TWI675820B - 與ａｍｐａ受體特異性結合之新穎化合物 - Google Patents

與ａｍｐａ受體特異性結合之新穎化合物 Download PDF

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Takuya Takahashi
宮崎智之
Tomoyuki Miyazaki
須原哲也
Tetsuya Suhara
樋口真人
Makoto Higuchi
張明栄
Meiei CHO
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Abstract

本發明提供一種以下述式(I)所表示之化合物、其醫藥上可容許之鹽、或其溶劑合物。
Figure TWI675820B_A0001
(式中，A及Z分別獨立，為CO、SO或SO2；X及Y分別獨立，為S或O；R1~R4分別獨立，為氫、烷基、烯基、炔基或鹵素；R5每次出現時分別獨立，為烷基、烯基、炔基或鹵素；n為0~4之整數)。該化合物能夠與AMPA受體特異性結合，且腦移行性極高。

Description

與AMPA受體特異性結合之新穎化合物
本發明係關於一種與AMPA(α-胺基-3-羥基-5-甲基-4-異
Figure TWI675820B_D0001
唑-丙酸)受體特異性結合之新穎化合物、其醫藥上可容許之鹽、及其溶劑合物、以及包含該等化合物之組合物、該等化合物之製造方法、及用以製造該等化合物之中間物。
關於AMPA受體，已知：廣泛分佈於中神經系統，且會參與學習、記憶、神經退化、及細胞死亡等。近年來，正在推進以AMPA受體為目標之關於精神、神經疾病之治療之研究(專利文獻1~3)。為了調查AMPA受體與該等疾病之關係，可尋求對腦內之AMPA受體之顯現量及分佈進行評價。然而，為了調查該等AMPA受體之顯現量等，存在目前必須使用死後腦、及無法與健康人進行比較等各種問題。
關於分子成像法，例如正電子發射斷層攝影法(PET)，係能夠使活體內之分子之行為於體內可見化之方法。為了使活體內之AMPA受體之行為於體內可見化，以往係使幾個分子探針合成(非專利文獻1~3)。然而，先前之分子探針因對AMPA受體之特異性結合不充分、或探針之腦移行性較低之原因，難以將該等使用於AMPA受體之體內成像。因此，謀求與AMPA受體特異性結合並表現出較高之腦內集聚之新化合物之開發。
先前技術文獻 專利文獻
專利文獻1：日本專利特開2012-207021號公報
專利文獻2：日本專利特開2010-202525號公報
專利文獻3：日本專利特表2006-525292號公報
非專利文獻1：Gao M et al., Synthesis of carbon-11 and fluorine-18 labeled N-acetyl-1-aryl-6,7-dimethoxy-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline derivatives as new potential PET AMPA receptor ligands., Bioorg. Med. Chem. Lett. 2006 Apr 15; 16(8): 2229-33.
非專利文獻2：Langstrom B et al., Endogenous compounds labeled with radionuclides of short half-life-some perspectives., J. Labelled Comp. Radiopharm. 2013 Mar-Apr; 56(3-4): 251-62.
非專利文獻3：Arstad E. et al., Closing in on the AMPA receptor: synthesis and evaluation of 2-acetyl-1-(4'-chlorophenyl)-6-methoxy-7-[11C]methoxy-1,2,3,4-tetrahydro- isoquinoline as a potential PET tracer., Bioorg. Med. Chem. 2006 Jul 15; 14(14): 4712-7.
本發明之目的在於提供一種與AMPA受體特異性結合且腦移行性較高之新穎化合物。本發明之目的尤其在於提供一種用以使AMPA受體於體內成像之新穎化合物。
本發明者等人進行了銳意研究，結果於合成能夠與AMPA受體特異性結合之較高之新穎化合物方面獲得了成功。進而，本發明者等人以藉由結晶結構分析而得之關於2-[2,6-二氟-4-({2-[(苯磺醯基)胺基]乙基}硫)苯氧基]乙醯胺與AMPA受體之相互作用部位之見解(Biochemistry 2010年，第49卷，第2843-2850頁)為基礎，發現：於化合物之兩末端具備磺醯胺部位(-SO2N-)及醯胺基(-CON-)，能夠於無 損於AMPA受體中之結合活性之情況下對磺醯胺基之氮原子加成取代基，藉此使化合物之腦集聚性提昇。因此，藉由本發明而提供的是以下述式(I)所表示之化合物、或其醫藥上可容許之鹽或者溶劑合物。
Figure TWI675820B_D0002
(式中，A及Z分別獨立，為CO、SO或SO2；X及Y分別獨立，為S或O；R1~R4分別獨立，為氫、烷基、烯基、炔基或鹵素；R5每次出現時分別獨立，為烷基、烯基、炔基或鹵素；n為0~4之整數)。
於一實施態樣中，式(I)之化合物中，1個或1個以上原子為該原子之放射性同位素。
本發明之化合物能夠與AMPA受體特異性結合，且腦移行性極高。尤其是本發明之化合物能夠用作分子探針例如PET探針，能夠使活體內之AMPA受體於體內進行成像。又，本發明之化合物容易合成，且能夠以高產率獲得。
圖1係表示各種化合物於海馬(hippocampus)組織中之集聚率之圖表。
圖2係表示投予PEPA或K-2之後之相對於AMPA電流之基準值之比的圖表。
圖3係表示將K-2或媒劑進行活體投予時之AMPA受體量之變化的圖表。左圖：呈現於細胞膜表面之AMPA受體之量；右圖：AMPA受體之總量。
圖4係使用了放射性標記化K-2之大鼠之體內PET圖像。左圖：投予了媒劑之大鼠；右圖：利用0.5mg/kg之非放射性標記化K-2進行阻斷之大鼠。
圖5係表示大鼠之海馬及腦幹中之K-2之時間放射能曲線(TAC)。(a)媒劑投予後之海馬、(b)阻斷後之海馬、(c)媒劑投予後之腦幹、及(d)阻斷後之腦幹。圖表中，(c)之線與(d)之線重複。
圖6係經低濃度(0.05mg/kg)之非放射性標記化K-2進行過阻斷之大鼠之體內PET圖像。
圖7係表示以腦幹作為對照之特異性結合之TAC。
圖8係將放射性標記化K-2於體內之特異性進行定量化之圖表。左：紋狀體；右：海馬。黑色：投予了媒劑之大鼠；灰色：進行過阻斷之大鼠。
圖9係表示各腦區域中之AMPA受體之顯現總量之比較的圖表。
圖10係表示各腦區域中之AMPA受體之生物化學顯現量與PET圖像值(%SUV)之關聯的圖表。
圖11係於兩側紋狀體投予了shRNA之大鼠之體內PET圖像。使同一個體之左紋狀體中顯現有相對於GluA1~3之shRNA(使AMPA受體之蛋白質無法顯現之RNA)，使右紋狀體中顯現有零亂RNA(尤其不具有效果之RNA)。
圖12係於兩側紋狀體投予了shRNA之大鼠中之shRNA側及零亂側之PET圖像值之比較的圖表。
(1.定義)
所謂用語「烷基」，意指脂肪族飽和烴失去1個氫原子而產生之1價基。烷基例如具有1~15個(C1-C15)碳原子，典型而言，具有1~10個(C1-C10)、1~8個(C1-C8)、1~6個(C1-C6)、1~5個(C1-C5)、1~4個(C1-C4)、1~3個(C1-C3)、1~2個(C1-C2)、或2~6個(C2-C6)碳原子。烷基可為直鏈或者支鏈狀。若列舉烷基之例，則有：甲基、乙基、丙基、異丙基、2-甲基-1-丙基、2-甲基-2-丙基、2-甲基-1-丁基、3-甲基-1-丁基、2-甲基-3-丁基、2,2-二甲基-1-丙基、2-甲基-1-戊基、3-甲基-1-戊基、4-甲基-1-戊基、2-甲基-2-戊基、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、2,2-二甲基-1-丁基、3,3-二甲基-1-丁基、2-乙基-1-丁基、正丁基、異丁基、第三丁基、戊基、異戊基、新戊基、及己基等，但並無限定。烷基亦可進而藉由適當之取代基取代。用語「烷基」可包含含有放射性同位素之烷基，例如[11C]烷基。
所謂用語「烯基」，意指至少具有1個雙鍵之脂肪族不飽和烴基。烯基例如具有2~15個(C2-C15)碳原子，典型而言，具有2~10個(C2-C10)、2~8個(C2-C8)、2~6個(C2-C6)、2~5個(C2-C5)、2~4個(C2-C4)、2~3個(C2-C3)、3~6個(C3-C6)、3~8個(C3-C8)、4~6個(C4-C6)、4~7個(C4-C7)、或4~8個(C4-C8)碳原子。烯基可為直鏈或者支鏈狀。若列舉烯基之例，則具體而言有：乙烯基(-CH=CH2)、烯丙基(-CH2CH=CH2)、-CH=CH(CH3)、-CH=C(CH3)2、-C(CH3)=CH2、-C(CH3)=CH(CH3)、-C(CH2CH3)=CH2、1,3-丁二烯基(-CH=CH-CH=CH2)、及庚-1,6-二烯-4-基(-CH2-(CH2CH=CH2)2)等，但並無限定。烯基亦可進而藉由適當之取代基取代。用語「烯基」可包含含有放射性同位素之烯基，例如[11C]烯基。
所謂用語「炔基」，意指至少具有1個三鍵之脂肪族不飽和烴 基。炔基例如具有2~15個(C2-C15)碳原子，典型而言，具有2~10個(C2-C10)、2~8個(C2-C8)、2~6個(C2-C6)、2~5個(C2-C5)、2~4個(C2-C4)、2~3個(C2-C3)、3~6個(C3-C6)、3~8個(C3-C8)、4~6個(C4-C6)、4~7個(C4-C7)、或4~8個(C4-C8)碳原子。炔基可為直鏈或者支鏈狀。若列舉炔基之例，則有：乙炔基(-C≡CH)、-C≡CH(CH3)、-C≡C(CH2CH3)、-CH2C≡CH、-CH2C≡C(CH3)、及-CH2C≡C(CH2CH3)等，但並無限定。炔基亦可進而藉由適當之取代基取代。用語「炔基」可包含含有放射性同位素之炔基，例如[11C]炔基。
所謂用語「[11C]烷基」，意指構成烷基之碳之中之1個以上為11C之烷基。同樣，用語「[11C]烯基」及用語「[11C]炔基」分別意指構成烯基之碳之中之1個以上為11C之烯基、及構成炔基之碳之中之1個以上為11C之炔基。
用語「鹵素(halogen)」或「鹵素(halo)」意指氟(-F)、氯(-Cl)、溴(-Br)、及碘(-I)。
所謂用語「醫藥上可容許之鹽」，係指對哺乳動物尤其是人類並非有害之鹽。醫藥上可容許之鹽可使用包含無機酸或者無機鹼、或有機酸或者有機鹼之無毒性之酸或鹼而形成。若列舉醫藥上可容許之鹽之例，則有：由鋁、鈣、鋰、鎂、鉀、鈉及鋅等而形成之金屬鹽、或由離胺酸、N,N'-二苄基乙二胺、氯普魯卡因、膽鹼、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺(N-甲基葡萄胺)及普魯卡因等而形成之有機鹽等。又，醫藥上可容許之鹽包含酸加成鹽及鹼加成鹽。
所謂用語「溶劑合物」，意指相對於本發明化合物之藉由1個或複數個溶劑分子之聚集而形成之含溶劑化合物。溶劑合物例如包含一溶劑合物、二溶劑合物、三溶劑合物、及四溶劑合物。又，溶劑合物包含水合物。
(2.化合物及放射性標記化合物)
本發明提供下述式(I)之化合物、或其醫藥上可容許之鹽或者溶劑合物。
Figure TWI675820B_D0003
式中，A及Z分別獨立，為CO、SO或SO2，只要為該等基，則可期待於與AMPA受體之間顯示相互作用。該等之中，較佳為A及Z分別獨立，為CO或SO2，更佳為A為SO2且Z為CO。
X及Y分別獨立，為S或O，較佳為X為S且Y為O。
R1~R4分別獨立，為氫、烷基、烯基、炔基或鹵素。於一實施態樣中，並非R1~R4之全部成為氫，即R1~R4之至少1者為氫以外者。於一實施態樣中，R2為烷基。於另一實施態樣中，R1為烷基或鹵素。R1可存在於鄰位、間位、或對位之任一者。較佳為R1存在於對位。於進而另一實施態樣中，R3及R4之中之一者為氫，另一者為烷基。
R5每次出現時分別獨立，為烷基、烯基、炔基或鹵素。較佳為R5為鹵素，尤佳為氟。進而較佳為R5相對於Y基存在於兩者之鄰位(即，相對於X基兩者之間位)。
n為0~4之整數。較佳為n為2。
於進而另一實施態樣中，作為式(I)之化合物中之各取代基之組合，於A為SO2、Z為CO、X為S、Y為O、R2為烷基、R1為氫、烷基或鹵素、R1為烷基或鹵素之情形時，較佳為R1存在於對位、R3及R4之中一者為氫且另一者為烷基、R5每次出現時分別獨立且為烷基、烯基、 炔基或鹵素、n為0~4之整數之組合。
於進而另一實施態樣中，作為式(I)之化合物中之各取代基之組合，於A為SO2、Z為CO、X為S、Y為O、R2為烷基、R1為氫、烷基或鹵素、R1為烷基或鹵素之情形時，較佳為R1存在於對位、R3及R4之中一者為氫且另一者為烷基、R5為鹵素、尤其是氟、R5相對於Y基存在於兩者之鄰位(即，相對於X基兩者之間位)、n為2之組合。
於進而另一實施態樣中，作為式(I)之化合物中之各取代基之組合，於A為SO2、Z為CO、X為S、Y為O、R2為烷基、R1為氫、烷基或鹵素、R1為烷基或鹵素之情形時，較佳為R1存在於對位、R3及R4同時為氫、R5每次出現時分別獨立且為烷基、烯基、炔基或鹵素、n為0~4之整數之組合。
於一實施態樣中，自式(I)之化合物除去不包含放射性同位素之2-[2,6-二氟-4-({2-[(苯磺醯基)胺基]乙基}硫)苯氧基]乙醯胺(PEPA)、4-[2-(4-氯苯磺醯基胺基)乙硫基]-2,6-二氟苯氧基乙醯胺、N,N-二甲基-4-[2-(4-氯苯磺醯基胺基)乙硫基]-2,6-二氟苯氧基乙醯胺、4-[2-(4-氯苯磺醯基胺基)乙硫基]-2-氟苯氧基乙醯胺、N,N-二甲基-4-[2-(4-氯苯磺醯基胺基)乙硫基]-2-氟苯氧基乙醯胺、N,N-二甲基-4-[2-(苯磺醯基胺基)乙硫基]-2,6-二氟苯氧基乙醯胺、4-[2-(苯磺醯基胺基)乙硫基]-2-氟苯氧基乙醯胺、及N,N-二甲基-4-[2-(苯磺醯基胺基)乙硫基]-2-氟苯氧基乙醯胺。
若列舉式(I)之化合物之具體例，則有以下化合物：
於一實施態樣中，式(I)之化合物或其醫藥上可容許之鹽或者溶劑合物之構成該化合物之1個或1個以上原子為該原子之放射性同位素，即為下述式(I)之化合物、或其醫藥上可容許之鹽或者溶劑合物：
Figure TWI675820B_D0005
(式中，A及Z分別獨立，為CO、SO或SO2； X及Y分別獨立，為S或O；R1~R4分別獨立，為氫、烷基、烯基、炔基或鹵素；R5每次出現時分別獨立，為烷基、烯基、炔基或鹵素；n為0~4之整數；1個或1個以上原子為該原子之放射性同位素)。
於式(I)之化合物中，放射性同位素選自由15O、13N、11C、及18F等所組成之群，但並無特別限定。就半衰期之觀點而言，放射性同位素較佳為11C或18F。
較佳為R1~R4之1、2、3或4個較佳為1個為包含放射性同位素之基(例如，[11C]烷基(較佳為11CH3)、[11C]烯基、或[11C]炔基、或18F)。
作為式(I)之化合物，於A為SO2、Z為CO、X為S、Y為O、R2為烷基、R1為氫、烷基或鹵素、R1為烷基或鹵素之情形時，較佳為R1存在於對位、R3及R4之中一者為氫且另一者為烷基、R5為鹵素尤其是氟、R5相對於Y基存在於兩者之鄰位(即，相對於X基兩者之間位)、n為2、R1~R4之1個為包含放射性同位素之基(例如，[11C]烷基(較佳為11CH3)、[11C]烯基、或[11C]炔基、或18F)。
於進而另一實施態樣中，作為式(I)之化合物，於A為SO2、Z為CO、X為S、Y為O、R2為烷基、R1為氫、烷基或鹵素、R1為烷基或鹵素之情形時，更佳為R1存在於對位、R3及R4之中一者為氫且另一者為烷基、R5為鹵素尤其是氟、R5相對於Y基存在於兩者之鄰位(即，相對於X基兩者之間位)、n為2、R1~R4之1個為包含放射性同位素之基(例如，[11C]烷基(較佳為11CH3)、[11C]烯基、或[11C]炔基、或18F)。
若列舉包含放射性同位素之化合物之具體例，則有以下化合物：[表2]
(3.製造方法及中間物)
(合成例1)
R2為烷基、烯基或炔基之式(I)之化合物或其醫藥上可容許之鹽或者溶劑合物例如可藉由使下述式(II)之化合物或其醫藥上可容許之鹽或者溶劑合物：
Figure TWI675820B_D0007
(式中，A、X、Y、Z、R1、R3、R4、R5、及n與於式(I)之化合物 中所定義者相同)與X1-R2(式中，R2為烷基、烯基或炔基，X1為鹵素)進行反應而製造。於一實施態樣中，式(I)及式(II)中之R3及R4均為氫。於一實施態樣中，R2為[11C]烷基、[11C]烯基、或[11C]炔基，較佳為R2為[11C]烷基尤其是11CH3。於一實施態樣中，X1為I。若列舉式(II)之化合物之具體例，則有2-[2,6-二氟-4-({2-[(苯磺醯基)胺基]乙基}硫)苯氧基]乙醯胺(PEPA)。
該反應可於二甲基甲醯胺(DMF)、四氫呋喃、乙腈、丙酮或二甲基亞碸等極性非質子性溶劑中進行。又，該反應較佳為使用NaOH等鹼於鹼性條件下進行。反應溫度較佳為室溫~回流溫度，尤其是60~100℃，更佳為80℃。反應時間為1分鐘~10分鐘，尤其是5分鐘。
由於放射性同位素之較短之半衰期，PET探針通常必須於較短之時間內且以高產率進行製造。該反應由於係於較短之時間內定量地進行，故而適合於PET探針之製造。
本發明者等人發現：式(II)之化合物與X1-R2之反應由式(II)之化合物之與A基鄰接之NH基定量地引起。因此，即便R3及R4為氫，亦能夠於不使用保護基之情況下僅將該NH基轉換為N-R2基。
式(II)之化合物或其醫藥上可容許之鹽或者溶劑合物可用作用以製造R2為烷基、烯基或炔基之式(I)之化合物或其醫藥上可容許之鹽或者溶劑合物之中間物。又，式(II)之化合物或其醫藥上可容許之鹽或者溶劑合物能夠用作用以製造R2為[11C]烷基、[11C]烯基、或[11C]炔基之經放射性標記之式(I)之化合物或其醫藥上可容許之鹽或者溶劑合物之中間物。
(合成例2)
R1為烷基、烯基、或炔基之式(I)之化合物、或其醫藥上可容許之鹽或者溶劑合物例如可藉由使下述式(III)之化合物、或其醫藥上可容許之鹽或者溶劑合物：
Figure TWI675820B_D0008
(式中，A、X、Y、Z、R2、R3、R4、R5、及n與上述所定義者相同，Ra分別獨立，為烷基、烯基、或炔基)與X1-R1(式中，R1與上述所定義者相同，X1為鹵素)進行反應而製造。於一實施態樣中，Ra全部為正丁基。於一實施態樣中，R1為[11C]烷基、[11C]烯基、或[11C]炔基，較佳為R1為[11C]烷基尤其是11CH3。於一實施態樣中，X1為I。
式(III)之化合物之具體例為如下。
該反應可於鈀觸媒、膦配體、碳酸鹽及鹵化銅之存在下進行。該鈀觸媒例如有三(二亞苄基丙酮)二鈀等。又，該膦配體例如有三(鄰甲苯基)膦或(二-第三丁基)甲基膦等。該碳酸鹽有K2CO3等。該鹵化銅有CuCl等。該反應可於二甲基甲醯胺(DMF)、四氫呋喃、乙腈、丙酮或二甲基亞碸等極性非質子性溶劑中進行。反應溫度較佳為室溫~回流溫度尤其是60~100℃，更佳為80℃。反應時間為1分鐘~10分鐘，尤其是5分鐘。
PET探針通常因放射性同位素之較短之半衰期而必須以較短之時間且以高產率進行製造。該反應由於係以較短之時間定量地進行，故而適合於PET探針之製造。
式(III)之化合物或其醫藥上可容許之鹽或者溶劑合物可用作用以製造R1為烷基、烯基、或炔基之式(I)之化合物或其醫藥上可容許之鹽或者溶劑合物之中間物。又，式(III)之化合物或其醫藥上可容許之鹽或者溶劑合物可用作用以製造R1為[11C]烷基、[11C]烯基、或[11C]炔基之進行過放射性標記之式(I)之化合物或其醫藥上可容許之鹽或者溶劑合物之中間物。
式(I)之化合物或其醫藥上可容許之鹽或者溶劑合物亦能夠藉由下述實施例所示之方法而製造。
(4.使用)
式(I)之化合物或其醫藥上可容許之鹽或者溶劑合物能夠與AMPA受體特異性結合。因此，式(I)之化合物或其醫藥上可容許之鹽或者溶劑合物能夠使用於AMPA受體之成像。該化合物尤其能夠用作分子探針例如PET探針。
關於成像，包含分子成像，例如正電子發射斷層攝影法(Positron Emission Tomography，PET)、多光子成像法、雙光子成像法、近紅外螢光成像法、放射攝影術(autoradiography)、及單光子發射電腦斷層掃描攝影術(Single photon emission computed tomography，SPECT)等。較佳為成像為PET成像。
本發明提供一種包含式(I)之化合物或其醫藥上可容許之鹽或者溶劑合物之用以使AMPA受體成像之組合物。該組合物可包含醫藥上可容許之載體。關於醫藥上可容許之載體，並無特別限制，例如有：殺菌水、食鹽水、生理食鹽水或磷酸鹽緩衝液(PBS)、氯化鈉注射液、林葛爾氏注射液、等張性葡萄糖注射液、無菌水注射液、葡萄 糖、及乳酸林葛爾氏注射液等。
該組合物中之式(I)之化合物或其醫藥上可容許之鹽或者溶劑合物、及醫藥上可容許之載體之含量並無特別限制，該等可由所使用之化合物之種類；所投予之哺乳動物之年齡、體重、健康狀態、性別及食物內容；投予之次數、及投予路徑；治療時間；同時使用之其他藥劑等各種因素而決定。式(I)之化合物或其醫藥上可容許之鹽或者溶劑合物之含量只要為能夠使AMPA受體成像之量，則並無特別限制。該組合物較佳為以能夠投予式(I)之化合物或其醫藥上可容許之鹽或者溶劑合物之方式進行製備。關於醫藥上可容許之載體之含量，例如可設為該組合物之1~99重量%之量。
又，本發明提供一種用於AMPA受體之成像中之用途之式(I)之化合物或其醫藥上可容許之鹽或者溶劑合物。進而，本發明提供一種用於使AMPA受體成像之藥劑之製造中之式(I)之化合物或其醫藥上可容許之鹽或者溶劑合物之用途。
進而，本發明提供一種用以使AMPA受體成像之方法，該方法包含將有效量之式(I)之化合物或其醫藥上可容許之鹽或者溶劑合物投予至哺乳動物。哺乳動物例如包含大鼠、小鼠、豚鼠、或倉鼠等。投予方法並無特別限制，例如有非經口投予、靜脈內投予、或腹腔內投予。較佳為靜脈內投予。關於投予量，只要為能夠使AMPA受體成像之量，則並無特別限制。
進而，本發明提供一種包含式(I)之化合物或其醫藥上可容許之鹽或者溶劑合物之用以使AMPA受體成像之試劑盒。又，本發明提供一種用以製造式(I)之化合物或其醫藥上可容許之鹽或者溶劑合物之中間物，例如式(II)之化合物或其醫藥上可容許之鹽或者溶劑合物；及/或包含式(III)之化合物或其醫藥上可容許之鹽或者溶劑合物之用以使AMPA受體成像之試劑盒。該試劑盒可進而包含對該化合物之投予 量、投予方法、使用方法、保管方法、及/或用以使AMPA受體成像之方法進行指示之指示書。該試劑盒可進而包含放射性標記化用試劑，例如鹵化[11C]烷基、鹵化[11C]烯基、或鹵化[11C]炔基等。
進而，本發明提供一種AMPA受體之成像方法，該方法具有對自投予了式(I)之化合物、或其醫藥上可容許之鹽或者溶劑合物之被檢者之腦發出之放射線進行檢測之步驟。
[實施例]
(5.實施例)
以下記載實施例。下述實施例係為了加深關於申請專利範圍之理解而記載者，並非意在對申請專利範圍進行限定。
(實施例1)
(K-1及K-2之合成)
按照下述方案，而合成2-[2,6-二氟-4-({2-[(苯磺醯基)胺基]乙基}硫)苯氧基]乙醯胺(K-1，PEPA)及{4-[2-(苯磺醯基-甲基-胺基)-乙硫基]-2,6-二氟-苯氧基}-乙醯胺(K-2)。
關於各化合物之1H NMR光譜，使用TMS(tetramethylsilane，四甲基矽烷)作為內部標準，並以Bruker Avance III 400MHz或Varian Mercury plus-300MHz進行記錄。
Figure TWI675820B_D0010
Figure TWI675820B_D0011
步驟(i)：(2,6-二氟-苯氧基)-乙酸甲酯(2)之合成
Figure TWI675820B_D0012
於2,6-二氟-苯酚(1)(5.00g，38.5mmol)之丙酮溶液(75mL)中加入K2CO3(8.40g，60.7mmol)，並於10分鐘後於反應溶液中加入溴乙酸甲酯(5.80g，38.5mmol)。將該反應溶液於室溫下攪拌一晚。於反應結束後，將該反應混合液注入濃鹽酸(20mL)與冰水(200ml)之混合液中，利用EtOAc(100mL×3)進行萃取，並利用水(50mL×3)及食鹽水(100mL×2)洗淨有機層，利用Na2SO4使其乾燥並進行過濾。其後，於真空下進行濃縮，以黃色油之形式而獲得化合物(2)(7.50g，97%)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)：δ 3.78(s,3H),4.74(s,2H),6.86-6.99(m,3H).
步驟(ii)：(4-氯磺醯基-2,6-二氟-苯氧基)-乙酸甲酯(3)之合成
Figure TWI675820B_D0013
於(2,6-二氟-苯氧基)-乙酸甲酯(2)(5.00g，24.7mmol)之DCM(dichloromethane，二氯甲烷)溶液中加入氯磺酸(17.2g，24.7mmol)，於冰浴下滴加加入，將反應溶液加熱至45℃，並攪拌1.5小時。於反應結束後，將該反應混合液利用50mL之冰水進行驟冷，分離有機層，且利用水(300mL×3)進行洗淨。利用Na2SO4使其乾燥並進行過濾，其後，於真空下進行濃縮，藉此以黃色油之形式而獲得化合物(3)(5.50g，74%)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)：δ 3.81(s,3H),4.96(s,2H),7.61(s,1H),7.64(s,1H).
步驟(iii)：(2,6-二氟-4-巰基-苯氧基)-乙酸甲酯(4)之合成
Figure TWI675820B_D0014
於(4-氯磺醯基-2,6-二氟-苯氧基)-乙酸甲酯(3)(5.50g，18.3mmol)、SnCl2(14.5g，64.2mmol)、及甲醇(50mL)之混合液中滴加加入濃鹽酸(25mL)。將反應混合液加熱至回流溫度，並攪拌2小時。於冷卻後，將該反應混合液注入冰水(100mL)中，利用DCM(100mL×3)進行萃取。利用水(100mL×3)及食鹽水(100mL×2)洗淨有機層，並利用Na2SO4使其乾燥並進行過濾，其後，於真空下進行濃縮，藉此以黃 色油之形式而獲得化合物(4)(3.30g，77%)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)：δ 3.52(s,1H),3.77(s,3H),4.71(s,2H),6.83(s,1H),6.86(s,1H).
步驟(iv)：[4-(2-苯磺醯基胺基-乙硫基)-2,6-二氟-苯氧基]-乙酸甲酯(5)之合成
Figure TWI675820B_D0015
將(2,6-二氟-4-巰基-苯氧基)-乙酸甲酯(4)(1.10g，4.7mmol)、碳酸鉀(778mg，5.6mmol)、及丙酮(15mL)之混合液於N2下於室溫下攪拌20分鐘。於該反應溶液中加入N-(2-溴-乙基)-苯磺醯胺(9)(1.30g，4.90mmol)，並將該反應溶液於室溫下攪拌一晚。於反應結束後，將該反應溶液注入30mL之2N HCl中，利用EtOAc(50mL×3)進行萃取。利用水(50mL×3)及食鹽水(100mL×2)洗淨有機層，並利用Na2SO4使其乾燥並進行過濾，其後，於真空下進行濃縮，藉此獲得殘渣。利用矽膠管柱層析法(PE(petroleum ether，石油醚)/EA(ethyl acetate，乙酸乙酯)=10/1至3/1，v/v)將該殘渣進行精製，以黃色油之形式而獲得化合物(5)(1.60g，84%)。
1HNMR(300MHz,CDCl3)：δ 2.95(t,J=6.6Hz,2H),3.12(q,J=6.3Hz,2H),3.78(s,3H),4.72(s,2H),5.20(t,J=6.0Hz,1H),6.76-6.83(m,2H),7.47-7.60(m,3H),7.82-7.84(m,2H).
步驟(v)：{4-[2-(苯磺醯基-甲基-胺基)-乙硫基]-2,6-二氟-苯氧基}-乙酸甲酯(6)之合成
Figure TWI675820B_D0016
於[4-(2-苯磺醯基胺基-乙硫基)-2,6-二氟-苯氧基]-乙酸甲酯(5)(300mg，0.72mmol)及K2CO3(397mg，2.88mmol)之10mL DMF混合液中，於0℃下加入MeI(255mg，1.80mmol)。其後，將反應溶液於室溫下攪拌1小時。於反應結束後，將該反應溶液利用20ml之水進行稀釋，並利用EtOAc(30mL×3)進行萃取。利用水(30mL×3)及食鹽水(20mL×2)洗淨有機層，並利用Na2SO4使其乾燥並進行過濾，其後，於真空下進行濃縮，藉此以黃色油之形式而獲得化合物(6)(285mg，92%)。
1HNMR(300MHz,CDCl3)：δ 2.81(s,3H),3.04-3.09(m,2H),3.19-3.24(m,2H),3.79(s,3H),4.74(s,2H),6.90-6.94(m,2H),7.50-7.60(m,3H),7.74-7.77(m,2H).
步驟(vi)：{4-[2-(苯磺醯基-甲基-胺基)-乙硫基]-2,6-二氟-苯氧基}-乙醯胺(K-2)之合成
Figure TWI675820B_D0017
將{4-[2-(苯磺醯基-甲基-胺基)-乙硫基]-2,6-二氟-苯氧基}-乙酸甲酯(6)(40.0mg，0.09mmol)及13mL之4N MeOH/NH3之混合液於室溫下攪拌18小時。於反應結束後，將該反應混合液於真空下進行濃縮，藉此獲得殘渣。利用製備型HPLC(high performance liquid chromatography，高效液相層析法)將該殘渣進行精製，以白色固體之形式而獲得化合物(K-2)(22.0mg，57%)。
1HNMR(300MHz,CDCl3)：δ 2.82(s,3H),3.08-3.13(m,2H),3.20-3.26(m,2H),4.58(s,2H),6.93-6.99(m,2H),7.50-7.63(m,3H),7.75-7.78(m,2H).
步驟(vii)：2-[2,6-二氟-4-({2-[(苯磺醯基)胺基]乙基}硫)苯氧基]乙醯胺(K-1)之合成
Figure TWI675820B_D0018
將[4-(2-苯磺醯基胺基-乙硫基)-2,6-二氟-苯氧基]-乙酸甲酯(5)(200mg，0.48mmol)及10mL之4N MeOH/NH3之混合液於室溫下攪拌18小時。於反應結束後，將該反應混合液於真空下進行濃縮，藉此獲得殘渣。利用製備型HPLC將該殘渣進行精製，以白色固體之形式而獲得化合物K-1(110mg，57%)。
1HNMR(300MHz,CDCl3+D2O)：δ 2.97-3.02(m,2H),3.11-3.16(m,2H),4.56(s,2H),6.82-6.90(m,2H),7.48-7.61(m,3H),7.82-7.87(m,2H).
步驟(viii)：N-(2-溴-乙基)-苯磺醯胺(9)之合成
Figure TWI675820B_D0019
於苯磺醯基氯(7)(3.00g，17.0mmol)及2-溴乙胺氫溴酸鹽(8)(3.80g，18.7mmol)之DCM(30mL)溶液中，於冰浴下加入DIPEA(diisopropylethylamine，二異丙基乙胺)(4.80g，37.4mmol)。其後，將反應溶液於相同溫度下攪拌1.5小時。於反應結束後，將該反應溶液利用20mL之水進行稀釋，並利用EtOAc(30mL×3)進行萃取。利用水(30mL×3)及食鹽水(20mL×2)洗淨有機層，並利用Na2SO4使其乾燥並進行過濾，其後，於真空下進行濃縮，藉此以白色固體之形式而獲得化合物(9)(4.40g，98%)。
1HNMR(300MHz,CDCl3)：δ 3.36-3.39(m,4H),5.09(s,1H),7.50-7.63(s,3H),7.87-7.89(s,2H).
(實施例2)
(M-1、M-2及M-3之合成)
按照下述方案，而合成2-[4-(2-苯磺醯基胺基-乙硫基)-2,6-二氟-苯氧基]-N-甲基-乙醯胺(M-1)、2-{2,6-二氟-4-[2-(4-氟-苯磺醯基胺基)-乙硫基]-苯氧基}-乙醯胺(M-2)、及2-{2,6-二氟-4-[2-(4-甲基-苯磺醯基胺基)-乙硫基]-苯氧基}-乙醯胺(M-3)。
關於各化合物之1H NMR光譜，使用TMS作為內部標準，並以Varian Mercury plus-400MHz進行記錄。關於LCMS，使用下述者：Agilent 1200A；管柱：C18；管柱大小：4.6*50分鐘；流動相： B(ACN)，A(0.05%NH3之水)；梯度(B%)：如實施例所示。
Figure TWI675820B_D0020
步驟(i)：3,5-二氟-4-羥基-苯磺醯基氯(10)之合成
Figure TWI675820B_D0021
於化合物(1)(5.0g)之DCM(50mL)溶液中滴加加入氯磺酸(15 mL)。將反應混合液於25℃下攪拌1小時。TLC(石油醚/EtOAc：20/1)表示反應已完成。其後，將該溶液注入碎冰中。將有機層分離，並使其通過矽藻土進行過濾。使濾液乾燥，並於真空下進行蒸餾去除，而以黃色油之形式而獲得化合物(10)：5g(57%)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)：δ 6.30(s,1H),7.66-7.68(m,2H).
步驟(ii)：2,6-二氟-4-巰基-苯酚(11)之合成
Figure TWI675820B_D0022
於三苯基膦(3.4g，13.1mmol)及DMF(0.1mL)之DCM(3mL)溶液中，於氮氣下於0℃下滴加加入化合物(10)(1.0g，4.3mmol)之DCM(4mL)溶液。將反應混合液於25℃下攪拌2小時。其後，於該混合液中加入1N HCl調整為pH值=3，並利用EA進行萃取。利用硫酸鈉使有機層乾燥，將溶劑去除，以黃色油之形式而獲得粗化合物(11)。
步驟(iii)：2-[2-(3,5-二氟-4-羥基-苯基硫基)-乙基]-異吲哚-1,3-二酮(12)之合成
Figure TWI675820B_D0023
於粗化合物(11)(14g，86mmol)之DMF(100mL)溶液中，加入2- (2-溴-乙基)-異吲哚-1,3-二酮(13.2g，51.8mmol)及K2CO3(23.8g，172.4mmol)。將混合液於25℃下攪拌一晚。其後，於該混合液中加入1N HCl調整為pH值=3，並利用EA(ethyl acetate，乙酸乙酯)進行萃取。利用硫酸鈉使有機層乾燥，將溶劑去除，以黃色固體之形式而獲得化合物(12)(8g，27%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO_d6)：δ 3.20-3.23(t,2H),3.75-3.79(t,2H),7.08-7.10(d,2H),7.84(s,4H).
步驟(iv)：{4-[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-異吲哚-2-基)-乙硫基]-2,6-二氟-苯氧基}-乙酸乙酯(13)之合成
Figure TWI675820B_D0024
於將化合物(12)(5.0g，15mmol)溶解於DMF(30mL)中而成之溶液中，加入3-溴-丙酸乙酯(2.5g，15mmol)及K2CO3(3.0g，22.5mmol)。將混合液於25℃下攪拌一晚。其後，利用EA對該混合液進行萃取。利用硫酸鈉使有機層乾燥，將溶劑去除，以白色固體之形式而獲得化合物(13)(6g，97%)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)：δ 1.21-1.24(t,3H),3.11-3.14(t,2H),3.84-3.88(t,2H),4.18-4.20(d,2H),4.61(s,2H),6.91-6.94(d,2H),7.66-7.68(m,2H),7.77-7.79(m,2H).
步驟(v)：2-{4-[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-異吲哚-2-基)-乙硫基]-2,6-二氟-苯氧基}-N-甲基-乙醯胺(14)之合成
[化20]
Figure TWI675820B_D0025
將化合物(13)(0.5g，1.2mmol)之甲基胺醇溶液(10mL)於100℃下攪拌30分鐘。其後，將混合液進行濃縮，以黃色油之形式而獲得粗化合物(14)(1g)。
步驟(vi)：2-[4-(2-胺基-乙硫基)-2,6-二氟-苯氧基]-N-甲基-乙醯胺(15)之合成
Figure TWI675820B_D0026
於90℃下將肼水合物(0.25g，5mmol)加入粗化合物(14)(1g，2.5mmol)之EtOH(10mL)溶液中。將溶液加熱至90℃，並攪拌30分鐘，其後，冷卻至室溫。將產物過濾，並利用EtOH進行洗淨。利用硫酸鈉使有機層乾燥，並進行濃縮，以黃色油之形式而獲得粗化合物(15)(0.5g)。
步驟(vii)：2-[4-(2-苯磺醯基胺基-乙硫基)-2,6-二氟-苯氧基]-N-甲基-乙醯胺(M-1)之合成
[化22]
Figure TWI675820B_D0027
將苯磺醯基氯(0.4g，2.2mmol)及三乙基胺(0.2g，2.2mmol)加入粗化合物(15)(0.5g，1.8mmol)之DCM(10mL)溶液中。其後，將混合液於25℃下攪拌1小時，並利用EA進行萃取。利用硫酸鈉使有機層乾燥，並進行濃縮。將殘渣利用急速層析法進行精製，以白色固體之形式而獲得化合物(M-1)(20mg)。
1H-NMR(400MHz,DMSO_d6)：δ 2.65-2.66(d,3H),2.91-2.94(t,2H),2.01-3.04(t,2H),4.50(s,2H),7.10-7.12(d,2H),7.57-7.65(m,3H),7.76-7.78(d,2H),7.92-7.95(t,1H),8.05(s,1H).
MS：m/z 417(M+1)+
LCMS[流動相：90%水(0.1% NH4OH)及10% CH3CN更換成5%水(0.1% NH4OH)及95% CH3CN；6.0分鐘；最後於該等條件下0.5分鐘]純度97.4%，Rt=3.341分鐘；MS Calcd.：416；MS Found：417([M+1]+).
步驟(viii)：2-{4-[2-(1,3-二側氧基-1,3-二氫-異吲哚-2-基)-乙硫基]-2,6-二氟-苯氧基}-乙醯胺(16)之合成
Figure TWI675820B_D0028
將化合物(13)(5.0g，11.8mmol)之NH3/EtOH(100mL)溶液於25℃下攪拌2小時。其後，將該溶液進行濃縮，以黃色油之形式而獲得粗 化合物(16)(6.0g)。
步驟(ix)：2-[4-(2-胺基-乙硫基)-2,6-二氟-苯氧基]-乙醯胺(17)之合成
Figure TWI675820B_D0029
於90℃下將肼水合物(1.5g，30mmol)加入粗化合物(16)(6.0g，15.3mmol)之EtOH(50mL)溶液中。將溶液加熱至90℃，並攪拌30分鐘，其後，冷卻至室溫。將產物過濾，並利用EtOH進行洗淨。利用硫酸鈉使有機層乾燥，並進行濃縮，以黃色油之形式而獲得粗化合物(17)(4.0g)。
步驟(x)：2-{2,6-二氟-4-[2-(4-氟-苯磺醯基胺基)-乙硫基]-苯氧基}-乙醯胺(M-2)之合成
Figure TWI675820B_D0030
將4-氟-苯磺醯基氯(0.4g，2.3mmol)及三乙基胺(0.2g，2.2mmol)加入粗化合物17(0.5g，1.9mmol)之DMF(10mL)溶液中。其後，將混合液於25℃下攪拌1小時，並利用EA進行萃取。利用硫酸鈉 使有機層乾燥，並進行濃縮。將殘渣利用急速層析法進行精製，以白色固體之形式而獲得化合物(M-2)(20mg)。
1H-NMR(400MHz,DMSO_d6)：δ 2.92-2.95(t,2H),3.01-3.04(t,2H),4.45(s,2H),7.09-7.11(d,2H),7.40-7.44(m,3H),7.47(s,1H),7.81-7.85(m,2H),7.95-7.98(t,1H).
MS：m/z 421(M+1)+
LCMS[流動相：90%水(0.1% NH4OH)及10% CH3CN更換成5%水(0.1% NH4OH)及95% CH3CN，6分鐘，最後於該等條件下0.5分鐘]純度95.1%，Rt=3.284分鐘；MS Calcd.：420；MS Found：421([M+1]+).
步驟(xi)：2-{2,6-二氟-4-[2-(4-甲基-苯磺醯基胺基)-乙硫基]-苯氧基}-乙醯胺(M-3)之合成
Figure TWI675820B_D0031
將4-甲基-苯磺醯基氯(0.5g，2.3mmol)及三乙基胺(0.2g，2.2mmol)加入粗化合物(17)(0.5g，1.9mmol)之DMF(10mL)溶液中。其後，將混合液於25℃下攪拌1小時，並利用EA進行萃取。利用硫酸鈉使有機層乾燥，並進行濃縮。將殘渣利用急速層析法進行精製，以白色固體之形式而獲得化合物(M-3)(20mg)。
1H-NMR(400MHz,DMSO_d6)：δ 2.38(s,3H),2.88-2.91(t,2H),2.99-3.02(t,2H),4.49(s,2H),7.08-7.10(d,2H),7.37-7.48(m,4H), 7.64-7.66(d,2H),7.81-7.84(t,1H).
MS：m/z 417(M+1)+
LCMS[流動相：90%水(0.1% NH4OH)及10% CH3CN更換成5%水(0.1% NH4OH)及95% CH3CN，6.0分鐘，最後於該等條件下0.5分鐘]純度96.6%，Rt=3.365分鐘；MS Calcd.：416；MS Found：417([M+1]+).
(實施例3)
(M-3pre之合成)
按照下述方案，而合成2-(2,6-二氟-4-((2-(4-(三丁基甲錫烷基)苯基磺醯胺)乙基)硫基)苯氧基)乙醯胺(M-3pre)。
關於各化合物之1H NMR光譜，使用TMS作為內部標準，並以Bruker Avance III 400MHz及Bruker Fourier 300MHz進行記錄。關於LCMS，使用下述者：四極質譜儀，Agilent LC/MSD 1200系列(管柱：ODS 2000(50×4.6mm，5μm)於ES(+)或(-)離子化模式下進行操作；T=30℃；流速=1.5mL/min；檢測波長：254nm)。
Figure TWI675820B_D0032
步驟(i)：2-(2,6-二氟苯氧基)乙酸乙酯(19)之合成
Figure TWI675820B_D0033
將化合物(1)(39.0g，0.30mol)、K2CO3(62.0g，0.45mol)、化合物(18)(50.1g，0.30mol)、及丙酮(200mL)之混合液於室溫下攪拌約16小時。將反應混合液注入3% HCl中，並利用乙酸乙酯(90mL×3)進行萃取。利用無水硫酸鈉使合併之有機層乾燥並進行過濾、濃縮。將殘渣利用矽膠管柱層析法(PE：EA=10：1)進行精製，而獲得化合物(19)(57g，87%)。
1H NMR(CDCl3,300MHz)：δ 1.19(t,J=7.2Hz,3H),4.17(q,J=7.2Hz,2H),4.82(s,2H),7.06-7.13(m,3H).
步驟(ii)：2-(4-(氯磺醯基)-2,6-二氟苯氧基)乙酸乙酯(20)之合成
Figure TWI675820B_D0034
於化合物(19)(50g，0.23mol)之DCM(180mL)溶液中，於35℃下加入ClSO3H(106mL，1.38mol)。將反應混合液加熱至回流溫度，並攪拌約1.5小時。其後，注入冰中。將有機層分離，利用無水硫酸鈉使其乾燥並進行濃縮，而獲得化合物20(37g，50%)。
1H NMR(CDCl3,300MHz)：δ 1.18(t,J=6.9Hz,3H),4.16(q,J= 6.9Hz,2H),4.83(s,2H),7.18-7.21(m,2H).
步驟(iii)：2-(2,6-二氟-4-巰基苯氧基)乙酸甲酯(21)之合成
Figure TWI675820B_D0035
將化合物(20)(25.0g，0.08mol)、SnCl2(63.3g，0.28mol)、濃鹽酸(46.6mL，0.56mol)、及MeOH(333mL)之混合液加熱至回流溫度，並攪拌約1.5小時。其後，將反應混合液注入冰中，並利用甲苯進行萃取。利用12% HCl將有機層洗淨3次，並利用無水硫酸鈉使其乾燥並進行濃縮。將殘渣利用矽膠管柱層析法(PE：EA=2：1)進行精製，而獲得化合物(21)(14g，75%)。
1H NMR(CDCl3,300MHz)：δ 3.52(s,1H),3.79(s,3H),4.72(s,2H),6.88(d,J=6.3Hz,2H).
步驟(iv)：4-溴-N-(2-溴乙基)苯磺醯胺(24)之合成
Figure TWI675820B_D0036
將化合物(23)(1.35g，11.0mmol)加入化合物(22)(2.54g，10.0mmol)之DCM(40mL)溶液中，繼而，加入TEA(Tetraethylammonium，四乙基銨)(1.52g，15.0mmol)。其後，將反應混合液於室溫下攪拌約3小時，並利用水進行稀釋。將該溶液利用DCM(80mL×3)進行萃取。 利用食鹽水洗淨有機層，並利用無水硫酸鈉使乾燥並進行濃縮。將粗產物利用矽膠管柱層析法(PE：EA=5：1)進行精製，而獲得化合物(24)(2.45g，72%)。
1H NMR(DMSO-d6,300MHz)：δ 3.12-3.16(m,2H),3.43(t,J=3.6Hz,2H),7.69-7.73(m,2H),7.79-7.82(m,2H),8.13(t,J=3.9Hz,1H).
步驟(v)：2-(4-((2-(4-溴苯基磺醯胺)乙基)硫基)-2,6-二氟苯氧基)乙酸甲酯(25)之合成
Figure TWI675820B_D0037
將化合物(21)(1.25g，5.36mmol)、K2CO3(905mg，6.55mmol)、化合物(24)(1.88g，5.50mmol)、及丙酮(50mL)之混合液於室溫下攪拌約16小時。將反應混合液注入3% HCl中，並利用乙酸乙酯(90mL×3)進行萃取。利用無水硫酸鈉使有機層乾燥並進行濃縮。將粗殘渣利用矽膠管柱層析法(PE：EA=5：1)進行精製，而獲得化合物(25)(2g，76%)。
1H NMR(CDCl3,300MHz)：δ 2.94-2.98(m,2H),3.08-3.14(m,2H),3.77(s,3H),4.73(s,2H),5.33(t,J=6.0Hz,1H),6.78-6.84(m,2H),7.61-7.70(m,4H).
步驟(vi)：2-(4-((2-(4-溴苯基磺醯胺)乙基)硫基)-2,6-二氟苯氧基)乙醯胺(26)之合成
[化33]
Figure TWI675820B_D0038
將化合物(25)(3.00g，6.06mmol)及2M NH3/MeOH(150mL，300mmol)之混合液於室溫下攪拌約16小時。藉由過濾對所獲得之沈澱物進行回收，而獲得化合物(26)(2.3g，80%)。
1H NMR(DMSO-d6,400MHz)：δ 2.93-2.96(m,2H),3.00-3.03(m,2H),4.48(s,2H),7.10(d,J=9.2Hz,2H),7.40-7.45(m,2H),7.70(d,J=8.4Hz,2H),7.80(d,J=8.4Hz,2H),8.01(br s,1H).
步驟(vii)：2-(2,6-二氟-4-((2-(4-(三丁基甲錫烷基)苯基磺醯胺)乙基)硫基)苯氧基)乙醯胺(M-3pre)之合成
Figure TWI675820B_D0039
於化合物(26)(670mg，1.39mmol)之二甲苯(50mL)溶液中加入雙(三丁基錫)(0.87mL，1.81mmol)及Pd(PPh3)4(40mg)。將反應混合液於N2下於120℃下攪拌約1小時。其後，將該反應混合液於真空下進行濃縮，並將殘渣利用矽膠管柱層析法(PE：EA=3：1)進行精製，以黃色油之形式而獲得化合物(M-3pre)(180mg，18%)。
1H NMR(CD3OD,300MHz)：δ 0.94(t,J=7.2Hz,9H),1.12-1.17(m,5H),1.29-1.39(m,8H),1.52-1.60(m,5H),2.98-3.06(m,4H),4.55 (s,2H),7.01(d,J=9.0Hz,2H),7.68(d,J=8.1Hz,2H),7.77(d,J=8.1Hz,2H)；LCMS[流動相：30%水(0.02% NH4OAc)及70% CH3CN更換成5%水(0.02% NH4OAc)及95% CH3CN，6分鐘，最後於該等條件下0.5分鐘]純度>95%，Rt=4.259分；MS Calcd.：692；MS Found：693([M+H]+).
(實施例4)
(放射性標記化K-2之合成)
以下述方式合成放射性標記化K-2。
Figure TWI675820B_D0040
將PEPA 1mg(ca 2.5μmol)溶解於DMF(0.3mL)中，添加0.5N-NaOH aq(7μL)並進行混合，裝入至輻射室(hot cell)內之反應容器中。利用常規方法捕獲[11C]碘甲烷之後，使其於80℃下反應5分鐘。冷卻至室溫附近，利用500μl之LC溶劑(CH3CN：H2O=1：1)進行稀釋，進行LC分離。於管柱中使用CapcellPak UG-80(10×250)(資生堂，日本)，以流速5.0ml/min進行分離，檢測係使用UV 254nm及RI而進行。分取約8分鐘附近之RI波峰部分，於Tween 80(最終濃度0.8%)及2.5mg抗壞血酸添加下，使用蒸發器進行濃縮。加入2.5ml生理食鹽水使殘渣溶解。
使用HPLC，對放射性標記化K-2與非標記K-2進行比較。HPLC分析係於管柱中使用CapcellPak UG-80(4.6×250)(資生堂，日本)，以流速1.0ml/min進行展開，檢測係使用UV 254nm及RI進行。非標記K-2(UV檢測)及放射性標記化K-2(RI檢測)於保持時間8分鐘時呈現出 同一波峰。其表示兩者為同一物質，且能夠製造放射性標記化K-2。
可知，進行過反應之碘甲烷會與100% PEPA之磺醯胺結合，且可知放射性標記化K-2之合成極為簡單，且呈現出較高之產率。
(實施例5)
(放射性標記化M-3之合成)
稱取Pd2(dba)3(1.74mg)、氯化亞銅(1.7mg)、碳酸鉀(2.25mg)至1mL之玻璃瓶中，於氮氣氛圍下將P(o-tol)3(1.7mg)之DMF(300μL)溶液加入至該混合物中。於室溫下攪拌約5分鐘左右後將本溶液移至標記用反應容器中。於冷卻下捕獲[11C]CH3I，使放射能飽和，其後，加入原料之三丁基錫體(preM-3)(1.6mg)之DMF溶液(300μL)，並使其於80℃下反應約5分鐘。使反應混合物通過PTFE濾波器將固形物去除之後進行HPLC分離，分取約7分鐘附近之RI波峰部分進行濃縮並進行配製。
Pd2(dba)3：三(二亞苄基丙酮)二鈀
P(o-tolyl)3：三(鄰甲苯基)膦
(實施例6)
(生物學實施例)
(AMPA受體結合化合物之製備及投予)
將於LC-MS/MS實驗中所合成之所有化合物以成為2.5mM之濃度之方式溶解於100% DMSO中，並於即將投予之前利用生理食鹽水進行稀釋(PEPA(1.2pmol/g)、M-1(12pmol/g)、K-2(12pmol/g)、M-3(60pmol/g)、及M-2(240pmol/g))，經靜脈投予。於電生理學實驗中，將PEPA及K-2以成為150mM之濃度之方式溶解於100% DMSO中，並於即將實驗之前利用作為回流液之ACSF(Artificial cerebrospinal fluid，人工腦脊液)以成為150μM之濃度之方式進行稀釋而使用。生物化學實驗及PET之阻斷實驗中，將K-2以成為2.5mM及25mM之濃度之方 式溶解於50% DMSO中，以1μl/體重(g)之投予量分別以成為0.5mg/kg及5mg/kg之方式對大鼠進行經靜脈投予。
(實驗動物)
所有動物實驗接受了橫濱市立大學及放射線醫學綜合研究所之動物實驗委員會之審議及批准。
大鼠係使用6~10週齡之公成體Sprague-Dawley大鼠(SD大鼠)(Charles River，日本)。
LC-MS/MS實驗及生物化學實驗係藉由異氟醚之吸入使大鼠入眠後，使用專用之氣化器於1.5%之濃度下維持麻醉而進行。以成為1μl/體重(g)之投予量之方式對化合物進行調整。將大鼠之頸部切開使頸靜脈露出，其後，使用胰島素注射器(TERUMO，日本)於直視下將化合物自頸靜脈投予。於化合物之投予後，將大鼠於麻醉下維持15分鐘，其後，將腦摘出。於LC-MS/MS實驗中，自所取出之全腦使用Brain matrix(ASI instruments，美國)以前後2mm之厚度回收海馬區域，並測量組織重量，其後，放入至1.5ml之錐形管。於生物化學實驗中，自所取出之全腦使用Vibratome(VT1000；Leica，德國)製作包含海馬之厚度400μm之急性腦切片。
(LC-MS/MS實驗)
作為測定條件之事先研究，使用海馬組織逐個化合物地決定最佳之稀釋溶劑及稀釋倍率(表4)。
樣品回收後，將預設量之經事先研究之溶劑加入至錐形管。使用均質機杵(Homogenizer pestle)進行懸浮，並使用手持音波振動器(UR-20P；TOMY SEIKO，日本)充分地進行破碎。其後，進行渦旋，分別於預設之條件下進行離心之後，回收上清液。上清液於即將於LC-MS/MS之測定之前利用預設之倍率進行稀釋。海馬組織中所包含之化合物之濃度係使用液相層析法及四極質譜分析裝置(UPLC-MS/MS，Aquity UPLC I-Class System，Xevo TQ-S，日本waters公司，日本)進行測定。UPLC係使用2.1mm i.d.×100mm 1.8μm之管柱(HSS T3，日本Waters，日本)，對各化合物之流動相條件進行事先研究(表5)，於其條件下對化合物之濃度進行測定。
於質量分析中，逐個化合物地預先使用高濃度化合物制定MS方法(表6)，按照其協定(protocol)將母離子分解成子離子，並使用MRM(multiple reaction monitoring，質譜多反應監測)方式對化合物之濃度進行測定。又，濃度測定中使用之校正曲線係對將6~10週齡之藥劑非投予大鼠於異氟醚麻醉下斷頭所回收之海馬組織以已知之濃度加入各化合物而製作者。
(化合物之組織集聚率之計算)
逐個化合物地進行測定條件之最佳化，結果得知：對活體之投予量或測定時之稀釋倍率不同。因此，為了展現所投予之化合物之幾%集聚於海馬，使用以下計算式算出%ID/g(percentage injected dose per gram tissue，每克組織之注射劑量百分比)：%ID/g=測定值(pM)×稀釋倍率×10/化合物之投予濃度(pmol/g)×體重(g)/組織重量(mg)
將5種已知會與AMPA受體結合之化合物自尾靜脈對大鼠進行投予，於投予15分後回收海馬組織，並對此處所累積之化合物濃度進行測定，結果為PEPA之集聚最高。根據該結果，提示了PEPA自血液向腦之移行率最高(圖1)。
對60個目標受體網羅性地研究了作為PEPA之甲基賦予體之K-2對自身之結合區域以外之受體進行結合之能力。其結果為，無其他可結合之受體，提示了PEPA之特異性較高。
(電生理學實驗)
使用7~8週齡之雄性SD大鼠。於藉由異氟醚之麻醉下進行斷頭，使用Vibratome(VT1000；Leica，德國)而製作包含海馬之厚度400μm之急性腦切片。將該切片於ACSF中於室溫下靜置60分鐘，其後，利用全細胞記錄法測量AMPA電流。於以3ml/min之速度使ACSF回流之條件下投予100μM苦毒素及100μM DL-APV，僅單離出AMPA電流進行測量。
記錄電極係置於CA1之錐體細胞，刺激電極係置於距記錄細胞100~200μm之薛佛氏纖維(Schaffer fiber)上。全細胞記錄係將細胞膜電位固定於-80mV而進行，並以30秒一次之頻度施加100微秒之刺激而進行。記錄5分鐘基底狀態之AMPA電流，其後於加入有PEPA或K-2之ACSF中回流15分鐘，其後，於不包含PEPA或K-2之回流液下記錄AMPA電流30分鐘。
於腦切片之靜置時及回流時，利用95% O2/5% CO2使常規ACSF飽和而使用。ACSF之組成如下所述：119mM NaCl、2.5mM KCl、 2.5mM CaCl2、1.5mM MgSO4、26mM NaHCO3、1mM NaH2PO4。記錄電極係使用玻璃管(GD-1.5；成茂科學器械研究所，日本)以前端電阻成為3-5MOhm之方式進行製作而使用。記錄電極內填充液之組成如下所述：115mM CsMeSO4、20mM CsCl、10mM HEPES、2.5mM MgCl2、4mM Na2ATP、0.4mM Na3GTP、10mM磷酸肌酸鈉(Na-phosphocreatinine)、0.6mM EGTA。結果係以將5分鐘之基底狀態之AMPA電流之平均值設為1進行換算，藥劑投予後30分鐘之記錄之中，最後10分鐘之AMPA電流之平均值而表示。
(生物學實驗)
海馬膜表面餾分-使用7~8週齡之雄性SD大鼠。於藉由異氟醚之麻醉下經靜脈投予K-2或50% DMSO，並於15分鐘後進行斷頭。使用Vibratome製作包含海馬之厚度400μm之急性腦切片，並將該切片於室溫之ACSF下靜置60分鐘。繼而，為了使膜表面蛋白質生物素化，自急性腦切片僅取出海馬切片，並將該切片於包含2.0mg/ml之生物素(EZ Link Sulfo-NHS-Biotin；Thermo Scientific，美國)之ACSF內於4℃下緩慢地攪拌45分鐘。於生物素化後，將該切片利用1ml之冰浴冷卻TBS(Tetrapropylenebenzene sulfonate，四丙烯本磺酸鹽)於pH值7.5下沖洗5次，並於150μl之均質緩衝液(Homogenization buffer)(150mM NaCl、0.5mM EDTA、0.1mM EGTA、1mM HEPES、20% Triton X100)內利用杵使其懸浮。進而，加入150μl之均質化緩衝液，使用手持音波振動器進行超音波破碎。其後，以14,000×g於4℃下進行15分鐘離心分離，並回收上清液(~300μl)。藉由蛋白質定量進行上清液之蛋白質濃度之均一化，其後，將50μl之上清液與10μl之6×樣品緩衝液進行混合，並於100℃下加熱5分鐘，回收總蛋白質餾分(total fraction)。又，為了將經生物素化之表面蛋白質進行免疫沈澱，將150μl之剩餘之上清液與150μl之NeutrAvidin瓊脂糖樹脂(Thermo Scientific，美國)進行混合，並於4℃下攪拌16小時。其後，以2,000×g於4℃下進行離心1分鐘，將上清液廢棄，將剩餘之顆粒利用1000μl之IP(ImmunoPrecipitation，免疫沈降)緩衝液沖洗5次。繼而，加入150μl之2×樣品緩衝液，並加熱5分鐘，其後，回收上清液，而獲得膜蛋白質餾分(surface fraction)。
定量使西方墨點轉漬法(Western blot)-總蛋白質餾分及膜蛋白質餾分於聚丙烯醯胺凝膠(Mini-PROTEAN TGX precast Gel；Bio-rad，美國)中進行電泳，其後，轉印於PVDF(polyvinylidenefluoride，聚偏二氟乙烯)膜。關於膜，藉由利用阻斷劑(Perfectblock；Mobitec，美國)/TBS-T(137mM NaCl、2.68mM KCl、25mM Tris、0.1% Triton-X、PH值7.6)製作而成之阻斷溶液處理1小時。關於1次抗體，為了確認細胞內餾分未混入膜蛋白質餾分，使用Pan AMPA抗體/GluA2/3/4兔抗體(1：1000，cell signaling technology，美國)、及GAPDH抗體(1：1000，cell signaling technology)，以1：1000於阻斷溶液中進行稀釋，於室溫下分別使其反應1及3小時。其後，利用TBS-T進行10分鐘、3次洗淨，其後，使其與抗兔2次抗體(1：1000；Jackson ImmunoResearch，美國)於室溫下反應1小時。繼而，利用TBS-T進行3次10分鐘之洗淨，並使用amersham ECL(GE Healthcare Japan，日本)，利用化學發光(Chemiluminescence)攝像裝置(LAS4000mini；GE)對頻帶進行檢測。利用Multi Gauge V3.0(FUJIFILM，日本)對所獲得之頻帶之訊號強度進行定量分析。
(使用大鼠之體內PET攝像)
PET攝像使用microPET(Focus 220；Siemens Medical Solution)而進行。
使用大鼠之PET攝像實驗：利用異氟醚(DS-pharma animal-health，日本)使大鼠入眠，其後，於1.5%之異氟醚濃度(空氣2L/min) 下維持麻醉，自尾靜脈利用24G SURFLO留置針(TERUMO，日本)確保靜脈路。將大鼠固定於PET攝像台，其後，於攝像之前進行用以確認位置之放射攝像。其後，將50% DMSO或溶解於50%DMSO之K-2進行經靜脈投予，於投予3分鐘後，投予經放射性標記之K-2(約4MBq)。於PET攝像中，使用反饋型加溫盤(BWT-100A；Bioresearch Center，日本)將體溫維持於37±0.5℃。於攝像後，拔除靜脈路並中止異氟醚投予，其後，將大鼠自PET攝像台取下，放回居住籠(home cage)。大鼠於攝像後1週於所攝像之房間進行飼養，其後，放回普通大鼠集體飼養室。
構成相加(Summation)圖像，並利用0.5mm漢寧(Hanning)濾波器除去透印，重建動態圖像。重建圖像係使用PMOD圖像分析軟體(PMOD technologies)，與將包含紋狀體、海馬、小腦、腦幹等複數個區域之VOIs製作於模板MRI圖像上而成者合併進行分析。用於定量之運算值為%SUV(% of standardized uptake value，標準攝取值百分比)，利用以下式求出：%SUV=由VOI所包圍之各組織之放射線量(MBq)/所投予之放射線量(MBq)×體重(g)
(實驗結果)
(AMPA受體識別化合物之特性評價)
為了評價所合成之化合物對AMPA受體之結合特性，使用電生理學及生物化學方法進行分析。使用利用成體大鼠所製作之急性海馬切片，藉由PEPA之15分鐘投予，確認到AMPA電流顯著地增加(2.4±0.13，自4組動物n=4；p=0.01 vs基準)。又，使用K-2進行相同之實驗，K-2亦確認到AMPA電流顯著地增加(1.7±0.22，自4組動物n=5；p=0.01 vs基準)(圖2)。
繼而，生物化學性地研究該AMPA電流之增加係依據何種機制。 利用對活體投予了K-2之大鼠製作包含海馬之腦切片，並利用生物素化法對呈現於細胞膜表面之AMPA受體進行定量。其結果為，藉由5mg/kg之K-2之投予，使AMPA受體向膜表面之移行得到促進(136%±14，自5組動物n=5；p=0.05 vs 50% DMSO)。其另一方面，於相同動物中，對於AMPA受體之總量未確認到有變化(圖3)。根據以上結果，可知K-2會使AMPA受體之表面呈現量急性地增加。
(於使用了AMPA受體識別化合物K-2之大鼠中之PET攝像)
由於已明確K-2會表現出對AMPA受體之結合，故而繼而對大鼠投予放射性標記化K-2，並進行於體內之PET攝像。其結果為，於大鼠中，放射性標記化K-2呈現出極高之於腦內之吸收，且特異性地集聚於包含海馬、紋狀體、及小腦之組織學上已知大量存在AMPA受體之區域(圖4左及圖5中(a))。
繼而，為了研究K-2集聚之特異性，於投予放射性標記化K-2之3分鐘前，進行投予非放射性標記化K-2之阻斷實驗。明確：藉由於0.5mg/kg之非放射性標記化K-2之前進行投予，放射性標記化K-2之特異性集聚消失，且K-2於體內對AMPA受體特異性結合(圖4右及圖5中(b))。
又，由於在0.05mg/kg之非放射性標記化K-2之前進行投予較於0.5mg/kg之K-2之前進行投予，特異性結合之消失程度較少，故而表現出阻斷中之濃度依存性，結果為暗示飽和性結合(圖6)。關於腦幹，由於不會因阻斷而使吸收產生變化，故而可知：於該區域中，AMPA受體之顯現較少(圖5中(c)及(d))。因此，若以腦幹作為參照部位而算出海馬中之放射性標記化K-2之吸收之比，則可知：於放射性標記化K-2之投予後20~60分鐘呈現出較高之特異性結合(圖7)。利用Logan Plot法將特異性結合數值化(圖8)。因使用有非放射性標記化K-2之阻斷(圖8中之灰色)，BPnd(estimated binding potential，估計結合 可能性)顯著降低。又，明確：表示特異性結合之值(圖8中之黑色)與生物化學性地對AMPA受體之組織顯現總量進行研究而得之值(圖9)顯示出較高之關聯，且使用有放射性標記K-2之體內PET攝像反映了AMPA受體之分佈。又，各腦區域中之AMPA受體之生物化學顯現量(粗餾分)與相同區域之PET圖像值顯示出較高之關聯(圖10)。
shRNA能夠特異性地抑制特定之蛋白質之顯現。使用慢病毒使能夠抑制AMPA受體(GluA1~3)之顯現之shRNA顯現於左側紋狀體，使非功能shRNA即零亂RNA顯現於右側紋狀體。結果為，於體內PET圖像中，於shRNA側確認到放射性標記K-2之吸收降低(圖11)。又，實施例中之PET圖像值之降低為約30%(圖12)。根據該結果，放射性標記K-2於活體內顯示出對AMPA受體之較高之特異性。
(縮寫之說明)
ACSF：人工腦脊髄液
AMPA：α-胺基-3-羥基-5-甲基-4-異
Figure TWI675820B_D0046
唑-丙酸
DIPEA：二異丙基乙胺
DCM：二氯甲烷
EA：乙酸乙酯
PE：石油醚
PEPA：2-[2,6-二氟-4-({2-[(苯磺醯基)胺基]乙基}硫)苯氧基]乙醯胺
PET：正電子發射斷層攝影法
TEA：四乙基銨
TMS：四甲基矽烷
1-BCP：1-(1,3-苯并二氧雜環戊烯-5-基羰基)-哌啶(1-(1,3-benzodioxol-5-ylcarbonyl)-piperidine)
SYM2206：(±)-4-(4-胺基苯基)-1,2-二氫-1-甲基-2-丙基胺甲醯基- 6,7-亞甲基二氧基酞
Figure TWI675820B_D0047
((±)-4-(4-Aminophenyl)-1,2-dihydro-1-methyl-2-propylcarbamoyl-6,7-methylenedioxyphthalazine)
GYKI：4-(8-甲基-9H-[1,3]二
Figure TWI675820B_D0048
茂并[4,5-h][2,3]苯二氮呯-5-基)苯胺(4-(8-methyl-9H-[1,3]dioxolo[4,5-h][2,3]benzodiazepin-5-yl)aniline)
CX546：2,3-二氫-1,4-苯并戴奧辛-7-基-(1-哌啶基)甲酮(2,3-dihydro-1,4-benzodioxin-7-yl-(1-piperidyl)methanone)

Claims (25)

  1. 一種式(I)之化合物、或其醫藥上可容許之鹽：
    Figure TWI675820B_C0001
    (式中，A及Z分別獨立，為CO、SO或SO2；X及Y分別獨立，為S或O；R1、R3及R4分別獨立，為氫、烷基、烯基、炔基或鹵素；R2為烷基、烯基、或炔基；R5每次出現時分別獨立，為烷基、烯基、炔基或鹵素；n為0~4之整數)。
  2. 如請求項1之化合物、或其醫藥上可容許之鹽，其中A及Z分別獨立，為CO或SO2。
  3. 如請求項1或2之化合物、或其醫藥上可容許之鹽，其中A為SO2，且Z為CO。
  4. 如請求項1或2之化合物、或其醫藥上可容許之鹽，其中X為S，且Y為O。
  5. 如請求項1或2之化合物、或其醫藥上可容許之鹽，其中R2為烷基。
  6. 如請求項1或2之化合物、或其醫藥上可容許之鹽，其中R1為烷基或鹵素。
  7. 如請求項1或2之化合物、或其醫藥上可容許之鹽，其中R3及R4之中之一者為氫，另一者為烷基。
  8. 如請求項1或2之化合物、或其醫藥上可容許之鹽，其中R5為鹵素。
  9. 如請求項8之化合物、或其醫藥上可容許之鹽，其中上述鹵素為氟。
  10. 如請求項1或2之化合物、或其醫藥上可容許之鹽，其中n為2。
  11. 一種以下式所表示之化合物、或其醫藥上可容許之鹽：
    Figure TWI675820B_C0002
  12. 一種式(I)之化合物、或其醫藥上可容許之鹽：
    Figure TWI675820B_C0003
    (式中，A及Z分別獨立，為CO、SO或SO2；X及Y分別獨立，為S或O；R1、R3及R4分別獨立，為氫、烷基、烯基、炔基或鹵素；R2為烷基、烯基、或炔基；R5每次出現時分別獨立，為烷基、烯基、炔基或鹵素；n為0~4之整數；1個或1個以上原子為該原子之放射性同位素)。
  13. 如請求項12之化合物、或其醫藥上可容許之鹽，其中上述放射性同位素為11C或18F。
  14. 如請求項13之化合物、或其醫藥上可容許之鹽，其中包含放射性同位素之基為R1。
  15. 如請求項13之化合物、或其醫藥上可容許之鹽，其中包含放射性同位素之基為R2。
  16. 如請求項13之化合物、或其醫藥上可容許之鹽，其中包含放射性同位素之基為R3及R4之至少一者。
  17. 一種以下式所表示之化合物、或其醫藥上可容許之鹽：
    Figure TWI675820B_C0004
  18. 一種組合物，其包含如請求項1至17中任一項之化合物、或其醫藥上可容許之鹽。
  19. 一種組合物，其係用於將生物體之腦內之α-胺基-3-羥基-5-甲基-4-異
    Figure TWI675820B_C0005
    唑-丙酸(AMPA)受體進行成像之組合物，其包含式(I)之化合物、或其醫藥上可容許之鹽：
    Figure TWI675820B_C0006
    (式中，A及Z分別獨立，為CO、SO或SO2；X及Y分別獨立，為S或O；R1、R3及R4分別獨立，為氫、烷基、烯基、炔基或鹵素；R2為烷基、烯基、或炔基；R5每次出現時分別獨立，為烷基、烯基、炔基或鹵素；n為0~4之整數；1個或1個以上原子為該原子之放射性同位素)。
  20. 如請求項19記載之組合物，其為分子成像用。
  21. 一種組合物，其係用於將生物體之腦內之α-胺基-3-羥基-5-甲基-4-異
    Figure TWI675820B_C0007
    唑-丙酸(AMPA)受體進行成像之組合物，其包含式(I)之化合物、或其醫藥上可容許之鹽：
    Figure TWI675820B_C0008
    (式中，A及Z分別獨立，為CO、SO或SO2；X及Y分別獨立，為S或O；R1、R3及R4分別獨立，為氫、烷基、烯基、炔基或鹵素；R2為烷基、烯基、或炔基；R5每次出現時分別獨立，為烷基、烯基、炔基或鹵素；n為0~4之整數)。
  22. 一種製造方法，其係如請求項1至17中任一項之化合物或其醫藥上可容許之鹽之製造方法，其包含使式(II)之化合物、或其醫藥上可容許之鹽與X1-R2(式中，R2與上述所定義者相同，且X1為鹵素)進行反應：
    Figure TWI675820B_C0009
    (式中，A、X、Y、Z、R1、R3、R4、R5、及n與上述所定義者相同)。
  23. 如請求項22之製造方法，其中上述R2為[11C]烷基。
  24. 如請求項22或23之製造方法，其中上述式(I)及式(II)中之R3及R4均為氫。
  25. 一種方法，其係生物體之腦內之α-胺基-3-羥基-5-甲基-4-異
    Figure TWI675820B_C0010
    唑-丙酸(AMPA)受體之成像方法，其包含對自已被投予如請求項12至17中任一項之化合物、或其醫藥上可容許之鹽的被檢者之腦發出之放射線進行檢測之步驟。
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