UA119635C2 - Спосіб переробки твердих побутових відходів для одержання біометану - Google Patents

Спосіб переробки твердих побутових відходів для одержання біометану Download PDF

Info

Publication number
UA119635C2
UA119635C2 UAA201500139A UAA201500139A UA119635C2 UA 119635 C2 UA119635 C2 UA 119635C2 UA A201500139 A UAA201500139 A UA A201500139A UA A201500139 A UAA201500139 A UA A201500139A UA 119635 C2 UA119635 C2 UA 119635C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
waste
bacteria
fermentation
lactate
enzymatic hydrolysis
Prior art date
Application number
UAA201500139A
Other languages
English (en)
Inventor
Якоб Вагнер Йєнсен
Якоб Вагнэр Йенсэн
Георг Ернсков Рьонш
Георг Эрнсков Рёнш
Себастіан Бух Антонсен
Себастиан Бух Антонсэн
Original Assignee
Ренесаєнс А/С
Ренесаенс А/С
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ренесаєнс А/С, Ренесаенс А/С filed Critical Ренесаєнс А/С
Publication of UA119635C2 publication Critical patent/UA119635C2/uk

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P5/00Preparation of hydrocarbons or halogenated hydrocarbons
    • C12P5/02Preparation of hydrocarbons or halogenated hydrocarbons acyclic
    • C12P5/023Methane
    • BPERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B09DISPOSAL OF SOLID WASTE; RECLAMATION OF CONTAMINATED SOIL
    • B09BDISPOSAL OF SOLID WASTE NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • B09B3/00Destroying solid waste or transforming solid waste into something useful or harmless
    • BPERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B09DISPOSAL OF SOLID WASTE; RECLAMATION OF CONTAMINATED SOIL
    • B09BDISPOSAL OF SOLID WASTE NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • B09B5/00Operations not covered by a single other subclass or by a single other group in this subclass
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C02TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02FTREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F11/00Treatment of sludge; Devices therefor
    • C02F11/02Biological treatment
    • C02F11/04Anaerobic treatment; Production of methane by such processes
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205Bacterial isolates
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/02Monosaccharides
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/14Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of a carbohydrase (EC 3.2.x), e.g. by alpha-amylase, e.g. by cellulase, hemicellulase
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/02Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group
    • C12P7/04Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group acyclic
    • C12P7/06Ethanol, i.e. non-beverage
    • C12P7/08Ethanol, i.e. non-beverage produced as by-product or from waste or cellulosic material substrate
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/40Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
    • C12P7/56Lactic acid
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/62Carboxylic acid esters
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C02TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02FTREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F3/00Biological treatment of water, waste water, or sewage
    • C02F3/34Biological treatment of water, waste water, or sewage characterised by the microorganisms used
    • C02F3/342Biological treatment of water, waste water, or sewage characterised by the microorganisms used characterised by the enzymes used
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12RINDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12RINDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/04Actinomyces
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12RINDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07Bacillus
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12RINDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07Bacillus
    • C12R2001/08Bacillus brevis
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12RINDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07Bacillus
    • C12R2001/10Bacillus licheniformis
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12RINDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07Bacillus
    • C12R2001/125Bacillus subtilis ; Hay bacillus; Grass bacillus
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12RINDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225Lactobacillus
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02EREDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
    • Y02E50/00Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
    • Y02E50/10Biofuels, e.g. bio-diesel
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02EREDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
    • Y02E50/00Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
    • Y02E50/30Fuel from waste, e.g. synthetic alcohol or diesel

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Environmental & Geological Engineering (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Hydrology & Water Resources (AREA)
  • Water Supply & Treatment (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Processing Of Solid Wastes (AREA)
  • Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Treatment Of Sludge (AREA)

Abstract

Винахід стосується способу переробки твердих побутових відходів (MSW) або несортованих MSW, згідно з яким здійснюють ферментативний гідроліз частин сортованих MSW або несортованих MSW, які біологічно розкладаються, із застосуванням речовини з целюлазною активністю паралельно з мікробіологічною ферментацією у температурному діапазоні 35-75 °C, що приводить до зрідження частин відходів, які біологічно розкладаються, і накопичення мікробних метаболітів, відокремлення зріджених частин відходів, які біологічно розкладаються, від твердих речовин, які біологічно не розкладаються, з отриманням біорідини, у якій щонайменше 40 % за масою від вмісту безводних речовин знаходяться у вигляді розчинених летких речовин, які при цьому складають щонайменше 25 % за масою у вигляді будь-якої комбінації з ацетату, бутирату, етанолу, форміату, лактату та/або пропіонату. Після чого біорідину зброджують для одержання біометану. При цьому лактат присутній у більш високій концентрації за масою у порівнянні з будь-якою іншою окремою розчиненою леткою речовиною, вибраною з групи, що складається з ацетату, бутирату, етанолу, форміату та/або пропіонату, а паралельна мікробіологічна ферментація включає інокуляцію MSW із застосуванням одного або декількох видів з групи, що включає молочнокислі бактерії, бактерії, що продукують ацетат, бактерії, що продукують пропіонат, бактерії, що продукують бутират, або бактерії, що зустрічаються в MSW в природних умовах, причому один або декілька видів бактерій, що використовують для інокуляції MSW, не продукують етанол як первинний продукт зазначеної паралельної ферментації.

Description

мікробних метаболітів, відокремлення зріджених частин відходів, які біологічно розкладаються, від твердих речовин, які біологічно не розкладаються, з отриманням біорідини, у якій щонайменше 40 95 за масою від вмісту безводних речовин знаходяться у вигляді розчинених летких речовин, які при цьому складають щонайменше 25 95 за масою у вигляді будь-якої комбінації з ацетату, бутирату, етанолу, форміату, лактату та/або пропіонату.
Після чого біорідину зброджують для одержання біометану.
При цьому лактат присутній у більш високій концентрації за масою у порівнянні з будь-якою іншою окремою розчиненою леткою речовиною, вибраною з групи, що складається з ацетату, бутирату, етанолу, форміату та/або пропіонату, а паралельна мікробіологічна ферментація включає інокуляцію М5МУ із застосуванням одного або декількох видів з групи, що включає молочнокислі бактерії, бактерії, що продукують ацетат, бактерії, що продукують пропіонат, бактерії що продукують бутират, або бактерії, що зустрічаються в МОМУ в природних умовах, причому один або декілька видів бактерій, що використовують для інокуляції МОМУ, не продукують етанол як первинний продукт зазначеної паралельної ферментації.
СПОСОБИ ТА КОМПОЗИЦІЇ ДЛЯ ОДЕРЖАННЯ БІОМЕТАНУ
Тверді побутові відходи (МОМ), зокрема, у тому числі побутові відходи, відходи з ресторанів і підприємств з виробництва харчових продуктів, а також відходи з адміністративних будівель містять значну кількість компонентів органічного матеріалу, які далі можуть бути перероблені з одержанням енергії, паливних матеріалів та інших корисних продуктів. На сьогоднішній день лише малу частину доступних М5УМ піддають рециркуляції, при цьому переважну більшість викидають на смітники.
Значний інтерес виник до розробки ефективних і екологічно безпечних способів переробки твердих відходів для максимального вилучення притаманного їм енергетичного потенціалу, а також рециркуляції матеріалів, що переробляються. Однією з істотних проблем при переробці "відходів в енергію" був неоднорідний характер МОМУУ. Тверді відходи, як правило, містять значну кількість компонентів органічного матеріалу, що розкладається, змішаного з пластмасою, склом, металами та іншими матеріалами, що не розкладаються. Несортовані відходи можуть безпосередньо бути використані в сміттєспалюванні, як це широко практикується в таких країнах, як Данія та Швеція, де використовуються в системах централізованого опалення (БігепіїК 2009). Разом з тим, способи сміттєспалювання пов'язують із негативними наслідками для навколишнього середовища, і з їхньою допомогою не досягають ефективної рециркуляції сировини. Чисте та ефективне застосування компонента М5МУМ, що розкладається, об'єднане з переробкою, як правило, потребує будь-якого способу сортування для відокремлення матеріалу, що розкладається, від того, що не розкладається.
Компонент М5ЗУМ, що розкладається, можна використовувати при переробці "відходів в енергію" із застосуванням як термохімічних, так і біологічних способів. МОУУ можна піддавати піролізу або іншим режимам термохімічної газифікації. Органічні відходи, що термічно розкладаються при надзвичайно високих температурах, продукують леткі компоненти, такі як смола та метан, а також твердий залишок або "кокс" який можна спалювати з меншими токсичними наслідками в порівнянні 3 такими, які асоціюються з безпосереднім сміттєспалюванням. У якості альтернативи, органічні відходи можна термічно перетворювати на "сингаз", що містить монооксид вуглецю, діоксид вуглецю та водень, які далі можна перетворювати на синтетичні палива. Див., наприклад, для огляду МаїЇКом/ 2004.
Зо Біологічні способи конверсії компонентів М5УУ, що розкладаються, включають ферментацію з одержанням специфічних корисних кінцевих продуктів, таких як етанол. Див., наприклад,
МО2009/150455; МО2009/095693; МО2007/036795; Ваїевієгоз єї аІ. 2010; 1 єї а! 2007.
У якості альтернативи, біологічної конверсії можна досягти шляхом анаеробного зброджування з одержанням біометану або "біогазу". Див., наприклад, для огляду Нагітапп апа
Апгіпд 2006. Попередньо сортований органічний компонент М5УМ може бути безпосередньо перетворений на біометан, див., наприклад, О52004/0191755, або після порівняно простого способу "розмелювання", що включає здрібнювання в присутності доданої води, див., наприклад, 52008/0020456.
Однак, попереднє сортування М5УМ для одержання органічного компонента є, як правило, дорогим, неефективним або недоцільним. Первинне сортування потребує великої інфраструктури та експлуатаційних витрат, а також активної участі та підтримки населенням, від якого одержують відходи, - діяльність, якої важко досягти в сучасних міських суспільствах.
Механічне сортування є, як правило, капіталомістким та додатково асоціюється з великою втратою органічного матеріалу, порядку щонайменше 3095, а часто значно вище. Див., наприклад, Сопп5оппі 2005.
Деякі з цих проблем із системами сортування були успішно усунуті за допомогою здійснення зрідження органічних компонентів, що розкладаються, у несортованих відходах. Зріджений органічний матеріал може бути з легкістю відокремлений від матеріалів, що не розкладаються.
Після зрідження в пульпу, органічний компонент можна з легкістю використовувати в способах термохімічної або біологічної конверсії. Неодноразово повідомлялося про зрідження компонентів, що розкладаються, з використанням способів "автоклавування" при високому тиску та високій температурі, див., наприклад, И52013/0029394; И52012/006089;
О5БгО110008865; М/О2009/150455; МуО2009/108761; МУО2008/081028; О52005/0166812;
О52гО04/0041301; 05 5427650; 005 5190226.
Принципово інший підхід до зрідження органічних сполук, що розкладаються, полягає в тому, що цього можна досягти з використанням біологічного процесу, зокрема, за допомогою ферментативного гідролізу, див. Уепзеп еї аї. 2010; Уепз5еп еї а. 2011; Топіпі апа Авігир 2012;
МО2007/036795; ММО2010/032557.
Ферментативний гідроліз пропонує специфічні переваги над способами "автоклавування" бо для зрідження органічних компонентів, що розкладаються. Використовуючи ферментативне зрідження, переробку МЗУМ можна здійснювати безперервним способом з використанням порівняно недорогого устаткування та реакцій не під тиском, що проходять при порівняно низьких температурах. Напроти, способи "автоклавування" можуть бути здійснені в пакетному режимі та, як правило, передбачають більш високі капіталовкладення.
Усвідомлена необхідність в "стерилізації" для зменшення таким чином можливих ризиків для здоров'я, викликаних патогенними мікроорганізмами, що переносяться М5БУМ, була переважною темою, що стосується підтвердження переваги способів зрідження "автоклавуванням". Див., наприклад, УМО2009/150455; ММО2000/072987; І і еї аї. 2012; ВайПевіего5 еї а, 2010; Її еї аІ. 2007. Аналогічним чином, раніше вважали, що ферментативне зрідження вимагає теплової попередньої обробки з досягенням порівняно високої температури щонайменше 90-95 "С. Ця висока температура вважалася необхідною, зокрема, для здійснення "стерилізації" несортованих М5МУУ, і щоб таким чином органічні компоненти, що розкладаються, можна було розм'якшити та паперові вироби "переробити в паперову масу". Див. Уепзеп еї аї. 2010; Уепзеп еї а. 2011; Топіпі апа Азігир 2012.
Було виявлено, що безпечного ферментативного зрідження несортованих МЗУМ можна досягти без високотемпературної попередньої обробки. Дійсно, всупереч очікуванням, високотемпературна попередня обробка є не тільки недоцільною, але може активним чином нашкодити, оскільки знищує мікроорганізми навколишнього середовища, які розмножуються у відходах. Стимулювання мікробіологічної ферментації разом з ферментативним гідролізом у термофільних умовах 245 "С поліпшує "поглинання органічних речовин" або з використанням мікроорганізмів "навколишнього середовища", або з використанням вибірково "інокульованих" організмів. Таким чином, паралельна термофільна мікробіологічна ферментація надійно підвищує органічний вихід "біорідини", яка є терміном у даному документі для зріджених компонентів, що розкладаються, одержаних шляхом ферментативного гідролізу. За цих умов патогенні мікроорганізми, що звичайно виявляються в МеУМ, не розмножуються. Див., наприклад, Нагітапп апа Апйгіпд 2006; Оерогіез еї аї. 1998; Сагтіпоїп еї а. 1998; Вепаїхеп еї аї. 1994; Кибріег еї аІ. 1994; іх апа Ое Ваеєїте еї аІ. 1992. За цих умов типові патогени, що переносяться МБУМ, з легкістю витісняються повсюдно розповсюдженими молочнокислими бактеріями та іншими безпечними організмами.
Зо Додатково до поліпшення "поглинання органічних речовин" за рахунок ферментативного гідролізу, паралельної мікробіологічної ферментації з використанням будь-якої комбінації з молочнокислих бактерій або мікроорганізмів, що продукують ацетат, етанол, форміат, бутират, лактат, пентаноат або гексаноат, "попередні умови" для біорідини є такими, щоб зробити її більш ефективною в якості субстрату для одержання біометану. При мікробіологічній ферментації продукується біорідина, що характеризується в цілому підвищеним відсотковим вмістом розчинених твердих речовин у порівнянні зі зваженими твердими речовинами, порівняно з біорідиною, одержаною окремо шляхом ферментативного зрідження.
Високомолекулярні полісахариди в цілому більш повно розкладаються у результаті мікробіологічної "попередньої підготовки". Паралельна мікробіологічна ферментація та ферментативний гідроліз розщеплює біополімери до легко застосовуваних субстратів та, додатково, досягається метаболічна конверсія вихідних субстратів до коротколанцюгових карбонових кислот та/або етанолу. Одержана в результаті біорідина, що містить високий відсоток мікробних метаболітів, забезпечує субстрат біометану, за допомогою якого ефективно усувається обмежуючий швидкість етап "гідролізу", див., наприклад, ЮОеїдепеб5 еї аї. 2000;
Апдеїїдакі еї а. 2006; Сузпеїго5 еї аї. 2011, і застосування якого пропонує додаткові переваги для одержання метану, зокрема, із використанням дуже швидких систем анаеробного зброджування на основі "фільтрів з нерухомим завантаженням".
Короткий опис
Короткий опис фігур
Фігура 1. Конверсія сухої речовини, вираженої у вигляді сухої речовини, одержаної в надосадовій рідині, у вигляді загального вмісту сухої речовини у відсотках, при паралельному ферментативному гідролізі та мікробіологічній ферментації, стимульованих шляхом інокуляції біорідини ЕС12В із прикладу 5.
Фігура 2. Бактеріальні метаболіти, одержані в надосадовій рідині після паралельного ферментативного гідролізу та ферментації, індукованих шляхом додавання біорідини із прикладу 5.
Фігура 3. Графічне представлення випробувального реактора КЕпезсієпсе.
Фігура 4. Схематичне зображення демонстраційної установки.
Фігура 5. Поглинання органічних речовин у біорідині в різні періоди часу, виражене в кг М5 60 на кг перероблених М5УУ.
Фігура 6. Бактеріальні метаболіти, виражені у вигляді відсотка розчинених М5 у біорідині, а також у вигляді числа аеробних бактерій у різні моменти часу в експерименті.
Фігура 7. Розподіл видів бактерій, ідентифікованих у біорідині із прикладу 3.
Фігура 8. Розподіл 13 переважних бактерій в ЕС12В, зразки якої відбирали під час випробування, описаного в прикладі 5.
Фігура 9. Вихід на робочий режим та зниження вироблення біометану з використанням біорідини із прикладу 5.
Фігура 10. Характеристика "виходу на робочий режим" і "зниження" вироблення біометану з біорідини "з високим вмістом лактату" із прикладу 2.
Фігура 11. Характеристика "виходу на робочий режим" і "зниження" вироблення біометану з біорідини "з низьким вмістом лактату" із прикладу 2.
Фігура 12 демонструє характеристику "виходу на робочий режим" вироблення біометану з біорідини із гідролізованої пшеничної соломи.
Докладний опис варіантів здійснення
У деяких варіантах здійснення даний винахід забезпечує спосіб переробки твердих побутових відходів (М5УМ), що включає етапи () забезпечення М5УУ при вмісті безводних речовин від 5 до 40 95 і при температурі від 45 до 75 градусів С, (ії) ферментативного гідролізу частин М5МУУ, що біологічно розкладаються, паралельного з мікробіологічною ферментацією при температурі від 45 до 75 градусів С, результатом яких є зрідження частин відходів, що біологічно розкладаються, і накопичення мікробних метаболітів з наступним (ії) відокремленням зріджених частин відходів, що біологічно розкладаються, від твердих речовин, що біологічно не розкладаються, для одержання біорідини, яка відрізняється вмістом розчинених летких твердих речовин, з яких щонайменше 2595 за масою містять будь-яку комбінацію з ацетату, бутирату, етанолу, форміату, лактату та/або пропіонату, з наступним (м) анаеробним зброджуванням біорідини для одержання біометану.
У деяких варіантах здійснення даний винахід забезпечує органічний рідкий субстрат біогазу, який одержують шляхом ферментативного гідролізу та мікробіологічної ферментації твердих побутових відходів (МЗМУМ), який відрізняється тим, що щонайменше 4095 за масою від вмісту безводних речовин знаходяться у вигляді розчинених летких твердих речовин, при цьому розчинені леткі тверді речовини складають щонайменше 2595 за масою у вигляді будь-якої комбінації з ацетату, бутирату, етанолу, форміату, лактату та/або пропіонату.
У деяких варіантах здійснення даний винахід пропонує спосіб одержання біогазу, що включає етапи () забезпечення органічного рідкого субстрату біогазу, попередньо підготовленого шляхом мікробіологічної ферментації таким чином, що щонайменше 40 95 за масою від вмісту безводних речовин знаходяться у вигляді розчинених летких твердих речовин, при цьому розчинені леткі тверді речовини складають щонайменше 2595 за масою у вигляді будь-якої комбінації з ацетату, бутирату, етанолу, форміату, лактату та/або пропіонату, (і) перенесення рідкого субстрату в систему анаеробного зброджування з наступним (ії) здійсненням анаеробного зброджування рідкого субстрату для одержання біометану.
Динамічні характеристики метаболізму мікробних угруповань, що беруть участь в анаеробному зброджуванні, є складними. Див. Зирарйпої еї аІ. 2010; Могійа апа Зазакі 2012;
СНапага єї а. 2012. При типовому анаеробному зброджуванні (АЮ) для одержання біогазу- метану біологічні процеси, опосередковані мікроорганізмами, досягають чотирьох початкових етапів - гідроліз біологічних макромолекул до складених мономерів або інші метаболітів; кислотогенез, у результаті чого утворюються коротколанцюгові вуглеводневі кислоти та спирти; ацетогенез, у результаті чого засвоювані живильні речовини катаболізуються в оцтову кислоту, водень і діоксид вуглецю; і метаногенез, у результаті чого оцтова кислота та водень катаболізуються певними археями до метану і діоксиду вуглецю. Етап гідролізу, як правило, є обмежуючим швидкість реакції. Див., наприклад, ОеєЇдепев5 еї аїЇ. 2000; Аподеїїдакі еї аї. 2006;
Сузпвеїгов5 єї а. 2011.
Відповідно, переважним при одержанні субстратів для одержання біометану є їхній попередній гідроліз за допомогою деяких видів попередньої обробки. У деяких варіантах здійснення в способах за даним винаходом поєднують мікробіологічну ферментацію з ферментативним гідролізом М5МУУ, обидва з яких являють собою швидку біологічну попередню обробку для наступного одержання біометану, а також способом відокремлення органічних 60 компонентів, що розкладаються, від інших несортованих МБУМ.
Повідомляли про біологічні попередні обробки з використанням твердих субстратів біометану, у тому числі первинно сортованих органічних компонентів МЗМУ. Див., наприклад,
Еде2-сСцего єї аІ. 2012; Рде7-Сцего еї а. 2011 А; Где7-Сиетно еї аї. 2011 В; Се єї аї. 2010; 1м єї аІ. 2010; Вогопйї єї а. 1999. Поліпшення в наступних виходах метану в результаті анаеробного зброджування були представлені як результат підвищеного розкладання складних біополімерів і підвищеної розчинності летких твердих речовин. Однак рівень розчинності летких твердих речовин і рівень конверсії в леткі жирні кислоти, досягнуті за допомогою способів, про які раніше повідомляли, навіть не наблизилися до рівнів, досягнутих за допомогою способів за даним винаходом. Наприклад, Еде7-сцейо еї аІ. 2011 повідомляють про 10-50 95 відносне поліпшення розчинності летких твердих речовин, досягнуте за допомогою різних біологічних попередніх обробок первинно сортованих органічних фракцій з М5УМ - це відповідає кінцевим абсолютним рівням розчинності від приблизно 7 до 1095 летких твердих речовин. Для порівняння, за допомогою способів за даним винаходом одержують рідкі субстрати біометану, що містять щонайменше 40 95 розчинених летких твердих речовин.
Також повідомляли про системи двоетапного анаеробного зброджування, у яких у способі першого етапу гідролізуються субстрати біометану, у тому числі первинно сортований органічний компонент із М5УМ і інші певні біогенні субстрати. Під час першого анаеробного етапу, що є, як правило, термофільним, розкладаються високомолекулярні полімери та утворюються леткі жирні кислоти. Після чого йде другий анаеробний етап, який здійснюють у зовсім іншому реакторі, у якому переважають метаногенез і ацетогенез. Повідомляли про системи двоетапного анаеробного зброджування, у яких, як правило, використовують первинно сортовані, певні біогенні субстрати із загальним вмістом твердих речовин менше 7 95. Див., наприклад, Зирарнпої еї аї. 2011; Кіт еї аї. 2011; Їм еї аї. 2010; Кіаи еї а. 2010; Кіт еї аї. 2004;
Зесптії апа Еїїв 2000; І аїце- Тгошдиє апа Рогеієг 2000; бидба апа 7Напо 1999; Каїзвег єї а!ї. 1995;
Наттіз апа Садие 1993. Нещодавно повідомляли про декілька двоетапних систем АЮ, у яких використовують первинно сортовані певні біогенні субстрати при рівнях загального вмісту твердих речовин аж до 10 95. Див., наприклад, Ми еї аЇ. 2012; І ее еї аІ. 2010; 7Напо еї аї. 2007.
Зрозуміло, у жодній з описаних систем двоетапного анаеробного зброджування ніколи не передбачалося застосування несортованих МОУМ у якості субстрату, не говорячи вже про
Зо одержання рідкого субстрату біометану з високим вмістом твердих речовин. Двоетапне анаеробне зброджування спрямоване на конверсію твердих субстратів з безперервною подачею додаткових твердих речовин у реактор першого етапу та безперервним видаленням летких жирних кислот з реактора першого етапу.
Для здійснення на практиці способів за даним винаходом можна використовувати будь-які тверді відходи. Як буде зрозуміло фахівцеві в даній галузі техніки, термін "тверді побутові відходи" (М5УМ) відноситься до фракцій відходів, які, як правило, наявні в місті, але не повинні надходити з будь-якого району як такі. М5БУМ можуть являти собою будь-яку комбінацію з відходів целюлози, рослинних відходів, відходів тваринництва, пластмасових відходів, відходів металу або відходів скла, включаючи без обмеження будь-який один або декілька з наступних: сміття, зібране у стандартних міських системах збору відходів, необов'язково перероблене у декількох центральних пристроях, що сортують, подрібнюють або розмелюють, таких як
Режавіег або геСийигеФф); тверді відходи, відокремлені від побутових відходів, у тому числі як органічні фракції, так ії фракції, багаті на папір; фракції відходів промисловості, такої як ресторанна індустрія, харчова промисловість, промисловість у цілому; фракції відходів целюлозно-паперової промисловості; фракції відходів підприємств рециркуляції відходів; фракції відходів харчової або кормової промисловості; фракції відходів медичної промисловості; фракції відходів, одержані від сільськогосподарського сектору або сектору, пов'язаного з фермерством; фракції відходів, одержані при переробці продуктів, багатих на цукор або крохмаль; забруднені або будь-яким чином зіпсовані сільськогосподарські продукти, такі як зернові, різновиди картоплі та різновиди буряка, не придатні до використання для харчових або кормових цілей; садові відходи.
М5ЗУУ за своєю природою, як правило, неоднорідні. Статистичні дані про склад відходів, що забезпечують стійку базу для порівняння між країнами, не одержали широкого поширення.
Стандарти та операційні методики для правильного відбору зразків і визначення характеристик залишаються нестандартизованими. Фактично, у літературі описані лише декілька стандартизованих способів відбору зразків. Див., наприклад, Кібег еї аїІ., 2007. Щонайменше у випадку з побутовими відходами, склад характеризується сезонними та географічними коливаннями. Див., наприклад, Бапіеп еї аї., 2007; Еиговіаї, 2008; Напзеп еї аї., 2007Б; Мипйіе еї а!І., 2010; Вібрег єї а!., 2009; біттопв еї аЇ., 2006; Те Оапізй Епмігоптепіа! Ргоїесіп адепсу,
2010. Також у літературі описані географічні коливання в складі побутових відходів, навіть на невеликих відстанях 200-300 км між районами (Напзеп еї а!., 20075).
У деяких варіантах здійснення МОЗУМ можуть бути перероблені у вигляді "несортованих" відходів. Використовуваний у даному документі термін "несортований" відноситься до способу, у якому МЗУМ по суті не розділяють на окремі фракції, у результаті чого біогенний матеріал по суті не відокремлюють від пластику та/або іншого неорганічного матеріалу. Як використовується в даному документі, відходи можуть бути "несортованими", незважаючи на видалення ряду великих об'єктів або металевих об'єктів і незважаючи на часткове відокремлення пластикового та/або неорганічного матеріалу. "Несортовані" відходи, як використовується в даному документі, відносяться до відходів, які по суті не розділяли для забезпечення біогенної фракції, у якій менше 15 95 за сухою масою являють собою небіогенний матеріал. Як використовується в даному документі, відходи, що містять суміш біогенного та небіогенного матеріалу, у яких більше 1595 за сухою масою являють собою небіогенний матеріал, є "несортованими". Як правило, несортовані Ме5МУУ включають біогенні відходи, а саме відходи, які можуть розкладатися в біологічно перетворювані речовини, включаючи харчові та кухонні відходи, матеріали, що містять папір і/або картон, харчові відходи і їм подібні; матеріали, що переробляються, включаючи скло, пляшки, консервні банки, метали та певні види пластику; інші матеріали, що піддаються спалюванню, які, незважаючи на те, що практично не піддаються переробці як такі, можуть бути джерелом теплотворної здатності у формі видів палива, одержаних з відходів; а також інертні матеріали, включаючи керамічні матеріали, гірські породи та різні форми сміття.
У деяких варіантах здійснення МОУМ може бути перероблений у вигляді "сортованих" відходів. Використовуваний у даному документі термін "сортований" відноситься до способу, у якому М5УМ по суті розділяють на окремі фракції, у результаті чого біогенний матеріал по суті відокремлюють від пластику та/або іншого неорганічного матеріалу. Як використовується в даному документі, відходи, що містять суміш біогенного та небіогенного матеріалу, у яких менше 15 95 за сухою масою являють собою небіогенний матеріал, є "сортованими".
У деяких варіантах здійснення М5УМ можуть являти собою первинно відокремлені органічні відходи, що включають переважно плодово-ягідні відходи, відходи при виробництві овочів і/або
Зо відходи тваринництва. У деяких варіантах здійснення може бути використаний ряд різних систем сортування, у тому числі первинне сортування, де населення утилізує різні відходи роздільно. Нині системи первинного сортування діють у деяких районах в Австрії, Німеччині,
Люксембурзі, Швеції, Бельгії, Нідерландах, Іспанії та Данії. У якості альтернативи, можуть бути використані промислові системи сортування. Засоби механічного сортування та розділення можуть включати будь-які способи, відомі з рівня техніки, але не обмежуватися системами, описаними в И52012/0305688; УМО2004/101183; УУО2004/101098; УМО2001/052993;
МО2000/0024531; Му01997/020643; М/01995/0003139; СА2563845; |И55465847. У деяких варіантах здійснення відходи можуть бути слабко сортовані, утворюючи ще фракцію відходів, яка є "несортованою", як використовується в даному документі. У деяких варіантах здійснення використовують несортовані МОМУ, у яких більше 1595 за сухою масою являють собою небіогенний матеріал, або більше 18 95, або більше 20 95, або більше 21 95, або більше 22 95, або більше 23 95, або більше 24 95, або більше 25 95.
При здійсненні способів за даним винаходом необхідно забезпечувати М5УМ із вмістом безводних речовин від 10 до 45 95, або в деяких варіантах здійснення від 12 до 40 95, або від 13 до 35 9о, або від 14 до 30 95, або від 15 до 25 95. МБ5УМ, як правило, містить значну кількість води.
Як використовується в даному документі, усі інші тверді речовини, що входять до складу М5УУ, називають "безводні речовини". Рівень вмісту води, використовуваний при здійсненні способів за даним винаходом, відноситься до декількох взаємозалежних змінних. За допомогою способів за даним винаходом одержують концентровану біогенну суспензію. Як буде легко зрозуміло фахівцеві в даній галузі техніки, здатність переводити тверді компоненти в стан концентрованої суспензії підвищується з підвищенням вмісту води. Ефективне здрібнювання паперу та картону, які являють собою значну частку типових М5ОМУ, як правило, поліпшується, якщо вміст води підвищений. Крім того, як добре відомо з рівня техніки, речовини з ферментативною активністю можуть проявляти знижену активність, якщо гідроліз проводять за умов з низьким вмістом води.
Наприклад, целюлази, як правило, проявляють знижену активність у гідролітичних сумішах з вмістом безводних речовин вище приблизно 10 95. У випадку з целюлазами, що викликають розкладання паперу та картону, повідомляли про практично лінійну обернено пропорційну залежність між концентрацією субстрату та виходом у результаті ферментативної реакції на грам субстрату. Див. Кгібхїепзеп еї аїЇ. 2009. Використовуючи комерційно доступні препарати на бо основі виділених ферментів, оптимізовані для конверсії лігноцелюлозної біомаси, у дослідженнях напівпромислового масштабу спостерігали, що вміст безводних речовин може становити аж до 15 95 без явних несприятливих впливів.
У деяких варіантах здійснення деякий об'єм води звичайно повинен бути доданий до відходів для досягнення відповідного вмісту безводних речовин. Наприклад, можна розглянути фракцію несортованих побутових відходів з Данії. У таблиці 1, у якій описаний характерний склад несортованих М5УУ за даними КіБвег еї а1. (2009), "Спетіса! сотрозйоп ої тагегіа! їтасіопо іп ЮОапібзп поизепоїй мавіе, " УМаєте Мападетепі 29:1251. В Кібег еї аІ. охарактеризовані фракції компонентів побутових відходів, одержаних від 2220 будинків у Данії за один день в 2001 році.
Фахівець у даній галузі техніки легко зрозуміє, що даний опублікований склад є просто ілюстративним прикладом, застосовуваним при поясненні способів за даним винаходом. У прикладі, показаному в таблиці 1, без будь-якого додавання об'єму води перед помірним нагріванням, очікують, що органічна фракція, що розкладається та містить відходи виробництва овочів, паперу і відходи тваринництва, буде мати в середньому приблизно 47 95 вміст безводних речовин. Кабсолютний 95 безводних речовин)/(9Уо за сирою масою)-:(7,154-18,76-4,23)/(31,084-23,18-9,88) - 47 95 вміст безводних речовин). Додавання об'єму води, що відповідає одному масовому еквіваленту фракції відходів, що зазнає переробки, буде зменшувати вміст безводних речовин самих відходів до 29,1 95 (58,2 90 /2), одночасно знижуючи вміст безводних речовин компонента, що розкладається, до приблизно 23,5 90 (47 96/2). Додавання об'єму води, що відповідає двом масовим еквівалентам фракції відходів, що зазнає переробки, буде зменшувати вміст безводних речовин самих відходів до 19,4 945 (58,2 96/3), одночасно знижуючи вміст безводних речовин компонента, що розкладається, до приблизно 15,7 95 (47 9/3).
Таблиця 1. Підсумковий розподіл за масою фракцій відходів з Данії, 2001 рік (а) Чиста фракція (б) Суміш із газет, журналів, рекламної друкованої продукції, книг, офісного та чистого/використаного паперу, паперової та картонної тари, картону, картону із пластиком, картону з алюмінієвою фольгою, використаного картону та кухонних серветок. (с) Суміш із м'якого пластику, пластикових пляшок, іншого твердого пластику, та пластику, що не піддається рециркуляції.
Зо (4) Суміш із грунту, гірських порід тощо, золи, різновидів кераміки, наповнювача для котячих туалетів і інших негорючих речовин. (є) Суміш із алюмінієвої тари, алюмінієвої фольги, металоподібного "паперу", металевої тари та інших металевих виробів. (Ї) Суміш із безбарвного, зеленого, коричневого та іншого скла. (9) Суміш із фракцій 13 матеріалів, що залишилися.
Частина загальної кількості
Частина загальної | відходів, виражена у вигляді
Фракція відходів кількості відходів у абсолютного внеску до
Фо за сирою масою | загального вмісту безводних речовин 58,2 9о
Фахівець у даній галузі техніки здатний легко визначити відповідну кількість вмісту води та, при необхідності, додати воду до відходів при здійсненні способів за даним винаходом. На практиці, як правило, незважаючи на деякі відмінності в складі МБ5УМ, що зазнають переробки, доречним є додавання води, виходячи з порівняльного постійного співвідношення, у деяких варіантах здійснення від 0,8 до 1,8 кг води на кг М5МУ, або від 0,5 до 2,5 кг води на кг МБМУ, або від 1,0 до 3,0 кг води на кг МОМУ. У результаті, фактичний вміст безводних речовин в МОУМ при переробці може варіювати в придатному діапазоні. Залежно від способів, використовуваних для досягнення ферментативного гідролізу, придатний рівень вмісту безводних речовин може варіювати.
Ферментативного гідролізу можна досягти при використанні ряду різних способів. У деяких варіантах здійснення ферментативного гідролізу можна досягти при використанні препаратів на основі виділених ферментів. Використовуваний у даному документі термін "препарат на основі виділених ферментів" відноситься до препарату, що містить речовини з ферментативною активністю, які були екстраговані, виділені або іншим способом одержані з біологічного джерела та необов'язково частково або високоочищені.
Ряд різних речовин з ферментативною активністю може бути з успіхом використаний при здійсненні способів за даним винаходом. Враховуючи, наприклад, склад М5УМ, показаний в таблиці 1, буде очевидно, що відходи, які містять папір, становлять найбільший однорідний компонент за сухою масою біогенного матеріалу. Відповідно, фахівцеві в даній галузі техніки буде очевидно, що активність, яка розкладає целюлозу, щодо типових побутових відходів буде особливо переважною. У випадку відходів, що містили папір, целюлозу попередньо переробляли та відокремлювали від її природного оточення у вигляді компонента лігноцелюлозної біомаси в суміші з лігніном і геміцелюлозою. Відповідно, відходи, що містять папір, можна переважно піддавати розкладанню при використанні порівняно "простого" препарату на основі целюлази. "Целюлазна активність" відноситься до ферментативного гідролізу 1,4-8-Ю-глікозидних зв'язків у целюлозі У препаратах на основі виділених ферментів целюлази, одержаних з бактеріальних, грибкових або інших джерел, речовина з целюлазною активністю, як правило, містить суміш із різних речовин з ферментативною активністю, включаючи ендоглюканази та екзоглюканази (також звані целобіогідролазами), які, відповідно, каталізують ендо- і екзо- гідроліз 1,4-8-Ю-глікозидних зв'язків поряд з В-глюкозидазами, які гідролізують олігосахаридні продукти, одержані в результаті екзоглюканазного гідролізу, до моносахаридів. Повний гідроліз нерозчинної целюлози, як правило, вимагає синергічної дії речовин з різними активностями.
На практиці в деяких варіантах здійснення може бути переважним просте використання комерційно доступних препаратів на основі виділених целюлаз, оптимізованих для конверсії лігноцелюлозної біомаси, оскільки вони легко доступні при порівняно невисокій вартості. Ці
Зо препарати особливо придатні для практичних способів за даним винаходом. Термін "оптимізований для конверсії лігноцелюлозної біомаси" відноситься до способу розробки продукту, при якому суміші ферментів вибирали та модифікували з конкретною метою поліпшення виходів при гідролізі та/л"або зниження витрат ферменту при гідролізі попередньо обробленої лігноцелюлозної біомаси до зброджуваних цукрів.
Однак, комерційні суміші целюлаз, оптимізовані для гідролізу лігноцелюлозної біомаси, як правило, містять високі рівні додаткових і специфічних речовин з ферментативною активністю.
Наприклад, визначали вміст речовин з ферментативною активністю, присутніх у комерційно доступних препаратах на основі целюлаз, оптимізованих для конверсії лігноцелюлозної біомаси, представлених МОМО2УМЕЗ "М під торговельними марками СЕС СТЕС2 Мі СЕ ГІС
СТЕСЗМ, а також у подібних препаратах, представлених СЕМЕМСОМ "М під торговельною маркою АССЕЇ ГЕКАБЕ 1500 "7М, ії виявили, що кожний з даних препаратів містив речовину з ендоксиланазною активністю вище 200 од./г, ксилозидазною активністю при рівнях вище 85 од./г, В-І -арабінофуранозидазною активністю при рівнях вище 9 од./г, аміноглюкозидазною активністю при рівнях вище 15 од./г і а-амілазною активністю при рівнях вище 2 од./г.
Більш прості препарати на основі виділених целюлаз можуть також бути ефективно використані при здійсненні способів за даним винаходом. Придатні препарати на основі целюлаз можна одержати за допомогою способів, добре відомих з рівня техніки, з ряду мікроорганізмів, включаючи аеробні та анаеробні бактерії, гриби білої гнилизни, гриби м'якої гнилизни та анаеробні гриби. Як описано в пос. 13, К. біпойапіа еї аї., "Адмапсетепі апа сотрагаїїме ргойевз іп те ргодисійп їесппоіодієв ивіпд 5оїїа-віаїє апа зиртегодей Тептепіаїйоп ог тістобіа! сеПШавзе5, " Епгуте апа Містобіа! Тесппоіоду (2010) 46:541-549, яке явно включено в даний документ за допомогою посилання у всій своїй повноті, організми, які продукують целюлази, як правило, продукують суміш різних ферментів у відповідних пропорціях, що в такий спосіб робить їх придатними для гідролізу лігноцелюлозних субстратів. Переважні джерела препаратів на основі целюлаз, застосовувані для конверсії лігноцелюлозної біомаси, включають гриби таких видів, як Тгісподегта, Репісійшт, Ризагішт, Нитісоїа, Азрегойив5 і Рпапегоспавєг!е.
Додатково до речовин із целюлазною активністю деякі додаткові речовини з ферментативною активністю, які можуть виявитися переважними при здійсненні способів за даним винаходом, включають ферменти, які впливають на харчові відходи, такі як протеази, 60 глюкоамілази, ендоамілази, протеази, пектин-естерази, пектин-ліази та ліпази, а також ферменти, які впливають на відходи рослинництва, такі як ксиланази та ксилозидази. У деяких варіантах здійснення може бути переважним включення до складу інших речовин з ферментативною активністю, таких як ламінарази, кетатинази або лакази.
У деяких варіантах здійснення вибрані мікроорганізми, які проявляють позаклітинну целюлазну активність, можна безпосередньо інокулювати при проведенні паралельного ферментативного гідролізу та мікробіологічної ферментації, включаючи без обмеження будь- який один або декілька з наступних термофільних, целюлолітичних організмів, які можуть бути інокульовані окремо або в комбінації з іншими організмами, Раепірасійше5 Багсіпопепвів, див.
Авпа евї аї 2012, Сіовіпаійт (пептосеїЇІшт, див. Віште еєї а! 2013 апа І м апа Ми 2013, вибрані види зігеріотусев, Місторізрога і Раєпірасіїйш5, див. Еїда еї а! 2012, Сіозійаіт вігатіпізоїмеп5, див.
Каїо єї а! 2004, види Ріктісшіев, Асііпорасієїліа, Ргоїеобасівгіа і ВасієгоіЇдеїев, див. Макі єї а! 2012,
Сіозігідіит сіанйНамит, див. базакі еї аі 2012, нові види Сіовзігідіаєєв, філогенетично та фізіологічно споріднені Сіовігідінт (ШептосейПЙшит і Сіозіпідійт вігатіпізоїмеп5, див. ЗпПігаюгі еї аї 2006, Сіовіпаіит сіапШамит 5р. пом. і Сіовілдіит Саепісоїа, див. Зпігайштгі еї а! 2009, СеорасіПив5
Тпепто!іеєомогапв, див. Таї єї а! 2004, Сіовігідішт 5іегсогагіит, див. 7уепом еї а! 2010, або будь- який один або декілька з термофільних грибів брогоїіснит Шепторніе, зЗсугаїйаійт
Тепторийит, Сіовійаіит 5ігатіпізоїмеп5 і Тиептопозрога сигмаїа, Китаг еї а. 2008 для огляду.
У деяких варіантах здійснення організми, що проявляють інші корисні позаклітинні ферментативні активності, можуть бути інокульовані для сприяння паралельному ферментативному гідролізу та мікробіологічній ферментації, наприклад, протеолітичними та кератинолітичними грибами, див. КоуавєКа єї а). 2010, або молочнокислі бактерії, що проявляють позаклітинну ліпазну активність, див. Меуе"з єї а!. 1996.
Ферментативний гідроліз може бути здійснений за допомогою способів, добре відомих з рівня техніки, з використанням одного або декількох препаратів на основі виділених ферментів, включаючи будь-який один або декілька з ряду препаратів на основі ферментів, у тому числі будь-який з таких, які були згадані раніше або, у якості альтернативи, шляхом інокулювання у процесі переробки М5УУ одним або декількома вибраними організмами, здатними впливати на необхідний ферментативний гідроліз. У деяких варіантах здійснення ферментативний гідроліз може бути здійснений з використанням ефективної кількості одного або декількох препаратів на основі виділених ферментів, що містять речовини із целюлазною, В-глюкозидазною, амілазною і ксиланазною активностями. Кількість являє собою "ефективну кількість" у тому випадку, якщо при використанні в сукупності препарату на основі ферментів досягається розчинність щонайменше 4095 за сухою масою біогенного матеріалу, що розкладається, присутнього в
М5УМ, протягом часу реакції гідролізу 18 годин при використовуваних умовах. У деяких варіантах здійснення використовують один або декілька препаратів на основі виділених ферментів, у яких у сукупності відносні пропорції речовин з ферментативною активністю є наступними: суміш речовин з ферментативною активністю використовують так, щоб 1 ЕРУ целюлазної активності асоціювалася із щонайменше 31 СМС од. ендоглюканазної активності, і так щоб 1 ЕРИ целюлазної активності асоціювалася із щонайменше 7 рМРО од. бета- глюкозидазної активності. Фахівцеві в даній галузі техніки буде зрозуміло, що СМС од. відноситься до одиниць карбоксиметилцелюлози. Одна СМС од. активності вивільняє 1 мкмоль цукрів, що редукують (виражених в еквівалентах глюкози) за одну хвилину в специфічних умовах аналізу 50 "С і рН 4,8. Фахівцеві в даній галузі техніки буде зрозуміло, що рМРО од. відноситься до РМРО одиниць. Одна рМРО од. активності вивільняє 1 мкмоль нітрофенолу у хвилину з пара-нітрофеніл-В-О-глюкопіранозиду при 50 "С і рН 4,8. Далі фахівцеві в даній галузі техніки буде зрозуміло, що ЕРИ "одиниць фільтрувального паперу" представляє показник целюлазної активності. Як використовується в даному документі, ЕРИ відноситься до одиниць фільтрувального паперу, визначених за допомогою способу за Айдпеу, В. апа Вакег, 9.,
І арогаїогу Апаїуїїса! Ргоседиге 2006, "Меазигетенпі ої сеЇІШМіазе асіїмпу", Айдиві 12, 1996, Ше О5А
Маїопа! Кепеуларіе Епегду І арога(огу (МКЕГ), який включений у даний документ як посилання у всій своїй повноті.
При здійсненні варіантів здійснення за даним винаходом переважним може бути регулювання температури М5МУ перед запуском ферментативного гідролізу. Як добре відомо з рівня техніки, целюлази та інші ферменти, як правило, проявляють активність в оптимальному температурному діапазоні. Незважаючи на те, що достовірно відомі приклади ферментів з оптимальними температурами порядку 60 або навіть 70 градусів С, виділених з екстремально термофільних організмів, оптимальні для ферментів температурні діапазони, як правило, знаходяться у діапазоні від 35 до 55 градусів. У деяких варіантах здійснення ферментативний гідроліз здійснюють у межах температурного діапазону від 30 до 35 градусів С, або від 35 до 40 60 градусів С, або від 40 до 45 градусів С, або від 45 до 50 градусів С, або від 50 до 55 градусів С,
або від 55 до 60 градусів С, або від 60 до 65 градусів С, або від 65 від 70 градусів С, або від 70 до 75 градусів С. У деяких варіантах здійснення переважним є здійснення ферментативного гідролізу та паралельної мікробіологічної ферментації при температурі щонайменше 45 градусів
С, оскільки це є переважним для обмеження росту патогенів, що переносяться М5МУУ. Див., наприклад, Нагітапп апа Апйгіпд 2006; Оерогіез еї аї. 1998; Сагтіпоїп еї а. 1998; Вепаїхеп еї аї. 1994; Кибіег єї а). 1994; 5іх апа Ое Ває!те вї а. 1992.
При ферментативному гідролізі з використанням целюлазної активності целюлозний матеріал, як правило, буде оцукрюватися. Відповідно, при ферментативному гідролізі тверді відходи як оцукрюються, так і зріджуються, перетворюючись у такий спосіб із твердої форми в концентровану суспензію.
Раніше способи переробки М5УУ з використанням ферментативного гідролізу для досягнення зрідження біогенних компонентів передбачали необхідність нагрівання МОУМ до значно більш високої температури, ніж та, яка потрібна для ферментативного гідролізу, зокрема, для досягнення "стерилізації" відходів, з наступним обов'язковим етапом охолодження із доведенням нагрітих відходів до температури, прийнятної для ферментативного гідролізу.
При здійсненні способів за даним винаходом достатньо того, щоб М5УМ були просто доведені до температури, прийнятної для ферментативного гідролізу. У деяких варіантах здійснення може бути переважним просте регулювання до прийнятного вмісту безводних речовин у МБУМ з використанням нагрітої води, що подається, для доведення М5УМ до температури, прийнятної для ферментативного гідролізу. У деяких варіантах здійснення М5МУ нагрівають або шляхом додавання кількості нагрітої води, або пари, або за допомогою інших способів нагрівання в баку реактора. У деяких варіантах здійснення МОУ нагрівають у баку реактора до температури більше 30 "С, але менше 85 "С, або до температури 84 "С або менше, або до температури 80 "С або менше, або до температури 75 "С або менше, або температури 70 "С або менше, або температури 65 "С або менше, або до температури 60 "С або менше, або до температури 59 С або менше, або до температури 58 "С або менше, або до температури 57 "С або менше, або до температури 56 "С або менше, або до температури 55 "С або менше, або до температури 54 "С або менше, або до температури 53 "С або менше, або до температури 52 "С або менше, або до температури 51 "С або менше, або до температури 50 "С або менше, або до температури 497
Ко) або менше, або до температури 48 "С або менше, або до температури 47 "С або менше, або до температури 46 "С або менше, або до температури 45 "С або менше. У деяких варіантах здійснення М5УУ нагрівають до температури не більше, ніж на 10 "С вище найвищої температури, при якій здійснюють ферментативний гідроліз.
Використовувані в даному документі М5УУ є "нагрітими до температури", при цьому середня температура М5УМ підвищується в реакторі до даної температури. Як використовується в даному документі, температура, до якої нагрівають М5УМ, являє собою найвищу середню температуру М5МУ, якої досягають у реакторі. У деяких варіантах здійснення найвища середня температура може не підтримуватися протягом усього періоду. У деяких варіантах здійснення тепловий реактор може містити різні зони, у результаті чого нагрівання відбувається в ході етапів при різних температурах. У деяких варіантах здійснення нагрівання можна досягти з використанням того ж реактора, у якому здійснюють ферментативний гідроліз. Метою нагрівання є просте доведення більшої частини відходів, що містять целюлозу, і значної частини рослинних відходів до стану, оптимального для ферментативного гідролізу. Для того, щоб знаходитися у стані, оптимальному для ферментативного гідролізу, відходи в ідеалі повинні мати температуру та вміст води, прийнятні для речовин з ферментативною активністю, використовуваних для ферментативного гідролізу.
У деяких варіантах здійснення переважним може бути збовтування при нагріванні для досягнення рівномірного нагрівання відходів. У деяких варіантах здійснення збовтування може включати змішування за допомогою вільного падіння, наприклад, змішування в реакторі з камерою, що обертається по суті навколо горизонтальної осі, або в змішувачі з поворотною віссю, що піднімає М5МУУ, або в змішувачі з горизонтальними валами або лопатями, що піднімають М5ЗУУ. У деяких варіантах здійснення збовтування може включати струшування, перемішування або переміщення за допомогою шнекового транспортера. У деяких варіантах здійснення збовтування продовжують після нагрівання МОУМ до необхідної температури. У деяких варіантах здійснення збовтування здійснюють протягом від 1 до 5 хвилин, або від 5 до 10 хвилин, або від 10 до 15 хвилин, або від 15 до 20 хвилин, або від 20 до 25 хвилин, або від 25 до 30 хвилин, або від 30 до 35 хвилин, або від 35 до 40 хвилин, або від 40 до 45 хвилин, або від 45 до 50 хвилин, або від 50 до 55 хвилин, або від 55 до 60 хвилин, або від 60 до 120 хвилин.
Ферментативний гідроліз запускають на етапі додавання препаратів на основі виділених бо ферментів. У якості альтернативи, у тому випадку, якщо не додають препарати на основі виділених ферментів, а замість цього використовують мікроорганізми, які проявляють бажані позаклітинні ферментативні активності, ферментативний гідроліз запускають на етапі додавання необхідних мікроорганізмів.
При здійсненні способів за даним винаходом ферментативний гідроліз здійснюють разом з мікробіологічною ферментацією. Паралельної мікробіологічної ферментації можна досягти з використанням ряду різних способів. У деяких варіантах здійснення мікроорганізмам, присутнім у природних умовах в МУ, просто дозволяють розмножуватися в умовах реакції, якщо перероблені МБМУУ раніше не нагрівали до температури, достатньої для ефекту "стерилізації".
Як правило, мікроорганізми, присутні в М5МУ, будуть включати організми, адаптовані до місцевого навколишнього середовища. Основним сприятливим ефектом паралельної мікробіологічної ферментації є відносна надійність, при цьому мається на увазі, що дуже широкий ряд різних організмів може окремо або в сукупності сприяти поглинанню органічних речовин за допомогою ферментативного гідролізу МБ5МУ. Не бажаючи бути зв'язаними теорією, вважають, що мікроорганізми, які здійснюють паралельну ферментацію, окремо можуть виявляти деякий безпосередній вплив на розкладання харчових відходів, які необов'язково гідролізуються ферментами целюлазами. Разом з тим мономери та олігомери вуглеводів, що вивільняються за допомогою гідролізу целюлазою, зокрема, з легкістю засвоюються фактично будь-якими видами мікроорганізмів. Це створює сприятливий синергізм із ферментами целюлазами, можливо, за допомогою вивільнення продукту, що інгібує речовини з ферментативною активністю, а також, можливо, з інших причин, які не відразу стають очевидними. Кінцеві продукти мікробного метаболізму в будь-якому разі є, як правило, придатними для одержання субстратів біометану. Таким чином, збагачення мікробними метаболітами ферментативно гідролізованих МБ5УМ уже саме по собі являє собою поліпшення якості одержаного в результаті субстрату біометану. Зокрема, молочнокислі бактерії є повсюдно розповсюдженими в природі, і продукування молочної кислоти, як правило, спостерігається в тому випадку, якщо МЗУМ ферментативно гідролізується при вмісті безводних речовин від 10 до 4595 у межах температурного діапазону 45-50. При більш високих температурах, можливо, можуть домінувати інші види мікроорганізмів, що зустрічаються в природних умовах, і можуть стати більш переважними інші мікробні метаболіти, відмінні від молочної кислоти.
Зо У деяких варіантах здійснення мікробіологічна ферментація може бути здійснена шляхом прямої інокуляції з використанням одного або декількох видів мікроорганізмів. Фахівцеві в даній галузі техніки буде зрозуміло, що один або декілька видів бактерій, використовуваних для інокуляції для забезпечення таким чином одночасного ферментативного гідролізу та ферментації М5МУ, можуть бути переважно вибрані в тому випадку, якщо вид бактерій здатний розмножуватися при температурі, рівній або близькій до оптимальної для використовуваних речовин з ферментативною активністю.
Інокуляція гідролітичної суміші для індукування мікробіологічної ферментації може бути здійснена за допомогою ряду різних способів.
У деяких варіантах здійснення переважним може бути інокулювання М5УУ або до, або після, або разом з додаванням речовин з ферментативною активністю, або з додаванням мікроорганізмів, які проявляють позаклітинну целюлазну активність. У деяких варіантах здійснення може бути переважним інокулювання з використанням одного або декількох видів
АВ, включаючи без обмеження будь-який один або декілька з наступних або їх генетично модифікованих варіантів: Іасіобасіййє ріапіагит, бйМеріососсив Іасіїз, І асіобрасіїй5 савзеї,
І асторасійив5 Іасіїв, І асіобасійи5 сигмайив5, І асіобасіїи5 заке, І асіобасійи5 Пе/меїїсив, І асіобасіїшв5 наші, ІГасіобрасійе Тептепійт, Іасіобасійи5 сатів, Іасіобрасіїйи5 рівсісоїа, ІасюбасшШив согупіїогтів, І асіорасійив5 "патповзив, І асюбасій5 тайаготісив, І асіорасіїй5 рзейдоріапіагит,
Іасіюбрасійн5 адіїє, Іасіюбасійн5 Бамагіси5, Іасіорасціи5 аїйтепіатйивє, Іасіобаснш5 цатапазпіепвів5, І асіобасійй5 атуїорпійш5, Іасіобрасійиє Тагсітіпіх, І асіобасійи5 зНагреавє,
І асіорасійи5 аїмегдеп5, І асіюбасійив5 аіасіозив, І асюбасійив5 рагасавзвеї, І астобасійи5 потопіоснії,
Іасіюбасійи5 запітапсібзсо, І асіобасіїйиє їписіїмогап5, І асіорасни5 бБгеміб5, Іасіобасійив5 ропії,
І асторасійи5 тгешеп, Іасіюбасійй5 рисппегі, І асіобасійй5 мігідебзсеп5, Іасіобрасійй5 сопіивив,
ІГасіюбрасійй5 тіпог, Іасіобасіййи5 Капаїегі, Іасіобасійи5 Наіою!егап5, Іасіобасіни5 Підагаї,
І астіорасійи5 Кеїіїг, Іасіобасійив5 соїІпоідев5, І асіобасійи5 массіповієгісив, І асторасійи5 ае!ргиескії,
Гасюбасійив5 риїЇдагісив5, І асюбасіи5 Івісптаппі, І асіорасіни5 асідорпін5, І асюбасійив5 заїїманіив,
І асторасійш5 заїїсіпи5, І асіорбасійи5 давзеті, І асіобасійи5 5йерісив5, асіобасійи5 огів, І асіобасіив5 ргемів, І асіобасійнив5 мадіпаїїв5, І асіобасіїш5 репіоз5ив, І асіобасійн5 рапів, І асіососсив5 сгтетогів,
І асіососси5 аехігапісит, І асіососси5 дагуієає, І асіососсив5 Погапіає, І асіососсив ганіпоїасіїв, зігеріососсив аїіасеїуїасіїє, І еисоповзіос тезепієегоіїдез5, І ейисоповіос дехігапісит, І ейсоповіос 60 стетогів, І енсоповіос оепов, І еисоповіос рагатезепіегоїде5, І еисоповіос рзейдоезепіегоїдев,
Їенсоповіос сійгтецт, Іеисоповіос деїйдит, Іеисопобвіос сагтобзит, Редіососси5 датпов5ив,
Редіососсив5 асіаїйасіїсі, Редіососси5 сегмівіає, Редіососсив рагушив5, Реаіососси5 Паїіорпісшв5,
Редіососсив репіозасєив, Редіососсив іпівептеєдіиє, Віїйдобасієгцт опдит, 5геріососсив5
Шепторніи5, Оепососсив оепі, Віїдобрасієгшт Бгеме і Ргоріопірасієгійт ецйдепгеїснії, або деякими згодом виявленими видами ГАВ, або іншими видами роду Епіегососсив, І асіобасіїнв5,
Ї асюсоссив, І еисоповіос, Редіососси5 або Сагпорасіепит, які характеризуються сприятливою інтенсивністю щодо метаболічних процесів, при яких продукується молочна кислота.
Фахівцеві в даній галузі техніки буде легко зрозуміло, що бактеріальний препарат, використовуваний для інокуляції, може містити угруповання різних організмів. У деяких варіантах здійснення можуть бути використані бактерії, що зустрічаються в природних умовах, які існують у будь-якому певному географічному регіоні і які адаптовані до розмноження в МОУМ із цього регіону. Як добре відомо з рівня техніки, АВ поширені повсюдно та будуть, як правило, становити основний компонент будь-якого бактеріального угруповання, що зустрічається в МОМУ у природних умовах.
У деяких варіантах здійснення М5УМ може бути інокульований бактеріями, що зустрічаються у природних умовах, шляхом безперервної рециркуляції промивних вод або технологічних розчинів, використовуваних для вилучення залишкового органічного матеріалу з твердих речовин, що не розкладаються. Оскільки промивні води або технологічні розчини піддають рециркуляції, поступово в них досягаються більш високі рівні мікроорганізмів. У деяких варіантах здійснення мікробіологічна ферментація характеризується ефектом зниження рн, особливо, якщо метаболіти включають коротколанцюгові карбонові кислоти/жирні кислоти, такі як форміат, ацетат, бутират, пропіонат або лактат. Відповідно, у деяких варіантах здійснення може бути переважним здійснювати контроль і регулювання рН суміші при паралельному ферментативному гідролізі та мікробіологічній ферментації. Якщо промивні води або технологічні розчини використовують для підвищення вмісту води у М5МУ, що надходять, перед ферментативним гідролізом, то інокуляцію переважно здійснюють перед додаванням речовин з ферментативною активністю або у вигляді препаратів на основі виділених ферментів, або мікроорганізмів, що проявляють позаклітинну целюлазну активність. У деяких варіантах здійснення бактерії, що зустрічаються в природних умовах, адаптовані до розмноження в МОУМ
Зо з певного регіону, можна культивувати в М5УМ або в зрідженому органічному компоненті, одержаному шляхом ферментативного гідролізу МеУУ. У деяких варіантах здійснення культивовані бактерії, що зустрічаються в природних умовах, далі можуть бути додані у вигляді інокулята або окремо, або у вигляді добавки для інокуляції з використанням рециркульованих промивних вод або технологічних розчинів. У деяких варіантах здійснення бактеріальні препарати можуть бути додані до або разом з додаванням препаратів на основі виділених ферментів, або після деякого початкового періоду попереднього гідролізу.
У деяких варіантах здійснення специфічні штами можна культивувати для інокуляції, у тому числі штами, які модифікували або "тренували" для розмноження в умовах реакції ферментативного гідролізу та/або посилення або ослаблення конкретних метаболічних процесів. У деяких варіантах здійснення може бути переважним інокулювання МЗУМ із використанням штамів бактерій, які були ідентифіковані як здатні до виживання на фталатах у якості єдиного джерела вуглецю. Такі штами включають без обмежень будь-який один або декілька з наступних або їх генетично модифікованих варіантів: Спгузеотістобішт іпіеспепзе
ММУУТОТ, Гузіпірассійие Ти5йоптіє МВАС 157175, Тгорісірбасієї рНіНаїїсиб5, Сюогаопіа 900-2, Аппорасієг 9000-32, Васіїйив вибБійїв ЗОЗ, Сотатопав іевіозієгопії, Сотатопа5 5р Еб, ОеєїйНіа
Ізигипаїепвів, Нподоссоссив |овії, Ви"КпоїЇдегіа серасіа, Мусобасієгцт мапрааїепії, Аппобасіевг
Кеузеті, Васійи5 56 007, Анпобасієг 5р. РМРХ-4-2, Стіогаопіа патірієеєп5ві5, Вподососсив рпепоїїсив,
Рзейдотопаз 5р. РОВ2, Рзейдотопав 5р. ОЗ, Рзепдотопазв з5р. 1131, Рзендотопавз 5р. САТ1-8,
Реєндотопаз 5р. Миігогедисепе, Апйпорасієг 5р АЮЗВ, Сюгдопіа 5р СМО863, Согаопіа гобгірепіпсіиз5, Айпобасієг охудапв, Асіпегобрасієї депотозр і Асіпеїобасієг саїІсоасеїїси5. Див., наприклад, Еикипига єї а! 2012; Імакі єї аї. 2012А; Імакі еї аї. 20128; Гаюгте еї аї. 2012; Папад єї аІ. 2010; Мапод єї аїІ. 2008; Мамаснагоеп еї а. 2011; Рак єї аї. 2009; Ми єї а). 2010; Ми еї аї. 2011.
Фталати, використовувані в якості пластифікаторів у багатьох комерційних препаратах на основі полівінілхлориду, є продуктами, що зазнають вилуговування, і як показує практика, часто присутні в зрідженому органічному компоненті при рівнях, які є небажаними. У деяких варіантах здійснення переважно можуть бути використані штами, які були генетично модифіковані за допомогою способів, добре відомих з рівня техніки, таким чином, щоб підсилити метаболічні процеси та/або послабити інші метаболічні процеси, включаючи без обмеження процеси, у результаті яких відбувається засвоєння глюкози, ксилози або арабінози.
У деяких варіантах здійснення переважним може бути інокулювання М5МУУ з використанням бактеріальних штамів, які ідентифікували як здатні до розщеплення лігніну. Такі штами включають без обмежень будь-який один або декілька з наступних або їх генетично модифікованих варіантів: Сотатопабє 5р В-9, СПйгобрасієг їШМейпаїй, Сйорасієї зр ЕГО581023,
Рапдогеа погітрегдепвізї, Атусоїайорзіє в5р АТСС 39116, пмМеріотусев міпдозрогои5,
АПодососсиз іовії і 5рпіпдобішт 5р. 5УК-6. Див., наприклад, Вапдошцпаз еї аї. 2011; Вида еї а). 2011; Спапага еї аїІ. 2011; Спеп еї аї. 2012; Оамі5 еї аІ. 2012. Як показує практика, М5УМ, як правило, містить значну кількість лігніну, яку, як правило, виділяють у вигляді незбродженого залишку після АЮ.
У деяких варіантах здійснення переважним може бути інокулювання МЗУМ з використанням штаму бактерій, що продукують ацетат, включаючи без обмеження будь-який один або декілька з наступних або їх генетично модифікованих варіантів: Асейотасишт гитіпів, Апаегозіїре5 сассає, Асеїоапаєгобрішт поїегає, Асеїобасієгішт сагбіпоїйсит, Асеїобасієгішт м/іегіпдає,
Асеїобрасієтішт моодаії, Асеодепішт Кімиі, Асідатіпососсив Тептепіап5, Апаеєгомірго Іро|уїїса,
Васієгоїдеб5 соргов5иці5, Васієгоїде5 ргоріопісітасієп5, Васієгоіїдеб5 сеїІшШіозоїмеп5, Васієгоіїде5 хуїапоїуїіси5, Віїйдобасієгцт саїепшіашйт, Віїчдобасієпит Бійдит, ВійдобБасієгішт адоїезсепіїв,
Вітдобасієтішт апдиіашт, Віїдобасіепит Бргеме, Вітідобасієгішт даїййсит, Віїдобасіепит іпгапіів,
Вітідорасієгцт опдит, Війдобрасієгйшт рзепдоіопдит, Вшугіміргіо ргівоїмепе, Сіовійаійт асеїїсит, Сіозійдіит асеюбшуїїсит, Сіовіпаіит асідигісі, Сіозійдішт Бітенптепіапе, Сіозтіайт
Брошіїпит, Сіовігпдійт ршутісішт, Сіовігідіит сеПобіорагит, Сіовілаійт гоптісасеїїсит, Сіовілаійт півтоїуїісит, Сіовігідішт Іоспнеєавдії, Сіовійдішт теїйурепіозит, Сіозійдішт равзієшіапит,
Сіозіаішт рептгіпдепв, Сіовігідіит ргоріопісит, Сіовігаїішт риїгеїасієпв, Сіовігідінт 5зрогодепев,
Сіовігідіит іеїапі, Сіовігідіит іеїапотогрпит, Сіовігідіит ШептосеПЙшт, Оезипоїютасишт огієпіїв,
Епіегорасієї аегодепеб5, Ез5зсПегіспіа соїї, Еибрасієйит Птовзит, Еибрасієгшт гитіпапішт,
Еіргобасієг зиссіподепев, І асппоб5ріга тийіраги5, Медазрпаєга еїізаеєпії, МоогеПа Шептоасеїса,
РеІобасієг асеїуіепісив5, Репіобасієг асіадідаїїсі, РеІорасієї табввіїйепві5, РгемоїеМНа гитіпосоїа,
Ргоріопірасієгішт ецйдепгеїснії, Нитіпососси5 Памеїасіепо, Нитіпобрасієї атупорнпісв5,
Витіпососсив аіриб5, Витіпососсив Бготії, Витіпососси5 сПпатрапеїІепвзів, ЗеІепотопав5 гитіпапійт, Броготивза райсімогап5, Зиссіпітопаз атуїоїуїїса, зиссіпімірно аехігіпозоїмеп,
Зо Зупігорпотопав моїїєї, Зупігторпив асіййгорнісив, бЗупігорпив депііапає, Ттеропета Бгуапіїй і
Тгтеропета ріїтійа.
У деяких варіантах здійснення переважним може бути інокулювання М5МУУ з використанням штаму бактерій, що продукують бутират, включаючи без обмеження будь-який один або декілька з наступних або їх генетично модифікованих варіантів: Асідатіпососсив5 Теппепіапв,
Апаєговзіїре5 сассає, Віїаобасієгішт адоїІезсепіїв, Вшиїугімірно сто55зоїи5, Вшугіміргіо Тібгівоїмепв5,
Вшугмірго Ппипдаїві, Сіовіпйдішт асебшіуїїсит, Сіовійдішт ацгапіршугйсит, Сіовніашйт
Беї|егіпекКії, Сіовігпдійт Бшугісішт, Сіовідійт сейПобіорагпит, Сіовігідійт айісійе, Сіозтайт іппосицт, Сіовіпйадішт Кінумегі, Сіовігідіпт равієшгіапит, Сіовігідішт рептгіпдепв, Сіовмнайт ргоїєосіавіїсит, Сіовійдіит 5рогозрНнаєгоїдев5, Сіовігідіпт 5утбріозит, Сіовзійайішт їепійт,
Сіовігідіит їугобшутісит, Соргососсив ешасіив, Соргососсив сотев, ЕзсПетісніа соїї, Еибасієтійт раїКегті, Еибрасієгит бБітгпте, Еибасієгтішт сеїІшШо5оїмеп5, Еибрасієгішт суїїпагоїде5, Еибрасієгт доїїспит, Еибрасієгішт Падгит, Еибасієтішт Паїї, Еибасієтішт Птовзит, Еибасієгійт топіїйогте,
Еибасієтішт охідогедисеп5, Еибасієгит гатиишв5, Еибасівепит гесіаІє, Еибасієгит завритеит,
Еирасієтішт опиоб5ит, Еибасієгйт мепіпозит, Раесаїїрасієтит ргаийзпіїгії, Еибзобасіетит ргашивпіїгії, Реріозігеріоссоссив мадіпаїї5, Реріозігеріоссоссив Івігадіи5, Рзендоршугіміргіо гитіпів,
Рзепдоршугіміргіо хуїапімогап5, Нозеригіа сесісоїа, Нозеригіа іпіевзііпаї5, Нозеригіа Ппотіпів і
Витіпососсив ріотії.
У деяких варіантах здійснення переважним може бути інокулювання М5МУУ з використанням штаму бактерій, що продукують пропіонат, включаючи без обмеження будь-який один або декілька з наступних або їх генетично модифікованих варіантів: Апаєгомібгіо Ііроїуїіса,
Васієгоїде5 соргозиців, Васієгоїдев5 ргоріопісітасієпе, Віїйдобрасієгішт адоїіезсепіїв, Сіовіпайт асеїоршуїйсит, Сіовігдійт бБшугісішт, Сіовійдішт теїйуїрепіозит, Сіовійдішт равієшіапит,
Сіовігідіит репііпдепе, Сіовтідішт ргоріопісшт, ЕзсНегісніа соїї, ЕРивобрасієгішт писієашт,
Медазрпаєта еї5аєпії, РгемоїейПа гитіпосоїа, Ргоріопірбасієгйт Ппецадепгеїснії, Нитіпососси5 ротії, Витіпососси5 спатрапеїІепві5, ЗХеїепотопавз гитіпапіїшт і Зупігорпотопа:в умоїГеї.
У деяких варіантах здійснення переважним може бути інокулювання М5МУУ з використанням штаму бактерій, що продукують етанол, включаючи без обмеження будь-який один або декілька з наступних або їх генетично модифікованих варіантів: Асеїобасієгцт сагтбіпоїїсит,
Асеюобрасієйцт улегппдає, Асеїобасієйцт мооаії, Васієгоіїдеб5 сейПміозоїмеп5, Васіегоїде5 60 хуїапоїміісив, Сіовігідіит асебшуїїсит, Сіовігідіит Беї|егіпскії, Сіовійаіт Бшутісішт, Сіовігдійт сеПовіорагит, Сіовігідіит ІоспНеадії, Сіовітідіит равзівшіапит, Сіовігідіит репгіпдепв, Сіовігідійт
ШептосейПйит, Сіовійдійт (ептопуагозийигісит, Сіовійаішт (пептозассНагоїуїїсит, Епіегобасіег аегодепев5, ЕзсПепгіспіа соїї, Кіерзієїа охуїоса, Кіерзієїа рпеитопіа, І асппоз5ріга тийрагив,
І астіорасійн5 Бгемів, І еисоповіос тезепієегоіїде5, Раєпірасій5 тасегапв, РепІобасієг асеїуІепісив,
Витіпососсив аІри5, Пептоапаегобасієгї таїНгапії, Тгеропета Бгуапіїй і 72утотопавз тобіїїв.
У деяких варіантах здійснення консорціум різних мікроорганізмів, що необов'язково включає різні види бактерій і/або грибів, можна використовувати для здійснення паралельної мікробіологічної ферментації. У деяких варіантах здійснення придатні мікроорганізми можна вибирати для забезпечення в такий спосіб бажаного метаболічного результату при запланованих умовах реакції, а потім інокулювати з високим рівнем дози для витіснення в такий спосіб штамів, що зустрічаються в природі. Наприклад, у деяких варіантах здійснення може бути переважним інокулювання за допомогою гомоферментативного продуцента лактату, оскільки це забезпечує більш високий очікуваний метановий потенціал одержаного в результаті субстрату біометану, ніж такий, який може бути забезпечений гетероферментативним продуцентом лактату.
У деяких варіантах здійснення ферментативний гідроліз і паралельну мікробіологічну ферментацію здійснюють за допомогою реактора для гідролізу, який забезпечує збовтування із змішуванням за допомогою вільного падіння, як описано в М/О2006/056838 і в ММО2011/032557.
Після певного періоду ферментативного гідролізу та паралельної мікробіологічної ферментації, МОУМ, за умови вмісту безводних речовин від 10 до 45 95, змінюються таким чином, що біогенні або "ферментовані" компоненти стають зрідженими та у водній фазі відбувається накопичення мікробних метаболітів. Після певного періоду ферментативного гідролізу та паралельної мікробіологічної ферментації зріджені ферментовані частини відходів відокремлюють від неферментованих твердих речовин. Відразу після відокремлення від неферментованих твердих речовин зріджений матеріал являє собою те, що називають "біорідина". У деяких варіантах здійснення щонайменше 40 95 безводних речовин цієї біорідини містять розчинені леткі тверді речовини, або щонайменше 35 95, або щонайменше 30 95, або щонайменше 25 95. У деяких варіантах здійснення щонайменше 25 956 за масою розчинених летких твердих речовин у біорідині містять будь-яку комбінацію з ацетату, бутирату, етанолу,
Зо форміату, лактату та/"або пропіонату. У деяких варіантах здійснення щонайменше 70 95 за масою розчинених летких твердих речовин містять лактат, або щонайменше 60 95, або щонайменше 50 95, або щонайменше 40 95, або щонайменше 30 95, або щонайменше 25 95.
У деяких варіантах здійснення відокремлення неферментованих твердих речовин від зріджених ферментованих частин М5МУУ для одержання в такий спосіб біорідини, яка характеризується вмістом розчинених летких твердих речовин, з яких щонайменше 25 95 за масою містять будь-яку комбінацію з ацетату, бутирату, етанолу, форміату, лактату та/або пропіонату, здійснюють протягом менше 16 годин після запуску ферментативного гідролізу, або протягом менше 18 годин, або протягом менше 20 годин, або протягом менше 22 годин, або протягом менше 24 годин, або протягом менше 30 годин, або протягом менше 34 годин, або протягом менше 36 годин.
Відокремлення зріджених ферментованих частин відходів від неферментованих твердих речовин можна досягти за допомогою ряду способів. У деяких варіантах здійснення цього можна досягти шляхом використання будь-якої комбінації із щонайменше двох різних технологічних операцій розділення, включаючи без обмежень технологічні операції з використанням шнекового преса, технологічні операції з використанням балістичного сепаратора, технологічні операції з використанням вібраційного сита або інші технологічні операції розділення, відомі з рівня техніки. У деяких варіантах здійснення неферментовані тверді речовини, відокремлені від ферментованих частин відходів, містять щонайменше приблизно 20 95 за сухою масою М5ОМУ, або щонайменше 25 95, або щонайменше 30 95. У деяких варіантах здійснення неферментовані тверді речовини, відокремлені від ферментованих частин відходів, містять щонайменше 2095 за сухою масою матеріалів, що рециркулюють, або щонайменше 2595, або щонайменше 3095, або щонайменше 3595. У деяких варіантах здійснення при розділенні з використанням щонайменше двох технологічних операцій розділення одержують біорідину, яка містить щонайменше 0,15 кг летких твердих речовин на кг перероблених М5МУУ, або щонайменше 0,10. Фахівцеві в даній галузі техніки буде легко зрозуміло, що характерний біогенний склад М5УМ може варіювати. При цьому, кількісний показник 0,15 кг летких твердих речовин на кг перероблених М5УМ виражає загальне уловлювання біогенного матеріалу в типових несортованих МБ5УМ у щонайменше 80 95. Показник кг летких твердих речовин, уловлених у біорідині на кг перероблених М5МУ, можна розрахувати бо в період часу, за який визначають загальний вихід і загальну кількість перероблених М5УУ.
У деяких варіантах здійснення після відокремлення неферментованих твердих речовин від зріджених ферментованих частин М5УМ з одержанням біорідини, ця біорідина може зазнати вторинної ферментації за різних умов, включаючи різну температуру або рн.
Використовуваний у даному документі термін "розчинені леткі тверді речовини" відноситься до простого значення вимірювання, яке розраховують у такий спосіб: зразок біорідини центрифугують при 6900 9 протягом 10 хвилин в 50 мл пробірці типу РаІсоп з одержанням осаду та надосадової рідини. Надосадову рідину зливають і сиру масу осаду виражають у вигляді частки у відсотках від загальної вихідної маси зразка рідини. Зразок надосадової рідини висушують при 60 градусах протягом 48 годин для визначення вмісту сухої речовини. Вміст летких твердих речовин у зразку надосадової рідини визначають шляхом вирахування зі значення вимірювання вмісту сухої речовини золи, що залишилася після спалювання в печі при 550 "С, і виражають як відсотковий вміст за масою у вигляді розчинених летких твердих речовин в 96. Незалежне значення вимірювання розчинених летких твердих речовин визначають шляхом розрахунків, заснованих на вмісті летких твердих речовин в осаді. Частку осаду у вигляді сирої маси використовують як оцінку у вигляді частки об'ємного співвідношення нерозчинених твердих речовин від загального вихідного об'єму. Вміст сухої речовини в осаді визначають шляхом висушування при 60 градусах С протягом 48 годин. Вміст летких твердих речовин в осаді визначають шляхом вирахування зі значення вимірювання вмісту сухої речовини золи, що залишилася після спалювання в печі при 550 "С. Вміст летких твердих речовин в осаді коригують із урахуванням виправлення на розрахований внесок надосадової рідини, одержаний шляхом (1--астка осаду у вологому вигляді)х(івимірюваний 956 летких твердих речовин у надосадовій рідині). Від 96 загального вмісту летких твердих речовин, вимірюваного у вихідних зразках рідини, віднімають (відкоригований 9о летких твердих речовин в осаді)х(оцінка у вигляді частки об'ємного співвідношення нерозчинених твердих речовин від загального вихідного об'єму) з одержанням незалежної оцінки розчинених летких твердих речовин у вигляді 95.
Більша із двох оцінок використовується для того, щоб не завищити відсотковий вміст нерозчинених летких твердих речовин, представлених бактеріальними метаболітами.
У деяких варіантах здійснення даний винахід пропонує композиції та способи для одержання біометану. Попереднє детальне обговорення, що стосується варіантів здійснення
Зо способів переробки М5УМ можна необов'язково використовувати застосовно до варіантів здійснення, що пропонують способи та композиції для одержання біометану. У деяких варіантах здійснення спосіб одержання біометану включає етапи () забезпечення органічного рідкого субстрату біометану, попередньо підготовленого шляхом мікробіологічної ферментації таким чином, що щонайменше 40 95 за масою від вмісту безводних речовин знаходяться у вигляді розчинених летких твердих речовин, при цьому розчинені леткі тверді речовини складають щонайменше 25 95 за масою у вигляді будь-якої комбінації з ацетату, бутирату, етанолу, форміату, лактату та/або пропіонату, (і) перенесення рідкого субстрату в систему анаеробного зброджування з наступним (ії) здійсненням анаеробного зброджування рідкого субстрату для одержання біометану.
У деяких варіантах здійснення даний винахід пропонує органічний рідкий субстрат біометану, одержуваний шляхом ферментативного гідролізу та мікробіологічної ферментації твердих побутових відходів (М5УМ) або попередньо обробленої лігноцелюлозної біомаси, у якості альтернативи, що містить ферментативно гідролізовані та мікробіологічно ферментовані
МОУ, або що містить ферментативно гідролізовану та мікробіологічно ферментовану попередньо оброблену лігноцелюлозну біомасу, яка характеризується тим, що щонайменше 4095 за масою від вмісту безводних речовин знаходяться у вигляді розчинених летких твердих речовин, при цьому розчинені леткі тверді речовини складають щонайменше 2595 за масою у вигляді будь-якої комбінації з ацетату, бутирату, етанолу, форміату, лактату та/або пропіонату.
Використовуваний у даному документі термін "система анаеробного зброджування" відноситься до ферментаційної системи, що містить один або декілька реакторів, що працюють при контрольованих умовах аерації, при цьому в кожному з реакторів, що входять у систему, продукується газ метан. Газ метан продукується у такому об'ємі, що концентрація розчиненого метану, що утворюється метаболічним шляхом, у водній фазі ферментаційної суміші в "системі анаеробного зброджування" підвищується при використовуваних умовах, і газ метан випускається із системи.
У деяких варіантах здійснення "система анаеробного зброджування" являє собою систему на основі фільтрів з нерухомим завантаженням. "Система анаеробного зброджування на основі фільтрів з нерухомим завантаженням" відноситься до системи, у якій консорціум для анаеробного зброджування є імобілізованим, необов'язково в межах біоплівки або на фізичній матриці-підкладці.
У деяких варіантах здійснення рідкий субстрат біометану містить щонайменше загальний вміст твердих речовин 895, або щонайменше загальний вміст твердих речовин 9 95, або щонайменше загальний вміст твердих речовин 10 95, або щонайменше загальний вміст твердих речовин 11 95, або щонайменше загальний вміст твердих речовин 12 95, або щонайменше загальний вміст твердих речовин 13 95. "Загальний вміст твердих речовин", як використовується в даному документі, відноситься як до розчинних, так і до нерозчинних твердих речовин і фактично означає "вміст безводних речовин". Загальний вміст твердих речовин визначають шляхом висушування при 60 "С до одержання постійної маси.
У деяких варіантах здійснення мікробіологічну ферментацію здійснюють за умов, які перешкоджають продукуванню метану бактеріями, що продукують метан, наприклад, при рн менше 6,0, або при рН менше 5,8, або при рН менше 5,6, або при рН менше 5,5. У деяких варіантах здійснення рідкий субстрат біометану містить розчинений метан у менш насичених концентраціях. У деяких варіантах здійснення рідкий субстрат біометану містить менше 15 мг/л розчиненого метану, або менше 10 мг/л, або менше 5 мг/л.
У деяких варіантах здійснення до анаеробного зброджування з одержанням біометану один або декілька компонентів розчинених летких твердих речовин можуть бути вилучені з рідкого субстрату біометану за допомогою перегонки, фільтрації, електродіалізу, специфічного зв'язування, осадження та інших способів, добре відомих з рівня техніки. У деяких варіантах здійснення етанол або лактат можуть бути вилучені з рідкого субстрату біометану до анаеробного зброджування з одержанням біометану.
У деяких варіантах здійснення твердий субстрат, такий як М5УМ або волоконна фракція з попередньо обробленої лігноцелюлозної біомаси, піддають ферментативному гідролізу одночасно з мікробіологічною ферментацією для одержання в такий спосіб рідкого субстрату біометану, попередньо підготовленого шляхом мікробіологічної ферментації таким чином, що щонайменше 40 95 за масою від вмісту безводних речовин знаходяться у вигляді розчинених летких твердих речовин, при цьому розчинені леткі тверді речовини складають щонайменше 2595 за масою у вигляді будь-якої комбінації з ацетату, бутирату, етанолу, форміату, лактату
Зо та/або пропіонату. У деяких варіантах здійснення рідкий субстрат біометану зі згаданими вище властивостями одержують шляхом паралельного ферментативного гідролізу та мікробіологічної ферментації зрідженого органічного матеріалу, одержаного з несортованих М5УМ за допомогою способу автоклавування. У деяких варіантах здійснення попередньо оброблена лігноцелюлозна біомаса може бути змішана з ферментативно гідролізованими та мікробіологічно ферментованими М5МУУ необов'язково таким способом, щоб речовина з ферментативною активністю з біорідини, одержаної з М5УМ, забезпечувала ферментативну активність для гідролізу лігноцелюлозного субстрату з одержанням складу на основі рідкого субстрату біометану, одержаного як з М5МУ, так і з попередньо обробленої лігноцелюлозної біомаси. "М'яка лігноцелюлозна біомаса" відноситься до рослинної біомаси, за винятком деревини, що містить целюлозу, геміцелюлозу та лігнін. Можна використовувати будь-яку придатну м'яку лігноцелюлозну біомасу, у тому числі такі види біомаси, як щонайменше пшенична солома, кукурудзяна солома, стрижні кукурудзяних качанів, плодоніжки без плодів, рисова солома, вівсяна солома, ячмінна солома, солома каноли, житня солома, сорго, сорго цукрове, соєва солома, просо, свинорий пальчастий і інші трави, багаса, жом цукрового буряка, волокна кукурудзи або їх будь-які комбінації. Лігноцелюлозна біомаса може включати інші лігноцелюлозні матеріали, такі як папір, газетний папір, картон або інші побутові або канцелярські відходи. Лігноцелюлозну біомасу можна використовувати у вигляді суміші матеріалів, джерелом яких є різна вихідна сировина, причому вона може бути свіжою, частково висушеною, повністю висушеною, або їх будь-якої комбінації. У деяких варіантах здійснення в способах за даним винаходом на практиці використовують щонайменше приблизно 10 кг сировини з біомаси, або щонайменше 100 кг, або щонайменше 500 кг.
Лігноцелюлозну біомасу в цілому необхідно піддати попередній обробці за допомогою способів, відомих з рівня техніки, до проведення ферментативного гідролізу та мікробіологічної попередньої підготовки. У деяких варіантах здійснення біомасу піддають попередній обробці за допомогою гідротермічної попередньої обробки. "Гідротермічна попередня обробка" відноситься до застосування води або у вигляді гарячої рідини, водяної пари або пари під тиском, включаючи рідину або пар при високій температурі, або і те, і інше, для "готування" біомаси при температурах 120 "С або вище, або з додаванням кислот або інших хімічних речовин, або без додавання. У деяких варіантах здійснення сировину з лігноцелюлозної 60 біомаси попередньо обробляють шляхом автогідролізу. "Автогідроліз" відноситься до способу попередньої обробки, при якому оцтова кислота, що вивільняється шляхом гідролізу геміцелюлози під час попередньої обробки, додатково каталізує гідроліз геміцелюлози і застосовується в будь-якій гідротермічній попередній обробці лігноцелюлозної біомаси, здійснюваній при рН від 3,5 до 9,0.
У деяких варіантах здійснення лігноцелюлозна біомаса, попередньо оброблена гідротермальним способом, може бути розділена на рідку фракцію та тверду фракцію. "Тверда фракція" і "рідка фракція" відносяться до фракціонування попередньо обробленої біомаси при розділенні на рідку/тверду фазу. Відділена рідина в загальному значенні називається "рідкою фракцією". Залишкова фракція, що має в складі значну кількість нерозчинних твердих речовин, називається "тверда фракція". Як тверда фракція, так і рідка фракція або обидві разом можуть бути використані при здійсненні способів за даним винаходом або для одержання композицій за даним винаходом. У деяких варіантах здійснення тверда фракція може бути промита.
Приклад 1. Паралельна мікробіологічна ферментація поліпшує поглинання органічних речовин за допомогою ферментативного гідролізу несортованих МБ5УУ
Реакції лабораторного масштабу проводили зі зразком біорідини, одержаним в результаті випробування, описаного в прикладі 5.
Експериментальний субстрат на основі М5МУУ для реакцій лабораторного масштабу одержували із використанням свіжих продуктів, що включали органічну фракцію (визначену як целюлозна фракція, фракції тваринного та рослинного походження) твердих побутових відходів (одержаних, як описано в депзеп еї а!., 2010, грунтуючись на Кірег еї аї. 2009).
Експериментальний субстрат на основі М5УУ зберігали в аліквотах при -20 "С і піддавали відтаванню протягом ночі при 4 "С. Реакції виконували в 50 мл пробірках для центрифугування та загальний об'єм для реакції становив 20 г. Додавали експериментальний субстрат на основі
МЗУМ до 5 95 сухої речовини (ОМ) (виміряної у вигляді вмісту сухої речовини, що залишився після 2 днів при 60 "С).
Для гідролізу застосовували целюлазу Сеїїїс СТес3 (МОМІО00ОЗ3, Момогутевз А/5, Багсверд,
Данія) (СТес3). Для регулювання та підтримання рн на рівні рН5 використовували цитратний буфер (0,05М), доводячи до загального об'єму 20 г.
Реакційні суміші інкубували протягом 24 годин на ротаторі 5іцагі 5В3 (обертання при 4
Зо об./хв.), поміщеному в піч (Віпаег зпВН, Тутлінген, Німеччина). Паралельно проводили реакцію з негативними контролями для оцінки фонового вивільнення сухої речовини із субстрату при інкубації. Після інкубації пробірки центрифугували при 1350 уд протягом 10 хвилин при 4 с.
Потім зливали надосадову рідину, відбирали 1 мл для НРІ С-аналізу, та надосадову рідину та осад, що залишилися, висушували протягом 2 днів при 60 "С. Масу висушеного матеріалу реєстрували та використовували для розрахунків розподілу сухої речовини. Конверсію ОМ в експериментальному субстраті на основі МБУМ розраховували, виходячи з цих чисел.
Концентрації органічних кислот і етанолу вимірювали за допомогою ОКіМасе 3000 НРІС (Тпепто зЗсіепійс Оіопех), оснащеного рефрактометричним детектором (ЗподехФ КІ-101) і ультрафіолетовим детектором, при 250 нм. Розділення проводили на колонці для розділення моносахаридів Кегех ЕНМ (Рпепотепех) при 80 "С з 5 мМ Не5Ох у якості елюенту та швидкістю потоку 0,6 мл/хв. Ці результати аналізували за допомогою програмного забезпечення
Спготеїеоп (Оіопех).
Для оцінки впливу паралельної ферментації та гідролізу 2 мл/20 г біорідини, одержаної в результаті випробування, описаного в прикладі 5 (зразки відбирали 15 і 16 грудня), додавали до реакційних сумішей з або без СТес3з (24 мг/г ОМ).
Конверсія ОМ в МБ5УУ
Конверсію твердих речовин вимірювали як вміст твердих речовин, визначених у надосадовій рідині як загальний вміст сухої речовини у відсотках. На фігурі 1 показана конверсія для контрольних М5МУМ, препарату на основі виділених ферментів, окремо мікробіологічного інокуляту та комбінації мікробіологічного інокуляту та ферменту. Ці результати показували, що результатом додавання ЕС12В із прикладу 5 був значно більш високий ступінь конверсії сухої речовини в порівнянні з фоновим вивільненням сухої речовини в контрольній реакційній суміші (контрольні МБМУ Віапк) (-тест Ст'юдента р«0,0001). Паралельна мікробіологічна ферментація, індукована шляхом додавання зразка ЕС12В, і ферментативний гідроліз за допомогою СТес3 у результаті приводили до значно більш високого ступеня конверсії сухої речовини в порівнянні з реакційною сумішшю, гідролізованою тільки за допомогою СтТесз, і реакційними сумішами, у які додавали тільки ЕС12В (р«0,003).
НРІ С-аналіз глюкози, лактату, ацетату та ЕЮН
Концентрації глюкози та мікробних метаболітів (лактат, ацетат і етанол), вимірювані в 60 надосадовій рідині, показані на фігурі 2. Як показано, оскільки матеріал, використаний для одержання субстрату, зовсім не був стерильним або його не нагрівали для знищення бактерій, низька фонова концентрація цих речовин в експериментальному контрольному зразку М5УМУ і вміст молочної кислоти, імовірно, були результатом життєдіяльності бактерій, характерних для експериментальних субстратів на основі МОМУ. Вплив додавання СТесз у результаті приводив до підвищення концентрації глюкози та молочної кислоти в надосадовій рідині. Найбільш високі концентрації глюкози та бактеріальних метаболітів визначали в тих реакційних сумішах, де біорідину ЕС12В із прикладу 5 додавали разом з СТес3. Паралельна ферментація та гідроліз, таким чином, поліпшували конверсію сухої речовини в експериментальних субстратах на основі
М5УУ і підвищували концентрацію бактеріальних метаболітів у рідинах.
Посилання: Щдасор Умадпег депзеп, Сіаиз5 ЕеїЇБу, Неппіпд Удегдепзеп, Сеогд Угп5Ком Кепз5сп,
Маппа Огеуег МегпоЇт. Еплутаййс ргосезвзіпд ої типісіра! 5оЇйі м/абзіє. УМазів Мападетепі. 12/2010; 30(12):2497-503.
Вібег, С., Реїегзеп, С., Спгізієпзеп, Т.Н., 2009. Спетіса! сотрозйоп ої таїетгіа! масійпв іп
Бапібп поизенпоїй жмавзіє. У/азіє Мападетенпі 29, 1251-1257.
Приклад 2. Паралельна мікробіологічна ферментація поліпшує поглинання органічних речовин шляхом ферментативного гідролізу несортованих МБ5УУ
Випробування проводили в спеціально сконструйованому реакторі періодичної дії, показаному на фігурі 3, з використанням несортованих М5еУУ з метою підтвердження результатів, одержаних в експериментах лабораторного масштабу. В експериментах перевіряли вплив додавання інокуляту мікроорганізмів, що містив біорідину, одержану з бактерій у прикладі 3, для досягнення паралельної мікробіологічної ферментації та ферментативного гідролізу. Випробування проводили з використанням несортованих М5МУ.
М5УУ, використані для випробувань малого масштабу, були основною темою досліджень і розробок в КЕпезсієепсе. Для того, щоб результати випробувань мали цінність, відходи повинні бути репрезентативними та такими, які можна відтворити.
Відходи збирали в Моті І/5, Хольстебро в березні 2012 року. Відходи являли собою несортовані тверді побутові відходи (МОУМ) з відповідної області. Відходи подрібнювали до розміру 30х30 мм для використання в дослідженнях малого масштабу та для збору типових зразків для досліджень. План відбору зразків застосовували відносно здрібнених відходів
Зо шляхом відбору частини зразків здрібнених відходів в 22-літрові відра. Відра зберігали в морозильній камері при -18"С до використання. "Фактичні відходи" складалися з восьми відер зібраних відходів. Вміст цих відер перемішували та повторно відбирали зразки для того, щоб упевнитися, що відмінність між повторностями була низькою настільки, наскільки це можливо.
Усі зразки піддавали обробці в аналогічних умовах щодо води, температури, обертання та механічного впливу. Використовували шість камер, три з інокуляцією та три без інокуляції.
Визначений вміст безводних речовин при дослідженні доводили до вмісту безводних речовин 15 9565 шляхом додавання води. Враховували суху речовину в матеріалі для інокуляції для того, щоб додавання свіжої води в камери з інокулятом було меншим. В кожну камеру додавали 6 кг
М5УМ, що відповідало 84 г СТЕСЗ, комерційного препарату целюлази. 2 літра інокуляту додавали в камери для інокуляції з відповідним зменшенням додавання води.
У камері з інокулятом підтримували рН на рівні 5,0, а в камері без інокуляту - рН 42 шляхом, відповідно, додавання 20 95 Маон для підвищення рн і 72 95 Наг5Ох для зниження рн.
Більш низький рівень рН у камері без інокуляту забезпечував те, що власні бактерії не будуть рости. Раніше було показано, що при використанні застосовно до гідролізу МБ5УМ препарату на основі ферментів СТЕСЗ Тт різниця активності при рН 4,2 і рН 5,0 не була виявлена. Реакція тривала при 50 градусах С протягом З днів в експериментальному реакторі, що забезпечував постійне перемішування шляхом обертання.
По завершенню реакції камери спорожняли шляхом пропускання вмісту через сито і одержували біорідину, що містила зріджений матеріал, одержаний шляхом паралельного ферментативного гідролізу та мікробіологічної ферментації М5БУУ.
Суха маса зразка
Визначали вміст сухої речовини (Т5) і летких твердих речовин (М5) за допомогою способу визначення сухої речовини (ОМ). Зразки сушили при 60 "С протягом 48 годин. Використовували масу зразка до та після висушування для розрахунків ОМ, вираженого у відсотках.
Сира маса (г) зі ку щуші лих дже ку сні х 100.
ОМ (95) у зразку стра мася (г)
Спосіб визначення вмісту летких твердих речовин
Леткі тверді речовини розраховували та представляли у вигляді вмісту ОМ у відсотках, від якого віднімали вміст золи. Вміст золи в зразку знаходили шляхом спалювання попередньо висушеного зразка при 550 "С у печі протягом мінімум 4 годин. Потім вміст золи розраховували в такий спосіб.
Вміст золи у зразку у відсотках від сухої речовини:
Міжалоли у аж суха маса зразка іт
Вміст летких твердих речовин у відсотках: (1 - вміст золи в зразку у відсотках) х вміст ОМ у зразку у відсотках.
Одержані результати показані нижче. Як показано, більш високий загальний вміст твердих речовин був одержаний у біорідині, одержаній в камерах з інокулятом, що вказує на те, що паралельна мікробіологічна ферментація та ферментативний гідроліз перевершували тільки ферментативний гідроліз. 11111111 Борідина.///// | 77777777 |ССС2С нин ЕС НИ ПОЕТЕСИ ПО ПОЛО (Станд., знизьким вмістомлактату | 1098 | 0853 | /
Інокул.,з високим вмістом лактату | 1376 | 041 нІЬШ:ЬПШ.ДП ПшШВШВВВВВВОВОВЛОО ВОЛО ОН ПОЛЯ
Доданийінокул. 3-5 ОЇ 158 ЇЇ
Кк 11111111 111б228 | 07 | 11171
Ша
Одержанод///-/://СЇ11111111111Ї111111111111С1111111111Їг1 11111111 |Борідина.ї7///7777777/ ЇЇ 11111111 07503 0 |Ст.овідхил. |М5(к) //// |Ст.відхил. 11111111 |Більшебе | -// |Більшебе | Ж (Станд. знизькимвмістомлактату |: ЇЇ. //1СЇ1111711111111Ї111
Мнокул.,з високим вмістом лактату | 4,5579 | | 18429
Станд. серед. 11192203 гл | С н"н"'"6ЕВЄП'ЗИИ РО ПІНІЛОИВВВНЬССВВО ВА Я (Станд., серед. (знизьким вмістом лактатуу | 1896075 (гл
Приклад 3. Паралельна мікробіологічна ферментація поліпшує поглинання органічних речовин шляхом ферментативного гідролізу несортованих МБ5УУ
Експерименти проводили на демонстраційній установці КЕпезсіепсе, розміщеній в Центрі переробки Амагер (АКС), Копенгаген, Данія. На схематичному зображенні показані основні елементи установки, як показано на фігурі 4. Основним напрямком АКС КЕпезсіепсе Умавіе
Кеїйпегу є сортування М5ОМУ на чотири види продуктів. Біорідина для одержання біогазу, інертні відходи (скло та пісок) для рециркуляції, та 20 і ЗО фракції з неорганічних матеріалів, придатні для одержання КОЕ або для рециркуляції металів, пластику та деревини.
М5УМУ збирали з великих міст у пластикових пакетах. МБУУ транспортували в КЕпезсієепсе
Умазіе Кеїпегу, де їх зберігали в бункері до переробки. Залежно від характеру М5УМ етап сортування може бути передбачений у системі КЕпезсіепсе для відбору частинок більше припустимого розміру (більше 600 мм).
Технологія КЕпезсієпсе, яку випробовували в даному прикладі, включала три етапи.
Перший етап являв собою помірне нагрівання (попередню обробку, як показано на фігурі 4)
Зо М5УУ за допомогою гарячої води до температур у діапазоні 40-75 "С протягом 20-60 хвилин. Під час цього періоду нагрівання та змішування розкривали пластикові пакети та забезпечували прийнятне здрібнювання компонентів, що розкладаються, з одержанням більш однорідної органічної фази перед додаванням ферментів. У період нагрівання температуру та рн доводили до оптимальних для препаратів на основі виділених ферментів, які застосовують для ферментативного гідролізу. Гарячу воду можна додавати у вигляді чистої водопровідної води або у вигляді промивної води, використовуваної спочатку в промивних барабанах, а потім повторно поданої в реактор з помірним нагріванням, як показано на фігурі 4.
Другий етап являв собою ферментативний гідроліз і ферментацію (зрідження, як показано на фігурі 4). На другому етапі процесу КЕпезсіепсе додавали ферменти та необов'язково вибрані мікроорганізми. Ферментативне зрідження та ферментацію проводили безперервно із тривалістю прибл. 16 годин при оптимальних температурі та рН для ефективної роботи ферменту. За допомогою цього гідролізу та ферментації відбувалося зрідження біогенної частини М5МУУ до біорідини з високим вмістом сухої речовини у оточенні матеріалів, що не розкладаються. рН регулювали шляхом додавання СасСоз.
Третій етап технології КЕпезсіепсе, як здійснювали у даному прикладі, являв собою етап розділення, на якому біорідину відокремлювали від фракцій, що не розкладаються. Розділення здійснювали у балістичному сепараторі, промивних барабанах і гідравлічних пресах. У балістичному сепараторі відбувалося розділення М5МУ, оброблених ферментами, на біорідину, 2О-фракцію з матеріалів, що не розкладаються, і ЗЮО-фракцію з матеріалів, що не розкладаються. ЗЮО-фракція (фізичні З-мірні об'єкти, такі як консервні банки та пластикові пляшки) не зв'язували значні кількості біорідини, отже, однократного етапу промивання було достатньо для очищення З3О-фракції. 20-фракція (текстильні матеріали та різновиди плівки як приклади) зв'язували значну кількість біорідини. Отже, 20-фракцію віджимали із використанням шнекового преса, промивали і знову віджимали для оптимального вилучення біорідини та для одержання "чистої" і сухої 20-фракції. Інертний матеріал, який являв собою пісок і скло, відсівали від біорідини. Воду, використовувану у всіх промивних барабанах, можна повторно подавати, нагрівати, а потім використовувати як гарячу воду на першому етапі для нагрівання.
Експеримент, докладно розглянутий у даному прикладі, розділили на три секції, як показано в таблиці 1.
Таблиця 1 нагрівання 867124 | /////- 11 |водопровідндавода.//:///СС:(/Ки;7ССССССССсС:(/У8 СГ о 142187 | 7770-1111 |промивнавода.7//7/7/7/7/:///СС/:(КНЯССС:(/////-:НС(Жг/ З
У 7-денному дослідженні несортовані М5УМ, одержані з Копенгагена, Данія, безперервно завантажували в кількості 335 кг/год. у демонстраційну установку КЕпезсіепсе. У реактор з помірним нагріванням додавали 536 кг/год. води (водопровідної води або промивної води),
Зо нагрітої до прибл. 75"С перед подачею в реактор з помірним нагріванням. Тим самим температуру доводили до прибл. 50 "С в М5МУ, а рН доводили до прибл. 4,5 шляхом додавання
СасСо».
У першій секції поверхнево-активний антибактеріальний засіб Кодаїоп тм (бензилалкіламонію хлорид) вносили в додану воду в кількості З г активного інгредієнта на кг
МОМ.
У реактор для зрідження додавали прибл. 14 кг Сеїїс Сіес3 (комерційно доступний препарат на основі целюлази від Момо7уте5) на тонну вологих М5МУ. Температуру підтримували в діапазоні 45-50ИС і регулювали рН у діапазоні 4,2-4,5 шляхом додавання СасСОз. Час утримання ферменту в реакторі становив прибл. 16 годин.
У системі розділення, що містила балістичний сепаратор, преси та промивні барабани, дану біорідину (зріджений матеріал, що розкладається) відокремлювали від матеріалів, що не розкладаються.
Промивну воду вибірково або зливали, при цьому реєструючи вміст органічних речовин, або повторно подавали та повторно використовували для зволоження МОМУ, що надходять, при помірному нагріванні. Повторна подача промивної води характеризувалася ефектом досягнення більш високих рівнів бактеріальної інокуляції за допомогою організмів, що розмножуються за умов реакції 50 "С, ніж тих, які спочатку були присутні. В схемі використовуваного процесу повторно подану промивну воду спершу нагрівали до приблизно 70 "С для того, щоб привести
М5УМУ, що надходять, до температури, придатної для ферментативного гідролізу, у цьому випадку приблизно 50 "С. Зокрема, у випадку молочнокислих бактерій було показано, що нагрівання до 70 "С забезпечувало відбір і "стимулювання" експресії генів теплової стійкості.
Зразки відбирали у вибрані моменти часу в наступних місцях: - біорідина, що проходить часте сито, яку назвали "ЕС12В";
- біорідина у резервуарі для зберігання; - промивна вода після сита для відокремлення сироватки; - 20-фракція; - ЗО-фракція; - залишкова фракція інертних матеріалів з обох пристроїв для промивання.
Вироблення біорідини вимірювали за допомогою тензометричних датчиків на резервуарі для зберігання. Потік свіжої води, що надходить, вимірювали за допомогою витратомірів, рециркульовані або злиті промиті відходи вимірювали за допомогою тензометричних датчиків.
Кількість бактерій перевіряли в такий спосіб: відібрані зразки біорідини розбавляли 10- кратно в 5РО (пептонно-сольовому розчині) ії 1 мл розведених зразків висівали згідно з методикою глибинного посіву на м'ясо-пептонний агар (3,0 г/л м'ясного екстракту (Ріка, номер за каталогом В4888), 10,0 г/л триптону (Зідта, номер за каталогом 79410), 5,0 г/л масі (Мегеск, номер за каталогом 7647-14-5), 15,0 г/л агару (5ідта, номер за каталогом 9002-18-0)). Чашки інкубували при 50 градусах, відповідно, в аеробному та анаеробному середовищі. Анаеробне культивування проходило у відповідних контейнерах, де анаеробне середовище зберігали шляхом насичення газом за допомогою Апохутаї і додавання саше, що створюють анаеробні умови (Апаегосбеп від Охоїдй, номер за каталогом АМО025А). Аеробні колонії підраховували через 16 годин і ще раз через 24 години. Бактерії, що росли в анаеробних умовах, кількісно оцінювали через 64-72 години.
На фігурі 5 показаний загальний вміст летких твердих речовин у зразках біорідини, одержаних після ЕС12В, у вигляді кг на кг перероблених М5МУМ. Точкові оцінки одержували в різні моменти часу під час експерименту з урахуванням кожного із трьох окремих періодів проведення експерименту у вигляді окремого періоду часу. Таким чином, точкова оцінка за період 1 (Кодаіоп) виражала співвідношення балансів мас і потоків матеріалів за період 1. На фігурі 5 показано, що за період 1, який починався після тривалої зупинки через труднощі на установці, загальний вміст твердих речовин, поглинених у біорідині, неухильно падав, вказуючи на слабкий антибактеріальний ефект Кодаіюп'"Мм, За період 2 загальний вміст поглинених твердих речовин повертався до незначно більш високих рівнів. За період З повторна подача води забезпечувала ефективну "інокуляцію" МОМУМ, що надходять, при цьому поглинання органічних речовин у біорідині, виражене в кг М5/кг відходів, підвищувалося до значно більш високих рівнів приблизно 12 95.
Для кожного з 10 моментів часу, показаних на фігурі 5, відбирали зразки біорідини (ЕС12В) і визначали за допомогою НРІС загальний вміст твердих речовин, загальний вміст летких твердих речовин, загальний вміст розчинених летких твердих речовин, а також концентрації передбачуваних бактеріальних метаболітів, таких як ацетат, бутират, етанол, форміат і пропіонат. Ці результати, включаючи концентрації гліцерину, показані в таблиці 1 нижче.
Таблиця 1
Аналіз зразків біорідини
Загальний
Час ВМІСТ У Розчинені Лактат Мурашина Ацетат | Пропіонат | Етанол | Гліцерин твердих УБ кислота речовин ни я Я ПНЯ ПОЛЯ ПО КОНЯ НО НО КОХ ни я Я ПНЯ ПОЛЯ ПОЛЯ КОНЯ КОН КОН КОХ 45 | 1030 869 700 | 322 | 000 | 035 000 / оле | 04165 53 | 977 822 6б2 | 300 | 000 | 042 000 017| 0 63 | 931 7,74 607 | 274 | 009 | 041 003 | 017 | б 67 | 866 75 554 | 282 | 000 | 039 003 020 | 0475 88 | 957 7,97 602 | 324 | 000 | 031 004 | 013 | 0,554 116 | 71057 1890 6// | 327 | 001 | 025 | 000 | оті | 05635 130 | 993 833 643 | 339 | 000 | 025 | 000 | о0л1| 0 лаї | 1207 1908 66 | 416 | 000 | 028 | 000 | 04 | 0205 159 | 11,30 868 633 | 463 | 000 | 031 000 о0л1| 0 7166 | 71104 87) 572 | 450 | 000 |032/ 003 | 02 | 0646 л81 | 711,76 8,75) бл | 548 | бла | 037 | 000 | олії 18 і л88 | 71120 805) 6го | 540 | 000 |о040| 000 |о0л1| о
Що стосується зразків біорідини, які відбирали у кожний з десяти моментів часу, на фігурі б показані обидва числа живих бактерій, визначені для бактерій, вирощених в аеробних умовах, а також відсоток маси "бактеріальних метаболітів" (а саме сума ацетату, бутирату, етанолу, форміату та пропіонату), у перерахуванні на відсотковий вміст розчинених летких твердих речовин. Показано, що відсоток маси бактеріальних метаболітів чітко зростає з підвищенням бактеріальної активності і асоціюється з підвищеним поглинанням твердих речовин у біорідині.
Приклад 4. Ідентифікація мікроорганізмів, що беруть участь у паралельній ферментації у прикладі З
Зразки біорідини, одержані в прикладі 3, аналізували щодо складу мікроорганізмів.
Види мікроорганізмів, присутні в зразку, ідентифікували шляхом порівняння послідовностей їх генів, що кодують 165 рРНК, із послідовностями генів, що кодують 165 рРНК, у добре вивчених видів (референтні види). Нормальна гранична величина для ідентифікації видів становить 9795 подібність послідовності генів, що кодують 165 рРНК, у порівнянні з референтним видом. Якщо подібність становить менше 97 95, то найбільш ймовірно це вид, що відрізняється.
Одержані в результаті послідовності порівнювали з гомологічними послідовностями з використанням сервісу ВіавзіМ у базі даних МОВІ. База даних містить високоякісні послідовності довжиною щонайменше 1200 п.о. і таксономічно пов'язані з базою даних МСВІ. Ураховували тільки ВІ А5Т-хіти з ідентичністю 295 95.
Одержані зразки біорідини безпосередньо спрямовували для проведення аналізу без заморожування перед екстракцією ДНК.
Усього ідентифікували 7 видів бактерій (фігура 7) і 7 видів архей. У ряді випадків для видів бактерій не змогли встановити підвид (І. асідорпійш5, Її. атуіомоги5, І. 5обБііиє, Ї. гешіегі, Г.
Титепії, С. Тепгтепшт, І... тарітентепіапв5, І. ріапіагит, І. репіовив).
Приклад 5. Докладний аналіз поглинання органічних речовин при використанні паралельної мікробіологічної ферментації та ферментативного гідролізу несортованих М5УУ
Демонстраційну установку КЕпебсіепсе, описану в прикладі 1, використовували для
Зо проведення докладного вивчення загального поглинання органічних речовин при використанні паралельної бактеріальної ферментації та ферментативного гідролізу несортованих М5УУ.
Сміття з Копенгагена характеризували за допомогою Есопеї для визначення його вмісту.
Аналіз відходів проводили для визначення вмісту та варіації. Великий зразок М5УУ доставляли в Есопеї А/5, де проводили аналізи відходів. Первинний зразок зменшували до підзразка приблизно 50-200 кг. Цей підзразок сортував спеціально навчений персонал на 15 різних фракцій відходів. Встановлювали масу кожної фракції та розраховували розподіл.
Таблиця х
Загальний склад відходів в (95), одержаний в аналізі, проведеному за допомогою Есопеї, при випробуванні протягом 300 годин -к (12151515 1515» | (ери значення | відхилення 77777711 | 95 96| 96| 96 | 961 96) 96| 96| 96| 9 | 4
Тени виіви|во|хе|ве|зв|вг|т5|вя 551 упаковки плюа є 06 в ол те м те в/в в 92 из
Іншийпластик 007 10,81 0,51|07|10107|161|04109| 08 / 033
Склл |021001|05|06|061001|061|041|00| 03 | 027
ПЕ фев зів оо ал ов зв гг! гів подвір'я
МЕЕЕ
(елементи. | 97 | о 04 | 0,7 чом | 05 0,33 живлення і т.ін.)
Полімерні та картонні 10,4 21,4 | 11,9 110) 6,7 |10,7111,81135,9 11,8 413 упаковки
Підгузки |80/10,3| 6,9 |188| 81 |25л|152|101|140| 129 | 600 при 656777 ве вв|те БИ во тя 08 речовни 20090612 те ои|ол|ааов 12 | ов речовини речовини 000 | 77777.)
Склад відходів, що змінюється час від часу і представлений у таблиці 2, є результатом аналізу відходів, одержаний з різними зразками, відібраними за 300 годин. Найбільшу варіацію спостерігали в наступних фракціях: підгузки, полімерні та картонні упаковки, а також харчові відходи, які всі є фракціями, що впливають на вміст органічного матеріалу, який може бути поглинений.
За весь процес "випробування протягом 300 годин" середнє значення "поглиненого" матеріалу, що біологічно розкладається, виражене в кг У5 на кг перероблених М5МУ, становило 0,156 кг У5/кг М5МУУ, що надходять.
Репрезентативні зразки біорідини відбирали в різні моменти часу в процесі експерименту, якщо установка знаходилась в стабільному режимі роботи. Зразки аналізували за допомогою
НРІС і визначали вміст летких твердих речовин, вміст твердих речовин і вміст розчинених твердих речовин, як описано в прикладі 3. Результати показані в таблиці 2 нижче.
Таблиця 2
Аналіз зразків біорідини
Загальний
Час ВМІСТ УЗ Розчинені| Мурашина Лактат | Ацетат | Пропіонат | Етанол | Гліцерин твердих У5 кислота речовин 22 | 1045 |836| 595 | 000 | 536 | 046 | 003 | 046 | 082 239 | 1091 Щ|864| 585 | 000 | 608 | 033 | 000 | 033 | 077 2гбаБ| 11,35 |882| 625 | 000 | 497 | 049 | 000 | 049 | 106 (294 | 10,66 )|848| 560 | 008 | 3,37 | 039 | 000 | 039 | 055
Приклад 6. Ідентифікація мікроорганізмів, що беруть участь у паралельній ферментації в прикладі 5
Зразок біорідини "ЕС12В" відбирали під час випробування, описаного в прикладі 5, 15 і 16 грудня 2012 року, і зберігали при -20 "С для проведення аналізу 165 рДНК для ідентифікації мікроорганізмів у зразку. Аналіз 165 рДНК широко використовується для ідентифікації та філогенетичного аналізу прокаріот на основі компонента 165 малої рибосомальної субодиниці.
Заморожені зразки направляли в сухому льоді в СЗАТС Віоїеспй АВ, Солна, Швеція, де проводили аналіз 165 рДНК (САТС Віоїесіп). Аналіз включав наступні етапи: екстрагування геномної ДНК, одержання бібліотеки ампліконів шляхом використання пари універсальних праймерів, що перекривали гіперваріабельні ділянки М1-УЗ 2ТЕ:
АСАСТТТОАТССТООСТСАС/534К: АТТАССОСООСтТОСТОО; довжиною 507 п.0о.), ПЛР- мічення адаптерами 5 РЇХ, секвенування за допомогою пристрою Сепоте Зедиепсег РІХ з одержанням числа читань на зразок 104000-160000. Одержані в результаті послідовності потім порівнювали з гомологічними послідовностями з використанням сервісу ВіабіМ у базі даних
ТОМА з Кірозота! ЮОаїарахзе Рго|есі (СоІе еї аїЇ.,, 2009). База даних містить високоякісні послідовності довжиною щонайменше 1200 п.о. і таксономічно пов'язані з базою даних МСВІ.
Поточна версія (КОР випуск 10, оновлено 19 вересня 2012 року) містить послідовності 9162 бактерій і 375 архей. Результати, одержані за допомогою ВІ АЗТ, фільтрували для видалення коротких і низькоякісних хітів (ідентичність послідовності 290 96, покриття при вирівнюванні 290 95).
Усього було ідентифіковано 226 різних бактерій.
Переважною бактерією в зразку ЕС12В була Раїшаіврасієег ргоріопісідепе5 МУ/В4, бактерія, що продукує пропіонат (Оекі єї а. 2006), яка становила 13 90 від загального числа ідентифікованих бактерій. Розподіл 13 ідентифікованих переважних бактерій (Раїшаірасіег ргоріопісідепе5 М/В4,
Ргоївіпірнішт асеїаїйдепев5, Асііпотусез5 епгораєив, І еміїпєа зассНагоїуїїса, Стуріапаєегорасієг рпепоїїсив, Зедітепіїрасієї Нуагохурепгоїсив, Сіовігдішт рпуюїенптепіап5 ІЗО9, Рейїтопав5 взийийрпйа, Сіовіпадішт Іасіацйептепіап5, Сіовійдішт саепісоїа, СагсієПйа пігайгедисепв,
Зо РепаїпІобрасієг гевзігісїиз ОМ 9455, Магіпобасіег Імаоепвів) показаний на фігурі 8.
Порівняння бактерій, ідентифікованих на рівні роду, показало, що Сіозігідішт, Раїчаірасіег,
Ргоїеіпірпішт, Асііпотусез і І еміїпеа (всі є анаеробами) представляють приблизно половину ідентифікованого роду. Рід І асіобасійц5 становить 2 95 від ідентифікованих бактерій. Переважна бактерія виду Р. ргоріопісідепе5 МУВ4 належить до другого найбільш переважного роду (Раїшаірасіег) у зразку ЕС12В.
Переважною патогенною бактерією в зразку ЕС12В була 5ігеріососсив5 5рр., яка становила 0,028 95 від загального числа ідентифікованих бактерій. У біорідині не виявили будь-яких патогенних бактерій, що утворюють спори. зігеріососси5 5рр. являв собою єдину патогенну бактерію, присутню в біорідині із прикладу 5. зігеріососси5 5рр. являв собою бактерію з найвищою стійкістю до температур (серед таких, що не утворюють спори) і О-значенням, яке означає кількість часу, необхідного для зменшення кількості живих клітин Зігеріососси5 5рр. при цій температурі у десять разів, при цьому таким, що є вище, ніж у будь-яких інших патогенних бактерій за даними Рерогіез5 еї а!. (1998) в М5МУ. Ці результати показують, що умови, використані в прикладі 5, придатні для санірування М5УМ при розділенні в процесі КЕпезсіепсе до рівня, при якому був присутній лише Зігеріососсиз 5рр.
Конкуренція між бактеріями за живильні речовини та підвищення температури під час процесу будуть значно зменшувати число патогенних організмів і, як показано вище, усувати патогенні мікроорганізми, присутні в М5МУ, підданих сортуванню в процесі КЕпезсіепсе. Інші фактори, такі як рН, ам, витривалість до кисню, СО», масі ії Мамо», також впливають на ріст патогенних бактерій у біорідині. Взаємодія між згаданими вище факторами може зменшити час і температуру, необхідні для зменшення кількості живих клітин під час процесу.
Приклад 7. Детальний аналіз поглинання органічних речовин при використанні паралельної мікробіологічної ферментації та ферментативного гідролізу несортованих М5УМ, одержаних з віддалених географічних об'єктів
Демонстраційну установку КЕпебсіепсе, описану в прикладі З, використовували для переробки М5МУ, завезених з Нідерландів. Установили, що М5УМ мали наступний склад.
Таблиця У
Загальний склад відходів (5), підданий аналізу Есопеї під час тесту мап сапзем/іпкеї нич
Дріб'язок. 77719
Цей матеріал зазнавав паралельного ферментативного гідролізу та мікробіологічної ферментації, як описано в прикладах З і 5, і здійснювали випробовування із використанням установки протягом З днів. Відбирали та характеризували зразки біорідини, одержані в різні моменти часу. Результати показані в таблиці 3.
Таблиця З
Аналіз біорідини
Загальний
Час ВМІСТ УЗ Розчинені Лактат Мурашина Ацетат | Пропіонат | Етанол | Гліцерин твердих УБ кислота речовин -- ни п Я Я ПОЛЯ ПО ПОН НО КОН КОХ 76 | 7,96 |608. 307 |4132 008 0189 0 0298 | Омго5 і 95 | еле Щ|6.99у 666 |6943| 0 |05352| 0034 | 0,069 | 0,6465
Що стосується розчинених У5, вносили виправлення 9 95, виходячи із втрати лактату при висушуванні.
Приклад 8. Одержання біометану з використанням біорідини, одержаної в результаті паралельної мікробіологічної ферментації та ферментативного гідролізу несортованих МБУУ
Біорідину, одержану в експерименті, описаному в прикладі 5, заморожували в 20 літрових відрах і зберігали при -18 "С для подальшого використання. Цей матеріал випробовували щодо одержання біометану з використанням двох ідентичних, добре підготовлених систем анаеробного зброджування на основі фільтрів з нерухомим завантаженням, що містили консорціум мікроорганізмів для анаеробного зброджування в біоплівці, іммобілізованій на фільтрі-підкладці.
Вихідні зразки відбирали як з поданої рідини, так і з рідини усередині реактора.
Концентрацію летких жирних кислот (МЕА), повну хімічну потребу в кисні КСОБ), хімічну потребу в кисні (5СОБ) і концентрацію аміаку визначали за допомогою кюветних тестів НАСН ГАМОЕ на спектрофотометрі ОК 2800, а точну концентрацію МЕРА щодня визначали за допомогою НРІ С.
Показники Т5М5 також визначали за допомогою гравіметричного способу.
Зразки газу для аналізу СС відбирали щодня. Контроль швидкості подачі проводили шляхом вимірювання об'єму вільного простору над продуктом у живильному резервуарі, а також кількості стічних вод, що виходять із реактора. Відбір зразків під час процесу проводили шляхом збору рідини або стічних вод за допомогою шприца.
Стійке одержання біогазу спостерігали при використанні як однієї, так і іншої системи анаеробного зброджування протягом 10 тижнів, що становило від 0,27 до 0,32 л/г СОБ0, або від
Е до 7 л/г У5.
Потім припиняли подачу біорідини в одну із двох систем, і відслідковували повернення до вихідного рівня, як показано на фігурі 9. Стійкий рівень одержання газу показаний горизонтальною лінією, позначеною цифрою 2. Момент часу, у який припиняли подачу, показаний у вигляді вертикальних ліній, позначених цифрою 3. Показано, що після місяців стійкої роботи залишався залишковий пружний матеріал, який перетворювався протягом періоду, позначеного між вертикальними лініями, що позначені цифрами З і 4. Повернення до вихідного рівня або "зниження" показане в періоді після вертикальної лінії, що позначена цифрою 4. Після періоду на вихідному рівні поновлювали подачу в момент, позначений вертикальною лінією, що позначена цифрою 1. Зростання до стійкого стану одержання газу або "вихід на робочий режим" показаний в періоді після вертикальної лінії, що позначена цифрою 1.
Параметри одержання газу з біорідини, у тому числі "вихід на робочий режим" і "зниження" вимірювали як описано нижче.
Назва зразка 300
Параметр Одиниця вимірювання | годин, відходи з
Амагер (Часповноговиснаженнят? 77777711 ЇДдні 77777 1771117141
Сн //11111111111111111111106111111111111111111111111111601 (Загальнийвихід. 77777777 |Лгазуулподанотріддйниї | 66 Б переробляються Й межею і в біорідині "Час виходу на робочий режим являє собою час від першої подачі до того моменту, коли припиняється підвищення вироблення газу та відбувається стабілізація. Час виходу на робочий режим вказує на рівень органічних речовин, що легко переробляються, у поданій рідині. "«Час зниження являє собою час від останньої подачі до того моменту, коли припиняється різке падіння вироблення газу. Час зниження показує вироблення газу з органічних речовин, що легко переробляються. е»«Повне виснаження являє собою час після часу зниження до того моменту, коли вироблення газу повністю припиняється та відбувається повернення до вихідного рівня. Час повного виснаження показує вироблення газу з органічних речовин, що повільно переробляються. яеВнесена поправка для вироблення газу на вихідному рівні 2 л/день.
Приклад 9. Порівняльне одержання біометану з використанням біорідини, одержаної в результаті ферментативного гідролізу несортованих М5УМ з і без паралельної мікробіологічної ферментації
Біорідини з "високим вмістом лактату" і "низьким вмістом лактату", одержані в прикладі 2, порівнювали щодо одержання біометану з використанням системи анаеробного зброджування на основі фільтра з нерухомим завантаженням, описаної в прикладі 8. Одержували показники та визначали час "виходу на робочий режим" і "зниження", як описано в прикладі 8.
На фігурі 10 показані характеристики "виходу на робочий режим" і "зниження" при використанні біорідини "з високим вмістом лактату". Стійкий рівень вироблення газу показаний горизонтальною лінією, позначеною цифрою 2. Момент часу, у якій починалася подача газу, показаний у вигляді вертикальних ліній, позначених цифрою 1. Зростання до стійкого стану вироблення газу або "вихід на робочий режим" показане в періоді після вертикальної лінії, позначеної цифрою 1. Момент часу, у якій припиняли подачу, показаний у вигляді вертикальної лінії, позначеної цифрою 3. Повернення до вихідного рівня або "зниження" показане в періоді після вертикальної лінії, позначеної цифрою 3, до періоду з вертикальною лінією, позначеною цифрою 4.
На фігурі 11 показані ті ж показники для біорідини з "низьким вмістом лактату" із зазначеними моментами, що відповідають описаним для фігури 11.
Нижче показані порівняльні параметри вироблення газу з біорідини "з високим вмістом лактату" і "низьким вмістом лактату", що включають "вихід на робочий режим" і "зниження", вимірювані як описано.
Різниця часу "виходу на робочий режим»/«зниження" демонструє різницю щодо легкості біологічного розкладання. Біомаси, здатні до найбільш швидкої біоконверсії, у підсумку будуть характеризуватися найбільш високою загальною швидкістю конверсії органічних речовин при використанні для одержання біогазу. Більше того, "Сільш швидкі" субстрати біометану є найбільш ідеально прийнятними для конверсії за допомогою дуже швидких систем анаеробного зброджування, таких як анаеробні реактори на основі фільтра з нерухомим завантаженням.
Показано, що біорідина із "високим зміст лакатату" демонструє більш швидкий час "виходу на робочий режим" і "зниження" при одержанні біометану.
Відходи з Контрольний
Параметр Одиниця високим зразок відходів З вимірювання вмістом низьким вмістом лактату з лактату з
Хольстебро Хольстебро (Часзниження? 77777770 (Години | 6 17777141 (Часповноговиснаженнят? 0 ЇДні 7 | 77/27/1772 2
Кот РА; У НС СУ КОН се ННЯ КОН ст НОЯ рідини поннння Волю рон переробляються Й собуподанійбіорідині 0 (Г/л | 71106 17777790 2 біорідині
Котов лі: КВН СУ КОН с: ННЯ ПОН с: ОН "Час виходу на робочий режим являє собою час від першої подачі до того моменту, коли припиняється підвищення вироблення газу та відбувається стабілізація. Час виходу на робочий режим вказує на рівень органічних речовин, що легко переробляються, у поданій рідині. "«Час зниження являє собою час від останньої подачі до того моменту, коли припиняється різке падіння вироблення газу. Час зниження показує вироблення газу з органічних речовин, що легко переробляються. е»«Повне виснаження являє собою час після часу зниження до того моменту, коли вироблення газу повністю припиняється та відбувається повернення до вихідного рівня. Час повного виснаження показує вироблення газу з органічних речовин, що повільно переробляються. яеВнесена поправка для вироблення газу на вихідному рівні 2 л/день.
Приклад 11. Одержання біометану з використанням біорідини, одержаної в результаті паралельної мікробіологічної ферментації та ферментативного гідролізу пшеничної соломи, попередньо обробленої гідротермічним способом
Пшеничну солому попередньо обробляли, розділяли на волоконну фракцію та рідку фракцію, а потім волоконну фракцію окремо промивали. 5 кг промитих волокон потім інкубували в реакторі барабанного типу з горизонтальною віссю обертання з дозою СеїЇйс СТЕСЗ і інокулятом ферментуючих мікроорганізмів, що входять до складу біорідини, одержаної в прикладі 3. Пшеничну солому піддавали одночасному гідролізу та мікробіологічній ферментації протягом З днів при 50 градусах.
Потім цю біорідину тестували щодо одержання біометану з використанням системи анаеробного зброджування на основі фільтра з нерухомим завантаженням, описаної в прикладі 8. Показники були одержані для часу "виходу на робочий режим", як описано в прикладі 8.
На фігурі 12 показана характеристика "виходу на робочий режим" для біорідини з гідролізованої пшеничної соломи. Стійкий рівень вироблення газу показаний горизонтальною лінією, позначеною цифрою 2. Момент часу, у якій запускали подачу, показаний у вигляді вертикальних ліній, позначених цифрою 1. Зростання до стійкого стану вироблення газу або "вихід на робочий режим" показаний в періоді після вертикальної лінії, позначеної цифрою 1.
Параметри вироблення газу з біорідини з гідролізованої пшеничної соломи показані нижче.
Показано, що попередньо оброблену лігноцелюлозну біомасу можна з легкістю використовувати для практичних способів одержання біогазу та для одержання нових субстратів біометану за даним винаходом. вимірювання соломи «з біорідина (Часповноговиснаження?" Дні 0 |Данівідсутні////////СССсСС
Кот РА; У УНН КОН 7 ПО рідини переробляються біорідині "Час виходу на робочий режим являє собою час від першої подачі до того моменту, коли припиняється підвищення вироблення газу та відбувається стабілізація. Час виходу на робочий режим вказує на рівень органічних речовин, що легко переробляються, у поданій рідині. "«Час зниження являє собою час від останньої подачі до того моменту, коли припиняється різке падіння вироблення газу. Час зниження показує вироблення газу з органічних речовин, що легко переробляються. е»«Повне виснаження являє собою час після часу зниження до того моменту, коли вироблення газу повністю припиняється та відбувається повернення до вихідного рівня. Час повного виснаження показує вироблення газу з органічних речовин, що повільно переробляються. яеВнесена поправка для вироблення газу на вихідному рівні 2 л/день.
Приклад 12. Паралельна мікробіологічна ферментація та ферментативний гідроліз МБМУУ з використанням вибраних організмів
Паралельні реакції мікробіологічної ферментації та ферментативного гідролізу з використанням специфічної монокультури бактерій здійснювали в лабораторному масштабі з використанням експериментальних М5УМ (описані в прикладі 1) і згідно з методикою, описаною у прикладі 1. Умови реакції та дозування ферменту зазначені в таблиці 4.
Живі бактеріальні штами Іасіобассійш5 атуіорпіез (05М2 Ме 20533) і Ргоріопірасіегійт асідіргоріопісі (0О5МА2А Мо 20272) (О5М2, Брауншвейг, Німеччина) (зберігали при 4 "С протягом 16 годин до використання) використовували як інокулят для визначення їх впливу на конверсію сухої речовини в експериментальних М5УМ з або без додавання СТес3. Основними метаболітами, які вони продукували, були молочна кислота та пропіонова кислота, відповідно.
Концентрацію цих метаболітів визначали за допомогою процедури НРІ С (описаної в прикладі 1).
Оскільки Ргоріопірбасієегішт асіаіргоріопісі є анаеробом, то буфер, застосовуваний в реакціях, де використовували цей штам, продували газоподібним азотом і живу культуру інокулювали в реакційні пробірки усередині переносної анаеробної камери (Айтоз Вад, бідта Спетіса! СО,
Сент-Луїс, Міссурі, США), яку також продували газоподібним азотом. Реакційні пробірки з Р. ргоріопісі закривали перед перенесенням у термостат. Реакційні суміші інокулювали 1 мл або Р. ргоріопісі, або І. атуіорпіЇн5.
Результати, представлені в таблиці 4, чітко показують, що утворювалися очікувані метаболіти; при цьому пропіонову кислоту визначали в реакційних сумішах, інокульованих Р. асідіргоріопіс, тоді як у контрольних зразках, що містили експериментальні МБУМ з або без
СТес3, пропіонову кислоту не визначали. Концентрація молочної кислоти в контрольній реакційній суміші, у яку додавали тільки експериментальні М5МУУ, була майже такою ж, як і в реакційних сумішах, у які додавали тільки Г. атуіорпйи5. Утворення молочної кислоти в цій контрольній реакції приписували бактеріям, що населяли експериментальні М5МУ. Очікували, що будуть присутні деякі бактерії з оточення, оскільки окремі компоненти експериментальних відходів були тільки-но одержаними продуктами, замороженими, але без додаткової стерилізації за допомогою будь-якого способу перед підготовкою експериментальних М5МУ.
Якщо Г. атуіорпйи5 додавали разом з СТес3, то концентрація молочної кислоти фактично подвоювалася (Таблиця 4).
Позитивний вплив щодо вивільнення ОМ у надосадовій рідині після гідролізу було продемонстровано у вигляді більш високого ступеня конверсії ОМ у реакційних сумішах після додавання або І. атуіорпйи5, або Р. ргоріопісі у комбінації з СТес3 (30-33 95 підвищення в порівнянні з реакційними сумішами, у які додавали тільки СТес3).
Таблиця 4
Культури бактерій, які випробовували в лабораторному масштабі окремо або разом з ферментативним гідролізом Показані температура, рН і доза СТес3 96 мг/г Контрольні реакції з
М5УМ у буфері з або без СТес3 виконували в паралелях для оцінки фону бактеріальних
Зо метаболітів у реакції (Показані середнє значення та стандартне відхилення для 4 реакцій, за винятком контрольних М5ОМУ, реакції з якими були проведені окремо). ма Не визначено, нижче межі детектування.
Таблиця 4 . й Пропіонова Молочна
Ргоріопірасієетіит
Й 7171. 21 ма , асіобасіе бе 1
Приклад 13. Ідентифікація мікроорганізмів, що беруть участь у паралельній ферментації в прикладі 7
Зразки біорідини "ЕС12В" і оборотної води "ЕАО2" відбирали при проведенні випробування, описаного в прикладі 7 (зразки відбирали 21 березня та 22 березня). Зразки рідини заморожували в 10 95 гліцерині та зберігали при -20 "С з метою проведення аналізу 165 РДНК для ідентифікації мікроорганізмів, причому даний аналіз широко використовують для ідентифікації та філогенетичного аналізу прокаріот на основі компонента 165 малої рибосомальної субодиниці. Заморожені зразки направляли в сухому льоді в ЗАТС Віоїесп АВ,
Солна, Швеція, де проводили аналіз 165 рДНК (САТ Віоїесі). Аналіз включав наступні етапи:
екстрагування геномної ДНК, одержання бібліотеки ампліконів шляхом використання пари універсальних праймерів, що перекривають гіперваріабельні ділянки М1-М3 27Е:
АСАСТТТОАТССТООСТСАС/534К: АТТАССОСООСтТОСТОоо; довжиною 507 п.о), ПЛР- мічення адаптерами 5 РЇХ, секвенування за допомогою пристрою Сепоте Зедиепсег РІХ з одержанням числа читань на зразок 104000-160000. Одержані в результаті послідовності далі порівнювали з гомологічними послідовностями з використанням сервісу ВіазіМ у базі даних
ТОМА з Кірозота! ЮОаїаразе Рго|есі (СоІе еї аїЇ.,, 2009). База даних містить високоякісні послідовності довжиною щонайменше 1200 п.о. і таксономічно пов'язані з базою даних МСВІ.
Поточна версія (КОР випуск 10, оновлена 19 вересня 2012 року) містить послідовності 9162 бактерій і 375 архей. Результати, одержані за допомогою ВІАЗТ, фільтрували для видалення коротких і низькоякісних хітів (ідентичність послідовності 290 96, покриття при вирівнюванні 290 95).
У зразках ЕС12В-21/3, ЕС12В-22/3 і ЕАО2В 21/3, ЕАО2-22/3 усього було ідентифіковано 452, 310, 785, 594 різних бактерій.
На рівні виду цей аналіз чітко показав, що Іасіобасіїйй5 аптуїоїуїйси5, безумовно, була найбільш домінуючою бактерією, на частку якої припадало від 26 95 до 48 95 усієї детектованої мікробіоти. Мікробіота в зразку ЕС12В була подібною; причому при порівнянні даних від двох різних зразків розподіл 13 переважних бактерій (Іасіорасійш5 атуїоіуйси5 ОМ 11664,
І асторасійи5 аеїргиескії зирзр. аеїбгиескії, Г астобасіїйи5 атуіомогив, І асіорасіив аеїргиескії зир5р іпдісив, І асіобасіив вітіїв УСМ 2765, І асіобасіїи5 аеїбгиескії вирер. І асіїї ОМ 20072, Васйив5 соадшіапв, І асіобасіїи5 патвівєгі, І асіобасійив5 рагариснпегі, І асіобасіїи5 ріапіагит, І асіобасйив
Бргемів, І асіорасійи5 ропії5, | асіобасійи5 Бисппегі) був практично однаковим.
Зразки ЕАО2 були подібні ЕС12В, незважаючи на те, що Її. атуїоїуйсиє була менш домінуючою. Розподіл 13 переважних бактерій (ІГасіобрасійй5 атуїіоїуйсиє О5М 11664,
І асторасійи5 аеїргиескії зибзр ае!ргиескії, І асіобасійи5 атуіомогив, І асіюбасійив5 аеІрпескії зирзгр.
Іасі ОМ 20072, Іасіобасійй5 вітіїв УСМ 2765, І асіюбрасійи5 авеєїБгиескКії 5!,ирер. іпаісив,
І астобасійи5 рагаріапіагит, МУеївзеМйа дпапепвів, Іасіобасіїйв5 оїЇїдоїенптепіапе Ма 22743,
МУєіззеМйа бБепіпеп5і5, І еисоповзіос дазісотйашт ІМС 18811, МУвєївзейа зоїЇ, Іасюбасйив5 рагаріапіагит) був також подібним, за винятком присутності або за винятком наявності
Зо Реєндотопав ехігетаийзвігайз 14-3 серед 13 переважних видів бактерій. Цю Р5еидотопав, виявлену в ЕАО2 (21/3), раніше виділили зі ставка тимчасового перетримування в Антарктиці, і вона здатна продукувати полігідроксіалканоат (РНА) як з октаноату, так і із глюкози (І оре? еї аї. 2009; Ттіреїї еї а!., 2012).
Порівняння результатів на рівні роду показало, що І асіорасіїїш5 становила 56-94 95 бактерій, ідентифікованих у зразку. Крім того, розподіл бактерій роду був у високому ступені подібним між даними, одержаними від двох зразків ЕС12В і ЕАО2. Примітно те, що в зразках ЕАО2 роди
МУєізеІПа, І еисоповзіос і Рзейдотопах5 були присутні в значній мірі (1,7-22 95), хоча в зразку
ЕС1Т2В (50,1 95) вони були виявлені лише у вигляді меншої складової. Обидва з УУеізеїіа і
Ї еисоповіос належать до порядку І асіобасіЇПа|ев, так само як і І асіобасійи5.
Переважні патогенні бактерії в зразках ЕС12В і ЕАО2, відібраних при проведенні випробування, описаного в прикладі 7, становили 0,281-0,539 95 і 0,522-0,592 95, відповідно, від загального числа ідентифікованих бактерій. Переважними патогенними бактеріями в зразках
ЕС12В були Аеготопаз 5рр., ВасіПи5 сегеив, Вгисейа 5р., Сйгобасівг зрр., Сіозійаішт репгтгідепв,
КіІерзів!5 5р., Ргоївеи5 5р., Ргомідепсіа 5р., ЗаітопейМйа в5рр., Зеїтайа 5р., зпідеМає 5рр. і еарпуіососси5 аигеи5. В ЕС12В і ЕАО2, описаних у прикладі 7, не виявляли патогенні бактерії, що утворюють спори. Загальне число патогенних бактерій, ідентифікованих як в ЕС12В, так і в
ЕАО2, згодом знижувалося, фактично зменшуючись у кількості від загального числа бактерій в
ЕС128В за один день.
В Оерогієз еї аї. (1998) був зроблений огляд відомих патогенних мікроорганізмів, присутніх в
М5УУ. Патогенні мікроорганізми, присутні в М5УМ, описаних у прикладах 3, 5 і 7, показані в таблиці 5 (Оєрогієз еї аї. (1998) і аналіз 165 рДНК). Крім патогенних мікроорганізмів, описаних в реропез еї аї. (1998), як Ргоїеца 5р., так і Ргомідепсіа 5р. були виявлені в зразках ЕС12В і в
ЕАО2, відібраних при випробуванні, описаному в прикладі 7. У той час як 5ігеріососси5 5рр. були єдиними патогенними бактеріями, присутніми в біорідині в прикладі 5, у даному прикладі вони не були присутні. Це вказує на те, що в ЕС12В і ЕАО2 із прикладу 7 присутнім є інше угруповання бактерій, яке може бути результатом конкуренції між бактеріями за живильні речовини і незначного зниження температури під час процесу, що буде сприяти росту іншого угруповання бактерій.
Таблиця 5. Огляд патогенних мікроорганізмів, присутніх у прикладах 3, 5 і 7
Зо
«Організми Темперитурат Е Дівпазон вне Мініма- Бівень- Джерелає Песулания на:
Бактерів?; ОдІн- Макси- Баківок- Необхі- /Д- Мінсо Мак лЛЕБИЕ: бізбезпекна Зустрічаю. декументоде 2 мальна? мальна: циляиза дНнЙ: зна- рве: ТаСЯ наведенгумови: (вля- ча: «енне активно- МУух растух растую міншо (мі ІЕВОдЕ вх КбА
Бопбавй-
Відет 1971, бріоко-есві., (Шерадези 3005, Ваше?
Зекошовсітро кт ї53 Ве д бр д а бе 1-2 есгі 199852 зіу1чв4е (Юеродез, Тапсіюцшеесті.
Басбіттекентї За Ода з5е ре п ча 0 вДде ма їх егаг ізевюе 20015 іПероне:,:
ЯВунсецоа ро л ро « щ к щ р. ло її ера! 1998513 ш
Уепіреалі-
Тхвраи 1917
БІБИй вай.
Бпзджає ії, (ЮШеранези Соіхтуна сі віс
Сттобастюют ох : ЕКжс т з |з бла їла 000 єіл993у 2003е:
Сбібжінйй ит (Бероцпез, регтінвєнхо їта 0 зів Т3х ж м Ще бле їх егай ізевю зву Т Міра (Бероцпез,
Ківбтійа ня БУ 2 Бе Ес пи | «Зк 5 2 1-22 егаі і995Е 2 івхи ТМ 1981, (Беранезх" Брішка ев.
Яапномей тро їж 3їх ЕЕ вих 2 як ве да 2-34 есві 1993: 200бє (Бероцпез, Брішкз ера,
Зеттапалро 2 2 Зо щд 155 щд 2 23 їд егай'ізовю зо (Бероцпез, Брішкз ера,
ЗБідерлестрвро їта 483 де щ із їх ще - з-2 егай'ізовю зо біпрауіосогеня іПероне:,: снкенхз 2 БИ щ п щ їк ЯЗ б. да себя! Т9ОЕХ ву, МО 1881
Хбертогессив: с Перонмех,: ТапвсівА Бо зро « щ бхд ха ш 2 « щш зе еп 1995 19592
Ідентифікація штамів і депонування в 05М2
Зразки ЕАО?2 від 21 березня та 22 березня, одержані в результаті випробування, описаного в прикладі 7, направляли для посіву в Центр вивчення біологічної стійкості Ново Нордиск (центр
НН) (Хорсхольм, Данія) з метою ідентифікації та одержання монокультур виділених бактерій.
Після доставки в центр ММ зразки інкубували протягом ночі при 50 "С, потім висівали на різні чашки (ЗМ17, триптиказо-соєвий бульйон і м'ясний екстракт (агар СМ17:48,25 г/л агару т!17, після 20 хв. автоклавування додавали глюкозу до кінцевої концентрації 0,5 956, триптиказо- соєвий агар: 30 г/л триптиказо-соєвий бульйон, 15 г/л агару, м'ясний бульйон (Зіагеп5 бЗегит
Іпоійше, Копенгаген, Данія) додавали 15 г/л агарози) і вирощували в аеробних умовах при 50 "С.
Через один день чашки перевіряли візуально та вибрані колонії пересівали штрихом на відповідні чашки, а потім направляли в О5МА для ідентифікації.
Наступні штами, виділені з оборотної води з ЕАО2, були депоновані в депозитарії для патентних процедур ОМ52, О5МА, Брауншвейг, Німеччина.
Ідентифіковані зразки
Ідентифікаційний номер зразка: 13-349 (Васійй5 5агепві5), одержаний з (ЕАО2-21/3), О5М 27312.
Ідентифікаційний номер зразка: 13-352 (Вгемірасіїйй5 Бгемі5), одержаний з (ЕАО2-22/3), ОМ 27314.
Ідентифікаційний номер зразка: 13-353 (Васійи5 зиБ5 5р. зибБій5), одержаний з (ЕАО2-22/3),
ОМ 27315.
Ідентифікаційний номер зразка: 13-355 (ВасШи5 Іспепітогтів), одержаний з (ЕАО2-21/3), О5М 27316.
Ідентифікаційний номер зразка: 13-357 (Асііпотусе5 Бомі5), одержаний з (ЕАО2-22/3), ОБМ 27317.
Неїдентифіковані зразки
Ідентифікаційний номер зразка: 13-351, одержаний з (ЕАО2-22/3), ОМ 27313.
Ідентифікаційний номер зразка: 13-362А, одержаний з (ЕАО2-22/3), ОМ 27318.
Зо Ідентифікаційний номер зразка: 13-365, одержаний з (ЕАО2-22/3), ОМ 27319.
Ідентифікаційний номер зразка: 13-367, одержаний з (ЕАО2-22/3), ОМ 27320.
Посилання
Со!е, 9. В., Уапо, О., Сагдепав, Е., Рі5иП, у., СНаї, В., Раттів, В. у., 5 Тієдіє, у. М. (2009). Тне
Вібозотаї! Оагаразе Ргоіесії: ітргомейд аідптепів апа пему/ ї00і5 Тог "ЯМА апаїувів. Мисівїс асідб гезеагси, 37 (5иррі 1), (0141-0145).
САТС Віоїесй 5ирропгіпа таїегіа!. Оеєїїпіпд їте Містобіа! Сотровійоп ої Епмігоптепіа! Затріев Овіпуд Мехі Сепегайоп бедиепсіпд. Мегвіоп 1.
Тиівбеїїї, Р. М., Інвітап, І. У. К., Саюпе, М. М., рі Мапіпо, С., Кеуаїє, 5., Мепаел, В. 5., І бре,
М. І. (2012). депоте бедиеєпсе ої Те Роіупуагохубшугаїеє Ргодисег Рзендотопах ехігтетаийвзігаїїв5, а Нідніу біге55-Вевівіапі Апіагсіїс Васієтіит. ). Васіегіо!. 194(9):2381.
Мапсу І. Горе, М. І., Рейціпагі, У. М., 5іаскебгапаї, Е., Раша М. Ттгібеїї, Р. М., Роцег, М.,
Зіеіприспе!ї, А., Мепаел, В. 5. (2009). Реепдотопав5 ехігетаивзігаїйв в5р. пому., а Роїу(3-
Нуагохуршугаїє) Ргодисег Ізоїаїей їтот ап Апіагсіїс Епмігоптепі. Сиг. Містобріо!. 59(5):514-519.
Варіанти здійснення та приклади є тільки ілюстративними та не призначені для обмеження об'єму формули винаходу.
ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
«110» Ренесаєнс А/5 «120» Способи та композиції для одержання біометану -130» 49906РСОг2 -16052 -1705» ВІЗ5АР 1.2 «2105 1 «2115 20 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «222» 1...20 «223» /мол тип-"нетипована ДНК" /примітка-"праймер 27Е для гіперваріабельної ділянки м! 165 рДНнК"
Зо /організм-"Штучна послідовність" «4005 1 адчадшоаї ссіддсісад 20 -21052 «211517 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «221» джерело «222» 1...17 «223» /мол тип-"нетипована ДНК" /примітка-"праймер 534К для гіперваріабельної ділянки уЗ 165 рДдНнкК" /організм-"Штучна послідовність" «40052 ацассесее сівсіве 17

Claims (10)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Спосіб переробки сортованих твердих побутових відходів (МОУУ) або несортованих МОМУ, який включає етапи: () ферментативного гідролізу частин сортованих МЗУМ або несортованих М5МУ, які біологічно розкладаються, із застосуванням речовини з целюлазною активністю паралельно з мікробіологічною ферментацією у температурному діапазоні 35-75 "С, причому зазначений ферментативний гідроліз приводить у результаті до зрідження частин відходів, які біологічно розкладаються, і накопичення мікробних метаболітів; з наступним (і) відокремленням зріджених частин відходів, які біологічно розкладаються, від твердих речовин, які біологічно не розкладаються, з отриманням біорідини, у якій щонайменше 40 95 за масою від вмісту безводних речовин знаходяться у вигляді розчинених летких речовин, при цьому розчинені леткі речовини складають щонайменше 25 95 за масою у вигляді будь-якої комбінації з ацетату, бутирату, етанолу, форміату, лактату та/або пропіонату; з наступним
(ії) анаеробним зброджуванням біорідини для одержання біометану, причому лактат присутній у більш високій концентрації за масою у порівнянні з будь-якою іншою окремою розчиненою леткою речовиною, вибраною з групи, що складається з: ацетату, бутирату, етанолу, форміату та/або пропіонату; при цьому паралельна мікробіологічна ферментація включає інокуляцію М5МУ із застосуванням одного або декількох видів з групи, що включає молочнокислі бактерії, бактерії, що продукують ацетат, бактерії, що продукують пропіонат, бактерії, що продукують бутират, або бактерії, що зустрічаються в МОМУ в природних умовах, причому один або декілька видів бактерій, що використовують для інокуляції МОМУ, не продукують етанол як первинний продукт зазначеної паралельної ферментації.
2. Спосіб за п. 1, де відокремлення зріджених частин відходів, які біологічно розкладаються, від твердих речовин, які біологічно не розкладаються, забезпечують за допомогою щонайменше двох технологічних операцій розділення, достатніх для одержання біорідини, яка містить щонайменше 0,10 кг летких речовин на кг перероблених М5ОМУ.
3. Спосіб за п. 1 або за п. 2, де інокуляцію здійснюють шляхом рециркуляції промивних вод або технологічних розчинів, використовуваних для вилучення залишкового органічного матеріалу з твердих речовин, які не розкладаються.
4. Спосіб за будь-яким з попередніх пунктів, де вміст безводних речовин в твердих побутових відходах становить від 10 до 4595.
5. Спосіб за будь-яким з попередніх пунктів, де інокуляцію здійснюють перед або паралельно з додаванням речовин з ферментативною активністю або з додаванням мікроорганізмів, що проявляють позаклітинну целюлазну активність.
6. Спосіб за будь-яким з попередніх пунктів, де речовину з целюлазною активністю додають (і) шляхом інокуляції вибраним мікроорганізмом, що проявляє позаклітинну целюлазну активність, та/або (ії) у вигляді препарату на основі виділених целюлаз.
7. Спосіб за будь-яким з попередніх пунктів, де мікробіологічну ферментацію здійснюють шляхом інокуляції із застосуванням одного або декількох видів молочнокислих бактерій.
8. Спосіб за будь-яким з попередніх пунктів, де ферментативний гідроліз і мікробіологічну ферментацію здійснюють у температурному діапазоні 45-50 70. Зо
9. Спосіб за будь-яким з попередніх пунктів, де паралельні ферментативний гідроліз та мікробіологічну ферментацію здійснюють при рН менше 6,0.
10. Спосіб за будь-яким з попередніх пунктів, де щонайменше 40 95 за масою розчинених летких речовин біорідини містять лактат та/або біорідина має вміст розчиненого метану при 25 "С менше 15 мг/л. 5 нн я рон - і В : Е ш ! обо на З З маш ж В І МНН. поккнкннн т ше | | ! НЕ фон : пннмнве повин у шик. Ко Контрольні МУ стесз ЕСТ2В 0 сСтесаевсі128 Чнгеви Ї. Конверсб жхої вечонннк, вножженеї ж ВНглядЬ СУХОЇ реовнив, поержано в наосалонні рілен У виг ЛІ загелянОогоО вМмієту сухої речовини є відксоткех ря пвралеленомх бсурзетєхтнноме хурєютізй же вікрбнвогічний ферментаєві. стимуУлЛЬОВАНИХ ЖІЛЕХОМ ІНОКУЛЯЦІЇ СНОрРіДННИ ССІЗВ і пряклалу 5 зх і ! Їх ре Н кі Го зт ОА ЕЕ ! о Ка Її влекіщу ко : І обл шо як п 55 1 щеуюавна кінімієть ПСдяк.ся і шо ТО жодвема крезки х : ще с Ук с ТИЕЧНИН ВИ ВЖК. МКЯЯНМ г ИН: В: т - ШЕ : о 5 ШЕ ві - КО ОВ САНЯ ! : с З я ВН. Ве :
з 4. ше ЗК СК іа Вк Жанні МЕЖ сте екс херачвня ЗчЧЕтра с: Бектерійльні ометвбювтн, ев ЖНВЕ 5 мафвловик имнІ пі зіва ель «ера етан) РЕЗУНАНЕВ а ферманти, інсеконаннх мств додавання зви З прикладе а й ЕКО ТОК ке щу ване с о: А х ж пока МК. М 5 КОМ ХХ ЗХ ї Сх ХУ ЗУ ЩЕ ОО Й : й Ка ще хе Є у ія
Ж. ух Фігура 3. Графічне представлення випробувального реактора ВЕпезсіспсе
Пра : я - х з свіже кове ВЛУММ сен Реактор пемірнимо ЖК и сж вода Ветатнвк ЯКЕ жо. накнівниняМ Ез нини нини с використав уЄться ренох, ще Тепловаміаннк Х ' ЕЕ гегоссссссосссвгсесоКесссгосе пе Перменти сення Бевющні не зрідження | до Кислота нева К ш Ї І ; в
5. : Ко; іді Дкомахеурйя он Баністнчне розділення з Прев Іі 1 ху її НН іх ді ц рив уро ниви ТИ зттннетноенюстсстосоу ЇЙКУВ есеї ГЕркевВ ЕН СК а миши Зинк; й А ШИ М | ї " узкщО використовується дю КІН мія яті ази | п КЗ | свішща вода і | Рош фер ї : Й пваходк Ї Н х Ії : х і ! ре Й й Тірев У У, ддккнннннакжккннкнркккнннннанкннн Езорідниа і і 5 Кй Збматерійх шу ! «пуджачня Ой Фигурв Я. Схематичне зображення девсвстраціни устезовки ! «в - ве М: г : : Ж ЕК ! Кз й : Я для. іо ОБ : : ж Н ! т хх ее ІЗ : ш : : Е ОВ ' х де пох па і : : о 5 щю 150 МВ: : Години : Фігура 5. Поглинання крані них речовни т Щорілнні в різні дперізди часу, виражене в кг УК на хг перезюбдених МАУ
5: КУ рОБОФеОХ : Ж: і жов ше пи шк пишний й ння : т р. зх Ї ї шої Ж ще 4 - ЕЕ : й ай ше ЕЕ НІ МЖК Кі Ж де С ; і їх «т : п : о Е : й хе . во Щ- яд! Щ ПН: о лю озчнЕені Мегаболітн ря "е І Н - к : : В х са й :К о хом св всяо свжекнВ за Я Н ЕСЯ Я ї ОВАКЕя Ге За ви зе дк Часто. «Фігура 6. Бактеріальні метвбслітн, виржшжені ж внгляді відсотка розчинених У т бїнорілня). а також у вигляді чнона йеребних бактерій У різні моменти часу в експерименті : с . х о ВОВНИ кока Я : Ж ! ! й ОХ й і СХ У відс щей. Н з ОХ КК КК : і ОМ ПИКА кові мо МОЯ : ТО а о Я і ОХ СОМ Н : с М і т 55 а : і : Ох ОО і
С . А кіненвк ни : ! й аква І колах І КБ С фежі : вина НН пса ем Фігура 7. Рузаодія видів бахтерій, ідсятномковання у пк лині в прикладу З
ЗО0 годи ЗИ В ЕК ві ВЦЮвУХ ДИ З АСМСЮОЮІ СУМНЕ ШО КК, дк Веіижнях ен с о : еожевцт вра с о. ж сних Мебайікунвеах М М ому ак Ме с Я СКК СВК У МОХ и в роки ко ша. ОВУ хіекаквалях ва ПОМ ЗЕ а . хх х ВажННІМКт пеорхаюрдето ВА шо. | «нав гучутечка Й дес М одживукт ех з туге і КЕ нут кі зе рі тку стві Ффигтра ХХ, Розподіл 13 переважних бактерій в ЕСТОВ, зразки якої відбнрави під час нииробування, списвного в пенкла я М годин, АВ, вихіз на нмючий режим та знаження вироблення їх Мі тгод. АБ, вихміа на робочий : пк режвю та змиження ввуюєлення
; . сл: АКаначевия що ших ! нка ние Вот оо Ох пе ; ТЕ Во дак МК кмин вносимо Демо ляко кн чий лк жк жк Весно че оо шав| Гери пока мн ве екон нн пеня шо Пере й хоча і ; а З М лох р зжкназі а ! ро в 2. Рівень щі о ЕН ско хо у і х ! х В; я зеройлення
МЕ. ше ке шк ї Зх і У ;
Що. і ї ! З. стання м ес . і я . Кн . ее тачка тванані і і ! З ооо со ооо ою осо ооо» Позерекная пЕ Ж ЩУ с: Х5 М» прос» ХЗ Є: «З «5 дО С ЩО ЩО с 45») ХУ до с 55 КО сх м дивини ВВЕ М ловнхівн о СЕ ан в а І а з и ВИ Уж ВО КО В ОО В В МЕ М В З ВЗ ЕСЕ ФО Ух и Й Зб сх о А до фі УЖ Ух до ші У ФУ У У МК ОА ФА й хв ОД за:5сосвооовиооеискоиоОвОох зипсппзпсшносмоокоовозови «инамниниикашЕниакиминииияВАи Куггясвує ї В ії 5 тм стнже Чу хз. х о пули те їі к- ше ФнжраУ, Вихід нз робочий режим та зниження вироблення йометану з викорнеувиням боріднин із прикладу 5 їМерізння з внезким вмістом ламтату, Коальстовре, вихід на Я ребечий режня ка звискени виржйзення : 7 : Герда З янсукутх юмісуєх лактату» : : Жтульстеєюь ЗИХіх м росЗНИ раз тах Ще ЗАКажеНОї МТВ : МЕ: й б : і Гіружнечевея : І ї : : і Фе БОЖЕ шт Е но Ж: що М п пили п В перо точки : І не Й З З - носінні нон нн і: о жи овен М пожеж «елададчі : ж КО ШЕ пе що ри щ; : ' ше ! Ї 2. Вівень ! : І ї Е 1 мя : р ї ве стійкого : КЗ 0-3 : ПЕ чі і мову : я хЕ : : ї7 Ех: і в Кк з ! зі : зх бстиних : ві Е з лочкВІННЯЯ хи Є В І ох . рих Н ; : он, Зх ше 4. Пеоверневня : Шана І пива - що а І шву щи ВОВНИ ВОК КУ УК м У У м ек де де Меси я ЕВЕБОМАВОВООВВІУКНОВОВ МАО ! о ВЕК В В в В В у В цк о Ко З Фигури 10. Хараютернстика оєвихОлу она вобочзий режим» 0 зниження» сеекозузує ДО ду: у іі тву тя ; : ча: ; кт: вироблення (ометауу з біврішнни «з високим вмістом лактате» із прикладу З Кавзуньня пізренння З неви нає вх екам звати, Хуювстовро, нихід ни рофечий дека ЩА тазниження ниреблення й МКК зн Кацтурольня пірідннх з ннеким аміно деку, : Хоазьстеро, знуія на робочна режим та зниження Ї вда: тн ВВДКНКВЕННЯ : : Тюзначення : : і ! : є : : і : Й ї К.Перння точка : і : і тожазІ 19 : з І ! КЗ Я ї й і З. Віваць я БЕ ? і стівНевио фрі А мовам фочю шк Ж сах ун ДЕККи ж Ко ооо щи ян ню вно ть ярок Ше кого з ек ІН з а виренненвя паз : КЗ АН Ши й й у єї шо к Ел і і З ; і Б в! З. Зетвинх де З ту ' тачка поляні ЕЕ Е Я Е : й 1 4 т В : в ен ї де нихівниохо ! Й е х Порно « : яко ТИХ гітару мімімнм нм мімімімімімисує ЮНЙНЯ : ши ен 100 ЖК мм КК У Кеті оок икутаоК : шо ВОК МО КО ОК С во С мох МИМО о и ОК ОК р Ди НИ КВ І : . Б патини Ффиури 11. Характернстика «виходу она робочий орожнме» і зниження» винросолення піюметану з ОНЯчлЛИиНи «з низьким яМмістОоМм лактати» із не ладе я
UAA201500139A 2012-06-12 2013-06-12 Спосіб переробки твердих побутових відходів для одержання біометану UA119635C2 (uk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261658419P 2012-06-12 2012-06-12
PCT/DK2013/050194 WO2013185778A1 (en) 2012-06-12 2013-06-12 Methods and compositions for biomethane production.

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA119635C2 true UA119635C2 (uk) 2019-07-25

Family

ID=48670314

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201500139A UA119635C2 (uk) 2012-06-12 2013-06-12 Спосіб переробки твердих побутових відходів для одержання біометану

Country Status (24)

Country Link
US (3) US20150167022A1 (uk)
EP (1) EP2859106A1 (uk)
JP (1) JP6120955B2 (uk)
KR (2) KR20150028812A (uk)
CN (3) CN108949838A (uk)
AP (1) AP2014008108A0 (uk)
AU (1) AU2013275760B2 (uk)
BR (1) BR112015030765B1 (uk)
CA (3) CA2874549C (uk)
CL (1) CL2014003386A1 (uk)
DK (1) DK3008193T3 (uk)
EA (1) EA033645B1 (uk)
ES (1) ES2683828T3 (uk)
HU (1) HUE040271T2 (uk)
IL (1) IL236158A0 (uk)
IN (1) IN2014DN10063A (uk)
MX (2) MX2014015231A (uk)
MY (1) MY180118A (uk)
NZ (1) NZ702906A (uk)
PH (1) PH12014502712B1 (uk)
SG (1) SG11201407902YA (uk)
TN (1) TN2014000481A1 (uk)
UA (1) UA119635C2 (uk)
WO (2) WO2013185778A1 (uk)

Families Citing this family (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014198274A1 (en) * 2013-06-12 2014-12-18 Renescience A/S Methods of processing municipal solid waste (msw) using microbial hydrolysis and fermentation
KR101640303B1 (ko) * 2014-04-24 2016-07-15 경성대학교 산학협력단 유산균을 이용한 매몰된 가축사체 분해방법
DE102014108233B4 (de) * 2014-06-12 2018-11-08 Petra Rabe Verfahren zur Initialisierung des Fermentationsprozesses in Biogasanlagen
MY189867A (en) 2014-08-28 2022-03-15 Renescience As Solubilization of msw with blend enzymes
CN104178526B (zh) * 2014-09-11 2016-09-07 北京科技大学 一种两相干式混合厌氧发酵产沼气的方法
CN105802871B (zh) * 2014-12-30 2021-06-18 中国科学院分子植物科学卓越创新中心 乳酸菌群及其在秸秆饲料制备中的应用
US11613484B2 (en) * 2015-05-29 2023-03-28 Anaergia Inc. Organics recovery from dry fraction
CN108136452A (zh) * 2015-11-02 2018-06-08 雷内科学有限公司 用混合酶溶解城市固体废物
CN106121809A (zh) * 2016-06-24 2016-11-16 国网安徽省电力公司黄山供电公司 一种基于生物质发电的电网系统发电站
CN106396325A (zh) * 2016-11-14 2017-02-15 安徽新季环保科技有限公司 一种消化污泥的微生物菌剂
CN107176695A (zh) * 2017-06-30 2017-09-19 常州市协旺纺织品有限公司 一种利用微生物改良养殖水质的方法
EP3524699B1 (en) * 2018-02-13 2021-05-19 Renescience A/S Building materials comprising digestate
WO2019201765A1 (en) 2018-04-20 2019-10-24 Renescience A/S Method for determining chemical compounds in waste
EP3569657A1 (en) 2018-06-26 2019-11-20 Renescience A/S Asphalt mixture composition comprising digestate additive
AU2020322315A1 (en) 2019-07-29 2022-03-10 Suez International Process for anaerobic digestion of carbonaceous material
CN111271034A (zh) * 2020-01-19 2020-06-12 山西大学 一种低级脂肪醇诱导提高生物煤层气产量的方法
US20230405653A1 (en) 2020-11-04 2023-12-21 Renescience A/S Method for sanitizing waste
WO2022096406A1 (en) 2020-11-04 2022-05-12 Renescience A/S Method for enzymatic and/or microbial processing of waste comprising recirculation of process water
CN114606093B (zh) * 2022-04-07 2023-05-05 九江礼涞生物科技有限公司 一种餐厨废弃物高温厌氧发酵装置
CN115287215A (zh) * 2022-05-30 2022-11-04 内蒙古农业大学 一种秸秆降解菌hxb11及其应用
WO2024039857A1 (en) * 2022-08-18 2024-02-22 The Trustees Of Dartmouth College Cascade continuous fermentation of cellulosic biomass via consolidated bioprocessing
CN115305227B (zh) * 2022-09-22 2023-07-21 郑州轻工业大学 一株降解废弃烟叶并产氢的霍氏肠杆菌zj-21及其应用
WO2024068556A1 (en) 2022-09-26 2024-04-04 Renescience A/S A method for processing fines
CN116173075A (zh) * 2022-10-17 2023-05-30 西北农林科技大学 一种基于生孢梭菌改善认知功能的合生元组合物及其应用

Family Cites Families (45)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS609879B2 (ja) * 1982-02-03 1985-03-13 工業技術院長 固形廃棄物の処理方法
US5190226A (en) 1991-04-29 1993-03-02 Holloway Clifford C Apparatus and method for separation, recovery, and recycling municipal solid waste and the like
WO1995000313A1 (en) 1991-12-20 1995-01-05 Scott & Fyfe Limited A method of producing a polyolefinic film by a water quench process
US5427650A (en) 1992-06-25 1995-06-27 Holloway; Clifford C. Apparatus and method for preparation for separation, recovery, and recycling of municipal solid waste and the like
US5465847A (en) 1993-01-29 1995-11-14 Gilmore; Larry J. Refuse material recovery system
CA2237173C (en) 1995-12-01 2002-12-10 Eastern Power Limited Apparatus and method for use in waste recycling and conversion
FR2780857B1 (fr) 1998-07-07 2006-09-22 Novartis Ag Agent pesticide
US6397492B1 (en) 1999-05-27 2002-06-04 Msw Patents, Inc. Apparatus and method for processing municipal solid waste
SE515649C2 (sv) 2000-01-11 2001-09-17 Franz Wroblewski Bearbetningsverktyg för sorteringsmaskiner av det slag som är avsedda för bearbetning av gods, i synnerhet sopor
US20040041301A1 (en) 2002-08-30 2004-03-04 Bouldin Floyd E. Method for transforming municipal solid waste into useful material
US8313921B2 (en) 2003-03-24 2012-11-20 Ch2M Hill, Inc. Reclaimable hybrid bioreactor
US8877992B2 (en) 2003-03-28 2014-11-04 Ab-Cwt Llc Methods and apparatus for converting waste materials into fuels and other useful products
US6962255B2 (en) 2003-05-13 2005-11-08 Steven Tse Apparatus and method of separating medium-sized materials from garbage for collection
EP1646449A4 (en) 2003-05-13 2008-03-26 Wst Internat Holdings Ltd APPARATUS AND METHOD FOR THE SEPARATION FOR RECOVERY OF SMALL WASTE AND ORGANIC MATERIAL CONTAINED IN HOUSEHOLD GARBAGE
US20050166812A1 (en) 2003-11-13 2005-08-04 Horizon Fuel And Financial Management, Llp MSW processing vessel
ITMI20040803A1 (it) 2004-04-23 2004-07-23 Sist Ecodeco S P A Metodo per la produzione di energia naturale dai rifiuti
BE1016178A3 (fr) * 2004-09-06 2006-04-04 Debailleul Gerard Procede et installation pour fabriquer du carburant vert economiquement.
MX2007006260A (es) 2004-11-29 2008-01-14 Elsam Engineering As Hidrolisis enzimatica de biomasas que tienen un contenido elevado de materia seca (dm).
WO2006110902A1 (en) * 2005-04-12 2006-10-19 E. I. Du Pont De Nemours And Company System and process for biomass treatment
DE602006012536D1 (de) * 2005-09-30 2010-04-08 Dong Energy Generation As Ohne druck erfolgende vorbehandlung, enzymatische hydrolyse und fermentation von abfallfraktionen
US7955839B2 (en) 2006-06-23 2011-06-07 Recology Inc. Systems and methods for converting organic waste materials into useful products
TW200918192A (en) 2007-01-05 2009-05-01 Sterecycle Ltd Process and apparatus for waste treatment
JP4028588B2 (ja) * 2007-04-27 2007-12-26 政弘 井筒 リグノセルロース系バイオマスの利用方法
KR20100031526A (ko) * 2007-06-27 2010-03-22 노보자임스 에이/에스 발효 산물의 제조 방법
US7819976B2 (en) * 2007-08-22 2010-10-26 E. I. Du Pont De Nemours And Company Biomass treatment method
GB0801787D0 (en) 2008-01-31 2008-03-05 Reclaim Resources Ltd Apparatus and method for treating waste
WO2009100042A2 (en) * 2008-02-05 2009-08-13 Syngenta Participations Ag Systems and processes for producting biofuels from biomass
CN101544990A (zh) * 2008-03-25 2009-09-30 中国科学技术大学 一种利用含有木质纤维素的生物质发酵生产气体燃料及副产纤维素酶的方法
GB2460834A (en) 2008-06-09 2009-12-16 Adam Elliston Converting biowaste into useful commercial products
BRPI0916598A2 (pt) * 2008-07-28 2017-05-30 Qteros Inc métodos e composições para aumentar a produção de produtos em micro-organismos
CN101337838B (zh) * 2008-08-11 2012-02-22 鄂尔多斯市东胜区传祥垃圾处理有限责任公司 有机固体废弃物联合厌氧发酵方法
WO2010019935A2 (en) * 2008-08-15 2010-02-18 Brijen Biotech, Llc Refinery process to produce biofuels and bioenergy products from home and municipal solid waste
JP5443721B2 (ja) 2008-09-16 2014-03-19 シャープ株式会社 冷蔵庫
WO2010042842A2 (en) * 2008-10-09 2010-04-15 Eudes De Crecy A method of producing fatty acids for biofuel, biodiesel, and other valuable chemicals
DE102009009985A1 (de) * 2009-02-23 2010-08-26 Envio Biogas Beteiligungs Gmbh Verfahren zur Aufkonzentration von Mikroorganismen in wässrigen Substraten
US20110008865A1 (en) 2009-06-16 2011-01-13 Visiam, Llc Integrated waste/heat recycle system
WO2011002824A1 (en) * 2009-06-29 2011-01-06 Qteros, Inc. Pretreatment of biomass
EP2477747B1 (en) 2009-09-15 2019-03-20 Renescience A/S Enzymatic treatment of household waste
DE102010004081C5 (de) 2010-01-06 2016-11-03 Benteler Automobiltechnik Gmbh Verfahren zum Warmformen und Härten einer Platine
GB201001375D0 (en) 2010-01-28 2010-03-17 Aerothermal Group Plc Apparatus and process for treating municipal solid waste
WO2012003379A1 (en) * 2010-06-30 2012-01-05 Novozymes A/S Polypeptides having beta-glucosidase activity and polynucleotides encoding same
CN101914576B (zh) * 2010-07-16 2012-07-18 华南农业大学 一种利用造纸污泥与味精废液混合发酵产乙醇和甲烷的方法
CN102199630B (zh) * 2011-04-15 2014-06-04 上海富诚环保科技有限公司 一种厌氧干发酵产沼气的方法及其使用的系统
US9162231B2 (en) 2011-06-03 2015-10-20 Accordant Energy, Llc Systems and methods for producing engineered fuel feed stocks from waste material
WO2014198274A1 (en) * 2013-06-12 2014-12-18 Renescience A/S Methods of processing municipal solid waste (msw) using microbial hydrolysis and fermentation

Also Published As

Publication number Publication date
WO2013185777A4 (en) 2014-02-06
JP2015521533A (ja) 2015-07-30
KR20150028812A (ko) 2015-03-16
NZ702906A (en) 2017-09-29
TN2014000481A1 (en) 2016-03-30
CA3095401A1 (en) 2013-12-19
BR112015030765B1 (pt) 2021-08-03
AU2013275760B2 (en) 2017-08-31
EP2859106A1 (en) 2015-04-15
DK3008193T3 (en) 2018-09-03
IL236158A0 (en) 2015-01-29
MY180118A (en) 2020-11-23
CA2874549C (en) 2020-12-22
EA033645B1 (ru) 2019-11-12
EA201590010A1 (ru) 2015-08-31
WO2013185777A1 (en) 2013-12-19
CN113403344A (zh) 2021-09-17
MX2014015231A (es) 2015-04-10
CA3095401C (en) 2023-01-31
PH12014502712A1 (en) 2015-02-02
CA3182785A1 (en) 2013-12-19
IN2014DN10063A (uk) 2015-08-14
CA2874549A1 (en) 2013-12-19
JP6120955B2 (ja) 2017-04-26
WO2013185778A4 (en) 2014-01-30
US20150167022A1 (en) 2015-06-18
US20190375664A1 (en) 2019-12-12
HUE040271T2 (hu) 2019-02-28
WO2013185778A1 (en) 2013-12-19
MX2021006422A (es) 2021-06-30
US20210130852A1 (en) 2021-05-06
KR102069460B1 (ko) 2020-01-22
PH12014502712B1 (en) 2015-02-02
BR112015030765A2 (pt) 2017-07-25
ES2683828T3 (es) 2018-09-28
AP2014008108A0 (en) 2014-12-31
WO2013185778A9 (en) 2014-03-20
CL2014003386A1 (es) 2015-07-31
CN108949838A (zh) 2018-12-07
AU2013275760A1 (en) 2015-01-22
KR20180064546A (ko) 2018-06-14
CN104769118A (zh) 2015-07-08
SG11201407902YA (en) 2014-12-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA119635C2 (uk) Спосіб переробки твердих побутових відходів для одержання біометану
Rouches et al. White-Rot Fungi pretreatment of lignocellulosic biomass for anaerobic digestion: Impact of glucose supplementation
US10358370B2 (en) Methods of processing municipal solid waste (MSW) using microbial hydrolysis and fermentation
Schimpf et al. Industrial by-products from white-rot fungi production. Part II: Application in anaerobic digestion for enzymatic treatment of hay and straw
Wongfaed et al. Taxonomic and enzymatic basis of the cellulolytic microbial consortium KKU-MC1 and its application in enhancing biomethane production
Martin-Ryals Evaluating the potential for improving anaerobic digestion of cellulosic waste via routine bioaugmentation and alkaline pretreatment
Rani et al. Frontier in dark fermentative biohydrogen production from lignocellulosic biomass: Challenges and future prospects
US20230405654A1 (en) Method for enzymatic and/or microbial processing of waste comprising recirculation of process water
Ali et al. Biodegradation of willow sawdust by novel cellulase-producing bacterial consortium from wood-feeding termites for enhancing methane production
Tsapekos Enhancing biogas production from recalcitrant lignocellulosic residue
Franceschi et al. Improving dry anaerobic methane production from OFMSW by co-digestion with grass waste and pretreatment with white rot fungi
Singh et al. Biogasification of Agricultural Biomass: Towards a Zero-Waste Circular Agrieconomy
CA3196334A1 (en) Method for enzymatic and/or microbial processing of waste comprising recirculation of process water
CN116783007A (zh) 包括处理水再循环、用于废料酶促和/或微生物处理的方法
Bhardwaj et al. Enhanced Biogas Production and Enzymatic Studies from Biologically Pretreated Paddy Straw
OA17181A (en) Methods and compositions for biomethane production.