WO2021167097A1 - 立毛筋細胞の賦活化による老化改善方法 - Google Patents

立毛筋細胞の賦活化による老化改善方法 Download PDF

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    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing

Definitions

  • the present invention relates to an aging improvement and a cosmetological method by activating arrector pili muscle cells.
  • Skin sagging has a large effect on the appearance age, and maintaining the firmness of the skin and improving the sagging is a major cosmetic issue.
  • the loss of firmness of the skin causes sagging, wrinkles, or moss, which gives the impression of aging.
  • the firmness of the skin is mainly due to the thickness of the dermis layer, and the firm skin is rich in elastic fibers such as collagen and elastin that fill the dermis layer. It is known that the function of dermal fibroblasts is reduced and matrix metalloproteinase is activated due to the effects of aging and exposure to ultraviolet rays.
  • the challenge is to provide a method for improving sagging using a new mechanism that is different from the sagging mechanism that has been found so far.
  • the present inventors have conducted intensive studies to determine the causes of facial aging such as decreased firmness and sagging, which are surprisingly found in the sagging and elasticity of the skin and the amount of arrector pili muscle. I found a relationship between them. Furthermore, as a result of further research, it was found that stem cell-like cells are present in the arrector pili muscle, and that stem cell-like cells proliferate when a physical stimulus is applied. Furthermore, the present inventors have found that stem cell-like cells existing in the arrector pili muscle express adrenergic receptors, and that stem cell-like cells can be activated and / or proliferated by activating the adrenergic receptor. I arrived.
  • the present invention relates to the following: [1] A cosmetic method comprising activating and / or proliferating arrector pili muscle cells. [2] The beauty method according to item 1, which improves sagging, wrinkles, or moss. [3] The cosmetological method according to item 1 or 2, wherein the arrector pili muscle cells proliferate by physical stimulation of the skin or stimulation via the adrenergic receptor of the arrector pili muscle cells. [4] The cosmetological method according to item 3, wherein the physical stimulus is an extension stimulus of the arrector pili muscle in the running direction.
  • the screening method is as follows: The process of culturing skin organs; The process of performing candidate treatment on skin organs; The process of measuring the activity of stem cell-like cells present in the arrector pili muscle; 7. The screening method according to item 7 or 8. [10] The screening method according to item 9, wherein the candidate treatment is culturing a skin organ in a solution containing a candidate drug. [11] A step of culturing adrenergic receptor-expressing cells in a solution containing a candidate drug, A method for screening a sagging and arrector pili muscle cell activator using the activity of adrenergic receptor-expressing cells as an index, which comprises a step of measuring the activity of adrenergic receptor-expressing cells.
  • a beauty device including a photographing unit, a probe unit having an extension direction adjusting mechanism, and an information processing unit.
  • the information processing department processes the image taken by the shooting department to determine the flow of hair;
  • the information processing department determines the extension direction based on the flow of hair;
  • the cosmetological device wherein the extension direction adjusting mechanism of the probe portion adjusts the angle of the probe portion in a determined extension direction.
  • a device for determining the direction of skin extension for massage Shooting section that shoots face images;
  • An information processing unit that analyzes the captured facial image and determines the hair flow and / or the extension direction along the hair flow; and an output that displays the hair flow and / or the extension direction along the hair flow. Department;
  • the device including.
  • a program for controlling a device for determining a skin extension direction for massage including a photographing unit, an information processing unit, and an output unit.
  • the program comprising a command to display the determined hair flow and / or the extension direction along the hair flow on the output unit.
  • a new screening method can be provided, and a new drug selected by such a screening method can be provided.
  • FIG. 1 shows the amount of movement as a heat map for a three-dimensional display in which pressure is applied to a skin section obtained in a columnar shape by X-ray CT imaging as it is or with pressure applied from the epidermis side. It is an image.
  • FIG. 2A shows the coordinates of the circular skin.
  • FIG. 2B is a diagram showing that pressure is applied to the circular sample from the upper surface.
  • FIG. 2C is a graph showing the resistance of subjects in the young and elderly groups to vertical deformation in the skin.
  • FIG. 3A is a diagram showing the mobility of the skin when pressure is applied to the circular skin from the upper surface as a heat map.
  • FIG. 3B shows the heat map image of the circular sample and the structure in the circular sample superimposed.
  • FIG. 4 is a graph showing the deformation rate of each tissue in the three-dimensionally reconstructed skin tissue before and after pressing.
  • FIG. 5A shows the arrector pili muscle present in a certain skin area in a sample obtained from a young subject and a sample obtained from an elderly subject.
  • FIG. 5B is a graph showing the amount of arrector pili muscle per fixed skin area in the subjects of the young group and the subjects of the elderly group.
  • FIG. 6 shows a fluorescence micrograph of a skin sample stained with a CD49f / CD34 marker. When comparing the young subject and the elderly subject, there were many cells that were double positive with the CD49f / CD34 marker in the young subject.
  • FIG. 5A shows the arrector pili muscle present in a certain skin area in a sample obtained from a young subject and a sample obtained from an elderly subject.
  • FIG. 5B is a graph showing the amount of arrector pili muscle per fixed skin area in the subjects of the young group and the
  • FIG. 6B shows the density of cells that are double positive with the CD49f / CD34 marker (stem cell marker) in the young subject and the elderly subject.
  • FIG. 7 shows the changes in CD34 (stem cell marker) -positive cells in the skin without the extension stimulus and the skin with the extension stimulus in the skin sample.
  • FIG. 7A shows the result of tissue staining
  • FIG. 7B shows the result of staining under a fluorescence microscope.
  • FIG. 8A shows the relationship between the hair follicles of the hair follicles reconstructed three-dimensionally by X-ray CT and the arrector pili muscle.
  • FIG. 8B shows the flow of hair on the human face.
  • FIG. 8C shows the difference in hair flow in the forehead and the ratio thereof.
  • FIG. 9 is a schematic view showing a dynamic belt of the face.
  • FIG. 10 shows the ratio when the degree of improvement in sagging is classified into four stages: remarkable effect, effective, slow effect, and ineffective.
  • FIG. 11A shows cultured smooth muscle cells stained with a CD49f / CD34 marker (stem cell marker).
  • FIG. 11B shows cultured smooth muscle cells stained with CD34 and ADRA1.
  • FIG. 11C shows cells stained with CD34, ADRA1 in a skin sample.
  • FIG. 11A shows cultured smooth muscle cells stained with a CD49f / CD34 marker (stem cell marker).
  • FIG. 11B shows cultured smooth muscle cells stained with CD34 and ADRA1.
  • FIG. 11C shows cells stained with CD34, ADRA1 in a skin sample.
  • FIG. 12A shows CD49f / CD34 marker (stem cell marker) double positive cells in cultured smooth muscle cells with and without phenylephrine stimulation.
  • FIG. 12B shows the proliferation rate of the number of CD49f / CD34 marker (stem cell marker) double positive cells, which is dependent on the concentration of phenylephrine.
  • FIG. 13 is a graph showing that licorice extract activates smooth muscle cells.
  • FIG. 14 shows that the licorice extract activates smooth muscle cells, while the licorice extract does not activate smooth muscle cells (FIG. 14A). It is a graph which shows that it does not inhibit the efficacy of an extract (FIG. 14B).
  • FIG. 15A shows a schematic view of the beauty device 10 according to the present invention.
  • FIG. 15A shows a schematic view of the beauty device 10 according to the present invention.
  • FIG. 15B is a block diagram showing the configuration of the beauty device 10 according to the present invention.
  • FIG. 16A shows a block diagram showing the configuration of a device for determining the skin extension direction for a massage according to the present invention.
  • FIG. 16B shows a block diagram showing a configuration of a system in which information processing is performed in an external device connected to the Internet in such a device.
  • FIG. 17 is a flowchart showing the processing of the device for determining the skin extension direction for massage.
  • One aspect of the present invention relates to a cosmetological method comprising growing arrector pili muscle cells. Since the sagging of the skin is improved by proliferating the arrector pili muscle cells and activating the arrector pili muscle, it can be said to be a sagging improving method. Further, since the decrease in sagging and skin viscoelasticity is involved in the decrease in skin elasticity, wrinkles or moss and gives the impression of aging, the beauty method of the present invention is a method for improving swelling, wrinkles or moss, or a method for improving moss. It can also be called an aging improvement method.
  • Arrector pili is a type of smooth muscle that exists between the hair follicle and the upper dermis.
  • the arrector pili muscle is dominated by the sympathetic nerves and contracts due to cold stress and emotional stress such as fear and surprise. Hair roots grow diagonally to the surface of the skin, creating a flow of hair.
  • the traveling direction of the hair or the hair follicle can be referred to as the traveling direction of the arrector pili muscle.
  • the arrector pili muscle contracts, the hair roots move in a direction perpendicular to the skin surface, causing the hair to stand upright, forming what is called goose bumps.
  • a pressing test on a columnar skin sample by the present inventors has shown that the facial skin has a directionality in resistance to deformation stimuli (Fig. 2), and the arrector pili muscle is involved in such resistance. It was shown (Fig. 3).
  • Arrector pili muscle mass correlates with skin sagging or viscoelasticity (Example 2). Since the arrector pili muscle decreases with aging (Fig. 5), increasing the amount of the arrector pili muscle can improve the phenomenon related to skin sagging or viscoelasticity, for example, swelling, wrinkles, or moss.
  • Arrector pili muscle cells are muscle cells that make up the arrector pili muscle.
  • Arrector pili muscle cells are mononuclear cells.
  • the present inventors have found that among the cells contained in the arrector pili muscle, many cells expressing the CD49f / CD34 marker are present (FIG. 6).
  • the CD49f and CD34 markers are known as markers for smooth muscle stem cells present in smooth muscle, and the CD49f and CD34 markers can also be referred to as stem cell markers in the present invention. Then, it was found that cells expressing a stem cell marker were also present in the arrector pili muscle of the skin, and it was shown that stem cell-like cells were also present in the arrector pili muscle.
  • arrector pili muscle cells include arrector pili muscle cells and arrector pili muscle stem cells.
  • the CD34 marker can be referred to as a stem cell marker by itself, and the CD34-positive arrector pili muscle cells are referred to as arrector pili muscle stem cells. ..
  • the present inventors have found that the proportion of cells expressing CD34 is increased by further applying mechanical stimulation (Fig. 7). It has been reported that CD34 is expressed in various somatic stem cells including mesenchymal stem cells (Pediatric Cardiology and Cardiac Surgery (2015) 31 (3): 80-87).
  • the CD34-positive cells were ⁇ SMA-negative, which is a smooth muscle cell marker.
  • most of the CD34-positive cells were ⁇ SMA-positive cells (Fig. 7B).
  • arrector pili muscle stem cells express ⁇ 1 adrenergic receptor (ADRA1) in the same manner as myocardial cells and other smooth muscle cells (FIG. 11), and arrector pili by administering an agonist of ⁇ 1 adrenergic receptor. It was found that muscle cells proliferate (Fig. 12). Therefore, arrector pili muscle cells can be proliferated via the ⁇ 1 adrenergic receptor. Any compound known in the art is known as a substance that activates the ⁇ 1 adrenergic receptor.
  • catecholamine compounds such as adrenergic, noradrenaline, and phenylephrine are known as agonists of the ⁇ 1 adrenergic receptor. Therefore, by applying an ⁇ 1 adrenergic receptor agonist directly to the skin, it acts on the arrector pili muscle cells to activate the arrector pili muscle cells, thereby inducing proliferation and differentiation into the arrector pili muscle, thereby activating the arrector pili muscle. It can be used as a beauty method to improve sagging, sagging, moss, and wrinkles.
  • the ⁇ 1 adrenergic receptor agonist can be referred to as an arrector pili muscle cell activating agent or a stem cell-like cell activating agent present in the arrector pili muscle.
  • activation means an increase in cell activity.
  • Activation of cells can promote proliferation, metabolism, or differentiation, for example.
  • the activation of the ⁇ 1 adrenergic receptor can also be measured by measuring the intracellular signal transduction by the ⁇ 1 adrenergic receptor and the accompanying calcium influx.
  • Noradrenaline which is an agonist of ⁇ 1 adrenergic receptor, is a kind of neurotransmitter, but it is released from the adrenal gland into the bloodstream and also acts as a hormone.
  • Noradrenaline contributes to the activation of the autonomic nervous system, especially the sympathetic nerve, by emotional stimulation.
  • the arrector pili muscle contracts due to the action of noradrenaline, causing the phenomenon of so-called goose bumps.
  • Goosebumps are caused by cold stress and fear, but also by emotional stimuli such as strong joy and emotion.
  • arrector pili muscle cells can be activated through the action of noradrenaline, which causes emotion, and can be used as a cosmetological method for improving sagging, moss, and wrinkles.
  • the emotional stimuli that cause emotions include five sense stimuli such as visual, taste, auditory, tactile, and olfactory stimuli. , Preferable as an emotional stimulus that causes emotion.
  • a cosmetological method for improving sagging, wrinkles, or moss is provided through the use of fragrances to induce emotional stimuli through the sense of smell and activate arrector pili muscle cells.
  • fragrances include fragrances such as grapefruit, pepper, hyssop and sage. Such fragrances may be used as perfumes, aromas, fragrances, or may be incorporated into cosmetics.
  • Physical stimulus refers to the mechanical stimulus given to the skin.
  • Mechanical stimulation can be applied by bringing a roller or probe into contact with the skin as an example, but from the viewpoint of applying extension stimulation to the arrector pili muscle, the roller or probe is applied to extend the skin or extend the pores. It is preferable that it is a stimulus that causes the extension of the arrector pili muscle. Since the arrector pili muscles are present along the hair flow (FIG. 8A), the direction of applying the mechanical stimulus can be determined based on the hair flow (FIGS. 8B and C). Mechanical stimulation results in skin deformation, which imparts extension stimulation along the direction of the arrector pili muscle, i.e. along the direction of hair flow.
  • the deformation is 5% to 50%, preferably 10% to 40%. , Most preferably applied with a strength that results in a deformation of about 30%.
  • Deformation can be determined by measuring the amount of deformation such as analysis of the photographed surface morphology or actual measurement of the surface morphology, or by a strain gauge or a force gauge. In addition, by obtaining the relationship between the amount of deformation and the extension force in advance in the subject group, the deformation can be measured using the extension force as an index.
  • the present specification relates to a cosmetological method for improving sagging, wrinkles, or moss through activation of arrector pili muscle cells, and can be distinguished from treatments performed by doctors and medical personnel.
  • a beauty method may be performed individually, or may be performed at a beauty salon, a cosmetics store, an esthetic salon, or the like.
  • Another aspect of the present invention relates to a screening method for a treatment for improving sagging, wrinkles, or moss, using the activity of stem cell-like cells present in the arrector pili muscle as an index. More specifically, this screening method involves the following steps: The process of culturing skin organs; The process of performing candidate treatment on skin organs; The process of measuring the activity of stem cell-like cells present in the arrector pili muscle; including.
  • a further step of comparing the activity of stem cell-like cells present in the arrector pili muscle in the candidate-treated treatment group with the activity of stem cell-like cells present in the arrector pili muscle in the control group, which differs only in that no candidate treatment is performed. It may be included. Experiments on the control group may be performed in parallel, or experiments on the control group may be performed in advance. If the activity of stem cell-like cells present in the arrector pili muscle is increased compared to the activity of the stem cell-like cells present in the control group of arrector pili muscle, the candidate treatment is screened as a sagging, wrinkle, or moss improving treatment. be able to.
  • the culturing step shall include only the step of sowing the skin organs.
  • the medium any medium usually used for skin organ culture can be used, and as an example, DMEM medium, MEM medium and the like can be used.
  • the candidate treatment may be any treatment that is expected to enhance the activity of stem cell-like cells existing in the arrector pili muscle, and may be, for example, a physical stimulation treatment or a drug stimulation treatment.
  • the physical stimulus is not limited to the mechanical stimulus, and includes temperature stimulus, light stimulus, and the like.
  • the drug treatment includes a step of substituting with a solution containing the candidate drug or adding the candidate drug and culturing.
  • the drug treatment can be carried out, for example, for 1 hour to 7 days.
  • techniques known in the art can be used, for example, the degree of reduction of the medium, the number of cells expressing CD34, the proliferative ability of arrector pili muscle cells, and arrector pili muscle. It can be determined based on at least one of the cell shapes.
  • Yet another aspect relates to a method for screening an arrector pili muscle activator using the activity of adrenergic receptor-expressing cells as an index. More specifically, this screening method involves the following steps: The step of culturing adrenergic receptor-expressing cells in a solution containing a candidate drug, Includes the step of measuring the activity of adrenergic receptor-expressing cells.
  • a pre-culturing step in the medium containing no candidate drug may be included before the step of culturing the adrenergic receptor-expressing cells in the solution containing the candidate drug.
  • a step of comparing the activity of adrenergic receptor-expressing cells in a group in which adrenergic receptor-expressing cells are cultured in a solution containing a candidate drug with the activity of adrenergic receptor-expressing cells in a control group that differs only in that it does not contain a candidate drug. May be further included. Experiments on the control group may be performed in parallel, or experiments on the control group may be performed in advance.
  • Candidate agents can be screened as arrector pili muscle activators when the activity of adrenergic receptor-expressing cells is increased as compared to the activity of adrenergic receptor-expressing cells in the control group.
  • the arrector pili muscle activating agent can activate arrector pili muscle cells or stem cells present in the arrector pili muscle through excitation of adrenergic receptors. Stem cells proliferate and differentiate into arrector pili muscle cells, which can increase arrector pili muscle mass, thereby improving sagging, wrinkles, or moss. Therefore, the arrector pili muscle activator screened by this method can also be referred to as a sagging, wrinkle, or moss improving agent.
  • the solution containing the candidate drug may be any solution, but is preferably a medium.
  • the medium any medium usually used for skin organ culture can be used, and as an example, DMEM medium, MEM medium and the like can be used.
  • the step of culturing the adrenergic receptor-expressing cells in the solution containing the candidate drug can be carried out by substituting with the solution containing the candidate drug or by adding the candidate drug to the preculture medium and culturing.
  • the culture period can be, for example, 1 hour to 7 days.
  • the degree of reduction of the medium for example, the degree of reduction of the medium, the number of cells expressing CD34, the proliferative ability of adrenergic receptor-expressing cells, and the shape of adrenergic receptor-expressing cells. It can be determined based on at least one of.
  • a drug contained in an arbitrary drug library such as a cosmetic material, a food material, or a pharmaceutical material
  • drug libraries may be compound libraries or extract libraries.
  • licorice extract could be screened as a sagging, wrinkle, or moss improving agent as a drug for activating smooth muscle cells.
  • Fig. 13 Although the raspberry extract did not activate smooth muscle cells, it did not interfere with the activation action of licorice extract on smooth muscle cells when used in combination with licorice (FIG. 14).
  • the adrenergic receptor-expressing cell may be any cell as long as it expresses the adrenergic receptor, or may be a cell expressing the adrenergic receptor by gene transfer.
  • adrenergic receptor cells include smooth muscle cells, cardiomyocytes, and nerve cells.
  • the smooth muscle cell may be any smooth muscle cell, and may be selected from the group consisting of vascular muscle cell, tracheal smooth muscle cell, arrector pili muscle cell, and uterine muscle cell as an example. These cells may be established cells, cells primary cultured from a tissue sample, or progeny cells thereof.
  • Licorice extract is extracted from the plant body of licorice, which is a perennial plant of the genus Glycyrrhiza, which grows naturally in the Mediterranean region, Asia Minor, southern Russia, Central Asia, northern China, North America, etc., especially roots and / or rhizomes.
  • Any solvent such as water, alcohol, such as ethanol, butylene glycol, or a mixture thereof can be used for the extraction.
  • a 50% ethanol aqueous solution and a 50% butylene glycol aqueous solution are used.
  • Rubus extract refers to an extract extracted from plants of the genus Rubus, which grows naturally in the boreal to temperate zones of the Northern Hemisphere, especially fruits. Any solvent such as water, alcohol, such as ethanol, butylene glycol, or a mixture thereof can be used for the extraction. As an example, an extract extracted with butylene glycol can be used.
  • the present invention relates to a smooth muscle cell utilization composition containing licorice extract.
  • it also relates to a composition for improving sagging, wrinkles, or moss containing licorice extract.
  • the composition for improving sagging, wrinkles, or moss can also be referred to as an aging improving agent.
  • This sagging improving composition can improve sagging, wrinkles, or moss on the skin through activation of smooth muscle cells, particularly arrector pili muscle cells.
  • the utilization composition and / or the composition for improving sagging, wrinkles, or moss according to the present invention may be incorporated into cosmetics, pharmaceuticals, or quasi-drugs, and foods such as supplements and other nutritional supplements. It may be blended in.
  • the amount of licorice extract and / or raspberry extract to be added to cosmetics, pharmaceuticals, or quasi-drugs can be arbitrarily selected within the range in which arrector pili muscle cells can be activated, for example, 0.01 to 1. Can be blended in%. From the viewpoint of activating arrector pili muscle cells, 0.01% or more is preferable, and 0.1% or more is more preferable. From the viewpoint of not exhibiting side effects, 1% or less is preferable, and 0.3% or less is more preferable. Since arrector pili muscle cells are present around the pores of the skin, they are preferably applied transdermally, and are preferably added to cosmetics applied to the skin.
  • Examples of the cosmetics to be blended include lotions, beauty essences, beauty creams, sunscreens, bathing agents, massage creams, makeup products, etc., but any cosmetics to be blended can be blended as long as they are applied to the skin. be able to.
  • any cosmetics to be blended can be blended as long as they are applied to the skin. be able to.
  • any commonly used ingredients are appropriately added as necessary. be able to.
  • the optional compounding ingredients include fats and oils, surfactants, powders, coloring materials, water, alcohols, thickeners, chelating agents, silicones, antioxidants, ultraviolet absorbers, moisturizers, fragrances, and various medicinal properties.
  • Ingredients, preservatives, pH regulators, neutralizers and the like can be mentioned.
  • a collagen production promoter may be contained.
  • the present invention relates to an application that senses the flow of hair and teaches that a stretching stimulus is performed along the flow of hair, and further relates to a beauty device 10 that gives a stretching force along the flow of hair. ..
  • the present invention is a device 30 for determining the skin extension direction for massage, and a photographing unit 11 for specifically capturing a facial image;
  • Information processing unit 13 that analyzes the captured face image and determines the hair flow and / or the extension direction along the hair flow; and displays the hair flow and / or the extension direction along the hair flow.
  • Output unit 21 It may be related to a device including.
  • Such a device 30 may store the photographed facial image data and the determined hair flow and / or the extension direction along the hair flow in the storage unit 23.
  • it may relate to a program that activates such a device.
  • Such programs are as follows: A command to operate the information processing unit to analyze the face image taken by the photographing unit 11 and determine the hair flow and / or the extension direction along the hair flow; It includes a command to display the determined hair flow and / or the extension direction along the hair flow on the output unit 21. Further, such a program may include a command to operate the photographing unit 11 to take a face image.
  • the device of the present invention may be a system 50 including an external device 40 in which the information processing unit 13 is arranged externally.
  • a system includes a terminal device 31 and an external device 40, and the terminal device 31 includes the following: Shooting unit 11 for shooting a face image; Communication unit 22 for transmitting the photographing data to an external device and receiving the data in the hair flow and / or the extension direction along the hair flow; Output unit 21 that displays the flow of hair and / or the direction of extension along the flow of hair Including, the external device 40 Communication unit 22 for receiving the photographed data and transmitting the determined hair flow and / or the data in the extension direction along the hair flow; Information processing unit 13 that analyzes the facial image of the photographed data and determines the hair flow and / or the extension direction along the hair flow; including.
  • Such a program is as follows: A command to operate the communication unit 22 and transmit the face image captured by the photographing unit 13; A command to operate the communication unit 22 to receive data about the hair flow and / or the extension direction along the hair flow; A command to cause the output unit 21 to display the hair flow and / or the extension direction along the hair flow; including.
  • the program that operates the external device is A command to operate the communication unit 22 to receive the face image captured by the photographing unit 11;
  • the information processing unit 13 is operated to analyze the face image taken by the photographing unit 22, and the command communication unit 22 for determining the hair flow and / or the extension direction along the hair flow is operated to operate the hair flow.
  • the beauty device 10 includes a photographing unit 11 and a probe unit 12, and further includes an information processing unit 13 (FIG. 15).
  • the photographing unit 11 is a camera capable of photographing the hair growth on the face, preferably a microscope.
  • the probe portion 12 is an extension probe provided with an extension direction adjusting mechanism 15 capable of applying an extension force to the skin surface from an arbitrary direction.
  • the size of the surface of the skin contact portion 14 of the probe portion 12 can be arbitrarily determined and can be set to 1 mm 2 to 100 cm 2.
  • the extension direction adjusting mechanism 15 can adjust the probe to an arbitrary angle by the rotation mechanism 18 that rotates the base 19 together with the angle adjusting mechanism 17 that adjusts the angle with respect to the base 19.
  • the angle adjusting mechanism may have one axis, but may include two or more axes.
  • the extension force adjusting mechanism 16 By the extension force adjusting mechanism 16, the skin contact portion 14 of the probe portion 12 expands and contracts, so that it can be adjusted so as to impart an appropriate extension force to the skin.
  • the image captured by the photographing unit 11 is image-processed by the information processing unit 13 to determine the flow of hair.
  • the extension direction and / or extension force of the probe portion 12 is adjusted based on the determined hair flow. More specifically, the information processing unit 13 can determine the extension direction along the hair flow.
  • the extension mechanism direction adjusting mechanism 15 adjusts the angle of the probe portion 12 with respect to the determined extension direction.
  • the deformation when applied to the cheek of the face, as an example, the deformation is 5% to 50%, preferably 10% to 40%, and most preferably about 30%.
  • Deformation can be determined by measuring the amount of deformation such as analysis of the photographed surface morphology or actual measurement of the surface morphology, or by a strain gauge or a force gauge. Further, by obtaining the relationship between the amount of deformation and the force in the subject group in advance, the deformation can be measured using the extension stimulus (force) as an index.
  • the beauty instrument 10 may include a plurality of probe portions 12. In that case, the photographing unit 11 may also be installed for each probe unit 12.
  • Such a beauty device may be provided with any configuration usually provided in the facial device, for example, a light irradiation unit, a temperature control mechanism, and a voltage applying mechanism.
  • the beauty device 10 further includes an operation unit 20, and can turn on / off the power supply and switch the mode.
  • the storage unit 23 relates to an arbitrary device for storing data, and examples thereof include a memory device such as a RAM, ROM, and a flash memory, a fixed disk device such as a hard disk drive, and a portable storage device such as a flexible disk and an optical disk. ..
  • the storage unit 23 stores image data and instructions taken by the photographing unit 11, programs used for various computer processes, processing results by the information processing unit 13, a database, a form to be output to the output unit 21, and the like.
  • the computer program may be installed via a computer-readable recording medium such as a CD-ROM or a DVD-ROM, or via the Internet.
  • the computer program is installed in the storage unit 23 using a known setup program or the like.
  • the information processing unit 13 is an arbitrary device that performs arithmetic processing, and usually has one or a plurality of processors or peripheral circuits thereof.
  • the information processing unit 13 controls the overall operation of the device 30 in an integrated manner, and is, for example, a central processing unit (CPU).
  • the information processing unit 13 executes various arithmetic processes according to the program stored in the storage unit 23.
  • the arithmetic processing is performed by the processor included in the information processing unit 13.
  • This processor includes a functional module that controls a photographing unit 11, a storage unit 23, and an output unit 21, and can perform various controls. Each of these parts may be composed of independent integrated circuits, microprocessors, firmware, and the like.
  • the information processing unit 13 determines the flow of hair on the face from the image data photographed by the photographing unit 11. With image recognition technology, it is possible to determine the flow of hair on the entire face by recognizing each hair growing on the face and determining the flow from each pore to the tip of the hair. .. The information processing unit 13 further determines the extension direction along the hair flow based on the hair flow. The information about the hair flow and / or the extension direction along the hair flow determined by the information processing unit 13 may be temporarily stored in the storage unit 23.
  • the output unit 21 is an output means such as an arbitrary device capable of outputting the result of processing by the information processing unit 13, for example, a display device such as a liquid crystal display that directly displays the result, a printer, or the like, and may include an interface.
  • the output unit 21 outputs the result processed by the information processing unit 13, that is, the hair flow and / or the extension direction along the hair flow.
  • the foam or face image stored in the storage unit 23 is called, and the hair flow and / or the extension direction along the hair flow is displayed by superimposing the foam or face image on the foam or face image.
  • the communication unit 22 may be connected to a communication unit or an external storage device for outputting via a network via an interface.
  • the communication unit used in the photographing unit 11 and the output unit 14 relates to a communication interface such as a LAN or a port for connecting an information processing device to a network.
  • Steping can be performed based on the resistance to skin aging output from the output unit 14.
  • preventive measures can be provided according to the resistance of the skin to aging. "Depending on the resistance of the skin to aging” is to provide a treatment that can supplement the resistance when the resistance is low.
  • the relationship between the resistance to skin aging and the preventive measures may be stored in the storage unit 12 in advance, and the output unit 14 outputs the information on the preventive measures together with the output of the resistance to the skin aging. be able to.
  • the preventive treatment in addition to cosmetic treatments such as the frequency of use of cosmetics and ingredients, treatments that change lifestyle habits and the external environment may be used.
  • Example 1 Three-dimensional analysis of arrector pili muscle X-ray CT observation
  • a skin specimen was obtained from excess skin excised during plastic surgery.
  • a columnar skin section having a diameter of several millimeters was cut out from the skin specimen and subjected to X-ray CT imaging in an unfixed and moist environment using an Xradia device (ZEISS).
  • ZEISS Xradia device
  • By observing in an unfixed state it became possible to observe the tissue in a deformed state of the skin. Even when the skin was deformed by pressing, the deformation of the skin was restored when the pressing was stopped.
  • the images acquired by X-ray CT imaging were three-dimensionally reconstructed using an automatic classification technique by Dragonfly (Object Research Systems), which is a deep learning system based on artificial intelligence.
  • X-ray CT imaging was performed while pressing vertically from the epidermis side, and three-dimensional reconstruction was performed. Landmark points were placed at high density on the surface of each tissue that had been three-dimensionally reconstructed, and the amount of movement of the structure of the pore tissue before and during pressing was analyzed. The amount of movement of each landmark is shown in FIG. 1 as a heat map. It was shown that the deformation does not occur uniformly by pressing, and the amount of deformation changes depending on the tissue inside the skin.
  • a skin sample obtained from a young person (14 years old) and a skin sample obtained from an elderly person (76 years old) were subjected to X-ray CT imaging and three-dimensionally reconstructed to show arrector pili muscle (Fig. 5A).
  • the amount of arrector pili muscle per skin in a certain area was compared (Fig. 5B).
  • Example 2 Correlation between arrector pili muscle and skin sagging or elasticity
  • the skin viscoelasticity of the cheeks of the face was measured using a cutometer.
  • the severity of skin sagging was photographed.
  • the relationship between the amount of arrector pili muscle in the skin of the cheeks of the face in each subject was analyzed.
  • Skin viscoelasticity and arrector pili muscle mass, and the severity of skin sagging and arrector pili muscle mass were statistically analyzed using Speaman's correlation co-efficient. The results are shown in the table below.
  • Example 3 Observation of skin sections Stem cell-like cells Immunostaining was performed on skin samples obtained from young subjects and skin samples obtained from elderly subjects according to a conventional method. Labeling was performed using the CD49f / CD34 marker (Abcam). Nuclei were stained with DAPI and observed under a fluorescence microscope (FIG. 6A). It was shown that the arrector pili muscle contained cells expressing the CD49f / CD34 marker (stem cell marker). Comparing the skin sample of the young subject and the skin sample of the elderly subject, the number of cells expressing the CD49f / CD34 marker (stem cell marker) decreased in the elderly subject (Fig. 6B). It was shown that the amount of arrector pili muscle decreases as the number of stem cells contained in arrector pili muscle decreases with aging.
  • Organ culture experiment A columnar skin sample with a diameter of 10 mm was obtained, one was cultured without any extension stimulus, and the other was extended so as to be deformed in the vertical direction by about 30%, and 10% FBS.
  • the cells were immersed in DMEM medium containing 5% CO 2 , and cultured in an atmosphere of 37 ° C. for 7 days.
  • Anti-CD34 antibody (cell signaling) was reacted with the skin section to which the staining extension stimulus was given and the skin section not given the staining extension stimulus, and then 3,3-diaminobenzidine (DAB) was reacted with the Emvision system (DAKO).
  • CD34 was stained and hematoxylin staining was performed as a post-staining (Fig. 7A). The nucleus was stained blue (indicated by a black oval to flat shape in the figure) and the presence of CD34 was stained brown (indicated by an arrow in the figure).
  • Example 4 Orientation of arrector pili muscle on the face
  • the relationship between hair follicles forming hair growth from facial skin specimens and arrector pili muscle was investigated by X-ray CT imaging and three-dimensional reconstruction (FIG. 8A).
  • the orientation of the arrector pili muscle and the orientation of the hair were in agreement. Since hair flow occurs when hair grows in the direction of the hair follicle, the orientation of the arrector pili muscle can be determined by analyzing the hair flow. Hair orientation was analyzed from facial photographs of 62 female volunteers (Fig. 8B). The flow of hair on the face was common except for the forehead (Fig. 8C).
  • Example 5 Stem cell activation via adrenergic receptor 1 (ADRA1) Expression of ADRA1 in stem cell-like cells
  • Smooth muscle cells PromoCel
  • Primary cultured smooth muscle cells were labeled with a CD49f / CD34 marker (Abcam).
  • the nuclei were stained with DAPI and observed with a fluorescence microscope (Fig. 11A). It was shown that primary smooth muscle cells also contain stem cell-like cells.
  • the immobilized primary cultured smooth muscle cells and skin sections were labeled with anti-ADRA1 antibody (Abcam) and anti-CD34 antibody (Abcam).
  • the nuclei were stained with DAPI and observed with a fluorescence microscope.
  • stem cells in arrector pili also expressed adrenergic receptors (FIGS. 11B, 11C).
  • Noradrenaline-stimulated smooth muscle cells were cultured in phenylephrine-added smooth muscle culture medium (3 ⁇ M, 10 ⁇ M) for 48 hours. After culturing, cells were labeled with a CD49f / CD34 marker (Abcam) and the corresponding fluorescently labeled secondary antibody according to a conventional method and observed under a fluorescence microscope. , CD49f / CD34 marker double positive cells were counted. Stem cell marker-positive cells increased in a dose-dependent manner of phenylephrine (FIGS. 12A and 12B), and it is considered that stem cell-like cells proliferated by the action of phenylephrine.
  • a CD49f / CD34 marker Abcam
  • CD49f / CD34 marker double positive cells were counted.
  • Stem cell marker-positive cells increased in a dose-dependent manner of phenylephrine (FIGS. 12A and 12B), and it is considered that stem cell-like cells proliferated by
  • Example 6 Measurement of Smooth Muscle Cell Activity Smooth muscle cells (Promo Cell) are suspended in smooth muscle cell growth medium 2 (Promo Cell) at a density of 1 ⁇ 10 4 cells / well and seeded on a 24-well plate. bottom. Licorice extract (Maruzen Pharmaceuticals Co., Ltd.) was added so as to be 0.1%, and 50% butylene glycol was added in the control group. Further, Almar Blue (Invitrogen) was added to the medium so as to be 10%, and the cells were cultured for 3 hours in a 37 ° C. and 5% CO 2 atmosphere. The fluorescence intensity of the 24-well plate was measured with a fluorescence plate reader (FIG. 13). It was shown that the fluorescence was increased in the licorice extract-added group as compared with the control group, and the cell activity was increased.
  • Licorice extract Maruzen Pharmaceuticals Co., Ltd.
  • Almar Blue Almar Blue
  • Smooth muscle cells were suspended in smooth muscle cell proliferation medium 2 (Promo Cell) at a density of 1 ⁇ 10 4 cells / well and seeded on a 24-well plate.
  • Licorice extract (Maruzen Pharmaceuticals) and raspberry extract (Maruzen Pharmaceuticals) were added so as to be 0.1%, respectively, and 50% butylene glycol was added in the control group.
  • a test group to which both licorice extract (Maruzen Pharmaceuticals) and raspberry extract (Maruzen Pharmaceuticals) were added was prepared. Further, Almar Blue (Invitrogen) was added to these media so as to be 10%, and the cells were cultured for 3 hours in a 5% CO 2 atmosphere at 37 ° C.
  • the fluorescence intensity of the 24-well plate was measured with a fluorescence plate reader (FIG. 14).
  • the licorice extract had a smooth muscle cell activating effect, while the raspberry extract-added group did not have a cell activating effect.
  • the cell activating effect was shown, and it was shown that the licorice extract did not interfere with the cell activating effect of the licorice extract.

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Abstract

ハリの低下やたるみといった顔の老化の改善剤や顔の老化改善のための既知の手法とは異なる新たなメカニズムを利用した老化の改善のための方法を提供することを課題とする。 肌のたるみと、立毛筋との間の関連に着目し、立毛筋細胞を賦活化又は増殖させることにより、たるみ、シワ、又はこけを改善する美容方法を提供する。

Description

立毛筋細胞の賦活化による老化改善方法
　本発明は立毛筋細胞を賦活化することによる老化改善及び美容方法に関する。
　肌のたるみは見た目年齢への影響が大きく、肌のハリを維持し、たるみを改善することは、美容上の大きな課題である。肌のハリが失われることで、たるみ、シワ、又はこけが現れ、これにより老けた印象を与える。肌のハリは、主に真皮層の厚さに起因しており、ハリのある肌には、真皮層を充填するコラーゲンやエラスチンといった弾性線維が豊富に含まれている。加齢や紫外線への曝露などの影響により、真皮線維芽細胞の機能が低下し、マトリクスメタロプロテイナーゼが活性化することが知られている。これにより、コラーゲンやエラスチンをはじめとする弾性線維が減少することで真皮層が菲薄化し、皮膚からハリが失われてたるみ、シワ、又はこけが生じる。一方で肌のハリ低下の原因は必ずしも真皮層の厚さのみにあるわけではなく、表情筋の衰えや皮下脂肪の増大などによりハリが失われて、たるみ、シワ、又はこけが生じることも知られている。従来の美容方法では、たるみの改善を達成するために、真皮線維芽細胞の賦活化によりコラーゲンや弾性線維等を増加させること、或いはコラーゲンや弾性線維等の分解を抑制することに注力してきており、真皮線維芽細胞の賦活作用や、コラーゲン産生促進作用又は分解抑制作用を有する成分が発見され、化粧料に応用されている。
特開２０１２－１４４４９９号公報 特開２０１３－０１４５５５号公報
　これまで見出されてきたたるみのメカニズムとは異なる新たなメカニズムを利用した、たるみを改善する方法を提供することを課題とする。
　本発明者らは、これまで知られているハリの低下やたるみといった顔の老化の原因を突き止めるために鋭意研究を行ったところ、驚くべきことに、皮膚のたるみや弾力と立毛筋量との間の関連を見出した。さらに、研究をすすめたところ、立毛筋には、幹細胞様の細胞が存在しており、物理刺激を加えることで幹細胞様の細胞が増殖することを見出した。
さらに、本発明者らは立毛筋に存在する幹細胞様細胞がアドレナリン受容体を発現しており、アドレナリン受容体を作動させることで幹細胞様細胞を賦活化及び／又は増殖できることを見出し、本発明に至った。
　そこで本発明は、以下に関する：
［１］　立毛筋細胞を賦活化及び／又は増殖させることを含む、美容方法。
［２］　たるみ、シワ、又はこけを改善する、項目１に記載の美容方法。
［３］　立毛筋細胞が、皮膚に対する物理刺激又は立毛筋細胞のアドレナリン受容体を介した刺激により増殖する、項目１又は２に記載の美容方法。
［４］　物理刺激が、立毛筋の走行方向への伸展刺激である、項目３に記載の美容方法。
［５］　立毛筋細胞のアドレナリン受容体を介した刺激が、カテコールアミン系化合物の皮膚投与による刺激である、項目３に記載の方法。
［６］　立毛筋細胞のアドレナリン受容体を介した刺激が、情動刺激による生体内でのノルアドレナリン放出による刺激である、項目３に記載の方法。
［７］　立毛筋内に存在する幹細胞様細胞の活性を指標とする、たるみ、シワ、又はこけ改善処理のスクリーニング方法。
［８］　前記幹細胞様細胞が、ＣＤ３４陽性細胞である、項目７に記載のスクリーニング方法。
［９］　前記スクリーニング方法が、以下の：
　皮膚器官培養を行う工程；
　皮膚器官に対し、候補処理を行う工程；
　立毛筋内に存在する幹細胞様細胞の活性を測定する工程；
　を含む、項目７又は８に記載のスクリーニング方法。
［１０］　前記候補処理が、候補薬剤を含む溶液中での皮膚器官の培養である、項目９に記載のスクリーニング方法。
［１１］　候補薬剤を含む溶液中でのアドレナリン受容体発現細胞を培養する工程、
　アドレナリン受容体発現細胞の活性を測定する工程
　を含む、アドレナリン受容体発現細胞の活性を指標としたたるみ、立毛筋細胞賦活化剤のスクリーニング方法。
［１２］　前記アドレナリン受容体発現細胞が、平滑筋細胞、心筋細胞、神経細胞、及びアドレナリン受容体の遺伝子導入細胞からなる群から選択される、項目１１に記載の立毛筋細胞賦活化剤のスクリーニング方法。
［１３］　立毛筋細胞賦活化剤が、たるみ、シワ、又はコケ改善剤である、項目１１又は１２に記載のスクリーニング方法。
［１４］　平滑筋細胞が、血管筋細胞、立毛筋細胞、及び子宮筋細胞からなる群から選ばれる、項目１２に記載の方法。
［１５］　カンゾウエキスを含む、平滑筋細胞の賦活用組成物。
［１６］　さらにキイチゴエキスを含む、項目１５に記載の賦活用組成物。
［１７］　前記平滑筋細胞が、血管筋細胞、立毛筋細胞、及び子宮筋細胞からなる群から選ばれる、項目１５又は１６に記載の賦活用組成物。
［１８］　項目１５～１７のいずれか一項に記載の平滑筋細胞の賦活用組成物を含む、たるみ、シワ、又はこけ改善用組成物。
［１９］　撮影部、伸展方向調節機構を備えたプローブ部、情報処理部を備えた美容器具であって、
　情報処理部が、撮影部で撮影された画像を画像処理して、毛の流れを決定し；
　情報処理部が、毛の流れに基づき伸展方向を決定し；
　プローブ部の伸展方向調節機構が、決定された伸展方向にプローブ部の角度を調節する
　を含む、前記美容器具。
［２０］　マッサージのための皮膚伸展方向を決定するための装置であって、
　顔画像を撮影する撮影部；
　撮影された顔画像を分析して、毛の流れ及び／又は毛の流れに沿った伸展方向を決定する情報処理部；及び
　毛の流れ及び／又は毛の流れに沿った伸展方向を表示する出力部；
　を含む、前記装置。
［２１］　撮影部、情報処理部及び出力部を含む、マッサージのための皮膚伸展方向を決定するための装置を制御するためのプログラムであって、
　情報処理部を作動して、撮影部で撮影された顔画像を分析し、毛の流れ及び／又は毛の流れに沿った伸展方向を決定させる指令；
　決定された毛の流れ及び／又は毛の流れに沿った伸展方向を出力部に表示させる指令
　を含む、前記プログラム。
　ハリの低下やたるみ、シワ、又はこけといった顔の老化の改善について、新たなメカニズムを利用することにより、効果的に老化の改善を図ることができる。また、新たなメカニズムに着目することで、新規のスクリーニング方法を提供することができ、かかるスクリーニング方法により選択された新たな薬剤を提供する。
図１は、円柱状に取得された皮膚切片を、そのまま又は表皮側から圧力を付与した状態でＸ線ＣＴ撮影を行い、圧力を付与した状態の３次元表示について、移動量をヒートマップとして示した画像である。 図２Ａは、円形状の皮膚の座標を示す。図２Ｂは、円形試料に対し、上面から圧力を付したことを示す図である。図２Ｃは、若齢者群と高齢者群の対象の皮膚における垂直方向への変形に対する抵抗性を示すグラフである。 図３Ａは、円形状の皮膚に上面から圧力を付した場合の皮膚の移動度をヒートマップとして示した図である。図３Ｂは、円形試料のヒートマップ画像と、円形試料内の構造を重ね合わせて示す。 図４は、押圧前後において３次元再構築された皮膚組織における各組織の変形率を表すグラフである。 図５Ａは、若齢者の対象から得られた試料及び高齢者の対象から得られた試料において、一定の皮膚領域に存在する立毛筋を示す。図５Ｂは、若齢者群の対象と、高齢者群の対象における、一定の皮膚領域あたりの立毛筋の量を示すグラフである。 図６は、皮膚試料を、ＣＤ４９ｆ／ＣＤ３４マーカーで染色した蛍光顕微鏡写真を示す。若齢者の対象と、高齢者の対象とを比較した場合に、若齢者の対象においてＣＤ４９ｆ／ＣＤ３４マーカーで二重陽性となる細胞が多く存在した。図６Ｂは、若齢者の対象と、高齢者の対象とにおける、ＣＤ４９ｆ／ＣＤ３４マーカー（幹細胞マーカー）で二重陽性となる細胞の密度を示す。 図７は、皮膚試料において、伸展刺激を加えなかった皮膚と伸展刺激を加えた皮膚におけるＣＤ３４（幹細胞マーカー）陽性細胞の変化を示す。図７Ａは、組織染色の結果であり、図７Ｂは、蛍光顕微鏡下での染色の結果を示す。 図８Ａは、Ｘ線ＣＴを行い３次元再構築された産毛の毛包と立毛筋との関係を示す。毛包と立毛筋の配向が一致しており、立毛筋の配向が毛の流れと一致していることを示す。図８Ｂは、ヒトの顔面における毛の流れを示す。図８Ｃは、額部における毛の流れの違いと、その割合を示す。 図９は、顔のダイナミックベルトを示す模式図である。 図１０は、たるみ改善度を著効、有効、緩効、無効と４段階に分類した場合の割合を示す。 図１１Ａは、培養平滑筋細胞においてＣＤ４９ｆ／ＣＤ３４マーカー（幹細胞マーカー）で染色された細胞を示す。図１１Ｂは培養平滑筋細胞においてＣＤ３４、ＡＤＲＡ１で染色された細胞を示す。図１１Ｃは皮膚試料においてＣＤ３４、ＡＤＲＡ１で染色された細胞を示す。 図１２Ａは、培養平滑筋細胞においてフェニレフリン刺激の有無における、ＣＤ４９ｆ／ＣＤ３４マーカー（幹細胞マーカー）二重陽性細胞を示す。図１２Ｂは、フェニレフリンの濃度依存的な、ＣＤ４９ｆ／ＣＤ３４マーカー（幹細胞マーカー）二重陽性細胞数の増殖率を示す。 図１３は、カンゾウエキスが平滑筋細胞を賦活化することを示すグラフである。 図１４は、カンゾウエキスが平滑筋細胞を賦活化する一方、キイチゴエキスは平滑筋細胞を賦活化させないことを示す（図１４Ａ）が、カンゾウエキスとキイチゴエキスを併用した際に、キイチゴエキスはカンゾウエキスの効力を阻害しないことを示すグラフである（図１４Ｂ）。 図１５Ａは、本発明に係る美容機器１０の模式図を示す。図１５Ｂは、本発明に係る美容器１０の構成を示すブロック図である。 図１６Ａは、本発明に係るマッサージのための皮膚伸展方向を決定するための装置の構成を示すブロック図を示す。図１６Ｂは、かかる装置においてインターネットに接続された外部装置において情報処理が行われるシステムの構成を示すブロック図を示す。 図１７は、マッサージのための皮膚伸展方向を決定するための装置の処理を示すフローチャートである。
　本発明の１の態様は、立毛筋細胞を増殖させることを含む、美容方法に関する。立毛筋細胞を増殖させて、立毛筋を賦活化することにより肌のたるみが改善することから、たるみ改善方法ということができる。また、たるみや皮膚粘弾性の低下は、肌のはりの低下、シワ又はこけに関与し、老けた印象をあたえることから、本発明の美容方法は、はり、シワ、又はこけの改善方法、又は老化改善方法ともいうことができる。
　立毛筋とは、毛包部と真皮上層との間に存在する平滑筋の一種である。立毛筋は交感神経により支配されており、寒冷ストレスや、恐怖、驚きなどの情緒性ストレスにより収縮する。毛根は皮膚表面に対し斜め方向に生えており、これにより毛の流れを作り出している。また、立毛筋は毛または毛包に略平行に配向しているため、毛または毛包の走行方向を、立毛筋の走行方向ということもできる。立毛筋が収縮すると、毛根が皮膚表面に対し垂直方向になるように動くことで毛が逆立ち、いわゆる鳥肌と呼ばれる状態を形成する。本発明者らによる円柱状皮膚試料に対する押圧試験により、顔面の皮膚には、変形刺激に対する抵抗について方向性があることが示されており（図２）、かかる抵抗性には立毛筋が関与することが示された（図３）。立毛筋量と、皮膚のたるみ又は粘弾性とが相関する（実施例２）。立毛筋は加齢とともに減少することから（図５）、立毛筋量を増加させることで、皮膚のたるみ又は粘弾性にかかわる現象、例えば、はり、シワ、又はこけの改善することができる。
　立毛筋細胞とは、立毛筋を構成する筋細胞である。立毛筋細胞は単核の細胞である。本発明者らにより、立毛筋に含まれる細胞の中に、ＣＤ４９ｆ／ＣＤ３４マーカーを発現する細胞が多く存在することが見いだされた（図６）。ＣＤ４９ｆ及びＣＤ３４マーカーは、平滑筋中において存在する平滑筋幹細胞のマーカーとして知られており、本発明においてＣＤ４９ｆ及びＣＤ３４マーカーを幹細胞マーカーとも称することができる。そして、皮膚の立毛筋中においても幹細胞マーカーを発現する細胞が存在することが見いだされ、立毛筋中にも幹細胞様の細胞が存在することが示された。本発明において立毛筋細胞は、立毛筋細胞及び立毛筋幹細胞を包含する。立毛筋中では、ＣＤ３４陽性細胞は、ＣＤ４９ｆマーカーについても陽性であったので、ＣＤ３４マーカーを単独で幹細胞マーカーとも呼ぶことができ、またＣＤ３４陽性の立毛筋細胞を、立毛筋幹細胞と呼ぶこととする。本発明者らは、さらに機械刺激を付与することにより、ＣＤ３４を発現する細胞の割合が増加することを見出した（図７）。ＣＤ３４は、間葉系幹細胞をはじめ、様々な体性幹細胞に発現することが報告されている（Pediatric Cardiology and Cardiac Surgery (2015) 31(3): 80-87）。なお、機械刺激前の立毛筋において、ＣＤ３４陽性細胞は、平滑筋細胞マーカーであるαＳＭＡ陰性であった。一方、機械刺激後の立毛筋では、ＣＤ３４陽性細胞の多くはαＳＭＡ陽性細胞であった（図７Ｂ）。理論に限定されることを意図するものではないが、立毛筋細胞に含まれていた立毛筋幹細胞が賦活化し、増殖し、さらに分化することでＣＤ３４及びαＳＭＡの両陽性細胞数が増加したと考えられる。
　本発明者らにより、立毛筋幹細胞が心筋細胞や他の平滑筋細胞と同様にα１アドレナリン受容体（ＡＤＲＡ１）を発現すること（図１１）、並びにα１アドレナリン受容体のアゴニストを投与することで立毛筋細胞が増殖することが見いだされた（図１２）。したがって、α１アドレナリン受容体を介して、立毛筋細胞を増殖させることができる。α１アドレナリン受容体を活性化させる物質としては、本技術分野に公知の任意の化合物が知られている。例えば、アドレナリン、ノルアドレナリン、フェニレフリンといったカテコールアミン系の化合物がα１アドレナリン受容体のアゴニストとして知られている。したがって、α１アドレナリン受容体のアゴニストを直接皮膚に適用することで、立毛筋細胞に作用させて、立毛筋細胞を賦活化し、それにより増殖及び立毛筋への分化を誘導することで立毛筋を賦活化し、たるみ、こけ、シワを改善する美容法とすることができる。したがって、α１アドレナリン受容体のアゴニストを、立毛筋細胞賦活化剤、又は立毛筋に存在する幹細胞様細胞の賦活化剤ということができる。本発明において、賦活化とは、細胞の活性が増大することを意味する。細胞が賦活化されることで、一例として増殖、代謝、又は分化が促進されうる。α１アドレナリン受容体の活性化は、α１アドレナリン受容体による細胞内シグナル伝達やそれに伴うカルシウム流入などを測定することによっても計測することができる。
　α１アドレナリン受容体のアゴニストであるノルアドレナリンは、神経伝達物質の一種であるが、副腎から血流中に放出されて、ホルモンとしても作動する。ノルアドレナリンは、情動刺激により自律神経系、特に交感神経の活性化に寄与する。立毛筋はノルアドレナリンの作用により収縮し、いわゆる鳥肌が立つという現象が生じる。鳥肌は、寒冷ストレスや恐怖により生じるものの、強い喜び、感動といった情動刺激によっても生じる。したがって、情動刺激を付与することで、感動を引き起こしノルアドレナリンの作用を介して、立毛筋細胞を賦活化することができ、ひいてはたるみ、こけ、シワを改善する美容法とすることができる。感動を引き起こす情動刺激としては、視覚、味覚、聴覚、触覚、嗅覚といった５感刺激が挙げられるが、特に音楽による聴覚刺激、特定の匂いによる刺激、画像、色彩の変化や動画などによる視覚刺激が、感動を引き起こす情動刺激として好ましい。一例として、フレグランスを用いて嗅覚を介して、情動刺激を引き起こし、立毛筋細胞を賦活化することを介した、たるみ、シワ、又はこけを改善する美容方法が提供される。このようなフレグランスとしては、一例として、グレープフルーツ、ペッパー、ヒソップ、セージなどのフレグランスが挙げられる。かかるフレグランスは、香水、アロマ、芳香剤として使用されてもよいし、化粧料中に配合されてもよい。
　物理刺激は、皮膚に対して与えられる機械刺激のことを指す。機械刺激は、一例としてローラーやプローブを皮膚に接触させることで付与することができるが、立毛筋に対して伸展刺激を付与する観点から、ローラーやプローブを適用して皮膚の伸展や毛穴の伸展を引き起こし、立毛筋の伸展を導く刺激であることが好ましい。毛の流れに沿って、立毛筋が存在することから（図８Ａ）、毛の流れ（図８Ｂ、Ｃ）に基づいて機械刺激の付与方向を決定することができる。機械刺激により皮膚の変形がもたらされ、それにより立毛筋の方向に沿って、すなわち毛の流れ方向に沿って伸展刺激が付与される。特に額部の毛の流れは、個人ごとに異なるため、個人ごとに毛の流れを解析することで、最適なマッサージを提供することができる。３次元再構築された皮膚における皮膚変形時の動態解析において、立毛筋の表皮への係留部については、押圧刺激によって皮膚の動きを制限することが示されており、係留部で表皮を吊り上げることで、たるみなどを防いでいると考えられる。このようにたるみを改善する立毛筋の配向をダイナミックベルトと呼び、この配向に沿った伸展刺激を与えることで、立毛筋細胞を賦活化しうる（図９）。真皮層に存在する立毛筋に対して伸展刺激を付与する観点から、機械刺激を顔の頬に適用する場合には、一例として５％～５０％の変形、好ましくは１０％～４０％の変形、最も好ましくは３０％程度の変形をもたらす強さで適用される。変形は、撮影された表面形態の解析や表面形態の実測などの変形量計測、或いは歪計やフォースゲージにより決定することができる。また、予め被験者群において変形量と伸展力との関係を求めておくことで、伸展力を指標として変形を計測することができる。
　本明細書は、立毛筋細胞を賦活化することを介してたるみ、シワ、又はこけを改善する美容方法に関しており、医師や医療関係者により行われる治療とは区別できる。このような美容方法は、個人的に行われてもよいし、美容室や、化粧品の販売店、エステサロンなどで行われてもよい。
　本発明の別の態様は、立毛筋内に存在する幹細胞様細胞の活性を指標とする、たるみ、シワ、又はこけ改善処理のスクリーニング方法に関する。より具体的に、このスクリーニング方法は、以下の工程：
　皮膚器官培養を行う工程；
　皮膚器官に対し候補処理を行う工程；
　立毛筋内に存在する幹細胞様細胞の活性を測定する工程；
　を含む。
　候補処理を行った処理群における立毛筋内に存在する幹細胞様細胞の活性を、候補処理を行わない点でのみ異なる対照群における立毛筋内に存在する幹細胞様細胞の活性と比較する工程をさらに含んでもよい。対照群についての実験は並行して行われてもよいし、予め対照群の実験が行われていてもよい。対照群の立毛筋内に存在する幹細胞様細胞の活性に比較して、立毛筋内に存在する幹細胞様細胞の活性が増加した場合に、候補処理をたるみ、シワ、又はこけ改善処理としてスクリーニングすることができる。
　皮膚器官培養では、特に立毛筋を含む器官を培養することが好ましい。培養工程には、皮膚器官を播種する工程のみも含むものとする。培地は、皮膚器官培養に通常用いる任意の培地を利用することができ、一例として、ＤＭＥＭ培地、ＭＥＭ培地などを使用することができる。候補処理としては、立毛筋内に存在する幹細胞様細胞の活性を高めることが期待される任意の処理であってよく、一例として物理刺激処理又は薬剤刺激処理であってもよい。物理刺激としては、機械刺激に限られず、温度刺激、光線刺激などが挙げられる。薬剤処理としては、候補薬剤を含む溶液に置換して、又は候補薬剤を添加して培養する工程を含む。薬剤処理は、例えば１時間～７日間間行われうる。立毛筋内に存在する幹細胞様細胞の活性は、本分野において既知の手法を用いることができ、一例として培地の還元度、ＣＤ３４を発現する細胞の数、立毛筋細胞の増殖能、及び立毛筋細胞の形状のうちの少なくとも１に基づき決定することができる。
　さらに別の態様は、アドレナリン受容体発現細胞の活性を指標とする、立毛筋賦活化剤のスクリーニング方法に関する。より具体的に、このスクリーニング方法は、以下の工程：
　候補薬剤を含む溶液中でのアドレナリン受容体発現細胞を培養する工程、
　アドレナリン受容体発現細胞の活性を測定するする工程
　を含む。
　候補薬剤を含む溶液中でのアドレナリン受容体発現細胞を培養する工程の前に、候補薬剤を含まない培地中での前培養工程を含んでもよい。候補薬剤を含む溶液中でのアドレナリン受容体発現細胞を培養した群におけるアドレナリン受容体発現細胞の活性を、候補薬剤を含まない点でのみ異なる対照群におけるアドレナリン受容体発現細胞の活性と比較する工程をさらに含んでもよい。対照群についての実験は並行して行われてもよいし、予め対照群の実験が行われていてもよい。対照群のアドレナリン受容体発現細胞の活性に比較して、アドレナリン受容体発現細胞の活性が増加した場合に、候補薬剤を立毛筋賦活化剤としてスクリーニングすることができる。立毛筋賦活化剤は、アドレナリン受容体の励起を介して、立毛筋中に存在する立毛筋細胞又は幹細胞を賦活化することができる。幹細胞が、増殖し、立毛筋細胞へと分化することで、立毛筋量が増え、それによりたるみ、シワ、又はこけを改善することができる。したがって、本方法によりスクリーニングされた立毛筋活性剤は、たるみ、シワ、又はこけ改善剤ともいうことができる。
　候補薬剤を含む溶液は、任意の溶液であってもよいが、好ましくは培地である。培地は、皮膚器官培養に通常用いる任意の培地を利用することができ、一例として、ＤＭＥＭ培地、ＭＥＭ培地などを使用することができる。候補薬剤を含む溶液中でのアドレナリン受容体発現細胞を培養する工程は、候補薬剤を含む溶液に置換して、又は前培養培地に候補薬剤を添加して培養することで行われうる。培養期間は、例えば１時間～７日間間行われうる。平滑筋細胞の活性は、本分野において既知の手法を用いることができ、一例として培地の還元度、ＣＤ３４の発現する細胞数、アドレナリン受容体発現細胞の増殖能、及びアドレナリン受容体発現細胞の形状のうちの少なくとも１に基づき決定することができる。
　候補薬剤としては、化粧品素材、食品素材、医薬品素材などの任意の薬剤ライブラリーに含まれる薬剤を用いることができる。これらの薬剤ライブラリーは、化合物ライブラリーであってもよいし、抽出物ライブラリーを用いてもよい。化粧品素材の抽出物ライブラリーを用いて、本発明に係るスクリーニング方法を行った結果、平滑筋細胞を賦活化させる薬剤として、カンゾウエキスをたるみ、シワ、又はこけ改善剤としてスクリーニングすることができた（図１３）。なお、キイチゴエキスは、平滑筋細胞を賦活化させることはないものの、カンゾウと組み合わせて使用した際にカンゾウエキスの平滑筋細胞の賦活化作用を妨害するものではなかった（図１４）。
　アドレナリン受容体発現細胞としては、アドレナリン受容体を発現している細胞であれば任意の細胞であってよく、遺伝子導入によりアドレナリン受容体を発現している細胞であってもよい。アドレナリン受容体細胞としては、一例として、平滑筋細胞、心筋細胞、神経細胞などが挙げられる。平滑筋細胞は、任意の平滑筋細胞であってもよく、一例として血管筋細胞、気管平滑筋細胞、立毛筋細胞、及び子宮筋細胞からなる群から選ばれうる。これらの細胞は、株化された細胞であってもよいし、組織試料から初代培養された細胞又はその子孫細胞であってもよい。
　カンゾウエキスは、地中海地方、小アジア、ロシア南部、中央アジア、中国北部、北アメリカなどに自生するマメ科カンゾウ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ）属の多年草であるカンゾウの植物体、特に根及び／又は根茎から抽出されたエキスを指す。抽出には、任意の溶媒、例えば水、アルコール、例えばエタノール、ブチレングリコール、又はそれらの混合液が使用されうる。一例として５０％エタノール水溶液、５０％ブチレングリコール水溶液が用いられる。
　キイチゴエキスは、北半球の寒帯から温帯に自生するキイチゴ（Ｒｕｂｕｓ）属の植物体、特に果実から抽出されたエキスを指す。抽出には、任意の溶媒、例えば水、アルコール、例えばエタノール、ブチレングリコール、又はそれらの混合液が使用されうる。一例としてブチレングリコールで抽出されたエキスが使用されうる。
　本発明の別の態様では、本発明はカンゾウエキスを含む平滑筋細胞の賦活用組成物に関する。さらに別の態様では、カンゾウエキスを含むたるみ、シワ、又はこけ改善用組成物にも関する。たるみ、シワ、又はこけ改善用組成物は、老化改善剤ということもできる。このたるみ改善用組成物は、平滑筋細胞、特に立毛筋細胞の賦活化を介して、皮膚のたるみ、シワ、又はこけを改善することができる。本発明に係る賦活用組成物及び／又はたるみ、シワ、又はこけ改善用組成物は、化粧料、医薬品、又は医薬部外品に配合されてもよいし、食品、例えばサプリメントなどの栄養補助食品に配合されてもよい。カンゾウエキス及び／又はキイチゴエキスを化粧料、医薬品、又は医薬部外品に配合する場合の配合量は、立毛筋細胞を賦活化できる範囲で任意に選択することができ、例えば０．０１～１％で配合しうる。立毛筋細胞を賦活化する観点から、０．０１％以上が好ましく、０．１％以上がさらに好ましい。副作用を発揮させない観点から、１％以下が好ましく、０．３％以下がさらに好ましい。立毛筋細胞は皮膚の毛穴の周囲に存在していることから、経皮的に適用することが好ましく、皮膚に適用される化粧料に配合することが好ましい。配合される化粧料としては、化粧水、美容液、美容クリーム、日焼け止め、入浴剤、マッサージクリーム、メーキャップ製品などが挙げられるが、皮膚に適用されるものであれば任意の化粧料に配合することができる。本発明の平滑筋細胞の賦活用組成物及び／又はたるみ、シワ、又はこけ改善用組成物が配合される化粧品や医薬品には、通常使用される任意配合成分を、必要に応じて適宜配合することができる。前記任意配合成分としては、例えば、油脂、界面活性剤、粉末、色材、水、アルコール類、増粘剤、キレート剤、シリコーン類、酸化防止剤、紫外線吸収剤、保湿剤、香料、各種薬効成分、防腐剤、ｐＨ調整剤、中和剤などが挙げられる。他の薬効成分として、例えばコラーゲン産生促進剤などが含まれていてもよい。
　本発明のさらに別の態様では、毛の流れを感知して毛の流れに沿って伸展刺激を行うことを指導するアプリケーションや、さらに毛の流れに沿って伸展力を与える美容器具１０にも関する。このようなアプリケーションを実行するため、本発明は、マッサージのための皮膚伸展方向を決定するための装置３０であって、具体的に
　顔画像を撮影する撮影部１１；
　撮影された顔画像を分析して、毛の流れ及び／又は毛の流れに沿った伸展方向を決定する情報処理部１３；及び
　毛の流れ及び／又は毛の流れに沿った伸展方向を表示する出力部２１；
　を含む装置に関していてもよい。かかる装置３０は、撮影された顔画像のデータ及び決定された毛の流れ及び／又は毛の流れに沿った伸展方向を記憶部２３に記憶してもよい。
　さらに別の態様では、かかる装置を作動するプログラムに関していてもよい。そのようなプログラムは、以下の：
　情報処理部を作動して、撮影部１１で撮影された顔画像を分析し、毛の流れ及び／又は毛の流れに沿った伸展方向を決定させる指令；
　決定された毛の流れ及び／又は毛の流れに沿った伸展方向を出力部２１に表示させる指令
　を含む。さらに、かかるプログラムは、撮影部１１を作動して顔画像を撮影させる指令を含んでもよい。
　本発明の装置は、情報処理部１３が外部に配置された外部装置４０を含むシステム５０であってもよく。そのようなシステムとしては、端末装置３１と外部装置４０とを含み、端末装置３１が、以下の：
　顔画像を撮影する撮影部１１；
　撮影データを外部装置へ送信し、毛の流れ及び／又は毛の流れに沿った伸展方向のデータを受信するための通信部２２；
　毛の流れ及び／又は毛の流れに沿った伸展方向を表示する出力部２１
　を含み、外部装置４０が、
　撮影データを受信し、決定された毛の流れ及び／又は毛の流れに沿った伸展方向のデータを送信するための通信部２２；
　撮影データの顔画像を分析して、毛の流れ及び／又は毛の流れに沿った伸展方向を決定する情報処理部１３；
を含む。さらに別の態様では、かかるシステムを作動するプログラムに関していてもよい。そのようプログラムは、以下の：
　通信部２２を作動して、撮影部１３で撮影された顔画像を送信する指令；
　通信部２２を作動して、毛の流れ及び／又は毛の流れに沿った伸展方向についてのデータを受信する指令；
　出力部２１に、毛の流れ及び／又は毛の流れに沿った伸展方向を表示させる指令；
　を含む。さらに外部装置を作動するプログラムは、
　通信部２２を作動して、撮影部１１で撮影された顔画像を受信させる指令；
　情報処理部１３を作動して、撮影部２２で撮影された顔画像を分析し、毛の流れ及び／又は毛の流れに沿った伸展方向を決定させる指令
　通信部２２を作動して、毛の流れ及び／又は毛の流れに沿った伸展方向についてのデータを送信させる指令；
　を含む。
　美容器具１０は、撮影部１１とプローブ部１２とを備え、さらに情報処理部１３を備える（図１５）。撮影部１１は顔面の産毛を撮影可能なカメラ、好ましくはマイクロスコープである。プローブ部１２は、皮膚表面に対して任意の方向から伸展力を付与可能な伸展方向調節機構１５を備えた伸展プローブである。プローブ部１２の皮膚接触部１４の表面の大きさは任意に決定することができ、１ｍｍ2～１００ｃｍ2で設定することができる。一例として、伸展方向調節機構１５は、基台１９に対して角度を調節する角度調節機構１７とともに、基台１９を回転させる回転機構１８により、任意の角度にプローブを調節することができる。角度調節機構は１軸であってもよいが、２以上の軸を備えてもよい。伸展力調節機構１６により、プローブ部１２の皮膚接触部１４が伸縮することにより、皮膚に対して適切な伸展力を付与するように調節することができる。撮影部１１で撮影された画像は、情報処理部１３において画像処理され、毛の流れが決定される。決定された毛の流れに基づいて、プローブ部１２の伸展方向及び／又は伸展力が調節される。より具体的に、情報処理部１３において毛の流れに沿った伸展方向を決定することができる。決定された伸展方向に対して、伸展機構方向調節機構１５がプローブ部１２の角度を調節する。プローブ１２が伸展した結果、顔の頬に適用する場合には、一例として５％～５０％の変形、好ましくは１０％～４０％の変形、最も好ましくは約３０％程度変形する。変形は、撮影された表面形態の解析や表面形態の実測などの変形量計測、或いは歪計やフォースゲージにより決定することができる。また、予め被験者群において変形量と力との関係を求めておくことで、伸展刺激（力）を指標として変形を計測することができる。美容器具１０は複数のプローブ部１２を備えていてもよい。その場合、撮影部１１もプローブ部１２毎に設置されていてもよい。かかる美容器具には、美顔器が通常備える任意の構成、例えば光線照射部、温度調節機構、電圧付与機構を備えてもよい。かかる美容器具１０はさらに操作部２０を備えており、電源のオン／オフやモードの切り替えを行うことができる。
　記憶部２３は、データを記憶する任意のデバイスに関し、例えばＲＡＭ、ＲＯＭ、フラッシュメモリ等のメモリ装置、ハードディスクドライブ等の固定ディスク装置、又はフレキシブルディスク、光ディスク等の可搬用の記憶装置などが挙げられる。記憶部２３は、撮影部１１で撮影された画像データ及び指示、コンピュータの各種処理に用いられるプログラム、情報処理部１３による処理結果、データベース、出力部２１に出力するフォームなどを記憶する。コンピュータプログラムは、例えばＣＤ－ＲＯＭ、ＤＶＤ－ＲＯＭ等のコンピュータ読み取り可能な記録媒体や、インターネットを介してインストールされてもよい。コンピュータプログラムは、公知のセットアッププログラム等を用いて記憶部２３にインストールされる。
　情報処理部１３は、演算処理を行う任意のデバイスであり、通常１又は複数のプロセッサ又はその周辺回路を有する。情報処理部１３は、装置３０の全体的な動作を統括的に制御するものであり、例えば中央演算処理装置（ＣＰＵ）である。情報処理部１３は、記憶部２３に記憶しているプログラムに従って各種の演算処理を実行する。演算処理は情報処理部１３に含まれるプロセッサによりおこなわれる。このプロセッサは、撮影部１１、記憶部２３及び出力部２１を制御する機能モジュールを含み、各種の制御を行うことができる。これらの各部は、それぞれ独立した集積回路、マイクロプロセッサ、ファームウェアなどで構成されてもよい。情報処理部１３は、撮影部１１で撮影され画像データから、顔面の毛の流れを決定する。画像認識技術により、顔に生えている１本１本の毛を認識し、一本一本の毛穴から毛先への流れを決定することで、顔全体の毛の流れを決定することができる。情報処理部１３は、さらに毛の流れに基づいて、毛の流れに沿った伸展方向を決定する。情報処理部１３により決定された毛の流れ及び／又は毛の流れに沿った伸展方向についての情報は、一旦、記憶部２３に記憶されてもよい。
　出力部２１は、情報処理部１３による処理の結果を出力可能な任意のデバイス、例えば結果を直接表示する液晶ディスプレイ等の表示装置、プリンタ等の出力手段であり、インターフェイスを含んでいてもよい。出力部２１は、情報処理部１３で処理された結果、すなわち毛の流れ及び／又は毛の流れに沿った伸展方向を出力する。この際、記憶部２３に記憶されたフォーム又は顔画像を呼び出し、フォーム又は顔画像に重ねて、毛の流れ及び／又は毛の流れに沿った伸展方向を表示する。
　通信部２２は、インターフェイスを介して、ネットワークを介して出力するための通信部、外部記憶装置に接続されていてもよい。撮影部１１及び出力部１４において用いられる通信部は、情報処理装置をネットワークに接続するためのＬＡＮやポート等の通信インターフェイスに関する。
　出力部１４から出力された、肌の老化に対する抵抗力に基づいて、カウンセリングを行うことができる。カウンセリングにおいて、肌の老化に対する抵抗力に応じた予防処置を提供することができる。肌の老化に対する抵抗力に応じた」とは、抵抗力が低い場合に、抵抗力を補うことのできる処置を提供することである。肌の老化に対する抵抗力と、予防処置との関係を予め記憶部１２に記憶しておいてもよく、出力部１４は肌の老化に対する抵抗力の出力と併せて、予防処置の情報を出力することができる。予防処置としては、化粧料、成分とともに、その使用頻度方法などの美容処置に加えて、生活習慣や外部環境を変化させる処置であってもよい。
　本明細書において言及される全ての文献はその全体が引用により本明細書に取り込まれる。
　以下に説明する本発明の実施例は例示のみを目的とし、本発明の技術的範囲を限定するものではない。本発明の技術的範囲は特許請求の範囲の記載によってのみ限定される。本発明の趣旨を逸脱しないことを条件として、本発明の変更、例えば、本発明の構成要件の追加、削除及び置換を行うことができる。
実施例１：立毛筋の３次元解析
Ｘ線ＣＴ観察
　形成手術中に切除した余剰皮膚から皮膚標本を得た。皮膚標本から数ミリ径の円柱状皮膚切片を切り出し、Ｘｒａｄｉａ装置（ＺＥＩＳＳ）を用いて、未固定、湿潤環境下でＸ線ＣＴ撮影に供した。未固定での観察を行うことにより、皮膚を変形させた状態での組織の観察が可能になった。押圧により皮膚を変形させた場合も、押圧をやめると皮膚の変形も元に戻った。Ｘ線ＣＴ撮影に取得された画像について、人工知能に基づくディープラーニングシステムであるＤｒａｇｏｎｆｌｙ（Ｏｂｊｅｃｔ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｓｙｓｔｅｍｓ）による自動分類技術を用いて皮膚の３次元再構築を行った。
　表皮側から垂直方向に押圧をかけつつＸ線ＣＴ撮影を行い、３次元再構築を行った。３次元再構築がされた各組織の表面にランドマーク点を高密度に配置し、押圧付与前と付与中における毛穴組織の構造の移動量を分析した。各ランドマークの移動量をヒートマップにして図１に示す。押圧により一様に変形するわけではなく、皮膚内部の組織によって、変形量が変わることが示された。
　若齢者（１４歳）から得られた皮膚試料と、高齢者（７６歳）から得られた皮膚試料について、Ｘ線ＣＴ撮影を行い３次元再構築し、立毛筋を示し（図５Ａ）、一定領域の皮膚当たりの立毛筋量を比較した（図５Ｂ）。
押圧刺激を付与した皮膚切片
　円柱状に切り出された皮膚切片（若齢対象と及び高齢対象）に垂直方向から押圧を付与した（図２Ａ，Ｂ）。垂直に圧力をかけた場合に、高齢対象の皮膚では一様に伸展した一方で、若齢対象の皮膚では水平方向に伸展する一方で、垂直方向に対して伸展に対し抵抗性であった。伸展に対する抵抗性をグラフ化して示した（図２C）。若齢対象の円形皮膚試料について上面から圧力を付した場合の皮膚の移動度をヒートマップで表した（図３Ａ）。皮膚試料中に移動量が制限される箇所が局在することを見出した（図３Ａ）。この円形皮膚試料について、Ｘ線ＣＴ撮影を行い３次元再構築した結果、移動量が制限される位置には立毛筋が存在することが示された（図３Ｂ）。円形皮膚試料に存在する、立毛筋、毛包、汗腺、及び皮脂腺を特定し、押圧による変形量を比較した（図４）。皮膚内部に立毛筋が存在する個所では伸展が抑制されることが示された。
実施例２：立毛筋と皮膚たるみ又は弾力との相関
　中年代の被験者３０名について、顔面の頬部の皮膚粘弾性を、Ｃｕｔｏｍｅｔｅｒを用いて測定した。また、皮膚のたるみの重篤度を、写真評価した。各被験者における顔面の頬部の皮膚中の立毛筋量の関係性を解析した。皮膚粘弾性と立毛筋量及び皮膚のたるみの重篤度と立毛筋量について、Ｓｐｅａｍａｎ’ｓ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔを用いて統計解析を行った。結果を下記表に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
 　この結果により、立毛筋量とたるみ重篤度との間に逆相関がみられ、並びに立毛筋量と皮膚粘弾性との間に相関がみられた。したがって、立毛筋量と、たるみ、しわ、コケなどとの関連性が示された。
実施例３：皮膚切片の観察
幹細胞様細胞
　若齢対象から得られた皮膚試料と、高齢対象から得られた皮膚試料について、定法に従い免疫染色を実施した。ＣＤ４９ｆ／ＣＤ３４マーカー（Ａｂｃａｍ）を用いて標識を行った。ＤＡＰＩを用いて核を染色し、蛍光顕微鏡で観察した（図６Ａ）。立毛筋には、ＣＤ４９ｆ／ＣＤ３４マーカー（幹細胞マーカー）を発現する細胞が含まれていることが示された。若齢対象の皮膚試料と、高齢対象の皮膚試料を比較すると、高齢対象ではＣＤ４９ｆ／ＣＤ３４マーカー（幹細胞マーカー）を発現する細胞数が減った（図６Ｂ）。加齢に伴い立毛筋に含まれる幹細胞が減少することで、立毛筋量も減少することが示された。
器官培養実験
　直径１０ｍｍの円柱状皮膚試料を取得し、一方については、伸展刺激を与えずに培養し、もう一方に対しては、３０％程度縦方向に変形するように伸展し、１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ培地中に浸漬して、５％ＣＯ2、３７℃雰囲気下で７日間培養した。
染色
　伸展刺激を付与した皮膚切片と付与していない皮膚切片について、抗ＣＤ３４抗体（セルシグナリング）を反応させ、次いでＥｍｖｉｓｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ（ＤＡＫＯ）にて３，３－ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）を反応させて、ＣＤ３４を染色し、後染色として、ヘマトキシリン染色を行った（図７Ａ）。核が青色（図中では黒色楕円～扁平形状で示される）に染色され、ＣＤ３４の存在が茶色（図中矢印で示す）に染色された。
蛍光染色
　伸展刺激を付与した皮膚試料と、付与していない皮膚試料について、定法に従い免疫染色を実施した。抗ＣＤ３４抗体（Ａｂｃａｍ）と抗αＳＭＡ抗体（Ａｂｃａｍ）を用い、対応する蛍光標識二次抗体を用いて標識を行い、蛍光顕微鏡で観察した（図７Ｂ）。伸展刺激を付与していない場合には、立毛筋にはＣＤ３４陽性αＳＭＡ－陰性細胞が少量存在していた（図中白三角で示す）。一方、伸展刺激を付与することにより、ＣＤ３４αＳＭＡ二重陽性細胞が大量に存在した（図中白矢印で示す）。これらの結果から、伸展刺激を行うことで、ＣＤ３４陽性αＳＭＡ－陰性の幹細胞が賦活化されて増殖し、次いで分化することでＣＤ３４－αＳＭＡ二重陽性細胞が増加したと考えられる。
実施例４：顔面における立毛筋の配向
　顔面皮膚標本から産毛を形成する毛包と立毛筋との関係を、Ｘ線ＣＴ撮影と、３次元再構築により調べた（図８Ａ）。顔面の産毛については、立毛筋の配向と、毛の配向とが一致した。毛包の方向に毛が生えることで毛の流れが生じることから、毛の流れを解析することで、立毛筋の配向を決定することができる。６２名の女性ボランティアについて、顔面の写真から毛の配向を分析した（図８Ｂ）。顔面の毛の流れは、額部を除き共通した（図８Ｃ）。
立毛筋の配向に対してマッサージ
　８名の女性ボランティア（中年代）について、毛の流れ方向に合わせて、１日１回、４週間にわたり伸展刺激を付与し、写真を撮影した。写真に基づいて、一例として下瞼のたるみの改善度を、著効、有効、緩効、無効と４段階に分類した（図１０）。立毛筋の配向に対し伸展刺激を行うことで、たるみが改善した。
実施例５：アドレナリン受容体１（ＡＤＲＡ１）を介した幹細胞の賦活化
幹細胞様細胞におけるＡＤＲＡ１の発現
　平滑筋細胞（ＰｒｏｍｏＣｅｌ）を平滑筋培養培地で培養した。初代培養平滑筋細胞を、、ＣＤ４９ｆ／ＣＤ３４マーカー（Ａｂｃａｍ）を用いて標識を行った。さらにＤＡＰＩを用いて核を染色し、蛍光顕微鏡で観察した（図１１Ａ）。初代平滑筋細胞にも、幹細胞様細胞が含まれることが示された。次に、固定された初代培養平滑筋細胞及び皮膚切片について、抗ＡＤＲＡ１抗体（Ａｂｃａｍ）と抗ＣＤ３４抗体（Ａｂｃａｍ）を用いて標識を行った。さらにＤＡＰＩを用いて核を染色し、蛍光顕微鏡で観察した。初代平滑筋細胞と同様に、立毛筋における幹細胞もアドレナリン受容体を発現した（図１１Ｂ、１１Ｃ）。
ノルアドレナリン刺激
　平滑筋細胞について、フェニレフリン添加平滑筋培養培地（３μＭ、１０μＭ）中で４８時間間培養した。培養後に、細胞を、ＣＤ４９ｆ／ＣＤ３４マーカー（Ａｂｃａｍ）を用い、対応する蛍光標識二次抗体を用いて、定法に従い標識を行って蛍光顕微鏡で観察した。、ＣＤ４９ｆ／ＣＤ３４マーカー二重陽性細胞を計数した。フェニレフリンの用量依存的に、幹細胞マーカー陽性細胞が増えており（図１２Ａ、Ｂ）、フェニレフリンンの作用により幹細胞様細胞が増殖したと考えられる。
実施例６：平滑筋細胞の活性測定
　平滑筋細胞（Ｐｒｏｍｏ　Ｃｅｌｌ社）を１×１０4個／ウェルの密度で平滑筋細胞増殖培地２（Ｐｒｏｍｏ　Ｃｅｌｌ社）中に懸濁し、２４穴プレートに播種した。０．１％となるようにカンゾウエキス（丸善製薬）を添加し、対照群では５０％ブチレングリコールを添加した。さらに培地中にＡｌｍａｒ　Ｂｌｕｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ　社）を１０％となるように添加し、３時間、３７℃５％ＣＯ2雰囲気下で培養した。２４穴プレートを蛍光プレートリーダーで蛍光強度を測定した（図１３）。カンゾウエキス添加群において対照群に比較して蛍光が増大し、細胞活性が高まっていることが示された。
　平滑筋細胞（Ｐｒｏｍｏ　Ｃｅｌｌ社）を１×１０4個／ウェルの密度で平滑筋細胞増殖培地２（Ｐｒｏｍｏ　Ｃｅｌｌ社）中に懸濁し、２４穴プレートに播種した。０．１％となるようにカンゾウエキス（丸善製薬）、キイチゴエキス（丸善製薬）をそれぞれ添加して試験群とし、対照群では５０％ブチレングリコールを添加した。さらに、カンゾウエキス（丸善製薬）とキイチゴエキス（丸善製薬）の両方を添加した試験群を調製した。さらにこれらの培地中にＡｌｍａｒ　Ｂｌｕｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ　社）を１０％となるように添加し、３時間、３７℃５％ＣＯ2雰囲気下で培養した。２４穴プレートを蛍光プレートリーダーで蛍光強度を測定した（図１４）。カンゾウエキスは平滑筋細胞賦活化作用を有する一方、キイチゴエキス添加群は、細胞賦活化作用を有さなかった。その一方で、カンゾウエキスとキイチゴエキスの添加群では、細胞賦活化作用が示されており、キイチゴエキスは、カンゾウエキスの細胞賦活化作用を妨害することはないことが示された。
１０　　美容機器
１１　　撮影部
１２　　プローブ部
１３　　情報処理部
１４　　皮膚接触部
１５　　伸展方向調節機構
１６　　伸展力調節機構
１７　　角度調節機構
１８　　回転機構
１９　　基台
２０　　操作部
２１　　出力部
２２　　通信部
２３　　記憶部
３０　　装置
３１　　端末装置
４０　　外部装置
５０　　システム

Claims (21)

  1. 　立毛筋細胞を賦活化及び／又は増殖させることを含む、美容方法。
  2. 　たるみ、シワ、又はこけを改善する、請求項１に記載の美容方法。
  3. 　立毛筋細胞が、皮膚に対する物理刺激又は立毛筋細胞のアドレナリン受容体を介した刺激により増殖する、請求項１又は２に記載の美容方法。
  4. 　物理刺激が、立毛筋の走行方向への伸展刺激である、請求項３に記載の美容方法。
  5. 　立毛筋細胞のアドレナリン受容体を介した刺激が、カテコールアミン系化合物の皮膚投与による刺激である、請求項３に記載の方法。
  6. 　立毛筋細胞のアドレナリン受容体を介した刺激が、情動刺激による生体内でのノルアドレナリン放出による刺激である、請求項３に記載の方法。
  7. 　立毛筋内に存在する幹細胞様細胞の活性を指標とする、たるみ、シワ、又はこけ改善処理のスクリーニング方法。
  8. 　前記幹細胞様細胞が、ＣＤ３４陽性細胞である、請求項７に記載のスクリーニング方法。
  9. 　前記スクリーニング方法が、以下の：
    　皮膚器官培養を行う工程；
    　皮膚器官に対し、候補処理を行う工程；
    　立毛筋内に存在する幹細胞様細胞の活性を測定する工程；
    　を含む、請求項７又は８に記載のスクリーニング方法。
  10. 　前記候補処理が、候補薬剤を含む溶液中での皮膚器官の培養である、請求項９に記載のスクリーニング方法。
  11. 　候補薬剤を含む溶液中でのアドレナリン受容体発現細胞を培養する工程、
    　アドレナリン受容体発現細胞の活性を測定する工程
    　を含む、アドレナリン受容体発現細胞の活性を指標としたたるみ、立毛筋細胞活性剤改善剤のスクリーニング方法。
  12. 　前記アドレナリン受容体発現細胞が、平滑筋細胞、心筋細胞、神経細胞、及びアドレナリン受容体の遺伝子導入細胞からなる群から選択される、請求項１１に記載の立毛筋細胞賦活化剤のスクリーニング方法。
  13. 　立毛筋細胞賦活化剤が、たるみ、シワ、又はコケ改善剤である、請求項１１又は１２に記載のスクリーニング方法。
  14. 　平滑筋細胞が、血管筋細胞、立毛筋細胞、及び子宮筋細胞からなる群から選ばれる、請求項１２に記載の方法。
  15. 　カンゾウエキスを含む、平滑筋細胞の賦活用組成物。
  16. 　さらにキイチゴエキスを含む、請求項１５に記載の賦活用組成物。
  17. 　前記平滑筋細胞が、血管筋細胞、立毛筋細胞、及び子宮筋細胞からなる群から選ばれる、請求項１５又は１６に記載の賦活用組成物。
  18. 　請求項１５～１７のいずれか一項に記載の平滑筋細胞の賦活用組成物を含む、たるみ、シワ、又はこけ改善用組成物。
  19. 　撮影部、伸展方向調節機構を備えたプローブ部、情報処理部を備えた美容器具であって、
    　情報処理部が、撮影部で撮影された画像を画像処理して、毛の流れを決定し；
    　情報処理部が、毛の流れに基づき伸展方向を決定し；
    　プローブ部の伸展方向調節機構が、決定された伸展方向にプローブ部の角度を調節する
    　を含む、前記美容器具。
  20. 　マッサージのための皮膚伸展方向を決定するための装置であって、
    　顔画像を撮影する撮影部；
    　撮影された顔画像を分析して、毛の流れ及び／又は毛の流れに沿った伸展方向を決定する情報処理部；及び
    　毛の流れ及び／又は毛の流れに沿った伸展方向を表示する出力部；
    　を含む、前記装置。
  21. 　撮影部、情報処理部及び出力部を含む、マッサージのための皮膚伸展方向を決定するための装置を制御するためのプログラムであって、
    　情報処理部を作動して、撮影部で撮影された顔画像を分析し、毛の流れ及び／又は毛の流れに沿った伸展方向を決定させる指令；
    　決定された毛の流れ及び／又は毛の流れに沿った伸展方向を出力部に表示させる指令
    　を含む、前記プログラム。
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