KR20100087019A - 변형 클로스트리듐 독소를 사용한 비뇨생식기-신경학적 질환의 치료 방법 - Google Patents

변형 클로스트리듐 독소를 사용한 비뇨생식기-신경학적 질환의 치료 방법 Download PDF

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Abstract

본 명세서는 변형 클로스트리듐 독소, 이러한 독소를 포함하는 조성물 및 이러한 변형 클로스트리듐 독소 및 조성물을 사용하여 포유류에서 비뇨생식기-신경학적 질환을 치료하는 방법을 개시한다.

Description

변형 클로스트리듐 독소를 사용한 비뇨생식기-신경학적 질환의 치료 방법 {Methods of Treating Urogenital-Neurological Disorders Using Modified Clostridial Toxins}
본 발명은 35 U.S.C. §119(e)에 따라 2007년 10월 23일 출원된 미국 가특허 출원 제60/982,021호 및 2008년 6월 27일 출원된 미국 가특허 출원 제61/076,228호의 우선권을 주장하며, 이들은 본 명세서에 전체적으로 참고로 포함된다.
클로스트리듐 독소, 예를 들어, 보툴리늄 신경독 (BoNTs), BoNT/A, BoNT/B, BoNT/C1, BoNT/D, BoNT/E, BoNT/F 및 BoNT/G, 및 파상풍 신경독 (TeNT)이 신경 전달을 억제하는 능력이 광범위하게 다양한 치료적 및 미용적 응용에 활용되고 있다, 예를 들어, 문헌 [William J. Lipham, Cosmetic and Clinical Applications of Botulinum Toxin (Slack, Inc., 2004)] 참조. 약학적 조성물로서 구매가능한 클로스트리듐 독소에는, BoNT/A 제제, 예를 들어, 보톡스(BOTOX® (미국 캘리포니아 이르빈 소재의 알러간, 인크.(Allergan, Inc.)), 디스포르트/릴록신(Dysport®/Reloxin® (영국 포턴 다운 소재의 뷰포 입센(Beaufour Ipsen)), 리누라제(Linurase®(캐나다 온타리오 소재의 프롤레늄, 인크.(Prollenium, Inc.)), 뉴로녹스(Neuronox®(한국 오창면 소재의 메디-톡스, 인크.(Medy-Tox, Inc.)), BTX-A (중국 소재의 란저우 인스티튜트 바이올로지컬 프로덕츠(Lanzhou Institute Biological Products)) 및 크세오민(Xeomin®(독일 프랑크푸르트 소재의 메르츠 파마슈티칼스, 게엠베하(Merz Pharmaceuticals, GmbH.)); 및BoNT/B 제제, 예를 들어, 미오블록/뉴로블록(MyoBloc®/NeuroBloc® (미국 캘리포니아주 샌프란시스코 소재의 엘란 파마슈티칼스(Elan Pharmaceuticals))가 포함된다. 예로서, 보톡스(BOTOX®)는 최근 하나 이상의 국가에서 다음 증상(indication)에 대해 승인되었다: 이완불능증(achalasia), 성인성 경직(adult spasticity), 치열(anal fissure), 등 통증(back pain), 안검경련(blepharospasm), 이갈이(bruxism), 경부 디스토니아(cervical dystonia), 본태성 진전(essential tremor), 미간 주름(glabellar line) 또는 과운동성 안면 주름(hyperkinetic facial line), 두통, 반측안면 경련(hemifacial spasm), 방광의 활동과잉(hyperactivity of bladder), 다한증(hyperhidrosis), 소아 뇌성 마비(juvenile cerebral palsy), 다발성 경화증(multiple sclerosis), 근간대성 질환(myoclonic disorder), 코 입술 주름(nasal labial line), 경련성 발성 질환(spasmodic dysphonia), 사시(strabismus) 및 VII 신경 질환.
클로스트리듐 독소 요법은 많은 증상에 성공적으로 사용된다. 일반적으로, 클로스트리듐 독소 치료제의 투여는 잘 허용된다(well tolerated). 그러나, 일부 응용에서의 독소 투여는 이로운 효과를 달성하기 위해서는 더 많은 투여량이 필요하기 때문에 도전적일 수 있다. 더 많은 투여량은 독소가 신체의, 간질액(interstitial fluid) 및 순환계, 예를 들어, 심혈관계 및 림프계를 통해 이동할 수 있는 가능성을 증가시켜서, 독소 치료의 표적 아닌 영역으로 바람직하지 않게 독소를 확산시킬 것이다. 이러한 확산은 바람직하지 않은 부작용, 예를 들어, 치료의 표적이 아닌 뉴런에서의 신경전달물질 방출의 억제 또는 치료의 표적이 아닌 근육의 마비를 야기할 수 있다. 예를 들어, 사경의 치료를 위해 치료적 유효량의 BoNT/A 치료제를 목 근육에 투여한 환자는 구인두(oropharynx)로의 독소의 확산으로 인하여 연하곤란(dysphagia)을 겪을 수 있다. 다른 예로서, 과민성 방광의 치료를 위해 치료적 유효량의 BoNT/A 치료제를 방광에 투여한 환자는 구강건조증(dry month) 및/또는 안구건조증(dry eye)을 겪을 수 있다. 따라서, 치료 부위에서는 효과적이나 독소 치료의 표적이 아닌 영역에서의 효과는 무시할 수 있을 정도 내지 최소인 개선된 클로스트리듐 독소가 여전히 필요하다.
클로스트리듐 독소 치료제는 신경전달물질을 시냅스 틈(synaptic cleft)으로 방출하는 데 사용되는 엑소시토시스 과정을 방해하여 신경전달물질 방출을 억제한다. 현재의 근육-이완(myo-relaxant) 응용을 넘어서서 감각 신경계 질환, 예를 들어, 다양한 종류의 만성 통증, 신경성 염증(neurogenic inflammation) 및 비뇨생식기 질환, 뿐만 아니라, 다른 질환, 예를 들어, 췌장염을 처치하는 것으로 클로스트리듐 독소 요법의 사용을 확장하는 것이 약학 산업에서 크게 요구된다. 클로스트리듐 독소-기반 요법을 확장하는 데 현재 활용되고 있는 한 가지 접근법은 클로스트리듐 독소을 변형하여, 변형 독소(modified toxin)가 비-클로스트리듐 독소 표적 세포에 대해 변경된 세포 표적 능력을 갖도록 하는 것을 수반한다. 이러한 재-표적화(re-targeted) 능력은 클로스트리듐 독소의 자연 발생적 표적 도메인(naturally-occurring targeting domain)을, 비-클로스트리듐 독소 표적 세포 상에 존재하는 수용체에 대한 선택적인 결합 활성을 나타내는 표적 도메인으로 대체하여 달성된다. 표적 도메인에 대한 이러한 변형은 비-클로스트리듐 독소 표적 세포 상에 존재하는 비-클로스트리듐 독소 수용체 (표적 수용체)에 선택적으로 결합할 수 있는 변형 독소를 야기한다(재-표적화). 비-클로스트리듐 독소 표적 세포에 대한 활성을 표적 활성을 갖는 변형 클로스트리듐 독소는 비-클로스트리듐 독소 표적 세포 상에 존재하는 수용체에 결합할 수 있으며, 세포질로 전위(translocate)될 수 있고, 비-클로스트리듐 독소 표적 세포의 SNARE 복합체에 대해 단백분해 효과를 발휘할 수 있다.
본 명세서는 침해수용성 감각 뉴런 매개 비뇨생식기 질환을 겪는 개체(individual)를 치료하기 위한 변형 클로스트리듐 독소 조성물 및 방법을 개시한다. 이는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 치료적 유효량으로 이를 필요로 하는 개체에 투여하여 달성될 수 있다. 개시된 방법은 비뇨생식기 질환의 치료를 위한 안전하고, 저가이며, 외래 환자에 기반한 치료를 제공한다.
따라서, 본 발명의 태양은 오피오이드(opioid) 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 포함하는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 제공한다. 이러한 조성물의 개발에 유용한 변형 클로스트리듐 독소는, 예를 들어, 문헌 [Steward, L.E. et al., Modified Clostridial Toxins with Enhanced Translocation Capabilities and Altered Targeting Activity For Non-Clostridial Toxin Target Cells, 미국 특허출원 제11/776,075호 (2007년 7월 11일); Dolly, J.O. et al., Activatable Clostridial Toxins, 미국 특허출원 제11/829,475 (2007년 7월 27일); Foster, K.A. et al., Fusion Proteins, 국제특허출원 공개 WO 2006/059093 (2006년 6월 8일); 및 Foster, K.A. et al., non - Cytotoxic Protein Conjugates, 국제특허출원 공개 WO 2006/059105호 (2006년 6월 8일)]에 기재되어 있으며, 각각은 본 명세서에 전체적으로 참고로 포함된다. 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물은 약학적 조성물일 수 있다. 이러한 약학적 조성물은, 변형 클로스트리듐 독소에 더하여, 약학적 캐리어(pharmaceutical carrier), 약학적 성분, 또는 둘 모두를 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 태양은 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 포함하는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 치료적 유효량으로 포유류에 투여하는 단계를 포함하는, 포유류에서 비뇨생식기 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 예를 들어, 문헌[Steward, supra, (2007); Dolly, supra, (2007); Foster, supra , WO 2006/059093 (2006); 및 Foster, supra, WO 2006/059105 (Jun. 8, 2006)]에 기재된 것들을 포함하여, 본 명세서에 개시된 임의의 변형 클로스트리듐 독소를 사용할 수 있는 것으로 생각된다.
본 발명의 다른 태양은 포유류에서 비뇨생식기-신경학적 질환을 치료하기 위한 의약품을 제조하기 위한, 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 포함하는 변형 클로스트리듐 독소의 용도로서, 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 포함하는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 치료적 유효량으로 이를 필요로 하는 포유류에 투여하는 단계를 포함하는 용도를 제공한다. 예를 들어, 문헌[Steward, supra, (2007); Dolly, supra, (2007); Foster, supra , WO 2006/059093 (2006); 및 Foster, supra, WO 2006/059105 (Jun. 8, 2006)]에 기재된 것들을 포함하여, 본 명세서에 개시된 임의의 변형 클로스트리듐 독소를 사용할 수 있는 것으로 생각된다.
본 발명의 또 다른 태양은 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 포함하는 변형 클로스트리듐 독소, 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 포함하는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 포유류에 투여하는 단계를 포함하는 사용 방법을 제공한다. 예를 들어, 문헌[Steward, supra, (2007); Dolly, supra, (2007); Foster, supra , WO 2006/059093 (2006); and Foster, supra, WO 2006/059105 (Jun. 8, 2006)]에 개시된 것들을 포함한, 본 명세서에 개시된 임의의 변형 클로스트리듐 독소를 사용할 수 있는 것으로 생각된다.
도 1은 중추 및 말초 뉴런에서의 신경전달물질 방출 및 클로스트리듐 독소 중독(intoxication)의 현재의 패러다임의 개략도를 나타낸다. 도 1A는 중추 및 말초 뉴런의 신경전달물질 방출 메커니즘에 대한 개략도를 나타낸다. 방출 프로세스는 다음 2단계를 포함하는 것으로 설명될 수 있다: 1) 소포 도킹(vesicle docking), 여기서는, 신경전달물질 분자를 함유하는 소포의 소포-결합 SNARE 단백질이 원혈질 막에 위치하는 막-결합 SNARE 단백질과 연합한다; 및 2) 신경전달물질 방출, 여기서는, 소포가 원형질 막과 융합하고 신경전달물질 분자가 엑소시토시스된다. 도 1B은 중추 및 말초 뉴런에서의 파상풍 및 보툴리늄 독소 활성에 대한 중독 메커니즘의 개략도를 나타낸다. 중독 프로세스는 다음 4 단계를 포함하는 것으로서 설명될 수 있다: 1) 수용체 결합, 여기서는, 클로스트리듐 독소가 클로스트리듐 수용체 시스템에 결합하고 중독 프로세스를 개시한다; 2) 복합체 내재화(complex internalization), 여기서는, 독소 결합 후에, 독소/수용체 시스템 콤플렉스를 함유하는 소포가 세포 내에 엔도시토시스된다(endocytosed); 3) 경쇄 전위(light chain translocation), 여기서는, 예를 들어, 소포의 내부 pH의 변화, 클로스트리듐 독소 중쇄의 HN 도메인을 포함하는 채널 포어(channel pore)의 형성, 중쇄로부터 클로스트리듐 독소 경쇄의, 및 활성 경쇄의 방출을 포함하는 다수의 사건이 일어나는 것으로 여겨진다; 그리고 4) 효소 표적 변형(enzymatic target modification), 여기서는, 클로스트리듐 독소의 활성 경쇄가 그의 표적SNARE 기질, 예를 들어, SNAP-25, VAMP 또는 신택신 단백분해적으로 절단하여, 소포 도킹 및 신경전달물질 방출을 방지한다.
도 2는 자연 발생적 클로스트리듐 독소의 도메인 구조(domain organization)를 나타낸다. 단일-사슬 형태는 효소 도메인, 전위 도메인, 및 오피오이드 펩티드 결합 도메인을 포함하는 아미노 내지 카르복실 선형 구조를 나타낸다. 전위 및 효소 도메인 사이에 위치하는 이중-사슬(di-chain) 루프 영역은 더블 SS 브래킷으로 나타내었다. 이러한 영역은 자연 발생적 프로테아제, 예를 들어, 내인성 클로스트리듐 독소 프로테아제 또는 자연에서 생성되는 자연 발생적 프로테아제에 의한 단백분해 절단시, 독소의 단일-사슬 형태를 이중-사슬 형태로 변환시키는 내인성 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위를 포함한다. 단일-사슬 형태 위에, 클로스트리듐 독소 결합 도메인의 HCC 영역이 나타나있다. 이 영역은 아미노 내지 카르복실 선형 구조에서 α-폴드, β4/β5 헤어핀 턴, β-폴드, β8/ β9 헤어핀 턴 및 γ-폴드를 포함하는 β-트레포일(trefoil) 도메인을 나타낸다.
도 3은 변형 독소의 아미노 말단에 위치한 향상된 표적 도메인을 갖는 변형 클로스트리듐 독소를 나타낸다. 도 3A는 결합 요소, 전위 요소, 외인성 프로테아제 절단 부위 (P)를 포함하는 이중-사슬 루프 영역, 및 치료 요소를 포함하는 아미노 내지 카르복실 선형 구조를 갖는 변형 클로스트리듐 독소의 단일-사슬 폴리펩티드 형태를 나타낸다. P 프로테아제에 의한 단백분해 절단시, 독소의 단일사슬 형태가 이중-사슬 형태로 변환된다. 도 3B는 결합 요소, 전위 요소, 외인성 프로테아제 절단 부위 (P)를 포함하는 이중-사슬 루프 영역, 및 치료 요소를 포함하는 아미노 내지 카르복실 선형 구조를 갖는 변형 클로스트리듐 독소의 단일 폴리펩티드 형태를 나타낸다. P 프로테아제 에 의한 단백분해 절단시, 독소의 단일 사슬 이중-사슬 형태로 변환된다.
도 4는 다른 두 도메인 사이에 위치한 향상된 표적 도메인을 갖는 변형 클로스트리듐 독소를 나타낸다. 도 4A는 치료 요소, 외인성 프로테아제 절단 부위 (P)를 포함하는 이중-사슬 루프 영역, 결합 요소, 및 전위 요소를 포함하는 아미노 내지 카르복실 선형 구조를 갖는 변형 클로스트리듐 독소의 단일 폴리펩티드 형태를 나타낸다. P 프로테아제에 의한 단백분해 절단시, 독소의 단일-사슬 형태가 이중-사슬 형태로 변환된다. 도 4B는 전위 요소, 외인성 프로테아제 절단 부위 (P)를 포함하는 이중-사슬 루프 영역, 결합 요소, 및 치료 요소를 포함하는 아미노 내지 카르복실 선형 구조를 갖는 변형 클로스트리듐 독소의 단일 폴리펩티드 형태를 나타낸다. P 프로테아제에 의한 단백분해 절단시, 독소의 단일-사슬 형태가 이중-사슬 형태로 변환된다. 도 4C는 치료 요소, 결합 요소, 외인성 프로테아제 절단 부위 (P)를 포함하는 이중-사슬 루프 영역, 및 전위 요소를 포함하는 아미노 내지 카르복실 선형 구조를 갖는 변형 클로스트리듐 독소의 단일 폴리펩티드 형태를 나타낸다. P 프로테아제에 의한 단백분해 절단시, 독소의 단일-사슬 형태가 이중-사슬 형태로 변환된다. 도 4D는 전위 요소, 결합 요소, 외인성 프로테아제 절단 부위 (P)를 포함하는 이중-사슬 루프 영역, 및 치료 요소를 포함하는 아미노 내지 카르복실 선형 구조를 갖는 변형 클로스트리듐 독소의 단일 폴리펩티드 형태를 나타낸다. P 프로테아제에 의한 단백분해 절단시, 독소의 단일-사슬 형태가 이중-사슬 형태로 변환된다.
도 5는 변형 독소의 카르복실 말단에 위치한 향상된 표적 도메인을 갖는 변형 클로스트리듐 독소를 나타낸다. 도 5A는 치료 요소, 외인성 프로테아제 절단 부위 (P)를 포함하는 이중-사슬 루프 영역, 전위 요소, 및 결합 요소를 포함하는 아미노 내지 카르복실 선형 구조를 갖는 변형 클로스트리듐 독소의 단일 폴리펩티드 형태를 나타낸다. P 프로테아제에 의한 단백분해 절단시, 독소의 단일-사슬 형태가 이중-사슬 형태로 변환된다. 도 5B는 전위 요소, 외인성 프로테아제 절단 부위 (P)를 포함하는 이중-사슬 루프 영역, 치료 요소, 및 결합 요소를 포함하는 아미노 내지 카르복실 선형 구조를 갖는 변형 클로스트리듐 독소의 단일 폴리펩티드 형태를 나타낸다. P 프로테아제에 의한 단백분해 절단시, 독소의 단일-사슬 형태가 이중-사슬 형태로 변환된다.
본 발명의 태양은, 일부분, 변형 클로스트리듐 독소를 제공한다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "변형 클로스트리듐 독소"는 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 포함하는 임의의 분자를 의미한다. 본 발명의 태양을 실시하는 데 유용한 예시적인 변형 클로스트리듐 독소가 예를 들어, 문헌[Steward, supra, (2007); Dolly, supra, (2007); Foster, supra , WO 2006/059093 (2006); Foster, supra, WO 2006/059105 (Jun. 8, 2006)]에 기재되어 있다.
클로스트리듐 보툴리늄(Clostridium botulinum ), 클로스트리듐 테타니(Clostridium tetani ), 클로스트리듐 바라티(Clostridium baratii) 및 클로스트리듐 부티리쿰(Clostridium butyricum)에 의해 생성되는 클로스트리듐 독소가 사람 및 다른 포유류의 치료적 및 미용적 처치에 있어서 가장 널리 사용된다. C. 보툴리늄 균주는 7가지 항원적으로 식별되는 유형의 보툴리늄 독소 (BoNT)를 생성하며, 이는 사람 (BoNT/A, /B, /E 및 /F), 동물 (BoNT/C1 및 /D) 보툴리즘 발생을 조사하여 확인되거나, 토양으로부터 분리되었다(BoNT/G). BoNT들은 서로 대략 35%의 아미노산 일치율(identity)을 가지며, 동일한 기능성 도메인 구조 및 전체 구조적 뼈대를 공유한다. 각 유형의 클로스트리듐 독소에는 아미노산 서열 및 또한 이러한 단백질을 인코딩하는 핵산에 있어서 다소 상이한 서브타입이 속할 수 있음을 당업자는 알 것이다. 예를 들어, 현재 4가지 BoNT/A 서브타입, BoNT/A1, BoNT/A2, BoNT/A3 및 BoNT/A4가 있으며, 특정 서브타입은 다른 BoNT/A 서브타입과 비교할 때 대략 89% 아미노산 일치율을 나타낸다. 7가지의 모든 BoNT 세로타입이 유사한 구조 및 약리학적 특성을 가지며, 각각은 또한 이질적인 세균학적 특성을 나타낸다. 대조적으로, 파상풍 독소 (TeNT)는 C. 테타니(C. tetani)의 균일한 군에 의해 생성된다. 2가지 다른 종의 클로스트리디아(Clostridia), C. 바라티 및 C. 부티리쿰은 또한 각각 독소, BaNT 및 BuNT를 생성하며, 이들은 각각 BoNT/F 및 BoNT/E와 유사하다.
각각의 성숙한 이중-사슬 분자는 3가지의 기능적으로 구분되는 도메인: 1) 신경전달물질 방출기구의 코어 구성요소를 특이적으로 표적화하는 아연-의존성 엔도펩티다아제 활성을 포함하는 메탈로프로테아제 영역을 포함하는 LC에 위치하는 효소 도메인; 2) 세포내 소포로부터 표적 세포의 세포질로 LC의 방출을 촉진하는 HC (HN)의 아미노-말단 반쪽에 포함되는 전위 도메인; 및 3) 표적 세포의 표면에 위치하는 수용체 복합체에 대한 독소의 결합 활성 및 결합 특이성을 결정하는 HC (HC)의 카르복실-말단 반쪽에서 발견되는 결합 도메인을 포함한다. HC 도메인은 기능을 나타내는 대략 동일한 크기의 2가지 개별적인 구조적 특징부를 포함하며, HCN 및 HCC 서브도메인으로 지정된다. 표 1은 예시적인 클로스트리듐 독소에서 발견되는 각 도메인에 대한 대략적인 경계 영역을 제공한다.
표 1. 클로스트리듐 독소 참조 서열 및 영역
독소 SEQ ID NO : LC H N H C
BoNT/A 1 M1-K448 A449-K871 N872-L1296
BoNT/B 2 M1-K441 A442-S858 E859-E1291
BoNT/C1 3 M1-K449 T450-N866 N867-E1291
BoNT/D 4 M1-R445 D446-N862 S863-E1276
BoNT/E 5 M1-R422 K423-K845 R846-K1252
BoNT/F 6 M1-K439 A440-K864 K865-E1274
BoNT/G 7 M1-K446 S447-S863 N864-E1297
TeNT 8 M1-A457 S458-V879 I880-D1315
BaNT 9 M1-K431 N432-I857 I858-E1268
BuNT 10 M1-R422 K423-I847 Y1086-K1251
이러한 3가지 기능성 도메인의 결합, 전위 및 효소 활성이 모두 독성을 위해 필요하다. 이러한 프로세스의 모든 상세는 정확히 알려져 있지 않지만, 클로스트리듐 독소가 뉴런으로 들어가서 신경전달물질 방출을 억제하는 전반적인 세포 중독 메커니즘은 세로타입 및 서브타입에 관계 없이 유사하다. 출원인은 하기 설명으로 제한하는 것을 원하지 않지만, 중독 메커니즘은 적어도 4 단계를 포함하는 것으로 설명될 수 있다: 1) 수용체 결합, 2) 복합체 내재화, 3) 경쇄 전위, 및 4) 효소 표적 변형 (도 1 참조). 프로세스는 클로스트리듐 독소의 HC 도메인이 표적 세포의 원형질 막 표면에 위치하는 독소-특이적인 수용체 시스템에 결합할 때 개시된다. 수용체 복합체의 결합 특이성은, 각각 클로스트리듐 독소 수용체 복합체를 확실히 포함하는 것으로 여겨지는 강글리오사이드와 단백질 수용체의 특이적인 조합에 의해 일부분 달성되는 것으로 생각된다. 일단 결합되면, 독소 /수용체 복합체는 엔도시토시스에 의해 내재화되고 내재화된 소포는 특이적인 세포내 경로에 의해서 분류된다(sorted). 전위 단계는 소포 격막(vesicle compartment)의 산성화에 의해 유발되는 것으로 보인다. 이러한 프로세스는 소수성을 증가시키는 2가지 중요한 pH-의존성 구조 재배열을 개시하고 독소의 이중-사슬 형태의 형성을 촉진하는 것으로 생각된다. 일단 활성화되면, 독소의 경쇄 엔도펩티다아제가 세포내 소포로부터 세포질로 방출되고, 여기서 신경전달물질 방출 기구의 3가지 알려진 코어 구성요소 중 하나를 특이적으로 표적화하는 것으로 보인다. 이러한 코어 단백질, 소포-관련 막 단백질 (VAMP)/시냅토브레빈, 25 kDa의 시냅토소말-관련 단백질 (SNAP-25) 및 신택신(Syntaxin)은 시냅스 소포 도킹 및 신경 말단에서의 융합에 필수적이이며, 수용성 N-에틸말레이미드-감응성 인자-부착 단백질-수용체 (soluble N -ethylmaleimide-sensitive factor-attachment protein-receptor; SNARE) 패밀리의 구성원을 이룬다. BoNT/A 및 BoNT/E는 SNAP-25를 카르복실-말단 영역에서 절단하여, 각각 9개 또는 26개의 아미노산 세그먼트를 방출하고, BoNT/C1은 또한 SNAP-25를 카르복실-말단 근처에서 절단한다. 보툴리늄 세로타입 BoNT/B, BoNT/D, BoNT/F 및 BoNT/G, 및 파상풍 독소는, VAMP의 보존된 중앙 부분에서 작용하며, VAMP의 아미노-말단 부분을 세포질로 방출한다. BoNT/C1는 신택신을 세포질 막 표면 근처의 단일 부위에서 절단한다. 시냅스SNARE의 선택적인 단백분해는 생체 내(in vivo)에서 클로스트리듐 독소에 의해 야기되는 신경전달물질 방출의 차단을 설명한다. 클로스트리듐 독소의 SNARE 단백질 표적은 다양한 비-뉴런 유형에서의 엑소시토시스에 일반적이며; 이러한 세포에서는, 뉴런에서와 같이, 경쇄 펩티다아제 활성이 엑소시토시스를 억제한다, 예를 들어, 문헌[Yann Humeau et al., How Botulinum and Tetanus Neurotoxins Block Neurotransmitter Release, 82(5) Biochimie. 427-446 (2000); Kathryn Turton et al., Botulinum and Tetanus Neurotoxins : Structure , Function and Therapeutic Utility, 27(11) Trends Biochem. Sci. 552-558. (2002); Giovanna Lalli et al., The Journey of Tetanus and Botulinum Neurotoxins in Neurons, 11(9) Trends Microbiol. 431-437, (2003)]을 참고한다.
본 발명의 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소는 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 일부분 포함한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "클로스트리듐 독소 효소 도메인"은 중독 프로세스의 효소 표적 변형 단계를 행할 수 있는 임의의 클로스트리듐 독소 폴리펩티드를 의미한다. 따라서, 클로스트리듐 독소 효소 도메인은 클로스트리듐 독소 기질을 특이적으로 표적화하며 클로스트리듐 독소 기질, 예를 들어, SNARE 단밸질, 예를 들어, SNAP-25 기질, VAMP 기질 및 신택신 기질의 단백분해 절단을 포함한다. 클로스트리듐 독소 효소 도메인의 비-제한적인 예는, 예를 들어, BoNT/A 효소 도메인, BoNT/B 효소 도메인, BoNT/C1 효소 도메인, BoNT/D 효소 도메인, BoNT/E 효소 도메인, BoNT/F 효소 도메인, BoNT/G 효소 도메인, TeNT 효소 도메인, BaNT 효소 도메인, 및 BuNT 효소 도메인을 포함한다. 클로스트리듐 독소 효소 도메인의 다른 비-제한적인 예는, 예를 들어, SEQ ID NO: 1의 아미노산 1-448, SEQ ID NO: 2의 아미노산 1-441, SEQ ID NO: 3의 아미노산 1-449, SEQ ID NO: 4의 아미노산 1-445, SEQ ID NO: 5의 아미노산 1-422, SEQ ID NO: 6의 아미노산 1-439, SEQ ID NO: 7의 아미노산 1-446, SEQ ID NO: 8의 아미노산 1-457, SEQ ID NO: 9의 아미노산 1-431, 및 SEQ ID NO: 10의 아미노산 1-422을 포함한다.
클로스트리듐 독소 효소 도메인은, 제한없이, 자연 발생적 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체, 예를 들어, 클로스트리듐 독소 효소 도메인 이소형 (isoform) 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인 서브타입; 비-자연 발생적 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성(conservative) 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체, 비-보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체, 클로스트리듐 독소 효소 도메인 키메라(chimeric), 이의 활성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체"는, 자연 발생적이든 또는 비- 자연 발생적이든, 개시된 참조 서열(표1)의 상응하는 영역으로부터 적어도 하나의 아미노산이 바뀐 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 의미하며, 참조 서열의 상응하는 영역에 대한 %일치율로 설명될 수 있다. 달리 명확하게 표시되지 않는다면, 개시된 실시 형태를 실시하는 데 유용한 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체는 중독 프로세스의 효소 표적 변형 단계를 행하는 변이체이다. 비-제한적인 예로서, SEQ ID NO: 1의 아미노산 1-448을 포함하는 BoNT/A 효소 도메인 변이체는 SEQ ID NO: 1의 아미노산 영역 1-448과 비교하여, 적어도 하나의 아미노산 상이성(difference), 예를 들어, 아미노산 치환(substitution), 제거(deletion) 또는 추가(addition)을 가지며; SEQ ID NO: 2의 아미노산 1-441 를 포함하는 BoNT/B 효소 도메인 변이체는 SEQ ID NO: 2의 아미노산 영역 1-441과 비교하여 적어도 하나의 아미노산 상이성, 예를 들어, 아미노산 치환, 제거 또는 추가를 가질 것이며; SEQ ID NO: 3의 아미노산 1-449을 포함하는 BoNT/C1 효소 도메인 변이체는 SEQ ID NO: 3의 아미노산 영역 1-449과 비교하여 적어도 하나의 아미노산 상이성, 예를 들어, 아미노산 치환, 제거 또는 추가를 가질 것이며; SEQ ID NO: 4의 아미노산 1-445을 포함하는 BoNT/D 효소 도메인 변이체는 SEQ ID NO: 4의 아미노산 영역 1-445과 비교하여 적어도 하나의 아미노산 상이성, 예를 들어, 아미노산 치환, 제거 또는 추가를 가질 것이며; SEQ ID NO: 5의 아미노산 1-422를 포함하는 BoNT/E 효소 도메인 변이체는 SEQ ID NO: 5의 아미노산 영역 1-422과 비교하여 적어도 하나의 아미노산 상이성, 예를 들어, 아미노산 치환, 제거 또는 추가를 가질 것이며; SEQ ID NO: 6의 아미노산 1-439을 포함하는 BoNT/F 효소 도메인 변이체는 SEQ ID NO: 6의 아미노산 영역 1-439과 비교하여 적어도 하나의 아미노산 상이성, 예를 들어, 아미노산 치환, 제거 또는 추가를 가질 것이며; BoNT/G 효소 도메인 변이체는 SEQ ID NO: 7의 아미노산 영역 1-446과 비교하여, 적어도 하나의 아미노산 상이성, 예를 들어, 아미노산 치환, 제거 또는 추가를 가질 것이며; 그리고, SEQ ID NO: 8의 아미노산 1-457을 포함하는 TeNT 효소 도메인 변이체 는 SEQ ID NO: 8의 아미노산 영역 1-457과 비교하여, 적어도 하나의 아미노산 상이성, 예를 들어, 아미노산 치환, 제거 또는 추가를 가질 것이다.
클로스트리듐 독소의 각각의 세로타입에는 아미노산 서열 및 이러한 단백질을 인코딩하는 핵산에 있어서 다소 상이한 자연 발생적 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체가 속할 수 있음을 당업자는 알고 있다. 예를 들어, 현재 5가지 BoNT/A 서브타입, BoNT/A1, BoNT/A2, BoNT/A3, BoNT/A4 및 BoNT/A5가 있으며, 특이적인 효소 도메인 서브타입은 다른 BoNT/A 효소 도메인 서브타입과 비교했을 때 대략 95%의 아미노산 일치율을 나타낸다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "자연 발생적 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체"는, 제한없이, 대안적으로-스플라이싱된 전사(alternatively-spliced transcript)에 의해 생성된 클로스트리듐 독소 효소 도메인 이소형, 자발적인 돌연변이에 의해 생성된 클로스트리듐 독소 효소 도메인 이소형 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인 서브타입을 포함하는, 자연 발생적 프로세스에 의해 생성된 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 의미한다. 자연 발생적 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체는 자연 발생적 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인과 실질적으로 동일한 방식으로 기능할 수 있으며, 본 발명의 임의의 태양에서 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 대신할 수 있다. 자연 발생적 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체는 자연 발생적 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인으로부터 1개 이상의 아미노산, 2개 이상의 아미노산, 3개 이상의 아미노산, 4개 이상의 아미노산, 5개 이상의 아미노산, 10개 이상의 아미노산, 20개 이상의 아미노산, 30개 이상의 아미노산, 40개 이상의 아미노산, 50개 이상의 아미노산 또는 100개 이상의 아미노산을 치환할 수 있다. 자연 발생적 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체는 또한 자연 발생적 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인으로부터 적어도 10개의 인접한(contiguous) 아미노산, 적어도 15 개의 인접한 아미노산, 적어도 20 개의 인접한 아미노산, 또는 적어도 25 개의 인접한 아미노산을 치환할 수 있으며, 이는 자연 발생적 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인에 대해 적어도 50%의 아미노산 일치율, 65%의 아미노산 일치율, 75%의 아미노산 일치율, 85%의 아미노산 일치율 또는 95%의 아미노산 일치율을 가질 수 있다.
자연 발생적 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체의 비-제한적인 예는 클로스트리듐 독소 효소 도메인 이소형, 예를 들어, BoNT/A 효소 도메인 이소형, BoNT/B 효소 도메인 이소형, BoNT/C1 효소 도메인 이소형, BoNT/D 효소 도메인 이소형, BoNT/E 효소 도메인 이소형, BoNT/F 효소 도메인 이소형, BoNT/G 효소 도메인 이소형, 및 TeNT 효소 도메인 이소형이다. 클로스트리듐 독소 효소 도메인 이소형은 클로스트리듐 독소 효소 도메인 이소형이 기초한 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인과 실질적으로 동일한 방식으로 기능할 수 있으며, 본 발명의 임의의 태양에서 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 대신할 수 있다.
자연 발생적 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체의 다른 비-제한적인 예는 클로스트리듐 독소 효소 도메인 서브타입, 예를 들어, 서브타입 BoNT/A1, BoNT/A2, BoNT/A3, BoNT/A4 및 BoNT/A5로부터의 효소 도메인; 서브타입 BoNT/B1, BoNT/B2, BoNT/B 2가(bivalent) 및 BoNT/B 비단백가수분해성(nonproteolytic)으로부터의 효소 도메인; 서브타입 BoNT/C1-1 및 BoNT/C1-2 로부터의 효소 도메인; 서브타입 BoNT/E1, BoNT/E2 및 BoNT/E3 로부터의 효소 도메인; 및 서브타입 BoNT/F1, BoNT/F2, BoNT/F3 및 BoNT/F4 로부터의 효소 도메인을 포함한다. 클로스트리듐 독소 효소 도메인 서브타입은 클로스트리듐 독소 효소 도메인 서브타입이 기초한 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인과 실질적으로 동일한 방식으로 기능할 수 있으며 본 발명의 임의의 태양에서 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인 도메인을 대신할 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "비-자연 발생적 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체"는, 제한없이, 무작위 돌연변이유발 또는 합리적인 디자인(rational design)을 사용하여 유전자 공학에 의해 생성된 클로스트리듐 독소 효소 도메인 및 화학 합성에 의해 생성된 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 포함하는 인공적인 조작의 도움으로 생성된 임의의 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 의미한다. 비-자연 발생적 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체의 비-제한적인 예는, 예를 들어, 보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체, 비-보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체, 클로스트리듐 독소 효소 도메인 키메라 변이체 및 활성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 단편을 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체"는, 적어도 하나의 아미노산이 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인 서열(표 1)로부터의 원래의 아미노산과 유사한 적어도 하나의 특성을 갖는 다른 아미노산 또는 아미노산 유사체에 의해 치환된 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 의미한다. 특성의 예는, 제한없이, 유사한 크기, 토포그래피(topography), 전하, 소수성, 친수성, 친유성, 공유 결합 능력, 수소 결합 능력, 물리화학적 특성 등, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체는 보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인과 실질적으로 동일한 방식으로 기능할 수 있으며, 본 발명의 임의의 태양에서 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 대신할 수 있다. 보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체는 보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인으로부터 1개 이상의 아미노산, 2개 이상의 아미노산, 3개 이상의 아미노산, 4개 이상의 아미노산, 5개 이상의 아미노산, 10개 이상의 아미노산, 20개 이상의 아미노산, 30개 이상의 아미노산, 40개 이상의 아미노산, 50개 이상의 아미노산, 100개 이상의 아미노산, 또는 200개 이상의 아미노산을 치환할 수 있다. 보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체는 또한 보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인으로부터 적어도 10개의 인접한 아미노산, 적어도 15 개의 인접한 아미노산, 적어도 20 개의 인접한 아미노산, 또는 적어도 25 개의 인접한 아미노산을 치환할 수 있으며, 이는 보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인에 대해 적어도 50%의 아미노산 일치율, 65%의 아미노산 일치율, 75%의 아미노산 일치율, 85%의 아미노산 일치율 또는 95% 아미노산 일치율을 갖는다. 보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체의 비-제한적인 예는, 예를 들어, 보존성 BoNT/A 효소 도메인 변이체, 보존성 BoNT/B 효소 도메인 변이체, 보존성 BoNT/C1 효소 도메인 변이체, 보존성 BoNT/D 효소 도메인 변이체, 보존성 BoNT/E 효소 도메인 변이체, 보존성 BoNT/F 효소 도메인 변이체, 보존성 BoNT/G 효소 도메인 변이체, 및 보존성 TeNT 효소 도메인 변이체이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "비-보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체"는 다음과 같은 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 의미한다; 1) 적어도 하나의 아미노산이 비-보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인으로부터 제거되거나; 2) 적어도 하나의 아미노산이 비-보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인이 기초한 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인에 추가되거나; 또는 3) 적어도 하나의 아미노산이, 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인 서열(표 1)로부터의 원래 아미노산과 유사한 어떠한 특성도 공유하지 않는 다른 아미노산 또는 아미노산 유사체로 치환된다. 비-보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 비-보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체 가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인과 실질적으로 동일한 방식으로 기능할 수 있으며, 본 발명의 임의의 태양에서 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 대신할 수 있다. 비-보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체는 1개 이상의 아미노산, 2개 이상의 아미노산, 3개 이상의 아미노산, 4개 이상의 아미노산, 5개 이상의 아미노산, 및 10개 이상의 아미노산을, 비-보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인으로부터 제거할 수 있다. 비-보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체는 1개 이상의 아미노산, 2개 이상의 아미노산, 3개 이상의 아미노산, 4개 이상의 아미노산, 5개 이상의 아미노산, 및 10개 이상의 아미노산을 비-보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인에 추가할 수 있다. 비-보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체는 1개 이상의 아미노산, 2개 이상의 아미노산, 3개 이상의 아미노산, 4개 이상의 아미노산, 5개 이상의 아미노산, 10개 이상의 아미노산, 20개 이상의 아미노산, 30개 이상의 아미노산, 40개 이상의 아미노산, 50개 이상의 아미노산, 100개 이상의 아미노산, 또는 200개 이상의 아미노산을 비-보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인으로부터 치환할 수 있다. 비-보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체는 또한 적어도 10개의 인접한 아미노산, 적어도 15 개의 인접한 아미노산, 적어도 20 개의 인접한 아미노산, 또는적어도 25개의 인접한 아미노산을 비-보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인으로부터 치환할 수 있으며, 이는 비-보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체이 기초한 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인에 대해 적어도 50%의 아미노산 일치율, 65% 의 아미노산 일치율, 75% 의 아미노산 일치율, 85% 의 아미노산 일치율 또는 95% 의 아미노산 일치율을 갖는다. 비-보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체의 비-제한적인 예는, 예를 들어, 비-보존성 BoNT/A 효소 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/B 효소 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/C1 효소 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/D 효소 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/E 효소 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/F 효소 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/G 효소 도메인 변이체, 및 비-보존성 TeNT 효소 도메인 변이체를 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "클로스트리듐 독소 효소 도메인 키메라"는 클로스트리듐 독소 효소 도메인의 적어도 일부분 및 적어도 하나의 다른 폴리펩티드의 적어도 일부분을 포함하여 독소 효소 도메인 을 형성하는, 적어도 하나의 특성이 표 1의 참조 클로스트리듐 독소 효소 도메인과 상이한 폴리펩티드를 의미하며, 단, 이러한 클로스트리듐 독소 효소 도메인 키메라는 여전히 신경전달물질 방출 기구의 코어 구성 요소를 특이적으로 표적화할 수 있으므로 전체 세포 메커니즘을 행하는 데 참여하여 클로스트리듐 독소가 기질을 단백분해적으로 절단한다. 이러한 클로스트리듐 독소 효소 도메인 키메라는, 예를 들어, 문헌[Lance E. Steward et al., Leucine - based Motif and Clostridial Totoxins, U.S. Patent Publication 2003/0027752 (Feb. 6, 2003); Lance E. Steward et al., Clostridial Neurotoxin Compositions and Modified Clostridial Neurotoxins, U.S. Patent Publication 2003/0219462 (Nov. 27, 2003); and Lance E. Steward et al., Clostridial Neurotoxin Compositions and Modified Clostridial Neurotoxins, U.S. Patent Publication 2004/0220386 (Nov. 4, 2004)]에 기재되어 있으며, 이들 각각은 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "활성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 단편"은 본 발명의 태양에 유용할 수 있는 효소 도메인을 포함하는 임의의 다양한 클로스트리듐 독소 단편을 의미하며, 단, 이러한 효소 도메인 단편은 신경전달물질 방출 기구의 코어 구성요소를 특이적으로 표적화할 수 있으므로 전체 세포 메커니즘을 행하는 데 참여하여 클로스트리듐 독소가 기질을 단백분해적으로 절단한다. 클로스트리듐 독소의 효소 도메인은 길이가 대략 420-460개의 아미노산이며 효소 도메인 (표 1)을 포함한다. 연구는 효소 도메인의 효소 활성을 위해 클로스트리듐 독소 효소 도메인의 전체 길이가 필요하지 않다는 것을 보여주었다. 비-제한적인 예로서, BoNT/A 효소 도메인의 처음 8개의 아미노산 (SEQ ID NO: 1의 잔기 1-8)은 효소적 활성을 위해 필요하지 않다. 다른 비-제한적인 예로서, TeNT 효소 도메인의 처음 8개의 아미노산 (SEQ ID NO: 8의 잔기 1-8) 효소적 활성을 위해 필요하지 않다. 마찬가지로, 효소 도메인의 카르복실-말단은 활성을 위해 필요하지 않다. 비-제한적인 예로서, BoNT/A 효소 도메인의 마지막 32개의 아미노산 (SEQ ID NO: 1의 잔기 417-448)은 효소 활성을 위해 필요하지 않다. 다른 비-제한적인 예로서, TeNT 효소 도메인의 마지막 31개의 아미노산 (SEQ ID NO: 8의 잔기 427-457)은 효소 활성을 위해 필요하지 않다. 따라서, 본 실시 형태의 태양은 길이가, 예를 들어, 적어도 350개의 아미노산, 적어도 375개의 아미노산, 적어도 400개의 아미노산, 적어도 425개의 아미노산 및 적어도 450개의 아미노산인 효소 도메인을 포함하는 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 포함할 수 있다. 본 발명의 다른 태양는 길이가, 예를 들어, 최대 350 개의 아미노산, 최대 375 개의 아미노산, 최대 400 개의 아미노산, 최대 425 개의 아미노산 및 최대 450 개의 아미노산인 효소 도메인을 포함하는 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 포함할 수 있다.
임의의 다양한 서열 정렬(sequence alignment) 방법이 자연 발생적 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체 및 비-자연 발생적 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체의 %일치율을 결정하는 데 사용될 수 있으며, 제한없이, 글로벌(global) 방법, 로컬(local) 방법 및 하이브리드(hybrid) 방법, 예를 들어, 세그먼트 접근(segment approach) 방법이 포함된다. %일치율을 결정하는 프로토콜은 본 명세서의 교시로부터 당업자가 결정할 수 있는 범주에 속하는 일상적인 절차이다.
글로벌 방법은 분자의 처음부터 끝까지의 서열을 정렬하며 개별적인 잔기 쌍의 점수를 더하고 갭 패널티(gap penalty)를 부여하여 최상의 정렬을 결정한다. 비-제한적인 방법은, 예를 들어, CLUSTAL W, 예를 들어, 문헌[Julie D. Thompson et al., CLUSTAL W: Improving the Sensitivity of Progressive Multiple Sequence Alignment Through Sequence Weighting , Position - Specific Gap Penalties and Weight Matrix Choice, 22(22) Nucleic Acids Research 4673-4680 (1994)] 참조; 그리고 반복 세분(iterative refinement) 을 포함한다, 예를 들어, 문헌 [Osamu Gotoh, Significant Improvement in Accuracy of Multiple Protein Sequence Alignments by Iterative Refinement as Assessed by Reference to Structural Alignments, 264(4) J. Mol. Biol. 823-838 (1996)]참조.
로컬 방법은 모든 입력 서열이 공유하는 1개 이상의 보존된 모티프(motif)를 확인하여 서열을 정렬한다. 비-제한적인 방법은, 예를 들어, Match-box , 예를 들어, 문헌[Eric Depiereux and Ernest Feytmans, Match-Box: A Fundamentally New Algorithm for the Simultaneous Alignment of Several Protein Sequences, 8(5) CABIOS 501-509 (1992)] 참조; 깁스 샘플링(Gibbs sampling), 예를 들어, 문헌 [C. E. Lawrence et al., Detecting Subtle Sequence Signals : A Gibbs Sampling Strategy for Multiple Alignment, 262(5131) Science 208-214 (1993)] 참조; Align-M을 포함한다, 예를 들어, 문헌 [Ivo Van Walle et al., Align -M A New Algorithm for Multiple Alignment of Highly Divergent Sequences, 20(9) Bioinformatics,:1428-1435 (2004)] 참조.
하이브리드 방법은 글로벌 정렬 방법과 로컬 정렬 방법의 기능적 측면을 조합한 것이다. 비-제한적인 방법은, 예를 들어, 세그먼트-투-세그먼트 비교(segment-to-segment comparison), 예를 들어, 문헌 [Burkhard Morgenstern et al., Multiple DNA and Protein Sequence Alignment Based 0n Segment - To -Segment Comparison, 93(22) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 12098-12103 (1996)] 참조; T-Coffee, 예를 들어, 문헌 [Ceric Notredame et al., T- Coffee : A Novel Algorithm for Multiple Sequence Alignment, 302(1) J. Mol. Biol. 205-217 (2000)] 참조; MUSCLE, 예를 들어, 문헌 [Robert C. Edgar, MUSCLE : Multiple Sequence Alignment With High Score Accuracy and High Throughput, 32(5) Nucleic Acids Res. 1792-1797 (2004)] 참조; 및 DIALIGN-T를 포함한다, 예를 들어, 문헌 [Amarendran R Subramanian et al., DIALIGN -T: An Improved Algorithm for Segment - Based Multiple Sequence Alignment, 6(1) BMC Bioinformatics 66 (2005)] 참조.
따라서, 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 변형 클로스트리듐 독소는 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, 클로스트리듐 독소 효소 도메인은 자연 발생적 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체, 예를 들어, 클로스트리듐 독소 효소 도메인 이소형 또는 클로스트리듐 독소 효소 도메인 서브타입을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 클로스트리듐 독소 효소 도메인은 비-자연 발생적 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체, 비-보존성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체, 클로스트리듐 독소 키메라 효소 도메인, 활성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
다른 실시 형태에서, 클로스트리듐 독소 효소 도메인은 BoNT/A 효소 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, BoNT/A 효소 도메인은 SEQ ID NO: 1의 아미노산 1-448을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/A 효소 도메인은 자연 발생적 BoNT/A 효소 도메인 변이체, 예를 들어, BoNT/A 이소형으로부터의 효소 도메인 또는 BoNT/A 서브타입로부터의 효소 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/A 효소 도메인은 SEQ ID NO: 1의 자연 발생적 BoNT/A 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-448, 예를 들어, SEQ ID NO: 1의 BoNT/A 이소형의 아미노산 1-448 또는 SEQ ID NO: 1의 BoNT/A 서브타입의 아미노산 1-448을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/A 효소 도메인은 비-자연 발생적 BoNT/A 효소 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성 BoNT/A 효소 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/A 효소 도메인 변이체, BoNT/A 키메라 효소 도메인, 활성 BoNT/A 효소 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/A 효소 도메인은 SEQ ID NO: 1의 비-자연 발생적 BoNT/A 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-448, 예를 들어, SEQ ID NO: 1의 보존성 BoNT/A 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-448, SEQ ID NO: 1의 비-보존성 BoNT/A 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-448, SEQ ID NO: 1의 활성 BoNT/A 효소 도메인 단편의 아미노산 1-448, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/A 효소 도메인은 SEQ ID NO: 1의 아미노산 1-448에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/A 효소 도메인은 SEQ ID NO: 1의 아미노산 1-448에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95%인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/A 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 1의 아미노산 1-448에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 1의 아미노산 1-448에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 1의 아미노산 1-448에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 1의 아미노산 1-448에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 1의 아미노산 1-448에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 1의 아미노산 1-448에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/A 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 1의 아미노산 1-448에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 1의 아미노산 1-448에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 1의 아미노산 1-448에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 1의 아미노산 1-448에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 1의 아미노산 1-448에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 1의 아미노산 1-448에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 클로스트리듐 독소 효소 도메인은BoNT/B 효소 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, BoNT/B 효소 도메인은 SEQ ID NO: 2의 아미노산 1-441을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/B 효소 도메인은 자연 발생적 BoNT/B 효소 도메인 변이체, 예를 들어, BoNT/B 이소형으로부터의 효소 도메인 또는BoNT/B 서브타입으로부터의 효소 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/B 효소 도메인은 SEQ ID NO: 2의 자연 발생적 BoNT/B 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-441, 예를 들어, SEQ ID NO: 2의 BoNT/B 이소형의 아미노산 1-441 또는 SEQ ID NO: 2의 BoNT/B 서브타입의 아미노산 1-441을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/B 효소 도메인은 비-자연 발생적 BoNT/B 효소 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성 BoNT/B 효소 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/B 효소 도메인 변이체, BoNT/B 키메라 효소 도메인, 활성 BoNT/B 효소 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/B 효소 도메인은 SEQ ID NO: 2의 비-자연 발생적 BoNT/B 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-441, 예를 들어, SEQ ID NO: 2의 보존성 BoNT/B 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-441, SEQ ID NO: 2의 비-보존성 BoNT/B 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-441, SEQ ID NO: 2의 활성 BoNT/B 효소 도메인 단편의 아미노산 1-441, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/B 효소 도메인은 SEQ ID NO: 2의 아미노산 1-441에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95% 인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/B 효소 도메인은 SEQ ID NO: 2의 아미노산 1-441에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95% 인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/B 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 2의 아미노산 1-441에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 2의 아미노산 1-441에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 2의 아미노산 1-441에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 2의 아미노산 1-441에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 2의 아미노산 1-441에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 2의 아미노산 1-441에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/B 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 2의 아미노산 1-441에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 2의 아미노산 1-441에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 2의 아미노산 1-441에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 2의 아미노산 1-441에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 2의 아미노산 1-441에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 2의 아미노산 1-441에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 클로스트리듐 독소 효소 도메인은 BoNT/C1 효소 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, BoNT/C1 효소 도메인은 SEQ ID NO: 3의 아미노산 1-449를 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/C1 효소 도메인은 자연 발생적 BoNT/C1 효소 도메인 변이체, 예를 들어, BoNT/C1 이소형으로부터의 효소 도메인 또는 BoNT/C1 서브타입으로부터의 효소 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/C1 효소 도메인은 SEQ ID NO: 3의 자연 발생적 BoNT/C1 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-449, 예를 들어, SEQ ID NO: 3의 BoNT/C1 이소형의 아미노산 1-449 또는 SEQ ID NO: 3의 BoNT/C1 서브타입의 아미노산 1-449를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/C1 효소 도메인은 비-자연 발생적 BoNT/C1 효소 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성 BoNT/C1 효소 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/C1 효소 도메인 변이체, BoNT/C1 키메라 효소 도메인, 활성 BoNT/C1 효소 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/C1 효소 도메인은 SEQ ID NO: 3의 비-자연 발생적 BoNT/C1 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-449, 예를 들어, SEQ ID NO: 3의 보존성 BoNT/C1 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-449, SEQ ID NO: 3의 비-보존성 BoNT/C1 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-449, SEQ ID NO: 3의 활성 BoNT/C1 효소 도메인 단편의 아미노산 1-449, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/C1 효소 도메인은 SEQ ID NO: 3의 아미노산 1-449에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/C1 효소 도메인은 SEQ ID NO: 3의 아미노산 1-449에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95%인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/C1 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 3의 아미노산 1-449에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 3의 아미노산 1-449에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 3의 아미노산 1-449에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 3의 아미노산 1-449에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 3의 아미노산 1-449에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 3의 아미노산 1-449에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/C1 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 3의 아미노산 1-449에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 3의 아미노산 1-449에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 3의 아미노산 1-449에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 3의 아미노산 1-449에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 3의 아미노산 1-449에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 3의 아미노산 1-449에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 클로스트리듐 독소 효소 도메인은 BoNT/D 효소 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, BoNT/D 효소 도메인은 SEQ ID NO: 4의 아미노산 1-445를 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/D 효소 도메인은 자연 발생적 BoNT/D 효소 도메인 변이체, 예를 들어, BoNT/D 이소형으로부터의 효소 도메인 또는 BoNT/D 서브타입으로부터의 효소 도메인를 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/D 효소 도메인은 SEQ ID NO: 4의 자연 발생적 BoNT/D 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-445, 예를 들어, SEQ ID NO: 4의 BoNT/D 이소형의 아미노산 1-445 또는 SEQ ID NO: 4의 BoNT/D 서브타입의 아미노산 1-445를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/D 효소 도메인은 비-자연 발생적 BoNT/D 효소 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성 BoNT/D 효소 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/D 효소 도메인 변이체, BoNT/D 키메라 효소 도메인, 활성 BoNT/D 효소 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/D 효소 도메인은 SEQ ID NO: 4의 비-자연 발생적 BoNT/D 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-445, 예를 들어, SEQ ID NO: 4의 보존성 BoNT/D 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-445, SEQ ID NO: 4의 비-보존성 BoNT/D 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-445, SEQ ID NO: 4의 활성 BoNT/D 효소 도메인 단편의 아미노산 1-445, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/D 효소 도메인은 SEQ ID NO: 4의 아미노산 1-445에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/D 효소 도메인은 SEQ ID NO: 4의 아미노산 1-445에 대한 아미노산 일치율, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95%인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/D 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 4의 아미노산 1-445에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 4의 아미노산 1-445에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 4의 아미노산 1-445에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 4의 아미노산 1-445에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 4의 아미노산 1-445에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 4의 아미노산 1-445에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/D 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 4의 아미노산 1-445에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 4의 아미노산 1-445에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 4의 아미노산 1-445에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 4의 아미노산 1-445에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 4의 아미노산 1-445에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 4의 아미노산 1-445에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 클로스트리듐 독소 효소 도메인은 BoNT/E 효소 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, BoNT/E 효소 도메인은 SEQ ID NO: 5의 아미노산 1-422를 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/E 효소 도메인은 자연 발생적 BoNT/E 효소 도메인 변이체, 예를 들어, BoNT/E 이소형으로부터의 효소 도메인 또는 BoNT/E 서브타입으로부터의 효소 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/E 효소 도메인은 SEQ ID NO: 5의 자연 발생적 BoNT/E 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-422, 예를 들어, SEQ ID NO: 5의 BoNT/E 이소형의 아미노산 1-422 또는 SEQ ID NO: 5의 BoNT/E 서브타입의 아미노산 1-422을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/E 효소 도메인은 비-자연 발생적 BoNT/E 효소 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성 BoNT/E 효소 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/E 효소 도메인 변이체, BoNT/E 키메라 효소 도메인, 활성 BoNT/E 효소 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/E 효소 도메인은 SEQ ID NO: 5의 비-자연 발생적 BoNT/E 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-422, 예를 들어, SEQ ID NO: 5의 보존성 BoNT/E 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-422, SEQ ID NO: 5의 비-보존성 BoNT/E 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-422, SEQ ID NO: 5의 활성 BoNT/E 효소 도메인 단편의 아미노산 1-422, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/E 효소 도메인은 SEQ ID NO: 5의 아미노산 1-422에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/E 효소 도메인은 SEQ ID NO: 5의 아미노산 1-422에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95% 인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/E 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 5의 아미노산 1-422에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 5의 아미노산 1-422에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 5의 아미노산 1-422에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 5의 아미노산 1-422에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 5의 아미노산 1-422에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 5의 아미노산 1-422에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/E 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 5의 아미노산 1-422에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 5의 아미노산 1-422에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 5의 아미노산 1-422에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 5의 아미노산 1-422에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 5의 아미노산 1-422에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 5의 아미노산 1-422에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 클로스트리듐 독소 효소 도메인은 BoNT/F 효소 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, BoNT/F 효소 도메인은 SEQ ID NO: 6의 아미노산 1-439를 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/F 효소 도메인은 자연 발생적 BoNT/F 효소 도메인 변이체, 예를 들어, BoNT/F 이소형으로부터의 효소 도메인 또는BoNT/F 서브타입으로부터의 효소 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/F 효소 도메인은 SEQ ID NO: 6의 자연 발생적 BoNT/F 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-439, 예를 들어, SEQ ID NO: 6의 BoNT/F 이소형의 아미노산 1-439 또는 SEQ ID NO: 6의 BoNT/F 서브타입의 아미노산 1-439을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/F 효소 도메인은 비-자연 발생적 BoNT/F 효소 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성 BoNT/F 효소 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/F 효소 도메인 변이체, BoNT/F 키메라 효소 도메인, 활성 BoNT/F 효소 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/F 효소 도메인은 SEQ ID NO: 6의 비-자연 발생적 BoNT/F 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-439, 예를 들어, SEQ ID NO: 6의 보존성 BoNT/F 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-439, SEQ ID NO: 6의 비-보존성 BoNT/F 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-439, SEQ ID NO: 6의 활성 BoNT/F 효소 도메인 단편의 아미노산 1-439, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/F 효소 도메인은 SEQ ID NO: 6의 아미노산 1-439에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/F 효소 도메인은 SEQ ID NO: 6의 아미노산 1-439에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95% 인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/F 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 6의 아미노산 1-439에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 6의 아미노산 1-439에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 6의 아미노산 1-439에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 6의 아미노산 1-439에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 6의 아미노산 1-439에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 6의 아미노산 1-439에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/F 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 6의 아미노산 1-439에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 6의 아미노산 1-439에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 6의 아미노산 1-439에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 6의 아미노산 1-439에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 6의 아미노산 1-439에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 6의 아미노산 1-439에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 클로스트리듐 독소 효소 도메인은 BoNT/G 효소 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, BoNT/G 효소 도메인은 SEQ ID NO: 7의 아미노산 1-446을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/G 효소 도메인은 자연 발생적 BoNT/G 효소 도메인 변이체, 예를 들어, BoNT/G 이소형으로부터의 효소 도메인 또는 BoNT/G 서브타입으로부터의 효소 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/G 효소 도메인은 SEQ ID NO: 7의 자연 발생적 BoNT/G 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-446, 예를 들어, SEQ ID NO: 7의 BoNT/G 이소형의 아미노산 1-446 또는 SEQ ID NO: 7의 BoNT/G 서브타입의 아미노산 1-446을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/G 효소 도메인은 비-자연 발생적 BoNT/G 효소 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성 BoNT/G 효소 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/G 효소 도메인 변이체, BoNT/G 키메라 효소 도메인, 활성 BoNT/G 효소 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/G 효소 도메인은 SEQ ID NO: 7의 비-자연 발생적 BoNT/G 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-446, 예를 들어, SEQ ID NO: 7의 보존성 BoNT/G 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-446, SEQ ID NO: 7의 비-보존성 BoNT/G 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-446, SEQ ID NO: 7의 활성 BoNT/G 효소 도메인 단편의 아미노산 1-446, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/G 효소 도메인은 SEQ ID NO: 7의 아미노산 1-446에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/G 효소 도메인은 SEQ ID NO: 7의 아미노산 1-446에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95%인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/G 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 7의 아미노산 1-446에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 7의 아미노산 1-446에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 7의 아미노산 1-446에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 7의 아미노산 1-446에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 7의 아미노산 1-446에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 7의 아미노산 1-446에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/G 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 7의 아미노산 1-446에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 7의 아미노산 1-446에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 7의 아미노산 1-446에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 7의 아미노산 1-446에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 7의 아미노산 1-446에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 7의 아미노산 1-446에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 클로스트리듐 독소 효소 도메인은TeNT 효소 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, TeNT 효소 도메인은 SEQ ID NO: 8의 아미노산 1-457을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, TeNT 효소 도메인은 자연 발생적 TeNT 효소 도메인 변이체, 예를 들어, TeNT 이소형으로부터의 효소 도메인 또는 TeNT 서브타입으로부터의 효소 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, TeNT 효소 도메인은 SEQ ID NO: 8의 자연 발생적 TeNT 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-457, 예를 들어, SEQ ID NO: 8의 TeNT 이소형의 아미노산 1-457 또는 SEQ ID NO: 8의 TeNT 서브타입의 아미노산 1-457을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, TeNT 효소 도메인은 비-자연 발생적 TeNT 효소 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성 TeNT 효소 도메인 변이체, 비-보존성 TeNT 효소 도메인 변이체, TeNT 키메라 효소 도메인, 활성 TeNT 효소 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, TeNT 효소 도메인은 SEQ ID NO: 8의 비-자연 발생적 TeNT 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-457, 예를 들어, SEQ ID NO: 8의 보존성 TeNT 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-457, SEQ ID NO: 8의 비-보존성 TeNT 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-457, SEQ ID NO: 8의 활성 TeNT 효소 도메인 단편의 아미노산 1-457, 또는 이들의 임의의 조합.
본 실시 형태의 다른 태양에서, TeNT 효소 도메인은 SEQ ID NO: 8의 아미노산 1-457에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, TeNT 효소 도메인은 SEQ ID NO: 8의 아미노산 1-457에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95%인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, TeNT 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 8의 아미노산 1-457에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 8의 아미노산 1-457에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 8의 아미노산 1-457에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 8의 아미노산 1-457에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 8의 아미노산 1-457에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 8의 아미노산 1-457에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, TeNT 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 8의 아미노산 1-457에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 8의 아미노산 1-457에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 8의 아미노산 1-457에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 8의 아미노산 1-457에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 8의 아미노산 1-457에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 8의 아미노산 1-457에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 클로스트리듐 독소 효소 도메인은 BaNT 효소 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, BaNT 효소 도메인은 SEQ ID NO: 9의 아미노산 1-431을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BaNT 효소 도메인은 자연 발생적 BaNT 효소 도메인 변이체, 예를 들어, BaNT 이소형으로부터의 효소 도메인 또는BaNT 서브타입으로부터의 효소 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BaNT 효소 도메인은 SEQ ID NO: 9의 자연 발생적 BaNT 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-431, 예를 들어, SEQ ID NO: 9의 BaNT 이소형의 아미노산 1-431 또는 SEQ ID NO: 9의 BaNT 서브타입의 아미노산 1-431을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BaNT 효소 도메인은 비-자연 발생적 BaNT 효소 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성 BaNT 효소 도메인 변이체, 비-보존성 BaNT 효소 도메인 변이체, BaNT 키메라 효소 도메인, 활성 BaNT 효소 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BaNT 효소 도메인은 SEQ ID NO: 9의 비-자연 발생적 BaNT 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-431, 예를 들어, SEQ ID NO: 9의 보존성 BaNT 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-431, SEQ ID NO: 9의 비-보존성 BaNT 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-431, SEQ ID NO: 9의 활성 BaNT 효소 도메인 단편의 아미노산 1-431, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BaNT 효소 도메인은 SEQ ID NO: 9의 아미노산 1-431에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BaNT 효소 도메인은 SEQ ID NO: 9의 아미노산 1-431에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95%인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BaNT 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 9의 아미노산 1-431에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 9의 아미노산 1-431에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 9의 아미노산 1-431에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 9의 아미노산 1-431에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 9의 아미노산 1-431에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 1-431에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BaNT 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 9의 아미노산 1-431에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 9의 아미노산 1-431에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 9의 아미노산 1-431에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 9의 아미노산 1-431에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 9의 아미노산 1-431에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 1-431에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 클로스트리듐 독소 효소 도메인은 BuNT 효소 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, BuNT 효소 도메인은 SEQ ID NO: 10의 아미노산 1-422을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BuNT 효소 도메인은 자연 발생적 BuNT 효소 도메인 변이체, 예를 들어, BuNT 이소형으로부터의 효소 도메인 또는BuNT 서브타입으로부터의 효소 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BuNT 효소 도메인은 SEQ ID NO: 10의 자연 발생적 BuNT 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-422, 예를 들어, SEQ ID NO: 10의 BuNT 이소형의 아미노산 1-422 또는 SEQ ID NO: 10의 BuNT 서브타입의 아미노산 1-422을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BuNT 효소 도메인은 비-자연 발생적 BuNT 효소 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성 BuNT 효소 도메인 변이체, 비-보존성 BuNT 효소 도메인 변이체, BuNT 키메라 효소 도메인, 활성 BuNT 효소 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BuNT 효소 도메인은 SEQ ID NO: 10의 비-자연 발생적 BuNT 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-422, 예를 들어, SEQ ID NO: 10의 보존성 BuNT 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-422, SEQ ID NO: 10의 비-보존성 BuNT 효소 도메인 변이체의 아미노산 1-422, SEQ ID NO: 10의 활성 BuNT 효소 도메인 단편의 아미노산 1-422, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BuNT 효소 도메인은 SEQ ID NO: 10의 아미노산 1-422 에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BuNT 효소 도메인은 SEQ ID NO: 10의 아미노산 1-422 에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95%인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BuNT 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 10의 아미노산 1-422에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 10의 아미노산 1-422에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 10의 아미노산 1-422에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 10의 아미노산 1-422에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 10의 아미노산 1-422에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 10의 아미노산 1-422에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BuNT 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 10의 아미노산 1-422에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 100 또는 200개의 인접한 아미노산 치환을 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BuNT 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 10의 아미노산 1-422에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 100 또는 200개의 인접한 아미노산 치환을 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BuNT 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 10의 아미노산 1-422에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 100 또는 200개의 인접한 아미노산 제거를 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BuNT 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 10의 아미노산 1-422에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 100 또는 200개의 인접한 아미노산 제거를 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BuNT 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 10의 아미노산 1-422에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 100 또는 200개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BuNT 효소 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 10의 아미노산 1-422에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 100 또는 200개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
"전위 도메인"은 전위 활성을 갖는 클로스트리듐 신경독중쇄의 일부분을 포함한다. "전위"는 혈관 막을 통한 폴리펩티드의 이동을 용이하게 하여, 폴리펩티드의 일부 또는 전부를 세포질에 노출시키는 능력을 말한다. 다양한 보툴리늄 신경독 전위가 엔도솜(endosome) 내부의 pH의 감소에 의해 야기되는 중쇄의 알로스테릭 배좌 변화(allosteric conformational change)를 수반하는 것으로 생각된다. 이러한 배좌 변화는 중쇄의 N 말단 반쪽에 의해 매개되는 것으로 여겨지며, 그 결과 혈관 막에 포어가 형성되는 것으로 여겨진다; 이러한 변화는 엔도솜 소포 안으로부터 세포질로 단백분해성 경쇄의 이동을 허용한다. 예를 들어, 문헌 [Lacy, et al., Nature Struct . Biol . 5:898-902 (October 1998)] 참조.
보툴리늄 신경독 중쇄의 전위-매개 부분의 아미노산 서열은 당업자에게 알려져 있으며; 추가적으로, 전위 활성을 제공하는 데 필수적이라고 알려진 이러한 부분 내의 아미노산 잔기가 또한 알려져 있다. 따라서, 예를 들어, 전위 도메인으로서 임의의 다양한 클로스트리듐 테타너스 또는 클로스트리듐 보툴리늄 신경독 서브타입의 중쇄의 자연 발생적 N-말단 펩티드 반쪽을 사용하는 것, 또는 다양한 중쇄의 N-말단 반쪽의 일차 서열을 정렬하고 보존된 아미노산, 극성, 서열들 사이의 입체구조 및 소수성 특성에 기초하여 공통 일차 전위 서열(consensus primary translocation sequence)을 선택해 유사한 전위 도메인을 디자인하는 것은 당업자의 능력 범위에 속한다.
본 발명의 다른 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소는 클로스트리듐 독소 전위 도메인을 일부분 포함한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "클로스트리듐 독소 전위 도메인"은 클로스트리듐 독소 경쇄 전위를 매개하는 중독 프로세스의 전위 단계를 행할 수 있는 임의의 클로스트리듐 독소 폴리펩티드를 의미한다. 따라서, 클로스트리듐 독소 전위 도메인은 막을 가로지른 클로스트리듐 독소 경쇄의 이동을 용이하게 하며, 세포내 소포의 막을 통과하여 세포의 세포질로 이동하는 클로스트리듐 독소 경쇄의 이동을 포괄한다. 클로스트리듐 독소 전위 도메인의 비-제한적인 예는, 예를 들어, BoNT/A 전위 도메인, BoNT/B 전위 도메인, BoNT/C1 전위 도메인, BoNT/D 전위 도메인, BoNT/E 전위 도메인, BoNT/F 전위 도메인, BoNT/G 전위 도메인, TeNT 전위 도메인, BaNT 전위 도메인, 및BuNT 전위 도메인을 포함한다. 클로스트리듐 독소 전위 도메인의 다른 비-제한적인 예는, 예를 들어, SEQ ID NO: 1의 아미노산 449-873, SEQ ID NO: 2의 아미노산 442-860, SEQ ID NO: 3의 아미노산 450-868, SEQ ID NO: 4의 아미노산 446-864, SEQ ID NO: 5의 아미노산 423-847, SEQ ID NO: 6의 아미노산 440-866, SEQ ID NO: 7의 아미노산 447-865, SEQ ID NO: 8의 아미노산 458-881, SEQ ID NO: 9의 아미노산 432-857, 및 SEQ ID NO: 10의 아미노산 423-847를 포함한다.
클로스트리듐 독소 전위 도메인은, 제한없이, 자연 발생적 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체, 예를 들어, 클로스트리듐 독소 전위 도메인 이소형 및 클로스트리듐 독소 전위 도메인 서브타입; 비-자연 발생적 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체, 비-보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체, 클로스트리듐 독소 전위 도메인 키메라, 이들의 활성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체"는 자연 발생적이든 또는 비- 자연 발생적이든, 개시된 참조 서열(표1)의 상응하는 영역으로부터 적어도 하나의 아미노산이 바뀐 클로스트리듐 독소 전위 도메인을 의미하며, 참조 서열의 상응하는 영역에 대한 %일치율로 설명될 수 있다. 달리 명확하게 표시되지 않는다면, 개시된 실시 형태를 실시하는 데 유용한 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체는 클로스트리듐 독소 경쇄 전위를 매개하는 중독 프로세스의 전위 단계를 행하는 변형체이다. 비-제한적인 예로서, SEQ ID NO: 1의 아미노산 449-873을 포함하는 BoNT/A 전위 도메인 변이체는 SEQ ID NO: 1의 아미노산 영역 449-873과 비교할 때 적어도 하나의 아미노산 상이성, 예를 들어, 아미노산 치환, 제거 또는 추가를 가질 것이다; SEQ ID NO: 2의 아미노산 442-860을 포함하는 BoNT/B 전위 도메인 변이체는 SEQ ID NO: 2의 아미노산 영역 442-860과 비교할 때 적어도 하나의 아미노산 상이성, 예를 들어, 아미노산 치환, 제거 또는 추가를 가질 것이다; SEQ ID NO: 3의 아미노산 450-868을 포함하는 BoNT/C1 전위 도메인 변이는 SEQ ID NO: 3의 아미노산 영역 450-868과 비교할 때 적어도 하나의 아미노산 상이성, 예를 들어, 아미노산 치환, 제거 또는 추가를 가질 것이다 ; SEQ ID NO: 4 의 아미노산 446-864을 포함하는 BoNT/D 전위 도메인 변이체는 SEQ ID NO: 4의 아미노산 영역 446-864 과 비교할 때 적어도 하나의 아미노산 상이성, 예를 들어, 아미노산 치환, 제거 또는 추가를 가질 것이다; SEQ ID NO: 5의 아미노산 423-847을 포함하는 BoNT/E 전위 도메인 변이체는 SEQ ID NO: 5의 아미노산 영역 423-847과 비교할 때 적어도 하나의 아미노산 상이성, 예를 들어, 아미노산 치환, 제거 또는 추가를 가질 것이다; SEQ ID NO: 6의 아미노산 440-866을 포함하는 BoNT/F 전위 도메인 변이체는 SEQ ID NO: 6의 아미노산 영역 440-866 과 비교할 때 적어도 하나의 아미노산 상이성, 예를 들어, 아미노산 치환, 제거 또는 추가를 가질 것이다; SEQ ID NO: 7의 아미노산 447-865을 포함하는 BoNT/G 전위 도메인 변이체는 SEQ ID NO: 7의 아미노산 영역 447-865 과 비교할 때 적어도 하나의 아미노산 상이성, 예를 들어, 아미노산 치환, 제거 또는 추가를 가질 것이다; SEQ ID NO: 8 의 아미노산 458-881을 포함하는 TeNT 전위 도메인 변이체는 SEQ ID NO: 8의 아미노산 영역 458-881과 비교할 때 적어도 하나의 아미노산 상이성, 예를 들어, 아미노산 치환, 제거 또는 추가를 가질 것이다; SEQ ID NO: 9의 아미노산 432-857을 포함하는 BaNT 전위 도메인 변이체는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 영역 432-857 과 비교할 때 적어도 하나의 아미노산 상이성, 예를 들어, 아미노산 치환, 제거 또는 추가를 가질 것이다; 그리고 SEQ ID NO: 10의 아미노산 423-847을 포함하는 BuNT 전위 도메인 변이체는 SEQ ID NO: 10의 아미노산 영역 423-847 과 비교할 때 적어도 하나의 아미노산 상이성, 예를 들어, 아미노산 치환, 제거 또는 추가를 가질 것이다.
클로스트리듐 독소의 각각의 세로타입에는 아미노산 서열 및 이러한 단백질을 인코딩하는 핵산에 있어서 다소 상이한 자연 발생적 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체가 속할 수 있음을 당업자는 알고 있다. 예를 들어, 현재 5가지 BoNT/A 서브타입, BoNT/A1, BoNT/A2, BoNT/A3, BoNT/A4, 및 BoNT/A5이 있으며, 특이적인 전위 도메인 서브타입은 다른 BoNT/A 전위 도메인 서브타입과 비교할 때 대략 87%의 아미노산 일치율을 나타낸다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "자연 발생적 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체"는 제한없이, 대안적으로-스플라이싱된 전사로부터 생성된 클로스트리듐 독소 전위 도메인 이소형, 자발적인 돌연변이에 의해 생성된 클로스트리듐 독소 전위 도메인 이소형 및 클로스트리듐 독소 전위 도메인 서브타입을 포함하는 자연 발생적 프로세스에 의해 생성된 임의의 클로스트리듐 독소 전위 도메인을 의미한다. 자연 발생적 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체는 자연 발생적 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인과 실질적으로 동일한 방식으로 기능할 수 있으며 본 발명의 임의의 태양에서 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인을 대신할 수 있다. 자연 발생적 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체는 자연 발생적 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체 가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인으로부터 1개 이상의 아미노산, 2개 이상의 아미노산, 3개 이상의 아미노산, 4개 이상의 아미노산, 5개 이상의 아미노산, 10개 이상의 아미노산, 20개 이상의 아미노산, 30개 이상의 아미노산, 40개 이상의 아미노산, 50개 이상의 아미노산 또는 100개의개 이상의 아미노산을 치환할 수 있다. 자연 발생적 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체는 또한 자연 발생적 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체 가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인으로부터 적어도 10개의 인접한 아미노산, 적어도 15 개의 인접한 아미노산, 적어도 20 개의 인접한 아미노산, 또는 적어도 25 개의 인접한 아미노산을 치환할 수 있으며, 이는 자연 발생적 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인에 대해 적어도 50%의 아미노산 일치율, 65%의 아미노산 일치율, 75%의 아미노산 일치율, 85% 의 아미노산 일치율 또는 95%의 아미노산 일치율을 갖는다.
자연 발생적 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체의 비-제한적인 예는 클로스트리듐 독소 전위 도메인 이소형, 예를 들어, BoNT/A 전위 도메인 이소형, BoNT/B 전위 도메인 이소형, BoNT/C1 전위 도메인 이소형, BoNT/D 전위 도메인 이소형, BoNT/E 전위 도메인 이소형, BoNT/F 전위 도메인 이소형, BoNT/G 전위 도메인 이소형, TeNT 전위 도메인 이소형, BaNT 전위 도메인 이소형, 및 BuNT 전위 도메인 이소형이다. 클로스트리듐 독소 전위 도메인 이소형은 클로스트리듐 독소 전위 도메인 이소형이 기초한 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인과 실질저긍로 동일한 방식으로 기능할 수 있으며, 본 발명의 임의의 태양에서 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인을 대신할 수 있다.
자연 발생적 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체다른 비-제한적인 예는 클로스트리듐 독소 전위 도메인 서브타입, 예를 들어, 서브타입 BoNT/A1, BoNT/A2, BoNT/A3, BoNT/A4, 및 BoNT/A5으로부터의 전위 도메인; 서브타입 BoNT/B1, BoNT/B2, BoNT/B 2가 및 BoNT/B 비단백분해성으로부터의 전위 도메인; 서브타입 BoNT/C1-1 및 BoNT/C1-2로부터의 전위 도메인; 서브타입 BoNT/E1, BoNT/E2 및 BoNT/E3으로부터의 전위 도메인; 및 서브타입 BoNT/F1, BoNT/F2, BoNT/F3 및 BoNT/F4로부터의 전위 도메인이다. 클로스트리듐 독소 전위 도메인 서브타입은 클로스트리듐 독소 전위 도메인 서브타입이 기초한 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인과 실질적으로 동일한 방식으로 기능할 수 있으며, 본 발명의 임의의 태양에서 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인을 대신할 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "비-자연 발생적 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체"는, 제한없이, 무작위 돌연변이유발 또는 합리적인 디자인을 사용하여 유전자 공학에 의해 생성된 클로스트리듐 독소 전위 도메인 및 화학 합성에 의해 생성된 클로스트리듐 독소 전위 도메인을 포함하는 인공적인 조작의 도움으로 생성된 임의의 클로스트리듐 독소 전위 도메인을 의미한다. 비-자연 발생적 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체의 비-제한적인 예는, 예를 들어, 보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체, 비-보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체, 클로스트리듐 독소 전위 도메인 키메라 변이체 및 활성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 단편을 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체"는, 적어도 하나의 아미노산이 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인 서열(표 1)로부터의 원래의 아미노산과 유사한 적어도 하나의 특성을 갖는 다른 아미노산 또는 아미노산 유사체에 의해 치환된 클로스트리듐 독소 전위 도메인을 의미한다. 특성의 예는, 제한없이, 유사한 크기, 토포그래피, 전하, 소수성, 친수성, 친유성, 공유 결합 능력, 수소 결합 능력, 물리화학적 특성 등, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체는 보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체 가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인과 실질적으로 동일한 기능을 할 수 있으며, 본 발명의 임의의 태양에서 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인을 대신할 수 있다. 보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체는 보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인으로푸버 1개 이상의 아미노산, 2개 이상의 아미노산, 3개 이상의 아미노산, 4개 이상의 아미노산, 5개 이상의 아미노산, 10개 이상의 아미노산, 20개 이상의 아미노산, 30개 이상의 아미노산, 40개 이상의 아미노산, 50개 이상의 아미노산, 100개 이상의 아미노산, 또는 200개 이상의 아미노산을 치환할 수 있다. 보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체는 또한 보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인으로부터 적어도 10개의 인접한 아미노산, 적어도 15 개의 인접한 아미노산, 적어도 20 개의 인접한 아미노산, 또는 적어도 25 개의 인접한 아미노산을 치환할 수 있으며, 이는 보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인에 대해 적어도 50%의 아미노산 일치율, 65%의 아미노산 일치율, 75%의 아미노산 일치율, 85%의 아미노산 일치율 또는 95%의 아미노산 일치율을 갖는다. 보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체의 비-제한적인예는, 예를 들어, 보존성 BoNT/A 전위 도메인 변이체, 보존성 BoNT/B 전위 도메인 변이체, 보존성 BoNT/C1 전위 도메인 변이체, 보존성 BoNT/D 전위 도메인 변이체, 보존성 BoNT/E 전위 도메인 변이체, 보존성 BoNT/F 전위 도메인 변이체, 보존성 BoNT/G 전위 도메인 변이체, 보존성 TeNT 전위 도메인 변이체, 보존성 BaNT 전위 도메인 변이체, 및 보존성 BuNT 전위 도메인 변이체를 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "비-보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체"는, 다음과 같은 클로스트리듐 독소 전위 도메인을 의미한다; 1) 적어도 하나의 아미노산이 비-보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인으로부터 삭제되거나; 2) 적어도 하나의 아미노산이 비-보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인이 기초한 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인에 추가되거나 또는 3) 적어도 하나의 아미노산이 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인 서열(표 1)로부터의 원래 아미노산과 유사한 어떠한 특성도 공유하지 않는 다른 아미노산 또는 아미노산 유사체로 치환된다. 비-보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체는 비-보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인과 실질적으로 동일한 방식으로 기능할 수 있으며, 본 발명의 임의의 태양에서 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인을 대신할 수 있다. 비-보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체는 1개 이상의 아미노산, 2개 이상의 아미노산, 3개 이상의 아미노산, 4개 이상의 아미노산, 5개 이상의 아미노산, 및 10개 이상의 아미노산을, 비-보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인으로부터 삭제할 수 있다. 비-보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체는 1개 이상의 아미노산, 2개 이상의 아미노산, 3개 이상의 아미노산, 4개 이상의 아미노산, 5개 이상의 아미노산, 및 10개 이상의 아미노산을, 비-보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인에 추가할 수 있다. 비-보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체는 1개 이상의 아미노산, 2개 이상의 아미노산, 3개 이상의 아미노산, 4개 이상의 아미노산, 5개 이상의 아미노산, 10개 이상의 아미노산, 20개 이상의 아미노산, 30개 이상의 아미노산, 40개 이상의 아미노산, 50개 이상의 아미노산, 100개 이상의 아미노산, 또는 200개 이상의 아미노산을, 비-보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인으로부터 치환할 수 있다. 비-보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체는 또한 적어도 10개의 인접한 아미노산, 적어도 15 개의 인접한 아미노산, 적어도 20 개의 인접한 아미노산, 또는 적어도 25 개의 인접한 아미노산을, 비-보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인으로부터 치환할 수 있으며, 이는 비-보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체가 기초한 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인에 대해 적어도 50%의 아미노산 일치율, 65%의 아미노산 일치율, 75%의 아미노산 일치율, 85%의 아미노산 일치율 또는95%의 아미노산 일치율을 가질 수 있다. 비-보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체의 비-제한적인 예는, 예를 들어, 비-보존성 BoNT/A 전위 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/B 전위 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/C1 전위 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/D 전위 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/E 전위 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/F 전위 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/G 전위 도메인 변이체, 및 비-보존성 TeNT 전위 도메인 변이체, 비-보존성 BaNT 전위 도메인 변이체, 및 비-보존성 BuNT 전위 도메인 변이체를 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "클로스트리듐 독소 전위 도메인 키메라"는 클로스트리듐 독소 전위 도메인의 적어도 일부분 및 적어도 하나의 다른 폴리펩티드의 적어도 일부분을 포함하여 독소 전위 도메인을 형성하는, 적어도 하나의 특성이 표 1의 참조 클로스트리듐 독소 전위 도메인과 상이한 폴리펩티드를 의미하며, 단, 이러한 클로스트리듐 독소 전위 도메인 키메라는 여전히 신경전달물질 방출 기구의 코어 구성요소를 특이적으로 표적화할 수 있으므로 전체 세포 메커니즘을 행하는 데 참여하여 클로스트리듐 독소가 기질을 단백분해적으로 절단한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "활성 클로스트리듐 전위 도메인 단편"은 발명의 태양에 유용할 수 있는 전위 도메인을 포함하는 임의의 다양한 클로스트리듐 독소 단편을 의미하며, 단, 이러한 활성 단편은 세포내 소포로부터 표적 세포의 세포질로 LC의 방출을 촉진할 수 있으므로, 전체 세포 메커니즘을 행하는 데 참여하여 클로스트리듐 독소가 기질을 단백분해적으로 절단한다. 클로스트리듐 독소의 중쇄로부터의 전위 도메인은 길이가 대략 410-430개의 아미노산이고, 전위 도메인 (표 1)을 포함한다. 연구는 전위 도메인의 전위 활성을 위해 클로스트리듐 독소 중쇄로부터의 전위 도메인의 전체 길이가 필요하지 않다는 것을 보여주었다. 따라서, 본 실시 형태의 태양은 길이가, 예를 들어, 적어도 350개의 아미노산, 적어도 375개의 아미노산, 적어도 400개의 아미노산 및 적어도 425개의 아미노산인 전위 도메인을 포함하는 클로스트리듐 독소 전위 도메인을 포함할 수 있다. 이러한 실시 형태의 다른 태양은 길이가, 예를 들어, 최대 350개의 아미노산, 최대 375개의 아미노산, 최대 400개의 아미노산 및 최대 425개의 아미노산인 전위 도메인을 포함하는 클로스트리듐 독소 전위 도메인을 포함한다.
임의의 다양한 서열 정렬 방법이 자연 발생적 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체 및 비-자연 발생적 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체의 %일치율을 결정하는 데 사용될 수 있으며, 제한없이, 글로벌 방법, 로컬 방법 및 하이브리드 방법, 예를 들어, 세그먼트 접근 방법이 포함된다. %일치율을 결정하는 프로토콜은 본 명세서의 교시로부터 당업자가 결정할 수 있는 범주에 속하는 일상적인 절차이다.
따라서, 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 변형 클로스트리듐 독소는 클로스트리듐 독소 전위 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, 클로스트리듐 독소 전위 도메인은 자연 발생적 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체, 예를 들어, 클로스트리듐 독소 전위 도메인 이소형 또는 클로스트리듐 독소 전위 도메인 서브타입을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 클로스트리듐 독소 전위 도메인은 비-자연 발생적 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체, 비-보존성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 변이체, 클로스트리듐 독소 키메라 전위 도메인, 활성 클로스트리듐 독소 전위 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
다른 실시 형태에서, 클로스트리듐 독소 전위 도메인은 BoNT/A 전위 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, BoNT/A 전위 도메인은 SEQ ID NO: 1의 아미노산 449-873을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/A 전위 도메인은 자연 발생적 BoNT/A 전위 도메인 변이체, 예를 들어, BoNT/A 이소형으로부터의 전위 도메인 또는 BoNT/A 서브타입으로부터의 전위 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/A 전위 도메인은 SEQ ID NO: 1의 자연 발생적 BoNT/A 전위 도메인 변이체의 아미노산 449-873, 예를 들어, SEQ ID NO: 1의 BoNT/A 이소형의 아미노산 449-873 또는 SEQ ID NO: 1의 BoNT/A 서브타입의 아미노산 449-873을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/A 전위 도메인은 비-자연 발생적 BoNT/A 전위 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성 BoNT/A 전위 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/A 전위 도메인 변이체, BoNT/A 키메라 전위 도메인, 활성 BoNT/A 전위 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/A 전위 도메인은 SEQ ID NO: 1의 비-자연 발생적 BoNT/A 전위 도메인 변이체의 아미노산 449-873, 예를 들어, SEQ ID NO: 1의 보존성 BoNT/A 전위 도메인 변이체의 아미노산 449-873, SEQ ID NO: 1의 비-보존성 BoNT/A 전위 도메인 변이체의 아미노산 449-873, SEQ ID NO: 1의 활성 BoNT/A 전위 도메인 단편의 아미노산 449-873, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/A 전위 도메인은 SEQ ID NO: 1의 아미노산 449-873에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/A 전위 도메인은 SEQ ID NO: 1의 아미노산 449-873에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95%인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/A 전위 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 1의 아미노산 449-873에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 1의 아미노산 449-873에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 1의 아미노산 449-873에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 1의 아미노산 449-873에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 1의 아미노산 449-873에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 1의 아미노산 449-873에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가 를 가진 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/A 전위 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 1의 아미노산 449-873에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 1의 아미노산 449-873에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 100 또는 200개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 1의 아미노산 449-873에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 1의 아미노산 449-873에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 1의 아미노산 449-873에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 1의 아미노산 449-873에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가를 가진 폴리펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 클로스트리듐 독소 전위 도메인은 BoNT/B 전위 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, BoNT/B 전위 도메인은 SEQ ID NO: 2의 아미노산 442-860을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/B 전위 도메인은 자연 발생적 BoNT/B 전위 도메인 변이체, 예를 들어, BoNT/B 이소형으로부터의 전위 도메인 또는 BoNT/B 서브타입으로부터의 전위 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/B 전위 도메인은 SEQ ID NO: 2의 자연 발생적 BoNT/B 전위 도메인 변이체의 아미노산 442-860, 예를 들어, SEQ ID NO: 2의 BoNT/B 이소형의 아미노산 442-860 또는 SEQ ID NO: 2의 BoNT/B 서브타입의 아미노산 442-860을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/B 전위 도메인은 비-자연 발생적 BoNT/B 전위 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성 BoNT/B 전위 도메인 변이체, -보존성 BoNT/B 전위 도메인 변이체, BoNT/B 키메라 전위 도메인, 활성 BoNT/B 전위 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/B 전위 도메인은 SEQ ID NO: 2의 비-자연 발생적 BoNT/B 전위 도메인 변이체의 아미노산 442-860, 예를 들어, SEQ ID NO: 2의 보존성 BoNT/B 전위 도메인 변이체의 아미노산 442-860, SEQ ID NO: 2의 비-보존성 BoNT/B 전위 도메인 변이체의 아미노산 442-860, SEQ ID NO: 2의 활성 BoNT/B 전위 도메인 단편의 아미노산 442-860, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/B 전위 도메인은 SEQ ID NO: 2의 아미노산 442-860에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/B 전위 도메인은 SEQ ID NO: 2의 아미노산 442-860에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95%인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/B 전위 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 2의 아미노산 442-860에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 2의 아미노산 442-860에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 100 또는 200개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 2의 아미노산 442-860에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 2의 아미노산 442-860에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 2의 아미노산 442-860에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 2의 아미노산 442-860에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/B 전위 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 2의 아미노산 442-860에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 2의 아미노산 442-860에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 2의 아미노산 442-860에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 2의 아미노산 442-860에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 2의 아미노산 442-860에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 2의 아미노산 442-860에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 클로스트리듐 독소 전위 도메인은 BoNT/C1 전위 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, BoNT/C1 전위 도메인은 SEQ ID NO: 3의 아미노산 450-868을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/C1 전위 도메인은 자연 발생적 BoNT/C1 전위 도메인 변이체, 예를 들어, BoNT/C1 이소형으로부터의 전위 도메인 또는 BoNT/C1 서브타입으로부터의 전위 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/C1 전위 도메인은 SEQ ID NO: 3의 자연 발생적 BoNT/C1 전위 도메인 변이체의 아미노산 450-868, 예를 들어, SEQ ID NO: 3의 BoNT/C1 이소형의 아미노산 450-868 또는 SEQ ID NO: 3의 BoNT/C1 서브타입의 아미노산 450-868을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/C1 전위 도메인은 비-자연 발생적 BoNT/C1 전위 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성 BoNT/C1 전위 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/C1 전위 도메인 변이체, BoNT/C1 키메라 전위 도메인, 활성 BoNT/C1 전위 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/C1 전위 도메인은 SEQ ID NO: 3의 비-자연 발생적 BoNT/C1 전위 도메인 변이체의 아미노산 450-868, 예를 들어, SEQ ID NO: 3의 보존성 BoNT/C1 전위 도메인 변이체의 아미노산 450-868, SEQ ID NO: 3의 비-보존성 BoNT/C1 전위 도메인 변이체의 아미노산 450-868, SEQ ID NO: 3의 활성 BoNT/C1 전위 도메인 단편의 아미노산 450-868, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/C1 전위 도메인은 SEQ ID NO: 3의 아미노산 450-868에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/C1 전위 도메인은 SEQ ID NO: 3의 아미노산 450-868에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95%인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/C1 전위 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 3의 아미노산 450-868에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 3의 아미노산 450-868에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 3의 아미노산 450-868에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 3의 아미노산 450-868에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 3의 아미노산 450-868에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 3의 아미노산 450-868에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/C1 전위 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 3의 아미노산 450-868에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 3의 아미노산 450-868에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 3의 아미노산 450-868에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 3의 아미노산 450-868에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 3의 아미노산 450-868에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가; SEQ ID NO: 3의 아미노산 450-868에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 클로스트리듐 독소 전위 도메인은 BoNT/D 전위 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, BoNT/D 전위 도메인은 SEQ ID NO: 4의 아미노산 446-864을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/D 전위 도메인은 자연 발생적 BoNT/D 전위 도메인 변이체, 예를 들어, BoNT/D 이소형으로부터의 전위 도메인 또는 BoNT/D 서브타입으로부터의 전위 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/D 전위 도메인은 SEQ ID NO: 4의 자연 발생적 BoNT/D 전위 도메인 변이체의 아미노산 446-864, 예를 들어, SEQ ID NO: 4의 BoNT/D 이소형의 아미노산 446-864 또는 SEQ ID NO: 4의 BoNT/D 서브타입의 아미노산 446-864을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/D 전위 도메인은 비-자연 발생적 BoNT/D 전위 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성 BoNT/D 전위 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/D 전위 도메인 변이체, BoNT/D 키메라 전위 도메인, 활성 BoNT/D 전위 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/D 전위 도메인은 SEQ ID NO: 4의 비-자연 발생적 BoNT/D 전위 도메인 변이체의 아미노산 446-864, 예를 들어, SEQ ID NO: 4의 보존성 BoNT/D 전위 도메인 변이체의 아미노산 446-864, SEQ ID NO: 4의 비-보존성 BoNT/D 전위 도메인 변이체의 아미노산 446-864, SEQ ID NO: 4의 활성 BoNT/D 전위 도메인 단편의 아미노산 446-864, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/D 전위 도메인은 SEQ ID NO: 4의 아미노산 446-864에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/D 전위 도메인은 SEQ ID NO: 4의 아미노산 446-864에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95%인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/D 전위 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 4의 아미노산 446-864에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 4의 아미노산 446-864에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 4의 아미노산 446-864에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 4의 아미노산 446-864에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 4의 아미노산 446-864에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 4의 아미노산 446-864에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/D 전위 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 4의 아미노산 446-864에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 4의 아미노산 446-864에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 4의 아미노산 446-864에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 4의 아미노산 446-864에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 4의 아미노산 446-864에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 4의 아미노산 446-864에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 클로스트리듐 독소 전위 도메인은 BoNT/E 전위 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, BoNT/E 전위 도메인은 SEQ ID NO: 5의 아미노산 423-847을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/E 전위 도메인은 자연 발생적 BoNT/E 전위 도메인 변이체, 예를 들어, BoNT/E 이소형으로부터의 전위 도메인 또는 BoNT/E 서브타입으로부터의 전위 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/E 전위 도메인은 SEQ ID NO: 5의 자연 발생적 BoNT/E 전위 도메인 변이체의 아미노산 423-847, 예를 들어, SEQ ID NO: 5의 BoNT/E 이소형의 아미노산 423-847 또는 SEQ ID NO: 5의 BoNT/E 서브타입의 아미노산 423-847을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/E 전위 도메인은 비-자연 발생적 BoNT/E 전위 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성 BoNT/E 전위 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/E 전위 도메인 변이체, BoNT/E 키메라 전위 도메인, 활성 BoNT/E 전위 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/E 전위 도메인은 SEQ ID NO: 5의 비-자연 발생적 BoNT/E 전위 도메인 변이체의 아미노산 423-847, 예를 들어, SEQ ID NO: 5의 보존성 BoNT/E 전위 도메인 변이체의 아미노산 423-847, SEQ ID NO: 5의 비-보존성 BoNT/E 전위 도메인 변이체의 아미노산 423-847, SEQ ID NO: 5의 활성 BoNT/E 전위 도메인 단편의 아미노산 423-847, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/E 전위 도메인은 SEQ ID NO: 5의 아미노산 423-847에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/E 전위 도메인은 SEQ ID NO: 5의 아미노산 423-847에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95%인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/E 전위 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 5의 아미노산 423-847에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 5의 아미노산 423-847에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 5의 아미노산 423-847에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 5의 아미노산 423-847에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 5의 아미노산 423-847에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 5의 아미노산 423-847에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/E 전위 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 5의 아미노산 423-847에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 5의 아미노산 423-847에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 5의 아미노산 423-847에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 5의 아미노산 423-847에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 5의 아미노산 423-847에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 5의 아미노산 423-847에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 클로스트리듐 독소 전위 도메인은 BoNT/F 전위 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, BoNT/F 전위 도메인은 SEQ ID NO: 6의 아미노산 440-866을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/F 전위 도메인은 자연 발생적 BoNT/F 전위 도메인 변이체, 예를 들어, BoNT/F 이소형으로부터의 전위 도메인 또는BoNT/F 서브타입으로부터의 전위 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/F 전위 도메인은 SEQ ID NO: 6의 자연 발생적 BoNT/F 전위 도메인 변이체의 아미노산 440-866, 예를 들어, SEQ ID NO: 6의 BoNT/F 이소형의 아미노산 440-866 또는 SEQ ID NO: 6의 BoNT/F 서브타입의 아미노산 440-866을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/F 전위 도메인은 비-자연 발생적 BoNT/F 전위 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성 BoNT/F 전위 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/F 전위 도메인 변이체, BoNT/F 키메라 전위 도메인, 활성 BoNT/F 전위 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/F 전위 도메인은 SEQ ID NO: 6의 비-자연 발생적 BoNT/F 전위 도메인 변이체의 아미노산 440-866, 예를 들어, SEQ ID NO: 6의 보존성 BoNT/F 전위 도메인 변이체의 아미노산 440-866, SEQ ID NO: 6의 비-보존성 BoNT/F 전위 도메인 변이체 의 아미노산 440-866, SEQ ID NO: 6의 활성 BoNT/F 전위 도메인 단편의 아미노산 440-866, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/F 전위 도메인은 SEQ ID NO: 6의 아미노산 440-866에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/F 전위 도메인은 SEQ ID NO: 6의 아미노산 440-866에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95%인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/F 전위 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 6의 아미노산 440-866에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 6의 아미노산 440-866에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 6의 아미노산 440-866에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 6의 아미노산 440-866에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 6의 아미노산 440-866에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 6의 아미노산 440-866에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/F 전위 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 6의 아미노산 440-866에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 6의 아미노산 440-866에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 6의 아미노산 440-866에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 6의 아미노산 440-866에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 6의 아미노산 440-866에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 6의 아미노산 440-866에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 클로스트리듐 독소 전위 도메인은 BoNT/G 전위 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, BoNT/G 전위 도메인은 SEQ ID NO: 7의 아미노산 447-865을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/G 전위 도메인은 자연 발생적 BoNT/G 전위 도메인 변이체, 예를 들어, BoNT/G 이소형으로부터의 전위 도메인 또는 BoNT/G 서브타입으로부터의 전위 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/G 전위 도메인은 SEQ ID NO: 7의 자연 발생적 BoNT/G 전위 도메인 변이체의 아미노산 447-865, 예를 들어, SEQ ID NO: 7의 BoNT/G 이소형의 아미노산 447-865 또는 SEQ ID NO: 7의 BoNT/G 서브타입의 아미노산 447-865을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/G 전위 도메인은 비-자연 발생적 BoNT/G 전위 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성 BoNT/G 전위 도메인 변이체, 비-보존성 BoNT/G 전위 도메인 변이체, BoNT/G 키메라 전위 도메인, 활성 BoNT/G 전위 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/G 전위 도메인은 SEQ ID NO: 7의 비-자연 발생적 BoNT/G 전위 도메인 변이체의 아미노산 447-865, 예를 들어, SEQ ID NO: 7의 보존성 BoNT/G 전위 도메인 변이체의 아미노산 447-865, SEQ ID NO: 7의 비-보존성 BoNT/G 전위 도메인 변이체의 아미노산 447-865, SEQ ID NO: 7의 활성 BoNT/G 전위 도메인 단편의 아미노산 447-865, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/G 전위 도메인은 SEQ ID NO: 7의 아미노산 447-865에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BoNT/G 전위 도메인은 SEQ ID NO: 7의 아미노산 447-865에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95%인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/G 전위 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 7의 아미노산 447-865에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 7의 아미노산 447-865에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 7의 아미노산 447-865에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 7의 아미노산 447-865에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 7의 아미노산 447-865에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 7의 아미노산 447-865에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BoNT/G 전위 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 7의 아미노산 447-865에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 7의 아미노산 447-865에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 7의 아미노산 447-865에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 7의 아미노산 447-865에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 7의 아미노산 447-865에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 7의 아미노산 447-865에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 클로스트리듐 독소 전위 도메인은 TeNT 전위 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, TeNT 전위 도메인은 SEQ ID NO: 8의 아미노산 458-881을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, TeNT 전위 도메인은 자연 발생적 TeNT 전위 도메인 변이체, 예를 들어, TeNT 이소형으로부터의 전위 도메인 또는 TeNT 서브타입으로부터의 전위 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, TeNT 전위 도메인은 SEQ ID NO: 8의 자연 발생적 TeNT 전위 도메인 변이체의 아미노산 458-881, 예를 들어, SEQ ID NO: 8의 TeNT 이소형의 아미노산 458-881 또는 SEQ ID NO: 8의 TeNT 서브타입의 아미노산 458-881을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, TeNT 전위 도메인은 비-자연 발생적 TeNT 전위 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성 TeNT 전위 도메인 변이체, 비-보존성 TeNT 전위 도메인 변이체, TeNT 키메라 전위 도메인, 활성 TeNT 전위 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, TeNT 전위 도메인은 SEQ ID NO: 8의 비-자연 발생적 TeNT 전위 도메인 변이체의 아미노산 458-881, 예를 들어, SEQ ID NO: 8의 보존성 TeNT 전위 도메인 변이체의 아미노산 458-881, SEQ ID NO: 8의 비-보존성 TeNT 전위 도메인 변이체의 아미노산 458-881, SEQ ID NO: 8의 활성 TeNT 전위 도메인 단편의 아미노산 458-881, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, TeNT 전위 도메인은 SEQ ID NO: 8의 아미노산 458-881에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, TeNT 전위 도메인은 SEQ ID NO: 8의 아미노산 458-881에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95%인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, TeNT 전위 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 8의 아미노산 458-881에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 8의 아미노산 458-881에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 8의 아미노산 458-881에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 8의 아미노산 458-881에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 8의 아미노산 458-881에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 8의 아미노산 458-881에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, TeNT 전위 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 8의 아미노산 458-881에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 8의 아미노산 458-881에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 8의 아미노산 458-881에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 8의 아미노산 458-881에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 8의 아미노산 458-881에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 8의 아미노산 458-881에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 클로스트리듐 독소 전위 도메인은 BaNT 전위 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, BaNT 전위 도메인은 SEQ ID NO: 9의 아미노산 432-857을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BaNT 전위 도메인은 자연 발생적 BaNT 전위 도메인 변이체, 예를 들어, BaNT 이소형으로부터의 전위 도메인 또는 BaNT 서브타입으로부터의 전위 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BaNT 전위 도메인은 SEQ ID NO: 9의 자연 발생적 BaNT 전위 도메인 변이체의 아미노산 432-857, 예를 들어, SEQ ID NO: 9의 BaNT 이소형의 아미노산 432-857 또는 SEQ ID NO: 9의 BaNT 서브타입의 아미노산 432-857을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BaNT 전위 도메인은 비-자연 발생적 BaNT 전위 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성 BaNT 전위 도메인 변이체, 비-보존성 BaNT 전위 도메인 변이체, BaNT 키메라 전위 도메인, 활성 BaNT 전위 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BaNT 전위 도메인은 SEQ ID NO: 9의 비-자연 발생적 BaNT 전위 도메인 변이체의 아미노산 432-857, 예를 들어, SEQ ID NO: 9의 보존성 BaNT 전위 도메인 변이체의 아미노산 432-857, SEQ ID NO: 9의 비-보존성 BaNT 전위 도메인 변이체의 아미노산 432-857, SEQ ID NO: 9의 활성 BaNT 전위 도메인 단편의 아미노산 432-857, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BaNT 전위 도메인은 SEQ ID NO: 9의 아미노산 432-857에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BaNT 전위 도메인은 SEQ ID NO: 9의 아미노산 432-857에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95% 인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BaNT 전위 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 9의 아미노산 432-857에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 9의 아미노산 432-857에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 9의 아미노산 432-857에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 9의 아미노산 432-857에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 9의 아미노산 432-857에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 432-857에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BaNT 전위 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 9의 아미노산 432-857에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 9의 아미노산 432-857에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 9의 아미노산 432-857에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 9의 아미노산 432-857에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 9의 아미노산 432-857에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 432-857에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 클로스트리듐 독소 전위 도메인은 BuNT 전위 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, BuNT 전위 도메인은 SEQ ID NO: 10의 아미노산 423-847을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BuNT 전위 도메인은 자연 발생적 BuNT 전위 도메인 변이체, 예를 들어, BuNT 이소형으로부터의 전위 도메인 또는 BuNT 서브타입으로부터의 전위 도메인을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BuNT 전위 도메인은 SEQ ID NO: 10의 자연 발생적 BuNT 전위 도메인 변이체의 아미노산 423-847, 예를 들어, SEQ ID NO: 10의 BuNT 이소형의 아미노산 423-847 또는 SEQ ID NO: 10의 BuNT 서브타입의 아미노산 423-847을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BuNT 전위 도메인은 비-자연 발생적 BuNT 전위 도메인 변이체, 예를 들어, 보존성 BuNT 전위 도메인 변이체, 비-보존성 BuNT 전위 도메인 변이체, BuNT 키메라 전위 도메인, 활성 BuNT 전위 도메인 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BuNT 전위 도메인은 SEQ ID NO: 10의 비-자연 발생적 BuNT 전위 도메인 변이체의 아미노산 423-847, 예를 들어, SEQ ID NO: 10의 보존성 BuNT 전위 도메인 변이체의 아미노산 423-847, SEQ ID NO: 10의 비-보존성 BuNT 전위 도메인 변이체의 아미노산 423-847, SEQ ID NO: 10의 활성 BuNT 전위 도메인 단편의 아미노산 423-847, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BuNT 전위 도메인은 SEQ ID NO: 10의 아미노산 423-847에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BuNT 전위 SEQ ID NO: 10의 아미노산 423-847에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95%인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BuNT 전위 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 10의 아미노산 423-847에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 10의 아미노산 423-847에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 10의 아미노산 423-847에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 10의 아미노산 423-847에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 10의 아미노산 423-847에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 10의 아미노산 423-847에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BuNT 전위 도메인은, 예를 들어, SEQ ID NO: 10의 아미노산 423-847에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 10의 아미노산 423-847에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 10의 아미노산 423-847에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 10의 아미노산 423-847에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 10의 아미노산 423-847에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 10의 아미노산 423-847에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 또는 100개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 발명의 다른 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소는, 일부분, 오피오이드 펩티드 결합 도메인을 포함한다. "결합 도메인"은 생리학적 조건 하에서 표적 세포의 세포 표면 마커 특성부(marker characteristic)에 우선적으로 결합하는 아미노산 서열 영역을 의미한다. 세포 표면 마커는 폴리펩티드, 폴리사카라이드, 지질, 글리코프로테인, 리포프로테인을 포함할 수 있거나, 또는 이들 중 하나 이상의 구조적 특성을 가질 수 있다. "우선적으로 상호작용한다(preferentially interact)"는 세포 표면 마커에 대한 결합 도메인의 해리 상수(disassociation constant) (Kd)가 임의의 다른 세포 표면 마커에 대한 결합 도메인의 해리 상수보다 적어도 1차수 더 작은 것을 의미한다. 바람직하게는, 해리 상수는 신경독 또는 변형 신경독이 노출되는 임의의 다른 세포 표면 마커에 대한 결합 도메인의 해리 상수보다 적어도 2 차수 더 작으며, 훨씬 더욱 바람직하게는 해리 상수는 적어도 3 차수 더 작다. 결합 도메인의 예는, 예를 들어, 문헌 [Steward, L.E. et al., Modified Clostridial Toxins with Enhanced Translocation Capability and Enhanced Targeting Activity, U.S. Patent Application No. 11/776,043 (Jul. 11, 2007); Steward, L.E. et al., Modified Clostridial Toxins with Enhanced Translocation Capabilities and Altered Targeting Activity For Clostridial Toxin Target Cells, U.S. Patent Application No. 11/776,052 (Jul. 11, 2007); 및 Steward, L.E. et al., Modified Clostridial Toxins with Enhanced Translocation Capabilities and Altered Targeting Activity For Non-Clostridial Toxin Target Cells, U.S. Patent Application No. 11/776,075 (Jul. 11, 2007)]에 기재되어 있으며, 이들 각각은 본 명세서에 전체적으로 참고로 포함된다.
본 명세서에 개시된 오피오이드 펩티드 결합 도메인의 비-제한적인 예는, 예를 들어, 엔케팔린(enkephalin), 엔도모르핀(endomorphin), 엔도르핀, 디노르핀(dynorphin), 노시셉틴(nociceptin) 또는 헤모르핀(hemorphin)이다. 따라서, 실시 형태에서, 결합 도메인은 오피오이드 펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 오피오이드 펩티드는 엔케팔린 펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, 엔케팔린 펩티드는 Leu-엔케팔린, Met-엔케팔린, Met-엔케팔린 MRGL 또는 Met-엔케팔린 MRF를 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 엔케팔린 펩티드는 SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54 또는 SEQ ID NO: 55를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, 엔케팔린은 SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54 또는 SEQ ID NO: 55에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 엔케팔린은 SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54 또는 SEQ ID NO: 55에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95%인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, 엔케팔린은, 예를 들어, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54 또는 SEQ ID NO: 55에 대해 적어도 1, 2, 또는 3개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54 또는 SEQ ID NO: 55에 대해 최대 1, 2, 또는 3개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54 또는 SEQ ID NO: 55에 대해 적어도 1, 2, 또는 3개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54 또는 SEQ ID NO: 55에 대해 최대 1, 2, 또는 3개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54 또는 SEQ ID NO: 55에 대해 적어도 1, 2, 또는 3개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54 또는 SEQ ID NO: 55에 대해 최대 1, 2, 또는 3개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, 엔케팔린은, 예를 들어, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54 또는 SEQ ID NO: 55에 대해 적어도 1, 2, 또는 3개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54 또는 SEQ ID NO: 55에 대해 최대 1, 2, 또는 3개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54 또는 SEQ ID NO: 55에 대해 적어도 1, 2, 또는 3개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54 또는 SEQ ID NO: 55에 대해 최대 1, 2, 또는 3개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54 또는 SEQ ID NO: 55에 대해 적어도 1, 2, 또는 3개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54 또는 SEQ ID NO: 55에 대해 최대 1, 2, 또는 3개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 오피오이드 펩티드는 소 부신수질(bovine adrenomedullary)-22 (BAM22) 펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, BAM22 펩티드는 BAM22 펩티드 (1-12), BAM22 펩티드 (6-22), BAM22 펩티드 (8-22) 또는 BAM22 펩티드 (1-22)를 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, BAM22 펩티드는 SEQ ID NO: 56의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 57의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 58의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 59의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 60의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22 또는 SEQ ID NO: 61의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BAM22는 SEQ ID NO: 56의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 57의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 58의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 59의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 60의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; 또는 SEQ ID NO: 61의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, BAM22 펩티드 결합 도메인은 SEQ ID NO: 56의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 57의아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 58의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 59의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 60의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; 또는 SEQ ID NO: 61의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95% 인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BAM22 펩티드는, 예를 들어, SEQ ID NO: 56의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 57의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 58의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 59의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 60의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; 또는 SEQ ID NO: 61의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 56의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 57의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 58 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 59의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 60의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; 또는 SEQ ID NO: 61의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 56의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 57의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 58의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 59의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 60의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; 또는 SEQ ID NO: 61의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 56에 대해아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 57의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 58의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 59의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 60의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; 또는 SEQ ID NO: 61의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 56의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 57의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 58의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 59의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 60의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; 또는 SEQ ID NO: 61의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 56의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 57의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 58의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 59의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 60의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; 또는 SEQ ID NO: 61의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리 펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, BAM22는, 예를 들어, SEQ ID NO: 56의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 57의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 58의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 59의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 60의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; 또는 SEQ ID NO: 61의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 56의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 57의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 58의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 59의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 60의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; 또는 SEQ ID NO: 61의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 56의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 57의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 58의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 59의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 60의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; 또는 SEQ ID NO: 61의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 56의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 57의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 58의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 59의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 60의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; 또는 SEQ ID NO: 61의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 56의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 57의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 58의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 59의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 60의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; 또는 SEQ ID NO: 61의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 56의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 57의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 58의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 59의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 60의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; 또는 SEQ ID NO: 61의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리 펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 오피오이드 펩티드는 엔도모르핀 펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, 엔도모르핀 펩티드는 엔도모르핀-1 또는 엔도모르핀-2를 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 엔도모르핀 펩티드는 SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, 엔도모르핀은 SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 엔도모르핀은 SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95%인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, 엔도모르핀은, SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63에 대해 예를 들어, 적어도 1, 2, 또는 3개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63에 대해 최대 1, 2, 또는 3개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63에 대해 적어도 1, 2, 또는 3개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63에 대해 최대 1, 2, 또는 3개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63에 대해 적어도 1, 2, 또는 3개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63에 대해 최대 1, 2, 또는 3개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, 엔도모르핀은, 예를 들어, SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63에 대해 적어도 1, 2, 또는 3개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63에 대해 최대 1, 2, 또는 3개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63에 대해 적어도 1, 2, 또는 3개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63에 대해 최대 1, 2, 또는 3개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63에 대해 적어도 1, 2, 또는 3개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63에 대해 최대 1, 2, 또는 3개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 오피오이드 펩티드는 엔도르핀 펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, 엔도르핀 펩티드는 엔도르핀-α, 네오엔도르핀-α, 엔도르핀-β, 네오엔도르핀-β 또는 엔도르핀- γ를 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 엔도르핀 펩티드는 SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 또는 SEQ ID NO: 69를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, 엔도르핀은 SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 또는 SEQ ID NO: 69에 대한 아미노산 일치율, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 엔도르핀은 SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 또는 SEQ ID NO: 69에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95% 인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, 엔도르핀은, 예를 들어, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 또는 SEQ ID NO: 69에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 또는 SEQ ID NO: 69에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 또는 SEQ ID NO: 69에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 또는 SEQ ID NO: 69에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 또는 SEQ ID NO: 69에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 또는 SEQ ID NO: 69에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, 엔도르핀은, 예를 들어, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 또는 SEQ ID NO: 69에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 또는 SEQ ID NO: 69 에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 또는 SEQ ID NO: 69 에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 또는 SEQ ID NO: 69에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 또는 SEQ ID NO: 69 에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 또는 SEQ ID NO: 69 에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 오피오이드 펩티드는 디노르핀 펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, 디노르핀 펩티드는 디노르핀 A, 디노르핀 B (류모르핀(leumorphin)) 또는 리모르핀(rimorphin)을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 디노르핀 펩티드는SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 83, SEQ ID NO: 84, SEQ ID NO: 85, SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 87, SEQ ID NO: 88, SEQ ID NO: 89, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO: 91, SEQ ID NO: 92, SEQ ID NO: 93, SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO: 96, SEQ ID NO: 97, SEQ ID NO: 98, SEQ ID NO: 99 또는 SEQ ID NO: 100를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, 디노르핀은 SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 79 또는 SEQ ID NO: 95에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 디노르핀은 SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 79 또는 SEQ ID NO: 95에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95% 인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, 디노르핀은, 예를 들어, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 79 또는 SEQ ID NO: 95에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 79 또는 SEQ ID NO: 95에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 79 또는 SEQ ID NO: 95에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 79 또는 SEQ ID NO: 95에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 79 또는 SEQ ID NO: 95에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 79 또는 SEQ ID NO: 95에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, 디노르핀은, 예를 들어, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 79 또는 SEQ ID NO: 95에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 79 또는 SEQ ID NO: 95에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 79 또는 SEQ ID NO: 95에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 79 또는 SEQ ID NO: 95에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 79 또는 SEQ ID NO: 95에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 79 또는 SEQ ID NO: 95에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 오피오이드 펩티드는 노시셉틴 펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, 노시셉틴 펩티드는 노시셉틴 RK, 노시셉틴, 뉴로펩티드 1, 뉴로펩티드 2 또는 뉴로펩티드 3을 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 노시셉틴 펩티드는 SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 102, SEQ ID NO: 103, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109 또는 SEQ ID NO: 110을 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, 노시셉틴은 SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109 또는 SEQ ID NO: 110에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%인 폴리펩티드를 포함한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 노시셉틴은SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109 또는 SEQ ID NO: 110에 대한 아미노산 일치율이, 예를 들어, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90% 또는 최대 95% 인 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, 노시셉틴은, 예를 들어, SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109 또는 SEQ ID NO: 110에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109 또는 SEQ ID NO: 110에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 비-인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109 또는 SEQ ID NO: 110에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109 또는 SEQ ID NO: 110에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 비-인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109 또는 SEQ ID NO: 110에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 비-인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109 또는 SEQ ID NO: 110에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 비-인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, 노시셉틴은, 예를 들어, SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109 또는 SEQ ID NO: 110에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109 또는 SEQ ID NO: 110에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 인접한 아미노산 치환; SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109 또는 SEQ ID NO: 110에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109 또는 SEQ ID NO: 110에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 인접한 아미노산 제거; SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109 또는 SEQ ID NO: 110에 대해 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 인접한 아미노산 추가; 또는 SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109 또는 SEQ ID NO: 110에 대해 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 인접한 아미노산 추가를 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
클로스트리듐 독소는 각각 대략 150 kDa의 단일-사슬 폴리펩티드로서 번역되며(translated), 이후에 자연 발생적 프로테아제에 의해 다이설파이드 루프 내의 단백분해 분할(proteolytic scission)에 의해서 절단된다(도 18). 절단은 다이설파이드 브릿지를 형성하는 2개의 시스테인 잔기 사이에 생성된 개별적인 이중-사슬 루프 영역 내에서 일어난다. 이러한 번역후 (posttranslational) 프로세싱은 두 사슬 사이의 단일 다이설파이드 결합 및 비-공유적 상호작용에 의해서 함께 결합되어 있는 대략 50 kDa의 경쇄(LC) 및 대략 100 kDa의 중쇄 (HC)를 포함하는 이중-사슬 분자를 제공한다(도 2). 변형 클로스트리듐 독소의 재조합 생성을 용이하게 하기 위하여, 외인성 프로테아제 절단 부위는 본 명세서에 개시된 변형 클로스트리듐 독소의 단일-사슬 폴리펩티드 형태를 이중-사슬 형태로 변환하는 데 사용될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Steward, L.E. et al., Modified Clostridial Toxins with Enhanced Targeting Capabilities For Endogenous Clostridial Toxin Receptor Systems, U.S. Patent Publication No. US 2008/0096248 (Apr. 24, 2008); Steward, L.E. et al., Activatable Clostridial Toxins, U.S. Patent Publication No. US 2008/0032930 (Feb. 7, 2008); Steward, supra, (2007); Dolly, supra, (2007); Foster, supra , WO 2006/059093 (2006); and Foster, supra, WO 2006/059105 (2006)]을 참조하며, 이들 각각은 본 명세서에 전체적으로 참고로 포함된다.
제한없이, 내인성 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위 및 외인성 프로테아제 절단 부위를 포함한, 임의의 및 모든 프로테아제 절단 부위가 클로스트리듐 독소의 단일-사슬 폴리펩티드 형태를 이중-사슬 형태로 변환하는 데 사용될 수 있는 것으로 생각된다. 따라서, 본 발명의 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소는, 일부분, 내인성 프로테아제 절단 부위를 이중-사슬 루프 영역 내에 포함한다. 본 발명의 다른 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소는, 일부분, 외인성 프로테아제 절단 부위를 이중-사슬 루프 영역 내에 포함한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어"이중-사슬 루프 영역"은 클로스트리듐 독소의 단일-사슬 형태를 이중-사슬 형태로 변환하는 데 사용되는 프로테아제 절단 부위를 포함하는 클로스트리듐 독소의 아미노산 서열을 의미한다. 클로스트리듐 독소 이중-사슬 루프 영역의 비-제한적인 예는, SEQ ID NO: 1의 아미노산 430-454을 포함하는 BoNT/A의 이중-사슬 루프 영역; SEQ ID NO: 2의 아미노산 437-446을 포함하는 BoNT/B의 이중-사슬 루프 영역; SEQ ID NO: 3의 아미노산 437-453을 포함하는 BoNT/C1의 이중-사슬 루프 영역; SEQ ID NO: 4의 아미노산 437-450을 포함하는 BoNT/D의 이중-사슬 루프 영역; SEQ ID NO: 5의 아미노산 412-426을 포함하는 BoNT/E의 이중-사슬 루프 영역; SEQ ID NO: 6의 아미노산 429-445을 포함하는 BoNT/F의 이중-사슬 루프 영역; SEQ ID NO: 7의 아미노산 436-450을 포함하는 BoNT/G의 이중-사슬 루프 영역; 및 SEQ ID NO: 8의 아미노산 439-467을 포함하는 TeNT의 이중-사슬 루프 영역 (표 2) 을 포함한다.
표 2. 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 영역
독소 SEQ ID NO : 경쇄
영역 		자연 발생적 프로테아제 절단 부위를 포함하는 이중-사슬 루프 영역 중쇄 영역
BoNT/A 11 NMNFTKLKNFTGLFEFYKLL CVRGIITSKTKSLDKGYNK*----ALNDLC IKVNNWDL
BoNT/B 12 KQAYEEISKEHLAVYKIQM CKSVK*-------------------APGIC IDVDNEDL
BoNT/C1 13 PALRKVNPENMLYLFTKF CHKAIDGRSLYNK*------------TLDC RELLVKNTDL
BoNT/D 14 PALQKLSSESVVDLFTKV CLRLTKNSR*---------------DDSTC IKVKNNRL
BoNT/E 15 PRIITPITGRGLVKKIIRF CKNIVSVKGIR*--------------KSIC IEINNGEL
BoNT/F 16 PKIIDSIPDKGLVEKIVKF CKSVIPRKGTK*------------APPRLC IRVNNSEL
BoNT/G 17 KEAYEEISLEHLVIYRIAM CKPVMYKNTGK*--------------SEQC IIVNNEDL
TeNT 18 TNAFRNVDGSGLVSKLIGL CKKIIPPTNIRENLYNRTA*SLTDLGGELC IKIKNEDL
BaNT 19 SRIVGPIPDNGLVERFVGL CKS-IVSKKGTK*------------NSLC IKVNNRDL
BuNT 20 PRIITPITGRGLVKKIIRF CKN-IVSVKGIR*--------------KSIC IEINNGEL
나타낸 아미노산 서열은 다음과 같다: BoNT/A, SEQ ID No: 1의 잔기 410-462; BoNT/B, SEQ ID No: 2의 잔기 418-454; BoNT/C1, SEQ ID No: 3의 잔기 419-463; BoNT/D, SEQ ID No: 4의 잔기 419-458; BoNT/E, SEQ ID No: 5의 잔기 393-434; BoNT/F, SEQ ID No: 6의 잔기 410-453; BoNT/G, SEQ ID No: 7의 잔기 419-458; TeNT, SEQ ID No: 8의 잔기 422-475; BaNT, SEQ ID No: 9의 잔기 402-443; 및 BuNT, SEQ ID No: 10의 잔기 393-434. 별표 (*)는 클로스트리듐 독소 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 결합을 나타낸다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "내인성 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위"는 "자연 발생적 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위"와 동의어이며, 자연 발생적 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 영역 내 에서 발견되는 자연 발생적 프로테아제 절단 부위를 의미하며, 제한없이, 자연 발생적 클로스트리듐 독소 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위 변이체, 예를 들어, 클로스트리듐 독소 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위 이소형 및 클로스트리듐 독소 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위 서브타입을 포함한다. 내인성 프로테아제 절단 부위의 비-제한적인 예는, 예를 들어, BoNT/A 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위, BoNT/B 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위, BoNT/C1 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위, BoNT/D 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위, BoNT/E 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위, BoNT/F 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위, BoNT/G 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위 및 TeNT 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위를 포함한다.
전술한 바와 같이, 클로스트리듐 독소는 대략 150 kDa의 단일-사슬 폴리펩티드로서 번역되며, 이후에 자연 발생적 프로테아제에 의해 다이설파이드 루프 내의 단백분해 분할에 의해서 절단된다. 이러한 번역후 프로세싱은 단일 다이설파이드 결합 및 비-공유적 상호작용에 의해서 함께 결합되어 있는 대략 50 kDa의 경쇄(LC) 및 대략 100 kDa의 중쇄 (HC)를 포함하는 이중-사슬 분자를 제공한다. 프로테아제의 정체는 현재 알려져 있지 않지만, 많은 클로스트리듐 독소에 대한 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위가 결정되었다. BoNT에서는, K448-A449에서의 절단이 BoNT/A의 단일 폴리펩티드 형태를 이중-사슬 형태로 변환시키고; K441-A442에서의 절단이 BoNT/B의 단일 폴리펩티드 형태를 이중-사슬 형태로 변환시키고; K449-T450에서의 절단이 BoNT/C1의 단일 폴리펩티드 형태를 이중-사슬 형태로 변환시키고; R445-D446에서의 절단이 BoNT/D의 단일 폴리펩티드 형태를 이중-사슬 형태로 변환시키고; R422-K423에서의 절단이 BoNT/E의 단일 폴리펩티드 형태를 이중-사슬 형태로 변환시키고; K439-A440에서의 절단이 BoNT/F의 단일 폴리펩티드 형태를 이중-사슬 형태로 변환시키고; K446-S447에서의 절단이 BoNT/G의 단일 폴리펩티드 형태를 이중-사슬 형태로 변환시킨다. A457-S458에서 TeNT의 단일 폴리펩티드 형태의 단백분해 절단은 이중-사슬 형태를 야기한다. K431-N432에서 BaNT의 단일 폴리펩티드 형태의 단백분해 절단은 이중-사슬 형태를 야기한다. R422-K423에서 BuNT의 단일 폴리펩티드 형태의 단백분해 절단은 이중-사슬 형태를 야기한다. 이러한 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위는 융합 단백질로서 변형 클로스트리듐 독소에 인-프레임(in-frame)으로 작동가능하게 연결된다(operably-linked). 그러나, 이중-사슬 루프 내의 추가적인 절단 부위가 또한 절단되어, 손실되는 작은 펩티드 단편의 발생을 야기하는 것으로 여겨진다는 것에 또한 주목하여야만 한다. 비-제한적인 예로서, BoNT/A 단일-사슬 폴리펩티드는 궁극적으로 절단되어 이중-사슬루프 내의 10개의 아미노산의 단편의 손실을 가져온다.
따라서, 실시 형태에서, 내인성 클로스트리듐 독소 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위를 포함한 프로테아제 절단 부위는 단일-사슬 독소를 이중-사슬 형태로 변환하는 데 사용된다. 본 실시 형태의 태양에서, 단백분해 절단에 의한 이중-사슬 형태로의 변환은, 예를 들어, BoNT/A 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위, BoNT/B 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위, BoNT/C1 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위, BoNT/D 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위, BoNT/E 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위, BoNT/F 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위, BoNT/G 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위, TeNT 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위, BaNT 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위, 또는 BuNT 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위를 포함하는 부위로부터 일어난다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, 단백분해 절단에 의한 이중-사슬 형태로의 변환은, 예를 들어, SEQ ID NO: 1의 아미노산 430-454를 포함하는 BoNT/A의 이중-사슬 루프 영역; SEQ ID NO: 2의 아미노산 437-446을 포함하는 BoNT/B의 이중-사슬 루프 영역; SEQ ID NO: 3의 아미노산 437-453을 포함하는 BoNT/C1의 이중-사슬 루프 영역; SEQ ID NO: 4의 아미노산 437-450을 포함하는 BoNT/D의 이중-사슬 루프 영역; SEQ ID NO: 5의 아미노산 412-426을 포함하는 BoNT/E의 이중-사슬 루프 영역; SEQ ID NO: 6의 아미노산 429-445를 포함하는 BoNT/F의 이중-사슬 루프 영역; SEQ ID NO: 7의 아미노산 436-450을 포함하는 BoNT/G의 이중-사슬 루프 영역; 또는 SEQ ID NO: 8의 아미노산 439-467을 포함하는 TeNT의 이중-사슬 루프 영역; SEQ ID NO: 9의 아미노산 421-435를 포함하는 BaNT의 이중-사슬 루프 영역; 또는 SEQ ID NO: 10의 아미노산 412-426을 포함하는 BuNT의 이중-사슬 루프 영역을 포함하는 부위로부터 일어난다.
외인성 프로테아제 절단 부위가 사용되어 본 명세서에 개시된 변형 클로스트리듐 독소의 단일-사슬 폴리펩티드 형태가 이중-사슬 형태로 변환되는 것으로 생각된다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "외인성 프로테아제 절단 부위"는 "비-자연 발생적 프로테아제 절단 부위" 또는 "비-천연(non-native) 프로테아제 절단 부위"와 동의어이며, 자연 발생적 클로스트리듐 독소로부터의 이중-사슬 루프 영역에는 정상적으로는 존재하지 않는 프로테아제 절단 부위를 의미하고, 단, 외인성 프로테아제 절단 부위는 사람 프로테아제 절단 부위 또는 본 명세서에 개시된 활성화가능한 폴리펩티드를 인코팅하는 구조를 발현하는 숙주 세포에서 발현되는 프로테아제에 대해 감수성(susceptible)인 프로테아제 절단 부위가 아니다. 임의의 및 모든 외인성 프로테아제 절단 부위가 클로스트리듐 독소의 단일-사슬 폴리펩티드 형태를 본 발명의 태양을 실시하는 데 유용한 이중-사슬 형태로 변환하는 데 사용될 수 있는 것으로 생각된다. 외인성 프로테아제 절단 부위의 비-제한적인 예는, 예를 들어, 식물 파파인(papain) 절단 부위, 곤충 파파인 절단 부위, 갑각류 파파인 절단 부위, 엔테로키아나제 절단 부위, 사람 리노바이러스 3C 프로테아제 절단 부위, 사람 엔테로바이러스 3C 프로테아제 절단 부위, 담배 식각 바이러스 (TEV) 프로테아제 절단 부위, 담배 엽맥 반점 바이러스(Tobacco Vein Mottling Virus; TVMV) 절단 부위, 서브틸리신(subtilisin) 절단 부위, 하이드록실아민 절단 부위, 또는 카스파아제 3 절단 부위를 포함한다.
임의의 및 모든 길이의 외인성 프로테아제 절단 부위가 본 발명의 태양에 유용할 수 있으며, 단, 외인성 프로테아제 절단 부위는 그의 각각의 프로테아제에 의해 절단될 수 있다. 따라서, 본 실시 형태의 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는 길이가, 예를 들어, 적어도 6개의 아미노산, 적어도 7 개의 아미노산, 적어도 8 개의 아미노산, 적어도 9 개의 아미노산, 적어도 10 개의 아미노산, 적어도 15 개의 아미노산, 적어도 20 개의 아미노산, 적어도 25 개의 아미노산, 적어도 30 개의 아미노산, 적어도 40 개의 아미노산, 적어도 50 개의 아미노산, 또는 적어도 60 개의 아미노산일 수 있다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는 길이가, 예를 들어, 최대 6 개의 아미노산, 최대 7 개의 아미노산, 최대 8 개의 아미노산, 최대 9 개의 아미노산, 최대 10 개의 아미노산, 최대 15 개의 아미노산, 최대 20 개의 아미노산, 최대 25 개의 아미노산, 최대 30 개의 아미노산, 최대 40 개의 아미노산, 최대 50 개의 아미노산, 또는 최대 60 개의 아미노산일 수 있다.
실시 형태에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치한다. 본 실시 형태의 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소는, 예를 들어, 식물 파파인 절단 부위, 곤충 파파인 절단 부위, 갑각류 파파인 절단 부위, 비-사람 엔테로키아나제 프로테아제 절단 부위, 담배 식각 바이러스 프로테아제 절단 부위, 담배 엽맥 반점 바이러스 프로테아제 절단 부위, 사람 리노바이러스 3C 프로테아제 절단 부위, 사람 엔테로바이러스 3C 프로테아제 절단 부위, 서브틸리신 절단 부위, 하이드록실 아민 절단 부위, SUMO/ULP-1 프로테아제 절단 부위, 및 비-사람 카스파아제 3 절단 부위를 포함하는 외인성 프로테아제 절단 부위를 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 변형 BoNT/A, 변형 BoNT/B, 변형 BoNT/C1, 변형 BoNT/D, 변형 BoNT/E, 변형 BoNT/F, 변형 BoNT/G, 변형 TeNT, 변형 BaNT, 또는 변형 BuNT의 이중-사슬 루프 내에 위치한다.
본 실시 형태의 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 비-사람 엔테로키나아제 절단 부위를 포함할 수 있다. 실시 형태의 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 소 엔테로키나아제 프로테아제 절단 부위를 포함할 수 있다. 실시 형태의 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, SEQ ID NO: 21를 포함하는 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 소 엔테로키나아제 프로테아제 절단 부위를 포함할 수 있다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 소 엔테로키나아제 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 변형 BoNT/A, 변형 BoNT/B, 변형 BoNT/C1, 변형 BoNT/D, 변형 BoNT/E, 변형 BoNT/F, 변형 BoNT/G, 변형 TeNT, 변형 BaNT, 또는 변형 BuNT의 이중-사슬 루프 내에 위치할 수 있다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 담배 식각 바이러스 프로테아제 절단 부위를 포함할 수 있다. 실시 형태의 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 공통 서열E-P5-P4-Y-P2-Q*-G (SEQ ID NO: 22) 또는 E-P5-P4-Y-P2-Q*-S (SEQ ID NO: 23) (여기서, P2, P4 및 P5는 임의의 아미노산일 수 있음)를 포함하는 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 담배 식각 바이러스 프로테아제 절단 부위를 포함할 수 있다. 실시 형태의 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32 또는 SEQ ID NO: 33를 포함하는 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 담배 식각 바이러스 프로테아제 절단 부위를 포함할 수 있다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 담배 식각 바이러스 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 변형 BoNT/A, 변형 BoNT/B, 변형 BoNT/C1, 변형 BoNT/D, 변형 BoNT/E, 변형 BoNT/F, 변형 BoNT/G, 변형 TeNT, 변형 BaNT, 또는 변형 BuNT의 이중-사슬 루프 내에 위치한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 담배 엽맥 반점 바이러스 프로테아제 절단 부위를 포함할 수 있다. 실시 형태의 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 공통 서열 P6-P5-V-R-F-Q*-G (SEQ ID NO: 113) 또는 P6-P5-V-R-F-Q*-S (SEQ ID NO: 114) (여기서, P5 및P6은 임의의 아미노산일 수 있음)을 포함하는 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 담배 엽맥 반점 바이러스 프로테아제 절단 부위를 포함할 수 있다. 실시 형태의 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, SEQ ID NO: 115, SEQ ID NO: 116, SEQ ID NO: 117, 또는 SEQ ID NO: 118를 포함하는 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 담배 엽맥 반점 바이러스 프로테아제 절단 부위를 포함할 수 있다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 담배 엽맥 반점 바이러스 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 변형 BoNT/A, 변형 BoNT/B, 변형 BoNT/C1, 변형 BoNT/D, 변형 BoNT/E, 변형 BoNT/F, 변형 BoNT/G, 변형 TeNT, 변형 BaNT, 또는 변형 BuNT의 이중-사슬 루프 내에 위치한다.
본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 사람 리노바이러스 3C 프로테아제 절단 부위를 포함할 수 있다. 실시 형태의 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 공통 서열 P5-P4-L-F-Q*-G-P (SEQ ID NO: 34) (여기서, P4는 G, A, V, L, I, M, S 또는 T이고 P5는 임의의 아미노산일 수 있되, D 또는 E가 선호됨)을 포함하는 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 사람 리노바이러스 3C 프로테아제 절단 부위를 포함할 수 있다. 실시 형태의 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 또는 SEQ ID NO: 40를 포함하는 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 사람 리노바이러스 3C 프로테아제 절단 부위를 포함할 수 있다. 실시 형태의 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 프리시션(PRESCISSION®)에 의해 절단될 수 있는 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 사람 리노바이러스 3C 프로테아제를 포함할 수 있다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 사람 리노바이러스 3C 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 변형 BoNT/A, 변형 BoNT/B, 변형 BoNT/C1, 변형 BoNT/D, 변형 BoNT/E, 변형 BoNT/F, 변형 BoNT/G, 변형 TeNT, 변형 BaNT, 또는 변형 BuNT의 이중-사슬 루프 내에 위치한다.
본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 서브틸리신 절단 부위를 포함할 수 있다. 실시 형태의 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 공통 서열 P6-P5-P4-P3-H*-Y (SEQ ID NO: 41) 또는 P6-P5-P4-P3-Y-H* (SEQ ID NO: 42), (여기서, P3, P4 및 P5 및 P6은 임의의 아미노산일 수 있음)을 포함하는 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 서브틸리신 절단 부위를 포함할 수 있다. 실시 형태의 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, 또는 SEQ ID NO: 45를 포함하는 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 서브틸리신 절단 부위를 포함할 수 있다. 실시 형태의 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 제네나아제(GENENASE®)에 의해 절단될 수 있는 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 서브틸리신 절단 부위를 포함할 수 있다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 서브틸리신 절단 부위는, 예를 들어, 변형 BoNT/A, 변형 BoNT/B, 변형 BoNT/C1, 변형 BoNT/D, 변형 BoNT/E, 변형 BoNT/F, 변형 BoNT/G, 변형 TeNT, 변형 BaNT, 또는 변형 BuNT의 이중-사슬 루프 내에 위치할 수 있다.
본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 하이드록실아민 절단 부위를 포함할 수 있다. 실시 형태의 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 다수의 다이펩티드 N*G를 포함하는 하이드록실아민 절단 부위를 포함할 수 있다. 실시 형태의 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, SEQ ID NO: 46, 또는 SEQ ID NO: 47를 포함하는 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 하이드록실아민 절단 부위를 포함할 수 있다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 하이드록실아민 절단 부위는, 예를 들어, 변형 BoNT/A, 변형 BoNT/B, 변형 BoNT/C1, 변형 BoNT/D, 변형 BoNT/E, 변형 BoNT/F, 변형 BoNT/G, 변형 TeNT, 변형 BaNT, 또는 변형 BuNT의 이중-사슬 루프 내에 위치한다.
본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 SUMO/ULP-1 프로테아제 절단 부위를 포함할 수 있다. 실시 형태의 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 공통 서열 G-G*-P1'P2'P3'(SEQ ID NO: 112) (여기서, P1' P2' 및 P3'는 임의의 아미노산일 수 있음)을 포함하는 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 SUMO/ULP-1 프로테아제 절단 부위를 포함할 수 있다. 실시 형태의 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, SEQ ID NO: 48를 포함하는 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 SUMO/ULP-1 프로테아제 절단 부위를 포함할 수 있다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, SUMO/ULP-1 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 변형 BoNT/A, 변형 BoNT/B, 변형 BoNT/C1, 변형 BoNT/D, 변형 BoNT/E, 변형 BoNT/F, 변형 BoNT/G, 변형 TeNT, 변형 BaNT, 또는 변형 BuNT의 이중-사슬 루프 내에 위치한다.
본 실시 형태의 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 비-사람 카스파아제 3 절단 부위를 포함할 수 있다. 실시 형태의 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 절단 부위 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 마우스 카스파아제 3 프로테아제를 포함할 수 있다. 실시 형태의 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 공통 서열 D-P3-P2-D*P1'(SEQ ID NO: 119) (여기서, P3는 임의의 아미노산일 수 있되, E가 선호되고, P2는 임의의 아미노산일 수 있으며 P1'은 임의의 아미노산일 수 있되, G 또는 S가 선호됨)을 포함하는 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 비-사람 카스파아제 3 프로테아제 절단 부위를 포함할 수 있다. 실시 형태의 다른 태양에서, 외인성 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, SEQ ID NO: 120, SEQ ID NO: 121, SEQ ID NO: 122, SEQ ID NO: 123, SEQ ID NO: 124, 또는 SEQ ID NO: 125를 포함하는 변형 클로스트리듐 독소의 이중-사슬 루프 내에 위치하는 비-사람 카스파아제 3 프로테아제 절단 부위를 포함할 수 있다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 소 엔테로키나아제 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 변형 BoNT/A, 변형 BoNT/B, 변형 BoNT/C1, 변형 BoNT/D, 변형 BoNT/E, 변형 BoNT/F, 변형 BoNT/G, 변형 TeNT, 변형 BaNT, 또는 변형 BuNT의 이중-사슬 루프 내에 위치한다.
외인성 프로테아제 절단 부위를 위해 이중-사슬 루프 영역을 변형하여 자연 발생적 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위를 대신한다. 이러한 변형에서, 자연 발생적 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위는 작동불가능하게(inoperable)되므로 그의 프로테아제에 의해 절단될 수 없다. 오직 외인성 프로테아제 절단 부위만이 그의 상응하는 외인성 프로테아제에 의해 절단될 수 있다. 이러한 유형의 변형에서, 외인성 프로테아제 부위는 융합 단백질로서 변형 클로스트리듐 독소에 인-프레임으로 작동가능하게 연결되고, 부위는 그의 각각의 외인성 프로테아제에 의해 절단될 수 있다. 내인성 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위를 외인성 프로테아제 절단 부위로 대체하는 것은 부위를 치환하는 것일 수 있으며, 여기서, 외인성 부위는 내인성 부위의 절단 부위 위치에 가까운 곳에서 조작된다(engineered). 내인성 이중-사슬 루프 프로테아제 절단 부위를 외인성 프로테아제 절단 부위로 치환하는 것은 외인성 부위를 추가하는 것일 수 있으며, 여기서, 외인성 부위는 내인성 부위의 절단 부위 위치와 상이한 곳에서 조작되며, 내인성 부위는 작동불가능하게 되도록 조작된다. 프로테아제 절단 부위의 위치 및 종류가 중요할 수 있으며, 소정의 결합 도메인은 유리 아미노-말단 또는 카르복시-말단 아미노산을 필요로 하기 때문이다. 예를 들어, 오피오이드 펩티드 결합 도메인이 두 가지 다른 도메인 사이에 위치한다, 예를 들어, 도 4 참조, 프로테아제 절단 부위의 선택 기준은 부위를 절단하는 프로테아제가 플러시 컷(flush cut)을 남겨서, 수용체에 대한 결합 도메인의 선택적인 결합에 필요한 결합 도메인의 유리 아미노-말단 또는 카르복실-말단을 노출시키는 지의 여부일 수 있다.
자연 발생적 이중-사슬 루프 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 결합 옆에 있는 적어도 2개의 아미노산을 변경하여 자연 발생적 프로테아제 절단 부위를 작동불가능하게 만들 수 있다. 더욱 확장된 변경이 이루어질 수 있되, 단, 이중-사슬 루프 영역의 2개의 시스테인 잔기는 그대로 남아있어 영역은 여전히 다이설파이드 브릿지를 형성할 수 있다. 아미노산 변경의 비-제한적인 예는 아미노산을 제거하는 것 또는 원래의 아미노산을 상이한 아미노산으로 치환하는 것을 포함한다. 따라서, 일 실시 형태에서, 자연 발생적 프로테아제 절단 부위는 자연 발생적 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 결합의 옆에 있는 2개의 아미노산을 변경함으로써 작동불가능하게 만든다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 자연 발생적 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 자연 발생적 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 결합 옆에 있는 2개의 아미노산을 포함하는 적어도 3개의 아미노산; 자연 발생적 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 결합 옆에 있는 2개의 아미노산을 포함하는 적어도 4개의 아미노산; 자연 발생적 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 결합 옆에 있는 2개의 아미노산을 포함하는 적어도 5개의아미노산; 자연 발생적 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 결합 옆에 있는 2개의 아미노산을 포함하는 적어도 6개의 아미노산; 자연 발생적 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 결합 옆에 있는 2개의 아미노산을 포함하는 적어도 7개의 아미노산; 자연 발생적 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 결합 옆에 있는 2개의 아미노산을 포함하는 적어도 8개의 아미노산; 자연 발생적 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 결합 옆에 있는 2개의 아미노산을 포함하는 적어도 9개의 아미노산; 자연 발생적 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 결합 옆에 있는 2개의 아미노산을 포함하는 적어도 10개의 아미노산; 자연 발생적 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 결합 옆에 있는 2개의 아미노산을 포함하는 적어도 15개의 아미노산; 또는 자연 발생적 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 결합 옆에 있는 2개의 아미노산을 포함하는 적어도 20개의 아미노산을 변경하여 작동불가능하게 만든다.
본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 자연 발생적 이중-사슬 프로테아제 절단 부위는, 예를 들어, 자연 발생적 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 결합 옆에 있는 2개의 아미노산을 포함하는 최대 3개의 아미노산; 자연 발생적 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 결합 옆에 있는 2개의 아미노산을 포함하는 최대 4개의 아미노산; 자연 발생적 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 결합 옆에 있는 2개의 아미노산을 포함하는 최대 5개의 아미노산; 자연 발생적 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 결합 옆에 있는 2개의 아미노산을 포함하는 최대 6개의 아미노산; 자연 발생적 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 결합 옆에 있는 2개의 아미노산을 포함하는 최대 7개의 아미노산; 자연 발생적 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 결합 옆에 있는 2개의 아미노산을 포함하는 최대 8개의 아미노산; 자연 발생적 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 결합 옆에 있는 2개의 아미노산을 포함하는 최대 9개의 아미노산; 자연 발생적 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 결합 옆에 있는 2개의 아미노산을 포함하는 최대 10개의 아미노산; 자연 발생적 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 결합 옆에 있는 2개의 아미노산을 포함하는 최대 15개의 아미노산; 또는 자연 발생적 프로테아제에 의해 절단되는 펩티드 결합 옆에 있는 2개의 아미노산을 포함하는 최대 20개의 아미노산을 변경하여 작동불가능하게 만든다.
본 발명에 개시된 변형 클로스트리듐 독소는 선택적으로 유연성 스페이서(flexible spacer)를 포함하는 유연성 영역을 추가로 포함할 수 있다. 유연성 스페이서를 포함하는 유연성 영역은 폴리펩티드의 특성, 속성 또는 성질을 최적화하도록 폴리펩티드 영역의 길이를 조절하는 데 사용될 수 있다. 비-제한적인 예로서, 1개 이상의 유연성 스페이서를 나란히(in tandem) 포함하는 폴리펩티드 영역을 사용하여 프로테아제 절단 부위을 더욱 잘 노출시켜 프로테아제에 의한 부위의 절단을 용이하게 할 수 있다. 다른 비-제한적인 예로서, 1개 이상의 유연성 스페이서를 나란히 포함하는 폴리펩티드 영역을 사용하여 오피오이드 펩티드 결합 도메인을 더욱 잘 제공함으로써, 수용체에 대한 그 결합 도메인의 결합을 용이하게 할 수 있다.
펩티드를 포함하는 유연성 스페이서는 길이가 적어도 1개의 아미노산이며 작은 측쇄 R 기를 갖는 비-하전된 아미노산으로, 예를 들어, 글리신, 알라닌, 발린, 류신, 또는 세린이다. 따라서, 실시 형태에서, 유연성 스페이서는 길이가, 예를 들어, 적어도 1개의 아미노산, 적어도 2 개의 아미노산, 적어도 3 개의 아미노산, 적어도 4 개의 아미노산, 적어도 5 개의 아미노산, 적어도 6 개의 아미노산, 적어도 7 개의 아미노산, 적어도 8 개의 아미노산, 적어도 9 개의 아미노산, 또는 적어도 10 개의 아미노산일 수 있다. 다른 실시 형태에서, 유연성 스페이서는 길이가, 예를 들어, 최대 1 개의 아미노산, 최대 2 개의 아미노산, 최대 3 개의 아미노산, 최대 4 개의 아미노산, 최대 5 개의 아미노산, 최대 6 개의 아미노산, 최대 7 개의 아미노산, 최대 8 개의 아미노산, 최대 9 개의 아미노산, 또는 최대 10 개의 아미노산일 수 있다. 여전히 다른 실시 형태에서, 유연성 스페이서는, 예를 들어, 1 내지 3 개의 아미노산, 2 내지 4 개의 아미노산, 3 내지 5 개의 아미노산, 4 내지 6 개의 아미노산, 또는 5 내지 7 아미노산일 수 있다. 유연성 스페이서의 비-제한적인 예는, 예를 들어, GGG, GGGG (SEQ ID NO: 49), 및 GGGGS (SEQ ID NO: 50)와 같은 G-스페이서 또는 AAA, AAAA (SEQ ID NO: 51) 및 AAAAV (SEQ ID NO: 111)와 같은 A-스페이서를 포함한다. 이러한 유연성 영역은 융합 단백질로서 변형 클로스트리듐 독소에 인-프레임으로 작동가능하게-연결된다.
따라서, 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 변형 클로스트리듐 독소는 유연성 스페이서를 포함하는 유연성 영역을 추가로 포함할 수 있다. 다른 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 변형 클로스트리듐 독소는다수의 유연성 스페이서를 나란히 포함하는 유연성 영역을 추가로 포함할 수 있다. 본 실시 형태의 태양에서, 유연성 영역은 나란히, 예를 들어, 적어도 1개의 G-스페이서, 적어도 2 개의 G-스페이서, 적어도 3 개의 G-스페이서, 적어도 4 개의 G-스페이서 또는 적어도 5 개의 G-스페이서를 포함할 수 있다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 유연성 영역은 나란히, 예를 들어, 최대 1 개의 G-스페이서, 최대 2 개의 G-스페이서, 최대 3 개의 G-스페이서, 최대 4 개의 G-스페이서 또는 최대 5 개의 G-스페이서를 포함할 수 있다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 유연성 영역은 나란히, 예를 들어, 적어도 1 개의 A-스페이서, 적어도 2 개의 A-스페이서, 적어도 3 개의 A-스페이서, 적어도 4 개의 A-스페이서 또는 적어도 5 개의 A-스페이서를 포함할 수 있다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 유연성 영역은 나란히, 예를 들어, 최대 1 개의 A-스페이서, 최대 2 개의 A-스페이서, 최대 3 개의 A-스페이서, 최대 4 개의 A-스페이서 또는 최대 5 개의 A-스페이서를 포함할 수 있다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소는 동일한 유연성 스페이서의 1개 이상의 카피, 상이한 유연성 스페이서의 1개 이상의, 또는 이들의 임의의 조합. 를 포함하는 유연성 영역을 포함할 수 있다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, 유연성 스페이서를 포함하는 변형 클로스트리듐 독소는, 예를 들어, 변형 BoNT/A, 변형 BoNT/B, 변형 BoNT/C1, 변형 BoNT/D, 변형 BoNT/E, 변형 BoNT/F, 변형 BoNT/G, 변형 TeNT, 변형 BaNT, 또는 변형 BuNT일 수 있다.
본 명세서에 개시된 변형 클로스트리듐 독소는, 변형 클로스트리듐 독소가 중독 프로세스를 실행할 수 있다는 조건부로, 유연성 스페이서를 임의의 및 모든 위치에 포함할 수 있는 것으로 생각된다. 본 실시 형태의 태양에서, 유연성 스페이서는, 예를 들어, 효소 도메인과 전위 도메인, 효소 도메인과 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 효소 도메인과 외인성 프로테아제 절단 부위 사이에 위치한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, G-스페이서는, 예를 들어, 효소 도메인과 전위 도메인, 효소 도메인과 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 효소 도메인과 외인성 프로테아제 절단 부위 사이에 위치한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, A-스페이서는, 예를 들어, 효소 도메인과 전위 도메인, 효소 도메인과 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 효소 도메인과 외인성 프로테아제 절단 부위 사이에 위치한다.
본 실시 형태의 다른 태양에서, 유연성 스페이서는, 예를 들어, 오피오이드 펩티드 결합 도메인과 전위 도메인, 오피오이드 펩티드 결합 도메인과 효소 도메인, 오피오이드 펩티드 결합 도메인과 외인성 프로테아제 절단 부위 사이에 위치한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, G-스페이서는, 예를 들어, 오피오이드 펩티드 결합 도메인과 전위 도메인, 오피오이드 펩티드 결합 도메인과 효소 도메인, 오피오이드 펩티드 결합 도메인과 외인성 프로테아제 절단 부위 사이에 위치한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, A-스페이서는, 예를 들어, 오피오이드 펩티드 결합 도메인과 전위 도메인, 오피오이드 펩티드 결합 도메인과 효소 도메인, 오피오이드 펩티드 결합 도메인과 외인성 프로테아제 절단 부위 사이에 위치한다.
본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 유연성 스페이서는, 예를 들어, 전위 도메인과 효소 도메인, 전위 도메인과 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 전위 도메인과 외인성 프로테아제 절단 부위 사이에 위치한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, G-스페이서는, 예를 들어, 전위 도메인과 효소 도메인, 전위 도메인과 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 전위 도메인과 외인성 프로테아제 절단 부위 사이에 위치한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, A-스페이서는, 예를 들어, 전위 도메인과 효소 도메인, 전위 도메인과 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 전위 도메인과 외인성 프로테아제 절단 부위 사이에 위치한다.
본 명세서에 개시된 변형 클로스트리듐 독소는 변형 클로스트리듐 독소가 중독 프로세스를 실행할 수 있다는 조건부로, 오피오이드 펩티드 결합 도메인을 임의의 및 모든 위치에 포함할 수 있는 것으로 생각된다. 비-제한적인 예는, 오피오이드 펩티드 결합 도메인을 변형 클로스트리듐 독소의 아미노 말단에 위치시키는 것; 오피오이드 펩티드 결합 도메인을 변형 클로스트리듐 독소의 클로스트리듐 독소 효소 도메인과 전위 도메인 사이에 위치시키는 것; 및 오피오이드 펩티드 결합 도메인을 변형 클로스트리듐 독소의 카르복실 말단에 위치시키는 것을 포함한다. 다른 비-제한적인 예에는, 오피오이드 펩티드 결합 도메인을 변형 클로스트리듐 독소의 클로스트리듐 독소 효소 도메인과 클로스트리듐 독소 전위 도메인 사이에 위치시키는 것이 포함된다. 자연 발생적 클로스트리듐 독소의 효소 도메인은 천연 개시 메티오닌(native start methionine)을 포함한다. 따라서, 효소 도메인이 아미노 말단 위치에 있지 않은 도메인 구조에서, 개시 메티오닌을 포함하는 아미노산 서열은 아미노-말단 도메인의 앞에 위치하여야 한다. 마찬가지로, 오피오이드 펩티드 결합 도메인이 아미노-말단 위치에 있는 경우, 오피오이드 펩티드 결합 도메인이 유리 아미노 말단을 필요로 하는 상황에서 개시 메티오닌 및 프로테아제 절단 부위를 포함하는 아미노산 서열은 작동가능하게-연결될 수 있다, 예를 들어, 문헌 [Shengwen Li et al., Degradable Clostridial Toxins, U.S. Patent Application 11/572,512 (Jan. 23, 2007)]을 참조하며, 이는 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다. 또한, 개시 메티오닌을 포함하는 다른 폴리펩티드의 아미노 말단에 작동가능하게-연결된 폴리펩티드가 추가되는 경우, 원래의 메티오닌 잔기가 제거될 수 있음이 본 기술 분야에 알려져 있다.
따라서, 실시 형태에서, 변형 클로스트리듐 독소는 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 전위 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위 및 효소 도메인을 포함하는 아미노 내지 카르복실 단일 폴리펩티드 선형 오더(linear order)를 포함할 수 있다 (도 3A). 본 실시 형태의 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소는 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 포함하는 아미노 내지 카르복실 단일 폴리펩티드 선형 오더를 포함할 수 있다.
다른 실시 형태에서, 변형 클로스트리듐 독소는 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 효소 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 및 전위 도메인을 포함하는 아미노 내지 카르복실 단일 폴리펩티드 선형 오더를 포함할 수 있다 (도 3B). 본 실시 형태의 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소는 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 클로스트리듐 독소 전위 도메인을 포함하는 아미노 내지 카르복실 단일 폴리펩티드 선형 오더를 포함할 수 있다.
또 다른 실시 형태에서, 변형 클로스트리듐 독소는 효소 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 및 전위 도메인을 포함하는 아미노 내지 카르복실 단일 폴리펩티드 선형 오더를 포함할 수 있다 (도 4A). 본 실시 형태의 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소는 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 및 클로스트리듐 독소 전위 도메인을 포함하는 아미노 내지 카르복실 단일 폴리펩티드 선형 오더를 포함할 수 있다.
또 다른 실시 형태에서, 변형 클로스트리듐 독소는 전위 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 및 효소 도메인을 포함하는 아미노 내지 카르복실 단일 폴리펩티드 선형 오더를 포함할 수 있다 (도 4B). 본 실시 형태의 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소는 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 포함하는 아미노 내지 카르복실 단일 폴리펩티드 선형 오더를 포함할 수 있다.
다른 실시 형태에서, 변형 클로스트리듐 독소는 효소 도메인, 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 및 전위 도메인을 포함하는 아미노 내지 카르복실 단일 폴리펩티드 선형 오더를 포함할 수 있다 (도 4C). 본 실시 형태의 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소는 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 클로스트리듐 독소 전위 도메인을 포함하는 아미노 내지 카르복실 단일 폴리펩티드 선형 오더를 포함할 수 있다.
또 다른 실시 형태에서, 변형 클로스트리듐 독소는 전위 도메인, 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위 및 효소 도메인 (도 4D)을 포함하는 아미노 내지 카르복실 단일 폴리펩티드 선형 오더를 포함할 수 있다. 본 실시 형태의 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소는 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 포함하는 아미노 내지 카르복실 단일 폴리펩티드 선형 오더를 포함할 수 있다.
또 다른 실시 형태에서, 변형 클로스트리듐 독소는 효소 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 전위 도메인, 및 오피오이드 펩티드 결합을 포함하는 아미노 내지 카르복실 단일 폴리펩티드 선형 오더를 포함할 수 있다 (도 5A). 본 실시 형태의 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소는 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 및 오피오이드 펩티드 결합 도메인을 포함하는 아미노 내지 카르복실 단일 폴리펩티드 선형 오더를 포함할 수 있다.
또 다른 실시 형태에서, 변형 클로스트리듐 독소는 전위 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 효소 도메인 및 오피오이드 펩티드 결합 도메인을 포함하는 아미노 내지 카르복실 단일 폴리펩티드 선형 오더를 포함할 수 있다 (도 5B). 본 실시 형태의 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소는 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 포함하는 아미노 내지 카르복실 단일 폴리펩티드 선형 오더를 포함할 수 있다.
본 발명에 유용한 조성물은 일반적으로 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 약학적으로 허용가능한 조성물로서 투여된다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "약학적으로 허용가능한"은 개체에 투여시 유해한, 알러지성 또는 다른 바람직하지 않거나 원치않는 반응을 제공하지 않는 임의의 분자 실체(entity) 또는 조성물을 의미한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "약학적으로 허용가능한 조성물"은 "약학적 조성물"과 동의어이며 치료적으로 유효한 농도의 활성 성분, 예를 들어, 본 명세서에 개시된 임의의 변형 클로스트리듐 독소를 의미한다. 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 약학적 조성물은 의학 및 수의학 응용에 유용하다. 약학적 조성물은 환자에 단독으로, 또는 다른 보충 활성 성분, 제제, 약물 또는 호르몬과 조합하여 투여될 수 있다. 약학적 조성물은, 제한없이, 종래의 혼합, 용해, 과립화, 드래지-제조 (dragee-making), 레비게이팅(levigating), 에멀젼화, 캡슐화, 인트랩핑(entrapping) 및 동결건조를 포함하는 임의의 다양한 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 약학적 조성물은 제한없이, 멸균 용액, 현탁액, 에멀젼, 동결건조물, 정제, 환제(pill), 펠렛, 캡슐, 분말, 시럽, 엘릭서(elixir) 또는 투여에 적합한 임의의 다른 투여 형태를 포함하는 임의의 다양한 형태를 취할 수 있다.
본 발명의 태양은, 일부분, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 제공한다. 조성물은 비뇨생식기-신경학적 질환과 관련된 증상을 방지 또는 감소시킨다는 조건부로, 임의의 본 명세서에 개시된 조성물이 이를 필요로 하는 포유류에서 비뇨생식기-신경학적 질환을 치료하는 방법에 유용할 수 있을 것으로 생각된다. 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 비-제한적인 예는 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 포함하는 변형 클로스트리듐 독소를 포함한다. 예를 들어, 문헌 [Steward, supra, (2007); Dolly, supra, (2007); Foster, supra , WO 2006/059093 (2006); Foster, supra, WO 2006/059105 (Jun. 8, 2006)]에 개시된 것들을 포함하는, 임의의 본 명세서에 개시된 변형 클로스트리듐 독소를 사용할 수 있는 것으로 생각된다. 2개 이상의 상이한 변형 클로스트리듐 독소가 별도의 조성물로서 또는 단일 조성물의 일부로서 제공될 수 있는 것으로 또한 이해된다.
변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 약학적 조성물은 약학적으로 허용가능한 조성물로의 활성 성분의 프로세싱을 용이하게 하는 약학적으로 허용가능한 캐리어를 선택적으로 포함할 수 있다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "약학적으로 허용가능한 캐리어"는 "약학적 캐리어"와 동의어이며, 투여시 장기간 또는 영구적인 유해한 효과를 실질적으로 갖지 않는 임의의 캐리어를 의미하며, "약학적으로 허용가능한 비히클, 안정제, 희석제, 첨가제, 보조제 또는 부형제"와 같은 용어를 망라한다. 이러한 캐리어는 일반적으로 활성 화합물과 혼합되거나, 또는 활성 화합물을 희석 또는 봉입(enclose)하는 데 허용되며 고체, 반고체, 또는 액체 제제일 수 있다. 활성 성분은 요구되는 캐리어 또는 희석제에 용해성일 수 있거나 또는 현탁액으로서 송달될 수 있는 것으로 이해된다. 제한없이, 수성 매질, 예를 들어, 물, 염수, 글리신, 히알루론산 등; 고체 캐리어 예를 들어, 만니톨, 락토오스, 전분, 마그네슘 스테아레이트, 소듐 사카린, 탤컴(talcum), 셀룰로오스, 글루코오스, 수크로오스, 마그네슘 카르보네이트 등; 용매; 분산 매질; 코팅; 항균제 및 항진균제; 등장제 및 흡수 지연제; 또는 임의의 다른 불활성 성분을 포함하는 임의의 다양한 약학적으로 허용가능한 캐리어가 사용될수 있다. 약학적으로 허용가능한 캐리어의 선택은 투여 방식에 따라 좌우될 수 있다. 임의의 약학적으로 허용가능한 담체가 활성 성분과 상용성이 없는 경우를 제외하고는, 약학적으로 허용가능한 조성물 중에 이를 사용하는 것이 고려된다. 이러한 약학적 담체의 특정 사용의 비-제한적인 예는 문헌 [Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems (Howard C. Ansel et al., eds., Lippincott Williams & Wilkins Publishers, 7th ed. 1999); Remington: The Science and Practice of Pharmacy (Alfonso R. Gennaro ed., Lippincott, Williams & Wilkins, 20th ed. 2000); Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics (Joel G. Hardman et al., eds., McGraw-Hill Professional, 10th ed. 2001); 및 Handbook of Pharmaceutical Excipients (Raymond C. Rowe et al., APhA Publications, 4th edition 2003)]에서 찾을 수 있다. 이러한 프로토콜은 일상적인 절차이며 본 명세서의 교시로부터 당업자가 결정할 수 있는 범주에 속한다.
본 명세서에 개시된 약학적 조성물은, 제한없이, 완충제, 방부제, 장성 조절제(tonicity adjuster), 염, 산화방지제, 삼투압 조절제, 생리학적 물질, 약학적 물질, 벌크제(bulking agent), 유화제, 습윤제, 감미제 또는 향미제 등을 포함하는 다른 약학적으로 허용가능한 성분 (또는 약학적 성분)을 선택적으로, 제한없이, 포함할 수 있는 것으로 또한 생각된다. 얻어지는 제제가 약학적으로 허용가능하다면, 다양한 완충제 및 pH 조절 수단이 본 명세서의 약학적 조성물을 제조하는 데 사용될 수 있다. 이러한 완충제는, 제한없이, 아세테이트 완충제, 시트레이트 완충제, 포스페이트 완충제, 중성 완충된 염수, 포스페이트 완충된 염수 및 보레이트 완충제를 포함한다. 필요하다면 산 또는 염기가 조성물의 pH를 조절하는 데 사용될 수 있는 것으로 이해된다. 약학적으로 허용가능한 산화방지제는, 제한없이, 소듐 메타바이설파이트, 소듐 티오설페이트, 아세틸시스테인, 부틸화 하이드록시아니솔 및 부틸화 하이드록시톨루엔을 포함한다. 유용한 방부제는, 제한없이, 벤즈알코늄 클로라이드, 클로로부탄올, 티메로살, 페닐수은 아세테이트, 페닐수은 니트레이트, 안정화된 옥시 클로로 조성물, 예를 들어, 퓨라이트(PURITE®) 및 킬란트(chelant), 예를 들어, DTPA 또는 DTPA-비스아미드, 칼슘 DTPA, 및 CaNaDTPA-비스아미드를 포함한다. 약학적 조성물에 유용한 장성 조절제는, 제한없이, 염, 예를 들어, 염화나트륨, 염화칼륨, 만니톨 또는 글리세린 및 다른 약학적으로 허용가능한 장성 조절제를 포함한다. 약학적 조성물은 염으로서 제공될 수 있으며 염산, 황산, 아세트산, 락트산, 타르타르산, 말산, 석신산 등을 포함하나 이로 한정되지 않는 다수의 산을 사용하여 형성될 수 있다. 염은 상응하는 유리 염기 형태보다 수성 또는 다른 양성자성 용매 중에서 더욱 안정한 경향이 있다. 약학 기술 분야에 알려진 이러한 및 다른 물질이 본 발명에 유용한 약학적 조성물에 포함될 수 있는 것으로 이해된다.
실시 형태에서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 약학적 조성물이다. 본 실시 형태의 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 약학적 조성물은 약학적 캐리어, 약학적 성분, 또는 약학적 캐리어와 약학적 성분 둘 모두를 추가로 포함한다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 약학적 조성물는 적어도 하나의 약학적 캐리어, 적어도 하나의 약학적 성분, 또는 적어도 하나의 약학적 캐리어와 적어도 하나의 약학적 성분을 추가로 포함한다.
본 발명의 태양은, 일부분, 비뇨생식기-신경학적 질환에 제공된다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "비뇨생식기-신경학적 질환"은 비뇨생식기-근원 질환을 의미하며, 여기서, 처리되는 적어도 하나의 근본적인 증상은 침해수용성(nociceptive) 감각 신경-기반 병인, 예를 들어, 강직성 기능이상(spastic dysfunction) 및/또는 천수 반사궁(sacral reflex arc)의 변성(degeneration)으로 인한 것이다. 비뇨생식기-신경학적 질환의 비-제한적인 예는, 제한 없이, 요실금, 과민성 방광(overactive bladder), 배뇨근 기능이상, 하부 요로 기능이상(lower urinary tract dysfunction), 요폐(urinary retention), 배뇨 주저(urinary hesitancy), 다뇨증(polyuria), 야간뇨(urinary frequency), 만성 요로 감염(chronic urinary tract infection), 다른 비뇨생식기 질환과 관련되거나 관련되지 않은 전립선 질환, 다른 비뇨생식기 질환과 관련되거나 관련되지 않은 자궁 질환(uterine disorder), 및 신경성 기능이상과 관련된 비뇨생식기 질환 (예를 들어, 파킨슨 병, 다발성 경화증, 이분척추(이분척추), 횡단성 척추염(transverse myelitis), 졸중, 척수 손상, 경련 반사(spasm reflex), 및 척수 또는 뇌의 신경학적 상해와 관련된 비뇨생식기 질환), 및 침해수용성 감각 신경-기반 병인의 기타 이러한 비뇨생식기 질환 을 포함한다.
소변(urine)을 수용하고 참고 유지하는 개체의 능력은 하부요로, 신장 및 신경계의 정상적인 기능에 따라 좌우된다. 개체는 또한 배뇨 충동을 인지하고 적적하게 반응하는 신체적 및 심리학적 능력을 가져야만 한다. 소변을 채우고 저장하는 방광의 능력은 기능적 괄약근(괄약근 muscle)(체외로의 소변의 흐름을 제어함) 및 안정한 방광 벽 근육(배뇨근)을 필요로 한다. 정상적인 방광 기능은 방광이 가득 찬 것을 감지하고 방광을 비우거나 아니면 소변을 참는 근육 운동을 유발하는 신경에 의존적이다. 배뇨의 프로세스는 2 단계를 포함한다: 1) 방광을 채우고 저장, 및 2) 방광을 비움. 채우고 저장하는 단계 동안은, 방광이 늘어나서 증가된 양의 소변을 수용할 수 있다. 평균적인 사람의 방광은은 350 mL 내지 550 mL의 소변을 수용할 수 있다. 일반적으로, 개체의 방광은 약 200 mL의 소변이 방광에 모였을 때 배뇨를 위한 이완이 유발된다. 비우는 단계는 배뇨근이 수축하여, 소변을 요도를 통해 방광 밖으로 밀어내는 것을 필요로 한다. 이때 괄약근이 이완되어 소변을 체외로 흘려 내보낼 수 있어야만 한다. 방광, 내부 괄약근, 및 외부 괄약근은 모두 방광 기능의 이상을 일으키는 침해수용성 감각 신경-기반 질환에 의해 영향을 받을 수 있다. 손상은 방광을 덜 활동성으로 만들어, 방광이 수축할 수 없고 완전히 비울 수 없거나, 또는 지나치게 활동성으로 만들어서, 방광이 너무 빨리 또는 빈번히 수축한다.
비뇨생식기-신경학적 질환의 한 가지 유형은 요실금이다. 요실금은 소변의 통행을 제어할 수 없는 것이다. 이는 소변이 가끔 누출되는 것으로부터, 어떠한 소변도 참는 것이 완전히 불가능한 것까지의 범위일 수 있다. 요실금은 방광 용량의 이상 또는 방광의 저장 능력을 위해 중요한 방광 경부 및/또는 외부 요도 괄약근과 같은 제어 메커니즘의 기능부전에 의해 야기될 수 있다. 많은 유형의 요실금이 있다.
스트레스성 실금이 요실금의 한 유형이며, 여기서는 방광 및 요도를 지지하는 약화된 골반 근육의 결과로서 또는 요도 괄약근의 기능부전으로 인해 배뇨를 제어하는 근육의 강도 (요도 괄약근)가 감소된다. 약화는 이전의 요도 영역의 상해, 신경학적 상해, 일부 약물에 의해, 또는 전립선 또는 골반 영역의 수술 후에 야기될 수 있다. 소정의 활동, 예를 들어, 기침, 재채기, 웃음, 또는 운동 동안과 같이 복부로부터의 압력이 증가한 경우 괄약근이 소변의 흐름을 막을 수 없다. 스트레스성 요실금은 여성에서 가장 흔한 유형의 요실금이다. 연구에서 모든 여성의 약 50%가 요실금이 있으며, 10%만큼은 빈번한 실금이 있는 것으로 나타났다. 75세 이상의 거의 20%의 여성이 매일 요실금을 경험한다. 스트레스성 실금은 흔히 다회의 임신 및 질 출산을 경험한 여성에게서 나타나며, 방광, 요도, 또는 직장 벽이 질 공간(vaginal space) 안으로 내밀어진다(골반 탈출). 급박성 실금(Urge incontinence)이 요실금의 한 가지 유형이며, 이는 강하고, 갑작스런 배뇨 요구에 이어서 즉각적인 방광 수축 및 무의식적인 소변의 누출을 수반한다. 급박성 실금이 있는 개체는 배뇨 요구를 인지한 시점과 배뇨가 실제로 일어나는 시점 사이의 시간이 충분하지 않다. 급박성 실금은 부적절하게 수축하는 방광 근육으로 인한 소변의 누출이다. 흔히 이러한 수축은 방광 안에 있는 소변의 양과 상관없이 일어난다. 급박성 실금은 신경학적 상해(예를 들어, 척수 손상 또는 졸중), 신경학적 기능이상(예를 들어, 파킨슨 병 및 다발성 경화증), 감염, 방광 암, 방광결석, 방광 염증 또는 방광 출구 폐색(bladder outlet obstruction)으로부터 기인할 수 있다. 남자에서, 급박성 실금은 신경학적 질환 또는 양성 전립선 비대증 (BPH) 또는 커진 전립선으로 인한 방광 출구 폐색에 의한 방광 변화로 인한 것일 수 있다. 급박성 실금의 대부분의 경우는 특발성이며, 이는 특별한 원인을 확인할 수 없다는 의미이다. 급박성 실금은 모든 연령에서 누구에게나 일어날 수 있지만, 여성 및 중장년층에게 더 일반적이다. 급박성 실금은 또한 민감성 방광, 경련성 방광 및 불안정 방광으로도 알려져 있다.
일류성 요실금은 항상 채워져 있는 방광으로부터 소량의 소변이 누출되는 경우에 일어난다. 노령 남자에서, 보통은 커진 전립선에 의해서 방광으로부터 소변의 흐름이 차단되는 경우에 일어날 수 있다. 때때로, 일류성 요실금은 전립선 비대증의 초기 증상, 예를 들어, 빈뇨가 나타나는 경우에 약물에 의해 예방될 수 있다. 당뇨병이 있는 일부 사람들에게 또한 일류성 실금이 있다. 혼합성 요실금은 스트레스성 실금과 급박성 실금 둘 모두와 관련된 증상을 한 개체가 나타내는 경우의 질환을 설명한다. 지속성 요실금은 계속적인 누출을 호소한다.
따라서, 실시 형태에서, 요실금을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 요실금과 관련된 증상을 감소시킨다. 이러한 실시 형태의 태양에서는, 스트레스성 실금을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 치료는 스트레스성 실금과 관련된 증상을 감소시킨다. 본 실시 형태의 다른 태양에서는, 급박성 실금을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 치료는 급박성 실금과 관련된 증상을 감소시킨다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서는, 일류성 요실금을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 치료는 일류성 요실금과 관련된 증상을 감소시킨다. 본 실시 형태의 추가적인 태양에서는, 혼합성 요실금을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 치료는 혼합성 요실금과 관련된 증상을 감소시킨다. 본 실시 형태의 추가적인 태양에서는, 지속성 요실금을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 치료는 지속성 요실금과 관련된 증상을 감소시킨다.
다른 유형의 비뇨생식기-신경학적 질환은 과민성 방광이다. 과민성 방광은 급박성 요실금이 있거나 없으면서, 보통은 빈뇨 및 야간뇨가 있으면서, 배뇨 절박이 증가된다. 개체는 배뇨 절박(즉시 배뇨하고자 하는 갑작스런, 강렬한 욕구), 빈뇨 (정상적인 것보다 많은 회수의 배뇨 요구), 유뇨증 (enuresis, 임의의 무의식적인 소변 누출), 다뇨증, 야간뇨, 및/또는 요실금의 증상을 말할 수 있다.
따라서, 과민성 방광은 수축해야만 하는 것보다 많이 수축하여, 사람이 필요한 것보다 더 빈번히 및/또는 급박하게 배뇨 요구를 느끼는 는 방광을 설명하며, 방광으로부터 제어되지 않고, 빈번하게 소변이 방출되는 것을 특징으로 한다. 과민성 방광은, 항상은 아니지만, 보통, 요실금을 야기한다. 과민성 방광이 있는 개체는 화장실에 매우 자주, 예를 들어, 밤낮으로 2시간 마다 갈 수 있으며, 심지어 침대를 적실 수 도 있다. 흔히, 단지 소량의 소변이 방광에 있는 경우에도 배뇨의 강한 급박성을 경험한다. 방광 용량이 감소될 수 있으며 소변이 불완전하게 비워질 수 있다. 과민성 방광은 방광으로 가는 신경 통로가 천골 위에서 방해를 받아 야기될 수 있다. 예를 들어, 경련성(spastic) 방광은 방광의 배뇨근이 합리적인 양의 소변이 축적될 때까지 비우는 수축을 억제할 수 없게 되는 것에 의해 야기될 수 있다. 마찬가지로, 과민성 방광은 흔히 배뇨근 과잉활동, 요역동 검사(urodynamics)동안 관찰되는 방광 근육 수축의 패턴에 의해 야기될 수 있다. 과민성 방광은 또한 요로 감염, 출구 폐색 또는 스트레스성 실금에 의해 야기될 수 있다. 때때로 아무런 원인이 발견되지 않을 수 있으며 이러한 특발성 경우는 불안증(anxiety) 또는 노화에 의한 것일 수 있다. 증상은 밤낮 전반적으로 많은 회수의 배뇨 요구, 즉시 배뇨를 해야만 한다는 느낌, 및/또는 방광으로부터 소변의 갑작스런 누출를 포함한다.
방광과 무관한 질환이 또한 과민성 방광의 증상을 야기할 수 있다. 남성 환자에 있어서, 대부분 흔히 과민성 방광의 원인이 되는 외적 질환은 방광 출구 폐색(BOO)이다. 여성 환자에서 방광과 무관한 질환은 요도 게실(urethral diverticulum), 자궁 후굴(retroverted uterus), 골반 탈출 (방광류(cystocele) 포함), 임신 자궁(gravid uterus), 및 에스트로겐의 손실 또는 감소이다. 남성 및 여성 둘 모두에서 일반적인 방광과 무관한 질환은 골반 종괴(pelvic mass ), 과도한 수분 섭취, 이뇨제 사용 또는 당뇨병과 같은 인자에 의해 야기되는 생리적 야간 다뇨증 (physiologic nocturnal diuresis) 및 다뇨증을 포함한다.
신경근 질환이 또한 과민성 방광을 일으킬 수 있다. 제한 없이, 파킨슨 병, 다발성 경화증, 이분척추, 경부 협착 (cervical stenosis), 척수 손상, 당뇨병성 신경병증, 골반 수술, 또는 추간판 탈출증(invertebral disc herniation), 뇌수종, 졸중, 척수 상해 및 척수 또는 뇌의 손상을 포함하는, 감각 신경에 대한 신경 손상에 기인한 신경성 질환이 또한 과민성 방광을 야기할 수 있다. 방광 노화가 또한 이러한 증상을 일으킬 수 있다. 골반 외상, 골반 방사선(radiation) 또는 방광, 전립선, 또는 요도 수술에 대한 환자 병력이 또한 과민성 방광의 병인을 결정하려고 할 때 고려되어야만 한다.
따라서, 실시 형태에서, 과민성 방광을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 과민성 방광과 관련된 증상을 감소시킨다. 이러한 실시 형태의 태양에서, 과민성 방광을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 실금을 감소시킨다. 이러한 실시 형태의 태양에서, 과민성 방광을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 빈뇨를 감소시킨다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 과민성 방광을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 배뇨 절박(urinary urgency)을 감소시킨다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 과민성 방광을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 유뇨증을 감소시킨다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 과민성 방광을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 다뇨증을 감소시킨다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 과민성 방광을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 야간뇨를 감소시킨다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 과민성 방광을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 요실금을 감소시킨다
다른 유형의 비뇨생식기-신경학적 질환은 배뇨근 기능이상이며, 제한 없이, 배뇨근 과잉활동(overactivity), 배뇨근 불안정, 및 배뇨근-괄약근 조율장애(dyssynergia)를 포함한다. 배뇨근 기증이상의 한 종류는 배뇨근 과잉활동 또는 무의식적인 배뇨근 수축 (앞서 배뇨근 항진(hyperreflexia)이라고 함)이다. 배뇨근 과잉활동은 채워져 있는 기간 동안의 배뇨근의 증가된 무의식적인 수축을 수반하며, 이는 자발적인 것이거나 또는 억제할 수 없는 방광 수축으로 인해 일어날 수 있다. 배뇨근 과잉활동의 근육 수축 패턴은, 제한 없이, 위상성(phasic) 배뇨근 과잉활동 및 말기(terminal) 배뇨근 과잉활동을 포함한다. 배뇨근 과잉활동은 속성이 특발성일 수 있거나, 또는 비-신경성 또는 신경성 상태에 의해 야기될 수 있다. 배뇨근 과잉활동의 증상은, 제한 없이, 억제할 수 없는 방광 수축, 배뇨 절박, 빈뇨, 유뇨증, 다뇨증, 야간뇨, 및/또는 요실금을 포함한다. 다른 종류의 배뇨근 기능이상은 배뇨근 불안정이다. 배뇨근 불안정은 제어되지 않은 무의식적인 배뇨근의 수축을 수반하여 방광 용량과 관계 없이 억제할 수 없는 방광 수축을 야기한다. 배뇨근 불안정의 증상은, 제한 없이, 억제할 수 없는 방광 수축, 배뇨 절박, 빈뇨, 유뇨증, 다뇨증, 야간뇨, 및/또는 요실금을 포함한다. 다른 종류의 배뇨근 기이상은 배뇨근-괄약근 조율장애 (DSD)이다. 배뇨근-괄약근 조율장애는 배뇨근 근육 조직의 수축이 괄약근의 이완과 조화되지 않아서, 배설시 요도가 완전히 이완되지 않는 경우에 일어난다. 배뇨근-괄약근 조율장애의 증상은, 제한 없이, 소변 흐름 중단(urine flow interruption), 배뇨근 압력 증가 및/또는 요폐를 포함한다. DSD는 척수 상해 또는 다발성 경화증과 같은 신경학적 상태의 결과로서 야기될 수 있다.
따라서, 실시 형태에서, 배뇨근 기능이상을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 배뇨근 기능이상과 관련된 증상을 감소시킨다. 이러한 실시 형태의 태양에서, 배뇨근 기능이상을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 억제할 수 없는 방광 수축을 감소시킨다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 배뇨근 기능이상을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 빈뇨를 감소시킨다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 배뇨근 기능이상을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 배뇨 절박을 감소시킨다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 배뇨근 기능이상을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 유뇨증을 감소시킨다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 배뇨근 기능이상을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 다뇨증을 감소시킨다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 배뇨근 기능이상을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 야간뇨를 감소시킨다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 배뇨근 기능이상을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 요실금을 감소시킨다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 배뇨근 기능이상을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 소변 흐름 중단을 감소시킨다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 배뇨근 기능이상을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 배뇨근 압력을 감소시킨다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 배뇨근 기능이상을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 요폐를 감소시킨다.
다른 실시 형태에서, 배뇨근 과잉활동을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 배뇨근 과잉활동과 관련된 증상을 감소시킨다. 이러한 실시 형태의 태양에서, 배뇨근 과잉활동을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 억제할 수 없는 방광 수축을 감소시킨다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 배뇨근 과잉활동을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 빈뇨를 감소시킨다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 배뇨근 과잉활동을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 배뇨 절박을 감소시킨다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 배뇨근 과잉활동을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 유뇨증을 감소시킨다.. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 배뇨근 과잉활동을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 다뇨증을 감소시킨다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 배뇨근 과잉활동을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 야간뇨를 감소시킨다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 배뇨근 과잉활동을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 요실금을 감소시킨다.
또 다른 실시 형태에서, 배뇨근 불안정을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 배뇨근 불안정과 관련된 증상을 감소시킨다. 이러한 실시 형태의 태양에서, 배뇨근 불안정을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 억제할 수 없는 방광 수축을 감소시킨다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 배뇨근 불안정을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 빈뇨를 감소시킨다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 배뇨근 불안정을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 배뇨 절박을 감소시킨다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 배뇨근 불안정을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 유뇨증을 감소시킨다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 배뇨근 불안정을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 다뇨증을 감소시킨다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 배뇨근 불안정을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 야간뇨를 감소시킨다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 배뇨근 불안정을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 요실금을 감소시킨다.
또 다른 실시 형태에서, 배뇨근-괄약근 조율장애를 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 배뇨근-괄약근 조율장애와 관련된 증상을 감소시킨다. 이러한 실시 형태의 태양에서, 배뇨근-괄약근 조율장애를 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 소변 흐름 중단을 감소시킨다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 배뇨근-괄약근 조율장애를 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 배뇨근 압력을 감소시킨다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 배뇨근-괄약근 조율장애를 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 요폐를 감소시킨다.
다른 유형의 비뇨생식기-신경학적 질환은 하부 요로 기능이상 (LUTD)이다. 예를 들어, 문헌 [Paul Abrams et al., The Standardisation of Terminology of Lower Urinary Tract Function : Reposrt from the Standardisation Subcommittee of the International Continence Society, 21 Neurourol Urodyn. 167-178 (2002)]을 참고하며, 이는 본 명세서에 전체적으로 참고로 포함된다. 하부 요로 기능이상(Lower urinary tract dysfunction)은 3가지 일반적인 유형의 증상: 저장, 방출, 및 방뇨후 증상을 확실하게 보여준다. 저장 증상은 방광의 저장 상태 동안 경험되며, 제한 없이, 배뇨 절박, 빈뇨, 유뇨증, 다뇨증, 야간뇨, 방광 감각(sensation) 증가, 방광 감각 감소, 방광 감각 부재, 비-특이적 방광 감각, 및/또는 요실금을 포함한다. 방출 증상(Voiding symptom)은 방출 상태동안 경험된다. 증상은, 제한 없이, 소변 흐름 감소, 소변의 갈라짐(splitting) 또는 분무(spraying), 단속적인 소변 흐름, 배뇨 주저(urinary hesitancy), 소변 방출을 위한 무리한 노력(strained effort to void urine), 및/또는 소변의 마지막의 찔금거림(terminal dribble of urine)을 포함한다. 방뇨후 증상은 방뇨 직후에 경험되며, 제한 없이, 잔뇨감(sensation of incomplete emptying) 및/또는 방뇨후 찔끔거림(post-micturition dribble)을 포함한다.
따라서, 실시 형태에서, 실시 형태에서, 하부 요로 기능이상을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 하부 요로 기능이상과 관련된 증상을 감소시킨다. 이러한 실시 형태의 태양에서, 하부 요로 기능이상을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 저장 증상을 감소시킨다. 본 실시 형태의 태양에서, 감소되는 저장 증상은 배뇨 절박, 빈뇨, 유뇨증, 다뇨증, 야간뇨, 방광 감각 증가, 방광 감각 감소, 방광 감각 부재, 비-특이적 방광 감각, 또는 요실금이다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 하부 요로 기능이상을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 방출 증상을 감소시킨다. 본 실시 형태의 태양에서, 감소되는 방출 증상은 소변 흐름 감소, 소변의 갈라짐 또는 분무, 단속적인 소변 흐름, 배뇨 주저, 소변 방출을 위한 무리한 노력, 및/또는 소변의 마지막의 찔금거림이다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 하부 요로 기능이상을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 방뇨후 증상을 감소시킨다. 본 실시 형태의 태양에서, 방뇨후 증상은 잔뇨감 또는 방뇨후 찔끔거림이다.
다른 유형의 비뇨생식기-신경학적 질환은 요폐이다. 요폐는 소변이 방광으로부터 통과해 나오지 못하는 것으로, 금성 또는 만성 질환일 수 있다. 정상적으로, 배뇨 반사는 방광이 약 300-500 mL 찼을 때 유발된다. 이때 방광 벽이 수축하여 소변을 요도를 통해 밀어 내어 방광이 비워지게 된다. 방광, 내부 괄약근, 외부 괄약근이 모두 방광의 기능의 이상을 일으켜 요폐를 야기하는 질환의 영향을 받을 수 있다. 요폐는 방광 근육 수축 성능의 손실, 또는 방광 근육과 요도 괄약근 사이의 적절한 조화의 손실로 인한 것일 수 있다. 배뇨 괄약근을 절절히 이완시킬 없는 것이 방광을 비우는 것을 어렵게 하여, 요폐를 야기할 수 있다. 흔히, 단지 소량의 소변이 방광에 있어도 배설하고자 하는 강렬한 충동을 경험한다. 게다가, 방광 용량이 감소할 수 있으며 소변이 불완전하게 비워질 수 있다. 요폐는 또한 괄약근 강직으로 인한 괄약근 이완의 어려움에 의해서 야기될 수 있다. 대안적으로, 방광 경부가 비대할 수 있다. 요폐의 다른 원인은 방광으로 가는 신경 통로가 천골 위에서 방해를 받아 야기될 수 있다. 이는 감각 및 근육 운동의 손실을 가져오며 흔히 졸중, 파킨슨 병, 이분척추, 당뇨병, 골반 수술 또는 추간판 탈출증, 대부분의 형태의 척수 상해에서 나타난다. 때때로 아무런 원인이 발견되지 않으며, 이러한 특발성 경우는 불안증 또는 노화로 인한 것일 수 있다. 요폐는 또한 전립선 비대증 또는 요로 결석으로 인해 요의 흐름이 차단되어 발생한다. 다른 유형의 요폐 질환은 결석이며, 이는 개체의 요로를 막아서 소변 흐름을 중단시키거나 및/또는 감염을 야기한다. 만성 또는 급성 요폐가 과도하게 차있는 방광으로부터 소변이 누출되는 것으로 인한 실금을 야기할 수 있다.
따라서, 실시 형태에서, 요폐를 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 요폐와 관련된 증상을 감소시킨다. 이러한 실시 형태의 태양에서, 요폐를 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 배뇨 절박을 감소시킨다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 요폐를 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 빈뇨를 감소시킨다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 요폐를 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 방광 용량을 증가시킨다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 요폐를 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 요실금을 감소시킨다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 요폐를 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 정상적인 소변 흐름을 회복시킨다.
다른 실시 형태에서, 급성 요폐를 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 급성 요폐와 관련된 증상을 감소시킨다. 또 다른 실시 형태에서, 만성 요폐를 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 만성 요폐와 관련된 증상을 감소시킨다.
다른 유형의 비뇨생식기-신경학적 질환은 배뇨 주저(urinary hesitancy)이다. 배뇨 주저는 소변의 줄기를 시작하거나 유지하기가 어려운 것이다. 이러한 문제는 모든 연령에서 나타나며 양성 모두에서 일어나지만, 대부분 전립선이 비대해진 남성에서 일반적이다. 배뇨 주저는 보통 서서히 일어난다. 때때로 요폐(완전한 배뇨 불능)가 방광의 팽창 및 불쾌감을 일으킬 때까지 눈치채지 못한다. 대부분의 모든 노령 남성은 배뇨를 시작할 때 어느 정도의 어려움을 겪으며, 찔끔거리거나, 소변 줄기의 힘이 감소된다. 배뇨 주저는 양성 전립선 비대증 (커진 전립선), 요로 감염에 의해 야기될 수 있으며, 특히 만성 및 재발성인 경우, 전립선염(전립선의 염증 또는 감염), 약물(일부 감기 치료제, 일부 코막힘제거제, 트라이사이클릭 항우울제, 및 실금에 사용될 수 있는 항콜린성 약물), 젊은 사람들에서의 수줍은 또는 부끄러운 방광 증후군(shy or bashful bladder syndrome) (다른 사람이 같이 있을 때 배뇨하지 못함), 및 신경학적 질환에 의해 야기될 수 있다.
따라서, 실시 형태에서, 배뇨 주저를 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 배뇨 주저와 관련된 증상을 감소시킨다. 이러한 실시 형태의 태양에서, 배뇨 주저를 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 배뇨 절박을 감소시킨다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 배뇨 주저를 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 빈뇨를 감소시킨다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 배뇨 주저를 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 방광 용량을 증가시킨다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 배뇨 주저를 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 요실금을 감소시킨다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 배뇨 주저를 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 정상적인 소변 흐름을 회복시킨다.
다른 유형의 비뇨생식기-신경학적 질환은 다뇨증이다. 다뇨증은 매일 비정상적으로 과도한 부피의 소변을 배출하는 경우이다. 성인에서 과도한 부피의 배뇨는 매일 적어도 2.5리터의 소변이다. 다뇨증은 상당히 흔한 증상으로, 흔히 밤에 화장실에 가기 위해 일어나야만 하는 경우에 알게 된다. 따라서, 실시 형태에서, 다뇨증을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 다뇨증과 관련된 증상을 감소시킨다.
다른 유형의 비뇨생식기-신경학적 질환은 야간뇨이다. 야간뇨는 밤의 과도한 배뇨이며, 예를 들어, 밤에 배뇨를 위해 수회 일어난다. 정상적으로, 밤에는 소변의 양이 감소하며 더욱 농축된다. 이는, 대부분의 사람이 6시 내지 8시에는 배뇨할 필요없이 잠을 잘 수 있음을 의미한다. 그러나, 야간뇨가 있는 사람은 밤에 배뇨를 위해 1회 이상 일어난다. 그 때문에, 밤에 과도한 배뇨는 흔히 수면 주기를 방해한다. 원인은 양성 전립선 비대증, 이뇨제를 비롯한 소정 약물, 강심배당체, 메클로사이클린, 리튬, 메톡시프루란, 페니토인, 프로폭시펜, 및 과도한 비타민 D, 만성 또는 재발성 요로 감염, 만성 신부전, 울혈성 심부전, 방광염, 당뇨병, 잠자기 전 너무 많은 수분의 섭취, 특히, 커피, 카페인 음료, 또는 술의 섭취, 및 폐쇄성 수면 무호흡증 및 다른 수면 질환을 포함한다. 따라서, 실시 형태에서, 야간뇨를 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 야간뇨와 관련된 증상을 감소시킨다.
다른 유형의 비뇨생식기-신경학적 질환은 만성 요로 감염 (재발성 감염)이다. 만성 요로 감염 (UTI)은 방광 또는 하부 요로(요두)의 세균성 감염으로 장기간 지속된다. 대부분의 요로 감염은 방광 및 요도를 포함하는 하부 요로에서 일어난다. 이 질환은 정상적으로는 깨끗한 하부 요로가 세균에 의해 감염되어 감염된 염증이 나타날 때 일어난다. 요로 감염은 매우 흔하다. 대부분의 경우, 요로 감염의 증상은 처치를 시작한 지 24-48 시간 후에 사라지기 시작한다. 그러나, 이 질환이 6개월 내에 2회 이상 발병하고, 2주 이상 지속되는 경우, 또는 보통의 치료에 반응하지 않는 경우, 만성으로 간주된다. 중장년층은 양성 전립선 비대증, 전립선염, 및 요도 협착과 같은 질환으로 인해 방광이 완전히 비워지지 않기 때문에 이러란 감염에 대한 위험성이 증가된다. 다른 자극적인 증상은 배뇨시의 통증 (배뇨통)을 포함할 수 있으며, 이는 방광에 너무 오래 수용된 소변에 의해 야기되는 요로 감염(UTI)의 결과일 수 있다. 열이 나는 UTI는 잠재적인 심각한 신장 감염(신우신염)의 징후이며, 영구적인 신장 손상을 야기할 수 있기 때문에 더욱 염려스러운 상황이다. 다른 유형의 요로 감염은 방광요관역류(vesicoureteral reflux) (VUR)이다. 방광요관역류는 방광의 높은 압력을 해제하기 위해 일어나는 방광으로부터 신장으로의 소변의 비정상적인 후퇴이다. VUR은 감염된 방광 소변이 신장으로 직접 이동하는 것에 의한 심각한 신장 감염의 상당한 위험성이 있기 때문에 UTI가 특히 문제가 된다.
따라서, 실시 형태에서, 요로 감염을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 요로감염과 관련된 증상을 감소시킨다. 이러한 실시 형태의 태양에서, 배뇨통을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 배뇨통과 관련된 증상을 감소시킨다. 이러한 실시 형태의 태양에서, 방광요관역류를 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 방광요관역류와 관련된 증상을 감소시킨다.
다른 유형의 비뇨생식기-신경학적 질환은 전립선 질환과 관련된 질환이다. 전립선은 남성 생식계의 부분적으로 선 (glandular) 및 부분적으로 섬유근인 조직으로, 사정시 정자를 운반하는 체액을 생성한다. 전립선은 소변이 체외로 배설되는 관인 요도를 둘러싼다. 전립선 질환의 한 가지 유형은 양성 전립선 비대증 (BPH)이다. 나이가 들면, 전립선이 커지는(비대증) 경향이 있으며 이러한 커진 전립선을 흔히 양성 전립선 비대증 (BPH) 또는 양성 전립선 생장증이라고 말한다. 전립선 비대는 커진 전립선이 요를 누를 수 있기 때문에 요도 폐색 및 방출 기능이상을 일으킬 수 있다. BPH는 암이 아니며, 전립선 암에 대한 위험성을 증가시키지 않는다. 전립선 질환의 한 유형은 전립선염이다. 전립선염은 전립선의 염증이다. 전립선염은 급성 및 만성 세균성 전립선염 및 세균 감염으로 인한 것이 아닌 염증(비세균성 전립선염)을 포함한다. 전립선 질환의 한 유형은 전립선통(prostatodynia)이다. 전립선통은 세균성 감염이 아닌 전립선 염증의 한 유형으로 그 영역의 비정상적인 신경 또는 금육에 의해 야기될 수 있다. 전립선통은 전형적으로 만성, 통증성 질환이다. 증상 (한기, 열, 하복부 및 생식기 통증 및 몸살, 배뇨시 화끈거림 또는 통증, 및 배뇨에 대한 빈번하고 절박한 요구를 포함함)은 특징적으로 전조없이 사라졌다가 돌아온다.
따라서, 실시 형태에서, 전립선 질환과 관련된 비뇨생식기-신경학적 질환을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 전립선 질환과 관련된 비뇨생식기-신경학적 질환과 관련된 증상을 감소시킨다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 양성 전립선 비대증과 관련된 비뇨생식기-신경학적 질환을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 양성 전립선 비대증과 관련된 비뇨생식기-신경학적 질환과 관련된 증상을 감소시킨다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 전립선염과 관련된 비뇨생식기-신경학적 질환을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 전립선염과 관련된 비뇨생식기-신경학적 질환과 관련된 증상을 감소시킨다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 전립선통과 관련된 비뇨생식기-신경학적 질환을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 전립선통과 관련된 비뇨생식기-신경학적 질환과 관련된 증상을 감소시킨다
다른 실시 형태에서, 전립선 질환을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 전립선 질환과 관련된 증상을 감소시킨다. 이러한 실시 형태의 태양에서, 양성 전립선 비대증을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 양성 전립선 비대증과 관련된 증상을 감소시킨다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 전립선염을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 전립선염과 관련된 증상을 감소시킨다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 전립선통을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 전립선통과 관련된 증상을 감소시킨다.
다른 유형의 비뇨생식기-신경학적 질환은 자궁 질환과 관련된 질환이다. 자궁은 비어 있는, 근육의 배-모양의 여성 생식 기관으로, 수정란(fertilized zygote)이 착상하여 태아로 발달시킨다. 자궁은 2층의 조직으로 된 체부, 기저부, 협부, 및 여성 포유류의 골반강에서 방광과 직장 사이에 위치한 경부를 포함한다. 자궁 질환의 한 유형은 자궁내막증이다. 자궁내막증은 자궁의 안쪽을 이루는 조직(내막 또는 내측 라이닝이라고 함)이 자궁 밖의 다른 부위(일반적으로, 난소, 나팔관, 자궁 바깥표면, 장의 바깥표면, 골반의 근처 구조)에서 성장하여 발견되는 질환이다. 이러한 질환은 흔히 매월 생리기간과 관련될 수 있는 하복부 및 골반의 심각한 통증을 야기한다. 자궁내막증의 증상은 생리기간 전후의 통증, 배란기의 통증, 성행위 동안 및 후의 통증, 다량의 또는 부정기적 출혈, 피로, 생리기간 중 장운동과 관련된 통증, 배뇨와 관련된 통증을 포함한다. 다른 유형의 자궁 질환은 월경통(dysmenorrheal)이다. 월경통은 생리기간 중의 또는 직전의 통증 또는 불쾌감(월경성 경련)이다. 2가지 유형의 월경통, 일차 월경통 및 이차 월경통이 있다. 일차 월경통은 근본적인 병이 없는 극심한 무기력하게 하는 경련이다. 증상은 요통, 다리 통증, 메스꺼움, 구토, 설사, 두통 및 현기증을 포함할 수 있다. 이러한 종류의 월경통은 보통 초경 후 2년 이내의 젊은 여성에게 나타나며 매월 1일 또는 2일 지속된다. 이차 월경통은 다른 의학적 문제(들), 예를 들어, 자궁내막증(자궁 내막의 이상), 자궁선근증(adenomyosis)(자궁의 근육층으로의 내막의 비악성 성장), 골반 염증 질환, 자궁근종(uterine fibroid), 경부의 좁아짐(cervical narrowing), 자궁의 비정상적인 위치(uterine malposition), 골반 종양 또는 IUD (자궁내 장치)으로 인한 경련이다. 이 질환은 보통 나이든 여성에서 발생한다.
따라서, 실시 형태에서, 자궁 질환과 관련된 비뇨생식기-신경학적 질환을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 자궁 질환과 관련된 비뇨생식기-신경학적 질환과 관련된 증상을 감소시킨다. 이러한 실시 형태의 태양에서, 자궁 내막증을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 자궁 내막증과 관련된 증상을 감소시킨다. 이러한 실시 형태의 태양에서, 월경통을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 월경통과 관련된 증상을 감소시킨다.
다른 유형의 비뇨생식기-신경학적 질환은 신경학적 기능이상과 관련된 비뇨생식기-신경학적 질환이다. 따라서, 실시 형태에서, 신경학적 기능이상과 관련된 비뇨생식기-신경학적 질환을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 신경학적 기능이상과 관련된 비뇨생식기-신경학적 질환과 관련된 증상을 감소시킨다. 이러한 실시 형태의 태양에서, 파킨슨 병과 관련된 비뇨생식기-신경학적 질환을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 파킨슨 병과 관련된 비뇨생식기-신경학적 질환과 관련된 증상을 감소시킨다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 다발성 경화증과 관련된 비뇨생식기-신경학적 질환을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 다발성 경화증과 관련된 비뇨생식기-신경학적 질환과 관련된 증상을 감소시킨다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 이분척추와 관련된 비뇨생식기-신경학적 질환을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 이분척추와 관련된 비뇨생식기-신경학적 질환과 관련된 증상을 감소시킨다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 횡단성 척추염(transverse myelitis) 과 관련된 비뇨생식기-신경학적 질환을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 횡단성 척추염과 관련된 비뇨생식기-신경학적 질환과 관련된 증상을 감소시킨다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 졸중과 관련된 비뇨생식기-신경학적 질환을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 졸중과 관련된 비뇨생식기-신경학적 질환과 관련된 증상을 감소시킨다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 척수 상해와 관련된 비뇨생식기-신경학적 질환을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 척수 상해와 관련된 비뇨생식기-신경학적 질환과 관련된 증상을 감소시킨다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 경련 반사(spasm reflex)와 관련된 비뇨생식기-신경학적 질환을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 경련 반사와 관련된 비뇨생식기-신경학적 질환과 관련된 증상을 감소시킨다. 본 실시 형태의 추가적인 태양에서, 척수 또는 뇌의 신경학적 손상과 관련된 비뇨생식기-신경학적 질환을 겪는 포유류를 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량을 포함하는 조성물로 치료하며, 이러한 투여는 척수 또는 뇌의 신경학적 손상과 관련된 비뇨생식기-신경학적 질환과 관련된 증상을 감소시킨다.
본 발명의 태양은, 일부분, 포유류에 제공된다. 포유류는 사람을 포함하며, 사람은 환자일 수 있다. 본 발명의 다른 태양은, 일부분, 개체에 재공된다. 개체는 사람을 포함하며, 사람은 환자일 수 있다.
본 발명의 태양은, 일부분, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "투여하다"는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 환자에 제공하여 잠재적으로 임상적, 치료적, 또는 실험적으로 유익한 결과를 얻는 임의의 송달 메커니즘을 의미한다. 변형 클로스트리듐 독소는 세포 흡수 접근법(cellular uptake approach)을 사용하여 환자에 송달될 수 있으며, 변형 클로스트리듐 독소는 세포내 또는 유전자 요법 접근법에 의해 송달되며, 여기서, 변형 클로스트리듐 독소는 발현 벡터로부터 발현된 전구체 RNA로부터 발현 유도된다.
본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물은 세포 흡수 접근법을 사용하여 포유류에 투여될 수 있다. 세포 흡수 접근법을 사용한 변형 클로스트리듐 독소를 포하하는 조성물의 투여는, 제한없이, 임의의 허용가능한 형태의 경구 투여, 예를 들어, 정제, 액제, 캡슐, 분말 등; 임의의 허용가능한 형태의 국소 투여, 예를 들어, 드롭제(drop), 스프레이, 크림, 젤 또는 연고; 임의의 허용가능한 형태의 혈관내 투여, 예를 들어, 정맥내 볼루스 주사(intravenous bolus injection), 정맥내 주입(intravenous infusion), 동맥내 볼루스 주사(intra-arterial bolus injection), 동맥내 주입(intra-arterial infusion) 및 혈관계로의 카테터 설치(catheter instillation into the vasculature); 임의의 허용가능한 형태의 조직 주면 및 조직내 투여(peri- and intra-tissue administration), 예를 들어, 복강내 주사, 근육내 주사, 피하 주사, 피하 주입, 안내 주사, 망막 주사, 또는 망막하 주사(sub-retinal injection) 또는 경막외 주사(epidural injection); 임의의 허용가능한 형태의 소포내 (intravesicular) 투여, 예를 들어, 카테터 설치; 및 배치 장치(placement device)에 의한 것, 예를 들어, 임플란트(implant), 패치, 펠렛, 카테터, 삼투압 펌프, 좌약, 생부식성 송달 시스템, 비-생부식성 송달 시스템 또는 다른 이식된 연장 또는 저속 방출 시스템을 포함하는 다양한 장관 또는 비경구 접근법을 포함한다. 생침식성 중합체 및 사용 방법의 예시적인 목록이, 예를 들어, 문헌 [Handbook of Biodegradable Polymers (Abraham J. Domb et al., eds., Overseas Publishers Association, 1997)]에 기재되어 있다.
변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물은 리포솜 내의 캡슐화, 이온영동(ionophoresis), 또는 하이드로젤, 사이클로덱스트린, 생분해성 나노캡슐 및 생접착성 미소구체와 같은 다른 비히클 내로의 혼입, 또는 단백질성 벡터에 의한 것을 포함하나 이로 한정되지 않는 당업자에게 알려진 다양한 방법에 의해 포유류에 투여될 수 있다. 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 환자에 투여하기 위한 송달 메커니즘은, 예를 들어, 문헌 [Leonid Beigelman et al., Compositions for the Delivery of Negatively Charged Molecules, U.S. Patent 6,395,713 (May 28, 2002); and Achim Aigner, Delivery Systems for the Direct Application of siRNAs to Induce RNA Interference ( RNAi ) in vivo, 2006(716559) J. Biomed. Biotech. 1-15 (2006); Controlled Drug Delivery : Designing Technologies for the Future (Kinam Park & Randy J. Mrsny eds., American Chemical Association, 2000); Vernon G. Wong & Mae W. L. Hu, Methods for Treating Inflammation - mediated Conditions of the Eye, U.S. Patent No. 6,726,918 (Apr. 27, 2004); David A. Weber et al., Methods and Apparatus for Delivery of Ocular Implants, U.S. Patent Publication No. US2004/0054374 (Mar. 18, 2004); Thierry Nivaggioli et al., Biodegradable Ocular Implant, U.S. Patent Publication No. US2004/0137059 (Jul. 15, 2004); Patrick M. Hughes et al., Anti - Angiogenic Sustained Release Intraocular Implants and Related Methods, U.S. Patent Application 11/364,687 (Feb. 27, 2006); 및 Patrick M. Hughes et al., Sustained Release Intraocular Drug Delivery Systems, U.S. Patent Publication 2006/0182783 (Aug. 17, 2006)]에 기재되어 있으며, 이들 각각은 본 명세서에 전체적으로 참고로 포함된다.
본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물은 또한 세포 내에서 변형 클로스트리듐 독소를 발현시켜 비뇨생식기-신경학적 질환에 기여하는 신경-기반 병인을 명백히 함으로써 유전자 요법 접근법(gene therapy approach)을 사용하여 환자에 투여될 수 있다. 변형 클로스트리듐 독소는 발현 벡터에 작동적으로-연결되는 핵산 분자로부터 발현될 수 있다, 예를 들어, 문헌 [P. D. Good et al., Expression of Small , Therapeutic RNAs in Human Cell Nuclei, 4(1) Gene Ther. 45-54 (1997); James D. Thompson, Polymerase III-based expression of therapeutic RNAs, U.S. Patent 6,852,535 (Feb. 8, 2005); Maciej Wiznerowicz et al., Tuning Silence : Conditional Systems for RNA Interference, 3(9) Nat. Methods 682-688m (2006); Ola Snove and John J. Rossi, Expressing Short Hairpin RNAi in vivo, 3(9) Nat. Methods 689-698 (2006); 및 Charles X. Li et al., Delivery of RNA Interference, 5(18) Cell Cycle 2103-2109 (2006)]을 참조한다. 당업자는 적합한 발현 벡터를 사용하여 진핵 세포에서 임의의 변형 클로스트리듐 독소를 발현시킬 수 있음을 알 것이다.
변형 클로스트리듐 독소를 발현시킬 수 있는 발현 벡터는 세포에서 변형 클로스트리듐 독소의 지속적인(persistent) 또는 안정한 발현을 제공하여 비뇨생식기-신경학적 질환에 기여하는 신경-기반 변인을 명확히 할 수 있다. 대안적으로, 변형 클로스트리듐 독소를 발현시킬 수 있는 발현 벡터는 세포에서 변형 클로스트리듐 독소의 일시적 발현(transient expression)을 제공하여 비뇨생식기-신경학적 질환에 기여하는 신경-기반 변인을 명확히 할 수 있다. 이러한 일시적으로 발현하는 벡터는 필요한 대로 반복적으로 투여될 수 있다. 변형 클로스트리듐 독소-발현 벡터는 환자로부터 외식된(ex-planted) 표적 세포에 투여한 후 환자에 재도입함으로써, 또는 원하는 표적 세포로의 도입이 허용되는 임의 다른 수단에 의해서 상기에 논의된 송달 메커니즘 및 투여 경로에 의해서 투여될 수 있다, 예를 들어, 문헌 [Larry A. Couture and Dan T. Stinchcomb, Anti - gene Therapy : The Use of Ribozymes to Inhibit Gene Function, 12(12) Trends Genet. 510-515 (1996)]을 참조한다.
변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 포유류에 투여하는 데 사용되는 실제 송달 메커니즘은, 제한없이, 비뇨생식기-신경학적 질환의 유형, 비뇨생식기 -신경학적 질환의 위치, 비뇨생식기-신경학적 질환의 원인, 비뇨생식기-신경학적 질환의 위중도, 원하는 치유 정도, 원하는 치유 지속 시간, 사용된 구체적인 변형 클로스트리듐 독소, 사용된 변형 클로스트리듐 독소의 배설 속도, 사용된 변형 클로스트리듐 독소의 약력학, 조성물에 포함된 다른 화합물의 성질, 구체적인 투여 경로, 환자의 구체적인 특성, 병력 및 위험 인자를 포함하는 인자들, 예를 들어, 연령, 체중, 일반적인 건강 등, 또는 이들의 임의의 조합을 고려하여 당업자에 의해서 결정될 수 있다.
실시 형태에서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물은 주사에 의해서 처치할 부위에 투여된다. 본 실시 형태의 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 주사는, 예를 들어, 근육내 주사, 피하 주사, 또는 피부 주사(dermal injection)이다. 본 실시 형태의 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 주사는 방광 벽, 요도 괄약근, 또는 방광 경부를 포함한 하부 요로의 주사이다.
변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물은 다양한 경로를 사용하여 포유류에 투여될 수 있다. 본 명세서에 개시된 것과 같은 비뇨생식기-신경학적 질환을 치료하는 방법에 적합한 투여 경로는 국부적 (local) 및 전신적 투여를 둘 모두 포함한다. 국부적 투여는 포유류의 전신과 비교하여 특정 위치로 상당히 더 많이 조성물을 송달하는 반면, 전신적 투여는 본질적으로 환자의 전신에 조성물을 송달한다. 본 명세서에 개시된 것과 같은 비뇨생식기-신경학적 염증 질환을 치료하는 방법에 적합한 투여 경로는 또한 중추적 및 말초적 투여를 둘 모두 포함한다. 중추적 투여는 본질적으로 환자의 중추 신경계에 조성물을 송달하며, 예를 들어, 척추강내(intrathecal) 투여, 경막외(epidural) 투여뿐만 아니라 두개(cranial) 주사 또는 임플란트를 포함한다. 말초 투여는 본질적으로 중추 신경계 밖의 환자의 임의의 영역에 조성물을 송달하며 척수 또는 뇌에 직접 투여하는 것 이외의 임의의 투여 경로를 포함한다. 포유류에 사용되는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 실제 투여 경로는, 제한없이, 비뇨생식기-신경학적 질환의 유형, 비뇨생식기-신경학적 질환의 위치, 비뇨생식기-신경학적 질환의 원인, 비뇨생식기-신경학적 질환의 위중도, 원하는 치유 정도, 원하는 치유 지속 시간, 사용된 구체적인 변형 클로스트리듐 독소, 사용된 변형 클로스트리듐 독소의 배설 속도, 사용된 변형 클로스트리듐 독소의 약력학, 조성물에 포함된 다른 화합물의 성질, 구체적인 투여 경로, 포유류의 구체적인 특성, 병력 및 위험 인자를 포함하는 인자들, 예를 들어, 연령, 체중, 일반적인 건강 등, 또는 이들의 임의의 조합을 고려하여 당업자에 의해 결정될 수 있다.
실시 형태에서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물은 전신적으로 포유류에 투여된다. 다른 실시 형태에서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물은 국부적으로 포유류에 투여된다. 본 실시 형태의 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물은 포유류의 방광에 투여된다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물은 포유류의 전립선에 투여된다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물은 포유류의 자궁에 투여된다.
본 발명의 태양은, 일부분, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 제공한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어"치료적 유효량"은 "치료적 유효 투여량"과 동의어이며, 비뇨생식기-신경학적 질환을 치료하는 데 언급되어 사용되는 경우, 원하는 치료적 효과를 달성하는 데 필요한 변형 클로스트리듐 독소의 최소 투여량을 의미하며, 비뇨생식기-신경학적 질환과 관련된 증상을 감소시키기에 충분한 투여량을 포함한다. 본 실시 형태의 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 치료적 유효량은 비뇨생식기-신경학적 질환과 관련된 증상을, 예를 들어, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 또는 적어도 100% 감소시킨다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 치료적 유효량은 비뇨생식기-신경학적 질환과 관련된 증상을, 예를 들어, 최대 30%, 최대 40%, 최대 50%, 최대 60%, 최대 70%, 최대 80%, 최대 90% 또는 최대 100% 감소시킨다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 치료적 유효량은 비뇨생식기-신경학적 질환과 관련된 증상을, 예를 들어, 약 10% 내지 약 100%, 약 10% 내지 약 90%, 약 10% 내지 약 80%, 약 10% 내지 약 70%, 약 10% 내지 약 60%, 약 10% 내지 약 50%, 약 10% 내지 약 40%, 약 20% 내지 약 100%, 약 20% 내지 약 90%, 약 20% 내지 약 80%, 약 20% 내지 약 20%, 약 20% 내지 약 60%, 약 20% 내지 약 50%, 약 20% 내지 약 40%, 약 30% 내지 약 100%, 약 30% 내지 약 90%, 약 30% 내지 약 80%, 약 30% 내지 약 70%, 약 30% 내지 약 60%, 또는 약 30% 내지 약 50% 감소시킨다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "약"은 언급된 아이템, 숫자, 백분율, 또는 기간의 값을 한정할 때, 언급된 아이템, 백분율, 파라미터, 또는 기간의 값의 ± 10%의 범위를 말한다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소의 치료적 유효량은 뉴런 활성을, 예를 들어, 적어도 1주일, 적어도 1 개월, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 4개월, 적어도 5개월, 적어도 6개월, 적어도 7개월, 적어도 8개월, 적어도 9개월, 적어도 10개월, 적어도 11개월, 또는 적어도 12개월 동안 억제하는 데 충분한 투여량이다.
포유류에 투여될 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 실제 치료적 유효량은, 제한없이, 비뇨생식기-신경학적 질환의 유형, 비뇨생식기-신경학적 질환의 위치, 비뇨생식기-신경학적 질환의 원인, 비뇨생식기-신경학적 질환의 위중도, 원하는 치유 정도, 원하는 치유 지속 시간, 사용된 구체적인 변형 클로스트리듐 독소, 사용된 변형 클로스트리듐 독소의 배설 속도, 사용된 변형 클로스트리듐 독소의 약력학, 조성물에 포함된 다른 화합물의 성질, 구체적인 투여 경로, 환자의 구체적인 특성, 병력 및 위험 인자를 포함하는 인자들, 예를 들어, 연령, 체중, 일반적인 건강 등, 또는 이들의 임의의 조합을 고려하여 당업자에 의해 결정될 수 있다. 또한, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 반복적인 투여가 사용되는 경우, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 실제 유효량은, 제한없이, 투여 빈도, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 반감기, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는 인자에 따라 또한 좌우될 수 있다. 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 유효량은 사람에 투여하기 전에 시험관내 분석 및 동물 모델을 사용하는 생체내 투여 연구로부터 추정될 수 있음을 당업자는 알고 있다. 다양한 투여 경로의 상이한 효능의 관점에서 필요한 유효량은 매우 다양할 것으로 예상된다. 예를 들어, 경구 투여는 정맥내 또는 유리체내 주사에 의한 투여보다 일반적으로 더 높은 투여량 레벨을 필요로 할 것으로 예상된다. 이러한 투여량 레벨의 변동은 당업자에게 잘 알려져 있는 최적화의 표준 실험 경로를 사용하여 조정될 수 있다. 정확한 치료적으로 유효한 투여량 레벨 및 패턴은 바람직하게는 주치의에 의해서 상기에 확인된 인자들을 고려하여 결정된다.
비-제한적인 예로서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 포유류에 투여할 때, 치료적 유효량은 일반적으로 약 1 fg 내지 약 3.0 mg의 범위이다. 본 실시 형태의 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 유효량은, 예를 들어, 약 100 fg 내지 약 3.0 mg, 약 100 pg 내지 약 3.0 mg, 약 100 ng 내지 약 3.0 mg, 또는 약 100 ㎍ 내지 약 3.0 mg일 수 있다. 본 실시 형태의 다른 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 유효량은, 예를 들어, 약 100 fg 내지 약 750 ㎍, 약 100 pg 내지 약 750 ㎍, 약 100 ng 내지 약 750 ㎍, 또는 약 1 ㎍ 내지 약 750 ㎍ 일 수 있다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 치료적 유효량은, 예를 들어, 적어도 1 fg, 적어도 250 fg, 적어도 500 fg, 적어도 750 fg, 적어도 1 pg, 적어도 250 pg, 적어도 500 pg, 적어도 750 pg, 적어도 1 ng, 적어도 250 ng, 적어도 500 ng, 적어도 750 ng, 적어도 1 ㎍, 적어도 250 ㎍, 적어도 500 ㎍, 적어도 750 ㎍, 또는 적어도 1 mg일 수 있다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 치료적 유효량은, 예를 들어, 최대 1 fg, 최대 250 fg, 최대 500 fg, 최대 750 fg, 최대 1 pg, 최대 250 pg, 최대 500 pg, 최대 750 pg, 최대 1 ng, 최대 250 ng, 최대 500 ng, 최대 750 ng, 최대 1 ㎍, 적어도 250 ㎍, 최대 500 ㎍, 최대 750 ㎍, 또는 최대 1 mg일 수 있다.
다른 비-제한적인 예로서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 포유류에 투여할 때, 치료적 유효량은 일반적으로 약 0.00001 mg/kg 내지 약 3.0 mg/kg의 범위이다. 본 실시 형태의 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 유효량은, 예를 들어, 약 0.0001 mg/kg 내지 약 0.001 mg/kg, 약 0.03 mg/kg 내지 약 3.0 mg/kg, 약 0.1 mg/kg 내지 약 3.0 mg/kg, 또는 약 0.3 mg/kg 내지 약 3.0 mg/kg일 수 있다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 치료적 유효량은, 예를 들어, 적어도 0.00001 mg/kg, 적어도 0.0001 mg/kg, 적어도 0.001 mg/kg, 적어도 0.01 mg/kg, 적어도 0.1 mg/kg, 또는 적어도 1 mg/kg일 수 있다. 본 실시 형태의 또 다른 태양에서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 치료적 유효량은, 예를 들어, 최대 0.00001 mg/kg, 최대 0.0001 mg/kg, 최대 0.001 mg/kg, 최대 0.01 mg/kg, 최대 0.1 mg/kg, 또는 최대 1 mg/kg일 수 있다.
투여는 단일 투여 또는 누적 (일련의 투여) 투여일 수 있으며, 당업자에 의해 쉽게 결정될 수 있다. 예를 들어, 비뇨생식기-신경학적 질환의 치료는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 유효 투여량을 1회 투여하는 것을 포함할 수 있다. 비-제한적인 예로서, 예를 들어, 비뇨생식기-신경학적 질환의 증상이 나타난 부위에서 또는 그 근처에서 단일 주사 또는 침적(deposition)으로서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 유효 투여량을 환자에 1회 투여할 수 있다. 대안적으로, 비뇨생식기-신경학적 질환의 치료는 일정 범위의 기간에 걸쳐, 예를 들어, 매일, 수일마다 1회, 매주, 매월 또는 매년 행해지는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 유효량의 다회 투여를 포함할 수 있다. 비-제한적인 예로서, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물은 매년 1회 또는 2회 포유류에 투여될 수 있다. 투여 타이밍은 포유류의 증상의 위중도와 같은 인자에 따라 포유류마다 다를 수 있다. 예를 들어, 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 유효 투여량을 포유류에 무기한으로 또는 환자가 더 이상 치료를 필요로 하지 않을 때까지 1개월에 1회 투여할 수 있다. 당업자는 치료 기간 전반에 걸쳐 포유류의 상태를 모니터링하고, 그에 따라 투여되는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 유효량을 조절할 수 있음을 알 것이다.
본 명세서에 개시된 바와 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물은 또한 처치의 전체 치료 효과를 증가시키기 위하여 다른 치료적 화합물과 조합하여 포유류에 투여될 수 있다. 증상을 처치하기 위하여 다수의 화합물을 사용하는 것이 부작용의 존재는 감소시키면서 이로운 효과는 증가시킬 수 있다.
본 발명의 태양은 또한 다음과 같이 설명될 수 있다:
1. 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 포함하는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 포유류에 투여하는 단계를 포함하며, 조성물의 투여는 비뇨생식기-신경학적 질환과 관련된 증상을 감소시켜 포유류를 치료하는, 포유류에서 비뇨생식기-신경학적 질환을 치료하는 방법.
2. 1의 방법에 있어서, 변형 클로스트리듐 독소는 1) 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 2) 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 3) 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 4) 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 5) 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 클로스트리듐 독소 효소 도메인 및 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 또는 6) 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 오피오이드 펩티드 결합 도메인 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인의 선형 아미노-내지-카르복실 단일 폴리펩티드 오더를 포함하는 방법.
3. 1의 방법에 있어서, 오피오이드 펩티드 결합 도메인은 엔케팔린, BAM22 펩티드, 엔도모르핀, 엔도르핀, 디노르핀, 노시셉틴 또는 헤모르핀인 방법.
4. 3의 방법에 있어서, 엔케팔린은 Leu-엔케팔린, Met-엔케팔린, Met-엔케팔린 MRGL 또는 Met-엔케팔린 MRF인 방법.
5. 3의 방법에 있어서, 엔케팔린은 SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54 또는 SEQ ID NO: 55를 포함하는 방법.
6. 3의 방법에 있어서, BAM22 펩티드는 BAM22 펩티드 (1-12), BAM22 펩티드 (6-22), BAM22 펩티드 (8-22) 또는 BAM22 펩티드 (1-22)인 방법.
7. 3의 방법에 있어서, BAM22 펩티드는 SEQ ID NO: 56의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 57의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 58의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 59의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 60의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22 또는 SEQ ID NO: 61의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22을 포함하는 방법.
8. 3의 방법에 있어서, 엔도모르핀은 엔도모르핀-1 또는 엔도모르핀-2인 방법.
9. 3의 방법에 있어서, 엔도모르핀은 SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63을 포함하는 방법.
10. 3의 방법에 있어서, 엔도르핀은 엔도르핀-α, 네오엔도르핀 -α, 엔도르핀-β, 네오엔도르핀-β 또는 엔도르핀-γ인 방법.
11. 3의 방법에 있어서, 엔도르핀은 SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 또는 SEQ ID NO: 69를 포함하는 방법.
12. 3의 방법에 있어서, 디노르핀은 디노르핀 A, 디노르핀 B (류모르핀) 또는 리모르핀인 방법.
13. 3의 방법에 있어서, 디노르핀은 SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 83, SEQ ID NO: 84, SEQ ID NO: 85, SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 87, SEQ ID NO: 88, SEQ ID NO: 89, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO: 91, SEQ ID NO: 92, SEQ ID NO: 93, SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO: 96, SEQ ID NO: 97, SEQ ID NO: 98, SEQ ID NO: 99 또는 SEQ ID NO: 100을 포함하는 방법.
14. 3의 방법에 있어서, 노시셉틴은 노시셉틴 RK, 노시셉틴, 뉴로펩티드 1, 뉴로펩티드 2 또는 뉴로 펩티드 3인 방법.
15. 3의 방법에 있어서, 노시셉틴은 SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 102, SEQ ID NO: 103, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109 또는 SEQ ID NO: 110을 포함하는 방법.
16. 1의 방법에 있어서, 클로스트리듐 독소 전위 도메인은 BoNT/A 전위 도메인, BoNT/B 전위 도메인, BoNT/C1 전위 도메인, BoNT/D 전위 도메인, BoNT/E 전위 도메인, BoNT/F 전위 도메인, BoNT/G 전위 도메인, TeNT 전위 도메인, BaNT 전위 도메인, 또는 BuNT 전위 도메인인 방법.
17. 1의 방법에 있어서, 클로스트리듐 독소 효소 도메인은 BoNT/A 효소 도메인, BoNT/B 효소 도메인, BoNT/C1 효소 도메인, BoNT/D 효소 도메인, BoNT/E 효소 도메인, BoNT/F 효소 도메인, BoNT/G 효소 도메인, TeNT 효소 도메인, BaNT 효소 도메인, 또는 BuNT 효소 도메인인 방법.
18. 1의 방법에 있어서, 비뇨생식기-신경학적 질환은 요실금, 과민성 방광, 배뇨근 기능이상, 하부 요로 기능이상, 요폐, 배뇨 주저, 다뇨증, 야간뇨, 만성 요로 감염, 전립선 질환과 관련된 비뇨생식기 질환, 자궁 질환과 관련된 비뇨생식기 질환, 또는 신경학적 기능이상과 관련된 비뇨생식기 질환인 방법.
19. 18의 방법에 있어서, 요실금은 급박성 요실금, 스트레스성 요실금, 일류성 요실금, 혼합성 요실금, 또는 지속성 요실금인 방법.
20. 18의 방법에 있어서, 배뇨근 기능이상은 배뇨근 과잉활동, 배뇨근 불안정, 또는 배뇨근-괄약근 조율장애인 방법.
21. 18의 방법에 있어서, 전립선 질환과 관련된 비뇨생식기 질환은 양성 전립선 비대증과 관련된 비뇨생식기 질환, 전립선염과 관련된 비뇨생식기 질환, 또는 전립선통과 관련된 비뇨생식기 질환인 방법.
22. 18의 방법에 있어서, 신경학적 기능이상과 관련된 비뇨생식기 질환은 파킨슨 병과 관련된 비뇨생식기 질환, 다발성 경화증과 관련된 비뇨생식기 질환, 이분척추와 관련된 비뇨생식기 질환, 횡단성 척추염과 관련된 비뇨생식기 질환, 졸중과 관련된 비뇨생식기 질환, 척수 상해와 관련된 비뇨생식기 질환, 경련 반사와 관련된 비뇨생식기 질환, 척수의 신경학적 손상과 관련된 비뇨생식기 질환, 또는 뇌의 신경학적 손상과 관련된 비뇨생식기 질환인 방법.
23. 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 클로스트리듐 독소 효소 도메인 및 외인성 프로테아제 절단 부위를 포함하는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 포유류에 투여하는 단계를 포함하며, 조성물의 투여는 비뇨생식기-신경학적 질환과 관련된 증상을 감소시켜 포유류를 치료하는, 포유류에서 비뇨생식기-신경학적 질환을 치료하는 방법.
24. 23의 방법에 있어서, 변형 클로스트리듐 독소는 1) 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 2) 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 3) 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 4) 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 5) 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 클로스트리듐 독소 효소 도메인 및 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 또는 6) 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 오피오이드 펩티드 결합 도메인 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인의 선형 아미노-내지-카르복실 단일 폴리펩티드 오더를 포함하는 방법.
25. 23의 방법에 있어서, 오피오이드 펩티드 결합 도메인은 엔케팔린, BAM22 펩티드, 엔도모르핀, 엔도르핀, 디노르핀, 노시셉틴 또는 헤모르핀인 방법.
26. 25 의 방법에 있어서, 엔케팔린은 Leu-엔케팔린, Met-엔케팔린, Met-엔케팔린 MRGL 또는Met-엔케팔린 MRF인 방법.
27. 25의 방법에 있어서, 엔케팔린은 SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54 또는 SEQ ID NO: 55을 포함하는 방법.
28. 25의 방법에 있어서, BAM22 펩티드는 BAM22 펩티드 (1-12), BAM22 펩티드 (6-22), BAM22 펩티드 (8-22) 또는 BAM22 펩티드 (1-22)인 방법.
29. 25의 방법에 있어서, BAM22 펩티드는 SEQ ID NO: 56의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 57의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 58의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 59의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 60의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22 또는 SEQ ID NO: 61의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22를 포함하는 방법.
30. 25의 방법에 있어서, 엔도모르핀은 엔도모르핀-1 또는 엔도모르핀-2인 방법
31. 25의 방법에 있어서, 엔도모르핀은 SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63을 포함하는 방법.
32. 25의 방법에 있어서, 엔도르핀은 엔도르핀-α, 네오엔도르핀-α, 엔도르핀-β, 네오엔도르핀-β 또는 엔도르핀-γ인 방법
33. 25의 방법에 있어서, 엔도르핀은 SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 또는 SEQ ID NO: 69을 포함하는 방법.
34. 25의 방법에 있어서, 디노르핀은 디노르핀 A, 디노르핀 B (류모르핀) 또는 리모르핀인 방법.
35. 25의 방법에 있어서, 디노르핀은 SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 83, SEQ ID NO: 84, SEQ ID NO: 85, SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 87, SEQ ID NO: 88, SEQ ID NO: 89, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO: 91, SEQ ID NO: 92, SEQ ID NO: 93, SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO: 96, SEQ ID NO: 97, SEQ ID NO: 98, SEQ ID NO: 99 또는 SEQ ID NO: 100을 포함하는 방법.
36. 25의 방법에 있어서, 노시셉틴은 노시셉틴 RK, 노시셉틴, 뉴로펩티드 1, 뉴로펩티드 2 또는 뉴로펩티드 3인 방법.
37. 25의 방법에 있어서, 노시셉틴은 SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 102, SEQ ID NO: 103, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109 또는 SEQ ID NO: 110을 포함하는 방법.
38. 23의 방법에 있어서, 클로스트리듐 독소 전위 도메인은 BoNT/A 전위 도메인, BoNT/B 전위 도메인, BoNT/C1 전위 도메인, BoNT/D 전위 도메인, BoNT/E 전위 도메인, BoNT/F 전위 도메인, BoNT/G 전위 도메인, TeNT 전위 도메인, BaNT 전위 도메인, 또는 BuNT 전위 도메인인 방법.
39. 23의 방법에 있어서, 클로스트리듐 독소 효소 도메인은 BoNT/A 효소 도메인, BoNT/B 효소 도메인, BoNT/C1 효소 도메인, BoNT/D 효소 도메인, BoNT/E 효소 도메인, BoNT/F 효소 도메인, BoNT/G 효소 도메인, TeNT 효소 도메인, BaNT 효소 도메인, 또는 BuNT 효소 도메인인 방법.
40. 23의 방법에 있어서, 외인성 프로테아제 절단 부위는 식물 파파인(papain) 절단 부위, 곤충 파파인 절단 부위, 갑각류 파파인 절단 부위, 엔테로키나아제 절단 부위, 사람 리노바이러스 3C 프로테아제 절단 부위, 사람 엔테로바이러스 3C 프로테아제 절단 부위, 담배 식각 바이러스 프로테아제 절단 부위, 담배 엽맥 반점 바이러스 절단 부위, 서브틸리신 절단 부위, 하이드록실아민 절단 부위, 또는 카스파아제 3 절단 부위인 방법.
41. 23의 방법에 있어서, 비뇨생식기-신경학적 질환은 요실금, 과민성 방광, 배뇨근 기능이상, 하부 요로 기능이상, 요폐, 배뇨 주저, 다뇨증, 야간뇨, 만성 요로 감염, 전립선 질환과 관련된 비뇨생식기 질환, 자궁 질환과 관련된 비뇨생식기 질환, 또는 신경학적 기능이상과 관련된 비뇨생식기 질환인 방법.
42. 41의 방법에 있어서, 요실금은 급박성 요실금, 스트레스성 요실금, 일류성 요실금, 혼합성 요실금, 또는 지속성 요실금인 방법.
43. 41의 방법에 있어서, 배뇨근 기능이상은 배뇨근 과잉활동, 배뇨근 불안정, 또는 배뇨근-괄약근 조율장애인 방법.
44. 41의 방법에 있어서, 전립선 질환과 관련된 비뇨생식기 질환은 양성 전립선 비대증과 관련된 비뇨생식기 질환, 전립선염과 관련된 비뇨생식기 질환, 또는 전립선통과 관련된 비뇨생식기 질환인 방법.
45. 41의 방법에 있어서, 신경학적 기능이상과 관련된 비뇨생식기 질환은 파킨슨 병과 관련된 비뇨생식기 질환, 다발성 경화증과 관련된 비뇨생식기 질환, 이분척추와 관련된 비뇨생식기 질환, 횡단성 척추염과 관련된 비뇨생식기 질환, 졸중과 관련된 비뇨생식기 질환, 척수 상해와 관련된 비뇨생식기 질환, 경련 반사와 관련된 비뇨생식기 질환, 척수의 신경학적 손상과 관련된 비뇨생식기 질환, 또는 뇌의 신경학적 손상과 관련된 비뇨생식기 질환인 방법.
46. 변형 클로스트리듐 독소를 사용하여 비뇨생식기-신경학적 질환의 치료가 필요한 포유류에서 비뇨생식기-신경학적 질환을 치료하기 위한 의약품을 제조하는 방법으로서, 변형 클로스트리듐 독소는 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 포함하며, 포유류에 대한 치료적 유효량의 의약품의 투여는 비뇨생식기-신경학적 질환의 증상을 감소시킴으로써 포유류를 치료하는 방법.
47. 46 의 방법에 있어서, 변형 클로스트리듐 독소는 1) 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 2) 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 3) 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 4) 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 5) 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 클로스트리듐 독소 효소 도메인 및 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 또는 6) 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 오피오이드 펩티드 결합 도메인 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인의 선형 아미노-내지-카르복실 단일 폴리펩티드 오더를 포함하는 방법.
48. 46의 방법에 있어서, 오피오이드 펩티드 결합 도메인은 엔케팔린, BAM22 펩티드, 엔도모르핀, 엔도르핀, 디노르핀, 노시셉틴 또는 헤모르핀인 방법.
49. 48 의 방법에 있어서, 엔케팔린은 Leu-엔케팔린, Met-엔케팔린, Met-엔케팔린 MRGL 또는 Met-엔케팔린 MRF인 방법.
50. 48의 방법에 있어서, 엔케팔린은 SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54 또는 SEQ ID NO: 55을 포함하는 방법.
51. 48 의 방법에 있어서, BAM22 펩티드는 BAM22 펩티드 (1-12), BAM22 펩티드 (6-22), BAM22 펩티드 (8-22) 또는 BAM22 펩티드 (1-22)인 방법.
52. 48 의 방법에 있어서, BAM22 펩티드는 SEQ ID NO: 56의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 57의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 58의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 59의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 60의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22 또는 SEQ ID NO: 61의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22을 포함하는 방법.
53. 48 의 방법에 있어서, 엔도모르핀은 엔도모르핀-1 또는 엔도모르핀-2인 방법.
54. 48 의 방법에 있어서, 엔도모르핀은 SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63을 포함하는 방법.
55. 48 의 방법에 있어서, 엔도르핀은 엔도르핀-α, 네오엔도르핀-α, 엔도르핀-β, 네오엔도르핀-β 또는 엔도르핀-γ인 방법.
56. 48 의 방법에 있어서, 엔도르핀은 SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 또는 SEQ ID NO: 69을 포함하는 방법.
57. 48 의 방법에 있어서, 디노르핀은 디노르핀 A, 디노르핀 B (류모르핀) 또는 리모르핀인 방법.
58. 48 의 방법에 있어서, 디노르핀은 SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 83, SEQ ID NO: 84, SEQ ID NO: 85, SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 87, SEQ ID NO: 88, SEQ ID NO: 89, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO: 91, SEQ ID NO: 92, SEQ ID NO: 93, SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO: 96, SEQ ID NO: 97, SEQ ID NO: 98, SEQ ID NO: 99 또는 SEQ ID NO: 100을 포함하는 방법.
59. 48 의 방법에 있어서, 노시셉틴은 노시셉틴 RK, 노시셉틴, 뉴로펩티드 1, 뉴로펩티드 2 또는 뉴로펩티드 3인 방법.
60. 48 의 방법에 있어서, 노시셉틴은 SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 102, SEQ ID NO: 103, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109 또는 SEQ ID NO: 110을 포함하는 방법.
61. 46의 방법에 있어서, 클로스트리듐 독소 전위 도메인은 BoNT/A 전위 도메인, BoNT/B 전위 도메인, BoNT/C1 전위 도메인, BoNT/D 전위 도메인, BoNT/E 전위 도메인, BoNT/F 전위 도메인, BoNT/G 전위 도메인, TeNT 전위 도메인, BaNT 전위 도메인, 또는 BuNT 전위 도메인인 방법.
62. 46의 방법에 있어서, 클로스트리듐 독소 효소 도메인은 BoNT/A 효소 도메인, BoNT/B 효소 도메인, BoNT/C1 효소 도메인, BoNT/D 효소 도메인, BoNT/E 효소 도메인, BoNT/F 효소 도메인, BoNT/G 효소 도메인, TeNT 효소 도메인, BaNT 효소 도메인, 또는 BuNT 효소 도메인인 방법.
63. 46의 방법에 있어서, 비뇨생식기-신경학적 질환은 요실금, 과민성 방광, 배뇨근 기능이상, 하부 요로 기능이상, 요폐, 배뇨 주저, 다뇨증, 야간뇨, 만성 요로 감염, 전립선 질환과 관련된 비뇨생식기 질환, 자궁 질환과 관련된 비뇨생식기 질환, 또는 신경학적 기능이상과 관련된 비뇨생식기 질환인 방법.
64. 63의 방법에 있어서, 요실금은 급박성 요실금, 스트레스성 요실금, 일류성 요실금, 혼합성 요실금, 또는 지속성 요실금인 방법.
65. 63의 방법에 있어서, 배뇨근 기능이상은 배뇨근 과잉활동, 배뇨근 불안정, 또는 배뇨근-괄약근 조율장애인 방법.
66. 63의 방법에 있어서, 전립선 질환과 관련된 비뇨생식기 질환은 양성 전립선 비대증과 관련된 비뇨생식기 질환, 전립선염과 관련된 비뇨생식기 질환, 또는 전립선통과 관련된 비뇨생식기 질환인 방법.
67. 63의 방법에 있어서, 신경학적 기능이상과 관련된 비뇨생식기 질환은 파킨슨 병과 관련된 비뇨생식기 질환, 다발성 경화증과 관련된 비뇨생식기 질환, 이분척추와 관련된 비뇨생식기 질환, 횡단성 척추염과 관련된 비뇨생식기 질환, 졸중과 관련된 비뇨생식기 질환, 척수 상해와 관련된 비뇨생식기 질환, 경련 반사와 관련된 비뇨생식기 질환, 척수의 신경학적 손상과 관련된 비뇨생식기 질환, 또는 뇌의 신경학적 손상과 관련된 비뇨생식기 질환인 방법.
68. 변형 클로스트리듐 독소를 사용하여 비뇨생식기-신경학적 질환의 치료가 필요한 포유류에서 비뇨생식기-신경학적 질환을 치료하기 위한 의약품을 제조하는 방법으로서, 변형 클로스트리듐 독소는 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 및 외인성 프로테아제 절단 부위 을 포함하며, 포유류에 대한 치료적 유효량의 의약품의 투여는 비뇨생식기-신경학적 질환의 증상을 감소시킴으로써 포유류를 치료하는 방법.
69. 68의 방법에 있어서, 변형 클로스트리듐 독소는 1) 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 2) 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 3) 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 4) 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 5) 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 클로스트리듐 독소 효소 도메인 및 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 또는 6) 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 오피오이드 펩티드 결합 도메인 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인의 선형 아미노-내지-카르복실 단일 폴리펩티드 오더를 포함하는 방법.
70. 69의 방법에 있어서, 오피오이드 펩티드 결합 도메인은 엔케팔린, BAM22 펩티드, 엔도모르핀, 엔도르핀, 디노르핀, 노시셉틴 또는 헤모르핀인 방법.
71. 70의 방법에 있어서, 엔케팔린은 Leu-엔케팔린, Met-엔케팔린, Met-엔케팔린 MRGL 또는 Met-엔케팔린 MRF인 방법.
72. 70의 방법에 있어서, 엔케팔린은 SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54 또는 SEQ ID NO: 55을 포함하는 방법.
73. 70의 방법에 있어서, BAM22 펩티드는 BAM22 펩티드 (1-12), BAM22 펩티드 (6-22), BAM22 펩티드 (8-22) 또는 BAM22 펩티드 (1-22)인 방법.
74. 70의 방법에 있어서, BAM22 펩티드는 SEQ ID NO: 56의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 57의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 58의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 59의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22; SEQ ID NO: 60의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22 또는 SEQ ID NO: 61의 아미노산 1-12, 아미노산 6-22, 아미노산 8-22 또는 아미노산 1-22을 포함하는 방법.
75. 70의 방법에 있어서, 엔도모르핀은 엔도모르핀-1 또는 엔도모르핀-2인 방법.
76. 70의 방법에 있어서, 48 의 방법에 있어서, 엔도모르핀은 SEQ ID NO: 62 또는 SEQ ID NO: 63을 포함하는 방법.
77. 70의 방법에 있어서, 엔도르핀은 엔도르핀-α, 네오엔도르핀-α, 엔도르핀-β, 네오엔도르핀-β 또는 엔도르핀-γ인 방법.
78. 70의 방법에 있어서, 엔도르핀은 SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 또는 SEQ ID NO: 69을 포함하는 방법.
79. 70의 방법에 있어서, 디노르핀은 디노르핀 A, 디노르핀 B (류모르핀) 또는 리모르핀인 방법.
80. 70의 방법에 있어서, 디노르핀은 SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 83, SEQ ID NO: 84, SEQ ID NO: 85, SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 87, SEQ ID NO: 88, SEQ ID NO: 89, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO: 91, SEQ ID NO: 92, SEQ ID NO: 93, SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO: 96, SEQ ID NO: 97, SEQ ID NO: 98, SEQ ID NO: 99 또는 SEQ ID NO: 100을 포함하는 방법.
81. 70의 방법에 있어서, 노시셉틴은 노시셉틴 RK, 노시셉틴, 뉴로펩티드 1, 뉴로펩티드 2 또는 뉴로펩티드 3인 방법.
82. 70의 방법에 있어서, 노시셉틴은 SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 102, SEQ ID NO: 103, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109 또는 SEQ ID NO: 110을 포함하는 방법.
83. 68의 방법에 있어서, 클로스트리듐 독소 전위 도메인은 BoNT/A 전위 도메인, BoNT/B 전위 도메인, BoNT/C1 전위 도메인, BoNT/D 전위 도메인, BoNT/E 전위 도메인, BoNT/F 전위 도메인, BoNT/G 전위 도메인, TeNT 전위 도메인, BaNT 전위 도메인, 또는 BuNT 전위 도메인인 방법.
84. 68의 방법에 있어서, 클로스트리듐 독소 효소 도메인은 BoNT/A 효소 도메인, BoNT/B 효소 도메인, BoNT/C1 효소 도메인, BoNT/D 효소 도메인, BoNT/E 효소 도메인, BoNT/F 효소 도메인, BoNT/G 효소 도메인, TeNT 효소 도메인, BaNT 효소 도메인, 또는 BuNT 효소 도메인인 방법.
85. 68의 방법에 있어서, 비뇨생식기-신경학적 질환은 요실금, 과민성 방광, 배뇨근 기능이상, 하부 요로 기능이상, 요폐, 배뇨 주저, 다뇨증, 야간뇨, 만성 요로 감염, 전립선 질환과 관련된 비뇨생식기 질환, 자궁 질환과 관련된 비뇨생식기 질환, 또는 신경학적 기능이상과 관련된 비뇨생식기 질환인 방법.
86. 85의 방법에 있어서, 요실금은 급박성 요실금, 스트레스성 요실금, 일류성 요실금, 혼합성 요실금, 또는 지속성 요실금인 방법.
87. 85의 방법에 있어서, 배뇨근 기능이상은 배뇨근 과잉활동, 배뇨근 불안정, 또는 배뇨근-괄약근 조율장애인 방법.
88. 85의 방법에 있어서, 전립선 질환과 관련된 비뇨생식기 질환은 양성 전립선 비대증과 관련된 비뇨생식기 질환, 전립선염과 관련된 비뇨생식기 질환, 또는 전립선통과 관련된 비뇨생식기 질환인 방법.
89. 85의 방법에 있어서, 신경학적 기능이상과 관련된 비뇨생식기 질환은 파킨슨 병과 관련된 비뇨생식기 질환, 다발성 경화증과 관련된 비뇨생식기 질환, 이분척추와 관련된 비뇨생식기 질환, 횡단성 척추염과 관련된 비뇨생식기 질환, 졸중과 관련된 비뇨생식기 질환, 척수 상해와 관련된 비뇨생식기 질환, 경련 반사와 관련된 비뇨생식기 질환, 척수의 신경학적 손상과 관련된 비뇨생식기 질환, 또는 뇌의 신경학적 손상과 관련된 비뇨생식기 질환인 방법.
90. 변형 클로스트리듐 독소를 사용하여 비뇨생식기-신경학적 질환의 치료가 필요한 포유류에서 비뇨생식기-신경학적 질환을 치료하는 방법으로서, 치료적 유효량의 변형 클로스트리듐 독소를 이를 필요로 하는 포유류에 투여하는 단계를 포함하며, 변형 클로스트리듐 독소는 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 포함하며, 변형 클로스트리듐 독소의 투여는 비뇨생식기-신경학적 질환의 증상을 감소시킴으로써 포유류를 치료하는 방법.
91. 변형 클로스트리듐 독소를 사용하여 비뇨생식기-신경학적 질환의 치료가 필요한 포유류에서 비뇨생식기-신경학적 질환을 치료하는 방법으로서, 치료적 유효량의 변형 클로스트리듐 독소를 이를 필요로 하는 포유류에 투여하는 단계를 포함하며, 변형 클로스트리듐 독소는 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 클로스트리듐 독소 효소 도메인 및 외인성 프로테아제 절단 부위를 포함하며, 변형 클로스트리듐 독소의 투여는 비뇨생식기-신경학적 질환의 증상을 감소시킴으로써 포유류를 치료하는 방법.
하기 실시예는 특정 실시 형태를 설명하기 위해 제공되며, 본 발명의 범주를 어떤 식으로든 제한하지 않는다.
실시예 1
요실금의치료
69세 여성이 소변 통행의 제어가 불가능함을 호소하였다. 의사는 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 요실금으로 진단하였다. 이 여성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로(urethroscopically) 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부(trigone), 방광 천정부(bladder dome) 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막(urogenital diaphragm), 또는 하부 골반 근육에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 여성은 소변의 통행을 제어할 수 있는 능력이 개선된 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 여성은 소변 통행의 제어에 대한 증가된 능력이 계속되는 것으로 나타났다. 요실금 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다.
72세 여성이 소변 통행의 제어가 불가능하며, 특히 기침, 재채기, 웃음 또는 운동 시에 누출이 일어남을 호소하였다. 의사는 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 스트레스성 요실금으로 진단하였다. 이 여성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 또는 하부 골반 근육에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 여성은 특히 기침, 재채기, 웃음 또는 운동 시에 소변의 통행을 제어할 수 있는 능력이 개선된 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 여성은 소변 통행의 제어에 대한 증가된 능력이 계속되는 것으로 나타났다. 스트레스성 요실금 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다.
62세 남성이 소변 통행의 제어가 불가능하며, 갑작스런 배뇨 요구를 경험한다고 호소하였다. 의사는 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 급박성 요실금으로 진단하였다. 이 남성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 하부 골반 근육, 전립선, 요도구선(bulbourethral gland), 벌브(bulb), 크루스(crus) 또는 음경에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 남성은 갑작스런 배뇨 요구가 감소되었기 때문에 소변의 통행을 제어할 수 있는 능력이 개선된 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 남성은 소변 통행의 제어에 대한 증가된 능력이 계속된 것으로다 나타났다. 급박성 요실금 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다.
58세 남성이 누출이 일어나기 때문에 소변 통행의 제어가 불가능함을 호소하였다. 의사는 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 일류성 요실금으로 진단하였다. 이 남성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 하부 골반 근육, 요도구선, 벌브, 크루스 또는 음경에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 남성은 감소된 누출로 인해 소변의 통행을 제어할 수 있는 능력이 개선된 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 남성은 소변 통행의 제어에 대한 증가된 능력이 계속되는 것으로 나타났다. 일류성 요실금 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다.
실시예 2
과민성 방광의 치료
58세 남성이 증가된 배뇨 절박을 호소하였다. 의사는 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 과민성 방광으로 진단하였다. 이 남성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 하부 골반 근육, 요도구선, 벌브, 크루스 또는 음경에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 남성은 배뇨 절박이 감소되는 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 남성은 감소된 배뇨 절박이 계속되는 것으로 나타났다. 과민성 방광 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다.
66세 여성이 밤 동안 배뇨를 위해 수차례 일어나야만 하는 것을 호소하였다. 의사는 이것이 야간뇨라고 판단하고 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 과민성 방광으로 진단하였다. 이 여성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 또는 하부 골반 근육에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 여성은 밤 동안 배뇨를 위해 수차례 일어날 필요가 감소되는 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 여성은 밤 동안 배뇨를 위해 수차례 일어날 필요가 감소된 것이 계속되는 것으로 나타났다. 과민성 방광 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다.
47세 여성이 낮에 수차례 배뇨해야만 하는 것을 호소하였다. 의사는 이것이 다뇨증이라고 판단하고 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 과민성 방광으로 진단하였다. 이 여성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 또는 하부 골반 근육에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 여성은 낮 동안 배뇨의 필요가 감소되는 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 여성은 낮 동안 배뇨의 필요가 감소된 것이 계속되는 것으로 나타났다. 과민성 방광 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다.
67세 남성이 갑작스런 배뇨 요구 때문에 소변 통행의 제어가 불가능함을 호소하였다. 의사는 이것이 급박성 요실금이라고 판단하고 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 과민성 방광으로 진단하였다. 이 남성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 하부 골반 근육, 요도구선, 벌브, 크루스 또는 음경에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 남성은 배뇨에 대한 절박감이 감소되는 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 남성은 감소된 배뇨 절박이 계속되는 것으로 나타났다. 과민성 방광 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다.
실시예 3
배뇨근 기능 장애의 치료
44세 여성이 제거불가능한 방광 수축을 호소하였다. 의사는 이것이 억제할 수 없는 방광 수축이라고 판단하고 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 배뇨근 기능이상으로 진단하였다. 이 여성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 또는 하부 골반 근육에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 여성은 억제할 수 없는 방광 수축이 감소된 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 여성은 제어불가능한 방광 수축이 감소된 것으로 나타났다. 배뇨근 기능이상 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다.
대안적인 시나리오에서, 의사는 이것이 억제할 수 없는 방광 수축이라고 판단하고 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 배뇨근 과잉활동으로 진단하였다. 이 여성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 또는 하부 골반 근육에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 여성은 제어불가능한 방광 수축이 감소된 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 여성은 제어불가능한 방광 수축의 감소가 계속되는 것으로 나타났다. 배뇨근 과잉활동 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다.
다른 대안적인 시나리오에서, 의사는 이것이 억제할 수 없는 방광 수축이라고 판단하고 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 배뇨근 불안정으로 진단하였다. 이 여성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 또는 하부 골반 근육에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 여성은 제어불가능한 방광 수축의 감소가 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 여성은 제어불가능한 방광 수축의 감소가 계속되는 것으로 나타났다. 배뇨근 불안정 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다.
50세 여성이 배뇨에 대한 절박감을 호소하였다. 의사는 이것이 배뇨 절박이라고 판단하고 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 배뇨근 기능이상으로 진단하였다. 이 여성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 또는 하부 골반 근육에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 여성은 배뇨에 대한 절박감이 감소된 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 여성은 배뇨에 대한 절박감의 감소가 계속되는 것으로 나타났다. 배뇨근 기능이상 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다.
대안적인 시나리오에서, 의사는 이것이 배뇨 절박이라고 판단하고 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 배뇨근 과잉활동으로 진단하였다. 이 여성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 또는 하부 골반 근육에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 여성은 배뇨에 대한 절박감이 감소된 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 여성은 배뇨에 대한 절박감의 감소가 계속되는 것으로 나타났다. 배뇨근 과잉활동 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다.
다른 대안적인 시나리오에서, 의사는 이것이 배뇨 절박이라고 판단하고 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 배뇨근 불안정으로 진단하였다. 이 여성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 또는 하부 골반 근육에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 여성은 배뇨에 대한 절박감이 감소된 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 여성은 배뇨에 대한 절박감의 감소가 계속되는 것으로 나타났다. 배뇨근 불안정 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다.
59세 남성이 매우 자주 배뇨해야만 하는 것을 호소하였다. 의사는 이것이 빈뇨라고 판단하고 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 배뇨근 기능이상으로 진단하였다. 이 남성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 하부 골반 근육, 요도구선, 벌브, 크루스 또는 음경에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 남성은 매우 자주 배뇨할 필요가 감소된 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 남성은 매우 자주 배뇨할 필요가 감소된 것이 계속되는것으로 나타났다. 배뇨근 기능이상 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다.
대안적인 시나리오에서, 의사는 이것이 빈뇨라고 판단하고 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 배뇨근 과잉활동으로 진단하였다. 이 남성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 또는 하부 골반 근육에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 남성은 매우 자주 배뇨할 필요가 감소된 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 남성은 매우 자주 배뇨할 필요가 감소된 것이 계속되는것으로 나타났다. 배뇨근 과잉활동 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다.
다른 대안적인 시나리오에서, 의사는 이것이 빈뇨라고 판단하고 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 배뇨근 불안정으로 진단하였다. 이 남성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 또는 하부 골반 근육에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 남성은 매우 자주 배뇨할 필요가 감소된 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 남성은 매우 자주 배뇨할 필요가 감소된 것이 계속되는것으로 나타났다. 배뇨근 불안정 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다
74세 남성이 소변의 무의식적인 누출을 호소하였다. 의사는 이것이 유뇨증이라고 판단하고 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 배뇨근 기능이상으로 진단하였다. 이 남성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 하부 골반 근육, 요도구선, 벌브, 크루스 또는 음경에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 남성은 무의식적인 소변 누출이 감소된 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 남성은 무의식적인 소변 누출의 감소가 계속되는 것으로 나타났다. 배뇨근 기능이상 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다.
대안적인 시나리오에서, 의사는 이것이 유뇨증이라고 판단하고 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 배뇨근 과잉활동으로 진단하였다. 이 남성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 또는 하부 골반 근육에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 남성은 무의식적인 소변 누출이 감소된 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 남성은 무의식적인 소변 누출의 감소가 계속되는 것으로 나타났다. 배뇨근 과잉활동 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다.
다른 대안적인 시나리오에서, 의사는 이것이 유뇨증이라고 판단하고 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 배뇨근 불안정으로 진단하였다. 이 남성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 또는 하부 골반 근육에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 남성은 무의식적인 소변 누출이 감소된 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 남성은 무의식적인 소변 누출의 감소가 계속되는 것으로 나타났다. 배뇨근 불안정 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다..
63세 남성이 밤 동안 배뇨를 위해 수차례 일어나야만 하는 것을 호소하였다. 의사는 이것이 야간뇨라고 판단하고 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 배뇨근 기능이상으로 진단하였다. 이 남성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 하부 골반 근육, 요도구선, 벌브, 크루스 또는 음경에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 남성은 밤동안 배뇨를 위해 수차례 일어날 필요가 감소된 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 남성은 밤동안 배뇨를 위해 수차례 일어날 필요가 감소된 것이 계속되는 것으로 나타났다. 배뇨근 기능이상 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다.
대안적인 시나리오에서, 의사는 이것이 야간뇨라고 판단하고 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 배뇨근 과잉활동으로 진단하였다. 이 남성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 또는 하부 골반 근육에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 남성은 밤동안 배뇨를 위해 수차례 일어날 필요가 감소된 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 남성은 밤동안 배뇨를 위해 수차례 일어날 필요가 감소된 것이 계속되는 것으로 나타났다. 배뇨근 과잉활동 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다.
다른 대안적인 시나리오에서, 의사는 이것이 야간뇨라고 판단하고 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 배뇨근 불안정으로 진단하였다. 이 남성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 또는 하부 골반 근육에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 남성은 밤동안 배뇨를 위해 수차례 일어날 필요가 감소된 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 남성은 밤동안 배뇨를 위해 수차례 일어날 필요가 감소된 것이 계속되는 것으로 나타났다. 배뇨근 불안정 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다.
61세 여성이 낮에 수차례 배뇨해야만 하는 것을 호소하였다. 의사는 이것이 다뇨증이라고 판단하고 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 배뇨근 기능이상으로 진단하였다. 이 여성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 또는 하부 골반 근육에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 여성은낮에 수차례 배뇨할 필요가 감소된 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 여성은낮에 수차례 배뇨할 필요가 감소된 것이 계속되는 것으로 나타났다. 배뇨근 기능이상 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다.
대안적인 시나리오에서, 의사는 이것이 다뇨증이라고 판단하고 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 배뇨근 과잉활동으로 진단하였다. 이 여성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 또는 하부 골반 근육에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 여성은낮에 수차례 배뇨할 필요가 감소된 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 여성은낮에 수차례 배뇨할 필요가 감소된 것이 계속되는 것으로 나타났다. 배뇨근 과잉활동 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다.
다른 대안적인 시나리오에서, 의사는 이것이 다뇨증이라고 판단하고 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 배뇨근 불안정으로 진단하였다. 이 여성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 또는 하부 골반 근육에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 여성은낮에 수차례 배뇨할 필요가 감소된 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 여성은낮에 수차례 배뇨할 필요가 감소된 것이 계속되는 것으로 나타났다. 배뇨근 불안정 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다..
65세 여성이 소변 통행의 제어가 불가능함을 호소하였다. 의사는 이것이 요실금이라고 판단하고 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 배뇨근 기능이상으로 진단하였다. 이 여성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 또는 하부 골반 근육에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 여성은 소변의 통행을 제어하는 능력이 개선된 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 여성은 소변의 통행을 제어하는 데 대한 개선된능력의 계속되는 것으로 나타났다. 배뇨근 기능이상 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다.
대안적인 시나리오에서, 의사는 이것이 요실금이라고 판단하고 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 배뇨근 과잉활동으로 진단하였다. 이 여성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 또는 하부 골반 근육에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 여성은 소변의 통행을 제어하는 능력이 개선된 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 여성은 소변의 통행을 제어하는 데 대한 개선된능력의 계속되는 것으로 나타났다. 배뇨근 과잉활동 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다.
다른 대안적인 시나리오에서, 의사는 이것이 요실금이라고 판단하고 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 배뇨근 불안정으로 진단하였다. 이 여성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 또는 하부 골반 근육에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 여성은 소변의 통행을 제어하는 능력이 개선된 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 여성은 소변의 통행을 제어하는 데 대한 개선된능력의 계속되는 것으로 나타났다. 배뇨근 불안정 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다..
55세 여성이 배뇨시 소변 흐름의 중단을 호소하였다. 의사는 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 배뇨근 기능이상으로 진단하였다. 이 여성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 또는 하부 골반 근육에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 여성은 소변 흐름의 중단 감소된 것을 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 여성은 치료로 인한 소변 흐름 중단의 감소가 계속되는 것으로 나타났다. 배뇨근 기능이상 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다.
대안적인 시나리오에서, 의사는 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 배뇨근-괄약근 조율장애로 진단하였다. 이 여성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 또는 하부 골반 근육에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 여성은 소변 흐름 중단의 감소가 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 여성은 치료로 인한 감소된 소변 흐름 중단이 계속되는 것으로 나타났다. 배뇨근-괄약근 조율장애 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다.
53세 남성이 증가된 방광 압력을 호소하였다. 의사는 이것이 배뇨근 압력 증가라고 판단하고 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 배뇨근 기능이상으로 진단하였다. 이 남성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 하부 골반 근육, 요도구선, 벌브, 크루스 또는 음경에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 남성은 방광 압력의 감소가 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 남성은 치료로 인한 방광 압력의 감소가 계속되는 것으로 나타났다. 배뇨근 기능이상 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다.
대안적인 시나리오에서, 의사는 이것이 배뇨근 압력 증가라고 판단하고 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 배뇨근-괄약근 조율장애로 진단하였다. 이 남성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 또는 하부 골반 근육에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 남성은 방광 압력의 감소가 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 남성은 치료로 인한 방광 압력의 감소가 계속되는 것으로 나타났다. 배뇨근-괄약근 조율장애 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다.
75세 남성이 배뇨 불능을 호소하였다. 의사는 이것이 요폐라고 판단하고 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 배뇨근 기능이상으로 진단하였다. 이 남성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 하부 골반 근육, 요도구선, 벌브, 크루스 또는 음경에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 남성은 배뇨 능력을 회복한 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 남성은 배뇨 능력을 갖는 것이 계속되는 것으로 나타났다.. 배뇨근 기능이상 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다.
대안적인 시나리오에서, 의사는 이것이 요폐라고 판단하고 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 배뇨근-괄약근 조율장애로 진단하였다. 이 남성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 또는 하부 골반 근육에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 남성은 배뇨 능력을 회복한 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 남성은 배뇨 능력을 갖는 것이 계속되는 것으로 나타났다. 배뇨근-괄약근 조율장애 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다.
실시예 4
하부 요로 기능 이상의 처치
69세 남성아 갑작스런 배뇨 요구를 호소하였다. 의사는 이것이 소변 저장 문제(urine storage problem)라고 판단하고 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 하부 요로 기능이상으로 진단하였다. 이 남성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 하부 골반 근육, 요도구선, 벌브, 크루스 또는 음경에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 남성은 갑작스런 배뇨 요구가 감소된 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 남성은 배뇨 요구의 감소를 여전히 경험하고 있는 것으로 나타났다. 하부 요로 기능이상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다. 유사한 시나리오에서, 환자는 하부 요로 기능이상의 다른 저장 증상, 예를 들어, 빈뇨, 유뇨증, 다뇨증, 야간뇨, 방광 감각 증가, 방광 감각 감소, 방광 감각 부재, 비-특이적인 방광 감각, 및/또는 요실금을 호소하였다. 이러한 경우에, 하부 요로 기능이상의 진단 후에, 의사는 환자를 상기한 바과 같이 처치할 수 있으며 하부 요로 기능이상 저장 증상이 감소하였다.
70세 남성이 배뇨가 어렵고 배뇨를 위해서 무리하게 힘을 주어야 하는 것을 호소하였다. 의사는 이것이 소변 방출 문제(urine voiding problem)라고 판단하고 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 하부 요로 기능이상으로 진단하였다. 이 남성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 하부 골반 근육, 요도구선, 벌브, 크루스 또는 음경에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 남성은 배변이 더 쉬워졌고 배뇨를 위해 전처럼 무리하게 힘을 주지 않아도 되는 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 남성은 여전히 배뇨가 더 쉬운 것으로 나타났다. 하부 요로 기능이상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다. 유사한 시나리오에서, 환자는 하부 요로 기능이상의 다른 방출 증상, 예를 들어, 소변 흐름 감소, 소변의 갈라짐 또는 분무, 단속적인 소변 흐름, 배뇨 주저, 및/또는 소변의 마지막의 찔금거림 을 호소하였다. 각각의 경우에, 하부 요로 기능이상의 진단 후에, 의사는 환자를 상기한 바과 같이 처치할 수 있으며 하부 요로 기능이상 방출 증상이 감소하였다.
77세 남성이 배뇨를 끈낸 후에 소변을 찔끔거린다고 호소하였다. 의사는 이것이 방뇨후 문제(post-micturition problem)라고 판단하고 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 하부 요로 기능이상으로 진단하였다. 이 남성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 하부 골반 근육, 요도구선, 벌브, 크루스 또는 음경에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 남성은 배변을 끝낸 후의 소변의 찔끔거림이 감소한 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 남성은 배변을 끝낸 후 찔끔거림이 감소된 것이 여전히 지속되는 것으로 나타났다. 하부 요로 기능이상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다. 유사한 시나리오에서, 환자는 하부요로 기능이상의 다른 방뇨후 증상, 예를 들어, 잔뇨감을 호소하였다. 각각의 경우에, 하부 요로 기능이상의 진단 후에, 의사는 환자를 상기한 바과 같이 처치할 수 있으며 하부 요로 기능이상 방뇨후 증상이 감소하였다.
실시예 5
요폐의 치료
79세 여성이 배변을 할 수 없음을 호소하였다. 의사는 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 요폐로 진단하였다. 이 여성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 또는 하부 골반 근육에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 여성은 배뇨 능력을 회복한 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 여성은 여전히 지속하여 배뇨 능력을 제어하는 것으로 나타났다. 요폐 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다.
실시예 6
배뇨 주저의 치료
78세 남성이 배뇨를 시작하거나 및/또는 배뇨 능력을 유지하는 데 어려움이 있다고 호소하였다. 의사는 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 배뇨 주저로 진단하였다. 이 남성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 하부 골반 근육, 요도구선, 벌브, 크루스 또는 음경에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 남성은 배뇨를 시작하거나 및/또는 배뇨 능력을 유지하는 데 어려움이 감소된 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 남성은 배뇨를 시작하거나 및/또는 배뇨 능력을 유지하는 데 있어서의 어려움이 감소된 것이 여전히 지속되는 것으로 나타났다. 배뇨 주저 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다.
실시예 7
다뇨증의 치료
68세 남성은 낮 동안 매우 자주 배뇨해야만 한다고 호소하였다. 의사는 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 다뇨증으로 진단하였다. 이 남성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 하부 골반 근육, 요도구선, 벌브, 크루스 또는 음경에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 남성은 치료 전만큼 낮동안 여러 번 배뇨하지 않아도 되는 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 남성은 여전히 치료 전만큼 낮동안 여러 번 배뇨하지 않아도 되는 것으로 나타났다. 다뇨증 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다.
실시예 8
야간뇨의 치료
57세 여성이 배뇨하기 위해서 밤동안 여러 차례 일어나야만 하는 것을 호소하였다. 의사는 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 야간뇨로 진단하였다. 이 여성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 또는 하부 골반 근육에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 여성은 처치 전처럼 배뇨를 위해 밤동안 여러 차례 일어나지 않아도 되는 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 여성은 여전히 치료 전만큼 여러 차례 일어나지 않아도 되는 것으로 나타났다. 야간뇨 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다.
실시예 9
만간 요로 감염의 치료
76세 여성이 매우 잦은 요로 감염을 호소하였다. 의사는 만성 요로 감염이 비세균성인 것으로 판단하고 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 비뇨생식기 질환으로 진단하였다. 이 여성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 또는 하부 골반 근육에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 여성은 요로 감염이 없는 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 여성은 처치 이후 계속 요로 감염이 없는 것으로 나타났다. 요로 감염 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다.
75세 여성이 매우 잦은 요로 감염을 호소하였다. 의사는 만성 요로 감염이 방광요관역류로 인한 것으로 판단하고 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 비뇨생식기 질환으로 진단하였다. 이 여성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 또는 하부 골반 근육에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 의사는 이 환자에서 방광으로부터 신장으로의 소변의 비정상적인 후퇴가 감소하였다고 판단하였다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 여성은 처치 이후 계속 요로 감염이 없는 것으로 나타났다.
실시예 10
전립선 질환과 관련된 비뇨생식기 질환의 처치
78세 남성이 배뇨를 시작하거나 및/또는 배뇨 능력을 유지하는 데 어려움이 있다고 호소하였다. 의사는 이 남성이 양성 전립선 비대증이 있으며, 비대증이 정상적인 소변의 흐름을 차단하는 것으로 판단하였다. 의사는 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 양성 전립선 비대증과 관련된 배뇨 주저로 진단하였다. 이 남성에게 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 비정상적인 감각 뉴런 활성 부위에 따라 전립선에 및/또는 전립선을 주변 영역에 주사하여 처치하였다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1주 내지 2부 후에, 이 남성은 배뇨를 시작하거나 및/또는 배뇨 능력을 유지하는 데 대한 어려움이 감소된 것으로 나타났다. 의사는 처치후 전립선의 크기가 감소된 것으로 판단하였다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 남성은 여전히 배뇨를 시작하거나 및/또는 배뇨 능력을 유지하는 데 대한 어려움이 지속해서 감소되는 것으로 나타났다. 양성 전립선 비대증과 관련된 배뇨 주저 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다.
실시예 11
신경학적 기능이상과 관련된 비뇨새식기 질환의 치료
파킨슨 병으로 진단된 81세 여성이 갑작스런 배변 요구에 대하여 호소하였다. 의사는 이러한 배변 절박이 파킨슨 병으로 인한 것으로 판단하고 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 신경학적 기능이상과 관련된 비뇨생식기 질환으로 진단하였다. 이 여성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 또는 하부 골반 근육에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 여성은 갑작스런 배뇨 요구가 감소된 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 여성은 갑작스런 배뇨 요구의 감소가 계속되는 것으로 나타났다. 신경학적 기능이상과 관련된 비뇨생식기 질환 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다.
다발성 경화증으로 진단된 39세 여성이 매우 잦은 배변 요구를 호소하였다. 의사는 이러한 빈뇨가 다발성 경화증으로 인한 것으로 판단하고 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 신경학적 기능이상과 관련된 비뇨생식기 질환으로 진단하였다. 이 여성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 또는 하부 골반 근육에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 여성은 매우 잦은 배뇨 요구가 감소된 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 여성은 매우 잦은 배뇨 요구의 감소가 여전히 지속되는 것으로 나타났다. 신경학적 기능이상과 관련된 비뇨생식기 질환 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다.
이분척추로 진단된 12세 남성이 소변의 통행을 제어하지 못하는 것을 호소하였다. 의사는 이러한 요실금이 이분척추로 인한 것으로 판단하고 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 신경학적 기능이상과 관련된 비뇨생식기 질환으로 진단하였다. 이 남성을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 하부 골반 근육, 요도구선, 벌브, 크루스 또는 음경에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 남성은 소변의 통행을 제어하는 능력의 증가된 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 남성은 여전히 소변의 통행을 제어하는 능력의 증가가 지속되는 것으로 나타났다. 신경학적 기능이상과 관련된 비뇨생식기 질환 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다.
졸중을 겪는 84세 남성이 배뇨할 수 없음을 호소하였다. 환자는 이러한 요폐가 졸중으로 인한 것으로 판단하고 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 신경학적 기능이상과 관련된 비뇨생식기 질환으로 진단하였다. 이 남성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 하부 골반 근육, 요도구선, 벌브, 크루스 또는 음경에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 남성은 배뇨할 수 있는 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 남성은 배뇨 능력이 계속되는 것으로 나타났다. 신경학적 기능이상과 관련된 비뇨생식기 질환 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다.
자동차 사고로 인한 척수 상해를 겪는 23세 남성이 소변의 통행의 제어가 불가능함을 호소하였다. 의사는 이러한 요실금이 척수 손상으로 인한 것으로 판단하고 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 신경학적 기능이상과 관련된 비뇨생식기 질환으로 진단하였다. 이 남성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 또는 하부 골반 근육에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 남성은 소변의 통행을 제어하는 능력이 증가된 것으로 나타났다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 남성은 여전히 소변의 통행을 제어하는 데 있어서 증가된 능력이 지속되는 것으로 나타났다. 신경학적 기능이상과 관련된 비뇨생식기 질환 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다.
뇌에 암성 손상(cancerous lesion)이 있는 63세 남성이 매우 잦은 배뇨 요구를 호소하였다. 의사는 이러한 빈뇨가 그러한 손상으로 인한 것으로 판단하고 환자를 비정상적인 감각 뉴런 활성과 관련된 신경학적 구성요소를 갖는 신경학적 기능이상과 관련된 비뇨생식기 질환으로 진단하였다. 이 남성을, 본 명세서에 개시된 것과 같은 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 요도경으로 주사하여 처치하였다. 비정상적인 감각 뉴런 활성의 위치에 따라, 독소를, 예를 들어, 배뇨근, 외부 및 내부 요도 괄약근을 포함하는 방광 경부, 삼각부, 방광 천정부 또는 방광 벽의 다른 영역, 및/또는 방광을 둘러싸는 다른 영역, 예를 들어, 요도, 요관, 비뇨생식 격막, 하부 골반 근육, 요도구선, 벌브, 크루스 또는 음경에 투여할 수 있다. 환자의 상태를 모니터링하고 처치로부터 약 1일 내지 3일 후에, 이 남성은 매우 잦은 배변 요구의 감소를 나타내었다. 1개월 및 3개월의 체크-업 시에, 이 남성은 여전히 매우 잦은 배뇨 요구의 감소가 지속되는 것으로 나타났다. 신경학적 기능이상과 관련된 비뇨생식기 질환 증상의 이러한 감소는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물을 사용한 처치가 성공적이었음을 나타낸다.
본 발명의 상기 설명은 실례 및 설명의 목적으로 예시적이다. 본 발명의 진의 및 범주를 벗어남이 없이 변경 및 수정이 가능하다는 것이 당업자에게 명백할 것이다. 본 명세서에 인용된 모든 문헌은 본 명세서에 참고로 포함된다. 하기 청구의 범위는 모든 이러한 변경 및 수정을 포용하는 것으로 해석되는 것을 의도한다.
SEQUENCE LISTING <110> Francis, Joseph Aoki, Kei Roger Mitchell Brin <120> Methods of Treating Urogenital-Neurological Disorders Using Modified Clostridial Toxins <130> 18323 (BOT) <150> US 60/982,021 <151> 2007-10-23 <150> US 61/076,228 <151> 2008-06-27 <160> 125 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 1296 <212> PRT <213> Clostridium botulinum Serotype A <220> <221> DOMAIN <222> (1)...(448) <223> Light chain comprising the enzymatic domain. <221> DOMAIN <222> (449)...(860) <223> Amino-terminal half of heavy chain comprising the translocation domain. <221> DOMAIN <222> (861)...(1296) <223> Carboxyl-terminal half of heavy chain comprising the binding domain. <400> 1 Met Pro Phe Val Asn Lys Gln Phe Asn Tyr Lys Asp Pro Val Asn Gly 1 5 10 15 Val Asp Ile Ala Tyr Ile Lys Ile Pro Asn Ala Gly Gln Met Gln Pro 20 25 30 Val Lys Ala Phe Lys Ile His Asn Lys Ile Trp Val Ile Pro Glu Arg 35 40 45 Asp Thr Phe Thr Asn Pro Glu Glu Gly Asp Leu Asn Pro Pro Pro Glu 50 55 60 Ala Lys Gln Val Pro 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botulinum Serotype B <220> <221> DOMAIN <222> (1)...(441) <223> Light chain comprising the enzymatic domain. <221> DOMAIN <222> (442)...(847) <223> Amino-terminal half of heavy chain comprising the translocation domain. <221> DOMAIN <222> (848)...(1291) <223> Carboxyl-terminal half of heavy chain comprising the binding domain. <400> 2 Met Pro Val Thr Ile Asn Asn Phe Asn Tyr Asn Asp Pro Ile Asp Asn 1 5 10 15 Asn Asn Ile Ile Met Met Glu Pro Pro Phe Ala Arg Gly Thr Gly Arg 20 25 30 Tyr Tyr Lys Ala Phe Lys Ile Thr Asp Arg Ile Trp Ile Ile Pro Glu 35 40 45 Arg Tyr Thr Phe Gly Tyr Lys Pro Glu Asp Phe Asn Lys Ser Ser Gly 50 55 60 Ile Phe Asn Arg Asp Val Cys Glu Tyr Tyr Asp Pro Asp Tyr Leu Asn 65 70 75 80 Thr Asn Asp Lys Lys Asn Ile Phe Leu Gln Thr Met Ile Lys Leu Phe 85 90 95 Asn Arg Ile Lys Ser Lys Pro Leu Gly Glu Lys Leu Leu Glu Met Ile 100 105 110 Ile Asn Gly Ile Pro Tyr Leu Gly Asp Arg Arg Val Pro Leu Glu Glu 115 120 125 Phe Asn Thr Asn Ile Ala Ser Val Thr Val Asn Lys Leu Ile Ser Asn 130 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Lys Leu Phe Lys Arg 85 90 95 Ile Asn Glu Arg Asp Ile Gly Lys Lys Leu Ile Asn Tyr Leu Val Val 100 105 110 Gly Ser Pro Phe Met Gly Asp Ser Ser Thr Pro Glu Asp Thr Phe Asp 115 120 125 Phe Thr Arg His Thr Thr Asn Ile Ala Val Glu Lys Phe Glu Asn Gly 130 135 140 Ser Trp Lys Val Thr Asn Ile Ile Thr Pro Ser Val Leu Ile Phe Gly 145 150 155 160 Pro Leu Pro Asn Ile Leu Asp Tyr Thr Ala Ser Leu Thr Leu Gln Gly 165 170 175 Gln Gln Ser Asn Pro Ser Phe Glu Gly Phe Gly Thr Leu Ser Ile Leu 180 185 190 Lys Val Ala Pro Glu Phe Leu Leu Thr Phe Ser Asp Val Thr Ser Asn 195 200 205 Gln Ser Ser Ala Val Leu Gly Lys Ser Ile Phe Cys Met Asp Pro Val 210 215 220 Ile Ala Leu Met His Glu Leu Thr His Ser Leu His Gln Leu Tyr Gly 225 230 235 240 Ile Asn Ile Pro Ser Asp Lys Arg Ile Arg Pro Gln Val Ser Glu Gly 245 250 255 Phe Phe Ser Gln Asp Gly Pro Asn Val Gln Phe Glu Glu Leu Tyr Thr 260 265 270 Phe Gly Gly Leu Asp Val Glu Ile Ile Pro Gln Ile Glu Arg Ser Gln 275 280 285 Leu Arg Glu Lys Ala Leu Gly His Tyr Lys Asp Ile Ala 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translocation domain. <221> DOMAIN <222> (835)...(1252) <223> Carboxyl-terminal half of heavy chain comprising the binding domain. <400> 5 Met Pro Lys Ile Asn Ser Phe Asn Tyr Asn Asp Pro Val Asn Asp Arg 1 5 10 15 Thr Ile Leu Tyr Ile Lys Pro Gly Gly Cys Gln Glu Phe Tyr Lys Ser 20 25 30 Phe Asn Ile Met Lys Asn Ile Trp Ile Ile Pro Glu Arg Asn Val Ile 35 40 45 Gly Thr Thr Pro Gln Asp Phe His Pro Pro Thr Ser Leu Lys Asn Gly 50 55 60 Asp Ser Ser Tyr Tyr Asp Pro Asn Tyr Leu Gln Ser Asp Glu Glu Lys 65 70 75 80 Asp Arg Phe Leu Lys Ile Val Thr Lys Ile Phe Asn Arg Ile Asn Asn 85 90 95 Asn Leu Ser Gly Gly Ile Leu Leu Glu Glu Leu Ser Lys Ala Asn Pro 100 105 110 Tyr Leu Gly Asn Asp Asn Thr Pro Asp Asn Gln Phe His Ile Gly Asp 115 120 125 Ala Ser Ala Val Glu Ile Lys Phe Ser Asn Gly Ser Gln Asp Ile Leu 130 135 140 Leu Pro Asn Val Ile Ile Met Gly Ala Glu Pro Asp Leu Phe Glu Thr 145 150 155 160 Asn Ser Ser Asn Ile Ser Leu Arg Asn Asn Tyr Met Pro Ser Asn His 165 170 175 Gly Phe Gly Ser Ile Ala Ile Val Thr 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Asn Leu Gly Asn Ile His 1010 1015 1020 Val Ser Asp Asn Ile Leu Phe Lys Ile Val Asn Cys Ser Tyr Thr Arg 1025 1030 1035 1040 Tyr Ile Gly Ile Arg Tyr Phe Asn Ile Phe Asp Lys Glu Leu Asp Glu 1045 1050 1055 Thr Glu Ile Gln Thr Leu Tyr Ser Asn Glu Pro Asn Thr Asn Ile Leu 1060 1065 1070 Lys Asp Phe Trp Gly Asn Tyr Leu Leu Tyr Asp Lys Glu Tyr Tyr Leu 1075 1080 1085 Leu Asn Val Leu Lys Pro Asn Asn Phe Ile Asp Arg Arg Lys Asp Ser 1090 1095 1100 Thr Leu Ser Ile Asn Asn Ile Arg Ser Thr Ile Leu Leu Ala Asn Arg 1105 1110 1115 1120 Leu Tyr Ser Gly Ile Lys Val Lys Ile Gln Arg Val Asn Asn Ser Ser 1125 1130 1135 Thr Asn Asp Asn Leu Val Arg Lys Asn Asp Gln Val Tyr Ile Asn Phe 1140 1145 1150 Val Ala Ser Lys Thr His Leu Phe Pro Leu Tyr Ala Asp Thr Ala Thr 1155 1160 1165 Thr Asn Lys Glu Lys Thr Ile Lys Ile Ser Ser Ser Gly Asn Arg Phe 1170 1175 1180 Asn Gln Val Val Val Met Asn Ser Val Gly Asn Asn Cys Thr Met Asn 1185 1190 1195 1200 Phe Lys Asn Asn Asn Gly Asn Asn Ile Gly Leu Leu Gly Phe Lys Ala 1205 1210 1215 Asp Thr Val Val Ala Ser Thr Trp Tyr Tyr Thr His Met Arg Asp His 1220 1225 1230 Thr Asn Ser Asn Gly Cys Phe Trp Asn Phe Ile Ser Glu Glu His Gly 1235 1240 1245 Trp Gln Glu Lys 1250 <210> 6 <211> 1274 <212> PRT <213> Clostridium botulinum Serotype F <220> <221> DOMAIN <222> (1)...(436) <223> Light chain comprising the enzymatic domain. <221> DOMAIN <222> (437)...(852) <223> Amino-terminal half of heavy chain comprising the translocation domain. <221> DOMAIN <222> (853)...(1274) <223> Carboxyl-terminal half of heavy chain comprising the binding domain. <400> 6 Met Pro Val Ala Ile Asn Ser Phe Asn Tyr Asn Asp Pro Val Asn Asp 1 5 10 15 Asp Thr Ile Leu Tyr Met Gln Ile Pro Tyr Glu Glu Lys Ser Lys Lys 20 25 30 Tyr Tyr Lys Ala Phe Glu Ile Met Arg Asn Val Trp Ile Ile Pro Glu 35 40 45 Arg Asn Thr Ile Gly Thr Asn Pro Ser Asp Phe Asp Pro Pro Ala Ser 50 55 60 Leu Lys Asn Gly Ser Ser Ala Tyr Tyr Asp Pro Asn Tyr Leu Thr Thr 65 70 75 80 Asp Ala Glu Lys Asp Arg Tyr Leu Lys Thr Thr Ile Lys Leu Phe Lys 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Arg Tyr Gln Asn Phe Ser Ile Ser Phe Trp Val Arg Ile Pro Lys His 930 935 940 Tyr Lys Pro Met Asn His Asn Arg Glu Tyr Thr Ile Ile Asn Cys Met 945 950 955 960 Gly Asn Asn Asn Ser Gly Trp Lys Ile Ser Leu Arg Thr Val Arg Asp 965 970 975 Cys Glu Ile Ile Trp Thr Leu Gln Asp Thr Ser Gly Asn Lys Glu Asn 980 985 990 Leu Ile Phe Arg Tyr Glu Glu Leu Asn Arg Ile Ser Asn Tyr Ile Asn 995 1000 1005 Lys Trp Ile Phe Val Thr Ile Thr Asn Asn Arg Leu Gly Asn Ser Arg 1010 1015 1020 Ile Tyr Ile Asn Gly Asn Leu Ile Val Glu Lys Ser Ile Ser Asn Leu 1025 1030 1035 1040 Gly Asp Ile His Val Ser Asp Asn Ile Leu Phe Lys Ile Val Gly Cys 1045 1050 1055 Asp Asp Glu Thr Tyr Val Gly Ile Arg Tyr Phe Lys Val Phe Asn Thr 1060 1065 1070 Glu Leu Asp Lys Thr Glu Ile Glu Thr Leu Tyr Ser Asn Glu Pro Asp 1075 1080 1085 Pro Ser Ile Leu Lys Asn Tyr Trp Gly Asn Tyr Leu Leu Tyr Asn Lys 1090 1095 1100 Lys Tyr Tyr Leu Phe Asn Leu Leu Arg Lys Asp Lys Tyr Ile Thr Leu 1105 1110 1115 1120 Asn Ser Gly Ile Leu Asn Ile Asn Gln Gln Arg Gly Val 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(853)...(1297) <223> Carboxyl-terminal half of heavy chain comprising the binding domain. <400> 7 Met Pro Val Asn Ile Lys Asn Phe Asn Tyr Asn Asp Pro Ile Asn Asn 1 5 10 15 Asp Asp Ile Ile Met Met Glu Pro Phe Asn Asp Pro Gly Pro Gly Thr 20 25 30 Tyr Tyr Lys Ala Phe Arg Ile Ile Asp Arg Ile Trp Ile Val Pro Glu 35 40 45 Arg Phe Thr Tyr Gly Phe Gln Pro Asp Gln Phe Asn Ala Ser Thr Gly 50 55 60 Val Phe Ser Lys Asp Val Tyr Glu Tyr Tyr Asp Pro Thr Tyr Leu Lys 65 70 75 80 Thr Asp Ala Glu Lys Asp Lys Phe Leu Lys Thr Met Ile Lys Leu Phe 85 90 95 Asn Arg Ile Asn Ser Lys Pro Ser Gly Gln Arg Leu Leu Asp Met Ile 100 105 110 Val Asp Ala Ile Pro Tyr Leu Gly Asn Ala Ser Thr Pro Pro Asp Lys 115 120 125 Phe Ala Ala Asn Val Ala Asn Val Ser Ile Asn Lys Lys Ile Ile Gln 130 135 140 Pro Gly Ala Glu Asp Gln Ile Lys Gly Leu Met Thr Asn Leu Ile Ile 145 150 155 160 Phe Gly Pro Gly Pro Val Leu Ser Asp Asn Phe Thr Asp Ser Met Ile 165 170 175 Met Asn Gly His Ser Pro Ile Ser Glu Gly Phe Gly Ala Arg Met Met 180 185 190 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Glu Asn Ile Tyr Thr Gln Ser 1 5 <210> 28 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(7) <223> Tobacco Etch Virus protease cleavage site. <400> 28 Glu Asn Ile Tyr Leu Gln Gly 1 5 <210> 29 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(7) <223> Tobacco Etch Virus protease cleavage site. <400> 29 Glu Asn Ile Tyr Leu Gln Ser 1 5 <210> 30 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(7) <223> Tobacco Etch Virus protease cleavage site. <400> 30 Glu Asn Val Tyr Phe Gln Gly 1 5 <210> 31 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(7) <223> Tobacco Etch Virus protease cleavage site. <400> 31 Glu Asn Val Tyr Ser Gln Ser 1 5 <210> 32 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(7) <223> Tobacco Etch Virus protease cleavage site. <400> 32 Glu Asn Val Tyr Ser Gln Gly 1 5 <210> 33 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (0)...(0) <223> Tobacco Etch Virus protease cleavage site. <400> 33 Glu Asn Val Tyr Ser Gln Ser 1 5 <210> 34 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(7) <223> human rhinovirus 3C protease cleavage site consensus sequence <221> VARIANT <222> (1)...(1) <223> Xaa can be amino acid, with D or E preferred <221> VARIANT <222> (2)...(2) <223> Xaa can be G, A, V, L, I, M, S or T <400> 34 Xaa Xaa Leu Phe Gln Gly Pro 1 5 <210> 35 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(7) <223> Human Rhinovirus 3C protease cleavage site. <400> 35 Glu Ala Leu Phe Gln Gly Pro 1 5 <210> 36 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(7) <223> Human Rhinovirus 3C protease cleavage site. <400> 36 Glu Val Leu Phe Gln Gly Pro 1 5 <210> 37 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(7) <223> Human Rhinovirus 3C protease cleavage site. <400> 37 Glu Leu Leu Phe Gln Gly Pro 1 5 <210> 38 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(7) <223> Human Rhinovirus 3C protease cleavage site. <400> 38 Asp Ala Leu Phe Gln Gly Pro 1 5 <210> 39 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(7) <223> Human Rhinovirus 3C protease cleavage site. <400> 39 Asp Val Leu Phe Gln Gly Pro 1 5 <210> 40 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (0)...(0) <223> Human Rhinovirus 3C protease cleavage site. <400> 40 Asp Leu Leu Phe Gln Gly Pro 1 5 <210> 41 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(6) <223> subtilisin cleavage site consensus sequence <221> VARIANT <222> (1)...(4) <223> Xaa can be any amino acid <400> 41 Xaa Xaa Xaa Xaa His Tyr 1 5 <210> 42 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(6) <223> subtilisin cleavage site consensus sequence <221> VARIANT <222> (1)...(4) <223> Xaa can be any amino acid <400> 42 Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr His 1 5 <210> 43 <211> 2 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(2) <223> subtilisin cleavage site <400> 43 His Tyr 1 <210> 44 <211> 2 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(2) <223> subtilisin cleavage site <400> 44 Tyr His 1 <210> 45 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(6) <223> subtilisin cleavage site <400> 45 Pro Gly Ala Ala His Tyr 1 5 <210> 46 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(6) <223> hydroxylamine cleavage site <400> 46 Asn Gly Asn Gly Asn Gly 1 5 <210> 47 <211> 2 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(2) <223> hydroxylamine cleavage site <400> 47 Asn Gly 1 <210> 48 <211> 98 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(98) <223> SUMO/ULP-1 protease cleavage site. <400> 48 Met Ala Asp Ser Glu Val Asn Gln Glu Ala Lys Pro Glu Val Lys Pro 1 5 10 15 Glu Val Lys Pro Glu Thr His Ile Asn Leu Lys Val Ser Asp Gly Ser 20 25 30 Ser Glu Ile Phe Phe 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sapiens <400> 56 Tyr Gly Gly Phe Met Arg Arg Val Gly Arg Pro Glu Trp Trp Met Asp 1 5 10 15 Tyr Gln Lys Arg Tyr Gly 20 <210> 57 <211> 22 <212> PRT <213> Necturus maculosus <400> 57 Tyr Gly Gly Phe Met Arg Arg Val Gly Arg Pro Glu Trp Trp Leu Asp 1 5 10 15 Tyr Gln Lys Arg Tyr Gly 20 <210> 58 <211> 22 <212> PRT <213> Bombina orientalis <400> 58 Tyr Gly Gly Phe Met Arg Arg Val Gly Arg Pro Glu Trp Trp Gln Asp 1 5 10 15 Tyr Gln Lys Arg Tyr Gly 20 <210> 59 <211> 22 <212> PRT <213> Xenopus laevis <400> 59 Tyr Gly Gly Phe Met Arg Arg Val Gly Arg Pro Glu Trp Trp Glu Asp 1 5 10 15 Tyr Gln Lys Arg Tyr Gly 20 <210> 60 <211> 22 <212> PRT <213> Neoceratodus forsteri <400> 60 Tyr Gly Gly Phe Met Arg Arg Val Gly Arg Pro Glu Trp Lys Leu Asp 1 5 10 15 Asn Gln Lys Arg Tyr Gly 20 <210> 61 <211> 21 <212> PRT <213> Danio rerio <400> 61 Tyr Gly Gly Phe Met Arg Arg Val Gly Arg Pro Asp Trp Trp Gln Glu 1 5 10 15 Ser Lys Arg Tyr Gly 20 <210> 62 <211> 4 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 62 Tyr Pro Trp Phe 1 <210> 63 <211> 4 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 63 Tyr Pro Phe Phe 1 <210> 64 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 64 Tyr Gly Gly Phe Met Thr Ser Glu Lys Ser Gln Thr Pro Leu Val Thr 1 5 10 15 <210> 65 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 65 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Lys Tyr Pro Lys 1 5 10 <210> 66 <211> 31 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 66 Tyr Gly Gly Phe Met Thr Ser Glu Lys Ser Gln Thr Pro Leu Val Thr 1 5 10 15 Leu Phe Lys Asn Ala Ile Ile Lys Asn Ala Tyr Lys Lys Gly Glu 20 25 30 <210> 67 <211> 31 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 67 Tyr Gly Gly Phe Met Ser Ser Glu Lys Ser Gln Thr Pro Leu Val Thr 1 5 10 15 Leu Phe Lys Asn Ala Ile Ile Lys Asn Ala His Lys Lys Gly Gln 20 25 30 <210> 68 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 68 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Lys Tyr Pro 1 5 <210> 69 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 69 Tyr Gly Gly Phe Met Thr Ser Glu Lys Ser Gln Thr Pro Leu Val Thr 1 5 10 15 Leu <210> 70 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 70 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Ile Arg Pro Lys Leu Lys Trp Asp Asn 1 5 10 15 Gln <210> 71 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 71 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Ile Arg Pro Lys Leu Lys 1 5 10 <210> 72 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 72 Gly Gly Phe Leu Arg Arg Ile Arg Pro Lys Leu Lys Trp Asp Asn Gln 1 5 10 15 <210> 73 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 73 Gly Gly Phe Leu Arg Arg Ile Arg Pro Lys Leu Lys 1 5 10 <210> 74 <211> 17 <212> PRT <213> Xenopus laevis <400> 74 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Ile Arg Pro Lys Leu Arg Trp Asp Asn 1 5 10 15 Gln <210> 75 <211> 17 <212> PRT <213> Xenopus laevis <400> 75 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Ile Arg Pro Arg Leu Arg Trp Asp Asn 1 5 10 15 Gln <210> 76 <211> 17 <212> PRT <213> Protopterus annectens <400> 76 Tyr Gly Gly Phe Met Arg Arg Ile Arg Pro Lys Ile Arg Trp Asp Asn 1 5 10 15 Gln <210> 77 <211> 17 <212> PRT <213> Danio rerio <400> 77 Tyr Gly Gly Phe Met Arg Arg Ile Arg Pro Lys Leu Arg Trp Asp Asn 1 5 10 15 Gln <210> 78 <211> 17 <212> PRT <213> Anguilla rostrata <400> 78 Tyr Gly Gly Phe Met Arg Arg Ile Arg Pro Lys Leu Lys Trp Asp Ser 1 5 10 15 Gln <210> 79 <211> 29 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 79 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Gln Phe Lys Val Val Thr Arg Ser Gln 1 5 10 15 Glu Asp Pro Asn Ala Tyr Ser Gly Glu Leu Phe Asp Ala 20 25 <210> 80 <211> 28 <212> PRT <213> Rattus norvegicus <400> 80 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Gln Phe Lys Val Val Thr Arg Ser Gln 1 5 10 15 Glu Asn Pro Asn Thr Tyr Ser Glu Asp Leu Asp Val 20 25 <210> 81 <211> 28 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 81 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Gln Phe Lys Val Val Thr Arg Ser Gln 1 5 10 15 Glu Ser Pro Asn Thr Tyr Ser Glu Asp Leu Asp Val 20 25 <210> 82 <211> 29 <212> PRT <213> Cavia porcellus <400> 82 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Gln Phe Lys Val Val Thr Arg Ser Gln 1 5 10 15 Glu Asp Pro Asn Ala Tyr Ser Glu Glu Phe Phe Asp Val 20 25 <210> 83 <211> 29 <212> PRT <213> Sus scrofa <400> 83 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Gln Phe Lys Val Val Thr Arg Ser Gln 1 5 10 15 Glu Asp Pro Asn Ala Tyr Tyr Glu Glu Leu Phe Asp Val 20 25 <210> 84 <211> 29 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 84 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Gln Phe Lys Val Val Thr Arg Ser Gln 1 5 10 15 Glu Asp Pro Asn Ala Tyr Ser Gly Glu Leu Leu Asp Gly 20 25 <210> 85 <211> 29 <212> PRT <213> Bos taurus <400> 85 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Gln Phe Lys Val Val Thr Arg Ser Gln 1 5 10 15 Glu Asp Pro Ser Ala Tyr Tyr Glu Glu Leu Phe Asp Val 20 25 <210> 86 <211> 29 <212> PRT <213> Bufo marinus <400> 86 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Gln Phe Lys Val Thr Thr Arg Ser Glu 1 5 10 15 Glu Asp Pro Ser Thr Phe Ser Gly Glu Leu Ser Asn Leu 20 25 <210> 87 <211> 29 <212> PRT <213> Bombina orientalis <400> 87 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Gln Phe Lys Val Thr Thr Arg Ser Glu 1 5 10 15 Glu Glu Pro Gly Ser Phe Ser Gly Glu Ile Ser Asn Leu 20 25 <210> 88 <211> 29 <212> PRT <213> Xenopus laevis <400> 88 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Gln Phe Lys Val Asn Ala Arg Ser Glu 1 5 10 15 Glu Asp Pro Thr Met Phe Ser Asp Glu Leu Ser Tyr Leu 20 25 <210> 89 <211> 29 <212> PRT <213> Xenopus laevis <400> 89 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Gln Phe Lys Val Asn Ala Arg Ser Glu 1 5 10 15 Glu Asp Pro Thr Met Phe Ser Gly Glu Leu Ser Tyr Leu 20 25 <210> 90 <211> 29 <212> PRT <213> Polypterus senegalus <400> 90 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg His Phe Lys Ile Ser Val Arg Ser Asp 1 5 10 15 Glu Glu Pro Ser Ser Tyr Ser Asp Glu Val Leu Glu Leu 20 25 <210> 91 <211> 27 <212> PRT <213> Danio rerio <400> 91 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg His Phe Lys Ile Ser Val Arg Ser Asp 1 5 10 15 Glu Glu Pro Ser Ser Tyr Glu Asp Tyr Ala Leu 20 25 <210> 92 <211> 27 <212> PRT <213> Anguilla rostrata <400> 92 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg His Phe Lys Ile Ser Val Arg Ser Asp 1 5 10 15 Glu Glu Pro Gly Ser Tyr Asp Val Ile Gly Leu 20 25 <210> 93 <211> 29 <212> PRT <213> Neoceratodus forsteri <400> 93 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg His Phe Lys Ile Thr Val Arg Ser Asp 1 5 10 15 Glu Asp Pro Ser Pro Tyr Leu Asp Glu Phe Ser Asp Leu 20 25 <210> 94 <211> 27 <212> PRT <213> Oncorhynchus masou <400> 94 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg His Tyr Lys Leu Ser Val Arg Ser Asp 1 5 10 15 Glu Glu Pro Ser Ser Tyr Asp Asp Phe Gly Leu 20 25 <210> 95 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 95 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Gln Phe Lys Val Val Thr 1 5 10 <210> 96 <211> 13 <212> PRT <213> Bufo marinus <400> 96 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Gln Phe Lys Val Thr Thr 1 5 10 <210> 97 <211> 13 <212> PRT <213> Xenopus laevis <400> 97 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg Gln Phe Lys Val Asn Ala 1 5 10 <210> 98 <211> 13 <212> PRT <213> Polypterus senegalus <400> 98 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg His Phe Lys Ile Ser Val 1 5 10 <210> 99 <211> 13 <212> PRT <213> Neoceratodus forsteri <400> 99 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg His Phe Lys Ile Thr Val 1 5 10 <210> 100 <211> 13 <212> PRT <213> Oncorhynchus masou <400> 100 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Arg His Tyr Lys Leu Ser Val 1 5 10 <210> 101 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 101 Phe Gly Gly Phe Thr Gly Ala Arg Lys Ser Ala Arg Lys Arg Lys Asn 1 5 10 15 Gln <210> 102 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 102 Phe Gly Gly Phe Thr Gly Ala Arg Lys Ser Ala Arg Lys Leu Ala Asn 1 5 10 15 Gln <210> 103 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 103 Phe Gly Gly Phe Thr Gly Ala Arg Lys Ser Ala Arg Lys Tyr Ala Asn 1 5 10 15 Gln <210> 104 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 104 Phe Gly Gly Phe Thr Gly Ala Arg Lys Ser Ala 1 5 10 <210> 105 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 105 Phe Gly Gly Phe Thr Gly Ala Arg Lys Tyr Ala 1 5 10 <210> 106 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 106 Phe Gly Gly Phe Thr Gly Ala Arg Lys Ser Tyr 1 5 10 <210> 107 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 107 Phe Gly Gly Phe Thr Gly Ala Arg Lys Ser Ala Arg Lys 1 5 10 <210> 108 <211> 30 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 108 Met Pro Arg Val Arg Ser Leu Phe Gln Glu Gln Glu Glu Pro Glu Pro 1 5 10 15 Gly Met Glu Glu Ala Gly Glu Met Glu Gln Lys Gln Leu Gln 20 25 30 <210> 109 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 109 Phe Ser Glu Phe Met Arg Gln Tyr Leu Val Leu Ser Met Gln Ser Ser 1 5 10 15 Gln <210> 110 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 110 Thr Leu His Gln Asn Gly Asn Val 1 5 <210> 111 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> flexible A-spacer <400> 111 Ala Ala Ala Ala Val 1 5 <210> 112 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(5) <223> Consensus sequence for a SUMO/ULP-1 protease cleavage site <221> VARIANT <222> (3)...(5) <223> Xaa can be any amino acid <400> 112 Gly Gly Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 113 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(7) <223> Consensus sequence for a Tobacco Vein Mottling Virus protease cleavage site <221> VARIANT <222> (1)...(2) <223> Xaa can be any amino acid <400> 113 Xaa Xaa Val Arg Phe Gln Gly 1 5 <210> 114 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(7) <223> Consensus sequence for a Tobacco Vein Mottling Virus protease cleavage site <221> VARIANT <222> (1)...(2) <223> Xaa can be any amino acid <400> 114 Xaa Xaa Val Arg Phe Gln Ser 1 5 <210> 115 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(7) <223> Tobacco Vein Mottling Virus protease cleavage site <400> 115 Glu Thr Val Arg Phe Gln Gly 1 5 <210> 116 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (0)...(0) <223> Tobacco Vein Mottling Virus protease cleavage site <400> 116 Glu Thr Val Arg Phe Gln Ser 1 5 <210> 117 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(7) <223> Tobacco Vein Mottling Virus protease cleavage site <400> 117 Asn Asn Val Arg Phe Gln Gly 1 5 <210> 118 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(7) <223> Tobacco Vein Mottling Virus protease cleavage site <400> 118 Asn Asn Val Arg Phe Gln Ser 1 5 <210> 119 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(5) <223> Consensus sequence for a non-human Caspase 3 protease cleavage site <221> VARIANT <222> (2)...(2) <223> Xaa can be any amino acid with E preferred <221> VARIANT <222> (3)...(3) <223> Xaa can be any amino acid <221> VARIANT <222> (5)...(5) <223> Xaa can be any amino acid with G or S preferred <400> 119 Asp Xaa Xaa Asp Xaa 1 5 <210> 120 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(5) <223> Non-human Caspase 3 protease cleavage site <400> 120 Asp Glu Val Asp Gly 1 5 <210> 121 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(5) <223> Non-human Caspase 3 protease cleavage site <400> 121 Asp Glu Val Asp Ser 1 5 <210> 122 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(5) <223> Non-human Caspase 3 protease cleavage site <400> 122 Asp Glu Pro Asp Gly 1 5 <210> 123 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(5) <223> Non-human Caspase 3 protease cleavage site <400> 123 Asp Glu Pro Asp Ser 1 5 <210> 124 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(5) <223> Non-human Caspase 3 protease cleavage site <400> 124 Asp Glu Leu Asp Gly 1 5 <210> 125 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> SITE <222> (1)...(5) <223> Non-human Caspase 3 protease cleavage site <400> 125 Asp Glu Leu Asp Ser 1 5

Claims (15)

  1. 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 포함하는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 포유류에 투여하는 단계를 포함하며, 조성물의 투여는 비뇨생식기-신경학적 질환과 관련된 증상을 감소시켜 포유류를 치료하는, 포유류에서 비뇨생식기-신경학적 질환을 치료하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 변형 클로스트리듐 독소는 1) 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 2) 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 3) 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 4) 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 5) 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 클로스트리듐 독소 효소 도메인 및 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 또는 6) 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 오피오이드 펩티드 결합 도메인 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인의 선형 아미노-내지-카르복실 단일 폴리펩티드 오더를 포함하는 방법.
  3. 제1항에 있어서, 오피오이드 펩티드 결합 도메인은 엔케팔린, BAM22 펩티드, 엔도모르핀, 엔도르핀, 디노르핀, 노시셉틴 또는 헤모르핀인 방법.
  4. 제1항에 있어서, 클로스트리듐 독소 전위 도메인은 BoNT/A 전위 도메인, BoNT/B 전위 도메인, BoNT/C1 전위 도메인, BoNT/D 전위 도메인, BoNT/E 전위 도메인, BoNT/F 전위 도메인, BoNT/G 전위 도메인, TeNT 전위 도메인, BaNT 전위 도메인, 또는 BuNT 전위 도메인인 방법.
  5. 제1항에 있어서, 클로스트리듐 독소 효소 도메인은 BoNT/A 효소 도메인, BoNT/B 효소 도메인, BoNT/C1 효소 도메인, BoNT/D 효소 도메인, BoNT/E 효소 도메인, BoNT/F 효소 도메인, BoNT/G 효소 도메인, TeNT 효소 도메인, BaNT 효소 도메인, 또는 BuNT 효소 도메인인 방법.
  6. 제1항에 있어서, 비뇨생식기-신경학적 질환은 요실금, 과민성 방광, 배뇨근 기능이상, 하부 요로 기능이상, 요폐, 배뇨 주저, 다뇨증, 야간뇨, 만성 요로 감염, 전립선 질환과 관련된 비뇨생식기 질환, 자궁 질환과 관련된 비뇨생식기 질환, 또는 신경학적 기능이상과 관련된 비뇨생식기 질환인 방법.
  7. 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 클로스트리듐 독소 효소 도메인 및 외인성 프로테아제 절단 부위를 포함하는 변형 클로스트리듐 독소를 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 포유류에 투여하는 단계를 포함하며, 조성물의 투여는 비뇨생식기-신경학적 질환과 관련된 증상을 감소시켜 포유류를 치료하는, 포유류에서 비뇨생식기-신경학적 질환을 치료하는 방법.
  8. 제7항에 있어서, 변형 클로스트리듐 독소는 1) 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 2) 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 3) 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 4) 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 5) 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 클로스트리듐 독소 효소 도메인 및 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 또는 6) 클로스트리듐 독소 전위 도메인, 외인성 프로테아제 절단 부위, 오피오이드 펩티드 결합 도메인 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인의 선형 아미노-내지-카르복실 단일 폴리펩티드 오더를 포함하는 방법.
  9. 제7항에 있어서, 오피오이드 펩티드 결합 도메인은 엔케팔린, BAM22 펩티드, 엔도모르핀, 엔도르핀, 디노르핀, 노시셉틴 또는 헤모르핀인 방법.
  10. 제7항에 있어서, 클로스트리듐 독소 전위 도메인은 BoNT/A 전위 도메인, BoNT/B 전위 도메인, BoNT/C1 전위 도메인, BoNT/D 전위 도메인, BoNT/E 전위 도메인, BoNT/F 전위 도메인, BoNT/G 전위 도메인, TeNT 전위 도메인, BaNT 전위 도메인, 또는 BuNT 전위 도메인인 방법.
  11. 제7항에 있어서, 클로스트리듐 독소 효소 도메인은 BoNT/A 효소 도메인, BoNT/B 효소 도메인, BoNT/C1 효소 도메인, BoNT/D 효소 도메인, BoNT/E 효소 도메인, BoNT/F 효소 도메인, BoNT/G 효소 도메인, TeNT 효소 도메인, BaNT 효소 도메인, 또는 BuNT 효소 도메인인 방법.
  12. 제7항에 있어서, 외인성 프로테아제 절단 부위는 식물 파파인(papain) 절단 부위, 곤충 파파인 절단 부위, 갑각류 파파인 절단 부위, 엔테로키나아제 절단 부위, 사람 리노바이러스 3C 프로테아제 절단 부위, 사람 엔테로바이러스 3C 프로테아제 절단 부위, 담배 식각 바이러스 프로테아제 절단 부위, 담배 엽맥 반점 바이러스 절단 부위, 서브틸리신 절단 부위, 하이드록실아민 절단 부위, 또는 카스파아제 3 절단 부위인 방법.
  13. 제7항에 있어서, 비뇨생식기-신경학적 질환은 요실금, 과민성 방광, 배뇨근 기능이상, 하부 요로 기능이상, 요폐, 배뇨 주저, 다뇨증, 야간뇨, 만성 요로 감염, 전립선 질환과 관련된 비뇨생식기 질환, 자궁 질환과 관련된 비뇨생식기 질환, 또는 신경학적 기능이상과 관련된 비뇨생식기 질환인 방법.
  14. 변형 클로스트리듐 독소를 사용하여 비뇨생식기-신경학적 질환의 치료가 필요한 포유류에서 비뇨생식기-신경학적 질환을 치료하기 위한 의약품을 제조하는 방법으로서, 변형 클로스트리듐 독소는 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인을 포함하며, 포유류에 대한 치료적 유효량의 의약품의 투여는 비뇨생식기-신경학적 질환의 증상을 감소시킴으로써 포유류를 치료하는 방법.
  15. 비뇨생식기-신경학적 질환의 치료가 필요한 포유류에서 비뇨생식기-신경학적 질환을 치료하기 위한 의약품을 제조하기 위한 변형 클로스트리듐 독소의 사용 방법으로서, 치료적 유효량의 조성물을 포유류에 투여하는 단계를 포함하며, 변형 클로스트리듐 독소는 오피오이드 펩티드 결합 도메인, 클로스트리듐 독소 전위 도메인 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인, 및 외인성 프로테아제 절단 부위를 포함하며, 포유류에 대한 치료적 유효량의 의약품의 투여는 비뇨생식기-신경학적 질환의 증상을 감소시킴으로써 포유류를 치료하는 방법.
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WO (1) WO2009055351A1 (ko)

Families Citing this family (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7811584B2 (en) * 2004-06-30 2010-10-12 Allergan, Inc. Multivalent clostridial toxins
GB0426394D0 (en) * 2004-12-01 2005-01-05 Health Prot Agency Fusion proteins
US8778634B2 (en) 2004-12-01 2014-07-15 Syntaxin, Ltd. Non-cytotoxic protein conjugates
US8512984B2 (en) 2004-12-01 2013-08-20 Syntaxin, Ltd. Non-cytotoxic protein conjugates
US8603779B2 (en) 2004-12-01 2013-12-10 Syntaxin, Ltd. Non-cytotoxic protein conjugates
US8399400B2 (en) 2004-12-01 2013-03-19 Syntaxin, Ltd. Fusion proteins
GB0610867D0 (en) 2006-06-01 2006-07-12 Syntaxin Ltd Treatment of pain
RU2491086C2 (ru) 2007-10-23 2013-08-27 Аллерган, Инк. Способы лечения мочеполовых-неврологических расстройств с использованием модифицированных клостридиальных токсинов
US20100303757A1 (en) * 2009-05-29 2010-12-02 Allergan, Inc. Methods of Treating Chronic Neurogenic Inflammation Using Interleukin Retargeted Endopepidases
US20100303788A1 (en) * 2009-05-29 2010-12-02 Allergan, Inc. Methods of Treating Chronic Neurogenic Inflammation Using Galanin Retargeted Endopepidases
US8198229B2 (en) 2009-05-29 2012-06-12 Allergan, Inc. Methods of treating urogenital-neurological disorders using galanin retargeted endopepidases
US20100303783A1 (en) * 2009-05-29 2010-12-02 Allergan, Inc. Methods of Treating Urogenital-Neurological Disorders Using Tachykinin Retargeted Endopepidases
US20100303791A1 (en) * 2009-05-29 2010-12-02 Allergan, Inc. Methods of Treating Chronic Neurogenic Inflammation Using Glucagon Like Hormone Retargeted Endopepidases
US20100303798A1 (en) * 2009-05-29 2010-12-02 Allergan, Inc. Methods of Treating Urogenital-Neurological Disorders Using Neurotrophin Retargeted Endopepidases
US20100303794A1 (en) * 2009-05-29 2010-12-02 Allergan, Inc. Methods of Treating Urogenital-Neurological Disorders Using Glucagon Like Hormone Retargeted Endopepidases
US20100303789A1 (en) * 2009-05-29 2010-12-02 Allergan, Inc. Methods of Treating Chronic Neurogenic Inflammation Using Neurotrophin Retargeted Endopepidases
US20100303756A1 (en) * 2009-05-29 2010-12-02 Allergan, Inc. Methods of Treating Urogenital-Neurological Disorders Using Interleukin Retargeted Endopepidases
US8147848B2 (en) * 2009-08-26 2012-04-03 Allergan, Inc. Method for treating premature ejaculation with a botulinum neurotoxin
JP6148979B2 (ja) 2010-05-20 2017-06-14 アラーガン、インコーポレイテッドＡｌｌｅｒｇａｎ，Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ 分解性クロストリジウム毒素
WO2012112432A1 (en) * 2011-02-14 2012-08-23 Allergan, Inc. Methods of inhibiting aberrant blood vessel formation using opioid retargeted endopeptidases
US20120207742A1 (en) * 2011-02-14 2012-08-16 Allergan, Inc. Treatments Using PSMA Ligand Endopeptidases
US20120207704A1 (en) * 2011-02-14 2012-08-16 Allergan, Inc. Inhibiting Aberrant Blood Vessel Formation Using Growth Factor Retargeted Endopeptidases
US20120207743A1 (en) * 2011-02-14 2012-08-16 Allergan, Inc. Inhibiting Aberrant Blood Vessel Formation Using Retargeted Endopeptidases
US20120251518A1 (en) * 2011-03-29 2012-10-04 Allergan, Inc. Endopeptidase Treatment of Sexual Dysfunction Disorders
CN103813802A (zh) 2011-07-14 2014-05-21 阿勒根公司 用于治疗与性活动相关的失禁的方法
US20140056870A1 (en) 2012-08-27 2014-02-27 Allergan, Inc. Fusion proteins
CN104870468B (zh) * 2012-11-21 2020-11-10 益普生生物创新有限公司 用于制备经蛋白水解处理的多肽的方法
GB201312317D0 (en) * 2013-07-09 2013-08-21 Syntaxin Ltd Cationic neurotoxins
US11117935B2 (en) * 2016-08-24 2021-09-14 President And Fellows Of Harvard College Engineered botulinum neurotoxin

Family Cites Families (43)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4932936A (en) 1988-01-29 1990-06-12 Regents Of The University Of Minnesota Method and device for pharmacological control of spasticity
US5401243A (en) 1990-08-21 1995-03-28 Associated Synapse Biologics Controlled administration of chemodenervating pharmaceuticals
US5437291A (en) 1993-08-26 1995-08-01 Univ Johns Hopkins Method for treating gastrointestinal muscle disorders and other smooth muscle dysfunction
US5766605A (en) 1994-04-15 1998-06-16 Mount Sinai School Of Medicine Of The City University Of New York Treatment of autonomic nerve dysfunction with botulinum toxin
US5670484A (en) 1994-05-09 1997-09-23 Binder; William J. Method for treatment of skin lesions associated with cutaneous cell-proliferative disorders
US6146886A (en) 1994-08-19 2000-11-14 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. RNA polymerase III-based expression of therapeutic RNAs
GB9508204D0 (en) 1995-04-21 1995-06-07 Speywood Lab Ltd A novel agent able to modify peripheral afferent function
US5861431A (en) 1995-06-07 1999-01-19 Iotek, Inc. Incontinence treatment
US7192596B2 (en) 1996-08-23 2007-03-20 The Health Protection Agency Ipsen Limited Recombinant toxin fragments
GB9617671D0 (en) 1996-08-23 1996-10-02 Microbiological Res Authority Recombinant toxin fragments
US5939070A (en) 1996-10-28 1999-08-17 Wisconsin Alumni Research Foundation Hybrid botulinal neurotoxins
US7449192B2 (en) 1997-07-15 2008-11-11 The Regents Of The University Of Colorado Use of neurotoxin therapy for treatment of urologic and related disorders related to neurogenic bladder dysfunction
US7470431B2 (en) 1997-07-15 2008-12-30 The Regents Of The University Of Colorado Use of neurotoxin therapy for treatment of urological-neurological disorders associated with prostate cancer
DK1475099T4 (da) * 1997-07-15 2014-05-19 Univ Colorado Anvendelse af botulinum-toksin til behandling af urininkontinens
US6063768A (en) 1997-09-04 2000-05-16 First; Eric R. Application of botulinum toxin to the management of neurogenic inflammatory disorders
GB9721189D0 (en) 1997-10-08 1997-12-03 Speywood Lab The Limited Analgesic conjugates
KR100876060B1 (ko) 1999-08-25 2008-12-26 알러간, 인코포레이티드 활성화가능한 재조합 신경독
US20030180289A1 (en) 1999-09-23 2003-09-25 Foster Keith Alan Inhibition of secretion from non-neuronal cells
US7138127B1 (en) 2000-01-19 2006-11-21 Allergan, Inc. Clostridial toxin derivatives and methods for treating pain
US20040009180A1 (en) 2002-07-11 2004-01-15 Allergan, Inc. Transdermal botulinum toxin compositions
AU2003259246A1 (en) 2002-07-29 2004-02-16 Rajiv Doshi Methods for the use of neurotoxin in the treatment of urologic disorders
GB0321344D0 (en) 2003-09-11 2003-10-15 Health Prot Agency Re-targeted toxin conjugates
GB0328060D0 (en) 2003-12-04 2004-01-07 Sod Conseils Rech Applic Botulinum toxin treatment
US20100266638A1 (en) * 2004-02-26 2010-10-21 Allergan, Inc. Headache treatment method
US9078892B2 (en) * 2004-02-26 2015-07-14 Allergan, Inc. Methods for treating pain and for treating a medication overuse disorder
US20080097219A1 (en) * 2004-07-20 2008-04-24 Allergan , Inc. Thermographic Assessment Of Clostridial Toxin Applications
JP5089388B2 (ja) * 2004-09-01 2012-12-05 アラーガン、インコーポレイテッド 分解可能なクロストリジウム毒素
CA2588758C (en) * 2004-11-22 2017-01-03 New York University Genetically engineered clostridial genes, proteins encoded by the engineered genes, and uses thereof
WO2006059105A2 (en) 2004-12-01 2006-06-08 Health Protection Agency Non-cytotoxic Protein Conjugates
EP1830872B1 (en) 2004-12-01 2010-11-17 Health Protection Agency Fusion proteins
GB0426397D0 (en) 2004-12-01 2005-01-05 Health Prot Agency Fusion proteins
JP5815915B2 (ja) 2005-10-11 2015-11-17 ユニバーシティー オブ ピッツバーグ − オブ ザ コモンウェルス システム オブ ハイヤー エデュケーション 過活動膀胱障害の治療のためのスフィンゴミエリンリポソーム
WO2008030638A2 (en) 2006-05-16 2008-03-13 Mayo Foundation For Medical Education And Research Use of dmso and botulinum toxin therapy for urinary incontinence and related disorders
GB0610867D0 (en) 2006-06-01 2006-07-12 Syntaxin Ltd Treatment of pain
GB0610868D0 (en) 2006-06-01 2006-07-12 Syntaxin Ltd Treatment of pain
US9061025B2 (en) * 2006-08-31 2015-06-23 Allergan, Inc. Methods for selecting headache patients responsive to botulinum toxin therapy
RU2491086C2 (ru) 2007-10-23 2013-08-27 Аллерган, Инк. Способы лечения мочеполовых-неврологических расстройств с использованием модифицированных клостридиальных токсинов
US20100303756A1 (en) * 2009-05-29 2010-12-02 Allergan, Inc. Methods of Treating Urogenital-Neurological Disorders Using Interleukin Retargeted Endopepidases
US20100303798A1 (en) * 2009-05-29 2010-12-02 Allergan, Inc. Methods of Treating Urogenital-Neurological Disorders Using Neurotrophin Retargeted Endopepidases
US20100303783A1 (en) * 2009-05-29 2010-12-02 Allergan, Inc. Methods of Treating Urogenital-Neurological Disorders Using Tachykinin Retargeted Endopepidases
US20120251519A1 (en) * 2011-03-29 2012-10-04 Allergan, Inc. Endopeptidase Treatment of Smooth Muscle Disorders
CN103813802A (zh) * 2011-07-14 2014-05-21 阿勒根公司 用于治疗与性活动相关的失禁的方法
EP2934571B1 (en) * 2012-12-18 2018-05-30 Allergan, Inc. Prophylactic treatment of herpes recurrence

Also Published As

Publication number Publication date
JP2011514308A (ja) 2011-05-06
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MX2010004502A (es) 2010-06-17
WO2009055351A1 (en) 2009-04-30

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