TWI722984B - 絲蛋白水溶液的製造方法及絲蛋白多孔質體的製造方法 - Google Patents
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Abstract
本發明有關於一種絲蛋白多孔質體,其含有蛋白質換算分子量為110,000~310,000的絲蛋白而成。
Description
本發明是有關於一種機械強度及伸縮性優異的絲蛋白多孔質體、以及適於製作機械強度及伸縮性優異的絲蛋白多孔質體的絲蛋白水溶液及絲蛋白原料。
可利用蛋白質、糖類等生物源性物質而製作的多孔質體可用於美容護膚沙龍(esthetic salon)或個人所使用的以保濕等為目的的化妝品及美容領域,創傷包覆材料、藥劑緩釋載劑等醫療領域,拋棄式尿布、衛生用品等生活日用品領域,可活用為成為微生物、細菌等的住處的載體的水淨化領域,組織工程、再生醫療工學等中的細胞培養載體(基礎材料)及組織再生載體等產業上範圍廣泛的領域中。
構成該些多孔質體的生物源性物質已知有纖維素(cellulose)、幾丁質(chitin)等糖類,膠原蛋白(collagen)、角蛋白(keratin)、絲蛋白(silk fibroin)等蛋白質群組等。
該些生物源性物質中,蛋白質經常利用膠原蛋白,但自
從發生瘋牛病(bovine spongiform encephalopathy,BSE)問題後,變得非常難以利用源自牛的膠原蛋白。而且,角蛋白雖然可由羊毛、羽毛等而獲得,但在原料獲得方面存在問題,難以工業性利用。羊毛的原料價格非常高,且關於羽毛的市場小,因此難以穩定地獲得該些原料。另一方面,自原料獲得的觀點考慮,絲蛋白可期待穩定地供給,另外價格亦可穩定,因此具有容易工業性利用的特長。
絲蛋白除了衣服用途以外,還有長期作為手術用縫合線而使用的實效,於現在還用作食品及化妝品的添加物,對人體的安全性亦無問題,因此可利用於如上所述的多孔質體的利用領域中。
關於製作絲蛋白多孔質體的手法,存在若干報告。
例如有將絲蛋白水溶液急速冷凍後浸漬於結晶化溶劑中,同時進行融解與結晶化而獲得絲蛋白多孔質體的方法(專利文獻1)。然而,該方法需要大量使用作為結晶化溶劑的有機溶劑,另外亦不可否認殘留溶劑的可能性,於化妝品、美容領域等所述應用領域的使用中存在問題。
繼而,有將絲蛋白水溶液的pH保持為6以下而使其凝膠化或者於其水溶液中添加不良溶劑而使其凝膠化,將所得的凝膠凍結乾燥而製作多孔質體的方法(專利文獻2)。然而,藉由該方法無法獲得具有充分強度的多孔質體。另外,報告了將絲蛋白水溶液冷凍後長時間維持凍結狀態而製作多孔質體的手法(專利文獻3)。然而,根據本發明者等人的研究,該手法缺乏再現性,多數
情況下無法製作多孔質體。
報告了與所述絲蛋白多孔質體的製作手法相比可靠且簡便的手法(專利文獻4及非專利文獻1)。該手法是對絲蛋白水溶液添加少量的水溶性有機溶劑後,冷凍一定時間後使其融解,藉此獲得絲蛋白多孔質體的手法。而且,在專利文獻5中提出了對絲蛋白水溶液添加少量的脂肪族羧酸之後,使其凍結一定時間,其後使其融解,藉此製造比所述專利文獻4及非專利文獻1中所記載的手法更高強度的絲蛋白多孔質體的方法。
製作絲蛋白水溶液的手法已知有如下數種手法:溶解於包含溴化鋰、氯化鈣與乙醇的水溶液(以下亦稱為「氯化鈣/乙醇水溶液」)等中性鹽溶液中,藉由透析而除鹽的手法(非專利文獻2);溶解於過氧化氫水中之後,進行乾熱乾燥,將過氧化氫除去的方法(非專利文獻3);溶解於銅乙二胺中,添加銅離子分離劑後進行透析的手法(非專利文獻4)等。自處理的容易性考慮,多利用溶解於中性鹽溶液中,藉由透析而除鹽的手法。
[專利文獻1]日本專利特開平8-41097號公報
[專利文獻2]日本專利特公平6-94518號公報
[專利文獻3]日本專利特開2006-249115號公報
[專利文獻4]日本專利第3412014號公報
[專利文獻5]國際公開第2010/116994號
[非專利文獻1]生物巨分子(Biomacromolecules),6,3100-3106(2005)
[非專利文獻2]日本蠶絲學會雜誌,20,89-94(2012)
[非專利文獻3]“關於利用過氧化氫的絲蛋白的溶解”、[在線]、2006年9月1日、京都府織物‧機械金屬振興中心主頁、[2014年4月17日檢索]、網際網路<URL:http://www.silk.pref.kyoto.jp/oriki/index-d/d0609/kenkyusyokai_0901htm.html>
[非專利文獻4]日本蠶絲學會雜誌,10,57-63(2001)
然而,例如在化妝品、美容領域中的面罩、眼罩等皮膚保養構件,醫療領域中的假設貼附到手指、肘、膝等人體的運動部的創傷包覆材料,組織工程、再生醫療工學等領域中的細胞培養載體的用途中,多為較薄地使用絲蛋白多孔質體的情況,特別是對該多孔質體要求撕裂強度等機械強度。而且,在運動部中使用的情況下,要求拉伸應變高、伸縮性優異的絲蛋白多孔質體。然而,即使藉由專利文獻5中所揭示的製法而所得的絲蛋白多孔質體,亦存在無法充分對應所述要求的情況。
作為使絲蛋白多孔質體的機械強度提高的簡便的手法,可列舉藉由在製作絲蛋白多孔質體時使用高濃度的絲蛋白水
溶液而使孔隙率降低的方法,在這種情況下,除了所得的絲蛋白多孔質體的拉伸應變低以外,亦存在顯著較硬、無法應用的用途多的問題點。
因此,本發明的目的在於提供並不損及絲蛋白多孔質體的柔軟性、接觸肌膚時的感覺等質感的長處、且機械強度及伸縮性亦優異的絲蛋白多孔質體、以及用以製作機械強度及伸縮性優異的絲蛋白多孔質體的絲蛋白水溶液及絲蛋白原料。
本發明者等人為了達成所述課題而反覆進行銳意研究,結果發現藉由下述發明可解決該課題。
亦即,本發明的主旨如下所示。
[1]一種絲蛋白多孔質體,其含有蛋白質換算分子量為110,000~310,000的絲蛋白而成。
[2]如上述[1]所述的絲蛋白多孔質體,其含有蛋白質換算分子量為180,000~310,000的絲蛋白而成。
[3]如上述[1]或[2]所述的絲蛋白多孔質體,其中,拉伸應變為52%~67%。
[4]如上述[1]~[3]中任一項所述的絲蛋白多孔質體,其中,撕裂強度為20N/mm~45N/mm。
[5]如上述[1]~[4]中任一項所述的絲蛋白多孔質體,其中,25%壓縮應力(compressive stress)為20kPa~25kPa。
[6]一種絲蛋白水溶液,其含有蛋白質換算分子量為160,000
~410,000的絲蛋白而成。
[7]如上述[6]所述的絲蛋白水溶液,其含有蛋白質換算分子量為240,000~310,000的絲蛋白而成。
[8]如上述[6]或[7]所述的絲蛋白水溶液,其進一步包含脂肪族羧酸。
[9]如上述[8]所述的絲蛋白水溶液,其中,脂肪族羧酸為乙酸。
[10]一種絲蛋白原料,其蛋白質換算分子量為160,000~410,000。
[11]一種製造絲蛋白多孔質體的方法,其是製造如上述[1]~[5]中任一項所述的絲蛋白多孔質體的方法,使如上述[6]~[9]中任一項所述的絲蛋白水溶液、或由如上述[10]所述的絲蛋白原料所得的水溶液凍結,繼而使其融解。
[12]一種創傷包覆材料,其使用如上述[1]~[5]中任一項所述的絲蛋白多孔質體。
藉由本發明可提供並不損及絲蛋白多孔質體的柔軟性、接觸肌膚時的感覺等質感的長處、且機械強度及伸縮性優異的絲蛋白多孔質體、以及用以製作機械強度及伸縮性優異、且緩衝性及保水性亦優異的絲蛋白多孔質體的絲蛋白水溶液及絲蛋白原料。
圖1是用以將層析圖的峰頂的保持時間轉換為蛋白質換算分子量的校準曲線。
圖2是表示實施例7及比較例3中的於人肘部的貼附試驗的結果的照片。
本發明的絲蛋白多孔質體是含有蛋白質換算分子量為110,000~310,000的絲蛋白而成的絲蛋白多孔質體。
於本說明書中,所謂「蛋白質換算分子量」是表示使用校準曲線將使用高效液相層析儀(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)而所得的評價試樣的層析圖換算為蛋白質分子量的分子量,其可藉由實施例中所記載的方法而測定,所述校準曲線是使用麩胺酸脫氫酶(分子量:290,000)、豬心肌乳酸脫氫酶(分子量:142,000)、酵母烯醇酶(分子量:67,000)作為分子量標記而作成者。於本說明書中,「分子量」若無特別說明則表示「蛋白質換算分子量」。
本發明的絲蛋白多孔質體中所含的絲蛋白的蛋白質換算分子量為110,000~310,000,較佳的是140,000~310,000,更佳的是180,000~310,000。含有該範圍的分子量的絲蛋白的絲蛋白多孔質體的機械強度及伸縮性優異。
包含具有所述分子量的絲蛋白的絲蛋白多孔質體可藉由使用
後述的本發明的絲蛋白水溶液及本發明的絲蛋白原料而適宜地製作。
本發明的絲蛋白多孔質體中所含的絲蛋白的含量較佳的是80質量%以上,更佳的是90質量%以上,進一步更佳的是95質量%以上,特佳的是實質上為100質量%。
本發明的絲蛋白多孔質體的平均微孔徑較佳的是1μm~500μm,更佳的是5μm~300μm,進一步更佳的是10μm~100μm。若平均微孔徑為所述範圍內,則接觸肌膚時的感覺良好,而且在考慮作為面向再生醫療的細胞培養載體(基礎材料)的用途的情況下,細胞容易進入至微孔內。
此處,絲蛋白多孔質體的平均微孔徑是攝影5枚多孔質體剖面的掃描式電子顯微鏡照片,進一步攝影5枚在不同日期所製作的多孔質體剖面的掃描式電子顯微鏡照片,使用影像分析軟體對該些10枚掃描式電子顯微鏡照片進行影像處理,從而算出的微孔徑的平均值。
而且,本發明的絲蛋白多孔質體的大小、厚度並無特別限制,可根據用途而使用適宜大小、厚度的絲蛋白多孔質體。具體而言,例如在面罩、眼罩等皮膚保養構件的情況下,較佳的是使用0.2mm~1mm左右的絲蛋白多孔質體。而且,亦可藉由加工而獲得所期望的形狀的絲蛋白多孔質體。
加工的方法並無特別限制,可列舉使用湯姆生刀的衝壓、利用帶鋸的切片加工等。
絲蛋白多孔質體的25%壓縮應力較佳的是20kPa~25kPa,更佳的是20kPa~23kPa。25%壓縮應力為該範圍的絲蛋白多孔質體的柔軟性優異。
絲蛋白多孔質體的撕裂強度較佳的是20N/mm~50N/mm,更佳的是20N/mm~45N/mm,進一步更佳的是25N/mm~45N/mm。撕裂強度為該範圍的絲蛋白多孔質體的機械強度、伸縮性、柔軟性的平衡優異。
絲蛋白多孔質體的拉伸強度較佳的是35kPa~75kPa,更佳的是40kPa~70kPa。拉伸強度為該範圍的絲蛋白多孔質體的機械強度、伸縮性、柔軟性的平衡優異。
絲蛋白多孔質體的拉伸應變較佳的是52%~67%,更佳的是56%~65%。拉伸應變為該範圍的絲蛋白多孔質體的伸縮性優異。
另外,本說明書中的「拉伸強度」及「拉伸應變」是表示在使用萬能試驗機等對試片進行拉伸時,試片破斷時的應力及應變,拉伸應變(%)的值表示[[(變形後的長度-變形前的長度)/(變形前的長度)]×100]所表示的比率的值。
絲蛋白多孔質體的25%壓縮應力、撕裂強度及拉伸應變可藉由實施例中所記載的方法而測定。
繼而,關於本發明的絲蛋白多孔質體的製造中所較佳使用的本發明的絲蛋白原料、本發明的絲蛋白水溶液及使用該些的本發明的絲蛋白多孔質體的製造方法而加以說明。
本發明的絲蛋白原料是蛋白質換算分子量為160,000~410,000的絲蛋白原料,可於本發明的絲蛋白多孔質體的製造中較佳地使用。
本發明的絲蛋白原料的蛋白質換算分子量是160,000~410,000,較佳的是200,000~360,000,更佳的是240,000~310,000。藉由使用該範圍的分子量的絲蛋白原料而製作絲蛋白多孔質體,可獲得機械強度及伸縮性優異的絲蛋白多孔質體。
絲蛋白原料的蛋白質換算分子量可藉由實施例中所記載的方法而測定。
本發明的絲蛋白原料除了絲蛋白以外,亦可藉由對包含絲膠的繭、生絲等蠶絲原料進行精練,將絲膠除去而獲得。
所使用的蠶絲原料並無特別限制,可使用繭、切繭、生絲等。蠶的品種亦無特別限制,自可穩定地獲得的方面考慮,較佳的是使用家蠶的蠶絲原料。
通常情況下,精練是藉由在溶解有鹼性試劑的水溶液中放入蠶絲原料,進行加熱的步驟而進行。
精練的方法並無特別限制,可使用吊練、機械精練、袋練、泡沫精練等手法。
鹼性試劑並無特別限制,可使用馬賽肥皂、碳酸鈉、碳酸氫鈉等,自擔心殘留肥皂的方面考慮,較佳的是使用碳酸鈉、碳酸氫鈉,自容易控制分子量的方面考慮,更佳的是使用碳酸鈉。
鹼性試劑的濃度較佳的是15%owf~25%owf。藉由設定為該
範圍,可效率良好地將絲膠除去,且可獲得目標分子量的絲蛋白原料。
精練時的浴比(溶解有鹼性試劑的水溶液的質量相對於絲蛋白原料的質量的比)較佳的是20倍~100倍。藉由設定為該範圍,可效率良好地將絲膠除去。
精練時的加熱的溫度若可將絲膠充分除去則並無特別限制,在常壓的情況下,較佳的是85℃~100℃。藉由將溫度設定為該範圍,可效率良好地將絲膠除去。
精練的時間若可將絲膠充分除去則並無特別限制,較佳的是3小時~5小時。藉由設定為該範圍,可效率良好地將絲膠除去,且獲得目標分子量的絲蛋白原料。
為了在精練後將絲蛋白原料上所附著的鹼及絲膠除去,較佳的是在進行熱水清洗、水清洗之後,進行脫水、乾燥。
本發明的絲蛋白水溶液是含有蛋白質換算分子量為160,000~410,000的絲蛋白而成的絲蛋白水溶液,可於本發明的絲蛋白多孔質體的製造中較佳地使用。
本發明的絲蛋白水溶液中的絲蛋白的蛋白質換算分子量為160,000~410,000,較佳的是200,000~350,000,更佳的是240,000~310,000。藉由使用該範圍的分子量的絲蛋白水溶液而製作絲蛋白多孔質體,可獲得機械強度及伸縮性優異的絲蛋白多孔質體。
絲蛋白水溶液的蛋白質換算分子量可藉由實施例中所記載的
方法而測定。
本發明的絲蛋白水溶液例如可藉由將本發明的絲蛋白原料溶解於溶解液中之後,將溶解中所使用的藥劑除去而獲得。
溶解的方法並無特別限制,可使用溶解於溴化鋰水溶液、氯化鈣/乙醇水溶液等中性鹽溶液中,藉由透析而除鹽的手法;溶解於過氧化氫水中之後,進行乾熱乾躁而將過氧化氫除去的方法;溶解於銅乙二胺中,添加銅離子分離劑之後進行透析的手法等,自後處理及分子量調節的容易性考慮,較佳的是溶解於中性鹽溶液中,進行除鹽的手法。
所使用的中性鹽溶液較佳的是溴化鋰水溶液、氯化鈣/乙醇水溶液。而且,該些的濃度在溴化鋰水溶液的情況下較佳的是8mol/L~10mol/L。在氯化鈣/乙醇水溶液的情況下,較佳的是使用將氯化鈣與乙醇與水以莫耳比為1:2:8進行混合而成的溶液。藉由設定為該些濃度,可效率良好地溶解絲蛋白原料。
溶解溫度若為絲蛋白原料溶解的溫度則並無特別限制,在溴化鋰水溶液的情況下較佳的是10℃~40℃。在氯化鈣/乙醇水溶液的情況下,較佳的是70℃~90℃,更佳的是75℃~85℃。藉由設定為該些溫度範圍,可效率良好地溶解,且可獲得目標分子量的絲蛋白水溶液。
溶解時間並無特別限制,在使用溴化鋰水溶液的情況下,較佳的是3小時~24小時,更佳的是5小時~18小時。在氯化鈣/乙醇水溶液的情況下,較佳的是10分鐘~60分鐘,更佳的
是15分鐘~40分鐘。藉由設定為該些溶解時間,可使絲蛋白原料充分地溶解,且可獲得目標分子量的絲蛋白水溶液。
絲蛋白的溶解濃度若為可溶解於溶解液中的濃度,則並無特別限制,較佳的是50g/L~200g/L,更佳的是100g/L~150g/L。將溶解濃度設定為該範圍,藉此獲得適於製作絲蛋白多孔質體的濃度的絲蛋白水溶液。
除鹽的手法並無特別限制,可藉由使用透析膜的透析、超濾等進行除鹽。透析膜或超濾膜的截留分子量較佳的是5,000~40,000,更佳的是5,000~10,000。藉由使用該範圍的截留分子量的透析膜或超濾膜,可兼顧除鹽效率與絲蛋白的損耗較少。
較佳的是本發明的絲蛋白水溶液進一步包含脂肪族羧酸。
另外,於本說明書中,特別將包含脂肪族羧酸的本發明的絲蛋白水溶液稱為「絲蛋白多孔質體製作溶液」。
<絲蛋白多孔質體製作溶液>
本發明的絲蛋白多孔質體製作溶液可藉由於所述絲蛋白水溶液中添加脂肪族羧酸與濃度調整用水而獲得。
絲蛋白多孔質體製作溶液中的絲蛋白濃度較佳的是10g/L~70g/L,更佳的是20g/L~50g/L,進一步更佳的是25g/L~45g/L。藉由將絲蛋白濃度設定為該範圍,可獲得質感良好、而且操作性優異的絲蛋白多孔質體。絲蛋白濃度可將絲蛋白水溶液放入至容器中使其完全乾燥,根據其質量減少而如下式所示那樣求出。
(絲蛋白濃度,g/L)=(絲蛋白水溶液的乾燥後質量,g)/(乾燥前的絲蛋白水溶液的體積,L)
所添加的脂肪族羧酸若為水溶性者,則並無特別限制,可較佳地列舉較佳的是碳數為1~6、更佳的是碳數為3~5的飽和或不飽和的單羧酸、二羧酸、三羧酸。此種脂肪族羧酸例如可較佳地列舉甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、乳酸、丙烯酸、2-丁烯酸等單羧酸;草酸、丙二酸、琥珀酸、馬來酸等二羧酸,該些可單獨使用或者將多種組合使用。若考慮對人體的安全性,則更佳的是乙酸、乳酸、琥珀酸,進一步更佳的是乙酸。
所添加的脂肪族羧酸的濃度較佳的是在絲蛋白多孔質體製作溶液中為0.5體積%~10體積%,更佳的是1體積%~4體積%,進一步更佳的是1.5體積%~2.5體積%。藉由將濃度設定為該範圍,可獲得機械強度優異的絲蛋白多孔質體。
所添加的水並無特別限制,自雜質少的方面考慮,較佳的是使用純水及超純水。
本發明的絲蛋白多孔質體的製造方法是使本發明的絲蛋白水溶液、或由本發明的絲蛋白原料所得的水溶液凍結,繼而使其融解的方法。
本發明的絲蛋白多孔質體例如可藉由將所述絲蛋白多
孔質體製作溶液流入至模具或容器中使其凍結一定時間後使其融解而適宜地獲得。
凍結溫度較佳的是-10℃~-30℃,更佳的是-15℃~-25℃。為了使加入有添加劑的絲蛋白水溶液充分地凍結、且可將凍結狀態保持一定時間,凍結時間較佳的是4小時以上,更佳的是6小時以上。而且,特別是自可再現良好地形成機械強度優異的多孔質體的觀點考慮,較佳的是在-15℃~-25℃的溫度條件下、保持6小時至100小時而進行凍結。
此處,可將所述絲蛋白多孔質體製作溶液一下子降低至凍結溫度而進行凍結,但於獲得均一結構的絲蛋白多孔質體方面考慮,較佳的是於凍結之前經過過冷狀態。例如將加入有添加劑的絲蛋白水溶液暫時在-5℃下保持2小時,其後降低至凍結溫度而進行凍結,藉此可獲得均一結構的絲蛋白多孔質體。
藉由所述手法使絲蛋白水溶液凍結後,繼而使其融解,藉此獲得絲蛋白多孔質體。融解的方法並無特別限制,可較佳地列舉自然融解、在恆溫槽中保管等方法。
如上所述而所得的絲蛋白多孔質體中殘存有添加劑。殘存的添加劑可根據用途而設為原來的狀態,亦可除去。將添加劑自絲蛋白多孔質體中除去的方法例如可列舉將絲蛋白多孔質體浸漬於純水中而將其除去作為最簡便的方法。
如上進行而所得的絲蛋白多孔質體是吸水的狀態。在需要乾燥狀態的絲蛋白多孔質體的情況下,對吸水狀態的絲蛋白多
孔質體進行乾燥即可。絲蛋白多孔質體的乾燥手法並無特別限制,於抑制收縮的含義上而言,較佳的是凍結乾燥。在凍結乾燥的情況下,若並未使水分完全昇華地結束乾燥,則殘留的冰融解而成為水,由於其表面張力的影響而造成空孔被擠破,因此較佳的是乾燥至水分完全昇華。
而且,自防止乾燥時的裂縫(fissure)、且在乾燥後獲得柔軟的複合物的觀點考慮,較佳的是在凍結乾燥時,預先將絲蛋白多孔質體浸漬於甘油水溶液中。
在這種情況下,浸漬絲蛋白多孔質體的甘油水溶液中的甘油的濃度較佳的是0.5體積%~10體積%,更佳的是1體積%~8體積%,進一步更佳的是1.5體積%~6體積%。
藉由將甘油濃度設定為該範圍,可獲得質感良好、無裂縫的乾燥絲蛋白多孔質體。如上進行而所得的乾燥絲蛋白多孔質體的特徵在於含有甘油。
乾燥絲蛋白多孔質體中的甘油的含量較佳的是20質量%~70質量%,更佳的是25質量%~60質量%,進一步更佳的是30質量%~50質量%。藉由將濃度設為該範圍,可對乾燥絲蛋白多孔質體賦予適度的柔軟性。
乾燥絲蛋白多孔質體中的甘油的含量(質量%)是導入至乾燥絲蛋白多孔質體的甘油的質量除以導入甘油後的乾燥絲蛋白多孔質體的質量而所得的,藉由以下的式而算出。
(乾燥絲蛋白多孔質體中的甘油的含量(質量%))=((導入有甘油的乾燥絲蛋白多孔質體的質量)-(未導入甘油的乾燥絲蛋白多孔質體的質量))/(導入甘油後的乾燥絲蛋白多孔質體的質量)×100
如上所述而進行了乾燥的絲蛋白多孔質體實質上不含水分。絲蛋白多孔質體是使絲蛋白水溶液凍結、融解而所得者,因此通常成為於微孔部存在有水分等的狀態。通常的絲蛋白多孔質體與乾燥絲蛋白多孔質體在微孔部存在水等的量的方面狀態不同。
絲蛋白多孔質體可藉由適宜選擇使加入有添加劑的絲蛋白水溶液流入的容器而設為片狀、方塊狀、管狀等與目的對應的形狀。
而且,藉由調節用作原料的絲蛋白及添加劑的種類及添加量,可調整絲蛋白多孔質體的內部結構與硬度,可獲得具有各種硬度的凝膠狀、片狀或方塊狀的絲蛋白多孔質體。
本發明的創傷包覆材料是使用本發明絲蛋白多孔質體的創傷包覆材料。
而且,本發明的創傷包覆材料較佳的是使用乾燥絲蛋白多孔質體,所述乾燥絲蛋白多孔質體是將本發明的絲蛋白多孔質體如上所述地浸漬於甘油中,進行凍結乾燥而所得者。藉由使用乾燥
絲蛋白多孔質體,可獲得吸水性或緩衝性優異的創傷包覆材料。
在使用多孔質體作為創傷包覆材料的情況下,除了用以緩和由貼附於創傷部所造成的疼痛、且減輕碰到該創傷部時的疼痛的緩衝性以外,亦期望可用以活用於濕潤療法中的保水性,所述濕潤療法是吸收自傷口等滲出的滲出液而將其保持於創傷面,積極地活用該滲出液中所含的成分,由此治癒創傷。
本發明的絲蛋白多孔質體並不損及柔軟性、接觸肌膚時的感覺等質感的長處,且機械強度及伸縮性優異,另外保水性及緩衝性亦優異。
因此,本發明的創傷包覆材料的如下特性優異,且亦可於濕潤療法中適宜地使用:緩和由貼附於創傷部所造成的疼痛、且減輕碰到該創傷部時的疼痛的特性;吸收自傷口等滲出的滲出液而將其保持於創傷部,可積極地活用該滲出液中所含的成分的特性;可用於腕或肘等運動部的特性。
本發明的創傷包覆材料可活用吸水性優異的特性而含有藥劑。藉由含有藥劑,可對本發明的創傷包覆材料賦予促進創傷治癒的功能。在含有藥劑的情況下,例如將殺菌劑、抗生素、生理活性物質等藥劑含浸或塗佈於本發明的創傷包覆材料中即可。該些藥劑可使用1種或組合使用2種以上。
本發明的創傷包覆材料可以藉由敷料膜、繃帶、黏著帶等固定片狀的本發明的絲蛋白多孔質體的狀態而使用。
絲蛋白多孔質體即使在乾燥狀態下亦柔軟,因此可直接使
用,且亦可使其含有保濕劑而使用。保濕劑可使用甘油、聚乙烯吡咯啶酮、聚乙烯醇、聚乙二醇等。另外,在含有保濕劑的狀態的情況下,在使用之前,為了在保持水分量的狀態下防止乾燥,較佳的是預先將本發明的創傷包覆材料設為密閉狀態。
本發明的創傷包覆材料較佳的是包含如下者的絲蛋白多孔質體:含有本發明的絲蛋白多孔質體的多孔質層、僅僅於其中一個面並不具有微孔的膜層。作為其使用方法,較佳的是使多孔質層與創傷面相接,於創傷面的相反側的對向面包含膜層。其原因在於:若將此種創傷包覆材料應用於濕潤療法中,則具有可吸收及保持來自創傷面的滲出液,抑制該滲出液蒸發或擴散的效果。
進一步而言,藉由於多孔質層中含有藥劑,可使其具有促進創傷治癒的功能。例如藉由將殺菌劑、抗生素、生理活性物質等含浸或塗佈於多孔質層中,可促進治癒。該些藥劑可使用1種或組合使用2種以上。
另外,亦可控制膜層的微孔數,視需要可設為具有少量微孔的膜層。
另一方面,膜層的微孔極少,因此表面平滑。因此,可藉由使用該膜層作為創傷面側,使其具有防止黏連的功能;或者可藉由控制膜層的液體透過性而控制藥劑的放出速度。
本發明的創傷包覆材料包含含有多孔質層與其兩個面並不具有微孔的膜層的多孔質體的情況下,存在吸收如上所述的
來自創傷面的滲出液的速度降低的情況,但具有抑制滲出液蒸發的功能、與防止黏連於創傷面上的功能。
而且,在本發明的創傷包覆材料包含僅僅含有多孔質層的多孔質體的情況下,假設來自創傷面的滲出液通過該多孔質層,滲出至相反側,但該創傷包覆材料即使是多孔質層自身,亦具有充分的保水性,因此充分起到本發明的效果。而且,使用水分透過性低的敷料膜亦可抑制蒸發。
以下,藉由實施例對本發明更具體地加以說明,但本發明並不受該些實施例任何限定。
另外,於以下的實施例中,將為了測定絲蛋白原料的蛋白質換算分子量而製備的絲蛋白水溶液稱為「絲蛋白水溶液(A)」,將絲蛋白多孔質體的製作中所使用的絲蛋白水溶液稱為「絲蛋白水溶液(B)」,將為了測定絲蛋白多孔質體中所含的絲蛋白的蛋白質換算分子量而製備的絲蛋白水溶液稱為「絲蛋白水溶液(C)」。
而且,絲蛋白的蛋白質換算分子量可藉由以下的方法而測定。
為了測定絲蛋白原料的蛋白質換算分子量,首先藉由下述手法而製備絲蛋白水溶液(A)。
以濃度成為100g/L的方式將絲蛋白原料投入至20℃的9mo1/L溴化鋰水溶液中,進行10小時攪拌,藉此使其完全溶解。繼而,對溶解液進行離心分離(轉速:12,000min-1、5分鐘),藉
由傾析將沈澱物除去後,注入至透析管(商品名:Spectra/Por 1 Dialysis Membrane、MWCO6,000-8,000、仕必純公司(Spectrum Laboratories,Inc.)製造),對於5L自超純水製造裝置(PRO-0500及FPC-0500(以上為型號)、奧璐佳瑙(Organo)股份有限公司製造)中採集的超純水反覆進行5次12小時的透析而進行除鹽,對所得的溶液再次進行離心分離(轉速:12,000min-1、30分鐘),藉此獲得絲蛋白水溶液(A)。藉由與絲蛋白多孔質體製作溶液之項中所示者同樣的方法而測定絲蛋白水溶液(A)中的絲蛋白濃度。將該絲蛋白水溶液(A)作為絲蛋白原料的分子量測定溶液。
絲蛋白水溶液(B)可藉由後述的實施例中所記載的方法而製備,作為分子量測定溶液。
為了測定絲蛋白多孔質體的分子量,首先藉由下述手法而製備絲蛋白水溶液(C)。
以濃度成為100g/L的方式將絲蛋白多孔質體投入至20℃的9mol/L溴化鋰水溶液中,進行10小時攪拌,藉此使其完全溶解。繼而,對溶解液進行離心分離(轉速:12,000min-1、5分鐘),藉由傾析將沈澱物除去後,注入至透析管(商品名:Spectra/Por 1 Dialysis Membrane、MWCO6,000-8,000、仕必純公司製造),對於5L自超純水製造裝置(PRO-0500及FPC-0500(以上為型號)、奧璐佳瑙股份有限公司製造)採集的超純水反覆進行5次12小時
的透析而進行除鹽,對所得的溶液再次進行離心分離(轉速:12,000min-1、30分鐘),藉此獲得絲蛋白水溶液(C)。藉由與絲蛋白多孔質體製作溶液之項中所示之方法同樣的方法而測定絲蛋白水溶液(C)中的絲蛋白濃度。將該絲蛋白水溶液(C)作為絲蛋白多孔質體的分子量測定溶液。
在玻璃燒杯中放入700mL的超純水,於其中加入14.2g硫酸鈉(無水物、和光純藥工業股份有限公司製造、試劑特級)與120.1g尿素(和光純藥工業股份有限公司製造、試劑特級),將所得的溶液連同燒杯一起放入至超音波清洗機中進行超音波處理,使其完全溶解。在該溶液中進一步加入20g磷酸緩衝劑粉末(1.15mol/L、pH為7.0、和光純藥工業股份有限公司製造、生物化學用),再次進行超音波處理而使其溶解。繼而,將溶解後的溶液移至量瓶中,定容為1L後進行攪拌而製成均一的溶液。將該溶液作為分子量測定中所使用的流動相。
在測定絲蛋白原料的蛋白質換算分子量的情況下使用絲蛋白水溶液(A),在測定絲蛋白水溶液(B)的蛋白質換算分子量的情況下使用其自身,在測定絲蛋白多孔質體的蛋白質換算分子量的情況下使用絲蛋白水溶液(C),進行下述評價,藉此測定各自的蛋白質換算分子量。
以下,將該些絲蛋白水溶液(A)~絲蛋白水溶液(C)稱為
「分子量測定溶液」。
以絲蛋白濃度成為10g/L的方式在分子量測定溶液中加入超純水而進行混合,繼而於其中加入流動相而稀釋為5倍,使所得的溶液通過0.45μm的過濾器(東洋濾紙股份有限公司製造、商品名:25HP045AN)而進行過濾,作為層析評價試樣。
測定使用除了高效液相層析儀(HPLC)本體(日立高新技術股份有限公司製造、商品名:Chromaster(「Chromaster」是註冊商標))、與作為其選項的UV檢測器(日立高新技術股份有限公司製造、型號:5410)、泵(日立高新技術股份有限公司製造、型號:5110)、自動取樣器(日立高新技術股份有限公司製造、型號:5210)、管柱烘箱(日立高新技術股份有限公司製造、型號:5310)以外,亦使用組合有管柱(昭和電工股份有限公司製造、商品名:SHODEX PROTEIN KW-804(「SHODEX」是註冊商標))的HPLC裝置。測定條件是流動相流量為0.5mL/sec、管柱溫度為30℃、檢測波長為UV 220nm。
用以將所得的層析圖換算為蛋白質分子量的校準曲線的作成中使用作為HPLC用分子量標記蛋白質的源自酵母的麩胺酸脫氫酶(分子量:290,000、東方酵母工業股份有限公司(Oriental Yeast Co.,LTD)製造、商品名:MW-Marker(HPLC))、源自豬心肌的乳酸脫氫酶(分子量:142,000、東方酵母工業股份有限公司製造、商品名:MW-Marker(HPLC))、源自酵母的烯醇酶(分子量:67,000、東方酵母工業股份有限公司製造、商品名:MW-Marker
(HPLC))作為分子量標記。
使流動相於HPLC裝置中流動1小時而等待基準線穩定。在基準線穩定後,注入22μL的以各分子量標記在水溶液中分別成為0.05質量%的方式而溶解的分子量標記水溶液,根據所得的層析圖的峰頂與分子量標記的分子量而作成校準曲線。將校準曲線示於圖1中。繼而,根據注入22μL層析評價試樣而所得的層析圖的峰頂的位置,使用校準曲線而測定絲蛋白的蛋白質換算分子量。
實施例1
(鹼精練)
使用2L碳酸鈉水溶液作為精練液,在表1中所記載的條件下進行精練。精練容器使用3L的玻璃燒杯,一面藉由K熱電偶對加熱攪拌器(As One股份有限公司製造、商品名:CT-5HT)進行溫度控制一面進行精練的加熱,藉由玻璃棒而適宜進行攪拌。將加熱而所得的精練後的切繭在60℃的熱水中充分清洗後,用純水進行清洗。將所得的清洗後的切繭在24℃的室內自然乾燥兩星期,使其完全乾燥,獲得絲蛋白原料。繼而,依照下式而算出練減率。將結果示於表1中。
練減率(質量%)=(精練前質量-精練後質量)÷精練前質量×100
而且,使用所得的絲蛋白原料,藉由所述方法製備絲蛋白水
溶液(A),將測定絲蛋白原料的蛋白質換算分子量的結果示於表1中。
(絲蛋白水溶液(B)的製備)
在製備絲蛋白水溶液(B)時,首先以濃度成為100g/L的方式將進行所述鹼精練而所得的絲蛋白原料投入至1L的20℃的9mol/L溴化鋰水溶液中,進行10小時的攪拌,藉此使其完全溶解。繼而,對溶解液進行離心分離(轉速:12,000min-1、5分鐘),藉由傾析將沈澱物除去後,注入至透析管(商品名:Spectra/Por 1 Dialysis Membrane、MWCO6,000-8,000、仕必純公司製造(「Spectra/Por」是註冊商標))中,對於5L自超純水製造裝置(PRO-0500及FPC-0500(以上為型號)、奧璐佳瑙股份有限公司製造)採集的超純水反覆進行5次12小時的透析而進行除鹽,對所得的溶液再次進行離心分離(轉速:12,000min-1、30分鐘),藉此獲得絲蛋白水溶液(B)。藉由絲蛋白多孔質體製作溶液之項中所示之方法而測定絲蛋白水溶液(B)中的絲蛋白濃度。
而且,將藉由所述方法而測定絲蛋白水溶液(B)中的絲蛋白的蛋白質換算分子量的結果示於表1中。
(絲蛋白多孔質體製作溶液的製備)
於所述絲蛋白水溶液(B)的製備之項中所製備的絲蛋白水溶液(B)中,以絲蛋白濃度成為30g/L、乙酸濃度成為2.0%(v/v)的方式加入乙酸及超純水,製備絲蛋白多孔質體製作溶液。
(絲蛋白多孔質體的製作)
使所述絲蛋白多孔質體製作溶液流入至以鋁板而製作的模具(內側尺寸:400mm×300mm×10mm)中,放入至預先冷卻至-5℃的液冷式低溫恆溫槽(前川製作所股份有限公司製造)中,在-5℃下靜置2小時。使用耐美(Nybrine)Z1(莫雷斯科(MORESCO)股份有限公司製造、商品名(「Nybrine」是註冊商標))作為冷媒。
其後,以-3℃/小時的速度冷卻至-20℃,在該溫度下保持5小時而進行凍結。
藉由自然解凍使凍結的試樣恢復至室溫後,自模具中取出,浸漬於超純水中,每天2次而進行3天的超純水交換,藉此將所使用的乙酸除去,獲得絲蛋白多孔質體。將藉由所述方法測定所得的絲蛋白多孔質體中所含的絲蛋白的蛋白質換算分子量的結果示於表1中。
實施例2~實施例5及比較例1及比較例2
於實施例1中,如表1所示那樣改變精練時間,除此以外與實施例1同樣地進行鹼精練、絲蛋白水溶液的製備、絲蛋白多孔質體製作溶液的製備、絲蛋白多孔質體的製作,獲得絲蛋白多孔質體。
將藉由所述方法測定所得的絲蛋白原料、絲蛋白水溶液(B)及絲蛋白多孔質體的蛋白質換算分子量的結果示於表1中。
實施例6
將絲蛋白水溶液(B)的製備方法設為以下記載的方法,除此以外與實施例1同樣地進行鹼精練、絲蛋白多孔質體的製作,獲
得絲蛋白多孔質體。將藉由所述方法測定所得的絲蛋白原料、絲蛋白水溶液(B)及絲蛋白多孔質體的蛋白質換算分子量的結果示於表1中。
(絲蛋白水溶液(B)的製備-2)
絲蛋白水溶液(B)是將進行了鹼精練而所得的絲蛋白原料,以絲蛋白的濃度成為100g/L的方式投入至1L的20℃的將氯化鈣、乙醇、水以1:2:8的莫耳比混合而成的溶液中,於80℃下進行40分鐘的加熱、攪拌,藉此使其完全溶解。繼而,對溶解液進行離心分離(轉速:12,000min-1、5分鐘),藉由傾析將沈澱物除去後,注入至透析管(商品名:Spectra/Por 1 Dialysis Membrane、MWCO6,000-8,000、仕必純公司製造)中,對於5L自超純水製造裝置(PRO-0500及FPC-0500(以上為型號)、奧璐佳瑙股份有限公司製造)中採集的超純水反覆進行5次12小時的透析而進行除鹽,對所得的溶液再次進行離心分離(轉速:12,000min-1、30分鐘),藉此獲得絲蛋白水溶液(B)。藉由絲蛋白多孔質體製作溶液之項中所示的方法而測定絲蛋白水溶液(B)中的絲蛋白濃度。
關於所述所得的絲蛋白多孔質體,將藉由以下條件而測定25%壓縮應力、撕裂強度、拉伸強度及拉伸應變的結果示於表1中。
(25%壓縮應力的測定)
關於絲蛋白多孔質體,使用萬能試驗機(型號:EZ-(N)S、
島津製作所股份有限公司製造),在荷重元為50N,使用直徑為8mm的圓形壓縮板作為夾具,壓縮速度為1mm/min、室溫為22℃的條件下測定藉由壓縮板壓入材料厚度的25%時的負載,將藉由以下式而算出的值作為25%壓縮應力(kPa)。
25%壓縮應力(kPa)=藉由壓縮板壓入材料厚度的25%時的負載/壓縮板的面積(mm2)×1000
(撕裂強度的測定)
關於切入100mm×15mm的大小、且長度為40mm的切口、衝壓為褲形的絲蛋白多孔質體的試片,使用萬能試驗機(型號:EZ-(N)S、島津製作所股份有限公司製造),在荷重元為50N、夾具使用拉伸試驗用夾具,撕裂速度為200mm/min、初始夾具間距離為40mm、室溫為22℃的條件下,測定撕裂力的中央值,藉由以下式而算出的值。
撕裂強度=撕裂力的中央值(N)/試片的厚度(mm)
(拉伸強度、拉伸應變的測定)
關於衝壓成為50mm×5mm的大小的絲蛋白多孔質體的試片,使用萬能試驗機(型號:EZ-(N)S、島津製作所股份有限公司製造),在荷重元為50N、夾具使用拉伸試驗用夾具,拉伸速度
為5mm/min、初始夾具間距離為30mm、室溫為22℃的條件下對試片進行拉伸,分別將試片破斷時的應力與應變作為拉伸強度、拉伸應變。
根據表1可知:於實施例1至實施例6中,練減率均為31質量%左右,絲膠基本被完全除去。
根據表1可知:於實施例1至實施例6中,絲蛋白多孔質體的25%壓縮應力與分子量過高的比較例2相比而言更低,柔軟性優異。
根據表1可知:於實施例1至實施例6中,絲蛋白多孔質體的撕裂強度與分子量過低的比較例1相比而言更高,機械強度優異。
根據表1可知:於實施例1至實施例6中,絲蛋白多孔質體的拉伸強度與分子量過低的比較例1相比而言更高,機械強度優異。
根據表1可知:於實施例1至實施例6中,絲蛋白多孔質體的拉伸應變與並非適宜分子量的比較例1、比較例2相比而言更高,伸縮性優異。
根據表1可知:於實施例1至實施例6中,絲蛋白原料及絲蛋白水溶液的蛋白質換算分子量為168,000~403,000,但在精練時間長的比較例1中為126,000,在精練時間短的比較例2中為731,000,隨著精練時間變長,分子量降低。
根據表1可知:於實施例1至實施例6中,絲蛋白多孔質體的蛋白質換算分子量為119,000~308,000,但在精練時間長的比較例1中為92,000,在精練時間短的比較例2中為592,000,隨著精練時間變長,分子量降低。
根據以上可知:使用蛋白質換算分子量為160,000~410,000的絲蛋白原料而製作的絲蛋白水溶液的蛋白質換算分子量為160,000~410,000,且使用該絲蛋白水溶液而製作的絲蛋白多孔質體的蛋白質換算分子量為110,000~310,000,該些絲蛋白多孔質體均是機械強度、伸縮性、柔軟性優異。
繼而,為了進行保水性試驗及於人肘部的貼附試驗,藉由以下的方法而製作絲蛋白多孔質體。
實施例7
(絲蛋白多孔質體的製作)
於實施例3中,將流入絲蛋白多孔質體製作溶液的藉由鋁板而製作的模具的尺寸設為內徑:50mm×50mm×0.6mm,除此以外與實施例3同樣地進行而獲得絲蛋白多孔質體。
(絲蛋白多孔質體的乾燥)
將所得的絲蛋白多孔質體在5L的3體積%甘油水溶液中浸漬96小時,將絲蛋白多孔質體內部的水分置換為甘油水溶液。繼而,使用凍結乾燥機(「FD-550P(型號)」、東京理化器械股份有限公司製造)而對甘油水溶液浸漬後的絲蛋白多孔質體進行3天凍結乾燥,獲得乾燥絲蛋白多孔質體。
藉由下述的方法評價該乾燥絲蛋白多孔質體中的甘油的含量,結果是41.9質量%。
(甘油的含量的測定)
乾燥絲蛋白多孔質體中的甘油的含量(質量%)是導入至乾燥絲蛋白多孔質體的甘油的質量除以導入甘油後的乾燥絲蛋白多孔質體的質量而所得的,藉由以下的式而算出。
(乾燥絲蛋白多孔質體中的甘油的含量(質量%))=((導入有甘油的乾燥絲蛋白多孔質體的質量)-(未導入甘油的乾燥絲蛋白多孔質體的質量))/(導入甘油後的乾燥絲蛋白多孔質體的質量)×100
(包覆材料的製作)
用剪刀將施樂輝公司(Smith & Nephew KK)製造的膜敷料材料OPSITE GENTLE ROLL(10cm寬、產品編號:66801197)切斷為8cm見方。將所得的8cm見方的膜敷料材料的脫模膜(襯墊)剝離,使膜敷料材料本體的黏著劑塗佈面露出。在剝離了脫模膜的膜敷料材料本體的黏著劑塗佈面的中央部貼附所述乾燥絲蛋白多孔質體(以下將其稱為「包覆材料」)。
比較例3
使用與比較例1同樣的絲蛋白原料,除此以外與實施例7同樣地進行,製作乾燥絲蛋白多孔質體及包覆材料。
比較例4
使用與比較例2同樣的絲蛋白原料,除此以外與實施例7同樣地進行,製作乾燥絲蛋白多孔質體及包覆材料。
使用實施例7、比較例3及比較例4中所得的乾燥絲蛋白多孔質體及包覆材料,藉由以下條件進行保水性試驗及於人肘部的貼附試驗。將結果示於表2中。
(保水性試驗)
對乾燥絲蛋白多孔質體進行秤量後(將此時的質量作為乾燥質量),在超純水中浸漬30秒。繼而,在空氣中保持30秒,使表面的水分落下,再次進行秤量(將此時的質量作為濕潤質量),依照下式而測定保水率。
保水率(%)=[(濕潤質量(g)-乾燥質量(g))/乾燥質量(g)]×100
(於人肘部的貼附試驗)
將包覆材料在伸肘的狀態下貼附於日本人男性5人及日本人女性5人的肘部,繼而,以包覆材料並不剝離的方式緩緩地曲肘,觀察包覆材料的樣子,依照以下基準進行判定。
A:在曲肘時,包覆材料中所使用的絲蛋白多孔質體無1人產生破裂的情況
B:在曲肘時,包覆材料中所使用的絲蛋白多孔質體即使有1人產生破裂的情況
根據實施例7的結果可知:本發明的創傷包覆材料(乾燥絲蛋白多孔質體)的保水性高,因此可用作在浸出液多的創傷中使用的創傷包覆材料。而且可知:使用本發明的絲蛋白多孔質體的創傷包覆材料的拉伸應變大,機械強度高,因此即使貼附於肘、膝、手指等皮膚的動作大的關節部分亦難以破裂,具有創傷
包覆材料所需的伸縮性及機械強度。
另外,在戴上實施例7的包覆材料時,如果在曲肘後再次伸肘,則包覆材料再次追從皮膚而收縮,基本恢復為原來的大小。由此可知使用本發明的絲蛋白多孔質體的創傷包覆材料的拉伸殘留應變小,因此可追從反覆的動作。
相對於此,比較例3中所製作的包覆材料(乾燥絲蛋白多孔質體)的原料的分子量低,因此拉伸強度及拉伸應變差,因此可知若貼附皮膚的動作大的關節部分,則容易在動作時破裂,難以作為創傷包覆材料而使用。另外,若對比較例4中所製作的絲蛋白多孔質體進行凍結乾燥則產生大的收縮,變硬的同時產生翹曲。另外保水性亦差,由此可知藉由分子量高的原料而製作的乾燥絲蛋白多孔質體難以應用於創傷包覆材料中。
繼而,為了進行緩衝性試驗而藉由以下的方法製作絲蛋白多孔質體。
實施例8
於實施例7中,將流入絲蛋白多孔質體製作溶液的藉由鋁板而製作的模具的尺寸設為內徑:50mm×50mm×3mm,除此以外與實施例7同樣地進行而製作包覆材料。
比較例5
於比較例3中,將流入絲蛋白多孔質體製作溶液的藉由鋁板而製作的模具的尺寸設為內徑:50mm×50mm×3mm,除此以外
與比較例3同樣地進行而製作包覆材料。
比較例6
於比較例4中,將流入絲蛋白多孔質體製作溶液的藉由鋁板而製作的模具的尺寸設為內徑:50mm×50mm×3mm,除此以外與比較例4同樣地進行而製作包覆材料。
使用所述實施例8、比較例5及比較例6中所得的包覆材料,藉由以下條件而進行緩衝性試驗。將結果示於表3中。
(緩衝性試驗)
將包覆材料在曲肘的狀態下貼附於日本人男性5人及日本人女性5人的肘部,對將被包覆材料覆蓋的部分擊打於桌子上時的緩衝性,依照以下基準進行判定。
A:判斷為緩衝性高、特別減輕疼痛的被試驗者為8人以上。
B:判斷為緩衝性高、特別減輕疼痛的被試驗者為4人~7人。
C:判斷為緩衝性高、特別減輕疼痛的被試驗者不足3人。
根據實施例8、比較例5及比較例6的結果可知:使用本發明的絲蛋白多孔質體的包覆材料的緩衝性優異,因此具有藉由貼附於創傷部而減輕撞擊時的疼痛的效果。相對於此,可知比
較例6中所製作的包覆材料的乾燥絲蛋白多孔質體部分硬,因此緩衝性差,並不適於創傷包覆材料。
本發明的絲蛋白多孔質體可廣泛地應用於化妝品及美容領域等中,亦極其有效地用作與臉的形狀吻合的面罩、眼罩等皮膚保養材料。而且,可應用於創傷包覆材料、藥劑緩釋載劑、止血海綿等醫療領域,拋棄式尿布、衛生用品等生活日用品領域,組織工程、再生醫學工程學中的細胞培養載體及組織再生載體、水淨化用途及環境領域中的成為微生物、細菌等的住處的載體等各種產業中。
Claims (8)
- 一種絲蛋白水溶液的製造方法,具有將絲蛋白溶解於溴化鋰水溶液或氯化鈣/乙醇水溶液中的溶液,藉由使用截留分子量為5,000~40,000的透析膜或超濾膜透析而進行除鹽的步驟,將所述絲蛋白水溶液作為分子量測定溶液,使用高效液相層析儀而獲得所述分子量測定溶液的層析圖,將所述層析圖的峰頂,作為分子量標記,使用分子量為290,000的源自酵母的麩胺酸脫氫酶、分子量為142,000的源自豬心肌的乳酸脫氫酶以及分子量為67,000的源自酵母的烯醇酶而作成的校準曲線而換算為蛋白質的分子量的蛋白質換算分子量為231,000~310,000。
- 如申請專利範圍第1項所述的絲蛋白水溶液的製造方法,其中所述蛋白質換算分子量為240,000~310,000。
- 如申請專利範圍第1項所述的絲蛋白水溶液的製造方法,其中所述截留分子量為5,000~10,000。
- 如申請專利範圍第1項所述的絲蛋白水溶液的製造方法,其中所述將絲蛋白溶解於溴化鋰水溶液或氯化鈣/乙醇水溶液中的溶液中的絲蛋白的溶解濃度為50g/L~200g/L。
- 如申請專利範圍第1項至第4項中任一項所述的絲蛋白水溶液的製造方法,其中更包含脂肪族羧酸,且絲蛋白濃度為10g/L~70g/L。
- 如申請專利範圍第5項所述的絲蛋白水溶液的製造方法,其中所述脂肪族羧酸的濃度為0.5體積%~10體積%。
- 如申請專利範圍第5項所述的絲蛋白水溶液的製造方法,其中所述脂肪族羧酸為乙酸。
- 一種絲蛋白多孔質體的製造方法,其將利用如申請專利範圍第5項所述的絲蛋白水溶液的製造方法所得的絲蛋白水溶液凍結,繼而使其融解。
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