CN104223056B - 龟甲胶在制备治疗肿瘤的药物中的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了龟甲胶在制备抗肿瘤的药物中的用途。本发明龟甲胶能有效抑制肿瘤细胞生长，可用于制备抗肿瘤或者肿瘤辅助治疗的药物、特殊膳食食品或保健食品药物，副作用小，应用前景良好。
Description
技术领域
本发明涉及龟甲胶在制备治疗肿瘤的药物中的用途。
背景技术
动物胶原类物质，包括动物皮、鳞、甲壳、角，是动物的基本组成成分，是动物及人体组织结构的基础，包括空腔器官、血管、骨骼、脏器等，其分子结构是进化中最保守的，因而在人类应用中是最不易引起过敏反应的一类物质，在我国中醫药中被广泛应用，如取自驴皮的阿胶、龟甲动物的龟甲胶、鹿类动物的鹿角胶等，均广泛用于我国中醫药散结化瘀、创伤修复、补血养颜等方面。
龟甲胶，性凉，味咸、甘，归肝、肾、心经，有滋阴，养血，止血之功效，用于阴虚潮热，骨蒸盗汗，腰膝酸软，血虚萎黄，崩漏带下。现代研究表明，龟甲胶的主要成分是蛋白质、骨胶原、脂肪、钙、磷、肽类和多种酶以及多种人体必需微量元素，还富含天门冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸等多种氨基酸，有抗凝血、增加冠脉含量、提高耐缺氧功能、促进免疫等作用，还可以延缓衰老。
发明内容
本发明的目的在于提供龟甲胶在制备治疗抗肿瘤药物中的新用途。
本发明提供了龟甲胶在制备抗肿瘤的特殊膳食食品、药品或者保健品中的用途。
本发明还提供了龟甲胶在制备用于肿瘤辅助治疗的特殊膳食食品、药品或者保健品中的用途。
特殊膳食营养品，是指在肿瘤治疗过程中的具有营养支持作用的营养食品。
其中，所述肿瘤是肉瘤或者肺癌。
其中，所述龟甲胶按照如下方法制备：将龟甲漂泡洗净，分次水煎，滤过，合并滤液，静置，滤去胶液，浓缩至稠膏状，冷凝，切块，晾干，即得。
本发明还提供了一种抗肿瘤或者用于肿瘤辅助治疗的药品、特殊膳食食品或者保健品，它是以龟甲胶为活性成分，加上药品、食品保或健食品上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。
其中，所述制剂为液体制剂、固体制剂或半固体制剂。
其中，所述龟甲胶按照如下方法制备：将龟甲漂泡洗净，分次水煎，滤过，合并滤液，静置，滤去胶液，浓缩至稠膏状，冷凝，切块，晾干，即得。
本发明龟甲胶可以有效抑制肿瘤的生长，对肉瘤和肺癌的疗效确切，副作用小，为临床抗肿瘤或肿瘤辅助治疗的药物、特殊膳食食品或保健食品提供了一种新的选择，应用前景良好。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1龟甲胶组与对照组的实验解剖图
图2龟甲胶组与对照组的肿瘤（肉瘤）大小比对图
图3实体肿瘤生命延长实验（本发明龟甲胶组）
图4实体肿瘤生命延长实验（对照组）
图5龟甲胶组与对照组小鼠外观比对图
图6龟甲胶组与对照组的肿瘤（肺癌）外观对照
图7龟甲胶实验组和对照组肿瘤组织
具体实施方式
实施例1 本发明龟甲胶的制备
本发明龟甲胶由湖北老中醫制药有限公司提供，也可按照《中华人民共和国药典(2010年版)》第169页龟甲胶的制法制备：将龟甲漂泡洗净，分次水煎，滤过，合并滤液（或加入白矾细粉少许），静置，滤去胶液，浓缩（可加适量的黄酒、冰糖及豆油）至稠膏状，冷凝，切块，晾干，即得。
以下通过药效试验证明本发明的有益效果：
实施例1 本发明龟甲胶的抗肉瘤实验
1、材料和方法
动物：昆明种小鼠，体重20克左右，雌性，无特定病原体(SPF)条件下饲养，购自湖北省疾病预防控制中心；
瘤种：S180肉瘤，来自武汉大学保种中心。
营养物来源：
龟甲胶：湖北老中醫制药有限公司（按照《中华人民共和国药典(2010年版)》第169页龟甲胶的制法制备）提供。
2、试验方法：
（1）实体肿瘤单剂量抑瘤实验
取上述昆明种小鼠20只，称重，随机分成两组，一组为对照组，生理盐水灌胃；一组为龟甲胶组。将龟甲胶溶解在生理盐水溶液中，形成10%浓度的龟甲胶溶液。
对照组口服生理盐水，龟甲胶组口服10%浓度的龟甲胶溶液，每天按照0.2ml（龟甲胶组相当于接种20mg龟甲胶/天.只鼠）剂量分别灌胃，前肢腋下接种S180肿瘤；同时灌胃十天后处死动物，解剖，观察实体肿瘤生长状况，称重瘤体。
（2）实体肿瘤量效关系实验
取上述昆明种小鼠40只，称重，完全随机分成4组，分为对照组和3个龟甲胶组。将龟甲胶溶解在生理盐水溶液中，形成10%、5%、2.5%浓度的龟甲胶溶液。
对照组口服生理盐水，3个龟甲胶组分别口服10%、5%、2.5%浓度的龟甲胶溶液，每天按照0.2ml（3个龟甲胶组相当于分别接种20mg、10mg和5mg龟甲胶/天.只鼠）三个剂量要求分别灌胃，前肢腋下接种S180肿瘤；同时灌胃十天后处死动物，解剖，观察肿瘤生长状况，称重瘤体。
（3）实体肿瘤生命延长实验
取上述昆明种小鼠20只，称重，随机分成两组，一组为对照组，生理盐水灌胃；一组为龟甲胶组。将龟甲胶溶解在生理盐水溶液中，形成10%浓度的龟甲胶溶液。
对照组口服生理盐水，龟甲胶组口服10%浓度的龟甲胶溶液，每天按照0.2ml（龟甲胶组相当于接种20mg龟甲胶/天.只鼠）剂量分别灌胃，前肢腋下接种S180肿瘤；同时灌胃十天，之后不再给药，按常规饲养，记录小鼠生存状况，60天后处死未死亡动物，解剖，观察实体肿瘤生长状况，称重瘤体。
抑瘤率计算
统计学处理
数据以或％表示，用SAS软件包中的方差分析(ANOVA)和直线回归分析处理数据，均为双侧检验，α取0.05。
3、实验结果
（1）动物实体肿瘤实验抑瘤结果
实验结果如下表1和图1所示：
表1 动物实体肿瘤实验抑瘤结果
如图1～2所示，对照组肿块生长旺盛，肿块组织周边血管丰富，呈充血状；本发明龟甲胶组，肿块组织生长状况一般，外观大部分呈淡淡白色，周边血管不丰富，有的肿块在植入处呈分散状或者扁平状，外部包膜整齐无血管分布。
如表1所示，龟甲胶组小鼠的体重与对照组无明显差别，而瘤重则非常显著低于对照组，对肉瘤的抑瘤率为77.75%，说明本发明龟甲胶可以有效抑制肉瘤的生长。
（2）实体肿瘤量效关系实验：
实验结果如下表2和图2所示：
表2 抑瘤作用动物数(n)体重(g)
根据表2可以看出，各组的体重无明显差别，而不同剂量的龟甲胶组的瘤重则非常显著低于对照组，对肉瘤的抑瘤率分别为79.54%，69.45%，66.45%，说明本发明龟甲胶在不同剂量下均可以有效抑制肉瘤的生长，并且，随着给药剂量增加，抗肿瘤效果增强，呈明显的剂量效应关系。
（3）实体肿瘤生命延长实验：
实验结果如下表3和图3～4所示。
表3 生命延长实验结果
如表4和图3～4所示，处理2个月后，对照组有6只死亡，剩余的4只小鼠的肿瘤明显，而本发明龟甲胶组中，10只小鼠仅2只死亡，其余8只中有5只小鼠的肿瘤完全消失，一只小鼠的肿瘤非常小，重量仅0.27g，说明本发明龟甲胶可以有效抑制肉瘤生长，提高小鼠存活率。
实验结果说明，本发明龟甲胶能够有效抑制肉瘤细胞的生长，治疗肉瘤，可用于制备抗肿瘤或者肿瘤辅助治疗的药物、特殊膳食食品或保健食品。
实施例2 本发明龟甲胶的抗肺癌实验
1、材料和方法
动物：BALB／C裸鼠30只，3～4周龄，体质量15g左右；购自武汉大学实验动物中心
瘤种：人肺癌A549细胞株，购自武汉大学保种中心。
营养物来源：
龟甲胶：湖北老中醫制药有限公司（按照《中华人民共和国药典(2010年版)》第169页龟甲胶的制法制备）提供。
2、试验方法：
（1）对老鼠实体肿瘤生长的抑制作用
在每只裸鼠右前腋皮下接种(1x107／ml)对数生长期A549细胞株0.2m1，待移植瘤直径约5mm时，取20只荷瘤裸鼠随机分成4组开始实验。分为对照组、龟甲胶组。将龟甲胶溶解在生理盐水中，制成10%浓度的龟甲胶溶液。
对照组接种生理盐水，龟甲胶组口服10%浓度的龟甲胶溶液，每天按照0.2ml（龟甲胶组相当于接种20mg龟甲胶/天.只鼠）剂量要求分别灌胃，灌胃十天后停止给药，一周后处死动物，解剖，观察肿瘤生长状况，游标卡尺测量移植瘤最长径(a)和最短径(b)，按公式(V=0.52×ab2)计算体积；称重瘤体。
抑瘤率计算：
肿瘤组织微血管密度计数：
取各组部分移植瘤组织10％甲醛固定。石蜡包埋．4μm连续切片，分别做常规HE染色和CD34免疫组化染色，移植瘤石腊标本4斗m切片2张，常规脱腊。组织抗原修复采用微波抗原修复法，CD34抗工作浓度均为l：50：具体染色步骤按照试剂盒说明书操作。按Weidner微血管计数法计算微血管数目。本过程采用盲法．由两位经验丰富的病理专家同时计数3次，取均值作为MVD值。
统计学处理：数据以或％表示，用SAS软件包中的方差分析(ANOVA)和直线回归分析处理数据，均为双侧检验，α取0.05。
3、实验结果
实验结果如表4所示：
表4 龟甲胶的抑瘤作用
如表4所示，龟甲胶组小鼠的体重与对照组无明显差别，而瘤重则非常显著低于对照组，对肺癌的抑制率为60.82%。
如图5～6所示，对照组小鼠肿瘤明显，体积大，生长旺盛，肿块组织周边血管丰富，呈充血状；而本发明龟甲胶组小鼠的肿瘤不明显，体积较小，外观大部分呈淡淡白色，周边血管不丰富。
如图7镜下观察结果所示，对照组肿瘤组织中的血管丰富，而本发明龟甲胶组的血管数量少，肿瘤组织微血管密度明显降低。
实验结果说明，本发明龟甲胶可以有效抑制肺癌细胞的增殖，减少肿瘤组织中血管数量，能够有效治疗肺癌，可用于制备抗肿瘤或肿瘤辅助治疗的药物、特殊膳食食品或保健食品。
综上，本发明龟甲胶可以有效抑制肿瘤的生长，对肉瘤和肺癌的疗效确切，副作用小，可用于制备抗肿瘤药物或者肿瘤的辅助治疗，应用前景良好。
Claims (4)
1.龟甲胶作为唯一活性成分在制备抑制肿瘤血管生成的抗肺癌的药物中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述龟甲胶按照如下方法制备：将龟甲漂泡洗净，分次水煎，滤过，合并滤液，静置，滤去胶液，浓缩至稠膏状，冷凝，切块，晾干，即得。
3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述药品是以龟甲胶为唯一活性成分，加上药品上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。
4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于：所述制剂为液体制剂、固体制剂或半固体制剂。
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