UA110961C2 - КОМБІНАЦІЯ ІНГІБІТОРУ ФОСФАТИДИЛІНОЗИТ-3-КІНАЗИ (PI3K) І ІНГІБІТОРУ mTOR - Google Patents

КОМБІНАЦІЯ ІНГІБІТОРУ ФОСФАТИДИЛІНОЗИТ-3-КІНАЗИ (PI3K) І ІНГІБІТОРУ mTOR Download PDF

Info

Publication number
UA110961C2
UA110961C2 UAA201311138A UAA201311138A UA110961C2 UA 110961 C2 UA110961 C2 UA 110961C2 UA A201311138 A UAA201311138 A UA A201311138A UA A201311138 A UAA201311138 A UA A201311138A UA 110961 C2 UA110961 C2 UA 110961C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
compound
everolimus
combination
shi
pharmaceutically acceptable
Prior art date
Application number
UAA201311138A
Other languages
English (en)
Inventor
Крістіна Фрітш
Карлос Гарсія-Ечеверрія
Ксіжонг Хуанг
Совер-Мішель Мера
Original Assignee
Новартіс Аг
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=46018130&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=UA110961(C2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Новартіс Аг filed Critical Новартіс Аг
Publication of UA110961C2 publication Critical patent/UA110961C2/uk

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4439—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. omeprazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/425—Thiazoles
    • A61K31/427—Thiazoles not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/436—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a six-membered ring having oxygen as a ring hetero atom, e.g. rapamycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/439—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom the ring forming part of a bridged ring system, e.g. quinuclidine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/506—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/10—Drugs for disorders of the urinary system of the bladder
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/02—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for disorders of the vagina
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/38—Drugs for disorders of the endocrine system of the suprarenal hormones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives

Abstract

Винахід стосується застосування сполуки 1-({4-метил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилетил)піридин-4-іл]тіазол-2-іл}амід) 2-аміду (S)-піролідин-1,2-дикарбонової кислоти або її фармацевтично прийнятної солі і інгібітору mTOR - еверолімусу (RAD001) або його фармацевтично прийнятної солі для одержання лікарського засобу для лікування захворювання, залежного від мішені рапаміцину (mTOR) кінази у ссавців, де вказане залежне від мішені рапаміцину (mTOR) кінази захворювання у ссавців являє собою рак.

Description

Опис
Галузь техніки, до якої відноситься винахід
Даний винахід відноситься до фармацевтичної комбінації, що включає сполуку-інгібітор фосфатидилінозит-3-кінази (РІЗК), яка є похідним 2-карбоксамідциклоаміносечовини , або її фармацевтично прийнятну сіль і щонайменше один інгібітор мішені рапаміцину (тТОК) у ссавців або його фармацевтично прийнятну сіль; фармацевтичної композиції, що містить таку комбінацію; і до застосування такої комбінації при лікування проліферативних захворювань, більш краще захворювань, залежних від мішені рапаміцину (тТОК ) кінази у ссавців.
Рівень техніки
Показано, що інгібування мішені рапаміцину (тТОЕ ) у ссавців може індукувати передачу сигналу розташованого вище рецептора інсулінподібного фактору росту 1 (ІСБЕ-1К), що приводить до активації АКТ у ракових клітинах . Припускають, що це явище відіграє роль в ослабленні клітинних відповідей на інгібування ттТоО і може зменшувати клінічну активність інгібіторів ТТОК . Наприклад, збільшення вмісту рАКТ виявлене приблизно у 5095 пухлин у всіх пацієнтів у фазі | дослідження пацієнтів, у яких є запущені солідні пухлини (Тарегпо еї аї., дошитаї ої Сіїпіса! Опсоіоду, 26 (2008), рр. 1603-1610).
Незважаючи на наявність численних засобів лікування проліферативного захворювання у пацієнтів, зберігається необхідність в ефективних і безпечних терапевтичних засобах і необхідність у їх кращому використанні в комбінованій терапії. Сполуки формули (А), запропоновані в даному винаході, які включають /1-(4-метил-5-(2-(2,2,2-трифтор-1,1- диметилетил)піридин-4-іліІтіазол-2-ілламід 2-аміду (5)-піролідин-1,2-дикарбонової кислоти, є високоселективними інгібіторами ізоформи альфа-фосфатидилінозит-кінази (РІЗК).
Несподівано було виявлено, що комбінація ефективної кількості альфа-специфічного інгібітору
РІЗК, сполуки формули (А), з ефективною кількістю щонайменше одного інгібітору тТОокК приводить до несподіваного синергічного поліпшення при лікуванні захворювань, залежних від мішені рапаміцину (тТОК ) у ссавців, особливо раку. При введенні одночасно, послідовно або роздільно альфа-специфічний інгібітор РІЗК ії інгібітор тТОм винаходу взаємодіють і значно інгібують проліферацію клітин. Ця сприятлива взаємодія дає можливість зменшити необхідну дозу кожної сполуки, що приводить до зменшення побічних ефектів і збільшення тривалої
Зо клінічної ефективності сполук при лікуванні.
Суть винаходу
Згідно з даним винаходом виявлено, що альфа-ізоформа специфічного інгібітору фосфатидилінозит-3-кінази (РІЗК) - сполуки формули (А), або її фармацевтично прийнятна сіль зменшує або блокує фосфорилювання і активацію АКТ інгібіторами ттоК. Відповідно до цього даний винахід відноситься до фармацевтичної комбінації, що включає сполуку формули (А) або її фармацевтично прийнятну сіль і щонайменше один інгібітор тТОК або його фармацевтично прийнятну сіль.
У кращому варіанті здійснення сполукою формули (А), запропонованою у даному винаході, є 1-(4-метил-5-(2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилетил)піридин-4-іл|гіазол-2-іл)амід) 2-аміду (5)- піролідин-1,2-дикарбонової кислоти ("сполука 1").
У кращому варіанті здійснення інгібітор ттТОК, запропонований у даному винаході, вибраний із групи, що складається з КАЮО рапаміцину (сиролімус) і його похідних/аналогів, таких як еверолімус (КАБОО1), темсиролімус (ССІ-779), зотаролімус (АВТ578), ЗАК543, аскоміцин (етильний аналог ЕК5БОб6), деферолімус (АР23573/МК-8669), АР2З3841, КО-0063794, ІМК-128,
ЕХ2044, ЕХЗ3855, ЕХ7518, АЙ0О8055, 051-027, М/МЕ-125132, ХІ 765, МУ-128, М/МЕ-125132 і
ЕМ101/ 303511.
Одним аспектом даного винаходу є фармацевтична комбінація, що включає сполуку формули (А) або її фармацевтично прийнятну сіль і щонайменше один інгібітор тТОм. або його фармацевтично прийнятну сіль, для застосування при лікуванні або попередженні захворювання, залежного від кінази ттТОкК.
Іншим аспектом даного винаходу є застосування сполуки формули (А) або її фармацевтично прийнятної солі і щонайменше одного інгібітору ттТОк або його фармацевтично прийнятної солі для одержання лікарського засобу для лікування або попередження захворювання, залежного від кінази ттТОКк.
Іншим аспектом даного винаходу є спосіб лікування або попередження захворювання, залежного від кінази ттТОм, шляхом уведення сполуки формули (А) або її фармацевтично прийнятної солі і щонайменше одного інгібітору ттТОК або його фармацевтично прийнятної солі.
Іншим аспектом даного винаходу є комбінація сполуки формули (А) і щонайменше одного бо інгібітору ттТО, вибраного із групи, що складається з КАЮ рапаміцину (сиролімус) і його похідних/аналогів, таких як еверолімус (КА0БОО1), темсиролімус (ССІ-779), зотаролімус (АВТ578), 5БАК543, аскоміцин (етильний аналог ЕК5БОб6), деферолімус (АР23573/МК-8669),
АР2З3841, КО-0063794, ІМК-128, ЕХ2044, ЕХЗ3855, ЕХ7518, А70О08055,. 051-027, ММЕ-125132,
ХІ 765, МУ-128, М/МЕ-125132 і ЕМ101/ 303511, де активні інгредієнти в кожному випадку присутні у вільній формі або у формі фармацевтично прийнятної солі, і необов'язково щонайменше одного фармацевтично прийнятного носія для одночасного, роздільного або послідовного застосування при лікуванні захворювань, залежних від мішені рапаміцину (ттоК) кінази у ссавців.
Іншим аспектом даного винаходу є спосіб зменшення або блокування фосфорилювання і активації АКТ інгібіторами тТОК, що включає введення теплокровній тварині, яка цього потребує, сполуки формули (А) або її фармацевтично прийнятної солі.
В іншому варіанті здійснення даний винахід відноситься до способу лікування проліферативного захворювання, залежного від набутого фосфорилювання і активації АКТ під час лікування щонайменше одним інгібітором ттОК або його фармацевтично прийнятною сіллю, що включає введення теплокровній тварині, яка цього потребує, терапевтично ефективної кількості сполуки формули (А) або її фармацевтично прийнятної солі.
В іншому варіанті здійснення даний винахід відноситься до способу лікування проліферативного захворювання, яке стало резистентним або має зменшену чутливість до лікування щонайменше одним інгібітором ттТОкК або його фармацевтично прийнятною сіллю, що включає введення теплокровній тварині, яка цього потребує, терапевтично ефективної кількості сполуки формули (А) або її фармацевтично прийнятної солі. Резистентність обумовлена, наприклад, фосфорилюванням і активацією АКТ.
Іншим аспектом даного винаходу є спосіб підвищення ефективності лікування проліферативного захворювання щонайменше одним інгібітором ттТОК або його фармацевтично прийнятною сіллю, що включає введення теплокровній тварині, яка цього потребує, комбінації, що включає сполуку формули (А) або її фармацевтично прийнятну сіль і щонайменше один інгібітор тТОкК або його фармацевтично прийнятну сіль.
Одним аспектом даного винаходу є фармацевтична композиція, що містить інгібітор РІЗК, сполуку формули (А) або її фармацевтично прийнятну сіль і щонайменше один інгібітор ттТОокК
Зо або його фармацевтично прийнятну сіль.
Докладний опис винаходу
На фіг. 1 представлені ступені фосфорилювання АКТ (5473); МАРК (1202/7204); МЕКТ/2 (5217/5221) і вмісту актину в присутності тільки одного засобу еверолімусу (ЕАБООТ), тільки одного засобу 1-(/4-метил-5-(2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилетил)піридин-4-іл|гіазол-2-іл)іаміду) 2- аміду (5)-піролідин-1,2-дикарбонової кислоти ("сполука 1") і еверолімусу (КАБОО1) у комбінації зі сполукою 1 у клітинах ВТ474 пухлини молочної залози, визначені аналізом вестерн-блотингу.
На фіг. 2 представлені ступені фосфорилювання АКТ (5473) у присутності тільки одного засобу еверолімусу (КАБООТ), тільки одного засобу сполуки 1 і еверолімусу (КАБОО1) у комбінації зі сполукою 1 при порівнянні з розріджувачем як контролем в клітинах ВТ474 пухлини молочної залози, кількісно визначені за методикою білкових біочипів зворотної фази.
На фіг. З представлені ступені фосфорилювання АКТ (1308) у присутності тільки одного засобу еверолімусу (КАБООТ), тільки одного засобу сполуки 1 і еверолімусу (КАБОО1) у комбінації зі сполукою 1 при порівнянні з розріджувачем як контролем в клітинах ВТ474 пухлини молочної залози, кількісно визначені за методикою білкових біочипів зворотної фази.
На фіг. 4 представлені повні ступені експресії АКТ у присутності тільки одного засобу еверолімусу (КАБОО1), тільки одного засобу сполуки 1 і еверолімусу (КАБООТ1) у комбінації зі сполукою 1 при порівнянні з розріджувачем як контролем в клітинах ВТ474 пухлини молочної залози, кількісно визначені за методикою білкових біочипів зворотної фази.
На фіг. 5 представлені ступені фосфорилювання АКТ (5473); МАРК (1202/у204) і вмісту актину в присутності тільки одного засобу еверолімусу (КАБОО1), тільки одного засобу сполуки 1 ї еверолімусу (КАБООТ) у комбінації зі сполукою 1 у клітинах МОА-МВ231 пухлини молочної залози, визначені аналізом вестерн-блотингу.
На фіг. 6 представлені ступені фосфорилювання АКТ (5473) у присутності тільки одного засобу еверолімусу (КАБООТ), тільки одного засобу сполуки 1 і еверолімусу (КАБОО1) у комбінації зі сполукою 1 при порівнянні з розріджувачем як контролем в клітинах МОА-МВ231 пухлини молочної залози, кількісно визначені за методикою білкових біочипів зворотної фази.
На фіг. 7 представлені ступені фосфорилювання АКТ (1308) у присутності тільки одного засобу еверолімусу (КАБООТ), тільки одного засобу сполуки 1 і еверолімусу (КАБОО1) у комбінації зі сполукою 1 при порівнянні з розріджувачем як контролем в клітинах МОА-МВ231 бо пухлини молочної залози, кількісно визначені за методикою білкових біочипів зворотної фази.
На фіг. 8 представлені повні ступені експресії АКТ у присутності тільки одного засобу еверолімусу (КАБОО1), тільки одного засобу сполуки 1 і еверолімусу (КАБОО1) у комбінації зі сполукою 1 при порівнянні з розріджувачем як контролем в клітинах МОА-МВ231 пухлини молочної залози, кількісно визначені за методикою білкових біочипів зворотної фази.
На фіг. 9 представлені ступені фосфорилювання АКТ (5473) (діаграма А) і повні вмісти АКТ (діаграма В) у присутності еверолімусу (КАБО0О1) і еверолімусу (КАБООЇ) у комбінації зі сполукою 1 у клітинах МОА-МВ231 пухлини молочної залози, визначені шляхом вестерн- блотингу і додатково кількісно визначені шляхом програмного забезпечення Очапійу Опе у другій групі експериментів.
На фіг. 10 представлені ступені фосфорилювання АКТ (5473) у присутності тільки одного засобу еверолімусу (КАБООТ), тільки одного засобу сполуки 1 і еверолімусу (КАБОО1) у комбінації зі сполукою 1 при порівнянні з розріджувачем як контролем в клітинах МОА-МВ231 пухлини молочної залози, кількісно визначені за методикою білкових біочипів зворотної фази в другій групі експериментів.
На фіг. 11 представлені ступені фосфорилювання АКТ (1308) у присутності тільки одного засобу еверолімусу (КАБООТ), тільки одного засобу сполуки 1 і еверолімусу (КАБОО1) у комбінації зі сполукою 1 при порівнянні з розріджувачем як контролем в клітинах МОА-МВ231 пухлини молочної залози, кількісно визначені за методикою білкових біочипів зворотної фази в другій групі експериментів.
На фіг. 12 представлені повні ступені експресії АКТ у присутності тільки одного засобу еверолімусу (КАБОО1), тільки одного засобу сполуки 1 і еверолімусу (КАБОО1) у комбінації зі сполукою 1 при порівнянні з розріджувачем як контролем в клітинах МОА-МВ231 пухлини молочної залози, кількісно визначені за методикою білкових біочипів зворотної фази в другій групі експериментів.
На фіг. 13 наведені дані для матриці повної дози для проліферації клітин, отримані шляхом обробки засобом окремо і разом з еверолімусом (КАОООТ1) і/або сполукою 1 на моделях клітин
ЗКВВ-3 раку молочної залози людини.
На фіг. 14 наведені дані для матриці повної дози для проліферації клітин, отримані шляхом обробки засобом окремо і разом з еверолімусом (КАОООТ1) і/або сполукою 1 на моделях клітин
Зо ВТ-474 раку молочної залози людини.
На фіг. 15 наведені дані для матриці повної дози для проліферації клітин, отримані шляхом обробки засобом окремо і разом з еверолімусом (КАОООТ1) і/або сполукою 1 на моделях клітин тТ47-а раку молочної залози людини.
На фіг. 16 наведені дані для матриці повної дози для проліферації клітин, отримані шляхом обробки засобом окремо і разом з еверолімусом (КАБОО1) і/або сполукою 1 на моделях клітин 28-75-1 раку молочної залози людини.
Докладний опис винаходу
Даний винахід відноситься до фармацевтичної комбінації, що включає (а) сполуку формули (А), як визначено в даному винаході, або її фармацевтично прийнятну сіль і (б) щонайменше один інгібітор тТОК або його фармацевтично прийнятну сіль.
У даному описі використовуються наведені нижче визначення, якщо не зазначене інше:
Терміни "що містить" і "що включає" використовуються в даному винаході у значенні, що допускає зміну в необмеженому сенсі, якщо не зазначено інше.
При використанні у даному винаході (особливо у формулі винаходу) терміни, що використовуються в однині, включають як однину, так і множину, якщо в даному винаході не зазначено інше, і якщо це явно не суперечить контексту. Якщо для сполук, солей і т.п. використовується форма множини, це також означає і одну сполуку, сіль і т.п. "Комбінація" означає фіксовану комбінацію в одній одиничній дозованій формі або наборі компонентів для комбінованого введення, при якій сполука формули (А) і компонент комбінації (наприклад, інший лікарський засіб, як зазначено нижче, що також називається "компонентом комбінації" або "терапевтичним засобом") можна незалежно вводити одночасно або окремо через визначені проміжки часу, особливо, якщо ці проміжки часу дають можливість компонентам комбінації виявляти спільний, наприклад, синергічний вплив. "Фармацевтична комбінація" при використанні у даному винаході означає продукт, отриманий змішуванням або комбінуванням більше одного активного інгредієнта, і включає фіксовані й нефіксовані комбінації активних інгредієнтів. Термін "фіксована комбінація" або "фіксована доза" означає, що активні інгредієнти, наприклад, сполука формули (А) і компонент комбінації, обидва вводять пацієнту одночасно у вигляді однієї форми або дози. Термін "нефіксована комбінація" означає, що активні інгредієнти, наприклад, сполука формули (Ї), і бо компонент комбінації, обидва вводять пацієнту у вигляді окремих форм спільно, одночасно або послідовно без установлених тимчасових обмежень, і таке введення забезпечує терапевтично ефективні вмісти цих двох сполук в організмі теплокровної тварини, яка цього потребує.
Останнє також відноситься до змішаного лікування, наприклад, введення трьох або більше активних інгредієнтів.
Термін "інгібітор фосфатидилінозит-3-кінази" у даному винаході визначений як такий, що означає сполуку, яка вибірково діє, зменшує вміст або інгібує РІ З-кіназу. Показано, що активність РІ З-кінази у відповідь на цілий ряд стимулюючих гормональних факторів і факторів росту, включаючи інсулін, тромбоцитарний фактор росту, інсуліноподібний фактор росту, епідермальний фактор росту, колонієстимулюючий фактор і гепатоцитарний фактор росту та бере участь у процесах, пов'язаних з ростом і трансформацією клітин.
Термін "фармацевтична композиція" у даному винаході визначений як такий, що означає суміш або розчин, що містить щонайменше один активний інгредієнт або терапевтичний засіб для введення теплокровній тварині, наприклад, ссавцеві або людині, для попередження або лікування конкретного захворювання або патологічного стану, яким страждає теплокровна тварина.
Термін "фармацевтично прийнятне" у даному винаході визначений як такий, що означає такі сполуки, матеріали, композиції і/або дозовані форми, які з погляду медичних норм застосовні для взаємодії з тканинами теплокровної тварини, наприклад, ссавця або людини, без прояву надмірної токсичності, подразнення, алергійної реакції й інших ускладнень у комбінації з прийнятним співвідношенням користь/ризик.
Вислів "терапевтично ефективна кількість" використовується в даному винаході для позначення кількості, достатньої для такого, що складає щонайменше приблизно 1595, краще щонайменше приблизно 5095, ще краще щонайменше приблизно 9095 ослаблення клінічно значимого дефіциту активності, функції і відповіді теплокровної тварини, яка цього потребує, ще краще його попередження. Альтернативно, терапевтично ефективна кількість достатня для забезпечення поліпшення клінічно значимого стану/симптому теплокровної тварини, яка цього потребує.
Термін "лікування", "лікувати" при використанні у даному винаході включає лікування, полегшення, зменшення прояву або ослаблення щонайменше одного симптому у суб'єкта або
Зо затримку прогресування захворювання. Наприклад, лікування може приводити до ослаблення одного або більше симптомів порушення або повне усунення порушення, такого як рак. У даному винаході термін "лікування" також означає зупинку, затримку початку (тобто період до клінічного прояву захворювання) і/або зменшення небезпеки розвитку або погіршення протікання захворювання. Термін "захист" використовують у даному винаході для позначення затримки або лікування, або, якщо це прийнятно, розвитку, продовження або погіршення захворювання у суб'єкта.
Термін "попередження", "попереджати" при використанні в даному винаході включає попередження щонайменше одного симптому, пов'язаного з патологічним станом, що попереджується, захворюванням або порушенням або викликаного ним.
Термін "спільно терапевтично активні" або "спільний терапевтичний ефект" при використанні у даному винаході означає, що сполуки можна вводити окремо (хронологічно почерговим шляхом, переважно послідовно-специфічним шляхом) через такі проміжки часу, що вони, переважно у теплокровній тварині, переважно людині, що зазнає лікування, все-таки виявляють (переважно синергічну) взаємодію (спільний терапевтичний ефект). Спільний терапевтичний ефект, зокрема, можна виявити по визначенню вмістів у крові, яке проводиться щонайменше через деякі проміжки часу, які показують, що обидві сполуки містяться в крові людини, що зазнає лікування.
В УМО 2010/029082 описані конкретні похідні 2-карбоксаміддиклоаміносечовини, для яких виявлено, що вони мають інгібуючу активність у відношенні РІ З-кіназ (фосфатидилінозит-3- кіназ). Ці специфічні інгібітори фосфатидилінозит-3-кінази (РІЗК) мають корисні фармакологічні характеристики і виявляють поліпшену селективність у відношенні Рі З-кінази альфа у порівнянні з підтипами бета і/або дельта, і/або гама. Конкретні похідні /-2- карбоксаміддцдиклоаміносечовини, які є прийнятними для даного винаходу, їх одержання і придатні препарати, що їх містять, описані в УМО 2010/029082 і включають сполуки формули (А):
во М М М лш (в) (в; Мн, в в! (А) або їх фармацевтично прийнятну сіль, де
А означає гетероарил, вибраний із групи, що складається з: 5
М М улим їн
М
М. кн
В' означає один з наступних замісників: (1) незаміщений або заміщений, переважно заміщений С:-С7алкіл, де зазначені замісники незалежно обрані з одного або більше, переважно одного-дев'яти наступних фрагментів: дейтерію, фтору або одного-двох наступних фрагментів:
Сз-Социклоалкілу; (2) необов'язково заміщений Сз-Свєциклоалкіл, де зазначені замісники незалежно обрані з одного або більше, переважно одного-чотирьох наступних фрагментів: дейтерію, Сі-Сзалкілу (переважно метилу ), фтору, ціаногрупи, амінокарбонілу; (3) необов'язково заміщений феніл, де зазначені замісники незалежно обрані з одного або більше, переважно одного-двох наступних фрагментів: дейтерію, галогену, ціаногрупи, Сі-Сталкілу, Сч-
Сталкіламіногрупи, ди(Сі-сталкіл)аміногрупи, С1-Сталкіламінокарбонілу, ди(С-
Сталкіл)амінокарбонілу, Сі-С7алкоксигрупи; (4) необов'язково моно- або дизаміщений амін, де зазначені замісники незалежно обрані з наступних фрагментів: дейтерію, Сі-С7алкілу (який є незаміщеним або заміщеним одним або більше замісниками, обраними із групи, що складається з дейтерію, фтору, хлору, гідроксигрупи), фенілсульфонілу (який є незаміщеним або заміщеним одним або більше, переважно одним С.1-С7алкілом, Сі-Сталкоксигрупою, ди(С:і-Сталкілламіно-Сч-
Сталкоксигрупою); (5) заміщений сульфоніл, де зазначений замісник вибраний з наступних фрагментів: Сі-Сталкілу (який є незаміщеним або заміщеним одним або більше замісниками, обраними із групи, що складається з дейтерію, фтору), піролідинової групи (яка є незаміщеною або заміщеною одним або більше замісниками, обраними із групи, що складається з дейтерію, гідроксигрупи, оксогрупи; переважно однієї оксогрупи); (6) фтор, хлор;
Вг означає водень;
ВЗ означає (1) водень, (2) фтор, хлор, (3) необов'язково заміщений метил, де зазначені замісники незалежно обрані з одного або більше, переважно одного-трьеох наступних
Зо фрагментів: дейтерію, фтору, хлору, диметиламіногрупи; за винятком /1-(15-(2-(трет-бутил)піримідин-4-іл|-4-метилтіазол-2-іліамід) 2-аміду (5)- піролідин-1,2-дикарбонової кислоти.
Радикали і символи, що використовуються у визначенні сполуки формули (А), мають значення, розкриті в МО 2010/029082, і ця публікація у всій своїй повноті включена в даний опис шляхом посилання.
Кращою сполукою даного винаходу є сполука, яка спеціально описана в УМО 2010/029082.
Ще кращою сполукою даного винаходу Є 1-(4-метил-5-(2-(2,2,2-трифтор-1,1- диметилетил)піридин-4-ілітіазол-2-іліамід) 2-аміду (5)-піролідин-1, 2-дикарбонової кислоти (сполука 1) або її фармацевтично прийнятна сіль. Синтез 1-((4-метил-5-(2-(2,2,2-трифтор-1,1- диметилетил)піридин-4-ілі|тіазол-2-іліаміду) 2-аміду (5)-піролідин-1,2-дикарбонової кислоти описаний в М/О 2010/029082 як приклад 15.
Фармацевтичні комбінації даного винаходу включають щонайменше одну сполуку, яка спрямовано впливає, зменшує або інгібує активність/функцію серин/треонинкінази ттокК. Такі сполуки будуть називатися "інгібітор тТоОкК" і включають, але не обмежуються ними, сполуки, білки або антитіла, які спрямовано впливають/нгібує активність/функцію представників сімейства кіназ ттТОкК , наприклад, КАО рапаміцин (сиролімус, який також відомий за назвою
РАПАМУН) і його похідні/ланалоги, такі як еверолімус (КАБООЇ, Момагпіз) або сполуки, які інгібують активність кінази ттТОК шляхом прямого зв'язування зі зв'язуючим АТФ (аденозинтрифосфат) поглибленням у ферменті. Еверолімус (КАБООЇ) також відомий за назвою ЦЕРТИКАН або АФІНІТОР.
Придатні інгібітори тТОК включають, наприклад:
Ї Рапаміцин, який є імунодепресивним лактамним макролідом, що продукується зігеріотусев пуагозсорісив.
ІІ. Похідні рапаміцину, такі як: а. заміщений рапаміцин, наприклад, 40-о-заміщений рапаміцин наприклад, описаний в 05 5258389, МО 94/09010, МО 92/05179, 005 5118677, 05 5118678, 05 5100883, 005 5151413, 5 5120842, МО 93/11130, МО 94/02136, УМО 94/02485 і МО 95/14023, які всі включені в даний винахід шляхом посилання; р. 16-о-заміщений рапаміцин, наприклад, розкритий в УМО 94/02136, МО 95/16691 і УМО 96/41807, зміст яких включений в даний винахід шляхом посилання; с. З2-гідрований рапаміцин, наприклад, описаний в УМО 96/41807 і 05 5256790, які включені в даний винахід шляхом посилання; а. кращі похідні рапаміцину, якими є сполуки формули (В):
Вдтон А 42 ек, т Щ - 35 33 зо ЕІ з 5 Рій КТ за З
Си й 29 дин а 8 й 27 З 9 То То 26 (в) 10, он -8в 11 е Е й 18 20 22 28 2 12 14 песен 13 15 19 21 Е де
В: означає СНз або Сз.Свалкініл,
АВ? означає Н або -СНАСН.ОН, 3-гідрокси-2-(гідроксиметил)-2-метилпропаноїл або тетразоліл, і Х означає 50, (Н,Н) або (Н,ОН), за умови, що КЕ»: не означає Н, якщо Х означає -0О, і К: означає СНзв, або її проліки, де К2 означає -СН»-СНо-ОН, наприклад, його фізіологічно здатний до гідролізу простий ефір.
Сполуки формули (В) розкриті, наприклад, у міжнародних заявках РСТ УМО 94/09010, УМО 95/16691 або УУО 96/41807, які включені в даний винахід шляхом посилання. їх можна одержати, як розкрито в зазначених публікаціях, або за аналогією з описаними в них методиками.
Кращими сполуками є 32-дезоксорапаміцин, 16-пент-2-інілокси-З2-дезоксорапаміцин, 16- пент-2-інілокси-32(5)-дигідрорапаміцин, 16-пент-2-інілокси-32(5)-дигідро-40-0-(2- гідроксиетил)рапаміцин і, ще краще, 40-0-(2-гідроксиетил )рапаміцин, розкритий як приклад 8 у міжнародній заявці РСТ УМО 94/09010.
Особливо кращим похідними рапаміцину формули (В) є 40-О-(2-гідроксиетил)рапаміцин, 40-
ІЗ-гідрокси-2-(гідроксиметил)-2-метилпропаноат|рапаміцин (також позначуваний, як ССІ779), 40- епі(тетразолілурапаміцин (також позначуваний, як АВТ578), 32-дезоксорапаміцин, 16-пент-2- інілокси-32(5)-дигідрорапаміцин або ТАЕБА-93. е. Похідні рапаміцину також включають так звані рапалоги, наприклад, розкриті в міжнародних заявках РСТ У/098/02441 і М/001/14387, наприклад, АР23573, АР23464 або
АР2З841.
Виявлено, що рапаміцин і похідні, здатні внаслідок активності, що спостерігається, зв'язуватися, наприклад, з макрофіліном-12 (також відомим, як білок, що зв'язує ЕК-506, або
ЕКВР-12), наприклад, як описано в міжнародних заявках РСТ УМО 94/09010, УМО 95/16691 або
УМО 96/41807, застосовні, наприклад, як імуносепресант, наприклад, для лікування гострого відторгнення алотрансплантату.
ІП. Аскоміцин, який є етильним аналогом ЕК5БОб.
ІМ. А20ОО8055 (Авіга7епеса) і О51-027 (051 Рпаптасешііса!5), які являють собою сполуки, які інгібують активність кінази тТОК шляхом прямого зв'язування зі зв'язуючим АТФ поглибленням у ферменті.
М. ЗАК5Б43, деферолімус (АР23573/МК-8669, Апад/Метек а Со.) АР2З3841 (Агад), КО- 0063794 (Авіга/епеса /Кидов), ІМК-128 (ІпіейКіпе), ЕХ2044, ЕХЗ855, ЕХ7518, М/МЕ-125132 (Уууеїй), ХІ 765 (Ехеїївів), МУ-128 (Момодеп), МММЕ-125132 (УУуеій), ЕМ1О1/Л У303511 (Єтіет).
Для даного винаходу кращим інгібітором ттТОКк є еверолімус (КАБОО1). Еверолімус (КАБОО1) має хімічну назву (18,95,125,158,16Е,188,198, 218,235,24Е 26Е 28Е,305,325,358)- 1,18-дигідрокси-12-Ц1 8)-2-(15,38,4Н8)-4-(2-гідроксиетокси)-З-метоксициклогексилі|- 1- метилетил)-19,30-диметокси-15,17,21,23,29,35-гексаметил-11 ,36-диокса-4- азатрициклої/30.3.1.04,9)гексатриаконта-16,24,26,28-тетраен-2,3,10,14,20-пентаон). Еверолімус і його аналоги описані в патенті США 5665772, від стовпця 1, рядок 39 до стовпця 3, рядок 11.
Структура активних агентів, у яких є кодові номери, родові або торговельні назви, наведена в останньому виданні довідника "Те МегскК Іпдех" і в базах даних, наприклад, Раїепіб
Іптептаїййопаї! (наприклад, ІМ5 УМопа Рибіїсайоп5). Відповідний їхній зміст включений у даний винахід шляхом посилання.
В обсяг даного винаходу також входять їх фармацевтично прийнятні солі, відповідні рацемати, диастереоіїзомери, енантіомери, таутомери, а також відповідні кристалічні модифікації розкритих вище сполук (тобто сполук формули (А) і інгібіторів тТОкК), якщо вони присутні, наприклад, сольвати, гідрати і поліморфні форми, які розкриті в даному винаході.
Сполуки, що застосовуються як активні інгредієнти у комбінаціях, запропонованих у даному винаході, можна одержати і увести, як описано в цитованих документах, відповідно. В обсяг даного винаходу також входить комбінація більше двох окремих активних інгредієнтів, зазначених вище, тобто фармацевтична комбінація, що входить в обсяг даного винаходу, може включати три активні інгредієнти або більше.
В одному варіанті здійснення даний винахід відноситься до фармацевтичної комбінації, що включає сполуку формули (А), або, більш конкретно, 1-((4-метил-5-(2-(2,2,2-трифтор-1,1- диметилетил)піридин-4-ілі|гіазол-2-іліамід) 2-аміду (5)-піролідин-1, 2-дикарбонової кислоти ("сполука 1"), або її фармацевтично прийнятну сіль і щонайменше один інгібітор тТО. або його фармацевтично прийнятну сіль.
В одному варіанті здійснення даний винахід відноситься до фармацевтичної комбінації, що включає сполуку формули (А), або, більш конкретно, 1-((4-метил-5-(2-(2,2,2-трифтор-1,1-
Зо диметилетил)піридин-4-ілі|гіазол-2-іліамід) 2-аміду (5)-піролідин-1, 2-дикарбонової кислоти ("сполука 1"), або її фармацевтично прийнятну сіль і інгібітор тТОК еверолімус (КАБОО1) або його фармацевтично прийнятну сіль.
Фармацевтичні комбінації даного винаходу корисні при лікуванні або попередженні захворювання, залежного від кінази ттТОК, у теплокровної тварини, що цього потребує. Таким чином, одним аспектом даного винаходу є фармацевтична комбінація, що включає сполуку формули (А), або, більш конкретно, 1-(/4-метил-5-(2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилетил)піридин-4- іл|)гіазол-2-іліамід) 2-аміду (5)-піролідин-1,2-дикарбонової кислоти ("сполука 1"), або її фармацевтично прийнятну сіль і щонайменше один інгібітор тТОК або його фармацевтично прийнятну сіль, для застосування при лікуванні або попередженні захворювання, залежного від кінази ттТОк..
Термін "захворювання, залежні від кінази тТОКк" включають, але не обмежуються ними, наступні: відторгнення трансплантата органа або тканини, наприклад, при лікуванні реципієнтів трансплантатів, наприклад, серця, легенів, об'єднаних серця-легенів, печінки, нирок, підшлункової залози, шкіри або роговиці; реакція "трансплантат проти хазяїна", така як після трансплантації кісткового мозку; рестеноз; синдроми гамартоми, такі як туберозний склероз або хвороба Коудена; лімфангіолейоміоматоз; пігментозний ретиніт; аутоїмунні захворювання, включаючи енцефаломієліт, інсулінозалежний цукровий діабет, вовчак, дерматоміозит, артрит і ревматичні захворювання; стійкий до стероїдів гострий лімфобластний лейкоз; фіброзні захворювання, включаючи склеродермію, фіброз легенів, фіброз нирок, муковісцидоз; легеневу гіпертензію; імуномодуляцію; розсіяний склероз; синдром фон Хіппеля-Ліндау; 60 комплекс Карні;
сімейний аденоматозний поліпоз; синдром юнацького поліпозу; синдром Берта-Хогга-Дьюка; сімейну гіпертрофічну кардіоміопатію; синдром Вольфа-Паркінсона-Уайта; нейродегенеративні порушення, такі як хвороба Паркінсона, Гентінгтона, Альцгеймера і слабоумство, викликане мутаціями їай, спинально-церебелярна атаксія типу 3, бічний аміотрофічний склероз, викликаний мутаціями ОО, неврональний цероїд- ліпофусциноз/хвороба Баттена (нейродегенеративне захворювання у дітей); мокру і суху дегенерацію жовтої плями; м'язову слабість (атрофія, кахексія) і міопатії, такі як хвороба Данона; бактеріальні і вірусні інфекції, включаючи М. їшрегсціо5і5, стрептокок групи А, вірус герпеса типу 1, інфекція ВІЛ (вірус імунодефіциту людини); нейрофіброматоз, включаючи нейрофіброматоз типу 1; синдром Пейтца-Егерса.
Крім того, "захворювання, залежні від кінази ттТОКкК " включають проліферативні захворювання, такі як ракові захворювання та інші споріднені злоякісні новотвори.
Необмежуючий перелік ракових захворювань, пов'язаних з патологічними каскадами передачі сигналів ТТОК включає рак молочної залози, нирковоклітинну карциному, пухлини кишечнику, нейроендокринні пухлини, лімфоми і рак передміхурової залози.
Прикладами проліферативного захворювання є, наприклад доброякісна або злоякісна пухлина, карцинома головного мозку, нирок, печінки, надниркових залоз, жовчного міхура, молочної залози, шлунка, пухлини кишечнику, яєчників, товстої кишки, прямої кишки, передміхурової залози, підшлункової залози, легенів, піхви або щитовидної залози, саркома, гліобластома, множинна мієлома або шлунково-кишковий рак, переважно карцинома товстої кишки або колоректальна аденома, або пухлина голови і шиї, гіперпроліферація епідермісу, псоріаз, гіперплазія передміхурової залози, неоплазія, неоплазія епітеліального характеру, лімфоми, карцинома молочної залози або лейкоз.
Іншим аспектом даного винаходу є застосування сполуки формули (А), або, зокрема, 1-(14-
Зо метил-5-(2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилетил)піридин-4-ілі|тіазол-2-іліамід) 2-аміду (5)-піролідин- 1,2-дикарбонової кислоти (сполука 1) або її фармацевтично прийнятної солі і щонайменше одного інгібітору ттТОК або його фармацевтично прийнятної солі для одержання лікарського засобу для лікування або попередження захворювання, залежного від кінази тТОк.
Іншим аспектом даного винаходу є спосіб лікування або попередження захворювання, залежного від кінази тТОК, шляхом уведення сполуки формули (А), або, зокрема, 1-((4-метил- 5-(2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилетил)піридин-4-іл|тіазол-2-іліамід) 2-аміду (5)-піролідин-1,2- дикарбонової кислоти (сполука 1), або її фармацевтично прийнятної солі і щонайменше одного інгібітору ттТОК або його фармацевтично прийнятної солі.
Іншим аспектом даного винаходу є комбінація сполуки формули (А), або, зокрема, 1-(4- метил-5-(2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилетил)піридин-4-ілі|тіазол-2-іліамід) 2-аміду (5)-піролідин- 1,2-дикарбонової кислоти (сполука 1), і щонайменше одного інгібітору ттоОК, вибраного із групи, що складається з КАЮ рапаміцину (сиролімус) і його похідних/аналогів, таких як еверолімус (КАБОО1), темсиролімус (ССІ-779), зотаролімус (АВТ578), 5АК543, аскоміцин (етильний аналог ЕК5БОб6), деферолімус (АР23573/МК-8669), АР2З3841, КО-0063794, ІМК-128,
ЕХ2044, ЕХЗ3855, ЕХ7518, АЙ0О8055, 051-027, М/МЕ-125132, ХІ 765, МУ-128, М/МЕ-125132 і
ЕМ101/ 303511, де активні інгредієнти в кожному випадку присутні у вільній формі або у формі фармацевтично прийнятної солі, і необов'язково щонайменше одного фармацевтично прийнятного носія для одночасного, роздільного або послідовного застосування при лікуванні захворювань, залежних від мішені рапаміцину (тт) кінази у ссавців.
Даний винахід відноситься до способу зменшення або блокування фосфорилювання і активації АКТ інгібіторами тТОК, що включає введення теплокровній тварині, що потребує цього, сполуки формули (А) або її фармацевтично прийнятної солі. В іншому варіанті здійснення даний винахід відноситься до способу лікування проліферативного захворювання, залежного від набутого фосфорилювання і активації АКТ під час лікування щонайменше одним інгібітором ток або його фармацевтично прийнятною сіллю, що включає введення теплокровній тварині, що потребує цього, терапевтично ефективної кількості сполуки формули (А) або її фармацевтично прийнятної солі.
В іншому варіанті здійснення даний винахід відноситься до способу лікування проліферативного захворювання, яке стало резистентним або має зменшену чутливість до бо лікування щонайменше одним інгібітором ттТОК або його фармацевтично прийнятною сіллю,
що включає введення теплокровній тварині, що потребує цього, терапевтично ефективної кількості сполуки формули (А) або її фармацевтично прийнятної солі. Резистентність обумовлена, наприклад, фосфорилюванням і активацією АКТ.
Іншим аспектом даного винаходу є спосіб підвищення ефективності лікування проліферативного захворювання щонайменше одним інгібітором ттТОК або його фармацевтично прийнятною сіллю, що включає введення теплокровній тварині, що потребує цього, комбінації що включає сполуку формули (А), або, зокрема, 1-(/4-метил-5-(2-(2,2,2- трифтор-1,1-диметилетил)піридин-4-ілітіазол-2-ілламід) 2-аміду (5)-піролідин-1,2-дикарбонової (сполука 1), або її фармацевтично прийнятну сіль і щонайменше один інгібітор тТОкК або його фармацевтично прийнятну сіль.
Інгібітор ттТОК, що застосовується згідно з даним винаходом, може бути вибраний із групи, що складається з КАЮ рапаміцину (сиролімус) і його похідних/аналогів, таких як еверолімус (КАбБОО1), темсиролімус (ССІ-779), зотаролімус (АВТ578), БАК5Б43, аскоміцин (етильний аналог
ЕК5БОб), деферолімус (АР23573/МК-8669), АР2З3841, КО-0063794, ІМК-128, ЕХ2044, ЕХЗ855,
ЕХ7518, А7008055, 051-027, М/МЕ-125132, ХІ 765, ММУ-128, М/МЕ-125132 ії ЕМ101/ 303511.
Особливо кращими інгібіторами ттТоЕ цього винаходу є сиролімус і/або еверолімус.
Фармацевтичні композиції або комбінація, згідно з даним винаходом, можна вивчити в клінічних дослідженнях. Прийнятними клінічними дослідженнями можуть бути, наприклад, відкриті з підвищенням дози дослідження пацієнтів, що страждають проліферативними захворюваннями. Такі дослідження підтверджують, зокрема, синергізм активних інгредієнтів комбінації даного винаходу. Сприятливий вплив на проліферативні захворювання можна безпосередньо визначити за результатами досліджень, які відомі фахівцеві в цій галузі техніки.
Такі дослідження, зокрема, можуть бути прийнятними для порівняння впливу монотерапії з використанням активних інгредієнтів і комбінації даного винаходу. Краще, якщо дозу засобу (а) підвищують до максимальної стерпної дози, і засіб (Б) вводять у фіксованій дозі.
Альтернативно, засіб (а) можна вводити у фіксованій дозі, і дозу засобу (Б) можна підвищувати.
Кожний пацієнт може одержувати дози засобу (а) щодня або періодично. У таких дослідженнях ефективність лікування можна визначити, наприклад, через 12, 18 або 24 тижні шляхом оцінки показників симптомів, проведеної кожні 6 тижнів.
Зо Введення фармацевтичної комбінації даного винаходу може привести не тільки до сприятливого ефекту, наприклад, синергічного ефекту лікування, наприклад, відповідно до полегшення протікання, затримки прогресування або пригнічення симптомів, але й до додаткових несподіваних сприятливих ефектів, наприклад, меншій кількості побічних ефектів, поліпшеній якості життя або зменшенню захворюваності у порівнянні з монотерапією з використанням тільки одного з фармацевтично активних інгредієнтів, що використовуються в комбінації даного винаходу.
Іншою перевагою може бути те, що можна використовувати менші дози активних інгредієнтів комбінації даного винаходу, наприклад дози, часто не тільки повинні бути менше, але також часто можуть вводитися рідше, що може зменшити частоту або тяжкість побічних ефектів. Це відповідає бажанням і вимогам пацієнтів, що піддаються лікуванню.
Одним завданням даного винаходу є одержання фармацевтичної композиції, що містить кількість, яка спільно терапевтично ефективна для спрямованого впливу або попередження у теплокровної тварини захворювання, залежного від мішені рапаміцину (ттТок ) кінази у ссавців, (а) сполуки формули (А) або її фармацевтично прийнятної солі і (Б) щонайменше одного інгібітору тТОК або його фармацевтично прийнятної солі, і необов'язково щонайменше один фармацевтично прийнятний носій. У даній композиції компонента комбінації (а) і (Б) можна вводити спільно, один після іншого або окремо в одній об'єднаній одиничній дозованій формі або у двох окремих одиничних дозованих формах. Одинична дозована форма також може являти собою фіксовану комбінацію.
Одним аспектом даного винаходу є фармацевтична композиція, що містить (а) сполуку формули (А) або її фармацевтично прийнятну сіль і (б) щонайменше один інгібітор ттТОкК або його фармацевтично прийнятну сіль, і необов'язково щонайменше один фармацевтично прийнятний носій. В одному варіанті здійснення фармацевтична композиція містить кількість сполуки формули (А) і щонайменше одного інгібі тору ттТОК, яка спільно терапевтично ефективна відносно захворювання, залежного від мішені рапаміцину (ттокК ) у ссавців.
Іншим аспектом даного винаходу є фармацевтична комбінація, що включає (а) сполуку формули (А) або її фармацевтично прийнятну сіль і (б) щонайменше один інгібітор ттТОкК або його фармацевтично прийнятну сіль і необов'язково щонайменше один фармацевтично прийнятний носій для одночасного, роздільного або послідовного застосування. Компоненти 60 комбінації (а) і (Б) можна вводити спільно або окремо теплокровній тварині, що потребує цього.
Згідно з даним винаходом, композиції для роздільного введення компонента комбінації (а) і компонента комбінації (Б) або для введення у фіксованій комбінації, тобто однієї галенової композиції, що включає щонайменше 2 компонента комбінації (а) і (Б), можна одержати за методикою, яка сама по собі відома, і вони придатні для ентерального, такого як пероральне, або ректального і парентерального введення ссавцям (теплокровним тваринам), включаючи людей, і містять терапевтично ефективну кількість щонайменше одного компонента комбінації окремо або в комбінації з одним або більше фармацевтично прийнятними носіями, що особливо прийнятні для ентерального або парентерального введення.
Термін "носій" означає розріджувач, ад'ювант, ексципієнт або розчинник, разом з яким вводять сполуку. Такі фармацевтичні носії можуть являти собою стерильні рідини, такі як вода і олії, включаючи олії, отримані з нафти, і олії тваринного, рослинного або синтетичного походження, такі як арахісове масло, соєве масло, мінеральне масло, кунжутна олія і т.п. Як носії, особливо для розчинів для ін'єкцій, краще використовувати воду або водні фізіологічні розчини і водні розчини декстрози і гліцерину. Придатні фармацевтичні носії описані в публікації "Ветіпдіюоп'5 Рпагтасеціїса! Зсіепсев" Бу Е. М. Мапіп.
Фармацевтичними препаратами для комбінованої терапії при ентеральному або парентеральному введенні є, наприклад, препарати у вигляді одиничних дозованих форм, таких як таблетки, покриті цукром, таблетки, капсули або суппозиторії, або ампули. Якщо не зазначено інше, то їх одержують за відомими методиками, наприклад, за звичайними методиками змішування, гранулювання, нанесення покриття з цукру, розчинення або ліофілізації. Слід розуміти, що одинична кількість компонента комбінації, що міститься в окремій дозі кожної дозованої форми, сама по собі не повинна бути ефективною кількістю, оскільки необхідна ефективна кількість може бути забезпечене шляхом введення безлічі дозованих форм.
Придатні фармацевтичні композиції можуть містити, наприклад, приблизно від 0,195 до приблизно 99,995, краще приблизно від 195 до приблизно 6095, активного інгредієнта (інгредієнтів). Реальна кількість сполуки формули (А) і інгібітора тТОкК. , що вводиться згідно з даним винаходом, залежить від безлічі факторів, таких як тяжкість захворювання, що піддається лікуванню, вік і відносний стан здоров'я суб'єкта, активність використовуваної
Зо сполуки, шлях і форма введення та інші фактори. Лікарський засіб можна вводити більше одного разу на добу, краще один або два рази З на добу. Усі ці фактори входять у компетенцію лікаря.
Сполуку формули (А) можна вводити в терапевтично ефективних кількостях у діапазоні приблизно від 0,05 до приблизно 50 мг/(кг маси тіла) реципієнта на добу; краще приблизно 0,1- 25 мг/кг"/добу, ще краще приблизно від 0,5 до 10 мг/кг/добу. Так, для введення суб'єктові масою 70 кгдіапазон доз найкраще становить приблизно 35-700 мг/добу.
Інгібітор ттТОК еверолімус (КАБООЇ) можна вводити людині в добових дозах, що перебувають у діапазоні від 0,5 до 1000 мг; краще в діапазоні від 0,5 мг до 15 мг; найкраще в діапазоні від 0,5 мг до 10 мг.
Зокрема, терапевтично ефективну кількість кожного з компонентів комбінації даного винаходу можна вводити одночасно або послідовно і у будь-якому порядку, і компоненти можна вводити окремо або у вигляді фіксованої комбінації. Наприклад, спосіб попередження або лікування проліферативних захворювань даного винаходу може включати (ї) введення першого засобу (а) у вільній формі або у формі фармацевтично прийнятної солі і (ії) введення засобу (Б) у вільній формі або у формі фармацевтично прийнятної солі, одночасно або послідовно в будь- якому порядку, у кількостях, які спільно є терапевтично ефективними, краще в синергічно ефективних кількостях, наприклад, у вигляді добових доз або доз, що періодично вводяться, які містять кількості, описані в даному винаході. Окремі компоненти комбінації даного винаходу можна вводити окремо в різні моменти часу протягом курсу лікування або одночасно у вигляді розділених або одиничних комбінованих форм. Крім того, термін "введення" також включає застосування проліків компонента комбінації, які іп мімо перетворюються в сам компонент комбінації. Тому слід розуміти, що цей винахід включає всі такі режими одночасного і/або почергового лікування, і термін "введення" слід інтерпретувати відповідним чином.
Ефективна використовувана доза кожного з компонентів комбінації, що застосовуються у комбінації даного винаходу, може мінятися залежно від конкретної застосовуваної сполуки або фармацевтичної композиції, шляху введення, патологічного стану, що зазнає лікування, тяжкості патологічного стану, що зазнає лікування. Таким чином, дозувальний режим комбінації даного винаходу вибирається залежно від безлічі факторів, включаючи шлях введення і функцію нирок та печінки пацієнта. Клініцист або лікар із загальною підготовкою в цій галузі бо техніки може легко визначити і призначити ефективну кількість одного з активних інгредієнтів,
необхідну для попередження, протидії або зупинки прогресування патологічного стану.
Оптимальна точність при встановленні концентрацій активних інгредієнтів у діапазоні, у якому забезпечується ефективність без прояву токсичності, вимагає вибору режиму на підставі кінетики вступу активного інгредієнта в необхідні області організму.
Даний винахід додатково включає наступні варіанти здійснення: синергічна комбінація для введення людині, що включає сполуку формули (А), якою є 1-(14- метил-5-(2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилетил)піридин-4-ілі|тіазол-2-іліамід) 2-аміду (5)-піролідин- 1,2-дикарбонової кислоти і щонайменше один інгібітор ттОКЕ, у вільній формі або у формі його солі, у діапазоні сполуки, яка відповідає синергічному діапазону сполуки, що становить приблизно 330 нМ-3 мкМ і приблизно 1 нМ-27 нМ, відповідно, на моделі клітин ЗКВК-3 раку молочної залози або на моделі клітин ВТ-474 раку молочної залози; синергічна комбінація для введення людині, що включає сполуку формули (А), якою є 1-(14- метил-5-(2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилетил)піридин-4-ілі|тіазол-2-іліамід) 2-аміду (5)-піролідин- 1,2-дикарбонової кислоти і щонайменше один інгібітор ттОКЕ, у вільній формі або у формі його солі, у діапазоні сполуки, яка відповідає синергічному діапазону сполуки, що становить приблизно 12 нМ-100 нМ і приблизно 1 нМ-27 нМ, відповідно, на моделі клітин Т47-ЮО раку молочної залози; синергічна комбінація для введення людині, що включає сполуку формули (А), якою є 1-(14- метил-5-(2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилетил)піридин-4-ілі|тіазол-2-іліамід) 2-аміду (5)-піролідин- 1,2-дикарбонової кислоти і щонайменше один інгібітор ттТОЕ, у вільній формі або у формі його солі, у діапазоні сполуки, яка відповідає синергічному діапазону сполуки, що становить приблизно З мкМ і приблизно 1 нМ-27 нМ, відповідно, на моделі клітин 2К-75-1 раку молочної залози.
Наведені нижче приклади є тільки ілюстративними і не призначені для накладення обмежень.
Приклад 1
Дослідження шляхом аналізу вестерн-блотингу впливу комбінації еверолімусу (КАОООТ1) зі сполукою 1 на клітини пухлини молочної залози ВТ474 і МОА-МВ-231
Матеріали і методики
Зо Одержання сполук: Сполуку еверолімус (КАБОО1) синтезують на фірмі Момагііз Рпагта АО. 20 мМ вихідний розчин готують у ДМСО (диметилсульфоксид) і зберігають при -202С. 10 мМ
Вихідний розчин 1-((4-метил-5-(2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилетил)піридин-4-ілігіазол-2-іліаміду) 2-аміду (5)-піролідин-1,2-дикарбонової кислоти ("сполуку 1") готують у ДМСО і зберігають при - 2026.
Клітини і умови використання клітинних культур: Клітини карциноми молочної залози ВТ474 людини (АТСС НТВ-26) і МОА-МВ-231 (АТОС НТВ-20) одержують в Атегісап Туре Сийиге
СоїПесіїоп (АТСС, РоскКміПе, МО, ОА).
Клітини ВТ474 витримують у середовищі Нубгі-Саге (АТСС), до якого додано 1095 об./об. фетальна теляча сироватка і 2 мМ І-глутамін. Клітини МОА-МВ-231 вирощують у середовищі
ВРМІ 1640 (Аптіттеа, АЇЇ5спміЇ, Зм/йгегіапа), до якого додано 1095 об./о0б. фетальної телячої сироватки і 2 мМ І-глутаміну. До всіх середовищ додають 100 мкг/мл пеніцилін/стрептоміцин, і клітини витримують при 372С в 595 СО».
Обробка клітин і екстракція клітин: Клітини ВТ474 і МОА-МВ-231 висівають при щільності, рівній 3,3х1027 клітин/см2 і 1,6х1027 клітин/см-, відповідно, і інкубують протягом 48 год при 372С і
Бує СО», потім обробляють розріджувачем ДМСО, 20 нМ КАБОО1 і/або сполукою 1 у різних концентраціях протягом 24 год.
Лізати клітин одержують у такий спосіб. Культуральні планшети один раз промивають охолодженим льодом РВ5 (забуференний фосфатом фізіологічний розчин), що містять 1 мМ
РМ5Е (фенілметилсульфонілфторид) і один раз охолодженим льодом екстракційним буфером
БО мМ Нерез (рН 7,4), 150 мМ Масі, 25 мМ В-гліцерофосфат, 25 мМ Мат, 5 мМ ЕСТА (етиленглікольтетраоцтова кислота), 1 мМ ЕОТА (етилендиамінтетраоцтова кислота), 15 мМ РРІі (неорганічний пірофосфат), 2 мМ ортованадат натрію, 10 мМ молібдат натрію, лейпептин (10 мкг/мл), апротинін (10 мкг/мл), 1 мМ ДТТ (дитіотреїтол)у і 1 мМ РМБРЕ). Інгібітори протеази купують у фірми ЗІСМА СПетісаї!, 51. І оці5, Мо. Клітини екстрагують цим же буфером, що містить 195 МР-40 (БІОМА Спетіса!5). Екстракти гомогенізують, висвітлюють центрифугуванням, ділять на аліквоти і заморожують при -802С. Концентрацію білка визначають аналізом білка ВСА
Ргоїєїп Аззау (Рієгсе, НКоскКіога, І, ОА).
Імуноблотинг: 20 мкг екстракту клітин розділяють електрофорезом на поліакриламідних гелях (50О5-РАСЕ), що містять 1295 денатуруючого додецилсульфату натрію, і переносять на бо фільтри з полівінілідендифториду (РМОЕ; Мійроге Согрогайоп, Веатога, МА, ОСОБА) за допомогою вологого промокального паперу (1 год при 250 мА) і досліджують протягом ночі при 42 з наступними первинними антитілами: (а) анти-фосфо-АКІ (547з) (клон 14-05; 1:2000), одержують у фірми САКО (Сіозігир, Оептагк) і розводять в РВ5, 0,595 об./06. Тмееєп, 0,595 мас./об. молока; (5) анти-фосфо-МАРК (Тгог/Уго4) (клон ЕСА297; 1:50), одержують у фірми ВБАКО (Сіозігир,
Рептагк) і розводять в РВ5, 0,595 об./06б. Тмееп, 0,595 мас./об. молока; (с) анти-фосфо-МЕК 1/2 (5217/5221) (саї Ж 9154; 1:1000), одержують у фірми Сеї! Зідпаїїпд
Тесппоіоду і розводять в РВ5, 0,195 об./06. Тмееп, 0,595 мас./об. молока; (а) анти-Асіїп (саї Ж МАВ1501; 1:20,000), одержують у фірми Спетісоп (ВіПегіса, МА, ОА) і розводять в РВ5, 0,195 об./06. Тмеєп.
Після інкубації з відповідними первинними антитілами (зазначеними вище), зв'язані білки виявляють за допомогою кон'югованих з пероксидазою хріну антимишачих або антикролячих імуноглобулінів з наступною посиленою хемілюмінесценцією (набір ЕСІ Рій; Атегб5пат
РПпагтасіа Віоїесп, ВисКіпдапат»еіге, ШК) і кількісно визначають шляхом програмного забезпечення Оцапійу Опе (Віо-Райд, Мипісн, Септапу).
Кожний екстракт клітин додатково кількісно досліджують за методикою білкових біочипів зворотної фази, описаної нижче.
Кожний екстракт клітин наносять на чипи білкових матриць 7ері0МАККФ РУС (7еріозепв,
МуЩщегемії, Зм/йлепапа) за допомогою заснованого на п'єзоелектричному мікродозаторі безконтактного пристрою Мапо-Ріонег 2.1 (безім, СгоззегКктаппзаогії, Сегптапу). Після нанесення на білкові матриці 7еріоМАККФ чипи інкубують протягом 1 год при 372С. Для забезпечення однорідних результатів блокування з використанням ультразвукового розпилювача вводять Се уА блокувальний буфер ВВІ1 (7еріозеп5, саї. Мо 9040). Після 30 хв блокування чипи інтенсивно промивають деіонізованою водою (якості МІіП-О, 18 МОмхсм) і сушать у потоці суміші азоту з повітрям.
Після нанесення зразків і проведення процедури блокування, чипи 7еріоМАККО переносять в 2еріоСАЕКНКІЕК (2еріозепв, саї. Мо 1100), 6 проточних комірок якого окремо включають 6 рядів на чипі, і двічі промивають 200 мкл буфера для аналізу САВІ Сеї уА (2еріозеп5, саї. Мо 9032).
Потім буфер для аналізу відсмоктують і кожний компартмент інкубують зі 100 мкл первинних
Зо антитіл-мішеней (рАКІ Зег473: С5ТЖ4060; рАКІ Тиг308: СЗТЯ2965, АКИ рап: Ерйоптіс5й1085-1) при КТ протягом ночі. Після інкубації первинні антитіла видаляють, ряди двічі промивають буфером САВІ і додатково інкубують зі 100 мкл АЇеха йог 647-мічених антикролячих фрагментів дос РіБ (Мігодеп; 2225305) протягом 1 год у темряві при КТ. Після інкубації ряди двічі промивають 200 мкл буфера САВІ1. Флуоресценцію пов'язаних з мішенню фрагментів Гір зчитують на зчитувальному пристрої 7еріоКеадег (еріозеп5, УМЩШегем/іЇї, Змйгепапа) з використанням лазера (довжина хвилі збудження 635 нм) і камери ССО. Сигнал флуоресценції визначають при часі експозиції, що становить 1, 3, 5 і 10 с залежно від інтенсивності сигналу.
Флуоресцентні зображення кожного ряду аналізують за допомогою програмного забезпечення 2еріоМІЕМу Рго 2.0 (2еріозеп5, М/ШЩШегем/ії, Зм/йгепапа) і розраховують КРЇ для кожного сигналу.
Антитіла і розведення антитіл, використані в даному експерименті:
Результати:
Ступінь фосфорилювання АКТ (5473), МАРК (1202/7204), МЕК1/2 (5217/5221) і повний вміст актину в присутності еверолімусу (КАБООЇ) і еверолімусу (КАБООТ) у комбінації зі сполукою 1 у клітинах ВТ474 пухлини молочної залози, визначені шляхом аналізу вестерн- блотингу, представлені на фіг. 1.
Ступінь фосфорилювання АКТ (5473), АКТ (1308) і повний вміст АКТ у присутності еверолімусу (КАБООТ) і еверолімусу (КАБООТЇ) у комбінації зі сполукою 1 у клітинах ВТ474 пухлини молочної залози, кількісно визначені за методикою білкових біочипів зворотної фази, представлені на фіг. 2-4, відповідно.
Ступінь фосфорилювання АКТ (5473) МАРК (1202/7204) і повний вміст актину в присутності еверолімусу (КАБООТ1) і еверолімусу (КАБООТ) у комбінації зі сполукою 1 у клітинах
МОА-МВ231 пухлини молочної залози, визначені шляхом аналізу вестерн-блотингу, представлені на фіг. 5.
Ступінь фосфорилювання АКТ (5473), АКТ (1308) і повний вміст АКТ у присутності еверолімусу (КАБООТ) і еверолімусу (КАОООТ) у комбінації зі сполукою 1 у клітинах МОА-МВ231 пухлини молочної залози, кількісно визначені за методикою білкових біочипів зворотної фази, представлені на фіг. 6-8, відповідно.
Ступінь фосфорилювання АКТ (5473) і повний вміст АКТ у присутності еверолімусу (КАБОО1) і еверолімусу (КАЮБОО1) у комбінації зі сполукою 1 у клітинах МОА-МВ231 пухлини молочної залози, визначені шляхом аналізу вестерн-блотингу і кількісно визначені шляхом програмного забезпечення Оцапійу Опе у другій групі експериментів, представлені на фіг. 9.
Ступінь фосфорилювання АКТ (5473), АКТ (1308) і повний вміст АКТ у присутності еверолімусу (КАБООТ) і еверолімусу (КАОООТ) у комбінації зі сполукою 1 у клітинах МОА-МВ231 пухлини молочної залози, кількісно визначені в другій групі експериментів за методикою білкових біочипів зворотної фази, представлені на фіг. 10-12, відповідно.
Приклад 2
Вплив комбінації еверолімусу (КАБООЇ) зі сполукою 1 на моделі клітин 5КВЕК-3 раку молочної залози людини
Матеріали і методики
Клітини лінії «2КВК-3 раку молочної залози людини купують в Атегісап Туре Сеїї! СоПесійоп.
Клітини лінії «КВК-3 раку молочної залози людину ампліфіціюють з НЕК2. Клітини лінії БХКВК-3 раку молочної залози людини вирощують при 372С в 595 СО» в інкубаторі в середовищі КРМІ 1640 (АТОС й30-2001) або інших рекомендованих середовищах, до яких додана 1095 фетальної бичачої сироватки, 2 ммоль/л глутаміну і 195 пірувату натрію.
Аналіз проліферації клітин: Життєздатність клітин оцінюють шляхом визначення в клітинах утримання АТФ за допомогою люмінесцентного аналізу життєздатності клітин СепТйег-сІоФ (Рготеда йО7573) відповідно до протоколу виробника. Коротко, методика полягає в наступному: 1500-50000 клітин поміщають в 384- або 9б-ямкові планшети в 25 мкл (384- ямковий) або 100 мкл (96-ямковий) середовища для вирощування, клітинам дають прилипнути протягом ночі і потім протягом 72 год їх інкубують з лікарським засобами або комбінаціями лікарських засобів, узятих у різних концентраціях, після закінчення обробки лікарськими засобами в кожну лунку для лізису клітин додають однаковий об'єм реагенту СеПТйег-с|0, і
Зо сигнали люмінесценції реєструють с використанням планшет-рідера Епмівзіоп.
Методика розрахунків впливу комбінації: Для дослідження впливу комбінації еверолімусу (КАООО1) її 0/0 1-(74-метил-5-(2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилетил)піридин-4-іл|тіазол-2-іл)амід) -2- аміду (5)-піролідин-1,2-дикарбонової кислоти ("сполука 1") і виявлення можливого синергічного ефекту при всіх можливих концентраціях дослідження комбінацій проводять за допомогою "матриці доз", коли комбінацію досліджують при всіх можливих перестановках доз серійно розведеного еверолімусу (КАБО0О1) і використовуваного окремо засобу-сполуки 1, при всіх дослідженнях комбінації сполуки використовують одночасно. Залежність відповідей на дозу використовуваного окремо засобу, ІСьо, ІСоо, і синергію аналізують шляхом програмного забезпечення Спаїїсе (Сотбіпаїомх, Сатрбгідде МА). Синергію оцінюють шляхом зіставлення відповідей на комбінацію з відповідями на використовувані окремо її засоби-компоненти при порівнянні з еталонною моделлю адитивних доз того самого лікарського засобу. Відхилення від адитивності для дози можна оцінити візуально по ізоболограмі або кількісно шляхом індексу комбінації. Для виявлення прояву синергії надлишкове у порівнянні з адитивним інгібування також можна представити графічно шляхом матричної діаграми повної дози. Для кількісного визначення повного впливу комбінації також розраховують об'ємний показник Унед-: хх Іпіх Іпіу (Іама-Іінсл) між даними і найвищою поверхнею для використовуваного окремо засобу, нормований на коефіцієнти розведення засобу їх Ту.
Результати:
Вплив впливу використовуваного окремо засобу і разом з еверолімусом (ЕАБОО1)/сполуку 1 на проліферацію клітин оцінюють шляхом аналізу СепТПйег-сіов (СТО), описаного вище. Клітини по 3000 клітин/лунку клітин поміщають в 384-ямкові планшети в групи по З лунки і обробляють сполукою протягом 72 год і потім проводять вимірювання (фіг. 13). У даному дослідженні "матриці доз" еверолімус (КАООО1) піддають 4 серійним Зх розведенням при найбільшій дозі, рівній 27 НМ, і найменшій дозі, рівній 1 нМ, і сполуку 1 піддають 7 серійним Зх розведенням при найбільшій дозі, рівній З мкМ, і найменшій дозі, рівній приблизно 4 нМ.
Результати даного дослідження представлені на фіг. 13. Сполука 1 при використанні окремо приводить до залежного від концентрації пригнічення росту клітин зі значенням Апрпуах, максимальна частка пригнічення -0,40 (інгібування росту на 4095 у порівнянні з контролем
ДМСО); еверолімус (КАБООТ) приводить до подібного невеликого пригнічуючого впливу на 60 проліферацію клітин при використанні окремо, ніколи не досягаючи ІСбхо, зі значенням Атах-0,32.
Обробка комбінацією еверолімус (КАБОО1Т)/сполуку 1 приводить до значного збільшення максимального ступеня пригнічення зі значенням Атах-0,63, у порівнянні з випадком використання тільки одного засобу (еверолімус (КАООО1) Атах-0,32 і сполука 1 Атах-0,40). У всій матриці доз збільшена синергічна активність спостерігається для еверолімусу (КАБООТ) при всіх дозах (1 нМ-27 нМ) і в частині діапазону найбільших доз сполуки 1 (330 нМ-3 мкМ). У даному експерименті при відносно низьких концентраціях сполуки 1 (4 нМ-37 нМ) комбінація, очевидно, не приводить до додаткової переваги, у порівнянні зі сполукою 1 і еверолімусом (КАБОО1) при їхньому використанні окремо.
Приклад З
Вплив комбінації еверолімусу (КАБОО1) зі сполукою 1 на моделі клітин ВТ-474 пухлини молочної залози людини
Матеріали і методики
Клітини лінії ВТ-474 раку молочної залози людини одержують в Атегісап Туре СеїЇ
СоПесійоп. Клітини лінії ВТ-474 раку молочної залози людини включають мутацію РІКЗСА і ампліфікацію НЕК. Клітини лінії ВТ-474 раку молочної залози вирощують при 372С в 595 СО» в інкубаторі в середовищі КЕРМІ 1640 (АТСС 2300-2001) або інших рекомендованих середовищах, до яких додано 1095 фетальної бичачої сироватки, 2 ммоль/л глутаміну і 195 пірувату натрію.
Дослідження проліферації клітин: Життєздатність клітин оцінюють шляхом визначення в клітинах вмісту АТФ шляхом люмінесцентного аналізу життєздатності клітин Сей Пйег-с|Іотв (Рготеда Ж5З7573) відповідно до протоколу виробника. Коротко, методика полягає в наступному: 1500-50000 клітин поміщають в 384- або 9б-ямкові планшети в 25 мкл (384- ямковий) або 100 мкл (96-ямковий) середовища для вирощування, клітинам дають прилипнути протягом ночі і потім протягом 72 год їх інкубують з лікарським засобами або комбінаціями лікарських засобів, узятих у різних концентраціях, після закінчення обробки лікарським засобами в кожну лунку для лізису клітин додають однаковий об'єм реагенту СеїПнег-Сіо і сигнали люмінесценції реєструють на планшет-рідері Епмівіоп.
Методика розрахунків впливу комбінації: Для дослідження впливу комбінації еверолімусу (КАООО1) її 0/0 1-(74-метил-5-(2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилетил)піридин-4-іл|тіазол-2-іл)амід) -2- аміду (5)-піролідин-1,2-дикарбонової кислоти ("сполука 1") і виявлення можливого синергічного
Зо ефекту при всіх можливих концентраціях дослідження комбінацій проводять шляхом "матриці доз", коли комбінацію досліджують при всіх можливих перестановках доз серійно розведеного еверолімусу (КАБООТ) і використовуваного окремо засобу-сполуки 1, при всіх дослідженнях комбінації сполуки використовують одночасно. Залежність відповідей на дозу використовуваного окремо засобу, ІСьо, ІСоо, і синергію аналізують шляхом програмного забезпечення СПаїїсе (Сотбіпаїгх, Сатрбгідде МА). Синергію оцінюють шляхом зіставлення відповідей на комбінацію з відповідями на використовувані окремо її засоби-компоненти при порівнянні з еталонною моделлю адитивних доз того самого лікарського засобу. Відхилення від адитивності для дози можна оцінити візуально по ізоболограмі або кількісно шляхом індексу комбінації. Для виявлення прояву синергії надлишкове у порівнянні з адитивним інгібування також можна представити графічно шляхом матричної діаграми повної дози. Для кількісного визначення повного впливу комбінації також розраховують об'ємний показник Унед-: хх Іпіх Іпіу (Іама-Іінсл) між даними і найвищою поверхнею для використовуваного окремо засобу, нормований на коефіцієнти розведення засобу їх Ту.
Результати:
Вплив впливу використовуваного окремо засобу і разом з еверолімусом (КАБОО1)/сполуку 1 на проліферацію клітин оцінюють за допомогою аналізу СеїППег-СіотФ (СТО), описаного вище.
Методика проведення експерименту ідентична експериментальній методиці, описаній вище для моделі ЗКВЕ-3 (фіг. 14). Використовують таку ж "матрицю доз" (еверолімус (КАОБООТ1): 4 дози,
Зх, від 1 НМ до 27 НМ, сполука 1: 7 доз, Зх, від 4 НМ до З мкМ).
Результати даного дослідження представлені на фіг. 14. Сполука 1 при використанні окремо приводить до залежного від концентрації пригнічення росту клітин зі значеннями ІСво, рівним приблизно З мкМ, і Атах, рівним приблизно 0,53 (пригнічення росту на 5395 у порівнянні з контролем ДМСО); еверолімус (КАБООТ) приводить до невеликого пригнічуючого впливу на проліферацію клітин при використанні окремо, ніколи не досягаючи ІСбво, і Атах-0,36. Обробка комбінацією (КАБОО1Т)/сполуку 1 приводить до значного збільшення максимального ступеня пригнічення зі значенням Атах-0,66, у порівнянні з випадком використання тільки одного засобу (еверолімус (КАОООТ) Атах-:0,36 і сполука 1 Атах-0,53). У всій матриці доз збільшена синергічна активність спостерігається для еверолімусу (КАОООТ1) при всіх дозах (1 нМ-27 нМ) і при великій дозі сполуки 1 (330 нМ-3 мкМ). У даному експерименті при менших концентраціях сполуки 1 (4
НМ-37 нМ) комбінація, очевидно, не приводить до додаткової переваги, у порівнянні зі сполукою 1 ії еверолімусом (КАБООТ) при їх використанні окремо.
Приклад 4
Вплив комбінації еверолімусу (КАОООТ) зі сполукою 1 на моделі клітин Т47-О раку молочної залози людини
Матеріали і методики
Клітини лінії Т47-О раку молочної залози людини купують в Атегісап Туре СеїїЇ СоПесійоп.
Клітини лінії Т47-О раку молочної залози людини включають мутацію РІКЗСА. Клітини лінії Т47-
О раку молочної залози вирощують при 372С в 595 СО» в інкубаторі в середовищі ЕРМІ 1640 (АТСС 8530-2001) або інших рекомендованих середовищах, до яких додана 1095 фетальна бичача сироватка, 2 ммоль/л глутамін і 195 піруват натрію.
Дослідження проліферації клітин: Життєздатність клітин оцінюють шляхом визначення в клітинах вмісту АТФ за допомогою люмінесцентного аналізу життєздатності клітин Се Пйег-с|Іот (Рготеда йО7573) відповідно до протоколу виробника. Коротко, методика полягає в наступному: 1500-50000 клітин поміщають в 384- або 9б-ямкові планшети в 25 мкл (384- ямковий) або 100 мкл (96-ямковий) середовищ для вирощування, клітинам дають прилипнути протягом ночі і потім протягом 72 год їх інкубують з лікарським засобами або комбінаціями лікарських засобів, узятих у різних концентраціях, після закінчення обробки лікарськими засобами в кожну лунку для лізису клітин додають однаковий об'єм реагенту СеїїПйег-Сі|юо і сигнали люмінесценції реєструють на планшет-рідері Епмівіоп.
Методика розрахунків впливу комбінації: Для дослідження впливу комбінації еверолімусу (КАООО1) її 0/0 1-(74-метил-5-(2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилетил)піридин-4-іл|тіазол-2-іл)амід) -2- аміду (5)-піролідин-1,2-дикарбонової кислоти ("сполука 1") і виявлення можливого синергічного ефекту при всіх можливих концентраціях дослідження комбінацій проводять за допомогою "матриці доз", коли комбінацію досліджують при всіх можливих перестановках доз серійно розведеного еверолімусу (КАБОО1) і використовуваного окремо засобу-сполуки 1, при всіх дослідженнях комбінації сполуки використовують одночасно. Залежність відповідей на дозу використовуваного окремо засобу, ІСьо, ІСоо, і синергію аналізують шляхом програмного забезпечення Спаїїсе (Сотбіпаїобх, Сатрбгідде МА). Синергію оцінюють шляхом зіставлення
Зо відповідей на комбінацію з відповідями на використовувані окремо її засоби-компоненти при порівнянні з еталонною моделлю адитивних доз того самого лікарського засобу. Відхилення від адитивності для дози можна оцінити візуально по ізоболограмі або кількісно за допомогою індексу комбінації. Для виявлення прояву синергії надлишкове у порівнянні з адитивним інгібування також можна представити графічно за допомогою матричної діаграми повної дози.
Для кількісного визначення повного впливу комбінації також розраховують об'ємний показник
Мнвде ух м Іпїх Іпіїм (Ідаа-Інсд3) між даними і найвищою поверхнею для використовуваного окремо засобу, нормований на коефіцієнти розведення засобу їх Ту.
Результати:
Вплив впливу використовуваного окремо засобу і разом з еверолімусом (КАБОО1)/сполуку 1 на проліферацію клітин оцінюють за допомогою аналізу СейПТйег-СіоФ (СТО), описаного вище.
Методика проведення експерименту ідентична експериментальній методиці, описаній вище для моделі ЗКВА-3 (фіг. 15). Використовують таку ж "матрицю доз" (еверолімус (КАОООТ): 4 дози,
Зх, від 1 НМ до 27 НМ, сполука 1: 7 доз, Зх, від 4 НМ до З мкМ).
Результати даного дослідження представлені на фіг. 15. Сполука 1 при використанні окремо приводить до значного залежного від концентрації пригнічення росту клітин зі значеннями ІСво, рівним приблизно 330 нМ, і Атах, рівним приблизно 0,67 (пригнічення росту на 6795 у порівнянні з контролем ДМСО); еверолімус (КАБООТ) приводить до невеликого пригнічуючого впливу на проліферацію клітин при використанні окремо, ніколи не досягаючи ІСбво, і Атах-0,37. Обробка комбінацією еверолімус (КАЮБООТ)/сполуку 1 не приводить до значного збільшення максимального ступеня пригнічення зі значенням Атах-0,68, у порівнянні з випадком використання тільки одного засобу сполуки 1 (Атах-0,67). У всій матриці доз трохи збільшена і слабко синергічна активність спостерігається для еверолімусу (КАООО1) при всіх дозах (1 нМ-27
НМ) і відносно великих дозах сполуки 1 (12 нМ-100 нМ). У даному експерименті при граничних високій і низькій концентраціях сполуки 1 (4 нМ, 330 нМ-3 мкМ) комбінація, очевидно, не приводить до додаткової переваги, у порівнянні зі сполукою 1 і еверолімусом (КАБОО1) при їхньому використанні окремо.
Приклад 5
Вплив комбінації еверолімусу (КАБООТ) зі сполукою 1 на моделі клітин 22К-75-1 раку молочної залози людини 60 Матеріали і методики
Клітини лінії 2К-75-1 раку молочної залози людини купують в Атегісап Туре Сеї! СоПесіоп.
Клітини лінії 2К-75-1 раку молочної залози людини включають мутацію РТЕМ. Клітини лінії 2К- 75-1 раку молочної залози людини вирощують при 372С в 595 СО» в інкубаторі в середовищі
ВАВРМІ 1640 (АТСС й30-2001) або інших рекомендованих середовищах, до яких додано 1095 фетальної бичачої сироватки, 2 ммоль/л глутаміну і 195 пірувату натрію.
Методика розрахунків впливу комбінації: Для дослідження впливу комбінації еверолімусу (КАООО1) її 0/0 1-(74-метил-5-(2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилетил)піридин-4-іл|тіазол-2-іл)амід) -2- аміду (5)-піролідин-1,2-дикарбонової кислоти ("сполука 1") і виявлення можливого синергічного ефекту при всіх можливих концентраціях дослідження комбінацій проводять шляхом "матриці доз", коли комбінацію досліджують при всіх можливих перестановках доз серійно розведеного еверолімусу (КАБООТ) і використовуваного окремо засобу-сполуки 1, при всіх дослідженнях комбінації сполуки використовують одночасно. Залежність відповідей на дозу використовуваного окремо засобу, ІСьо, ІСоо, і синергію аналізують шляхом програмного забезпечення Спаїїсе (Сотбіпаїобх, Сатрбгідде МА). Синергію оцінюють шляхом зіставлення відповідей на комбінацію з відповідями на використовувані окремо її засоби-компоненти при порівнянні з еталонною моделлю адитивних доз того самого лікарського засобу. Відхилення від адитивності для дози можна оцінити візуально по ізоболограмі або кількісно шляхом індексу комбінації. Для виявлення прояву синергії надлишкове у порівнянні з адитивним інгібування також можна представити графічно шляхом матричної діаграми повної дози. Для кількісного визначення повного впливу комбінації також розраховують об'ємний показник Унед-: хх Іпіх Іпіу (Іама-Іінсл) між даними і найвищою поверхнею для використовуваного окремо засобу, нормований на коефіцієнти розведення засобу їх Ту.
Результати:
Вплив впливу використовуваного окремо засобу і разом з еверолімусом (КАБОО1)/сполуку 1 на проліферацію клітин оцінюють за допомогою аналізу СеПТйег-СіоФ (СТО), описаного вище.
Методика проведення експерименту ідентична експериментальній методиці, описаній вище для моделі ЗКВЕ-3 (фіг. 16). Використовують таку ж "матрицю доз" (еверолімус (КАОООТ): 4 дози,
Зх, від 1 НМ до 27 НМ, сполука 1: 7 доз, Зх, від 4 НМ до З мкМ).
Результати даного дослідження представлені на фіг. 16. Сполука 1 при використанні окремо
Зо не приводить до значного пригнічення росту клітин зі значенням Атах, рівним приблизно 0,16 (пригнічення росту на 1695 у порівнянні з контролем ДМСО); еверолімус (КАБОО1) приводить до більшого пригнічуючого впливу на проліферацію клітин при використанні окремо зі значеннями
ІСво, рівним приблизно 15 нМ, і Атах-0,55. Обробка комбінацією еверолімус (КАБОО1)/сполуку 1 до значного збільшення максимального ступеня пригнічення зі значенням Атах-0,67 у порівнянні з випадками використання тільки одного будь-якого засобу (еверолімус (ЕАБООТ) Атах-0,55 і сполука 1 Атах-0,16). Однак у всій матриці доз значна і трохи збільшена синергічна активність спостерігається при найбільшій дозі сполуки 1 (3 мкМ). У даному експерименті в діапазоні менших доз сполуки 1 (4 нМ-1 мкМ) комбінація, очевидно, не приводить до додаткової переваги, у порівнянні зі сполукою 1 і еверолімусом (КАОООТ1) при їхньому використанні окремо.
Приклад 6
Вплив комбінації еверолімусу (КАБООЇ) зі сполукою 1 на моделі на голих мишах ксеротрансплантата карциноми передміхурової залози 00145 людини
Методики і матеріали:
Використовують самців голих мишей (пи/пи, Напап) у віці 8 тижнів, у день 1 дослідження тих, що мають масу тіла (МТ), яка перебуває в діапазоні 21,0-31,3 г. Тваринам без обмежень надають воду (очищену шляхом зворотного осмосу, 1 ч./млн. СІ) і модифікований і опромінений кормовий раціон МІН З1їаб ріеккК), що містить 18,095 неочищеного білка, 5,095 неочищеного жиру і 5,095 неочищених волокон. Мишей утримують на опроміненій підстилці для лабораторних тварин Епгісп-о'сор5(ТМ) у статичних мікроізоляторах у циклі 12-годинного освітлення при 21- 2226 і вологості, рівній 40-6095.
Клітини лінії 00145 карциноми передміхурової залози людини одержують в Атегісап Туре
Сипиге СоїПесіоп (АТСС). Клітини лінії 00145 підтримують у вигляді експоненційно зростаючих культур у середовищі КРМІ-1640, до якого додано 1095 фетальної бичачої сироватки, 2 мМ глутаміну , 100 Ед/мл натрієвої солі пеніциліну С, 100 мкг/мл сульфату стрептоміцину, 2 мкг/мл гентаміцину, 10 мМ НЕРЕЗ ї 0,07595 бікарбонату натрію. Пухлинні клітини вирощують у матрацах для клітинних культур у зволоженому інкубаторі при 372С в атмосфері, що містить 595
Со» і 9595 повітря.
Клітини 0О145 карциноми передміхурової залози збирають під час експонентного росту і повторно суспендують при концентрації, рівній 5х107 клітин/мл, у холодному РВ5 з додаванням бо БОбо Маїйдейт (ВО Віоб5сіепсе5). Кожній голій миші підшкірно в правий бік вводять 0,2 мл суспензії (1х107 клітин). Пухлини вимірюють штангенциркулем у двох напрямках для моніторингу росту, поки їх середній об'єм не досягне необхідного діапазону 100-150 мм3. Розмір пухлини в мм" розраховують за формулою: Об'єм пухлини-:(ширинагхдовжина)/2. Масу пухлини можна оцінити при допущенні, що 1 мг еквівалентний 1 мм3 об'єму пухлини. Через 7 днів після імплантації пухлини, у день 1 дослідження, мишей з розмірами окремих пухлин, рівними 144- 196 мму, розподіляють на 11 груп по 10 мишей з середнім об'ємом пухлини в групі, рівним 181- 184 мм3. 1-(4-Метил-5-(2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилетил)піридин-4-ілІтіазол-2-іліамід) 2-аміду (5)- піролідин-1,2-дикарбонової кислоти ("сполуку 1") перемішують в М-метилпіролідоні (ММР; 1095 від кінцевого об'єму) при кімнатній температурі до розчинення. Додають поліетиленгліколь 300 (ПЕГЗО0) (3095 від кінцевого об'єму), потім БоЇшоке НЗ515 (2095 від кінцевого об'єму) і суміш перемішують до гомогенності. Кінцевий об'єм установлюють додаванням деїіонізованої води (4095 від кінцевого об'єму). Розріджувач для сполуки 1, ММР: ПЕГЗОО0:боІшок
НЗІ15:деіонізована вода (10:30:20:60), позначають, як "розріджувач 1". Розчини для менших доз одержують розведенням розчину, що містить більшу дозу, розріджувачем 1. Свіжі розчини доз готовлять раз на тиждень і зберігають при 420 у захищеному від світла місці.
Еверолімус (КАБОО1) одержують у вигляді мікроемульсії, яка містить 295 (мабс./мас.) активного інгредієнта, тобто 20 мг КАБОО1/г; щільність мікроемульсії рівна 0,995 г/см3.
Мікроемульсію КАБОО1 ділять на аліквоти і спочатку зберігають при -202С. Аліквоту вихідної емульсії розморожують, ділять на відважені добові порції і зберігають при 42С. У кожен день лікування аліквоту КАЮОО1 нагрівають до кімнатної температури і розводять декстрозою у воді (0О5ММ), з одержанням розчину концентрації 1 мг/мл для найбільшої дози. Отриманий вихідний розчин розводять в Ю5МУМ, з одержанням розчинів з меншими дозами. Мікроемульсію плацебо, розведену О5МУ, позначають, як "розріджувач 2".
Схема лікування:
Сполуку 1, КА0ООТ і їх розріджувач вводять шляхом перорального шлункового зонду (ПО) щодня протягом 21 дня (щодня х21). При комбінованій терапії в дні 1-20 вводять КАЮБОО1 через хв послу сполуки 1. У день 21 і в день 7 у групі 10 КАБОО1 вводять відразу після сполуки 1 послідовно тваринам, що перебувають у кожній клітині. Паклітаксел вводять болюсною ін'єкцією
Зо у хвостову вену через день, усього 5 доз (через день х5). Об'єм дози (10 мл/кг, 2 мл/на мишу масою 20 г) визначають відповідно до маси кожної тварини, визначеної в день введення за винятком вихідних днів, для яких використовують МТ, визначену в п'ятницю.
Голих мишей 11 груп (п-10 у групі) обробляють у такий спосіб: миші групи 1 одержують розріджувач 1 і розріджувач 2, і вони виступають як контрольні для всіх аналізів. Мишей груп 2-4 обробляють у режимі монотерапії 12,5, 25 і 50 мг/кг сполуки 1, відповідно. Мишей груп 5-7 обробляють у режимі монотерапії шляхом 2,5, 5 і 10 мг/кг КАБОО1, відповідно. Миші групи 8 одержують 12,5 мг/кг сполуки 1 у комбінації з 10 мг/кг КАБОО1. Миші групи 9 одержують 25 мг/кг сполуки 1 у комбінації з 5 мг/кг КАБОО1. Миші групи 10 одержують 50 мг/кг сполуки 1 у комбінації з 2,5 мг/кг КАБОО1; внаслідок токсичності обробку зупиняють після введення 7 доз кожного засобу (щодня х7). Миші групи 11 одержують 25 мг/кг паклітаксел.
Пригнічення росту пухлини:
Ефективність лікування визначають у день 21. Для проведення статистичного і графічного аналізу для кожної тварини, що дожила до дня 21, визначають, АТМ, різницю об'ємів пухлин у день 1 (початок введення) і в останній день дослідження. Для кожної групи відповідь в останній день дослідження розраховують за наступним співвідношенням:
Т/С(95)-100хАТ/АС, при АТ» де АТ-(середній об'єм пухлини для групи, що одержувала лікування, в останній день дослідження)-(середній об'єм пухлини для групи, що одержувала лікування, у день 1) і дС-(середній об'єм пухлини для контрольної групи в останній день дослідження)-(середній об'єм пухлини для контрольної групи в день 1). Лікування, що приводить до значення Т/С, рівного 4095 або менше, можна вважати потенційно терапевтично активним.
Критерії для випадків ремісії:
Ефективність лікування також можна визначити за кількістю випадків ремісії. Обробка може привести до часткової ремісії (ЧР) або повної ремісії (ПР) пухлини у тварини. ЧР показує, що об'єм пухлини становить 5095 або менше від об'єму в день 1 за даними трьох послідовних вимірювань протягом курсу лікування і більше або рівний 13,5 мм" за даними одного або більшої кількості із цих трьох вимірювань. ПР показує, що об'єм пухлини рівний менше 13,5 мм3 за даними трьох послідовних вимірювань протягом курсу лікування.
Токсичність:
Тварин зважують у дні 1-5 і в кожний день обробки (за винятком вихідних днів) до завершення дослідження. Прийнятна токсичність для максимальної стерпної дози визначається, як середня для групи втрата МТ, що складає менше 1595 протягом дослідження, і пов'язана з обробкою (ТЕ) загибель не більше однієї з 10 тварин. Будь-яку тварину з втратою
МТ, що перевищує 2095 за даними одного вимірювання необхідно вмертвити і цей випадок віднести до ТК загибелі, якщо це не перша загибель у групі. Не пов'язані з лікуванням випадки загибелі (МТК) розділяються на МТКа (внаслідок нещасного випадку або помилки), МТКи (з невідомих причин) або МТКІт (підтверджене розтином поширення пухлини внаслідок інвазії іабо метастазування). Для збереження тварин з одержанням максимуму інформації першу загибель у групі відносять до МТКи, але загибель слід віднести до ТЕ, якщо наступні дані для групи показують, що обробка є токсичною.
Відбір зразків:
У день 7 тварин Мо 1-4 у групі 10 через 2 год після введення шляхом проколу серця при анестезії СО». У день 8 через 24 год після введення у аналогічний спосіб як зразок відбирають тварину Мо 5. У кожної тварини відбирають усю кров і окремо обробляють з відділенням плазми з використанням К-ЕОТА як антикоагулянту. Зразки плазми заморожують при -802С. Пухлини вирізають і швидко заморожують у рідкому М». Через 2 і 24 год після введення останньої дози в день 21 по 4 тваринних груп 1, 4, 6 і 9 використовують для взяття крові і пухлин за описаною вище методикою.
За попередніми даними в групі 4 тварини Мо 2, 6 і 7 виключаються з дослідження з причини
ТК загибелі; у групі 9 тварини 4 і 10 виключаються з дослідження з причини ТК і МТЕ, відповідно. У дійсності ці тварини дожили до дня 21 і використані як зразки.
Статистичний і графічний аналіз
Статистичний і графічний аналіз проводять з використанням програмного забезпечення
Ргізт 3.03 (Сгаріпї Рад) для Міпдом5. Статистичну значимість різниць середніх значень АТМ для груп мишей, яких піддавали обробці, і контрольних груп визначають за допомогою дисперсійного аналізу (АМОМА) з використанням критерію Бартлетта і апостеріорного критерію множинного порівняння Даннетта. Оскільки критерій Бартлетта вказує на статистично значиму різницю дисперсій (Р«0,0001), результати проаналізовані шляхом непараметричного критерію
Зо Крускала-Уолліса, що показало наявність статистичної значимості різниць середніх змін об'єму (Р«0,0001). Різниці між групами проаналізовані шляхом критерію множинного порівняння Данна.
Критерій ОЦ Манна-Уїтні використовували для зіставлення середніх змін об'єму у двох групах.
Двосторонні статистичні аналізи проводять при Р-0,05. Програма Ргізт класифікує результати дослідження як статистично незначущі (п5) при Р»0,05, значущі (позначені """) при 0,01-Р-0,05, досить значущі (позначені "") при 0,001«Р«0,01, і надзвичайно значущі (позначені "3 при
Р«0,001. Оскільки критерії статистичної значимості не дають оцінку значення різниці між групами, усі рівні значимості описані, як значущі або незначущі.
Побудована діаграма розкиду даних, щоб показати значення ЛТМ для окремих тварин у групі. Середнє значення для групи стандартна похибка середнього значення (СПС), або середні об'єми пухлини представлені як лінійна функція від часу. Середнє значення змін МТ для групи протягом дослідження представлені у вигляді зміни у відсотках (СПС у порівнянні з днем 1. Залежність для росту пухлини обрізають, коли ТЕ загибель перевищує 1095.
Результати:
У результаті дослідження одержують наступні дані: . Кількість
Середня Статистична значущість (у Середня випадків
Група!| п Обробка зміна об'єму, порівнянні з групою 1, групою 2, | найменша загибелі мм групою 3, групою 6 або групою 7) Мт Ттв/МТА
Розріджувач 1, 784 о 0ороорідвемо оса ог розвою о псввю в (12,5 мг/кг) Т/С-6496) | -- (інші) з озиму о пслвю св 7009 (25 мг/кг) Т/С-1696) | -- (інші) (50 мг/кг) Т/С-1996) | -- (інші) день 8 5 о|овмна пове 1710 (2,5 мг/кг) Т/С-5490) | -- (інші)
. Кількість
Середня Статистична значущість (у Середня випадків
Група!| п Обробка зміна об'єму, порівнянні з групою 1, групою 2, | найменша загибелі
ММЗ групою 3, групою 6 або групою 7) Мт Ттв/МТА се роби (пс 10710 (5 мг/кг) Т/С-4396) | -- (інші) от ройомю 0 |ссзюі и 1т 10 (10 мг/кг) Т/С-4396) | -- (інші)
Сполука 1 х (у порівнянні з групою 1) -А 99 (12/мг/кг), 226 п5 (у порівнянні з групою 2, у І 1/4
ВАБОО1 (Т/0-29965) | порівнянні з групою 7) (10 мг/кг) -- (інші) день 15 115 п5 (у порівнянні з групою 3, мг/кг), КАБОО1 - . 1/1 (Т/С-1596) | порівнянні з групою 6) (10 мг/кг) с. день 21 -- (інші) сю |осмкуянюю 0 воетеенотєі ек во (2,5 мг/кг) -- (інші) день 5 (5 УЗ) п5 (з використанням критерію Ю 14 Паклітаксепл 898 п (у порівнянні з /-1,995 Ол
Т/С-11596) | -- (інші) день 12
Кінцева точка дослідження - 1000 мм3; тривалість дослідження - 21. п - кількість тварин у групі, що не загинули у зв'язку з обробкою, випадково або з невідомих причин, або умертвлених для використання як зразки.
Середня зміна об'єму - Середня зміна об'єму для групи в період від дня 1 до дня 21. тТ/-100((А4т/АС) - виражене у відсотках зміна середнього об'єму пухлини в період від дня 1 до дня 21 для групи, яку піддавали обробці (АТ), у порівнянні з контрольною групою 1 (АС).
Статистична значущість (критерій Крускала-Уолліса з апостеріорним критерієм множинного порівняння Данна): пе - неоцінюване, п5 - не значиме, "-Р«0,05; и-Р«О0,001, у порівнянні із зазначеною групою.
Середня найменша МТ - найменша середня для групи маса тіла у вигляді вираженої у 90 зміни в період від дня 1 до дня 21; -- вказує, що спостерігається зменшення середньої маси тіла.
УЗ - умертвіння для використання як зразка.
У даному дослідженні широкий діапазон значень АТМ для групи мишей 1, що одержувала розріджувач, приводить до максимально 9,9-кратних різниць між окремими тваринами. Значна активність все-таки спостерігається для всіх видів обробки, що приводять до значень Т/С, менших, ніж граничні значення, що складають 40 95, які вказують на потенційну терапевтичну активність.
Комбінації сполука 1/КАБОО1 при відношеннях доз, що становлять 12,5:10 і 25:5 мг/кг (групи 8 і 9) приводить до значень Т/С, рівним 2995 ії 1595, і статистично значимим даним по активності (Р«е0,05 і Р«е0,001), відповідно. Комбінована терапія при відношенні доз, що становить 12,5:10 мг/кг (група 8), приводить до кращих результатів, ніж монотерапія сполукою 1 і ЕА0ОО!1 у групах 2 і 7 відповідно; однак значення АТМ для групи 8 перебувають у діапазонах значень для груп 2 і 7, і статистично значиме поліпшення у порівнянні з монотерапією не спостерігається.
Комбінована терапія при відношенні доз, що становить 25:5 мг/кг (група 9) приводить до Т/С, рівного 15 95, і це є невеликим поліпшенням у порівнянні з монотерапією сполукою 1 у групі З (1695 Т/С). Комбінація сполука 1/КАБООЇ при відношенні доз, що становить 50:2,5 мг/кг, приводить до середньої втрати МТ у групі до 5 дня, рівної 19,4 90; і рівної 50 95 смертності до 7 дня, коли лікування зупиняють.

Claims (5)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Застосування сполуки 1-(14-метил-5-(2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилетил)піридин-4-іліІгіазол-2- іл)амід) 2-аміду (5)-піролідин-1,2-дикарбонової кислоти або її фармацевтично прийнятної солі і інгібітору ттТОК еверолімусу (КАБОО1) або його фармацевтично прийнятної солі для одержання лікарського засобу для лікування захворювання, залежного від мішені рапаміцину (ттокК) кінази у ссавців, де вказане залежне від мішені рапаміцину (ТОК) кінази захворювання у ссавців являє собою рак.
2. Спосіб лікування захворювань, залежних від мішені рапаміцину (тТОК) кінази у ссавців, шляхом введення теплокровній тварині, що цього потребує, сполуки 1-(/4-метил-5-(2-(2,2,2- трифтор-1,1-диметилетил)піридин-4-ілітіазол-2-ілламід) 2-аміду (5)-піролідин-1,2-дикарбонової кислоти або її фармацевтично прийнятної солі і інгібітору тТТОК еверолімусу (КАБОО1) або його фармацевтично прийнятної солі, де залежне від мішені рапаміцину (ттТОК) кінази захворювання у ссавців являє собою рак.
З. Застосування за п. 1 або спосіб за п. 2, де рак вибраний із групи, що складається з доброякісної або злоякісної пухлини, карциноми головного мозку, нирок, печінки, надниркових залоз, сечового міхура, молочної залози, нирковоклітинної карциноми, нейроендокринних пухлин, передміхурової залози, шлунка, пухлин шлунка, яєчників, товстої кишки, прямої кишки, підшлункової залози, легенів, піхви або щитовидної залози, саркоми, гліобластом, множинної мієломи шлунково-кишкового раку, неоплазії, неоплазії епітеліального характеру, лімфом, карциноми молочної залози або лейкозу.
4. Застосування за п. 1 або спосіб за п. 2, де рак являє собою шлунково-кишковий рак, вибраний із групи, що складається з карциноми товстої кишки, колоректальної аденоми і пухлини голови та шиї.
5. Застосування за п. 1 або спосіб за п. 2, де рак вибраний із групи, що складається з раку молочної залози, нирковоклітинної карциноми, пухлин шлунка, нейроендокринних пухлин, лімфом і раку передміхурової залози. СО фу ють ШІ І БО нм сполукні Ще | 1 250нм сполуки! "| 1 1 11250 М сполуки 1 І: и ЩО |Бонм сполуки! я 20 нм КАОО! р ду фони сполуки! 20 нм НАРО! Еш: Мо 11950 нм сполуки ї я 20 М БАпООЯ Б В з ЖЕ хх ос боти, Га - й -о ух ре ФВ, І-Я Метьче
Фіг. 1 ше ни пе в в в и в в и в ї Її втата рАКі (5473) ГЕ ; ту М ши НИ МНЕ ви ший ше шшнш шш Сай ше ни и С І и и и з В ; Ф а ах ки Ф : «г й .чш з : кА че х КЗ і : Є « ще Й ! 2 в з» і ї Ь. а / ! ? Фо
Фіг. 2 спинна пн сп пи п сс пи пи ни пня с писк пс п ння ин ! тата ! орАкІ (Т308) ! Н : і НЕ ; - «і й а й м С ще ж й ї ІЗ Я хз ще ще Ку ки ке хо У - В киш и м и м о В г и ЗИ М и Ще ша и МК я І : Є ке є ! ї Геоши С . хе Н ! Б ! Ж г г ща Н ШК
Фіг. З ру ун а а и а а А о п м о тт і : вТ4А74 ще Всього АКТ пен в в В В НН В В ОВО ши нн 0 мин ни ЕЕ І . Й : є фу о-- ЯВНИМ а нн нн нн ан їх хЯ С 2 я Н я і ; ок ! с КОШИКУ Кй в й де с Ф | ас КЗ у Ей Я й : і в м я а я КЗ | с т й ки Ши ЗМ зе На і г х о г5 і. ж цу Я Е їй їй Кей Ж - х Ї : ми ни Ше 7 оо І Е т Кз : і «Ж ї
Фіг. 4 ї 17 20 ям АОС! ши шк шк і й Ії с ще | 250 НМ сполуки 1 ші і 01250 нм сполуки 1 Ії | ї у 2500 нм сполуки 1 Її | Її ш | 250нМ сполуки ї 20 нм КАОООЇ ' ЩО 000 побонмосполукн я жом вАООЮ! її | 1 що | 2500 вм сполуки 1 - 20 нм ВАГОЮ х 7 з в М оо- жо ою се а Кн "асани 5 ко - -
Фіг. 5 поши и а о в ЕК панни підем Ст ш МОА-МВ231 с рАКТ (5473) і 1:06 ЕНН Х ТВ Кв Ек я т Етики кінні нлють ндккну кін аікакж нка кн на тане днів івана і квісиювнк Кк і що. : ЕЕ Я Я Е ще : | іх їй з : Ай ни ОД ; з а НИЄ Є / « м мк СЕ НК ! є г г ' СИ З НИ ж ' вв ! "ее
Фіг. 6 ванн пики рн нини Я вн н ері ніна в МмоА-МвВ231 : / її рАКТ (Т308) : ЕОФБО пре н тюятнтт к птя я ннтннтятитх тнттпуктття тяя т ттятнтутя : і ї ще п- отрну пан нн ан маже діння дня неднянтяня онттннттх пнях і ше ЩІ і В ща и пня я по чннсттжеююю ятки ин тех сет петия пити ще Ї у Е й І | ЩА чі де Кк Ф КІ і -щ с Кк : : Но і ня ни ої и а и ие В Я х Я ше М: С св «7 А Я ЗИ М. і Е У І З : Е т «7 ше НК КК, ! Н ; с щ Ї і а м Фо Ї і щУ з ке ї с 5 оф Е м І АНА НААН НН НН АН А НН НИ пе тзлатяанехталяікютніхь 11 вветінканісаїнья. 4
Фіг. 7
Щ МОд-МВ231 ! що Всього АКТ ! з ч4а й фкдіія ев етні інжжо ік зок нн іже Пенн онко чкіті ни хрвеюха кинув івана ія вірі явж Конан і ї а й сині, крій даю ненні плину ши ех лиття, ке сміляе сехх ! ГЕ ! і ; а а се і і я ще ко. ще йо « І чи Ах СЯ «Ж : ШИ й «В «е « Ка і я Мі -и М ЗО Ми г ї «хе -е ще 5 ще Кз як ї Е ще з я я як У? ях і ! т и В СН ОН й я ее є ЗИ З с Как в ї: І п я : Фе
Фіг. 8
А МОАМЕ-231 вАКТІВАТІ дея 5 денна нн кн нс ен етно ВВ "вини нини нн нн ви ен щ ою офрукаилки моьк межа акті» нені у вени ет нт нн у ут ке нет тк тд тет нн ттнтнн Е З'яюю пт вана ят АТАК Кава; і вень пеня певен винне певне нн вин па пн анна Ге ВВ дев птн пертннтнн нене тет ненні нене сттте кепка кое пет стне кт, те тк | Длина | она Ежен ІК ФМ ям я ок маю жк вій етно шок вне ш-- ш-ео шини. нн Б яю й мйклл і ж таіалілтя пелети стажу пе Кк пев етно спід оч есеткататечекнокнх, й 700050 З я "Банан і саме ее зн зоевеемакня зве їх ек мевкв У пілік летіти В що що : т пежкюнннй «миня Донна сакакожках сяк саккв шия. жа: нев - ЕК, шк вої в Енн ш те-- й ноз ш я й к: н и я о г й « й КЕ: м а а зи 8 е ий а м? Ко КЗ ; іа - - Кк А с є о Є ше ех як 5 ка й - Кі в ; ку МОА-МаВ- Всього АКТ ж Ка з попи в о пп пилка п жит
Фо. ! ! : че ЯМІ она, ! Я кожи ще: Щ оллдтінятнсоВ и пітінсю жен ших нені -- Е чо - мае ше 0 Ше наше сн ! няня - ч що Кт пкт миша - нн ! Ваня: ект ее ше енлкльт - попа ви | м: нини чия "жи ж» г ни НН ЗВ є же ж і «а | ноу - я щи Кей ще щі он в ха сх Як я як де же ж шк жк п м я є «-? - КУ КІ - К: са ж ж ЗЕ я й ж ще я я - Мей Кай ув! ще ет Же Ка щі че «Ф й Ку ?
Фіг. З
МОА-МВ231 : рАКТ (5473) Б 8 146 і п о п нн 58 4126 нн длжюнітинталнелн куоав ун тт мстити уні ті танін нтн ех пнех мн днк тентімтоля є х зав фен я - ження ши ше ші ще шин Е ї во т лрухленуєт поккежнкеюя но насе тяюх кет нія дк скляну НА сук іч кнеук катет нлрекучікКе тк чена клітку чик, М ай я слескннум злятеклах ла пон ноют тні Кути тя дич жен киев ук пет нку ун ною нених СБ з - ЩЕ ЩЕ... -. птн -йї- ЕЕ : «ра: се тт : А шо 5 « З иа к ж ж. Еко КЗ) С Й ще КУ ; : сой ХУ С я ее я ши и не ШИ. й ще я «е а и я Ф «г и и А а «В «5 ; м -? ке Ей Кей Кк е к ЗИ Ж - ха з - й й : є (5; МИ ЯК Фе
Фіг. 10 МОд-МВ231 Ї рАКТ (Т308) р жов 4 ї
В. Я 420 нн нн пн он нн нн пн Ви Ше : 8 з ЯщИН | Щ Ше Кз КЕ пли шу ли ши ши ши я С і З т и и и и НН : ; Кт а хе З а 6 7 : щи Шк З а М ас і в ий Ж щи х «е я : : ок чи г к ; І "ге ак г : х А . с - і ! м є ! ШИК ! "є ;
Фіг. 11 дн ніна п вн нні нн нки нн нн З | Ще й Е ї МОд-мМВ231 , Всього АКТ і ї НЕ ЖД. босенининня стен ВВ ти в ня систе довів т і : Ї Н ПЕ Е ї | с. ї 4 х І ха пвяня хм --е пені сяк сс мне вн кт учня зе ЖЕ ; гаї ШИ: | | і з я : | І 4 ії в важ: ее -е Не БЕ БИ 5 ЗБ ЗИ ї ов. В; ; Е; й ке газ са соління сосок -Й сплднштим нон солі и В пеня етені ЗАОАУН оцінні сен ї 1 І Й шк | ож й прин ск нин ШЕ і ! й: м ік СУ зах ХУ я хе : Е ай о є г з чи ши «г я г? . ! Є а а Ка / І : те Ке; -е ! 4: : козі ; В ! 7 є І і а ШЕ . ї " "в .
Фіг. 12 ж й Додаткове яв Тетібування надантякові інгібування Воболограма За С. ше гош . І В - - " НН ОО вай йо ней - с ж дк вх ї- шо є ПУ ож що кові в : ж й | Е век в замах о неролі веролімує (ним) Еверолімуєс (мк) м сро; му Атах
Фіг. 13 інгібуваніяя 0000 Додаткове сування наданшкове інгібування Ізоболограма с - ШИНИ. :: ШЕ вт474 Ми 5 ЕНН х ше злий ЩЕ Еш з "ВШ Є меш ней 5 онов я мн на Я -- ТІ ШЕ: 55 2 с М , кі В, к ШЕ 00 хг о . Б ж в Я А є ьо а о се с тож ло в : ! з Бе боки г зи о Ши не пою я 5 ЩЕ 5 5 ЕЕ ті Е - | ї ПК НИ -; КОШЕНЯ Ка ше вим Ше. " М 0-х ше ОВ є вози Вис 0 зїез ки а і Еверолімує її Ен лі мусім КМ Еверолімує (МАМ - й й еронтму веролімує (мем) 0,027 мкм
Фіг. 14 Додаткове ізоболограма о Івгібування надлишкове інгібування свв пихи В шо - - ШЕ 5 шо, шедсю в не ТОВ Ва СВ з млини не Ж : тА М Хв ШЕ Б о Е о МІК 25: р НИК НИ о : Й й - о шо - ШИ шко шо РІКЗСА - Шо з ее а ! З п Ж : ше м: ї : 0 сс, ги ку ко: З: хо св - - . З шо 5 В 8: - 5 й Дт ОК - ШК йо ро и голу с о шшн з ЩЕ : мн Ной Ь ША пад тржіюуі вежу ярів и в. З мож З Чех За беу б? о 5 Її - Еверолімує (мкм) Еверолімус (МКМ). Еверолімує ОО МКМ
Фіг. 15
UAA201311138A 2011-04-25 2012-04-23 КОМБІНАЦІЯ ІНГІБІТОРУ ФОСФАТИДИЛІНОЗИТ-3-КІНАЗИ (PI3K) І ІНГІБІТОРУ mTOR UA110961C2 (uk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161478572P 2011-04-25 2011-04-25
PCT/US2012/034647 WO2012148846A1 (en) 2011-04-25 2012-04-23 Combination of a phosphatidylinositol-3-kinase (pi3k) inhibitor and a mtor inhibitor

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA110961C2 true UA110961C2 (uk) 2016-03-10

Family

ID=46018130

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201311138A UA110961C2 (uk) 2011-04-25 2012-04-23 КОМБІНАЦІЯ ІНГІБІТОРУ ФОСФАТИДИЛІНОЗИТ-3-КІНАЗИ (PI3K) І ІНГІБІТОРУ mTOR

Country Status (25)

Country Link
US (3) US20140066474A1 (uk)
EP (1) EP2701703A1 (uk)
JP (2) JP6086902B2 (uk)
KR (1) KR101925656B1 (uk)
CN (1) CN103491955B (uk)
AR (1) AR086481A1 (uk)
AU (2) AU2012250010A1 (uk)
BR (1) BR112013027486A2 (uk)
CA (1) CA2833962A1 (uk)
CL (1) CL2013003078A1 (uk)
CO (1) CO6801759A2 (uk)
EA (1) EA025948B1 (uk)
EC (1) ECSP13012994A (uk)
GT (1) GT201300263A (uk)
IL (1) IL229008A (uk)
MA (1) MA35038B1 (uk)
MX (1) MX2013012385A (uk)
NZ (1) NZ615593A (uk)
PE (1) PE20140601A1 (uk)
SG (1) SG193919A1 (uk)
TN (1) TN2013000392A1 (uk)
TW (1) TWI602567B (uk)
UA (1) UA110961C2 (uk)
WO (1) WO2012148846A1 (uk)
ZA (1) ZA201306973B (uk)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2012331125A1 (en) * 2011-11-02 2014-05-22 Novartis Ag 2-carboxamide cycloamino urea derivatives for use in treating VEGF - dependent diseases
EP2968340A4 (en) * 2013-03-15 2016-08-10 Intellikine Llc COMBINING KINASE INHIBITORS AND USES THEREOF
CN105899232A (zh) * 2013-11-13 2016-08-24 诺华股份有限公司 用于增强免疫应答的mTOR抑制剂
CA2937504A1 (en) * 2014-02-11 2015-08-20 Novartis Ag Pharmaceutical combinations comprising a pi3k inhibitor for the treatment of cancer
WO2015148626A1 (en) * 2014-03-26 2015-10-01 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Treatment of fibrotic disorders
EP3200772B1 (en) * 2014-10-03 2022-08-03 Novartis AG Pharmaceutical compositions comprising alpelisib
US20160339030A1 (en) * 2015-05-19 2016-11-24 University Of Maryland, Baltimore Treatment agents for inhibiting hiv and cancer in hiv infected patients
GB202010627D0 (en) * 2020-07-10 2020-08-26 Qbd (Qs-Ip) Ltd Blocking method

Family Cites Families (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PT98990A (pt) 1990-09-19 1992-08-31 American Home Prod Processo para a preparacao de esteres de acidos carboxilicos de rapamicina
US5120842A (en) 1991-04-01 1992-06-09 American Home Products Corporation Silyl ethers of rapamycin
US5100883A (en) 1991-04-08 1992-03-31 American Home Products Corporation Fluorinated esters of rapamycin
US5118678A (en) 1991-04-17 1992-06-02 American Home Products Corporation Carbamates of rapamycin
US5118677A (en) 1991-05-20 1992-06-02 American Home Products Corporation Amide esters of rapamycin
US5151413A (en) 1991-11-06 1992-09-29 American Home Products Corporation Rapamycin acetals as immunosuppressant and antifungal agents
GB9125660D0 (en) 1991-12-03 1992-01-29 Smithkline Beecham Plc Novel compound
ZA935111B (en) 1992-07-17 1994-02-04 Smithkline Beecham Corp Rapamycin derivatives
ZA935112B (en) 1992-07-17 1994-02-08 Smithkline Beecham Corp Rapamycin derivatives
US5256790A (en) 1992-08-13 1993-10-26 American Home Products Corporation 27-hydroxyrapamycin and derivatives thereof
GB9221220D0 (en) 1992-10-09 1992-11-25 Sandoz Ag Organic componds
US5258389A (en) 1992-11-09 1993-11-02 Merck & Co., Inc. O-aryl, O-alkyl, O-alkenyl and O-alkynylrapamycin derivatives
CA2175215C (en) 1993-11-19 2008-06-03 Yat Sun Or Semisynthetic analogs of rapamycin (macrolides) being immunomodulators
NZ277498A (en) 1993-12-17 1998-03-25 Novartis Ag Rapamycin derivatives
CN1124276C (zh) 1995-06-09 2003-10-15 诺瓦蒂斯有限公司 雷帕霉素衍生物
EP0937082A2 (en) 1996-07-12 1999-08-25 Ariad Pharmaceuticals, Inc. Materials and method for treating or preventing pathogenic fungal infection
IL147803A0 (en) 1999-08-24 2002-08-14 Ariad Gene Therapeutics Inc 28-epirapalogs
TW200519106A (en) * 2003-05-02 2005-06-16 Novartis Ag Organic compounds
EP1962839A4 (en) * 2005-11-14 2010-08-25 Ariad Pharma Inc ADMINISTRATION OF A MNTOR INHIBITOR FOR THE TREATMENT OF PATIENTS WITH CANCER
UA104147C2 (uk) * 2008-09-10 2014-01-10 Новартис Аг Похідна піролідиндикарбонової кислоти та її застосування у лікуванні проліферативних захворювань
US20110195966A1 (en) * 2008-10-31 2011-08-11 Novartis Ag Combination of a phosphatidylinositol-3-kinase (pi3k) inhibitor and a mtor inhibitor

Also Published As

Publication number Publication date
EA201391565A1 (ru) 2014-02-28
CL2013003078A1 (es) 2014-05-30
BR112013027486A2 (pt) 2017-02-14
CA2833962A1 (en) 2012-11-01
JP6086902B2 (ja) 2017-03-01
CN103491955B (zh) 2015-12-23
IL229008A (en) 2017-11-30
US20180085362A1 (en) 2018-03-29
KR101925656B1 (ko) 2018-12-05
MX2013012385A (es) 2013-11-04
US20170095463A1 (en) 2017-04-06
TW201244716A (en) 2012-11-16
SG193919A1 (en) 2013-11-29
TWI602567B (zh) 2017-10-21
JP2017061527A (ja) 2017-03-30
ZA201306973B (en) 2014-06-25
AU2012250010A1 (en) 2013-10-10
EP2701703A1 (en) 2014-03-05
KR20140012147A (ko) 2014-01-29
EA025948B1 (ru) 2017-02-28
PE20140601A1 (es) 2014-05-24
AU2016202372B2 (en) 2017-07-20
NZ615593A (en) 2015-05-29
WO2012148846A1 (en) 2012-11-01
AU2016202372A1 (en) 2016-05-05
GT201300263A (es) 2015-11-24
ECSP13012994A (es) 2013-12-31
AR086481A1 (es) 2013-12-18
MA35038B1 (fr) 2014-04-03
JP2014513097A (ja) 2014-05-29
US20140066474A1 (en) 2014-03-06
CN103491955A (zh) 2014-01-01
TN2013000392A1 (en) 2015-01-20
IL229008A0 (en) 2013-12-31
CO6801759A2 (es) 2013-11-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA110961C2 (uk) КОМБІНАЦІЯ ІНГІБІТОРУ ФОСФАТИДИЛІНОЗИТ-3-КІНАЗИ (PI3K) І ІНГІБІТОРУ mTOR
US20230302001A1 (en) Preservation of immune response during chemotherapy regimens
CN110368497B (zh) 用于治疗癌症的组合疗法
CA2736361C (en) Combination of a phosphatidylinositol-3-kinase (pi3k) inhibitor and a mtor inhibitor
RU2695228C2 (ru) Прерывистое введение ингибитора mdm2
US20210177854A1 (en) Methods of treating and preventing alloantibody driven chronic graft versus host disease
TW201519893A (zh) 治療及預防移植物抗宿主病之方法
US10722484B2 (en) Methods of cancer treatment
KR20170134462A (ko) Mdm2 저해제와 btk 저해제의 병용 치료법
US20180015075A1 (en) Methods and compositions for treatment of venous malformation
WO2013059548A9 (en) Compositions and methods for treating cancer using jak2 inhibitor