UA112282C2 - Антагоніст толл-подібного рецептора 3 - Google Patents

Антагоніст толл-подібного рецептора 3 Download PDF

Info

Publication number
UA112282C2
UA112282C2 UAA201114064A UAA201114064A UA112282C2 UA 112282 C2 UA112282 C2 UA 112282C2 UA A201114064 A UAA201114064 A UA A201114064A UA A201114064 A UAA201114064 A UA A201114064A UA 112282 C2 UA112282 C2 UA 112282C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
shi
antibodies
shk
antibody
sho
Prior art date
Application number
UAA201114064A
Other languages
English (en)
Inventor
Марк Каннінгхем
Марк Каннингхем
Іцин Фен
Ицин Фен
Катаріна Херінга
Катарина Херинга
Цзиньцюань Ло
Роберт Раухенбергер
Марк Рутц
Матео Лані Сан
Матео Лани Сан
Роберт Т. Саріскі
Роберт Т. Сариски
Реймонд Світ
Реймонд Свит
Фан Тен
Алєксєй Тепляков
Алексей Тепляков
Шен-Дзюн Ву
Original Assignee
Янссен Байотек, Інк.
Янссен Байотек, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from US12/609,675 external-priority patent/US8409567B2/en
Application filed by Янссен Байотек, Інк., Янссен Байотек, Инк. filed Critical Янссен Байотек, Інк.
Publication of UA112282C2 publication Critical patent/UA112282C2/uk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/02—Muscle relaxants, e.g. for tetanus or cramps
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/54—Interleukins [IL]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/22—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against growth factors ; against growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2299/00—Coordinates from 3D structures of peptides, e.g. proteins or enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)

Abstract

Винахід належить до антитіла-антагоніста толл-подібного рецептора 3 (TLR3), полінуклеотиду, що кодує антитіло-антагоніст TLR3, і способу виготовлення вищезгаданого антитіла.

Description

Даний винахід стосується антитіл, які є антитілами-антагоністами толл-подібного рецептора
З (ТК), полінуклеотидів, які кодують антитіла-антагоністи ТІ КЗ або їх фрагменти, а також способів отримання і використання названих продуктів.
Передумови створення винаходу
Толл-подібний рецептор (ТІК) регулює активацію уродженої імунної відповіді, а також розвиток адаптивного (специфічного) імунітету, активуючи каскади внутрішньоклітинної передачі сигналу у відповідь на зв'язування бактерійних, вірусних, паразитичних, а в деяких випадках і ендогенних лігандів (І апсавзіег еї аї., у). РПузіоІ. 563: 945-955, 2005). Розташовані на плазматичній мембрані ТІК, ТІ К1, ТІ К2, ТІ К4 і Кб розпізнають ліганди, включаючи білкові або ліпідні компоненти бактерій і грибків. Толл-подібні рецептори, ТІ КЗ, ТІК7 і ТІ Ко, переважно внутрішньоклітинні, активуються дволанцюжковими РНК, одноланжюжковими РНК і неметилованими Сро ДНК, відповідно. Вважається, що дисрегуляція сигнального шляху ТІ К є причиною множини проблем, і терапевтичні стратегії розвиваються в цьому напрямку (Нойтап еї аї., Маї. Нем. Огиа Оібсом. 4:879-880, 2005; Нелаві, Іпї. ІттипорНнаптасої. 6:863-869, 2006;
МуісКеІдтеп, 5сіепсе 312:184-187, 2006). Наприклад, антагоністи ТІ К4, а також ТІК 7 і ТІК 9, проходять клінічні випробування можливості їх застосування для лікування тяжкого сепсису і системного червоного вовчака, відповідно (Капліег еї аї., Маї. Меа. 13: 552-559, 2007).
Сигнальний шлях ТІ КЗ активується дволанцюжковою РНК, матричною РНК або РНК, що вивільняється некротичними клітинами при запаленні або вірусній інфекції. Активація ТІ КЗ індукує секрецію інтерферонів і прозапальних цитокінів, а також приводить до активації і збільшення числа імунних клітин, захищаючи таким чином від деяких мікробних інфекцій.
Наприклад, виявлений зв'язок домінантно-негативного алелю ТІКЗ з підвищеною сприйнятливістю до енцефаліту, викликаного вірусом простого герпесу, після первинного інфікування вірусом Н5М-1 в дитячому віці (2Ппепао еї аї., 5сіепсе 317:1522-1527 2007). У мишей недостача ТІКЗ пов'язана зі зниженою виживаністю при експериментальному зараженні вірусом Коксакі (Кіспег еї аІ., Р о5 Опе 4:е4127, 2009). Проте, показано, що порушена регуляція сигнального шляху ТІ КЗ стосується захворюваності і смертності при певних вірусних інфекціях, в тому числі викликаних вірусом западнонільської лихоманки, флебовірусом, вірусом коров'ячої віспи і вірусом грипу типу А (Умапо еї аї., Маї. Мей. 10:1366-1373, 2004; Соуеп вї аї., У. Іттипої. 177:6301-6307, 2006; Ниїспепз вї аї., у. Іттипої. 180:483-491, 2008; Ге Соніс еї а!., Ріо5 Раїпод. 2:Е5З, 2006).
Кристалічна структура позаклітинних доменів людського і мишачого ТІ КЗ відома (Веїї! еї аї.,
Ргос. Маї!. Асай. 5сі. (ОА), 102:10976-80, 2005; Сноєеє, вї а!., Зсієпсе 309:581-585, 2005; іш еї аї., осієпсе, 320:379-381, 2008). ТІ КЗ має підковоподібну форму соленоїда, несе на своїй поверхні глікани і включає 23 домени, що складаються з лейцитових повторів (КК). Були картовані ділянки зв'язування дволанцюжкової РНК в двох різних областях (І ім еї аї., 5сіепсе, 320:379-81, 2008). Передбачається, що сигнальна одиниця складається з однієї дволанцюжкової РНК і двох позаклітинних доменів ТІ КЗ (І еопага еї аї., Ргос. Маї). Асад. Маї!. Асад. сі. (ОА) 105: 258-263, 2008). 4о Показано, що ТІКЗ запускає патогенні механізми при цілому ряді запальних, імуноопосередкованих і аутоїмунних захворювань, що включають, наприклад, септичний шок (Самаззапі еї а!., У. Ехр. Мед. 205:2609-2621, 2008), гостре ураження легень (Миптгтау еї аї., Ат. «).
Везріг. Стії. Саге Мей. 178:1227-1237, 2008), ревматоїдний артрит (Кіт еї аї., Іттипої. Гей. 124:9-17, 2009; Вгепіапо еї аї., Ап. Впецйт. 52:2656-2665, 2005), астму (Зидіюга еї аї., Ат. у.
Везр. СеїЇ Мої. ВіоІ. 40:654-662, 2009; Могівпіта еї аї., Іпії. Агсй. АПегду Іттипої. 145:163-174, 2008; омеїЇ еї а!І., Кезріг. Ке5. 10:43, 2009), запальні захворювання ШКТ, наприклад, хворобу
Крона і виразковий коліт (2пои еї аї.,.). Іттипої. 178:4548-4556, 2007; 7Нои еї аї., Ргос. Маї!).
Асайд. осі. (О5А) 104:7512-7515, 2007), аутоїмунні захворювання печінки (Гапд еї аї., У. Сіїп.
Іпмеві. 116:2456-2463, 2006) і цукровий діабет І типу (Юодизап еї а. Оіабесе5 57:1236-1245, 2008;
Пеп апа 7іргів, Сцт. Мої. Мей. 9: 52-68, 2009). Крім того, показано, що органоспецифічна експресія ТІ КЗ корелює з рядом патологічних станів, що викликаються порушенням регуляції місцевих запальних реакцій, наприклад, в тканинах печінки при первинному біліарному цирозі (Такії еї аї., аб Іпмезі. 85:908-920, 2005), в суглобах при ревматоїдному артриті (О5реї еї аї.,
Ап АНейт. 58:3684-3692, 2008) і слизовій оболонці носа при алергічному риніті (Ргап55оп еї а!., Везріг. Нез. 6:100, 2005).
При некрозі вивільнення клітинного вмісту, в тому числі ендогенних матричних РНК, індукує секрецію цитокінів, хемокінів і інших чинників, які ініціюють процес місцевого запалення, полегшують знищення клітинних залишків і відновний процес. Некроз часто приводить до безупинного запального процесу, сприяючи його переходу в хронічну форму або посиленню 6о (Вегозракеп еї а!., Майте Неміємув5 7:99-109, 2009). Активація ТІ КЗ в місці некрозу може сприяти розвитку ненормального запального процесу і привести до виникнення прозапального позитивного зворотного зв'язку за рахунок вивільнення лігандів ТІ КЗ. Таким чином, антагоністи
ТІКЗ можуть відіграти позитивну роль при багатьох захворюваннях, що супроводжуються хронічним або гострим запаленням і/або некрозом.
Зниження активації ТІКЗ може розглядатися як нова стратегія в лікуванні онкологічних захворювань, таких, як нирковоклітинний рак і плоскоклітинний (епідермальний) рак області голови і шиї (Могікауча еї аї., Сііп. Сапсег Кев5. 13:5703-5709, 2007; Ріієз вї аї., Іпі. 9. Мої. Мед. 21: 209-215, 2008). Крім того, алель ТІ 3123, що кодує білок з меншою активністю, пов'язаний з функцією захисту проти просуненої "сухої" макулярної дегенерації внаслідок вікових змін (апа еї аї., М. Епаї. У. Мей. 359:1456-1463, 2008), що вказує на можливу позитивну роль антагоністів
ТІ КЗ при цьому захворюванні.
Захворювання, пов'язані із запаленням, також як і захворювання, що викликаються інфекціями, мають значний вплив на здоров'я і, отже, велике економічне значення. Проте, незважаючи на прогрес в багатьох галузях медицини, існує відносно мало можливостей для лікування більшості названих захворювань.
Таким чином, існує необхідність в придушенні активності ТІ КЗ для лікування пов'язаних з функцією цього рецептора захворювань.
Короткий опис фігур
На фіг. 1 показаний ефект моноклональних антитіл (мАБ) проти людського ТІ КЗ (пит КЗ) в експерименті з використанням гена-репортера МЕ-кВ.
На фіг. 2А і 2Б показаний ефект (95 інгібування) або ефект моноклональних антитіл проти людського ТІ КЗ в експерименті з використанням гена ВЕАЗ-2В.
На фіг. ЗА і ЗБ показаний ефект моноклональних антитіл проти людського ТІКЗ в експерименті з використанням гена МНВЕ.
На фіг. 4 показаний ефект моноклональних антитіл проти людського ТІ КЗ в експерименті з використанням гена РВМС.
На фіг. 5А і 5Б показаний ефект моноклонального антитіла проти людського ТІКЗ в експерименті з використанням гена НАЗМ.
На фіг. бА, 6Б і 6В показане зв'язування моноклонального антитіла проти людського ТІ КЗ з мутантами ТІ КЗ.
На фіг. 7А показані епітопи, розпізнавані мАб 15ЕМО (чорним кольором) і С1068 (сірим кольором) (верхня частина фігури), і епітопи, розпізнавані мАб 120М0/О5М (чорним кольором, нижня частина фігури), накладені на зображення структури позаклітинного домену людського
ТКЗ. На фіг. 7Б показана карта збурень при вибірковому заміщенні водню дейтерієм у випадку, коли позаклітинний домен ТІ КЗ утворює комплекс з мАб 15ЕМО.
На фіг. 8А і 88 показаний ефект сурогатних щурячих/умишачих мАб (мАБб проти мишачого
ТКЗ, мАБ 5429) в експериментах з використанням А) гена-репортера МЕ-кВ і В) гена-репортера
ІЗВЕ.
На фіг. 9 показаний ефект сурогатних мАб (мАб 5429, мАБб с1811) в експерименті з МЕР
СХОС ТО/Р-10.
На фіг. 10 показана специфічність зв'язування сурогатних тАб з ТІ КЗ. Верхня панель: контроль ізотипу; нижня панель: тАБб с1811.
На фіг. 11 показаний вплив сурогатних мАб на рівень репН в при експериментально індукованій гіперчутливості дихальних шляхів (ГДШ).
На фіг. 12 показаний ефект сурогатних мАбБ на загальне число нейтрофілів в рідині бронхоальвеолярного лаважу (БАЛ) при гіперчутливості дихальних шляхів (ГДШ).
На фіг. 13 показаний ефект впливу сурогатних мАб на рівень продукції СХСІ 1О/ЛР-10 в рідині після лаважу при ГДШ.
На фіг. 14 показаний ефект сурогатних мАБ на гістопатологічні показники при використанні декстран сульфату натрію (ДСН).
На фіг. 15 показаний ефект сурогатних мАб на А) гістопатологічні показники і Б) приплив нейтрофілів при перенесенні Т-клітин.
На фіг. 16 показаний вплив сурогатних мАБб на клінічні показники при колагеніндукованому артриті (КІА).
На фіг. 17 показаний ефект сурогатних мАб на площу під кривою, що описує динаміку клінічних показників при КІА.
На фіг.18 показаний вплив сурогатних тАБбБ на виживаність мишей С57ВІ/6 після інтраназального введення вірусу грипу А/РК/8/34. Введення тАбБ почалося в день -1.
На фіг. 19 показаний вплив сурогатних мАб на клінічні показники після зараження вірусом 6о грипу типу А/РК/8/34. Введення тАбБ почалося в день -1.
На фіг. 20 показаний вплив сурогатних тАб на масу тіла протягом 14 днів після введення вірусу грипу А/РК/8/34. Введення тАб почалося в день -1.
На фіг. 21 показаний вплив сурогатних мАБб на концентрацію глюкози в крові у тварин (А) М/УТ
РІО і (Б) ТІ ЗКО БІО після пробного введення глюкози.
На фіг. 22 показаний вплив сурогатних мАБб на концентрацію інсуліну у тварин УУТ БІО.
На фіг. 23 показаний вплив мАбБ 15ЕМО на (А) МТНІі ї (В) продукцію СХСІ1О/Р-10 і
ССІ Б/КАМТЕЗ в клітинах МНВЕ, індуковану риновірусом.
На фіг. 24 показаний вплив мАб 15ЕМО на (А) вміст вІСАМ-1 ї (В) життєздатність клітин
НОМЕбС.
На фіг. 25 показана виживаність тварин після введення сурогатних тАБб через З дні після інфекції вірусом грипу А.
На фіг. 26 показані оцінки клінічного стану після введення сурогатних тАБб через З дні після зараження вірусом грипу А.
На фіг. 27 показана зміна маси тіла тварин після введення сурогатних тАб через З дні після інфекції вірусом грипу А.
На фіг. 28 показана молекулярна структура четвертинного комплексу позаклітинного домену
ТАЗ з Рар 1290МС/О5У, Рар 15ЕМО і баб с1068 в А з представленням ланцюгів в формі стрічок і загальною структурою поверхні. Позаклітинний домен ТІ КЗ показаний світло-сірим кольором,
М-кінець відмічений буквою М; всі Рар-фрагменти на схемі розташування ланцюгів показані темно-сірим кольором. В. Епітопи показані світло-сірим кольором і відмічені на схемі позаклітинного домену ТІ КЗ так само, як Раб в А. На фіг. 28, 29 і 30 Рар 120М0/О5М, Раб с1068 і гар 15ЕМО скорочено вказані як Раб12, Раб1068 і бабр15, відповідно, для ясності.
Фігура 29 показує механізм нейтралізації Бар 15ЕМО. А. Сигнальна одиниця (СО) дволанцюжкова РНК:ТІ КЗ з епітопом Бар 15ЕМО, відміченим світло-сірим кольором, в одному з двох позаклітинних доменів ТІ КЗ (світло- і темно-сірий колір, і відмічений ТІ КЗ). Ліганд дволанцюжкової РНК показаний у вигляді подвійної спіралі сірого кольору. В. Ілюстрація зв'язування Бар 15ЕМО), що створює стеричні перешкоди для зв'язування з дволанцюжковою
РНК їі, таким чином, утворення СО. Зв'язування Бар 15ЕМОс високою спорідненістю буде перешкоджати формуванню СО, або викличе розпад СО, що вже утворилася.
На фіг. 30 показаний механізм Бар 1290МО/О5М і Раб с1068 і з'єднання одиниць в сигнальну одиницю (СО) ТІ КЗ. а. Раб 1290М0/0О5М і баб с1068 можуть зв'язуватися (в тому числі спільно) з однією СО. В. Модель тісного об'єднання двох СО на дволанцюжковій РНК довжиною приблизно 76 пар основ. Для наочності три епітопи виділені кольором. С. Зв'язування Бар 129М0/О5М і Раб с1068 перешкоджає об'єднанню СО через стеричні зіткнення між антитілами і сусідніми СО. Дві стрілки, направлені ліворуч, означають різні кількісні ступені розділення СО під впливом антитіл (нижня стрілка стосується Гар 120МО/О5М, а верхня - до Раб с1068).
На фіг. 31 показана відповідність між послідовною нумерацією і системою нумерації Кабата і
Чотіа на прикладах антитіл. Області, що визначають комплементарність, і гіперваріабельні ділянки показані сірим кольором.
На фіг. 32 показане поєднання області Мі. тАБб 15ЕМО з каркасним сегментом людського антитіла Ук1. Гіперваріабельні петлі Чотіа підкреслені, паратопи підкреслені подвійною межею, а відмінності каркасного сегмента показані сірим кольором. Гени Мк1 являють собою алелі "01, якщо не вказане інше. Нумерація залишків послідовна.
На фіг. 33 показане поєднання області МН тАБб 15ЕМО з каркасним сегментом людського антитіла МА5. Особливості послідовності показані як на фіг. 32.
На фіг. 34 показане поєднання області МІ тА з каркасним сегментом людського антитіла
МКЗ. Особливості послідовності показані як на фіг. 32.
На фіг. 35 показане поєднання областей МІ і МН тАр 15ЕМО або тАб 120М0/О5М з каркасними сегментами людського антитіла Ук, УА або Оп. Особливості послідовності показані як на фіг. 32.
Виклад суті винаходу
Один з аспектів винаходу стосується ізольованого антитіла або його фрагмента, при цьому антитіло зв'язується з амінокислотними залишками К416, К4А18, І 440, М441, Е442, у465, М4А66,
К467, 468, 8488, Н489, А491, К493, М515, М516, М517, Н5ЬЗ39, М541, 5571, І 595 і Кб19 5ЕО ІЮ
МО: 2 толл-подібного рецептора З (ТІ КЗ).
Інший аспект даного винаходу стосується ізольованого антитіла або його фрагмента, при цьому антитіло зв'язується з амінокислотними залишками 5115, 0116, К117, А120, К139, М140,
М141, М144, К145, Т166, 2167, М168, 5188, Е189, 0192, А195 і А219, ЗЕО ІЮ МО: 2, толл- подібного рецептора З (ТІ КЗ). 6о Інший аспект даного винаходу стосується ізольованого антитіла, що має варіабельну область важкого ланцюга і варіабельну область легкого ланцюга, або його фрагменту, при цьому антитіло зв'язується з ТІ КЗ, що має амінокислотну послідовність, показану в ЗЕО ІЮ МО: 2, через варіабельну область важкого ланцюга із залишками Чотіа МУЗ33, 50, 052, 054, У56,
М58, РБбІ, Е95, м97, М100 і 010065 ї варіабельну область легкого ланцюга із залишками Чотіа 027, 32, МО92, Т93, 1 94 і 595.
Інший аспект даного винаходу стосується ізольованого антитіла, що має варіабельну область важкого ланцюга і варіабельну область легкого ланцюга, або його фрагменту, при цьому антитіло зв'язується з ТІ КЗ, що має амінокислотну послідовність, показану в ЗЕО ІЮ МО: 2 через варіабельну область важкого ланцюга із залишками Чотіа МЗ1Та, 252, 2520, 553, К5Ба4,
У56, 97, РО8, Е99, і 100, і варіабельну область легкого ланцюга із залишками Чотіа 529, 530,
У31, 32, Е50, 051, М91, 092 і 093.
Наступний аспект даного винаходу полягає в ізольованих антитілах, здатних реагувати з
ТКУ, причому антитіла мають щонайменше одну з наступних властивостей: а. зв'язуються з людським ТІ КЗ з Ка «10 нМ; р. зменшують біологічну активність ТІ КЗ в аналізі іп міго з використанням гена-репортера
МЕ-кВ і полі(І:С) на 2 5095, при концентрації 1 мкг/мл; с. на 2 6095 інгібують продукцію І--6 або СХСІ 10/Р-10 в клітинах ВЕА5-2В, стимульованих впливом «100 нг/мл полі(І:С), при концентрації 10 мкг/мл; а. на 2 5095 інгібують продукцію 1-6 або СХСІ 10/Р-10 в клітинах ВЕА5-2В, стимульованих впливом «100 нг/мл полі(І:С), при концентрації 0,4 мкг/мл; е. на 2 5095 інгібують продукцію ІЇ/-б в клітинах МНВЕ, стимульованих впливом 62,5 нг/мл полі(І:С), при концентрації 5 мкг/мл;
І. на 2 5095 інгібують продукцію ІЇ-б6 в клітинах МНВЕ, стимульованих впливом 62,5 нг/мл полі(І:С), при концентрації 1 мкг/мл; д. на 2 2095 інгібують »полі(І:С)-індуковану продукцію ІЕМ-у, 1І--6 або 1-12 в клітинах РВМС, при концентрації 1 мкг/мл
М. інгібують біологічну активність ТІ КЗ яванської макаки в аналізі іп міго з використанням гена-репортера МЕ-кВ при ІС50О «10 мкг/мл; або і. інгібують біологічну активність ТІ КЗ яванської макаки в аналізі іп міго з використанням гена-репортера ІЗКЕ при ІС5О «5 мкг/мл.
Наступний аспект даного винаходу полягає в ізольованих антитілах, здатних взаємодіяти з
ТІКЗ, конкуруючих за зв'язування ТІКЗ з моноклональними антитілами, причому ці моноклональні антитіла складаються з амінокислотних послідовностей визначаючих комплементарність ділянок 1, 2 їі З (сотріетепіеагйу адегептіпіпуд гедіоп5 - СОК) певних важких ланцюгів, амінокислотних послідовностей СОК 1, 2 і З певних легких ланцюгів, а також з амінокислотних послідовностей варіабельних ділянок певних важких ланцюгів (МН) або амінокислотних послідовностей варіабельних ділянок певних легких ланцюгів (МІ).
Наступний аспект даного винаходу полягає в ізольованих антитілах, здатних реагувати з
ТАЗ, що містять як варіабельну ділянку важкого, так і варіабельну ділянку легкого ланцюга, 4о причому ці антитіла також містять визначаючі комплементарність ділянки 1, 2 і З (СОК) певних важких ланцюгів і амінокислотні послідовності 1, 2 і З ділянок СОК певних легких ланцюгів.
Наступний аспект даного винаходу полягає в ізольованих антитілах, здатних реагувати з
ТАЗ, що містять варіабельні ділянки як важкого, так і легкого ланцюга, причому ці антитіла також містять амінокислотні послідовності варіабельних ділянок певних важких ланцюгів (МН) і амінокислотні послідовності варіабельних ділянок певних легких ланцюгів (МІ).
Наступний аспект даного винаходу полягає в ізольованих антитілах, здатних реагувати з
ТАЗ, що містять варіабельні ділянки як важкого, так і легкого ланцюгів, причому ці антитіла також містять амінокислотні послідовності певних важких ланцюгів і амінокислотні послідовності певних легких ланцюгів.
Наступний аспект даного винаходу полягає в ізольованому важкому ланцюгу антитіла, що містить амінокислотну послідовність, представлену в ЗЕО ІЮО МО: 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24,26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 159, 198, 200, 202, 164, 212, 213, 214, 215 або 216.
Наступний аспект даного винаходу полягає в ізольованому важкому ланцюгу антитіла, що містить амінокислотну послідовність, представлену в ЗЕО ІЮО МО: 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23,25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 122, 123, 197, 199, 201, 163, 209, 210, 211 або 225.
Наступний аспект даного винаходу полягає в ізольованому важкому ланцюгу антитіла, що містить амінокислотну послідовність, представлену в ЗЕО ІЮ МО: 102, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 160, 204, 206, 208, 220, 166 або 168. 6о Наступний аспект даного винаходу полягає в ізольованому легкому ланцюгу антитіла, що містить амінокислотну послідовність, представлену в ЗЕО ІЮ МО: 155, 156, 157, 158, 203, 205, 207, 165, 167 або 227.
Наступний аспект даного винаходу полягає в ізольованому полінуклеотиді, який кодує важкий ланцюг антитіла, що містить амінокислотну послідовність, представлену в ЗЕО ІЮО МО: 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 159, 198, 200, 202, 164, 212, 213, 214, 215 або 216.
Наступний аспект даного винаходу полягає в ізольованому полінуклеотиді, який кодує легкий ланцюг антитіла, що містить амінокислотну послідовність, представлену в 5ЕО ІЮ МО: 5, 7,9,11,13, 15,17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 122, 123, 197, 199, 201, 163, 209, 210, 211 або 225.
Наступний аспект даного винаходу полягає в ізольованому полінуклеотиді, який кодує важкий ланцюг антитіла, що містить амінокислотну послідовність, представлену в ЗЕО ІЮ МО: 102, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 160, 204, 206, 208, 220, 166 або 168.
Наступний аспект даного винаходу полягає в ізольованому полінуклеотиді, який кодує легкий ланцюг антитіла, що містить амінокислотну послідовність, представлену в 5ЕО ІЮ МО: 155, 156, 157, 158, 203, 205, 207, 165, 167 або 227.
Наступний аспект даного винаходу полягає в фармацевтичній композиції, що складається з ізольованих антитіл даного винаходу і фармацевтично прийнятних носіїв.
Наступний аспект даного винаходу полягає у векторі, що включає щонайменше один полінуклеотид, представлений в даному винаході.
Наступний аспект даного винаходу полягає в клітинах-хазяях, що містять вектор, представлений в даному винаході.
Наступний аспект даного винаходу полягає в способі отримання антитіл, здатних реагувати з ТКЗ, що полягає в культивуванні клітин-хазяїв, представлених в даному винаході, і відборі антитіл, що виробляються клітинами-хазяями.
Наступний аспект даного винаходу полягає в способі лікування або профілактики запальних захворювань, який включає введення терапевтично ефективних доз ізольованих антитіл, представлених в даному винаході, потребуючим лікування пацієнтам протягом періоду, достатнього для лікування або попередження запального захворювання.
Наступний аспект даного винаходу полягає в способі лікування або профілактики системних запальних захворювань, який включає введення терапевтично ефективних доз ізольованих антитіл, представлених в даному винаході, потребуючим лікування пацієнтам протягом періоду, достатнього для лікування або попередження системного запального захворювання.
Наступний аспект даного винаходу полягає в способі лікування діабету 2 типу, який включає введення терапевтично ефективних доз ізольованих антитіл, представлених в даному винаході, потребуючим лікування пацієнтам протягом періоду, достатнього для лікування діабету 2 типу.
Наступний аспект даного винаходу полягає в способі лікування гіперглікемії, який включає введення терапевтично ефективних доз ізольованих антитіл, представлених в даному винаході, потребуючим лікування пацієнтам протягом періоду, достатнього для лікування гіперглікемії. 4о Наступний аспект даного винаходу полягає в способі лікування гіперінсулінемії, який включає введення терапевтично ефективних доз ізольованих антитіл, представлених в даному винаході, потребуючим лікування пацієнтам протягом періоду, достатнього для лікування резистентності до інсуліну.
Наступний аспект даного винаходу полягає в способі лікування або профілактики вірусних інфекцій, який включає введення терапевтично ефективних доз ізольованих антитіл, представлених в даному винаході, потребуючим лікування пацієнтам протягом періоду, достатнього для лікування або профілактики вірусних інфекцій.
Докладний опис винаходу
Всі публікації, що згадуються в даному описі, в тому числі, крім іншого, патенти і патентні заявки, включені в даний опис шляхом посилання, є частиною цього документа, як якби вони були викладені безпосередньо в цьому документі.
Використовуваний в даному винаході термін "антагоніст" означає молекулу, яка будь-яким способом, частково або повністю, інгібує ефект іншої молекули, такої, як рецептор або внутрішньоклітинний медіатор.
Використовуваний в даному винаході термін "антитіла-антагоністи ТК 3" або антитіла, "здатні реагувати з ТІ КЗ", стосується антитіл, здатних прямо або опосередковано фізично взаємодіяти, зменшувати або інгібувати біологічну активність ТІ КЗ або активацію рецептора
Т.КЗ. Наприклад, антитіло, здатне реагувати з ТІ КЗ, може зв'язуватися безпосередньо з ТІ КЗ і нейтралізувати активність ТІКЗ3, тобто блокувати сигнальний шлях ТІК3, приводячи до 6о зменшення продукції цитокінів і хемокінів, або до активації МЕ-кВ.
Використовуваний в даному винаході термін "антитіла" що має широке значення і стосується імуноглобулінів або молекул антитіл, включаючи поліклональні антитіла, моноклональні антитіла, включаючи мишачі/щурячі, людські адаптовані до людини, гуманізовані і химерні моноклональні антитіла і фрагменти антитіл.
У загальному значенні антитіла є біле"ами або пептидними ланцюжками, які специфічно зв'язуються зі специфічним антигеном. Інтактні антитіла є гетеротетрамерними глікопротеїнами, що складаються з двох однакових легких ланцюгів і двох однакових важких ланцюгів. Звичайно, кожний легкий ланцюг пов'язаний з важким ланцюгом за допомогою одного ковалентного дисульфідного містка, тоді як число дисульфідних зв'язків між важкими ланцюгами різних імуноглобулінових ізотипів може варіюватися. Кожний важкий і кожний легкий ланцюг також має регулярно розташовані внутрішні дисульфідні містки. На одному кінці кожного важкого ланцюга розташований варіабельний домен (варіабельна область, МН), за якою йде ряд постійних доменів (постійні області). Кожний легкий ланцюг має на одному кінці варіабельний домен (МІ), а на іншому кінці - постійний домен. Постійний домен легкого ланцюга знаходиться навпроти першого постійного домену важкого ланцюга, а варіабельний домен легкого ланцюга знаходиться навпроти варіабельного домену важкого ланцюга. Виходячи з амінокислотної послідовності постійних доменів легкий ланцюг антитіла будь-якого виду хребетних може бути віднесена до одного з двох типів, що чітко розрізнюються, а саме, каппа (к) і лямбда (Х).
Імуноглобуліни діляться на п'ять великих класів, а саме, ІдА, дО, ІДЕ, до і ДМ, в залежності від амінокислотного складу постійного домену важкого ланцюга. ІА і дб, в свою чергу, поділяються на ізотипи ІДА1, ІдАг, ІДС, Ідс2, ДОЗ і Іа.
Термін "фрагмент антитіла" стосується частини інтактного антитіла, звичайно це антигензв'язувальна або варіабельна ділянка інтактного антитіла. Наприклад, до фрагментів антитіла належать фрагменти Рар, Рар, Е(аб)» ії Ем, діатіла, одноланжюжкові фрагменти антитіла і мультиспецифичні антитіла, сформовані з щонайменше двох інтактних антитіл.
Варіабельні ділянки легкого або важкого ланцюга складаються з "каркасної" ділянки, перерваної трьома "антигензв'язувальними ділянками". Антигензв'язувальні ділянки можуть називатися по-різному, наприклад: (ї) термін "визначаючі комплементарність ділянки" (СОК) відображає варіабельність послідовності (МУ апа Кабаї, У. Ехр. Мей. 132: 211-250, 1970). Як правило, антигензв'язувальна ділянка має шість СОК; три з яких розташовані на МН (НСОКІ1,
НСОК2, НОСОК), а інші три - на МІ (І СОК1, І СО, І СОКУ) (Кабаї еї аї., Зедиепсез ої Ргоївіп5 ої Іттипо|одісаї! Іпіегеві, Бій Ей. Рибіїс Неацй 5егмісе, Маййопаї! Іпзійшевз ої Неанцй, Веїпезаа, Ма., 1991). (ії) Згідно з визначенням Чотії і Леска, термін "гіперваріабельна ділянка", "НМК", або "НМУ" стосується варіабельного домену антитіла, який має гіперваріабельну структуру (Споїпіа апа
ГезкК, Мої. Віої. 196: 901-917, 1987). Як правило, антигензв'язувальна ділянка містить шість гіперваріабельних областей, три з яких знаходяться в МН (НІ, Н2, НЗ)ітри -вМІ (11,12, 1 3).
Чотіа і Леск називають структурно консервативні НМ "канонічними структурами". (ії) "МетТ-СОВ"
Згідно з Лефранком (І еїгапс еї аІ.,, Оем. Сотрагаї. Іттипої. 27:55-77, 2003), термін ""МОТ-СОВ" основується на порівнянні п'яти доменів імуноглобулінів і рецепторів Т-клітин. У міжнародній 4о базі даних ІптпМипоСепетТіс5 (ІМОеТ; пЕр:/Лимли ітої огу) приводиться стандартизоване позначення і визначення цих ділянок. Відповідність між СОК, НМ ї ІМОСТ детально описане у
Ї етапс еї а!., Оєм. Сотрагаї. Іттипої. 27:55-77, 2003. (ім) Антигензв'язувальна ділянка також може бути визначена на основі використання залишків, що визначають специфічність (ОВО) (АІтадго, Мої. Несодпії. 17:132-143, 2004), де термін "визначаючі специфічність амінокислотні залишки" (5ресійсну аейегтіпіпуд гезічце5, ЗОК) використовується для позначення амінокислотних залишків імуноглобулінів, безпосередньо залучених до контакту з антигеном.
ЗОВИ - точна міра кількості і розподілу ЗОК для різних типів антигенів, згідно з результатами аналізу кристалічної структури комплексів антиген-антитіло. (м) Антигензв'язувальну ділянку також можна визначити як залишки паратопу антитіла, визначені в кристалічній структурі комплексу антиген-антитіло.
Використовуваний в даному винаході термін "композитні послідовності" означає антигензв'язувальну ділянку, що включає всі амінокислотні залишки, індивідуально згадані у
Кабата, Чотії або в ІМСТ, або будь-які інші ділянки, визначені як антигензв'язувальні. "Залишки Чотіа" в даному документі належать до Мі. і МН областей антитіла і нумеруються згідно з АЇ!-І агіКапі (А!-І агіКапі еї аї., У. Мої. Віої. 273: 927-48, 1997). Відповідністье між двома найбільш використовуваними системами нумерації, Кабата (Караї єї аїЇ., бедиєпсе5 ої
Іпптипо!одісаї Іптегеві, Бій Ей. Рибіїс Неацй з5егмісе, МІН, Веїпезаа, МО, 1991) і Чотіа (Споївіа апа
І езкК, Мої. Віої. 196:901-17, 1987) по відношенню до послідовної нумерації поліпептидів показано на фіг. 31 на прикладі антитіл, які належать до даного винаходу. 6о Назва "каркасна ділянка" або "каркасні послідовності" стосується послідовностей варіабельних ділянок, які не були визначені як антигензв'язувальні. Каркасну ділянку звичайно розділяють на чотири області, ЕК1, ЕК2, ЕКЗ і ЕКЗ, які утворюють каркасну структуру для трьох антигензв'язувальних ділянок в кожній варіабельній області. Оскільки для визначення антигензв'язувальної ділянки можуть використовуватися різні терміни, як указано вище, визначення точної послідовності амінокислот каркасного ділянки залежить від визначення антигензв'язувальної ділянки. "Каркасна ділянка варіабельної області легкого ланцюга каппа 1 (Мк1)" або "Мк1" в цьому документі означає каркасну ділянку з амінокислотною послідовністю, що кодується будь-яким з людських функціональних генів Мкі або їх алелів. Наприклад, це наступні функціональні людські гени Мк1: ІЗКМ1-5701, ІШКМ1-6701, ІШКМ1-8701, ІШКМ1-9701, КМ1-12701, ІЖКМ1-13702,
ІаКМ1-16701, ІКМ1-17701, ІШКМ1-27701, ІШКМ1-33701, ІШКМ1-37701, ІШКМ1-39701, ІЖКМ10-8701,
ІаКМ10-12701, ІаКМ10-13701, І2КМ10-16701, І2КМ10-17701, ІїаКМ10-33701, І2КМ10-37701,
ІШКМ10-39701, ІЯКМ10-42701 або ІБКМ10-43701. Номенклатура генів імуноглобуліну добре відома. "Каркасна ділянка варіабельної області легкого ланцюга ламбда З (МАЗ)" або "МАЗ" в цьому документі означає каркасну ділянку з амінокислотною послідовністю, що кодується будь-яким з людських функціональних генів МАЗ або їх алелів. Наприклад, це наступні функціональні людські гени МАЗ: ІІ М3-1701, ІІ М3-9701, ІІ М3-10701, ІСІ М3-12701, ІШІ М3-16701, ІСІ М3-19701,
І2І М3-21701, ІСІ М3-22701, ІІ М3-25701, ІШІ М3-27701 і ІСІ М3-32701. "Каркасна ділянка варіабельної області легкого ланцюга МИ5" або "Мп5" в цьому документі означає каркасну ділянку з амінокислотною послідовністю, що кодується будь-яким з людських функціональних генів Уп5 або їх алелів. Наприклад, це наступні функціональні гени МА5: ІЗНМ5- 51701 ії ІЗНМ5-1701. "Каркасна ділянка варіабельної області легкого ланцюга Мб" або "Мпб6" в цьому документі означає каркасну ділянку з амінокислотною послідовністю, що кодується будь-яким з людських функціональних генів Упб або їх алелів. Наприклад, це функціональний ген Упб ІЗНМб-1701. "Каркасна ділянка легкого ланцюга .)-каппа (або дк)" в цьому документі означає каркасну ділянку з амінокислотною послідовністю, що кодується будь-яким з людських функціональних генів Ук або їх алелів. Наприклад, це функціональні людські гени Мк їКУ1, ІЗКОг, ІБКОЗ, ІКО4 і КБ. "Каркасна ділянка --ламбда легкого ланцюга (або ХА)" в цьому документі означає каркасну ділянку з амінокислотною послідовністю, що кодується будь-яким з людських функціональних генів ОА або їх алелів. Наприклад, це функціональні людські гени ОА ІСІ 91, 502, ІБ ОЗ, ІІ 04,
ІБ ОБ, 16 і 167. "Каркасна ділянка У-області важкого ланцюга" або "дп" в цьому документі означає каркасну ділянку з амінокислотною послідовністю, що кодується будь-яким з людських функціональних генів Ой або їх алелів. Наприклад, це функціональні гени УП ІїНУ1, ЗНУОг, ІНОЗ, І6Н.Я, ІБНОБ і
ІшНУб.
Термін "гени зародкової лінії" або "гени зародкової лінії антитіла" в цьому документі означає послідовності імуноглобуліну, що кодуються нелімфоїдними клітинами, що не піддались процесу дозрівання, який веде до генетичної перебудови і мутації для експресії конкретного імуноглобуліну.
Термін "каркасний білок' в цьому документі означає амінокислотні послідовності варіабельної області легкого або важкого ланцюгів, що кодуються людськими зародковими генами. Таким чином, цей термін охоплює і каркасну область, і антигензв'язувальну ділянку.
Використовуваний в даному винаході термін "антиген" означає будь-яку молекулу, яка прямо або опосередковано може приводити до вироблення антитіл. Поняття "антиген" також включає кодуючу білок нуклеїнову кислоту.
Термін "гомолог" означає білкові послідовності, що мають від 4095 до 10095 схожості по відношенню до послідовності, що розглядається. Гомологами людського ТІ КЗ є поліпептиди інших видів, що мають від 4095 до 100905 схожості по відношенню до вже відомої послідовності людського ТІ КЗ. Ідентичність між двома пептидними ланцюжками, визначена в процентному співвідношенні, може бути обчислена шляхом попарного поєднання за допомогою настройки за умовчанням в модулі АЇйдпХ програмного забезпечення Месіог МТ! м.9.0.0 (Іпмігодеп,, СА).
Термін "ТІ! КЗ" означає людський ТІКЗ (пит! КЗ) і його гомологи. Повна нуклеотидна і амінокислотна послідовності людського ТІ БЕЗ показані в ЗЕО І МО: 1 і 2, відповідно.
Нуклеотидні і амінокислотні послідовності позаклітинного домену (ЕСО) людського ТІКЗ представлені в зЕО ІЮ МО: З і 4, відповідно.
Використовуваний в даному винаході термін "по суті ідентичний" означає, що амінокислотні 6о послідовності двох антитіл або фрагментів антитіл при порівнянні є ідентичними або мають
"незначні відмінності". Незначними відмінностями є заміщення 1, 2, 3, 4, 5 або 6 амінокислот в амінокислотній послідовності антитіла або фрагмента антитіла. Амінокислотні послідовності, по суті ідентичні послідовностям, представленим в даному винаході, також розглядаються як частина даного винаходу. У деяких випадках ідентичність послідовностей може досягати 90905, 9195, 9295, 9395, 9495, 9595, 9695, 9795, 9895, 9995 або більше. Ідентичність в процентному співвідношенні може бути обчислена, як описано вище. Для порівняння пептидних ланцюжків найкращим чином підходять варіабельні ділянки важкого або легкого ланцюга.
Використовуваний в даному винаході термін "в поєднанні з" означає, що описані активні речовини можуть використовуватися спільно, утворюючи суміш, окремо або послідовно в будь- якому порядку.
Використовуваний в даному винаході термін "запальне захворювання" означає місцеву (локальну) реакцію на клітинне пошкодження, частково опосередковану активністю цитокінів, хемокінів або запальних клітин (наприклад, нейтрофілів, моноцитів, лімфоцитів, макрофагів), яка в більшості випадків супроводжується болем, почервонінням, припухлістю і втратою тканиною своєї нормальної функції. Використовуваний в даному винаході термін "запалення легень" означає запальне захворювання, що вражає легені, або пов'язане з ними.
Використовуваний в даному винаході термін "моноклональне антитіло" (мАбБ) означає антитіло (або фрагмент антитіла), отримане з популяції по суті гомогенних антитіл.
Моноклональні антитіла високоспецифічні і, як правило, направлені проти єдиної антигенної детермінанти. Визначення "моноклональні" означає по суті гомогенний характер антитіл і не вимагає використання якого-небудь певного способу виробництва антитіл. Наприклад, мишачі тАб5 можна отримати гібридомним методом згідно з КопПіег еї аїЇ., Майшге 256:495-497, 1975.
Химерні тАбр5, що містять варіабельну область легкого і важкого ланцюга, отримані з донорного антитіла (звичайно мишачого) і постійні області легкого і важкого ланцюгів, отримані з акцепторного антитіла (звичайно іншого виду ссавців, наприклад, людини), можна отримати по методу, описаному в патенті Мо 4,816,567. Гуманізовані тАб, що мають СОК з донорного не людського імуноглобуліну (звичайно мишачого) і частини молекули, що залишилися, взяті з одного або декількох людських імуноглобулінів, можна отримати за допомогою методик, відомих фахівцям, наприклад, як описано в пат. Мо 5,225,539. Людські каркасні послідовності, які використовуються для отримання гуманізованих антитіл, можуть вибиратися фахівцями в цій галузі з відповідних баз даних. У випадку необхідності, для збереження афінності зв'язування гуманізовані мА можуть бути додатково модифіковані включенням змінених основ каркасної ділянки за допомогою способів, запропонованих Оцееп еї аї., Ргос. Май). Асай. сі. (О5А), 86:10029-10032, 1989 апа Нодозоп еї а!., Віо/ГесппоіІоду, 9:421, 1991.
Повністю людські мАб, що не містять жодної екзогенної послідовності, можуть бути отримані від мишей, що мають людський трансген, за допомогою існуючих методів, наприклад, І опрегд
Маїцгте 368:856-859, 1994; РібпУліа еї аї., Маште Віоїесппоіоду 14:845-851, 1996; і Мепае? еї аї.,
Маїште Сепеїйсв 15:146-156, 1997. Людські мАБ можуть бути отримані і оптимізовані за допомогою комбінаторних фагових бібліотек, а також за допомогою інших доступних способів, наприклад, Кпаррік еї аї., У. Мої. Вісі. 296:57-86, 2000; апа Кгерз еї аї., У. Іттипої. Мей. 254:67- 84 2001. Фрагменти антитіл, наприклад, Бар, Е(аб)», Ра ії АБ, можуть бути отримані шляхом розщеплення антитіл або методами рекомбінантної технології. Наприклад, фрагменти Раб і
Каб): можуть бути отримані шляхом обробки антитіл ферментом, наприклад, пепсином.
Використовуваний в даному винаході термін "епітоп" означає частину антигену, з якою специфічно зв'язуються антитіла. Епітопи звичайно складаються 3 хімічно активних (неполярних, полярних або гідрофобних), поверхнево розташованих функціональних груп, таких як бічні групи амінокислот або полісахаридів і можуть мати специфічну тривимірну структуру, а також специфічний заряд. Будова епітопа може бути лінійною або переривистою, наприклад, конформаційний епітоп, який формується в результаті просторової взаємодії амінокислот, що не знаходяться в безперервній амінокислотній послідовності антигену, на відміну від взаємодії лінійно пов'язаних амінокислот. Конформаційний епітоп включає епітопи, які виникають в результаті просторового зсідання білків антигенів, при якому амінокислоти з різних ділянок лінійної послідовності антигену виявляються в тісній близькості в тривимірному просторі.
Використовуваний в даному винаході термін "паратоп" означає частину антитіла, з якою специфічно зв'язується антиген. Паратоп може бути лінійним або дискретним, утвореним за рахунок просторових взаємовідношень між амінокислотами, що не знаходяться в безперервній послідовності, на відміну від взаємодії лінійно пов'язаних амінокислот. Терміни "паратоп легкого ланцюга" і "паратоп важкого ланцюга", або "амінокислотні залишки паратопа легкого ланцюга" і "амінокислотні залишки паратопа важкого ланцюга" означає амінокислотні залишки легкого і 60 важкого ланцюгів, що контактують з антигеном.
Використовуваний в даному винаході термін "специфічне зв'язування" стосується антитіл, що виявляють велику афінність при зв'язуванні з певними антигенами, в порівнянні з іншими антигенами або білками. Як правило, зв'язування антитіла характеризується константою дисоціації (Ко) 1077 М або менше. Зв'язування з призначеним антигеном відбувається при Ко, в два рази меншій, ніж Ко зв'язування з неспецифічним антигеном (наприклад, ВЗА, казеїн, або будь-який інший поліпептид), відмінним від призначеного антигену. Фрази "антитіло, що розпізнає антиген" і "антитіло, специфічне до антигену" використовуються як взаємозамінні разом з виразами "антитіло, яке специфічно зв'язується з антигеном" або "специфічне до антигену антитіло", наприклад, антитіло, специфічне до ТІ КЗ. Константа дисоціації може бути виміряна за допомогою стандартних способів, описаних далі.
Використовуваний в даному винаході термін "Біологічна активність ТІ КЗ " або "активація
ТІ КЗ" стосується будь-якої активності, що є результатом зв'язування ліганду з ТІ КЗ. Ліганди
ТГКЗ включають дволанцюжкову РНК, полі(І:С) і ендогенну МРНК, наприклад, мРНК, вивільнену з некротичних клітин. У окремих випадках, активація ТІ КЗ приводить до активації МЕ-кВ у відповідь на зв'язування ліганду ТІ КЗ3. Експериментальна оцінка активації МЕ-кВ може бути здійснена з використанням гена-репортера після індукції рецептора лігандом полі(І:С) (Аіехороціои вї аї., Майшге 413:732-738, 2001; НаскКег вії аІ., ЕМВО 4). 18: 6973-6982, 1999). У інших випадках активація ТІ КЗ приводить до активації факторів (ІКЕ-3, ІВЕ-7), що беруть участь в інтерфероновій відповіді, у відповідь на ліганд ТІ КЗ. Експериментальна оцінка опосередкованої рецептором ТІ КЗ активації ІЖКЕ може бути зроблена за допомогою гена-репортера, що контролюється інтерферон-стимульованими елементами (іпіепегоп-5ійтиасгеа гезропзе єіетепі - ІЗКЕ). У окремих випадках активація ТІ КЗ приводить до секреції прозапальних цитокінів і хемокінів, наприклад, ТМЕ-а, 1-6, І -8, І/-12, СХСІ Б/Р-10 ії КАМТЕ5. Вивільнення цитокінів і хемокінів з клітин, тканин або в циркуляційних потоках може бути виміряне за допомогою добре відомих імунологічних тест-систем, таких як ІФА.
У даному винаході використані загальноприйняті одно- і трибуквені коди позначення амінокислот:
Амінокислота Трибуквений код Однобуквений код
Аланін Аа А
Аргінін Ага в
Аспарагін Авп Н
Аспарагінова кислота Ар р
Цистеїн Сув (9;
Глутамінова кислота Сім Е
Глутамін Сіп (Ф)
Гліцин спу (Є.
Гістидин Ніб н
Ізолейцин Пе Ї
Лейцин Ї еи Г
Лізин Гуз К
Метіонін Меї М
Фенілаланін Рпе Е
Пролін Ріо Р
Серин зег З
Треонін Ти т
Триптофан Тр М
Тирозин Ту У
Валін Маї М
Композиції даного винаходу
Даний винахід стосується антитіл-антагоністів, здатних інгібувати біологічну активність ТІ КЗ і використання цих антитіл. Антагоністи ТІ КЗ можуть зв'язуватися з ТІ КЗ і інгібувати активацію
ТІКЗ3. Приклади механізмів, по яких вказані антитіла можуть інгібувати активацію ТІ КЗ, включають інгібування іп міїго, іп мімо або іп 5йи шляхом зв'язування лігандів з ТІ КЗ, інгібування димеризації рецептора, інгібування ТІ КЗ в ендосомі, інгібування кіназної активності подальшого сигнального шляху або інгібування транскрипції матричних РНК ТІ КЗ. Інші антитіла-антагоністи, здатні інгібувати активацію ТІКЗ за рахунок інших механізмів, також є частиною даного винаходу. Дані антагоністи знаходять застосування як дослідницькі і діагностичні реагенти, а також терапевтичні агенти.
У природі різноманітність антитіл створюється завдяки множині генів зародкової лінії, які кодують варіабельні області, і множині соматичних подій. Соматичні події включають рекомбінацію змінного генного сегмента, сегмента різноманітності (0) і сегмента приєднання (7), а при утворенні ділянки МІ. - рекомбінацію М і) сегментів. Сам процес рекомбінації може бути неточним, приводячи до зменшення або збільшення числа амінокислот в місці з'єднання М(0).
Ці механізми різноманітності діють в В-клітинах, що розвиваються, до антигенної стимуляції.
Після антигенної стимуляції гени антитіл, які експресуються, в В-клітинах піддаються соматичній мутації. На основі оцінки числа сегментів генів зародкової лінії, довільна рекомбінація цих сегментів і довільне спарювання МН-МІ може дати початок до 1,6х107 різних антитіл (ГипдатепіаІ Іттипооду, З ей. (1993), єа. Раш, Вамеп Ргез5, Мем Мої, М.У.). Якщо враховувати інші процеси, які сприяють різноманітності антитіл (наприклад, соматичні мутації), вважають, що можлива генерація до 1079 різних антитіл (Іттиподіобийп Сепев, 279 ей. (1995), ей5. допіо еї аї., Асадетіс Ргез55, Зап Оіедо, Саїй.). Оскільки в забезпеченні різноманітності антитіл бере участь багато процесів, дуже малоймовірно, що отримані незалежно моноклональні антитіла з такою ж антигенною специфічністю буде мати ідентичні амінокислотні послідовності.
Винахід представляє нові ділянки зв'язування антигенів і ланцюги імуноглобуліну, отримані з використанням бібліотек людських генів імуноглобулінів. Структура, яка несе антигензв'язувальну ділянку, звичайно є важким або легким ланцюгом антитіла, або частиною вказаних структур, де антигензв'язувальна ділянка розташовується на своєму природному місці, згідно з приведеним вище описом.
У даному винаході пропонуються ізольовані антитіла або їх фрагменти, здатні реагувати з
ТІ КЗ, що містять варіабельні ділянки важкого і легкого ланцюгів, в тому числі антитіла, що містять амінокислотні послідовності 1, 2 ії З (НСОКІ, НОСОК? ї НСОКЗ) визначаючої комплементарність ділянки важкого ланцюга (СОК) і амінокислотні послідовності 1, 2 і З (СОК1, СОКа2 ї ГСОКЗ) визначаючої комплементарність ділянки важкого ланцюга (СОК), показані в Таблиці та.
Таблиця Та 27177 Ї77117581 11164 | 60 | 55 | 56 |ЮющД Я(Я57 718. | 70 2 | 77 | 72 | 67 | 68 | 65 719 | ю.82 | 83 | 84 | 7 | 80 | 89 / 8758 | 59 | щ60 | 55 | 56 | 57 774. 6 1 62 | 60 | 55 | 56 | 57 25 | 6 Її 64 | 60 | 55 | 56 | 63 / 76 | 6 1 64 | 60 | 55 | 56 | 6 27771161 1 64 | 60 | 55 | 56 | 66 / 78 | 7 7 | 72 | 67 | 68 | 65 778 | ю.7 |! 73 | 72 | 67 | 68 | 65 70 7770... 75 | 72 | 67 | 68 | 74 17111701 111177 | 72 | 67 | 68 (ДБ Бм75 712. .| 7 2 | 77 | 72 | 67 | 68 1 78 / 713 | 82 2 | 83 | 84 | 7 | 80 | 8 7714... 82 | 86 | 84 | 7 | 80 | 85 / 715" 77771782. | 86 | 84 | 7 | 80 | Юющ ж 87
Таблиця Та
Ме таб: ЗЕО ІЮ МО:
Й І нНСОВІ1 неова2 нсОоВвЗ ІСОВ1 сорв2 І совЗ 15-40. | 716 | 2 | 7119. | 79 | 80 | 226 7 761 | 7192 | 60 | 55 | 56 | 19 8 | 702 2 Ю .| 7194 | 72 | 67 | 68 | 193 ле | 82 | 7196 | 84 | 79 | 80 | 1855 157 СОК по базі ІМОТ 1577 СОК як загальний типовий елемент
У певних варіантах здійснення даного винаходу пропонуються ізольовані антитіла або їх фрагменти, здатні реагувати з ТІ КЗ, що містять варіабельні ділянки важкого і легкого ланцюгів, включаючи антитіла, що містять амінокислотну послідовність НСОК2, представлену в ЗЕО ІЮ
МО: 192, де НСОКЗ2 послідовності 5ЕО 10 МО: 192 НСОКІ2 визначається формулою (1):
Хаав-І-Хаа;-Хаав-А-5-Хаа»-М/-У-М-0-М-А-М-5-У, (І) де
Хаає може бути Аг або І уз;
Хаа; може бути Туг, Ні або Зег;
Хаав може бути Меї, Агу або Туг; і
Хаа» може бути ГГ уз або Ага.
У інших варіантах здійснення даного винаходу пропонуються ізольовані антитіла або їх фрагменти, здатні реагувати з ТІ КЗ, що містять варіабельні ділянки важкого і легкого ланцюгів, включаючи антитіла, що містять амінокислотну послідовність НСОК2, показану в ЗЕО ІЮО МО: 194, де НСОКЗО послідовності 5ЕО ІЮ МО: 194 визначається формулою (11):
ІІ-О Хааїв5-8-5-К-М/-У-М-Хаатв-У-А-Хаа17-5-М-К-5, (І) де
Хаа:5 може бути ГГ уз, Тпиг або Іе;
Хааїє може бути Азп або Азр; і
Хаа:? може бути Маї або І еи;
У інших варіантах здійснення даного винаходу пропонуються ізольовані антитіла або їх фрагменти, здатні реагувати з ТІ КЗ, що містять варіабельні ділянки важкого і легкого ланцюгів, включаючи антитіла, що містять амінокислотну послідовність НСОК2, показану в ЗЕО ІЮО МО: 196, де НСОКЗО з 5ЕО ІЮО МО: 196 визначається як показано в формулі (М):
Хаага-І-0-Р-5-0-5-У-Т-М-У-Хааг5-Р-5-Е-0-0, (М) де
Хаага може бути Ре або Аго; і
Хааг» може бути Аа або 5ег.
У інших варіантах здійснення даного винаходу пропонуються ізольовані антитіла або їх фрагменти, здатні реагувати з ТІ КЗ, що містять варіабельні ділянки важкого і легкого ланцюгів, включаючи антитіла, що містять амінокислотну послідовність ЇЇ СОКЗ, показану в БЕО ІЮ МО: 191, де (СОКЗ з 5БЕО ІЮО МО: 191 визначається як показано в формулі (І):
Хааї-5-7-О0 Хааг-Хааз-Хаа«-Хаав- Т-У, (І) де
Хаа: може бути Аа, СіІп, Су або 5ег;
Хаа: може бути Су, Сім або 5ег;
Хааз може бути Азр або Авп;
Хаах може бути Сім або Зегі
Хаа5 може бути Ре, Аїа або І еи.
У інших варіантах здійснення даного винаходу пропонуються ізольовані антитіла або їх фрагменти, здатні реагувати з ТІ КЗ, що містять варіабельні ділянки важкого і легкого ланцюгів,
включаючи антитіла, що містять амінокислотну послідовність ЇЇ СОКЗ, показану в БЕО ІЮ МО: 193, де Ї/СОКЗ з БЕО ІЮ МО: 193 визначається як показано в формулі (ІМ):
Хааю-5-х7-О Хаа-Р-Хаа2г-Хааїз-Хаат-У, (ІМ) де
Хаао може бути Сіп або 5ег;
Хаа:: може бути ТНг, Сім або Авр;
Хаа:г може бути Маї або Авп;
Хааїз може бути Туг або Ре; і
Хаа:« може бути 5ег, Азп або Сіп; або
У інших варіантах здійснення даного винаходу пропонуються ізольовані антитіла або їх фрагменти, здатні реагувати з ТІ КЗ, що містять варіабельні ділянки важкого і легкого ланцюгів, включаючи антитіла, що містять амінокислотну послідовність ЇЇ СОКЗ, показану в БЕО ІЮ МО: 195, де Ї/СОКЗ з БЕО ІЮ МО: 195 визначається як показано в формулі (МІ):
О-О Хааїв Хаате-Хааго-Хаагі-Хаагг-Хаагз-Т, (МІ) де
Хааїв може бути Туг, Су або Аа;
Хаа:о може бути Су, Сім або Авп;
Хааго може бути бег або ТНг;
Хаа» може бути Маї, Пе або І еи;
Хаа» може бути 5ег або І ви; і
Хаагз може бути Пе, 5ег, Рго або Туг.
У даному винаході також пропонуються ізольовані антитіла і їх фрагменти, здатні реагувати з ТІ КЗ, що містять амінокислотні послідовності 1, 2 ії З (НСОКІ, НСОКЗ2 і НСОКЗ) визначаючі комплементарність ділянки важкого ланцюга (СОК) і амінокислотні послідовності 1, 2 і З (СОКІ, сСОК2 ії ГСОКЗ) визначаючі комплементарність ділянки легкого ланцюга (СОК), показані в Таблиці та.
Антитіла, чиї амінокислотні послідовності антигензв'язувальних ділянок не відрізняються істотним чином від послідовностей, представлених в Таблиці 1а (ЗЕО ІЮ МО5: 49-121 або 191- 196), розглядаються як частина даного винаходу. Як правило, це стосується заміни амінокислот на інші амінокислоти, що мають схожий заряд, гідрофобні або стереохімічні характеристики.
Також можливі додаткові заміни в каркасних ділянках, на відміну від антигензв'язувальних ділянок, у випадку, якщо вони не змінюють властивостей антитіла. Можливі заміщення, поліпшуючі властивості антитіла, такі, як стабільність або афінність. Одне, два, три, чотири, п'ять або шість заміщень можуть бути зроблені в антигензв'язувальній ділянці. Можливе заміщення 195, 295, 395, 495, 595, 1095, 1595, 2095, 2595 або 3095 амінокислотних залишків каркасного фрагмента при умові збереження бажаних властивостей антитіла.
Консервативні модифікації приведуть до створення молекул, що мають функціональні і 4о хімічні характеристики, близькі до вихідної молекули. Суттєві модифікації функціональних і/або хімічних характеристик молекул можуть бути досягнуті шляхом тих заміщень в амінокислотній послідовності, які приводять до змін (1) в структурі каркаса молекули в ділянці заміщення, наприклад, до плоскої або спіральної конформації, (2) в заряді або гідрофобності молекули в ділянці заміщення або (3) в розмірі молекули. Наприклад, "консервативні амінокислотні заміщення" можуть означати заміщення природних амінокислотних залишків на неприродні, які не супроводжуються зміною полярності або з незначними змінами полярності в ділянці заміщення. Більш того, будь-який природний амінокислотний залишок в поліпептиді може бути заміщений аланіном, згідно зі способом, описаним як аланінскануючий мутагенез (Масі еппап еї а!І., Аста Рпузіої. 5сапа. зиррі. 643:55-67, 1998; Зазакі єї а!., Аду. Віорпув. 35: 1-24, 1998). Будь- яке бажане амінокислотне заміщення (консервативне або ні) може бути заплановане фахівцем у випадку необхідності. Наприклад, амінокислотне заміщення може бути використане для того, щоб ідентифікувати важливі амінокислотні залишки в послідовності або з метою збільшення/зменшення афінності молекул, запропонованих в даному винаході. Деякі амінокислотні заміщення показані в Таблиці 16.
У деяких варіантах здійснення консервативні амінокислотні заміщення можуть бути здійснені шляхом введення в молекулу неприродних амінокислотних залишків, яке звичайно відбувається при хімічному синтезі білків. Амінокислотні заміщення можуть бути здійснені, наприклад, за допомогою ПЛР мутагенезу (США Пат. Мо 4,683,195). Можуть бути створені бібліотеки нових варіантів за допомогою добре відомих способів, наприклад, застосування випадкових (ММК) або невипадкових кодонів, таких як кодони ЮМК, що кодують 11 амінокислот (АСОЕСКМАЗУУМ), а також пошуку варіантів з необхідними властивостями у вже існуючих бібліотеках, як показано в Прикладі 1. У Таблиці 1в показані заміщення, зроблені з метою покращення характеристик антитіл в трьох споріднених антитілах-антагоністах ТІ КЗ в межах ділянок ГСОРЗ і НСОК2.
У залежності від визначення антигензв'язувальних ділянок амінокислотні залишки антигензв'язувальних ділянок антитіл, запропонованих в даному винаході і, отже, амінокислотні залишки каркасних ділянок можуть злегка відрізнятися для кожного важкого і легкого ланцюга.
Таблиця 16 . - Більше
Вихідний й заміщень пес) цей, Ма, МебАіа, Рпе, Норлейцин./././://./ | ген о ец() о /Норлейцин,Пе, Ма, МебАіа,РНє.д//-/:/
У Таблицях 2а і 2б показані залишки антигензв'язувальних ділянок деяких антитіл, запропонованих в даному винаході, згідно з Кабатом, Чотія і ІМОСТ, а також їх композитні послідовності.
У інших варіантах здійснення даного винаходу пропонуються ізольовані антитіла або фрагменти антитіл, здатні взаємодіяти з ТІ КЗ, що містять варіабельні ділянки важкого і легкого ланцюгів, де антитіла містять амінокислотні послідовності варіабельних ділянок важкого (МН) і легкого (МІ) ланцюгів, а також пропонуються варіабельні ділянки для кожного окремого важкого і легкого ланцюга, як показано в Таблиці За. Е17, Е18 і Е19 належать до варіантів антитіл, що містять амінокислотну послідовність-консенсунс для сімейств 17, 18 і 19, відповідно (див.
Приклад 1).
Таблиця 1в том І Нк к КОКО
І СОВЗ ІО бе 17. | А 5 осо єЕ|Ї ЕМ ГП ши и п п я Я ПО ПО ПО ПО НАХ НН НО НІ НІ НІ КН АН А А ПАХ
АТ
Го 11 ГЕ 5 АГ ППП 6 1а її 51485 с ППП 77 |511ї її 1551151 -711 17 71717177 загальний /Жеїе типовий АБ У С.Е,БІО,МЕ,5ІБЕ, АГ І ТІМ 191 жен аб у | о веволеввАЦТМ | 11 нед п п я я По ПО ПО ПО НОЯ НН ПО НІ НІ НІ НН НА НОЯ НА ПОН
МО: 17... їв 1.1 м/ мів /|5Ї|к|мМмІмМ! о МІАЇмМІ5іУЇКк|5|Ї. ( вн 41 к/ 5 м тв ПП пи и п п я ПО ПО ПО НОЯ ПО НАХ НН НО НІ НІ НА КН АН А А ПАХ в в и п п я ПО ПО ПО НОЯ ПОН НАХ НН НК ННІ НІ НА КН АН А А ПАХ жен | як пкнами ов зкрж ємо Ам екв те типовий вк У,н,5 У ЗІКВІ|І М |М|М МІАЇМІВІМІКІВЇ 192 елемент 7 З 18А І СОВЗ ІО
Мо 18 |о5|ЇМ|о|5 (951 ЕЕ см ППП пи и п А п я ПО ПО ПО ПО НОЯ КОХ НОЯ ПО НОЖІ ННІ КІ НАХ НАЖИВКА ПОН ши и п А я я ПО ПО ПО ПО НОЯ ВХ ПОНІ ПО НОЖІ НОЖНІ КІ НАХ НАЖИВКА ПОН
Сімейство ее 17171155 тА 10. Го 5ЇМ о тім мМі вм ППП 1 1511 ГЕ ЇМ мМ 111 12 |5:11ї |о|1|чєЕ!о91 її 1 1 1 1117171 загальний оливи завів) о ов иківном (90011 елемент
Їх Загальний типовий елементнаоснові тАб5 10.1112І | ГП едии п а о я ПО ОО ПО ПО ПО НА НО НОХ НОЖІ НІ КИ НК НИ НІ НА ПОЇ 18А, 188 ноеОоВв2 ,
МО: 18 10111 о|ЇкІві5Ікімім|ІмМімМміМІАЇМмМ|5|мМ|кКкі/Ів пи и п А Я ох В ПО Я ПО НОЯ НОЯ НО Кт» Я НОЯ НОЯ НОЯ НОЯ КОНЯ НО НК ПАХ ши и п п А В ПО Я ПО ПО НОЯ НО Кт» УА НОЯ НОЯ КК ННЯ КОНЯ НОЯ НК ПАХ о з шк Р МИ М В Я ПО ПО Я ПО НОЯ НОЯ НО НОЯ НО НОЯ КОХ НОЖНІ КОН НО НК ПОХК ре ратів вро ра м я муе рю кув| в типовий І ЗІКІМІМІМІМОЇ МАМІ | 5|ІМ|КІВ 194 елемент
ЗЕО па Ко: 19 (910 |х|с|51М|511117 13 | | |сб ЕІ! 4151 1 7.14 | | |ІАЇЕЇ т! | (РІ! 15 | | |сіІм/т7 с м 151 | | смт їм 152 | | |сім/т7/с м 155 | | |с|ІмМ/т7 с м 154 | | |сіІм/т7 с м 155 | | |сім/т7/ с мМ 1566 | | |сіІм/т7/с мМ 157 | | см/с м 155 | | |с|ІмМ/т7/с мМ 159 | | |с0|мМ/т7 с мМ 15570 | | |сім/т7 с мМ загальний реве елемент " пе и а п По По пох По НОЯ ПО НОЯ
Іо МО: 19 | 101о /РІ|З/|Оо|51М| т |Мм|М|А|РІ5Іг(ОЇс в и т ОО Я ПО ПО ПО ПО КОНЯ НОЯ КОНЯ ННЯ ННЯ КОНЯ НАННЯ НЯ КОНЯ НАННЯ НАННЯ КОХ п: ст В Я ПО ПО ПО ПО КОНЯ НОЯ КОЛОН ННЯ ННЯ КОНЯ НАННЯ НЯ КОНЯ НАННЯ НАННЯ КОНЯ 151 в Її Її 17171 152 111 153 1117 ГГ 154 | 1 її 11717115 1 15 |В | Її Її 1 1 151111 1 156 1 1 171 15 156.4. 1 1 1 1111111 159 |в ЇЇ Її Її 1 1 11511111 15570 11 17171 загальний
ДЕ ее вія елемент
Хоч варіанти здійснення, проілюстровані в прикладах, містять варіабельні ділянки, одна для важкого і одна для легкого ланцюга, фахівці зрозуміють, що альтернативні варіанти здійснення можуть містити різні варіабельні ділянки важкого або легкого ланцюга. Одиночна варіабельна ділянка може використовуватися для пошуку другої варіабельної ділянки, здатної до формування дводоменного специфічного антигензв'язувального фрагмента, здатного, наприклад, зв'язуватися з ТІ КЗ. Такий пошук може здійснюватися за допомогою методів фагового відображення, наприклад, з використанням ієрархічного подвійного комбінаторного підходу, описаного в РСТ Рибі. Мо. УМО92/01047. Згідно з вказаним методом індивідуальна колонія, що містить клон Н або І ланцюгів, використовується для інфікування всієї бібліотеки клонів, що кодують інший ланцюг (Її або НН), а дволанцюжковий специфічний антигензв'язувальний домен, що з'являється в результаті, селективно відбирається відповідно до методів фагового відображення.
Таблиця 2а
Неон неон? Нео
ІМСТ СУЗЕТМУМ Що ІОРБЗОбУТМУ ові ПНЕСТОВУМОТЕ 141. Чота | | су | | РЗОБУТ ГТ уоаУмМотТео загальний ЕІОРЗОБУТМУАР АВЕГУОСУМОТЕ вувЕТММММ
ІМСТ СУЗЕТМУМ Що ІОРБЗОбУТМУ ва |НЕСОВУМОТЕ 151 юю Чота | | су5ЕТ | | РЗОБУТ ГТ уоаУмМотТео загальний ЕІОРЗОБУТМУАР АВЕГУОСУМОТЕ вувЕТММММ
ІМСТ СУЗЕТМУМ Що ІОРБЗОбУТМУ ові ПНЕСТОВУМОТЕ 15-41. Чота | | су5ЕТ | | РЗОБУТ ГТ уоаУмМотТео загальний ВІОР5О5УТМУАР АВЕГУОСУМОТЕ вувЕТММММ
ІМСТ СУЗЕТМУМ Що ІОРБЗОбУТМУ ові ПНЕСТОВУМОТЕ 15-21 Чота | | су5ЕТ | | РЗОБУТ ГТ уоаУмМотТео загальний ЕІОРЗОБУТМУАР АВЕГУОСУМОТЕ вувЕТМУМО
ІМСТ СУЗЕТМУМ Що ІОРБЗОбУТМУ ові ПНЕСТОВУМОТЕ 15-31 Чота | | сУу5ЕТ | | РЗОБУТ ГТ уоаУмМотТео загальний ЕІОРЗОБУТМУАР АВЕГУОСУМОТЕ вувЕТМУМИВ
ІМСТ СУЗЕТМУМ Що ІОРЗОЗУТМУ ва АвСВУМОТЕ 15-41 Чота | | су5ЕТ | | РБОБУТ ГТ УОЯУМОТео загальний ЕІОРБОБУТМУЄР, АВЕГУОСУМОТЕ вувЕТММММ
ІМСТ СУЗЕТМУМ Що ІОРЗОЗУТМУ ва АвСВУМОТЕ 15-51 Чота | | су5ЕТ | | РБОБУТ ГТ УОЯУМОТео загальний ВІОР5О5УТМУБР АВЕГУОСУМОТЕ увЕТМУЛВ
ІМСТ СУЗЕТМУМ Що ІОРЗОЗУТМУ о иасввимоте
Таблиця 2а
НСОВІ1 нерва несОоВвЗ 15-6| Чотіа | | сУ5ЕТ | 01 РБОБУТ | | госУМоОтТео загальний ЕОРБОБУТМУАР АВОЇ ХОСУМОТЕ
ІМСТ СУВЗЕТМУМ Що ІОРБОБУТМУ ва АвСВУМОТЕ 15-7| Чотіа | | сУ5ЕТ | 1 РБОБУТ | | госУМоОтТео загальний ЕОРБОБУТМУАР АВЕГ МОСУМОТЕ
ІМСТ СУВЗЕТМУМ Що ІОРБОБУТМУ ва | НЕО ВУМОТЕ 15-8| Чотіа | | сУ5ЕТ | 1 РБОБУТ | | госУМоОтТео загальний ЕОРБОБУТМУАР АВЕГ МОСУМОТЕ
ІМСТ СУВЗЕТМУМ Що ІОРБОБУТМУ ле лногувауМотЕ 15-9| Чотіа | | сУ5ЕТ | 0 РБОБУТ | | госУМоОтТео загальний ВІОРБОБУТМУ5Р АВОЇ ХОСУМОТЕ
У інших варіантах здійснення даного винаходу пропонуються ізольовані антитіла або фрагменти антитіл, здатні взаємодіяти з ТІ КЗ, що містять варіабельні ділянки важкого і легкого ланцюгів, що мають щонайменше 9595-а схожість з амінокислотною послідовністю певної варіабельної ділянки, як показано в Таблиці За.
Наступний аспект даного винаходу полягає в ізольованих антитілах, що мають певну амінокислотну послідовність важкого і легкого ланцюгів, як показано в Таблиці 36.
Наступний аспект даного винаходу полягає в ізольованих полінуклеотидах, що кодують будь-яке з антитіл, представлених в даному винаході і його доповненнях. Деякі полінуклеотиди описуються в даному винаході, однак, інші полінуклеотиди, які, беручи до уваги виродженість генетичного коду або перевагу використання кодонів в даній експресійній системі, кодують запропоновані в даному винаході антитіла-антагоністи, також розглядаються як частина даного винаходу.
Таблиця 26
І СОВ1 ІсОов2 І СсОовЗ мат ОБІСІУ | 80 | АА5 | 85 | ООАЕТУ5РТ 14 | Кабат | |ВАБОБІВІМА| | лАБ5БІО5 | | ООАЕТУ5РТ 14 | Чота | | 5ОБІСІМ | | АА5 | | АЕТУБР загальний
ВАБОБІСІ МА ААБЄЇ 05 ООАЛЕТУ5РТ
ІМСТ ОБІСІМ | 80 | АА5 | 87 | ОООМТІБУТ | Кабат | |ВАБОБІСІІМА!| | лАб5бІО5 | | ООСМТІ5УТ 151 Чота | | 5ОБІСІМ | | дА5 | | смт загальний
ВАБОБІСІ МА ААБЄЇ 05 ОООМтІ вт мат ОБІСІУ | 80 | АА5 | 87 | О00МЗБУТ
Таблиця 26
І СОВІ1 ІСсОоВ2 І СОВЗ 15-1| Кабат | | ВАБОБІСІІМА| | ААББІОВ | | ООСМТІ5УТ 5-1, Чота | | 5ОБІСІМ | | АА5 1777 | ОМТт5У загальний
ІМСТ ОБІСІМ | 80 | ААБ5 | 87 | ООСМТІ5УТ 15-2| Кабат | | ВАБОБІСІІМА| | ААББІОВ | | ООСМТІ5УТ л5-2| Чота | | 5ОБІСІМ | | АА5 1777 | ОМТт5У загальний
ВАБОВІСІ МА ААБІ О5 ООсМтІ УТ
ІМСТ ОБІСІМ | 80 | ААБ5 | 87 | ООСМТІ5УТ 15-3| Кабат | | ВАБОБІСІІМА| | ААББІОЗ | | ООСМТІ5УТ 715-3| Чота | | 5ОБІСІМ | | АА5 1777 | ОМТт5У загальний
ВАБОВІСІ МА ААБІ О5 ООсМтІ УТ
ІМСТ ОБІСІМ | 80 | ААБ5 | 87 | ООСМТІ5УТ 15-4| Кабат | | ВАБОБІСІІМА| | ААББІОЗ | | ООСМТІ5УТ 715-4| Чота | | 5ОБІСІМ | | АА5 1777 | ОМТт5У загальний
ВАБОВІСІ МА ААБІ О5 ООсМтІ УТ
ІМСТ ОВІСІМ | 80 | АА5 | 87 | ООСМТІЗУТ 15-5| Кабат | | ВАБОВІСІІМА| | ААЗБОВ | | ООСМТІ5УТ 15-5| Чота | | 8О8ІВІМ | (| АА5 || ОМмтвУ загальний
ВАВОІСІ МА ААББЇ 05 ООСМТтІ БУТ
ІМСТ ОБІСІМ | 80 | ААБ5 | 87 | ООСМТІ5УТ 15-6| Кабат | | ВАБОБІСІІМА| | ААББІОЗ | | ООСМТІ5УТ 15-6Ї Чота | | 5ОБІСІМ | | АА5 1777 | ОМТт5У загальний
ВАБОВІСІ МА ААБІ О5 ООсМтІ УТ
ІМСТ | О5ІББМ | 80 | 2 щ ААБ5 | 87 | ООСМТІБУТ 15-7| Кабат | | ВАБОБІЗБМІА| | ААББІОВ | | ООСМТІ5УТ 15-7| Чота | | 505І5БМ | | АА5 177 | ОМТт5У загальний
ВАБОБІЗ5МА ААБІ О5 ООсМтІ УТ
ІМСТ ОБІСІМ | 80 | ААБ5 | 87 | ООСМТІ5УТ 15-8| Кабат | | ВАБОБІСІМІМ| | ААББІОВ | | ООСМТІ5УТ 715-8| Чота | | 5ОБІСІМ | | АА5 1777 | ОМТт5У загальний
ВАБОВІСІ УМ ААБІ О5 ООсМтІ УТ
ІМСТ ОБІСІМ | 80 | ААБ5 | 87 | ООСМТІ5УТ 15-9| Кабат | | ВАБОБІСІІМА| | ААББІОЗ | | ООСМТІ5УТ 715-9| Чота | | 5ОБІСІМ | | АА5 1777 | ОМТт5У загальний
ВАБОВІСІ МА ААБІ О5 ООсМтІ УТ
Таблиця За 7.16 | 6 | 5 7117. .| 8 | 7 18 | 710 | 9 77776 | 24 | 2 717778... 28 | 27 75:98 Б5Ю ж ЮфЮф| 30 | 29
Деякими антитілами-антагоністами можуть бути антитіла ізотипів дос, дО, Ідс, ІА або ІдМ.
Крім того, ці антитіла-антагоністи можуть модифікуватися на постранскрипційцному рівні за рахунок таких процесів, як глікозилування, ізомеризація, деглікозилування або ненатуральна ковалентна модифікація, така як додання активної групи поліетиленгліколю (РЕС) або ліпідизація. Такі модифікації можуть відбуватися іп мімо або іп міго. Наприклад, антитіла, що пропонуються в даному винаході можуть бути кон'юговані з полиетиленгліколем з метою удосконалення їх фармакокінетичних характеристик. Кон'югація може бути виконана за допомогою відомих фахівцям способів. Показано, що кон'югація терапевтичних антитіл з ПЕГ посилює фармакодинаміку, не впливаючи на функцію (ЮОескегі еї аї., пі. у. Сапсег 87:382-390, 2000; Кпідні еї аї., РіаїеіІвїв 15:409-418, 2004; І еопд еї аїІ., СуюкКіпе 16:106-119, 2001; Мапа еї аї.,
Ргоївїп Епа. 16: 761-770, 2003).
Таблиця Зв
Таблиця Зв
Фармакокінетичні властивості антитіл, описаних в даному винаході, також можуть бути посилені за рахунок модифікацій Ес із застосуванням способів, добре відомих фахівцям.
Наприклад, важкий ланцюг імуноглобуліну ізотипу Їдс4 в шарнірній ділянці містить мотив Сув-
Рго-Бег-Суз (СРЗС), здатний формувати дисульфідні містки між важкими ланцюгами або всередині важкого ланцюга, наприклад, два Сух-залишки в мотиві СРОС можуть утворювати дисульфідний місток з двома іншими залишками в іншому важкому ланцюгу (між), або два залишки Суз всередині даного СРЗС мотиву можуть утворювати дисульфідний місток один з одним (всередині). Вважається, що іп мімо ферменти, що здійснюють ізомеризацію, здатні конвертувати дисульфідні містки між важкими ланцюгами у внутрішньоланцюжкові містки і місе мегза (Ааірегзє апа бспцйптап, Іттипоіоду 105:9-19, 2002). Відповідно, оскільки пара важкий:легкий ланцюги (НІ) в молекулах імуноглобуліну ЇД54 з внутрішньоланцюжковими містками в шарнірній ділянці важкого ланцюга не пов'язані один з одним ковалентним зв'язком, вона може дисоціювати на Ні мономери, а услід за цим реасоціювати, формуючи біспецифічну, гетеродимерну молекулу імуноглобуліну Ідс4. У біспецифічному антитілі ЇЧ4 два фрагменти Бар молекули розрізнюються по епітопах, з якими вони зв'язуються. Заміщення амінокислотного залишку Зег в мотиві СРБС шарнірної ділянки ІдД04 на залишок Рго приводить до "Ід01-подібної поведінки," наприклад, молекули формують стабільні дисульфідні містки між важкими ланцюгами і, отже, не можуть брати участь в обміні НІ з іншою молекулою імуноглобуліну 3954. У одному з варіантів здійснення описані в даному винаході антитіла складають Ес домен імуноглобуліну Їд04 з мутацією 5 в Р в мотиві СР5С Мотив СРБС, як правило, розташований біля залишку 228 зрілого важкого ланцюга, але розташування цього мотиву може змінюватися в залежності від довжини СОК.
Крім того, в антитілах, описаних в даному винаході, ділянки, що впливають на зв'язування з рецепторами Ес, відмінними від рецептора ЕсКп, можуть бути видалені. Наприклад, в антитілах, описаних в даному винаході, ділянки, які зв'язують рецептор Ес, залучений до активності АОСС, можуть бути видалені. Наприклад, мутація Геи234/Л еи235 в шарнірній ділянці ІдсС1 в
Ї234А//235А або мутація Рпе235/Л еи236 в шарнірній ділянці дС4 в Р2З5А//236А мінімізує зв'язування ЕсСК і зменшує здатність імуноглобуліну опосередковувати комплементарно залежну цитотоксичність і АЮСС. У одному варіанті здійснення даного винаходу описані антитіла містять Ес домен імуноглобуліну ЇД54 з мутацією Р2З35А//236А. Розташування цих амінокислотних залишків в зрілих важких ланцюгах вказане вище, але може змінюватися в залежності від довжини СОК. Деякі антитіла з мутаціями Р2З5А/Л 236А є антитілами, чиї важкі ланцюги кодуються послідовністю, показаною в 5ЕО ІЮ МО5: 218, 219 або 220.
Повністю людські, адаптовані до людини, гуманізовані і афінно-зрілі молекули антитіл або фрагменти антитіл є частиною даного винаходу, також як гібридні і химерні білки. Афінність антитіла до антигену може бути поліпшена за допомогою продуманої конструкції або випадкового дозрівання афінності з використанням добре відомих способів випадкового або направленого мутагенезу або комбінаторних фагових бібліотек. Наприклад, можливе заміщення 4о залишків зони верньєра, розташованих переважно в каркасній області, або "Залишків, що визначають афінність", АОК, для регуляції афінності антитіла (пат. Мо 6,639,055; РСТ Рибі. Мо.
МО10/045340).
Частиною даного винаходу є повністю людські, адаптовані до людини, гуманізовані, афінно- зрілі молекули антитіл або фрагментів антитіл, модифіковані з метою покращення стабільності, селективності, перехресної реактивності, афінності, імуногенності або досягнення інших бажаних біологічних характеристик. Стабільність антитіла визначається цілим рядом факторів, включаючи (1) просторове укладання індивідуальних доменів, що впливає на природну стабільність, (2) поверхневу взаємодію білків, що визначає спарювання НС і с, (3) глибину розташування полярних і заряджених амінокислотних залишків, (4) мережу водневих містків між полярними і зарядженими амінокислотними залишками; а також (5) поверхневий заряд і розподіл полярних амінокислотних залишків нарівні з іншими внутрішньо- і міжмолекулярними взаємодіями (Умогп еї аї., 9. Мої. Віої., 305:989-1010, 2001). Амінокислотні залишки, здатні дестабілізувати структуру, можуть бути ідентифіковані на основі кристалічної структури антитіла або шляхом молекулярного моделювання, а ефект певних амінокислотних залишків на стабільність антитіла може бути перевірений шляхом створення мутацій і оцінки їх впливу. Один зі способів збільшити стабільність антитіла полягає в збільшенні серединної точки термопереходу (Тт), що вимірюється шляхом диференціальної скануючої калориметрії (ДСК).
Як правило, Тт білка має позитивну кореляцію з його стабільністю і негативну кореляцію з підданістю порушенням третинної структури і денатурації в розчинах, а також деградації, яка також залежить від схильності білюа до порушення третинної структури (Кептіпеїєе еї аї.,
Віорпапт., 13:36-46, 2000). Ряд досліджень свідчить про кореляцію між ступенем фізичної стабільності, виміряним як термостабільність шляхом ДКС, і вимірюваннями, проведеними за допомогою інших способів (Сиріа еї аІ., ААР5 Рпаптосі. 5Е8, 2003; 7папод еї аї., У Рпапт. 5бі. 93:3076-3089, 2004; Маа єї аї., Іпі. У. Рпагт., 140:155-168, 1996; Веди-Аадао еї аї., Рпагт. Незв., 21:1353-1361, 2004; Веттвеїе еї аї., Рпапт. Вев., 15:200-208, 1997). Результати досліджень складу дозволяють передбачити, що Тт ЕРар-фрагмента впливає на довготривалу фізичну стабільність відповідного тАб. Відмінності амінокислот каркасного фрагмента або антигензв'язувальних ділянок може значно впливати на термічну стабільність домену Рар (Хазиї, еї аі., ЕЕВ5 І еїйї. 353: 143-146, 1994).
Запропоновані в даному винаході антитіла-антагоністи можуть зв'язувати ТІ КЗ з Ка, яка менша або дорівнює 107, 109, 109, 1079, 10-17 або 10-72 М. Афінність даної молекули до ТІ КЗ, наприклад, такої як антитіло, може бути визначена експериментально за допомогою будь-якого відповідного способу. Такі способи можуть включати використання апаратури Віасоге або
КіпЕХА, набору реагентів для ІФА або способів конкурентно-зв'язуючого аналізу, добре відомих фахівцям.
Антитіла-антагоністи, з необхідної афінністю що зв'язуються з даним гомологом ТІКЗ, можуть бути вибрані в бібліотеках варіантів або фрагментів за допомогою способів, основаних на дозріванні афінності антитіла. Антитіла-антагоністи можуть бути ідентифіковані за допомогою відповідних способів на основі їх здатності інгібувати біологічну активність ТІ КЗ.
Такі способи можуть включати тестову систему з геном-репортером або вимірювання за допомогою вже відомих способів виробництва цитокінів, як показано в додатку.
Інший варіант здійснення даного винаходу полягає у векторі, що містить щонайменше один запропонований в даному винаході полінуклеотид. Такі вектори можуть побут плазмідними, вірусними, бакуловірусними експресійними векторами, векторами на основі транспозонів або будь-якими іншими векторами, придатними для інтродукції запропонованих в даному винаході полінуклеотидів в даний організм або в дане генетичне оточення.
Інший варіант здійснення даного винаходу полягає в клітинах-хазяях, що мають будь-який із запропонованих в даному винаході полінуклеотидів, що кодують поліпептид, що включає в свій склад варіабельну ділянку важкого ланцюга імуноглобуліну з амінокислотною послідовністю, представленою в ЗЕО ІЮО МО: 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 159, 198, 200, 202, 164, 212, 213, 214, 215 або 216, або варіабельну ділянку легкого ланцюга імуноглобуліну з амінокислотною послідовністю, представленою в ЗЕО
ІО МО: 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 122, 123, 197, 199, 201, 163, 209, 210, 211 або 225.
Інший варіант здійснення даного винаходу полягає в клітинах-хазяях, що мають будь-який із запропонованих в даному винаході полінуклеотидів, що кодують поліпептид, що включає в свій склад важкий ланцюг імуноглобуліну з амінокислотною послідовністю, представленою в 5ЕО ІЮ
МО: 102, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 160, 204, 206, 208, 220, 166 або 168, або легкий ланцюг імуноглобуліну з амінокислотною послідовністю, представленою в 5ЕО ІЮ МО: 155, 156, 157, 158, 203, 205, 207, 165 або 227. Такими клітинами-хазяями можуть бути еукаріотичні, бактерійні, рослинні клітини або клітини архей. Як правило, використовуються еукаріотичні клітини ссавців, комах, птахів або інші клітини тваринного походження. Еукаріотичні клітини ссавців включають безсмертні клітинні лінії, такі як гібридоми або клітинні лінії мієломи, наприклад, 5Р2/0 (Американська колекція типових культур (АТСС), Манассас, МА, СКІ-1581), МО (Європейська колекція клітинних культур (ЕСАСС), Солеобері, Уїлтшир, Великобританія, ЕСАСС Мо 85110503),
РО (АТОС СВІ-1646) і А9653 (АТСС СКІ-1580) - мишачі клітинні лінії. Звичайно використовується лінія клітин мієломи людини 0266 (АТТС СКІ -ТІВ-196). Інші корисні клітинні лінії включають лінії, отримані з яєчників китайського хом'ячка (СНО), наприклад, лінії СНО-
КІМ (Гопга Віоіодісв, УаїКегвміПе, МО), СНО-КІ1 (АТОС СВІ -61) або ОС44.
Інший варіант здійснення даного винаходу полягає в способі отримання антитіл, здатних реагувати з ТІ КЗ, що включає культивування запропонованих в даному винаході клітин-хазяїв, і відборі антитіл, що виробляються клітинами-хазяями. Способи створення і очищення антитіл добре відомі фахівцям в даній галузі.
Інший варіант здійснення даного винаходу полягає в клітинній лінії гібридоми, що виробляє 6о запропоновані в даному винаході антитіла.
Ще один варіант здійснення винаходу стосується ізольованого антитіла або його фрагмента, при цьому антитіло зв'язується з амінокислотними залишками К416, К418, І 440, М441, Е442, 465, М466, К467, 468, 488, 489, А491, К493, М515, М516, М517, Н5УЗ39, М541, 5571, І 595 і
Кб19, ідент. Мо послідовності: 2с, толл-подібного рецептора З (ТІ КЗ).
Інший варіант здійснення даного винаходу стосується ізольованого антитіла або його фрагмента, при цьому антитіло зв'язується з амінокислотними залишками 5115, 0116, К117,
А120, К139, М140, М141, М144, К145, Т166, 0167, М168, 5188, Е189, 0192, А195 і А219, 5ЕО ІО
МО 2, толл-подібного рецептора З (ТІ КЗ).
Декілька добре відомих способів можуть бути використані для визначення епітопа антитіл, запропонованих в даному винаході. Наприклад, у випадку, коли відома структура кожного з компонентів, може бути використаний аналіз іп б5іїсо білок-білюового стикування з метою ідентифікації здатних до взаємодії ділянок. Може бути проведене вибіркове заміщення водню дейтерієм в антигені і антитілі з метою визначення ділянок антигену, здатних зв'язуватися з антитілом. Сегментний і точковий мутагенез, що модифікують антиген, можуть бути використані для визначення місцеположення необхідних для зв'язування антитіла амінокислот. Для таких великих білків, як ТІ КЗ, картування шляхом точкового мутагенезу може бути полегшене попереднім визначенням ділянки зв'язування за допомогою комп'ютерного аналізу з'єднання білків, сегментним мутагенезу або вибіркового заміщення водню дейтерієм. У випадку, коли відома структура кожного з компонентів, може бути використаний аналіз білок-білкового стикування іп 5ійсо з метою ідентифікації здатних до взаємодії ділянок. Спів-кристалічна структура комплексу антиген-антитіло може використовуватися для ідентифікації залишків, що беруть участь в утворенні епітопа і паратопа.
Інший варіант здійснення даного винаходу стосується ізольованого антитіла, що має варіабельну область важкого ланцюга і варіабельну область легкого ланцюга, або його фрагменту, при цьому антитіло зв'язується з ТІ КЗ, що має амінокислотну послідовність, показану в ЗЕО ІЮ МО: 2, через варіабельну область важкого ланцюга із залишками Чотіа УУЗ3,
Е50, 052, 054, 56, М58, РБ1, Е95, 97, 100 ії 01006 і варіабельну область легкого ланцюга із залишками Чотіа 2027, 32, М92, Т93, 194 і 595. Залишки Чотіа паратопа важкого ланцюга і паратопа легкого ланцюга відповідають залишкам важкого ланцюга УУЗ33, Е50, 052, 055, У57, 3о М59, Рб2, Е99, 101, 104 ії 0106 5ЕО ІЮ МО: 216 і залишкам легкого ланцюга 027, 32, МО92,
Т93,194 і 5950 МО: 41.
Інший варіант здійснення даного винаходу стосується ізольованого антитіла, що має варіабельну область важкого ланцюга і варіабельну область легкого ланцюга, або його фрагменту, при цьому антитіло зв'язується з ТІ КЗ, що має амінокислотну послідовність, показану в ЗЕО ІЮ МО: 2, через варіабельну область важкого ланцюга із залишками Чотіа МЗ1а, 052, К52р, 553, К54, 56, М97, РО8, Е99, і М100, ії варіабельну область легкого ланцюга із залишками Чотіа 329, 530, 31, 32, Е50, 051, 91, Щ092 і 093. Залишки Чотіа паратопа важкого і легкого ланцюгів відповідають залишкам важкого ланцюга М32, 054, К56, 557, К58, 60, 104,
Р105, 2106, ї М107 5ЕО ІЮО МО: 214 і залишкам легкого ланцюга 528, 529, 30, 31, Е49, 050,
У90, 0591 їі 092, 5ЕО ІЮО МО: 211.
Ізольовані антитіла, що мають певні залишки паратопа, які зв'язують ТІ КЗ, можуть бути отримані, наприклад, вбудовуванням залишків паратопа у відповідний каркасний білок, збиранням штучних каркасних білків в суцільні антитіла, експресією отриманих антитіл і дослідженням антитіл на здатність до зв'язування ТІ КЗ або вплив на біологічну активність
ТІКЗ. Як приклад каркасних білків можна привести амінокислотні послідовності варіабельних областей людських антитіл, що кодуються людськими генами зародкової лінії. Вибір каркасного білка може основуватися, наприклад, на загальній гомології послідовності, 95 ідентичності між залишками паратопа або ідентичності канонічної структури каркасного білка і зразкового антитіла, наприклад, тАб 15ЕМО або тАр 120М0/05М. Людські гени зародкової лінії описані, наприклад, в роботі, Тотіїпбоп еї аї., У. Мої. Віо!ї 227:776-798, і в міжнародних базах даних
ІтпМипосСепетТісз (МОТ) (пр :// м/мли ітдї ог9у). Також можна використовувати консенсусні послідовності людських каркасних областей, як описано в пат. Мо 6,300,064. Вибір відповідного каркасного білка може проводитися, наприклад, відповідно до методів, описаних в РСТ Рибі.
Мо. МО10/045340.
Прикладами людських генів зародкової лінії, які можна використовувати для отримання каркасних білків, в які вбудовуються залишки паратопа, є гени, що кодуються Мк!, МАЗ, МА5,
Мб, ук, 9А і уп. У-області зародкової лінії використовуються повністю або частково для вибору послідовностей ЕК4. Наприклад, залишки паратопа легкого ланцюга тАб 15ЕМО можуть бути вбудовані в каркасну ділянку Мк1, що кодується ІЗКМ1-39701, безпосередньо з'єднану з 3- 6о областю, що кодується (5КО1. Також можуть використовуватися послідовності, що кодуються іншими генами Мк1!, і послідовності ЕК4 інших генів Ук можуть заміняти ІЗКО1. Залишки паратопа важкого ланцюга тАб 15ЕМО можуть вбудовуватися в каркасну ділянку МИ5, що кодується (ЗНМ5-51701, і за ними може йти приблизно 11-13 залишків, наприклад, 12 залишків, які складають НСОКЗ і послідовність ЕК4, що кодується ІЗНО1. 11-13 залишків можуть розташовуватися між ЕКЗ-областю ("САК") і початком ЕК4 області (М/БО в більшості УН- областей) і включати 4 визначених залишки паратопа з тАБр 15ЕМО Мп. Також можуть використовуватися послідовності, що кодуються іншими генами МУП5, і послідовності інших генів
Уп можуть заміняти ІБОНІ. У іншому прикладі, залишки паратопа легкого ланцюга тАр 129МО0/О5М можуть бути вбудовані в каркасну ділянку МАЗ, що кодується ІСІ М3-1701, безпосередньо з'єднану з у.-областю, що кодується І5О/2. Також можна використовувати послідовності, що кодуються іншими генами МАЗ ії А. Довжина ГСОКЗ підтримується на рівні приблизно 9-11 залишків, наприклад, 10 залишків. Ці приблизно 9-11 залишків розташовуються між кінцем області ЕКЗ ("УУС" в більшості М ламбда каркасних білків) і початком області ЕК4 (ГОСб" в більшості областей Д/) і включають 3 визначених залишки паратопа з тА 120МО/О5М. Залишки паратопа важкого ланцюга тА 120М0/095М можуть вбудовуватися в каркасну ділянку Мб, що кодується ІЗНМб6-1701, і за ними може йти приблизно 9-11 залишків, наприклад, 10 залишків, які складають НСОМКЗ і послідовність ЕК4, що кодується ІСУНІ1.
Приблизно. 9-11 залишків можуть розташовуватися між ЕКЗ-областю ("САК") і початком ЕК4 області (М/БО в більшості УН-областей) і включати 4 визначених залишки паратопа з тАр 129МО/О5М МП. Послідовності ЕКА інших генів п можуть заміняти ІЗНУ1. Зв'язування з ТІ КЗ і біологічну активність отриманого антитіла можна оцінити стандартними методами. Орієнтація варіабельних областей легких і важких ланцюгів тАб 15ЕМО і тАб 120М0/О5М з генами Мк1,
МА5, МАЗ, МАб, Кк, УА або Оп показані на фіг. 32 - 35. Штучні антитіла з вбудованим паратопом можуть бути далі модифіковані шляхом заміни залишків зони верньєра або залишків, що визначають афінність, для покращення властивостей антитіла, наприклад, афінності, як описано вище. Доти, поки антитіло з вбудованим паратопом зберігає здатність до зв'язування
ТАЗ, амінокислотна послідовність каркасної ділянки антитіла з вбудованим паратопом може бути на 7095, 7595, 8095, 8595, 9095, 9595, 9695, 9795, 9895 або 9995 ідентичною послідовностям каркасної області тАб 15ЕМО або 120М0/О5У.
Послідовності антигензв'язувальних ділянок можуть вбудовуватися в доповнення до залишків паратопів з використанням стандартних методів. Наприклад, можливе вбудовування повної послідовності НСОЕКЗ або І СОКЗ.
Інший аспект даного винаходу стосується ізольованих антитіл або їх фрагментів, здатних реагувати з ТІ КЗ, які конкурують за зв'язування з ТІКЗ з моноклональними антитілами, причому ці моноклональні антитіла складаються з амінокислотних послідовностей ділянок 1, 2 і 3, що визначають комплементарність (сотріетепіагу аегептіпіпуд гедіоп5, СОК) певних важких ланцюгів, амінокислотних послідовностей СОК 1, 2 і З певних легких ланцюгів, а також з амінокислотних послідовностей варіабельних ділянок певних важких ланцюгів (МН) або амінокислотних послідовностей варіабельних ділянок певних легких ланцюгів (МІ) Як правило, моноклональні антитіла, представлені в даному винаході, є ізольованими антитілами, що містять варіабельну ділянку важкого ланцюга, що має амінокислотну послідовність, представлену в 5ЕО ІЮ МО: 216, і амінокислотну послідовність варіабельної ділянки легкого ланцюга, представлену в 5ЕБО ІЮ МО: 41, а також антитіла, що містять амінокислотну послідовність варіабельної ділянки важкого ланцюга, представлену в ЗЕО ІЮ МО: 214 і амінокислотну послідовність варіабельної ділянки легкого ланцюга, представлену в 5ЕО ІЮ МО: 211.
Аналіз конкуренції за зв'язування з ТІ КЗ може бути проведений іп міго за допомогою вже відомих способів. Наприклад, оцінка зв'язування М5О З!йийо-Тад'м МНзЗ-ефір міченого антитіла з
ТАЗ в присутності неміченого антитіла може бути проведена за допомогою ІФА. Як правило, в даному винаході використовуються антитіла мАб 12, мАБб 15 і мАб с1811 (див. Таблицю За).
Раніше відомі антитіла с1068 проти ТІ КЗ і їх похідні (описані в РСТ Рибі. Мо. УМО06/060513А2),
ТІ К3.7 (еВіозсіеєпсе5, кат. Мо 14-9039) і Ітдепех ІМО-З315А (Ітодєпех ІМОа-315А; проти амінокислотної послідовності 55-70, МЕМСТНМОЇ ККГРААМ, людського ТІ КЗ) не конкурують за зв'язування з ТІ КЗ з мАБ 12, 15 або з мАБб с1811, як показано в Прикладі 5.
Наступний аспект даного винаходу полягає в ізольованому антитілі, здатному реагувати з
ТІ КЗ, яке має щонайменше одну з наступних властивостей: а. зв'язується з людським ТІ КЗ з Ка « 10 нм; р. зменшує біологічну активність ТІ КЗ в аналізі іп міго з використанням гена-репортера МЕ- кВ і полі(І:С) на 2 5095, при концентрації 1 мкг/мл; 6о с. на 2 6095 інгібує "продукцію ІЇ/-6 або СХСІ 5/Р-10 в клітинах ВЕА5-2В, стимульованих впливом « 100 нг/мл полі(І:С), при концентрації 10 мкг/мл; с. на 2 5095 інгібує продукцію ІЇ-б6 або СХСІ 5Б/Р-10 в клітинах ВЕА5-2В, стимульованих впливом « 100 нг/мл полі(І:С), при концентрації 0.4 мкг/мл; е. на 2 5095 інгібує продукцію І--6б в клітинах МНВЕ, стимульованих впливом 62,5 нг/мл полі(І:С), при концентрації 5 мкг/мл;
Її. на 2 5095 інгібує "продукцію ІЇ/-б6 в клітинах МНВЕ, стимульованих впливом 62,5 нг/мл полі(І:С) при концентрації 1 мкг/мл; д. на 2 2095 інгібує полі(І:С)-індуковану продукцію ІЕМ-у, 1-6 або 1--12 в клітинах РВМС при концентрації 1 мкг/мл,
М. інгібує біологічну активність ТІ КЗ яванської макаки в аналізі іп міго, з використанням гена- репортера МЕ-кВ при ІС50 « 10 мкг/мл; або і. інгібує біологічну активність ТІ КЗ яванської макаки в експериментальній системі іп міїго, з використанням гена-репортера ІЗКЕ при ІС5О « 5 мкг/мл.
Способи лікування
Запропоновані в даному винаході антагоністи ТІ КЗ, наприклад, антитіла-антагоністи ТІ КЗ, можуть використовуватися для впливу на імунну систему. Опускаючи теоретичне обгрунтування, автори стверджують, що запропоновані в даному винаході антагоністи можуть модулювати імунну систему, запобігаючи або зменшуючи зв'язування ліганду з ТІ КЗ, димеризацію ТІ КЗ, інтернаціоналізацію ТІ КЗ або перенесення ТІ КЗ. Запропоновані в даному винаході способи можуть бути використані для лікування будь-якої тварини. Наприклад, це можуть бути ссавці, в тому числі людина, гризуни, собаки, кішки і сільськогосподарські тварини.
Наприклад, представлені в даному винаході антитіла можуть знайти застосування як антагоністи активності ТІ КЗ при лікуванні запалення, запальних захворювань і метаболічних розладів, а також у виготовленні медикаментозних препаратів для лікування вказаних захворювань, причому даний винахід також пропонує призначену для введення дозу.
Взагалі, запальні, інфекційні або імуноопосередковані запальні стани, які можуть бути попереджені або вилікувані введенням запропонованих в даному винаході антитіл-антагоністів
ТІКЗ, включають захворювання, опосередковані дією цитокінів або хемокінів, а також захворювання, які повністю або частково виникають в результаті активації ТІКЗ або сигнального шляху ТІ КЗ. Прикладами таких запальних станів є стани, пов'язані з сепсисом, запальні захворювання травного тракту, аутоїмунні, запальні і інфекційні захворювання. Також вважається, що рак, серцево-судинні захворювання, порушення метаболізму, невралгічні і фіброзні захворювання можуть бути попереджені або вилікувані введенням запропонованих в даному винаході антитіл-антагоністів ТІ КЗ. Запалення може торкатися однієї тканини або бути системним. Як правило, вражаються тканини дихальних шляхів, легені, шлунково-кишковий тракт, тонкий і товстий кишечник, товста кишка, пряма кишка, серцево-судинна система, тканина серця, кровоносні судини, суглоби, мозок, синовіальні тканини, хрящова тканина, епітелій, ендотелій, печінка і жирова тканина. Типовими системними запальними станами є "цитокіновий шторм" або гіперцитокінемія, синдром системної запальної реакції (5ІК5), реакція 4о "трансплантат проти хазяїна" (МНОЮ), гострий респіраторний дистрес-синдром (АКО5), тяжкий гострий респіраторний дистрес-синдром (ЗАК5Б), тяжкі вірусні інфекції, грип, пневмонія, шок або сепсис.
Запалення є захисною реакцією організму на атаку проникаючого агента. Запалення складається з послідовності подій, в якій беруть участь багато які клітинні або гуморальні медіатори. З іншого боку, придушення запальних реакцій може приводити до ослаблення імунітету; проте, при відсутності контролю, запалення може приводити до серйозних ускладнень, таких, як хронічні запальні захворювання, (наприклад, астма, псоріаз, артрит, ревматоїдний артрит, розсіяний склероз, запальне захворювання травного тракту і тому подібні), септичного шоку і поліорганної недостатності. Важливо, що всі ці захворювання мають загальні запальні медіатори, такі, як цитокіни, хемокіни, запальні клітини і інші медіатори, секретовані цими клітинами.
Активація ТІ КЗ лігандами полі(І:С), дволанцюжковою РНК або ендогенними матричними
РНК веде до активації сигнального шляху, що приводить до синтезу і секреції прозапальних цитокінів, активації і рекрутингу клітин, що беруть участь в запальній реакції, таких як макрофаги, гранулоцити, нейтрофіли і еозинофіли, а також до клітинної смерті і руйнування тканини. ТІ КЗ індукує секрецію 1-6, ІІ -8, І/-12, ТМЕ-а, МІР-1, СХСІ 5/Р-10 ії КАМТЕ5, а також прозапальних цитокінів і хемокінів, що беруть участь в залученні і активації імунокомпетентних клітин, приводячи до руйнування тканини у випадку аутоімунних і інших запальних захворювань.
Ендогенні матричні РНК, що є лігандами ТІ КЗ, вивільняються з некротичних клітин в процесі 60 запалення, і можуть приводити до виникнення замкненого позитивного зворотного зв'язку, який активує ТКЗ, приводячи до продовження запального процесу і подальшого руйнування тканини. Антагоністи ТІ КЗ, такі як антитіла-антагоністи ТІ КЗ, можуть брати участь в нормалізації секреції цитокінів, зменшувати залучення клітин, що беруть участь в запальному процесі, а також зменшувати пошкодження тканини і клітинну смерть. Отже, антагоністи ТІ КЗ мають терапевтичний потенціал в лікуванні запалення і цілого спектра запальних захворювань.
Як приклад запального стану, пов'язаного з сепсисом, можна привести синдром системної запальної реакції (ССЗР), септичний шок або синдром поліорганної недостатності.
Дволанцюжкова РНК, що вивільняється при вірусній, бактерійній, грибковій інфекції або паразитарної інвазії а також некротичними клітинами, може сприяти розвитку сепсису.
Опускаючи теоретичне обгрунтування, стверджується, що лікування антагоністами ТІ КЗ може дати позитивний терапевтичний ефект, збільшивши час життя пацієнтів, які страждають на пов'язані з сепсисом запальні захворювання, або запобіши поширенню місцевого запального процесу (наприклад, в легенях) і переходу запалення в системне за рахунок природної антимікробної активності, а також за рахунок взаємодії з антимікробними агентами, мінімізуючи локальне запалення, що бере участь в розвитку патології, або за рахунок будь-якої комбінації вказаних ефектів. Таке втручання може вистачати для проведення необхідного для виживання пацієнта додаткового лікування (наприклад, лікування основної інфекції або зменшення рівня цитокінів). Сепсис може дослідитися на тваринних моделях, наприклад, у мишей, шляхом введення ЮО-галактозаміна і полі(І:С). У таких моделях ЮО-галактозамін і гепатотоксин діють як сенсибілізатори при сепсисі, а полі(І:С) індукує сепсис, імітуючи ефект дволанцюжкової ДНК, і активує ТІКЗ3. Лікування антагоністом ТІКЗ здатне підвищити виживаність тварин в експериментах з сепсисом на мишах, отже, антагоністи ТЇКЗ можуть використовуватися для лікування сепсису.
Запалення шлунково-кишкового тракту є запаленням слизової оболонки і включає гострий і хронічний стан. Гостре запалення звичайно характеризується коротким початковим періодом і інфільтрацією або припливом нейтрофілів. Хронічне запалення звичайно характеризується відносно більш довгим початковим періодом і інфільтрацією або припливом мононуклеарних клітин. Слизова оболонка може бути слизовою оболонкою травного тракту (включаючи тонкий і товстий кишечник), прямої кишки, вистильного шару шлунка або ротової порожнини. Приклади хронічних запальних захворювань включають запальне захворювання травного тракту, індукований зовнішніми впливами коліт (наприклад, запалення ШКТ, (наприклад, коліт), викликане або супутнє (наприклад, як побічний ефект) терапевтичним режимам, таким як хіміотерапія, радіотерапія і тому подібні), інфекційний коліт, ішемічний, колагеновий або лімфоцитний коліт, некротичний ентероколіт, коліт, викликане іншими захворюваннями, такими як хронічна грануломатозна хвороба або целіакія, харчові алергії, гастрити, інфекційні гастрити або ентероколіти (наприклад, хронічний гастрит, викликаний інфекцією Неїїсобасіег руїогі), а також інші форми шлунково-кишкового запалення, викликана інфекційним агентом.
Запальні захворювання травного тракту включають групу хронічних запальних захворювань звичайно невідомої етіології, наприклад, виразковий коліт і хвороба Крона. Клінічні і експериментальні спостереження дозволяють передбачити, що патогенез запальних захворювань ШКТ оснований на багатьох чинниках, що включають генетичну схильність і вплив навколишнього середовища. При запаленні травного тракту пошкодження тканини є результатом неправильної або надмірної імунної відповіді на антиген або мікрофлору кишечника. Існує декілька тваринних моделей запальних захворювань травного тракту.
Найбільш поширена модель коліту, індукованого введенням 2,4,6-тринітробензолсульфонової кислоти/етанолу (ТМВ5), і модель з використанням оксазалону, який індукує хронічне запалення і покриття виразками прямої кишки (Мешншгаїйй еї аї., Іпїет. Кем. Іттипої 19:51-62, 2000). У іншій моделі використовується декстрансульфат натрію (ДСН), який індукує гострий коліт, що супроводжується такими симптомами, як кривава діарея, втрата ваги, скорочення прямої кишки і покриття виразками слизової оболонки, що викликається інфільтрацією нейтрофілів. ДСН- індуковані коліти гістологічно характеризуються інфільтрацією клітин, що беруть участь в запаленні у власну пластинку слизової оболонки, лімфоїдною гіперплазією, ураженням центральної крипти і покриттям виразками епітелію (Непагіскзоп еї аї., Сіїпіса! Місторіоїоду
Веміємв 15:79-94, 2002). Інша модель основана на адоптивному перенесенні наївних СО45КВ ср4 Т-клітин мишам ліній КАС або СІЮ. У даній моделі, наївні Т-клітини донора атакують кишечник реципієнта, спричиняючи хронічне запалення травного тракту і симптоми, схожі із запальним захворюванням травного тракту людини (Кеай апа Ромлгіє, Си. Ргоїос. Іттипої).
Спаріег 15 цпії 15.13, 2001). Введення запропонованих в даному винаході антагоністів в будь- яку з названих моделей може бути використане для оцінки потенційної ефективності вказаних 6о антагоністів в полегшенні симптомів і зміни протікання хвороб, пов'язаних із запальним процесом в травному тракті, наприклад, запального захворювання травного тракту. Існують декілька можливостей лікування запальних захворювань ШКТ, наприклад, антитіла проти ТМЕ-а вже протягом десятиріччя використовуються для лікування хвороби Крона (Мап Ав5спе еї аї.,
Еиг. У. РПаптасоІ. Ериб Осі 2009). Проте, значна частина пацієнтів несприйнятлива до використовуваних в цей способів лікування (Напацпцег еї аї!., І апсеї 359:1541-1549, 2002; Напацег еї аі., Сазігоєпієгоїюду 130:323-333, 2006) і, отже, необхідна розробка нових підходів до лікування вказаних пацієнтів.
Іншим прикладом запального стану є запальний процес в легенях. Типово, запалення легенів включає викликані інфекцією захворювання легенів, в тому числі пов'язані з вірусними, бактерійними, грибковими, паразитарними або пріоновими інфекціями; індуковані алергеном захворювання легенів; індуковані забрудненням навколишнього середовища захворювання легенів, такі як асбестоз, силікоз і бериліоз; викликані аспірацією шлункового вмісту, а також викликані імунною дисрегуляцією захворювання, запальні захворювання, що залежать від генетичної схильності, такі як муковісцидоз, захворювання індуковані фізичною травмою легенів, наприклад, травма при штучній вентиляції Вказані запальні захворювання також включають астму, емфізему, бронхіти, хронічні обструктивні захворювання легенів (ХОЗЛ), саркоїдози, гістіоцистози, лімфоангіоматози, гостре пошкодження легенів, синдром гострого порушення дихання, хронічне захворювання легенів, бронхопульмональну дисплазію, позалікарняну пневмонію, госпітальну пневмонію, викликану штучною вентиляцією легенів пневмонію, сепсис, вірусну пневмонію, інфекції вірусом грипу, парагрипозні інфекції, інфекції ротавірусом, інфекції людським метапневмовірусом, респіраторно-синціальні інфекції, легеневий аспергильоз і інші грибкові інфекції. Як правило, пов'язані з інфекцією запальні захворювання можуть включати вірусну або бактерійну пневмонію, в тому числі тяжку пневмонію, муковісцидоз, бронхіт, загострення захворювань дихальних шляхів і синдром гострого порушення дихання (СГПД). Такі пов'язані з інфекцією захворювання можуть залучати множинні інфекції, такі як первинну вірусну і вторинну бактерійну інфекції.
Астма є запальним захворюванням легенів, яке характеризується гіперчутливістю дихальних шляхів (ГДШ), бронхостенозом, хрипами в легенях, еозинофільним або нейтрофільним запаленням, гіперсекрецією слизу, субепітеліальним фіброзом і збільшенням рівня імуноглобуліну МЕ. Хворі на астму переживають "приступи", погіршення симптомів, частіше за все в результаті інфекцій респіраторного тракту (наприклад, риновірус, грип, гемофільна паличка Наєеторпійи5 іпїшеп7а і інше). Астматичні приступи можуть провокуватися чинниками навколишнього середовища (наприклад, аскариди, комахи, тварини (наприклад, кішки, собаки, кролики, миші, пацюки, хом'ячки, морські свинки і птахи), грибки, забруднення повітря (наприклад, тютюновий дим), подразнювальні гази, запахи, випаровування, аерозолі, хімікати, пилок, фізичні вправи або холодне повітря). Крім астми, деякі хронічні, вражаючі легені запальні захворювання, характеризуються нейтрофільною інфільтрацією дихальних шляхів, наприклад, хронічне обструктивне захворювання легенів (ХОЗЛ), бактерійна пневмонія і муковісцидоз (І іпдеп еї а!., Єиг. Кезріг. 9. 15:973-977, 2000; НКантанп евї а!., Сіїп. Іттипої. 115:268- 4о 276, 2005), а такі захворювання, як ХОЗЛ, алергічні риніти і муковісцидоз, характеризуються гіперчутливістю дихальних шляхів (Рапу апа О'Вугпе, Ат. у. Кезріг. Стії. Саге Меа. 163: 822-823, 2001). Як тваринні моделі для вивчення астми і запалення дихальних шляхів звичайно використовують провокацію овальбуміном, а також моделі, в яких сенсибілізація тварини досягається введенням метахоліну (Неззе! еї а!Ї., Еиг. У. Рпаптасої. 293: 401-412, 1995).
Інгібування продукції цитокінів і хемокінів в культурах людських епітеліальних бронхіальних клітин, бронхіальних фібробластів або клітин гладкої мускулатури дихальних шляхів може бути використане як експериментальні моделі іп міго. Введення запропонованих в даному винаході антагоністів в будь-якій з вказаних моделей може бути використане для оцінки ефективності даних антагоністів в полегшенні симптомів і зміни протікання астми, запалень дихальних шляхів, ХОЗЛ і інших подібних захворювань.
Інші запальні захворювання і нейропатії, які можуть бути попереджені або вилікувані представленими в даному винаході способами, є хворобами, викликаними аутоїмунними процесами. Ці захворювання і нейропатії включають розсіяний склероз, системний червоний вовчак і нейродегенеративні захворювання і розлади центральної нервової системи (ЦНе), наприклад, хворобу Альцгеймера, хворобу Паркінсона, хворобу Хантінгтона, біполярний афективний розлад і аміотрофічний бічний склероз, хвороби печінки, наприклад, первинний біліарний цироз, первинний склерозуючий холангіт, неалкогольну жирову інфільтрацію (жировий метаморфоз) печінки/стеатогепатит, фіброз, гепатит С (НСМ) і гепатит В (НВУ), діабет і резистентність до інсуліну, серцево-судинні розлади, наприклад, атеросклероз, церебральні 6о кровотечі, інсульт і інфаркт міокарда, артрит, ревматоїдний артрит, псоріатичний артрит і ювенільний ревматоїдний артрит, остеопороз, остеоартрит, панкреатит, фіброз, енцефаліт, псоріаз, гігантоклітинний артеріїт, анкілозуючий спондиліт, аутоїмунний гепатит, вірус імунодефіциту людини (ВІЛ), запальні захворювання шкіри, трансплантати, рак, алергії, ендокринні захворювання, загоєння ран, інші аутоїмунні захворювання, гіперчутливість дихальних шляхів, а також клітинні, вірусні або опосередковані пріонами інфекції і захворювання.
Артрити, включаючи остеоартрит, ревматоїдний артрит, артрит, розвинений внаслідок пошкодження суглобів, і інші подібні захворювання, є звичайними запальними захворюваннями, лікування яких може бути поліпшене за рахунок терапевтичного використання протизапальних білків, таких, як представлені в даному винаході антагоністи. Наприклад, ревматоїдний артрит (РА) є системним захворюванням, що вражає все тіло, і однією з форм артриту, що найбільш часто зустрічаються. Оскільки ревматоїдний артрит приводить до ураження тканин, ліганди
ТІКЗ, швидше всього, присутні в місці запалення. Активація сигнального шляху ТІ КЗ може приводити до безупинного запалення і пошкодження інших тканин в запаленому суглобі.
Існують тваринні моделі для вивчення ревматоїдного артриту. Наприклад, при моделюванні колагеніндукованого артриту (КІА), у миші розвивається хронічний запальний артрит, який сильно нагадує людський ревматоїдний артрит. Введення представлених в даному винаході антагоністів ТІ КЗ експериментальним мишам з КІА може бути використано для оцінки застосування вказаних антагоністів для полегшення симптомів і зміни протікання хвороби.
Цукровий діабет (лат. Оіабесе5 тейййи5), є багатофакторним захворюванням (4 характеризується гіперглікемією (ГекКойп еї аї., (еаз.), Оіареїез МейШив5, Гірріпсой-Намеп
Рибріїєпеге, РПйЙадеїрпіа, Ра. Ш.5.А. 1996, а також всі згадані в роботі посилання).
Неконтрольована гіперглікемія може приводити до збільшення передчасної смертності внаслідок підвищення ризику мікро- і макроангіопатій, включаючи нефропатії, нейропатії, ретинопатії, гіпертензії, цереброваскулярні захворювання і ішемічну хворобу серця. Отже, контроль гомеостазу глюкози є критично важливим в лікуванні діабету.
Діабет може бути розділений на дві великі групи, основуючись на викликаючих захворювання дефектах: діабет типу 1 (інсулінозалежний цукровий діабет, ІООМ), який виникає при відсутності в підшлунковій залозі пацієнта виробляючих інсулін бета-клітин, і діабет типу 2 (інсулінонезалежний цукровий діабет, МІООМ), який виникає у пацієнтів з порушенням секреції інсуліну бета-клітинами і/або резистентністю до дії інсуліну.
Діабет типу 2 характеризується стійкістю до інсуліну, що супроводжується відносною, але не абсолютною, інсуліновою недостатністю. У інсулінрезистентних індивідуумів секретується аномальна висока кількість інсуліну, що має компенсаторний ефект. При недостатній кількості інсуліну для компенсації резистентності до інсуліну і контролю концентрації глюкози розвивається стан порушення толерантності до глюкози. У значного числа індивідуумів під час хвороби секреція інсуліну зменшується і концентрація глюкози в плазмі зростає, приводячи до клінічного діабету. Пов'язані з жировою тканиною запалення значною мірою пов'язані з розвитком резистентності до інсуліну, діабетом типу 2, дисліпідемією і серцево-судинними 4о захворюваннями. У страждаючих на ожиріння пацієнтів макрофаги переміщаються в жирову тканину і накопичуються там, приводячи до вироблення прозапальних цитокінів, таких як ТМЕ-а і 1-6, вільних жирних кислот і адипокінів, здатних впливати на інсуліновий сигнальний шлях і індукувати розвиток резистентності до інсуліну. Активація рецепторів ТІ КЗ на макрофагах може приводити до стану, який сприяє запаленню, в жировій тканині. Існує декілька моделей для вивчення резистентності до інсуліну. Наприклад, у експериментальних тварин з аліментарним ожирінням розвивається гіперглікемія і резистентність до інсуліну, що супроводжуються набором ваги. Введення представлених в даному винаході антагоністів ТІ КЗ експериментальним тваринам з аліментарним ожирінням може бути використане для оцінки ефективності антагоністів для полегшення ускладнень, пов'язаних з діабетом типу 2, і зміни протікання хвороби.
До ракових захворювань належать злоякісні зміни в клітині, тканині, органі, організмі, будь то тварина або людина, включаючи, крім іншого, такі захворювання, як лейкоз, гострий лейкоз, гострий лімфобластний лейкоз (лімфолейкоз) (ГЛЛ), В-лімфобластний, або Т-лімфобластний
ГЛЛ, гострий мієлоїдний лейкоз (ГМЛ), хронічний мієлоїдний лейкоз (ХМЛ), хронічний лімфоцитарний лейкоз (ХЛЛ), волосатоклітинний лейкоз, мієлодиспластичний синдром (МДСОС), лімфома, хвороба Ходжкіна (лімфогранульоматоз), злоякісна лімфома, неходжкінська лімфома, лімфома Беркітта, множинна мієлома, саркома Капоші, колоректальна карцинома, карцинома підшлункової залози, рак нирки, рак молочної залози, назофарингеальна карцинома, злоякісний гістіоцитоз, паранеопластичний синдром/гіперкальціємія, пов'язана зі злоякісним ростом, тверді 6о (локалізовані) пухлини, аденокарциноми, плоскоклітинні карциноми, саркоми, злоякісна меланома, особливо метастатична меланома, гемангіома, метастазуюча пухлина, пов'язана з раком резорбція кісткової тканини і пов'язаний з раком біль.
Типово, серцево-судинні захворювання включають серцево-судинні порушення в клітинах, тканини, органі, організмі будь то тварина або людина, включаючи, крім іншого, такі захворювання, як синдром раптової смерті, інфаркт міокарда, застійна серцева недостатність, інсульт, ішемічний інсульт, кровотеча, артеріосклероз, атеросклероз, рестеноз, атеросклероз на фоні цукрового діабету, гіпертензія, артеріальна гіпертензія, вазоренальна гіпертензія, непритомність, шок, сифіліс серцево-судинної системи, зупинка серця, легеневе серце (лат. сог риїтопаїе), первинна легенева гіпертензія, серцеві аритмії, суправентрикулярна ектопічна систола, трепетання передсердь, мерехтіння передсердь (хронічне або нападоподібне/пароксизмальне), реперфузійний синдром, запальна відповідь на штучний кровообіг, хаотична або політопна передсердна тахікардія, тахікардія з вузькими комплексами
ОК5, специфічні аритмії, фібриляція шлуночків, аритмії пов'язані з порушенням функції пучків
Гіса, атріовентрикулярний блок, атріовентрикулярна блокада, ішемії міокарда, захворювання коронарної артерії, стенокардія (лат. апдіпа ресіогіз), інфаркт міокарда, кардіоміопатія, дилатаційна (застійна) кардіоміопатія, рестриктивна кардіоміопатія, порок серця, ендокардит, перикардит, пухлини серця, аневризм аорти і периферична аневризма, розшаровувана аневризма аорти, запалення аорти, оклюзія абдомінальної аорти і її відгалужень, захворювання периферичних кровоносних судин, оклюзії артеріальних судин, атеросклероз периферичних артерій, тромбоангіїт (лат. (пготроападійіє обБійегап5), функціональні розлади периферичних артерій, феномен Рейно і віброхвороба, акроціаноз, еритромелалгія, венозні захворювання, тромбоз вен, варикозне розширення вен, артеріовенозна фістула, лімфедема, ліпедема, нестабільна стенокардія, реперфузійне пошкодження, постперфузійний синдром і ішемічно- реперфузійне пошкодження.
Типово, неврологічні захворювання включають неврологічні порушення в клітинах, тканини, органі, організмі, будь то тварина або людина, включаючи, крім іншого, такі захворювання, як нейродегенеративні хвороби, розсіяний склероз, мігрень, СНІД-деменцію, демієлінізуючі захворювання, такі як розсіяний склероз і гострий поперечний мієліт; екстрапірамідний синдром і мозочкові розлади, такі як ураження кортико-спінальної системи; захворювання, що вражають базальні ганглії або мозочкові розлади; гіперкінетичні синдроми, такі як хорея Гентінгтона і сенільна хорея; медикаментозні порушення руху, такі як порушення, що викликаються блокуванням допамінових рецепторів; гіпокінетичні порушення руху, такі як хвороба Паркінсона; прогресуючий супрануклеарний параліч; структурні порушення мозочка; спіноцеребелярні дегенерації, такі як спінальна атаксія, атаксія Фрідрейха, мізочкові кортикальні дегенерації, мультисистемні дегенерації (Менцеля, Дежерина-Тома, Ши-Драгера і Мачадо-Джозефа); системні розлади (хвороба Рефсума, абеталіпопротеїнемія, атаксія, телеангієектазія і мітохондріальні мультисистемні розлади); демієлінізуючі захворювання, такі як розсіяний склероз, гострий поперечний мієліт; і розлади моторної функції, такі як нейрогенні м'язові атрофія (дегенерація моторних нейронів, наприклад, аміотрофічний бічний склероз, дитяча і 4о юнацька спінальні м'язові атрофія); хвороба Альцгеймера; синдром Дауна в зрілому віці; деменція з тільцями Леві; сенільна деменція з тільцями Леві; синдром Верніке-Корсакова; хронічний алкоголізм; хвороба Крейтцфельда-Якоба; підгострий склерозуючий лейкоенцефаліт, хвороба Галлервордена-Шпатца і деменція боксерів.
Типові фіброзні захворювання включають фіброз печінки (включаючи, крім іншого, такі захворювання, як викликаний алкоголем цироз, цироз, індукований вірусною інфекцією, аутоїмунний гепатит); фіброз легенів (включаючи, крім іншого, такі захворювання, як склеродермія, ідіопатичний фіброз легенів); фіброз нирок (включаючи, крім іншого, такі захворювання, як склеродермія, викликаний діабетом нефрит, гломерулонефрит, викликаний системним червоним вовчаком нефрит); фібрози шкіри (включаючи, крім іншого, такі захворювання, як склеродермія, гіпертрофічні і келоїдні рубці); мієлофіброз; нейрофіброматоз; фіброму; фіброзні зміни кишечника; і фіброзні спайки, які виникають в результаті хірургічного втручання. У цих способах фіброз може бути оорганоспецифічним або системним.
Органоспецифічний фіброз може бути пов'язаний з щонайменше одним з наступних захворювань: фіброз легенів, фіброз печінки, фіброз нирок, фіброз серця, фіброз судин, фіброз шкіри, фіброз ока, фіброз кісткового мозку і ін. Фіброз легенів може бути пов'язаний з щонайменше одним 3 наступних захворювань: ідіопатичний легеневий фіброз, медикаментозний легеневий фіброз, астма, саркоїдоз або хронічна обструктивна хвороба легенів. Фіброз печінки може бути пов'язаний з щонайменше одним з наступних захворювань: цироз, шистосомоз або холангіт. Цироз може бути або алкогольним, або який виник після 6о гепатиту С або первинним біліарним цирозом. Холангіт є склерозуючим холангітом. Фіброз нирок може бути пов'язаний з діабетичною нефропатією або з викликаним системним червоним вовчаком гломерулосклерозом. Фіброз серця може бути пов'язаний з інфарктом міокарда.
Фіброз судин може бути пов'язаний з повторним звуженням артерій після ангіопластки або атеросклерозом. Фіброз шкіри може бути пов'язаний з рубцями, які виникли внаслідок опіку, гіпертрофічними рубцями, келоїдними рубцями або нефрогенною фіброзуючою дермопатією.
Фіброз ока може бути пов'язаний з ретро-орбітальним фіброзом, з хірургічним втручанням при лікуванні катаракти або проліферативною вітреоретинопатією. Фіброз кісткового мозку може бути пов'язаний з ідіопатичним мієлофіброзом або медикаментозним мієлофіброзом. Інші фібрози можуть бути вибрані з таких захворювань, як хвороба Пейроні, контрактура
Дюпюїтрена (синдром) або дерматоміозит. Системні фібрози можуть бути системними склерозами або реакцією "трансплантат проти хазяїна".
Введення/Складання фармацевтичних композицій "Терапевтично ефективна кількість" агента, ефективного в лікуванні або профілактиці захворювання, при якому бажана активність ТІ КЗ, може бути визначена шляхом стандартних дослідницьких способів. Наприклад, доза агента, ефективна в лікуванні або профілактиці запальних захворювань, таких як астма, хвороба Крона, виразковий коліт або ревматоїдний артрит, може бути визначена введенням агента у відповідну модель, таку як представлені тут моделі.
Крім того, у випадку необхідності, для оптимізації дози можуть бути використані тест- системи іп міго. Точне визначення ефективної дози (наприклад, за допомогою клінічних випробувань) може бути здійснене фахівцями на основі декількох чинників. Такими чинниками є: захворювання, що підлягає лікуванню або профілактиці, симптоми захворювання, маса тіла пацієнта, імунологічний статус пацієнта і інші відомі фахівцям чинники. Точна доза, призначена для застосування в формулі композиції, залежить від способу введення препарату, а також від тяжкості хвороби, і повинна визначатися на основі лікарського рішення і стану кожного пацієнта.
Ефективна доза може бути екстрапольована виходячи з кривої динаміки доза-відповідь, отриманої в експериментах на тваринах або іп міїго.
У представлених в даному винаході способах антагоністи ТКЗ можуть вводитися по одному або в поєднанні з щонайменше однією додатковою молекулою. Як додаткові молекули можуть виступати інші молекули-антагоністи ТІ КЗ3 або молекули, що мають терапевтичне значення, не опосередковане сигнальним шляхом рецептора ТІ КЗ. Компаунди, що зменшують виробництво або активність цитокінів, які складаються з антибіотиків, противірусних, паліативних або інших речовин, є прикладами таких додаткових молекул.
Для введення призначеного для терапевтичного використання агента може бути використаний будь-який прийнятний шлях введення, який забезпечує потрапляння агента до пацієнта. Фармацевтичні композиції даних агентів є особливо корисними при парентеральному введенні, наприклад, внутрішньошкірному, внутрішньом'язовому, внутрішньоочеревинному, внутрішньовенному, підшкірному або інтраназальному.
Запропонований в даному винаході агент може бути виготовлений у вигляді 4о фармацевтичної композиції, що містить ефективну кількість агента як активний компонент разом з фармацевтично прийнятним носієм. Термін "носій" стосується розчинників, ад'ювантів, зв'язувальних речовин або середовища, разом з якими активна сполука буде вводитися.
Фармацевтичне середовище може бути рідким, як, наприклад, вода або масла, включаючи масла, що отримуються з нафти, масла рослинного, тваринного або синтетичного походження, наприклад, арахісове, соєве, мінеральне, кунжутне і інші подібні масла. Наприклад, можуть бути використані 0,495 розчин куховарської солі і 0,395 розчин гліцину. Вказані розчини стерильні і звичайно не містять твердих домішок. Стерилізація проводиться 3 використанням загальноприйнятих, добре відомих способів стерилізації (наприклад, фільтрації). Композиції можуть містити прийняті в фармацевтиці допоміжні речовини, необхідні для наближення до фізіологічних умов, наприклад, речовини, необхідні для контролю і зміни рн, стабілізатори, що збільшують густину, зволожувальні агенти і агенти, які додають забарвлення, і т. д.
Концентрація запропонованого в даному винаході агента в таких фармацевтичних формулюваннях може значно варіювати, тобто, від менше ніж 0,595 (звичайно не менше 195) до 15-2095 від ваги і визначається, насамперед, на основі необхідної дози, об'ємі, в'язкості і т. д., відповідно до вибраного способу введення.
Таким чином, запропоновані в даному винаході фармацевтичні композиції, призначені для внутрішньом'язового введення, можуть містити 1 мл стерильного буферного розчину, а також приблизно від 1 нг до 100 мг, наприклад, приблизно від 50 нг до 30 мг, або, переважніше, приблизно від 5 мг до 25 мг запропонованого в даному винаході антитіла-антагоніста ТІ КЗ. 6о Схожим чином, запропонована в даному винаході фармацевтична композиція для внутрішньовенного введення може містити приблизно 250 мл стерильного розчина Рінгера і приблизно від 1 мг до 30 мг, або, переважніше, приблизно від 5 мг до 25 мг запропонованого в даному винаході антагоніста. Способи виготовлення композицій, що вводяться парентерально, добре відомі і їх детальний опис може бути знайдений, наприклад, в "Кетіпдіоп'є
Ріпаптасеціїіса! бсіепсе", 15Ій єд., Маск Рибіїзнпіпд Сотрапу, Еазюп, РА.
Запропоновані в даному винаході антитіла-антагоністи можуть бути ліофілізовані для зберігання і згодом перед використанням відновлені (розчинені) у прийнятному носії. Було показано, що цей спосіб ефективний для звичайно використовуваних імуноглобулінів і білкових препаратів, при цьому можуть бути використані відомі фахівцям способи ліофілізації і відновлення.
Даний винахід зараз буде охарактеризований за допомогою нижчеприведених прикладів, які описують даний винахід, але які не обмежують його.
Приклад 1
Ідентифікація і отримання антагоністів мАб проти пит КЗ
Комбіаторна бібліотека людських антитіл Могрпобуз (НиСАІ?) Соїй ріаде аїізріау Іргагу (Могрпозу5 АС, Мартінсрід, Німеччина) використовувалася як джерело фрагментів людських антитіл і планувалася для отримання антитіл проти очищеного антигену ТІ КЗ, отриманого шляхом експресії амінокислот 1-703 людського ТІКЗ3 (пиТтіКкЗ3) (ЗБО ІЮ МО: 4) з полігістидиновим хвостом она С-кінці і очищення методом афінної хроматографії з використанням іммобілізованих металів. Амінокислоти 1-703 відповідають передбаченому позаклітинному домену (ЕСО) пит КЗ. Рар-фрагменти, що специфічно зв'язуються з позаклітинним доменом ПпиТКІЗ3, вибирали шляхом представлення білка ТІКЗ різними способами, щоб ідентифікувати різнорідний набір фрагментів антитіл, секвенували і підтверджували його унікальність. Використовуючи різні стратегії, було відібрано 62 білки- кандидати (з різними послідовностями М-сегмента), здатних зв'язуватися виключно з позаклітинним доменом пит К3.
Ці 62 білки, ідентифіковані як здатні зв'язуватися виключно з позаклітинним доменом пит КЗ, були перевірені на здатність нейтралізувати його активність за допомогою цілого ряду працюючих на клітинному рівні тест-систем, придатних для аналізу протизапальної активності.
Використовуючи попередні показники активності (див. далі Приклад 2), з 62 були відібрані чотири кандидати (Бар 16-19), що визначають сімейства 16-19, як вихідний матеріал для дозрівання важкого ланцюга СОК2 (НСОКЗ) і легкого ланцюга СОКЗ (І СОКЗ). Один з вихідних кандидатів (кандидат 19) мав М-пов'язану глікозиловану ділянку в НСОК2; з метою позбутися глікозилованої ділянки в гені, що кодує названий білок-кандидат, була індукована мутація, що замінює 5ег на Аїа (5 на А). Після дозрівання СОК. чотирьох вихідних кандидатів було вибрано 15 дочірніх кандидатів (кандидати 1-15) для подальшої характеризації, згідно 3 описом, приведеним нижче в Прикладі 2. Варіабельні ділянки легкого і важкого ланцюгів кожного з 19 кандидатів перераховані в Таблиці 3. Вказані кандидати будуть далі називатися мАб 1-19 або
Еаб 1-19, в залежності від того, чи є вони Габ-фрагментами антитіл, або являють собою повну 4о клоновану послідовність антитіла (Приклад 3). Внаслідок особливості дизайну експресійного вектора крайніми сегментами варіабельних ділянок зрілих антитіл у всіх кандидатів Є ОМЕ для важкого ланцюга і ОСІ для легкого ланцюга. Переважними послідовностями для вказаних сегментів є послідовності генів клітин зародкової лінії, що мають високий ступінь схожості з послідовністю кандидата. Для сімейств 17 і 18 послідовність генів клітин зародкової лінії була
ОМО для УН і 5У для МІ. Послідовності сімейства 19 є послідовностями ЕМО для МН і І для
МІ. Послідовність ЗУ є унікальною для лямбда підгрупи 3, і існують свідоцтва гетерогенності З або М відносно кінцевого залишку. Таким чином, консенсусний кінець О5М з виступаючої підгрупи лямбда 1 вважався більш прийнятною заміною ОІЕ для МІ. сімейств 17 і 18. Ці зміни були внесені в кандидати 9, 10 і 12 з сімейства 18 і кандидати 14 і 15 з сімейства 19. У цьому процесі були оптимізовані кодони областей МН і Мі цих антитіл. Варіанти М-кінця амінокислотних послідовностей варіабельної ділянки легкого ланцюга, отримані з клітин зародкової лінії, які є варіантами кандидатів 9, 10 і 11 показані в хЕО ІЮ МО: 209-211, а варіанти
М-кінця амінокислотних послідовностей варіабельної ділянки важкого ланцюга, отримані з клітин зародкової лінії, які є варіантами кандидатів 9, 10, 12, 14, і 15 показані в зХЕО ІЮО МО: 212- 216, відповідно. Варіанти М-кінця даних кандидатів називаються в даному винаході кандидат/мАБ/Бар 99М0/05М, 100МО/О5МУ, 120МО0/О5М, 14ЕМО або 15ЕМО). Варіанти М-кінця, отримані з клітин зародкової лінії, експресовані як мАб, не надають впливу на зв'язування ТІ КЗ або на здатність антитіл інгібувати біологічну активність ТІ КЗ в порівнянні з вихідними білками (дані не показані). 6о Приклад 2
Зо
Визначення активності антагоніста ТІ ВАЗ іп міго 15 охарактеризованих вище кандидатів зі зрілим СОЕК були відібрані, як потенційно придатні для лікування людини, була визначена ефективність зв'язування і здатність надавати нейтралізуючий ефект на активність рецептора. Результати дослідження активності і результати для чотирьох вихідних Раб, Раб 16-19 і фрагментів Раб 15, що містять зрілі СОК,
Еаь 1-15, або їх М-ділянки, не запозичені з клітин зародкової лінії, приводяться далі.
Інгібування сигнального каскаду кМЕ-В і ІЗВЕ
Клітини 293Т культивували в середовищах ОМЕМ і сСішамМах (Іпмігодеп, Сагіврайд, СА), що містять інактивовану за допомогою термічного впливу ЕВ5, потім клітини були трансфековані введенням 30 нг рМЕ-кВ або плазміди-репортера ІЗКЕ, що містить ген люциферази світляка, 13,5 нг вектора плазмідної ДНК 3.1, 5 нг вектора рикг-ТК і 1,5 нг вектора плазмідної КДНК, що кодує РІ. ТІ КЗ (5ЕО ІЮ МО: 2). Плазміда риКІ--ТК містить ген люциферази Кепіїа (люцифераза корала, Кепійа гепітоптів), регульований НЗМ-1 промотором тимідинкінази (Рготеда, Мадіоп,
М). Антитіла ТІ КЗ інкубувались протягом 30-60 хв. перед доданням полі(І:С) (ЗЕ Неайпсаге,
Різсаїаулау, МУ). Планшети інкубувались протягом 6 год. або 24 год. при 37 "С перед доданням люциферазного реагенту ЮцаІ-б5Іо; подальший аналіз планшет проводився за допомогою приладу ЕГООзіаг. Нормалізацію значень (відносна інтенсивність сигналу) отримали діленням
КЦЦ (інтенсивність сигналу, виміряна у відносних одиницях люмінесценції - геіаїйме Іштіпезсепсе цпії5, КІ.) люциферази світляка на КГ ШО коралової люциферази (Кепійа). Шляхом стимуляції агентом полі(І:С), який є агоністом ТІ КЗ (1 мкг/мл), домагалися специфічного інгібування каскаду передачі сигналу за участю МЕ-кВ або ІЗКЕ, стимулюючого виробництво люциферази світляка, що досягалося за рахунок інкубації клітин з антитілами проти ТІ КЗ (0,4, 2,0 ї 10 мкг/мл). Результати аналізу МЕ-кВ показані на фіг.1, як виражене в процентах відносне інгібування люцифераз РігепПу/Кепійа з 5465 як позитивний контроль (нейтралізація мАб проти людського ТІ КЗ) і мАр проти людського тканинного фактора (859) як контроль для людського ізотипу Ідс4. »5095 інгібування було досягнуте при концентрації мАбр 0,4-10 мкг/мл. с1068 і
ТІ К3.7 інгібують близько 3895 і 895 біологічної активності ТЇКЗ при концентрації 10 мкг/мл.
Схожі результати були отримані при використанні гена-репортера ІЗРЕ (дані не показані).
Виробництво цитокінів клітинами ВЕА5З-2В
Клітини ВЕА5-2В (55у-40 трансформовані нормальні людські клітини бронхіального епітелію) висівалися на чашки, покриті колагеном типу 1, і, перед додаванням полі(І:С), інкубувались з антитілами проти людського ТІ КЗ або без них. Через 24 год. після обробки збирали надосадову рідину і визначали вміст цитокінів і хемокінів за допомогою зробленої на замовлення тест- системи, основаної на гібридизації на поверхні кульок, для визначення 1-6, ІІ -8, ССІ -2/МО Р-1,
ССІ5Б/КАМТЕВ і СХСІ1О/ЛР-10. Результати показані на фіг.2 як 905 інгібування окремих цитокінів/хемокінів після обробки тАВ, при концентрації 0,4, 2,0 і 10 мкг/мл. 5465 - позитивний контроль; 859 - контроль ізотипу.
Виробництво цитокінів клітинами МНВЕ
Виробництво цитокінів може бути також вивчене в нормальних клітинах людського епітелію 4о (МНВЕ) (Гопла, УмаїЇКегеміе, МО). Клітини МНВЕ були розмножені, а потім перенесені на покриті колагеном чашки для інкубації протягом 48 годин; після цього використане середовище видалили і додавали 0,2 мл свіжого середовища. Клітини інкубувались з мАб проти людського
ТАЗ або без них протягом 60 хв. перед додаванням полі(І:С). Через 24 години надосадову рідину збирали і зберігали при 20 "С, або аналізували на вміст ІЇ-6. Результати представлені графічно на фіг. З як виражене в процентах інгібування секреції ІІ-6 в результаті обробки мАб в дозах від 0,001 до 50 мкг/мл. 5465 - позитивний контроль 859 - контроль ізотипу. Більшість мАб викликали щонайменше 5095 інгібування вироблення 1-6, при концентраціїс1 мкг/мл і інгібування до 7595, при концентрації « 5 мкг/мл.
Виробництво цитокінів клітинами РВМС
Виробництво цитокінів також було вивчене в мононулеарних клітинах периферичної крові людини (РВМО). Кров, отримана від донорів, збиралася в пробірки, які містять гепарин, до яких обережно, як нижній шар, додавали розчин Фіколл Пак Плюс (РісоїІ-Радие Ріив5). Пробірки центрифугувались і клітини РВМС, що формують білий шар безпосередньо над шаром РісоїїЇ, були зібрані і висіяні на планшети. Після цього клітини РВМС культивували з мАБр проти людського ТІ КЗ або без них перед додаванням 25 мкг/мл полі(І:С). Через 24 год. відбирали надосадову рідину і визначали концентрацію цитокінів за допомогою технології І итіпех.
Результати представлені на графіку на фіг. 4, де показане виражене процентне сумарне інгібування ІЕМ-у, ІС-12 ії 1-6 при використанні одиничної дози мАб (0,4 мкг/мл) з 5465 як позитивний контроль; пиЇдся використаний як контроль ізотипу. 6о Виробництво цитокінів клітинами НА5М
Коротко, клітини гладкої мускулатури дихальних шляхів людини (НА5М) інкубувались з мАб проти людського ТІ КЗ або без них, після чого до клітин була додана комбінація 500 нг/мл полі(І:С) і 10 нг/мл ТМЕ-а. Через 24 год. супернатанти зібрали і визначили рівень цитокінів за допомогою технології І штіпех. Результати показані графічно на фіг. 5 у вигляді концентрацій хемокіну ССІ З/КАМТЕЗ при трьох дозах мАбБ (0,4, 2 і мкг/мл). 5465 - позитивний контроль; пІЧе4 - контроль ізотипу.
Результати дослідження клітин людини іп міго підтверджують здатність запропонованих в даному винаході антитіл зменшувати виробництво цитокінів і хемокінів в результаті зв'язування з пит КЗ.
Приклад З
Конструкції антитіл в повну довжину
Чотири вихідні фрагменти Рар (кандидати Ме 16-19) і 15 дочірніх РГар (кандидати Ме 1-15) важких ланцюгів були клоновані в клітинах, що містять мутацію в гені імуноглобуліну Ідс4 (мутація 5229Р Ес). Кандидати 999М0/05, 100МО0/О5М, 120МО/О5М, 14ЕМО або 15ЕМО були клоновані в клітинах, що містять мутації в гені імуноглобуліну Ідся4, мутації Е235А/ 236А і 5229Р
Ес.
Зрілі, які мають повну довжину амінокислотні послідовності важких ланцюгів, показані в «ЕС
ІО МО: 90-102 і 218-220:
Кандидат ЗЕОІЮО МО: 16 90 17 91 18 92 19 93 1 94 2 95
З 96 4 97 5,6, 7 98 8 99 9 100 10,11,12 101 13, 14,15 102 9ЕМО 218
ТОЕМО, 12ЕМО 219 14ЕМО, 15ЕМО 220
Для експресії ці послідовності важких ланцюгів можуть включати М-кінцеву лідерну послідовність, наприклад, МАМ/ММУТІІ! РІ МАААОБІОА (5ЕБО І МО: 103). Нуклеотидні послідовності, що кодують важкий ланцюг кандидатів 14ЕМО і 15ЕМО з лідерною послідовністю, а також зрілу форму (без лідерної послідовності) показані в зЗЕО ІЮ МО: 104 ії 105, відповідно.
Подібним чином, для експресії послідовності легкого ланцюга антитіл даного винаходу можуть включати М-кінцеву лідерну послідовність, наприклад МОМРТОМІ СГ УМ ТрАКС (5ЗЕО ІЮО МО: 106). Нуклеотидні послідовності, що кодують важкий ланцюг кандидата 15 після оптимізації кодонів з лідерною послідовністю, а також зрілу форму (без лідерної послідовності) показані в
ЗЕО ІЮ МО: 107 і 108, відповідно.
Приклад 4
Характеристика зв'язування тАб проти ТІ КЗ
Значення ЕК5БО при зв'язуванні тАБ з позаклітичсним доменом (ЕСО) людського ТІ КЗ визначали методом ІФА. Білок ЕСО людського ТІ КЗ розводили до 2 мкг/мл в фосфатно- сольовому буфері (ФСБ), і аліквоти по 100 мкл вносили в кожну ямку 96-ямкового планшета (Сотіпо Іпс., Асіоп, МА). Після інкубації протягом ночі при 4 "С планшет тричі промивали відмивальним буфером, що містить 0,0595 Твін-20 (Зідта-Аїдгісп) в ФСБ. У ямку вносили 200 мкл блокуючого розчину 295 І-ВіІоскК (Аррієй Віозуєіет5, Боб5іег Спу, СА) і 0,05965 твіну-20 в фосфатно-сольовому буфері. Після блокування протягом 2 год. при кімнатній температурі планшет тричі промивали доданням серійних розведень кандидатів
Таблиця 4 71717768. 71858 ДЗ 2281 11111122861 1-9 антитіл проти ТЇ/КЗ в блокуючому буфері МАБ проти ТІ КЗ інкубували при кімнатній температурі протягом 2 годин і тричі промивали. Потім додавали кон'юговані з пероксидазою овечі антитіла проти людського до (СЕ Неайсаге, Різсаїаулау, МУ), розведені в співвідношенні 1:4000 в блокуючому буферному розчині, інкубували при кімнатній температурі протягом 1 год., потім тричі промили у відмивальному буфері. Зв'язування виявляли шляхом 10-15-хвилинної інкубації в ТМВ-5 (Рідегай Іпдивійе5 Іпіегпайопаї!, Іпс., Сопсога, МА). Реакцію зупиняли додаванням 25 мкл 2М Не5О» і вимірювали поглинання при 450 нм (віднімаючи поглинання при 650 нм) за допомогою спектрофотометра 5БРЕСТКА Мах (МоїІесшаг ЮОемісе5 Согр., З Уиппумаїе,
СА). Значення ЕКб5О визначали способом нелінійної регресії за допомогою програмного забезпечення сСгарпРаай Ргізт (сгарпРайд 5оймаге, Іпс., Зап Оіедо, СА).
Значення ЕК5БО визначали в реакції зв'язування, інкубуючи пит КЗ (Таблиця 4) з 100 мкл 4- кратних серійних розведень тАр: від 2,5 мкг/мл до 0,6 пг/мл. Негативними контрольними зразками служили антилюдський тканинний фактор тАб 859 і пи дк.
Афінність зв'язування для пит! КЗ ЕСО визначали також за допомогою Віасоге-аналізу.
Отримані дані (не показані) продемонстрували, що Ка тАб 1-19 при зв'язуванні з пиТІ КЗ ЕСО складає менше 103 М.
Приклад 5
Конкурентне зв'язування з епітопами
Експерименти по зв'язуванню з епітопами проводили з метою визначення конкурентних груп або "груп епітопів" антитіл проти ТІ КЗ.
При конкурентному ІФА 5 мкл очищеного людського білка ТІК3 ЕСО (20 мкг/мл), синтезованого відповідно до опису в Прикладі 1, вносили в ямки планшета М5О НіднВіпа (Мезо зсаіе Оізсомегу, сСайпегзриго, МО) і витримували 2 години при кімнатній температурі. У кожну ямку додавали 150 мкл блокуючого буфера А (Мезхо Зсаїе Різсомегу) і інкубували 2 год. при кімнатній температурі. Планшети тричі промивали буфером 0,1 М НЕРЕ5, рН 7,4, потім додавали суміш мічених тАб проти ТІ КЗ з різними конкуруючими агентами. Мічені антитіла (10
НМ) інкубували зі збільшуваними концентраціями (від 1 нМ до 2 мкМ) немічених антитіл проти
ТАЗ, потім суміш вносили в позначені ямки в об'ємі 25 мкл. Після 2 год. інкубації з обережним струшуванням при кімнатній температурі планшети тричі промивали буфером 0,1 М НЕРЕЗ5 (рн 7,4). Буфер М5О Кеай Випїег Т розводили дистильованою водою в 4 рази і вносили в ямки в об'ємі 150 мкл/ямку, а потім аналізували за допомогою приладу БЕСТОК Ітадег 6000. Антитіла мітили ефіром М5О Зиййо-Тад м МН згідно з інструкцією виробника (Мезхо Зсаїе Різсомегу).
Оцінювали наступні антитіла проти ТІ КЗ: тАб 1-19, отримані з комбінаторної бібліотеки антитіл людини Могрпозуз (МогрпобЗуз Нитап СотріпаїйогіаІ) (показані в Таблиці За); с1068 (описані в М/006/060513А2), с1811 (щурячі тАб проти мишачих ТІ КЗ, отримані з гібридоми щурів, імунізованих мишачим білком ТІ КЗ), ТІ К3.7 (еВіозсіепсе5, Дієго, Каліфорнія, кат. номер 14-9039) їі ІМО-315А (проти амінокислот людського ТІКЗ амінокислот 55-70 (ММСТНМОЇ ЕКГ РААМ) від Ітдепех, Дієго, Каліфорнія). Для тА 9, 10, 12, 14 ї 15 в даному дослідженні використовували варіанти 9ОМС/О5У, 100МО/О5М, 129МО/О5М, 14ЕМО або 15ЕМО.
При кількісній оцінці конкуренції антитіла проти ТІ КЗ взаємодіяли з п'ятьма різними групами.
Група А: тАБ 1, 2, 13, 14ЕМО, 15ЕМО, 16, 19; група В: тАБ 3, 4, 5, 6, 7, 8, ЗОМО/О5М, 1009М0/О951М, 11, 120М0/О5, 17, 18; група С: антитіло Ітдепех ІМО-315А; група 0: антитіла
ТІКЗ.7, с1068; і група Е: антитіло с1811.
Приклад 6
Картування епітопів
Для подальшого картування епітопів відповідно до опису, приведеного в Прикладі 5, відбирали репрезентативні антитіла з різних наборів епітопів. Картування епітопів проводили за допомогою різних способів, в числі яких експерименти по заміні сегментів ТІ КЗ, мутагенез, заміна Н/О (водню на дейтерій) і комп'ютерне моделювання білок-білкового стикування (Те
Ерпоре Марріпод Ргоїосої5, Мейоз іп МоїІесшаг Віоіоду, Моїште 6, Сіеп Е. Моїтіх ейд., 1996).
Заміна сегментів ТІ КЗ. Химерні людські-мишачі білки ТІ КЗ використовували для виявлення місцеположення великих антителзв'язувальних доменів в ТІКЗ. Позаклітинний домен людського білка ділили на три сегменти (аа 1-209, аа 210-436, аа 437-708 відповідно до нумерації амінокислот в людському, сепВапк Асс. Мо. МР. 003256). Химерний білок МТ5420 був створений шляхом заміни амінокислот людського ТІ КЗ 210-436 і 437-708 на відповідні мишачі амінокислоти (мишачий ТІ КЗ, СепВапк Асс. Мо. МР 569054, амінокислоти 211-437 і 438-709).
Химера МТ6251 була створена шляхом заміни людських амінокислот в положеннях 437-708 на амінокислоти мишачого ТІ КЗ (мишачий ТІ КЗ, бепВапк Асс. Мо. МР 569054, амінокислоти 438- 709). Всі конструкти були створені на основі вектора рСЕРА4 (Ііїе Тесппоїодіє5, Карлеобад,
Каліфорнія) за допомогою стандартних методик клонування. Білки експресували в НЕК293 клітинах як білки з М5-Нівб6, приєднаним до С-кінця, і очищали відповідно до опису в Прикладі 1. тАр с1068. тАб с1068 з високою афінністю зв'язується з ЕСО людського ТІ КЗ, однак не зв'язується належним чином з мишачим ТІ КЗ. с1068 загубило здатність зв'язуватися як з
МТ5420, так і з МТ6251, з чого можна зробити висновок, що ділянка зв'язування розташовувалася в межах послідовності амінокислот 437-708 М/Т білка людського ТІ КЗ. тАр 120М0/95У. тАр 1290/0905 зв'язувалося з обома химерами, вказуючи на те, що ділянка зв'язування тАб 120М0/95М розташовувалася в межах послідовності амінокислот 1- 209 білка людського ТІ З з послідовністю, показаною в ЗЕО ІЮ МО:2.
Стикування білок-білок Іп 5йЙісо. Кристалічна структура тАБб 15ЕМО (див. нижче) і опублікована структура людського ТІ КЗ (ВеїЇ еї аї., У. Епдоїохіп Ке5. 12:375-378, 2006) були мінімізовані по енергії в СНАКМт (ВгооК5 еї аї., 9. Сотршаї. Спет. 4:187-217, 1983) для використання як стартових моделей для докінгу. Стикування білок-білок вивчалося за допомогою програми 20ОСКрго 1.0 (Ассеїгу5, Зап Оіедо, СА), еквівалентної 20ОСК 2.1 (Спеп і
Меп, Ргоївїіп5 51: 397-408, 2003) з кутовою сіткою 6 градусів. Відому ділянку М-глікозилування по залишку Азп в людському ТІ КЗ (Азп 52, 70, 196, 252, 265, 275, 291, 398, 413, 507 і 636) (!ип еї а!., У. Віої. Спет. 281:11144-11151, 2006) блокували від участі в утворенні комплексу антиген- антитіло по терміну епегду в алгоритмі програми 20ОСК. Було отримано 2000 вихідних положень, які використовували при угрупуванні, потім положення при білок-білковому стикуванні уточнювали і повторно оцінювали в програмі КООСК (і еї аї., Ргоївїп5 53:693-707, 2003). Візуально перевірили 200 положень з найбільш високими початковими оцінками по 20ОСК і 200 кращих положень по КООСК.
Кристалізація 15ЕМО проводилася способом дифузії пари при 20 "С (Вепмепшії і Мапдапі,
Маїиге Ргоїосої5 2:1633-51, 2007). Початковий скринінг проводили за допомогою автомата Нуага на 96-ямкових планшетах. У експерименті краплі по 0,5 мкл розчину білка змішували з 0,5 мкл резервуарного розчину. Краплі врівноважували проти 90 мкл резервуарного розчину. Розчин
Раб в 20 мМ Тріс-буфера, рН 7,4, що містить 50 мМ Масі, концентрували до 14,3 мг/мл за допомогою комірок Атісоп ШПга-5 Кба. Скринінг проводили за допомогою Умігага І 8. І (Етегаїай
Віобубзієт5, Бейнбрідж Айленд, Вашингтон) і лотків з комірками для кристалізації, що використовувалися в лабораторії. Кристалізацію фрагментів баб 120М0/05М проводили схожим способом.
Дані по дифракції рентгенівських променів збирали і обробляли за допомогою мікрофокусного генератора рентгенівських променів Кідаки МісгоМах -007НЕ, забезпеченого конфокальною оптикою О5тіс"м МагіМах"М, детектором Зайгтп 944 ССО і системою 6о кріосохолодження Х-5ігеат "м 2000 (Кідаки, Вудлендс, Техас). Інтенсивність дифракції виявляли по обертанню кристала більше ніж на 270", причому час експозиції при повороті кристала на півградуса становив 120 с. Дані рентгенографії обробляли за допомогою програми О-ТКЕК (Кідаки). Структуру визначали способом молекулярного заміщення за допомогою програми
Ріпазег або СМХ (Ассеїгу5, Дієго, Каліфорнія). Положення атомів і температурні коефіцієнти уточнювали за допомогою програми КЕЕМАС з використанням всіх даних в діапазоні розрізнення 15-2.2 А для Баб 15ЕМО і 50-1.9 А для Рар 120М0/О5У. Молекули води додавали при піках електронної густини (Бо-Рс) з точкою відтину Зо. Всі кристалографічні обчислення проводили за допомогою набору програм ССРА (СоїІарогаїйме Сотршацйопаї Ргоіесі, Митрбег 4. 1994. ССРА 5,йе: програми для кристалографії білків. Асіа СгуєїаІНодг. 050:760-763). Корекцію моделі здійснювали за допомогою програми СООТ (Етзвієу еї аї., Асіа Стуєайодг. 060:2126- 2132, 2004).
Розшифровка кристалічної структури тАр 15ЕМО показала, що на ділянці контакту з антитілом у важкому ланцюгу міститься велика кількість негативно заряджених залишків (052, 055, Е99, 0106 і 0109). Таким чином, в розпізнаванні таб 15ЕМО і ТІ КЗ, ймовірно, беруть участь позитивно заряджені залишки. Імітації білок-білюового стикування виявили хорошу комплементарність антитіла і двох великих ділянок ТЇКЗ з множиною позитивно заряджених залишків. При симуляції взаємодії ТІКЗ з антитілом проти ТІ КЗ були виявлені залишки на
ТІ КЗ, що беруть участь в цій взаємодії: 64, К182, К416, К467, 468, К488, К489 і К493.
Дослідження за допомогою мутагенезу. За допомогою одиничних і комбінованих точкових мутацій змінювали поверхневі залишки позаклітинного домену ТІ КЗ в ділянках, які, як було встановлено вище, формували епітопи тАб 12 і тАр 15ЕМО,, і перевіряли здатність отриманих мутантних білків до зв'язування антитіл.
Нуклеотидну послідовність, що кодує амінокислоти 1-703 людського ТІ КЗ (ЕС), (ЗЕО ІЮ
МО: 4; СбепВапК номер доступу МР 003256) клонували згідно зі стандартними протоколами. Всі мутанти створювали способом сайт-направленого мутагенезу за допомогою набору реагентів
ОпгцісКкспапде ПІ ХІІ (Зігаїадепе, Дієго, Каліфорнія) відповідно до протоколу виробника і з використанням олігонуклеотидів, показаних в Таблиці ба. Мутації ідентифікували секвенуванням ДНК. Білки експресували під контролем СММ-промотору, приєднуючи до С-кінця гістидиновий хвіст (Нів-Їад), в клітинах лінії НЕК293 і очищали відповідно до опису в Прикладі 1.
Кількісна оцінка зв'язування. Активність зв'язування тАб 120М0/953у і тАБ 15ЕМО з людським ТІ КЗ і його штучними варіантами оцінювали за допомогою ІФА. Щоб прискорити процес, мутантів в передбаченій ділянці зв'язування тар 15ЕМО коекспресували в клітинах
НЕК, здійснюючи котрансфекцію мутантного ТКЗ ЕСО, що містить гістидиновий хвіст на С- кінці, з тАБ 129М0/05У, а потім очищали метал-афінною хроматографією. Отриманий зразок являв собою комплекс мутанта ТІКЗ з тАБ 12. Даний спосіб придатний тим, що ділянки зв'язування тАр 1290МСУ0О5М і тАБб 15ЕМО розташовані на відстані одна від одної, і, таким чином, точкові мутації в одному сайті навряд чи вплинуть на епітоп іншого сайту. Ці комплекси використовувалися при дослідженні зв'язування методом ІФА. У ямки планшета М5О НідпВіпа (Мезо 5саїе різсомегу, Гейтерсбург, Меріленд) вносили по 5 мкл розчину ТІ КЗ ЕСО дикого типу 4о або мутантних білків в ФБР (20 мкг/мл). Планшети інкубували 60 хвилин при кімнатній температурі, а потім вносили блокуючий розчин А М5О (Мезо 5саїе Ррізсомегу, сайпетгериго, МО) на ніч при 4 "С.
Таблиця 5а
Показані послідовності смислових олігонуклеотидів. При реакції мутагенезу використовували антисмислові олігонуклеотиди з комплементарними послідовностями
К4А9ЗЕ ТАасСтТСтТосСттО 3"
Таблиця 5а
Показані послідовності смислових олігонуклеотидів. При реакції мутагенезу використовували антисмислові олігонуклеотиди з комплементарними послідовностями
АСАТСТИТО З"
Б ВААдААТТАААААТААТоССТТ ТатосАаСАСААСААТТТААТСА
САТТАС 3" дастаАс З
На наступний день планшети промивали і додавали мічені МБО ЗиМйо-ад тАр 15ЕМО в концентраціях від 500 пМ до 1 пМ на 1,5 години. Після промивання для виявлення мічених антитіл використовували буфер М5О Кеай Вийег Т і вимірювали планшети на приладі ЗЕСТОК
Ітадег 6000. Для оцінки активності зв'язування тАбБ 1290МС/05М з людським ТІ КЗ і його варіантами здійснювали спільну експресію з тАБб 15ЕМО), оцінювали зв'язування за допомогою
ІФА, як було описано для тАб 15ЕМО, але детектуючі антитіла мітили тАб 120М0/О054. тАб 1209М0/95Уу: Як було визначено в дослідженнях із заміною сегмента, ділянка зв'язування з таб 120М0/05У розташовувалася в межах амінокислотної послідовності 1-209 людського ТІ КЗ. Були проаналізовані наступні ТКЗ мутанти: О116К, М196А, М140А, М144А,
К1І45Е, КІ1І47Е, КІб6З3Е і О0167А. ТІКЗ дикого типу і мутант М144А зв'язувалися з тА 129М0/О5М з приблизно однаковою активністю (фіг. бА). Антитіло не зв'язувалося з мутантним
ТАЗ 0116, і афінність зв'язування з мутантом К145Е була значно меншою. Таким чином, було визначено, що близькі залишки 0116 і К145 на поверхні ТЇ/КЗ є ключовими фрагментами епітопа для тАб 120МС/05М (фіг. 7А).
Два критичних залишки тАБбБ 1290М0/9О5МУ, що зв'язуються з епітопом, розташовувалися поблизу поверхні ділянки зв'язування дволанцюжкової РНК на М-кінці ектодомену ТІ КЗ (Рігпег, еї а!., Маїште бігисі. 5 Мої. Віої!., 15:761-763, 2008). До складу повного епітопа будуть входити і інші залишки, що належать до сусідніх ділянок, не виявлені мутаційним аналізом. Не вдаючись до конкретної теорії, вважається, що зв'язування тар 120МСУ0О5М з відповідним епітопом на
ТІКЗ може прямо або опосередковано перешкоджати зв'язуванню дволанцюжкової РНК з ектодоменом ТІ КЗ, через що порушується димеризація рецептора і активація наступних сигнальних шляхів. тАбр 15ЕМО: Аналізу піддались наступні мутанти ТІ КЗ: К64Е, К182Е, К416Е, у465А, К467Е,
В488Е, В489Е, М517А, ЮО5З36А, 05З36К, О538А, Н5ЗОА, Н5ОЗОЕ, М54АТА, Е57ОВ, КбІ19А, Кб19Е, подвійний мутант К467Е/у468А, потрійний мутант Т4725/К4731/М4745 і потрійний мутант
Зб
КА88Е/К489Е/К493Е. ТІ КЗ дикого типу, мутанти КбАЕ, К1І82Е, К416Е і потрійний мутант т4725/К4731/М4745 продемонстрували порівнянну активність зв'язування з тАб 15ЕМО (фіг. 68 і Таблиця 55). Антитіло не зв'язується з мутантами ТІКЗ3 К467Е, К489Е, К467Е/у468А і
К488Е/К489Е/К493Е (фіг.бВ і 6С). У інших варіантів білка активність зв'язування була середньою в порівнянні з найбільшою активністю К488Е. Всі ці мутанти зв'язуються з тАБ 129М0/О5У. Ці результати говорять про те, що залишки К467 і К489 були критичними детермінантами епітопа тА 15ЕМО). Залишок К488 також є частиною епітопа. Ці залишки знаходилися близько один від одного на тій же поверхні ТІ КЗ (фіг. 7А). Отримані результати продемонстрували також, що залишки 465, 468, М517, 0536, 0538, Н5З9, М541, Е570 і Кб19, розташовані на тій же поверхні, що і К467, К488 і К489, також є частиною епітопа. Цей висновок був надалі підкріплений дослідженнями по заміні Н/О в тАбБ 15ЕМО). На фіг. 7А показані ділянки зв'язування епітопа тАбБ5 120МС/05М і 15ЕМО (чорним) і С1068 тАБ (сірим), накладені на структуру людського ТІ КЗ. Епітоп для тАр 15ЕМО охоплює залишки 465, К467, 468, К488,
К489, М517, 0536, 0538, Н5З39, М541, Е570 і Кб19.
Дослідження із заміною Н/О. При заміні Н/О методики, що використовуються для аналізу збурень антитілами, були аналогічні описаним раніше (Натиго еї аї., У. Віотої. Тесппідне5 147171 182, 2003; Нот еї аї., Віоспетівігу 45:8488-8498, 2006) з деякими модифікаціями.
Рекомбінантний ТІ КЗ ЕСО (експресований з клітин 519 з гістидиновим хвостом на С-кінці і очищений) інкубували в розчині на основі дейтерованої води протягом вказаного періоду часу, при цьому в нього впроваджувався дейтерій, який замінює атоми водню. Дейтерований ТІ КЗ
ЕСО відділяли на колонці, що містить іммобілізовані тАб 15ЕМО, і промивали буферним водним розчином. Потім білок ТІКЗ ЕСО елюювали з колонки і - після обробки протеазами - визначали місцеположення дейтерійвмісних фрагментів за допомогою мас-спектрометричного аналізу. Використовуваний як еталон зразок ТІ КЗ ЕСО був оброблений тим же способом, але з дейтерованою водою його витримували після іммобілізації на колонці з антитілами, а потім промивали і елюювали так само, як експериментальний зразок. Передбачалося, що областями, пов'язаними з антитілом, є ділянки, відносно захищені від обміну дейтерію на водень і, отже, що містять більше дейтерію, еталонний зразок ТІКЗ ЕСО. Близько 8095 білка можна було картувати відносно специфічних пептидів. Карти замін Н/О при збуренні ТІ КЗ ЕСО антитілами тАр 15ЕМО показані на фіг. 7В. Для ясності зображений тільки сегмент ТІ КЗ поблизу ділянки, що піддалася впливу тАб 15ЕМО). Частини білка ТІ КЗ ЕСО, що залишилися, далі до М- і С-кінця практично не були зачеплені.
У дослідженнях із заміною Н/О були ідентифіковані пептидні сегменти 465УМКМІ ОЇ 471, 5149 МММІАМІМОЮМІ 526 і 52еЇ ЕКІ 5з2 ЗЕО ІЮО МО: 2, які були ділянками, де ТІ КЗ особливо сильно змінився при зв'язуванні з тАб 15ЕМО. За свою природою заміна Н/О є способом лінійного картування, і звичайно за допомогою цього способу не можна визначити, які залишки пептидного сегмента в більшій мірі зачеплені зв'язуванням антитіла. Однак значний збіг результатів досліджень із заміною і мутаціями дає додаткові докази того, що показана на фіг. 7А поверхня є ділянкою зв'язування тАр 15ЕМО. Ця ділянка зв'язування знаходиться в тій же ділянці послідовності амінокислот, що і ділянка, описана вище для тАБр с1068 (РСТ Рибі. по.
МУО06/060513А2), але яка була виявлена на неперекривній поверхні (фіг. 7А), що узгоджується з даними про відсутність перехресної конкуренції між цими антитілами.
Епітоп, з яким зв'язується тАБ 15ЕМО, розташовується проксимальніше ділянки зв'язування дволанцюжкової ДНК на С-кінці ТІ КЗ (ВеїЇ еї аїІ., Ргос. Маї). Асай. сі. (ОА) 103: 8792-8797, 2006; Вапійн-Китаг еї а!., У Віої Спет, 282: 7668-7678, 2007; Пи еї аї., Зсіеєпсе, 320: 379-381, 2008). Без зв'язку з якою-небудь теорією, вважається, що при зв'язуванні тАб 15ЕМО з його епітопом ТІ КЗ виникає стеричне зіткнення з молекулою ліганду дволанцюжкової РНК і/або з димером-партнером, тобто стають неможливими зв'язування ліганду і ліганд-індукована димеризація рецептора.
Таблиця 5Б5 лів 71117111
КабЕ 1111171 вв 7 / ЇЇ -.
КабТЕЛЯЯВВА свавв/ВАВУКАЯЗЕ. /:: | -
Приклад 7
Синтез варіантів з підвищеною термостабільністю
Для створення варіантів антитіл з підвищеною термостабільністю і з одночасним збереженням біологічної активності і мінімізацією імуногенності застосовувалися способи структурної інженерії.
Для інженерії вибрали тАб 15ЕМО. З метою мінімізації імуногенності викликали мутації тільки гаметичного типу, які, на основі даних про структуру, могли бути корисними. В результаті пошуку ВГАБТ встановили, що людським генам гаметичного типу відповідали Мі їі Мн послідовності тАб 15ЕМО (5ЕБО І МО: 41 і 5БО ІЮ МО: 216, відповідно). Найбільш близькоспорідненими послідовностями гаметичного типу були послідовності зепВапк Асс. МоМо
ААСОЗО93 ії Х59318 для МН і Мі, відповідно. Між МН ії МІ гаметичного типу і МН ї МІ. послідовностями тАб 15ЕМО були виявлені наступні відмінності: (МН) М34їЇ, 5355, ЕБОГ, Аб15 і
О67Н; (М) 305, 1315 і АЗ4М. Виявлені відмінності в послідовності нанесли на карту кристалічної структури тАб 15ЕМО і вибрали для інженерії ті залишки, які, приблизно, могли змінити упаковку і інтерфейс взаємодії. Залишки ідентифікували на основі кристалічної структури антитіла (див. приклад 6). (1) У серцевині МН поблизу У34 була виявлена невелика обмежена порожнина. Ця порожнина була досить велика, щоб вмістити дещо більший бічний ланцюг, наприклад, Пе. (2) Е99 в МН СОКЗ був занурений в поверхню зіткнення МН// без мережі водневих зв'язків. Негативно заряджена карбоксилатна група Е9УУО в практично гідрофобному оточенні була пов'язана з сусідніми залишками переважно Ван-дер-ваальсовими (вдв) зв'язками. Занурення зарядженої групи звичайно є енергетично невигідним і надає дестабілізуючу дію. (3) 50 МН - це залишок в складі МН// інтерфейсу. У нього об'ємистий ароматичний бічний ланцюг, який може, таким чином, негативно впливати на процес кон'югації.
Утворення водневих зв'язків і вдв в Ем були прораховані і візуально перевірені в Рутої (мумлуи:// руто! ого). Занурені порожнини в УН і МІ. доменах були прораховані за допомогою програми Самег (Рейек еї аїІ,, ВМС Віоіптогтаїйіс5, 7:316, 2006). Вся молекулярна графіка створювалася в Рутої. Мутації у векторах експресії, що кодують фрагменти Бар або Ідс4 повністю людських антитіл, створених відповідно до методики, описаної в Прикладі 3, вносили з використанням стандартних способів клонування за допомогою набору для сайт-направленого мутагенезу Оціск Спапде І! Хі. (Зігаїадепе, Дієго, Каліфорнія), Спапде-ІТ Мийіріе Миїайоп 5іе рігесієа Мшадепезів Кі (05В Согрогаїййоп, Клівленд, Огайо) або набору для сайт-направленого мутагенезу Оціск Спапде І! (Зігаїадепе, Дієго, Каліфорнія). Реакції проводили відповідно до рекомендацій відповідного виробника. Отримані клони секвенували для підтвердження, і отримані штучні варіанти позначали як тАбБз»5 15-1 - 15-10 відповідно до модифікованого легкого або важкого ланцюга. Кожний варіант ланцюга (Н або І) експресувався з диким типом Ї. або Н ланцюга тАб 15ЕМО для отримання антитіл тАр 15-10, за винятком того, що важкий ланцюг для тАбБ 1501- був з тАб 15-6. Список 5ЕО ІЮО МО5: відносно СОК, варіабельні області легкого і важкого ланцюгів і повна довжина важкого і легкого ланцюгів тАб 15ЕМО і їх штучних варіантів показані в Табл. 6. У Табл. 7 показані праймери для отримання кожного варіанту.
Таблиця 6 1111111 8БОЮМої 77111111
Мо: ЇДС24 | ланцюг
Зв'язування тАб 15-1 15-9 з ТІ КЗ кількісно оцінювали за допомогою ІФА. ЕСО людського
ТІКЗ (100 мкл ТІ К3-ЕСО, при концентрації 2 мкг/мл) іммобілізували на чорних планшетах
Махізогь (еВіозсіепсе) протягом ночі при 4 "С. Планшети промивали і блокували, розчинені антитіла наносили порціями по 50 мкл в кожну ямку по два рази. Обережно струшуючи, планшет інкубували при кімнатній температурі протягом 2 годин. Зв'язування виявляли за допомогою люмінесцентного субстрату РОД (Коспе Арріїеєа Зсіепсе, Маннхейм, Німеччина, кат.
Мо11 582 950 001) і козячих антилюдських ЕСс:НКР (Часкбзоп ІттипоКезеагсі, Вест Гроув,
Пенсильванія, кат. Ме109-035-098), планшет вміщували в планшетний фотометр ЗресігаМах (МоїІесшаг Оемісе5, Саннівейл, Каліфорнія) і проводили аналіз.
Експерименти з диференціальною скануючою калориметрією (ДСК) проводили на МісгоСаї5
Аціо МР-капілярній системі для ДСК (МісгоСаІм, ЇЇ С, Нортгемптон, Массачусетс), в якій температурні відмінності між еталонною і дослідною ямками безперервно вимірювалися і калібрувалися по блоках живлення. Зразки нагрівали з 10 "С до 95 "С зі швидкістю нагрівання б6О "С/година. Час до сканування становив 15 хвилин, період фільтрування - 10 секунд.
Концентрація при ДСК-експериментах становила приблизно 0,5 мг/мл. Аналіз отриманих термограм проводили за допомогою програмного забезпечення МісгоСа! Огідіп 7 (МісгосСаї, с).
Таблиця 7
ЗЕО
ЩШ МО: зва ноілвівювтн. (ОСТ АТОСтТоАоотооо о товАКССТА ВСТА дв, 148 сататАс не:
Аб15/О67 Н сататАс
Таблиця 7
ЗЕО
Канлидат Мутанти Праймери ІО
ЩШ МО: 15.6. |НС: СаСсСАТаТАСТАСТИАСОСССассСАЙСТОТАССАСОССТАС
У34/а355/ЕЗ9О |стАассстаатТАСАастТоаСООСОсСАСТАСТАСАТОССО 157 |(б:с305/1315 | ЗССАСССАСАССАТСАССАССТАССТОСССТОСТАССАСС і встТаатТАССАвЙОССАостТАаСстТасСтТалтастостваствас
АаАпЙатААСТоССсаттасОс 15-8. | 1 С: АЗАМ сасоесттотастастТАССАаттсАватаастастадтаст ста
Не: СаСсСАТаТАСТАСТИАСОСССассСАЙСТОТАССАСОССТАС 15-9 | РБОВБ/УЗА/сЗ355
ІАв15/О67Н/Е99О стлассСстаатТАсАХастааСсавасСасСАатАатАСАТассса 15-10 1 С: 595Р САСайСААСАСССтТасссСстТАСАССТТОССасССсАа і стаассаАлАвататТАваосСАсастотТаСсстТа
Термостабільність (Тт) створених варіантів вимірювали за допомогою ДСК (Таблиця 8).
Зв'язування варіантів антитіл з ТІ КЗ було порівнянним зі зв'язуванням вихідного антитіла.
Таблиця 8
Короткий огляд температур плавлення (Тм) варіантів і обгрунтування для їх отримання 15ЕМО ЇЇ МТ 77 ї11111111111111111111111111111111111111111116471 о
Е5ОВ поверхня зіткнення МНЛ/.
МУЗА упаковка ядра УН 669 | ге
У341/а355 водневий зв'язок, упаковка ядра МН
Аб15/067Н Упаковка МН//І., поверхневий заряд МН
ЕБОВН/УЗА41/2355/ Поверхня зіткнення МН/Л/І,, водневі уз4/сЗ45/Е990 Водневі зв'язки, упаковка серцевини УН, видалення 3005/1315 поверхневі полярні залишки І-СОВІ
АЗАМ взаємодія МІЛ/Н 15-9 НУ ЕБОВА/З41/2355/ Поверхня зіткнення МН/Л/І,, водневі 76 113
Аб15/067Н/Е99О | зв'язки, серцевина МН " 15-10 595Р Стабілізація канонічної структури
Приклад 8
Створення сурогатного антитіла проти ТІ З
Було отримане химерне антагоністичне щуряче/мишаче антитіло проти мишачих ТІ КЗ, яка називається тут тАб 5429, для вивчення ефектів інгібування сигнального шляху ТІ КЗ іп мімо, оскільки гуманізовані антитіла, отримані в Прикладі 1, не мали достатньої специфічності або антагоністичної активності відносно мишачого ТІ КЗ. Сурогатне химерне тАБ 5429, як і батьківське щуряче антитіло до мишачого ТІ КЗ с1811, придушувало сигнальний шлях ТІ КЗ іп мігго і іп мімо, і полегшувало патогенні механізми при декількох експериментально індукованих захворюваннях у мишей.
Дані, які обговорюються нижче, наводять на думку про роль ТІ КЗ в індукції і підтримці патологічного запалення, і частково обгрунтовують терапевтичне застосування антагоністів
ТІ КЗ ї антитіл-антагоністів ТІ КЗ, наприклад, при гострих і хронічних запальних захворюваннях, в тому числі, при гіперцитокінемії, астмі і запаленні дихальних шляхів, запальних захворюваннях травного тракту і ревматоїдному артриті, вірусних інфекціях і цукровому діабеті
ЇЇ типу.
Створення сурогатного тАб 5429
СО щурів імунізували рекомбінантним мишачим ектодоменом ТІ КЗ (амінокислоти 1-703
ЗЕО ІО МО: 162, СепВапкК Асс. Мо. МР 569054), створеним звичайними способами. Лімфоцити двох щурів, які демонстрували титри антитіл, специфічних до мишачого ТІ КЗ, зливали з БО мієломними клітинами. Ідентифікували ряд моноклональних антитіл, реагуючих з мишачим
ТІКЗ, ї перевірили їх ефективність як антагоністи іп міго шляхом кількісних вимірювань з мишачим люциферазним репортером і мишачими ембріональними фібробластами. Для подальшої роботи вибрали гібридомну лінію С1811А. Функціональні гени варіабельної ділянки тА с1811, секретованої гібридомою, секвенували. Потім клоновані гени варіабельних ділянок важкого і легкого ланцюгів вставляли в плазмідні вектори експресії, що дозволило отримати кодуючі послідовності для створення химерного Каї/ВаІр С тидс1/тАб, створеного, як і тАб 5429, за допомогою рутинних методів. Антитіла експресувались як описано в Прикладі 3.
Амінокислотні послідовності варіабельних ділянок важкого і легкого ланцюгів тА 5429 показані відповідно в 5ЕО ІЮ МО:164 і БЕО ІО МО: 163, а повні послідовності важкого і легкого ланцюгів показані в ЗЕО ІЮ МО:166 і 5ЕО ІЮ МО: 165, відповідно. Повні послідовності важкого і легкого ланцюгів ІтАБ с1811 показані відповідно в зЕО ІЮ МО: 168 і БЕО ІО МО: 167.
Характеристика тАбр 5429
Здатність тАб 5429 до нейтралізації сигналів ТІ КЗ охарактеризували в ході аналізів іп міїго.
Аналіз і результати активності описуються нижче.
Аналіз мишачого люциферазного гена-репортера
КДНК мишачого ТІ КЗ (5ЕО ІЮ МО: 161, СепВапк Асс. Мо: ММ 126166) ампліфікували методом ПЛР з кДНК селезінки миші (ВО Віозсіепсе5, Веагтога, МА) і клонували у вектор РСЕР4 (Те Тесппоїодіеє5, Сагзірад, СА) стандартними методами. 200 мкл клітин НЕК293Т вносили в 96-ямкові планшети з білим прозорим дном, при концентрації 4х107 клітин на ямку в повному модифікованому середовищі Ігла і на наступний день брали для трансфекції з використанням ліпофектаміну 2000 (Іпмігодеп Согр., СагзІрад, СА) ії З нг рМЕ-кВ люциферази світляка (Зігаїадепе, Зап Оіедо, СА) або 30 нг РІЗКЕ люциферази світляка (ВО Віозсіепсе5, Вейгога, МА), 5 нг рАИКС-ТК контрольної люциферази Кепійа (Рготеда Согр., Мадізоп, УМ) репортерних плазмід, 1,5 нг СЕР4, що кодує повну довжину мишачого ТІ КЗ, і 13,5 нг пустого вектора плазмідної ДНК 3.1 (І їе Тесппоїіодіє5, Саг5Ірай, СА) до загальної кількості ДНК 50 нг/ямку. Через 24 год. після трансфекції клітини інкубували від ЗО хвилин до 1 год. при 37 "С з антитілами проти мишачого ТІ КЗ в свіжому повному безсироватковому середовищі Ігла перед додаванням 0,1 або 1 мкг/мл полі(І:С). Через 24 години планшети вимірювали за допомогою системи для аналізу люциферази ЮиаІ-б5Іо (Рготеда, Медісон, Вісконсин). Кількість відносних світлових одиниць вимірювали за допомогою мультирідера Рі ОО5іаг ОРТІМА з програмним забезпеченням ОРТІМА (ВМО І аріесп стрьн, Німеччина). Нормалізовані рівні (люциферазні відношення) отримували шляхом розподілу відносних світлових одиниць (КІ )) зі світляковими люциферазами на КІ ШО КепіПа. тА 5429, а також його батьківські тАб с1811 і тАБ 15 (Таблиця
За) зменшували індуковану полі(І:С) активацію МЕ-кВ і пропорційно дозі (фіг. ЗА і 88), що доводить їх здатність бути антагоністами ТІ КЗ. Виміряні в ході аналізу ІЗКЕ ІС5О складали відповідно 0,5, 22 і 0,7 мкг/мл для тАбр 5249, тАВ 15 і тАБ с1811, гезресіїмеїу.
Аналіз з використанням мишачих ембріональних фібробластів (МЕР)
Клітини С57ВІ/6 МЕРЕ отримали з компанії Апіз Орійти5 (Орі-МЕБ7мМ С57ВІ/6 - 0001).
Клітини вміщували в ямки 96-ямкового плоскодонного планшета (ВО Раїсоп) в кількості 20000 клітин/'ямку в 200 мкл середовища МЕЕ (ОМЕМ з глутамаксом, 1095 інактивованих нагріванням
ЕВ5, 1х МЕАА і 10 мкг/мл гентаміцину). Інкубацію у всіх випадках проводили при 37 "С/595 СО».
Через 24 години в ямки планшетів додавали тАБб 5429 або тАБ с1811. Планшети інкубували з тАб протягом 1 години, після чого в кожну ямку додавали полі(І:С), при концентрації 1 мкг/мл.
Супернатанти збирали після 24 годин інкубації. Концентрацію цитокінів визначали за допомогою набору намистин (Іпмігодеп Согр., Карлобад, Каліфорнія) для виявлення СХСЇ 10/ІР-10 згідно з протоколом виробника. Результати представили у вигляді графіків, створених за допомогою програмного забезпечення сгарпРайд Ргізт. Обидва антитіла зменшували індуковані полі(І:С) концентрації СХСІ ТО/Р-10 в залежності від дози. Це показує, що такі антитіла можуть бути антагоністами ендогенних ТІ КЗ і можуть інгібувати сигнали ТІ КЗ (фіг. 9).
Проточна цитометрія - Поверхневе фарбування
Нокаутні миші по гену С57ВІ/6 і ТІ КЗ (ТІ КЗКО) (С57ВІ/6 фон; самиці, 8-12 тижнів, Асе
Апітаї!5, Іпс.), по 10 тваринах в групі, отримували внутрішньочеревинно дозу в 1 мл 395 тіогліколевого середовища (5бідта), через 96 годин мишей піддавали евтаназії і очеревину кожної миші промивали 10 мл стерильного фосфатно-сольового буфера. Витягнуті тіогліколевим середовищем очеревинні макрофаги ресуспендували в фосфатно-сольовому буфері, потім оцінювали життєздатність клітин за допомогою фарбування Трипановим синім. 6о Клітини осаджували центрифугуванням і ресуспендували в 250 мкл буфера ЕАС5 (ФБР -Саг--
Маг", що містить 195 інактивованого нагріванням ЕВЗ і 0,0995 азиду натрію) і зберігали на льоду. Для блокування Ес-рецепторів на макрофагах застосовували реагент СО16/32 (еВіозсіепсе), в концентрації 10 мкг/105 клітин протягом 10 хвилин. Клітини, в концентрації 106 клітин вносили аліквотами по 100 мкл/ямку для поверхневого фарбування. Кон'юговані з АІеха-
РіІсог 647 (молекулярні зонди) тАбр с1811 і тАБ 1679 (щурячі антитіла проти мишачого ТІ КЗ, не специфічні по відношенню до ТІ КЗ, використовуються як ізотипічний контроль) додавали, в концентрації 0,25 мкг/105 клітин і інкубували на льоду в темряві протягом 30 хвилин. Клітини промивали і ресуспендували в 250 мкл буфера БАС5. При фарбуванні для оцінки життєздатності 7-ААО (ВО Віозсієпсе5, Веагога, МА) додавали, в концентрації 5 мкл/ямку не більше ніж за 30 хвилин до дослідження зразків на ЕАС5 Саїїбиг, що дозволяло виявити мертві клітини. Зразки збирали за допомогою БАС5 Саїїриг, застосовуючи програмне забезпечення
Се Оцеві Рго. Для аналізу зібраних даних шляхом побудови гістограм застосовували ЕС5
Ехргевв5.
Зв'язування тАБбБ с1811 з мишачими очеревинними макрофагами (отриманими за допомогою тіогліколевого середовища) з С57ВІ/6 і ТІКЗКО мишей оцінювали способом проточної цитометрії для оцінки специфічності зв'язування. тАб 5429 при такому кількісному визначенні не використовували, оскільки мишача Ес ділянка цього химерного антитіла, ймовірно, бере участь в неспецифічному зв'язуванні. тАбр с1811 не зв'язувався з макрофагами
ТІ АЗКО і збільшував зв'язування з поверхнею клітин С57ВІ /6 очеревинних макрофагів, що говорить про специфічність тАб по відношенню до ТІ КЗ (фіг. 10). тАб 5429 з тими ж ділянками зв'язування, що і у тАб с1811, ймовірно, має таку ж специфічність при зв'язуванні, як і таб с1811.
Приклад 9
Антитіла-антагоністи ТІ КЗ захищають від опосередкованого ТІ КЗ системного запалення
Модель
Як модель опосередкованого ТІ КЗ системного запалення використовували індуковану полі(:С) системну цитокін/хемокінову модель. У цій моделі полі(І:С) (РІС), введений внутрішньочеревинно, індукував системні цитокінову і хемокінову відповіді, які були частково опосередковані ТІ КЗ.
Самиці мишей С57ВІ/6 (8-10 тижневі) або самиці мишей ТІЕЗКО (С57ВІ/6 фон; 8-10 тижневі, Асе Апітаг/!5, Іпс.) отримували підшкірно: тАб 5429 в концентрації 10, 20 або мг/кг в 0,5 мл фосфатно-сольового буфера, тАБ с1811 - в концентрації 2, 10 або 20 мг/кг в 0,5 мл ФСБ або 0,5 мл ФСБ (контроль за допомогою середовища). Через 24 години після введення дози антитіл мишам вводили внутрішньочеревинно по 50 мкг полі(І:С) (Атег5пат кат. Мо. 26-4732 партія Мо
ІНО156) в 0,1 мл ФСОБ. Кров з очної орбіти збирали через 1 і 4 години після ін'єкції полі(І:С).
Сироватку отримували з цільної крові і визначали в ній концентрації цитокіну і хемокіну за допомогою І итіпех.
Результати
Полі (І:С) при внутрішньочеревинному введенні індукувала системна цитокінова і хемокінова відповідь, яка була частково опосередкована ТІ КЗ, як було доведено по синтезу ряду цитокінів і хемокінів, який значно зменшився, у тварин ТКЗКО (Таблиця 9А). Залежними від ТІ КЗ індукованими полі(І:С) медіаторами служили ІІ -6, КС, ССІ 2/МОР-1 і ТМЕ-а через 1 годину після ін'єкції полі(І:С) і 1-1, ССІ Б/КАМТЕ5 і ТМЕ-А через 4 години після ін'єкції полі(І:С). Як тАр с1811, так і тАбБ 5429 значно знижували концентрації цих ТІ КЗ-залежних медіаторів, що доводить здатність антитіл зменшувати кількість сигналів з ТІ КЗ іп мімо (Таблиця 9В). У Таблиці 9 вказані середні концентрації цитокіну і хемокіну (пг/мл) у шести тварин на групу ж станд. помилка середнього. Отримані дані наводять на думку, що антагоністи ТІ КЗ можуть знайти застосування для зниження надмірних концентрацій опосередкованих ТІ КЗ цитокінів і хемокінів при таких станах, як "цитокінова буря" або смертельний шок.
Таблиця 9А ши С57ВІ/6 твЗКоО
РІС 1111-1111 тАБ 5429 тала тАбБ с1811 тала 1 год. обробка РІС 6,005 з 0,32 319,4 ж 34,17 9,13 ж 4,41 43,80 10,13 129,3 з 9,83 2357 ж 491,57 152,0 ж 21,34 432,3 5 90,66: 40,91 з 5,66 5317 - 856,77 120,1 х 99,99 1214 ж 294,97
МОР-1 84,67 - 18,45 694,6 з 127,87 67,85 з 34,16 249,9 ж 55,60 4 год. обробка РІС 28,21 17,78 796,7 ж 45,07 13,94 з 13,84 408,5 я 299175
ВАМТЕЗ 20,87 з 1,738 4511 з 783,47 36,01 з 4,484 706,3 з 84,36"
Оло жо 561,7 ж 81,847 3,215 х 3,115 305,8 х 53,6377 "р «0,001: Однофакторний дисперсійний аналіз для С57ВІ /6 ФБР «хр «0,001 Однофакторний дисперсійний аналіз для С57ВІ /6 РІС
Таблиця 98 ши с57вІ/6 тА 5429 БО 20 10 тала тА с1811 20 10 2 тала 1 год. обробка РІС
ТМЕ-а 29,33 ж 31,05 59,55 ж 32,54 ж 42,22 х 42,61 ж 3,787 1,597 12,71 3,897 7,047 10,58777 кс 466,3 ж 440,3 ж 744,6 ж 637,3 ж 944,2 х 919,3 ж 92,35777 10,017х 105,17 151,07 130,97 231,27 480,2 ж 375,9 705,2 ж 739,2 ж жжж 1229 ж 628 дви 149,87: іде 1047 ж 222 зу 168,5 ж «184,0
МОР-1 15,04 321,6 - 206,7 (219,2 - 70,58 1492 278,3 - 53,57 | 414,9 з 97,17 4 год. обробка РІС 343,0 ж 452,6 ж «354,8 351,7 352,4 3301 завви 0811210 дв дня в8,8Би 39,60 1381 ж жк 1601 ж 1303 ж 1365 ж жк
ВАМТЕ5 169772 2439 ж 308,7 398,95 168072 дае 2209 ж 402,5 жжж 205,1 ж 226,1 ж 138,9 ж 121,6 ж 223,8 ж тво вве | ват звиве | алла якхр «0,001, р «0,01, "р « 0,05: Статистичні дані однофакторного дисперсійного аналізу порівнювали з групою С57ВІ /6 х РІС
Приклад 10
Антитіла-антагоністи ТІ КЗ знижують гіперчутливість дихальних шляхів
Модель
Гіперчутливість дихальних шляхів індукувала полі(І:С).
Самиць мишей С57ВІ/6 (12-тижневих) або самиць мишей ТІКЗКО (С57ВІ/6 фон; 12- тижневих, Асе Апітаї!5, Іпс.) анестезували ізофлураном і вводили їм інтраназально декілька доз (10-100 мкг) полі(І:С) в 50 мкл стерильного ФОБ. Мишам тричі вводили полі(І:С) (або ФСБ) з 24- годинним періодом відпочинку перед кожним введенням. Через 24 год. після останнього введення полі(:С) (або фосфатно-сольового буфера) вимірювали функцію легенів і гіперреактивність дихальних шляхів до метахоліну методом плетизмографії всього тіла (система ВОХСО). Мишей вміщували в камеру для плетизмографії всього тіла і дозволяли звикнути до обстановки протягом 5 хвилин. Після визначення початкових показників мишам давали збільшувані дози розпиленого метахоліну (Зідта, Сент-Луїс, Міссурі). Розпилюваний метахолін давали протягом 2 хвилин, потім протягом 5 хвилин збирали дані, потім робили 10- хвилинну перерву перед наступними збільшуваними дозами метахоліну. Вимірювали резистентність до збільшення потоку повітря (поліпшений показник паузи (Реп), і представляли у вигляді середнього значення Реп за 5 хвилин запису (система ВОХСО). Після вимірювань легеневої функції мишу піддавали евтаназії і канюлювали легені. Робили ін'єкцію 1 мл ФСБ в легені, витягували рідину назадо і отримували таким чином змив з бронхів і легенів (БАЛ). Тканини легенів виймали і заморожували. БАЛ центрифугували (1200 об./хв., 10 хв.), збирали безклітинні супернатанти і зберігали при -80 "С до моменту аналізу. Осад клітин ресуспендували в 200 мкл ФСБ для підрахунку загальної кількості клітин і окремих фракцій клітин. Мультиплексний аналіз проводили відповідно до протоколу виробника за допомогою набору Мийіріех Іттипоаззау (МіПіроге, Біллеріка, Массачусетс).
Результати
Попередні спостереження показали, що інтраназальне введення полі(І:С) індукувало опосередковане ТІКЗ погіршення функції легенів у мишей при одночасному підвищенні поліпшеного показника паузи (РепнН) в ході плетизмографії всього тіла (Вихсо) в порівнянні з початковим показником, і підвищення гіперчутливості до розпилюваного метахоліну (індикатору гіперчутливості дихальних шляхів) (РСТ Рибрі. Мо. УУО06/060513А2). Таке погіршення функції легенів пов'язано з припливом нейтрофілів в легені і збільшенням рівнів прозапальних цитокінів/хемокінів в легенях. У цьому дослідженні ефект тАбр 1811 і тАБ 5429 оцінювали при індукованому полі(І:С) погіршенні функції легенів шляхом підшкірного введення кожного з антитіл в дозі 50 мг/кг перед введенням полі(І:С).
Опосередковане ТІ КЗ погіршення функції легенів значно зменшувалося при введенні тваринам антитіл-антагоністів ТІКЗ перед введенням полі(І:С). Опосередковане ТіКкЗ підвищення початкового Репн і чутливість дихальних шляхів до метахоліну вдалося відвернути у тварин, яким вводили антитіла проти ТІ КЗ (фіг. 11). У тварин, що отримали антитіла проти
ТІКЗ, опосередкований ТІ КЗ приплив нейтрофілів в легені мишей і утворення хемокінів в дихальних шляхах знижувався. Число нейтрофілів (фіг. 12) і рівень СХСІ ТЛО/Р-10 (фіг. 13) визначали в бронхолегеневому змиві. Дослідження повторювали щонайменше три рази зі схожими результатами. Дані, приведені на Ффіг.11, 12 і 13, отримані в одному репрезентативному дослідженні. Кожний символ являє собою один результат по одній миші, а горизонтальні риски показують середнє значення для групи. Дослідження показало, що антитіла-антагоністи ТІКЗ при системному введенні досягають легенів, знижуючи у використовуваній моделі опосередковане ТІ КЗ погіршення функції легенів, інфільтрацію нейтрофілами дихальних шляхів, утворення хемокінів і запалення дихальних шляхів. Таким чином, антагоністи ТЇКЗ можуть бути корисні при лікуванні або профілактиці респіраторних захворювань, для яких характерна гіперчутливість дихальних шляхів, наприклад, астми, алергічного риніту, хронічного обструктивного захворювання легенів (ХОЗЛ) і муковісцидозу.
Приклад 11
Антитіла-антагоністи ТІ КЗ захищають від запальних захворювань травного тракту
Модель
Як модель запального захворювання травного тракту використовували коліт, індукований ден
Самиць мишей С57ВІ/6 (« в-тижневих) або мишей ТІ КЗКО (С57ВІ/6 фон; «8-тижневих, масою від 16.5 до 18 г, Асе Апітаї5, Іпс.) годували кормом, опроміненим гамма-променями, починаючи з дня -1. ДСН (декстрансульфат) (МР Віотеаісаї5, А!йгога, ОН, кат. Мо: 160110; 35-50
КОа; 18-2095 сірки, лот Мо 8247) розводили в автоклавованій підкисленій питній воді до кінцевої концентрації 595. Воду з декстрансульфатом давали протягом 5 днів, після чого замінювали її звичайною водою. Воду мишам протягом всього дослідження давали без обмежень. Кожний день всі пляшки з водою зважували для врахування споживання води. На 0, 2 і 4 день мишам вводили внутрішньочеревинно 5 мг/кг (0,1 мг в 0,1 мл ФСБ) тАбБ 5429, мишачих антитіл проти
ТМЕ-а або фосфатно-сольовий буфер як контроль. За мишами спостерігали щодня протягом всього дослідження і зважували їх на 0-4 дні і на 7 день. На 2 ї 7 дні дослідження мишей піддавали евтаназії. Черевну порожнину мишей розкривали, висхідну ободову кишку відрізали в місці з'єднання зі сліпою кишкою. Відрізки кишки збирали і фіксували в 1095 нейтральному буферному формаліні. Потім відрізки кишки заливали парафіном, готували зрізи і 6о забарвлювали гематоксиліном-еозином (НУЕ) (Оцанек МоїІесшіаг Іарз5, Санта-Барбара,
Каліфорнія). Гістопатологічні дослідження кишки проводили ветеринарні патологи "сліпим" способом, описаним нижче (РаїйоМеїгіх, Хосе, Каліфорнія).
Гістопатологічні дослідження
Досліджували два сегменти товстого кишечнику, тонкого кишечнику і прямої кишки і розраховували наступні змінювані показники: (ї) некроз окремих клітин; (ії) епітеліальні виразки; (ії) відторгнення епітеліальних мас; (ім) абсцес крипт; (м) проліферацію клітин; (мі) проліферацію клітин крипт; (мії) утворення грануляційної тканини в Іатіпа ргоргіа (власній пластинці слизової оболонки); (мії) грануляційної тканини в підслизовій оболонці; (їх) інфільтрації підслизової оболонки запальними клітинами, переважно нейтрофілами; і (х) набряк підслизової оболонки.
Однократно визначали тяжкість стану на основі наступних стандартних визначень:
О - відсутні, 1 - легкі, вогнищеві або рідко зустрічаються, 2 - легкі, множинні вогнища,
З - помірні, часто зустрічаються, але на обмежених ділянках, 4 - важкі, часто зустрічаються на багатьох ділянках або на великих ділянках відповідної тканини, 5 - дуже важкі, на великих ділянках відповідної тканини.
Результати
Попередні спостереження показали, що у тварин ТІ КЗКО значно менше гістопатологічних змін в порівнянні з мишами дикого типу при моделюванні запального захворювання травного тракту, індукованого прийомом ДСН всередину (РСТ Рибі. Мо. УМО06/60513А2), що наводить на думку про те, що сигнали ТІ КЗ відіграють якусь роль при патогенезі цієї моделі. Відомо, що
РНК умовно-патогенних бактерій або РНК ссавців, що вивільняється з некротичних клітин, може бути ендогенним лігандом, стимулюючим сигнали ТІ КЗ (Каїіко еї аї., Іттипйу 23165-231175 2005; Кагпіко єї аї., 9. Віої. Спет. 279:12542-12550 2004), і, отже, стимуляція ендогенними лігандами ТІ КЗ кишечнику може посилювати і закріпляти запалення при коліті, індукованому декстрансульфатом.
Тяжкість захворювання була меншою у тварин, що отримали ДСН, при введенні їм антитіл проти ТІ КЗ, судячи по сумарних гістопатологічних показниках (фіг. 14). На фіг. 14 у вигляді горизонтальних ліній показані середні значення, стандартні відхилення і 9595 довірчі інтервали параметрів, що використовуються при оцінці тяжкості захворювання. Значне погіршення параметрів спостерігалося у тварин дикого типу, що отримали ДСН, при введенні антитіл проти
ТІ КЗ (р «х 0,05) в порівнянні з тваринами дикого типу, що не отримували антитіл. ТІ ЕЗКО тварини, що отримали ДСН, були захищені від індукованих ДСН захворювань. У тварин, що отримували декстрансульфат, яким вводили тАБб проти мишачого ТМЕ-а, було відсутнє покращення гістопатологічних параметрів в експерименті з декстрансульфатом. Отже, така модель може бути корисна при оцінці терапевтичних засобів, що вивчаються, призначених для людей, що не відповідають на терапію анти- ГМЕ-а, а нейтралізуючі антитіла проти ТІ КЗ можуть бути корисні пацієнтам із запальними захворюваннями травного тракту, які не відповідають на 4о терапію анти- ГМЕ-а.
Модель
Як модель запального захворювання травного тракту використовували модель перенесення
Т-клітин. При цьому у мишей ЗСІЮО індукували запалення кишечнику перенесенням популяції наївних Т-клітин імунокомпетентних мишей, які уникли Т-супресорів, які атакували антигенпредставляючі клітини в слизовій кишечника.
Для індукції хронічного коліту наївні Т-клітини (С0О4-С045КВ Т-клітини) ін'єктували внутрішньочеревинно реципієнтам - мишам 5СІЮ. Мишам вводили або ФСБ (500 мкл/миша внутрішньочеревинно; контроль із середовищем), тА 5429 (0,1 мг/миша внутрішньочеревинно), або антитіла проти ТМЕ-йж (0,05 мг/миша внутрішньочеревинно; позитивний контроль), починаючи з 48 годин після перенесення Т-клітин, а після цього - двічі на тиждень протягом 8 тижнів дослідження. Через 8 тижнів після перенесення Т-клітин (або коли миша втрачає »1595 від початкової ваги тіла) тварин піддавали евтаназії і витягували кишечник.
Кишечник фіксували, заливали парафіном і забарвлювали гематоксиліном-еозином (НаЕ).
Гістопатологічні параметри (інфільтрації клітин, абсцеси крипт, епітеліальні ерозії, втрата келихоподібних клітин і потовщення стінок травного тракту) кількісно оцінювали фахівці "сліпим" способом.
Результати
У тварин, яким переносили Т-клітини, при лікуванні антитілами проти ТІКЗ тяжкість захворювання зменшувалася, про що говорить значне зниження у них зведеної 6о гістопатологічної оцінки в порівнянні з контрольними тваринами (р«0,05) (фіг. 15А). Для отримання зведеної оцінки оцінювали абсцеси крипт, виразки, нейтрофільний інфлюкс, втрату келихоподібних клітин, кількість ненормальних крипт, запалення власної пластинки і залучення до процесу декількох шарів стінки. Спостерігалося значне зменшення абсцесів крипт, числа виразкових вогнищ і нейтрофільних інфлюксів (для всіх ре 0,05) (фіг. 158). Антитіла проти ТМЕ- сш в дозах, що достовірно забезпечують оптимальне покращення, використовували як позитивний контроль.
Дослідження за допомогою добре вивчених моделей запальних захворювань травного тракту (ДСН і перенесення Т-клітин) показали, що при системному введенні антитіла- антагоністи ТКЗ досягають слизової кишечнику і зменшують запалення травного тракту, індуковане двома різними патогенними механізмами. Таким чином, антагоністи ТІ КЗ можуть знайти застосування при лікуванні запальних захворювань травного тракту, в тому числі які не піддаються лікуванню анти- ГМЕ-а, і в інших випадках, опосередкованих імунними механізмами патологій травного тракту.
Приклад 12
Антитіла-антагоністи ТІ КЗ захищають від колаген-індукованого артриту
Модель
Колаген-індукований артрит (КІА) використовували як модель ревматоїдного артриту.
Самців мишей ВІОКІЇї (6-8-тижневих, Уаскзоп І арз) ділили на групи по 15 тварин в групі (групи артриту) або по 4 на групу (контрольні тварини). Групі артриту під ізофлюрановим наркозом вводили колаген ІЇ типу шляхом ін'єкції(ЕЇІавзііп Ргодисів) і повний ад'ювант Фрейнда з додаванням М. їшбрегсиіо5зіз (Ойсо) на 0 ї 15 день. На 12 день мишей з артритом, що розвивається через колаген ІІ типу, рандомізували в залежності від ваги тіла на дослідні групи і вводили їм підшкірно (п/ш) на 12, 17 і 22 (а12, а17, 242) дні тАбр 5429 (25 мг/кг), як негативний контроль - антитіло СМАМ (рекомбінантне тАб, неспецифічне у мишей) (5 мг/кг) або антитіла проти ТМЕ-а (5 мг/кг, позитивний контроль). Контрольним мишам вводили носій (фосфатно- сольовий буфер) або дексаметазон (0,5 мг/кг, Оех, стандартний компонент) підшкірно (п/ш) раз на добу на 12-25 дні. За тваринами спостерігали щодня з 12 по 26 день. Оглядали передні і задні лапки для оцінки по клінічній системі (див. нижче). Тварин піддавали евтаназії на 26 день дослідження, їх гістопатологічні показники оцінювали "сліпим" способом (шкала приведена нижче). Дослідження ефективності проводили з урахуванням ваги тіла тварин і оцінок по клінічній шкалі артриту. Всі тварини вижили до кінця дослідження.
Критерії клінічної оцінки дистальних частин передніх і задніх кінцівок 0 - норма, 1 - зачеплені суглоби задніх або передніх лапок, або мінімальна дифузна еритема і припухлість, 2 - зачеплені суглоби задніх або передніх лапок, або легкі дифузна еритема і припухлість,
З - зачеплені суглоби задніх або передніх лапок, або помірні дифузна еритема і припухлість, 4 - помітна дифузна еритема і припухлість, або зачеплені суглоби 4 пальців, 5 - тяжка дифузна еритема і тяжка припухлість всієї лапки, нездатність згинати пальці. 4о Способи гістопатологічної оцінки суглобів мишей при артриті, спровокованим колагеном ІЇ типу
При оцінці лапок або гомілковостопних (променезап'ясткових) суглобів у мишей з артритом, спровокованим колагеном І! типу, враховується тяжкість змін, а також кількість окремих уражених захворюванням суглобів. При ураженні тільки 1-3 суглобів лапи або гомілковостопних (променезап'ясткових) суглобів без ураження зап'ястних/плеснових/пальцевих або передплеснових/тибіотарсальних суглобів, довільно оцінювали максимальну тяжкість по 1, 2 або З параметрах з перерахованих нижче залежно від тяжкості змін. Якщо уражено більше 2 суглобів, критерії перераховані нижче, застосовуються до найбільш ураженого суглоба/більшості суглобів.
Клінічні дані з метою оцінки кистей аналізували за допомогою площі під кривою в 1-15 дні і розраховували 95 інгібування з урахуванням контрольних показників.
Оцінка 0 - норма, 1 - мінімальна інфільтрація запальними клітинами синовіального шару і навколосуглобової тканини уражених суглобів, 2 - легка інфільтрація, у випадку лапок, обмеженість в уражених суглобах,
З - помірна інфільтрація з помірним набряком, у випадку лапок, обмеженість рухів в уражених суглобах, 4 - помітна інфільтрація в більшості ділянок з помітним набряком, во 5 - тяжка дифузна інфільтрація з тяжким набряком.
Панус 0 - норма, 1 - мінімальна інфільтрація пануса в хрящі і субхондральній кістці, 2 - легка інфільтрація з крайовими зонами деструкції твердих тканин в уражених суглобах,
З - помірна інфільтрація з помірною деструкцією уражених суглобів, 4 - помітна інфільтрація з помітною деструкцією архітектури суглоба в більшості суглобів, 5 - тяжка інфільтрація і тотальна або майже тотальна деструкція архітектури суглоба, уражені всі суглоби.
Пошкодження хряща 0 - норма, 1 - мінімальна або невелика втрата забарвлення толуїдиновим синім за відсутності явної втрати хондроцитів або розриву колагену в уражених суглобах, 2 - невелика втрата забарвлення толуїдиновим синім з вогнищевою легкою (поверхневою) втратою хондроцитів і/або розривами колагену в уражених суглобах,
З - помірна втрата забарвлення толуїдиновим синім і багатовогнищевою помірною (глибокою в середній зоні) втратою хондроцитів і/або руйнуванням колагену в уражених суглобах, 4 - помітна втрата забарвлення толуїдиновим синім з багатовогнищевою помітною (глибокою в глибокій зоні) втратою хондроцитів і/або руйнуванням колагену в більшості суглобів, 5 - сильна втрата забарвлення толуїдиновим синім з багатовогнищевою вираженою (від глибокої до крайньої) втратою хондроцитів і/або руйнуванням колагену у всіх суглобах.
Резорбція кістки 0 - норма, 1 - мінімальна з маленькими ділянками резорбції, не явно виражена при малому збільшенні, рідкі остеокласти в уражених суглобах, 2 - легка з більш численними ділянками резорбції, не явно виражена при малому збільшенні, більш численні остеокласти в уражених суглобах,
З - помірна з помітною резорбцією медулярної трабекулярної і кортикальної кістки без зо дефектів, що поширюються на весь кортекс, втрата деяких медулярних трабекул, явні пошкодження при малому збільшенні, більш численні остеокласти в уражених суглобах, 4 - помітні дефекти, що поширюються на всю коркову речовину, часто з спотвореним профілем іншої кортикальної поверхні, з помітною втратою медулярної кістки, численними остеокластами, уражена більшість суглобів, 5 - тяжкі дефекти, що поширюються на всю коркову речовину і руйнування архітектури всіх суглобів.
Результати
Дексаметазон (Оех) і антитіла проти мишачого ТМЕ-й використовували як позитивний контроль, фосфатно-сольовий буфер використовували як контроль середовища, а СМАМ 4о використовували як негативний контроль антитіл. Всі види терапії починалися на 12 день дослідження при розвитку захворювання суглобів. Захворюваність в контрольній групі, що отримувала носій, досягла 10095 до 22 дня. У груп негативного контролю, що отримували антитіла СМАМ або носій, були найвищі оцінки по системі клінічної оцінки. Значне зниження клінічної оцінки спостерігалося в групах, що отримували Оех (р«0.05 для 18-26 днів), 5 мг/кг антитіл до ТМЕ-а (р«е0,05, дні 18-26) або 25 мг/кг тАБб 5429 (р«е0,05, дні 18-23 і 25-26) (фіг. 16).
Клінічна оцінка тяжкості артриту, виражена як площа під кривою (АС), значно знижувалася при застосуванні 25 мг/кг тАр 5429 (4395 зниження), 5 мг/кг антитіл до ТМЕ-а (52965) або дексаметазону (6995) в порівнянні з контрольною групою, що отримувала носій. На фіг. 17 показані середні і стандартні відхилення АОС для кожної групи.
Також оцінювалися гістопатологічні ефекти різних препаратів. Резорбція кісток кистей значно знижувалася при введенні 25 мг/кг тАр 5429 (зниження на 4795) в порівнянні з контролем при введенні середовища. У мишей з групи позитивного контролю, 5 мг/кг антитіл, що отримали проти ТМЕ-а, значно зменшувалося запалення суглобів лап (3395), пошкодження хрящів (3895) і знижувалася зведена оцінка суглобів лап (3795). Введення Юех значно зменшило всі гістопатологічні параметри суглобів лап (7395-не зниження зведених оцінок).
Ці дані демонструють, що антитіла-антагоністи ТКЗ полегшують симптоми клінічних і гістопатологічних захворювань в моделі КІА, що наводить на думку про можливість застосування антагоністів ТІ КЗ для лікування ревматоїдного артриту.
Приклад 14 6о Антитіла-антагоністи ТІ КЗ захищають від гострих летальних вірусних інфекцій
Модель
Експериментальне зараження вірусом грипу А використовували як модель гострої летальної вірусної інфекції.
На 1, 4, 8 і 12 дні самиці мишей С57ВІ /6 (12-тижневі) або самиці мишей ТІ КЗКО (С57ВІ /6 фон; 12- тижневі, АСЕ Апітаї!5, іпс., по 15 мишей в групі) отримували підшкірно тАб 5429 в дозі 20 мг/кг або тільки ФСБ. На 0 день мишей піддавали анестезії ізофлураном і вводили інтраназально вірус грипу А/РК/8/34 (АТСС, Рокленд, Меріленд, партія Мо 218171) в 25 мкл ФБР (еквівалент 105,55 СЕІО50). Тварин протягом 14 днів оглядали двічі на день: вимірювали вагу тіла і перевіряли виживаність. Для оцінки прогресування захворювання і невеликих покращень у відповідь на обробку вірусом грипу А використовували шкалу клінічної оцінки.
Шкала клінічної оцінки 0 - нормальні, живі і реагуючі тварини, без видимих ознак захворювання, 1 - скуйовджена вовна, звичайна або злегка зменшена рухливість, 2 - скуйовджена вовна, згорблена поза при ходьбі, тварина неохоче рухається, утруднене дихання,
З - скуйовджена вовна, утруднене дихання, нерухомість, тремор, 4 - скуйовджена вовна, тварина нездатна ходити навіть при невеликому підштовхуванні, втрата свідомості, холодне тіло при дотику, 5 - смерть.
Результати
У рамках дослідження оцінювали виживаність, щодня визначали оцінку по шкалі клінічної оцінки і реєстрували зміни ваги. Інфікованим грипом А мишам в групі М/Т вводили тАб 5429 (20 мг/кг), тоді як інфіковані миші в групі А ТІКЗКО не отримували тАб 5429. При цьому в обох групах виявлене статистично значне збільшення виживаності (р«0,001 і р«е0,01, відповідно) в порівнянні з інфікованими вірусом грипу мишами С57ВІ/б, що вказує на можливість профілактики загибелі від грипу за допомогою антагоністів ТІКЗ або шляхом створення дефіциту ТІ КЗ (фіг. 18). Оцінка по шкалі клінічної оцінки була значно нижчою в групі, що отримувала 20 мг/кг тАБб 5429, а також в групі ТІ КЗКО (фіг. 19). Вагу мишей оцінювали протягом 14 днів після введення вірусу грипу. У мишей С57ВІ /6, що отримали дозу вірусу грипу
А, вага незмінно знижувалася. Однак, і у мишей С57ВІ /6б, що отримували 20 мг/кг тАб 5429, і у мишей ТІ КЗКО вага тіла була значно більшою, ніж у мишей М/Т С57ВІ /6, заражених вірусом грипу (фіг. 20). Отримані результати показують, що при моделюванні гострої летальної вірусної інфекції антитіла-антагоністи ТІКЗ зменшують тяжкість клінічних симптомів і смертність, і наводять на думку про застосування антагоністів ТІ КЗ як засобу профілактики у людей з гострими інфекціями.
Приклад 15
Антитіла-антагоністи ТІ КЗ покращують протікання гіперглікемії і знижують рівень інсуліну в плазмі крові.
Модель 4о Моделювання аліментарного ожиріння використовували як модель гіперглікемії з інсулінорезистентністю і ожирінням.
Тварин С57ВІГ/6 М/Т (приблизно З-тижневих, Ччаскзоп І абз) і тварин ТІ КЗКО (С57ВІ /6 фон; приблизно З-тижневих, Асе Апітаї!5, Іпс.) утримували на дієті з високим вмістом жирів протягом 12-16 тижнів. Як миші ТІ ЕЗКО, так і миші М/Т С57ВІ /6 отримували або нормальну їжу, або їжу з високим вмістом жирів (Ригіпа Тезібієї кат. Мо 58126), яка містить 60,995 ккал жирів і 20,895 ккал вуглеводів. Цикл день:ніч становив 12:12 год., воду і їжу миші отримували без обмежень. Вагу кожної миші в кожній з груп вимірювали щотижня. МАЮ 5429 вводили внутрішньочеревинно двічі на тиждень протягом першого тижня, потім один раз на тиждень протягом 7 тижнів. Для вимірювань концентрацій інсуліну у вказані терміни використовували сироватку із зразків крові з очної ямки. Перевірку переносимості глюкози проводили через 7 тижнів шляхом внутрішньочеревинного введення глюкози в дозі 1,0 мг/г ваги тіла після ночі натще. Крім того, вимірювали інсулін і глюкозу натще.
НОМА-ІК розраховували, підставляючи концентрації глюкози натще і інсуліну (12) в наступне рівняння: НОМА-ІК - (глюкоза натще (ммоль/л) х інсулін натще (мОд/л)/ 22,5 (ММаМасе еї а!., Оіабеїе5 Саге 27:1487-1495, 2004). Глюкозу в крові натще (ВО) визначали за допомогою глюкозооксидазного аналізу. Інсулін натще визначали за допомогою набору реагентів ЕГІЗА для визначення інсуліну у щурів/миші (СтуєїаІ Спет, саї. Мо 90060).
Результати
Після 12-16 тижнів на дієті з високим вмістом жирів у тварин УМТ рІО розвивалася 6о гіперглікемія і гіперінсулінемія. Переносимість глюкози була кращою у тварин М/Т ІС, але не у
ТсАЗКО БІО, при застосуванні тАб 5429. У тварин, що отримували тАб 5429, через 60, 90, 120 і 180 хв. після введення глюкози концентрація глюкози в сироватці була значно нижчою, ніж в контрольній групі, що отримувала тільки фосфатно-сольовий буфер (фіг. 21А). У порівнянні з мишами МУТ БІО, що не отримували тАб, АОС у тварин, що отримували тАр 5429, М/Т 0ІО була нижче приблизно на 2195. Також у тварин М/Т 0бІО, що отримували тАб 5429, зменшувалися концентрації інсуліну натще (фіг.22). У тварин ТІКЗКО БІО покращень концентрації інсуліну натще при введенні тАр 5429 не спостерігалося. Аналіз результатів дослідження гомеостатичної моделі (НОМА) виявив покращення чутливості до інсуліну у тварин
МЛ ІС, що отримували тАБ 5429, але не у тварин ТІ КЗКО 0ІО. Вміст НОМА-ЇК складав відповідно 14,04.9, 9.09.8, 8.73,0 у тварин ММТ 0ІО, що не отримували тАбр 5429, тварин УУТ
ПІО, що отримували 5 мг/кг тАб 5429 і 20 мг/кг тАБб 5429. Ніякого впливу на тварин ТІ КЗКО рІО антитіла не надавали.
Дослідження показало, що антитіла-антагоністи ТІ КЗ підвищували інсулінорезистентність і знижували рівні глюкози натще при моделюванні БІО без втрати ваги, тобто антагоністи ТІ КЗ можуть бути корисними при лікуванні гіперглікемії, інсулінорезистентності і діабету ЇЇ типу.
Приклад 16
Антитіла-антагоністи ТІ КЗ захищають від бактерій і індукованих вірусами запальних реакцій.
Реагенти
Нетиповані штами Наеторпіи5 іпЯнеп7а (МТНІ) 35, виділені з організму пацієнтів 3 ХОЗЛ з бактерійними ускладненнями, були отримані від д-ра Т.Є. Мигрпу (Медичний центр Вийаїо МА,
Баффало, Нью-Йорк). Людський риновірус 16 отримали з Американської колекції типових культур (АТСС) з ТСІЮ(50)-2,8 х 107/мл.
Аналіз стимуляції МТНІ
Клітини МНВЕ (Гопла, Уокерсвілл, Меріленд) висівали на 9б-ямкові планшети для культивування тканин Місгоїевзі (ВО Віозсіепсе5, Бедфорд, Массачусетс) в кількості 1 х 105/ямку.
МТНІ, що зросли на агарових планшетах протягом 16-20 годин, ресуспендували в поживному середовищі до концентрації 2 х 108 КУО/мл, додавали 100 мкг/мл гентаміцину на 30 хв. і наносили, при концентрації я2 х 10"/ямку на 96-ямкові планшети, які містять МНВЕ. Через З години збирали надосадову рідину і замінювали свіжим поживним середовищем з антитілами або без них (до кінцевої концентрації 0,08-50 мкг/мл). Ще через 24 год. інкубації тричі визначали вміст в клітинних супернатантах цитокінів і хемокінів за допомогою набору реагентів СуїоКіпе 25-ріеєх АВ реайд, Нитап (який включає ІІ -1рД, 1-1 ВА, 1-2, 1--2Н, 1-4, 11 -5, 11 -6, 1-7, 1-8, 1-10,
ІП т2рабр7б, 11-13, 11-15, 11-17, ТМЕ-а, ІЄМ-а, ІЕМ-у, (М-С5Е, МІР-1а, МІР-18, ІР-10, МІС, Еоїахіп,
ЕАМТЕЗ і МОР-1) (Пе Тесппоїодієз, Карлобад, Каліфорнія) і мультиплексного флуоресцентного аналізатора І итіпех 10015 і рідера (Гитіпех Согрогайоп, Остін, Техабс).
Аналіз стимуляції риновірусами
Клітини МНВЕ висівали на 9б-ямкові планшети для культивування тканин Місгоїе5і (ВО
Віозсіепсе5, Бедфорд, Массачусетс) в кількості 1 х 105 клітин/ямку. На наступний день антитіла 4о (в кінцевій концентрації 0,08-50 мкг/мл) додавали до клітин МНВЕ або ВЕАЗ-2В і інкубували протягом 1 години, потім додавали 10 мкл/ямку риновірусу. Ще через 24 години інкубації наявність цитокінів і хемокінів в клітинних супернатантах оцінювали за допомогою приладу
Імтіпех відповідно до вищенаведеного опису.
Результати тАбр 15ЕМО інгібували індукований МТНІ синтез ІР-10/СХСІ 10 і КАМТЕЗ/ССІ 5 в залежності від дози, тоді як при введенні контрольного антитіла, людського Ідс4 (Зідта, Сент-Луїс,
Міссурі), була виявлена відсутність інгібування стимуляції МТНІі (фіг. 23А). тА 15ЕМО також інгібували індукований риновірусом синтез СХСІ Т1О/ЛР-10 ії ССІ Б/КАМТЕЗ (фіг. 238).
Приклад 17
Антитіла-антагоністи ТІ КЗ придушують запальні реакції в астроцитах
Способи
Нормальні людські астроцити від 2 донорів (І оп7а, Уолкерсвілл, Меріленд) вносили в 24- ямковий планшет в кількості 75 000 клітин/ямку і залишали на ніч для прикріплення до підкладки. На наступний день до астроцитів додали 200 нг/мл полі(І:С) і/або 10 мкг/мл тАб 18 на 24 години. Концентрацію цитокінів вимірювали за допомогою приладу І иштіпех.
Результати
Індукований полі(І:С) синтез ІІ -6, ІІ -8, 1-12, ІЕМ-а, ІЕМ-у, СХСІ 9/МІС, ССІ З/МІР-Та, СС 4,
СС 5/ВАМТЕЗ ї СХСІ Т1О/Р-10 інгібували тА 18, як показано в Таблиці 10.
Таблиця 10
Полі(є) | о" | о | 303ж15| 471х3М | 35910
Донор2/////// | 77777711
Полі(є) | о | о | 255:504 | 363жт9 | 30809 пил я Я ПО ПОЛО ПОЛ
Безоброби | 126ж07 | 21509 | 148ж07| в | в тАр18 | 14817 | 19,5ж1,5 | 4811 | 6 |в лебаея | евие | пня гне! но | вен
Донор2/////// | 77777711
Безоброби | 99516 | 123ж1,7 | 11303 | в | в тАр18 | 8.9ж0,7 | 132ж15 | Мижх0О7| 6 |в пеня | ант | щеззв | шлю! во | влеог "о!: вище межі виявлення "рі: нижче межі виявлення
Приклад 18
Антитіла-антагоністи ТІ КЗ придушують запальні реакції в клітинах ендотелію
Способи
Клітини НОМЕС (І опа, Уолкерсвілл, Меріленд) культивували в поживному середовищі, яке містить сироватку, рекомендованому компанією опа. Клітини ресуспендували в безсироватковому середовищі (І оп/7а, Уолкерсвілл, Меріленд), висівали на 96-ямкові планшети в кількості З3х10» клітин/мл, і інкубували при 37 "С, 595 СО2 протягом 24 год. Полі(І:С) (СЕ
Неапйсаге, Різсаїамлау, МУ) додавали в збільшуваних концентраціях (1,5 - 100 мкг/мл) і інкубували 24 год. при 37 "С. Для дослідження інгібування цитокінів тАб 15ЕМО додавали до клітин в різних концентраціях (0 - 50 мкг/мл) і інкубували 30 хвилин, а потім додавали 20 мкг/мл полі(І:С) протягом 24 год. Збирали надосадову рідину і вимірювали концентрацію цитокінів за допомогою набору для аналізу людських цитокінів З30-ріех і технології І итіпех МАР (Іпмйгодеп
Согр., Карлобад, Каліфорнія). Для визначення експресії БІСАМ-1 до клітин НОМЕС додавали 20 нг/мл полі(І:С) ї різні концентрації тАб 15ЕМО (0,8 - 50 мкг/мл). Рівні експресії БІСАМ-1 в клітинних супернатантах визначали за допомогою ІФА (КУО 5узіетв5). Життєздатність клітин вимірювали за допомогою набору реагентів СейТйегоіо (Рготеда, Медісон, Віськонсин).
Результати
Клітини НОМЕС у відповідь на полі(І:С) продукували наступні цитокіни: 1-1 ВА, 1І -2, І -28, ІІ - б, 1-7, СХСОІ 8/ЛІ-8, 11-12 (р40/р70), 1-15, 11-17, ТМЕ-а, ІЄМ-а, ІЕМ-у, ЗМ-С5Е, СС З/МІР-1а,
ССІ 4/МІР-1В8, СХСІ1О/ЛР-10, ССІ 5/ВАМТЕ5, ССІ2/МСР-1, МЕСЕ, 0-С5Е, БОаБ-равіс і НО (Таблиця 11). тАБбБ 15ЕМО в залежності від дози знижували концентрації всіх цитокінів, індукованих полі(І:СЄ) (Таблиця 12). Здатність тАбБ 15ЕМО знижувати індукований полі(І:С) синтез ТМЕ-а, ССІ 2/МОСР-1, ССІ Б/КАМТЕЗ і СХСІ 10/Р-10 наводить на думку, що інгібування опосередкованих ТІ КЗ реакцій може захищати від інфільтрації лейкоцитами і Т-клітинами (яка може привести до атеросклерозу). Інгібування МЕСЕ тАб 15ЕМО також наводить на думку про потенційну користь блокади ТІ КЗ при патологіях, опосередкованих МЕСЕ, в тому числі при ангіогенезі ряду злоякісних пухлин і захворювань очей, таких як вікова макулодистрофія.
Функція ТМЕ-а і ІЕМ-у при залученні лейкоцитів і підвищенні експресії адгезійних молекул на активованому ендотелії (ЮОоикКаз еї а!., Ат. 9. Раїпої. 145:137-47, 1994; Робег єї аї., Ат. У). Раїної. 133: 426-333, 1988). ССІ2/МОСР-1, ССІ Б/КАМТЕЗ і СХСІ 1О/ЛР-10 брали участь в залученні моноцитів і Т-клітин і вносили внесок в розвиток атеросклерозу (І ипадегод еї аї., Сіїп. Іттипої. 2009). Клітини ендотелію синтезують МЕСЕ при ангіогенезі при аномальному зростанні тканин або розвитку ряду злоякісних пухлин (І імепдоос еї аї., СеїЇ. Іттипої. 249: 55-62, 2007).
Таблиця 11 неполі(Кс) | --.и/ 000 | л1286,6-3008 | 13601 2454 9 щ ниию:"нфи ЮИКТІНІИНИНИННИнининншишншишишишиши неполієдїї) | 0 00777 Ї777717171717100 | 00 г г ниию"ннИННИшнннн шили неполієдїї) | 0 00777 Ї777717171717100 | 00 г г ниию;"ньияОИИІЬИНиннннИннишишнн шили концентрація в пг/мл
Розчинний фактор міжклітинної адгезії 1 (5ІСАМ-1), що утворюється при протеолізі, є маркером активації клітин ендотелію. ІСАМ-1 відіграє ключову роль в міграції і активації лейкоцитів, його концентрація в клітинах ендотелію і епітелію при запаленні підвищується, він опосередковує адгезію цих клітин до лейкоцитів через молекули інтегринів ГЕА-1 і Мас-1. У активованих за допомогою Полі(І:С) активувала клітини ендотелію, підвищуючи експресію 5ІСАМ-1, яка знижувалася при додаванні тАб 15ЕМО (фіг. 24А).
Таблиця 12 тАЬ5(мк/мл| 5000 | 1000 | 200 | 040 | 008 | 0016 | 0003 | 0
РІС 1 (75015015 15015151 5 |:
І-8 185,9 97,1 3684,4 6293,4 88279,2 52393,1 113541 122298,4 "Показує значні значення р (менше 0,05) в порівнянні концентрацій тАбт15 тільки з полі(І:С)
Значення представлені як середнє (пг/мл) хх станд. помилка середнього
Це наводить на думку про те, що антитіла-антагоністи ТІ КЗ можуть інгібувати міграцію лейкоцитів і, отже, пошкодження тканин, спровоковане міграцією запальних клітин до вогнища.
Для аналізу життєздатності клітини НИОМЕС культивували, висівали на планшети і стимулювали полі(І:С), як описувалося вище. тАр 15ЕМО в залежності від дози відновлювали індуковане полі(І:С) зниження життєздатності клітин НОМЕС (фіг. 248).
Зниження активації клітин ендотелію може зменшувати надмірну інфільтрацію імунних клітин і пошкодження тканин, спровоковане цитокінами, концентрація яких при запаленні збільшується. Запалення і надекспресія цитокінів і молекул адгезії в клітинах ендотелію відіграють основну роль при розвитку атеросклерозу і гіпертензії. Отримані дані дозволяють обгрунтувати потенційно корисне застосування антагоністів ТІ КЗ при хворобах кровоносних судин, в тому числі васкулітах, і при хворобах, що викликають дисфункцію ендотелію. Інше захворювання, для якого властиве запалення і надекспресія цитокінів - це саркома Капоші (КБ), яка часто зустрічається при імуносупресії і у ВІЛ-інфікованих пацієнтів, збудником якої є герпесвірус саркоми Капоші (К5НМ). Синтез МЕСЕ і цитокінів зумовлює виживання клітин саркоми Капоші (І імепдоса еї а!., Сеї!І Іттипої. 249: 55-62, 2007). Антагоністи ТІ КЗ можуть бути корисні при зниженні ангіогенного ризику, пов'язаного з саркомою Капоші і іншими пухлинами, при профілактиці втрати життєздатності клітинами, при збереженні цілісності захисного ендотеліального бар'єра, який відвертає транссудацію, потенційно серйозне захворювання, пов'язане з пошкодженням органів і загрозливим життю запаленням, таким як сепсис.
Антагоністи ТЗ можуть бути корисними і при вірусних інфекціях, що провокують патології клітин ендотелію, наприклад, при вірусній геморагічній лихоманці, збудниками якої є члени сімейства флавівірусів (наприклад, Денге, жовтої лихоманки), філовірусів (Ебола, Марбурга), бун'явірусів (наприклад, хантавірус, найровірус, флебовірус) і аренавірусів (наприклад, Луйо,
Ласса, аргентинська, болівійська, венесуельська геморагічні лихоманки (зіпірбатіуа еї аї., Віосі 113:714-722, 2009).
Приклад 20
Перехресні реакції антитіл-антагоністів з ТІ КЗ яванських макак і мишей
Активність відносно ТІ КЗ яванської макаки або миші оцінювали шляхом кількісного визначення гена-репортера ІЗКЕ, як описано в прикладі 2. КДНК ТІ КЗ макаки (ЗЕО ІЮ МО: 217) і миші (ЗЕО ІЮ МО: 161) ампліфікували з цільної крові, клонували у векторі рСЕРА (Сіопіесі) і експресували як описано вище. У макак при аналізах МЕ-кВ і ІЗКЕ ІС5О тАБ 15ЕМО складали відповідно 4,18 мкг/мл і 1,74 мкг/мл, тоді як для людського ТІ КЗ при МЕ-кВ і ІЗКЕ ІС50 становили 0,44 і 0,65 мкг/мл відповідно. Контрольні ізотипні антитіла не впливали на ТІ КЗ за результатами цих аналізів.
Приклад 21
Терапевтична доза антитіл-антагоністів ТІ КЗ захищає від гострих летальних вірусних інфекцій
У Прикладі 14 описується профілактичне лікування інфекції вірусом грипу А (введення в дні -4, 4, 8 їі 12) антитілами-антагоністами ТІКЗ3. Цей приклад показує, що терапевтичне застосування антитіл-антагоністів ТІ КЗ (на З день після появи клінічних симптомів інфекції вірусом грипу А) ефективно збільшує виживаність.
Модель
Як модель гострої летальної вірусної інфекції використовували експериментальне зараження вірусом грипу А, як описано в Прикладі 14, за винятком того, що тваринам вводили тА 5249 через З дні після зараження вірусом грипу А, і вік тварин був 8 тижнів. Як контроль ізотипу використовували антитіла проти ЇДС1 миші виробництва ВіоЇ едепа. Антитіла вводили через 3, 7 і 11 днів після зараження вірусом грипу А.
У рамках дослідження оцінювали виживаність, щодня визначали оцінку по шкалі клінічної оцінки і реєстрували зміни ваги. | у мишей С57ВІ/б, що отримували тАбБ 5249, і у мишей
ТІКЗКО показане статистично значне підвищення виживаності (р. «х 0,028 ії р '« 0,001, відповідно), в порівнянні з мишами С57ВІ/6б, яким вводили антитіла проти ІДС! миші як контроль ізотипу і вірус грипу (фіг. 25). У групі мишей С57ВІ /б, що отримали тАБ 524, і мишей
ТІ КЗКО клінічна оцінка була нижчою (фіг. 26), а маса тіла вищою (фіг. 27) в порівнянні з мишами С57ВІ/6, яким вводили антитіла проти Їдс1 миші як контроль ізотипу і вірус грипу А.
Отримані результати показують, що при моделюванні гострої летальної вірусної інфекції антитіла-антагоністи ТІ КЗ зменшують тяжкість клінічних симптомів і смертність, і наводять на думку про застосування антагоністів ТІКЗ як засобу профілактики у людей з гострими інфекціями.
Приклад 22
Епітопи і паратопи антитіл-антагоністів ТІ КЗ по результатах рентгенокристалографії
Позаклітинний домен ТІ КЗ людини кристалізували в комплексі з Гар-фрагментами таб 15ЕМО, тАБб 120У0/О5У і тАБ с1068.
Методи
Експресія і очищення білків
Експресію і очищення позаклітинного домену ТІ КЗ (амінокислоти 1-703 з БЕО ІЮ МО: 2) три
Еаб-фрагменти проводили як описано вище.
Приготування четвертинного комплексу ТІКЗ ЕСО-3 Бар 4 мг позаклітинного домену людського ТІ КЗ змішували з 2,4 мг кожного Бар-фрагмента і і інкубували при 4 "С протягом 3,5 год., що відповідає молярному співвідношенню 1 ТіІКкЗ
ЕСО:1.1 Раб. Комплекс очищали методом аніонообмінної хроматографії на колонці Мопос) 5/50
СІ (СЕ Неасаге, Піськатауей, Нью Джерсе), врівноважували 20 мМ тріс рН 8,5, 1095 гліцерином (буфер А) і елюювали 20 мМ тріс рН 8,, 1095 гліцерином, 1 М Масі (буфер В).
Приблизно 2,48 мг комплексу в 1,74 мл розводили до 10 мл буфером А, вносили в колонку з швидкістю протікання 1 мл/хв. і елюювали з лінійним градієнтом 0-4095 В, подаючи більше 40 об'ємів колонки. Проводили п'ять послідовних циклів очищення. Фракції, відповідні піку 1, зливали разом, концентрували за допомогою центрифугального фільтра Атісоп-15 ті ОПга- 30000 МУУСО і Місгосоп 30000 МУУСО до 14,49 мг/мл в 20 мМ тріс рН 8,5, 27 мМ Масі, 10 965 гліцерину (коефіцієнт загасання: Агво (1 мг/мл)) - 1.31.
Кристалізація
Автоматичний скринінг кристалів проводили за допомогою автомата для кристалізації білків
Огух4 (бошдіах Іпзігитепів), дозуючи однакові об'єми білка і резервуарний розчину в форматі сидячої краплі з використанням планшета Согпіпд 3550 (Согпіпд Іпс., Асіоп, МА). Початковий скрининг проводили за допомогою лотка з осередками для кристалізації Натріоп НТ (НК2-130,
Натріоп Кезеагсй, АїЇїбзо МієЇо, СА). Дрібні кристали, отримані в різних умовах, використовували для отримання кристалів-затравок, а потім застосовували метод мікроперенесення кристалів (МПК) як затравки для скринінгу умов кристалізації. Було проведено декілька циклів очищення, основаних на умовах початкового скринінгу, при яких виходили дрібні кристали. Умови в резервуарі при МПК підбиралися на основі тих, які давали маленькі кристали після очищення: 18-28965 поліетиленгліколю (ПЕГ) 3350, 1М ІСІ, рН 4,5 їі 2,0-2,9 М (МНа)250», 595 ПЕГаоо, РН 4,5, досліджувалися різні значення рН і різні добавки. Скринінг кристалізації методом МПК проводився за допомогою автомата для кристалізації білків Огух4 (Юоидіаб5 Іпбігитепів), компоненти дозувалися в наступних співвідношеннях : 1 частина білкового розчину: 0,25 частин маточного кристала-затравки: 0,75 частин резервуарного розчину. Кристали з розділенням дифракційної решітки до -10-А утворювалися в розчині з концентрацією від 0.1 М Ма ацетату рН 4,5, 2.9 М (МНаА)250», 595 метилпентандіолу (МПД) і 0.1 М Ма ацетату рН 4,5, 2695 ПЕГззво, 1
М С. 6о У спробі підвищити розділення кристалів МПК у вищевказаних умовах поєднували з додатковим скринінгом з використанням вибраних компонентів комплекту для додаткового скринінгу Натріоп НК2-428 (Натріоп Кезеагсі, АїЇїзо Мієїю), СА) в наступному об'ємному співвідношенні: 1 ч розчину білка: 0,125 ч маточного розчину затравки: 0.2 ч адитивного розчину: 0,675 резервуарного розчину. Кристали КЗ ЕСО в комплексі з Бар-фрагментами, прийнятні для рентгенівської дифракції, з розділенням до -«- 5-А отримували за допомогою МПК в поєднанні з додатковим скринінгом з розчину, що містить 0.1 М Ма ацетату рН 4,5, 2895
ПЕГ»ззво, 1 М ГІС ї 30 мМ СіІи-С1и-С1и.
Збір даних рентгенодифракційного аналізу четвертинного комплексу ТІ КЗ ЕСО
Для отримання даних рентгенодифракційного аналізу кристал (розмір «1,0 х 0,5 х 0,1 мм3) на декілька секунд занурювали в синтетичний маточний розчин (0,1 М Ма ацетату, рН 4,5, 2895
ПЕГззво, 1 М ІСІ, 1695 гліцерину) і швидко заморожували в потоці азоту при 100 К. Дані про дифракцію рентгенівських променів збирали і обробляли за допомогою мікрофокусного генератора рентгенівських променів Кідаки МісгомМах"м-007НЕ, забезпеченого конфокальною оптикою О5тістм МагіМах"мМ, детектором Зайшгп 944 ССО і системою кріоохолодження Х- вігеат"м 2000 (БідаКки, Вудлендс, Техас). Інтенсивність дифракції вимірювали при обертанні кристала на 2507 з часом експозиції 1 хв. на кожний поворот на половину градуса з максимальним розділенням 5 А. Дані про дифракцію рентгенівських променів обробляли за допомогою програми О"ТКЕК (РПидгай, Асіа СгузіаПйодгарпіса Зесцоп 0, 55:1718-1725, 1999).
Кристали належать до групи моноклінних кристалів С2 3 наступними параметрами елементарної комірки: а - 214,90 А, Б - 142,08 А, с - 125,04 А, ії дД - 103,17. Асиметрична комірка містить одну молекулу комплексу. Статистика даних рентгенодифракційного аналізу представлена в Таблиці 13.
Таблиця 13
Збір даних
Просторова група б2
Осі елементарної комірки (А) 214,90, 142,08, 125,04
Кути елементарної комірки (7) 90, 103,17, 90
Розділення (А) 30-5,0 (5,18-5,00)
Відсутність унікальних відображень 15,877 (1589)
Повнота (95) 99,8 (99,6)
Надлишок 52 (4,9)
Атеге? 0,121 (0,912) «Іо» 7 (2,9)
Уточнення структури
Розділення (А) 29,4-5,0
Веаузу/ Вітее (У)? 26,8/30,0
Число відображень
Робочий набор 15,792
Досліджуваний набор (595 даних) 788
Кт:ха ідеальних значений
Довжина зв'язку (А) 0,007
Кути зв'язку (7) 0,744
Число атомів білка 15,42
Графік Рамачандрана
Сприятливі області (95) 93,1
Дозволені (90) 98,8
Заборонені (95) 12
Визначення структури
Кристалічна структура ТІ З ЕСО - Рар 15ЕМО - Гар 120МС/О5М - Раб с1068 визначалася за допомогою програми Ріазег (Кеай, Асіа СтузіаПйодг. СтгуєіаНодг. О. Віої. СтуєіайПйодг. 57: 1373- 1382, 2001). Моделями пошуку були структури ІО 17ім ТІ З ЕСО (банк даних про білки (РОВ) після видалення всіх гліканів, Спое еї аї., Зсіепсе 309:581-585, 2005) і певні кристалічні структури високого розділення всіх фрагментів Раб (підсумкові дані про кристали і статистику для цих Рар-фрагментів див. в Табл. 13). Кут вигину фрагмента Раб 120М0/053У значно відрізнявся від такого у вільній формі. Була отримана серія моделей Гаю 1200/0905 шляхом підстановки різних кутів вигину з інтервалом «57, одна з яких добре узгоджується з електронною густиною. Уточнення структури проводили за допомогою програми РНЕМІХ (Адатзв еї аї., 9.
Зупепгоїгоп Надіаї. 11: 53-55, 2004). Уточнена структура являла собою жорсткі домени "кістяка" (кожний з доменів М або С) у Раб-фрагментів і 13 жорстких сегментів (визначення, що використовувалися при деталізуванні структури: 30-60,61-108,109-156,157-206,207-257,258- 307,308-363,364-415,416-464,465-514,515-570,571-618,619-687) для ТІКЗ ЕСО з одним В фактором для кожного жорсткого кістяка Раб і одним В для всього комплексу ТІ КЗ ЕСО.
Структуру кожного з жорстких кістяків ЕРар-фрагмента уточнювали поправками на зміщення/коливання/обертання атомів (ТІ 5), а позаклітинний домен ТІ КЗ ЕСО був розділений на 2 ТІ! 5 сегменти по залишку 330 5ЕО ІО МО: 2. Щільність гліканів була видима в 10 з 15 ділянок М-глікозилування. Потім додавали моделі вуглеводів з кристалічної структури позаклітинного домену ТІ КЗ (Споеє еї аї., Зсієпсе 309:581-585, 2005, РОВ вігисіиге ІО: 1721ім/).
Після уточнення структури жорсткого кістяка видима щільність короткого відсутнього сегмента у позаклітинному домені ТІ КЗ (залишки 337-342 з ЗЕО ІО МО: 2) була введена в модель разом з відповідним сегментом з позаклітинної структури ТІ КЗ 2а07 Веї еї а!., Ргос. Май. Асайд. 5бі. (О5А) 102:10976-10980, 2005, РОВ вігисішге ІЮ: 2а07). С-кінець ТІ КЗ ЕСО містив додаткову щільність, відповідну 2а07. Цей сегмент (647-703 ЕЕ ЗЕО ІЮ МО: 2) був потім замінений (залишки 647-687) 2айм. Таким чином, модель ТІ КЗ ЕСО являла собою гібрид між структурами
ТІ КЗ 17ім/ і 2207 і була визначена як така, що складається з 13 жорстких сегментів основи (діапазон амінокислот: 30-60,61-108,109-156,157-206,207-257,258-307,308-363,364-415,416- 464,465-514,515-570,571-618,619-687).
Мабуть, ІСОКЗ з Бар 120М0/95МУ приймали конформацію, відмінну від такої у вільної форми. Симульований відпал з декількома точками старту проводили зі стандартними параметрами за допомогою програми РНЕМІХ. Моделі цього ЇСОКЗ оцінювали візуально по карті електронної густини і включали в початкову модель конформацію з "кращою відповідністю". Процес уточнення структури контролювали по показнику Кетее проти 590 відображень, встановлених до початку обчислень. У цьому кінцевому циклі включали один В- фактор для кожного залишку. Дослідження моделі і ручна побудова області вигину Еар- фрагментів і бічних ланцюгів на поверхні спряження білок-білок проводили за допомогою програми СООТ (Ептвзіеву еї а!., Асіа СтузіаПодг. Ю. Вісі. СтувіаМодг. 60: 2126-32, 2004). Остаточні значення Кеуз: і Кітее становили 26,895 і З30,095, відповідно, для всіх 15 792 незалежних відображень до 5,0 А. Статистика визначення точної структури приведена в таблицях 13 і 14.
Результати
Молекулярна структура четвертинного комплексу КЗ ЕСО-три Бар
Загальна молекулярна структура комплексу показана на фіг. 28. У асиметричній одиниці присутня одна молекула ТІ КЗ ЕСО їі одна молекула кожного Раб. Модель структури ТІ КЗ ЕСО включає всі залишки з 30 до 687 пит КЗ (5ЕО ІЮ МО: 2). Що стосується трьох Рар-фрагментів, були включені всі залишки з відповідних непов'язаних форм, за винятком іонів розчинника і молекул води. Молекула ТІ КЗ ЕСО по загальній топології дуже схожа з раніше описаними структурами (птза 0.79 А для!17ім/, 613 Саг5, і 1.37 А для 2а07, 595 Саг5). Всі Рар-фрагменти по структурі ідентичні своїм незв'язаним формам, за винятком ЇСОКЗ в Бар 120МО/О5М, як описано в методах, а як і ділянки вигину і деякі бічні ланцюги в місці з'єднання ТІ КЗ ЕСО/Рар.
Таблиця 14
Збір даних
Еаь 1200/0005 Еаб 15ЕМО Еаб с10о68
Просторова група Ра: Ра: Ра
Розміри комірки а, 5, с (А) 75,83, 80,35, 83,06 54,68, 74,74, 64,99 82,48, 136,94, 83,25 а, В, м С) 90, 115,24, 90 90, 103,69, 90 90, 114,95, 90
Розділення (А) 70-2,5 (2,59-2,50) 49-22. (228-220) 50-1,9 (2,0-1,9)
Унікальні відображення 27,185 (1653) 24,439 (1859) 117,490 (5916)
Повнота (95) 88,5 (53) 94,2 (72,8) 89,3 (45.2)
Надлишок 4 (1,8) 52 (4,3) 32 (2)
Атегте? 0,164 (0,297) 0,088 (0,445) 0,065 (0,264) «Іо» (без усереднення) 2,9 (1,2) 3,8 (1,4) 5,7 (1,6)
Уточнення структури
Розділення (А) 15-2,5 (2,56-2,50) 15-2,2 (2,26-2,20) 75,38-1,90 (1,94-1,90)
Таблиця 14
Збір даних
Веаугу/Вее (7) 19,7/25,4 (30,8/40,8) 19,3/26,9 (24,6/31,1) 20,4/27,7 (39,8/51,1)
Число відображень
Робочий набор 26,723 23,308 111,413
Тестова сукупність 882 1,008 5,917
Число атомів
Білки 7,046 3,705 13,421
Розчинник (вода и т. п) 486 333 1,779
Довжини зв'язку (А) 0,012 0,013 0,023
КМ5О кути зв'язку (7) 16 1,5 2
Графік Рамачандрана" рив області 923 96,8 97,2
Дозволені (90) 98,9 99,3 99,7
Заборонені (95) 1,1 0,7 0,3
Значення для найбільшого розділення показані в ()
Втеге - х| І«І» | /ХІ, де І - інтенсивність виміряного відображення, а «і» - середня інтенсивність всіх виміряних відображень.
Ь Всеуві - Х | | Еспост. | - | Ерозрах. | |Ї/х | Еспост., Де Еспост. і Ерозрах, - СПОСТережувані і розрахункові коефіцієнти, а Кгтее Обчислюється для набору довільно вибраних 595 відображень перед уточненням структури. с Графік Рамачандрана будували за допомогою програми Мо!ІРгоркгу (Оамів, І.М/., еї аї., Мисієїс
Асіа5 Нез, 32:М/615-9, 2004).
Епітопи і паратопи
Залишки, що беруть участь в зв'язуванні між ТІ КЗ ЕСО і трьома Рар-фрагментами, показані на фіг. 288. Рар 120М0/О5МУ зв'язується поблизу М-кінця ТІ КЗ ЕСО. Конформаційний епітоп складався із залишків ТІ КЗ І КК 3-7 (амінокислоти 100-221 5ЕО ІЮО МО: 2). Зв'язування Еар 120МО0/О5М приводило до занурення приблизно на 928 А? і 896 А? для антигену і антитіла, відповідно. Що стосується Бар 120М0/О5У, кристалічна структура ідентифікувала наступні залишки епітопа ТІ КЗ (5ЕО ІЮ МО: 2): 5115, 0116, К117, А120, К139, М140, М141, М144, К145,
Т166, 2167, М168, 5188, Е189, 0192, А195 ії А219. Що стосується Бар 120МО0/О5У, кристалічна структура ідентифікувала наступні залишки паратопа: (ЗЕО ІЮ МО: 211): 528, 529, 30, У31,
Е49, 050, М90, 091 і 092. Важкий ланцюг (ЗЕО ІО МО: 214): М32, 054, 56, 557, К58, 60, 104,
Р105, Е106 і М107.
Бар 15ЕМО ії Бар с1068 зв'язували неперекривні епітопи, що охоплюють КК 15-23 (амінокислоти 406-635 5ЕО ІЮ МО: 2) поблизу С-кінця (фіг. 28). РЕар-фрагмент 15ЕМО занурений на 1080 Аг і 1064 А? в поверхню антигену і антитіла, відповідно, тоді як Раб с1068 був занурений на 963 Аг і 914 Аг, відповідно. Епітоп для Гар 15ЕМО включає залишки КА16, КА18, 1 440, М441,
Е442, 465, М466, КА67, 468, 8488, 489, А491, К493, М515, М516, М517, Н5З9, М541, 5571, 595 і Кб19 з ТІ КЗ, показані в БЕО ІЮО МО: 2. Що стосується Бар 15ЕМО, його кристалічна структура ідентифікувала наступні залишки паратопа (ЗЕО ІЮО МО: 41): 027, 32, М92, Т93, 194 і 595. Важкий ланцюг (ЗЕО ІЮО МО: 216): МУЗ3, Е50, 052, 055, 57, М59, Рб2, Е99, У101, У104 і р1іто6.
Відносно Раб с1068, кристалічна структура ідентифікувала наступні залишки епітопа ТІ КЗ (ЗЕО ІЮ МО: 2): Е446, Т448, 0450, Н453, В473, М474, А4А77, 1478, РАВ8О, 5498, Р499, 0503, РБОЯ4,
К5О7, 0523, 0524, Е527, Е530 їі К559. Відносно Бар с1068, його кристалічна структура ідентифікувала наступні залишки паратопа: легкий ланцюг: НЗО, М31, 32, М50, Ебб, 567, 568 (діус). Важкий ланцюг: Т30, Т31, 32, МУ33, НЗ5, Е50, М52, М54, М55, К57, М59, М99, М102, І103 ї
Т104.
Механізми нейтралізації і передумови функції ТІ КЗ тАр 15ЕМО: епітоп тАБбБ 15ЕМО містить залишки ТІ КЗ М517, Н5ЬЗО і М541, що перекриваються з С-кінцем ділянки зв'язування дволанцюжкової РНК (Веї! єї аї., Ргос. Маї!. Асад. сі. ОА, 103:8792-7, 2006). Таким чином, не вдаючись в конкретну теорію, вважають, що тАб 15ЕМО конкурує за зв'язування з ТІКЗ з його лігандом і перешкоджає ліганд-індукованій димеризації, необхідній для формування сигнальної одиниці (Сіш еї аїЇ., Зсіепсе 320:379-81, 2008). На фіг.29 показаний механізм прямої конкуренції тАр 15ЕМО. У залежності від концентрації антитіл, цей механізм приведе до повного інгібування активації ТІ КЗ, індукованому полі(І:С) або дволанцюжкової РНК. тАр 129М0/95У і тАБ с1068: як показано на фіг. 30, ці два антитіла не стикаються безпосередньо з лігандом дволанцюжкової ДНК. Таким чином, малоймовірно, що вони будуть нейтралізувати функцію ТІ КЗ по механізму, схожому з таким у тАб 15ЕМО. Крім того, Рар- фрагменти орієнтовані в сторону від ліганду (фіг. 30). По структурі і тАбБ 120МО/О5М, і Рар с1068 здатні зв'язуватися з сигнальною одиницею, не порушуючи її функцію. Зі стеричної точки зору малоймовірно, що два Бар-фрагменти молекули тАб здатні одночасно зв'язуватися з двома молекулами ТІ КЗ в одній сигнальній одиниці, тим самим перешкоджаючи димеризації
ТГКЗ, опосередкованій дволанцюжковою РНК. Не вдаючись до конкретної теорії, вважають, що зв'язування тАр 120М0/05У або тА с1068 з ТІ КЗ перешкоджає об'єднанню сигнальної одиниці через стеричні зіткнення антитіл і сусідні сигнальні одиниці. Зв'язування ТІ КЗ з дволанцюжковою РНК не обмежене сигнальною одиницею, що визначається комплексом дволанцюжкової РНК:ТІ КЗ (ім, еї аї., Зсіепсе, 320: 379-81, 2008). Можливо, що угрупування декількох сигнальних одиниць може привести до посилення сигналізації, або ефективна сигналізація ТІ КЗ вимагає такого угрупування. Розташування тАб 120М0/053 і тАб с1068 може блокувати об'єднання і приводити до нейтралізації активності ТІ КЗ. Отже, максимальний нейтралізуючий ефект антитіл буде залежати від ступеня розділення сигнальних одиниць через зв'язування антитіла. Як показано на фіг. 30, тАбБ 1290М0/95У буде сприяти більшому розділенню, ніж тАр с1068, що може зумовлювати велику силу дії таб 120М0/О5МУ. Це узгоджується зі спостереженням, що тАб с1068 ії тАБб 15ЕМО здатні привести до -«-50 95 і 100 95 нейтралізації ТІ КЗ, при концентрації насичення, відповідно, і що активність тАб 120М0/05М виявляється відразу. Таким чином, дослідження структури і нейтралізації ТІ КЗ дозволяють передбачити модель сигналізації за допомогою ТІ КЗ, в якій для ефективної сигналізації необхідне об'єднання сигнальних одиниць дволанцюжкової РНК:ТІ КЗ. тАб 120М0/О5М і тА с1068 також визначають клас антитіл, здатних до часткової модуляції сигналізації за допомогою
ТІ КЗ, не перешкоджаючи зв'язуванню ліганду або димеризації рецептора.
й х
ПЕРЕНІК пОСЛІДОВНОСТЕИ «11б5 сеЕКТОоСОВ сБТКОо ВІОТЕСК ТМ, кіп АНТАКОНІСТИ ТОПЛ-ПпОДТВБНОГО ВЕПЦЕЛЕА З «1302 сема Всі «до» встаю оз чва єі14ї5 030-02-55 «Ми» 125 «151» 2803-15-30 . к«іво» 51710874 к15із 008-10-31 «Іза» ели1816 «1512» 2009-0352 «к15й» 1715510 «дБХ2 жо ОЗ «кі» Є1І17 586 суді» поО09-и8-28 «16» гта «Вій» КазвпеКО для мопс версій 4,0 «вій» 1 кетї я «сля ПЕК чиїам» Нет дует. харак зіссдацасача ссскосстсоз Басстасисє капопулоасс СЕККассою: базове БО
ШшЕЧсакост соноссвссва ЗзсусвесЕчеК азссекааац свосесвося задосзсєеа ї5О застшчазьс апссатосов бовоссовсос асавзасаєаа скчечеєцаа состассовх ЗЯ0 забсозаастся Чеасастасс адссцевавс гесасвадох аїтвгдесвчси австаческу ло чЧаїатадоає сгачсвоссяає себязаасеу Чаусосвазаї гутуссвва ассрсоссавя Зо
СЕзсавоббе пись сєса ссасзавову сваксвсває сЕсогдчаєва застосо БО сЕСтЧевсва вто оссОа асесосвиовУ асцессавсу сяесосацве аасбаняаай Фа звтесствст куавасапеав сдзасктвакс аслтбадако ствобсовзсах годе Уєсва 490 ксхасвазае саолазосксвя, досксвчєсо зЗааваксков авоааєсвсост векассваяс о захтазавтіс зачсасївнеав авассвазав сісчяакев ссдссавсЕє зеЕстстаавна БО заахсвавоє спесассова бсазайсзва дастбссссс сведасавЕх гсоводсваКЕ 850 стався таї бБцлеспосв Собдаасавь Фоссвасіца зсоссазес сасадаодвнавя 720 стасчи ба гастачсваз сасавусавсї сздваєсбуь сіссдатнаа сазесадчето "о сосвесвасса доавіасайи: Бебсгтодда сесаведсода сеаваєстсевсе сасустевею ВО сітсессстася асеавсскава гасачесяєє засцескосі ткасЕвайа пеласацера 500 зчачсажксся сествавута кавіветасяи саусвосваЄ Бетоссаєсс сесосвеоцо; ЗО стжтєсвакст вовачЕвесе давбселаве сочвоссгЕва ставасвааз хекпесовосе 31020 цесссвебвс соваачареда гавЕсЕсрою соевадсоуде Заавакавсс Чаачсавесх зо засаіказвад абвакдасзї госваодеата зазабсваєя Ептвсасаноу абгкаакваво 1130 стдаватасі база страте савосссеее зсяачиксує чЧайєсїКуас азяасопаваєса 199 сссоватсво ЕкесСесасЕе бесовсасей агасесазос Каййсазоаа сбайааєссва 26 зазасаЧадае Фосдаєдосво сосккосско зпцесасосяй веадраєстоа сскадувеве 135 закцаавлке засвадазся свозауосяс пазсбдацчай стстауваза єв кесовза 1335 зестасеттсу ссхасвасав поасегочрає пСізаєтазув авссоекетас сктоадессва Т940 заостссаяе Часеднсде созвауачео Чесобсвавла вспечоахая спопосвсвв 1803 сзаєресавс сесевеукаа спуівосаєс стссзЕЗбая шоваасявнай сатацегаво 15850 асаавсдата асакочскзоа пдавсскову вавссадаав Бисксдаюве ссадсатвнаєт 1650 заптсвосає сдсссгадава всасогадає собоосадео ссасєссавес сегавзачоде 1680 ссцісксаср ссзсваєссь свазгозава сосваєочех сстоазсуаови сссассєсає 1740 чкшіссвзазце актсаєсгєав встзаасзаєс вгсодасвєсах дчастоваєсва сесзаасаса 1800 сжжссвоєає ссавесєвач сзассасуєу себссвазо сагкоавосо ссадваднах 18550 стсесавосатї соцетоасва чадо задссацисе спсавзавост тасссадика ве часасцспев сїсазвсстек сЧавссувася сосгравадта сеооосцаЕЄ согсвавевац Я ассаасоаедв ссесзкаєсва сасососават сСтбгсвачес асбасссевиа савсаскшева ОТО бетсасватс акцоцитеос вусбачасво сісовастасає бакссгусав вчасааслес 00 зосрсводвасє веврсесоісаї дассватаос апеассстаї сздІіксктах схов ма КВ сетєтсакос всі суаоао стодапловса сскгрувтасху Чувак запасассва го чЕссксауек ссевасвазви воасачасає асвузасазс ссуазсасде вопсасавака, 280 асісаєзссь зезаєчаєза сцакеоосьс создазсакс с пековкстав дохааавцова ЗА чассевксекс ссвадеуова бссосазава засдуаєсзека задспвотах геграваєта ЯМІ чаацоваєто сізасассаї бвааапавос зулавевска ВссЕсоїсає здасасзсса 2360 сеахсзазазч асссозтову сзвазоасіс азпогайасс апосаасловз асвадеває 2550 чЧчазсававіо сочастосакє гвсакеоауєх сособссвао водастсовав спасаваєта КОВО азсесасзсвс осбопссссо вауасоваєсє страз ссвс вебосвсскх завссессса Я здібосадаазс засодатазе пассбккозо сагаавссоус зазбвссвст копабосада 2790 вастссасвс ах 2712 «ій «її ВО8 «812» БЕТ «рій Нотюо зарієепа «о й
Мег ока сій ТвВу її Бко Сув Ті ТУк БМе Ткробіу бі із Бей оБго
Ї 5 10 ж пе біу Меї Ге Суз А1ів бех бек Твх ТЕ її Сув ту Маї ет Чів о З за м Увь Алла АвросСув явЕ Нів ей Тує Сей так бій Уві Еко дер Аво
З5 0 Б
Гей вгОо Тит йапоїлІіє Тах Уві їла АБа їшЄ ТБ оОНІв Ав сій оре; Ак
БЕ 0 дкщ рез ро діа вів Авіа Ба ТаАсодка Тут хек (1 Тем так Єв сей
БО тла у во
АкроУні шіу РПе йо ТЗ Ті Беж Був Пей слів вка Бій Пец був сао
Во іл 5 пув оце» РЕсоМеє цем зу Уві Бей Ав Тей йіж ніз Вал осій пеб бах їй 105 шва
Сл ву зе АвОопув ТаЄ пев Авіа Бе Сук ТВ Ав їй таб БМ Беб
ІК 159 195 піз цей Меб Бей Ази бек ї1іЕ бій Буш їїе Бу аа Ап о Бка рив оуаї ї50 а 149 вуз іп Бод АВо Бей оїзїв ТнжЖ оте; Др оце; Хек Ніш дат піу пед одакє 145 5 Т5х їбо бех Жат Бе ем обБіу Те біб уві бів нм біб два ем бій Зі ес 155 У 175
Кец ої Беї Авп деп Був о їіє 217; Аівбьей був БЕК Іо сім мі йо тво 185 ва тіла Оне він Ав бек бе тїеО б Був їні ін Беж ойеє беж Дай сл
КО 200 ца І її був біо Ме бек ро) бу Суворе нів Афа ті 53у Ак їеа Ре 258 215 ше
Зі їж) вче фей Акпойзи Маї бій Без біб ВБЕб Бек їй ТВЕ ООЖа мук
Же 245 235 240
Кеш Сук Пес ось Бе) Аза Ав Тйх беб Ге Ако дзай бе щажх цем щех 255 ду 25 йвап бех бій бей лвЕ ТАК о Тме Баг одве Те тТАх вне їб щфе Бей оБує во 95 шо
ТЕЮ ТП дю Бей ТВх Меї Гей бББ їв Зех ТК дей Авй іх ДВП чаї 215 чо 2а5
Уаї спі Ав соло дес Бе Аза с тко пев рто бій Бей о ОТО тує рве вне аа дач 30 пей бій Тк Ав два Ї1е ода НЕЗ тей РБе Бех нів беї Бей нів піу
ЗО Зо 31 320
Вец о Епе йеп о Маії Ак Тук Цей Ава цей цув Аку ех Бпе ТЕ Буш б ве 230 35 джу Ті Бех іїшвме Вів беж Пе окЕО Гу їа8»водерь Авр РН о беє Ре пух
ЗА ЗАЗ ЗБ тїжхв'ез бує був обед ЗТ мів Грек бе Меб Сів 4веродзп Авро ге ро 355 з5О 365
І тів бу пер ойви Меарсвив ТИЖ лу цезч о Т18в Ап о Сбео Бук тує Бо 37 ние зва дек Гео Бек о двй ех рве тТикоех іш Ака Таж Земі ТИС ОоАВІВ ЗМ Те заз овао 5-38 Зло
Ене Уді вел ой) А15 ні Бек Бо дви ОН бів гей Адооцви пе пев
Я 0 15
АВпоГУз ЇТе о бек пу 1ї6 Зі спек АзвоАта вБе о зех ТЕробеб сіє пів «2 425 30
Іва) бів чЧатк бен йвр ово бЗу лей Авпоста їі блю зи бу Ге ТОЖ 435 448 245 сі сій сію Тер дкй сСіу Пец бів дян ЇЇ Ве о біч Ті Тує пер ЕК 58 о 45 тож авпо був ТУ Пли бій о Ге) тик Ако Ап одек Ре Аза Гжих Уві Буо дек ївпоспій дя Пец мае ТО дб вка Ууаї АтБа їмо» ув дя! в Ар 485 490 495
Жет дек го й ес Вре бій ро йецп оду дей Бей ТвЕ Т3є Те» Авр
ОО 0 19 їеп дек Аве вчи Ап гів Аза Дах Іл» дви двр дер Мей цем за іх
БУ За зи
Пед оюіч Був їх Щі Їх лі ВКвзи о бец еп нів девполяаз Бей вів АК їви Ттр муж Па Віз Ав обто біх пі шо Їїе Тк о Вбе Мед був ТУ ах ЕВ) па 55 теп пер Ні бер Нія Ї1і6 реп дя ївц із Зеху вай п0їу Ше дат у ве5 Во 5175 і1їв рхв Уві Бій ді Ка Го Де бе же ій Теп гу 1198 18 Ар яв пк Бе їжо Шіу поз дзп Аза бею Дзй ТЕ Бей Рко Дія бех уаї бе Авлодзо
БЛЯ о5и В сіб Маї шШеє бе Пух бек оїей Ав Пец біб був Ав бео Її Тех деє чуаї сти бує пу УВІ Рне біб Бхб АтТа овБеосАка Ави бек ТВ би реа пе | 53 535 ва; дер. Меє дує Вне Авт бо ВББе АзроСуво Тк Сув їі. бек їїе Аїа Тур
У а ав па уві Аза Тв жтТе двпостїв Ту Ні тих ази ї1е Бе СТ Бей опе єв 85 57
Зак ні Тує ей) Сув до Так о вЕШ ВО ПіЗз Тег жа піу риє вБКкО Ууді 55 ко с85 дж їви Рне Ав ТБе пек дек був Су Авробеж АЇв Бко вБе 51 дей ща 765
Бін» ріж Мех ті айви Твг бек їі Грет бен їі Бе Ііє ме тів чувї 703 ВИ а тео .
Пеє це) ї1є Вів Ре бін біу Тер оАхя ї1є Сех Ре Бук Тур йди ді тех 780 155 дат Чаї Ні йку Маї Беп Сім бе Буз сій ТТе днр Ак бій ТБЕобідй 745 КЕ 5 іп овне Зіз Тух Ата Віа Тух Ті Ті Пія Аза бук пуд Дар Гуд дер 1755 Т5Х 65
Тхромаї ТЕвр Січ Ні Ре бек обех Месб бі їбувз бій Вер ос12» ех рез 7 те тво
Був вне був Темно бід Ат ДЕрогбе сім Аза суу Уві ве см дей
ТВ та 75 ВО бо бІш віза Т1іє Уа1 Депо обев їі Був Аве бес Ако бух 118 т1іє БвБе хаі 85 | Во вІЖ
Ті ТЕ Бі НІВ дво Бо Бук дав ржЖОо цей Су пу Ах Ре пув УВІ 850 ви Зо нів ків Вів Уві сій оЗІй Аїа ле Бій бій ва цез Аз Зек їїв о їТ1Є 815 У 845 їн уУші Бме Бац єї шля сфе жо Др ТУЄ Був пес Ай Нів Аза Бей ях БЕ 860 був о ів агро Ак обтіу Меї ЕнНе гу« Бер нів Су Її Сей вний ТЕО РКО
Уві Бі був СІ АкЯ діє 53Ху вів РБае дКа нів ПУ еп мій ТВі Ага тей бічу ЗБЕ Був Ав овес Маї НІВ
Ба «ато З «вії 103 «шк ДНК ккіЗ» ПоОбо зарівпх
ЕНН апсадеевов спсбсевсвоа бавкстаєстте коадЧузаоаеє поктпссовосв бпсцаполноа БО кчечевншоос ссассвосав чкЧсесках вассатовач сссепявссо садесвоссі 25 зазссуавесс ечаїесссово ковессасоо всавасасає сачечесова ссбсасосає 180 зассзаскса даздасіасо вдесассваає Єсесвсвазсх акадоссачет заскавесьс ба засчлацтяає козасбассвь стсваваску зчадоєсвоаває спезссадва асктсссата 50 совазаусек сдзасетсся дезсазЕпао соврсоспаве СсЕсслаєва аасетекоєс ЗКО ссекасасов ассечасуда вобесвісце зЕзрссавої Сзатссадла дакставнвцт Я чаїссеоіра зсеабсвцяа завоставес асаЕсасабс сассеісасаа бУпсгсота 400 уствсвзазає байозаліса састсвоско давзавокос заазасеесє зсвагсвнав 535 закаваассо кзасоставе авоблавува сіозатасоє сосєватьо апсеесвана 500 зваставсазє сс ссова ссаваєкава часов сазооабЧику ссвсдпавто БО
Фузасважсау сродоостовЕ СЕ давнаве чороеядевЗа зоссасост сададзоващ 795 ткеЕцеккод вастадсана Сасвеосаєє бпоаакссоє спогпабтня садосадеви тва тесаогаєсов чусазизиваєх сесссєузуа бсазазсуча сазакоссає асесесвах чай пи остасвз звсаасвсвна счссасоаше аасавпцьссі сеосисрае коссасавоса 00 павуаксьсх БесСбацядіа сязуеасаїа сазсвиковь секстевекс вегобсасода Ео ееекксвасч гувцаєвост завссковай соус єєа стазвасазая габссосвеє 1079 пестсвстес псвацаєеса как сЕвсаЧоцос беваттвчеко зЗдадсвесвЕ ОО засассчцавс асвзаксатво бссазопсасв айазазсавова хастсовсвуЗ асбуасвавос 1149 спспжаакато йааекстаєс савооекс зсааовскоє Заасссоуає азаклаєлося кОО кІбаратсоас вупсвовотс ресестїасас асвотшвасс сдассовасав Сававвассосс ТБ назарачаза сепакеасосо ссосскочозвс засевсесву вецовссав собача Зх забоаззакся досазовасі сабаоуссвя свасооуваво сістадваав саєсвтсуаа 138 кпстахтстоо собасадсяа совсстдсве соЗаєствозда астесссвес сееоадрсосв Іо егассгослає часктавсасе седааазуко десосевайв зкЗсдазсва сіскссевся 1500 ссраскссацю сусктсоена стововссвс сгзавоссвае чезвасавсяв сасволсваєс. БО візааслабоа абсасчекачта І ессвпа звассапава Бопсосласек певосаєавот МУ засстацсво сасосводва асасзсзває сеохаЯпсчсс ссозвесавеск ссовдадоах 1580 зоцЕстсаєст КсСсвосатссь бавсоєбасач бссавсадоє пбдвечачак сесвеєтаво 1750 сесіксааут асесасксоа асказяцагє абсовсківа одасгоравтав Ексаваовся 1800 пекессвосає обцессства сгавісадаву гесставвоує састтіовассої гсацазаане 150 песакансві сечсоясчва зваЯоскосс зусспяосве кесвцавссе бассдворев 392 дасаєцецОк жсавесосске дат гараса вобоваваєв ссбостодек сустязекча 1980 зежКазссовача соссабассва сапассноат стассаачас аепасехно Седеасеесюв ко сассвстатс акдоперепо «Зкдейвск шгепасасає саєсріЗсає взасачісио 206 сопе сваа т лох 4 катів То
КИТИ РЕТ
«КУ Вот вабієпа
Ме дха Збій ТБгомец Бгто Сув Ііє Тук Ре Тгр о біу біу цей Пер Ро 1 У 10 ї5
Не біу Ме еп оСув Азія беє бег Тв Так Був Сув ТВк Уві Бех. Нв 25 ХВ 29 пім Уа Аза Дер оСує Шер Нівз Цей Був їео Тк обіп чаї Рхо дзв два 35 46 «5 мем реє тТпге Авт о Її Тс Узі дев ди іїе. Тв нія Авпобібп мб: йо
Бо 53 БО дк бер окко Віа Ат1я Ав пе тня тя тух дек бів бев тТакоЗек ден п то 75 ЩО
Аквоувь іу впе йо ТВ сіє бвх бе Те) БІ вБКОо бів їв був бі
З пу ей овко Ме бе) був Уві Гео АЗОосівя бій нія Ази бій пев дет ї0о 125 115 бій реч ех двБЮОоїБеє ТЕ бме діа Ре Сов так Аяпогей Тк сію Бей 115; іо 175 нів ги Мес бек Ава пер їі бій Бу Зі Був дей овапобуо Епе Уду
І5О 135 140
Був са му Ав Лев); ЇСТЕ Бей Ак Бей Бак онія ви біг Бей Ех 145 150 тах 160 дек ЖИК Був ЦцЕО сбРу ТВжоЗвра Уві ія дей СТ ДевпоГев Аа 1 сем 155, Кто 5 ії ей Как одвп о йвп о був Ще сій діа БпЕй Пул БЕЖ сої біл гей дяю 180 188 130
Ме рве Аа дей Бех ек бе; Бу пув йеп піч без дет пет й СИ 185 ОО ОВ
Ше пу біш ББа бек вко 5ІуУ Сув Бе нів Аїа тре бі Ахо Гео Рде 84 215 о блю цею Бає Пед дз дво Уві шій; цей) о біу Рхо бек пе ТВробьи пу 25 230 255 240 їнна Су Пез біш Гво йїа Аво Тер обекр їі до Ав Те бат Гей дек 245 250 БВ авп о бет бів рес бек ТВ ТБЕ бек Ап о ТВ Тдж Бе Гео біу Бей буд 25 БЕ о
Тур ТЕЖ дви об Тр Меї їєб Дар ев сег Тук дви Авп о їм дл уаї
Те тво ай
Уві бі дах Ар дех Рре діа То їяй Рхо сій Пец обіц тує Бош Він І 90 295 330 цен» пі Тує Ави Авп Її зів Нія Без Рле бек Ніє Щек рей Ні біт 305 310 15 80 репо вве о йзопоуві Ак о Тує Тем Ваг бед Пух дк Шек Ве ТВБЕк Гуз бів зак 330 335
Бак Т1е бек йпей Ат шек рей Бк Був Ї1їе Авройвро Ре Бек ре сії зай ЗІЗ 350 їв цей ув осСув цеб Біб Нав їй Явз Ме бі: Дар олша бавоїїе ВкКе зва оо 3655 слу пзіє ув ЗБЕ Авто Меї Бе Тахо Біу 1 ТБ АБ Бей о пув Тусг.ошех 370 375 зво бек ей опек АБО дек Бе тик бвж цез Ака Тах Пе); тТкк деп пли тв за5 за дав ас тре Ууяі Хек зей Віа Ні бек рЕб Пево НІіБ Тіз Пец дви Бей ТЕЖ Бед . 305 13 ЕВ вай мух 11 бек ув Хе їжі бе дер Аза Бае бег Тр іно БЗУЮ ів 150 5 ал з-за 53 Уві їви Аз одеп біу Мем Авли біз ТІ БіуУу п о б1о Бевз о тТве 540 ща піу іп сія Жкродта Сіу бе йіш Ам тів ге бір її Тук їеб бек
БЕ йо 53
Тже Ав бух Тух ев бій Пе Твгодку двлобек Ба Дія ісп уді Ехо 155 470 75. «в ек іа зів Ах цем Ме Се Ага Ахс уві Ака о пец бух дам Маї дер 1855 «зо 355 бек бак око бек рка ре бій бро беб Аго бай їец Та Тів без Ар з0о0 505 зіб це бек Ав два дяп 116 Аза далпоїїе дзп дар бдроМес Бей біз бі
ЗІ тушу ЗеЕ
Вей сі; пув цею сіб їфе Би дв сей бій Ві Ав Ази Шец іа АК 530 ОЗ 540 ма о ткробух Ків Азв А Рка йіУу Біу Ба Те тую Бра зей св БіУу 545 по ЗБЕ 5 еп бек Ні пей нів т1іЄ пен лай Сей бій век Ав бі» ВНеоАВр щі 58 У: 875
Те вус сві сій Уяі ре Бу дао феш рік бі Бео Був їїБ ХІ16'йВВ зай ч8я вав їжа у Цвзо Аз ВВ здеш вжи ТЕ ЇТБи БК Акба зеу Ма рве сАви Аво за БИ Би
Щі та: Бек Бей Був дек їйЯц Ав; дев сій Був о ввр опей ТТ Тв сват о 515 Бод
Уатї Бі МУ Цуз Ме. ЄМЄ сіУ РКО бід РК дка два Сей ТБ ЗАМ їм ви 63 ЗУ паб
Аза о Мек вка Ре два Ре пе Авростю ЖЕ ув бів дек Біе вра дер я о по
Не чаї Азов зе Аби Фі ТВі Нів Тпс дБ Ме бо злий Гей дес 5Бо даже 67о беж Ні ТУК бо був АЗО ТБ все БЕО НівБ теє Ні БУ вла ро Уві ота вно вий
Аха їви вра дер оТву Бех веж Сує уз дев Бах АТВ КО кКНце сх ба а Ме «ВКОрР. В сті МО «кі» Синтетична поспідевноскен «в «пе» Кандидат 16 УК «а ЩО 5
Авр оті дів мес трек обіз Беу РЕ Бей беж Пец бек Лів Бей бя1 бі ї ще 15 15 дяр Ага Маї Тих їі ТВроСув йто діз бек бів біу ті бет бах Ткр й 25 ЗО
Пец дат бкю Тух біпсосіп Був БЕс ооіу Був йїа Бхеа Був ев бі ТТ 35 о дз
Тук сіу Дів дек дви бед бія бек бу чаї Бжо Вех буд Бе бек іу
БО 58 650 бехтопіу ех біу ТвкоАДлв рнеоТну Гео Тве Ії бех бех їею Піп бхо 7 й ва біз АзровВве Аїа ові Тухє Тук Сує 014 біб отук дар овяю Ре» йех її
Так оВрБа сту біб бі ТЕ Був Ммаї СІ Ії12 пу
ІЗ 1п5 «Ех в «іі 116 кУд вДт Ії чиїй Сивтетична послаловнусть о «З» Кандинат 16 МВ. «10525 5 сій чаї сій Пес уаї бій бек с1у АТ бі Увь був ьує вто ту БІ 1 5 15 ї5 дає цей Пук 118 5ех Сук Був бі дек ЗІУ Тук Бех рре Аво о дЕВ ТУ ОС т а ТКУ ах ад ки
ТЕВБ Гі Сіу Тр Мах Аа біб Мес пЕє іу уз 50; без 010 Тхр о Мек ай їх су Ті Тіе Ар» БЕо сіу дар бек Туб Тв Ай Тух Віа ко бех Ре 5 й і щі Зіп Уаї тах 112 Бек Ак Авромуз бех ІТ1е бех пе Аза тую
БЕ то 75 ти іє пі Теробех Бех їмо Був віз бек дво Теж Вів Ме: бук Тек Сув 85 ЗИ 5 діа тд ба Ті ТУух 51) Бпе дво Тук Ткев о бБ1У Біпобіх Тих без уУді
Ма 105 115
ТвЕ о Уа1 Чек Зех ла
А
«810» 7 «118 7 «Ти РЕТ «Ай» Синтетична поопідовнисха «Ей» «ве» Кандидат 17 МІ: , «ай 7 двБюЮ Їсе бій Пец о тТпк бір Рко Рто беї Уді Бек Уві Аїа Рхо піт б1п і З 10 ко тех ес у ШИ тик бижкю С - и А Не Шк От зи їх Пл хи вк ойів ака дів бек суз век Су АБозойла ей білу біу Тук Ре Уві о 28 Зо вк ТЕроТтТук іп зів буд жо аіу аа Аза Ко Уа Без Уді Ті Тух де їй 45 во дер о АВр МВ аа Ро бак обіу Ці Біо зо Ако Рпє дес біт Бек во 55 БО
Аква Бех біу йза Тпковів ТВжо Пен ТрЕ Їж шекопюоУ ТБк олій Аіа пи кц три тр, Ген 05 то 1 ЗУ
Аво осІч Ат Аве оту ТУук сСуз дів Зах Тух йо ові Мет ма Бе ТИє ва Зо 5
Чаї рпж 5іУу бі Біу Тпх Бувс'сіво ТлЕ Удї Гей 1050 ЩО «кевЩпх в и» ТЕ?
ЕМ ЕНУ й «ав синтетична послідовність «ях «ота» Канпидат УТУн «оз 8 щіпт Маї біс без і піз бек сі РкЕб сію пей о уаї Су Бра бек сі ї 5 Іо 15
ТвЕ Бей обех Гезп Тау Сув діа пі пек біб Азр шекє Уві цес Тв одКч 2 а - по й й М дек Аїа Аїа Ткр о біу Тгрої1є йкоа піп бед Бго біу Ак біУ ев осо 35 40 чо т дію чу Е хв. пу Тл В ткож теє ча сук Мк
Ер опер Сіу ка 116 ТУуює Мет Аж ве Був ТКр» ТУХ Авп дар Туюк ДІВ во ЗВ аб пд шва що І: полою доую СК оф для ну тарою ую Кох ох хаї Бек Уа Був беж вто їіє Лу Тіє Авповкс вар о Тобх Бех Пув деп ща то 5 о піп Бре беж ї«пі біп бен АбпоЗек Уаі Тс о бко шій Аве ОТИХ Лів Уві
ЩЕ Зо за
ТУК тую Сув Аїв Ду НОЗ ТВЄ тує Бко тТук пеа Чек Бе кве обаї Тер т00. 105 ЕК піу сій ШрУ ТХх без Чаї ТВх Уві бах Бе
НК Її кет з бо115: ОВ «сади» РК «тів Сямтетична песлідеовність «вад «т2а» Кандидат 18 М, «1605 а дротів бів Бец о бТрх Пій Буо Бко бек о Уаі бек уві А1ів о бхо йіу бай и 5 ІЗ 15
Тих ойіз пк Тіє еко Оув бок лу Адоодвлої1ів Бір бек о тухк Тук Уві ау я 30
Нів Тер Тут бів о біп іа БЕоз бу бБіп віза Рее мві Без Уві Те стук 35 ко | ах
Біч-Авор ет сія дея ко пет ПТУ Тї6є та Бій Ак Ре Бк о бЗ1у Зак 20 о ви йвподек біусАвА Тпховйіа Ту їм Тнж о І1ів бек Бім ТВ бів АТа бу вх 78 т В
Звробів Вів дер оТює Тукобувосіл ЗекоТує бар Бех бів Бе Бех ре ну що де сіу чаї рпвобБьу шву діу Тако Був фен тн Уві Ге т0о 195 «иа 10 «вів ИЙ «ет» ВЕТ «ЕД» Синнакична. побсльдовність «ох х223» Кзидяадат Я он «об 1 щі баї біз опеб бій щі баж сто РЕ ЗіУу ЄМ 8. Му со беж БІЙ і 5 то 15
ТВжЖ їяо Беї їв; ТКЕосСув АТ 136 беж бі Ввродет Уві бек бек вв
Ра 25 з
Звковіа йія їкробуУ То Г16 дра слів беж Рхб 5ІУу Кк осСьу Па сла ча Ся їкО цем біу ТТ їз біз ТувоАжс бек блуз тТЕр о Тук о Ана Ава о тук о Атя ще 55 БІ
Чаї бек Захє му о євих вх г1їе тах ле Хвп обу дар тру пев бух Ав
ЕВ ЩЕ 75 ва біп о Рає сх без піс Бей лай Евж чаї Тс оБто бій йввотак о Аїв Уві
Я чи че
Тук Тк Сув іа йо Тук Шек Тут око бле Тук ех Іі дзроТух Тгр вв 125 їБО бсіу мів о сбіу ТЕ бем Уві ТП Уві бер бек
КІ5 ї2о киТо» ті «алу хат
КИТ РТ
«рід» Сбимтетична посліровнуств
Ка ТКх сЕУх Канливат ТЗ Мі; І кап 11 двю її сій Ме ТБ бій Бех ве Хек ЗБК ої Беї діа дет Уді СІу ї З; 10 35
Джо го Маї ТЕ Тіє є тТакосСув о Аку йіа Зех Біл Зех їі біу пев тує
Тїеч Аїа Тер олую біл СТВ Був ко біу пув діа Вухо Пуз ва рез Її
Тух Кі АТ ек Зак бе сій деко бТту Заї Бо хее о Аку тре обеж ПОТУ
Ба 55 «а
Бек Бі бес с1уУу ТЕ бзе сб ТП без» Твх о ї1е Бек обех ем Зо ро піль даро ває Ага тах тує ТУуК осуд біт Ол огуї ШіУ бек Ві пдеж ТБ я зо ЗВ
Твж РІЄ СТУ БІЙ Бі» ТВЕ Му МБ БІО тт6 Був 152 тО5 «198 те «2115 151 дало. РЕТ «Бк Сиквенвиній! пев Есе еИтх «ка кидаю Канцицат 19 У са ТЕ
Стпомаї си їні Уаії біп Шев обі йтв Ома уаї був муз ве шку у ї 5 15 ї5
Ів іш) Ппув 11 Же СУБ Був бШіу Бек сТфу Тук бек Рпе ТЕ Аза ТУуЄ р КВ за
ТгроУві слу тур Уеі Ак вій Мес Бо спау був бу Бее Ма Тер Мех 0 45 сту Бо ізїе АвроБже Зек Авробеї Тук Ту Ай Тук Віз Вко Зех Бе
Зо ВЕ ко іп сб ій УйА Тр їі бах Аза Аврозув Жнж ї1є беї ТВЄ діа стТУух
Ізж 70 Та 8 меб жів Ттро зас яву пцей Був Аїй бек даю ТЕ Аза ЖМек тук тек пух
У зо ЗЕ дів Аж бів Пемй Тух пі 519 Лук Ме о Аяроткк Раз Авробакс тю діє ня) 105 Ка ій Ту ЖК іа Ухі ЖМКХ Майї шек ак 115 їх «їх 15 сук 08 «Вуд ВЕт са» Сипуитетечна песлідовність «вх Ї «игі» Кевнцилат ої Мі «щойх КЗ
Аввоїхе Маю ев тТвК сом Бех Бко Ата Тк Би Беж Беб Чеє Бо у,
Е 5 тка) ха зима ка Аза Тих Бей бек був АБЯ- Аїта бек біп оТУЮ 1-6 Ав ТІВ дек 23 5 Зо їмк паз овіз ТО тк іл дів бпувовхс Би соАй віз вто Вгдо їжу Пи а 4о 5
Це Бук дев Аза Заг Бех Аа Аїа тил піу Уві Бхб Вів Аха БбНеошет
Б во :
- біїЖш дек йіу ЗЕК сіб ТБгр одяр Ре тТйр обер ТВгої1а бек бЗет йей 015
Рео Шії Ав оре Аз5 Уві Тук Тух був СОфап бій Тує Тух бек Гей Зех
Ех щи зу
І1є Тпх ВБео обі бір бішж Те Був Маї біл Тіж Був і: 105 «ій» 18 «21іх 118 «війуУ рЕТ «12 Синтетична боспідовність «Ей «пе КМандилетв 1 У «сій 14
Зтїу Маї ЗВ) Бемб уаї бій бек сі дів Сі чаї був Був Рко 51уУ о 1 Ж То 15 бак їву Бує тії Вет був бух С1у Яєк піу Туг Жет не Твт Авр деп 9 за ттроїівз бек Трроучі дюш СЇІп Дів рес сбіу Був Ру цез бі) Тхд Мех 439 Б пку УВА Ті Ав БЕЗ БеЄ Авровдек Тую Тс оАвм о Тук Аза Бо беж Ре щи Зо 5 піт є у Мі бі) Тева ТІ Вак Мія Аввобув бек ї12г дек отпх дів ТУує
Бе то 75 | во
Гезобіай Ттробет бетоїво Гуд іа бах о Авр Тпсобйів Ме Тух Тух Сув пе Б) З віш Ага, бів Теробіу тів сіу біу Меб Уві Дар тів Тур о біу пів біу
Її іч5 1ІЗ
Тк оїем Уві ТБ Узі бек бек ії «0» 15 «Віїз ЦО «ві2в РЕТ «ІЗ Синтетична послідовну сть «их «вра» Кавпицат й мі ках :
Лавр ї1іє біз Ме ТИЖ бів бек Весь бек Бек оїео бек літ беї ув) біу 1 з Ка ї5 дз обк Уі Сп її ТНК осув вп іа беж Зі піу їТ16 бек Бек Тхр ке о ІН їецо вай о ттротух сібБосївй був о Беоа ЗЗу Був два Бо Бу Мей бен сіє за 45 45 тТук сіу Аїа Зх Ав Бен бій дес біу Уві БгбобБех Ака Ре бех сто
Бо реж ой
Закосію бавсостіу ВХ дво Ебаотіюс бевожфню Же бах бек ТІнмі 31 Белх
СУ | й я ве ши АвроРпе о АТїа Уві тую Тук Сувкобів сів тує АзроАвро Ре Бех Т1І5
Я. а Зо
ТЕ Рйа оту піп біу Так Гу Уа) бім її Гуз іо 105 ких 16 «ліз 116 сеї РЕТ
«іа синтетична Осопівавність І : «ав ух «ЕЗ» Кандипат 2 МВ «Ас діб маі 185 рей мні бів Бек Пі Ага бро уві зуб Був рео сту 61 1 х ІЗ 15 дек бе був ї1е Бех Су ув біу дет Бім Тує Беж Ре дало Ав Тук о ва Зп
ТЕО їі су тТюЕроуві асо бів Меб о бко бі пев ож Бей сій теромеє 85 | чо 45 д1іу ті 11Ж дев обко біт дер бек ТЕБ Так дво Ту ія бро Беж вва:
В В 5 в Бі БіпоувЬ Топ о іїїе бек АР Авробув'зех ії Беж ТЕ ОАЇТа тує | та тв ве тей Бі Тк Зек пек рез оБуз АТ дей Ар їж Аїа Має ТУЮ ГУК СУВ не Зо 95 та Акщц Акй ТІіє тую сіб вве Ар Тук Тер Сто сій о БІуУ Так отТяц чаї 100 105 То їх Уві пес ес
ТЕ
«Вп у? шля «їй ВЕ «віз» глантетична послідовність «их чага» Кандидат о УМ саопьк 17 аю ті піс ви тн пі РЕО БЕо бах узі бек уаї А1й Бгто сту іп 1 і: 15 І
ТвВековьа ха Т1-5 Бех був Бак біУ вер вв Сем зу іу тує Біт УВІ 2 ке 38
Зах Тк тую стіп біль Бу Бко біу Б165 дів РІ Уа)! цем Маї ТІ тує мое що 4
Ав обер обзор ан вт Рео ех біу Тфе ро уз Аха Бе бек бі дек 53 55 б яп дає СТУ йно Таж дів Те о цец Те Хі бек о бьу тах сю Ат 45153 65 ЩО 75 СЕ
Квест Аза дв тує Тук Сув іа ех Тут Ажр бік Авробозі Блеотове
СЯ за Зо
Уві пе Біу Сі щу біб пує бев Твж Ма1ї Гей їсеа 105 кхато ІВ ших ВЕХ
ХуЗ» Синтетиння пері дев іт хивиах та Кандида а В «пох 15 ій Узі За Ше бій озЗьй Бек ЗіУ БЖ Біу бейпоМа)ї Бе ге бек Ми ї їх ТО 15 таж Пец дех бе) ТЕ Сув Ага ї15 дек С1у Аввобеї Ууді Бет ТтцЕ де 4 ву Зо бек Ала діа їкросшіу Тр ОІ1Їв дху Сбіп бек Бко Піх Аква сіу Бей бів. | 40 45
Ткр оцей Зіу аку Те Ні Ако Ак цех обув о Тко Тує дяп лавр отук діа
БО 58 0
Уві бак Узі Пух Бек Акоа ї1є ТЕ ІТе Вяй бус Аво Трж бак Гув Ав
Бо. Ще 75 во см» РНе бак Пен бій ей; аА8Зв бах УМ ТЕ оре біб АБ СТИХ Азв о хУах 55 Зо па теж Ту Сея лів Ауп ніж Т»ЮК Тує реа Ту Без» бу Бе Зви туахк Тер їде че 115 сіб сеп сіє тТиє Пе Уві тн Уді йЗвЕ. вах 115 її «1
Кеті ВО кій ВНТ клі аж Сунететичия послдевНієть ах «иа Канлдядах Я УК «вп у вав оІзле бій Без тва бій о Бкб рт бек о уві бах Маї Ата беб бу ші ї х Не 15
Тахо Вів Ага лів Бек Сув Бек пі АвроАЇа ем о бпіу бБіу ТУук РБе хаз во ве 30 зах ТкротТук СІ осв цу Бе 51у біз Ада реп Мві Меп оМді ТЩе теє 35 40 ща йвроАвроАвр дв Ах Еко ек о БіУу Пе реко зЗіч де Впе пес о зуу дек
ЗО х5 9 взп Зв біу Яви Тек Аза Тве без Тс 112 Вех Біу Те бів дія Сію 55 7 75 о
Авр бів Аія дво о тТуж Гук сСув Аза веж Ту вв сСІу АЮ шій впе ТЕ 55 за 35 маї Ре йпіу бі іу Ти Був їво» ТБ Уаї рем.
КО 125 сій 20 «11 155 «пьаз ВЕТ «21325 Синтетична: послідовність «ай «03» Кавдипат 4 УК «Ну» 25
Зв уві бін без Сік сої беж БТ Ре сіу БебоМаї був оБЕо беж іп ї й 1 15 тях бецо век Гец так Су АТа ї1е бах слу дзр Бех УВІ Бех ТВЕІ Аха ра 25 що ет Алїа вів Тр оУу ТЖр її яку сій Зех Бо СТУ Ак БУ Бемобій
З5 во 15
Тв о бепобЗіу Ку їЇТїе ЗБК тус Аку Як вжш ТЕв Ту Ав АБрОТУК АЇ8 5. ВХ 50 чаї Веко УВІ ув беж ли їі Те іє АБ гро даротлЕ зекх ПуБ ДЕВ
ЖЕ 70 т во сіло Бе бах Сезо бій се одвподав охаї ТНК о Бко бій а5БротТоЕ Дів уд зо 85 тую Жук був діа АвгУу Мія Тк тую Рко ТУую їжи бдек Бе Аве УвЕ тТЕр ще 105 М бу іп зх Те Бецп уаі ТнНЕ Уві Зак о Бег
«у т «йл13 ТУ; «виз Ват «ТПУ Синтетична поспідовніств «фИИх «аа Кампидют Ж Ук «ап» 2 й
Зо Ге біб бі Тк обів Рхо со Шеє Уді Бе Уві Аза го біу бів ї я 15 15
Тве Віа Ага ї1їє беж Сук бек обі дЕроАтТа без 019 С1у тує Ве Уві во ря за
Зехк отЕр отТук сім 10 ЗУ ха сію щіб дія Рекс Уаї сво маї ті тує 35 о 85
АвроАзройнв Азо Акт Рко деко біу 118 ро бі Ака БЕ бек обіу бу що 5 во
Ази Зет пу дев Ток одіва Тих Без Те їів беж біт ТЕ біб Азія щі ба та Та зо
Авробіш лів бо Тут Тух Сук б1появу Тук АвроО1У Дер бек Ат» ТВ; вх за З5 уаї Епе Біж Зіу бу тБк Ббуз Тем ТКУ Уві Пец тод 135 «рив киїїв ТВ «віко ВЕТ «813» Синтетична поспідовність «во» «ва» Кандидат Б У «ай» я піп Уеї біз Без біз Б бек пут Бешосру пев о ЗаЕ Був Ро бех сХп 1 5 1 їЗ
Тв Тер обех їв ТВк Сую Дів Ті Верозіу Ар обвх ві бек Тк Аа 2 25 Зо бек ві Віа Тхр біу Ткр її Вко бів бехс хо біу дк щу деовосій 35 40 45
Тер оте) біу Вгт 1Те Сук Меб Ака бек пух Тко ТУух Ав одев Тур Ків
ЗВ во зі ву уві суб дес Бк 13е Ївг їі Жав Бо во ТВробетк був два
Бе о 75 ВІК о ЕНа дес без шій без дей бек баї Те во Бій дарств Аїв уві 5 зо ЗБ
ТУК Тук СУ Айя Акоа Ні ТВЕ Тур Бко тую Фо Яеж Ро АвроМаї тер 195 155 116
Зі ів СЕУ Тк оїейц Уві ТЕ Уві дек Зеї 115 120 «в1б» а «рії» 107 «рій БВТ «йіат Сивтетизна люслідевністе кро «ВЗ» Камдицатов Мі;
кап» 23 | з
Ввв її біз беєб ТП обі Бго ко бек Маї бек УдВ АтТа Рсо сту 018 1 5 48 15
ТнЕ Ага бку Тіє беБ Суз зек біУ Авр Аза Мем біу бБіу тую Ра Уві 20 з хо
Мет Ттр Тухк сія Бі бує го біу біп вія Рко уаї реч ді їте тук аз ойвроАвр Аз Ак оВко Беж Пі ї1е то біо йкФ ББя бек біу ех
Бо я ка
Ав дес біу бо тих Ав о ТВЕ Їва Тв Ті бек б1у Тк бів АТ 51 85 то 75 8о девооУя Аза Алю тує ТУую Сув у ел Тк двробБег яп бек пев отче 55 зо ча
Маї Рре у біу шу Тих був Пер бік Ма Бей 100 105 «ЕВ ва «їм ій «5122 ВЕУ «х11» Сичтетична зослідовність кри» «вгах канлимат ше У «а0пж. 24 віз уві біо Бех бій бій бек бію Кеге Бім їжа Мав) вує Рко беж бій і 5 їо 15
Тк Бепошек Мем Тож був Аа лів дек бі двро бе Уві Берг оТвке АК бех Аза Аїа Ткр б1у Ткв її дес біп Бег бе бі Веу ПІУ пеб бід 33 30 5
То Пез БІіУ Аря Зї-е Тух Мег Ак Зек Му Тк Туг о ввп о Ввротує ДІА
Уаї бек Уаї мух ву Дко ї1е ТВ оІіє Дяпо го АвроТНу бер був Деге ба | то та 8о біп Ре бех Геч сій Пемд одно бої Уві Тож БЕ ЦІ АвроТврк о Біва Чаї ях Зо ЗВ туш отТую Суз Аїа вка Нія Ти о Тую Бтб тук ес беж Бе Аве: Мі Ткв їа0 105 115 сту 515 сту так тей таї Твт о тві бах обех 1І5 129 «й» 95 «йти 107 кит» РН ч«че135 сСичтетична посслідавнасть «дах - «ваз» Канцидет б УТ, «400 25 паролів піц без Тк сій Бгто Бсо ек Уві Ввх Уві вія ЕВ С3у ба
Н З. НН ЕІ
Тнх дів дко Ї1є Бех сСує бек о біу дер дія їмо ПЗУ біу Тух Ре таї 7о 273 за бек ТкротуУуЮ бів о біп пув Ре бу сій йТа Рко Уаї Сею Уа сіє стук 35 ви БІ дар йзв Вер йвп Ах Рхо Чер о біу Ті Бо біч Аку Єпесбех біу бах во ВУ в)
Азповек СіУ двлотТйх Аза тт реи ТвВжк Тїе бек 31 Те бій йта собів 7 КЕ: 88 даробіш Аза Ар оТуг Тук Схмв бек охех Туг дЕр бек АБ бек Бей Тих я зо ЗОВ
Чаї Ве бі ху Бл ТЕ оБсвоцев об Уаї бео 105 МУ «а» и «я 10 «ев БЕ «вух Синтетичня послідовник сть ши кер» Канципат 7 чи чо 6 піп зві біз пас пів шьй Зек ЗУ Вро бі їй таї цув БЕКо Бех бій 3 5 18 ї5
Тих тен де сні тлу Су дія Ле ех Сі пар ойек ад вве ТВ Ве 20 ж З аж Ася віз Тв олюіш Теротіє Кр сіб ве Боб бі дка ву пемо ши 35 ав Я
ЛлЛтвоіве 5Му вгу тіє Ту Ме духу ех пув ТКр о ТУК Аво Авротут Аїв за -5 ва
Ууаї Зах та) Був Бек о дку Їе Жйх Т1іє ВЕА БКО АБротно Зак оцпув Ав зій вне Бак рей сіп Їїємї А бек Улі ТВ орЕе біз дев отих лід Узі на що з5.
Тух тую Су Віз Аха ЯХе ТО оТук Бо ТУкК Бей одех Би Аве оуді ТК 160 165 110 сту І ЗІУу Тис бе я! тТвк Маї Зв БЕ 1ї5 г «дзйх г ка1їз Тая «хів БУ
Ех Сумтетгизня песнодоахніісте
ЕХ
«-Зз Кандипат й МІ. «ал о лЕр її піз ей! ТвЕ сій Бо Рко Бех Зві ет Уві дія Бко пі бів ї ї Іб 15 твж дія дго 1156 бек Сув бек біу йвроджб о ї1і6 бі бе Тук Тюк Чаї аз 25 о
Яка то Тук оба бі ПУ Вжо зу Пів діа вка уві пес шаї зе стук 35 чо щх пай Авробек біо Ага бю бек Оіу 1)Ще ро 10 дещо Бе бек о бію ях
БИ пе Ей
Авробек біу йка ТАкодів Ту їм Твх Її бек обію Тато бій АТ ми о лу З вавросіцч Аза Авротує Тух сув ск дек ТУю ДЕр о бес ІБ раз бек Ров 85 З чВ ві чаї рве шіб сту Ху ТЕ пу І Тк Уві Бех год тб «Ов В саЕТу їй «12» РКТ «иа» Свнтетизна послідовна ть «78 «232 Кандидат й У
«502 28 пів Маї біч пе) біб біт дек ОТ Бус пу Пец Уді Буг Рко Бех іп 1 Е 15 15
Тис без бек іши ТМ Сув Аіж Іі Яве б1іу Дар шву Маї Бек бек Дей що 25 З й дек Аза дід Тж піу Жероїїє дк біз бер о бсо 0іу АкеосТту веб о 45 о 45
Тероіав біУу 116 ГБ бій Тву Деу бек був Тк оТук пап о Авю Тук дів
За З 5 уггі Квек Уві Був Бех Ахо Ї1е ТНХ п11е лай Ес Даю отв Бех дря ех піп Ве Явж Гео п1п о бецд одна беє уві Так обко бів двробнк Ата Уві 85 за за
Тук Теє Сув йла Два тую бах Тук рЕб вне тук Бах ІЛю Дві тує Тор то 155 її сім віп бі тТвх о Гви Уаї ть уаї бек вве 115 ї5юе «ТІ З «711» 108 «Рій ват «135 Синтетична послідовна ет» кто» «дЕЗ» Кандидал З У. «4005 79
Ввроїївє біб» їз ТВкЕобіпоРго бго бвс Хаї деко таї Аа Бо С1у бі 1 у 16 15
Тйк дів тс Гб бекосСт Бек біу дер одн іє бі ЖШек оТУєЄ Тук Уві
Вів'тТке отТух ШІо бій був Рус бік со віз хо бла Гей Уві Тіє Ту 35 я 5 пі вже шШек Ма Ака о Бго век осіу Бів Рус біс Агеа Бе бек Оу Бех
ЗУ 55 во дяка бек пі Ави Три сАТфа ТвВк о Гец Тит тів бек Бім Так віз АТа Бі
ІВ 19 75 Б)
Авробіс й1а двротТух Тук був С1п бер отуковею бек біт Еде дех ре 50 55 ді Уаї ре пі діт бі ти Був без ТВх Мвь бе їо6 щ05 «й ТО» Б «Раф ТЕ «яТйх ЕХ «КЛ» шинтЕТИЧНО ПОСЛІДОВНІСТЬ. «евО «ай» о Кавнляидат а МН
АП» З піб уві бів рез іп бій бек б1у хо біу їй Уві пул Вк беюж 1 41 З Му 15
Тбх беи бек Ге) ТБк Суз А1іх ІТ1з бек біт Дво бек Уві бек бвк Дав | в в бек Аза Вата Тер біу Тер її Ахо біб бег го бі йку бім без іч 4 Я
Тер без біу їїє Їїз б1о0 Ті Ас бек Був Ткроїух во йвроїух Аї а
Ба 55 «о їв; Яек о Уаі Буш бер дк її Тк ії Ав со Яво ТркоЗек пув Авт й то 78 во сі о Вне беє Бей бопоцеа ДЕ бек Уві Тк Вк ба АвроТнЕ діа Ущі 85 : за З тУК ТУук Сує ДІВ Аку Тук Чек Тук Бсо тде Тухк Зех Кіз леротТує Тер 105 105 Ко
ЗУ іп бі Тис о меа ді Тврж УВе Беж дек 115 їі90 «ши» З «-2115» 187 «вір» БЕ «віз» Синтетична послідов Оз» «Оси кига» Кандицит 10 У, «ша» 31
Аве ЩІ Од Бей тп біб бко ра бек Маї Ве Чаї Дія Вухо бЕе зІй 1 5 То з тих Ага Акач 1їа дев Сув Зех слу Бар Ази Ге Біб Вей Ту Тух УВІ о Ти ЗО піз ТЕ тую сіль бів був вхо біу бів бів Рхо Увк їни Маї Ре о тух 35 40 їБ мі Авробех ПЛ Акт ре дер піУ її Еко Іа Яку Бе бек біт ше
БО 55 й
Ави бек бі Аза отве дів їЇВу тев Трек оті бек о БЗшу ТАх бій вів ОК «8 то Тк во
Ав ошіч Вів лавр тує тТУХ Су сх Бек тую вза ТЕ ОБтКОо Чаї Тук бак це а за
Уві вне СТУ пі бі Так обу тео дих Маж оцей 100 | 105 «Рі За «ух Та «ав РЕ «Ед синтетична пбсльцеовність шипи» «3 Кандидат 10 У «дО» 35 біп чуві Біб Ме сій бла осек БЕуУ ро БвІУ їж о Ууйі БУ РЕй ех іп ї х 10 15 твж Бе дек тех пвх Су Дів Її1є дах пу Ар обек Чаї бек Бех два то 25 30 тек Ата АТа ТкЕробіУ Тк їі Ак св век ре щуІю Ах бі1у пев Зій 35 ко ЕК їкш Їж СІ 118 тіж ср був Ав ек Був ТЕ Хух о йва Ави ТУук АВ що 55 во раї бек уві Пуз дех Аке Тіє ТБ те Ав Бо Дар Тве Бех Був Ава | ха отв яд сій Ббе деї Тен бій пев Авй Бек Уві Тву ке бів; Дюеротйк Ата Майї
Я За ЩЕ тТУк тТух Сув Аза дкЯ Туг бек Тух ра СКе Тук Зак її АвроТук ТІр й 00 ТОБ її сту бів сліу тТяЄ реа Маї тп ві бек Бек ті5 159 «йї05 3 «им кий РВТ «13» Сивтетични поспідовнусть:
«ей «и» КандеЮцак ТОЖ «ей» 33
Мер о Т1є біц о ГПез Тве бій о бко Рез обЗет Ма)! бек Уві Аіа Рео сту дів 1 К: Іб 15
ТВ о Аіїв Ах ііс Бех Су Бех піу звродапогїе біу Бех Тук Ту Уді 2 25 за
Ні Ткротук біз сія ПУуа бхо сбіу бій Аа бус Уві тез Ма1і їтіє Тух сів йвродеє сСіз Аго ко бек бїу 112 Рхо піз Вга РОє Шек бі бек 5 в
Адп дет біу ва Тех Дів Тв бал Так Ті бегобіу Теж біп діа 01 85 зо 75 во
Азробіо Афкасжзо Тут Гує о Сув дво Зак тує Авробіо Вко Аваи Рре дав
В що ав
Уупі БЧе сіу піу СІіу вх Гу ба Тпжт Чаї еп 12 105 «2105 34 «еп115 ї955 «2142 РЕТ «вій» Синтетична послідовні «аю «22535 Кандидат 11 СУ «005 34 іп Уа біл рев олій бій Зек щі Вжо 5іу цейпоуУві Буш Ре бек 1 ї 5 | то 15 тТптТ цез беб ої ТКС дія їіє бе б1іу Дробев Чиї бек беж Ава о 2 35 тех Аїв вра тТкв ошьу ТІр їз Акт обі Зеї рт біу Да бьУу Гей бів
ТЕв о їей сім її їі бів студ дк бек був ТсротТух деп дай тую АМ1а во З5 | Б
Чаї беж Уаї цув бех дея Ті8 тих Ті АВ Бко Ар тк бе Був дев
КЕ ла та В сій отпє Шет Ти біт зей ва беїг о чаї тиж БЖ біз Ар тТвжЖ Аза чаї
Ви за з жо отТує Су зів Акоа Тур бег Тук ЕКО РІВ ТУ Чех тіе даю ТУЮ ТЕО о 195 їмо сх вій бу Тс без УувМ о Ттпс Маї бет бек 115 125 «віп» 3 «115 125, «ета» ре х21ах Синтетизна посліІпевністіх «ДР «ува Канпилат 12 УБ «апоз 35
АвВвоїїа біб Без біп бій бек біб Ве Сту б Уаї був Кб беж бух і 5 іс ДУ
Так оце); Беж ей Тв сСув дів їі Шеї зу Авр Зег Уві Бек бек оАве о | п З тес Дів Аїа Ту Сіу Тероїї8 Аку біп Бех бо Сіу Ажт о сіу ем обі
Тжр МеВ бі Ле Ті біб Су дру беж Був То Ту Аве Ази Тук А1А 10 З БО
Узі Бек очуві Му бек Ако тів Те тів Ада Роз Дер Тек бвк Бучі Ап 7 7 БМ зтй овре ває деп сіб дез деп дек чаї Те вк бій вав тп віх УВІ : а зо з5
Туєстує ув Ада Аа тТух щас тою Бко Ре Ту Чеб їзе дяр тує ТКр 150 То тій пі сі Зі ТВЕ Те ув. Тпк узі беж БЕ ї15 159 х2195 36 ха ВЕ: киах ВЕ я-1У срнієстична Маслідавніють «шо» кЕРаз Канмилдах 2 УН «80005 35 бін Уа1 01 бейпосів біз бек о бту Ре блю бен о Маї Був Рко Щек зе ї З 10 15
ТЕ Ццео жах Тео Тв о Сув Ах сіе бек о 5іУ Авробеє УВІ Вех бек АцЕ
ЗИ дл 30
Ббес АТЗ Аів Тер обі Тк ТІВ Ак бій веж рез об1У дк біу бецп сіб
ЗВ о 45
Тер ви Зіш ї3їе ї1є сій був Ага бек Пух ТЕр Тує Дело АвпоТук дів
БО 55 б уаї бек Мак бух бах дко їте те 1|е дсп оре) дер Тек обех ПувоАви ща 7 та о шій впе Бек їм бін рес ден Бек чаї те тко сі Баротве Аза сУущі вх о 5
Ту тТук без Дія ха Ту Зак ТУЮ Ехо РВЕ тТук дек дл дар тую тер зай таз ії0 ві» піз БУ ТВ бе) Уаї Ті уві де ек
МІ т124 «2105 37 «в11ї1х 107 : «2132 Синтетична послідов Мох
КАВУ
«2 Канцимшат 13 У; «ара» 37 де тів біп Меб ТБ б16 бек го беж 8ех ів Вед йіз Бек очзал о біу
І 5 19 ї5
Авробка Узі ТБбх ті ТЕ Суз Ако Вів Бас бій Бек ТІїе бфу тва тує й 2 3 - цей дія Тв отТух сій ін ПУБ рко Ту Буя Ав Бко дУуя ПейоБбез ТГК 858 13 | ї3
Тут Ві Аїв дет Зеж рес сій Бек тку Уа рке Зеї Ахо БМе зе обту
Ба 25 5
Чек БУ бек БІУ Тк дав оБНе Таж во ТЕ Ті Чеє дей веб с ре на та 75 хо
Ор АвЮ ре Аза ТИХ тує ТУух Сувосій бій сбгу свій йШеє їМе бей Ше 85 ЗО з5 тих Впе щІУ біб 1 те буя уаї сім Ії БУВ
«Із В «ваз 124 «2122 РЕТ «ій Синтетична песлідовніст» «их ктераз Кавплицат 3 У «капоз Зв із о уаї Стій пво чаї 0 ів беж о бію Аїд боїв Чаї Бу був Бу БЮ ОТО 1 за То 15 зак сем о бук іїіє БЕет су цу осіу аежЖ слу Тук шві Бін ТАК два ТУух
Ох Я « 30
Ттр Уаї б1у тТесб Уві Вку бій Мес орео ЗУ уз У Тем бій Тео Меє
ЗУ 4 С сі Рре 118 АвроБко Бек Аню Зек тує Тк Ав ТУЮ Дів Бко бер Се
У 5В я
Біт зу бій Уві ТЕ Кіа Бех Лів АВо мук БЕХ Ті ве ТВх Дія ТУЮ
В та 75 0 їесосбіпй Ткр ої ваекоіжч цу Аа Зек Авротнт віз Меб ТУЄ Жук СУБ
ЕВ ЗИ 35 дів Ако ЗМ; ес тую БіпосіУ Тух Ме дее о тТвх Ре ав 5вкЕ ТЕВ БТ У б 05 119 бів Об тнє Сей соувї ТБе чаї дек бах вих 20 «дО 35 : «Ії 7 «вій НЕ «13з Синтетична послідавніІсть «дО х «гІ3з кандидат 18 М. «Ох а двр оте бл мек тпя сій бек о Бсо бОвк о шех темі беж Аза бек Мах шеу ї 5 ха І5
Квр Ага чаї тю ї16 Тье сСув'лЕУ дів Бек бій бек Т1іе біу Пец Туг йо - зо
Тео Вів Ткр о ТуУЄ білові бує БЕ бім Був діа Еко пув Мем їз 116 15 4 45
Тс оАїв Аз дак бес Пец опція бе зЕу Ууаї бе» бак Ака Бе бек о бім ха 5 во зак сіу зек су Тв дао ББеотлх зец тах їв Бех бек Гей бо го де 70 та І) дій дев Бе діва тТвЕ тю тує оСув сіб 1 Акфа біо Твеоуві еко Вео 83 ВО Зв
Лк овде Біу Ба сію Ту був чаї Біо тіж Був
ТБ х215ж 4 «иуАЕХ таз Синтетична пйослійовнісхв «ох стежі» Кандидат мі УК «ПО» 8 пре о баї сіс тей Уві бій Бак осі Аїд Зі: Мед пу Мув Ву сьУ 5
ХЕ Е 10 5
Чек їж Му Ії дек Смив був соту Зек бі Ту бек Ве ТОЖ Ап отує ткв Чаї бьу ТкроУаї Ажоозій Мес бко БШіУу цуко сію Бей біо бкр Має 3 ай р
Піу Бпе Тїе йо РеЕо о Зех Авробет Тук Тбу ВйапоТук АТа Бго ех Вве сіп осі сів о Уді Тв Іі бек Аве Аз бує Мак о Їїв бек Те діва стр б за 75 яо
Цев бів Тер обех бет Бео був дів Зеу дз То Вів Ме Туг Тут Сув 85 зо з5
Кіз вка сій Мву Тк сів ту Тук Меї Дер оТвк Ве Дер бе ткв І1У ех 105 | Ой біп Оле ТВ Бо Маї Тв омЩї бах Бек 118 190 «ах 41 ві» 107 «212 РЯТ «І Синтетична послудовнідть «ду» «аа» Кандидат 18 мМ «ап» 43
Ава сі бра Ме Тип біз Бех рес беж обвї (Пец; бер о Лів бек уві бі 1 5 То 15 «Авр о Ата Уай ТБж тіе Тис Суз Аха Ав обекосіпт дек Із біу бедо тує йо 25 за їецоАВа Тго Тух зіпосхп ув Рео біу був оАра Рко Був цей їец ї1в; 35 ко 45
Тук Аїа Атя бек бек без бій ех біу Уві Бгто бак дк бде бжх СУ що 25 85
Зек оту Беж б5іуУ ТЕЖ АвроБре Тк фей ТВЕ Їі8 бек одев ей ій Вко
ВІ то Ка Що
Зій одер Рие вів Твсотую Бук Сує біп бій біу Аве ТАЄ Бей бек тує я 5 як тТвж че сіє біг обіу тв бує ма міч їв Був за Во «102 ай ярі 12 сві» ВХ «иа» Сентетична послідовністіх
КВЯОА чиї» Кандидат 15 УК «ап яй зів Уаї Стів рез хаї біп о беє бі дів бів Мах ув Був ко сім 1 1 В 19 15 бек ре буяє тів бек Сув Пуз біу Бех біб бух Зег Бе Твк Ват Тук | 109 їхр уві бБіу ттв Уаї бка ія Меб Рво біу Був СПТУ Тем біо Тер мес
З 4 А се бле хів Ар Рто беж Ав БеЄ Тух ТЕЖ вп Ту дія Бо дек РН
БІ в Би піп ціу бій Уві ТБ о їїе Як Алла Авроїув Ше їіФ бек тп Аїда ТУК
Ба та ть за
Бедосзю Теробею век Бем Був Акта Бек вве ЖАХ вівоМеє ТУЮ Туко сив я Зо 55
Аха Ахка бів йем ТУЮ Біп зі Тук Ме ВЕБ О ТИЖ Ме дар бе ттроЗіу зоб 105 ко дів біу Тпс Бе) Узі тож Уві Бех бек 115 То «ві я еВ «вій РЕТ «ие (сСВрибЕсниИчнНВ послідов «вих поту ту ху а исух тяж вн тех «газ Мамцидат 1 СВІ «лих Я чіп отТУує дв АВЮ Зівосек Тут - Кк 4. З «10» 4 ие Я «вій ре
СО 1лж (чем тмітьг біз у ри ие, ши Сер ти чі в посла лев кепютут кави : «Ми Канмльищет й ІМ «Од» 44
АВИ вів ов «жІ1ох 45 кл а «2 ВАТ «138 Ститетична послпідевниств «То и Зак ктх - отр «ках Кандидат 1 1СББА жащав Я
ЗІп ів ТУїх Тук ших Гей Хек 116 ТЕ х 5 і З сліз «в сер її «ТІ» РВТ «214» Сунжетична песлідсвнЕств сЕДИх «пі» Кандидат Її НОСОВІ капот 5 пі Тук дає спе тв йвродап о ткр 1 5 й ких 87 «ліМх «ах БЕХ 7У з схуд ем: сеЕвРші Срри я З я и У і И каз сСиєтатичиа послідовність сиг «вив Кандидат 1 СНОСОКХ '
«100» 47 у її дв Бо бех Ав оБЕш 510 Те .
А й
А в;
ЕЛ 8 «1 ій «Киї ВТ «РІВ» Синтетична ПОСЛІДОВНІ ств; че? «й» Кандидат 1 НОСИ «Ах я
Аїа дка бі о тТІш ЗІ ГТ бі оку Ме Узі Ар оїїе
НН 5 ІЗ «іп» 45 «че в «вішв РЕТ «из Синтетична песпідовнвість. ких «йде Маннимет я СК «пох аз сів су лі век сек БгБ ї а «вх 50 «ВІТ З ки1їа» РА «ІЗ» Сявстетична посльдевність «рей члеЗУ Канлмлат я 1СОВХ «ап
Зі Аа бек «В ПЕ
КИМ сліз РЕ «рі Зк сСівтетична тесл іде ї Са «ЕІ «ай» Кандидат й ПОЗ «ап і ста зів Туж Аво др оврпе веб тів ТЕ ї к І «М ла
Си: «Ір РІЖЕ «тла» Сивлєетична. пОоСизловність чех «роза» кандидат й НОБКІ1 айс й сту ту Бек вна Азп о Ави оТух ТЕ лі о «21 5 «вії В «ої РЕ. ейійх бмнтатизна послідсавність «а О иа» Кандидат є НОрМЄ «40» 53
Іге о дкр о рко бій Авробею Теротве 1 5 «810 54 «212 5 «їй ВАК «813» Синтетична послідовність «веОо «или Кандидат 9 ВСОВІ «00 хм 54 дів йо Ап 11 Тук піс Бо Дяв» Теє 1 В «10: 55 «То «ж БЕ «2135 Синтетичав послідовність еко «ат» сСапоаводлтея з.4,5,5, її МСЕК «ас» 55
Авіа цем біу ШІ Тух ЕКе ї їх «ра Ве «и киш ВК «ві3» Синтетична поспідависстеь «ЕР «ІЗюм свидаічагев 3З,дИлИивВ, З СП ї «ап по
Кар Авт дар ї : «вах 7 се о І ха» вЕТ «7155 Сивтетична побліцевність
«йди «ваз Сапаїаєвв За СБК ка 5 дів век Тут Ер от Аврозів РНе ТЛх Уві) ї з їй «п ЗВ «вії 10 «РІЙ ЕТ «1» Сизчтетична песпішевнхієсть ло НІх криз» Сатдлатєев З НСБВІ «и ЩЕ зЗіу взр овек Уаї бек ТІ Аж дес взяв Аза 1 З То «еф У сил ВИ «ти» Вр тика» Сивтетична послійдсвність «их «лаийа» Сапзчацвв Ш КТК «апп я їз Чів вк Ед смек ому ТУук Ткроаки Ар 1 Є Б я ж чи «тую БО «Віт Те «й ВХ «ема» сллнтатичне послідовні сте «вия струк тки дощ я до сво дек пвх «кепі спапОітововев 3,5, и, НСОБУ апа» БО
Віа вка НІВ Те тує Рко Тут ва Бех ре АвБ од 1 З 10 «ем
Фр ака рих сИ135 Симтетиеяма послідовність епох сийд» Сариізбзгва й, о ВОорКА «ай ех сСіу Ар обег туаї бек тТвЕ жа бек Дів Аїа ї У 1-х . шк ЕІ
«двох ва дл кт арх о «Феї ВАТ «мух Синтетична послідовність «Ме же Сапаїчате 4 НСрко капа Б їїт Бек ТуК Ата бе о АКЯ ТЕБ ОТУК Ам дю їй В 10 «ил ва штх Я «і ло ол хх х'ї «иїй» БЕТ «21ах Синтетична песлідевність
ОЗ
«ее Сеапатоает й СКЗ «ап а сів БЕК тує дв са Аяр век Аїв о ТНу Ус.
А з 1 и» 54 хегіз 5
ЕЙ» РЕ «жі» шШантетична поспідавність вид мот ті деко кн НН НИ Кен «йиЗз Сен асев о Я,б, ВСЮ «вах ов ее тує Ме бр бетону Тер отУю Ав ї в) же» 65 «сеї 4 «ШЕ вт «к1й» Смнтетачна песлідсвніссюь ств си «иав Сапоідйвка: й МСА «Ах 6 кю дя х пу ЄЮ х ср те пули її
Ої1у Бет Тут Авробес АБб о Бек Гей ТпЕ Удї ї Би що «ЕЛ Бо «вл о ких». РЕТ «їй Симтезичне послідовник єть
«ати» «Еш сатойсівсе 7 ОКУ «оп бо бак обек Тух др Бек Аеробех пес тп Уді. ї в 15 «в1йх 6 «ех в «вів ВІТ «еЕ1ах Синтетична послішсвність «2205 «клийе мата вре я,З,10,,18 БСОКІ «ай в
Вей Ге Бім шек бух ТУЮ ї їте «Р1цк ве «важ З «АТам ВАТ
Феї» Синтетична послідовність й «п сив Ссасаїдаєе йиВи10,.11519 ТПВ «ДО Я -оа Авро ває я і
Ку «БЖ 85 «ситі» 11 «им рРЕТ «їж Синтетична послідовнусть кати кейа» сСаппійвее Б СР кис» 5 сума бек Тук Ар о Явс паля Ре бек РБВБ о бім Уві) ій 5 ТО «йМИпж то «211 10 «й105 вВТ «213» Синтетична послідовність сви р іч 2 З тя ле нсегВ сей» Сапоівсе 75,2,19,11,15 ЕСОВІ «ПОх 7 звіУу аАво беїх Уа! беж бак ава Кес АТа Аза
ВН у ях
А з Ів
«105 7 «тк» З «125 вв «і8х Синтетична посліповністів «рШх «ВЗ» Сапдідаєе ЯОНСОВИХ «40 71 ее біб Тв Ара дес ув тую ткЕро вв ї 5 в-ва 10 ТЕ «115 17 «12 РЕ «Ід» Синтетична послідсян ст
ФВ пулу х рик а НА НН окоту мтс у «рах Сагпоазависю 5,3, 0,1 ВСОВА «ай те
Аїа де отує Мек о Тук Рко Бе тук бек Ті АввоТує ж 5 Кп
Я зи ж «ІТ 3 «її а «оІхз ЕВІ 1» Стввавнчна послудовнисть «ой» хижа Сапіідйасе З ОНСОКУ ад та а ШК З Моль Не тури За Т що лих ех І -кї
Іїш суб ті Агу БОС Був ТУЮ Ткр оди 1 5 капела же кеїш рр каз» Симнеетичма песліневнІсув сах кг УХ Сепиіїайаже 10 1853 капОм 74 біБоБев ТУук Аве Тв то Уаїі Тук дек чаї ї 5 їй у 5 сві» І «ек ВК лох, зу допит стеж Ер яти ті ит к шок МТ чнНя после
«У705 гулі дж портр «же» Села це 5 БО й «дій та їІїе сій буз Ак Баг оБтю ТУЄ ТероАєй 1 М «ліс 75 сеї» 185 «се ВК «п1ій2 Симтетична пасдлапОовніств «а «ей Сасаісаце 11 ПС «ащмр в ет аж ТУК Ах зКХЧ вЕО АВОо пе Аве Уду ї 5 не ит «15 5 «отв РЕ ту їх, тя зп ре РОН дек - а» Синтетична посі ВОоЖнХЄть
СОН
«два» сСапокоане ії1,12 НООКе «аа т
Іїе бій пує« Аку беж пу Ткротук дви ї 5 «Ту В: «Ера То «Ів ВНЕ «каз Синтетична посліІповність. «ЕЕ тега» сао ічасе ГУ БО кхааз 7
Кеш БЕЖ Тук одяЮ АВ ОРЕО Ащи де БІВ СУ, ї У ї8 «їй» р : «із б хіх ВЕТ кеу3» Симргетична поесліІвОовнІсСтТвВ ее
Шия й -й Корея т- з шо тоезжяуєя «шій» сапозсдие 13, 15, т5БІЛ с410а5 78 біт секоїїв лу Цей УК ї щу ня ух «рійх Во сем тт т се «сита ру «її» Синеитична пеоспидовнасть «ЙО «а Сапсіобатаеа їЗИи 14, ВТБ СПБ «ПО ВО
АВ оАТа ев «вію «Вії» З «ер Е еВ «13» Сичтетична посліду те с слнтЕТИчЧвнОоО Послідовна єсте «дей дра» Сапоісвасе 13 Пера «Оп КІ ос пе лу г С аж их й 2 пи я є я зі Зп обу зі Бей Тфе гей бек ТБЕ ї а
ТУ пи сиВп я: сті т чем Кк 2т1ї12х ВВТ : киїйх Синуєтична пепшледевнісн «ВЕД кита Свичійакє ї3, Ю4, І5 БОБ. слати я «пам яй
СТУ тукК БЕК БКе тТвлхоАвй Туктжрв і 5 «вій Ви «ЇВ кис ВАТ сеї Сдмтетична послідовні єють «их «тех Свибійдсє З НСНУ чАйО» 83
Тіе АвроБко бек АзроЄве ТУк тах сеї на же. 6 хиЩе РЕК й «3». Синтетична песпедоннастів и» лю трюки кч идр и й вет що що щу меч ам а Фі пи АЮЬ кива саспсч сасев 15, 18, М, МТ, 5-й 15-53, 5-4, 35-55, кО-З,1 0-8 0 НО
«або» А віз Ак 5 бе) Тує Сйт біу Тук Меї дя» тТйх Вре Ар оВех 1 З 16 «2102 85 «ау а кори Р «Е1лУ Синтетичма послідсвність «нах «иа Сапохадке ЛЯ СТО «Мах я бів біп Аїз б3в То ях Бек ЕКО те х 5 «віце ве «2її5 18 «Ту ЕТ а , го «кі Синтатична послівовність «Рей «ий Салеісакеа ї4, 35 НСС капох ве ії: АБО рРко бек Ар Бех тує ТБЕ Авпотух 1 в 13 «вх я сії а кита» РТ «вік Синтетична послідовність «2805 «РЕа» Сапсідате ТЗ ОВ «пи: я
ЗІ1й сь о біу йеа тв Їїво дек ТУ ТНЕ ї 5 кл ВВ «ки я «рік вВВт «вій Сивтетична послідовність чех «ВІ» Сапаїбаве 16 НОВУ «ап В їв АвроРго Сі др вк Тут ТВЕ 1 х «8102 89
«ШАР З «вій» РЕТ «Фіз» Синтетична послідовність ке: краЗев сапаїтавов 10 БСОКЗ хадОо» ва
За Біб Тук се Як Уві бек іє тиж 1 5 кеЩоОх що «п1їз 443 «йіше ВКУ «віз» Синтетична послідовність кам кейЗя Камшицат 16, їшвна повжина важкого панцюра. тайм 0
ЗЕв чав Бій їн Уа1ї бьбвобве о УУ Аїа Бай Уа Буд Був Бк сі у сою 1 й то 15 бек во їв її дає Сук Був ві; бек опію Теж дав оБме дяй АдзпотТух шо ши за
Жхв ов о сіу ТкроМаї Ахо ій МеєЄ ко сту бує су бе січ бер Меж 35 ри 45
МУ Ті ГТїе Азр о Рго СЬб Ар обек Ту ТП яп отут ха бо чек оре й У ви бів ЗКУ сіб Уа тТвх тіе Бех дів йяробув век ТТ Бак Тех дія Ту 55 за ть но
Бен бій тер бак бес пе Був Аля дек дер отак о АТа Мек Тук Тук Ту во З5
Ата« Ак Ави ої1е тТУроі це Аврротую Тв осі бів осі Так оба Уа 168 105 118
Ть»Е Узі дек баг діа Бех ТК руз біс рес Бех Уві рве БЕ їв діа 115 зха 185 І
Еха Сув ес дося Бест та бек січ ех Тс оАза Атїа ве бу був без
ЗИ 135 155
Уві був дво тут Ра во шій Ехо Уа! Тех Уві БК То АвБп дек бІу
ТЯ 150 їЕ5 150 дів сви Те бЗек СІУ Уві Мів отв БАН овке Аа мзк фе бік Шежк бес 155 175 і75 спі є Жук бе їх бер беж Мді Ма) Твр УВА же бер Єв бах Гео ї8о 155 | 156
Сіу тек був тах Тук Твг Сув йзп Уві Яврв Пі Був Рко цех аза тре 155 ОД пре
Буш Узі йзрооув Ак Маї біс ек Бус Ту бі. РКО Вго Су Бго го иа що сСув Вухо від Бк шій Бе Бей обі? бі Бо бек баї Ре гей раа орто 230 | 235 2
Бко Був Рхтс Був ВБо ТЕ еп оМес бів Бек бка тНЕ рко бін Уаї ТЕ 245 за еВ
Суб Маї аг Маї АврроУді век озіп бій Авробто біз Уді біт бБе дай 250 ше 87 тТхротух Уві Азробіу бві бів Уві НЕ АЗИ Абя Був ТАЄ був Рхо Аво т ВО 5 біз Ота бін рне Авпобех ТБ Тух Ак Узі ві дек Ма бе Тих Уа 290 285 зап їм ців бід дев тс ер дапоспіт Бу вій Тук пу бев Був уд Бек зах 3 35 325
Анй пу звіУ Пец го бек шек Ті щі Був тп Те бек бив йтія пуд зав 330 335 І біу піч ру Ах Зі ре сій Уві Тує Та ес хо Рто бех біп бій бБіш Ме Муз був Авт обілй Уві Бек Гец Твж бує Бреб уві Був біу Бере туУук Вхо бек бар Ті Аїа Маїі біс Тсросіц ес дей сту Зі Бро бід 370 щі5 380 дяпоАви Тух був тих ТБе Бо гео Маї пес дер обес Дер осьу вес РБе ях З Зак що
Вце Гео оТує Зех БФ Бев ТЕ Уві дев Гує Бег Агу Ткр о бІп Зі 01у 405 | жів 415
Ази Уві Рне бек оСув бек суді Меї Ві біз йїа феї Міз деп Бі Тук 550 125 4 І тво сіл о буз бах Гем Зех пе» Зву Геви 01Уу ух і35 «А «212 з «115 49 «ній» вет «гаї» Смнтетизна послідовність «Во чЕ03» Кандипат 17, повна псовжина важксо ленню «аопе 81 біпоуві бій Пею Зіп бій Вес О1у Рує біу Тен Уві Був о бто Бех філ 1 щ ке) 15 з Твх Бев бек Пец стТвк Сув Аіва ітїе Єву ЗІіу АКвзвобехк Уві бет Так Ахо 295 25 Ло
ЯХшІ Азія дів ТїробіУ Тер ТТ Аго о біпо Бех ро бі Ак обіу Бе; обі 35 40 щ5
Ткв о їєв б1іу вра гіе стук Меї Ако бек Був Ткр о Тукю Авт ВБр Тух Аа
Уві Бек Уаї МСу5 бек Аа ЇТ1е ТБ ТТ Ачо Рко бер Три: Бех Був Азп
Бо 70 ТУ Я біп Вне бЗетх Пер о білоїжц Авп обех Уді Тву РоевоОЇО Авроїбни Аза чаї
ВЗ Зх 95
Тух тТук Сук с Ата та Нія Тиротух Вгро Ту Грей Ябєх БНо АвроУві Тхо тоо то5 11 пім біт біу Тк ев Уаії Тк Уві бек йек Віва бек ТЕЖ Буз Ту БКо ї25 1-55 звх Таї бів Еко лей Аїаз Еко сСуз щес йо ше ТЬт бЗех бім ще ТЕ 3 ї55 14 ка сАїв Мей біу Суб Бей Маї їув Лер Тує Ре Бкссбівш Бо МАї ТК 145 КЗ КБУ Вей
Уа дек жЕО Ази одет бі Аіа Пец ТЕ бек щу чай нів тах РБЄ РК ї55 75 у
Аіїа чаї пев сій бек бек осіу їжи Тук йпвЕ Грей леж беж Уві УА ТЕ 186 їв 135 та о Бко Шет Зеє бек цем обу Тр Був Тис Жук тТпкосбув вало Уві Вар 183 20й 295
Тів Мує ВБуро Бек Ака ЇБбт Був Ма Авр ог йко Чаї біз еко був Тук ів 218 а бі вто бхо буяє Сто Вус Суз Рус Діва Вуо біш бе пеу щ1у біу Вко ве 238 235 пі)
Зехк Угі бе Ге Ре Бо Рхо був о рхо Пув двроїйх Сер оМмек ЇТе бах ж пу
АкчЧ Тих Рка біс баз Таб Суз Уві ува) Узі Дар оЗаі Бевковів бі яв
БО ша ВО
Ехо бів Уві бій Бе АвпоТкхротує Узі Авр обу маї бін Заї Вів Два не: 285 285 ліз пуюж їйкопув Ро Агку Сім іа біп ре йзпобеєв Тех Тук вхо Уаї
258 295 зо ур Беє уві йем ТрЕ Маї дез Кі Сів АвротТер їм бял обу пуд СІ 305 310 315 зо
Тук Був Сув уз Мві бек Ап оГбуд Піу Гец рго бех бек 112 біз Буз 385 зо 315 тик ТІ бек опея Аіа Був сіу бі» Бо дез біз Бгто біб Таї Тую ТЕ з40 з45 359
Бред овко Без дек біл сід 610 Ме ТК оБбук йдвпосСіт Уа бек Цей Ту 355 Зео 355
Суб опи Узі був біу пе Ту Рко Бех дзп Іі Ага Уві бі: Тгробіє
Хек Ва біу біп реко пі) Авподап о Тук Буд Твю ТВ оБко Рхо Уді їец 385 396 385 о
Явюробекоднробіу бер Бе ре Бер Тук Дет одед во ТВе о чзаї Азо пух у 476 518 дек аку Тр осС1ій 51М спьу дв Уаї бе Зех Сув Бех узі Мег Нія б
Ат ї85 130
Віа Пем пів АвпоБтя ЖУуХ Твкосій цу пес цей ошекв мем Бех мезо піу 435 аа 445
БУВ
«их «21їз 445 «з ВАТ «піде Сиктетична послушювил єтих «кий» «птах Кандидат 18, повиа довжина важкого данихоха «ай» 93 біп бат ор бен бів біп бек біу Бко С1іу паші Ппув Еко Зх 1
Ї З 16 т
Так без чех ре Тс був Аза іє бек бім Аве обет Узі Бек бек Ап й 5 Зо бег о АТ Аїа Теробі ТЕротіє Ахе бік бак о Бко біу дхе БД бен 01
Зо 45 Ал тро бви біу Її Ті бійпоБуз Ако бек Гуз Тео Туг Ап дво Тукю АТ
За 5а б чаї бах Уа пув бек Акта Т16 Твж ГІе Ав! Бко дере. Тк Бех був вт 55 то 73 | я сій вне бек мем сій їй Ай Зех За1і ЇВ Бус біс Дшр Тк АТ Уаї
Зо 5
Теє тук Сув Аза Ах Тух Бех Тук жо Бне Тує бек Ті АвротТую Ткр ї50 що 1то бу біз оту тик омец удо Ти Узі ех дек Аз о шєК лвх о пудо бу Ех
М ї9о реа век Уві Рие с рко степ дів Рко був беж АкЗ БбБес тт Ббеє Сі Бех ТАх о ї35 1550 віз Аїв цер бМу Сув пем о Маї був деротТук ЕвБе Бо Пій ро шаї ТБЕ 145 152 тА 150 т7аї Зек о Тро о Авпобех жо Аза Пем Тнх Бек Бу Уа) Ні Тк Рив Рго
І6ї 179 іт діва Узі Бем о бій бек бек Сбіу Бей Туж бЗех Ге Бек обер Чаї Маї Тре і18о 185 130 уві кс Зех Зех Бех цей б1іу тп пу оТвс Тух ТВробСуз Аво Маї дер 135 20 ФУ
Ні іув ко Чек ДЕВ Тік Був Уаії дно бух Дкоа Уві Січ Зехє ПСув Тує
Іо 215 жк
Зіу Бгто Бо Сув Рко Ро Су Бко Аза Бо 10 Ре рей с1у піу Бов 225 рАклВ) 235 тай
Фек о Маї вбе тео Вве Рг Бжо Був Бжт» Був Дер Так Пец Меї її дет дк Стах Бко біц Уаї Жах Су Ма1 Уві Маї Аво ча» Бек бій мі Ар ! ко ге5 | 270
Еко іш Маї О1ї6й БРав о Ав ОтТКО тує уді Аве осСту Ма» бід Ууаї НІВ АБ а1їв ув їпт Був Ех ку біз біз 613 Ре дей о бет Тк о Туюк Дта Зах
ЗО. 255 Зо чав Бшхк УВА Бей о тйх УЗА рей хв Осій яр ТЕ о без Ап о СьуУу Ту со
За 31 лт5 Зо тТук пузв Суз Гув Уві бек Аз пуч бїУ Бес пута бек бек тле сія Був 39585 335 355
ТВЕ їїє Беб був Аза Бує бу біп йко Акт сій Бо біз Уа оту теЕ . 340 345 ЗО ува БКо ру бек бта Бі Бій Меб Тек був дай біп Маї бек ей ТВх 355 зво ЗБ5
Су о йти Уві Був Зі Бпе Ту Ріє Зак АвроЇТе йіа уаї Бій ТЕВ Зі ато 315 зно цекодяп сту сію жо ТЯ Ав дяв отТух Був Те Тйж жо Ргб Уві Тео з85 ї90 ав зас
Мр век ВЕБ ОСІуУ Ба БІ Бі ви Тук бек АЕф Тви о тТБЕ Уві АЗОТУ 05 ко 415 бвкодко Тер обіповіш СЬу Ав ущі бле бек Сує Бек Уа) Меб Віз СІ 420 С 1436
Вів їжи НОВ АвпоНів Шук Тк сій ГеБ Бех Ів ЗЕ Пей Щек їв І 385 | 446 445
Гуз «МО» 8 жеїїз ВАК «Її РЕТ «і» Синтетична песлідсвність «ви «кеа3» Канцидат 19, повна довжина важкого лаавиюта «ап» 3
ЗіпотУуац БІ цем о Ууаі БМ Бе бі АТбас бе увї був був рке БМ Б 1 5 т 13 деє т) гу Бі бар був о гув о с1у Вях біу Ту Вес Вце ТЕ Ав Тух 2 Ж зп тТЕрочаії бху ТЕв Маї Ах сій Мес вБко бі Був о біу Бе) б) тер Ме за 35 15
Зіу вве тів АВи РКО Беж лавр оБех тує Ту дяпотТує Атя РЕ бек Рі бо зіпоцім бів Маї Тв Тіе бек Дія Ар оБуз беж 112 бек ТМЄ Віа тТук
Б з. 5 я реп ожіп Тхробпеж бех Пец обма Аза бек о АвротТьи бів ТУЮ УК КВ 55 З За
Аїа йхч Фіз пев Тук бій слу Туг Мек одер ТЕ РБе Авр Зах Тер бВіу т180 ота тб зів сі тТвх рей УяІ Тех Уві Бех бек діа век Тс був 01у РФ Бек 115 Т2О Га
УМ ге Бхо рез Мі то був бет хо бат Ту бек бій бек Тех Ві 138 135 149
Віз рем ошір Сує ем Уві Му ар тую Вес кко ба Бжо УВЕ Тех Уві 155 Та ї55 ї5О бетотий дай бех Бу дьа гас о Твнх бає ру Уві нів тТни Ве Вко Аїд 165 та й ї75
Уві Пед ОЇ Бех бек Ту Пен тТУух Бех їеб чех бек Удт УудіІ ТКЕ УВУ тї83 їх 130
РЕ век бас бек пед Піу Тл пу Тис тую ТпЕ Су депоУуві АвБроній цтва Ро беж Аза їв пу Уаії Азроцув Ах Уві біз бек Мпуж Лук ХУ
МЯКІ Ії бо
Вхе Бгто був БЕО рЕб був Рко Атв о Бге бі вВНЕ Меп у пі Ро Заг чаї РБе Без Епе го Бхо Му орга пу дер отак Мей Меб її1є ШВвЕ АК 285 ра 235 тиж БЕб сій Уві ТВт Сбуз Уві Уві Уяїі Ав Чаї вав Бій сії Ар ово 250 Б ря: та Уві ба вна дев Тхв тує уаї дев обі Маі би Уйї ів деЕМ луд й по 85 ов ТВг о оБуз Река ВК бій біз СІ РКе Два бек Тпк Ту АЖЯ Уві Удї 23а Ж за
Еєж Уя1і їеви Тлх уві їши Ні Зіп АвБроткв ем дай слу ТУ б тує
БЕН зів За з2о туз був уз Уві Бех Ав пуд 51» вм овгто вес бах Тіз біб ру ТЕ зви зза Зп тте Бек оцев о Аїз пу Бі сіб РФ Ако (Із Ре бій Уві тую ТВЕ о Мец 340 ух 35
Бк бо дек суп бів лій Меє тах Ббев Ав сій баї бек рей Тр Сув 355 Зб 365
Гез; Уа Бе слу БйесТук Рко Бет АврвотТ1іє Ажа Увь сід тже сла очеє
БЖКО) ВТ 38
Кзеобіу піп ко біб Аза АБА ОТУує пуд так ТЕ ре рев ТВі беч АЕр 85 150 335 збо бХвтї Квробзуу шеб ве вра бе) ТУк Бак АкФ оСец тве Уві АЮ Був Шеж чо5 410 415 дкч тТеросій пі Зіу Азпочаіїі РНб бе Сув о беє чаї мМек між ЗМІ АТ 259 425 430
ТезсКів йвп о Нів Ту ТВІ Оїп ГУуя дДвгоржиоа Бек Цей бекорбемосіу був 455 448 вав «8102 34 «жі» 446 «хз БВТ «вій» Синтетична рослідовиність «ой» «горах Канцицат і, повна довжиБа важкого павиюга «30 55 бій чаї біц їв Уві бід деко б1у із сто Уві був Пт Бе пу 1 1 Б ТО ячка
Зех Іжа Їде І1е бех Суз Був сїу ву біу Ту Звк Ре ТИт дер» дви -й й і)
Тхр їїє дек Ткв УВІ Яка Зп Аза оБко Біу Був біу йем Зб Тур Меє зб 49 ау піу маї ті ДЕроРко бек Авзройек тую тво ва Тує Аід Бо Бего вне
За 55 : 65 ів Єї1У бій Узі Тих їле Бе Афа Авр о був бее ТІ бет ТБкК АТ тую
Б та 75 Бо й їви зів с тко Шах беж Та Пуз Аї5 ек др Тйпх Аза Мер ТтТух тую Суб . ях за 35
Аза дха зів тІвр Бі гів Сі зіу Меї Ууді аво ї131є теру щу су
Мо 125 118
Тнх ей Уві) Тих УаХ Щек ек вів Бех ТВЕ пу Су Бк Бех о Ууву вве її5 129 ї25 вхо Бец дів Бк о сСув бак оАкЧ севЕ тре двк обьо Бех тік діа АТ гей ї30 135 140 біу бив бви чаї ув одЕю Тук Впе Вво сіб Бра уяі ТБх Уа ех тТкр їах 155 152 іБ5О
Авп дес бу віз Пе) ТВ Бех сіу Уаї Ні8 Тс Ре о Буо діа Уві Пе
155 130 175 сів дек Зак о біу Бе Тує бах Бей обег йек уві УР Так Уві Бо век тва 185 ІТЗо вк дек Бембі Тахо Був ТВкоТук ТпЕ Сув Авип о Уаї АвроНіж Бу Сто дек Ави Тих тя аї бйероїмя Деко уаї бій бех був Тує біу Рто БКо гий 213 2» сСув Рго ро Сув Рхз Ага Рко Сі оВайе Гей бі» Се вхо бек о маї Ве: 325 830 235 зіб вс Бе Рко Бсо ПувоБто був Ар оЇБУ Гез МеЕ Їїїє бак Аку Таро БКо бід Уві Ту Суя Маї Уві Уві Авр оуаї ет бій біб Аво Рго бів ві зво 265 з7о сій Бае дяп о тжроТух Уаї дар ді бвї бій уві Чіз дез Аа буз ТЕБЕ
В 280 25 цу о Рго Ако із бій Сів Боє Дал обек Тв Тук йху Уаі Уаї бвю Уч 25 25 зо іго3 Так Чаї пеб Нав бів обзор Ткроівц Ав б1іУу Був сій Тує Був Суд 35 з10 ЗЕ БОТИ пув ові бек о Авл ув Зі Геч Бгто беє бах Т18 біз Був оТрт Їіє Зеу
Бу: Б 335
У Аза пух біу ії Бгто дра Бій обко біб мМаї бук тТВж рей рес Бкое 345 35 350 дежх піп сід бім Меаб їтке Пта блпоЗіп Уві бект пем ТАХ Сут їжм уві
З5 360 365 уз 01у Ре Туг Рус бех Ар Ії Віа Уа1ї біо Тер б10 бек Авст П1у
З 75 ЗВО
Сі ко Бім дДьп о Аа тує Був ТАЕ ТВ Бо Вес Мді Бевза Бек дар
За 355 що спіу бех бе Бе деп Тух Дек АКЯ Гео Те УВІ) АвроБуз обех Ак Тер
СОУ ато 45 бій біз щу ЕЛ Маї Вое бек Сув сеї Уві Меб Нв Сі АТа ей нів 451 рус 35
Анп ніш тую ТВжЖ о сій Муз Бех дей Шекс обей Зевс овем 51У Був
Бевз 280 445 «21 5
ФРІ» 443 кг1йУ ВТ «се: йж Синтетична поспідсвність кегОх -д23» Кавжшилат й» повна довжина важкого ланцюга «Ох 5
Ваза чаї ліс їз Уві бій Щек Зіу вія біб Тав Був Пув о бте даху с ги 1 5 ТО 15 йек опям пуд її вес бух Був сту бек щу Тук цех ве йла Ап о тТУК го 88 30
Тквр 116 З3Му Ттш о Маї Ак сів Мес Бко біу був с1у Без бін Тхр Меб ї5 4 5 піу їіе тів Двробто біло дер бек ТжроТве Авто тую дій Рко Зех Вие ще 55 БО піп біу бій уві ТБ Т1і2 бек Дія йзробуа Бех іє бес Тк лів Тех п 7 т5 83 їец біп Ттр обех бек оіез Ббуз Аза Бехс Авроїйх Аїв Ме Тукю Тук Сув
Віа Ака Ави т11іє Тук Бій о БВе АврвотТУєЄ Ткрозію пі блу Тк оБец ма 166. ав ій їНЕ ха» Бер Бех йАів Беж Твх пу біУу Роз ех УДдЕЬ Вае о врту рей дів 315 хо 125
Бго Сух дек Ах Бек ТУ Вес бій бек їМху Азв о Ата бев обі Сув Пе
430 і155 ї40
Чаї Був АвроТух Ре Рко бій Бко Увазі Тахо Уві Бех Тхо Ав беж СТУ їх | 150 1558 160
АМЗа їж ТЕ цех ТУ Маї Ні Тв оре Во діа аї Теза бій Зекс ех їб5 Ето іль су тей тТух екс пе) чек Чек Мах Уві Тьк Маї рРео бЗех бек вве Беца
ТВО 185 159 сі так Без тах Тує ТВ Сув дяк Мат дО Ві Був ко беж дало тТве 1з5 та «ОВ пув мах Ав» сук й Уві цій Бех пуб Тож біу РКО Ро був РЕ рЕо 21 215 що пПув вто дій жо піч ББе рев сію біж Бко бух Маї ВВЕ тей Брле реа вл Зо 235 240 вхо ув Рхо Пух яр ТБЕ ем о Мех Ті бек Аку Тьх РО бЩ Уві тве 2Е5 251 235 був чаї хаї Уві йво Уаї бат бів бій Аврорео бій аб бів о ВНе Ай
ВО ра 27 їхр о тжук Уаї Авв о біу Уві Сіл Уа) Зіз дп АТ цуз ТІ Пе ВЕО АКО я го 28
Бім ій біп вра Авп»обек Тис Тух Ак УаТ Уві ет У гц ТтвЕ Ук 25. Зо З їецп пів ск Ар Тер Пец деп сої був о сТМ Ту Був Сух ув УВІ бек
БІ Ве 315 з
Авпобуя пі цем пт пек бес о Тіє СІ Був Так Ті дет пул Дія Був
У 330 335 зіж піп во ВЕ Б1д Ето сій ув тух тн без бко РКО бек бів вуц 330 35 350 спів Мех ТИЖ Пеш ово бів Маї бах Бей тлх Сує дей Уві Бук овУу РНе
ЗБ За ЗБ тТук рко 5ек Аво Хі Вів узі сі ТкКроіц бак Ав бі бі Рхо бі аа 35 389
Яви оВап оТук ув ТВс Тк вує Рекс Маї ей Авробек Два ПЗУ Бек о Бпе лах 236; 95 400 бе бец бук Бек Ак рез Тс Уві АвоОо пу бек дк Ткр піп біз б1у
Соя 4. 15 дек хві БПе Бех Су Бет Уві Ме Мів бій Аїа Пеобо Вів Дал оНів Тух 420 425: Зо
Тяжх бів Був Бек Меп Бек цем о бек цем бі Був 435 яв «1» 96 «211» 448 «12 ВЕ «із Синтетична послідовниуств «ках «ва» Ханцидат й, повна довжина віажеЗго ланцююи «асп Зб. зі чаї бій цесів о бая беї ге во З1уУ ву уві був Бі ще бій
Її 5 То 15 тТиг ої дво Мевотня був Аза тте Бех 15 Авробат Уаї веб ТЕ Ат
ЗО
Бех Азїз Ата Тр о сьу тжрої1е дес біт бу реє Сіу Ато щ1Уу Бем 53 зо 42 45
Ткробен біу Ако тів Мія До Ага беж Ппую ТсротТук Ав Аяротух дАігі
З БО таі дек чаї пу бек Аха Ії Тих Т18 Ап орто Ар оТвх бЗвробув Аяй й з 75 У) 12 бле Дек оїну 010 їеуц Аво бек Уві Те Рко со дво оТВг Аза: уаї 85 90 о тУук Тут Суз Аза Ве Кіа Ту Тук о Вко Тук о їву о беїх БРве Азр Уві ТЕр ї00 125 110 піу бій ЗьУу ТЕЖ Ген Уві ТБт Уві бек Бех Аїв Бех Так уз Ду Бо 115 125 ї25 век УНІ ке бхо Пес АТя Бк Сув Бек Ар Беє Те бвеЕ м бат те 135 135 150
Аїа Зіа бе сту сСув пев оУші Су вв тує Ве вто бін Бк Уа оте ї25 5 о І55 ьо чаї пак ТкродЕй сех бу Аза Мел тк Ше біу мах ніз ТЕ Рве бе 165 ї17а 175
Аїа чаї їжи С3В Чає бек о бту реа тую Бех ово бек дек Уаї Мді ТЕ хво 155 150
Уаї Ре Бех бек Бе цем об5ху Тахо Му ТВ Тук ТЕ Суб вп Уві Ав ї55 210 205
Ні бує вхо сек вчп тик Був Уві дво о Бе ДЕ Маї б дек му ук вій : 218 шо біу кос вко Сув Его го Сув Бей діа ркосіа Ре Ген Сі оту ко
ІЗ 239 235 ча
Зак уві вве Сей Бе БКо Бо бу Еко був АвротТНЕ Пец Меє 1Те ЕвЕ 45 ВО в
Акта Так оРжа сла Маї тих Сук Чаї! Уві аї бер Уві бек ій 015 Ав ви 255 та вто біб Уаї ап Ре Аз Тїо тТух Ууді с Авросіу уві бі у нів АВ
ПЕ «8 я йха Був Те ув с вБЕе Аху бій бій ск свле Ав бек ТПЖ тує АкЯ Ма 23 235 за чаї Веб оуві Бей Тахо Уві дез Нів сіб АчроТер ов Авп осі був 615 305 Б 315 320 тТук Був ув с' су: Мал ех Аяп уз бу ей БкО Зах Зак Із (І: Ббуз 323 З 32
ТпЕ ТІВ БЕК ув Ві Бу фу 1 орсо Ако бгч бко бій Уві тТУух ТЕ зай 35 350
Без о РЕЄ жо бек ско тб біцоМев тп Був оАвп сСіп Уаї Бек Бе Тв 35 385 85 сук оїзвч Уві Бук бі вне Тук Бгто бек двр о їїе АТ УВІ Зі тв ої 375 З75 Зо ех ви іму паб Ехо сів овеуя дДаб Тех ув отве Тве сбге Бео Уві сце 385 335 395 00
Авр бас др осту Бех гце с впе цей тує Бах жо пев так таї Двреогув 405 410 315 чес Ага тТхр а шві сСіу вза Уві Рпе дес бух брех Чаї оМмеє Ніж ІВ ху 30
Ма їеп БхЗ Аве Нів оту Ту біб Буя Бек лей Ебт їй Бек цревоб)у 435 14 445 «ув седхря 87 хтітУ 448 «ЕКЗ» Синтетична вобпідовність тех Й хв» Кандидат 5, повна довжина вожкаєе панишююа: «05 87 ап я бій лей бепозій векошім бо сСіу еп УВІ Бу оржее Бех ї З ї9 15
Тнї їм Бех Пейп Твж о Сув Дів тТтє Беж біб Авробеє Уда Бек т Ах т) йв За
Зех дов Аза ткв о шТу тТхр о т1іе Аа ій Зах рхо БІУ Вся суль пей єї
ЗУ 4 45 їж їйех Бу бує Вів Бес тТук вка век Ака Тсв» тує ва АВ ОоТук дія
БИ 5В о
Уві вер оМаі Був бек Аке її: ТНх Ті дДяп о гу АвроїТлк бех ув Вп 25 70 5 во
Сів бе бек обео бій Пез Ав Бех уві Тех Вуб 01 ВвротТнє Вів Ук. за 9
Тук тую сума Аіїа АК НОВ Та о Тук Рис тує їжну дек вне Дяр УВІ ТКЮ тав 155 ТІ іУу піп б1у ТнЕ рен Чаї Тс Уві Беє Бех Ага чех Тк Мув С1У ЕЖе 115 120 155
Зак Уа Бі Рте ей Аза БЕо Су дес Аку бек тек оЗек бій дек ТЕ їй 155 ї14З
КІ Аза їжи бі Сув Кей оУяі Пув одно тую вче обоз Сів рРге Уаї ТКУ 14 ї50 155 150 чаї дек тТкроаві Бек Біу АкКа Бей Ти ех Сі Узі Не жк Рпе го 165 ке ту
Аїа Уві цемоспі: Бе бах спі реб о тук бек їей бек Бех Уаї о уаї ТЕ 189 185 1505
Мав Бо Бех Зах цех Бесббіу тп Гу сне тує ТЕ Су дя хМваі С Ахв 135 га ТРУ нів ев Ро бек дей ТК Опуб Мчі йвроцує Дкб Уві 5іц дек Був тує 210 АВ 2 плу ро Еко сПув о Ржеа вхо Сув БІ АЇа Ре сі Беж ци о пум Я Бжо га 230 3 жо цех чаї рве МЕМ Рре Ре реб уз Бура Був дер тс Бе Ме сте 5ЕЄ
ЗИ 55
Аа тьс Ро бо Уаї ТИЖ Сув уві чаї Уві Авромві БЕ бій 51 ази бо 265 яп вкОо сої Уві бій Впйе Авв отр отТух Маю Авт сіУу таї сплю Маї пів дей -В ви 25
АтТа Гшя ТЕЖ Був Бк Ак сіб січ бій Бре Ав Бес Тк бук дез ві 28о «5 300
Чаї Бех Уві Печ Тк отуві Сец нів іп Впо тхроСей два бі пу СТ зі 1о зів Зо тТук Туя Сув ЦцЦув Уаї Бех Авп цу БІ ім оБжо дек бек І1ве ств пуб 325 50 335
Те ТТе дек Був біз Пух С1у бів Ро Агу 01 Бко пів Уві Тує ТВК 340 345 50 вп Бко го бах зЧіпобію ів Меї бпк Пуз Ада біп Уді бек Іо ТБЕ
Зо 60 3655 дув ївю Уві був Бу Бе с тух Бгто бек Агро їі АІв Уві бій Теробіз аа 375 ЗВО дек дви Сі ій рез 51 два Ав оТук мух ТЕО Тве Бус Рхо Уві Без 385 зо Зах що
АвробЗех АвроСіу Беж Бне Ре рес Тут бек Ага Гецотебе Чаї Аяро був 05 410 415
Зах Агоа тТктобіюв Зій бу Ава Чаї Ге Бех Сув беж Уді Мех пів 1 то щи 430 діа без вв Авй нія Тує ТК бій Був Бех Гей бе Гей Шежх Ба сту 435 480 45 пут «1005 З й «М» 449 «із БВт «рій Синтетична послідовнісТЬ «Ва тий Кавдицати 5, й, 7, Повна довжина важкоро пансюга «4005 58 піпсуві біз пев біпобівз бве о сіу Во з3у ес уві був Ехо бек біп ї й 1 15 тТпко рей оЗек о Бемд Тйх Су лі Ті бек бі Аяр Бех МУаї Бех тик АКа ме 25 | 30
Бех Аїа Кіа МЕ осзлУу Тер Ті ДЕ сія Бех Рко сіу Ах СТУ пев 510 | 40 15 сероїві) бю пед ї1е Тух Меї Акй бес був Тер оТук вп дев тук АВ
З Зо о чаї Зек Уві буз чех АгаЯ Бі ТАЖ Тіе Аз ро Аво о Тк бек Гуз Авіа 65 то ть БО св вна Бек бер осій Бемодем Ззек Уві тТвх Бра бій Аше ТВ АГ Майї 85 З 5
ТУє Тук Суз вів Дт Вів тТпс Ту РжО Туї Бей бак Ре Ар Уді ТЖр їбо т05 110 5зку біпосьіу Так оМцеч Маі ТБ Уа дек бе Дів бек ТБ Пув ББУу Вко 115 та ї28 пек о чаб свй Бто Без оАї- Ро Суз бек Аха бек Твх бех Бій бЗех ТАу 11О0 їаЗБ ї40
Аїв Віа дей Сіу Сув пе Уаї Бу зро тТук РпеоБхо біо) Мго Уві ТНх 145 ї3О їз шо уаї бер Тер о Аби дей пі Аза Бец тах бах Сі Уві Нія ТБ вве БЕЗ 65 ТО Їт75
Аха чай Мем біс Бех бек п1Уу Ме оТух бак їж; бак вк Маї Мей тре 380 185 ї95 уах Рез Бег пак бек бе о1уУ ТЕ Був ТЕ ТуЄ Тк Ср Авй Маї Дер 183 асо ОВ
Ні Був Бхо пек Аза Твж Пуз уві дбропув Деу Уві б3ім бЗеб Буш Тує ох ті» шк біу ВхО хо СувовВко Рис Сув ро Дів оРЕОо 01 ве оПех Бі біу ро авй За -ї5 ха
Хех УВІ о ВвВеа бе) Ве ко Вро Дув Еко Бу в8О Тс пецш Ме Тїе дек 250 «55
АК ТНЖ Вже сіла Ма1 тву Сув Уаї Уукі Уа) дер Уві Бек бло Зі: Ав зей 25 ат го іп суді Бій тре дей Хтротуює уві Ар Бу уаі с01о Ущі Нав. Ава 25. го | 285
Аза Ку ТЕ Бен охо Аку сій зЗіц Сів бле вза Бе ТЕ тую дк Уві -3а 25 ЗО чаї шах Хаі Пем Тр стуаї їй нів сій дар отур се) АВ БІ Був осів зо За 315 2
РУК Пув бує пух уві Же Ав обоз біу збц оре Беж Бек гЩїесоів дев 325 3 355
Твх їі обеЄ Мув дів цув с сі ій РЕЗ пке Бій Бке бій Уві УЖ ТцЕ з45 за 351 їн вхо Рекс бек бів б3а ЄМ Меб тв ов Ап озіп Уаї Зех Пе) Тв 355: Зо Зе8 сув цей уві Ппув біУу Бра остТоує ре ек АБ 'їхе Аїз ЧУаї 510 ТЕрсозіцй 37 3175 З сет Адп зЗіж сшй овКО ій Ав Авпотук о Бук Те ТвВЕ вка сехо Уві Бей
ІА З) За що
Ази бек йвробіу бек о Ре Ре Ппеп оТук бек Ак Пец: ТВх Маі Ашр Був т 515 85 вк го Тр обів біц біу Ап ові Бе бек Стуя Зех Уаї Меб Нів біз го 825 «30
Вів пе Нів Ав» о ніз Тує Тк іп о Кув бек цей дет Бех бет без о біх 135 15 445 був: «ВУ «ві1їж 448 «1 ВНТ «8135 Синтетична послідовньотхь кара» «ей» Кандидат Я, повнї довжина важкого ланцюга «пох 35 біл уві біз ік ів бів бек сі5 Рко біу без уві Був орто бе,т ІВ 1 З 15 ї5 тТвк цей Бех їец тає Суз АтЯ тів бве Сі Дер ве хві Бек бет АВ 2 З збо
Бех АтТа вата Тв о бІУ Тер 112 Акта сій дек вхо бі деко зЗту цей ЗІ
ЗЕ 45 45
Тк цем пі ті Ті бло тах Абу Бех пу Ткр тує Ан оаБОо Тух вів за 55 БО чаї пек уві Був бек дАкщ ї1є ТЕ їтТе Ап орто Аза отв Бет Буд АВ 85 7 78 що біпрка беж реж сл без Ав бек оувїі ТЕ обсте БІ Давотне Атїа Уа ад а
ТУук тую був Аза йка тую Бех ТУК Рро вне Ту бек 118 Ахе» ТУЮ ТК 12 155 І116 сту піп біу ЇНЕ БО Уаї ТЕ аї бЗеб Важ Дія Хек Твк обу Сію вхо 115 ї7о 155
Зекж УщЩі ре Бе Геча Аа Ве сСує бве Лк дек Тк обер сів ЗЕ Те 150 135 140 дів діа Пебосіу Суб ва уаї був Ар оТує ЗВе рео сі) бкхо уаї Тце 145 5 155 155 ові Бет Тхо. Ав спек 5З1Уу Міа ї-ща ТАЄ бек оБфуу Ув) НЕ Таж Ре орга
То5 170 1715
Ві чаї бПес бій беж бБев СІ Бе Тук оЗже зо щшеб бек маї Маї Те їі 185 130
Уві рев пек бпеє бех Сей сіб Тв бує Твх тує ТЕ Сух Ази Уаї Аво ї95 ай ТО. нів Гуях Рго Зег аз Тс бує Уві йвр був духо Узі біб Бех був Тут 216 215 ги піу ке Бро Сув Рис РЕ Су ро Дія РЕе іш Ре Тещфосьу бу Мко ех 8 ай а
Чех уві Бе Пец РНе Руб БгОо був Бко Гув ввр Тих їеви о Мек їі Бес газ о Мене
Ак Лвк о Бко біз Уві ТвгоСув Уві Уді Маі АвроУві Шет б Фіш Аа ко шій Уаі су бе АероТхрю Тук Ма1 Авр о біу Узі бій Уді Вів дв ша 285 285
Аз о цує Твж Гуз Во Асе б3)ій бі» біб Бпе Аяп бежс Те Тую дко Уві 239 295 305
Уві Зег Уві рем ТЬБу Уаі Пем Вів біп Зв; Тер оїей Два обі бу 1 305 315 зі 380
Тук їв Суд муз Уаї Бех Авипобує 01іу цес Бус бет Бех ї18 біз пу
За 330 135
Те їі2 бехс пух дія Був (З1у ість хо Ако Зі Бко біг Чаї Тую ТВб 349 345 | ЗО
Пе ро Ртообеат Бі біз сій Меб оївх Був Ав цій Уві Беж ем отв: 355 350 365
Сув їши 7аї ПУ сіу РНє Тук рРхо бах дер тіе8 вів Маї б ТЕВ сТо 379 378 зно дек ав о с1У 1 БкКе зп АвподапотТук Бу ФК Тато Рхо гха Уаеї пео
За жа. з55 45о
Авр о ввї Авр'осіу Бек ЕНе ЕНЕе їз» Тур век дкЯ бес тик Уві дв гуд 405 1 415 щек Ака Тер сій бій 5іу ва Уа рве век осюя бек уві Меб НЕ БО
Аїа о їви Вів дав Ніз ТУ Твсобіп Гу бех Тез Зах їй бех їжи сту 338 140 5 уз
«китах 100 «2115 449 «ах ВАТ «вУЗх динтетична послюодовність «вед х «геї» Канлидат З, повна довжина важкого панцюгра «пох 1 біп уві біб лез сій Фіп бек бі рро Суу Гео Уві ув Бжо Бек ій 1 З 18 18 тик о їеч бек по тк обуз Аза Т1іє бек бБіу Авр»обак Улі ббк Бек АН о йв зо
Бах Аїя АтТасткЕюр ові То 116 пса біз Зеб те От Ах бі Сех бів
Що 35 тре тей 01у Її Ті біб Ізіє Ако ех бу Тер о Тує два АзроТує Аїд бен опеє чаї був дес Аква ї3е Тк І1е зва РЕОо Аве ТВК Бек буз Аве: 5 ле В Во см о впе бек Бей сій Ген дви бек УВІ стих Бро сло о АвроТвНЕ Аїд Уві дя за зу тує тТук був Аів вка тух пев тТук вто рве Тут Бак Іїе дер тТук Тер
Та м 119 слу ши БУ Таб обец не ток туяї БвтоБеж іа дек їн Му біу РЕб 115. ї8а я зех Маі Ра реж Пец вла Кло Сув о чеж Акч Чак Тк бек сіц Бех ТВ т4о
Та АтТа ії с0іу Су оїва уві пої Бзротук рве ВО біо вхо ба тах 145 ї55 | 155 ІБ чаї шеє ТжроАвіа бек сі дів во Тбт Бек сіб бі Ні ТБЕ ра ро 155 | 17а 175 діа хві рей сій За» бер обпіу цви Тук очЗеб Би бек бек ді УудІ тах зва 185 ї50
Уа всЗ Бак обБег Беє Пецбц дію Та був ТК оте Тк Сувсодзп мні Аво 183 иа 2п5 нів СУ во вк ода Тс обу ув дер Був Бк уаї щіЧ бегобув тує 21 215 роя
Фу хо рт Ста Буб БЕр оСув бе дій Бо Бі ВВЕ ів пі біу рей
Бора - Кх35 й
Бех Мах Ришч Гео вне р» РКО Му РЕ пу Аве Тв їво Мев Те Бех 245 25О 258 захв ТЕ ОБОХ з Уах ТВі ств Уві УВІ Уаї Або Уві дех бій бі Бр
РК сиг уві бі РБае зо Тк о Тук Уві двроску Уві сім УвіУ нія Ай
ПО НО 585
Вів їжа зх пувоВео дже бід біб біл вне дай бетоїйх Тух Аж Уді
Уві Зек уві емо Ти Уві іш Мів біб Авро Тер пед йвп о Б1у цув ба 305 Зо З15 зай тую Був пеує ув Уві баб Ал обув Сім Мей о бхо бек бе Т3Зє 515 Був 395 З 335
ТЕ Їїе деЕ Бу Аів Був біт іа Бус дк біц БЕ біб уві Тукотвю о без о Вхо Рко Бах Сіпобіч БЕ: о Мек тп був дви сбіп уві Бех Беавотвх зва Зв
Су без Уві бує щіу Еде Тук ЕКО ет Ар о ї1їе АХвоУві Зі ТБ ос
Зо 375 Зв бат йва біу бів РЕО Сім Аза дви о тТУуЮК Був ТК ТНЕ Рез рко Уві Гей 85 5 355 с
Авиозек АВ о біУ бек ББе ББев о Пеб тую Зах Ах пем тах Уя«) АвОопує 405 к10 15
Бек дя Тхв о БІЙ БІ: зЗіу дя увазі Рбє ЗеК Суб бек Уві Меє нія 1
420 чея 430 віз їм бів Ав Нівю Тухє ЖК Сів був бек о Пеб бех Цеб бех Бе) о б51У 435 44с 145 пуг «іст и «віх аа «ий РТ «і32» Шинтетична Ппослійовність «ВОМ чаша» Кайдидати З0,ї, ї2, повна довжина важкоко дпазцюга «аб» 101 тів щі бій Мей сій бій Щек сіУ рт БкКУу еп уаї був о ржо беж осв : 5 10 15 тТвт тією ес ївю Три буз АТ із1є бек біт Авю Бек о Уві век бек дей жо я 35
Бет Аха Ахма ТЕ; 515 ТхвБ 1 Вбкз б2іп Беж б ко бу джо діхж Ем ОТ 35 їй І тТхроїву сі тів ТЗМе біп Був вхо бах Бує Їгв оту Ви ап отУуг дід
Бо ав 50 чаї фет УВі пуд бек Ахе їі ТБ їїє Ав орто АзротТах Чек пух Аво щу та В Я щіб Ре бе цеб сій бевойвп Зах Уаї Фах Рко бі ВаБЮ Твх Аїя Уві
В. З 5
Тег ТуксСув Аза Ага Тук Бех Тук Вуо Ра Тут беж ї1125 АзроТух ТКШ 100 то 110 бСіж біпоої1у ТнкоПев Уві ТвВу уві бек Зак Аза Хе ТВ був БТуУ ВКо 115 120 15 дає аз Ева ро цем Аїа Бгто Сув бу Ак бек Тв ех О16 дет НЕ 150 іа 10 ліз діа рез Сіу був о їва Узі Пуд АзвотТую Рпе обро біо бто Уді ТнЕ 159 155 180 ув) Зех Тгр дво бек бІУу дів Пес Та дв сім уві нів Тк о Ріа бу 165 170 іт
Аза ві їеи біп бек Бек Сі ер оТук ех оЇеос Бех Бек Маї Маї ЇНЕ ї130 185 зо
Уаі Ржо Жеїт бек Бех Цей піу Тахо Був ТВ о ТтТук Тдх Суз Азпотаї Адр 135 250 205
Ніж Пув Бго Бек бяц Так оцуз уві Вар ойух йогу Уві сію Еес Тл Тур що зів 290 сім Рко Рко Сув Ртхо Его Сує Бо Аза Рко піч Ейе пед бі біу рес: 335 аа 24О
Зак тТаї вне Бес КМе БшО Еко Пув рРко Му о АБІ ТлЛЕ Тева Меї їіє бах 245 БИ 255 джу тах Ко сок Уві ТБЕ був Уві Звї Уві Авр Уа Бех сій ЗЕ АБО о 255 жо ко біз Уді сід влде сАво Тур Тк о Увж дЕвобьу Мах сію Майї Нав АБ
З во 5
Аїа їв тпрошВув ржхо АкКа сіц б. бій Бе Аа бех ТНг тую Ака ха 53 55 НВ) чаї бек Уаї ей Та Уді Сб) о Бів8 бій йароткробез аби с1уУ Був ВІ 305 310 315 За
Тук Му Сув Буз Уаї бек Аз Повз сіу Бей Рко бек Зах їіесцзій Гу
ЗЕВ 330 Зль
Тих 116 дет ув Аїв буд бій бів Бо акад бів Ро сій уві Тує ТНх 335 345 355 меч Ехо ко бек б3п Їм біс Ме Тогоцуя зо піп уві Бех ев Так 355 з5о 365 суз їжа зі Був З1у Вов о Тухє Бгто бек Бр її Аза та бів Ттросїц,
375 375 зво
Зве Ар оОсІ1 ій Бо іш Аяподав о Тух був Тс Тв Вухо о Бко Мдаі Пе з85 Зо 395 400
Авро беж дво сі Бах Бе Ббе без Тує Вер Атщо інн тах Уві Дерозув 455 418 415 ек ка то осіп іч сіУ дви балі Бве бек Сув бек Уаї Меб ніє 5 «88 155 435 діа цес Нів Двпонів Тук ТВх Сі4 був Бак огев Зех Пез Єву ев пт 435 4 45 пуд «гій 105 ки1їі» 448 «2193 РТ «РІЗ Синтетична послідовність «р» «ва» Кандидати 13,18,15,15-1,А5-8 повна довжина важкаго панцюєе «ва0» 129
Зіа Уаї бїв ї-р бас іп баб біу діа 5153 Уві Пуш Буд о бто ТУ 015 1 й то З дет обео Ку їз пер осСуйє пу сіу Зах обіу Тух Бвт Ве Жвх Авт тує 2 ж КІВ тТхвроуаі Сі Тхр о тУуаї Ах сбідлоМейї рес сіу Пув'є1Ту Бею сій Тер оМає 35 до 4 сі РБе 1їе Ар о Бо бвголяро бек Тує Трт оАяп тує Аа о Вто ет РНЕ о 58 ві дів бій біп Чаї їпу Тіє Яви Алла АвроБувз Пет ІТ1е дек ТЕ діа бук цец за Ттровпек бех мед був Аза бех йвроїйт Віа Меї Тукотук Суб 5 55
Аза Вез біб без Тух їз о біу Тук Меб дер Тк пе Ахробет Тер оту 153 15 зла сів Шіу лих без Чаї Ти Уві Бех Бех бів бек о ТБ цув біт рко Зех 115 т5а 158
Уаї Брпе Бго без Віа Рко Суз Бек бкуобек Тк обех іс бек Так дія їз ІЗВ ї4о
Хіз пев обіу Сув Меп У Муз дер тТух Рре Бгро бід Бго уві Те Уві 145 х5О їБ5 Те
Бетотрройаи ет З1іу Аза їво вк дет СІУу Хаї Нів ТЕ Бе Бко лів бо то ї75
Чаї їтеви бій Звк бак зі Гяо Тух Бек Гей бек бех аї Уві Тих Уві 80 ува 155 то пес бек вве оїва БІі1Уу Тбж Був ТП Тук таж Суд ДЕ Уві Ар НІВ 155 Я; 205 дув с РЕБ дек зви ТАК оПуз Маї Азр ТУ дке У Біб Беж Був Тук піч о У 28 хо РЕО бив рез Ро Суд Бк діа Еш щі) Бе обец о зіу 615 Бра беж 25 23 245 245 чаї ВБе рес: Рре Рко Бо Гу хо БУ ВжЖроТвбе без Ме Її бек Ах 45 БО 255
Тео вро бу Мав осввх Су Маї Уаї Уві Аве Чаї вах біл бій йво Вго
Ф6о 205 27о вій чаї бій реє деп Тгр о Тух Уві ВвробсТу Ма8м З15 Уві Кіз дп А1а внИ 285
Був Те Буш Рго дка бід б15 бій Ва Деми Шех Тс Тух Яга Уві Уві 290 295 зба
Зек Уаі мес Тр Меї без Нів сіб Авротїув бе Аяап біу Бу бо тук зах 316 35 ЗЕ ув Суб оТув УаЗі Бех баз пує б1у Пео о Бко йех бек Іі біз Тує ТВ
355 33 335
Тіз бек о їув Афв Ббуз бзу бій ко дко 233 Рко бів Уві Тук ТВ пей
За 315 зо
Рко Куб бек сіп біо ї31з Мек Тбх о Пує депобій Мі ех їєм Твх Сув
Тен чаї цу 5іу Ве Тух Рко баг Вар Гзє Аза Уа) бі: тТЕробів ех 375 315 350 двпопі; Бій Бко дій Лав Ав Тут пута ТВх Тес Вхо ко Уді рей Аво зя5 Зо 395 4по
Сех дво обіУу бек Ре Рне ге Тух Вест оАкуа Мб отв Уві Ав був беж. де 310 ро вка ттр осі біб; бху Аво Мак Вне Заг о Сув дет маї Мей Ні 15 Ав 420 125 420 їв оНіе Ав обі Тух ТВ біз був бек Пен бех рем обак те Зі» Буд моих 240 45 «віх Т0У «і» «2122 ВЕТ «їй» Синтетична послідовність «СЕ Е 233» М-кінценз лідера послодевність для експресії важких ланцюгів «чи Оу
Ме Аза Тсроуаї Тюо їМПу Тео Ше) Бе Геу Мес Абе АтТа Аівз біду бе і 5 10 15
Тіе біж дів «рІшя 104 «гії 1491 «т1йз ДЕК «213» Синтевична послідовність хво «23» Повна довжина важких лакцютіьк іще Кавлидатаї9вує з лідерною послідовнустю «аци» 104 зушоствучч сасленосев дсбасососу асуссапесоа оссозававутаї ссвазозааи 50 діхинатесоЗ спсвойцедс счсодаданко аадвадоссс чдесопаздауссе зававассває 180 коасавудусв зезпствазе остсясовве бзстоасосад Зссоодсдия соваявцєсе ТВО заовацччис оваасасає чечсовови: спассосачес зсачоввсве сагскасасо я сссвЯексос абоапссазов сассвісздс Чесдасайоя чсврсвасас сзоскассва 30 сазтозіасеа соскочвавує садодасасс ассзтогаєї астосасоса совастуває. 350 тсастієваста басвсвсаве сузовосксо поссалччея ссссезчечас сопгчачлеаи о чцоиссссасов вадасссаксо счпосьесос стадеасесев пЧегослозчад свосксоттао во здрасацево ссстаооско сегодссазу застасоссє осадвассцяв даслосоєою 540 о ЖжЖоацавсссау осчессідвс садозчеосо сдасасссссе садсокеасоск арадсосеосв бою садассспась сесссварас согсоасзасс бсдососпов чсаасессда сасовазаєт й5О гасассобаса зсобаодося савсоссазс авсаосавою содасвачат азбсоцауіте 23 азасаєставс сесосасуссс вассавхзосса сосасосссвод ссуссодудс воссаєсеоле ТВО пЕсстовесс сессвавласс сазазеизсявї стсакцяшев сссоласссс тавоуксасо 840 баооіодіоу бодасссдву сосаодавазес соспасуйсс аосісавосво сдовсоршеве З0о частсасаду сосвтавгще свадаєсвзаз сеодсузЧаче ассацієсва садсасяєво 980 сасебодтсов зсоегостево соуссоєдсас своцчассоде богасодсла одадсасайа 1026 касавоцісь ссаасваада сстлесобес Ессехсзаца ааассабсвкс садацесаза М зозсазпссос даспасссаса зобїорасасс стосососях сосаузасоз чЧасовессвач 1143 дассазотсв сосідассь ссобсоссяза дусоскстаєс сосадосасає сдесосодад 1203 «спосадазчсв зслочовчсс ссвоявсває бзсавчвссв босстсссці дсбадаєтос 1250 чсвопаскоє; тесростсоєв сачеаосоаєста зсезбісцаса зазасацату Чсводачааоч 13595 ваїсіврест сасоссссяЯає дабосасцат депстссеса дссастасає асссвасвос 1380 сстсбеосгосцІ сгсрадатадов 1401 «підж 105 «гаї 1344 «кіс ДК «її» Синтетична послідовкість «кро чи Важкі памцюти Ід. Каниидата зп без лідерної послідовності хаОих 185
Папчсасвос Єазусапасла судсЯссову Чбсвазвасс содуссваяу ссгоаауаюо в зассодсавцеа поачсооаста сачесссовос ааосастюєс хоЗостоЧас пеуотася я 18 спопасвачи посів засос єскс віссивосства чЧоезасваста свссваоствс З дицостачеє» сесвосуссв чзаслассавс вдеЗссдвса всзасазбсвс сасодсосас а пспсосатеула ссвуссо чав ядуссвцеєдас восессатеє аскасодсце сечспалота Зо гассацечсї адсесузЗасваєс зскеуасвсас сосоцссаляу доассстачи дассокоадо 45 зпедетессв ссайацосев аБосотерів ссосстлцедс ссрастсса задевосією 42 зацачевсза софсроссноая почсссоЧес засовевас песссяавсс сесовсодсо ява жепспувави садосссось песседсеас чсспастасе полоуусеоє шесасаціта о ссаисувестеї асстсссстову сзососучЧея всосдоцоесох ссацеачссх дФабсводача бо всстасаосо цезаєсзутача сбасвадосос восвасасов вок пдавсяв падваседял бо ссавасату шстсссссвізЗ сосассатоас безчусасску вудссоссоза содассатосв ТО псеосстасває коссосесава всосааводзо асссссасца бессспесаас сесеслпауге тяй зассслдсоспс саусчаасох садссвоявда пддосеслацеа госастосяла осоастаоцсо я саїодосвос асятчсасав россвадаса звуссусоса зададсазьв саасадевст ВОЮ жассоваеае Бсачсякссї сасссобсосту сессзгяцашт застсвасоє савсчазево Зо зазісчгаадо бсіссавсза водо ссся Бросгссзбся аданазесає сбпссазасоюв 305 завопесадс сосдчазацюєс всваосоасає асосіцевсю сассссачеа чопадасовос ТОНО звацалесасц сбсапсстсас спцестоасес звапоостсь ассссвгусада свтоедопого 114 зачтодоваса ссавсчоуєса дссодацавс авастасавцчца ссаєосохес собчстдоас ЗО стесчасоечоє ссткскусоє совсзосадчо сктазссассо зсвадаасаст збсопсадува 1260 зпозаветої Сбогбевсдесе сасдатчсвое чадусссьос возаєссаскя сасасачлет 1350 адпетссссс сдрссосссуц вав 1345 «10 105 «кт оо «ій РЕТ кеш» Синтетична посльпеваністів си «283» М кінцева дідерна посрішавність див експевоїії лержих панпюсів када» таб
Хе білу Маї ВО стТвж Зій У«і пем бБіУ еп обеб Бей оре ств о беб ТЕ 1 | с 10 ІВ
Вир вів Акщ Су нен «ВІ 17 «тя той «2122 ДНК «її» Синтетична пзслідовність «3205 «г2ах Повиа довжина леткого дамуюта Канлилшата 15 з лідерною лослідсвнустю «а0б» 107 а«уадєчеоо спаєтесвовує автацоасєта обсоастастдт часьстасаца сосаззатує ва часзібвсаца хозессааво соссавчсасс вЕдассуєсв чспьодоасча сеасесдасо 159 аксбасстцсс дсуєсялпосв двасаходас стотасскав согаяевеоса дсадвасойе 180 ччсвачуссо сеавостуєю дассевеоей чосачсеадес сасачаєсся очодсссвоє 280 спєепісвусу здсваосозсає супсвосовос Ебовзесоскуа созссвасва сопоевеавос 00 члаууассвет ссвостасса ссупбазсау дусбвасвсес сгсаоссвевес бссваЧевая ТБ пасассавад содаовьсай чсапасоцво зевасассав стахксквсяє сЕкКсссцосвВ 420 когдаковас забавах соцавосаос восбуксоває чесеасксав сзасЕкобає ВО сосвчацаду созавогася убочааЗЗвя двсовецесо босвааєсоася сеасрсовову 5 чачлачечісв сасаосаула бапсвааучне адсассувса усстсвосваЯ сасессчаєса шо ссцазсазач саздвссвоза данасасвав сбссясьсяє зодаваесво ссаксвезус обо ссовцесоде сесісасааа задесссаво восдсадече 9 Ох «Ей БВ ке11» Бай «вийЗ ДНК «УЗ» Синтвуйчна послідовна сть «РО «3» Йегкий лаквцюрг Канпилата ї5 бБЗаз лідерної поспідовность іпочичається з
ВО; чан ЛВ
Засасссаса сСспасссасач сссседевоб сЕдадедосе асусодасаяа сспсЗсдаєв о звісзссіей дгоссвасов дассапесоє ссасвсстсй себдстасса чевсазцесо 195 часвадоссє севадсвоасе дчавссвсдос ссевасадчео єдсзуаосаа субдвссаче 188 сдсстовцся дезусопчсва соцповссцео сЕСассоКо В Сеавсацевну ссгдовусиє гай забцаєкевоа солескасть сбоссвосва посавсвссе Єдадесвове сек есВа ой ззсассавчу судеувтсяава ссотаєссва чесосвесає сто кЕсає весосссося 360 сстаазсааао ассовзнаєс бозааекуютє обоє тУуюае оссптуєстда свассєосає лей зссачацвуц сбезачеасв чеЕсуавасс о пдасвасосюсс Бебавзкоссяц сапаствсвац ТВО часезчсухєса сасдвосвоача садсвачиес «чбасопаса десісачсвая сасбсбоавою 540 ссчЧачцсвнах сасассасов даавсбасава чествоедест додзацчесве осатовеоате еоо сісацексас сеосенсвах дачессюсває зазоцачаєче се | І вай «Ей 05 «ЯТЬ сети» Ват с2пу3х Синтетична послідовно се «2235 Змішана послідовність БОПВІ Кзнайнаті 15, 15-11, 1555, 1-3, 5-4, 1-5, 15-65, ЕБ-8 «ад 158
Вже діа бах біз де ІІ1є 51у пев тує Беш Аїа ії їх 1 «ета» ва и 7 ста ЕТ «213» Синтетична послідовність «9202 «аа» Берк кандилатів 15, 1551 15-58 «апйж
Ма діа бет бер рес пін дах ї в ха . «їй 111 «й 15 «хаїт ЕТ «Рі» Синтетична пеоспьпевність хай «ша Змішана послідевність МНСОКі Кавшшядатів 15, В-1, 5-4, 1-7, ЇВ-Я хаепих 111
ВЕУ Тук беї Рада трі Аа о ТУуК Тер Уа ЗДУ 1 5 то «си «и ї7 «ти ВТ «різ синтетична побнвдовністе потіти нен люлі які: КРД туйзиетьві прут меві. МУК вись пани 75 щи 8 ї ти. я ще «ва» Змішана послідавнзсть БСОКО Канвшидатів 15, 15-55, Бе, ВА, долю НВ «пп и
РФ о ї1е Ав о ржОУ Ззет АвБЮ Зех Тут ТИК Ав ТУЮ Аа Еко бек бе ій ї й 45 І оту квар 113
СОН
«ах ЕТ «гід Синжетична песнідовністів «еру кхрІаЗ» Змішвна послідовність ОСОБУ Камшядатів 15, ї5-ї Мл-а капс 13 піт бак чу вв лат бе) вет тТУх тп ї я «ЕТ» 18 «дії 17 «и ВИТ сті3з Сунтетична посліцовність «вав НОобне Кандипатів 15-55 «ап 14
Акч 116 йвю рЕФ бек Азр о бек Ту Сх Ав оту Аза Ре» бЗех рне Фів 1 5 То 15 зку жі ХІ5
І ТО
«рам вит «13 Сидтетична песлідесвнЕсть й яв ч«ишая Сапа завтев 15-95 Сов
«00» 118
З)іу тук бет Рре стик оАВи Туко жур лів У м Н с во я -Ж Ал 2103 115 «и й сЕї12з ВЕ «185 пинтетична посбсліпойвність «ЕМ ря» Свлоаковсве ва-3, а-5, 15-55, 15-5 МОП, «ч00У ТІ сту Тук щех Бе ТЕ Ав Тух Тхр тів Бек «м 5 о жук Кн» «ех 17 шві ії7 «оз РВТ «тій» сСевтєтична ПпПослідОонмість «оце «дв Саргсзаясва 15-54 НОСОВІ «асп 117 пе ЛІ12 дар ко Бех Авр озшЕ туї Тцх Аза стує зех рхо де Ба сія 1 5 То 15 пі зум у, те 1: чеїй 118 .
Фр крах вт «вій сризтетична послідовність «й «ай Сипійаееяа 1-3, 1-5 НОВАХ «АП» 118 ли ба аву Бжхо Зерозвробах Тук ЖИх вип Тутс век Бро ЖХет реессти с їі е хї ії «а 1 Во
Гу «ик ІЗ «ЕМ Ай «г12к Ву «й|жУ Синтетизна песлідесвність чих «из папазавевв п-ж, 1-5 НСКУ ква» 118 йта Акта пЬб рей тую Сік сБу ТЕ Мес йзр отих БКе дев Зеє 1 5 18 са Уго «в1їх 11 р1йх вит «иа Сивевелаячиа пос лю сан «Ех «вих Сапозіачартев ф-т ОВК «адм 18
Ага Ата Зак бій Зек сів БетоЗею Тук Пец йіж 1 5 10 «210 191 «вії» 1 «Ем ЕКЕ «1» Синмеетинснна послідавмісте «ЙО» сова» бапоуаакев 15-88 СВІ «З» 121
Яку Аїа Бек Бій бек Пе ЩіУ їм Туг Пен АБп 1 В 19 «вій» де «вія 107 . ати РІК «23» Синтетична поспілевність І сок «раз» Папдідаєев 15-77 М, «ів 122
М-е т1іє Щі о Меє Тв бій беж Бко бер бжу їні Бек йіз беж уаї Бу ї Ка 10 ї5 ар аку хаії Тк оліє ТВЕ Суд вуха Лія бех біб бок (Зі бес бех бук ва 25 0 їви Аза ТЕр тую біб біп Був Бюс бу МВ Ага ее Бу без бен їхе
Ве о 45
Тук Аїа Аза Чер Чеб іш обіп бек сіу Мах Рхо Яєв Всц Бе Бех 61 50 55 о тек пі Бек 1 Тк Азюо Бце тих спец тиж Тіє бех бей Цеви БМ Стухз в та 7 Во піз АжвоРчпе Аів тт тую тує Ста бу сіб пу бай ТК оЇїез Шех Тех зо щу твк о рпе Біу ЇВ шлу ТБу Був ові шій їЛе Тух їпО 125 «Во» 193 «11 107 «12» ват «1 синте тиеми посліловністьв з «280» «923» Салаїзаєей 15-89 У «апо» га йвр. 118 біп Меботвьк біповек Бре Беробех Бей бФех Віа Беж Маі біду ї 5 18 15
Авробха чаї Тре ЇХе ТНК оСбує ко Аза бек біп бек ті бі їви Тук 2 25 ло
Бей Аза Тгротую сбіпобіп пу хо б1у Був Аза вхо Гуя Бей бе 1Іе:
З СУ а
Тук Аз Аза Ввкоцек їв бій деко оту Уві Рке Шек Ако би Бех СЬУ що 55 во г рушення Ек ва - ва її т Зги пд тіла ць
Пекобіу веб біу Те Авор Бне ТАЖ Пей тт І1із бек Бех Бе; пл бко
БЕ т Та я зма АВрорпе Аїа тк Тух Тук о сСуз Оз) ому сіу йбап ТЕ без Бех Туг
За Зо 25
Ї сах шк хх мощі ст сн Ж,
Тих тла ші бій іу ТИХ був Ма1ї бло Тез рув 159 то5 киїбМ ТУЯ суку ях «Із 12 «св ВК «Віз» Синтетична послідовність пики, аж у дтулутв ся з куди ЖАХ «сива» сатаксвсев кр СУВ кад» іа ще ні з : . щ р щ щч - , шо лях с й й али я виш Уві пів рей Уа) бід бек осі Аа бій Уві був Був Ргообіу бБігч ї З 10 15
Бек о»ей пу Гі бет був нує бі беж біт Тух Бех Ре ТйхХ Авт ух о п 30
ТЕр Увь сьу Тр Уві йкЯ біб Ме ка 5іМ йув З1у Мей бій тТув Ме 35 а «5
Стус Ага ї1ів бно Бко бек Акю Бет ТУую ТйкоАно Тух Аїа Вто беж спе 5 ГТ
Ме ї" р. у То З ду кот йо ШИН ж Ж - т, що би по ву ЗІп Уаї Тех Ті бе ов зо ВУЗ зак їБе Зак тп од ТУ 53 72 Ота а
З З 5 що їви бів ТЕЮ Бегобет їей Був йіз бек Ар ТНЕ Аза оМех тую Тут Суб ях 95 ВУ діа вх біс лей Тук бій бік Тук Мек Аве о ТвЕ БНе Азов бек Тхр Щ1У 100 105 115
Ох их сиру ж щі БО имя оч яп ошіу тт о їєнь Уві ТОЇ Улі зеї ее 115 ї2о сах 195 «вії ій сх лах хеїЙж РВАТ «413» дивтетична послілавність
ЧО» кава» спа ійзіє їв-8 УК «апоз 15 т то я сот з т ря ТА КА тля ром отже Дня еліт
Бій Уві біп зевоуах бів бет бі Вів сій Уді Був Був Бжо шіу ші і 5 15 ї5
Хеє рес о Ппуя їТіє бек пуб Був П1іу Зех бі Тук Бак де ТБо бе Тух дО В а
Ткр о тіє щіу Тгв оМаїі Аго біт Меж Буо спЕуУу бу щі» цер ЗімМ о ТЕр Ме о 5
Зі Бпе Пе вве РКО беж йво бек отук ТАК Ява Тук діа Бжо дес ге
ЗО ЗЕ ва 3 1 їх пік А це ся нь бот тукро б ж ії тр де Те тек
За су сіл УВУ ТЬХ ЗїХе зах Аха Вар опе пек ГІе пек Теж АТвВ Ту
Бо 7 7 о пі пе Є ї Тед о ПОЗ о туз Мо пр до но ен УХ Ша бех осів їв бек вак бєю Буя пів бек вро ТЕ дів Мет Тух Ту су
ЗЕ чо з5 діа йжб сів їх тує бій біУу ТУ МеЄб Авр Тих Бе дво бежт Тр осі з 18 1 що 155 ьо ту ти, пом що т. тю ЛЮ аудіо ЖЖ, патоку Тв Гешф маїф Трт Маї шеж ек
115 12о «102 їва й «81їх 19 сеї» ЕТ «2135 Скнитетизна песпідсовність се «жа» Сапоіїзасе 1-5 Ук «ап БЕ стц Уа! Зій їєш Уа. спій бек оту Дід б) Уді руд бук Вуо 021У 61 1 2 хо її ви Кен був ІТТЄ Бех був уз Сіу вах сі тує век реє ТУ Ави стук 20 да ЗО
ТІВ 116 зЗек тк хі дру Зі Ме Рко зі Був осіб пе» СЮ те Мер 35 40 45
Биу БВ Тіє Аяр оБус ек Дар обек Тух Тит дев ОКУух Іа ро Бех ВВЕ
Зо в: во
Сів бьу Біб ув. ТМ Ті шеК Аїз др Був йей їбе бек по вва ту 55 та те щи
Мезмо бі Тебробек йеє цей Був тя бак Аве о тйт йіа МЕС Тех ТуУукК був йіа дк Сіб пер тут О1п о сіу тТУК Меї Азов оТтво бмче Ащробеє ТЕВБ СТУ 190 135 150 ій Біб лве беб уві тех уаї ек Бе ї15 155
Ел и? киЇЕ Ти «ши РЕТ «ей синтетична посвідасвніств 200 «82 Сатпордтяе 9-4 МВ «ад 157 сім Уві біт ей Уві бів Бех сіє дів піб Уа! Бу був Кко БУ СТ їх 5 Ід їх
Зех дей о Буз іі1і« беж Суд пує біу бек біу Тук беж ВБЕ ТНК длй ук о 25 за
Ттв Уяі с1у їкт Уві Ага бхпомеб рго б1іу Бу бі Бец 5: Тк Мех «0 15 сту вра Т1е аву ка бе йвробек Тує Так Ав оТУю дек о Рко бек Не ко 5 ва сіпобкж Не ай Тве Ті Жек Дт АевроПпув дет їі Бек ТВ Абя о ТУг 85 та Ов до їм обіп о ТгробЗех бак ої був Аза Бек Азр Твх АТ ОМеб Тук о Тук сСув 5 зу зЗ5
Віа Акоа Бім ден тує іп о зі1у Тух мех дав ТЕ ЕпПе йярошет тТЕроСту
І Її 119 бум ау Таб їжм хмаї Тис чаї бет беЕх І 115 Т20 «10 128 «ої1і8 Мої «е8т2» РЕ «Ід сСимтетишка посліковність «28» сгеЗ» сапоіЗате ї5-5 У
«пи 198
Сіш Уві сСьп обер Уві бів бар обіу Азаббіцо Уяі пУую Буй Во 01У БІ ї ту 16 15
Яех їеи Му їі бегоСув Гув 51у Зах біу тБТух бек Епе Тк АвпоТУє о 28 зо
ТЕр Пі дес ТероУдї Дхо сіл Мет Рхо бі Був слу Беу іє Ттр Ммеє
Зх 3 а піу Аж її Авробто БЕ АвБвоЗех гТУуЄ ТлЕ двз тує Бак РІє беж Бе що біз сту Нів Маї ТвЕ їЗ3е Бех Аїв Ввр пу Зах Ті бе ТВ Абе отТук 55 то 7 ху о ви сій ТЕб бек Беу їев Був Аїа бек дЕр тних Але Меб Ту Ту Сув
За що 35
Аіїз вк За рез тТук сій сіу Ту Мах двроїТнж БНе двЕ Бет їх бі 150 КО о
Сія сіу Твж о йво мя) ТНК Уеї Ве Жвж 115 1285 «я 175 рії 181 «21Ш2 РЕЖ «и» Сузітякирчна: послідовність ех «риа» Сзиаідчаєе 15-6 ОВ «ай» 1955 пів Уві бій Пен Уві бів бек біу Дія біб узі ру був ко опіу БІ 1 Но їз ї5 бБеє пер отув Тів Дек бує Пув 819 Беу біу ТуУух Вау Бе Тйт двпо Тех о 2 30
Тжр їі бек Ткероуаї Ахо біл Меб вхо 03у Був о сіу ев ра тку Меє
За СЯ Ен
Фіу бе ІТ Авшр о бхо ек Азр о бех Тук Тож дап тує діа Рус пет Ру
За тес 0 бів піу іп чаї Тву Іїа Зех Аза Аяр Був Яжк 11з дес Тк о Аїа Тут 5Е Ко; 775 ер ша Сію ЇКробер век отец Був Хва бех Аври о ТВе діа Має Тур Тут обСув
Яїа Ас З) во Тук біп бі Тук Меб Ав Тих рБе Дю пек Тлв І "ой 105 110 кіп обіу Тпх о їею баї Тех Уа) беж щег 315 12 «2105 тай «2115 445 «ех вих «віз Синтетична послідовна сте «Ех сигйз Кандидат 15-3, поОвма довжина важеото ланцюга «400» 13) піч Ма) піп їв уаї біп бек бїу Дів бр; Уа) Куй пув Бо ПІУу 01 1 5 жо 15
ЖХвк оїве був їі беж був пув йіу Бах Біу Тух Век о ББе Ту Ада тує ко й 3 ткр Маї Сіу бюро уві Ат бій Мес бео біу був Зіу беб щі Ткр о Меє 5 жо 5 пу да ліве Авробкос пек однро дек Тк Те вжи Тук Аїд РЕс Бех Бе
Б 55 5 дій сіу сій ба1ї ТАК ОІтїе Бег діз дер пуб бег їів бек Тк дів Тук теп сії» ТхйЯ бек Бек ей Був Аа бесб одер Твс Аїа Меї ТукоТук Суд
Зо ЗУ
Вів дАке бій Бен Тук бій п1у Тує Меї АвроТвх Бпе вер Бех Ткробіу 100 І05 119 піп бБіу ТЕ То) Май Те Маії бет бер Для ет Тах Туя біу го беж 115 ї5О та
Уві Ве Ро Бем о Діа Рхо Сув дех Лрд обех ТВЕ бек бію бек отпс Дів 146 155 їй
Аіа Тенц Зіх Суворец Маї пув бвроТує Ра бух бій хо уаї Твроуаї 145 ї50 155 о
Шежх тТуройви дек ту Ві їву Тв Бех біу Чах Нів ТК Ве Веоодія ее) ї7о 175
Укі Геєс сій бек беє 5Зку іївм Тут дек іїя-и Зех Яр Уа) Уді Таж Уеї шо І35 ї5 -
Кко бек бек бах во спі лак бує ТВ отбук ТЕ Суз Аво Уді Вероні із5 ВОЮ кВ уз Рус Зек АБпоТнуг Був Уві Дер пу Асо 781 бід Бех Гуз Ту СТУ їй 218 22
Рта Вухо Схмв Сто Рко Суз бо дів хе піс Дів дія бу біу Буб йеж 230 235. 240 ! уві Вре ей где го бі ув Бхє Був дзор ТЕ пес Мер о ЇЇ ЗЄЄ бго гай що іо
ТвкЕ рко бі» Уві Твж Сув Уві Узі Уа) дев оУаі бек бій біз Аве Рез іш Маї бій Бе бза ТхротТух уУаї Вер біу чаї Біб Маї Ніж пп Дія 27 285 285
Був Тьє Був Рко дк біс бти біпоБпе дяп бек Тох Тек дко баї Ма й яз БІО цех УМа1 Без Те Уві Сей нів біп блю ТкроПей Аво сту вуз сіб стує
ЗОВ 315 з15 385
Був Суя був уві ех Азп обу біу Ге БХо бес Зех їі 1й Шу ТЕ 435 235
Іїе бег цуз Діта Бу біу Чіп о бко Ду діа Бгто 1 Маї Жук Тк Сеу зей ЗІ зво
Про бо Веб обі бів бій Меє Тву Муя Аво біл Уаї бек ши Льж Сув 355 то Та5 їец узі бує Ту Ве Тую Ро беж Дюр о ї1їе Аїв Таї біц Ткр біз Бех два сіум сла Вко бі Ава Дело отукК Су ТАК ОТЖЕ Во Буро Маї Цей дер
ЗВ 350 З СІ
Зек Авю 5Ту бек РБе где ем Тух бей Ако їсю ТОЖ Маї Дер бух Зк 205 «15 15
Ага Ттро бів бій б'іу АвроУаї бле бех Сув дет Уді Мею Ніа бій Від цес; Вів дап о нів ТУЮ Тех пів Пуз Щек це) беж Сей бек о Грец Сім був 432 що 445
Феї 15 -йКї5 448 «ги» ВТ «035 Сивтетизна посведовнаісюь каре «ТйЯ» Кандийпат ід-у, повна довжима важксто панцюера «я 151 шіц маа ситі зей ува) бів век обсіу Аїв бів Маї пу о Мущ о Вко спім ід 1 х ща 15 бек обер був Ї1є бек Сув Без Сіу беж бі» Туд век ВКе То Ай тТук тво оїтїв о 21у ТкроУві дез бі Меї Бк с1у Був ос у Депо СП. Ту МЕ.
сіу бе Іі Дер Ро Яес йороЗех Тк Тс дей Тук лій кб Я РОЄ 50 35 8 сів біф сіп Уві Тв 16 Зех Дів д5б був Же Т1і8 Веб тТнУ дія тук 55 Зх 5 ВИ
Бей бій тТжроБет Зеї рез Буз дів Бех А ТВ Азїз Мес ТУук ТУуг Су у зо 5
А18 Ак бі пе) Тук шків що Тук Мек двротТвЕ бе дввоЗех ткрозіх шо 105 начй
СізоЗіУу ТЕ їшц Уві ТВ Уві бек Беж Аза бее Твх був сіу БкО дек
Ух Ти 125
Чаї гЗе роз ей іа КО сСув Бах Вко бБеш ТК бек бік бер ТнЕ Від 130 135 140 лів їв пі був Бей оуаі Був одвроХую РКе Рій паї ко Заї ТАХ Уві їжв ї53 І55 150
ЗежЖ Трр ода бек зіУ Ада цей Тех деко о5ЗіУ Уві Нів тв Ве рез ба 155 І їі іт
Уві блюз сін Бех щек Су їм ту беї це) бех бек Уві ма тв уд їа 85 ї59 вхо о шЕХ щей Ов без оту ТИЖ Був тик о їУух тТпе оСув дБоб Ма1 Дах НЕ ї95 200 уІву див го беж баб Те зу Уві ДЗ Гуз Ак Уві бій Бек Був Тую шу 2Ій їх яна вЕо ре Су РБгро ска Сув Рто АТв кра обі віз Аіа зі Бу бу вер 225 20 35 | М)
Уаї ВпЕ Бей ВБвоРко Рео був Рез був АврБОотТАК цем МЕеї їїеа Ббег Аа 250 я
ТпЕ Еко осів уУеї тих Сув Чеї Уві УзУ ввю а оЗек Я БІВ дво обо ав го о
Зій уУвь бій Ре два Тов Ту чаї АЮ сі 081 сій Уві Піх дай Дів і БО 5
БУ Так Був Рис дк Зім сій ІВ Ве Аврпобек так оту юку уві чаї 2 255 за беж Уві Бей Яче Маї Бей Ново со Аню Торо Бей дви Сі ув БІО тує
БЖ ще АБ зро
Був Був вуз Мах беж Ап зув'шіу їй БЕЗ бек пек 118 бів Буш ТЕ
Зах 330 З3а
Тв о'лек був Аза ув бу ій Ре Ак оз; вхо бі маї Тух ТВх Га лад 345 зо ка РКО дек сій пім пі; Меб тв оує йвй іп Уаї Зву а Тк Су 355 ко 355 їевоМаї був бім вне Тек о Бко бек Квр її діа Уаї сів тТЕв обі) бек 375 375 зо
АБМ біх підп Бер БІО Ава дао ТУужЖ пу ТНЖ три рРко сто Ув) їй АБО 385 335 зве 400
Чек о Авр обіу ек Ра Впе це) Тк бек дк Два Тв Уві дер бує ех 95 р 415 йха лко пів бій бі Вдала оУа! Бе бек» будо бек уяї Меї Нів бін дід ря) вив АЗо
Бешц Нів АБ нів Тук Тих бій був пек Бебп бек бе бех ее ЗЕу Був 435 148 аз: «2105 52 - «ВЕ 448 «але еВ «233» Синветична пайпідовність «ех свй» Кандидат ї13-3, сована пеовжина вежкого паноюга «00» 132 бів Уві сія їж тві Ів пеж бі АТ бл УВЬ бу Був Кк бі буз ї З хо ХВ жет Гез пу Т1е Бех Сув Був Бі беї БІїу Тук ех Рие ТЕ два ТУує 2 25 3 тюків бек Тур Уві вгу діа Ме ро 515 Бу шу Те ОЇ Тхро Ме 35 49 4 зве Ера тів йо бко бек дз Сех ТУук ТЕ Дей тТук йіїв ЕКО беї КНЦе 0 5 Гог: піп обім бів УвЬ ТАК о тіЄє зе АїБ АБро був бек сів Бек Твк лів Тух 5-3 ТК й 75 яп тей бій Ттродак єв Пе) був Ліза бет АБр оїфх АТа Меї Тух Тук був 55 зо 5 дів ка сію Мех тук ств о бзМ тТУукоМес АвБротє Бе Ав беж Ттроохту 195 195 110 бавопьу ТАк о Гевз ах Твх Уаї 5БУ ето дів Бек ТИЖ Був бур овБсо СЕК
Шо 120 125 баї рве рко Мей) Азіа Еко був дек Ак бек ТК бек Сів бес ТБІ лів 130 ІЗ5 145 діа лей б1у Су їво УВІ фу ДероТюе бе Ркоо бій Вхо Маї тих таї 145 що 150 155 169
Беж Тгв о Авп бек о віу вАсга гео те бвке о бО1у Маї Ніж Тьх Бе бро А1а 1655 170 Мк чеї їн осів ех бек о п1У Бейотук бек оїен беж беї Уві Зві Тат Уві 185 їн5 155
Бо Беж беї Беж іа бІ1Уу ТЕ їу8 ТВ ОтТує Тк Су бай уві Авронів 195 0 295
Бу Бо ех АВМ ОТАх Бук чаї Авробув тд Уві Бо век ПУ ТУЄ БЕ вв 215 І 220 тро вто був Без хо Су БхО лій Рус піз дів Азїаощіу бі Рута ес й 23 255 иа дві Вп Ме КНЄ Бо СЕхО пу РО Був АБО ТНК безпо Ме Ті Єви ДАЄ ди аа шуй
ТВЕ вхо о бма Уа тк СУ Уві чаї Уві Аве» мав бе бай са Аз го 255 ЕВ то піз маї сіб Ре деб о тто ТтТух Уві вер ої У Обі. та Мі Дело лід був Тих уз Вжа одка ОМ лїо бій Ве саАви бек ТЕ оту Ака Уві чаї 283 255 00
Весочаї ре тик Уві Без Ніз бію с дев Трої; дян оІі ре СТ рук 305 Зо 315 Зк
Був сту Був Уві деж дей ГСув бі Бер ро бак бек Ті біз Буш ТБЕ
За 3У 45
ТІ Зех Був АЇа буд йпіу бій Рхо йго піч оРко бір Уві Тук ТВ без
БЕ 345 Зо тка Рхб Бех бів бій бів Меб Таж цУуз дал обіп баї бех Бео тТве Суд 355 зво ЗБЕ і-ььі Мал був сіу РН ТУ Бо бат Ар І118 Віа Уві січ Тер Бі; БВ 370 375 зно
Адп осі біп о Вго Бін оАбвп йза тує Псуз ЛЬх тТвх о вто Рхо Ул Пей Деу 385 390 355 400
Яех йзробху бах Реве оБре Ти ТУх бек дк ївм ТБк Уві Дар іде БЕК
Я чї5
Дт тЕр біб біб біт Авй Уві РН ВЕУ Сув Бех УаІі Мер Мія бію ді
Тез нів АвБл Нів Жук ТвЗж біл Гу Бех їз о бек Бе бек теза О1їу був 135 я 445 ех 133 «вії» «4 «218» РК хЕ1ї» Синтетична прслідавніусть «ле» «3» Кандидат 1п-4, повка ловжива важкесо ладнюхка
«боз 133
Сів мас сло їй Маї (Іа Бек СТУ Акта біз Уві пт Бук овВте бБіУ 1 3 В та ТБ
Зек ей Муз Г1є Бех Суз пуб С1у Бек ЗІКу Тук бек Рка тик Ав тує о 25 За тжр ві сім Тер Уві Ася біб Мех Бхо піу Пув Сію їех сі Тур Меє 33 43 45
Чім бе 112 Аво Бо бек дар о бет Ту Тйх Ав чо Тух бетх РКО Чет Ре бів бі Нів Уві Те їЗе бес діа Авроїую Чех ї1- Яву ТЯ» о АТа Тук
БО Ко Та во їм біб Тгр Бех бек цем цуз дів бек Дар Тис й1ід Мев Тує Тух Сув но 0 я діа вВгу біб Теш тТук о Зіа бі Тукю Мес АвротТвк Ббе Авробек Тгробіх ї10о 105 й біт сі їх рес Уві Твх Уві бех Бек діа бек ТбЕ ру біу бхо Беє 115 150 їх
Уві ВБе Вухо Ген оДіа Бгто Сув Вер о Аку Зах Тк оЖех із Веб Лю Вів 132 135 149 дів ім біх Сув Гей Ммаї Муз дер тую Ре Бко сій Рис Маї Твт Уа 145 15 155 ї51
ЯЖетобтроАвоо бек о біу Аіа бе) ТНК о бех біу Уві Нав Тек Бе Бро Вів 155 їто 175
Чаї бен біп дет оЯекобіу ї2у Тук бек о їву бех бек о баї Уді ТргоУг1 ї80 ТЯ 18
Еко бат бе Бек рем ПіІУу Тпх Був Тих Тук Тк Сув Ав Уві Арон 135 ви 255 пув вто Бек Ав» ТВх Був Маї Дер Був Ажос уві сіб бег пу Тук бу 218 215 | заб
Еко Вхо Сув Ро Рко Сув Рко Аїв бро біб: Аїа Аіа біу бі Вис ех 225 230 235 2439
Уаї Ве пев ре рго Руб пу бсз Му бю Тл без Ме о Т1і дек го трх о Вжо біз Маї Таж Суд уяі Уеь Маї АЗор чаї дак бів бід дво вк 260 265 да бів Ха» біп о РАс даго тя» ТУук Маї Ав обту Уві біз Маї Ні АвпоАга шВ БНО ев їша Тк ому Ро Аксос)я бі сл Бе Авт бБех тат Те Акад Узі уд 20 Я : ЗО вк Чаї Їецз Тьвк Маї Без НЕаз біпоАвроТЕр опем Аяпобіу був Бій Тук 305 19 315 З
Був Сув був Уаї бек й о цув біу еп Бо Бех бек 115.01 пук ТИХ 355 30 335
Її бах Був діа цу Ту бій Рко ба Сі со біпоуай Тує Твях Бей їжбо вхо пек бів бів опію Меї Так о Пув Ав СЯЄ УВІ бек ем Твт Сув 355 зБО ЗБ
Без Уа був о спіу Бде Тук сво Бак Дир їі АТа Уві сіц Тер біс Беж азу 375 зво
Ар осіУ Сів гео 100 Ана Азп Тух обБуз ТИХ ТрЕСБЕС Рко Увї Гео пер 385 330 за 109 бЕхїх зв о біу жшек ре Бле рей Тух бексАдка Пес Тпх Уві) АвроїПув Бех 519 415
Ак Тер Суп біб бі Ваза оМаї Рбе бек Сує бек Уві Мес Нів 010 Аза 450 425 430 цев о Нія Ав Дів Тут ТВ біл обу Жес ей Явек бецобек Пец обі був «рій 334 «2112» «45 «212» РЕТ
ЗІ» Синтетична побспідовність
«ЕР» «ваз» Кандидат 153-5, повна довжина важко ланиюга -аооах ТА піз уві бів Пезб о Маї біп беж біб Віа біз Уві ГБ Бое Бе Бу декобей Був Те Бек Сув пу ос1у беж о сСьу Тух бех Ре ТТН бепотуг 3
ТЕр тів бес Ткр Маї вка рій Меб обко СІу Стув СТУ Бей обем Тер МЕС 33 ЕН 5 сіУу вра Її лДеробко БІ Мвробех Тук тТнж Ай тТук БОБ Кс) Зак оРнЄ
БИ 55. о св сі Ні Уві тТьк їз бек Аза Ав опдув бе т11е бек тн Аа ТУує а КК) Те во
Пе сія Теробех Зеаї Тебовув Ав дес дДвротах Аза Меб тую Тук Сук 85 0 З: щіа Ага БІ) Гео тук сіпобау Тук Мей Азо Так ре Аврошех тТжр ТУ тои ТЕ 15
Сігпробію тв о Бес Маї ТНт Уві Бех Же вів век ТЕБЕ бух блу Рко ще 115 ї2а 125
Так бе Бео рес Аа Бо су дес бра яек ТЕ бек Іа бек тТпх Аа ліз Пе) Біт Сук Бей Уві Пув дже тує Ре ржо сь же УдІ Тк уд їх5 155 Вес: Те ак Тер Аз бех 20ІуУ Віа бе: Так беж діу Чаї Нів Таб Бре БЕЗ іа ї65 Мо 75 ча ївиа Ср сВек век 5Їу пе) Тук ощек їй бес Бех тат ві бах Уві тво 1п5 що
БЕЄ Бех бек бех тех су ТВ МУЗ ТЕ Тух ТЕХ Су Аа був) АЗронів. 185 дою 208
Був ВЕ бЗет дев тп Пух Уві Авробуз Ага Уві біб Бек Ге Тут б2У 210 гій 20
Ту Без о Суя Руб Веб Су обко Аза рке сі: ліа Аіа с сфу БТу Бко Зех вав 230 35 246 чаю Ре бео; вве Рко вко груд Рхо був дво о ЗпЕ Бей Ме діє зе АКу
У а 05
Тве орг сів Уві Так Сук чаї узі Уві Вер Уяі бек сіпо СТО Авр Бгто
БО па та біз уві бій Ре дви Ткротук Уа Ави бі Уаї бі Уаї НОВ о АвВо о АЛа
Буш ТЕ пу жа вх бій сів ай Бпе дей бек Так тує Акоа мМаї Уві
В жа 35 зак Уак ес Тек Уві ей нів сія дво То ев Адоа сім був ско ТУ 305 ЗИ Мо зо
Бук пу пуд омМаї декомат му Оу Бей рЕо сек Зак Тв о біу ув ТЕ і 328 330 335 діє вик дує Вів дув льУу ОїпоБха Ак Сабо оРко баб оУувВІ Бух о тТвх ви 34 345 355
Еко РкЕс Бех сбіп біз бі Ме Тахо бує дам чів ув дек їв Те ув ви мах пух Сі Ве ТУК о БЕОо бек БЮ Гіє віз МУК зро Ткгр біш Бек
Зла 375 зво
Ал обіУу Суп орто біб ввБлоАвап Тує Був ТВ Твх Веб Вкс о уаї бес Ар зва за 95 ща
Зетг Аве Сіу ек ве БЯв їва Тук бек Ак їви ТК Уві двору Вес
ОЕ АТО їв кс їжхр» ств бі:5 сту вла Уві Ве дек Сук Бех Уві МеБонія сУБС'АТА як пе. 335 пес» піз Аза ній тТух Тих п)ій був хек беїт Ббетс Пец Бек щем бум Був 435 4 345 хат» 135
«о115 48 І «12 ВАТ «9213» Синтетична послідовність «Фа» «й» Хавдидат 15-65, позна довжина важкове ланцюєа «Апож 135 піс маї сіб без ув) піз Зех біу Аза сів уві рух ув бкс сім 51 ї й ті 15
Зек Кеш оЗзув Т1іе Зако СУБ ПУуш СіУу ваг опіу ТМх йеє Ріта дру Адпотую ке р 3а
Тер рів Зак Ткр ові Ага бів Мекорсо біу був Сію рем Бі ТероМех за 4 45 сіб ие Тіє Аврора бег оДвробает Ту Трт. Вап Тук вів: рус цес лне о
Зіп іу біп Узі Тпх зе бек Аїа дер оБує Зеї їУє Жет лох вла Тут 03 то те но їпи біл оТЕробек Бог о їси буз Аівд бек Аяр о ТВк Аія Мек о ТУю оТую Сув 8 зо ЗУ віз Аке бій оінек Ту біп біуУу Бую Мес Аз ТВх Ббе дз Бех Тур ві 190 ТОБ 115 бів сту ТБ їжну УЗА ТЕ оМві бек беж Аза бет ТНК Буд обіу Вкос беж 115 їі20 175
УвА вне Бо Га Аїв Бо Су беї Ахо о пех Тйкобет ЗМ бек Твгодуд 135 155 146
Ва бео піу СУуз Пез баї Був вав Тух Вне Рго 015 ВБко аз Тих Уві) 145 150 155 ї68 бас Тсродйви йех сіу лів Пе Так бек обіу Уві Ні Тв Ре Бо дід 155 ї7а 175
Чаї бпец шій» Ве» Яєж (ту Іеб Туд Век Пец бах бесобді Уаї Тв уві 1859 Ів 50 вко Зек бек обех Пец біУу ТВЕ Був ТлІ Тух ТбБк Сук АзпоМаї АяронНів 155 210 КО
Був БРло с бех Аво Тих Був Уві Азробув Ака Уві біо оВек був Тук і1уУ 718 215 220
Бге Бко Сув Бго Рго Суз Ро АЗіа Ехо бішо Аїа ві 012 бу Бхо в ай КЗ «35 га
Уві Вне Пен РБе Бко Ро Гуя Вко Пує Дер оТВк без Мат ї1іе бек Вкду 245 250 285
ТЕ хо сіб Уві ТВк ув Уді Уві ай Ар о Уді век 5іп біш АероБЕо й ай ТО він уаї бів Рів обев Тер оТух Уві Вввоспіу Увь біз оУаї Ні. Де Ала
Муз Ти Буз Бгто аку ЗМ: біз сій о РБе Два дах Твт тТУуу Аха Уві ді
Зп 255 Зде
Шек Уді Меп Тнхг Уваї ем Нів бій дер Тур о Пез Вп ОРБу пу бій Туг з Зо З5 Здо пуБ був бук Чаї Вес оди був 01у бер» Вхо деб дек ТІ Ста був тик
ТІхе вах ге Дія пев ЄВУ бій Бк Ат діа Бжо Тв ді тТук тТНЕ Ге зах 345 5
Вуз вка Щек сій бі) 510 Меє ТКх пув дяв сіб уаї бек без тн Сов : 355 38 . 35 ец о Маї пу бу Бе Тех Бхо бвж дяв ІТе Ав Ууді бу Тов сію две 370 375 за
Мт обі іп Вхо бі) Ав одних Тухк Бу ТЬе Тк оБко Вухо Уві зби Ар
Чек Др сту Зах Епе Бпа ес Тух Бех Акб о їжс Тк ха) Ар був бек 405 ОБО 5:15
Акту То оЗІіп січ біу вп обаї Бе бек Суз ек Уві Меб Ні бій ліз 425 425 т цез о Нів Ава Чів Тре Твх біо цуї Бек без дех лем бек бео щ1у му 435 440 345
«вій» 136 «ТЕ» ні тій» дНЕ «к13з Синтетична послідовність «ШЕ «тра» Праиймер «400» 136 ссетасссв ваїсвасрео азауветавсо едесуосавс що «ві 87 «2112 49 «ви ДВ «вії» Сичтетична потсліловністев «В «Р3» праймер «ар» 137 савлацеКво пгастассдаа пеаспавеїх севосчесяв авасдсчядУ В «10 138 «ТІ» я шт, ря «ш10». ДК «ті Синтетична лослідовність стусрвуя ки «Еш. Прарімаю «пох 138 пектвсесаб астсваоств Зссчасваса зайсосксава вас 15 «шїб» 139 «гії 47 «тля ДНК «вій» Синтетична посліповмасте
КОМ Онея «й» праймер «ап 135 саватєссаєсо стпосгаєсва повощеосво садоссЗаснта чсвасье Я «їй 140 кеїїз 58 «іш ПАК «ІЗ Синтетична паслін сих «швах Прабмею «р 14й сетохсавсз астчЧакаєсс дадсвосьст постала Блюзсасатче ссбосвкс ЗИ ситим 151 «8115 8 «ав» ДНК «йшла» синтетична послідовність
ЯВКУ кива» Праймер
«асп» ії здкассовсав сптяхствосдча четосеЕос сосудеесе ув «105 149 «рії» 33 «125 МНК «215» Синтетична послідовність их «я 3» Праймии «ади» 145. часкчцачкоа часчадесоо апсдассося до ха «її» 143 же» 33 «іш ДЕК чи13» Сантетичид послідовність «жк» «Ей ат Праймер «ай» сессецазіє папосаоесо вссонснося дає За «210» 144 «81» 2 рожі зу «АТ ДЕ каМіх Сичжтетична послідовньстяе кат «и зт лу т ть див чита праймер сАПо» й ачвасгаасї сеисасзусоце о «піп 145 «авта слій» ДНК хіх Симтєтична послідовність св сект роя м си» Праймер «айм 145
Фдеасстоапеч сасссавачссву зеосадсязо состава 28 «їй» 145 «АВК» дО чаї ДНЖ «»13х Синтетична послідовні ств «ох «ви Праймер «0 15 адпадоаво ссоцесочсЯе; 0 «й А сем ЗВ кака ДНК «али Сишеетична посліІдавнисть
«ау
«ваАЗ» праймед
«ах 47 пеаксосашесо сбвосозасву всссвавачв сосочка За «10» 189
«11 8
«812» ДЯК
«р1ах Сичтетичма порялідевнюс в»
«0202
«Ккеа» Повимер Е
«до» аз суссовеочЕ сасуєодове содеасеса Фаототадек зубагає в «віх 14
«вір ЗВ
«иїВ» ПК
«ій» Синтетична последовна єть
«рШе
«швіаю Праймер
«ОО» 143 спіксассвас гасразаєса зчесодечсв ссадуаєує як «ісп» 156
«Вії» я
«щ1й» ДНК
«213 Сюимстетечна побсліловніств
«ох
«ВИЗ» Позймер
«айс» 150 сдесвкасає свегавосеє восацеузста бсадочсває що «їй» 151
«їз 49
212» ДВК
«Із Синтетична поспіІловнаість
«ай»
рази ЦПраймер
«пост 151 асацокссод Засачебаче зепедсазчуа ясасаєцоє з «1 152
«11» г
«дій» ДНК
«Рі» Ново варів
«4ЇМІх Г5й спезацесвлва ссагсадсва ствсесстодес Босзпассече «0 «війз І153
«рії» й хжієт.
НЕ
«аз Синтетична пролаідевнаєюь вх
«й» Праймер «300» 153 чссавсасов дусевчоєтає поооозасає всобусскоце ЩО «10 154 «11 43 «їй» ДНК «213 Синевтична поЄледевність «ІДИ «2235 праймер «ОО» ух еспдесоітсхо сезатассве Ехсвадовас їсозоссоассе сет і «хх 155 «її» 814 «122 рт каїа» Синтетична посліповноь «Тр» «232 Кандидат ї4, повна довжива петкото пампюега «адрх во
Авр її бів Ме тре бій бат реко Ваг бек пес бат Кіа дек Уді ТУ їх 5 То 15 зроду Уві ТВ оїіе Тв буз Ака о Афа бек біл о Зех Ті сіу без Тух 2 За
Та від тер Тук пл шій суд Бго ску ув Аза ро бу Бе) (ен о ліє тТук Бів Аїх Зег бех реи бій бек біу в) Ркео бек Аха ре бЗех пут
З За ва бек жіу Зак ошіу ТВ оАБр Ре Ті Тем їйх їіє бе Зех Себ с! во
Ін ТВ ТЕ ВУ сій Вар ВБе Дів Так оТуюк о Тух Сувобіп Сів діа біостТпк Уді Зехо Во ве й | ак
Тих оБне бІУ ів о сСтіу ТВкЕ пуд Маї щіц; Сів фув Ака вк оУві АфЗа Ат 10о то 116
Вго бех таї ре їла Ре Брго Бхо бек ойво ім бів їей бує бер СУ
НК 170 185 те діа бек Уві Маї Сув пе Гео Авпобап о Бпє Тує Рро йко бу 18 135 38 14
Туз уді Зі Жсю о пує Маї йзродай Аїв ос іп бе біуУу Авп бек осів 145 156 155 150 біб дет Маї Те БІ бій Аве Чех мук о дврю Вес Тих Тук Єву Ті бевт 155 а їт5
Явк тах пев ТвВх Бе; дет бую йід Дер тує бій обує Ні був Уві СтТУж ї85 Тв 135
АТа був сіц МАТ тпеоВів бі біб Єреб Яек бех рю) Маз ТАЖ Був беЕ тазу а ПОВ капа ява Вк спіу Бій Сув їй «-тїаз 156 «112 214 «ій РТ сах Синеетична послідовність «их «га» Качдидат 15, 5а-М, 1-й, 15-53, ХУ-а, ХБ-5, Ю5Б-5, 1-5, повна довжина паерпжаво ланцюга
«002 ІБ .
АяроГа бій Меї Тех сія бек Рус бас щеє ій беб А1іЗ вк уді ТУ 1 те 19 ее ш
Авр йхо Уа1 Твк Тіє твробув духу Ата беж бій Яеї Ї1165:615 цео Тух
ВІ є) 20
Пец. із тв тує їй біб Гоа Бо бі Бе Азв о бкО Був це Бен її й 50 43 тТУк Азіа вдів бек вт ви СіпоЗехк біу уві Рго бех Аха Ре бек БІ1у вн 5 цве сіу бек осіу Тл Аворо ре ТАК оОем Тв Тіє беє Зх Се дій Бе 5 7т7а 5 во сі ввЮ рве Ат ЖЕ ТУую Туг шу бій Зіп бкму йвпотТвЕж мед Бек тує
З о з
Таю ре с1у Сіп біу тоє Буд уві бій Ії Гуз Ас Тк Уві Вій дів 195 105 ке. рука осбех Маї ВНе ї16 рве орхо го Бех ду біб бій Пезч обув бБеробію
ТБ 180 155 тп Аіз бек Уве1 Уді Сов Бей пес АйпоАви Бпе Тух ро Ака БІХ Аза 136 115 149 пу УукІі сІ15 о Тгробув Уві Ар Дев Дій Бей бів беж ЗУ вва Бек 513 ї45 150 155 т60 бій беж Чаї Зо біс шів йзробех Був Аве обБех Ту Тує веї Їм) ве цаєт ко їжа Тк бе щеє був лій дДевролук Кі пух ВТБ ПувоУаї ТУуЄ ї5о МЕ. 155
А1а Су біб Уві Трж Ніл бікопіу Гео бек бах рко Мас Тк Бувосяк їч5 р) ав
Ве дз Акое ОКУ Зі Су ею «піз А «11» 214 «їси ВВТ каза» Синтетична поспідевнусть «Ди» «роз» Канлипат 15-77, пове довжина легкого ланиюга «вд» Тх дар І1е бів Меї ТБкобів бегобго беж Бех оїео беє Аа беє чаї пу 1. в КІ 15
ВБЕ дра Маї ТЕ їїе Таг був лк дів дес бік бек їз Бек Зак Тує й а за їжи вів Тур о Тук б1й бій бух Буо біу Був Аза Рео Був рем офву ТІ о Я Ах
Тух вка дів Бах дек Гео біо ех біу Уві Бко Вегойке Рг бек ЩУ 5О 55 Ге
Кквкоб1У Бех ЗМУ ТБ о АвроБре тТнНХ Лев Тих Іі бег Бах Бей ПМ; Ббке
Зі явБЮ Ре Аза ТНЕ Тух тує Сув а біповіУ дк отв Бей Шес Тух 85 23 55
Тне рне бі ПІіпобіу тт Пук о уві ста їтїе Був Вуу Тк Уві Аїів дія
Мо 105 115
Рко дек чаї Бе ІЗє Ре Рко бко бек дев обі Зі Мей був бах Бу 115 12и 1255
Тит Аїв бек Маїс чаї сСув без во Дявп Аво РОе Тух Бко дк Бі ів
ЗО 135 140
Пух уві бій Тр оМПує Уа) Авродйят Дія Гена біо бе Оу Аза ех ОІВ ід 150 155 165 п) бек уві їБзкобМо Зір бер бат був Аво Єву Твг о Тує Бех їео Беж 165 175 на
Бех Так оїец їбкобец бек бує дів Ар оТук Сів обу Віз був Уа1ї Тур дів Сує біз Уві Тию Нів біб б1іж Бе бек обех Бо Чаї тТВКо був бек 195 295 05 бе Авт Ара біу бід Суд : 510 «гіпо В «е1ім 4 «вих ВТ «йіаж Синтетична послідовність
ЕН
«ик кКавдимат 15-8, тоВна довжина легкого паницюта «Об 158.
АвроІ1є біт Має Так Сій дес кб бех дек гейш бек Ата бак УВЮ БІ їх 5 10 15
Вев Вго уві ТЕ Тіе Тк о Суєж деп іа беж сію Зах їі бі цем Тук
ОО яка во) печ дае Тех Тую Пій дій був ко Сіу ув діа буб Був Без оїсю Ті 35 ао а
Туг Вів Аїа Бек бек Персі бек сі Уяі Бко Зех Ак Бле бех 915 5Ю 55 ВО
Бек бі Бек 01у Так дав Бе тях Сей бве Їїе беб бек Пемз бзб Бко та 75 во бій аеро рле діа Тл Тур тує Су піп бій Оз йо ТЕ Без бе Ту 85 зо а5 твх вив обігу віз пту ті пу У біб ї1в Тв Акт ТЕ Уві Аів Аїа 155 105 119
Рке Жек уві Ріє ї1і8 Емо гро Рго Зах йзв бій 010 Тем був дак ВІУ 115 398 Бе
Три Аіа бек Уді Уа! Суб це Пе Ап о Дяк Бпе Тук Рко дДро б1н Ата 130 135 140 ую Ма1! біл Ткроіде ді Авродат Ліва ібн бій бек біу депо бак сія 145 ї5б 155 150 біц бек уві Тв сів бій Акр орех Бук бар Беж Хлх тух Беж Сем цех ту 15 Т75 хек Тк Пец Тв ГЦез бве оГув Аза АвроТув Зі буд Нів був Уві Тує 185 105 195
Аїа Сузобіц Уві ТБхо Бі бів Сі Ге Зех бек о Бсо Уві ТВе фу дет 155 оо 205
Зуче Авт дкш о сіу відо сув 21 «210» 153 «11 ії саіо ВЕ «152 Синтетична послідовні ште чия «ІВ» ТВ Камдидата 15-59 «оп 159 сіє Уві бів їви Уаї біп бек бі іа бій Уві Пув о Гуво Бхо пі ба ї 5 їй 15
Яех їшо пуд о ііїє йех сСув був о шіу Зех ФіУ Тух Бак Ре так два Ту 2 ЖЕ 35
Те ї1е бек Ткромаїі Вход сій Мех го бі був обі ред спі Тер Мах 3 З В
Зі АкФф І18 дар Еко бех дшю бек Тук тик дае отТук Зек Ру двко Боє 5 ЗВ й пів Бім вів Уаі Тит їі беж Діла дер був беж їіїє бає Тве Дія Тук | о | 75 во
Шев обіп тер обев бек пев був Аіа Бех Авр тп Азія Мес Тує Тух Су я5 90. 35
Аїа Ак Бій їєцш Тук біп піУ Тук Ме Аяр ТВ Ре Аво бех Тгр обі 100. 155 110
Сіп біу Тнг оїєв Узі тТвк уві бек Бех 115 129 «115 169 «11 448 хто РЕТ г Жиїа» Синтетична послідовність «кв «2»із Канцилат МУЗ, повна довжина важкого ланнюва «4002 160 під Маї бій Пез уаї біп бек 01У Аза біз Уві був Був Рко біу Б
І 5 19 5 ет оПйей Був Тіле бек Сув Був біу бек СТУ Ту бек РП ТЕ дви тує 20 З 30
Тхв Ії ББЖ Тув Уві Ака б1л Меб Ро сіу мує 015 ей біб тир Меє 35 4 В сіу Ага 116 АвробБко Бе: АБр Чех Тух Тк Аз ТУ Вес Рг бех Ре 50 35 650
Зі сіу Біб Уаі ТП ї1іе Бех Аїя ВБр був Бех Тієе Бек ТНК Аїа Тук бо 70 ТБ во їв іп Тгр бак обех цей Буя Дів дак Авр отих Аїда Меб Тук Тух Суд 5о 95
Кіа Аха бій опе: Тут бів 01у Тух Меї Авоотпт Бпе дев бех шко Сі 150 105 110
Шіп Сіу Тих цес уві ТБЖж о Уаі бек бег Діа бек ТАК був біу Рго бех 115 1250 195
Ууаї Ейе Рто рес діа Ро Су Бак Ака бек Ту дет обі; беє Тв діа 130 135 140 віз ем біу Су рез уді був АвротТук Ре Рхо бій Ро Уаі Так очаї 145 159 155 160
Зес Ткр Аяп бЗех Бі Аза Гео ТВх бех біу Ууа1і Нія Тв; бе вро Аа 165 170 155
Маії їй біп Бек бвк Сіу без Тус бек їеж бер Зег Уві Маї Тлх Уа. 150 185 190;
Бко бек бек бек Пец Сіу їпж був Тс оТук Тк Су Дяп о Уа1 АвроНів 155 290 205 пув о Бто Бех АвпотТця пу Чаї Авробув Ак уві Бі Бах Буд Тук с1у 210 218 за
Рхо Рто Сув Бко Рто Су Рго Аїд Рко бій АТа вів біу біу Ро Бек
ВХ 230 235 240
Чаї Рре йеш Бі Ро Рхо Був Ро Був АвроТвВт бец Меб ї1е бек Ако 245 258 255
Тв орто бій Уаї ТЕ Сув Уаї Чаї Уаї АвроУаї бек бій біз дев ро 255 27о зі чаї зій Ре йзп ТТвЮ Ту Уаї Авропіу Уа сі ат нів деп о Аїа
З 280 . 28
Був Твж Ду Ро Ага сті бі біп Ре Ай бЗех Тк Тут Атб баї Уа 250 285 3З0о
Зехт Уаї Пео о Тпт уаї без Вів сій о АвроТкЕр оїву Ава біб Ппув буд Тує зав 3195 315 | 323
Гуя Сув Був Уді Бех Авп Був СТУ Без рко бек бек тів 0105 Був ТпЕ зв 330 335 її пек їув Ата Був Біу біп Рез Ак ЗБ рРко обійп о уаї Тух Так рез за 345 350
Рко рхо бек 01п о бін бі Мебс Тк ру Ап сій уві бек Бей Тато був 355 зо з65
Без. уві цу ЗМУ Рае Тут Рхо Зех Азр ІБе йіа Уді Сів» Тр обіч бек
37 75 зно
Леп СЕу біп Рко біб АвпоАво Тух Буд ТВу ТВу Рто рго Уві Тем Дер 385 390 З5 100 бек Авр о біу бек Рпе Ре Гей Тук бек Акд Тез Трг Маї АДвр Гух Зег 405 410 415
АЕЧ Ткр бБіп біз біу Азй Уа) РБе бек Сух бак Уві Меє Нів 01іч Аїз 420 425 435
Пец нів Авоп о Ніз Тук Ту Сіп Був бек Пец бек Пец бег Гец біу Був 435 440 445; «2105. 161 «211їз 2718 «212» ДНК «віз» Мов шозсвіов. «4005 161 агдавачаяє чЕСссосЕса єстаасусаєс сесгтсдодя дассвстеаєс сетасодаєс 69 сскссдуєує сббссасаада ссаасосасс дсоадаєаса асясадссдаа стдсадссат 120 сесдазуоєсаа сасасаєасо бдаєдаєссє сссістааса Євасадсаєє днасестасс 180 сасаассаве ссадазуаєс ассасстасс вассісасаз чдагасваєса асссостатс 540 сЕддасосад часесаасос састссвава ссудадссач азссобосса аасСсасссссе 300
ЕЕдсідаваєф сассуаассь дсаасаєаає давдсістесо адасеЕбссда Єсавасостр 360 чсессессцеса суаасстдасє ауаавсєсває ссвасоісса асссвасаса слааасстада 420 ацдсевассссї Ссааазасса чаацааєсть ассавассач зЕБЕЯБсЕса таасаЧчЕсса о саєсіасаа асбседоцдааєс додсоссода сгдбадавсс бсосаадавсь Ядессгбадса 540 аавадіааза ссссбоасос дсзадцеуаа двассвЧачї ссссбодсва бестксссса 600 счазавісоя асеєкоєсако аватосасії авадачесст ссссодазся БЕсссацдаєа ебо ассдосааці басгссдсссо сессрсдаає васадсссзаєс бдаассосса остсасадад 790 авастЕвасе псууаасьссс ааасасаадс абссадаатсо бссскссбодо Саасавссвя 780 седсгдадсса ссадсуадад саєсесосссї доадеєдаадї ддасаайассо сасссадстс 840 часстстсст асласаассто ссабоаавсЯсс дусаасЯдеьх ссЕсессова гсбсссавоєс 900 скавауЕаєс гасСссстода дсасавсавї абасассоабс єціессосвсуд сбссссєсає 960 чаастістоса асссоаодта сстуаціїсд4 вадсдадсаї ссасгаадса взасьусесса 1020 сЕсосоксас ассесаасає Єдаєсчаєсео Єесссесваїє ууссававса кссудавсає 1980 сгсзасасау агудзсаатаз габссссааді зссгазадса ахассєтсяо босасідаса 3149 зассісвазі асстаацетст гсссаваасо бесасзаасє бдсавасссї авсаваєцва 1900 асаєтецсує састрдссса ЕбеБосоєсо сбсзсссєса асставасадва аввосасаєє 1260 ссаааавзсау сааатоддіас СбССсссєсау КСадоссаає єсзучаєвоє Еуасстсодс 1320 сесавечазаа ссдаасвава асссадседус садчвасояда оадудсстуад ааасастассс 1350 чачасстасс сатсстасва сававсаєсссо свастасеса ссадесссе бодсаєсадее 1440 сесацесєсс вавцассдає доєбсаздада асдасссЕса яавасгоасоада барсокоссст 1500 свсобЕвсо Чебсссесеу савасесуасо абтобадасе базосаасза сазсатацес 1550 азасасалато аудасевосє дчадасссве дазваїстаяад ааассесєвса ЕЕ ксвчеве 1620 азкагоєсау ссачусостя дЧчазасасоса ваєсссячка збсссоссва сссссідаву 1680 чадсЕЧЕссо ассоссасає сісоваєєса чадгосзасяЯя чоссазаєча авабсссацєє 740 даадЕсссса вадвасесаеє сдзассазаєч адсассзаєс вочасьчаа пвассбдадс 1800 авадсетодас сзстеастії сдароассад асасстстаз даксасідйаа сссссадаво 1860 зассесасав савссуєсоа чазучакесє сссоЗоосас сесстсзааа сесозасазоє 1920 срачцасаєзс дсрісавесс чдсбЧасіос асевцєцава са ссоскоа ЧдЕрсцієааєс 1980 садассаасс ядасссасас бвабабсьсь дадссобссва сбсасвасстї седсвасасс 2040 ссасаєсатт: весасачссс ссесссдава ссгсєстата свссвессго базадасвоє 2100 чЧесссеоцесу аастсстсстї сасзаєсвоає ассадтаєує состуустсс сасасієсбса 2150 чЕассасеса Бсасассда дадссодада абстіссьЕЕЕ ассддвабоає гссадтдсає 822Й садчавіесєвЯ сссСссзадуа аасацдасаса сзодсідадс адсбсссдаата гасадостаєс 9280 абавсссаба сссасяавача сададаєсуд згсісодаас абссстоссос взасадазова 2340 свзацассаває сесссзавоє стоссбадав зЗзазасоадась ггодзацезау сгсестсода 2400 сігдааядсва сссЕбаакад сассазавоа адссддазав ссавЕЕссЯї сассасасас 2460 саєссаєстав аздасєсстсї упдсадавуа сгсаваодсає абсасосауі гсадсвачов 2520 асгдчасесаав зЕссЯдасєсс застатассо абббсксссс адаактаєссс адаєсаєааа 2580 ссавассаєу сассстуєте дсузададда асусссадає сссаєсосає ссобсавассяц 2640 ссачессядча задазсодас адабоаєссссї Сабсаєааає їдсавосвоє асссодабсї 2700 судзаєссву сасаєева 27І8
«135 Т69 «втім 305 «Туз ВАТ «2132 Мив швасо1че І «800» То
Меб був б1Уу Сув бек Бех Тук пев оКеб Тук чех Вп біб сту Ген Бей
І 5 10 То зак олез о тТхр 116 їш-в рей уаї Щек век ТБо дая сі) бує Тртома! Ак 2 й за тує дво Мак Ата двросСув йек пія пев обу їв ТвЕ Бі 136 Рхб дев 35 45 15
Азроїжи Ехо Бек бвп о Ті Тако Уві еч Авл бОви Тйх Бі Авц опшуй Бех 50 За 20
Вжхо АЕЧ бе Бо Бко Твх Авап Бр отах Ака Тух беж сіл о Без; Аїа хів
БЕ 7 т во йо вяр о Атїа б1у Бде Ав пех с14 Бек пуд Бемо іа Буш бід ей сук
Зо ав сій лів Тев Бк цей Сеи був МаА1 їз Аз рев сій Чіз вп об бе 16 05 1то бех сій се Бек о Авробсій тиж БОе уаї гпе був ТЕЖ Авооїви Ту бід ї15х 129 ВЕ. пед дао іївм о МеЄ Бех Его Чек їі Нів Був їі Бу бетгр два Бк риє 1350 135 140
Муз аз обіпогувз вбяпоіївнвої1е Бу пео Аве пей йде Нв о Азп осі Сем 145 МБО 135 140 цех Зах Те пу рей сосіу Тих о спіу Уві бів їм біо Ав дез іп іш 165 ко 175 їм їв о Аіа Св Азп о ПтЕ ЗЕ без Азія таз оАко Зек й Бі Ге ї8О 185 їво
Сі: ЕБе Гео 31 авпобеє бах ей Ахоп Пуз Сец Ав Пе; бек Зеу Дек 185 Ко во
Рго печ Гуд біо Бпє бек орго бі уз Бе спів Тлх 115 бїу Пух їв ; 510 АВ ТЕО
Бве дія цез Гей Гео йва Депо Аа бів без йдт о бко Ні пев Тве бі 5 | 230 га Ше
Муч Гб Ст Тер бід БПео бе Або Тот бек їі бів Дягобенр бай ен ге що а Ба ши 2558
Аїа деп одяп біб фец геу Аза ТВж обех бі бек Тих Рре бек о ціу ре; або 25 27
Був Тбр тв ов Шев Теж осів де др опе) Зеж о Тук о Ав Аз оГе нів я Кожен) -8о лввоуві біж АвпосСі ВекоВре дет Тух цезч ро бек оБеб Ака Тує Цей
ЗО «Ва 309
Бех пек пі ТуксАза дявп 116 сід дка їПеб ОвуоРго Ак Зех пе тую а ЗК МОВ аб їУу іви ваак о Авра оба Аку Тук їни бек ої» їв Аг Аія па ТАК ув чи 30 - за5
Змі сбех Уаї БЕЖ їеи дія беж НІВ Ру Ва Ті8 Авб о дБЮ БНе дес рце зас 45 35 пій Ткр оцей буд Тує без бій Тук Пец дей Мес дер бар Ап о дем Ії 355 3655 З :
Ресоват ТВу був бек йзиа Тай» Бе ТВк о біу Шви Уаї бек оїед був Тує зт 375 Зв їжч ет їм Бех Був Тк Ре Тв бегоїев біп Тк бе Твродвп опік зв5 580 | 395 | 105
Тих Ре Маї Бак опейш Аїв8 Біж вет ро їм о Їївис Тйх і-й Ява Бей отнЕ 205 10 815
Пуш дви Бі Іі Зег був тів Діа Ав Сіу Тк РБе бех Тр Меч бі 425 425 439
Сілоївєс Ага ТІЇв Гм Азро їз бі їв зв осів Ї1з бір бБіп буз о ї2у 538 ч40 445 дек опіум бп бі: Ттр о Ако біу їєз Акч дей Ше Нв обі; 116 Тух ме
Б. 555 «85 ех тук Ази муз їУХ Пез біп би ех ТБ Бек Бех Ре АТа Ти Уч 25 їто А75 «8 ро Бак тез бій джу Те МеЖ Те: Акшо оба УаЗ АТа ес Був о йвт Уві з85 430 455
Азрої1їе бек Рко Бвж Бро Рпе дво Вко Бец Аещ дялобем ТйЙХ І1е ів во 505 51
Авроїеви Вакодви АБполат 115 Аїа Ал отіє БВ 1) др Бей пе ЗІ 15 52 зга оту Пен сті Авп оїео бій 136 Бе; Авоовлє Сіп Бі Авв АБ Гц ВІ 539 535 | 5
Ку обей Тер огув лк Аївя Ав обо Бі б5їу то Уві Авт пе цей був 545 50 п'я за сію їн бек Ні їец Нія Ті Тєз Авла Гей Пій ер о Ави бу Бей ДБр
За 570 575 сів їі зво чаї 01у Маї Бе уз дл оїєм Ве бів еп Туз Бех Її
БО БНО 5
Авлоїйта су ме) Ав Ав Пен о йяв Му ойеч СЕМ ро бе Тіє РА одер 555 НІ Бак дворосій Твг о Бек оїєоб о Ако бек бен Авпобе) Су Був оАво фей їйе ЖНЕ 510 515 520 зек тал сій пн Ар оЧаї Рпе сіу Рке Рус Бе сів Аво бе) Авл дек ва5 30 б вій їжн дво Мес Ага Бе деп Вго рве Авробую Трх Су сій бек Ті щеж аа 5) Клсжи
Тк» рр заї йвзй тгроті1е йвпо сів тв Нів ЖАК Ави бів бек бін фей вяО 655 579 бек тв нав оту гей був Ап о Тот Бго Пі нів тує тую 015 Ре Бо 578 во 633 їев осує Баб бе дер отТНя бах ау ув Бо Аво Зв Аїа реко Бе 513
Б а т7ов
Мей; оїна БМе о І1їв Гівзошеє Тре Зах Ме: Теж ГТ Мат Бе ЇТе без ді
У ті ЗО
Уа Мещ Без їз Ні Ті бій Зі ТЕродхУу іле БВЕ Бра отух ТК АБИ
ТА т7за з чаї век уаї Ні Аху Кіе їесфобіб РНеспу« 5. лів Аве тп Бій АїА т8а 7А5 75
ПМ бка РКе сі тую Тв Віз Тук Ст15 Хі Ні Аза Яів Пув Авю АСЗ тв їБО | пев
Ар отр чаї тт «(14 Ні Рпє аж о ббо Мас сла соб бій АБ обіп ех 72 ЕВ то дез му вве Суб Бен піз бій Ду ав о Вле сі) вія оту Уві Сей оту 185 о 785 по пез бій АТ сті Маї вл беж 16 Був Ду Бех АгЯ Буг Її ТІіє Еце ох ВІЗ ЗЕ чаї ті тТвЕ Нія Нав пе! ву Бу АВ РК ото Суб Ак Акб гне Був га ке вла чаї Кіз Ні Аїа маї БЗів сій діа іє 1 біз йчий емо Азро Бах Т1ге 85 о 45
Іі цей зе ББе пед бів оАзм Те Бк АвзооТукю був о їео деп оців діа 859 55 о мезо Су пес овбка АЛсу щіу Мей свБве Бу еко ний Суз ї1е Гец дви Тк ява дло ВО во го бар о бта пуб о Ак ТІЄ Взб Аза рРИЄ Ні Ні БУ їмо зі УВІ 885 БА па ків лей піу бек до Авп бек АТ Кіш зо з05 «яЕїй5 1653 «ЕЕІЇ о «гій» Вакбив гафтив
«або» 183 взр їі бік Ме Тдкосіьй ет ро ЖАЄ бек о їшвМми бек Аїа беб пей Ту 1 5 16 15 сід тб ові Тв ї1їе бін Сув йку ів бек сі) йшр ї1іе Тук Ава С1У то 2 За їв йла ТЕр о Тук піп бій Пув ро ББу Бу Бек хо бій Гей Бей Тіє 35 ко п
Тук Дер бек о Авк бек Пцез Вія Тк опі1у Уа1і Вго Бех деко Бпе беї Бі
ЗО БЯ еп
Дкш біу бек ЗКУ Тк сій Тук бехоїез Ахе тів Ай бек Пе) бів бех
Ба 7о 5 ва іш йзросві Віа Беж Суб де Суз бій обі Ту Тух АБО їТую ко ред
НЕ ЗИ й З
Тк РМа сіу Бех біу Тв Муз без бів ті уз 1 1605 «рій» ій4 сії М «ім ВЕТ «13» Вактоє гаксов «400» 154
Сіш уві біп їеє баї Діа беє біу сьу біуУу без Уві Був оВБхо Стіу ДІА 1 ге їй 15
Евх ої був без чех Су Уві ЕВ Бех біу Ріє ик Ре Вех Вер Тух а Коса З
ТсроМес вата Тов уві леЯ Сіл Тве орто ЗУ Був рРкОо Меб обім Тух її
ЗВ 40 45 пі» дише» Її Був Бех Абвр о Сію бек Був Маї вп отТукобіа Рко бег Гео 50 В Бо рук Депп ДЕЗ рве теж тів Бак дкй йзроАвпоАта де ТЕ ОТВР Гви Тук 65 то те во їеп біб Мех Вех Ав Уаї Ага Єви їба Ар ЇЖАК о Ака ТИЖ лук ТУЮ Сув 25 а з
Ав Вазт дз їїє шіу РЕО азротТЕротТук Вцпе Аво ГБЕ Тер Б3У Бо аку 155 ТО 115 тп Меб Уві тик У беж бзж стій 165 «рлїх 234 клі НТ «йій» Синтетечна послідовність «ев кЕайг Гібрниц вавіабельнеої сблаєті щува ії пастаійнеїх областа мені «ож б мер ще Чаї Ето ЖВи бля ба Бешоліу Мк їво Бен пей Тер оТів їв ї В їй 15 язройіа ї1їе бух йлю тів бій Ме оту біб бес бро Тре обех дей бек
МК ха Зо аа Бей ісп БхУ СТИ Так о Угі тн тіе бін був Аг3 Ара ех за Авр 5 ча 45
Те тТук двп шву Пес Аза ТЕ ТУхХ піп осів» Бу бо 51Уу Буш бБекогЕб
Бо 55 о біп оїво їж ле Тук Авр бек Аяп о Зекб ої) Нія ТвеобТу Уді Бгб зе 5 та 75 30
ВЕЯЧ Бе ес біу вко щ1іу Бек біт Тк СілоТую Мах сей Аж її Ав
БЖ за о бдех їв бів беб бій Авб ові дія дет Тую Бе Суд о біл біб тує тус 100 203 не их
АвротТую Био без ТВ вве бі бе с1у ТУ Був Бей ЗБ пе пчЕ босу 115 15 155
Аїа ввю Віа Аїа Бго їх Уаї Зех ЇТїе Кпв реко Ехо 5ею Бех ота БІЙ 136 135 140 рем тис Сет о 51іу біу дів дек Маї Уа Сук Ре Гео с Аво деп Бнє Тук
Бко Бук йо 1їіє Во Ууаї бух ТЕр пул їв Авробіу Бек сім Апео бів 155 179 | 175
ДАвпобі Ма Пес Азпобат Тхвр ТЕО Азропуій дар обес пух Дар обех Те: 180 І83 190
Тер бек о Мех ек бек ТВтоце)з ЇВБоїей ТУ Був дво Оію Тук бів йко 155 20 В піз дзп бек Тк о Ткк Сбуз Сім Від Тве Пів Гуз Тв бех ТЬЕ бек га 215 215 сао
Ії бв1і Був бах Бе йвй дл Аа січ Сув 235 сої Яви кей БЕТ «013» Сентеєетична посліковньсть сиди» «ви» Нуртій об хаб уакіабів Кезісл айй щоузе сопатави хедтов «АТ іо
Меж Був во дк Бей о беє Ме» ТІ Віа Тіє Сув дя їн Їй Буз Дав 1 Е 15 І
Чаї бій ув сін ві біб сем ді Кіа шех піт ки Бу їй Уві ув жо 25 30
Ра біу Аів Бех їжи Ббуб бе) бек о Сую Уві 213 Бек сію Ре о Твк Ре то 45
Бех Аво Ту ткОо Меб Ала Ттв ах АкФф бій ТК оРКОо біт був ке Ме
ВИ п БО
ОТч тує Ті біУ Аврош3зє Був дек Аня бі ес Був 81 Аа тує сАТа
Що а вк я кб бек їша Був Ан бод пе ТИС біе ес дж АБО Вей Аза Ака Твх тик оБап о тТУК Їжа сіб Ме Зек АзпоУві Ако бек сій дер оОТвІ АЇв ТЕ
ТО 5 Шо
ТтчУж тек Се Авт Акт дв бі БІО вВКО Авротхротуєю где Аа сЕрБе Тер 115 1256 ї25 сіу ве БАУ тп оМмес Уаї Ту Уві Зак Бег вів пу ТпХ ТАК ОРКОа ЕКО 130 115 ай йвжоМаї ТУЮ рРжЕб Бей дів РЕ сСуу Беж Дія Ді ів ТБу дви шеє Мак тету 155 88. 160
Чаї Те фі Сту був оцеб баї Був і Тух Ба ба піч Вто Маї Те і65 17 175
Маі Тра тво Азв бек С1у беж Бер бек бек с1іу Уві Кіз ТЕ оре РК ї185 185 1950
Аїз уаї їви с5ій бек дер обец ТУж Тахо Їїєц бех бек даг о Уді Тк о Уді 155 то Ох
ВЕ бек Шек Рко дк о рке дек біб Тв Маї ТТН Сув дат Уві Ата Ні й 15 ло вже Вів Бек Бех ТЕ Був Уві аю пув пузх Тів Уві го вка Авросув дев вас 2553 го біу Сув був Рга був їіж су тако Уі Во біш Уві ес Бу УЗ) вне 245 280. 255
Ті тв о Бк Во БУЄ БЕБ Був вору уві Пе тп їі тТвБЕ рем Три РКО 269 Ек зв ув Уві ТВх був МЕ Уві Уаї зро Бех іт дво Ав БЕЗ біз Уа 278 28о о ва5
Сів гпе бБет тер о РМе маї Ав одзр Уа біс уа1ї Нів Тв Аза ЗМ тТвЕ 253 95 349
ОБ оБго Ак біш бів сій Рее Ав бек Тв РБе дДко Бех Уа) Бех обі 3о5 зо 315 320 пер) оРка Ті Мес Вів булодяр о Тхроїец Авв о піУу Пуз СІ Рене Ццув Сув 325 30 335
Акч Уа! Аяп Зек Аїз Азія Ре Бко дія Ро їТе сія був Тнк ІЇ18 бет 34 34х 55
Пув отих їв БІУ вк орсо дув Лів рЕс бій Уві Тук Те Тіє РкФ Бго 355 зво зва
Бо Гуя бій біг Мер діа був бзробув Уві Бек пес Тахо бук Мех ліє зло Б зо : тах дев ОрБе бе Бере біз АвооТів ТБж уві біз Тхю бій Тко вп о с1У 385 390 95 40 біл Рко дів бій Ава! Тук о Був деп ТНК обі Рко Ті Меє оди Тахо деп
Ко 15
Ту бек Тус Ре Уві Тук бек був цец дяп Уві сій Був Бек Лад ТЕр го та5 430 біх Азія Б1іу Двп о ТтТВс Жпе Твк Су Вега) Тем онів бій сСіу ев обі 415 40 445 дак Ніз Ві Тк Ба був бас це беу ів бек бто Зіу бує а 455 460 «від и «дим нт
Її» Каїтсив вести в «ав Те?
Ме ШЕУ Уді ко ТНЕ бай бем їм 03уУ цей тез о пей во То Ї1їе ТОК 1 5 19 15
АВ оА1їа її Сув дав Ії16 бБіп Меє так біп о бек РКО Та обет бе) ет та яв 20
Аа Бех Бе сію зЗій їлт УЗаї Тахо Її біз був вка Аїв бег о бі ВБР зо 4
Іхїе Тук бай зТУу Пед Аза Тер отТук Бій Та Бе БЕ бію Був Бех РКО
БЕ За БО ' сів Пеш бейп її1е ТУєЄ двробек Авпобеє без нів ТВ о біу Уві Рко зех 5 70 ТЕ во аж впе пек сРу дк пту бавЕ бі Твьх о бій Тук бок пес дкУ Ше дай ве З з8 зет Бей біп беж ій Авзр о Уві Ата шек Туї ре був біп СТ ТУук Тук 100 105 о авВОТУук Бк їни ТАЖ Ви обу беж ОБе ТИЖ Буш лей лім Їтв їм АкУ 115 ТО и
А1в Аз А1ів Аза хо ль Уеії ЗеЕ її Ме бра БЕО дек бек біз би 0 155 140 цей обу бвк о піу Біу йів Чет хаії У5ї Суво Ба пев дес дви Бе тує 145 155 15 166
Тго Був Авроїіє Ап мах Був о ТЛТьквобув о Тіве Авт Біу дек ШІй ко св 165 170 не
Вкпобіє Чаї Бей ойви Беб Те ТК оАвросів Аеробек бух йзр бек ТВЕ ї8о хо зо
Тух беї Меб беж Бех Тк ПО Тк пеа тах Був Авробіє тує сій йгу
Те 230 ги
Віз АвпоВет Тук ТЕ Сув бін ліз Тк Ніж Буз ТК бЗву Так дек бко 5 ух йо тїе УЖІ Був Бех рре Ай АгУ Аза сіб Су «у ТБ киті1з а
«хі» ВД - «шій» папстив щактив . «1095 158 мес цув бейсодку Пес дек їв її Бре їтїе був Аза ГІжи ба Буд Аво
Уві біп Суз сі Узі іп бе) уві Аза беж пі б1у ру їй Уві буз 2 25 За
Вко іл Аіяд Зек їею був їв бвж о Сув ув) діа бех бі Бе Тех рце зу ск) 45 дет дер Тук Ткр о Меб дія Тео Уві дго 515 Тв реосбІ1у був: Рхо Ме що БВ 50 ото Туб ї18 біу Авроїіє Пуз йжу Азробпіу пек тує Чаї дело тую Ата 65 7 75 по
Бкб бек їей Пух деп Ду Ріє Тв о Їїе ЗвеоАсе дар Ав одіа йта Та 85 Зо 5
ТпжЕ їей Тук іви лів Мек рев Аза Маї бохо пет сі) дев отТрЕ Аба Те
То 135 115
ТуУук Теж Суз дви йху даю Біе Сбіу Бко Дяр Тко Тут кре АвроБНя Тк; 15 20 щ25 біМ о Бко піу тар ОоМеє Уві твеоМаї йех бек овіз Був ТКк о ТВж рве Бро 30 135 1458 йек Маї Тук ГжоОо ей Аїа Рко -1у бек о Аіа Аза біп ТВХ Ав бег Мес 145 188 155 ї50
Ууакю ть без згу Сув цей; Уа? Му бі Тук Бле Рро Бі) Рко Уві ТНг 155 170 ТЕ такт тах тТЕр Ащи 58х Стус мет цей бек БВ сіу Уві наб о ТБе рве бо тво 185 їз та маї сбви біб бек Дер Гвв тує ТеЕ Бей бер обек звк Уві тик Уві 195 | 200 205 жо Беж о5зех р Ахе вко Бех біо тає Маї Тне був два баї Вів нів то ув а го втіш ес Бех ЗК Був Мак дер БУВ ую ес чаї Бко АКЧ Ар Суд сіу буз су БхОо був ї1е був тпкЕ оуатї бко бід Уві век о баЖ Уві Бе 2425 го 855 ме Рпж БЕ сво цу ЕКО Був Аво так сені ТвЕ о Їте ббЕ Бей Тих вхо 25 Б ак, ув Мву Те осбув Уві Уві Уаї о двев тів пеє уж вар Аво РК січ Мал
ЕВ 2Ва жах
ОІіп ма бек тЕр КВ Мав о ввродйвор о Уаї ЗІБ Узі Бів Сх ліз стік сте 290 І 95 О0 бій БЕ дет сій бін пік Бне Аа ет Тнк Бе лк бех Таї дет пуй
ЗЕ Зо 15 БІ їей о бто тіж Ме Ні ал Аве о ЖЕрв ої бБи бі був 014 рве ув був
Зах за 335 дхо узі двпоВек Аів Аїв Бдев рко дія вто Тіє Щ1і5 Зув ТвкЕ тре Бве зай 345 350
Був ТБк був у Абу Бо пув діа ко бін Уві Туру ТВг їІІе Ехо Бо 355 а5о 365 во Пуко бій зів Меп оЗіа ПУуз Дар о цдув Май бек їжи ТЕ пт МеЄб діє за З зо
Тк Ар пе Рпе Еко бій Аво 116 Тв Уві 01сї ТЕБ Сів Тер оАББ ОСВІТУ
ЗВ 90 За5 400 сів Бе дів іп дай тує Бу Авй Тв бій Бо Ї(1е Ме дяп отак дав г мо 415 сіу ех Тух Ре Маї Ту бвк ПЦея їеб ло УТ біб пуб ек дви теВ 2 425 3 швів зі Ав ТЕЖ Бе оте о Стувз сек уві інд ЕВ осла бі Бей НІВ 435 240 Зах
Ав ОНЕВБ НІВ Тих пін оїдув Бах Гео Зеє Нів бек ре бі Був 455 ро!
пкт Кк ко» 185 «ит 4
КАН Ця «1 За Синтетична послідовність дл т, пере сш» Оліговуклевтий для мутаренезчу ТІВ «80 1 чузацдадскоаз агессжекас сессесвтоес сбваававатї сацачеся 1Н «віп іт «118 44 «ев ДНК «КЗ» Смнсєетичне послідовністю керх «ки жх Оплітонукчоотиц для мутагенезу варіанта ІЗ чад» о тисассрасз азагводаз срасчатся чосшовавах со З «ВО 11 «жі» 4 тудоуху чек ПИк «иМіж бмктетична послкдевністіх «РЕ «ле3в Опіппочукниствий лих мутатенелу варійнтяй ТТ. «ешшх 171 спт:сатавсцу сссасбашик ясаоавохех Чаасссяцах хбато 5 «Ера» ктй сії У «аа» ЦВК. «кіш» Синтетична поолашвністіь» «о» : шт ГЕ еп аЕК их кі ки пед Киї візою ОВ «гай» ОпіконуклесотвОа рля мМУтавронезу варіанта ТЕЗ хай 175 чеазаккачна закавкссик Кбопствассув Фіалавсксов вбсасвсєвс ас Бі «ве т «11 50 «й ДНК «213 Сянтетична посолущовністух «айох «газ бпісгснуклеотид дня мутагенезу варіанта ТІ «абз 17 . :
Чавеасіваа гвсавоссс босеєсовчса азчавеетя восасавку 6 «рів р
ЕІТУВ ОО НЕ тів ДНК «2135 Синтетична послідовність «рах ники учи т їх ; т я еро охоп нет рих піт с щ- А
ЖИшУух бпіточуклестил вля мутагенезу варізнта ОЗ скдпвітА садааватта завзасвасос ссстдесваво спасваславехе вабсасво аФ. й «10 175 «2112 47 «или ДАК хаї3» Синтетична песлудевністе «ЕРУХ «З» Одітонукилесотид дин мутастенизу варізкта Ти «аббх 175 ссавессаво сбаззавакх айасокщдає секеЕсоєсвя Зсачаву Я, «102 16 «нїїз 4х се1й ПНЕ хР135 Сивтетична геслідоса сте» и ех с«віЗ» Слітсовуклесюмих пля мутагенезу маріавнта ТЕ «ап» те саасдвоста сорпсааемих сесакзнавас ссосссстс бщеає яЕ «105 177 чу 18 «кій» ДНК «лаз Синтетична лпоспідовністе: «Ех севаз йлігочУкДдастик для мутагеневу вврівнтав ТВО «йод»
ЧчЕспсЕсазлав дстарнавиї сосавсобооас адозізасажи сокассВ З «10» ГІВ «1» 35 кві ДЕК «і їх Синтетична послі девністі -сбашя СмдаАтетиМна послудеБАхсть «2» «2235 Опіконуклесотид пля мутахкенезу варіанта ТЦ «пз Я пищецасас Евзуавасьосс сосаспчстя сасеавсавов пеадево то «катов 75 ки а «ви МНК кеї13З5 Сивтетична пеблюодовніст. се» «ваз» спігонуклества пля мутаесенету варозігсна ТЕЗ «всйх 179 повазассає Едвасосіся повчав сте вбзасансоге сво 43 «вт» зво «ді А" «Рій» ДЕК «13» Синтетична послідловністе «ваг сема ОдігомуєлеІстий пня МмутамеєнеовУ жаріанта ТКА
«доз 18 т ствсвзацесо зібтаасосе сачосаааос ссавзатавс сегецаз ї7 «вупк 181 «8112 37 жо лову ПУ
СДН ля «ЛІ» слимжеттчна послідовні ше «ий жей в КК ОсНУукласВиИХ Для МукВКСеНеВМ ВВ сВека тика «а ТВ. йсвсаблоео васссяазив ссевсовс лес 37 «йо В сті дж «кіш НЕ «ії» Синтетична послудавність «дай «шах ОпіговУукнестид плив миутатеназу вабійнея ТОВ «ви 1? завастсссге потссасвоцса бавосБсестота цзсасезсссх чаавяє 48 сеї 18 «11» «ит ДЕК «ее бимтетичнв послідовні
ЕЕ
«вра мпірОочуклестий для мутагенезу варіанта ТЕЗ «4ПОР» ТЯ чЧацазассад зазксестодца сопцсосах ваагаассоза саесуде Я «3102 184 «й. й «РЕМ ДНК «8135» Синтетизва поєспідовнсув «То» «ги3з Олітовухлесотик дня мутагеневу варійнта ТЦК «ах 18 сгвсаваксос сода са пувазаскас спе СЕ жа ло 185 «ух Ай сЯ Ки ДНК «гійз Синтетична послідовнисть кед» «3? Опігонуклестид для мутареневу ваткакта ІН «400 1955 спадвавексс подзассроса зесрадслевнх спесхасюєте ек аа «хш430з 185 «її ай «иїрУ НК «шій» Синтетична послідовийоте
«ШИХ «ий ОлігонУкюластил для мутагенезу варівзнтя ТВі «чуму во сапгестеазає созачеаносв веФчсрайиос Савсчтоааає часоаас 45 «Ріпа «ем БО «12 ДНК чаї» Симтеєтичий послудевністів.
ЖІ Хя «ва» рміішоснуклеотид для мутатеневу нарізаний ТЕЗ «йо х 187 туазавтсасні содааеста Кох Ежесосо весвязкасс сповцовуде за «го 18 «2117 41 «5122 ЦЕК -2135 Синтетична посліненвнслть «ой «шах супінвоснуклестий пля мутатенезу езріанта ТВі «ві» 188 чесігсавоя асоласдєсе ваачаокозе ссітаввавк І «від ва «112 43 чі» ДН кеїйя Синтетична послідовність «ІЙ «83» Опіхомуклестид лпя мутахомтзу варувнтв ТІВ «Оп» 155 сетсавссас тоевЕЗевсоч адавподтачес споавеваваєо со 58 «2105 150 «г1ї5 «122 ЦДНЕ «213» Синтежпична послідовна єть «й кий» ССпігонекнлестид спла мутагенезу варіанта КО ВКУ «пою 150 спреавнкскае сЕрсслсвоя застадесаюсу дев чи «ло» 181 «2115 15 «рзії РЕЖ . : «ід» Сичтехична посСсліщовнаєть «вах «вий КонсенсуУєма послідевніть ппя сімейстяеа 4 СПА «и фх сЕйїіМ ЖМщу додатєки «бий «сейм Де хХва може бути ій, Пій, Су або сах «Ех
«трав ТІНІ додатки «ВШ йР кве3» Де Кав може бум чіу, паз або ек «ах «из Їнша дати «дз Ів «ей» Де хав може бути пЕЮ о амо Аа каеОх «вгїЗ їні додати «ее «ше Де Хай може бити с або Бек чай «вйї» Твна додатки «ий 8 «3» Це Хаз може бути ВБне, А1й дябо Пер ктабж ГТ ну. КЕ хе пу манто мето Мово оч ти ква зак тує АЩЮ хХваа аз хай мав ВХ УВУ 1 5 12 «210 132 «4115 18 «іш РТ «13» Смитетияя посллдовніств «айиз «бАЗР Кочцсенсусна послідовність ди сіищдейства У НСБ «ЕрОх «тай жнЕі податки «кий 11 хат3РоДе Хай може бути Дктч абсо зує «От» тти1» ЕвшІ додат «рад 3 «гі де Хзва може бути ту, Ні або дек «ДИ «ЙЕЕУ ЇншУ додаткй «кг 18 сао де Хва може бути Ме, Ак збо теє «РИХ «Ек19 ТМ попа ткИи «вже «ииЗ» Де Хай може бути Пув пса вка «их 157
Хаа Ії Хаа хХая Ас Бех хХав То Тк о Авподвю Тух вія баї Вер Ув) 1 З ХЛ а
Гу ВЕК ках 193 «гії» 10 «10 вит «ках Сиатетична послідовність
«Й х «03» КнеЕзнеуєсна песлідовність для бімейства ЛВ СКУ «РЕ «сип ХНУ дейдтКи «ай «незз. де Хав може бути І або бе «ий ие Інші податки шИтТех (Ву «еВ» Де Хай може бути Тк, Піч або Аве; «Ех «айь» їн доданки І «ша сей Це Хав може бути Уві ба дей «пад» «ті» Івщі додатки шо И (В св03» Де Хай може бути Ту дао рив «иЖИЖ ах людях, ке гр тити: каві» Мажх податки «ший 15) ней» це Хаа може бути бат, АЕи абе т «00 193 хай бах Тук Ави Хай СЕЗ Хаз хда кхав уді й ї Бо їв «2ійх їз «8112 18 «кий РА 21 ж о сСтинтеатична побсліловністе спи1 їж Синтетична посліловністе «ие стей» Консенсусєсна послідовність для сімейства 188 НОСОВ со єт21» Інші додатеий хилем 14 чи» Пе Хаз може бути був, Тр о аба те со
Киї» смші додатки «аа (і хйша» Де хва може бути Авб збо Ар «ЕР У жааа Тнші податки хЕших (15 коша» Де Хаз може бути Уаї абе Пем й «ад В їв тва цій Хла Ару йдех Ту Ткроїму вп охХана Ту АТа хХва бак хі 1 5 о 15
Туз чех
«105 Щ55 «й «12» РЕТ «Ії» Синтетична послідаеввісиея «ШЕ» «раї» Юонсенсусна псаслідовнаєсть для сімемекна. 13 ОСОва «вух «кі? Інші податки чий 8 «тої» Це Хав може Єшти Тур, Піу або Віа чиїх «игім ТГвіші додатки «вий ід «й 3» Бе Хав може Спуєи ойіу, Бі ай Ади «ах «021» їнші податки сддй Ст «Т235 Ле Хаз може буде бехє або тТве «каву тЕФіз' кмі додатки «ий ві «кож Це Хаа може бути Уві, КБ збо Пей «ех «риїв Інші додетки шайй С «Еа3» Де Хаз може бути дек зба ей
КЕМух сЕйїМ тні додашки «ша (8 хЕга» Де Хав маже бени Біє, ек, го ОО тує ка а піп ЗУ хай хХаз ха) хво Ха жав г 1 з «гав ЗЕ шк «2192 РЕЖ «й1Х» Синтетична посспіловеість «ЙДИ І «03» Кенсенсуєна послідовність пла сьмемства З Не двох сайрх інші доданки «Ей 1 кали де Хай може бухи опе ве дк «ВЛ кий1х ТШХ додат «ваша У «РИЗІ Ще Хаз може бути Аїя або Зах
«00 во
Хаа іїїе АвроБто бек Авр пес Тух ТВх дви Тук Хаа Бко Беб Рпв бів 1 в; 19 ІЗ о1у «Ето» 187 «Ії 107 «рим и «2135 Синтетична лослідовність сайз «УЗ» Конеонсусна послідовність Варізбеацльної області легкого ланцюга сімейства чі «ВИ» «ка» днша додатки кийех ТВ «вка» Де Хаа може бут лба, Пів, О0іу або бек де. ках жншії додатки «РИБ. 1954 «шва» Пе Хава може бути б1у, Сім зба бах «и желаз Інші дюдетки «Вот газі кегЯ Де хва може бути Дер або Автгі «ВЕ кигі» Їнші лодатки ее ІВ сте3» Да жав може бий і аа бе «каинх дей ІНВ ДОКИ кий 955 . «23» бе хХав може бути РЕВв, дія аби ген «100 157 хвв їі віз пев тис бів Ре Бжо Явк Уві Шеж ді від Бет о ЗКУ Сил їх В іо 15 тТвжх АТа Ак лі Бек Сув беж ЗіуУу АБ АТа ви біу 5іу ТУ ВП маї пек оТтробую Піп ій бує Бго бі бів АТаобко Маї фев Маї Ті Тук
БЖ 40 5 лавр оАвр Ар оавВи Аква Бо бек сіу їзфе Бто 015; Аку Впє Шех ОДУ век по 5 са дзпобек С1У Ам Трх Аза так обес ТАЖ Тіз век пл ТКЕко осів ВІшЖ Ти
ЕВ Ко то а :
Ав оБвІз Аза Авротує Ту був ха Бек тую АБИ Хавз хХав хав йаз Тих в о 5 мах Рбе бує ту Бу ТЕх губ ївео ТАХ УДІ гео 100 та5 «ем 198 кк1ї? 158 «їв» РТ : «ій» Синтетична поспідовнішть
«лиЗ3» КОонсенсусни послідевніств вархасенльної області важко панцюєе сімейства 17 си «Кі» Інші додаткЕй оди кв «вів Ме ва може бути вто айо Був «гдз серії» ЖнНіВО додати «Зопз 54) «ри» Пв'хада може бути тує, Нів це ве вина чиї» ІНШЕ додатки
ЧЯКв ав «кам де хва може бути мех, АкФсасу ТуУЄ ше 5 ср. «жі ЇНншЬ лодатки «вам В) «ейЗе пе Хна може бути Муз або ду «апп 198 біт ді бБію Пес бі біп щев Я1у БО осіу Гез баї бух бо Зак осів ї 5 Не ї5
Тюд Гек Чех без Тбе о Суз Тв їі бек Щ1У бвродек Уа! Яех Ту Ве 29 5 30
Зак лі Вів Ткр о Сіу Тхроїіє Дюк ЗМ бек БЕо с1у Вхяа біу бем о б3юш
Ткр Пес злу Мав ї1є Хаа Хав Ахо бек Хва їх» Тує дзп Ер отТух Аза
За бо аз Щек Уві пу бек Акд І1є їТйх Іі дав бко дар отех бех Бта Ав 55 7 5 БО
Пій ВИе бек реє Сп Бей вай Яех Уві Тк Бо 1 Авротву Віз Уві
Тут отух був Віз дез Нав о тТвЕ Жук Все був дез бах Бе Авр ота ТЕр 159 95 уже; зу Бі о бІіУу ТБ оГезч мні ТЕ Уві беє ЗВУ 2 «210 153 ке ТИ «а РЕЖ
Ув1ї Сиктетнчна поснклевністть вра: : - «03 Кантщє псисца постідовність заріабельнаї сеазсті сегкоРо пдаичюга сімейства
ТВА. «вг0х «ааї» Інші лопатки «веж ВВ «ех Це Хав меже бути біп або Заг еВ. «ті Інші додатки живи вт «23» Де хХаа може Бути тт, шій бо Авр кох
«Ше: ївщІі долатки «ший З «ва» Де хва може бути Уу«ї або деп «пд» «1 Їнші додатку «ваг 195 «га3з Де Хва може були Тур збо рБе сих «дві» Інші додатки «ПИ ВЕ ха» Це Хад може бути бе, Ав по овбсо сій «АпОв і
Во оЇіє біз он ТБ бів Бк» бко бес о баї бек уаїсАїз Бго бу 01 ї 5 15 МО
Тк Аїа Ак 11іе бек о Сув бак бу Азрожви Ї1а фу бет Тук Тек Уа
Ва 25 Б
Бі Тко Тк бій піп був обко сиу біп о дів Во Зако оТей чаї тів тує о 5
Сьіо Айр обех біб вгз вх Зек бі ї1і8 бро біз дк о вНе бек біу Бех 5О ЗХ в
Ази обер осі Аз ТЕ Аза Тпс без ТБЕ Ї1їЄє Бех ЗІу ТБк бій Аїв 5 5 ла а а дев іш віза веротук Тує Су» Хаа бек ТУк Аврохаа бо Хай Хва Хаа 85 па ЗВ
УМ ЕБе сту БіУ БЕУ ТВ Був Пец Тих Уві Гев зай 35 «зї0м 00 «2112 12 «12» ВТ «іа» Синтетична послідовність «вед» «ва» Консенсуєва посніновність варівбеньної області важкого ланцюга Симеиства 1В8А - 18 «аж» «ка їз Інші додати «рве 55 чи)» да ляа може бути Пув, ТПпЕ ВОВ ТТ «крах «ау Інші додатки сейм шві «23» Це Хав може бути ЛЕТ або АВ «их «ваш» Інші ДОДАЖКІИ: - «ви. Б «рез Де хаа може бути Уді аб: Бей «Пп оо аа с Пец сій бр бек сіу РКО сіу це Уаї Був ркса Бак сїй 1 ту хо 15 тик цей бегобво та осСув Аїа 11 Зех б3у Кв о бет Уві бек бек АВ й 5 30
Бех Віа Аїа Тжр біб с Ткв їі Ах йпбіб бек Рхо БіУу Акад БіУ Бе бів чи а
Ткр бо 5іУу Біе тіє біл каз вру ек оцуво Тсроїук йво хна тую Да
Би 23 ке
Хза Зеж Узі пу Бех Акф ті: ЖНЕ Гі Аз Бко Дер о тТлк Бе був Ав
БЕХ 7 7 б біб Рпе бах Цем осіп рей Аявй о Бех туаї ТАх Рко обім йею тТвх Аа т 85 Зо са їух Тук Суз Аїа Атча тую цех тує Бк риє Тук Зак її165 ВБр ТУЮ ТХЕ
Таб 15, їтО су сіпобі тв бе Уві тає Ууйі бе ех їз «ТО вах «її 107 свт ВЕТ «213з Синтетична аоОслідбвність «Ел «223з Консенсусна посліденність варіасельнаї ссопасті перпхопо ланцюга сіменстева їв чив» «тиір» ніші. под «ВЗ 19) «раз Де хавоможе бути Сїут, С1у або ДІ «ех «ит» інші делатки «дви 9 сети? Де кава може бут іт, Зіч апа вчи «20» «ек21з Інші додатки : «ВЕ (З8 «ВШ? Ле Каш омеже бУТИ Бек зба ТЕ жив» «Е21?» Інші додатки «дит 194 «ита» де Хав може бути Уаї, Тісє або цец «ВО» : «801» Інше податки «айв (ЗБ «ва» пе Хав може бути о бек'або Гей «Ек «пі» Івші додатки «Ева 35) «аЕЗ» Де хХавоможе бути 5185, Беї, РКО ай тує «О0пв сі дя Іі Ото Меї Теж біо де обхо бе Бах оїео; Зак Аїз бек Уаї ЗІ ї 5 15 15
Аве; опо чаї Тх Ме тре Суз йха Аїа ес сплав ще Т1а б)3у Ле ТеЕ о З 35 їжа А)1з Тер о Тух бЗіпобрв Гу Бжо біу ГУув Ата пт МПув Мей Пез Те
За щи ЩЕ
Тук А14 Аїа бех бек цеч біб бер обіу баї Во бек дку ре За бТу
УВ Бо
Зах біу бек ої Так АДво РбеоТвє Пе Так бів бег Чек їв; бій го 65 о 8 па ім йвр Бе Аїв ТБЕ Тук Тук буз біб Зір Хве Кава Хаз Маа хай Хав.
ВЕ 50 5 лине спіУу смів осіУ ТВ Був о Уаї Сі о тів Був що 105 «8105 п «аїїМій «ій» РЕХ «ві3ж Синтетична послідовніств «рий» «Йо їх Коксенесуємва. послідовність варіабельної аслаєті важкого ланцюра сімейства їз . «200» «ві» Інші додатки : «шви ЗО «ваз Пе охХавз може бери гпесвбо дЕц «Ж» «291» Інші долееки «дей» (81 «риЗ» Де Хда може бути Дів або бах «200» 205 сід уві бій пек Заї бій бек біу йівосіз чаї уз був Буро Бі би 1 5 о ї5 бек мен Був ї11є бек о Сув Буз бі Бех БІТу Тух Єв ре Тл Аза Тут ко . 23 Зо
Тер Уві Б1у Тср о Уаі! Ак бій Меї Еко 2іу буз С1у їец бів Тер Мех 35 що ї5 біу Хаа іє Дер Кто бек о дзр бек ТукК ТВ Ди Тук Кая Бус Чет Бре о БУ о ща біж біп Уві Те Ії Зех Дів двр бух дев ії бек ТВх Атїа Туг о та ТЕ 5 ївб) бів Тер Вех дек ем оїща Аїв беж йвротТве Азїв о Меж Тух Тук Сув
Зо За віз ка зій Бей Тк іп бі тує Ме: АхроТис гпе вар ех тк ослу
Кж М 110 сів 5ЗАуУ Тлх їз Уаї Тпк Уа) бек дек яко; 15у «Іо 203 «Рі» 214 «Еш РК «гї13а» Синтетична послідовність «рід» ті» Повна довжина консенсуєної посліревнесті перкото ланцюга, стлюкжнство 17 «ва. й ві» жВвші додатки «йййм (ВВ) хр» де лаз може бути дув, СБіп, бі або мат «дО: : ха інші додатки «й (я «2235 Це Хаа може бути іу, 51: ябо бе
Фе «01» Гнщі додатки сЕшЕт ССЗ «и» Де Хва може бути дзр ябо Азо «220 «й» Кві додатки «ее З «и Ух пе Ха може Суб сід або Бах «ЖЕ» ХМшщІі. Додатки «вав 8 «285 Де Хав може бути рив, Аіпй або гей «00» ОЗ йею Тле БІТИ без ТАК ОСбІй Бо БЕ дет Чаї ви Маї Аіа Рго піу БІ
Х М) що 15
Твк дія дха Іі бех бує беб Бі дер ові бе піУу сіу Тук РИ МА ! за | КЕ: | В чек ТІе Тує зів Стій ПУ РКО озіУ оп Аїш о Всо Уві Сем Маф оті ЖУуЄ 35 40 У азеоАвр дво Ави Аа ВКо Єшек біу ТТе бо І Ах где бек біу бвЕ щ-е Кут во
Зви Баг Січ АВ ТБ Аза ТЕ дви ТВЕОТІів Хве сіб Тс одІв Ада М с за сх ва двооіч дів дво Тут Тук Су Хав бек Тук Аврохяя Хад Хаа Хана ТЕ 85 50 З ча овке ому бі У ТЕ ву Пе: стТВЕ Уаї БаосАкц тре Уві Ара дів
ВО 195 125
Бк озех Уві пе ї1є РБе ка Руб зек Аза бій біб іо ку БЕХ СІЮ 120 25 тдк Віа дат Уві ві Сув їм мес Ав Ав слав Тук око дея бі Аз 8
ВО 735 110
СувомМві сій Тев обу чві дав Аза вів ївос Біпобех сі вва бех ул
КРХ РУ І І не зЗійп век о уаї Твх олія ЗІій АвроБеє буд оАвЮ ше ТБЕ Тухє Вех Гей дек 165 о 175 дес тих рем ЖЖ їси бес Зуз Аза АБ оТук ско Ту нія Буз Уді тек
ІВ 185 їз ліз Сув што Уа) Тв Не оса шу бецп сват дес РЕ Уаі тдЕ Гу дак 195 о шОЕ
Ре Аз АкЯ бі сів Су
ЩО
«пі» ой «С1їх 58 «сиЇйх Скхнтетична гпуспідоваихсть «ВВП «БеїЇ»х Повна довжини коснвеснемсної послпідсвності важкого пагшеара, сімейство 7 «ИЙ» «их інші додетЕмМ хийот ІБ кі» Де хав'може бути АрчЯ або їТУк «ДО» «кі їні додатки ки иЖ БА же» Це Хва можа бути Ту, із ав Бех «йти щей» їнші податки «вит ІБ чига» Де Хаа може бути Мес, Вб ово Тк «ги «кер Інні додатки «ТІг 158) «виі» де Хаз Уюоже бути Бу яйо Ак ср 04 сій уві біб цес бів біб бес 5Зіу Бкб б1у їецоуай ув Ро бек сіл ї В Що ї5
Тек рес дек ей) ТЕ Сея Аіа іа Зак осіб даю бех Уві Бех ТВЕ АК то 25 | зо
Вес ові Аза Трроблу Тр тів ду са Бах Вро Сьу Ака мпіу ва бо
АХ Аз
Тер Геч сіу Хаа Ті Хаа Хаа Аку пек Хав Тгр отук Ав бер Тух Аїа во 5Е 50
Уа Бех Уві їв Бех ка їїе ТКУ (а деп о Бхо Ар отлх Яех Ту оВЕЙ
БЕ то 18 вах іп Бве зах Бей осо Фей АВЯ Бех УВА ТВ о Рго 31 дер отТвЕ ОАЇа Ух 85 БО 5 тук Ту Сув Акта від Ні ОтТаЕ тус ореа тух їви с бекоВреа Аврочуаї тТкр іа 105 110
Зі піп обу ТАК Цей Ма» Так ота аг беж Аів щет Тв обув Щ1у во 1ї8 120 1955
Хеє Мяі Риш Вт ви Ата ско Сув зве АКЯ ех Так оває пра беюх Те 130 ї35 таз
Ата діа бец сту був їв Узі фу дзу Тук бив Роб ЗІ рЕо Уі ву 145 155 | 000185 ї6о
Уві Бех тк делоБеає бпіУ АБ Гей Та бек бпіу Уві Вів ТВ о бпе го 165 ї78 ВЕ вій тах їз Бій бек бек шіу сей Тут бЗех Ге Бех Зек Уві Уві Тах 180 185 150 уві рхо йеб зех Бек іей СТУ ТБ о»ув ТБ тує тат бут дя Уал дво не мя 200 ТОБ нів Був бре Бек ДЕЙ ТАК ПУБ МАМ о Аввопув АкЧ У Зі бат ме ЖУК жо 215 тей 5іУу вхо гкз був БО Боб Сув ЕКО АТЗ Бі сій Атїа вія бі б1У Р хи5 2 235 ас вк уаї Бе цей бе рЕФ ро Бук РО Су Авроїбж без Меб ї1т5 бек дах 25 я хе тах р сів Май ТАК Су УЩІ1 Мао щі Яд тдо ек іп СМ Акор бо ех рен зже Зх чаї Ай бКе АБ о Тор ТУкК УМ Во ху Уві ші Маї іа Ав 275 288 255
Мій Муз ТВж о буз о Бо дга бій Біб біт Врє бай оВеє ЩХьу Фуко одко хаї 299 295 їзда
Уві бек хХаї Цви То уві Бей ціз бій Двзр» Тур їєз Авп обі Буш Бо за5 ЗІ 315 За тук пуз Сув Був уаї Хег Аа бує Ту Без с го бек Яєк тів Зі Був
Зк 350 зах їБж їїе беж Був Аза зу Сіу біл БжЖо Ака бів Бго біп Уві Тук ТвЕ 349 за зва цес рге Буз бак БІ шій біз Меб ТЕ пу Ави сіп уві ех ве Те
За зб: | з65
Суб без Майї Був с1уУ Би отУє РО бе дво їі Дія Уа шт Тер бів 3 375 8
Зак дав стіу сія Бо сій Ав Авпотук пу Тв Тве рхе жа Уві їв
За 399 395. ай)
АБ йдВК двро Сб шеє ВН Рі се) оТую Бех Абу бещ тях Уві БбвроБув 105 о ЗЕЗ
Бек Ако Тгросій сі» біт дзап Маї Ре бек Су бес Уві МекоНія 51
ГИ) 48 430
Вів бе Нія Ав Ніж Ту Тк одбій Бу Ябет без бах це бех бей пу 435 ди 145
Був жеїаз ТУ «йфкх 214 «їй Вт кій? Сивтетична послідовність «вах чивіх Повна довжина консенсуєної послідовності дперЕсСТтО даннюга, сімейство За «вих «виз» ївБШі дбдатки «ароз ВВ «ах Де хХаз уже бути 5іп або бек «де рик Р лівші депятки «пас ТЗ «гйаз Де Ха може Бути їйх, 515 збе дер нки «1 ж Інші полатки «ор 94 ча» це каз може бути Уді збе лев со «ВФїх Інші додатки «прі» 1985 «ий ца Хая може бути Тут збо вНе «2202 «гі» Інші додатки «вик 190 ср Це Хва може бути дах, Авпсаїо іп «ап» 2О5 деврої1є біб бен ТЕ п пре Вус бЗеї Узі бек бі діа Ртб 01У ЗІ тако Аза вго бАе бек був Зекопіу Явробеп Те Му беж Тук Тук Уві хо 5 0 пі о Ткв жук пів З Муз бо біу бій АБвоБкО МяЯї Бе Уаї Те Тух 46 ке бік вве бак біо Аха Бо беж Бу ТІ вро Сів Бра ре ек спіу цдеї
БИ ЗБ а
Аву Зак піУ Ада Тай Аа ТвьЕ веб ТНХ Ії бек біу ТвкЕ Сів дід 51 53 то - ТВ ВО вв Сі Вів Азрвобух ТУЮ Сув Хай бек тує Азр о Хаз Рус Хав хХва Хаа ва ау зЗ5 чаї БВе бі пі бі ТАЖ пу Бей тиж Уві Гео деч тТис Уві Віа дів 00 105 тів
Еко Зек уві Бе ТЇ1і« Бе Бко Рко Звк АБИ біо піт ер Був Зех пу 115 125 125
Їй Аха ек уві Уві Ст Іму Це Авт Лев Ре тую ре Еш бів А ї3о0 135 140 муз уві пій Те пуз Маї АБ АВ о Аїва Гей бів Явж с О1У Авпо дек сло їта5 ї5І ї55 1855 сі дво чУаі Те біс 512 Ав Чех Гу Азо Зв оТнЕ Тує Бех їси бек
165 іа 175
Зах ТНт Пец Ту бен бек Гуз діа дар Тек обім уз Нів цу чаї Ту
ТО 1855 їза за сСув 1 Уві Ткк Ніє Зі біу Пе; бах бек Бо Уа) таж Був дак їз Ж газ ке дя Акч чіу бій Суд 21й «аїоз хо х2тух 54 «кі БЕТ «дій Сичтетична послідовнасть
Хей кае3» Повна довжина консенесуєнОої послідовності важко павцюєюа, сьмМенство 18А и 188 «ве «вий Інші доюлашки «газ де Кая може буси Був, Так або Іїе «КО У «віз їнші додатки «воЕл (бі кеш» Це хай може ЗЕтИи Аа збо паю «и «221 ІБШі додат «дор (ж «пол» Пе Хаз може бути Уді або Пед «00» 306 бів чаї Сів рем бів біпобеї бі врко біу децп Уді Був Бі бек о 3 З а х3
ТБ бепобеж чі Тк був Ата ї)е бер обі Др обет уаії Зех Вег дет 2 : г ЗО дек А1а Аза тТхробіу Тхв Гі Ак бій Векорко Біу вхо, біУ Бей 19 а Ер
Ткропеи біу Її Тіє бСіпоХавз Ару бек омМуд Ттротую Ап оХаз тує ВІЗ
Зо За бе
Хва хек Уаії пу Зек Ахсо Тіз ТБкої18 АзворРто Дер ТЬк бас Буд Вал 65 7а т но
Зіп Віце йдет ема Мо бе бо Чех ді Тчт о Бко бо Ар оїнт Ата Маї ве -о Зх тую Тут Сужш Аз ка Тух ек Тук БЕ Риш Тух ек Бі Аво ТУк Тхр т90 М 115 і і спів сту ТНК ота чі ТИЖ Уяі ех Бек Аза 5аЖ ТЕ був біу рко 115 155 1575
Бах баї Бе рКо Без діа ско Су Бех дус бах тир обес обі Ба Тих
Я 130 35 Мао
Кіа кіз без бі був без Уді Був йве оТук вБе рез біб РеооУаї Таж 145 ї50 155 І5О уві бЗає Тхв дя дах бі Аїв Ге Тай бет біу Ув) Міз тлвЕ ре рег 155 ї170 ут
Ата тві Мей зо Зах Бак осіу бею Тукюк Веє бе ех мек оувіи Ууді ТЕБЕ 185 185 КЗ тїаї Вко беж бек бек Тех СТУ Зву пу тТвкК оту тн Су Адп о уві дей і95 -О о
Мі Муз Бо бек дав о ТЬЕ мув Уві Дер був АкФ Уві біб Бек пув тує 21 215 520
Зі ВО гро Су Рко БЕ Сув РЕбо Аїв Рхо сіб Аза вів Сі оту вс 295 250 235 24 зек чаї Бпе це все Рхо Ро був Рхб був АвюЮ ТВК Сей Мес їі дв гав 250 па
Аха о ТнЕ Рхб щі Уві ТЕ Сув хаї Ма) уві Азю Уаї Век болю біо дяр 258 255 а
Ехо піз Уаї Бій о Биз азп тТЕр ТУЮ Уві Ар сіу уаї бі ха1 Нів ДЕвб
Аве Пув Таж Був хо Акч бій спів сій Бве Авіа беж ТвБЕ о ТтТук Аса в 255 ЗО
Чаї бак Уа) рей отїве аб гей Ні сіполАвроїхр о печ Авт бі був С
Зах ЗІ 315 325
ТУук ув Су Був Уа! Бек а Гуз біУу песо го бек Бех їїва о бСіш тує 355 330 335 тБж тає Бех о КУ Аха Буз су сів КЕ АрУ Біб Бго зів Ма1ї Тух ТАК зай з45 зо
Тез око РхЄб бек іп бів ша Ме ТВ Гу Авй бій Уаї Бек їм ТАК
ЗУ Зо за
Сув тез Угб Був БІ Вве тТУк Рхо бек одар Ії Аїд Маї 3 Тер ше зУуй ЗТ 386 вес Авп ому іп РЕо біз Ав оАва Тук Бук Тип Тл Рго Бкб Уві ев 285 330 0028855 400 джр о баЕ Азросту Шех де РНе Мей Тук бвх Акй ее» Тпж Маї Авробув ох . тт 4ї5 дає да бер осі 53 1 Двб чаї бресзеєс Сув йвхи Майї Вес Нія сла чо 55 130
Аїа їев нів Ав нів Ту тТвж стіп бух ше Те ошек Бец Шек цей 1Уу ї45 145 пух «віз се «хіх вій «ЯЗ ВЖЕ тех» Синтетична послідевнаисть «ах «еках цОдна довжиив консаенсуєнах послідовнасті негкоре панцюєа, смейсевоО 19 «а «й23» тні додатки : серй 911 «ва» Де Хай маже бути. Тук, пуб або: А1а «и тегії» Інші податки
Ти й» СНІ «223» це Хав може бути: піу, біс або дей «ау» «Ре» тТаші дедатки - : кивм ст) «ве» Це Хаз може бутси шек бе ТНЕ «Ох «хай» ївшї дедатки етйй (ЗА) «3» Де Хаз шоже бути Уа1ї, Ті вбо Би «айв «їх Їнші допаТки теж З5Ї
«бо3» Де Хваа може бути Зек сабо цем" «ий «віх Інші додатни «ог 55 «ший» де хазв'може бути Її, Бех, РЕ сабо ТУХ «Ост двБ її шік» Ме Ти ша дес Бсо Бек дес іш Бех діа бек УА Біу 1 : 5 15 15
Авв Ах уві ТЕ Те ТвкЕ Су Ар Аза дек сїпсдех вів біу їБо тує о 25 30
Тен діа їжр Тут хуй боп орув ВЕБ еіу уз вза вто був їео Бей отхе дк
Тук вів Аїа Бех бек ме бій Зек о біУу Уві Рго 5ек дк Рае беж О1у що пу дО дв бу дак ру ТЛК Азровлпе ТЕ во тТлЖ Їіє Зк бек Її діб Бо ців дв баз діа те Тує тує Сук дім сій Хаа Хай хХаа Хавохаа Хва
В Зо з
Тк ве піу бій бу ТвЕ Був Мах біз 118 Зув да тво Аід слі
М 10 То
РЕ бак оУв) ББе ТІ вве реа РКО век Ави пІій обіп Бо Буз Яр озлу 115 То і25
ТБх одіж Бех Уві Маі Сув гені пед деп оАяй РЕ тує Ргс де 0 Ада 135 ї35 125 ув УВА Бій Бр о рув Уві АБО о Авв Він вах бай бек опіу Ави сех сій 145 і 155 й сіб Бех уві тає сіл сій йзп дет пуд дзю беї Твї Тухк бек їм дек ідв ії 173
Зех Твг Бей Тс сем дек оБув дія Вр отук 14 Буд Ні був Уві Тв їй 185 130. дів Сук бі Маії Так Вів сіл о біу Гео дек бех го Уві ТвВх Пух дет 195 295 26
Бе бем Ак Ге біз ув 218 «210 808. «во АВ «ТІійх РЕТ «Ше Синтетична послудовність «й «Та Повна довжина консеносуснаї послідовності важкого павцюта Сімейство 19 «аг «паз ви рдоматки
Корй кВ кегі» де Хаа може бути спе яшо лк иа «із ТІВ пойатки «дра в «еко Це хХав може бути діа або Бех «й ОВ
Сіп о уаі бій без Маї бій деж піу Аза бін Уеї був Був Рюкє у 1
Х 5 ЩО 15 бек Пезб Був 11е бек Сув Ппув 015 Зак біу Ту бек Вре о тнк дак оТує о 85 зо ткв уаі! сіу Тер Уві Яка бів Меї Бро б1іу був бу рез Змі Тор Мех
35 ня 15
Зіу ха ліз АЕрв о Бко Бех Аво Єву Тук ТВ оАзи Тук хай Ро БеЕ Ре що Б бо бів шіу біп Чаї Тех їїе бек Аїв Аврогув Зек Іфе Бех Тлродів Тук
Та тА 50 теж бів Тхр беж бех о бе) цуз АМа бат йзо Тв діа Ме Тух Жук Су ча р; ва
Віа бу бів Це Тут сі біу Тук Меб АвроТвк бе йвробек Ткроаму ї0о 105 а стіповіб Ти ГМезх Уві Те оуваі екс бек Аза цех ТЬБроБуг Сів Ехо всех заї бе рко Бец йіз Ро Сув бегр дес бек ТВЕ бебоб Бо бех ТБ й1а 130 135 | 140
Аа дес сту Сув бем о йаї Буз йзроїУє Бл Бо бів Рко Ма1 Тйх Маї 145 ї50 155 їібО
Бех ТгроАви Зах О1у АТа їем ТВх бег ой уаї нів ТВ о Бйе то Аба 155 МО 5
Маі Сем ЗМ Зехк ек бі Гей Тух век ес беє бак Ма! ві Тпкомах, 18 185 НТ ко Зех бех еко їец ЗіУ те іув їх Ту Так Су Взи Маї Аяр Нив 155 Ов ОБ був Ркс бех о Авгв ТАК опув чаї дер їв дка баї біс бек був Гує Бім о йо кажи ко Ро Сув Рко бкооСуз Вуб АТ Бко бів Аїа Від біу біу Бо ЖеБ га нати ка: 241 чаї Бне цес Бе Ро ко бух Бо Був дер Жах це Меб Ії бек Ахо
А ФУ 25
ТнЕ Вк біз Узі ТЬжх о Сив о Уві Уаї чаї Авроуаї Ясв Ств Біб Дер обо рих аа 27 січ Уві Віз рпє й ТХв Ту Уах дзрошіу уві бі: Мак Нівз Аво дха 18 280 5 ув о тТвж ув о Бко зка спіл бій біп бе дей бек тах ТукоАсе Уаї Уві
Зекоуві це Тйх Уві Мец Кре сій др о Тгр о бєш вдо Су ру ОБО СТУК за5 зі ВІВ 350
Бук Сувопув уні Бек Депо омув С1У Їїо Бо Бек обеж Тіз бів Був тв 25 З 35 їіє сет Пув о Ата ру Бту бій Бо Аве бі Бо іп баї ТУ ТВх оБев 80 та ЗБ
Вте ВкЕб бек обСів 02 С1О Меб ТКЖ Ту два ій Мі Бек Бей ТЕ Схуз 335 БІ За
Без Уві йуз щіу Ріе тук Рус 5еї АзО ї1іє Аіз уві 10 Тер оБіц Бех
БТ) З 480
Кві піУ ІВ о Вхо сі Ан Ав ТУЮ був ТЕ Ткк о Бко Бко У Бей Авр а85 350 355 400
Бех Авросьу Зек Бйб; РБе цем ЇїУук Бек Хгу пе); тТкк Чаї Ав бух ех 405 аа ч5 дет тТтшоФілобта пі Ар Мі БВеспьж був дек Уві Меб Ніж бла Аа
Що Ей 4535 цем» Кіз Аза нів їж ТпХх сіп муж ак їв Яві меш Бек ре) сту Бук 435 40 445 «210з ЩО9 кеїх їО8 «2їп5 ВВЕ сі» синтетична послідовність «ай «293» Ввріабельна область легкого лавпютв варіанта Об Кандидата З «Ой» газ сів бек Уаї йем Тих біп о Рко о Рсо Бех Уаї беб Майї Аза Рко сім Бій 1 5 10 15
ТвЕж АтТа дк гіє Бек Сов ех с1у двродвй 118 біу Бек Тук Тує Узі
КО 25 За
ЕЕ Тер тую біп ій ув рко сту біг дів вто уві ца Ук оті тує 35 го 45 сім йкЕр бек ЗІ деп Рео баг о щіу 118 ро зла Ака ББае беж бІіу Бек 85 рев)
Ап обек Ту дай ТЕ діа Та їн Ту ГІ беї о біу тнкю бій Атж Бі 65 то ТБ Вб дербі Ва Авр отую Тую Суд Сіл бек бук дер беж Біт БВ дає РНЕ 85 80 з бі ах пе бі Му З1іу ТОЖ о пук обєм Тих Уа. Бей
Кт НЕ «Ом иа «жі» М «ріг БВт «віз» Синтетична послідовністя: «шо» «УЗ» Варіабольна область пескосо паноюєа варбанта Є? Казоидата й «кядах 915
Піч беє баї цем Тве бій Бо вхо бак Мі беж Узі Діва Бк Бію Біт ї 5 то 15 тТвж АтТа о Вру Ті Єву Сув бер обйоу дев Авй ї1і8 о біу Бе Тут ТУук Оаї 29 25 3
Нів о тТкротук вій бій ому ркс сіб бій Віа согво Мав ей тах 18 Тк 0 45 іш айви дев БУ вто рко бек сі г1Зіе с бкб Зій дей РБе бек осі Бех | 25 «0
Азп век обі Авт оТвг дів Тв оре Тр їв Яєж БІУ Тв Обі лів ОО п тА а в дав ості: Аіа дво отут Тую Сув Тіп бек оту АВбОТНЕ хо У тТуковег
Я зо З5 ува ря сі бзіУу У ТАК Був Гея ТБ Уа їй 109 ТУ «ід 211 «я «В1йх ВЕТ ке13х Синтетична посліновність «ке У «йи3»х ВЗаріабевнивнав Зблаєть песнохо люнмеєе варіанта 05 Кандидата 19 «ай 211 бів пдеж аз Цен ТвВеобіт Бкге Рео Чек аї Бех Чаї Аза Рхо біу БМ 1 З І! ї5
Тк обла дко Лів Бек Суз Бех ОТ1у МБО вет ЇЗе б1Уу йеє Тук Тук Уа о я за «нь о тТЕЮ ТУБ бій сів був Сто 5ІУ ів Дів Рко Уаі ївй Уяї тів тує
За хо 5 сів Аво бек сій Аку Бсое бек осі іа Бко сій Асу ББа шШех бігу бе 50 55 50 вза Бек бі Ави ТвЕ АтТа Твгб зем ТУ ТТ Зв сту ТВх б) да іа вх за їв й
Дер Осій дів Авротуг Тут СуЄ бат бек тує йББ ДБ Бо дей Бре СЕ
ВВ Бен 5
Маї бвпо У ІФ МУ ТЕ Був бе ТОК бах Тео ї0о 05
«10 м 217 у : І ке» ре яти ВВ «13» Синтетична послідовність «ех «ера» Заріясельна обпаєть важкого лаемцюга варіанта СУС Кандидата З «ЦЮ» І зіп уві біт ей бій бій бек 3у Бо біт пем Уа Бу бус бек ой ї З 1 ТВ
Тих Мей БЕХ їй Льв був Віз 1Ще бек січ Ар бек о уУуаї Беж бек Ат
Зеї Аїа АТ Ткв Біу Тов 16 Ак Пій Щеборко сту Ака осьу Беч оси | 45 ак
ТЕр Без; біт Із Іїтїе бі Хі Аху Бек був о Тхр Тує Ав ва отТук Від
З 5 50 їви бех Уві цу бек дксб о 11 ТА о Т1іе Ай Бо дев ОТнЕ бек Був о Авт. бе то 75 8
Сів Бе КЖеж ел обі Бей дл» бек уаї Теж Бро бів дар тає Аза ух
Зо за За
Тут Тук Су Аза Аку Тух Бек тує Бо ВБе стек Бах Те Ано Тук Ткр ждав | 105 ща с пре сій Бу ЖАХ Пец о Заї Тих Уві зех Бах 115 ї2а «а да как їж хе ВТ «вії» Синтевична мослідсовність «Бей «иа» Наріабспьна область пажкого панцинва варіанта су Канлилатд 10 каст ві ашпечаь бів ви. Бій бій ек 01 РКО у Тео Ме Бош РБжО Век оби 1 й з о
ТЕвБ Пец обеїх Пеб тиж Су АхвОоїів вт Бі дар ошек уаї шви баг Дай го ШЕ о пеї Ліз Аза тТжросБу ТевБ І131е Ага сій дехє Бко біб Ак То Бей біти
Зх 45 «8
ТБ БО ау Іі із бій дух йка БЕК Му Тк ТУЮ Авт Азп о тує ля
ЗО За ва уві бе: уд Був БЕЖ Ака Ті ТНж гі дак ро ар оТвж Бех Му Аз ви та її о -іпоВНе Заї бе; біпоей дапоБеб Злі рю о бте бін Ар тТЯк вів Мах 85 за 5
Тук тую Сув Аїз Ак ТУуюк Зав о Тук Бро Бре Тур Бег Т3фе АвроТухк Тюрго їса 105 Ах бі лій бі» Те Гей Маї Тве Уві бек бек 118 120 «ЕІ 15 гі РЕТ «БМ» синтетична послідовність «РО «З» Варіабельна область важкосо панцюга нарівнта УЮ Казлидата 16 «Ох сала сіб У1 іп пен бій біп бек обслу вхо Бту Бей оМа1 Був Бхо бвюе бів
1 5 10 15
Те бво беж Тез Тк оСув Аїз її Бех Сі Авробех Удаі бву вт Авт жо 2 30
Чех діа Аїд Тжр о сСіу Тр оЇіе Ак біз одек Вко у два БіУ Мен осів ж5 10 48
Ткв ей БУ д1ш Ті бів Був Аж оЗеу Був ТжвротТук делодйви тк луд за що 5О їаі Бех Уві КБуз Бес дко (12 ТБЕ Ї16 Ап оБео Азоро тик бек пув дип 45 19 т во біб бе Шежк пе)» бів пев Азб Яек о Чаі Те бео бій дав їТвк дів Уаї не - З
Тує Тук був віза Ага тує ває Ту хо Рпе тую беж 11 Акротук Тюр пі бів бу ТвВжЖ цей Ма її Уа) ех ек 115 129 «їх із. «1» 1821 «12 ВНТ «2135 Синтетична послідсвність
Фе чЕгіМ Барішнуо КМО карпилала 14 «От 315 бій Уаї біпобев мМаї біп бек Піу йіз біч уаї пу Буз бхо Б1у 1 ві То ІЗ бек еп Гує їІЗе Бех Сув Буз Оїу Зеї біу Тук Бекс ВНе Тих одапо Тук
Тхроуві біу ТЕр Уві Ака бій Меб Ркєс С1у Буз Біб дей тій Тер Мех 35 40 «5 піУу Вл тзе дар Кто Бех АвшошВех ТУК Вик деп ТУ дід Рхо дев Бе піп біу біл Узі тре Іїе Бех йіз дер Суз бег Ї1є Чек Твх діа стук б 79 75 яп
ІТС бір Ткробек бек Бех пуб діа беж Ввр Тл ДЕ Мес Тут Туш Сув зо 35 іа духа Бім Бей Тук см 019 ТСую Ме АвювотТнЕ Ре Ар дек ТхвобіУу що 105. 110 бів 5іу Тв ім оУуак Твху МА1 ет бах «еїйх 16 хіт ВРХ «кал БЕК «13 синтетична послідовнвость
ОД
«вах Варіачт ЕМО карлината 15 «400 ої - біз Уві бід Бе) Уяі піп бек Ці» Вія бі Уві був о прув Ркб 01У іа ї 5 Ід 15
Бех Гей був о їїє Ве Сув був С1у Бех ту бух бес Ве ТВу Аза Туг и 28 Зп
ТІхр. Ха1ї Сіу Тр Уві Ауе біло Мет Рекс Зі був йду Бе сім тер мех
ЩО «45
З1іу бе сіє Авробко бех Ар обек оТух Те о АБб Жух Аід ву ет Рне
ЗО 55 бо бів пі іп Уві Тв ї1їе бех діа йо був бех їі бек Так вів туф їгеа ій Твр бех бек цех був Дів бес вер Тйх Ата Меє Тух Тух Сув
85 Зо Й З
Аіа дека бій Гез Ту бів сіу Тує Мет АвроТнк Бе дво бах тто іх то 105 115
Сіп зіу Теж Пе) Узі Тк о уяї бек бек 155 129 «от в «еЕівоштій «из ДНК «сеї? Масаса ївносїісзіахін айв ве всчадасада сте суссттв сасскаесеє боастоацеацає бЕКтоссобо сеуаатасюи бо жесдсвкшсе ссзссзаєва асосастаєє зубсзадзау Соус ссе саассассво 150 зазскавсс ззЧсасосов суасстевок асвавсаєва сазкассоав сесБівессає ВО авссвасість даяцекєкасс азсодсбави сСбівсвасає «свуссваєт аассакокт жо засчтастаї севаскссві сксозавасто Чадссацене саБассавай всптсссата 398 кбзаваЧвЕсо Сопваєстьсса ссвасаведах ссвчсксває сісстшвова засзбсссасе Зо шкспценода ВЕбспасодв апіссассео вгабссавоюї свасссесва забставазаю и засос гаавосвлва садка с апасгатлавс вас себаз соло сасса ЯКО текавадвис Сазчавссса засксваска дашааєстоє ведаческоб всбабсаави 540 аасазаасто вадессбана адтосзвоаза соска тосс сетлосавібо ассспкаааа 609 видетадачеЕ Бассавосавз бодвастсвав даакквЕессс сзоЯцасаєск боасусавеї 55 цочавцаєсво соуддеерств ссоуозаснає здрспсяосоч скссссуссе бСисазацава 79 стасскссза зах вусааа сасачососи сдоаавссях сбссчазува бадссвасе ТО ссвссасевз здоавсвозас стос содов созвзачсссв савасссхає табоесодах 85 ссхксогаса зсавоттава осо ваот аасазЕссст сепаореооєї косасапста: ЗО цаатавьссо гсссгесеаса сезсваясаха сеусас оса соссксастт пебчсасуєюе 560 сЕсххсвакУ цосбсусасст чавсеедана са ссоста сразасзлац СвкекосогЕ 1059 чевиассес севазатеца сспавссЕЕтеХ Есредаспос сваасагсівК совдвсабсте 108 засасучайо апвастшасаєс сссадоссася звавуцеваїєв посісвозоає всбоасаади 1140 скчЧазаєвої газцсотахс севссесоої зсазвитетоас зазосісохс азвагуавчаєя 1200 трах ассат Корассосвокос сососсасас акасссайсс павссяавсаз гававесепа 1250 авагаасацаде «чел пеосх сссскозсвя здссассосвч зазусасебта скрасдесте 1590 вагпаазсст сдцевауаает сасаадссво заасодачоо честацавав габестоова 138 абстакесссе сесасваєва стассіуєва сопаставова асбосовров сесорссепа 1540 авпссіїсаво сессоаЕчсв содазвпазсо ссосстдааях аіокадасста стсссствса 1500 певктссаас стсссцльав ссідаєсаєь ссозасосах одасавсав сасаадсвсано ВВБО зхаавЕзасч восвпувсесе зчаЗексчву зааосвохаа сосен чсзусатаво І852О засісацсво узсоскстав асасосавай сопе ке стзковахеб серазжудає 15859 стсксссплов схссвсассс Свасксодаз сссазсаЗеє сІздвссадво сосвастова 1750 поессЕсдасе вЕсгаєссстяа астаєацесс збіпасссаоз Засславсяв пЕсвавсяся Х805 сЕпссачеце сезессеєЧа тавсозмчро сблосівайз пбаїкцавссоїх гсаздаачавє 1650 «псаєвасає сазспгоацава чаадеаресрое заассаоссу поводуавсзв дачбсадсска 195 пакавЕчесси ббавссоссте ждасстесосвз здодаавоси Сгдпесслоате сасбаасоца їз ашсяводаса осовсдосва сасоостяву ссуссвацеє авобвосесре сваасяєтсся, ЗПАО, псссвссавсс асучасссос вусуатаєть зЕссасвсяє сасссслсев адасацаідес 5150 шеесктаавас пеКсвЕсяВ даксааевос воасбакбссае счаствєває сбебасвата 18 зшЕсвсаксс воссексачуцє сеЗпзаоазчава фер еве чаваєакскс адтасаксов Же щскскейоєс созавозазб зузозовова Збацпансоваї седавЕеспе апсавабаєа гово зресасоссс абзазвувеяа одасвояцеос седевасаєє кокос ксяяє ядазаваааа 234о аспаантис тсбСавасккб ссгочаалав воасовсісоєя азсасовоечкчо сестовастя о
Чаацсвеїєточ сбавсалоови сдаватазно ачазадасра стЕБЕЗетає вабпасасові 2460. сівесазаяз асСсобаккату саававаєсс ааочкасвеє втоссзкеса зсвазстакк жук: сазсвазакс соадаскоссат бахаєтсавссткосогзачо асаттосача стаїадвсса НО зассвкцево спе нсЯ йачзодавсо сставассо вогчсаеете даастшеса Я цітісауваво васоцасаєо сосспевсатс о сесвавстає аздгсадивзиї. гедаресяавя ий азвиссвуєво ас іє «кеМмкк т1В «ЕЛЕ За «2122 ВЕ «12 Синтетична послідовність
«ВО «вії» Повій довжина важкоге анцюга кандидата З ВИЗ 8 БРИЗ, БЕЗБА/БОЗОА «асо» 219 біб уві бій без біб Піп обер опіу бро біу без Узі був Рекс Же біл 1 СІ 18 | 15 тиж о бес бех гей ТК Сувз с Аіа Тіє бес бі Бо Як Уві Шев цех Аво хо 25 Зо
Бах йів Аіа Тжо б1у тТхроїіз Ак бів обнк Рго Су Ага пту їн о б1и ее го Б
Тор цем біу Тіе Ліве зів) іа Ака ех ув Ткр о Тук Ав АвОЮ Тук ла за В | 3 бей Бех маг уз ває вхо Те ТВ Її Ав оРко сво оТипкобек ГПув Аз 65 то ТБ за бій пве Бех цей бій Ген Аза Беб уУаї тТБжх Вго сбіз двроїТве Аїа Уві
Зо 55
Тук Лук Сук Дів Ахо Тую Бек ур Бко Вбе Тук бев (іє АвроТує Тгр
Її 105 119
ВРУ ій піф Жак іс Зею Те Уаї Дек Бех дів бекотТйк Гуз ОХу ко 115 120 та
Заж Уа Ве ро Без Аїа го був Бех Ах бек Тих бек оо дек тах 130 во 140
Аів вів ей С1у був йес; Мат Гуз Аза отук о бе Рко біо Ехо Уві твх 145 150 185 їКо уаї чек Ткроави бех с1іу Аба бейш тв Бек оїу Уаї пів Тк бБасгко 155 1793 17 віз Уві Пем біт бет 58к о сіу Би Тук бак Пер бек бек уаї Уві тик 185 155 їз уві веб бек бек ех цец Бі» їх Був отак тую ТБи бСуз о Ачп Уві ДЕР 195 дО | ОВ
Нів Му Бко шШек оАвп отв пу Уві АвроБув Аг Уаї Бій бек був ТУух о піз и озу ву ро Сув о рхО Бхо Су Ріс АТА ОБтОо бі А1їа діа біу 015 о Кко
ВО 235. 24 жк уві спе іє Еле шжОо Бтб пу Ро БУ дю То це Ме 16 беж га БО 2З8 да хх Рез сг Мах Так оСув Уа1і Уві Уві вБроуні Зеє ЗЕА ЗБ сдвЮ по -вї тв
Рез нів улі бів о Бре Азп оту Тує М) дар осі Мі бін вії Ніж дай іх ж В
АТ Буг тик пух Бо Ако біш сій бій ББЕ дей обеє ТАКЕ тує АхФфоУВІ ав Зх ЗО чМало БЕ Ма1ї Беж тнє Майї Бей нів бів Авр отр ої6мМм Авпосту Був'стів 305 315 315 | 359 тує цу Сув був Мас зе дп був сіу це бкО Бек бек Тїє БОЇ уб
ТнЕ 18, дах Був Аз пу ЗіУ шіп Бо Аа бій Боб сій Маї Тух ТнЕ 345 ЗАЗ 350 еп око Всо бек бів біш бію Меє Тпж ру двпобій узі Же Сем ТЕ
ЗВ зво 363
Су бе Уахм уз біб Бе Тук Ро ЗекоАярв Тіе Дія Маї бій Тер обій
ЗО ту ЗВО
Бек Аква о біу іп Бгто ст Ап одна Тує Був Так ТВЕ ко Рко Уві Бей з3 І 355 395 КС
Азою» йех Азов осі бех сце Бе Без Тук Бек Аку їв Та ові Ав оБув у я 15
Бек одха Ттробій бі: ім дабо Уві ге дек Суб Беї Ууаї Меє Нів 3
Аза цес Ківодяп Яї5 тую ТБх Зо був бек Га Бех рей дек Бей пІу 435 в) 445. пув
«ел УТ «ші15 45 «0195 РУ «вій» Синтетична послідсвність «ук» «Вау» Важемй ланцює Кандидатів ЗОБМО, КУЕАЛУ є 5орар, кІЗБА ГИ ЗОА сій Уві бій пеп бій біп Бах оСіу Во СіУу ев щі пух Ву дах бів 1 5 Кен їб
Тв ої веж Бе) тжвВЕ був 'йза лів бек сі АвроБаЕ Маї бек бек Аво
Р а зо
Зек йіа Ата Ткр обу Ткв Ще Ах іб бер Рхо су Ата біу бен сії о) 45
Тр ово Б5Іі1Уу їКе Ів бів Був йта БеК Ммувс'ткр Тук АБ Авт тує Аїа п 69 чаї бек Маї дув Бек дека її тах Іїв АБп о бто АвротТне БЕ Буд Азії 7 75 во бій бле беу без Пій їеройзп о бех Уаїф тТвх Руб біз дар Таж Дія ві 55 За ЗУ
Ук Тук Сув дів вка тТук бак Тух Еко Рнеотук Бек їіє Ар Тує ТЕ 1пи 1655 110 злу сіп біб тТвБк о іє Уві Тис У шек щеК Аів дек ТАЖ о Був осі Ру
Е 115 120 155 зак уві РЯ вжо фей вія ко бує БЕК Ака пек Тк Бе С бек ТБ 133 135 Адд
Аїв дід Пес СЕУ Сув Пец оуді Бук о Даоюобує Ре бхо по Вхо Угії тп 155 150 155 160
Ууах дек тор лав щех обіу власне ХЕ ек сіу Уві Ні ТБ Бпе Бко 155 іо іт дів Уві Гви Сіп бек Бек обіх цеч о Тух беж Гес бек обек Уві Маї тТНЕ 18 чВ85 155 уз вро бек бех бах рез біу Тож буд Те тує Тве був Аяп о Уді Двж 195 «дй ай
Чі ув Рез бак Ат ТАК обу Маб Ав о Мух Аксо Уах паца обех о Дуз лу 213 215 22
Су рос Бо був бо со Суто Аїа бже зі дів Дт аку бу Ббхе пев 05 235. гай
Зек оба)! РВе Гео» Бе Бо о Вго МУ со бує Дер ТБ цез Ме: Тіе о Зех 245 25 БВ дка тве рро ші Уві ТвЄ був узі У«і уаї бар ува! Яебс бів біз АБр бо 255 то ко сі»; Уві бій РКе о двп отТтр тує Уа вар сіу уаї ба уах Нів йец
МТ Був ТБ бу Кко дко вій біс сій Рає дв бек твх Ту пкоа Чаї дО 235 зай тах Бек чЧаі Певотак ай тей НЕВОЛІ Авр оТхв їей АвпобКу Був 3 тТУЕ Був Сув лув Уа1ї йЖек дав був бі Бей БЕЗ бек бек І1їш сп Був
Зах з50 аа
Те жів Бек бу АТ Сбуз Біу біт рко Дис бід ко Бі Уві Тух тку 43 ЗА 5о
Бей РКО Рго бак обіп бі січ Ме М Бу дви біт Уві бек Гей ТВЕ 355 ЗО 363
Сув їв Уві Муз бБіу біє Тук реє веж Авро Ті дій Хаї біб ТЕО
Б ЗТ 3ве ех Депо с1у біп ро бій дал ДЕ тук ру тах Тв реко ко лах пам 385 395 385 «ба
Авр оЗек йзр Сіу Бек Ре бде їй Ту бек Ар їні Тис баї дво був ап 45о 415 дек Ак Тер бів біз бу дя Уді Боє бек Сув бек Улі Меб Пів 019
420 425 436 діа їє» Ні АБп оНів тую тТбробів Був бек Мец Жех оре) Явт пе БІ; ах що ща 1 «віпз 250 «115 848 «твід РЕВЕ чех Синтетична послідовну сте «вих «ай Повна поОвжина важкого ламцюста варіаниа ЕЛ МаАБІЯ 3 БАВІЗ БЖ,
ЕраЗАТЯЗОК каша дя
Сім Уаї бра пес уді зів шек бі А1в'єзіш Уві пуз Пук РЕБ ЄТ1У ІВ 1 й КН) 15
Беє Тес МПує Лі Шев Сув пу сіу бе біу тує бат Би ОтТвю Ав оту 2 ах во
ТЇжв Уді Зіу Ттр Уувї дк бій Меб Еко й1у Буволіу пед Бі ТЕ Ме
ЗВ о 45 сіу Ре ів Авр орго Бех Авробес Тує Таб оАБАа тук Аза Рхо бек рив о Зх бо шкпобкУу бій баз Жак сіє Зеї ліва брому Зак Ії бек Їпе Аза Тус п то та що їаво сій Любо сек бек рей о гпув Аіа бек дер ТБІ Аза Мех Тух Тук шув
ЯЗ ЗО 55
Вів дже дій ем Тук бів Б1у Тує Меб Ар Тах Рое Дяв бСеєе Терому 100 105 її птпбосщіУ РЕ Пезрмаі ТК оУаї Бек щшеж о Аія щек тих Губ5ос1іу РЕо Беж 115 1 і25
Уаї сне Рко бе Аза Ро сСуя Бек дб беє Тих деж бі; дек ТЕ Аде 159 ї35 їйо
Вів цец піУ сСув бем Меаї був АвротТук ре буо біб хо Ух Тих Маї. 145 159 її5 ї55
Бек Тхо Ази бек Сіу Вів Пед Те оЗек Су Увї Ніє тах Бве Рро діа
І655 175 175
Таї Тез біп бес бек сіу Сей Тус бек їео бех Яєк Уві Уаї Тахо Уві Й 18 їв ї8о
Вус беж дек Бех Беб бім Тео їув ТЕ Тух Тек о Суз Бо Уаї Аазр: нів тех 205) 205 іт й бро Яєт Ази ТвЕ був Уаї Азов о їуз йха чаї бід бек іув Тук 0Щіу шо і ВХ у ве Бго Сує Вго Бко бух ко Аіа Бко ім вза Аіва бу піу Бо ЗвЕ жа. 23 а5 ай
Уаї Ве ої ББе вто Бко Пув Бко Був Ар ТВ Бен Меб ІЇїє Бек АК 245 25 ач
Тие РЕ бій УЮ тик обев таі Ма Уа дав оодх бек шій БІВ дз о вБге - во ДВ; . ато
Бі» Чаї біб орйе бай о ткроТує Уаї йвзвобІУу бат Сів Уві Мівз о Ави Ата
Ох яв рез еі
Ге ше Бу гру Дкч Сід біш сі Бе Авт бек ТНХ Тув йра Уві до 290 та 30
Зех Мві їекх тис УМаї ей Нів обжіп бар о Жжроївц дви біб Був біз тує 395 ЗІ0 З15 390
Пух Су Сх Маї Беб дай Пух біу Гей Рро бек Зех їі й1з руд ТЕ 425 330 335
Ге дело був Аія Пув піу б1й5 рРто Акт біо Бго біп Уа Тук ТЕ Гей 280 345 350
Рхє Бко бек обіп бім біб Меб ТБ обуз Авпобівз Уві бег Сеч ТВх Сув
ЗУ 363 365 їй туаї бу Б1у Бе Ту рко Жех Ар Ії йїа У«і бій Ткро бій беє су зтя зво
Авпосіж сій впхє сих два Ав Туг був Твес Тв орко Бо Маї ей Ав
З85 з 395 400
БвЕ Авробіу беж Ба вів їєб тую дес да ви ТБх Уяї АВрогух бек ап 310 1х5
Ага тросі осі ХУ Ап Чаї де Зек о Сув дві Узі Меї Нів бі15 Аза 424 Я яз пеї ів Ави нів Тує ТЕЖ бій був дет пез беж Бдм о Бек це бу ув 435 442 545 чеках й «ту В
ЯКУ» ВЕТ кг135 Наше варів кап ах
Аще іє біп меє ТвВЕ Бій хех ко бек Беж їм: Шег Віз Хек Уаї бі ї 5 13 В
Вар Ас Уаії Трх 18 ТИХ Сув два Ада Бек сілобев Її Бек век Тук 2 28 зо
Тех Ав Тв тую Пій сб Ду Вхе бу пут Мів бо Зуєв Бема фей її
З А вх!
ТукоАла Ат Бек бех Бей сії Бех бу Маг вЕс Зег два Бе дек бу 50 З5 во зе біу юшнж о1Уу ТВ Ах реє Чх бе ТВ ТЗ Бек беж Беш біл ово во то а 5 сбім АвроБВлде лів тТпт тук тус Суєт бів бо век Теж деко тни РКО
З зх в ВУ «ех За си БУК «ві3к Нсщо Зеріжца «ах тя щі чи біпобеч ува сів Бек Бі да Зм маї Муж шує РЕВ ШЕУ ЗИ ї З ї0 15
Зек бе Був (те бек о Сув руя щі ШБеї бі ТУ дек ррае тних бесє ТУух 2 га Зо
ТЕЖ Ії біу ТЕБ Чаї Ак бсіп Мер ОовВкОо біу Був біу Бею Бім Тер Меїх «о кВ сіу П1е Тіе Ту гео Біу дер бетг Авр о їнНх Ака Тук Бек обто бек РНе 5 вх 5О сій діу бСіпоуа1ї Те оТіе бех АЇз Авробув бекоїіє ет Тах Аля Туд
ПУ 7 КЕ чи село Тхвобехо Беж зей Був біз йек о Ави ТІ АзавоМеє Тк туж Сув 5 о 5 вла дви «їв 223 «Іов «еТЕ ВТ сеї» Нешо оврієвя «пох ви
Беє о тТук лій пеб те обіп ве вЖОо бах Уві бех Узі бек око сьу піт
1 І З 10 | 15 тТвх Ата дек Ме тк обув Хек біу Дер був о О1у Аврогує ТУую Аа; 20 25 З
Сук Ткр Тук Сів бій обув Бго біу БІБ За Бхо Уві ів оуаї Г16 Тух
З и 45
Бій йве дек Був Аку Вб бах біх ї16 вко біз дра ре Звк піу Бех що 55 о дви бек бу Аз ти фа тТвЕ о бео Тих ї1е Бех І ТНЕ Сг Ага Ме ях то т що
Авр осів Аїа Ар Ту Тув був
З
«еп иа «Рв 01 «1 ват «2138 ноше барзвих «в ка зЗіп маї бій о бецн бід біб дер ові» Бо Бі Пез Уві Був Рка бек сій ї. З 49 ТБ
ТвЕ іє) бу їеб Тс Суб Аіз іє Зк біу дес Беж Уді Звк бех Азо о З за
Зек о Аіз Ава Тев'Ава ТКо іє ду сій бЗех рРко Зак о йкоіу цем осмю
У 40 я тевоіь Пі» Ах ТВ Тук Тує Ага бек Був ТгЮроТук Аз) Авро Тух АТа за 5 о чаї бек маї Ццує бет Агу ї16 Те І12 два ко Веротик Зах Був Ав о та 75 БО чіп о бре бек пей піб БГем дай бех Чаї ТВж Бо біо Ввротвт Аза Уві ях я з5
Туд о Тук Сув Аха Аку ї0о «ап» 25 им 07 «1 ВТ 213» Пунтетична послідсвність «до» «да» Заміна БОБ з легкоро плюсюгта пар ої «ап» 225
Аврої1е біп Мей Тс біо Бер Бго дес бегоПей Бек оАїв Яек Чаї біу
Авор ода Уаї пе її Ту Суз Аку дів бек Сів бек ої1е бів бен тут йо Іо З цем діа стко тує сл осіз Ге Рез оІіУ СУБ ой Роб мує гей Та я 35: 42 45 тТук Аїа Віа бек дес пез сій Беб Бу УяхМ Бка ес Атщ опа бек їх пет озГу его шіу тп Аве Рв ТНЖ Ге; о тбЕ тв его дер Пец сіїт ЕКО 653 КК - ху Зо сій Ав ре вів бах тує ТУЮ Сув бій Бій бі Авт бБпк їєд Бо Тут зо За тп ява сту пі бі ТАх пув Уаї 010 ліс Пух 150 115 «21» 295 кг1їїЕ 8 «ті» ЕТ «рії» Синтетична послідовні»
«аг» край» АВ Ї0-НО ЦОБИЗ «00 225 йпівссій 015 АвпобвВж бе Ве вує Те ї 5 «вій» ге «Вт1У ВІ «шли ВЕЖ «ві Синтатичнкя послідовність «Тих едиУ» Легкий яанцют йтслю фе) «ап тт
Ар їіє сій Меб Те б бек бро дек Бас Бей Бек дів век ові сту ї 5 10 15
Авродйта УВУ ТНІ Те Тахо Сув Ака Аза беєс біл бек Ті Б1У вц тує 28 25 Зо їв Ака тор оТук бїа бій Цуво Бгто БіУу Був Аіа Ве буд ої Ме 118
ЗВ Ех а5 тук кі віз Бех бек Мем обі ббж зЗіу Уа гбко Бер Аха Бе бек б1у | бо бвЕсбІУ Жек ШУ ТБ ОоАжрО вве ТК оре Твк се беж Вех Гей бій бю 65 7 Ка; на сто Авр вве Ата тре тую ТУЮ Суб тп бів СьУу Ав Теж Бей о бко стУх ва Зо 5 бвЕ Бпе У БІВ бу тв пу Уч) Бім гів Бу Ах ТЕ УЗ) тя діа 108 105 Й ї16
Ркосбек чві опе тів ожВе Вкб Бхо вах Авробіц сій Бей Був авк сту 115 159 щук
ТнЕоАїв Зак оуаї Уа бух ей пен Дяп о Ачо вве соТую та де сій АТЗ 136 135 149
Буз уві біт Ту Мув УВА Авр ода Ззіа Пе) б305 ВЕ Бім Ана бек б1п 145 150 п 150 біз) ет уаї Тек біо сів Азродее був о бвр о зей Тік тТух бек іо ЕЕ 165 іт їт5 бек ТП бе тик Бец чес ув Аля дев о тУК сі бує Ні був Уві тує 18о 185 ІЗ
Аїш сук ші ау тТвЕ оКавосій бі Бей дер обех Ро та) ТВЖ о пув 5БЖ 155 го 25
ЕБе лай дк бут ши УЗ що «Вій отв. ки» 3 «тах ДЕК «ру» Сиптетична послідевність «ваш «пйЗ» Праймер пл мутагени МИяЯ дю ТЯ-О «Осо» ?УВ пеадчепсваса сосбопестй сасобссчос баз у «вій ОЗ «1» 3 ий де
Синтєтична послідовність
«23» Подимер для мутагенезу пля АБО Т5-10 «00» вия. вЕасотаве Зобачалов оіаеваєо са 3

Claims (1)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Ізольоване антитіло, або його фрагмент, яке здатне реагувати з ТІКЗ3, що містить варіабельну область важкого та легкого ланцюгів, де антитіло містить: а) варіабельну область важкого ланцюга ЗЕО ІЮ МО: 214 та варіабельну область легкого ланцюга 5ЕО ІЮ МО: 211; або р) амінокислотні послідовності СОК 1, 2 і З важкого ланцюга, які представлені зБЕО ІЮ МО: 70, 77 і 72, і амінокислотні послідовності СОК 1, 2 і З легкого ланцюга, які представлені 5ЕО ІЮ МО: 67, 68 і 78.
2. Ізольоване антитіло або його фрагмент за п. 1, де антитіло є повністю людським або адаптованим для людини.
3. Ізольоване антитіло або його фрагмент за п. 1 або 2, яке має ізотип Ідс1, Ідс2, ІдеЗ або
ІС.
4. Виділений полінуклеотид, який кодує важкий ланцюг антитіла, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 214.
5. Виділений полінуклеотид, який кодує легкий ланцюг антитіла, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 211.
6. Вектор, який містить полінуклеотид за п. 4 або 5.
7. Клітина-хазяїн, яка містить вектор за п. 6.
8. Спосіб отримання антитіла, здатного реагувати з ТІ КЗ, який включає культивування клітини- хазяїна за п. 7 і виділення антитіла, яке продукується клітиною-хазяїном.
Людський ТІ.К3/ МЕ-КВ сю ДІ 100 рбоесо В т 95 й - Й | -й як її шк яз мс -М дише сов киш ШК ---0 р 75 КУ ре З ще Ка 55, 70 з КГ в шк: ни Ті на. 65 М р Ко й а . роя 8 Ж 60 й і К тв хеофе нащо "о ЛЕ кт т» 50 о ї -е-Я Ю 45 го ! непо 1 2 Ж 40 Її ; сне ВЗ 35 ! В ЩА 25 Й Я : -- 16 20 / Е сей 17 75 ше. чив 10 в я век сосоііс ТЕТ У й ШИ Ше в 5 А 6 5 0 ЕЙ очккху 8 5 9 Й гово
0.1 1 10 100 тАБ
Фіг. 1
ТиАВ Тала роюов тре тосТвАВИТЕВ МВТ то ло 365 | б | й | 23 | 4 21502124 21785 15120 Т- 0 «ЛИ 3 « « Ж - 2 ----- - що ТТ- «ТЯ ІШИМ- ЗБ 5ЖККЗБР КК З А Б -- 7 я о 04 ИШ217776001175 18 15135 Т- «(2 КМЗ ИЗХК Ж ЛЗ « ИВЖ щ 5 («ЖЮю« «З 502 « « (Щ Я З З | 2 2 (« («- шт ИШЗ 15855779, 85187 Т- «ТЛ ( - ю( НТЕВШВБМА- ЗБК - 2 -0К5553235---- я5 7 ве 18552215, 5553537 З5352ИШ176600155031035 15155 ТТ- «РТ«ЙЩШИ- .6'7 и? « « «ХЛ Р Ж 8 Щ З("МКБЗЗ-Ь 5 88382 5 5З5 -' Ж «(жжК- я, 52 1758522Ш217551 56 21758520 25 135155 Т- «2 2 2 Щ« (« «ЖТЖх З «Ж Щ( « «532 Я З Ж ( ( юЗ яО-то яра 1 55220215 57 ШТ- « т (| щ: 5 Р ( ( Щ - 65ж 3 -5--5- ---5- я8 о Т- РттшТ ШИ ШТ ОТ к'юч«ШИТ 6 щ(ЩхиИК« «ЬОЮЗу-З ЗШЗКЕрКЗВЗШИШЗКЗКЗКЗИБШЖЩИЗИЗ2З237З-- що о 02 22177580 1566 1 20 20 1 6 Т-Н- «ТТ «т (« Я «Ж « « « «« ЛТ ф 5 « Щ(: т«ЗЯИКЗЖЗ ЛЗ Ж- що-то 552,1 а 17755301 85055
Фіг. 2А
АВ НІ Б 1 РО 1 КАМЕВ | МОР Її 6 рило ло Її 83 | 9 | 4 Ц лм І 55. Б . Го 52ИШ ре 17751177 755Щ1 60 Го 5302ЗШН6 17701775 Дріб 101 нини ПИ ПИННННЯ ПОЛННННННЯ ННЯ КОНЯ ау яр 1515 51781175 17775515 АТ 55 15177851 нини ПИИНННЯ ПОН ПОЛОН КОНЯ НОЯ 3 пи: тлИ ПИТАННЯ ПОН сс ПОН НОЯ ПОЛОН: т ДОН пн я ПА ЛИН ПН: ІННО ПОН с ННЯ ПОН ПНЯ ПОЛОН: ся 56521171 5217775 МВБВБТї- 5-ЗШЗШБШЙМШЗШЗШШИШ5Ш30ИШ350333 Яя-о ЗИ 15217 8502Ш2151 нин я ПИ ПИ: ННЯ о: о НЯ ПОН тя пос сло пил т:зя ПОН ОН: з ло НОООННН ННЯ ОННННЯЄ::ННННЯ НОНОННН т ННЯ МЖМВТШ8їЙШ8-В--ШБШББК-ШВБВШ-ТШШБВКИЕБЙШ8ВШ--Ш2ЗКО-- Во ар 55217527 1775 рег 13155215 пит По: ЛИН ПОН: с ННЯ НО ННЯ НОЯ ПОЛОН сл МЖМВТШБ8їЙШ8-- ШКТ ШВБШКЗТШШШВЗ6Б3АТБИЙШМШ8ВОИИ".Ц5ЮОЇ0ШЗ-- ето 52121521 5175 ет 3115 шитти ши ши ши ши ШИ то пилу и ПОН ЗНО ПОН: ННЯ НОООН ТЯ ООН ННЯ НОНННОЄсУ чНННЯ МВБВТТШТ- 5-5 ШБЙМШЗШЗШШБШЙШМШЗШЗШШ8ВБЙШБ8Б3ЩШИШВМ3-Ш030Ш07- СЕНТ пн зи ПИ: ЗНЯ ПОС НЯ ПО: ЯННЯ ПОК: лоЯ ПОЛО: ПОН пи су и ПЕ: НОЯ ПОС ОНННЯ ПОЛОН ТВОЯ ООН ННЯ ПОН ННЯ МВБВБТШТ--Й-ШБЙМШЗШШШЙШЗШЗШШ87ВАШЙШМШЗШБВ3ЩШИШ8ВК3ЗШ0Ш0О- пе-о р 1515 пики ти ПИЛУ НЯ ПО: ОН ПО РОН ПОН УЧНЯ ПО: ННЯ МЖМВУЗТЙШТ-ШКЖ--КМЖМК-Ш-Ш0ШБВ8ХШКА-ЖЕКШБ8»85ХОМШМВ8ЩЗАЗА«Ш8НИШВЦЮИЮОГЗЇЗУЗьЬь- 03317811 5185168 поп ПИНННЯ НОЯ КОЛОН ООН НО вто 551113
Фіг. 283 і 1 00 дббееесо ов що 75 а тА - с Я мох я 5 їх БО жа шк й зі кн 5 465 ек К я хоне 859 М г 0 Сом, КИ я ш- й
0.001 0.01 0.1 1 10 100 Конц. (мкг/млі
Фіг. ЗА Жан Я Ж 1 00 дек - що схфрдне щ 0 р о ді а кор й О Т 5 Кз зкюдуюння З 15 у ЩО т шу еко?
5. БО Ї де нен» БАВБ - ше Л, «ве 85О З ту а гу о ще в й «В о. Бей м я й Мч шко 0 що ОЙ я й
0.00 0.01 0.1 1 10 100 Конц. (мкг/млі
Фіг. ЗВ
Інгібування (95) секреції цитокінів лодськими?ВмМС х ГЕ Ме ех ССНІ-12 -о НІ -6 й щ щ 3 дАйа НАННЯ. КЕ З З з - ЗЕ ще М Сх З Е Ка ще З 58 ЗА ЯН вача ке г З ЕХ х ЗКУ У х Ф Е кт ї . що 283 - їх Ме нінінННІЙ ШІНІНІЙ хх ик ній НИЙ | й оно З жа 5 бо, яв 9 я й 2 813 14 15 516 9417 Я18 819 5465Ниб4 тА х 0.4 мкг/мл
Фіг. 4 Концентрації ССІ.5/КАМТЕЗ після стимуляції полі І:С - ТМЕ- с, ТЕ
ОС . є ЧЕ. ШЕ з й. и ние ше шли или пили ть (10, 2, 0,4 мкг/мл)
Фіг. 5А Концентрації ССІ Б/КАМТЕЗ після стимуляції полі І:С я ТМЕ- о, ТедОне і - : . 5ОВОНЕ й ! ї- ЖК ж шк :
Е. КЕ щ ще ШЕ і ШЕ 1 Е і І ях Ям х че я - і че і, і. в-вий рай Й В | х К, і їж | --- ни ВІ КЕНЕ во І ще ми " 7 обробкитільки рІ:с тА (10, 2, 0,4 мкг/мл)
Фіг. 58 тА 12 зв'язується з комплексами варіант ЕСО ТЕЯЗ / тА 15 --01168 100000 - -8е МІ4Од шо 0000 х | ше у о Во0оо й М144А Я 70000 І А н-хне КІЯ5Е 2 : - КО бО0О0 ря ння КАТЕ Щ Борсо 4 и -е-кібзЕ є ї й в явово 7 г ! тане Д167А її 30000 - ? Ши ттвв: ку ! лекс пф М196А О 20000. ци ще 10000 - фа ши не тіЗ Ге -Жа о о - ; фі о що 200 з00 400 500 600 конц. тАб 12 (М)
Фіг. в6А к --мтв83
Е 4.5 --тІВВАЕ В 4 -- ТІКІВОЕ Фо 35 -Є-тіКА1вЕ в --птикаАвТЕ, ХАбВЕ 5 З -2-тіРА88Е, БА89Е, К493Е ш 25 о Уа 2 5 т 1.5 я 5 1 о т 05 (о 100 1000 10000 конц. тАБ 12 (пМ)
Фіг. 68 ть 12 зв'язується з комплексами варіант ЕСО ТІКЗ / тА 15 250000 : ь я-ф-- КАБТЕ щ : Е 200000 -; -Ш- ВА89Е с. | нн ВАВВЕ а 150000 Я педен УАББА а я : с : -же М517А Ж 100000 -. одн і | див - фс НОЗОД о : ян Є нен Н5ЗОЄ 50000 що т Й рі ііі ями ТІВЗ 0-8 фар 0: 200 300 60 конц. тА 12 (пМ)
Фіг. С я нео роя
К. Її: ше й МЕСВ ВК ОК ТВ 457 У зер я, Ще вва ШО Мам М ї прик ніин В м Ок! шо ШИЯ ооо, п оо сш, ПЕ о І м НН НИ й: ВІКО Я І Як М КЕ й зн ех З і ОА жи Й ШЕ ШУ 00 ток о
Ки. ДНК леж жи ОТО ЩО дО пост ДЖ ши и Й Б ей: ОК 0 | У по нні нн о КС Ки, Ж ою НК ее ш Може пл ше Б ча КЗ ЗК У АК осли, еще я: а ЯКО сн а. аку ще ще з КН : с Я Що ке в ве ЗЕ ще й Же. - ШИ шк і чне ; в - І ве я ЗЕ ші
А .. с а Ой я што про Я пов же Я що зав е- о ШУ Ди а НН св ов З ше й ОО щоки, св НН І бе чи. Б Бе т- - 7- 180 " ФМеддни й -С ше Я а ШЕ Хв Е веб вка ЕОББе» я, б'є» Б116 УЖ ж ОК яти Мо І КВ тт і. шо й Я в ЕТ Во В СІ НН ЗВУ ше ня КЕ и плвя КК ев ІМ їх дк Ше я Еш се ши. Б о я СП з ші Я КК НН й ол, фр і ДЕ сне них ШИ, пл тте ВЕТИЕ. ЛЕ СОС, сити ще ЕК ей Же Я дов МИ - ШК КІВ пе в що | ЖЕ 5 и шк: ж шу у в дв ше. во ЯТЬ о в шо в : ев ши и я
М. Ши в ШК КО х я ОО С ве с: й о ни Не а М о о В я ни Де се ОДУ вх ос З М, ш - Ще я ННІ ОО о и НН и НИ
М а. я НК НУ ти с у Е. ши с ІН НЯ ЧО МО й пи зи ви КА я ша ши с: ще їеоКе ДЕ 00 СК В ой Кн с о НИ ОН а КК З и я ЗВО 4 Я х іх же 3 У ок
Фіг. ТА 498 430 240 ад ІКй їй 152 ши ТК МХІЕдОАЕБЕІ СОБІ, МЕТО вки вид РМтТтВ туту сети птдмат т се нк і 'ЕЗОАКУКЬ БЕТЕМОВЬСЬ ККІСОБАТОЮ ЕКОТККТУК ТУТ5УКЕХУУ СТЕХЕКАЇМР СТОВІМИВКУ АГБКММОЗБЕО ст с Є сс аа С Що і - Он вм 53о 5 БО во сої вне мк и БЕ сно вени ІМБоМОЕССЕ КТЕТІОТОНХ МІАВІЖКНАМ РОСРІХКОКО БОБОНІТМРЕ ЗКОБОБІЕУВ УЕКОБЕЕБКІ че І а ко дет отиктт іо мМмгду ступити ї тЕпОтмтнт й : ІПОТЕК ГВАБУКММОУ БЬЕСОМІАМ БІТВУЄККУК ШРАМ души» ШИ Багато замін водню на дейтерій при захисті антитілом ще Мало замін водню на дейтерія при закисті антитілом і | Без захисту
Фіг. 78
2951 -МиТСКУ МЕ-КЕ
1.00 шк пон ІТ! т й ши
0.75 -- З п «Ве ше Ко тА БА г хх -- ПП тАБіБ Ф ч й ня у - - і чі
0.25 с «пп
0.00 шк Є мих Ви ле 0 З 72 З 4 5 б Конц. тА П102Хмкг/мл) ІК БО шайті) БагО тАр15 І азЗаЗу 14175
Фіг. вВА
293Т-Ми ТЦ. КЗ/ ІЗКЕ 08 07 А шашка КО АБ 5429 Ж 06 --е ПА та 15 ж 0. Ф ть як шив тААЬ С1811
З о. слот щ 0.4 у с. 5 03 Кк. - Я ; т ш 02 тво зе той тт: 01 ще жк чь м
0.0 -5 4-3 -24-4012г23-:45 Конц. тАБ,10 2Х мкг/мл тАрБ429 тАр15 тАБС1811 ЕКБО ГГ 04856 22.13 07481 мкгімМмп
Фіг. 88 Аналіз мишачих ембріональних фібробластів т ВНККУ. те о . ; вв У ще яке її т Е шле ще БІ шк - ех - ВО І ек В Б як зе а соя ВИ фе НЕ я ! в - Б НА сш МОВ ОН Б
В. етеру нкюенк рай інн вв нн ян Ск М. во кмй ді че В - я мн й - КУ В. НА. Я т Е 5 З З Б її З ї в У ш З їх - т з я її я З 5 В ж й їх З Є я й 8 й г 5 Я в т А Ж В Б Б ЕЕ: Я Я хх Е Ку ж ши Ж Б б в "її
Фіг. З кВ стос сгосону: ї ве КИТИ КМ, : гатех Хе 2 КМ. що (в ек нн ШІ Я сх КТ 2 ЗЕ кують з : її - пАиЖОо в ТЕ й їх ІЗ ИН а: х їз ше: Зк У г дет З Ж зи їх ї мож ХВ ор, ї ок Ж. ге ї їх : Ша ЕЗ ср ЖЕ з в З ; х Б ів зі ев в зі най і ас сні зай й іі з о «й хх хх Є Я шої З Я я я те аг ї дек 4 й че М У Ж и ї х пох деко й фа ж КУ т іх Я СТ АКОТИ КИМ ми ХХ о и МЕ Ж оо Я С ї нн м й ПОМ И Е СКМ пе; З ЕК Ї З ВМ я У а ШК З кі а. Е а. ! їх; г С Я да КЗ БО я ; : зей Ех «В Е попі лі й Дю ВО з Е «а - кро Му т СЯ че - КЗ щу жк ее жа ху ОКУ БО 1 ку З БЕ Си: ши ші ФМ й хв ех й У ше: ен Са АННИ
Фіг. т0
Гіперактивність дихальних шляхів (ВОХСО)
11 то а 8 т 7 в Ге 5 4 З 2 1 широ ря І никтиитих 0 Початковий фосфатно- 10 мг/мл 20 мг/мл рівень сольовий буфер нини кону. метахоліну еВ рі я Баба (50МККГ) ЩЕ СТВІ кро) я 1811050 Ммкекг) -- 57 В р(КС) «ЕЗ- С5тВі 6 «фосфатно-сольовий буфер ФІ
Клітини ВАКЕ: Нейтрофіли 5ОВ - 456
5 . х 400 . Ж 350 Мі зов зах - 5 з 5 шо 29 (БОМКГКГ) 5 700 я 1811 (5ОМКГ/Кг) а. ї- 75 - Пн ние: й до лоо и хяж Бо и М а ! ш С5/ВІ РЕС)я 5428 (БОМКГ/КГ) т СБТВІВ - РКС) я 1811 (БОМмкг/кг) а сятВІуВ я ВККС) п осві Ж - фосФфатно-сольовий буфер
Фіг. 12 ВАК СХ 10 15500 . « івано, ГЕ Е - Ж 10000 Али в. є - Е Ек жшиж . - 5 . ОЕ " т о 8 50003 мини -- З т ЖЖ шк 0 ш ССЗ В к р(:О) я 542 (5ОМКГКГ) ж СЕТ ріг) 41814 (5О0МКГ/КГ) . Сс57ВИ в я РІС) мжоС57ві и я фосфатно-сольовий буфер
Фіг. 13 ї ян З і в хх Ж | св ве: я ! ге СНУ ий -шщ: Е ж е й Ж се, ї 2 я ї ; | ож я ше ; о 1 г ї скан, ! ко а з жк Ще г Ка. КЕ Ї «в г: ослкнідкафеєтнсеях он в ад пиши бшжння що . їх ня "Ей Бі де Кл ке е гіф. » | ЕЙ У. і ї і і 5 КІ КЕ і й. зх а х 8 п жмеретернй х мож керу екран «ви ву Й Скюденха а |: ! тез КО ДИКНЕТНИ САУ В -хожноєвеви в І Вероні см ооігеня с семан нн нн в гусок седосеи шо БИ. Ж ж воно нин ин нн п о ов п ни кові но оо у вання Вк тАь ВНТ» знтяуа преки і т ЖМЕж зт оцінка на сснюві: Некроз окремих кими, покриття виразками х Б Уч 5 4 Ко кож. зах екевелію. Злувування епіезно; абецесн кран Проза мес: кривт, СР ракєтяцій в опіаєленві Я сно. Небтрофіне відслизовій веноні: Набриклості підслизової сболенки:
Фіг. 14 Зведена рій нологічна ціна. КЕ а а ва ж В Бона « шк ж ч . ей? во у й БУ й БУ ач | К.3 Е ! зе а Е 8 вав е ше 84 зн вант» дювфеуних ТУЯ мопьсвна БУфо» Свинка в групах пехуван авта ПВ КЕ ж Ге значно вирізняються віз зніжок в груді Бе нап о п о ОО оо п п в т о пп пп поп повінні 1 Зквезену оцінку розраховували по збонеках крипт. виразках, : і вештросникних нефнокеах вера кенихоподійних клігвн, ! І внамальних крах. залаленни власної жесткнкв. уреженнкх і всех шарів сних й Й ду пд тт АКА ооо кдокнніожнк тпм одн кі кА Аніс дося лок Кн КК
Фіг. 15А
Нейтрофільний індекс
54 . г а Як - оз а й її 1 хи «5 іт т в й . ве ваг З 1 в-ашь- че 0 анти-ТЇ.ВУ анти-ТМЕа фосфатно- сольовий буфер
Фіг. 1583 Клінічна оцінка артриту - всі папки ішкапа 0-5) ЯК дит НН ТТ тт еЕ е | т ж Норжзльний коню Яма | ! Е ОО сен Чисті нео ! Я я й ся Оса (5 мік ЕХ . : х - ті Е -е ЗАД мойки СВІ ЗВ ни В б й ее МАМІ може! Нетативний кавтродіь що Не й ЖЕ ЗК ли датитіяа протя ТМЕ-а (5 межі жи ше
ЕВ... Кірананкака ковтронн 1-8 м ще РЕЯ щи Ж а я) НЕ і зі І Я : й ! ЕК Ще МИ кн Ще Ку м | -- ще Е й : за им сх гост й М а ; ль жк ще Спо: ще М У З: ЗИ З У ВЕ о З Я ВИ ЗЕ День артриту
Фіг. 16
Середня Ж СО клінічна оцінка артриту з обчисленням АОС, для всіх лапок 0036 дя я : ; пекекчянкнннх, кровні е кошовим сс м во в С
ЗА. :
в. | шк ! зо Ед ! | ! Я» | шк Ж Ю | ч я т І ІЙ жо | Ї ! Н ! жав | ! Е ї о ж і оте ; | і но з я | : ш В х | | ; і х 1 -в" 1 ! Я ФО фннннннноччюння А пе НИК... кляті і 9 МНеремальний СТВО серія! БВ 0 СУА нях век Й контроль банки 00 Експериментальна група.
Фіг. 17 Р2009-128 150 т в 5 100 реб.ою в ре-001 й ж шк хе в 50 5 її о Є о 0 З 10 15 Час я-к- СУ/ВуВ я грип -- СУБ я грип 20 мг/кг тА 5429
- П.ВЗКО я Трип
Фіг. 18 р2009-128 - рк0001 У а - Ж ' - о о Ж 2 т : вв Б щ хі як ой й Б НН ВО Нд со а що і ГК рій що ї ол
0.0 25.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 День після зараження -- 0576 грип я-йн БУВ я грип 20 мг/кг ть 5429 -- ТІ ВЗКО я Грип Значні відмінності в групах, оброблених тА і КО, в порівнянні з С57ВІ /ю--вірус грипу через 8 днів
Фіг. 19 Р2гО09-128 і; ва ва ОО ОО ЖЖ ш -10 «ке -20 Й -2 -30 ! -35 наш День після зараження --С057В5 кю грип -к- СБ 0 грипя 20 мг/кг тд 5429 -- ТТ КЗКО я грип ЇХ Загибель тварин Значні відмінності в групах, оброблених тАб і КО, в порівнянні з С57В бжвьроує грипу, реО0,0115, 617 дві фіг. 20
ТКЗ МТ 6Ой НЯ ---20трк анти-ТІ КЗ 9 500 тк ОТОК анти-ті КЗ в х я-щ- фосфатно-сольовий е в З 400 фосф уфер БЕ їх як р « 0.0001 т З00 три 005 ла Ж 200 У 100 - 0 50 100 150 200 Тривалість (хв.)
Фіг. 21А ТС Ко
600. - 500 о я Мк я Е 460. що «У о 5 з00- Кх і - ШО 200-Й з
00. о І 1 ї 0 50 100 150 200 Тривалість (хв.)
Фіг. 218 ТЬКЗУУГ юю Інсулін 2 чани фосфатно-сальовий буфер жаефнек 5 МКГ Ї | чедрни 20 МГ/КГ й "р«005 -25 о 25 50 75 День дозування
Фіг. 22 вх їх: жк не А ! рок мех за и ох ї й те - У же --, КК Е і ї й т Ж Я У 5 що З ОН й Щ Я зе Ще : ої й ше мКх ее ях щ- і І т ме сс Мне ЩЕ п- А І щ- щих Н І ї ад ну 4 ! - і Як ШЕ о ке Же о ої їй г | І х ! МК І ! : З Н 3 ЕН ук м з і я В а о в в В Б чт
5.5 02 в 8 ши ше шк ши З ЖЕ чо хх Ж - й ож в вк а Й я Фа 5 же т в оо дв ф ри ши я Б М в ж ою в ЕВ т В В я в З ЕВ В а в ож а Зо ЕВ 5 ЕВ ЕЕ "Я ХХ Ех в и: Е Е «а її ЕЕ гу р х Ех Б! З -е аку зе в Н в шо т --Ще є т. щя що с о т- 5 я ВИ о Е ж Є Н и - - г що й ме о їх МЕ со р дико фе -т | й ов Й и лов п - с ШІ о Н Я се | о а. її ; п НН ШЕ ! жо й і зе - | ; ! Е о Я ; У лк, Й і ї ви п | - СЕ нн і дих | ще йо НИКИ Те й й З «5 Я сих й ГУ й й х й шо " Ж ш й Кк фж Ф в о -ш що шО Од Фо ше шк ШЕ ши ше Еш З тю в й що й че ю М и У тов ЕК ,; шо шин ї ва я ча їй В ав Ф т во Я Е « Ем ш - Ек «У Е х г о Е гі о я ЕЕ Е Б З Е
Фіг. 23 тАдр15 інгібує віСАМ-1 в НИМЕС», стимульованих полі (С) 6 - Без обробки Е саме полу: С) 20 мкгіми 54 в поко) к тАбі5 бо мкгляал
- о. пояц:С) ї тАБ15 9 мкг/мл 2 о ШЕ пояс) я тАБ15 0.08 меми Ф Б 0 Я ВМ рда ЕЖЯ НН КУ х Е Е Б -- ж х Е х ча - с - се ча з ре - | - Гані й о то а І - ре « - ЕЕ ЕЕ Є я о ж Е є В 5 о Ко ХХ шо щ о ЕЕ 8 є ВЕ 5 Е "середні значення, значні(рс0о05 волорівнянні з полі ФС) Стимуляція клітин ендотелію
Фіг. 24А
Биживаність клітин відновлюється тАБіз 800000.0 тАр15 500000 0: ЇКЯ Контроль ізотипу (Ни ІЗ) 500000.0 Ї ЩО без полКСС) ві 40000004 ЦІЇ. НИНІ Ве 00 ЧЕН Ва " вевеоодвоо вого Фов о «сосен ес я. сус я пох сво « З г це ш ц- ж ф й ою в в ї- ЕЕ Концентрація антитіл (нг/мл)
Фіг. 2485 100 т 8 80 р. 0.00 З Е 60 р хх 0.028 х ш м 40 а 20 Гн
0
0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 Час після інфекції (днів) -- 057 ж грип -- 57 грип ж 20 мкг/кг тАб 5429 як БВ ГРИП я 20 мкг/кг антитіл проти КОН -Щ-1 кК3КО я Грип
Фіг. 25 є 5 ОК зх лик шко шко ак ле лаль Дол ле ек Фу ; ! ; Ї з ЖАДАН: Ї ї2 5-й І ли 1 У -к і 0 ; ! І : з о і К Час (днів після зараження грипом) - С57ВІ/в грип -к- Свв грип 20 мг/кг тА 5429 не СБУВІВ Грип. 20 мг/кг антитіл проти КОН -- Т.ВЗКО Грип
Фіг. 26 ви з ни с НИ З НИ Є ВИ Р ДОНЮ КЗ ЩЕ, гяхЯ де - я о - х ко Ся -щк фе -40 Час (днів після зараження грипом) -- 205781 /5 грип -- С57ВІ/б грип. 20 мг/кг. тА 5429 пен СВІ В грип 20 мг/кг антитіл проти КН -- Т.КЗКО грип
Фіг. 27
А Я ур, кар1068 ши Еф во в НН у в У М МО х Еаві5 0 ИН ра і о Я я зх ши ЗОН ий Гой СУК Бар1'0б8 оо дк тівз епітоп 90 ТЕ ооо, ек Вй Пд йо хх ду х я ще т я НЕ ві ОК о КО фо Во, шо и Я Ан ща ї, о. . щ і. 5 ше о Я ПО СО Еабі НІ ж ї до ЕЕ ї Ка що що Еа в ? епітоп ьо ою о епітоп пон ге і ї В їй БЕ с Хо вк
Фіг. 28
А Барі гавіб ептпОоп : ЛЬ у. ен ен С ЩЕНЯ Дьйке Кіш Ж Ух в ШИ Й ша Ще 000505 фе дяоланвшвюжкова яю АН Но й РНК ет м - М п, жи ни шо ис иа, ВО шк на и ик и І НИ КИ ово Біо низка ОНИ Зх аа ех Би МИ ОЕ й Б КД дити КЕ Кк ТЕ вз ву і з Сигнальна одиниця дволанцюжкова РНІСТІ КЗ ре "мешкаю ви у БВ п и ся хе З я і Ше в. ЕД що. хо й с. Наст Стеричні зіткнення АКОМЕВЮХ ИЙ к Бавіб
Фіг. 29 з БО -2о 0 Баб'бво ДМ езьловв ; КЕ Я Ш А п: тів ланцюжкова 00 ; ПН ни Б РНК і. о Б Є бок ЕХ НИ ЕЗБУКУКЯ іє де сту Б с а Є ШЕоо ро и: ЕТ. шу ТИ К я шк. во щи Он СЮ 5 ше ПК ще: ни ДИ ШЕ шо т ще Ето ее й КК дея ж Ж й и и й ах Ще а; у з, нки - иа ше Сн ЕЕ де АЛКЖНОХ 5 А Ж ЕЛЕ тя их і | й і щожх УК КО МНН шоп ух в ес Ки о Я ї її ЕЕ . 5. ше ши: їн По І ния в МОЯ плн. в
0. Я ЕК п у
0. З а Я КК ще Й ше де ШЕ В ех Ж | ж ОО ве ЗШ я ни С Едь1й пвро тіяз по.КУ пре еше дволанцюжкова ск ан БОГОМ ей тк т Ех о орех ї ВАС ех СО ЖЖ ДУ лю РН й де Ве СЕУ ТБ Як «о ДЖЕК Ех ЖЕ З С Я вк ШИН дп и ОА я 5 В пок Ма ОК ЗЕ ях . Ка чи А, ре т ЖЕ й ех Мі я т Х ее ше не се ОВЕЖ, Леля КЗ зи Допит В МЕНЯ ро: З що х ке ж ше хо Я п поли ПВ их и я що ек и у «0 дн ж КАК, ук Ех Ех дути вк й ов ар ще те В ЕК КУ ай ХК ТЕ ж КМ Ба 7 БО а ХВ Уест КУ иа ІІ ОХ ВК і а 15 Б Ся сх о ТЕЛЕ КАК Ва Ж й Е о Ме; ТМ КЕ Же У Й М і ; пт і щ ті вЗ ештоп каш епітоп а ЗО Е З г. ти сах 00808080. бартобв ; , з МОУ з о о ; дволан Ю 4 пр 4 ре Шо о. ЗК ря Кя г де ще | З РєРНК с зу ХЕ ПО п я Ми ЕВ п ЕН ПИ йо. не Бе С бо дк, НЕ вня Ко ОН Бен ше УМ | они, 5 Я ше с М й и я шо А «р ЕК АЮ и М ще ре : Я ОТЖЕ т ЗД МК Кв «7 й Се Я йо а ов я що ці ш ВЕК в ДЕ КИ ЗОЯ ЗБ З шо І МВ ої. ще 5 З с 5 ЖМ рук п : й ль 5 вх и ; МОВО з, несу шо ек Кавів ох вавіг у . у у МЕЖКЖКИ Фіг . 30 на по по в в в о 177777 нумевацяїд 17117711 Нежраця | 177 Нумереця 11 2 12 | 21101 з її з 38 || т 74 | 74 74 01 3 1313. 6 | 75 в в 40 40 40 || 5 | 76 | 76 1 76. а 6 1776 16 1 Ко 4212 48 0 СВ 1 017785 | 89 82 а 55 85861 9 99 м 17788 | 5 11 те 8 ши в 1 24 1 24 83 851 60 860 60 || | в | Б. в 16101 81 1 в ЇЇ т 970 | 87 Ви ше нКслИ МЕНШИХ НИ ШК ШИ пв-7857 7873 57 | Кк 5 05 5 са 68 68 68 | М | 104 м 677 1 71701111 06 11061 106. Кк о1107 | 7107 107 ши и Я ПНЯ
Фіг. Зіа тАБіБЕУО й В р. : : Ще | : Й ПОГ неенця. 0141171... Ниеря 31701 Нумераця МБ Послідовна | чета | Кабат М МЕН МИ НЕ АН О АСА НАЕЕИ ВЕЕА АСЕ Я шишесши ши ши слини мк нин нини и НИКИ ММ ШК НС ТБ с 196 92 9 Ав 1 6 86316 ж ШЕ І РН 31 7 | 69189. СТАТТЯ 7 ж 5 5 І ІМ 40 40 | 40 || ХХ | во | 79 | 79
Фіг. 16 пяАВІМНОВМ : : В : : : : Нумерація 1 ердя. 30310111 Нуйераця -юоай СЕТМУ поелідовнс| чота | КобаК |. 8 Ко | зв юю | 11174175 16 ВИ ВИС МАСИ ВЕН ЗИ МАНКУ ПАННО ХАН ПОЛЕ АВ ПС Є МО те ов в 1 я3 | 414 101 Ав оо во Свв 15 ЕВ ши шише ше ши и МИ НН о А НИ ВО о НО НИ У ши ЕН МЕС ЛА НО МО о птетртя у т т СА НОМ М ЗИ МИ ЗИ Й те Те 1 8 1786 вв ста ОСТЕ 759 | 53 01017785 | 88 65 С 118 18001501 м к 5 | 58 | в 18 6 п ши ши с 8 пиши ши а и и тв 25 БОБ В Е ві бо СА ШИ М й ях СЛ лк ПЕ ря 1951 в в Вб 99 З 71765 | 06166115 | 010 -х м ОА МИ НИ НО сн НКТ ПИКА КОКС ОДЕСА ЗА МАО СУА ООН: ЗАННИ ПОА Ж ТОН НО СН МО СУБ ро
Фіг. 31с тАВМДОМОЮЯМ : : : : І : : : пттттрттттнижваця 70 нуераця іа а роя | вв 111 ПК МС АС СА ВСТА МАЕ ще з 38144101 51611 ШЕ 175 | м | 21 42 | її 1 84 | 80 во і 9 81 45 | а | 8 19 176 | 46 1 44 1-8 | 47 | 45 14511 М 1181 а 1 ре | в | 8 | 8 1. ЕЕ | яв | в 1 6 пв.177501178515 17917077 1 ОО ВВ В Гм 156 1 в ок ат в 81 60175183 | 86 і.Р шШ-Ш 4.4 ВВ 1 856 ВВ М 1811901 а от 166 76011199 | вв ДЯ 4002089 ПОВЕ А1 ою ші пиши пев ер г ШШШШ2025 2551 89 1 538103 | 60 ря ря АБ ОВ 6 пиши С ії о М 187 | в | Б ЩЕ пиши на шини и З ши шини ни з НН ПЕ в | м | 68561 61 101 о | юю ІА МИ ВИМИ МСА ДЕН і А 15 ТЯ В 108 та шк п МЕ М МИ МА НИКА ЕЕ МИ шо ллктротрв тв рт тя оп сеї ю 38138 17 1 6 | ж 51.
Фіг. 31а шав 15ЕУО Ук РІОМТО5РУВІ ВА 59 з МОУ рІОМТО5РЗБІБАВУСрВУТІВС штудтут - З таху1-39 КН ве екс МОН овц ня їовУітаз СОМТОВРОЗЬЗАБУСОВУТІТСВАВОВІОБУТМИТООКРОСВ слот лу ІСКУ15-39 ОІОМТОВРОЗЕВАВУЄТНУТ ТСКАБОБІВУТ МУООКРОКАРКЦЬІТА за зеББ5БІБАБУСИКУ щу птодерост тт кулю. и ичтж чех тбкуї-27 ОІОМТОВРЕчтеАВУ "ТТТСКАБОБІББУЦДИТООКЕОКАРКЬІТА пУкте МОМТОБРЕБЗАБУСОВУТІТСВА смт аг ; г Й тску1ї-33 профе АБ СРВУТІТСКАБОСІЗМУ БАК ООКРОКМРЕБОІТ А ку1-33 ПІОМТОБРОЗІБАБУСОВУТІТСОАВОРІБВНУ ЩІ і су МО и їх ль "у ). Н у мг яви й току нт ре т ааеисрву ТСОАБОРІБНУІНХООКРОКАРКОЬТХО теку1ї-37 ІОМТОБРІБЬБАБУЧРВУТІТСОАВОВІ ВМ МУООКРОКАРКОЬТУ ІбкУу1-37 ВІОСБТОВРОБІ сдЕУСПВУТІТСВУЄ А ють КАРЕ ТХО хвлУїТ БТОВРЕБІЕБАБУСИКУ у ВУвОбІсЕУТМУВОКРОКУрЕ ; їапкУу15-37 рІСОБТтТОЕРЕВІЗАВУЄ ні гтсвУувОвІВБУТ и ОКУОКІРКООТУВ ІСсКУ1-12 ІО.ТО5РЗ5ІБАВУСРВУТІТСВУВОСІВВУЦЦИУ ОКРОКОРКТЬІХВ тоКкУу1-17 рІОМтТОдРЯ Же деохлттуя лях й З й ах БУ КЕОЖЕХЬ Я ІсКУ1-12 пісне ЕВ В ВІ ВООТІ ТТН вОсІВ ОАЕ ТОК Ам НН дл Ал н - пет щи романи й ІЗКУ1ТОті РІОМТО5РЗЗУВАВУСРВУТІТСВАВОСІВВИИАМХООКРОКАРКЬЦІХ І5КУу1-16 ОтОМТОВРечСеАБУСОВУТІТСВАВ і ВВИБАНТООКЕОКАРЕТНІТА С кл лив Ем Х ЗКУ нвАсеитТ Мт ді КІМ Я ІбКУ10-16 реа вовків ми Оки п тлпяроять ОТОМТО5РЗБІВАВУВСРрВУТІТСНАВОСІВВИПАМХООКРЕКАРЕЧЬТ У ІЗКУ1-17 ПІОМТОВРОЗБЗАБУСОІВУТІТС ІБК БАНТООКРЕУКАРКЦЬТТА ІоКУ РІОМТОВРЕЗЬБАБУСОИУТІТСВАВОСТЕМОЦОМТООКРОКАРКІ ток є ІМтОвревІ АВС ОВ ТЯ ПЛОМТООКРОКАРКЦІІТУА я оТомто РЗБІБАВУСВВУТІТСВАБОСІВМОІКХООКРОКАРКСОТХА ІбКУ1О-17 тОоМмтЗавейбедауєвв - А и: прадввноавон ІСКУ1Т-В а неон ен ни ІЄСКУ1- ХІВМТОВРЕКВАВЙСрВХ п з п НН г ЩІБМТОЗРЕБ БАВІСРКУТІТСВАБОСІВВУПАНУООКРОКАРКІ. ІбКУТО-8 ок оМтовРе АІС ТІМ СІ АН КРоКАРТІУХ МІЖМТОБРЕШІЗАБЦОРВУТІВСВМЕОСІВВУ САНИ рих АРЕТТ ІСКУ1ТО-43 ДІМТОЗРВІВАВУСОВУТІТ ВМБОСІББУБАНТООКРОКАРНОТІХА перо Й пато ещю ого ЕК ТОМА ЕМ АТ стар в тт ІСКУ10-42 рІОМ'ЯОЄРОВІ сАсУЄрВУЙ ТонАБОбТЕВУЦАНХООКРИКАРКО ТУ прОВМВОВВО ВО РІОМІОЗРЕНЬЗАБУСОВУВЦІСКАЗЕСТУБМЬАТИОКРОКЦРКІНХ ІбКУ1-13502 ІОЦТОБРЕЗЬВАВУСОВУТІТСВА ви в « ВІОБТОБРЕБЬБАБУСОВ "ОВАВОСІВЕАТАНУ оби т таку1їв-13 пІС ТОсРЕКІДАСУЄ УТІТСВАБОСІВБАЦАМТООКРОКАРКЦІТО пе Ше ОТО БР5ЗББАВУСРВУТІТСКАВОСІВВАСАЙХООКРОКАЕК х ІСКУу1Т-5 теамтосвсйтсве БОСІЗВАБАЙУООКЕОКАРКСОІТО 2 ПІОМТОБРОШОБАБУСОВКУТІТСРАБВОБІБЕМАМУООКРОВ ї1скУ1-3 пІОКТОБРЕКІ АК ТОСРАБОБІБЕНСАМУООКРОКАРКОСІХО Е МОКТОБРУКІЬБАВУСОВУТІТСВАБОСІВВХУТАМУООКРОК ту Бе ТОКАБОСІВВБУГЦАМУООКРОКАРККЬОІХУА 51 ве др; 15ЕЧУО уко АЗЗБОдОоУР Й 35 107 - й - девВ5БОоБоУвЕВЕБОоВОоТЕТОТІВЇ щ тскуї- 39 і ВІВСЯ вЕКЕБбОсСБОоБ5ОоТрЕТОТІВВООРКОКАТиСОоОМТІ Ко ТКУКІК
ІС. 25 есіОбсУура рот датя пет щі М вес дали тску1в-з АЗВБОБСУРБЗВЕВСВОВСТОЕТЬТІ5ВЬОРЕОРАТУУСООБУВТР ІбхУу12-39 АаББОВСУРЄВЕОЗСВОТОЕТЕТІВВ ОРЕ, из ТскуТ ол Вино КБсС5ОООТрЕТЬТІВВОРЕОКАТУХСОВУ ТЕ ІшкУу1-7 детІтовсУвавВЕВСсСВОВБаТОЕтТІтІ ВВ тітїї -к ша твиУ1-33 лем тс ші засто тТОТтІЗЗБОРБОМАТУХСОКУМВАР ТУ 3 ня НЯ ( т зи сиг - шою Й Іску1-33 век ТоИтТОНЕЗОоВоВоТОЕ стВацОвва АтТУСООУВиМЕ хаВУТЮ 35 дЕеМБЕТОУРаВЕВОСВІЕСТТІЕТВТ 551ОРЕПТАТУУС пумикт о тбКУу1-37 АеМІОВСУРОВЕЗОЗОВСТОЕТІТІ дош Мк АХ СсоотоМОЕ тйкт15-37 КОЗОУТРУВЕЗСЗСБОТРЕТЬТІВЦОРЕОТАТУХОВТУМАР ІскУу15-57 АЗМІОБСУРЕВЕВСЯСЕСТрЕТІТІВІОРЕ ЕВ ик иИОвнни токчі-42 пемомох ЕБСЕСЕСТРЕТІТІВББОРЕГМАТУУЦОВТУМАР 1611-12 АБІОВСІУРЕВЕОСВОБОТОЕТЬТІВВЇ ОРБОЖАТ повно що тд ГрБЕТЬТІВВ, УттУСООдМЕЕ ІСКУ10-12 ОСІ СУ РОС ТОРТІВ ВЕР АТТУСООАНВЕР прання Ман /РОВЕВОВОБОТОКТІТІББІОРЕОКАТУХСООАМВЕЕ тїсСКкУуї-16 дестасттрсті БОРЕВКАТХХУСОСАМОЕР Є я: АебІОБСУРОВЕССЯСВСТрЕТЬТІВВІ - пра іа ЕЕ о з ПЕТТІ ОРЕОКАТУУСОСМЕ ІСКУ1В-Ї тата й БББОРЕОРКАТТТСОЦТНОТ ІКТ 16 АБВБОБОУРОВЕБОВОБОТОЕТЬТІ ВІОРЕПРАТУУСОЮУ ІБУ ІсКу1Т-17 АевІОБСУРУНЕСЯсяСсСТВКтТІтТІВВІ КЕВТАТУТСООТИВУЄ ІСКУ1Т-6 АВВІОВОУЄЗКЕ ОВО ВОТЕЕТЬТІВЗБОРЖОТАТУУСТОВИВИЕ огУшто АБО ОУРБВЕВОБОСБОТОКТІТІВВІ ЗЕдАтУХ кто я АБО ЗБС5СТОРТІТІВВІОРЕОРАТУУСЬОСУМУР Таку девіо5сУгаВЕЗсвсвостЕЕТІ ТІ Ов О попи тт з КО Е юс В Моє БОЮ МАТтУСОнНМдуУВ І6БКУ1-8 доТОодСУРЕВЕЕСВОЗСЯ Як оптові КАТУХСТОНМУХР Тскотв-В й Боно 7 ЗКЕБСБОБОТРЕ ТЬТІ БЕТОБЕОКАТУУСООУУЕХР КУТ АВТІОБСУРУДЕЗСДОВОатТОЕРиТІ ше ух м й тски1в-4 зни УкОи З ВавБстТОКтТІТІВШшЬОВЕОКАТХСОСХУВЕВ І6бКкУу1Тр-43 Ае5ТОдОУРЕВЕБСВСВСТОХТІ, ТІ 851 оте дупі току10-42 АББТОБСУРЯНЕНСВСВСТОУТЬТІВЗЬОРЕОКАТУТСОСТТВТР І1скУ10-42 АКРІНРОУЗ5ВКЗОВООСТОКТИТІ НІЙ РЕВРАЩУТСКО пл ІСКУ1-1302 А5ВІЕВОУРЕВР5ОВЗОВО ЕТОТІДЗЕДРЕРКАКТУСКОВЕВУВ І5КУ1-13502 АЗБІБВОУРЕКЕБОВОБОТРЕТІТІВ5БОРЕОКАТУУСООККЕТР текМ10-13 АВСІКЕСУРЕВЕВСЯСЗСТОЕ ТІ ТІ 5ВІОРЕПУАТУУСОСЕМИТЕ тІбКкУуТт-8 АЕБТЕБСУРЕВІ ЗБОБСТОКТОТІ5БООРЕОКТАТУХСОВЕММІР 15КУ1-5 ДЕЧІЕБСУРОВЕсСЕСЯСТЕЕТЬТІСВгОРПОТАТУТСОО тео ІсКУ1-9 ВІ СЕСУРЕВЕ С ЕТРІТІВІ Р ПЕАТТТСОІМатЬ ЗТОО5СУРБВЕВОВОВСТ ЕТІТІЗБООРВОКАТУХСОСІМВИ Р
Фіг. 32 я
1 5О юАвібшУЄ УВ (1) ЕУОТУОБОАЕУККРОЕВІКІБСКОВОУВЕ ЕМ УЛ УВОМРОКСЬВИМОЕ ІсНнУБ-5І (1) ЕУОГУОВСАБУККРОЕЗЬКІВСКОВСХБКЕТБУМ ОМУРОМРОКОТЕНМО ІСНУ5-а (1) ЕУОПУОБСАБУККРОББІВІ5СКОВСУВЕТВУХ МУВОМРОКОСЕИМОЇ 51 109 парібЗБУО Уй о (51) ІЮРБРЕУТМХАРОКОСОУТІВАРКБІЗТАХТЬОМВВІКАВОТАМУХСАВЕО Іі0НУу5-51 (51) ІУРСО5ОТВУВРВКОСОУТІЗАВКВІВТАХБОМУ5ІКАВОТАМУХСАВА- ІбНУ5-а (51) ІОРВряУТЕХУУРЗКОСВУТІВАРКЗІ5ТАУТОМВВЬКАВОТАМУУСАВ- - 101 121 мАБіБЕУО ув о (101) ХОСУМОТЕОБИСОСТІУТУ 5 ІБНУ5-ВІ 00(99);р ел ІОНУб-а 00(99);, ---яяяяяняяяяяянянняяя
Фіг. 33 1 5о тарі ОБУСТОРРЕУЗУАРОСОТАВІВСВООМІСЗУХУНИХООКРОСАРУБУТУЕО ІБЬУ3-1 ЩІК ТТОРРЕУВЗУЮРООТАВІЙСВООКСОКУЦМУООКРООДРУТУІХОЮ Ісру3-9 ПеББТОРЕЗУЗУАЦООТАВІДШСВОЮЦМІСВЕМУНИХООКРООАЕУБУТТВО ІсьУуЗ3-10 УБОТОРРЕУВУВРСОТАВІ СВОПАСРЕКУЦУНХООКВСОАРУТУТХЕР Ібс1уУ3-12 ПК ОТОРИЗУЗУАНДАОВАВІНСКОЮМІСВКАУНИТООКРООВЕУБУТХ ЗО ІББУЗ-16 БУБІТОРРІУВУЮВООМАВІТСВОВАБРККХАУМУООКРООВРУТУТУКО І6173-19 З5ЕБТОПРИУЗУАНООТМВІ СОСОБТВВУХ ВИХООКРООАВУБТТчОК ІбБуЗз-21 ЗБУСТОРРЕУЄУАРОВТАВІТСООММІСВКЗУНИХООКРООАРУТУТУ ХО Ііс1м3-22 БІЕСТОДРОУЗУВРООТАВІТСЗОВУТСЕМУАНКУООКРООАРВІУТУЕр І5БУ3-25 ВОБІЛОРРЕУЄУВРСОТАВІСВООАБРКОХЦКИХУООКРООАРУТУТУКО ІсБУЗ-27 Бе НБТОРИЗУВУ РООТАВІТСЗСОУСАККУВНИКООКРООАРУБЧІХКО ІсіуЗ-32 ЩВОВТОУРБУВУАВСОМАВІТСОСОМЕСУУЄНИХООКРООАРУБУТХОВ Зі 7 107 тАріг БЕВРЯСІРЕВЕБСЕМБОМТАТЬТІБСТОВЕОВАрТУСВБУПЕМЕОУКСОСТКОТУ, ІСЬУЗ-1 БКАРОСІРЕРРБОВМБОМТАТЬТІВОСТОАОКАРУХСОВИОВВТА 16руУ3-9 ВЦРРОСІРЕКЕВОВМВОМТАТИТІ ВОЛО КАрУУСОУНОВВТА ІСЬУЗ-10 Б КРЗСІРЕВЕВОВОБСЯМАТЬТІВСЛОВЕОЕАрУХСЯВТОоеВОМН І10р73-12 ВПВРЯСІРЕКТЗОВМИОМТИТИТІЗВ БАСОБАрТХСОУМОВВВрН ІБЬУЗ-16 5ЕБРОЗСІРЕВЕВОВОССоВІУТЬТІВОТОВЕПЕАОУУСЬЯАреВСсТУ І101м3-13 МЖЕРОСІРШЕЕБОВИВОМТАБІТІВССОВЕОНАРрУХСМЗВОВБОМН ІвБуЗ-21 5ЦАРОСІРЕВРОСЯМ5ОМТАТЬТІЗВ КАЙОЕАВУХСОУМОВЕБОН І1с1х3-32 ВЕВЖЕВСІРЕВТВЗОВТВОМТЕТТ ТІВ ВЕОрКАСІХСЬВОСОВОМ ІСЬУЗ-25 ЗЕВРБЗСІРЕВРУВОСВВОСИТТЬТІВСУОАЕРЕАВУСОВАреБСТХ ІСБУ3-27 БЕВРЕСІРЕВЕБОВОНОДТ ТЬТІЗСООУКЕОЕАОУУСУБАВОМИ ІСГУ3-32 ЕЙВРЕВІРЕВЕБОВКЗОМТІТЬТІЙСВОВЕРЕАРУХУОБІОМНА ;
Фіг. З4а Н НІ ШАВ 12 ОУОІООБОРСЬУКРВОТЬБІТСАІ5СОБУВВМВААЙИСНІКОВРОВСЬЕИ ІСНУЄ-1 ОУОГОО5ОРСІУКРЕОТЬТІТСАІБСРБУБЕМІАВИЩМІВОВРЕВСЬКИН, 51 109 МАЮ 12 СІТОКВЯКЛУММУАУВУКУВІТІМРОТЗКМОКЗБОМІВУТРЕОТАУХУСА тсвує-їі ОВЕУУВОКИУМОУАУВУКОВІТІМРОТЗКМОКУБОЇМ5УТРЕОТАУЧУСА 101 122 тав 12 ВХ5УРЕЇВІруМсОстоУТУВА Існуб-1 В к
Фіг. 345 тАв 15ЕУО ХТЕБОСТКУКІК такої ЯТЕСОСТКУБІК ІСКЮТ2 УТЕСОСТКБКІК ІСКОЗ ЕТЕСОСТКУЦІК І6Ки14 т КСЦОТКУКІ Кк тАвБ'Т2О0УО/ОВУ ОУКОоОТКЬЕУТ ІСІ УУЕОТОТКУТУХ 1с1е УуковоткКІтУї ІСТОТІ УФК ТУ, пен ЕУЕОСОСТІНЛ ТІ, ІСТО5 МУКСИОТВОТУХ тс106 МУКО щОоТКиТУ 1. тА 15ЕМО -.МОТЕЛЕНСОСТБУТУВВ тА 120Уу53,/385У .,ІОрУМСОСТІУТУВЕ Іон а: «АБУКОНИЯСОСТОУТУВЕ ІСНО? а. УМХУЕВІДСВСсТЬУТУВВ чсН03 ях «АЕБУНСОСТЕКАТІ 55 тІоно4 аз, Крути УТтУВе чан) є «МНЕрЗИСОСТЬУТУВЕ ІСНОВ УУХуУоМручсостжуТУВ В «
Фіг. 35 Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП "Український інститут інтелектуальної власності", вул. Глазунова, 1, м. Київ - 42, 01601
UAA201114064A 2009-04-29 2010-04-29 Антагоніст толл-подібного рецептора 3 UA112282C2 (uk)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US17368609P 2009-04-29 2009-04-29
US12/609,675 US8409567B2 (en) 2008-10-31 2009-10-30 Toll-like receptor 3 antagonists
PCT/US2010/032964 WO2010127113A2 (en) 2009-04-29 2010-04-29 Toll-like receptor 3 antagonists

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA112282C2 true UA112282C2 (uk) 2016-08-25

Family

ID=43032773

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201114064A UA112282C2 (uk) 2009-04-29 2010-04-29 Антагоніст толл-подібного рецептора 3

Country Status (33)

Country Link
EP (2) EP3020822A1 (uk)
JP (1) JP5727463B2 (uk)
KR (2) KR101758713B1 (uk)
CN (1) CN102482699A (uk)
AU (1) AU2010241581A1 (uk)
BR (1) BRPI1016191A2 (uk)
CA (1) CA2760525A1 (uk)
CL (1) CL2011002703A1 (uk)
CO (1) CO6450607A2 (uk)
CR (1) CR20110642A (uk)
DK (1) DK2425008T3 (uk)
EA (1) EA021512B1 (uk)
EC (1) ECSP11011428A (uk)
ES (1) ES2556239T3 (uk)
HK (1) HK1170536A1 (uk)
HR (1) HRP20151352T1 (uk)
HU (1) HUE028021T2 (uk)
IL (1) IL215906A0 (uk)
ME (1) ME02280B (uk)
MX (2) MX2011011623A (uk)
MY (1) MY180699A (uk)
NI (1) NI201100187A (uk)
NZ (1) NZ596036A (uk)
PE (1) PE20121493A1 (uk)
PL (1) PL2425008T3 (uk)
PT (1) PT2425008E (uk)
RS (1) RS54451B1 (uk)
SG (1) SG175396A1 (uk)
SI (1) SI2425008T1 (uk)
SM (1) SMT201500293B (uk)
UA (1) UA112282C2 (uk)
WO (1) WO2010127113A2 (uk)
ZA (1) ZA201108724B (uk)

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20130090457A1 (en) * 2008-10-31 2013-04-11 Janssen Biotech, Inc. Toll-Like Receptor 3 Antagonists for the Treatment of Metabolic and Cardiovascular Diseases
LT2350304T (lt) 2008-10-31 2017-02-10 Janssen Biotech, Inc. Toll tipo receptoriaus 3 antagonistai
AU2010270163B2 (en) 2009-07-10 2016-05-05 Innate Pharma, S.A. TLR3 binding agents
WO2012095432A2 (en) * 2011-01-12 2012-07-19 Innate Pharma Tlr3 binding agents
WO2012098113A1 (en) * 2011-01-17 2012-07-26 Novo Nordisk A/S Il-21 ligands
KR20140075708A (ko) * 2011-09-12 2014-06-19 얀센 바이오테크 인코포레이티드 대사 및 심혈관 질환의 치료를 위한 톨-유사 수용체 3 길항제
US9944712B2 (en) 2012-05-31 2018-04-17 Innate Pharma TLR3 binding agents
KR101878023B1 (ko) 2015-12-07 2018-07-16 현대자동차주식회사 차량용 전원 관리 시스템
CN113484526B (zh) * 2021-08-11 2024-08-23 上海迈晋生物医药科技有限公司 一种抗FcRn抗体或其抗原结合片段生物学活性的检测方法

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
AU675916B2 (en) 1991-06-14 1997-02-27 Genentech Inc. Method for making humanized antibodies
CA2229043C (en) 1995-08-18 2016-06-07 Morphosys Gesellschaft Fur Proteinoptimierung Mbh Protein/(poly)peptide libraries
WO2003031573A2 (en) * 2001-10-05 2003-04-17 Coley Pharmaceutical Gmbh Toll-like receptor 3 signaling agonists and antagonists
JP2004016021A (ja) 2002-06-12 2004-01-22 Japan Science & Technology Corp 抗体および阻害剤並びにそれを用いた形質転換方法および形質転換キット
AR051836A1 (es) 2004-11-30 2007-02-14 Centocor Inc Antagonistas de receptor 3 simil toll metodos y usos
EP1945820B1 (en) 2005-10-27 2013-08-28 Janssen Biotech, Inc. Toll like receptor 3 modulators, methods and uses
WO2010045340A1 (en) 2008-10-14 2010-04-22 Centocor Ortho Biotech Inc. Methods of humanizing and affinity-maturing antibodies
LT2350304T (lt) * 2008-10-31 2017-02-10 Janssen Biotech, Inc. Toll tipo receptoriaus 3 antagonistai

Also Published As

Publication number Publication date
EA201171307A1 (ru) 2012-07-30
JP5727463B2 (ja) 2015-06-03
BRPI1016191A2 (pt) 2020-12-08
SMT201500293B (it) 2016-01-08
NI201100187A (es) 2012-05-24
ES2556239T3 (es) 2016-01-14
SG175396A1 (en) 2011-12-29
SI2425008T1 (sl) 2015-12-31
RS54451B1 (en) 2016-06-30
CL2011002703A1 (es) 2012-07-20
PE20121493A1 (es) 2012-11-05
KR20170018110A (ko) 2017-02-15
PL2425008T3 (pl) 2016-03-31
MX2011011623A (es) 2011-11-18
HRP20151352T1 (hr) 2016-01-01
MY180699A (en) 2020-12-07
CO6450607A2 (es) 2012-05-31
HK1170536A1 (zh) 2013-03-01
ME02280B (me) 2016-02-20
PT2425008E (pt) 2015-12-04
EP2425008A4 (en) 2012-11-07
KR101758713B1 (ko) 2017-07-18
IL215906A0 (en) 2012-01-31
ZA201108724B (en) 2013-06-26
CA2760525A1 (en) 2010-11-04
CR20110642A (es) 2012-07-16
EP3020822A1 (en) 2016-05-18
JP2012525425A (ja) 2012-10-22
EP2425008B1 (en) 2015-09-16
EA021512B1 (ru) 2015-07-30
KR20120040141A (ko) 2012-04-26
ECSP11011428A (es) 2012-02-29
WO2010127113A2 (en) 2010-11-04
HUE028021T2 (en) 2016-11-28
NZ596036A (en) 2014-03-28
EP2425008A1 (en) 2012-03-07
AU2010241581A1 (en) 2011-11-17
DK2425008T3 (en) 2015-10-05
MX349056B (es) 2017-07-06
CN102482699A (zh) 2012-05-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA112282C2 (uk) Антагоніст толл-подібного рецептора 3
US9932404B2 (en) Methods of reducing clinical symptoms of viral infection by administering a toll-like receptor 3 antagonist
UA124734C2 (uk) Антитіло проти с5 і його застосування
CN102741283B (zh) 具有高阻断活性的抗-C5a结合部分
UA121844C2 (uk) Людське антитіло до cd27, спосіб його одержання та застосування
CN108137702A (zh) 抗siglec-7抗体及其使用方法
SA519402246B1 (ar) طريقة لعلاج أو تحسين اضطرابات أيضية باستخدام مساعدات مستقبل ببتيد شبيه بالجلوكاجون-1 مقترنة بمناهضات لمستقبل ببتيد مثبط معوي
CN107922480A (zh) 抗cd33抗体及其使用方法
UA119570C2 (uk) Анти-ctla4 моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, фармацевтична композиція і їх застосування
AU2009296937A2 (en) Anti-CD147 antibodies, methods, and uses
US20130090457A1 (en) Toll-Like Receptor 3 Antagonists for the Treatment of Metabolic and Cardiovascular Diseases
CN110790839A (zh) 抗pd-1抗体、其抗原结合片段及医药用途
US8460659B2 (en) Toll-like receptor 3 antagonists for the treatment of metabolic and cardiovascular diseases
EP2755685A1 (en) Toll-like receptor 3 antagonists for the treatment of metabolic and cardiovascular diseases