UA123672C2 - Похідні моно- або дизаміщених індолів як інгібітори реплікації вірусів денге - Google Patents

Description

А: являє собою Н, Е» являє собою Е або СІ, а Ез являє собою Н або СН»;

В: являє собою Е, Е»2 являє собою ЕК, а Ез являє собою Н;

Ві являє собою СН»з, Н2 являє собою ОСН», а Ез являє собою Н;

Ві являє собою СН», В» являє собою ЕК, а Ез являє собою НН;

Ві являє собою СН», В2 являє собою Н, а Ез являє собою Е;

Ві являє собою СІ, Е2 являє собою Н, а Ез являє собою СН;

Ві являє собою ОСЕ», Рг являє собою Н або ОСН», а Ез являє собою Н; і

Ві являє собою ОСЕ», Р2 являє собою Н, а Ез являє собою СН».

Також винахід розкриває способи запобігання вірусним інфекціям або лікування вірусних інфекцій, які спричиняються вірусом денге, із застосуванням вказаних сполук, додатково розкриває фармацевтичні композиції або комбіновані препарати на основі таких сполук. Даний винахід також стосується способів одержання цих сполук.

Даний винахід стосується похідних моно- або дизаміщених індолів, способів запобігання інфекціям або лікування інфекцій, спричинених вірусом денге, із застосуванням цих сполук, а також стосується цих сполук для застосування як лікарського препарату, більш переважно для застосування як лікарського препарату для лікування інфекцій або запобігання інфекціям, спричиненим вірусом денге. Даний винахід додатково стосується фармацевтичних композицій або комбінованих препаратів на основі таких сполук, композицій або препаратів для застосування як лікарського препарату, більш переважно для запобігання інфекціям або лікування інфекцій, спричинених вірусом денге. Даний винахід також стосується способів одержання цих сполук.

ПЕРЕДУМОВИ СТВОРЕННЯ ВИНАХОДУ

Флавівіруси, які переносяться комарами або кліщами, спричиняють інфекції у людини, які становлять загрозу життю, такі як енцефаліт і геморагічна гарячка. Відомо чотири різних, але тісно пов'язаних серотипи флавівірусу, що спричиняє денге, які називаються ОЕММ'І, -2, -3 і -4.

Денге є ендемічним захворюванням для більшості тропічних і субтропічних регіонів усього світу, переважно у міських і напівміських районах. Згідно з даними Всесвітньої організації охорони здоров'я (МУ/НО), 2,5 мільярда людей, з яких 1 мільярд дітей, перебувають під загрозою інфікування ОЕММ (МУНО, 2002). За оцінками, щорічно в усьому світі виникає від 50 до 100 мільйонів випадків гарячки денге (ОР), півмільйона випадків захворювання денге у тяжкій формі (тобто геморагічної гарячки денге (ОНР) і синдрому шоку під час геморагічної гарячки денге

ІОЗ5І), а також більш ніж 20000 смертей. ОНЕ стала основною причиною госпіталізації та смерті дітей в ендемічних регіонах. Загалом денге є найбільш поширеною причиною захворювання, спричиненого арбовірусом. Через нещодавні великі спалахи у країнах, розташованих у

Латинській Америці, Південно-Східній Азії і західній частині Тихого океану (у тому числі в

Бразилії, Пуерто-Рико, Венесуєлі, Камбоджі, Індонезії, В'єтнамі, Таїланді), кількість випадків денге за останні роки значно збільшилася. Не лише число випадків денге збільшується із поширенням захворювання в нові райони, але й спалахи мають тенденцію набувати більш тяжкого перебігу.

Для запобігання захворюванню та/або контролю захворювання, пов'язаного з інфекцією, спричиненою вірусом денге, на даний час єдиними доступними способами є стратегії,

Зо спрямовані на знищення комарів з метою контролю чисельності переносника інфекції. Хоча й у розробці вакцин проти денге має місце наявний прогрес, існує багато труднощів. Вони включають існування явища, що має назву антитілозалежне посилення (АОЕ).

Одужання після інфекції, спричиненої одним серотипом, забезпечує довічний імунітет проти даного серотипу, однак надає лише частковий і тимчасовий захист проти наступної інфекції, спричиненої одним із трьох інших серотипів. Після інфікування іншим серотипом, вже існуючі гетерологічні антитіла формують комплекси із серотипом вірусу денге, який щойно інфікував організм, але не нейтралізують патоген. Замість цього, як передбачається, полегшується проникнення вірусу в клітини, що призводить до неконтрольованої реплікації вірусу та підвищення піку титрів вірусів. Як під час первинної, так і під час вторинної інфекцій підвищення титрів вірусу пов'язане із захворюванням денге в більш тяжкій формі. Однією з причин того, що діти є більш схильними до захворювання денге у тяжкій формі, ніж дорослі, може бути той факт, що материнські антитіла можуть легко передаватися немовлятам під час грудного вигодовування.

У місцевостях із поширенням двох або більше серотипів, котрі циркулюють одночасно, які називаються також регіонами з підвищеною ендемічністю, ризик захворювання денге у серйозній формі значно вищий через підвищений ризик перенесення вторинної, більш тяжкої інфекції. До того ж, в умовах підвищеної ендемічності ймовірність появи більш вірулентних штамів є підвищеною, що так само підвищує ймовірність геморагічної гарячки денге (ОНЕ) або синдрому шоку під час геморагічної гарячки денге.

Комарі, які переносять вірус денге, у тому числі Аєдез аеадурії та Аєдез аіІрорісіи5 (тигровий комар), рухаються по земній кулі на північ. Згідно з даними Центрів контролю і профілактики захворювань (СОС) Сполучених Штатів (США), обидва види комарів в даний час є поширеними в південному Техасі. Поширення на північ комарів, які переносять вірус денге, не обмежується поширенням у США, а спостерігається також і в Європі.

Нещодавно (грудень 2015 року) вакцина проти вірусу денге, одержана Запоїї Разхіеиг, була вперше схвалена в Мексиці. Вакцина також була схвалена в Бразилії, на Філіппінах і в

Сальвадорі. Експертиза й тестування тривають в інших країнах, де денге є пріоритетом для охорони здоров'я. Проте вакцина залишає широкі можливості для вдосконалення через обмежену ефективність, особливо проти ОЕММ-1 і -2, низьку ефективність у суб'єктів, які раніше бо не були заражені флавівірусами, і надто тривалу схему прийому препарату.

Незважаючи на ці недоліки, вакцина являє собою революційний продукт в ендемічних умовах, оскільки вона забезпечуватиме захист більшої частини населення, але ймовірно не немовлят, які найбільше страждають від денге. Крім того, схема прийому препарату та надто обмежена ефективність у суб'єктів, які раніше не були заражені флавівірусами, робить її непридатною та недоцільною/неекономічною для мандрівників із не ендемічних районів у райони, ендемічні за денге. Вищезгадані недоліки вакцин проти вірусу денге є причиною того, чому існує потреба у противірусному засобі проти збудника денге для передконтактної профілактики денге.

До того ж, на даний час відсутні спеціальні противірусні лікарські засоби для лікування або запобігання інфекції, спричиненої вірусом гарячки денге. Очевидно, що все ще існує велика нереалізована потреба медицини у терапевтичних засобах для запобігання вірусним інфекціям або лікування вірусних інфекцій у тварин, більш конкретно в людини, а особливо вірусних інфекцій, спричинених флавівірусами, більш конкретно вірусом денге. Надзвичайно необхідними є сполуки з придатною противірусною ефективністю, які не мають побічних ефектів або мають низькі ступені прояву побічних ефектів, характеризуються широким спектром активності проти багатьох серотипів вірусу денге, низькою токсичністю та/або придатними фармакокінетичними або фармакодинамічними властивостями.

Отже, в даному винаході передбачаються сполуки, похідні моно- або дизаміщених індолів, які проявляють високоефективну активність проти всіх чотирьох (4) серотипів вірусу денге.

Також сполуки згідно з даним винаходом мають придатний фармакокінетичний профіль, і несподівано ці конкретні сполуки проявляють покращену хіральну стабільність.

КОРОТКИЙ ОПИС ВИНАХОДУ

Даний винахід базується на несподіваному відкритті того, що щонайменше одна із вищезгаданих проблем може бути розв'язана за допомогою наявних сполук за даним винаходом.

У даному винаході представлені сполуки, які, як було показано, мають високу противірусну активність проти всіх чотирьох (4) серотипів, відомих на сьогодні. До того ж у даному винаході продемонстровано, що всі ці сполуки ефективно інгібують проліферацію вірусу денге (ОЕММ).

Таким чином, дані сполуки являють собою придатний клас високоефективних сполук, які можна

Зо застосовувати в лікуванні вірусних інфекцій та/або запобіганні вірусним інфекціям у тварин, ссавців і людей, більш конкретно для лікування інфекцій та/або запобігання інфекціям, спричиненим вірусами денге.

До того ж, даний винахід стосується застосування таких сполук як лікарських препаратів і застосування їх для виготовлення лікарських препаратів для лікування вірусних інфекцій та/або запобігання вірусним інфекціям, які, зокрема, спричиняються вірусами, що належать до родини вірусів денге, у тварин або ссавців, більш конкретно в людини. Даний винахід також стосується способів одержання всіх таких сполук і фармацевтичних композицій, що включають їх в ефективній кількості.

Даний винахід також стосується способу лікування вірусних інфекцій або запобігання вірусним інфекціям, що спричиняють денге, у людей за допомогою введення ефективної кількості однієї або декількох таких сполук або їхніх фармацевтично прийнятних солей необов'язково в комбінації з одним або кількома іншими лікарськими засобами, наприклад з іншим противірусним засобом, пацієнту, який потребує цього.

Одним аспектом даного винаходу є забезпечення сполук формули (1): в Е й, (о; ОСсНз «А о,

С М 5 ко Н о х

Кз (), їх стереоїзомерної форми, фармацевтично прийнятної солі, сольвату або поліморфу, які містять моно- або дизаміщену індольну групу; при цьому вказана сполука вибрана з групи, де

А: являє собою Н, Е»: являє собою Е або СІ, а Ез являє собою Н або СН»;

В: являє собою ЕК, Е2 являє собою ЕК, а Ез являє собою НН;

Ві являє собою СН»вз, Н2 являє собою ОСН», а Ез являє собою Н;

Ві являє собою СН», В» являє собою ЕК, а Ез являє собою НН;

Ві являє собою СН», В»: являє собою Н, а Ез являє собою Е;

В: являє собою СІ, Е2 являє собою Н, а Ез являє собою СНз;

Ві являє собою ОСЕ», Рг являє собою Н або ОСН», а Ез являє собою Н; і

Ві являє собою ОСЕ», Р2 являє собою Н, а Ез являє собою СН».

Зокрема, сполуки за даним винаходом або їхня стереоїзомерна форма, фармацевтично прийнятна сіль, сольват або поліморф вибрані із групи:

Е Е й но но но

Ха то ФВ, ОМе то ФВ ОМе о оМе (о) (о) іо)

М М ія х й 5 х Н РА: В; 257 го о От

Е М (о) с М (о) Е М о

Н Н

Е Е Е но но но х-к о оМе сто оМе то оМе -О Мао УЗ

М М М

Н Е

ФІ у; о. У" 237 У 237 сі М о М ов М ов

Н Е Н МебО Н

Е Е Е но но но х- "то Фі оМе о (З оМе "то ФВ ОМе на о У

М М

М сі

Н іч 8- (фі і 28 У мн 38- - од ОТ

Е М оо М о М є;

Н в Н

Е Е Е но но но хек ФВ "то ФВ оМе "то ФВ, оМе о оМе іа і

М

ЕЗСО М ев) М ЕзсО

У мн 385- У мн 35- Уч 28

М оо М оо М бо

Н МеО Н Н

Частиною даного винаходу також є фармацевтична композиція, що містить сполуку формули (І) або її стереоїзомерну форму, фармацевтично прийнятну сіль, сольват або поліморф разом з однією або кількома фармацевтично прийнятними допоміжними речовинами, розріджувачами або носіями.

Фармацевтично прийнятні солі сполук формули (І) включають їхні солі приєднання кислот та основні солі. Придатні солі приєднання кислот утворюються з кислот, які утворюють нетоксичні солі. Придатні основні солі утворюються з основ, які утворюють нетоксичні солі.

Сполуки за даним винаходом можуть існувати також у несольватованій і сольватованій формах. Термін "сольват" застосовується в даному документі для опису молекулярного комплексу, що містить сполуку за даним винаходом і одну або декілька молекул фармацевтично прийнятного розчинника, наприклад етанолу.

Термін "поліморф" означає здатність сполуки за даним винаходом існувати в більше ніж одній формі або кристалічній структурі.

Сполуки за даним винаходом можна вводити у вигляді кристалічних або аморфних продуктів. ЇХ можна одержувати, наприклад, у вигляді твердої пресованої маси, порошків або

Зо плівок за допомогою таких способів як осадження, кристалізація, ліофілізація, висушування розпиленням або висушування випарюванням. Їх можна вводити окремо або в комбінації з однією або кількома іншими сполуками за даним винаходом або в комбінації з одним або кількома іншими лікарськими засобами. Зазвичай їх будуть вводити у вигляді складу з однією або кількома фармацевтично прийнятними допоміжними речовинами. Термін "допоміжна речовина" застосовується в даному документі для опису будь-якого інгредієнта, відмінного від сполуки(-лук) за даним винаходом. Вибір допоміжної речовини значною мірою залежить від таких факторів як конкретний спосіб введення, вплив допоміжної речовини на розчинність і стабільність, а також природа лікарської форми.

Сполуки за даним винаходом або будь-яка їхня підгрупа можуть бути складені в різні фармацевтичні форми для цілей введення. Як відповідні композиції можна зазначити усі композиції, які зазвичай застосовують для лікарських засобів, що вводяться системно. Для одержання фармацевтичних композицій за даним винаходом ефективну кількість конкретної сполуки, необов'язково у формі солі приєднання, як активний інгредієнт об'єднують в однорідну суміш із фармацевтично прийнятним носієм, при цьому носій може набувати великого різноманіття форм залежно від форми препарату, потрібної для введення. Ці фармацевтичні композиції переважно представлені у вигляді одиничної лікарської форми, придатної наприклад для перорального або ректального введення. Наприклад, під час одержання композицій у лікарській формі для перорального введення може застосовуватися будь-яке зі звичайних фармацевтичних середовищ, таких як, наприклад, вода, гліколі, олії, спирти тощо, у випадку рідких препаратів для перорального введення, таких як суспензії, сиропи, настоянки, емульсії та розчини; або твердих носіїв, таких як крохмалі, цукри, каолін, розріджувачі, змащувальні засоби, зв'язувальні речовини, розпушувачі тощо, у випадку порошків, пігулок, капсул і таблеток. Через простоту їх введення таблетки і капсули є найбільш переважними одиничними лікарськими формами для перорального введення, у випадку яких, безумовно, використовуються тверді фармацевтичні носії. Також включені препарати у твердій формі, які можуть бути перетворені безпосередньо перед застосуванням у рідкі форми.

Особливо переважним є складання вищезгаданих фармацевтичних композицій в одиничну лікарську форму для простоти введення та рівномірності дозування. Одинична лікарська форма, яка використовується в даному документі, означає фізично окремі одиниці, придатні як одиничні дози, при цьому кожна одиниця містить попередньо визначену кількість активного

Зо інгредієнта, розраховану для одержання потрібного терапевтичного ефекту, у поєднанні з необхідним фармацевтичним носієм. Прикладами цих одиничних лікарських форм є таблетки (в тому числі подільні або вкриті оболонкою таблетки), капсули, пігулки, пакетики з порошком, пластинки, супозиторії, розчини або суспензії для ін'єкцій тощо, а також багато окремих варіантів з ними.

Фахівці в галузі лікування інфекційних захворювань зможуть визначити ефективну кількість з урахуванням результатів тестів, представлених у даному документі далі. Загалом передбачається, що ефективна добова кількість буде становити від 0,01 мг/кг до 50 мг/кг ваги тіла, більш переважно від 0,1 мг/кг до 10 мг/кг ваги тіла. Доцільним може бути введення необхідної дози у вигляді двох, трьох, чотирьох або більше частин дози через відповідні інтервали протягом доби. Вказані частини дози можуть бути складені у вигляді одиничних лікарських форм, наприклад таких, що містять від 1 до 1000 мг ї, зокрема, від 5 до 200 мг активного інгредієнта на одиничну лікарську форму.

Точне дозування і частота введення залежать від конкретної застосовуваної сполуки формули (І), конкретного стану, лікування якого здійснюють, тяжкості стану, лікування якого здійснюють, віку, ваги і загального фізичного стану конкретного пацієнта, а також від іншого медикаментозного лікування, яке індивідуум може одержувати, що є добре відомим фахівцям у даній галузі. До того ж очевидно, що ефективну кількість може бути знижено або збільшено залежно від реакції суб'єкта, лікування якого здійснюють, та/або залежно від оцінки лікаря, який призначає сполуки за даним винаходом. Таким чином, вищевказані діапазони ефективної кількості Є лише рекомендаціями і не призначені для обмеження тією чи іншою мірою обсягу або застосування даного винаходу.

Мається на увазі, що даний винахід також включає будь-які ізотопи атомів, що наявні у сполуках за даним винаходом. Наприклад, ізотопи водню включають тритій і дейтерій, а ізотопи вуглецю включають С-13 і С-14.

Ці сполуки, що застосовуються в даному винаході, можуть також існувати в їхній стереохімічно ізомерній формі, охоплюючи всі можливі сполуки, складені з тих самих атомів, які зв'язані за допомогою такої ж послідовності зв'язків, однак мають різні тривимірні структури, які не є взаємозамінними. Якщо не згадано або не вказано інше, то хімічне позначення сполук охоплює суміш усіх можливих стереохімічно ізомерних форм, які можуть мати вказані сполуки. бо Вказана суміш може містити всі діастереомери та/або енантіомери з основною молекулярною структурою вказаної сполуки. Передбачається, що всі стереохімічно ізомерні форми сполук, застосовувані в даному винаході або в чистому вигляді, або в суміші одна з одною, призначені для включення в обсяг даного винаходу, у тому числі будь-які рацемічні суміші або рацемати.

Чисті стереоіїзомерні форми сполук і проміжних сполук, вказаних у даному документі, визначаються як ізомери, які практично не містять інших енантіомерних або діастереомерних форм тієї ж основної молекулярної структури вказаних сполук або проміжних сполук. Зокрема, термін "стереоїзомерно чистий" стосується сполук або проміжних продуктів, які характеризуються стереоїзомерним надлишком, що становить щонайменше 8095 (тобто не менше 9095 одного ізомеру і не більше 1095 інших можливих ізомерів), аж до стереоізомерного надлишку, що становить 10095 (тобто 10095 одного ізомеру і відсутність іншого), більш конкретно, сполук або проміжних продуктів, які характеризуються стереоїзомерним надлишком від 9095 до 10095, ще більш конкретно, які характеризуються стереоїзомерним надлишком від 9495 до 10095, і найбільш конкретно, які характеризуються стереоїзомерним надлишком від 9795 до 10095. Терміни "енантіомерно чистий" і "діастереомерно чистий" слід розуміти аналогічно, але в даному разі щодо енантіомерного надлишку, відповідно діастереомерного надлишку суміші, що становить інтерес.

Чисті стереоїзомерні форми сполук і проміжних сполук, що застосовуються згідно з даним винаходом, можна одержати із застосуванням процедур, відомих із рівня техніки. Наприклад, енантіомери можна відокремлювати один від одного шляхом селективної кристалізації їхніх діастереомерних солей з оптично активними кислотами або основами. Їх прикладами є винна кислота, дибензоїлвинна кислота, дитолуоїлвинна кислота та камфорсульфонова кислота. Як альтернатива, енантіомери можна відокремлювати за допомогою хроматографічних методик із застосуванням хіральних нерухомих фаз. Вказані чисті стереохімічно ізомерні форми також можна одержувати з відповідних чистих стереохімічно ізомерних форм придатних вихідних речовин за умови, що реакція відбувається стереоспецифічно. Переважно, якщо потрібний певний стереоізомер, то вказану сполуку можна синтезувати стереоспецифічними способами одержання. У даних способах переважно застосовують енантіомерно чисті вихідні матеріали.

Загальні підходи щодо синтезу

Синтез сполук загальної формули І можна здійснювати, як викладено на схемі 1. Похідне 2- (4-фтор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)оцтової кислоти загальної формули Ії, яке містить О-захисну групу РО гідроксильної функціональної групи (РО може являти собою, наприклад, О-бензильну захисну групу), можна перетворювати на відповідне похідне хлорангідриду загальної формули

І їз застосуванням реагенту для хлорування, наприклад такого як оксалілхлорид або тіонілхлорид. Реакцію Фріделя-Крафтса за участі хлорангідриду загальної формули ПІ із заміщеним індолом загальної формули ІМ можна здійснювати із застосуванням реагенту кислоти Льюїса, наприклад такого як ЕСАЇСІ, у придатному розчиннику, наприклад такому як

СНесі», і за придатних умов реакції, які зазвичай включають охолоджування, з одержанням 3- ацильованого індолу загальної формули У. Видалення захисної групи Ро зі сполук загальної формули М можна здійснювати шляхом, наприклад, відновлювального гідрогенолізу (РО - бензил) у придатному розчиннику, наприклад такому як ЕІОАсС, із одержанням сполук загальної формули МІ. Введення анілінового фрагмента в альфа-положенні в карбонільний фрагмент сполук загальної формули МІ можна здійснювати за допомогою послідовності реакцій, яка включає, наприклад, бромування МІ реагентом, наприклад таким як трибромід фенілтриметиламонію, у придатному розчиннику, наприклад такому як ТНЕ, з одержанням сполук загальної формули МІЇ, і подальше здійснення реакції сполук загальної формули МІ! із 3- метокси-5-(метилсульфоніл)аніліном (МІ) у придатному розчиннику, наприклад такому як

СНзСМ, і необов'язково із застосуванням основи, наприклад такої як ТЕА або ОІРЕА, з одержанням сполук загальної формули І у вигляді рацемічних сумішей. Хіральне розділення сполук загальної формули !/ можна здійснювати за допомогою, наприклад, хіральної хроматографії з одержанням енантіомерів А і В загальної формули І.

Е

Ку я ш- рт. вт я 1 я й Сх РЕ Ше й г У

Е Е в в с- дк я З

А АТ й І в й НІ

У й М г Ко от со ж о жен ----2535 ао000- -6ШИШИШИШИШ20- ПИ: ра нене м-н вро К не М МНЕ с | ее ве т

Е Е Гей Е

Но, ї » шк щу У я Ши ТЯ ь, ше

Ой й Ї 4 зи ни че о, ї Но шен о о, що ень 7 Гящ Я Єо- мн чу ха "ве ЗЛ во а ї НК

ОТО ж У с ж Ї ТО Всзаи дж Ї й й «Бооейк От 7 ЗА К ве З " в ее К з

Я з вх У В» І

Хіральне розділення

Енантюомери НАХІ НВ

Схема 1

Як альтернатива, перетворення проміжних сполук загальної формули М у сполуки загальної формули І можна здійснювати також за допомогою послідовності реакцій, викладеної на схемі 2: бромування в альфа-положенні карбонільної функціональної групи проміжних сполук загальної формули М за допомогою придатного реагенту для бромування, наприклад такого як трибромід фенілтриметиламонію, у придатному розчиннику, наприклад такому як ТНЕ, забезпечує одержання сполук загальної формули ЇХ. Подальше здійснення реакції сполук загальної формули ІХ із З-метокси-5-(метилсульфоніл)аніліном (МІ!) у придатному розчиннику, наприклад такому як СНзЗСМ, і необов'язково із застосуванням основи, наприклад такої як ТЕА або ПІРЕА, забезпечує одержання сполук загальної формули Х. Після видалення О-захисної групи (РО) зі сполук загальної формули Х шляхом, наприклад, відновлювального гідрогенолізу (РО - бензил) у придатному розчиннику, наприклад такому як ЕІОАс або Меон, одержують сполуки загальної формули І як рацемічні суміші. Хіральне розділення сполук загальної формули | можна здійснювати за допомогою, наприклад, хіральної хроматографії з одержанням енантіомерів А і

В загальної формули І.

ій

Кит Ра-й ш-х

Ж м 0;

Е я ев в я ма ше в ря п ж ЕкЯ -- А ж еиеть, --я й в шк: що м оте -к х яд ще Т ГА но й - КРУ Ж щ с-а ко У й 7 Е Е пе те А ен чи г | Но, ть Що ші Ї р й Об ие ни о ши Фь Ба. й пр Кк й: пед Бк ЕЕ Врошмюлий рОС-я ми Тл Н с-м,

Хе -НШВВ-2-22 ДМ

ВЕ шо ге І КО ІВ о вот В Не не їх ях х на і

Хіральне розділення

Енантіамерн НАЗК

Схема 2

Приклади 5 Способи І С/М5

Вимірювання під час здійснення високоефективної рідинної хроматографії (НРІС) проводили за допомогою насоса для І С, детектора на діодній матриці (БАС) або УФ-детектора та колонки, як описано у відповідних способах. За необхідності використовували додаткові детектори (див. наведену нижче таблицю способів).

Потік із колонки спрямовували до мас-спектрометра (М5), який був оснащений джерелом іонізації за атмосферного тиску. У компетенції фахівця в даній галузі є встановлення настроюваних параметрів (наприклад, діапазону сканування, часу витримки тощо) з метою одержання іонів, які забезпечують визначення номінальної моноізотопної молекулярної ваги (ММУ) сполуки. Збір й обробку даних здійснювали за допомогою відповідного програмного забезпечення.

Сполуки описували за їхніми значеннями експериментального часу утримування (Кі) та іонами. Якщо не вказано інше, то в таблиці даних вказаний молекулярний іон відповідає (МАНІ: (протонована молекула) та/або ІМ-НІ (депротонована молекула). У випадку, якщо сполука не була безпосередньо здатна до іонізації - вказують тип аддукту (тобто |МАМНАГ, (МАНСООГ тощо). Для молекул зі складними ізотопними розподілами (Вг, СІ) описане значення є таким значенням, яке одержане для найменшої маси ізотопу. Усі результати одержували з експериментальними похибками, які зазвичай пов'язані із застосовуваним способом.

Далі в даному документі "БОЮ" означає одиничний квадрупольний детектор, "МБО" означає мас-селективний детектор, "КТ" означає кімнатну температуру, "ВЕН" означає містковий гібрид етилсилоксану/діоксиду кремнію, "САЮ" означає детектор на діодній матриці, "Не" означає діоксид кремнію підвищеної міцності.

Коди способів І С/М5 (швидкість потоку, виражена у мл/хв.; температура колонки (Т) в "С; час аналізу у хвилинах)

Швидкість

Код й потоку Час способу Прилад Колонка Рухома фаза Градієнт 007 аналізу

Т колонки (хв.)

УМаїегв: А: 10 ММ . дсацйує Мазегт5: ВЕН. | СНІСООМНа в ІВід 9595 А до 595 А за/|0,8 мл/хв.

ІЇС-А ОРІ СО - С18 (1,7 мкм, | 9595 НгО -- 595 | 1,3 хв., утримування тт 2 рАр/Оо 2,1 х 50 мм) СНнЗСМ протягом 0,7 хв. 5576

В: СНзЗСМ со стоку |на д Прилад Колонка Рухома фаза Градієнт У аналізу способу тя (хв)

Т колонки І й А: 10 мМ . о

УУаїегв: Маїегтв: НЬО5 Т3|. СНЗІСООМНА Від 10076 А до 0,7 мл/хв.

Асдийує 5965 А за 2,10 хв.,

І 0-в Ф (1,8 мкм, в 9595 НгО о птн 3,5

ОРОС | аяїхлобмм) | 595СНСМ доб АЗабеохв.! вве з о Го) рдАр/ЗОр в. СНЗСМ до 595 А за 0,5 хв. 84295 А протягом о

УМаїегв: А: 9595 0,19 хв до, о БА 0 343

Асдийує МУагетв: ВЕН | СНІСООМНА им вання мл/хв 0-6) ОРІСЄ- С18(1,7 мкм, | 7 мМ/595 прутримує ОА ХВ плхв. 1 в2 рАр'Омацго 2,1х100 мм) СизСМ знову до 84,295 А за 4с

Місто В: СНЗСМ 0,73 хв., утримування протягом 0,73 хв.

УМаїегв: : о, о

АоДИЙУЄ дет д:ізомм | Від 8076 А до Б А

Ф аегв: ВЕН за 3,4 хв. до 1095 А |0,5 мл/хв.

ОРІ С9- СНіЗСООМНа,

І 6-0 С18 (1,7 мкм, за 0,6 хв., тя 5 рАв- 2,1 х 50 мм) рН то утримування 40:

Асаийує ТО- В: СНЗСМ протягом 1 хв. детектор

УМаїегв:

Асдийує , А: 10 мМ Від 5095 А до 1095 А

ОРІСе- | Мат: ВЕН | стсОоМн, заЗ,5хв., 0/0 мл/хв.

І С-Е С18 (1,7 мкм, тя 5 рдор- 2,1 х 50 мм) рн утримування 402с

Асдийує ТО-Д| 7 В: СНЗСМ протягом 1,5 хв. детектор

УМаїегв: А: 019 : Мо Н о, о, сану" Маїетв: НЬ5 мурашина Від 50965 А до 1055 А 0,5 мл/хв.

ОРІ С9 - за 3,5 хв.,

І С-Е рАО- С18 (1,8 мкм, кислота имування тя 5 2,1 х 50 мм) в НЕО угриму 402с

Асадцйує ТтО- , протягом 1,5 хв.

В: СНЗСМ детектор

Від 84295 А/15,895 В

А: 959; до 10,595 А за

УМаїегв: Муаїегв: ВЕН СНСООМНа 2,18 хв., утримування| 0,343

Асдийує н- протягом 1,96 хв., мл/хв.

Ії б-а С18 (1,7 мкм, 7 ММ/596 о б

Сіазз - ВАЮ 21 х100 мм) сНУсМ знову до 84,295 пятяння та БОрам | - в. си СМ А/Л15,895 В за 40 ши 0,73 хв., утримування протягом 0,49 хв.

Способи ЗЕС/М5

Вимірювання під час 5ЕС проводили із застосуванням аналітичної системи хроматографії з надкритичною рухомою фазою, укомплектованою бінарним насосом для доставки діоксиду вуглецю (СО2) і модифікатором, автоматичним дозатором, термостатом для колонок, детектором на діодній матриці, обладнаним проточною кюветою для роботи під високим тиском, що витримує до 400 бар. За умови оснащення мас-спектрометром (М5) потік із колонки спрямовували до (М5). У компетенції фахівця в даній галузі є встановлення настроюваних параметрів (наприклад, діапазону сканування, часу витримки тощо) з метою одержання іонів, які забезпечують визначення номінальної моноізотопної молекулярної ваги (МУМ) сполуки. Збір й обробку даних здійснювали за допомогою відповідного програмного забезпечення.

Аналітичні способи БЕС/М5 (швидкість потоку, виражена в мл/хв.; температура колонки (Т) в "С; протитиск (ВРЕ) у барах).

Швидкість Час

Код способу Колонка Рухома фаза Градієнт потоку аналізу

Т колонки ВРА

Колонка Оаїсе! о

СпігаІракф ІА А:СО» 5036 В з З 7

ЗЕС-А , утримуванням тттнння тттнння (5 мкм, в: меон 7 хв з5 100 150 х 4,6 мм) І

Колонка мате! А:СО» 3095 В з З 7

ЗЕС-В (5 ем в: меон утримуванням тя тя 150 х 4,6 мм) -0, Зоо ІРТМН» 7 хв. 35 100

Колонка Оаїсеї А:СО» 3096 В з З 7

Спігаїсекюо О0Б-Н ,

ЗЕО-С (5 МКМ В: ЕЮН утримуванням тя ттяянння 150 х 4,6 мм) -0, Зоо ІРТМН» 7 хв. 35 100 2595 В з

Колонка Оаїсеї А: СО» утримуванням 25 95

ФЕС-О Спігаїраке А5З В: ЕЮОН б хв., до 5095 за НИ НИ (3,0 мкм, 0 2 ІРТМН» 1 хв. з 40 110 150 х 4,6 мм) -3965 НгО утримуванням 2,5 хв.

Колонка Оаїсеї А: СО» 1095 - 5095 В за 25 95

ФЕС-Е СНігаїракв д53 В: ЕЮОН б хв., з В ВИ (3,0 мкм, 0,296 ІРІМН»г| утримуванням 40 110 150 х 4,6 мм) -3965 НгО 3,5 хв.

Колонка Оаїсеї А:СО» 3096 В з З 7

Спігаїраке АБ-Н М

ЗЕС-Е (5 МКМ В: ІРОН утримуванням тя тя 140 х 4,6 мм) -0, Зоо ІРТМН» 7 хв. 35 100

Значення температури плавлення

Значення являють собою або максимальні значення, або діапазони значень температури плавлення, і їх одержують з експериментальними похибками, які зазвичай пов'язані з даним аналітичним способом. рЗСО823е (позначений як ОС)

Для ряду сполук значення температури плавлення визначали за допомогою О5С823Зе (МеШег!-ТоІедо). Значення температури плавлення вимірювали за градієнту температури 10"С/хвилина. Максимальна температура становила 3007С.

Кути оптичного обертання

Кути оптичного обертання вимірювали на поляриметрі РегКкіп-ЕЇІтег 341 із натрієвою лампою й позначали наступним чином: |Ф12 (Х, с у ГгЛ00 мл, розчинник, ТС).

ІФ» - (100су/(І х с): де І означає товщину шару в дм, а с означає концентрацію в г/100 мл для зразка за температури Т (СС) та довжини хвилі А (у нм). Якщо використовувана довжина хвилі світла становить 589 нм (О-лінія натрію), то замість цього можна використовувати символ р. Завжди має наводитися знак напрямку обертання (ж або -). У випадку застосування цього рівняння концентрацію і розчинник завжди наводять в круглих дужках після кута обертання. Кут обертання вказують у градусах, а одиниці концентрації не наводять (вважають, що вони виражені в г/100 мл).

Приклад 1. Синтез 1-(6-фтор-1 Н-індол-З3-іл)-2-(4-фтор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-2-((3- метокси-5-(метилсульфоніл)феніл)аміно)етанону (сполука 1) і хіральне розділення на енантіомери ТА і 18.

ЕЕ БвІсост /й уй

А | тр зт 28 й ун я й те

Х а ТАНЕ. кл. 30 хв. У й Вега: СНІ» У р. бить а, ям В, КТ з но що ОН. кл в 7 - й щО. їа 1 год. зр

Е Е Е а «вп --щ- сит ні п

І-ше ех док ке на шк, ану

Свісов 5 бянМОонН у У осі а х А -- ( ----к дит -- - -л- - --- М ИтХ

ОМ кт. по хХерри ОВОВОТЕ вне Зебра ОМЕОСНИю др мов протягохі Уч З кл. протягом кочі та к.т.. протягом наці за й е : Щ в ше шен я ши я У

А 4 В; КУ ший Ой І і - о й щі ша: а Не Ро ві оовв «З -- :--як р - - - - - п -- - --Ж Я

ЕКАІСІ дит ВАС кл. ен ТНЕ. від С до кло. ть

Нр у лет ре я й СК о й сті ї

Ко не. Суд вало ре їх) Е М еЕ Й її їв їв

ОМ г я НВ, т, ще Хіральне думи Оті розділення хх ся о, ром б чи Да ! - 565 -к . он й пнів Енантіомери 11 т іх . ие ши На !

СНИМ, кот. протягом ночі «ВИД ск лави ами ІК Га я

Синтез проміжної сполуки Та

Розчин 2-(4-фтор-2-метоксифеніл)оцтової кислоти |(СА5 886498-61-9| (2,15 г, 11,7 ммоль) у сухому ТНЕ (40 мл) охолоджували при 0"С. Додавали оксалілхлорид (2,04 мл, 23,4 ммоль) і дві краплі ЮОМЕ. Реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом 30 хв.

Розчинник випарювали за зниженого тиску. Залишок розчиняли в етанолі (40 мл), і реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом 1 год. Реакційну суміш концентрували за зниженого тиску. Залишок очищали за допомогою флеш-хроматографії на силікагелі з використанням градієнта ЕОАс (від 595 до 50905) у гептані з одержанням етил-2-(4-фтор-2- метоксифеніл)ацетату Та (2,40 г) у вигляді олії.

Синтез проміжної сполуки 16

До розчину етил-2-(4-фтор-2-метоксифеніл)ацетату їа (2,40г, 11,3 ммоль) у СНоСі» (110 мл), охолодженому при -30"С, по краплях додавали 1 М розчин ВВгз у СНоСі» (22,6 мл, 22,6 ммоль), при цьому температуру підтримували нижчою за -20"С. Реакційну суміш перемішували при -30"С протягом 1 год. перед гасінням за допомогою метанолу. Значення рн доводили до 8 шляхом додавання водного насиченого розчину МанНСоОз. Фази розділяли. Водну фазу екстрагували дихлорметаном. Органічні фази об'єднували, висушували над Ма»5Ом, фільтрували та концентрували за зниженого тиску. Залишок очищали за допомогою флеш- хроматографії на силікагелі з використанням градієнта етилацетату (від 595 до 5095) у гептані з одержанням етил-2-(4-фтор-2-гідроксифеніл)ацетату 16 (2,10 г) у вигляді олії.

Синтез проміжної сполуки 1с

До суміші етил-2-(4-фтор-2-гідроксифеніллацетату 16 (|САБ5Б 1261751-44-3| (1,24 г, 6б.26б ммоль) і карбонату цезію (4,08г, 12,5 ммоль) у ОМЕ (20 мл) додавали бензил-2- брометиловий етер |(СА5 1462-37-91) (1,61 г, 7,51 ммоль). Реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом ночі. Додавали НгО і реакційну суміш екстрагували за допомогою ЕТОАс. Органічну фазу висушували над Ма»5О»4, фільтрували і концентрували за

Зо зниженого тиску. Залишок очищали за допомогою флеш-хроматографії на силікагелі із використанням градієнта СНеСіг (від 1595 до 10095) у гептані з одержанням етил-2-(2-(2- (бензилокси)етокси)-4-фторфеніл)ацетату 1с (1,55 г).

Синтез проміжної сполуки 14

До розчину етил-2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-фторфеніл)ацетату 1с (1,55 г, 4,66 ммоль) у суміші ЕН (45 мл) і ТНЕ (22 мл) додавали 0,5 н. Маон (28 мл, 14,0 ммоль). Реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом ночі. Реакційну суміш частково концентрували за зниженого тиску для видалення органічних розчинників. Залишок підкислювали за допомогою 1 н. НСІ до рН 2-3 і екстрагували за допомогою ЕАс. Органічну фазу висушували над Мд5О5, фільтрували та концентрували за зниженого тиску з одержанням 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-фторфеніл)оцтової кислоти 14 (1,41 г).

Синтез проміжної сполуки 1е

До розчину 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-фторфеніл)оцтової кислоти 14 (1,41 г, 4,63 ммоль) у сухому СНоСІз(20 мл), охолодженому при 0"С, додавали оксалілхлорид (0,811 мл, 9,27 ммоль) і ОМЕ (2 краплі). Реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом ночі.

Реакційну суміш концентрували за зниженого тиску з одержанням 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4- фторфеніл)ацетилхлориду Те (1,50 г), який застосовували на наступній стадії без додаткового очищення.

Синтез проміжної сполуки 17

Додавали по краплях 1 М хлорид дієтилалюмінію у гексані (4,72 мл, 4,72 ммоль) при 0"С до розчину б-фтор-1Н-індолу |СА5 399-51-9) (0,42г, 3,11 ммоль) у СНоСі» (б мл). Після перемішування протягом 30 хв. при 0"С повільно додавали розчин 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)- 4-фторфеніл)ацетилхлориду Те (1,50 г, 4,66 ммоль) у дихлорметані (б мл). Реакційну суміш перемішували при 0"С протягом 2 год. Додавали 1 М розчин сегнетової солі. Реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом 2 год. і екстрагували двічі за допомогою

ЕАс. Органічні фази об'єднували, промивали сольовим розчином, висушували над Ма5Оха, фільтрували та концентрували за зниженого тиску. Залишок очищали за допомогою флеш- хроматографії на силікагелі із використанням градієнта ЕЮАс (295 - 40965) у гептані. Шляхом додаткового очищення за допомогою флеш-хроматографії на силікагелі із використанням градієнта ЕТОАс (від 095 до 1095) у СНе2Сі» одержували 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4- фторфеніл)-1-(6-фтор-1Н-індол-З-іл)етанон 11 (0,88 г).

Синтез проміжної сполуки 19

Суміш 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-фторфеніл)-1-(6-фтор-1Н-індол-З-іл)уетанону 1 (0,88 г, 2,09 ммоль) і 1095 паладію на вугіллі (0,088 г) в ЕЮАс (90 мл) перемішували за кімнатної

Зо температури протягом 2 год. в атмосфері Н». Реакційну суміш фільтрували через шар Сеїйеф і осад на фільтрі промивали за допомогою СНесі2 і МеОнН. Об'єднані фільтрати концентрували за зниженого тиску. Забезпечували твердіння залишку шляхом розтирання з СНеСі». Тверді речовини відфільтровували та висушували під вакуумом з одержанням 1-(6б-фтор-1Н-індол-3- іл)-2-(4-фтор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)етанону 19 (0,59 г).

Синтез проміжної сполуки 1п

Розчин триброміду фенілтриметиламонію (САЗ 4207-56-11 (0,70 г, 1,86 ммоль) у ТНЕ (10 мл) додавали по краплях при 0"С до розчину /1-(6-фтор-1 Н-індол-3-іл)-2-(4-фтор-2-(2- гідроксиетокси)феніл)етанону 149 (0,56 г, 1,69 ммоль) у ТНЕ (15 мл). Суміш перемішували при

ОС протягом 15 хв. і за кімнатної температури протягом 1 год. Осад відфільтровували і промивали за допомогою ЕОАс. Фільтрат концентрували за зниженого тиску з одержанням 2- бром-1-(6-фтор-1Н-індол-З3-іл)-2-(4-фтор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)етанону п (0,69 г), який застосовували на наступній стадії без додаткового очищення.

Синтез сполуки 1 і хіральне розділення на енантіомери 1А і 18

Суміш //2-бром-1-(6б-фтор-1Н-індол-З-іл)-2-(4-фтор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)етанону - 1йп (0,69 г, 1,69 ммоль) і З-метокси-5-(метилсульфоніл)аніліну (СА 62606-02-4) (1,02 г, 5,07 ммоль) у СНіСМ (10 мл) перемішували за кімнатної температури протягом ночі. Реакційну суміш розбавляли ЕОАс і промивали за допомогою 1 н. НСІ. Органічний шар промивали водним насиченим розчином Мансо», НО і сольовим розчином, висушували над Ма»5О», фільтрували і концентрували за зниженого тиску. Залишок очищали за допомогою флеш-хроматографії на силікагелі з використанням градієнта ЕАс (від 1595 до 7095) у СНеСі». Фракції, що містять потрібну сполуку, об'єднували та концентрували за зниженого тиску. Залишок перекристалізовували із суміші Е(ОАс, ЕСО і гептану з одержанням першої партії 1-(6-фтор-1 Н- індол-З3-іл)-2-(4-фтор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-2-((З-метокси-5- (метилсульфоніл)феніл)аміно)етанону (сполука 1, 0,47 г) у вигляді рацемічної суміші. Фільтрат концентрували за зниженого тиску, і залишок перекристалізовували із суміші ЕТЮАс, ЕСО і гептану з одержанням другої партії сполуки 1 (0,11 г) у вигляді рацемічної суміші.

Хіральне розділення енантіомерів сполуки 1 (620 мг) здійснювали за допомогою хірального розділення з використанням нормальної фази (нерухома фаза: Спігаїраке АЮ 1000А 20 мкм (Оаїсе!) (600 г), рухома фаза: ЕЮН/Меон (1/1). Фракції, що містять продукт, об'єднували і бо випарювали за зниженого тиску з одержанням енантіомеру ТА як першого елюйованого продукту та енантіомеру 1В як другого елюйованого продукту. Обидва енантіомери розчиняли в суміші води (5 мл) - МеОнН (20 мл). Розчинник частково випарювали за зниженого тиску (водяна баня при 40"С) до залишкової кількості, що становила приблизно 5 мл. Одержані суспензії розбавляли водою (10-15 мл) і інтенсивно перемішували протягом 2 днів. Тверді речовини відокремлювали за допомогою фільтрації і висушували під вакуумом за кімнатної температури з одержанням енантіомеру ТА (227 мг) і енантіомеру 1В (251 мг) у вигляді білих порошків.

Сполука 1 "Н ЯМР (300 МГц, ОМ5О-ав) б ррт 3,08 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,87 -А10 (т, 2 Н) 417 (т, 2 Н) 5,30 (Брг. 5., 1 Н) 6,36 (й, 9-78 Гц, 1 Н) 6,57 (І, 9У-1,6 Гц, 1 Н) 6,65 (5, 1 Н) 6,72 (9, У-8,5, 2,5 Гц, 1

Н) 6,92 - 6,96 (т, 2 Н) 7,03 - 7,10 (т, 2 Н) 7,24 (да, 2-96, 2,3 Гу, 1 Н) 7,38 (аа, У-8,6, 6,9 Гц, 1 Н) 8,16 (ай, У-8,8, 5,6 Гц, 1 Н) 8,68 (5, 1 Н) 12,16 (Бг. 5., 1 Н)

І.С/М5 (Спосіб І С-0): Вк 3,43 хв., МН" 531

Енантіомер ТА

І"Н ЯМР (360 МГц, ОМ5О-ав) б ррт 3,08 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,89 - 4,07 (т, 2 Н) 4,18 (ї, 9-4,7

Гу, 2 Н) 5,30 (г, 9-5,7 Гц, 1 Н) 6,35 (а, 9У-7,8 Гц, 1 Н) 6,55 - 6,59 (т, 1 Н) 6,62 - 6,67 (т, 1 Н) 6,71 (рг а, 9У-8,4, 2,6 Гу, 1 Н) 6,91 - 6,97 (т, 2 Н) 7,01 - 7,09 (т, 2 Н) 7,24 (09, 9-96, 2,4 Гц, 1 Н) 7,38 (ад, У-8,6, 6,8 Гу, 1 Н) 8,15 (ад, 9-8,9, 5,5 Гц, 1 Н) 8,68 (5, 1 Н) 12,16 (бг 5, 1 Н)

І.С/М5 (Спосіб ГС-В): Ві 1,91 хв., МН" 531

ІФого: 118,62 (с 04335, ОМЕ)

Хіральна ЕС (Спосіб 5ЕС-0): В: 1,68 хв., МН" 531, хіральна чистота 10095.

Енантіомер 18 "Н ЯМР (360 МГц, ОМ5О-ав) б ррт 3,08 (в, З Н) 3,71 (в, З Н) 3,89 - 4,06 (т, 2 Н) 4,17 (Бгії, 9-48 Гц, 2 Н) 5,30 (ри, 9У-5,2 Гу, 1 Н) 6,35 (а, У-7,7 Гц, 1 Н) 6,55 - 6,59 (т, 1 Н) 6,62 - 6,67 (т, 1

Н) 6,71 (рий, 9-8,4, 2,7 Гц, 1 Н) 6,90 - 6,97 (т, 2 Н) 7,02 - 7,10 (т, 2 Н) 7,23 (ад, У-9,6, 2,5 Гц, 1

Н) 7,37 (аа, У-8,6, 6,8 Гц, 1 Н) 8,15 (ад, У-8,8, 5,5 Гц, 1 Н) 8,68 (5, 1 Н) 12,15(Бг5,1 Н)

І.С/М5 (Спосіб ГС-В): Ві 1,91 хв., МН" 531

ІФЧого: -115,47 (с 0,3985, ОМЕ)

Хіральна ЕС (Спосіб 5ЕС-0): В 2,20 хв., МН" 531, хіральна чистота 10095.

Приклад 2. Синтез 1-(6-хлор-1Н-індол-З3-іл)-2-(4-фтор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-2-((3-

Зо метокси-5-(метилсульфоніл)феніл)аміно)етанону (сполука 2) і хіральне розділення на енантіомери 2А та 28 и Во шт, Наш ть сти

Ге боови Ой пов С сті Її У - пу 42 чі на. ар ще во шрнят й ЕБАКІ дет ЕОАс, кло оду ТНЕ. від 0 до кт. сн, ОС. др ря ік н га о с. Н сме зт Н на биту, Те ее Ша Ге: -а тт

Орні ЩЕ Кв ре Хіральне

Зоні, наяв З Й, розділення ек ї- Шо пет, се І Енантюмери ЗА :3В а Хм х г СОМ, кот. З Я. шк. н. с ж В протягом ночі а

Синтез проміжної сполуки 2а

Додавали по краплях 1 М хлорид дієтилалюмінію у гексані (13,1 мл, 13,1 ммоль) при 0"С до розчину б-хлор-1Н-індолу |(САЗ 17422-33-21 (1,33 г, 8,76 ммоль) у СНоСі» (20 мл). Через 30 хв. при 0"С повільно додавали розчин 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-фторфеніл)ацетилхлориду Те (4,24 г, 13,1 ммоль, синтез: див. приклад 1) у СНеСі» (10 мл). Реакційну суміш перемішували при 0"С протягом З год. Додавали 1 М розчин сегнетової солі. Через 30 хв. за кімнатної температури реакційну суміш розбавляли за допомогою СНоСі» і промивали за допомогою 6 н. НС. Фази розділяли. Органічну фазу промивали сольовим розчином, фільтрували через фільтр для розділення фаз і концентрували за зниженого тиску. Залишок очищали за допомогою флеш- хроматографії на силікагелі із використанням градієнта Е(ОАс (1095 - 80905) у гептані. Фракції, що містять потрібний продукт, об'єднували та концентрували за зниженого тиску. Залишок очищали шляхом осадження із суміші ЕОАс і гептану з одержанням 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4- фторфеніл)-1-(6-хлор-1Н-індол-з-іл)етанону 2а (2,39 г).

Синтез проміжної сполуки 25

Суміш 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-фторфеніл)-1-(б-хлор-1Н-індол-З-іл)етанону 2а (2,05 г, 4,68 ммоль) і 1095 паладію на вугіллі (0,20 г) в ЕЮАс (30 мл) перемішували за кімнатної температури протягом 5 год. в атмосфері Нео. Реакційну суміш фільтрували через діатомову землю і промивали за допомогою ТНЕ. Фільтрат концентрували за зниженого тиску. Залишок розтирали з ЕІЮАс. Осадок відфільтровували з одержанням 1-(6б-хлор-1Н-індол-З3-іл)-2-(4-фтор- 2-(2-гідроксиетокси)феніл)етанону 25 (1,41 г).

Синтез проміжної сполуки 2с

Розчин триброміду фенілтриметиламонію (САЗ 4207-56-11 (1,83 г, 4,87 ммоль) у ТНЕ (15 мл) додавали по краплях при 0"С до розчину /1-(б-хлор-1Н-індол-3-іл)-2-(4-фтор-2-(2- гідроксиетокси)феніл)етанону 26 (1,54 г, 4,43 ммоль) у ТНЕ (30 мл). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом 1 год. Осад відфільтровували і промивали за допомогою ТНЕ.

Фільтрат концентрували за зниженого тиску з одержанням 2-бром-1-(6-хлор-1Н-індол-3-іл)-2-(4- фтор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)етанону 2с (1,89 г), який застосовували на наступній стадії без додаткового очищення.

Синтез сполуки 2 і хіральне розділення на енантіомери 2А і 28

Суміш //2-бром-1-(б-хлор-1Н-індол-З-іл)-2-(4-фтор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)етанону -:2с (1,89 г, 4,43 ммоль) і З-метокси-5-(метилсульфоніл)аніліну (СА 62606-02-4) (2,67 г, 13,3 ммоль) у СНіІСМ (45 мл) перемішували за кімнатної температури протягом ночі. Реакційну суміш концентрували за зниженого тиску. Залишок розподіляли між ЕІОАс і 1 н. НСІ. Фази розділяли.

Органічну фазу промивали водним насиченим розчином МанНсСОз і сольовим розчином, висушували над Мо95О5, фільтрували та концентрували за зниженого тиску. Залишок очищали за допомогою флеш-хроматографії на силікагелі із використанням градієнта ЕЮАс (4095 - 10095) у гептані. Фракції, що містять потрібний продукт, об'єднували та концентрували за зниженого тиску. Залишок розтирали із сумішшю Еб2О і СНеСі». Осад відфільтровували та очищали за допомогою флеш-хроматографії на силікагелі з використанням градієнта МеОн (від

Зо 195 до 1095) у СНеаСі2 з одержанням / 1-(6б-хлор-1Н-індол-З-іл)-2-(4-фтор-2-(2- гідроксиетокси)феніл)-2-((З-метокси-5-(метилсульфоніл)феніл)аміно)етанону (сполука 2, 1,05 г) у вигляді рацемічної суміші.

Енантіомери сполуки 2 (1,01 г) розділяли за допомогою хіральної 5ЕС (нерухома фаза:

Спігаракт? ІА 5 мкм, 20 х 250 мм, рухома фаза: 5095 СО», 5095 МеонН) з одержанням 460 мг першого елюйованого енантіомеру і 424 мг другого елюйованого енантіомеру. Дві фракції знову очищали за допомогою флеш-хроматографії на силікагелі (15-40 мкм, 12г, СН.Сі/меОн 99,5/0,5). Чисті фракції об'єднували і випарювали до сухого стану. Забезпечували твердіння залишків шляхом розтирання із сумішшю Его та діїзопропілового етеру. Тверді речовини відфільтровували і висушували з одержанням 353 мг першого елюйованого енантіомеру і 363 мг другого елюйованого енантіомеру. Перший елюйований енантіомер додатково очищали за допомогою ахіральної 5ЕС (нерухома фаза: ОЕАР (діетиламінопропіл) 5 мкм, 150 х 21,2 мм, рухома фаза: 6095 СО», 4095 ЕН (-- 0,395 іІРІИМН»)). Чисті фракції об'єднували і випарювали до сухого стану, а потім забезпечували твердіння шляхом розтирання з МеОН/водою. Осад відфільтровували, промивали діїзопропіловим етером і висушували з одержанням енантіомеру 2А (269 мг). Другий елюйований енантіомер додатково очищали за допомогою ахіральної 5ЕС (нерухома фаза: ОЕАР 5 мкм, 150 х 21,2 мм, рухома фаза: 6095 СО», 4095 ЕН (-- 0,395 ІРІМН?)).

Чисті фракції об'єднували і випарювали до сухого стану, а потім забезпечували твердіння шляхом розтирання з МеОН/водою. Осад відфільтровували, промивали діїзопропіловим етером і висушували з одержанням енантіомеру 2В (261 мг).

Сполука 2 "Н ЯМР (300 МГц, ОМ50О-ав) б ррт 3,10 (5, З Н) 3,74 (5, З Н) 3,86 - 412 (т, 2 Н) 4,20 (т, 2 Н) 5,32 (Брг. 5., 1 Н) 6,38 (й, 9-7,7 Гу, 1 Н) 6,59 (5, 1 Н) 6,67 (5, 1 Н) 6,74 (4, 9У-8,4,2,2 Гц, 1 Н) 6,91 - 7,00 (т, 2 Н) 7,08 (й, 9-7,7 Гу, 1 Н) 7,24 (ад, 9-8,5, 1,7 Гц, 1 Н) 7,39 (1, 9-7,7 Гц, 1 Н) 7,52 (й, 3У-1,5 Гц, 1 Н) 8,18 (а, У-8,5 Гц, 1 Н) 8,72 (5, 1 Н) 12,24 (Бг. 5., 1 Н)

І С/М5 (Спосіб І С-Р): Ві 1,25 хв., МН" 547

Енантіомер 2А

ІН ЯМР (500 МГц, ОМ50О-ав) б ррт 3,08 (в, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,89 - 4,07 (т, 2 Н) 4,18 (Бгії, 94,3 Гу, 2 Н) 5,31 (Бг 5, 1 Н) 6,36 (а, 9-7,9 Гц, 1 Н) 6,57 (5, 1 Н) 6,65 (Бг 5, 1 Н) 6,72 (14, 9-8,4, 2,0

Гу, 1 Н) 6,90 - 6,98 (т, 2 Н) 7,06 (бг а, 9-7,9 Гц, 1 Н) 7,22 (ай, 2-8,5, 1,6 Гц, 1 Н) 7,37 (Її, 9У-7,7 Гц, (510) 1 Н) 7,50 (а, 9-1,3 Гц, 1 Н) 8,16 (а, 9-8,5 Гу, 1 Н) 8,70 (5, 1 Н) 12,21 (Бг5, 1 Н)

І С/М5 (Спосіб І С-0): В 2,94 хв., МН" 547

ІФого: 127,67 (с 0,25, ОМЕ)

Хіральна ЕС (Спосіб 5БЕС-А): В: 2,02 хв., МН" 547, Хіральна чистота 98,22965.

Температура плавлення: 118 70

Енантіомер 28

ІН ЯМР (500 МГц, ОМ50О-4дв) б ррт 3,08 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,89 - 4007 (т, 2 Н) 4,15 - 420 (т, 2 Н) 5,91 (Брг 5, 1 Н) 6,36 (й, У-7,6 Гу, 1 Н) 6,57 (5, 1 Н) 6,65 (Бг 5, 1 Н) 6,72 (14, У-8,4, 2,0 Гц, 1

Н) 6,89 - 6,99 (т, 2 Н) 7,06 (рг а, 9-7,6 Гу, 1 Н) 7,22 (дай, 9-8,5, 1,3 Гц, 1 Н) 7,37 (І, 957,7 Гц, 1 Н) 7,50 (й, 9-1,3 Гц, 1 Н) 8,16 (а, 9-8,5 Гу, 1 Н) 8,70 (5, 1 Н) 12,21 (рг5, 1 Н)

Ї С/М5 (Спосіб І С-0): В 2,94 хв., МН" 547

ІФого: -125,67 (с 02555, ОМЕ)

Хіральна ЕС (Спосіб 5БЕС-А): В: 2,40 хв., МН" 547, Хіральна чистота 10095.

Температура плавлення: 117 "С

Приклад 3. Синтез 2-(4-фтор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(6-фтор-7-метил-1Н-індол-З-іл)-2- ((З-метокси-5-(метилсульфоніл)феніл)аміно)етанону (сполука 3) і хіральне розділення на енантіомери ЗА і ЗВ. й мен --х 1 с-й 1 й що Я ої З пий Ю; на ран Ф0700онетаю Б ови ши БАС У 00 БЮД, кл. У ТНЕ. від 00 до кт. й СН. С, о год, ту Е ше 2 год, за зв

Е Е на, ту, Її на як я ші й Ше чи Се Хіральне чі яв б розлілення реч Бо чі що Енантіомерн ЗА 3 век НЮМТНЕ, кт. овееу у ї протягом наче Н КІ ще

Синтез проміжної сполуки За

Додавали по краплях 1 М хлорид дієтилалюмінію у гексані (13,2 мл, 13,2 ммоль) при 0"С до розчину 6-фтор-7-метил-1Н-індолу |ІСА5 57817-10-41 (1,3 г, 8,71 ммоль) у СНоСі» (17 мл). Через

ЗО хв. при ще) повільно додавали розчин 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4- фторфеніл)ацетилхлориду Те (4,22 г, 13,1 ммоль, синтез: див. приклад 1) у дихлорметані (17 мл). Реакційну суміш перемішували при 0"С протягом 2 год. Додавали 1 М розчин сегнетової солі. Реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом 2 год. і екстрагували двічі за допомогою ЕТАс. Органічні фази об'єднували, промивали сольовим розчином, висушували над Ма5О5, фільтрували та концентрували за зниженого тиску. Залишок поглинали за допомогою мінімальної кількості СНоСі». Осад відфільтровували, промивали за

Зо допомогою СНоСі» і висушували під вакуумом з одержанням першої партії 2-(2-(2- (бензилокси)етокси)-4-фторфеніл)-1-(6-фтор-7-метил-1 Н-індол-З-іл)летанону За (1,2 г). Фільтрат концентрували за зниженого тиску. Залишок очищали за допомогою флеш-хроматографії на силікагелі із використанням градієнта ЕЮАс (595 - 5095) у гептані. Фракції, що містять продукт, об'єднували та концентрували за зниженого тиску. Залишок розтирали з СНзСМ. Тверді речовини відфільтровували, промивали за допомогою СНоСі»г і висушували під вакуумом з одержанням другої партії 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-фторфеніл)-1-(6-фтор-7-метил-1 Н-індол-

З-іл)етанону За (0,88 г). Фільтрат частково концентрували. Утворену тверду речовину відфільтровували, промивали за допомогою СНесСіг і висушували під вакуумом з одержанням третьої партії 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-фторфеніл)-1-(6б-фтор-7-метил-1 Н-індол-3- іл)етанону За (0,17 г).

Синтез проміжної сполуки ЗБ

Суміш 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-фторфеніл)-1-(6-фтор-7-метил-1 Н-індол-З3-іл)етанону За (1,95 г, 4,48 ммоль) і 1095 паладію на вугіллі (0,2 г) в ЕОАс (120 мл) перемішували за кімнатної температури протягом З год. в атмосфері Нео. Реакційну суміш фільтрували через подушку з

СеїШефФ. Фільтрат концентрували за зниженого тиску. Залишок поглинали за допомогою мінімальної кількості СН2Сі». Осад відфільтровували та висушували під вакуумом з одержанням 2-(4-фтор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(6-фтор-7-метил-1 Н-індол-3-іл)уетанону ЗБ (1,27 г).

Синтез проміжної сполуки Зс

Розчин триброміду фенілтриметиламонію (САЗ 4207-56-11 (1,77 г, 4,71 ммоль) у ТНЕ (28 мл) додавали по краплях при 0"С до розчину 2-(4-фтор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(б-фтор-7- метил-1Н-індол-З-іл)летанону ЗБ (1,48г, 4,29 ммоль) у ТНЕ (40 мл). Реакційну суміш перемішували при 0"С протягом 15 хв. і за кімнатної температури протягом 2 год. Осад відфільтровували і промивали за допомогою ЕОАс. Фільтрат концентрували за зниженого тиску

З одержанням 2-бром-2-(4-фтор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(6-фтор-7-метил-1 Н-індол-3- іл)етанону Зс (1,82 г), який застосовували на наступній стадії без додаткового очищення.

Синтез сполуки З і хіральне розділення на енантіомери ЗА і ЗВ

Суміш 2-бром-2-(4-фтор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(б-фтор-7-метил-1 Н-індол-3-іл/уетанону

Зс (1,16г, 2,63 ммоль) і З-метокси-5-(метилсульфоніл)аніліну ІСАБ 62606-02-4| (1,59 г, 7,90 ммоль) у СНІСМ (6 мл) і ТНЕ (6 мл) перемішували за кімнатної температури протягом ночі.

Реакційну суміш розбавляли ЕОАс і промивали за допомогою 1 н. НСЇ. Фази розділяли.

Органічну фазу промивали 1 н. НСІ, водним насиченим розчином МансСоз, НО і сольовим розчином, висушували над Ма5О5, фільтрували та концентрували за зниженого тиску. Залишок очищали за допомогою флеш-хроматографії на силікагелі із використанням градієнта ЕОАс (від 1595 до 10095) у СНоСі». Фракції, що містять потрібну сполуку, об'єднували та концентрували за зниженого тиску. Залишок поглинали за допомогою мінімальної кількості СНоСі». Осадок відфільтровували та висушували під вакуумом з одержанням першої партії 2-(4-фтор-2-(2- гідроксиетокси)феніл)-1-(6-фтор-7-метил-1 Н-індол-З-іл)-2-((З-метокси-5- (метилсульфоніл)феніл)аміно)етанону (сполука 3, 0,73 г) у вигляді рацемічної суміші. Фільтрат концентрували за зниженого тиску. Залишок розтирали з СНоСі» і СНзЗСМ. Тверді речовини відфільтровували та висушували за зниженого тиску з одержанням другої партії сполуки З (0,23 г) у вигляді рацемічної суміші. Фільтрат концентрували за зниженого тиску. Залишок очищали за допомогою флеш-хроматографії на силікагелі із використанням градієнта ЕЮАсС (від

Зо 1595 до 10095) у СНеСі». Фракції, що містять сполуку З, об'єднували і концентрували за зниженого тиску. Залишок розтирали з СНеСі». Тверді речовини відфільтровували та висушували за зниженого тиску з одержанням третьої партії сполуки З (0,20 г) у вигляді рацемічної суміші.

Хіральне розділення енантіомерів сполуки З (1,15 г) здійснювали за допомогою хірального розділення з використанням нормальної фази (нерухома фаза: А5 20 мкм, рухома фаза: 10090

Меон). Фракції, що містять продукт, об'єднували і випарювали із забезпеченням енантіомеру

ЗА як першого елюйованого продукту та енантіомеру ЗВ як другого елюйованого продукту.

Енантіомер ЗА очищали за допомогою флеш-хроматографії (нерухома фаза: картридж Сгасе

КемеїегібфФ із силікагелем 40г, рухома фаза: гептан/Ег(ОАс/ЕЮН, градієнт від 100/0/0 до 40/45/15). Фракції, що містять продукт, об'єднували і випарювали, і випарювали спільно з Меон.

Пінистий залишок перемішували в НгО (8 мл) і по краплях додавали Меон (2,5 мл). Після перемішування протягом 15 хвилин осад відфільтровували, промивали за допомогою

НгО/Меон 3/ (Ах 1,5 мл) і висушували під вакуумом при 507"С з одержанням енантіомеру ЗА (0,341 г). Енантіомер ЗВ очищали за допомогою флеш-хроматографії (нерухома фаза: картридж

Сгасе КемеїегізФ із силікагелем 40 г, рухома фаза: гептан/г(ОАсС/ЕЮН, градієнт від 100/0/0 до 40/45/15). Фракції, що містять продукт, об'єднували і випарювали. Маслянистий залишок перемішували в Нг2О (8 мл) і по краплях додавали Меон (17,5 мл). Після перемішування протягом 15 хвилин осад відфільтровували, промивали за допомогою МеОН/Нго 1/1 (4х 1,5 мл) і висушували під вакуумом при 50"7С з одержанням енантіомеру ЗВ (0,266 г).

Сполука З "Н ЯМР (300 МГц, ОМ50О-ав) 6 ррт 2,39 (5, З Н) 3,08 (5, З Н) 3,72 (5, 3 Н) 3,90 -411 (т, 2 Н) 4,17 (т, 2 Н) 5,32 (бБг. 5., 1 Н) 6,39 (й, 9У-7,7 Гу, 1 Н) 6,57 (5, 1 Н) 6,66 (5, 1 Н) 6,71 (4, 9У-8,5, 2,3

Гц, 1 Н) 6,89 - 7,10 (т, 4 Н) 7,37 (, 9-71 Гц, 1 Н) 7,99 (аа, У-8,7, 5,5 Гц, 1 Н) 8,63 (5, 1 Н) 12,22 (Бг. 5.,1 Н)

Ї С/М5 (Спосіб І С-Е): Ві 1,07 хв., МН" 545

Енантіомер ЗА

І"Н ЯМР (360 МГц, ОМ50-ав) б ррт 2,35 - 2,43 (т, З Н) 3,08 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,89 -410 (т, 2 Н) 4,17 (І, 9-4,6 Гц, 2 Н) 5,32 (І, 9-5,7 Гц, 1 Н) 6,39 (а, 927,7 Гц, 1 Н) 6,56 - 6,58 (т, 1 Н) 6,65 - 6,68 (т, 1 Н) 6,71 (ід, 9У-8,5,2,4 Гц, 1 Н) 6,91 - 6,98 (т, 2 Н) 6,98 - 7,07 (т, 2 Н) 7,37 (да, У-8,6, 60 6,8 Гу, 1 Н) 7,99 (ад, 9У-8,7, 5,2 Гц, 1 Н) 8,63 (й, 9-3,2 Гц, 1 Н) 12,22 (а, 9У-3,2 Гц, 1 Н)

І С/М5 (Спосіб І С-А): В: 1,08 хв., МН" 545

ІФого: я110,07 (с 0,46, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (Спосіб БЕС-Е): Ве 3,30 хв., МН" 545, хіральна чистота 10095.

Температура плавлення: 21270

Енантіомер ЗВ

І"Н ЯМР (360 МГц, ОМ50-дв) б ррт 2,35 - 2,42 (т, З Н) 3,08 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,90 - 4,10 (т, 2 Н) 4,18 (1, 9-48 Гц, 2 Н) 5,32 (Її, 9-5,7 Гц, 1 Н) 6,39 (а, 9-7,7 Гц, 1 Н) 6,55 - 6,59 (т, 1 Н) 6,66 - 6,68 (т, 1 Н) 6,71 (ід, 9У-8,5,2,4 Гц, 1 Н) 6,91 -6,97 (т, 2 Н) 6,98 - 7,07 (т, 2 Н) 7,37 (да, У-8,6, 6,6 Гу, 1 Н) 7,99 (аа, У-8,7, 5,2 Гц, 1 Н) 8,64 (а, 9-32 Гу, 1 Н) 12,22 (а, 20-3,2 Гц, 1 Н)

І С/М5 (Спосіб І С-А): В: 1,08 хв., МН" 545

ІФого: -107,37 (с 04985, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (Спосіб 5ЕС-Е): Ве 3,74 хв., МН" 545, хіральна чистота 10095.

Температура плавлення: 214"7С

Приклад 4. Синтез 1-(6-хлор-7-метил-1Н-індол-З-іл)-2-(4-фтор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-2- ((З-метокси-5-(метилсульфоніл)феніл)аміно)етанону (сполука 4) і хіральне розділення на енантіомери 4А і 48

Е ще Е ; а сне Дн дк МО -ах и че: и сих дит " їв стави І: ря Не а е. М що Ві» п я й ЕіоАІСІ У, м «ОН, ТЕ, кт. й» ТНЕ ОСІ год. кл.

СС ОС. Зтад си сет аа 45

Е Е

Ді ОЗ ай ОМе ХКіральне 97 подих п янях зазлілення пра ни ря али СН т ТНЕ, ес "а

Н кот. З гол, Кі че

Синтез проміжної сполуки 4а

Додавали по краплях 1 М хлорид дієтилалюмінію у гексані (13,5 мл, 13,5 ммоль) при 0"С до розчину б-хлор-7-метил-1Н-індолу |(СА5 57817-09-1) (1,49 г, 9 ммоль) у СНоСі» (70 мл). Через

ЗО хв. при 0"С повільно додавали 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-фторфеніл)ацетилхлорид Те (8,5 г, 26,3 ммоль) у СНоСі» (20 мл) при 0"С. Реакційну суміш перемішували при 07С протягом

З год. Додавали льодяну воду і реакційну суміш екстрагували за допомогою СНесСі». Органічний шар висушували над Мд5О», фільтрували і розчинник випарювали під вакуумом. Неочищений продукт очищали за допомогою флеш-хроматографії на силікагелі (15-40 мкм, 120Гг,

СНеСІг/СНЗОН 99,5/0,5). Чисті фракції об'єднували і випарювали до сухого стану з одержанням 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-фторфеніл)-1-(6-хлор-7-метил-1Н-індол-З-іл)/етанону 4а (1,86 г).

Зо Синтез проміжної сполуки 4р

Суміш 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-фторфеніл)-1-(6-хлор-7-метил-1Н-індол-З-іл/уетанону 4а (1,76 г, 3,9 ммоль) у СНЗОН (40 мл) і ТНЕ (40 мл) гідрогенізували за атмосферного тиску Нео протягом 2 год. із Ра/С (1095) (170 мг, 0,16 ммоль) як каталізатора. Суміш фільтрували через шар Сеїйеф і промивали за допомогою ЕІАС/ТНЕ 70/30. Фільтрат концентрували за зниженого тиску. Забезпечували твердіння залишку шляхом розтирання з СНзСМ/дііззопропіловим етером.

Осадок відфільтровували і висушували з одержанням 1-(6б-хлор-7-метил-1Н-індол-З-іл)-2-(4- фтор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)етанону 45 у вигляді білого порошку (800 мг).

Синтез сполуки 4 і хіральне розділення енантіомерів 4А і 48

У потоці М2 при 0"С розчин триброміду фенілтриметиламонію (СА 4207-56-1| (0,89 г, 2,38 ммоль) у ТНЕ (40 мл) додавали по краплях до розчину 1-(6б-хлор-7-метил-1Н-індол-З-іл)-2- (4-фтор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)етанону 45 (0,86г, 2,38 ммоль) у ТНЕ (20 мл). Суміш перемішували при 0"С протягом 1 год., охолоджуючу баню прибирали і перемішування продовжували за кімнатної температури протягом З год. По краплях додавали З-метокси-5- (метилсульфоніл)анілін (СА 62606-02-4| (1,43 г, 7,13 ммоль) у СНІСМ (20 мл), і одержану суміш перемішували за кімнатної температури протягом 48 год. Суміш концентрували за зниженого тиску. Залишок поглинали за допомогою ЕТОАс і промивали за допомогою 1 н. НС (двічі), висушували над Мд5О5», фільтрували і розчинник випарювали за зниженого тиску. Неочищений продукт кристалізували з СНзСМ/діізопропілового етеру з одержанням 1-(6-хлор-7-метил-1 Н- індол-З3-іл)-2-(4-фтор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-2-((З-метокси-5- (метилсульфоніл)феніл)аміно)етанону (сполука 4, 1,07 г) у вигляді рацемічної суміші.

Енантіомери сполуки 4 (837 мг) розділяли за допомогою хіральної 5ЗЕС (нерухома фаза:

СПігаїсекю О0-Н, 5 мкм, 250 х 30 мм, рухома фаза: 6095 СО», 4095 ЕЮН (- 0,395 ІРІМН»)) з одержанням 326 мг першого елюйованого енантіомеру і 350 мг другого елюйованого енантіомеру. Забезпечували твердіння першого елюйованого енантіомеру шляхом розтирання з

СНзсМ/діїізопропіловим етером. Осад відфільтровували та висушували з одержанням 298 мг енантіомеру 4А. Другий елюйований енантіомер кристалізували з СНзСМ/діізопропілового етеру. Осад відфільтровували та висушували з одержанням 267 мг енантіомеру 48.

Сполука 4

ІН ЯМР (500 МГц, ОМ50О-4дв) б ррт 3,09 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,92 - 4008 (т, 2 Н) 4,13 - 421 (т, 2 Н) 5,32 (ріг 5, 1 Н) 6,40 (й, 9-7,6 Гу, 1 Н) 6,57 (5, 1 Н) 6,67 (рі 5, 1 Н) 6,71 (4, У-8,4, 2,0 Гц, 1

Н) 6,92 - 6,98 (т, 2 Н) 7,05 (ра, У-7,6 Гц, 1 Н) 7,23 (а, 9-8,5 Гц, 1 Н) 7,37 (Ії, 9-7,7 Гц, 1 Н) 8,00 (а, 9-8,5 Гу, 1 Н) 8,64 (5, 1 Н) 12,28 (Біг 5, 1 Н)

І.С/М5 (Спосіб ГС-С): Ве 3,07 хв., МН" 561

Енантіомер 4А

ІН ЯМР (500 МГц, ОМ5О-адв) 6 ррт 3,08 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,91 - 4,07 (т, 2 Н) 4,17 (І, 9-46

Гц, 2 Н) 5,31 (Ббг 5, 1 Н) 6,39 (а, У-7,9 Гу, 1 Н) 6,57 (І, 9-1,7 Гц, 1 Н) 6,66 (Бг 5, 1 Н) 6,71 (а, 9-8,5, 2,5 Гц, 1 Н) 6,91 - 6,98 (т, 2 Н) 7,04 (0, 9-76 Гц, 1 Н) 7,22 (а, 9-8,5 Гц, 1 Н) 7,37 (аа, О-8,5, 6,9

Гц, 1 Н) 8,00 (а, 9-8,5 Гц, 1 Н) 8,64 (5, 1 Н) 12,28 (Бг 5, 1 Н)

І.С/М5 (Спосіб ГС-С): Ве 3,07 хв., МН" 561

ІФЧого: -110,27 (с 0,256, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (Спосіб 5ЕС-В): Не 3,52 хв., хіральна чистота 10095.

Енантіомер 48

ІН ЯМР (500 МГц, ОМ50О-ав) б ррт 3,08 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,92 - 4,07 (т, 2 Н) 4,17 (ї, 9-46

Зо Гц, 2 Н) 5,32 (ріг 5, 1 Н) 6,39 (а, 9У-7,6 Гц, 1 Н) 6,57 (І, 9-1,7 Гу, 1 Н) 6,66 (в, 1 Н) 6,71 (14, 9У-8,4, 2,4

Гц, 1 Н) 6,91 - 6,97 (т, 2 Н) 7,04 (а, У-7,9 Гц, 1 Н) 7,22 (й, 9У-8,5 Гц, 1 Н) 7,37 (ас, У-8,8, 6,9 Гц, 1

Н) 8,00 (а, 9-8,5 Гц, 1 Н) 8,64 (в, 1 Н) 12,19 (рг 5, 1 Н)

І.С/М5 (Спосіб ГС-С): Ве 3,07 хв., МН" 561

ІФого: я112,87 (с 0,257, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (Спосіб 5ЕС-В): Не 4,69 хв., хіральна чистота 10095.

Температура плавлення: 16270

Приклад 5. Синтез 1-(5,6-дифтор-1Н-індол-З3-іл)-2-(4-фтор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-2-((3- метокси-5-(метилсульфоніл)феніл)аміно)етанону (сполука 5) і хіральне розділення на енантіомери 5А і 5В ту Е Е що шк бе тан От

Бо су їз - о 85 я я на Рв с ее хх до як а: Бвуд й зу ВІЗАс. кт. й ть ТНЕ. від С ла кот. М.Я голо.

СН ОС, З тод. во В ви за Зв но. - Ії" на я, ші Ї т рив рме Хіральне

З в пи, розділення

Битьн в пре у ЯК й Енантіомгери ЗА 15 вн СНЯСМ/УТНЕ. кл. рибу Ку

В протятом нечі я т

Синтез проміжної сполуки 5а

Додавали по краплях 1 М хлорид діетилалюмінію у гексані (9,5 мл, 9,50 ммоль) при 0"С до розчину 5,6-дифтор-1Н-індолу |(САЗ 169674-01-5І| (0,73 г, 4,73 ммоль) у СНоСі» (20 мл). Через

ЗО хв. при ще) повільно додавали розчин 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4- фторфеніл)ацетилхлориду Те (2,29 г, 7,10 ммоль, синтез: див. приклад 1) у дихлорметані (12 мл). Реакційну суміш перемішували при 0"С протягом З год. Додавали 1 М розчин сегнетової солі. Після перемішування за кімнатної температури протягом 2 год. реакційну суміш підкислювали за допомогою 1 н. НСІ ї екстрагували двічі за допомогою ЕОАс. Органічні фази об'єднували, промивали сольовим розчином, висушували над Мо5О:4, фільтрували та концентрували за зниженого тиску. Залишок очищали за допомогою флеш-хроматографії на силікагелі з використанням градієнта ЕТОАс (від 095 до 5095) у гептані з одержанням 2-(2-(2- (бензилокси)етокси)-4-фторфеніл)-1-(5,6-дифтор-1 Н-індол-3-іл)уетанону 5а (0,66 г).

Синтез проміжної сполуки 56

Суміш /2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-фторфеніл)-1-(5,6-дифтор-1Н-індол-З-іл)уетанону ба (0,66 г, 1,50 ммоль) і 1095 паладію на вугіллі (0,07 г) в ЕоАс (15 мл) перемішували за кімнатної температури протягом 1 год. в атмосфері Но. Реакційну суміш фільтрували через Сеїйеф.

Фільтрат концентрували за зниженого тиску. Залишок очищали за допомогою флеш- хроматографії на силікагелі з використанням градієнта ЕЮАс (від 3095 до 8590) у гептані з одержанням 1-(5,6-дифтор-1Н-індол-З-іл)-2-(4-фтор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)етанону 5 (0,28 г).

Синтез проміжної сполуки 5с

Розчин триброміду фенілтриметиламонію (САЗ 4207-56-11 (0,93 г, 2,47 ммоль) у ТНЕ (10 мл) додавали по краплях при 0"С до розчину 1-(5,6-дифтор-1Н-індол-3-іл)-2-(4-фтор-2-(2- гідроксиетокси)феніл)етанону 56 (0,79г, 2,29 ммоль) у ТНЕ (15 мл). Реакційну суміш перемішували при 0"С протягом 15 хв. і за кімнатної температури протягом 2,5 год. Осад відфільтровували і промивали за допомогою ЕІОАс. Фільтрат концентрували за зниженого тиску з одержанням 2-бром-1-(5,6-дифтор-1Н-індол-З3-іл)-2-(4-фтор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)етанону

Бе (0,98 г), який застосовували на наступній стадії без додаткового очищення.

Синтез сполуки 5 і хіральне розділення на енантіомери 5А і 5В

Суміш 2-бром-1-(5,6-дифтор-1Н-індол-З-іл)-2-(4-фтор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)етанону 5с (0,98 г, 2,28 ммоль) і З-метокси-5-(метилсульфоніл)аніліну (СА 62606-02-4) (1,36 г, 6,78 ммоль) у СНІСМ (6 мл) і ТНЕ (6 мл) перемішували за кімнатної температури протягом ночі. Реакційну

Зо суміш концентрували за зниженого тиску. Залишок розподіляли між ЕОАс і 1 н. НСІ. Фази розділяли. Водну фазу екстрагували двічі за допомогою ЕЇОАс. Органічні фази об'єднували, промивали сольовим розчином, висушували над М950О54, фільтрували та концентрували за зниженого тиску. Залишок очищали за допомогою флеш-хроматографії на силікагелі з використанням градієнта ЕОАс (від 1595 до 7095) у СНеСі». Фракції, що містять потрібну сполуку, об'єднували та концентрували за зниженого тиску. Залишок розтирали з ЕІОАс. Тверді речовини відфільтровували та висушували під вакуумом з одержанням 1-(5,6-дифтор-1Н-індол-

З-іл)-2-(4-фтор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-2-((З-метокси-5- (метилсульфоніл)феніл)аміно)етанону (сполука 5, 0,53 г) у вигляді рацемічної суміші.

Хіральне розділення енантіомерів сполуки 5 (482 мг) здійснювали за допомогою хірального розділення з використанням нормальної фази (нерухома фаза: А5 20 мкм, рухома фаза: 10090

Меон). Фракції, що містять продукт, об'єднували і випарювали за зниженого тиску з одержанням енантіомеру 5А як першого елюйованого продукту та енантіомеру 5В як другого елюйованого продукту. Енантіомер 5А очищали за допомогою флеш-хроматографії (нерухома фаза: картридж Сгасе Кемеїегі5б із силікагелем 12 г, рухома фаза: гептан/нгОАсС/ЕОЮН, градієнт від 100/0/0 до 40/45/15). Фракції, що містять продукт, об'єднували, випарювали за зниженого тиску і випарювали спільно з СНСМ. Залишок ліофілізували із суміші СНІСМ (З мл) і води (З мл) і висушували під вакуумом при 50"С для одержання енантіомеру 5А (0,147 г). Енантіомер 5В очищали за допомогою флеш-хроматографії (нерухома фаза: картридж ОСгасе КемеїегізФ із силікагелем 12 г, рухома фаза: гептан/г(ОАсС/ЕЮН, градієнт від 100/0/0 до 40/45/15). Фракції, що містять продукт, об'єднували, випарювали за зниженого тиску і випарювали спільно з СНзСМ.

Залишок ліофілізували із суміші СНзСМ (З мл) і води (З мл) і висушували під вакуумом при 507 для одержання енантіомеру 58 (0,107 г).

Сполука 5 "Н ЯМР (300 МГц, ОМ50О-ав) б ррт 3,08 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,89 - 4,09 (т, 2 Н) 4,18 (т, 2 Н) 5,30 (Її, У-5,3 Гц, 1 Н) 6,36 (а, 9-7,8 Гу, 1 Н) 6,58 (5, 1 Н) 6,65 (5, 1 Н) 6,71 (14, 9-8,5, 2,3 Гц, 1 Н) 6,90 - 6,99 (т, 2 Н) 7,07 (а, 9У-7,8 Гц, 1 Н) 7,37 (1, 97,1 Гц, 1 Н) 7,50 (аа, 9У-10,7, 7,0 Гц, 1 Н) 8,01 (ад, 9У-11,2, 8,2 Гц, 1 Н) 8,72 (5, 1 Н) 12,29 (бБг. 5., 1 Н)

Г.С/М5 (Спосіб ГС-Р): Ві 1,10 хв., МН. 549

Енантіомер 5А (510) І"Н ЯМР (360 МГц, ОМ5О-ав) 6 ррт 3,08 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,86 - 4,07 (т, 2 Н) 4,17 (і, 9У-4,8

Гц, 2 Н) 5,30 (Її, У-5,5 Гц, 1 Н) 6,35 (а, 9-7,8 Гц, 1 Н) 6,57 (І, У-1,9 Гц, 1 Н) 6,63 - 6,67 (т, 1 Н) 6,72 (9, 9-8,5,2,4 Гц, 1 Н) 6,91 -6,97 (т, 2 Н) 7,07 (а, 9-7,8 Гц, 1 Н) 7,37 (ай, 2-8,6, 6,8 Гц, 1 Н) 7,50 (аа, 9-10,7, 7,0 Гц, 1 Н) 8,01 (да, 9-11,1, 8,1 Гц, 1 Н) 8,72 (5, 1 Н) 12,29 (рг5, 1 Н)

І С/М5 (Спосіб І С-А): В: 1,03 хв., МН" 549

Фо: 122,77 (с 0,49, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (Спосіб 5ЕС-Е): В 3,28 хв., МН" 549, хіральна чистота 10095.

Енантіомер 5В "Н ЯМР (360 МГц, ОМ50-ав) б ррт 3,08 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,86 - 4,07 (т, 2 Н) 4,18 (Бгі, у-4,8 Гц, 2 Н) 5,30 (1, У-5,5 Гц, 1 Н) 6,36 (а, У-7,8 Гц, 1 Н) 6,58 (ї, У-1,8 Гц, 1 Н) 6,63 - 6,67 (т, 1

Н) 6,73 (19, У-8,5, 2,5 Гц, 1 Н) 6,91 - 6,97 (т, 2 Н) 7,07 (а, 9-7,8 Гц, 1 Н) 7,38 (ад, У-8,6, 6,8 Гц, 1

Н) 7,50 (аа, 9У-10,7, 6,9 Гц, 1 Н) 8,02 (ад, 9У-11,1, 8,1 Гц, 1 Н) 8,72 (5, 1 Н) 12,29 (рг 5, 1 Н)

І С/М5 (Спосіб І С-А): В: 1,04 хв., МН" 549

ІФЧого: -123,37 (с 0,48, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (Спосіб 5ЕС-Е): Ве 3,74 хв., МН" 549, хіральна чистота 10095.

Приклад б. Синтез 2-(4-фтор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-2-((З-метокси-5- (метилсульфоніл)феніл)аміно)-1-(б-метокси-5-метил-1Н-індол-З-іл)етанону (сполука б) і хіральне розділення на енантіомери бА і 68

Е зе, нин че не Раюньк Б зве мет ск Рід! тре МеОН, НЕ, тету ТНЕ, ФС.

СНІСЬ ОО, З год мл кот. 15 хв. мот ТМ ігодокт. ба ві а год.

Е Е но, ш-х ме на рек ше ЧИ; га шк я В оме Хіральне

А наяв ЗК роздіпення

НІ я по що онй І тру, ат рН Ше --- - -.. ЕнзніІюЮмернбА :58 м ва | сн; ЕНЕ, хо. мет тК о ве зе Код. в

Синтез проміжної сполуки ба

Додавали по краплях 1 М хлорид діеєтилалюмінію в гексані (35,8 мл, 35,8 ммоль) при 0"С до розчину б-метокси-5-метил-1Н-індолу |ІСА5 1071973-95-91| (3,85 г, 23,9 ммоль) у СНеСіг (50 мл).

Через 30 хв. при 0"С повільно додавали 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-фторфеніл)уацетилхлорид

Те (8,5 г, 26,3 ммоль) у СНеСі»г (50 мл) при 0"С. Реакційну суміш перемішували при 0"С протягом

З год. Додавали льодяну воду і реакційну суміш екстрагували за допомогою СНеСіІг/СнзЗОнН 90/10. Органічний шар промивали насиченим розчином сегнетової солі, а потім сольовим розчином, висушували над Ма5О5, фільтрували, і розчинник випарювали за зниженого тиску.

Залишок поглинали за допомогою мінімальної кількості СНеСі», осад відфільтровували і

Зо висушували з одержанням 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-фторфеніл)-1-(6б-метокси-5-метил-1Н- індол-З-іл)етанону ба (6,6 г).

Синтез проміжної сполуки бр

Суміш 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-фторфеніл)-1-(б-метокси-5-метил-1Н-індол-З-іл/уетанону ба (5,2 г, 11,6 ммоль) у СНЗОН (200 мл) і ТНЕ (100 мл) гідрогенізували за атмосферного тиску Нг протягом 15 хв. із 2095 РЯА(ОН)2г/С (2,45 мг, 3,49 ммоль). Суміш фільтрували через шар Сеїйеф і промивали за допомогою ЕТОАсС/ТНЕ 70/30. Фільтрат концентрували за зниженого тиску.

Сполуку розтирали з ЕСО, осад відфільтровували і висушували з одержанням 2-(4-фтор-2-(2- гідроксиетокси)феніл)-1-(6-метокси-5-метил-1 Н-індол-3-іллетанону 66 у вигляді білого порошку (2,54 г).

Синтез сполуки 6 і хіральне розділення енантіомерів бА і 6В

У потоці Ма при 0"С розчин триброміду фенілтриметиламонію (ІСАБ 4207-56-1| (2,4 г, бЗ8в ммоль) у ТНЕ (15мл) додавали по краплях до розчину /2-(4-фтор-2-(2- гідроксиетокси)феніл)-1-(б-метокси-5-метил-1 Н-індол-з-іл)уетанону 66 (2,28 г, 6,38 ммоль) у ТНЕ (100 мл). Суміш перемішували при 0"С протягом 1 год., охолоджуючу баню прибирали і перемішування продовжували за кімнатної температури протягом З год. По краплях додавали

З-метокси-5-(метилсульфоніл)анілін (ІСАЄ 62606-02-4| (3,85 г, 19,1 ммоль) у СНІСМ (45 мл), і одержану суміш перемішували за кімнатної температури протягом 72 год. Суміш концентрували за зниженого тиску. Залишок поглинали за допомогою ЕІЮАс і промивали за допомогою 1 н. НСІ (двічі), висушували над Мо95Ох, фільтрували і розчинник випарювали за зниженого тиску.

Неочищений залишок (4 г) об'єднували з іншою фракцією (1 г) і очищали за допомогою флеш- хроматографії на силікагелі (15-40 мкм, 120 г, СН»2СІг/СНзОН 99/1). Чисті фракції об'єднували та випарювали до сухого стану з одержанням 2-(4-фтор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-2-((З-метокси- 5-(метилсульфоніл)феніл)аміно)-1-(6-метокси-5-метил-1 Н-індол-З3-іл)етанону (сполука 6, 1,3 г) у вигляді рацемічної суміші.

Енантіомери сполуки 6 (1,55 г) розділяли за допомогою хіральної БЕС (нерухома фаза:

СПігаїсекю О0-Н, 5 мкм, 250 х 30 мм, рухома фаза: 6095 СО», 4095 ЕЮН (0,395 іРІМН»)) з одержанням 590 мг першого елюйованого енантіомеру і 613 мг другого елюйованого енантіомеру. Перший елюйований енантіомер кристалізували із ЕСО. Осад відфільтровували та висушували з одержанням 529 мг енантіомеру бА. Другий елюйований енантіомер кристалізували із ЕБО. Осад відфільтровували та висушували з одержанням 517 мг енантіомеру 68.

Сполука 6 "Н ЯМР (500 МГц, ОМ5О-ав) 6 ррт 2,21 (5, З Н) 3,08 (в, З Н) 3,71 (5, З Н) 3,79 (5, З Н) 3,90 - 3,97 (т, 1 Н) 3,98 - 4,06 (т, 1 Н) 4,17 (І, 2-46 Гц, 2 Н) 5,29 (Бгї, 9У-4,9 Гу, 1 Н) 6,31 (а, 9-7,6 Гц, 1

Н) 6,56 (ї, 9-1,7 Гц, 1 Н) 6,64 (5, 1 Н) 6,71 (19, У-8,4, 2,4 Гц, 1 Н) 6,89 (5, 1 Н) 6,91 -6,95 (т, 2 Н) 6,99 (а, 9-7,9 Гц, 1 Н) 7,37 (аа, У-8,5,6,9 Гц, 1 Н) 7,91 (5, 1 Н) 8,48 (5, 1 Н) 11,82 (5,1 Н)

Г.С/М5 (Спосіб ГС-0): Не2,67 хв., МН" 557

Енантіомер бА

ІН ЯМР (500 МГц, ОМ5о-ав) 6 ррт 2,21 (5, З Н) 3,08 (в, З Н) 3,71 (в, З Н) 3,79 (в, З Н) 3,94 (д9, 9-8,2,4,1 Гу, 1 Н) 4,03 (д4, 9У-11,7, 5,6 Гц, 1 Н) 4,17 (І, 9-46 Гц, 2 Н) 5,29 (І, 9У-5,5 Гц, 1 Н) 6,32 (а, 9-7,9 Гу, 1 Н) 6,56 (т, 1 Н) 6,64 (Бг 5, 1 Н) 6,71 (14, 9У-8,5, 2,2 Гц, 1 Н) 6,89 (5, 1 Н) 6,91 - 6,96 (т, 2 Н) 6,99 (й, 9-7,9 Гц, 1 Н) 7,37 (09, 9У-8,5, 6,9 Гц, 1 Н) 7,91 (5, 1 Н) 8,48 (5, 1 Н) 11,82 (Бг 5,1 Н)

І.С/М5 (Спосіб ГС-С): В: 2,87 хв., МН" 557

Коо) ІФого: 125,57 (с 0,2527, ОМЕ)

Хіральна ЕС (Спосіб 5ЕС-О): В 2,52 хв., МН" 557, хіральна чистота 10095.

Температура плавлення: 232760

Енантіомер 68

ІН ЯМР (500 МГц, ОМ50-ав) 6 ррт 2,21 (5, З Н) 3,08 (5, З Н) 3,71 (5, З Н) 3,79 (5, З Н) 3,90 - 3,97 (т, 1 Н) 3,99 -4,07 (т, 1 Н) 4,17 (Ї, 9-46 Гц, 2 Н) 5,29 (г 5, 1 Н) 6,32 (а, 9-7,9 Гц, 1 Н) 6,56 (т, 1 Н) 6,64 (рг 5, 1 Н) 6,71 (Ід, 9-84, 2,4 Гц, 1 Н) 6,89 (5, 1 Н) 6,91 - 6,96 (т, 2 Н) 6,99 (й, 9-7,6

Гц, 1 Н) 7,37 (аа, У-8,4, 7,1 Гу, 1 Н) 7,91 (5, 1 Н) 8,48 (5, 1 Н) 11,82 (Бг 5, 1 Н)

І.С/М5 (Спосіб ГС-С): В: 2,87 хв., МН" 557

ІФЧого: -127,17 (с 0,2455, ОМЕ)

Хіральна ЕС (Спосіб 5ЕС-0): В. 4,14 хв., МН" 557, хіральна чистота 10095.

Температура плавлення: 23570

Приклад 7. Синтез 2-(4-фтор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(6-фтор-5-метил-1 Н-індол-3-іл)-2- ((З-метокси-5-(метилсульфоніл)феніл)аміно)етанону (сполука 7) і хіральне розділення на енантіомери 7А і 78.

Е й Н ій и Во т Ноя, ГГ» пе: ня с, СЕ ів -ши ку це вас й Би (Я ве п - - - - М ---- - 5 ( А Ч- - ех БАК! пр МеОН, ТНЕ. ср» ТНЕ, бе,

СНюТЬ о. БТ кт. За хв. в М ї год, кл.

З гап. НЕС. З тод. та ть гол.

Е Е

НО ть Її" де т шнй Її й | дн щей сме Хіральне бе вм та З т розпідення пери А Ек по келих Ко Я . Й Енантюмерн7А 178

ШК, СНАСМТВЕ, від що ек ой те й кл.дОКс. Я год. Ди.

Синтез проміжної сполуки 7а

Додавали по краплях 1 М хлорид діетилалюмінію у гексані (25,1 мл, 25,1 ммоль) при О'С і в потоці М2 до розчину б-фтор-5-метил-1Н-індолу |(САЗ 162100-95-0) (2,5 г, 16,8 ммоль) у СНоСї» (135 мл). Через 10 хв. при 0"С розчин 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-фторфеніл)ацетилхлориду

Те (8,11 г, 25,11 ммоль) у СН»Сі» (50 мл) додавали по краплях при 0"С протягом періоду, що становив 45 хв., при цьому температуру реакції підтримували нижче 5"С. Реакційну суміш перемішували при 0"С протягом 2 год. і при 10"С протягом 2 год. Реакційну суміш охолоджували до 0"С, і по краплях додавали розчин сегнетової солі |Є100-16-9| (9,46 г, 33,5 ммоль) у воді (10 мл). Після додавання реакційну суміш перемішували при 0"С протягом 10 хвилин, а потім забезпечували нагрівання до кімнатної температури. Додавали ТНЕ (150 мл) і

Ма»5О. (40 г) і суміш перемішували протягом 18 год. Суміш фільтрували через ОісаїЇйефб і промивали великою кількістю ТНЕ. Об'єднані фільтрати випарювали за зниженого тиску і випарювали спільно із толуолом. Залишок кристалізували з СНзСМ (10 мл), відфільтровували, промивали за допомогою СНЗіСМ (2х) і висушували під вакуумом при 40"С з одержанням першої фракції 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-фторфеніл)-1-(6-фтор-5-метил-1 Н-індол-З-іл)оетанону 7а (1,86 г). Фільтрат випарювали за зниженого тиску. Залишок (7,7 г) очищали за допомогою флеш-хроматографії (нерухома фаза: картридж Огасе КемеїегізФ із силікагелем 120 г, рухома фаза: гептан/Е(ОАс, градієнт від 100/0 до 0/100). Фракції, що містять продукт, об'єднували і залишали у відкритому резервуарі для забезпечення випарювання розчинника і кристалізації продукту. Осад виділяли за допомогою фільтрації, промивали Зх за допомогою гептану/Ег (Ас (1/1) ії висушували під вакуумом при 40"С з одержанням другої (1,51 г) і третьої (0,75 г) фракції проміжної сполуки 7а.

Синтез проміжної сполуки 70

Суміш 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-фторфеніл)-1-(6-фтор-5-метил-1 Н-індол-З3-іл)етанону 7а (1,86 г, 4,27 ммоль) у метанолі (80 мл) гідрогенізували за атмосферного тиску Нег протягом 90 хв. із 1095 Ра/С (0,5 г). Суміш фільтрували через подушку з ОісаШШеФ і промивали за допомогою Меон. Фільтрат концентрували за зниженого тиску. Твердий залишок перемішували

Зо у діізопропіловому етері (10 мл). Осад відфільтровували, промивали за допомогою ОІРЕ (4х 1,5 мл) і висушували під вакуумом при 507С з одержанням 2-(4-фтор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)- 1-(6-фтор-5-метил-1 Н-індол-3-іл)етанону 75 (330 мг).

Синтез сполуки 7 і хіральне розділення енантіомерів 7А і 7В

У потоці Маг при 0"С розчин триброміду фенілтриметиламонію |(СА5 4207-56-1| (447 г, 124 ммоль) у ТНЕ (25мл) додавали по краплях до розчину /2-(4-фтор-2-(2- гідроксиетокси)феніл)-1-(6-фтор-5-метил-1 Н-індол-З-іл)етанону 75 (390 мг, 1,13 ммоль) у ТНЕ (25 мл). Суміш перемішували при 0"С протягом 2 год. і за кімнатної температури протягом 1 год.

Реакційну суміш, що містить неочищений 2-бром-2-(4-фтор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(6- фтор-5-метил-1 Н-індол-3-ілуетанон то, змішували З розчином З-метокси-5- (метилсульфоніл)аніліну (СА5 62606-02-4| (579 мг, 2,88 ммоль) і дізопропілетиламіну (165 мкл, 0,96 ммоль) у СНзСМ (100 мл), і реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом ночі в атмосфері М2. Температуру реакції поступово збільшували до 507С протягом 4 год. і до 60"С протягом 24 год. Розчинники випарювали за зниженого тиску. Залишок розчиняли в ЮСМ (100 мл) і промивали за допомогою 1 н. НСІ (100 мл). Органічний шар промивали водою (100 мл), висушували над Мд5О», фільтрували і випарювали за зниженого тиску. Залишок очищали за допомогою колонкової хроматографії (нерухома фаза: картридж

Сгасе КемеїегібФ з силікагелем 120 г, елюент: ЕІЮАс : ЕН (3:1)/гептан, градієнт від 0/100 до 50/50). Фракцію, що містить продукт, об'єднували та випарювали за зниженого тиску. Твердий залишок кристалізували з МеОН/води. Осад виділяли за допомогою фільтрації, промивали за допомогою МеОН/води 1/1 (4 мл) і висушували під вакуумом при 50"С з одержанням рацемічного 2-(4-фтор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(6-фтор-5-метил-1 Н-індол-3-іл)-2-((3- метокси-5-(метилсульфоніл)феніл)аміно)етанону (сполука 7, 205 мг).

Хіральне розділення енантіомерів сполуки 7 здійснювали за допомогою препаративної ЗЕС (нерухома фаза: Спігаїраке Оіасе! А5 20 х 250 мм, рухома фаза: СО», ЕЮН -«- 0,495 ІРИМН»).

Фракції, що містять продукт, об'єднували і випарювали з одержанням енантіомеру 7А як першого елюйованого продукту та енантіомеру 7В як другого елюйованого продукту. Обидва енантіомери перемішували в МеОнН/воді 1/1 (10 мл) і перемішували протягом 1 год. Тверді речовини відфільтровували і висушували під вакуумом при 40"С з одержанням енантіомеру 7А (8 мг) і енантіомеру 7В (32 мг) у вигляді білих порошків.

Енантіомер 7А

ІН ЯМР (400 МГц, ОМ50-ав) б ррт 2,30 (а, 9-1,1 Гц, З Н) 3,07 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,89 - 4,07 (т, 2 Н) 4,18 (І, 9-4,5 Гц, 2 Н) 528 (ріг 5, 1 Н) 6,33 (а, 9-:7,7 Гц, 1 Н) 6,57 (Ї, 9-1,7 Гц, 1 Н) 6,64 (Її, у2,3 Гу, 1 Н) 6,71 (14, 9-8,5, 2,4 Гу, 1 Н) 6,89 - 6,96 (т, 2 Н) 6,99 (а, 9-7,9 Гц, 1 Н) 7,19 (а, 9-10,1

Гу, 1 Н) 7,37 (ад, 9у-8,6, 7,0 Гу, 1 Н) 8,03 (а, 927,7 Гц, 1 Н) 8,61 (5, 1 Н) 11,89 (ру 5, 1 Н)

Ї С/М5 (Спосіб І С-В): В: 1,95 хв., МН" 545

ІФого: я141,47 (с 0,43, ОМЕ)

Хіральна ЕС (Спосіб 5ЕС-Е): В: 3,36 хв., МН" 545, хіральна чистота 98,9965.

Енантіомер 7В

І"Н ЯМР (400 МГц, ОМ50О-ав) б ррт 2,30 (а, 9У-1,3 Гц, З Н) 3,07 (в, З Н) 3,72 (в, З Н) 3,88 - 4,05 (т, 2 Н) 4,18 (ї, 9-4,6 Гц, 2 Н) 5,34 (рг 5, 1 Н) 6,32 (а, 9-7,7 Гц, 1 Н) 6,56 (І, 9-1,68 Гц, 1 Н) 6,64 (ї, у-2и1 Гу, 1 Н) 6,70 (14, 9-8,4, 2,3 Гц, 1 Н) 6,89 - 6,95 (т, 2 Н) 6,98 (а, 9-7,7 Гц, 1 Н) 7,19 (а, 9-10,1

Гу, 1 Н) 7,37 (аа, 2-8,6, 6,8 Гц, 1 Н) 8,02 (й, 9-7,7 Гц, 1 Н) 8,62 (5,1 Н)

Ї С/М5 (Спосіб І С-В): В: 1,95 хв., МН" 545

ІФЧого: -144,77 (с 0,465, ОМЕ)

Ко) Хіральна ЕС (Спосіб 5ЕС-Е): В: 3,77 хв., МН" 545, хіральна чистота 10095.

Приклад 8. Синтез 2-(4-фтор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(7-фтор-5-метил-1Н-індол-З-іл)-2- ((З-метокси-5-(метилсульфоніл)феніл)аміно)етанону (сполука 8) і хіральне розділення на енантіомери 8А і 88.

Ж з е Е дач во з но ять оч маш ЕБАКІ пр ЕЮАг, НЕ. рр ТНЕ. с,

Й сн с, в коло хв. ва Згоду кт. і гад. НКЕС, год, Е ва Е вв Згад

Е ; в рі Ї ЩІ ну Оме Хіральне о. і взяти Оу, зозділени

Зк св Щ бо ше лбж п . т Ч і; --ШЩ Л 20 : 5-7 Її ЩІ У ЩІ в мини Енантівмерн ЯА 88

З ті ПІРЕА ТЕ Ге

Р як СНЯИМЛНЕ КС. ік тол м

Синтез проміжної сполуки ва

Додавали по краплях 1 М хлорид діетилалюмінію у гексані (18,6 мл, 18,6 ммоль) при О'С і в потоці М2 до розчину 7-фтор-5-метил-1Н-індолу (САЗ 442910-91-0| (1,85 г, 12,4 ммоль) у СНоСї» (100 мл). Через 5 хв. при 0"С розчин 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-фторфеніл)уацетилхлориду

Те (6,0 г, 18,6 ммоль) у СНоСіІ» (35 мл) додавали по краплях при 0"С протягом періоду, що становив 50 хв., при цьому температуру реакції підтримували нижче 6"С. Реакційну суміш перемішували при 0"С протягом 90 хв. і при 10"С протягом 1 год. Реакційну суміш охолоджували до 0"С, і по краплях додавали розчин сегнетової солі |6100-16-9| (7,0 г, 24,8 моль) у воді (7,5 мл). Після додавання реакційну суміш перемішували при 0"С протягом 10 хвилин, а потім забезпечували нагрівання до кімнатної температури. Додавали ТНЕ (125 мл) і

Маг5О. (30 г) і суміш перемішували протягом 18 год. Суміш фільтрували через бБісаїйеф, промивали великою кількістю ТНЕ і об'єднані фільтрати випарювали за зниженого тиску.

Залишок перемішували в СНзСМ (7,5 мл) при 40"С протягом 1 год. Осад відфільтровували, промивали за допомогою СНЗіСМ (2х) і висушували під вакуумом при 40"С з одержанням 2-(2-(2- (бензилокси)етокси)-4-фторфеніл)-1-(7-фтор-5-метил-1Н-індол-З-іл)летанону ва (два виходи: 0,55 г і 1,86 г).

Синтез проміжної сполуки 86

Суміш 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-фторфеніл)-1-(7-фтор-5-метил-1 Н-індол-З3-іл)етанону ва (24 г, 5,51 ммоль) в Е(ЮАс (80 мл) і ТНЕ (10 мл) гідрогенізували за атмосферного тиску Нео протягом 15 хв. із 1095 Ра/С (0,5 г). Суміш фільтрували через подушку з ОісаїйетФф, і осад на фільтрі промивали за допомогою ЕІЮАс і ТНЕ. Фільтрат концентрували за зниженого тиску.

Твердий залишок перемішували у діїізопропіловому етері/діетиловому етері 1/1 (30 мл). Осад відфільтровували, промивали за допомогою ОІРЕ/ЕСО 1/1 (Зх) і висушували під вакуумом при 50"С 3 одержанням / 2-(4-фтор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(7-фтор-5-метил-1 Н-індол-3- іл)етанону 85 (1,47 г).

Синтез проміжної сполуки 8с

Розчин /2-(4-фтор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(7-фтор-5-метил-1Н-індол-З-іл)уетанону 8р (147 г, 4,26 ммоль) у ТНЕ (40 мл) охолоджували до 0"С у потоці Ма. Порціями додавали трибромід фенілтриметиламонію І(САБ 4207-56-1| (1,68 г, 4,47 ммоль), і реакційну суміш перемішували при 0"С протягом 2 год. і за кімнатної температури протягом 2 год. Осад відфільтровували, промивали за допомогою ТНЕ і об'єднані фільтрати випарювали за зниженого тиску з одержанням 2-бром-2-(4-фтор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(7-фтор-5-метил- 1Н-індол-З3-іл)етанону 8с (1,81 г), який застосовували без додаткового очищення на наступній стадії.

Синтез сполуки 8 і хіральне розділення енантіомерів 8А і 88 2-Бром-2-(4-фтор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(7-фтор-5-метил-1Н-індол-З3-іл)етанон вс (1,81 г, 4,26 ммоль), З-метокси-5-(метилсульфоніл)анілін (СА 62606-02-4) (1,71 г, 8,51 ммоль) і діззопропілетиламін (1,47 мл, 8,51 ммоль) розчиняли в СНзСМ (60 мл) і ТНЕ (40 мл), і реакційну суміш перемішували при 607С протягом 18 год. в атмосфері М. Забезпечували досягнення реакційною сумішшю кімнатної температури і виливали Її в воду (400 мл). Продукт екстрагували за допомогою ЕСО (2х). Об'єднані органічні шари промивали сольовим розчином, висушували над М95О5, фільтрували та випарювали за зниженого тиску. Залишок (3,4 г) очищали за допомогою флеш-хроматографії (нерухома фаза: картридж ОСгасе КемеїегібФ із силікагелем 80г, рухома фаза: гептан/Е(ОАсС/ЕЮН, градієнт від 100/0/0 до 40/45/15). Потрібні фракції об'єднували і випарювали за зниженого тиску. Продукт додатково очищали за допомогою препаративної НРІ С (нерухома фаза: Оріїзрпеге С18 О0ОВ - 10 мкм, 200 г, 5 см, рухома фаза: 0,25965 розчин МНАНСО: у воді, СНіІСМ). Потрібні фракції об'єднували, а органічні леткі речовини випарювали дуже повільно в роторному випарнику за зниженого тиску (температура бані 402), забезпечуючи осадження продукту. Тверді речовини відфільтровували, промивали за допомогою води (4х) і висушували під вакуумом при 507С з одержанням рацемічного 2-(4-фтор- 2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(7-фтор-5-метил-1 Н-індол-3-іл)-2-((З-метокси-5- (метилсульфоніл)феніл)аміно)етанону (сполука 8, 1,26 г).

Хіральне розділення енантіомерів сполуки 8 здійснювали за допомогою хірального розділення з використанням нормальної фази (нерухома фаза: АЗ 20 мкм, рухома фаза: 10090 метанол). Фракції, що містять продукт, об'єднували і випарювали з одержанням енантіомеру вА як першого елюйованого продукту та енантіомеру 88 як другого елюйованого продукту. Обидва залишки перемішували у воді (З мл) і МеонН (2 мл), відфільтровували, промивали (Зх) за допомогою МеоН/води (1/2) і висушували під вакуумом при 45"С з одержанням енантіомеру ВА (416 мг) і енантіомеру 88 (399 мг).

Сполука 8

ІН ЯМР (400 МГц, ОМ50О-дв) 6 ррт 2,39 (5, З Н) 3,08 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,90 - 4,03 (т, 2 Н) 4,16 (І, 9-4,7 Гц, 2 Н) 5,22 (І, 9-5,6 Гу, 1 Н) 6,37 (а, 9-7,7 Гц, 1 Н) 6,57 (І, 9-1,8 Гц, 1 Н) 6,65 (ї, у2,3 Гц, 1 Н) 6,71 (49, У-8,5, 2,4 Гц, 1 Н) 6,687 - 6,96 (т, З Н) 6,99 (й, 9-7,7 Гц, 1 Н) 7,38 (аа, у-8,6, 6,8 Гц, 1 Н) 7,80 (Бг 5, 1 Н) 8,60 (5, 1 Н) 12,50 (5,1 Н)

Ї С/М5 (Спосіб І С-В): Ві: 1,97 хв., МН" 545

Енантіомер ВА (510) "Н ЯМР (400 МГц, ОМ50-дв) 5 ррт 2,39 (в, З Н) 3,08 (5, З Н) 3,72 (в, З Н) 3,89 - 4,03 (т, 2 Н)

4,16 (І, 9-4,6 Гу, 2 Н) 5,22 (Ї, 95,5 Гц, 1 Н) 6,37 (а, 9-7,9 Гц, 1 Н) 6,57 (І, 9-1,9 Гц, 1 Н) 6,65 (ї, у2,3 Гц, 1 Н) 6,71 (49, У-8,5, 2,4 Гц, 1 Н) 6,687 - 6,96 (т, З Н) 6,99 (а, 9У-7,9 Гц, 1 Н) 7,38 (аа, 98,6, 6,8 Гц, 1 Н) 7,80 (5, 1 Н) 8,60 (5, 1 Н) 12,50 (ру 5, 1 Н)

І С/М5 (Спосіб І С-А): В: 1,05 хв., МН" 545

ІФЧого: 146,7 (с 0,54, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (Спосіб 5ЕС-Е): В 3,18 хв., МН" 545, хіральна чистота 10095.

Енантіомер 88 "Н ЯМР (400 МГц, ОМ50О-ав) 6 ррт 2,39 (5, З Н) 3,08 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,89 - 4,03 (т, 2 Н) 4,16 (, У-4,6 Гц, 2 Н) 5,22 (ри, 9-5,3 Гц, 1 Н) 6,36 (а, У-7,7 Гц, 1 Н) 6,57 (І, 9У-1,8 Гц, 1 Н) 6,65 (ї, 109-211 Гц, 1 Н) 6,71 (4, 2-8,5, 2,4 Гц, 1 Н) 6,86 - 6,96 (т, з Н) 6,99 (а, 9У-7,7 Гц, 1 Н) 7,37 (аа, у-8,6, 6,8 Гц, 1 Н) 7,80 (5, 1 Н) 8,60 (5, 1 Н) 12,50 (Біг 5, 1 Н)

І С/М5 (Спосіб І С-А): В: 1,05 хв., МН" 545

ІФЧого: -144,57 (с 0,53, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (Спосіб 5ЕС-Е): Ве 3,59 хв., МН" 545, хіральна чистота 99,395.

Приклад 9. Синтез 1-(5-хлор-7-метил-1Н-індол-З-іл)-2-(4-фтор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-2- ((З-метокси-5-(метилсульфоніл)феніл)аміно)детанону (сполука 9) і хіральне розділення на енантіомери 9А і 98.

Е

5 й Е Е в ва й ж НО Ши со я

ЩІ Оу оте дО ониРяю кн що ве ї М БАБІ ті гу вОАЄТНЕ Су ТНЕ, ПС,

ЄНЯДУ С, Я гол. т "М кол. 15 хв. й Ше ї.5 гад, К.т. за дь і гол.

Е Е ті Ї І | й дме Хіральне б ня км розділення се Гу Ве го СБ ха г "ач Енантіомерн ЗАЯВ і. К СА їх ЧУ у де 00 СНИСМ/ТНЕ. 589, 20 год, й

Синтез проміжної сполуки За

Додавали по краплях 1 М хлорид діетилалюмінію у гексані (28,1 мл, 28,1 ммоль) при О'С і в потоці М2 до розчину 5-хлор-7-метил-1Н-індолу (СА 15936-77-3| (3,1 г, 18,7 ммоль) у СНоСї» (175 мл). Після перемішування протягом 15 хв. при 0"С розчин 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4- фторфеніл)ацетилхлориду Те (9,06 г, 28,1 ммоль) у СНеСі»г (75 мл) додавали по краплях при 0"С протягом періоду, що становив 75 хв., при цьому температуру реакції підтримували нижче 4"7с.

Реакційну суміш перемішували при 0"С протягом 4 год. Реакційну суміш охолоджували до Ос, і по краплях додавали розчин сегнетової солі (6100-16-9| (10,6 г, 37,4 моль) у воді (11 мл). Після додавання реакційну суміш перемішували при 0"С протягом 10 хвилин, а потім забезпечували

Зо нагрівання до кімнатної температури. Додавали ТНЕ (200 мл) і Ма»5О4 (45г) і суміш перемішували протягом 18 год. Суміш фільтрували через бісаїйеФ, промивали великою кількістю ТНЕ і об'єднані фільтрати випарювали за зниженого тиску. Залишок перемішували в

СНазСМ (15 мл) при 40"С. Осад відфільтровували, промивали за допомогою СНзСМ (25х) і висушували під вакуумом при 40"С з одержанням 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-фторфеніл)-1- (5-хлор-7-метил-1Н-індол-З-іл)етанону 9а (4,0 г).

Синтез проміжної сполуки 95

Суміш 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-фторфеніл)-1-(5-хлор-7-метил-1Н-індол-З-іл/уетанону 9а (4,0 г, 8,85 ммоль) в Е(Ас (80 мл) і ТНЕ (50 мл) гідрогенізували за атмосферного тиску Н2 протягом 15 хв. із 1095 Ра/С (0,5 г). Суміш фільтрували через подушку з РісаШефт і осад на фільтрі промивали за допомогою ТНЕ. Фільтрат концентрували за зниженого тиску. Твердий залишок перемішували у діїзопропіловому етері/діеєтиловому етері 1/1 (40 мл). Осад відфільтровували, промивали за допомогою ОІРЕ/ЕСО 1/1 (Зх) і висушували під вакуумом при

З одержанням 1-(5-хлор-7-метил-1 Н-індол-3-іл)-2-(4 фтор-2-(2- гідроксиетокси)феніл)етанону 95 (2,88 г).

Синтез проміжної сполуки 9с

Розчин / 1-(5-хлор-7-метил-1Н-індол-3-іл)-2-(4-фтор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)етанону -9р (1,5 г, 4,15 ммоль) у ТНЕ (40 мл) охолоджували до 0"С у потоці М2. Порціями додавали трибромід фенілтриметиламонію І(САБ 4207-56-1| (1,64 г, 4,35 ммоль), і реакційну суміш перемішували при 0"С протягом 90 хв. і за кімнатної температури протягом 1 год. Осад відфільтровували, промивали за допомогою ТНЕ (Зх) і об'єднані фільтрати випарювали за зниженого тиску з одержанням /2-бром-1-(5-хлор-7-метил-1Н-індол-З3-іл)-2-(4-фтор-2-(2- гідроксиетокси)феніл)етанону 9с (1,83 г), який застосовували без додаткового очищення на наступній стадії.

Синтез сполуки 9 і хіральне розділення енантіомерів 9А і 98 2-Бром-1-(5-хлор-7-метил-1 Н-індол-3-іл)-2-(4-фтор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)етанону 9с (1,83 г, 4,15 ммоль), З-метокси-5-(метилсульфоніл)аніліну (СА 62606-02-4) (1,67 г, 8,29 ммоль) і діззопропілетиламіну (1,43 мл, 8,29 ммоль) розчиняли в СНіІСМ (60 мл) і ТНЕ (40 мл), і реакційну суміш перемішували при 557С протягом 20 год. в атмосфері М2. Забезпечували досягнення реакційною сумішшю кімнатної температури і виливали її в воду (400 мл). Продукт екстрагували за допомогою ЕСО (2х). Об'єднані органічні шари промивали сольовим розчином, висушували над М9505, фільтрували та випарювали за зниженого тиску. Залишок перемішували у СНоСі» (7,5 мл). Тверді речовини відфільтровували, промивали (2х) за допомогою СНесСіг і висушували під вакуумом при 45"7С з одержанням рацемічного 1-(5-хлор-7-метил-1 Н-індол-З-іл)-2-(4-фтор-2- (2-гідроксиетокси)феніл)-2-((З-метокси-5-(метилсульфоніл)феніл)аміно)етанону (сполука 9, 1,08 г).

Хіральне розділення енантіомерів сполуки 9 здійснювали за допомогою хірального розділення з використанням нормальної фази (нерухома фаза: АЗ 20 мкм, рухома фаза: 10090 метанол). Фракції, що містять продукт, об'єднували і випарювали з одержанням енантіомеру 9А як першого елюйованого продукту та енантіомеру 9В як другого елюйованого продукту. Обидва енантіомери кристалізували з СНесСі» (4 мл), відфільтровували, промивали (3х) за допомогою

СНесі» і висушували під вакуумом при 457С з одержанням енантіомеру 9А (256 мг) і енантіомеру 98 (183 мг).

Енантіомер ЗА

Коо) ІН ЯМР (400 МГц, ОМ50О-дв) 6 ррт 2,47 (5, З Н) 3,08 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,90 - 4,07 (т, 2 Н) 4,18 (її, 9-4,6 Гу, 2 Н) 5,28 (Ї, 95,7 Гц, 1 Н) 6,38 (а, 9-7,7 Гц, 1 Н) 6,58 (І, 92-1,8 Гц, 1 Н) 6,67 (ї, у2,2 Гц, 1 Н) 6,71 (й, У-8,5, 2,4 Гц, 1 Н) 6,89 - 6,97 (т, 2 Н) 7,01 (а, 9-7,7 Гц, 1 Н) 7,07 (а, 9-11

Гц, 1 Н) 7,37 (аа, У-8,6, 6,8 Гц, 1 Н) 7,99 (й, 9-1,8 Гц, 1 Н) 8,64 (5, 1 Н) 12,29 (Бг 5, 1 Н)

І.С/М5 (Спосіб І С-В): Не 2,06 хв., МН" 561

ІФого: 145,37 (с 0,45, ОМЕ)

Хіральна ЕС (Спосіб 5ЕС-Е): В; 3,63 хв., МН... 561, хіральна чистота 10095.

Енантіомер 98 "Н ЯМР (400 МГц, ОМ50О-ав) 6 ррт 2,47 (5, З Н) 3,08 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,90 - 4,07 (т, 2 Н) 4,17 (1, 9-4,7 Гц, 2 Н) 5,28 (Її, 9-5,7 Гц, 1 Н) 6,38 (а, 9-7,9 Гц, 1 Н) 6,57 (І, 9-1,8 Гц, 1 Н) 6,66 (Її, 40. 9У-21 Гу, 1 Н) 6,71 (4, 9-8,5, 2,4 Гц, 1 Н) 6,90 - 6,97 (т, 2 Н) 7,01 (а, У-7,7 Гц, 1 Н) 7,06 - 7,09 (т, 1 Н) 7,37 (да, У-8,6, 7,0 Гц, 1 Н) 7,99 (а, 9-1,8 Гц, 1 Н) 8,64 (а, У-3,3 Гц, 1 Н) 12,29 (а, 2-2,9 Гц, 1

Н)

І С/М5 (Спосіб І С-А): Ві 1,13 хв., МН" 561

ІФого: -144,67 (с 0,605, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (Спосіб БЕС-Е): В: 4,14 хв., МН" 561, хіральна чистота 10095.

Приклад 10. Синтез 2-(4-фтор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-2-((З-метокси-5- (метилсульфоніл)феніл)аміно)-1-(5-(трифторметокси)-1Н-індол-З-іл)етанону (сполука 10) і хіральне розділення на енантіомери 10А і 108

Ж й г. Е г ит Ваб шт Не, ях Ж жах ша в Що: «й СУ и га ря й те в, Не пак 4 чи вв о 000 вйю регу БАС, ТНЕ, г ТНЕ, ос, сс. вд Жббдеклу оч 7М кот. 0 хв. ній? Ще ігод.о кл. хол, 4да 40 0,5 год.

Н оме й но 7 на 7 туя о г хто ме Хіральне

РЕЖ их п ве ме са но ши в й тр -Щн---- 5 -кя ЩЕ р» Ши --Ж- - - ЕнантіюмернійАа 1198 їх СНАИМ ЗУЄ, І гол, 10

Синтез проміжної сполуки 1ба

Додавали по краплях 1 М хлорид дієтилалюмінію в гексані (18,6 мл, 18,6 ммоль) при ОС і в потоці Ма до розчину 5-(трифторметокси)-1Н-індолу |(САБ 262593-63-5) (2,5 г, 12,4 ммоль) у

СНеаСіг (150 мл). Після перемішування протягом 15 хв. при 0"Сб розчин о /2-(2-(2- (бензилокси)етокси)-4-фторфеніл)уацетилхлориду Те (6,02г, 18,6 ммоль) у СНеСі» (100 мл) додавали по краплях при 0"С, при цьому температуру реакції підтримували нижче 7"С.

Реакційну суміш перемішували при 0"С протягом 1,5 год. і за кімнатної температури протягом 2 год. Реакційну суміш охолоджували до 0"С, і по краплях додавали розчин сегнетової солі

І6Є100-16-91| (7,02 г, 24,9 ммоль) у воді (7 мл). Реакційну суміш перемішували при 0"С протягом 30 хвилин, а потім забезпечували нагрівання до кімнатної температури. Додавали ТНЕ (150 мл) і Маг25О54 (25 г) і суміш перемішували протягом 1,5 год. Суміш фільтрували через РісаШеФфФ. Осад на фільтрі промивали за допомогою ТНЕ (4 х 150 мл), і об'єднані фільтрати випарювали за зниженого тиску і випарювали спільно з СНСМ. Забезпечували твердіння залишкової олії при відстоюванні протягом ночі. Продукт перемішували у СНзСМ (5 мл). Осад відфільтровували, промивали за допомогою СНзСМ (З х 1 мл) і висушували під вакуумом при 507"С з одержанням першої фракції /2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-фторфеніл)-1-(5-трифторметокси-1Н-індол-3- іл)етанону 10а (1,3 г). Об'єднані фільтрати випарювали за зниженого тиску. Залишок (7 г) очищали за допомогою флеш-хроматографії (нерухома фаза: картридж ВіоїадеФ 5МАР ШкКга із силікагелем 100 г, рухома фаза: гептан/г(ОАс/ЕЮН, градієнт від 100/0/0 до 40/45/15). Потрібні фракції об'єднували, випарювали за зниженого тиску та випарювали спільно із СНзСМ і толуолом. Олію, що залишилася, розтирали із сумішшю толуолу/гептану 1/1 (30 мл). Тверді речовини відфільтровували, промивали 2х толуолом/гептаном 1/1 і висушували під вакуумом при 50"С з одержанням другої фракції проміжної сполуки 10а (1,97 г).

Синтез проміжної сполуки 106

Суміш 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-фторфеніл)-1-(5-«трифторметокси)-1Н-індол-З3- іл)етанону 10ба (1,97 г, 4,04 ммоль) в ЕІОАс (75 мл) і ТНЕ (10 мл) гідрогенізували за кімнатної температури за атмосферного тиску Нео протягом 20 хв. із 1095 Ра/С (0,5 г). Суміш фільтрували

Зо через подушку з Оісаїйеф і промивали за допомогою ТНЕ. Об'єднані фільтрати концентрували за зниженого тиску. Твердий залишок перемішували у СНесСі» (3,5 мл). Осад відфільтровували, промивали за допомогою СНесі» (З х 1 мл) і висушували під вакуумом при 45"7С з одержанням 2- (4-фтор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(5-трифторметокси-1 Н-індол-3-іл)етанону 105 (1,49 мг).

Синтез проміжної сполуки 10с

Розчин 2-(4-фтор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(5-трифторметокси-1Н-індол-З3-іл)етанону 10р (149 г, 3,75 ммоль) у ТНЕ (60 мл) охолоджували до 0"С у потоці М». Додавали трибромід фенілтриметиламонію ІСАЗ 4207-56-11 (1,48 г, 3,94 ммоль), і реакційну суміш перемішували при

ОС протягом 1 год. і за кімнатної температури протягом 30 хв. Осад відфільтровували, промивали за допомогою ТНЕ (2х), і об'єднані фільтрати випарювали за зниженого тиску з одержанням 2-бром-2-(4-фтор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(5-трифторметокси-1Н-індол-3- іл)етанону 10с (1,79 г), який застосовували без додаткового очищення на наступній стадії.

Синтез сполуки 10 і хіральне розділення енантіомерів 10А і 108 2-Бром-2-(4-фтор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-1-(5-«"трифторметокси)-1Н-індол-З3-іл)уетанон 10с (1,79 г, 3,76 ммоль), З-метокси-5-(метилсульфоніл)анілін, |САБ 62606-02-4| (3,41 г, 17,0 ммоль) і дізопропілетиламін (2,92 мл, 17,0 ммоль) розчиняли в СНзСМ (90 мл), і реакційну суміш перемішували при 557"С протягом 18 год. в атмосфері М». Тверду фракцію видаляли за допомогою фільтрації промивали за допомогою ТНЕ (2х) і відкидали (непрореагований вихідний матеріал З-метокси-5-(метилсульфоніл)анілін). До об'єднаних фільтратів додавали воду, і продукт екстрагували за допомогою ЕСО. Об'єднані органічні шари промивали сольовим розчином, висушували над Мд5О», фільтрували та випарювали за зниженого тиску. Залишок очищали за допомогою колонкової хроматографії (нерухома фаза: картридж Сгасе КемеїегібФ із силікагелем 80 г, рухома фаза: ЕІАДОсС : ЕН (3:1)у/гептан, градієнт від 0/100 до 40/60). Фракції, що містять продукт, об'єднували і випарювали за зниженого тиску. Залишок додатково очищали за допомогою препаративної НРІС (нерухома фаза: КР ХВгіддеє Ргер С18 ОВО - 10 мкм, 1050 х 150 мм, рухома фаза: 0,2595 розчин МНАНСО:» у воді, СНІСМ). Фракції, що містять продукт, об'єднували, випарювали за зниженого тиску і випарювали спільно з МеОН з одержанням рацемічного 2-(4-фтор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-2-((З-метокси-5- (метилсульфоніл)феніл)аміно)-1-(5-(трифторметокси)-1Н-індол-3-іл)уетанону (сполука 10, 861 мг).

Хіральне розділення енантіомерів сполуки 10 (810 мг) здійснювали за допомогою хірального розділення з використанням нормальної фази (нерухома фаза: М/пеІк-О1 (КК), рухома фаза: 8095 гептану, 2095 етанолу). Фракції, що містять продукт, об'єднували і випарювали з одержанням енантіомеру 10А як першого елюйованого продукту та енантіомеру 10В як другого елюйованого продукту. Обидва енантіомери додатково очищали за допомогою колонкової хроматографії (картридж Сгасе КемеїегієФ із силікагелем 12г, елюент: ЕАОс: Он (371)у/гептан, градієнт від 0/100 до 40/60). Фракції, що містять продукт, об'єднували, випарювали за зниженого тиску і випарювали спільно з МеоОН. Забезпечували твердіння залишків за допомогою осадження із суміші розчинників Месон і води, відфільтровували і висушували при 50"С під вакуумом з одержанням енантіомеру 10А (119 мг) та енантіомеру 108 (78 мг).

Енантіомер 10А

І"Н ЯМР (360 МГц, ОМ50О-4дв) б ррт 3,08 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,85 -4,08 (т, 2 Н) 414-421 (т, 2 Н) 5,32 (І, 9У-5,5 Гц, 1 Н) 6,37 (а, 9-7,7 Гц, 1 Н) 6,57 (І, 9-1,68 Гц, 1 Н) 6,64 (Брг 5, 1 Н) 6,69 - 6,78 (т, 1 Н) 6,90 - 6,99 (т, 2 Н) 7,08 (й, 9-7,3 Гц, 1 Н) 7,21 (рг а, 9-9,1 Гц, 1 Н) 7,38 (аа, 9У-8,8, 7,0 Гу, 1 Н) 7,56 (а, У-8,4 Гц, 1 Н) 8,07 (а, 9-1,5 Гу, 1 Н) 8,78 (5, 1 Н) 12,37 (ріг 5, 1 Н)

Зо І С/М5 (Спосіб І С-А): В: 1,11 хв., МН" 597

ІФЧого: -112,27 (с 0,565, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (Спосіб 5ЕС-Е): Не 2,95 хв., МН" 597, хіральна чистота 99,895.

Енантіомер 108 "Н ЯМР (360 МГц, ОМ50О-4дв) б ррт 3,08 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,88 - 407 (т, 2 Н) 414-421 (т, 2 Н) 5,32 (І, 9У-5,5 Гц, 1 Н) 6,37 (а, 9-7,7 Гц, 1 Н) 6,56 - 6,59 (т, 1 Н) 6,65 (ї, 9-22 Гц, 1 Н) 6,73 (а, У-8,4, 2,6 Гц, 1 Н) 6,91 - 6,98 (т, 2 Н) 7,08 (а, У-7,7 Гц, 1 Н) 7,21 (аа, У-9,0, 2,0 Гу, 1 Н) 7,38 (аа, 2-8,8, 7,0 Гу, 1 Н) 7,56 (а, 9У-8,8 Гц, 1 Н) 8,08 (а, 9-1,5 Гц, 1 Н) 8,78 (5, 1 Н) 12,38 (Біг 5, 1 Н)

І С/М5 (Спосіб І С-А): В: 1,11 хв., МН" 597 (Фо: 112,12 (с 0,527, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (Спосіб БЕС-Е): В 2,65 хв., МН" 597, хіральна чистота 98,295.

Приклад 11. Синтез 2-(4-хлор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-2-((З-метокси-5- (метилсульфоніл)феніл)аміно)-1-(б-метокси-5-(трифторметокси)-1Н-індол-З-іл)етанону (сполука 11) ї хіральне розділення енантіомерів 11А та 118 ру

РА. Мен РУйО. я ксилал с Не мвок

Хв ШЗНШЗЮННИШЗ22ИЗ2 МАША

Ша БНО. Мас Жак рол температура ме с Й в) МеснНною -59 З рдж. Кт. Ма У утворення нь 12 гол. - в з й Ша У і. о, І сг -овВи у и осн и я С кіно БЕЖ. с у їв Б и ще ши ШВЗ- 2 2 0 ---- т 0 -- 3-5 - - маю М вно сама, ве І Ей ме МО ТНЕ. відб докт. її 12 тал. ча СН о. 3 гох. їв З год,

Е Ме й Е меч тУ ви ние У На я бу МН я б а: На РОЮ А т,

Рв. ин пев М Бе оо ста ее коту СНЯМ.ОМИС. малі ОЙ Ме, атм. шо ої 48 гол. т тнок, і год, Я. і Хіральне розділення

Енантюмерн 11А ІБ

Синтез проміжної сполуки 11а

Розчин Маокї (0,69 моль, одержаний із 15,9 г Ма та 700 мл ЕН) додавали по краплях протягом періоду, що становив 2 год., до охолодженого (-157"С) розчину З-метокси-4- (трифторметокси)бензальдегіду |(САЗ 8537 71-90-11 (50 г, 230 ммоль) та етилазидоацетату (89 г, 690 ммоль) у ЕЮН (400 мл). Реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом ночі. Після охолодження на льодяній бані реакційну суміш гасили насиченим розчином МНС (1,2 л) і перемішували протягом 10 хв. Осад відфільтровували, промивали водою і висушували з одержанням (7)-етил-2-азидо-3-(З-метокси-4--трифторметокси)феніл)акрилату 11а (32 г) як жовтуватої твердої речовини.

Синтез проміжної сполуки 116

Розчин (2)-етил-2-азидо-3-(З-метокси-4-«трифторметокси)феніл)акрилату 114 (З г, 10 ммоль) у ксилолі (40 мл) нагрівали за температури утворення флегми протягом ночі. Після охолодження до кімнатної температури розчинник випарювали до сухого стану. Залишок розтирали із гексаном (50 мл), ії осад відфільтровували з одержанням метил-6-метокси-5- (трифторметокси)-1Н-індол-2-карбоксилату 116 (вихід: 1,4-1,6 г) як жовтої твердої речовини.

Синтез проміжної сполуки 11с

До суміші / метил-б-метокси-5-(трифторметокси)-1Н-індол-2-карбоксилату 115 Ж (25г, 87 ммоль) у Меон/Нго (2/1, 300 мл) додавали Маон (7 г, 175 ммоль), і суміш нагрівали за температури утворення флегми до одержання прозорого розчину. Після охолодження до кімнатної температури більшу частину метанолу видаляли за зниженого тиску, і водний розчин, що залишився, підкислювали за допомогою конц. НСІ до рН 3-4. Продукт екстрагували за допомогою ЕАс (2 х250 мл). Об'єднані органічні шари промивали сольовим розчином, висушували та випарювали за зниженого тиску з одержанням б-метокси-5-(трифторметокси)- 1Н-індол-2-карбонової кислоти 11с (22,7 г) як твердої речовини.

Синтез проміжної сполуки 114

Суспензію /б-метокси-5-(трифторметокси)-1Н-індол-2-карбонової кислоти 11с (7,5г, 27 ммоль) і Си (1,22 г, 0,7 екв.) у хіноліні (150 мл) нагрівали до 220-230"С в інертній атмосфері

Зо протягом 12 год. Після охолодження до кімнатної температури суміш розбавляли метил-трет- бутиловим етером (МТВЕ, 400 мл) і промивали насиченим водним розчином МанНзол (2 х 500 мл). Органічний шар висушували над Ма5О5, фільтрували через тонкий шар силікагелю і випарювали за зниженого тиску. Залишок очищали за допомогою колонкової хроматографії з одержанням б-метокси-5-(трифторметокси)-1Н-індолу 114 (3,75г) у вигляді жовтої твердої речовини.

Синтез проміжної сполуки 11е

Додавали по краплях 1 М хлорид діетилалюмінію в гексані (7,8 мл, 7,8 ммоль) при 0"С до розчину б-метокси-5-(трифторметокси)-1Н-індолу (1,2 г, 5,19 ммоль) у СНоСі» (25 мл). Через

ЗО хв. при 0"С по краплях додавали 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-хлорфеніл)ацетилхлорид Те (1,94 г, 6,0 ммоль) у СНоСі» (25 мл). Реакційну суміш перемішували за 0"С протягом З год.

Реакційну суміш обережно гасили льодом при 0"С, а потім водою. Шари розділяли і водний шар екстрагували за допомогою СНеСі». Об'єднані органічні шари висушували над Мозоз, фільтрували, і розчинник випарювали за зниженого тиску. Залишок очищали за допомогою флеш-хроматографії на силікагелі (15-40 мкм, 80 г, елюент: СНеСі»). Чисті фракції об'єднували і випарювали до сухого стану з одержанням 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-фторфеніл)-1-(6- метокси-5-(трифторметокси)-1 Н-індол-З3-іл)етанону 11е (1,6 г).

Синтез проміжної сполуки 117

У потоці Мг при 0"С додавали краплями розчин триброміду триметилфеніламонію (1,1 г, 2,9 ммоль) у ТНЕ (40 мл) до розчину 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-фторфеніл)-1-(6-метокси-5- (трифторметокси)-1Н-індол-З-іл)етанону 116 (1,5г, 2,9ммоль) у ТНЕ (40мл). Суміш перемішували при 0"С протягом 1 год., охолоджуючу баню прибирали і перемішування продовжували за кімнатної температури протягом Згод. Додавали З-метокси-5- (метилсульфоніл)анілін (СА 62606-02-04 (1,75 г, 8,7 ммоль) у СНІСМ (40 мл), і одержану суміш перемішували протягом 48 год. при 50"С. Суміш концентрували за зниженого тиску. Залишок розбавляли за допомогою ЕЇОАс, промивали водою, 1 н. НСІ (Зх), а потім водою. Органічний шар висушували над Мд5оО»5», фільтрували і розчинник випарювали за зниженого тиску. Залишок очищали за допомогою флеш-хроматографії на силікагелі (15-40 мкм, 80 г, елюент: СНебСіг).

Чисті фракції об'єднували і випарювали до сухого стану з одержанням 2-(2-(2- (бензилокси)етокси)-4-фторфеніл)-2-((3З-метокси-5-(метилсульфоніл)феніл)аміно)-1-(б-метокси- 5Б-(трифторметокси)-1Н-індол-з-ілуетанону 111 (1 г).

Синтез сполуки 11 і хіральне розділення на енантіомери 11А і 118

Суміш 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-фторфеніл)-2-(З-метокси-5- (метилсульфоніл)феніл)аміно)-1-(6-метокси-5-(трифторметокси)-1Н-індол-З-іл)уетанону 111 (1 г, 1,39 ммоль) у СНзЗОН (30 мл) гідрогенізували за атмосферного тиску Но протягом 1 год. із використанням 1095 Ра/С (300 мг, 0,28 ммоль) як каталізатора. Реакційну суміш розбавляли 0) СНесСіг і фільтрували через шар СеїйеФ. Фільтрат випарювали за зниженого тиску. Залишок очищали за допомогою флеш-хроматографії на силікагелі (15-40 мкм, 40г, елюент:

СНеСіІг/СНзЗОН 99/1). Друге очищення здійснювали за допомогою обернено-фазової НРІС (нерухома фаза: ХВгіддеФ - С18 10 мкМ, 30 х 150 мм, рухома фаза: градієнт від 5095 МНАНСО»з (0,295)3/5095 МеОН до 095 МНАНСО:» (0,295)3/10095 МеонН). Чисті фракції об'єднували і випарювали до сухого стану з одержанням, після затвердіння в діїзопропіловому етері, 2-(4-фтор-2-(2- гідроксиетокси)феніл)-2-((З-метокси-5-(метилсульфоніл)феніл)аміно)-1-(6б-метокси-5- (трифторметокси)-1Н-індол-З-іл)етанону (сполука 11, 170 мг) у вигляді рацемічної суміші.

Енантіомери сполуки 11 (150 мг) розділяли за допомогою хіральної 5ЕС (нерухома фаза:

СВігазрак» А0-Н 5 мкм 250 х 20 мм, рухома фаза: 7095 СО», 30965 ІРОН (- 0,395 ІРІМН»)) з одержанням 67 мг першого елюйованого енантіомеру їі 70 мг другого елюйованого енантіомеру.

Забезпечували твердіння першого елюйованого енантіомеру з діїзопропілового етеру/петролейного етеру з одержанням 58 мг енантіомеру 11А. Забезпечували твердіння другого елюйованого енантіомеру з діїізопропілового етеру/петролейного етеру з одержанням 58 мг енантіомеру 118.

Сполука 11

І"Н ЯМР (400 МГц, ОМ5О-ав) б ррт 3,07 (5, З Н) 3,71 (5, З Н) 3,86 (5, З Н) 3,88 - 4,06 (т, 2 Н) 4,17 (Її, 9-45 Гц, 2 Н) 5,26 (Бг 5, 1 Н) 6,33 (а, 9-81 Гц, 1 Н) 6,57 (а, У-1,5 Гц, 1 Н) 6,63 (5, 1 Н) 6,72 (9, 9-86, 2,5 Гц, 1 Н) 6,89 - 6,97 (т, 2 Н) 7,01 (а, 9-7,6 Гу, 1 Н) 7,17 (5, 1 Н) 7,38 (аа, У-8,6, 7,1

Гу, 1 Н) 8,03 (а, 9-1,0 Гц, 1 Н) 8,61 (5, 1 Н) 12,14 (рег 5, 1 Н)

І.С/М5 (Спосіб ГС-С): В. 2,99 хв., МН" 627

Сполука 1ТА "Н ЯМР (500 МГц, ОМ50О-ав) б ррт 3,08 (5, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,87 (5, З Н) 3,89 - 4,08 (т, 2 Н) 4,16-4,19 (т, 2 Н) 5,30 (Брі 5, 1 Н) 6,34 (й, У-7,6 Гц, 1 Н) 6,57 (5, 1 Н) 6,63 (рі 5, 1 Н) 6,72 (19, 9-84, 1,9 Гц, 1 Н) 6,90 - 6,98 (т, 2 Н) 7,05 (бга, 9-7,9 Гц, 1 Н) 7,17 (5, 1 Н) 7,38 (І, У-7,7 Гц, 1 Н) 8,04 (5, 1 Н) 8,63 (5, 1 Н) 12,14 (рг 5, 1 Н)

І.С/М5 (Спосіб ГС-С): В. 2,99 хв., МН" 627

ІФЧо-о: -90,37 (с 0,29, ОМЕ)

Хіральна ЕС (Спосіб 5ЕС-Е): Ві: 2,31 хв., МН» 627, хіральна чистота 10095.

Сполука 118 (510) ІН ЯМР (500 МГц, ОМ50О-дв) 6 ррт 3,08 (в, З Н) 3,72 (5, З Н) 3,87 (в, З Н) 3,89 - 4,08 (т, 2 Н)

4,14-4,20 (т, 2 Н) 5,30 (Брі 5, 1 Н) 6,34 (й, У-7,6 Гц, 1 Н) 6,57 (5, 1 Н) 6,63 (рі 5, 1 Н) 6,72 (19, 9-84, 2,0 Гц, 1 Н) 6,90 - 6,99 (т, 2 Н) 7,05 (а, 9-7,6 Гц, 1 Н) 7,17 (5, 1 Н) 7,38 (ї, У-7,6 Гц, 1 Н) 8,04 (5,1

Н) 8,63 (5, 1 Н) 1210 (рг 5, 1 Н)

І.С/М5 (Спосіб ГС-С): В. 2,99 хв., МН" 627

ІФого: 95,4? (с 0,26, ОМЕ)

Хіральна ЕС (Спосіб 5БЕС-РЕ): Ве 3,29 хв., МН" 627, хіральна чистота 10095.

Приклад 12. Синтез 2-(4-фтор-2-(2-гідроксиетокси)феніл)-2-((З-метокси-5- (метилсульфоніл)феніл)аміно)-1-(7-метил-5-(трифторметокси)-1Н-індол-З-іл)етанону (сполука 12) і хіральне розділення енантіомерів 12А і 128

Межі о

ЕОМ шт і, Ве БО ет и мав ення

ЕзоО т В ся, Вста Її. рій ( я, У т "Мц, снжь Ї мч звеОН,НЬО Ї і від С дотемператури у ВОС 2.5 гол, й ттворення флегми, їй ль є ЕХ гол. й- Вт. щі й сіМе і Ша ЛЯ Що ях З і яд Я сова ЧИ щи У н «М

Шо он пове ря й б» нич | ї Ж ШШ0ЬВЗ З 2 2 2 От -5 боті

ЕБАКІ ве "М ТНЕ вид Є да кто. Ї М сних зе

СНИ. від до кл. 2.3 год, | год, Ї ІН ше й 77 -. вон їза ЗХ гол.

Е Е

Впех дя но я- й тео з обме ша В; оме Хірвльне ші шк но. ває чі в розділення

РОМ синй, ЯК й ее Ще І Енантюмерн 24 :128

Ц А. и с ОАЄ Ї й ? Й

Ї Я 126 атм. тиск. З гад ій Е 12 й

Синтез проміжної сполуки 12а

Суміш 1 М хлориду бору(І) у СНеоСі2 (25,5 мл, 25,5 ммоль) і хлориду алюмініюці!!) (3,40 г, 25,5 ммоль) розбавляли СНоСі» (20 мл) і охолоджували на льодяній бані в атмосфері М».

Додавали по краплях розчин 2-метил-4-«трифторметокси)аніліну (СА 86256-59-9| (4,88 г, 25,5 ммоль) і хлорацетонітрилу (3,24 мл, 51,0 ммоль) у СНеСі» (7,5 мл). Після закінчення додавання льодяну баню прибирали і суміш нагрівали за температури утворення флегми протягом 8 год. Суміш знову охолоджували до 0"С із застосуванням льодяної бані. Додавали по краплях 2 н. НСІ (75 мл), що спричиняло значне утворення осаду. Одержану суспензію нагрівали за температури утворення флегми протягом 90 хв. і охолоджували до кімнатної температури. Тверді речовини видаляли за допомогою фільтрації. Осад на фільтрі промивали за допомогою СНесСіг (4х). Фільтрати об'єднували і фази розділяли. Органічний шар виділяли, промивали водним розчином МансСоОз, висушували над Мод5О5, фільтрували і випарювали за зниженого тиску. Залишок очищали за допомогою флеш-хроматографії (нерухома фаза: картридж Віоїаде?»? 5МАР Шпга із силікагелем 100 г, рухома фаза: гептан/СНесСі», градієнт від 100/0 до 0/100). Потрібні фракції об'єднували і концентрували до залишкового об'єму, що становив 30 мл. Осад відфільтровували, промивали гептаном і СНоСі» і висушували під вакуумом за 50"С із одержанням 1-(2-аміно-3-метил-5-«"«трифторметокси)феніл)-2-хлоретанону

Зо 12а (1,37 г). Фільтрат концентрували за зниженого тиску. Твердий залишок перемішували в суміші гептану (20 мл) і діізопропілового етеру (З мл), відфільтровували, промивали гептаном (3х) і висушували під вакуумом при 50"7С з одержанням другої фракції 12а (0,24 г).

Синтез проміжної сполуки 125

Борогідрид натрію (326 мг, 8,61 ммоль) додавали до перемішуваного розчину 1-(2-аміно-3- метил-5-(трифторметокси)феніл)-2-хлоретанону 12а (1,92 г, 7,17 ммоль) у трет-бутанолі (50 мл) і воді (5 мл). Реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом 30 хв. і при 907С протягом 2,5 год. Додавали воду (50 мл), і продукт екстрагували за допомогою діетилового етеру (2х). Об'єднані органічні шари промивали сольовим розчином, висушували над Ма5Оа, фільтрували і випарювали за зниженого тиску. Залишок очищали за допомогою флеш-

Зо хроматографії (нерухома фаза: картридж Віоїаде?ж 5МАР Шкга із силікагелем 25 г, рухома фаза: гептан/ЕОАс, градієнт від 100/0 до 20/80). Потрібні фракції об'єднували, концентрували за зниженого тиску, випарювали спільно з гептаном і висушували під вакуумом при 50"С з одержанням 7-метил-5-(трифторметокси)-1Н-індолу 125 (1,2 г).

Синтез проміжної сполуки 12с

Додавали по краплях 1 М хлорид діеєтилалюмінію в гексані (16,5 мл, 16,5 ммоль) при 0"С до розчину 7-метил-5-(трифторметокси)-1 Н-індолу 126 (2,36 г, 11,0 ммоль) у СНоСі» (150 мл). Після перемішування протягом 25хв. при 0"С додавали по краплях розчин /-2-(2-(2- (бензилокси)етокси)-4-фторфеніл)ацетилхлориду Те (5,3 г, 16,4 ммоль) у СНоСі» (75 мл), при цьому температуру реакції підтримували нижче 5"С. Реакційну суміш перемішували при 0"С протягом 1 год. і за кімнатної температури протягом 2,5 год. Реакційну суміш охолоджували до

ОС, і по краплях додавали розчин сегнетової солі (6,20 г, 22,0 ммоль) у воді (6 мл). Реакційну суміш перемішували протягом 30 хв при 0"С. Водяну баню прибирали і забезпечували досягнення сумішшю кімнатної температури. Додавали ТНЕ (200 мл) і Ма»бОх (25 г), і суміш перемішували протягом ночі. Реакційну суміш фільтрували через ОісаїйеФф, і осад на фільтрі промивали за допомогою ТНЕ (4х 150 мл). Фільтрати об'єднували і випарювали за зниженого тиску. Твердий залишок перемішували в суміші розчинників СІРЕ (25 мл) і ЕІОАс (2 мл). Тверді речовини відфільтровували, промивали за допомогою ОІРЕ (Зх) і висушували при 50"7С під вакуумом З одержанням 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-фторфеніл)-1-(7-метил-5- (трифторметокси)-1Н-індол-з3-іл)етанону 12с (4,3 г).

Синтез проміжної сполуки 124

У потоці Маг при 0"С трибромід фенілтриметиламонію (3,39 г, 9,0 ммоль) додавали до перемішуваного розчину 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-фторфеніл)-1-(7-метил-5- (трифторметокси)-1Н-індол-З-іл)етанону 120 (4,3г, 86 ммоль) у ТНЕ (40 мл). Суміш перемішували при 0"С протягом 1 год. і за кімнатної температури протягом 2 год. Тверді речовини видаляли за допомогою фільтрації, і фільтр промивали за допомогою ТНЕ (2х).

Об'єднані фільтрати випарювали за зниженого тиску з одержанням 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)- 4-фторфеніл)-2-бром-1-(7-метил-5-(трифторметокси)-1Н-індол-З-іл)етанону 124 (6,9 г), який застосовували без додаткового очищення на наступній стадії.

Зо Синтез проміжної сполуки 12е

В атмосфері Ма суміш /2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-фторфеніл)-2-бром-1-(7-метил-5- (трифторметокси)-1Н-індол-З3-іл)етанону 124 (6,73 г, 11,6 ммоль), З-метокси-5- (метилсульфоніл)аніліну (СА5 62606-02-041 (4,67 г, 23,2 ммоль) і діїзопропілетиламіну (4,00 мл, 23,2 ммоль) у СНІСМ (90 мл) перемішували протягом 48 год. при 55"С. Додавали воду (125 мл), і продукт екстрагували за допомогою ЕСО (2х). Об'єднані органічні шари промивали сольовим розчином, висушували над Мд5О5, фільтрували і розчинник випарювали за зниженого тиску.

Залишок перемішували у СНаСі», що приводило до осадження непрореагованого вихідного матеріалу З3-метокси-5-(метилсульфоніл)аніліну. Тверді речовини видаляли за допомогою фільтрації і фільтрат випарювали за зниженого тиску. Залишок очищали за допомогою флеш- хроматографії (нерухома фаза: картридж Сгасе КемеїегібФ із силікагелем 80 г, рухома фаза: гептан/г(ОАсС/ЕТН, градієнт від 100/0/0 до 40/45/15). Чисті фракції, що містять продукт, об'єднували і випарювали до сухого стану з одержанням 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4- фторфеніл)-2-((З-метокси-5-(метилсульфоніл)феніл)аміно)-1-(7-метил-5-(трифторметокси)-1 Н- індол-З-іл)етанону 12е (4,37 г).

Синтез сполуки 12 і хіральне розділення на енантіомери 12А і 128

Суміш 2-(2-(2-(бензилокси)етокси)-4-фторфеніл)-2-(З-метокси-5- (метилсульфоніл)феніл)аміно)-1-(7-метил-5-(трифторметокси)-1Н-індол-З3-іл)етанону 12е (4,37 г, 5,11 ммоль) у ЕОАсС гідрогенізували за кімнатної температури за атмосферного тиску Не протягом З год. із використанням 1095 Ра/С (500 мг) як каталізатора. Реакційну суміш фільтрували через подушку з ОісайефФ, і осад на фільтрі промивали за допомогою великої кількості ТНЕ. Леткі речовини випарювали за зниженого тиску. Залишок перемішували у

СНеСІг/ЕОАс (90/10) протягом 30 хв. Тверді речовини відфільтровували і висушували під вакуумом при 50"С протягом ночі з одержанням рацемічноого /2-(4-фтор-2-(2- гідроксиетокси)феніл)-2-((З-метокси-5-(метилсульфоніл)феніл)аміно)-1-(7-метил-5- (трифторметокси)-1Н-індол-З-іл)етанону (сполука 12, 2,02, чистота згідно І С/М5: 9590).

Фракцію сполуки 12 (505 мг) додатково очищали за допомогою препаративної НРІ С (нерухома фаза: ЕР ХВгіддефб Ргер С18 ОВО - 10 мкм, 30 х 150 мм, рухома фаза: 0,2595 МНАНСО: розчин у воді, МеОН). Фракції, що містять продукт, об'єднували, випарювали за зниженого тиску і випарювали спільно з Меон. Забезпечували твердіння залишку з розчину Меон за допомогою бо повільного додавання води. Осад відфільтровували і висушували при 50"С під вакуумом з одержанням чистої сполуки 12 (300 мг).

Енантіомери сполуки 12 (1569 мг) розділяли за допомогою хіральної 5ЕС (нерухома фаза:

Раїсе! СпігаїракфФф ІА; рухома фаза: ізократична суміш із 7595 СО», 2095 дихлорметану ж 0,290 ізопропіламіну, 595 метанолу « 0,295 ізопропіламіну). Фракції, що містять продукт, об'єднували і випарювали за зниженого тиску. Перший елюйований енантіомер додатково очищали за допомогою флеш-хроматографії (нерухома фаза: картридж ОСгасе КемеїегібФ із силікагелем 40 г, рухома фаза: гептан/Б(ОАс/ЕН, градієнт від 100/0/0 до 40/45/15). Потрібні фракції об'єднували і концентрували до залишкового об'єму, що становив приблизно 15 мл. Суміш залишали відстоюватися протягом 30 хвилин. Тверді речовини відфільтровували, промивали гептаном/ЕОАСс 4/1 (Зх) і висушували під вакуумом при 457С з одержанням енантіомеру 12А (324 мг). Другий елюйований енантіомер додатково очищали за допомогою флеш- хроматографії (нерухома фаза: картридж ОСгасе КемеїегізФ із силікагелем 40 г, рухома фаза: гептан/шг(ОАс/ЕОН, градієнт від 100/0/0 до 40/45/15). Потрібні фракції об'єднували і концентрували до залишкового об'єму, що становив приблизно 10 мл. Суміш залишали відстоюватися протягом 18год. Тверді речовини відфільтровували, промивали Зх гептаном/Е(ОАс 4/1 і висушували під вакуумом при 507"С з одержанням енантіомеру 12В (295 мг).

Сполука 12 "Н ЯМР (600 МГц, ОМ50О-дв) 6 ррт 2,52 (5, З Н) 3,06 (5, З Н) 3,74 (5, З Н) 3,93 - 4,05 (т, 2 Н) 4,19 (9-48 Гц, 2 Н) 5,07 (бгії, 9У-5,3 Гу, 1 Н) 6,37 (а, 9-7,8 Гу, 1 Н) 6,59 (Її, 9-1,8 Гц, 1 Н) 6,65 (ї, у2,1 Гу, 1 Н) 6,70 (19, 9-84, 2,4 Гу, 1 Н) 6,89 (а, 9-7,8 Гц, 1 Н) 6,90 - 6,95 (т, 2 Н) 7,01 (рг 5, 1 Н) 7,40 (да, 9-8,7, 6,9 Гц, 1 Н) 7,93 (Бг 5, 1 Н) 8,63 (5, 1 Н) 12,10 - 12,32 (т, 1 Н)

І С/М5 (Спосіб І С-А): Ві 1,17 хв., МН" 611

Сполука 12А "Н ЯМР (400 МГц, ОМ50О-дв) б ррт 2,51 (в, З Н) 3,08 (5, З Н) 3,73 (5, З Н) 3,91 - 4,08 (т, 2 Н) 4,18 (1, 9-46 Гц, 2 Н) 5,29 (ї, 9-5,7 Гц, 1 Н) 6,40 (а, 90-7,7 Гц, 1 Н) 6,58 (І, 9У-1,9 Гц, 1 Н) 6,66 (ї, у-2,3 Гц, 1 Н) 6,72 (19, 9У-8,5, 2,4 Гц, 1 Н) 6,91 - 6,98 (т, 2 Н) 7,00 - 7,06 (т, 2 Н) 7,38 (аа, 9-8,6, 6,8 Гу, 1 Н) 7,92 (рег 5, 1 Н) 8,70 (а, 9-3,3 Гц, 1 Н) 12,37 (9, 9-29 Гц, 1 Н)

І С/М5 (Спосіб І С-А): Ві 1,16 хв., МН" 611

Коо) ІФЧого: 77,97 (с 0,425, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (Спосіб БЕС-Е): В 2,65 хв., МН" 611, хіральна чистота 91,195.

Сполука 128 "Н ЯМР (400 МГц, ОМ50О-дв) б ррт 2,51 (в, З Н) 3,08 (5, З Н) 3,72 (в, З Н) 3,90 - 4,07 (т, 2 Н) 4,18 (1, 9-46 Гц, 2 Н) 5,29 (ї, 9-5,7 Гц, 1 Н) 6,40 (а, 90-7,7 Гц, 1 Н) 6,58 (І, 9У-1,9 Гц, 1 Н) 6,66 (ї, 9-21 Гц, 1 Н) 6,72 (19, 2-8,5, 2,4 Гу, 1 Н) 6,89 - 6,98 (т, 2 Н) 6,99 - 7,08 (т, 2 Н) 7,38 (аа, У-8,6, 6,8 Гу, 1 Н) 7,92 (ріг 5, 1 Н) 8,70 (в, 1 Н) 12,37 (рг 5, 1 Н)

І С/М5 (Спосіб І С-А): Ві 1,15 хв., МН" 611

ІФЧого: -81,42 (с 0,435, ОМЕ)

Хіральна 5ЕС (Спосіб 5ЕС-Е): Ве 3,01 хв., МН" 611, хіральна чистота 92,595.

Ві

ПРОТИВІРУСНА АКТИВНІСТЬ СПОЛУК ЗА ДАНИМ ВИНАХОДОМ

Аналіз противірусної активності щодо ОЕММ-2

Тестували противірусну активність усіх сполук за даним винаходом проти штаму ОЕММ-2 16681, який мітили підсиленим зеленим флуоресцентним білком (естР). Середовище для культивування складалося з мінімального підтримувального середовища, доповненого 290 термічно інактивованої ембріональної телячої сироватки, 0,0495 гентаміцину (50 мг/мл) і 2 мМ 1- глутаміну. Клітини Мего, одержані з ЕСАСС, суспендували в середовищі для культивування і додавали по 25 мкл у 384-лункові планшети (2500 клітин/лунка), які вже містили противірусні сполуки. Зазвичай ці планшети містили 5-кратні серійні розбавляння, що складалися з 9 стадій розбавляння тестованої сполуки за 200-кратної кінцевої концентрації в 10095 ЮОМ5О (200 нл).

Крім того, кожну концентрацію сполуки тестували в чотирьох паралельних аналізах (кінцевий діапазон концентрацій: 25 мкМ - 0,000064 мкМ або 2,5 мкМ - 0,0000064 мкМ для найбільш активних сполук). Врешті, кожний планшет містив лунки, які визначали як контролі з вірусом (які містять клітини та вірус за відсутності сполуки), контролі з клітинами (що містять клітини за відсутності вірусу та сполуки) та контролі із середовищем (які містять середовище за відсутності клітин, вірусу та сполук). У лунки, які визначали як контролі із середовищем, додавали по 25 мкл середовища для культивування замість клітин Мего. Після того, як клітини додавали у планшети, планшети інкубували протягом 30 хвилин за кімнатної температури для забезпечення рівномірного розподілу клітин у лунках. Далі планшети інкубували у термостаті з 60 повністю зволоженою атмосферою (37"С, 595 СО»2) до наступного дня. Потім додавали штам

РЕМУ-2 16681, мічений есЕР, за множинності зараження (МОЇ), що становила 0,5. Отже, по 15 мкл вірусної суспензії додавали у всі лунки, що містили тестовану сполуку, і в усі лунки, які визначали як контролі з вірусом. Паралельно до контролів із середовищем та клітинами додавали по 15 мкл середовища для культивування. Далі планшети інкубували протягом З днів

Б у термостаті з повністю зволоженою атмосферою (37"С, 595 02). У день проведення зчитування вимірювали флуоресценцію есЕР із застосуванням автоматизованого флуоресцентного мікроскопа за 488 нм (блакитний лазер). Застосовуючи внутрішньолабораторну систему ГІМ5, розраховували криві залежності інгібування від дози для кожної сполуки та визначали напівмаксимальну ефективну концентрацію (ЕСво). Отже, розраховували відсоток інгібування (І) для кожної тестованої концентрації із застосуванням наступної формули: І - 100(5т-Зсс)/(Змо-Зсс); при цьому 5т, бос і Змео являють собою рівень сигналу есСЕР у лунках із тестованими сполуками, контролями з клітинами і контролями з вірусом відповідно. ЕСво являє собою концентрацію сполуки, за якої реплікація вірусу інгібується на 5095, що виміряно за 5095 зниженням інтенсивності флуоресценції есЕР порівняно з контролем із вірусом. ЕСво розраховували із застосуванням лінійної інтерполяції (таблиця 1).

Паралельно у тих самих планшетах оцінювали токсичність сполук. Після закінчення зчитування сигналу есЕР в усі лунки 384-лункових планшетів додавали по 40 мкл АТРІЙе, барвника, який є індикатором життєздатності клітин. АТР присутній у всіх метаболічно активних клітинах, і якщо клітини піддаються некрозу або апоптозу, то його рівень різко знижується.

Система аналізу АТРІ йе базується на продукуванні світла, спричиненому реакцією АТР із доданою люциферазою та Ю-люциферином. Планшети інкубували протягом 10 хвилин за кімнатної температури. Потім планшети вимірювали на Мем их. Також визначали напівмаксимальну цитотоксичну концентрацію (ССво), визначену як концентрацію, потрібну для зменшення люмінесцентного сигналу на 5095 порівняно з лунками контролю з клітинами.

Врешті, визначали індекс вибірковості (5І) для сполук, який розраховували так, як вказано нижче: 5І - СС5о/ЕСво.

Таблиня і

ЕСе. ССоеіЗідля сполук за даним винаходом в яналізі противірусної активності шодо ПЕМУ-2 і ОО 4 те 5 3520 4 ід пох рі 5.6 рі 2315 рі ів п.Оо85 4 13 4 1342 4

З оКюКІ 4 0.2 4 тю 4 гА поО0Оо32 5 4.5 5 івх00 5 зв позі 4 і2 4 ЗКО 4 3 оо 4 щі 4 350 4 3д ОН 6 40 6 ва 6

В 0025 4 1 4 36о 4 4 пн 7 4 3.5 5 оС 4 4А пОІ 4 НИ 4 1020 4 48 по0О2о0 4 ЗЕ 4 тів 4 пБОопо 4 63 4 Бо 4

ЗА позі 5 ке: 5 БІО 2 хв по16 4 1 4 Б 4 6 жене 4 5. 5 4280 4

А Ж ечЕ 5 56 5 5310 5 5 016 4 15 4 ОЇ 4 7А паза 3 зі 4 6БОБО 3 ув п0о36 1 5.0 1 наве 1 5 023 З Б. З 3050 З чА АН 3 ше 3 3520 3 в 0 04к 3 ще 3 17 3

ЗА 00039 4 3.2 7 310 4

Зв пох 3 13 3 253 3

ША пого 3 12 3 597 3 їв ІЗ З 2.8 З 21200 З

І п х 3 9 4 15-00 3

ПА по 3 12 3 віз 3 ів оно 5 ва 6 ВАНІ У 12 п.о0022 4 3.7 4 15900 3

ПА пою 3 в. 3 22100 3 в Я З де З 540 З

Аналіз із застосуванням кількісної ПЛР зі зворотною транскриптазою (КТ-ДРСК) щодо чотирьох серотипів: Протокол А 5 Тестували противірусну активність сполук за даним винаходом проти штаму ОЕММ-1

ТтС9748666 (МСРМУ), штаму ОЕММ-2 16681, штаму ОЕММ-3 Н8В7 (МСРМ) і штамів ОЕММ-4 Нга1 (МСРМ) і ЕОЕМ (505/06К22700К1/2005; номер доступу в СепВапк 00398256) в аналізі із застосуванням КТ-ДРСК. Таким чином, клітини Мего інфікували за допомогою одного з ОЕММ-1, або -2, або -3, або -4 за наявності або відсутності тестованих сполук. У день З після інфікування здійснювали лізис клітин і клітинні лізати застосовували для одержання кДНК як вірусу-мішені (ЗО ОЕММ; таблиця 2), так і еталонного гена клітини (В-актин, таблиця 2). Згодом здійснювали дуплексну ПЛР у режимі реального часу на пристрої І ідпісусіеєг480. Одержане значення Ср є обернено пропорційним відносно рівня експресії РНК цих мішеней. Інгібування реплікації ОЕММ під дією тестованої сполуки спричиняє зсув Ср для гену З'ОТЕ. З іншого боку, якщо тестована сполука є токсичною для клітин, то спостерігатиметься аналогічний ефект для експресії В-актину. Для обчислення ЕС5о застосовували порівняльний спосіб ДАсСр, який базується на відносній генній експресії гена-мішені (З'ОТЕ), нормалізованій за конститутивним геном клітини (В-актином). Крім того, визначали значення ССво, застосовуючи значення Ср, одержані для конститутивного гена р-актину.

Табдння 2

Праймерн та зонди. застосовувані для кількісної ЕТ-РСЕ у режимі реального часу

ЕМмш255 ПЕМУ У- | УК ГАСАСАСАСОССТО-Х лк

КЗана25 ПЕМУ У- | УЕСАСАСАССАССАТСІСТОСТС-У їлЕ

Віце 343 ПЕМУ У- | ГАМ-Я-А АСЗАСТАСНЯЕМ-

Її АССТТАСАССАСАСССССС-З- А БАИ

Расци773 блактин НЕХ-У- ТО ТОС-И ЕМ СТАТ.

ТАБКЕО

" Елементн, що являють собою репортерні барвники (ГАМ, НЕХ) ії гасники люмінесненні (ЛЕМ 1 1АВККО), виділені жирним шрифтом і курсивом. ь Нуклеотидну послідовність праймерів і зондів вибирали їз консернативної ділянки в ЗТ К-ділянці теному вірусу денге, вихолячи з вирівнювання 300 нуклеотидних послідовностей чотирьох серотипів вірусу денге, депонованнх у бСепранк (Сопе еї ві, 2013. Меївой5 Мо! Вії, Спжргек 16).

Середовище для культивування складалося з мінімального підтримувального середовища, доповненого 295 термічно інактивованої ембріональної телячої сироватки, 0,0495 гентаміцину (50 мг/мл) і 2 мМ І-глутаміну. Клітини Мего, одержані з ЕСАСС, суспендували в середовищі для культивування і додавали по 75 мкл/лунка в 96-лункові планшети (10000 клітин/лунка), які вже містили противірусні сполуки. Зазвичай ці планшети містили 5-кратні серійні розбавляння, що складалися з 9 стадій розбавляння тестованої сполуки за 200-кратної кінцевої концентрації у 10055 0ОМ5О (500 нл; кінцевий діапазон концентрацій: 25 мкМ - 0,000064 мкМ або 2,5 мкМ - 0,0000064 мкМ для найбільш активних сполук). Крім того, кожний планшет містив лунки, які визначали як контролі з вірусом (що містять клітини та вірус за відсутності сполуки) і контролі з клітинами (що містять клітини за відсутності вірусу та сполуки). Після того як клітини додавали у планшети, планшети інкубували у термостаті із повністю зволоженою атмосферою (37"С, 5960

СО») до наступного дня. Серотипи 1, 2, З і 4 вірусу денге розбавляли, щоб одержати в аналізі

Ср, що становить приблизно 22-24. Отже, по 25 мкл вірусної суспензії додавали в усі лунки, що містили тестовану сполуку, а також в усі лунки, які визначали як контролі з вірусом. Паралельно до контролів із клітинами додавали по 25 мкл середовища для культивування. Потім планшети інкубували протягом З днів у термостаті з повністю зволоженою атмосферою (37"С, 595 СОг).

Після З днів надосадову рідину з лунок видаляли і клітини двічі промивали льодяним РВ5 (приблизно 100 мкл). Осади клітин у 9б-лункових планшетах зберігали при -807С протягом щонайменше 1 доби. Потім екстрагували РНК із застосуванням набору для лізування СеїЇ5-ю-

СТ згідно з інструкціями виробника (І їїе Тесппоіодіє5). Клітинні лізати можна зберігати при - 80"С або негайно застосовувати на стадії зворотної транскрипції.

У порядку підготовки до стадії зворотної транскрипції готували суміш А (таблиця ЗА) і розподіляли по 7,57 мкл/лунка в 96-лунковий планшет. Після додавання 5 мкл клітинних лізатів здійснювали п'ятихвилинну стадію денатурації при 75"С (таблиця ЗВ). Згодом додавали

Зо 7,АЗ мкл суміші В (таблиця ЗС) та ініціювали стадію зворотної транскрипції (таблиця 30) для утворення кДНК.

Врешті, готували суміш С (таблиця 4А), суміш для КТ-ДРСК, і розподіляли по 22,02 мкл/лунка в 96-лункових планшетах для ЧФРСК ГідніСусіег, до яких додавали З мкл кКДНК і здійснювали ЯРСК на ГіднпіСусієг 480 згідно з умовами в таблиці 4В.

Застосовуючи програмне забезпечення ГіднСусіег і службову систему ГІМ5, розрахували криві залежності ефекту від дози для кожної сполуки, і визначали напівмаксимальну ефективну концентрацію (ЕСзо) і напівмаксимальну цитотоксичну концентрацію (ССзо) (таблиці 5-8).

Таблиця 5 Синтез КДНЕ їз застосуванням сумні А. денатурації. суміші Ві зворотної транекринції

СУМА

Об'єм реакційної

Зразки 828 шо 20 суміниі імклі

Елемент й й Об'єм (чкл) с. Коннентрація суміні на

Олинння | х й Вихілна Кіннева 1 зразок й вимірювання зразків

Обєм о сумішнлунка

І | АК їмклі

Ккліптиннілізати 5,0

Стадія

В денатуранії стадія Температура - | утримув

Утримування | С ання

Є Сумни В

Одиниця Щ і х

Вихілна Кіннева вимірювання зразок | зразків

Буфер 2 Ехрапій ; : х 10.00 100 2.00 17250

НІБІ

Загальний об'єм | 7.43 сумині (мкл о Протокол есннтезу КДНК

Стадія Температура

Ззворетна ЩІ шо Бу транеєкриннія

Утримування утримування

Тайлиня 4 Суміш і протокол для ОРСК

АЄСуміш С

Об'єм реакційної й зразки 43 ше 25 суміті імклі

Елемент суміші (Коннентрація Об'ємімкл) на І

Одиниця І Щ х й Вихілна о Кіннева 1 зржиок , вимірювання зразків

НО для ПЛР від що ша 7.74 64742

Коспе

Сумі Коспе І ШИ Що Й х 2 і 12,50 1041250

ХМ йб'єм суміші пробірка 22,02 імклі

В Протокол ОР КУ

І Швилкієсть

Стадія Температура |Чає І зміни

Попередня щи

ВИ І З ійхво 54 інкубація:ленатурапія

БІ циклів

Таблиня 5

ЕС. СС» і зі дня сполук проти серотину І в аналізах із застосуванням КТ-ЯДРСВ

ІА Ою55 3 БА 3 |75Х 3

ЗА НА: 4 3 1960 5

ЗА 00033 З 2,5 3 51150 5 00033 3 |х55 з |836 1 5А по 4 1225 4 |: 562 4 бА ю15 6 І|Е 5 ПІ 5 7А ОЗ 3 4 4 |з2220 3

ЗА 00023 3 |м2,5 3 214 5 9А Де 3 1525 3 |233М З 1ав 0.600020 3 125 3 она пів плюво 3 22,5 1 |:5550 З

ПА пд002о 31510 3 25074 3

М - кількість незалежних експериментів, в яких тестували сполуки.

Таблиця 6

ЕС СС» 5і для сполук проти серотипу 2 в аналізах із застосуванням КІ-ЯРСК

ЕС СС

ІА ОДНІ 3 6.6 3 5790 3

ЗА пох хі 6 1ю 5

ЗА 000043 5 в 5 »5560 5 ав ооо: 4 16 5 зі 4

ЗА от: 5 19 5 5370 5

А опо 6 52 7 БІ б 7А пло 4 32 3 5570 К;

А 0014 4 3,5 4 ліва 4

ЗА обі 4 Ід 4 запо 4

Ів 0000057 3 35 3 2100553 3 іІВ ОЛЯ 4 В 4 2413200 4

ГА 0.000075 3 2510 3 220500 3

М - кількість незалежних експериментів, в яких тестували

СПОЛУКИ.

Таблиця 7

ЕСж. СС: БІ для снолук проти серотипу 3 в аналізах із застосуванням КІ-ЯРОК

ЕСо Сб

ІА 006 3 5,8 2 94 2

А бах 4 40 3 64 3

ЗА 0045 4 2, 2 еко 2 48 О05х 3 35 2 в 2

ЗА пові 4 заг 3 36 3 бА 0043 6 1,5 3 37 3 7А 0003 22 2 126 З

ХА 00536 «3 25 3 575 3

А 0016 з педа 3 206 3 000213 з2.5 3 зі630 3 ів 00073 3 з2.У 3 щі 3

ПА 00032 3 ій 3 2463 3

М о - кількість незалежних експериментів, в яких тестунали сполуки. ге

Таблиця 5

ЕС. ССові БІ для сполук проти серотину 4 в аналізах із застосуванням КТ-ЯРСК

ЕС-о Са

ІА 029 4 30 2 а 2 2А 017 б 343 х 15 5

ЗА 0.19 5 25 3 15 3

В І 5 21 4 15 4

А ФК 5 2.6 5 18 5 бА Б 5 3,3 3 28 3

ТА 012 4 1,9 3 17 3

ЗА ло 3 1 3 49 3

ЗА 0 4 РІЙ 3 ай 3 ов 0012 з 1.5 Е що 3

В 0034 3 5 3 -о 3

А 00143 0.69 2 47 2

ЕС Сов

ІА п0036 | 50 | 1356 і

ЗА 00023 4 28 4 ТРК 4

ЗА ох 4 пов 3 зії 3

В 00032 З од 3 -е1231 З 5А 00037 4 й 4 зі 4 бА 00034 5 37 4 1045 4

М - кількість незалежних експериментів, в'якнх тестували сполуки.

ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ

«1102 Тяпеяев Рваітнасенісяіх, с

КашоенеКе Питезненігепуєв «іме ПОХІДНІ МОНО- АБО ДИЗАМІЩЕНИХ ІНлЛОЛІВ ЯК

ІНГІБІТОРИ РЕПЛІКАНІЇ ВІРУСІВ ДЕНГЕ

Іо «1302 ТІР 333 СТ «150 ЕРІв1653465 4 «сіре 15-01 «150» ЕРІ51855278 «151» 2015-16 «1602 6 «172 ВІБ5АР 13,6 «дозі «811519 «2122 НК «218» вірус денге «а севпававе аеассссіс 19 340 «31022 «ді 21

«312» ДНК «2134» вірус денте «що» 2 вакасавсве ваісісівої с 21 «21052 «211528 «212» ДАК «813» вірус денге «кю» 3 заввасіана геЧававра васссссс 28 «тій» 4 «211515 «212» ДНК «г13» вірус денте «0» 4

Евссаквіся Кассвії їх «21055 «21531 «212» ДНК «213» вірус дентге

«В» 5 шіотесасеі сасасисв 1

«ВН о «112 31 «12 ДНК «213» вірус денге та «00» 6 песвостосс сігаврсст с гі іх

Claims (11)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ

1. Сполука формули (1): дк Е о с о Осн Ві НМ в, : М я Аз ; (І) її стереоїзомерна форма або фармацевтично прийнятна сіль; при цьому вказана сполука вибрана з групи, де: А: являє собою Н, Е»: являє собою Е або СІ, а Ез являє собою Н або СН»; В: являє собою ЕК, Е2 являє собою ЕК, а Ез являє собою НН; Ві являє собою СН»вз, Н2 являє собою ОСН», а Ез являє собою Н; Ві являє собою СН», В»: являє собою ЕК, а Ез являє собою НН; Ві являє собою СН», В»: являє собою Н, а Ез являє собою Е; В: являє собою СІ, Е2 являє собою Н, а Ез являє собою СНз; Ві являє собою ОСЕ», Рг являє собою Н або ОСН», а Ез являє собою Н; і Ві являє собою ОСЕ», Р2 являє собою Н, а Ез являє собою СН».

2. Сполука або її стереоїзомерна форма або фармацевтично прийнятна сіль за п. 1, де вказана сполука вибрана з групи:

Е Е Е но но но ок ФВ, то ФВ, ОМе то ФВ ОМе Ге) ОМе (о) (в, о М М М і ча 28- Ул 38- фі З 28- М оо М оо Е М бо Е М сі їв Н Е Е Е но но но -к (в) ОМе то ОМе то ОМе М М М

Е. Зх й З х н ри: ВХ Н Ат сі М св М оо М шо! Н Е їв Мео їй Е Е Е но но но Мк то ФВ ОоМе (в; ФВ ОМе "то Фі ОМе Мао; іа У М М М СІ о? М ої М оті М в) Е Н І Н Н Е Е Е но но но Мк то ФІ, ОМе то ФІ, ОМе (о) ОМе (о) с (о) о М ЕЗСО М ЕЗСО М ЕзСо Н Ьх Нн 587 хх н 58- (Фі хх 587 М що! М оо М то Н Меб Н Н

3. Фармацевтична композиція, що містить сполуку формули (І) або її стереоїзомерну форму або фармацевтично прийнятну сіль за п. 1 або п. 2 разом з однією або кількома фармацевтично прийнятними допоміжними речовинами, розріджувачами або носіями.

4. Сполука формули (І) або її стереоізомерна форма або фармацевтично прийнятна сіль за п. 1 або 2, або фармацевтична композиція за п. З для застосування як лікарського препарату.

5. Сполука формули (І) або її стереоїзомерна форма або фармацевтично прийнятна сіль за п. 1 або 2, або фармацевтична композиція за п. З для застосування в лікуванні денге.

6. Застосування сполуки, представленої наступною структурною формулою (1): шк Е о , (о) ОоСН»з тк ни в, : М с Що Н о х Кз ;() її стереоїзомерної форми або фармацевтично прийнятної солі; при цьому вказана сполука вибрана з групи, де: А: являє собою Н, Е»: являє собою Е або СІ, а Ез являє собою Н або СН»; В: являє собою ЕК, Е2 являє собою ЕК, а Ез являє собою НН; Ві являє собою СН»вз, Н2 являє собою ОСН», а Ез являє собою Н;

Ві являє собою СН», В»: являє собою ЕК, а Ез являє собою НН; Ві являє собою СН», В»: являє собою Н, а Ез являє собою Е; В: являє собою СІ, Е2 являє собою Н, а Ез являє собою СНз; Ві являє собою ОСЕ», Рг являє собою Н або ОСН», а Ез являє собою Н; і Ві являє собою ОСЕ», Р2 являє собою Н, а Ез являє собою СН», для інгібування реплікації вірусу(ів) денге в біологічному зразку або у пацієнта.

7. Застосування сполуки за п. б, яке додатково передбачає спільне введення додаткового терапевтичного засобу.

8. Застосування за п. 7, де вказаний додатковий терапевтичний засіб являє собою інший противірусний засіб.

9. Спосіб синтезу сполук формули (І) за п. 1 або 2, який включає стадії: а) перетворення похідного 2-(4-фтор-2-(2-гідроксіетокси)феніл)оцтової кислоти загальної формули (ІІ) на похідне хлорангідриду загальної формули (ІІ) із застосуванням реагенту для хлорування, де РО являє собою захисну групу; Б) реакції Фріделя-Крафтса за участі хлорангідриду загальної формули (ІІ) їз заміщеним індолом загальної формули (ІМ), яка проводиться із застосуванням реагенту кислоти Льюїса у придатному розчиннику і за придатних умов реакції з одержанням З-ацилованого індолу загальної формули (М), де К., В» і Ез мають ті ж значення, що і в п. 1; с) видалення захисної групи Ро зі сполук загальної формули (М) з одержанням сполук загальної формули (МІ); 4) бромування (МІ) реагентом у придатному розчиннику з одержанням сполук загальної формули (МІЇ); е) реакції сполук загальної формули (МІ) із З-метокси-5-(метилсульфоніл)аніліном (МІ!) у придатному розчиннику і необов'язково із застосуванням основи з одержанням сполук загальної формули І у вигляді рацемічних сумішей; 7) хірального розділення сполук загальної формули І з одержанням енантіомерів А і В загальної формули І Е перу ре ше | т» дк же Я й р-н 4 2 іч І: й вв. в - 6565655 -- і, т ще ре ан: що ву" що у не в ні с ре Ів СО ВЗ У на А ще Н в як ші хи АУ не КУ А Но шк МГУ. Ме не Ї Ві . й о геол пе Р и и с у. й ре ія пе «НИХ ук; ера си Че чи о не с ни щи йо Ве 00000 ЗВ Ва і Хіральне розділення Енантіомери ЦАЛі їв)

10. Спосіб синтезу сполук формули (І) за п. 1 або 2, що включає стадію перетворення проміжної Зо сполуки загальної формули (М) на сполуки загальної формули І в результаті стадій: Її бромування в альфа-положенні карбонільної функціональної групи проміжних сполук загальної формули (М) за допомогою придатного реагенту для бромування у придатному розчиннику з одержанням сполук загальної формули (ІХ), де РО така, як визначено уп. 10, їі КК, В» і Ез мають такі ж значення, що і в п. 1; і) реакції сполук загальної формули (ІХ) із З-метокси-5-(метилсульфоніл)аніліном (МІ!) у придатному розчиннику і необов'язково із застосуванням основи з одержанням сполук загальної формули (Х);

ії) видалення О-захисної групи зі сполук загальної формули (Х) у придатному розчиннику з одержанням сполук загальної формули І у вигляді рацемічних сумішей; ім) хірального розділення сполук загальної формули І з одержанням енантіомерів А і В загальної формули І Е он о ку кі АК яву ше, Е КЕ її й "ЦЯ інн аа жд я ре СУЩКЗ | ічер еВ М- Вк бе дич ща и ас їз в се ЕЗ й ї М у о не ірсу пе з. пек п шу ї в р вже ше | г; Б щи нт | й У щи ше ї | о ши ШК й ВУ г м вощина й се п г сої Іл 4 Ве ха о ї век Го; У - т ее мне й Ай о Чи зе и ШИ М ШК С ЧИ НІ вит М доти Ко в В і н Ж г ЗУ Ж ся Я ; : Хіральне : розділення ; в Енантіомери ЦАЛі їв

11. Спосіб за п. 10, де проміжну сполуку загальної формули (М) отримують за допомогою: (1) перетворення похідного 2-(4-фтор-2-(2-гідроксіетокси)феніл)оцтової кислоти загальної формули (ІІ) на похідне хлорангідриду загальної формули (ІІ) із застосуванням реагенту для хлорування, (2) реакції Фріделя-Крафтса за участі хлорангідриду загальної формули (ІІІ) їз заміщеним індолом загальної формули (ІМ), яка проводиться із застосуванням реагенту кислоти Льюїса у придатному розчиннику і за придатних умов реакції з одержанням З-ацилованого індолу загальної формули (М).