UA126466C2 - Толерантний до інгібуючого als гербіциду мутант буряка звичайного - Google Patents
Толерантний до інгібуючого als гербіциду мутант буряка звичайного Download PDFInfo
- Publication number
- UA126466C2 UA126466C2 UAA201610997A UAA201610997A UA126466C2 UA 126466 C2 UA126466 C2 UA 126466C2 UA A201610997 A UAA201610997 A UA A201610997A UA A201610997 A UAA201610997 A UA A201610997A UA 126466 C2 UA126466 C2 UA 126466C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- herbicides
- gene
- amino acid
- plants
- biu
- Prior art date
Links
- 239000004009 herbicide Substances 0.000 title claims description 138
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 title claims description 86
- 241000335053 Beta vulgaris Species 0.000 title claims description 50
- 230000002363 herbicidal effect Effects 0.000 title claims description 49
- 235000016068 Berberis vulgaris Nutrition 0.000 title description 19
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 66
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims abstract description 55
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 40
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 39
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 37
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 28
- 108010000700 Acetolactate synthase Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 125000000430 tryptophan group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C12 0.000 claims abstract description 6
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 121
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 55
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 52
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 31
- 101150096316 5 gene Proteins 0.000 claims description 25
- 229940100389 Sulfonylurea Drugs 0.000 claims description 14
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- YROXIXLRRCOBKF-UHFFFAOYSA-N sulfonylurea Chemical class OC(=N)N=S(=O)=O YROXIXLRRCOBKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 11
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims description 8
- PRZRAMLXTKZUHF-UHFFFAOYSA-N 5-oxo-n-sulfonyl-4h-triazole-1-carboxamide Chemical compound O=S(=O)=NC(=O)N1N=NCC1=O PRZRAMLXTKZUHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- CAAMSDWKXXPUJR-UHFFFAOYSA-N 3,5-dihydro-4H-imidazol-4-one Chemical compound O=C1CNC=N1 CAAMSDWKXXPUJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- -1 pyrimidinyl (thio)benzoate Chemical compound 0.000 claims description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 abstract description 62
- 241000219310 Beta vulgaris subsp. vulgaris Species 0.000 abstract description 53
- 101150001232 ALS gene Proteins 0.000 abstract 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 68
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 63
- 235000021536 Sugar beet Nutrition 0.000 description 36
- 239000005560 Foramsulfuron Substances 0.000 description 33
- PXDNXJSDGQBLKS-UHFFFAOYSA-N foramsulfuron Chemical compound COC1=CC(OC)=NC(NC(=O)NS(=O)(=O)C=2C(=CC=C(NC=O)C=2)C(=O)N(C)C)=N1 PXDNXJSDGQBLKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 29
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 26
- 238000000034 method Methods 0.000 description 26
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 26
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 26
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 22
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 22
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 21
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 19
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 19
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 18
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 18
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 18
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 15
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 15
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- JUJFQMPKBJPSFZ-UHFFFAOYSA-M Iodosulfuron-methyl-sodium Chemical compound [Na+].COC(=O)C1=CC=C(I)C=C1S(=O)(=O)[N-]C(=O)NC1=NC(C)=NC(OC)=N1 JUJFQMPKBJPSFZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 13
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 13
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 13
- 230000009418 agronomic effect Effects 0.000 description 10
- 235000021537 Beetroot Nutrition 0.000 description 9
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 9
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 9
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 9
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 8
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 8
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 8
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 8
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 7
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 7
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 7
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 7
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 7
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 7
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 7
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 7
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 6
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 6
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 6
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 6
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 6
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 6
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 6
- PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N Ethyl methanesulfonate Chemical compound CCOS(C)(=O)=O PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000021394 Veia Species 0.000 description 5
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 5
- 208000027697 autoimmune lymphoproliferative syndrome due to CTLA4 haploinsuffiency Diseases 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 5
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 5
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 5
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 5
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 5
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 5
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 4
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 4
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N N-benzyladenine Chemical compound N=1C=NC=2NC=NC=2C=1NCC1=CC=CC=C1 NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241001483078 Phyto Species 0.000 description 4
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- HFCYZXMHUIHAQI-UHFFFAOYSA-N Thidiazuron Chemical compound C=1C=CC=CC=1NC(=O)NC1=CN=NS1 HFCYZXMHUIHAQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- CVSVTCORWBXHQV-UHFFFAOYSA-N creatine Chemical compound NC(=[NH2+])N(C)CC([O-])=O CVSVTCORWBXHQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 4
- 239000010451 perlite Substances 0.000 description 4
- 235000019362 perlite Nutrition 0.000 description 4
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 4
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 229960002363 thiamine pyrophosphate Drugs 0.000 description 4
- 235000008170 thiamine pyrophosphate Nutrition 0.000 description 4
- 239000011678 thiamine pyrophosphate Substances 0.000 description 4
- YXVCLPJQTZXJLH-UHFFFAOYSA-N thiamine(1+) diphosphate chloride Chemical compound [Cl-].CC1=C(CCOP(O)(=O)OP(O)(O)=O)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N YXVCLPJQTZXJLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101150069452 z gene Proteins 0.000 description 4
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 3
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 3
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 3
- 238000010187 selection method Methods 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 3
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- PRPINYUDVPFIRX-UHFFFAOYSA-N 1-naphthaleneacetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CC=CC2=C1 PRPINYUDVPFIRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KJCVRFUGPWSIIH-UHFFFAOYSA-N 1-naphthol Chemical compound C1=CC=C2C(O)=CC=CC2=C1 KJCVRFUGPWSIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WTLNOANVTIKPEE-UHFFFAOYSA-N 2-acetyloxypropanoic acid Chemical compound OC(=O)C(C)OC(C)=O WTLNOANVTIKPEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000019750 Crude protein Nutrition 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 description 2
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 2
- 206010053759 Growth retardation Diseases 0.000 description 2
- NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N Guanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 2
- 241001191009 Gymnomyza Species 0.000 description 2
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 231100000674 Phytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000035199 Tetraploidy Diseases 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 2
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 2
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 229930002875 chlorophyll Natural products 0.000 description 2
- 235000019804 chlorophyll Nutrition 0.000 description 2
- ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M chlorophyll a Chemical compound C1([C@@H](C(=O)OC)C(=O)C2=C3C)=C2N2C3=CC(C(CC)=C3C)=[N+]4C3=CC3=C(C=C)C(C)=C5N3[Mg-2]42[N+]2=C1[C@@H](CCC(=O)OC\C=C(/C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H](C)C2=C5 ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 2
- 229960003624 creatine Drugs 0.000 description 2
- 239000006046 creatine Substances 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 235000003869 genetically modified organism Nutrition 0.000 description 2
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000037824 growth disorder Diseases 0.000 description 2
- 231100000001 growth retardation Toxicity 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 2
- 208000006278 hypochromic anemia Diseases 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 238000011173 large scale experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 229940076788 pyruvate Drugs 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000007894 restriction fragment length polymorphism technique Methods 0.000 description 2
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 2
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 230000036435 stunted growth Effects 0.000 description 2
- 238000013337 sub-cultivation Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 230000017260 vegetative to reproductive phase transition of meristem Effects 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- FDKWRPBBCBCIGA-REOHCLBHSA-N (2r)-2-azaniumyl-3-$l^{1}-selanylpropanoate Chemical compound [Se]C[C@H](N)C(O)=O FDKWRPBBCBCIGA-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 101150070093 AG gene Proteins 0.000 description 1
- 241001657091 Avima Species 0.000 description 1
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 1
- MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N Crotonoside Natural products C1=NC2=C(N)NC(=O)N=C2N1[C@H]1O[C@@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N 0.000 description 1
- FDKWRPBBCBCIGA-UWTATZPHSA-N D-Selenocysteine Natural products [Se]C[C@@H](N)C(O)=O FDKWRPBBCBCIGA-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N D-guanosine Natural products C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1C1OC(CO)C(O)C1O NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 239000005503 Desmedipham Substances 0.000 description 1
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 101150017040 I gene Proteins 0.000 description 1
- 101150062179 II gene Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 108010044467 Isoenzymes Proteins 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 108091026898 Leader sequence (mRNA) Proteins 0.000 description 1
- 239000005579 Metamitron Substances 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 108091092878 Microsatellite Proteins 0.000 description 1
- MMVYPOCJESWGTC-UHFFFAOYSA-N Molybdenum(2+) Chemical compound [Mo+2] MMVYPOCJESWGTC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 1
- 239000005594 Phenmedipham Substances 0.000 description 1
- 108700001094 Plant Genes Proteins 0.000 description 1
- 208000020584 Polyploidy Diseases 0.000 description 1
- 241000743048 Puya Species 0.000 description 1
- 229910019567 Re Re Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004963 SAMO calculation Methods 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- 208000026487 Triploidy Diseases 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- JKKPSTXVKNWEAH-VWHZSNQBSA-N bbip Chemical compound NC(=N)NCCC[C@@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1N(C(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)CNC(=O)C=2C=CC(=CC=2)C(=O)C=2C=CC=CC=2)CCC1 JKKPSTXVKNWEAH-VWHZSNQBSA-N 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000033558 biomineral tissue development Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- FPPNZSSZRUTDAP-UWFZAAFLSA-N carbenicillin Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)C(C(O)=O)C1=CC=CC=C1 FPPNZSSZRUTDAP-UWFZAAFLSA-N 0.000 description 1
- 229960003669 carbenicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 244000038559 crop plants Species 0.000 description 1
- 238000012272 crop production Methods 0.000 description 1
- 238000009402 cross-breeding Methods 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- WZJZMXBKUWKXTQ-UHFFFAOYSA-N desmedipham Chemical compound CCOC(=O)NC1=CC=CC(OC(=O)NC=2C=CC=CC=2)=C1 WZJZMXBKUWKXTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 241001233957 eudicotyledons Species 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229940029575 guanosine Drugs 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 1
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- VHCNQEUWZYOAEV-UHFFFAOYSA-N metamitron Chemical compound O=C1N(N)C(C)=NN=C1C1=CC=CC=C1 VHCNQEUWZYOAEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000000816 peptidomimetic Substances 0.000 description 1
- IDOWTHOLJBTAFI-UHFFFAOYSA-N phenmedipham Chemical compound COC(=O)NC1=CC=CC(OC(=O)NC=2C=C(C)C=CC=2)=C1 IDOWTHOLJBTAFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 235000013550 pizza Nutrition 0.000 description 1
- 230000008635 plant growth Effects 0.000 description 1
- 230000010152 pollination Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- ZKZBPNGNEQAJSX-UHFFFAOYSA-N selenocysteine Natural products [SeH]CC(N)C(O)=O ZKZBPNGNEQAJSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000016491 selenocysteine Nutrition 0.000 description 1
- 229940055619 selenocysteine Drugs 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000000153 supplemental effect Effects 0.000 description 1
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- IMEVJVISCHQJRM-UHFFFAOYSA-N triflusulfuron-methyl Chemical group COC(=O)C1=CC=CC(C)=C1S(=O)(=O)NC(=O)NC1=NC(OCC(F)(F)F)=NC(N(C)C)=N1 IMEVJVISCHQJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009417 vegetative reproduction Effects 0.000 description 1
- 238000013466 vegetative reproduction Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H5/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their plant parts; Angiosperms characterised otherwise than by their botanic taxonomy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H1/00—Processes for modifying genotypes ; Plants characterised by associated natural traits
- A01H1/06—Processes for producing mutations, e.g. treatment with chemicals or with radiation
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H5/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their plant parts; Angiosperms characterised otherwise than by their botanic taxonomy
- A01H5/06—Roots
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H5/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their plant parts; Angiosperms characterised otherwise than by their botanic taxonomy
- A01H5/12—Leaves
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H6/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their botanic taxonomy
- A01H6/02—Amaranthaceae or Chenopodiaceae, e.g. beet or spinach
- A01H6/024—Beta vulgaris [beet]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/01—Preparation of mutants without inserting foreign genetic material therein; Screening processes therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
- C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
- C12N15/8274—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for herbicide resistance
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/04—Plant cells or tissues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/88—Lyases (4.)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
- C12P19/28—N-glycosides
- C12P19/38—Nucleosides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P5/00—Preparation of hydrocarbons or halogenated hydrocarbons
- C12P5/02—Preparation of hydrocarbons or halogenated hydrocarbons acyclic
- C12P5/023—Methane
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/02—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group
- C12P7/04—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group acyclic
- C12P7/06—Ethanol, i.e. non-beverage
- C12P7/08—Ethanol, i.e. non-beverage produced as by-product or from waste or cellulosic material substrate
- C12P7/10—Ethanol, i.e. non-beverage produced as by-product or from waste or cellulosic material substrate substrate containing cellulosic material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y401/00—Carbon-carbon lyases (4.1)
- C12Y401/03—Oxo-acid-lyases (4.1.3)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2502/00—Coculture with; Conditioned medium produced by
- C12N2502/99—Coculture with; Conditioned medium produced by genetically modified cells
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
- Y02E50/00—Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
- Y02E50/10—Biofuels, e.g. bio-diesel
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
- Y02E50/00—Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
- Y02E50/30—Fuel from waste, e.g. synthetic alcohol or diesel
Abstract
Винахід стосується толерантної до інгібуючих ALS гербіцидів рослини буряка звичайного та її частин, які включають мутацію ендогенного гена ацетолактатсинтази (ALS), причому ген ALS кодує поліпептид ALS, який містить амінокислоту, відмінну від триптофану, у позиції 569 поліпептиду ALS.
Description
Даний винахід стосується толерантних до інгібуючих АЇЗ гербіцидів рослин буряка звичайного та їх частин, а також способу їх одержання.
Культурні форми буряка звичайного (як визначено у публікації Рога-І Іоуа (2005) бойцгсев ої депеїіс магіайоп, Сепив Веїа. Іп: Віапсагаі Е, Сатрреї! І с, 5Кагасії с М, Оє Віадаі М (єдвз) Саепеїйс5 ап Вгеєдіпу ої Зидаг Вееї. Зсієпсе РибіїзНеге, Епіїєїй (МН), ОА, рр 25-33) є важливими сільськогосподарськими культурами у районах з помірним та субтропічним кліматом. Наприклад, близько 20 95 світового виробництва цукру здійснюється на основі цукрового буряка. Оскільки сіянці та молоді рослини буряка протягом перших 6-8 тижнів їхнього життя є чутливими до жорсткої конкуренції, спричиненої швидко зростаючими бур'янами, які пригнічують молоді культурні рослини, надійні заходи з боротьби з бур'янами є нагальною потребою на площах вирощування культур.
Вже понад 40 років гербіциди є оптимальними засобами для боротьби з бур'янами на площах вирощування буряків. Продукти, які застосовуються з цією метою, такі, як фенмедифам, десмедифам та метамітрон, пригнічувати бур'яни на полях цукрового буряка без шкоди культурі. Незважаючи на це, за несприятливих екологічних умов ефективність цих продуктів ще є далекою від максимальної, особливо у випадках, коли такі бур'яни, як Спепородішт аїірит,
Атагапійих гейгоПехи5 та/або Тгіріеюгозрептит іподогаїа розвиваються протягом тривалого періоду часу.
Нові гербіцидні активні інгредієнти є дуже бажаними для розширення засобів боротьби з бур'янами на площах вирощування буряка. Такі сполуки мають діяти проти широкого спектра бур'янів, в оптимальному варіанті - від проростання до повного розвитку рослин бур'янів, без ураження культури буряків незалежно від її стадії розвитку. При застосуванні класичного відбору гербіцидів за останні десятиліття не вдавалося виявити активних інгредієнтів з вибірковою гербіцидною активністю для буряків, які б мали всі ці чіткі властивості, що забезпечували б агрономічні переваги.
Деякі хімічні речовини інгібують фермент "синтазу ацетогідроксикислоти" (АНА5), також відомий як "ацетолактатсинтаза" (А! 5 (ЕС 4.1.3.181). АГ 5 є місцем дії п'яти різних за структурою родин гербіцидів, які належать до класу інгібуючих АЇ5 гербіцидів, таких, як (а) сульфонілсечовинні гербіциди (Веуег Е.М еї аї. (1988), Б!иМопуїшгеа5 іп Негрісідеє: Спетівігу,
Зо Юедгадайоп, апа Моде ої Асіоп; Магсє! ОекКег, Мем МОЖ, 1988, 117-189), (Б) сульфоніламінокарбонілтриазолінонові гербіциди (Ропігеп, К., РПап7.-Маснгіснієп Вауеєг, 2002, 55, 37-52), (с) імідазолінонові гербіциди (Зпапег, О.Г.., еї аї., Ріапі Рпузіої!., 1984, 76, 545-546;
ЗПпапетг, 0.І., апа О'Соппог, 5.І. (Еав5.) ТНе Ітідагоїїпопе Негбрісіде5, СВО Ргезз, Воса Вайшп, РІ, 1991), (ад) триазолпіримідинові гербіциди (КіезспіскК, МУ. А. еїа!., Адгіс. Роса Спет., 1992,40, 1083- 1085), та (є) піримідиніл(тіо)бензоатні гербіциди (Зпіті?и, Т.)., Ревіїс. З5сі.,1997,22, 245-256;
Зпітіги, Т. еї аї., Асеюіасіаїе Зупіеназе Іппірітог5 іп Негтбісіде Сіаззез іп ОемеІортепі, Водетг, Р.,
Ууакабауавні, К., Нікаї, К., (Еав.), Зргіпдег Мепад, Вепіп, 2002, 1-41).
АЇ 5 бере участь у перетворенні двох молекул пірувату на молекулу ацетолактату та діоксид вуглецю. У реакції застосовують тіамінпірофосфат з метою з'єднання двох молекул пірувату.
Одержаний в результаті продукт цієї реакції, ацетолактат, зрештою стає валіном, лейцином та ізолейцином (5іпоп (1999) "Віозупіпевзі5 ої маїїпе, Іеисіпе апа ізоІеисіпе", іп Ріапї Атіпо Асідв5, зіпай, В.К., ед., Магсе! ОекКкКег Іпс. Мем Могк, Мем мок, рр. 227-247).
Інгібітори АЇ 5 переривають біосинтез валіну, лейцину та ізолейцину в рослинах. Внаслідок цього відразу вичерпуються запаси відповідних амінокислот, що викликає припинення біосинтезу білків, призводячи до припинення росту рослини та, зрештою, її загибелі або щонайменше ураження.
Інгібуючі АЇЗ гербіциди широко застосовуються у сучасному сільському господарстві завдяки їхній ефективності при помірних нормах внесення та відносній нетоксичності для тварин. Через інгібування активності АЇ 5 ці родини гербіцидів запобігають подальшому ростові та розвиткові сприйнятливих рослин, включаючи багато видів бур'янів. Для забезпечення рослин з підвищеною толерантністю до ще більших концентрацій інгібуючих АЇ 5 гербіцидів, які можуть вимагатися для достатнього контролю над бур'янами, потрібні додаткові резистентні до інгібуючих АЇ З гербіцидів лінії та сорти культурних рослин, а також способи та композиції для виведення та застосування резистентних до інгібуючих АЇ 5 гербіцидів ліній та сортів.
Широкий вибір інгібуючих АЇ З гербіцидів дозволяє фермерам боротися з різними видами бур'янів незалежно від стадії їхнього росту, але ці високоефективні гербіциди не можуть бути застосовані для буряка, оскільки традиційні рослини цукрового буряка / комерційні сорти цукрового буряка, є дуже уразливими перед цими інгібуючими АГ 5 гербіцидами. Незважаючи на це, такі інгібуючі АЇ5З гербіциди демонструють відмінну гербіцидну активність проти бо широколистяних та трав'янистих видів бур'янів. Перші гербіциди, механізмом дії яких було інгібування АГ 5, були розроблені для їх застосування у сільському господарстві ще 30 років тому. Нині активні інгредієнти цього класу гербіцидів демонструють високу ефективність. у боротьбі з бур'янами і широко застосовуються для захисту кукурудзи та злаків, а також для дводольних культур, але не для буряків.
Єдиним інгібуючим АГ 5 гербіцидом, який нині є відомим як такий, що може застосовуватися для післясходового внесення для буряків, є ЮОерикя»Ж. Цей гербіцид (який містить трифлусульфурон-метил як активний інгредієнт плюс специфічні сполуки для рецептування) розщеплюється рослиною буряка, перш ніж зможе інгібувати ендогенний А! З фермент буряка, але він має серйозні пропуски у боротьбі з бур'янами на площах вирощування буряка.
З часу запровадження інгібуючих АЇ 5 гербіцидів у сільському господарстві спостерігалося, що сприйнятливі види рослин, включаючи природні бур'яни, іноді розвивають спонтанну толерантність до цього класу гербіцидів. Окремі заміни пар нуклеотидів у певних сайтах гена
АЇ5 зазвичай ведуть до більш або менш резистентних різновидів ферменту АЇ5, які демонструють різні рівні інгібування через інгібуючі АЇ 5 гербіциди.
Таким чином, рослини, які надають мутантні алелі АГ5, демонструють різний рівень толерантності до інгібуючих АЇ 5 гербіцидів, залежно від хімічної структури інгібуючого АЇ 5 гербіциду та місця точкової мутації у гені АЇ 5.
Наприклад, у публікації Найогі еї а). (1995), МоІЇ. Сбеп. Сепеї. 246:419-425, описується односпрямована мутація у кодоні Тгр 557 лінії клітин Вгаззіса пари5 (згідно з нумерацією послідовності Агарідорзіз ІПпаійапа, яка застосовується в літературі, з метою порівняння всіх мутантів А 5/АНАЗ вона відповідає позиції "574") - що дорівнює позиції 569 послідовності А 5 буряка. Ці автори спостерігали резистентність до кількох представників підкласів інгібуючих АЇ 5 гербіцидів, таких, як сульфонілсечовини, імідазолінони та триазолпіримідини.
Були описані мутанти буряка, які забезпечують точкову мутацію в кодоні Аїйа 122, які ведуть до певної толерантності до імідазолінонів підкласу інгібуючих АЇ 5 гербіцидів (документ УМО 98/02526), яка все ж є недостатньою для боротьби з бурянами у програмах сільськогосподарського застосування. Не містилось відомостей про перехресну толерантність до інших класів інгібуючих АЇ 5 гербіцидів при застосуванні цього мутанта. Крім того, рослини буряка, які забезпечують другу точкову мутацію у кодоні Рго 197 продемонстрували помірну
Зо толерантність до інгібуючих АЇ З гербіцидів, які належать до підкласу сульфонілсечовинних гербіцидів. Також було описано подвійні мутанти, що складаються з цих двох (документ УМО 98/02527). Однак жоден з цих мутантів не було застосовано для впровадження на ринок сортів буряків, оскільки рівень толерантності до інгібуючих АЇ 5 гербіцидів у цих мутантах був недостатньо високим для агрономічного застосування.
У публікації Зіоидаага еї аї. (1990), 9. Сеї! Віоспет., 5,иррі. 14Е, 310, описується виділення мутантів АГЗ у культурі тетраплоїдних клітин цукрового буряка. Було виділено два різні АЇ 5 гени (АГ 5 І та АГ З ІЇ), які відрізнялися лише в амінокислотній позиції 37. Мутант 1 містив у його
АЇ З І гені 2 мутації, а мутант 2 містив З мутації в його АГ з ІІ гені. Після відокремлення мутацій для визначення конкретної мутації, яка має забезпечувати резистентність до інгібітора АЇ 5, було виявлено, що АЇ 5, синтезована з рекомбінантної Е. соїї, була резистентною до гербіцидів, якщо містила точкову мутацію в кодоні Тгр 574 (згідно з нумерацією послідовності Агарідорзів
Іаїїапа, яка застосовується в літературі, з метою порівняння всіх мутантів АЇ 5) - що дорівнює позиції 569 послідовності АЇ 5 буряка, що веде до заміни амінокислоти "Тгтр" на амінокислоту "Геи". Автори 5іоидаага еї аІ. не продемонстрували на цукровому буряку, що мутація у позиції 569 будь-якого з АЇ 5 генів цукрового буряка є достатньою для досягнення прийнятного рівня толерантності до інгібуючих АЇ5 гербіцидів. Крім того, Зіоцдаага еї аїЇ. не регенерували і не розглядали рослини цукрового буряка, які включають мутації, включаючи мутацію Тгр - Гей у позиції 569 АЇ 5 цукрового буряка.
На основі цих відомостей Зіоцдаага еї а. побудували вектори трансформації рослин, які містили різні АГ 5 гени, для застосування у трансформації рослин. Однак до нинішнього часу цими або іншими авторами протягом наступних понад 20 років більше не повідомлялося ніяких даних, зокрема, стосовно впливу застосування інгібуючих АЇ 5 гербіцидів до рослин та/або сільськогосподарських площ, з включенням цієї мутації у рослини буряка звичайного, або піддані генній інженерії, або мутовані.
У документі УМО 99/57965 в цілому описуються резистентні до сульфонілсечовини рослини цукрового буряка та способи їх одержання шляхом мутагенезу, викликаного ЕМ5 (етилметансульфонатом).
Однак, крім дослідження, необхідного для одержання таких мутантів, у цій публікації не представлено таких рослин і не описується конкретне розташування у гені АГ 5, яке може бути бо пов'язане з одержанням мутантів, толерантних до інгібуючих АЇ З гербіцидів, а також не розкривається будь-який спосіб їх агрономічного застосування. Крім того, існує висока ймовірність, що при використанні такої високомутагенної сполуки, як ЕМ5, можуть відбуватися різні інші мутації в будь-якому іншому місці геному, які можуть призводити до порушень, аж до нефертильності та/або уповільнення росту одержаних таким чином рослин. Крім того, через хімічну взаємодію з ДНК застосування ЕМ5 може мати пропуски у викликанні специфічних мутацій на зразок перетворення триплету ТОСб на ТО, оскільки ЕМ5 завжди перетворює гуанозин на аденозин.
У деяких видах бур'янів, таких, як Атагапійих, мутація Тгр 574 Гей може бути виявлена у популяціях рослин, які багаторазово піддавалися дії інгібуючих АЇ 5 гербіцидів. Ці мутанти Тгр 574 І ем демонструють високий рівень толерантності до кількох хімічних класів інгібуючих АЇ 5 гербіцидів, таких, як ті, що є вибраними з групи, до якої належать сульфонілсечовини та сульфоніламінокарбонілтриазолінони.
У документі МО 2008/124495 описуються подвійні та потрійні АЇЗ мутанти. Згідно з документом УМО 2009/046334, забезпечувалися специфічні мутації у гені А 5. Однак придатні для агрономічного застосування толерантні до гербіцидів мутанти буряка звичайного, які містять такі мутації згідно з документом УМО 2009/046334, до цього часу не було одержано.
Більш того, зважаючи на те, що, наприклад, з цукрового буряка виробляється близько 20 95 цукру у світі, існує висока потреба у наявності рослин цукрового буряка, які б мали перевагу росту порівняно з високоактивними бур'янами. Таким чином, існує висока потреба у наявності нетрансгенних стосовно АЇ З гена рослин буряка звичайного, включаючи рослини цукрового буряка, які є толерантними до інгібуючих АЇ 5 гербіцидів. Отже, існує потреба у таких нетрансгенних рослинах буряка звичайного, зокрема, рослинах цукрового буряка, які були б толерантними до інгібуючих АЇ 5 гербіцидів на придатному для агрономічного застосування рівні інгібуючих АЇ 5 гербіцидів.
Таким чином, технічна проблема полягає у виконанні цієї потреби.
Даний винахід стосується цієї потреби, а отже, забезпечує як розв'язання технічної проблеми толерантної до інгібуючих АЇ 5 гербіцидів рослини буряка звичайного та її частин, які включають мутацію ендогенного гена ацетолактатсинтази (А 5), причому АЇ5 ген кодує поліпептид АЇ 5, який містить амінокислоту, відмінну від триптофану, у позиції 569 поліпептиду
АЇІ5.
Насіння згідно з даним винаходом було депоновано у МСІМВ (Національній колекції промислових, харчових та морських бактерій), Абегдееп, Великобританія, під номером МСІМВ 41705 12 березня 2010 р.
При застосуванні різних способів селекції можуть бути розроблені високоврожайні комерційні сорти, які мають високу конкурентоспроможність на всіх відповідних ринках, з додатковою стійкою толерантністю до інгібуючих АЇ 5 гербіцидів шляхом використання первісно одержаних мутантних рослин.
Слід зазначити, що у контексті даного опису форми однини також можуть означати множину, якщо чітко не вказано іншого. Таким чином, наприклад, посилання на "реагент" передбачає один або кілька таких різних реагентів, а посилання на "спосіб" передбачає посилання на рівноцінні етапи та способи, відомі спеціалістам уданій галузі, які можуть бути модифіковані або заміщені способами, описаними авторами цього винаходу.
Усі публікації та патенти, наведені в цьому описі є включеними шляхом посилання у повному обсязі. Якщо включені шляхом посилання матеріали суперечать або є несумісними з цим описом, цей опис має пріоритет перед будь-яким з цих матеріалів.
Якщо спеціально не вказано іншого, термін "принаймні", вжитий перед переліком елементів, слід розуміти як такий, що стосується кожного елемента з переліку. Спеціалісти у даній галузі визнають або шляхом звичних експериментів зможуть переконатись у можливості багатьох рівноцінних варіантів втілення описаного винаходу. Ці рівноцінні варіанти охоплюються обсягом даного винаходу.
В усьому тексті цього опису та у представленій нижче формулі винаходу, якщо контекстом не вимагається іншого, слово "включати" та його варіанти, такі, як "включає" та "включаючи", слід розуміти як таке, що означає включення цілого числа або етапу, або групи цілих чисел або етапів, але не виключення будь-якого цілого числа або етапу, або групи цілих чисел або етапів.
Слово "включати" та його варіанти з одного боку і слово "містити" та його аналогічні варіанти з іншого боку можуть вживатися взаємозамінно без надання переваги жодному з них.
Згідно з даним винаходом, одержували рослини буряка, які включають змінений ендогенний
АЇ 5 ген (також відомий як "АНА5" ген), який має точкову мутацію в кодоні Тгр 569 (для буряка звичайного контрольна амінокислотна послідовність А! 5, показана як 5ЕБЕО ІЮ МО: 2; це бо дорівнює позиції 574 контрольної послідовності Агарідорзі5 (паІапа, як показано у БЕО ІЮ МО:
б), і цієї точкової мутації досягали через кілька циклів селекції на спеціально вибраних інгібуючих АГ 5 гербіцидах.
Через те, що рослини В. миїЇдагі5 згідно з даним винаходом одержували шляхом виділення спонтанних клітин мутантних рослин, які були прямо регенеровані до повністю фертильних рослин буряка, які мають точкову мутацію, як описується авторами більш детально. Ці рослини є нетрансгенними стосовно АГ 5 гена.
Крім того, самі рослини згідно з даним винаходом, а також їхнє потомство є фертильними, а отже, можуть використовуватися з метою розведення без будь-яких додаткових маніпуляцій, які можуть спричинювати стрес, викликаний подальшими змінами генетичного середовища. Такі рослини, одержані згідно з застосовуваною авторами цього винаходу процедурою селекції, можуть безпосередньо використовуватися з метою виведення сортів та/або гібридів буряка, які забезпечують агрономічно ефективний рівень толерантності до інгібуючих АЇ 5 гербіцидів, що, таким чином, дозволяє на новому рівні застосовувати заходи боротьби з бур'янами на площах вирощування буряка.
У контексті даного опису термін "трансгенний" означає, що ген, який може бути взятий з того самого або іншого виду, було включено у рослину через відповідний біологічний носій, такий, як
Адгорасієгійт штегїасієпз, або будь-яким іншим фізичним способом, таким, як трансформація протопластів або бомбардування частинками, і цей ген здатен експресуватися в новому середовищі, тобто, у генетично модифікованому організмі (ГМО).
Згідно з вищенаведеним визначенням, термін "нетрансгенний" означає прямо протилежне, тобто, відсутність включення відповідного гена через відповідний біологічний носій, або будь- яким іншим фізичним способом. Однак мутований ген може бути перенесений через запилення, природним шляхом або через процес селекції, для створення іншої рослини, яка не є трансгенною стосовно цього конкретного гена. "Ендогенний" ген означає ген рослини, який не було включено у рослину через застосування технологій генної інженерії.
У контексті даного опису термін "послідовність" означає нуклеотидну(ї) послідовність (послідовності), полінуклеотид(и), нуклеїновокислотну(і) послідовність (послідовності), нуклеїнову(ї) кислоту(и), молекулу нуклеїнової кислоти, пептиди, поліпептиди та білки, залежно від контексту, в якому вжито термін "послідовність".
Терміни "нуклеотиднайї) послідовність (послідовності)", "полінуклеотид(и)", "нуклеїновокислотна(ї) послідовність (послідовності)", "нуклеїнова(ї) кислота(и)", "молекула нуклеїнової кислоти" у контексті даного опису вживаються взаємозамінно і стосуються нуклеотидів, або рибонуклеотидів, або дезоксирибонуклеотидів, або їх комбінації, у полімерній нерозгалуженій формі будь-якої довжини. До нуклеїновокислотних послідовностей належать
ДНК, кДНК, геномні ДНК, РНК, синтетичні форми та змішані полімери, смислові та антисмислові ланцюги, або ж вони можуть містити неприродні або дериватизовані нуклеїнові основи, як може бути легко визначено спеціалістами у даній галузі.
Вжитий у контексті даного опису термін "поліпептид" або "білок" (обидва терміни у контексті даного опису вживаються взаємозамінно) означає пептид, білок або поліпептид, який охоплює амінокислотні ланцюги певної довжини, причому амінокислотні залишки з'єднуються ковалентними пептидними зв'язками. Однак винахід також охоплює пептидоміметики таких білків/поліпептидів, у яких амінокислоту(и) та/або пептидний(ії) зв'язок (зв'язки) замінено функціональними аналогами, а також відмінні від 20-ген-кодованих амінокислоти, такі, як селеноцистеїн. Пептиди, олігопептиди та білки можуть називатися поліпептидами. Термін "поліпептид" також стосується і не виключає модифікацій поліпептиду, наприклад, глікозилування, ацетилування, фосфорилування і т. ін. Такі модифікації належним чином описуються у навчальних посібниках та більш детальних монографіях, а також у дослідницькій літературі. Поліпептид (або білок) у контексті цього опису в оптимальному варіанті означає поліпептид АЇ 5 (або білок АЇ 5) В. миїдагі5 І(ІЗЕО ІЮ МО: 21.
Амінокислотні заміщення охоплюють амінокислотні зміни, в яких амінокислота є заміненою на інший природний амінокислотний залишок. Такі заміщення можуть бути класифіковані як "консервативні", у яких амінокислотний залишок, який міститься у білку АЇ З дикого типу, є заміненим на іншу природну амінокислоту з подібними характеристиками, наприклад Сіує»Аїйа,
МаієчЧеєяї ви, Аврездім, І ув«е»Ага, Аб5пез»СіІп або Рпеє»Ттре»Туг. Заміщення, які охоплюються даним винаходом, також можуть бути "неконсервативними", при яких амінокислотний залишок, присутній у білку АЇ З дикого типу, є заміщеним амінокислотою з іншими властивостями, такою, як природна амінокислота з іншої групи (наприклад, заміщення зарядженої або гідрофобної амінокислоти аланіном). Термін "подібні амінокислоти" у контексті даного опису означає 60 амінокислоти, які мають подібні амінокислотні бокові ланцюги, тобто, амінокислоти, які мають полярні, неполярні або практично нейтральні бокові ланцюги. "Неподібні амінокислоти" у контексті даного опису означають амінокислоти, які мають різні амінокислотні бокові ланцюги, наприклад, амінокислота з полярним боковим ланцюгом не є подібною до амінокислоти з неполярним боковим ланцюгом. Полярні бокові ланцюги зазвичай є присутніми на поверхні білка, де вони можуть взаємодіяти з водним середовищем, яке міститься у клітинах
Стідрофільні" амінокислоти). З іншого боку, "неполярні" амінокислоти зазвичай містяться у центрі білка, де вони можуть взаємодіяти з подібними неполярними сусідніми амінокислотами
Стідрофобними" амінокислотами"). Прикладами амінокислот, які мають полярні бокові ланцюги, є аргінін, аспарагін, аспартат, цистеїн, глутамін, глутамат, гістидин, лізин, серин та треонін (усі є гідрофільними, за винятком цистеїну, який є гідрофобним). Прикладами амінокислот, які мають неполярні бокові ланцюги, є аланін, гліцин, ізолейцин, лейцин, метіонін, фенілаланін, пролін та триптофан (усі є гідрофобними, за винятком гліцину, який є нейтральним).
В цілому при застосуванні термінів АГ 5, А 5І, АНАЗ або АНАФбБІ. спеціалістам у даній галузі відомо, на основі загальних знань та контексту, чи мається на увазі нуклеотидна послідовність або нуклеїнова кислота, чи амінокислотна послідовність або поліпептид, відповідно.
У контексті даного опису термін "ген" означає полімерну форму нуклеотидів будь-якої довжини, або рибонуклеотидів, або дезоксирибонуклеотидів. Термін включає дво- та одноланцюгові ДНК та РНК. Він також охоплює відомі типи модифікацій, наприклад, метилування, "кепи", заміщення одного або кількох з природних нуклеотидів аналогом. В оптимальному варіанті ген включає кодуючу послідовність, яка кодує визначений поліпептид. "Кодуюча послідовність" є нуклеотидною послідовністю, яка транскрибується в мРНК і/або транслюється у поліпептид, коли є поміщеною або перебуває під контролем відповідних регуляторних послідовностей. Межі кодуючої послідовності визначають за старт-кодоном трансляції на 5'-кінці та стоп-кодоном трансляції на 3'-кінці Кодуюча послідовність може включати, крім іншого, мРНК, кДНК, рекомбінантні нуклеїновокислотні послідовності або геномну ДНК, і при цьому за певних обставин можуть бути присутні інтрони.
У контексті цього опису термін "буряк звичайний" (Веїа миЇдагіє) скорочено вказується як "В. миїдагіє". Крім того, в описі вживається термін "буряк". Вищезгадані терміни вживаються взаємозамінно, і їх слід розуміти як такі, що повністю охоплюють культурні форми буряка звичайного, визначені у публікації Рога-ПІоуй (2005) Зошгсев ої депеїїс магіайоп, Сепив5 Веїа. Іп:
Віапсагді Е, Сатрреї! І с, 5Кагасіє Сх М, Оє Віададі М (єдз) Сепеїйс5 апа Вгеєдіпд ої Зидаг Веві.
Зсієпсе РибіївНегв, Епіївїд (МН), О5А, рр 25-33. Подібним чином, наприклад, термін "Агабідорвзів
Інаійапа" скорочено вказується як "А. ІНаііапа". Обидва терміни вживаються взаємозамінно.
Термін "позиція", вжитий згідно з даним винаходом, означає або позицію амінокислоти в описаній авторами амінокислотній послідовності, або позицію нуклеотиду в описаній авторами нуклеотидній послідовності. Термін "відповідний" у контексті даного опису також передбачає, що позиція не лише визначається кількістю попередніх нуклеотидів/амінокислот.
Позиція даного нуклеотиду згідно з даним винаходом, який може бути заміщений, може змінюватися через делеції або додаткові нуклеотиди у будь-якому місці 5'-нетрансльованої ділянки (ТА) АГ 5, включаючи промоторні та/або будь-які інші регуляторні послідовності або ген (включаючи екзони та інтрони). Подібним чином позиція даної амінокислоти згідно з даним винаходом, яка може бути заміщена, може змінюватися через делецію або додавання амінокислот у буд-якому іншому місці поліпептиду АЇ 5.
Таким чином, під "відповідною позицією" згідно з даним винаходом слід розуміти, що нуклеотиди / амінокислоти можуть відрізнятися за вказаним номером, але все одно можуть мати подібні сусідні нуклеотиди / амінокислоти. Вищезгадані нуклеотиди / амінокислоти, які можуть бути замінені, видалені або додані, також охоплюються терміном "відповідна позиція".
Для того, щоб визначити, чи відповідає нуклеотидний залишок або амінокислотний залишок у даній нуклеотидній/амінокислотній послідовності АЇ5З певній позиції у нуклеотидній
БО послідовності ФЕО ІЮО МО: 1 або амінокислотній послідовності ФЕО ІЮ МО: 2, спеціалісту даній галузі може застосовувати засоби та способи, добре відомі спеціалістам у даній галузі, наприклад, вирівнювання, ручні або за допомогою комп'ютерних програм, таких, як ВІ А5Т (Айз5СсНпиі єї аї. (1990), Чоштаї ої Моїесшіаг Віоіоду, 215,403-410), тобто, Вавзіс І оса! АІїдптепі зЗеагсі Тоої, або СіиетаіМу (Тпотрзоп вї а). (1994), Мисівїс Асіа Вев., 22,4673-4680), або будь-якої іншої прийнятної програми, яка є прийнятною для створення лінійних послідовностей.
ЗЕО ІЮ МО: 1 представляє нуклеотидну послідовність, яка кодує АЇ 5 дикого типу буряка звичайного. ФЕО ІО МО: 2 представляє амінокислотну послідовність буряка звичайного, яка походить від БЕО ІЮ МО: 1.
Відповідним чином, кодон у позиції 1705-1707 нуклеотидної послідовності 560) ІЮО МО: 1 кодує амінокислоту у позиції 569 (тобто, амінокислоту "Тгр" згідно з трилітерним кодом або "Му" згідно з однолітерним кодом) 5ЕО ІО МО: 2.
В альтернативному варіанті, для того, щоб визначити, чи відповідає нуклеотидний залишок або амінокислотний залишок у даній нуклеотидній/амінокислотній послідовності АЇ 5 певній позиції у нуклеотидній послідовності 5ЕО ІО МО: 1, може використовуватися нуклеотидна послідовність, яка кодує АЇ 5 дикого типу А. ІПпаїїапа, яку показано у 5ЕО ІЮО МО: 5, 5ЕО ІЮ МО: 6 представляє амінокислотну послідовність А. ІНайіапа, яка походить від 5ЕО 10 МОБ.
Відповідним чином, кодон у позиції 1720-1722 нуклеотидної послідовності 5ЕО І МО: 5 кодує амінокислоту у позиції 574 (тобто, амінокислоту "Тгр" згідно з трилітерним кодом або "Му" згідно з однолітерним кодом) 5ЕО ІО МО: 6.
Якщо нуклеотидна послідовність АЇ 5 дикого типу А. ІПаійапа, показана у 5ЕО ІЮО МО: 5, застосовується як контрольна послідовність (як описується у більшості літературних джерел, а отже, застосовується для полегшення порівняння з такими відомими послідовностями), кодон, який кодує амінокислоту, відмінну від триптофану, перебуває у позиції, що відповідає позиції 1720-1722 нуклеотидної послідовності АЇ 5 гена А. ІНаїІйапа, показаній у 5ЕО 10 МО: 5.
Однак 5ЕО ІО МО: 1 віддають перевагу як контрольній нуклеотидній послідовності, а 5ЕО ІЮ
МО: 2 віддають перевагу як контрольній амінокислотній послідовності в усіх наступних описах.
Представлена нижче таблиця являє собою огляд контрольних послідовностей, які застосовують при визначенні позиції точкової мутації у нуклеотидній послідовності або заміщення в амінокислотній послідовності:
ЗЕСОІЮ МО: 0000000 Типпослідовностіїд/////// | Вид (| 6 амінокислотнапослідовність А Шаїйапа:
Таким чином, у будь-якому разі рівноцінна позиція може бути визначена через вирівнювання та співставлення з контрольною послідовністю, такою, як ХЕО ІЮ МО: 1 або 5 (нуклеотидна послідовність) або 5ЕО ІО МО: 2 або 6 (амінокислотна послідовність).
З огляду на розбіжності між АГ 5 геном дикого типу В. миїЇдагі5 та АЇ 5 геном, який міститься у рослині В. миЇдагі5 згідно з даним винаходом, АЇ З ген (або полінуклеотидна чи нуклеотидна послідовність), що міститься в рослині В. миЇдагіє згідно з даним винаходом, також може
Зо вважатися "мутантним АГ 5 геном", "мутантним АГ 5 алелем", "мутантним АГ 5 полінуклеотидом" і т. ін. Таким чином, в у сьому тексті цього опису терміни "мутантний алель", "мутантний АГ 5 алель", "мутантний АЇ 5 ген" або "мутантний АГ 5 полінуклеотид" вживаються взаємозамінно.
Якщо не вказано іншого, ці терміни стосуються нуклеотидної послідовності, яка включає кодон, який кодує амінокислоту, відмінну від триптофану, у позиції, яка відповідає позиції 1705- 1707 нуклеотидної послідовності АГ 5 гена В. миЇдагіє5, показаної у БЕО ІЮ МО: 1. Якщо йдеться про контрольну послідовність А. (Паіапа, показану у 5ЕО ІО МО: 5, позиція кодону відповідає 1720-1722.
Подібним чином ці терміни стосуються нуклеотидної послідовності, яка кодує білок АЇ 5, який у позиції, яка відповідає позиції 569 амінокислотної послідовності білка А! 5 буряка звичайного, показаній у 560 ІЮО МО: 2, має амінокислоту, відмінну від триптофану. Якщо йдеться про контрольну послідовність А. (Ппаіапа, показану у 5ЕО ІЮО МО: 6, позиція відповідає 574. "Амінокислота, відмінна від триптофану" (позначається як "Тгр" у трилітерному коді або "Му" у рівноцінному однолітерному коді) означає будь-яку природну амінокислоту, відмінну від триптофану. До цих природних амінокислот належать аланін (А), аргінін (К), аспарагін (М), аспартат (0), цистеїн (С), глутамін (С), глутамат (ЕЕ), гліцин (С), гістидин (Н), ізолейцин (1), лейцин (ГІ), лізин (К), метіонін (М), фенілаланін (Р), пролін (Р), серин (5), треонін (Т), тирозин (У) або валін (М).
Однак в оптимальному варіанті амінокислота, відмінна від триптофану (що належить до групи нейтрально-полярних амінокислот), є амінокислотою з фізико-хімічними властивостями, відмінними від властивостей триптофану, тобто, належить до будь-якої з амінокислот, які виявляють нейтрально-неполярні, кислотні або основні властивості. У ще кращому варіанті амінокислоту, відмінну від триптофану, вибирають з групи, до якої належать аланін, гліцин,
ізолейцин, лейцин, метіонін, фенілаланін, пролін, валін та аргінін. У ще кращому варіанті вищезгадана амінокислота є нейтрально-неполярною амінокислотою, такою, як аланін, гліцин, ізолейцин, лейцин, метіонін, фенілаланін, пролін або валін. Особливу перевагу серед вищезгаданих амінокислот віддають таким, як аланін, гліцин, ізолейцин, лейцин, валін. Ще кращими вважаються гліцин та лейцин. Найбільшу перевагу віддають лейцинові.
Натомість, якщо не вказано іншого, терміни "алель дикого типу", "АГ5 алель дикого типу", "А! 5 ген дикого типу" або "полінуклеотид АЇ5 дикого типу" стосуються нуклеотидної послідовності, яка кодує білок АЇ 5, у якому відсутнє МУ569 заміщення відносно 5ЕО ІЮ МО: 2 (або М/574 заміщення відносно ЗЕО ІЮ МО: 6). Ці терміни також стосуються нуклеотидної послідовності, яка у позиції, що відповідає позиції 1705-1707 нуклеотидної послідовності А! 5 гена В. миЇдагі5, показаної у БЕО ІЮО МО: 1, включає кодон, який кодує амінокислоту, відмінну від триптофану.
Такий "алель дикого типу", "АЇЗ алель дикого типу", "АЇ5З ген дикого типу" або "полінуклеотид АЇ 5 дикого типу" необов'язково може включати мутації, відмінні від мутації, що викликає МУ569 заміщення.
По суті, якщо йдеться про АГ 5 ген, єдина розбіжність між рослиною В. миЇдагі5 дикого типу та рослиною В. миїЇдагі5 згідно з даним винаходом в оптимальному варіанті (і головним чином) полягає в тому, що у зазначеній позиції (зокрема, у позиції, яка відповідає позиції 1705-1707 нуклеотидної послідовності АГ 5 гена В. миЇдагі5, показаній у БЕО ІЮ МО: 1), рослина В. миЇдагів5 згідно з даним винаходом включає кодон, який кодує амінокислоту, відмінну від триптофану, в оптимальному варіанті кодон кодує амінокислоту, як вказано у будь-яких інших розділах цього опису. Однак, як було згадано вище, можуть бути наявними інші розбіжності, такі, як додаткові мутації, між АГ 5 алелем дикого типу та мутантним АГ 5 алелем, як вказується авторами. Втім, ці додаткові розбіжності не є релевантними за наявності розбіжностей, які пояснювалися вище.
Отже, М/569 заміщення (або М/574 заміщення, якщо амінокислотну послідовність АЇ 5 А.
Іаїйапа згідно з БЕО ІЮ МО: 6 використовують як контрольну) є результатом зміни кодону в позиції, яка відповідає позиції 1705-1707 нуклеотидної послідовності, показаної у ЕО ІЮ МО: 1 (або у позиції, яка відповідає позиції 1720-1722 нуклеотидної послідовності, показаної у ЗЕО ІЮ
МО: 5, відповідно).
Зо В оптимальному варіанті заміщення у позиції 569 є М/--їЇ. заміщенням, де "І" кодується будь- яким з кодонів "СТІ", "СТО", "СТА", "СТО", "ТТА" або "ТТО".
У найкращому варіанті заміщення у позиції 569 є М/--Ї заміщенням через трансверсію нуклеотиду "с" у позиції, яка відповідає позиції 1706 нуклеотидної послідовності, показаної у
ЗЕО ІЮО МО: 1 (або у позиції, яка відповідає позиції 1721 нуклеотидної послідовності, показаної у
ЗЕО ІЮ МО: 5, відповідно) на нуклеотид "Т". Відповідним чином, кодон у позиції, яка відповідає позиції 1705-1707 нуклеотидної послідовності, показаної у ЗЕО ІЮ МО: 1 (або у позиції, яка відповідає позиції 1720-1722 нуклеотидної послідовності, показаної у ЗЕО ІО МО: 5, відповідно) змінюється з "ТО" на "ТТ". Якщо кодон "Тс" кодує триптофан, то кодон "ТТ" кодує лейцин.
Отже, у варіанті втілення, якому віддають найбільшу перевагу, даний винахід забезпечує рослину буряка звичайного, яка включає у нуклеотидній послідовності ендогенного АЇ 5 гена кодон ТТ (який кодує лейцин) у позиції, яка відповідає позиції 1705-1707 нуклеотидної послідовності мутантного АЇ 5 гена В. миїЇдагі5, показаної у ЗЕО ІЮ МО: 1, причому вищезгадана нуклеотидна послідовність включає 5ЕО ІЮ МО: З (або у менш бажаному варіанті складається з неї).
Рослини В. миїдагі5, які кодують поліпептид АЇ 5, який у позиції, що відповідає позиції 569 амінокислотної послідовності білка АЇ З буряка звичайного, показаної у 5ЕО ІЮ МО: 2, має амінокислоту, відмінну від триптофану, в оптимальному варіанті включають у нуклеотидній послідовності ендогенного АЇ 5 гена кодон, який кодує амінокислоту, відмінну від триптофану, у позиції, яка відповідає позиції 1705-1707 нуклеотидної послідовності АЇЗ гена В. миїдагів, показаної у БЕО ІЮО МО: 1.
Термін "АГ 5" або "АНА5" ген В. миЇдагі5 також охоплює нуклеотидні послідовності В. миїдагів, які є принаймні на 90, 95, 97, 98 або 99 95 ідентичними нуклеотидній послідовності А 5 В. миЇдагі5 згідно з з«ЕО ІЮ МО: 1 або 3, причому ці на 60, 70, 80, 90, 95, 97, 98 або 99 95 ідентичні нуклеотидні послідовності у позиції яка відповідає позиції 1705-1707 нуклеотидної послідовності ЗЕО ІО МО: 1, включають кодон, який кодує амінокислоту, відмінну від триптофану.
Подібним чином ці принаймні на 90, 95, 97, 98 або 99 95 ідентичні нуклеотидні послідовності кодують поліпептид АЇ 5, який у позиції, яка відповідає позиції 569 5ЕБО ІО МО: 2, включає амінокислоту, відмінну від триптофану. Вищезгадані ідентичні нуклеотидні послідовності бо кодують білок АЇ 5, який зберігає активність, як описано авторами, у ще кращому варіанті кодований таким чином поліпептид АЇ З є толерантним до одного або кількох інгібуючих АЇ 5 гербіцидів, як описано авторами. Вищезазначений термін також охоплює алельні варіанти та гомологи, які кодують поліпептид АЇ 5, який в оптимальному варіанті є толерантним до одного або кількох інгібуючих АГ 5 гербіцидів, як описано авторами.
Для того, щоб визначити, чи має нуклеїновокислотна послідовність певний ступінь ідентичності з нуклеотидними послідовностями згідно зданим винаходом, спеціалісту даній галузі може застосовувати засоби та способи, добре відомі спеціалістам у даній галузі, наприклад, вирівнювання, ручні або за допомогою комп'ютерних програм, таких, як ті, що вказуються нижче у зв'язку з визначенням терміну "гібридизація" та ступенями гомології.
Наприклад, може застосовуватися ВІ А5Т, тобто, Вавіс І оса! АІїдпітепі 5вагсі Тоої (АїЇївспиї,
Мисі. Асіаз Невз. 25 (1997), 3389-3402; АїЇ5СПиї, У. Мої. Емої. 36 (1993), 290-300; АБС, 9. Мої.
Віої. 215 (1990), 403-410), для пошуку місцевих збігів послідовностей. ВІАЗТ забезпечує вирівнювання як нуклеотидних, так і амінокислотних послідовностей для визначення подібності послідовностей. Через місцевий характер вирівнювання програма ВІ А5Т є особливо придатною для визначення точних збігів або для розпізнавання подібних послідовностей. Основною одиницею результату роботи алгоритму ВІ А5Т є пара сегментів з високою подібністю (Нідй- зсогіпд Зедтепі Раї-Н5Р). НЗР складається з двох фрагментів послідовності довільної, але однакової довжини, збіг яких у цьому місці є максимальним, і для яких показник збігу дорівнює пороговому або критичному показникові, встановленому користувачем, або перевищує його.
Підхід з застосуванням ВГА5БТ передбачено для пошуку НОР між послідовністю запиту та послідовністю бази даних для оцінки статистичної значущості будь-яких виявлених збігів і для повідомлення лише про ті збіги, які відповідають вибраному користувачем порогові значущості.
Параметр Е визначає статистично значущий поріг для збігів послідовності зі звітною базою даних. Е представляє верхню межу очікуваної частоти ймовірності НОР (або набору Н5Р) у межах пошуку в усій базі даних. Будь-яка послідовність бази даних, збіг якої відповідає Е, повідомляється у результаті виконання програми.
Аналогічні комп'ютерні технології з застосуванням ВІ АЗТ (Аїї5спи! (1997), ос. сі.; Ак5спиі (1993), Іос. сії; Акбспиці! (1990), Іос. сії.) використовують для пошуку ідентичних або споріднених молекул у базах даних нуклеотидів, таких, як СепВапк або ЕМВІ. Цей аналіз є значно
Зо швидшим, ніж гібридизація на основі багатошарових мембран. Крім того, чутливість комп'ютерного пошуку може бути змінена для визначення категорії будь-якої відповідності як точної або подібної. Основою цього пошуку є показник добутку, що визначається як:
Фо ідентичності послідовності х 96 максимальний показник ВІ А5Т 100 з врахуванням як ступеня подібності між двома послідовностями, так і довжини збігу послідовностей. Наприклад, при показнику добутку 40 відповідність має точність у межах похибки 1-2 90; а при 70 відповідність є точною. Подібні молекули зазвичай розпізнають шляхом відбору молекул з низькими показниками добутку від 15 до 40, хоча нижчі показники можуть визначати споріднені молекули.
Термін "поліпептид АЇ 5" або "АНА5" В. миЇдагі5 також охоплює амінокислотні послідовності, які є принаймні на 90, 95, 97, 98 або 99 95 ідентичними амінокислотній послідовності АГ 5 згідно з ЗЕО ІЮО МО: 2 або 4, причому ці принаймні на 90, 95, 97, 98 або 99 95 ідентичні амінокислотні послідовності у позиції, яка відповідає позиції 569 5ЕО ІО МО: 2, включають амінокислоту, відмінну від триптофану. Вищезгадані ідентичні амінокислотні послідовності зберігають активність АГ 5, як описано авторами, у ще кращому варіанті поліпептид АГ 5 є толерантним до інгібуючих АЇ 5 гербіцидів, як описано авторами.
Активність АЇЗ у разі необхідності може бути виміряна згідно з аналізом, описаним у публікації Зіпой (1991), Ргос. Май. Асай. Зсі. 88:4572-4576.
Однак вказані авторами нуклеотидні послідовності АЇ 5, які кодують поліпептид АЇ5, в оптимальному варіанті забезпечують толерантність до одного або кількох інгібуючих АЇ5 гербіцидів (або, навпаки, меншу чутливість до інгібуючого АЇ 5 гербіциду), як описано авторами.
Це відбувається через точкову мутацію, що веде до заміщення амінокислот, як описано авторами.
Відповідним чином, толерантність до інгібуючого АЇЗ гербіциду (або, навпаки, менша чутливість до інгібуючого АЇ 5 гербіциду) може вимірюватися шляхом порівняння активності
АЇІ 5, одержаної з екстрактів клітин рослин, які містять мутовану послідовність АЇ 5, та рослин з відсутністю мутованої послідовності АЇ 5 у присутності інгібуючого АЇ 5 гербіциду, як описується, наприклад, у публікації Зіпой еї а! (1988) 19. Спготацодг, 444, 251-2611.
Однак ще кращий аналіз активності для поліпептиду АГ5, який кодується нуклеотидною послідовністю, яка включає кодон, який кодує амінокислоту, відмінну від триптофану у позиції,
яка відповідає позиції 1705-1707 нуклеотидної послідовності АЇ 5 гена В. миїЇдагі5, показаної у
ЗЕО ІЮ МО: 1, може здійснюватися таким чином:
Кодуючу послідовність дикого типу буряка звичайного та мутантної рослини В. мпцдагі5 клонують, наприклад, у вектори Момадеп рЕТ-32а(ж) і вектори трансформують, наприклад, в
АР494 ЕзсПпегіспіа соїї згідно з інструкціями виробника. Бактерії в оптимальному варіанті вирощують при 37 "С у середовищі під тиском відбору, наприклад, в І В-середовищі, яке містить 100 мг/л карбеніциліну та 25 мг/л канаміцину, стимулюють, використовуючи, наприклад, 1 мМ ізопропіл-В-ЮО-тіогалактопіранозиду при оптимальному ОЮвоо приблизно 0,6, культивують протягом приблизно 16 годин, в оптимальному варіанті при 18С і збирають шляхом центрифугування. Згустки бактерій ресуспендують у 100 мМ буфера з фосфату натрію, рН 7,0, який містить 0,1 мМ тіамінпірофосфату, 1 мМ Мдеї» та 1 мкМ ЕАб0, у концентрації 1 г сирої маси на 25 мл буфера і руйнують шляхом ультразвукової обробки.
Неочищений білковий екстракт, одержаний після центрифугування, використовують для вимірювання активності АЇ 5.
Після цього здійснюють аналізи АЇ5, наприклад, у 96б-лункових мікротитрувальних планшетах, застосовуючи модифікацію процедури, описаної у публікації Кау (1984), Ріапі
РНузіоіІ., 75, 827-831. Реакційна суміш в оптимальному варіанті містить 20 мМ буфера з фосфату калію, рН 7,0, 20 мМ пірувату натрію, 0,45 мМ тіамінпірофосфату, 0,45 мМ Мас», 9
МКМ ЕАбО, фермент АГ 5 та інгібітори АГ З у різних концентраціях у кінцевому об'ємі приблизно 90 мкл.
Аналізи починають шляхом додавання ферменту і завершують в оптимальному варіанті після 75 хв інкубації при 30 "С шляхом додавання 40 мкл 0,5 М Н25О»х. Приблизно через 60 хв при кімнатній температурі додають приблизно 80 мкл розчину 1,4 95 а-нафтолу та 0,14 95 креатину в 0,7 М Ммаон і після додаткових приблизно 45 хв інкубації при кімнатній температурі визначають оптичну густину при 540 нм. Показники рібо для інгібування АЇ З визначали, як описано у публікації Кау (1984)), Ріапі РВузіоІ,, 75, 827-831, застосовуючи програму апроксимації кривих по точках ХІ Р Ехсеї, додаткова версія 4.3.1, від ІЮ Визіпе55 БОЇШІОПп5
Їіткеа, сийагога, Великобританія.
При використанні рослин активність АЇ5 в оптимальному варіанті визначають в екстрактах клітин або екстрактах листя дикого типу та екстрактах клітин або екстрактах листя одержаного мутанта В. миїдагіх у присутності інгібуючих АЇ 5 гербіцидів у різних концентраціях, в оптимальному варіанті - сульфонілсечовинних гербіцидів або сульфоніламінокарбонілтриазолінонових гербіцидів, у ще кращому варіанті - у присутності інгібуючого АЇ 5 гербіциду "форамсульфурон" у різних концентраціях. Таким чином, АЇ5 в оптимальному варіанті видобувають з листя цукрового буряка або культур тканин цукрового буряка, як описано у публікації Кау (1984) іп Ріапі Рвпузіої! 75: 827-831.
В оптимальному варіанті рослини В. миїЇдагі5 згідно з даним винаходом є менш чутливими до інгібітора АЇ5, у ще кращому варіанті вони є принаймні у 100 разів менш чутливими, у ще кращому варіанті - у 500 разів, у ще кращому варіанті - у 1000 разів, і у найкращому варіанті - у 2000 разів. | навпаки, менш чутливі у контексті цього опису можуть розглядатись як "більш толерантні" або "більш резистентні". Подібним чином "більш толерантні" або "більш резистентні" можуть, у свою чергу, розглядатись як "менш чутливі".
Наприклад, рослини В. миїЇдагіз5 згідно з даним винаходом, зокрема, рослина В. миїдагів, описана у супровідних Прикладах, є принаймні у 2000 разів менш чутливими до інгібуючого АЇ 5 гербіциду форамсульфурону (належить до підкласу інгібіторів А! З "сульфонілсечовинні гербіциди") порівняно з ферментом дикого типу.
В оптимальному варіанті рослини В. миїЇдагі5 згідно з даним винаходом є менш чутливими різних представників інгібуючих АЇ5 гербіцидів, таких, як сульфонілсечовинні гербіциди, сульфоніламінокарбонілтриазолінонові гербіциди та імідазолінонові гербіциди. В оптимальному варіанті вибирають сульфонілсечовинні гербіциди та сульфоніламінокарбонілтриазолінонові гербіциди, до яких вищезгадані рослини є менш чутливими. У варіанті, якому віддають особливу перевагу, рослини В. миЇдагіє5 згідно з даним винаходом є менш чутливими до інгібуючого АЇ 5 гербіциду форамсульфурону (сульфонілсечовинний гербіцид), окремо або у комбінації з одним або кількома іншими інгібуючими АЇ5З гербіцидами, або з підкласу сульфонілсечовинних гербіцидів, або з будь-якого іншого підкласу інгібуючих АЇ 5 гербіцидів.
Отже, рослини В. миїЇдагі5 згідно з даним винаходом, які в оптимальному варіанті є менш чутливими до інгібуючого АЇЗ гербіциду, так само можуть характеризуватись як "більш толерантні до інгібітора АГ 5" (тобто, толерантні до інгібітора А З рослини).
Таким чином, "толерантна до інгібітора АГ 5" рослина означає рослину, зокрема, рослину В. 60 мцідагі5, яка є більш толерантною до принаймні одного інгібуючого АЇ 5 гербіциду на рівні, який зазвичай інгібує ріст нормальної рослини дикого типу, в оптимальному варіанті інгібуючий АЇ 5 гербіцид стримує ріст нормальної рослини або рослини дикого типу. Вищезгадана нормальна рослина або рослина дикого типу не включає у нуклеотидній послідовності будь-якого алеля ендогенного АЇ 5 гена кодон, який кодує амінокислоту, відмінну від триптофану, у позиції, яка відповідає позиції 1705-1707 нуклеотидної послідовності АЇ 5 гена В. миЇдагі5, показаної у зЕО
ІО МО: 1.
Вищезгадана нуклеотидна послідовність в цілому також може характеризуватись як "голерантна до інгібуючого АЇ 5 гербіциду" нуклеотидна послідовність. Під "голерантною до інгібуючого АЇ 5 гербіциду нуклеотидною послідовністю" слід розуміти молекулу нуклеїнової кислоти, яка включає нуклеотидну послідовність, яка включає принаймні мутацію, яка в результаті забезпечує кодон, який кодує амінокислоту, відмінну від триптофану, відносно білка
АЇ 5, який не має у позиції, яка відповідає позиції 569 амінокислотної послідовності білка АГ 5 В. миЇдагіз, показаної у 5ЕБЕО ІО МО: 2, амінокислоти, відмінної від триптофану, причому вищезгадана принаймні одна мутація в результаті забезпечує експресію білка АЇ 5, менш чутливого до інгібуючого АЇ 5 гербіциду.
У разі "толерантного до гербіциду білка АЇ 5" слід розуміти, що такий білок А 5 демонструє вищу активність АЇ З відносно активності АЇ 5 білка АЇ З дикого типу у присутності принаймні одного інгібуючого АЇ З гербіциду, який перешкоджає активності АЇ 5, і при концентрації або рівні вищезгаданого гербіциду, який інгібує активність АГ 5 білка АЇ 5 дикого типу.
Подібним чином терміни "інгібуючий(і) А З гербіцид(и)" або просто "інгібітор(и) АГ 5" вживаються взаємозамінно. У контексті даного опису "інгібуючий АЇ 5 гербіцид" або "інгібітор
АЇ 5" не обмежується одним гербіцидом, який перешкоджає активності ферменту АЇ 5. Таким чином, якщо іншого не вказано і не випливає з контексту, "інгібуючий АЇ5 гербіцид" або "інгібітор АГ5" може бути одним гербіцидом або сумішшю двох, трьох, чотирьох або більшої кількості гербіцидів, відомих спеціалістам у даній галузі, в оптимальному варіанті - таких, як зазначено в цьому описі, кожен з яких перешкоджає активності ферменту АЇ 5.
Несподівано було виявлено, що навіть одна точкова мутація згідно з даним винаходом забезпечує агрономічно ефективний і стійкий рівень толерантності до інгібуючих АГ 5 гербіцидів у рослинах В. миїЇдагі5, а також у їхньому потомстві, зокрема, при встановленні гомозиготності.
Зо Порівняно з толерантними до гербіцидів рослинами буряка звичайного з однаковим генетичним середовищем, у яких така мутація є присутньою лише гетерозиготно, толерантна до гербіцидів рослини буряка звичайного, яка є гомозиготною щодо мутації, демонструє вищий агрономічний рівень толерантності до інгібуючих АЇ 5 гербіцидів.
Отже, даний винахід стосується толерантної до інгібуючих АЇ5 гербіцидів рослини буряка звичайного, яка має мутацію ендогенного гена ацетолактатсинтази (АЇІ 5), причому АЇ 5 ген кодує поліпептид АЇ5, який містить амінокислоту, відмінну від триптофану, у позиції 569 поліпептиду А! 5. Відповідна мутація може бути присутньою гетерозиготно і в оптимальному варіанті може бути єдиною мутацією АЇ 5 гена. У ще кращому варіанті відповідна мутація може бути гомозиготно присутньою, і у найкращому варіанті відповідна мутація є гомозиготно присутньою як єдина мутація ендогенного АЇ 5 гена.
Також не варто очікувати, що лише одна мутація АЇ 5 гена у буряку звичайному має бути достатньою, оскільки, наприклад, у документі УМО 2010/037061 вказано, що подвійні або потрійні мутанти у гені АЇ5 є необхідними для надання агрономічно ефективної толерантності до інгібуючих АГ 5 гербіцидів.
Отже, рослини В. миЇдагіз та їх частини, які є гетерозиготними щодо мутації, є менш бажаними, але вони все ж охоплюються даним винаходом і можуть бути достатніми для певних режимів внесення та/або певних навколишніх умов. Також даний винахід охоплює рослини, які містять принаймні в одному алелі ендогенного АЇ З гена кодон, який кодує амінокислоту, відмінну від триптофану, в оптимальному варіанті - лейцин у позиції, яка відповідає позиції 1705-1707 нуклеотидної послідовності АЇ 5 гена В. миЇдагі5, показаній у БЕО ІЮ МО: 1, і містять один (у разі диплоїдії) або кілька додаткових алелів (у разі поліплоїдії), які мають одну або кілька додаткових мутацій в ендогенному АЇ 5 гені.
Відповідним чином, у контексті цього опису термін "гетерозиготний" або "гетерозиготно" означає, що рослина згідно з даним винаходом має різні алелі у конкретному локусі, зокрема, у локусі АГ 5 гена. "Гомозиготний" або "гомозиготно" означає, що рослина згідно з даним винаходом має дві копії одного алеля на різних ланцюгах ДНК, зокрема, у локусі АЇ 5 гена.
У контексті даного опису, якщо чітко не вказано іншого, термін "рослина" означає рослину на будь-якій стадії розвитку.
В оптимальному варіанті рослина буряка звичайного згідно з даним винаходом є ортоплоїдною або анортоплоїдною. Ортоплоїдна рослина в оптимальному варіанті може бути гаплоїдною, диплоїдною, тетраплоїдною, гексаплоїдною, октаплоїдною, декаплоїдною або додекаплоїдною, тоді, як анортоплоїдна рослина в оптимальному варіанті може бути триплоїдною або пентаплоїдною.
Частини рослин можуть приєднуватися або відокремлюватися від цілої інтактної рослини.
До таких частин, крім інших, належать органи, тканини та клітини рослини, в оптимальному варіанті - насіння.
Відповідним чином, рослина В. миїЇдагі5 згідно з даним винаходом є нетрансгенною стосовно ендогенного АЇ 5 гена. Звичайно, чужорідні гени можуть бути перенесені у рослину або шляхом генної інженерії, або традиційними способами, такими, як схрещування. Вищезгадані гени можуть бути генами, які надають толерантності до гербіцидів, в оптимальному варіанті - толерантності до гербіцидів, відмінної від толерантності до інгібуючих АЇ 5 гербіцидів, генами, які поліпшують врожайність, генами, які поліпшують резистентність до біологічних організмів, та/або генами, пов'язаними з модифікацією складу.
В іншому аспекті даний винахід стосується способу одержання рослини буряка звичайного та її частин, який включає такі етапи: (а) піддавання калюсів, в оптимальному варіанті - з цукрового буряка, дії приблизно 107 М - 109 М інгібуючого АГ 5 гербіциду, в оптимальному варіанті - форамсульфурону; (5) відбір колоній клітин, які можуть рости у присутності до 3х105 М інгібуючого АЇ5 гербіциду, в оптимальному варіанті - форамсульфурону |(САЗ КМ 173159-57-4|; (с) регенерація пагонів у присутності інгібуючого АЇ 5 гербіциду, в оптимальному варіанті - форамсульфурону; (а) відбір регенерованих паростків за допомогою інгібуючого АЇ 5 гербіциду, в оптимальному варіанті - форамсульфурону, йодосульфурон-метил-натрію (СА ЕМ 144550-36-7| та/або їх суміші, причому доза форамсульфурону в оптимальному варіанті є еквівалентною 7-70 г а.і./га, і доза йодосульфурон-метил-натрію в оптимальному варіанті є еквівалентною 1-10 г а.і./га.
В іншому аспекті регенеровані паростки, одержані згідно з вищезазначеними процесами (а) до (4), можуть використовуватися для подальшого одержання рослин буряка звичайного
Зо шляхом застосування таких етапів з (е) по (іт): (е) вегетативне розмноження окремих паростків з етапу (4) для збереження різних позитивних варіантів шляхом створення лінії клітин (клону) кожного толерантного до інгібуючих
АЇ 5 гербіцидів паростка; (Ї) довготривале зберігання кожного створеного клону у вегетативному стані; (9) перенесення клонованих рослин кожного клону з місця довготривалого зберігання до теплиці; (п) яровизація та адаптація у яровизаційних камерах для викликання цвітіння; () перенесення яровизованих рослин до приміщень для вирощування (з регулюванням температури та світла); () відбір рослин з найкращим летом пилку з клонів з найкращим цвітінням для схрещування з кастрованими рослинами елітної, але чутливої до інгібуючого АЇЗ гербіциду лінії для подолання негативного впливу соматоклонального варіанта на генеративну фертильність (чоловічу та жіночу) паростків з етапу (4); (К) зворотне схрещування з елітною лінією до відновлення фертильності та досягнення самозапиленими гетерозиготними рослинами гомозиготного стану; () одержання тест-кросів з чутливим до інгібуючого АЇ5 гербіциду партнером та самозапиленого насіння кожної підданої зворотному схрещуванню лінії для оцінки у польових умовах; (т) внесення агрономічно прийнятних доз різних інгібуючих АЇ5 гербіцидів для відбору найбільш ефективної лінії, в оптимальному варіанті - у її гомозиготному стані.
Лінії, одержані згідно з вищезазначеними етапами з (а) по (т), складають основу для виведення комерційних сортів через дотримання процедур, відомих серед селекціонерів, із залученням технологій молекулярної селекції (такими, як схрещування з використанням маркера або відбір з використанням маркера) для прискорення процесів та забезпечення належного відбору рослин або для одержання мутації в її гомозиготній формі, або, у разі наявності однієї або кількох мутацій у різних місцях кодуючого ендогенного АЇ З гена, для виконання належного відбору гетерозиготних рослин, які містять принаймні в одному з алелів
УУ569 мутацію згідно з даним винаходом (огляд міститься у публікації Вегігапа С.У. еї аї. (2008),
РпИЇ. Тгапв. В. 5о0с, В., 363, 557-572).
Калюси одержують, застосовуючи засоби та способи, загальновідомі серед спеціалістів у даній галузі, наприклад, як описано у супровідних Прикладах.
Насіння, одержане на етапі (т), було депоновано у МСІМВ (Національній колекції промислових, харчових та морських бактерій), Абегдееп, Великобританія, під номером МСІМВ 41705.
В іншому аспекті даний винахід стосується способу одержання толерантної до гербіцидів рослини буряка звичайного та її частин, який включає (їЇ) мутацію ендогенного гена ацетолактатсинтази (АГ 5), причому АЇ 5 ген кодує поліпептид АЇ 5, який містить амінокислоту, відмінну від триптофану, у позиції 569 поліпептиду АЇ 5, та (ії) додаткову мутацію в ендогенному
АЇ 5 гені, причому спосіб включає такі етапи: (а) одержання толерантної до інгібуючих АЇ5 гербіцидів рослини буряка звичайного, яка включає мутацію ендогенного гена ацетолактатсинтази (АЇ5), причому АЇ5 ген кодує поліпептид АЇ 5, який містить амінокислоту, відмінну від триптофану, у позиції 569 поліпептиду
АЇ 5 (батьківська рослина А); (5) схрещування батьківської рослини А з рослиною буряка звичайного (батьківська рослина
В), яка містить одну або кілька додаткових мутацій в ендогенному АГ гені у позиціях, відмінних від амінокислотної позиції 569; (с) одержання потомства буряка звичайного, яке є гетерозиготним щодо мутації АЇ 5 гена амінокислотної позиції 569 і однієї або кількох інших мутацій АЇ5 гена, які кодуються батьківською рослиною В; (4) причому процес селекції контролюють через () застосування схрещування з використанням маркера та/або технологій мікросеквенування і/або (ії) внесення агрономічно прийнятних доз одного або кількох інгібуючих АЇ 5 гербіцидів, до яких виведене потомство згідно з етапом (с) є толерантним.
Відповідним чином, передбачається, що даний винахід також стосується рослин В. миїдагів, які можуть бути одержані з застосуванням вищезгаданих способів виробництва.
У необмежувальному прикладі рослини цукрового буряка згідно з даним винаходом одержували шляхом виконання описаного нижче необмежувального протоколу. Без
Зо прив'язування до будь-якої теорії такий самий протокол також може застосовуватися для одержання рослин В. миїЇдагіх5, відмінних від цукрового буряка.
Клітинні культури цукрового буряка одержували з сіянців диплоїдного цукрового буряка генотипу 719044 (як описано, наприклад, у публікації АІехапаег Юом2пепко, РО ТПезвів, "Тожагаз ріазіа ігапетогптаїйоп іп гарезеей (Вгаззіса париз І.) апа зидагбевєї (Веїа миїдатів І)",
Ї пдмід-Махітійапе-Опімегзйаг Мипспеп, Німеччина, 2001).
Насіння цукрового буряка занурювали на 60 секунд у 70 95-й етанол, потім двічі промивали у стерильній воді з 0,01 95 детергента, а потім інкубували протягом 1-4 годин в 1 95 вилуговувачі
Маосі. Після цього насіння тричі промивали стерильною Нео і зберігали у стерильній воді до наступного дня при 4 "С. Після цього зародки відокремлювали за допомогою пінцета та скальпеля.
Щойно підготовлені зародки занурювали у 0,5 95 Маосі на 30 хв, а потім тричі промивали у стерильній воді. Після останнього етапу промивання їх поміщали на безгормональне М5- агарове середовище (Мигазпіде апа 5Коод (1962), Ріпузіої. Ріапіагит, 15, 473-497). Зародки, з яких розвинулися стерильні сіянці, використовували для закладання клітинних культур цукрового буряка, що піддаються регенерації.
Сім'ядолі, а також гіпокотилі розрізали на відрізки по 2-5 мм завдовжки, а потім культивували на затвердженому агаром (0,8 95) М5-агаровому середовищі, яке містило 1 мг/л бензиламінопурину (ВАР) або 0,25 мг/л тидіазурону (Т072). Через 4 тижні культури пагонів, що розвивалися, переносили на свіже агарове середовище такого самого складу, а потім субкультивували з одномісячними інтервалами. Культури тримали при 25 "С при тьмяному світлі з циклом 12 год. /12 год. світла/темряви.
Через 7-10 днів субкультивування культури пагонів, які вирощували на середовищі, яке містило тидіазурон, утворювали калюс чіткого типу, який був швидко зростаючим, м'яким і крихким. Колір цього типу калюсу був від жовтуватого до світло-зеленого. Деякі з цих крихких калюсів незмінно продукували хлорофіловмісні примордії пагонів з зародкоподібних утворень.
Ці швидко зростаючі калюси, що піддавалися регенерації, застосовували для відбору толерантних до інгібуючих АЇ 5 гербіцидів мутантів цукрового буряка.
Коли цей тип калюсу піддавали дії 109 М сульфонілсечовини форамсульфурону (СА5 КМ 173159-57-4), клітини виживали, але продукували менше, ніж 50 95 біомаси їхніх сиблінгів на 60 середовищі, позбавленому інгібітора. На середовищі, яке містило 3х103 М форамсульфурону,
ріст не виявлявся. Для великомасштабних експериментів з селекції мутантів вибирали 1077 М форамсульфурону. Колонії клітин, які вижили й зростали, нумерували й переносили через 4-6 тижнів на свіже середовище, яке містило 3х10- М інгібітора. Одна з цих колоній клітин була здатна зростати не лише при цій концентрації інгібітора, але й у присутності 3х105 М форамсульфурону.
З цього клону (58574ТІ) регенерували пагони у присутності інгібуючого АЇ 5 гербіциду, а потім пагони переносили до М5-середовища, яке містило 0,05 мг/л нафталіноцтової кислоти (МАА).
Протягом 4-12 тижнів у пагонів формувалося коріння, а потім їх переносили у стерильні тепличні контейнери, заповнені вологим стерилізованим перлітом, і поливали з неорганічними інгредієнтами М5-середовища половинної концентрації. В альтернативному варіанті паростки переносили прямо з затвердженого агаром середовища у грунтову суміш з вмістом перліту у теплиці. Протягом перших 10-15 днів після перенесення у грунт, який містить субстрат, рослини тримали у середовищі з високою вологістю повітря. Під час та після їх переведення на режим нормальної тепличної вологості повітря рослини тримали у теплиці під штучним світлом (12 год.) при 204-3 "С / 154--2 "С денної/нічної температури.
Через 3-5 тижнів регенеровані рослини з підготовлених раніше толерантної до форамсульфурону культури клітин (585741), а також з культур клітин дикого типу обробляли форамсульфуроном, йодосульфурон-метил-натрієм (СА КМ 144550-3-7) та сумішшю обох активних інгредієнтів. Випробувані дози гербіциду були еквівалентні 7-70 г аі/га для форамсульфурону і 1-10 г а.ї/га для йодосульфурон-метил-натрію. Регенеровані рослини з цієї толерантної лінії клітин витримували навіть найвищі дози гербіцидів (форамсульфурону, йодосульфурон-метил-натрію та їхніх сумішей у співвідношенні 7:1, тоді, як рослини дикого типу гинули навіть від найнижчих доз.
Потомство випробували описаним нижче способом (необмежувальним):
На основі 58574ТІЇ. насіння Е2 та ЕЗ експериментальних гібридів, які забезпечують алель резистентності у гетерозиготному стані, а також насіння Е4-Еб, що забезпечує мутантний алель у гомозиготному стані, висівали у полі й обробляли форамсульфуроном, йодосульфурон-метил- натрієм, а також сумішами обох інгібуючих АЇ 5 гербіцидів, коли у рослин розвивалися 3-5 листів
Зо розетки. Гомозиготні сіянці витримували суміші 35 г форамсульфурону/га ж 7 г йодосульфурон- метил-натрію/га без затримки росту або будь-яких ознак видимої шкоди. У кількох випадках гетерозиготні лінії при такій кількості демонстрували ознаки уповільненого росту та певний хлороз листя, але вони відновлювалися за 3-5 тижнів, тоді, як звичайні сіянці цукрового буряка гинули від інгібуючих АГ 5 гербіцидів.
АЇ 5-мутанти характеризували таким чином:
Видобування та аналіз нуклеїновокислотної послідовності одержаного мутанта здійснювали за допомогою (03С (бепотіс5 ЗтбрБН, Берлін, Німеччина, згідно зі зміненими стандартними протоколами.
Нуклеїновокислотну послідовність, одержану з мутанта цукрового буряка 5В574ТІ, показано у ЗЕО ІЮО МО: 3. 5ЕО ІЮ МО: 4 представляє відповідну амінокислотну послідовність, тоді, як ЗЕО
ІО МО: 1 одержували після секвенування послідовності рослини цукрового буряка дикого типу, яку брали як вихідний матеріал. ЗЕО ІО МО: 2 представляє відповідну амінокислотну послідовність цукрового буряка дикого типу.
Порівняння цих послідовностей виявляє лише одну мутацію у позиції 574, але більше не відбувалося ніяких змін у жодній іншій частині цього ендогенного АЇ 5 гена.
ЗЕОІЮО МО: 1 (1)
АТОМИ ТАКТ САСАААСССАЛАСАТ ТТ ТО ОСООТ ТОСТОСААСТОЕСАТТААССААААСЄС
ЗЕОІЮ МО: З (1)
АТС ТТ АССТТСАСАААСССААСАТТ ТТ ОСС ТП СААСТОСАТТААССААААСЄ
ЗЕОІЮО МО: 1 (61)
СТААААТЕОССААТСТТССАТ СТО ТОААССС ТОНИ ТТ ТС САН ПСО СААВССССА
ЗЕОІЮ МО: З (61)
СТААДАТЕСААНЮ ТТ ТССАТО ТО ПТ СААСН ПЕНКН ТТТОСАСКНСНЮ ССО ВАЛАССССА
ЗЕОІЮО МО: 1 (121)
АСТОСАСТОСТТТСАССОТОССССТОСААЛАТСТСАТОСТОССААТООССАСАЛАТСАТОСОСО
ЗЕОІЮО МО: З (121)
АСТОСАСТОТТТОАСОСОТОСОСТОСАЛАТСТСАТОСТОССААТОССАСАААТСАТОСОСО
ЗЕО ІЮ МО: 1 (181)
АТТААААСАСЛААСТСААССАССТТ ОТ ТО ТССАВСТАТТОААОАТТСАТСТТ СОТ ТЕСТ
5ЕО ІЮ МО: З (181)
АТТААААСАСААЛАСТСААОСАССТТСТТОТОСАОСТАТТОДАСАТТСАТСТТТСОТТТСТ
ЗЕО ІЮ МО: 1 (241)
ОСОАТТТООСССТОАТОДАСССАВААААОВОТССВАТОТОСТОВТТОЛАВСТСТТОАВОСТ
ЗЕОІЮО МО: З (241)
ООАТТТОВОССТОАТОААССОАОВЛАААССЗ ПНТ УТ ТО ААССТИ ТАС
ЗЕО ІЮ МО: 1 (301)
ОААОСТОТТАССАА ВУ НТ ТАС ОКО ОСА СТАТ ОБАААТОСАОСААОВСТ
ЗЕОІЮО МО: З (301)
ПААПОТОТТАССААТОТОТТТОСТТАСССТОСТООТОСАТСТАТОВАВАТОСАССАДОСТ
ЗЕО ІЮ МО: 1 (361)
СТСАСАССОВСОТ СТААААСОАТООМОСАВМ ОТО НК СОС САТ ОВАСАКОСНИЗОНЕ ТТ
ЗЕОІЮО МО: З (361)
СОСОК СТ ААААССАТОСО АТО ПО ОО КОСТА ТОААСААОССССКНИ ТС
ЗЕО ІЮ МО: 1 (421) зо ВССОСССАСОБАТАТОСТАСЛОСТАСТОВАААВОТТОСТОТСТОСАТТОСОВАСТТСТОСТ
ЗЕОІЮО МО: З (421)
ЗССОССВАВОВАТАТОСТАОАОСТАСТООАААОСТТОСТОТСТОСАТТОСОАСТТСТОСТ
ЗЕО ІЮ МО: 1 (481)
СОТ ПОСТАССАОСТОТАТОАОВОН СТ ТОН ТО АССС ТС ОУТ ТАТТСТ ТОСТИ
ЗЕОІЮО МО: З (481)
СОН ОТ АСОМ СОТ АТСАВИЕТСТТОСТОАСССТСТОСТ ТАТО ТО ТСТЕ
ЗЕО ІЮ МО: 1 (541)
ОТТОССАТСАСТООССААОТТССАСОССОТАТОАТТОССАСТОАТОСТТТТСАВСАВАСТ
ЗЕОІЮО МО: З (541) 15 ШТТОССАТСАСТООССААСТТОССАСОССОТАТОАТТООСАСТОАТОСТТТТСАОСАСАСТ
ЗЕО ІЮ МО: 1 (601)
ОСАЛАТТОТТОАОСТОАСААСОТСТАТТАСТААОСАТААТТАТТТАОТТТТОСАТОТАСАЄ
ЗЕОІЮО МО: З (601)
ССААТТОТТОАОСТОАСААООТСТАТТАСТААОСАТААТТАТТТАВТТТТОВАТОТАСАЮ
ЗЕО ІЮ МО: 1 (661)
ЗАТАТТССТАОВААТ ОТ ТААВОААСССТ ТТ ТТ ТАССТААТТСТОТАСОССТОСЬКССТ
ЗЕОЮ МО: З (661)
САТАТТОСТАСААТТОТТААСОААВССТТТТТІТТАОСТААТТСТОСТАОВОСТОдАССТ
ЗЕОЮ МО: 1 (721)
ШТТТТОАТТОАТСТТССТАЛАВАТАТТСАОСАВСААТ ТОВ ТС ЗАТ ООСЗАТАСС
ЗЕОЮ МО: З (721)
ТТ ТСОАТТ АТ ТИС ТАААВАТАТ САВА ТО ТС ОСТ ЗАТЕ АТАСОЮ
ЗЕОЮ МО: 1 (781)
СИ ТААВТТОБВОТОВОТАТАТО ОТАК ТОСОАЛАЛОТОСААСТ ТС АСЮААТИАО
ЗЕОЮ МО: З (781)
СОТ ТТ ТАТО ТО ТАТАТО ОТАК АААСВТОСВААС ТТ ТО АСОААТСЬКОУ
ЗЕОЮ МО: 1 (841)
ОТТО ТС ТТ ОАСНСАВА ТТ ПОТ ОСНО ГНІТ ОО ГОСТ ОВААОААСССТЕ СТО ТАТ
ЗЕОЮ МО: З (841)
ЗТТООАСТ СТ ОАССАЗАТТ ОТ ОАОВ ТАТО АСТЗАВТСОААВААКНСТО СТ ТО ТА
ЗЕОЮ МО: 1 (901)
ЗТОМОАВОТООО ТО ПТО ААТТСТАСТОАВОДО ТТ ОАСОСАСАТТ ТО ТОАВТТОАСАСОВ
ЗЕОЮ МО: З (901) оТООСАСОТОООТОТТТОДАТТСТАВТОАОСАВТТОАССАСАТТТОТТОАОТТОАСАВОЄ
ЗЕОЮ МО: 1
Зо (961)
Іти ТАВТАСТТТ ОТО ГТ ОО СТ ТАСОСТТОТААТСАТОВААСТО ТЕ
ЗЕО Ю МО: З (961)
АТТОСЗОТООВСТАСТАСТТ ТАТО ОТТЗОСО ТСО ТАСССТ ТО ТААТСАТОААСТО ТТ
ЗЕОЮ МО: 1 (1021)
СТСАТАТОТТОССАТОСАСОСОАСТО ТТ ТАТОССОААТТАТОСООВТ ОА ТАНОК А
ЗЕОЮ МО: З (1021)
СТТСАТАТО ТОВОВАТОСАСОССОАСТО ТТ ТАТИ АА ТАТО СОТ ОБА ТАКА
ЗЕОЮ МО: 1 (1081)
ТНУГТОСТТОСТТ ССС ТАС ТВА ТВАТОС ПО ТОК ОВ ОААСВСТ СО АСВОСОТІ
ЗЕОЮ МО: З (1081)
ТЕСТУ СВО ТАВОТ ТТ ВАТА ОСАССОООААСОСТ САБО СЕТ
ЗЕОЮ МО: 1 (1141)
ВОТАВСНО ТО ТААВАТ ТО ТОСАТАТ ТАТА ОАСТСТОСТОАСВАТТООВОААСААСААВ
БО ЗЕОЮ МО: З (1141)
ОСТАССОСВ ТОСТААВАТ ТО ТОСАТАТТОАТАТТ ОАЄ ТСТОСТОАВАТТООСЛАСААСААЄ
ЗЕОЮ МО: 1 (1201)
САМКА САТ ТО АТО ТАААТТССА ТТ КОКО ТАТО ААТААСАТТ
ЗЕО І МО: З (1201)
ПАВООВА ТО ТО СОСА ТТ ТО ТОСТОА ТС ТАААТТООСА ТОСОСОО ТАТ ОЗААТАДСАТТ
ЗЕО ІЮ МО: 1 (1261)
ПТЕОАОТСТАВААТАСВОААОСТОААТТТООАТТТСТОСААСТОСАСАОААСААТ ТАС
ЗЕО І МО: З (1261)
СТОВАЗТСТАСААТАСВОЗААСОСТОААТТТОЗАТТ ТЕТ СААСТОВАСАСВААОСААТТАВСЇ
ЗЕО ІЮ МО: 1 (1321)
ОАЕСАСААСААСОААТ ОСС АСТОАСОТТ ГТААСАСАТ ЕТ ОСС АТОСААТ ЕС ТОСАСАА
ЗЕО ІЮ МО: З (1321)
ВАСОАСААВАМОАА ТТ СССАСТОАВІТ ТТ ТААСВАСАТТ ОО БАТОСААТТОС ТС АСАА
ЗЕО ІЮ МО: 1 (1381)
ТАТОССАТТСАСОТОСТ ГТ ОЗАТОАВТ ОСС ААТОСТААТОСТАТТАТААСТ АТС
ЗЕО І МО: З (1381)
ТтТАТОССАТТОАВОТОСТТЗАТЗАОСТТАССАА ОТ ААТОСТАТТАТААОТАСТИО ОТ
ЗЕО ІЮ МО: 1 (1441)
ПООСАОССАССАААТ ОТО ОСТ ОО СОСКА ТАСААСТАСАВААДАСОССТОССААТО ОСТ
ЗЕО І МО: З (1441)
ОСА САСОЮАААТИаИ ПНО ГО СО СА СОСАТ ТАСААОТАСАСВААСССТ ОСС ТО
ЗЕО ІЮ МО: 1 (1501)
АВС ОЕТОООВТ ТООНО ОВО ТАТОВОСО ТТ ОВО ТАСОАС ОСА ТЕЗА ОСАВТ зо ї
ЗЕО ІЮ Мо З (1501)
АС ОО ТО ТО ТАТ ВОАС АССАОКО СОСКА ПІСОК ТО КАК т
ЗЕО ІО Мо 1 (1561)
СТО АССАОА ТИСА ОН ОТО АТАТІ АТО СЬКА СОС ТТ ТАТТАТОВАТОТІ
ЗЕО І МО: З (1561)
СТЕ АССАСВАТОСАСТОСТ ТОТСОАТАТТВАТВОБОАТООСАЗТТТТАТТАТОСААТСТ
ЗЕО ІЮ МО: 1 (1621)
СААБАСЄТ ТОВСТА СААТ ТВО ООАААА НТ СОС АСТТААСАТААТО НИ АААСААТ
ЗЕО ІЮ МО: З (1621)
САВАН ПООСТАСААГ ТАВОС ГО АААА ОО ПООСАСИ ТААЗАТАА КН ОСТ АЛАСАА
ЗЕО ІЮ МО: 1 (1681)
СААСАТТТАССТАТОСТ ТО ТСООАА ТО ОААСАТАССО І ТАТА АСОСТААССОМВОСАСА
ЗЕО І МО: З (1681)
СААСАТ ТАТА ТОН ТО ССААТТОВААСАТАСОЮТ ПУТАТАААСТТААССССАСАТ
ЗЕО ІЮ МО: 1
АСАТАСКСТ ТОСОАКАСССТТКСАААТСО ОСТ ОАТАТСОТ ТО ТОАТАТОСТ САЛАТУ
ЗЕОЮ МО: З (1741)
АСАТАСЮ ТТ ОБВАААСССТ СОСАААТ С ТОСТОЗАТАТС ТТ СССТОЗАТАТОСТОАААТТСССТ
ЗЕОІЮ МО: 1 (1801)
САВОСАТОТОАТАТТОСТІСТОСССОТОТТАССЛАСОТООСТОАТТТОАОВОССОССАТТ
ЗЕОЮ МО: З (1801)
ВАСВОСАТО ТАТА ТО СПОСО ТО ТАОССААСО ГОСТ ЗАТ ТО АСНН НН
ЗЕОІЮ МО: 1 (1861)
ПАААПЛАТОТТООАТАСТОСАВОССООТАССТОСТІЗАТОТЗАТТОТАССОСАТСААВАО
ЗЕОЮ МО: З (1861)
САДАСААТОаТТОвАТАСТОСАООВССОТАОСТВсТОоОАТОТОАТТатАССОСАТСААсАО
ЗЕОІЮ МО: 1 (1921)
СА ТОКТАТВАТ ОСА ОО ОО ГГ СААСАТАССА ТТ АСАОАСООТО
ЗЕОЮ МО: З (1921)
САМО ТОССТАТОАТ КОААСТО ТОСОЛ АОВСАТАССАТТАСАВАССОСОТОАТ
ЗЕОІЮ МО: 1 (1981)
ВОДАСАВОСТТАТТОА
ЗЕОЮ МО: З (1981)
ОССААСААОСТОТТАТТОА
3о ЗЕОЮ МО: 2 0)
МААТЕТМЕТЕВРЕБТРІ КТ КОВІ ВТеЕВТеРКЕТеЕТРЕ ЕНЕР ОО НКВВА
ЗЕОІЮ МО: 4 п)
МААТЕТМРТЕБРОВТ РЕК КОВІ ЕТ еКТЕТ ЕВ ОСІВ ННКОЗА
ЗЕОЮ МО: 2 (61)
ІКТОТОАРОЯВАЕОКЕУЧВЕСВОВВНКОВОМ УКАКЕВЕОУТМУКАУВООАОМЕНОХ
ЗЕОІЮ МО: 4 (61)
ІСТОТОДРОБЕАДЕОЗВЕУЗВКОВОЕВВКОСВОМ УА ЕВЕСУТМУКАУРООАОМЕНОВ
ЗЕОЮ МО: 2 (121)
ТЕКУ ЕВНЕВОСУКААКОТАВАТОКУСУСІАТЗОВЗАТМ УВС АПА УВІ,
ЗЕО ІЮ МО: 4 (121)
СТАВКИ РАНКОВУ ААЕОСТАМНАТОКУ ВУСА ТВОРОМ УВС АЙВА СУ,
ЗЕОЮ МО: 2 (181)
УА ПТ ОСУРВЕМІТОДЕОЕТУЄУТЕЧТКНМУ МЦЗУКТНЬВІУКЕАКР АМВОКАОВ
БО ЗЕОІЮ МО: 4 (181)
УАПОСУВВВМИТОАЕОСТЕ МЕМ ТВВТКНЯМ МЕ ОУЕН КЕАВЕ АМЗОКРОВ
ЗЕОЮ МО: 2 (241)
Деко У УВА ЕК ОБУМОВ еКОКЕВІМЕУО ЕС УВЕМОЕБККРУЄТ
ЗЕО ІЮ МО: 4 (241)
МОСК СО УМО РЕКІ СУМОК РКК ЕВ КОТУ МОБ ЕККРУСУ
ЗЕОІЮ МО: 2 (301) чию Мак ВКРАВ УАЗ УМ ОБР ОМОВІ ВЕ НМЕОМНО ГУТАМУАУЮКАЮ
ЗЕО ІЮ МО: 4 (301)
УМСА ВЕЧУЕСТО РУДУ МЕС ОБУ РСКОВЕ ЗНУ ОМНОТУТАМУАУЄКАЮВ
ЗЕОІЮ МО: 2 (361)
М КАКОУКРОЮВУ ТОК КАКАВКАЮУНИОВАЄСЮМКОВНУ В САСУКАСКОМАКІ
ЗЕО ІЮ МО: 4 (361)
ЕКО УК НКУ ТОК САКАКАЮУНИМОЗАЄСВМКОНУМСАЮУКАСКСММКІ
ЗЕОІЮ МО: 2 (421)
ПЕБКС КМ ОКЕКУУКЕ ВК СЕСККЕКРЕБЕКТКООАВРО УМО ОСС ТМОМАНВТСЮ
ЗЕО ІЮ МО: 4 (421)
СЕБВІО КО МЕС БКУУВЕК ЗКОЕКЕКРІ ВККС ОВАІВВО АЮ У ОК ТМОВАНВТОМ
ЗЕОІЮ МО: 2 (481)
СОНЕТ ААСНУКУВИРКОУМ ТАВО ЗАМОК РААНЗААЧАКРЗАУ У ЧЕНО СС ВАМНУ
ЗЕО ІЮ МО: 4 (481)
ЗОНОМАААДОНУКТУ ВМС ТЗОВ САМЕ РААІБААУАВРОАКАЛААЛННОВОСЕМІММУ
ЗЕОІЮ МО: 2
Коо) (541)
ЗЕАТУЄМЦ РУК МОН СМУУСЧУЕОВНЕУКАМВАНТУ С ОМРЗКБАСНЕРОМІКЕА
ЗЕО ІЮ МО: 4 (541)
ДЕСАТВУЄМЕРУКІМО МОН ОМУУЄВ КСВ УКАВКАНТУ ОМ ЗКВАСНЕВОМі КА
ЗЕОІЮ МО: 2 (601)
ЕАСПІРВВАВУЄМУАССКААЮТМ ПТО РУ ЦОАИУРНОСНУЄ ВМІВ САСККОМТЕОО
ЗЕО ІЮ МО: 4 (601)
ЕАСОРВБАКУЗМУАСЯ НАЛІТ ДТеОВУ СОУ УВО РМЗ ОАСЗККСТІТЕСНО
ЗЕОІЮ МО: 2 (661) вТ5У-
ЗЕО ІЮ МО: 4 (661) вТ5У-
Втім, в оптимальному варіанті рослини В. миїдагі5 згідно з даним винаходом та їх частини є придатними для агрономічного застосування. "Придатні для агрономічного застосування" означає, що рослини В. миЇдагіє та їх частини можуть використовуватися з агрономічними цілями. Наприклад, рослини В. миЇдагіх мають призначатися для використання у виробництві цукру, виробництві біологічного палива (такого, як біогаз, біобутанол), виробництві етанолу, виробництві бетаїну та/або уридину. У контексті цього опису термін "придатні для агрономічного застосування" також означає, що рослини В. миЇдагі5 згідно з даним винаходом в оптимальному варіанті є менш чутливими до інгібуючого АЇ 5 гербіциду, у ще кращому варіанті вони є принаймні у 100 разів менш чутливими, у ще кращому варіанті - у 500 разів, у ще кращому варіанті - у 1000 разів, і у найкращому варіанті - у 2000 разів. Інгібуючий АГ 5 гербіцид являє собою один або кілька описаних авторами гербіцидів, в оптимальному варіанті - форамсульфурон, окремо або у комбінації з одним або кількома іншими інгібуючими АЇ5 гербіцидами, або з підкласу сульфонілсечовинних гербіцидів, або з будь-якого іншого підкласу інгібуючих АЇ 5 гербіцидів, у найкращому варіанті - форамсульфурон у комбінації з іншим сульфонілсечовинним гербіцидом та/або інгібітором А 5 З підкласу сульфоніламінокарбонілтриазолінонових гербіцидів.
В оптимальному варіанті придатні для агрономічного застосування рослини В. миЇдагі5, у найкращому варіанті - рослини цукрового буряка згідно з даним винаходом є повністю фертильними, у ще кращому варіанті - мають фертильність рослин дикого типу. Фертильність має надзвичайне значення для рослини В. миЇдагіє згідно з даним винаходом з точки зору придатності для агрономічного застосування.
Прикладом придатної для агрономічного застосування рослини В. миЇдагі5 є цукровий буряк.
Рослина цукрового буряка згідно з даним винаходом при культивуванні на площі в один гектар (з врожайністю приблизно від 80 000 до 90 000 цукрових буряків) в оптимальному варіанті служить для виробництва принаймні 4 тонн цукру.
В альтернативному варіанті рослина цукрового буряка рослина згідно з даним винаходом має містити 15-20 95 цукру, у ще кращому варіанті - принаймні 17 95, щоб бути придатною для агрономічного застосування. Таким чином, рослини цукрового буряка, які мають вміст цукру 15- 2095, в оптимальному варіанті - принаймні 17 96, є оптимальним варіантом втілення даного винаходу.
Рослини згідно з даним винаходом можуть бути розпізнані з застосуванням будь-якого способу генотипного аналізу. Оцінка генотипну рослин включає застосування таких технологій, як електрофорез ізозимів, поліморфізм довжини рестрикційних фрагментів (КР Р), випадкова ампліфікація поліморфних ДНК (КАРО), полімеразна ланцюгова реакція з довільними праймерами (АР-РСК), алель-специфічна полімеразна ланцюгова реакція (А5-РСВ), фінгерпринтинг на основі ампліфікації ДНК (САБЕ), ампліфіковані ділянки з охарактеризованою послідовністю (З5САК), поліморфізм довжини ампліфікованих фрагментів (АРІ Р), прості повторювані послідовності (55), які також називаються "мікросателітами". До передбачених авторами додаткових композицій та способів аналізу генотипу рослин належать способи, описані у Публікації США Мо 2004/0171027, Публікації США Мо 2005/02080506 та Публікації США
Мо 2005/0283858.
Зо Інший аспект даного винаходу стосується застосування описаної рослини буряка звичайного та/або описаних авторами придатних для збирання частин або матеріалу для розмноження для вирощування/селекції рослин буряка звичайного. Способи вирощування/селекції рослин В. миЇдагіз описуються в інших розділах цього опису. Такі способи вирощування/селекції можуть застосовуватися для одержання рослин В. миїдагі5 згідно з даним винаходом, які також мають нові особливості, такі, як стійкість до стресів, то яких, крім інших, належать посуха, спека, холод або надмірна мінералізація і т. ін.
У ще одному аспекті даний винахід передбачає застосування описаної авторами толерантної до гербіцидів рослини буряка звичайного та/або одержаних з них придатних для збирання частин або матеріалу для розмноження згідно зі способом відбору для відбору інгібуючих АЇ З гербіцидів.
Краще розуміння даного винаходу та багатьох його переваг забезпечують представлені нижче приклади, які мають лише ілюстративне призначення і жодним чином не обмежують обсягу даного винаходу.
Приклад 1: Виділення мутантів
Клітинні культури цукрового буряка одержували з сіянців диплоїдного цукрового буряка генотипу 719044 (як описано, наприклад, у публікації АІехапдег Юом2пепко, РО ТНевів, "Тожагаз ріазіа ігапетогптаїйоп іп гарезеей (Вгаззіса париз І.) апа зидагбевєї (Веїа миїдатів І)",
Ї пдмід-Махітійапе-Опімегзйаг Мипспеп, Німеччина, 2001).
Насіння цукрового буряка занурювали на 60 секунд у 70 95 етанол, потім двічі промивали у стерильній воді з 0,01 95 детергента, а потім інкубували протягом 1-4 годин в 1 95 вилуговувачі
Маосі. Після цього насіння тричі промивали стерильною Нео і зберігали у стерильній НгО до наступного дня при 4 "С. Після цього зародки відокремлювали за допомогою пінцета та скальпеля.
Щойно підготовлені зародки занурювали у 0,5 95 Маосі на 30 хв, а потім тричі промивали у стерильній Н2О. Після останнього етапу промивання їх поміщали на безгормональне М5- агарове середовище (Мигазпіде апа 5Коод (1962), Рпузіої. Ріапіагит, 15, 473-497). Зародки, з яких розвинулися стерильні сіянці, використовували для закладання клітинних культур цукрового буряка, що піддаються регенерації.
Сім'ядолі, а також гіпокотилі розрізали на відрізки по 2-5 мм завдовжки, а потім бо культивували на затвердженому агаром (0,8 95) М5-агаровому середовищі, яке містило 1 мг/л бензиламінопурину (ВАР) або 0,25 мг/л тидіазурону (Т072). Через 4 тижні культури пагонів, що розвивалися, переносили на свіже М5-агарове середовище такого самого складу, а потім субкультивували з одномісячними інтервалами. Культури тримали при 25 С при тьмяному світлі з циклом 12 год. /12 год. світла/темряви.
Через 7-10 днів субкультивування культури пагонів, які вирощували на середовищі, яке містило тидіазурон, утворювали калюс чіткого типу, який був швидко зростаючим, м'яким і крихким. Колір цього типу калюсу був від жовтуватого до світло-зеленого. Деякі з цих крихких калюсів незмінно продукували хлорофіловмісні примордії пагонів з зародкоподібних утворень.
Ці швидко зростаючі калюси, що піддавалися регенерації, застосовували для відбору толерантних до інгібуючих АГ 5 гербіцидів мутантів цукрового буряка.
Коли цей тип калюсу піддавали дії 10 "" М інгібуючого АГ 5 гербіциду форамсульфурону (який належить до сульфонілсечовинного підкласу, див. вище), клітини виживали, але продукували менше, ніж 50 95 біомаси їхніх сиблінгів на середовищі, позбавленому інгібітора.
На середовищі, яке містило З3х108 М форамсульфурону, ріст не виявлявся. Для великомасштабних експериментів з селекції мутантів вибирали, 1077 М форамсульфурону.
Колонії клітин, які вижили й зростали, нумерували й переносили через 4-6 тижнів на свіже середовище, яке містило 3х10- М інгібітора. Одна з цих колоній клітин була здатна зростати не лише при цій концентрації інгібітора, але й у присутності З х 106 М форамсульфурону.
З цього клону (58574ТІ) регенерували пагони у присутності інгібуючого АЇ 5 гербіциду, а потім пагони переносили до М5-середовища, яке містило 0,05 мг/л нафталіноцтової кислоти (МАА).
Протягом 4-12 тижнів у пагонів формувалося коріння, а потім їх переносили у стерильні тепличні контейнери, заповнені вологим стерилізованим перлітом, і поливали з неорганічними інгредієнтами М5-середовища половинної концентрації. В альтернативному варіанті паростки переносили прямо з затвердженого агаром середовища у грунтову суміш з вмістом перліту у теплиці. Протягом перших 10-15 днів після перенесення у грунт, який містить субстрат, рослини тримали у середовищі з високою вологістю повітря. Під час та після їх переведення на режим нормальної тепличної вологості повітря рослини тримали у теплиці під штучним світлом (12 год.) при 20 -3 "С. /15 ж-2 "С денної/нічної температури.
Зо Через 3-5 тижнів регенеровані рослини з підготовлених раніше толерантної до форамсульфурону культури клітин (585741), а також з культур клітин дикого типу обробляли форамсульфуроном, йодосульфурон-метил-натрієм (СА КМ 144550-3-7) та сумішшю обох активних інгредієнтів. Випробувані дози гербіциду були еквівалентні 7-70 г а.і/га для форамсульфурону і 1-10 га.і/га для йодосульфурон-метил-натрію. Регенеровані рослини з цієї толерантної лінії клітин витримували навіть найвищі дози гербіцидів (форамсульфурону, йодосульфурон-метил-натрію та їхніх сумішей у співвідношенні 7:1, тоді, як рослини дикого типу гинули навіть від найнижчих доз.
Приклад 2: Випробування потомства
На основі 58574ТІЇ. насіння Е2 та ЕЗ експериментальних гібридів, які забезпечують алель резистентності у гетерозиготному стані, а також насіння Е4-Еб що забезпечує мутантний алель у гомозиготному стані висівали у полі й обробляли форамсульфуроном, йодосульфурон-метил- натрієм, а також сумішами обох інгібуючих АЇ 5 гербіцидів, коли у рослин розвивалися 3-5 листів розетки. Гомозиготні сіянці витримували суміші 35 г форамсульфурону/га ж 7 г йодосульфурон- метил-натрію/га без затримки росту або будь-яких ознак видимої шкоди. Гетерозиготні лінії при такій кількості демонстрували ознаки уповільненого росту та певний хлороз листя, але вони відновлювалися за 3-5 тижнів, тоді, як звичайні сіянці цукрового буряка гинули від інгібуючих
АЇ 5 гербіцидів.
Приклад 3: Молекулярна характеризація одержаного мутанта цукрового буряка (58574)
Видобування та аналіз нуклеїновокислотної послідовності одержаного мутанта здійснювали за допомогою (03С (бепотіс5 ЗтбрН, Берлін, Німеччина, згідно зі зміненими стандартними протоколами.
Нуклеїновокислотну послідовність, одержану з мутанта цукрового буряка 5В574ТІ, показано в ЗЕО ІЮО МО: 3, причому 5ЕО ІЮ МО: 4 представляє відповідну амінокислотну послідовність, тоді, як БЕО ІО МО: 1 одержували після секвенування послідовності рослини цукрового буряка дикого типу, яку брали як вихідний матеріал. 5БО ІЮО МО: 2 представляє відповідну амінокислотну послідовність цукрового буряка дикого типу.
Порівняння всіх цих послідовностей чітко виявляє лише одну мутацію у позиції 569, але більше не відбувалося ніяких змін у жодній іншій частині цього ендогенного АЇ 5 гена цього рослинного матеріалу цукрового буряка. бо Приклад 4: Вимірювання ферментної активності
Кодуючі послідовності А! З гена буряка звичайного дикого типу та Л/574і -мутанта (58574ТІ) клонували у вектори Момадеп рЕТ-32а(- і вектори трансформували в АО494
Езспегіспіа соїї згідно з інструкціями виробника. Бактерії вирощували при 37 "С в | В-середовищі (Гипйа-Вгоїй), яке містило 100 мг/л карбеніциліну та 25 мг/л канаміцину, стимулювали, використовуючи 1 мМ ізопропіл-б-Ю-тіогалактопіранозиду при ОЮвоо 0,6, культивували протягом 16 годин при 18 "С і збирали шляхом центрифугування. Згустки бактерій ресуспендували у 100
ММ буфера з фосфату натрію, рн 7,0, який містив 0,1 мМ тіамінпірофосфату, 1 мМ Мдсесі?» та 1
МКМ ЕАб, у концентрації 1 г сирої маси на 25 мл буфера і руйнували шляхом ультразвукової обробки. Неочищений білковий екстракт одержаний після центрифугування, використовували для вимірювання активності АЇ 5.
Аналізи АЇЗ здійснювали у 9б-лункових мікротитрувальних планшетах, застосовуючи модифікацію процедури, описаної у публікації Кау (1984). Реакційна суміш містила 20 мМ буфера з фосфату калію рН 7,0, 20 мм пірувату натрію, 0,45 мМ тіамінпірофосфату, 0,45 мм
Масі», 9 мкМ ЕАЮ, фермент АГ та інгібітори АЇ З у різних концентраціях у кінцевому об'ємі приблизно 90 мкл. Аналізи розпочинали шляхом додавання ферменту і завершували після 75 хв інкубації при 30 С шляхом додавання 40 мкл 0,5 М Н25О»х. Через 60 хв при кімнатній температурі додавали 80 мкл розчину 1,4 95 а-нафтолу та 0,14 95 креатину у 0,7 М Маон і після додаткових 45 хв інкубації при кімнатній температурі визначали оптичну густину при 540 нм.
Показники рібО для інгібування АЇ5З визначали, як описано у публікації Кау (1984), застосовуючи програму апроксимації кривих по точках ХІ/Рії Ехсеї, додаткова версія 4.3.1, від ІЮ
Визіпезв5 боІшіопз І ітед.
В цілому мутантний фермент був принаймні у 2000 разів менш чутливим до інгібітора АЇ 5 форамсульфурону порівняно з ферментом дикого типу.
Приклад 5: Вимірювання активності ферменту (з рослин)
АЇ 5 видобували з листя цукрового буряка або культур тканин цукрового буряка, як описано у публікації Кау (1984), РіІапі Рпувіої! 75:827-831.
Активність АЇ 5 визначали в екстрактах листя цукрового буряка дикого типу та екстрактах листя одержаного 58574ТІ. у присутності різних концентрацій форамсульфурону, як описано у
Прикладі 4.
Зо В цілому мутантний фермент був принаймні у 2000 разів менш чутливим до інгібітора АЇ 5 форамсульфурону порівняно з ферментом дикого типу.
Приклад 6: Польові випробування з застосуванням гомозиготних толерантних до інгібуючих
АЇ 5 гербіцидів рослин цукрового буряка
На основі 5857411, насіння Е4-Еб що забезпечує мутантний алель ендогенного АЇ 5 гена у гомозиготному стані, застосовували для подальшого випробування.
Насіння гомозиготних мутантних рослин 58574ТІ. та насіння традиційного сорту КІ АКІМА (загальнодоступні чутливі до інгібітора АЇ5З контрольні сорти цукрового буряка не мали відповідної мутації у позиції 569 у цьому білку АЇ 5) висівали у полі й вирощували до різних стадій росту згідно зі стандартом ВВСН (визначеним у монографії "ЕпімісКіипуд55іадіеп. топо- ипа аїкоїуїег Ріапгеп", 2па едйіоп, 2001, ва. Оме Меїег, Віоіїодізспе Випаезапвіаї! Тиг апа па
Еогзім/інвспай).
Після цього рослини обробляли відповідними інгібуючими АЇЗ гербіцидами, які вказано нижче у Таблиці і які є ідентичними тим, що застосовуються під час процедури відбору.
Кількість води, застосовуваної у різних випадках, дорівнювала 200 л/га.
Через 8, 14 та 28 днів (як вказано у Таблиці) після внесення (САА) відповідного(их) інгібуючого(их) АЇ 5 гербіциду(ів) шкоду (фітотоксичність/фіто) для різних рослин цукрового буряка визначали за шкалою від 0 905 до 100 95.
У цьому контексті "0 95" означає "відсутність фітотоксичності/фіто", а "100 90" означає, що рослини повністю загинули.
Таблиця
Цукровий Цукровий Цукровий буряк на буряк на буряк на
Характеристики сорту КІ АВІМА | "УРЯК На | Ку ддумд | буряк На |у ддуМд | ЗУРЯК Н основі основі основі
ЗВ574ТІ. ЗВ574ТІ. ЗВ574ТІ.
Етап внесення ВввВеН 14 | ВВСН 14 | ВВСН 14 | ВВСН 14 | ВВСН 14 | ВВСН 14
Показник Фо фіто Фо фіто Фо фіто Фо фіто | 905 фіто Фо фіто
Інтервал Внесення - Оцінка 8 днів 8 днів 14 днів 14 днів 28 днів 28 днів
Активна речовина айа! 777777
Форамсульфурон 25пла| 85 | 0 | 83 | 0 | 86 | 0
Форамсульфурон зола! 90 | 0 | 92 | 0 | 94 | 0
Йодосульфурон-метил- досульфур 7 г/га 97 100 натрій
Перелік послідовностей «110» БАЄР ІНТЕЛЛЕКЧУЕЛ ПРОПЕРТІ ГМБХ та КВС ЗААТ АГ «120» Толерантні до інгібуючого АЇ 5 гербіциду мутанти буряка звичайного -130» ВС5 09-1021 / КМУ5 0172 ЕР -1605 6 «170» Раїепійп версія 3.3 «2105 1 «2115 1998 «212» ДНК «213» Веїа миЇдагів «4005» 1 акоусочеса сосссзсаза сесавсавксс бесссксосї садоссссас зассадавеє о сузззассосс зассссссас сссссбсаваасс стссосерЕс ссассссісс савайсосов 179 асгссассоє Кгсассуєсо сетосадваєсс бсассстоссо авсосовосза ассакосуєе 150 ассзааасас азасссзвує асосбсссс ссазчесаску азузсєсакс БЕсСсУККеє 24 сзасєссдцсс стдасозасс сазазавачоу Ксечасобсо ссоглоавачес поссузасо зво сзазукоаста ссвасзсЗЄ Сасссасосї здабгдзабусає соакочаває ссоасозадеє 4659 сссвсасчсї скалаассво ссусавсЯабс сесссоссуєс зсовасазуо сао ко 42 зссзссолача дасасзссзоа ваазсезссоза заз сосзсвссас асо сте во ссіззкоска ссазостозї зссазукоєу зоссузозссо Єсосскоавсс собоссКосКе 540 чссзспсвссв ссудссзазе бесасзссуї асзасстцоаса созастЗсес ссзжчачасе во ссавссуссЯ азосцасавао дсосассвасу заєатстазкт австоаваеосе пзвсасзувУ БО чакасссссз сааскусїваа ЧдавазчосЕсс сККссазоасока зосоубаз псесчавосе ТО чив акКссбсстава ззасастісва садсвассЗо Сбор скіла Кбочавкао тво пеискссазас сасасасзЗзУєа басусстазу сідосвазвах созвасКсс засзавезаз по чІказвсссс ссодазсававе сзсоазоспссо зесазсзаче сзазвлавУзос сзсссгаає запо чЧчіззаазаса часа ссзав сссізасов9 Чдзассзаода затв посзасвз зе зіхсссасЗЗ стазсасесї зассоазУувтя зУудссосвос ссгцовасцв базис 1070 ссксзізсає сцоцазеЕзчсв сузавоКУуЄЄ сСвЕзчссваЄ чропоечсзоа сзвопацзсоччах 10п8о скзеЕгзссво сссксоззас саззсссоас чассзтаїза сспоузаваєо совазосаєсє 1150 зосгзоссзсч ссавцассзс псозсзббзчаїт абезассссоа созазчассозЗО двачазсвах Т2по сзассссвоа сзсссасско сзстсасасе заассооасас сзсзЗсасяо ЧавсавУвесе 128а стоачазіссз чаасздозаз чскоаактсто засЕгссссв васздзсдазча взазеезУдх ЗО ззасазаача ззозаїєксесс ассовУсЕкї зачасаєстскоа ззоавсасваї Соскссасва 1380 савсдссасто адзсчсскаа содззссоасс вабсцтавку стасгасвацч бассоубосЕ 1450 чччсеаводсасс ззасзсодзає сдсдсачевк басзачтасаз заваасосст зсвасоачсе 1505 вистсбозсоз УЗсзоаЗуЯс сесоззаКе доЗзссвосау созссасбуч звобсосвуєє 153650 чстезЗассву зсзсвосУУЄ сЗзссзасасс чдасузазасо зЗсазукекає савсЗзнаох 15 сазозуккзУ ствсватєзж зУугузадазк сссозаска зоасвакоеас осбазвоває 1655 сазсзвссєсва чсзсцпассах ссзасзЗзцва забвзазсгсо збазайзстав ссузаовсвх 1740 асасассскоа счазассстссс сазаєстоасї зчзасвиссссс спзасвоосі сзавексое їа0о0 цачасабатоа акзЕксаєсс касссесас адсзасаєзу сгозЕскова зуссасовсх їн савасзаєзє созчабасосс здазссзсас ссЗзсієзчаса сзасгзчовсс зсвссзацац їіч4О сасссЗссос соасзаНкссо зазедосасс заз свазу всзостастівс ззвочухов 1950 зцаазчзазосї сптаксоза їзавд -21052 «2115» 665 «212» Білок «213» Веїа миЇдагів «40052
Меї Аза Ді Тпк о РБе ТВвх Авп о Рко ТВЖ бле 5еї во бек Зер Тк о Бхо 1 5 19 15 їви Тв Ббуз Тнх без ув Беж біз Беїх бех їі Зак Бек Тбх бе Вко 40. 25. 30
ЕМе Бех Тпжх хо Рко Був ТЕЖ РКО ТВ оВко цей Впе біз Або Рко бе о 15 бій ї18 Зех Бех Явх бій Бех Нів йув бех Чеї Аїа їі Пув ТК бій 0 55 БО так бів дів хо Зах Бех Бко Аіа Тіз біз Авропег бех Бе Уді зех 70 75 во
Ака Вбе біу Рко Авробіз Рко Ага Бу піу бек Авроуаії бе уві 510 дів Пео біз Ага біб пух Уі ТВх Ав оУзі РБе ліз Тух Бко біу біу 1ї0о 105 110
Дів бдех Меб бі їТ1е нія біб Аїа їжч ТВжх Ака Ббес Бу Тит її Ага 115 125 НУ
Аяп Уаї бец Рго Аху Нів біб біз біу біу Ма) Рбе Аіа Азїз 03 біу 139 135 146
Тух Аза Ату Аза Твх біу Був Уаї б1іу Уа) Сув ї1їз Дів ТВх Бек біу 145 159 155 ївБо
Бко бі Аза ТЕ АБО інф) Уаї беї 1у Пец Дів Ар о А1в8 їм Тео Дер 155 178 175 бе Уаї Рко бе Уаї Аза ї1е Твх біу пів хХаї Рхо Агу Ака Меє ї1ег 150 ї85 їча
Сіу Тих Авр Аіїа Рпе іп біб Твж хо Т1е Узі бім Узі Тк Аху Вес 195 хо 245
ЇТїе ТБ Гуз Нів Ап оТує дей Узі Геї Авр УВі біб дДяв о їі8з Бко Ах 219 2515 22
Ї1їе Узі Муз біз Аза РрБе Рів То Аза Ап бек біу Аг Бо бБіу Бу 225 230 2135 340 уаї їжи ї1е Ав їі Рко Був Авр о Тіе бів бій бій без Уві Уді Ро 245 230 55 двр о Ткр о Азр Аку Рго Рпє Пув Бей біу бБіу Тухк Має бек Аку Їж Вко 250 ЕВ 275
Муз Бех Був Вре бек ТПж Азп бій Маії біу їі бе бій із БКіє Уві 278 во яв
Акч бен Мех бек біз бек бух Був Рхо Уаізї Бе Тук Ущі бБіу бі щу 238 235 305
Сув їва Аво Зег Бех бій біз їеви Ага Аку Рае Ма) бій ви ТВк о біу 05 310 315 380 їі Рто Чаї Аіа Зех ТВпх Сей Мебє Зіу Пен бі1у Бех тТук Рко Суя Авп 325 330 335
Айр біз цей бех бе) Нів Мебє йец біу Меє Нія сбіу тТвх Уві Тук Аі1в 340 343 350
АвпоТук Аза Чаї Ар Був Аіа Азройец ГПез пес дів Ре біу Уаії Ах 355 3650 З65
Рпе Авр Авр Агу Уві Твк о біу був Пец біз Аіїз Бе Аза Бег Аку діа зт7а 375 зво цув І1іеє Уаї Нів Т1іе Авр Т1е Авр Бек Азїа бій 118 біу Був Ап о Був зах зо 355 400
Сіп Ро Нів Уаї бек Ііє Сув Аза Авр Уаї Був цес Аїа їси Аку біу 405 410 415
Мес Авп оцув Іїе Бец біз Бек Аку Ті щу Був Меп Дяп Гец Авро рве 420 425 139
Бек йбув Тхр Аку біц біз Без біт 010 біп був Мув бі) рве Рко бец 435 440 445
Бех Рпе йбуз Так Рбе біу Авр Аза Її ро Рго біо Тух Аїа їі біл 450 455 469 туаї зе Авр бій ей ТВйх Авп о біу Авп Аза ї18 їі бек Тк о біу Уві 465 470 475 480 сіу біп Нів б)з Мес Тктр АТа Аїа біп Ні Тук йув Тут Аку Аво ро 485 490 195
Ака бів Тхр бео Твпк бек біу б1іу бе б51у Аза Мек біу Ре 81Уу Цей 500 505 510
Рго А1їа Аіа ІїІ1е б1іу Аза Аза Уві Аїа АкЯ Рхо Авр о Аза чаї Уві Маї зі5 520 525
Авр о Іїіє Авр біу Авр біу Бех Ре І18 Мес Азп Уаї біп бій ей Аза з30 535 5АЗ
Тв: ї12е Ака Уаї бі) Ап обец Бхо Маі був Т1і6є Меї без цез Авп Ап 245 550 555 вео
Сіп Віб8 бей біу Меї Маї Уаї піп Тер 510 Авр Ага Рпе Тук Пув Аза 2655 570 575
Авп о Ата Аіа Нів Тйх Тух без біу Ап Ро Зег був бек Аіїа Авр ї1е 58О 585 зо
Рпе Рко Авр Мебє Ге Гуз Ре Аза бі Аза Сув Азр 116 Рко Бех Лів 595 ОО 503
Ак Уві Бех Авп Уаі Аіїа Ар це Ак Аза Аїа її біб ТБ Меб Тк) 610 615 Бай
Авр оТВх Рко біу Рго Тух Пец Пец вро уаї Т1е Уві Рхо Вів бів Бій 625 630 635 640
Нів Уві Пей Рто Меб І1їе Рхо Бех Сіу Аза Піу Рре Був Ар Тв Ї1в 645 650 ва5
Тих біс Зіу Авр біу Ак Тих бех Тух бо 665 «2105 3 «2115 1998 «212» ДНК «213» Веїа миЇдагів «220» «221» мутація «2222» (1706)... (1706) «223» Заміщення гуанозиду тимідином «4005» З зсчусчасса состозсави сссавзсзсЕ Бесспоїсоск савсотоесвії аассазвавос 5 стазавеосос засосьсоах сісттсввнос сЕвссобЕЕб повососвосо сзавасосоВ 159 астосасвсу Сссзссабос ссбосваавсс ксассстсос азгісстасая зосасбосоєо ів всказзасас вавссскначо ассжЕкосЕскЕ ссазеваєса ззуасхсввї хто 2-4 сувЕссодос соопасуавсс сазаааваду ссоссатакос безссзавоєс Єссковосеє 500 чазучкчссаз ссавбобоасЕ сасікасосє засос соакопевахє сосасєсаазоє Зо стісасасдасє ставазссакє ссадсваксакто сбссосстсдес асуавсваза сов ке 412 чсозсспачо чабакуссаЗ звостассуца авузссоува собосеусос часа 480 ссткзчсцсета созвсоссяс абсазубакУ зсезчасаст соска с бокс оКЕ За чЕсуссвеса ссдассвзачу Ссовсзссує аєузссаусв созавкоассЕ созудазасе оо совассцахка зуодгзасава осствсїасс авусасавтіб агсїаесс ззагесвзад во часасбсоста узаїссосЄсав здааЧчссвКК ссЕссхассв вЕсскоачово зсопуцассх 80 чис сззвсо зссскссоівзи аузсасссау саусаввєкоу Ссзасесоговз СсуЗзуасвоу 780 сокстсссзазч соду сзсдса сабзсосвозз сгоссваазї созвУисбос засзавеаяоу ня
Чсказзасьсс сссазчсвчаї сЗзбзаззссУ йабдазтаазї соуваовачос Зоо КлКо чЕзазачасу здесчсссЗавз ссссаусдад зауєссазов засссусеза зекзасвуду 960 вкжссообод стаутассє: здабззоУкеа сдоудесЕезес ссітосваковз суавсОКех 1050 сеЕксакакої создоозасаса сзадастоєе сакзсовасї зкоасозсоца сазуцсоазчає 1980 ктоссаоско ссстсазуцчх стазакссзЗає дао ссззчавуєє сзадусакох 1149 чдекадесугз ссавоззсгос зчсаїтассдЧає ассчассссо ссзЗазаєсоУ сзачаасава 12550 свассссаєу Буєссасссу босізабуєс азассадсовЕї сасоуоусає завсвадаєє 1769 сктазазчЕста зазсадочав зссзвасьсу засбсесвсса ззсзозоаза зозаскадуї 1359 чЧчадсзааауа ззадастсос астзазесЕ яаачасахтскчЯ посдасзчсвахє бссгссасавз 1350 стабоссвссс азчусусссдЧча соззаксуасс аасочасзата сізесакззва гасезасЗе 1448 чзчезцювсс азасзсудче скусусазсає сасавзуцсася зазасостса ссзвощаоко 1500 асстсссзсо зуссзаздаас скасопоЗзЗсе доазоссассвау ссоссвссуч азоссцсазчее 1550 тпоссЧассавз асдсазсаце суєсдчасаєс засчачсаєз асзассссак бабака: 15329 саазачЕсозЗз стасааєсва засодааває стсосазсса взавсавкасі чобавасдає 16850 сазсакєссау часу ссааєсозаа часгачасосс з'аазцетаа ссзаусасає 1749 асабтасскску азаасссусс саваєстосї чЧастассткос ссзаєзкасс сававтсбсзсє 1500
Ччазасвзсока зсакссскіс сосссЧтасс зосавсутаз стовсскоза чоссасосвс 1880 савасвзатує бодасасксо адодзссЯсас ссодстсдасу бЄдвітЧгасс одсаєсвзачач 1929 сакчеучзєкас стакоаакєбісс зазкоадесуєс чуссссзаву абасовсгас зозузусчах 1959 ччваачавссї сосбассча 1598 «2105 4 «2115 665 «212» Білок «213» Веїа миЇдагів «220» «221» МІЗС ЕГЕАТОВЕ «2222» (569)...(569) «223» Заміщення триптофану лейцином «4005» 4
Ме діа діа Тпх Ре ТБ Авп Бко ТЕ Ре бех Рко Бех бек Таж Ркго 1 З 10 15
Без ТВх Був Тах без Ббуя Зех біп бетї бек їі бек Бех ТВх їГеу Рко 2 23 30
Бпа бе Тих Рго ко Був ТИХ Рго ТВу Рхо Ге Бе Нія Аку Вб Бей 35 о 45 бів ї1і8 бех Зех Беї бій беї нія МДув бек Бек Аїа їі Був Тк бів зо 55 5 тТвх бій Аза хо бдех бек Рко Аіа Т1е біс Ар обеї бек Рбе Уаі ет 70 та Ва дк Ре біу Рго Авр бій ВРго Ак Був біу бос Аквр о Уві Пец Уві біш 85 20 а
Аів реч біш Аку біо біу Уві ТВ Аза о уаї РБе Аїа Тух Бко щіу біх 100 105 118
А1їа Бех Мек біз Іі Нів біп Аіїа Пей ТЕ Аку Беж Пув ТВг ї16 АхЗ 115 120 135
Авп Чаї Пе Рхго Аку нів біз біп біу біу Уаї Ре Аза Аза 016 піу 135 135 140
Тук Аіїа Аку Аїа Тпкобіу Був Чаї біу Уа) Сув Ті Аза твгобек біу 145 159 155 1650 хто біу Аза Тв Азвб Гей Уаї бек бі1у ї-ей Діз Азр Аза їво Пец Дар 185 179 175 б5еї Ууаї Рхо їв Уаї Лів Ті Твх біу бів Узі Бк Ак Ака Меб Т1о 180 185 139 біу ТБт Авр Аія Ре бій біс Твх бко т1іє Уаї сій Уа! ТНЕ Ахка Бек 195 200 25
Іїе ТпЕ Був Нів Азп о Тук Без Уаїф ви АвроУаї Зі Леюр 116 Ро Ахга 219 215 хо її Уві Бйуз бій Аза Бе Рбе Гей Лів Авпобек бі Ак Рго о бБіу Бо 225 230 245 4
Уві їжи ї12 Азр о без хо був Азр о тТ1е біп біз бів Бей Узі Уві Рка 2-45 250 258
Азр оїхр о Авро Ак Ро Ре Ббуз без біу О1у Тук Меє бек Аку би ро 260 265 ато
Буз бек Був Ре бех Тпх Ап бі) Уві бБіу без Пес біз біп ї1є Уві) 875 280 яВ5
Ага їв Меб бек піц бех Був Був Рко Уві Бей Туг Уві Су Бі Сту 23 235 300
Сув без Авп о бех бех біз бій лез Аху Ака Бо Уві біз Гей ТБ бі1у 305 310 315 ЗО
Іїе Рко Уаї йіз бех Твх бе) Меї піу пес шіу бек Тук Рко Сук Азп 355 330 338
Авр обіц цем Хек цей Нів Мек Цей біу Мебє Нів Біу Тювг Уві Тухк Аі1а 340 345 50
Аво о Тує Ада Уаї Авр оГув Аіа Авр іч їви їез Аза Бе бі Уаі дкЗ
За збо 35
Бе Азродвр Ат Уві Тк біу був во бій Аїз ББа дів Зех деку діа
Зо 375 Б їув бів Уві Нів тів Ар оїіє Ав обеж Азз біб Ті біу Гуз Аа Гуз 385 390 3955 40 зів хо Нів Уві бЗех їі Сув йДів Ав» Узі Бу Її Аіз їез Ако іє 405 419 415
Мес Азп о Ббуа 1168 Пец сій бек Ак Ті піУу пу пецз; Авт Гей Авробвбе 420 425 438 зех Пув ТКр Акч біз сій еп біуУу біз бій Пув Був бі вне рЕо Певу 435 440 445
Бек Ріе Пуя Тьж Рпе біу Аяю Аїа Ті Рко Рко бЗіп Тк Дів ї1е бів 450 455 480 уві їжи Авробіш їжи ТвІх Аяп о сбфіу Аза Аза Ті їТ1і6 бок ТВкобіу Узі 4185 47 475 350 сіу вів нів біп Меб Ткр Аза Аза бів нів ТУує Дуб ТУук Аку Авп рев 4855 10 455 ако бій Тхр їви Твт бЗех біу біу Бви біу Аза Мебє бі РБе 0іу Гей
Бай аб зів хо Аза Аза Її 01іу Аза Аїа Уві Аїз Ак ржхо АвроАЛіз Уві Уві Уві 515 520 525
Ахр Іі Авр о біу Авр біу Зах Ве ї1іе Меї АвпоУві бів біо Сва Аза 530 535 540
ТВХ І1е ка Уві біб Авпобем Рко Уві цув їі Меї цеб йез Авто» лап 545 550 555 5БО
Сів Ні ез біу Меї Уві Узі біб без під Авр Ага ББе Тук Пув Аза 565 570 575
Азп о Ака Аіа Нів Тпх Тук цей біу Аза Рто Бех Пув Зеї Аза Авр о Т1е 580 585 Зоо
Епе Рго дДяр Меб йеи буя Рре Аза бій Аза Суз Аврог1е8 Бо Звж лів 00 БО5 зо дхч Чаї бек Азп Маї Аза Ар Пи дхЯ Аіа Аза їі біз Тьт Меб ву 610 515 62о
Авр о їВх Рко біуУу Рко Тухк Гео пес Ар оУаії Т1і6 Уаї ро Нів біп бів 525 530 535 щ-О
Нів Узі їі Рко Мес їі Рхо бех 031у Аів бі РБе Пуз АеротТвЕ ї1е 513 650 558
ТвВх сів біу Азр БіУу Ака ТВх Зек Тук
Бо 665 «-21055 «2115 2013 «212» ДНК «213» Агарідорві5 Іпаіапа «4005 5 зіччозосоуу саасавсазає васзасваса сссесіссаав Есбосібсо своисаааеса 6 сссезвсссеЕ ссссстазаєс ассабтассз абсбсосача: себососїбссо вооКосеси 128 зассссавсз ваєсасссбос сссстсссЧс сассосоачса гсвавісстаз сгштоссио 15 бссвісксся особастсав сасависвос аасчссасав сСеастсоишоо Кссазассавя ай ссгзоссазвс ссоаззасас: свсстссоча скссасьссзуа віосаасиссз свавдазиЗих БІ засассоссса ссозазасссї азазсубєсваа дзсчсадава сечсвоечео Кбасоскоча З«9 зЗусасаєсза кззачаєсксса ссаауєсстка асссозсто ссссзвіхоЗ ташоченке 420 спосгбсоссаса аасзвоазаза бабасссоса усазазузчає зсчзогозасо сосзЗзугава 150 ссвоазтасс зсасзасесво Сесадасосо здааодсівсяв весссУкуваОа спав чо чзакчезссЧЕ сачасазкує сосстссбогз пдсавссвсаз часязувоос козссуако що азсказізсза асозсЯчїксса азазчастссу ассускзазу Євасоєосо часа во сзразстаєс ксусаазкзцЧа сосказазчзає абсостзооз ЄКбаскозеуа весскКЕсеКЕ Тихо ствасрассс сезасаЗасо СоазасскаЗсс єсаЗсгцасЗ кЕсотаваича Євессваюна то савзссбосоя бЕсссазсса оудвасавоауст зідазаєтас ссзасєсвіяк зсстаздака ча шосааассссо сззвачаскс бсасссоЗаз сазассасста сасзаксо заз скавз зп0 зачсскусЗЕ Басагсакоу сазсСУуЧЕКУЄ Стодвассссв зстаєовасс зозчсачуєсс зво счіксвасіка саззуасєосс саскусзазе асчисуас заосозУо свое сає 1020 часчасзазі сассуєтаса басосскКазча абасабоччав сзчбаасосо чавеоасуше 108о часзузасака ахзасЕкКаїЕ «чссодез заазчвзаччє Ссовсовпассо сзссасозао 1140 зазсітзвуЗ сссскгусувзо саздуоссазу аксчсїсаєв Ссзвсовссца ссср 12509 ассуодааза асазоасксс совбосеасої зсчсасззса асЗєсаацек зУсксгосав іо чачасзваса ачусссссЗа заассчацеє ууазчаучссса ззстсаакс сочачоу 132 зазаакавУє сдазсосаса зазасазаво сесссаєбув зсгссвзучас еко 1380 есасссесс сасачсасчс чассвачаєс ссссоасавУє суазссазсза азаваазссата 1440 вівауксзску чсоссоддся зсяєсазаєу содасодсзс азссстасза сгзсаводазу 1569 ссавччсвує пустассатс ацдзазачссс сдддазссасча зссссузнос босбусбсосо 1569 аксодазсЯє ссоассоссва ссстізаєоса асазскУсча збассувсозу ачабдоваво 16925 їссвсавасєча аксчкусавуа пдосудосаса асссазузсао задсвзаскісо ззсззазаса 1585 тс саа асавссвоса Ксоксозсаку зссзсосззЕ зЗзазазаеЗ ЧЕК асвац 1748 читазссозавз стсасвсвсК єстосдсоЗзає ссзустісвоч вззасзвоаві Ззопжосчавах 150 акаксчсотаи ссосачсазс Єкзсзззасс сстазсузсоа зчагпасзва дчазачозоає тв сксезчазчава стахєссауасє забчссззаєс звсзосвочас стсваосссоак ззасасоВе 1325 тазкссосасо зазазсасаї зксоссзаса весссосзавасаз засво савсзакеко 13853 зівастозву одачасодесЯя засбаавквос баз -ЖЗ13 «2105 6 «2115» 670 «212» Білок «213» Агарідорвів Іпаіапа «4005» 6
Мехс Аза Азїа Аза ТЬБк ТВ ТБ ТВЕ Тах Ту бек беє бек Ті Кек Бе ії З 10 15 бек Тпх о Пуз Рхо Бех Рхо Бех бек Зет Мув бек Ро Гео РЕ Ті Бек о 25 ЗО
Аку Рпе Зевх Бей Бхо Ре Зах лес АзпоРто Аво Був 5еє бек беж Бу
Бех Аку Ахоа дхЯ Б5іУу ї11є уз бек Бех бек Руз мех бБеє Ті бек Аїа 5 55 БО
Чаї їз Аза ТВ Тахо ТВх о Авп о Уві ТВх ТвВЕ ТВу Бо бек Бго ТВ був 55 7о 15 о
Рхо ТВх був Вхо біб Те Рпе ї165 Бек Аха Ре Аза ро Лавр о біп РКО ве зо з5
Ако бу біу діа Авр Ті1є Пец Уаі біз Аіз без бін Ахе бій піу Уві 100 105 118 пі Так Уаї вве діа Тух Рго 1Уу 01у Аза Бек Мах бій 11 Ніз бій 115 120 155 діа Гей ТвВх Аку Зеї бек бек 116 Ак Ап оУаії Це Рко Ака Бів 31 130 135 145
Сів біу біу Маії Рре Аза Аза бій біу Тук Аїз Ахку бек Зек бі ПДув 145 155 155 160 го біу ї16е Сув Іі Віа Твах бЗех б1у Рко біу Аїа тв Авгобей Уві 165 179 175
Зах біуУу Бей Аза Авр Аза Бей це АвробБек Уа) РКО Ббеи Уві Аза Тіз 189 185 10
Те Бі піп Уаї Ро Аку Аха Меї Ті біу БТБтх Авр о Лів Ре Зі бій 135 200 05
Тих Рко Ті Уві біс Уаї Тк Ака Бех Ті їх Ббуз Ні Аво о Тук цех 219 215 вий
Уаї Мес Азр Уві бін Аяр Тіз Рго Ака її Тіз біз біо Аза Ре Ре 230 «35 24 їз Аіїа Тк бек біУу Ага Вхго 0іу Рхо Уаї Гей Уві Аво Уві Рго Був 250 5
Авр о ї11із бів бБіп бій пей діа Тіє Бо АзпоТкр обі біз йіа Меї Аха 250 265 21
Тез Рко біу Тук Мебє бЗех Аку Меб Ркто Був Вко Ро бід АвроЗзех Нія 280 285 їєо біз бів І1е Уаїі Ака ви ЇїТе бек бій бек буз Був ВБгао Маї Бе ке в За 305
Тукх Уві біу біу біУу Суз Без Авп ойек бек Авр обі їз Біу Аку Ре 305 310 315 зо
Уаї сі Геч Тих біУу Тів Бко Уві Аіа бек Тв їши Ме біу ви біу 325 330 335 пек Тух Рко Сув Авр Азр бій пе) бех Бей Нів Меб Без Піу Мек Нів 340 345 350
Зіу ТЬВжх Уві Тух Діа Дяп Тук Азія Уді бій нів ех Авробен Бен Бе 355 Зоо 365 діа Ре біу Уаі Аку Рре Ар Авр Ах Уві тТвх біуУу Був Пви із дів 37о 315 зво пе Аза бБет Аху Аза Був їіе Узі Ніз Т1їе Азр ї1іє Ар бок дія СИ 385 390 235 400 їТїе бі Сув АвпоПув Тах Рто Нів Уві дек Узі Сув б1іу Азр о Уаї Туз 105 419 415 їе-з Аза бен біп 5зіу Ме Ап був Уві Пец зів Акп о Агу Ат бі біб з2й 425 4150 йец Пув їз Авр о Ре біу уаї Тхтр Ак Авп обі Пец Авб Уві піп оПув 435 440 445 біп Бу Рпе Рхо Мем бек Рпе Був Тпх Ве піу бів Аіа їі рРго вго 458 455 45О сів Тух Аза Тіе Пув Уазї Бей Авр бій Пем ТВЕ Ав біу Був Аза Тіе 465 47 4178 480 їі Бех Твх Біу чаї щі біп Ніз біз Меї Ткр Аза Аза пів Ве тТук 485 450 135
Авп о Тук Пцув Буг Рко Аку зі Тхр без Зех бак біу біу ем БУ Аза
ОО 505 518
Мехї бі Рпе біу пе Рхо дів Аза ті біу Азз Зег о Ууаї діа Аяп о рКо 515 ЖЕО 5а5
Азв Аїа Іі Уаії Уві Авр тіє Авр обі Авр бі бБеї РББе їі Меб Ап
З 545 549
Уаї бів біз пев Аза Твх Тіз Ага Уві 5Біз Авп о Гео Бко Маї був Уві 545 55О 555 56 їви Сех їво Аап Авп о біб Ні бе біу Меє Уві Ме бів Ткр біз Авр 55 570 575 дха Ре Тухк Був Аіа Авп о Агча Аза Нів Тк оВбе ішц Сіу АвроБкКо Аза
БНО 5а5 590 віз біз Аве бін Ті РБе Рго дви оМеб Бе без Рв лЛіа Аіз Аза Сув 55 оо БО сіу Ті Рко діа діа Ак Уаі ТБжЕ Пув Буз Аза Ар о беи Агу біз Аїа 10 515 БИЙ її Біп Твк Ме без Авр о ТАх Бко бі Рго Тук без без Ар оуУві Тітв 028 539 63 540
Сув Рко Нів біп січ Ні Узі Без ро Меб їі РБко Ачзп об1іу БіУу ТвЕ 6415 655 055
Рре Аяп Азр о Уві тї1іе ТВх біз бі Авр біУу Ако ї3е Пуз Туг 56О 65 70
Claims (6)
1. Толерантна до інгібуючих АЇ 5 гербіцидів рослина буряка звичайного та її органи, які включають мутацію в позиції, відповідній позиції 1705-1707 ендогенного гена ацетолактатсинтази (АГ 5), показаного еталонною нуклеотидною послідовністю ЗЕО ІО МО: 1, причому зазначений мутантний ген АЇ 5 кодує поліпептид А! 5, який принаймні на 95 905 ідентичний поліпептиду А! 5, що має амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 2, причому зазначений поліпептид АЇ 5 містить лейцин замість триптофану у позиції 569 поліпептиду АЇ 5, причому рослина буряка звичайного є принаймні у 500 разів менш чутливою до інгібуючого АЇ 5 гербіциду в порівнянні з рослиною дикого типу, що не містить зазначеної мутації.
2. Рослина буряка звичайного та її органи за п. 1, причому мутантний поліпептид АЇ 5 є ідентичним послідовності поліпептиду, визначеній у 5ЕО ІЮ МО: 4.
3. Рослина буряка звичайного та її органи за п. 1, в яких мутантний ендогенний ген АЇ 5 є ідентичним нуклеотидній послідовності, визначеній у зЕО ІЮО МО: 3.
4. Рослина буряка звичайного та її органи за п. 1, які є толерантними до одного або кількох інгібуючих АЇ 5 гербіцидів, які належать до групи, яка складається з сульфонілсечовинних гербіцидів, сульфоніламінокарбонілтриазолінонових гербіцидів, імідазолінонових гербіцидів, триазолпіримідинових гербіцидів та піримідиніл(тіо)бензоатних гербіцидів.
5. Рослина буряка звичайного та її органи за п. 1, які є гомозиготними щодо мутації ендогенного гена ацетолактатсинтази (АЇ 5).
6. Рослина буряка звичайного та її органи за п. 1, причому органи є насінням.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP10187751 | 2010-10-15 | ||
| US39446310P | 2010-10-19 | 2010-10-19 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA126466C2 true UA126466C2 (uk) | 2022-10-12 |
Family
ID=43466458
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAA201306008A UA113721C2 (uk) | 2010-10-15 | 2011-10-13 | Толерантний до інгібуючого als гербіциду мутант буряку звичайного |
| UAA201610997A UA126466C2 (uk) | 2010-10-15 | 2011-10-13 | Толерантний до інгібуючого als гербіциду мутант буряка звичайного |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAA201306008A UA113721C2 (uk) | 2010-10-15 | 2011-10-13 | Толерантний до інгібуючого als гербіциду мутант буряку звичайного |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US10865406B2 (uk) |
| EP (2) | EP2627168B1 (uk) |
| JP (3) | JP6093303B2 (uk) |
| CN (3) | CN108034668A (uk) |
| CA (1) | CA2814591C (uk) |
| CL (1) | CL2013000928A1 (uk) |
| DK (1) | DK3326453T5 (uk) |
| EA (2) | EA036006B1 (uk) |
| ES (1) | ES2954135T3 (uk) |
| FI (1) | FI3326453T3 (uk) |
| HR (1) | HRP20230964T1 (uk) |
| HU (1) | HUE063371T2 (uk) |
| LT (1) | LT3326453T (uk) |
| MA (1) | MA34605B1 (uk) |
| PL (2) | PL3326453T3 (uk) |
| RS (2) | RS64602B1 (uk) |
| UA (2) | UA113721C2 (uk) |
| WO (1) | WO2012049268A1 (uk) |
Families Citing this family (25)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| UA112533C2 (uk) | 2010-10-15 | 2016-09-26 | Баєр Інтеллекчуел Проперті Гмбх | Застосування інгібуючих als гербіцидів для боротьби з небажаною рослинністю на площах вирощування толерантного до інгібуючих als гербіцидів буряку звичайного |
| JP2014527973A (ja) | 2011-09-23 | 2014-10-23 | バイエル・インテレクチユアル・プロパテイー・ゲー・エム・ベー・ハー | 非生物的な植物ストレスに対する作用剤としての４−置換１−フェニルピラゾール−３−カルボン酸誘導体の使用 |
| WO2013050324A1 (de) | 2011-10-06 | 2013-04-11 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Abiotischen pflanzenstress-reduzierende kombination enthaltend 4- phenylbuttersäure (4-pba) oder eines ihrer salze (komponente (a)) und eine oder mehrere ausgewählte weitere agronomisch wirksame verbindungen (komponente(n) (b) |
| CA2890489C (en) * | 2012-12-13 | 2022-05-03 | Guy Weyens | Method to develop herbicide-resistant sugar beet plants |
| LT2931034T (lt) | 2012-12-13 | 2018-10-10 | Bayer Cropscience Ag | Als slopinančių herbicidų panaudojimas nepageidaujamos augmenijos kontrolei augaluose beta vulgaris, kurie tolerantiški als slopinantiems herbicidams |
| DE102013010026A1 (de) | 2013-06-17 | 2014-12-18 | Kws Saat Ag | Resistenzgen gegen Rizomania |
| CA2917762A1 (en) | 2013-07-12 | 2015-01-15 | Bayer Cropscience Nv | Als inhibitor herbicide tolerant mutant plants |
| EA201692516A1 (ru) * | 2014-06-12 | 2017-04-28 | Сесвандерхаве Н.В. | Применение селектируемого маркерного гена в способе и системе трансформации протопластов сахарной свеклы |
| CN106715697A (zh) * | 2014-06-12 | 2017-05-24 | 西斯凡德尔哈维公众公司 | 通过talen平台技术的甜菜原生质体的转化方法 |
| CN104206400B (zh) * | 2014-09-26 | 2015-10-07 | 青岛瀚生生物科技股份有限公司 | 甲酰氨基嘧磺隆和甲基碘磺隆钠盐复合除草剂 |
| CN105779479B (zh) * | 2016-04-12 | 2017-08-25 | 江苏省农业科学院 | 一种als突变型基因及其在抗除草剂方面的应用 |
| CN105695493A (zh) * | 2016-04-12 | 2016-06-22 | 江苏省农业科学院 | 一种als突变型基因在抗除草剂方面的应用 |
| EP3567111A1 (en) | 2018-05-09 | 2019-11-13 | KWS SAAT SE & Co. KGaA | Gene for resistance to a pathogen of the genus heterodera |
| EP3571925A1 (en) | 2018-05-24 | 2019-11-27 | KWS SAAT SE & Co. KGaA | Artificial marker allele |
| EP3623379A1 (en) | 2018-09-11 | 2020-03-18 | KWS SAAT SE & Co. KGaA | Beet necrotic yellow vein virus (bnyvv)-resistance modifying gene |
| EP3628738A1 (en) * | 2018-09-25 | 2020-04-01 | KWS SAAT SE & Co. KGaA | Method for controlling weed beets and other weeds |
| EP3628160A1 (en) | 2018-09-25 | 2020-04-01 | KWS SAAT SE & Co. KGaA | Use of glyphosate herbicide for controlling unwanted vegetation in beta vulgaris growing areas |
| CA3129973A1 (en) | 2019-02-18 | 2020-08-27 | KWS SAAT SE & Co. KGaA | Gene for resistance to plant disease |
| EP3696188A1 (en) | 2019-02-18 | 2020-08-19 | KWS SAAT SE & Co. KGaA | Gene for resistance to plant disease |
| BR112022009067A2 (pt) | 2019-11-12 | 2022-08-09 | Kws Saat Se & Co Kgaa | Gene para resistência a um patógeno do gênero heterodera |
| EP3957168A1 (en) | 2020-08-17 | 2022-02-23 | KWS SAAT SE & Co. KGaA | Plant resistance gene and means for its identification |
| BR112023024858A2 (pt) | 2021-06-08 | 2024-02-15 | Yissum Res Dev Co Of Hebrew Univ Jerusalem Ltd | Plantas de gergelim resistentes a herbicidas que inibem acetolactato sintase, composições e métodos para produzir as mesmas |
| WO2023031117A1 (en) | 2021-09-02 | 2023-03-09 | Bayer Aktiengesellschaft | Performance gain in als inhibitor herbicide tolerant beta vulgaris plants by combination of best fitting als large and small subunits |
| WO2023031112A1 (en) | 2021-09-02 | 2023-03-09 | Bayer Aktiengesellschaft | Als-inhibitor herbicide tolerant beta vulgaris hybrids with increased heterosis |
| AR127377A1 (es) | 2021-10-15 | 2024-01-17 | Kws Saat Se & Co Kgaa | Mutantes de beta vulgaris tolerantes a herbicidas inhibidores de als |
Family Cites Families (23)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2080506A (en) | 1933-04-14 | 1937-05-18 | Western Electric Co | Process of and apparatus for electroplating articles |
| US5378824A (en) | 1986-08-26 | 1995-01-03 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Nucleic acid fragment encoding herbicide resistant plant acetolactate synthase |
| ATE342968T1 (de) * | 1995-04-20 | 2006-11-15 | Basf Ag | Auf basis ihrer struktur entworfene herbizid resistente produkte |
| WO1997008327A1 (fr) * | 1995-08-30 | 1997-03-06 | Nissan Chemical Industries, Ltd. | Gene de l'acetolactate synthase resistant aux herbicides |
| SK286030B6 (sk) * | 1996-07-17 | 2008-01-07 | Michigan State University | Rastlinný materiál cukrovej repy rezistentnej voči herbicídom, spôsob produkcie herbicídne rezistentnej rastliny cukrovej repy a spôsob kontroly burín v prítomnosti týchto rastlín |
| US5773702A (en) * | 1996-07-17 | 1998-06-30 | Board Of Trustees Operating Michigan State University | Imidazolinone herbicide resistant sugar beet plants |
| US5859348A (en) | 1996-07-17 | 1999-01-12 | Board Of Trustees Operating Michigan State University | Imidazolinone and sulfonyl urea herbicide resistant sugar beet plants |
| DE19821614A1 (de) | 1998-05-14 | 1999-11-18 | Hoechst Schering Agrevo Gmbh | Sulfonylharnstoff-tolerante Zuckerrübenmutanten |
| DE19821613A1 (de) * | 1998-05-14 | 1999-11-18 | Hoechst Schering Agrevo Gmbh | Transgene Sulfonylharnstoff-tolerante Zuckerrübenmutanten |
| US7612255B2 (en) * | 1999-02-03 | 2009-11-03 | Jonathan Gressel | Transgenic plants for mitigating introgression of genetically engineered genetic traits |
| AR036712A1 (es) * | 2001-10-03 | 2004-09-29 | Syngenta Participations Ag | Composicion herbicida |
| WO2004040011A1 (en) | 2002-10-29 | 2004-05-13 | Advanta Canada Inc. | Assay for imidazolinone resistance mutations in brassica species |
| WO2004062351A2 (en) * | 2003-01-09 | 2004-07-29 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Gene encoding resistance to acetolactate synthase-inhibiting herbicides |
| US7432082B2 (en) | 2004-03-22 | 2008-10-07 | Basf Ag | Methods and compositions for analyzing AHASL genes |
| US7355098B2 (en) | 2004-06-22 | 2008-04-08 | Saskatchewan Wheat Poo1 | Brassica AHAS genes and gene alleles that provide resistance to imidazolinone herbicides |
| ES2692594T1 (es) * | 2005-03-02 | 2018-12-04 | Instituto Nacional De Tecnologia Agropecuaria | Plantas de arroz resistentes a herbicidas, polinucleótidos que codifican proteínas de la subunidad grande de la acetohidroxiácido sintasa resistentes a herbicidas y métodos para su uso |
| TR200709185T2 (tr) * | 2005-07-01 | 2008-02-21 | Basf Aktiengesellschaft | Herbisitlere dayanıklı ayçiçeği bitkileri, herbisitlere dayanıklı asetohidroksiasit sintaz geniş alt ünite proteinlerini kodlayan polinükleotidler ve kullanma metotları |
| AR055593A1 (es) * | 2005-08-01 | 2007-08-29 | Basf Ag | Un metodo para controlar malezas |
| VN21892A1 (en) | 2007-04-04 | 2010-01-25 | Basf Plant Science Gmbh | Ahas mutants |
| GB0712884D0 (en) * | 2007-07-03 | 2007-08-15 | Syngenta Ltd | Formulations |
| EP2700722B1 (en) | 2007-10-05 | 2019-06-19 | Cibus Europe B.V. | Mutated acetohydroxyacid synthase genes in brassica |
| CA2737939C (en) | 2008-09-26 | 2021-04-27 | Basf Agrochemical Products B.V. | Herbicide-resistant ahas-mutants and methods of use |
| CA2890489C (en) | 2012-12-13 | 2022-05-03 | Guy Weyens | Method to develop herbicide-resistant sugar beet plants |
-
2011
- 2011-10-13 CA CA2814591A patent/CA2814591C/en active Active
- 2011-10-13 PL PL17206713.4T patent/PL3326453T3/pl unknown
- 2011-10-13 CN CN201711329651.5A patent/CN108034668A/zh active Pending
- 2011-10-13 RS RS20230710A patent/RS64602B1/sr unknown
- 2011-10-13 HR HRP20230964TT patent/HRP20230964T1/hr unknown
- 2011-10-13 CN CN2011800497663A patent/CN103200812A/zh active Pending
- 2011-10-13 PL PL11768029T patent/PL2627168T3/pl unknown
- 2011-10-13 DK DK17206713.4T patent/DK3326453T5/da active
- 2011-10-13 HU HUE17206713A patent/HUE063371T2/hu unknown
- 2011-10-13 FI FIEP17206713.4T patent/FI3326453T3/fi active
- 2011-10-13 JP JP2013533223A patent/JP6093303B2/ja active Active
- 2011-10-13 EA EA201692296A patent/EA036006B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2011-10-13 UA UAA201306008A patent/UA113721C2/uk unknown
- 2011-10-13 US US13/821,969 patent/US10865406B2/en active Active
- 2011-10-13 ES ES17206713T patent/ES2954135T3/es active Active
- 2011-10-13 UA UAA201610997A patent/UA126466C2/uk unknown
- 2011-10-13 RS RS20210511A patent/RS61766B1/sr unknown
- 2011-10-13 EP EP11768029.8A patent/EP2627168B1/en active Active
- 2011-10-13 LT LTEP17206713.4T patent/LT3326453T/lt unknown
- 2011-10-13 CN CN201610822031.4A patent/CN106386474A/zh active Pending
- 2011-10-13 EP EP17206713.4A patent/EP3326453B9/en active Active
- 2011-10-13 MA MA35819A patent/MA34605B1/fr unknown
- 2011-10-13 WO PCT/EP2011/067925 patent/WO2012049268A1/en active Application Filing
- 2011-10-13 EA EA201390454A patent/EA027918B1/ru not_active IP Right Cessation
-
2013
- 2013-04-05 CL CL2013000928A patent/CL2013000928A1/es unknown
-
2017
- 2017-02-10 JP JP2017022680A patent/JP6375398B2/ja active Active
-
2018
- 2018-07-23 JP JP2018137782A patent/JP2018183168A/ja active Pending
-
2020
- 2020-11-06 US US17/091,776 patent/US20210054360A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| UA126466C2 (uk) | Толерантний до інгібуючого als гербіциду мутант буряка звичайного | |
| US8030547B2 (en) | Gene coding for acetolactate synthase | |
| US20210189416A1 (en) | Creation of herbicide resistant gene and use thereof | |
| CN108004224B (zh) | 使植物具有除草剂抗性的水稻als突变型蛋白及其应用 | |
| BR122017021070B1 (pt) | método para produzir uma planta lenhosa perene transgênica apresentando um crescimento aumentado medido pela altura em comparação com seu tipo selvagem | |
| AU2016318051A1 (en) | Diplospory gene | |
| CN115433722A (zh) | 调控水稻耐盐性的类受体蛋白激酶strk2蛋白、基因及应用 | |
| CN106755019A (zh) | 一种小麦als突变型基因及其蛋白在抗除草剂方面的应用 | |
| US20220204980A1 (en) | Restorer plants | |
| CN106868027B (zh) | 粳稻als突变型基因及其蛋白在抗除草剂方面的应用 | |
| Zou et al. | Fine mapping and characterization of the or gene in Chinese cabbage (Brassica rapa L. ssp pekinensis) | |
| US20220282271A1 (en) | Herbicide resistant plants and methods of making and using | |
| CN106591334A (zh) | 一种小麦als突变型基因及其在抗除草剂方面的应用 | |
| CN114032218A (zh) | 新型抗除草剂乙酰辅酶a羧化酶突变体及其应用 | |
| US20120011599A1 (en) | Hyddroperoxide genes and tolerance to abiotic stress in plants | |
| US11312967B2 (en) | Restorer plants | |
| CN106868028B (zh) | 粳稻的als突变型基因及其蛋白和应用 | |
| CN104450739B (zh) | 一种水稻源抗虫相关基因OsHR1及其编码产物与应用 | |
| WO2024031987A1 (zh) | 植物耐盐碱基因及其用途 | |
| CN106434714B (zh) | 一种小麦als突变型基因及其蛋白和应用 | |
| CN117701514A (zh) | 调控作物氮肥利用率、产量和籽粒外观品质的基因及其应用 |