TWI701994B - 塊菌菌種液之製備方法及塊菌菌根苗之培育方法 - Google Patents

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Abstract

本案係關於一種塊菌菌種液之製備方法，包括步驟：提供塊菌子囊果；自塊菌子囊果取得產孢組織；加入海藻精溶液至產孢組織，並進行粉碎以得到子囊與孢子液；加入海藻精溶液至子囊與孢子液後，進行打氣及分層萃取，並取得位於下層之萃取物；以及加入甲基纖維素粉末至萃取物，以得到塊菌菌種液。藉此，可達到抑制子囊果內潛伏原生動物之游動、維持子囊與孢子的濃度以及提升菌根感染率之功效。

Description

塊菌菌種液之製備方法及塊菌菌根苗之培育方法
本案係關於一種塊菌菌種液之製備方法，尤指一種塊菌菌種液之製備方法及塊菌菌根苗之培育方法。
隨著科技的進步，人工合成菌根苗已成為實現塊菌生產的關鍵核心技術。塊菌是營養共生型的外生菌根菌，必須與合適的宿主植物根系營共生生活，否則將無法形成菌根與子囊果，意即人工栽培塊菌離不開活體宿主植物。
然而，在習知的塊菌菌根苗人工合成技術中，子囊果内可能含有其他的原生動物，而吸嗜塊菌的子囊與孢子，導致菌根苗接種塊菌的菌種中有效子囊與孢子偏少，進而造成接種塊菌的菌根感染率偏低。並且，由於塊菌的子囊孢子會經歷其固有的休眠期，需要很長的時間才能萌發，使得栽培時孢子不易發芽。
再者，以往菌根苗接種塊菌的菌種中，孢子濃度每毫升須高達12000個以上，否則菌根感染率偏低，惟塊菌子囊果價格昂貴，且為限定季節性生產，無異增加人工合成菌根苗之製作成本。此外，傳統之接種方式係採取蘸根，然蘸取過程中常因孢子在液態菌種中分布不均勻，或宿主植物根系發育不一致等因素，使得菌根形成率偏低。
故此，如何發展一種有別於以往的塊菌菌種液之製備方法及塊菌菌根苗之培育方法，以改善習知技術中的問題與缺點，實為目前技術領域中的重點課題。
本案之目的為提供一種塊菌菌種液之製備方法及塊菌菌根苗之培育方法，俾解決並改善前述先前技術之問題與缺點。
本案之另一目的為提供一種塊菌菌種液之製備方法及塊菌菌根苗之培育方法，透過使用海藻精溶液製備塊菌菌種液及進行菌根苗培育，可提供養分促進塊菌菌絲體之生長，且可提供宿主植物與塊菌孢子發芽吸收之營養成分，促進宿主植物根系的生長。
本案之另一目的為提供一種塊菌菌種液之製備方法及塊菌菌根苗之培育方法，透過使用甲基纖維素製備塊菌菌種液及進行菌根苗培育，可達到保水、使孢子混合均勻以及抑制子囊果內潛伏原生動物之游動之功效，且可避免孢子脫色。
本案之另一目的為提供一種塊菌菌種液之製備方法及塊菌菌根苗之培育方法，透過添加中藥材，俾使液中原生動物進入休眠狀態，可避免原生動物大量繁殖造成子囊與孢子快速消失，藉此以維持子囊與孢子的濃度。
為達上述目的，本案之一較佳實施態樣為提供一種塊菌菌種液之製備方法，包括步驟：(a) 提供一塊菌子囊果；(b) 自該塊菌子囊果取得一產孢組織；(c) 加入海藻精溶液至該產孢組織，並進行粉碎以得到一子囊與孢子液；(d) 加入海藻精溶液至該子囊與孢子液後，進行打氣及分層萃取，並取得位於下層之一萃取物；以及(e) 加入甲基纖維素粉末至該萃取物，以得到該塊菌菌種液。
為達上述目的，本案之另一較佳實施態樣為提供一種塊菌菌根苗之培育方法，包括步驟：(a) 製備一塊菌菌種液，包括步驟：(a1) 提供一塊菌子囊果；(a2) 自該塊菌子囊果取得一產孢組織；(a3) 加入海藻精溶液至該產孢組織，並進行粉碎以得到一子囊與孢子液；(a4) 加入海藻精溶液至該子囊與孢子液後，進行打氣及分層萃取，並取得位於下層之一萃取物；以及(a5) 加入甲基纖維素粉末至該萃取物，以得到該塊菌菌種液；(b) 提供一栽培基質；(c) 將該塊菌菌種液澆淋於該栽培基質；(d) 將一宿主幼苗浸沒於該塊菌菌種液；以及(e) 將該宿主幼苗植入該栽培基質以進行培育。
體現本案特徵與優點的一些典型實施例將在後段的說明中詳細敘述。應理解的是本案能夠在不同的態樣上具有各種的變化，其皆不脫離本案的範圍，且其中的說明及圖示在本質上係當作說明之用，而非架構於限制本案。
請參閱第1圖，第1圖係顯示本案較佳實施例之塊菌菌種液之製備方法之流程示意圖。如第1圖所示，本案較佳實施例之塊菌菌種液之製備方法，係包括步驟如下：首先，如步驟S10所示，提供塊菌子囊果。其次，如步驟S20所示，自塊菌子囊果當中取得其產孢組織。接著，如步驟S30所示，加海藻精溶液至產孢組織，並進行粉碎以得到子囊與孢子液。然後，如步驟S40所示，加入海藻精溶液至該子囊與孢子液後，進行打氣及分層萃取，並取得位於下層之萃取物。最後，如步驟S50所示，加入甲基纖維素粉末至該萃取物，以得到塊菌菌種液。
根據本案之構思，  所加入之海藻精溶液之成分係包括海藻酸、硝酸銨及磷酸，其有機質高達 8-10%，係仿照塊菌生長棲地表土中有較高有機質環境。由於塊菌菌絲體或菌絲叢除依靠宿主植物根系供給營養外，亦能獨立進行營養的吸收，是以，本案塊菌菌種液之製備方法中添加之海藻精溶液，係可當輔劑提供養分促進外生菌根菌菌絲體之生長。於一些實施例中，本案之製備方法所使用之海藻精溶液係為海藻精500-1000倍稀釋液，較佳為海藻精500倍稀釋液或海藻精1000倍稀釋液，然並不以此為限。
於一些實施例中，本案之步驟S10更包括將塊菌子囊果進行滅菌並與河沙混合之步驟。具體而言，本案之步驟S10更可包括步驟：首先，收集局部切開可見灰白色至灰褐色大理石條紋菌脈之成熟、個頭大、無損傷且味道相對較濃的塊菌子囊果。接著，以軟刷輕刷淨塊菌子囊果表面泥土，再於體積百分濃度75%的酒精中浸泡3分鐘以將其表面滅菌。然後，將塊菌子囊果於酒精燈火焰上快速灼燒以消除酒精後，再與121°C高溫高壓下滅菌1小時之河沙混合。而後，將塊菌子囊果於3 -5°C的溫度下冷藏保存備用。
於一些實施例中，於本案之步驟S20中，係將冷藏之塊菌子囊果取出後，將塊菌子囊果切開，並以利刃割取及/或湯匙刮取黄褐色、褐色或黑色且具有白色的大理石條紋菌脈之產孢組織，但並不以此為限。
於一些實施例中，本案之步驟S30更可包括步驟：將取得的產孢組織放置於攪拌機中，並加入海藻精溶液以進行粉碎，其中係例如視塊菌子囊果之單位公克重量，加入50-100倍體積之海藻精溶液。於顯微鏡下以10-40倍放大鏡檢，確定可見子囊游離，且至少20%以上的孢子從子囊分離出為止，藉此以得到子囊與孢子液。惟塊菌子囊果表面往往有細小的疣突（verrucose）或大而明顯的多角形瘤突（warts），因其直接接觸土壤且有些種類係為硬質，故菌種製作時以不取為原則。
於一些實施例中，本案之步驟S40更可包括步驟：在15-25°C溫控情形下，將子囊與孢子液倒入燒杯中，並加入5-10倍體積之海藻精溶液。而後，將其導入打氣管並以打氣幫浦進行連續打氣，其中打氣量為 1± 0.5 公升/分鐘。5天後，以分液漏斗進行分層萃取，分離取得液中位於下層之萃取物，並丟棄含有醇類、醛類和芳香化合物等孢子發芽抑制物成分之上層液。於一些實施例中，本案之步驟S40係重複2至3次後，方繼續執行步驟S50，藉此以稀釋萃取物當中，塊菌子囊與厚壁孢子中所含醇類、醛類和芳香化合物等孢子發芽抑制物成分。
於一些實施例中，本案之步驟S50更可包括步驟：加入甲基纖維素粉末至所得之萃取物，其中甲基纖維素粉末與該萃取物的比例為20±2公克：100毫升，即每100毫升之萃取物係加入20±2公克之甲基纖維素粉末。並且，於混勻時係少量多次加入含萃取物之海藻精溶液，直至呈透明狀黏稠液，且肉眼可見透明黏稠液中黑點即為子囊與孢子，至此以製得塊菌菌種液。
所得之塊菌菌種液於鏡檢下每毫升約含3000-6000 個子囊或孢子，即可感染宿主植物根系並形成菌根，意即透過較低之孢子濃度，即能夠有效感染菌根，達到提升菌根感染率及降低成本之功效。
根據本案之構思，於本案之步驟S50中，添加甲基纖維素粉末處理除了可充當保水劑及孢子混勻稀釋劑外，尚可抑制塊菌子囊果內潛伏原生動物之游動，且能夠維持透明狀黏稠液中子囊與孢子的濃度。此外，塊菌孢子常帶有褐色系保護色素，而溶解於海藻精溶液中之甲基纖維素不會造成孢子脫色，即不會影響孢子的色素殘存率。同時，添加海藻精溶液係可提供宿主植物與塊菌孢子發芽吸收之營養成分，促進宿主植物根系的生長。
換言之，本案之塊菌菌種液之製備方法中，係透過使用海藻精溶液製備塊菌菌種液及進行菌根苗培育，可提供養分促進塊菌菌絲體之生長，且可提供宿主植物與塊菌孢子發芽吸收之營養成分，促進宿主植物根系的生長。同時，透過使用甲基纖維素製備塊菌菌種液及進行菌根苗培育，可達到保水、使孢子混合均勻以及抑制子囊果內潛伏原生動物之游動之功效，且可避免孢子脫色。
於一些實施例中，於本案之步驟S40前更可包括步驟：加入中藥材至該子囊與孢子液，其中，中藥材係可為五味子或當歸。具體而言，於本案之步驟S40前，以顯微鏡10-40倍放大鏡檢時若見液中原生動物游離或停留在子囊與孢子表面吸噬之原生動物，則須進一步添加五味子或當歸等中藥材至子囊與孢子液。其中，所加入之中藥材劑量與步驟S40中所加入之海藻精溶液的比例為1公克：100 毫升，即每100毫升之海藻精溶液係加入1公克之中藥材。藉此，透過添加中藥材，俾使液中原生動物進入休眠狀態，可避免原生動物大量繁殖造成子囊與孢子快速消失，藉此以維持子囊與孢子的濃度。
於加入中藥材至該子囊與孢子液之步驟後，係執行步驟S40。並且，為洗除萃取物中殘存之中藥成分，步驟S40係需重複2至3次，或者3次以上後，方繼續執行步驟S50。
請參閱本案第1圖及第2圖，其中第2圖係顯示本案較佳實施例之塊菌菌根苗之培育方法之流程示意圖。如第1圖及第2圖所示，本案較佳實施例之塊菌菌根苗之培育方法，係包括步驟如下：首先，如步驟S100所示，製備塊菌菌種液，步驟S100係包括步驟S10、步驟S20、步驟S30、步驟S40以及步驟S50，其中步驟S10、步驟S20、步驟S30、步驟S40及步驟S50之細部流程於前已進行詳細說明，故於此不再贅述。
接著，如步驟S200所示，提供栽培基質。然後，如步驟S300所示，將塊菌菌種液澆淋於栽培基質。接著，如步驟S400所示，將宿主幼苗浸沒於塊菌菌種液。然後，如步驟S500所示，將該宿主幼苗植入栽培基質，以進行培育。
舉例而言，以總量為1公升之栽培基質為例，係先於容器底部放入栽培基質直至佔容器容積之1/5。而後，將約10-15毫升之塊菌菌種液澆淋於栽培基質。接著，取得宿主幼苗並剪去其根的末端，以促使生出更多的側根，再將宿主幼苗浸沒於塊菌菌種液。然後，將宿主幼苗植入栽培基質，並補充栽培基質直至佔容器容積之4/5，以進行塊菌菌根苗之培育。
於一些實施例中，本案之步驟S200更包括步驟：首先，將甲基纖維素粉末與海藻精溶液以20±2公克：100毫升之比例混合至達透明狀黏稠液，以得到一混合液，即每100毫升之海藻精溶液係與20±2公克之甲基纖維素粉末混合。接著，將泥炭土與混合液以1000克：100毫升之比例混合，以得到栽培基質，即每1000克之泥炭土係與100毫升之混合液混合。於一些實施例中，更可先將泥炭土與蛭石以體積比1：1 的比例混合並適量加水，使水分含量約為30%後，接著以溫度121°C 高壓蒸氣滅菌40 分鐘以上，再將其與混合液以1000克：100毫升之比例混合，以得到栽培介質。其中，泥炭土質地疏鬆，具有較高的微孔性和低土壤體積密度，可提供宿主植物根系生長所需的營養成分。
於一些實施例中，於本案之步驟S500後更包括步驟：將塊菌菌種液刷附於宿主幼苗之根系以進行二次接種。具體而言，於本案之步驟S500後，已接種的宿主幼苗係置於溫度20-28°C且光照充足的育苗大棚内培養，待60 天後取出並觀察幼苗根系菌根感染情形。針對未感染菌根根系，則以軟刷蘸塊菌菌種液，將其刷附於幼苗根系上，以促成菌根第二次感染。
在塊菌的培養管理中，於宿主植物根部周圍用塊菌菌種液進行二次接種，係可增加異源交配型菌株，以增進塊菌子囊果的形成，進而提高其產量。為方便進行菌根之二次接種，係可以圓柱形不織布袋作為容器，並將其底部與距離底部1/3高度處進行密縫處理，以防止栽培基質外漏。此外，將容器從圓柱形圓形頂端等距往下直切至距離底部1/3高度之密縫處計5-8 條切口，切口片往下拉時如剖開之柚子皮，且兩切口片外面則以魔鬼氈固定，以便於重覆觀察或處理，然並不以此為限。
綜上所述，本案係提供一種塊菌菌種液之製備方法及塊菌菌根苗之培育方法，透過使用海藻精溶液製備塊菌菌種液及進行菌根苗培育，可提供養分促進塊菌菌絲體之生長，且可提供宿主植物與塊菌孢子發芽吸收之營養成分，促進宿主植物根系的生長。並且，透過使用甲基纖維素製備塊菌菌種液及進行菌根苗培育，可達到保水、使孢子混合均勻以及抑制子囊果內潛伏原生動物之游動之功效，且可避免孢子脫色。同時，透過添加中藥材，俾使液中原生動物進入休眠狀態，可避免原生動物大量繁殖造成子囊與孢子快速消失，藉此以維持子囊與孢子的濃度。
縱使本發明已由上述之實施例詳細敘述而可由熟悉本技藝之人士任施匠思而為諸般修飾，然皆不脫如附申請專利範圍所欲保護者。
S10、S20、S30、S40、S50:步驟
S100、S200、S300、S400、S500:步驟
第1圖係顯示本案較佳實施例之塊菌菌種液之製備方法之流程示意圖。 第2圖係顯示本案較佳實施例之塊菌菌根苗之培育方法之流程示意圖。
S10、S20、S30、S40、S50:步驟

Claims (10)

  1. 一種塊菌菌種液之製備方法，包括步驟：(a)提供一塊菌子囊果；(b)自該塊菌子囊果取得一產孢組織；(c)加入一海藻精溶液至該產孢組織，並進行粉碎以得到一子囊與孢子液；(d)加入該海藻精溶液至該子囊與孢子液後，進行打氣及分層萃取，並取得位於下層之一萃取物；以及(e)加入一甲基纖維素粉末至該萃取物，以得到該塊菌菌種液。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之塊菌菌種液之製備方法，其中該步驟(a)更包括將該塊菌子囊果進行滅菌並與一河沙混合之步驟。
  3. 如申請專利範圍第1項所述之塊菌菌種液之製備方法，其中該海藻精溶液之成分係包括海藻酸、硝酸銨及磷酸。
  4. 如申請專利範圍第1項所述之塊菌菌種液之製備方法，其中於該步驟(d)前更包括步驟(d0)：加入一中藥材至該子囊與孢子液。
  5. 如申請專利範圍第4項所述之塊菌菌種液之製備方法，其中該中藥材係為五味子或當歸。
  6. 如申請專利範圍第1項或第4項所述之塊菌菌種液之製備方法，其中該步驟(d)係重複2至3次。
  7. 如申請專利範圍第1項所述之塊菌菌種液之製備方法，其中於該步驟(e)中，該甲基纖維素粉末與該萃取物的比例為20±2公克：100毫升。
  8. 一種塊菌菌根苗之培育方法，包括步驟： (a)製備一塊菌菌種液，包括步驟：(a1)提供一塊菌子囊果；(a2)自該塊菌子囊果取得一產孢組織；(a3)加入一海藻精溶液至該產孢組織，並進行粉碎以得到一子囊與孢子液；(a4)加入該海藻精溶液至該子囊與孢子液後，進行打氣及分層萃取，並取得位於下層之一萃取物；以及(a5)加入一甲基纖維素粉末至該萃取物，以得到該塊菌菌種液；(b)提供一栽培基質；(c)將該塊菌菌種液澆淋於該栽培基質；(d)將一宿主幼苗浸沒於該塊菌菌種液；以及(e)將該宿主幼苗植入該栽培基質以進行培育。
  9. 如申請專利範圍第8項所述之塊菌菌根苗之培育方法，其中該步驟(b)更包括步驟：(b1)將該甲基纖維素粉末與該海藻精溶液以20±2公克：100毫升之比例混合，以得到一混合液；以及(b2)將該混合液與一泥炭土混合，以得到該栽培基質。
  10. 如申請專利範圍第8項所述之塊菌菌根苗之培育方法，其中於該步驟(e)後更包括步驟(f)：將該塊菌菌種液刷附於該宿主幼苗之根系以進行二次接種。
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Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101061781A (zh) * 2007-04-23 2007-10-31 攀枝花市农林科学研究院 中国块菌和印度块菌菌根苗培育方法
CN101328464A (zh) * 2008-05-27 2008-12-24 中国科学院昆明植物研究所 一种块菌与菌根合成方法
JP2013226130A (ja) * 2012-03-28 2013-11-07 Unitika Ltd 新規マゴジャクシ菌株及びその人工栽培方法
CN103548575A (zh) * 2013-11-12 2014-02-05 中国科学院昆明植物研究所 白块菌菌根合成方法
CN108990707A (zh) * 2018-05-15 2018-12-14 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所 一种块菌接种山核桃大树苗的菌根培育方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101061781A (zh) * 2007-04-23 2007-10-31 攀枝花市农林科学研究院 中国块菌和印度块菌菌根苗培育方法
CN101328464A (zh) * 2008-05-27 2008-12-24 中国科学院昆明植物研究所 一种块菌与菌根合成方法
JP2013226130A (ja) * 2012-03-28 2013-11-07 Unitika Ltd 新規マゴジャクシ菌株及びその人工栽培方法
CN103548575A (zh) * 2013-11-12 2014-02-05 中国科学院昆明植物研究所 白块菌菌根合成方法
CN108990707A (zh) * 2018-05-15 2018-12-14 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所 一种块菌接种山核桃大树苗的菌根培育方法

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