TWI794677B - 自體隱性腎小管發育不全之檢測方法、其基因標誌物及檢測套組 - Google Patents
自體隱性腎小管發育不全之檢測方法、其基因標誌物及檢測套組 Download PDFInfo
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Abstract
本發明提供一種檢測自體隱性腎小管發育不全的方法，包含：齊備一
受試者之核酸樣品；檢測所述受試者之核酸樣品是否呈現AGT基因缺陷，若所述受試者之核酸樣品有一等位基因呈現AGT基因缺陷，則為AGT基因缺陷帶原者，若所述受試者之核酸樣品之兩等位基因均呈現AGT基因缺陷，則為罹患自體隱性腎小管發育不全之患者；另提供一種用於檢測AGT基因缺陷的基因標誌物及提供一種檢測套組，包含一引子對，其包含正向引子包含如SEQ ID NO：1所示序列及反向引子包含如SEQ ID NO：2所示序列。藉由檢測核酸是否有AGT基因缺陷，能準確檢測受試者是否罹患自體隱性腎小管發育不全。
Description
本發明是關於一種檢測方法，尤指一種檢測自體隱性腎小管發育不全之方法。
遺傳性腎小管疾病包括吉特曼症候群、巴特氏症候群、以范康尼氏症候群表現的LOWE症候群、Dent’s疾病、粒線體疾病、體隱性鈉磷通道疾病、家族性低血鎂高尿鈣腎髓質鈣化症、腎性尿崩症及自體隱性腎小管發育不全等，雖然部份病人在診斷後給予適當的治療，病情可以獲得改善，然自體隱性腎小管發育不全目前沒有準確及快速的診斷方法，也無治療方法，且其死亡率極高。
自體隱性腎小管發育不全是一種近曲小管發育不良的疾病，導因於腎素-血管收縮素系統蛋白質的缺陷，包含血管收縮素原蛋白異常。其臨床表現為嚴重低血壓、腎臟功能衰竭、續發性的肺部發育不良、顱骨病變等，生化檢驗可以電解質或酸鹼不平衡如氮血症、高血鉀、低血鈣、代謝性酸中毒等特徵，且幾乎所有罹病者會在子宮內死亡或在產後最初幾天內死亡。
因此目前迫切需要一種可以快速準確的檢測自體隱性腎小管發育不全的方法，以應用於產前篩檢。
有鑑於現有技術存在之缺陷，本發明之一目的在於提供一種檢測自體隱性腎小管發育不全的方法，其能達到準確檢測自體隱性腎小管發育不全之目的，進而能於產前提早發現罹病胎兒，而能作為產前篩檢的方法。
本發明之另一目的在於提供一種檢測具有隱性血管收縮素原(Angiotensinogen，AGT
)基因異常的方法，進而能預測子代染色體異常的發生。
為達成前述目的，本發明提供一種檢測AGT
基因缺陷帶原或自體隱性腎小管發育不全的方法，其包含：步驟(a) 齊備一受試者之核酸樣品；步驟(b) 檢測所述受試者之核酸樣品是否呈現AGT
基因缺陷，若所述受試者之核酸樣品有一等位基因呈現AGT
基因缺陷，則為AGT
基因缺陷帶原者，若所述受試者之核酸樣品之兩等位基因均呈現AGT
基因缺陷，則為罹患自體隱性腎小管發育不全之患者。根據上述技術手段，本發明因能檢測AGT
基因異常，而由於血管收縮素原蛋白異常將導致近曲小管發育不良，因此藉由本發明能提早檢測胎兒是否罹患自體隱性腎小管發育不全或發現AGT
基因異常帶原者，以預測子代之罹病機率。
較佳的，所述自體隱性腎小管發育不全為製造腎素-血管收縮素系統蛋白的基因異常導致近曲小管的發育不良。
依據本發明，所述AGT
基因缺陷是包含AGT
基因的第三外顯子及第四外顯子發生缺失。較佳的，所述AGT
基因缺陷是包含AGT
基因的第二內含子的619鹼基對(base pair，bp)、第三外顯子(268 bp)、第三內含子(1595 bp)、第四外顯子(145 bp)和第四內含子(243 bp)發生缺失，共缺失2870鹼基對，亦即E3_E4 del:2870bp 缺失 (NM_000029.3:c.857-619_C1269.243del)。較佳的，所述AGT
基因缺陷是指AGT
基因的第二內含子的619鹼基對(base pair，bp)、第三外顯子(268 bp)、第三內含子(1595 bp)、第四外顯子(145 bp)和第四內含子(243 bp)發生缺失，共缺失2870鹼基對，亦即E3_E4 del:2870bp 缺失 (NM_000029.3:c.857-619_C1269.243del)。
較佳的，所述步驟(a)中之受試者之核酸樣品來自人類，更佳的，所述步驟(a)中之受試者之核酸樣品來自人類組織或人類體液。
較佳的，所述人類體液包含血液或唾液。所述人類組織包含：口腔內膜抹片。較佳的，所述血液包含白血球。
較佳的，所述步驟(a)中之受試者之核酸樣品來自亞洲人。更佳的，所述步驟(a)中之受試者之核酸樣品來自蒙古人(黃種人)。更佳的，所述步驟(a)中之受試者之核酸樣品來自臺灣人。
較佳的，所述步驟(a)中之受試者之核酸樣品包含DNA或RNA。
較佳的，所述步驟(a)中之受試者之核酸樣品經擴增。較佳的，所述擴增可透過聚合酶連鎖反應(polymerase chain reaction，PCR)、即時定量PCR(Real-time PCR)擴增。
較佳的，所述擴增是在添加能夾出用以辨別出前述AGT
基因缺陷之引子對下進行。較佳的，前述引子對為能夾出AGT
基因的第二外顯子至第五外顯子之引子對。更佳的，所述核酸擴增是在添加包含編碼SEQ ID NO：1所示序列及包含編碼SEQ ID NO：2所示序列之引子對下進行。
較佳的，所述步驟(b) 中之檢測所述受試者之核酸樣品是否呈現AGT
基因缺陷，可以透過膠體電泳、核酸定序法或Taqman分析判斷。
更佳的，所述膠體電泳為瓊脂膠體電泳。
較佳的，瓊脂膠體電泳分析之結果，自體隱性腎小管發育不全患者之條帶為5000 bp至6000 bp；而正常受試者之條帶均為8000 bp至9000 bp；而AGT
基因缺陷帶原者因為隱性帶原者即具有顯性的正常AGT
基因及異常的AGT
基因缺陷，因此具有兩條帶，一為5000 bp至6000 bp，另一為8000 bp至9000 bp。
更佳的，電泳分析之結果，自體隱性腎小管發育不全患者之條帶為5200 bp 至 5800 bp；而正常受試者之條帶均為8200 bp至8800 bp；而AGT
基因缺陷帶原者因為隱性帶原者即具有顯性的正常AGT
基因及異常的AGT
基因缺陷，因此具有兩條帶，一為5200 bp 至 5800 bp，另一為8200 bp至8800 bp。
在一特定的實施例中，所述的核酸為DNA，且DNA經能夾出AGT
基因第二外顯子至第五外顯子的編碼SEQ ID NO：1所示序列及編碼SEQ ID NO：2所示編碼的引子對進行聚合酶連鎖反應擴增並透過膠體電泳分析、定序後，發現自體隱性腎小管發育不全患者之AGT
基因缺陷是與正常受試者(8565 bp)相比僅有5695bp，其中為2870 bp的缺失。而正常受試者經編碼SEQ ID NO：1所示序列及編碼SEQ ID NO：2所示序列之引子對進行聚合酶連鎖反應、Sanger定序後得到編碼SEQ ID NO：3所示之序列；而自體隱性腎小管發育不全患者AGT
基因經過編碼SEQ ID NO：1所示序列及編碼SEQ ID NO：2所示序列之引子對進行聚合酶連鎖反應、Sanger定序後得到如編碼SEQ ID NO：4所示之序列。
本發明之另一目的為提供一種用於檢測AGT
基因缺陷的基因標誌物，其中所述基因標誌物包含基因缺陷的AGT
基因，所述基因缺陷的AGT
基因是包含AGT
基因的第三外顯子及第四外顯子發生缺失。較佳的，所述基因缺陷的AGT
基因是包含AGT
基因的第二內含子的619 bp、第三外顯子(268 bp)、第三內含子(1595 bp)、第四外顯子(145 bp)和第四內含子的243 bp發生缺失，共缺失2870鹼基對，即E3_E4 del:2870bp 缺失(deletion) (NM_000029.3:c.857-619_C1269.243del)。更佳的，所述基因缺陷的AGT
基因是指AGT
基因的第二內含子的619 bp、第三外顯子(268 bp)、第三內含子(1595 bp)、第四外顯子(145 bp)和第四內含子的243 bp發生缺失，共缺失2870鹼基對，即E3_E4 del:2870bp 缺失(deletion) (NM_000029.3:c.857-619_C1269.243del)。
在一實施例中，所述基因標誌物可包含編碼SEQ ID NO：4所示序列。當受試者之核酸樣品有一等位基因具有前述基因標誌物，則為AGT
基因缺陷帶原者，若受試者之核酸樣品之兩等位基因均有前述基因標誌物，則為罹患自體隱性腎小管發育不全之患者。
較佳的，所述基因標誌物包含與編碼SEQ ID NO：4所示序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%以上同一性的核苷酸序列。更佳的，所述基因標誌物如SEQ ID NO：4所示。
本發明之另一目的為提供一種可用於檢測自體隱性腎小管發育不全或AGT
基因缺陷帶原之檢測套組，其包含一引子對，所述引子對包含正向引子及反向引子，所述正向引子包含如SEQ ID NO：1所示序列，所述反向引子包含如SEQ ID NO：2所示序列。由於所述引子對能於聚合酶連鎖反應夾出前述基因標誌物，因此能用於檢測自體隱性腎小管發育不全或AGT
基因缺陷帶原者。較佳的，所述正向引子係如SEQ ID NO：1所示序列，所述反向引子係如SEQ ID NO：2所示序列。
本發明之另一目的為提供一種可用於檢測自體隱性腎小管發育不全或AGT
基因缺陷帶原之檢測套組，其包含檢測AGT
正常基因之引子對及探針及檢測AGT
基因缺陷之引子對及探針，所述檢測AGT
正常基因之引子對包含檢測AGT
正常基因之正向引子及檢測AGT
正常基因之反向引子，所述檢測AGT
正常基因之正向引子包含如SEQ ID NO：5所示序列、所述檢測AGT
正常基因之反向引子包含如SEQ ID NO：6所示序列，所述檢測AGT
正常基因之探針包含如SEQ ID NO：7所示序列；所述檢測AGT
基因缺陷之引子對包含檢測AGT
基因缺陷之正向引子及檢測AGT
基因缺陷之反向引子，所述檢測AGT
基因缺陷之正向引子包含如SEQ ID NO：8所示序列、所述檢測AGT
基因缺陷之反向引子包含如SEQ ID NO：9所示序列，所述檢測AGT
基因缺陷之探針包含如SEQ ID NO：10所示序列。較佳的，所述檢測AGT
正常基因之正向引子係如SEQ ID NO：5所示序列，所述檢測AGT
正常基因之反向引子係如SEQ ID NO：6所示序列，所述檢測AGT
正常基因之探針係如SEQ ID NO：7所示序列；所述檢測AGT
基因缺陷之正向引子係如SEQ ID NO：8所示序列、所述檢測AGT
基因缺陷之反向引子係如SEQ ID NO：9所示序列，所述檢測AGT
基因缺陷之探針係如SEQ ID NO：10所示序列。
較佳的，前述可用於檢測自體隱性腎小管發育不全或AGT
基因缺陷帶原之檢測套組中，所述檢測AGT
正常基因之探針及所述檢測AGT
基因缺陷之探針之5’有螢光修飾、3’有淬滅劑(quencher)。較佳的，所述檢測AGT
正常基因之探針之5’有VIC螢光修飾，所述檢測AGT
基因缺陷之探針5’有FAM螢光修飾。
所述AGT
正常基因係能夠轉錄、轉譯出正常功能血管收縮素元蛋白質的DNA序列。
根據前述之技術手段，本發明之檢測方法、基因標誌物、檢測套組可達到準確檢測自體隱性腎小管發育不全，而能作為孕婦產前篩檢及罹患自體隱性腎小管發育不全的胎嬰兒的檢測。
以下配合圖式及本發明的實施例，進一步闡述本發明為達成預定發明目的所採取的技術手段。
實施例1
(一)、萃取DNA
受試者共14人，其中1號為病人，2至7號為基因缺陷帶原者，8至14號為正常受試者。以含EDTA抗凝血劑之採血管採集受試者的全血後，加入10倍血液體積之紅血球裂解緩衝液(RBC Lysis Buffer)，將採血管上下翻轉混勻、室溫靜置15分鐘；接著於轉速3000 rpm下離心10分鐘，去除上清液。加入10 mL PBS(磷酸鹽緩衝液)沖洗細胞，再以轉速3000 rpm離心10分鐘，移除上清液，再以PBS懸浮白血球。
將前述懸浮白血球利用DNA萃取套組(PureLink®
Genomic DNA Kits，Catalog Numbers K1820-01)根據操作手冊進行DNA萃取。具體而言，是將200 μL PBS懸浮白血球加入20 μL蛋白酶 K (Proteinase K)、20 μL核糖核酸酶A (RNaseA) 稍震盪混勻，室溫靜置2分鐘，再加入200 μL PureLink®
Genomic Lysis/Binding Buffer，充分混勻後，於55°C下靜置10分鐘。接著再加入200 μL 100%無水酒精混合成均質細胞裂解溶液後移至管柱內，於室溫下10000x g離心1分鐘。
接著加入500 μL 清洗緩衝液1 (Wash Buffer 1)，以10000x g 離心1分鐘後，再以500 μL清洗緩衝液2 (Wash Buffer 2)，以20000x g 離心3分鐘，將管柱放至1.5ml 微量離心管，加入25 μL至200 μL 的PureLink®
Genomic Elution Buffer於室溫下反應1分鐘後，再以20000x g離心3分鐘，洗滌、純化出基因組DNA (genomic DNA，gDNA)，並於-20°C下保存。
(二)、聚合酶連鎖反應
利用PrimeSTAR® GXL DNA Polymerase Cat. #R050A套組，根據操作手冊進行聚合酶連鎖反應，具體而言是進行以下步驟：
1. 配製PCR反應物
根據下表1配製PCR反應物。
表1：PCR反應物
| 5X PrimeSTAR GXL Buffer | 5 μL |
| dNTP Mixture (2.5mM each) | 4 μL |
| 正向引子 | 0.5 μL |
| 反向引子 | 0.5 μL |
| gDNA | 1 μL |
| PrimeSTAR GXL DNA Polymerase | 0.5 μL |
| 滅菌水 | 13.5μL |
| 總體積 | 25 μL |
2. 齊備能夾出AGT
基因的第二至五外顯子之DNA引子對
正向引子：TTCCATGGAGCTTTGAATCCA，即SEQ ID NO：1。
反向引子：AGCACTTTCGTTTGCACAGT，即SEQ ID NO：2。
若為正常之AGT
基因應夾出8565 bp，若為AGT
基因缺陷則會夾出5695 bp。
3. 設定PCR反應條件
利用PCR反應物及SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2引子對，根據下表2設定PCR反應條件，進行PCR反應。
表2：PCR 反應條件
| 溫度 | 時間 | |
| 95°C | 5分鐘 | |
| 95°C | 30秒鐘 | 10個循環 |
| 58°C | 30秒鐘 | |
| 68°C | 9分鐘30秒鐘 | |
| 95°C | 30秒鐘 | 30個循環 |
| 61°C | 30秒鐘 | |
| 68°C | 9分鐘30秒 | |
| 68°C | 20分鐘 | |
| 16°C |  |
(三)、DNA膠體電泳分析
利用0.8%瓊脂凝膠 (agarose gel)對PCR產物進行電泳分析，並以第15泳道為陰性控制組，其結果如圖1所示。
根據圖1所示之結果，最左邊的泳道為marker，可看出1號受試者僅有一條帶，而該條帶約落在6000 bp，因兩等位基因均呈AGT
基因缺失而為自體隱性腎小管發育不全患者，而2至7號受試者，因有一等位基因呈現AGT
基因缺失，具有兩較明顯條帶，分別約為6000 bp及8000 bp，及另有一較不明顯之非特異性條帶，因此為AGT
基因缺陷帶原者。而8至14號受試者因為沒有基因缺陷、鹼基對之缺失而為正常受試者，該條帶約落在8000 bp。而將正常受試者之聚合酶連鎖反應擴增後之核酸經Sanger定序後，結果如SEQ ID NO：3序列所示，而將1號受試者之聚合酶連鎖反應擴增後之核酸定序後，其結果如SEQ ID NO：4序列所示。而其中之基因缺陷為是指部分AGT
基因的第二內含子的619 bp、第三外顯子(268 bp)、第三內含子(1595 bp)、第四外顯子(145 bp)和第四內含子(243 bp)發生缺失，即E3_E4 del:2870bp缺失(deletion) (NM_000029.3:c.857-619_C1269.243del)。
亦即，根據前述引子對進行聚合酶連鎖反應所夾出AGT
基因的序列中，自體隱性腎小管發育不全患者之AGT
基因缺陷是與正常受試者8566 bp相比僅有5695 bp，其中為2870 bp的缺失。
實施例2
實施例2採用相同於實施例之方法，其差別僅在於受試者為3人，分別為正常人(代號為C)、患者父親(代號為F)及患者母親(代號為M)，並加入陽性控制組(代號為P)，以及水作為陰性控制組(代號為Neg)其結果如圖2所示。
根據圖2之結果，可看出患者父親及母親均具有分別約為兩條帶，分別約為正常的AGT
基因 8000 bp 及AGT
基因缺陷之 6000 bp 而為AGT
基因缺陷之帶原者。而陽性控制組僅具有一條帶，約為6000 bp。
實施例3
實施例2如同實施例1先進行(一)、DNA萃取，接著利用PrimeSTAR®
GXL DNA Polymerase Cat. #R050A套組，根據操作手冊進行Taqman qPCR。
(二)、Taqman qPCR
1.配製Taqman qPCR反應物
根據下表3配製Taqman qPCR反應物
表3：Taqman qPCR反應物
進行(二)、即時定量PCR，步驟如下：
| 2X IQ2 Buffer | 5 μL |
| 檢測AGT 正常基因之buffer(4X) | 1.25 μL |
| 檢測AGT 基因缺陷之buffer (4X) | 1.25 μL |
| gDNA(100 ng) | 1 μL |
| 滅菌水 | 1.5 μL |
| 總體積 | 10 μL |
2. 齊備特殊設計的引子
齊備特殊設計的引子及探針
表4：
| 檢測AGT 正常基因引子對及探針 | 檢測AGT 基因缺陷引子對及探針 | |
| 正向引子 | TATGAGCAGGGGCCTCTAGG (SEQ ID NO：5) | GCTGGGGCTAGACATGGAT (SEQ ID NO：8) |
| 反向引子 | ACACTGACACGTCCTCAGCA (SEQ ID NO：6) | CAGGTCCAGGGGTGCTTGC (SEQ ID NO：9) |
| 探針 | CTACGTGCGTCCAAACCTACAGAATG (SEQ ID NO：7) | ATTCTACGTGCGTCCCTTGGCCTT (SEQ ID NO：10) |
| 探針5’修飾 | VIC | FAM |
| 探針3’修飾 | MGB-NFQ | MGB-NFQ |
利用Taqman qPCR反應物及表4所示引子對及探針，根據下表5設定Taqman qPCR反應條件，以進行Taqman qPCR反應。
進行(二)、Taqman qPCR，步驟如下：
使用96孔反應盤，加入10 μL加入表3所示之Taqman qPCR反應物、5 μL Taqmen master mix，300 nM的表4所示之兩引子對 (即檢測AGT
正常基因引子對及檢測AGT
基因缺陷引子對各300 nM，每條引子各150 nM)、及檢測AGT
正常基因探針及檢測AGT
基因缺陷探針之兩探針各300 nM及100 ng gDNA，根據下表5設定反應條件，以QuantStudio 5 Real-Time PCR System (ThermoFisher)進行即時定量PCR反應。
表5：即時定量PCR 反應條件
| 溫度 | 時間 | |
| 60°C | 30秒鐘 | |
| 95°C | 5分鐘 | |
| 95°C | 15秒鐘 | 40個循環 |
| 60°C | 1分鐘 | |
| 60°C | 30秒鐘 | |
| 16°C | |
(三) 結果分析
利用Taqman Genotyper software v.1.3 (Life Technologies) 由於用於檢測正常AGT
基因的VIC螢光探針是經設計而會與擴增正常序列之區間結合，只有人體DNA中帶有AGT
正常基因序列才可偵測到VIC(綠色)螢光反應，所以正常受試者及AGT
基因缺陷之帶原者體內的VIC 螢光訊號會增強，反之自體隱性腎小管發育不全患者及無模板對照組(no template control，NTC)並無螢光訊號反應。
而FAM 螢光探針是經設計而會與擴增大段缺失片段前後序列區間結合，只有人體DNA帶有AGT
大段缺失基因片段的序列可偵測到FAM (藍色)螢光反應，所以自體隱性腎小管發育不全患者及AGT
基因缺陷之帶原者體內FAM訊號會增強，反之正常受試者及無模板對照組並無螢光訊號反應。
並可依據X軸=FAM、Y軸=VIC分為4象限以同時監控二種螢光探針偵測的擴增結果。當DNA樣本只有VIC訊號為正常受試者；同時有VIC訊號及FAM訊號為AGT
基因缺陷之帶原者；只有FAM訊號為自體隱性腎小管發育不全患者；無任何螢光訊號反應則為無模板對照組。Taqman qPCR也可得出與傳統PCR及電泳分析類似的結果。
綜合上述實施例1至3之結果，本發明藉由檢測受試者之核酸樣品是否具有AGT
基因缺陷，確實能夠準確檢測出是否罹患有自體隱性腎小管發育不全，而能具體作為孕婦產前篩檢及罹患此病的胎嬰兒確定檢測的方法。
無
圖1 含自體隱性腎小管發育不全患者、AGT
基因缺陷帶原者及正常受試者之核酸膠體電泳圖，M為核酸Marker。
圖2 自體隱性腎小管發育不全患者及其父母之核酸膠體電泳圖，C為正常人、F為患者父親、M為患者母親、P為陽性控制組、Neg為陰性控制組。
無
Claims (15)
- 一種檢測AGT基因缺陷帶原或自體隱性腎小管發育不全的方法，其包含：步驟(a)齊備一受試者之核酸樣品；步驟(b)檢測所述受試者之核酸樣品是否呈現AGT基因缺陷，若所述受試者之核酸樣品有一等位基因呈現AGT基因缺陷，則為AGT基因缺陷帶原者，若所述受試者之核酸樣品之兩等位基因均呈現AGT基因缺陷，則為罹患自體隱性腎小管發育不全之患者，其中，所述AGT基因缺陷是包含AGT基因的第三外顯子及第四外顯子的缺失。
- 如請求項1所述之檢測AGT基因缺陷帶原或自體隱性腎小管發育不全的方法，其中，所述AGT基因缺陷是包含AGT基因的第二內含子的619鹼基對(base pair，bp)、第三外顯子、第三內含子、第四外顯子和第四內含子的243bp發生缺失。
- 如請求項1所述之檢測AGT基因缺陷帶原或自體隱性腎小管發育不全的方法，其中，所述步驟(a)中之受試者之核酸樣品來自人類組織或人類體液。
- 如請求項3所述之檢測AGT基因缺陷帶原或自體隱性腎小管發育不全的方法，其中，所述人類體液包含血液或唾液。
- 如請求項1所述之檢測AGT基因缺陷帶原或自體隱性腎小管發育不全的方法，所述步驟(a)中之受試者之核酸樣品來自亞洲人。
- 如請求項5所述之檢測AGT基因缺陷帶原或自體隱性腎小管發育不全的方法，所述步驟(a)中之受試者之核酸樣品來自臺灣人。
- 如請求項1所述之檢測AGT基因缺陷帶原或自體隱性腎小管發育不全的方法，所述步驟(a)中之受試者之核酸樣品包含DNA或RNA。
- 如請求項1所述之檢測AGT基因缺陷帶原或自體隱性腎小管發育不全的方法，所述步驟(a)中之受試者之核酸樣品經擴增。
- 如請求項1所述檢測AGT基因缺陷帶原或自體隱性腎小管發育不全的方法，所述步驟(b)中之檢測所述受試者之核酸樣品是否呈現AGT基因缺陷是透過膠體電泳、核酸定序法或Taqman分析判斷。
- 一種用於檢測AGT基因缺陷的基因標誌物，其中所述基因標誌物包含基因缺陷的AGT基因，所述基因缺陷的AGT基因是包含AGT基因的第三外顯子及第四外顯子的缺失。
- 如請求項10所述之用於檢測AGT基因缺陷的基因標誌物，其中，所述基因缺陷的AGT基因是包含AGT基因的第二內含子的619bp、第三外顯子、第三內含子、第四外顯子和第四內含子的243bp發生缺失。
- 如請求項10所述用於檢測AGT基因缺陷的基因標誌物，所述基因標誌物包含與編碼SEQ ID NO：4所示序列具有至少80%以上同一性的核苷酸序列。
- 如請求項10所述用於檢測AGT基因缺陷的基因標誌物，所述基因標誌物包含編碼SEQ ID NO：4所示序列。
- 一種用於檢測AGT基因缺陷帶原或自體隱性腎小管發育不全之檢測套組，其包含一引子對，所述引子對包含正向引子及反向引子，所述正向引子包含如SEQ ID NO：1所示序列，所述反向引子包含如SEQ ID NO：2所示序列。
- 一種用於檢測AGT基因缺陷帶原或自體隱性腎小管發育不全之檢測套組，其包含檢測AGT正常基因之引子對及探針及檢測AGT基因缺陷之引子對及探針， 其中，所述檢測AGT正常基因之引子對包含檢測AGT正常基因之正向引子及檢測AGT正常基因之反向引子，所述檢測AGT正常基因之正向引子包含如SEQ ID NO：5所示序列、所述檢測AGT正常基因之反向引子包含如SEQ ID NO：6所示序列，所述檢測AGT正常基因之探針包含如SEQ ID NO：7所示序列；所述檢測AGT基因缺陷之引子對包含檢測AGT基因缺陷之正向引子及檢測AGT基因缺陷之反向引子，所述檢測AGT基因缺陷之正向引子包含如SEQ ID NO：8所示序列、所述檢測AGT基因缺陷之反向引子包含如SEQ ID NO：9所示序列，所述檢測AGT基因缺陷之探針包含如SEQ ID NO：10所示序列。
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| TW109139049A TWI794677B (zh) | 2020-11-09 | 2020-11-09 | 自體隱性腎小管發育不全之檢測方法、其基因標誌物及檢測套組 |
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-
2020
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Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 期刊 Gribouval O., et al., Mutations in renin-angiotensin system genes are associated with autosomal recessive renal tubular dysgenesis", Nature genetics, Vol. 37(9), 2005, page: 964-968. |
Also Published As
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