CN104185785B - 用于评价化妆品的皱纹改善效果的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明的课题是,提供能够对候选化妆品的角质层的皱纹改善能力迅速并且大规模地实施评价的化妆品评价方法。本发明提供了,通过将带有褶皱的角质层片浸渍在候选化妆品中确认干燥后的褶皱消失状态、来评价候选化妆品的皱纹改善效果的评价方法,从而解决上述课题。
Description
技术领域
本发明涉及化妆品的评价方法。优选地、本发明涉及用于评价化妆品的皱纹改善效果的方法。
背景技术
随着年龄增长,作为皮肤的老化现象之一,皱纹也随之增加,但从美容等的观点出发,特别是女性、对皱纹的防止和改善的热情非常高。皱纹大致可分为由于包含角质层的表皮的功能降低而产生的小皱纹、和由于比表皮更深的真皮的功能降低而产生的大皱纹(或表情皱纹)。由于包含角质层的表皮的功能降低而产生的皱纹,主要是由于表皮的水分保持功能受年龄增长、紫外线、低温、低湿等的影响而降低,从而产生的。另一方面,一般认为,由于真皮的功能降低而产生的皱纹,是由于基质金属蛋白酶(MMPs)受老化、紫外线、以及机械性压力的影响而发生增减,导致含有胶原蛋白、弹性蛋白(Elastin)的皮肤的弹力结构状态崩溃而产生的(专利文献1、非专利文献1、2和3)。已经知道了,皮肤上产生的小皱纹的沟变深,会向大皱纹转变(非专利文献4),小皱纹和大皱纹紧密相关。
在非常干燥的冬季容易产生小皱纹,这是许多人的共识,大家都认为,为了预防和改善小皱纹,用化妆品、特别是化妆水、乳液、软膏、美容液等进行保湿、并且使用加湿器进行加湿这些很重要。以保湿为目的的化妆品,特别是含有甘油、透明质酸等保湿剂的化妆品一直都在被人们使用着。
迄今为止已经知道了,使用了干燥表皮的粗糙皮肤模型来筛选能够提高角质层透明度的候选物质的方法(专利文献2)、以角质层细胞间脂质的结构变化作为指标来筛选能够改善或提高皮肤阻挡功能的候选物质的方法(专利文献3)。但这些方法筛选的是改善角质层透明度或皮肤阻挡功能的候选物质,还没有关于对改善皱纹的候选物质进行筛选的记载。
现有技术文献
专利文献
专利文献1:日本特开2003-201229号
专利文献2:日本特开2010-172200号
专利文献3:日本特开2010-175264号
专利文献4:日本特开2010-119428号
非专利文献
非专利文献1:Arch Dermatol Res(2002)294:405-410
非专利文献2:Cell Motil Cytoskeleton 2000 Jan;45(1):1-9
非专利文献3:Matrix Biol.2001 Nov;20(7):397-406
非专利文献4:Skin Research and Technology 2011;17:135-140
发明内容
发明要解决的课题
大家都希望开发出能够对角质层上的皱纹进行修复的化妆品,因而需要能够对候选化妆品的角质层的皱纹改善能力进行迅速并且大规模地实施评价的化妆品的评价方法。
解决课题的手段
本发明人对由于包含角质层的表皮的功能降低而产生的小皱纹的产生机理进行了深入研究,结果发现了,由于角质层的功能降低和皮肤下存在的筋肉的运动而产生的非定性的角质层性的皱纹(本说明书中定义为“假性皱纹”)的沟,不能够通过洗澡、化妆品的保湿等充分地修复,这样长时间得不到修复就会产生定性的小皱纹(图1)。具体地说,在角质层上产生的非定性的假性皱纹,是在皮肤中特别硬的角质层上产生的惯性褶,硬的角质层上的沟成为机械应力,定型成为表皮上的沟,由此形成比静态皱纹深的表皮性的小皱纹。
小皱纹由包含角质层的表皮的功能降低产生,主要是由于冬季干燥而产生的,这是经验上已知的。通过对小皱纹使用化妆水、乳液进行充分保湿,能够修复和改善小皱纹,这是已知的,但是,一旦小皱纹在比角质层更内部的表皮(颗粒层、棘层、基底层)上也定型了,那么即使进行保湿、一时间可以消灭小皱纹,但时间一长,小皱纹就会又出现。如果将这样在表皮上定型了的小皱纹放置不管,就会成为进而随着表皮的深部的真皮中的胶原蛋白和弹性蛋白等的结构变化而发展成大皱纹的原因,即使对大皱纹进行保湿也难以修复,这是众所周知的事实。
过去对随着表皮的结构变化而产生的小皱纹,很漠然地认识到,有可通过保湿进行修复的轻度皱纹、和即使进行保湿、也只能一时间使皱纹消失的重度皱纹,但无论如何,对于小皱纹的预防,大家都认为保湿是必要的,但对能够修复小皱纹的化妆品的评价还不能合适地进行。经本发明人的研究发现了,在随着表皮的结构变化而产生的皱纹中,能够通过保湿进行修复的轻度皱纹是仅在角质层上发生结构变化的皱纹(假性皱纹),而即使进行保湿、也只能期待仅一时间能够修复的重度皱纹是由于除了在角质层以外、还在包含颗粒层、棘层、基底层的表皮上发生结构变化而产生的皱纹(本说明书中将其定义成“小皱纹”或“定性的小皱纹”。)。
本说明书中定义的假性皱纹,指的并不是在角质层以外的表皮和真皮中发生结构变化,而是通过皮下筋肉的运动在由于干燥等原因而功能降低了的角质层上产生了惯性褶的状态。已经知道了,如果将这样的惯性褶放置不管,则惯性褶就会成为机械应力,在包含角质层的表皮上发生结构变化,转变成定性的小皱纹。再者,时间一长、小皱纹就会转变成大纹(非专利文献4),因此,在化妆品的开发中发现了,开发出能够对假性皱纹中的角质层的惯性褶进行修复的化妆品,这对于定性的小皱纹形成的预防、甚至大皱纹形成的预防都很重要。这样的化妆品能够解放由假性皱纹产生的机械应力,所以通过在一定长的期间连续使用该化妆品,就能够对已经在表皮上定型的小皱纹或是在真皮上定型的大皱纹发挥改善效果。
进而本发明人对假性皱纹进行了深入研究,惊讶地发现了,能够使用角质层片将假性皱纹模型化。即、角质层片上带有褶皱的状态,简直就是在角质层上通过皮下筋肉运动而产生了惯性褶的状态的假性皱纹的模型化,能够合适地修复该褶皱的化妆品就够合适地修复皱纹、特别是假性皱纹,甚至有助于定性小皱纹和大皱纹的改善。
因此,本发明人发现了,通过将带有褶皱的角质层片在候选化妆品中浸润、干燥,可以测定皱纹改善度,从而发明了候选化妆品的皱纹改善效果的评价方法。
更具体地说,本发明涉及以下技术方案。
(1).一种候选化妆品的皱纹改善效果的评价方法,包含以下工序:
对培养角质层片赋予褶皱的工序;
浸渍在候选化妆品中的工序;
干燥的工序;以及
测定培养片的褶皱改善度的工序。
(2).如项目1所述的评价方法,褶皱改善度的测定通过目视进行。
(3).如项目1所述的评价方法,在浸渍在候选化妆品中的工序前和干燥工序后,包含对培养片拍照的工序。
(4).如项目3所述的评价方法,褶皱改善度的测定通过拍摄到的培养片的图像处理进行。
(5).如项目1~4的任一项所述的评价方法,其特征在于,皱纹改善效果是对假性皱纹的改善效果。
发明效果
一直以来,在皱纹的评价中都需要对动物模型或实际的人皮进行试验,但在个体差异的问题、伦理上的问题、试验数量方面受到限制,由于本发明可以使用角质层片来评价候选化妆品,所以能够实现产品开发时的大规模、均质的筛选,能够使产品开发变得容易。
附图说明
图1是显示人的面部皮肤中的假性皱纹的形成的照片。
图2是显示角质层片皱纹模型中的皱纹改善效果的图。
图3是显示活体(in vivo)的表情运动前后的皱纹状态、以及表情运动刚刚过后的模型化妆水涂抹后的皱纹状态的对比图。
具体实施方式
作为第一方案,本发明提供了对候选化妆品的皱纹改善效果进行评价的方法。更具体地说,本发明的评价方法包含选自以下工序中的1种以上工序:
对角质层片赋予褶皱的工序;
浸渍在候选化妆品中的工序;
干燥的工序;和
测定角质层片的褶皱改善度的工序。
本发明的候选化妆品是指,有可能会对皱纹改善有效果的化妆品。更具体地说,候选化妆品特别是指化妆水、乳液、软膏、美容液,但是那些不是以皮肤的改善作为直接目的、但有意图涂抹到皮肤上的所有东西例如,防晒剂、除虫剂、脱毛剂、生发剂、刮胡剂、刮胡后护理剂等也包括在内。从通过向角质层片中浸润、干燥而发挥皱纹改善效果的观点,可以认为,本发明的候选化妆品优选是水性的化妆品,例如化妆水、美容液。
皱纹改善效果是指,皮肤上形成的皱纹消失。从本发明的观点来看,优选在角质层上产生的作为惯性褶的假性皱纹的消失或减弱,但并不局限于此,也指随着含有角质层的表皮的结构变化而产生的小皱纹、和随着真皮结构变化而产生的大皱纹消失或减弱。
本发明中,角质层片是指从活体的皮肤调制出的角质层片(调制角质层片)、或经细胞培养而得到的角质层片(下面称作“培养角质层片”),但从大规模并且均一地筛选的观点,优选培养角质层片。
虽然对调制角质层片的由来并没有限定,但特别优选是从人皮肤中的角质层获取的角质层片。更具体地说,也可以是通过外科手段等侵袭性方法获取的角质层片。
培养角质层片,是指通过体外(in vitro)培养而得到的角质层的片,包含:从将由人等的皮肤获取的皮肤组织培养并维持得到的物质中分离出的角质层片、从三维培养皮肤中得到的角质层片,所述三维培养皮肤是在由胶原蛋白、纤维蛋白、聚乳酸等聚合物、或几丁质、壳聚糖、硫酸软骨素、透明质酸等多糖类构成的培养支撑体上培养成纤维细胞、或者由干细胞(例如上皮干细胞、胚胎干细胞、诱导多能干细胞)体外(in vitro)分化得到的成纤维细胞而得的。角质层片是使用在控制了钙离子和镁离子浓度的生理盐水中通过蛋白质分解酶进行处理等的方法,从在培养下维持的皮肤组织中分离得到的。作为三维培养皮肤,使用可以从LabCyte EPI-MODEL(株式会社ジャパン·ティッシュ·エンジニアリング)商业获得的人三维培养表皮模型产品。从可商业获得的三维培养表皮模型产品得到的培养角质层片,由于批次间的差异小,所以可以使用不同批次的来实施本发明的评价方法,但是为了不出现批次间的差异,可以将1个培养角质层片切分成几片,再用于本发明。
本发明中,可以用手使角质层片产生褶皱,但是为了产生固定不变的褶皱,可以使用具有折叶部的板,通过将板折到固定不变的角度来赋予褶皱。可以根据预定的褶皱的深度来选择任意的角度,例如可以选自30°、45°、60°、75°、90°、120°、135°、150°、180°。
将本发明中的角质层片在化妆品的通常使用温度范围内浸渍在候选化妆品中。浸渍温度可以优选地按照候选化妆品的使用地域的温度来相应设定,通常是10℃~40℃的范围、优选为15℃~30℃的范围、更优选为20℃~30℃的范围。浸渍时间可以选择任意的时间,但如果缩短浸渍时间,则可以筛选出皱纹改善能力更高的候选化妆品。作为浸渍时间,可以选择10秒、15秒、30秒、1分钟、2分钟、3分钟、5分钟、10分钟、20分钟、30分钟、45分钟、1小时、1.5小时、2小时、3小时、或更长的时间例如4小时、8小时、12小时、24小时等。在候选化妆品在皮肤上的涂抹是预先确定的情况,涂抹在皮肤上的候选化妆品通常会在较短的时间蒸发,所以要选择10秒~2分钟左右的较短的浸渍时间。另一方面,在候选化妆品要以膜贴等形式进行应用的情况,要选择10分钟、20分钟、30分钟至一晚这样的更长时间。浸渍,只要是与候选化妆品接触即可,也可以是通过滴下或涂抹来与候选化妆品接触的工序。
作为候选化妆品中可以含有的成分,作为主剂可以包含水、乙醇、甘油、聚乙二醇等醇类,作为保湿剂可以包含甘氨酸、甜菜碱、吡咯烷酮羧酸钠等氨基酸类、果糖、麦芽糖醇、甘露糖醇、海藻糖等糖类,作为表明活性剂可以包含油酸甘油酯、异硬脂基甘油基醚、植物精油,作为油分可以包含霍霍巴油、山茶油、橄榄油、角鲨烷等,进而作为有效成分可以包含透明质酸、胶原蛋白、神经酰胺、抗坏血酸酸、维他命E等,并且作为赋形剂可以包含柠檬酸钠、柠檬酸、乳酸钠,作为防腐剂可以包含苯甲酸盐、山梨酸等,但不限于这些。也可以含有在通常的化妆品中使用的任一种成分。
本发明中,通过浸渍而被候选化妆品浸润了的角质层片,在过了规定的浸渍时间后,要被干燥。干燥工序可以在任意的温度和湿度下进行,但优选在预测的、候选化妆品通常使用中的温度和湿度下进行。例如,温度和湿度根据候选化妆品的销售地域等而异,但可以分别独立地、选择10℃~40℃、优选为15℃~30℃、进而优选为20℃~30℃范围的温度,并且选择30~90%、优选为40~80%、进而优选为50~60%范围的湿度。从可以缩短筛选时间的观点,也可以在比预测的、候选化妆品通常使用中的温度和湿度更高的温度和/或更低的湿度下进行干燥工序。
角质层片的褶皱改善度的测定,通过目视评价褶皱的消失程度来进行。可以以使用例如基准溶液例如10%甘油水溶液、在相同条件下经历了褶皱的赋予工序、浸渍工序、和干燥工序后的褶皱的消失程度作为基准,将与基准同等或与基准相比褶皱更加消失了的、作为具有优异的皱纹改善效果的候选化妆品筛选出来。反之,将与基准相比褶皱没有消失的、判定成是不具有皱纹改善效果的候选化妆品。这里,作为基准溶液可以选择任意的溶液,但也可以使用已市售的化妆品、美容液等作为基准溶液。
褶皱的改善度的测定,也可以通过图像处理来评价褶皱的消失程度。在这种情况,在褶皱的改善度的测定工序中还可以包含对角质层片拍照的工序、进行二值化处理的工序。通过进行二值化处理,可以将褶皱的消失程度数值化,从对大量候选药剂进行高通量筛选的观点,优选通过图像处理进行评价。
下面将列举具体例来对本发明进行更具体说明。再者,本发明并不受这些例子限定。
实施例
实施例1:假性皱纹的形成
让1名受试人用肥皂洗脸,然后在人工气候室(温度22~24℃、湿度10~45%RH)中熟化10~30分钟,在熟化后对眼角皱纹进行拍照(图1左)。接着,将紧紧闭眼和睁眼的动作每5秒进行10次,将此作为表情运动。在表情运动后马上对眼角皱纹进行拍照(图1右)。如图1中箭头所示,在表情运动刚结束时,像是将原本存在的大皱纹拉长了那样、形成了假性皱纹。
实施例2:针对褶皱改善的候选药剂筛选
从株式会社ジャパン·ティッシュ·エンジニアリング买入人表皮再构建模型。将其用胰蛋白酶处理,使角质层片在32℃、湿度60%下干燥而得到透明的角质层片。将其折成90度角度,然后再恢复到原来,由此就在角质层片上形成了褶皱。在褶皱部分、角质层透明度降低,将受破坏部位可视化(图2左面照片)。将带有褶皱的角质层片作为皮肤在由于表情变化而伸缩后在皮肤表面产生的假性皱纹的模型,将其用于美容法或化妆品的评价中。将带有褶皱的角质层片在室温(23℃)下浸渍在模型化妆水(10%甘油、3%乙醇、0.3%HCO60(聚乙二醇(60)氢化硬化蓖麻油醚(日光ケミカルズ株式会社))、0.09%柠檬酸钠,0.01%柠檬酸)或乙醇中30分钟,将其在32℃、湿度60%下干燥18小时,然后拍照(图2)。结果显示了,模型化妆水对角质层褶皱的修复有效。
实施例3:通过活体(in vivo)的表情运动进行的皱纹形成、和通过涂抹
模型化妆水进行的皱纹改善
让1名受试人用肥皂洗脸,然后在人工气候室(温度22~24℃、湿度10~45%RH)中熟化10~30分钟,熟化后马上依照前述的方法获取皮肤复制品。接下来在面膜板上获取进行表情运动(多次进行紧紧闭眼的动作)后的复制品。然后,涂抹模型化妆水,在这10分钟后,通过前面进行的方法获取复制品。针对获取的复制品,使用依照专利文献4中记载的方法制作的图像解析软件进行三维图像解析,计算出皱纹的面积率。结果如图3所示。该实验显示了,对于由表情运动形成的假性皱纹,在活体的实验中也显示出了通过模型化妆水的涂抹等能够改善皱纹,至于带有褶皱的角质层片,其将假性皱纹合适地模型化了,通过利用本发明的带有褶皱的角质层片进行的化妆品或美容法的筛选方法选出的化妆品实际上在活体的实验中也能够改善皱纹。
像这样,如果是通常、要调查化妆品对皱纹的改善效果,需要进行使几个人~几十个人的检验人历时几个星期使用候选化妆品的检验试验,而通过将带有褶皱的角质层片作为假性皱纹的模型,能够简单且方便地对具有皱纹改善效果的候选化妆品进行一次筛选。
Claims (5)
1.一种候选化妆品的皱纹改善效果的评价方法,包含以下工序:
对培养角质层片赋予褶皱的工序;
浸渍在候选化妆品中的工序;
干燥的工序;以及
测定培养片的褶皱改善度的工序。
2.如权利要求1所述的评价方法,褶皱改善度的测定通过目视进行。
3.如权利要求1所述的评价方法,在浸渍在候选化妆品中的工序前和干燥工序后,包含对培养片拍照的工序。
4.如权利要求3所述的评价方法,褶皱改善度的测定通过拍摄到的培养片的图像处理进行。
5.如权利要求1~4的任一项所述的评价方法,其特征在于,皱纹改善效果是对假性皱纹的改善效果。
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