TWI755612B - 抹草萃取物用於治療乳癌之用途 - Google Patents

Abstract

本發明係提供一種將抹草萃取物用於製備治療乳癌之組合物之用途。具體來說，藉由投予含有一有效劑量之抹草萃取物之組合物至一乳癌患者，係能夠有效抑制乳癌細胞生長，達到治療乳癌或延緩乳癌惡化之功效。

Description

抹草萃取物用於治療乳癌之用途

本發明係有關於一種植物萃取物之用途，特別係指一種抹草萃取物用於治療乳癌之用途。

根據衛生福利部資料顯示，乳癌(breast cancer)發生率在臺灣逐年上升，為女性癌症死亡的第二大原因，且為西方國家女性普遍的疾病之一。乳癌通常發生在乳房腺上皮組織，當乳腺細胞發生病變並變成腫瘤時，即屬於乳腺癌，而乳癌的特徵包括乳房腫塊或形狀改變、乳頭分泌物、皮膚凹陷、皮膚出現紅色鱗屑狀斑塊等。基於乳房含有豐富的血管、淋巴，所以乳癌容易擴散到其他器官，造成癌症快速惡化，因此，早期發現乳癌之病徵對於乳癌之治療及預後是非常重要的。

目前臨床上對於乳癌治療是以採取手術切除為主，再輔以化療、放療或荷爾蒙療法等，惟，大多數患者在半年之後會因癌細胞再度增生而使病情惡化，使得目前臨床上對於乳癌治療仍面臨無法降低復發率及死亡率之問題。雖然目前研究指出降低乳腺管細胞的增生作用被視為是有效預防及治療乳腺癌之方法，但是目前現有治療方法中仍未能提供有效降低乳腺管細胞的增生作用之物質。

本發明之主要目的係在於揭露一種抹草萃取物之用途，其係具有抑制乳癌細胞生長之能力，以達到治療乳癌及延緩乳癌惡化之功效，並且能夠作為臨床治療乳癌之輔助療法，以達到提高乳癌預後及降低復發率之功效。。

本發明之另一目的係在於揭露一種抹草萃取物之用途，其係具有抑制乳癌增生，且對於生物體不會產生嚴重副作用，而能被應用作為醫藥組合物或是輔療品之有效成份。

緣是，為能達成上述目的，本發明係揭露一種將抹草萃取物用於製備治療乳癌之組合物之用途。藉由投予含有一有效劑量之抹草萃取物之組合物至一乳癌患者，係能夠有效抑制乳癌細胞生長，達到治療乳癌或延緩乳癌惡化之功效。

於本發明之另一實施例中，本發明係揭露一種將抹草萃取物用於製備抑制乳癌復發之組合物之用途。藉由投予含有一有效劑量之抹草萃取物之組合物至一已接受乳癌治療之患者，係能夠有效抑制乳癌細胞生長，達到提高乳癌預後及降低復發率之功效。

其中，乳癌治療係指手術治療、放射線治療、雷射治療、賀爾蒙療法或其他臨床上用於治療乳癌之手段。

於本發明之實施例中，該組合物係為一醫藥組合物，意即該醫藥組合物中係包含有一有效劑量之抹草萃取物，及一藥學上可接受之載體或/及賦型劑。

於本發明之實施例中，該組合物係為一食品，意即該食品係包含有一抹草萃取物，及一食品製造上可接受之載體。而該食品得為一營養補充品、一飲品、一餅乾等。

於本發明之實施例中，該抹草萃取物中包含有多酚化合物及類黃酮化合物。

更進一步來說，該抹草萃取物係取一抹草以水作為萃取溶劑，並於高溫下進行萃取後，將所得濾液進行乾燥而得者，其中，萃取溫度以約100℃為佳。

於本發明之實施例中，該抹草萃取物之濃度為至少100μg/mL，其中，又以該抹草萃取物之濃度至為250～500μg/mL為佳，例如250μg/mL、300μg/mL、350μg/mL、400μg/mL、500μg/mL。

於本發明之實施例中，該抹草萃取物係能夠抑制下列至少一蛋白表現：cyclinD1、cyclinE、E2F、cdk2、cdk4、p-Rb/Rb、Bcl-2。

於本發明之實施例中，該抹草萃取物係能夠提升下列至少一蛋白表現：cleaved-casepase 3、CAD。

本發明所揭「乳癌」，係包含乳小葉癌（lobular carcinoma）以及乳腺管癌（ductal carcinoma），其中，乳腺管癌又可分為乳腺管原位癌（ductal carcinoma in-situ）、浸潤性乳腺管癌（infiltrating ductal carcinoma）、髓質癌（medullary carcinoma）、管狀癌（tubular carcinoma）、黏液性癌（mucinous carcinoma）、乳突狀癌（papillary carcinoma）。

本發明所揭「抹草」，其學名為Desmodium caudatum，全日照多年生草本或亞灌木，高約 1-2 公尺，分布在台灣中、北部平地和低海拔山區。

下列實例中所採用的腫瘤細胞株包含有為MCF-7 細胞株（ATCC number: HTB-22）及人類乳腺上皮H184B5F5/ M10 細胞（BCRC Number : 60197），分別來自於為財團法人食品工業發展研究所菌種中心／國家衛生研究院細胞庫(BCRC)。

實例一：製備抹草萃取物

秤300 g 之乾燥抹草，磨成粉末狀後，加入1.5L蒸餾水，以100℃煮1小時，收集抹草水萃取物，再加入1.5 L distilled water重複熬煮第二次，重複以上動作三次，將濾液進行冷凍乾燥，得其粉末即為抹草萃取物。

藉由總多酚及總黃酮之定量分析法分析抹草萃取物中之總多酚及總黃酮含量，結果如表一所示，顯示抹草萃取物之總多酚含量約有20.5 ± 7.7%，總黃酮含量約有17.3 ± 3.5%。

其中，總多酚含量之測定係採Folin-Ciocalteu定量分析法，總黃酮含量之測定係採Jia定量分析法，而上述定量分析方法為本發明所屬技術領域且具通常知識者所所周知的分析方法，故於此不加以贅述。

表一：抹草萃取物成分定量分析結果

組成物	於抹草萃取物中之含量（％）
總多酚	20.5 ± 7.7%
總黃酮	17.3 ± 3.5%

實例二：動物實驗（一）

取以Balb/c 裸鼠20 隻，將MCF-7 細胞以生理食鹽水稀釋細胞數成10⁷ cell/0.1 mL，經皮下注射於各裸鼠大腿外側之皮下脂肪層，於MCF-7 細胞注射後1週，隨機分為3 組，再依下列各組處理方式處理4週，並給予餵食：

第一組：單獨移植腫瘤對照組；

第二組：劑量試驗組，投予本發明所揭抹草萃取物，劑量為200 mg/kg；

第三組：臨床藥物組，投予藥物tamoxifen，劑量為4 mg/kg；

其中，飼料是購於雍立貿易公司之#5058 老鼠專用飼料，將飼料磨成粉與本發明所揭抹草萃取物或藥物Tamoxifen 混均勻，加入飲水搓成團塊餵食。

於試驗開始之每七天測量各組裸鼠體重，結果如第一圖所示，並於試驗4週結束後之次日犧牲各組裸鼠，並分別取其皮下腫瘤塊。

而由第一圖之結果可知，第二組裸鼠體重逐漸增加，於第14天時，其體重較第0天增加3g，且持續餵食投予抹草萃取物至第28天時，體重已增加7g；第三組裸鼠之體重卻隨著投予時間越長而下降。

由第一圖之結果顯示投予本發明所揭抹草萃取物係能夠不影響個體成長發育，維持體重之增加及營養吸收之能力。

實例三：腫瘤尺寸比較

將實例二中自各組裸鼠取出之腫瘤進行稱重，並量其腫瘤大小紀錄之，結果如第二圖至第三圖所示。

由第二圖至第三圖之結果可知，第二組裸鼠於投予本發明所揭抹草萃取物12天後，其腫瘤體積係明顯小於第一組及第三組；於投予本發明所揭抹草萃取物30天後，第二組裸鼠之腫瘤生長幅度係呈現平穩被抑制之狀態，並相較於第一組裸鼠之腫瘤體積來說，第二組裸鼠之腫瘤體積係約小600mm³ ，顯示本發明所揭抹草萃取物確實有抑制及減緩乳癌細胞增生之能力，而能夠達到治療乳癌或減緩乳癌惡化之功效。

更進一步來說，由第一圖至第三圖之結果可知，本發明所揭抹草萃取物不僅能夠抑制腫瘤生長，更能夠維持個體成長發育。

實例四：裸鼠腫瘤組織之血紅素分析

將來自實例二之各組裸鼠的腫瘤組織放入磷酸鹽緩衝液（PBS）中取其溶液後，與Drabkin’s 試劑反應後，所測得的吸收值與此標準曲線比對即可得到血紅素濃度值，結果如第四圖所示。

由第四圖之結果可知第二裸鼠腫瘤組織中的血紅素濃度較第一組裸鼠降低70％，並且，相較於第三組裸鼠來說，亦降低29％。由此結果可推知本發明所揭抹草萃取物係具有阻斷腫瘤血管新生之能力，而能夠達到減緩乳癌惡化或是避免乳癌復發之功效。

實例五：以免疫組織化學染色法分析裸鼠腫瘤組織

將實例二中自各組裸鼠取出之腫瘤經石蠟包埋處理後，進行切片後分別以H&E染色法及TUNEL（Terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling）染色法進行染色，並分別以市售Thermo Pierce® Peroxidase 檢測套組及市售BioVision Apo-BrdU-IHCTM In Situ DNA Fragmentation 分析套組進行檢測，結果如第五圖至第七圖所示。

如第五圖所示，在H&E染色下，第一組裸鼠之的組織切片型態呈現MCF-7 細胞浸潤瀰漫的特性，而第二組及第三組裸鼠之組織則呈現現結節狀，顯示投予本發明所揭抹草萃取物或是藥物tamoxifen都會使癌細胞惡性度降低而不會擴散增生。

再者，由第六圖及第七圖之結果可知，相較於第一組裸鼠，第二組裸鼠及第三組裸鼠組織中之細胞增生蛋白PCNA的表現量下降40％，並且促凋亡蛋白（apoptotic body）表現量上升7倍；而比對第二組裸鼠與第三組裸鼠之組織內細胞增生蛋白PCNA及促凋亡蛋白之表現量，可知顯示本發明所揭抹草萃取物對於抑制腫瘤細胞增生及促進腫瘤細胞凋亡之效果係優於藥物tamoxifen。

由第五圖至第七圖之結果可知，本發明所揭抹草萃取物係能夠有效地抑制腫瘤細胞生長，並使腫瘤細胞走向凋亡，而能夠達到治療乳癌及增加預後之功效。

實例六：西方墨點法分析裸鼠腫瘤組織內細胞週期蛋白之表現

將自實例二各組裸鼠所取出之腫瘤組織進行均質化後，以西方墨點法分析與細胞週期分子相關蛋白之表現，包含有：E2F、p-Rb/Rb、cyclin D1、cyclin E、以及p-p53/p53，以及與細胞凋亡相關蛋白之表現，包含有其Bax/Bcl-2、caspase3 及CAD 蛋白，分析結果分別如第八圖及第九圖所示，

由第八圖之結果可知，於第二組中，p-p53/p53 表現較第一組增加50％，並且cyclin D1& E、E2F 和p-Rb/Rb 表現受到抑制，大約皆下降20%；而將第二組與第三組之分析結果相比，顯示本發明所揭抹草萃取物對於上述細胞週期分子之調控能力優於藥物tamoxifen。

由第九圖之結果可知，相較於第一組或第三組來說，投予本發明所揭抹草萃取物之第二組裸鼠腫瘤組織內之Bax/Bcl-2、caspase3 及CAD 蛋白表現量皆明顯上升，分別較第一組增加約29％、19％及42％，顯示本發明所揭抹草萃取物能夠促進腫瘤細胞凋亡。

由上述結果可知，本發明所揭抹草萃取物係具有調控活體內腫瘤細胞生長週期停滯相關分子表現，以抑制腫瘤增生，進而達到治療癌症之功效。

實例七：動物實驗（二）

將受精16小時後的斑馬魚卵用Pronase 酵素液（2 mg/mL 溶於一次水）進行破殼，置於37℃溫箱反應4至8分鐘（每兩分鐘觀察一次），以一次水終止反應，製造水流使卵殼浮起並吸除，放回28℃培養箱24 小時後，隨機分為5 組。分別加入不同濃度之本發明所揭抹草萃取物做處理，濃度分別為0、100、200、500、1000 μg/mL，放置於28℃恆溫培養箱中生長24小時後，再進行後續分析。

實例八：斑馬魚致死率及心跳速分析

觀察實例七中之斑馬魚胚胎於不同濃度之抹草萃取物下發育24小時的影響，發現於抹草萃取物濃度為100、200g/mL時，斑馬魚之致死率約為9.7％及9.8％，而當抹草萃取物濃度為500、1000g/mL時，斑馬魚之致死率約為53％及93％，如第十圖所示。

請再參閱第十圖，以每分鐘斑馬魚之心跳數與DCE 濃度0 g/mL 相比作為心跳異常率，可知心跳異常率於抹草萃取物濃度0~1000 g/mL間呈鐘型曲線分布，並於濃度200 g/mL時，雖然心跳異常率為45％，但其相對致死率為低。

實例九：斑馬魚血管新生數量分析

斑馬魚胚胎經不同濃度抹草萃取物處理24 小時後，利用福馬林固定後犧牲，藉由解剖顯微鏡可觀察並記錄血管分支之數量，結果如第十一圖及第十二圖所示。

由第十一圖及第十二圖之結果可知，與濃度為0 g/mL之抹草萃取物相比，血管分支數目隨著抹草萃取物濃度之增加而減少。具體來說，相較於濃度為0 g/mL之抹草萃取物，當抹草萃取物濃度為100 g/mL，血管新生數量下降43%，而當抹草萃取物濃度為200 g/mL，血管新生數量下降50％以上，而能夠有效抑制血管新生。

更進一步來說，綜合第十圖至第十二圖之結果可知，本發明所揭抹草萃取物於濃度200 g/mL或以下時，如200 g/mL、100 g/mL，同時具有最低致死率及較佳抑制血管新生之功效。

實例十：細胞培養

取人類乳癌細胞株MCF-7及人類乳腺上皮H184B5F5/ M10 細胞，並分別進行培養，其中，培養條件為：含有2 mM 麩醯胺酸（L-glutamine）、1% 鏈黴素、1% 盤尼西林、0.1 mM 非必須胺基酸以及10% 胎牛血清之培養基；培養於含有5％二氧化碳之37℃環境下；每兩天更換一次培養基。

將經培養之各細胞株進行計數，並種植於培養皿中，進行培養，使細胞生長貼附後，移除培養基且以磷酸鹽緩衝液進行清洗，而後於每一培養孔中加入加入3 mL 飢餓培養基（意即上述培養基中不含10% 胎牛血清），再放置於含5% 二氧化碳、37℃之環境下進行培養，24小時候，移除飢餓培養基，以磷酸鹽緩衝液清洗細胞，更換新的3 mL培養基，再分別加入不同濃度之抹草萃取物進行處理，濃度分別為0、10、50、100、250、500μg/mL，放置於含5%二氧化碳、37℃之環境下進行培養，培養24小時後，利用顯微鏡觀察細胞型態，結果如第十三圖及第十四圖所示；並且，進一步進行細胞存活分析，結果如第十五圖所示，顯示本發明所揭抹草萃取物於濃度100～500 μg/mL時，對於於MCF-7 細胞之生長皆有明顯的抑制情形，但對於H184B5F5/ M10 細胞卻沒有明顯之存活率變化。

而由第十三圖至第十五圖之結果推知，本發明所揭抹草萃取物對於乳腺癌細胞係有專一性之抑制生長作用，意即對於正常乳腺細胞之生長無明顯抑制作用。

實例十一：分析抹草萃取物濃度對於人類乳腺癌MCF-7 細胞生長週期之影響

如同前述實例中所述，將MCF-7 細胞經由不同濃度之抹草萃取物處理24 小時後，以流式細胞儀分析各個細胞週期之分佈情形，並進行量化，結果如第十六圖所示。

由第十六圖B之結果可知，相較於未以抹草萃取物處理之細胞來說，有以抹草萃取物處理之細胞於G0/G1 時期之數量係明顯上升；於抹草萃取物於濃度250 以及500 μg/mL時，則有明顯升高20%的G0/G1 期停滯（arrest）之表現。由第十六圖C之結果可知，當抹草萃取物於濃度為250 以及500 μg/mL時，對於MCF-7 細胞之生長確實有明顯之抑制作用。更進一步來說，於抹草萃取物濃度為250 或500 μg/mL，於24或48小時之細胞生長曲線街不再生長。

因此，綜合第十三圖至第十六圖之結果顯示，本發明所揭抹草萃取物於濃度100～500μg/mL，如100、250、500μg/mL，係具有抑制腫瘤細胞生長之能力，並且又以於濃度為250、500μg/mL時，具有促使G0/G1 細胞週期停滯之能力。換言之，本發明所揭抹草萃取物於濃度100～500μg/mL具有良好抑制腫瘤細胞生長之能力，而能達到治療或延緩乳癌之功效，其中抹草萃取物之濃度為250μg/mL，其係為抑制腫瘤細胞生長之最低濃度。

實例十二：分析抹草萃取物於不同時間對於人類乳腺癌MCF-7 細胞生長週期之影響

以不同濃度之抹草萃取物：0、100、250μg/mL處理MCF-7 細胞反應0、24和48 小時後，進一步以流式細胞儀分析抹草萃取物在不同時間點之細胞週期性變化，結果如第十七圖所示。

由第十七圖之結果可知，隨著抹草萃取物之濃度增加，反應24小時後之細胞處於生長週期G0/G1期之數量增加越明顯（如第十七圖A），並且由第十七圖B可知，於反應24小時後，有明顯G0/G1期停滯的表現，於反應48小時後無明顯差異。

由第十六圖及第十七圖之結果證實，本發明所揭抹草萃取物具有誘發細胞週期於G0/G1 期停滯作用進而抑制腫瘤生長。

實例十三：分析MCF-7 細胞生長週期分子機制

將MCF-7 細胞分別以濃度：0、100、250μg/mL之抹草萃取物處理24小時，並於24小時時間點收集細胞裂解液。

先利用細胞核質分離以及西方墨點法分析細胞週期中週期素（cyclin）、細胞週期蛋白依賴性激酶（cyclin dependent kinase，cdk），以及細胞週期蛋白依賴性激酶抑制者（inhibitor of cdk，cki）三者之調控情形，結果可觀察到腫瘤抑制基因p-p53/p53 隨著抹草萃取物濃度至250μg/mL，其表現量上升80%（如第十八圖A），並由細胞質漸漸進入細胞核影響細胞週期蛋白cki，包含p27和p21隨著抹草萃取物濃度而有表現增加。而由第十八圖B之結果可知，抹草萃取物之濃度對於p16 蛋白表現並無顯著差異，顯示主要路徑並非透過抑制G0/G1之前期。又，如第十八圖C所示，cyclinD1以及cyclinE 蛋白表現皆受到抹草萃取物處理而降低，其中，經抹草萃取物濃度為250μg/mL後，cyclinD1以及cyclinE 蛋白表現分別下降32% 以及21%，而cyclinA（S 和G2 期調控蛋白）表現量則並不具明顯統計意義。由上述結果可知，抹草萃取物造成MCF-7 細胞週期G0/G1 後期停滯作用。

請參第十八圖D，可知抹草萃取物於濃度250μg/mL 時，細胞中cdk2 以及cdk4蛋白表現量分別明顯下降35%以及70%。由第十八圖E之結果可知，經抹草萃取物處理之細胞中，細胞週期轉錄因子E2F表現量及其調控蛋白p-Rb/Rb 比值皆下降，顯示Rb被去活化（p-Rb）之比率下降，大部分之Rb可能與E2F 形成複合體，使游離之E2F 處於低表現狀態，無法促進細胞週期進行。

綜合第十八圖A至第十八圖E之結果證實本發明所揭抹草萃取物係透過調節p21、p27 和p-p53/p53，進而抑制cyclinD1、cyclinE、cdk2、cdk4、E2F、p-Rb/Rb 等表現，促使細胞週期G0/G1 於後期停滯，以達到治療及延緩乳癌之功效。

實例十四：分析抹草萃取物對MCF-7 細胞生長週期蛋白複合物表現之調控

利用免疫沉澱法分析在細胞週期相關調控分子中蛋白彼此間之結合能力，結果如第十九圖A至第十九圖D所示。

由第十九圖A至第十九圖D可知，隨著抹草萃取物濃度上升至250μg/mL，可促使MCF-7 細胞中Rb/E2F 複合體 表現量增加24%、cyclin D1/cdk4 以及cyclin E/cdk2 之結合表現則分別下降26%以及32%。

由此結果推知，本發明所揭抹草萃取物係藉由增加p53 蛋白磷酸化、p21和p27之表現而抑制cyclinD1/cdk4 和cyclinE/cdk2 複合體之活化，以增強Rb/E2F 之結合能力，進而導致p-Rb 和游離E2F之表現受到抑制，促使細胞週期停滯。

實例十五：分析抹草萃取物誘導MCF-7 細胞凋亡作用

將MCF-7 細胞經不同濃度之本發明所揭抹草萃取物處理24 小時後，藉由流式細胞儀以annexin V-PE apoptosis assay 分析早期細胞凋亡表現，結果如第二十圖所示。

由第二十圖A之結果可知，隨著抹草萃取物處理濃度上升，MCF-7 細胞呈現進入早期和晚期細胞凋亡階段皆有明顯增加之情形，並由第二十圖B之統計分析結果得知細胞凋亡之比率明顯增加。由此結果顯示，本發明所揭抹草萃取物於濃度為10~250 μg/mL時，會誘導乳癌細胞產生凋亡作用，進而達到治療乳癌之功效。

實例十六：分析抹草萃取物對MCF-7 細胞凋亡分子機制之影響

利用西方墨點法分析促凋亡關鍵分子cleaved-casepase 3 及其下游CAD（caspase activated DNase）之蛋白表現量，結果如第二十一圖所示。

由第二十一圖A之結果可知，cleaved-casepase 3 及其下游CAD之表現量係隨著所處理之抹草萃取物濃度上升而增加，並於抹草萃取物濃度達到250μg/mL時，cleaved-casepase 3 及其下游CAD之表現量分別增加42%及18%；而由第二十一圖B之結果可知，MCF-7 細胞內Bcl-2表現量明顯下降。

由第二十一圖A及第二十一圖B之結果顯示，本發明所揭抹草萃取物能夠使乳癌細胞行經Bax/ Bcl-2 誘導凋亡路徑，進而活化caspase3 和CAD，使細胞產生凋亡現象，進而達到治療乳癌之功效。

無

第一圖係為各組裸鼠之重量變化圖。 第二圖係為各組裸鼠腫瘤組織圖。 第三圖係為各組裸鼠腫瘤體積之統計分析結果。 第四圖係為各組裸鼠腫瘤組織血紅素濃度之分析統計結果。 第五圖係為各組裸鼠腫瘤組織切片經染色後之結果。 第六圖係為分析各組裸鼠腫瘤組織中細胞增生蛋白PCNA表現量之結果。 第七圖係為分析各組裸鼠腫瘤組織中促凋亡蛋白（apoptotic body）表現量之結果。 第八圖係為檢測與細胞週期分子相關蛋白之表現及將之進行統計分析之結果。 第九圖係為檢測與細胞凋亡相關蛋白之表現及將之進行統計分析之結果。 第十圖係為分析經不同濃度之抹草萃取物處理的斑馬魚，其致死率及心跳變異率之結果。 第十一圖係為以解剖顯微鏡可觀察經不同濃度之抹草萃取物處理的斑馬魚，計算其血管分支數量之結果。 第十二圖係為統計分析經不同濃度之抹草萃取物處理的斑馬魚之血管分支數量的結果。 第十三圖係為MCF-7細胞以不同濃度之抹草萃取物進行培養後之結果。 第十四圖係為H184B5F5/ M10細胞以不同濃度之抹草萃取物進行培養後之結果。 第十五圖係顯示MCF-7細胞及H184B5F5/ M10細胞分別以不同濃度之抹草萃取物培養後之細胞存活率。 第十六圖A係顯示經由不同濃度之抹草萃取物處理之MCF-7 細胞，以流式細胞儀分析各個細胞週期之結果。 第十六圖B係顯示經由不同濃度之抹草萃取物處理之MCF-7 細胞於G0/G1 時期之細胞數量比率。 第十六圖C係顯示經由不同濃度之抹草萃取物處理之MCF-7 細胞的細胞生長情形。 第十七圖A係顯示經由不同濃度之抹草萃取物處理不同時間之MCF-7 細胞，以流式細胞儀分析各個細胞週期之結果。 第十七圖B係顯示經由不同濃度之抹草萃取物處理不同時間之MCF-7 細胞於G0/G1 時期之細胞數量比率。 第十八圖A係顯示經由不同濃度之抹草萃取物處理之MCF-7 細胞，其內p-p53/p53之表現及表現量。 第十八圖B係顯示經由不同濃度之抹草萃取物處理之MCF-7 細胞，其內細胞週期蛋白依賴性激酶之表現及表現量。 第十八圖C係顯示經由不同濃度之抹草萃取物處理之MCF-7 細胞，其內細胞週期中週期素之表現及表現量。 第十八圖D係顯示經由不同濃度之抹草萃取物處理之MCF-7 細胞，其內細胞週期蛋白依賴性激酶抑制者之表現及表現量。 第十八圖E係顯示經由不同濃度之抹草萃取物處理之MCF-7 細胞，其內E2F、p-Rb、Rb之表現及表現量。 第十九圖A係顯示經由不同濃度之抹草萃取物處理之MCF-7 細胞，其內Rb/E2F 複合體之表現。 第十九圖B係顯示經由不同濃度之抹草萃取物處理之MCF-7 細胞，其內cyclin D1/cdk4之表現。 第十九圖C係顯示經由不同濃度之抹草萃取物處理之MCF-7 細胞，其內cyclin E/cdk2之表現。 第十九圖D係為第十九圖A至第十九圖C之定量結果。 第二十圖A係以annexin V-PE apoptosis assay 分析經由不同濃度之抹草萃取物處理之MCF-7 細胞之早期細胞凋亡表現。 第二十圖B係為第二十圖A之量化結果。 第二十一圖A係顯示經由不同濃度之抹草萃取物處理之MCF-7 細胞內促凋亡關鍵分子cleaved-casepase 3 及其下游CAD之表現及表現量。 第二十一圖B係顯示經由不同濃度之抹草萃取物處理之MCF-7 細胞內Bax、Bcl-2之表現及表現量。

無

Claims (8)

1. 一種將抹草萃取物用於製備治療乳癌或抑制乳癌復發之組合物之用途，其中，該抹草萃取物係取一抹草以水作為萃取溶劑，並於100℃下進行萃取後，將所得濾液進行乾燥而得者。
2. 如請求項1所述用途，其中，該抹草萃取物中包含有多酚化合物及類黃酮化合物。
3. 如請求項1所述用途，其中，該抹草萃取物之濃度至少為100μg/mL。
4. 依據申請專利範圍第1、2或3項所述用途，其中，該組合物係為一食品。
5. 依據申請專利範圍第1、2或3項所述用途，其中，該組合物係為一醫藥組合物。
6. 依據申請專利範圍第3項所述用途，其中，該抹草萃取物之濃度至為250~500μg/mL。
7. 依據申請專利範圍第1、2或3項所述用途，其中，該抹草萃取物係能夠抑制下列至少一蛋白表現：cyclinD1、cyclinE、E2F、cdk2、cdk4、p-Rb/Rb、Bcl-2。
8. 依據申請專利範圍第1、2或3項所述用途，其中，該抹草萃取物係能夠提升下列至少一蛋白表現：cleaved-casepase 3、CAD。

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