CN107190071A - 一种用于检测RhD变异表型的SNP标记 - Google Patents
一种用于检测RhD变异表型的SNP标记 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107190071A CN107190071A CN201710477922.5A CN201710477922A CN107190071A CN 107190071 A CN107190071 A CN 107190071A CN 201710477922 A CN201710477922 A CN 201710477922A CN 107190071 A CN107190071 A CN 107190071A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- rhd
- blood
- snp marker
- snp
- seq
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000003550 marker Substances 0.000 title claims abstract description 21
- 101150108975 Rhd gene Proteins 0.000 claims abstract description 62
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 54
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 52
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 12
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 20
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 claims description 13
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 7
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 2
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 claims 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 14
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 abstract description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 17
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 15
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 14
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N isoamylol Chemical compound CC(C)CCO PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 6
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 6
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 6
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 6
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 6
- 102100027544 Blood group Rh(D) polypeptide Human genes 0.000 description 4
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 4
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 4
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 101150032892 RHCE gene Proteins 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 2
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 2
- 230000010100 anticoagulation Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 2
- 102100038341 Blood group Rh(CE) polypeptide Human genes 0.000 description 1
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 208000025174 PANDAS Diseases 0.000 description 1
- 208000021155 Paediatric autoimmune neuropsychiatric disorders associated with streptococcal infection Diseases 0.000 description 1
- 240000000220 Panda oleosa Species 0.000 description 1
- 235000016496 Panda oleosa Nutrition 0.000 description 1
- 208000003441 Transfusion reaction Diseases 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 description 1
- 230000000869 mutational effect Effects 0.000 description 1
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000004513 sizing Methods 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6881—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for tissue or cell typing, e.g. human leukocyte antigen [HLA] probes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明的目的是提供一种用于检测RhD变异血型的SNP标记，此SNP标记是RHD基因编码区域由起始密码子起第739位碱基发生了突变，由G突变为C；导致第247位氨基酸改变进而造成蛋白构象改变。本发明通过检测筛选获得的SNP位点，从而提供了一种有效的进行RhD血型基因诊断途径，应用效果表明本发明所提供的基因的SNP位点及检测引物可以有效的用于临床患者及血站献血员进行RHD基因的快速检测。
Description
技术领域
本发明属于基因诊断制品技术领域，具体涉及一种用于检测红细胞RhD变异血型的SNP标记。
发明背景
Rh血型系统(Rhesus monkeys)是由著名科学家、诺贝尔奖得主Karl Landsteiner率先从恒河猴的红细胞上发现，故因此得名。Rh血型系统是目前人类36个血型系统中最复杂的，其重要性仅次于ABO系统，在临床输血、新生儿溶血病的诊治中占有重要地位。Rh血型系统中D抗原是免疫原性最强、多态性最复杂的。对于中国大陆的汉族人来讲，RhD阴性人群只占千分之三左右，由于十分罕见，故又名熊猫血。由于RhD的强抗原性，导致RhD阴性者不能接受RhD阳性血液，因为RhD抗原将刺激RhD阴性人体产生抗-RhD抗体。如果再次输入RhD阳性血液，即可导致溶血性输血反应。同样，若RhD阴性妇女由于妊娠或输血刺激体内产生抗-RhD抗体，再次怀孕则会导致新生儿溶血病的发生。
RhD血型系统而除了正常的RhD阳性、阴性外，还存在许多变异型，包括弱D(weakD)、部分D(partial D)及DEL型(放散型)。这些变异型的红细胞表面存在不完全的、或者变异的RhD抗原，若输注给阴性个体也有可能刺激产生抗体，因此这些变异型的个体有两个主要特点：一是他们作为受血者和献血者是不同的两种处理，作为受血者，他们只能输入RhD阴性血液；而作为献血者，他们的血液只能作为RhD阳性血使用。二是容易漏检，由于RhD抗原的变异，导致在常规的血型血清学检测时常规抗体无法与之反应，故易错判为RhD阴性，由于目前没有特别有效的清除不规则抗体的措施，所以这对于需多次输血的患者、妊娠期妇女来说危害十分巨大。因此准确的定型是确保正确输注的前提。目前血型的常规检测方法是血清学实验，但这个实验受多种限制，比如样本的质量、自身抗体或不规则抗体的干扰、疾病的影响等，同时对于DEL型这种只能通过吸收放散试验才能检测到的类别更是无法判断，这就需要利用分子生物学的方法在基因水平进行诊断。
发明内容
本发明的目的是提供一种用于检测RhD变异血型的SNP标记，可以准确的对红细胞RhD变异血型进行确证，从而弥补现有技术的不足。
本发明提供一种与RhD变异血型相关的SNP标记，所述的SNP标记，是RHD基因编码区域由起始密码子起第739位碱基发生了突变，由G突变为C。
本发明的另一个方面提供上述SNP标记的应用，是在制备检测红细胞RhD变异血型的制品中的应用；
根据本发明的另一个方面，是提供上述SNP标记在检测红细胞RhD变异血型中的应用。
上述的测定方法，是通过能扩增上述SNP标记的引物对待检测的血样DNA进行PCR扩增，扩增产物进行测序后进行基因型分析，确定待检样品是否存在上述的SNP标记。
上述方法中所使用的引物对，其引物的序列信息如下：
RHD-5F:5’-AGCACTTCACAGAGCAGGTTCA-3’(SEQ ID NO:1)
RHD-5R:5’-ACTGTGACCACCCAGCATTCTA-3’(SEQ ID NO:2)。
其中SEQ ID NO：1同时为测序引物。
本发明通过检测筛选获得的SNP位点，从而提供了一种有效的进行RhD血型基因诊断途径，应用效果表明本发明所提供的SNP位点及检测引物可以有效的用于临床患者及血站献血员进行RHD基因的快速检测。
附图说明
图1：实施例1的RhD变异表型RHD基因测序图，其中A：先证者父亲，正常RhD阳性表型，携带RHD全缺失基因；B：先证者母亲，正常RhD阳性表型，携带突变基因；C：先证者，RhD变异表型。该家系中两名RHD基因编码区域由起始密码子起第739位碱基发生了突变，由G突变为C。
具体实施方式
申请人从226例血清学检测为RhD阴性或变异型个体进行RHD基因测序，发现了一例新的SNP突变导致RhD变异型，从而促成了本发明。
RH基因位于染色体1p34.3-1p36.1区域，可转录成2837bp的mRNA(NCBI登录号为NM_016124.4)，最终翻译形成417个氨基酸组成的蛋白质。由RHD基因(编码RhD抗原)和RHCE基因(编码RHC、c、E和e抗原)紧密串联排列组成。RHD基因和RHCE基因结构高度同源，均由10个外显子和9个内含子组成，其中两者的第8外显子完全相同，差异较大的是外显子3、4、5、7、9和内含子4。因此采用分子生物学的手段，建立RHD基因检测系统，并应用于临床和采供血工作当中，有助于RhD阴性个体的准确检出，有助于降低受血者不规则抗体的产生，有助于产前不规则抗体的预防和监测，有助于降低新生儿溶血病的发生。
对于本发明所涉及SNP标记，申请人解释如下：
SNP(single nucleotide polymorphism，SNP，即单核苷酸多态性)是指基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性。SNP表现出的多态性仅涉及到单个碱基的变异，表现是有转换、颠换、插入和缺失等。
下面结合实施例对本发明进行详细的描述。
实施例1：SNP标记的筛选
1、提取外周血基因组DNA：
在符合国家相关政策规定，并在取样对象同意的基础上，抽取RhD阴性或变异型献血员外周静脉血2-5mL，放入EDTA抗凝管内，-80℃冻存备用；冻存的EDTA抗凝血在室温融化后，取500μL放于离心管，加入等体积TE(pH8.0)，混匀，4℃，10000rpm离心10分钟，弃上清。
加入180μL TE、20μLSDS(10％)、8μL蛋白酶K(l0mg/ml)混匀，置于37℃水浴过夜。从水浴中取出样品，瞬时离心沉淀样本。在反应管中加入等体积的Tris-饱和酚(约300μL)，充分混匀，室温下10000rpm离心10分钟，吸取上清液(约300μL)至一新离心管中。重复酚抽提一次，吸取上清液至一新离心管中。
加入等体积的Tris饱和酚:氯仿混合液(酚、氯仿各150μL)，混匀，室温10000rpm离心10分钟，转移上清液至一新离心管。
加入等体积的Tris饱和酚:氯仿:异戊醇混合液(酚、氯仿、异戊醇各100μL)，混匀，室温10000rpm离心10分钟，转移上清液至一新离心管。
加入l/10体积3mol/L、pH5.2醋酸钠(约30μL)，2倍体积预冷100％乙醇，轻轻混合，可见白色絮状沉淀。室温10000rpm离心10分钟，使DNA沉淀于管底，弃上清。
向DNA沉淀加入70％乙醇，漂洗一次，室温7000rpm离心5分钟，弃上清，置于室温中挥发剩余乙醇，最后加入50μL TE(pH8.0)，4℃过夜溶解DNA。
对提取的DNA行琼脂糖胶电泳，并应用紫外分光光度计在260nm和280nm比色，检测DNA纯度及浓度。
2、直接测序法寻找该献血员RHD基因的突变
PCR扩增目的片段：反应条件与反应体系：
(1)PCR反应条件：95℃5m；95℃30s，58℃30s，72℃60s，35cycles；72℃5m。
(2)反应体系：(Onelambda公司Fast startTaq polymerase)
应用该反应体系分别进行每位RhD阴性或D变异型献血员的基因组DNA模板与该RhD引物的扩增反应。
PCR产物测序：应用常规Sanger测序法对上述PCR产物进行测序，RHD-5F:5’-AGCACTTCACAGAGCAGGTTCA-3’，在该RhD变异型献血员RHD基因第五外显子处发现一处突变，第739位碱基G突变为C，(图1C)，从而导致nt739-741由GTC突变为CTC,氨基酸密码子由缬氨酸(Val)变为亮氨酸(Leu)，造成RhD蛋白构象改变，血清学显示RhD变异表型。多次测序结果表明此突变位点并不是因为扩增或测序错误引进的，应为为一新生突变。该突变不存在于下面的四个数据库中：单核苷酸多态性数据库(ftp://ftp.ncbi.nih.gov/snp/database/)，千人基因组计划(ftp://ftp-trace.ncbi.nih.gov/1000genomes/ftp/)，Hapmap8数据库(http://hapmap.ncbi.nlm.nih.gov/)，及炎黄数据库(http://yh.genomics.org.cn/)，表明该突变非常罕见，该突变导致了RhD蛋白构象改变，从而导致RhD变异型。而在200例RhD阳性献血员的外周血基因组DNA样本中进行该位点的突变筛查，未发现该突变。
通过上述的分析，证明该方法可以准确测定RHD基因，从而可以更加精准的确定待测者的RhD血型，对于患者制定输血政策具有重要意义。
实施例2：对SNP突变先证者的父母进行遗传验证
1、提取外周血基因组DNA：
在符合国家相关政策规定，并在取样对象同意的基础上，抽取RhD阴性或变异型献血员外周静脉血2-5mL，放入EDTA抗凝管内，-80℃冻存备用；冻存的EDTA抗凝血在室温融化后，取500μL放于离心管，加入等体积TE(pH8.0)，混匀，4℃，10000rpm离心10分钟，弃上清。
加入180μL TE、20μLSDS(10％)、8μL蛋白酶K(l0mg/ml)混匀，置于37℃水浴过夜。从水浴中取出样品，瞬时离心沉淀样本。在反应管中加入等体积的Tris-饱和酚(约300μL)，充分混匀，室温下10000rpm离心10分钟，吸取上清液(约300μL)至一新离心管中。重复酚抽提一次，吸取上清液至一新离心管中。
加入等体积的Tris饱和酚:氯仿混合液(酚、氯仿各150μL)，混匀，室温10000rpm离心10分钟，转移上清液至一新离心管。
加入等体积的Tris饱和酚:氯仿:异戊醇混合液(酚、氯仿、异戊醇各100μL)，混匀，室温10000rpm离心10分钟，转移上清液至一新离心管。
加入l/10体积3mol/L、pH5.2醋酸钠(约30μL)，2倍体积预冷100％乙醇，轻轻混合，可见白色絮状沉淀。室温10000rpm离心10分钟，使DNA沉淀于管底，弃上清。
向DNA沉淀加入70％乙醇，漂洗一次，室温7000rpm离心5分钟，弃上清，置于室温中挥发剩余乙醇，最后加入50μL TE(pH8.0)，4℃过夜溶解DNA。
对提取的DNA行琼脂糖胶电泳，并应用紫外分光光度计在260nm和280nm比色，检测DNA纯度及浓度。
2、直接测序法寻找该先证者父母RHD基因第二外显子的突变
PCR扩增目的片段：反应条件与反应体系：
(1)PCR反应条件：95℃5m；95℃30s，58℃30s，72℃60s，35cycles；72℃5m。
(2)反应体系：(Onelambda公司Fast startTaqpolymerase)
应用该反应体系分别进行先证者父母的基因组DNA模板与扩增引物的扩增反应。
PCR产物测序：采用常规Sanger测序法对上述PCR产物进行测序(图1)，先证者父亲(A)为正常RhD阳性表型，携带RHD全缺失基因；先证者母亲(B)为正常RhD阳性表型，携带突变基因，表现为RHD正常基因与SNP突变基因杂合峰；先证者(C)遗传父亲RHD全缺失基因和母亲SNP突变基因，故表现为RhD变异表型。该突变不存在于下面的四个数据库中：单核苷酸多态性数据库(ftp://ftp.ncbi.nih.gov/snp/database/)，千人基因组计划(ftp://ftp-trace.ncbi.nih.gov/1000genomes/ftp/)，Hapmap8数据库(http://hapmap.ncbi.nlm.nih.gov/)，及炎黄数据库(http://yh.genomics.org.cn/)，表明该突变非常罕见。而在200例RhD阳性献血员的外周血基因组DNA样本中进行该位点的突变筛查，未发现该突变。
上述的实验结果表明，该SNP突变位点能够精准的确定待测者的RhD血型，对于患者制定输血政策具有重要意义。
SEQUENCE LISTING
<110> 青岛市中心血站（青岛市公民义务献血办公室青岛市输血医学研究所）
<120> 一种用于检测RhD变异表型的SNP标记
<130>
<160> 2
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 22
<212> DNA
<213> 1
<400> 1
agcacttcac agagcaggtt ca 22
<210> 2
<211> 22
<212> DNA
<213> 2
<400> 2
actgtgacca cccagcattc ta 22
Claims (10)
1.一种SNP位点，其特征在于，所述的SNP位点是RHD基因编码区域由起始密码子起第739位碱基，是G突变为C。
2.权利要求1所述的SNP标记在制备检测红细胞RhD变异血型的制品中的应用。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的制品为检测试剂盒。
4.权利要求1所述的SNP标记在检测红细胞RhD变异血型中的应用。
5.一种检测红细胞RhD变异血型的方法，其特征在于，所述的方法是通过检测权利要求1所述的SNP位点来完成的。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的方法是通过能扩增权利要求1所述的SNP标记的引物对待检测的血样的DNA进行PCR扩增，扩增产物进行测序后进行基因型分析，确定待检样品是否存在上述的SNP标记。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的引物的序列为SEQ ID NO:1和SEQ IDNO:2。
8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的测序，其使用的测序引物的序列为SEQID NO:1。
9.一种用于检测权利要求1所述的SNP标记的引物对，其特征在于，所述的引物对中的引物的序列分别为SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2。
10.一种用于检测权利要求1所述的SNP标记的测序引物，其特征在于，所述的测序引物的序列为SEQ ID NO:1。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710477922.5A CN107190071B (zh) | 2017-06-22 | 2017-06-22 | 一种用于检测RhD变异表型的SNP标记 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710477922.5A CN107190071B (zh) | 2017-06-22 | 2017-06-22 | 一种用于检测RhD变异表型的SNP标记 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN107190071A true CN107190071A (zh) | 2017-09-22 |
| CN107190071B CN107190071B (zh) | 2019-07-30 |
Family
ID=59878741
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201710477922.5A Expired - Fee Related CN107190071B (zh) | 2017-06-22 | 2017-06-22 | 一种用于检测RhD变异表型的SNP标记 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN107190071B (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108179185A (zh) * | 2018-03-08 | 2018-06-19 | 青岛市中心血站 | 一种用于检测h血型变异型的snp位点 |
| CN109486946A (zh) * | 2019-01-08 | 2019-03-19 | 青岛市中心血站 | 一种用于检测rhd血型变异型的snp位点 |
| CN113249466A (zh) * | 2021-06-01 | 2021-08-13 | 青岛大学附属医院 | 一种引发溶血性输血反应和严重新生儿溶血病的rhce血型基因的snp位点 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106834287A (zh) * | 2017-04-11 | 2017-06-13 | 青岛市中心血站 | 一种用于检测RhD阴性表型的SNP标记 |
-
2017
- 2017-06-22 CN CN201710477922.5A patent/CN107190071B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106834287A (zh) * | 2017-04-11 | 2017-06-13 | 青岛市中心血站 | 一种用于检测RhD阴性表型的SNP标记 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| ANDREA DOESCHER 等: "weak D type 1.1 exemplifies another complexity in weak D genotyping", 《TRANSFUSION》 * |
| CÉDRIC LE MARÉCHAL 等: "Identification of 12 novel RHD alleles in western France by denaturing high-performance liquid chromatography analysis", 《TRANSFUSION》 * |
| YANN FICHOU 等: "Establishment of a medium-throughput approach for the genotyping of RHD variants and report of nine novel rare alleles", 《TRANSFUSION》 * |
| 谢敬文 等: "番禺地区RHD 变异体基因分型研究", 《中国输血杂志》 * |
| 赵桐茂: "R h D 抗原变异体及其在输血中的意义", 《中国输血杂志》 * |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108179185A (zh) * | 2018-03-08 | 2018-06-19 | 青岛市中心血站 | 一种用于检测h血型变异型的snp位点 |
| CN109486946A (zh) * | 2019-01-08 | 2019-03-19 | 青岛市中心血站 | 一种用于检测rhd血型变异型的snp位点 |
| CN109486946B (zh) * | 2019-01-08 | 2021-11-16 | 青岛市中心血站 | 一种用于检测rhd血型变异型的snp位点 |
| CN113249466A (zh) * | 2021-06-01 | 2021-08-13 | 青岛大学附属医院 | 一种引发溶血性输血反应和严重新生儿溶血病的rhce血型基因的snp位点 |
| CN113249466B (zh) * | 2021-06-01 | 2022-04-15 | 青岛大学附属医院 | 一种引发溶血性输血反应和严重新生儿溶血病的rhce血型基因的snp位点 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN107190071B (zh) | 2019-07-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106834502A (zh) | 一种基于基因捕获和二代测序技术的脊髓性肌萎缩症相关基因拷贝数检测试剂盒及方法 | |
| CN109735610B (zh) | 一种用于检测类孟买血型的基因多态性位点 | |
| CN107541561B (zh) | 提高母体外周血中胎儿游离dna浓度的试剂盒、装置及方法 | |
| CN104120132A (zh) | Fbn1基因突变体及其应用 | |
| CN106834287A (zh) | 一种用于检测RhD阴性表型的SNP标记 | |
| CN106048059A (zh) | 一种引发急性溶血性输血反应的a变异型血型的snp位点 | |
| CN104561016A (zh) | 先天性白内障pitx3基因新突变 | |
| CN106521023B (zh) | 一种检测中国人HPFH和δβ-地中海贫血的试剂盒及方法 | |
| CN106636420B (zh) | 一种引发溶血性输血反应的abo血型变异型的snp位点 | |
| CN106282195A (zh) | 基因突变体及其应用 | |
| CN107190071B (zh) | 一种用于检测RhD变异表型的SNP标记 | |
| CN106906220B (zh) | 一种突变的col4a5基因及其应用 | |
| CN106967808A (zh) | 一种用于检测RhD阴性血型的引物组及其应用 | |
| CN109517908A (zh) | 一种引发溶血性输血反应的ab型变异型的snp位点 | |
| CN109486946A (zh) | 一种用于检测rhd血型变异型的snp位点 | |
| CN107312859A (zh) | Aqp5基因在制备检测先天性白内障制品中的应用 | |
| CN104178487A (zh) | Atm基因突变体及其应用 | |
| CN111004849A (zh) | 检测cdh1基因的多个位点突变的引物、方法和试剂盒 | |
| CN108531580A (zh) | C5orf42基因突变体及其应用 | |
| CN104232650A (zh) | 特发性基底节钙化新的致病基因及其编码蛋白质和应用 | |
| CN104099338A (zh) | Myo15a基因突变体及其应用 | |
| CN105274236A (zh) | Abca3基因的应用 | |
| CN106399564A (zh) | Ercc8基因在先天性白内障合并圆锥角膜检测中的应用 | |
| CN104673928B (zh) | 一种遗传性视锥细胞营养不良疾病的致病突变及其检测试剂 | |
| CN106434933A (zh) | Crybb2基因在制备检测先天性白内障制品中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Hu Bin Inventor after: Chi Xiaoyun Inventor after: Zhu Yuli Inventor after: Feng Zhihui Inventor before: Hu Bin |
|
| CB03 | Change of inventor or designer information | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20190730 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |