강직성 척추염, 반응성 관절염(라이터 증후군), 건선성 관절염, 염증성 장 질환과 관련된 장병증성 관절염, 휘플 병 또는 베체트 병 포함), 활막염, 통풍, 가성통풍, 또는 스틸병, 뿐만 아니라, 활액낭염, 류마티즘 열, 또는 건초염과 관련된 만성 신경성 염증을 겪는 환자를 처치하는 데 사용될 수 있다. 게다가, 전신 투여를 또한 사용해 개시된 변형 클로스트리듐 독소를 투여하여 만성 신경성 염증을 처치할 수 있다.
본 발명의 상기 설명은 실례 및 설명의 목적으로 예시적이다. 본 발명의 진의 및 범주를 벗어남이 없이 변경 및 수정이 가능하다는 것이 당업자에게 명백할 것이다. 본 명세서에 인용된 모든 문헌은 본 명세서에 참고로 포함된다. 하기 청구의 범위는 모든 이러한 변경 및 수정을 포용하는 것으로 해석되는 것을 의도한다.
SEQUENCE LISTING <110> Francis, Joseph Aoki, Roger <120> Methods of Treating Chronic Neurogenic Inflammation Using Modified Clostridial Toxins <130> 18447 (BOT) <150> US 60/982,021 <151> 2007-10-23 <150> US 61/076,228 <151> 2008-06-27 <150> US 61/090,692 <151> 2008-09-10 <160> 125 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 1296 <212> PRT <213> Clostridium botulinum Serotype A <220> <221> DOMAIN <222> (1)...(448) <223> Light chain comprising the enzymatic domain. <221> DOMAIN <222> (449)...(860) <223> Amino-terminal half of heavy chain comprising the translocation domain. <221> DOMAIN <222> (861)...(1296) <223> Carboxyl-terminal half of heavy chain comprising the binding domain. <400> 1 Met Pro Phe Val Asn Lys Gln Phe Asn Tyr Lys Asp Pro Val Asn Gly 1 5 10 15 Val Asp Ile Ala Tyr Ile Lys Ile Pro Asn Ala Gly Gln Met Gln Pro 20 25 30 Val Lys Ala Phe Lys Ile His Asn Lys Ile Trp Val Ile Pro Glu Arg 35 40 45 Asp Thr Phe Thr Asn Pro Glu Glu Gly Asp Leu Asn Pro Pro Pro Glu 50 55 60 Ala 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Clostridium botulinum Serotype B <220> <221> DOMAIN <222> (1)...(441) <223> Light chain comprising the enzymatic domain. <221> DOMAIN <222> (442)...(847) <223> Amino-terminal half of heavy chain comprising the translocation domain. <221> DOMAIN <222> (848)...(1291) <223> Carboxyl-terminal half of heavy chain comprising the binding domain. <400> 2 Met Pro Val Thr Ile Asn Asn Phe Asn Tyr Asn Asp Pro Ile Asp Asn 1 5 10 15 Asn Asn Ile Ile Met Met Glu Pro Pro Phe Ala Arg Gly Thr Gly Arg 20 25 30 Tyr Tyr Lys Ala Phe Lys Ile Thr Asp Arg Ile Trp Ile Ile Pro Glu 35 40 45 Arg Tyr Thr Phe Gly Tyr Lys Pro Glu Asp Phe Asn Lys Ser Ser Gly 50 55 60 Ile Phe Asn Arg Asp Val Cys Glu Tyr Tyr Asp Pro Asp Tyr Leu Asn 65 70 75 80 Thr Asn Asp Lys Lys Asn Ile Phe Leu Gln Thr Met Ile Lys Leu Phe 85 90 95 Asn Arg Ile Lys Ser Lys Pro Leu Gly Glu Lys Leu Leu Glu Met Ile 100 105 110 Ile Asn Gly Ile Pro Tyr Leu Gly Asp Arg Arg Val Pro Leu Glu Glu 115 120 125 Phe Asn Thr Asn Ile Ala Ser Val Thr Val Asn Lys Leu Ile 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the translocation domain. <221> DOMAIN <222> (835)...(1252) <223> Carboxyl-terminal half of heavy chain comprising the binding domain. <400> 5 Met Pro Lys Ile Asn Ser Phe Asn Tyr Asn Asp Pro Val Asn Asp Arg 1 5 10 15 Thr Ile Leu Tyr Ile Lys Pro Gly Gly Cys Gln Glu Phe Tyr Lys Ser 20 25 30 Phe Asn Ile Met Lys Asn Ile Trp Ile Ile Pro Glu Arg Asn Val Ile 35 40 45 Gly Thr Thr Pro Gln Asp Phe His Pro Pro Thr Ser Leu Lys Asn Gly 50 55 60 Asp Ser Ser Tyr Tyr Asp Pro Asn Tyr Leu Gln Ser Asp Glu Glu Lys 65 70 75 80 Asp Arg Phe Leu Lys Ile Val Thr Lys Ile Phe Asn Arg Ile Asn Asn 85 90 95 Asn Leu Ser Gly Gly Ile Leu Leu Glu Glu Leu Ser Lys Ala Asn Pro 100 105 110 Tyr Leu Gly Asn Asp Asn Thr Pro Asp Asn Gln Phe His Ile Gly Asp 115 120 125 Ala Ser Ala Val Glu Ile Lys Phe Ser Asn Gly Ser Gln Asp Ile Leu 130 135 140 Leu Pro Asn Val Ile Ile Met Gly Ala Glu Pro Asp Leu Phe Glu Thr 145 150 155 160 Asn Ser Ser Asn Ile Ser Leu Arg Asn Asn Tyr Met Pro Ser Asn His 165 170 175 Gly Phe Gly Ser Ile Ala Ile Val 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(853)...(1297) <223> Carboxyl-terminal half of heavy chain comprising the binding domain. <400> 7 Met Pro Val Asn Ile Lys Asn Phe Asn Tyr Asn Asp Pro Ile Asn Asn 1 5 10 15 Asp Asp Ile Ile Met Met Glu Pro Phe Asn Asp Pro Gly Pro Gly Thr 20 25 30 Tyr Tyr Lys Ala Phe Arg Ile Ile Asp Arg Ile Trp Ile Val Pro Glu 35 40 45 Arg Phe Thr Tyr Gly Phe Gln Pro Asp Gln Phe Asn Ala Ser Thr Gly 50 55 60 Val Phe Ser Lys Asp Val Tyr Glu Tyr Tyr Asp Pro Thr Tyr Leu Lys 65 70 75 80 Thr Asp Ala Glu Lys Asp Lys Phe Leu Lys Thr Met Ile Lys Leu Phe 85 90 95 Asn Arg Ile Asn Ser Lys Pro Ser Gly Gln Arg Leu Leu Asp Met Ile 100 105 110 Val Asp Ala Ile Pro Tyr Leu Gly Asn Ala Ser Thr Pro Pro Asp Lys 115 120 125 Phe Ala Ala Asn Val Ala Asn Val Ser Ile Asn Lys Lys Ile Ile Gln 130 135 140 Pro Gly Ala Glu Asp Gln Ile Lys Gly Leu Met Thr Asn Leu Ile Ile 145 150 155 160 Phe Gly Pro Gly Pro Val Leu Ser Asp Asn Phe Thr Asp Ser Met Ile 165 170 175 Met Asn Gly His Ser Pro Ile Ser Glu Gly Phe Gly Ala Arg Met Met 180 185 190 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Ile Ile 885 890 895 Ser Asp Ile Ser Gly Phe Asn Ser Ser Val Ile Thr Tyr Pro Asp Ala 900 905 910 Gln Leu Val Pro Gly Ile Asn Gly Lys Ala Ile His Leu Val Asn Asn 915 920 925 Glu Ser Ser Glu Val Ile Val His Lys Ala Met Asp Ile Glu Tyr Asn 930 935 940 Asp Met Phe Asn Asn Phe Thr Val Ser Phe Trp Leu Arg Val Pro Lys 945 950 955 960 Val Ser Ala Ser His Leu Glu Gln Tyr Gly Thr Asn Glu Tyr Ser Ile 965 970 975 Ile Ser Ser Met Lys Lys His Ser Leu Ser Ile Gly Ser Gly Trp Ser 980 985 990 Val Ser Leu Lys Gly Asn Asn Leu Ile Trp Thr Leu Lys Asp Ser Ala 995 1000 1005 Gly Glu Val Arg Gln Ile Thr Phe Arg Asp Leu Pro Asp Lys Phe Asn 1010 1015 1020 Ala Tyr Leu Ala Asn Lys Trp Val Phe Ile Thr Ile Thr Asn Asp Arg 1025 1030 1035 1040 Leu Ser Ser Ala Asn Leu Tyr Ile Asn Gly Val Leu Met Gly Ser Ala 1045 1050 1055 Glu Ile Thr Gly Leu Gly Ala Ile Arg Glu Asp Asn Asn Ile Thr Leu 1060 1065 1070 Lys Leu Asp Arg Cys Asn Asn Asn Asn Gln Tyr Val Ser Ile Asp Lys 1075 1080 1085 Phe Arg Ile Phe Cys Lys Ala Leu Asn Pro 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Glu Asn Ile Tyr Thr Gln Ser 1 5 <210> 28 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(7) <223> Tobacco Etch Virus protease cleavage site. <400> 28 Glu Asn Ile Tyr Leu Gln Gly 1 5 <210> 29 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(7) <223> Tobacco Etch Virus protease cleavage site. <400> 29 Glu Asn Ile Tyr Leu Gln Ser 1 5 <210> 30 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(7) <223> Tobacco Etch Virus protease cleavage site. <400> 30 Glu Asn Val Tyr Phe Gln Gly 1 5 <210> 31 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(7) <223> Tobacco Etch Virus protease cleavage site. <400> 31 Glu Asn Val Tyr Ser Gln Ser 1 5 <210> 32 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(7) <223> Tobacco Etch Virus protease cleavage site. <400> 32 Glu Asn Val Tyr Ser Gln Gly 1 5 <210> 33 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (0)...(0) <223> Tobacco Etch Virus protease cleavage site. <400> 33 Glu Asn Val Tyr Ser Gln Ser 1 5 <210> 34 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(7) <223> human rhinovirus 3C protease cleavage site consensus sequence <221> VARIANT <222> (1)...(1) <223> Xaa can be amino acid, with D or E preferred <221> VARIANT <222> (2)...(2) <223> Xaa can be G, A, V, L, I, M, S or T <400> 34 Xaa Xaa Leu Phe Gln Gly Pro 1 5 <210> 35 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(7) <223> Human Rhinovirus 3C protease cleavage site. <400> 35 Glu Ala Leu Phe Gln Gly Pro 1 5 <210> 36 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(7) <223> Human Rhinovirus 3C protease cleavage site. <400> 36 Glu Val Leu Phe Gln Gly Pro 1 5 <210> 37 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(7) <223> Human Rhinovirus 3C protease cleavage site. <400> 37 Glu Leu Leu Phe Gln Gly Pro 1 5 <210> 38 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(7) <223> Human Rhinovirus 3C protease cleavage site. <400> 38 Asp Ala Leu Phe Gln Gly Pro 1 5 <210> 39 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(7) <223> Human Rhinovirus 3C protease cleavage site. <400> 39 Asp Val Leu Phe Gln Gly Pro 1 5 <210> 40 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (0)...(0) <223> Human Rhinovirus 3C protease cleavage site. <400> 40 Asp Leu Leu Phe Gln Gly Pro 1 5 <210> 41 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(6) <223> subtilisin cleavage site consensus sequence <221> VARIANT <222> (1)...(4) <223> Xaa can be any amino acid <400> 41 Xaa Xaa Xaa Xaa His Tyr 1 5 <210> 42 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(6) <223> subtilisin cleavage site consensus sequence <221> VARIANT <222> (1)...(4) <223> Xaa can be any amino acid <400> 42 Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr His 1 5 <210> 43 <211> 2 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(2) <223> subtilisin cleavage site <400> 43 His Tyr 1 <210> 44 <211> 2 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(2) <223> subtilisin cleavage site <400> 44 Tyr His 1 <210> 45 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(6) <223> subtilisin cleavage site <400> 45 Pro Gly Ala Ala His Tyr 1 5 <210> 46 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(6) <223> hydroxylamine cleavage site <400> 46 Asn Gly Asn Gly Asn Gly 1 5 <210> 47 <211> 2 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(2) <223> hydroxylamine cleavage site <400> 47 Asn Gly 1 <210> 48 <211> 98 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(98) <223> SUMO/ULP-1 protease cleavage site. <400> 48 Met Ala Asp Ser Glu Val Asn Gln Glu Ala Lys Pro Glu Val Lys Pro 1 5 10 15 Glu Val Lys Pro Glu Thr His Ile Asn Leu Lys Val Ser Asp Gly Ser 20 25 30 Ser Glu Ile Phe Phe Lys Ile Lys Lys Thr Thr Pro Leu Arg Arg Leu 35 40 45 Met Glu Ala Phe Ala Lys Arg Gln Gly Lys Glu Met Asp Ser Leu Arg 50 55 60 Phe Leu Tyr Asp Gly Ile Arg Ile Gln Ala Asp Gln Thr Pro Glu Asp 65 70 75 80 Leu Asp Met Glu Asp Asn Asp Ile Ile Glu Ala His Arg Glu Gln Ile 85 90 95 Gly Gly <210> 49 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> flexible G-spacer <400> 49 Gly Gly Gly Gly 1 <210> 50 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> flexible G-spacer <400> 50 Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 <210> 51 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> flexible A-spacer <400> 51 Ala Ala Ala Ala 1 <210> 52 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 52 Tyr Gly Gly Phe Leu 1 5 <210> 53 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 53 Tyr Gly Gly Phe Met 1 5 <210> 54 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 54 Tyr Gly Gly Phe Met Arg Gly Leu 1 5 <210> 55 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 55 Tyr Gly Gly Phe Met Arg Phe 1 5 <210> 56 <211> 22 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 56 Tyr Gly Gly Phe Met Arg Arg Val Gly Arg Pro Glu Trp Trp Met Asp 1 5 10 15 Tyr Gln Lys Arg Tyr Gly 20 <210> 57 <211> 22 <212> PRT <213> Necturus maculosus <400> 57 Tyr Gly Gly Phe Met Arg Arg Val Gly Arg Pro Glu Trp Trp Leu Asp 1 5 10 15 Tyr Gln Lys Arg Tyr Gly 20 <210> 58 <211> 22 <212> PRT <213> Bombina orientalis <400> 58 Tyr Gly Gly Phe Met Arg Arg Val Gly Arg Pro Glu Trp Trp Gln Asp 1 5 10 15 Tyr Gln Lys Arg Tyr Gly 20 <210> 59 <211> 22 <212> PRT <213> Xenopus laevis <400> 59 Tyr Gly Gly Phe Met Arg Arg Val Gly Arg Pro Glu Trp Trp Glu Asp 1 5 10 15 Tyr Gln Lys Arg Tyr Gly 20 <210> 60 <211> 22 <212> PRT <213> Neoceratodus forsteri <400> 60 Tyr Gly Gly Phe Met Arg Arg Val Gly Arg Pro Glu Trp Lys Leu Asp 1 5 10 15 Asn Gln Lys Arg Tyr Gly 20 <210> 61 <211> 21 <212> PRT <213> Danio rerio <400> 61 Tyr Gly Gly Phe Met Arg Arg Val Gly Arg Pro Asp Trp Trp Gln Glu 1 5 10 15 Ser Lys Arg Tyr Gly 20 <210> 62 <211> 4 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 62 Tyr Pro Trp Phe 1 <210> 63 <211> 4 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 63 Tyr Pro Phe Phe 1 <210> 64 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 64 Tyr Gly Gly Phe Met Thr Ser Glu Lys Ser Gln Thr Pro Leu Val Thr 1 5 10 15 <210> 65 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 65 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Lys Tyr Pro Lys 1 5 10 <210> 66 <211> 31 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 66 Tyr Gly Gly Phe Met Thr Ser Glu Lys Ser Gln Thr Pro Leu Val Thr 1 5 10 15 Leu Phe Lys Asn Ala Ile Ile Lys Asn Ala Tyr Lys Lys Gly Glu 20 25 30 <210> 67 <211> 31 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 67 Tyr Gly Gly Phe Met Ser Ser Glu Lys Ser Gln Thr Pro Leu Val Thr 1 5 10 15 Leu Phe Lys Asn Ala Ile Ile Lys Asn Ala His Lys Lys Gly Gln 20 25 30 <210> 68 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 68 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Lys Tyr Pro 1 5 <210> 69 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 69 Tyr Gly Gly Phe Met Thr Ser Glu Lys Ser Gln Thr Pro Leu Val Thr 1 5 10 15 Leu <210> 70 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 70 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Ile Arg Pro Lys Leu Lys Trp Asp Asn 1 5 10 15 Gln <210> 71 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 71 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Ile Arg Pro Lys Leu Lys 1 5 10 <210> 72 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 72 Gly Gly Phe Leu Arg Arg Ile Arg Pro Lys Leu Lys Trp Asp Asn Gln 1 5 10 15 <210> 73 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 73 Gly Gly Phe Leu Arg Arg Ile Arg Pro Lys Leu Lys 1 5 10 <210> 74 <211> 17 <212> PRT <213> Xenopus laevis <400> 74 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Ile Arg Pro Lys Leu Arg Trp Asp Asn 1 5 10 15 Gln <210> 75 <211> 17 <212> PRT <213> Xenopus laevis <400> 75 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Ile Arg Pro Arg Leu Arg Trp Asp Asn 1 5 10 15 Gln <210> 76 <211> 17 <212> PRT <213> Protopterus annectens <400> 76 Tyr Gly Gly Phe Met Arg Arg Ile Arg Pro Lys Ile Arg Trp Asp Asn 1 5 10 15 Gln <210> 77 <211> 17 <212> PRT <213> Danio rerio <400> 77 Tyr Gly Gly Phe Met Arg Arg Ile Arg Pro Lys Leu Arg Trp Asp Asn 1 5 10 15 Gln <210> 78 <211> 17 <212> PRT <213> Anguilla rostrata <400> 78 Tyr Gly Gly Phe Met Arg Arg Ile Arg Pro Lys Leu Lys Trp Asp Ser 1 5 10 15 Gln <210> 79 <211> 29 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 79 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Gln Phe Lys Val Val Thr Arg Ser Gln 1 5 10 15 Glu Asp Pro Asn Ala Tyr Ser Gly Glu Leu Phe Asp Ala 20 25 <210> 80 <211> 28 <212> PRT <213> Rattus norvegicus <400> 80 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Gln Phe Lys Val Val Thr Arg Ser Gln 1 5 10 15 Glu Asn Pro Asn Thr Tyr Ser Glu Asp Leu Asp Val 20 25 <210> 81 <211> 28 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 81 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Gln Phe Lys Val Val Thr Arg Ser Gln 1 5 10 15 Glu Ser Pro Asn Thr Tyr Ser Glu Asp Leu Asp Val 20 25 <210> 82 <211> 29 <212> PRT <213> Cavia porcellus <400> 82 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Gln Phe Lys Val Val Thr Arg Ser Gln 1 5 10 15 Glu Asp Pro Asn Ala Tyr Ser Glu Glu Phe Phe Asp Val 20 25 <210> 83 <211> 29 <212> PRT <213> Sus scrofa <400> 83 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Gln Phe Lys Val Val Thr Arg Ser Gln 1 5 10 15 Glu Asp Pro Asn Ala Tyr Tyr Glu Glu Leu Phe Asp Val 20 25 <210> 84 <211> 29 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 84 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Gln Phe Lys Val Val Thr Arg Ser Gln 1 5 10 15 Glu Asp Pro Asn Ala Tyr Ser Gly Glu Leu Leu Asp Gly 20 25 <210> 85 <211> 29 <212> PRT <213> Bos taurus <400> 85 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Gln Phe Lys Val Val Thr Arg Ser Gln 1 5 10 15 Glu Asp Pro Ser Ala Tyr Tyr Glu Glu Leu Phe Asp Val 20 25 <210> 86 <211> 29 <212> PRT <213> Bufo marinus <400> 86 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Gln Phe Lys Val Thr Thr Arg Ser Glu 1 5 10 15 Glu Asp Pro Ser Thr Phe Ser Gly Glu Leu Ser Asn Leu 20 25 <210> 87 <211> 29 <212> PRT <213> Bombina orientalis <400> 87 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Gln Phe Lys Val Thr Thr Arg Ser Glu 1 5 10 15 Glu Glu Pro Gly Ser Phe Ser Gly Glu Ile Ser Asn Leu 20 25 <210> 88 <211> 29 <212> PRT <213> Xenopus laevis <400> 88 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Gln Phe Lys Val Asn Ala Arg Ser Glu 1 5 10 15 Glu Asp Pro Thr Met Phe Ser Asp Glu Leu Ser Tyr Leu 20 25 <210> 89 <211> 29 <212> PRT <213> Xenopus laevis <400> 89 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Gln Phe Lys Val Asn Ala Arg Ser Glu 1 5 10 15 Glu Asp Pro Thr Met Phe Ser Gly Glu Leu Ser Tyr Leu 20 25 <210> 90 <211> 29 <212> PRT <213> Polypterus senegalus <400> 90 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg His Phe Lys Ile Ser Val Arg Ser Asp 1 5 10 15 Glu Glu Pro Ser Ser Tyr Ser Asp Glu Val Leu Glu Leu 20 25 <210> 91 <211> 27 <212> PRT <213> Danio rerio <400> 91 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg His Phe Lys Ile Ser Val Arg Ser Asp 1 5 10 15 Glu Glu Pro Ser Ser Tyr Glu Asp Tyr Ala Leu 20 25 <210> 92 <211> 27 <212> PRT <213> Anguilla rostrata <400> 92 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg His Phe Lys Ile Ser Val Arg Ser Asp 1 5 10 15 Glu Glu Pro Gly Ser Tyr Asp Val Ile Gly Leu 20 25 <210> 93 <211> 29 <212> PRT <213> Neoceratodus forsteri <400> 93 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg His Phe Lys Ile Thr Val Arg Ser Asp 1 5 10 15 Glu Asp Pro Ser Pro Tyr Leu Asp Glu Phe Ser Asp Leu 20 25 <210> 94 <211> 27 <212> PRT <213> Oncorhynchus masou <400> 94 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg His Tyr Lys Leu Ser Val Arg Ser Asp 1 5 10 15 Glu Glu Pro Ser Ser Tyr Asp Asp Phe Gly Leu 20 25 <210> 95 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 95 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Gln Phe Lys Val Val Thr 1 5 10 <210> 96 <211> 13 <212> PRT <213> Bufo marinus <400> 96 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Gln Phe Lys Val Thr Thr 1 5 10 <210> 97 <211> 13 <212> PRT <213> Xenopus laevis <400> 97 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Gln Phe Lys Val Asn Ala 1 5 10 <210> 98 <211> 13 <212> PRT <213> Polypterus senegalus <400> 98 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg His Phe Lys Ile Ser Val 1 5 10 <210> 99 <211> 13 <212> PRT <213> Neoceratodus forsteri <400> 99 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg His Phe Lys Ile Thr Val 1 5 10 <210> 100 <211> 13 <212> PRT <213> Oncorhynchus masou <400> 100 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg His Tyr Lys Leu Ser Val 1 5 10 <210> 101 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 101 Phe Gly Gly Phe Thr Gly Ala Arg Lys Ser Ala Arg Lys Arg Lys Asn 1 5 10 15 Gln <210> 102 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 102 Phe Gly Gly Phe Thr Gly Ala Arg Lys Ser Ala Arg Lys Leu Ala Asn 1 5 10 15 Gln <210> 103 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 103 Phe Gly Gly Phe Thr Gly Ala Arg Lys Ser Ala Arg Lys Tyr Ala Asn 1 5 10 15 Gln <210> 104 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 104 Phe Gly Gly Phe Thr Gly Ala Arg Lys Ser Ala 1 5 10 <210> 105 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 105 Phe Gly Gly Phe Thr Gly Ala Arg Lys Tyr Ala 1 5 10 <210> 106 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 106 Phe Gly Gly Phe Thr Gly Ala Arg Lys Ser Tyr 1 5 10 <210> 107 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 107 Phe Gly Gly Phe Thr Gly Ala Arg Lys Ser Ala Arg Lys 1 5 10 <210> 108 <211> 30 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 108 Met Pro Arg Val Arg Ser Leu Phe Gln Glu Gln Glu Glu Pro Glu Pro 1 5 10 15 Gly Met Glu Glu Ala Gly Glu Met Glu Gln Lys Gln Leu Gln 20 25 30 <210> 109 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 109 Phe Ser Glu Phe Met Arg Gln Tyr Leu Val Leu Ser Met Gln Ser Ser 1 5 10 15 Gln <210> 110 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 110 Thr Leu His Gln Asn Gly Asn Val 1 5 <210> 111 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> flexible A-spacer <400> 111 Ala Ala Ala Ala Val 1 5 <210> 112 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(5) <223> Consensus sequence for a SUMO/ULP-1 protease cleavage site <221> VARIANT <222> (3)...(5) <223> Xaa can be any amino acid <400> 112 Gly Gly Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 113 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(7) <223> Consensus sequence for a Tobacco Vein Mottling Virus protease cleavage site <221> VARIANT <222> (1)...(2) <223> Xaa can be any amino acid <400> 113 Xaa Xaa Val Arg Phe Gln Gly 1 5 <210> 114 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(7) <223> Consensus sequence for a Tobacco Vein Mottling Virus protease cleavage site <221> VARIANT <222> (1)...(2) <223> Xaa can be any amino acid <400> 114 Xaa Xaa Val Arg Phe Gln Ser 1 5 <210> 115 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(7) <223> Tobacco Vein Mottling Virus protease cleavage site <400> 115 Glu Thr Val Arg Phe Gln Gly 1 5 <210> 116 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (0)...(0) <223> Tobacco Vein Mottling Virus protease cleavage site <400> 116 Glu Thr Val Arg Phe Gln Ser 1 5 <210> 117 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(7) <223> Tobacco Vein Mottling Virus protease cleavage site <400> 117 Asn Asn Val Arg Phe Gln Gly 1 5 <210> 118 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(7) <223> Tobacco Vein Mottling Virus protease cleavage site <400> 118 Asn Asn Val Arg Phe Gln Ser 1 5 <210> 119 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(5) <223> Consensus sequence for a non-human Caspase 3 protease cleavage site <221> VARIANT <222> (2)...(2) <223> Xaa can be any amino acid with E preferred <221> VARIANT <222> (3)...(3) <223> Xaa can be any amino acid <221> VARIANT <222> (5)...(5) <223> Xaa can be any amino acid with G or S preferred <400> 119 Asp Xaa Xaa Asp Xaa 1 5 <210> 120 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(5) <223> Non-human Caspase 3 protease cleavage site <400> 120 Asp Glu Val Asp Gly 1 5 <210> 121 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(5) <223> Non-human Caspase 3 protease cleavage site <400> 121 Asp Glu Val Asp Ser 1 5 <210> 122 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(5) <223> Non-human Caspase 3 protease cleavage site <400> 122 Asp Glu Pro Asp Gly 1 5 <210> 123 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(5) <223> Non-human Caspase 3 protease cleavage site <400> 123 Asp Glu Pro Asp Ser 1 5 <210> 124 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(5) <223> Non-human Caspase 3 protease cleavage site <400> 124 Asp Glu Leu Asp Gly 1 5 <210> 125 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(5) <223> Non-human Caspase 3 protease cleavage site <400> 125 Asp Glu Leu Asp Ser 1 5

Claims (13)

  1. 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 포함하는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 포유류에 투여하는 단계를 포함하며, 조성물의 투여는 염증 유도 분자의 방출을 감소시킴으로써 만성 신경성 염증과 관련된 증상을 감소시키는, 포유류에서 만성 신경성 염증을 치료하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 변형 클로스트리듐 독소는 1) 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 2) 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 3) 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 4) 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 5) 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 클로스트리듐 독소 효소 도메인 및 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 또는 6) 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 오피오이드 펩티드 결합 도메인 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인의 선형 아미노-내지-카르복실 단일 폴리펩티드 오더를 포함하는 방법.
  3. 제1항에 있어서, 오피오이드 펩티드 결합 도메인은 엔케팔린, BAM22 펩티드, 엔도모르핀, 엔도르핀, 디노르핀, 노시셉틴 또는 헤모르핀인 방법.
  4. 제1항에 있어서, 클로스트리듐 독소 전위 도메인은 BoNT/A 전위 도메인, BoNT/B 전위 도메인, BoNT/C1 전위 도메인, BoNT/D 전위 도메인, BoNT/E 전위 도메인, BoNT/F 전위 도메인, BoNT/G 전위 도메인, TeNT 전위 도메인, BaNT 전위 도메인, 또는 BuNT 전위 도메인인 방법.
  5. 제1항에 있어서, 클로스트리듐 독소 효소 도메인은 BoNT/A 효소 도메인, BoNT/B 효소 도메인, BoNT/C1 효소 도메인, BoNT/D 효소 도메인, BoNT/E 효소 도메인, BoNT/F 효소 도메인, BoNT/G 효소 도메인, TeNT 효소 도메인, BaNT 효소 도메인, 또는 BuNT 효소 도메인인 방법.
  6. 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인 및 외인성 프로테아제 절단 부위를 포함하는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 포유류에 투여하는 단계를 포함하며, 조성물의 투여는 염증 유도 분자의 방출을 감소시킴으로써 만성 신경성 염증과 관련된 증상을 감소시키는, 포유류에서 만성 신경성 염증을 치료하는 방법.
  7. 제6항에 있어서, 변형 클로스트리듐 독소는 1) 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 2) 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 3) 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 4) 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 5) 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 클로스트리듐 독소 효소 도메인 및 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 또는 6) 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 오피오이드 펩티드 결합 도메인 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인의 선형 아미노-내지-카르복실 단일 폴리펩티드 오더를 포함하는 방법.
  8. 제6항에 있어서, 오피오이드 펩티드 결합 도메인은 엔케팔린, BAM22 펩티드, 엔도모르핀, 엔도르핀, 디노르핀, 노시셉틴 또는 헤모르핀인 방법.
  9. 제6항에 있어서, 클로스트리듐 독소 전위 도메인은 BoNT/A 전위 도메인, BoNT/B 전위 도메인, BoNT/C1 전위 도메인, BoNT/D 전위 도메인, BoNT/E 전위 도메인, BoNT/F 전위 도메인, BoNT/G 전위 도메인, TeNT 전위 도메인, BaNT 전위 도메인, 또는 BuNT 전위 도메인인 방법.
  10. 제6항에 있어서, 클로스트리듐 독소 효소 도메인은 BoNT/A 효소 도메인, BoNT/B 효소 도메인, BoNT/C1 효소 도메인, BoNT/D 효소 도메인, BoNT/E 효소 도메인, BoNT/F 효소 도메인, BoNT/G 효소 도메인, TeNT 효소 도메인, BaNT 효소 도메인, 또는 BuNT 효소 도메인인 방법.
  11. 제6항에 있어서, 외인성 프로테아제 절단 부위는 식물 파파인 절단 부위, 곤충 파파인 절단 부위, 갑각류 파파인 절단 부위, 엔테로키나아제 절단 부위, 사람 리노바이러스 3C 프로테아제 절단 부위, 사람 엔테로바이러스 3C 프로테아제 절단 부위, 담배 식각 바이러스 프로테아제 절단 부위, 담배 엽맥 반점 바이러스 절단 부위, 서브틸리신 절단 부위, 하이드록실아민 절단 부위, 또는 카스파아제 3 절단 부위인 방법.
  12. 변형 클로스트리듐 독소를 사용하여 만성 신경성 염증의 치료가 필요한 포유류에서 만성 신경성 염증 치료하기 위한 의약품을 제조하는 방법으로서, 변형 클로스트리듐 독소는 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 및 외인성 프로테아제 절단 부위를 포함하며, 포유류에 대한 치료적 유효량의 의약품의 투여는 염증 유도 분자의 방출을 감소시킴으로써 만성 신경성 염증과 관련된 증상을 감소시키는 방법.
  13. 변형 클로스트리듐 독소를 사용하여 만성 신경성 염증의 치료가 필요한 포유류에서 만성 신경성 염증을 치료하는 방법으로서, 치료적 유효량의 변형 클로스트리듐 독소를 포유류에 투여하는 단계를 포함함며, 변형 클로스트리듐 독소는 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 및 외인성 프로테아제 절단 부위를 포함하며, 변형 클로스트리듐 독소의 투여는 염증 유도 분자의 방출을 감소시킴으로써 만성 신경성 염증과 관련된 증상을 감소시키는 방법.
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102174197B1 (ko) * 2019-06-12 2020-11-04 주식회사 앤씨비아이티 생산성이 향상된 비독성 프로테아제

Families Citing this family (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7811584B2 (en) * 2004-06-30 2010-10-12 Allergan, Inc. Multivalent clostridial toxins
US8512984B2 (en) 2004-12-01 2013-08-20 Syntaxin, Ltd. Non-cytotoxic protein conjugates
GB0426394D0 (en) 2004-12-01 2005-01-05 Health Prot Agency Fusion proteins
US8778634B2 (en) 2004-12-01 2014-07-15 Syntaxin, Ltd. Non-cytotoxic protein conjugates
US8603779B2 (en) 2004-12-01 2013-12-10 Syntaxin, Ltd. Non-cytotoxic protein conjugates
US8399400B2 (en) * 2004-12-01 2013-03-19 Syntaxin, Ltd. Fusion proteins
GB0610867D0 (en) 2006-06-01 2006-07-12 Syntaxin Ltd Treatment of pain
CA2716424C (en) 2008-03-04 2015-04-28 Pfizer Limited Methods of treating chronic pain
US8198229B2 (en) * 2009-05-29 2012-06-12 Allergan, Inc. Methods of treating urogenital-neurological disorders using galanin retargeted endopepidases
US20100303798A1 (en) * 2009-05-29 2010-12-02 Allergan, Inc. Methods of Treating Urogenital-Neurological Disorders Using Neurotrophin Retargeted Endopepidases
US20100303791A1 (en) * 2009-05-29 2010-12-02 Allergan, Inc. Methods of Treating Chronic Neurogenic Inflammation Using Glucagon Like Hormone Retargeted Endopepidases
US20100303756A1 (en) * 2009-05-29 2010-12-02 Allergan, Inc. Methods of Treating Urogenital-Neurological Disorders Using Interleukin Retargeted Endopepidases
US20100303757A1 (en) * 2009-05-29 2010-12-02 Allergan, Inc. Methods of Treating Chronic Neurogenic Inflammation Using Interleukin Retargeted Endopepidases
US20100303789A1 (en) * 2009-05-29 2010-12-02 Allergan, Inc. Methods of Treating Chronic Neurogenic Inflammation Using Neurotrophin Retargeted Endopepidases
US20100303788A1 (en) * 2009-05-29 2010-12-02 Allergan, Inc. Methods of Treating Chronic Neurogenic Inflammation Using Galanin Retargeted Endopepidases
US20100303794A1 (en) * 2009-05-29 2010-12-02 Allergan, Inc. Methods of Treating Urogenital-Neurological Disorders Using Glucagon Like Hormone Retargeted Endopepidases
US20100303783A1 (en) * 2009-05-29 2010-12-02 Allergan, Inc. Methods of Treating Urogenital-Neurological Disorders Using Tachykinin Retargeted Endopepidases
RU2535074C2 (ru) 2009-08-28 2014-12-10 Лэйбрис Байолоджикс, Инк. Способы лечения висцеральной боли путем введения антител-антагонистов, направленных против пептида, связанного с геном кальцитонина
US20120207734A1 (en) * 2011-02-14 2012-08-16 Allergan, Inc. Methods of Inhibiting Aberrant Blood Vessel Formation Using Opioid Retargeted Endpeptidases
WO2012112434A1 (en) * 2011-02-14 2012-08-23 Allergan, Inc. Inhibiting aberrant blood vessel formation using retargeted endopeptidases
US20140056870A1 (en) 2012-08-27 2014-02-27 Allergan, Inc. Fusion proteins
US20140120077A1 (en) 2012-10-28 2014-05-01 Revance Therapeutics, Inc. Compositions and Methods for Safe Treatment of Rhinitis
KR20180077343A (ko) 2012-11-21 2018-07-06 입센 바이오이노베이션 리미티드 단백질 가수분해 처리된 폴리펩티드의 제조방법
RS65360B1 (sr) 2014-03-21 2024-04-30 Teva Pharmaceuticals Int Gmbh Antagonistička antitela specifična za peptid genski srodan kalcitoninu i postupci njihove upotrebe
US10556945B2 (en) 2014-03-21 2020-02-11 Teva Pharmaceuticals International Gmbh Antagonist antibodies directed against calcitonin gene-related peptide and methods using same
US11484580B2 (en) 2014-07-18 2022-11-01 Revance Therapeutics, Inc. Topical ocular preparation of botulinum toxin for use in ocular surface disease
CA2986026A1 (en) * 2015-05-15 2016-11-24 Board Of Regents Of The University Of Nebraska Engineered clostridium botulinum toxin adapted to deliver molecules into selected cells
EP3504226A1 (en) * 2016-08-24 2019-07-03 President and Fellows of Harvard College Engineered botulinum neurotoxin
MX2019003337A (es) 2016-09-23 2019-09-26 Teva Pharmaceuticals Int Gmbh Tratamiento para migraña refractaria.
US20210290740A1 (en) * 2018-07-23 2021-09-23 Universitetssykehuset Nord-Norge Hf Neurotoxin b for use in the treatment of skin diseases

Family Cites Families (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2006A (en) * 1841-03-16 Clamp for crimping leather
US4189426A (en) * 1976-04-12 1980-02-19 Hoffmann-La Roche, Inc. Recombinant hormonal compositions and method
US4481139A (en) * 1983-04-13 1984-11-06 Board Of Regents, The University Of Texas System Peptide antagonists of substance P
US4664911A (en) * 1983-06-21 1987-05-12 Board Of Regents, University Of Texas System Immunotoxin conjugates employing toxin B chain moieties
JPS60248659A (ja) * 1984-05-25 1985-12-09 Microbial Chem Res Found ３−〔ｎ−（メルカプトアシル）〕アミノ−４−アリ−ル酪酸誘導体及びそれを有効成分とする鎮痛剤
US5668255A (en) * 1984-06-07 1997-09-16 Seragen, Inc. Hybrid molecules having translocation region and cell-binding region
US4683202A (en) * 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
US4800159A (en) * 1986-02-07 1989-01-24 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or cloning nucleic acid sequences
US5410019A (en) * 1987-09-24 1995-04-25 The Administrators Of The Tulane-Educational Fund Therapeutic peptides
US5919665A (en) * 1989-10-31 1999-07-06 Ophidian Pharmaceuticals, Inc. Vaccine for clostridium botulinum neurotoxin
DE69210645T2 (de) * 1991-02-19 1996-11-28 Takeda Chemical Industries, Ltd., Osaka Verfahren zur Herstellung von cysteinfreien Peptiden
ES2117050T3 (es) * 1991-06-27 1998-08-01 Genelabs Tech Inc Ensayo de cribado para la deteccion de moleculas de union al adn.
US5891842A (en) * 1993-04-09 1999-04-06 Trustees Of Tufts College Methodology for eliciting an analgesic response in a living subject
US5766605A (en) * 1994-04-15 1998-06-16 Mount Sinai School Of Medicine Of The City University Of New York Treatment of autonomic nerve dysfunction with botulinum toxin
JP3122319B2 (ja) * 1994-05-02 2001-01-09 アソシエーティド ユニバーシティーズ，インコーポレイティド 錫−１１７ｍ−含有放射性治療剤
ES2238969T3 (es) * 1994-05-09 2005-09-16 William J. Binder Neurotoxinas presinapticas para el tratamiento de cefaleas migrañosas.
US5538733A (en) * 1994-07-07 1996-07-23 Willmar Poultry Company, Inc. Method of priming an immune response in a one-day old animal
US5846216A (en) * 1995-04-06 1998-12-08 G & P Technologies, Inc. Mucous membrane infusor and method of use for dispensing medications
GB9508204D0 (en) * 1995-04-21 1995-06-07 Speywood Lab Ltd A novel agent able to modify peripheral afferent function
GB9617671D0 (en) * 1996-08-23 1996-10-02 Microbiological Res Authority Recombinant toxin fragments
US6063768A (en) * 1997-09-04 2000-05-16 First; Eric R. Application of botulinum toxin to the management of neurogenic inflammatory disorders
GB9818548D0 (en) * 1998-08-25 1998-10-21 Microbiological Res Authority Treatment of mucas hypersecretion
EP2267010B1 (en) * 1999-08-25 2014-05-07 Allergan, Inc. Activatable recombinant neurotoxins
US6500436B2 (en) * 2000-01-19 2002-12-31 Allergan, Inc. Clostridial toxin derivatives and methods for treating pain
US7138127B1 (en) * 2000-01-19 2006-11-21 Allergan, Inc. Clostridial toxin derivatives and methods for treating pain
US6641820B1 (en) * 2000-01-19 2003-11-04 Allergan, Inc. Clostridial toxin derivatives and methods to treat pain
US7022329B2 (en) * 2002-02-25 2006-04-04 Allergan, Inc. Method for treating neurogenic inflammation pain with botulinum toxin and substance P components
AU2005311086B2 (en) * 2004-12-01 2012-03-29 Allergan, Inc. Fusion proteins
GB0610867D0 (en) 2006-06-01 2006-07-12 Syntaxin Ltd Treatment of pain

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102174197B1 (ko) * 2019-06-12 2020-11-04 주식회사 앤씨비아이티 생산성이 향상된 비독성 프로테아제
WO2020251163A1 (ko) * 2019-06-12 2020-12-17 주식회사 앤씨비아이티 생산성이 향상된 비독성 프로테아제

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EP2214696A1 (en) 2010-08-11
WO2009055350A1 (en) 2009-04-30

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