TWI558867B - Evaluation method of cosmetic effect on wrinkle improvement effect - Google Patents

Description

關於皺紋改善效果之化妝料評價方法

本發明係關於一種化妝料之評價方法。較佳為本發明係關於一種關於皺紋改善效果之化妝料評價方法。

皮膚老化現象之一之皺紋隨著年齡增長而增加，自美容等觀點而言，特別是女性對皺紋之防止及改善非常關心。皺紋係大致分為因包含角質層之表皮之功能下降而產生之小皺紋、及因較表皮深之真皮之功能下降而產生之大皺紋(或表情皺紋)。一般認為，因包含角質層之表皮之功能下降而產生之皺紋係主要由於如下情況而產生：因年齡增長、紫外線、低溫度、低濕度等影響而表皮之水分保持功能下降。另一方面，由真皮之功能下降而產生之皺紋係因如下情況而產生：因老化或紫外線以及機械性壓力之影響而基質金屬蛋白酶(MMPs)發生增減，因此包含膠原蛋白或彈力蛋白之皮膚彈力構造狀態崩潰(專利文獻1、非專利文獻1、2及3)。已知，藉由皮膚中產生之小皺紋紋路深深刻印而向大皺紋轉變(非專利文獻4)，小皺紋與大皺紋各自緊密相連。

於嚴重乾燥之冬季容易產生小皺紋，此係眾人所共通之認識，為預防、改善小皺紋，一般認為，以化妝料、特別是化妝水、乳液、乳霜、美容液等進行保濕且使用加濕器進行加濕較為重要。以保濕為目的之化妝料中尤其使用包含甘油或玻尿酸等保濕劑之化妝料。

目前為止，已知使用採用乾燥表皮之皮膚粗糙樣本篩選提高角 質層透明度之候補物質之方法(專利文獻2)，及將角質層細胞間脂質之構造變化作為指標而篩選改善或提高皮膚障壁功能之候補物質的方法(專利文獻3)。上述之方法係篩選改善角質層透明度或皮膚障壁功能之候補物質，但並無關於改善皺紋之候補物質之篩選的記載。

[先前技術文獻] [專利文獻]

[專利文獻1]日本專利特開2003-201229號

[專利文獻2]日本專利特開2010-172200號

[專利文獻3]日本專利特開2010-175264號

[專利文獻4]日本專利特開2010-119428號

[非專利文獻]

[非專利文獻1]Arch Dermatol Res (2002)294 : 405-410

[非專利文獻2]Cell Motil Cytoskeleton 2000 Jan; 45 (1) : 1-9

[非專利文獻3]Matrix Biol. 2001 Nov; 20 (7) : 397-406

[非專利文獻4]Skin Research and Technology 2011; 17 : 135-140

業者期望開發一種可修復角質層中產生之皺紋之化妝料，而必需一種可對候補化妝料之角質層之皺紋改善能力迅速且大規模地實施的化妝料評價方法。

本發明者關於因包含角質層之表皮之功能下降而產生之小皺紋的產生機制進行銳意研究，結果發現，固定性之小皺紋係因角質層功能下降與存在於皮膚下之肌肉活動而產生的非固定性之角質層性皺紋(於本說明書中定義為「殘餘皺紋」)之紋路藉由於利用入浴或化妝料之保濕等未充分恢復之狀態下經過長時間而產生(圖1)。具體而言， 發現，角質層中產生之非固定性殘留皺紋係於皮膚中特別是堅硬之角質層中產生之折印，堅硬之角質層紋路形成機械壓力而固定為表皮之紋路，藉此形成較殘留皺紋深之表皮性之小皺紋。

憑經驗已知，小皺紋係因包含角質層之表皮之功能下降而產生，且主要因冬季之乾燥而產生。對於小皺紋，已知藉由使用化妝水或乳液進行充分保濕而可修復、改善小皺紋，然而小皺紋一旦固定至較角質層內部之表皮(顆粒層、有棘層、基底層)，則進行保濕雖可暫時消滅小皺紋但經過一段時間小皺紋亦出現。周知之事實為，若對此種固定於表皮之小皺紋置之不理，則成為進而導致伴隨有表皮之內部之真皮中膠原蛋白或彈力蛋白等之構造變化之大皺紋的原因，且即便對大皺紋進行保濕亦難以修復。

先前，關於伴隨有表皮之構造變化之小皺紋，籠統地認為存在藉由保濕可修復之輕度者、與藉由保濕皺紋亦只暫時消失之重度者，認為無論如何要預防小皺紋必須進行保濕，且尚未可恰當地進行可修復小皺紋之化妝料之評價。依據本發明者等人之研究發現，伴隨有表皮之構造變化之皺紋中，藉由保濕可修復之輕度者為僅於角質層中發生構造變化之皺紋(殘留皺紋)，藉由保濕只可期待暫時恢復之重度者為於除角質層以外亦包含顆粒層、有棘層、基底層之表皮中產生構造變化之皺紋(本說明書中定義為「小皺紋」或「固定性小皺紋」)。

本說明書中所定義之殘留皺紋並非於角質層以外之表皮及真皮中發生構造變化，而為藉由皮下肌肉之活動對因乾燥等而功能下降之角質層添附折印之狀態。若對該折印置之不理，則折印成為機械壓力，而包含角質層之表皮中產生構造變化，並轉變成固定性之小皺紋。再者，已知經過較長時間小皺紋轉變成大皺紋(非專利文獻4)，因此，於化妝料之開發中發現，開發可修復殘留皺紋之角質層之折印的化妝料時預防固定性小皺紋之形成、進而預防大皺紋之形成較為重 要。此類化妝料可解除殘留皺紋之機械壓力，故藉由一定程度上長時間連用該化妝料，可對已固定於表皮之小皺紋或固定於真皮之大皺紋發揮改善效果。

進而本發明者等人關於殘留皺紋進行銳意研究，結果驚奇地發現，使用角質層片可將殘留皺紋樣本化。即，發現：正是角質層片中帶有折皺之狀態，恰恰為將藉由皮下肌肉之活動對角質層添附折印而成之狀態即殘留皺紋樣本化者，且可恰當修復此折皺之化妝料可恰當修復皺紋、特別是殘留皺紋，進而亦可有助於改善固定性小皺紋及大皺紋。

此處，本發明者等人發現，藉由將帶有折皺之角質層片浸潤於候補化妝料中並使之乾燥而可測量出皺紋改善度，且發明一種關於候補化妝料之皺紋改善效果的評價方法。

更具體而言，本案發明係關於以下者：

(1)一種關於候補化妝料之皺紋改善效果之評價方法，其包括：於角質層片中添附折皺之步驟；浸漬於候補化妝料中之步驟；乾燥步驟；及測定角質層片之折皺之改善度之步驟。

(2)如項目1之評價方法，其中折皺改善度之測定利用目視進行。

(3)如項目1之評價方法，其中包括於向候補化妝料之浸漬步驟前、及乾燥步驟後拍攝角質層片之步驟。

(4)如項目3之評價方法，其中折皺改善度之測定藉由拍攝之角質層片之圖像處理而進行。

(5)如項目1至4中任一項之評價方法，其中皺紋改善效果為殘留皺紋之改善效果。

先前，皺紋之評價中需對動物樣本或實際人體皮膚進行試驗，存在個體差異之問題或倫理問題或試驗次數受限，但於本發明中，可使用角質層片評價候補化妝料，故產品開發時可大規模且均質地進行篩選，可使產品開發較為容易。

圖1係顯示人臉皮膚中之殘留皺紋之形成的照片。

圖2係顯示角質層片皺紋樣本之皺紋改善效果之圖。

圖3係對比顯示活體內之表情運動前後之皺紋狀態、及表情運動後立刻塗抹樣本化妝水後之皺紋狀態的圖。

作為第1態樣，本發明係提供一種關於候補化妝料之皺紋改善效果之評價方法。更具體而言，本發明之評價方法包括選自由以下步驟所組成之群中之1個以上步驟：於角質層片中添附折皺之步驟；浸漬於候補化妝料中之步驟；乾燥步驟；及測定角質層片之折皺改善度之步驟。

本發明之候補化妝料係指有可能對皺紋改善有效果之化妝料。更具體而言，候補化妝料尤其指化妝水、乳液、乳霜、美容液，但並非以皮膚改善為直接目的者，意圖包含全部塗抹於皮膚上者，例如亦包含防曬劑、除蟲劑、脫毛劑、育毛劑、剃鬚乳液或剃鬚後乳液等。就經由對角質層片之浸潤、乾燥來發揮皺紋改善效果之觀點而言，可認為較佳為水性之化妝料、特別是化妝水或美容液。

所謂皺紋改善效果，係指形成於皮膚中之皺紋消失。就本發明之觀點而言，較佳為角質層中產生之折印即殘留皺紋消失或減弱，但並不限定於此，係指伴隨有包含角質層之表皮之構造變化之小皺紋、 及伴隨有真皮之構造變化之大皺紋消失或減弱。

於本發明中，角質層片係指由活體皮膚製備之角質層片(製備角質層片)或藉由細胞培養而獲得之角質層片(以下稱為培養角質層片)，就大規模且均一之篩選之觀點而言，較佳為培養角質層片。

製備角質層片之由來未限定，較佳為由人皮膚之角質層所製備者。更具體而言，亦可為藉由外科手段等侵襲性方法而取得者。

所謂培養角質層片，係指藉由活體外(in vitro)培養所獲得之角質層之片，包括由將自人等之皮膚採取之皮膚組織進行培養並維持而得者單離而成的角質層片；及由將纖維母細胞或由幹細胞(例如上皮幹細胞、胚性幹細胞、誘導多能性幹細胞)於活體外中分化而得之纖維母細胞於由膠原蛋白、纖維蛋白、聚乳酸等聚合物或幾丁質、殼聚糖、硫酸軟骨素、玻尿酸等多糖類所構成之培養支撐體上進行培養所獲得之立體培養皮膚而獲得的角質層片。角質層片係使用自培養下維持之皮膚組織於鈣離子及鎂離子濃度經控制之生理食鹽水中以蛋白質分解酶進行處理等手法而單離。作為立體培養皮膚，使用可從LabCyte EPI-MODEL(Japan Tissue Engineering股份有限公司)購得之人立體培養表皮樣本產品。自可購得之立體培養表皮樣本產品所獲得的培養角質層片係批次間差異較少，故而可使用不同批次來實施本發明之評價方法，但為了不出現批次間之差異，可將1片培養角質層片切分為數片而用於本發明。

於本發明中，亦可用手對角質層片添附折皺，為添附一定折皺而使用具有鉸鏈部之板，藉由將板折至一定角度而可添附折皺。可根據預定之折皺之深度而選擇任意之角度，例如選自30°、45°、60°、75°、90°、120°、135°、150°、180°中。

於本發明中，角質層片係於通常使用化妝料之溫度區域內浸漬於候補化妝料中。浸漬溫度較佳為可配合候補化妝料之使用區域之溫 度進行設定，通常為10℃~40℃、較佳為15℃~30℃、更佳為20℃~30℃之範圍。浸漬時間可選擇任意時間，若縮短浸漬時間，則可篩選皺紋改善能力更高之候補化妝料。作為浸漬時間，可選擇10秒、15秒、30秒、1分鐘、2分鐘、3分鐘、5分鐘、10分鐘、20分鐘、30分鐘、45分鐘、1小時、1.5小時、2小時、3小時或更長時間，例如4小時、8小時、12小時、24小時等。於預定對皮膚塗抹候補化妝料之情形時，由於塗抹於皮膚之候補化妝料通常於相對較短之時間內蒸發，故選擇10秒~2分鐘左右之相對較短之浸漬時間。另一方面，於候補化妝料使用面膜而使用之情形時，選擇10分鐘、20分鐘、30分鐘~一晚等更長時間。所謂浸漬，與候補化妝料接觸即可，亦可為藉由滴加或塗抹而與候補化妝料接觸之步驟。

可含於候補化妝料中之成份中，可包含作為基劑之水、乙醇、甘油、聚乙二醇等醇類，作為保濕劑之甘胺酸、甜菜鹼、吡咯烷酮羧酸Na等胺基酸類、果糖、麥芽糖醇、甘露醇、海藻糖等糖類，作為界面活性劑之油酸甘油酯、異硬脂基甘油、植物提取物，作為油分之荷荷巴油、山茶油、橄欖油、角鯊烷等，以及作為有效成分之玻尿酸、膠原蛋白、神經醯胺、抗壞血酸、維生素E等，及作為賦形劑之檸檬酸鈉、檸檬酸、乳酸鈉，作為防腐劑之苯甲酸鹽、山梨酸等，但未受上述限定，亦可包含用於普通化妝料之任意成分。

於本發明中，藉由浸漬而浸潤於候補化妝料中之角質層片於特定之浸漬時間後乾燥。乾燥步驟可以任意之溫度及濕度進行，但較佳為以通常預測使用候補化妝料之溫度及濕度進行。例如，溫度及濕度依據候補化妝料之銷售區域等而不同，各自獨立地選自10℃~40℃、較佳為15℃~30℃、進而較佳為20℃~30℃、且濕度為30~90%、較佳為40~80%、進而較佳為50%~60%之範圍。自縮短篩選時間之觀點而言，亦可以與通常預測使用候補化妝料之溫度及濕度相比較高之 溫度及/或較低之濕度進行乾燥步驟。

角質層片折皺之改善度之測定係藉由對折皺之消失程度以目視進行評價而進行。例如，使用標準溶液例如10%甘油水溶液，以於相同條件下經過折皺之添附步驟、浸漬步驟及乾燥步驟之情形時的折皺消失程度作為標準，可篩選與標準同等或與標準相比折皺更可消失者作為具有優秀皺紋改善效果之候補化妝料。反之，與標準相比折皺未消失者判定為不具有皺紋改善效果之候補化妝料。此處，標準溶液可選擇任意之溶液，亦可將已有市售之化妝料、美容液等用作標準溶液。

折皺之改善度之測定係亦可將折皺之消失程度利用圖像處理進行評價。於該情形時，於折皺之改善度之測定步驟中，亦可進而包括拍攝角質層片之步驟、進行二值化處理之步驟。藉由進行二值化處理可將折皺之消失程度數值化，就高處理量篩選大量候補藥劑之觀點而言，較佳為利用圖像處理之評價。

以下，舉出具體例更具體地說明本發明。再者，本發明並不受此限定。

[實施例]

實施例1：殘留皺紋之形成

1名被試驗者使用肥皂洗臉後，於人工氣候室(溫度22~24℃、濕度10~45%RH)中進行10~30分鐘之適應，適應後拍攝眼角之皺紋(圖1左)。繼而，每5秒進行10次用力閉眼睜眼之動作，將此作為表情運動。拍攝表情運動後之眼角皺紋(圖1右)。如圖1中箭頭所示般顯示，表情運動後殘留皺紋以延長原本存在之大皺紋之方式形成。

實施例2：針對折皺改善之候補藥劑之篩選

自Japan Tissue Engineering股份有限公司購入人表皮重構樣本。將其進行胰蛋白酶處理並以32℃、濕度60%使角質層片乾燥而獲得透 明之角質層片。將其彎折成角度90度再折回原位，藉此使角質層片中形成折皺。折皺部分角質層透明度降低，受損部位可視化(圖2照片左)。將帶有折皺之角質層片作為因表情變化而皮膚伸縮時產生於皮膚表面上之殘留折皺之樣本而用於美容法或化妝料之評價中。將帶有折皺之角質層片於室溫(23℃)下於樣本化妝水(10%甘油、3%乙醇、0.3% HCO60(聚乙二醇(60)氫化蓖麻油醚(NIKKO CHEMICALS股份有限公司))、0.09%檸檬酸鈉、0.01%檸檬酸)或乙醇中浸漬30分鐘，使其以32℃、濕度60%乾燥18小時並拍攝照片(圖2)。其結果為，樣本化妝水顯示對角質層折皺之修復有效。

實施例3：由活體內之表情運動所致之皺紋形成、及由塗抹樣本化妝水所致之皺紋改善

1名被試驗者使用肥皂洗臉後，於人工氣候室(溫度22~24℃、濕度10~45%RH)中進行10~30分鐘適應，適應後立刻依據記載之方法採取皮膚之複製品。繼而，採取使面部進行表情運動(複數次用力閉眼之動作)後之複製品。之後，塗抹樣本化妝水，於10分鐘後利用先前進行之方法採取複製品。關於採取之複製品，使用依據專利文獻4中記載之方法作成之圖像解析軟體進行立體圖像解析，算出皺紋之面積率。將結果示於圖3。根據該實驗顯示，因表情運動所形成之殘留皺紋係於活體內實驗中亦顯示藉由樣本化妝水之塗抹等可改善皺紋之情況，帶有折皺之角質層片恰當地將殘留皺紋樣本化，藉由本案發明之帶有折皺之角質層片之化妝料或美容法之篩選方法選出之化妝料實際於活體內實驗中亦可改善皺紋。

如此，通常為研究化妝料對皺紋之改善效果，必需對數人~數十人之監控進行歷時數周之使用候補化妝料之監控試驗，但藉由將帶有折皺之角質層片作為殘留折皺之樣本，可對具有皺紋改善效果之候補化妝料簡易且簡便地進行一次篩選。

Claims (5)

1. 一種關於候補化妝料之皺紋改善效果之評價方法，其包括：於培養角質層片中添附折皺之步驟；浸漬於候補化妝料中之步驟；乾燥步驟；及測定培養片之折皺改善度之步驟。
2. 如請求項1之評價方法，其中折皺改善度之測定利用目視進行。
3. 如請求項1之評價方法，其中包括於在候補化妝料中之浸漬步驟前及乾燥步驟後拍攝培養片之步驟。
4. 如請求項3之評價方法，其中折皺改善度之測定利用拍攝之培養片之圖像處理進行。
5. 如請求項1至4中任一項之評價方法，其中皺紋改善效果為殘留皺紋之改善效果。