CN104223056A - 龟甲胶在制备治疗肿瘤的药物中的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了龟甲胶在制备抗肿瘤的药物中的用途。本发明龟甲胶能有效抑制肿瘤细胞生长，可用于制备抗肿瘤或者肿瘤辅助治疗的药物、特殊膳食食品或保健食品药物，副作用小，应用前景良好。
Description
技术领域
本发明涉及龟甲胶在制备治疗肿瘤的药物中的用途。
背景技术
动物胶原类物质，包括动物皮、鳞、甲壳、角，是动物的基本组成成分，是动物及人体组织结构的基础，包括空腔器官、血管、骨骼、脏器等，其分子结构是进化中最保守的，因而在人类应用中是最不易引起过敏反应的一类物质，在我国中醫药中被广泛应用，如取自驴皮的阿胶、龟甲动物的龟甲胶、鹿类动物的鹿角胶等，均广泛用于我国中醫药散结化瘀、创伤修复、补血养颜等方面。
龟甲胶，性凉，味咸、甘，归肝、肾、心经，有滋阴，养血，止血之功效，用于阴虚潮热，骨蒸盗汗，腰膝酸软，血虚萎黄，崩漏带下。现代研究表明，龟甲胶的主要成分是蛋白质、骨胶原、脂肪、钙、磷、肽类和多种酶以及多种人体必需微量元素，还富含天门冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸等多种氨基酸，有抗凝血、增加冠脉含量、提高耐缺氧功能、促进免疫等作用，还可以延缓衰老。
发明内容
本发明的目的在于提供龟甲胶在制备治疗抗肿瘤药物中的新用途。
本发明提供了龟甲胶在制备抗肿瘤的特殊膳食食品、药品或者保健品中的用途。
本发明还提供了龟甲胶在制备用于肿瘤辅助治疗的特殊膳食食品、药品或者保健品中的用途。
特殊膳食营养品，是指在肿瘤治疗过程中的具有营养支持作用的营养食品。
其中，所述肿瘤是肉瘤或者肺癌。
其中，所述龟甲胶按照如下方法制备：将龟甲漂泡洗净，分次水煎，滤过，合并滤液，静置，滤去胶液，浓缩至稠膏状，冷凝，切块，晾干，即得。
本发明还提供了一种抗肿瘤或者用于肿瘤辅助治疗的药品、特殊膳食食品或者保健品，它是以龟甲胶为活性成分，加上药品、食品保或健食品上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。
其中，所述制剂为液体制剂、固体制剂或半固体制剂。
其中，所述龟甲胶按照如下方法制备：将龟甲漂泡洗净，分次水煎，滤过，合并滤液，静置，滤去胶液，浓缩至稠膏状，冷凝，切块，晾干，即得。
本发明龟甲胶可以有效抑制肿瘤的生长，对肉瘤和肺癌的疗效确切，副作用小，为临床抗肿瘤或肿瘤辅助治疗的药物、特殊膳食食品或保健食品提供了一种新的选择，应用前景良好。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1龟甲胶组与对照组的实验解剖图
图2龟甲胶组与对照组的肿瘤（肉瘤）大小比对图
图3实体肿瘤生命延长实验（本发明龟甲胶组）
图4实体肿瘤生命延长实验（对照组）
图5龟甲胶组与对照组小鼠外观比对图
图6龟甲胶组与对照组的肿瘤（肺癌）外观对照
图7龟甲胶实验组和对照组肿瘤组织
具体实施方式
实施例1 本发明龟甲胶的制备
本发明龟甲胶由湖北老中醫制药有限公司提供，也可按照《中华人民共和国药典(2010年版)》第169页龟甲胶的制法制备：将龟甲漂泡洗净，分次水煎，滤过，合并滤液（或加入白矾细粉少许），静置，滤去胶液，浓缩（可加适量的黄酒、冰糖及豆油）至稠膏状，冷凝，切块，晾干，即得。
以下通过药效试验证明本发明的有益效果：
实施例1 本发明龟甲胶的抗肉瘤实验
1、材料和方法
动物：昆明种小鼠，体重20克左右，雌性，无特定病原体(SPF)条件下饲养，购自湖北省疾病预防控制中心；
瘤种：S180肉瘤，来自武汉大学保种中心。
营养物来源：
龟甲胶：湖北老中醫制药有限公司（按照《中华人民共和国药典(2010年版)》第169页龟甲胶的制法制备）提供。
2、试验方法：
（1）实体肿瘤单剂量抑瘤实验
取上述昆明种小鼠20只，称重，随机分成两组，一组为对照组，生理盐水灌胃；一组为龟甲胶组。将龟甲胶溶解在生理盐水溶液中，形成10%浓度的龟甲胶溶液。
对照组口服生理盐水，龟甲胶组口服10%浓度的龟甲胶溶液，每天按照0.2ml（龟甲胶组相当于接种20mg龟甲胶/天.只鼠）剂量分别灌胃，前肢腋下接种S180肿瘤；同时灌胃十天后处死动物，解剖，观察实体肿瘤生长状况，称重瘤体。
（2）实体肿瘤量效关系实验
取上述昆明种小鼠40只，称重，完全随机分成4组，分为对照组和3个龟甲胶组。将龟甲胶溶解在生理盐水溶液中，形成10%、5%、2.5%浓度的龟甲胶溶液。
对照组口服生理盐水，3个龟甲胶组分别口服10%、5%、2.5%浓度的龟甲胶溶液，每天按照0.2ml（3个龟甲胶组相当于分别接种20mg、10mg和5mg龟甲胶/天.只鼠）三个剂量要求分别灌胃，前肢腋下接种S180肿瘤；同时灌胃十天后处死动物，解剖，观察肿瘤生长状况，称重瘤体。
（3）实体肿瘤生命延长实验
取上述昆明种小鼠20只，称重，随机分成两组，一组为对照组，生理盐水灌胃；一组为龟甲胶组。将龟甲胶溶解在生理盐水溶液中，形成10%浓度的龟甲胶溶液。
对照组口服生理盐水，龟甲胶组口服10%浓度的龟甲胶溶液，每天按照0.2ml（龟甲胶组相当于接种20mg龟甲胶/天.只鼠）剂量分别灌胃，前肢腋下接种S180肿瘤；同时灌胃十天，之后不再给药，按常规饲养，记录小鼠生存状况，60天后处死未死亡动物，解剖，观察实体肿瘤生长状况，称重瘤体。
抑瘤率计算
统计学处理
数据以或％表示，用SAS软件包中的方差分析(ANOVA)和直线回归分析处理数据，均为双侧检验，α取0.05。
3、实验结果
（1）动物实体肿瘤实验抑瘤结果
实验结果如下表1和图1所示：
表1 动物实体肿瘤实验抑瘤结果
如图1～2所示，对照组肿块生长旺盛，肿块组织周边血管丰富，呈充血状；本发明龟甲胶组，肿块组织生长状况一般，外观大部分呈淡淡白色，周边血管不丰富，有的肿块在植入处呈分散状或者扁平状，外部包膜整齐无血管分布。
如表1所示，龟甲胶组小鼠的体重与对照组无明显差别，而瘤重则非常显著低于对照组，对肉瘤的抑瘤率为77.75%，说明本发明龟甲胶可以有效抑制肉瘤的生长。
（2）实体肿瘤量效关系实验：
实验结果如下表2和图2所示：
表2 抑瘤作用动物数(n)体重(g)
根据表2可以看出，各组的体重无明显差别，而不同剂量的龟甲胶组的瘤重则非常显著低于对照组，对肉瘤的抑瘤率分别为79.54%，69.45%，66.45%，说明本发明龟甲胶在不同剂量下均可以有效抑制肉瘤的生长，并且，随着给药剂量增加，抗肿瘤效果增强，呈明显的剂量效应关系。
（3）实体肿瘤生命延长实验：
实验结果如下表3和图3～4所示。
表3 生命延长实验结果
如表4和图3～4所示，处理2个月后，对照组有6只死亡，剩余的4只小鼠的肿瘤明显，而本发明龟甲胶组中，10只小鼠仅2只死亡，其余8只中有5只小鼠的肿瘤完全消失，一只小鼠的肿瘤非常小，重量仅0.27g，说明本发明龟甲胶可以有效抑制肉瘤生长，提高小鼠存活率。
实验结果说明，本发明龟甲胶能够有效抑制肉瘤细胞的生长，治疗肉瘤，可用于制备抗肿瘤或者肿瘤辅助治疗的药物、特殊膳食食品或保健食品。
实施例2 本发明龟甲胶的抗肺癌实验
1、材料和方法
动物：BALB／C裸鼠30只，3～4周龄，体质量15g左右；购自武汉大学实验动物中心
瘤种：人肺癌A549细胞株，购自武汉大学保种中心。
营养物来源：
龟甲胶：湖北老中醫制药有限公司（按照《中华人民共和国药典(2010年版)》第169页龟甲胶的制法制备）提供。
2、试验方法：
（1）对老鼠实体肿瘤生长的抑制作用
在每只裸鼠右前腋皮下接种(1x107／ml)对数生长期A549细胞株0.2m1，待移植瘤直径约5mm时，取20只荷瘤裸鼠随机分成4组开始实验。分为对照组、龟甲胶组。将龟甲胶溶解在生理盐水中，制成10%浓度的龟甲胶溶液。
对照组接种生理盐水，龟甲胶组口服10%浓度的龟甲胶溶液，每天按照0.2ml（龟甲胶组相当于接种20mg龟甲胶/天.只鼠）剂量要求分别灌胃，灌胃十天后停止给药，一周后处死动物，解剖，观察肿瘤生长状况，游标卡尺测量移植瘤最长径(a)和最短径(b)，按公式(V=0.52×ab2)计算体积；称重瘤体。
抑瘤率计算：
肿瘤组织微血管密度计数：
取各组部分移植瘤组织10％甲醛固定。石蜡包埋．4μm连续切片，分别做常规HE染色和CD34免疫组化染色，移植瘤石腊标本4斗m切片2张，常规脱腊。组织抗原修复采用微波抗原修复法，CD34抗工作浓度均为l：50：具体染色步骤按照试剂盒说明书操作。按Weidner微血管计数法计算微血管数目。本过程采用盲法．由两位经验丰富的病理专家同时计数3次，取均值作为MVD值。
统计学处理：数据以或％表示，用SAS软件包中的方差分析(ANOVA)和直线回归分析处理数据，均为双侧检验，α取0.05。
3、实验结果
实验结果如表4所示：
表4 龟甲胶的抑瘤作用
如表4所示，龟甲胶组小鼠的体重与对照组无明显差别，而瘤重则非常显著低于对照组，对肺癌的抑制率为60.82%。
如图5～6所示，对照组小鼠肿瘤明显，体积大，生长旺盛，肿块组织周边血管丰富，呈充血状；而本发明龟甲胶组小鼠的肿瘤不明显，体积较小，外观大部分呈淡淡白色，周边血管不丰富。
如图7镜下观察结果所示，对照组肿瘤组织中的血管丰富，而本发明龟甲胶组的血管数量少，肿瘤组织微血管密度明显降低。
实验结果说明，本发明龟甲胶可以有效抑制肺癌细胞的增殖，减少肿瘤组织中血管数量，能够有效治疗肺癌，可用于制备抗肿瘤或肿瘤辅助治疗的药物、特殊膳食食品或保健食品。
综上，本发明龟甲胶可以有效抑制肿瘤的生长，对肉瘤和肺癌的疗效确切，副作用小，可用于制备抗肿瘤药物或者肿瘤的辅助治疗，应用前景良好。
Claims (7)
1.龟甲胶在制备抗肿瘤的特殊膳食食品、药品或者保健品中的用途。
2.龟甲胶在制备用于肿瘤辅助治疗的特殊膳食食品、药品或者保健品中的用途。
3.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于：所述肿瘤是肉瘤或者肺癌。
4.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于：所述龟甲胶按照如下方法制备：将龟甲漂泡洗净，分次水煎，滤过，合并滤液，静置，滤去胶液，浓缩至稠膏状，冷凝，切块，晾干，即得。
5.一种抗肿瘤或者用于肿瘤辅助治疗的药品、特殊膳食食品或者保健品，其特征在于：它是以龟甲胶为活性成分，加上药品、食品或保健食品上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。
6.根据权利要求5所述的药品、特殊膳食食品或者保健品，其特征在于：所述制剂为液体制剂、固体制剂或半固体制剂。
7.根据权利要求5所述的药品、特殊膳食食品或者保健品，其特征在于：所述龟甲胶按照如下方法制备：将龟甲漂泡洗净，分次水煎，滤过，合并滤液，静置，滤去胶液，浓缩至稠膏状，冷凝，切块，晾干，即得。
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