UA115985C2 - Спосіб лікування або запобігання раку шлунка - Google Patents

Спосіб лікування або запобігання раку шлунка Download PDF

Info

Publication number
UA115985C2
UA115985C2 UAA201413807A UAA201413807A UA115985C2 UA 115985 C2 UA115985 C2 UA 115985C2 UA A201413807 A UAA201413807 A UA A201413807A UA A201413807 A UAA201413807 A UA A201413807A UA 115985 C2 UA115985 C2 UA 115985C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
cells
antibody
rgo
cancer
bek
Prior art date
Application number
UAA201413807A
Other languages
English (en)
Inventor
Уґур Сахін
Езлем Тюречі
Ріта Мітнахт-Краус
Штефан Деніс Якобс
Маґдалена Ядвіґа Уч
Корнелія Адріана Марія Хайнц
Крістіане Регіна Штадлер
Original Assignee
Ґанімед Фармасьютікалз Аґ
Трон - Транслаціонале Онколоґі Ан Дер Йоханнес Ґутенберґ-Універзітет Майнц Ґемайннютціґе Ґмбх
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ґанімед Фармасьютікалз Аґ, Трон - Транслаціонале Онколоґі Ан Дер Йоханнес Ґутенберґ-Універзітет Майнц Ґемайннютціґе Ґмбх filed Critical Ґанімед Фармасьютікалз Аґ
Publication of UA115985C2 publication Critical patent/UA115985C2/uk

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/28—Compounds containing heavy metals
    • A61K31/282—Platinum compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/337—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having four-membered rings, e.g. taxol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/4375—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a six-membered ring having nitrogen as a ring heteroatom, e.g. quinolizines, naphthyridines, berberine, vincamine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/513—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. cytosine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/555—Heterocyclic compounds containing heavy metals, e.g. hemin, hematin, melarsoprol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/66—Phosphorus compounds
    • A61K31/662—Phosphorus acids or esters thereof having P—C bonds, e.g. foscarnet, trichlorfon
    • A61K31/663—Compounds having two or more phosphorus acid groups or esters thereof, e.g. clodronic acid, pamidronic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/66—Phosphorus compounds
    • A61K31/675—Phosphorus compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pyridoxal phosphate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
    • A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
    • A61K33/243—Platinum; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/20—Interleukins [IL]
    • A61K38/2013—IL-2
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3046—Stomach, Intestines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/734—Complement-dependent cytotoxicity [CDC]

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Винахід стосується способу лікування або запобігання раку шлунку, що характеризується злоякісними пухлинними клітинами, експресуючими CLDN18.2, який передбачає введення пацієнтові антитіла, яке проявляє здатність зв'язуватися з CLDN18.2, в комбінованій терапії із засобом, який стимулює (( Т-клітини, де (a) антитіло, яке зв'язує CLDN18.2 являє антитіло, здатне опосередкувати знищення клітин, експресуючих CLDN18.2 за допомогою антитілозалежної клітинноопосередкованої цитотоксичності (ADCC), опосередковуючої лізис, де антитіло включає важкий ланцюг антитіла, що включає амінокислотну послідовність, представлену в SEQ ID NО:32 та легкий ланцюг антитіла, що включає амінокислотну послідовність, представлену в SEQ ID NО:39; і (b) агент, стимулюючий (( Т-клітини, являє собою бісфосфонат, і де бісфосфонат вводять пацієнтові в комбінованій терапії з інтерлейкіном-2.

Description

Раки шлунка й стравоходу (гастроезофагеальні раки; СЕ) належать до злоякісних новоутворень, з якими пов'язана найвища нереалізована потреба медицини. Рак шлунка посідає друге місце серед причин смерті від раку в усьому світі. Частота випадків виникнення езофагеального раку збільшилася за останні десятиліття, збігаючись зі зміною гістологічного типу й первинної локалізації пухлини. У цей час аденокарцинома стравоходу є більш поширеною в Сполучених штатах і Західній Європі, ніж плоскоклітинна карцинома, при цьому більшість пухлин знаходяться в дистальному стравоході. Рівень загального 5-літнього виживання для СЕ раку становить 20-2595, незважаючи на агресивність установленого стандартного лікування, пов'язаного з істотними побічними ефектами.
У більшості пацієнтів виявляється місцеворозташована або метастазуюча пухлина, після чого вони проходять першу серію хіміотерапії. Режими лікування, засновані на комбінації платини й похідних фторпіримідину, звичайно комбінують із третьою сполукою (наприклад, таксаном або антрациклінами). Однак, медіана виживання без прогресування від 5 до 7 місяців і медіана загального виживання від 9 до 11 місяців - це найкраще, чого можна чекати.
Відсутність істотної користі від різних режимів комбінованої хіміотерапії нового покоління щодо цих видів раку стимулювала дослідження, пов'язані з використанням таргентних (націлених на мішень) препаратів. Останнім часом для лікування Негг/пеи-позитивних гастроезофагеальних видів раку був схвалений трастузумаб. Однак, даний вид лікування придатний тільки для «2095 пацієнтів, у яких експресується дана мішень, тому потреба медицини в препаратах залишається як і раніше високою.
Молекула щільних контактів клаудин 18 сплайс-варіант 2 (клаудин 18.2 (СІ ОМ18.2)) є членом родини білків клаудину -- білків щільних контактів. СІОМ18.2 є трансмембранним білком (27.8 кДа), який містить чотири трансмембранні домени із двома невеликими позаклітинними петлями.
У нормальних тканинах, за винятком шлунка, відсутня експресія СІ ОМ18.2, яку б можна було б зафіксувати за допомогою КТ-РСЯ. Проведення |імуногістохімічного аналізу за допомогою СІ ОМ18.2-специфічних антитіл показує, що шлунок є єдиною позитивною за цим білком тканиною.
СІГОМ18.2 є високоселективним гастральним антигеном, експресованим винятково на короткоживучих диференційованих епітеліальних клітинах шлунка. СІ ОМ18.2 зберігається в ході злоякісної трансформації, і тому часто виявляється на поверхні клітин раку шлунка людини.
Більше того, цей панпухлинний антиген ектопічно активований на значимих рівнях в аденокарциномах стравоходу, підшлункової залози й легенів. Білок СІОМ18.2 також локалізується в метастазах аденокарциноми шлунка в лімфатичних вузлах і у віддалених метастазах, зокрема, у яєчниках (так звана пухлина Крукенберга).
Химерне Ідс1 антитіло ІМАВЗ362, спрямоване проти СІ ОМ18.2, було розроблене компанією
Сапутейд РНаптасешісаїє Ас. ІМАВЗ362 розпізнає перший позаклітинний домен (ЕСО1)
СІГОМ18.2 з високої афінністю й специфічністю. ІМАВЗб62 не зв'язується з будь-яким іншим членом родини клаудинів, включаючи близькоспоріднений сплайс-варіант 1 клаудину 18 (СГОМ18.1). ІМАВ362 демонструє вузьку специфічність до пухлинних клітин і поєднує в собі чотири незалежні високоактивні механізми дії. Після зв'язування з мішенню ІМАВЗ362 опосередковує знищення клітин за допомогою АЮСС, СОС та індукції апоптозу, спричиненого перехресним зв'язуванням мішені на поверхні пухлинної клітини, і прямого інгібування проліферації. Таким чином, ІМАВЗ362 ефективно викликає лізис СІ 0ОМ18.2-позитивних клітин, включаючи лінію клітин раку шлунка людини іп міо і іп ммо. У мишей, які несуть СГОМ18.2- позитивну лінію клітин раку, спостерігається позитивний вплив на виживання, і аж до 40 95 мишей демонструє регресію пухлини при лікуванні ІМАВЗ362.
Токсичність і РК//ДК профіль ІМАВ362 були ретельно досліджені на мишах і яванських макаках (супотоїЇди5), включаючи визначення діапазону доз, 28-денне дослідження токсичності багаторазового застосування препарату на макаках і З-місячне дослідження токсичності багаторазового застосування препарату на мишах. Було показано, що при внутрішньовенному уведенні (і.м.) багаторазові дози ІМАВ362 добре переносяться й мишами (сама більша тривалість щотижневого введення З місяці, найвищий рівень доз 400 мг/кг) і яванськими макаками (до 5 щотижневих застосувань аж до 100 мг/кг). Не виявлено ознак системної або місцевої токсичності. Зокрема, у жодному дослідженні токсичності не спостерігалося токсичної дії на шлунок. ІМАВ362 не викликає активації імунітету й вивільнення цитокінів. Не було відзначено негативних ефектів на репродуктивні органи самців або самок. ІМАВ362 не зв'язується із тканинами, які не мають мішені. Дослідження біорозподілення на мишах показало, що причиною відсутності гастральної токсичності найімовірніше є компартменталізація щільних 60 контактів у місці просвіту в здоровому епітелії шлунка, яка, очевидно, значно зменшує доступність ІМАВЗ62 епітопа. Ця компартменталізація пропадає після злоякісної трансформації, що приводить епітоп у стан, який піддається впливу ІМАВЗ362.
ІМАВЗ362 перебуває на ранній стадії клінічних випробувань. Фаза І клінічних випробувань проводиться на людях. 5 дозових груп (33 мг/м", 100 мг/м-, 300 мг/м, 600 мг/м, 1000 мг/м") по З пацієнти в кожній одержували одне внутрішньовенне введення ІМАВЗ62, спостереження проводили протягом 28 днів. ІМАВ362 добре переносився, при цьому не проводилося відповідного дослідження безпеки для пацієнтів. В одного пацієнта всі вимірювані пухлинні маркери були значно знижені в межах 4 тижнів після лікування. Протягом МПа фази клінічних досліджень ІМАВЗ62 призначається повторно.
Представлені в цьому документі дані показують, що бісфосфонати, такі як золедронова кислота (2А), зокрема, при введенні в комбінації з рекомбінантним інтерлейкіном-2 (ІІ -2), збільшують активність анти-СІ ОМ18.2 антитіла, такого як ІМАВЗ362. Основним механізмом є активація й розмноження високоцитотоксичної популяції імунних клітин (у962 Т-клітини).
Крім того, ми представляємо результати, які демонструють, що хіміотерапевтичні засоби можуть стабілізувати або збільшувати експресію СІ ОМ18.2 на поверхні ракових клітин, що приводить до підвищення доступності СІ ОМ18.2 для анти-СОМІ18.2 антитіла, такого як
ІМАВЗ362. Спостерігалася синергійна дія анти-СІ ОМ18.2 антитіла, такого як ІМАВЗ62, з певними хіміотерапевтичними режимами, зокрема, хіміотерапевтичними режимами, які використовуються при лікуванні раку шлунка або лікуванні солідних пухлин людини. Клітини раку людини, попередньо оброблені хіміотерапевтичними засобами, краще піддаються лізису, індукованому мішень-специфічним антитілом. На мишачих пухлинних моделях пригнічення пухлини з використанням анти-СЇ ОМ18.2 антитіла в комбінації з хіміотерапією перевершує застосування анти-СІ ОМ18.2 антитіла у вигляді монотерапії.
Розкриття винаходу
Загалом, даний винахід надає комбіновану терапію для ефективного лікування й/або запобігання захворюванням, пов'язаним із клітинами, які експресують СГ ОМ18.2, включаючи ракові захворювання, такі як рак шлунка, рак стравоходу, рак підшлункової залози, рак легенів, такий як недрібноклітинний рак легенів (МЗС С), рак яєчників, рак товстої кишки, рак печінки, рак голови й шиї, рак жовчного міхура та їх метастази, зокрема, метастази раку шлунка, такі як пухлина Крукенберга, метастази в очеревину й/або лімфатичні вузли. Зокрема, переважно раковими захворюваннями є аденокарциноми шлунка, стравоходу, протоки підшлункової залози, жовчовивідних шляхів, легенів і яєчників.
В одному аспекті даний винахід пропонує спосіб лікування або запобігання ракового захворювання, який передбачає введення пацієнтові антитіла, яке проявляє здатність зв'язуватися з СІ ОМ18.2, у комбінації із засобом, який стимулює уб Т-клітини. Засіб, який стимулює уб Т-клітини, може бути введено до, одночасно з або після введення антитіла, яке проявляє здатність зв'язуватися з СІ ОМ18.2, або його комбінації.
В одному варіанті здійснення уб Т-клітини є Му9Мб2 Т клітинами. В одному варіанті здійснення засіб, який стимулює уб Т-клітини, є бісфосфонатом, таким як азотовмісний бісфосфонат (амінобісфосфонат). В одному варіанті здійснення засіб, який стимулює уб Т- клітини, вибирають із групи, яка складається із золедронової кислоти, клодронової кислоти, ібандронової кислоти, памідронової кислоти, ризедронової кислоти, минодронової кислоти, олпадронової кислоти, алендронової кислоти, інкадронової кислоти та їх солей. В одному варіанті здійснення засіб, який стимулює уб Т-клітини, уводять у комбінації з інтерлейкіном-2.
В одному варіанті здійснення спосіб винаходу додатково включає введення засобу, який стабілізує або збільшує експресію СІ ОМ18.2. Експресія СІ ОМ18.2 бажано відбувається на поверхні ракової клітини.
Засіб, який стабілізує або збільшує експресію СІ ОМ18.2, може бути цитотоксичним і/або цитостатичним засобом. В одному варіанті здійснення засіб, який стабілізує або збільшує експресію СІ ОМ18.2, включає засіб, який викликає зупинку клітинного циклу або накопичення клітин в одній або більше фазах клітинного циклу, бажано в одній або більше фазах клітинного циклу, відмінних від (з1-фази. Засіб, який стабілізує або збільшує експресію СІ ОМ18.2, може включати препарат, обраний із групи, яка складається з антрациклінів, сполук платини, аналогів нуклеозидів, таксанів і аналогів камптотецину або його проліків, та їх комбінацій. Засіб, який стабілізує або збільшує експресію СІ 0ОМ18.2, може включати препарат, обраний із групи, яка складається з епірубіцину, оксаліплатину, цисплатину, 5-фторурацилу або його проліків, таких як капецитабін, доцетаксел, іринотекан, та їх комбінацій. Засіб, який стабілізує або збільшує експресію СГ ОМ18.2, може включати комбінацію оксаліплатину й 5-фторурацилу або його проліків, комбінацію цисплатину й 5-фторурацилу або його проліків, комбінацію, щонайменше, 60 одного антрацикліну й оксаліплатину, комбінацію, щонайменше, одного антрацикліну й цисплатину, комбінацію, щонайменше, одного антрацикліну й 5-фторурацилу або його проліків, комбінацію, щонайменше, одного таксану й оксаліплатину, комбінацію, щонайменше, одного таксану й цисплатину, комбінацію, щонайменше, одного таксану й 5-фторурацилу або його проліків, або комбінацію, щонайменше, одного аналога камптотецину й 5-фторурацилу або його проліків. Засіб, який стабілізує або збільшує експресію СІ ОМ18.2, може бути засобом, який викликає імуногенну загибель клітин. Засіб, який викликає імуногенну загибель клітин, може включати засіб, обраний із групи, яка складається з антрациклінів, оксаліплатину та їх комбінацій. Засіб, який стабілізує або збільшує експресію СІ ОМ18.2, може включати комбінацію епірубіцину й оксаліплатину. В одному варіанті здійснення спосіб запропонований винаходом передбачає введення, щонайменше, одного антрацикліну, щонайменше, однієї сполуки платини й, щонайменше, одного 5-фторурацилу і його проліків. Антрациклін можна вибрати із групи, яка складається з епірубіцину, доксорубіцину, даунорубіцину, ідарубіцину й валрубіцину. Бажано, антрациклін є епірубіцином. Сполуку платини можна вибрати із групи, яка складається з оксаліплатину й цисплатину. Нуклеозидний аналог може бути обраний із групи, яка складається з 5-фторурацилу і його проліків. Таксан можна вибрати із групи, яка складається з доцетакселу й паклітакселу. Аналог камптотецину може бути обраний із групи, яка складається з іринотекану й топотекану. В одному варіанті здійснення спосіб запропонований винаходом передбачає введення (ї) епірубіцину, оксаліплатину й 5-фторурацилу, (ії) епірубіцину, оксаліплатину й капецитабіну, (ії) епірубіцину, цисплатину й 5-фторурацилу, (ім) епірубіцину, цисплатину й капецитабіну, або (м) фолінієвої кислоти, оксаліплатину й 5-фторурацилу.
Спосіб винаходу може додатково включати введення, щонайменше, одного додаткового хіміотерапевтичного засобу, який може бути цитотоксичним засобом.
Антитіло, яке проявляє здатність зв'язуватися з СІ ОМ18.2, може зв'язуватися з нативними епітопами СГОМ18.2, присутніми на поверхні живих клітин. В одному варіанті здійснення антитіло, яке проявляє здатність зв'язуватися з СІ ОМ18.2, зв'язується з першою позаклітинною петлею СІ ОМ18.2. В одному варіанті здійснення антитіло, яке проявляє здатність зв'язуватися з
СІГОМ18.2, опосередковує знищення клітини за допомогою одного або більше з поміж опосередкованого комплементзалежною цитотоксичністю (СОС) лізису, опосередкованого антитілозалежною клітинноопосредкованою цитотоксичністю (АОС) лізису, індукції апоптозу й інгібування проліферації. В одному варіанті здійснення антитіло, яке проявляє здатність зв'язуватися з СІ ОМ18.2, є моноклональним, химерним або гуманізованим антитілом або фрагментом антитіла. В одному варіанті здійснення антитіло, яке проявляє здатність зв'язуватися з СІ ОМ18.2, є антитілом, обраним із групи, яка складається з (ї) антитіла, продукованого й/або отриманого від клону, депонованого під обліковим номером О5М
АСС2737, ОМ АСС2738, ОМ АСОС2739, ЮО5М АСС2740, ОМ АСОС2741, О5М АСОС2742, ОМ
АСС2743, О5М АСС2745, ОМ АСОС2746, ОМ АСС2747, ОМ АСОС2748, Ю5М АСС2808, О5М
АСС2809 або О5М АСС2810, (ії) антитіла, яке є химерною або гуманізованою формою антитіла згідно (і), (ії) антитіла, яке проявляє специфічність антитіла згідно (і) і (м) антитіла, яке містить антигензв'язуючу ділянку або антигензв'язуючий сайт, зокрема, варіабельну область, антитіла згідно (ї) антитіла, яке бажано проявляє специфічність, згідно (ї). В одному варіанті здійснення антитіло з'єднане з терапевтичним засобом, таким як токсин, радісізотоп, лікарський засіб або цитотоксичний засіб.
В одному варіанті здійснення спосіб запропонований винаходом передбачає введення антитіла, яке проявляє здатність зв'язуватись з СІ ОМ18.2, у дозі аж до 1000 мг/м-. В одному варіанті здійснення спосіб запропонований винаходом передбачає введення антитіла, яке проявляє здатність зв'язуватись з СІ ОМ18.2, повторно в дозі від З00 до 600 мг/м.
В одному варіанті здійснення рак є СГОМ18.2-позитивним. В одному варіанті здійснення ракове захворювання вибирають із групи, яка складається з раку шлунка, раку стравоходу, раку підшлункової залози, раку легенів, раку яєчників, раку товстої кишки, раку печінки, раку голови й шиї, раку жовчного міхура та їх метастазів. Ракове захворювання може бути пухлиною
Крукенберга, метастазами в очеревину й/або лімфатичні вузли. В одному варіанті здійснення рак є аденокарциномою, зокрема аденокарциномою, що прогресує. В одному варіанті здійснення рак вибирають із групи, яка складається з раку шлунка, раку стравоходу, зокрема, нижнього відділу стравоходу, раку гастроезофагіального з'єднання й гастроезофагіального раку. Пацієнт може бути пацієнтом з негативним статусом за НЕК2г/пеи або пацієнтом з позитивним статусом за НЕК2/пеи, але таким, для якого лікування трастузумабом не придатне.
Згідно з винаходом, СІ ОМ18.2 бажано має амінокислотну послідовність відповідно до ЗЕО
ІО МО: 1.
У додатковому аспекті даний винахід пропонує медичний препарат, який містить антитіло, 60 яке проявляє здатність зв'язуватися з СІ ОМ18.2, і засіб, який стимулює уб Т-клітини. Медичний препарат даного винаходу може додатково включати засіб, який стабілізує або збільшує експресію СІ ОМ18.2. Антитіло, яке проявляє здатність зв'язуватися з СІ ОМ18.2, і засіб, який стимулює уб Т-клітини, і необов'язковий засіб, який стабілізує і який збільшує експресію
СГ ОМ18.2, можуть бути присутніми у медичному препараті у вигляді суміші або окремо один від одного. Медичний препарат може бути набором, який включає перший контейнер, який містить антитіло, яке проявляє здатність зв'язуватись з СІ ОМ18.2 і контейнер, який містить засіб, який стимулює уб Т-клітини, і необов'язково контейнер, який містить засіб, який стабілізує і збільшує експресію СІ ОМ18.2. Медичний препарат може додатково включати друковані інструкції із застосування препарату для лікування раку, зокрема, для застосування препарату згідно способу запропонованого винаходом. Різними варіантами втілення медичного препарату й, зокрема, засобу, який стимулює уб Т-клітини, і засобу, який стабілізує або збільшує експресію
СІГОМІ18.2, є описані вище відносно способу винаходу.
Даний винахід також пропонує описані тут засоби, такі як антитіло, яке проявляє здатність зв'язуватись з СІ ОМ18.2, для застосування в описаних тут способах, наприклад, для введення в комбінації із засобом, який стимулює уб Т-клітини, і необов'язково засобом, який стабілізує або збільшує експресію СІ ОМ18.2.
Інші ознаки й переваги даного винаходу стануть зрозумілими з наступного докладного опису й пунктів формули винаходу.
Короткий опис креслень
Фігура 1. Дія хіміотерапії на клітини раку шлунка. Культивування клітин Каф протягом 96 годин приводить до зупинки клітинного циклу в (30/(51-фазі й негативної регуляції СІ ОМ18.2.
Цитостатичні сполуки, які викликають зупинку клітинного циклу в різних фазах клітинного циклу (5-фаза(5-ЕУ) або с2-фаза (епірубіцин)), стабілізують СІ ОМ18.2-експресію.
Фігура 2. Дія хіміотерапії на клітини раку шлунка. а/р: Дія хіміотерапії на рівні транскрипта й білка СГОМ18.2 у клітинах раку шлунка. с: Результати дослідження за допомогою проточної цитометрії позаклітинного зв'язування ІМАВЗ362 на клітинах раку шлунка, оброблених хіміотерапевтичними засобами.
Фігура 3. Дія хіміотерапії на клітини раку шлунка. Цитостатична сполука, яка викликає зупинку клітинного циклу в різних фазах клітинного циклу (5/5 2-фаза (іринотекан) або 52-фаза (доцетаксел)).
Фігура 4. ІМАВ 362-індукований АОСС опосередковує знищення клітин раку шлунка після попередньої обробки хіміотерапевтичними засобами.
Фігура 5. Дія хіміотерапії на клітини раку шлунка. а: Клітини, оброблені іринотеканом, доцетакселем або цисплатином демонструють більш низький рівень життєздатних клітин у порівнянні із клітинами, культивованими в середовищі. р: СІ ОМ18.2 експресія в клітинах, оброблених іринотеканом, доцетакселем або цисплатином, є підвищеною в порівнянні із клітинами, культивованими в середовищі. с/а: Обробка клітин іринотеканом, доцетакселем або цисплатином збільшує потенційну можливість ІМАВЗ62 викликати АЮСС.
Фігура 6. Ефекти хіміотерапії на СОС, індукований ІМАВЗ362.
Фігура 7. Ефекти хіміотерапії на ефекторні клітини.
Фігура 8. Розмноження РВМС у культурах з додаванням 2АЛІ -2.
Фігура 9. Збагачення МуЗМб2 Т-клітин в РВМС культурах з додаванням 2АЛІ -2.
Фігура 10. Збагачення МуЗМб2 Т-клітин у середовищі з додаванням 7А і зростаючої дози ЇЇ - 2.
Фігура 11. Розмноження й цитотоксична активність Му9Уб2 Т-клітин після спільної інкубації з 2А-активованими моноцитами й клітинами раку людини.
Фігура 12. 2А-залежний розвиток різних типів клітин в РВМО-культурах.
Фігура 13. Поверхневі маркери на МуЗмб2 Т-клітинах після 2АЛІ -2 обробки.
Фігура 14. АОСС активність Му9Мб2 Т-клітин у комбінації з ІМАВЗ362 на СІ ОМ18.2-позитивних
МОас-4 клітинах раку шлунка.
Фігура 15. АОСС активність ІМАВ362 з використанням Му9Мб2 Т-клітин як ефекторних клітин.
Фігура 16. Дія 2А на поверхневе розташування СІ ОМ18.2 на клітинах-мішенях.
Фігура 17. Ефекти хіміотерапії й 2АЛІ-2- обробки на ефекторні клітини.
Фігура 18. Дослідження біорозподілення кон'югованих антитіл у мишей.
Фігура 19. Раннє лікування НЕК293-СІ ЮМ18.2 ксенотрансплантатів пухлини.
Фігура 20. Лікування розвинених НЕК293-СІ 0М18.2 ксенотрансплантатів пухлини.
Фігура 21. Дія ІМАВЗ62 на ріст підшкірних ксенотрансплантатів раку шлунка.
Фігура 22. Ефекти імунотерапії ІМАВЗ362 на МСІ-М87-СІ10М18.2 ксенотрансплантати 60 карциноми шлунка.
Фігура 23. Ефекти комбінованої терапії ІМАВ362 і режиму ЕОЕ на МСІ-М87-СІ ОМ18.2 ксенотрансплантати.
Фігура 24. Ефекти комбінованої терапії ІМАВ362 і ЕОЕЄ режиму на МООСС-4-СІ ЮМ18.2 ксенотрансплантати.
Фігура 25. Дія 2АЛІ-2-індукованих МуЗ9Мб2 Т-клітин на контроль макроскопічних пухлин з використанням ІМАВЗ62 у мишей М5О.
Фігура 26. Ефекти комбінованої терапії ІМАВ362 і ЕЄОЕ режиму на СІ 5-103-сІдп18.2 алотрансплантати пухлин.
Докладний опис винаходу
Незважаючи на те, що даний винахід докладно описаний далі, зрозуміло, що цей винахід не обмежується конкретними методиками, протоколами й реагентами, описаними тут, оскільки вони можуть відрізнятися. Також слід розуміти, що використана в описі термінологія призначена тільки для опису окремих варіантів здійснення й не покликана обмежувати обсяг даного винаходу, який буде обмежуватися тільки прикладеними пунктами формули винаходу. Якщо не зазначено інакшого, усі технічні й наукові терміни, використані в описі, мають ті ж самі значення, які звичайно зрозумілі пересічному фахівцеві у даній галузі техніки.
Надалі будуть описані елементи даного винаходу. Ці елементи перелічуються в конкретних варіантах здійснення, однак, повинно бути зрозумілим, що вони можуть поєднуватися будь-яким чином і в будь-якій кількості для створення додаткових варіантів здійснення. Описані різним чином приклади й кращі варіанти здійснення не повинні тлумачитися як такі, що обмежують даний винахід тільки точно описаними варіантами здійснення. Слід розуміти, що цей опис підтримує й розглядає варіанти здійснення, які поєднують точно описані варіанти здійснення з будь-яким числом розкритих і/або кращих елементів. Більше того, будь-які перестановки й комбінації всіх описаних елементів у цій заявці слід розглядати як розкриті описом даної заявки, якщо контекст не диктує іншого.
Бажано, використані в описі терміни визначаються так, як описано в "А тийіїпдиаї діоззагу ої БіоїесппоЇодіса! Тегт5: (РАС Кесотптепааїйоп5)", Н..МУ. Гецепрегдег, В. Мадеї, ї Н. КОЇБІ,
Е9з5., Немеїїса Спітіса Асіа, СН-4010 Вазеї, Зм/йїгепапа, (1995).
При здійсненні даного винаходу використовуються, якщо не зазначене інакше, звичайні методи хімії, біохімії, клітинній біології, імунології й методи рекомбінантних ДНК, які пояснюються в літературі, присвяченій даної галузі техніки (дивися, наприклад, Моїесшіаг
Сіопіпа: А І арогаїюгу Мапиаї, 279 Едайоп, У. бБатрбгоок еї аї. єдв., Соїй бргіпуд Нагтог І арогаїюгу
Ргезв, Соїд брііпа Нагброг 1989).
Протягом цього докладного опису й наступних пунктів формули винаходу, якщо контекст не вимагає іншого, слід розуміти, що слово "містити" і його варіанти, такі як "містить" і "який утримує", припускає включення певного члена, цілого числа або стадії або групи членів, цілих чисел або стадій, а не виключення будь-якого іншого члена, цілого числа або стадії або групи членів, цілих чисел або стадій, хоча в деяких варіантах здійснення такий інший член, ціле число або стадія або група членів, цілих чисел або стадій може виключатися, тобто об'єкт винаходу полягає у включенні встановленого члена, цілого числа або стадії або групи членів, цілих чисел або стадій. Терміни "а" і "ап" ї "Пе" і подібні посилання, використані в контексті опису винаходи (особливо в контексті формули винаходу) слід тлумачити, як такі, що включають і однину й множину, якщо в описі не зазначено іншого або інше явно не продиктоване контекстом.
Перерахування меж значень в описі служить тільки як спосіб скорочення згадування окремо кожного окремого значення, що попадає в межі. Якщо не зазначене інше, кожне конкретне значення включається до докладного опису, як ніби воно було окремо перераховане в описі. Усі описані тут методи можуть здійснюватися в будь-якому придатному порядку, якщо в описі не зазначене інше або іншим способом явно не суперечить контексту. Використання всіх без винятку прикладів або характерних виразів (наприклад, "такий як"), наданих в описі, вживається тільки з метою кращої ілюстрації винаходу й не обмежує рамки винаходу, заявлені в іншій формі. Формулювання докладного опису не повинні бути витлумачені, як такі, що означають який-небудь незаявлений елемент, істотний для здійснення винаходу на практиці.
Протягом тексту даної заявки процитовано кілька документів. Кожний з наведених в описі документів (включаючи всі патенти, патентні заявки, наукові публікації, специфікації виробника, інструкції тощо), чи то вище або нижче за текстом, повністю включаються до опису як посилання. Ніщо в описі не слід розглядати як допущення, що винахід не має права датувати таке розкриття відповідно до попереднього винаходу.
Термін "ССГОМ18" відноситься до клаудину 18 і включає будь-які варіанти, включаючи клаудин 18 сплайс-варіант 1 (клаудин 18.1 (СГ ОМ18.1)) і клаудин 18 сплайс-варіант 2 (клаудин 60 18.2 (СГ ОМ18.2)).
Термін "СІ ОМ18.2" переважно має відношення до людського СІ ОМ18.2 і, зокрема, до білка, який містить, бажано складається з амінокислотної послідовності відповідно до ЗЕО ІЮ МО: 1 зі списку послідовностей або варіанта зазначеної амінокислотної послідовності.
Термін "СІ ОМ18.1" переважно має відношення до людського СІ ОМ18.1 і, зокрема, до білка, що містить, бажано складається з амінокислотної послідовності відповідно до ЗЕО ІЮ МО: 2 зі списку послідовностей або варіанта зазначеної амінокислотної послідовності.
Термін "варіант" згідно з винаходом має відношення, зокрема, до мутантів, сплайс-варіантів, ізоформ, алельних варіантів, видових варіантів і видових гомологів, зокрема, наявних у природі.
Алельний варіант має відношення до зміни в нормальній послідовності гена, значення якого часто є незрозумілим. Повне генетичне секвенування часто встановлює численні алельні варіанти для даного гена. Видовим гомологом є послідовність нуклеїнових кислот або амінокислот, джерелом походження яких є інший вид, що відрізняється від виду походження даної послідовності нуклеїнових кислот або амінокислот. Термін "варіант" буде включати будь- які посттрансляційно модифіковані варіанти й конформаційні варіанти.
Згідно з винаходом термін "СІ ОМ18.2-позитивний рак" означає рак за участю ракових клітин, які експресують СІ ОМ18.2, бажано на поверхні зазначених ракових клітин.
Термін "поверхня клітини" використовується відповідно до його звичайного значення в даній галузі, і в такий спосіб передбачає зовнішню поверхню клітини, доступну для зв'язування з білками й іншими молекулами.
СГОМ18.2 експресується на поверхні клітин у тому випадку, якщо він розташовується на поверхні зазначених клітин, і є доступним для зв'язування СІ ОМ18.2-специфічними антитілами при додаванні їх до клітин.
Згідно з винаходом, вважають, що СІ ОМ18.2 незначно експресується у клітині, якщо рівень експресії є більш низьким у порівнянні з експресією в клітинах шлунка або тканині шлунка.
Бажано, рівень експресії становить менше, ніж 10 96, бажано менше ніж 5 95, З о, 2 9, 1 9, 0,590, 0,1 95 або 0,05 95 експресії в клітинах шлунка або тканині шлунка або навіть нижче.
Переважно, вважають, що СІ ОМ18.2 незначно експресується у клітині, якщо рівень експресії перевищує рівень експресії в нераковій тканині, відмінній від тканини шлунка, не більше, ніж в 2 рази, бажано в 1, 5 рази, і бажано не перевищує рівень експресії в зазначеній нераковій тканині.
Переважно, вважають, що СІ 0ОМ18.2 незначно експресується у клітині, якщо рівень експресії нижче межі виявлення, і/або якщо рівень експресії є занадто низьким, щоб забезпечити можливість зв'язування СІ ОМ18.2- специфічними антитілами при додаванні їх до клітин.
Згідно з винаходом СІ ОМ18.2 експресується в клітині, якщо рівень експресії перевищує рівень експресії в нераковій тканині, відмінній від тканини шлунка, бажано більше, ніж в 2 рази, краще в 10 разів, в 100 разів, в 1000 разів або в 10000 разів. Переважно, СІ 0ОМ18.2 експресується в клітині, якщо рівень експресії вище межі виявлення, і/або якщо рівень експресії є досить високим, щоб забезпечити можливість зв'язування СІ 0ЮМ18.2-специфічними антитілами при додаванні їх до клітин. Бажано, експресований у клітині СГ ОМ18.2 експресується або експонується на поверхні зазначеної клітини.
Згідно з винаходом термін "хвороба" відноситься до будь-якого патологічного стану, включаючи рак, зокрема, до описаних у даному документі форм раку. Будь-які згадування раку або конкретних форм раку в даному документі також включають його метастази. У кращому варіанті здійснення хвороба, яку необхідно лікувати відповідно до даної заявки, стосується клітин, які експресують СІ ОМ18.2. "Хвороби, пов'язані із клітинами, які експресують СІ ОМ18.2," або подібні вирази означають згідно з винаходом, що СІ ОМ18.2 експресується в клітинах хворої тканини або органа. В одному варіанті здійснення експресія СІ ОМ18.2 у клітинах хворої тканини або органа є підвищеною в порівнянні зі станом у здоровій тканині або органі. Під підвищенням слід розуміти підвищення, щонайменше, на 10 95, зокрема, щонайменше, на 20 95, щонайменше, на 50 95, щонайменше, на 100 95, щонайменше, на 200 95, щонайменше, на 500 95, щонайменше, на 1000 95, щонайменше, на 10 000 95 або навіть більше. В одному варіанті здійснення експресія виявлена тільки у хворій тканині, тоді як експресія в здоровій тканині пригнічена. Згідно з винаходом, хвороби, пов'язані із клітинами, які експресують СГ ОМ18.2, включають ракові захворювання. Крім того, згідно з винаходом раковими захворюваннями переважно є ті, у яких ракові клітини експресують
СІ ОМ18.2.
При використанні в описі термін "ракова хвороба" або "рак" включає хворобу, яка характеризується неправильно регульованим клітинним ростом, проліферацією, диференціюванням, адгезією й/або міграцією. Під " раковою клітиною" слід розуміти аномальну клітину, яка росте за допомогою швидкої, неконтрольованої клітинної проліферації й продовжує 60 рости після стимулу (впливу), що ініціює припинення нового росту. Бажано "ракова хвороба"
характеризується клітинами, які експресують СІ ОМ18.2, а ракова клітина експресує СГОМІ18.2.
Клітина, яка експресує СІ ОМ18.2, переважно є раковою клітиною, переважно описаних тут видів раку. "Аденокарцинома" є раком, що виникає в залозистій тканині. Ця тканина до того ж є частиною великої групи тканин, відомих як епітеліальна тканина. Епітеліальна тканина включає шкіру, залози й цілий ряд інших тканин, що вистилають порожнини й органи тіла. З погляду ембріології епітелій походить із ектодерми, ендодерми й мезодерми. Щоб відноситися до аденокарциноми, клітини необов'язково повинні бути частиною залози, за умови, що вони мають секреторні властивості. Ця форма карциноми може виникати в деяких вищих тварин, включаючи людей. Добре диференційовані аденокарциноми мають тенденцію бути подібними до залозистої тканини, з якої вони походять, у той час як погано диференційовані можуть не бути подібними до залозистої тканини. За допомогою фарбування клітин, отриманих з біопсійного матеріалу, патолог визначає, чи є пухлина аденокарциномою або іншим типом раку.
Аденокарциноми можуть виникати в багатьох тканинах організму внаслідок широкого поширення залоз в організмі. Поряд з тим, що кожна залоза не може секретувати ту саму речовину, коли в клітини існує зовнішньосекреторна функція, вона вважається залозистою, і тому її злоякісна форма називається аденокарциномою. Злоякісні аденокарциноми вторгаються в інші тканини й дають метастази, які також проникають в інші тканини. Аденокарцинома яєчника є найпоширенішим типом карциноми яєчника. Сюди включаються серозні й слизові аденокарциноми, світлоклітинна аденокарцинома й ендометриоїдна аденокарцинома.
Під "метастазуванням" розуміють поширення ракових клітин з первинного місця розташування в іншу частину організму. Утворення метастаз є дуже складним процесом і залежить від відділення злоякісних клітин від первинної пухлини, вторгнення (інвазії) у позаклітинний матрикс, проникання в ендотеліальні базальні мембрани для проникнення в порожнину тіла й судин, а потім, після транспортування кровотоком, інфільтрації в органі- мішені. Нарешті, ріст нової пухлини в місці-мішені залежить від ангіогенезу. Метастази пухлини можуть виникати навіть після видалення первинної пухлини, тому що пухлинні клітини або компоненти можуть залишитися й розвити метастатичний потенціал. В одному варіанті здійснення термін "метастаза" згідно з винаходом має відношення до "віддаленої метастази", тобто метастази, вилученої від первинної пухлини й системи регіональних лімфатичних вузлів.
В одному варіанті здійснення термін "метастаза" згідно з винаходом відноситься до метастаз в лімфатичному вузлі. Однієї конкретною формою метастаз, яка піддається лікуванню за допомогою терапії запропонованої винаходом, є метастаза, яка бере початок від раку шлунка як первинного вогнища. У кращих варіантах здійснення така метастаза раку шлунка є пухлиною
Крукенберга, метастазами в очеревину й/або метастазами в лімфатичні вузли.
Пухлина Крукенберга є рідкісною метастатичною пухлиною яєчника, яка охоплює від 1 95 до 2 9о від усіх пухлин яєчника. Прогноз пухлини Крукенберга залишається поганим, при цьому не існує загальноприйнятого лікування для пухлини Крукенберга. Пухлина Крукенберга є метастатичною перстневидноклітинною аденокарциномою яєчника. Шлунок є первинним вогнищем для більшості випадків пухлини Крукенберга (70 95). Наступними за поширеністю первинними локалізаціями є карциноми товстої кишки, апендикса й молочної залози (в основному інвазивна долькова карцинома). Повідомлялося про одиничні випадки пухлини
Крукенберга, які походять з карциноми жовчного міхура, жовчних проток, підшлункової залози, тонкого кишечнику, Фатерова сосочка, шийки матки й сечового міхура/сечової протоки. Інтервал між постановкою діагнозу первинної карциноми й наступним виявленням ураження яєчника становить звичайно 6 місяців або менше, однак повідомлялося й про більш тривалі строки. У багатьох випадках, первинна пухлина є дуже маленькою й може залишитися непоміченою.
Попередня карцинома шлунка або іншого органа в анамнезі спостерігається тільки в 20-30 95 випадків.
Пухлина Крукенберга являє приклад селективного поширення раку, найчастіше в напрямку шлунок - яєчник. Ця "вісь" поширення пухлини історично привертає увагу багатьох патоморфологів, зокрема, коли було виявлено, що новоутворення в шлунку селективно метастазують у яєчники, не уражаючи інших тканин. Шлях метастазів карциноми шлунка в яєчники був загадкою протягом тривалого часу, однак тепер очевидно, що ретроградне поширення лімфатичними судинами є найбільш імовірним шляхом метастазування.
Пухлини Крукенберга з'являються в молодих жінок, що є незвичайним для пацієнтів з метастатичною карциномою, яка спостерігається в більшості випадків на п'ятому десятку життя, із середнім віком 45 років. Цей ранній вік поширення може бути почасти пов'язаний з підвищеною частотою випадків перстневидноклітинної карциноми шлунка в молодих жінок. 60 симптоми, які при цьому часто зустрічаються, як правило, пов'язані із залученням у процес яєчників, найпоширенішими з яких є біль у животі й здуття живота (в основному внаслідок двосторонньої великої маси яєчників). В іншої частини пацієнтів спостерігаються неспецифічні шлунково-кишкові симптоми або симптоми відсутні. На додачу до цього, пухлина Крукенберга за наявним даними пов'язана з маскулінізацією, що є результатом виділення гормонів стромою яєчників. В 50 Фо випадків у пацієнтів є асцит, що звичайно містить злоякісні клітини.
Пухлина Крукенберга є двосторонньою більше ніж в 80 95 відомих випадків. Як правило, яєчники збільшені асиметрично й мають горбистий контур. Поверхні зрізів жовтого або білого кольору; звичайно це солідні пухлини, хоча іноді бувають кистовидними. Важливо, щ поверхня капсули яєчників з пухлиною Крукенберга в більшості випадків є гладкою й не має спайок або очеревинних відкладань. Слід зазначити, що інші метастатичні пухлини в яєчнику, як правило, пов'язані з поверхневими імплантатами. Це може пояснювати, чому макроскопічне патоморфологічне дослідження пухлини Крукенберга може давати хибне враження первинної пухлини яєчника. Однак, двостороння симетрія пухлини Крукенберга відповідає його метастатичній природі.
Слід зазначити високий відсоток загальної летальності серед пацієнтів з пухлиною
Крукенберга. Більшість пацієнтів умирає протягом 2 років (медіана виживання 14 місяців). Деяка кількість досліджень показує, що прогноз є поганим, у тому випадку, коли первинна пухлина встановлена після виявлення метастазів у яєчниках, при цьому прогноз стає ще гіршим, якщо первинна пухлина залишається невиявленою.
У літературі оптимальна стратегія лікування пухлини Крукенберга чітко не встановлена.
Питання здійснення хірургічного видалення недостатньо врегульоване. Хіміотерапія або радіотерапія не має значної дії на прогноз пацієнтів з пухлиною Крукенберга.
Під терміном "лікувати" слід розуміти введення суб'єктові сполуки або композиції або комбінації сполук або композицій з метою запобігання або усунення хвороби, включаючи зменшення розмірів пухлини або кількості пухлин у суб'єкта; затримку або уповільнення хвороби в суб'єкта; інгібування або уповільнення розвитку нової хвороби в суб'єкта; зменшення частоти й тяжкості симптомів і/(або рецидивів у суб'єкта, що має в цей час або, який раніше мав захворювання; і/або подовження, тобто збільшення тривалості життя суб'єкта.
Зокрема, термін "лікування хвороби" включає лікування, зменшення тривалості, полегшення, запобігання, уповільнення або інгібування прогресу або погіршення, або запобігання або затримку початку хвороби або її симптомів.
Згідно з винаходом термін "пацієнт" позначає суб'єкта, який потребує лікування, зокрема, хворого суб'єкта, включаючи людей, нелюдиноподібних приматів або інших тварин, зокрема, ссавців, таких як корови, коні, свині, вівці, кози, собаки, кішки, або гризунів, таких як миші й пацюки. В найкращому варіанті здійснення пацієнт є людиною. уб Т-клітини (гама дельта Т-клітини) представляють невелику підгрупу Т-клітин, які мають різні Т-клітинні рецептори (ТОК) на поверхні. Більшість Т-клітин мають ТСК, які складаються із двох ланцюгів глікопротеїнів, які називаються а- і Д-ТСК ланцюги. На противагу до цього, в уб Т- клітин ТСК складається з одного у-ланцюга й одного б-ланцюга. Ця група Т-клітин ще менше поширена, ніж «8 Т-клітини. У людини уб Т клітини відіграють важливу роль у відповідях, пов'язаних з наглядом за стресами, подібними до інфекційних хвороб і аутоіїмунних реакцій.
Крім того, уважається, що індуковані трансформацією зміни в пухлинах викликають відповіді, пов'язані з наглядом за стресом, які опосередковані уб Т-клітинами, і збільшують протипухлинний імунітет. Важливо відзначити, що після захоплення антигену активовані уб Т- клітини в місцях ушкоджень забезпечують цитокіни (наприклад, ІМЕУу, ТМЕо) і/або хемокіни, які опосередковують залучення інших ефекторних клітин, і демонструють безпосередні ефекторні функції, такі як цитотоксичність (за допомогою рецепторів клітинної смерті й цитолітичних гранул) і АОС.
Більша частина уб Т-клітин у периферійній крові експресує МуЗМб2 Т-клітинний рецептор (ТСКуб). Мму9Мб2 Т-клітини характерні тільки для людей і приматів і, як вважається, відіграють попереджувальну й істотну роль у відчутті "небезпеки" у відношенні інвазивних патогенів, оскільки їх кількість різко збільшується при багатьох гострих інфекціях і може перевищувати кількість усіх інших лімфоцитів у межах декількох днів, наприклад, при туберкульозі, сальмонельозі, ерліхіозі, бруцельозі, туляремії, лістеріозі, токсоплазмозі й малярії. уб Т-клітини реагують на невеликі непептидні фосфорильовані антигени (фосфоантигени), такі як пірофосфати, синтезовані бактеріями, і ізопентеніл пірофосфат (ІРР), продукований клітинами ссавців за допомогою мевалонатного шляху. Тоді як вироблення ІРР у нормальних клітинах є недостатнім для активації уб Т-клітин, дисрегуляція мевалонатного шляху в пухлинних клітинах призводить до накопичення ІРР і активації уб Т-клітин. ІРР також може бути 60 терапевтично підвищеним за допомогою амінобісфосфонатів, які інгібують фермент мевалонатного шляху фарнезил пірофосфат синтази (ЕРРБ). Серед інших, такого роду амінобісфосфонатом є золедронова кислота (2А, золедронат, 7отеїайт, Момагііє), яка уже вводиться пацієнтам у клініці для лікування остеопорозу й метастатичного захворювання кісток.
Після обробки РВМСО5 іп міго, 2А поглинається винятково моноцитами. ІРР, накопичується в моноцитах, і вони видозмінюються в антиген-презентуючі клітини, які стимулюють розвиток уб
Т-клітин. У даному контексті кращим є додавання інтерлейкіну-2 (1-2) як фактора росту й виживання для активованих уб Т-клітин. І нарешті, повідомлялося, що деякі алкильовані аміни активують Му9Мб2 Т-клітини іп міїго, однак, тільки в мілімолярних концентраціях.
Згідно з винаходом термін "засіб, який стимулює уб Т-клітини, " має відношення до сполук, які стимулюють розвиток уб Т-клітин, зокрема, Му9Мб2 Т-клітин, іп міго і/або іп мімо, зокрема шляхом індукції активації й розмноження уб Т-клітин. Бажано, термін має відношення до сполук, які збільшують, іп міго і/або іп мімо, вироблення ізопентеніл пірофосфату (ІРР) у клітинах ссавців, переважно шляхом інгібування ферменту мевалонатного шляху фарнезил пірофосфат синтази (ЕРРБ).
Однієї окремою групою сполук, які стимулюють уб Т-клітини, є бісфосфонати, зокрема азотовмісні бісфосфонати (М-бісфосфонати; амінобісфосфонати).
Наприклад, придатні для використання у винаході бісфосфонати можуть включати одну або більше з поміж наступних сполук, включаючи їх аналоги й похідні, фармацевтичні солі, гідрати, складні ефіри, кон'югати й проліки:
П-гідрокси-2-(1Н-імидазол-1-іл)етан-1,1-диїіл|біс (фосфонова кислота), золедронова кислота, наприклад, золедронат; (дихлор-фосфоно-метил) фосфонова кислота, наприклад, клодронат
П-гідрокси-3-(метил(пентил)аміно|пропан-1,1-диіл)біс (фосфонова кислота), ібандронова кислота, наприклад, ібандронат (З-аміно-1-гідроксипропан-1,1-диіл)біс(фосфонова кислота), памідронова кислота, наприклад, памідронат; (1-гідрокси-1-фосфоно-2-піридин-З-іл-етилу фосфонова кислота, ризедронова кислота, наприклад, ризедронат; (1-гідрокси-2-імідазо|1,2-а|піридин-3-іл-1-фосфоноетил) фосфонова кислота, мінодронова кислота;
ІЗ-(диметиламіно)-1-гідроксипропан-1,1-диїіл|біс (фосфонова кислота), олпадронова кислота.
І4-аміно-1-гідрокси-1-(гідрокси-оксидо-фосфорил)-бутил| фосфонова кислота, алендронова кислота, наприклад, алендронат;
ІЦиклогептиламіно)метиленібіс(фосфонова кислота), інкадронова кислота; (1-гідроксиетан-1,1-диіл)біс(фосфонова кислота), етидронова кислота, наприклад, етидронат; і
ЦА-хлорфеніл)тіо|метилен)біс(фосфонова кислота), тилудронова кислота.
Згідно з винаходом, золедронова кислота (ІММ) або золедронат (який продається компанією
Момапіє під торговими марками 7отеїа, 7отега, Асіабзіа і Кесіає) є особливо бажаним бісфосфонатом. 7отеїа використовується для запобігання переломів костей скелету в пацієнтів з такими видами раку, як множинна мієлома й рак передміхурової залози, а також для лікування остеопорозу. Препарат також використовується для лікування гіперкальціємії при злоякісних новоутвореннях і може бути корисним при лікуванні болі, яка є результатом кісткових метастазів.
В одному з кращих варіантів здійснення, засіб, який стимулює уб Т-клітини, згідно з винаходом уводять у комбінації з ІЇ-2. Показано, що така комбінація, зокрема, є ефективною при опосередкуванні розмноження й активації у962 Т-клітин.
Інтерлейкін-2 (ІІ -2) - це інтерлейкін, тип цитокіна - сигнальної молекули в імунній системі. Це білок, який "притягає" лімфоцити і є частиною природної імунної відповіді на мікробну інфекцію, і відіграє роль при проведенні розрізнення між "чужим" ("не своїм") і "своїм". І-2 опосередковує свої ефекти шляхом зв'язування з І-2 рецепторами, які експресуються лімфоцитами.
І/-2, який використовується у винаході, може бути будь-яким 1//-2, який сприяє або забезпечує можливість стимулювання уб Т-клітин, і може походити від будь-яких видів, бажано, від людини. 1-2 може бути ізольованим, отриманим рекомбінантним шляхом або синтетичним
І/-2, може бути інтерлейкіном природного походження або модифікованим ЇЇ -2.
Термін "засіб, який стабілізує або збільшує експресію СІ ОМ18.2," відноситься до засобу або комбінації засобів, забезпечення наявності яких у клітинах приводить до підвищення рівнів РНК іМабо білка СГОМ18.2, бажано підвищення рівнів більа СІ ОМ18.2 на клітинній поверхні, у порівнянні з умовами, коли клітини не забезпечуються даним засобом або комбінацією засобів. 60 Переважно, клітина є раковою клітиною, зокрема, раковою клітиною, яка експресує СІ ОМ18.2,
такою як клітини описаних тут видів раку. Термін "засіб, який стабілізує або збільшує експресію
СГ ОМ18.2," відноситься, зокрема, до засобу або комбінації засобів, забезпечення наявності яких у клітинах приводить до більш високої щільності СІ ОМ18.2 на поверхні зазначених клітин у порівнянні з умовами, коли клітини не забезпечуються даним засобом або комбінацією засобів. "Стабілізація експресії СІ ОМ18.2" включає, зокрема, ситуацію, коли даний засіб або комбінація засобів запобігає зниженню або зменшує зниження експресії СІ ОМ18.2, наприклад, експресія
СІГОМ18.2 могла б знижуватися без забезпечення наявності засобу або комбінації засобів, а забезпечення наявності засобу або комбінації засобів запобігає зазначеному зниженню або зменшує зниження СІ ОМ18.2 експресії. "Збільшення експресії СІ ОМ18.2" включає, зокрема, ситуацію, коли даний засіб або комбінація засобів збільшує експресію СІ ОМ18.2, наприклад, експресія СІОМ18.2 могла б знижуватися, залишатися в основному постійною або збільшуватися без забезпечення наявності засобу або комбінації засобів, а забезпечення наявності засобу або комбінації засобів збільшує С ОМ18.2 експресію в порівнянні з умовами без забезпечення наявності засобу або комбінації засобів, так що одержана в результаті експресія є більш високою в порівнянні із ситуацією, за якої експресія СІ ОМ18.2 могла знижуватися, залишатися в основному постійною або збільшуватися без забезпечення наявності засобу або комбінації засобів.
Згідно з винаходом термін "засіб, який стабілізує або збільшує експресію СІ ОМ18.2," включає хіміотерапевтичні засоби або комбінації хіміотерапевтичних засобів, таких як цитостатичні засоби. Хіміотерапевтичні засоби можуть впливати на клітини одним з наступних способів: (1) можуть пошкоджувати ДНК клітин, так що вони не здатні більше відтворюватися, (2) інгібувати синтез нових ниток ДНК, так що стає неможливою клітинна реплікація, (3) зупиняти мітотичні процеси в клітинах, так що клітини не можуть ділитися на дві клітини.
Згідно з винаходом термін "засіб, який стабілізує або збільшує експресію СІ ОМ18.2," переважно відноситься до засобу або комбінації засобів, таких як цитостатичні сполуки або комбінація цитостатичних сполук, забезпечення наявності яких у клітинах, зокрема, ракових клітинах, призводить до зупинки або накопичення клітин в одній або більше фазах клітинного циклу, бажано в одній або більше фазах клітинного циклу, відмінних від (31- і (30-фаз, бажано відмінних від з1-фази, бажано в одній або більше з поміж 52- або 5-фази клітинного циклу, такої як 61/052-, 5/52-, (42- або 5-фаза клітинного циклу. Термін "зупинка або накопичення клітин в одній або більше фазах клітинного циклу" означає, що відсоток клітин, які перебувають у зазначеної одній або більш фазах клітинного циклу, збільшується. Для самовідтворення кожна клітина проходить цикл, який включає чотири фази. Перша фаза називається с1-фаза, у цій фазі клітина готується до подвоєння своїх хромосом. Друга фаза називається 5-фаза, у цій фазі відбувається синтез і подвоєння ДНК. Наступна фаза - це с2-фаза, у ній відбувається подвоєння РНК і білка. Заключна фаза - це М-фаза, яка є фазою фактичного поділу клітини. У цій кінцевій стадії подвоєні ДНК і РНК розходяться й переміщаються до різних кінців клітини, і клітина дійсно ділиться на дві ідентичні, функціональні клітини. Хіміотерапевтичні засоби, які пошкоджують ДНК, як правило, призводять до накопичення клітин у фазі (1 і/або с2.
Хіміотерапевтичні засоби, що перешкоджають клітинному росту, втручаючись у синтез ДНК, наприклад, антиметаболіти, як правило, призводять до накопичення клітин в 5-Фазі.
Прикладами цих лікарських засобів є б-меркаптопурин і 5-фторурацил.
Згідно з винаходом термін "засіб, який стабілізує або збільшує експресію СІ ОМ18.2," включає антрацикліни, такі як епірубіцин, сполуки платини, такі як оксаліплатин і цисплатин, аналоги нуклеозидів, такі як 5-фторурацил або його проліки, таксани, такі як доцетаксел, і аналоги камптотецину, такі як іринотекан і топотекан, і комбінації лікарських препаратів, такі як комбінації лікарських засобів, які містять один або більше антрациклінів, таких як епірубіцин, оксаліплатин їі 5-фторурацил, такі як комбінація лікарських засобів, які містить оксаліплатин і 5- фторурацил, або інші описані тут лікарські комбінації.
В одному з кращих варіантів здійснення "засіб, який стабілізує або збільшує експресію
СІГОМ18.2," є "засобом, який викликає імуногенну загибель клітин".
За певних обставин ракові клітини можуть вступати на шлях летального стресу, пов'язаного з виділенням визначеної із просторово-часової точки зору комбінації сигналів, яка перетворюється імунною системою на активацію пухлино-специфічних імунних відповідей (2модеї Її. еї аї. (2010) Сеї! 140: 798-804). За такого розвитку подій ракові клітини починають виділяти сигнали, які сприймаються вродженими імунними ефекторами, такими як дендритні клітини, щоб ініціювати когнатну (содпаїєе) імунну відповідь, яка зачіпає СО8-- Т-клітини й ІЕМ-у сигнальний шлях, так що загибель пухлинної клітини може викликати ефективну протипухлинну імунну відповідь. Ці сигнали включають предапоптотичну експозицію білка-шаперона 60 ендоплазматичного ретикулума (ЕК) калретикуліну (СКТ) на клітинній поверхні,
предапоптотичну секрецію АТФ і постапоптотичне вивільнення ядерного білюа НМОВІ1. У сукупності ці процеси становлять молекулярні детермінанти імуногенної загибелі клітин (ІС).
Антрацикліни, оксаліплатин і у-опромінення здатні індукувати усі сигнали, які визначають ІСО, у той час як одного цисплатину, наприклад, недостатньо для індукції переміщення СКТ від ЕК до поверхні клітин, що гинуть - процесу, який передбачає стрес ЕК - і потрібне додавання тапсигаргину, індуктора ЕК-стресу.
Згідно з винаходом термін "засіб, який викликає імуногенну загибель клітин, " відноситься до засобу або комбінації засобів, наявність яких у клітинах, зокрема ракових клітинах, дозволяє стимулювати вступ клітини на шлях летального стресу, який в остаточному підсумку спричиняє пухлино-специфічні імунні відповіді. Зокрема, "засіб, який викликає імуногенну загибель клітин, " (при забезпеченні його наявності в клітинах) викликає виділення клітинами визначених із просторово-часової точки зору комбінації сигналів, включаючи, зокрема, предапоптотичну експозицію білка-шаперона ендоплазматичного ретикулума (ЕК) калретикуліну (СКТ) на клітинній поверхні, предапоптотичну секрецію АТФ і постапоптотичне вивільнення ядерного білка НМОВІ.
Згідно з винаходом термін "засіб, який викликає імуногенну загибель клітин", включає антрацикліни й оксаліплатин.
Антрацикліни - це клас лікарських засобів, які звичайно використовуються у хіміотерапії пухлин, також відомий за назвою антрациклінових антибіотиків. У структурному відношенні всі антрацикліни мають загальну структуру 7,8,9,10-тетрагідротетрацен-5,12-хінону, який має чотири кільця й звичайно потребують глікозилювання в специфічних сайтах.
Антрацикліни переважно здійснюють один або більше із наступних механізмів дії: 1.
Інгібування синтезу ДНК і РНК шляхом інтеркаляції між парами основ ДНК/РНК ланцюжка, що запобігає реплікації швидкозростаючих ракових клітин. 2. Інгібування ферменту топоізомерази
ІЇ, що перешкоджає релаксації суперспіральної ДНК і в такий спосіб блокує транскрипцію й реплікацію ДНК. З. Утворення залізо-опосередкованих вільних кисневих радикалів, що пошкоджують ДНК і мембрани клітин.
Згідно з винаходом термін "антрациклін" переважно має відношення до препарату, бажано протипухлинного препарату, призначеного для індукції апоптозу, бажано шляхом інгібування повторного зв'язування (геріпаіпод) ДНК із топоїзомеразою.
Бажано, згідно з винаходом термін "антрациклін" в основному відноситься до класу сполук, які мають наступну кільцеву структуру (в) он (в) он включаючи аналоги й похідні, фармацевтичні солі, гідрати, складні ефіри, кон'югати та їх проліки.
Приклади антрациклінів і аналогів антрациклінів включають, але не обмежуються цим, даунорубіцин (дауноміцин), доксорубіцин (адриаміцин), епірубіцин, ідарубіцин, родоміцин, пірарубіцин, валрубіцин, М-трифтор-ацетил доксорубіцин-14-валерат, аклациноміцин, морфолінодоксорубіцин (морфоліно-БОХ), ціаноморфоліно-доксорубіцин (ціаноморфоліно- рох), 2-піроліно-доксорубіцин (2-РООХ), 5-імінодауноміцин, мітоксантрон і аклациноміцин А (акларубіцин). Мітоксантрон є членом класу антрацендіонів, аналогів антрациклінів, які втратили цукровий компонент антрациклінів, але, які зберегли плоску поліциклічну структуру ароматичних кілець, яка забезпечує можливість інтеркаляції в ДНК.
Найкращим антрацикліном згідно з винаходом є сполуки наступної формули:
(в) в в) он !
Х ви
В» (о он о МН» о Аз
В,
СНз у якій
В: вибирають із групи, яка складається з Н і ОН, КЕ» вибирають із групи, яка складається з Ні
ОМе, Ез вибирають із групи, яка складається з Н і ОН, і Ка вибирають із групи, яка складається з ніон.
В одному варіанті здійснення Кі є Н, Ко є ОМе, Ез є Н, і Ка є ОН. В іншому варіанті здійснення К: є ОН, ЕК» є ОМе, Ез є Н, і Ка є ОН. В іншому варіанті здійснення ЕК: є ОН, ЕЕ» є ОМе,
Вз є ОН, і Ра є Н. В іншому варіанті здійснення Кі: є Н, Ке є Н, Ез є Н, і Ка є ОН.
Зокрема, передбачено, що антрацикліном в контексті даного винаходу є епірубіцин.
Епірубіцин є антрацикліновим препаратом, який мають наступну формулу: о но о ОН зва:
О ОонНОо,.0.,сН нас? З "он
МН і продається під торговою маркою еленс у США й під торговою маркою фарморубіцин або епірубіцин (Ебежме) в інших країнах. Зокрема, термін "епірубіцин" відноситься до сполуки (8ЕК, 105)-10-(25, 45, 58, 65)-4-аміно-5-гідрокси-6-метил-оксан-2-іл|окси-6,11-дигідрокси-8-(2- гідроксиацетил)-1-метокси-8-метил-9,10-дигідро-7Н-тетрацен-5,12-діону. Епірубіцин є кращим у порівнянні з доксорубіцином, найбільш популярним антрацикліном, у деяких хіміотерапевтичних режимах, тому що, очевидно, він викликає менше побічних ефектів.
Згідно з винаходом термін "сполука платини" має відношення до сполук, які містять платину у своїх структурах, таких як платинові комплекси, і включає такі сполуки, як цисплатин, карбоплатин і оксаліплатин.
Термін "цисплатин" відноситься до сполуки цис-диамінодихлороплатини (ІІ) (СООР), яка має наступну формулу: лі, ре "а
СІ МН,
Термін "карбоплатин" відноситься до сполуки цис-диаміно(1,1-
Чиклобутандикароскрилато)платинис), яка має наступну формулу:
НзЗМ Ф) їжи ре
Нзім о (6;
Термін "оксаліплатин" відноситься до сполуки платини, яка утворює комплекс із диаміноциклогексаном, і яка має наступну формулу:
н. ІФ)
М Ко) я ря пизеорі о ху
Н. о!
Зокрема, термін "оксаліплатин" відноситься до сполуки (ІК, 2К)-циклогексан-1,2- діамін|(етандіоато-О, О)платина(ІІ). Оксаліплатин для ін'єкцій також продається під торговою маркою елоксатин.
Термін "нуклеозидний аналог" відноситься до структурного аналога нуклеозида, включаючи й аналоги пурину й аналоги піримідину. Зокрема, термін "нуклеозидний аналог" відноситься до похідних фторпіримідину, які включають фторурацил і його проліки.
Термін "фторурацил" або "5-фторурацил" (5-РШ або 15) (продається під торговими марками
Адруцил, Сагас, Ефудикс, Ефудекс і Флюороплекс) відноситься до сполуки, яка є аналогом піримідину, і яка має наступну формулу:
НН ней о "фе
Е
Зокрема, термін відноситься до сполуки 5-фтор-1Н-піримідин-2,4-діон.
Термін "капецитабін" (ХеІода, Коспе) відноситься до хіміотерапевтичного засобу, який є проліками, які перетворюється на 5-ГО у тканинах. Капецитабін може вводитися перорально й має наступну формулу: но Он і і і Хм о
На" шт ! ра і но ал ше М ; Н
Е
Зокрема, термін відноситься до сполуки пентил |1-(3,4-дигідрокси-5-метилтетрагідрофуран- 2-іл)-5-фтор-2-оксо-1Н-піримідин-4-ілІікарбамат.
Таксани представляють клас дитерпенових сполук, які спочатку були отримані із природних джерел, таких як рослини роду Тахив5, а деякі були синтезовані штучно. Основним механізмом дії лікарських препаратів класу таксанів є порушення функції мікротрубочок, і в такий спосіб інгібування процесу клітинного поділу. Таксани включають доцетаксел (таксотер) і паклітаксел (таксол).
Згідно з винаходом термін "доцетаксел" відноситься до сполуки, яка має наступну формулу: сн нас ЇЙ о но он нс (в; Нзе ра нос (в) Мн о
Е я -ез юр он о о зр" 5 і
Згідно з винаходом термін "паклітаксел" відноситься до сполуки, яка має наступну формулу:
о. сн щ З
У о о
ОН
ОМ пе, бу Ф - «вай к (ІФ) он Ооні: НА 0-0 ОУН» і
Згідно з винаходом термін "аналог камптотецину" відноситься до похідних сполуки камптотецину (СРТ; (5)-4-етил-4-гідрокси-1 Н-піраної|3',4"6,7|індолізино (1,2-БІ хінолін-3,14-(4Н, 12Н)-діон). Бажано, термін "аналог камптотецину" відноситься до сполук, які містять наступну 5 структуру: о - ЧК
А кл "оо
М .
Назб--с ОН (в)
Згідно з винаходом кращими аналогами камптотецину є інгібітори ферменту ДНК- топоїзомерази І! (ро І). Кращими аналогами камптотецину згідно з винаходом є іринотекан і топотекан.
Іринотекан є лікарським засобом, який запобігає розкручуванню ДНК шляхом інгібування топоїзомерази І. З погляду хімії, він є напівсинтетичним аналогом природного алкалоїду камптотецину, який має наступну формулу: нс о - М о »-5
Он й о о щі)
НУ
Зокрема, термін "Іринотекан" відноситься до сполуки (5)-4,11-диетил-3,4,12,14-тетрагідро-4- гідрокси-3,14-діоксо1Н-піраної3",4":6,7|-індолізино|1,2-Біхінолін-9-іл-(1,4'біпиперидині-1 - карбоксилат.
Топотекан є інгібітором топоізомерази, який має формулу: (6) нас
З М - /4 о
Нзо 7 но М ноу 9
Нзо
Зокрема, термін "топотекан" відноситься до сполуки (5)-10-(диметиламіно)метил|-4-етил- 4,9-дигідрокси-1 Н-пірано/3',4"6,7|індолізино|1,2-БІхінолін-3,14(4Н, 12Н)-діон моногідрохлорид.
Згідно з винаходом засіб, який стабілізує або збільшує експресію СГОМ18.2, може бути хіміотерапевтичним засобом, зокрема, хіміотерапевтичним засобом, визнаним у протипухлинній терапії, може бути частиною комбінації лікарських засобів, такої як комбінація лікарських засобів, загальноприйнята для застосування при лікуванні раку. Такою комбінацією лікарських засобів може бути комбінація лікарських засобів, які використовуються у хіміотерапії, і може бути комбінація лікарських засобів, які використовуються у хіміотерапевтичному режимі, обраному із групи, яка складається з ЕОХ хіміотерапії, ЕСЕ хіміотерапії, ЕСХ хіміотерапії, ЕОГ хіміотерапії, РО хіміотерапії, РОЇ РОХ хіміотерапії, БОЇ РІКІ хіміотерапії, ОСЕ хіміотерапії й
ЕГОТ хіміотерапії.
Комбінація лікарських засобів, які використовуються у режимі ЕОХ хіміотерапії, включає епірубіцин, оксаліплатин і капецитабін. Комбінація лікарських засобів, які використовуються у режимі ЕСЕ хіміотерапії, включає епірубіцин, цисплатин і 5-фторурацил. Комбінація лікарських засобів, які використовуються у режимі ЕСХ хіміотерапії, включає епірубіцин, цисплатин і капецитабін. Комбінація лікарських засобів, які використовуються у режимі ЕОЕ хіміотерапії, включає епірубіцин, оксаліплатин і 5-фторурацил.
Епірубіцин звичайно призначають у дозі 50 мг/м", цисплатин у дозі 60 мг/м, оксаліплатин у дозі 130 мг/м, тривала венозна інфузія 5-фторурацилу в дозі 200 мг/м"/день і перорально капецитабін 625 мг/м: два рази на день, усього вісім З-тижневих циклів.
Комбінація ліків, які використовуються у режимі хіміотерапії РО, включає 5-фторурацил, фолінову кислоту й оксаліплатин (зазвичай 5-фторурацил 2,600 мг/м? 24-годинна інфузія, фолінова кислота 200 мг/м: і оксаліплатин 85 мг/м, кожні 2 тижні).
РОГРОХ - це режим хіміотерапії, який включає фолінову кислоту (лейковорин), 5- фторурацил й оксаліплатину. Рекомендований режим дозування кожні два тижні виглядає наступним чином: День 1: Оксаліплатин 85 мг/м", внутрішньовенна (ІМ) інфузія й лейковорин 200 мг/м? ІМ інфузія, потім 5-БИ 400 мг/м? ІМ уведення, потім 5-РО 600 мг/м? ІМ уведення у вигляді 22-годинного безперервного уливання; День 2: Лейковорин 200 мг/м? ІМ уливання протягом 120 хвилин, потім 5-РО 400 мг/м? ІМ уведення в протягом 2-4 хвилин, потім 5-БО 600 мг/м? ІМ уливання у вигляді 22-годинного безперервного уливання.
Комбінація ліків, які використовуються у режимі хіміотерапії БОЇ РІКІ, включає 5- фторурацил, лейковорин і іринотекан.
Комбінація ліків, які використовуються у режимі хіміотерапії ОСЕ, включає доцетаксел, цисплатин і 5-фторурацил.
Комбінація ліків, які використовуються у режимі хіміотерапії РОТ, включає доцетаксел, оксаліплатин, 5-фторурацил і фолінову кислоту.
Термін "фолінова кислота" або "лейковорин" відноситься до сполуки, яка використовується в синергійній комбінації з хіміотерапевтичним препаратом 5-фторурацилом. Фолінова кислота має наступну формулу: (6) о о С ут (9) нм М о он з пн он
Зокрема, термін відноситься до сполуки (25)-2-Ц4-(2-аміно-5-форміл-4-оксо-5,6,7,8- тетрагідро-1Н-птеридин-6б-іл)уметиламіно|бензоїламіно)пентандіова кислота.
В одному варіанті здійснення даного винаходу стандартна хіміотерапія відповідно до ЕОХ режиму у комбінації з антитілом, яке проявляє здатність зв'язуватися з СІ ОМ18.2, зокрема
ІМАВЗ3З62, проводиться максимум протягом 8 циклів. Дози й режими можуть бути такими, як зазначено далі: "- 50 мг/м? епірубіцину вводиться внутрішньовенно (і.м.) у вигляді 15 хвилинного уливання в 1 день кожного циклу протягом ЕОХ фази. "- 130 мг/м2 оксаліплатину вводиться і.у. у вигляді 2-годинного уливання в 1 день кожного циклу протягом ЕОХ фази. "625 мг/м2 капецитабіну призначається для перорального приймання (р.о.) два рази на день протягом 21 дня ранком і ввечері, починаючи з вечора першого дня кожного циклу протягом
ЕОХ фази. "- 1000 мг/м2 антитіл уводиться і.м. у вигляді 2-годинного уливання в 1 день циклу 1. Після цього 600 мг/м? антитіло вводиться ім. у вигляді 2-годинного уливання в 1 день кожного наступного циклу після завершення уливання оксаліплатину. " Після завершення хіміотерапії пацієнт продовжує приймання 600 мг/м? антитіл у вигляді 2- годинного уливання кожні З або 4 тижня.
В одному варіанті здійснення даного винаходу стандартна хіміотерапія відповідно до ЕОХ- режиму у комбінації з 2АЛІ-2 і антитілом, яке проявляє здатність зв'язуватися з СІ ОМ18.2, зокрема ІМАВЗ62, проводиться аж до 8 циклів (24 тижня).
Термін "антиген" має відношення до агента, такого як білок або пептид, який містить епітоп, на який спрямована або повинна бути спрямована імунна відповідь. У кращому варіанті здійснення антиген є асоційованим з пухлиною антигеном, таким як СІ ОМ18.2, тобто, компонентом ракових клітин, які походять з цитоплазми, клітинної поверхні й клітинного ядра, зокрема, тих антигенів, які виробляються, переважно у великій кількості, внутрішньоклітинно або як поверхневі антигени на ракових клітинах.
У контексті даного винаходу термін "асоційований з пухлиною" передусім має відношення до білків, які за нормальних умов специфічно експресуються в обмеженому числі тканин і/або органів або під час конкретних стадій розвитку й експресуються або ненормально експресуються в одній або більше пухлинних або ракових тканинах. У контексті даного винаходу асоційований з пухлиною бажано пов'язаний із клітинною поверхнею ракової клітини й бажано не експресується або тільки вкрай рідко експресується в нормальних тканинах.
Термін "епітоп" відноситься до антигенної детермінанти в молекулі, тобто частини в молекулі, яка розпізнається імунною системою, наприклад, яка розпізнається антитілом.
Наприклад, епітопи є окремими, тривимірними ділянками на антигені, які розпізнаються імунною системою. Звичайно епітопи складаються з хімічно активних поверхневих груп молекул, таких як амінокислоти або бічні ланцюги цукрів, і звичайно мають специфічні тривимірні структурні характеристики, а також специфічні характеристики заряду. Конформаційні й неконформаційні епітопи відрізняться тим, що зв'язування з першими, але не із другими, втрачається в присутності денатуруючих розчинників. Епітоп білка, такого як СІ ОМ18.2, бажано містить безперервну або переривчасту частину зазначеного білка й переважно становить від 5 до 100, бажано від 5 до 50, ще краще від 8 до 30, найкраще від 10 до 25 амінокислот у довжину, наприклад, бажано епітоп може мати 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 або 25 амінокислот у довжину.
Термін "антитіло" відноситься до глікопротеїну, який містить, щонайменше, два важкі (Н) ланцюги й два легкі (І) ланцюги, взаємо-з'єднані дисульфідними зв'язками, і включає будь-яку молекулу, яка містить антигензв'язуючу ділянку. Термін "антитіло" включає моноклональні антитіла й фрагменти або похідні антитіл, включаючи, без обмеження, людські антитіла, гуманізовані антитіла, химерні антитіла, одноланцюгові антитіла, наприклад, 5сЕм5 і антигензв'язуючі фрагменти антитіл, такі як Раб і Рар' фрагменти, а також включає всі рекомбінантні форми антитіл, наприклад, антитіла, експресовані в прокаріотах, неглікозильовані антитіла й будь-які антигензв'язуючі фрагменти антитіл і похідні, як описується тут. Кожний важкий ланцюг складається з варіабельної області важкого ланцюга (позначається в описі МН) і константної області важкого ланцюга. Кожний легкий ланцюг складається з варіабельної області легкого ланцюга (позначається в описі МІ) і константної області легкого ланцюга. Області МН і
МІ. можна додатково розділити на області гіперваріабельності (гіпермінливі), які називаються гіперваріабельними ділянками (СОК.), і які чергуються з ділянками, які є більш консервативними, які називаються каркасними ділянками (ЕК). Кожна УН і МІ. складається із трьох СОК і чотирьох
ЕК, що розташовуються від амінокінця до карбоксикінця в наступному порядку: ЕКТ, СОКІ1, ЕКЗ,
СОВ2, ЕАЗ, СОВЗ, ЕН4. Варіабельні області важкого й легкого ланцюга містять домен зв'язування, який взаємодіє з антигеном. Константні області антитіл можуть опосередковувати зв'язування імуноглобуліну із тканиною або факторами "хазяїна", включаючи різні клітини імунної системи (наприклад, ефекторні клітини) і перший компонент (Сід) класичної системи комплементу.
Антитіла, описані в даному документі, можуть бути людськими антитілами. Використаний в описі термін "людське антитіло" включає антитіла, які мають варіабельну й константну області, джерелом походження яких є людські зародкові послідовності імуноглобуліну. Людські антитіла, описані в даному документі, можуть містити залишки амінокислот, не кодовані людськими зародковими послідовностями імуноглобуліну (наприклад, мутації, уведені шляхом випадкового або сайт-специфічного мутагенезу іп міго або шляхом соматичних мутацій іп мімо).
Термін "гуманізоване антитіло" відноситься до молекули, яка має ділянку зв'язування антигену, отриману в основному від імуноглобуліну такого виду тварин, який не є людиною, при цьому інша частина молекули імуноглобуліну грунтується на структурі й/або послідовності імуноглобуліну людини. Ділянка зв'язування антигену може містити або повні варіабельні домени, приєднані до константних доменів, або тільки гіперваріабельні ділянки (СОК), приєднані до придатних каркасних ділянок у варіабельних доменах. Ділянки зв'язування антигену можуть бути дикого типу або модифікованими за допомогою однієї або більше амінокислотних замін, наприклад, модифікованими для того, щоб бути більш подібними на людський імуноглобулін. Деякі форми гуманізованих антитіл зберігають усі СОК-послідовності (наприклад, гуманізоване мишаче антитіло, яке містить усі шість СОК від мишачого антитіла).
Інші форми мають один або більше СОК, змінених у порівнянні з первинним антитілом.
Термін "химерне антитіло" відноситься до антитіл, у яких одна частина кожної з амінокислотних послідовностей важкого й легкого ланцюгів є гомологічною до відповідних послідовностей в антитілі, отриманому від конкретного виду або яке належить до певного класу, тоді як інший сегмент ланцюга є гомологічним до відповідної послідовності іншого виду. 60 Звичайно варіабельна ділянка й легкого й важкого ланцюгів копіює варіабельні ділянки антитіл,
отримані від одного виду ссавців, тоді як константні частини є гомологічними до послідовностей антитіл, отриманих від іншого виду. Однією очевидною перевагою таких химерних форм є те, що варіабельну ділянку можна легко одержати з відомих на цей час джерел, використовуючи легкодоступні В-клітини або гібридоми від організмів-хазяїв, які не є людиною, у комбінації з константними областями, отриманими, наприклад, із препаратів клітин людини. При цьому, варіабельна область має перевагу, яка полягає в легкості одержання, а специфічність не підпадає під вплив джерела, константна область, будучи людською, менш імовірно викличе імунну відповідь у людини при введенні антитіл, ніж викликала б константна область із джерела, яке не є людиною. Однак дане визначення не обмежується цим окремим прикладом.
Терміни "антигензв'язуюча ділянка" антитіла (або просто "ділянка зв'язування") або "антигензв'язуючий фрагмент" антитіла (або просто "зв'язувальний фрагмент") або подібні терміни відносяться до одного або більше фрагментів антитіла, які зберігають здатність до специфічного зв'язування з антигеном. Показано, що антигензв'язуюча функція антитіла може здійснюватися фрагментами повнорозмірного антитіла. Приклади зв'язувальних фрагментів, охоплені терміном "антигензв'язуюча ділянка" антитіла, включають (ї) Раб фрагменти, одновалентні фрагменти, які складаються із МІ, МН, СІ ї СН доменів; (ії) Е(аб)2 фрагменти, двовалентні фрагменти, що містять два Еар-фрагменти, з'єднані дисульфідним містком у шарнірній області; (ії) га фрагменти, які складаються із УН і СН доменів; (ім) Ем фрагменти, які складаються із МІ і МН доменів одноланцюгових антитіл, (м) ЧАЮ фрагменти (Мага еї аї, (1989)
Маїшге 341: 544-546), які складаються із МН домена; (мі) ізольовані гіперваріабельні ділянки (СОК) і (мії) комбінації двох або більше ізольованих СОК, які необов'язково можуть з'єднуватися синтетичним лінкером. Крім того, хоча два домена Ем фрагмента, МІ. ї МН, кодуються окремими генами, їх можна з'єднати, використовуючи рекомбінантні методи, за допомогою синтетичних лінкерів, що дає їм можливість формувати єдиний білковий ланцюг, у якому МІ і МН області розташовуються парами, щоб утворювати одновалентні молекули (відомі як одноланцюговий Ем (5сЕм); дивися, наприклад, Віга еї а. (1988) Зсіепсе 242: 423-426; і Нив5юп еї а. (1988) Ргос. Маї).
Асад. Осі. ОБА 85: 5879-5883). Такі одноланцюгові антитіла також охоплюються терміном "антигензв'язуюча ділянка" антитіла. Додатковим прикладом є домен-зв'язувальні гібридні імуноглобуліни, які містять (ї) поліпептидний домен зв'язування, який приєднується до шарнірної області імуноглобуліну, (ії) константну область СН2 важкого ланцюга імуноглобуліну, приєднану до шарнірної області, і (ії) константну область СНЗ важкого ланцюга імуноглобуліну, приєднану до константної області СН2. Зв'язувальний домен поліпептиду може бути варіабельною областю важкого ланцюга або варіабельною областю легкого ланцюга. Домен-зв'язувальні імуноглобулінові гібридні білки додатково розкриваються в США 2003/0118592 і США 2003/0133939. Ці фрагменти антитіл одержують за допомогою звичайних методів, відомих фахівцям у даній галузі техніки, при цьому фрагменти зазнають скринінгу щодо їх придатності, так само, як і інтактні антитіла.
Термін "біспецифічна молекула" включає будь-який агент, наприклад, білок, пептид або білковий або пептидний комплекс, який має дві різні специфічності зв'язування. Наприклад, молекула може зв'язуватися з або взаємодіяти з (а) антигеном клітинної поверхні, і (Б) Ес- рецептором на поверхні ефекторної клітини. Термін "мультиспецифічна молекула" або "гетероспецифічна молекула" включає будь-який агент, наприклад, білок, пептид або білковий або пептидний комплекс, який має більш ніж дві різні специфічності зв'язування. Наприклад, молекула може зв'язуватися з або взаємодіяти з (а) антигеном клітинної поверхні й (Б) Ес- рецептором на поверхні ефекторної клітини й (с), щонайменше, з одним іншим компонентом.
Відповідно, винахід включає, але не обмежується цим, біспецифічні, триспецифічні, тетраспецифічні та інші мультиспецифічні молекули, спрямовані на СІ ОМ18.2 і на інші мішені, такі як Ес-рецептори на ефекторних клітинах. Термін "біспецифічні антитіла" також включає діабоди (аіабодіе5). Діабоди є двовалентними біспецифічними антитілами, у яких МН і мМ домени експресуються на одному поліпептидному ланцюзі, але з використанням лінкера, який є занадто коротким, щоб дати можливість розташовуватися парами між двома доменами на одному й тому ж ланцюзі, таким чином, змушуючи домени утворювати пари з комплементарними доменами іншого ланцюга й породжуючи дві антигензв'язуючі ділянки (дивися, наприклад, Ногїїїдег, Р., еї аІ. (1993) Ргос. Маї!. Асад. осі. ОБА 90: 6444-6448; Роак, В. 55 .,еїаї!. (1994) Бігисіште 2: 1121-1123).
Антитіло може бути кон'юЮпованим з терапевтичною молекулою або агентом, таким як цитотоксин, лікарським засобом (наприклад, імуносупресорним засобом) або радіоізотопом.
Цитотоксин або цитотоксичний засіб включає будь-який засіб, який завдає шкоди й, зокрема, знищує клітини. Приклади включають таксол, цитохалазин В, граміцидин О, етидіум бромід, 60 еметин, мітоміцин, етопозид, тенопозид, вінкристин, вінбластин, колхіцин, доксорубіцин,
даунорубіцин, дигідроксиантрациндіон, мітоксантрон, мітраміцин, актиноміцин ОО, 1- дегідротестостерон, глюкокортикоїди, прокаїн, тетракаїн, лідокаїн, пропранолол і пуроміцин та їх аналоги або гомологи. Придатні для утворення кон'югатів з антитілами терапевтичні засоби включають, але не обмежуються цим, антиметаболіти (наприклад, метотрексат, 6- меркаптопурин, б-тіогуанін, цитарабін, флударабін, 5-фторурацил декарбазин), алкілюючі засоби (наприклад, мехлоретамін, тіотепа, хлорамбуцил, мелфалан, кармустин (В5МИ) і ломустин (ССМІ), циклофосфамід, бусулфан, дибромманітол, стрептозотоцин, мітоміцин С, і цис-дихлородиамін платини (І) (0О0ОР) цисплатин), антрацикліни (наприклад, даунорубіцин (раніше даунорубіцин) і доксорубіцин), антибіотики (наприклад, дактиноміцин (раніше актиноміцин), блеоміцин, мітраміцин і антраміцин (АМС), і антимітотичні засоби (наприклад, вінкристин і вінбластин). У кращому варіанті здійснення терапевтичний засіб є цитотоксичним засобом або радіотоксичним засобом. В іншому варіанті здійснення терапевтичний засіб є імуносупресорним засобом. В іншому варіанті здійснення терапевтичний засіб є СМ-С5Е. У кращому варіанті здійснення терапевтичний засіб є доксорубіцином, цисплатином, блеоміцином, сульфатом, кармустином, хлорамбуцилом, циклофосфамідом або рицином А.
Антитіла також можуть бути кон'юговані з радіоїзотопом, наприклад, йодом-131, ітрієм-90 або індієм-111, для одержання цитотоксичних радіофармацевтичних засобів.
Кон'югати антитіл запропоновані винаходом можна використовувати для того, щоб модифікувати дану біологічну відповідь, при цьому лікарська частка (дгид тоіесу) не повинна розглядатися як така, що обмежує застосування класичних хімічних терапевтичних лікарських засобів. Наприклад, лікарська частка може бути білком або поліпептидом, які проявляють бажану біологічну активність. Такий білок може включати, наприклад, ферментативно активний токсин, або його активний фрагмент, такий як абрин, рицин А, екзотоксин синьогнійної палички або дифтерійний токсин; білок, такий як фактор некрозу пухлини або інтерферон-у; або модифікатори біологічної відповіді такі як, наприклад, лімфокіни, інтерлейкін-1 ("ПП -17), інтерлейкін-2 ("І -2"), інтерлейкін-б ("7-6"), гранулоцитарно-моноцитарний колонієстимулюючий фактор ("ЗМ-С5Е"), гранулоцитарний колонієстимулюючий фактор ("5-С5Е") або інші фактори росту.
Методи кон'югування такої терапевтичної частки з антитілом добре відомі, дивися, наприклад, Агпоп еї аї, "Мопосіопа! Апіїбодіе5 Рог Іттипоїагдеїйпу ОЇ Огиав5 Іп Сапсег ТНегару", іп Мопосіопа! Апіїродієх апа Сапсег ТНегару, Веївтеєїа еї аї. (єдв.), рр. 243-56 (Айдап В. І івв, Іс. 1985); Неїївіот еї аї., "Апіїродіеє Рог Огид Оеєїїмегу", іп СопігоПїей Огид Оеєїїмегу (2па Еа.),
Вобіпзоп еї аї. (єдв.), рр. 623-53 (Маїсе! ОекККег, Іпс. 1987); Трогре, " Апіїроду Сатієтв ОЇ
Суїюхіс Адепів Іп Сапсег ТПнегару: А Немієм/", іп Мопосіопа! Апіїбодієв "84: Віоіодіса! апа Сіїпісаї
Арріїсайопв, РіпсНегаві аї. (єдв.), рр. 475-506 (1985); "Апаїузів, Незиїйїв, апа Ешиге Ргозресіїме ОЇ
Тне Тнегарешіс О5е ОГ РадіоїареІєд Апіїбоду Іп Сапсег Тнегару", іп Мопосіопа! Апіїбодіеєв. Гог
Сапсег Оеїесіп апа Тнегару, Ваїдм/іп еї аї. (еад5.), рр. 303-16 (Асадетіс Рге55 1985) і Трогре еї аІ,, "Те Ргерагайоп апа Суїюхіс Ргорепієз ОЇ Апіїбоду-Тохіп Сопіидаїев", Іттипої. Вем., 62: 119-58 (1982).
При використанні в описі виразу антитіло "походить від" окремої зародкової послідовності, якщо антитіло отримане із системи шляхом імунізації тварини або шляхом скринінга бібліотеки генів імуноглобулінів, і при цьому обране антитіло є, щонайменше, на 90 95, більш бажано, щонайменше, на 9595, навіть ще краще, щонайменше, на 9695, 97 95, 9895, або 99 95 аналогічним до послідовності амінокислот у порівнянні з послідовністю амінокислот, яка кодується зародковим геном імуноглобуліну. Як правило, антитіло, джерелом походження якого є окрема зародкова послідовність, буде демонструвати не більше ніж 10 амінокислотних відмінностей, більш бажано, не більше ніж 5, або навіть ще краще, не більше, ніж 4, 3, 2 або 1 амінокислотну відмінність від амінокислотної послідовності, яка кодується зародковим геном імуноглобуліну.
Термін "гетероантитіла", як він використовується в описі відноситься до двох або більше антитіл, їх похідних або антигензв'язуючих ділянок, з'єднаним разом, щонайменше, дві з яких мають різні специфічності. Ці різні специфічності включають специфічність зв'язування для Ес- рецептора на ефекторній клітині й специфічність зв'язування для антигену або епітопа на клітині-мішені, наприклад, пухлинній клітині.
Описані в даному документі антитіла можуть бути моноклональними антитілами. Термін "моноклональне антитіло", як він використовується в описі відноситься до препарату молекул антитіл з однаковим молекулярним складом. Моноклональне антитіло має одну специфічність зв'язування й спорідненість до окремого епітопу. В одному варіанті здійснення моноклональні антитіла виробляються за допомогою гібридоми, яка включає В-клітину, отриману від тварини, 60 яка не є людиною, наприклад, миші, з'єднану з іморталізованою клітиною.
Описані в даному документі антитіла можуть бути рекомбінантними антитілами. Термін "рекомбінантне антитіло", як він використовується в описі включає всі антитіла, які виходять, експресуються, створюються або виділяються за допомогою рекомбінантних способів, наприклад, (а) антитіла, виділені із тварини (наприклад, миші), яка є трансгенною або трансхромосомною відносно генів імуноглобулінів або гібридоми, отриманої з них, (Б) антитіла, виділені із клітини-хазяїна, трансформованої для того, щоб вона експресувала антитіла, наприклад, із трансфектоми, (с) антитіла, виділені з комбінаторної бібліотеки рекомбінантних антитіл, і (4) антитіла отримані, експресовані, створені або виділені будь-якими іншими способами, які стосуються сплайсинг послідовностей генів імуноглобулінів з іншими ДНК- послідовностями.
Джерелом походження описаних в даному документі антитіл можуть бути різні види, включаючи, але не обмежуючись цим, мишу, пацюка, кролика, морську свинку й людину.
Описані в даному документі антитіла включають поліклональні й моноклональні антитіла й включають ІдА, такі як ІЇДА1 або ІдАг, ІДС, Ідс2, ІдеЗ, Ідс4, ЧЕ, ІОМ, і дО антитіла. У різних варіантах здійснення антитіло є (Дс1 антитілом, конкретніше ЇдС1, каппа або Ідс1, лямбда ізотипом (тобто ІДС1, к, Л), ІдсС2а антитілом (наприклад, Ідсга, к, А), Ідо25 антитілом (наприклад, Ід, к, А), (ДОЗ антитілом (наприклад, ІдсЗ, к, А) або Ідс4 антитілом (наприклад,
ІЧ04, Кк, А).
Термін "трансфектома", як він використовується в описі включає рекомбінантні еукаріотичні клітини-хазяї, які експресують антитіло, такі як клітини СНО, клітини М5/0, клітини НЕК293, клітини НЕК293Т, рослинні клітини або клітини грибів, включаючи клітини дріжджів.
Термін "гетерологічне антитіло", як він використовується в описі, визначається з погляду трансгенного організму, який продукує таке антитіло. Цей термін відноситься до антитіла, яке має амінокислотну послідовність або яке кодується нуклеїновокислотною послідовністю, яка відповідає послідовності, виявленій в організмі, який не містить трансгенний організм, і як правило, отриманому від іншого виду, ніж трансгенний організм.
Термін "гетерогібридне антитіло", як він використовується в описі, відноситься до антитіла, яке має легкий і важкий ланцюги від різних організмів. Наприклад, антитіло, яке має людський важкий ланцюг, з'єднаний з мишачим легким ланцюгом, є гетерогібридним антитілом.
Винахід включає всі антитіла й похідні антитіл, описані тут, які для цілей винаходу охоплюються терміном "антитіло". Термін "похідні антитіл" відноситься до будь-якої модифікованої форми антитіла, наприклад, кон'югату антитіла й іншого агента або антитіла або фрагмента антитіла.
Описані тут антитіла бажано є ізольованими. Термін "ізольоване антитіло", як він використовується в описі, відноситься до антитіла, яке в основному є вільним від інших антитіл, які мають інші антигенні специфічності (наприклад, ізольоване антитіло, яке специфічно зв'язується з СІ ОМ18.2, є в основному вільним від антитіл, які специфічно зв'язують антигени, відмінні від СІ ОМ18.2). Однак, ізольоване антитіло, яке специфічно зв'язується з епітопом, ізоформою або варіантом людського СІ ОМ18.2, може мати перехресну реактивність до інших споріднених антигенів, наприклад, від інших видів (наприклад, видових гомологів СІ ОМ'18.2).
Більше того, ізольоване антитіло може бути в основному вільним від іншого клітинного матеріалу й/або хімічних речовин. В одному варіанті здійснення винаходу комбінація "ізольованих" моноклональних антитіл має відношення до антитіл, які мають різні специфічності й об'єднані у чітко визначену композицію або суміш.
Термін "зв'язування" згідно з винаходом, переважно має відношення до специфічного зв'язування.
Згідно із даним винаходом антитіло є здатним зв'язуватися з певною мішенню, якщо воно має значну спорідненість до зазначеної певної мішені й зв'язується із зазначеною певною мішенню в стандартних методах дослідження. "Спорідненість" або "спорідненість зв'язування" часто оцінюється рівноважною константою дисоціації (Ко). Бажано термін "значна спорідненість" відноситься до зв'язування з певною мішенню з константою дисоціації (Ко) 107 М або нижче, 10- 6 М або нижче, 107 М або нижче, 108 М або нижче, 1079 М або нижче, 10-79 М або нижче, 10-! М або нижче або 10-2 М або нижче.
Антитіло не є здатним (значно) зв'язуватися з мішенню, якщо воно не має значної спорідненості із зазначеною мішенню й не зв'язується значною мірою, зокрема, не зв'язується, в тій мірі, яка піддається виявленню, із зазначеною мішенню за стандартних методів аналізу.
Бажано антитіло не зв'язується, в тій мірі, яка піддається виявленню із зазначеною мішенню, якщо воно присутнє у концентрації до 2, бажано до 10, ще краще, до 20, зокрема 50 або 100 мкг/мл або вище. Бажано антитіло не має значної спорідненості до мішені, якщо воно 60 зв'язується із зазначеною мішенню з Ко, який є, щонайменше, в 10 разів, 100 разів, 103 разів,
1027 разів, 105 разів або 105 разів вищим, ніж Ко зв'язування з певною мішенню, з якою здатне зв'язуватися антитіло. Наприклад, якщо Ко зв'язування антитіла з мішенню, з якою здатне зв'язуватися антитіло, становив 10- М, то тоді Ко зв'язування з мішенню, до якої антитіло не має значної спорідненості, становив би, щонайменше, 10 М, 105 М, 107 М, 103 М, 102 М або 107 М.
Антитіло є специфічним для зазначеної мішені, якщо воно здатне зв'язуватися із зазначеною певною мішенню, тоді як воно не здатне зв'язуватися з іншими мішенями, тобто має незначну спорідненість до інших мішеней і незначно зв'язується з іншими мішенями за стандартних методів аналізу. Згідно з винаходом антитіло є специфічним до СІ ОМ18.2, якщо воно здатне зв'язуватися з СІ ОМ18.2, але (практично) не здатне зв'язуватися з іншими мішенями. Бажано, антитіло є специфічним до СІ ОМ18.2, якщо спорідненість і зв'язування з іншими мішенями не перевищує значної спорідненості до або зв'язування з білками, неспорідненими з СІ ОМ18.2, такими як бичачий сироватковий альбумін (В5А), казеїн, людський сироватковий альбумін (НЗА) або трансмембранні білки, які не є клаудинами, такі як молекули
МНС або рецептор трансферину або будь-який інший специфічний поліпептид. Бажано антитіло є специфічним для визначеної мішені, якщо воно зв'язується із зазначеною мішенню з Ко, який є, щонайменше, в 10 разів, 100 разів, 103 разів, 107 разів, 105 разів або 105 разів меншим, ніж Ко зв'язування з мішенню, яка не є специфічною. Наприклад, якщо Ко зв'язування антитіла з мішенню, яка є специфічною становить 10-77 М, то тоді Ко зв'язування з мішенню, яка не є специфічною, мабуть, щонайменше, 105 М, 105 М, 107 М, 103 М, 102 М або 107 М.
Зв'язування антитіла з мішенню можна визначити експериментально, використовуючи будь- який придатний метод, дивися, наприклад, Веглої5Ку еї аї., "Апіїбоду-Апіїдеп Іпіегасіпв" п
Еипдатепіа! Іттипоіоду, Раш, МУ. Е., Ед., Намеп Ргебз5 Мем мок, М М (1984), Киру, Уатв
Іпптипоіоду, УМ. Н. Егеетап і Сотрапу Мем мок, М МУ (1992), і описані тут методи. Спорідненість можна легко визначити за допомогою звичайних методів, таких як рівноважний діаліз; за допомогою приладу Віасоге 2000, використовуючи загальні методики, запропоновані виробником; за допомогою радіоіїмунологічного аналізу з використанням міченого радіоактивним ізотопом цільового антигену або іншими методами, відомими фахівцям. Дані щодо спорідненості можна проаналізувати, наприклад, за допомогою методу зсаїснаго е6ї аї.,
Апп М.У. Асад. сі, 51:660 (1949). Величина, яка характеризує спорідненість окремої взаємодії антитіло-антиген може варіювати, якщо вимірювання проводилося за різних умов, наприклад, концентрації солі, рН. Таким чином, вимірювання спорідненості й інших параметрів зв'язування антигену, наприклад, Ко, ІСво, бажано проводяться за допомогою стандартизованих розчинів антитіла й антигену й стандартизованого буфера.
Термін "ізотип", як він використовується в описі, відноситься до класу антитіл (наприклад,
ІМ або Ід 1), які кодуються генами константної області важкого ланцюга.
Термін "перемикання ізотипа", як він використовується в описі, відноситься до явища, за допомогою якого клас або ізотип антитіла змінюється від одного класу Ід до одного з інших класів Ід.
Термін "природний", як він використовується в описі, стосовно об'єкта відноситься до тієї обставини, що об'єкт може бути знайдений у природі. Наприклад, послідовність поліпептиду або полінуклеотиду, яка є присутньою в організмі (включаючи віруси), і яка може бути виділеною із природного джерела, і яка не була навмисно модифікована людиною в лабораторії, є природною.
Термін "перегрупована", як він використовується в описі, відноситься до конфігурації важкого ланцюга або легкого ланцюга імуноглобулінового локусу, у якому М сегмент розташовується безпосередньо поруч із О-У або у) сегментом у конформації, що кодує фактично повний МН або МІ. домен, відповідно. Перегрупований генний локус імуноглобуліну (антитіла) може бути встановлений шляхом порівняння із зародковою ДНК; перегрупований локус буде мати, щонайменше, один рекомбінований семичленний/дев'ятичленний гомологічний елемент.
Терміни "перегрупування" або "зародкова конфігурація", як вони використовуються в описі, стосовно М сегмента відноситься до конфігурації, у якій М сегмент є нерекомбінованим для того, щоб бути безпосередньо поруч із О або у сегментом.
Згідно з винаходом антитіло, яке проявляє здатність зв'язуватися з СІ ОМ18.2, є антитілом, здатним зв'язуватися з епітопом, присутнім на СГ ОМ18.2, переважно епітопом, розташованим у межах позаклітинних доменів СІ ОМ18.2, зокрема першому позаклітинному домені, бажано о в положеннях амінокислот від 29 до 78 СІ ОМ18.2. В окремих варіантах здійснення антитіло, яке проявляє здатність зв'язуватися з СІ ОМ18.2, є антитілом, здатним зв'язуватися з (ї) епітопом на
СІГОМ18.2, не присутнім на СІ ОМ18.1, бажано 5ЕО ІО МО: 3, 4 і 5, (ії) епітопом, розташованим на СІ ОМ18.2 - петля!, бажано 5ЕО ІЮ МО: 8, (ії) епітопом, розташованим на СІ ОМ18.2-петляг, 60 бажано 5ЕО ІО МО: 10, (ім) епітопом, розташованим на СІ ОМ18.2-петляр3, бажано 5ЕО ІЮ МО:
11, (м) епітопом, який містить СІ0ОМ18.2-петлю!ї і СІГОМ18.2-петлюО3, або (мі неглікозильованим епітопом, розташованим на СІ ОМ18.2-петлярЗ, бажано 5ЕО ІЮО МО: 9.
Згідно з винаходом антитіло, яке проявляє здатність зв'язуватися з СІ ОМ18.2, бажано є антитілом, здатним зв'язуватися СІ ОМ18.2, але не з СІ ОМ18.1. Бажано, антитіло, яке проявляє здатність зв'язуватися з СІОМ18.2, є специфічним до СІ ОМ18.2. Бажано, антитіло, яке проявляє здатність зв'язуватися з СІ ОМ18.2, бажано є антитілом, яке проявляє здатність зв'язуватися з СІ ОМ18.2, експресованим на клітинній поверхні. В окремих кращих варіантах здійснення антитіло, яке проявляє здатність зв'язуватися з СІ ОМ18.2, зв'язується з нативними епітопами СІ ОМ18.2, присутніми на поверхні живих клітин. Бажано, антитіло, яке проявляє здатність зв'язуватися з СІ ОМ18.2, зв'язується з одним або більше пептидами, обраними із групи, яка складається з 5ЕО ІО Мо: 1, 3-11, 44, 46, і 48-50. Бажано, антитіло, яке проявляє здатність зв'язуватися з СІ ОМ18.2, є специфічним для згаданих вище білків, пептидів або імуногенних фрагментів або їх похідних. Антитіло, яке проявляє здатність зв'язуватися з
СІГОМ18.2, може бути отримане способом, який включає стадію імунізації тварини білком або пептидом, який містять амінокислотну послідовність, обрану із групи, яка складається з ЗЕО ІЮ
Мо: 1, 3-11, 44, 46, і 48-50, або нуклеїнову кислоту або клітину-хазяїна, яка експресує зазначений білок або пептид. Бажано, антитіло зв'язується з раковими клітинами, зокрема клітинами згаданих вище типів раку й, бажано, практично не зв'язується з нераковими клітинами.
Бажано, зв'язування антитіла, яке проявляє здатність зв'язуватися з СІ ОМ18.2, із клітинами, які експресують СГ ОМ18.2, викликає або опосередковує знищення клітин, які експресують
СІГОМ18.2. Клітини, які експресують СІ ОМ18.2, бажано є раковими клітинами, і, зокрема, їх вибирають із групи, яка складається зі злоякісних клітин раку шлунка, стравоходу, підшлункової залози, легенів, яєчника, товстої кишки, печінки, голови і шиї й жовчного міхура. Бажано, антитіло викликає або опосередковує знищення клітин, індукуючи один або більше із поміж опосередкованого комплементзалежною цитотоксичністю (СОС) лізису, опосередкованого антитілозалежною клітинноопосредкованою цитотоксичністю (АЮБСС) лізису, апоптозу й інгібування проліферації клітин, які експресують СГ ОМ18.2. Бажано, АОСС-опосередкований лізис відбувається в присутності ефекторних клітин, які в окремих варіантах здійснення вибирають із групи, яка складається з моноцитів, мононуклеарних клітин, МК-клітин і РММ5.
Інгібування проліферації клітин можна вимірювати іп міго шляхом визначення проліферації клітин методом аналізу із застосуванням бромдезоксиуридіну (5-бром-2-дезоксиуридін, Вга).
ВІідФО є синтетичним нуклеозидом, аналогом тимідину, і може вбудовуватися в знову синтезовану ДНК клітин, які відтворюються шляхом клітинного поділу (у ході 5 фази клітинного циклу), заміняючи тимідин під час реплікації ДНК. Виявлення "включеної" хімічної речовини за допомогою, наприклад, антитіл, специфічних до ВгаО, указує на клітини, які активно відтворювали свою ДНК.
У кращих варіантах здійснення описані в даному документі антитіла можуть бути охарактеризовані за однією або більше із наступних властивостей: а) специфічність до С ОМ18.2;
Б) афінність зв'язування з СІ ОМ18.2 близько 100 нМ або менше, бажано, близько 5-10 нм або менше і ще краще, близько 1-3 нМ або менше, с) здатність викликати або опосередковувати СОС СІ ОМ18.2-позитивних клітин; а) здатність викликати або опосередковувати АОСС СІ ОМ18.2-позитивних клітин; е) здатність інгібувати ріст СІ ОМ18.2-позитивних клітин; 7) здатність викликати апоптоз СІ ОМ18.2-позитивних клітин.
В окремому кращому варіанті здійснення антитіло, яке проявляє здатність зв'язуватися з
СІГОМ18.2, виробляється гібридомою, депонованою в 05М2 (Мазспегодег Мед 16, 31824
Вгайпзспугеід, Септапу; пем/ адагевв: ІппойПепвії. 7В, 31824 Вгайп5зспугеід, Сеппапу), яка має наступне позначення й обліковий номер: а. 182-01106-055, обліковий номер ОБМ АСС2737, депонована 19 жовтня 2005 р. 182-01106-056, обліковий номер ОБМ АСС2738, депонована 19 жовтня 2005 с. 182-01106-057, обліковий номер О5М АСС2739, депонована 19 жовтня 2005 а. 182-01106-058, обліковий номер ОБМ АСС2740, депонована 19 жовтня 2005 е. 182-01106-059, обліковий номер ОБМ АСС2741, депонована 19 жовтня 2005
І. 182-01106-062, обліковий номер О5М АСС2742, депонована 19 жовтня 2005 9. 182-01106-067, обліковий номер О5М АСС2743, депонована 19 жовтня 2005 п. 182-0758-035, обліковий номер ОБМ АСС2745, депонована 17 листопада 2005 і. 182-0758-036, обліковий номер ОБМ АСС2746, депонована 17 листопада 2005
Ї. 182-0758-040, обліковий номер ОБМ АСС2747, депонована 17 листопада 2005 60 К. 182-01106-061, обліковий номер ОМ АСС2748, депонована 17 листопада 2005
І. 182-01106-279, обліковий номер ОБМ АСС2808, депонована 26 жовтня 2006 т. 182-01106-294, обліковий номер О5М АСС2809, депонована 26 жовтня 2006 п. 182-01106-362, обліковий номер О5М АСС2810, депонована 26 жовтня 2006.
Кращими антитілами згідно з винаходом є антитіла, які виробляються або одержані за допомогою вищезгаданих гібридом; тобто 3711 у випадку 182-01106-055, 37НВ у випадку 182- 0р1106-056, 38055 у випадку 182-01106-057, З38НЗ у випадку 182-01106-058, З9Е11 у випадку 182-01106-059, 43А11 у випадку 182-01106-062, 6102 у випадку 182-01106-067, 2685 у випадку 182-0758-035, 26012 у випадку 182-0758-036, 28010 у випадку 182-0758-040, 42Е12 у випадку 182-01106-061, 125Е1 у випадку 182-01106-279, 163Е12 у випадку 182-01106-294, і 175010 у випадку 182-01106-362; та їх химерних й гуманізованих форм.
Кращі химерні антитіла та їх послідовності показані в наступній таблиці. ш- Ще (ен нки ренненння область 77. | лезеЕТ2 | 182-01106-294 | доз | 5ЕОІЮМОзо | 5ЕОІЮМО5 7111111 | лаБЕТ | 182-01106-279 | дбга | 5ЕОІЮ МОЗ | 5ЕОІЮМОб 7... | 7662 | 182-01106-308, / їюоз | 5ЕОІЮМОзЗ3 | 5ЕОІЮМО8 71111 л1и7Бото | 182-01106-362, | 0юс1 | 5ЕОІ0ЮМмОЗ2 | 5ЕОІЮМОл7 77111111 4а5БС1 | 182-0758-187 | юдбга | 5ЕОІЮМОЗ4 | 5ЕОІЮМОЛ9 77. | лезеЕТ2 | 182-01106-294 | юкК | 5ЕОІЮМОз5 | 5ЕОІЮМОгО 7111111 | лаБЕТ | 182-01106-279 | юкК | 5ЕОІ0ЮМмОЗ3З7 | 5ЕОІЮМОг2 7... | 7662 | 182-01106-308 / юк | 5ЕОІ0МОЯ4о | 5ЕОІЮМО25 71111 л1иБото | 182-01106-362, | юк | 5ЕОІ0МмОз9 | 5ЕОІЮМО4 77711111 451 | 182-0758-187 | ЮК | 5ЕОІ0ЮМОз8 | 5ЕОІЮМО3 77111111 451 | 182-0758-187 | юк | 5ЕОІЮМмОЯ! | 5ЕОІЮМОг6 77111111 451 | 182-0758-187 | юк | 5ЕОІ0МмОм2 | 5ЕОІЮМО 111111 аБс1 | т182-0758-1187 | юк | 5ЕОІ0МмОя3 | 5ЕОІЮМО28
У кращих варіантах здійснення антитіла, зокрема, химерні форми антитіл запропоновані винаходом, включають антитіла, які містять константну область важкого ланцюга (СН) яка включає, амінокислотну послідовність, яка походить з людської константної області важкого ланцюга, таку як амінокислотна послідовність, представлена 5ЕО ІЮ МО: 13, або її фрагмент. У додаткових кращих варіантах здійснення, антитіла, зокрема, химерні форми антитіл запропоновані винаходом, включають антитіла, які містять константну область легкого ланцюга (С) яка включає, амінокислотну послідовність, яка походить з людської константної області легкого ланцюга, таку як амінокислотна послідовність, представлена 5ЗЕО ІЮ МО: 12, або її фрагмент. В окремому кращому варіанті здійснення антитіла, зокрема, химерні форми антитіл запропоновані винаходом, включають антитіла, які містять СН, яка включає амінокислотну послідовність, яка походить від людської СН, таку як амінокислотна послідовність, представлена 5ЕО ІЮ МО: 13, або її фрагмент, і які містять Сі, яка включає амінокислотну послідовність, яка походить від людської Сі, таку як амінокислотна послідовність, представлена
ЗЕО ІЮ МО: 12, або її фрагмент.
В одному варіанті здійснення антитіло, яке проявляє здатність зв'язуватися з СІ ОМ18.2, є химерним миша/людина /|дсї моноклональним антитілом, яке містить мишачу каппа варіабельну область легкого ланцюга, людську каппа константну область легкого ланцюга алотип Кт/(3), мишачу варіабельну область важкого ланцюга, константну область людського
ІЧО1, алотип с1т(3).
У деяких кращих варіантах здійснення химерні форми антитіл включають антитіла, які містять важкий ланцюг, який включає амінокислотну послідовність, обрану із групи, яка складається з 5ЕО ІЮ Мов: 14, 15, 16, 17, 18, 19, і її фрагмента, і/або які містять легкий ланцюг, який включає амінокислотну послідовність, обрану із групи, яка складається з ЗЕО ІЮ Мов: 20, 21,22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, та її фрагмента.
У деяких кращих варіантах здійснення химерні форми антитіл включають антитіла, які містять комбінацію важких ланцюгів і легких ланцюгів, обраних з наступних можливих варіантів ()- (їх): () важкий ланцюг містить амінокислотну послідовність, представлену 5ЗЕО ІЮО МО: 14, або її фрагмент, і легкий ланцюг містить амінокислотну послідовність, представлену 5ЕО ІЮО МО: 21, або її фрагмент, (ії) важкий ланцюг містить амінокислотну послідовність, представлену 5ЕО ІЮ МО: 15, або її фрагмент, і легкий ланцюг містить амінокислотну послідовність, представлену ЗЕО ІЮО МО: 20, або її фрагмент, (ії) важкий ланцюг містить амінокислотну послідовність, представлену 5ЕО ІЮ МО: 16, або її фрагмент, і легкий ланцюг містить амінокислотну послідовність, представлену 5ЕО ІЮО МО: 22, або її фрагмент, (ім) важкий ланцюг містить амінокислотну послідовність, представлену ЗЕО ІЮО МО: 18, або її фрагмент, і легкий ланцюг містить амінокислотну послідовність, представлену 5ЕО ІЮО МО: 25 або її фрагмент, (м) важкий ланцюг містить амінокислотну послідовність, представлену ЗЕО ІО МО: 17, або її фрагмент, і легкий ланцюг містить амінокислотну послідовність, представлену 5ЕО ІЮО МО: 24, або її фрагмент, (м) важкий ланцюг містить амінокислотну послідовність, представлену ЗЕО ІЮО МО: 19, або її фрагмент, і легкий ланцюг містить амінокислотну послідовність, представлену 5ЕО ІЮО МО: 23, або її фрагмент, (мі) важкий ланцюг містить амінокислотну послідовність, представлену ЗЕО ІО МО: 19, або її фрагмент, і легкий ланцюг містить амінокислотну послідовність, представлену ЗЕО ІЮ МО: 26, або її фрагмент, (мії) важкий ланцюг містить амінокислотну послідовність, представлену ЗЕО ІЮ МО: 19, або її фрагмент, і легкий ланцюг містить амінокислотну послідовність, представлену 5ЕО ІЮ МО: 27, або її фрагмент, і (їх) важкий ланцюг містить амінокислотну послідовність, представлену ЗЕО ІЮО МО: 19, або її фрагмент, і легкий ланцюг містить амінокислотну послідовність, представлену 5ЕО ІЮО МО: 28, або її фрагмент.
Термін "фрагмент" або "фрагмент амінокислотної послідовності", як він використовується в описі, має відношення до частини послідовності антитіла, тобто послідовності, яка є послідовністю антитіла, укороченою на М- і/або С-кінцях, і яка, у тому випадку, коли вона заміняє зазначену послідовність антитіла в антитілі, зберігає здатність зв'язування зазначеного антитіла з СГОМ18.2 і бажано функції зазначеного антитіла, описані тут, наприклад, СОС- опосередкований лізис або АЮСС-опосередкований лізис. Бажано, фрагмент амінокислотної послідовності містить, щонайменше, 80 95, бажано, щонайменше, 90 95, 95 95, 96 95, 97 Фо, 98 9о або 9995 амінокислотних залишків від зазначеної амінокислотної послідовності. Фрагмент амінокислотної послідовності, обраний із групи, яка складається з ЗЕО ІЮ Мов: 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27 і 28, бажано має відношення до зазначеної послідовності, у якій 17, 18, 19, 20, 21, 22 або 23 амінокислоти вилучені на М-кінці.
У кращому варіанті здійснення антитіло, яке проявляє здатність зв'язуватися з СІ ОМ18.2, містить важкий ланцюг варіабельної області (УН), який включає амінокислотну послідовність, обрану із групи, яка складається з 5ЕО ІО Мов: 29, 30, 31, 32, 33, 34 та їх фрагмента.
У кращому варіанті здійснення антитіло, яке проявляє здатність зв'язуватися з СІ ОМ18.2, містить легкий ланцюг варіабельної області (МН) який включає амінокислотну послідовність, обрану із групи, яка складається з 5ЕО ІЮО МО: 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43 та їх фрагмента.
У деяких кращих варіантах здійснення антитіло, яке проявляє здатність зв'язуватися з
СІ ОМ18.2, містить комбінацію важкого ланцюга варіабельної області (УН) і легкого ланцюга варіабельної області (МІ), обрану з наступних можливих варіантів (і) - (їх): (Ї) МН містить амінокислотну послідовність, представлену 5ЕО ІЮ МО: 29, або її фрагмент, і
МІ. містить амінокислотну послідовність, представлену 5ЕО ІЮ МО: 36, або її фрагмент, (ії) МН містить амінокислотну послідовність, представлену ЗЕО ІО МО: 30, або її фрагмент, і
МІ. містить амінокислотну послідовність, представлену 5ЕО ІЮ МО: 35, або її фрагмент, (ії) МН містить амінокислотну послідовність, представлену ЗЕО ІЮ МО: 31, або її фрагмент, і
МІ. містить амінокислотну послідовність, представлену 5ЕО ІЮ МО: 37, або її фрагмент, (ім) МН містить амінокислотну послідовність, представлену ЗЕО ІО МО: 33, або її фрагмент, і
МІ. містить амінокислотну послідовність, представлену 5ЕО ІЮ МО: 40, або її фрагмент, (М) МН містить амінокислотну послідовність, представлену 5ЕО ІЮО МО: 32, або її фрагмент, і
МІ. містить амінокислотну послідовність, представлену ЗЕО ІЮО МО: 39, або її фрагмент, (м) МН містить амінокислотну послідовність, представлену ЗЕО ІО МО: 34, або її фрагмент, і
МІ. містить амінокислотну послідовність, представлену 5ЕО ІЮ МО: 38, або її фрагмент, (мії) МН містить амінокислотну послідовність, представлену 5ЕО ІЮ МО: 34, або її фрагмент, і 60 МІ. містить амінокислотну послідовність, представлену 5ЕО ІЮ МО: 41, або її фрагмент,
(мії) МН містить амінокислотну послідовність, представлену ЗЕО ІО МО: 34, або її фрагмент, і МІ. містить амінокислотну послідовність, представлену ЗЕО ІЮ МО: 42, або її фрагмент, (їх) МН містить амінокислотну послідовність, представлену ЗЕО ІО МО: 34, або її фрагмент, і
МІ. містить амінокислотну послідовність, представлену 5ЕО ІЮ МО: 43, або її фрагмент.
У кращому варіанті здійснення антитіло, яке проявляє здатність зв'язуватися з СІ 0ОМ18.2, містить УН, що включає набір гіперваріабельних ділянок СОКІ, СОК2 і СОКЗ, обраних з поміж наступних варіантів здійснення (і) - (мі): () СОМ1: положення 45-52 5ЕО ІЮ МО: 14, СОК2: положення 70-77 5ЕО ІЮ МО: 14, СОВЗ: положення 116-125 5ЕО ІО МО: 14, (ії) СОКІ1: положення 45-52 5ЕБО ІЮ МО: 15, СОК2: положення 70-77 5БЕО І МО: 15, СОВЗ: положення 116-126 5ЕО ІО МО: 15, (ії СОК1: положення 45-52 5ЕО ІЮ МО: 16, СОК2: положення 70-77 5ЕО ІЮ МО: 16, СОВЗ: положення 116-124 5ЕО І МО: 16, (м) СОКІ1: положення 45-52 5ЕО ІЮО МО: 17, СОК2: положення 70-77 5ЕО ІЮ МО: 17, СОВЗ: положення 116-126 5ЕО І МО: 17, (м) СОКІ1: положення 44-51 5ЕО ІО МО: 18, СОК2: положення 69-76 5ЕО І МО: 18, СОВЗ: положення 115-125 5ЕО ІЮО МО: 18, і (м) СОКІ1: положення 45-53 5БЕО ІЮО МО: 19, СОК2: положення 71-78 5ЕО ІЮ МО: 19, СОВЗ: положення 117-128 5ЕО І МО: 19.
У кращому варіанті здійснення антитіло, яке проявляє здатність зв'язуватися з СІ ОМ18.2, містить МІ, що включає набір гіперваріабельних ділянок СОКІ, СОМК2 і СОКЗ, обраних з поміж наступних варіантів здійснення (і) - (їх): () СОМ1: положення 47-58 5ЕО ІЮ МО: 20, СОК2: положення 76-78 5ЕО ІЮ МО: 20, СОВЗ: положення 115-123 5ЕО І МО: 20, (ії) СОКІ1: положення 49-53 5ЕО ІЮ МО: 21, СОК2: положення 71-73 5ЕО І МО: 21, СОВЗ: положення 110-118 5ЕО І МО: 21, (ії) СОК1: положення 47-52 5ЕО ІЮ МО: 22, СОМК2: положення 70-72 5ЕО ІЮ МО: 22, СОВЗ: положення 109-117 5ЕО І МО: 22, (м) СОКІ1: положення 47-58 5ЕО ІЮО МО: 23, СОК2: положення 76-78 5ЕО ІЮ МО: 23, СОВЗ: положення 115-123 5ЕО І МО: 23, (м СОКІ1: положення 47-58 5ЕО І МО: 24, СОК2: положення 76-78 5ЕО І МО: 24, СОВЗ: положення 115-123 5ЕО І МО: 24, (м) СОКІ1: положення 47-58 5ЕО ІЮО МО: 25, СОК2: положення 76-78 5ЕО ІЮ МО: 25, СОВЗ: положення 115-122 5ЕО І МО: 25, (мі) СОКІ1: положення 47-58 5ЕО ІЮ МО: 26, СОК2: положення 76-78 5ЕО І МО: 26, СОВЗ: положення 115-123 5ЕО І МО: 26, (мії) СОКІ1: положення 47-58 5ЕО ІЮ МО: 27, СОК2: положення 76-78 5ЕО ІЮО МО: 27, СОВЗ: положення 115-123 5ЕО ІЮО МО: 27, і (їх) СОКІ1: положення 47-52 5ЕО ІЮО МО: 28, СОК2: положення 70-72 5ЕО ІЮ МО: 28, СОВЗ: положення 109-117 5ЕО І МО: 28.
У кращому варіанті здійснення антитіло, яке проявляє здатність зв'язуватися з СІ ОМ18.2, містить комбінацію УН і МІ, кожна з яких включає набір гіперваріабельних ділянок СОКІ, СОР2 і
СОН, обраних з поміж наступних варіантів здійснення (і) - (їх): () МН: СОКІ1: положення 45-52 5ЕО ІЮ МО: 14, СОМТК2: положення 70-77 5ЕО ІЮО МО: 14,
СОм3: положення 116-125 5ЕО ІЮ МО: 14, МІ: СОР1: положення 49-53 5ЕО ІЮО МО: 21, СОВО: положення 71-73 5ЕО ІЮ МО: 21, СОКЗ: положення 110-118 5ЕО ІЮ МО: 21, (ії) МН: СОКІ1: положення 45-52 5ЕБЕО ІЮО МО: 15, СОМК2: положення 70-77 5БО ІЮО МО: 15,
СОв3: положення 116-126 5ЕО ІЮ МО: 15, МІ: СОВІ1: положення 47-58 5ЕО ІЮ МО: 20, СОВ2: положення 76-78 5ЕО ІЮ МО: 20, СОКЗ: положення 115-123 5ЕО І МО: 20, (ії) МН: СОК1: положення 45-52 5ЕО ІО МО: 16, СОК2: положення 70-77 5ЕО ІЮО МО: 16,
СОм3: положення 116-124 5ЕО ІЮ МО: 16, М: СОР1: положення 47-52 5ЕО ІЮО МО: 22, СОВО: положення 70-72 5ЕО ІЮ МО: 22, СОКЗ: положення 109-117 5ЕО І МО: 22, (м) МН: СОКІ1: положення 44-51 5ЕО ІЮ МО: 18, СОК2: положення 69-76 5БЕО ІЮ МО: 18,
СОм3: положення 115-125 5БЕО ІЮ МО: 18, М: СОР1: положення 47-58 5ЕО ІЮО МО: 25, СОН2: положення 76-78 5ЕО ІЮ МО: 25, СОКЗ: положення 115-122 5ЕО І МО: 25, (м МН: СОК1: положення 45-52 5ЕО ІЮ МО: 17, СОК2: положення 70-77 5БО ІЮО МО: 17,
СОм3: положення 116-126 5ЕО ІЮ МО: 17, М: СОР1: положення 47-58 5ЕО ІЮО МО: 24, СОН: положення 76-78 5ЕО ІЮ МО: 24, СОКЗ: положення 115-123 5ЕО І МО: 24, (м) МН: СОК1: положення 45-53 5ЕО ІЮ МО: 19, СОК2: положення 71-78 5БО ІЮ МО: 19, 60 СОм3: положення 117-128 5ЕО ІЮ МО: 19, М: СОР1: положення 47-58 5ЕО ІЮО МО: 23, СОВО:
положення 76-78 5ЕО ІЮ МО: 23, СОВ3З: положення 115-123 5ЕО ІО МО: 23, (мі) МН: СОКІ1: положення 45-53 5ЕО ІЮ МО: 19, СОК2: положення 71-78 5ЕО ІЮ МО: 19,
СОм3: положення 117-128 5ЕО ІЮ МО: 19, М: СОР1: положення 47-58 5ЕО ІЮО МО: 26, СОВО: положення 76-78 5ЕО ІЮ МО: 26, СОКЗ: положення 115-123 5ЕО І МО: 26, (мії) МН: СОК1: положення 45-53 5ЕО ІЮ МО: 19, СОК2: положення 71-78 5БЕО ІЮО МО: 19,
СОм3: положення 117-128 5ЕО ІЮ МО: 19, М: СОР1: положення 47-58 5ЕО ІЮО МО: 27, СОВО: положення 76-78 5ЕО ІЮ МО: 27, СОКУ: положення 115-123 5ЕО ІО МО: 27, і (іх) МН: СОКІ1: положення 45-53 5ЕО ІЮ МО: 19, СОК2: положення 71-78 5БО ІЮ МО: 19,
СОм3: положення 117-128 5ЕО ІЮ МО: 19, М: СОР1: положення 47-52 5ЕО ІЮО МО: 28, СОН: положення 70-72 5ЕО ІЮ МО: 28, СОКЗ: положення 109-117 5ЕО І МО: 28.
У додаткових кращих варіантах здійснення антитіло, яке проявляє здатність зв'язуватися з
СІГОМ18.2, бажано містить одну або більше гіперваріабельних ділянок (СОР5), бажано, щонайменше, СОМКЗ варіабельну ділянку, варіабельної області важкого ланцюга (МН) і/або варіабельної області легкого ланцюга (МІ) моноклонального антитіла до СІ ОМ18.2, бажано моноклонального антитіла до СІ 0ОМ18.2, описаного в даному документі, і бажано містить одну або більше гіперваріабельних ділянок (СОК5), бажано, щонайменше, СОКЗ варіабельну ділянку, варіабельних областей важкого ланцюга (МН) і/або варіабельних областей легкого ланцюга (МІ), описаних тут. В одному варіанті здійснення зазначений одну або більше гіперваріабельних ділянок (СОК5) обирають із набору гіперваріабельних ділянок СОКІ, СОК2 і
СОМ, описаних тут. В особливо кращому варіанті здійснення антитіло, яке проявляє здатність зв'язуватися з СІ ОМ18.2, бажано містить гіперваріабельні діллнки СОКІ, СОК2 і СОКЗ варіабельної області важкого ланцюга (МН) і/або варіабельної області важкого ланцюга (МІ) моноклонального антитіла до СГ ОМ18.2, бажано моноклонального антитіла до СГ ОМ18.2, описаного тут, і бажано містить гіперваріабельні ділянки СОКІ, СОК2 і СОКЗ варіабельних областей важкого ланцюга (МН) і/або варіабельних областей легкого ланцюга (МІ), описаних тут.
В одному варіанті здійснення антитіло, яке містить одну або більше СОК»5, набір СОН» або комбінацію наборів СОК»5, як описано тут, включає зазначені СОК5 разом з їхніми проміжними каркасними ділянками. Бажано, дана ділянка буде також включати, щонайменше, близько 50 95 будь-якої або обох з першої й четвертої каркасних ділянок, причому, будучи на 50 95 б- кінцевими 50 95 першої каркасної ділянки й М-кінцевими 50 95 четвертої каркасної ділянки.
Створення антитіл методами рекомбінантних ДНК може призводити до введення М- або С- кінцевих залишків у варіабельні ділянки, які кодуються лінкерами, уведеними для полегшення клонування або інших стадій маніпуляції включаючи введення лінкерів для з'єднання варіабельних областей винаходу з додатковими білковими послідовностями, включаючи важкі ланцюги імуноглобулінів, інші варіабельні домени (наприклад, при одержанні діабодів) або білкові мітки.
В одному варіанті здійснення антитіло, яке містить один або більше СОК»5, набір СОН» або комбінацію наборів СОК»5, як описано тут, містить зазначені СОК5 у каркасній ділянці антитіла людини.
Посилання в даному документі на антитіло, яке містить у його важкому ланцюзі конкретний ланцюг або конкретну область (ділянку) або послідовність, бажано відноситься до ситуації, у якій усі важкі ланцюги зазначеного антитіла містять зазначений конкретний ланцюг, область або послідовність. Це відповідно може бути застосовано до легкого ланцюга антитіла.
Термін "нуклеїнова кислота", який використовується в описі включає ДНК і РНК. Нуклеїнова кислота може бути одноланцюговою або дволанцюговою, але бажано є дволанцюговою ДНК.
Згідно з винаходом термін "експресія" використовується в його найбільш загальному значенні й включає вироблення РНК або РНК і білка/пептиду. Термін також включає часткову експресію нуклеїнових кислот. Крім того, експресія може протікати тимчасово або постійно.
Слід ураховувати, що викладена в документі ідея у відношенні специфічних амінокислотних послідовностей, наприклад, зазначених у списку послідовностей, також має відношення до варіантів зазначених специфічних послідовностей, що призводять до утворення послідовностей, які є функціонально еквівалентними до зазначених специфічних послідовностей, наприклад, амінокислотних послідовностей, які демонструють властивості, ідентичні або подібні, до властивостей специфічних амінокислотних послідовностей. Однією важливою властивістю є збереження зв'язування антитіла з його мішенню або підтвердження ефекторних функцій антитіла. Бажано, послідовність, яка є варіантом відносно специфічної послідовності, у тому випадку, коли вона заміняє специфічну послідовність в антитілі, зберігає здатність зв'язування зазначеного антитіла з СІ ОМ18.2 і бажано функції зазначеного антитіла, 60 як описано тут, наприклад, СОС-опосередкований лізис або АОСС-опосередкований лізис.
Фахівцям у даній галузі ясно, що послідовності СОК, гіперваріабельних і варіабельних областей можуть бути модифіковані без втрати здатності зв'язуватися з СІ ОМ18.2. Наприклад,
СОК ділянки будуть або ідентичними або високогомологічними до ділянок антитіла, визначеного в описі. Під "високогомологічним" мають на увазі, що може бути зроблено від 1 до 5, бажано від 1 до 4, наприклад від 1 до З замін, або 1 або 2 заміни в СОМК5. Крім того, гіперваріабельні й варіабельні області можуть бути модифіковані таким чином, щоб вони демонстрували значну гомологію до областей антитіла, зокрема, розкритих в описі.
Для цілей даного винаходу "варіанти" амінокислотної послідовності включають варіанти із вставками амінокислот, варіанти з добавками амінокислот, варіанти з делеціями амінокислот і або варіанти із замінами амінокислот. Варіанти з делеціями амінокислот, які містять делецію на М-кінці й/або С-кінці білка, також називаються М-кінцевими й/або С-кінцевими вкороченими варіантами.
Варіанти із вставкою амінокислот включають вставки однієї або двох або більше амінокислот в окрему амінокислотну послідовність. У випадку варіантів, які мають вставку, амінокислотної послідовності в окрему ділянку амінокислотної послідовності вставляється один або більше амінокислотних залишків, хоча за відповідного скринінга отриманого продукту також можна виявити випадкові вставки.
Варіанти амінокислотних добавок включають аміно- і/або карбокси-кінцеві злиття з однією або більше амінокислотами, наприклад, з 1, 2, 3, 5, 10, 20, 30, 50 або більше амінокислотами.
Варіанти з делецією амінокислот характеризуються видаленням однієї або більше амінокислот з послідовності, наприклад, видаленням 1, 2, 3, 5, 10, 20, 30, 50 або більше амінокислот. Делеції можуть відбуватися в будь-якому місці білка.
Варіанти із замінами амінокислот характеризуються, щонайменше, видаленням одного залишку в послідовності й вставкою іншого залишку на його місце. Перевага віддається модифікаціям, які перебувають у положеннях амінокислотної послідовності, які не є консервативними між гомологічними білками або пептидами, і/або замінам амінокислот на інші амінокислоти, що мають подібні властивості. Бажано амінокислотні зміни в білкових варіантах є консервативними амінокислотними змінами, тобто замінами аналогічно заряджених або незаряджених амінокислот. Консервативна зміна амінокислоти має відношення до заміни однієї із родини амінокислот, які є спорідненими за структурою бічного ланцюга. Природні амінокислоти підрозділяються на чотири родини: кислі (аспартат, глутамат), основні (лізин, аргінін, гістидін), неполярні (аланін, валін, лейцин, ізолейцин, пролін, фенілаланін, метіонін, триптофан) і незаряджені полярні (гліцин, аспарагін, глутамін, цистеїн, серин, треонін, тирозин) амінокислоти. Фенілаланін, триптофан і тирозин іноді класифікуються разом як ароматичні амінокислоти.
Бажано ступінь подібності, бажано ідентичності між даною амінокислотною послідовністю й амінокислотною послідовністю, яка є варіантом зазначеної даної амінокислотної послідовності, буде становити, щонайменше, близько 60 95, 65 Ус, 70 95, 80 9, 81 Зо, 82 95, 83 Зо, 84 о, 85 95, 86 то, 87 то, 88 то, 89 то, 90 то, 91 то, 92 то, 93 то, 94 то, 95 то, 96 то, 97 то, 98 Фо, або 99 965. Ступінь подібності або ідентичності бажано надається для амінокислотної області, яка становить, щонайменше, близько 1095, щонайменше, близько 2095, щонайменше, близько 30 95, щонайменше, близько 4095, щонайменше, близько 5095, щонайменше, близько 60 95, щонайменше, близько 709565, щонайменше, близько 80 956, щонайменше, близько 90 95 або близько 10095 повної довжини еталонної амінокислотної послідовності. Наприклад, якщо еталонна амінокислотна послідовність складається з 200 амінокислот, ступінь подібності або ідентичність бажано надається, щонайменше, приблизно для 20, щонайменше, приблизно 40, щонайменше, приблизно 60, щонайменше, приблизно 80, щонайменше, приблизно 100, щонайменше, приблизно 120, щонайменше, приблизно 140, щонайменше, приблизно 160, щонайменше, приблизно 180 або приблизно для 200 амінокислот, бажано послідовних амінокислот. У кращих варіантах здійснення надається ступінь подібності або ідентичності до повної довжини еталонної амінокислотної послідовності. Вирівнювання для визначення ступеня подібності послідовності, бажано ідентичності послідовності, можна виконати відомими у даній галузі техніки способами, краще з використанням найкращого способу вирівнювання послідовності, наприклад, АЇїдп з використанням стандартних налаштувань, бажано
ЕМВО55:пееаіе, Майіх: Віозитб2, Сар Ореп 10.0, Сар Ехієпа 0.5. "Подібність послідовності" указує відсоток амінокислот, які або є ідентичними або які представляють консервативні амінокислотні заміни. "Ідентичність послідовності" між двома амінокислотними послідовностями визначає відсоток амінокислот, які є ідентичними для даних послідовностей. 60 Термін "відсоток ідентичності" застосовують для позначення відсотка амінокислотних залишків, ідентичних між двома порівнюваними послідовностями після виконання найбільш оптимального вирівнювання, цей відсоток є чисто статистичним, а відмінності між двома послідовностями розподіляються випадково й у межах їх повної довжини. Порівняння послідовностей між двома амінокислотними послідовностями звичайно здійснюється шляхом порівняння цих послідовностей після їхнього оптимального вирівнювання, зазначене порівняння проводиться за допомогою сегмента або "вікна порівняння" для того, щоб установити й порівняти локальні області подібності послідовності. Оптимальне вирівнювання послідовностей для порівняння може бути проведене, крім способу "вручну", за допомогою алгоритму локальної гомології Зтййп і Уастептап, 1981, дах Арр. Маїб. 2, 482, за допомогою алгоритму локальної гомології МедаІетап і МУйп5сп, 1970, 9. Мої. ВіоІ. 48, 443, за допомогою методу пошуку подібності Реагзоп апа Гіртап, 1988, Ргос. Май Асад. Зсі. ОБА 85, 2444, або за допомогою комп'ютерних програм із застосуванням цих алгоритмів (ЗАР, ВЕ5ТРЇІТ, РАЗТА, ВІ А5Т Р,
ВІАБ5БТ М ї ТЕАБЗТА іп Умізсопзіп Сепеїйс5 Зоймжаге РасКаде, Сепеїййс5 Сотршіег ОСгоцр, 575 зЗсієпсе Огіме, Мадізоп, М/ів.).
Відсоток ідентичності вираховується шляхом визначення числа ідентичних положень між двома послідовностями при порівнянні, розділенням цього числа на число порівнюваних положень і множенням отриманого результату на 100 для того, щоб одержати відсоток ідентичності між цими двома послідовностями.
Термін "трансгенна тварина" відноситься до тварини, яка має геном, що містить один або більше трансгенів, бажано трансгенів важкого й/або легкого ланцюга, або трансхромосом (або інтегрованих або неінтегрованих у природну геномну ДНК тварини), бажано здатних експресувати трансгени. Наприклад, трансгенна миша може мати трансген людського легкого ланцюга й або трансген людського важкого ланцюга або трансхромосому людському важкому ланцюга, так що миша продукує людські анти-СІ ОМ18.2 антитіла, коли вона імунізована
СІ ОМ18.2-антигеном і/або клітинами, які експресують СІ ОМ18.2. Трансген людського важкого ланцюга може бути інтегрований у хромосомну ДНК миші, як у випадку трансгенної миші, наприклад, НиМАБ миші, наприклад НСо7 або НСоЇ2 миші, або трансген людського важкого ланцюга може бути збережений екстрахромосомно, як у випадку трансхромосомних (наприклад,
КМ) мишей, як описано в УМО 02/43478. Такі трансгенні й трансхромосомні миші можуть бути здатні продукувати багато ізотипів людських моноклональних антитіл до СІ ОМ18.2 (наприклад,
ІЧ, ІдА і/або ІЧЕ) при проведенні М-0-) рекомбінації й перемикання ізотипа. "Зменшувати", "знижувати" або "інгібувати" при використанні в описі означає бути здатним викликати загальне зменшення, бажано на 5 95 або більше, 10 95 або більше, 20 95 або більше, ще краще 50 95 або більше й найкраще на 75 95 або більше рівня, наприклад, рівня експресії або рівня проліферації клітин.
Такі терміни як "збільшення" або "посилення" бажано відносяться до збільшення або посилення, щонайменше, приблизно на 1095, бажано, щонайменше, на 20 95, бажано, щонайменше, на 30 95, бажано, щонайменше, на 40 95, ще краще, щонайменше, на 50 95, навіть ще краще, щонайменше, на 80 95, і найкраще, щонайменше, на 100 95, щонайменше, на 200 95, щонайменше, на 500 95, щонайменше, на 1000 95, щонайменше, на 10 000 95 або навіть більше.
Механізми дії тАр
Незважаючи на те, що наступний опис пропонує обговорення, стосовно механізму, який лежить в основі терапевтичної ефективності антитіл винаходу, він не повинен розглядатися як такий, що обмежує винахід яким би то не було чином.
Описані тут антитіла бажано взаємодіють із компонентами імунної системи, переважно через АОСС або СОС. Описані тут антитіла також можуть використовуватися для "цільового навантаження" (наприклад, радіоїзотопами, лікарськими засобами або токсинами), для того, щоб безпосередньо вбивати пухлинні клітини, або можуть використовуватися синергійно разом із традиційними хіміотерапевтичними засобами, впливаючи на пухлини за допомогою додаткових механізмів дії, включаючи протипухлинні імунні відповіді, які можуть бути порушені внаслідок побічних цитотоксичних ефектів хіміотерапевтичних препаратів на Т-лімфоцити.
Однак, описані тут антитіла також можуть діяти просто шляхом зв'язування з СІ ОМ18.2 на клітинній поверхні, таким чином, наприклад, блокуючи проліферацію клітин.
Антитілозалежна клітинноопосредкована цитотоксичність
АрСС описує здатність ефекторних клітин, як описано тут, зокрема, лімфоцитів, убивати клітини, при цьому необхідно, щоб клітина-мішень була бажано позначена антитілом.
Бажано АОСС спостерігається, коли антитіла зв'язуються з антигенами на пухлинних клітинах, а Ес-домени антитіл зв'язують Ес-рецептори (ЕСК) на поверхні імунних ефекторних клітин. Було встановлено кілька родин Ес-рецепторів, при цьому характерно, що специфічні 60 популяції клітин експресують певні Ес-рецептори. АОСС можна розглядати як механізм прямого руйнування (різного ступеню) пухлини, який призводить до презентації антигену й індукції Т- клітинних відповідей, спрямованих на пухлину. Бажано індукція АОСС іп мімо буде призводити до Т-клітинної відповіді, спрямованої на пухлинні клітини, і відповіді антитіл хазяїна.
Комплементзалежна цитотоксичність.
Іншим способом знищення клітин, який може бути опосередкований антитілами, є СОС.
Найефективнішим ізотипом для активації комплементу є (ЯМ. Також дуже ефективними при спрямовуванні СОС класичним шляхом активації комплементу є досі ії (9053. Бажано утворення комплексів антиген-антитіло в цьому каскаді призводить до "розкриття" численних місць зв'язування Сід у безпосередній близькості на СН2 доменах молекул антитіл, які беруть в цьому участь, наприклад, молекул до (СІд є одним із трьох субкомпонентів комплементу СІ). Бажано ці "розкриті" місця зв'язування Сід перетворюють взаємодію Сід-Ідс, яке до цього мало низьку спорідненість на спорідненість із високої авідністю, що запускає каскад подій, які залучають ряд інших білків комплементу, і призводить до протеолітичного вивільненню хемотаксичних/активуючих агентів, ефекторних клітин СЗа і Сба. Бажано каскад комплементу кінчається утворенням мембрано-атакуючого комплексу, який створює пори в клітинній мембрані, які сприяють вільному проходженню води й розчинених речовин у клітини й із клітин.
Описані в цьому документі антитіла можна одержати за допомогою ряду методів, включаючи звичайну методику одержання моноклональних антитіл, наприклад, методом гібридизації стандартних соматичних клітин Копіег і Міїєтеїп, Майиге 256: 495 (1975). Незважаючи на те, що методи гібридизації соматичних клітин є кращими, у принципі можна використовувати інші методи одержання моноклональних антитіл, наприклад, шляхом вірусної або онкогенної трансформації В-лімфоцитів, або метод фагового дисплею з використанням бібліотек генів антитіл.
Кращою тваринною системою для одержання гібридоми, яка секретує моноклональні антитіла, є мишача система. Одержання гібридом в миші є загальноприйнятим методом.
Протоколи імунізації й методики виділення імунізованих спленоцитів для злиття добре відомі у даній галузі техніки. Клітини, що зливаються (наприклад, мишачі клітини мієломи) і процедури злиття також добре відомі.
Іншими кращими тваринними системами для одержання гібридом, які секретують моноклональні антитіла, є пацюки або кролики (наприклад, система, описана в бріеКег-Роїеї єї а!.,, Ргос. Маї!. Асай. 5сі. 0О.5.А. 92:9348 (1995), дивися також Козбі еї аї., Ат. .). Сііп. 35 Раїйої. 124:295(2005)).
В іншому кращому варіанті здійснення людські моноклональні антитіла можна одержати за допомогою трансгенних або трансхромосомних мишей, що несуть частини людської імунної системи, а не мишачої системи. Ці трансгенні або трансхромосомні миші включають мишей, відомих як миші НиМАБ і миші КМ, відповідно, і які разом згадуються в описі як "трансгенні миші". Одержання людських антитіл у таких трансгенних мишах можна здійснити, як докладно описано для СО20О в УМО2004 035607.
Іншою стратегією одержання моноклональних антитіл є пряме виділення генів, які кодують антитіла, з лімфоцитів, які продукують антитіла, наприклад, див. Варсоск еї єї!., 1996; А помеї! вігаїеду ог депегаїіпа топосіопа! апііродіє5 їїтот віпдіє, ізоїаїед Іутрпосуїез ргодисіпа апіїбоіе5 ої аеїйпей 5ігаїеду. Подробиці розробки рекомбінантних антитіл дивися також в УмеІ5спої і Кгацйв,
Весотбіпапі апіїодев5 їог сапсег Шегару ІЗВМ-0-89603-918-8 і Веппу К.С. Го Апіроау
Епдіпеегтіпд ІЗВМ 1-58829-092-1.
Для одержання антитіл мишей можна імунізувати кон'югованими з носієм, пептидами отриманими з послідовності антигену, тобто послідовності, проти якої спрямовані антитіла, збагаченими препаратом рекомбінантно експресованого антигену або його фрагментів і/або клітинами, які експресують антиген, як описано. Альтернативно, мишей можна імунізувати ДНК, яка кодує антиген або його фрагменти. У тому випадку, коли імунізація з використанням очищеного або збагаченого препарату антигену не призводить до утворення антитіл, мишей також можна імунізувати клітинами, які експресують антиген, наприклад, клітинною лінією, щоб сприяти імунній відповіді.
Імунну відповідь можна контролювати протягом виконання протоколу імунізації, відбираючи зразки плазми й сироватки із хвостової вени або ретроорбітального кровотоку. Миші з достатнім титром імуноглобуліну можуть використовуватися для злиття клітин. Мишей можна піддавати стимуляції внутрішньоочеревинно й внутрішньовенно клітинами, які експресують антиген, за З дні до забою й видалення селезінки для того, щоб збільшити швидкість секретування специфічних антитіл гібридомами.
Для одержання гібридом, які продукують моноклональні антитіла, з лімфатичних вузлів або 60 селезінки, отриманих від імунізованих мишей, можуть бути виділені клітини й злиті з придатною іморталізованою клітинною лінією, наприклад, лінією клітин мієломи миші. Потім отримані гібридоми можна відібрати за виробленням антиген-специфічних антитіл. Потім за допомогою методу ЕГІБА можна відібрати окремі комірки з гібридомами, які секретують антитіла. За допомогою імунофлуоресценції й ЕБАСб-аналізу з використанням клітин, які експресують антиген, можна встановити антитіла зі специфічністю до антигену. Гібридоми, які секретують антитіла, можна знову висіяти, провести відбір і позитивні за моноклональними антитілами можна субклонувати за допомогою серійного розведення. Потім стабільні субклони культивують іп міго у середовищі для культури тканини, щоб одержати й охарактеризувати антитіла.
Антитіла також можна одержати в клітинах-хазяїнах, таких як, трансфектоми, використовуючи, наприклад, комбінацію методів рекомбінантних ДНК і методів трансфекції генів, добре відомих у даній галузі техніки (Могїгтізоп, 5. (1985) Зсіепсе 229: 1202).
Наприклад, в одному варіанті здійснення гени, які представляють інтерес(ген), наприклад, гени антитіл, можуть бути лігованими у вектор експресії, такий як еукаріотична експресуюча плазміда, наприклад, яка використовується системою експресії гена 55, розкритою в МО 87/04462, УМО 89/01036 і ЕР 338 841, або інші системи експресії, добре відомі в даній галузі.
Очищена плазміда із клонованими генами антитіла може бути введена в еукаріотичну клітину- хазяїна, таку як СНО клітини (клітини яєчників китайського хом'ячка), М5/0О клітини, НЕК29З3Т клітини або НЕК293 клітини або альтернативно інші еукаріотичні клітини, подібні до клітин рослин, грибів або дріжджів. Для введення цих генів можуть використовуватися методи, описані у даній галузі техніки, такі як електропорація, ліпофектин, ліпофектамін або інші. Після введення цих генів антитіл у клітини-хазяїни, клітини, які експресують антитіло можуть бути розпізнані й відібрані. Ці клітини є трансфектомами, які потім можна ампліфікувати і масштабувати для вироблення антитіл. Рекомбінантні антитіла можуть бути ізольовані й очищені із цих культуральних супернатантів і/або клітин.
Альтернативно, клоновані гени антитіла можуть бути експресовані в інших системах експресії, включаючи прокаріотичні клітини, такі як мікроорганізми, наприклад, Е. соїї. Більше того, антитіла можуть продукуватися в трансгенних організмах, які не є людиною, і бути присутніми, наприклад, у молоці овець і кроликів або в яйцях курей, або в трансгенних рослинах; дивися, наприклад, Мептпа, К., еї аї. (1998) 9. Іттипої. Меїй. 216: 165-181; РоПосК, єї аї. (1999) 9. Іттипої. Меїй. 231: 147-157; і Еізопег, К., еї а. (1999) ВіоІ. Спет. 380: 825-839.
Химеризація
Мишачі моноклональні антитіла можуть використовуватися як терапевтичні антитіла для людей, у тому випадку, коли до них прикріплюється токсин, або коли їх мітять радіоактивними ізотопами. При повторному застосуванні немічені мишачі антитіла є високоїмуногенними для людини, що призводить до зменшення терапевтичного ефекту. Основна імуногенність опосередкована константними областями важкого ланцюга. Імуногенність мишачих антитіл для людини можна зменшити або повністю її уникнути, якщо відповідні антитіла зробити химерними або гуманізованими. Химерні антитіла є антитілами, різні частини яких походять від різних видів тварин, наприклад, антитіла мають варіабельну область, отриману від мишачого антитіла, і константну область людського імуноглобуліну. Химеризація антитіл досягається з'єднанням варіабельних областей важкого й легкого ланцюгів мишачих антитіл з людською константною областю важкого й легкого ланцюга (наприклад, як описано Кгашцз еї аї., в Метод» іп МоіІесшіаг
Віоіоду зегіе5, Весотрбіпапі апіїбодієв Тог сапсег Тегару ІЗВМ-0-89603-918-8). У кращому варіанті здійснення химерні антитіла одержують з'єднанням людської константної області каппа-легкого ланцюга з мишачою варіабельною областю легкого ланцюга. У ще одному кращому варіанті здійснення химерні антитіла одержують з'єднанням людської константної області лямбда- легкого ланцюга з мишачою варіабельною областю легкого ланцюга. Кращими константними областями важкого ланцюга для одержання химерних антитіл є ІдДС1, ІдсеЗ і Ідс4. Іншими кращими константними областями важкого ланцюга для одержання химерних антитіл є Ідс2,
ІЧА, дО і ТОМ.
Гуманізація
Антитіла взаємодіють із цільовими антигенами переважно через амінокислотні залишки, розташовані в шести гіперваріабельних ділянках (СОМ) важкого й легкого ланцюгів. Із цієї причини амінокислотні послідовності в СОМ більш відрізняються між окремими антитілами, ніж послідовності поза СОК. Оскільки СОК-послідовності відповідають за більшість взаємодій антитіло-антиген, є можливою експресія рекомбінантних антитіл, які наслідують властивості специфічних природних антитіл, шляхом конструювання векторів експресії, які включають СОК- послідовності від специфічних природних антитіл, пересаджені на каркасні послідовності від іншого антитіла з іншими властивостями (див., наприклад, Кіесптапп, ІГ. еї аї. (1998) Майшге 332: 60 0 323-327; Уопев, Р. єї аї. (1986) Маїшге 321: 522-525; і Оцееп, С. еї аї. (1989) Ргос. Май. Асад. 5бі.
И. 5. А. 86: 10029-10033). Такі каркасні послідовності можна одержати з публічних баз даних
ДНК, які включають зародкові послідовності генів антитіл. Ці зародкові послідовності будуть відрізнятися від зрілих послідовностей генів антитіл, тому що вони не включають повністю зібрані мінливі гени, які формуються при М (0) 9 з'єднанні під час дозрівання В-клітини.
Зародкові генні послідовності також будуть відрізнятися від послідовностей високоафінного антитіла із вторинного репертуару окремою рівномірною варіабельною областю.
Здатність антитіла зв'язуватися з СІ ОМб можна визначити за допомогою стандартних методів аналізу зв'язування (наприклад, ЕЇГІ5А, вестерн-блотинг, імунофлуоресценція й проточна цитометрія).
З метою очищення моноклональних антитіл відібрані гібридоми вирощують у дволітровій ролерній колбі. Альтернативно антитіла можна одержати в біореакторі на основі діалізу. За необхідності супернатанти можна профільтрувати, концентрувати перед проведенням афінної хроматографії із протеїн-С-сефарозою або протеїн-А-сефарозою. Чистоту елюйованого до можна проконтролювати за допомогою гель-електрофорезу й високоефективної рідинної хроматографії. Буферний розчин можна поміняти на РВ5, а концентрацію можна визначити при 00280 з використанням коефіцієнта екстинції 1,43. Моноклональні антитіла можна розділити на аліквоти і зберігати при -80 "С.
Для того щоб визначити, чи зв'язуються відібрані моноклональні антитіла з єдиним епітопом, може бути застосований сайт-спрямований або мульти-сайт-спрямований мутагенез.
Для встановлення ізотипа очищених антитіл проводили аналіз ЕГІ5БА з різними комерційними наборами (наприклад, 2утей, Коспе Оіадпобвіїс5). Комірки титраційних мікропланшетів покривають антимишачим Ід. Після блокування (інгібування) проводили реакцію з моноклональними антитілами або очищеними ізотипними контролями за кімнатної температури протягом двох годин. Потім проводили реакцію або з мишачим Ідс1, Ідс2а, І|дс2Ь або Ідс3, ІдА або зі специфічним мишачим ДМ, кон'югованим з пероксидазою. Після промивання планшети обробляють АВТ5 субстратом (1 мг/мл) і досліджують при ОЮ 405-650.
Альтернативно, можна використовувати набір для ізотипування ізо5іїр Моизе Мопосіопаї
Апііроду Ізоїуріпо Кії (Босне, Саї. Мо. 1493027), як описано виробником.
Для того щоб продемонструвати наявність антитіл у сироватці імунізованих мишей або зв'язування моноклональних антитіл з живими клітинами, які експресують антиген, можна використовувати проточну цитометрію. Лінії клітин, які експресують антиген у нормі або після трансфекції, і негативні контролі, що втратили експресію антигену (вирощені за стандартних умов), змішують із різними концентраціями моноклональних антитіл у супернатантах від гібридоми або в РВ5, що містить 195 ЕВ5, і інкубують при 4 "С протягом 30 хв. Після промивання мічені АРС або АїЇехаб47 анти-Ідб антитіла можуть зв'язуватися з антиген- зв'язаними моноклональними антитілами за таких же умов, як умови для фарбування первинних антитіл. Зразки можна проаналізувати за допомогою проточної цитометрії на приладі
ЕАС5, використовуючи параметри прямого й бічного розсіювання світла, щоб пропускати окремі живі клітини. Для того, щоб відрізнити антиген-специфічні моноклональні антитіла від неспецифічних зв'язувальних речовин в одному вимірюванні, можна використовувати метод котрансфекції. Клітини тимчасово трансфіковані плазмідами, які кодують антиген, і флуоресцентним маркером, можна пофарбувати, як описано вище. Трансфіковані клітини можна виявити в іншому діапазоні флуоресценції, ніж антитіло-пофарбовані клітини. Оскільки більшість трансфікованих клітин експресує обидва трансгени, антиген-специфічні моноклональні антитіла зв'язуються переважно із клітинами, які експресують флуоресцентний маркер, тоді як неспецифічні антитіла зв'язуються в співрозмірному співвідношенні з нетрансфікованими клітинами. Можна застосовувати альтернативний метод аналізу з використанням флуоресцентної мікроскопії на додачу до або замість проточної цитометрії.
Клітини можна пофарбувати так, як описано вище, і досліджувати за допомогою флуоресцентної мікроскопії.
Для того щоб продемонструвати наявність антитіл у сироватці імунізованих мишей або зв'язування моноклональних антитіл з живими клітинами, які експресують антиген, можна використовувати імунофлуоресцентну мікроскопію. Наприклад, клітинні лінії, які експресують антиген або спонтанно або після трансфекції, і негативні контролі, які втратили експресію антигену, вирощують на предметних скельцях з комірками за стандартних умов росту в середовищі ОМЕМ/Е12 з додаванням 10 95 ембріональної телячої сироватки (ЕС5), 2 мМ 1- глутаміну, 100 мкг/мл пеніциліну й 100 мкг/мл стрептоміцину. Потім клітини фіксують метанолом або параформальдегідом або залишають необробленими. Потім проводять реакцію клітин з моноклональними антитілами до антигену протягом 30 хвилин при 25 "С. Після промивання 60 проводять реакцію клітин з міченими АІеха555 антимишачими дб вторинними антитілами
Зо
(МоїІесшаг Ргобев) за тих же самих умов. Після цього можна досліджувати клітини за допомогою флуоресцентної мікроскопії.
Із клітин, які експресують антиген та відповідних негативних контролів можна приготувати клітинні екстракти, а потім провести електрофорез у поліакриламідному гелі в присутності додецилсульфату натрію (505). Після електрофорезу відділені антигени переносять на нітроцелюлозні мембрани, інгібують і досліджують за допомогою тестованих моноклональних антитіл. Ідс-зв'язування можна визначити за допомогою антимишачого Ідс міченого пероксидазою і виявити за допомогою ЕСІ. субстрату.
Антитіла можна додатково протестувати на реакційну здатність із антигеном за допомогою імуногістохімічного аналізу добре відомим фахівцеві в даній галузі способом, наприклад, з використанням кріозрізів, фіксованих параформальдегідом або ацетоном, або фіксованих параформальдегідом парафінових зрізів зразків неракових тканин або ракових тканин, узятих у пацієнта під час звичайних хірургічних процедур, або в мишей із ксенотрансплантатом пухлин, інокульованих за допомогою ліній клітин, які експресують антиген спонтанно або після трансфекції. Для імунофарбування антитіла, які реагують із антигеном, можуть бути проінкубовані, а потім кон'юговані з міченими пероксидазою хріну козячими антимишачими або козячими антикроликовими антитілами (САКОС) згідно з інструкціями продавця.
Антитіла можна протестувати щодо їх здатності опосередковувати фагоцитоз і знищення клітин, які експресують СІ ОМ18.2. Перевірка активності моноклональних антитіл іп мйго забезпечує первинний скринінг до тестування на моделях іп мімо.
Антитілозалежна клітинноопосредкована цитотоксичність (АЮОСС):
Коротко, поліморфноядерні клітини (РММ), МК-клітини, моноцити, мононуклеарні клітини або інші ефекторні клітини від здорових донорів можна очистити центрифугуванням у градієнті щільності фікол-гіпака, з наступним руйнуванням забруднюючих еритроцитів. Промиті ефекторні клітини суспендують в КРМІ з додаванням 1095 інактивованої нагріванням ембріональної телячої сироватки або альтернативно з 5 95 інактивованої нагріванням людської сироватки й змішують із 7"С/-міченими клітинами-мішенями, які експресують СІ ОМ18.2, у різних співвідношеннях ефекторних клітин до клітин-мішеней. Альтернативно, клітини-мішені можна позначити лігандом, який підсилює флуоресценцію (ВАТОА). Високофлуоресцентний хелат європію з посилюючим лігандом, який вивільняється з мертвих клітин, можна визначити за допомогою флуориметра. В іншому альтернативному способі може використовуватися трансфекція клітин-мішеней з використанням люциферази. При цьому доданий люцифер жовтий може окислюватися тільки живими клітинами. Потім можна додати очищені анти-
СІОМ18.2 Ідб5 у різних концентраціях. Як негативний контроль можна використовувати нерелевантний людський ідо. Дослідження проводиться протягом від 4 до 20 годин при 37 "С залежно від типу ефекторних клітин які використовуються. Цитоліз у зразках можна оцінити шляхом вимірювання вивільнення "Сг або наявності хелата ЕшТОА у культуральному супернатанті. Альтернативно, можна виміряти люмінесценцію живих клітин, що є результатом окислення люцифера жовтого.
Також можна перевірити різні комбінації анти-СІ ОМ18.2 моноклональних антитіл, щоб визначити чи підсилюється цитоліз при дії композицій моноклональних антитіл.
Комплементзалежна цитотоксичність (СОС):
Моноклональні анти-СІОМб антитіла можна перевірити щодо їхньої здатності опосередковувати СОС за допомогою ряду відомих методів. Наприклад, сироватку для одержання комплементу можна одержати із крові відомим фахівцям способом. Для визначення
СОб-активності моноклональних антитіл можна використовувати різні методи. Наприклад, можна вимірювати вивільнення "Сг або можна оцінити підвищену проникність мембран за допомогою методу виключення пропідіум йодиду (РІ). Коротко, цільові клітини промивають і 5 х 105/мл інкубують з різними концентраціями тМАБ протягом 10-30 хвилин за кімнатної температури або при 37 "С. Потім додають сироватку або плазму до остаточної концентрації 20 95 (об./06.) і клітини інкубують при 37 "С протягом 20-30 хвилин. До всіх клітин кожного зразка додають розчин РІ у пробірку для ГАСзЗ-аналізу. Після цього суміш негайно аналізують за допомогою проточної цитометрії, використовуючи ЕАС5-набір.
В альтернативному способі дослідження індукцію СОС можна встановити на прикріплених клітинах. В одному варіанті здійснення цього методу аналізу клітини висівають за 24 години до дослідження із щільністю З х 10'/комірку в плоскодонні титраційні мікропланшети для культур тканин. Наступного дня ростове середовище видаляють і клітини інкубують з антитілами (три повторності). Контрольні клітини інкубують у ростовому середовищі або ростовому середовищі, яке містить 0,2 95 сапоніну для визначення фонового лізису й максимального лізису, відповідно. 60 Після інкубації протягом 20 хвилин за кімнатної температури супернатант видаляють, і додають до клітин 20 95 (06./ об.) людської плазми або сироватки в ОМЕМ (попередньо нагрітої до 37 "С) і інкубують протягом наступних 20 хвилин при 37 "С. До клітин кожного зразка додають розчин пропідій йодиду (10 мкг/мл). Потім супернатанти заміняють РВ5, які містять 2,5 мкг/мл етидіум броміду, і вимірюють вихідну флуоресценцію після зрушення при 520 нм при 600 нм за допомогою Тесап Заїйге. Відсоток специфічного лізису обчислюють як зазначено далі: відсоток специфічного лізису - (флуоресценція зразка - фонова флуоресценція)/ (флуоресценція при максимальному лізисі- фонова флуоресценція) х 100.
Індукція апоптозу й інгібування клітинної проліферації моноклональними антитілами
Наприклад, щоб перевірити здатність моноклональних анти-СІ ОМ18.2 антитіл ініціювати апоптоз, їх інкубують з пухлинними клітинами, позитивними за СІ ОМ18.2, наприклад, ЗМО-16, рАМ-Сї, КАТО-ПШ або СІ ОМ18.2-трансфікованими пухлинними клітинами при 37 "С протягом 20 годин. Клітини збирають, промивають в анексин-М зв'язувальному буфері (ВО бБіозсіепсеб), і інкубують з анексином М, з'єднаним з РІТС або АРС (ВО Біозсіепсе5), протягом 15 хвилин у темряві. До всіх клітин кожного зразка додають розчин РІ (10 мкг/мл в РВ5) у пробірку для
ЕАСб-аналізу й відразу оцінюють за допомогою проточної цитометрії (як описано вище).
Альтернативно, загальне інгібування клітинної проліферації моноклональними антитілами можна визначити за допомогою комерційно доступних наборів. За допомогою набору для визначення клітинної проліферації ОЕЇ РІА (РегкКіп-ЕІтег, Саї. Мо. АБО20О0) можна провести неізотопний імуноаналіз у мікропланшетах, заснований на вимірюванні включення 5-бром-2'- дезоксиуридіну (Вга0) під час синтезу ДНК проліферуючими клітинами. Включений ВгаШ визначають за допомогою мічених європієм моноклональних антитіл. Щоб зробити можливим виявлення антитіл, клітини фіксують і проводять денатурацію ДНК, використовуючи Ріх (фіксуючий) розчин. Незв'язані антитіла змивають і додають у розчин індуктор ОЕЇ РІА, щоб відокремити іони європію від мічених антитіл, де вони утворюють високофлуоресцентні хелати з компонентами індуктора ОБЕГРІА. Флуоресценція, яка визначається в кожній комірці за допомогою флуориметрії з часовим розрізненням, є пропорційною до синтезу ДНК у клітині.
Доклінічне дослідження
Моноклональні антитіла, які зв'язуються з СІ 0ОМ18.2, також можуть бути перевірені на моделі іп мімо (наприклад, на імунодефіцитних мишах із ксенотрансплантатами пухлин, інокульованих клітинними лініями, які експресують СІ ОМ18.2, наприклад, ОАМ-С, 5МИ-16 або
КАТО-І, або після трансфекції, наприклад, НЕК293) для встановлення їх ефективності при контролюванні росту пухлинних клітин, які експресують СІ ОМ18.2.
Дослідження антитіл запропонованих винаходом іп омімо можна провести після ксенотрансплантації пухлинних клітин, які експресують СІ ОМ18.2, імунодефіцитним мишам або іншим тваринам. Щоб визначити дію антитіл на запобігання утворення пухлин або симптомів, пов'язаних з пухлинами, антитіла можна ввести мишам, які не мають пухлин, з подальшою ін'єкцією пухлинних клітин. Щоб установити терапевтичну ефективність відповідних антитіл відносно зменшення пухлинного росту або симптомів, пов'язаних з пухлинами, антитіла можна ввести мишам-носіям пухлин. Застосування антитіл можна комбінувати із застосуванням інших речовин, таких як цитостатичні засоби, інгібітори факторів росту, блокатори клітинного циклу, інгібітори ангіогенезу або іншими антитілами, щоб визначити синергійну ефективність і потенційну токсичність комбінацій. Щоб проаналізувати токсичні побічні явища, опосередковані антитілами, тваринам можна інокулювати антитіла або контрольні реагенти й ретельно вивчити симптоми, можливо пов'язані з терапією антитілами до СІ ОМ18.2. Зокрема, можливі побічні явища від застосування іп мімо СІ ОМ18.2-антитіл включають токсичний вплив на тканини, які експресують СІ ОМ18.2, включаючи шлунок. Антитіла, які розпізнають СІ ОМ18.2 у людини й в інших видів, наприклад, мишей, є, зокрема, придатними для передбачення можливих побічних явищ, опосередкованих застосуванням моноклональних СІ ОМ18.2 -антитіл, у людей.
Картування епітопів, які розпізнаються антитілами, можна провести, як докладно описано в "Еріюре Марріпа Ргоїосоїв (Меїнодз іп МоїІесшіаг Віоіоду) Бу Сієпп Е. Моттіз ІЗВМ-089603-375-9 і в "Ерйоре Марріпо: А Ргасіїса! Арргоасі" Ргасіїса! Арргоасії Зегіє5, 248 Бу Оїмуп М. К. Ууезімовса,
Егапк с. Нау.
Сполуки й засоби, описані в даному документі, можуть бути введені у вигляді будь-якої придатної фармацевтичної композиції.
Фармацевтичні композиції в більшості випадків надаються в стандартній лікарській формі й можуть бути отримані добре відомим способом. Наприклад, фармацевтична композиція може мати форму розчину або суспензії.
Фармацевтична композиція може містити солі, буферні речовини, консервуючі речовини, носії, розріджувачі й/або ексципієнти, усі з яких бажано є прийнятними з погляду фармацевтики. 60 Термін "фармацевтично прийнятний" відноситься до нетоксичної речовини, яка не втручається в дію активного компонента фармацевтичної композиції.
Солі, які не є фармацевтично прийнятними, можуть використовуватися для одержання фармацевтично прийнятних солей і включаються у винахід. Фармацевтично прийнятні солі цього типу включають, без обмеження, солі, отримані з наступних кислот: хлористоводневої, бромистоводневої, сірчаної, азотної, фосфорної, малеїнової, оцтової, саліцилової, лимонної, мурашиної, малонної, бурштинової й подібних до них. Фармацевтично прийнятні солі також можуть бути отримані у вигляді солей лужних або лужноземельних металів, таких як солі натрію, солі калію й солі кальцію.
Придатні для використання у фармацевтичній композиції буферні речовини включають оцтову кислоту у вигляді солі, лимонну кислоту у вигляді солі, борну кислоту у вигляді солі й фосфорну кислоту у вигляді солі.
Придатні для використання у фармацевтичній композиції консервуючі речовини, включають бензалконію хлорид, хлорбутанол, парабен і тимеросал.
Призначена для ін'єкцій композиція може містити фармацевтично прийнятний ексципієнт, такий як лактат Рінгера.
Термін "носій" має відношення до органічного або неорганічного компонента, природного або синтетичного походження, з яким активний компонент поєднується, для того, щоб полегшити, підсилити або сприяти застосуванню. Згідно з винаходом термін "носій" також включає один або більше сумісних твердих або рідких наповнювачів, розріджувачів або інкапсулюючих речовин, придатних для введення пацієнтові.
Прийнятними для парентерального введення речовинами-носіями є, наприклад, стерильна вода, розчин Рінгера, лактат Рінгера, стерильний розчин хлориду натрію, поліалкіленгліколі, гідрогенізовані нафталіни й, зокрема, біологічно сумісні полімери лактида, співполімери лактида із гліколідом або співполімери поліоксиетилену з поліоксипропіленом.
Термін "ексципієнт", який використовується в описі позначає всі речовини, які можуть бути присутніми у фармацевтичній композиції й не є активними інгредієнтами, такі як, наприклад, носії, зв'язуючі речовини, змащувальні речовини, загущувальні речовини, поверхнево-активні речовини, консервуючі речовини, емульгуючі речовини, буферні речовини, ароматизуючі речовини або барвники.
Засоби й композиції, описані в даному документі, можуть уводитися будь-яким звичайним способом, наприклад, парентеральним шляхом, включаючи ін'єкцію або інфузію. Краще введення здійснюється парентерально, наприклад, внутрішньовенно, внутрішньоартеріально, підшкірно, внутрішньошкірно або внутрішньом'язево.
Композиції, придатні для парентерального введення, звичайно включають стерильні водні або неводні препарати активної сполуки, бажано ізотонічні відносно крові реципієнта.
Прикладами сумісних носіїв і розчинників є розчин Рінгера й ізотонічний розчин хлориду натрію.
Крім того, стерильні, жирні олії використовуються як середовище для розчину або суспензії.
Засоби й композиції, описані в даному документі, уводяться в ефективних кількостях. "Ефективна кількість" відноситься до кількості, за допомогою якої досягають бажаної реакції або бажаного ефекту окремо або в комбінації з додатковими дозуваннями. У випадку лікування конкретної хвороби або конкретного стану бажаною реакцією бажано є інгібування розвитку хвороби. Сюди включається уповільнення розвитку хвороби й, зокрема, переривання або зворотній розвиток хвороби. Бажаною реакцією при лікуванні хвороби або стану також може бути затримка початку або запобігання початку зазначеної хвороби або зазначеного стану.
Ефективна кількість засобу або композиції, описаної в даному документі, буде залежати від стану, який необхідно лікувати, тяжкості захворювання, індивідуальних характеристик пацієнта, включаючи вік, фізіологічний стан, розмір і вага, тривалість лікування, тип супутнього лікування (якщо воно є), конкретний спосіб уведення й подібні фактори. Відповідно дозування, яке вводиться, описаних тут засобів може залежати від тих або інших подібних характеристик. У тому випадку, коли реакція пацієнта є недостатньою при використанні первинного дозування, можуть використовуватися більш високі дози (або ефективні більш високі дози досягаються за допомогою іншого більш локального способу введення).
Засоби й композиції, описані в цьому документі, можуть уводитися пацієнтам, наприклад, іп мімо, для лікування або запобігання цілого ряду захворювань, таких, як описані тут. Бажано пацієнтами є люди, які мають захворювання, які можуть бути вилікувані або поліпшені введенням засобів і композицій, описаних тут. Сюди включаються захворювання, в яких задіяні клітини, які характеризуються зміненим профілем СІ ОМ18.2.
Наприклад, в одному варіанті здійснення описані тут антитіла можуть використовуватися для лікування пацієнта з раковою хворобою, наприклад, раковою хворобою, яку описано тут, 60 яка відрізняється наявністю ракових клітин, які експресують СІ ОМ18.2.
Фармацевтичні композиції й способи лікування, описані відповідно до винаходу, також можуть використовуватися для імунізації або вакцинації з метою запобігання описаної тут хвороби.
Даний винахід додатково ілюструється наступними прикладами, які не слід розглядати як такі, що обмежують рамки винаходу.
Приклади
Приклад 1: Експресія СІ ОМ18.2 у лінії клітин раку шлунка людини стабілізується при обробці хіміотерапевтичними препаратами іп міїго
Клітини Каші, лінія клітин раку шлунка людини, культивували в середовищі КРМІ 1640 (Іпмігодеп), яке містить 20 95 ЕС5 (Регбіо) і 2 мМ Сішатах (Іпмігодеп) при 37 "С і 5 95 СО» з або без цитостатичних сполук. Епірубіцин (Рії7ег) був перевірений у концентрації 10 або 100 нг/мл, 5-РО (Меойног від компанії Меосогр АС) був перевірений у концентрації 10 або 100 нг/мл, і оксаліплатин (Нозріга) був перевірено при концентрації 50 або 500 нг/мл. Також використовували комбінацію всіх З сполук (ЕОЕ; епірубіцин 10 нг/мл, оксаліплатин 500 нг/мл, 5-
Р 10 нг/мл). 8 х 105 клітин Кашюп культивували протягом 96 годин, не міняючи середовище, або протягом 72 годин з наступним культивуванням протягом 24 годин у стандартному середовищі, щоб "зняти" із блокування клітинного циклу клітин, в б-коміркових культуральних планшетах при 37 "С, 5 95 СО». Клітини збирали, використовуючи ЕОТА/трипсин, промивали й досліджували.
Для виявлення позаклітинного СІ ОМ18.2 клітини фарбували моноклональними анти-
СІГОМ18.2 антитілами ІМАВЗ62 (Сапутеа) або спорідненими за ізотипом контрольними антитілами (Сапутей). Як вторинний реагент використовували анти-пиЇда-АРС від компанії
Віапома.
Визначення стадій клітинного циклу грунтувалося на вимірюванні вмісту ДНК у клітинах. Це давало можливість розрізняти клітини, які перебувають у фазах С1, 5 або 2 клітинного циклу.
В 5-Фазі відбувається подвоєння ДНК, тоді як в С 2-фазі клітини ростуть і готуються до мітозу.
Аналіз клітинного циклу був зроблений з використанням набору Сусієїезі РІ О5 ОМА Кеадепі від компанії ВО Віозхсіепсе5 відповідно до протоколу виробника. Проточну цитометрію та її аналіз проводили за допомогою програмного забезпечення ВО ГАС Сапої! (ВО Віозсіепсев) і РІомо (Ітее 5іаї).
Стовпчики на Фігурі Та і Б показують відповідний відсоток клітин в (1-, 5- або с52-фазі клітинного циклу. Клітини Каші, культивовані в середовищі, демонструють зупинку клітинного циклу переважно в с1-фазі. Клітини, оброблені 5-РО, переважно блокуються в 5-Фазі. Клітини
Каші, оброблені епірубіцином або ЕСЕ, демонструють зупинку клітинного циклу переважно в б 2-фазі. При обробці клітин оксаліплатином спостерігається накопичення клітин переважно в с1- іс 2-фазах. Як видно на Фігурі 1с, зупинка клітинного циклу в 5-Фазі або С 2-фазі призводить до стабілізації або підвищення експресії СІ ОМ18.2. Відразу після того, як клітини виходять із будь-якої фази клітинного циклу (Фігура 1Б), експресія С ОМ18.2 на клітинній поверхні клітин
Каюі підвищується (Фігура 14).
Клітини МОСС-4 і КАТО ІІ обробляли 5-РООХ (10 нг/мл 5-РИШ і 500 нг/мл оксаліплатину),
ЕОЕК (10 нг/мл епірубіцину, 500 нг/мл оксаліплатину й 10 нг/мл 5-ЕУ) або РІО (10 нг/мл 5-РІ, 50 нг/мл фолінової кислоти й 500 нг/мл оксаліплатину) протягом 96 годин. РНК попередньо оброблених хіміотерапевтичними препаратами МО(С-4 і КАТО І клітин була виділена й перетворена на кДНК. Рівень СІ ОМ18.2 транскрипта аналізували за допомогою кількісної ПЛР у реальному часі. Результати показані на Фігурі 2а у вигляді відносної експресії в порівнянні з рівнем транскрипта конститутивного гена НРКТ. На Фігурі 25 показаний вестерн-блотинг
СІГОМ18.2 і "навантажених" актином контрольних необроблених і оброблених клітин МОСС-4.
Інтенсивність сигналу люмінесценції показана у відсотках відносно актину.
Попередня обробка МОСС-4 і КАТО І клітин ЕОЕ, РГО, а також комбінацією 5-ЕШ-ОХ хіміотерапевтичних препаратів приводила до збільшення рівнів РНК і білка СІ ОМ18.2, що показано за допомогою кількісної ПЛР у реальному часі (Фігура 2а) і вестерн-блотинга (Фігура 25).
Зв'язування ІМАВЗ362 на МОСС -4 і КАТО ІІІ клітинах раку шлунка, оброблених ЕОЕ (10 нг/мл епірубіцину, 500 нг/мл оксаліплатину й 10 нг/мл 5-БШ) або РГО (10 нг/мл 5-БИ, 50 нг/мл фолінової кислоти й 500 нг/мл оксаліплатину) протягом 96 годин аналізували за допомогою проточної цитометрії. Спостерігалося підвищення кількості білка СІ ОМ18.2, на який націлюється
ІМАВЗ62 на поверхні клітин раку шлунка, як видно на фігурі 2с. Цей ефект найбільш виражений на клітинах, попередньо оброблених ЕОЕ або РІ 0.
Клітини Кап попередньо обробляли протягом 4 днів іринотеканом або доцетакселем і 60 аналізували експресію СІ ОМ18.2 і зупинку клітинного циклу. Обробка клітин іринотеканом приводила до залежного від дози інгібування клітинного росту й зупинки клітинного циклу в 5/5 2-фазі (Фігура 3). Обробка клітин доцетакселем приводила до дозозалежного інгібування клітинного росту й зупинки клітинного циклу в с 2-фазі (Фігура 3).
Приклад 2: Попередня обробка клітин раку шлунка людини хіміотерапевтичними препаратами дає в результаті більш високу ефективність ІМАВ 362-опосередкованого АОСС
ІМАВ 362-опосередкований АОСС вивчали, використовуючи як мішеней клітини раку шлунка
МОас-4, які попередньо обробляли 10 нг/мл 5-РИи і 500 нг/мл оксаліплатину (5-ЕООХ), 10 нг/мл епірубіцину, 500 нг/мл оксаліплатину й 10 нг/мл 5-РО (ЕОР) або 10 нг/мл 5-БИ, 50 нг/мл фолінової кислоти й 500 нг/мл оксаліплатину (РІ С) протягом 96 годин (співвідношення ефектор: мішень 40:1) або нічим не обробляли. Значення ЕСбзо були отримані від 7 здорових донорів для необроблених і попередньо оброблених ЕОРЕ, ЕРГО або 5-РШОХ клітин МО С-4.
Як показано на Фігурі 4а, крива залежності доза-ефект у порівнянні з попередньо обробленими клітинами зміщена вгору й уліво в порівнянні з необробленими клітинками- мішенями. У результаті цього спостерігався більш високий максимальний лізис і зменшення значень ЕСбво до однієї третини значення необроблених клітин (Фігура 45).
Мононуклеарні клітини периферійної крові (РВМО5), включаючи МК-клітини, моноцити, мононуклеарні клітини або інші ефекторні клітини від здорових людей-донорів виділяли центрифугуванням у градієнті щільності фікол-гіпаку. Промиті ефекторні клітини висівали в Х-
Мімо середовище. За такої постановки завдання як клітини-мішені використовувались Кайоні клітини гастрального походження, які ендогенно експресують СІ ОМ18.2. Тільки живі клітини окислюють люцифер жовтий за допомогою ферменту люциферази, який стабільно експресується клітинками-мішенями. Очищене анти-СІ ОМ18.2 антитіло ІМАВЗ362 додавали в різних концентраціях, а як ізотипове контрольне антитіло використовували нерелевантне химерне пиЇдс1 антитіло. Цитоліз у зразках оцінювали шляхом вимірювання люмінесценції, яка є результатом окислення люцифера жовтого, що є показником кількості живих клітин, які залишилися після ІМАВ 362-індукованої цитотоксичності. Кап клітини, попередньо оброблені протягом З днів іринотеканом (1000 нг/мл), доцетакселем (5 нг/мл) або цисплатином (2000 нг/мл), порівнювали із клітинами-мішенями, культивованими в середовищі без обробки препаратами, і оцінювали ІМАВ 362-індукований АОС.
При попередній обробці протягом З днів іринотеканом, доцетакселем або цисплатином клітин Кай спостерігався більш низький рівень живих клітин у порівнянні із клітинами- мішенями, культивованими в середовищі (Фігура 5а), при цьому експресія клаудину18.2 у клітинах, попередньо оброблених іринотеканом, доцетакселем або цисплатином, була підвищена в порівнянні із клітинами, культивованими в середовищі (Фігура 55).
Крім того, попередня обробка клітин Каші іринотеканом, доцетакселем або цисплатином збільшувала потенційну можливість ІМАВЗ62 викликати АОСС (фігура 5с, 4).
Приклад 3: Хіміотерапія приводить до більш високої ефективності ІМАВ 362-індукованого (Ф/в)о;
Вплив хіміотерапевтичних засобів на ІМАВ 362-індукований СОС досліджували за допомогою попередньої обробки клітин раку шлунка Каїоїй комбінацією 5-БО 10 нг/мл і оксаліплатину 500 нг/мл (5-ЕЄЮ-ОХ) протягом 48 годин. Типові криві доза-ефект ІМАВ 362- індукованого СОС з використанням попередньо оброблених хіміотерапевтичними препаратами клітин Кай показані на Фігурі 6. Попередня обробка пухлинних клітин протягом 48 годин збільшувала потенційну можливість ІМАВ362 викликати СОС, що призводило до більш високого максимального лізису попередньо оброблених пухлинних клітин у порівнянні з необробленими клітинами.
Приклад 4: Здатність імунних ефекторних клітин здійснювати ІМАВ 362-опосередкований
АрСС не порушується обробкою хіміотерапевтичними препаратами
Хіміотерапевтичні засоби, які були використані в режимах ЕОЕ або РГО, є сильнодіючими при інгібуванні проліферації клітин-мішеней. Для вивчення негативної дії хіміотерапії на ефекторні клітини, РВМС від здорових донорів обробляли 10 нг/мл епірубіцину, 500 нг/мл оксаліплатину й 10 нг/мл 5-РШ (ЕОР) або 10 нг/мл 5-Р, 50 нг/мл фолінової кислоти й 500 нг/мл оксаліплатину (ЕГО) протягом 72 годин до проведення АЮСс-аналізів. Фігура 7а показує значення ЕСво 4х здорових донорів, а Фігура 7Б6 показує характерні криві залежності доза-ефект
ІМАВ З362-індукованого АОСС з використанням ефекторних клітин, попередньо оброблених ЕОГ або РІО. ІМАВ 362-індукований АОСС клітин раку шлунка МООС-4 не порушується у зв'язку з хіміотерапією ЕОЕ або РІ 0.
Приклад 5: Комбінація обробки 2АЛІ-2 призводить до оптимізованого збільшення культивованих мононуклеарних клітин периферійної крові (РВМС) 60 Дія 2АЛІ-2 на проліферацію культивованих РВМС була оцінена іп міго. РВМС одержували від здорових людей-донорів, і культури обробляли одноразовою дозою 2А. ІІ -2 додавали кожні 3-4 дні. Конкретно, отримані від З різних здорових донорів РВМС (1, 52, ЖЗ3) культивували в середовищі ЕРМІ (1 х 105 клітин/мл) протягом 14 днів з 1 мкМ 2А плюс висока (300 О/мл) або низька (25 Ш/мл) доза 1І-2; див. Фігуру ва. РВМС тих самих донорів культивували додатково в середовищі КРІМІ протягом 14 днів з 300 О/мл ІЇ-2 плюс 7А або без 7А; див. Фігуру 85.
Збільшення кількості клітин визначали, підраховуючи живі клітини в дні 6, 8, 11 і 14.
У середовищі з додаванням високої дози ІІ -2 кількість клітин збільшувалася приблизно в 2 - 5 разів у порівнянні з культурами з додаванням низької дози 1-2 (Фігура ва). Ріст клітин у середовищі без 2А був приблизно в 2 рази нижчим в порівнянні із клітинами, які ростуть у середовищі з 2А (Фігура 85). Ці результати показують необхідність використання двох сполук 2А і 1-2 у комбінації для забезпечення належного розмноження клітин.
Приклад 6: Обробка 2АЛІ-2 приводить до підвищеного росту Му9Мб2 Т-клітин в РВМО- культурах
РВМС культивували протягом 14 днів у середовищі КРМІ з додаванням 300 О/мл І/--2 і з або без 1 мклМ 7А. Відсоток Муд-Ууб2ж Т-клітин у межах популяції лімфоцитів СОЮЗ» (Фігура 9а) і відсоток СО16-- клітин у межах СЮОЗя-МуЗМУб2-- Т-клітинної популяції (Фігура 9Б) визначали за допомогою багатобарвного РАСбЗ-аналізу в дні 0 їі 14. Результати для кожного донора оцінювали в діаграмі розсіювання. На Фігурі 9с представлена діаграма розсіювання, що показує збільшення протягом часу (збагачення) кількості СОЗ-Музнуб2я і СОЗ3-Ср16-мМудмбо тТ- клітин у межах популяції лімфоцитів. Ураховували кількість клітин, висіяних у день 0, і кількість клітин, зібраних в 14 день.
Додавання ІЇ-2 в РВМС-культури необхідно для виживання й росту лімфоцитів. Вони ефективно ростуть у культурах з додаванням 300 О/мл І -2. РЕАС5-аналіз із використанням МУЗ і
Мб2 специфічних антитіл показав, що додавання 2АЛІ-2 специфічно викликає накопичення му9Мб2 Т-клітин (Фігура 9а). Через 14 днів СОЗж- популяція лімфоцитів може містити до 80 95
МуЗМб2 Т-клітин. Частина МуЗ9Мб2 Т-клітин експресує СО16, тоді як збагачення цих клітин у межах СОЗ- популяції лімфоцитів є 700-разовим залежно від донора (Фігури 9Б і 9с).
Збагачення СО16-МуЗМУб62 7 клітин у культурах в 10-600 разів вище в порівнянні з культурами, які ростуть без 2А (Фігура 9с). Ми зробили висновок, що обробка 2АЛІ-2 РВМО5 іп мйго приводить до посилення експресії АОСС-опосередкованого ЕсуПІ рецептора СО16 у значній частині уб Т-клітин.
Приклад 7: 1-2 впливає на ріст МУ9Уб2 Т-клітин дозозалежним чином
Додавання 2А у культури є найбільш важливим фактором стимулювання розвитку МуУЗУб2 Т- клітин. Добре відомо, що для росту й виживання Т-клітин потрібно ІЇ-2.
РВМС культивували протягом 14 днів у середовищі КРМІ з додаванням 1 мкМ 72А ії зростаючих концентрацій ІІ--2. ІІ -2 додавали в дні 0 і 4. Збагачення СО16б-Муздуба2 я Т-клітин у межах популяції лімфоцитів СОЮЗ визначали за допомогою багатобарвного ЕАС5 аналізу в дні
О ї 14. Для порівняння різних донорів кількість СО16-МуЗМб2 Т-клітин, зібраних після культивування з 600 Ш/мл 1-2, було взято за 100 95; див. Фігуру 10, ліворуч. Крім того, була перевірена АЮСсС-активність ізольованих культур, вирощених за 14 днів у зростаючих концентраціях ІІ --2; див. Фігуру 10, праворуч.
Проведення дозозалежного аналізу підтвердило, що 1-2 також стимулюють ріст і виживання підгрупи МуЗМб2 Т-клітин. При додаванні низьких концентрацій ІЇ-2 у середовище була виявлена кореляція між дозою І/-2 і відсотком СО16-МуЗМУб2 Т-клітин у межах популяції лімфоцитів СОЗ3-- (Фігура 10, ліворуч). АЮОСсС-активність клітин, вирощених за більш високих концентрацій ІС-2 (150-600 О/мл), краще в порівнянні із клітинами, вирощеними за низьких концентрацій ІІ -2 (Фігура 10, праворуч).
Приклад 8: 2А викликає вироблення ІРР у моноцитах і ракових клітинах, стимулюючи збільшення МуЗМб2 Т-клітин
Свіжі РВМСОз: (Ехр. 41) або 14-денні, стимульовані 2АЛІ-2 культури МуУЗ9Мб2 Т-клітин (Ехр. Ж2- 5), інкубували або без моноцитів (співвідношення ефектор: моноцит 1:0), з 0,2-разовою (4:1) або
Б-разовою (співвідношення 1:4) кількістю моноцитів ж 1 мкМ 2А. Збільшення МуЗУб2 Т-клітин у спільних культурах через 14 днів визначали за допомогою багатобарвного ГАСзЗ-аналізу, при цьому збільшення культури враховували при підрахунку. Коефіцієнт збагачення МуЗМб2 Т- клітин, культивованих з моноцитами в співвідношенні 1:4, був узятий за 100 95 для кожного експерименту. Збільшення моноцитів у культурі приводило до збагачення Му9Мб2 Т-клітин більше ніж в 10 разів. Цей ефект був явно 2А-залежним; див. Фігуру 11а.
Крім того, клітини раку шлунка людини (МОСС -4-люцифераза) і мишачі клітини раку шлунка (пофарбовані кальцеїном СІ 5103) були попередньо оброблені з або без 5 мкМ 2А протягом 2 60 днів. Людські МУ9Уб2 Т-клітини, виділені за допомогою МАСЗ5 (день 14), спільно культивували з раковими клітинами протягом 24 годин. Цитотоксичність МуЗМб2 Т-клітин у порівнянні з необробленими і 2а-обробленим клітинами-мішенями визначали шляхом вимірювання активності решти люциферази або флуоресценції кальцеїну; див. Фігуру 115. Клітини-мішені (МО02С-4 і СІ 5103) попередньо обробляли з або без 5 мкМ 7А протягом 2 днів і потім інкубували протягом 4 годин з мітоміцином С (50 МІ) для зупинки проліферації. МАСЗ-очищені людські 14-денні Му9Уб2 Т-клітини, які перебувають у спокої й ЗН-тимідин додали до клітин- мішеней і об'єднані культури інкубували протягом 48 годин при 37 "С. Проліферацію визначали, вимірюючи включення ЗН тимідину в ДНК за допомогою сцинтиляційного лічильника МісгоВеїа.
Проліферація клітин-мішеней, не оброблених 2А і без Му9Уб2 Т-клітин, була прийнята за 100 95; див. Фігуру 11с.
Як видно на Фігурах 116 і 11с, 2А-активовані клітини раку людини активували МуЗМб2 Т- клітини, маючи на увазі цитотоксичність (5-10 разів) і проліферацію (1,4-1,8 разів), тоді як лінія ракових клітин миші СІ 5103 не мала такого впливу на МуЗУба2 Т- клітини.
Приклад 9: Обробка 2АЛІ -2 впливає на склад культур РВМС
Ріст і диференціювання специфічних типів клітин в РВМС культурах залежить від присутності цитокінів. Ці компоненти або додають до середовища (наприклад, фактори росту, які присутні в сироватці, І/-2) або їх секретують самі імунні клітини. Який тип клітин розвивається, також залежить від вихідного складу РВМС5 і генетичної бази. Щоб проаналізувати загальне збільшення ефекторних клітин (МК клітини й МуУУб2 Т-клітини), РВМС 10 різних донорів вирощували в присутності 300 О/мл 1-2 разом з або без 1 мкМ 2А протягом 14 днів. Кількість ефекторних клітин у популяції лімфоцитів була встановлена за допомогою багатобарвного ЕАС5 фарбування з використанням СОЗ, СО16, СО56, Му9У і Мб2 антитіл. СОЗ- сСОо56-С2016- клітини представляють МК-клітини, і СОЗ-МуЗ-уб2- представляють МуЗМУб2 Т- клітини.
Багатобарвний ГАСсСзЗ-аналіз показав, що після обробки 1-2 розвиваються в основному МК- клітини, тоді як у культурах, оброблених 2А/ЛІ-2, переважно збільшується кількість МУ9Мб2 Т- клітин (Фігура 12).
Приклад 10: 2АЛІ-2 обробка породжує Му9Мб2-- ефекторні клітини пам'яті
Субпопуляції Т лімфоцитів можуть бути розмежовані за допомогою двох поверхневих маркерів, ізоформи з високою молекулярною вагою антигену лімфоцитів СО45КА і рецептора хемокінів ССК7. СС наївні й Т-клітини центральної пам'яті (СМ) відрізняються здатністю багаторазово циркулювати в лімфатичні вузли й натрапляти на антиген. На противагу до цього, ефекторні клітини пам'яті (ЕМ) і ефекторні Т-лімфоцити КАж (ТЕМКА) пригнічують ССК?7 і, очевидно, спеціалізуються в міграції до периферійних нелімфоїдних тканин, наприклад, в інфіковані ділянки або пухлинні ділянки. Клітини ЕМ можна додатково розділити, виходячи з характерної СЮО27 і 2028 експресії. Прогресуюча втрата СО28 і 2027 поверхневої експресії супроводжується активізацією цитолітичної здатності клітин. Крім того, рівень СО57 корелює з експресією гранзимів і перфоринів і в такий спосіб є третій маркер, який показує цитотоксичність/дозрівання клітини.
РВМС культивували з або без 1 мкМ 2А і 300 О/мл 1-2 протягом 14 днів. Експресію різних поверхневих маркерів визначали за допомогою багатобарвного БАС5б-аналізу на день 0 (РВМС5) і день 14. Наївні клітини є СО45КАжССК7, клітини центральної пам'яті (СМ) є
СО45ВА-ССК7ю, ТЕМКА є СО45КАЖССт7- і ефекторні клітини пам'яті (ЕМ) є негативними у відношенні обох маркерів; див. Фігуру 13а. Крім того, цитолітична активність МУ9Мб2 Т-клітин була визначена фарбуванням у відношенні СО27 і СО57 маркерів; див. Фігуру 136, с. На додачу до цього, розвиток МК-подібних властивостей, важливих для АЮОСсС-активності, було проаналізовано фарбуванням СОЮЗ клітин СО16 (зв'язування антитіла) і СО56 (адгезія); див.
Фігуру 134.
Багатобарвний ЕГАС5-аналіз МуЗМб2 Т-клітин показав, що 2АЛІ-2 обробка явно стимулює розвиток МУ9Уб2 Т-клітин ЕМ типу, які є СО27- і СО57-- (Фігура 13Б-с). На додачу до збільшеної цитолітичної активності в популяції СОЗ-- спостерігалося збільшення рівня СО16 і СО56, які, як відомо, походять від МК-клітин (СОЗ-СО16-С2056 х) і задіяні в АОСС, (Фігура 134).
Узяті разом, ці дані означають, що 2а-обробка РВМСОС5 приводить до розвитку сСр1б-уузУуб2-- ефекторних клітин пам'яті, які здатні мігрувати до периферійних нелімфоїдних тканин і які демонструють маркери високої цитолітичної активності. У комбінації з ІМАВЗ62, націленими на пухлину антитілами, ці клітини є дуже добре пристосованими для того, щоб мігрувати, націлюватися й знищувати пухлинні клітини.
Приклад 11: вирощені в присутності 2АЛІ-2 МуЗМб62 Т-клітини є сильними ефекторами для
ІМАВ З362-опосередкованого СІ ОМ18.2-залежного АОСС 60 Подібно до МК-клітин, вирощені в присутності АЛІ -2 Му9Мб2 Т-клітини є позитивними у відношенні СО16 (дивися Фігури 9 і 13), рецептор ЕсупіІ, через який антитіло, пов'язане із клітиною, запускає АОСС. Щоб оцінити, чи здатні МУ9Мб2 Т-клітини викликати сильний АОСС у комбінації з ІМАВЗ362 була проведена серія експериментів.
РВМС, отримані від 2 різних донорів (41 і 22), культивували в середовищі з 300 О/мл ІІ -2 і з або без 1 мкМ 2А. Через 14 днів клітини збирали й додавали зростаючі концентрації (0,26 нг/мл - 200 мкг/мл) ІМАВ362 до МООС-4 клітин, які експресують СГОМ18.2. Специфічне знищення визначали за допомогою люциферазного аналізу; див. Фігуру 14а. Фігура 140, с дає загальне уявлення про АЮОСс-аналізи, проведені з використанням клітин від 27 донорів, що виросли в 300 О/мл 1-2 і з або без 2А. МООС-4 служили клітинками-мішенями. Для кожного донора значення ЕСво (Б) обчислювали з дозозалежних кривих, і рівні максимального специфічного знищення в дозі від 200 мкг/мл ІМАВЗ62 (с) відзначали в діаграмах розсіювання.
Сильна ІМАВ 362-залежна АЮОСС активність спостерігалася у відношенні СІ ОМ18.2- позитивних МО(ЗС-4 клітин при використанні РВМС, культивованих протягом 14 днів з 2АЛІ-2 (Фігура 14а). При використанні 2АЛІ-2-оброблених РВМС культур АЮОСС залежить від присутності МуЗМб2 Т-клітин (Фігури 12 і 15). Якщо клітини культивували без 7А, АОСС активність знижувалася в культурах від більшості донорів. У цих культурах залишкова АЮОСС- активність є залежною від МК-клітин (Фігури 11 і 14). При тестуванні більше 20 донорів АОСС- аналіз показав, що 2АЛІ-2 обробка РВМСО5 поліпшує ЕсСбо і рівень максимального специфічного знищення в порівнянні з РВМС, культивованими тільки з ЇЇ -2.
Крім того, РВМС двох різних донорів (21 ї- 22) культивували з 1 мкМ 2А ї 300 О/мл 1. -2. Ці культури ефекторних клітин використовували в АЮСсС-аналізах з використанням СІ ОМ18.2- позитивних (МИО(3С-4, Ка І) і негативних (5К-ВА-3) ліній клітин-мішеней людини (Е:Т співвідношення 40:1). Були додані зростаючі кількості (0,26 нг/мл - 200 мкг/мл) ІМАВЗ62 антитіл.
АрСС вимірювали, використовуючи люциферазний метод; див. Фігуру 15а. Такий же експеримент, як описаний в (а), був проведений з МОСС-4 клітинами-мішенями й ефекторними клітинами, зібраними з культур, оброблених 2АЛІ--2 у різні моменти часу; див. Фігуру 155. Такий же експеримент, як описано в (а), був проведений з використанням МОСС -4 як клітин-мішеней; див. Фігуру 15с. Вирощені в присутності 2АЛІ-2 клітини або використовували безпосередньо, або МуємМб2 Т-клітини були виділені з культур з використанням ТСКуб МАС5 сортування (Міпепуї Віотесі). Ступінь чистоти МуЗУб2 Т-клітин у лімфоцитах становила більш ніж 97,0 95.
Спостерігалася сильна АОСС активність у відношенні СІ ОМ18.2-позитивних ліній пухлинних клітин людини, але не спостерігалася у відношенні СІ ОМ18.2-негативних ліній пухлинних клітин (Фігура 15а). Крім того, не була виявлена АЮСС-активність при використанні ізотипових контрольних антитіл (не показано). У процесі 2АЛІ-2 обробки АЮСС літична активність збільшується протягом часу для фракції донорів (Фігура 155). Крива доза-ефект ІМАВЗ362 зміщується вгору й уліво, показуючи кращі значення ЕсСбво і рівні максимального лізису із часом.
У порівнянні з необробленими РВМСОС, МуЗМб2 ефекторні Т-клітини, збагачені за допомогою 2 АЛІ -2-обробки, здатні досягати більш високого рівня знищення СІ ЮМ18.2-позитивних клітин- мішеней, крім того вони вимагають більш низьких концентрацій ІМАВ362 для того ж самого рівня знищення.
Щоб підтвердити, що МуЗУб2 Т-клітини є джерелом літичної активності, ці клітини ізолювали зі ступенем чистоти » 97 956 за допомогою магнітного сортування клітин з популяцій РВМС, культивованих з 2АЛІ-2, на 14 день. АЮОСсС-активність у комбінації з ІМАВЗ362 зберігається й почасти поліпшується внаслідок більш високої чистоти. Ці результати підтверджують, що
МуЗМб2 Т-клітини несуть основну відповідальність за АЮОСсС-активність, досліджену при використанні 14-денних РВМС культур (Фігура 15с).
Приклад 12: 2А/ ІПІ-2-обробка ліній клітин-мішеней не впливає на поверхневу експресію
СІ ОМ18.2
Ініційовані ІМАВЗ62 механізми дії строго залежать від присутності й кількості позаклітинного знайденого СІ ОМ18.2. Тому вплив обробки 7АЛІ-2 на щільність СІОМ18.2 на поверхні було проаналізовано за допомогою проточної цитометрії з використанням клітинних ліній МОСС -4 і
Кай І з ендогенною експресією СІ ОМ18.2. Зокрема, був проведений проточний цитометричний аналіз зв'язування ІМАВЗ62 на непермеабілізованих клітинах МОСС-4 раку шлунка, попередньо оброблених 7АЛІ -2 або 7АЛІ -24-ЕОЕ або 7АЛІ -2-5-ЕШОХ протягом 72 годин. 7 АЛІ -2 обробка іп міїго не викликає зміни кількості поверхово локалізованого СІ ОМ18.2; див.
Фігуру 16.
Приклад 13: Збільшення АОСС, опосередкованого ІМАВЗ62, за допомогою 2А/ ІІ-2-обробки
РВМС не порушується попередньою обробкою ЕОЕГ
Хіміотерапевтичні засоби порушують проліферацію клітин. На противагу до цього 2АЛІ. 2- 60 обробка ініціює збільшення кількості МуЗМб2 Т-клітин. Щоб проаналізувати вплив цих протилежних чинників на ефекторні клітини, РВМС від 6 здорових донорів культивували з 2АЛІ - 2 або 2АЛІ-22ЕОЕ протягом 8 днів до використання в АОСсС-аналізах (Е:Т співвідношення 15:1).
Були визначені ІМАВЗ362 концентрації, що приводять до 50 55 АЮСОС-опосередкованого лізису необроблених МОСС -4 клітин-мішеней (ЕСбво).
Значної зміни (приросту) АОСС, викликаного ІМАВЗ362, МОСС-4-клітин внаслідок обробки
РВМО 2АЛЇ -2 не спостерігається при комбінованій обробці з ЕОЕ (Фігура 17).
Приклад 14: Іп мімо націлювання ІМАВЗ362 на СІ 0ОМ18.2-позитивні пухлини й протипухлинні ефекти ІМАВЗ62 на ксенотрансплантатах пухлинних клітин на "голих" мишах
Для дослідження іп мімо ІМАВ 362-націлювання на пухлинні клітини 80 мкг Оуеїїднкєш 680- міченого антитіла вводили внутрішньовенно "голим" мишам З підшкірними ксенотрансплантатами клітин раку шлунка людини МОСС-4. МО(а0-4 клітини демонструють поверхневу експресію СІ ОМ18.2, а також НЕК2/пеи (мішень трастузумаба), але є негативними у відношенні СО20. У контрольних дослідженнях групам мишей з МОСС-4-ксенотрансплантатами вводили або Буеїїдні 680-мічений трастузумаб (група позитивний контроль) або Оуеїїднке 680- мічений ритуксимаб (негативний контроль). ІМАВ362 накопичується виражено й винятково в ксенотрансплантатах пухлин, що показано візуалізацією на живих мишах з використанням флуоресцентної системи візуалізації ХеподепФ через 24 години після внутрішньовенної ін'єкції антитіл (Фігура 18). ІМАВЗ362 ефективно утримується в мішень- позитивній пухлині й виявляється з співрозмірною інтенсивністю навіть через 120 годин (Фігура 18). Трастузумаб також виявляється винятково в ксенотрансплантатах через 24 години після ін'єкції. Сигнал трастузумаба швидко "розмивається" у межах 120 годин після ін'єкції. При використанні ритуксимаба сигнал не виявляється.
Крім того, ІМАВ362 використовували для лікування мишей із ксенотрансплантатами
СІ ОМ18.2-позитивних пухлин. Було проведене дослідження, пов'язане з раннім лікуванням моделі пухлини (з початком уведення ІМАВЗ3б2 через З дні після інокулювання пухлинних клітин). Більше того, експерименти, пов'язані з лікуванням розвинених пухлин, починали через 9 днів після інокулювання пухлинних клітин, коли пухлини досягали об'єму близько 60-120 мм3. "Голим" мишам підшкірно інокулювали 1 х 107 НЕК293-СІ ОМ18.2 трансфектантів. Через З дня після інокулювання пухлини починали лікування мишей (10 на групу). Мишам уводили 200 мкг ІМАВЗ362, інфликсимаб (як ізотиповий контроль) і РВ5 два рази на тиждень протягом 6 тижнів, чергуючи внутрішньовенний і внутрішньоочеревинний спосіб уведення. У той час як усі миші в групах, які одержували або РВЗ або ізотиповий контроль, гинули в межах 70-80 днів, тварини, яких лікували ІМАВЗ62, мали перевагу за тривалістю життя (Фігура 19). Спостерігалося не тільки збільшення часу до загибелі, а крім того 4 з 10 мишей залишалися живими протягом усього періоду спостереження 210 днів.
Лікування 9-10 мишей на групу починали, коли середні об'єми пухлини досягали 88 мм3 (62- 126 мм3). До лікування миші були розділені на дослідні групи з метою забезпечення співрозмірності розмірів пухлин у всіх групах. Мишей лікували 200 мкг ІМАВЗ62, ізотиповим контролем або РВ5З два рази на тиждень протягом б тижнів, чергуючи внутрішньовенне й внутрішньоочеревинне введення. Усі миші в групах, яких обробили або РВ5 або ізотиповим контролем, загинули в межах 50-100 днів. Тварини, яких лікували ІМАВЗ362 мали перевага у виживанні, при цьому середній час виживання майже подвоювався (47 проти 25 днів). Троє із цих мишей залишалися живими протягом повного періоду спостереження (Фігура 20). Важливо відзначити, що протипухлинна ефективність іп мімо залежить від присутності мішені на пухлинних клітинах. Протипухлинні ефекти ІМАВ 362-обробки не були відзначені на мишах із ксенотрансплантатами СГ ОМ18.2-негативних НЕК293 пухлинних клітин.
Для вивчення ефективності ІМАВЗ362 відносно ракових клітин з ендогенною експресією
СГОМ18.2 використовували МООС-4-модель раку шлунка. Спостерігався агресивний ріст клітин
МИСаС-4 в "голих" мишей. 1 х 107 клітин МШОС-4 раку шлунка вводили підшкірно в лівий бік безтимусних "голих" мишей (п-9 для ІМАВЗ62 групи; п-8 для контрольних груп). ІМАВЗ62 (200 мкг на ін'єкцію) і контролі вводили два рази на тиждень, чергуючи ім. і ір., починаючи через б днів після інокулювання пухлини за допомогою внутрішньовенної ін'єкції. Розміри пухлини визначали два рази на тиждень. Представлені на Фігурі 21а результати показані разом з ЗЕМ. Ріст пухлин у мишей, яких лікували ІМАВЗ62, був суттєво інгібований у порівнянні з контрольними групами мишей ("р«е0,05). Фігура 216 показує об'єми пухлин на 21 день після інокуляції пухлини. Об'єми пухлин у мишей, яких лікували ІМАВЗ362, були значно меншими, ніж об'єми пухлин у контрольних мишей (" р«0,05).
При інокульовані мишам 1 х 107 пухлинних клітин середня тривалість життя нелікованих 60 мишей не становила більше 25 днів. Лікування ІМАВЗ362, цетуксимабом, трастузумабом або ізотиповим контролем і буферним контролем починали, коли об'єми пухлини досягали середнього розміру близько 109 мм3 (63 - 135 мм3). Мишей розділили на лікувальні групи з різними дозами (Фігура 21). Було показано, що ІМАВЗ362 значно зменшує швидкість росту пухлини. Значного зменшення росту пухлини в порівнянні з контролями (фізрозчин або антитіло) не спостерігалося у відношенні цієї агресивно зростаючої моделі пухлини.
Уповільнення росту пухлини було пов'язане з незначним збільшенням середнього часу виживання в ІМАВ 362-яких лікували мишей (31 день проти 25 днів).
Протипухлинну активність ІМАВ362 досліджували на двох моделях ксенотрансплантатів раку шлунка людини з використанням МСІ-М87 або МО(ОС-4 клітин з використанням лентивірусної трансдукції ІМАВЗ362 мішені СІ ОМ18.2 (МСІ-М87-СІ ЮМ18.2 і МОСС-4-СІ ОМ18.2).
МСІ-М87-СІ ОМ18.2 пухлинні ксенотрансплантати інокулювали підшкірною ін'єкцією 1 х 107
МСІ-М87-СІ ОМ18.2 клітин у бік 8 "голих" мишей (самки, б-тижневого віку) на лікувальну групу.
Обробку починали на 5 день після інокулювання пухлини за допомогою внутрішньовенної ін'єкції 800 мкг ІМАВЗ362 або 200 мкл 0,995 МасСі у контрольній групі (фізрозчин).
Внутрішньовенне введення проводили щотижня протягом усього періоду спостереження.
Розмір пухлини й стан здоров'я тварин реєстрували два рази на тиждень. Фігура 22а показує вплив обробки ІМАВЗ62 на ріст пухлини. Розмір підшкірних пухлин вимірювали два рази на тиждень (середнє ї- ЗЕМ, ""р«е0,001). Фігура 220 показує графіки виживання Каплана-Мейера.
Мишей забивали, коли пухлини досягали розміру 1400 мм3.
Таким чином, тривала ІМАВ 362-обробка високозначимо інгібувала (р«е0,001) пухлинний ріст
МСІ-мМ87-СІ ОМ18.2 ксенотрансплантатів раку шлунка (Фігура 22а). Затримка росту пухлини була значимою (р«0,05) пов'язана з більш тривалим часом виживання мишей, яких лікували
ІМАВЗ62 (Фігура 225).
ІМАВЗ362 імунотерапія швидкозростаючих МИО(ОсС-4-С10М18.2 ксенотрансплантатів приводила до значимого (р«0,05) зменшення розмірів пухлин на 14 день лікування. Після перших двох тижнів ІМАВ 362-лікування розвиток МОСС-4-СІ0М18.2 пухлини був дуже агресивним. Однак, інгібування росту МО(СС-4-С10М18.2 пухлини до 14 дня лікування приводило до значимого (р « 0,05) більш тривалого виживання мишей, яких лікували ІМАВ362.
У підсумку, ІМАВЗ362 було високоефективним при лікуванні ксенотрансплантатів карциноми шлунка, демонструючи значиму затримку розвитку пухлини й тривале виживання на пухлинних моделях, позитивних у відношенні ендогенного СІ ОМ18.2. На моделях дуже агресивних пухлин ці протипухлинні ефекти ІМАВЗ362 є менш вираженими, але, проте, значними, що підкреслює сильні протипухлинні властивості ІМАВЗ362.
Приклад 15: Протипухлинні ефекти ІМАВ362 у комбінації з хіміотерапією на мишачих моделях пухлин іп міо, ІМАВ 362-опосередкований АЮСС є більш ефективним на клітинах раку шлунка людини, попередньо оброблених комбінаціями хіміотерапевтичних засобів, включаючи ЕОБЕ і 5-
ЕОчОХ. Тому, протипухлинна дія комбінації цих сполук із ІМАВЗ362 була досліджена на мишачих пухлинних моделях іп мімо.
МСІ-М87-СІОМ18.2 ксенотрансплантати пухлин інокулювали за допомогою підшкірної ін'єкції 1 х 107 МСІ-М87-СІ ОМ18.2 клітин у бік 9 мишей у кожній лікувальній групі. Мишей-носіїв пухлин лікували відповідно до режиму ЕОЕ-1,25 мг/кг епірубіцину, 3,25 мг/кг оксаліплатину й 56,25 мг/кг 5-фторурацилу внутрішньоочеревинно в дні 4, 11, 18 ї 25 після інокулювання пухлини, з наступної внутрішньовенною ін'єкцією 800 мкг ІМАВЗ36б2 через 24 години після введення хіміотерапії. ІМАВ 362-обробку продовжували щотижня. Розмір пухлини й стан здоров'я тварин контролювали два рази на тиждень. Фігура 23а показує вплив комбінованого лікування на ріст пухлини. Розмір підшкірних пухлин вимірювали два рази на тиждень (середнє значення ї- ЗЕМ; " р«0,05). Фігура 2306 показує графіки виживання Каплана-Мейера. Мишей забивали, коли об'єм пухлини досягав 1400 мм3.
В "голих" мишей з пухлиною МСІ-М87-СІ 0ОМ18.2 при лікуванні ІМАВЗ362 або ЕОЕ режимом спостерігалося високозначиме пригнічення росту пухлини в порівнянні з контрольними мишами.
Додаткове ІМАВЗ362 лікування в комбінації з ЕОБЕ хіміотерапією приводило до значимого (р«е0,05) більш сильного інгібування росту пухлини, ніж лікування ЕОЕ режимом окремо (Фігура 2За). Медіана виживання мишей у контрольній групі (фізрозчин) становила 59 днів. Щотижневе
ІМАВ 36б2-лікування мишей значно збільшувало медіану виживання до 76 днів, подібно до виживання мишей в ЕСЕ групі з медіаною виживання теж 76 днів. Однак комбіноване лікування
ІМАВЗ362 і ЕОЕ збільшувало медіану виживання до 81 дня (Фігура 235).
Ксенотрансплантати пухлин інокулювали підшкірною ін'єкцією 1 х 107 МО0СО-4-СІ 0М18.2 клітин у бік 10 "голим" мишам (самки, б-тижневого віку) на лікувальну групу. Мишей лікували в 60 дні 3, 10, 17 і 24 хіміотерапевтичними засобами. ІМАВ 362-обробку проводили щотижня. Фігура
24а показує криві росту підшкірних ксенотрансплантатів МОСС-4-СІ1 0М18.2 пухлин (середнє їх
ЗЕМ). Фігура 246 представляє графіки виживання Каплана-Мейера (логарифмічний ранговий (Коксу-Мантеля) тест, "ра«кб0,01).
Підшкірні ксенотрансплантати МО(С-4-СІ0М18.2 пухлин розвивалися дуже агресивно.
Проте, ІМАВ 362-лікування мишей-носіїв пухлин значно інгібувало ріст пухлини в порівнянні з контрольною групою із уведенням фізрозчину. При використанні комбінованої терапії ЕОБК, вплив ІМАВЗ362 на ріст пухлини МИО(С-4-СІ0М18.2 був прихований інгібуванням росту внаслідок ЕОРЕ-лікування, не демонструючи збільшення інгібування росту пухлини в порівнянні з лікуванням ЕОЕ окремо (Фігура 24а). Однак, медіана виживання мишей, яких лікували ІМАВЗ362 і
ЕОР режимом, була збільшена з високою значимістю (р«0,01) у порівнянні з виживанням мишей, яких лікували тільки ЕОЕ (Фігура 245).
Приклад 16: Вирощені в присутності 2АЛІ-2 МуЗМб2 Т-клітини поліпшують ІМАВ 362- опосередкований контроль розвинених пухлин іп мімо
Для дослідження комбінованої активності ІМАВЗ62 і отриманих у результаті обробки 2АЛІ -2 уб Т-клітин у мишачих системах ми використовували мишей МБО. У мишей М5О відсутні зрілі Т- клітини, В-клітини, натуральні кілери (МК), сигнальні шляхи багатьох цитокінів, і вони мають безліч дефектів уродженого імунітету, при тому, що ніші в первинній і вторинній імунологічних тканинах є доступними для колонізації людськими імунними клітинами.
МБО мишам підшкірно інокулювали 1 х 107 СІ 0ОМ18.2-трансфікованих НЕК293 клітин. У той же день миші одержували 8 х 105 людських РВМСО5, збагачених Му9Мб2 Т-клітинами, культивованими протягом 14 днів у середовищі з додаванням 2А. Більше того, мишам уводили 50 мкг/кг 2А і 5000 Ш 1-2 (РгоІеиКкіп). Для збереження людських Т-клітин у функціональному стані, І -2 уводили два рази на тиждень, а 2А - щотижня. Коли НЕК293-СІ ОМ18.2 пухлини ставали макроскопічно видимими, починали лікування 200 мкг ІМАВЗ62 два рази на тиждень.
На додачу до групи з 9 яких лікували мишей, були взяті також дві контрольні групи мишей. Одна група не одержувала людські уб Т-клітини, іншу групу лікували ізотиповими контрольними антитілами замість ІМАВЗ62. Ріст СІ ОМ18.2-позитивних пухлин у мишей, яких лікували ІМАВЗ362 у присутності людських уб Т-клітин і 2А, був значимо інгібований і практично припинений, у той час як у мишей, яких лікували або ізотиповими контрольними антитілами, або в мишей, позбавлених людських Т-клітинних ефекторів, пухлини росли агресивно, і тому мишей забивали раніше призначеного часу (Фігура 25).
Приклад 17: Протипухлинні ефекти ІМАВ362 у комбінації з хіміотерапією на мишачих пухлинних моделях
Протипухлинна активність ІМАВ36б2 у комбінації з хіміотерапією була досліджена на підшкірних алотрансплантатах карциноми шлунка в імунокомпетентних безпородних ММК мишей з використанням СІ 5-103 клітин з лентивірусною трансдукцією мишачого сідп18.2 (СІ 5- 103-сІдп18.2).
СІ 5-103--сідп18.2 алотрансплантат пухлини інокулювали за допомогою підшкірної ін'єкції 1 х 106 С1 5-103--сідп18.2 клітин у бік ММКІ-мишей (10 мишей на кожну лікувальну групу). Мишей- носіїв пухлин лікували внутрішньоочеревинним уведенням 1,25 мг/кг епірубіцину, 3,25 мг/кг оксаліплатину й 56,25 мг/кг 5-фторурацилу (ЕОР) у дні 3, 10, 17 і 24 після інокулювання пухлини, з наступною внутрішньовенною ін'єкцією 800 мкг ІМАВЗ362 через 24 години після введення хіміотерапії. І-2 уводили два рази на тиждень за допомогою підшкірної ін'єкції 3000 ІЕ. Після завершення хіміотерапії обробку ІМАВ362 і І/-2 продовжували протягом усього періоду спостереження. Розмір пухлини й стан здоров'я тварин контролювали два рази на тиждень.
Мишей забивали, коли пухлина досягала об'єму 1400 мм3 або коли з'являлася виразка пухлини.
Як видно на Фігурі 26, в ММКІ мишей з СІ 5-103--сІдп18.2 пухлинами, які лікувались ІМАВЗ362 або ЕОР окремо, не спостерігалося значимого інгібування росту пухлини в порівнянні з контрольною групою (фізрозчин). На противагу до цього, комбінація ЕОЕ хіміотерапії й ІМАВ
Зб2-лікування призводила до значно більш високого інгібування росту пухлини й тривалого виживання мишей-носіїв пухлин. Це спостереження демонструє наявність адитивних (сукупних) або навіть синергійних (взаємно посилюючих) ефектів при комбінації ЕЄОЕ хіміотерапії й
ІМАВЗ362 імунотерапії. Обробка ІІ -2 не впливала на ріст пухлини.
ЛЕМ ЯССо737 є
Атенти заявника | Й С ТМіжнаролна заявка Мо. стріт номер! 4342-15 РОТ
ВКАЗІВКИ "ЩО СТОСУЮТЬСЯ ДЕНОНОВАНОГО МІКРООРГАНІЗМУ АБОЇНШОГО
БІОЛОГІЧНОГО МАТЕРІАЛУ
(правило РОТ ІБК
А Вказівки, зроблені нижче, СТОСУЮТЬСЯ депонованого мікроорганізму або іні шого біологічного ЩЕ матеріалу, про який йдеться в описі на сторінці 40, в рядок І в. ІДЕНТИФІКАЦІЯ ДЕПОЗИТУ Наступні депозити вказані на лодатковому аркуші
Назва депозитарію рем Юенізсве Запипінаруют Міктоотранівяел нині Уеійонтгев Сливи
Адрвса депозитарію (включаючи поштовий код ї країну)
Мазсієвойст УМер КЕ 38124 Вузипесвувів ВЕ й дейонування Обліковий номер | ЩІ ШЕ 19 жовтня 2005 року о ВЕМАССІТВ - ше
С. ДОДАТКОВІ. ВКАЗІНКИ (запайте | Ця Інформація продбвжується на додатковому - Миншача (Меа5 пнізсоів) міслома РУХОЗАВВОІ, злита с мишачими (Ми пиецвку спложенвтами -«Тібридома, яка секретує зититнію до людського клаудитуІ18АХ о. ВИЗНАЧЕНІ КРАЇНИ, ЯКИХ СТОСУЮТЬСЯ ВКАЗІВКИ. (якщо вказівки стосуються це всіскраїну
КЕ ОКРЕМЕ НАДАННЯ ВКАЗІВОК смс спповнювети якщо не астесовуєтьсЬ 0000
Вказійки, перераховані нижче, будуть педані в Міжнароляє Бюро нізніше (ойнс загального хирактеру вказівок, напіліклад, «Обліковий Номер Депозиту "більки для викорнетання отримую чим о Тільки для кикорі нетанняй Міжнародним Бюро. закладом
Даний лист був нотриманий разом з Даний лист був отриманий Міжнародним бюро: міжнародному зайнкою
У повиоважена посадова особа ТУповноважена посидова особа т 3 ще й п де ВИ ПОДА ДНК А и НН
Нова міжнародна Патентна Заявка Сапутей РПагтасеціїса!5 АС, єї аї. "КОМБІНОВАНА ТЕРАПІЯ З ВИКОРИСТАННЯМ АНТИТІЛ ДО КЛАУДИНУ 18.2 ДЛЯ
ЛІКУВАННЯ РАКУ"
О!цгНеї.: 342-75 РСТ
Додатковий лист для Біологічного матеріалу
Ідентифікація наступних депозитів: 1) Назва і адреса депозитарію (05М АСС2738, 05М АСС2г739, О5М АСС2740, О5М
АСС2741, О5М АСС2742, О5М АСС2743, ОМ АСОС-2745, ОМ АСС2746, О5М АСС2747, О5М
АСС2748): р5М2А-Юешвспе Заттішипд моп МіКгоогдапізтеп ипа 2ейїКкийигтеп сіптЬрН МазсНегодег У/ед Ір 38124 Вгашпзспмеїд ОЄЕ 2) Назва і адреса депозитарію (05М АСС2808, О5М АСС2809, ОМ АСС2810): рЗМ2А-бешвспе Заттішипд моп Мікгоогдапізтеп ипа 2еїКийигеп СітЬН Іпроїепзвіг. 7 В 38124
Вгайп5зспмеїд СЕ депонованого мікроорганізму
Додаткові вказівки для всіх вищеказаних депозитів:
Мишача (Мих тизсши5) мієлома РЗ3ХбЗА980.1 злита з мишачими (Ми5 тивсии5) спленоцитами
Антитіло, яке секретує гібридома до людського клаудину-18А2
З) Депозитор:
Всі вищевказані депозити зроблені:
Сапутей Ріаптасецшісаї!5 АС ЕгеїїїдгаїнвзігаВе 12 55131 Маїп2 ОЄ
ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
«110» ГАНІМЕД ФАРМАСЬЮТІКАЛІ АГ «120» КОМБІНОВАНА ТЕРАПІЯ З ВИКОРИСТАННЯМ АНТИТІЛ ДО КЛАУДИНУ 18.7 Для
ЛІКУВАННЯ РАКУ
«ї350» 3425-75 РТ «і50х вСтуєР2012/002211 «151 2032-05-23 «1605 50 «1705 Патентована верстя 3.5 «105 1 «г1ї» 261 ; «212» РТ Сгрупа захисної / радикал транслокації) «21ї3» Мото заріепе (Людина розумна» «4005 ії мес АТа маї те АТа Су бій б1у ген біу РНе Ма! ма! бег цец тів 1 5 о 15 сіу ті Аїа бу їТе тї1іе діа АТа тн Суб МессАзр біп теробБеб тар сій А5р о вем туб АзпоАЗй Рго уді Тлг АТа Уа! РНЯЄ Ап тує Я Ту за 45
Ммец Тгродга бек суб уаї Ага бій бЗей баг сіу рне Тиг ОСТ Суб Аго бо бу тТуг вне тТпг сен оцец С1у це Рго Аїа Меє гей біп Ав Уа! Аго 65 70 75 80
Аїа бен Меї тте Уа! бі ше уді беу біу АтТа 116 біх Ген зей Уа 85 | 90 95
Зег т1е Ре АЇа Ге губ бух ї112е Аг їТе сіу бег Меї бі Ар зег 100 105 10
Аїа їу5 АТа Ап Мебс тиг оїєцу тиг обЗег б1у т16 Ме вне т116 ма! 5ег 115 120 125 сіу сем суз АТа с т1е АТа сіу Уа! 5ег уаї Рпе АТа Ап ме ей ма! 130 135 140
Тк дей Ре ТтгроМеї бек ТИг діа А5п Место тує Твгобіу Меє оту 61 145 150 155 160
Ммеє ма! біп тк ма! сїйп тбгодбб тує тйго вне сіу АТа А1а о сеу Ре 165 170 175 сторінка
Уа! 61уУ Тгр о уа! АтТа сіу біу ей ТйгоСебю те б1у сту ма! Мет мех 180 185 оо суб тів АтТа Сух Ага сіу беш діа Рго бішосій тТвб оди тує сує АТа 495 | 200 Рез: НИ
Уаі бек отут Ні АЇа бег біу Ні баг оуа! Аїа Туг бу5 рго сіу С1у 210 215 220
Рпе буз Аїа 5ег тйг біу РПе сіу бег А5п тТпг губ А5п о у5 уз ї1е 225 230 215 240
Туг А5роо1іу о1у Аїд Ага тВгобі: Азросів Уа! бій зег о туго рго 5вг 245 ЗО 235 їу5 ні А5р туго Ма! 260 «2105 2 «211 261. ря «е12з РЕТ (грула захисної / радикал транслокації) «гї3» Ното хзартеп5 (Людина розумна) «4005 2
Має бак тис ТНК о тве оСув біп о маї ма?! АЇа вве гео сен обзак Те рей 1 5 16 15
Фу їв А1їа БІіу Суз т11е Аїа АТа Тис бїу мес А5р Меє тгр о зег тп 20 25 30. сіп Ар їец туго А5роА5п о РГО Маї Тйгобегоуа! Рйе Є1и туг осів сту сен тер дк 5ег Су« Уа! Ага бій бак бек біу РНе тагобін Суб Ага 60
Рго тубг вне твг їі ви б1у се Рго діа меї сей іп о АТа ма! зго 65 20 75 о
АТа їеи Меє ї1е Ма! біу 112 маї Ген б1у Аза те б1іу беч Гей ма! 85 з0 з5 ек ї1іє пе Аа без ух Суб ТТе Аго Ііе біУу бег Мех біц Ар 5ег 100 105 110 діа су Аа Ап Меж ТНгогев Тпб Бегобіу їхТе Меж РНе тіє ма! 5ег 115 120 125 бі це суб АТа т1є Аїа біу ма! бек Уаї вне діа Ап Мет ї ги Ма! а 135 140
ТАг ОА Ре Тер Мет Зег тТпгоАїа Ай Меї тує тик сіу мет бім с1у
Сторінка
145 150 155 160
Мет Уа! с1п Тис оУуа! ба тік Аг Туг Те о рРне с1у Ав АТа гем Ре ї65 170 175 уаї біу тктр маї Аїа С1уУ сі1у реп тиб гей їТе б1у сіу уві мех мат 1850 185 190
Суз 11е Аїа Суб Аго біУу їец Аа вго біц бій тс одев тує їу5 Аїа 195 290 205 чаї бек Туг Ні Аїд бек біу ніх чек уа! Аїа туг Бу5 РКО біу сіу 218 "І 220
Рпе ух АТа бег тпгосоі1у Ре су 5вгодБп тпг оту Азпогуз ух 1 223 230 235 240
Туг А5робіу Ту АЇВЗ Ага тВг о аін Азрооіц Уаї біп бек Тук Рго бер 245 250 235
Гуз Ні Ар туг Уа! 250 «-2305 Ж 13 «2115 ЛО «212» рАТ (група захисної / радикал транслокації) «2135 Ното 5арієпе (людина розумна) «400» 3
АБИ бій Тер озег тпг осів А5р ге Туг деп 1 З 10 «2105 4 «11» її | , «21225 рРЕТ (група захисної / радикал транслокації) «213» Ното зартевпе (Людина розумна) «4005 4
АзпоАзпоРГО МаЇ ТНК о А1а Уа! Ре деп отуг бів 1 5 10 «і» 5 «їх 4 «212» РКЕТ (група захисної / радикал транслокації) «213» ото зарієп5 СЛюдина розумна) «4005 5 5зег Тигобіп Ар сей Тук Ази Аяп ого мМаї Твг дій ма! Ре 1 5 10 «25 б «її» 13 «2125 РЕТ (група захисної / радикал транслокації) кеїз» Ното зарієпе (Людина рохумна)
Сторінка
«4005 5
Тис Аблобре того Меї чего так діа дБп мес ту Те бу 1 5 16 «2105. 7 «2115 13 і - «212» КТ (група захисної / радикал транслокації) «2135 Нойо 5арієт5е (людина розумна) «4005 7 дхр 5ег Аїа (уз аїа Аби Мет Тигоїен Тс о беб біу 11е 1 5 Іо «Рі0Ом 8 «1 55. о. шия «212» РЕТ Сгрупа захисної / радикал транеєлокації) «213» Ното 5арієйя (людина розумна) «300ю 8
Меж дробів Тгр бек тТве сТй Ар оїеу туго Аа Ап о Рго ма! Тс АТа 1 5 10 15
Маї РНе дян ту бай біу їеи ТгроАгу 5еб Су маї Ага бій бек зеє 23 25 30 б1у Ре тйг бін Суб Аг біу Туг Рйе ТВгорей бу біу мей Рго АТа 35 40 45 мех сез сп Аа маї Ага лід 50 55 «Ох 9 «11». 24 «212» РВТ (група захисної / радикал транслокації) «213» Ното здотеп5 (Людина розумна) «00 9
Рне Аїа Сен су Суз тів Агд їі біу 5ег мес бі Азр о 5ег Аа губ 1 5 10 15
АТа Ап Ммеї Те Сей Ттиг бек оі1у «2103 ДЦ Ю «гії» 40 «12» РЕТ (група захисної / радикал транслокації) «2135 нОото зарієп5 (Людина розумна) «00» 10
А1а Аби Мет гец уді пТім'А5п Ре тгромежх Зег так Аїа Аяп Меї Туг ї 5 10 15
ТВе сту меє сіу сту мес ма! бій тк хаї біп тТве деа Тус Те Ре сторінка
29 25. 30 сіу АТа АТа еп Ре уаії су тер 35 ІЗЯ «0». 11 «2315 753 ще «212» РВТ (група захисної / радикал транслокації) «?ї13» Мото зарієп5 (Людина розумна) «1005 11
Меж А5роЯіп Тгробег Таг о біп АзроГец Туг А5подяй Рго Ууаї Тиг Аа 1 5 10 15
Уаї рйе. АБИ туго бій б1у сеш тер Ага Заг обу уд! Аго бі бек 5ег 20 25. 30 сіу- вве тиг бій Суз Ага біу туго Рйе Тигогем сец біу бец Рго Аїа 35 40 45 мет генобіп АТа уаї Ако діа ей омеї тіє Уаї сіу їі Ууа?ї Кей Ту 50 55 бо діа т1е біу гей оїеп Ууаї 5ег Ії11е РНе АїТа іец уз Сух І1а Ага 116 65 70 75 5о піу зег меб 61 А5роБаг о АТа губ АТа дей Ме тк ге) тТве бег сіу 85 0 95
Іїе Меї Рйє 112 уаї б5ег біу їеу Суб Аїа І11е АТа б1у ма! 5ег ма 300 195 10 рРНе А1й Ап Меб сей уаї ТИг оаБА РВе Тгромеє 5ег тТНе АТа Ав мех 120 125
Туг твг сіу Мек біу сіу мМмеб Ма! бїп тар оуаї бій тег оАго тує те 130 135 140 вве осіу Аіїв Аїа вед Райе маї с1у Тер 15 150 «2105 12 «211» 107 «іо» ВАХ (трупа захисної / радикал. транслокації) «2135 штучна «ге» «223» Опис штучної послідовності: трансляція продукту ПЛР «ЦЮ» 19
Ага тпгомаї АТїа діа Рго 5ег уа! Рпе тів вре Рго РГО бек А5р їй ї 5 10 15 біп Без гув5 бек су тіг АТа бек уді маї Суз сей вец дей Азп Реве стортнка
20 25 30 тТук РРО Аго сіб АТа буз ма! бій Тер огу» уд! Ар АЗп Аа ви си 40 45
ЗзвгооїЇУ Ап обег осів Ту зегома! таг о бТй ста Ад5р 5ег бух д5р 5ег 50 25 бо
Ти" тує бек бе его бег так овен ТК о рбеи Зег гу АТа Ар отуг 01 05 о 75 80 їу5 ні уз ма! туг Аа Су бі уаї тТве Ні біп е1у Ге бер баг 85 0 95
Рго Уа! Тнгогу« 5ег РБе АЗп Ага сі сій Су що 105 «13 «2115 396 | ! ; «212» РКЕТ (група захисної / радикал транслокації) «2135 Штучна «г20х І і й «23» опис штучної послідовності: трансляція продукту пле «48005 13
О1у Рго 5ек Ма) Рие Рго Сей діа РгОо Зег о 5ек Бу5 Заг таб о5ек О1У 1 5 10 15 біу тйг Аза АТа іїец сіу Суб їви мМаї їуб5 дер туг РВЕ Рго боти РгОо
Уа! ТР оУаї бек тер ди бек о бім Аа івец те бек сім уді нів Твг
Рне рго діа уаі іеб сій бек о5еє с1у ге туго бек рей 5егозег маї 50
Ууаї твВгромаії Рго бек бек озегогев с1іу ТБгосій Те тує тів Су5 дай 55 7а 73 во маї Ап Ні губ Рго бЗег Азпотйг рух ма! АброГу5 їм Ма! ТИ РКО 85 90 35 цуз 5ег Суб дер гу ТНг о ні ТИР Сує РгО РГО Суб РгО Аїа Рго 1 100 105 10 їм Сву сіу б1у Рго бек уд! Ре бе) Ре Рбго с вго уз Рго і у5 Ар 315 120 125
Тит ер Мет т1е 5ег дго Тпг о Рго сіш маї тб Суз уді уаї маї др 130 135 140
Сторінка уаі бек нів 51 А5р РгО сі Узі гу Ре Аби тр отук Уа! А5р обу 145 50 155 160 уаї 610 маї нів А5п о АТа туз Тис їуя вро Ага біб с1у сій тує деп 165 170 5 5ег ти" тут дод Уа! ма! Заг омаї Сер тйгб о уаї беу ніб5 сій Ар тер 150 185 190 кем деп ПТу їу5 ол туго суб Суз тує Уді чек дев уз АТа Бей РгО 195 200 2
Аїда рго Т1е сі бу5 тнг о тіє 5ек суб Аа гуз біу біп о Рго Ага су 2 215 0 бко со1й Уа! Тук Тйг оре РгОо Рго 5ег АгО А5В обі бе ТАаг губ АБО 285 230 235 240 ой маї бегоїец тВгоСув бе уві Бу 61У РНе тук Рго Зег Ар Те 245 250 255
Ата ма) бій Тгробіц 5Звгодзп б1У біп обро оТ0 АЗп о АБА Тубк рух ТВг 260 255 270
ТвкгорРга РКО Уа! сец абр о 5ег Ар ос1у бег РНе Ре їв тує баг ор ух ав 280 285 вен торг Маї А5р руб 5ег дра тиробіп бій с1у Аби Ма! Ре бег сСув 290 295 300
Зег уа! мет ні бій Аа без нів ад5п нів Туг тйг Осій губ 5ег г еу 305 си 315 320 зак бву б5егоРго Ф1у гу 325 кох 14 «Кі»: ав ! «212з рт (група захисної / радикал транслокації) «ві3» Штучна «ве» «223» Опис штучної послідовності; химерні моноклональні антитіла «0» 14
Мес бій тТеротве тетроуді ве тей Ре Гей гей 5ег о уаї ТВг оАТа сту 1 5 10 15 уаії ні 5ег бій Уа! біп о гез бій бій бек СТУ АТа би Ге Меб сує го су Аа бек оуа! бу5 І116є 5ег Суб Гуз: АТа ТВг о б1іу Туг о тиг вне
Сторінка
48 45 сег зве туг терте бій ткроуа! Сує віп Агу го сіу Ні сту ван 35 бо сій теротів діу біф тіе сей рго біу чего біу его тТНгодеп о Тугє Ап 65 70 75 во соти ме рРНе Гу біу уз АТа Те оРНе ТИ АТ АБр отИгояег о бег деп 85 0 Зх тТвгоАїд тТук мек бій сей бвег обек о гви Твг оЗег сій Абробек Аїа ума 100 105 120
Тук тур Сує АТа Агуо туго А5ротує Рго Тер Ре Аїя тує Терое1їу сп 115 120 125 сіу Тиг Мен уаї таг оуаї зег АТа діа бек тйг суз б1у рРго 5ег ма 130 135 140
Рне Рго без АТа Рго ЗегоЗег губ 5ек Тго5егосіу сту ТНг АТа Аа 145 150 155 160 ев 01у Суз ей уа! суб д5р тує Ре Рго бі Ро Уудї ТР оУуді хек 165 1720 175
Тго А5а бек обіу Аїа ївеи Тигбо5зег біу Уаї Ніб Таб оРНе Рго Ата маї 180 185 1950 іви біп бек о5ег б1у бен Туг 5ег бен бек зег маї Уа! тпгоУуаї РгО 195 200 205 зег бек век грец сту тйгобів таб отТук ї11іе Суз дп маі дп онів у 210 2415 220
Рго 5ег Аз Тпгогуз уаї Ар Гуз цу маії 1 РГО Су баг Су А5р 225 230 і 235 240 цу5 тТйгоніз ТагосСує ро го Суб Рго Аїа Рго сі цец сеу біу с1у 245 250 252
Рго зег уві пе Кей рРпе Рго Рго Був Рго ух дхр То їеи мех Тв 260 265 270
Фег Аг ТгоРго б1и ма! ти суб уд! уаї ма! Ар маї зЗег нії 1 275 250 285
Авр о Рго б1м Уа! Гуз РНЄ Ази ТкроТук уаї 45р о с1у маї ої Уа! нів 2930 295 300 д5п АЗа грує Тс гу РРО Аго б б б туго Аб5й чего ТНг тук дтга
Сторінка
305 510 315 320
Ууаї Ма! зек Ув! йец тс о Уаії беи нів бів Ар тр Гей Ап о о1у Гу5 325 330 335 бі туг груз Сух су Ма! бек Ап о цу5 АТа рей рРго АТа его тів БИ 340 345 350 іув ТБг о їІїє 5ег уз Аїа гу С1у біпоРгО дра бід Рго сіп о Уузї тує 355 160 365
ТВеосСвв Рго РРО беб Ак Аз бій Сей те о Суз Ази с1й маї бек сей 379 375 38о0
ТВг оСух Сен Уа! Гу біу ве Тугк Рго б5ег Азр. її Аїа ма! Їй Тер 3855 390 395 Зоо бій бег А5а бі ой го біц Абп Ап тує бує тк Таб овго рго Уві 510 415 іец А5р Зег Ар біу зег РМе Ре іец тус заг ух Ге тагс Уаї АБО 420 425 430 їуб бек дк тер обівя бів біу А5и маї БНе 5ег Су зЗегб хаї мес Ні 435 440 А січ Аїд Сец Ні Аза снів Тук ТВе бій бух бек без бег їв бег рга 450 455 460 о1у цу 465 «20» 15 «-йї1з 457 «ві2У Вт (група захисної / радикал транслокації) «213» штучна «РО й шк І «ваЗ» опис штучної послідовності: химерні моноклональні антитіла «-8005 Д15
Мет Ар Тер о беч Тер деп їен іє) РБе сен меї АТа Аїа АЗа сіп 5ег ї 9. 10 15 ті біб Аза біп тіе сіп сен маї с1п Зег о1у го бі сей бу5 кує его біу бі ТВг оуаї Суз їтіє 5ек Суб су Аїа чек у тук тнг РНе
Твг деп тує бТу Меї Азп о тТероуа! уз сія АТа рго о1у Суб О1у цеч 50 сторінка іу5 Ттр мекв с1у Тер Т1е Абп отТве Ай Те с1у сів РКО тб о туг АТа 65 7О 75 во сій бі впе кує 01у Агд РМПе АТа Ра бек гео СІ тиг обег АТа бет 85 90 95 тВгоАТа тТуб сей оїп 116 Ад5п Абп Сей губ Ап о сЄ1Н АБротог Аа ТНг
ТО 15 ВК; тТук РНе Суб Аїд дгб бен йім Ре с1у Ап АТа Меб аеро тує терооО1у 115 120 125 сів сту Тгобек о маї тТвг Ма! бегобег АТа бег тиг губ сіу Рго 5ег 130 135 140 чаї РНае Рго цей АТа Рго бек бег Суб 5ег оте беб біу їх тТВгОАТа 145 150 155 160
АТа їен 51у Суз це маї уз АзротТук рНе Рго бі Рго уаї тег Ха! 165 1798 175 зЗег о тгтроАб5п 5еє бу Аїа Ге твгобег сіу маї ні Тпг оРлЛе Рго Аа 1850 185 190 уа! їен біп бЗег баг біу Ген тує бек бец 5ег о 5ек ма! Ма1ї тигомаї 195 200 205 рога бе чес чес се біу таб Осій ТР отує ІТе Су Ай ма! деп онів 210 215 | 2820
Су Рго его доп твгоїу5 Уа! АВ Сує Гуз Ма! бю РКО уз бек суб 225 30 235 240 дер бує Тег оніз Тр оСуз Рго Рго Суз РГО АЛа Рго бій цей їбец оту 245 250 ра б1у рго 5вегоуаї Рпе гей РПе Рго Рго Гу РГО ух АБЮ ТАг ої мех 250 «05 жа т1іе б5ег ага То Рго Біц Ма! тає Сух5 маї чаї ча! А5о Уаї бек нів 275 280 285 сш Аб5р РКО бі Уа! Гуз РПе депотгр тує маї Ар о сіу уд)! с1о Уа 290 295 | 300
Нтя Ап АТа ує тТвгоСує Рго Ага бі бі бій туг Аби зЗеб тес тує 305 310 315 320
Ага маї уві 5ег мя! це тк оуа!? гей нів б)ій Абротеробем деп с1у 325 350 335 сторінка
Сує с тує бух Суз цуз ма! Заг оАб5п уз Аїа це Рго АЛа Рко Іс 340 345 350 бів уз тнгої1їе бер рух Аїа їу5 Б1У біп го Аг би РгО б Ма! 355 360 365
Туг Тйгогей Рго Рго бЗег Ага Азробіц Бей Тгогу5 А5п бів Уа! 5еаг 370 375 380 їец тиг Суб Ген ма! Суб бу Ре туго Рго бек Або ІТ6 Аа уаї Си
З85. 390 395 | 4
Тер біц беб деп сіу бій РГО біб А5п Ази Ту о буз ТНгОтТйК вго Рго 405 410 415 ма! цей А5розег А5рооіу 5ег Рів рНе це Туг 5ег Гуз Бец ТР Уві 420 425 330
Ар Су бек Ага тгросіп сТй б1у Абп о уаї Ре 5ег Суз бе уа! Мех 435 440 4345 ні сі Аїа гей нів дзи нія Тук Тйг обій Гу ваг бен зегоїен бер 450 55 460
Рго Ту цу 465 «10» 16 «911» 465 «їй» РАТ (група захисної и радикал транслокації) «23» Штучна х220» : : : . «23» Опис штучної послідовності: химерні моноклональні антиттла «4005 16 мес біч Тер о Ічіе терте ре рез Рпе їїе Сен обег б1у Твг Аїд бу ї 5 10 15
Уа! нія бег біл уаі біп сей бій бій 5Зеб бі Аа бій бе АТа Аго вго ЄТу АТа б5егомаї руб іїенобзег Су (уз Аа бек бім Тут Те Рне 0 45
ТВгоабротуг Туг ІТе деп тгтрома!ї їух оТп дго твг о о1у єп у і ец бо сіб тер оті 01у біб ї1е тук о вго сіу бек біу деп о тйг тує тук Абв 65 70 75 во сі гуз Ре їу5 О1Уу ГУБ АТа Тигобеу те АТа Ачр ог уз зег о бег 5ер сторінка
85. дО 95
Тк АТа Тує Меб бій іеу Зег бег іву Тис о5вгобій Ар о5ес АїяЯ Ма 100 305 що
Тукг вне Су Аїа о Аго бек Туг б1у АТа РНе дер тує тгор о біу бтТа с1у 115 120 125
Твен бен тб омаї бЗеагобек дід бек оТвг обу біу Рго баб уд РНе 130 135 150
Рго цеч Аїа Рго 5ег 5егоіу5 Заг тиг бегб боіу біу тпг Ата Аїд ве 145: 13 ї55 | 160 біуУ Су Ген омаї Суб АБротув РБе Рго біц бго Ма! Те омаї бек тгр 165 170 | 175
Ап ве біу Аз1а ше о тпгобег о сіу маї ні тії рне РО АТа уаї ен 1850 135 1950 сій 5ек зег сіу ей туб зег іец бег бег омаї маї тТнгоуаі вго бек 195 200 205 зек бек їеш Сіу твгобЄТи тйге отук Ії Суб дей маї АБ НіБ ув рРгГО 210 215 220 зег Аби ТВг о Ббуз маї А5рогуз уз Ма! бій рго ух ей бує Ар (ух 225 230 235 240
Те нів ТВгоСуз вго Рго Сух РГО А1їа РгГО бів їв) їв сб1у біу вго 245 250 255 зек уа! Ре ен РЕ РКО Рго Гу5 Рго уз д5р о ТИК осеу Меї їТе 5ег 290 253 270
Аг таб орго сту маї тб Сує ма! чаї Ма! Ар маї бек ні 610 Ар 275 280 285 вго БИ Уа! Гуз Ре Ап Тгротуг маї др озіу ма! ої ма1ї Ні Ай 296 235 300
Аїа ух тТиг о Гух рко Аго сія біб біпотуб аби ес тик тує Ага Уа 305 310 315 320
Уа! 5ег ма! ве тигоуаї ген нії сій Акротгр гей дп бу у си 325 330 335
Туг уз Суб був Уа?! 5ег А5Пп Куб Аїа Сец Рго АТа го їіє сбіц ух 340 345 350
Тис ошТе зекогуз Аїд вуз С1Уу бін РРО Аг сти РКО сій маї тує те сторінка
355: зво 365 їеи рРго Рго 5егодго А5робій їей тб оСу5 Аби біп Уаї бег о бе те 370 375 38о
Су геш уві бух сіу вне Туг о Рко Бег Ар тіє АтТа уд! біц тер б 385 з 395 00 зек ап Бі бій РгОо бі Абп о дбйЙ тТук бу тв тигб о рРго Рго Ууаї рез 405 410 415
Ар Бег Ар біу бЗег Ре РНе іє туго баг рух Сей тк Уа! Ар уз 420 425 аа чег одго Теросівй біп б1у Ап Уа! РБе 5ег Суб 5ег о Ууді мМмеї Ні б1у 435 Ай 445
Аїа гео ніх Аа нія туго тег біп ух бегоГез бег бен бег рго сіу 450 455 460
Гуз 465 «2105 17 «її» 467 «12» ЕТ (група захисної й радикал транслокації) «2135 Штучна «220 ; й ; : : «хвд3» Опис штучної послідовності: химерні моноклональні антитіла «4005 17
Ммеє віу тгроб5ег Су їіе їТ6 Севоеке рен Ууаії АТа тТне АТа твгое1у і 5 10 15 мат ніх 5Зек сій маї біп ін біп сій Рго С1уУ Аза сіц ву Уд1 Аго 5о 25 30 го оіу АїЯ зегоуаї був бе бег Суз тує АТа бег бу Ту тн РНе
ТВгобег тує тер тх1е Аби Теромаї су о1п АгО Рго Ту віп ої1у Сец
БО січ терте СТУ АЙ І16 Тук бго 5его одер Зег о Туг Таб Ап Ту Ап 55 7о0 75 80 сій уз Ре СУу5 др о1у5 АЇа те оїец твгоуаї дев суб зак о бре вас 85 90 95 тагоАТа туго меї сій іец Зег Зег о Рго ТНгобегобіц Аб5робег дів. Уа! 100 105 410
Сторінка тТуг Тут Су5 тпг о Аго бек Ткр пра сіу деп о Зег Ре АЗр туго тгрооїу що 12 ї25 сіп сіу так оте Бен їНе Ууаї бер бек Аїд бег ТИг огГу5 с1у РГО 5ег 130 135 143
Ууаї ре Рго сво Аїа ргОо 5еб зегоіує Зег ТР оЗев сту оту Тк Аа 145 150 158 160
АтТа сен біу суб сеу Уа! су Ар Тук РНе вро бін Рго муаї ТНгоуа! й 165 17/90 175 ек Тср АБИ Зег СІ АТа Сей тає Зес сіу уаї ні ТВроРйе го Аїд ідо 185 190 ма! меш сій 5еб о зеб біу їм Туг о бвб їви бег б5ег маї Маї тнкома! 155 200 205 рРго его бЗег заг сіваи су Тк бій тр оТує ХТе бує дп ма! Ап нів 210 215 2209
Гує рго бек деп ТС су Ууаї дру вуз Уа! б)й РГО їу5 Баг Суб 225 230 235 240 дер ух Тйгонія ТК оСух ргосРгОо Суб РГО АТа Рго біб цей без су 245 250 255 оіу рРго б5ег уді РНае сей Рпе РГО Рго цу Рго фу Авр Тиг ген Меє бо 255 270
І1е зегодго ти овго бій Уа! ТВгоСух ма! маї маї дяромаї 5егонів га 280 283 біш Ар орРго бій Уа! сух Ре деп о Тгротує уаї дер осіу ма! біш ма! 290 295 300
Ні АБ АТа мує Тигогу5 Рко Ага біз 610 бій туго А5а бек Те тує 305 310 315 320
Ага Уа! Уаї бек Уа! їеи ТйгоУуаф ву нів бій Ар терогей Ай с1у 325 330 335 їу5 їй туго ву Суб Гу Уа! зег Ап і у5 Аа гей Рго АЇїа Рко їїе 340 345 350 сій фує« тб т1е баг сук АЇа цу5 СЄ1у біп Ро ага біб ргообій ха! 355: 360 3655 тут тВи Кей РгГО РгО 5Зег АгО АЗросів Сей Твг. уз Аби бій Уаї 5ег 370 375 З50 сторінка ес таб Суб цей Уаї цу сіу Ріє тує Рго зЗег А5р те АїТа маї 10 385 390 395 400 тгробій 5ег ойбп О1у бій РРО 01 дб А5и туго Був Те отиг Рго Рго 405 410 415
Уаї бец д5р баг Авр о о1у б5ег ве РБе бе Туг 5ег їуя Бей тиг Ма! 4820 425 430
АЗроіу5 Баг дго тгробій їй с01у д5лоуа! Ре бек Суб зег ма! Мет 435 440 445
Ні бій Аїа ген Ні деп нів Туг Тпг обіп цуз бає ву Зего Ген Бер
А5О 455 460 его бі був 465 «0» 18 «2315 460 «232» РВТ (група захисної / радикал транслокації) «2135 Штучна ех І І «дез» Опис штучної поспідовності: химерні мовоклональні антитіла «400» 18
Ме бін тгтр Аго ї1е Бе сен Ре 116 їв озек о біу Те Аїасо1у маї ї 5 та 15 ніз 5ег о бФіп уд? 10 беш бій сто 5Зеє с1у Ргб бій гей ма! губ РгО бі АїВ 5ег Уаї (уз Меж Зег Су 1у5 Аїда бег Су тук о твг вне те дер отуг уаї їТа бек Тетрома! бу б1п Ага ти біУу біп а1у беу сти з5 Й 6о тер гів сіу він тіє Тук Брбо сіу его оТ1ус бек тис тук тус Азповіц 65 70 75 о
Мцуз Рпе ув ТУ цу Аїа тік беу тТйг дія А5роїуз бек 5ег дБА те 85 що За
Аїа туг мек сій бен б5ег 5ег ей Тип об5ек СТШ дб 5ег Аа маї туг 100 105 КК,
Ре суз Аїа АгО со1у Уаї мен ен Аго АТа Мет Ар тує Тер оту сп 115 120 125 с1у тб бег оуаї ти Уа! 5ег заг АЇй 5ег ТНК о гГух б1у вро 5ег У
Сторінка
130 135 140
РНе Рго гей АЇїа Рг бегобет гу бе тпг заг сіу оТу Так Аа діа 145 150 155 тей меш сіу Суб цен Уа! суб дер тТуг Ре РГО бішоРго Уаї Таке оуаї бек 165 | 170 175
Тер Абп о бег бі Аїа сен тнгробес бу уд! Нія Тс Ре рго дів ха
І5О0 їх5 о цей бій бЗег бер С1у без тує обег їеи б5ег о бЗегоуа! уаї Так омМаї РГО 135 200 295 чек чего бек гей сіу ТНгб бій тВготук ї1Те Суб А5п омаї ди Ні гу5 210 215 220
Бго бег Ази Тагоцуз Маї дер о цуз Суб ма! сій ро їу5 бак Сує Абр 225 230 235 гай цує Те оніє ТК оСух вто Рго Су рго Аїд РГО іш Се) іви біу бу 245. 250 255
Бго бзег о уаі Рпе Гей вйе рго Рго губ РгОо Су5 дв Ттиг о їви меї гі 260 255 27а
Зег Агу тб ого біц ма! тйг о Суз уаї Уві Уаф д5р Уа! Зеє Ні 0 280 285
Ар РГО Біб маї Су Ре Аби Тїго тус маї дв сіу уд! їй Маї нів 290 295 300
Азп АТа су ТИг Гуз РГО Аг б1м бін бій туго ди 5еготйг туго Ако 305 КИК 315 320 уаї уаї бек уаї їеу тп маї ей ні біп А5р Тр ен Ап о біу Су 325 330 335 січ тТуг цув Суб суб Уа! его Гу5 Аїд Сей Рго Азфа Рго Ті 1 340 345 350 мує ТНг о піє бек тує А1із суб б1у б1п РГО Аг би РО бій Узі тує 355 360 305
Тйгоре) БРОо БКОо Зв АгЯ АБО біб бе ТР огух Ап обіп Ма! бзег ові 370 375 380 тТйг бух сен ма! бух б1у Ре Туг о вго 5ег дер ї112е АТа уві б то 385 590 395 400 біш 5ег Ап о с1у бій Рго бій Ап одяп о Тугоїу5 ТНгОтТАг о РгГО РКО Уа
Сторінка
495 4310 415 іви д5р зег дяр о б1іу зебр оРНе Ра бен тує 5егоз уз сви Типг о Уді Аяр 42 425 330 їм 5ек Я тгвости сій бїу Ай Уа! Ре бек сСуз ак Ууді Мет нт 43 440 445 біш Аїз зей Ні5 АБИ НІ Туг типгобій Суб бек іец бег Гец бБег РГО 450 455 460 су ув 465
Ук 19 «211» 469 , , «12 РИНГ (група захисної / радияал транєлокації) «213» штучна «их «йе3» Опис штучної лослідовнасті: химерні моноклональні антитіла «4005 19 мес дзр о трр тів тгрої!Те Меб гей ні бе цез АТа Аїа Аїа о тпгосіу 1 5 10 15 ї16 Біп обег о біп уві Ні ів) бій обій 5еб о біу бек обі гей го ваг
Рго сіу бек зег Уа! Су цей бег Сує су дер Ре Або 5ег січ Уа! 43 45
Ре РгГО Рйе Аїа Туг Меї Зак тер ї11е Ага бій бу РГО сту Ні бу бо
РнНе сін Ткто тів б1іу Аброт1в гей Рго б5ег те бІуУ Аг тАготіе тус 65 70 75 во сіу Бін суб Рпе бій А5роїу Аїа пнб сен Ар Ай Ар Тиг Уві ет я Зо 95
Ап тНе Аа тТук без біш ої ец Аби бегобвуи Те 5ег о1й Ав Бек са 00 105 110
Іт1е тук туг Су АТа Аго с1у сій бі тук біу Аїй Тгробне А1а ту? 115 120 125 тгр ой біп 61у тик ораноуаї Тпгб Ома! 5ек Аа Аа заго тик обу Оу що | 135 лай
Рго зег уаї РйЄе Рго гейш Аїд РГО Зег бек ух беготНг Баг су бу 145 150 155 1650 стовінка бо
Тиг Аа Аа бец бу Су5 Гви уаї їує д5р Тук Вбе рго бі Рко ма! 165 173 175 тик омаї бек тр Аби бе сту Аа фей ТАгобетооіу уаї нія тйг Реве і80 І185 4190
Рго Аа Уаї сем сп бЗег бег біу цец Тусгсвег о сву его бегомаї ма? 195 200 205
Тиск о Ууаї РО бег бек обег о гец б1у Тс бів Те отуУв І1е Суб дви уд 210 215 2290
А5П Ні фу СРО бек оАдхп ТВгогує ма! А5роруз уз ма! сш рГО Суб 225 230 235 240 зег Суб А5рогув те ні ТАЄ Сух га РГО Су5 Рго Аїа РГО СТО Сей 245 2930 255 меш піу с1у Рга его уаї вре сец вве вго го цу РгОо бує дДеротНе 250 255 27й ігц Меї їТЛе чего Аг ТВгорРгОо сі уді тпгс Суб маії чаї аї Ар уд 275 280 285 5ег ні сій Авр Рго біц узі Гу РНе Ап тер отТує Уа! А5рв сту Уа! 0 295 300 зіз маї ні5 АБ Аїда зуб ТВгосуз бго Ага бій бій бій тук Абп о 5еє 305 310 315 320
ТР отут Ако ма! уаї 5ег о маії сем таб уаї Бей ніз бій Азр тгр о гем 375 339 335 деп осіу куб си Тук суб Суб суб Маї бек деп уз Аа їеу Рго Аза
ЗА | 345 350 рго ті бід Су5 тТаРоїтТе бег суб АЗа Су с1у СІЙ РРО АгОо сто Рго 355 360 365 сій Уа! Тук ТИйг Сей овго вго бек Аг Авросій Вей тйг зуб АБИ 1
БУ 375 380
Уаї бег ів ТвгоСуз гео уаї туз бі пе туго Рго бек Або тів Аа 3855 390 395 400 уаї бїш трроеіц ес дяп Є1у ІП РгОо ЗІ АБИ АЗИ туго сує ТАгоОтве 405 10 15
Рго го уаї ее Ар обЗег Азробіу Заг Рпе РБе їей Туг о 5ег гу ви 420 425 430
Сторінка
ТАгоУді Ар гу 5ег Аго Тгробій бай сіу Ап Уа РБе 5егосСуз Бас 435 440 45 ма! Мех ні5 с АТа їец ні А5 Ні туго тТиг сій ух бег цем 5екг 450 455 460 цен бег рго біу су 4655 «310» 29 «2115 7240 «212х вну Сгрупа захисної / радикал транслокації) «213» втучна «20 ; І кг23» Опис штучної послідовності: химерні моноклональні антитіла «4005 ЙД 20
Ммеє бій бег біп Тйгосоій маї Сен меї 5ек Гец Гей РПпПе Тгр ма! 5ег 1 5 10 15 біу тий осСув біУу дБ Іі ма! Меб ТК бій бег о рго бегобек гей Те 39 маї тапг АТа б1іу бін їм5 уаї Твпг оМеї бегоСу5 бух бек бек б1й. 5ег 30 45 фей бе дено его б1іу дки бій куб Ап тує се те тер тує ба с1а | бо му Рго біу біпоебко Рго ГУ бе бе ї1в туго ТгроАТа 5ек те ака 55 70 75 о біц 5ег біу маї РРО Ар Аго Ме тик обіу бер біу зег бу ти А5р 85 0 5
Ре тс ореу тпг їі бЗег бЗег о маї біп АТа сій а5робец Аїда маї туг 100 105 я) тує Сув біп АБ Ар отуг Зег туг РКО це тйг оРНе сб1у Аа сту тер 115 12 175
Був сви сТО Сен осує Ага тТвгбоУаї діа Аа Река деб о уаї вне ї1е РБе 130 135 140
Рго Рго 5ег А5р бу біп ен суб Зеб б1у те о дТа зегома! Уді Суб 145 150 155 160
Пец бе Ай Ай Ре Туг Рго Ага піц АТа уз Уа! бій терору уд! 165 170 175 дер Ап Аїа Сец біп дек 01уУ дп обег бій 613 5еє уд! тк обід сій сторінка
180 185 190
Азрозег уз Ар бек тТиг отТуг бек сей бег б5ег ти Бей Твг о їеу 5ег 195 290 205 їу5 діа двротук сій вуз ні цу ма! тТуг Аза Суб бій уаї те Ні 210 215 225 сів оБіУу рей зак обеєорго Уа! ТК оСУує Зег ве А5поАгЯ 51уУ ін о сув 225 230 235 240 «2105 21 «2113 955. «219» РКТ С(грула захисної И радикал транслокації) «2135 Штучна «2205 ; Я «2935 Опис штучної послідовності: химерні моноклональні антитіла «-ч005 21
Мет нів Ре сій уаї бій їїе РНе бек рпе сен сен їІТе бег Аїа 5ег 1 5 10 15
Уа! їТе Меє 5ег Ага сту сія їте уаї цем тйгобіп 5ег Рго АТа 21е меж зег Ата хек рго соту бі ух маї ТВг о їїє таг Суб бег АТа 5еї за 4ї
Зег 5ег уаї б5ег тує Меє Ні ТероРне сіп бій ух бго бі тВго5ег 60 рго суб цей Тгроїіє Туг бег тТйг бек Аби Се) АТа бес сіу уаї рРго 55 70 75 50
АТа Ага РНе его сіу явг ос1у зек сіу їйг о 5ер тук б5есоіву Те пе 85 0 45
Бег дра меж сію АТа бій Азр АТа АТа тне тує тує бує сіп сп Аго 100 105 110
Бег бег туго РКО Рго тайг оРве б1у біу о1у тпгоух сец біч їТе сує 115 120 125
Ага Тиг Уа! Аіа Аїа Ро бег ма! Рпе їТе РМе РгО РКО Заг А5р о1у 130 135 140 біп сей уз заг осіу Тиг Аїа вет Уа! маї сСуз сей бен Абп ди Рпе 145 150 155 160 тує ро Аго бій АТа їу5 уаї біп Тероїує ма! Ар Аза АТа тей сп 165 170 175 й Сторінка
5ег Біу АБИ баг бів 610 бегоуа! Тйг осіб бій АЗр бек бух Ар оЗег ї80 185 190
Тпготуг о б5ег сей Бег 5ег Тк обец Тг бе) 5ег о су5 А1а др отуг 1 195 200 205
Гу Ні гуя уд! тус АТа Су бів уаї тйгонів біт сту сен 5ег баг 210 215 220
Бко чаї Тк обу ек рпе Ап Ага сіу сід Су» 225 230 235 «105 22 «2115 534. «г12з РТ Сгрупа захисної / вадикал транслокації) «213з Штучна «220 «223» Опис штучної послідовності: химерні моноклональні антитіла «М» 22 мек бі РНе сій тйгобі? Уа! РМе уа! Ре УйїЇ се їец тгрівей с веї 1 в а 15 сіу маї А5р сту Ар І1е Уаї Мет твгобїп бег бій уз РНе Мет 5еаг
ТНг бек уа! с1у Ар Агу Уа? баб ї18 Таб Суб вуз Аїа бег бій Ав до | 45
Уа! до тс о АТа ма? Аїа ТгротТує б1п бій уз Рго о1у б1п бЗег Рго бо; ух Аїа цен їїе Ту Бей АТа с 5егб Ап АгРЯ Ні тВагоб1у Уа! РгО АБО 65 70 75 50 ага РНе ТНгосіу бек сіу бег о біу ТИг оАЗр РВе Тйг оре Тк те 5ег 85 90 95
Ап Уа! сп об5ег бій Азроїец АЇа Аз о туг РЕ Су ей бів нНіб тер щю 405 110
АБ Тук РгО Ме таб оРВе біу оїу 61у Те уз бе ств ІТе гу Ага 115 12а 125 твгоуа! АТа Аїа бго его омаї Рпе ї11а Ре Рго Рго чего Ар б195 1 130 135 140 ев уз зег с1у тТиг Аїд б5ег маї ма! Суз цей бе дей дяп РВЕ туг 145 150 155 160
Рго Ага біШ АТа цу уаї бій Тер обу5 Уді Ар оАЗИ Аїа ів о біп зек
Сторінка
165 170 175 бім А5поб5ег віп сіц бебомаї Твгобіц бій А5ро5ег ог у5 дер зеб те 180 185 190
Туг Бек вер бек 5ег тпговей ТНК цей 5егогуз Аїа деротуг би у 195 200 205 міх уз маї тут АтТа Су сти Ууаї те ні бів б1іу Ген бек бБеє рго 210 25 220
Уа! Тк оСує бек рРНе д5и Аго с1уУ с Суб 225 230 «2105 243 «г1ії1» 240 ще «212» РВТ (група захисної / радикал транслокації) «2135 штучна «ав «йе3» Опис штучної послідовності: химерні моноклональні антитіпа «00» 23
Мех Ар Зег сій Аїа бій ма! геу Меб беу Сей без гей о їго Уаї бе 1 5 10 15 сіу так Суб сіу А5р Іі Уаї Мес б5ег Оп бег РгО бек 5ег цей АТа | 30 чаї Зег ма! біу біц їуз Уаї ТНгомеї Зег Су5 іуб5 бЗег бек сій 5ес 0 ї5 це Бей Тук бего5ег Ахп сій уз Абп туго ген Аїа ТеротТук вів 1 60
Буз Рге сту бій бек Рго губ еп гео тліє тук тгр Аїд бЗег тк Агд 55 7 73 80 сіш Бек біу Уа! Вго АЗроАго Ре Тигосіу бзеб о біу ек б1у тк Ар 8 | За | ше
Ре те осей тпгої11і2 б5ег обег Уа! їу5 Аїз бі АЗр гей Аїа маї туг 100 105 То тує суз іп бій тує Туг бег туго рго цец тТВг Ре біу діа о1у твг 115 120 125 вуз цей бій вен їу5 Акуд те ма! АТа Аза Рго беєб о уаї РП ї11е Ре 130 135 140 го Бго бег Ар со сій тей бу5 б5егосіу тк Аїа бегоуаії Маї суб 145 150 155 160
Сторінка
Кен цен Ап Ай Ре Тук Рго Аг бій Аза суз Уаї біпоткробуз Уа 165 179 ІУ5
Авр о А5п Аїа гей бій б5ег о біу Абпобеє біп 610 Звгоуаї Тйг біб б 180 185 190
А5р бек суб Ар чег тйгоТує 5ег Бей озЗег заг те рей тре тей заг 195 200 205 їу5 діа Ар отут сій вує нія груз Уа! Туг А1а Су бів уаї тТвго Ні 216 215 229 біп б)у гей бек Зегорго маї ТИ ру 5ег РНе А5поАга біу Сн Суб 225 230 235 240 «М ой «2112 240 «212» ВЕТ (група захисної / радикал транслокації «ІЗ» Штучна «Его» киш «га3» Опис штучної послідовності: химерні моноклональні антитіла «00» У4
Ммеї біш 5ег біп тиб біп Уа! Ге Меб бек олецп сец Ре Тероуаї бег 1 5 10 15 сіу тТнгоСуз С1у Ар їТе Уа! мес тне біп чег его Зег 5Зег ве твг зо уаї Тег Аїа біу бїМ буз уві Те Меї б5ег о Су5 Гуз бес бек біпоЗег іби зей Ап 5ег біу Ап осій Су Ап тує без тТиеотеротує тп ос | 55. 650 уз Рго біу бІп РРО Рго Гуз Гец бец їТе Тук Тр Аїд Зег ТигоАга 65 70 75 80 сі 5ег оат1у маї Рго й5р Ага епе тйгобіу б5ек біу зег є1у тис др
КУ 90 85
Рпе таб Се тТигб їі бек бег ма! оій АТа бій А5р бен Аїа уві туг 108 І 105. ло тук Суз біп д5а Ар отТук бег Тук Рго Ре тВіг оРНе біу бек біу тнг 115 120 125 цу5 гец бі Т1е Буя Ага Те Уа! АТа АТа Рго баг оуаї Бе їТе рне 130 135 140
РО РО Бег А5р обіш сій Гей уз беє о оіу ТНг Аїа Зегомаї чаї Суб
Сторінка
145 150 155 160 іїви сей дей Ахи Рпе тус РРО Ага біо АТа сує ма! бій тео вух ма 1855 170 175
АвроАБИ Аїа сец біпт бек б1іу Або бек обів біб беб Уа! так обі ств 159 185 1995 др бБег цуз Ар оБаг тик туго Зег цей бег о 5еЕР тис Кей тб о рей 5ес 195 200 205 цу АТя Ар тує бі сухо нів су уаї туго Аза Су бі» ма! тигонів 210 215 220 сій сту бе 5екобег Рго Ууді ТНгоцу5 баг ре А5п АРо СУ от Су 225 230 235 240 «2105 25 «2115 239. «212» вет сгрупа захисної / радикал транслокації) «її» Штучна «020» «23» Опис штучної послідовності: химерні моноклональні антитіла «40025 25 мес Азр зве сіп Аа біп Уа! сей пів сей іє сешец тгроуаї зе 1 З ук; 15 оіу ти" Суб СТУ Ав о їі1е Маї Мес 5ег сіп 5еї РгОо 5ег беагоїеу Аа 20 25 БІ чаї зег діа б1у біц уз маії тпг Меї б5ег суб у бег 5ег бій 5ег їво ер Ап бек дго Тг о дгОо фу Ай Туг ів Аза тер отукг ств 618 бо бух рРго а1У бій бек вро ву Гео фе) ж1іе тує ТгРр Аа бер о твг Ага 55 70 75 50 іш Бе? сіу Ма! Рго др Аго Рие тпг о біу бек біїу 5ек о1у тс дер 85 Зо 25
РВе тнг оре тнг ої11є 5ес бек уаї біп АТа оіц Ар їен Аїя маї туг 160 105 110 тут сув цу сій 5ек туго Адкп гей тук Тйг оре сіу сту б1у тик ув 115 120 125 цей бін т11іе уз Аг9 Тс ма! АТа Аа вго чЗег о маї Рпе ї1Те Ре рго 130 435 зо
Сторінка вро зек А5р бі іп огеу їу5 5егосіу тТИб Аїд бек ма! Уаї Су5х 1 ец 145 150 155 160 цей АБ АБ РМ Тує РКО АгЯ 610 АТа бує уаї сій тТерогуб Уа! Ар 165 170 175 д5п А1а ген обіп бек біу дб 5егобіп біо бек Ул! тк об сп дер 180 155 199 зег ух Ар б5ег те Тук обег о їву бек бе лиг о бе ТК осеу беговує дв 200 205
Аіа Ар туг січ цу5 Ні (ує Уа! Туг Аїа Су5 бій маї тТвг нів б1п 210 215 220 сіу гей бек 5ег рРго маї ТИгогує 5ег о РНе деп асо с1У си сух 223 30 235 «ій» 26 «211 240 «їі?» РЕТІ Сгрупа захиснеї / радикал транслокації «213» Штучна «гей | о | о | | І кві» Опис штучної послідовності: химерні моноклональні антитіла «400» 26
Меї зер бек сп Діаз бій Мазі зви Меї сей івеип сей бе тео Уа! баг 1 5 10 15 сіу те о Сує біу Ар ї1а Уді Меб зег бій Бек орго баг бек їв АТа 25. за уаї 5егомаї сіу бін іїує Уа! Тег о меє бе Суб ух баг бег сій 5ег «а
Сем рац тук бек Бек Ап бів Суз АБЛ Тук сей Аїа тгроТук бій бій бо їув го біу біп бек Рго був їец Сеу Тіє тує Тер АТа бек ТНг Ага 65 70 75 50 сій Зег сі1у маії РгоОо А5р Ага РМе тйг біу 5ег боїу б5ег Аїа тагоОАБо 85 90 95
Ре тТйг цей Таготіе бег 5ек ма! бій Аїа сб А5р о еу Аїд АЯрв тує 100 305 110 ніх сСух біу біп б1у туго бек Тук о бго туго те све осіу сту б1у тат 115 120 125 ух вен бій ше ув Ага тт МХаї АТа Аїда Ро Зег Уа! ве їТе РВе
Сторінка
130 135 140 его Рго баг дер бів сій іей суб бег сту тТнб о АТа чек омаї УА Су 145 1590 155 160 меш цей АБп Ап РпЄ ТугоРго Аг сій АТа уз Уаї бів тгрозу5 Уд! 165 17 1275
Ар дхп Аїа ген сій 5ег біу дп 5ек бій бі зеб уаї те с1о сп ї80 185 190 деро5ек рух АВ Берг отвг тук Бек сен бек бег тТБе тен Тйгогеу бе 195 200 205 ух АТа Ахо тус бі губ нів уз маї тує дія сує сій Уаї тйсе нів 2314 15 | 220 бів бі бен бек бек рго Уа! Тйгосує бек Ре депоАга біу сін Сух 225 230 235 240 «2305 27 «2115 240 «12» РАТ (трупа захисної / радикал транслокації) х2іЗз2 Штучна «0 «223 опис штучної послідовності: Химерні моноклональні знтитіла «4005 87
Мет Або баг бій Аа сіп ма! цен Меї їец Кей їец Сем тгр уд! бек 1 5 16 15 біу тигосух Сіу Ар Тіе ма! Меї бЗекг бій 5ег рРго Зег бек ви Аїа 20 25 30
Ууаї век Уді б1уУ сі бує Уаї тйпг мес бек Сує їуб 5ег 5вг бій 5ег 35 40 45 цей о бей тує бег ет Ази біп уз Абп о тТук цей діа тир отує бій сів 50 55 бо іух вБго сту біп зек о Рго ув беу Се ї16 туго Тер Аза бек тв Ага 65 70 73 ва сіш зег біу Маї Рго Ар Ага Рпе Тйгосіу Зеб о1у зег о1у ТК Або 85 90 55
Ре Тйгосец тпготіє 5ек бег ма! цуз Аа сотий Ар вер Аа уа! туг 105 ї1о0 туг Сув біп сїй Туг Тук обего тує Рго беу Тйб Ре б1у АТа біу Тв цЦо 120 125
Сторінка уз цей о бтв Се) ву5 Аг так оУЗ! А1а Аїа бго бег омаї Рйе 116 РНе 130 135 140
РГО Рко 5ег Ар обі бій Мен уз бек біу Тиг о АТа 5егк о уаї Уа Су 145 150 155 160
Пец ве Ап Ап Рпе Туг о РГО АгОо СТИ АТа губ маї сій тер ої уз ма 165 170 175 дер Ай" Ай тен осоій Заг соту Абй бек бій ої 5егомаї ТК ств 1 180 185 190 дер об5ег Суб др бБег ТК о Тук век бе 5ег о бег їпгоБец Тпгогец о зЗег 195 200 205 уз Аїа А5ротук сій гуз нів Суб ма! ту АїТа Суб бій хаї ПТйеонів 20 215 220 біло оіу ен его бег Рго Уа! ТПпкК оіїубз бег Ре Ап дго б1іу 1 Су 225 230 235 2430 «2105 в «із 234 | щ «212» РКЕтТ (група захисної / радикал транслокації) «2135 Штучна к?г2О» «г2їх Опиє штучної послідовності: химерні моноклональні антитіла «ад» 28
Меє сів 5егооіп тб обеу маї вБе їТе 5ег т1е беу Гец Тгрогву туг ї 5 юю 15
О1У Аа Ар сіу А5п тів Ууді Мек типгобіп 5ег РгО суб 5ег Мет 5ег 20 25 0
Меє его ма!ї п1іу біш Агд маї тб о рей ТВ Суб Ух АТа бЗек С АБИ уУуаі маї пр отут Уа)! бек тро туго біп бій уз вто ол біп бек рго 0 35 во був цен бен ше тує біу Аїа 5ег Аби дк тує тТпг осіу уві Ргб Ар 65 70 75 що
Аг Рпе Тайг о сіу зег оту 5ег АїВ Тпг оАЗр вне тпг оїец їй ої1іе 5ек 85 90 95 чего уа! цух діа бій дер Се АТа маї Тук Туг Сує сої бій тукотут що 105 110 его тус рго бен тт вне с1у АТа сту тне уз бен січ бец суб Аго
Сторінка
115 120 125
Тигоуаї Аїа Аїд Бго о звг ма! Реве о ї1і6 Ре его РКО 5ег Ар от б1п 30 135 440 іеп уз бек б1у ТИ АТа Зего ма! Уа! Суб цец ей дев о Абп рве тує 145 750 155 160
Рга Ага Зіц Аїа вує маї сій тер бує уаї АБродей АТа цен сти 5ес і65 170 ї75 су Акп Бек сів сш бегомаї тк сої біп Азробек ух Абробек ТВг 180 185 190 тує 5ег сей заго озає те Се) тб Бей 5вг гує Аа Абротує бі суб 195 200 205.
НІ ух ма! туго аїа сСуз бі жа! твгонів бій о1у еу б5ег о бег бго 210 215 зо уаї тт цу5 бег рРнНе дп аку сі1у бЇУ Суб 225 | 230 «105 29 «115 117 жеі2» РНТ (група захисної / радикал транслокації) «еїїз Штучна
У | І «23» Опис штучної послідовності: трансляція продукту ПЛР «а» 29 вів ма! бій рецш сій бій бег біб АТ сі бе) Меж рує рко о1Уу Аа 1 5 10 ї5 ек уа1ї Гуз їі бегосСсує суч АТа тТайг ос1у тук тпг оРйв 5вгозвг о Туг 75 30 ткропе біш терзомаї уз бій АР Риб СТУ ні5 б1їу веб стю тер хе с1у бів ї1іе сей рго піу зЗегобіу бЗег тВг дп ту ап обі уз вле
БО іїу5 сіу Куб діа тйг Ре тк о АТа А5ротик беговаг Ах" ТНг о АТа тує 65 70 ТУ 80 мет сій беу зЗек о5ег ер тТвг оЗег СТО Ар о 5ег АТя та! туго отук Суб 85 90 95
Аза Аг Ту АБО туго Рго Тгр Ре АТя Туг тгробіу їй біу Тр оБен 100 195 115 сторінка чаї тпг Ма! Зес Аа «ій» 30 коїії» 118 «ТіЩ2з РКТ (група захисної / радикал транслокації) «13» Штучна «20 Й . . «ва» Опис штучної послідовності: трансляція продукту ПЛР «4005 30 ста те біп гей ма! Єїй 5ег о с1іу Рго бі сей був г ує РгОо сіу бій ї 5 10 15 таб Ууаї вуз І1ї2е зег Сує губ Ата 5ег бу тує Тр овне Тпг Аби Туг 20 25 30 сіу Мет д5п о тгр омаї уз біп Аійа го о1у уз б1у гей уз тго. Мет 315 40 45 о1у Тер ї1е А5й тає ОА Те біу біб Рго ТВг оту Аїа св ої Ре 50 55 бо їує« сіу Аго Ре діа Рпе бег їви сш ТВго5еє Аа 5ег тпг Аа тує 70 75 80 івц біп т11іє Азй А5погед уз Ап бій Ар отпгоАТа таб о Тугє ве су 855 | 90 95
Аїд Ага ве с1у РНе сіу Ап Аа Меї дер тує Тгробіу боти су те що 105 о бек уа! ТАК Уа! бег 5ег 115 «2305 ЗІ «ії» 116 «2125 РЕТ (група захисної / радикал транслюокації) «2135 Штучна «20» хег3» Опис штучної послідовності: трансляція продукту піль «400» 31 біп Ммаї бів ге біп бій б5егобіу АТа сій бен АТа дго Рго б1у Аїа ії З 10 15 бе уаї Гуз це «ек бух Буб Аїа Бег бу туг Те рве Твг дев туг
Ж вдкя 30
Туг їв А5п отгромаї Гуз біп Ага тт обіу біп б1у ен оту тго ї11є сторінка сіу сі Ії Туб рго біу бек біу АЗИ ТНК о тТуг Туг АБ сн Су5 РИ 30 55 50 уз с1у уз АТа тт огей тс АЇа Ар губ беє 5ев б5австне АЇА тує 65 70 75 80
Мет бій сей бек 5ек беи Тг бек Су дер вег АЇїа Уаї тує РНе Су 85 90 35 діа Ак бек тує сіу АЇа РНе А5ротує тр лу б1п оту ТВс оте ей 106 5 ло
Таиг Уді бег 5ег 135 «гі» 32 «із АС що : «212» ЕТ (група захисної / радикал транслоканії) «213» Штучна «220х І «ФеЗх Опис штучної послідовності: трансляція продукту ПЛР «00» 37 сіп ма! сій бе сій бій Рго с1у АТа біш сед мзї Аго Рго бі Аа 1 5 10 15 5ег Уа! Суб бен обег бух губ АТа Заг обту тукг ТйгоРйпа тТиг бегботуг
Тс Ії АБп терома! бу сій Ага Рго б1у біп сім рей бїш тро от1в 30 45 біу Ахп І1е Тут Рго бЗег о Азр Бек тує ТЕР Аби ТУуг АЗИ б1п Ку ебе 6О0 їуб5 др вух АТа тиг реп Тег оуа! Ар Кух бек бек баг тк Аїа Туг 65 70 75 о мес сіп гей бек бек Рго тнигобек обі) дер 5ег Аїа уаї тукотує бух 85 90 95
ТвгоАгса бес тер Аг ої1у Ап баг Ре дер тує Тер оіїу бій ту тег 400 105 10
Тнг осей тйгоМмаї бек ву 115 «Ох 33 «кії» 18 «212» РЕТ Сгрупа захисної / радикал транслокації) «ої3» Штучна сторінка
«дай» жива» Опис штучної послідовності: трансляція продукту ПЛР «4005 33 біп Уа! біп ген біп біп его біу Рго стх їеу уаї 1у5 рго б1у Аїа і 5 10 15 бе" Ма! Гуз мес бек Суз вуз АТа 56 біу туго тТиг Рйе ТйгОАБротує за
Уа! Іїе бек тгромаї був біп Ага тйг обіу біп біу еп ай ткр пе 0 45 сіу бій хів Тус вго бі 5ег біу 5ег Тег тТуг тус дбп Ту Гуз ве бо
Гуз біу уз АТа тб оіїєш тйг АТа Аврогуб бегобег Ап ТВг Аа туг 65 70 75 50 мес сіп рец 5ег зег беу тиг 5Зег біо АБ зег о Аїа маї Тук ре су 85 до 95
Аіа ака сіу Маї Геш ген Аго АТа Мек Ав тук Теробіу сіп біу ТНг 100 105 о б5аг уаї ТНтг Уаї 5вг 5еї 115 «2105 ЗА «її 190. »і25 РЕТ (група захисної / радикал транслокації) «2131» штучна «2205 «сі» Опис штучної послідовності: трансляція продукту пле «4005 3 спо уаї ніє грец сів біп бег Ф1у Бек бій Гей АгО 5єег РГО СТУ Бер 1 2 10 15 зегоуаї вуб бе Бек о буз Гуз д5р о Рпе Ар бек сій маї вве го вбе ий Б 30
Аїа тує Межх бек Тго Ті Ага біп вух го біу ні с01у Ре сій тгр 35 40 45 пе біу А5р о І1е бей оРго зег ї11е оту Аг таг хів туг б1у сід ву 50 55 бо
Рне січ А5р мух АЇа ти гей дер АТа Ар о Твгоуаї 5ег доп о тиг АїВ 65 70 75 80 туг цен бі сей АБ 5екогец тб озер бій Ахр бе АТа тів тує тує
Сторінка
85 Зо 25 суб АЇа АгЯ сім бТш біу туг 01у АТа го РН Аїа тує тер осіу сій що 105 що су тт рем уаї ТБг Ома! 5ег АТа 115 120 0» 35 -1їх 313 «212» РЕТ (група захисної / радикал транслокації? «213» Штучна «дДх й , «03» Опис штучної послідовності: трансляція продукту ПЛР «4005 35
Ар тіе маї межб Тк сіп вс вро Звб чай ву тк Уа! тнг Аїда оту 1 5 10 ї5 сіц у ма! їйг оМес бег Су Гу бег 5вг бі бего сен їв АБ Зег і 20 23 30 оіу Аза бій оцуз Аби туго веб те тТгротук їй бій суз го 51У вій
Рго РгО Куб Сен цем Ї1е Тук Тер Аїа бег ТИг Аго бі бег СТУ маї 60
РГО АброАКО РаЄ ТЙгосіу бек С1у бег бІіу ТИР А5робйе тЬгоцец тає
БУ 70 | 75 о жів баг озеє уві біп Аа біз дяро без вата ув! тус тує бує дій Ав 85 в) 95
АЮ отТук Бек отуг РгОо бе тис вне сіу Аза СТУ тре був ре су гей й 100 105 ца
СУБ
«2105 35 «її» 106. . «12» РКЕТ (група захисної / радикал транслакації) «213» Штучна «?2?О0х шо «веЗ Опис штучної послідовності: трансляція продукту ле «А» 36 сіп її маї бе таг ота бек Рго АТа їТе мебє бек лів чек рго су 1 5 10 15 бій ву ма! тигої1Та тигоСух бег Аа Бек бе бег ма! бек Туг Мей
Стертнка
20 25 зо ніз тгробве бій бій цу5 Рго с1у ТВео5ег о рго Суб сви стер оїТе туг 35 | 40 45
Баг тнг Зег Ап о мец АТа бек бу Ммаї рРгб Аа Аго РБе бек сіу зе 50 55 бо сіу б5ег о1у Тйг Зек о туг Зег їец тпготіе 5ег дго меж бТо Аїа біо 65 70 75 50
Азр Аїа Аїд те Тут туго Суб іп біл Аго Зеб зеб Тук о Рго РгГО ТНЕ 85 90 95
Рне біу б1у б1у тиг губ їец бін тів Куб 100 105 «210х 37 «2115 107 «212 РЕ (група захисної / радикал транслокації) каії3» штучна «220» і «ва35 спис штучної послідовності: трансляція продукту ПЛР «ВООЗ 37 дер І1іе маї Мек тнг біп обек біп Гуз Ре Меж бег о тТйг обег уд! сіу ї З 10 15 дер Ага уаї бек ї1е Тк Суб суб АТа 5егобій Ап оУуаії Ага таб Аа 20 0 ез 30 чаї Аїд тгтротук біп оп губ Рго б1уУ біл о5ег о РгОо цух АТа ги їв 35 40 45 туг Гей Аїа зЗег А5п Ага Ні ТНК осіу Маї Рго А5р Аго Ре тик б1у зо 55 бо чек бТу Бек Ф1у Тег одер РНЕ ТВ о геу Тйг оті веб оди уаї бів бет 65 70 75 50
СИ Ар оГеи АВ Ар отуг рРМПе Су ви біп Ні тро Абп тує вро цей 90 35 тТвРоРНЕ с1у бу о1у тигогУу5 сен бін їТе Суб 100 105 «г» 8 «гії 3. «2125 Вт (група захиєної / Бадикал транслокації) «213» Штучна «его «2235 Опис штучної послідовності: трансляція продукту ПЛР
Сторінка
«400» 38
Азр Ії Удаї Меї 5ег сій бек вго бек бвг іви дія мУаї бек узі Є1У ї 5 ід 15 сій ух Уа! ТигбоМмеж зег о Суб5 їу5 его бек сій бек оівеи гей Тут бе 5ег Ап біп Гуз ап ТУЄб Се Аїд тго тує бій бій іу5 ргсо оіу бій ши 40 45
Бег рРго Сує ей цец ї1е тує тгроАїа беготйг де сій Зегосіу ма! во
Рео А5р дго Ре ТВг о біу 5Зег бу 5ег оіу ТЯг др РНе Твгосец ТНг 65 70 75 о їТе зег обер ума! вує Аїа бі Абріеу АТа Уа! туп ту суб сля сій 85 90 95
Туг туг 5ег туго Рго ген Тнг впе біу АтТа біу ТвгоГбу5 ви іч ге 100 105 що сух «2105 39 «гі15 3 ! «й4й» вт Сгрупа захисної / вадикай транслокації) «ЯЗ» Штучна «2232. Опис штучної послідовності: трансляція продукту ПЛЕ «4002 39 дер їїе Ма! Мес тТакобіп Заг орго бек обек осей Тит Уа! тйг Аза Є1у ї У 10 15 сів ув уді Тие Мес бег Суб губ бвг ек бій бЗег геу їеу АБа бе 20 ев 50 бу АБ сій (уз АБИ туго Сей ТВе тТеротує Тв сій сухо Вго біу бій 35 | 40 45
Вго Бго іує бец зей їїє туг тгроАаїЇд 5ег тр оАго бі зер сіу ув! 50 55 50 го АБр Ак Ре тб сСіу бек сту бек су Тиг одеровйе тк окец тег. 55 70 75 | що їїе бек б5ег Уа! біп АТа бі д5рівц Аїд уа1 Тук Тук Суб бій Ай 85 Зо 95
Сторінка
АБр о Тук бБег Туг РГО Рпе ТИг РМпе с1у Заг о б1у тик був бе сій 118 100 105 її
Ту «105 80: «2115 1123. с. «212 РТ «(група захисної / Бадикал транслокацті) «2135 Штучна «20» «223» Ойвсо штучної послідовності: трансляція продукту пле «400» 40
Аз ої1їе Уа! меж б5ег о біп бек рго зЗег 5ер сер Аа уаї бег Аза у
У 5 10 15 б фу ма! Твг Меє 5ег Суб губ ет 5ег бій бек ге ви Ази 5ег й5 30 дго тВгоАго Бу Ап отук їв АТа теротує боїв бій Бу5 Рго оту. бів аекоРго ух бен бе її ту то АТ бек тйг Аго іо Бек сту уві бо
Рго А5роАго РНе тб о сіу еп біу б5ег біу Тигодяр Рпе ТАК ген о тиг 65 70 75 80
І1їе 5ек бег Уа! сій Аїа бій А5р ей АТа мМаї туг туго Су5 був ста 85 90 95 5ег Тук Аби гей Туг Тиг о рпе б1у біу біу таг бух ву б пе ув 100 105 110 ке05 41 «115 313 «12» РЕТ Сгрупа захисної / радикал транслокації) «2135 Штучна его ще й й «веЗ3» Опис штучної послідовності: трансляція продукту ПЛ
Ар їІте Уаї Меб бег сІп бег Рго я5егоЗег їеу Аїа маї б5ег маї с1у 1 5 10 ї5
Є цує муаї ТАг Мебє его сСух Гу бер об5ег бій ек сви сви Туб беї 20 25 за
Бек Ап біп ух Азпотуг їву АТа того тує с1й бл ух его сту 51 35 40 і 45
Сторінка ек рго іу5 їец їеу Її тТуг тро Аїа б5ек тр о Аго піч бег о сТу Маї 50 55 во
Рго А5р.Ага Ре Тег обіу б5ег о біу бек Аїва тТбгоАяр вне тб рей тег 55 70 75 50 ї1е 5ег Зег Уа! біп Аа бій Азроіен ліва Ар тує нів Сух сіу оп 85 90 чу сіу тут бЗег о тТук рРго туго те вве со1у о1у СТу тег гу їво со Ії то 105 ло
Гук «10549. «11» 13 «гід» РТ Сгрула захисної / радикал транслокації) «213» штучна
Его» . «223» Опис штучної послідовності: трансляція прадукту ПЛЕ «00 2 дер І1їв уа! мет 5ег біп 5ег Рго 5ег б5ег цей Аа ма! бек Уаї бу 1 5 10 15 бі уз ма! Тиг оМеж бег о Суз гу 5ег Зег біп бек їву Бей Туг 5ег
Зек АБИ біп о гу5 А5п туго ме Аїа Тгротук бій бій бує вго бі бій его рРго Муз Сен цеч ї11е туг тер АТа бек ТВг о Ага бїц Зег СТУ Уа! 50. 55 60
РКО Ар Ага Рпе Тис обіу зег сту бБег оту ТйгоАхрорНе тс гей тве 65 70 75 о ї16 бег бЗег Уа! Гуз Аїд сі Ар огеи Аза Ма! Туко тує Сух біпо віп 85 90 95 туг Тук зег Туг Рго Се Тйпг о Рпе б1у АТа су тйг о бух ви 10 ев 100 105 110
Гу «2105 43 «?1їх 07 І хеїй» РВТ (група захисної / радикал транслокації) «213» Штучна
Сторінка
«о» І «йе3» Опис штучної послідовності; трансляція продукту ПЛР «400» 43
А5потіїе ма! Межї Тиг бій бек рвго ух бен Меї бег Межк 5ег Уа! сіу ї 5 10 15 сі) Аг ма! тик овец ТК оСуб гу5 Аа заг бі Аби уаї Уві Тр Оотук
Ууаї заг теротуг оо бій зуб рко сіб біб Зег о бго буз сей гео ї1е тук су Аа Бег Ап Аг тує тАгОЄТУ Маї Рго дер Аго РВе твг 61у ж) Бо
Зегобіу зег АТа тТвгодзр Ре тв їеу твготІ1е бек баг ма! вуз Аа 70 75 во сш А5р.сец Аза ма! туго тук Єуб5 бій сбіп туго тує 5ег о тує о рго Гво 85 90 95 тик оРнНе с1іу АТа с1іу Твгогух ге с1у їец був що 105 «2105 44 «гії» 15 «212» РЕТ (трупа захисної / радикал транслокації хгі35 штучна | І ких «ййЗх БП ЕТОЙ «400» 44 меб дер сій тТго бег тс сої Ар ре Тує Аи АБп о вко Уа! Ти ї 5 о 15 «2105 45 «2115 5 «їй» РТ (трупа захисної / радикал транслоканіл» «13» штучна «22 «23 ЕПІТОп «ню» 45 зег тйг обіп А5робей Тукс Ач Ап о бго маії ТВКоАіа Уа! РНе Ап 1 5 40 15 «іх 45 «2115 15. «2125 РЕТ (грула захисної и радикал транслокації) «243» Штучна «дах «пи ЕПІТО сторінка
«1005 46 цей туг Ап Ап оРГО Ма! тб о Аїа Ууді вепесАбпотук бій еіУу Зеу ї 5 10 15 «2105 47 «1 15 й «212» вЕтТ (група захисної / радикал. транслокації) х2г135 Штучна: «вх «вах ЕпітОп «4005 47 го уаї тайг Аза Уаї бе А5За тує бій бі їеу тео Ага бег Суз 1 5 10 15 «105 ав «Аї» 15 «212» РЕЖ (група захисної / радикал транслокації) «2ї3» Штучна «да «веаж ЕПІТТОП «400» 48 маї ене Ап тує сів біу це Тгр о дго зег су уаї дго 1 заг ї 5 10 15 «210» «9 «2113 15. І «2122» РЕТ (група захисної / радикал транспокації) хаї3» Штучна «вгО0х «веЗУ ЕпПітТОП «300» 49 біп фу геу Тгр Аг бек Су уаї Ага бін бегобег біу ре стиг ії З: НК; не! «210х 50 «21» 15 І «12 рат СгОбупа захисної / вадикал транслокації) «Ії» штучна «ВО» «БеЗ» ЕПпітоп «Юх 50
Ага зег бух Уа! Аг сій бер о Зег б1у Райе Тк обі Суз Ага сіу 1 5 10 15
Сторінка

Claims (8)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Спосіб лікування або запобігання раку шлунка, що характеризується злоякісними пухлинними клітинами, експресуючими СІГОМ18.2, який передбачає введення пацієнтові антитіла, яке проявляє здатність зв'язуватися з СІ ОМ18.2, в комбінованій терапії із засобом, який стимулює уб Т-клітини, де (а) антитіло, яке зв'язує СІ ОМ18.2 являє антитіло, здатне опосередкувати знищення клітин, експресуючих СІОМ18.2 за допомогою антитілозалежної клітинноопосередкованої цитотоксичності (АОСС), опосередковуючої лізис, де антитіло включає важкий ланцюг антитіла, що включає амінокислотну послідовність, представлену в ЗЕО ІЮО МО:32 та легкий ланцюг антитіла, що включає амінокислотну послідовність, представлену в 5ЕО ІЮ МО:39; і (5) агент, стимулюючий уб Т-клітини, являє собою бісфосфонат, і де бісфосфонат вводять пацієнтові в комбінованій терапії з інтерлейкіном-2.
2. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що уб Т-клітини є МуУ9Уб2 Т-клітинами.
3. Спосіб за будь-яким з пунктів 1 або 2, який відрізняється тим, що засіб, який стимулює уб Т- клітини, є азотовмісним бісфосфонатом (амінобісфосфонатом).
4. Спосіб за будь-яким з пунктів 1-3, який відрізняється тим, що засіб, який стимулює уб Т- клітини, вибирають із групи, яка складається із золедронової кислоти, клодронової кислоти, ібсандронової кислоти, памідронової кислоти, ризедронової кислоти, минодронової кислоти, олпадронової кислоти, алендронової кислоти, інкадронової кислоти та їх солей.
5. Спосіб за будь-яким з пунктів 1-4, який відрізняється тим, що комбінована терапія додатково включає введення засобу, який стабілізує або збільшує експресію СІ ОМ18.2, де засіб, що стабілізує або підвищує експресію СІ ОМ18.2 вибирають з групи, яка складається з (ії) оксиплатину і 5-фторурацилу, (її) епирубіцину, оксаліплатину і 5-фторурацилу; (ії) 5- фторурацилу, фолінової кислоти і оксаліплатину.
6. Спосіб за п. 5, який відрізняється тим, що експресія СІ ЮОМ18.2 спостерігається на клітинній поверхні ракової клітини.
7. Спосіб за будь-яким з пунктів 1-6, який відрізняється тим, що антитіло, яке проявляє здатність зв'язуватися з СІ ОМ18.2, зв'язується з першою позаклітинною петлею СІ ОМ18.2.
8. Спосіб за будь-яким з пунктів 1-7, який відрізняється тим, що антитіло, яке проявляє здатність зв'язуватися з СІ 0ОМ18.2, опосередковує знищення клітини за допомогою одного або більше із числа опосередкованого комплементзалежною цитотоксичністю (СОС) лізису, опосередкованого антитілозалежною клітинноопосредкованою цитотоксичністю (АОСС) лізису, індукції апоптозу й інгібування проліферації.
9. Спосіб за будь-яким з пунктів 1-8, який відрізняється тим, що згідно з яким важкий ланцюг антитіла включає амінокислотну послідовність, представлену в ЗЕО ІЮ МО:17, а легкий ланцюг антитіла включає амінокислотну послідовність, представлену в ЗЕО ІЮО МО: 24.
10. Спосіб за будь-яким з пунктів 1-9, який відрізняється тим, що комбінована терапія передбачає введення антитіла, яке проявляє здатність зв'язуватися з СІ ОМ18.2, у дозі до 1000 мг/м.
11. Спосіб за будь-яким з пунктів 1-10, який відрізняється тим, що комбінована терапія передбачає введення антитіла, яке проявляє здатність зв'язуватися з СІ ОМ18.2, багаторазово в дозі від 300 до 600 мг/м-.
12. Спосіб за будь-яким з пунктів 1-11, який відрізняється тим, що рак є СІ 0ОМ18.2-позитивним.
13. Спосіб за будь-яким з пунктів 1-12, який відрізняється тим, що рак шлунка є аденокарциномою, зокрема, розвитою аденокарциномою.
14. Спосіб за будь-яким з пунктів 1-13, який відрізняється тим, що пацієнт є пацієнтом з негативним статусом за НЕК2г/пеи або пацієнтом з позитивним статусом за НЕК2г/пеи, але не придатним для лікування трастузумабом.
15. Спосіб за будь-яким з пунктів 1-14, який відрізняється тим, що СІ0ОМ18.2 має амінокислотну послідовність згідно 5ЕО ІЮ МО: 1.
а дів хіміотералевтичних завод, м ь Дія хіміотерапевтичних засобів що тодунаклнинний цикл Є (72 год) на кпітинний цикл КАТО ШІ 524 години у середовищі 160,00 . СЯ мес 100,90 сей ва ! ! Бо 5 Б: МО : і СВО; Ка о : тя вою ЕЕ: воло щі щ ; Бе В і ШЕ. я : му Ве Зах Й Н Й х Ко ЗВ й ев | ЩЕ. во,оо | шин о х я іі о Е і , В «ВУ о а ! й ЩО о м З: СЯ " х ШЕ с Я Кі : я о. чо ВС 15 я 5 вові В В ! м ше : сах | ; Ме Е Ж Й Ї Бен 1 пе Кот ; ту 1 і и золи и ЖЖ ше МІВ : пф 23 Бе о ЕЕ ше сеї 20405 ЩЙ ох п : зі й КК таж ек й: сн й я БЖ : й кл Я Ве КИ ! кс по Божу п Са Та Кая Ко. З чи шк В Є дея ие Шо ШИ ---Жой 0,00 Я пен Не (Я. ОЇ однина Обама с о8ббнима 1 би оо У алайлвцін Обнглял 1 Ббб ном ЗО нема і т Й ГОВреДОВ вв оксайлатині елрубщин 1. ОК | о и У ; доні і ри а в а о пода ПИ рн нин чи нн Си т а п п а песо Ра В уУ5 8837 1 Вб | 60,33 і пагуй-тваз 1 оби 0 лаві І Баг м База 5ІБЕ ! знос панни пи прое и про рве ми причин нн учи пику чить екв пив С пн повер очи: ни У Коли кою ливо и но чн Шан ОБО ВоМ: ОБО 000330 0988, песо в в ее и аа НИПОМ вів ї 8340 3 се 00 Заля | ве 1 86 й Паді-фоза Го БР Сава: ой?! са8 0103827 Фіг 1 щ ІМАВвЗ3б В ізотипічний контроль З с вену мор : ; руб КЕОЕ середовище Юма ЗА Од псом оковліплатин о 409 як/мл епірубіцин їй Фе годин Зб годин 96 годив Зв тодин Збтодин Оу фін риття вишня Доп токняніннн, Дек онженн же откжженннноя з І Ко | | ; щі "ше ше | Кк | Ко у ши ик ши ше Я: Код: ни и Ян ВІ . ши ші и нн ни и ОВ о пок - я ша я Б о. ше и ше и й І ши п. ши я шш- т. тка | : СВО ОК я: і ПЕ: є 3: : ї до ово в: 1 Пеонн ко ! | хто ВВ І ово ве і дію АД й ЩЕ | | шо. ШО І аа її слевщ "Кан : і а с ШИ 1 Г я Кв. ї ' Кн Кк СВ ШНИИ: 555 (НН ! і ів с ОЙ Н и ЕІ | ЕН і : Ся о г и уко ЩІ ДЕННА : Ко в -- й. Я НЕВІ Ї лй, Ши і 40: лох 30 1861 402 303 405. 405 Я зо ния ото 105 яра 105 жо лах зо я печення Яців я тат 100 пма, АК БИ змов оксалати НЮ пані епюубіцин ОК З тодини д в за, З Що й 72 24 години ТІ К24 години ТЯ ня одини ТА ка4 години ОВУ нер претнннентяттнннннн ря пи нини чи НЕ : Уч і й ! ях іі ій жан пи че й і м і и: і К НК: ШЕ ПІ: Я в. Но й В НІ З ЯН Й ЗК Я ! Не Це шо ши ше е ше і ш й 1 т Н : Ма 1 Но Ї зе " Н ЖК у а ЛЬ ши нш шишшшиншши; І ! Я, | ЩЕ 20 АБО ША ШИН сс Я Из НВ 1 8 АБ. Мо вв НИШОя МК щі 1. Я: ех НС Я г МЕ шк ШЕ і ав 1 ен | ї ін а. Яни ЗОВ хх ИН ВВ УК се . о Как ї КлвоАх нс БИ дао Я 402 403 30 лде т ям гео р чат чох зо ох чо 4 Яд дж чо 4 01 чо ни не нн Є іпів 2 зі ; Іамаїпів Фіг, 1 (продовження)
з ки З її З З Б в» ш к сне Й о шк оосся б ж г ЖЕ КАТО о їх а о ф- ЗЕ000О0. мк сш їх. в І Е зо00оз |. сромів.2 | же: фе ЯЩ я ! Я Й ш г акті шик во 200000. я ГІ і ВКТИН. ремепдван тва щ - 5 ї : нин о . гі дів бос ти тій ОО їн . відносна інтенсивність
Фіг. 2 Шлдвзва с ізотиничний контроль без обробки ЕОЕ то 100 нн Я т сн 100 т. - Н ї Ї ЧЕ її во | А | ве г ше о ж 60 щі Бо | Де бо | я З 5 а Па юю жов пи 40 | "ох ШИ в Ай 5-2 | зе Ї з у: Бе У | ! Дн і : г ЕТО, 20.4 ев ше бек Ї вен дв | п в й ов 8 нн ВО рес сво ТОЖ о яЯб її зоб ояд ОЗ Яр лоб Я яд: ор 40 яння Сіаодіп 18.9 100 дренннянннккутяннянннтих 100 т ів т А ! дю | во | В во ше а ! А Її 5а ! ще яко ї ! Р с га щ | ду ще З Ме з ше пек ий І шо .о о В» 2 іно Ох пе з однак І не в ОВ Кир ах ШО ! 101 405 403 Яд то8: жо об 403 30405 461 402 305 06 пет Сава т8.2 Н : . В Фіг. 2. (продовження)
100,0 Я я ще гав шо Ї я ї Й : Й | й : | БВЩЩ ШЕ ВШ яз в 8005 ! й . ре ще ЩЕ. шк що ж Е. а і ще В 200 я ' шо й Фе й --Я Я... пн ссстю-- й -- Ой ненха здуйнийки Звпмя о йбноми середовище іринкотекан іринотекан ЗОцетаюсея доцетаксел
Фіг. З то 5 , Я вчу в. ря 823. МАВЗО? 144 о Й" ря що БО Ох МАВ 0 804 Моя ї2- 03 Ди -Ж ОК» МАВОВ? т . г СУС ші РІ МАЦІЯ? що Ко во-- ; ; КІ г й ; КЗ вв Е 5о5 М; хол З ШО; ОО де 55. М ке Й їх м ОО. и х 30 І. 0-5 ЦЕ Е г Ф г пя во. й то / й 0.3 оо іі во ЖК ва с-ще У во як й оз в | вл и Падло Її пн 8.0 пет -40 т ї 10и 105 З ха
0. : р Пт тя -0 вх - я ж вк ж в В ІМАВЗВ2 (нг/мл гл; М: 8 сі 5 а Е Ж «
Фіг. 4 Е:
а 120,00 5 ОО | йно шо й ж я г щ- і : в восо- ШИ І І Най іт й ; «Кт й - ее 6000 бю Ж а бо» 1 кін Ой з т мли СЕЗ Я мк кош 400 - сок ще щи до Е | В Б В дня сша ЕЕ і
0.00 ЯН су - ЖЖ р БЕ сн середовище іринотекан доцетаксеол цисплатин Ж середовище іринотекан доцетаксеонп циспзатин Е вто - ш-е : нет пес вання й В! ін | х і - ї А а і о. / ї. й | й в Й : : їз і ду | їі гі КІ А ШКО Я; т
А. | шк і ді и В я В В - ві я . У а у дих В В! . Й син МНН зб ци зу неи лое за зах то яв зо 0 ох 103 0 не Ки я 40 30 я сСладаіпів. г
Фіг. 5 ІМАВЗ62 ЕС5О ДОС кю ЗО . г 5 -- й Зоо Ж Во "й ї Бе й дп і й й 2500 ЗВ в я т | в З а, - ТЕ 5 й ї у «Ж 00 Ф ! ї й я о т Боді Я діої о, В І е! у / я середовище 1000 о о не й (1 Іринстекан А ВВ щі ще А я 503 КЗ Я . Цой доцетаксеп З ву : а ; і кто Й ; ФО циспвратим в т С : ік м : ши ; й ' і ЗА 19 ї 10 середовище іринотекая доцетакови: цисапатим У -203 ву концентрації (нгімпі
Фіг. 5 (продовження)
40- яз. ІМАВЗб2 Яа- Зотипічний контроль ек --- ІМАВЗ82 я АЕН КОХ а і є ж - т. зок -- З) шо потипічний контроль Р Кк ОК ка т ? Ж 20. 29 що ! як ре | с 8 е 0 ня | ! - х 10: - ЖК ло -В- й й - лях Н й З ще 4. : А; ке р и Щі пий У о тин Й щ п . 4. ї п Ї я і -10 103 1 105 105 іса концечтрації ІМАВЗ36» (нг/імлі
Фіг. 6 а 5 5000 й к - о ікАдіБ2 а а д ж КОгГ оМмава в ту сте жо кб кцалнза? поро х і оо жим. т - що Ко с Я з А в т, Ж 3000 - Ії ка 2 Ти да питною ще й 20004 ння панни Ф їх . / 1605 ; 8 б й ж. де | й о І у - ма зи е Е їх «є ї І 2 В о що р їЇ З |» т їй - « « р. Е 5 х Я Ж я г прш -е Елвін стада допо тю Коееячетеєтист, це о їаї 19 т: ве зх
2. - щ ш АБЗ ном
Фіг.
а Пь-2-запевжна проліферація ВМО іп унго р 2А:звпежна проліферація ВМО іп чих що 5.ак1о7- вок 1 й ч. і 5 о Ша я щен х и в К Га Шй ро ВІ (ДАЄ ЗВО імп йо й сей за ЗО ИАНЬЙЇ К я х ГУ я - нада? Ко , «Ж так. НО (АЗИ мл Я о ; і; ОПЕК Ж поет" ІЙ нд й В хан їЇ ЯЗ(еТАЖ 2 В КК тв ан КІІАЄ ЗОВ ЦИ О 5 й/ 7 вка ше пе Ж, ш | ше я ие ке й во КІВ ЯК , ій ж ях еВ?) ЗЛО фе МБ соте ве БУ (ІАУТ ВИМИ) ЗК ут й ф- З - ція 1-2) т 8 -е» д3фдінивЦМті Ше тен УНН о ря третттннятттн о омомои пина анн І Я КБЯ 15 Гч 5 10 15 дви дни
Фіг. 8 у Як Токлі і и й а МОДНО Т жлітини р СОТеЕуучува т клітини Га Збагачення хузува Т-клітин. лова . через 14-днів: Зо; й о і й Б т 8о а 1 уч -- С га г - сл к | зх до сао - Еч г во. й з. Кя вв. «р - В : В | ї: . т 5» та щ з ще: Й- а? те « х Б. а з ши бук Жов т во і в ви зві ха 2 з в та? І ни 5 1 - в - 2 Й з ! «, ж яп прі ж Ї ї иа і то ре ис 1 , с ща а п 2 Кая роопвВо а з о 2 Ї бін вв А еефкрвни--- ВН дЩЯ я певно нини пн гамою Мої оАйСЮ ВМС» зно? ЗЖАЛЬЯ ЗНОВ ЖТАЙСЯ 00оЯНеР ЖІАННЯ, девь о день 14 день З день т4 у м нан АВСС ври використанні ЧУ т-клптивлта ІМАВЗО? на МУОС-А Срівба мук уда Т-клітини й в рон . ре шо: 426 їк ско дж і р ще й й - КЕ ра Вр го й а - ЩІ З дов бо Ю «3 КЕ : ПО т сен че 5 Ви 2 Во Ян це ке що М иа нм Я НО в Е о, Фо і | Я З ! Е ле. ї т во ня і 9 Ір в Ф не ев вх СЯ К ! / т ен В | х й, З Ве в | з у "шИше І ТИ о 5. у т Пе КЕ | є Щ/ по жавАЗР ДИМ НВ ! | І і ! | ' зе що НИВІ ї | шин п о и о й; що закетванать а і ме НИ вугле з; Ї Й о Ци ЗИ І: НЯ М ЖЕ | М / т оожлАЖІіВО МАН ї Ї З ЧОМ а ви пл. : 184 ій салі ут ши шт | Я з банні дня виш ве гий лети -й ві ЕН тт пдетнннннтутитння птн тт ниття ад: ще і8з ії данор щі донор доноб 3 донОоЮ во. ІМАВЗбА|аома"
Фіг. 10 а Моноцит-залежний розвиток МУЗ Т-клітин шо 90 В Й ! - З Я Ж го в і » . , ! з ; ово 5 в. є ! х Зоя Е х о й Е ІЗ х їй І к Е ж го Пере іх ШИ со, . І зо С т ге тс у ог ог толоку гос ер огу 5 ово єю шо шо ш ші шошо ве о ша ага пк в БЕ ШО ЩО ще х і вна пав йо ам вт Кожож ож ож ЖоосЖ вн ше ше З за ие яв ох Ж Ж хх ож ТМ в експеримент есперамент експеримент З експеримент А експеримент й: я йо ци Я в. т Цитотоксичність УУЗУбе Т-клітин, Де індукована 2А-активованими лініями ракових клітин ЕЕ Е 60 Ей «і 5 Г Ф - ховав: Й б іа ЖЕ га , Е шо 29 є Ж тр че і-й : ГБ) 5 зни лин знан мини зиттлння пл лок Й Е ЩоЯб Рон? ші як ен йо донор В «А Жид -ХЇА ЧТЯА ш нжчжчачаечжчнчанананаат ють ав і Мас: 4 СьЬВ1о3 с Проліфевація МУЗУБО Т-кпітин, індукована 2Асактивонамими пінідми ракових клітин 583004 Й ЕЕ Ї Ж а ї - КН ! Н і і ою ЗУ Е гі ! | ; Ж жо 1 | ! Н їх й шо ! 5 ОА ПИ ФІГ. 11 51 ОНА з ї ШО пане віннні ї ШЕ ЖЕ й НОЮ Я - НО - В1яХ донор'я А ОЗ ЖА ОА САЖА Ос-Я сомоЗ
Типи клітин чо МК клітини ШИ ОУ9УВО Т кпітини 50 в я ! е 50 я і і й - і - Я Е 5 7 В ! що | ! . ї (КЗ: їх М ! 70 | ЩЕ НІВ Ще чен й З ; і тА 2 Кт Щ. . в-ї : шшеЦяЯ ЛО ЖЕН НО мере в Це 12345678910 1234567585910 1234 5 6 7 6 9 10 злейкоцитарна плівка РВМС5 - МАЛ -2 В ЕАЛЬ-2 день й день 4 день їй Фіг 12
ХА. ндукований позвиток БАТне- юдукований развиток ве Муд ка ЕМ кпнНно я цитовітичних Му ува СОЯ і «в ЕМ клітин й 4 й. я жі тв, шо! 7 ; Зв. « Е о й ке ді «; 2 з е | "я? Ге дех ок ті х т ще 7 зїж їй пе й : й п в - й " г : й - їй ч ва - пе 5 7 В ів о Бьд сшиа бам ІЙ кишжижинииь житі Ж є Ж Ж ж я 5 я я Ж ж І І ЗІ Я Ся 0000МОьМмня 0 ЕМО сна боже прах лю сах шщакид ї Ох у пк пгт Гени ОВУ кА. шо б а ЖАТ-2-ндукована. СОТБСОБЕ пров зе експресія в. СЛ ліМфОоцИитТах ТАЙ «в ндукована нахопичення і «нитептичних Му мо» сю 5У ТТ» квітин 9 та за Б в і Ж | 5 й Щ | ; В 33» У жо - -ї що На | 5 і! я» 1 я І з ка д Н т -к вон ж і а жу Я і ОО це що шар й 2 БІ зв го -- в, пе ! 2 ей 8 ще їх 8 і, Кі ож 2 я Й шт з о ЗА ооахсвжо Ко х й о -рк СД 2 х а я х й я ЕЯ а А кий За ож кю соя вав» скоти 5 ва В а ох ФАО ОВБУМА днк кнкккі кі хна НК шо я "З В 5 я в що ваМсе «ВАНІ хг а: т о т СПУ КЗ СЕ се ораюю СОох ПО вк клітини Фіг 13 дя чек «а? у н. к Ф ден вка ' й з що т зов иа - .. «о бери с ЩІ й Но Ж ою М бо є х во . ШІ Щі ПИ А а : 923 їх . з 1 га ! 5 : З " пре б щі уд у з міна Й Е в І |; жо ягода нУВ я КЗ Б р може ІМ "ие за ши ние ие и ст яка ПАН яна юд ММАВЗБУ концентрації: (Неллі
Фіг. 14 а е : що / і в У в у ше. х 80 ! Й в 6 М мМосСЯ ою / ЖОВ КАТО НІ ся і У ЩІ ВКА Ес У) ; « ща МС В Їй а ВХ КАТОН ща й - а з ВК ги щи - її Й т пе жк я. й І ре 5. ре Й А. Ко я за. з Кік ІМАВЗ62 НОМ о! Во о дк // ко и зі Я з / і, / е РВМО бо: о У, й К, з МУВУВа Туйоте ау б й й ЗО ИКНЙ Тклавтиу ТЗ ще Уа я МІУ Пенн ву о за во че ще зр» ІМАВЗОЕ |нумл!
ФІГ. 15 і 109 й Ки В / «о : Ек 20 деньій я. еКАТОог ; з ЖАЛЬ? «ТСВІМАСЯ че» зе ем ча: ІМАВЗ62 (нгїмлі
ФІГ. 15 гАЛІ-2. ТАЛІ-ОБОК| 0 ХАЛІ-245-ЕШОХ ї їх | | КА І й ; ; Од ши Її й ше І А щ г ро НН ши мч ія и щ пиши шин нн ле га я ій Е; і іш І Що. І і К ик й І й | Е в 1 / А ! | | й С і | / ре М «я х ох і Її З у й Анкети ще. я дерен а: пумивЕ ши М ше шия нет 1 за" т їв" ня «ев 0 зв? пд! че пе По ро лай б" нин незафарбовані: ізотичний контроль
Фіг. 16
1000 м осла ї- т 600 ще і ПИ: півнів В дктікниіавніовонісн г ж з? м ес їх.
г. і о Б ш ко ц с т шої 4 зображення 24 І Ме - чав одини. 120. годин Мач- 1 Цех В НЕ хи «Ко прк Ко МОВ фея пе ОС ЩНИЙ кіш Ши . й 0. п з Б Аа В. "й ОВ. о» о. Ше Б еВ І у ку таз ж т
ШЕ. ЗЕ ща Бе. щі чи. с. виш ШЕ ся о. Ж ій НАУ до пря сх ВН. КАШ Я Ж о - ЩЕ 5 в ше и ва чі У УК ЇМАВО62 рітуксимаб трастузумаб ІмАВІ3б2 рітуксимаб трастузумаб Ефективність Гесьврютя смуга ІМ З ще 5
Фіг. 18 шия
100 рин | що І "я ІМАВЗб2 о «/« |зотипічний контроль ії . ЧО Ковтроль фізрозчин їв і. тез Й Ь п ! і. 504 І Фа
Б.Я ІБ « ея І ! .
-
й. зв ' фо Сех ! а 8 ді о 50 100 150 200 250 Дніпісля інокулювання
Фіг. 19 то ее: ІПМАВЗБО те «ек ІМАВЗбХ «К ІЗотипічний юднтроль. зв: Контройь фізрозанн: е «о Жоніропе фізрозчин і н Е 5 Є; і Е 35. шшще : шк : що з щ т е ч й Е 25 ї і: ов ження ткання, : І: ї з б що шк о З нини знаних повна зання о 40 80 129 16о 000 йо 00 00В0О 400. 320 аб чо Дні після інокулювання Дні піспя інокупювання Фіг 29 а Ь 4206 о вай оо ; яко імАВОВХ « пд о З Р ти цк 5 ж її сеефусснфу я во03 / люту Б 4000 Ода АХ -оо- ще Ї м -О Ковгропь Е о шк Її г і ІЧ й о Х Бо й 5 о Б ря і. ге нан 2 Я зи т 5004 пд А З зоб т 5 жк їй о о бегвії о : : в мак пив: дивани лин ся Ф ю Я 9 5 0 35 29 25 а З ГУ З Дні піспя трансплантації пухлини я х є В Е ж 5 Ка Е я ЕЕ
Фк . - (сі
Фіг. 21 е ЖЕ (2 х : і і «ж Контроль (фізрозчин) 5ов НВ Отя о в «а- ІМАВЗБВО , - ч я - - Е 50 1 та зи е Ске ЖХ або Ж Е , - г т І: т Го еще . ї й - г, В я 390 Го т ХЕ Н - й я з
5 К. й р 49 пня У Ще Е: Ь и 2 2 100 . 1 їх і (й х Но ситний рентою ЦІ 0 29 38 43 0 2О 40 бо 8 190 - Дні після трансплантації пухлини Дні піспя трансплантації пухлини с Фіг 22
100 , хе БОБ Контроль (дхзрозчик во н ! Ск те БОБ є ІМАВЗБІ - с «- ВО ї. 7 500 се ОВО ; - й Е. с х то, Ф х 40 іа з бо ви ї :
щ -. ї вою -- Й гав Я З піди? 5 Е йння 200-Ї.. ща С! ' Пре т Осяки г- за ' ї 100 ря не і о : о: ; се о то 520 30 40 50 60 о 29 40 65 80 109 Дні після трансплантації лухлини Днігпісля трансплантації пухвими
Фіг. 23 а Ь 00 й 100- й НИ Н «Дю ЕОЕ я Контроль (фізрозчин) 250 | ще --к- БОБ 5 ІМАВЗВО р ! 5 ВО М 2 Гая І е
8. 296 Ще гЗ ї х т аї а х ! З з 50 ; З ; р З ' 150 М ж ' г : ; ' їв - я нн ай пе у па Б тт З'аают жу г ' - Е т сю і - а 5 29 їл : і ХЕ ! ' вно о доннннкінтовення 0 18 І ЗО 40 0 20 40 65 Дні пісня трансплантації пухливи Дні тепя трансплантації пухлини
Фіг. 24
UAA201413807A 2012-05-23 2013-05-21 Спосіб лікування або запобігання раку шлунка UA115985C2 (uk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/EP2012/002211 WO2013174404A1 (en) 2012-05-23 2012-05-23 Combination therapy involving antibodies against claudin 18.2 for treatment of cancer
PCT/EP2013/001503 WO2013174509A1 (en) 2012-05-23 2013-05-21 Combination therapy involving antibodies against claudin 18.2 for treatment of cancer

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA115985C2 true UA115985C2 (uk) 2018-01-25

Family

ID=48651960

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201413807A UA115985C2 (uk) 2012-05-23 2013-05-21 Спосіб лікування або запобігання раку шлунка

Country Status (24)

Country Link
US (4) US9433675B2 (uk)
JP (5) JP6203830B2 (uk)
KR (3) KR102514338B1 (uk)
CN (3) CN107412773B (uk)
AR (1) AR091131A1 (uk)
AU (4) AU2013265637B8 (uk)
BR (1) BR112014028941B8 (uk)
CA (1) CA2874028A1 (uk)
ES (2) ES2924023T3 (uk)
HK (2) HK1208151A1 (uk)
HR (1) HRP20220897T8 (uk)
HU (1) HUE059241T2 (uk)
IL (2) IL235672B (uk)
LT (1) LT3725810T (uk)
MX (5) MX367241B (uk)
NZ (1) NZ701575A (uk)
PL (1) PL3725810T3 (uk)
PT (1) PT3725810T (uk)
RS (1) RS63437B1 (uk)
RU (1) RU2662066C2 (uk)
SG (2) SG10201609510UA (uk)
SI (1) SI3725810T1 (uk)
UA (1) UA115985C2 (uk)
WO (2) WO2013174404A1 (uk)

Families Citing this family (55)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE10254601A1 (de) 2002-11-22 2004-06-03 Ganymed Pharmaceuticals Ag Differentiell in Tumoren exprimierte Genprodukte und deren Verwendung
DE102004024617A1 (de) 2004-05-18 2005-12-29 Ganymed Pharmaceuticals Ag Differentiell in Tumoren exprimierte Genprodukte und deren Verwendung
EP1790664A1 (en) 2005-11-24 2007-05-30 Ganymed Pharmaceuticals AG Monoclonal antibodies against claudin-18 for treatment of cancer
US20100183558A1 (en) 2008-10-17 2010-07-22 Zhennan Lai Safe lentiviral vectors for targeted delivery of multiple therapeutic molecules
WO2013167153A1 (en) 2012-05-09 2013-11-14 Ganymed Pharmaceuticals Ag Antibodies useful in cancer diagnosis
EP3725810B1 (en) 2012-05-23 2022-07-06 Astellas Pharma Inc. Combination therapy involving antibodies against claudin 18.2 for treatment of cancer
WO2013174404A1 (en) * 2012-05-23 2013-11-28 Ganymed Pharmaceuticals Ag Combination therapy involving antibodies against claudin 18.2 for treatment of cancer
RU2678127C2 (ru) 2012-11-13 2019-01-23 Бионтех Аг Агенты для лечения экспрессирующих клаудин раковых заболеваний
WO2014127785A1 (en) 2013-02-20 2014-08-28 Ganymed Pharmaceuticals Ag Combination therapy involving antibodies against claudin 18.2 for treatment of cancer
WO2014146672A1 (en) 2013-03-18 2014-09-25 Ganymed Pharmaceuticals Ag Therapy involving antibodies against claudin 18.2 for treatment of cancer
WO2016165762A1 (en) * 2015-04-15 2016-10-20 Ganymed Pharmaceuticals Ag Drug conjugates comprising antibodies against claudin 18.2
WO2016165765A1 (en) 2015-04-15 2016-10-20 Ganymed Pharmaceuticals Ag Methods and compositions for prediction of therapeutic efficacy of cancer treatments and cancer prognosis
GB201507368D0 (en) * 2015-04-30 2015-06-17 Ucl Business Plc Cell
WO2017007994A1 (en) 2015-07-08 2017-01-12 American Gene Technologies International Inc. Hiv pre-immunization and immunotherapy
EP4295914A3 (en) 2015-09-03 2024-04-10 The UAB Research Foundation Genetically-engineered drug resistant t cells and methods of using the same
AU2017207906B2 (en) 2016-01-15 2021-03-11 American Gene Technologies International Inc. Methods and compositions for the activation of gamma-delta T-cells
US10767183B2 (en) * 2016-03-09 2020-09-08 American Gene Technologies International Inc. Combination vectors and methods for treating cancer
US11976292B2 (en) 2016-06-08 2024-05-07 American Gene Technologies International Inc. Non-integrating viral delivery system and methods related thereto
CA3028982A1 (en) 2016-07-08 2018-01-11 American Gene Technologies International Inc. Hiv pre-immunization and immunotherapy
JP7176756B2 (ja) 2016-07-21 2022-11-22 アメリカン ジーン テクノロジーズ インターナショナル インコーポレイテッド パーキンソン病を処置するためのウイルスベクター
CA3057142A1 (en) 2017-04-03 2018-10-11 American Gene Technologies International Inc. Compositions and methods for treating phenylketonuria
CN107177549A (zh) * 2017-06-29 2017-09-19 青岛麦迪赛斯医疗技术有限公司 一种简单高效的扩增γδT细胞的方法
CN111328330B (zh) * 2017-09-08 2024-03-08 普罗蒙托里治疗有限公司 作为免疫调节剂的磷铂化合物及其治疗用途
WO2019173420A1 (en) 2018-03-08 2019-09-12 Phanes Therapeutics, Inc. Anti-claudin 18.2 antibodies and uses thereof
JP2021515583A (ja) 2018-03-14 2021-06-24 ベイジン シュアンイー ファーマサイエンシーズ カンパニー， リミテッド 抗クローディン１８．２抗体
EP3794037A4 (en) * 2018-05-18 2022-03-02 Lanova Medicines Limited Company ANTI-CLAUDIN 18.2 ANTIBODIES AND USES THEREOF
WO2020018852A2 (en) * 2018-07-18 2020-01-23 Askgene Pharma Inc. Novel antibodies and methods for making and using the same
CN110862454B (zh) * 2018-08-27 2022-12-30 南京圣和药业股份有限公司 一种抗Claudin18_2抗体及其应用
EP3858384A4 (en) * 2018-09-30 2022-07-06 CRAGE medical Co., Limited COMBINATION THERAPY OF CLDN18 ANTIBODY AND CHEMOTHERAPEUTICS
US11352646B2 (en) 2018-11-05 2022-06-07 American Gene Technologies International Inc. Vector system for expressing regulatory RNA
CN113423735B (zh) * 2018-12-07 2024-02-13 再鼎医药(上海)有限公司 抗-紧密连接蛋白抗体及其用途
JP2022515487A (ja) * 2018-12-28 2022-02-18 ナンジン、ジェンスクリプト、バイオテック、カンパニー、リミテッド クローディン１８．２結合部分およびその利用
CN113166246A (zh) * 2018-12-28 2021-07-23 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 一种抗体及其用途
JP2022516505A (ja) * 2018-12-28 2022-02-28 スパークス・セラピューティクス・インコーポレイテッド 癌および他の疾患の治療のための、クローディン１８．２に特異的な結合分子、その組成物および方法
CN116333141A (zh) * 2019-01-15 2023-06-27 浙江道尔生物科技有限公司 抗cld18a2纳米抗体及其应用
CN109762067B (zh) 2019-01-17 2020-02-28 北京天广实生物技术股份有限公司 结合人Claudin 18.2的抗体及其用途
KR20210144792A (ko) * 2019-03-29 2021-11-30 페인스 테라퓨틱스 인코포레이티드 인간화된 항-클라우딘 18.2 키메라 항원 수용체 및 그의 용도
CN117264059A (zh) * 2019-05-16 2023-12-22 启愈生物技术(上海)有限公司 抗cldn抗体及其药物组合物和检测方法
KR20220024010A (ko) * 2019-05-16 2022-03-03 치루 파머수티컬 컴퍼니 리미티드 클라우딘 18a2에 대한 항체 및 그의 용도
KR20220012262A (ko) * 2019-05-24 2022-02-03 산유 바이오파마슈티컬스 씨오., 엘티디. 신형 cldn18.2 결합분자
KR20220006085A (ko) * 2019-05-30 2022-01-14 샨동 보안 바이오테크놀로지 컴퍼니, 리미티드 클라우딘(Claudin) 18.2를 표적화하는 항체 또는 키메라 항원 수용체
WO2021052307A1 (zh) * 2019-09-16 2021-03-25 南京圣和药业股份有限公司 一种抗b7-h3抗体及其应用
CN112707965A (zh) * 2019-09-30 2021-04-27 和铂医药(苏州)有限公司 靶向cldn18.2的抗体及其制备方法和应用
AU2020398045A1 (en) 2019-12-06 2022-06-09 Sotio Biotech A.S. Humanized CLDN18.2 antibodies
WO2021115303A1 (zh) * 2019-12-11 2021-06-17 上海复宏汉霖生物技术股份有限公司 一种抗Claudin18.2单克隆抗体、其制备方法及用途
JP2023507664A (ja) 2019-12-23 2023-02-24 ソティオ バイオテック エイ．エス． 腫瘍特異的クローディン１８．２抗体
WO2021129927A1 (en) 2019-12-23 2021-07-01 Biontech Cell & Gene Therapies Gmbh Treatment with immune effector cells engineered to express an antigen receptor
WO2021228141A1 (zh) * 2020-05-15 2021-11-18 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 抗体药物缀合物及其制备方法和用途
CN111705085B (zh) * 2020-08-20 2020-12-25 北京百奥赛图基因生物技术有限公司 构建动物模型的方法及应用
AU2021345124A1 (en) 2020-09-16 2023-03-30 Amgen Inc. Methods for administering therapeutic doses of bispecific T-cell engaging molecules for the treatment of cancer
JP2022061640A (ja) * 2020-10-07 2022-04-19 株式会社村田製作所 積層セラミックコンデンサ
WO2022100590A1 (zh) * 2020-11-10 2022-05-19 齐鲁制药有限公司 针对密蛋白18a2的adcc增强型人源化抗体及其应用
WO2022122709A1 (en) 2020-12-07 2022-06-16 Sotio Biotech A.S. Antibody-drug conjugates based on humanized cldn18.2 antibodies
JP2024500242A (ja) 2020-12-23 2024-01-05 ソティオ バイオテック エイ．エス． 腫瘍特異的クローディン１８．２抗体と薬物との複合体
CN118139876A (zh) * 2021-10-19 2024-06-04 博奥信生物技术（南京）有限公司 结合cldn18.2的抗体及其用途

Family Cites Families (54)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8601597D0 (en) 1986-01-23 1986-02-26 Wilson R H Nucleotide sequences
GB8717430D0 (en) 1987-07-23 1987-08-26 Celltech Ltd Recombinant dna product
GB8809129D0 (en) 1988-04-18 1988-05-18 Celltech Ltd Recombinant dna methods vectors and host cells
WO2000078961A1 (en) 1999-06-23 2000-12-28 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
WO2000012708A2 (en) 1998-09-01 2000-03-09 Genentech, Inc. Further pro polypeptides and sequences thereof
EP1144629A3 (en) 1998-09-01 2001-11-28 Genentech, Inc. Further pro polypeptides and sequences thereof
WO2000015659A2 (en) 1998-09-16 2000-03-23 Zymogenetics, Inc. Stomach polypeptide zsig28
AU766279B2 (en) 1998-10-06 2003-10-16 Curagen Corporation Novel secreted proteins and polynucleotides encoding them
AU3774500A (en) 1999-03-31 2000-10-16 Curagen Corporation Nucleic acids including open reading frames encoding polypeptides; "orfx"
EP1208202A2 (en) 1999-09-01 2002-05-29 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US6380362B1 (en) 1999-12-23 2002-04-30 Genesis Research & Development Corporation Ltd. Polynucleotides, polypeptides expressed by the polynucleotides and methods for their use
WO2001055321A2 (en) 2000-01-31 2001-08-02 Human Genome Sciences, Inc. Nucleic acids, proteins, and antibodies
CA2396719A1 (en) 2000-01-31 2001-08-02 Human Genome Sciences, Inc. 22 human secreted proteins
EP1255817A1 (en) 2000-01-31 2002-11-13 Human Genome Sciences, Inc. Nucleic acids, proteins, and antibodies
WO2001055326A2 (en) 2000-01-31 2001-08-02 Human Genome Sciences, Inc. Nucleic acids, proteins, and antibodies
AU6802801A (en) 2000-03-01 2001-09-24 Genentech Inc Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US6436703B1 (en) 2000-03-31 2002-08-20 Hyseq, Inc. Nucleic acids and polypeptides
AU2001260847A1 (en) 2000-05-24 2001-12-03 Genesis Research And Development Corporation Limited Compositions isolated from skin cells and methods for their use
JP2004519215A (ja) 2000-08-15 2004-07-02 イミュネックス・コーポレーション クローディンポリペプチド
JP2004520814A (ja) 2000-08-28 2004-07-15 ディアデクサス インコーポレーテッド 肺特異的遺伝子に関する組成物および方法
MXPA03002049A (es) 2000-09-08 2003-07-24 Schering Corp Genes de mamiferos: reactivos y metodos relacionados.
ES2405944T3 (es) 2000-11-30 2013-06-04 Medarex, Inc. Ácidos nucleicos que codifican las secuencias de inmunoglobulina humana reorganizadas a partir de ratones transcromoscómicos transgénicos zadas
US7754208B2 (en) 2001-01-17 2010-07-13 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
US20030133939A1 (en) 2001-01-17 2003-07-17 Genecraft, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
WO2004035607A2 (en) 2002-10-17 2004-04-29 Genmab A/S Human monoclonal antibodies against cd20
DE10254601A1 (de) 2002-11-22 2004-06-03 Ganymed Pharmaceuticals Ag Differentiell in Tumoren exprimierte Genprodukte und deren Verwendung
US20050181375A1 (en) 2003-01-10 2005-08-18 Natasha Aziz Novel methods of diagnosis of metastatic cancer, compositions and methods of screening for modulators of metastatic cancer
US7217703B2 (en) 2004-04-16 2007-05-15 Emisphere Technologies, Inc. 8-(2-hydroxyphenoxy)octyldiethanolamine and salts thereof for delivery of active agents
DE102004024617A1 (de) 2004-05-18 2005-12-29 Ganymed Pharmaceuticals Ag Differentiell in Tumoren exprimierte Genprodukte und deren Verwendung
DE102004042822A1 (de) 2004-08-31 2006-03-16 Technische Universität Dresden Verbindungen und Methoden zur Behandlung, Diagnose und Prognose bei Pankreaserkrankungen
WO2007027867A2 (en) 2005-08-31 2007-03-08 Cell Signaling Technology, Inc. Reagents for the detection of protein phosphorylation in carcinoma signaling pathways
US8609410B2 (en) * 2005-09-08 2013-12-17 Medinet Co., Ltd. Method for activation treatment of antigen-presenting cell
DK1934615T3 (da) 2005-09-19 2014-07-14 Janssen Diagnostics Llc Fremgangsmåder og materialer til identificering af oprindelsen af et karcinom med ukendt primær oprindelse
EP1790664A1 (en) 2005-11-24 2007-05-30 Ganymed Pharmaceuticals AG Monoclonal antibodies against claudin-18 for treatment of cancer
PL1976880T3 (pl) * 2005-12-21 2017-01-31 Amgen Research (Munich) Gmbh Kompozycje farmaceutyczne odporne na rozpuszczalny cea
US20100129929A1 (en) 2006-07-27 2010-05-27 Roberto Polakewicz Tyrosine Phosphorylation Sites
CN101687050A (zh) 2007-02-01 2010-03-31 维里德克斯有限责任公司 用于鉴别原发起源不明的癌的起源的方法和材料
EP2145902A3 (en) 2007-04-19 2010-09-29 Peter Hornbeck Tyrosine phosphorylation sites and antibodies specific for them
EP1997832A1 (en) * 2007-05-29 2008-12-03 Ganymed Pharmaceuticals AG Monoclonal antibodies against Claudin-18 for treatment of cancer
WO2008152822A1 (ja) * 2007-06-15 2008-12-18 Medinet Co., Ltd. 医薬
EP2178563A2 (en) 2007-07-06 2010-04-28 OSI Pharmaceuticals, Inc. Combination anti-cancer therapy comprising an inhibitor of both mtorc1 and mtorc2
EP2036987A1 (en) 2007-09-17 2009-03-18 Siemens Healthcare Diagnostics GmbH Molecular markers for tumor cell content in tissue samples
JP5596559B2 (ja) 2008-01-28 2014-09-24 メディミューン リミテッド 安定化アンジオポエチン２抗体とその用途
US20090304697A1 (en) 2008-06-02 2009-12-10 Nsabp Foundation, Inc. Identification and use of prognostic and predictive markers in cancer treatment
CA2731632A1 (en) 2008-07-25 2010-01-28 Merck Patent Gmbh Method of determination of receptor binding saturation effected by monoclonal antibodies
WO2010141093A2 (en) * 2009-06-04 2010-12-09 The University Of Maryland, Baltimore Co-signaling methods for treating cancers
WO2011090005A1 (ja) * 2010-01-19 2011-07-28 協和発酵キリン株式会社 大腸癌の治療用医薬および治療方法
EP2547695B1 (en) 2010-03-16 2018-05-09 Biontech Protein Therapeutics GmbH Tumor vaccination involving a humoral immune response against self-protein cldn18.2
CN102168067B (zh) * 2011-02-11 2012-08-29 浙江大学 一种调节性t细胞的诱导培养方法
WO2013167153A1 (en) 2012-05-09 2013-11-14 Ganymed Pharmaceuticals Ag Antibodies useful in cancer diagnosis
WO2013174403A1 (en) 2012-05-23 2013-11-28 Ganymed Pharmaceuticals Ag Combination therapy involving antibodies against claudin 18.2 for treatment of cancer
WO2013174404A1 (en) 2012-05-23 2013-11-28 Ganymed Pharmaceuticals Ag Combination therapy involving antibodies against claudin 18.2 for treatment of cancer
WO2014127785A1 (en) 2013-02-20 2014-08-28 Ganymed Pharmaceuticals Ag Combination therapy involving antibodies against claudin 18.2 for treatment of cancer
JP6241403B2 (ja) 2014-10-24 2017-12-06 横浜ゴム株式会社 リン酸変性ポリマー

Also Published As

Publication number Publication date
JP7204791B2 (ja) 2023-01-16
US20180326059A1 (en) 2018-11-15
US20200390887A1 (en) 2020-12-17
CA2874028A1 (en) 2013-11-28
KR20150027112A (ko) 2015-03-11
IL235672B (en) 2020-08-31
SI3725810T1 (sl) 2022-10-28
RU2018124328A (ru) 2019-03-12
WO2013174404A1 (en) 2013-11-28
IL235672A0 (en) 2015-01-29
ES2784855T3 (es) 2020-10-01
AU2020203557A1 (en) 2020-06-18
RU2018124328A3 (uk) 2021-10-22
US20150157711A1 (en) 2015-06-11
MX367241B (es) 2019-08-09
IL276434A (en) 2020-09-30
ES2924023T3 (es) 2022-10-04
KR102514338B1 (ko) 2023-03-28
BR112014028941B8 (pt) 2020-03-17
AU2013265637B2 (en) 2017-12-21
AU2013265637B8 (en) 2018-04-26
AU2018201856B2 (en) 2020-06-18
KR20230047493A (ko) 2023-04-07
HRP20220897T1 (hr) 2022-10-14
HUE059241T2 (hu) 2022-11-28
CN104427999A (zh) 2015-03-18
MX2020011796A (es) 2020-12-07
JP6203830B2 (ja) 2017-09-27
AU2018201856A1 (en) 2018-04-12
BR112014028941A2 (pt) 2016-10-25
US20160339101A1 (en) 2016-11-24
JP2018002724A (ja) 2018-01-11
KR20200140387A (ko) 2020-12-15
SG10201609510UA (en) 2016-12-29
JP2023038230A (ja) 2023-03-16
JP6833885B2 (ja) 2021-02-24
AR091131A1 (es) 2015-01-14
KR102188001B1 (ko) 2020-12-07
JP2015518838A (ja) 2015-07-06
CN107412773A (zh) 2017-12-01
AU2013265637A1 (en) 2014-11-20
CN107050460B (zh) 2021-06-22
US9433675B2 (en) 2016-09-06
MX2019009441A (es) 2019-12-16
PL3725810T3 (pl) 2022-09-05
CN107050460A (zh) 2017-08-18
PT3725810T (pt) 2022-08-01
MX2020011795A (es) 2020-12-07
BR112014028941B1 (pt) 2019-11-12
US10813996B2 (en) 2020-10-27
WO2013174509A1 (en) 2013-11-28
LT3725810T (lt) 2022-08-25
SG11201406963RA (en) 2014-12-30
MX2020011768A (es) 2020-11-24
HK1208151A1 (en) 2016-02-26
NZ701575A (en) 2016-10-28
RS63437B1 (sr) 2022-08-31
US10022444B2 (en) 2018-07-17
HK1247567A1 (zh) 2018-09-28
MX2014014215A (es) 2015-06-23
HRP20220897T8 (hr) 2022-11-11
RU2014152107A (ru) 2016-07-10
RU2662066C2 (ru) 2018-07-23
CN107412773B (zh) 2021-04-06
JP2019104747A (ja) 2019-06-27
JP2021080262A (ja) 2021-05-27
CN104427999B (zh) 2017-01-18
AU2023200682A1 (en) 2023-04-27
JP6490763B2 (ja) 2019-03-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA115985C2 (uk) Спосіб лікування або запобігання раку шлунка
US11826402B2 (en) Combination therapy involving antibodies against claudin 18.2 for treatment of metastatic pancreatic adenocarcinoma
JP6490764B2 (ja) がんを処置するためのクローディン１８．２に対する抗体を伴う併用療法
EP3791896B1 (en) Combination therapy involving antibodies against claudin 18.2 for treatment of cancer
EP2958945B1 (en) Combination therapy involving antibodies against claudin 18.2 for treatment of cancer
RU2789478C2 (ru) Комбинированная терапия с использованием антител к клаудину 18.2 для лечения рака
NZ711060B2 (en) Combination therapy involving antibodies against claudin 18.2 for treatment of cancer